NO301713B1

NO301713B1 - Krystallinske oksatiolan-derivater

Info

Publication number: NO301713B1
Application number: NO922182A
Authority: NO
Inventors: Paul Ravenscroft; Tony Gordon Roberts; Paul Evans
Original assignee: Glaxo Group Ltd
Priority date: 1991-06-03
Filing date: 1992-06-02
Publication date: 1997-12-01
Also published as: ZA924007B; AU1881092A; HK1009599A1; BG60914B1; IL102073A; IS1867B; CA2311988C; MX9202619A; JP2851480B2; IE20020782A1; IL102073A0; EP1099700A1; US5905082A; NO922182D0; TW254939B; CZ261293A3; EP0517145B1; AP9200395A0; ATE212630T1; SK125793A3

Description

Foreliggende oppfinnelse angår nukleosid-analoger som kan anvendes innen medisinen. Mer spesielt angår oppfinnelsen 1,3-oksatiolan-nukleosid-analoger, spesielle fysiske former av disse og farmasøytiske preparater derav.

Forbindelsen med formel (I)

også kjent som BCH-189 eller NGPB-21 er angitt å ha antiviral aktivitet, særlig mot human immunsvikt-virus (HIV), som er årsak til AIDS (5th Anti-Aids Conference,, Montreal, Canada, 5th - 9th June 1989: Abstracts T.C.0.1and M.C.P. 63; euro-peisk patentsøknad, publikasjon nr. 382562). Forbindelsen med formel (I) er en racemisk blanding av de to enantiomerene med formlene (I-l) og (1-2):

og ble beskrevet og undersøkt i form av racematet. Den eneste forbindelsen som nu anerkjennes for behandling av sykdommer forårsaket av HIV er 3'-azido-3'-deoksytymidin (AZT,

zidovudine, BW 509U). Denne forbindelsen har imidlertid betydelig tilbøyelighet til bivirkninger og kan enten ikke anvendes eller, om den blir anvendt, må stanses hos et betydelig antall pasienter. Det er følgelig et fortsatt behov for å

tilveiebringe forbindelser som er effektive mot HIV, men som samtidig har en betydelig bedre terapeutisk indeks.

Selv om entantiomerene av forbindelsen med formel (I) har-like sterk virkning mot HIV, har (-)-enantiomeren betraktelig lavere cytotoksisitet enn den andre enantiomeren, og er således den foretrukne forbindelse som antiviralt middel. (-)-enantiomeren har det kjemiske navnet (-)-cis-4-amino-1-(2-hydroksymetyl-1,3-oksatiolan-5-yl)-(1H)-pyrimidin-2-on. Den har den absolutte stereokjemi til forbindelsen med formel (I-l) som har navnet (2R,cis)-4-amino-l-(2-hydroksymetyl-1, 3-oksatiolan-5-yl)-(1H)-pyrimidin-2-on. Forbindelsen er kjent som 3TC.

3TC er fortrinnsvis fri for den tilsvarende enantiomer, dvs. at ikke mer enn ca. 5% vekt/vekt av (+)-enantiomeren, særlig ikke mer enn ca. 2%, og spesielt mindre enn ca. 1% vekt/vekt er til stede.

Internasjonal patentsøknad PCT/GB91/00706, WO-publikasjon 91/17159 beskriver fremstilling av 3TC, dens antivirale aktivitet og dens anvendelse innen medisinen. 3TC er beskrevet og fremstilt i W091/17159 som et frysetørret pulver.

Vi har nu funnet at 3TC kan oppnås i krystallinsk form og oppviser polymorfisme.

Ved et første aspekt av oppfinnelsen tilveiebringes således 3TC i krystallinsk form.

Når den krystalliseres fra vandig oppløsning oppnås 3TC i form av nåleformede krystaller (i det følgende Form I). I denne form er krystallene ikke egnet for farmasøytisk tilbe-redning til faste doseformer på grunn av deres fysiske egen-skaper, f.eks. dårlige flyt-karakteristika. Vi har videre funnet at under visse betingelser kan 3TC oppnås i form av i det vesentlige bipyramidale krystaller (i det følgende Form II). Krystallformen til Form II har forbedrede flyt-karakteristika og er således foretrukket for fremstilling av faste dose-former. I tillegg er Form I-krystallene en mindre stabil polymorf form og visse farmasøytiske operasjoner så som maling kan forårsake omdannelse av Form I til Form II som er et uønsket trekk ved fremstilling av faste doseformer.

