NO327420B1

NO327420B1 - N-formylhydroksylaminforbindelser, fremgangsmate til fremstilling derav, farmasoytiske sammensetninger og celledyrkningsmedium inneholdende slike forbindelser, samt anvendelse derav som legemiddel.

Info

Publication number: NO327420B1
Application number: NO20035571A
Authority: NO
Inventors: Dinesh V Patel; Zhengyu Yuan; Rakesh K Jain; Salvador Garcia Alvarez; Jeffrey Jacobs
Original assignee: Vicuron Pharm Inc
Priority date: 2001-06-15
Filing date: 2003-12-12
Publication date: 2009-06-29
Also published as: HK1064370A1; ATE323081T1; KR20040010721A; ZA200308379B; PT1401828E; BR0210377A; JP4361365B2; AU2002321062B2; RU2325386C2; NZ529489A; US20030045479A1; HUP0400208A2; NO20035571L; EP1401828B1; AR036053A1; RU2003137565A; PE20030100A1; US7148242B2; KR20060014083A; CA2448526A1

Abstract

N-[l -okso-2-alkyl-3-(N-hydroksyformamido)-propyl]-(karbonylamino-aryl eller -heteroaryl)-azacyklo.alkaner eller tiazacyklo.alkaner eller imidazacyklo.alkaner har interessante egenskaper, feks. ved behandling eller hindring av forstyrrelser som kan påvirkes av behandling av peptidyldeformylaseinhibitorer slike som behandling av bakterieinfeksjoner.

Description

Foreliggende oppfinnelse angår nye N-formyhydroksylaminforbindelser, anvendelsen av disse forbindelsene i forskjellige medisinske applikasjoner, som inkluderer behandling av forstyrrelser som kan påvirkes av behandling med peptidyldeformylaseinhibitorer slik som behandling av bakterieinfeksjoner, og farmasøytiske sammen-setninger og celledyrkningsmedium som innbefatter disse forbindelsene. Oppfinnelsen angår også en fremgangsmåte til fremstilling av forbindelsene.

Behandling av mikrobiell infeksjon i vertsorganismer krever en effektiv måte og drepe mikroben mens det gjøres så lite skade på verten som mulig. Følgelig er midler som er rettet mot karakteristikker som er unike for en patalogiforårsakene mikroorganisme ønskelig for behandling. Penicillin er et svært godt kjent eksempel på et slikt middel. Penicillin virker ved å inhibere biosyntesen av bakteriecellevegger. Siden pattedyrceller ikke krever cellevegger for overlevelse, kan administrasjon av penicillin til et menneske infisert med bakterier drepe bakterien uten å drepe humane celler.

Imidlertid har anvendelsen av antibiotika og antimikrobielle midler også resultert i økende resistens ovenfor disse midlene. Idet bakterier blir resistente for eldre, mer anvendte mikrobielle midler, må nye antimikrobielle midler utvikles for å tilveiebringe effektiv behandlinger for mennesker og ikke menneskedyr som lider av mikrobiell infeksjon.

Peptiddeformylase er en metallopeptidase funnet i prokaryotorganismer slik som bakterier. Proteinsyntese i prokaryotorganismer begynner med N-formylmetionin (fMet). Etter initiering av proteinsyntesen blir formylgruppen fjernet ved enzym-peptiddeformylasen (PDF); denne aktiviteten er essensiell for modning av proteiner. Det er blitt vist at PDF er påkrevet for bakteriell vekst (Chang et al., J. Bacteriol., Vol. 171, s: 4071-4072 (1989); Meinnel et al., J. Bacteriol., Vol. 176, nr. 23, s 7387-7390 (1994); Mazel et al., EMBO J., Vol. 13, Nr. 4, s 914-23 (1994)). Siden proteinsyntese i eukaryote organismer ikke avhenger av fMet for initiering, er midler som vil inhibere PDF attraktive kandidater for utvikling av nye antimikrobielle og antibakterielle lege-midler. Prokaryote organismer, som inkluderer sykdomsforårsakene prokaryoter, er beskrevet i Balows A, Truper HG, Dworkin M, Harder W og Schleifer K-H (eds.), "The Prokaryotes", 2. ed., New York: Spriger-Verlag (1992); og Holt JG (editor-in-chief), "Bergey's Manual of Systematic Bacteriology", Vol. 1-4, Baltimore: Williams & Wilkins (1982,1986,1989).

PDF er en del av metallproteinasesuperfamilien. Mens PDF helt klart deler mange av trekkene som kjennetegner metalloproteinaser er den forskjellig fra andre medlemmer av superfamilien i flere viktige henseender. For det første synes metallionet i det aktive enzymet å være Fe (II), eller muligens et annet divalent kationisk metall, i steden for sinkionet som er mer vanlig (Rajagopalan et al., J. Am. Chem. Soc, Vol. 119, s12418-12419 (1997)). Andre synes det divalente ionet spiller en viktig rolle, ikke bare ved katalyse, men også når det gjelder den strukturelle integriteten til proteinet. For det tredje er det tredje ligandet til det divalente ionet et cystein, og ikke et histidin eller et glutamat, som i andre metalloproteinaser, og er ikke lokalisert ved den C-terminale siden til HEXXH motivet, men langt bort fra aminosyresekvensen og N-terminalt til motivet. Til slutt viser løsningsstrukturen signifikante forskjeller i den sekundære og tertiære strukturen til PDF sammenlignet med andre prototypisk metalloproteinaser (se Meinnel et al., J. Mol. Biol., Vol. 262, s 375-386 (1996)). PDF fra E. coli, Bacillus stearothermophilus og Thermus thermophilus har blitt karakterisert (se Meinnel et al., J. Bol. Biol., Vol. 267, s 749-761 (1997)). Enzymstudier av Meinell et al. inneholdt et sinkion som det divalente ionet og strukturelle trekk summert ovenfor ble oppnådd fra sinkinnholdene proteiner. Strukturen til proteinet har også blitt bestemt ved NMR (se 0'Connell et al., J. Biornol. NMR, Vol. 13, nr. 4, s 311-324 (1999)).

Metalloproteinaser er kritiske ved mange sider av normal metabolisme. Klassen kjent som matriks metalloproteinaser (MMPer) er involvert i vevsremodellering, slik som nedbrytning av ekstracellulær matriks. Disse enzymene antas å spille en rolle i normale og fordelaktige biologiske hendelser slik som dannelse av corpus luteum ved graviditet (se Liu et al., Endocrinology, Vol. 140, nr. 11, s. 5330-5338 (1999)), sårheling (Yamagiwa et al., Bone, Vol. 25, nr. 2, s 197-203 (1999)), og benvekst hos friske barn (Bord et al., Bone, Vol. 23, nr. 1, s 7-22 (1998)). Forstyrrelser som involverer metalloproteinaser har blitt implisert i flere sykdommer slik som kreft, artritt og autoimmune sykdommer.

På grunn av viktigheten til MMPer i normale fysiologiske prosesser vil det være fordelaktig å utvikle midler som inhiberer det PDF, en metalloprotease til stede bare i prokaryoter, mens det unngås signifikant inhibering av MMPer. Alternativt kan PDF inhibitorer som også inhiberer MMPer anvendes hvor de terapeutiske fordelene ved inhibering av PDF overvinner riskioen ved bivikninger fra MMP inhibitering.

Et bredt spekter av forbindelser har blitt utviklet som kandidatinhibitorer av MMPer og andre metalloproteinaser, og mye arbeid har også blitt rettet mot syntetiske fremgangsmåter for disse forbindelsene og relaterte forbindelser (se Izquierdo-Martin et al., J. Am. Chem. Soc, Vol. 114, s 325-331 (1992); Cushman et al., kapittel 5, "Specific Inhibitors of Zinc Metallopeptidases", Topics in Molecular Pharmacology, Burgen & Roberts, eds. (1981); Mohler et al., Nature, Vol. 370, s 218-220 (1994); Gearing et al., Nature, Vol. 370 s. 555-557 (1994); McGeehan et al., Nature, Vol. 370, s. 558-561 (1994); U.S. patent nr. 4,052,511,4,303,662,4,311,705,4,321,383,4,599,361,4,804,676, 5,128,346, 5,256,657, 5,268,384, 5,447,929, 5,453,423, 5,552,419, 5,614,625, 5,643,908, 5,712,300 og 5,869,518; Europeisk patentpublikasjoner EP 236872, EP 274453, EP 334244, EP 423943, EP 489577, EP 489579, EP 497192, EP 574758; og international PCT patentsøknadpublikasjonsnr. WO 90/05716, WO 90/05719, WO 91/02716, WO 92/13831, WO 92/22523, WO 93/09090, WO 93/09097, WO 93/20047, WO 93/24449, WO 93/24475, WO 94/02446, WO 94/02447, WO 94/21512, WO 94/25434, WO 94/25435, WO 95/33731, WO 96/25158, WO 96/26918, WO 97/30707, WO 97/49674, WO 98/55449 og WO 99/02510.

Forskning på inhibitorer av PDF er langt mindre ekstensiv enn de for inhibitorer av MMPer. N-formylhydroksylaminderivater er beskrevet i international patentsøknad WO 99/39704. Peptidaldehydinihibitorer av PDFer er beskrevet i Durand et al., Arch. Biochem. Biophys., Vol. 367, nr. 2, s 297-302 (1999). PDF inhibitoren (S)-2-0-(H-fosfonoksy)-L-caproyl-L-leucyl-p-nitroanilid er også beskrevet I Hao et al., Biochemistry, Vol. 38, s 4712-4719 (1999), og peptidyl H-fosfonatinhibitorer av PDF er diskutert i Hu et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., Vol. 8, s 2479-2482 (1998). Formylerte peptider og pseudopeptider er beskrevet i Meinell et al., Biochemistry, Vol. 38, nr. 14, s. 4288-4295 (1999) som inhibitorer av PDF.

I lys av viktigheten ved å identifisere nye antibiotiske midler for behandling av bakterier resistente ovenfor eksisterende antibiotiske midler er det ønskelig å utvikle nye inhibitorer av PDF for evaluering og anvendelse som antibakterielle og antimikrobielle midler. Foreliggende oppfinnelse oppfyller dette behovet.

Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer en forbindelse med formel (I):

hvori X er -CH2- eller -CH(OH)-;

Ri er pyridyl eller et N-oksid derav, som eventuelt er substituert med en gruppe valgt fra trifluormetyl, et halogenatom, C1-C7 alkyl, fenyl eller C1-C7 alkoksy;

hver av R2, R3 og R* er hydrogen;

R5 er Ci.7alkyl; og

ner 1;

eller et salt derav.

I en foretrukket utførelsesform er Ri en rest med formel (II)

hvori hver av R^, R7, R« og R9 er uavhengig hydrogen, Ci-7alkyl, Ci^alkoksy, halogen, fenyl; eller et salt derav.

I en annen foretrukket utførelsesform har Ri formel (II. 1)

hvori Re, Rg og R9 er hydrogen og R7 er etyl eller metoksy.

I en ytterligere foretrukket utførelsesform har Ri formel (III) hvori hver av R^, R7, Rg og R9 er uavhengig hydrogen, C^alkyl, fenyl, halogen eller Ci.7alkoksy.

I enda en ytterligere foretrukket utførelsesform har Ri formel (III. 1)

hvori R6, R7 og R9 er hydrogen og Rg er fluor eller trifluormetyl.

Med mindre annet er angitt blir følgende begreper anvendt i beskrivelsen for å ha følgende betydning.

Begrepet "alkyl" refererer til mettede eller umettede alifatiske grupper slik som alkenyl eller alkynyl, cykloalkyl eller substituert alkyl som inkluderer rettkjedet, forgrenet og cykliske grupper som har fra 1 til 7 karbonatomer. Foretrukket er "alkyl" eller "alk", der det opptrer, en mettet alifatisk gruppe eller cykloalkyl, mer foretrukket CMalkyl. Eksempler på "alkyl" eller "alk" inkluderer, men er ikke begrenset til, metyl, etyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, sec-butyl, t-butyl, n-pentyl, neopentyl, n-heksyl eller n-heptyl, cyklopropyl og særlig n-butyl.

Begrepet "alkoksy" slik det anvendes heri referer til et CMalkyl bundet til et oksygen-atom, eller foretrukket Ci_4alkoksy. Eksempler på alkoksygrupper inkluderer, men er ikke begrenset til, grupper slike som metoksy, etoksy, n-butyoksy, terf-butosky og allyloksy.

Begrepet "halogen" eller "halo" slik det anvendes heri refererer til klor, brom, fluor, jod og er særlig fluor.

"Beskyttende gruppe" refererer til en kjemisk gruppe som fremviser følgende karakteristikker: 1) reagerer selektivt med den ønskede funksjonaliteten i godt utbytte for å gi et beskyttet substrat som er stabilt ovenfor de tiltenkte reaksjonene for hvilke beskyttelse er ønskelig; 2) kan fjernes selektivt fra det beskyttede substratet for å gi den ønskede funksjonaliteten; og 3) kan fjernes i godt utbytte ved reagenser kompatible med andre reagenser kompatible med de andre funksjonelle gruppene til stede eller generert i slike tiltenkte reaksjoner. Eksempler på egnede beskyttende grupper kan finnes i Greene et al., "Protective Groups in Organic Synthesis", 2. utg., John Wiley & Sons, Inc., New York (1991). Foretrukne aminobeskyttende grupper inkluderer, men er ikke begrenset til, benzyloksykarbonyl (CBz), t-butyl-oksykarbonyl (Boe), t-butyldimetylsilyl (TBDMS), 9-fluorenylmetyl-oksykarbonyl (Fmoc), eller passende fotolabile beskyttende grupper slik som 6-nitroveratryloksy karbonyl (Nvoc), nitropiperonyl, pyrenylmet-oksykarbonyl, nitrobenzyl, dimetyl dimetoksybenzyl, 5-brom-7-nitroindolinyl og lignende. Foretrukne hydroksybeskyttende grupper inkluderer Fmoc, TBDMS, fotolabile beskyttende grupper (slik som nitroveratryloksymetyleter (Nvom)), Morn (metoksymetyleter), og Mem (metoksyetoksymetyleter). Særlig foretrukne beskyttende grupper inkluderer NPEOC (4-nitrofenetyloksykarbonyl) og NPEOM (4-nitrofenetyl-oksymetyloksykarbonyl).

Det vil være på det rene at forbindelsene med formel (I) kan eksistere i form av optiske isomerer, racemater og diastereomerer. En forbindelse med formel (I) kan ha R- eller S-konfigurasjon. Det er å forstå at foreliggende oppfinnelse omfatter alle enantiomerer og alle deres blandinger. Tilsvarende overveielser gjelder i relasjon til utgangsmaterialer som fremviser assymetriske karbonatomer som nevnt.

Forbindelsene ifølge oppfinnelsen, f.eks. forbindelsen med formel (I), kan eksistere i fri form eller i saltform, f.eks. i form av et farmasøytisk akseptabelt salt. Et "farmasøytisk akseptabelt salt" av en forbindelse betyr et fysiologisk og farmasøytisk akseptabelt salt som fremviser den ønskede farmakologiske aktiviteten til morforbindelsen og ikke bevirker uønskede toksikologiske effekter. Slike salter inkluderer: (1) syreaddisjonssalter, dannet med uorganiske syrer slik som saltsyre, hydrobrom-syre, svovelsyre, salpetersyre, fosforsyre og lignende; eller dannet med organiske syrer slik som eddiksyre, propionsyre, heksansyre, cyklopentan-propionsyre, glykolsyre, pyrodruesyre, melkesyre, malonsyre, ravsyre, eplesyre, maleinsyre, fumarsyre, vinsyre, sitronsyre, benzosyre, 3-(4-hydroksybenzoyl) benzosyre, kanelsyre, mandelsyre, metansulfonsyre, etansulfonsyre, 1,2-etan-disulfonsyre, 2-hydroksyetansulfonsyre, benzensulfonsyre, 4-klorbenzensulfon-syre, 2-naftalensulfonsyre, 4-toluensulfonsyre, kamforsulfonsyre, 3-fenyl-propionsyre, trimetyleddiksyre, tertiærbutyleddiksyre, laurylsvovelsyre, glukonsyre, glutamsyre, hydroksynaftansyre, svovelsyre, stearinsyre, mukon-syre, og lignende; eller (2) salter dannet med et surt proton til stede på morforbindelsen som enten blir erstattet med et metallion, f.eks. et alkalimetallion, et jordalkalimetallion, eller et aluminiumion; eller koordonierer med en organisk base slik som etanolamin, dietanolamin, trietanolamin, trometamin, N-metylglukamin og lignende. Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer også en fremgangsmåte for fremstilling av en forbindelse ifølge oppfinnelsen, dvs. en forbindelse med formel (I) hvilken fremgangs måte innbefatter omsetting av en forbindelse med formel (V) hvor i R2, R3, R4 og R5 er som definert ovenfor og Y er en hydroksybeskyttende gruppe, eller et funksjonelt derivat derav, med en forbindelse med formel (VI)

hvor i Ri, X og n er som definert ovenfor, og X' er NH eller O, og der det er påkrevd, å omdanne de resulterende forbindelsene oppnådd i fri form til saltformer eller vica versa.

