NO318374B1 - Fremgangsmate for isolering av klavulansyre fra et vandig fermenteringsmedium - Google Patents

Fremgangsmate for isolering av klavulansyre fra et vandig fermenteringsmedium Download PDF

Info

Publication number
NO318374B1
NO318374B1 NO19963628A NO963628A NO318374B1 NO 318374 B1 NO318374 B1 NO 318374B1 NO 19963628 A NO19963628 A NO 19963628A NO 963628 A NO963628 A NO 963628A NO 318374 B1 NO318374 B1 NO 318374B1
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
clavulanic acid
microfiltration
water
fermentation medium
ethyl acetate
Prior art date
Application number
NO19963628A
Other languages
English (en)
Other versions
NO963628D0 (no
NO963628L (no
Inventor
Egidij Capuder
Original Assignee
Lek Tovarna Farmacevtskih
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=20431337&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=NO318374(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Lek Tovarna Farmacevtskih filed Critical Lek Tovarna Farmacevtskih
Publication of NO963628D0 publication Critical patent/NO963628D0/no
Publication of NO963628L publication Critical patent/NO963628L/no
Publication of NO318374B1 publication Critical patent/NO318374B1/no

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
    • C12P17/188—Heterocyclic compound containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen atoms and oxygen atoms as the only ring heteroatoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D503/00—Heterocyclic compounds containing 4-oxa-1-azabicyclo [3.2.0] heptane ring systems, i.e. compounds containing a ring system of the formula:, e.g. oxapenicillins, clavulanic acid derivatives; Such ring systems being further condensed, e.g. 2,3-condensed with an oxygen-, nitrogen- or sulfur-containing hetero ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/02—Separating microorganisms from their culture media
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/886—Streptomyces

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
  • Seasonings (AREA)

