JP3493608B2 - 医用高分子及びその用途 - Google Patents

医用高分子及びその用途

Info

Publication number
JP3493608B2
JP3493608B2 JP2002343256A JP2002343256A JP3493608B2 JP 3493608 B2 JP3493608 B2 JP 3493608B2 JP 2002343256 A JP2002343256 A JP 2002343256A JP 2002343256 A JP2002343256 A JP 2002343256A JP 3493608 B2 JP3493608 B2 JP 3493608B2
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
copolymer
side chain
peg
integer
sugar
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
JP2002343256A
Other languages
English (en)
Other versions
JP2003231748A (ja
Inventor
智典 佐藤
義之 小山
哲二 山岡
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Keio University
Original Assignee
Keio University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Keio University filed Critical Keio University
Priority to JP2002343256A priority Critical patent/JP3493608B2/ja
Priority to EP02785959A priority patent/EP1439199A4/en
Priority to AU2002354070A priority patent/AU2002354070A1/en
Priority to US10/469,136 priority patent/US20040097659A1/en
Priority to PCT/JP2002/012420 priority patent/WO2003046047A1/ja
Publication of JP2003231748A publication Critical patent/JP2003231748A/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP3493608B2 publication Critical patent/JP3493608B2/ja
Priority to US10/859,598 priority patent/US7550512B2/en
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Fee Related legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G81/00—Macromolecular compounds obtained by interreacting polymers in the absence of monomers, e.g. block polymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/34—Macromolecular compounds obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyesters, polyamino acids, polysiloxanes, polyphosphazines, copolymers of polyalkylene glycol or poloxamers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/61—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule the organic macromolecular compound being a polysaccharide or a derivative thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/0008—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition
    • A61K48/0025—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition wherein the non-active part clearly interacts with the delivered nucleic acid
    • A61K48/0041—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition wherein the non-active part clearly interacts with the delivered nucleic acid the non-active part being polymeric
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
    • C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
    • C08G65/04—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring from cyclic ethers only
    • C08G65/06—Cyclic ethers having no atoms other than carbon and hydrogen outside the ring
    • C08G65/14—Unsaturated oxiranes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
    • C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
    • C08G65/32—Polymers modified by chemical after-treatment
    • C08G65/329—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
    • C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
    • C08G65/32—Polymers modified by chemical after-treatment
    • C08G65/329—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds
    • C08G65/331—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds containing oxygen
    • C08G65/332—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds containing oxygen containing carboxyl groups, or halides, or esters thereof
    • C08G65/3324—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds containing oxygen containing carboxyl groups, or halides, or esters thereof cyclic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
    • C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
    • C08G65/32—Polymers modified by chemical after-treatment
    • C08G65/329—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds
    • C08G65/334—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds containing sulfur
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
    • C08L2205/00—Polymer mixtures characterised by other features
    • C08L2205/05—Polymer mixtures characterised by other features containing polymer components which can react with one another

