NO304523B1 - Vasoaktive cykliske polypeptider - Google Patents
Vasoaktive cykliske polypeptider Download PDFInfo
- Publication number
- NO304523B1 NO304523B1 NO923929A NO923929A NO304523B1 NO 304523 B1 NO304523 B1 NO 304523B1 NO 923929 A NO923929 A NO 923929A NO 923929 A NO923929 A NO 923929A NO 304523 B1 NO304523 B1 NO 304523B1
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- peptide
- lys
- boc
- mmol
- seq
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims description 313
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title description 28
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title description 5
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 title description 3
- 230000002227 vasoactive effect Effects 0.000 title description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 95
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 51
- -1 methyl-cyclohexyl Chemical group 0.000 claims description 50
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 45
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims description 32
- 102000001189 Cyclic Peptides Human genes 0.000 claims description 27
- 108010069514 Cyclic Peptides Proteins 0.000 claims description 27
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 22
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 14
- 101100129088 Caenorhabditis elegans lys-2 gene Proteins 0.000 claims description 12
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 9
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 8
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 8
- 229940124630 bronchodilator Drugs 0.000 claims description 7
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 7
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 6
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 5
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 5
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 4
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 claims description 4
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 claims description 4
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 4
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims description 4
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 claims description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 3
- 125000002147 dimethylamino group Chemical group [H]C([H])([H])N(*)C([H])([H])[H] 0.000 claims description 3
- 125000001624 naphthyl group Chemical group 0.000 claims description 3
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims description 3
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 claims description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 102100021257 Beta-secretase 1 Human genes 0.000 claims 1
- 101710150192 Beta-secretase 1 Proteins 0.000 claims 1
- 125000002877 alkyl aryl group Chemical group 0.000 claims 1
- 230000003182 bronchodilatating effect Effects 0.000 claims 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 228
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 228
- 238000000034 method Methods 0.000 description 100
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 91
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 90
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 87
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 86
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 85
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 85
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 78
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 76
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 75
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 75
- VBUWHHLIZKOSMS-RIWXPGAOSA-N invicorp Chemical class C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 VBUWHHLIZKOSMS-RIWXPGAOSA-N 0.000 description 70
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 68
- 108010003205 Vasoactive Intestinal Peptide Proteins 0.000 description 58
- 102400000015 Vasoactive intestinal peptide Human genes 0.000 description 57
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N aspartic acid group Chemical group N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 51
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 50
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 48
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 47
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 47
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 46
- 239000000047 product Substances 0.000 description 46
- 238000004992 fast atom bombardment mass spectroscopy Methods 0.000 description 44
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 44
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 42
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 42
- CTXPLTPDOISPTE-YPMHNXCESA-N (2s,3r)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-3-phenylmethoxybutanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)[C@@H](C)OCC1=CC=CC=C1 CTXPLTPDOISPTE-YPMHNXCESA-N 0.000 description 40
- MDXGYYOJGPFFJL-QMMMGPOBSA-N N(alpha)-t-butoxycarbonyl-L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OC(C)(C)C MDXGYYOJGPFFJL-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 37
- MGHPNCMVUAKAIE-UHFFFAOYSA-N diphenylmethanamine Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(N)C1=CC=CC=C1 MGHPNCMVUAKAIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 32
- FYYSQDHBALBGHX-YFKPBYRVSA-N N(alpha)-t-butoxycarbonyl-L-asparagine Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O FYYSQDHBALBGHX-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 29
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 25
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 24
- CNBUSIJNWNXLQQ-NSHDSACASA-N (2s)-3-(4-hydroxyphenyl)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 CNBUSIJNWNXLQQ-NSHDSACASA-N 0.000 description 22
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 18
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- DMBKPDOAQVGTST-GFCCVEGCSA-N (2r)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-3-phenylmethoxypropanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@@H](C(O)=O)COCC1=CC=CC=C1 DMBKPDOAQVGTST-GFCCVEGCSA-N 0.000 description 15
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- ZIOCIQJXEKFHJO-QMMMGPOBSA-N (2s)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]hexanoic acid Chemical compound CCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OC(C)(C)C ZIOCIQJXEKFHJO-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 14
- NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N Histamine Chemical compound NCCC1=CN=CN1 NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- DCLJSEPKYJSEHW-HNNXBMFYSA-N (2s)-3-[1-(4-methylphenyl)sulfonylimidazol-4-yl]-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1S(=O)(=O)N1C=C(C[C@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)N=C1 DCLJSEPKYJSEHW-HNNXBMFYSA-N 0.000 description 13
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 13
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 13
- WBIIPXYJAMICNU-AWEZNQCLSA-N (2s)-5-[amino-[(4-methylphenyl)sulfonylamino]methylidene]azaniumyl-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]pentanoate Chemical compound CC1=CC=C(S(=O)(=O)NC(N)=NCCC[C@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C=C1 WBIIPXYJAMICNU-AWEZNQCLSA-N 0.000 description 12
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 12
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Chemical compound CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 11
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical group CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 10
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 10
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 10
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 9
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 8
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 8
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 8
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 7
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 7
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 7
- BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N diisopropylcarbodiimide Natural products CC(C)NC(=O)NC(C)C BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 229960001340 histamine Drugs 0.000 description 7
- MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 1,2-Divinylbenzene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1C=C MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 6
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 6
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 5
- 230000003435 bronchoconstrictive effect Effects 0.000 description 5
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 5
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 5
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 5
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 5
- 230000004044 response Effects 0.000 description 5
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 description 5
- AYMLQYFMYHISQO-QMMMGPOBSA-N (2s)-3-(1h-imidazol-3-ium-5-yl)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 AYMLQYFMYHISQO-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 4
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QMMFVYPAHWMCMS-UHFFFAOYSA-N Dimethyl sulfide Chemical compound CSC QMMFVYPAHWMCMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 4
- 239000002249 anxiolytic agent Substances 0.000 description 4
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 4
- 230000007883 bronchodilation Effects 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 4
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 210000002460 smooth muscle Anatomy 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 125000002221 trityl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([*])(C1=C(C(=C(C(=C1[H])[H])[H])[H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FHOAKXBXYSJBGX-YFKPBYRVSA-N (2s)-3-hydroxy-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FHOAKXBXYSJBGX-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 3
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010006482 Bronchospasm Diseases 0.000 description 3
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 3
- 241000557626 Corvus corax Species 0.000 description 3
- JOYRKODLDBILNP-UHFFFAOYSA-N Ethyl urethane Chemical compound CCOC(N)=O JOYRKODLDBILNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000051325 Glucagon Human genes 0.000 description 3
- 108060003199 Glucagon Proteins 0.000 description 3
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000012088 Vasoactive Intestinal Peptide Receptors Human genes 0.000 description 3
- 108010075974 Vasoactive Intestinal Peptide Receptors Proteins 0.000 description 3
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 3
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 3
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 3
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 3
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 description 3
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000007885 bronchoconstriction Effects 0.000 description 3
- 239000000168 bronchodilator agent Substances 0.000 description 3
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 3
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 3
- MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N glucagon Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N 0.000 description 3
- 229960004666 glucagon Drugs 0.000 description 3
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 3
- UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N phenylmethyl ester of formic acid Natural products O=COCC1=CC=CC=C1 UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 3
- 210000003437 trachea Anatomy 0.000 description 3
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 3
- PXGPLTODNUVGFL-BRIYLRKRSA-N (E,Z)-(1R,2R,3R,5S)-7-(3,5-Dihydroxy-2-((3S)-(3-hydroxy-1-octenyl))cyclopentyl)-5-heptenoic acid Chemical compound CCCCC[C@H](O)C=C[C@H]1[C@H](O)C[C@H](O)[C@@H]1CC=CCCCC(O)=O PXGPLTODNUVGFL-BRIYLRKRSA-N 0.000 description 2
- DHBXNPKRAUYBTH-UHFFFAOYSA-N 1,1-ethanedithiol Chemical compound CC(S)S DHBXNPKRAUYBTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JMTMSDXUXJISAY-UHFFFAOYSA-N 2H-benzotriazol-4-ol Chemical compound OC1=CC=CC2=C1N=NN2 JMTMSDXUXJISAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HJBLUNHMOKFZQX-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxy-1,2,3-benzotriazin-4-one Chemical compound C1=CC=C2C(=O)N(O)N=NC2=C1 HJBLUNHMOKFZQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000004176 4-fluorobenzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1F)C([H])([H])* 0.000 description 2
- 125000003143 4-hydroxybenzyl group Chemical group [H]C([*])([H])C1=C([H])C([H])=C(O[H])C([H])=C1[H] 0.000 description 2
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000025254 Cannabis sativa Species 0.000 description 2
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010016825 Flushing Diseases 0.000 description 2
- 101500027956 Homo sapiens Vasoactive intestinal peptide Proteins 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 2
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N Styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1 PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 description 2
- 125000000613 asparagine group Chemical group N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 2
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 2
- 239000004044 bronchoconstricting agent Substances 0.000 description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- MKRTXPORKIRPDG-UHFFFAOYSA-N diphenylphosphoryl azide Chemical compound C=1C=CC=CC=1P(=O)(N=[N+]=[N-])C1=CC=CC=C1 MKRTXPORKIRPDG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 235000019439 ethyl acetate Nutrition 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 2
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 2
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 2
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 description 2
- 229910000040 hydrogen fluoride Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000001077 hypotensive effect Effects 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 2
- 125000005928 isopropyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(OC(*)=O)C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 2
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 2
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 2
- 125000004149 thio group Chemical group *S* 0.000 description 2
- 238000000825 ultraviolet detection Methods 0.000 description 2
- 229940124549 vasodilator Drugs 0.000 description 2
- 239000003071 vasodilator agent Substances 0.000 description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 2
- DRLDAGKWYRHQAE-RLUUKXCJSA-N (2S)-N-[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-6-amino-1-[[(2S)-6-amino-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-4-amino-1-[[(2S)-1-[[(2S,3S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1,4-diamino-1,4-dioxobutan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-1,4-dioxobutan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-1-oxohexan-2-yl]amino]-1-oxohexan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-4-methylsulfanyl-1-oxobutan-2-yl]-2-[[(2S)-6-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-amino-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]hexanoyl]amino]pentanediamide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 DRLDAGKWYRHQAE-RLUUKXCJSA-N 0.000 description 1
- WSLDOOZREJYCGB-UHFFFAOYSA-N 1,2-Dichloroethane Chemical compound ClCCCl WSLDOOZREJYCGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VYMPLPIFKRHAAC-UHFFFAOYSA-N 1,2-ethanedithiol Chemical compound SCCS VYMPLPIFKRHAAC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001917 2,4-dinitrophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C(=C1*)[N+]([O-])=O)[N+]([O-])=O 0.000 description 1
- HVAUUPRFYPCOCA-AREMUKBSSA-N 2-O-acetyl-1-O-hexadecyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCOC[C@@H](OC(C)=O)COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C HVAUUPRFYPCOCA-AREMUKBSSA-N 0.000 description 1
- KLDLRDSRCMJKGM-UHFFFAOYSA-N 3-[chloro-(2-oxo-1,3-oxazolidin-3-yl)phosphoryl]-1,3-oxazolidin-2-one Chemical compound C1COC(=O)N1P(=O)(Cl)N1CCOC1=O KLDLRDSRCMJKGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- GAWIXWVDTYZWAW-UHFFFAOYSA-N C[CH]O Chemical group C[CH]O GAWIXWVDTYZWAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100512078 Caenorhabditis elegans lys-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 239000012630 HPLC buffer Substances 0.000 description 1
- OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N Hydrazine Chemical compound NN OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000001953 Hypotension Diseases 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 125000000769 L-threonyl group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])[C@](O[H])(C([H])([H])[H])[H] 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000137850 Marrubium vulgare Species 0.000 description 1
- NDYNTQWSJLPEMK-WDSKDSINSA-N Met-Cys Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O NDYNTQWSJLPEMK-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- JCXJVPUVTGWSNB-UHFFFAOYSA-N Nitrogen dioxide Chemical compound O=[N]=O JCXJVPUVTGWSNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000007930 O-acyl isoureas Chemical class 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N Ornithine Natural products OC(=O)C(C)CCCN UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 108010003541 Platelet Activating Factor Proteins 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 102000003946 Prolactin Human genes 0.000 description 1
- 108010057464 Prolactin Proteins 0.000 description 1
- 102100028255 Renin Human genes 0.000 description 1
- 108090000783 Renin Proteins 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000001871 Tachycardia Diseases 0.000 description 1
- 239000004809 Teflon Substances 0.000 description 1
- 229920006362 Teflon® Polymers 0.000 description 1
- 235000001468 Triticum dicoccon Nutrition 0.000 description 1
- 240000000359 Triticum dicoccon Species 0.000 description 1
- 235000009754 Vitis X bourquina Nutrition 0.000 description 1
- 235000012333 Vitis X labruscana Nutrition 0.000 description 1
- 240000006365 Vitis vinifera Species 0.000 description 1
- 235000014787 Vitis vinifera Nutrition 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000007825 activation reagent Substances 0.000 description 1
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005076 adamantyloxycarbonyl group Chemical group C12(CC3CC(CC(C1)C3)C2)OC(=O)* 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003282 alkyl amino group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005907 alkyl ester group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001370 alpha-amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000008206 alpha-amino acids Nutrition 0.000 description 1
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 description 1
- MDFFNEOEWAXZRQ-UHFFFAOYSA-N aminyl Chemical compound [NH2] MDFFNEOEWAXZRQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 125000002029 aromatic hydrocarbon group Chemical group 0.000 description 1
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 1
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid group Chemical group C(C1=CC=CC=C1)(=O)O WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000010234 biliary secretion Effects 0.000 description 1
- 230000008512 biological response Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001627 cerebral artery Anatomy 0.000 description 1
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 210000000038 chest Anatomy 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 1
- 125000000582 cycloheptyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 125000000113 cyclohexyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 125000001511 cyclopentyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C1([H])[H] 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- IJKVHSBPTUYDLN-UHFFFAOYSA-N dihydroxy(oxo)silane Chemical compound O[Si](O)=O IJKVHSBPTUYDLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000010339 dilation Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 1
- 230000007515 enzymatic degradation Effects 0.000 description 1
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N ether Substances CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001033 ether group Chemical group 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000011737 fluorine Substances 0.000 description 1
- 125000001153 fluoro group Chemical group F* 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000003629 gastrointestinal hormone Substances 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 125000000291 glutamic acid group Chemical group N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004116 glycogenolysis Effects 0.000 description 1
- ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N guanidine group Chemical group NC(=N)N ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000008282 halocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 125000004029 hydroxymethyl group Chemical group [H]OC([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000036543 hypotension Effects 0.000 description 1
- 125000002883 imidazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000009434 installation Methods 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 230000003914 insulin secretion Effects 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 125000001909 leucine group Chemical group [H]N(*)C(C(*)=O)C([H])([H])C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 150000002617 leukotrienes Chemical class 0.000 description 1
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 210000001640 nerve ending Anatomy 0.000 description 1
- 210000004126 nerve fiber Anatomy 0.000 description 1
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 230000002572 peristaltic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 150000003141 primary amines Chemical class 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 229940097325 prolactin Drugs 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 239000012264 purified product Substances 0.000 description 1
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 1
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 description 1
- 239000002516 radical scavenger Substances 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004648 relaxation of smooth muscle Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 1
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 150000003335 secondary amines Chemical class 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000050 smooth muscle relaxant Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 229940120904 succinylcholine chloride Drugs 0.000 description 1
- YOEWQQVKRJEPAE-UHFFFAOYSA-L succinylcholine chloride (anhydrous) Chemical compound [Cl-].[Cl-].C[N+](C)(C)CCOC(=O)CCC(=O)OCC[N+](C)(C)C YOEWQQVKRJEPAE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- FDDDEECHVMSUSB-UHFFFAOYSA-N sulfanilamide Chemical compound NC1=CC=C(S(N)(=O)=O)C=C1 FDDDEECHVMSUSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940124530 sulfonamide Drugs 0.000 description 1
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 1
- 230000006794 tachycardia Effects 0.000 description 1
- 230000000213 tachycardiac effect Effects 0.000 description 1
- 125000001412 tetrahydropyranyl group Chemical group 0.000 description 1
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000005062 tracheal ring Anatomy 0.000 description 1
- 210000005090 tracheal smooth muscle Anatomy 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 125000002023 trifluoromethyl group Chemical group FC(F)(F)* 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 210000005166 vasculature Anatomy 0.000 description 1
- 108010043936 vasoactive intestinal peptide (10-28) Proteins 0.000 description 1
- 230000000304 vasodilatating effect Effects 0.000 description 1
- 230000024883 vasodilation Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/57563—Vasoactive intestinal peptide [VIP]; Related peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
- A61P11/08—Bronchodilators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
- A61P21/02—Muscle relaxants, e.g. for tetanus or cramps
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S930/00—Peptide or protein sequence
- Y10S930/01—Peptide or protein sequence
- Y10S930/17—Vasoactive intestinal peptides; related peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S930/00—Peptide or protein sequence
- Y10S930/01—Peptide or protein sequence
- Y10S930/27—Cyclic peptide or cyclic protein
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Neurology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Catalysts (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse angår cykliske peptider som
er vasoaktive peptid(VIP)-analoger samt farmasøytiske blandinger omfattende nevnte cykiske peptider. De farmasøytiske blandinger er nyttige ved behandling av bronkotrachiale konstriktive lidelser.
Vasoaktivt intestinalpeptid (VIP) ble først oppdaget,
isolert og renset fra svinetarm (US patent nr.
3.879.371). Peptidet har åtteogtyve (28) aminosyrer og har utstrakt homologi med secret in og glucagon. [Car-
lquist et al., Horm. Metab. Res., 14, 28-29 (1982)].
VIP's aminosyresekvens er som følger:
VIP er kjent for å oppvise et bredt område biologiske aktiviteter gjennom hele mage-tarm-kanalen og det sirkulatoriske system. I lys av dets likhet med gastrointestinale hormoner har man funnet at VIP
stimulerer pankreatisk og biliær sekresjon, hepatisk glykogenolyse, glucagon- og insulinsekresjon og akti-
verer pankreatisk bikarbonatfri-gjøring. [Kerrins, C.
og Said, S.I., Proe. Soc. Exp. Biol. Med., 142, 1014-
1017 (1972); Domschke, S. et al., Gastro-
enterology, 73, 478-480 (1977)].
Neuroner inneholdende VIP har blitt lokalisert ved
immunoassay i celler i de endokrine og eksokrine systemer, tarm og glatt muskulatur. [Polak, J.M. et al., Gut, 15, 720-724 (1974)]. VIP er funnet å være en neuroeffektor som forårsaker frigjøring av flere hormoner, innbefattende prolactin [Frawley, L.S., et al., Neuroendocrinology, 33, 79-83 (1981)], tyroksin
[Ahren, B. et al., Nature, 287, 343-345 (1980)], og insulin og glukagon [Schebalin, M., et al., Am. J. Physiology E., 232, 197-200 (1977)]. VIP har også blitt funnet å stimulere reninfrigjøring fra nyrer in vivo og in vitro. [Porter, J.P. et al., Neuroendocrinology, 36, 404-408 (1983)]. VIP har blitt funnet å være tilstede i nerver og nerveender, i luftveiene hos forskjellige dyrearter og mennesker. [Dey, R.D., og Said, S.I., Fed. Proe, 39, 1062 (1980); Said, S.I. et al., Ann. N.Y. Acad. Sei., 221, 103-114 (1974)]. VIP's kardiovaskulære og bronkopulmonale virkninger er av interesse, ettersom VIP har blitt funnet å være en kraftig vasodilator og et kraftig avlappende middel for glatt muskulatur som virker på perifere, pulmonale og koronare vaskulære kar. [Said, S.I. et al., Clin.Res., 20, 29 (1972)]. VIP har blitt funnet å ha en vasodilatorisk effekt på blodkar i hjernen. [Lee, T.J. og Berzin, I., Science, 224, 898-900 (1984)]. In vitro-studier har vist at vasoaktivt intestinalpeptid, tilført eksogent til arterier i hjernen, induserte blodkarutvidelse, noe som antyder VIP som et mulig overførende materiale for cerebral vasodilasjon. [Lee, T. og Saito, A., Science, 224, 898-901 (1984)]. I øyet har VIP også vist seg å være en kraftig vasodilator.
[Nilsson, S.F.E.. og Bill, A., Acta Physiol. Scand. , 121, 385-392 (1984)].
VIP kan ha regulatoriske effekter på immunsystemet. 0'Dorisio et al. har vist at VIP kan modulere forme-ringen og bevegelsen av lymfocytter. [J. Immunol., 135, 792S-796S (1985)].
Siden VIP har blitt funnet å avslappe glatt muskulatur og normalt er tilstede i luftveisvev, som bemerket ovenfor, er det antatt at VIP kan være en endogen mediator for avslapping av bronkial glatt muskulatur.
[Dey, R.D. og Said, S.I., Fed. Proe, 39, 1962
(1980)]. Det har blitt påvist at vev fra astmatiske pasienter ikke inneholder noe immunoreaktiv VIP, sammenlignet med vev fra vanlige pasienter. Dette kan indikere et tap av VIP eller VIPergiske nervefibre assosiert med sykdommen astma. [Ollerenshaw, S. et al., New England J. Med., 320, 1244-1248 (1989)]. In vitro- og in vivo undersøkelse har vist at VIP avslap-per trakeal glatt muskulatur og beskytter mot bronko-sammentrekkende midler, såsom histamin og prostaglandin F2a. [Wasserman, M.A. et al., i Vasoactive Intestinal Peptide, S.I. Said, ed., Raven Press, N.Y. 1982, s. 177-184; Said, S.I. et al., Ann. N.Y. Acad. Sei. 221, 103-114 (1974)]. Når det blir gitt intravenøst har VIP blitt funnet å beskytte mot bronkosammentrekk-ende midler såsom histamin, prostaglandin F2a, leu-kotriener, blodplateaktiverende faktor såvel som antigeninduserte bronkosammentrekninger. [Said, S.I. et al., supra, (1982)]. VIP har også blitt funnet å hemme mukøs sekresjon i humant luftveisvev in vitro [Coles, S.J. et al., Am. Rev. Respir. Dis., 124, 531-536 (1981)].
Hos mennesker har VIP, når det tilføres ved intravenøs transfusjon til astmatiske pasienter, vist seg å for-årsake en økning i maksimal ekspiratoris strømnings-grad og beskytte mot histaminindusert bronkoutvidelse.
[Morice, A.H. og Sever, P.S., Peptides, 7, 279-280
(1986); Morice, A. et al., The Lancet, II 1225-1227
(1983)]. De pulmonale effekter observert ved denne in-travenøse infusjon av VIP ble imidlertid fulgt av kardiovaskulære bieffekter, mest bemerkelsesverdig hypotensjon og tachycardia og også rødme i ansiktet. Når det ble gitt i intravenøse doser som ikke forårsaket kardiovaskulære effekter, lyktes VIP ikke i å endre spesifikk luftveiskonduktans. [Palmer, J.B.D., et al., Thorax, 41, 663-666 (1986)]. Grunnen til mangelen på aktivitet ble forklart med den lave dose som ble tilført, og muligens var grunnen rask nedbrytning av forbindelsen.
Når det ble tilført til mennesker med aerosoler, har nativt VIP kun vært marginalt effektiv når det gjelder å beskytte mot histaminindusert bronkosammentrekning.
[Altieri et al., Pharmacologist, 25, 123 (1983)]. VIP ble funnet å ikke ha noen signifikant effekt på grunn-leggende luftveisparametere, men hadde en beskyttende effekt mot histamidindusert bronkosammentrekning når det ble gitt til mennesker ved inhalasjon. [Barnes, P.J. og Dixon, C.M.S., Am. Rev. Respir. Dis., 130, 162-166 (1984)]. Det er blitt rapportert at VIP, når det er blitt gitt ved aerosol, ikke har oppvist noen tachykardia- eller hypotensive effekter i forbindelse med bronkoutvidelsen. [Said, S.I. et al., i Vasoactive Intestinal Peptide, S.I. Said, ed., Raven Press, N.Y., 1982, s. 185-191].