Description

Foreliggende oppfinnelse omhandler området farmasøytisk industri og vedrører en ny og forbedret fremgangsmåte for isolering av klavulansyre fra et vandig fermenteringsmedium.
Det eksisterer et konstant behov for en ny og forbedret fremgangsmåte for fremstilling av ren klavulansyre og farmasøytisk akseptable salter derav slik som kaliumklavulanat ved isolering fira fermenteringsmediet oppnådd ved hjelp av en klavulansyreproduserende mikroorganisme, hvorved sofistikerte konvensjonelle isoleringsmetoder og kromatografisk rensing av det ønskede produkt unngås.
Klavulansyre er det vanlige navnet for (2R,5R,Z)-3-(2-hydroksyetyliden)-7-okso-4-oksa-l-azabicyklo[3.2.0]heptan-2-karboksylsyre av følgende formel
Alkalimetallsalter og estere derav er aktive som inhibitorer av beta-laktamaser produsert av noen Gram-positive samt noen Gram-negative mikroorganismer.
I tillegg til virkningen av å inhibere beta-laktamaser har klavulansyre og alkalimetallsalter derav også en synergistisk virkning i kombinasjon med beta-Iaktam antibiotika i penicillin- og cephalosporinserien. Klavulansyre og salter derav benyttes derfor i galeniske preparater for å hindre deaktiveringen av beta-laktam antibiotika. Kommersielle preparater inneholder et mer stabilt kaliumsalt av klavulansyre (syren alene er temmelig ustabil) i kombinasjon med amoksicillintrihydrat.
v Klavulansyre fremstilles ved fermentering av en klavulansyreproduserende mikroorganisme slik som forskjellige mikroorganismer tilhørende forskjellige Streptomyces-stammer slik som S. clavuligerus NRRL 3585, S. jumoninensis NRRL 5741, S. katsurahamanus IFO 13716 og Streptomyces sp. P 6621 FERM P 2804.
Det vandige kulturmediet som oppnås etter fermentering kan renses og konsentreres i overensstemmelse med konvensjonelle prosesser som omfatter f. eks. filtrering og kromatografisk rensing som illustrert i GB 1.508.977 før ekstraksjon av den vandige oppløsningen med det organiske oppløsningsmidlet til oppnåelse av en oppløsning av uren klavulansyre i et organisk oppløsningsmiddel.
GB 1.508.977 beskriver blant annet at salter av klavulansyre kan oppnås ved adsorpsjon av klavulanatanionet i det filtrerte mediet på en anionisk utvekslerharpiks og elueres derfra med en elektrolytt, idet den dannede oppløsningen avsaltes og deretter fjernes oppløsningsmidlet. Denne prosessen kan benyttes for oppnåelse av akseptable utbytter av den ønskede substansen, likevel krever den sofistikerte rensinger ved hjelp av kromatografiske metoder og anvendelse av harpikskolonner nødvendiggjør viktige investeringer, hvilket begrenser produksjonsoperasjoner i stor målestokk.
GB 1.543.563 beskriver en modifisert fermenteringsprosess som benytter stammen S. clavuligerus NRRL 3585, hvor pH-verdien til mediet holdes i området mellom 6,3 og 6,7 og dermed øker utbyttet av den ønskede forbindelsen. Salter av klavulansyre slik som kaliumklavulanat fremstilles ved omsaltdannelse fra litiuirtklavulanat, hvorved den ønskede forbindelsen også renses.
EP- A-0 026 044 illustrerer bruken av tert-butylarninsalt av klavulansyre som et nyttig mellomprodukt i fremstillingen av klavulansyre. Saltet er kjent fra BE 862 211, men bare som en bestanddel i farmasøytiske preparater.
EP-B-0 182 522 beskriver en fremgangsmåte for fremstilling av klavulansyre ved fermentering av mikroorganismen S. clavuligerus. En viktig forbedring av prosessen ble oppnådd ved tilsetning av en karbonkilde slik som glycerol til fermenteringsmediet i løpet av prosessen enten kontinuerlig eller intermitterende, hvorved det er meget viktig at karbonnivået opprettholdes i en tilstrekkelig lav konsentrasjon, nemlig under 0,5%
(vekt/vol) og ikke på noen måte over 2%. Eksemplene illustrerer at den vesentlige forbedringen med det forøkede utbyttet av klavulansyre ble observert da karbonkilden ble tilsatt under fermentering. Det angis at konsentrasjonen av klavulansyre i fermenteringsmediet etter 160 timer var ca. 1400 ug/ml, og dette er en bemerkelsesverdig forbedring i forhold til tidligere prosesser.
En ytterligere forbedring var også en ny fremgangsmåte for rensing av klavulansyre fra oppløsning som dens litiumsalt. For å oppnå litiumklavulanat med høyere renhet ble det tilsatt en konsentrert oppløsning av et annet litiumsalt slik som litiumklorid. Det oppnådde omkrystalliserte litiumklavulanatet kunne renses ytterligere og deretter eventuelt omdannes til andre salter slik som kaliumklavulanat, på en måte som er kjent fira den ovenfor omtalte litteratur.
Myceliet, proteiner og andre faste stoffer fjernes ved hjelp av kjente metoder slik som sentrifugering eller filtrering med en mulig forutgående behandling av fermenteringsmediet med et utvalgt aggregeringsmiddel for å aggregere myceliet og således muliggjøre en lettere filtrering. Det filtrerte fermenteringsmediet behandles ytterligere med ionevekslingsharpikser eller ved utfelling med et oppløsningsmiddel slik som aceton for å fjerne proteiner og bunnfallet separeres ved gjentatt sentrifugering og filtrering. Denne separeringen av myceliet, proteiner og andre ledsagende partikler i suspensjon som opprinnelig er til stede i fermenteringsmediet er tidskrevende og nødvendiggjør ytterligere arbeidstrinn.
Disse tidskrevende fremgangsmåter for fjerning av myceliet, proteiner og andre suspenderte partikler og etterfølgende isolering fra det oppnådde, transparente fermenteirngsmediet samt fremstilling av ren klavulansyre og salter derav ble unngått på en måte som er beskrevet i publikasjonene EP-A-0 385 552 og EP-A-0 387 178.
Hele prosessen omfatter tre trinn, dvs. rensing av fermenteirngsmediet for myceliet, proteinene og de andre faste partiklene, rensing av klavulansyren som er til stede i en uren form i mediet av et renset filtrat av Streptomyces clauvuligerus ved bruk av et av de primære, sekundære eller tertiære aminene som danner stabile, intermediære salter av klavulansyre, hvorved størstedelen av de medfølgende urenhetene i klavulansyre separeres, og som siste trinn, omdannelse av intermediære aminsalter av klavulansyre (av 85% renhet) til det ønskede alkalimetallsaltet slik som kaliumklavulanat.
Det første trinnet er beskrevet mer detaljert i EP-A-0 385 552, hvor myceliet, proteinene og de andre faste partiklene fjernes fra det vandige kulturmediet oppnådd ved fermentering av mikroorganismen Streptomyces clavuligerus, ved hjelp av en fysikalsk-kjemisk prosess med koagulering-flokkulering. Flokkene oppnådd ved denne prosessen er tilstrekkelig store og kompakte slik at en lett sedimentering og separering er mulig, hvilket best oppnås ved bruk av rullende sikter. Det oppnås derved et transparent medium som eventuelt kan konsentreres ved omvendt osmose.
På denne måten oppnås et renset fermenteirngsmedium hvorved de konvensjonelle rensemetodene slik som sentrifugering, adsorpsjon på aktivt karbon, filtrering med ko-hjelpemidler osv. har blitt unngått.
I alle kjente prosesser er det også nødvendig (hvilket er forskjellig fra den beskrevne flokkuleringsmetoden) at det rensede kulturmediet behandles ved hjelp av forskjellige prosesser med deproteinisering og ioneveksling, hvilket forårsaker betydelige totale tap i det sluttelige utbyttet av den ønskede substansen. I motsetning til velkjente metoder er de totale utbyttene i flokkuleringsmetoden opptil fra 85 til 90%.