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、医用高分子及びそ
の用途に関し、より詳細には、糖残基含有側鎖とカルボ
キシル基含有側鎖を持つポリエチレングリコール誘導体
及び薬物や遺伝子の運搬体としてのその用途に関する。
【０００２】
【従来の技術】薬物送達システムは、薬物の体内動態を
制御し、生体内の目的とする作用部位に選択的に薬物を
送り込み、治療効果の最適化の実現を図る治療技術であ
る。近年、薬物送達システムの研究は急速に発展し、薬
物送達システム技術を利用した多くの医薬品製剤が市販
され、あるいは開発された投与法が臨床の現場で利用さ
れるようになってきている。
【０００３】薬物送達システムの対象となる薬物として
は、抗がん薬を始めとして、循環器用薬、抗炎症薬など
幅広い医薬品がとりあげられており、最近では、タンパ
ク質医薬品の実用化や遺伝子治療の実現にも薬物送達シ
ステムは不可欠の技術であると考えられている。
【０００４】現在、実用化されている遺伝子治療法は大
きくわけて２つある。１つは、先天性免疫不全症や先天
性代謝異常症等の先天的な遺伝病において、その欠損し
た遺伝子を外部から導入して補うという治療法であり、
もう１つはガン細胞やＡＩＤＳなどのような細胞やウイ
ルスをターゲットにして、それらの増殖を抑制したり、
それらを死滅させるための遺伝子を導入する治療法であ
る。上記どちらの治療法においても、目的とする遺伝子
を細胞内に導入し、発現させることが重要であることが
知られている。
【０００５】しかしながら、ＤＮＡと細胞膜は共にアニ
オン性を示し、電気的に反発してしまうため、遺伝子
（ＤＮＡ）を単独で直接細胞内に導入することは非常に
困難である。
【０００６】そこで、これまでにもＤＮＡキャリアーと
して様々な物質が検討されてきたが、安全性や導入効率
等の面で問題があり、実用化の妨げとなっている。例え
ば、代表的なウイルスベクターであるレトロウイルスベ
クターは、導入効率が高いという利点がある一方で、
（１）大きなサイズのＤＮＡを使えない、（２）非分裂
細胞に導入できない、（３）発現レベルが低いなどの欠
点がある。また、アデノウイルスベクターは、非分裂細
胞にも導入可能だが、免疫原性が強く、抗体ができてし
まうという欠点があり、ヘルペスウイルスベクターは、
神経細胞への導入に優れているが、細胞毒性が強いとい
う欠点がある。その他ウイルスベクター以外のキャリア
ーとしてカチオン性リポソーム、脂質、ポリマーなどが
研究されているが、導入効率や細胞特異性が低くなると
いう問題があった。
【０００７】また、特開平３−１９８７８２号公報にお
いて、低分子キトサンをキャリアーとした遺伝子導入の
方法が開示されているが、この方法は、遺伝子を細胞に
導入する際に、細胞膜の透過性を増強する薬剤を使用す
るため、細胞にダメージを与えてしまうという問題があ
った。
【０００８】本発明者らは、高分子キトサンを用いるこ
とにより、上記の問題を解決し、導入した遺伝子の発現
レベルが高く、しかも安全性に優れた遺伝子導入用キャ
リアーを開発した（特開２０００−１５７２７０号公
報）。
【０００９】しかし、高分子キトサンを遺伝子導入用キ
ャリアーとして用いた場合でも、遺伝子−キトサン複合
体は凝集が起こりやすいこと、また、遺伝子の発現レベ
ルが治療には十分でないことなどの問題点があった。他
の先行技術文献としては、特許文献１〜３が挙げられ
る。
【特許文献１】特開平０８−０４８７６３号公報
【特許文献２】特開平０８−０４８７６４号公報
【特許文献３】特開平０８−２９１２１７号公報
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、薬物送達シ
ステム用キャリアーとして利用可能な材料及びその製造
方法を提供することを目的とする。
【００１１】また、本発明は、薬物送達システム用キャ
リアーを提供することも目的とする。
【００１２】さらに、本発明は、薬物送達製剤を提供す
ることも目的とする。
【００１３】さらにまた、本発明は、遺伝子導入用キャ
リアーを提供することも目的とする。
【００１４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、糖残基含
有側鎖とカルボキシル基含有側鎖を持つポリエチレング
リコール誘導体を合成し、遺伝子とカチオン性高分子と
からなる複合体をこのポリエチレングリコール誘導体で
被覆して、生体内に投与することにより、遺伝子−カチ
オン性高分子複合体の場合よりも高い遺伝子発現を達成
することに成功し、本発明を完成させるに至った。
【００１５】本願の第１発明は、下記の一般式(I)、(I
I)及び(III)で表される構造単位を含む分子量１０００
〜２０００００の共重合体又はその塩を提供する。
【００１６】
【化６】
【００１７】
【化７】
【００１８】
【化８】
【００１９】（ただし、一般式(I)中のR1および一般式
(II)中のR2はスペーサー部分であり、一般式(II)中のR3
は糖残基を表し、単位(I)、(II)及び(III)のそれぞれの
モル％は、(I)＝１〜９８、(II)＝１〜９８、(III)＝１
〜９８である。）
【００２０】R1およびR2はスペーサー部分であり、この
スペーサー部分はカルボキシル基、糖残基などを有して
もよい。糖残基の糖としては、ガラクトース、マルトー
ス、グルコース、Nーアセチルグルコサミン、Nーアセチ
ルガラクトサミン、フコース、シアル酸、マンノース、
ラクトース、セロビオースあるいはマルトトリオースな
どを例示することができる。
【００２１】R1は、例えば、下記の一般式(C)または(D)
で表される基であるとよい。
【００２２】R2は、例えば、下記の一般式(B)、(D)また
は(E)で表される基であるとよい。 ＊−(CH2)n−S−(CH2)p−NH− (B) （ここで、nは、２〜８の整数であり、pは１〜８の整数
である。） ＊−(CH2)m−S−(CH2)p− (C) （ここで、mは２〜８の整数であり、pは１〜８の整数で
ある。）
【００２３】
【化９】 （ここで、mは２〜８の整数であり、rは０〜７の整数で
あり、sは０〜７の整数であり、tは０〜４の整数であ
り、RSはアミノ基、カルボキシル基または糖残基であ
る。）
【００２４】
【化１０】 （ここで、mは２〜８の整数であり、rは０〜７の整数で
あり、sは０〜７の整数である。）
【００２５】一般式(B)、(C)、(D)および(E)において、
＊はエチレンオキシド側またはその反対側（R1の場合は
カルボキシル基側、R2の場合はR3側）のどちらに結合す
る位置であってもよいが、エチレンオキシド側に結合す
る位置であることが好ましい。
【００２６】一般式(B)で表される基としては、 −(CH2)３−S−(CH2)２−NH− などを例示することができる。
【００２７】一般式(C)で表される基としては、 −(CH2)３−S−(CH2)２− などを例示することができる。
【００２８】一般式(D)で表される基としては、
【００２９】
【化１１】
【００３０】
【化１２】 などを例示することができる。
【００３１】一般式(E)で表される基としては、
【００３２】
【化１３】 などを例示することができる。
【００３３】R1としては、以下の基が合成上好ましい。 −(CH2)３−S−CH2− −(CH2)３−S−(CH2)２−
【００３４】
【化１４】
【００３５】R2としては、以下の基が合成上好ましい。 −(CH2)３−S−(CH2)2−NH- −(CH2)３−S−CH2−NH-
【００３６】
【化１５】
【００３７】一般式(D)中のRSの糖残基の糖としては、
ガラクトース、マルトース、グルコース、Nーアセチル
グルコサミン、Nーアセチルガラクトサミン、フコー
ス、シアル酸、マンノース、ラクトース、セロビオース
あるいはマルトトリオースなどを例示することができ
る。
【００３８】R3の糖残基の糖としては、ガラクトース、
マルトース、グルコース、Nーアセチルグルコサミン、N
ーアセチルガラクトサミン、フコース、シアル酸、マン
ノース、ラクトース、セロビオースあるいはマルトトリ
オースなどを例示することができる。
【００３９】本願の第１発明の共重合体における、単位
(I)のモル％と単位(II)のモル％を合計したものは、好
ましくは５〜６０モル％であり、より好ましくは１０〜
４０モル％である。
【００４０】また、本願の第１発明の共重合体におけ
る、単位(I)、(II)及び(III)のそれぞれのモル％は、好
ましくは３〜５８：２〜５７：４０〜９５であり、より
好ましくは６〜３６：４〜３４：６０〜９０である。
【００４１】本願の第１発明の共重合体は、さらに、他
の単位、たとえば、プロピレンオキシドなどを含んでも
よい。
【００４２】本願の第１発明の共重合体は、ランダム共
重合体、ブロック共重合体、グラフト共重合体のいずれ
であってもよい。
【００４３】本願の第１発明の共重合体の塩としては、
ナトリウム塩、カリウム塩などを例示することができ
る。
【００４４】本願の第２発明は、アリルグリシジルエー
テル及びエチレンオキシドを重合させた後、得られた共
重合体にメルカプトアルキルアミンとメルカプト脂肪酸
の混合物を添加して反応させることにより、アミノ基含
有側鎖とカルボキシル基含有側鎖を持つ共重合体を得、
次いで、得られたアミノ基含有側鎖とカルボキシル基含
有側鎖を持つ共重合体を糖ラクトンと反応させることを
特徴とする、糖残基含有側鎖とカルボキシル基含有側鎖
を持つ、分子量１０００〜２０００００の共重合体の製
造方法を提供する。
【００４５】アリルグリシジルエーテルとエチレンオキ
シドのモル比は、１：９９〜７０：３０であるとよく、
好ましくは５：９５〜５０：５０であり、より好ましく
は１０：９０〜４０：６０である。
【００４６】メルカプトアルキルアミンとしては、下記
の一般式： HS−(CH2)n−NH2 （式中、ｎは１〜８の整数である。）で表される化合物
であるとよく、具体的には、メルカプトエチルアミンな
どを例示することができる。
【００４７】メルカプト脂肪酸としては、下記の一般
式： HS−(CH2)n−COOH （式中、ｎは１〜８の整数である。）で表される化合物
であるとよく、具体的には、メルカプト酢酸、メルカプ
トプロピオン酸などを例示することができる。
【００４８】合成におけるメルカプトアルキルアミン：
メルカプト脂肪酸の仕込みモル比は、1：99〜70：30で
あるとよく、好ましくは5：95〜40：60であり、より好