3TC i form av bipyramidale krystaller har et smeltepunkt over 170°C, særlig 177-178°C når det er rent. 3TC i form av nåle-lignende krystaller har et smeltepunkt på under 130°C, særlig 124-127°C i ren fo"rm.

3TC i Form II oppviser karakteristiske absorpsjonsbånd i sitt infrarøde (IR) spektrum som ikke er til stede i IR-spekteret til Form I. Særlig oppviser Form II sterke absorpsjonsbånd ved~920 og -850 bølgetall. Videre er et karakteristisk bånd for Form I ved bølgetall 1110 ikke til stede i spekteret til Form II.

Form II av 3TC viser videre en karakteristisk endoterm med en begynnelsestemperatur på 177-178°C i sin differensial-skanning kalorimetri (DSC) profil. I motsetning viser Form I en karakteristisk endoterm i sin DSC-profil med en begynnelsestemperatur på 124-127°C.

Et ytterligere aspekt av oppfinnelsen tilveiebringer således 3TC i form av nåleformede krystaller.

Ved et ytterligere aspekt tilveiebringes 3TC i form av bipyramidale krystaller.

Ved enda et ytterligere aspekt av oppfinnelsen tilveiebringes 3TC i krystallinsk form med et smeltepunkt over 170°c, særlig 177-178°C Ved et alternativt aspekt tilveiebringes 3TC i krystallinsk form som har en endoterm med en begynnelsestemperatur på 177-178°C i sin DSC-profil.

Ved et ytterligere alternativ tilveiebringes 3TC i krystallinsk form som har absorpsjonsbånd ved bølgetall ca. 920 og ca. 850 i sitt infrarøde spektrum. Spesielt tilveiebringes 3TC som i tillegg til absorpsjonsbånd ved disse bølgetall karakteriseres ved at bånd ved bølgetall 1110 i det vesentlige er fraværende.

3TC kan oppnås fra racematet ved spaltning ved en hvilken som helst metode kjent innen teknikken for separering av racemater i deres enantiomerer. Spesielt kan 3TC oppnås fra det kjente racemat ved chiral HPLC, ved enzym-formidlet enantioselektiv katabolisme med et egnet enzym så som cytidin-deaminase eller ved selektiv enzymatisk nedbrytning av et egnet derivat under anvendelse av et 5 '-nukleotid. Egnede

metoder for fremstilling av 3TC er beskrevet i WO 91/17159.

3TC i form av nåleformede krystaller kan oppnås ved krystallisasjon av forbindelsen fra vandig oppløsning eller ved azeotrop destillasjon med propan-1-ol.

3TC i form av de foretrukne bipyramidal-formede krystallene kan oppnås ved omkrystallisering fra ikke-vandig medium, spesielt en lavere (C„ c)alkohol, f.eks. etanol, IMS (denaturert sprit) eller propan-l-ol. Ved en foretrukket metode kan 3TC i bipyramidal-form oppnås fra 3TC i nåleform ved aldring av sistnevnte i denaturert sprit (IMS) eller etanol ved for-høyet temperatur (f.eks. 30-70°C, særlig ca. 50°c) i en passende tid (f.eks. 0,5-3 timer, særlig ca. 1 time eller mer).

Alternativt kan 3TC i bipyramidal form oppnås ved opp-varmning av forbindelsen ovenfor i nåleform over sitt smelte- ' punkt på 124-127°, særlig over ca. 170°C, f.eks. over ca. 177-178°c og la smeiten avkjøles.

Ved et ytterligere alternativ kan 3TC i bipyramidal form oppnås ved knusing eller maling av forbindelsen i form av nåleformede krystaller.

3TC er fortrinnsvis i form av bipyramidal-formede krystaller som i det vesentlige er fri for nåleformede krystaller. Når disse krystaller oppnås ved omkrystallisering eller aldring i flytende medium oppnås forbindelsen normalt fullstendig fri for nåleformede krystaller.

3TC i krystallinsk form kan anvendes som et antiviralt middel som beskrevet i W091/17159 som inkluderes her ved referanse.

3TC i krystallinsk form kan tilberedes som et farmasøy-tisk preparat for anvendelse som et antiviralt middel som beskrevet i W091/17159.

