PT1455839E - Derivados de poli(etilenoglicol) heterobifuncionais e seus métodos de preparação - Google Patents
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Description
1
DESCRIÇÃO
"DERIVADOS DE POLI(ETILENOGLICOL) HETEROBIFUNCIONAIS E SEUS MÉTODOS DE PREPARAÇÃO"
CAMPO DA INVENÇÃO A invenção relaciona-se com derivados de (polietilenoglicol) heterobifuncionais e com métodos para a sua preparação.
FUNDAMENTO DA INVENÇÃO A ligação covalente do polimero poli (etilenoglicol) hidrofilico, abreviado (PEG), também conhecido como poli (óxido de etileno), abreviado (PEO), a moléculas e superfícies tem aplicações importantes em biotecnologia e medicina. Na sua forma mais comum, o PEG é um polimero linear possuindo grupos hidroxilo em cada extremidade:
HO-CH2-CH20 (CH2CH2O) nCH2CH2-OH
Esta fórmula pode ser representada de forma abreviada como HO-PEG-OH, em que é entendido que -PEG- representa a cadeia principal do polimero sem os grupos terminais: -PEG- é igual a -CH2CH20 (CH2CH20) nCH2CH2- PEG é comummente usado como metoxi-PEG-OH, ou mPEG abreviadamente, em que uma extremidade é o grupo metoxi relativamente inerte, enquanto que a outra extremidade é um grupo hidroxilo que é sujeito a pronta modificação quimica.
CH3O- (CH2CH20)n-CH2CH2-0H 2 É entendido por aqueles peritos na técnica que o termo poli(etilenoglicol) ou PEG representa ou inclui todas as formas acima e ainda outras.
Os copolimeros de óxido de etileno e óxido de propileno estão intimamente relacionados com o PEG na sua química, e podem ser substituídos por PEG em muitas das suas aplicações. HO-CH2CHRO (CH2CHRO) nCH2CHR-OH R= H e CH3 0 PEG é um polímero útil possuindo a propriedade de solubilidade em água bem como a solubilidade em vários solventes orgânicos. 0 PEG é também não tóxico e não imunogénico. Quando o PEG está quimicamente ligado a um composto insolúvel em água, o conjugado resultante é geralmente solúvel em água assim como solúvel em muitos solventes orgânicos. Quando a molécula à qual o PEG está ligado é biologicamente ativa, tal como um fármaco, esta atividade é comummente retida após ligação do PEG e o conjugado poderá exibir farmacocinéticas alteradas. Por exemplo, Bentley et al. em Polymer Preprints, 38(1), 584 (1997) demonstraram que a antemisinina insolúvel em água se torna solúvel em água e exibe atividade anti-malária aumentada quando acoplada a PEG. Davis et al., na Patente U.S. N°. 4,179,337 demonstraram que as proteínas acopladas a PEG aumentaram o tempo de vida da circulação sanguínea devido à reduzida depuração renal e à imunogenicidade reduzida. A falta de toxicidade de PEG e a sua rápida eliminação do corpo são vantajosas para as aplicações farmacêuticas.
As aplicações da química de PEG tornaram-se mais sofisticadas, houve uma necessidade aumentada de PEGs 3 heterobifuncionais, isto é de PEGs que suportam grupos terminais diferentes:
X-PEG-Y em que X e Y são grupos diferentes. Os PEGs possuindo grupos éster na cadeia principal e grupos terminais, X e Y:
X-PEG-C02-PEG-Y podem ser considerados sendo heterobifuncionais mesmo se X e Y forem 0 mesmo, uma vez que cada unidade PEG na estrutura principal se j a substituída de forma não simétrica.
Tais PEGs heterobifuncionais que suportam grupos funcionais adequados poderão ser utilizados para ligar os PEGs a superfícies ou outros polímeros, tais como polissacáridos ou proteínas, com a outra extremidade ligada, por exemplo, a um fármaco, um lipossoma, outra proteína, ou a um biossensor. Se uma extremidade estiver ligada a um polímero, e a outra extremidade estiver ligada a um grupo funcional adequado, pode ocorrer reticulação para formar um hidrogel útil. A WO 1999/034833 AI revela acrilatos de poli(etilenoglicol) e géis e seus derivados conjugados heterobifuncionais degradáveis.
Utilizando os métodos existentes, no entanto, os PEGs heterobifuncionais são muitas vezes difíceis ou impossíveis de preparar com elevada pureza. Por exemplo, pode realizar-se a reação adiante, utilizando equivalentes molares de cada reagente com o objetivo de preparar o produto PEG acetal heterobifuncional mostrado: 4 HO-PEG-OH + C1CH2CH (OC2H5) 2 + NaOH _► -► HO-PEG-OCH2CH (OC2H5) 2 +NaCl+H20
Na prática, no entanto, algum do PEG dietilacetal dissubstituído, (C2H5O) 2CH2O-PEG-OCH2CH (OC2H5) 2 é também inevitavelmente formado e algum PEG que não reagiu deverá também permanecer. Será requerida a cromatografia tediosa para separar esta mistura. A abordagem cromatográfica foi utilizada por Zalipsky (Bioconjugate Chemistry, 4: 296-299, 1993) para purificar os seguintes derivados heterobifuncionais de PEG:
HO-PEG-CONHCH2CO2H a partir de uma mistura de produtos reacionais contendo também PEG por reagir e o derivado de ácido carboxilico dissubstituido.
Em certas aplicações, é essencial que esteja presente o minimo de HO-PEG-OH em PEGs monoalquilados utilizados para preparar PEGs ativados monofuncionais, uma vez que a presença de HO-PEG-OH irá conduzir a derivados PEG duplamente ativados que irão resultar em produtos reticulados ou que possuem outros efeitos indesejáveis. De facto, o HO-PEG-OH é um contaminante comum em PEGs monoalquilados. A abordagem cromatográfica foi revelada na Patente U.S. N°. 5,298,410 para separar CH3O-PEG-OH de HO-PEG-OH através da formação de tritil(Ph3C-derivados), separando os derivados cromatograficamente, e removendo o grupo tritilo a partir de CH30-PEG-0CPh3. Num pedido recente de patente, Suzawa, et al. (W096/35451) revelaram PEG benzilico (C6H5-CH2-OPEG-OH) como um intermediário na preparação de um PEG heterobifuncional que suporta um grupo 5 numa extremidade possuindo afinidade para uma célula alvo e possuindo uma toxina na outra extremidade. 0 PEG benzilico, no entanto, foi preparado por benzilação de PEG, seguida por laboriosa cromatografia de gradiente extensivo para separar o PEG benzilado a partir de PEG dibenzilico e PEG que não reagiu. 0 procedimento foi feito numa escala pequena com um rendimento de apenas 7,8%. 0 método tem assim pouco valor para produção comercial útil.