ましくは15：85〜30：70である。
【００４９】アリルグリシジルエーテル及びエチレンオ
キシドを重合させて得られた共重合体中の２重結合と、
メルカプトアルキルアミンとメルカプト脂肪酸の混合物
とのモル比は、１：１〜１：８０であるとよく、好まし
くは１：１．５〜１：５０であり、より好ましくは１：
２〜１：３０である。
【００５０】糖ラクトンとしては、ラクトノラクトン、
マルトノラクトン、グルコノラクトン、マルトトリオノ
ラクトン、セロビオノラクトン、ガラクトノラクトン、
Ｎ−アセチルグルコサミノラクトン、Ｎ−アセチルガラ
クトサミノラクトン、シアロラクトン、マンノラクトン
などを例示することができる。
【００５１】アミノ基含有側鎖とカルボキシル基含有側
鎖を持つ共重合体中のアミノ基と糖ラクトンとのモル比
は、１：１〜１：２０であるとよく、好ましくは１：
１．３〜１：１０であり、より好ましくは１：１．５〜
１：５である。
【００５２】上記の方法により製造される糖残基含有側
鎖とカルボキシル基含有側鎖を持つ共重合体の分子量
は、好ましくは２０００〜２０００００であり、より好
ましくは４０００〜５００００である。
【００５３】本願の第２発明の方法により、本願の第１
発明の共重合体を製造することができる。
【００５４】本願の第３発明は、アリルグリシジルエー
テル及びエチレンオキシドを重合させた後、得られた共
重合体にメルカプト脂肪酸を添加して反応させることに
より、カルボキシル基含有側鎖を持つ共重合体を得、次
いで、得られたカルボキシル基含有側鎖を持つ共重合体
を、アミノ基を有する糖誘導体と反応させることを特徴
とする、糖残基含有側鎖とカルボキシル基含有側鎖を持
つ、分子量１０００〜２０００００の共重合体の製造方
法を提供する。
【００５５】アリルグリシジルエーテルとエチレンオキ
シドのモル比は、１：９９〜７０：３０であるとよく、
好ましくは５：９５〜５０：５０であり、より好ましく
は１０：９０〜４０：６０である。
【００５６】メルカプト脂肪酸としては、下記の一般
式： HS−(CH2)n−COOH （式中、ｎは１〜８の整数である。）で表される化合物
であるとよく、具体的には、メルカプト酢酸、メルカプ
トプロピオン酸などを例示することができる。
【００５７】アリルグリシジルエーテル及びエチレンオ
キシドを重合させて得られた共重合体中の２重結合とメ
ルカプト脂肪酸とのモル比は、１：１〜１：８０である
とよく、好ましくは１：１．５〜１：５０であり、より
好ましくは１：２〜１：３０である。
【００５８】アミノ基を有する糖誘導体としては、ヘキ
ソースの１位の炭素にアミノ基が結合しているもの（例
えば、１−アミノ−１−デオキシ−グルコース、１−ア
ミノ−１−デオキシ−ガラクトース、１−アミノ−１−
デオキシ−マンノース、１−アミノ−１−デオキシ−グ
ルシトール、１−アミノ−１−デオキシ−ガラクシトー
ル、１−アミノ−１−デオキシ−マンノシトール）、ヘ
キソースの２位の炭素にアミノ基が結合したもの（例え
ば、２−アミノ−２−デオキシ−グルコース、２−アミ
ノ−２−デオキシ−ガラクトース、２−アミノ−２−デ
オキシ−マンノース）、ヘキソースの６位の炭素にアミ
ノ基が結合しているもの（例えば、６−アミノ−６−デ
オキシ−グルコース、６−アミノ−６−デオキシ−ガラ
クトース、６−アミノ−６−デオキシ−マンノース）、
ヘキソースの１位の炭素に結合した水酸基にｐ−アミノ
フェノールが結合しているもの（例えば、ｐ−アミノフ
ェニル−グルコシド、ｐ−アミノフェニル−ガラクトシ
ド、ｐ−アミノフェニル−マンノシド）などを例示する
ことができる。
【００５９】反応におけるカルボキシル基含有側鎖を持
つ共重合体中のカルボキシル基とアミノ基を有する糖誘
導体との仕込みモル比は、１：１〜１００：１であると
よく、好ましくは３：２〜５０：１であり、より好まし
くは２：１〜１０：１である。
【００６０】上記の方法により製造される糖残基含有側
鎖とカルボキシル基含有側鎖を持つ共重合体の分子量
は、好ましくは２０００〜２０００００であり、より好
ましくは４０００〜５００００である。
【００６１】本願の第３発明の方法により、本願の第１
発明の共重合体を製造することができる。
【００６２】本願の第４発明は、本願の第１発明の共重
合体又はその塩を含む、薬物送達システム用キャリアー
を提供する。
【００６３】本願の第５発明は、薬剤及び本願の第１発
明の共重合体又はその塩を含む薬物送達製剤を提供す
る。
【００６４】薬剤としては、遺伝子、アンチセンス核
酸、リボザイムなどの核酸や核酸誘導体の他、高分子性
免疫賦活剤、ｃＡＭＰ，プロスタグランジン、ダウノマ
イシンなどの薬剤を例示することができる。
【００６５】本願の第６発明は、本願の第１発明の共重
合体又はその塩を含む、遺伝子導入用キャリアーを提供
する。
【００６６】本発明の薬物送達システム用キャリアー及
び遺伝子導入用キャリアー並びに薬物送達製剤は、さら
に、カチオン性の高分子（以下、「ポリカチオン」とい
う）を含んでもよい。ポリカチオンは、高分子キトサン
（Biomaterials, Vol. 22, 2001, pp2075-2080, Biochi
m. Biophys. Acta, Vol. 1514, 2001, pp51-64）ポリＬ
−リジン、ポリアミドアミンデンドリマー、ＤＥＡＥ−
デキストラン(これらの高分子に関する総説、Nonviral
Vectors for Gene Therapy, Academic Press,Inc., 199
9)、ポリエチレンイミンおよびそれらの組み合わせから
なる群より選択するとよい。
【００６７】核酸（またはその誘導体）はポリカチオン
と静電的に結合して小さく折り畳まれた複合体を形成
し、通常はエンドサイトシスで細胞に取り込まれるた
め、その多くは弱酸性となったエンドソーム内で酵素に
より分解されてしまう。これに対して、本発明の糖残基
含有側鎖とカルボキシル基含有側鎖を持つポリエチレン
グリコール誘導体は、マイナスに帯電しているために、
弱酸性下で細胞膜破壊機能を持つと考えられる。このよ
うなアニオン性の高分子で核酸−ポリカチオン複合体を
被覆することにより、核酸が酵素分解される前にエンド
ソーム膜を壊し、核酸を細胞質に移行させ、遺伝子発現
効率を向上させると考えられる。また、本発明のポリエ
チレングリコール誘導体は親水性であるために、血清タ
ンパクなどによる核酸−ポリカチオン複合体の凝集を阻
止すると考えられる。
【００６８】核酸（またはその誘導体）とポリカチオン
の配合比（各荷電基のモル比、アニオン：カチオン比）
は、１：０．１〜１：５０であるとよく、好ましくは
１：１〜１：２０であり、より好ましくは１：２〜１：
１０である。
【００６９】ポリカチオンと本願の第１発明の共重合体
の配合比（各荷電基のモル比、カチオン：アニオン比）
は１：０．０１〜１：２０であるとよく、好ましくは
１：０．１〜１：１６であり、より好ましくは１：０．
２〜１：１０である。
【００７０】本願の第１発明の共重合体は、ポリエチレ
ングリコール主鎖を持つことにより、溶液中や血液を始
めとする体液中での凝集や補体などの活性化が抑制され
ることが期待できる。また、糖残基含有側鎖を持つこと
により、癌細胞などの糖鎖を認識する細胞に特異的な薬
剤の送達を可能とする。その他に、製剤の水溶性を高め
ることも期待できる。
【００７１】本願の第７発明は、糖残基を側鎖に持つア
ニオン性高分子又はその塩と、カチオン性の高分子を含
む遺伝子導入用キャリアーを提供する。カチオン性の高
分子としてはキトサンを用いるとよい。
【００７２】糖残基を側鎖に持つアニオン性高分子又は
その塩として、本願の第１発明の共重合体又はその塩、
カルボキシルビニルポリマーとアミノ基を含む糖誘導体
との縮合生成物、側鎖ではないがヒアルロン酸などの酸
性ムコ多糖類を例示することができる。
【００７３】カチオン性の高分子としては、キトサンの
他、ポリ−Ｌ−リジン、ポリアミドアミンデンドリマ
ー、ポリエチレンイミン、プロタミン、DEAE−デキスト
ラン、ポリリジンデンドリマーなどを例示することがで
きる。
【００７４】カチオン性の高分子と糖残基を側鎖に持つ
アニオン性高分子又はその塩の配合比（各ポリマー中に
含まれる荷電基のモル比、カチオン：アニオン比）は、
１：０．０１〜１：２０であるとよく、好ましくは１：
０．１〜１：１６であり、より好ましくは１：０．２〜
１：１０である。
【００７５】核酸（またはその誘導体）とポリカチオン
の配合比（各荷電基のモル比、アニオン：カチオン比）
は、１：０．１〜１：５０であるとよく、好ましくは
１：１〜１：２０であり、より好ましくは１：２〜１：
１０である。
【００７６】本願の第８発明は、下記の一般式(I)及び
(III)で表される構造単位を含む分子量１０００〜２０
００００の共重合体又はその塩と、キトサンとを含む遺
伝子導入用キャリアーを提供する。
【００７７】
【化１６】
【００７８】
【化１７】
【００７９】（ただし、一般式(I)中のR1はスペーサー
部分であり、単位(I)及び(III)のそれぞれのモル％は、
(I)＝１〜８０、(III)＝２０〜９９である。）
【００８０】R1はスペーサー部分であり、このスペーサ
ー部分はカルボキシル基、糖残基などを有してもよい。
糖残基の糖としては、ガラクトース、マルトース、グル
コース、Nーアセチルグルコサミン、Nーアセチルガラク
トサミン、フコース、シアル酸、マンノース、ラクトー
ス、セロビオースあるいはマルトトリオースなどを例示
することができる。
【００８１】R1は、例えば、下記の一般式(C)または(D)
で表される基であるとよい。 ＊−(CH2)m−S−(CH2)p− (C) （ここで、mは２〜８の整数であり、pは１〜８の整数で
ある。）
【００８２】
【化１８】 （ここで、mは２〜８の整数であり、rは０〜７の整数で
あり、sは０〜７の整数であり、tは０〜４の整数であ
り、RSはアミノ基、カルボキシル基または糖残基であ
る。）
【００８３】一般式(C)または(D)において、＊はエチレ
ンオキシド側またはその反対側（カルボキシル基側）の
どちらに結合する位置であってもよいが、エチレンオキ
シド側に結合する位置であることが好ましい。
【００８４】一般式(C)で表される基としては、 −(CH2)３−S−(CH2)２− などを例示することができる。
【００８５】一般式(D)で表される基としては、
【００８６】
【化１９】
【００８７】