Den beskrevne fremgangsmåten med koagulering-fiokkulering fra fermenteringsmediet av Streptomyces clavuligerus er basert på tilsetning av en uorganisk elektrolytt til kulturmediet for å øke den koagulerende virkningen, anvendelse av det uorganiske koaguleringsmidlet som initiator for koaguleringsprosessen under omrøring og ved en pH-verdi i mediet mellom 6 og 8, tilsetning av en organisk elektrolytt når fiokkulering begynner, og deretter separering av de oppnådde flokkene fra fermenteringsmediet ved bruk av rullende sikter eller filtrering og, eventuelt, når fiokkulering finner sted i nærvær av et vannublandbart oppløsningsmiddel, dekantering av fasene, separering av flokkene og, eventuelt, konsentrering av væsken ved omvendt osmose eller inndampning.
EP-A-0 562 583 beskriver bruk av salter av klavulansyre med organiske diaminer slik som N,N'-diisopropyletylendiammoniumdiklavulanat som nyttige mellomprodukter for isoleringen og fremstillingen av ren klavulansyre eller alkalimetallsalter derav slik som kaliumklavulanat fra etylacetatekstrakt oppnådd etter oppløsningsmiddelekstraksjonen av det oppnådde vandige kulturmediet dannet etter fermentering, hvori klavulansyre er til stede.
Foreliggende oppfinnelse angår således en fremgangsmåte for isolering av klavulansyre fra et vandig fermenteringsmedium, kjennetegnet ved at myceliet, en større andel av proteinet og andre suspenderte faste partikler fjernes ved mikrofiltrering.
Egnede salter ifølge foreliggende oppfinnelse er farmasøytisk akseptable alkalim*etall-og jordalkalimetallsalter slik som natrium-, kalium-, kalsium- og magnesiumsalter. Blant disse saltene er natrium- og kaliumsalt, spesielt kaliumsalt, mest egnet.
Foreliggende oppfinnelse er generelt nyttig for rensing av fermenteirngsmedier oppnådd ved hjelp av en klavulansyreproduserende mikroorganisme.
Det fremgår klart fra den ovenfor omtalte tidligere teknikk at kjente prosesser har
omfattet tidskrevende isoleringsmetoder og bare EP-A-0 385 552 beskriver en forbedret fremgangsmåte hvorved det oppnås et fullstendig transparent medium. Det er imidlertid en ulempe med denne fremgangsmåten at for oppnåelse av det ønskede formål så må det benyttes flere reagenser slik som uorganiske elektrolytter, koaguleringsmidler, organiske polyelektrolytter og at fiokkulering, sedimenteirng eller filtrering av fermenteirngsmediet krever en relativt lang produksjonstid, hvilket påvirker renheten av det ønskede produktet.
På side 2, spalte 2, linjene 22-35, angis noen muligheter for rensing av fermenteringsmediet, men likevel vil nevnte metoder lede til en betydelig minsking av utbyttet av klavulansyre. Det angis videre at bruken av flere sofistikerte teknikker i prosessen for isolering og rensing slik som ultrafiltrering og omvendt osmose ikke ville forenkle prosessen fordi anvendelsen av disse metodene vil nødvendiggjøre forutgående filtreringer på aktivt karbon eller ioniske harpikser.
I motsetning til disse angivelsene har det overraskende blitt funnet at det kan være mulig å unngå anvendelsen av flere reagenser som er benyttet i fremgangsmåten beskrevet i EP-A-0 385 552, samt andre tidskrevende måter for rensing av det vandige fermenteringsmediet, hvilke måter er beskrevet i litteraturen, når det ifølge foreliggende oppfinnelse anvendes en mikrofiltreringsmetode hvorved myceliet, en større del av proteiner (minst 80% av de som er til stede i mediet) og andre suspenderte partikler fjernes.
For dette formålet anvendes en flertrinns anordning for kontinuerlig rnikrofiltrering, som gjør det mulig å utføre fremgangsmåten med separering av myceliet og vandig filtrat i en oppholdstid som er mindre enn en halv time, hvor anordningen består av flere (fem) seriekoblede uavhengige segmenter (filtreringssløyfer). Hvert segment har sin egen sirkulasjonspumpe som sørger for den ønskede hastighet for fermenteringsmediet (5-8 m/s) gjennom kanaler av keramiske fUtreringselementer som har en porestørrrelse på 0,05 (im. I mikrofiltreirngsprosessen som finner sted ved en temperatur mellom ca, 20°C og 40°C (temperaturen bør ikke overstige 40°C), reguleres tangentielle hastigheter på en slik måte at molekylene av en molekylvekt over 30.000 bibeholdes i en fast fraksjon. På en slik måte lyktes det å fjerne fra ca. 80 til 90% av de tilstedeværende proteinene. Myceliet som ble separert i mikrofiltreringsprosessen ble også vasket med vann for å øke utbyttet av klavulansyre i det kombinerte filtratet. Ved den beskrevne fremgangsmåten for rensing av det vandige fermenteirngsmediet ved rnikrofiltrering bibeholdes over 95% av klavulansyre i den rensede vandige fasen, hvilket til og med overskrider resultatene fra flokkuleringsmetoden i EP-A-0 385 552 og representerer en ytterligere forbedring ved foreliggende fremgangsmåte.
Etter rnikrofiltrering kan filtratet eventuelt renses ved en ultrafiltreirngsprosess. Formålet med denne rensingen er å separere en større del av de gjenværende proteinurenheter og andre medfølgende urenheter som har en høyere molekylvekt enn klavulansyre. På denne måten blir uønskede urenheter fjernet på vellykket måte, og kan utfelles ved ekstraksjon med et vannublandbart organisk oppløsningsmiddel, hvorved fargingen av det vandige filtratet oppnådd etter rensing med rnikrofiltrering i det vesentlige reduseres og renheten av det ønskede produktet blir ytterligere forbedret.
I ultrafiltreringsanordningen anvendes det en polymer membran med en høy oppløsningsgrad på ca. 20.000 dalton (mellom 10.000 og 30.000 dalton). Fremgangsmåten utføres kontinuerlig slik at oppholdstidene er så korte som mulig, og over to seriekoblede ultrafiltreringsanordninger (hvilket øker separeringsselektiviteten for urenheter og klavulansyre); ved tilsetning av rent vaskevann samt ved transport i motstrøm av retentatet (vandig fase) oppnådd i ultrafiltreirngsprosessen blir tapene av klavulansyre i den vandige fasen redusert til mindre enn 5%.
Det kombinerte vandige filtratet blir deretter konsentrert i en anordning med omvendt osmose ved en temperatur på omkring romtemperatur til 1/5 av det opprinnelige volumet til oppnåelse av en konsentrert vandig fase av uren klavulansyre og deretter bin-det oppnådde konsentratet (retentat) direkte ekstrahert ved temperaturer mellom 15°C og 25°C (ekstraksjon kan også finne sted ved en temperatur under 15°C) med et vannublandbart organisk oppløsningsmiddel slik som etylacetat, i et surt medium i pH-området for mediet mellom 1 og 3, hvilket justeres ved tilsetning av organisk syre slik som svovelsyre. Foruten etylacetat kan andre vannublandbare organiske oppløsningsmidler også anvendes slik som etylacetat, metylisobutylketon eller n-butylalkohol.
Siden man ved mikrofiltreringsprosessen har lykkes i å fjerne myceliet og en større del av de tilstedeværende proteiner, er en direkte ekstraksjon av det rensede og konsentrerte vandige fermenteringsmediet med et passende vannublandbart organisk oppløsningsmiddel slik som metylacetat mulig uten bruk av tidskrevende rensemetoder som benyttet i kjente metoder som er beskrevet i den ovenfor omtalte litteratur og bruken av ytterligere reagenser slik som benyttet i koagulering-flokkuleringsmetoden for rensing av fermenteringsmediet unngås. Således, i tillegg til den ovenfor omtalte forbedring, gir foreliggende fremgangsmåte også en reduksjon i omkostningene i forbindelse med medierensemetoden. For å unngå denaturering av de gjenværende proteinene i konsentratet av vandig fase på grunn av et samvirke med det organiske oppløsningsmidlet eller svovelsyre i løpet av ekstraksjonen av den urene klavulansyren fra den vandige fasen i den organiske fasen, er det best å utføre ekstraksjonen i en serie sentrifugalekstraktorer, hvor i en av dem, nemlig en selvtømmende sentrifugalseparator, de separerte proteinene fjernes samtidig og kontinuerlig.