Uma segunda estratégia, a abordagem de polimerização, para preparação de PEGs heterobifuncionais envolve a polimerização aniónica de óxido de etileno num anião, X que em última instância se torna o grupo terminal do polimero: 0 zx
-► X- (CH2CH20-)n--► X-(CH2CH20-)n H
+ H X + η 1 -X- (CH2CH20-) n" necessário também aumenta.
Este método foi utilizado por Yokoyama, el al. (Bioconjugate Chemistry, 3: 275-276, 1992) para preparar um PEG com um grupo hidroxilo numa extremidade e um grupo amino na outra. Cammas, el al. (Bioconjugate Chemistry, 6: 226-230, 1995) utilizaram este método para preparar PEGs com um grupo amino numa extremidade e um grupo hidroxilo ou metóxi na outra. Foi também utilizado por Nagasaki, et al. (Biocojugate Chemistry, 6: 231-233, 1995) para preparar um PEG possuindo um grupo formilo numa extremidade e um grupo hidroxilo na outra. Este método geralmente útil apenas se X for um grupo adequado e desejado no qual se inicia a polimerização: frequentemente este não é o caso. Também, a aplicação com sucesso deste método requer a exclusão rigorosa de água para prevenir a formação de HOPEG-OH, e este problema torna-se mais grave à medida que o peso molecular aumenta. É também necessário controlar 6 cuidadosamente o grau de polimerização de modo a se obter o peso molecular do derivado de PEG. Este método é limitado pela degradação de muitos tipos de moléculas de fármaco sob as condições drásticas da polimerização se a polimerização do óxido de etileno for conduzida diretamente na molécula de fármaco. 0 método é também limitado pela falta de seletividade se estiver presente mais do que um grupo funcional no qual a polimerização possa ocorrer.
Seria desejável providenciar métodos adicionais para preparação de PEGs heterobifuncionais que eliminem substancialmente pelo menos alguns dos problemas e desvantagens dos métodos prévios.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
No âmbito definido pelas reivindicações anexas, esta invenção providencia um método para preparar derivados de poli(etilenoglicol) heterobifuncionais através de um intermediário PEG que suporta um grupo removivel numa extremidade. Os derivados de PEG da classe, W-PEG-OH, em que W é um grupo removivel através de métodos químicos suaves, são providenciados e primeiro, alterados através da modificação do grupo OH num grupo desejado, X seguido de remoção de W para gerar um segundo grupo hidroxilo. 0 último grupo hidroxilo poderá em seguida ser alterado adicionalmente num segundo grupo funcional Y, providenciando assim o PEG heterobifuncional desejado:
W-PEG-OH -► W-PEG-X-► HO-PEG-X -► Y-PEG-X
Um exemplo de grupo (C6H5CH2-O-) , embora arilmetilo incluindo 3-metilbenzilo, removível preferido é o possam ser utilizados , mas não limitados a, 4-clorobenzilo, grupo benziloxi outros grupos 4-metilbenzilo, -metoxibenzilo, 7 difenilmetilo, trifenilmetilo, ou 1-naftilmetilo. Os grupos diarilmetilo e diarilmetilo serão também utilizáveis. 0 benziloxi-PEG-OH (BzO-PEG-OH) , por exemplo, poderá ser preparado com elevada pureza através de polimerização de óxido de etileno no ião benziloxido, BzO . Através da condução da reação sob condições anidras cuidadosamente controladas, pode ser preparado o produto derivado heterobifuncional, com uma quantidade minima de HO-PEG-OH. Uma vantagem do grupo benzilo e de outros grupos arilmetilo é que podem ser removidos do PEG sob condições relativamente moderadas por hidrogenólise ou através de hidrólise catalisada por ácido.
BzO-PEG-X + H2 (cat) _^ C6H5-CH3 + HO-PEG-X
BzO-PEG-X + H20 (H+) -► C6H5CH2OH + HO-PEG-X
Nas reações acima, cat é um catalisador tal como paládio sobre carbono.
Numa concretização da invenção, o método é utilizado conjugando PEG ou polímeros relacionados a macromoléculas tais como proteínas, lípidos, polissacáridos, ou outros polímeros ou superfícies. Primeiro, o grupo hidroxilo do polímero intermediário BzO-PEG-OH é convertido num primeiro grupo funcional reativo. Este grupo funcional reativo permite a ligação do BzO-PEG- a uma macromolécula. O grupo benzilo é em seguida removido por hidrogenólise ou hidrólise, sem afetar quimicamente a macromolécula, tornando assim disponível um novo grupo hidroxilo terminal no derivado de PEG. Este novo grupo hidroxilo poderá ser utilizado diretamente para ligar essa extremidade do derivado de PEG à mesma ou a outra macromolécula. Alternativamente, o grupo hidroxilo poderá ser convertido adicionalmente num segundo grupo funcional reativo, que é em seguida utilizado para ligar o derivado de PEG a uma macromolécula. Se o segundo grupo funcional reativo estiver ligado a outro polimero, poderá ser gerado um polimero reticulado útil como um hidrogel. 0 esquema reacional poderá ser ilustrado de uma forma geral como se segue: (1) BzO-PEG-OH _p. BzO-PEG-X (X= grupo funcional reativo) (2) BzO-PEG-X -► BzO-PEG-M, (Mi= uma macromolécula, e.g., superfície, fármaco, proteína, ou polímero.) (3) BzO-PEG-Mi + H2 (Pd/C) -► BzH + HO-PEG-Mi
OU
BzO-PEG-Mi + H20/H+ -► BzOH + HO-PEG-Mi (4) HO-PEG-Mi -► M2-PEG-Mi (M2 = uma macromolécula, e.g., superfície, fármaco, proteína, ou polímero, ou um sítio diferente em Mi.)
Se desejado, a ordem da sequência reacional pode ser manipulada para evitar a destruição de um grupo químico sensível à hidrogenação ou hidrólise:
(1) Bz-PEG-OH -► BzO-PEG-X (2) BzO-PEG-X -► BzO-PEG-M2 (M2= fármaco, superfície, polímero ou outro grupo não sensível à hidrogenação ou hidrólise.) (3) BzO-PEG-M2 + H2 (Pd/C) -+ BzH (ou BzOH) + HO-PEG-M2
OU > BzH (ou BzOH) + HO-PEG-M2
BzO-PEG-M2 + H20/H+ - 9 (4) HO-PEG-M2 -►M1-PEG-M2 (Mi= fármaco, superfície, polímero ou outro grupo sensível à hidrogenação ou hidrólise.)