【化２０】 などを例示することができる。
【００８８】R1としては、以下の基が合成上好ましい。 −(CH2)３−S−CH2− −(CH2)３−S−(CH2)２−
【００８９】
【化２１】
【００９０】一般式(D)中のRSの糖残基の糖としては、
ガラクトース、マルトース、グルコース、Nーアセチル
グルコサミン、Nーアセチルガラクトサミン、フコー
ス、シアル酸、マンノース、ラクトース、セロビオース
あるいはマルトトリオースなどを例示することができ
る。
【００９１】本願の第８発明に使用される共重合体にお
ける、単位(I)及び(III)のそれぞれのモル％は、好まし
くは１〜８０：９９〜２０であり、より好ましくは３〜
６０：９７〜４０である。
【００９２】本願の第８発明に使用される共重合体は、
さらに、他の単位、たとえば、プロピレンオキシドなど
を含んでもよい。
【００９３】本願の第８発明に使用される共重合体は、
ランダム共重合体、ブロック共重合体、グラフト共重合
体のいずれであってもよい。
【００９４】本願の第８発明に使用される共重合体の塩
としては、ナトリウム塩、カリウム塩などを例示するこ
とができる。
【００９５】本願の第８発明の遺伝子導入用キャリアー
において、キトサンと共重合体又はその塩の配合比（各
荷電基のモル比、カチオン：アニオン比）は、１：０．
０１〜１：２０であるとよく、好ましくは１：０．１〜
１：１６であり、より好ましくは１：０．２〜１：１０
である。
【００９６】核酸（またはその誘導体）とポリカチオン
の配合比（各荷電基のモル比、アニオン：カチオン比）
は、１：０．１〜１：５０であるとよく、好ましくは
１：１〜１：２０であり、より好ましくは１：２〜１：
１０である。
【００９７】
【発明の実施の形態】本発明の好ましい実施態様の一つ
について以下に説明する。 １．ポリエチレングリコール誘導体の製造 １−１ 糖残基含有側鎖とカルボキシル基含有側鎖を持
つ共重合体の製造（第１法） （１）アリルグリシジルエーテルとエチレンオキシドと
の共重合体の製造 ジエチレングリコールと水酸化カリウム（ジエチレング
リコールと水酸化カリウムのモル比は、１：０．３〜
１：１とするとよい。）を予めリアクターに仕込み、窒
素雰囲気下、約２０〜７０mmHgで０．５〜３時間、７０
〜９５℃で脱水した後、アリルグリシジルエーテル(AG
E)とエチレンオキシド(EO)の混合物（モル比３：９７〜
５０：５０）を１００〜１２０℃で、約５０〜６００ｇ
/h の速さで滴下する。モノマーを加える量により、分
子量が制御される。所定のモノマーを添加後、すぐに未
反応モノマーを減圧下（例えば、２００mmHg）で除去す
る。ポリマーをリン酸で中和した後、減圧下、８０〜１
２０℃で０．５〜３時間乾燥させ、最後に６０〜９５℃
でろ過する。アリルグリシジルエーテルとエチレンオキ
シドとの共重合体の分子量は、水酸基の滴定（JIS K-15
57 6.4 (1970)）で計算できる。ポリマーの組成は２重
結合の滴定（JIS K-1557 6.7 (1970)）で計算できる。
分子量分布は、GPC（溶媒THF）で調べることができる。
以上の方法で得られるのはランダム共重合体であるが、
ブロック性の高い共重合体、ブロック共重合体を得るに
は、それぞれモノマー混合物を一時に加えるか、あるい
はそれぞれのモノマーを順次加えると良い。
【００９８】（２）アミノ基とカルボキシル基の両方を
側鎖に持つPEG誘導体（PEG-A/C）の製造 （１）で得られたアリルグリシジルエーテルとエチレン
オキシドとの共重合体をメタノールに溶かし、あらかじ
め、メルカプトアルキルアミンとメルカプト脂肪酸をメ
タノールに溶かしておいた溶液に攪拌しながら滴下し、
２０〜６０℃で８〜７２時間反応させる。流水で１〜４
日、純水で０〜２日透析後、凍結乾燥し、または溶媒を
減圧除去し、アミノ基とカルボキシル基の両方を側鎖に
持つPEG誘導体 (PEG-A/C) を得る。反応におけるメルカ
プトアルキルアミンとメルカプト脂肪酸の仕込みモル比
は、１：９９〜７０：３０とするとよい。得られたPEG-
A/Cの分子量は、NMR等でアミノ基側鎖とカルボキシル基
側鎖の数を定量することにより、（１）のアリルグリシ
ジルエーテルとエチレンオキシドとの共重合体の分子量
を元に計算することができる。すなわち、アリルグリシ
ジルエーテルとエチレンオキシドの共重合体の分子量に
付加したメルカプトアルキルアミンの分子量とその付加
した数の積、および、付加したメルカプト脂肪酸の分子
量とその付加した数の積、をそれぞれ足して計算でき
る。反応率は１００％として計算した。
【００９９】（３）糖残基含有側鎖とカルボキシル基含
有側鎖を持つポリエチレングリコール誘導体（Sugar-PE
G-A/C）の製造 （２）で得られたPEG-A/Cと糖ラクトンを乾燥DMFに溶か
し、６０〜８０℃で１．５〜４時間反応させる。ゲルろ
過、凍結乾燥または溶媒の減圧除去によって、糖残基含
有側鎖とカルボキシル基含有側鎖を持つPEG誘導体が得
られる。糖ラクトンのPEG-A/Cのアミノ基に対するモル
比は、１：１以上とするとよい。得られたSugar-PEG-A/
Cの分子量は、NMR等で糖側鎖の数を定量することにより
PEG-A/Cの分子量を元に計算することができる。すなわ
ち、付加した糖の数と、糖が一つ付加することによって
増える分子量との積を、PEG-A/Cの分子量に足して計算
できる。また、Sugar-PEG-A/Cの分子量は、適当な溶媒
のGPCを用いて、常法により、見積もることも出来る。
【０１００】Sugar-PEG-A/Cの塩を製造するには、以下
のようにすればよい。
【０１０１】（４）Sugar-PEG-A/Cの塩の製造 （３）で得られたSugar-PEG-A/Cを水に溶解し、ｐＨが
８〜１１になるまで希ＮａＯＨまたは希ＫＯＨ水溶液を
加えて中和する。得られた水溶液をそのまま凍結乾燥す
るか、溶媒を減圧除去する。
【０１０２】（５）グラフト共重合体の製造 グラフト共重合体は、市販の末端に反応性の官能基（ア
ミノ基またはカルボキシル基）を導入したポリエチレン
グリコールなどを、幹となるポリマーの官能基と、ジシ
クロヘキシルカルボジイミドなどを用いて結合させるこ
とによって合成できる。
【０１０３】１−２ 糖残基含有側鎖とカルボキシル基
含有側鎖を持つ共重合体の製造（第２法） （１）アリルグリシジルエーテルとエチレンオキシドと
の共重合体の製造 １−１の（１）に記載した方法でアリルグリシジルエー
テルとエチレンオキシドとの共重合体を製造する。
【０１０４】（２）カルボキシル基を側鎖に持つPEG誘
導体（PEG-C）の製造 １−１の（１）で得られたアリルグリシジルエーテルと
エチレンオキシドとの共重合体をメタノールに溶かし、
あらかじめメルカプト脂肪酸をメタノールに溶かしてお
いた溶液に攪拌しながら滴下し、２０〜６０℃で８〜７
２時間反応させる。水で希釈後、ゲルろ過によって精製
し、凍結乾燥してカルボキシル基を側鎖に持つPEG誘導
体 (PEG-C) を得る。得られたPEG-Cの分子量は、（１）
のアリルグリシジルエーテルとエチレンオキシドとの共
重合体の分子量を元に計算することができる。すなわ
ち、アリルグリシジルエーテルとエチレンオキシドの共
重合体の分子量に、付加したメルカプト脂肪酸の分子量
とその付加した数の積、をそれぞれ足して計算できる。
【０１０５】（３）糖残基含有側鎖とカルボキシル基含
有側鎖を持つポリエチレングリコール誘導体（Sugar-N-
PEG-C）の製造 （２）で合成したカルボキシル基を側鎖に持つPEG誘導
体（PEG-C）とアミノ基を持つ糖誘導体を適当な溶媒に
溶かし、ジシクロヘキシルカルボジイミド、または水溶
性カルボジイミドを加えて、室温〜４０℃で18〜40時間
反応させ、必要に応じて過剰量の酢酸ナトリウムを加え
て反応を停止させ、ゲルろ過で精製することにより、糖
側鎖とカルボキシル基側鎖を持つPEG誘導体が得られ
る。得られたSugar-N-PEG-Cの分子量は、カルボキシル
基を側鎖に持つPEG誘導体（PEG-C）の分子量を元に計算
することができる。すなわち、NMRスペクトルによりポ
リマー中の糖側鎖とカルボキシル側鎖の割合を定量し、
付加した糖の数と、糖が一つ付加することによって増え
る分子量との積を、PEG-Cの分子量に足して計算でき
る。また、Sugar-N-PEG-Cの分子量は、適当な溶媒のGPC
を用いて、常法により、見積もることも出来る。
【０１０６】Sugar-N-PEG-Cの塩を製造するには、以下
のようにすればよい。
【０１０７】（４）Sugar-N-PEG-Cの塩の製造 １−１の（４）に記載した方法でSugar-N-PEG-Cの塩を
製造する。
【０１０８】（５）グラフト共重合体の製造 グラフト共重合体は、市販の末端にアミノ基を導入した
ポリエチレングリコールなどを、幹となるポリマーのカ
ルボキシル基と、ジシクロヘキシルカルボジイミドなど
を用いて結合させることによって合成できる。
【０１０９】１−３ カルボキシル基含有側鎖を持つ共
重合体の製造 （１）アリルグリシジルエーテルとエチレンオキシドと
の共重合体の製造 １−１の（１）に記載した方法でアリルグリシジルエー
テルとエチレンオキシドとの共重合体を製造する。
【０１１０】（２）カルボキシル基を側鎖に持つPEG誘
導体（PEG-C）の製造 １−２の（２）に記載した方法でカルボキシル基を側鎖
に持つPEG誘導体（PEG-C）を製造する。得られたPEG-C
の分子量は、１−２の（２）に記載した方法で計算する
ことができる。
【０１１１】（３）PEG-Cの塩の製造 １−１の（４）に記載した方法において、Sugar-PEG-A/
Cの代わりにPEG-Cを用いてPEG-Cの塩を製造する。
【０１１２】（４）グラフト共重合体の製造 １−１の（５）に記載した方法と同様の方法により、グ
ラフト共重合体を製造する。
【０１１３】２．薬物送達システム ここでは、遺伝子と高分子キトサンの複合体をSugar-PE
G-A/C又はPEG-Cで被服した遺伝子治療用の薬物送達シス
テムを例にとって説明する。
【０１１４】キトサンは、主にエビやカニなどの甲殻類
の甲羅に含まれるキチン（Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサ
ミンがβ−１，４結合した多糖）のアセトアミド基を脱
アセチル化して得られる多糖類である。
【０１１５】本発明で使用する高分子キトサンは、希酸
に可溶な通常のキトサンで、１．０ｄｌ／ｇ以上の固有
