PL180520B1 - Sposób wyodrebniania kwasu klawulanowego z brzeczki fermentacyjnej po fermentacji z uzyciem mikroorganizmu wytwarzajacego kwas klawulanowy PL PL PL PL PL PL PL - Google Patents
Sposób wyodrebniania kwasu klawulanowego z brzeczki fermentacyjnej po fermentacji z uzyciem mikroorganizmu wytwarzajacego kwas klawulanowy PL PL PL PL PL PL PLInfo
- Publication number
- PL180520B1 PL180520B1 PL95316085A PL31608595A PL180520B1 PL 180520 B1 PL180520 B1 PL 180520B1 PL 95316085 A PL95316085 A PL 95316085A PL 31608595 A PL31608595 A PL 31608595A PL 180520 B1 PL180520 B1 PL 180520B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- clavulanic acid
- extraction
- wort
- purified
- fermentation
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
- C12P17/188—Heterocyclic compound containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen atoms and oxygen atoms as the only ring heteroatoms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D503/00—Heterocyclic compounds containing 4-oxa-1-azabicyclo [3.2.0] heptane ring systems, i.e. compounds containing a ring system of the formula:, e.g. oxapenicillins, clavulanic acid derivatives; Such ring systems being further condensed, e.g. 2,3-condensed with an oxygen-, nitrogen- or sulfur-containing hetero ring
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/02—Separating microorganisms from their culture media
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/886—Streptomyces
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
- Seasonings (AREA)
Abstract
1. Sposób wyodrebniania kwasu klawulanowego z brzeczki fermentacyjnej po fer- mentacji z uzyciem mikroorganizmu wytwarzajacego kwas klawulanowy obejmujacy eta- py, w których usuwa sie grzybnie, wiekszosc bialek i innych zawieszonych w brzeczce cial stalych uzyskujac oczyszczona brzeczke, a nastepnie ekstrahuje sie rozpuszczalnikiem orga- nicznym niemieszajacym sie z woda kwas klawulanowy z oczyszczonej brzeczki, po czym wydziela sie z fazy organicznej sól kwasu klawulanowego z metalami alkalicznymi, zna- mienny tym, ze sól kwasu klawulanowego wydziela sie z fazy organicznej po ekstrakcji kwasu klawulanowego z brzeczki oczyszczonej przez mikrofiltracje. PL PL PL PL PL PL PL
Description
Przedmiotem wynalazku jest sposób wyodrębniania kwasu klawulanowego z brzeczki fermentacyjnej po fermentacji z użyciem mikroorganizmu wytwarzającego kwas klawulanowy.
Sposób według wynalazku dotyczy zwłaszcza wyodrębniania kwasu klawulanowego w postaci jego farmaceutycznie dopuszczalnych soli z brzeczki fermentacyjnej Streptomyces sp. P 6621 FERM P 2804.
Kwas klawulanowy jest popularną nazwą kwasu (2R, 5R, Z)-3-(2-hydroksyetylideno)-7-keto-4-oksa-1 -azabicyklo[3.2.0]-heptano-2-karboksylowego o wzorze
Jego sole metali alkalicznych i estry są aktywnymi inhibitorami beta-laktamaz produkowanych przez niektóre mikroorganizmy Gram dodatnie jak również niektóre mikroorganizmy Gram ujemne.
Poza działaniem inhibitującym beta-laktamazy, kwas klawulanowy i jego sole z metalami alkalicznymi, mają również działanie synergiczne w połączeniu z antybiotykami betalaktamowymi grupy penicylin i cefalosporyn. Zatem kwas klawulanowy i jego sole są stosowane w preparatach galenowych w celu zapobiegania dezaktywacji antybiotyków beta-laktamowych. Preparaty handlowe zawierają bardziej trwałą sól potasową kwasu klawulanowego (sam kwas jest raczej nietrwały) w połączeniu z trójwodzianem amoksycyliny.
Kwas klawulanowy otrzymywany jest przez fermentację z udziałem mikroorganizmu produkującego kwas klawulanowy takiego jak np. mikroorganizmy należące do szczepów Streptomyces, takie jak S. clavuligerus NRRL 3585, S. jumoninensis NRRL 5741, S. katsurahamanus IFO 13716 i Streptomyces sp. P 6621 FERM P 2804.
Otrzymana po fermentacji wodna brzeczka hodowlana może być oczyszczana i zatężana zgodnie z tradycyjnymi sposobami obejmującymi np. filtrację i chromatograficzne oczyszczanie jak przedstawiono w opisie GB 1.508.977 przed ekstrakcją wodnego roztworu rozpuszczalnikiem organicznym w celu otrzymania roztworu nieoczyszczonego kwasu klawulanowego w rozpuszczalniku organicznym.
Opis GB 1.508.977 podaje, między innymi, że sole kwasu klawulanowego można otrzymać przez adsorpcję anionu klawulanianowego z przefiltrowanej brzeczki na żywicy anionowymiennej i wyeluowanie go z niej elektrolitem, otrzymany roztwór wysala się, a następnie usuwa rozpuszczalnik. Proces ten może być stosowany dla uzyskania akceptowalnych wydajności pożądanej substancji, tym niemniej wymaga skomplikowanych oczyszczeń metodami chromatograficznymi, a zastosowanie kolumn wymaga poważnych inwestycji, które ograniczają produkcję na dużą skalę.
W opisie GB 1.543.563 ujawniono zmodyfikowany sposób fermentacji przy użyciu szczepu S. clavuligerus NRRL 3585, w którym wartość pH środowiska utrzymuje się w zakresie pomiędzy 6,3 a 6,7 i tym sposobem wzrasta wydajność pożądanego związku. Sole kwasu klawulanowego takie jak klawulanian potasu wytwarza się przez ponowne wy solenie z klawulanianu litu, w wyniku czego pożądany związek również zostaje oczyszczony.
Opis EP-A-0.026.044 ilustruje zastosowanie soli tertbutyloaminowej kwasu klawulanowego jako przydatnego produktu pośredniego do wytwarzania kwasu klawulanowego. Sól znana jest z BE 862.211, ale tylko jako składnik w preparatach farmaceutycznych.
180 520
EP-B-0.182.522 ujawnia sposób otrzymywania kwasu klawulanowego przez fermentację z udziałem mikroorganizmu S clavuligerus. Poważne ulepszenie procesu osiąga się przez dodawanie do środowiska fermentacji, w trakcie procesu, źródła węgla takiego jak gliceryna, bądź w sposób ciągły, bądź z przerwami, podczas którego ważne jest, aby stężenie węgla utrzymywać na dostatecznie niskim poziomie, mianowicie poniżej 0,5% (wag./obj.), a w żadnym przypadku by nie przekroczyć 2%. Przykłady ilustrują, że istotną poprawę zwiększenia wydajności kwasu klawulanowego zaobserwowano, gdy źródło węgla było dodawane podczas fermentacji. Stwierdzono, że stężenie kwasu klawulanowego w brzeczce fermentacyjnej po 160 godzinach wyniosło około 1400 mg/ml, co stanowi znaczną poprawę wcześniej stosowanych sposobów.