Funksjonelle derivater og forbindelser med formel (V) inkluderer f.eks. halogenider, f.eks. syreklorid, syreanhydrid eller en aktivert ester.

Reaksjonen ovenfor kan utføres i henhold til kjente fremgangsmåter i litteraturen eller som beskrevet i eksemplet nedenfor. Reaksjonen blir vanligvis utført under nærvær av en base og deretter fulgt av en hydrogenering, foretrukket under nærvær av en hydro-generingskatalysator. Egnede baser inkluderer f.eks. Hunigbase (dvs. diisopropyletylamin) og uorganiske baser slik som natriumbikarbonat. Hydrogeneringskatalysatoren, foretrukket en palladiumkatalysator, f.eks. palladium på karbon eller palladiumsvart, kan deretter tilsettes til det resulterende produktet, f.eks. etter konsentrering og røring under hydrogenatmosfære, f.eks. fra ca. 16 til ca. 24 timer. Palladiumkatalysatoren kan tilsettes foretrukket fra 5 mol% til ca 10 mol% av det konsentrerte produktet.

Forbindelser med formel (V) anvendt som utgangsmaterialer, kan fremstilles f.eks. ved reaksjon med en forbindelse med formel (VII)

hvor i R2, R3, R4, R5 og Y er som definert ovenfor, f.eks. under mild basiske betingelser, f.eks. som det er kjent i litteraturen. Typisk kan denne reaksjonen utføres ved å løse opp forbindelser med formel (VII) f.eks. i en blanding av et inert løsemiddel, slik som THF, DMF, toluen, dioksan eller CH2CI2, og vann, og tilsette hydrogenperoksid og deretter en vandig løsning av basen i vann til den avkjølte blandingen. Eksempler på base inkluderer, f.eks. natriumbikarbonat, litiumhydroksid, natriumhydroksid og lignende. Basen kan deretter anvendes i fra ca. 1,1 til ca. 1,5 ekvivalenter i forhold til forbindelsen med formel (VII).

Forbindelser med formel (VII) kan fremstilles f.eks. ved å sette en forbindelse med formel (VIII) hvor i R2, R3, R4 og Y er som definert ovenfor, med maursyre som kjent i litteraturen. Reaksjonen blir typisk utført f.eks. ved 0°C ved tilsetting av en løsning av eddiksyreanhydrid i maursyre til en løsning av en forbindelse med formel (VIII) i maursyre.

Forbindelser med formel (VIII) kan fremstilles f.eks. ved å reagere en forbindelse med formel (IX) hvor R2, R3, R4 og R5 er som definert ovenfor, med en løsning av p-toluensulfonsyre i et inert organisk løsemiddel, og en løsning av Na2CC"3, f.eks. IM, som det er kjent i litteraturen.

Forbindelser med formel (IX) kan fremstilles f.eks. ved å reagere en forbindelse med formel (X) hvor i R2, R3 og R5 er som definert ovenfor, med en hydroksybeskyttende forbindelse med formel (XI) hvor i Y er aryl, alkyl, aralkyl eller silyl, som kjent i litteraturen.

Forbindelse med formel (X) kan fremstilles f.eks. ved å omsette en forbindelse med formel (XII) med pivaloylklorid, hvor i R4 er som definert ovenfor, slik det er kjent i litteraturen.

Når det gjelder fremstilling av utgangsmaterialene er disse ikke spesielt beskrevet, forbindelsene er kjente eller kan fremstilles analogt med fremgangsmåter kjente i litteraturen eller slik det er beskrevet i eksemplene i det følgende.

Følgende forkortelser anvendes:

DIEA = diisopropyletylamin

DMF = dimetylformamid

DMSO = dimetylsulfoksid

EtOAc = etylacetat

FC = flashkromatografi

HATU = 0-(7-aza-benzotriazol-l-yl)-N,N-N\N'-tetrametyluroruumheksafluorfosfat MCPBA = meta-klorperoksy-benzosyre

PFP = pentafluofenyl

p-TSA = p-toluensulfonsyre

rt = romtemperatur

TFA = trifluoreddiksyre

THF = tetrahydrofuran

Generell frem<g>an<g>småte A; Syntese av l-{2(R)-[(formylhydroksyamino)-nietyl]-alkanoyl}-pyrrolidin-2(S)-karboksylsyreamid (Skjema)

Trinn 1: 2-/t-butylakrylsyre (A-2)

Til en løsning av alkylmalonsyre A-I (R = n-butyl (107,4 mmol) i etanol (200 ml) ble det tilsatt piperidin (12,7 ml, 128,8 mmol, 1,2 ekviv.) og 37% vandig formaldehyd (40,0 ml, 536,9 mmol, 5 ekviv.). Løsningen varmes til 80°C hvor ved et presipitat dannes, og dette gjenoppløses gradvis i løpet av 1 time. Reaksjonsblandingen røres ved 80°C over natten og deretter avkjøles til romtemperatur. Løsemidlene fjernes under redusert trykk og residuet løses i EtOAc, vaskes suksesivt med IM HC1 og saltvann, tørket over vannfri Na2SC«4 og filtreres. Filtratet konsentreres for å gi tittelforbindelsen A-2 som en klar olje.

Trinn 2: 4-benzyl-3-(2-butyl-akryloyl)-oksazolidin-2-on (A-3)

2-w-butylakrylsyre (9,90 g, 77,2 mmol, og 1 ekviv.) løses i tørr THF (260 ml) og av-kjøles til -78°C under nitrogen. Hunig's base (17,5 ml, 100,4 mmol, 1,3 ekviv.) og pivaloylklorid (9,5 ml, 77,2 mmol, 1 ekviv.) tilsettes i en slik hastighet at temperaturen holdes under -60°C. Blandingen røres ved -78°C i 30 minutter og varmes til romtemperatur i 2 timer og til slutt avkjøles tilbake til -78°C. I en separat kolbe blir (S)-(-)-4-benzyl-2-oksazolidinon (13,49 g, 77,24 mmol) løst i tørr THF (150 ml) og avkjølt til - 78°C under nitrogen, n-butyllitium (2,5 M løsning i heksan, 30,9 ml, 77,2 mmol, 1 ekviv.) tilsettes forsiktig ved -78°C og blandingen røres i 30 minutter ved romtempera-

tur. Det resulterende anionet blir sakte overført via kanyle til det opprinnelige reaksjons-karet. Blandingen varmes til romtemperatur og røres over natten ved romtemperatur. Reaksjonen stoppes med IM KHCO3 og løsemidlene fjernes under redusert trykk. Residuet fordeles mellom EtOAc og vann. Det organiske sjiktet vasket med saltvann, tørkes over vannfri Na2S04, filtreres og konsentreres som gir en gul olje som renses med FC (heksan:EtOAc = 4:1) for å gi tittelforbindelsen A-3 som et hvitt fast stoff.

1H NMR (CDCI3): 8 7,39-7,20 (m, 5H), 5,42-5,40 (d, J = 7,14 Hz, 2H), 4,76-4,68 (m, 1H), 4,29-4,16 (m, 2H), 3,40-3,35 (dd, J = 3,57,13,46 Hz, 1H), 2,86-2,79 (dd, J = 9,34, 13,46 Hz, 1H), 2,42-2,37 (t, J = 7,69 Hz, 2H), 1,55-1,30 (m, 4H), 0,95-0,90 (t, J = 7,14 Hz, 3H). ES-MS: beregnet for C17H21NO3 (287,35); funnet: 288,5 [M+H].

X = CH2, -S-, -CH(OH)-, -CH(OR)-, CH(SH)-, -CH(SR)-, -CF2-, -C=N(OR)- eller-CH(F)-; n = 0-3

Trinn 3: 4-benzyl-3-[2-(benzyIoksyamino-metyl)-heksanoyl]-oksazolidin-2-on ( p-toluen-sulfonsyresalt)

Forbindelse A-3 (8,25 g, 28,7 mmol) blandes med O-benzylhydroksylamin (7,07 g, 57,4 mmol, 2 ekviv.) og røres i 40 timer ved romtemperatur under nitrogen. Blandingen løses i EtOAc og p-TSA (21,84 g, 114,8 mmol og 4 ekviv.) tilsettes for å presipitere overskudd O-benzylhydroksylamin som et hvitt fast stoff. Det hvite faste stoffet filtreres fra og filtratet konsentreres om gir en uren gul olje (HPLC analyse indikerer små mengder utgangsmaterialer). Den urene gule oljen tilsettes overskudd dietyleter og avkjøles til 0°C i 30 min som gir et faststoff som samles opp ved filtrering og tørkes i vakuum som gir tittelforbindelsen som et hvitt krystallinsk faststoff (enkel diastereomer).

1H NMR (CDC13): 8 8,07-8,04 (d, J = 8,24 Hz, 2H), 7,59-7,39 (m, 10H), 7,18-7,15 (d, J = 7,69 Hz, 2H), 5,49-5,40 (q, J = 8,61 Hz, 2H), 4,65-4,56 (m, 1H), 4,25-4,08 (m, 3H), 3,83-3,79 (d, J = 13,46 Hz, 1H), 3,15-3,11 (d, J = 13,46 Hz, 1H), 2,56 (s, 3H), 1,83-1,67 (m, 4H), 1,40 (bs, 4H), 1,00-0,951 (t, J = 6,87,3H). ES-MS: beregnet for C24H3oN204<*>C7H803S (582,71); funnet: 411,7 [M+H] fri base.

Trinn 4: 4-benzyl-3-[2-(benzyloksyamino-metyl)-heksanoyl]-oksazolidin-2-on (A-5) Til en løsning av p-TSA (22,9 g, 39 3 mmol) løst i EtOAc (400 ml) ble det tilsatt IM Na2C03 (200 ml, 5 ekviv.) og blandingen ble rørt ved romtemperatur i 30 minutter. Sjiktene separeres og det vandige sjiktet ekstraheres med EtOAc. De kombinerte organiske sjiktene tørkes over vannfrie Na2C03, filtrers og konsentreres som gir tittelforbindelsen som en matt opak olje.

1H NMR (CDCI3): 8 7,57-7,38 (m, 10H), 4,98-4,90 (m, 2H), 4,87-4,79 (m, 1H), 4,38-4,28 (m, 3H), 3,64-3,57 (dd, J = 9,21,12,64 Hz, 1H), 3,46-3,36 (td, J = 3,76,13,05 Hz, 2H), 2,68-2,60 (dd, J = 10,03,13,46 Hz, 1H), 1,90-1,88 (m, 1H), 1,78-1,71 (m, 1H), 1,51-1,44 (m, 4H), 1,10-1,06 (t, J = 6,73 Hz, 3H). ES-MS: beregnet for C24H3oN204 (410,51); funnet: 411,7 [M+H].

Trinn 5: iV-[2-(4-benzyl-2-okso-oksazolidin-3-karbonyl)-heksyl]-iV-benzyloksy-formamid (A-6)

En løsning av forbindelse A-5 (5,38 g, 13,1 mmol, 1 ekviv.) i maursyre (7,4 ml, 196,6 mmol, 15 ekviv.) avkjøles til 0°C under nitrogen. I en separat flaske blir maursyre (7,4 ml, 196,6 mmol, 15 ekviv.) avkjølt til 0°C under nitrogen og eddiksyreanhydrid (2,47 ml, 26,2 mmol, 2 ekviv.) tilsatt dråpevis. Løsningen røres ved 0°C i 15 minutter. Det resulterende blandede anhydridet blir sakte overført via sprøyte til det opprinnelige reaksjonskarret. Blandingen røres ved 0°C i 1 time og deretter ved romtemperatur i 3 timer. Blandingen konsentreres, tas opp i CH2CI2 og vaskes suksessivt med mettet NaHC03 og saltvann. Det organiske sjiktet tørkes over vannfritt Na2S04, filtreres og konsentreres som gir en opak olje som renses med FC (heksan:EtOAc = 2:1 deretter CH2Cl2:aceton = 9:1) som gir tittelforbindelsen som en fargeløs olje.

1H NMR (CDCI3, rotamerer): 8 8,38 (s, 0,7H), 8,21 (s, 0,3H), 7,54-7,35 (m, 10H), 5,0,5,00 (m, 2H), 4,88-4,81 (m, 1H), 4,39-4,29 (m, 4H), 4,07-4,03 (m, 1H), 3,43-3,39 (m, 1H), 2,66-2,58 (m, 1H), 1,89 (bs, 1H), 1,73 (bs, 1H), 1,49-1,44 (m, 3H), 1,10-1,06 (t, J = 6,73 Hz, 3H). ES-MS: beregnet for C25H30N2O5 (438,52); funnet: 439,7 [M+H].

Trinn 6: 2-[benzyIoksy-formyl-amino)-metyl]-heksansyre (A-7)

Forbindelse A-6 (0,163 g, 0,372 mmol, 1 ekviv) løses i THF (4,5 ml) og vann (1,5 ml) og avkjøles til 0°C. Hydrogenperoksid (30% i vann, 228 fil, 2,23 mmol, 6 ekviv.) tilsettes dråpevis fulgt av sakte tilsetning av en løsning av litiumhydroksid (0,019 g, 0,446 mmol, 1,2 ekviv.) i vann (350 ul). Denne resulterende blandingen røres ved 0°C i 1,5 timer. Den basiske reaksjonsblandingen stoppes med Amberlitt IR-120 harpiks (H<+>) til pH 4-5 ved 0°C. Harpiksen filtreres fra og renses med EtOAc. Blandingen konsentreres for fjerne THF, og tas opp i EtOAc. Det vandige sjiktet separeres og det organiske sjiktet tørkes over vannfri Na2S04, filtreres og konsentreres som gir en opak olje som renses med FC (CH2Cl2:aceton = 4:1 deretter aceton:metanol = 99:1) som gir tittelforbindelsen A-7 som en fargeløs olje.

1H NMR (DMSO-d6, rotamerer): 8 11,2 (s, 1H), 8,20 (s, 0,2H), 7,95 (s, 0,8H), 7,33-7,41 (m, 5H), 4,87 (s, 2H), 3,71 (bs, 2H), 2,50 (bs, 1H), 1,35-1,45 (m, 2H), 1,14-1,28 (m, 4H), 0,857-0,813 (t, J = 13,1 Hz, 3H). ES-MS: beregnet for Ci5H2iN04 (279,33); funnet: 278,5 [M-H], 302,5 [M+Na].

Trinn 7: l-{2-[(benzyloksy-formyl-amino)-metyl]-heksanoyl}-pyrrolidin-2-karboksylsyreamid

Til en løsning av forbindelse A-7 (0,190 g, 0,680 mmol, 1 ekviv.) i tørr dioksan (4 ml) blir det ved romtemperatur under nitrogen tilsatt suksessivt Hunig's base (391 ul, 2,24 mmol, 3,3 ekviv.), amin A-8 (0,748 mmol, 1,1 ekviv) og HATU (0,284 g, 0,784 mmol, 1,1 ekviv.). Den resulterende blandingen røres ved romtemperatur i 22 timer. Blandingen fordeles mellom EtOAc og 10% sitronsyre. Det organiske sjiktet vaskes med saltvann og mettet NaHC03, tørkes over vannfri Na2S04, filtreres og konsentreres. Residuet renses med FC (Cl^Cferaceton = 3:1) som gir tittelforbindelsen som er fargeløs olje.