På grunn av VIP's interessante og potensielt klinisk anvendelige biologiske aktiviteter har denne substans vært mål for flere rapporterte syntetiske fremgangsmåter med det mål å øke en eller flere av egenskapene hos dette molekyl. Takeyama et al. har rapportert en VIP-analog med en gluta- aminsyre substituert for asparaginsyre ved posisjon 8. Denne forbindelse ble funnet å være mindre aktiv en nativ VIP. [Chem. Pharm. Bull., 28, 2265-2269 (1980)]. Wendlberger et al. har beskrevet fremstilling av en VIP-analog med norleucin substituert ved posisjon 17 i stedet for methionin.
[Peptid, Proe. 16th Eur. Pept. Symp., 290-295 (1980)]. Peptidet ble funnet å være like kraftig som nativt VIP når det gjelder dets evne til å erstatte radiojodinert VIP fra levermembranpreparater. Watts og Wooton har
rapportert en rekke lineære og cykliske VIP-fragmenter inneholdende mellom 6 og 12 residuer fra den native sekvens. [Eur. Pat. nr. 184309 og 325044; U.S. Pat.
nr. 4.737.487 og 4.866.039]. Turner et al. har rapportert at fragmentet VIP(10-28) er en antagonist til VIP. [Peptides 7, 849-854 (1986)]. Den substituerte analog [4-Cl-D-Phe<6>,Leu<17>]-VIP har også blitt rapportert å binde til VIP-reseptor og antagonisere VIP's aktivitet. [Pandol, S. et al., Gastrointest. Liver Physiol., 13, G553-G557 (1986)]. Gozes et al. har rapportert at analogen[Lys<1>,Pro<2>,Arg<3>,Arg<4>,Pro<5>, Tyr6] -VIP er en kompetitiv inhibitor for VIP-binding til dets reseptor på glialceller. [Endocrinology, 125, 2945-2949 (1988)]. Robberecht et al. har rapportert flere VIP-analoger med D-residuer substituert nativt VIP's N-terminal. [Peptides, 9, 339-345 (1988)]. Alle disse analoger bandt seg mindre kraftig til VIP-reseptoren og viste lavere aktivitet enn nativ VIP ved c-AMP-aktivering. Tachibana og Ito har rapportert flere VIP-analoger av precursormolekylet. [i Peptide Chem., T. Shiba og S. Sakakibara, red., Prot. Res. Foundation, 1988, s. 481-486, JP pat. 1083012, US pat. 4.822.774]. Disse forbindelser ble vist å være 1 til 3 ganger kraftigere bronkodilatorer enn VIP og hadde et 1 til 2 ganger høyere nivå av hypotensiv aktivitet. Musso et al. har også rapportert flere VIP-analoger som har substitusjoner ved posisjonene 6-7, 9-13, 15-17 og 19-28. [Biochemistry 27, 8174-8181 (1988); Eur. pat. nr. 8271141; US pat. nr. 4.835.252]. Disse forbindelser ble funnet å være like eller mindre kraftige enn nativ VIP ved binding til VIP-reseptoren og i biologisk respons. Bartfai et al. har rapportert en serie av flersubstituerte [Leu<17>] -VIP-analoger.
[International Patent Application WO 89/05857].
Foreliggende oppfinnelse omfatter slike cykliske vasoaktive peptidanaloger som er angitt i krav l's karak-teriserende del. Et cyklisk peptid er et peptid hvor karboksyl terminaler av sidekjeden hos en aminosyre i peptidkjeden er kovalent bundet til aminoterminalen hos sidekjeden til en annen aminosyre i peptidkjeden via dannelsen av en amidbinding. Den kovalente binding mellom de to aminosyreresiduer i peptidkjeden gir en ringstruktur.
Cykliske peptiders biologiske aktivitet kan være vesentlig forskjellig sammenlignet med de opprinnelige lineære analogers. Cykliske peptider er konformatorisk stivere og har mer veldefinerte strukturer. Disse endringer blir reflektert i de cykliske peptiders biologiske profiler. Cyklisering av en peptidanalog kan forlenge peptidets virkningsvarighet på grunn av den økede stivhet som gjør det mindre påvirkelig overfor kjemisk og enzymatisk nedbrytning. Biotilgjengelig-heten av cykliske peptider kan økes på grunn av endringer i peptidets fysiske egenskaper, som et resultat av strukturens stivhet. Videre kan den veldefinerte form av det cykliske peptid tillate større spesifisi-tet for målreseptoren enn spesifisiteten av lineære peptider, noe som således reduserer tilbøyeligheten for uønskede biologiske aktiviteter samtidig med den ønskede.
Foreliggende oppfinnelse omfatter nye cykliske peptider av formel: (V) hvor Q er cykloheksyl-lavere alkyl eller aryl-lavere alkyl; R8er Asp, Glu eller Ala; R10er Tyr, eller R6; R12er Arg eller Lys; R16er Gin or Ala; R17er Met, Nie eller Ala; R19er Val eller Ala; R22er Tyr eller R6; R24er Asn eller Ala; R26er Ile, Val eller Leu; R2, er Leu eller Lys; R^er Asn, Thr eller Lys; X er hydrogen eller en hydrolyserbar aminobeskyttende gruppe; Y er hydroksyl, en hydrolyserbar karboksylbeskyttende gruppe eller R29-R30-R31-Z; R^er Gly eller Ala; R30er Gly eller Ala; R31er Ala, Met, Cys (Acm) eller Thr; Z er hydroksyl eller en hydrolyserbar karboksylbeskyttende gruppe; eller farmasøytisk akseptable salter derav.
Q er fortrinnsvis
hvor n = 1,2; X og X2er uavhengig av hverandre lik hydrogen, OH, OCH3, F, Cl, I, CH3/CF3, N02, NH2, N(CH3)2, NHCOCH3/NHCOC6H5eller C(CH3)3.
Mer foretrukket er Q benzyl, p-fluorbenzyl, p-amino-benzyl, p-hydroksybenzyl, o-metyl, 1-metyl-naftyl eller 2-metyl-naftyl. Q er mest foretrukket benzyl.
Foretrukket er peptider av formlene:
hvor X, Y, R1#R^R6,'Rg, R1(j/<R>i2#^16/^17/^19'^22»^24og R27er som ovenfor for formel V.
Det mest foretrukne cykliske peptid er Ac-[Glu<8>,Lys<12>, Nie<17>,Ala ^Asp^Leu^Lys^sfGly^-^Thr31] -VIP
cykloCLys^-jAsp25) [Ac-(SEQ ID NO: 52)-NH2] .
Peptidene ifølge oppfinnelsen gir vedvarende avlapning av tracheobronkial glatt muskulatur uten kardiovaskulære bivirkninger og er således nyttige ved behandling av bronkokonstriktive lidelser, så som astma.
Foreliggende oppfinnelse angår nye analoger av vasoaktivt intestinalpeptid (VIP) , som har øket vedvarende bronkodilasjonsaktivitet uten observerbare bivirkninger .
Som brukt heri inkluderer uttrykket "lavere alkyl" rettkjedede eller forgrenede mettede alifatiske hydrokarbongrupper inneholdende 1-6 karbonatomer. Den foretrukne lavere alkylgruppe er metyl.
Som brukt heri betyr uttrykket "aryl" mononukleære aromatiske hydrokarbongrupper såsom fenyl, som i en eller flere posisjoner kan være usubstituert eller substituert med lavere alkyl, lavere alkoksy, amino, nitro, mono- eller di-lavere alkylamino, lavere alkylamido eller fenylamido. "Aryl" betegner også polynukleære arylgrupper, så som naftyl, som kan være substituert med én eller flere av de ovenfor nevnte grupper. De foretrukne arylgrupper er fenyl, usubstituert eller monosubstituert med fluor, eller usubstituert naftyl.
Som brukt heri er X en substituent på aminonitrogenet av den aminoterminale aminosyre, og Y er en substituent på karbonylgruppen av den karboksylterminale aminosyre. X kan være hydrogen eller en hydrolyserbar aminobeskyttende gruppe. Y kan være hydroksyl eller en hydrolyserbar karboksylbeskyttende gruppe.
Med hensyn til uttrykkene "hydrolyserbar aminobeskyttende gruppe" og "hydrolyserbar karboksylbeskyttende gruppe" kan enhver konvensjonell beskyttende gruppe som kan fjernes ved hydrolyse brukes i henhold til foreliggende oppfinnelse. Eksempler på slike grupper er nevnt nedenfor. Foretrukne aminobeskyttende grupper er
hvor X3er lavet alkyl eller halo lavere alkyl. Av
disse beskyttende grupper er de hvor X3er C^,-alkyl eller halo-C^-alkyl spesielt foretrukket.
Foretrukne karboksylbeskyttende grupper er lavere alkylestere, NH2og lavere alkylamider, med C^.,-alkylestere, idet NH2og -alkylamider er spesielt foretrukne.
Foreliggende oppfinnelse omfatter nye cykliske peptider av formel: (V)
hvor Rx er His, N-CH3-Ala; R2er Ser eller Ala; R^er
hvor Q er cykloheksyl-lavere alkyl eller aryl-lavere alkyl;
R8er Asp, GlUeller Ala; R10er Tyr eller R6; R^ er Arg eller Lys; R16er Gin eller Ala; R17er Met, Nie eller Ala; R19er Val eller Ala; R-^er Tyr eller R6; R^ er Asn eller Ala; R26er Ile, Val eller Leu; Rj, er Leu eller Lys; Rjg er Asn, Thr eller Lys; X er hydrogen eller en hydrolyserbar aminobeskyttende gruppe; Y er hydroksyl eller en hydrolyserbar karboksybeskyttende gruppe, eller R29-R30-R31-Z; R^er Gly eller Ala; R30er Gly eller Ala; R31er Ala, Met Cys (Acm) eller Thr; Z er hydroksyl eller en hydrolyserbar karboksybeskyttende gruppe; eller farmasøytisk aksepterbare salter derav.
Q er fortrinnsvis:
hvor n = 1,2; Xxog X2uavhengig er hydrogen, OH, OCH3, F, Cl, I, CH3, CF3, N02, NH2, N(CH3)2, NHCOCH3, NHCOC6H5, eller C(CH3)3.
Mer foretrukket er Q benzyl, p-fluorbenzyl, p-amino-benzyl, p-hydroksybenzyl, o-metyl, 1-metylnaftyl eller 2-metylnaftyl. Q er mest foretrukket benzyl.
Foretrukket er peptider med formlene:
hvor X, Y, Rx, Rj, R6, R8, R10, R12, R16, R17, R19, R^,<R>j4og R27er som ovenfor for formel V.
Oppfinnelsen er videre rettet mot farmasøytiske blandinger inneholdende slike peptider, såvel som anvendelse av slike peptider, ved fremstilling av et terapeutisk middel, samt et ikke-toksisk inert terapeutisk akseptabelt bæremateriale for å behandle bronkotrache-ale konstriktive lidelser.
Mulige fremgangsmåter for fremstilling av de cykliske polypeptider ifølge oppfinnelsen omfatter at
(a) et beskyttet og resinbundet peptid med tilsava-rende aminosyresekvens blir selektivt deblokkert for å danne en fri sidekjede-aminogruppe og en fri sidekj ede-karboksylgruppe; (b) den fri sidekjede-aminogruppe og den fri side-kjedekarboksylgruppe blir kovalent bundet til et passende amiddannende reagens; og (c) deblokkering og spalting av det cykliserte peptid fra resinet ved behandling med et passende deblokke-rende og spaltende middel, om ønsket i nærvær av ytterligere egnede additiver som kationf jemere, og om ønsket, omdanning av det cykliske peptid til et farma-søytisk akseptabelt salt.
Den nomenklatur som blir brukt for å definere peptidene er den som typisk brukes i faget, hvor aminogruppen ved N-terminaløen opptrer til venstre og karbok-sylgruppen ved C-terminalen opptrer til høyre. Med naturlige aminosyrer menes en av de naturlig forekom-mende aminosyrer som finnes i proteiner, dvs. Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Ser, Thr, Lys, Arg, Asp, Asn, Glu, Gin, Cys, Met, Phe, Tyr, Pro, Trp og His. Der hvor aminosyren har isometriske former, er det L-formen av aminosyren som er representert, med mindre noe annet er uttrykkelig angitt.
De følgende forkortelser eller symboler blir brukt for å representere aminosyrer i tillegg til dem beskrevet ovenfor, beskyttende grupper, oppløsningsmidler, reagenser og lignende.
Analoger av den native VIP peptidsekvens er indikert ved å angi de substituerte aminosyrer i parentes før "VIP". Derivatisering av den N-terminale aminogruppe, dvs. som ved X ovenfor, er angitt til venstre for substitusjonene i parentes. Sekvenstall som opptrer i parentes til høyre for "VIP", indikerer aminosyredele-sjoner og -addisjoner til den native sekvensnummere-ring. Det vil si, f. eks. indikerer Ac-[Lys12,Nie<17>, - Gly29] -VIP (1-29) -NH2 et polypeptid med en aminosyresekvens som tilsvarer det native humane VIP hvori en acylgruppe har blitt substituert for hydrogen ved N-terminalen, et lysin har blitt substituert for arginin ved posisjon 12 og et norleucin har blitt substituert for metionin ved posisjon 17. I tillegg har et glysin blitt koblet på karboksylposisjonen av asparagin 28, betegnet posisjon 29. Suffiksene "-0H" og 11 -NH2" etter "VIP" eller parentesene, refererer til henholdsvis de fri syre- og amidformer av polypeptidet. I tilfelle intet suffiks er brukt, er uttrykket tenkt å omfatte begge former.
Som angitt ovenfor er et cyklisk peptid som definert heri et peptid hvor sidekjede-karboksylterminalen av en aminosyre i peptidet er bundet kovalent til side-kjedeterminalen av en annen aminosyre i peptidkjeden via dannelsen av en amidbinding. Flere nomenklaturer og symboler blir brukt for å representere et cyklisk peptid. De følgende er eksempler:
De ovennevnte tre strukturer (a-c), og den medfølgende representasjon ved å bruke SEQ ID NO: og sekvensopplistingen nedenfor representerer og definerer hver det samme polypeptid med en aminosyresekvens som tilsvarer den native humane VIP hvori en acetylgruppe har blitt substituert for hydrogen ved N-terminalen, et lysin har blitt substituert for arginin ved posisjon 12, et norleucin har blitt substituert for metionin ved posisjon 17, et valin har blitt substituert for leucin ved posisjon 26 og et treonin har blitt substituert for asparagin ved posisjon 28. I tillegg har en amidbinding blitt dannet mellom sidekjedekarboksyl-gruppen asparaginsyren ved posisjon 8 og sidekjede-aminet av lysin ved posisjon 12, for således å danne den cykliske peptidanalog. De ovennevnte representa-sjoner av peptidstrukturen er regnet for å være ekvivalente og utbyttbare.
Som brukt heri er uttrykkene " T^" for en aminosyre ved posisjon n i en av strukturene vist heri og "Xaa" for en aminosyre ved posisjon n i den tilsvarende sekvens i sekvensopplistingen nedenfor ekvivalente og kan byttes ut med hverandre i de tilfeller hvor Xaa representerer et valg fra to eller flere aminosyrer.
I de cykliske peptider ifølge foreliggende oppfinnelse gjelder de følgende konfigurasjoner, med mindre noe annet er angitt.
Representative forbindelser av foreliggende oppfinnelse omfatter peptider med følgende aminosyresekven-ser:
Forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse kan lett bli syntetisert ved enhver kjent konvensjonell frem-gangsmåte for dannelse av en peptidbinding mellom aminosyrer. Slike konvensjonelle fremgangsmåter innbefatter f.eks. enhver oppløsningsfaseprosedyre som tillater en kondensasjon mellom den fri alfa-aminogruppe av en aminosyre eller rest derav med sin karboksylgruppe eller andre reaktive grupper beskyttet, og den fri primære karboksylgruppe av en annen aminosyre eller rest derav med sin aminogruppe eller andre reaktive grupper beskyttet.
Fremgangsmåten for syntetisering av forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse kan utføres ved en fremgangsmåte hvorved hver aminosyre i den ønskede sekvens legges til én ad gangen i rekkefølge til en annen aminosyre eller rest derav, eller ved en frem-gangsmåte hvorved peptidfragmenter med den ønskede aminosyresekvens først blir syntetisert konvensjonelt og deretter kondenseres for å gi det ønskede peptid.
Slike konvensjonelle fremgangsmåter for syntetisering av de nye forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse innbefatter f.eks. enhver fastfase-peptidsyntese-metode. I en slik metode kan syntesen av de nye forbindelser utføres ved sekvensielt å innlemme de ønskede aminosyreresiduer, én ad gangen, i den voksende peptidkjede i henhold til de generelle prinsipper for fastfasemetoder. [Merrifield, R. B., J. Amer. Chem. Soc. 85, 2149-2154 (1963); Barany et al., The Peptides, Analysis, Synthesis and Biology, vol. 2, Gross, E. and Meienhofer, J., Eds. Academic Press 1-284
(1989)].
Felles for kjemiske peptidsynteser er beskyttelsen av reaktive sidekjedegrupper av de forskjellige amino-syreenheter med passende beskyttende grupper som vil forhindre en kjemisk reaksjon fra å inntreffe ved dette sted inntil den beskyttende gruppe til slutt blir fjernet. Vanligvis er det også alminnelig å beskytte alfa-aminogruppen på en aminosyre eller - fragment mens denne enhet reagerer med karboksylgrup-pen, fulgt av selektiv fjerning av den alfa-aminobeskyttende gruppe for å tillate at den påfølgende reaksjon finner sted ved denne posisjon. Selv om spesielle beskyttende grupper har blitt beskrevet når det gjelder fastfasemetoden, bør det bemerkes at hver aminosyre kan beskyttes med en beskyttende gruppe som konvensjonelt blir brukt for den respektive aminosyre i oppløsningsfase-syntese.
Alfa-aminogrupper kan være beskyttet med en passende beskyttende gruppe valgt fra aromatiske beskyttende grupper av uretantypen, såsom benzyloksykarbonyl (Z) og substituert benzoksykarbonyl, såsom p-klorbenzyloksykarbonyl, p-nitro-benzyloksykarbonyl, p-brombenzyloksykarbonyl, p-bifenyl-isopropyloksykarbonyl, 9-fluorenylmetyl-oksykarbonyl (Fmoc) og p-metoksybenzy-loksy-karbonyl (Moz); alifatiske beskyttende grupper av uretantypen, såsom t-butyloksykarbonyl (Boe), diisopropylmetyloksykarbonyl, isopropyloksykarbonyl og allyloksykarbonyl. Boe er mest foretrukket for alfa-aminobeskyttelse.
Karboksylgrupper kan beskyttes med en passende beskyttende gruppe valgt fra aromatiske estere såsom benzyl (OBzl) eller benzyl substituert med lavere alkyl, halogen, nitro, tio eller substituerte tiogrupper, dvs. lavere alkyl(1-7 karbon-atomer)tio; alifatiske estere såsom lavere alkyl, t-butyl (Ot-Bu), cyklopen-tyl, cykloheksyl (OcHx), cykloheptyl og 9-fluorenylme-tyl (OFm). OBzl og OFm er mest foetrukket for gluta-minsyre (Glu) . OChx, OBzl og OFm er mest foretrukket for asparaginsyre (Asp) .
Hydroksylgrupper kan beskyttes med en passende beskyttelsesgruppe valgt fra eter som benzyl (Bzl) eller benzyl substituert med lavere alkyl, halogen, såsom 2,6-diklorbenzyl (DCB), nitro eller metoksy; t-butyl (t-Bu), tetrahydropyranyl og trifenylmetyl (trityl). Bzl er er mest foretrukket for serin (Ser) og treonin (Thr). Bzl og DCB er mest foretrukket for tyrosin (Tyr).
Sidekjedeaminogrupper kan beskyttes med en passende beskyttelsesgruppe valgt fra beskyttende grupper av aromatisk uretan-type, som benzyloksykarbonyl (Z) og substituerte benzyloksykarbonyl, såsom p-klorbenzyloksykarbonyl, 2-klorbenzyloksykarbonyl (2-C1-Z), p-nitrobenzyloksykarbonyl, p-brombenzyloksykarbonyl, p-bifenylisopropyloksykarbony1, 9-fluorenyImety 1 - oksykarbonyl (Fmoc) og p-metoksybenzyloksykarbonyl (Moz); alifatiske uretantype beskyttende grupper, såsom t-butyloksykarbonyl (Boe), diiso-propylmetyl-oksykarbonyl, isopropyloksykarbonyl og allyloksykarbonyl. Z er mest foretrukket for ornitin (Orn). 2-C1-Z og Fmoc er mest foretrukket for lysin (Lys).
Guanidingrupper' kan beskyttes med passende beskyttel-sesgrupper valgt fra nitro, p-toluensulfonyl (Tos), Z, adamantyloksykarbonyl og Boe. Tos er mest foretrukket for arginin (Arg).
Sidekjedeamidgrupper kan beskyttes med xantyl (Xan) . Ingen beskyttelse er foretrukket for asparagin (Asn) og glutamin (Gin).
Imidazolgrupper kan beskyttes med en passende beskyttelsesgruppe valgt fra p-toluensulfonyl (Tos), 9-fluorenyImetyloksykarbonyl (Fmoc), trifenylmetyl (trityl), 2,4-dinitrofenyl (Dnp), Boe og benzyloksyme- tyl (Bom). Tos og Bom er mest foretrukket for histidin (His).
Med mindre noe annet er angitt, er prosentandeler gitt nedenfor for fast stoff i faststoffblandinger, væsker i væsker og fast stoff i væsker henholdsvis på wt/wt-, vol/vol- og wt/vol-basis. Videre, med mindre noe annet er angitt, er forhandlere av reagenser og instrumenter nevnt nedenfor ikke ment å være obligatorisk. Det er opptil fagmannen å velge lignende reagenser eller instrumenter fra andre forhandlere.
Alle oppløsningsmidler, isopropanol (iPrOH), metylenklorid (CH2C12) og dimetylformamid (DMF) ble kjøpt fra Fisher eller Burdick & Jackson og ble brukt uten ytterligere destillasjon. Trifluoreddiksyre ble kjøpt fra Halocarbon og brukt uten ytterligere rensing. Diisopropyletylamin (DIPEA) ble kjøpt fra Pfaltz and Bauer og destillert fra CaO og ninhydrin før bruk. Dicykloheksylkarbodiimid (DCC) og diisopropylkarbodiimid (DIC) ble kjøpt fra Fluka og brukt uten ytterligere rensing. Hydroksybenzotriazol (HOBT) og 1,2-etanditiol (EDT) ble kjøpt fra Sigma Chemical Co. og brukt uten ytterligere rensing. Beskyttede aminosyrer var generelt av L-konfigurasjon og ble erholdt kommersielt fra Chemical Dynamics Corp. eller Bachem. Disse reagensers renhet ble bekreftet ved tynnsjiktskromatografi, NMR og smeltepunkt før bruk. Boc-O-Me-Tyr, Boc-2-Nal og Boc-p-F-Phe ble fremstilt som angitt. [Bolin, D.R., U.S. pat.søkn. 374.503]. Boc-Asp(OFm) og Boc-Glu(OFm) ble fremstilt som angitt [Bolin, D.R. et al., Org.Prep.Proe.Int., 21, 67-74
(1989)]. Benzhydrylaminresin (BHA) var en kopolymer av styren - 1% divinylbenzen (100-200 eller 200-400 mesh) erholdt fra Biomega, Bachem, Omni eller Advanced Chemtech. Totalt nitrogeninnhold i disse resiner var generelt mellom 0,3 - 1,2 meq/g. Tynnsjiktskromatografi (TLC) ble utført på kiselgel 60 F254-plater (Merck) forbelagt på glass ved å bruke passende opp-løsningsmiddelsystemer. Påvisning av forbindelser ble utført med UV-fluorescensdemping (254 nm absorpsjon), jodfarging eller ninhydrinspray (for primære og sekundære aminer).