Figur 1 viser 3TC i form av nåleformede krystaller

(Form I).

Figur 2 viser 3TC i form av bipyramidal-formede krystaller (Form II). Figur 3 er et infrarødt spektrum for Form I krystaller. Figur 4 er et infrarødt spektrum for Form II krystaller.

Figur 5 er et DSC termogram for Form I krystaller.

Figur 6 er et DSC termogram for Form II krystaller.

De følgende eksempler illustrerer oppfinnelsen, men skal ikke være en begrensning av den. Alle temperaturer er angitt - i °C.

Mellomprodukt 1

5- metoksy- l, 3- oksatiolan- 2- metanol- benzoat

En oppløsning av sinkklorid (1,6 g) i varm metanol (15 ml) ble satt til en omrørt oppløsning av merkaptoacetaldehyd, dimetylacetal (34,2 g) og benzoyloksy-acetaldehyd (48,3 g) i toluen (13 00 ml) som derefter ble oppvarmet til tilbakeløp under nitrogen i 50 minutter. Den avkjølte blandingen ble konsentrert, fortynnet med noe toluen, og derefter filtrert gjennom kiselgur. De samlede filtrater og toluen ble vasket med vandig mettet natriumbikarbonat-oppløsning (x2) og salt-oppløsning, tørret (MgS04) og derefter inndampet til en olje som ble underkastet kolonnekromatografi på silika (2 kg, Merck 93 85) under eluering med kloroform for å gi tittelproduktet som en olje (45,1 g), en blanding av anomerer (ca. 1:1);

1H NMR (DMSO-dg) 3,1-3,3 (4H), 3,42 (6H), 4,4-4,6 (4H), 5,41 (1H) , 5,46 (1H) , 5,54 (1H) , 5,63 (1H), 7,46 (4H) , 7,58 (2H) , 8,07 (4H); ymaks (CHBr^) 1717,6 cm"<1>.

Mellomprodukt 2

(+)- cis- 1-( 2- benzoyloksvmetvl- l, 3- oksatiolan- 5- yl)-( 1H)-pyrimidin- 2- 4- dion

En blanding av finmalt uracil (9,62 g) , heksametyldisilazan (50 ml) og ammoniumsulfat (30 mg) ble oppvarmet ved tilbakeløp under nitrogen inntil en klar oppløsning var oppnådd. Denne ble avkjølt og derefter inndampet til en farveløs olje, som under nitrogenatmosfære ble oppløst i acetonitril (100 ml). Oppløsningen ble satt til en omrørt, isavkjølt oppløsning av 5-metoksy-l,3-oksatiolan-2-metanol-benzoat (mellomprodukt 1) (19,43 g) i acetonitril (600 ml), og trimetylsilyl-trifluormetansulfonat (14,7 ml) ble tilsatt. Isbadet ble fjernet, og oppløsningen ble oppvarmet ved til-bakeløp under nitrogen i 45 minutter. Efter avkjøling og inndampning ble residuet renset ved kolonnekromatografi over 1 kg silikagel (Merck 9385) under eluering med kloroform/metanol 9:1. De passende fraksjoner ble avkjølt og inndampet for å gi-et rått residuum. Dette ble fraksjonert krystallisert fra minimalt med varm metanol (c.1200 ml) for å gi tittelforbindelsen (6,32 g) som hvite krystaller.

1H NMR (d<6>DMSO) 5 11,36 (1H, bs), 7,50-8,00 (6H, m), 6,20 (1H, t), 5,46 (2H, m), 4,62 (2H, m), 3,48 (1H, m), 3,25 (1H, m).

Mellomprodukt 3

(+)-( cis)- 4- amino- l-( 2- benzoyloksymetyl- l, 3- oksatiolan- 5- yl)-( 1H)- pyrimidin- 2- on

Metode ( a)