Noutra concretização da invenção, é revelado um método de inibir a reatividade de HO-PEG-OH numa mistura de W-O-PEG-OH e HO-PEG-OH. Nesta abordagem, a alquilação de W-O-PEG-OH contendo HO-PEG-OH produz uma mistura de W-O-PEG-OR e R0-PEG-OR, em que R é um grupo alquilo.
BzO-PEG-OH + HO-PEG-OH + R-X -► BzO-PEG-OR + R0-
PEG-OR + HX X é um grupo de saída tal como mesilato ou tosilato. A hidrogenação catalítica converte o BzO-PEG-OR em RO-PEG-OH.
BzO-PEG-OR + RO-PEG-OR + H2 (Pd/C) -► RO-PEG-OH +
RO-PEG-OR + BzH
Assim, é produzida uma mistura de RO-PEG-OH e RO-PEG-OR.
Contrariamente a HO-PEG-OH, o RO-PEG-OR é inerte e não reativo. Assim, a mistura é equivalente a um produto puro de RO-PEG-OH na maioria das reações químicas.
Os objetivos que se seguem e outros, vantagens, e características da invenção, e o modo pelo qual são atingidos, tornar-se-ão mais prontamente aparentes através da consideração da seguinte descrição detalhada da invenção. 10
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
Esta invenção providencia um método para preparação, com elevada pureza e rendimento elevado, derivados de poli (etilenoglicol) heterobifuncionais ou polímeros relacionados. Não é necessário um passo de purificação cromatográfico no método. De acordo com o método da invenção, é providenciado um polímero intermediário tendo uma fórmula de W-Poli-OH que suporta um grupo removível W numa extremidade. O polímero intermediário W-Poli-OH é primeiro alterado por modificação do grupo OH para um primeiro grupo funcional X, seguido pela remoção de W para gerar um segundo grupo hidroxilo. O último grupo hidroxilo poderá seguidamente ser convertido adicionalmente a um segundo grupo funcional Y, providenciando assim o derivado heterobifuncional desejado:
W-Poli-OH _► W-Poli-X _►HO-Poli-X _► Y-Poli-X
Na discussão abaixo, Poli será frequentemente referido por conveniência como PEG ou como poli(etilenoglicol). Contudo, deve ser entendido que os polímeros relacionados como definido nas reivindicações apensas são também apropriados para uso na prática da invenção e que o uso do termo PEG ou poli (etilenoglicol) é entendido ser inclusivo e não exclusivo a este respeito. O poli(etilenoglicol) ou PEG é útil em aplicações biológicas porque este tem propriedades que são altamente desejáveis e é geralmente aprovado para aplicações biológicas ou biotecnológicas. O PEG tipicamente é claro, incolor, inodoro, solúvel em água, estável ao calor, inerte a vários agentes químicos, não hidrolisa ou se deteriora, e é não tóxico. O poli(etilenoglicol) é considerado ser biocompatível, o quer dizer que PEG é capaz da coexistência 11 com tecidos vivos ou organismos sem causar danos. Mais especif icamente, PEG não é imunogénico, o quer dizer que PEG não tende a produzir uma resposta imune no organismo. Quando ligado a uma unidade possuindo alguma função desejável no organismo, o PEG tende a mascarar a unidade e pode reduzir ou eliminar qualquer resposta imunitária de modo a que um organismo possa tolerar a presença da unidade. Concordantemente, o derivado heterobifuncional da invenção deve ser substancialmente não tóxico e não deve tender substancialmente para produzir uma resposta imune ou causar coagulação ou outros efeitos indesejáveis. 0 PEG possuindo a fórmula -CH2CHO2- (CH2CH20) η-ΟΗ2ΟΗ2-, em que n é desde cerca de 8 a cerca de 4000, é um polímero útil na prática da invenção. Também são apropriados para a presente invenção outros polímeros não peptídicos solúveis em água, disfuncionais distintos de PEG como definido nas reivindicações apensas. Estes outros polímeros incluem outros poli(óxidos de alquileno) tal como poli(propileno glicol) ("PPG") e semelhantes; e poli(póliois oxietilados) tais como poli(glicerol oxietilado) , poli(sorbitol oxietilado), e poli(glucose oxietilado). Os polímeros podem ser homopolímeros ou copolímeros aleatórios ou de blocos e terpolímeros baseados nos monómeros dos polímeros acima, de cadeia linear ou ramificada. e a e a sua 5 629 384
Um polímero adicional apropriado poli (acriloilmorfolina) difuncional ("PAcM"), síntese e uso são descritos na Patente U.S. Nos. e 5,631,322.
Os termos "grupo", "grupo funcional", "unidade", "unidade ativa", e "sítio reativo" são todos um tanto sinónimos nas técnicas químicas e são usados na técnica e aqui para referir porções ou unidades definíveis distintas de uma 12 molécula e para unidades que realizam alguma função ou atividade e são reativas com outras moléculas ou porções de moléculas. 0 termo "ligação" é usado para referir grupos que normalmente são formados como o resultado de uma reação quimica e tipicamente são ligações covalentes.
Deve ser entendido que por "fármaco" é entendido qualquer substância destinada para o diagnóstico, cura, mitigação, tratamento, ou prevenção de doenças em seres humanos e outros animais, ou de alguma forma melhorar o bem-estar fisico ou mental. 0 termo "macromolécula" é usado como significando moléculas grandes, mas não limitado a, lipido, polissacárido, proteínas, sequências de nucleótidos, fármacos, polímeros, etc. É frequentemente desejável conjugar os polímeros descritos acima para tais macromoléculas.
De acordo com a invenção, o grupo removível W pode ser removido do polímero W-Poli-X por reações químicas moderadas. Tais reações químicas podem ser realizadas em condições sob as quais outras unidades de polímero W-Poli-X, particularmente o primeiro grupo funcional X, não são modificados indesejavelmente. Preferencialmente W tem uma fórmula de Ar-C(Ri) (R2)-0- e que Ar representa uma unidade selecionada a partir do grupo consistindo de fenilo, fenilo substituído, bifenilo, bifenilo substituído, arilos policíclicos, arilos policíclicos substituídos, e arilos heterocíclicos, em que Ri e R2 são H, alquilo, ou Ar que é definido acima. Assim, exemplos exemplificativos do grupo removível W incluem, mas não estão limitados a, grupo benziloxi (C6H5CH2-0-), e outros grupos arilmetiloxi incluindo, mas não limitados a, 4-metilbenziloxi, 3- 13 metilbenziloxi, 4-clorobenziloxi, 4-metoxibenziloxi, difenilmetiloxi, trifenilmetiloxi, e 1-naftilmetiloxi. Os grupos arilmetiloxi podem ser removidos do polímero sob condições relativamente moderadas por hidrogenólise catalítica ou hidrólise catalisada por ácido.