For aminosyresammensetningsanalyse, ble peptider hydrolysert i 6N HC1 inneholdende 1-4 mg fenol, ved 115°C i 22-24 timer i forseglede, evakuerte hydro-lyserør. Analyser ble utført enten på en Beckman 121M aminosyreanalysator eller et Waters HPLC-basert amino-syreanalyse-system ved å bruke enten et Waters Cat Ex-resin eller en Pierce AA511-kolonne og ninhydrin-påvisning.
Høyeffekts væskekromatografi (HPLC) ble utført på en LCD-apparatur bestående av Constametric I- og III-pumper, en Gradient Master oppløsningsmiddelprogramme-rer og blander, og en Spectromonitor III UV detektor med variabel bølgelengde. Analytisk HPLC ble utført i reversert-fase-tilstand ved å bruke Waters^Bondapack C18-kolonner (0,4 x 30 cm) . Prepara-tive HPLC-separa-sjoner ble utført på Whatman Magnum 20 partisil 10 ODS-3-kolonner (2 x 25 cm eller 2 x 50 cm) utstyrt med en Waters Guardpack C18prekolonne. Det ble utført gelkromatograf i under anvendelse av en 2 x 85 cm kolonne, en LKB varioperpex peristaltisk pumpe og en IBM variabel bølgelengde UV-detektor.
Peptidene ble fortrinnsvis fremstilt ved å bruke fastfasesyntese ved metoden generelt beskrevet av Merrifield, [J. Amer. Chem. Soc, 85, 2149 (1963)], selv om andre likeverdige kjemiske synteser kjent i faget kunne anvendes, som tidligere nevnt. Fastfase syntese blir påbegynt fra den C-terminale ende av peptidet ved å koble en beskyttet alfa-aminosyre til et passende resin. Et slikt utgangsmateriale kan fremstilles ved å feste en alfa-aminobeskyttet aminosyre via en esterbinding til et klormetylert resin eller et hydroksymetylresin eller ved en aminbinding til et benzhydrylamin (BHA) eller para-metylbenz-hydrylamin (MBHA)-resin. Fremstilling av hydroksym-etylresinet er velkjent i faget. Klormetylerte resiner er kommersielt tilgjengelige, og fremstillingen er også velkjent i faget. BHA- og NBHA-resin støttemate-rialer er kommersielt tilgjengelige og generelt brukt når det ønskede peptid som blir syntetisert har et usubstituert amid ved C-terminalen.
Generelt ble den første aminosyre som skulle kobles til BHA-resinet tilsatt som det symmetrisker Boc-aminosyre anhydrid ved å bruke 2-10 ekvivalenter av den aktiverte aminosyre pr. resin nitrogen-ekvivalent. Etter kobling ble resinet vasket og tørket under vakuum. Påsetning av aminosyren til resinet ble bestemt ved aminosyreanalyse av en alikvot av Boc-amino-syreresin. Mengdene lå generelt fra 0,2 - 0,4 mmol/g resin. Eventuelle uomsatte aminogrupper kan blokkeres ved å omsette resinet med eddiksyreanhydrid og diiso-propyl-etylamin i etylenklorid.
Etter tilsetning av Boe-aminosyren ble resinene ført gjennom flere gjentatte cykler for å legge til aminosyre sekvensielt. Alfa-amino-Boc-beskyttelsen ble fjernet under sure betingelser. Trifluoreddiksyre (TFA) i metylenklorid, HC1 i dioksan eller maur-syre/eddiksyreblandinger kan brukes for dette formål. Foretrukket blir 50% TFA i metylenklorid (v/v) brukt. Dette kan også inneholde 1-5 volum% EDT eller dimetylsulfid som en fjerner for t-butyl karboniumioner. Andre standard spaltningsreagenser som er kjent i
faget kan også brukes.
Etter fjerning av den alfa-aminobeskyttende gruppe blir de etterfølgende beskyttede aminosyrer koblet trinnvis i den ønskede rekkefølge for å erholde et intermediært beskyttet peptidresin. Aktiveringsreagen-sene som blir brukt for koblingen av aminosyrene i fastfasesyntesen av peptidene er velkjent i faget. For eksempel er passende reagenser for slik syntese ben-zotriazol-l-yloksy-tri- (dimetylamino) fosfonium-heksafluorfosfat (BOP), dicykloheksylkarbodiimid (DCC) , og diisopropylkarbodiimid (DIC) . Foretrukket er DCC og DIC. Andre aktiverende midler er beskrevet av Barany og Merrifield [i The Peptides, Vol. 2, J. Meienhofer, red., Academic Press, 1979, s. 1-284] og kan bli anvendt. For-skjellige reagenser, såsom 1-hydroksybenzotriazol (HOBT) , N-hydroksysuccinimid (HOSu) og 3,4-dihydro-3-hydroksy-4-okso-l,2,3-benzotriazin (HOOBT) kan tilsettes til koblingsblan-dingene for å optimalisere de syntetiske cykler. Foretrukket er HOBT.
Fremgangsmåten for en typisk syntesecyklus var som følger:
Oppløsningsmidler for alle vaskinger og koblinger ble målt til volumer på 10 - 40 ml/g resin. Koblinger ble utført ved å bruke enten de på forhånd dannede symme-triske anhydrider av Boe-aminosyrene, eller som 0-acyl isoureaderivatene. Generelt ble 2-10 ekvivalentdeler av aktivert Boc-aminosyre tilsatt til hver ekvivalent-del aminresin ved å bruke metylenklorid som oppløs-ningsmiddel. Boc-Arg(Tos), Boc-Gln, Boc-Asn, Boc-His(Tos) og Boc-His(Bom) ble koblet i 20-25% DMF/CH2C12. Boc-Asn, Boc-Gln og Boc-His(Bom) ble koblet som sine HOBT aktive estere for å minimalisere kjente bireaksj oner.
Peptidene ble cyklisert ved stort sett å bruke metoder velkjent i faget på følgende måte. Ved aminosyreposi-sjonene inne i peptidet hvor sidekjedene skal kobles til hverandre, ble forskjellige beskyttende grupper anvendt. For amino-posisjons aminosyrene Lys og Orn,
bleN<6->og N<8->Fmoc-derivatene inkorporert i peptidkjeden. For karboksylposisjons-aminosyrene Asp og Glu,
ble0S<->og 0T<->Fm-derivatene inkorporert. Peptidet ble, mens det fremdeles var festet til resinet, behandlet med 20-40% piperidin i DMF for å fjerne, selektivt, de Fmoc og Fm beskyttende grupper. De fri sidekjede amino- og karboksylgrupper ble så kovalent bundet inne i molekylet ved behandling ved et passende amiddannende reagens, såsom difenylfosforylazid (DPPA), DCC, DIC eller BOP. Foretrukket er her DCC og BOP.
Fremgangsmåten for en typisk cykliseringsprosess var som følger:
Koblingsreaksjoner gjennom syntesen ble overvåket med Kaiser ninhydrintesten for å bestemme utstrekningen av reaksjonen [Kaiser et al., Anal. Biochem., 34, 595-598
(1979)]. Langsom reaksjonskinetikk ble observert for Noc-Arg(Tos), Boc-Asn og Boc-Gln. Alle ufullstendige koblingsreaksjoner ble enten gjentatt med nyfremstilte aktiverte aminosyrer eller avsluttet ved å behandle peptidet resinet med eddiksyreanhydrid som beskrevet ovenfor. De fullstendig sammensatte peptidresiner ble tørket i vakuum i flere timer.
For hver forbindelse ble blokkeringsgruppene fjernet og peptidet spaltet fra resinet med den følgende prosedyre. Generelt ble peptidresinene behandlet med 25-100 pl etandi-tiol, 1 ml anisol og 9 ml flytende hydrogenfluorid pr. gram resin ved 0°C i 45-60 min, i et Teflon HF-apparatur (Penin- sula). Alternativt kan en modifisert totrinns spaltningsprosedyre [Tam et al., Tetrahedron Letters, 23, 2939-2940 (1982)] bli brukt, hvor peptidresinene ble behandlet med 3 ml dimetylsulfid og 1 ml hydrogenfluorid i 2 timer ved 0°C og inndampet før 90% HF-behandlingen. Flyktige reagenser ble så fjernet under vakuum ved isbadtempe-ratur. Residuet ble vasket med to eller tre 20 ml volumdeler hver av Et20 og EtOAc og filtrert. Peptidene ble ekstrahert fra resinet ved vask med tre eller fire 20 ml volumdeler av 10% AcOH og filtrert. De kombinerte vandige filtrater ble frysetørket for å gi grovproduktet.
Grovpeptidene ble initielt renset med gelkromatografi på Sephadex G-25 fine media for å skille monomere fra oligomere materialer. Peptidene ble oppløst i et minimalt volum 1% AcOH og satt på gelkolonnen. Kolon-nen ble eluert med 10% AcOH ved en strømningshastighet på 0,5 - 1,5 ml/min. Effluenten ble overvåket ved 254 nm, og fraksjonene som inneholdt det ønskede bånd ble slått sammen og frysetørket for å gi semi-rensede produkter.
Rensing av de semi-rensede peptider ble generelt utført med preparativ HPLC. Peptidene ble satt på kolonnene i et mini- malt volum av enten 1% AcOH eller 0,1% TFA. Gradienteluering ble generelt startet ved 10% B-buffer, 10-25% B i 10 min, og 25-35% B i 3 t (buffer A: 0,1% TFA/H20, buffer B: 0,1% TFA/CH3CN) ved en strømningshatighet på 8,0 ml/min. UV-påvisnng ble foretatt ved 220 nm. Fraksjoneene ble samlet opp med 1,5-2,5 minutters intervaller ogg undersøkt ved analy tisk HPLC. Fraksjoner som ble vurdert til å være av høy renhet ble slått sammen og frysetørket.
De endelige produkters renhet ble undersøkt ved analytisk HPLC på en revers fase-kolonne som angitt ovenfor. Generelt en gradienteluering på 20-40% B (buffer: 0,022% TFA/H20, buffer B: 0,022% TFA/CH3CN) i 15 min ved 2,0 ml/min. UV-påvisning var ved 210 nm. Alle produkters renhet ble vurdert til å være omkring 97-99%. Aminosyreanalyse av de enkelte peptider ble utført og verdiene som ble erholdt, lå innenfor akseptable grenser. Generelt ble alle sluttprodukter også underkastet rask atombombardement masse-spektrometri (FAB-MS). Alle produkter ga de ventede opprinnelige M+H-ioner innenfor akseptable grenser.
De nye forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse har verdifulle farmakologiske egenskaper. De kan ha tracheal avslappende aktivitet, og de er kraftige bronkodilatorer. Forbindelsene har ingen kardivasku-lære bivirkninger. Bronko-utvidelsen fremskaffet av disse nye peptider kan opprettholdes i over to timer. Ved at de er meget aktive bronkodilatorer, er forbindelsene således verdifulle farmasøytiske midler for behandling av bronkokonstriktive lidelser, såsom astma.
De nye forbindelser av formel V kan kombineres med forskjellige typiske farmasøytiske bæremidler, fortrinnsvis et ikke-toksisk inert terapeutisk akseptabelt bærermateriale, for å gi blandinger som er egnet for bruk ved behandling av bronkokonstriktive lidelser, såsom astma. Doseringen av disse forbindelser i den galeniske tilførselsform er avhengig av forskjellige faktorer, såsom den spesielle forbindelse som anvendes og den spesielle sammensetning. En effektiv dosering kan bestemmes av den vanlige fagmann utfra den effektive konsentrasjon (EC50) beskrevet heri. Typiske doseringer i mennesker vil være 0,01-100
^g/kg. For forbindelser med en lav EDS0, såsom 0,1^g, vil typiske doseringer i mennesker være fra omkring 0,2 - 20^g/kg.
Nye forbindelser av formel V danner farmasøytisk akseptable syreaddisjonssalter med et antall uorga-niske og organiske syrer, såsom svovel-, fosfor-, salt-, hydrobrom-, hydrojod-, salpeter-, sulfamin-, sitron-, melke-, drue-, oksal-, malin-, rav-, vin-, kanel-, eddik-, trifluoreddik-, benzo-, salisyl-, glukon-, ascorbinsyre og relaterte syrer.
Foreliggende forbindelser kan tilføres til en pasient ved parenteral tilførsel, enten intravenøst, intramus-kulært, oralt eller intranasalt. En foretrukket måte for parenteral tilførsel er med aerosol via oral eller intranasal tilførsel.
Foreliggende oppfinnelse blir videre illustrert ved hjelp av de etterfølgende eksempler.
Eksempel 1
Fremstilling av Boc-Thr(Bzl)-BHA-resin
Benzhydrylamin kopolystyren-1% divinylbenzen fornettet resin (9,5 g, 3,6 milliekvivalenter, 200-400 AS TM mesh, Vega Biochem) ble svellet i 100 ml metylenklorid, filtrert og vasket ved å bruke trinn 7-8 i frem-gangsmåte 1. Boc-Thr(Bzl) (3,35 g, 10,8 mmol) og dicykloheksylkarbodiimid (1,12 g, 5,42 mmol) ble omsatt i 50 ml CH2C12i 1 time, filtrert og tilsatt i 50 ml CH2C12til det svellede resin. Denne blanding ble ristet i 18 timer ved romtemperatur. DIPEA (630 ml, 3,6 mmol) ble tilsatt og deretter ristet i 1 time, filtrert, og deretter ble trinnene 10-14 av frem-gangsmåte 1 utført. Kaiser ninhydrinanalyse var negativ. Alle uomsatte amingrupper ble blokkert ved å behandle resinet med 1 ml eddiksyreanhydrid og 1 ml DIPEA i 50 ml metylenklorid i 30 min, filtrert og vasket med trinn 13-14 av fremgangsmåte 1. Resinet ble tørket under vakuum over natten, og gav 9,8 g Boc-Thr (Bzl) -BHA- resin. En del av dette resin ble underkastet aminosyreanalyse, som En 1,15 g (0,1 mmol) del av dette resin ble så selektivt deblokkert ved behandling med trinn 1-11 av fremgangsmåte 2 og omsatt to ganger med BOP (58 mg, 0,13 mmol) og 400 ml DIPEA i 20 ml destillert DMF i 24 og 6 timer. Kaiser ninhydri-danalyse var negativ. Resinet ble vasket ved å bruke trinn 13-16 av fremgangsmåte 2 og tørket under vakuum for å gi 1,05 g.
Eksempel 2
Fremstilling av Ac- [Lys12,Nie17,Val26,Thr28] -VIP cyklo (Lys21_>Asp<2S>) [Ac-(SEQ ID No:28)-NH2]
Benzhydrylamin-kopolystyren-1% divinylbenzen fornettet resin (5 g, 2,6 milliekvivalenter, 200-400 ASTM mesh, Biochem) ble svellet i 50 ml metylenklorid, filtrert og vasket ifølge trinnene 7-8 i fremgangsmåte 1. Resinet ble resuspendert i 60 ml metylenklorid, og til dette ble det tilsatt Boc-Thr(BZ1) (2,32 g, 7,5 mmol) og dicykloheksylkarbodiimid (774 mg, 3,75 mmol). Denne blanding ble ristet i 4 timer ved romtemperatur, filtrert og deretter ble trinn 10-14 av fremgangsmåte 1 utført. Kaiser ninhydrinanalyse var negativ. Alle uomsatte amingrupper ble blokkert ved behandling av resinet med 5 ml eddiksyreanhydrid og 5 ml DIPEA i 200 ml metylenklorid i 60 min, filtrert og vasket med fremgangsmåtetrinn 13-14. Resinet ble tørket under vakuum over natten for å gi 5,8 g Boc-Thr(Bzl)-BHA-resin. En del av dette resin ble underkastet araino-syreanalyse, som indikerte en påsetning av 0,276 mmol Thr/g.
En 1,44 g (0,4 mmol) del av dette resin ble underkastet fastfasesyntese ved å bruke ovennevnte fremgangsmåte. Tre koblingscykler ble utført, én cyklus med hver av Boc-Leu (399 g, 1,6 mmol), Boc-Val (348 mg, 1,6 mmol) og Boe-Asp(OFm) (329 mg, 0,8 mmol). Halv-parten av dette resin (0,2 mmol) ble ført gjennom fire koblingscykler, én cyklus med hver av Boc-Asn (204 mg, 0,88 mmol), Boc-Leu (199 mg, 0,8 mmol), Boc-Tyr(2,6-DCB) (352 mg, 0,8 mmol) og Boe-Lys(Fmoc) (375 mg, 0,8 mmol).
Dette resin ble så selektivt deblokkert ved behandling med trinn 1-11 av fremgangsmåte 2 og omsatt med Boe (177 mg, 0,4 mmol) i 20 ml 1% DIPEA/DMF i 2 timer. Kaiser ninhydrinanalyse var negativ.
Dette resin ble ført gjennom én koblingcyklus med Boc-Lys(2-Cl-Z) (332 mg, 0,8 mmol) og ble så underkastet fastfasesyntese på en Applied Biosystems modell 43 OA peptidsyntetisator. Det ble utført nitten kob lingscykler, én med hver av Boc-Val (435 mg, 2,0 mmol), Boc-Ala (378 mg, 2,0 mmol), Boc-Nle (462 mg, 2,0 mmol), Boc-Gln (493 mg, 2,0 mmol), Boc-Lys(2-C1-Z)
(830 mg, 2,0 mmol), Boc-Arg(Tos) (856 mg, 2,0 mmol), Boc-Leu (499 mg, 2,0 mmol), Boc-Lys(2-C1-Z) (830 mg, 2,0 mmol), Boc-Thr(Bzl) (618 mg, 2,0 mmol), Boc-Tyr(2,6-DCB) (880 mg, 2,0 mmol), Boc-Asn (464 mg, 2,0 mmol), Boc-Asp(OcHx) (630 mg, 2,0 mmol), Boc-Thr(Bzl)
(618 mg, 2,0 mmol), Boc-Phe (531 mg, 2,0 mmol), Boc-Val (435 mg, 2,0 mmol), Boc-Ala (378 mg, 2,0 mmol), Boc-Asp(OcHx) (630 mg, 2,0 mmol), Boc-Ser(Bzl) (590 mg, 2,0 mmol) og Boc-His(Tos) (819 mg, 2,0 mmol) og så ført gjennom trinn 1-8 av fremgangsmåte 1 og behandlet med 1 ml eddiksyreanhydrid i 20 ml 6% DIPEA/metylenklorid i 30 minutter. Resinet ble vasket ved å bruke trinn 10-14 i fremgangsmåte 1 og tørket under vakuum.
Dette peptidresin ble deblokkert for å gi 210 mg grovpeptid. Peptidet ble renset ved gelfiltrering for å gi 93 mg halvrent produkt. Dette materiale ble videre renset ved preparativ HPLC på en Whatman Magnum 20 ODS-3-kolonne (2 x 25 cm) og eluert med buffer B: buffer A (buffer A: 0,1% TFA/H20, buffer B: 0,1% TFA/CH3CN) ; 4 timer,, med en lineær gradient på 27-37%, for å gi 26,2 mg av et hvitt, amorft pulver. Forbindelsen var homogen i HPLC og gav en korrekt aminosyreanalyse.
FAB-MS: MH beregnet 3305,8, funnet 3305,8.
Eksempel 3
Fremstilling av Ac-[Lys12,Nie<17>,Ala<19>,Asp25,Val<26>,Thr<28>]-VIP cyklo (Lys21_»Asp25)[Ac-(SEQ ID No:29)-NH2]
En 0,4 g (01 mmol) del av benzhydrylaminresin (100-200 ASTM mesh, Bachem) ble underkastet fastfasesyntese ved å bruke ovennevnte fremgangsmåte. Alle koblinger ble utført ved å bruke like molare ekvivalenter av Boc-aminosyrer og diiso-propylkarbodiimid, Boc-asparagin og Boe-glutamin ble inkorporert som de respektive aktive estere ved tilsetning av 1,5 molart overskuddHOBT til koblingsblandingen. Reaksjonstider var generelt 2-18 timer for avslutning av koblingstrinnet. Det ble utført hi koblingscykler, én med hver av Boc-Thr(Bzl) (309 mg, 1,0 mmol), Boc-Leu (249 mg, 1,0 mmol), Boc-Val (217 mg, 1,0 mmol), Boe-Asp (OFm) (206 mg, 0,5 mmol), Boc-Asn (232 mg, 1,0 mmol), Boc-Leu (249 mg, 1,0 mmol), Boe-Tyr(2,6-DCB) (440 mg, 1,0 mmol), Boc-Lys(Fmoc) (234 mg, 0,5 mmol), og Boc-Lys(2-Cl-Z) (415 mg, 1,0 mmol).
Dette resin ble så selektivt deblokkert ved behandling med trinn 1-11 av fremgangsmåte 2 og omsatt med BOP (88 mg, 0,2 mmol) i 20 ml 1% DIPEA/DMF i 2 timer. Kaiser ninhydrinanalyse var negativ.
Det ble utført nitten koblingscykluser, én cyklus med hver av Boc-Ala (189 mg, 1,0 mmol), Boc-Ala (189 mg,1,0 mmol) , Boe-Nie (231 mg, 1,0 mmol), Boc-Gln (246 mg, 1,0 mmol), Boc-Lys(2-C1-Z) (415 mg, 1,0 mmol), Boc-Arg(Tos) (428 mg, 1,0 mmol), Boc-Leu (249 mg, 1,0 mmol), Boc-Lys (2-Cl-Z) (415 mg, 1,0 mmol), Boc-Thr(Bzl) (309 mg, 1,0 mmol), Boc-Tyr(2,6-DCB) (440 mg, 1,0 mmol), Boc-Asn (232 mg, 1,0 mmol), Boc-Asp(OcHx)
(315 mg, 1,0 mmol), Boc-Thr(Bzl) (309 mg, 1,0 mmol), Boc-Phe (265 mg, 1,0 mmol), Boc-Val (217 mg, 1,0 mmol), Boc-Ala (189 mg, 1,0 mmol), Boc-Asp (OcHx) (315 mg, 1,0 mmol), Boc-Ser(Bzl) (296 mg, 1,0 mmol) og Boc-His(Tos) (409 mg, 1,0 mmol). Peptidresinet ble så ført gjennom trinn 1-8 av fremgangsmåte 1 og behandlet med 0,5 ml eddiksyreanhydrid i 10 ml 6% DIPEA/metylenklorid i 30 min. Resinet ble vasket ved å bruke trinn 10-14 og tørket under vakuum.
Dette peptidresin ble deblokkert ved behandling med 9 ml HF, 1 ml anizol og 100 ml etanditiol i 1 time ved 0°C. Reaksjonsblandingen ble inndampet og residuet vasket med 2 x 15 ml Et20 og 2 x 15 ml EtOA,.. Resinet ble ekstrahert med 4 x 20 ml 10% AcOH. De kombinerte vandige filtrater ble frysetørket for å gi sluttpro-duktet i tørt form. Peptidet ble renset ved gelfiltrering på Sephadex G-25 fine (2 x 10 cm kolonne) ved eluering med 10% AcOH for å gi 215 mg av semirent produkt. Dette materiale ble ytterligere renset med preparativ HPLC med en lineær gradient på 26-36% buffer B:A, for å gi 20,1 mg av et hvitt, amorft pulver. Forbindelen var homogen i HPLC og gav en korrekt amino-syreanalyse. FAB-MS: MH beregnet 3277,6, funnet 3277,7.