En suspensjon av cytosin (20,705 g) og ammoniumsulfat (få mg) i heksametyldisilazan (110 ml) ble omrørt og oppvarmet ved tilbakeløp i 2,5 timer under nitrogen. Oppløsningsmidlet ble fjernet ved inndampning, og det gjenværende faste stoff ble oppløst i tørt acetonitril (350 ml). Denne oppløsningen ble under anvendelse av fleksibel nål-teknikker overført til en omrørt, isavkjølt oppløsning av 5-metoksy-l,3-oksatiolan-2-metanol-benzoat (Mellomprodukt I) (43,57 g) i acetonitril (650 ml) under nitrogen. Trimetylsilyl-trifluormetansulfonat (33 ml) ble tilsatt, oppløsningen fikk oppvarmes til omgivelses-temperatur (1,5 time) og ble derefter oppvarmet til tilbakeløp natten over. Den resulterende blanding ble konsentrert, fortynnet med mettet vandig natriumbikarbonat-oppløsning (500 ml), og derefter ekstrahert med etylacetat (3 x 500 ml). De samlede ekstrakter ble vasket med vann (2 x 250 ml) og salt-oppløsning (250 ml), tørret (MgS04) og derefter inndampet til et skum som ble underkastet kolonnekromatografi på silika (600 g, Merck 7734), under eluering med etylacetat-metanol-blandin-ger for å gi en blanding av anomerer (ca. 1:1 31,59 g). Blandingen ble krystallisert fra vann (45 ml) og etanol (9,0 ml) for å gi et fast stoff (10,23 g) som ble omkrystallisert fra etanol (120 ml) og vann (30 ml) for å gi tittelproduktet som et hvitt, fast stoff (9,26 g);

y maks (MeOH) 229,4 mm (E1% 610); 272,4 mm (E1<%>293);1lem ' lem H MR (DMSO d6) 6 3,14 (1H) , 3,50 (1H) , 4,07 (2H) , 5,52 (1H) ,-5,66 (1H), 6,28 (1H), 7,22 (2H), 7,56 (2H) 7,72 (2H), 8,10 (2H) .

Metode ( b)

Fosforoksyklorid (7,0 ml) ble satt dråpevis til en om-rørt, isavkjølt suspensjon av 1,2,4-triazol (11,65 g) i acetonitril (120 ml), og mens den indre temperaturen ble holdt under 15°C ble trietylamin (22,7 ml) derefter dråpevis tilsatt. Efter 10 minutter ble en oppløsning av ( + )-cis-1-(2-benzoyloksymetyl-1,3-oksatiolan-5-yl)-(1H)-pyrimidin-2,4-dion (Mellomprodukt 2) (6,27 g) i acetonitril (330 ml) langsomt tilsatt. Omrøring ble derefter fortsatt ved romtemperatur natten over. Blandingen ble avkjølt ved hjelp av et isbad, og trietylamin (3 0 ml) ble langsomt tilsatt fulgt av vann (21 ml). Den resulterende oppløsning ble inndampet, og residuet ble fordelt mellom mettet natriumbikarbonat-oppløsning (400 ml) og kloroform (3 x 200 ml). De samlede kloroform-ekstrak-tene ble tørret med magnesiumsulfat, filtrert og inndampet for å gi et rått residuum (9,7 g). Residuet ble oppløst i 1,4-dioksan (240 ml) og konsentrert, vandig ammoniakk-oppløsning (s.g. 0,880, 50 ml) ble tilsatt. Efter 1,5 time ble oppløs-ningen inndampet og residuet oppløst i metanol. Dette frem-kalte utfelling av et fast stoff som ble filtrert fra. Moder-lutene ble renset ved kolonnekromatografi over silikagel (Merck 9385, 600 g). De passende fraksjonene ble samlet og inndampet for å gi tittelforbindelsen som et lysebrunt, fast stoff (2,18 g) , identisk med det som ble oppnådd ved Metode (a) .

Mellomprodukt 4

(+)-( cis)- 4- amino- l-( 2- hydroksymetvl- l. 3- oksatiolan- 5- yl)-( 1H)- pyrimidin- 2- on

En suspensjon av (cis)-4-amino-l-(2-benzoyloksymetyl-l,3-oksatiolan-5-yl)-(1H)-pyrimidin-2-on (Mellomprodukt 3) (8,19

g) og Amberlite IRA-400 (OH) harpiks (8,24 g) i metanol (250 ml) ble omrørt og oppvarmet til tilbakeløp i 1,25 time. Fast

stoff ble fjernet ved filtrering og derefter vasket med meta- - noi. De samlede filtrater ble inndampet. Residuet ble ut-gnidd med etylacetat (80 ml). Det resulterende, hvite, faste stoff ble oppsamlet ved filtrering for å gi tittelproduktet (5,09 g),

1H NMR (DMSO-dr) 3,04 (1H), 3,40 (1H), 3,73 (2H), 5,18 (1H), 5,29 (1H), 5,73 (1H), 6,21 (1H), 7,19 (2H), 7,81 (1H).