Dalszym udoskonaleniem był również nowy sposób oczyszczania kwasu klawulanowego z roztworu w postaci soli litowej. Jednak, dla uzyskania wyższej czystości klawulanianu litu dodawano stężony roztwór innej soli litowej takiej jak chlorek litu. Otrzymany rekrystalizowany klawulanian litowy mógł być dalej oczyszczany i następnie ewentualnie przekształcony do innych soli takich jak klawulanian potasu, w sposób znany z powyższej literatury.
Grzybnię, białka i inne ciała stałe usuwano znanymi sposobami takimi jak odwirowanie lub filtracja z ewentualnym wstępnym traktowaniem brzeczki fermentacyjnej wybranym środkiem agregującym w celu zagregowania grzybni i w ten sposób ułatwienia filtracji. Przesączoną brzeczkę fermentacyjną dalej traktowano żywicą jonowymienną lub wytrącano rozpuszczalnikiem takim jak aceton w celu usunięcia białek, a wytrącony osad oddzielano przez kilkakrotne odwirowanie i filtrację. To oddzielanie grzybni, białek i innych towarzyszących cząsteczek, pierwotnie obecnych w zawiesinie w brzeczce fermentacyjnej, jest czasochłonne i wymaga kilku etapów roboczych.
Tych czasochłonnych metod usuwania grzybni, białek i innych cząsteczek zawieszonych i następnego wyodrębniania z otrzymanej przezroczystej brzeczki fermentacyjnej, jak również otrzymywania czystego kwasu klawulanowego i jego soli unikano przy sposobach ujawnionych w opublikowanych opisach EP-A-0.385.552 i EP-A-0.387.178.
Cały proces obejmuje trzy etapy, tj. oczyszczania brzeczki fermentacyjnej z grzybni, białek i innych stałych cząsteczek, oczyszczania kwasu klawulanowego obecnego w postaci nieoczyszczonej w brzeczce oczyszczonego przesączu Streptomyces clavuligerus przez zastosowanie jednej z pierwszorzędowych, drugorzędowych lub trzeciorzędowych amin tworzących trwałe pośrednie sole kwasu klawulanowego, i usunięcie tym sposobem większości towarzyszących zanieczyszczeń w kwasie klawulanowym, i jako ostatni etap, konwersję pośredniej soli aminowej kwasu klawulanowego (czystość 85%) do pożądanej soli z metalem alkalicznym, takiej jak klawulanian potasu.
Pierwszy etap ujawniony jest bardziej szczegółowo w EP-A-0 385 552, w którym z wodnej brzeczki hodowlanej otrzymanej przez fermentację mikroorganizmu Streptomyces clavuligerus za pomocą procesu fizyko-chemicznego koagulacji-flokulacji usuwa się grzybnię, białka i inne stałe cząsteczki. Kłaczki zawiesiny otrzymane w tym procesie są wystarczająco duże i zwarte by była możliwa sedymentacja i oddzielenie, które najlepiej przeprowadza się przy użyciu sit (rolling sieves). Tak otrzymuje się przezroczystą brzeczkę, która może być ewentualnie zatężona przez odwróconą osmozę.
Tym sposobem otrzymywano oczyszczoną brzeczkę fermentacyjną unikając tradycyjnych metod oczyszczania takich jak wirowanie, adsorpcja na węglu aktywnym, filtracja z substancjami wspomagającymi itd.
We wszystkich znanych procesach konieczne jest również (inaczej niż w ujawnionej metodzie flokulacyjnej), traktowanie oczyszczonej brzeczki hodowlanej za pomocą różnych procesów odbiałczania i wymiany jonowej, co powoduje znaczące straty całkowite w końcowej wydajności pożądanej substancji. W przeciwieństwie do znanych sposobów, całkowita wydajność w metodzie flokulacyjnej wynosi od 85 do 90%.
180 520
Istotą wynalazku jest sposób wyodrębniania kwasu klawulanowego z brzeczki fermentacyjnej po fermentacji z użyciem mikroorganizmu wytwarzającego kwas klawulanowy obejmujący etapy, w których usuwa się grzybnię, większość białek i innych zawieszonych w brzeczce ciał stałych uzyskując oczyszczoną brzeczkę, a następnie ekstrahuje się rozpuszczalnikiem organicznym niemieszającym się z wodą kwas klawulanowy z oczyszczonej brzeczki, po czym wydziela się z fazy organicznej sól kwasu klawulanowego z metalami alkalicznymi, w którym sól kwasu klawulanowego wydziela się z fazy organicznej po ekstrakcji kwasu klawulanowego z brzeczki oczyszczonej przez mikrofiltrację.
Korzystnie, brzeczkę oczyszcza się przez mikrofiltrację ciągłą przez elementy filtracyjne o wielkości porów 0,05 pm.
Korzystnie, ekstrakcję kwasu klawulanowego z brzeczki przeprowadza się przy pH od 1 do 3 stosując przeciwprądowy ekstraktor wirówkowy, bardziej korzystnie, szereg ekstraktorów wirówkowych.
Korzystnie, ekstrakcję kwasu klawulanowego z brzeczki przeprowadza się rozpuszczalnikiem wybranym spośród octanu etylu, octanu metylu, ketonu metylo-izobutylowego i n-butanolu. Najbardziej korzystnie stosuje się octan etylu.
Korzystnie, mikrofiltrację prowadzi się przy pH w zakresie 5,8 - 6,2 i w temperaturze 20-40°C.
Korzystnie, przed ekstrakcją kwasu klawulanowego brzeczkę dodatkowo oczyszcza się przez ultrafiltrację, którą prowadzi się sposobem ciągłym przy użyciu membrany półprzepuszczalnej o stopniu rozdziału w zakresie 10000 - 30000.
Korzystnie, przed ekstrakcją kwasu klawulanowego z oczyszczonej brzeczki dodatkowo usuwa się wodę drogą odwróconej osmozy.
Korzystnie, po ekstrakcji fazę organiczną suszy się in vacuo w kolumnie rektyfikacyjnej.
Korzystnie, ekstrakcję przeprowadza się Ν,Ν'-diizopropyloetylenodiaminą otrzymując sól diklawulanianowąN,N'-diizopropyloetylenodiaminy, a następnie przeprowadza się reakcję soli diklawulanianowej Ν,Ν'-diizopropyloetylenodiaminy z 2-etylokapronianem potasu otrzymując klawulanian potasu.
Do wykonania sposobu według wynalazku stosuje się urządzenie wielostopniowe do mikrofiltracji ciągłej, które umożliwia prowadzenie procesu oddzielania grzybni i filtratu wodnego w czasie przebywania krótszym niż pół godziny, przy czym urządzenie składa się z kilku (pięciu) szeregowo połączonych niezależnych segmentów (obwodów filtracyjnych). Każdy segment zaopatrzony jest w swoją własną pompę cyrkulacyjną która pozwala na pożądaną szybkość brzeczki fermentacyjnej (5 do 8 m/s) przez kanały ceramicznych elementów filtrujących o średnicy porów 0,05 pm. Proces mikrofiltracji prowadzi się w temperaturze pomiędzy 20°C a 40°Ć (temperatura nie powinna przekroczyć 40°C) szybkość obwodowa regulowana jest w taki sposób, że zatrzymywana jest stała frakcja cząsteczek o ciężarze cząsteczkowym powyżej 30000. Tym sposobem udało się usunąć 80 do 90% obecnych białek. Grzybnię oddzieloną w procesie mikrofiltracji przemywa się również wodą w celu zwiększenia wydajności kwasu klawulanowego w połączonym przesączu. Dzięki ujawnionej metodzie oczyszczania wodnej brzeczki fermentacyjnej przez mikrofiltrację, ponad 95% kwasu klawulanowego pozostaje w oczyszczonej fazie wodnej, co nawet przekracza wyniki metody flokulacyjnej z opisu EP-A-0.385.552 i przedstawia dalsze ulepszenie według obecnego wynalazku.
Po mikrofiltracji przesącz może być ewentualnie dalej oczyszczony przez ultrafiltrację. Celem tego oczyszczania jest oddzielenie większości pozostałych zanieczyszczeń białkowych i innych zanieczyszczeń towarzyszących kwasowi klawulanowemu mających ciężar cząsteczkowy wyższy niż kwas klawulanowy. W ten sposób zostają z powodzeniem usunięte niepożądane zanieczyszczenia, które mogą wytrącać się przy ekstrakcji rozpuszczalnikiem organicznym niemieszającym się z wodą, na skutek czego zasadniczo obniża się zabarwienie wodnego przesączu otrzymanego po oczyszczaniu mikrofiltracyjnym i dalej jest poprawiona czystość pożądanego produktu.
180 520
Ujawniona metoda koagulacji-flokulacji z brzeczki fermentacyjnej Streptomyces clavuligerus bazuje na dodawaniu elektrolitu nieorganicznego do brzeczki hodowlanej w celu zwiększenia działania koagulującego, zastosowaniu koagulanta nieorganicznego jako inicjatora procesu koagulacji w warunkach mieszania przy wartości pH środowiska pomiędzy 6 a 8, dodawaniu elektrolitu organicznego po zapoczątkowaniu flokulacji i następnie oddzielenie otrzymanych kłaczków z brzeczki fermentacyjnej przy użyciu sit (rolling sieves) lub filtracji i ewentualnie, gdy flokulacja zachodzi w obecności rozpuszczalnika niemieszającego się z wodą, zdekantowanie faz, oddzielenie kłaczków i ewentualnie zatężenie cieczy metodą odwróconej osmozy lub odparowania.
Opis EP-A-0.562.583 ujawnia zastosowanie soli kwasu klawulanowego z organicznymi diaminami, takich jak sól diklawulanianowa z Ν,Ν'-diizopropyloetylenodiaminąjako użytecznego produktu pośredniego do wyodrębniania i wytwarzania czystego kwasu klawulanowego lub jego soli z metalami alkalicznymi, takiej jak klawulanian potasu, z ekstraktu w octanie etylu otrzymanego po ekstrakcji rozpuszczalnikowej otrzymanej wodnej brzeczki hodowlanej utworzonej po fermentacji, w której obecny jest kwas klawulanowy.
Istnieje potrzeba opracowania nowego i ulepszonego sposobu wytwarzania czystego kwasu klawulanowego i jego farmaceutycznie dopuszczalnych soli, takich jak klawulanian potasu, przez wyodrębnianie z brzeczki fermentacyjnej otrzymanej przy użyciu mikroorganizmu produkującego kwas klawulanowy, w którym to procesie można by było uniknąć skomplikowanych tradycyjnych metod wyodrębniania i chromatograficznego oczyszczania .pożądanego produktu.
Celem wynalazku było więc ulepszenie sposobu wyodrębniania kwasu klawulanowego z brzeczki fermentacyjnej, otrzymanej przy użyciu mikroorganizmu produkującego kwas klawulanowy, takiego jak Streptomyces sp. P 6621 FERM P 2804, w którym można by uniknąć czasochłonnych tradycyjnych sposobów usuwania grzybni, białek i innych zawieszonych cząsteczek stałych w wodnej brzeczce hodowlanej, z następnym wytworzeniem soli o wysokiej czystości, takiej jak klawulanian potasu.
Odpowiednimi solami według obecnego wynalazku są farmaceutycznie dopuszczalne sole z metodami alkalicznymi i metalami ziem alkalicznych, takie jak sól sodowa, potasowa, wapniowa i magnezowa. Wśród tych soli sól sodowa i potasowa, a zwłaszcza sól potasowa są najbardziej odpowiednie.
Obecny wynalazek generalnie przydatny jest do oczyszczania brzeczek fermentacyjnych otrzymanych przy użyciu mikroorganizmu produkującego kwas klawulanowy.
Jest oczywiste ze stanu techniki, że znane sposoby obejmowały czasochłonne metody wyodrębniania i tylko opis EP-A-0.385.552 ujawnił ulepszony sposób, w którym otrzymuje się całkowicie przezroczystą brzeczkę. Jednak wadą tego procesu jest to, że żeby osiągnąć pożądany cel, należy stosować kilka reagentów takich jak elektrolity nieorganiczne, polielektrolity organiczne oraz, że flokulacja, sedymentacja lub filtracja brzeczki fermentacyjnej wymaga stosunkowo długiego czasu, co ma wpływ na czystość pożądanego produktu.
Na stronie 2, kolumna 2, wiersze 22 do 35 podano kilka możliwości oczyszczania brzeczki fermentacyjnej, jednak metody te prowadziłyby do znacznego obniżenia wydajności kwasu klawulanowego. Dalej stwierdzono, że zastosowanie kilku skomplikowanych technik w procesie wyodrębniania i oczyszczania takich jak ultrafiltracja i odwrócona osmoza nie uprościłyby procesu, ponieważ stosowanie tych metod wymagałoby uprzedniej filtracji na węglu aktywnym lub żywicach jonowych.
W przeciwieństwie do tych stwierdzeń, nieoczekiwanie stwierdzono, że możliwe jest uniknięcie stosowania kilku reagentów jakie stosowano w procesie ujawnionym w EP-A-0.385.552 jak również czasochłonnych dróg oczyszczania wodnej brzeczki fermentacyjnej ujawnionych w literaturze, jeśli według obecnego wynalazku zastosuje się metodę mikrofiltracji, w której usunie się grzybnię, główną część białek (co najmniej 80% białek obecnych w brzeczce) i inne zawieszone ciała stałe.
180 520
W ultrafiltracji stosuje się urządzenie z polimeryczną membraną o wysokim stopniu rozdzielczości około 20000 (pomiędzy 10000 a 30000). Proces prowadzi się w sposób ciągły tak, że czasy przebywania są możliwie najkrótsze w ponad dwu szeregowo połączonych urządzeniach ultrafiltracyjnych (które zwiększają selektywność rozdzielania kwasu klawulanowego i zanieczyszczeń); przez dodanie czystej wody jak również przeciwprądowego przeprowadzania retentatu (fazy wodnej) otrzymanego w procesie ultrafiltracji, straty kwasu klawulanowego w fazie wodnej są zredukowane do mniej niż 5%.
Połączony filtrat wodny następnie zatęża się w urządzeniu do odwróconej osmozy w temperaturze około temperatury pokojowej do 1/5 pierwotnej objętości otrzymując stężoną fazę wodną zanieczyszczonego kwasu klawulanowego a następnie otrzymany koncentrat (retentat) bezpośrednio ekstrahuje się w temperaturach pomiędzy 15°C a 25°C (ekstrakcję można prowadzić w temperaturze poniżej 15°C) rozpuszczalnikiem organicznym niemieszającym się z wodą, takim jak octan etylu, w środowisku kwaśnym o pH w zakresie pomiędzy 1 a 3, które nastawia się przez dodanie kwasu nieorganicznego takiego jak kwas siarkowy. Poza octanem etylu mogą być również stosowane inne rozpuszczalniki organiczne niemieszające się z wodą, takie jak octan metylu, keton metylowo izobutylowy lub alkohol n-butylowy.
Ponieważ w procesie mikrofiltracji z powodzeniem usuwa się grzybnię i większość obecnych białek, możliwa jest bezpośrednia ekstrakcja oczyszczonej i zatężonej wodnej brzeczki fermentacyjnej odpowiednim rozpuszczalnikiem organicznym niemieszającym się z wodą, takim jak octan etylu, bez stosowania czasochłonnych metod oczyszczania, stosowanych w znany sposób ujawniony w powyższej literaturze i unika się stosowania dodatkowych reagentów, jakie stosowane są w metodzie koagulacji-flokulacji w celu oczyszczania brzeczki fermentacyjnej. Tak więc, poza powyższym ulepszeniem, sposób według wynalazku zapewnia również obniżenie kosztów oczyszczania brzeczki. W celu uniknięcia denaturacji pozostałych białek w koncentracie w fazie wodnej, z uwagi na wzajemne oddziaływanie z rozpuszczalnikiem organicznym lub kwasem siarkowym w trakcie ekstrakcji zanieczyszczonego kwasu klawulanowego z fazy wodnej do fazy organicznej, najlepiej jest prowadzić ekstrakcję w szeregu ekstraktorów wirówkowych, w których w jednym z nich, mianowicie w samo opróżniającym się separatorze wirówkowym, oddzielone białka usuwa się jednocześnie i w sposób ciągły.
W otrzymanym ekstrakcie zanieczyszczonego kwasu klawulanowego w rozpuszczalniku organicznym niemieszającym się z wodą, mogą znajdować się również zanieczyszczenia rozpuszczalne w wodzie takie jak różne produkty rozkładu kwasu klawulanowego, które są bardziej polarne niż sam kwas klawulanowy, stąd zanieczyszczenia rozpuszczalne w wodzie usuwa się przez przemywanie połączonej fazy organicznej wodą. Tym sposobem otrzymuje się oczyszczony ekstrakt kwasu klawulanowego w fazie organicznej, taki jak ekstrakt w octanie etylu.
Kwas klawulanowy może być wyodrębniony z fazy organicznej i oczyszczany tak jak ujawniono w naszym procesie opisanym w EP-A-0.562.583. Najlepszy sposób wyodrębniania kwasu klawulanowego jak opisano w tym zgłoszeniu patentowym prowadzi się przez reakcję ekstraktu kwasu klawulanowego z Ν,Ν'-diizopropyloetylenodiaminą w temperaturze około temperatury pokojowej i przez następną konwersję otrzymanej pośredniej soli diklawulanianowej Ν,Ν'-diizopropyloetylenodiaminy z 2-etyloheksanianem potasu w wodnym roztworze izopropanolu i w temperaturze pokojowej otrzymując klawulanian potasu, który wyodrębnia się o wysokim stopniu czystości.
Obecnie stwierdzono, że wytwarzanie pośredniej soli diklawulanianowej N,N'-diizopropyloetylenodiaminy najlepiej prowadzi się w taki sposób, że reakcję pomiędzy fazą organiczną ni emieszającą się z wodą, taką jak ekstrakt w octanie etylu kwasu klawulanowego a Ν,Ν'-diizopropyloetylenodiaminą prowadzi się w fazie organicznej, z której całkowicie usunięto wodę, ponieważ już małe ilości wody mogą zakłócić wytwarzanie pośredniej soli, ponieważ oddzielona sól rozpuszcza się w wodzie obecnej w fazie organicznej i można otrzymać produkty uboczne rozkładu, które spowodują utrudnienie suszenia.
180 520
Jeśli wodę całkowicie usunie się z fazy organicznej, zwiększa się trwałość fazy organicznej lub ekstraktu, gdyż jak dobrze wiadomo trwałość kwasu klawulanowego w roztworach wodnych i w środowisku procesu ekstrakcyjnego o kwasowym pH jest bardzo mała. Zatem do suszenia fazy organicznej, takiej jak ekstrakt kwasu klawulanowego w octanie etylu, stosuje się suszenie w kolumnie rektyfikacyjnej (zasada destylacji frakcjonowanej) in vacuo, z uwagi na małą trwałość soli pośredniej w wyższych temperaturach. Istotną cechą tej metody jest to, że faza organiczna taka jak octan etylu oraz woda tworzą azeotrop mający najniższą temperaturę wrzenia i tym sposobem faza organiczna, taka jak ekstrakt w octanie etylu zostaje całkowicie wysuszona w ujawniony sposób. Zatem faza organiczna taka jak ekstrakt w octanie etylu ma zawsze zawartość wody poniżej 0,1% objętościowo, przeciętnie od 0,03 do 0,05%. Całkowicie bezwodną fazę organiczną taką jak ekstrakt kwasu klawulanowego w octanie etylu, następnie w bardzo krótkim czasie przebywania, zatęża się przez odparowanie do 1/20 pierwotnej objętości, aby z kolei poddać reakcji z N,N'-diizopropyloetylenodiaminą.
Następną reakcję soli diklawulanianowej Ν,Ν'-diizopropyloetylenodiaminy z 2-etyloheksanianem potasu do klawulanianu potasu o wysokiej czystości można prowadzić jak ujawniono w naszym zgłoszeniu EP-A-0.562.583 a najlepiej w sposób ujawniony w przykładach i zilustrowany powyższym ulepszeniem.
Wynalazek jest zilustrowany następującymi przykładami, które w żaden sposób nie ograniczająjego zakresu.
Przykład 1. Ciągłe wytwarzanie koncentratu ekstraktu w octanie etylu zawierającego zanieczyszczony kwas klawulanowy
Wodną brzeczkę fermentacyjną (10.000 1) otrzymaną przez fermentację mikroorganizmu Streptomyces sp. P 6621 FERM P 2804 (stężenie kwasu klawulanowego wynosiło 3580 mg/1) dodano do 33% wodnego roztworu (5 1) kwasu siarkowego w zbiorniku (pojemność 50 m3) w warunkach mieszania i chłodzenia tak, że wartość pH środowiska utrzymywana była pomiędzy 5,8 a 6,2. Następnie brzeczkę w sposób ciągły podawano do urządzenia do mikrofiltracji z szybkością 1200 1/h, przy czym urządzenie to składało się z pięciu segmentów połączonych w szereg. Każdy segment miał swoją własną pompę dla zapewnienia szybkości 8 m/s brzeczki fermentacyjnej przez kanały ceramicznych elementów filtrujących o wielkości porów 0,05 pm. W procesie mikrofiłtracji, w którym należy uważać, aby temperatura nie przekroczyła 40°C, usuwa się grzybnię i większość białek i innych zawieszonych cząsteczek stałych.
Oddzielone ciała stałe przemywa się wodą mającą szybkość przepływu 300 1/h, a następnie połączone przesącze (permeat) po mikrofiłtracji dodaje się w sposób ciągły z szybkością przepływu 1500 1/h do urządzenia do odwróconej osmozy, w którym permeat zatęża się do 1/5 pierwotnej objętości.
Do koncentratu (retentatu) otrzymanego po odwróconej osmozie z szybkością 300 1/h dodaje się 33% roztwór wodny (4 1/h) kwasu siarkowego tak, żeby wartość pH środowiska była utrzymywana pomiędzy 1,5 a 2,0, po czym dodaje się octan etylu z szybkością przepływu 900 1/h w celu wyekstrahowania kwaśnego retentatu w temperaturze pokojowej przeciwprądowo w szeregu pięciu ekstraktorów wirówkowych, gdzie w drugim samo opróżniającym się estraktorze wirówkowym jednocześnie usuwa się jeszcze pozostałe oddzielone białka.
Połączony ekstrakt w octanie etylu z szeregu ekstraktorów wirówkowych przemywa się w pierwszym wirówkowym ekstraktorze demineralizowaną wodą o szybkości przepływu 30 1/h i tym sposobem usuwa się stale jeszcze pozostałe zanieczyszczenia rozpuszczalne w wodzie.
Ekstrakt w octanie etylu mający szybkość przepływu 900 1/h suszy się in vacuo w temperaturze 30°C w kolumnie rektyfikacyjnej tak, że uzyskuje się zawartość wody 0,03% objętościowo, po czym ekstrakt odparowuje się w wyparce cienkowarstwowej in vacuo w temperaturze 30°C do 1/20 pierwotnej objętości. Otrzymany zatężony ekstrakt w octanie etylu (stężenie zanieczyszczonego kwasu klawulanowego wynosi 50 g/ml) o szybkości przepływu
180 520
1/h odbarwia się przez ciągłe dodawanie węgla aktywnego (0,45 kg), mieszaninę miesza się przez 30 minut, a następnie węgiel odfiltrowuje się z zawiesiny w koncentracie ekstraktu w octanie etylu na filtrze ciśnieniowym pod ciśnieniem azotu 0,1 MPa otrzymując suchy koncentrat (45 1) ekstraktu w octanie etylu zawierający zanieczyszczony kwas klawulanowy.
Przykład 2. Wytwarzanie soli diklawulanianowej
N,N'-diizopropyloetylenodiaminy
Do suchego koncentratu (45 1) ekstraktu w octanie etylu otrzymanego w procesie ciągłym z przykładu 1 (zawartość kwasu klawulanowego wynosi 50 g/1) dodaje się N,N'-diizopropyloetylenodiaminę (1,4 1) w ciągu 5 minut w trakcie energicznego mieszania, w temperaturze 25°C. Otrzymaną zawiesinę odsącza się i otrzymane kryształy ponownie zawiesza w octanie (45 1) i w trakcie mieszania i chłodzenia w temperaturze 10°C, wydzielone kryształy pożądanej substancji odsącza się, przemywa acetonem i suszy in vacuo w temperaturze 30°C. Otrzymuje się kryształy soli diklawulanianowej N,N'-diizopropyloetylenodiaminy (3,3 kg; zawartość kwasu klawulanowego wynosi 60%).
Przykład 3. Wytwarzanieklawułanianupotasu
Sól diklawulanianową N,N'-diizopropyloetylenodiaminy (3,3 kg) z przykładu 2 rozpuszcza się w mieszaninie izopropanolu/wody (82,5 1; zawartość wody wynosi 1,5%) i do otrzymanego roztworu dodaje się węgiel aktywny (1,5 kg) i 2-etyloheksanian potasu (0,5 1; 2 M) w ciągu 30 minut podczas mieszania w temperaturze pokojowej. Następnie węgiel i wytrącony osad odsącza się. Do przesączu (80 1) dodaje się roztwór (6 1) 2-etyloheksanianu potasu (2 M) w izopropanolu w ciągu 20 minut podczas mieszania w temperaturze pokojowej. Otrzymaną zawiesinę miesza się następnie w warunkach chłodzenia w temperaturze pomiędzy 0°C a 5°C przez dalsze 2 godziny, po czym wydzielone kryształy odsącza się, przemywa izopropanolem i acetonem i suszy in vacuo w temperaturze 30°C. Otrzymuje się klawulanian potasu (2 kg; jakości zgodnej z USP, o zawartości kwasu klawulanowego 80,6%, oznaczonej za pomocą HPLC).
180 520
Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 60 egz. Cena 2,00 zł.
Claims (14)
- Zastrzeżenia patentowe1. Sposób wyodrębniania kwasu klawulanowego z brzeczki fermentacyjnej po fermentacji z użyciem mikroorganizmu wytwarzającego kwas klawulanowy obejmujący etapy, w których usuwa się grzybnię, większość białek i innych zawieszonych w brzeczce ciał stałych uzyskując oczyszczoną brzeczkę, a następnie ekstrahuje się rozpuszczalnikiem organicznym niemieszającym się z wodą kwas klawulanowy z oczyszczonej brzeczki, po czym wydziela się z fazy organicznej sól kwasu klawulanowego z metalami alkalicznymi, znamienny tym, że sól kwasu klawulanowego wydziela się z fazy organicznej po ekstrakcji kwasu klawulanowego z brzeczki oczyszczonej przez mikrofiltrację.
- 2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że brzeczkę oczyszcza się przez mikrofiltrację ciągłą przez elementy filtracyjne o wielkości porów 0,05 pm.
- 3. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że ekstrakcję kwasu klawulanowego z brzeczki przeprowadza się przy pH od 1 do 3 stosując przeciwprądowy ekstraktor wirówkowy.
- 4. Sposób według zastrz. 3, znamienny tym, że ekstrakcję kwasu klawulanowego z brzeczki przeprowadza się rozpuszczalnikiem wybranym spośród octanu etylu, octanu metylu, ketonu metylo-izobutylowego i n-butanolu.
- 5. Sposób według zastrz. 4, znamienny tym, że ekstrakcję kwasu klawulanowego z brzeczki przeprowadza się octanem etylu.
- 6. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że mikrofiltrację prowadzi się przy pH w zakresie 5,8 - 6,2.
- 7. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że mikrofiltrację prowadzi się w temperaturze 20-40°C.
- 8. Sposób według zastrz. 3, znamienny tym, że ekstrakcję kwasu klawulanowego z brzeczki przeprowadza się stosując szereg ekstraktorów wirówkowych.
- 9. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że przed ekstrakcją kwasu klawulanowego brzeczkę dodatkowo oczyszcza się przez ultrafiltrację.
- 10. Sposób według zastrz. 9, znamienny tym, że ultrafiltrację prowadzi się sposobem ciągłym przy użyciu membrany półprzepuszczalnej o stopniu rozdziału w zakresie 10000 - 30000.
- 11. Sposób według zastrz. 3, znamienny tym, że przed ekstrakcją kwasu klawulanowego z oczyszczonej brzeczki dodatkowo usuwa się wodę drogą odwróconej osmozy.
- 12. Sposób według zastrz. 3 albo 11, znamienny tym, że po ekstrakcji fazę organiczną suszy się in vacuo w kolumnie rektyfikacyjnej.
- 13. Sposób według zastrz. 3 albo 11, znamienny tym, że ekstrakcję przeprowadza się Ν,Ν'-diizopropyloetylenodiaminą otrzymując sól diklawulanianową N,N'-diizopropyloetylenodiaminy.
- 14. Sposób według zastrz. 13, znamienny tym, że przeprowadza się reakcję soli diklawulanianowej Ν,Ν'-diizopropyloetylenodiaminy z 2-etyloheksanianem potasu otrzymując klawulanian potasu.180 520
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SI9400107A SI9400107A (en) | 1994-03-02 | 1994-03-02 | New process of the isolation of clavulanic acid and its pharmaceutical salts from fermented broth of streptomyces sp.p 6621 ferm p 2804. |
| PCT/SI1995/000002 WO1995023870A1 (en) | 1994-03-02 | 1995-02-23 | Novel process for the isolation of clavulanic acid and of pharmaceutically acceptable salts thereof from the fermentation broth of streptomyces sp. p 6621 ferm p 2804 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL316085A1 PL316085A1 (en) | 1996-12-23 |
| PL180520B1 true PL180520B1 (pl) | 2001-02-28 |
Family
ID=20431337
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL95316085A PL180520B1 (pl) | 1994-03-02 | 1995-02-23 | Sposób wyodrebniania kwasu klawulanowego z brzeczki fermentacyjnej po fermentacji z uzyciem mikroorganizmu wytwarzajacego kwas klawulanowy PL PL PL PL PL PL PL |
Country Status (25)
| Country | Link |
|---|---|
| US (4) | US5780274A (pl) |
| EP (1) | EP0748387B1 (pl) |
| JP (1) | JP2948661B2 (pl) |
| KR (1) | KR100293172B1 (pl) |
| CN (1) | CN1055694C (pl) |
| AT (1) | ATE159549T1 (pl) |
| AU (1) | AU694176B2 (pl) |
| BG (1) | BG62213B1 (pl) |
| CA (1) | CA2184619A1 (pl) |
| CZ (1) | CZ284117B6 (pl) |
| DE (1) | DE69500925T2 (pl) |
| DK (1) | DK0748387T3 (pl) |
| ES (1) | ES2108572T3 (pl) |
| FI (1) | FI963408A7 (pl) |
| GR (1) | GR3025942T3 (pl) |
| HU (1) | HUT74944A (pl) |
| NO (1) | NO318374B1 (pl) |
| NZ (1) | NZ279958A (pl) |
| PL (1) | PL180520B1 (pl) |
| RO (1) | RO118760B1 (pl) |
| RU (1) | RU2206613C2 (pl) |
| SI (1) | SI9400107A (pl) |
| SK (1) | SK279780B6 (pl) |
| WO (1) | WO1995023870A1 (pl) |
| ZA (1) | ZA951689B (pl) |
Families Citing this family (22)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AT400033B (de) | 1992-03-10 | 1995-09-25 | Biochemie Gmbh | Neues verfahren zur isolierung und reinigung von clavulansäure und zur herstellung von pharmakologisch verträglichen salzen derselben |
| SI9400107A (en) * | 1994-03-02 | 1995-10-31 | Lek Tovarna Farmacevtskih | New process of the isolation of clavulanic acid and its pharmaceutical salts from fermented broth of streptomyces sp.p 6621 ferm p 2804. |
| GB9500977D0 (en) * | 1995-01-19 | 1995-03-08 | Smithkline Beecham Plc | Novel process |
| SI9500074A (en) * | 1995-03-10 | 1996-10-31 | Lek Tovarna Farmacevtskih | Process for preparation of alkani salts of clavulanic acid. |
| SI9500134B (sl) * | 1995-04-20 | 2004-04-30 | Lek, | Postopek za pripravo čistih alkalijskih soli klavulanske kisline |
| GB9515809D0 (en) * | 1995-08-02 | 1995-10-04 | Smithkline Beecham Plc | Process |
| SI9500265A1 (en) * | 1995-08-28 | 1997-02-28 | Lek Tovarna Farmacevtskih | Process for purification of the aqueous fermented broth filtrate of streptomyces sp. p 6621 ferm p 2804 by ultrafiltration |
| AT403375B (de) * | 1995-11-15 | 1998-01-26 | Biochemie Gmbh | Verfahren zur fällung von alkalisalzen der clavulansäure |
| US6414142B1 (en) * | 1996-06-13 | 2002-07-02 | Smithkline Beecham Corporation | Process for preparing potassium clavulanate |
| TR199901631T2 (xx) * | 1996-11-11 | 1999-09-21 | Gist-Brocades B.V. | Klavülanik asitin esterleri ve tuzlarının hazırlanması için işlem. |
| AT404728B (de) * | 1996-11-27 | 1999-02-25 | Biochemie Gmbh | Verfahren zur herstellung von clavulansäure-aminsalzen |
| ES2142641T3 (es) | 1997-03-24 | 2000-04-16 | Cipan Comp Ind Prod | Procedimiento para aislar una sal alcalino-metalica farmaceuticamente aceptable del acido clavulanico. |
| WO1998042858A1 (en) * | 1997-03-24 | 1998-10-01 | Cipan-Companhia Industrial Produtora De Antibióticos, S.A. | Process for the isolation of a pharmaceutically acceptable alkali metal salt of clavulanic acid |
| DZ2456A1 (fr) * | 1997-04-04 | 2003-01-18 | Smithkline Beecham Plc | Procédé de préparation de sels de l'acide clavulanique. |
| US6979735B1 (en) * | 1999-04-01 | 2005-12-27 | Dsm N.V. | Agglomerates by crystallization |
| AU776184B2 (en) | 2000-05-13 | 2004-09-02 | Smithkline Beecham Plc | Process for the purification of a salt of clavulanic acid |
| GB0022841D0 (en) * | 2000-09-18 | 2000-11-01 | Smithkline Beecham Plc | Process |
| KR100443082B1 (ko) * | 2002-10-18 | 2004-08-04 | 삼성전자주식회사 | 반도체 장치의 트랜지스터 제조 방법 |
| AU2004283440A1 (en) * | 2003-10-10 | 2005-05-06 | Dsm Ip Assets B.V. | Activated carbon treatment |
| KR100768476B1 (ko) | 2005-11-24 | 2007-10-18 | 한국해양연구원 | 항암물질을 생산하는 방선균 스트렙토마이세스 속 균주,이의 분리방법, 이로부터 반고형 추출물을 제조하는 방법,이로부터 유래한 반고형 추출물 및 이를 이용한 항암제조성물 |
| CN102838624B (zh) * | 2012-09-07 | 2014-10-29 | 安徽普朗膜技术有限公司 | 一种从发酵液中纯化克拉维酸的方法 |
| CN104910194A (zh) * | 2015-05-28 | 2015-09-16 | 高希章 | 一种克拉维酸钾的制备方法及其复方制剂 |
Family Cites Families (58)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3873425A (en) * | 1971-11-19 | 1975-03-25 | Tatsuyoshi Kobayashi | Process for producing itaconic acid |
| GB1508977A (en) * | 1974-04-20 | 1978-04-26 | Beecham Group Ltd | Beta-lactam antibiotic from streptomyces clavuligerus |
| US4110165A (en) | 1974-04-20 | 1978-08-29 | Beecham Group Limited | Process for the production of clavulanic acid |
| NZ177159A (en) * | 1974-04-20 | 1978-03-06 | Beecham Group Ltd | Clavulanic acid, salts, esters and preparation thereof from streptomyces clavuligerus: pharmaceutical compositions |
| US4140764A (en) * | 1974-12-18 | 1979-02-20 | Beecham Group Limited | β-Lactamase inhibitors and process for their preparation |
| US4144242A (en) | 1975-02-07 | 1979-03-13 | Glaxo Laboratories Limited | Process for the purification of clavulanic acid |
| US4148880A (en) * | 1975-08-13 | 1979-04-10 | Pfizer Inc. | Mixture of antibiotics produced by a species of actinoplanes |
| GB1563103A (en) | 1975-10-13 | 1980-03-19 | Beecham Group Ltd | Process for the preparation of clavulanic acid |
| GB1578739A (en) * | 1976-07-23 | 1980-11-05 | Beecham Group Ltd | Amine salts of clavulanic acid methods for their preparation and compositions containing them |
| JPS55162993A (en) * | 1979-06-07 | 1980-12-18 | Sanraku Inc | Preparation of culavulanic acid |
| US4454069A (en) | 1979-08-24 | 1984-06-12 | Beecham Group Limited | Clavulanic acid salts and their preparation from the tertiary butyl amine salt |
| DE2948607A1 (de) | 1979-12-03 | 1981-06-11 | Chemische Fabrik Dr. Meyer-Castens & Co Nfg., 2000 Hamburg | Verfahren zur herstellung eines emulgators auf lecithinbasis |
| JPS5791196A (en) | 1980-11-27 | 1982-06-07 | Takeda Chem Ind Ltd | Separation of inosine, guanosine or their mixture from cell bodies and high polymeric substances |
| DE3146190A1 (de) | 1981-11-21 | 1983-06-16 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Isolierung von chemisch instabilen antibiotika aus fermentationsloesungen |
| JPS6070092A (ja) * | 1983-09-26 | 1985-04-20 | Ajinomoto Co Inc | グルタミン酸発酵液からのグルタミン酸結晶の取得法 |
| US4911847A (en) | 1983-12-20 | 1990-03-27 | Membrex, Inc. | Process for controlling the permeate composition in a rotary filtration device |
| NZ213963A (en) | 1984-10-27 | 1989-01-06 | Antibioticos Sa | Production of clavulanic acid |
| GB8521516D0 (en) | 1985-08-29 | 1985-10-02 | Beecham Group Plc | Compounds |
| IT1221982B (it) * | 1987-07-08 | 1990-08-31 | Mini Ricerca Scient Tecnolog | Antibiotici ab 006 e processo per la loro produzione |
| DE3730868A1 (de) * | 1987-09-15 | 1989-03-23 | Henkel Kgaa | Verfahren zur abtrennung von biotechnisch hergestellten wertstoffen aus einer fermenterbruehe durch querstrom-mikro- und/oder ultrafiltration |
| GB8823706D0 (en) * | 1988-10-10 | 1988-11-16 | Alcan Int Ltd | Microfilter device |
| ES2010143A6 (es) * | 1989-03-01 | 1989-10-16 | Pharma Mar S A Pharmar | Un nuevo procedimiento de obtencion del acido z(2r,5r)-3-(2-hiadroxietiliden)-7- oxo-4-oxa-1-azabiciclo(3,2,0) -heptano-2-carboxilico y de sales estares farmaceutiacamente aceptables del mismo,a partir de caldos de fermentacion de streptomyces, sp. |
| ES2010144A6 (es) * | 1989-03-01 | 1989-10-16 | Pharma Mar S A Pharmar | Un procedimiento de floculacion-coagulacion de caldos de fermentacion de streptomyces sp. que permite la obtencion directa de liquidos completamente transparentes. |
| US5024937A (en) * | 1989-04-06 | 1991-06-18 | Dow Corning Corporation | Method for processing aqueous fermentation broths |
| EP0431679B1 (en) * | 1989-12-05 | 1994-10-19 | Merck & Co. Inc. | Method of stabilizing recombinant hepatitis B virus surface proteins from yeast |
| DE4005132A1 (de) | 1990-02-17 | 1991-08-22 | Akzo Gmbh | Verfahren zum herstellen von hohlfadenstapeln |
| US5240600A (en) | 1990-07-03 | 1993-08-31 | International Environmental Systems, Inc., Usa | Water and wastewater treatment system |
| JP3021562B2 (ja) * | 1990-07-16 | 2000-03-15 | ダイセル化学工業株式会社 | ナイシンの製造方法 |
| US5073263A (en) | 1990-09-21 | 1991-12-17 | Fagundes Carlos A | Method and article for restraining extrusion of feed spacers and circumferential expansion in spiral filtration modules |
| US5268283A (en) * | 1990-10-05 | 1993-12-07 | Miles Inc. | Method for the production of detergent builder formulations utilizing spray granulated citric acid and salts thereof |
| DE4031854A1 (de) * | 1990-10-08 | 1992-04-09 | Basf Ag | Mikroorganismus und verfahren zur gewinnung von anthranilsaeure |
| JP2615272B2 (ja) * | 1991-03-22 | 1997-05-28 | 日本碍子株式会社 | 蛋白質溶液中の蛋白有価物の回収方法 |
| US5470356A (en) | 1991-10-11 | 1995-11-28 | Meszaros; Laszlo A. | Sulfur dye compositions and their production |
| AT399155B (de) * | 1992-03-26 | 1995-03-27 | Lek Tovarna Farmacevtskih | Neue alkylendiammonium-diclavulanat-derivate, verfahren zu deren herstellung sowie deren verwendung |
| SI9300296B (sl) * | 1992-06-11 | 1998-06-30 | Smithkline Beecham P.L.C. | Postopek in intermedianti za pripravo klavulanske kisline |
| GB9222841D0 (en) | 1992-10-31 | 1992-12-16 | Smithkline Beecham Plc | Novel process |
| SI9200139A (en) * | 1992-07-08 | 1994-03-31 | Lek Tovarna Farmacevtskih | New inclusion complex of clavulanic acid with hydrophylyc and hydropholyc beta-cyclodextrin derivates for production of them |
| KR100200239B1 (ko) * | 1992-10-21 | 1999-06-15 | 김충환 | 클라불란산 칼륨염의 제조방법 |
| US5547835A (en) | 1993-01-07 | 1996-08-20 | Sequenom, Inc. | DNA sequencing by mass spectrometry |
| GB9305565D0 (en) | 1993-03-18 | 1993-05-05 | Smithkline Beecham Plc | Novel compounds and processes |
| US5741903A (en) | 1993-03-26 | 1998-04-21 | Gist-Brocades N.V. | Diamine salts for purification of clavulanic acid |
| US5760218A (en) | 1993-03-26 | 1998-06-02 | Gist-Brocades N.V. | Diamine salts of clavulanic acid |
| WO1994022873A1 (en) * | 1993-03-26 | 1994-10-13 | Gist-Brocades N.V. | Diamine salts of clavulanic acid |
| US5470481A (en) | 1993-10-13 | 1995-11-28 | Modell Environmental Corporation | Method and apparatus for recovering wash water from pulp and paper mill effluent |
| WO1995011295A1 (en) | 1993-10-22 | 1995-04-27 | Gist-Brocades N.V. | An improved process to recover an aqueous fermentation broth |
| GB9401969D0 (en) | 1994-02-02 | 1994-03-30 | Smithkline Beecham Plc | Process |
| AT400846B (de) | 1994-02-25 | 1996-03-25 | Fermic S A De C V | Verfahren zur gewinnung und reinigung von alkalimetallsalzen der clavulansäure |
| SI9400107A (en) * | 1994-03-02 | 1995-10-31 | Lek Tovarna Farmacevtskih | New process of the isolation of clavulanic acid and its pharmaceutical salts from fermented broth of streptomyces sp.p 6621 ferm p 2804. |
| JPH0873227A (ja) | 1994-06-30 | 1996-03-19 | Olympus Optical Co Ltd | ガラス体の製造方法及びゲルの浸漬装置 |
| US5650101A (en) | 1994-07-25 | 1997-07-22 | University Of South Florida | Lock and key micelles |
| JP3617091B2 (ja) | 1994-11-30 | 2005-02-02 | 味の素株式会社 | 塩基性アミノ酸の精製方法 |
| GB9426261D0 (en) | 1994-12-24 | 1995-02-22 | Spurcourt Ltd | Clavulanic acid salts |
| MD1744F2 (ro) | 1995-02-25 | 2001-09-30 | Spurcourt Limited | Săruri ale acidului clavulanic şi procedeu de obţinere a lor |
| KR100200242B1 (ko) | 1995-05-16 | 1999-06-15 | 김충환 | 클라불란산염의 제조 방법 |
| GB9515809D0 (en) | 1995-08-02 | 1995-10-04 | Smithkline Beecham Plc | Process |
| AT403375B (de) * | 1995-11-15 | 1998-01-26 | Biochemie Gmbh | Verfahren zur fällung von alkalisalzen der clavulansäure |
| ES2101658B1 (es) | 1995-11-23 | 1998-03-01 | Antibioticos Sa | Nuevo procedimiento de produccion de acido clavulanico y sus sales. |
| US5837365A (en) | 1996-04-08 | 1998-11-17 | The Penn State Research Foundation | Hydrophilic polypropylene membranes |
-
1994
- 1994-03-02 SI SI9400107A patent/SI9400107A/sl not_active IP Right Cessation
-
1995
- 1995-02-23 KR KR1019960704806A patent/KR100293172B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 1995-02-23 DE DE69500925T patent/DE69500925T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1995-02-23 PL PL95316085A patent/PL180520B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1995-02-23 EP EP95909194A patent/EP0748387B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-02-23 CN CN95191927A patent/CN1055694C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1995-02-23 ES ES95909194T patent/ES2108572T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1995-02-23 RU RU96121357/13A patent/RU2206613C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1995-02-23 SK SK1120-96A patent/SK279780B6/sk unknown
- 1995-02-23 JP JP7522554A patent/JP2948661B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1995-02-23 HU HU9602351A patent/HUT74944A/hu unknown
- 1995-02-23 NZ NZ279958A patent/NZ279958A/en unknown
- 1995-02-23 RO RO96-01735A patent/RO118760B1/ro unknown
- 1995-02-23 AT AT95909194T patent/ATE159549T1/de not_active IP Right Cessation
- 1995-02-23 WO PCT/SI1995/000002 patent/WO1995023870A1/en not_active Ceased
- 1995-02-23 CZ CZ962557A patent/CZ284117B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1995-02-23 AU AU17241/95A patent/AU694176B2/en not_active Ceased
- 1995-02-23 CA CA002184619A patent/CA2184619A1/en not_active Abandoned
- 1995-02-23 US US08/632,402 patent/US5780274A/en not_active Expired - Fee Related
- 1995-02-23 DK DK95909194.3T patent/DK0748387T3/da active
- 1995-03-01 ZA ZA951689A patent/ZA951689B/xx unknown
-
1996
- 1996-08-30 NO NO19963628A patent/NO318374B1/no unknown
- 1996-09-02 BG BG100816A patent/BG62213B1/bg unknown
- 1996-09-02 FI FI963408A patent/FI963408A7/fi not_active IP Right Cessation
-
1998
- 1998-01-16 GR GR980400112T patent/GR3025942T3/el unknown
- 1998-07-10 US US09/113,790 patent/US5985625A/en not_active Expired - Fee Related
-
1999
- 1999-10-08 US US09/415,483 patent/US6207428B1/en not_active Expired - Fee Related
-
2001
- 2001-01-03 US US09/754,231 patent/US6566106B2/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| PL180520B1 (pl) | Sposób wyodrebniania kwasu klawulanowego z brzeczki fermentacyjnej po fermentacji z uzyciem mikroorganizmu wytwarzajacego kwas klawulanowy PL PL PL PL PL PL PL | |
| US5994534A (en) | Process for the preparation of pharmaceutically acceptable salts of clavulanic acid | |
| JPH11503744A (ja) | クラブラン酸塩の製造方法 | |
| AU714892B2 (en) | Isolation of clavulanic acid from fermentation broth by ultrafiltration. | |
| EP0941229B1 (en) | Purification of fermented clavulanic acid | |
| US6417352B1 (en) | Process for the isolation of a pharmaceutically acceptable alkali metal salt of clavulanic acid | |
| US20010029038A1 (en) | Purification of fermented clavulanic acid |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Decisions on the lapse of the protection rights |
Effective date: 20060223 |