粘度を有するものであればよく、起源、脱アセチル化度
等は特に限定されるものではない。固有粘度が上記より
も低い低分子キトサンでは、導入率が著しく低くなると
いう問題がある。
【０１１６】なお、本明細書において「固有粘度」と
は、例えば特開平１−１８５３０１号に記載された方法
に従って測定することができる。すなわち、キトサンを
これと同量の酢酸を用いて水に溶解し、この溶液と同量
の０．４Ｎ酢酸＋０．２Ｎ酢酸ナトリウムとを混合して
測定に用いる溶液を調製し、希釈には０．２Ｎ酢酸＋
０．１Ｎ酢酸ナトリウムを用い、３０℃の条件でウベロ
ーデ粘度計を用いて測定された値が固有粘度である。
【０１１７】本発明において、遺伝子は、導入するＤＮ
Ａが発現ベクターのプロモーター下流に連結されている
プラスミド（組み換えベクター）が好ましく用いられ
る。
【０１１８】遺伝子−キトサン複合体の形成は、両者の
溶液を０〜５０℃で１０分〜２４時間、好ましくは２０
〜３０℃で１〜４時間混合することにより得ることがで
きる。この時の両者の混合の比率は、遺伝子（例えば、
プラスミド）１塩基：キトサン中のグルコサミン単位＝
１：１〜１：２０とすることが好ましく、１：２〜１：
１０とすることがより好ましい。なお、両者の溶媒とし
ては、滅菌された超純水、緩衝液等が好ましく用いられ
る。プラスミド溶液用の溶媒は、ｐＨ５．５〜７．５に
調整しておくことが好ましい。
【０１１９】遺伝子−キトサン複合体をSugar-PEG-A/C
又はPEG-Cで被覆するには、遺伝子−キトサン複合体の
溶液にSugar-PEG-A/C又はPEG-Cの溶液を目的のカチオ
ン：アニオン比（キトサンのカチオンとSugar-PEG-A/C
又はPEG-Cのアニオンの電荷比）になるように、０〜５
０℃で５分〜２４時間、好ましくは２０〜３０℃で１０
〜６０分間混合する。カチオン：アニオン比は、１：
０．０１〜１：２０であるとよく、好ましくは１：０．
１〜１：１６であり、より好ましくは１：０．２〜１：
１０である。
【０１２０】カチオン：アニオン比は以下のようにして
計算することができる。 （（キトサンの重量／キトサン一繰り返し単位当たりの
平均分子量）Ｘ脱アセチル化度）：（（Sugar-PEG-A/C
又はPEG-Cの重量／（ポリマーの分子量／ポリマー一分
子当たりのカルボキシル基の数）） なお、Sugar-PEG-A/C又はPEG-Cの溶液の溶媒は、水また
は緩衝液であるとよく、好ましくはリン酸緩衝液であ
る。
【０１２１】本発明の好ましい態様においては、上記条
件で調製した遺伝子−キトサン複合体をSugar-PEG-A/C
又はPEG-Cで被覆したものを培養中の目的の細胞にその
まま添加して、細胞の培養温度で１〜１２時間静置して
上記複合体と細胞を十分接触させた後、血清を添加した
培地に交換して更に４〜４８時間培養することにより遺
伝子を細胞に導入する。培地中に血清を加えることによ
り、遺伝子発現率を高めることができる。
【０１２２】本発明で使用する血清成分は、細胞培養に
適したものであればよく、例えば牛胎児血清（ＦＢＳ）
などが好ましく用いられる。血清成分の培地中への添加
量は、０．１〜５０重量％が好ましく、２〜２０重量％
が更に好ましい。
【０１２３】本発明の共重合体の糖の種類を変えれば、
体内の様々な組織を標的として、治療用の遺伝子を始め
とする薬剤を運ぶキャリアーを設計することができる。
例えば、プルランには脳腫瘍指向性があること（Drug D
elivery System, Vol.5, No.4, 1990, pp.261-265）、
ラクトースは多種類の癌細胞に親和性があること（Bio
l. Cell, Vol. 47, 1983, pp95-110）、ガラクトースや
ラクトースは特にヘパトーマに親和性が高いこと（J. B
iol. Chem., Vol. 256, 1981, pp8878-8881）、メラノ
ーマはマルトースも認識すること（Naturwissenschafte
n Vol. 74, 1987,S.37）、マクロファージなどの免疫細
胞はマンノースを認識すること（Prog. Lipid. Res., V
ol. 31, 1992, pp345-372)などが知られており、これら
の情報を薬物送達システム用キャリアーおよび遺伝子導
入用キャリアーの設計に利用することができる。
【０１２４】さらに、本発明の薬物送達システム用キャ
リアーは、上記の高分子キトサンのようなポリカチオン
の他、スペルミン、ペプチド、カチオン性脂質、カチオ
ン性コレステロール誘導体、葉酸などを含んでもよい。
【０１２５】また、本発明の遺伝子導入用キャリアー
は、上記の高分子キトサンのようなポリカチオンの他、
スペルミン、ペプチド、カチオン性脂質、カチオン性コ
レステロール誘導体、葉酸などを含んでもよい。
【０１２６】本発明の共重合体により、従来の遺伝子−
キトサン複合体と比較して、遺伝子発現の活性が高く、
しかも細胞特異的な遺伝子のデリバリーを達成すること
が可能となった。また、本発明の共重合体を用いること
により、遺伝子−キトサン複合体の溶液中および血液を
始めとする体液中での凝集を抑制することができ、さら
に、製剤の水溶性を高めることもできる。
【０１２７】本発明の薬物送達システムは、遺伝子のみ
ならず、アンチセンス核酸やリボザイムなどの多くの核
酸誘導体にも応用できる技術であることから、遺伝子治
療のみならず、バイオテクノロジー分野での利用が考え
られる。
【０１２８】
【実施例】以下、本発明を実施例によって具体的に説明
する。なお、これらの実施例は、本発明を説明するため
のものであって、本発明の範囲を限定するものではな
い。
【０１２９】［実施例１］糖残基含有側鎖とカルボキシ
ル基含有側鎖を持つPEG誘導体（Mal-PEG-A/C, Lac-PEG-
A/C）の製造 ジエチレングリコール（56ｇ）と水酸化カリウム（1.2
ｇ）を予めリアクターに仕込み、窒素雰囲気下、約５０
mmHgで１時間、８５℃で脱水した後、アリルグリシジル
エーテル(AGE)とエチレンオキシド(EO)の混合物（モル
比１５：８５）を１００〜１２０℃で、約４００ｇ/h
の速さで滴下した。モノマーを加える量により、分子量
が制御される。アリルグリシジルエーテル(AGE)とエチ
レンオキシド(EO)を合わせて３０００ｇ添加後、すぐに
未反応モノマーを減圧下（２００mmHg）で除去した。ポ
リマーをリン酸で中和した後、減圧下、１００℃で１時
間乾燥させ、最後に８０℃でろ過した。得られたアリル
グリシジルエーテルとエチレンオキシドとの共重合体の
NMRスペクトルを図４に示す。
【０１３０】得られたアリルグリシジルエーテルとエチ
レンオキシドとの共重合体 (Mn : 7060、 Mw / Mn = 1.
05、 アリルグリシジルエーテル : エチレンオキシド
= 13.4 : 86.6) 2 gを4 mlのメタノールに溶かし、あら
かじめ、アミノエタンチオール1 g（関東化学株式会
社）とメルカプトプロピオン酸3 g（和光純薬工業株式
会社）を6 mlのメタノールに溶かしておいた溶液に攪拌
しながら滴下し、30℃で50時間反応させた。流水で３
日、純水で１日透析後、凍結乾燥し、アミノ基とカルボ
キシル基の両方を側鎖に持つPEG誘導体 (PEG-A/C) を得
た。収量1.1 g。アセチル化した生成物のNMRスペクトル
により計算したポリマー中のアミノ基とカルボキシル基
の割合は29 : 71であった。PEG-A/CのNMRスペクトルを
図５に示す。
【０１３１】次に、ラクトノラクトンまたはマルトノラ
クトンは文献に従って合成した（Polymer J., Vol. 17,
1985, 567 pp1985）。これらラクトン200 mgをPEG-A/C
200mgとを乾燥DMF 3 ml に溶かし70℃で2時間半反応さ
せた。ゲルろ過、凍結乾燥によって、糖残基含有側鎖と
カルボキシル基含有側鎖を持つPEG誘導体を得た。収量
146 〜 152 mg。NMRスペクトルによりすべてのアミノ基
に糖鎖が結合した誘導体(Lac-PEG-A/C及びMal-PEG-A/C)
であることが確認された。分子量10450、ポリマー1分子
あたりの糖鎖5.1個、COOH 12.6個。Lac-PEG-A/C及びMal
-PEG-A/CのNMRスペクトルをそれぞれ図６及び７に示
す。
【０１３２】アリルグリシジルエーテルとエチレンオキ
シドとの共重合体の分子量は、水酸基の滴定（JIS K-15
57 6.4 (1970)）で計算した。ポリマーの組成は２重結
合の滴定（JIS K-1557 6.7 (1970)）で計算した。分子
量分布は、GPC（溶媒THF）で調べた。その後の生成物の
分子量は、すべてそれを元にした計算値である。
【０１３３】［参考例１］カルボキシル基を側鎖に持つ
PEG誘導体(PEG-C9000)の製造 アリルグリシジルエーテルとエチレンオキシドとの共重
合体（Mn = 3260, Mw/Mn =1.05, 8.28 C=C group / pol
ymer molecule）２ｇを４ｍｌのメタノールに溶かした
ものを、３−メルカプトプロピオン酸（４ｇ）をメタノ
ール２ｍｌに溶かした溶液に室温で滴下した。４０℃で
７０時間放置後、メタノール/エーテル系で再沈を繰り
返し、さらにゲルろ過（セファデックスＧ-５０）によ
りポリマーを精製した。最後に凍結乾燥し、シロップ状
の PEG-C9000 (２．３ｇ)を得た。PEG-C9000のNMRスペ
クトルを図８に示す。
【０１３４】［実施例２］キトサンの製造 キトサンヒドロアセテート（焼津水産（株）製）をビン
に入れ、マグネチックスターラーで攪拌しながら、溶液
が透明になるまで、12N HClを添加した。得られた粉末
を凍結乾燥した。得られた塩酸キトサンの平均分子量
は、40,84および110 kDaであった。脱アセチル化度は約
85%であった。
【０１３５】［実施例３］キトサン / PEG誘導体 / プ
ラスミド複合体 における遺伝子発現 遺伝子・キトサン・PEG誘導体の３成分の複合体を作製
し、この複合体をマウス黒色腫細胞B16メラノーマと相
互作用させ、ルシフェラーゼ遺伝子の発現を確認した。 操作手順 (1) 複合体を導入する前日に、２４穴マルチプレート
に５×１０４cells/wellでB16細胞（JCRB細胞バンク）
をまき、２４時間インキュベートした。 (2) PBS(-)を１Ｎ ＨＣｌを用いて、ｐＨ6.5に調整し
た。 (3) ルシフェラーゼプラスミド7.5μＬ（Promega社、1