Mellomprodukt 5

(-)- cis- 4- amino- l-( 2- hydroksvmetvl- l, 3- oksatiolan- 5- Yl)-( 1H)-pyrimidin- 2- on

(i) Tre 50 ml kolber med næringsvæske (Oxoid Ltd) ble inokulert med en løkkefull av Escherichia coli (ATCC 23 84 8) skrapet fra en næringsagar-plate. Kolbene ble inkubert natten over ved 37°C med rysting ved 250 omdr./min og derefter ble hver kolbe anvendt for å inokulere 41 av CDD medium (glutamin-syre, 3 g/l; MgS04, 0,2 g/l; K2S04, 2,5 g/l; NaCl, 2,3 g/l, Na2HP042H2O, 1,1 g/l, NaH2P042H20 0,6 g/l, cytidin 1,2 g/l) i en 7 liter fermentator. Kulturene ble fermentert ved 750 omdr/min., 37°C med lufting 4l/min. Efter vekst i 24 timer ble cellene oppsamlet ved sentrifugering (5000g, 30 minutter) for å gi 72 g våt vekt. Celle-pelleten ble resuspendert i 3 00 ml 20 mM Tris HC1 buffer (pH 7,5) og splittet ved sonikering (4 x 45 sekunder). Det nedbrutte cellematerialet ble fjernet ved sentrifugering (30.000 g, 30 minutter) og proteinet i den overliggende væsken ble utfelt ved tilsetning av ammoniumsulfat til 75% metning. Det utfelte stoffet ble oppsamlet ved sentrifugering (30.000 g, 30 minutter) og pelleten ble resuspendert i 25 ml HEPES buffer (100 mM, pH 7,0) inneholdende ammoniumsulfat (75% metning). Enzym-oppløsning ble fremstilt ved sentrifugering ved 12.000 opm i 30 minutter. Den overliggende væsken ble kastet og pelleten ble oppløst i Tris HC1 buffer (pH 7,0; 100 mM) til opprinnelig volum. (ii) Mellomprodukt 4 (115 mg) ble oppløst i vann (100 ml) og omrørt. Enzym-oppløsning (0,5 ml) ble tilsatt, og blandin gen ble holdt ved en konstant pH ved kontinuerlig tilsetning av HCl (25 mM). Omdannelsen ble kontrollert ved chiral HPLC, som viste at fortrinnsvis (+)-enantiomeren i substratet ble deaminert. Efter 22 timer var (+)-enantiomeren i substratet (RT 12,5 min.) fullstendig fjernet, og pH i oppløsningen ble regulert til 10,5 ved tilsetning av konsentrert natrium-hydroksyd.

Oppløsningen fremstilt ovenfor ble eluert gjennom en kolonne av QAE Sephadex (A25, Pharmacia, 30X 1,6 cm), pre-ekvilibrert til pH 11. Kolonnen ble vasket med vann (200 ml) og derefter med HCl (0,1M). Fraksjoner (40 ml) ble tatt ut og analysert ved revers fase HPLC. Fraksjonene 5-13, som inneholdt den uomsatte (-)-enantiomeren i substratet, ble samlet og regulert til pH 7,5 med HCl. Fraksjon 47 som inneholdt deaminert produkt, ble regulert til pH 7,5 med fortynnet NaOH. Analyse ved chiral HPLC viste at dette materialet var en blanding bestående av en enantiomer (RT 10,2 min) som hoved-komponent med den andre enantiomeren (RT 8,5 min.) som en mindre bestanddel (e.e ca. 90%). (iii) Trinn (ii) ovenfor ble gjentatt i større skala. Forbindelsen i Eksempel 1 (363 mg) i 250 ml vann ble inkubert med enzym-oppløsning (0,5 ml), fremstilt som i Trinn (1). Ytterligere alikvoter (0,5 ml) av enzym ble tilsatt efter 18 og 47 timer. Reaksjonsblandingen ble omrørt i 70 timer, og fikk derefter stå i ytterligere 64 timer. Analyse ved chiral HPLC indikerte at (+)-enantiomeren i substratet var fullstendig deaminert, og den resulterende oppløsning ble regulert til pH 10,5 med NaOH.