I det oppnådde ekstraktet av den urene klavulansyren i et vannublandbart organisk oppløsningsmiddel kan det også finnes vannoppløselige urenheter slik som forskjellige dekomponeringsprodukter av klavulansyre som er mer polare enn klavulansyre alene, og således fjernes vannoppløselige urenheter ved vasking av den kombinerte organiske fasen med vann. På denne måten oppnås et renset ekstrakt av klavulansyre i organisk fase slik som etylacetatekstrakt.
Klavulansyre kan isoleres fra den organiske fasen og renses som beskrevet i fremgangsmåten i EP-A-0 562 583. Den beste måten for isolering av klavulansyre som beskrevet i denne patentsøknaden utføres ved en reaksjon av etylacetatekstraktet av klavulansyren med N,N'-diisopropyletylendiamin ved en temperatur på omkring romtemperatur og ved en etterfølgende omdannelse av det oppnådde intermediære NjN<1->diisopropyletylendiammoniumdiklavulanat med kalium-2-etylheksanoat i en vandig isopropanoloppløsning og ved romtemperatur for oppnåelse av kaliumklavulanat, som isoleres med en høy renhet.
Det har nå blitt funnet at fremstillingen av det intermediære N,N'-diisopropyletylendiammoniumdiklavulanatet best utføres på en slik måte at det i reaksjonen mellom en vannublandbar organisk fase slik som etylacetatekstrakt av klavulansyren og N^N-diisopropyletylendiamin anvendes en organisk fase hvorfra vann fullstendig har blitt fjernet siden allerede små vannmengder kan forstyrre fremstillingen av det intermediære saltet siden det separerte saltet oppløses i vannet som er til stede i den organiske fasen og "pitched" biprodukter kan oppnås, hvilket gjør tørkingen vanskeligere.
Dersom vannfjernes fullstendig fra den organiske fasen, øker den organiske fasens eller ekstraktets stabilitet fordi det er velkjent at stabiliteten til klavulansyre i vandige oppløsninger og i et medium med sur pH-verdi i ekstraksjonsprosessen er meget dårlig. For tørking av den organiske fasen slik som etylacetatekstrakt av klavulansyre ble det derfor benyttet tørking i en rektifiseringskolonne (prinsippet med fraksjonert destillasjon) i vakuum på grunn av den dårlige stabiliteten til det intermediære saltet ved høyere temperaturer. Det er et vesentlig trekk ved forreliggende fremgangsmåte at den organiske fasen slik som etylacetat og vann danner en azeotrop som har et minimum kokepunkt og således blir den organiske fasen slik som etylacetatekstrakt fullstendig tørket på den beskrevne måten. Den organiske fasen slik som etylacetatekstrakt har således alltid et vanninnhold mindre enn 0,lvol.%, gjennomsnittlig fra 0,03 til 0,05 vol.%. Den fullstendige vannfrie organiske fasen slik som etylacetatekstrakt av klavulansyre blir så, innenfor en meget kort oppholdstid, konsentrert ved inndampning til en 1/20 av det opprinnelige volumet for etterfølgende omsetning med N,N'-diisopropyletylendiamin.
Den etterfølgende reaksjon av N,N'-diisopropyletylendiammomumdiklavulanat med kalium-2-etylheksanoat til kaliumklavulanat av høy renhet kan utføres som beskrevet i EP-A-0 562 583 og best på en slik måte som er beskrevet i eksemplene og illustrert ved de ovenfor omtalte forbedringer.
Oppfinnelsen illustreres, men begrenses ikke på noen måte, av følgende eksempler.
Eksempel 1
Kontinuerlig fremstilling av et konsentrat av etylacetatekstrakt inneholdende uren klavulansyre
Et vandig fermenteirngsmedium (10.0001) oppnådd ved fermentering av mikroorganismen Streptomyces sp. P 6621 FERM P2804 (konsentrasjon av
klavulansyre var 3580 mg/l) ble tilsatt til en 33% vandig oppløsning (5 1) av svovelsyre i en beholder (kapasitet 50 m<3>) under omrøring og avkjøling slik at mediets pH-yerdi ble holdt mellom 5,8 og 6,2. Deretter ble mediet kontinuerlig tilsatt til en mikrofiltrerings-anordning med en strømningshastighet på 1200 l/time, hvilken anordning besto av fem seriekoblede segmenter. Hvert segment hadde sin egen sirkulasjonspumpe for å sørge for at fermenteringsmediets hastighet gjennom kanalene i keramiske filterelementer med en porestørrelse på 0,05 um ble 8 m/s. Ved mikrofiltreringsprosessen, hvorved det ble passet på at temperaturen ikke overskred 40°C, ble myceliet og en større del proteiner og andre suspenderte faste partikler fjernet.
De separerte faste stoffene ble vasket med vann som hadde en strømningshastighet på 300 l/time og deretter ble det kombinerte filtratet (permeat) etter rnikrofiltrering tilsatt kontinuerlig med en strømningshastighet på 1500 l/time til en anordning med omvendt osmose, hvor permeatet ble konsentrert til 1/5 av det opprinnelige volumet.
Til konsentratet (rententat) oppnådd etter den omvendte osmosen med en strømningshastighet på 300 l/time, ble det tilsatt en 33% vandig oppløsning (4 l/time) av svovelsyre slik at mediets pH-verdi ble holdt mellom 1,5 og 2,0, deretter ble etylacetat tilsatt ved en strømningshastighet på 900 l/time for å ekstrahere et surt retentat ved romtemperatur i motstrøm i en serie av fem sentrifugalekstraktorer, idet de fremdeles gjenværende separerte proteinene samtidig ble fjernet i den andre selvtømmende sentrifugalseparatoren.
Det kombinerte etylacetatekstraktet fra serien av sentrifugalekstraktorene ble vasket i den første sentrifugalekstraktoren med demineralisert vann som hadde en strømningshastighet på 30 l/time og således ble de fremdeles gjenværende vannoppløselige urenhetene fjernet.
Etylacetatekstraktet med en strømningshastighet på 900 l/time ble tørket i vakuum ved en temperatur på 30°C i rektifiseringskolonnen slik at det ble oppnådd et vanninnhold på 0,03 vol.%, og deretter ble ekstraktet inndampet i en tynnsjiktsevaporator i vakuum ved en temperatur på 30°C til en 1/20 av det opprinnelige volumet. Det oppnådde konsentrerte etylacetatekstraktet (konsentrasjon av den urene klavulansyren var 50 g/l) med strømningshastighet på 45 l/time, ble avfarget ved kontinuerlig tilsetning av aktivt karbon (0,45 kg), blandingen ble omrørt i 30 minutter og deretter ble karbonet frafHtrert fra suspensjonen av konsentratet av etylacetatekstraktet på et trykkfUter under et nitrogentrykk på 1 bar for oppnåelse av et tørt konsentrat (451) av etylacetatekstraktet inneholdende uren klavulansyre.
Eksempel 2
Fremstilling av N,N'-dlisoporpyletylendUammcmiumdiklavulanat
Til et tørt konsentrat (45 1) av etylacetatekstrakt oppnådd i den kontinuerlige prosessen i Eksempel 1 (klavulansyreinnholdet var 50 g/l), ble N,N'-diisopropyletylendiamin (1,41) tilsatt i 5 minutter under sterk omrøring ved en temperatur på 25°C. Den oppnådde suspensjonen ble frafHtrert, de oppnådde krystallene ble resuspendert i aceton (45 1) og, ved omrøring og avkjøling av suspensjonen ved en temperatur under 10°C, ble krystaller av den ønskede substansen separert, og disse krystallene ble frafiltrert, vasket med aceton og tørket i vakuum ved en temperatur på 30°C. Krystaller av HN1-diisopropyletylendiammoniumdiklavulanat (3,3 kg; klavulansyreinnholdet var 60%) ble oppnådd.
Eksempel 3
Fremstilling av kaliumklavulanat
N,N'-diisopropyletylendiarnmoniumdiklavulanat (3,3 kg) fra Eksempel 2 ble oppløst i en isopropanol/vann-blanding (82,5 1; andelen av vann var 1,5%) og til den oppnådde
oppløsning ble det tilsatt aktivt karbon (1,5 kg) og kalium 2-etyl-heksanoat (0,5 1; 2 M) i 30 minutter under omrøring ved romtemperatur. Deretter ble karbonet og det oppnådde bunnfallet frafiltrert. Til det oppnådde filtratet (801) ble det tilsatt en oppløsning (61) av kalium-2-etylheksanoat (2 M) i isopropanol i 20 minutter under omrøring ved romtemperatur. Den oppnådde suspensjonen ble deretter omrørt under avkjøling ved en temperatur mellom 0°C og 5°C i ytterligere 2 timer, og deretter ble de separerte krystallene frafiltrert, vasket med isopropanol og aceton og tørket i vakuum ved en temperatur på 30°C. Kaliumklavulanat (2 kg; USP kvalitet, klavulansyreinnhold 80,6%, bestemt ved HPLC-metoden) ble oppnådd.