Eksempel 4 Fremstilling av Ac- [p-F-Phee, 2-Nal10,Lys12,Nie17,Asp25, - Val<26>,Thr<28>,Gly29*3<0>,Met<31>]-VIP (1-31)-NH2cyklo (Lys21_>Asp<25>) [Ac-(SEQ ID No:30)-NH2] ;En 0,4 g (0,1 mmol) del benzhydrylaminresin (100-200 ASTM mesh, Bachem) ble underkastet fastfasesyntese som i eksempel 3. Tre koblingscykler ble utført, én med hver av Boc-Met (249 mg, 1,0 mmol), Boc-Gly (175 mg, 1,0 mmol) og Boc-Gly (175 mg, 1,0 mmol) . Ni koblingscykler og cykliseringen ble utført som i eksempel 3. Nitten koblingscykler ble utført som i eksempel 3, bortsett fra at Boc-Ala i tiende cyklus ble erstattet med Boc-Val (217 mg, 1,0 mmol), Boc-Tyr(2,6-DCB) i nittende cyklus ble erstattet med Boc-2-Nal (158 mg, 0,5 mmol) og Boc-Phe i tjuedredje cyklus ble erstattet med Boc-p-F-Phe (142 mg, 0,5 mmol). ;Dette peptidresin ble deblokkert som i eksempel 3 for å gi 345 mg grovpeptid. Peptidet ble renset med gelfiltrering som i eksempel 3 for å gi 215 mg halvrent produkt. Dette materiale ble ytterligere renset med preparativ HPLC med en lineær gradient på 30-40% buffer B:A, for å gi 16,4 mg av et hvitt, amorft pulver. Forbindelsen var homogen i HPLC og gav en korrekt aminosyreanalyse. FAB-MS: MH beregnet 3574,7, funnet 3575,1. ;Eksempel 5 ;Fremstilling, av Ac- [Glu<8>,Orn<12>,Nle<17>,Asp<25>,Val<2e>,Thr<28>] "<V>IP ;cyklo (Lys<21>^Asp<25>) [Ac-(SEQ ID No: 31)-NH2] ;En 0,4 g (0,1 mmol) del benzhydrylaminresin (100-200 ASTM mesh, Bachem) ble underkastet fastfasesyntese som i eksempel 3. Ni koblingscykler og cykliseringen ble utført som i eksempel 3. Nitten koblingscykler ble utført som i eksempel 3, bortsett fra at Boc-Ala i tiende cyklus ble erstattet med Boc-Val (217 mg, 1,0 mmol), Boc-Lys(2-C1-Z) i syttende cyklus ble erstattet med Boc-Orn(Z) (366 mg, 1,0 mmol) og Boc-Asp (OcHx) i tjueførste cyklus ble erstattet med Boc-Glu(Bzl) (337 mg, 1,0 mmol). ;Dette peptidresin ble deblokkert som i eksempel 3 for å gi 255 mg grovpeptid. Peptidet ble renset med gelfiltrering som i eksempel 3 for å gi 200 mg semirent produkt. Dette materiale ble ytterligere renset med preparativ HPLC med en lineær gradient på 28-38% buffer B:A, for å gi 30,7 mg av et hvitt, amorft pulver. Forbindelsen var homogen i HPLC og gav en korrekt aminosyreanalyse. FAB-MS: MH beregnet 3305,8, funnet 3305,5. ;Eksempel 6 ;Fremstilling av Ac-[p-F-Phe<6>,Lys<12>,Nle<17>,Ala<19>,Asp2S,Val<2>€, Thr28,Gly29,30,Cys (Acm)31] -VIP (1-31)-NH2cyklo ;(Lys<21_>»As<p2S>) [Ac-(SEQ ID No:32)-NH2] ;Benzhydrylaminresin (0,4 g, 0,1 mmol, 100-200 ASTM mesh, Bachem) ble underkastet fastfasesyntese som i eksempel 3. Tre koblingscykler ble utført, én cyklus med hver av Boc-Cys (Acm) (292 mg, 1,0 mmol), Boc-Gly (175 mg, 1,0 mmol) og Boc-Gly (175 mg, 1,0 mmol). Ni koblingscykler og cyklisering ble utført som i eksempel 3. Nitten koblingscykler ble utført som i eksempel 3, bortsett fra at Boc-Phe i den tjuetredje cyklus ble erstattet med Boc-p-F-Phe (142 mg, 0,5 mmol). ;Dette peptidresin ble deblokkert som i eksempel 3 og gav 268 mg grovpeptid. Peptidet ble renset ved gelfiltrering som i eksempel 3 for å gi 165 mg av halvrent produkt. Dette materiale ble ytterligere renset med preparativ HPLC med en lineær gradient på 25-35% buffer B:A, for å gi 28,1 mg av et hvitt, amorft pulver. Forbindelsen var homogen i HPLC og gav en korrekt aminosyre - analyse. FAB-MS: MH beregnet 3584,1, funnet 3584,0. ;Eksempel 7 ;Fremstilling av Ac- [Ala<2>,Lys<12>,Nie<17>,Ala<19>,Asp25, Val2e, - ;Thr28]VIP cyklo (Lys<21>_»Asp<25>) [Ac-(SEQ ID No:33)-NH2] ;Benzhydrylaminresin (1,5 g, 0,4 mmol, 100-299 ASTM mesh, Bachem) ble underkastet fastfasesyntese på en Applied Biosystems modell 43 OA peptidsyntetisator som i eksempel 3. Åtte koblingscykler ble utført, én cyklus med hver av Boc-Thr(Bzl) (619 mg, 2,0 mmol), Boc-Leu (499 mg, 2,0 mmol), Boc-Val (435 mg, 2,0 mmol), Boc-Asp(OFm) (822 mg, 2,0 mmol), Boc-Asn (464 mg, 2,0 mmol), Boc-Leu (499 mg, 2,0 mmol), Boc-Tyr(2,6-DCB) (880 mg, 2,0 mmol) og Boc-Lys(Fmoc) (938 ;mg, 2,0 mmol). ;Dette resin ble så selektivt deblokkert ved behandling med trinn 1-11 av fremgangsmåte 2 og ble omsatt med BOP (356 mg, 0,8 mmol) i 20 ml 1% DIPEA/DMF i 2 timer. Kaiser ninhydrin-analyse var negativ. Resinet ble vasket ved å bruke trinn 13-16 av fremgangsmåte 2 og tørket under vakuum for å gi 1,9 g av Boe-okta-peptidresin. ;En 0,95 g (0,2 mmol) del av dette resin ble igjen underkastet fastfasesyntese på en Applied Biosystems modell 430A peptidsyntetisator som i eksempel 3. Det ble utført atten koblingscykler, én med hver av Boc-Lys(2-Cl-Z) (830 mg, 2,0 mmol), Boc-Ala (378 mg, 2,0 mmol), Boc-Ala (378 mg, 2,0 mmol), Boc-Nle (462 mg, 2,0 mmol), Boc-Gln (493 mg, 2,0 mmol), Boc-Lys(2-C1-Z) ;(830 mg, 2,0 mmol), Boc-Arg(Tos) (856 mg, 2,0 mmol), Boc-Leu (499 mg, 2,0 mmol), Boc-Lys(2-Cl-Z) (830 mg, 2,0 mmol), Boc-Thr(Bzl) (618 mg, 2,0 mmol), Boc-Tyr(2,6-DCB) (880 mg, 2,0 mmol), Boc-Asn (464 mg, 2,0 mmol), Boc-Asp(OcHx) (630 mg, 2,0 mmol), Boc-Thr(Bzl) ;(618 mg, 2,0 mmol), Boc-Phe (531 mg, 2,0 mmol), Boc-Val (435 mg, 2,0 mmol), Boc-Ala (378 mg, 2,0 mmol) og Boc-Asp(OcHx) (630 mg, 2,0 mmol) for å gi 1,54 g boc-heksacosapeptidresin. ;En 0,77 g (0,1 mmol) del av dette resin ble underkastet fastfasesyntese. To koblingscykler ble utført, én cyklus med Boc-Ala (76 mg, 0,4 mmol) og én med Boc-His(Tos) (328 mg, 0,8 mmol). Peptidresinet ble ført gjennom trinn 1-8 av frem-gangsmåte 1 og behandlet med 0,5 ml eddiksyreanhydrid i 20 ml 6% DIPEA/metylenklorid i 60 min. Resinet ble vasket ved å bruke trinn 10-14 og tørket under vakuum for å gi 0,74 g. ;Dette peptidresin ble deblokkert som i eksempel 3 for å gi 172 mg grovpeptid. Peptidet ble renset med gelfiltrering som i eksempel 3 for å gi 110 mg av semirent produkt. Dette materiale ble ytterligere renset med preparativ HPLC med en lineær gradient på 22-37% buffer B:A, for å gi 40,0 mg av et hvitt, amorft pulver. Forbindelsen var homogen i HPLC og gav en korrekt aminosyreanalyse. FAB-MS: MH beregnet 3261,7, funnet 3261,88. ;Eksempel 8 ;Fremstilling av Ac- [N-Me-AlaSLys^Nle^Ala^Asp^V-al<26>, Thr<28>] VIP-cyklo (Lys21_>Asp25)[Ac-(SEQ ID No:34)-NH2];0,77 g (0,1 mmol) av Boc-heksaocosapeptidresinet fra eksempel 7 ble underkastet fastfasesyntese. To koblingscykler ble utført, én av hver med Boc-Ser(Bzl) ;(118 mg, 0,4 mmol) og Boc-N-Me-Ala (81 mg, 0,4 mmol). Peptidresinet ble ført gjennom trinn 1-8 av fremgangsmåte 1 og behandlet med BOP (442 mg, 1,0 mmol), eddiksyre (57 ml, 1,0 mmol) og DIPEA (523 ml, 3,0 mmol) i 20 ml DMF i 6 timer og deretter med 0,5 ml eddiksyreanhydrid i 20 ml 6% DIPEA/metylenklorid i 60 minutter. Resinet ble vasket ved å bruke trinn 10-14 og tørket under vakuum for å gi 0,73 g. ;Dette peptidresin ble deblokkert som i eksempel 3 for å gi 191 mg grovpeptid. Peptidet ble renset ved gelfiltrering som i eksempel 3 for å gi 138 mg av semirent produkt. Dette materiale ble ytterligere renset ved preparativ HPLC med en lineær gradient på 22-37% buffer B:A, for å gi 28,0 mg av et hvitt, amorft pulver. Forbindelsen var homogen i HPLC og gav en korrekt aminosyreanalyse. FAB-MS: MH beregnet 3225,4, funnet 3225,8. ;Eksempel 9 ;Fremstilling av Ac-[2-Nal<10>,Leu<12>,Nie<17>,Ala<19>,Asp25,Val<26>, ;Thr<28>] VIP cyklo (Lys<21>._»Asp<25>) [Ac-(SEQ ID No:35)-NH2] ;Benzhydrylaminresin (4,0 g, 1,08 mmol, 100-200 ASTM mesh, Bachem) ble underkastet fastfasesyntese ved å bruke fremgangsmåte 1. Åtte koblingscykler ble utført, én cyklus med hver av Boc-Thr(Bzl) (1,34 g, 4,3 mmol) , Boc-Leu (925 mg, 4,3 mmol), Boc-Val (938 mg, 4,3 mmol), Boc-Asp(OFm) (889 mg, 2,1 mmol), Boc-Asn 557 mg, 2,4 mmol), Boc-Leu (925 mg, 4,3 mmol), Boc-Tyr(2,6-DCB) (1,9 g, 4,3 mmol) og Boc-Lys (Fmoc) (1,1 g, 4,3 mmol). ;Dette resin ble så selektivt deblokkert ved behandling med trinn 1-11 av fremgangsmåte 2 og omsatt med BOP (885 mg, 2,0 mmol) i 20 ml 1% DIPEA/DMF i 2 timer. Kaiser ninhydrinanalyse var negativ. Resinet ble vasket ved å bruke trinn 13-16 av fremgangsmåte 2. ;Dette resin ble ført gjennom en koblingcyklus med Boc-Lys (2-C1-Z) (1,79 g, 4,3 mmol) og tørket under vakuum for å gi 6,3 g Boc-nonapeptidresin. ;En 1,89 g (0,3 mmol) del av dette resin ble ført gjennom ni koblingscykler, én cyklus med hver av Boc-Ala (227 mg, 1,2 mmol), Boc-Ala (227 mg, 1,2 mmol), Boc-Nle (278 mg, 1,2 mmol), Boc-Gln (325 mg, 1,32 mmol), Boc-Lys(2-C1-Z) (498 mg, 1,2 mmol), Boc-Arg(Tos) (514 mg, 1,2 mmol), Boc-Leu (299 mg, 1,2 mmol), Boc-Leu (498 mg, 2,0 mmol) og Boc-Thr(Bzl) (371 mg, 1,2 mmol) for å gi 2,06 g Boc-oktadekapeptidresin. ;0,68 g (0,1 mmol) av dette resin ble ført gjennom ti koblingscykler, én cyklus med hver av Boe-2-Nal (126 mg, 0,4 mmol), Boc-Asn (102 mg, 0,44 mmol), Boc-Asp(OcHx) (126 mg, 0,4 mmol), Boc-Thr(Bzl) (124 mg, ;0,4 mmol), Boc-Phe (106 mg, 0,4 mmol), Boc-Val (87 mg, 0,4 mmol), Boc-Ala (76 mg, 0,4 mmol), Boc-Asp(OcHx) ;(126 mg, 0,4 mmol), Boc-Ser(Bzl) (118 mg, 0,4 mmol) og Boc-His(Tos) (164 mg, 0,4 mmol). Peptidresinet ble ført gjennom trinn 1-8 av fremgangsmåte 1 og behandlet med 0,5 ml eddiksyreanhydrid i 20 ml 6% DIPEA/metylenklorid i 60 minutter. Resinet ble vasket ved å bruke trinn 10-14 og tørket under vakuum for å gi 0,82 g- ;Dette peptidresin ble deblokkert som i eksempel 3 for å 261 mg grovpeptid. Peptidet ble renset ved gelfiltrering som i eksempel 3 for å gi 186 mg av halvrent produkt. Dette materiale ble ytterligere renset med preparativ HPLC med en lineær gradient på 30-40% buffer B:A, for å gi 60,1 mg av et hvitt, amorft pulver. Forbindelsen var homogen i HPLC og gav en korrekt aminosyreanalyse. FAB-MS: MH beregnet 3296,8, funnet 3295,6. ;Eksempel 10 ;Fremstilling av Ac-[O-Me-Tyr10,Leu<12>,Nle<17>,Ala<19>,Asp<25>, - ;Val<26>,Thr<28>]-VIP cyklo (Lys^-^Asp<25>) [Ac-(SEQ ID No:36)-NH2];En 0,68 g (0,1 mmol) del av Boc-oktadekapeptidresinet fra eksempel 9 ble ført gjennom ti koblingscykler som i eksempel 9, bortsett fra at Boc-2-Nal i den nittende cyklus ble erstattet med Boc-Tyr(O-Me) (59 mg, 0,2 mmol) og gav 0,61 g. ;Dette peptidresin ble deblokkert som i eksempel 3 for å gi 175 mg grovpeptid. Peptidet ble renset ved gelfiltrering som i eksempel 3 for å gi 136 mg av semirent produkt. Dette materiale ble ytterligere renset ved preparativ HPLC med en lineær gradient på 28-38% buffer B:A, og gav 42,4 mg av et hvitt, amorft pulver. Forbindelsen var homogen i HPLC og gav en korrekt aminosyreanalyse. FAB-MS: MH beregnet 3276, 1, funnet 3276,0. ;Eksempel 11 ;Fremstilling av Ac- [p-F-Phe6,p-NH2,Phe10,Leu^Nle1-<7>,Ala<19>,Asp<25>,Val<26>,Thr<28>] -VIP cyklo (Lys<21>_>Asp<25>) [Ac-(SEQ ID No:37) -NH2] ;En 0,685 g (0,09 mmol) del av Boc-oktadekapeptidresinet ble ført gjennom ti koblingscykler som i eksempel 9, bortsett fra at Boe-2-Nal i den nittende cyklus ble erstattet med Boc-p-NH(Z)-Phe (166 mg, 0,4 mmol) og Boe-Phe i den tjuetredje cyklus ble erstattet med Boc-p-F-Phe (113 mg, 0,4 mmol), noe som gav 0,84 g. ;Dette peptidresin ble deblokkert som i eksempel 3 og gav 182 mg grovpeptid. Peptidet ble renset ved gelfiltrering som i eksempel 3 for å gi 136 mg av semirent produkt. Dette materiale ble ytterligere renset ved preparativ HPLC med en lineær gradient på 25-35% buffer B:A, og gav 47,2 mg av et hvitt, amorft pulver. Forbindelsen var homogen i HPLC og gav en korrekt aminosyreanalyse. FAB-MS: MH beregnet 3279,7, funnet 3279,8. ;Eksempel 12 ;Fremstilling av Ac-[Lys<12>,Nie<17>,Ala<19>,Asp<25>,Leu<26>,Lys<27>'<28>]-VIP cyklo (Lys<21_>»Asp<25>) [Ac-(SEQ ID No:38)-NH2] ;Benzhydrylaminresin (1,25 g, 1,0 mmol, 100-200 ASTM mesh, Bachem) ble underkastet fastfasesyntese ved å bruke fremgangsmåte 1. Åtte koblingscykler ble utført, én cyklus med hver av Boc-Lys (2-Cl-Z) (1,66 g, 4,0 mmol), Boc-Lys(2-C1-Z) (1,66 g, 4,0 mmol), Boc-Leu (925 mg, 4,0 mmol), Boc-Asp(OFm) (823 mg, 2,0 mmol), Boc-Asn (511 mg, 2,2 mmol), Boc-Leu (925 mg, 4,0 mmol), Boc-Tyr (2,6-DCB) (1,79 g, 4,0 mmol) og Boc-Lys (Fmoc) (937 mg, 2,0 mmol). ;Dette resin ble så selektivt deblokkert ved behandling med trinn 1-11 av fremgangsmåte 2 og omsatt med BOP (885 mg, 2,0 mmol) i 20 ml 1% DIPEA/DMF i 2 timer. Kaiser ninhydrinanalyse var negativ. Resinet ble vasket ved å bruke trinn 13-16 av fremgangsmåte 2. ;Dette resin ble ført gjennom en koblingcyklus med Boc-Lys (2-C1-Z) (1,66 g, 4,0 mmol) og tørket under vakuum for å gi 2,7 g Boc-nonapeptid-resin. ;En 0,54 g (0,2 mmol) del av dette resin ble underkastet fastfasesyntese på en Applied Biosystems modell 430A peptidsyntetisator. Atten koblingscykler ble utført, én cyklus med hver av Boc-Ala (378 mg, 2,0 mmol), Boc-Ala (378 mg, 2,0 mmol), Boc-Nle (462 mg, 2,0 mmol), Boc-Gln (493 mg, 2,0 mmol), Boc-Lys (2-C1-Z) ;(830 mg, 2,0 mmol), Boc-Arg(Tos) (856 mg, 2,0 mmol), Boc-Leu (499 mg, 2,0 mmol), Boc-Lys (2-C1-Z) (830 mg, 2,0 mmol), Boc-Thr(Bzl) (618 mg, 2,0 mmol), Boc-Tyr (2,6-DCB) (880 mg, 2,0 mmol), Boc-Asn (464 mg, 2,0 mmol), Boc-Asp(OcHx) (630 mg, 2,0 mmol), Boc-Thr(Bzl) ;(618 mg, 2,0 mmol), Boc-Phe (531 mg, 2,0 mmol), Boc-Val (435 mg, 2,0 mmol), Boc-Ala (378 mg, 2,0 mmol), Boc-Asp (OcHx) (630 mg, 2,0 mmol) og Boc-Ser(Bzl) (590 mg, 2,0 mmol) for å gi 1,16 g Boc-heptacosapeptidresin. ;En 0,54 g (0,1 mmol) del av dette resin ble ført gjennom én koblingscyklus med Boc-His(Tos) (819 mg, 2,0 mmol) og ble så ført gjennom trinn 1-8 av frem-gangsmåte 1 og behandlet med 0,5 ml eddiksyreanhydrid i 20 ml 6% DIPEA/metylenklorid i 60 minutter. Resinet ble vasket ved å bruke trinn 10-14 i fremgangsmåte 1 ;og tørket vinder vakuum, som gav 0,5 g. ;Dette peptidresin ble deblokkert som i eksempel 3, bortsett fra at 5 ml HF og 0,5 ml anisol ble brukt, og dette gav 127 mg grovpeptid. Peptidet ble renset ved gelfiltrering for å gi 74,6 mg av halvrent produkt. Dette materiale ble ytterligere renset med preparativ HPLC med en lineær gradient på 24-34% buffer B:A, noe som gav 17,1 mg av et hvitt, amorft pulver. Forbindelsen var homogen i HPLC og gav en korrekt aminosyreanalyse. FAB-MS: MH beregnet 3333,8, funnet 3333,4. ;Eksempel 13 ;Fremstilling av Ac-[N-Me-Ala<1>,Lys12,Nie17,Ala<19>,Asp<25>, ;Leu26,Lys<27>'<2>8]-VIP cyklo (Lys<21>_^Asp<2S>) [Ac-(SEQ ID No:39) -NH2] ;En 0,58 g (0,1 mmol) del av Boc-heptacosapeptidresinet fra eksempel 12 ble ført gjennom en koblingscyklus med Boc-N-Me-Ala (81 mg, 0,4 mmol) og så ført gjennom trinnene 1-8 i fremgangsmåte 1 og behandlet med BOP (443 mg, 1,0 mmol), eddiksyre (57 ml, 1,0 mmol) og DIPEA (523 ml, 3,0 mmol) i 20 ml DMF i 6 timer og med 0,5 ml eddiksyreanhydrid i 20 ml 6% DIPEA/metylenklorid i 60 minutter. Resinet ble vasket under anvendelse av trinnene 10-14 fra fremgangsmåte 1 og tørket under vakuum, og det gav 0,4 g utbytte. ;Dette peptidresin ble deblokkert som i eksempel 20 og gav 165 mg grovpeptid. Peptidet ble renset med gelfiltrering som i eksempel 3 for å gi 101 mg av semirent produkt. Dette materiale ble ytterligere renset ved preparativ HPLC som i eksempel 3, bortsett fra at en lineær gradient på 24-34% ble passert, og gav 19,8 mg av et hvitt, amorft pulver. Forbindelsen var homogen i HPLC og gav en korrekt aminosyreanalyse. FAB-MS: MH beregnet 3281,8, funnet 3281,9. ;Eksempel 14 ;Fremstilling av Ac- [Glu8,Lys12,Nle17,Alax9,Asp25,Leu26, - ;Lys<27>'<28>] -VIP cyklo (Lys<21>_)Asp<2S>) [Ac-(SEQ ID No:40)-NH2];En 0,54 g (0,2 mmol) del av Boc-nonapeptidresinet fra eksempel 12 ble underkastet fastfasesyntese på en Applied Biosystems modell 43 OA peptidsyntetisator. Atten koblingscykler ble utført, én cyklus med hver av Boc-Ala (378 mg, 2,0 mmol), Boc-Ala (378 mg, 2,0 mmol), Boc-Nle (462 mg, 2,0 mmol), Boc-Gln (493 mg, 2,0 mmol), Boc-Lys(2-C1-Z) (830 mg, 2,0 mmol), Boe-Arg(Tos) (856 mg, 2,0 mmol), Boc-Leu (499 mg, 2,0 mmol), Boc-Lys(2-C1-Z) (830 mg, 2,0 mmol), Boc-Thr(Bzl) (618 mg, 2,0 mmol), Boc-Tyr(2,6-DCB) (880 .mg, 2,0 mmol), Boc-Asn (464 mg, 2,0 mmol), Boc-Glu(OBlz) ;(675 mg, 2,0 mmol), Boc-Thr(Bzl) (618 mg, 2,0 mmol), Boc-Phe (531 mg, 2,0 mmol), Boc-Val (435 mg, 2,0 mmol), Boc-Ala (378 mg, 2,0 mmol), Boc-Asp(OcHx) (630 mg, 2,0 mmol) og Boc-Ser(Bzl) (590 mg, 2,0 mmol) for å gi 0,58 g Boc-heptacosapeptidresin. ;Dette resin ble ført gjennom en koblingscyklus med Boc-His(Tos) (164 mg, 0,4 mmol) og så ført gjennom trinnene 1-8 i fremgangsmåte 1 og behandlet med 0,5 ml