Oppløsningen ovenfor ble fylt på den samme QAE kolonnen og eluert som i trinn (i). Fraksjonene 2-6, som inneholdt en blanding av det gjenværende substrat og deaminert produkt, ble samlet. Fraksjonene 7-13, som inneholdt det gjenværende substrat ((-)-enantiomer) ble samlet og regulert til pH 7,5. Fraksjonene 25-26, inneholdende deaminert produkt, ble samlet og nøytralisert.

Fraksjonene 2-6 ovenfor ble eluert påny gjennom den samme QAE-kolonnen. Fraksjonene 3-11 fra denne andre kolonnen inne holdt uomsatt substrat ((-)-enantiomer). Fraksjon 70 inneholdt det deaminerte produkt. (iv) De oppløste substrat-fraksjoner fra trinnene (ii) og-(iii) ble blandet og regulert til pH 7,5. Denne oppløsningen ble eluert gjennom en kolonne av XAD-16 (40 x 2,4 cm), pakket i vann. Kolonnen ble vasket med vann og derefter eluert med aceton:vann (1:4 volum/volum). Fraksjonene inneholdende den ønskede (-)-enantiomer ble samlet og frysetørret for å gi et hvitt pulver (190 mg).

De anvendte HPLC-metoder var som følger:

1. Reversert fase analytisk HPLC

Kolonne: Capital Cartridge Spherisorb ODS-2 (5uM)

150 x 4,6 mm

Eluerings-

middel: Ammoniumdihydrogenfosfat (50 mM)+5% MeCN Flyt: 1,5 ml/min

Deteksjon: UV, 270 nm

Retensjonstid: BCH 189 5,5 min

deaminert BCH-189 8,1 min.

2. Chiral analytisk HPLC

Kolonne: Cyclobond I Acetyl

250 x 4,6 mm

Eluerings-

middel: 0,2% trietylammoniumacetat (pH 7,2) Flyt: 1,0 ml/min.

Deteksjon: UV, 270 nm

Retensjonstid: BCH 189 11,0 og 12,5 min.

deaminert BCH-189 8,5 og 10,2 min.

(Bioomdannelsen ble fulgt ved å overvåke tap av toppen ved 12,5 min., og akkumulert produkt ved 10,2 min.)

Eksempel 1

En suspensjon av Mellomprodukt 5 (64,8 g) i vann (200 ml) ble oppvarmet til 45°c for å gi en oppløsning. Oppløsningen ble avkjølt til 30°.

Produktet krystalliserte som en masse som ikke kunne omrøres. Denne ble brukket opp og suspensjonen omrørt ved ca. 10° i 1 time.

Produktet ble isolert ved filtrering og vasket med etanol (IMS; 2 x 30 ml) og derefter tørret i vakuum ved 45° i 24 timer for å gi 3TC som Form I (fin-nålede krystaller).

Forbindelsen hadde IR-spektrum og DSC termografe identisk med henholdsvis Figurene 3 og 5.

Eksempel 2

En suspensjon av forbindelsen ifølge Eksempel 1 (10,0 g) i denaturert sprit (IMS; 200 ml; 2 0 volumdeler) ble oppvarmet til tilbakeløp for å gi en klar oppløsning. Oppløsningen ble varm-filtrert og filtratet ble destillert ved atmosfærisk trykk inntil 100 ml (10 volumdeler) av oppløsningen var tilba-ke. Oppløsningen ble podet med autentisk materiale 2 og fikk avkjøles fra 80° til 25° i løpet av 1 time. Krystallisering begynte ved 79°. Suspensjonen ble omrørt ved 15° i 1 time. Produktet ble isolert ved filtrering og vasket med IMS (10 ml;

1 volumdel). Tørring i vakuum ved 50° ga tittelforbindelsen som aggregater av bipyramider (8,42 g) , sm.p. 179-181°. (-)-cis-4-amino-l-(2-hydroksymetyl-1,3-oksatiolan-5-yl)-(1H)-pyrimidin-2-on

Analyse," funnet: C 41,9; H 4,85; N 18,35

<C>8<H>11N3°3<S>krever: C 41,9; H 4,8; N 18,3%

Forbindelsen hadde IR-spektrum og DSC termografe identisk med henholdsvis Figur 4 og 6.