mg/mL）を先のＰＢＳ（-）135μＬに希釈し、15分間室
温で放置した。 (4) (3)に実施例２で製造したキトサン塩酸塩（平均分
子量40 kDa）の水溶液（2.95mg/mL）を7.5μＬ加え、数
回ピペッティングした後、15分間室温で静置した。 (5) (4)に、参考例１（PEG-C9000）および実施例１（M
al-PEG-A/C, Lac-PEG-A/C）で製造したPEG誘導体の溶液
（PEG誘導体40 mgをMilliQまたはＰＢＳ（-）1 mLに溶
かしたもの）を目的のカチオン：アニオン比になるよう
に加えて15分間静置した。ここではカチオン：アニオン
比＝1：0.5、1：1、1：2、1：4とした。ここで、カチオ
ン：アニオン比とは、具体的には、キトサンとPEG誘導
体の電荷のモル比である。カチオン：アニオン比は以下
のようにして計算した。 （（キトサンの重量／キトサン一繰り返し単位当たりの
平均分子量）Ｘ脱アセチル化度）：（（Sugar-PEG-A/C
又はPEG-C9000の重量／（ポリマーの分子量／ポリマー
一分子当たりのカルボキシル基の数）） (6) 静置している間に、１Ｎ ＨＣｌでｐＨ6.5に調整
した培地（10mM PIPES（SIGMA社）またはMOPS（SIGMA
社）、および10％血清（SIGMA社）を含む）を用意し、
各ウェル500μＬ入れておいた。 (7) 作成した複合体溶液をよくピペッティングした
後、3ウェルに加えた。 (8) 4時間、37℃、5％CO2-95% air下でインキュベート
した。 (9) 複合体を含んだ培地を除き、ＰＢＳ（-）で2〜3回
細胞表面を洗い、新たな培地を加えた。 (10) 24時間のインキュベート後、ＰＢＳ（-）で3回細
胞表面を洗った後、細胞溶解液（Promega社、Luciferas
e Assay Kit中の試薬）を100μＬずつ各ウェルに加え
た。15分ほど放置してから、セルスクレーパーを用いて
細胞を剥がし、エッペンに回収した。 (11) 遠心（12000rpm, 1 min）にかけてから、上清を
用いてLuciferase Assayを行った（Promega社、Lucifer
ase Assay Kitを使用）。
【０１３６】なお、Protein Assay を行う場合は、この
細胞溶解液をそのまま用いた。Protein Assay は、Bio-
Rad 社のProtein assay kitを用いて行った。
【０１３７】比較のために、PEG誘導体を添加しなかっ
たものについても遺伝子発現を調べた。
【０１３８】結果 結果を図１〜３に示す。ここで、図中の-/+の値はアニ
オン／カチオン比であり、具体的には、PEG誘導体のキ
トサンに対する電荷のモル比である。
【０１３９】図１について、PEG-C9000は、アニオン／
カチオン比依存的に発現を大きく向上させた。
【０１４０】図２については、Lac-PEG-A/Cの結果であ
り、発現活性はアニオン／カチオン比＝４において、発
現が一番高くなり、Lac-PEG-A/Cを加えていない場合と
比較して約１２倍近く発現が上がった。
【０１４１】図３については、Mal-PEG-A/Cの結果であ
り、発現活性はアニオン／カチオン比＝２において、発
現が一番高くなり、Mal -PEG-A/Cを加えていない場合と
比較して約８５倍近く発現が上がった。
【０１４２】［実施例4］ポリエチレンイミン / PEG誘
導体 / プラスミド コンプレックスにおける遺伝子発
現 遺伝子・ポリエチレンイミン・PEG誘導体の３成分の複
合体を作製し、この複合体をヒト肝癌細胞HepG2と相互
作用させ、ルシフェラーゼ遺伝子の発現を確認した。 操作手順 (1) コンプレックスを導入する前日に、９６穴マルチ
プレートに１×１０４cells/wellでHepG2細胞をまき、
２４時間インキュベートした。 (2) ルシフェラーゼプラスミド１００ngをDMEM培地
（−）４５μＬに溶解した溶液に、直鎖状ポリエチレン
イミン（Polyscience; 平均分子量25 kDa）のDMEM培地
（−）溶液を5μＬ加え、３０分間３７℃で静置した。
この時ポリエチレンイミンの溶液の濃度は、アニオン：
カチオン比が１：４になるように調整した。 (3) (2)に、実施例１で製造したPEG誘導体（Mal-PEG-A
/C, Lac-PEG-A/C）の溶液を目的のアニオン：カチオン
比になるように加え、さらに３０分間３７℃で静置し
た。ここで、アニオン：カチオン比とは、具体的には、
ポリエチレンイミンとPEG誘導体の電荷のモル比であ
る。 (4) 各ウェルに、作成したコンプレックス溶液５５μ
Ｌを加え、さらにクロロキンのDMEM溶液を、クロロキン
の最終濃度が２×１０−４Mになるように加えた。 (5) １０時間、37℃、5％CO2-95% air下でインキュベ
ートした。 (6) コンプレックスを含んだ培地を除き、ＰＢＳ（-）
で2〜3回細胞表面を洗い、新たな培地を加えた。 (7) ４０時間のインキュベート後、ＰＢＳ（-）で3回
細胞表面を洗った後、１wt−%のtritonX-100溶液で細胞
を溶解し、Luciferase Assay を行った。
【０１４３】結果 結果を図９、１０に示す。ここで、図中の-/+の値はア
ニオン／カチオン比であり、具体的には、PEG誘導体の
ポリエチレンイミンに対する電荷のモル比である。ま
た、図９および１０において、「タンパク質」とは、細
胞に含まれるすべてのタンパク質を意味する。「タンパ
ク質１ｍｇ当たりの相対ルシフェラーゼ活性」は、細胞
が生産するタンパク質のうちどれだけがこの遺伝子によ
るものかを表す値である。
【０１４４】図９については、Lac-PEG-A/Cの結果であ
り、発現活性はアニオン／カチオン比＝４において、発
現が一番高くなり、Lac-PEG-A/Cを加えていない場合と
比較して約３倍発現が上がった。
【０１４５】図１０については、Mal-PEG-A/Cの結果で
あり、発現活性はアニオン／カチオン 比＝８におい
て、発現が一番高くなり、Mal-PEG-A/Cを加えていない
場合と比較して約２倍発現が上がった。
【０１４６】［実施例５］アミノ基を持つ糖誘導体を用
いた糖側鎖とカルボキシル基側鎖を持つPEG誘導体（Gul
-N-PEG-C, Gal-N-PEG-C, Man-N-PEG-C）の製造 ［参考例１］と同様にして合成したカルボキシル基を側
鎖に持つPEG誘導体(PEG-C9000) （分子量8940、ポリマ
ー1分子あたりのCOOH 17.7個）100 mgとp-アミノフェニ
ルグルコシド１５mgを1 mlの純水に溶かし、水溶性カル
ボジイミド４０mgを加えた。さらに純水２mlを加えて、
室温で24時間反応させた。150 mgの酢酸ナトリウムを加
えて反応を停止させ、Sephacryl S-200でゲルろ過した
のち凍結乾燥した。得られたシロップを再び純水に溶解
し、アンバーライトB-120でイオン交換し、凍結乾燥し
て、グルコシド側鎖とカルボキシル基側鎖を持つPEG誘
導体を得た。収量45 mg。NMRスペクトルにより計算した
ポリマー中の糖側鎖とカルボキシル側鎖の割合は19：81
であった。
【０１４７】同様にして、p-アミノフェニルグルコシド
の代わりにp-アミノフェニルガラクトシドを用いて、ガ
ラクトシド側鎖とカルボキシル基側鎖を持つPEG誘導体
を得た。収量14 mg。NMRスペクトルにより計算したポリ
マー中の糖側鎖とカルボキシル側鎖の割合は26：74であ
った。
【０１４８】また、同様に、p-アミノフェニルグルコシ
ドの代わりにp-アミノフェニルマンノシドを用いて、マ
ンノシド側鎖とカルボキシル基側鎖を持つPEG誘導体を
得た。収量52mg。NMRスペクトルにより計算したポリマ
ー中の糖側鎖とカルボキシル側鎖の割合は23：77であっ
た。
【０１４９】グルコシド側鎖とカルボキシル基側鎖を持
つPEG誘導体のNMRスペクトルを図１１〜１３に示す。図
１１、１２および１３は、それぞれ、Gul-N-PEG-C、Gal
-N-PEG-CおよびMan-N-PEG-CのNMRスペクトルを示す。
【０１５０】
【発明の効果】本発明により、従来の遺伝子−キトサン
複合体と比較して、遺伝子発現の活性が高く、しかも細
胞特異的な遺伝子のデリバリーを達成することができ
る。
【０１５１】また、本発明により、従来の遺伝子−ポリ
エチレンイミン複合体と比較して、遺伝子発現の活性が
高く、しかも細胞特異的な遺伝子のデリバリーを達成す
ることができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】PEG-Cにおけるアニオン／カチオン比の影響を
示すグラフ。
【図２】Lac-PEG-A/Cにおけるアニオン／カチオン比の
影響を示すグラフ。
【図３】Mal-PEG-A/Cにおけるアニオン／カチオン比の
影響を示すグラフ。
【図４】アリルグリシジルエーテルとエチレンオキシド
との共重合体のNMRスペクトル。
【図５】PEG-A/CのNMRスペクトル。
【図６】Lac-PEG-A/CのNMRスペクトル。☆を付したHの
スペクトルは、糖残基の-CH(OH)-の下線部のHのスペク
トルと一部重なっている。
【図７】Mal-PEG-A/CのNMRスペクトル。☆を付したHの
スペクトルは、糖残基の-CH(OH)-の下線部のHのスペク
トルと一部重なっている。
【図８】PEG-C9000のNMRスペクトル。
【図９】Lac-PEG-A/Cにおけるアニオン／カチオン比の
影響を示すグラフ。
【図１０】Mal-PEG-A/Cにおけるアニオン／カチオン比
の影響を示すグラフ。
【図１１】Gul-N-PEG-CのNMRスペクトル。
【図１２】Gal-N-PEG-CのNMRスペクトル。
【図１３】Man-N-PEG-CのNMRスペクトル。
フロントページの続き (56)参考文献 特開 平８−48763（ＪＰ，Ａ) 特開 平８−48764（ＪＰ，Ａ) 特開 平８−291217（ＪＰ，Ａ) 特開2002−128889（ＪＰ，Ａ) 特開 平８−85704（ＪＰ，Ａ) 特表2001−525470（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C08G 65/329 - 65/337 A61K 47/30 - 47/42 A61K 48/00 C12N 15/00 - 15/90 ＣＡ（ＳＴＮ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)