eddiksyreanhydrid i 20 ml 6% DIPEA/metylenklorid i 60 minutter. Resinet ble vasket ved bruk av trinnene 10-14 fra fremgangsmåte 1 og tørket under vakuum, og det gav 0,53 g utbytte. ;Dette peptidresin ble deblokkert som i eksempel 3, bortsett fra at 5 ml HF og 0,5 ml anisol ble anvendt, noe som gav 151 g grovpeptid. Peptidet ble renset med gelfiltrering som i eksempel 3 for å gi 110 mg av semirent produkt. Dette materiale ble ytterligere renset ved preparativ HPLC med en lineær gradient på 23,5-33,5% buffer B:A, noe som gav 22,8 mg av et hvitt, amorft pulver. Forbindelsen var homogen i HPLC og gav en korrekt aminosyreanalyse. FAB-MS: MH beregnet 3347,9, funnet 3347,0. ;Eksempel 15 ;Fremstilling av Ac-[O-Me-Tyr<10>,Lys<12>,Nle<17>,Ala<19>,Asp<25>,' ;<v>al<26>'Thr<28>] -VIP cyklo (Lys<21>_»As<p25>) [Ac-(SEQ ID No: 41)-NH2];En 1,84 g (0,3 mmol) del av Boc-nonapeptidresinet fra eksempel 9 ble underkastet fastfasesyntese på en Applied Biosystems modell 430A peptidsyntetisator. ;Ni koblingscykler ble utført, én cyklus med hver av Boc-Ala (378 mg, 2,0 mmol), Boc-Ala (378 mg, 2,0 mmol), Boc-Nle (462 mg, 2,0 mmol), Boc-Gln (493 mgr 2,0 mmol), Boc-Lys(2-Cl-Z) (830 mg, 2,0 mmol), Boc-Arg(Tos) (856 mg, 2,0 mmol), Boc-Leu (499 mg, 2,0 mmol), Boc-Lys(2-C1-Z) (830 mg, 2,0 mmol) og Boc-Thr (Bzl) (618 mg, 2,0 mmol) for å gi 2,2 g Boc-oktadekapeptidresin. ;En 0,73 g (0,1 mmol) del av dette resin ble ført gjennom ti koblingscykler, én cyklus med hver av Boc-Tyr(O-Me) (59 mg, 0,2 mmol), Boc-Asn (102 mg, 0,44 mmol), Boc-Asp(OcHx) (126 mg, 0,4 mmol), Boc-Thr(Bzl) ;(124 mg, 0,4 mmol, Boc-Phe (106 mg, 0,4 mmol), Boc-Val (87 mg, 0,4 mmol), Boc-Ala (76 mg, 0,4 mmol), Boc-Asp(OcHx) (126 mg, 0,4 mmol), Boc-Ser(Bzl) (118 mg, 0,4 mmol) og Boc-His(Tos) (164 mg, 0,4 mmol). Peptidresinet ble ført gjennom trinn 1-8 av frem-gangsmnåte 1 og behandlet med 0,5 ml eddiksyreanhydrid i 25 ml 6% DIPEA/metylenklorid i 60 minutter. Resinet ble vasket ved å bruke trinn 10-14 og tørket under vakuum for å gi 0,77 g. ;Dette peptidresin ble deblokkert som i eksempel 3, noe som gav 187 mg grovpeptid. Peptidet ble renset ved gelfiltrering som i eksempel 3 for å gi 131 mg av semirent produkt. Dette materiale ble ytterligere renset ved preparativ HPLC med en lineær gradient på 26-36% buffer B:A, noe som gav 5,3 mg av et hvitt, amorft pulver. Forbindelsen var homogen i HPLC og gav en korrekt aminosyreanalyse. FAB-MS: MH beregnet 3291,8, funnet 3291,7. ;Eksempel 16 ;Fremstilling av Ac- [Glu8,Lys12,Nie17,Ala19,Asp25,Leu26, - ;Lys27'<28>,Ala<29>"<31>]-VIP cyklo (Lys<21>_»Asp<25>) [Ac-(SEQ ID No:42) -NH2] ;Benzhydrylaminresin (1,1 g, 0,5 mmol, 100-200 ASTM mesh, Biomega) ble underkastet fastfasesyntese ved _å bruke fremgangsmåte 1. Tretten koblingscykler ble utført, én cyklus med hver av Boc-Ala (378 mg, 2,0 mmol), Boc-Ala (378 mg, 2,0 mmol), Boc-Ala (378 mg, 2,0 mmol), Boc-Lys(2-Cl-Z) (830 mg, 2,0 mmol), Boc-Lys(2-Cl-Z) (830 mg, 2,0 mmol), Boc-Leu (499 mg, 2,0 mmol), Boc-Asp(OFm) (823 mg, 2,0 mmol), Boc-Asn (511 mg, 2,2 mmol), Boc-Leu (499 mg, 2,0 mmol), Boc-Tyr (2,6-DCB) (881 mg, 2,0 mmol), Boc-Lys (Fmoc) (936 mg, 2,0 mmol), Boc-Lys(2-C1-Z) (830 mg, 2,0 mmol) og Boc-Ala (378 mg, 2,0 mmol). ;Dette resin ble så selektivt deblokkert ved behandling med trinn 1-11 av fremgangsmåte 2 og omsatt med BOP (443 mg, 1,0 mmol) i 20 ml 1% DIPEA/DMF i 2 timer. Kaiser ninhydrinanalyse var negativ. Resinet ble vasket ved å bruke trinn 13-16 av fremgangsmåte 2 og tørket under vakuum for å gi 2,02 g Boc-tridekapeptidresin. ;En 0,8 g (0,2 mmol) del av dette resin ble underkastet fastfasesyntese på en Applied Biosystems modell 43 OA peptidsyntetisator. Seksten koblingscykler ble ut- ført, én cyklus med hver av Boc-Ala (378 mg, 2,0 mmol), Boc-Nle (462 mg, 2,0 mmol), Boc-Gln (493 mg, 2,0 mmol), Boc-Lys(2-C1-Z) (830 mg, 2,0 mmol), Boc-Arg(Tos) (856 mg, 2,0 mmol), Boc-Leu (499 mg, 2,0 mmol), Boc-Lys(2-C1-Z) (830 mg, 2,0 mmol), Boc-Thr(Bzl) (618 mg, 2,0 mmol), Boc-Tyr(2,6-DCB) (880 mg, 2,0 mmol), Boc-Asn (464 mg, 2,0 mmol), Boc-Asp(OcHx) ;(630 mg, 2,0 mmol), Boc-Thr(Bzl) (618 mg, 2,0 mmol), Boc-Phe (531 mg, 2,0 mmol), Boc-Val (435 mg, 2,0 mmol), Boc-Ala (378 mg, 2,0 mmol) og Boc-Asp(OcHx) ;(630 mg, 2,0 mmol) for å gi 1,2 g Boc-nonacosapep-tidresin. ;En 0,6 g (0,1 mmol) del av dette resin ble ført gjennom to koblingscykler som ovenfor med Boc-Ser(Bzl) ;(590 mg, 2,0 mmol) og Boc-His(Tos) (819 mg, 2,0 mmol) for å gi 0,72 g. Dette resin ble så ført gjennom trinn 1-8 av fremgangsmåte 1 og behandlet med 0,5 ntl eddiksyreanhydrid i 20 ml 6% DIPEA/metylenklorid i 60 minutter. Resinet ble vasket ved å bruke trinn 10-14 i fremgangsmåte 1 og tørket under vakuum, som gav 0,645 g- ;Dette peptidresin ble deblokkert som i eksempel 3, og dette gav 280 mg grovpeptid. Peptidet ble renset ved gelfiltrering som i eksempel 3 for å gi 160 mg av halvrent produkt. Dette materiale ble ytterligere renset med preparativ HPLC med en lineær gradient på 22-32% buffer B:A, noe som gav 23,1 mg av et hvitt, amorft pulver. Forbindelsen var homogen i HPLC og gav en korrekt aminosyreanalyse. FAB-MS: MH beregnet 3561,1, funnet 3560,8. ;Eksempel 17 ;Fremstilling av Ac- [Ala<2>, Glu8, Lys12,Nie17, Ala19, Asp25,<L>eu<26>, ;Lys<27>'<28>'Ala<29>'<31>]-VIP cyklo (Lys<21>_^Asp<25>) [Ac- (SEQ ID No:43) -NH2] ;En 0,6 g (0,1 mmol) del av Boc-nonacosapeptidresinet fra eksempel 16 ble ført gjennom to koblingscykler som ovenfor med Boc-Ser(Blz) (590 mg, 2,0 mmol) og Boc-His(Tos) (819 mg, 2,0 mmol), for å gi 0,68 g. Dette resin ble så ført gjennom trinn 1-8 av fremgangsmåte 1 og omsatt med 0,5 ml eddiksyreanhydrid i 25 ml 6% DIPEA/metylenklorid i 60 minutter. Resinet ble vasket ved å bruke trinn 10-14 av fremgangsmåte 1 og tørket under vakuum for å gi 0,56 g. ;Dette peptidresin ble deblokkert som i eksempel 3, noe som gav 160 mg grovpeptid. Peptidet ble renset ved _ gelfiltrering som i eksempel 3 for å gi 70 mg av semirent produkt. Dette materiale ble ytterligere renset ved preparativ HPLC med en lineær gradient på 25-35% buffer B:A, noe som gav 21,8 mg av et hvitt, amorft pulver. Forbindelsen var homogen i HPLC og gav en korrekt aminosyreanalyse. FAB-MS: MH beregnet 3545,1, funnet 3545,3. ;Eksempel 18 ;Fremstilling av Ac- [N-Me-Ala\Glu8,Lys1<2>,Nle1<7>,Ala1<9>,- ;Asp25, Leu26'Lys27,28] -VIP cyklo (Lys<21>_)Asp25)[Ac-(SEQ ID No:44) -NH2] ;En 1,1 g (0,4 mmol) del av Boc-nonapeptidresinet fra eksempel 12 ble underkastet fastfasesyntese på en Applied Biosystems modell 43 OA peptidsyntetisator. Sytten koblingscykler ble utført, én cyklus med hver av Boc-Ala (378 mg, 2,0 mmol), Boc-Ala (378 mg, 2,0 mmol), Boc-Nle (462 mg, 2,0 mmol), Boc-Gln (493 mg, 2,0 mmol), Boc-Lys(2-C1-Z) (830 mg, 2,0 mmol), Boe- Arg(Tos) (856 mg, 2,0 mmol), Boc-Leu (499 mg, 2,0 mmol), Boc-Lys(2-C1-Z) (830 mg, 2,0 mmol) og Boc-Thr (Bzl) (618 mg, 2,0 mmol), Boc-Tyr(2,6-DCB) (880 mg, 2,0 mmol), Boc-Asn (464 mg, 2,0 mmol), Boc-Asp((OcHx) ;(630 mg, 2,0 mmol), Boc-Thr(Bzl) (618 mg, 2,0 mmol), Boc-Phe (531 mg, 2,0 mmol), Boc-Val (435 mg, 2,0 mmol), Boc-Ala (378 mg, 2,0 mmol) og Boc-Asp(OcHx) ;(630 mg, 2,0 mmol) for å gi 2,24 g Boc-heksacosapep-tidresin. ;En 1,1 g (0,2 mmol) del av dette resin ble ført gjennom to koblingscykler, én med Boc-Ser(Bzl) (238 mg, 0,8 mmol) og en med Boc-N-Me-Ala (163 mg, 0,8 mmol) og så ført gjennom trinn 1-8 av fremgangsmåte 1 og behandlet med BOP-Cl (100 mg, 0,2 mmol), eddiksyre (23 ml, 0,2 mmol) og DIPEA (140 ml, 0,4 mmol) i 20 ml DMF i 1 time. Resinet ble vasket ved å bruke trinn 10-14 av fremgangsmåte 1 og tørket under vakuum for å gi 0,95 g. ;Dette peptidresin ble deblokkert som i eksempel 3, noe som gav 245 mg grovpeptid. Peptidet ble renset ved gelfiltrering som i eksempel 3 for å gi 165 mg av semirent produkt. Dette materiale ble ytterligere renset ved preparativ HPLC med en lineær gradient på 25-35% buffer B:A, noe som gav 33,7 mg av et hvitt, amorft pulver. Forbindelsen var homogen i HPLC og gav en korrekt aminosyreanalyse. FAB-MS: MH beregnet 3295,8, funnet 3294,5. ;Eksempel 19 ;Fremstilling av Ac-[p-F-Phe<6>,Glu<8>,Lys<12>,Nle<17>,Ala<19>,Asp<2S>, ;<L>eu26'Lys<27>'<28>]-VIP cyklo (Lys<21>_>Asp<2S>) [Ac-(SEQ ID No:45) - NH2];Benzhydrylaminresin (2,49 g, 2,0 mmol, 100-200 ASTM mesh, Bachem) ble underkastet fastfasesyntese ved å bruke fremgangsmåte 1. Seks koblingscykler ble utført, én cyklus med hver av Boc-Lys(2-Cl-Z) (3,32 g, 8,0 mmol), Boc-Lys(2-C1-Z) (3,32 g, 8,0 mmol), Boc-Leu (1,85 mg, 8,0 mmol), Boc-Asp(OFm) (823 mg, 2,0 mmol), Boc-Asn (1,02 g, 4,4 mmol) og Boc-Leu (1,05 g, 8,0 mmol). Resinet ble tørket og 0,4 mmol fjernet. Tre koblingscykler ble utført, én med hver av Boc-Tyr(2,6-DCB) (2,52 g, 6,4 mmol), Boc-Lys(Fmoc) (1,87 g, 6,4 mmol) og Boc-Lys(2-C1-Z) (2,65 g, 6,4 mmol). ;Dette resin ble så selektivt deblokkert ved behandling med trinn 1-11 av fremgangsmåte 2 og omsatt med BOP (l,42g, 3,2 mmol) i 20 ml 1% DIPEA/DMF i 4,5 time. Kaiser ninhydrinanalyse var negativ. Resinet ble vasket ved å bruke trinn 13-16 av fremgangsmåte 2 og tørket for å gi 6,56 g av Bocnonapeptidresin. ;En 1,64 g (0,4 mmol) del av dette resin ble underkastet fastfasesyntese på en Applied Biosystems modell 43OA peptidsyntetisator. Tretten koblingscykler ble utført, én cyklus med hver av Boc-Ala (378 mg, 2,0 mmol), Boc-Ala (378 mg, 2,0 mmol), Boc-Nle (462 mg, 2,0 mmol), Boc-Gln (493 mg, 2,0 mmol), Boc-Lys (2-C1-Z) ;(830 mg, 2,0 mmol), Boc-Arg(Tos) (856 mg, 2,0 mmol), Boc-Leu (499 mg, 2,0 mmol), Boc-Lys(2-C1-Z) (830 mg, 2,0 mmol), Boc-Thr(Bzl) (618 mg, 2,0 mmol), Boc-Tyr (2,6-DCB) (880 mg, 2,0 mmol), Boc-Asn (464 mg, 2,0 mmol), Boc-Asp(OcHx) (630 mg, 2,0 mmol) og Boc-Thr (Bzl) (618 mg, 2,0 mmol) for å gi 2,56 g Boc-docosapeptidresin. ;En 0,64 g (0,1 mmol) del av dette resin ble ført gjennom seks koblingscykler, én med hver av Boc-p-F-Phe (283 mg, 1,0 mmol), Boc-Val (218 mg, l,0mmol), Boc-Ala (189 mg, 1,0 mmol), Boc-AspOcHx) (315 mg, 1,0 mmol), Boc-Ser(Blz) (295 mg, 1,0 mmol) og Boc-Hos(Tos) ;(818 mg, 2,0 mmol). Peptid-resinet ble ført gjennom trinn 1-8 av fremgangsmåte 1 og behandlet med 0,5 ml eddiksyreanhydrid i 20 ml 6% DIPEA/metylenklorid i 60 minutter. Resinet ble vasket ved å bruke trinn 10-14 i fremgangsmåte 1 og tørket under vakuum, som gav 0,69 g- ;Dette peptidresin ble deblokkert som i eksempel 3, og dette gav 224 mg grovpeptid. Peptidet ble renset ved gelfiltrering som i eksempel 3 for å gi 213 mg av semirent produkt. Dette materiale ble ytterligere renset med preparativ HPLC med en lineær gradient på 27-37% buffer B:A, noe som gav 70,5 mg av et hvitt, amorft pulver. Forbindelsen var homogen i HPLC og gav en korrekt aminosyreanalyse. FAB-MS: MH beregnet 3365,9, funnet 3365,6. ;Eksempel 20 ;Fremstilling av Ac-[1-Nal6,Glu8,Lys12,Nie17, Ala19,Asp25," ;<L>eu26'Lys<27>'<28>] -VIP cyklo (Lys<21>_>Asp25)[Ac-(SEQ ID No:46)-NH2];En 1,28 g (0,2 mmol) del av Boc-docosapetidresinet fra eksempel 19 ble ført gjennom seks koblingscykler som i eksempel 19, bortsett fra at Boc-p-F-Phe i første cyklus ble erstattet med Boc-l-Nal (315 mg, 1,0 mmol). Peptidresinet ble ført gjennom trinn 1-8 av frem-gangsmåte 1 og behandlet med 0,5 ml eddiksyreanhydrid i 20 ml 6% DIPEA/metylenklorid i 60 minutter. Resinet ble vasket ved å bruke trinn 10-14 av fremgangsmåte 1 og tørket under vakuum for å gi 1,41 g. ;Dette peptidresin ble deblokkert som i eksempel 3, noe som gav 420 mg grovpeptid. Peptidet ble renset ved gelfiltrering som i eksempel 3 for å gi 305 mg av semirent produkt. Dette materiale ble ytterligere renset ved preparativ HPLC med en lineær gradient på 25-35% buffer B:A, noe som gav 66,9 mg av et hvitt, amorft pulver. Forbindelsen var homogen i HPLC og gav en korrekt aminosyreanalyse. FAB-MS: MH beregnet 3398,0, funnet 3398,8. ;Eksempel 21 ;Fremstilling av Ac-[Glu<8>,p-NH2-Phe<10>,Lys<12>,Nle<17>,Ala<19>,-Asp25, Leu26'Lys27'28] -VIP cyklo (Lys21_>Asp25)[Ac-(SEQ ID No:47) -NH2] ;En 1,64 g (0,4 mmol) del av Boc-nonapetidresinet fra eksempel 19 ble underkastet fastfasesyntese på en Applied Biosystems modell 43OA peptidsyntetisator. ;Ni koblingscykler ble foretatt, én cyklus av hver av Boc-Ala (378 mg, 2,0 mmol), Boc-Ala (378 mg, 2,0 mmol), Boc-Nle (462 mg, 2,0 mmol), Boc-Gln (493 mg, 2.0 mmol), Boc-Lys(2-C1-Z) (830 mg, 2,0 mmol), Boc-Arg(Tos) (856 mg, 2,0 mmol), Boc-Leu (499 mg, 2,0 mmol), Boc-Lys(2-C1-Z) (830 mg, 2,0 mmol) og Boc-Thr (Bzl) (618 mg, 2,0 mmol) for å gi 2,2 g Boc-oktadekapeptidresin. ;1.1 g (0,2 mmol) av dette resin ble ført gjennom ti koblingscykler, én med hver av Boc-p-NH(CBZ)-Phe (415 mg, 1,0 mmol), Boc-Asn (512 mg, 2,2 mmol), Boc-Glu(Bzl) (675 mg, 2,0 mmol), Boc-Thr(Bzl) (620 mg, 2,0 mmol), Boc-Phe (532 mg, 2,0 mmol), Boc-Val (436 mg, 2,0 mmol), Boc-Ala (378 mg, 2,0 mmol), Boc-Asp (OcHx) ;(630 mg, 2,0 mmol), Boc-Ser(Blz) (590 mg, 2,0 mmol) og Boc-His(Tos) (1,64 g, 4,0 mmol). Peptidresinet ble ført gjennom trinn 1-8 av fremgangsmåte 1 og behandlet med 0,5 ml eddiksyreanhydrid i 20 ml 6% DIPEA/metylenklorid i 60 minutter. Resinet ble vasket ved å bruke trinn 10-14 av fremgangsmåte 1 og tørket under vakuum for å gi 1,45 g. ;Dette peptidresin ble deblokkert som i eksempel 3, noe som gav 580 mg grovpeptid. Peptidet ble renset ved gelf iltrering som i eksempel 3 for å gi 400 mg av semirent produkt. Dette materiale ble ytterligere renset ved preparativ HPLC med en lineær gradient på 22-32% buffer B:A, noe som gav 60,9 mg av et hvitt, amorft pulver. Forbindelsen var homogen i HPLC og gav en korrekt aminosyreanalyse. FAB-MS: MH beregnet 3346,9, funnet 3346,8. ;Eksempel 22 ;Fremstilling av Ac- [Glu8,O-Me-Tyr10,Lys12,Nle17, Ala19, - ;Asp<25>,Leu<2>6'Lys2<7>'<28>]-VIP cyklo (Lys<21>_»Asp<25>) [Ac-(SEQ ID No:48) -NH2] ;En 1,1 g (0,2 mmol) del av Boc-oktadekapeptidresinet fra eksempel 21 ble ført gjennom ti koblingscykler som i eksempel 21, bortsett fra at Boc-p-NH(CBS)-Phe i første cyklus ble erstattet med Boc-O-Me-Tyr (148 mg, 0,5 mmol). Peptidresinet ble ført gjennom trinn 1-8 av fremgangsmåte 1 og behandlet med 0,5 ml eddiksyreanhydrid i 20 ml 6% DIPEA/metylenklorid i 60 minutter. Resinet ble vasket ved å bruke trinn 10-14 av frem-gangsmåte 1 og tørket under vakuum for å gi 1,45 g. ;Dette peptidresin ble deblokkert som i eksempel 3, noe som gav 555 mg grovpeptid. Peptidet ble renset ved gelfiltrering som i eksempel 3 for å gi 460 mg av semirent produkt. Dette materiale ble ytterligere renset ved preparativ HPLC med en lineær gradient på 25-35% buffer B:A, noe som gav 152,9 mg av et hvitt, amorft pulver. Forbindelsen var homogen i HPLC og gav en korrekt aminosyreanalyse. FAB-MS: MH beregnet 3361,9, funnet 3361,7. ;Eksempel 23 ;Fremstilling av Ac- [p-F-Phe6,Lys12,Nle17,Ala15, - ;Asp2S, Val26'Thr'28] -VIP cyklo (Lys<21>_>Asp25)[Ac-(SEQ ID No:49) -NH2] ;En 1,2 g (0,2 mmol) del av Boc-nonapeptidresinet fra eksempel 9 ble underkastet fastfasesyntese på en Applied Biosystems modell 430A peptidsyntetisator. Tretten koblingscykler ble foretatt, én cyklus av hver av Boc-Ala (378 mg, 2,0 mmol), Boc-Ala (378 mg, 2,0 mmol), Boc-Nle (462 mg, 2,0 mmol), Boc-Gln (493 mg, 2,0 mmol), Boc-Lys(2-C1-Z) (830 mg, 2,0 mmol), Boe-Arg(Tos) (856 mg, 2,0 mmol), Boc-Leu (499 mg, 2,0 mmol), Boc-Lys(2-C1-Z) (830 mg, 2,0 mmol), Boc-Thr(Bzl) (618 mg, 2,0 mmol), Boc-Tyr(2,6-DCB) (880 .mg, 2,0 mmol), Boc-Asn (464 mg, 2,0 mmol), Boc-Asp (OcHx) ;(630 mg, 2,0 mmol) og Boc-Thr(Bzl) (618 mg, 2,0 mmol) for å gi 1,3 g Boc-docosapeptidresin. ;En 0,65 g (0,1 mmol) del av dette resin ble ført gjennom seks koblingscykler som i eksempel 19. Peptidresinet ble ført gjennom trinn 1-8 av frem-gangsmåte 1 og behandlet med 0,5 ml eddiksyreanhydrid i 20 ml 6% DIPEA/metylenklorid i 60 minutter. Resinet ble vasket ved å bruke trinn 10-14 av fremgangsmåte 1 og tørket under vakuum for å gi 0,850 g. ;Dette peptidresin ble deblokkert som i eksempel 3, noe som gav 550 mg grovpeptid. Peptidet ble renset ved gelfiltrering som i eksempel 3 for å gi 225 mg av semirent produkt. Dette materiale ble ytterligere renset ved preparativ HPLC med en lineær gradient på 27-37% buffer B:A, noe som gav 80,9 mg av et hvitt, amorft pulver. Forbindelsen var homogen i HPLC og gav en korrekt aminosyreanalyse. FAB-MS: MH beregnet 3295,7, funnet 3296,2. ;Eksempel 