Claims (14)

1. Fremgangsmåte for isolering av klavulansyre fra et vandig ferrnenteringsmedium, karakterisert ved at myceliet, en større andel av proteinet og andre suspenderte faste partikler fjernes ved rnikrofiltrering.
2. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at nevnte faste partikler fjernes ved kontinuerlig rnikrofiltrering gjennom filterelementer som har en porestørrelse på 0,05 fim.
3. Femgangsmåte ifølge hvilket som helst av de foregående krav, karakterisert ved at det filtrerte mediet ekstraheres ved en pH-verdi mellom 1 og 3 med et vannublandbart oppløsningsmiddel ved anvendelse av en motstrøms-sentrifugalekstraktor.
4. Fremgangsmåte ifølge krav 3, karakterisert ved at oppløsningsmidlet velges fra: etylacetat, metylacetat, metylisobutylketon og n-butanol.
5. Fremgangsmåte ifølge krav 4, karakterisert ved at oppløsningsmidlet er etylacetat.
6. Fremgangsmåte ifølge hvilket som helst av de foregående krav, karakterisert ved at mikrofiltreringen utføres ved en pH-verdi,mellom 5,8 og 6,2.
7. Fremgangsmåte ifølge hvilket som helst av de foregående krav, karakterisert ved at mikrofiltreringen utføres ved en temperatur i området 20-40°C.
8. Fremgangsmåte ifølge hvilket som helst av de foregående krav 3-7, karakterisert ved at det filtrerte mediet ekstraheres suksessivt i en serie sentrifugalekstraktorer.
9. Fremgangsmåte ifølge hvilket som helst av de foregående krav, karakterisert ved at filtreringen av det vandige fermenteringsmediet innbefatter trinnene med rnikrofiltrering fulgt av ultrafiltrering.
10. Fremgangsmåte ifølge krav 9, karakterisert ved at ultrafiltreringen utføres kontinuerlig ved bruk av en semipermeabel membran som har en oppløsningsgrad mellom 10.000 og 30.000 dalton.
11. Fremgangsmåte ifølge hvilket som helst av kravene 3-10, karakterisert ved at den innbefatter trinnet med fjerning av vann ved omvendt osmose før ekstraksjon med det vannublandbare oppløsningsmidlet.
12. Fremgangsmåte ifølge hvilket som helst av kravene 3-11, karakterisert ved at den organiske fasen tørkes i vakuum ved bruk av en rektifiseringskolonne.
13. Fremgangsmåte ifølge hvilket som helst av kravene 3-12, karakterisert ved at klavulansyre oppløst i det vannublandbare oppløsningsmidlet omsettes med N,N-diisopropyletylentf amin.
14. Fremgangsmåte ifølge krav 13, karakterisert ved at Njh<T->diisopropyletylendiammoniumdiklavulanatet omsettes med kalium-2-etylheksanoat for dannelse av kaliumklavulanat.
NO19963628A 1994-03-02 1996-08-30 Fremgangsmate for isolering av klavulansyre fra et vandig fermenteringsmedium NO318374B1 (no)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SI9400107A SI9400107A (en) 1994-03-02 1994-03-02 New process of the isolation of clavulanic acid and its pharmaceutical salts from fermented broth of streptomyces sp.p 6621 ferm p 2804.
PCT/SI1995/000002 WO1995023870A1 (en) 1994-03-02 1995-02-23 Novel process for the isolation of clavulanic acid and of pharmaceutically acceptable salts thereof from the fermentation broth of streptomyces sp. p 6621 ferm p 2804