Trinn 8: l-{2-[(formyl-hydroksy-amino)-metyl]-heksanoyl}-pyrrolidin-2-karboksylsyreamid (A-9)

Pd-C (0,059 g, 0,1 ekviv.) tilsettes til en løsning av forbindelsen ovenfor (0,550 mmol, 1 ekviv.) i en 1:1 EtOAc/etanolløsning (12 ml) under nitrogen. Blandingen røres under hydrogenatmosfære i 36 timer. Katalysatoren fjærnes ved filtrering gjennom en celittpute. Filtratet konsentreres og residuet renses med preparativ TLC (CtfeCtøaceton = 2:1) som gir tittelforbindelsen som et amorft faststoff.

Generell fremgangsmåte B: Syntese av l-{2(R)-[(formylhydroksyamino)-metyl]-alkanoyl}-pyrrolidin-2(S)-karboksylatester

X = CH2, -S-, -CH(OH)-, -CH(OR)-, -CH(SR)-, -CF2-, -C=N(OR)- eller-CH(F)-; n = 0 til 3

Trinn 1: l-{2- [(benzyloksy-formyl-amino)-metyl]-heksanoyl}-pyrrolidin-2-karboksylsyreester

Til en løsning av forbindelse A-7 (0,680 mmol, 1 ekviv.) i tørr dioksan (4 ml) ble det under romtemperatur under nitrogen tilsatt suksessivt Hunig's base (391 ul, 2,24 mmol, 3,3 ekviv.), amin A-10 (0,748 mmol, 1,1 ekviv.) og HATU (0,284 g, 0,748 mmol, 1 ekviv.). Vanlig opparbeiding og rensing gir tittelforbindelsen.

Trinn 8:1 {2-[(formyl-hydroksy-amino)-metyl]-heksanoyl}-pyrrolidin-2-karboksyl-syreester (A-ll)

Pd-C (0,059 g, 0,1 ekviv.) tilsettes til en løsning av forbindelsen ovenfor (0,550 mmol) i en 1:1 EtOAc/etanolløsning (12 ml) under nitrogen. Blandingen røres under hydrogenatmosfære i 36 timer. Ved å følge samme fremgangsmåte som beskrevet ovenfor ble tittelforbindelsen oppnådd.

Eksempel 1: l-{2-R-[(formyl-hydroksy-amino)-metyl]-heksanoyl}-pyrrolidin-2-S-karboksylsyre pyridin-2-ylamid

Tittelforbindelsen fremstilles i henhold til generell fremgangsmåte A fra 2-[(benzyloksy-formyl-amino)-metyl]-heksansyre A-7 (R=n-butyl) og pyrrolidin-2-karboksylsyre pyridin-2-ylamid A-8 (X = CH2, n = 1, Ri = 2-pyridyl).

1H NMR (DMSO-d6): 8 10,7 (s, 1H), 9,89 (s, 1H), 8,50-8,44 (m, 1H), 8,23-8,17 (m, 1H), 7,97-7,92 (m, 2H), 7,29-7,25 (m, 1H), 4,83-4,71 (m, 1H), 3,91-3,51 (m, 4H), 3,30-3,15 (m, 1H), 2,46-1,83 (m, 4H), 1,52-1,31 (m, 6H), 1,11-0,93 (m, 3H). ES-MS: beregnet for C^eN^ (362,42); funnet: 363,6 [M+H], 385,5 [M+Na].

Fremstilling av pyrolidin-2-S-karboksylsyre (pyridin-2-yl) amid A-8 (X = CH2, n = 1, R, = 2-pyridyl)

2-S-(pyridin-2-ylkarbamoyl)-pyrirlidin-l-karboksyIsyrebenzylester En løsning av 2-S-(klorkarbonyl)-pyrrolidin-l-karboksylsyre benzylester (5,0 g, 18,7 mmol, 1 ekviv.) i pyridin (40 ml) avkjøles til 0°C under nitrogen. 2-aminopyridin (5,27 g, 56,0 mmol, 3 ekviv.) i pyridin (10 ml) tilsettes dråpevis. Den resulterende blandingen røres ved romtemperatur i 4 timer og deretter konsentreres. Restoljen røres i EtOAc og vaskes suksessivt med vann, 10% sitronsyre, mettet NaHC03 og saltvann. Det organiske sjiktet tørkes over vannfri Na2S04, filtreres og konsentreres som gir tittelforbindelsen som et opakt fast stoff.

1H NMR (DMSO-de): 8 10,8-10,7 (d, J = 15,6 Hz, 1H), 8,51-8,49 (m, 1H), 8,29-8,24 (m, 1H), 8,01-7,93 (m, 1H), 7,57-7,48 (m, 3H), 7,40-7,25 (m, 3H), 5,31-,22 (m, 2H), 4,76-4,68 (m, 1H), 3,72-3,58 (m, 2H), 2,50-2,31 (m, 1H), 2,14-1,95 (m, 3H).

Pyrrolidin-2-S-karboksylsyre (pyridin-2-yl) amidhydrobromsyresalt

En løsning av forbindelsen ovenfor (4,21 g, 13,0 mmol, 1 ekviv.) i AcOH (65 ml) blir ved romtemperatur behandlet med HBr (5,7 M, 33% i AcOH, 110 ml, 649 mmol, 50 ekviv.) og blandingen røres ved romtemperatur i 2 timer. Tilsetting til reaksjonsblandingen med overskudd til etyleter og avkjøling til 0°C i 30 minutter gir et faststoff som samles opp ved filtrering og tørkes i vakuum som gir tittelforbindelsen som et brunaktig pulver.

1H NMR (DMSO-dé): 8 11,3 (s, 1H), 8,89 (bs, 1H), 8,57-8,5 (m, 1H), 8,24-8,22 (m, 1H), 8,08-8,03 (m, 1H), 7,40-7,36 (m, 1H), 4,61 (bs, 1H), 3,47-3,45 (m, 2H), 2,65-2,55 (m, 1H), 2,21-2,07 (m, 3H). ES-MS: beregnet for Ci0H13N3O<*>2HBr (353,05); funnet: 192,4 [M+H] fri base.

Eksempel 2; l-{2-R-[(formyl-hydroksy-amino)-metyl]-heksanoyl}-pyrrolidin-2-S-karboksylsyre-(3-metyl-pyridin-2-yl)-amid

Tittelforbindelsen fremstilles henholdsvis generelt fremgangsmåte A fra 2-[(benzyl-oksyformyl-amino)-metyl]-heksansyre A-7 (R=n-butyl) og pyrrolidin-2-karboksylsyre (3-metyl-pyridin-2-yl)-amid A-8 [X = CH2, n = 1, Ri = 2-(3-metyl)pyridyl]. A-8 fremstilles fra 2-klorkarbonyl-pyrrolidin-l-karboksylsyrebenzylester og 3-pikolin som beskrevet for syntese av pyrrolidin-2-karboksylsyre pyridin-2-yl-amid (hydrobromsyresalt) i eksempel 1.

1H NMR (DMSO-d6): 8 8,45-8,42 (m, 1H), 8-7,8 (m, 1H), 7,4-7,36 (dd, 1H), 4,7 (bs, 1H), 3,8 (m, 4H), 3,15-3,3 (m, 1H), 2,37-2,3 (bs, 3H), 2,12 (bs, 4H), 1,65-1,43 (m, 6H), 1,03-1 (d, J = 6,2 Hz, 3H). ES-MS: beregnet for C19H28N4O4 (376,45); funnet: 377,7

[M+H].

Eksempel 3: l-{2-R-[(formyl-hydroksy-amino)-metyl]-heksanoyl}-pyrrolidin-2-S-karboksylsyre-(6-metyl-pyridin-2-yl)-amid

Tittelforbindelsen fremstilles i henhold til generell fremgangsmåte A fra 2-[(benzyloksy-formyl-amino)-metyl]-heksansyre A-7 (R=n-butyl) og pyrrolidin-2-karboksylsyre (6-metyl-pyridin-2-yl)-amid A-8 (X = CH2, n = 1, Ri = 2-(6-metyl)pyridyl). A-8 fremstilles fra 2-klorkarbonyl-pyrrolidin-l-karboksylsyrebenzylester og 6-pikolin som beskrevet for syntese av pyrrolidin-2-karboksylsyre pyridin-2-yl-amid (hydrobromsyre-saltet) i eksempel 1.

1H NMR (DMSO-d6): 8 8,04-7,8 (m, 1H), 7,2-7,12 (d, J = 7,42 Hz, 1H), 4,75-4,73 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 3,85-3,71 (m, 4H), 3,21 (bs, 1H), 2,58 (bs, 3H), 2,3-2,1 (m, 4H), 1,67-1,42 (m, 6H), 1,06-1,04 (d, J = 6,3 Hz, 3H). ES-MS: beregnet for C19H28N4O4 (376,45); funnet: 377,7 [M+H].

Eksempel 4: l-{2-R-[(formyl-hydroksy-amino)-metyl]-heksanoyl}-pyrrolidiii-2-S-karboksylsyre-(4-metyl-pyridin-2-yl)-amid

Tittelforbindelsen fremstilles i henhold til generell fremgangsmåte A fra 2-[(benzyloksy-formyl-amino)-metyl]-heksansyre A-7 (R=n-butyl) og pyrrolidin-2-karboksylsyre (4-metyl-pyridin-2-yl)-amid A-8 (X = CH2, n = 1, Ri = 2-(4-metyl)pyridyl).

1H NMR (DMSO-de): 8 8,35-8,34 (d, J = 4,67 Hz, 1H), 8,08-7,98 (d, 1H), 4,75-4,73 (d, J = 4,67 Hz, 1H), 4,74 (bs, 1H), 3,73 (bs, 2H), 3,52 (bs, 2H), 2,49 (bs, 3H), 2,27-2,05 (m, 4H), 1,66-1,46 (m, 6H), 1,05 (bs, 3H). ES-MS: beregnet for C19H28N4O4 (376,46); funnet: 377,7 [M+H].

A-8 fremstilles fra 2-klorkarbonyl-pyrrolidin-l-karboksylsyrebenzylester og 4-pikolin som beskrevet for syntese av pyrrolidin-2-karboksylsyre pyridin-2-yl-amid (hydrobromsyresalt) i eksempel 1.

2-S-(4-metyl-pyridin-2-ylkarbamoyl)-pyrrolidin-l-karboksylsyrebenzylester

1H NMR (DMSO-de): 8 8,33 (bs, 1H), 8,17-8,13 (m, 1H), 7,81-7,77 (m, 1H), 7,6-7,3 (m, 4H), 5,9-5,11 (m, 2H), 4,72-4,66 (m, 1H), 3,68-3,61 (m, 2H), 2,44 (bs, 3H), 2,34-1,98 (m, 4H). ES-MS: beregnet for C19H21N3O3 (339,39); funnet: 340,6 [M+H].

Pyrrolidin-2-S-karboksylsyre (4-metyl-pyridin-2-yl) amidhydrobromsyresalt

1H NMR (DMSO-dé): 8 8,45-8,43 (d, 1H, J = 5,2 Hz), 8,03 (bs, 1H), 7,29-7,28 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 4,64 (bs, 1H), 3,47 (bs, 2H), 2,63 (bs, 3H), 2,56-2,07 (m, 4H). ES-MS: beregnet for C11H15N3O (205,12); funnet: 206,4 [M+H],

Eksempel 5: l-{2-R-[(formyl-hydroksy-amino)-metyl]-heksanoyl}-pyrrolidin-2-S-karboksylsyre-(5-fluor-pyridin-2-yI)-amid

Tittelforbindelsen fremstilles i henhold til generell fremgangsmåte A fra 2-[(benzyloksy-formyl-amino)-metyl]-heksansyre A-7 (R=n-butyl) og pyrrolidin-2-karboksylsyre (5-fluor-pyridin-2-yl)-amid A-8 (X = CH2, n = 1, Ri = 2-(5-fluor)pyridyl).

1H NMR (DMSO-de): 8 8,51-8,44 (m, 1H), 8,3-8,25 (m, 1H), 7,97-7,88 (m, 1H), 4,75 (bs, 1H), 3,82-3,72 (m, 2H), 3,65-3,52 (m, 2H), 3,21 (bs, 1H), 2,7-2,68 (m, 4H), 2,3-1,45 (m, 6H), 1,04 (d, 3H). ES-MS: beregnet for C18H25FN4O4 (380,42); funnet: 381,7

[M+H].

A-8 fremstilles fra 2-klorkarbonyl-pyrrolidin-l-karboksylsyrebenzylester og 5-fluor-pyridin-2-ylamin som beskrevet for syntese av pyrrolidin-2-karboksylsyre pyridin-2-yl-amid (hydrobromsyresalt) i eksempel 1.

Pyrrolidin-2-S-karboksylsyre (5-fluor-pyridin-2-yl) amidhydrobromsyresalt

1H NMR (DMSO-dé): 8 8,58-8,57 (d, J = 3,02 Hz, 1H), 8,3-8,25 (m, 1H), 8,05-7,83 (m, 1H), 4,62-4,59 (d, J = 7,87 Hz, 1H), 3,46 (bs, 2H), 2,69-2,55 (m, 1H), 2,21-2,06 (m, 3H). ES-MS: beregnet for C10H12FN3O (209,1); funnet: 210,4 [M+H].

Eksempel 6: l-{2-R-[(formyl-hydroksy-amino)-metyl]-hekanoyl}-pyrrolidin-2-S-karboksylsyre-(5-metyl-pyridin-2-yI)-amid

Tittelforbindelsen fremstilles henholdsvis til generell fremgangsmåte A fra 2-[(benzyloksy-formyl-amino)-metyl]-heksansyre A-7 (R=n-butyl) og pyrrolidin-2-karboksylsyre (5-metyl-pyridin-2-yl)-amid A-8 (X = CH2, n = 1, Ri = 2-(5-metyl) pyridyl).

1H NMR (DMSO-d6): 8 7,95-7,92 (d, J = 8,52 Hz, 1H), 7,78 (bs, 1H), 7,6-7,58 (m, 1H), 4,55 (bs, 1H), 3,88-3,54 (bs, 2H), 3,33-3,29 (bs, 2H), 3,1-2,9 (m, 1H), 2,24 (bs, 3H), 2,11-1,87 (m, 4H), 1,48-1,26 (m, 6H), 0,87-0,85 (d, 3H). ES-MS: beregnet for C19H28N4O4 (376,46); funnet: 377,7 [M+H].

A-8 fremstilles fra 2-klorkarbonyl-pyrrolidin-l-karboksylsyrebenzylester og 5-metyl-pyridin-2-ylamin som beskrevet for syntese av pyrrolidin-2-karboksylsyre pyridin-2-yl-amid (hydrobromsyresalt) i eksempel 1.

2-S-(5-meryl-pyridin-2-ylkarbamoyl)-pyrrolidin-l-karboksylsyrebenzylester

1H NMR (DMSO-de): 8 8,36-8,35 (d, J = 4,7 Hz, 1H), 8,12 (bs, 1H), 7,57-7,14 (m, 5H), 5,3-5,11 (m, 2H), 4,74-4,68 (t, J = 9,34 Hz, 1H), 3,7-3,62 (m, 2H), 2,5 2 (bs, 3H), 2,41-2,06 (m, 4H). ES-MS: beregnet for C19H21N3O3 (339,39); funnet: 340,6 [M+H].

Pyrrolidin-2-S-karboksylsyre (5-metyl-pyridin-2-yl) amidhydrobromsyresalt

1H NMR (DMSO-de): 8 8,45-8,43 (d, 1H, J = 5,2 Hz), 8,03 (bs, 1H), 7,29-7,28 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 4,64 (bs, 1H), 3,47 (bs, 2H), 2,63 (bs, 3H), 2,56-2,07 (m, 4H). ES-MS: beregnet for C11H15N3O (205,12); funnet: 206,4 [M+H].