Claims (10)

    (57)【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 下記の一般式(I)、(II)及び(III)で表さ
    れる構造単位を含む分子量１０００〜２０００００の共
    重合体又はその塩。 【化１】 【化２】 【化３】 （ただし、一般式(I)中のR1は下記の一般式(C)または
    (D)で表される基であり、一般式(II)中のR2は下記の一
    般式(B)、(D)または(E)で表される基であり、一般式(I
    I)中のR3は糖残基を表し、単位(I)、(II)及び(III)のそ
    れぞれのモル％は、(I)＝１〜９８、(II)＝１〜９８、
    (III)＝１〜９８である。）＊−(CH 2 ) n −S−(CH 2 ) p −NH− (B) （ここで、nは、２〜８の整数であり、pは１〜８の整数
    であり、＊はエチレンオキシド側またはその反対側のど
    ちらに結合する位置であってもよい。） ＊−(CH 2 ) m −S−(CH 2 ) p − (C) （ここで、mは２〜８の整数であり、pは１〜８の整数で
    あり、＊はエチレンオキシド側またはその反対側のどち
    らに結合する位置であってもよい。） 【化４】 （ここで、mは２〜８の整数であり、rは０〜７の整数で
    あり、sは０〜７の整数であり、tは０〜４の整数であ
    り、R S はアミノ基、カルボキシル基または糖残基であ
    り、＊はエチレンオキシド側またはその反対側のどちら
    に結合する位置であってもよい。） 【化５】 （ここで、mは２〜８の整数であり、rは０〜７の整数で
    あり、sは０〜７の整数であり、＊はエチレンオキシド
    側またはその反対側のどちらに結合する位置であっても
    よい。）
  2. 【請求項２】 アリルグリシジルエーテル及びエチレン
    オキシドを重合させた後、得られた共重合体にメルカプ
    トアルキルアミンとメルカプト脂肪酸の混合物を添加し
    て反応させることにより、アミノ基含有側鎖とカルボキ
    シル基含有側鎖を持つ共重合体を得、次いで、得られた
    アミノ基含有側鎖とカルボキシル基含有側鎖を持つ共重
    合体を糖ラクトンと反応させることを特徴とする、糖残
    基含有側鎖とカルボキシル基含有側鎖を持つ、分子量１
    ０００〜２０００００の共重合体の製造方法。
  3. 【請求項３】 アリルグリシジルエーテル及びエチレン
    オキシドを重合させた後、得られた共重合体にメルカプ
    ト脂肪酸を添加して反応させることにより、カルボキシ
    ル基含有側鎖を持つ共重合体を得、次いで、得られたカ
    ルボキシル基含有側鎖を持つ共重合体を、アミノ基を有
    する糖誘導体と反応させることを特徴とする、糖残基含
    有側鎖とカルボキシル基含有側鎖を持つ、分子量１００
    ０〜２０００００の共重合体の製造方法。
  4. 【請求項４】 請求項１記載の共重合体又はその塩を含
    む、薬物送達システム用キャリアー。
  5. 【請求項５】 さらに、カチオン性の高分子を含む請求
    項４記載の薬物送達システム用キャリアー。
  6. 【請求項６】 薬剤及び請求項１記載の共重合体又はそ
    の塩を含む、薬物送達製剤。
  7. 【請求項７】 さらに、カチオン性の高分子を含む請求
    項６記載の薬物送達製剤。
  8. 【請求項８】 請求項１記載の共重合体又はその塩を含
    む、遺伝子導入用キャリアー。
  9. 【請求項９】 さらに、カチオン性の高分子を含む請求
    項８記載の遺伝子導入用キャリアー。
  10. 【請求項１０】 カチオン性の高分子がキトサンである
    請求項９記載の遺伝子導入用キャリアー。
JP2002343256A 2001-11-28 2002-11-27 医用高分子及びその用途 Expired - Fee Related JP3493608B2 (ja)