De acordo com a invenção, o polímero intermediário de W-Poli-OH é preferencialmente sintetizado, e.g., por polimerização de monómeros de polímeros apropriados sobre o ião arilmetilóxido. Por exemplo, Benziloxi-PEG-OH (BzO-PEG-OH) poderá ser preparado com elevada pureza e rendimento elevado por polimerização do óxido de etileno no ião de óxido de benzilo BzO-. Preferencialmente, a reação de polimerização é conduzida sob condições anidras. De acordo com este aspeto da invenção, a produção de HO-PEG-OH é minimizada. Não é requerida purificação cromatográfica por gradiente extensivo, e o rendimento de BzO-PEG-OH é elevado. Isto está em contraste com a técnica antecedente do método de benzilação de PEG seguido por uma laboriosa cromatografia de gradiente extensivo, que inevitavelmente conduz a custos elevados e rendimentos baixos tornando o método de valor reduzido para produção comercial.
De acordo com a invenção, o produto final do derivado de poli(etilenoglicol) heterobifuncional ou polímeros relacionados têm uma fórmula de Y-Poli-X. 0 primeiro grupo funcional X e o segundo grupo funcional Y são unidades reativas que são capazes de reagir com outras moléculas para as quais os derivados de PEG são desejados para serem conjugados com e.g.. macromoléculas incluindo, mas não limitado a, proteínas, lípidos, polissacáridos, e outros polímeros. 0 primeiro grupo funcional X é selecionado a partir de mesilato; tosilato; tresilato; -0-(CH2) n-C02R3 em que n=l-6 14 e R3 é um grupo alquilo; -NHR4 onde R4 é H ou alquilo ou um grupo protetor de amina tal como t-Boc e Fmoc; -0-(CH2)n-CH(ZR5)2 em que n é um número de 1-6, Z é 0 ou S, R5 é H ou um grupo alquilo; arilos e heteroarilos; e -0-(CH2) n-CH0.
Os exemplos do segundo grupo funcional Y incluem, mas não estão limitados a, grupo hidroxilo; mesilato; tosilato; mesilato; -0- (CH2) n-C02H em que n= 1-6; -0-(CH2) n-C02R3 em que n= 1-6 e R3 é um grupo alquilo; -NHR4 em que R4 é H ou alquilo ou um grupo protetor de amina tal como t-Boc e Fmoc; -0-(CH2)-CH (ZR5) 2 em que n é um número de 1-6, Z é 0 ou S, R5 é H ou um grupo alquilo; Ar-CH=CH-CH=CH-C02- em que Ar representa uma unidade selecionada a partir do grupo consistindo de fenilo, fenilo substituído, bifenilo, bifenilo substituído, arilos policíclicos, arilos policíclicos substituídos, e arilos heterocíclicos; -0- (CH2)nCH0; -02CCH2CH2C02R6, em que R6 é H ou NHS que representa N-succinimidilo; e CH2=CH-C02”. Num derivado de poli (etilenoglicol) de fórmula Y-Poli-X, o primeiro grupo funcional X e o segundo grupo funcional Y são diferentes um do outro, garantido assim que o polímero seja heterobifuncional.
Preferencialmente, quando X é -0- (CH2) n-CH (ZR5) 2, em que n é um numero de 1-6, Z é 0 ou S, e R5 é H ou um grupo alquilo, Y é preferencialmente -02CCH2CH2C02R6 em que Rí é H ou NHS.
Embora o esquema reacional do método da presente invenção seja demonstrado acima nas equações: W-Poli-OH -► W-Poli-X -► HO-Poli-X -► Y-Poli-X' deve ser entendido que pode existir mais do um passo da reação química entre quaisquer dos dois produtos nas equações. Por exemplo, diversos passos reacionais sequenciais poderão ocorrer para converter o grupo hidroxilo terminal de W-Poli-OH no primeiro grupo funcional 15 X. Igualmente, poderão ser realizados diversos passos reacionais para modificar o novo grupo hidroxilo de H0-Poli-X para produzir um segundo grupo funcional Y.
Adicionalmente, numa concretização da invenção, antes do passo de remoção do grupo W removível, o polimero W-Poli-X pode ser ligado a uma macromolécula ou superfície através de uma ligação formada entre o primeiro grupo funcional reativo X e uma unidade apropriada na superfície da macromolécula, conjugando assim a porção W-Poli- do polímero com a macromolécula: W-Poli-Μι em que Mi é uma macromolécula tal como uma proteína, um péptido, lípido, fármaco, polissacárido, ou outros polímeros, ou uma superfície de uma substância, e.g., um microrganismo. 0 grupo W removível no conjugado W-Poli-Μι é em seguida removido por reações químicas moderadas tais como, e.g., hidrogenólise catalítica ou por hidrólise catalisada por ácido. 0 -OH resultante pode se feito reagir diretamente com, e.g., outra macromolécula M2 tal como uma proteína, um péptido, lípido, fármaco, polissacárido, ou outros polímeros, ou uma superfície de uma substância, e.g., um microrganismo para formar M2-Poli-Mi. Se não for desejada a conjugação de outra macromolécula, o grupo -OH pode ser opcionalmente convertido num grupo não reativo inerte, e.g., blindado por alquilação. Alternativamente, o grupo -OH resultante pode ser convertido num grupo funcional Y reativo como descrito acima: Y-Poli-Mi. 0 grupo funcional Y pode seguidamente ser feito reagir com M2 para formar M2-Poli-Mi. (1) W-Poli-OH-► W-Poli-X (X = grupo funcional reativo) (2) W-Poli-X -► W-Poli-Μι Mi = uma macromolécula, e.g., superfície, fármaco, proteína, ou polímero.) 16 (3) W-Poli-Mi + H2 (Pd/C) -► WH + HO-Poli-Mi
OU W-Poli-Ml + H20/H+ -► WOH + HO-Poli-Mi (4) HO-Poli-Mi -► Y2-P0I1-M1 (5) Y-Poli-Mi + M2 -► M2-Poli-Mi (M2= a macromolécula, e.g., superfície, fármaco, proteína, ou polímero, ou um sítio diferente em Mi.)
Os hidrogéis podem ser produzidos neste método através da reticulação de macromoléculas diferentes múltiplas pelo PEG relacionado com o polímero Poli. Contudo, deve ser entendido que, de acordo com esta invenção, os dois grupos funcionais X e Y podem também estar ligados a mesma macromolécula, em que a conjugação dos polímeros relacionados com PEG na macromolécula poderão formar uma camada de polímero na macromolécula.