Eksempel 3

En suspensjon av produktet ifølge Eksempel 1 (20,0 g) i denaturert sprit (IMS; 100 ml; 5 volumdeler) ble langsomt omrørt ved 50° i 1 time.

En liten prøve (ca. 100 mg) ble fjernet, tørret i vakuum ved 50° og undersøkt ved mikroskopi og differensial-skanning-kalorimetri (DSC).

Prøven var 100% Form II (bipyramidal-form).

Suspensjonen ble omrørt ved 50° i ytterligere 2 timer og en prøve fjernet. Mikroskopi viste ingen forandring.

Suspensjonen ble omrørt ved 50° i 22 timer, derefter avkjølt til 20° og omrørt i 1 time.

Suspensjonen ble filtrert, produktet ble vasket med IMS (2 0 ml, 1 vol.) og tørret i vakuum for å gi et hvitt, krystallinsk, fast stoff (17,13 g) (-)-cis-4-amino-1-(2-hydroksy-metyl-1, 3-oksatiolan-5-yl)-(1H)-pyrimidin-2-on, sm.p. 180-181°.

Analyse, funnet: C 41,85; H 4,85; N 18,3

C0H.-N-O-S krever: C 41,9; H 4,8; N 18,3%

o XXjo

Produktet hadde IR-spektrum og DSC termogram identisk med henholdsvis Figur 4 og 6.

Eksempel 4

Røntgenkrystallografi- data for Form II

Krystall- data

C8<H>11<N>3°3<S>' M = 229'26

Tetragonal, a = b = 8,749(3), c = 26,523(9) Å, V=2030(2)Å3 (ved minste-kvadrat raffinering på diffraktometer vinkler for 14 automatisk sentrerte refleksjoner, 1 = 1,54184Å

_3 Rom-gruppe P4-2 2 (Nr. 96), z = 8, D = 1,50 g cm

-1

F(000) = 960, m(CuKa) = 27,5 cm .

Dimensjoner til data-krystall 0,48 x 0,32 x 0,30 mm.

Enkle krystaller av Form II (farveløse bipyram<i>ider) ble undersøkt ved røntgendiffraksjon. Totalt 1651 refleksjoner ble målt (3<2J<115°) på et Siemens R<3>m/V diffraktometer med monokromatisert Cu-Ka stråling og under anvendelse av 2J/w skanning. Strukturen ble løst ved direkte metoder og ikke-hydrogenatomer raffinert anisotropisk. Hydrogenatomer bundet til karbon ble idealisert (C-H = 0,96Å) og fikk sitte på deres tilhørende karbonatomer. Tre H på _NH2~og -OH-grupper ble lokalisert fra et differanse Fourier kart. Alle H-atomer ble raffinert isotropisk. Raffineringen konvergerte for å gi

-1 2 2

R=0,068, R =0,069, w = [s (F)+0,005 [F] ] . Maksimum gjenvæ-W -3

rende elektron-densitet var 0,45 eA . Den absolutte chiralitet ble bekreftet under anvendelse av Rogers eta-test [h=0,99(9)].

Eksempel 5

Farmasøytiske preparater

( a) 100 mg Tabletter

3TC (Form II), mikrokrystallinsk cellulose og natrium-stivelsesglykolat ble siktet og blandet i en V-blander i ca. 15 minutter. Siktet magnesiumstearat ble derefter tilsatt, og blanding ble fortsatt i ytterligere 2 minutter.

Blandingen ble presset i standard tabletterings-utstyr og derefter filmbelagt med en vandig suspensjon av grå Opadry for å fremstille estetisk godtagbare tabletter.

( b) 300 mg tabletter

Tablettene ble fremstilt som beskrevet under (a) ovenfor.

Claims

1. Kjemisk forbindelse,karakterisert vedat den er (-)-cis-4-amino-1-(2-hydroksymetyl-1,3-oksatiolan-5-yl)-(1H)-pyrimidin-2-on i krystallinsk form.

2. Forbindelse ifølge krav 1,karakterisertved at den er i form av bipyramidale krystaller.

3. Krystallinsk form ifølge i krav 1 eller 2,karakterisert vedsmeltepunkt over 170°c.

4. Krystallinsk form ifølge ett av kravene 1-3,karakterisert vedsmeltepunkt på 177-178°C.

5. Krystallinsk form ifølge ett av kravene 1 til 4,karakterisert vedabsorpsjonsbånd i det infrarøde spektrum ved bølgetall 920 og 850.