Eksempel 7: l-{2-R-[(formyl-hydroksy-amino)-metyl]-heksanoyI}-pyrrolidin-2-S-karboksylsyre-(6-etyl-pyridin-2-yl)-amid

Tittelforbindelsen fremstilles i henhold til generell fremgangsmåte A fra 2-[(benzyloksy-formyl-amino)-metyl]-heksansyre A-7 (R=n-butyl) og pyrrolidin-2-karboksylsyre (6-etyl-pyridin-2-yl)-amid A-8 [X = CH2, n = 1,2-(6-etyl)pyridyl].

1H NMR (DMSO-de): 8 8,06-7,83 (m, 2H), 7,17-7,14 (d, J = 7,69 Hz, 1H), 4,77 (bs, 1H), 3,83-3,78 (m, 2H), 3,58-3,32 (m, 2H), 3,05 (bs, 1H), 2,87-2,83 (m, 2H), 2,3-2,07 (m, 3H), 1,65-1,38 (m, 10H), 1,04 (bs, 3H). ES-MS: beregnet for C20H30N4O4 (390,48); funnet: 391,4 [M+H]

A-8 fremstilles fra 2-klorkarbonyl-pyrrolidin-l-karboksylsyrebenzylester og 6-etyl-pyridin-2-ylamin som beskrevet for syntese av pyrrolidin-2-karboksylsyrepyridin-2-yl-amid (hydrobromsyresalt) i eksempel 1.

Pyrrolidin-2-S-karboksylsyre (6-etyl-pyridin-2-ylamid (hydrobromsyresalt)

1H NMR (DMSO-de): 8 8,07-7,94 (m, 2H), 7,27-7,25 (d, J = 7,42 Hz, 1H), 4,61 (bs, 1H), 3,46 (bs, 2H), 2,93-2,85 (m, 2H), 2,61-2,56 (m, 1H), 2,18-2,09 (m, 3H), 1,44-1,39 (m, 3H). ES-MS: beregnet for C12H17N3O (219,1); funnet: 220,2 [M+H].

Eksempel 8: l-{2-R-[(formyl-hydroksy-amino)-metyl]-heksanoyl}-pyrrolidin-2-S-karboksylsyre-(5-trifluormetyl-pyridin-2-yl)-amid

Tittelforbindelsen fremstilles henhold til generell fremgangsmåte A fra 2-[(benzyloksy-formyl-amino)-metyl]-heksansyre A-7 (R=n-butyl) og pyrrolidin-2-karboksylsyre (5-trifluormetyl-pyridin-2-yl)-amid A-8 [X = CH2, n = 1, Ri = 2-(5-trifluormetyl)pyridyl].

1H NMR (DMSO-de): 8 8,45-8,35 (m, 2H), 7,98 (bs, 1H), 4,8-4,78 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 3,84-3,73 (m, 2H), 3,54 (bs, 2H), 3,2 (bs, 1H), 2,34-2,1 (m, 4H), 1,65-1,46 (m, 6H), 1,05 (bs, 3H). ES-MS: beregnet for C19H25F3N4O4 (430,43); funnet: 431,3 [M+H].

A-8 fremstilles fra 2-klorkarbonyl-pyrrolidin-l-karboksylsyrebenzylester og 5-trifluormetyl-pyridin-2-ylamin som beskrevet for syntese av pyrrolidin-2-karboksylsyre pyridin-2-yl-amid (hydrobromsyresalt) i eksempel 1.

Pyrrolidin-2-S-karboksylsyre (5-triflurometyl-pyridin-2-ylamid

(hydrobromsyresalt)

1H NMR (DMSO-de): 8,98 (bs, 1H), 8,49-8,40 (m, 2H), 4,67 (bs, 1H), 3,49-3,47 (d, 2H), 2,64-2,57 (m, 1H), 2,22-2,09 (m, 3H). ES-MS: beregnet for C11H12F3N3O (259,1); funnet: 260,2 [M+H].

Eksempel 9; l-{2-R-[(formyl-hydroksy-amino)-metyI]-heksanoyl}-pyrrolidin-2-S-karboksylsyre-(6-klor-pyridin-2-yl)-amid

Tittelforbindelsen fremstilles i henhold til generell fremgangsmåte A fra 2-[(benzyloksy-formyl-amino)-metyl]-heksansyre A-7 (R-n-butyl) og pyrrolidin-2-karboksylsyre (6-fluor-pyridin-2-yl)-amid A-8 [X = CH2, n = 1, Ri = 2-(5-trilfuormetyl) pyridyl].

1H NMR (DMSO-de): 8 8,14 (bs, 1H), 8,04-7,97 (m, 1H), 7,04-7,02 (m, 1H), 4,70 (bs, 1H), 3,85-3,78 (m, 2H), 3,72-3,47 (m, 2H), 3,24 (bs, 1H), 2,3-2,06 (m, 4H), 1,64-1,45 (m, 6H), 1,04 (d, 3H). ES-MS: beregnet C18H25FN4O4 (380,42); funnet: 381,3 [M+H].

A-8 fremstilles fra 2-klorkarbonyl-pyrrolidin-l-karboksylsyrebenzylester og 6-fluor-pyridin-2-ylamin som beskrevet for syntese av pyrrolidin-2-karboksylsyre pyridin-2-yl-amin (hydrobromsyresalt) i eksempel 1.

(6-fluor-pyridin-2-yl)-(4-metoksy-benzyl)-amin

Til en løsning av 2,6-di-fluor-pyridin (2,2 g, 1 ekviv.) i DMF (20 ml) ble det tilsatt 4-metoksy-benzylamin (5,6 g, 2,2 ekviv.) og kaliumkarbonat (12 g, 4,4 ekviv.). Etter oppvarming ved 50°C i 16 timer blir løsningen avkjølt ved romtemperatur og filtrert gjennom celitt. Filtratet konsentreres under redusert trykk. Residuet renses med silika-gelkolonnekromatografi ved anvendelse av en gradient av heksan:EtOAc (19:1 4:1) for å gi tittelforbindelsen.

1H NMR (CDCI3): 8 7,49-7,41 (dd, J = 7&8 Hz, 1H), 7,24-7,28 (m, 2H), 6,90-6,85 (m, 2h), 6,19-6,13 (m, 2H), 4,40 (d, J = 6 Hz, 2H), 3,80 (s, 3H). ES-MS: beregnet for C13H13FN2O (232,25); funnet: 233,4 [M+H].

2-S-(6-fluor-pyridin-2-yl-karbamoyl)-pyrrolidin-l-karboksylsyrebenzylester

2-klorkarbonyl-pyrrolidin-1 -karboksylsyrebenzylester og 3 -(fluor-fenyl)-(4-metoksy-benzyl)-amin omsettes fri amid intermediatet som beskrevet for syntese av 2-S-(pyridin-2-yl-karbamoyl)-pyrrolidin-l -karboksylsyrebenzylester i eksempel 1. Dette intermediatet behandles med 90% vandig TFA for å gi tittelforbindelsen.

1H NMR (CDCI3): 8 8,06 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,82-7,74 (dd, J = 8 Hz, 1H), 7,38-7,26 (m, 5H), 6,66 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 5,30-5,18 (m, 3H), 3,60-3,59 (m, 2H), 2,05-1,92 (m, 4H). ES-MS: beregnet for C18H18FN3O3 (343,35); funnet: 344,3 [M+H].

Pyrrolidin-2-S-karboksylsyre (6-fluor-pyridin-2-yl) amidhydrobromsyresalt

Tittelforbindelsen fremstilles fra intermediatet ovenfor som beskrevet for syntese av pyrrolidin-2-karboksylsyre pyridin-2-yl-amid (hydrobromsyresalt) i eksempel 1.

1H NMR (DMSO-de): 8 7,4-7,3 (m, 1H), 6,21-6,17 (m, 1H), 4,88-4,87 (d, 1H), 3,86 (bs, 1H), 2,89-2,69 (m, 2H), 1,99-1,91 (m, 1H), 1,58-1,45 (m, 3H). ES-MS: beregnet for C10H12FN3O (209,1); funnet: 242,3 [M+K].

Eksempel 11: l-{2-R-[(formyl-hydroksy-amino)-metyl]-heksanoyl}-pyrrolidin-2-S-karboksylsyre (4-metyl-l-oksy-pyridin-2-yl-)-amid

Tittelforbindelsen fremstilles i henhold til generell fremgangsmåte A fra 2-[(benzyloksy-formyl-amino)-metyl]-heksansyre A-7 (R=n-butyl) og pyrrolidin-2-karboksylsyre (4-metyl-l-oksy-pyridin-2-yl)-amid A-8 [X = CH2, n = 1, Ri = 2-(4-metyl-1 -oksy)-pyridyl].

1H NMR (DMSO-de): 8 8,45-8,42 (d, J = 6,32 Hz, 1H), 8,3 (bs, 1H), 7,17-7,15 (d, J = 6,7 Hz, 1H), 4,91-4,89 (d, J = 7,42 Hz, 1H), 3,87-3,68 (m, 2H), 3,53 (bs, 2H), 3,22 (bs, 1H), 2,5 (bs, 3H), 2,34-2,33 (d, J = 4,5 Hz, 2H), 2,13-2,12 (d, J = 3,3 Hz, 2H), 1,68-1,45 (m, 6H), 1,02 (bs, 3H). ES-MS: beregnet for C19H28N4O5 (392,46); funnet: 393,3

[M+H].

Pyrrolidin-2-S-karboksylsyre (4-metyl-l-oksy-pyridin-2-yl) amidhydrobromsyresalt

3-klorkarbonyl-pyrrolidin-1 -karboksylsyrebenzylester og 4-metyl-pyridin-2-ylamin omsettes for å gi amidintermediatet som beskrevet for syntese av 2-S-(pyridin-2-yl-karbamoyl)-pyrrolidin-l-karboksylsyre benzylester i eksempel 1. Dette intermediatet etter oksidasjon med MCPBA fulgt av behandling med HBr-AcOH gir tittelforbindelsen.

1H NMR (DMSO-de): 8 8,54-8,53 (d, J = 6,6 Hz, 1H), 8,32-8,315 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,31-7,28 (m, 1H), 4,98-4,96 (d, J = 6,77 Hz, 1H), 3,48-3,46 (d, J = 4,39 Hz, 2H), 2,62-2,54 (m, 4H), 2,2-2,07 (m, 3H). ES-MS: beregnet for CuHi5N302 (221,12); funnet: 222,3 [M+H].

Eksempel 14: Syntese av l-{2-R-[(formyl-hydroksy-amino)-metyl]-heksanoyl}-pyrrolidin-2-S-karboksylsyre-(4-etyl-pyridin-2-yl)-amid

Tittelforbindelsen fremstilles henhold til generell fremgangsmåte A fra 2-[(benzyloksy-formyl-amino)-metyl]-heksansyre A-7 (R=n-butyl) og pyrrolidin-2-karboksylsyre (4-etyl-pyridin-2-yl)-amid A-8 [X = CH2, n = 1, Ri = 2-(4-etyl)pyridyl].

1H NMR (DMSO-de, rotamerer): 8 10,6 (bs, 1H), 10,23 (s, 0,4H), 9,87 (s, 0,6H), 8,38-8,36 (m, 1H), 8,12 (bs, 1H), 7,99 (bs, 1H), 7,16-7,14 (m, 1H), 4,75 (bs, 1H), 3,75 (bs, 4H), 3,20 (bs, 1H), 2,82-2,75 (q, J = 7,56 Hz, 2H), 2,05 (bs, 4H), 1,65-1,45 (m, 6H), 1,38-1,33 (t, J = 7,56 Hz, 3H), 1,04 (bs, 3H). ES-MS: beregnet for C20H30N4O4 (390,48); funnet: 391,4 [M+H].

A-8 fremstilles fra 2-klorkarbonyl-pyrrolidin-l-karboksylsyrebenzylester og 4-etyl-pyridin-2-ylamin beskrevet for syntese av pyrrolidin-2-karboksylsyre pyridin-2-yl-amid (hydrobromsyresalt) i eksempel 1.

2-S-(4-etyl-pyridin-2-ylkarbamoyl)-pyrrolidin-l-karboksylsyrebenzylester

1H NMR (DMSO-de): 8 10,8-10,7 (d, J = 15,1 Hz, 1H), 8,39-8,36 (M, 1H), 8,16 (S, 1H), 7,57-7,25 (m, 5H), 7,18-7,17 (m, 1H), 5,27-5,25 (m, 2H), 4,74-4,68 (m, 1H), 3,68-3,61 (m, 2H), 2,82-2,77 (q, J = 6,50 Hz, 2H), 2,43-2,29 (m, 1H), 2,13-1,98 (m, 3H), 1,40-1,35 (t, J = 7,55 Hz, 3H). ES-MS: beregnet for C20H23N3O3 (353,42); funnet: 354,2

[M+H].

Pyrrolidin-2-S-karboksylsyre (4-etyl-pyridin-2-yl)-amidhydrobromsyresalt

1H NMR (DMSO-de): 8 11,43 (s, 1H), 8,47-8,45 (m, 1H), 8,24 (bs, 1H), 8,08 (s, 1H), 7,33-7,30 (m, 1H), 4,64 (s, 1H), 3,49-3,47 (m, 2H), 2,89-2,82 (q, J = 7,51 Hz, 2H), 2,65-2,55 (m, 1H), 2,33-2,07 (m, 3h), 1,40-1,35 (t, J = 7,56 Hz, 3H). ES-MS: beregnet for Ci2Hi7N30<*>2HBr (219,28); funnet: 220,3 [M+H] fri base.

Eksempel 21: l-{2-R-[(formyl-hydroksy-amino)-metyl]-heksanoyl}-pyrrolidin-2-S-karboksylsyre-(5-trifluormetyl-l-oksy-pyridin-2-yl)-amid

Tittelforbindelsen fremstilles i henhold til fremgangsmåte A fra 2-[(berizyloksy-formyl-amino)-metyl]-heksansyre A-7 (R=n-butyl) og pyrrolidin-2-karboksylsyre (5-trifluormetyl-l-oksy-pyirdin-2-yl)-amid A-8 [X = CH2, n = 1, Ri = 2-(5-trifluormetyl-l-oksy)-pyridyl].

1H NMR (DMSO-de): 8 9,15 (bs, 1H), 8,64-8,62 (d, J = 8,79 Hz, 1H), 7,98-7,96 (d, J = 9,34 Hz, 1H), 5,04-5,0 (m, 1H), 3,87-3,73 (m, 2H), 3,65 (bs, 2H), 3,49-3,48 (m, 1H), 2,34 (bs, 2H), 2,13-2,12 (d, J = 2,47 Hz, 2H), 1,67-1,45 (m, 6H), 1,03 (bs, 3H). ES-MS: beregnet for C19H25F3N4O5 (446,43); funnet: 447,3 [M+H].

A-8 fremstilles fra 2-klorkarbonyl-pyrrolidin-l-karboksylsyre benzylester og 3-amino-kinolin som beskrevet for syntese av pyrrolidin-2-karboksylsyre pyridin-2-yl-amid (hydrobromsyresalt) i eksempel 1.

2-S-(5-trifluormetyl-l-oksy-pyridin-2-ylkarbamoyl)-pyrrolidin-l-karboksylsyre benzylester

2-klorkarbonyl-pyrrolidin-l-karboksylsyre benzylester og 5-trifluormetyl-pyridin-2-ylamin omsettes for å gi amid intermediatet som beskrevet for syntese av 2-S-(pyridin-2-yl-karbamoyl)-pyrrolidin-l-karboksylsyrebenzylester i eksempel 1. Intermediatet etter oksidering med MCPBA gir tittelforbindelsen.

1H NMR (DMSO-de): 8 9,15 (bs, 1H), 8,67-8,58 (dd, J = 8,79 & 9,07 Hz, 1H), 7,98 (bs, 1H), 7,57 (bs, 2H), 7,37-7,34 (d, J = 8,065 Hz, 2H), 5,29-5,26 (d, J = 9,9 Hz, 2H), 5,1-5,0 (m, 1H), 3,68-3,53 (m, 2H), 2,63-3,57 (m, 2H), 2,2-2,05 (m, 2H). ES-MS: beregnet for C19H18F3N3O4 (409,12); funnet: 410,2 [M+H],

Pyrrolidin-2-S-karboksylsyre (5-tirfluormetyl-l-oksy-pyridin-2-yl) amidhydrobromsyresalt

Behandling av det N-beskyttede intermediatet med HBr-AcOH gir tittelforbindelsen.