Publications (3)

Publication Number Publication Date
NO963628D0 NO963628D0 (no) 1996-08-30
NO963628L NO963628L (no) 1996-10-17
NO318374B1 true NO318374B1 (no) 2005-03-14

Family

ID=20431337

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO19963628A NO318374B1 (no) 1994-03-02 1996-08-30 Fremgangsmate for isolering av klavulansyre fra et vandig fermenteringsmedium

Country Status (25)

Country Link
US (4) US5780274A (no)
EP (1) EP0748387B1 (no)
JP (1) JP2948661B2 (no)
KR (1) KR100293172B1 (no)
CN (1) CN1055694C (no)
AT (1) ATE159549T1 (no)
AU (1) AU694176B2 (no)
BG (1) BG62213B1 (no)
CA (1) CA2184619A1 (no)
CZ (1) CZ284117B6 (no)
DE (1) DE69500925T2 (no)
DK (1) DK0748387T3 (no)
ES (1) ES2108572T3 (no)
FI (1) FI963408A (no)
GR (1) GR3025942T3 (no)
HU (1) HUT74944A (no)
NO (1) NO318374B1 (no)
NZ (1) NZ279958A (no)
PL (1) PL180520B1 (no)
RO (1) RO118760B1 (no)
RU (1) RU2206613C2 (no)
SI (1) SI9400107A (no)
SK (1) SK279780B6 (no)
WO (1) WO1995023870A1 (no)
ZA (1) ZA951689B (no)

Families Citing this family (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AT400033B (de) 1992-03-10 1995-09-25 Biochemie Gmbh Neues verfahren zur isolierung und reinigung von clavulansäure und zur herstellung von pharmakologisch verträglichen salzen derselben
SI9400107A (en) * 1994-03-02 1995-10-31 Lek Tovarna Farmacevtskih New process of the isolation of clavulanic acid and its pharmaceutical salts from fermented broth of streptomyces sp.p 6621 ferm p 2804.
GB9500977D0 (en) * 1995-01-19 1995-03-08 Smithkline Beecham Plc Novel process
SI9500074A (en) † 1995-03-10 1996-10-31 Lek Tovarna Farmacevtskih Process for preparation of alkani salts of clavulanic acid.
SI9500134B (sl) 1995-04-20 2004-04-30 Lek, Postopek za pripravo čistih alkalijskih soli klavulanske kisline
GB9515809D0 (en) * 1995-08-02 1995-10-04 Smithkline Beecham Plc Process
SI9500265A1 (en) 1995-08-28 1997-02-28 Lek Tovarna Farmacevtskih Process for purification of the aqueous fermented broth filtrate of streptomyces sp. p 6621 ferm p 2804 by ultrafiltration
AT403375B (de) * 1995-11-15 1998-01-26 Biochemie Gmbh Verfahren zur fällung von alkalisalzen der clavulansäure
US6414142B1 (en) * 1996-06-13 2002-07-02 Smithkline Beecham Corporation Process for preparing potassium clavulanate
CN1238776A (zh) * 1996-11-11 1999-12-15 吉斯特-布罗卡迪斯有限公司 制备棒酸盐和酯的方法
AT404728B (de) * 1996-11-27 1999-02-25 Biochemie Gmbh Verfahren zur herstellung von clavulansäure-aminsalzen
WO1998042858A1 (en) * 1997-03-24 1998-10-01 Cipan-Companhia Industrial Produtora De Antibióticos, S.A. Process for the isolation of a pharmaceutically acceptable alkali metal salt of clavulanic acid
ATE187498T1 (de) 1997-03-24 1999-12-15 Cipan Comp Ind Prod Verfahren zur isolierung eines pharmazeutisch verträglichen alkalimetallsalzes der clavulansäure
DZ2456A1 (fr) * 1997-04-04 2003-01-18 Smithkline Beecham Plc Procédé de préparation de sels de l'acide clavulanique.
EP1165049B2 (en) * 1999-04-01 2011-07-06 DSM IP Assets B.V. Agglomerates by crystallisation
CA2408853C (en) 2000-05-13 2012-01-10 Smithkline Beecham P.L.C. Process
GB0022841D0 (en) * 2000-09-18 2000-11-01 Smithkline Beecham Plc Process
KR100443082B1 (ko) * 2002-10-18 2004-08-04 삼성전자주식회사 반도체 장치의 트랜지스터 제조 방법
KR100768476B1 (ko) 2005-11-24 2007-10-18 한국해양연구원 항암물질을 생산하는 방선균 스트렙토마이세스 속 균주,이의 분리방법, 이로부터 반고형 추출물을 제조하는 방법,이로부터 유래한 반고형 추출물 및 이를 이용한 항암제조성물
CN102838624B (zh) * 2012-09-07 2014-10-29 安徽普朗膜技术有限公司 一种从发酵液中纯化克拉维酸的方法
CN104910194A (zh) * 2015-05-28 2015-09-16 高希章 一种克拉维酸钾的制备方法及其复方制剂