6. Krystallinsk form ifølge i ett av kravene 1 til 5,karakterisert vedat den ikke har absorpsjonsbånd i det infrarøde spektrum ved bølgetall 1110.

7. Krystallinsk form ifølge et av kravene 1 til 6,karakterisert vedat den har en endoterm med en begynnelsestemperatur på 177-178°c i sin differensiale skanning-kalorimetri-profil.

8. Forbindelse ifølge krav 1, karakterisert vedat den er i form av nåleformede krystaller.

9. Krystallinsk form ifølge krav 1 eller 8,karakterisert vedet smeltepunkt under 130°C.

10. Krystallinsk form ifølge krav 1, krav 8 eller krav 9,karakterisert vedet smeltepunkt på 124-127°C.

11. Krystallinsk form ifølge krav 1 eller et av kravene 8-11,karakterisert veden endoterm med en begynnelsestemperatur på 124-127°C i sin differensiale skanning-kalorimetri-profil.

12. Krystallinsk form ifølge krav 1 eller et av kravene 8 til 11,karakterisert vedet absorpsjonsbånd i det infrarøde spektrum ved bølgetall ca.1110.

13. Forbindelsen (-)-cis-4-amino-1-(2-hydroksymetyl-1,3 - oksatiolan-5-yl)-(1H)-pyrimidin-2-onkarakterisert vedat den er i krystallinsk form som vist på Figur 1.

14. Forbindelsen (-)-cis-4-amino-l-(2-hydroksymetyl-l,3-oksatiolan-5-yl)-(1H)-pyrimidin-2-onkarakterisert vedat den er i krystallinsk form som vist på Figur 2.

15. Forbindelsen (-)-cis-4-amino-l-(2-hydroksymetyl-l,3-oksatiolan-5-yl)-(1H)-pyrimidin-2-onkarakterisert vedat den er i krystallinsk form med et infrarødt spektrum som vist i Figur 3.

16. Forbindelsen (-)-cis-4-amino-1-(2-hydroksymetyl-l,3 - oksatiolan-5-yl)-(1H)-pyrimidin-2-onkarakterisert vedat den er i krystallinsk form med et infrarødt spektrum som vist i Figur 4.

17. Fremgangsmåte for fremstilling av (-)-cis-4-amino-l-(2-hydroksymetyl-1,3-oksatiolan-5-yl)-(1H)-pyrimidin-2-on i krystallinsk form,karakterisert vedkrystallisering av forbindelsen fra vandig oppløsning.

18. Fremgangsmåte for fremstilling av (-)-cis-4-amino-1-(2 - hydroksymetyl-1,3-oksatiolan-5-yl)-(1H)-pyrimidin-2-on i krystallinsk form,karakterisert vedazeotrop destillering av en vandig oppløsning av forbindelsen med propan-1-ol.

19. Fremgangsmåte for fremstilling av (-)-cis-4-amino-1-(2-hydroksymetyl-1,3-oksatiolan-5-yl)-(1H)-pyrimidin-2-on i krystallinsk form,karakterisert vedomkrystallisering fra ikke-vandig medium.

20. Fremgangsmåte ifølge krav 19, karakterisert vedat det ikke-vandige medium er en C2_galkohol.

21. Fremgangsmåte ifølge krav 19 eller 20,karakterisert vedat det ikke-vandige medium er valgt fra etanol og denaturert sprit.

22. Fremgangsmåte for fremstilling av (-)-cis-4-amino-l-(2-hydroksymetyl-1,3-oksatiolan-5-yl)-(1H)-pyrimidin-2-on i form av bipyramidale krystaller, karakterisert vedaldring av forbindelsen i form av nåleformede krystaller i etanol eller denaturert sprit ved forhøyet temperatur.

23. Farmasøytisk preparat, karakterisert vedat det omfatter (-)-cis-4-amino-1-(2-hydroksymetyl-l,3-oksatiolan-5-yl)-(1H)-pyrimidin-2-on i krystallinsk form og en farmasøytisk godtagbar bærer.

24. Farmasøytisk preparat ifølge krav 23,karakterisert vedat det er i form av en tablett eller kapsel.