Priority Applications (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2002343256A JP3493608B2 (ja) 2001-11-28 2002-11-27 医用高分子及びその用途
EP02785959A EP1439199A4 (en) 2001-11-28 2002-11-28 MEDICAL POLYMERS AND THEIR USE
AU2002354070A AU2002354070A1 (en) 2001-11-28 2002-11-28 Medical polymers and use thereof
US10/469,136 US20040097659A1 (en) 2001-11-28 2002-11-28 Medical polymers and uses thereof
PCT/JP2002/012420 WO2003046047A1 (fr) 2001-11-28 2002-11-28 Polymeres medicaux et leur utilisation
US10/859,598 US7550512B2 (en) 2001-11-28 2004-06-03 Medical polymers and uses thereof

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2001-362482 2001-11-28
JP2001362482 2001-11-28
JP2002343256A JP3493608B2 (ja) 2001-11-28 2002-11-27 医用高分子及びその用途

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JP2003231748A JP2003231748A (ja) 2003-08-19
JP3493608B2 true JP3493608B2 (ja) 2004-02-03

Family

ID=26624735

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2002343256A Expired - Fee Related JP3493608B2 (ja) 2001-11-28 2002-11-27 医用高分子及びその用途

Country Status (5)

Country Link
US (1) US20040097659A1 (ja)
EP (1) EP1439199A4 (ja)
JP (1) JP3493608B2 (ja)
AU (1) AU2002354070A1 (ja)
WO (1) WO2003046047A1 (ja)

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ATE464913T1 (de) 2003-09-29 2010-05-15 Nitto Denko Corp Biologisch abbaubare polyacetale für die in-vivo- abgabe von polynucleotiden
JP5189243B2 (ja) * 2005-01-14 2013-04-24 旭化成株式会社 薬物複合体および薬物送達用担体
JP5092123B2 (ja) * 2005-02-28 2012-12-05 国立大学法人 熊本大学 遺伝子導入剤
US7674452B2 (en) 2005-03-16 2010-03-09 Nitto Denko Corporation Polymer coating of cells
JP4962931B2 (ja) * 2005-11-16 2012-06-27 公立大学法人大阪府立大学 ポリアミドアミンデンドロン脂質を含む遺伝子等運搬媒体組成物
JP4978949B2 (ja) * 2006-03-31 2012-07-18 国立大学法人 東京大学 感光性樹脂及び感光性組成物並びに光架橋体
US20090130761A1 (en) * 2006-05-17 2009-05-21 Yoshiyuki Koyama Freeze-Dried Product for Introducing Nucleic Acid, Oligonucleic Acid or Derivative Thereof
JP5561351B2 (ja) * 2012-12-27 2014-07-30 日本ゼオン株式会社 ポリエーテル系重合体
CN104479126B (zh) * 2013-12-02 2016-10-05 天津键凯科技有限公司 多臂聚乙二醇硬脂酸衍生物和油酸衍生物

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP3537525B2 (ja) * 1994-05-31 2004-06-14 日本油脂株式会社 アミノ基含有ポリオキシアルキレン化合物
JP3565608B2 (ja) * 1994-05-31 2004-09-15 日本油脂株式会社 カルボキシル基含有ポリオキシアルキレン化合物
US6228998B1 (en) * 1994-07-22 2001-05-08 Seikagaku Kogyo Kabushiki Kaisha Amino spacered glycosaminoglycan derivatives and their use in copolymerization with acrylamide
JP3537550B2 (ja) * 1995-02-24 2004-06-14 日本油脂株式会社 カルボキシル基含有ポリオキシアルキレン化合物
IL136680A0 (en) * 1997-12-12 2001-06-14 Macromed Inc Heterofunctionalized star-shaped poly(ethylene glycols) for protein modification
HU228491B1 (en) * 1999-10-08 2013-03-28 Nektar Therapeutics Heterobifunctional poly(ethylene glycol) derivatives and methods for their preparation
JP4837166B2 (ja) * 2000-10-25 2011-12-14 堺化学工業株式会社 メルカプト脂肪酸とポリオキシアルキレン化合物とのエステルおよびその製造方法

Also Published As

Publication number Publication date
JP2003231748A (ja) 2003-08-19
US20040097659A1 (en) 2004-05-20
AU2002354070A1 (en) 2003-06-10
EP1439199A1 (en) 2004-07-21
EP1439199A4 (en) 2005-08-03
WO2003046047A1 (fr) 2003-06-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Muddineti et al. Cholesterol-grafted chitosan micelles as a nanocarrier system for drug-siRNA co-delivery to the lung cancer cells
Jain et al. A new horizon in modifications of chitosan: syntheses and applications
Nam et al. Target gene delivery from targeting ligand conjugated chitosan–PEI copolymer for cancer therapy
Zhang et al. Designing polymers with sugar-based advantages for bioactive delivery applications
Khan et al. Polysaccharide gene transfection agents
Kumar et al. An insight to pullulan: a biopolymer in pharmaceutical approaches
Schatz et al. Polysaccharide‐containing block copolymers: synthesis, properties and applications of an emerging family of glycoconjugates
US7001891B1 (en) Biodegradable polycation composition for delivery of an anionic macromolecule
Li et al. 21-Arm star polymers with different cationic groups based on cyclodextrin core for DNA delivery
Tabujew et al. Functionalization of cationic polymers for drug delivery applications
MXPA04005194A (es) Compolimero soluble en agua policationico y metodo para transferir macromoleculas polianionicas a traves de barreras biologicas.
EP2070970B1 (en) Transfection Reagent
Askarian et al. PAMAM-pullulan conjugates as targeted gene carriers for liver cell
JP6606490B2 (ja) 二重誘導体化キトサンナノ粒子、並びに生体内での遺伝子導入のためのその製造、及び使用方法
Hu et al. Gene delivery of PEI incorporating with functional block copolymer via non-covalent assembly strategy
JP3493608B2 (ja) 医用高分子及びその用途
EP3284474B1 (en) Polyion complex of poly(l-arginine) segment-containing block copolymer and polyanionic polymer
Liu et al. TAT-functionalized PEI-grafting rice bran polysaccharides for safe and efficient gene delivery
Cavallaro et al. Smart inulin-based polycationic nanodevices for siRNA delivery
EP3568404A1 (en) Star-like (guanidyl)x-oligosaccharidic compounds and conjugates or complexes thereof
US7550512B2 (en) Medical polymers and uses thereof
EP2907876B1 (en) Reduction stimuli-responsive gene vector system and preparation and use thereof
WO2005094894A1 (ja) 細胞に核酸を導入するための製剤
Gupta et al. Delivery of genetic materials for the management of biological disorders: advancement and roles of polysaccharides and their derivatives
JP2004107272A (ja) 遺伝子治療剤

Legal Events

Date Code Title Description
R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20081121

Year of fee payment: 5

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20091121

Year of fee payment: 6

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20101121

Year of fee payment: 7

LAPS Cancellation because of no payment of annual fees