Family Cites Families (58)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3873425A (en) * 1971-11-19 1975-03-25 Tatsuyoshi Kobayashi Process for producing itaconic acid
GB1508977A (en) * 1974-04-20 1978-04-26 Beecham Group Ltd Beta-lactam antibiotic from streptomyces clavuligerus
US4110165A (en) 1974-04-20 1978-08-29 Beecham Group Limited Process for the production of clavulanic acid
NZ177159A (en) * 1974-04-20 1978-03-06 Beecham Group Ltd Clavulanic acid, salts, esters and preparation thereof from streptomyces clavuligerus: pharmaceutical compositions
US4140764A (en) * 1974-12-18 1979-02-20 Beecham Group Limited β-Lactamase inhibitors and process for their preparation
US4144242A (en) 1975-02-07 1979-03-13 Glaxo Laboratories Limited Process for the purification of clavulanic acid
US4148880A (en) * 1975-08-13 1979-04-10 Pfizer Inc. Mixture of antibiotics produced by a species of actinoplanes
GB1563103A (en) * 1975-10-13 1980-03-19 Beecham Group Ltd Process for the preparation of clavulanic acid
GB1578739A (en) 1976-07-23 1980-11-05 Beecham Group Ltd Amine salts of clavulanic acid methods for their preparation and compositions containing them
JPS55162993A (en) * 1979-06-07 1980-12-18 Sanraku Inc Preparation of culavulanic acid
US4454069A (en) 1979-08-24 1984-06-12 Beecham Group Limited Clavulanic acid salts and their preparation from the tertiary butyl amine salt
DE2948607A1 (de) 1979-12-03 1981-06-11 Chemische Fabrik Dr. Meyer-Castens & Co Nfg., 2000 Hamburg Verfahren zur herstellung eines emulgators auf lecithinbasis
JPS5791196A (en) 1980-11-27 1982-06-07 Takeda Chem Ind Ltd Separation of inosine, guanosine or their mixture from cell bodies and high polymeric substances
DE3146190A1 (de) 1981-11-21 1983-06-16 Hoechst Ag, 6230 Frankfurt Isolierung von chemisch instabilen antibiotika aus fermentationsloesungen
JPS6070092A (ja) * 1983-09-26 1985-04-20 Ajinomoto Co Inc グルタミン酸発酵液からのグルタミン酸結晶の取得法
US4911847A (en) 1983-12-20 1990-03-27 Membrex, Inc. Process for controlling the permeate composition in a rotary filtration device
AU600655B2 (en) 1984-10-27 1990-08-23 Beecham Group Plc Preparation of clavulanic acid and its salts and esters
GB8521516D0 (en) 1985-08-29 1985-10-02 Beecham Group Plc Compounds
IT1221982B (it) * 1987-07-08 1990-08-31 Mini Ricerca Scient Tecnolog Antibiotici ab 006 e processo per la loro produzione
DE3730868A1 (de) * 1987-09-15 1989-03-23 Henkel Kgaa Verfahren zur abtrennung von biotechnisch hergestellten wertstoffen aus einer fermenterbruehe durch querstrom-mikro- und/oder ultrafiltration
GB8823706D0 (en) * 1988-10-10 1988-11-16 Alcan Int Ltd Microfilter device
ES2010143A6 (es) * 1989-03-01 1989-10-16 Pharma Mar S A Pharmar Un nuevo procedimiento de obtencion del acido z(2r,5r)-3-(2-hiadroxietiliden)-7- oxo-4-oxa-1-azabiciclo(3,2,0) -heptano-2-carboxilico y de sales estares farmaceutiacamente aceptables del mismo,a partir de caldos de fermentacion de streptomyces, sp.
ES2010144A6 (es) * 1989-03-01 1989-10-16 Pharma Mar S A Pharmar Un procedimiento de floculacion-coagulacion de caldos de fermentacion de streptomyces sp. que permite la obtencion directa de liquidos completamente transparentes.
US5024937A (en) 1989-04-06 1991-06-18 Dow Corning Corporation Method for processing aqueous fermentation broths
EP0431679B1 (en) * 1989-12-05 1994-10-19 Merck & Co. Inc. Method of stabilizing recombinant hepatitis B virus surface proteins from yeast
DE4005132A1 (de) 1990-02-17 1991-08-22 Akzo Gmbh Verfahren zum herstellen von hohlfadenstapeln
US5240600A (en) 1990-07-03 1993-08-31 International Environmental Systems, Inc., Usa Water and wastewater treatment system
JP3021562B2 (ja) * 1990-07-16 2000-03-15 ダイセル化学工業株式会社 ナイシンの製造方法
US5073263A (en) 1990-09-21 1991-12-17 Fagundes Carlos A Method and article for restraining extrusion of feed spacers and circumferential expansion in spiral filtration modules
US5268283A (en) * 1990-10-05 1993-12-07 Miles Inc. Method for the production of detergent builder formulations utilizing spray granulated citric acid and salts thereof
DE4031854A1 (de) * 1990-10-08 1992-04-09 Basf Ag Mikroorganismus und verfahren zur gewinnung von anthranilsaeure
JP2615272B2 (ja) * 1991-03-22 1997-05-28 日本碍子株式会社 蛋白質溶液中の蛋白有価物の回収方法
US5470356A (en) 1991-10-11 1995-11-28 Meszaros; Laszlo A. Sulfur dye compositions and their production
AT399155B (de) * 1992-03-26 1995-03-27 Lek Tovarna Farmacevtskih Neue alkylendiammonium-diclavulanat-derivate, verfahren zu deren herstellung sowie deren verwendung
GB9222841D0 (en) 1992-10-31 1992-12-16 Smithkline Beecham Plc Novel process
SI9300296B (sl) * 1992-06-11 1998-06-30 Smithkline Beecham P.L.C. Postopek in intermedianti za pripravo klavulanske kisline
SI9200139A (en) * 1992-07-08 1994-03-31 Lek Tovarna Farmacevtskih New inclusion complex of clavulanic acid with hydrophylyc and hydropholyc beta-cyclodextrin derivates for production of them
KR100200239B1 (ko) * 1992-10-21 1999-06-15 김충환 클라불란산 칼륨염의 제조방법
WO1994016101A2 (en) 1993-01-07 1994-07-21 Koester Hubert Dna sequencing by mass spectrometry
GB9305565D0 (en) 1993-03-18 1993-05-05 Smithkline Beecham Plc Novel compounds and processes
US5760218A (en) 1993-03-26 1998-06-02 Gist-Brocades N.V. Diamine salts of clavulanic acid
US5741903A (en) 1993-03-26 1998-04-21 Gist-Brocades N.V. Diamine salts for purification of clavulanic acid
DE647229T1 (de) * 1993-03-26 1996-01-18 Gist Brocades Nv Diaminsalze von clavulansäure.
US5470481A (en) 1993-10-13 1995-11-28 Modell Environmental Corporation Method and apparatus for recovering wash water from pulp and paper mill effluent
WO1995011295A1 (en) 1993-10-22 1995-04-27 Gist-Brocades N.V. An improved process to recover an aqueous fermentation broth
GB9401969D0 (en) 1994-02-02 1994-03-30 Smithkline Beecham Plc Process
AT400846B (de) 1994-02-25 1996-03-25 Fermic S A De C V Verfahren zur gewinnung und reinigung von alkalimetallsalzen der clavulansäure
SI9400107A (en) * 1994-03-02 1995-10-31 Lek Tovarna Farmacevtskih New process of the isolation of clavulanic acid and its pharmaceutical salts from fermented broth of streptomyces sp.p 6621 ferm p 2804.
JPH0873227A (ja) 1994-06-30 1996-03-19 Olympus Optical Co Ltd ガラス体の製造方法及びゲルの浸漬装置
US5650101A (en) 1994-07-25 1997-07-22 University Of South Florida Lock and key micelles
JP3617091B2 (ja) 1994-11-30 2005-02-02 味の素株式会社 塩基性アミノ酸の精製方法
GB9426261D0 (en) 1994-12-24 1995-02-22 Spurcourt Ltd Clavulanic acid salts
PL321871A1 (en) 1995-02-25 1997-12-22 Spurcourt Ltd Clavulanic salts and compositions containing them as well as method of obtaining such salts
KR100200242B1 (ko) 1995-05-16 1999-06-15 김충환 클라불란산염의 제조 방법
GB9515809D0 (en) 1995-08-02 1995-10-04 Smithkline Beecham Plc Process
AT403375B (de) * 1995-11-15 1998-01-26 Biochemie Gmbh Verfahren zur fällung von alkalisalzen der clavulansäure
ES2101658B1 (es) 1995-11-23 1998-03-01 Antibioticos Sa Nuevo procedimiento de produccion de acido clavulanico y sus sales.
US5837365A (en) 1996-04-08 1998-11-17 The Penn State Research Foundation Hydrophilic polypropylene membranes