Noutra concretização da invenção, os derivados heterobifuncionais de PEG ou de polímero relacionado Y-Poli-X preparado como descrito acima podem ser feitos reagir com macromoléculas ou outras substâncias através de grupos funcionais X e Y e as unidades reativas nas macromoléculas ou outras substâncias. Por exemplo, X e Y podem ser selecionados tais que dois tipos diferentes de macromoléculas ou outras substâncias possam ser ligados a X e Y respetivamente. É também possível selecionar X e Y tal que reajam com os mesmos tipos de macromoléculas. ser
RgO-PEG-OH. Opcionalmente, o RgO-PEG-OH pode adicionalmente convertido em RgOPEG-CHO. 17
Os exemplos seguintes são dados para ilustrar a invenção, mas não devem ser considerados limitação da invenção.
Exemplo 1. Exemplo 2. Exemplo 5.
Sintese de H0-PEG-NH3+ Cl Sintese de H0-PEG-0CH2C02H
Sintese de C6H5-CH=CH-CH=CH-C02PEG- OCH2CH(OC2H5)2
Exemplo 9. Sintese de NHS-02CCH2CH2C00-PEG- OCH2CH2CH (OC2H5) 2 EXEMPLO 1 PREPARAÇÃO de HO-PEG-NH3+Cl" REAÇÕES:
BzO-PEG-OH + MsCl + (CH3CH2) 3N -^ BzO-PEG-OMs + (CH3CH2) 3NH+C1
BzO-PEG-OMs + 2NH3 -BzO-PEG-NH2 + NH4+OMs'
BzO-PEG-NH2 + H20 + HC1 -► HO-PEG-NH3+Cl~ + BzOH a) Preparação de BzO-PEG-OMs: BzO-PEG-OH (PM=3400, 34 g, 10 mmole) em 150 mL de tolueno foi destilado azeotropicamente durante 2 horas sob nitrogénio e a solução foi arrefecida até à temperatura ambiente. Foram adicionados a solução 40 mL de cloreto de metileno seco e 2,1 mL de trietilamina seca (15 mmole). A solução foi arrefecida num banho de gelo e foram adicionados gota a gota 1,2 mL de cloreto de mesilo seco (15 mmole). A solução foi agitada à temperatura ambiente sob nitrogénio durante a noite e a reação foi extinta pela adição de 2 ml de etanol absoluto. A mistura foi evaporada sob vácuo para remover os solventes, essencialmente aqueles diferentes de tolueno, 18 filtrada, concentrada de novo sob vácuo, e seguidamente precipitada em 100 mL de éter etilico. O produto foi recolhido por filtração e seco em vácuo. Rendimento 34 g (100%). RMN (DMSO-d6) : δ 3,5 (m largo, PEG) , 4,31 (t, OCH2CH2OMs), 4,49 (s, C6H5-CH2-OPEG-) , 7,33 (s + multipleto complexo, C6H5-CH2-OPEG-) . b) Preparação de BzO-PEG-NH2: BzO-PEG-OMs (25 g, 7,35 mmole) foi dissolvido em 500 mL de uma solução de amónia aquosa contendo 5 g de cloreto de amónio e a solução foi agitada à temperatura ambiente durante 72 horas. A solução foi seguidamente extraída três vezes com cloreto de metileno. A fase orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada, condensada sob vácuo, e o produto precipitado com 100 mL de éter etílico. O produto foi recolhido por filtração e seco em vácuo. Rendimento 23 g (92%). 1H RMN (DMSO-d6) : δ 3,5 (m largo, PEG), 2,9 (t, -CH2NH2) , 4,49 (s, C6H5-CH2-OPEG-) , 7,33 (s + multipleto complexo, C6H5-CH2- OPEG-). c) Preparação de HO-PEG-NH3+Cl~: Uma solução de BzO-PEG-NH2 (46 g, 14 mmoles) em 200 mL de HC1 concentrado (12 M) foi agitada à temperatura ambiente durante 44 h. Esta foi seguidamente diluída até 1200 mL com água e foi adicionado NaCl para fazer uma solução a 15%. A solução aquosa foi extraída três vezes com cloreto de metileno e os extratos combinados foram secos sobre sulfato de sódio. O cloreto de metileno foi concentrado sob vácuo e o produto precipitou pela adição de éter. O produto foi recolhido por filtração e seco sob vácuo à temperatura ambiente. Rendimento: 42 g (95%). ΧΗ RMN (DMSO-d6) : δ 2,96 (t, CH2-N) , 3,5 (m largo, PEG), 4,6 (largo, OH), 7,9 (largo, NH3+) 19 EXEMPLO 2
PREPARAÇÃO DE H0-PEG-0CH2C02H REACÇÕES:
BzO-PEG-OH +(CH3)3CO"K+ -► Bz0-PEG-0-K+ + (CH3)3COH
BzO-PEG-0"K+ + Br-CH2C02C (CH3) _ -► Bz0-PEG-0-CH2C02C (CH3) 3 + KBr
Bz0-PEG-0-CH2C02C (CH3) 3 + H20 (H+) -►
-► H0-PEG-0-CH2C02H + BzOH + (CH3)3COH a) Preparação DE Bz0-PEG-0CH2C02C (CH3) 3:
BzO-PEG-OH (PM=3400, 40 g, 11,7 mmole) foi seco azeotropicamente com 250 mL de tolueno sob N2. Após duas horas, a solução foi arrefecida até à temperatura ambiente. Foram adicionados terc-butóxido de potássio (2,8 g, 23,5 mmole) dissolvido em 90 mL de terc-butanol e 90 mL de tolueno a solução de PEG acima. A mistura foi agitada durante duas horas à temperatura ambiente. Foi adicionado bromoacetato de terc-butilo (4 mL, 26,3 mmole), e a solução foi agitada sob N2 à temperatura ambiente durante a noite. A solução foi filtrada, condensada sob vácuo, e precipitou em 300 mL de éter. O produto foi recolhido por filtração e seco sob vácuo. 1H RMN (DMSO-de) : δ 1,5 (s, t-Bu) , 3,51 (m, PEG), 3,98 (s, -0CH2C02-), 4,49 (s, C6H5CH20-) , 7,33 (s + multipleto complexo, C6H5CH20-) . b) Preparação de H0-PEG-0CH2C02H:
Bz0-PEG-0CH2C02C (CH3) 3 (10 g) foi dissolvido em 100 mL de ácido clorídrico (37%), e a solução foi agitada à temperatura ambiente durante 48 horas. A solução foi diluída com um litro de água destilada e o pH foi ajustado até 2 com solução de hidróxido de sódio 1 N. A solução foi 20 seguidamente extraída três vezes com cloreto de metileno. A fase orgânica foi seca sobre sulfato de sódio anidro, filtrada para remover o sal, condensada sob vácuo, e precipitada em éter. O produto foi recolhido por filtração e seco sob vácuo. Rendimento 8,5 g (85%). RMN (DMSO-d6) : δ 3,51 (m largo, PEG), 4,01 (s, -PEGOCH2COOH) . EXEMPLO 5 PREPARAÇÃO DE C6H5-CH=CH-CH=CH-C02PEG-0CH2CH (OC2H5) 2 REAÇÕES:
BzO-PEG-OH + C1CH2CH (OC2H5) 2 + NaOH -►BzO-PEG- OCH2CH (OC2H5) 2 + NaCl
BzO-PEG-OCH2CH (OC2H5) 2 + H2 (Pd, C) -* BzH + HO-PEG- OCH2CH(OC2H5)2
HO-PEG-OCH2CH (OC2H5) 2 + C6H5-CH=CH-CH=CH-C0C1 + (CH3CH2)3N -► C6H5-CH=CH-CH=CH-C02-PEG-0CH2CH (OC2H5) 2 + (CH3CH2)3 NH+C1~ a) Preparação de BzO-PEG-0-CH2CH (OC2H5) 2: Num balão de fundo redondo de 500 mL, equipado com três tubuladuras foram colocados 300 mL de dioxano e 14 g de BzO-PEG-OH (PM=3400, 0,0040 moles). A solução resultante foi seguidamente seca azeotropicamente por destilação sob N2 de 130 mL de solvente. Após arrefecimento da solução, foram adicionados NaOH finamente em pó (0,8 g, 0,02 moles) e C1CH2CH (OC2H5) 2 (3 mL, 0,02 moles) sob N2 e a suspensão resultante foi rapidamente agitada enquanto era sujeita a refluxo durante um período de 24 h. Trinta mL de dioxano foram seguidamente removidos por destilação e a solução agitada rapidamente foi sujeita ao refluxo sob N2 durante 24 h adicionais. A suspensão foi seguidamente arrefecida e filtrada com a adição de CeliteR. O filtrado foi evaporado sob vácuo e foram adicionados 200 mL de éter etílico ao óleo residual. O precipitado resultante foi recolhido por 21 filtração e seco sob vácuo à temperatura ambiente para se obter um pó acastanhado (13,6 g) . 0 pó foi dissolvido em CH2C12 (35 mL) e re-precipitado pela adição de 500 mL de éter etilico frio. O precipitado foi recolhido por filtração e seco sob vácuo à temperatura ambiente para obtenção de 13,0 g de BzO-PEG-OCH2CH (OC2H5) 2 como um pó branco (pureza 94-98% por RMN) . 2H RMN (DMSO-d6) : δ 1,11 (t, OCH2CH3) ; 3,51 (m largo, 0-CH2CH2-0) , 4,48 (s, C6H5- CH20) ; 4,55 (t, -CH (OC2H5) 2) , 7,32 (s, C6H5-) b) Preparação de HO-PEG-O CH2CH (OC2H5) 2 : BZO-PEG-OCH2CH (OC2H5) 2 (13 g) foi dissolvido em 150 mL de
95% etanol e foram adicionados 6,5 g de Pd em carvão a 10% sob N2. A suspensão foi agitada 70 h sob H2 (40 psi) e a suspensão filtrada. O residuo catalítico foi lavado com 2 x 25 mL de clorofórmio em ebulição e as lavagens combinadas com o etanol filtrado e evaporadas sob vácuo para obtenção de um óleo claro incolor. Ao óleo foram adicionados 400 mL de éter etilico frio e o precipitado resultante recolhido por filtração para obtenção, após secagem em vácuo à temperatura ambiente, de 11,3 g de HO-PEG-OCH2CH (OC2H5) 2 como um pó branco (92% puro por 1H RMN) . 1H RMN (DMSO-de) : δ 1,10, (t, OCH2CH3) , 3,51 (m largo, 0-CH2CH2-0) , 4,55, (m, HO + -CH(OCH2CH3)2) . c) Preparação de C6H5-CH=CH-CH=CH-C02PEG-OCH2CH (OC2H5) 2: Uma solução de ácido cinamilidenoacético (1,7 g, 0,01 moles) e cloreto de tionilo (3 mL, 0,04 moles) em 50 mL de hexano foi sujeita ao refluxo sob N2 durante 4 h, seguidamente filtrada para remover uma pequena quantidade de sólido escuro e o filtrado evaporado sob vácuo. O residuo foi seco sob vácuo durante a noite à temperatura ambiente para obtenção de 1,5 g de cloreto de cinamilidenoacetilo como um sólido amarelo, p.f. 51-52 °C. 22
Uma solução de HO-PEG-OCH2CH (OC2H5) 2 (3,4 g, 1,0 mmole) em tolueno (50 mL) foi destilada azeotropicamente sob nitrogénio durante 2 h para remover vestigios de água, seguidamente arrefecida até à temperatura ambiente. A trietilamina foi destilada a partir de KOH sob nitrogénio e 0,28 mL (2 mmoles) do destilado fresco foi injetado sob nitrogénio na solução de HO-PEG-OCH2CH (OC2H5) 2 em tolueno. À solução resultante foi adicionado cloreto de cinamilideno acetilo (C6H5CH=CH-CH=CHC0C1) gota a gota sob nitrogénio à temperatura ambiente com agitação rápida. Foi deixada continuar a agitação durante três dias sob as mesmas condições e o precipitado branco foi removido por filtração. O filtrado foi evaporado até 20 mL sob vácuo e foram adicionados 300 mL de éter frio. Foi recolhido um precipitado amarelo pálido por filtração e seco sob vácuo para obtenção de 3,4 g de pó amarelo pálido. O pó foi dissolvido em cloreto de metileno e extraído com 50 mL de cloreto de sódio aquoso saturado e uma vez com água. A fase orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, evaporada até 25 mL, e foram adicionados 300 mL de éter frio com agitação em forma circular. 0 precipitado resultante foi recolhido por filtração e seco sob vácuo à temperatura ambiente para obtenção de 3,05 g (86%) de C6H5-CH=CH-CH=CH-C02PEG- 0CH2CH (OC2H5) 2 como um pó amarelo pálido. RMN (DMSO-de) : δ 1.11 ppm (t, CH3CH2O-, 3,51 ppm (m, PEG-0-CH2CH2-0 + CH3CH2O) ; 4,20 ppm (t,-CH202C-) , 4,52 ppm (t, -CH(OC2H5)2) 6.11 (d, =CH, 7,57-7,12 (mult. comp., C6H5- + =CH) Pureza por RMN: 89-96% EXEMPLO 9 PREPARAÇÃO DE NHS-O2CCH2CH2OOO-PEG-OCH2CH2CH (OC2H5) 2 REAÇÕES: 23
BzO-PEG-OH + MsCl + (H5C2)3N -► BzO-PEG-OMs + (h5c2)3n+ci-
BzO-PEG-OMs + NaH + HOCH2CH2CH (OC2H5) 2 -► -► BzO-PEG-OCH2CH2CH (OC2H5) 2