1H NMR (DMSO-de): 8 9,21 (bs, 1H), 8,66-8,63 (d, J = 8,79 Hz, 1H), 8,06-8,02 (dd, J = 1,37 Hz, 1H), 5,05-5,0 (t, J = 6,58 & 7,14 Hz, 1H), 3,58-3,47 (m, 2H), 2,63-2,57 (m, 2H), 2,23-2,1 (m, 2H). ES-MS: beregnet for C11H12F3N3O2 (275,09); funnet: 276,1

[M+H].

Eksempel 22:1-I2-R- [(formyl-hydroksy-amino)-metyl] -heksanoy l}-py rrolidin-2-S-karboksylsyre-(4-etyl-l-oksy-pyridin-2-yl)-amid

Tittelforbindelsen fremstilles i henhold til generell fremgangsmåte A fra 2-[(benzyloksy-formyl-amino)-metyl]-heksansyre A-7 (R=n-butyl) og pyrrolidin-2-karboksylsyre (4-etyl-l-oksy-pyridin-2-yl)-amid A-8 [X = CH2, n = 1, Ri = 2-(4-etyl-l-oksy)-pyridyl].

1H NMR (DMSO-de): 8 8,47-8,45 (d, J = 6,593 Hz, 1H), 8,35-8,34 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,22-7,20 (m, 1H), 4,92-4,89 (t, J = 4,7 & 3,02 Hz, 1H), 3,85-3,80 (t, J = 6,49 & 8,24 Hz, 2H), 3,53 (bs, 2H), 3,22 (bs, 1H), 2,85-2,71 (m, 2H), 2,35-2,13 (m, 4H), 1,68-1,36 (m, 6H), 1,02 (bs, 3H). ES-MS: beregnet for C20H30N4O5 (406,48); funnet: 407,3

[M+H],

2-S-(4-etyl-l-oksy-pyridin-2-ylkarbamoyl)-pyrrolidin-l-karboksylsyrebenzylester

2-klorkarbonyl-pyrrolidin-1 -karboksylsyrebenzylester og 4-etyl-pyridin-2-ylamin omsettes for å gi amidintermediatet som beskrevet for syntese av 2-S-(pyridin-2-yl-karbamoyl)-pyrrolidin-l-karboksylsyrebenzylester i eksempel 1. Dette intermediatet etter oksidering med MCPBA gir tittelforbindelsen.

1H NMR (CDCI3): 8 8,8-8,12 (m, 1H), 7,4-7,2 (m, 1H), 6,85-6,83 (d, J = 6,59 Hz, 1H), 5,3-5,1 (m, 2H), 4,57 (bs, 1H), 3,71-3,54 (m, 2H), 2,7-2,63 (dd, J = 7,42 Hz, 2H), 2,24-1,73 (m, 4H), 1,3-1,2 (m, 3H). ES-MS: beregnet for C20H23N3O4 (369,17); funnet: 370,2

[M+H].

Pyrrolidin-2-S-karboksylsyre (4-etyl-l-oksy-pyridin-2-yl) amidhydrobromsyresalt

Behandling av det N-beskyttede intermediatet ovenfor med HBr-AcOH gir tittelforbindelsen.

1H NMR (DMSO-de): 8 8,56-8,53 (d, J = 6,6 Hz, 1H), 8,36-8,35 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 7,33-7,3 (dd, J = 2,37 & 2,47 Hz, 1H), 5,0-4,96 (t, J = 8,24 & 5,49 Hz, 1H), 3,39-3,42 (m, 2H), 2,88-2,81 (dd, J = 7,7 Hz, 2H), 2,64-2,55 (m, 1H), 2,2-2,05 (m, 3H), 1,29-1,25 (t, J = 7,14 & 6,87 Hz, 3H). ES-MS: beregnet for C12H17N3O2 (235,13); runnet: 236,2

[M+H].

Eksempel 23: l-{2-R-[(formyl-hydroksy-amino)-metyl]-heksanoyl}-pyrrolidin-2-S-karboksylsyre-(4-fenyl-pyridin-2-yI)-amid

Tittelforbindelsen fremstilles i henhold til generell fremgangsmåte A fra 2-[(benzyloksy-formyl-amino)-metyl]-heksansyre A-7 (R=n-butyl) og pyrrolidin-2-karboksylsyre (4-fenyl-pyridin-2-yl)-amid A-8 [X = CH2, n = 1, Ri = 2-(4-fenyl) pyridyl].

1HNMR (DMSO-de): 8 8,6-8,45 (m, 1H), 8,3-7,6 (m, 5H), 4,8 (bs, 1H), 3,85-3,71 (m, 2H), 3,31 (bs, 1H), 2,32-1,98 (m, 4H), 1,76-1,43 (m, 6H), 1,04 (bs, 3H). ES-MS: beregnet for C24H30N4O4 (438,53); funnet: 439,4 [M+H].

A-8 fremstilles fra 2-klorkarbonyl-pyrrolidin-l-karboksylsyre benzylester og 4-fenyl-pyridin-2-ylamin som beskrevet for syntese av pyrrolidin-2-karboksylsyre pyridin-2-yl-amid (hydrobromsyresalt) i eksempel 1.

2-S-(4-fenyl-pyirdin-2-yl-karbamoyl)-pyrrolidin-l-karboksylsyre benzylester

[M+H].

Pyrrolidin-2-S-karboksylsyre(4-fenyl-pyridin-2-yl) amidhydrobromsyresalt

1H NMR (DMSO-de): 8 8,64-8,63 (d, J = 5,22 Hz, 1H), 8,53 (s, 1H), 7,94-7,91 (dd, J = 1,65 & 1,1 Hz, 1H), 7,78-7,67 (m, 5H), 4,68 (bs, 1H), 3,5-3,46 (m, 2H), 2,65-2,58 (m, 1H), 2,24-2,09 (m, 3H). ES-MS: beregnet for Ci6Hi7N30 (267,14); funnet: 268,3

[M+H].

Eksempel 24: l-{2-R-[(formyl-hydroksy-amino)-metyl]-heksanoyl}-pyrrolidin-2-S-karboksylsyre-(4-fenyl-l-oksy-pyridin-2-yl)-amid

Tittelforbindelsen fremstilles i henhold til generell fremgangsmåte A fra 2-[(benzyloksy-formyl-amino)-metyl]-heksansyre A-7 (R=n-butyl) og pyrrolidin-2-karboksylsyre (4-fenyl-l-oksy-pyridin-2-yl)-amid A-8 [X = CH2, n = 1, Ri = 2-(4-fenyl-1- oksy)-pyridyl].

1H NMR (DMSO-de): 8 8,78-8,79 (d, J = 2,47 Hz, 1H), 8,64-8,62 (d, J = 6,87 Hz, 1H), 7,9-7,6 (m, 5H), 4,99-4,96 (t, J = 4,67 & 3,3 Hz, 1H), 3,88-3,76 (m, 1H), 3,53 (bs, 2H), 3,24 (bs, 1H), 2,35-2,15 (m, 4H), 1,68-1,45 (m, 6H), 1,05-1,03 (d, J = 6,59 Hz, 3H). ES-MS: beregnet for C24H30N4O5 (454,53); funnet: 455,3 [M+H].

2- S-(4-fenyl-l-oksy-pyridin-2-ylkarbamoyl)-pyrrolidin-l-karboksylsyrebenzylester

2-klorkarbonyl-pyrrolidin-l-karboksylsyrebenzylester og 4-fenyl-pyridin-2-ylamin omsettes for å gi amidintermediatet som beskrevet for syntese av 2-S-(pyridin-2-yl-karbamoyl)-pyrrolidin-l-karboksylsyrebenzylester i eksempel 1. Dette intermediatet etter oksidering med MCPBA gir tittelforbindelsen.

1H NMR (CDCI3): 8 8,3-8,2 (m, 1H), 7,96-7,13 (m, 12H), 5,73-5,12 (m, 2H), 4,7-4,4 (m, 1H), 3,8-3,5 (m, 2H), 2,5-2,01 (m, 4H). ES-MS: beregnet for C24H23N3O4 (417,17); funnet: 418,1 [M+H].

Pyrrolidin-2-S-karboksylsyre (4-fenyl-l-oksy-pyridin-2-yl)

amidhydrobromsyresalt

1H NMR (DMSO-de): 8 8,79-8,78 (d, J = 2,47 Hz, 1H), 8,7-8,67 (d, J = 6,87 Hz, 1H), 7,94-7,89 (m, 1H), 7,79-7,64 (m, 5H), 5,03-4,97 (dd, J = 6,59 Hz, 1H), 3,53-3,44 (m, 2H), 2,64-2,55 (m, 1H), 2,28-2,09 (m, 3H). ES-MS: beregnet for Ci6Hi7N302 (283,13); funnet: 284,2 [M+H].

Eksempel 25: l-{2-R-[(formyl-hydroksy-amino)-metyl]-heksanoyl}-pyrrolidin-2-S-karboksylsyre-(4-trifluormetyl-pyridin-2-yl)-amid

Tittelforbindelsen fremstilles i henhold til generell fremgangsmåte A fra 2-[(benzyloksy-formyl-amino)-metyl]-heksansyre A-7 (R=n-butyl) og pyrrolidin-2-karboksylsyre (4-trifluormetyl-pyridin-2-yl)-amid A-8 [X = CH2, n = 1, Ri = 2-(4-trifluormetyl)pyridyl].

1H NMR (DMSO-de): 8 8,8-8,78 (d, J = 5,22 Hz, 1H), 7,97 (bs, 1H), 7,66-7,65 (d, J = 4,67 Hz, 1H), 4,8-4,77 (t, J = 4,12 & 4,4 Hz, 1H), 3,86-3,7 (m, 2H), 3,52 (bs, 2H), 3,2 (bs, 1H), 2,33-2,1 (m, 4H), 1,64-1,45 (m, 6H), 1,06-1,04 (d, J = 6,32 Hz, 3H). ES-MS: beregnet for C19H25F3N4O4 (430,43); funnet: 431,3 [M+H].

A-8 fremstilles fra 2-klorkarbonyl-pyrrolidin-l -karboksylsyrebenzylester og 4-trifluormetyl-pyridin-2-ylamin som beskrevet for syntese av pyrrolidin-2-karboksyl-syrepyridin-2-yl-amid (hydrobromsyresalt) i eksempel 1.

Pyrrolidin-2-S-karboksylsyre (4-trifluormetyl-pyridin-2-yl) amidhydrobromsyresalt

1H NMR (DMSO-de): 8 8,93-8,85 (m, 2H), 7,77-7,75 (m, 1H), 4,67-4,65 (d, J = 6,593 Hz, 1H), 3,49-3,44 (m, 2H), 2,65-2,56 (m, 1H), 2,24-2,09 (m, 3H). ES-MS: beregnet for C11H12F3N3O (259,1); funnet: 260,2 [M+H].

Eksempel 26: l-{2-R-[(formyl-hydroksy-amino)-metyI]-heksanoyl}-pyrrolidin-2-S-karboksyIsyre-(4-trifluormetyl-l-oksy-pyridin-2-yl)-amid

Tittelforbindelsen blir fremstilt i henhold til generell fremgangsmåte A fra 2-[(benzyloksy-formyl-amino)-metyl]-heksansyre A-7 (R=n-butyl) og pyrrolidin-2-karboksylsyre (4-trifluormetyl-l-oksy-pyridin-2-yl)-amid A-8 [X = CH2, n = 1, Ri = 2-(4-trifluormetyl-1 -oksy)-pyridyl].

1H NMR (DMSO-de): 8 8,79-8,76 (m, 1H), 7,98 (bs, 1H), 7,73-7,65 (m, 1H), 5,04-5,0 (m, 1H), 3,84-3,72 (m, 2h), 3,52 (bs, 2H), 3,3 (bs, 1H), 2,32-2,13 (m, 2H), 1,77-1,44 (m, 6H), 1,04-1,02 (d, J = 6,04 Hz, 3H). ES-MS: beregnet for C^sF^Oj (446,43); funnet: 447,3 [M+H].

Pyrrolidin-2-S-karboksylsyre (4-trifluormetyl-l-oksy-pyridin-2-yl) amidhydrobromsyresalt 2-klorkarbonyl-pyrrolidin-1 -karboksylsyrebenzylester og 4-trifluormetyl-pyridin-2-ylamin ble omsatt og gav amidintermediatet som beskrevet i syntesen av 2-S-(pyridin-2-yl-karbamoyl)-pyrrolidin-l-karboksylsyrebenzylester i eksempel 1. Dette intermediatet etter oksidasjon med MCPBA fulgt av fjerning av N-benzyloksykarbonylgruppen med HBr-AcOH gav tittelforbindelsenn.

1H NMR (DMSO-de): 8,94-8,74 (m, 2H), 7,83-7,8 (m, 1H), 5,02-4,97 (t, J = 6,22 & 8,52 Hz, 1H), 3,5-3,42 (m, 2H), 2,61-2,52 (m, 1H), 2,27-2,06 (m, 3H). ES-MS: beregnet for C11H12F3N3O2 (275,09); funnet: 276,1 [M+H].

Eksempel 29: l-{2-R-[(formyl-hydroksy-amino)-metyI]-heksanoyl}-pyrrolidin-2-S-karboksylsyre (4-metoksy-pyridin-2-yl)-amid

Tittelforbindelsen fremstilles i henhold til generell fremgangsmåte A fra 2-[(benzyloksy-formyl-amino)-metyl]-heksansyre A-7 (R=n-butyl) og pyrrolidin-2-karboksylsyre (4-metoksy-pyridin-2-yl)-amid A-8 [X = CH2, n = 1, Ri = 2-(4-metoksy) pyridyl].

1H NMR (DMSO-de, rotamerer): 8 10,7 (bs, 1H), 10,2 (s, 0,3H), 9,87 (s, 0,7H), 8,44 (s, 0,6H), 8,32-8,30 (d, J = 5,77 Hz, 1H), 7,98 (s, 0,4H), 7,86 (s, 1H), 6,91-6,88 (m, 1H), 4,75-4,73 (m, 1H), 3,99 (s, 3H), 3,87-3,67 (m, 4H), 3,30-3,10 (bs, 1H), 2,30-2,06 (m, 4H), 1,65-1,36 (m, 6H), 1,11-0,926 (m, 3H). ES-MS: beregnet for Ci9H28N405 (392,45); funnet: 393,3 [M+H].

A-8 fremstilles fra 2-klorkarbonyl-pyrrolidin-1-karboksylsyre benzylester og 4-metoksy-pyridin-2-ylamin som beskrevet for syntese av pyrrolidin-2-karboksylsyre pyridin-2-yl-amid (hydrobromsyresalt) i eksempel 1.

2-S-(4-metoksy-pyridin-2-ylkarbamoyl)-pyrrolidin-l-karboksylsyrebenzylester

1H NMR (DMSO-de): 8 10,8-10,7 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 8,32-8,31 (d, J = 5,7 Hz, 1H), 7,91 (s, 1H), 7,58-7,27 (m, 5H), 6,92-6,89 (m, 1H), 5,32-5,16 (m, 2H), 4,75-4,68 (m, 1H), 4,00 (s, 3H), 3,76-3,53 (m, 2H), 2,44-1,98 (m, 4H). ES-MS: beregnet for C19H21N3O4 (355,39); funnet 356,3 [M+H].

Pyrrolidin-2-S-karboksylsyre (4-metoksy-pyirdin-2-yl)-amid hydrobromsyresalt 1H NMR (DMSO-de): 8 11,9 (bs, 1H), 8,98 (bs, 1H), 8,48-8,47 (d, J = 6,32 Hz, 1H), 7,67 (bs, 1H), 7,22-7,19 (m, 1H), 4,70-4,69 (m, 1H), 4,12 (s, 3H), 3,51-3,47 (m, 2H), 2,66-2,57 (m, 1H), 2,28-2,10 (m, 3H). ES-MS: beregnet for CiiHi5N302<*>2HBr (221,26); funnet: 222,2 [M+H] fri base.