Also Published As

Publication number Publication date
BG62213B1 (bg) 1999-05-31
US6566106B2 (en) 2003-05-20
BG100816A (en) 1997-10-31
FI963408A0 (fi) 1996-09-02
EP0748387B1 (en) 1997-10-22
US20010007761A1 (en) 2001-07-12
ZA951689B (en) 1995-12-11
HU9602351D0 (en) 1996-10-28
PL180520B1 (pl) 2001-02-28
JP2948661B2 (ja) 1999-09-13
JPH09504702A (ja) 1997-05-13
US5780274A (en) 1998-07-14
CN1055694C (zh) 2000-08-23
SK112096A3 (en) 1997-02-05
GR3025942T3 (en) 1998-04-30
AU1724195A (en) 1995-09-18
DE69500925D1 (de) 1997-11-27
NZ279958A (en) 1997-04-24
KR100293172B1 (ko) 2001-06-15
NO963628D0 (no) 1996-08-30
SK279780B6 (sk) 1999-03-12
ES2108572T3 (es) 1997-12-16
ATE159549T1 (de) 1997-11-15
CN1143388A (zh) 1997-02-19
AU694176B2 (en) 1998-07-16
DK0748387T3 (da) 1998-05-25
CZ284117B6 (cs) 1998-08-12
US6207428B1 (en) 2001-03-27
CA2184619A1 (en) 1995-09-08
SI9400107A (en) 1995-10-31
RO118760B1 (ro) 2003-10-30
US5985625A (en) 1999-11-16
DE69500925T2 (de) 1998-02-12
RU2206613C2 (ru) 2003-06-20
WO1995023870A1 (en) 1995-09-08
EP0748387A1 (en) 1996-12-18
CZ255796A3 (en) 1996-12-11
HUT74944A (en) 1997-03-28
PL316085A1 (en) 1996-12-23
FI963408A (fi) 1996-10-30
KR970701786A (ko) 1997-04-12
NO963628L (no) 1996-10-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
NO318374B1 (no) Fremgangsmate for isolering av klavulansyre fra et vandig fermenteringsmedium
US5994534A (en) Process for the preparation of pharmaceutically acceptable salts of clavulanic acid
EP0821687B1 (en) Preparation of clavulanate salts
US6127358A (en) Isolation of clavulanic acid from fermentation broth by ultrafiltration
EP0941229B1 (en) Purification of fermented clavulanic acid
US20010029038A1 (en) Purification of fermented clavulanic acid