BzO-PEG-OCH2CH2CH (OC2H5) 2 + H2 (Pd, C) _► _► BzH + HO-PEG-OCH2CH2CH (OC2H5) 2 HO-PEG-OCH2CH2CH (OC2Hs) 2 + anidrido succínico + piridina - _► H02CCH2CH2C02-PEG-0CH2CH2CH (OC2N5) 2 H02CCH2CH2C02-PEG-0CH2CH2CH (OC2H5) 2 + DCC + NHS -► -► NHS-02CCH2CH2C02-PEG-0CH2CH2CH (OC2H5) 2 a) Preparação de BzO-PEG-OMs: BzO-PEG-OH (PM=3400, 25 g, 7,35 inmol) em 150 mL de tolueno foi destilado azeotropicamente durante 1 hora sob nitrogénio e a solução foi arrefecida até à temperatura ambiente. Foram adicionados a solução 20 mL de cloreto de metileno seco, 1,14 mL de trietilamina (8,16 mmol) e 0,61 mL de cloreto de mesilo seco (7,86 mmol) gota a gota. A solução foi agitada à temperatura ambiente sob nitrogénio durante a noite e a reação foi extinta pela adição de 5 mL de etanol absoluto. A mistura foi concentrada sob vácuo, filtrada, concentrada novamente sob vácuo e precipitada em éter etílico. O produto foi recolhido por filtração e seco em vácuo. Rendimento 23 g (100%) . RMN (DMSO-de) : δ 3,5 (m largo, PEG) , 4,31 (t, OCH2CH2OMs), 4,49 (s, C6H5-CH2-0-PEG-) , 7,33 (s + m. comp, C6H5-CH2-OPEG-) . b) Preparação de BzO-PEG-OCH2CH2CH (OC2H5) 2 :
Uma solução de 3,3-dietoxipropanol (9,806 g, 66,2 mmol) foi destilada azeotropicamente em 90 mL de tolueno durante 1 hora sob nitrogénio. Após arrefecimento até à temperatura ambiente a solução foi adicionada a uma dispersão de hidreto de sódio (60% em óleo mineral, 2,75 g, 68,7 mmol) em 50 mL de tolueno anidro. A solução foi misturada durante 2 h sob aquecimento moderado a 350 °C e seguidamente filtrada. 0 filtrado foi adicionado a uma solução destilada azeotropicamente de BzOPEG-OMs (23 g, 6,76 mmol) em 150 mL de tolueno. A mistura foi agitada durante 20 horas a 125 °C sob uma atmosfera de nitrogénio. A mistura foi concentrada sob vácuo e o residuo foi dissolvido em 80 mL de cloreto de metileno. A solução foi filtrada e o produto foi precipitado com 1 litro de álcool isopropílico frio. O produto foi recolhido por filtração e seco em vácuo. O pó foi dissolvido em 100 mL de água desionizada e extraída três vezes com 200 mL de cloreto de metileno. A mistura foi concentrada sob vácuo, filtrada e precipitada em éter etílico. O produto foi recolhido por filtração e seco em vácuo. Rendimento 19 g (100%). RMN (DMSO-de) : δ 1,10 (t, -CH (OCH2CH3) 2, 1,73 (q, -OCH2CH2-CH) , 3,5 (m larga, PEG) , 4,49 (s, C6H5-CH2-OPEG-) , 4,56 (m, -CH (OCH2CH3) 2) , 7,33 (s + m. comp, C6H5-CH2-0-PEG-) . c) Preparação de HO-PEG-OCH2CH2CH (OC2Hs) 2 :
Foi dissolvido BzO-PEG-OCH2CH2CH (OC2H5) 2 (10 g, 2,94 mmol) em 100 mL de etanol a 96% e foram adicionados 5,0 g de Pd em carvão a 10% sob nitrogénio. A suspensão foi agitada 48 h sob H2 (40 psi) e a suspensão filtrada. O resíduo catalítico foi lavado com cloreto de metileno. O produto no filtrado combinado de cloreto de metileno e etanol foi concentrado sob vácuo e filtrado. A solução viscosa foi precipitada em éter etílico frio, e o produto recuperado por filtração e seco em vácuo. Rendimento 15 g. 1H RMN (DMSO-d6) : δ 1,10 (t, -CH (OCH2CH3) 2, 1,72 (q, -OCH2CH2-CH) . 3,5 (m largo, PEG), 4,55 (m, -CH (OCH2CH3) 2) . d) Preparação de H02CCH2CH2C02-PEG- OCH2CH2CH (OCH2CH3) 2: Foram dissolvidos HO-PEG-
OCH2CH2CH (OC2H5) 2 (3 g, 0,88 mmol) e BHT (5 mg) em 20 mL de tolueno anidro e destilados azeotropicamente a 1200 °C 25 durante 1 hora sob nitrogénio. Após arrefecimento da solução até 75 °C, foram adicionados piridina (0,36 mL) e anidrido sucinico (0,353 g) e agitados a 7 °C durante 24 horas. A solução foi concentrada sob vácuo, filtrada e precipitada em éter etilico frio. O precipitado foi recuperado por filtração e seco em vácuo. 0 pó foi reconstituído em 50 mL de água desionizada e foi adicionado hidróxido de sódio a 1 M gota a gota para manter um pH constante de 7,2 durante 1 hora. Foi adicionado rapidamente HC1 1 N gota a gota para obtenção de um pH de 3,0 e extraído imediatamente 3 vezes em 100 mL de cloreto de metileno. 0 produto na fase orgânica foi seco sobre sulfato de sódio, concentrado sob vácuo, precipitado em éter etílico frio, recuperado por filtração e seco em vácuo. Rendimento 2,0 g (88%). RMN (DMSO-d6) : δ 1,10 (t, - CH (OCH2CH3) 2, 1,72 (q, -OCH2CH2-CH) , 3,5 (m largo, PEG) , 4,12 (t, -CO2CH2-), 4,55 (t, -CH(OCH2CH3)2) ·
e) Preparação de NHS-02CCH2CH2C02-PEG-0CH2CH2CH (0CH2CH3) 2:
Foi dissolvido H02CCH2CH2C02-PEG-0CH2CH2CH (OCH2CH3) 2 (2,0 g, 0,56 mmol) em 20 mL de cloreto de metileno anidro sob uma atmosfera de nitrogénio. A N-hidroxisucinimida (105 mg, 0,91 mmol) foi primeiro adicionada a solução e seguidamente foi adicionada diciclohexilcarbodiimida (174 mg, 0,84 mmol) . A solução foi agitada durante a noite à temperatura ambiente sob atmosfera de nitrogénio. O produto foi concentrado sob vácuo, filtrado, precipitado em éter etílico frio, recuperado por filtração e seco em vácuo. Rendimento 1,5 g (99%). 2H RMN (DMSO-d6) : δ 1,10 (t, - CH (OCH2CH3) 2, 1,72 (q, -OCH2CH2-CH) , 2,80 (s, NHS) , 3,5 (m largo, PEG), 4,12 (t, -C02CH2-) , 4,55 (t, -CH (OCH2CH3) 2) . A invenção foi descrita em concretizações particulares exemplificadas. Contudo, a descrição precedente não é 26 26 às concretizações destinada limitar a invenção exemplificadas.
Lisboa, 17 de Abril de 2013
Claims (4)
1 REIVINDICAÇÕES 1. Um método para preparação de um derivado polimérico heterobifuncional, compreendendo: (i) ProvidenciandoO um polímero de fórmula W-O-Poli- OH, em que W é um grupo que é removível por hidrogenólise catalítica ou por hidrólise catalisada por ácido, e Poli representa uma unidade de polímero selecionada a partir do grupo consistindo de poli(óxidos de alquileno), poli(polióis oxietilados), poli(álcoois olefínicos) , e poli(acriloilmorfolina); (ii) modificação de um unidade -OH para produzir um primeiro grupo funcional, em que dito primeiro grupo funcional é selecionado a partir do grupo consistindo de: mesilato, tosilato, tresilato, -0- (CH2) n-C02R3, em que n=l-6 e R3 é um grupo alquilo, -NHR4, em que R4 é H, alquilo ou um grupo protetor de amina, -0- (CH2) n-CH (ZR5) 2, em que n é um número de 1-6, Z É 0 ou S, e R5 é H ou um grupo alquilo, -0-(CH2) n-CH0, em que n é 1-6, (iii) convertendo dito W num segundo grupo funcional, sendo o dito segundo grupo funcional diferente do dito primeiro grupo funcional 2. 0 método da Reivindicação 1, em que W tem uma fórmula de Ar-C(Ri) (R2)- em que Ar representa uma unidade selecionada a partir do grupo consistindo fenilo, fenilo substituído, bifenilo, bifenilo substituído, arilos policíclicos, arilos policíclicos substituídos, e arilos heterocíclicos, em que Ri e R2 são H, alquilo, ou Ar que é definido acima. 2 3. 0 método da Reivindicação 1, em que o dito segundo grupo funcional é -OH.
4. Um método para a preparação de um derivado polimérico heterobifuncional compreendendo: (i) providenciando um polímero de fórmula Ar-C(Ri) (R2) O-Poli-OH, em que Ar é selecionado a partir do grupo consistindo de fenilo, fenilo substituído, bifenilo, bifenilo substituído, arilos policíclicos, arilos policíclicos substituídos, e arilos heterocíclicos, em que Ri e R2 são H, alquilo ou Ar, em que Ar é como definido acima, e em que Poli é uma unidade polimérica selecionada a partir do grupo consistindo de poli(óxidos de alquileno), poli(polióis oxietilados), poli(álcoois olefinicos), e poli(acriloilmorfolina); (ii) modificação química do grupo -OH para produzir um primeiro grupo funcional -0-(CH2) n-CH (ZR5) 2, em que n é um número de 1-β, Z é 0 ou S, e Rs é H ou um grupo alquilo; (iii) remoção do grupo Ar-C (Ri) (R2)0- para produzir um novo grupo hidroxilo; (iv) conversão do novo grupo hidroxilo a um novo segundo grupo funcional, sendo o segundo grupo funcional diferente do dito primeiro grupo funcional. 5. 0 método da Reivindicação 1 ou Reivindicação 4, em que Poli é poli(etileno glicol) representado por CH2CH20 (CH2CH20) n'-CH2CH2-, em que n' é de cerca de 8 até cerca de 4000.
6. O método da Reivindicação 1 ou 4, em que Poli é um copolímero de óxido de etileno e óxido de propileno. 3 7. 0 método da Reivindicação 4, em que dito primeiro grupo funcional é metóxi. 8. 0 método da Reivindicação 1 ou 4, em que dito segundo grupo funcional é selecionado a partir do grupo consistindo de mesilato, tosilato, tresilato, -0- (CH2) n“C02H, em que n=l-6, -0- (CH2) n-C02R3, em que n=l-6 e R3 é um grupo alquilo, -NHR4, em que R4 é H, alquilo ou um grupo protetor de amina, -0- (CH2) n-CH (ZR5) 2, em que n é um número de 1-6, Z é 0 ou S, e R5 é H ou um grupo alquilo, -0-(CH2) n“CH0, em que n é 1-6, 9. 0 método da Reivindicação 4, em que dito segundo grupo funcional é -0- (CH2) n_CH (ZR5) 2 em que n é um número de 1-6, Z é 0 ou S, e R5 é H ou um grupo alquilo. 10. 0 método da Reivindicação 4, em que dito segundo grupo funcional é -0-(CH2) n-CH0, em que n é 1-6. 11. 0 método da Reivindicação 1, em que dito primeiro grupo funcional é -0- (CH2) n“CH (ZR5) 2, em que n é um número de 1-6, Z é 0 ou S, e R5 é H ou um grupo alquilo. 12. 0 método da Reivindicação 1 ou Reivindicação 4, em que o polimero in step (i) tem a fórmula C5H6-CH2-0- Poli-0H. 13. 0 método da Reivindicação 4, em que dito passo de remoção (iii) compreende uma hidrogenólise catalítica ou hidrólise catalisada por ácido. 4 14. 0 método da Reivindicação 4 para uso na inibição da reatividade de HO-PEG-OH num mistura, em que: Poli é polietileno glicol (PEG), Ar-C(Ri) (R2)0- é C5H6-CH2-0-, passo (ii) compreende a modificação quimicamente do grupo -OH grupo por alquilação para produzir um grupo -0R, em que R é alquilo, e passo (iii) compreende uma hidrogenação catalítica. 15. 0 método da Reivindicação 14, em que o grupo alquilo é metilo.
16. Um método para fixação de um derivado polimérico a um fármaco ou macromolécula, compreendendo a preparação do derivado polimérico utilizando os métodos das Reivindicações 1, 4, ou 14, e o passo adicional de fixação do derivado polimérico a dito fármaco ou macromolécula. Lisboa, 17 de Abril de 2013
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|---|---|---|---|---|
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