24 ;Fremstilling av Ac- [1 -Nal6,Lys12,Nie17,Ala19,Asp25,Val26'-Thr<28>]-VIP cyklo (Lys<21>_>Asp<25>) [Ac-(SEQ ID No:50)-NH2] ;0,65 g (0,1 mmol) del av Boc-docosapeptidresinet fra eksempel 23 ble ført gjennom seks koblingscykler som i eksempel 19, bortsett fra at Boc-p-F-Phe i første cyklus ble erstattet med Boc-l-Nal (315 mg, 1,0 mmol). Peptidresinet ble ført gjennom trinn 1-8 av frem-gangsmåte 1 og behandlet med 0,5 ml eddiksyreanhydrid i 20 ml 6% DIPEA/metylenklorid i 60 minutter. Resinet ble vasket ved å bruke trinn 10-14 av fremgangsmåte 1 og tørket under vakuum for å gi 0,801 g. ;Dette peptidresin ble deblokkert som i eksempel 3, noe som gav 250 mg grovpeptid. Peptidet ble renset ved gelfiltrering som i eksempel 3 for å gi 188 mg av semirent produkt. Dette materiale ble ytterligere renset ved preparativ HPLC med en lineær gradient på 27-37% buffer B:A, noe som gav 28,0 mg av et hvitt, amorft pulver. Forbindelsen var homogen i HPLC og gav en korrekt aminosyreanalyse. FAB-MS: MH beregnet 3327,8, funnet 3328,5. ;Eksempel 25 ;Fremstilling av Ac- [Ala2,Glu<8>, Lys<12>, Nie<17>, Ala<19>, Asp<25>," ;Leu26'Lys27,28,Gly29,30,Thr31] -VIP cyklo (Lys<21>_»Asp2S);[Ac-(SEQ ID No:51)-NH2];Benzhydrylaminresin (1,1 g, 0,5 mmol, 100-200 ASTM mesh, Biomega) ble underkastet fastfasesyntese ved å bruke fremgangsmåte 1. Tretten koblingscykler ble utført som i eksempel 16, bortsett fra at Boc-Ala i første cyklus ble erstattet med Boc-Thr(Bzl) (619 mg, 2,0 mmol), Boc-Ala i andre cyklus ble erstattet med Boc-Gly (350 mg, 2,0 mmol) og Boc-Ala i tredje cyklus ble erstattet med Boc-Gly (350 mg, 2,0 mmol) for å gi 2,03 g av Boc-tridekapeptidresin. ;En 1,22 g (0,3 mmol) del av dette resin ble underkastet fastfasesyntese på en Applied Biosystems modell 430A peptidsyntetisator. Det ble utført seksten koblingscykler somm i eksempel 16, bortsett fra at Boc-Asp(OcHx) i ellevte cyklus ble erstattet med Boc-Glu(Bzl) (675 mg, 2,0 mmol) for å gi 1,95 g av Boc-nonacosapeptidresin. ;En 0,975 g (0,15 mmol) del av dette resin ble ført gjennom to koblingscykler som ovenfor med Boc-Ala (378 mg, 2,0 mmol) og Boc-His(Tos) (819 mg, 2,0 mmol) for å gi 1.05 g. Dette resin ble så ført gjennom trinn 1-8 av fremgangsmåte 1 og behandlet med 0,5 ml eddiksyreanhydrid i 20 ml 6% DIPEA/metylenklorid i 60 min. Resinet ble vasket ved å bruke trinn 10-14 i frem-gangsmåte 1 og tørket under vakuum, som gav 0,897 g. ;Dette peptidresin ble deblokkert som i eksempel 3, og dette gav 270 mg grovpeptid. Peptidet ble renset ved gelfiltrering om i eksempel 3 for å gi 150 mg av semirent produkt. Dette materiale ble ytterligere renset med preparativ HPLC med en lineær gradient på 24-34% buffer B:A, noe som gav 28,7 mg av et hvitt, amorft pulver. Forbindelsen var homogen i HPLC og gav en korrekt aminosyreanalyse. FAB-MS: MH beregnet 3547,1, funnet 3546,9. ;Eksempel 26 ;Fremstilling av Ac- [Glu<8>, Lys12,Nie17,Ala19, Asp25, Leu26, - ;Lys<27>'<28>,Gly<29>'<30>,Thr<31>]-VIP cyklo (Lys<21>_»Asp<25>) ;[Ac-(SEQ ID No:52)-NH2];En 0,975 g (0,15 mmol) del av Boc-nonacosapeptidresinet fra eksempel 25 ble ført gjennom to koblingscykler som i eksempel 25, bortsett fra at Boc-Ala i første cyklus ble erstattet med Boc-Ser(Bzl) (590 mg, 2,0 mmol) for å gi 0,915 g. ;Dette peptidresin ble deblokkert som i eksempel 3, og dette gav 303 mg grovpeptid. Peptidet ble renset ved gelfiltrering som i eksempel 3 for å gi 180 mg av semirent produkt. Dette materiale ble ytterligere renset med preparativ HPLC med en lineær gradient på 25-35% buffer B:A, noe som gav 42,8 mg av et hvitt, amorft pulver. Forbindelsen var homogen i HPLC og gav en korrekt aminosyreanalyse. FAB-MS: MH beregnet 3563,1, funnet 3562,6. ;Eksempel 27 ;Fremstilling av Ac-[Ala<2>,Glu<8>,Lys<12>,Nie17,Ala<19>,Asp<25>,' ;<L>eu26'Lys<27>'<2>8] -VIP cyklo (Lys<21>_^Asp25)[Ac-(SEQ ID No:53)-NH2];En 0,27 g (0,1 mmol) del av Boc-nonapeptidresinet fra eksempel 12 ble underkastet fastfasesyntese på en Applied Biosystems modell 430A peptidsyntetisator. Nitten koblingscykler ble utført, én cyklus med hver av Boc-Ala (378 mg, 2,0 mmol), Boc-Ala (378 mg, 2,0 mmol), Boc-Nle (462 mg, 2,0 mmol), Boc-Gln (493 mg, 2,0 mmol), Boc-Lys(2-Cl-Z) (830 mg, 2,0 mmol), Boc-Arg(Tos) (856 mg, 2,0 mmol), Boc-Leu (499 mg, 2,0 mmol), Boc-Lys(2-C1-Z) (830 mg, 2,0 mmol), Boc-Thr(Bzl) (618 mg, 2,0 mmol), Boc-Tyr(2,6-DCB) (880 mg, 2,0 mmol), Boc-Asn (464 mg, 2,0 mmol), Boc-Glu(Bzl) ;(675 mg, 2,0 mmol), Boc-Thr(Bzl) (618 mg, 2,0 mmol), Boc-Phe (531 mg, 2,0 mmol), Boc-Val (435 mg, 1,0 mmol), Boc-Ala (378 mg, 2,0 mmol), Boc-Asp (OcHx) (630 mg, 2,0 mmol), Boc-Ser(Bzl) (590 mg, 2,0 mmol) og Boc-His(Tos (818 mg, 2,0 mmol) for å gi 0,57 g Boc-oktacosapeptidresin. ;Resinet ble så ført gjennom trinnene 1-8 i fremgangsmåte 1 og behandlet med 0,5 ml eddiksyreanhydrid i 20 ml 6% DIPEA/metylenklorid i 60 minutter. Resinet ble vasket ved å bruke trinn 10-14 av fremgangsmåte 1 og tørket under vakuum for å gi 0,506 g. ;Dette peptidresin ble deblokkert som i eksempel 3, og dette gav 160 mg grovpeptid. Peptidet ble renset ved gelfiltrering som i eksempel 3 for å gi100 mg av semirent produkt. Dette materiale ble ytterligere renset med preparativ HPLC med en lineær gradient på 25-35% buffer B:A noe som gav 17,1 mg av et hvitt, amorft pulver. Forbindelsen var homogen i HPLC og gav en korrekt aminosyreanalyse. FAB-MS: MH beregnet 3331,9, funnet 3332,0. ;Eksempel 28 ;Fremstilling av Ac-[p-NH2-Phe10,Lys12,Nle<17>,Ala<19>,Asp<2S>, ;Val26'Thr<28>]-VIP cyklo (Lys<21>_»Asp<2s>) [Ac-(SEQ ID No: 54)-NH2];En 0,6 g (0,1 mmol) del av Boc-nonapeptidresinet fra eksempel 9 ble underkastet fastfasesyntese på en Applied Biosystems modell 430A peptidsyntetisator. ;Ni koblingscykler ble utført som i eksempel 23, for å gi 0,72 g Boc-oktadekapeptidresin. Dette resin ble ført gjennom én koblingscyklus med Boc-p-NH (CBZ)-Phe (166 mg, 0,4 mmol) for å gi 0,79 g av Boc-nonadeka-peptidresin. Dette resin ble underkastet fastfasesyn tese på en Applied Biosystems modell 43OA peptidsyntetisator. Det ble utført ni koblingscykler som i eksempel 23, som gav 0,72 g Boc-okta-dekapeptidresin. Dette resin ble underkastet fastfasesyntese på en Applied Biosystems modell 43OA peptidsyntetisator. Ni koblingscykler ble utført, én cyklus med hver avBoc-Asn (464 mg, 2,0 mmol), Boc-Asp (OcHx) (630 mg, 2,0 mmol), Boc-Thr(Bzl) (618 mg, 2,0 mmol), Boc-Phe (531 mg, 2,0 mmol), Boc-Val (435 mg, 2,0 mmol), Boc-Ala (378 mg, 2,0 mmol), Boc-Asp(OcHx) (630 mg, 2,0 mmol), Boc-Ser(Bzl) (590 mg, 2,0 mmol) og Boc-His(Tos) (819 mg, 2,0 mmol) for å gi 0,91 g. Dette resin ble så ført gjennom trinnene 1-8 i fremgangsmåte 1 og behandlet med 0,5 ml eddiksyreanhydrid i 20 ml 6% DIPEA/metylenklorid i 60 minutter. Resinet ble vasket ved å bruke trinn 10-14 av fremgangsmåte 1 og tørket under vakuum for å gi 0,85 g. ;Dette peptidresin ble deblokkert som i eksempel 3, og dette gav 350 mg grovpeptid. Peptidet ble renset ved gelfiltrering som i eksempel 3 for å gi 138 mg av semirent produkt. Dette materiale ble ytterligere renset med preparativ HPLC med en lineær gradient på 25-35% buffer B:A, noe som gav 25,2 mg av et hvitt, amorft pulver. Forbindelsen var homogen i HPLC og gav en korrekt aminosyreanalyse. FAB-MS: MH beregnet 3276,8 funnet 3276,2. ;Eksempel 29 ;Fremstilling av Ac- [Lys12,Nie17, Ala19,m-OGH3-Tyr22,Asp25," ;<v>al<26>'Thr<281->VIP cyklo (Lys<21>_»Asp<25>) [Ac-(SEQ ID No:55)-N<H>2<]>;Benzhydrylaminresin (0,125 g, 0,1 mmol, 100-200 ASTM mesh, Bachem) ble underkastet fastfasesyntese ved å bruke fremgangsmåte 1. Ni koblingscykler ble utført, en cyklus hver med Boc-Thr (Bzl) (310 mg, 1,0 mmol), Boc-Leu (267 mg, 1,0 mmol), Boc-Val (217 mg, 1,0 mmol), Boc-Asp(OFm) 212 mg, 0,5 mmol), Boc-Asn (255 mg, 1,1 mmol), Boc-Leu (249 mg, 1,0 mmol), Boc-m-0GH3-Tyr(Bzl) (80 mg, 0,2 mmol), Boc-Lys (Fmoc) (234 mg, 0,5 mmol) og Boc-Lys(2-C1-Z) (415 mg, 1,0 mmol). ;Dette resin ble så selektivt deblokkert ved å behandle med trinnene 1-11 i fremgangsmåte 2 og omsette med BOP (132 mg, 0,3 mmol) i 10 ml DIPEA/DMF i 3,5 time. Kaiser ninhydrinanalyse var negativ. Resinet ble vasket ved å bruke trinnene 13-16 i fremgangsmåte 2. ;Nitten koblingscykler ble utført, én cyklus med hver av Boc-Ala (189 mg, 1,0 mmol), Boc-Ala (189 mg, 1,0 mmol), Boc-Nle (231 mg, 1,0 mmol), Boc-Gln (270 mg, 1,1 mmol), Boc-Lys(2-Cl-Z) (415 mg, 1,0 mmol), Boc-Arg(Tos) (428 mg, 1,0 mmol), Boc-Leu (267 mg, 1,0 mmol), Boc-Lys(2-Cl-Z) (415 mg, 1,0 mmol), Boc-Thr(Bzl) (310 mg, 1,0 mmol), Boc-Tyr (2,6-DCB) (220 mg, 0,5 mmol), Boc-Asn (256 mg, 1,0 mmol), Boc-Asp (OcHx) ;(315 mg, 1,0 mmol), Boc-Thr(Bzl) (310 mg, 1,0 mmol), Boc-Phe (265 mg, 1,0 mmol), Boc-Val (217 mg, 1,0 mmol), Boc-Ala (189 mg, 1,0 mmol), Boc-Asp (OcHx) (315 mg, 1,0 mmol), . Boc-Ser(Bzl) (295 mg, 1,0 mmol) og Boc-His(Tos (409 mg, 1,0 mmol). ;Dette resin ble så ført gjennom trinn 1-8 av frem-gangsmåte 1 og behandlet med 0,5 ml eddiksyreanhydrid i 10 ml 6% DIPEA/metylenklorid i 60 minutter. Resinet ble vasket ved å bruke trinn 10-14 av fremgangsmåte 1 og tørket under vakuum for å gi 0,814 g. ;Dette peptidresin ble deblokkert som i eksempel 3, og dette gav 265 mg grovpeptid. Peptidet ble renset ved gelfiltrering som i eksempel 3 for å gi 150 mg av semirent produkt. Dette materiale ble ytterligere renset med preparativ HPLC med en lineær gradient på 23-33% buffer B:A, noe som gav 8,1 mg av et hvitt, amorft pulver. Forbindelsen var homogen i HPLC og gav en korrekt aminosyreanalyse. FAB-MS: MH beregnet 3307,8, funnet 3306,8. ;Eksempel 30 ;Fremstilling av Ac- [Lys12,Nie17,Ala19,m-F-L-Tyr22,Asp25, - ;Val<26>,Thr<28>]-VIP cyklo (Lys<21_>»Asp<2S>) [Ac-(SEQ ID No: 56)-NH2];Benzhydrylaminresin (0,125 g, 0,1 mmol, 100-200 ASTM mesh, Bachem) ble underkastet fastfasesyntese ved å bruke fremgangsmåte 1. Tjueåtte koblingscykler ble utført som i eksempel 29, bortsett fra at Boc-m-OCH3-Tyr(Bzl) i syvende cyklus ble erstattet med Boc-m-F-DL-Tyr(Bzl) (78 mg, 0,2 mmol) for å gi 0,754 g. ;Dette peptidresin ble deblokkert som i eksempel 3, og dette gav 254 mg grovpeptid. Peptidet ble renset ved gelfiltrering som i eksempel 3 for å gi 114 mg av semirent produkt. Dette materiale ble ytterligere renset med preparativ HPLC med en lineær gradient på 27-37% buffer B:A, noe som gav 15,1 mg av et hvitt, amorft pulver. Forbindelsen var homogen i HPLC og gav en korrekt aminosyreanalyse. FAB-MS: MH beregnet 3295,7, funnet 3295,5. ;Eksempel 31 ;Fremstilling av Ac- [Glu8,Lys12,Nle17,Ala19,m-OGH3-Tyr22, ;Asp<25>,Leu<26>,Lys<27>,<2>8]-VIP cyklo (Lys<21>_»Asp<25>) [Ac-(SEQ ID No: 57)-NH2] ;Benzhydrylaminresin (0,125 g, 0,1 mmol, 100-200 ASTM mesh, Bachem) ble underkastet fastfasesyntese ved å bruke fremgangsmåte 1. Tjueåtte koblingscykler ble utført som i eksempel 37, bortsett fra at Boc-Thr(Bzl) første cyklus ble erstattet med Boc-Lys(2-C1-Z) (415 mg, 1,0 mmol), Boc-Leu i andre cyklus ble erstattet med Boc-Lys(2-C1-Z) (415 mg, 1,0 mmol), Boc-Val i tredje cyklus ble erstattet med Boc-Leu (268 mg, 1,0 mmol) og Boc-Asp (OcHx) i tjueførste cyklus ble erstattet med Boc-Glu(O-Bzl) (337 mg, 1,0 mmol) for å gi 0,90 g. ;Dette peptidresin ble deblokkert som i eksempel 3, og dette gav 270 mg grovpeptid. Peptidet ble renset ved gelfiltrering som i eksempel 3 for å gi 155 mg av semirent produkt. Dette materiale ble ytterligere renset med preparativ HPLC buffer B:A med en lineær gradient på 25-35%, noe som gav 29,6 mg av et hvitt, amorft pulver. Forbindelsen var homogen i HPLC og gav en korrekt aminosyreanalyse. FAB-MS: MH beregnet 3377,9, funnet 3377,9. ;Eksempel 32 ;Fremstilling av Ac- [Glu8,Lys12,Nie17,Ala19,m-F-L-Tyr22, ;Asp25,Leu26,Lys27'28] -VIP cyklo (Lys<21>_»Asp<25>) [Ac-(SEQ ID No: 58)-NH2] ;Benzhydrylaminresin (0,125 g, 0,1 mmol, 100-200 ASTM mesh, Bachem) ble underkastet fastfasesyntese ved å bruke fremgangsmåte 1. Tjueåtte koblingscykler ble foretatt som i eksempel 31, bortsett fra at Boc-m-0GH3-Tyr(Bzl) i den syvende cyklus ble erstattet med Boc-m-F-DL-Tyr(Bzl) (78 mg, 0,2 mmol) for å gi 0,83 g. ;Dette peptidresin ble deblokkert som i eksempel 3, og dette gav 240 mg grovpeptid. Peptidet ble renset ved gelfiltrering som i eksempel 3 for å gi 100 mg av semirent produkt. Dette materiale ble ytterligere renset med preparativ HPLC med en lineær gradient på 25-35% buffer B:A, noe som gav 37,2 mg av et hvitt, amorft pulver. Denne forbindelse var homogen i HPLC og gav en korrekt aminosyreanalyse. FAB-MS: MH beregnet 3365,9, funnet 3365,8. ;Eksempel 33 ;Fremstilling av Ac-[Ala<8>,Lys<12>,Nie<17>,Ala<19>,Ala24,Asp<25>, ;Leu<26>,Lys<27>'<28>]-VIP cyklo (Lys<21>_>Asp2S)[Ac-(SEQ ID No: 59) -NH2] ;Benzhydrylaminresin (0,125 g, 0,1 mmol, 100-200 ASTM mesh, Bachem) ble underkastet fastfasesyntese ved å bruke fremgangsmåte 1. Tjueåtte koblingscykler ble foretatt som i eksempel 31, bortsett fra at Boc-Asn i femte cyklus ble erstattet med Boc-Ala (189 mg, 1,0 mmol), Boc-m-OCH3-Tyr(Bzl) i syvende cyklus ble erstattet med Boc-Tyr (2,6-DCB) (440 mg, 1,0 mmol) og Boc-Glu(OBzl) i tjueførste cyklus ble erstattet med Boc-Ala (189 mg, 1,0 mmol) for å gi 0,85 g. ;Dette peptidresin ble deblokkert som i eksempel 3, og dette gav 255 mg grovpeptid. Peptidet ble renset ved gelfiltrering som i eksempel 3 for å gi 112 mg av semirent produkt. Dette materiale ble ytterligere renset med preparativ HPLC med en lineær gradient på 25-35% buffer B:A, noe som gav 12,0 mg av et hvitt, amorft pulver. Forbindelse var homogen i HPLC og gav en korrekt aminosyreanalyse. FAB-MS: MH beregnet 3246,8, funnet 3246,7. ;Eksempel 34 ;Fremstilling av Ac-[Glu<8>,Lys<12>,Ala<16>'<17>,<19>,Asp<25>,Leu<26>, ;Lys<27>,<2>8]-VI<P>cyklo (Lys<21>_>Asp<25>) [Ac-(SEQ ID No: 60)-NH2] ;Benzhydrylaminresin (0,125 g, 0,1 mmol, 100-200 ASTM mesh, Bachem) ble underkastet fastfasesyntese ved å bruke fremgangsmåte 1. Tjueåtte koblingscykler ble utført som i eksempel 33, bortsett fra at Boc-Ala i femte cyklus ble erstattet med Boc-Asn (256 mg, 1,0 mmol) , Boe-Nie i tolvte cyklus ble erstattet med Boc-Ala (189 mg, 1,0 mmol), Boc-Gln i trettende cyklus ble erstattet med Boc-Ala (189 mg, 1,0 mmol) og Boc-Ala i tjueførste cyklus ble erstattet med Boc-Glu(OBzl) (337 mg, 1,0 mmol) for å gi 0,80 g. ;Dette peptidresin ble deblokkert som i eksempel 3 og gav 254 mg grovpeptid. Peptidet ble renset ved gelfiltrering som i eksempel 3 for å gi 115 mg av semirent produkt. Dette materiale ble ytterligere renset med preparativ HPLC med en lineær gradient på 20-30% Buffer B:A, noe som gav 32,1 mg av et hvitt, amorft pulver. Forbindelse var homogen i HPLC og gav en korrekt aminosyreanalyse. FAB-MS: MH beregnet 3248,7, funnet 3248,3. ;Eksempel 35 ;Fremstilling av Ac-[Ala<8>,Lys<12>,Ala<16>,Nie<17>,Ala<19>,Ala<24>, ;Asp<25>,Leu26,Lys<27>'<28>]-VIP cyklo (Lys^-^Asp<25>) [Ac-(SEQ ID No: 61)-NH2] ;Benzhydrylaminresin (0,125 g, 0,1 mmol, 100-200 ASTM mesh, Bachem) ble underkastet fastfasesyntese ved å bruke fremgangsmåte 1. Tjueåtte koblingscykler ble utført som i eksempel 33, bortsett fra at Boc-Gln i trettende cyklus ble erstattet med Boc-Ala (189 mg, 1,0 mmol), for å gi 0.93 g. ;Dette peptidresin ble deblokkert som i eksempel 3 og gav 250 mg grovpeptid. Peptidet ble renset ved gelfiltrering som i eksempel 3 for å gi 100 mg av semirent produkt. Dette materiale ble ytterligere renset med preparativ HPLC med en lineær gradient på 27-37% buffer B:A noe som gav 23,6 mg av et hvitt, amorft pulver. Forbindelsen var homogen i HPLC og gav en korrekt aminosyreanalyse. FAB-MS: MH beregnet 3189,8, funnet 3189,9. ;Eksempel 36 ;Fremstilling av Ac-[Ala<8>,Lys<12>,Ala<16>'<17>'<19>,Ala<24>, ;Asp<25>,Leu<26>,Lys<27>'<28>]-VIP cyklo (Lys<21>_>Asp<2s>) [Ac-(SEQ ID No: 62)-NH2] ;Benzhydrylaminresin (0,125 g, 0,1 mmol, 100-200 ASTM mesh, Bachem) ble underkastet fastfasesyntese ved å bruke fremgangsmåte 1. Tjueåtte koblingscykler ble utført som i eksempel 35, bortsett fra at Boc-Nle i tolvte cyklus ble erstattet med Boc-Ala (189 mg, 1,0 mmol), for å gi 0.762 g. ;Dette peptidresin ble deblokkert som i eksempel 3 og gav 240 mg grovpeptid. Peptidet ble renset ved gelfiltrering som i eksempel 3 for å gi 150 mg av semirent produkt. Dette materiale ble ytterligere renset med preparativ HPLC med en lineær