1- {2-R-[(benzyloksy-formyl-amino)-metyl]-heksanoyl}-pyrrolidin-2-S-karboksylsyre (4-metoksy-pyirdin-2-yl)-amid

1H NMR (DMSO-de, rotamerer): 8 10,7 (s, 1H), 8,41 (s, 0,5H), 8,33-8,31 (m, 1H), 8,06 (s, 0,5H), 7,85 (s, 1H), 7,62-7,59 (m, 5H), 6,91-6,88 (m, 1H), 5,06 (s, 2H), 4,77 (s, 1H), 3,99 (s, 3H), 3,85-3,67 (m, 4H), 3,10 (bs, 1H), 2,28-2,06 (m, 4H), 1,65-1,44 (m, 6H), 1,05-1„01 (m, 3H). ES-MS: beregnet for C26H34N4O5 (482,57); funnet: 483,3 [M+H].

Eksempel 30: l-{2-R-[(formyl-hydroksy-amino)-metyI]-heksanoyl}-pyrrolidin-2-S-karboksylsyre (3-metoksy-pyridin-2-yl)-amid

Tittelforbindelsen fremstilles i henhold til generell fremgangsmåte A fra 2-[(benzyloksy-formyl-amino)-metyl]-heksansyre A-7 (R=n-butyl) og pyrrolidin-2-karboksylsyre (3-metoksy-pyirdin-2-yl)-amid A-8 [X = CH2, n = 1, Ri = 2-(3-metoksy) pyridyl].

1H NMR (DMSO-de): 8 9,83 (s, 1H), 8,45 (s, 1H), 8,13-8,11 (m, 1H), 7,98 (s, 1H), 7,65-7,62 (m, 1H), 7,40-7,36 (m, 1H), 4,83 (bs, 1H), 4,00 (s, 3H), 3,70-3,83 (m, 4H), 3,20 (bs, 1H), 2,35-2,205 (m, 4H), 1,75-1,43 (m, 6H), 1,15-1,00 (m, 3H). ES-MS:

beregnet for C19H28N4O5 (392,45); funnet: 393,3 [M+H].

A-8 fremstilles fra 2-klorkarbonyl-pyrrolidin-1-karboksylsyre benzylester og 3-metoksy-pyridin-2-ylamin som beskrevet for syntese av pyrrolidin-2-karboksylsyre pyridin-2-yl-amid (hydrobromsyresalt) eksempel 1.

2- S-(3-metoksy-pyridin-2-ylkarbamoyl)-pyrrolidin-l-karboksylsyrebenzylester

1H NMR (DMSO-de): 8 9,96-9,90 (d, J = 17,8 Hz, 1H), 8,17-8,13 (m, 1H), 7,66-7,39 (m, 7H), 5,28-5,19 (m, 2H), 4,72 (bs, 1H), 3,94 (s, 3H), 3,69-3,53 (m, 2H), 2,49-2,31 (m, 1H), 2,18-2,04 (m, 3H)s. ES-MS: beregnet for C19H21N3O4 (355,39); funnet: 356,3

[M+H].

Pyrrolidin-2-S-karboksylsyre (3-metoksy-pyridin-2-yl)-amid hydrobromsyresalt 1H NMR (DMSO-de): 8 10,8 (bs, 1H), 8,89 (bs, 1H), 8,23-8,21 (m, 1H), 7,87-7,85 (m, 1H), 7,60-7,56 (m, 1H), 4,73 (bs, 1H), 4,07 (s, 3H), 3,54-3,45 (m, 2H), 2,64-2,57 (m, 1H), 2,24-2,14 (m, 3H). ES-MS: beregnet for CiiHi5N302<*>2HBr (221,26); funnet: 222,2 [M+H] fri base.

l-{2-R-[(benzyloksy-formyl-amino)-metyl]-heksanoyl}-pyrolidin-2-S-karboksylsyre (3-metoksy-pyridin-2-yl)-amid

1H NMR (DMSO-de): 8 9,82 (s, 1H), 8,42 (s, 1H), 8,13-8,11 (m, 1H), 7,65-7,59 (m, 6H), 7,40-7,36 (m, 1H), 5,06 (s, 2H), 4,81 (bs, 1H), 4,00 (s, 3H), 3,88-3,70 (m, 4H), 3,10 (bs, 1H), 2,13-2,01 (m, 4H), 1,65-1,41 (m, 6H), 1,03-0,968 (m, 3H). ES-MS: beregnet for C28H34N4O5 (482,57); funnet: 483,3 [M+H].

Eksempel 36: l-{2-R-[(formyl-hydroksy-amino)-metyl]-heksanoyl}-pyrrolidiii-2-S-karboksylsyre (5-fluor-l-oksy-pyridin-2-yl)-amid

Tittelforbindelsen fremstilles i henhold til generell fremgangsmåte A fra 2-[(benzyloksy-formyl-amino)-metyl]-heksansyre A-7 (R=n-butyl) og pyrollidin-2-karboksylsyre (5-fluor-pyridin-2-yl)-amid A-8 [X = CH2, n = 1, Ri = 2-(5-fluor)-pyridyl fulgt av oksidasjon med MCPBA.

1H NMR (DMSO-de): 8 10,6 (s, 1H), 9,85 (s, 1H), 8,71 (s, 1H), 8,28 (m, 1H), 7,80 (s, 1H), 7,45 (m, 1H), 4,75 (m, 1H), 3,52-3,80 (m, 2H), 3,32 (m, 2H), 3,05 (m, 1H), 2,14 (m, 1H), 1,94 (m, 3H), 1,50 (m, 1H), 1,35 (m, 2H), 1,26 (m, 3H), d 0,84 (m, 3H). ES-MS beregnet for C18H25FN4O5 (396,42); funnet: 397,2 [M+H].

A-8 fremstilles fra 2-klorkarbonyl-pyrrolidin-1-karboksylsyre benzylester og 5-fluor-pyridin-2-ylamin som beskrevet i syntese for pyrrolidin-2-karboksylsyre pyridin-2-yl-amid (hydrobromsyresalt) i eksempel 1.

l-{2-R-[(benzyloksy-formyl-amino)-metyl]-heksanoyl}-pyrrolidin-2-S-karboksylsyre (5-fluor-pyridin-2-yl)-amid

1H NMR (DMSO-de): 10,66 (s, 1H), 8,33 (m, 1H), 8,10 (m, 1H), d, 7,75 (m, 1H), 7,44 (m, 5H), 7,14 (m, 1H), 4,88 (s, 2H), 4,59 (m, 1H), 3,67 (m, 2H), 3,55 (m, 2H), 2,94 (m, 1H), 1,72-2,12 (m, 4H), 1,48 (m, 1H), 1,34 (m, 1H), 1,26 (m, 4H), 0,86 (m, 3H). ES-MS beregnet for C25H31FN4O4 (470,55); funnet 471,4 [M+H].

l-{2-R-[(benzyloksy-formyl-amino)-metyl]-heksanoyl}-pyrrolidin-2-S-karboksylsyre (5-fluor-l-oksy-pyridin-2-yl)-amid

1H NMR (DMSO-de): 8 10,61 (s, 1H), 8,73 (m, 1H), 8,26 (m, 1H), 7,90 (m, 1H), d 7,42 (m, 5H), 7,11-7,30 (m, 1H), 4,86 (s, 2H), 4,78 (m, 1H), 3,67 (m, 2H), 3,56 (m, 2H), 2,92 (m, 1H), d 2,02 (m, 1H), 1,91 (m, 2H), 1,82 (m, 1H), 1,48 (m, 1H), 1,36 (m, 1H), 1,24 (m, 4H), d 0,83 (m, 3H). ES-MS beregnet for C25H31FN4O5 (486,55); funnet: 487,4

[M+H].

Eksempel 38: l-{2-R-[(formyl-hydroksy-amino)-metyl]-heksanoyl}-4-R-hydroksy-pyrrolidin-2-S-karboksylsyre (5-meryl-pyridin-2-yl)-amid

Tittelforbindelsen fremstilles i henhold til generell fremgangsmåte A fra 2-[(benzyloksy-formyl-amino)-metyl]-heksansyre A-7 (R=n-butyl) og 4-R-benzyloksy-pyrrolidin-2-karboksylsyre (5-metyl-pyridin-2-yl)-amid A-8 [X = (R)-CH-OH, n = 1, Ri = 2-(5-metyl)pyridyl].

1H NMR (DMSO-de): 8 8,4-8,3 (m, 1H), 8,17-8,01 (m, 1H), 7,86-7,75 (m, 1H), 5,36 (bs, 1H), 4,83-4,78 (t, J = 8,42 & 7,67 Hz, 1H), 4,56 (bs, 1H), 3,89-3,73 (m, 2H), 3,52 (bs, 2H), 3,14 (bs, 1H), 2,69 (bs, 3H), 2,26-2,09 (m, 4H), 1,63-1,44 (m, 6H), 1,03 (bs, 3H). ES-MS: beregnet for C19H28N4O5 (392,46); funnet: 393,5 [M+H].

A-8 fremstilles fra 4-R-benzyloksy-pyrrolidin-l-karboksylsyretert-butylester og 5-metyl-pyridin-2-ylamin under HATU betingelser som gir prolinamidderivatet som ved behandling med 4M HC1 i dioksan gir det ønskede aminet som beskrevet for syntese av azetidin-2-S-(4-metyl-pyridin-2-yl)-amidhydroklorsyresalt i eksempel 18.

4-R-benzyloksy-pyrrolidin-2-S-karboksylsyre (5-metyl-pyridin-2-yl)-amid

1H NMR (DMSO-de): 8 8,42 (bs, 1H), 8,15-8,12 (d, J = 8,24 Hz, 1H), 7,96-7,92 (m, 1H), 7,61-7,47 (m, 5H), 4,77-4,56 (m, 4H), 3,68-3,58 (m, 2H), 2,97-2,90 (m, 1H), 2,69 (bs, 3H), 2,27-2,17 (m, 1H). ES-MS: beregnet for C18H21N3O2 (311,38); funnet: 312,5

[M+H].

4- R-benzyloksy-l-{2-R-[(formyl-hydroksy-amino)-metyl]-heksanoyl}-pyrrolidin-2-5- karboksylsyre (5-metyl-pyridin-2-yl)-amid

1H NMR (DMSO-de): 8 8,4-8,3 (m, 1H), 8,14-8,01 (m, 1H), 7,8-7,76 (d, J = 8,52 Hz, 1H), 7,56-7,48 (m, 5H), 4,85-4,8 (t, J = 7,42 & 7,69 Hz, 1H), 4,75-4,46 (m, 2H), 4,05 (bs, 1H), 4,0-3,68 (m, 2H), 3,54 (bs, 2H), 3,16 (bs, 1H), 2,69 (bs, 3H), 2,49-2,23 (m, 4H), 1,64-1,44 (m, 6H), 1,04 (bs, 3H). ES-MS: beregnet for C26H34N4O5 (482,57); funnet: 483,5 [M+H].

Eksempel 39: l-{2-R-[(formyl-hydroksy-amino)-metyl]-heksanoyl}-4-S-hydroksy-pyrrolidin-2-S-karboksylsyre (5-metyl-pyridin-2-yl)-amid

Tittelforbindelsen fremstilles i henhold til generell fremgangsmåte A fra 2-[(benzyloksy-formyl-amino)-metyl]-heksansyre A-7 (R=n-butyl) og 4-S-O-benzoyl-pyrrolidin-2-karboksylsyre (5-metyl-pyridin-2-yl)-amid A-8 [X = (R)-CH-OH, n = 1, Ri = 2-(5-metyl)pyridyl].

1H NMR (DMSO-de): 8 8,31-8,38 (d, J = 7,42 Hz, 1H), 8,16-8,11 (m, 1H), 7,8-7,76 (m, 1H), 5,51-5,5 (d, J = 4,95 Hz, 1H), 4,63 (bs, 1H), 4,52-4,35 (d, J = 4,95 Hz, 1H), 4,02-3,68 (m, 2H), 3,52 (bs, 2H), 2,70 (bs, 1H), 2,69 (bs, 3H), 2,21-1,97 (m, 4H), 1,64-1,42 (m, 6H), 1,05-1,03 (d, J = 6,04 Hz, 3H). ES-MS: beregnet for C19H28N4O5 (392,46); funnet: 393,5 [M+H].

4-S-0-benzoyl-pyrrolidin-2-S-karboksylsyre (5-metyl-pyridin-2-yl)-amid

A-8 fremstilles ved inversjon av 4-R-hydroksy-pyrrolidin-l-karboksylsyre butyl (5-metyl-pyridin-2-yl)-amid under Mitsunobu betingelsen som gir 4-S-O-benzyloksy-prolinamid derivat som ved behandling med 4M HC1 i dioksan gir det ønskede aminet som beskrevet for syntese av azetidin-2-S-(4-metyl-pyridin-2-yl)-amidhydroklorid-syresalt i eksempel 18

1H NMR (DMSO-de): 8 8,38 (bs, 1H), 8,15-8,06 (m, 2H), 7,92-7,8 (m, 4H), 7,66-7,61 (t, J = 7,69 Hz, 1H), 5,74 (bs, 1H), 4,89 (bs, 1H), 3,83 (bs, 2H), 3,03-2,94 (m, 1H), 2,7-2,45 (m, 4H). ES-MS: beregnet for C18H19N3O3 (325,37); funnet: 326,4 [M+H].

Eksempel 40: l-{2-R-[(formyl-hydroksy-amino)-metyl]-heksanoyl}-4-R-hydroksy-pyrrolidin-2-S-karboksylsyre (4-etyl-pyridin-2-yl)-amid

Tittelforbindelsen fremstilles i henhold til generell fremgangsmåte A fra 2-[(benzyloksy-formyl-amino)-metyl]-heksansyre A-7 (R=n-butyl) og pyrrolidin-2-karboksylsyre (4-etyl-pyridin-2-yl)-amid A-8 [X = (R)-CH-OH, n = 1, Ri = 2-(4-etyl) pyridyl].

1H NMR (DMSO-de): 8 8,38-8,36 (d, J = 4,945 Hz, 1H), 8,12-8,01 (m, 1H), 7,16-7,14 (m, 1H), 5,37-5,36 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 4,85-4,8 (t, J = 7,69 Hz, 1H), 4,57 (bs, 1H), 3,89-3,55 (m, 2H), 3,52 (bs, 2H), 3,14 (bs, 1H), 2,82-2,6 (m, 2H), 2,26-2,09 (m, 4H), 1,63-1,33 (m, 9H), 1,04 (bs, 3H). ES-MS: beregnet for C20H30N4O4 (406,48); funnet: 407,5 [M+H].

A-8 fremstilles fra 4-R-benzyloksy-pyrrolidin-l-karboksylsyre tert-butylester og 4-etyl-pyridin-2-ylamin under HATU betingelser som gir prolinamidderivatet som ved behandling med 4M HC1 i dioksan gir det ønskede aminet som beskrevet for syntese av azetidin-2-S-(4-metyl-pyridin-2-yl)-amidhydrokloridsyresalt i eksempel 18.

4-R-benzyIoksy-pyrrolidin-2-S-karboksylsyre (4-etyI-pyridin-2-yl)-amid

1H NMR (DMSO-de): 8 8,48-8,46 (d, J = 5,22 Hz, 1H), 8,11 (bs, 1H), 7,62-7,34 (m, 8H); 4,81-4,56 (m, 4H), 3,69-3,59 (m, 2H), 2,98-2,83 (m, 3H), 2,29-2,19 (m, 1H), 1,41-1,38 (t, J = 5,49 & 2,2 Hz, 3H). ES-MS: beregnet for C19H23N3O2 (325,41); funnet: 326,3 [M+H].