gradient på ;22-32% buffer B:A, dette gav 53,3 mg av et hvitt, amorft pulver. Forbindelsen var homogen i HPLC og gav en korrekt aminosyreanalyse. FAB-MS: MH beregnet 3147,7 funnet 3148,0. ;Eksempel 37 ;Fremstilling av Ac-[Glu<8>,Lys<12>,Ala<16>,Nie17,Ala<19>,Asp<25>, ;Leu<26>,Lys<27>'<28>]-VIP cyklo (Lys21_»Asp25) [Ac-(SEQ ID No: 63) -NH2] ;Benzhydrylaminresin (0,125 g, 0,1 mmol, 100-200 ASTM mesh,Bachem) ble underkastet fastfasesyntese ved å bruke fremgangsmåte 1. Tjueåtte koblingscykler ble utført som i eksempel 34, bortsett fra at Boc-Ala i tolvte cyklus ble erstattet med Boc-Nle (231 mg, 1,0 mmol), for å gi 0.775 g. ;Dette peptidresin ble deblokkert som i eksempel 3 og gav 203 mg grovpeptid. Peptidet ble renset ved gelfiltrering som i eksempel 3 for å gi 100 mg av semirent produkt. Dette materiale ble ytterligere renset med preparativ HPLC med en lineær gradient på 27-37% buffer B:A, og dette gav 40,0 mg av et hvitt, amorft pulver. Forbindelsen var homogen i HPLC og gav en korrekt aminosyreanalyse. FAB-MS: MH beregnet 3290,8, funnet 3290,5. ;Eksempel 38 ;Fremstilling av Ac-[Glu<8>,Lys<12>,Ala16,17'19,Ala<24>,Asp<25>, ;Leu<2>6,Lys2<7>'<28>]-VIP cyklo (Lys<21>_»Asp<25>) [Ac-(SEQ ID ;No: 64) -NH2] ;Benzhydrylaminresin (0,125 g, 0,1 mmol, 100-200 ASTM mesh, Bachem) ble underkastet fastfasesyntese ved å bruke fremgangsmåte 1. Tjueåtte koblingscykler ble utført som i eksempel 35, bortsett fra at Boc-Ala i tjueførste cyklus ble erstattet med Boc-Glu(OBzl) (337 mg, 1,0 mmol), for å gi 0.837 g. ;Dette peptidresin ble deblokkert som i eksempel 3 og gav 178 mg grovpeptid. Peptidet ble renset ved gelfiltrering som i eksempel 3 for å gi 126 mg av semirent produkt. Dette materiale ble ytterligere renset med preparativ HPLC med en lineær gradient på 20-30% buffer B:A, for å gi 24,9 mg av et hvitt, amorft pulver. Forbindelsen var homogen i HPLC og gav en korrekt aminosyreanalyse. FAB-MS: MH beregnet 3205,7, funnet 3205,2. ;Eksempel 39 ;Fremstilling av Ac-[Glu8,Lys12,Nie17'Ala19,Asp25,Leu26, - ;Thr<28>,Gly<29>'<30>,Thr<31>]-VIP cyklo (Lys21_»Asp<25>) [Ac-(SEQ ID No: 65)-NH2] ;Benzhydrylaminresin (0,125 g, 0,1 mmol, 100-200 ASTM mesh, Bachem) ble underkastet fastfasesyntese ved å bruke fremgangsmåte 1. Tre koblingscykler ble utført, én cyklus hver med Boc-Thr(Bzl) (310 mg, 1,0 mmol), Boc-Gly (175 mg, 1,0 mmol) og Boc-Gly (175 mg, 1,0 mmol). Tjueåtte koblingscykler ble utført som i eksempel 29, bortsett fra at Boc-m-OCH3-Tyr(Bzl) i sjuende cyklus ble erstattet med Boc-Tyr(2,6-DCB) (440 mg, 1,0 mmol), og Boc-Asp(OcHx) i tjueførste cyklus ble erstattet med Boc-Glu(O-Bzl) (337 mg, 1,0 mmol) for å gi 0,895 g. ;Dette peptidresin ble deblokkert som i eksempel 3 og gav 440 mg grovpeptid. Peptidet ble renset ved gelfiltrering som i eksempel 3 for å gi 120 mg av semirent produkt. Dette materiale ble ytterligere renset med preparativ HPLC med en lineær gradient på 25-35% buffer B:A, for å gi 27,7 mg av et hvitt, amorft pulver. Forbindelsen var homogen i HPLC og gav en korrekt aminosyreanalyse. FAB-MS: MH beregnet 3506,9, funnet 3205,8. ;Eksempel 40 ;Fremstilling av Ac- [p-F-Phe6, Glu8, Lys12, Nie17,Asp25,Val-26,Thr28,Gly29'30,Thr31] -VIP cyklo (Lys<21>_»Asp<25>) [Ac-(SEQ ID No: 66)-NH2] ;Benzhydrylaminresin (0,125 g, 0,1 mmol, 100-200 ASTM mesh, Bachem) ble underkastet fastfasesyntese ved å bruke fremgangsmåte 1. Trettien koblingscykler ble utført som i eksempel 39, bortsett fra at Boc-Ala i trettende cyklus ble erstattet med Boc-Val (217 mg, 1,0 mmol), og Boc-Phe i tjuesjette cyklus ble erstattet med Boc-p-F-Phe (142 mg, 0,5 mmol) for å gi 0,754 g- ;Dette peptidresin ble deblokkert som i eksempel 3 og gav 280 mg grovpeptid. Peptidet ble renset ved gelfiltrering som i eksempel 3 for å gi 152 mg av semirent produkt. Dette materiale ble ytterligere renset med preparativ HPLC med en lineær gradient på 27-38% buffer B:A, for å gi 53,4 mg av et hvitt, amorft pulver. Forbindelsen var homogen i HPLC og gav en korrekt aminosyreanalyse. FAB-MS: MH beregnet 3553,0, funnet 3552,2. ;Eksempel 41 ;Fremstilling av Ac - [Ala<2>, Glu8, Lys12, Nie17, Asp25, Leu26, - ;Lys27'2<8>,Gly<29>,<30>,Thr31]-VIP cyklo (Lys<21>_»Asp<2S>) [Ac-(SEQ ID No: 67)-NH2] ;Benzhydrylaminresin (0,125 g, 0,1 mmol, 100-200 ASTM mesh, Bachem) ble underkastet fastfasesyntese ved å bruke fremgangsmåte 1. Trettien koblingscykler ble utført som i eksempel 39, bortsett fra at Boc-Thr (Bzl) i fjerde cyklus ble erstattet med Boc-Lys(2-C1-Z) (414 mg, 1,0 mmol), Boc-Leu i femte cyklus ble erstattet med Boc-Lys(2-C1-Z) (414 mg, 1,0 mmol), Boc-Val i sjette cyklus ble ertattet med Boc-Leu (249 mg, 1,0 mmol), Boc-Ala i trettende cyklus ble erstattet med Boc-Val (217 mg, 1,0 mmol) og Boc-Ser(Bzl) i trettiende cyklus ble erstattet med Boc-Ala (189 mg, 1,0 mmol) for å gi 0,838 g. ;Dette peptidresin ble deblokkert som i eksempel 3 og gav 370 mg grovpeptid. Peptidet ble renset ved gelfiltrering som i eksempel 3 for å gi 196 mg av semirent produkt. Dette materiale ble ytterligere renset med preparativ HPLC med en lineær gradient på 23-33% buffer B:A, for å gi 48,4 mg av et hvitt, amorft pulver. Forbindelsen var homogen i HPLC og gav en korrekt aminosyreanalyse. FAB-MS: MH beregnet 3575,1, funnet 3574,0. ;Eksempel 42 ;Fremstilling av Ac- [Glu<8>,Lys12,Nie<17>,Asp25,Leu<26>,Lys27'28, ;Gly29'<30>,Thr<31>]-VIP cyklo (Lys<21>_)Asp<25>) [Ac-(SEQ ID No: 68) -NH2];Benzhydrylaminresin (0,125 g, 0,1 mmol, 100-200 ASTM mesh, Bachem) ble underkastet fastfasesyntese ved å bruke fremgangsmåte 1. Trettien koblingscykler ble utført som i eksempel 41, bortsett fra at Boc-Ala i. trettiende cyklus ble erstattet med Boc-Ser(Bzl) (295 mg, 1,0 mmol) for å gi 0,913 g. ;Dette peptidresin ble deblokkert som i eksempel 3 og gav 378 mg grovpeptid. Peptidet ble renset ved gelfiltrering som i eksempel 3 for å gi 240 mg av semirent produkt. Dette materiale ble ytterligere renset med preparativ HPLC med en lineær gradient på 25-35% buffer B:A, for å gi 28,8 mg av et hvitt, amorft pulver. Forbindelsen var homogen i HPLC og gav en korrekt aminosyreanalyse. FAB-MS: MH beregnet 3591,1, funnet 3590,3. ;Eksempel 43 ;Fremstilling av Ac-[Lys",Nie<17>,Al<a19,>Asp<25>,Leu26,Lys27,<28>, ;Ala<29>"<31>]-VIP cyklo (Lys<21>_>Asp<25>) [Ac-(SEQ ID No: 69) -NH2] ;Benzhydrylaminresin (0,125 g, 0,1 mmol, 100-200 ASTM mesh, Bachem) ble underkastet fastfasesyntese ved å bruke fremgangsmåte 1. Trettien koblingscykler ble utført som i eksempel 39, bortsett fra at Boc-Thr(Bzl) i første cyklus ble erstattet med Boc-Ala (189 mg, 1,0 mmol), Boc-Gly i andre cyklus ble erstattet med Boc-Ala (189 mg, 1,0 mmol), Boc-Gly i tredje cyklus ble erstattt med Boc-Ala (189 mg, 1,0 mmol), Boc-Thr(Bzl) i fjerde cyklus ble erstattet med Boc-Lys (2-Cl-Z) (414 mg, 1,0 mmol), Boc-Leu i femte cyklus ble erstattet med Boc-Lys(2-C1-Z) (414 mg, 1,0 mmol), Boc-Val i sjette cyklus ble erstattet med Boc-Leu (249 mg, 1,0 mmol) og Boc-Glu(OBzl) i tjueførste cyklus ble erstattet med Boc-Asp(OcHx) (315 mg, 1,0 mmol) for å gi 0,844 g. ;Dette peptidresin ble deblokkert som i eksempel 3 og gav 360 mg grovpeptid. Peptidet ble renset med gelfiltrering som i eksempel 3 for å gi 115 mg av semirent produkt. Dette materiale ble ytterligere renset med preparativ HPLC med en lineær gradient på 24-34% buffer B:A, for å gi 34,7 mg av et hvitt, amorft pulver. Forbindelsen var homogen i HPLC og gav en korrekt aminosyreanalyse. FAB-MS: MH beregnet 3547,1, funnet 3546,0. ;Eksempel 44 ;Trakeal avslappende aktivitet av VIP-analoger ;Den avslappende aktivitet av VIP-analogene ble studert i en modell som bruker marsvintrakeer. [Wassermann, M.A. et al., i Vasoactive Intestinal Peptide, S.I. Said, ed., Raven Press, N.Y. 1982, s. 177-184]. Alle vev ble tatt fra albino hannmarsvin som veide 400-600 g, bedøvet med uretan (2 g/kg, i.p.). Etter blodtap-ping ble trakea fjernet, delt opp i fire ringsegmenter (3 mm lange). Hver ring ble suspendert med 30 gauge rustfritt stålvaiere i et 10 ml vevbad med kappe og festet via 4-0 silketråd til en Grass kraftforskyv-ningstransducer (modell FT03C, Grass Instruments Co., Quincy, MA), for isometrisk måling av spenning. Den glatte muskulatur ble badet i modifisert Krebs-oppløs-ning med følgende sammensetning: NaCl, 120 mM; KC1, 4,7 mM; CaCl2, 2,5 mM; MgSO«.7H20, 1,2 mM; NaHC03, 25 mM; KjHPO*monobasisk, 1,2 mM; og dekstrose, 10 mM.
Vevsbadene ble holdt ved 37°C og konstant gjennombob-let med 95% 02og 5% C02. Responser ble målt på en 8-kanals og en 4-kanals Hewlett-Packard^, (henholdsvis modell 7702B og 7754A)-måler (Hewlett-Packard, Para-mus, NJ). Trakeale ringer ble plassert under en hvile-spenning på 1,5 g som ble bestemt til å være optimal eller nesten optimal i foreløbige forsøk. Hyppig re jus ter ing av spenningen var nødvendig i løpet av den 60 minutters stabiliseringsperiode som fulgte. Vevet ble spylt med 15 minutters intervaller.
Kumulative konsentrasjonsresponskurver ble erholdt for hvert vev med suksessive ul-økninger i badkonsentra-sjonen av VIP eller VIP-analoger i henhold til metoden til vanRossum [Are. Int. Pharmacodyn., 143, 299-330
(1963)]. Kun én kumulativ doseresponskurve ble erholdt ved et enkelt vev. For å minimalisere variabiliteten mellom vev, ble avslappende responser uttrykt som en prosentdel av den maksimale respons som ble erholdt med VIP (IO"<6>M = 100%) tilsatt mot slutten av hvert konsentrasjonsresponsforsøk. Responser erholdt fra tre vev ble satt sammen, og EC50-verdier ble bestemt med lineær regresjon.
Resultatene oppsummert i Tabell I viser den trakeale avslappende aktivitet av VIP-analogene sammenlignet med nativ VIP.
Eksempel 45
Bronkodilatoraktivitet av VIP-analoger
In vivo bronkodilatoraktiviteten av VIP og VIP-analoger hos marsvin ble bestemt ved trakeal installasjons-rute for tilførsel. Denne teknikk anvendte hann-marsvin (Hartley-stammem Charles River) som veide 400-600 g. Dyrene ble bedøvet med uretan (2 g/kg) intraperito-nealt, og en polyetylenkanyle ble satt inn i halas-pulsåren for intravenøs medikamenttilførsel.
Dyrene ble trakeotomisert og doserende oppløsninger av destillert vann eller forsøksforbindelse oppløst i destillert vann ble tilført til trakea, omtrent ved tre fjerdedeler av avstanden til carina med en pi-pette. Konsentrasjonen av doseringsoppløsingen ble justert, til å gi et konstant vulum på 100 ml. Dyrene ble plasset utstrakt på ryggen i 1 minutt for å avhjelpe medikamentavlevering til lungen. Ett minutt senere ble spontant åndedrett stoppet med succinylcho-linklorid (1,2 mg/kg) tilført intravenøst, og dyrene ble ventilert med en Harvard Model 680 respirator for små dyr justert til 40 åndedrag pr. minutt og 4,0 cm<3>slagvolum. Dyrene ble tilført en maksimalt sammentrek-kende dose av histamin (50 mg/kg i.v.) og trakialt trykk (cm vann) ble nedtegnet frå en Statham trykk-transducer (P 32 AA).
Endringen i trakealt trykk ble gjort gjennomsnittlig for minst 3 kontroll- og 3 medikamentbehandlede dyr, og prosent inhibering ble regnet ut. Den relative effekt av forbindelsene som ble tilført via instal-lasjonsruten, ble bestemt ved å tilføre forskjellige doser av forsøksforbindelse og regne ut den mediane effektive dose (ED50-verdi) . EDS0ble bestemt fra logaritmiske doseresponskurver fremkommet fra minst 3 doser som forårsaket inhibitoriske effekter på mellom 10% og 90%. Korrelasjonskoeffisientene for regres-jonslinjen for hver forbindelse var alltid større enn 0,95.
For bestemmelse av tidsforløpet for inhibering ved forskjellige forbindelser ble tiden mellom tilførsel av forbindelsen og tilførsel av histamin variert. Tidsforløpet for aktiviteten ble regnet ut som den tid da inhiberingen minket til 40%.
Resultatene oppsummert i Tabell II viser VIP-analoge-nes in vivo bronkodilatoraktivitet, sammenlignet med nativ VIP.
Claims (66)
1. Cyklisk peptid,
karakterisert vedat det har formel
hvor Q er lavere alkyl-cykloheksyl eller lavere alkyl-aryl; R8er Asp, Glu eller Ala; R10er Tyr eller R6;<R>12er Arg eller Lys; R16er Gin eller Ala; R17er Met, Nie eller Ala;<R>ig er Val eller Ala; R22er Tyr eller R6;<R>24er Asn eller Ala; R26er Ile, Val eller Leu; R27er Leu eller Lys; R28er Asn, Thr eller Lys; X er hydrogen eller en hydrolyserbar amino-beskyttende gruppe; Y er hydroksyl, en hydrolyserbar karboksy-beskyttende gruppe, eller R29-<R>30-<R>31-Z; R2g er Gly eller Ala; R30er Gly eller Ala; R31erAla, Met, Cys (Acm) eller Thr; Z er hydroksyl eller en hydrolyserbar karboksy-beskyttende gruppe,
eller farmasøytisk akseptable salter derav.
2. Cyklisk peptid ifølge krav1,karakterisert vedat Q er metyl-cykloheksyl .
3. Cyklisk peptid ifølge krav 1,karakterisert vedat Q er C1_2-alkyl-aryl.
4. Cyklisk peptid ifølge krav 3,karakterisert vedat Q er C-^-alkyl-fenyl hvor fenyl-ringen er usubstituert eller substituert med en eller fler substituenter valgt fra OH, OCH3, F, Cl, I, CH3, CF3, N02, NH2, N(CH3)2, NHCOCH3, NHCOC6H5eller C(CH3)3.
5. Cyklisk peptid ifølge krav 3,karakterisert vedat Q er C1_2-alkyl-naftyl hvor naftyl-ringene er usubstituert eller substituert med en eller fler substituenter valgt fra OH, OCH3, F, Cl, I, CH3, CF3, N02, NH2, N(CH3)2, NHCOCH3, NHCOC6H5eller C(CH3)3.
6. Peptid ifølge krav 1,
karakterisert vedat R26er Val og R28er Thr [X-(SEQ ID N0:11)-Y].
7. Peptid iføgle krav 1,
karakterisert vedat R17er Nie, R26er Val og R28er Thr [X-[SEQ ID N0:12)-Y] .
8. Peptid ifølge krav 7,
karakterisert vedat peptidet er Ac- [Glu8,Orn12,Nie17,Asp25,Val26,Thr28] "VIP cyklo (Lys<21->>Asp<25>) [Ac-(SEQ ID No:31) -NH2] .
9. Peptid ifølge krav 7,
karakterisert vedat R12 er Leu, R17 er Nie,<R>19er Ala,<R>26er Val og<R>28er Thr [X-(SEQ ID No:13)-Y] .
10. Peptid ifølge krav 9,
karakterisert vedat peptidet er Ac-[2-Nal<10>,Leu<12>,Nie<17>,Ala<19>,Asp<25>,Val<26>,Thr<28>] VIP cyklo (Lys21-*Asp25) [Ac-(SEQ ID No:35)-NH2].
11. Peptid ifølge krav 9,
karakterisert vedat peptidet er Ac - [O-Me-Tyr10,Leu12,Nie17,Ala19,Asp25,Val26,Thr28] -VIP cyklo (Lys<21->»Asp<25>) [Ac-(SEQ ID No:36)-NH2] .
12. Peptid ifølge krav 9,
karakterisert vedat peptidet er Ac-[p-F-Phe<6>,p-NH2-Phe<10>,Leu<12>,Nle<17>,Ala<19>,Asp<25>, Val26, Thr28] -VIP cyklo (Lys<21->»As<p25>[Ac-(SEQ ID No: 37)-NH2] .
13. Peptid ifølge krav 7,
karakterisert vedat R12 er Lys, R17 er Nie, R26er Val og R28er Thr [X-(SEQ ID No:14)-Y] .
14. Peptid ifølge krav 13,
karakterisert vedat peptidet er Ac-[Lys<12>,Nie<17>, Val<26>, Thr28]-VIP cyklo (Lys<21->»Asp25)[Ac-(SEQ ID No:28)-NH2] .
15. Peptid ifølge krav 13,
karakterisert vedat peptidet er Ac- [p-F-Phe6, 2-Nal10, Lys12, Nie17, Asp25, Val26, Thr28, Gly29»30, Met<31>]-VIP (1-31)-NH2cyklo (Lys<21->»As<p25>) [Ac-(SEQ ID No:30) -NH2] .
16. Peptid ifølge krav 13,
karakterisert vedat peptidet er Ac-[p-F-Phe6, Glu8, Lys12, Nie17, Asp25, Val26, Thr28, Gly29'30, Thr31] -VIP cyklo (Lys21^Asp<25>) [Ac-(SEQ ID No: 66) -NH2] .
17. Peptid ifølge krav 7,
karakterisert vedat R12 er Lys, R17 er
Nie,<R>19er Ala,<R>26er Val og<R>28er Thr [X-(SEQ ID No:15)-Y] .
18. Peptid ifølge krav 17,
karakterisert vedat peptidet er Ac- [Lys12,Nie17,Ala19,Asp25,Val26,Thr28] -VIP cyklo (Lys2<1->»Asp<25>) [Ac-(SEQ ID No:29)-NH2],
19. Peptid ifølge krav 17,
karakterisert vedat peptidet er Ac-[p-F-Phe6, Lys12, Nie17, Ala19, Asp25, Val26, Thr28, Gly29'30, Cys (Acm)31]- VIP (1-31)-NH2cyklo (Lys<21->»As<p25>) [Ac-(SEQ ID No:32)-NH2].
20. Peptid ifølge krav17,
karakterisert vedat peptidet er Ac-[Ala<2>,Lys<12>,Nie<17>,Ala<19>,Asp<25>,Val<26>,Thr<28>] VIP cyklo (Lys21->-Asp<25>) [Ac-(SEQ ID No:33)-NH2].
21. Peptid ifølge krav 17,
karakterisert vedat peptidet er Ac-[N-Me-Ala<1>,Lys<12>,Nie<17>,Ala<19>,Asp<25>,Val<26>,Thr<28>] VIP-cyklo (Lys2<1->»Asp<25>) [Ac-(SEQ ID No:34)-NH2].
22. Peptid ifølge krav 17,
karakterisert vedat peptidet er Ac-[O-Me-Tyr10, Lys12, Nie17, Ala19, Asp25, val26' Thr28] -VIP cyklo (Lys2<1>^Asp<25>) [Ac-(SEQ ID No:41)-NH2] .
23. Peptid ifølge krav 17,
karakterisert vedat peptidet er Ac-[p-F-Phe<6>,Lys<12>,Nie<17>,Ala<19>,Asp<25>,Val<26->Thr'<28>]-VIP cyklo (Lys21-*-Asp<25>) [Ac - (SEQ ID No:49)-NH2] .
24. Peptid ifølge krav 17,
karakterisert vedat peptidet er Ac- [1-Nal6, Lys12 , Nie17, Ala19, Asp25, Val26'Thr28] -VIP cyklo (Lys<21>^-Asp<25>) [Ac-(SEQ ID No:50)-NH2] .
25. Peptid ifølge krav 17,
karakterisert vedat peptidet er Ac-[p-NH2-Phe10, Lys12,Nie17, Ala19, Asp25,val26'Thr28] -VIP cyklo (Lys2<1->*Asp<25>) [Ac-(SEQ ID No:54)-NH2] .
26. Peptid ifølge krav 17,
karakterisert vedat peptidet er Ac-[Lys<12>,Nle<17>,Ala19,m-OCH3-Tyr<22>,Asp<25>,<v>al26'Thr<28]>-VIP cyklo (Lys2<1->*Asp<25>) [Ac-(SEQ ID No:55)-NH2] .
27. Peptid ifølge krav 17,
karakterisert vedat peptidet er Ac-[Lys12,Nle17,Ala19,m-F-L-Tyr22,Asp25,Val26,Thr28] -VIP cyklo (Lys2<1>^Asp<25>) [Ac-(SEQ ID No: 56)-NH2].
28. Peptid ifølge krav 17,
karakterisert vedat peptidet er Ac-[Glu8,Lys12,Nie17'Ala19, Asp25,Leu26, Thr28,Gly29'30, -Thr<31>]-VIP cyklo (Lys<21->»Asp<25>) [Ac-(SEQ ID No: 65)-NH2] .
29. Peptid ifølge krav l,
karakterisert vedat R26 er Leu og R27 og<R>28begge er Lys [X-(SEQ ID No:16)-Y].
30. Peptid ifølge; krav 29,
karakterisert vedat Rl2 er Lys, R17 er Ala, R19er Ala, R26er Leu og R27og<R>28begge er Lys [X-(SEQ ID No:17)-Y].
31. Peptid ifølge krav 30,
karakterisert vedat peptidet er Ac- [Glu8,Lys12,Ala16'17'19,Asp25,Leu26,Lys27'28] -VIP cyklo (Lys2<1->»Asp<25>) [Ac-(SEQ IDNo: 60)-NH2] .
32. Peptid ifølge krav 30,
karakterisert vedat peptidet er Ac-[Ala<8>,Lys<12>,Ala<16>'<1>7'19,Ala<24>,Asp25,Leu<26>,Lys<2>7'28]-VIP cyklo
(Lys<21->»Asp<25>) [Ac-(SEQ ID No: 62)-NH2] .
33. Peptid ifølge krav 30,
karakterisert vedat peptidet er Ac-[Glu8, Lys12, Ala16'17'19, Ala24, Asp25,Leu26,Lys27'28] -VIP cyklo (Lys21-»Asp25) [Ac-(SEQ ID No: 64)-NH2].
34. Peptid ifølge krav 29,
karakterisert vedat R12 er Lys, R17 er Nie,<R>26er Leu og R27og<R>28begge er Lys [X-(SEQ ID No: - 18) -Y] .
35. Peptid ifølge krav 34,
karakterisert vedat peptidet er Ac- [Ala2,Glu8,Lys12,Nie17, Asp25,Leu26,Lys27'28,Gly29'30, Thr3<1>]-VIP cyklo (Lys<21->*Asp<25>) [Ac-(SEQ ID No: 67)-NH2] .
36. Peptid ifølge krav 34,
karakterisert vedat peptidet er Ac-[Glu<8>,Lys<12>,Nie<17>,Asp2<5>,Leu<26>,Lys<27>'<28>,Gly<29>'<30>,Thr<31>] - VIP cyklo (Lys21-»Asp<25>) [Ac-(SEQ ID No: 68)-NH2] .
37. Peptid ifølge krav 34,
karakterisert vedat R12 er Lys, R17 er Nie,<R>19er Ala,<R>26er Leu og<R>27og<R>28begge er Lys [X-(SEQ ID No:19]-Y].
38. Peptid ifølge krav 37,
karakterisert vedat R12 er Lys, R16 er Gin,<R>17er Nie, R19er Ala, R26er Leu og R27og R28begge er Lys [X-(SEQ ID No:70]-Y] .
39. Peptid ifølge krav 38,
karakterisert vedat R2 er Ser, R12 er Lys,<R>16er Gin,<R>17er Nie, R19er Ala, R26er Leu og R27og R28begge er Lys [X-(SEQ ID No:71]-Y].
40. Peptid ifølge krav 39,
karakterisert vedat peptidet er Ac-[Lys<12>,Nie<17>,Ala<19>,Asp<25>,Leu<26>,Lys27'28]-VIP cyklo (Lys21-»-Asp<25>) [Ac-(SEQ ID No:38)-NH2] .
41. Peptid ifølge krav 39,
karakterisert vedat peptidet er Ac-[N-Me-Ala1,Lys12>Nle17,Ala19,Asp25,Leu26,Lys27'28] -VIP cyklo (Lys<21->»Asp<25>) [Ac-(SEQ ID No:39)-NH2].
42. Peptid ifølge krav 39,
karakterisert vedat peptidet er Ac-[Glu8, Lys12, Nie17, Ala19, Asp25, Leu26, Lys27,28] -VIP cyklo (Lys<2->^Asp<25>) [Ac-(SEQ ID No:40)-NH2] .
43. Peptid ifølge krav 39,
karakterisert vedat peptidet er Ac-[Glu8,Lys12,Nie17,Ala19, Asp25,Leu26,Lys27,28,Ala29"31] -VIP cyklo (Lys<21->»As<p25>) [Ac-(SEQ ID No:42)-NH2] .
44. Peptid ifølge krav 39,
karakterisert vedat peptidet er Ac-[N-Me-Ala1,Glu8,Lys12,Nle17,Ala19,Asp25,Leu26'Lys27'28] -VIP cyklo (Lys<21->»Asp<25>) [Ac-(SEQ ID No:44)-NH2].
45. Peptid ifølge krav 39,
karakterisert vedat peptidet er Ac- [p-F-Phe<6>,Glu<8>,Lys<12>,Nie<17>,Ala<19>,Asp<25>,<L>eu26'Lys<27>'<28>] -VIP cyklo (Lys<21>^Asp<25>) [Ac-(SEQ ID No:45)-NH2].
46. Peptid ifølge krav 39,
karakterisert vedat peptidet er Ac-[1-Nal<6>,Glu<8>,Lys<12>,Nie<17>,Ala<19>,Asp<25>,<L>eu26'Lys2<7-2>8]-VIP cyklo (Lys<21->»Asp<25>) [Ac-(SEQ ID No : 46)-NH2] .
4 7.. Peptid ifølge krav 39,
karakterisert vedat peptidet er Ac-
[Glu<8>, p-NH2 - Phe10, Lys12, Nie17, Ala19, Asp25, Leu26' Lys27, 28] -VIP cyklo (Lys<21->»Asp<25>) [Ac-(SEQ ID No : 47) -NH2] .
48. Peptid ifølge krav 39,
karakterisert vedat peptidet er Ac-[Glu8,0-Me-Tyr10, Lys12, Nie17, Ala19, Asp25, Leu26'Lys27,28] -VIP cyklo (Lys21^Asp<25>) [Ac- (SEQ ID No:48) -NH2] .
49. Peptid ifølge krav 39,
karakterisert vedat peptidet er Ac-[Glu8, Lys12, Nie17, Ala19, Asp25, Leu26' Lys27•28, Gly29'30, Thr31] -VIP cyklo
(Lys<21>^Asp<25>) [Ac-(SEQ ID No: 52) -NH2] .
50. Peptid ifølge krav 39,
karakterisert vedat peptidet er Ac-[Glu8, Lys12 , Nie17, Ala19, m-OCH3-Tyr22, Asp25, Leu26, Lys27'28] -VIP cyklo (Lys<21->»As<p25>) [Ac-(SEQ ID No: 57)-NH2] .
51. Peptid ifølge krav 39,
karakterisert vedat peptidet er Ac-[Glu8, Lys12, Nie17, Ala19, m-F-L-Tyr22, Asp25, Leu26, Lys<27>'<28>]-VIP cyklo (Lys<21>^Asp<25>) [Ac-(SEQ ID No: 58)-NH2] .
52. Peptid ifølge krav 39,
karakterisert vedat peptidet er Ac-[Ala8, Lys12, Nie17, Ala19, Ala24, Asp25, Leu26, Lys27'28] -VIP cyklo (Lys<21->»Asp<25>) [Ac-(SEQ ID No: 59) -NH2] .
53. Peptid ifølge krav 39,
karakterisert vedat peptidet er Ac-[Lys12,Nie17, Ala19, Asp25, Leu26,Lys27'28, Ala29-31] -VIP cyklo (Lys<21>^Asp<25>) [Ac-(SEQ ID No: 69)-NH2] .
54. Peptid ifølge krav 38,
karakterisert vedat R2 er Ala, R12 er Lys,<R>16er Gin,<R>17er Nie, R19er Ala, R26er Leu, og R27og R28begge er Lys [X-SEQ ID No:72)-Y].
55. Peptid ifølge krav 54,
karakterisert vedat peptidet er Ac- [Ala2, Glu8, Lys12, Nie17, Ala19, Asp25, Leu26, Lys27'28, Ala<29>-<31>]-VIP cyklo (Lys21->Asp25)[Ac-(SEQ ID No:43)-NH2].
56. Peptid ifølge krav 54,
karakterisert vedat peptidet er Ac-[Ala<2>, Glu8, Lys12, Nie17, Ala19, Asp25, Leu26'Lys27'28, Gly29,30, Thr31] -VIP cyklo (Lys<21->»Asp25)[Ac- (SEQ IDNo:51)-NH2] .
57. Peptid ifølge krav 54,
karakterisert vedat peptidet er Ac-[Ala<2>,Glu<8>,Lys<12>,Nie<17>,Ala<19>,Asp25,<L>eu26'Lys2<7>'<28>] -VIP cyklo (Lys<21->»Asp<25>) [Ac-(SEQ ID No: 53)-NH2] .
58. Peptid ifølge krav 37,
karakterisert vedat R12er Lys, R16er Ala,<R>17er Nie, R19er Ala, R26er Leu og R27og R28begge er Lys [X-SEQ ID No:73)-Y].
59. Peptid ifølge krav 58,
karakterisert vedat peptidet er Ac- [Ala8 , Lys12 , Ala16 , Nie17 , Ala19 , Ala24 , Asp25, Leu26 ,Lys27'2<8>]-VIP cyklo (Lys<21->>Asp<25>) [Ac-(SEQ ID No: 61)-NH2] .
60. Peptid ifølge krav 58,
karakterisert vedat peptidet er Ac-[Glu8, Lys12, Ala16, Nie17, Ala19, Asp25, Leu26, Lys27'28] -VIP cyklo (Lys2<1->*Asp<25>) [Ac-(SEQ ID No: 63)-NH2].
61. " Anvendelse av cyklisk peptid ifølge ethvert av kravene1-60 ved fremstilling av et terapeutisk middel.
62. Anvendelse av cyklisk peptid ifølge ethvert av kravene1-60 ved fremstilling av et bronkodiltorisk middel.
63. Anvendelse av det cykliske peptid Ac-[Glu<8>,Lys<12>,Nie<17->, Ala19, Asp25, Leu26, Lys27,28, Gly29,30, Thr31] -VIP cyklo (Lys<21->>Asp<25>) [Ac-(SEQ ID No:52)-NH2]ved fremstilling av et terapeutisk middel.
64. Anvendelse av det cykliske peptid Ac-[Glu8, Lys12,Nie17-, Ala19, Asp25, Leu26, Lys27,28, Gly29,30, Thr31] -VIP cyklo (Lys<21->>Asp<25>) [Ac-(SEQ ID No:52)-NH2] ved fremstilling av et bronkodilatorisk middel.
65. Farmasøytisk blanding,
karakterisert vedat den inneholder et cyklisk peptid ifølge ethvert av kravene 1-60 samt et ikke-toksisk, inert, terapeutisk akseptabelt bæremateriale.
66. Farmasøytisk blanding for behandling av bronkotrakeale sammentrekningslidelser,
karakterisert vedat blandingen inneholder en effektiv mengde av et cyklisk peptid ifølge ethvert av kravene 1-60 såmt et ikke-toksisk, farmasøytisk akseptabelt bæremateriale i væskeform eller i fast form.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US77374791A | 1991-10-11 | 1991-10-11 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO923929D0 NO923929D0 (no) | 1992-10-09 |
| NO923929L NO923929L (no) | 1993-04-13 |
| NO304523B1 true NO304523B1 (no) | 1999-01-04 |
Family
ID=25099195
Family Applications (3)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO923929A NO304523B1 (no) | 1991-10-11 | 1992-10-09 | Vasoaktive cykliske polypeptider |
| NO975023A NO975023D0 (no) | 1991-10-11 | 1997-10-31 | Vasoaktive cykliske polypeptider |
| NO980377A NO980377D0 (no) | 1991-10-11 | 1998-01-28 | Vasoaktive cykliske peptider |
Family Applications After (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO975023A NO975023D0 (no) | 1991-10-11 | 1997-10-31 | Vasoaktive cykliske polypeptider |
| NO980377A NO980377D0 (no) | 1991-10-11 | 1998-01-28 | Vasoaktive cykliske peptider |
Country Status (26)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5677419A (no) |
| EP (1) | EP0536741B1 (no) |
| JP (1) | JP2515473B2 (no) |
| KR (1) | KR970001580B1 (no) |
| CN (3) | CN1034943C (no) |
| AT (1) | ATE132165T1 (no) |
| AU (1) | AU656230B2 (no) |
| BG (1) | BG61125B2 (no) |
| BR (1) | BR9203959A (no) |
| CA (1) | CA2080272C (no) |
| CZ (1) | CZ281818B6 (no) |
| DE (1) | DE69207138T2 (no) |
| DK (1) | DK0536741T3 (no) |
| ES (1) | ES2082317T3 (no) |
| FI (2) | FI111646B (no) |
| GR (1) | GR3019326T3 (no) |
| HU (2) | HUT62606A (no) |
| IL (3) | IL117252A (no) |
| MX (1) | MX9205822A (no) |
| NO (3) | NO304523B1 (no) |
| NZ (1) | NZ244644A (no) |
| RU (1) | RU2095368C1 (no) |
| SK (1) | SK279399B6 (no) |
| TW (1) | TW305846B (no) |
| UY (2) | UY23488A1 (no) |
| ZA (1) | ZA927724B (no) |
Families Citing this family (25)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6872803B1 (en) | 1993-09-21 | 2005-03-29 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Peptides |
| WO1997029126A1 (en) * | 1996-02-09 | 1997-08-14 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Synthesis of vip analog |
| AU725827B2 (en) * | 1996-07-12 | 2000-10-19 | Immunomedics Inc. | Radiometal-binding peptide analogues |
| WO1998002453A2 (en) * | 1996-07-15 | 1998-01-22 | Universite Libre De Bruxelles | Peptidic ligands having a higher selectivity for the vip1 receptor than for the vip2 receptor |
| PE20010612A1 (es) * | 1999-09-28 | 2001-07-12 | Bayer Corp | Agonistas del receptor 3 (r3) del peptido activador de la adenilato ciclasa de la pituitaria y su uso farmacologico |
| US6972319B1 (en) | 1999-09-28 | 2005-12-06 | Bayer Pharmaceuticals Corporation | Pituitary adenylate cyclase activating peptide (PACAP)receptor 3 (R3) agonists and their pharmacological methods of use |
| AU2000265051A1 (en) * | 2000-02-18 | 2001-08-27 | Dabur Research Foundation | Vasoactive intestinal peptide analogs |
| WO2001060863A1 (en) | 2000-02-18 | 2001-08-23 | Dabur Research Foundation | Radiolabeled vasoactive intestinal peptide analogs for diagnosis and radiotherapy |
| US6828304B1 (en) | 2000-07-31 | 2004-12-07 | Dabur Research Foundation | Peptides for treatment of cancer |
| US7507714B2 (en) * | 2000-09-27 | 2009-03-24 | Bayer Corporation | Pituitary adenylate cyclase activating peptide (PACAP) receptor 3 (R3) agonists and their pharmacological methods of use |
| JP2004514697A (ja) | 2000-11-28 | 2004-05-20 | モンドバイオテック・ソシエテ・アノニム | 肺及び細動脈高血圧症治療用の血管作動性腸管ペプチドの生物学的活性をもつ化合物 |
| EP1515745B1 (en) | 2002-06-10 | 2009-03-18 | MondoBIOTECH Licensing Out AG | Use of compounds having the biological activity of vasoactive intestinal peptide for the treatment of sarcoidosis |
| CA2554475A1 (en) * | 2004-01-27 | 2005-08-11 | Bayer Pharmaceuticals Corporation | Pituitary adenylate cyclase activating peptide (pacap) receptor (vpac2) agonists and their pharmacological methods of use |
| US20080085860A1 (en) * | 2004-08-18 | 2008-04-10 | Eli Lilly And Company | Selective Vpac2 Receptor Peptide Agonists |
| CA2577010A1 (en) * | 2004-08-18 | 2006-03-02 | Eli Lilly And Company | Selective vpac2 receptor peptide agonists |
| MX2008011048A (es) * | 2006-02-28 | 2008-09-08 | Lilly Co Eli | Agonistas peptidicos del receptor vpac2 selectivo. |
| JP2009542593A (ja) * | 2006-07-06 | 2009-12-03 | エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー | 血管作動性腸管ペプチドの類似体 |
| CN101906144B (zh) * | 2009-06-03 | 2013-06-19 | 首都医科大学 | 一根Arg-Gly-Asp-Val链通过Asp与两根脂肪醇链的偶联物、它们的合成及在医学中的应用 |
| EP2464370B1 (en) | 2009-08-14 | 2017-03-29 | Phasebio Pharmaceuticals, Inc. | Modified vasoactive intestinal peptides |
| CA2797033C (en) | 2010-04-22 | 2021-10-19 | Longevity Biotech, Inc. | Highly active polypeptides and methods of making and using the same |
| CA2873553C (en) | 2011-06-06 | 2020-01-28 | Phasebio Pharmaceuticals, Inc. | Use of modified vasoactive intestinal peptides in the treatment of hypertension |
| US9789164B2 (en) | 2013-03-15 | 2017-10-17 | Longevity Biotech, Inc. | Peptides comprising non-natural amino acids and methods of making and using the same |
| GB201421647D0 (en) | 2014-12-05 | 2015-01-21 | Amcure Gmbh And Ruprecht-Karls-Universitat And Karlsruher Institut F�R Technologie | CD44v6-derived cyclic peptides for treating cancers and angiogenesis related diseases |
| US10688156B2 (en) | 2015-02-09 | 2020-06-23 | Phasebio Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for treating muscle disease and disorders |
| KR102243870B1 (ko) | 2016-09-30 | 2021-04-22 | 후지필름 가부시키가이샤 | 환상 펩타이드, 어피니티 크로마토그래피 담체, 표지화 항체, 항체 약물 복합체 및 의약 제제 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB8427651D0 (en) * | 1984-11-01 | 1984-12-05 | Beecham Group Plc | Compounds |
| US4835252A (en) * | 1987-02-26 | 1989-05-30 | The Salk Institute Biotechnology/Industrial Associates, Inc. | Vasoactive intestinal peptide analogs |
| GB8729802D0 (en) * | 1987-12-22 | 1988-02-03 | Beecham Group Plc | Novel compounds |
| US5084442A (en) * | 1988-09-06 | 1992-01-28 | Hoffmann-La Roche Inc. | Cyclic growth hormone releasing factor analogs and method for the manufacture thereof |
| US5141924A (en) * | 1989-06-30 | 1992-08-25 | Hoffmann-La Roche, Inc. | Synthetic vasoactive intestinal peptide analogs |
-
1992
- 1992-10-06 AU AU26228/92A patent/AU656230B2/en not_active Ceased
- 1992-10-07 NZ NZ244644A patent/NZ244644A/en unknown
- 1992-10-07 ZA ZA927724A patent/ZA927724B/xx unknown
- 1992-10-08 DK DK92117185.6T patent/DK0536741T3/da active
- 1992-10-08 DE DE69207138T patent/DE69207138T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1992-10-08 AT AT92117185T patent/ATE132165T1/de not_active IP Right Cessation
- 1992-10-08 EP EP92117185A patent/EP0536741B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-10-08 TW TW081107995A patent/TW305846B/zh active
- 1992-10-08 RU SU925053217A patent/RU2095368C1/ru active
- 1992-10-08 ES ES92117185T patent/ES2082317T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1992-10-09 CA CA002080272A patent/CA2080272C/en not_active Expired - Fee Related
- 1992-10-09 FI FI924580A patent/FI111646B/fi active
- 1992-10-09 IL IL11725292A patent/IL117252A/xx not_active IP Right Cessation
- 1992-10-09 NO NO923929A patent/NO304523B1/no not_active IP Right Cessation
- 1992-10-09 HU HU9203194A patent/HUT62606A/hu unknown
- 1992-10-09 CZ CS923086A patent/CZ281818B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1992-10-09 SK SK3086-92A patent/SK279399B6/sk unknown
- 1992-10-09 IL IL103396A patent/IL103396A/xx not_active IP Right Cessation
- 1992-10-09 UY UY23488A patent/UY23488A1/es not_active IP Right Cessation
- 1992-10-09 JP JP4297835A patent/JP2515473B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1992-10-09 MX MX9205822A patent/MX9205822A/es not_active IP Right Cessation
- 1992-10-10 KR KR1019920018660A patent/KR970001580B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1992-10-10 CN CN92113069A patent/CN1034943C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1992-10-13 BR BR929203959A patent/BR9203959A/pt not_active Application Discontinuation
-
1994
- 1994-02-28 BG BG098608A patent/BG61125B2/bg unknown
- 1994-09-19 US US08/308,729 patent/US5677419A/en not_active Expired - Lifetime
-
1995
- 1995-06-21 HU HU95P/P00297P patent/HU211534A9/hu unknown
-
1996
- 1996-02-23 IL IL11725296A patent/IL117252A0/xx unknown
- 1996-03-15 GR GR960400712T patent/GR3019326T3/el unknown
- 1996-08-15 CN CNB961115238A patent/CN1198841C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1996-08-15 CN CNB961118075A patent/CN1225473C/zh not_active Expired - Fee Related
-
1997
- 1997-10-31 NO NO975023A patent/NO975023D0/no not_active Application Discontinuation
-
1998
- 1998-01-28 NO NO980377A patent/NO980377D0/no unknown
- 1998-07-06 UY UY25084A patent/UY25084A1/es unknown
-
2000
- 2000-09-15 FI FI20002041A patent/FI20002041A/fi unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NO304523B1 (no) | Vasoaktive cykliske polypeptider | |
| US4605641A (en) | Synthetic vasoactive intestinal peptide analogs | |
| US4835252A (en) | Vasoactive intestinal peptide analogs | |
| US4939224A (en) | Vasoactive intestinal peptide analogs | |
| US4734400A (en) | Synthetic vasoactive intestinal peptide analogs | |
| CN112912390B (zh) | Glp-1类似物的制备方法 | |
| US5141924A (en) | Synthetic vasoactive intestinal peptide analogs | |
| CA2047313A1 (en) | Polypeptides | |
| US5234907A (en) | Synthetic vasoactive intestinal peptide analogs | |
| US6080837A (en) | Synthesis of VIP analog | |
| CA2196308C (en) | Peptide, bronchodilator and blood flow ameliorant | |
| AU8237187A (en) | Derivatives of atrial natriuretic peptides | |
| CA2656757A1 (en) | Novel anologs of vasoactive intestinal peptide | |
| EP0315118A2 (en) | DNA coding for endothelin and use thereof | |
| FI111647B (fi) | Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten syklisten peptidien valmistamiseksi | |
| Rivier et al. | ATTEMPTS AT THE SYNTHESIS OF FOLLICLE STIMULATING HORMONE RELEASING PROTEIN (FRP) |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM1K | Lapsed by not paying the annual fees |
Free format text: LAPSED IN APRIL 2002 |