Eksempel 41: l-{2-R-[(formyI-hydroksy-amino)-metyl]-heksanoyl}-4-R-hydroksy-pyrrolidin-2-S-karboksylsyre (5-trifluormetyl-pyridin-2-yl)-amid Tittelforbindelsen fremstilles i henhold til generell fremgangsmåte A fra 2-[(benzyloksy-formyl-amino)-metyl]-heksansyre A-7 (R=n-butyl) og pyrrolidin-2-karboksylsyre (5-trifluormetyl-pyridin-2-yl)-amid A-8 [X = (R)-CH-OH, n = 1, Ri = 2-(5-trifluor-metyletyl)-pyridyl.

1H NMR (DMSO-de): 8 8,44-8,3 (m, 2H), 8,01 (bs, 1H), 4,88-4,83 (t, J = 7,69 Hz, 1H), 4,57 (bs, 1H), 3,91-3,66 (m, 4H), 3,15 (bs, 1H), 2,3-2,13 (m, 2H), 1,63-1,45 (m, 6H), 1,03 (bs, 3H). ES-MS: beregnet for C^sF-^Os (446,43); funnet: 447,3 [M+H].

A-8 fremstilles fra 4-R-benzyloksy-pyrrolidin-l-karboksylsyre tert-butylester og 5-trifluormetyl-pyridin-2-ylamin under HATU betingelser som gir prolinamidderivatet som ved behandling med 4M HC1 i dioksan gir det ønskede aminet som beskrevet for

syntese av azetidin-2-S-(4-metyl-pyridin-2-yl)-amidhydrokloridsyresalt i eksempel 18.

4-R-benzyloksy-pyrrolidin-2-S-karboksylsyre(5-trifluormetyl-pyridin-2-yl)-amid

1H NMR (DMSO-de): 8 8,98 (bs, 1H), 8,5-8,42 (m, 2H), 7,62-7,47 (m, 5H), 4,84-4,56 (m, 4H), 3,69-3,61 (m, 2H), 2,97-2,91 (m, 1H), 2,3-2,21 (m, 1H). ES-MS: beregnet for C18H18F3N3O2 (365,36); funnet: 366,3 [M+H].

Foretrukne forbindelser ifølge oppfinnelsen er f.eks. forbindelsene i eksemplene 6, 8,9, 14,21,22,29 eller 36. Enda mer foretrukket er de i eksemplene 14 eller 36.

Forbindelsen ifølge oppfinnelsen, i fri form eller i farmasøytisk akseptabelt saltform, fremviser verdifulle farma-kologiske egenskaper, f.eks. som anti-infeksjonsmidler, f.eks. som indikert i in vitro og in vivo tester og er derfor indikert for behandling.

A. Inhibering av peptiddeformylaseaktivitet

PDF/FDH koblet undersøkelse (Lazennec et al., Anal. Biochem., Vol. 224, s 180-182

(1997)) anvendes. I denne koblede undersøkelsen blir formatet frigitt ved PDF fra sitt substrat fMAS oksidert ved koblingsenzymet FDH som reduserer et molekyl NAD<+> til NADH, som forårsaker en økning i absorpsjon ved 340 nM. Alle undersøkelsene utføres ved romtemperatur i en buffer bestående av 50 mM HEPES, pH 7,2,10 mM NaCl, 0,2 mg/ml BSA, i halvareal 96-brønns mikrotiterplater (Corning). Reaksjonen initieres ved ulsetning av en blanding av 0,5 enhet/ml FDH, 1 mM NAD<+> og fMAS ved ønsket konsentrasjon. For å bestemme IC50 (konsentrasjon nødvendig for å inhibere 50% av enzymaktivitet) verdiene, blir PDF forhåndsinkubert i 10 minutter med forskjellige konsentrasjoner av inhibitoren og deformyleringsreaksjonen initieres ved tilsetning av reaksjonsblanding som inneholder 4 mM fMAS. Den initielle reaksjonshastigheten, y, måles som initiell hastighet ved absorpsjonsøkning ved 340 nM ved anvendelse av en SpektraMax plateavleser (Molecular Devices, Sunnyvale, CA). Inhibitorkonsentrasjonen [In] hvor ved 50% av enzymaktiviteten inhiberes, IC50, beregnes ved anvendelse av følgende formel: hvor y0 er reaksjonshastigheten under fravær av inhibitor. Ved å løse ligningen for IC50 ved [In] når y = y0/2 gir det IC50. IC50 beregnes basert på en ikke lineær minste kvadrat regressjonstilpasning ved anvendelse av en kommersiell softwarepakke (Deltapoint, Inc., Chicago, IL.).

Ved anvendelse av denne undersøkelsen ble IC50 til forskjellige forbindelser ifølge oppfinnelsen bestemmes ovenfor deformylaseenzym som inneholder nikkel og sink som metallionet. IC50 verdiene av foretrukne forbindelser med formel (I) bestemmes for sink-innholdende deformylase varierende fra ca. 0,001 uM til ca. 0,2 uM. IC50 verdiene til foretrukne forbindelser med formel (I) bestemmes for nikkel-inneholdende deformylase varierende fra 0,005 uM til ca. 3 uM.

B. Undersøkelse for å teste antimikrobiell aktivitet

Minimum inhiberingskonsentrasjoner (MICer) bestemmes ved anvendelse av mikro-fortynningsrfemgangsmåten i 96-brønns formatplater. Forbindelsene suspenderes i DMSO ved 5 eller 10 mg/ml og lagres ved 4°C til det anvendes. De fortynnes i Mueller-Hinton medium (MHB) eller Tryptikase soyamedium (TSB) og anvendes for MIC bestemmelse. Konsentrasjonsområdene som ble testet er 64-0,0625 ug/ml slutt-konsentrasjon ved anvendelse av to-ganger fortynningssystem.

Inokulumet ble fremstilt fra cellevekst på Trypticase Soy Agar (TS A) og inkubert over natten ved 35°C, 5-10 kolonier anvendes for å inokulere MHB eller TSB medier, og kulturen inkuberes over natten ved 35°C. Kulturen over natten fortynnes i 1:10, inkuberes i 1 time ved 35°C, fortynnes til passende inokuleringsstørrelse og tilføres brønnene som inneholder medium og testforbindelse. Inokuleringsstørrelsene er 2 x IO<4 >CFU/ml.

Platene inkuberes ved 35°C i 48 timer og MIC avleses etter 18 timer inkubering for bakterier. MIC defineres som laveste konsentrasjon av en forbindelse ifølge oppfinnelsen som ikke gir synlig vekst etter inkubering.

Minimum inhiberingskonsentrasjon for forskjellige foretrukne forbindelser med formel (I) varierer fra ca. 0,25 ug/ml til ca. 32 ug/ml overfor H. influenza (fire stammer), fra ca. 0,001 ug/ml til mer enn 8 ug/ml ovenfor S. aureus (fire stammer), fra ca. 0,016 ug/ml til ca 16 ug/ml ovenfor S. pneumonia (fire stammer) og fra ca. 0,008 ug/ml til ca.

16 ug/ml ovenfor M. catarrhalis. Deformylaseenzymet oppnås frais. coli.

C. Demonstrasjon av selektiv inhibering av PDF sammenlignet med MMP- 7

( Matrilysin)

Som angitt ovenfor er inhibitorene som er selektive for peptidyl deformylase over MMPer ønskelig for å unngå bivirkninger.

For å teste forbindelsen ifølge oppfinnelsen for mulige inhiberingsvekter på MMPer ble følgende undersøkelse for MMP-7 (matrilysin) anvendt.

MMP- 7 ( Matrilysin) undersøkelse:

Matrilysinaktivitet undersøkes ved anvendelse av et tio-peptid (Pro-Leu-Gly-S-Leu-Gly) som substrat. Etter enzymhydrolyse blir tiolatet frigitt som et produkt. Tiolatet således generert reagerer med DTNB (ditionitrobenzen), som gir opphav til en gul farge som overvåkes ved 405 nM. Undersøkelsen utføres ved romtemperatur; undersøkelses-bufferen inneholder 50 mM tricin, pH 7,5, 0,2 M NaCl, 10 mM CaCl2 og 0,05% Brij, i halvareal 96-brønns mikrotiterplate. Reaksjonen initieres ved tilsetning av en blanding av 200 TM DTNB og 100 TM tiopeptid i buffer. For å bestemme IC50 (konsentrasjon nødvendig for å inhibere 50% av enzymaktiviteten) verdier, MMP-7 blir forhåndsinkubert i 10 minutter med forskjellige konsentrasjoner av forbindelser ifølge oppfinnelsen, og hydrolysen initieres ved tilsetning av en reaksjonsblanding som inneholder tiopeptid og DTNB. Reaksjonshastigheten avledes som absorbansøkning i OD405 i løpet av 30 minutter ved anvendelse av en SpectraMax plateavleser (Molecular Devices, Sunnyvale, CA). Inhiberingskonsentrasjonen i [In] hvor ved 50% av enzymaktiviteten inhiberes, IC50, beregnes ved anvendelse av følgende formel:

hvor y„ er reaksjonshastigheten under fråvær av inhibitor. Å løse denne ligningen for IC50 ved [In] når y = yo/2 gir dette IC50.

Ved anvendelse av denne undersøkelsen ble IC50 for forskjellige forbindelser ifølge oppfinnelsen bestemt. IC50 for forskjellige foretrukne forbindelser med formel (I) ovenfor MMP-7 varierer fra mer enn 10 uM til mer enn 100 uM, mens IC50 til de samme forbindelsene ovenfor sink som inneholder PDF varierer fra ca. 0,005 uM til ca 5 uM, ovenfor nikkel som inneholder PDF varierende fra 0,001 uM til ca. 0,3 uM. Følgelig har forbindelsene ifølge oppfinnelsen overlegen selektivitet for PDF sammenlignet med deres aktivitet ovenfor MMP-7. Tilsvarende selektivitet hos forbindelsene for peptidyldeformylase over MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-9, MMP-13, MT-MMP-1, og vevnekrosefaktor som omdanner enzym ble observert. Tilsvarende selektivitet observeres også i forhold til andre metalloproteinaser slike som angiotensinomdann-ingsenzym.

D. Museseptisemiamodell for bestemmelse av In vivo effekti

CD1 hannkoblede mus (Charles River Laboratories) som veide 18-22 g hver injiseres intraperitonealt med 0,5 ml av en suspensjon som inneholder 5 x IO<7> cfu av S. aureus (Smith stamme) i 7% svingastrisk mukosa (mucin). Musen ble behandlet, etter subku-tant (s.c), intravenøs (i.v.) eller oralt (p.o.), 1 time og 5 timer etter infeksjon. Seks grupper av seks mus hver gis forskjellige doseringsnivåer som representerer to ganger fotynninger av hver forbindelse som skal testes (delende fra 100-0,1 mg/kg). Vancomycin anvendes som kontroll antibiotisk middel og administreres s.c. Forbindelsen ifølge oppfinnelsen formuleres i PBS og ubehandlede kontroller doseres med vehikkel alene.

Dødsfall i hver gruppe overvåkes daglig i 6 dager og kumulativ dødlighet anvendes for å bestemme 50% beskyttende doser (PD50), som beregnes ved anvendelse av fremgangsmåten til Reed og Muench. PD50 (s.c.) hos mus overfor S. aureus for flere foretrukne forbindelser med formel (I) varierer fra 0,1 mg/kg til mer enn 12 mg/kg. PD50 (p.o.) hos mus overfor S. aureus for de samme forbindelsene med formel (I) fra 1 mg/ml til mer enn 12 mg/kg.

E. Farmakokinetikkstudier av PDF inhibitorer hos mus

Farmakokinetikken til PDF forbindelsene ble bestemt hos CD1 hunnavlede mus (Charles River Laboratories) som veier 20-25 g. PDF forbindelser formuleres i 20% cyklodekstrin (Aldrich) og filtreres gjennom 0,22 um filter for sterilisering. Enten enkeltforbindelser eller blandinger av 4-6 forbindelser som en kassett administrerer i.v. og p.o. ved 10 ml/kg. Dosen varierer fra 3-15 mg/kg for hver forbindelse. Ved 0,083, 0,25, 0,5,1,2,4 og 7 timer etter dosering blir serumprøver som blir tatt via hjerte-punktering under anestesi. Grupper av fire mus anvendes for hvert tidspunkt. Serum-prøvene lagres ved -80°C til de blir analysert.

Serumprotein presipiteres ved tilsetning av acetonitril. Prøvene etter proteinpresipita-sjon analyseres ved LC/MS/MS fremgangsmåte. Standardkurve oppnås for hver forbindelse og anvendes for bestemmelse av forbindelseskonsentrasjon i serum. Farma-kokinetikkparametre som inkluderer Tmax (tid for maksimal konsentrasjon), Cmax (maksimalkonsentrasjon), (terminal halveringstid), og AUC (areal under kurve) beregnes i henhold til standardfremgangsmåte. Oral biotilgjengelighet beregnes som forholdet mellom AUC til p.o. administrasjon versus AUC administrert i.v. Foretrukne forbindelser med formel (I) fremviser oral biotilgjengelighet større enn 70%.

Forbindelser ifølge oppfinnelsen er derfor anvendelig for behandling og/eller hindring av infeksjonssykdommer forårsaket av et antall bakterie eller prokaryote organismer. Eksempler inkluderer, men ikke begrenset til, gram positiv og gram negative aerobe og anaerobe bakterier, som inkluderer Staphylococci, f. eks. S. aurerus og S. epidermidis; Enterococci, f. eks. E. feacalis ogE. faecium; Streptococci, f. eks. S. pneumoniae; Haemophilus, f. eks. H. influenza; Moraxella, f. eks. M. catarrhelis; Bacteroides, f. eks. Bacteroides fragilis, Clostridium, f. eks. Clostridium difficile, Niesseria, f. eks. N. meningitidis ogN. gonorrhoae, Legionella ogEscherichia, f. eks. E. coli. Andre eksempler inkluderer Mycobacteria, f. eks. M. tuberculosis intercellulære mikrober, f.eks. Chlamydia ogRickettsiae; ogMycoplasma, f. eks. M. Pneumoniae; og Pseudomonas, f. eks. P. aeruginosa; Helicobacter pylorie; og parasitter, f. eks. Plasmodium falciparum.

Slik det anvendes heri er en "infeksjonsforstyrrelse" en hvilken som helst forstyrrelse kjennetegnet ved tilstedeværelsen av en mikrobiell infeksjon, slik som tilstedeværelsen av en bakterie. Slike infeksjonsforstyrrelser inkluderer f.eks. sentralnærvesystem-infeksjoner, eksterne øreinfeksjoner, infeksjoner i mellomøret, slik som akutt otitis media, infeksjon i kraniesinuser, øyeinfeksjoner, infeksjon i det orale hulrommet, slik som infeksjoner i tenner, tannkjøtt og slim, øvre respirasjonstrakt infeksjoner, lavere respirasjonstraktinfeksjoner, genitourinære infeksjoner, gastrointestinale infeksjoner, gynekologiske infeksjoner, septicemia, ben og leddinfeksjoner, hud og hudstruktur-infeksjoner, bakteriell endokardititt, brannskader, antibakteriell profylakse ved kirurgi, antibakteriell profylakse hos immunoundertrykte pasienter, slike som pasienter som mottar krefkjemoterapi, eller organtransplantatpasienter og kroniske sykdommer forårsaket av infeksjonsorganismer, f.eks. arteriosklerose.

Forbindelsene kan anvendes for å behandle et subjekt for å behandle, hindre og/eller redusere alvorligheten til en infeksjon. Subjektet inkluderer dyr, planter, blodprodukter, kulturer og overflater slik som de på medisinsk eller forskningsutstyr, slik som glass, nåler, kirurgiske utstyr og rør, og objekter tiltenkt midlertidig eller permanent implanta-sjon inn i en organisme. Foretrukne dyr inkluderer pattedyr, f.eks. mus, rotte, katter, hunder, kuer, sauer, griser, hester, svin, primater, slik som resusaper, sjimpanser, gorillaer og mest foretrukket mennesker. Behandling av et subjekt, inkluderer, men er ikke begrenset til, hindring, redusering og/eller eliminering av de kliniske symptomene forårsaket av en infeksjon hos et subjekt av en mikroorganisme; hindring, redusering og/eller lindring av en infeksjon hos et subjekt med en mikroorganisme; eller hindring, redusering og/eller eliminering kontaminasjonen hos et subjekt med en mikroorganisme. Mikroorganismen involvert er foretrukket en prokaryot med foretrukket en bakterie.

For anvendelsen ovenfor vil påkrevd dose selvfølgelig variere avhengig av administra-sjonsmodus, den bestemte tilstand som behandles og den ønskede effekten. Sammensetningene kan f.eks. inneholde fra ca. 0,1 vekt% til ca 99 vekt%, f.eks. fra ca. 16-60 vekt%, av det aktive materialet, avhengig av administrasjonsrfemgangsmåten. Hvor sammensetningen innbefatter doseringsenheter vil hver enhet f.eks. inneholde fra ca. 1-1000 mg f.eks. 1-500 mg aktive ingredienser. Dosering som anvendes for voksne mennesker som behandles vil f.eks. variere fra ca. 1-3000 mg per dag, f.eks. 1500 mg per dag avhengig av administrasjonsrute og frekvens. En slik dosering korresponderer til ca. 0,015-50 mg/kg per dag. Egnet dosering er f.eks. fra ca. 5-20 mg/kg per dag. Egnede enhetsdoseirngsformer for oral administrasjon innbefatter ca. 0,25-1500 mg aktiv ingrediens.

En "farmasøytisk akseptabel bærer" betyr en eksipiens som er anvendelig for fremstilling av en farmasøytisk sammensetning som er generelt sikker, ikke toksisk og hverken biologisk eller på annen måte uønsket, og inkluderer en eksipient som er akseptabel for veterinæranvendelse så vel som human farmasøytisk anvendelse. En "farmasøytisk akseptabel bærer" slik det anvendes i beskrivelsen av kravene inkluderer både en eller flere enn en slik bærer.

Forbindelsene kan administreres ved en hvilken som helst passende rute, f.eks. lokalt eller systemisk, f.eks. oral, topisk, parenteral, subdermalt, eller ved inhalasjon og kan anvendes for behandling av bakterieinfeksjon hos et subjekt slik som dyr, foretrukket pattedyr, mer foretrukket mennesker.

Forbindelse ifølge oppfinnelsen kan formuleres for administrasjon på en hvilken som helst passende måte for anvendelse i human eller veterinærmedisin, analogt med andre antibiotiske midler. Slike fremgangsmåter er kjent i litteraturen (se f.eks. Remington's Pharmaceutical Sciences, Easton, PA: Mack Publishing Co.) og er ikke beskrevet i detalje heri.

Sammensetningene kan være en hvilken som helst form kjent i litteraturen, som inkluderer, men ikke begrenset til, tabletter, kapsler, vaffere, fastsmelte (uten vaffere), pulvere, granuler, losenger, kremer eller flytende preparater, slik som orale eller sterile parenterale løsninger eller suspensjoner. Forbindelsene kan også administreres i liposomale, micellare eller mikroemulsjonsformuleringer. Forbindelsene kan også administreres som prodrug, hvor prodruget som administreres gjennomgår bio-transformasjon i det behandlede pattedyret til en form som er biologisk aktiv.

De topiske formuleringene ifølge oppfinnelsen kan presenteres f.eks. som salver, kremer eller lotioner, løsninger, salver, emulsjoner, plastre, øyesalver og øye eller øredråper, impregnerte dressinger, transdermale plastere, sprayer og aerosoler, og kan inneholde passende vanligvis anvendte additiver slike som konserveringsmidler, løsemidler for å assistere legemiddelpenetrering og emollienter i salver og kremer.

Formuleringene kan også inneholde kompatible vanlige anvendte bærere, slike som krem eller salvebaser og etanol eller oleylalkohol for lotioner. Slike bærere kan f.eks. være tilstede fra ca. 1% til opptil ca. 99% av formuleringen. F.eks. kan de danne opptil ca. 80% av formuleringen.

Tabletter og kapsler for oral administrasjon kan være enhetsdosepresentasjonsform og kan inneholde vanlige eksipienter slik som bindemidler, f.eks. sirup, acasia, gelatin, sorbitol, tragant eller polyvinylpyrrolidon; fyllstoffer, f.eks. laktose, sukker, mais-stivelse, kalsiumfosfat, sorbitol eller glycin; tabletteringssmøremidler, f.eks. magne-siumstearat, talk, polyetylenglykol eller silika; disintegranter, f.eks. potetstivelse; eller akseptable fuktemidler, slik som natriumlaurylsulfat. Tablettene kan belegges i henhold til fremgangsmåter kjente innen standard farmasøytisk praksis.

Orale flytende preparater kan være i form av f.eks. vandige eller oljesuspensjoner, løsninger, emulsjoner, siruper eller eleksirer, eller kan presenteres som et tørt produkt for rekonstituering med vann eller annen egnet vehikkel før anvendelse. Slike flytende preparater kan inneholde vanlige additiver, slik som suspenderingsmidler, f.eks. sorbitol, metylcellulose, glukosesirup, gelatin, hydroksyetylcellulose, karboksymetyl-cellulose, aluminiumstearatgel eller hydrogenert spiselig fettstoffer; emulgeringsmidler, f.eks. lecitin, sorbitanmono-oleat eller acasia; ikke-vandige vehikler (som kan inkludere spiselige oljer), f.eks. mandelolje, oljeestere slik som glycerin, propylenglykol eller etylalkohol; konserveringsmidler, f.eks. metyl eller propyl p-hydroksybenzoat eller sorbinsyre, og hvis ønskelig vanlige anvendte smak og fargestoffer.

For parenteral administrasjon blir fluidenhetsdoseringsformer fremstilt ved anvendelse av forbindelsen og en steril vehikkel hvor vannet, foretrukket. Forbindelsene, avhengig av vehikkelen og konsentrasjonen som anvendes, kan enten suspenderes eller løses opp i vehikkel eller annet egnet løsemiddel. Ved fremstilling av løsninger kan forbindelsen løses i vann for injeksjon og filtersteirliseres før den fylles på et passende medisinglass eller ampulle og forsegles. Fordelaktig kan midler slik som et lokalt anestetisk konser-veringsmiddel og buffermidler løses i vehikkelen. For å øke stabiliteten kan omsetning frosses etter fylling på medisinglass og vann fjernes under vakuum. Det tørre lyofiliserte pulveret blir deretter forseglet i medisinglasset og et ledsagende medisin-glass med vann for injeksjon kan leveres for å rekonstitusjonere væsken før anvendelse. Parenteral suspensjoner fremstilles i det vesentlige på samme måte untatt at forbindelsene suspenderes i vehikkelen i stedet for å bli oppløst og sterilisering kan ikke utføres ved filtrering. Forbindelsen kan steriliseres ved eksponering for etylen-oksid før suspendering i den sterile vehikkelen. Fordelaktig blir en surfaktant eller fuktemiddel inkludert i sammensetningen for å lette enhetlig fordeling av forbindelsen.

Forbindelsen ifølge oppfinnelsen, f.eks. forbindelse med formel (I), kan administreres i fri form eller i farmasøytiske akseptable saltform, f.eks. som indikert ovenfor. Slike salter kan fremstilles på vanlig måte og fremviser samme aktivitetsgrad som de frie forbindelsene.

I henhold til det foregående tilveiebringer foreliggende ytterligere:

1. Farmasøytisk sammensetning som innbefatter en forbindelse ifølge oppfinnelsen med formel (I) i fri form eller i farmasøytisk akseptable saltform, i assosiasjon med et farmasøytisk akseptabelt fortynningsmiddel eller bærer derfor. 2. Forbindelse ifølge oppfinnelsen med formel (I), eller et farmasøytisk akseptabelt salt for anvendelse som et farmasøytisk middel. 3. Anvendelse av en forbindelse ifølge oppfinnelsen med formel (I), for fremstilling av et medikament for behandling og/eller forebyggelse av en infeksjonsforstyrrelse hos et subjekt.

"Behandle" eller "behandling" av en sykdom inkluderer:

(1) hindre sykdommen, dvs. forårsake at de kliniske symptomene til sykdommen ikke utvikles hos et subjekt, f.eks. et pattedyr, som kan være eksponert for eller forhåndsdisponert for sykdommen, men ennå ikke har opplevd eller uttrykt symptomene på sykdommen, (2) inhibere sykdommen, dvs. arrestere eller redusere utvikling av sykdommen eller dens kliniske symptomer, eller (3) lindre sykdommen, dvs. forårsake regresjon av sykdommen eller dens kliniske symptomer.

En "effektiv peptidyldeformylasinhiberinde mengde" betyr en mengde av en forbindelse, et farmsøytisk akseptabelt salt eller et prodrug derav, som når det administreres til et subjekt for behandling av en infeksjonsforstyrrelse ansvarlig for inhibering av peptidyldeformylase eller for å inhibere peptidyldeformylase, er tilstrekkelig til å inhibere peptidyldeformylase. Den "effektive peptidyldeformylase-inhiberende mengden" vil variere avhengig av forbindelsene, salter derav eller prodruget derav, som anvendes, mikroorganismen som inhiberes hos subjektet, alderen, vekten, kjønnet, medisinske tilstanden, arten, forstyrrelse og dens alvorlighet, til subjektet som behandles og administrasjonsrute, men kan uansett lett bestemmes av fagmannen.

Forbindelsen ifølge oppfinnelsen med formel (I), et farmasøytisk akseptabelt salt derav, kan administreres alene eller i kombinasjon med andre terapeutiske midler. Eksempler på slike terapeutiske midler inkluderer men er ikke begrenset til, andre antibakterielle midler slike som pMaktamer, f.eks. penicilliner; cefalosporiner; karbapenemer, ketolider; kinoloner f.eks. fluorkinoloner; makrolider f.eks. klaritromycin, azithromycin eller vancomycin; rifamyciner; monobaktamer; isoniazid; likosamider; mupirocin, sulfonamider; fenikoler; fosfomycin; glykopeptider; tetracykliner; straptograminer; kloramfenikol; og oksazolidinon, anti-inflammasjons-midler, f.eks. kortikosteroider eller NSAID, analgesiske midler, f.eks. narkotiske eller ikke-opioatiske analgesiske midler.

Følgende er representativ farmasøytiske formuleringer som inneholder en forbindelse med formel (I).

Eksempel 1: Tablettformulering

Følgende ingredienser blandes inngående og presses i enkeltskårtabletter:

Eksempel 2: Kapselformuléring

Følgende ingredienser blandes inngående og tilsettes en hard-skjell gelatinkapsel:

Eksempel 3: Suspensionsformulering

Følgende ingredienser blandes for å danne en suspensjon for oral administrasjon:

Eksempel 4: Iniiserbar formulering

Følgende ingredienser blandes for å danne en injiserbar formulering:

Eksempel 5: Stikkpilleformulering

En stikkpille som veier totalt 2,5 g fremstilles ved å blande forbindelser ifølge oppfinnelsen med Witepsol® H-5 (triglycerider av umettet vegetabilsk fettsyre; Riches-Nelson, Inc., New York), og har følgende sammensetning:

Foreliggende oppfinnelse er ikke begrenset til klinisk anvendelse av forbindelsen ifølge oppfinnelsen, dvs. ved behandling av infeksjon hos et subjekt. Forbindelsen ifølge oppfinnelsen er anvendelig for inhibering av bakterier hvor det ønskelig å inhibere bakterier ved å bringe bakteriene i kontakt med en eller flere forbindelser ifølge oppfinnelsen. På grunn av deres evne til å inhibere bakterier er forbindelsen ifølge oppfinnelsen særlig anvendelig for å hindre kontaminasjon av cellekulturer. Slik det anvendes i denne sammenheng betyr begrepet "inhibere" undertrykkelse, kontroll, stasis eller dreping av bakterier. Eukaryote celler, særlig dyreceller, blir ofte dyrket av forskjellige grunner slik som for deres evne til å fremstille substanser slik som proteiner. Eksempler på slike celler inkluderer Kinesiske hamstereggstokkceller (CHO celler), Afrikanske grønnape-nyreceller, hybridomoas konstruert ved sammensmeltning av en morcelle (myeloma, etc.) med en anvendelig substansproduserende normalcelle (lymfocytt, etc.) og lignende. Typisk blir forbindelsen ifølge oppfinnelsen inkorporert i celledyrknings-media ved en bakterieinhiberende mengde, f.eks. en konsentrasjon på ca. 0,0001 til ca 10 mikrogram/ml, foretrukket ca. 0,0001 til ca 1 mikrogram/ml, og mer foretrukket ca. 0,001 til ca 0,1 mikrogram/ml. Et hvilket som helst vanlig celledyrkn-ingsmedium kjent i litteraturen kan anvendes.

I henhold til det foregående tilveiebringer foreliggende oppfinnelse i et ytterligere aspekt: 4. Et celledyrkningsmedium som innbefatter en bakterieinhiberende mengde av en forbindelse ifølge oppfinnelsen med formel (I), eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav.

Foreliggende oppfinnelse er blitt beskrevet i detalj ved hjelp av illustrasjoner og eksempler. Det vil være nærliggende for fagmannen at forandringer og modifikasjoner kan gjøres innenfor omfanget av de vedlagte krav. Alle patenter, og patentsøknader og publikasjoner sitert i denne søknaden er innbefattet heri med referanse i sin helhet.

Claims

1. Forbindelse, karakterisert ved formel (I) hvori X er-CH2- eller -CH(OH)-; Ri er pyridyl eller et N-oksid derav, som eventuelt er substituert med en gruppe valgt fra trifluormetyl, et halogenatom, C1-C7 alkyl, fenyl eller C1-C7 alkoksy; hver av R2, R3 og R4 er hydrogen; R5 er Ci-7alkyl; og n er 1; eller et salt derav.

2. Forbindelse ifølge krav 1, karakterisert ved atXer -CH2-, Ri er som definert i krav 1; R2, R3 og R4 er hydrogen; R5 er n-butyl og n er 1; eller et salt derav.

3. Forbindelse ifølge krav 1 eller 2, karakterisert ved at Ri er en rest med formel (II) hvori hver av R^, R7, Rg og R9 er uavhengig hydrogen, Ci^alkyl, C^alkoksy, halogen, fenyl; eller et salt derav.

4. Forbindelse ifølge krav 1 eller 2, karakterisert ved at Ri er en rest med formel (III) hvori hver av R^, R7, R» og R9 er uavhengig hydrogen, Ci^alkyl, fenyl, halogen eller Ci-7alkoksy.

5. Forbindelse ifølge et hvilket som helst av kravene 1 til 3, karakterisert ved at Ri ct et heteroaryl med formel (II. 1) hvori Re, R» og R9 er hydrogen og R7 er etyl eller metoksy.

6. Forbindelse ifølge et hvilket som helst av kravene 1,2 eller 4, karakterisert ved at Ri er et heteroaryl med formel (III. 1) hvori R6, R7 og R9 er hydrogen og Rs er fluor eller trifluormetyl.

7. Fremgangsmåte for fremstilling av en forbindelse med formel (I) ifølge krav 1, karakterisert ved at fremgangsmåten omfatter å reagere en forbindelse med formel (V) hvori R2, R3, R4 og R5 er som definert i krav 1 og Y er en hydroksybeskyttende gruppe, eller et funksjonelt derivat derav, med en forbindelse med formel (VI) hvori Ri, X og n er som definert i krav 1, og X' er NH eller O, og hvis påkrevet, å omdanne den oppnådde forbindelsen på fri form til saltformer eller vice versa.

8. Farmasøytisk sammensetning, karakterisert ved at den innbefatter en forbindelse med formel I ifølge krav 1, eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, i assosiasjon med et farmasøytisk akseptabelt fortynningsmiddel eller bærer.

9. Forbindelse med formel I ifølge krav 1, eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, for bruk som et legemiddel.

10. Anvendelse av en forbindelse med formel (I) ifølge krav 1, for fremstilling av et medikament for behandling og/eller forebyggelse av en infeksjonsforstyrrelse hos et subjekt.

11. Celledyrkingsmedium, karakterisert ved at det innbefatter en bakterieinhiberende mengde av en forbindelse ifølge krav 1, eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav.