CZ284513B6

CZ284513B6 - (-)cis-4-amino-1-(2-hydroxymethyl-1,3-oxathiolan 5-yl)-(1H)-pyrimidin-2-on v krystalické formě

Info

Publication number: CZ284513B6
Application number: CS932612A
Authority: CZ
Inventors: Paul Ravenscroft; Tony Gordon Roberts; Paul Evans
Original assignee: Glaxo Group Limited
Priority date: 1991-06-03
Filing date: 1992-06-02
Publication date: 1998-12-16
Also published as: AU1881092A; JPH06211848A; JP2851480B2; AP300A; US5905082A; NO922182L; AP9200395A0; ATE212630T1; BG60914B1; SK125793A3; CA2311988A1; MX9202619A; EP0517145A1; IS4268A; CA2070230A1; TW254939B; CA2070230C; KR930000511A; HK1009599A1; EP1099700A1

Abstract

(-)cis-4-amino-1-(2-hydroxymethyl-1,3-oxathiolan-5-yl)-(1H)-pyridimin-2-on v krystalické formě, a to ve formě jehličkovitých nebo bipyramidálních krystalků. Řešení se týká také způsobu výroby této látky a farmaceutických prostředků s protivirovým účinkem, které tuto látku obsahují.ŕ

Description

Vynález se týká (-)cis-4-amino-l-(2-hydroxymethyl-l,3-oxathiolan-5-yi)-(lH)-pyrimidin2-onu v krystalické formě. Vynález se rovněž týká způsobu výroby této látky a farmaceutických prostředků k léčení virových infekcí, které tuto látku obsahují.

Dosavadní stav techniky

Sloučenina vzorce I

známá také jako BCH-189 nebo NGPB-21, se uvádí jako látka s protivirovým účinkem zejména proti virům lidské imunodeficience HIV, které jsou původci syndromu AIDS, jak uvádí 5^th AntiAids Conference, Montreal, Kanada, 5. - 9. června 1989, Abstracts T.C.O.l a M.C.P. 63 a evropský patentový spis č. 382 562. Sloučenina vzorce I je racemickou směsí dvou enantiomerů, které je možno vyjádřit vzorci 1-1 a 1-2

nh₂ i	NH, I
nA	oA)
HOCH·,, ψ D	HOCH, “ u

a byla popsána a zkoušena ve formě racemátu. Jedinou sloučeninou, která se běžně užívá pro léčení onemocnění, způsobených HIV, je 3'-azido-3'-deoxythymidin, označovaný také AZT, zidovudin nebo BW 509U. Tato sloučenina však často působí významné vedlejší účinky a tak ji buď není možno použít, nebo je nutno ji po použití opět přestat podávat u vysokého počtu nemocných. Bylo by proto zapotřebí nalézt sloučeniny, které jsou rovněž účinné proti HIV, avšak mají podstatně výhodnější terapeutický index.

Přestože enantiomery sloučeniny vzorce I mají proti HIV stejný účinek, má (-)-enantiomer podstatně nižší cytotoxický účinek než druhý z enantiomerů a je tedy výhodnou látkou s protivirovým účinkem.

- 1 CZ 284513 B6

Tento (-)-enantiomer je možno označit chemickým názvem (-)cis^4—amino-l-(2-hydroxymethyl-l,3-oxathiolan-5-yl)-(lH)-pyrimidin-2-on. Tato látka má stereochemii sloučeniny vzorce I-1, kterou je možno označit názvem (2R,cis)-4-amino-l-(2-hydroxymethyl-l,3-oxathiolan-5-yl)-(lH)-pyrimidin-2-on. Sloučenina je známa jako 3TC.

Sloučenina 3TC by měla být v podstatě prostá odpovídajícího (+)-enantiomeru, to znamená, že by měla obsahovat nejvýše 5 % hmotnostních uvedeného enantiomeru, s výhodou nejvýše 2 a zvláště nejvýše 1 % hmotnostní.

Mezinárodní patentová přihláška PCT/GB91/00706, zveřejněná jako WO 91/17159, popisuje způsob výroby 3TC, protivirový účinek této látky a její použití v medicíně. Podle této zveřejněné přihlášky se 3TC popisuje a připravuje jako lyofilizovaný prášek.

Nyní bylo zjištěno, že 3TC je možno získat v krystalické formě, přičemž je možno pozorovat polymorfismus.

Podstata vynálezu

Podstatu vynálezu tvoří uvedená sloučenina 3TC ve své krystalické formě, vybrané z bipyramidálních nebo jehličkovitých krystalků.

Při krystalizací z vodného roztoku se 3TC získá ve formě jehličkovitých krystalků, které budou dále uváděny jako forma I. V této formě nejsou krystalky vhodné pro zpracování na lékové formy farmaceutických prostředků vzhledem ke svým fyzikálním vlastnostem, například pro špatnou sypnost. Bylo prokázáno, že za určitých podmínek je možno 3TC získat ve formě v podstatě bipyramidálních krystalků, které budou dále uváděny jako forma II. Krystalická forma II má lepší sypnost a je tedy výhodnější pro použití při výrobě pevných lékových forem. Mimoto jsou krystalky formy I méně stálou formou a při některých farmaceutických postupech, například při mletí, může docházet k přeměně krystalické formy I na formu II, což je nežádoucí.

Sloučenina 3TC ve formě bipyramidálních krystalků má teplotu tání vyšší než 170°C, v čisté formě v rozmezí 177 až 178 °C. 3TC v jehličkovité formě má teplotu tání nižší než 130 °C, v čisté formě 124 až 127 °C.

3TC v krystalické formě II má charakteristické absorpční pásy v IR-spektru, které chybí v odpovídajícím spektru formy I. Zejména má forma II silné absorpční pásy při vlnočtu přibližně 920 a 850. Mimoto chybí ve spektru formy II charakteristický pás, který se ve spektru formy I nachází při vlnočtu 1110.

Forma II sloučeniny 3TC má charakteristický endotermní úsek při teplotě 177 až 178 °C při provádění diferenciální kalorimetrie DSC. Naproti tomu má forma I při provádění DSC endotermní úsek při teplotě 124 až 127 °C.

Podstatu vynálezu tedy tvoří také sloučenina 3TC ve formě jehličkovitých krystalků.

V dalším provedení vynálezu tvoří podstatu vynálezu také 3TC ve formě bipyramidálních krystalků.

V ještě dalším provedení se vynález týká sloučeniny 3TC v krystalické formě s teplotou tání vyšší než 170, zvláště 177 až 178 °C. Jinak je možno tuto skutečnost vyjádřit tak, že se vynález týká 3TC v krystalické formě, která má při provádění DSC endotermní úsek při teplotním rozmezí 177 až 178 °C.

-2CZ 284513 B6

V ještě dalším provedení se vynález týká 3TC v krystalické formě s absorpčními pásy v IR-spektru přibližně při vlnotočtu 920 a 850, přičemž ve spektru chybí absorpční pás při vlnočtu 1110.

3TC je možno z racemátu získat rozdělením racemátu jakýmkoliv známým postupem, který se v oboru užívá pro dělení racemátů na odpovídající enantiomery. Zvláště vhodným způsobem pro získání 3TC z racemátu je chirální HPLC, enantioselektivní katabolismus při použití vhodného enzymu, například cytidindeaminázy, nebo selektivní enzymatická degradace vhodného derivátu při použití 5'-nukleotidu. Vhodné postupy pro výrobu 3TC byly popsány v mezinárodní přihlášce WO 91/17159.

3TC ve formě jehličkovitých krystalků je možno získat krystalizací uvedené látky z vodného roztoku nebo azeotropní destilací s propan-l-olem.

3TC ve výhodné formě bipyramidálních krystalků je možno připravit překrystalováním z nevodného prostředí, s výhodou z alkoholu o 2 až 6 atomech uhlíku, například z ethanolu, IMS (průmyslový denaturovaný ethylalkohol), nebo propan-l-olu. Výhodným postupem pro získání 3TC v bipyramidální formě je postup, při němž se tato látka nejprve získá v jehličkovité formě a tato forma se pak nechá stát v IMS nebo v ethanolu při vyšší teplotě, například 30 až 70, s výhodou 50 °C, po dostatečně dlouhou dobu, například 0,5 až 3 hodiny, s výhodou alespoň 1 hodinu.

Sloučeninu 3TC v bipyramidální formě je možno získat také tak, že se sloučenina ve formě jehličkovitých krystalků zahřeje nad svou teplotu tání 124 až 127 °C, zvláště na teplotu vyšší než 170, například nad 177 až 178 °C a roztavená látka se pak nechá zchladnout.

Dalším možným postupem pro získání 3TC v bipyramidální formě je mletí téže látky ve formě jehličkovitých kiystalů.

S výhodou je sloučenina 3TC ve formě bipyramidálních krystalků v podstatě prostá jehličkovitých krystalků. V případě, že se tato krystalická forma připravuje překrystalováním nebo stáním uvedené látky v kapalném prostředí, získá se požadovaná forma obvykle tak, že je zcela prostá krystalků jehličkovitého tvaru.

3TC v krystalické formě je možno užít jako protivirovou látku, jak bylo popsáno ve zveřejněné mezinárodní patentové přihlášce WO 91/17159.

V uvedené patentové přihlášce je rovněž popsáno zpracování 3TC na farmaceutické prostředky s protivirovým účinkem.

Přehled obrázků na výkresech

Na obr. 1 je 3TC ve formě krystalků jehličkovitého tvaru, to znamená ve formě I. Na obr. 2 je 3TC ve formě bipyramidálních krystalků, to znamená ve formě II.

Na obr. 3 je znázorněno IR-spektrum formy I.

Na obr. 4 je znázorněno IR-spektrum ve formě II.

Na obr. 5 je znázorněn termogram DSC pro formu I.

Na obr. 6 je znázorněn termogram DSC pro formu II.

-3CZ 284513 B6

Praktické provedení vynálezu bude osvětleno následujícími příklady, které však nemají sloužit k omezení rozsahu vynálezu. Všechny teplotní údaje, uvedené v příkladové části, jsou ve stupních Celsia.

Příklady provedení vynálezu

Meziprodukt 1

5-Methoxy-l,3-oxathiolan-2-methanolbenzoát

Roztok 1,6 g chloridu zinečnatého v 15 ml horkého methanolu se přidá k míchanému roztoku 34,2 g merkaptoaldehyddimethylacetalu a 48,3 g benzoyloxyacetaldehydu v 1300 ml toluenu a 15 směs se pak zahřívá 50 minut pod dusíkem na teplotu varu pod zpětným chladičem. Zchlazená směs se zahustí, zředí malým množstvím toluenu a pak se zfiltruje přes infuzoriovou hlinku. Filtráty a toluenový roztok se spojí, dvakrát se promyjí nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a jednou nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem hořečnatým a odpaří na olej, který se podrobí chromatografii na sloupci s náplní 2 kg oxidu 20 křemičitého Měrek 9385, jako eluční činidlo se užije chloroform, čímž se získá 45,1 g produktu ve formě oleje jako směs anomerů v poměru přibližně 1:1.

'H-NMR (DMSO-dó): 3,1 - 3,3 (4H), 3,42 (6H), 4,4 - 4,6 (4H), 5,41 (1H), 5,46 (1H), 5,54 (1H), 5,63 (1H), 7,46 (4H), 7,58 (2H), 8,07 (4H).

IR-spektrum (CHBr₃) má maximum při 1717,6 cm“¹.

Meziprodukt 2 (±)-cis-l-(2-Benzoyloxymethyl-l ,3-oxathiolan-5-yl)-( 1 H)-pyrimidin-2,4-dion

Směs 9,62 g jemně mletého uracilu, 50 ml hexamethyldisilazanu a 30 mg síranu amonného se zahřívá pod dusíkem na teplotu varu pod zpětným chladičem tak dlouho, až vznikne čirý roztok. 35 Tento roztok se zchladí a pak odpaří na bezbarvý olej, který se pod dusíkem rozpustí ve 100 ml acetonitrilu. Roztok se přidá k míchanému, ledem chlazenému roztoku 19,43 g 5-methoxy-l ,3oxathiolan-2-methanolbenzoátu, to znamená meziproduktu 1 v 600 ml acetonitrilu a pak se přidá ještě 14,7 ml trimethylsilyltrifluormethansulfonátu. Ledová lázeň se odstraní a roztok se zahřívá pod dusíkem 45 minut na teplotu varu pod zpětným chladičem. Po zchlazení a odpaření 40 se odparek čistí chromatografií na sloupci s náplní 1 kg silikagelu Měrek 9385, jako eluční činidlo se užije směs chloroformu a methanolu v objemovém poměru 9:1. Příslušné frakce se zchladí a odpaří, čímž se získá surový odparek, který se podrobí frakční krystalizaci z co nejmenšího množství, přibližně 1200 ml horkého methanolu, čímž se získá 6,32 g výsledného produktu ve formě bílých krystalků.

'H-NMR (DMSO-d₆): 11,36 (1H, široký s), 7,50 - 8,00 (6H, m), 6,20 (1H, t), 5,46 (2H, m), 4,62 (2H, m), 3,48 (1H, m), 3,25 (1H, m).

-4I

Meziprodukt 3 (±)-(cis)-4-Amino-l-(2-benzoyloxymethyl-l ,3-oxathiolan-5-yl)-( 1 H)-pyrimidin-2-on

Metoda a)

Suspenze 20,705 g cytosinu a několik mg síranu amonného v 110 ml hexamethyldisilazanu se 2,5 hodiny míchá a zahřívá pod dusíkem na teplotu varu pod zpětným chladičem. Pak se rozpouštědlo odpaří a odparek se rozpustí ve 350 ml bezvodého acetonitrilu. Vzniklý roztok se přenese ohebnou jehlou do míchaného, ledem chlazeného roztoku 43,57 g 5-methoxy-l,3oxathioIan-2-methanolbenzoátu, to znamená meziproduktu 1 v 650 ml acetonitrilu pod dusíkem. Pak se přidá 33 ml trimethylsilyltrifluormethansulfonátu, roztok se 1,5 hodiny nechá zteplat na teplotu místnosti a pak se zahřívá přes noc na teplotu varu pod zpětným chladičem. Pak se směs odpaří, zředí 500 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a pak extrahuje 3 x 500 ml ethylacetátu. Extrakty se spojí, promyjí se 2x250 ml vody a 250 ml nasyceného vodného roztoku chloridu sodného, vysuší se síranem hořečnatým a odpaří na pěnu, která se chromatografuje na sloupci s náplní 600 g oxidu křemičitého Měrek 7734, jako eluční činidlo se užije směs ethylacetátu a methanolu, čímž se získá 31,59 g směsi anomerů v poměru přibližně 1:1. Tato směs se nechá krystalizovat ze směsi 45 ml vody a 9,0 ml ethanolu, čímž se získá 10,23 g pevné látky, která se nechá překrystalovat ze směsi 120 ml ethanolu a 30 ml vody, čímž se získá 9,26 g výsledného produktu ve formě bílé pevné látky.

UV-spektrum (methanol): 229,4 mm (E^1% 610), 272,4 mm (E^1% 293).

’Η-NMR (DMSO-d₆): 3,14 (1H), 3,50 (1H), 4,07 (2H), 5,52 (1H), 5,66 (1H), 6,28 (1H), 7,22 (2H), 7,56 (2H), 7,72 (2H), 8,10 (2H).

Metoda b)

7,0 ml oxychloridu fosforečného se po kapkách přidá k míchané, ledem chlazené suspenzi 11,65 g 1,2,4-triazolu ve 120 ml acetonitrilu a pak se po kapkách přidá 22,7 ml triethylaminu, přičemž vnitřní teplota směsi se udržuje na hodnotě nižší než 15 °C. Po 10 minutách se pomalu přidá ještě roztok 6,27 g (±)-cis-l-(2-benzoyloxymethyl-l,3-oxathiolan-5-yl)-(lH)-pyrimidin-2,4-dionu, tj. meziproduktu 2 v 330 ml acetonitrilu. Pak se směs míchá přes noc při teplotě místnosti. Směs se zchladí v ledové lázni a pomalu se přidá nejprve 30 ml triethylaminu a pak 21 ml vody. Výsledný roztok se odpaří a odparek se dělí mezi 400 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a 3 x 200 ml chloroformu. Chloroformové extrakty se spojí, vysuší síranem hořečnatým, pak se zfiltrují a odpaří, čímž se získá 9,7 g surového odparku. Odparek se rozpustí ve 240 ml 1,4-dioxanu a přidá se 50 ml koncentrovaného vodného roztoku amoniaku se specifickou hmotností 0,880. Po 1,5 hodině se roztok odpaří a odparek se rozpustí v methanolu. Dojde k vysrážení pevné látky, která se odfiltruje. Matečný louh se čistí chromatografii na sloupci s náplní 600 g silikagelu Měrek 9385. Příslušné frakce se spojí a odpaří, čímž se získá 2,18 g výsledné látky špinavě bílé barvy, produkt je totožný s produktem, získaným metodou a).

Meziprodukt 4 (±)-(cis)-4-Amino-l-(2-hydroxymethyl-l ,3-oxathiolan-5-yl)-( 1 H)-pyrimidin-2-on

Suspenze 8,19 g (cis}-4-amino-l-(2-benzoyloxymethyl-l,3-oxathiolan-5-yl)-{lH)-pyrimidin-2-onu, tj. meziproduktu 3 a 8,24 g pryskyřice Amberlite IRA—400 (OH) ve 250 ml methanolu se 1,25 hodin míchá a zahřívá na teplotu varu pod zpětným chladičem. Pevný podíl se

-5CZ 284513 B6 odfiltruje a promyje methanolem. Filtráty se spojí a odpaří, odparek se rozetře s 80 ml ethylacetátu. Výsledná bílá pevná látka se odfiltruje, čímž se získá 5,09 g produktu.

'H-NMR (DMSO-d₆): 3,04 (IH), 3,40 (IH), 3,37 (2H), 5,18 (IH), 5,29 (IH), 5,73 (IH), 6,21 (IH), 7,19 (2H), 7,81 (IH).

Meziprodukt 5 (-)-cis-4-Amino-l-(2-hydroxymethyl-l,3-oxathioloan-5~yl)-(lH)-pyrimidin-2-on

i) Tři baňky s objemem 50 ml a náplní živného bujónu (Oxoid Ltd) se naočkují vždy plnou bakteriologickou kličkou Escherichia coli ATCC 23848, odebranou z plotny živného agaru. Baňky se inkubují přes noc při teplotě 37 °C za protřepávání 250 ot/min a pak se každá z nich užije k naočkování 4 litrů prostředí CDD ve složení kyselina glutamová 3 g/1, síran hořečnatý 0,2 g/1, síran draselný 2,5 g/1, chlorid sodný 2,3 g/1, Na₂HPO₄.2H₂O 1,1 g/1, NaH₂PO4.2H₂O 0,6 g/1 a cytidin 1,2 g/1 ve fermentoru s objemem 7 litrů. Kultura se pěstuje při 750 ot/min o teplotě 37 °C za provzdušnění 4 1/min. Po 24 hodinách růstu se buňky oddělí odstředěním 30 minut při 5000 g, čímž se získá 72 g vlhké hmoty. Tylo buňky se znovu uvedou do suspenze ve 300 ml pufru 20 mM tris HC1, pH 7,5 a rozruší se působením ultrazvuku 4 x 45 sekund. Buněčná drť se oddělí odstředěním 30 minut při 30 000 g a bílkovina v supematantu se vysráží přidáním síranu amonného do 75% nasycení. Sraženina se oddělí odstředěním 30 minut při 30 000 g a usazenina se znovu uvede do suspenze ve 25 ml pufru HEPES s koncentrací 100 mM o pH 7,0, pufr obsahuje síran amonný do 75% nasycení. Roztok enzymu se připraví odstředěním 30 minut při 12 000 ot/min. Supematant se odloží a usazenina se rozpustí v původním objemu tris pufru s HC1 s koncentrací 100 mM o pH 7,0.

ii) 115 mg meziproduktu 4 se rozpustí ve 100 ml vody a roztok se míchá. Přidá se 0,5 ml roztoku enzymu a směs se udržuje na stálém pH kontinuálním přidáváním 25 mM kyseliny chlorovodíkové. Přeměna se sleduje pomocí chirální HPLC, je možno prokázat, že přednostně dochází k deaminaci (+)-enantiomeru ze substrátu. Po 22 hodinách je (+)-enantiomer ze substrátu při době retence 12,5 minut zcela odstraněn a pH roztoku se upraví na 10,5 přidáním koncentrovaného hydroxidu sodného.

Získaný roztok se nanese na sloupec s rozměrem 30 x 1,6 cm s náplní QAE-Sephadexu (A25, Pharmacia) v rovnovážném stavu při pH 11. Sloupec se promyje 200 ml vody a pak se vymývá 0,1 M kyselinou chlorovodíkovou. Odebírají se frakce po 40 ml a analyzují se HPCL v reverzní fázi. Frakce 5 až 13, obsahující nezreagovaný (-)-enantiomer ze substrátu, se spojí a pH se upraví na 7,5 kyselinou chlorovodíkovou. Frakce 47, obsahující deaminovaný produkt, se upraví na pH 7,5 zředěným hydroxidem sodným. Analýza chirální HPLC prokázala, že tento materiál je ve skutečnosti směs, obsahující jeden z enantiomerů s dobou retence 10,2 minut jako hlavní složku v množství přibližně 90 % a druhý enantiomer s dobou retence 8,5 minut v menším množství.

iii) Stupeň ii) se opakuje ve větším měřítku. 363 mg sloučeniny z příkladu 1 ve 250 ml vody se inkubuje s 0,5 ml roztoku enzymu, připraveného ve stupni i). Další podíly 0,5 ml enzymu se přidají po 18 až 47 hodinách. Reakční směs se míchá 70 hodin a pak se nechá stát dalších 64 hodin. Analýzou pomocí chirální HPLC je možno prokázat, že došlo k úplné deaminaci (+)enantiomerů v substrátu a výsledný roztok se upraví na pH 10,5 hydroxidem sodným.

Získaný roztok se nanese na tentýž sloupec s náplní QAE jako ve stupni i) a eluce se provádí také stejným způsobem. Frakce 2 až 6, obsahující směs zbylého substrátu a deaminovaného produktu, se spojí. Frakce 7 až 13, obsahující zbývající substrát, tj. (-)-enantiomer, se spojí a pH se upraví na 7,5. Frakce 25 až 26 s obsahem deaminovaného produktu se spojí a neutralizují.

-6CZ 284513 B6

Frakce 2 až 6 se znovu chromatografují na tomtéž sloupci s náplní QAE. Frakce 3 až 11 z této druhé chromatografie obsahují (-)-enantiomer. Frakce 70 obsahuje deaminovaný produkt.

iv) Rozdělené frakce substrátu ze stupně ii) a iii) se spojí a pH se upraví na 7,5. Roztok se nechá projít sloupcem s rozměrem 40 x 2,4 cm a náplní XAD-16 ve vodě. Sloupec se promyje vodou a pak se jako eluční činidlo užije směs acetonu a vody v objemovém poměru 1 : 4. Frakce, obsahující požadovaný (-)-enantiomer, se spojí a lyofilizují, čímž se získá 190 mg bílého prášku.

Při uvedených chromatografických postupech bylo užito následující analytické HPLC v reverzní fázi:

1. Analytická HPLC v reverzní fázi

sloupec:	náplň Spherisorb ODS-2 (5 μΜ) 150 x 4,6 mm,
eluční činidlo:	50 mM dihydrogenfosforečnanu amonného + 5 % ethylkyanidu,
rychlost průtoku:	1,5 ml/min,
detekce:	UV-záření, 270 nm,
doba retence:	BCH-189: 5,5 minut, deaminovaný BCH-189: 8,1 minut.

2. Chirální analytická HPLC

sloupec:	náplň Cyclobond I Acetyl 250 x 4,6 mm,
eluční činidlo:	0,2% triethylamoniumacetát, pH 7,2,
rychlost průtoku:	1,0 ml/min,
detekce:	UV-záření, 270 nm,
doba retence:	BCH-189: 11,0 a 12,5 min, deaminovaný BCH-189: 8,5 a 10,2 min. Biologická přeměna byla sledována průkazem ztráty vrcholu s dobou retence 12,5 min a hromaděním produktu s dobou retence 10,2 min.

Příklad 1

Suspenze 64,8 g meziproduktu 5 ve 200 ml vody se zahřeje na 45 °C, čímž vznikne čirý roztok, který se pak zchladí na teplotu 30 °C.

Produkt vykrystalizuje jako hmota, která ztuhne, takže se již nedá míchat. Tato hmota se rozruší na suspenzi, která se pak míchá 1 hodinu při teplotě přibližně 10 °C.

Produkt se oddělí filtrací a promyje se ethanolem (2 x 30 ml IMS), načež se suší ve vakuu 24 hodin při 45 °C za získání 3TC v krystalické formě I, jde o jemné jehličkovité krystalky.

IR-spektrum a termografický záznam DSC tohoto materiálu jsou uvedeny na obr. 3 a 5.

Příklad 2

Suspenze 10,0 g sloučeniny z příkladu 1 ve 200 ml (20 objemech) průmyslového denaturovaného lihu IMS se zahřívá na teplotu varu pod zpětným chladičem až do vzniku čirého roztoku. Pak se roztok za horka zfiltruje a filtrát se destiluje za atmosférického tlaku tak dlouho, až zbývá 100 ml (10 objemů) roztoku. Pak se roztok naočkuje krystalky požadovaného materiálu a nechá se v průběhu jedné hodiny zchladnout z 80 na 25 °C. Krystalizace začíná při teplotě 79 °C.

Suspenze se 1 hodinu míchá při teplotě 15 °C. Pak se produkt oddělí filtrací a promyje se 10 ml, jedním objemem IMS. Po sušení ve vakuu při teplotě 50 °C se získá 8,42 g produktu ve formě shluků bipyramidálních krystalků (-)-cis-4-amino-l-(2-hydroxymethyl-l,3-oxathiolan-5-yl)(lH)-pyrimidin-2_onu s teplotou tání 179 až 181 °C.

Analýza pro CgHnNjChS:

vypočteno: C 41,9, H 4,8, N 18,3 %, nalezeno: C 41,9, H 4,85, N 18,35 %.

IR-spektrum této látky a termografický záznam při DSC jsou uvedeny na obr. 4 a 6.

Příklad 3

Suspenze 20,0 g produktu z příkladu 1 ve 100 ml, pěti objemech, průmyslového denaturovaného ethanolu IMS se 1 hodinu pomalu míchá při teplotě 50 °C.

Malý vzorek přibližně 100 mg materiálu se oddělí, suší ve vakuu při 50 °C a zkoumá se mikroskopicky a mimoto pomocí DSC.

Bylo prokázáno, že vzorek je tvořen ze 100 % krystalickou formou II, bipyramidálními krystalky.

Suspenze byla další 2 hodiny zahřívána na 50 °C a znovu byl odebrán vzorek. V mikroskopu nebylo možno prokázat žádnou změnu.

Pak byla suspenze míchána 22 hodin při teplotě 50 °C, zchlazena na 20 °C a při této teplotě ještě 1 hodinu míchána.

Pak byla suspenze zfiltrována, produkt byl promyt 20 ml, tj. jedním objemem, IMS a sušen ve vakuu, čímž bylo získáno 17,13 g bílé krystalické pevné látky, (-)-cis-4-amino-l-(2hydroxymethyl-l,3-oxathiolan-5-yl)-(lH)-pyramidin-2-onu s teplotou tání 180 až 181 °C.

Analýza pro C8H11N3O3S: vypočteno: C 41,9, H 4,8, N 18,3 %, nalezeno: C 41,85, H 4,85, N 18,3 %.

IR-spektrum a termogram produktu při DSC jsou totožné s hodnotami, znázorněnými na obr. 4 a 6.

Příklad 4

Krystalografické údaje pro formu II při difrakci rtg-záření

Údaje jsou uvedeny pro CgHnNsChS, molekulová hmotnost 229,26.

Tetragonální struktura, a = b = 8,749(3), c = 26,523(9)A, V = 2030(2)A³ (hodnoty byly stanoveny metodou nejmenších čtverců na základě difraktometrických úhlů pro 14 automatických středovaných odrazů paprsků, 1 = 1,54184A).

Prostorová skupina P4₃2]2 (č. 96), z = 8, D_c = 1,50 g cm'³.

F(000) = 960, m(Cu-Ka) = 27,5 cm'¹.

-8CZ 284513 B6

Rozměry krystalů 0,48 x 0,32 x 0,30 mm.

Jednotlivé krystalky formy II (bezbarvé bipyramidální krystalky) byly zkoumány difrakcí rtgzáření. Bylo změřeno celkem 1651 odrazů (3 < 2J < 115°) na difraktometru Siemens R³ m/V s monochromatizovaným zářením Cu-Ka při použití stínítek 2J/W. Struktura byla stanovena přímou metodou, atomy, odlišné od vodíku, byly rozlišovány anizotropicky. Atomy vodíku, vázané na atomy uhlíku, byly idealizovány (C-H = 0,96A) v závislosti na spojení s jejich atomy uhlíku. Tři atomy vodíku na skupinách -NH₂ a -OH byly lokalizovány na základě Fourierovy mapy. Všechny vodíkové atomy byly rozlišeny izotropicky. Byly získány hodnoty R = 0,068, R_w = 0,069, w¹ = /s²(F)+0,005/F/²/. Maximální reziduální hustota elektronů byla 0,45 eA'³. Absolutní chiralita byla potvrzena při použití Rogerova testu eta /h = 0,99(9)/.

Příklad 5

Farmaceutické prostředky

a) Tablety s obsahem 100 mg účinné látky

složka	množství v mg
3TC (forma 11) mikrokrystalická celulóza NF sodná sůl glykolátu škrobu NF stearan hořečnatý NF celková hmotnost	100,0 189,5 9,0 1,5 300,0

3TC ve formě II, mikrokrystalická celulóza a sodná sůl glykolátu škrobu byly prosáty a míšeny v mísícím zařízení přibližně 15 minut. Pak byl přidán prosátý stearan hořečnatý a směs byla míchána další 2 minuty.

Pak byla směs lisována na standardním tabletovacím zařízení a získané tablety byly opatřeny šedým povlakem, nanášeným ve formě vodné suspenze (Opadry) za vzniku esteticky přijatelných tablet.

b) Tablety s obsahem 300 mg účinné látky

složka	množství v mg
3TC forma 11 mikrokrystalická celulóza NF sodná sůl glykolátu škrobu NF stearan hořečnatý NF celková hmotnost	300,0 279,0 18,0 1,5 600,0

Tablety byly připraveny stejným způsobem jako svrchu ve stupni a).

Claims

1. (-)-cis-4-Amino-l-(2-hydroxymethyl-l,3-oxathiolan-5-yl)-(lH)-pyrimidin-2-on v krystalické formě, vybrané z bipyramidálních nebo jehličkovitých krystalků.

2. (-)cis-4-Amino-l-(2-hydroxymethyl-l ,3-oxathiolan-5-yl)-(l H)-pyrimidin-2-on podle nároku 1 ve formě bipyramidálních krystalků.

3. Krystalická forma podle nároku 2 s teplotou tání 177 až 178 °C, s absorpčními pásy v IR-spektru při vlnočtu 920 a 85O.cm~' a s endotermním úsekem od teploty 177 až 178 °C při provádění diferenciální kalorimetrie.

4. (-)cis-4-Amino-l-(2-hydroxymethyl-l,3-oxathiolan-5-yl)-(lH)-pyrimidin-2-on podle nároku 1 ve formě jehličkovitých krystalků.

5. Krystalická forma podle nároku 4, s teplotou tání 124 až 127 °C, s endotermním úsekem od teploty 124 až 127 °C při diferenciální kalorimetrii a s absorpčním pásem v IR-spektru při vlnočtu 1110.cm“¹.

6. Způsob výroby (-)cis-4-amino-l-(2-hydroxymethyl-l,3-oxythiolan-5-yl)-(lH)-pyrimidin-2-onu v krystalické formě podle nároku 1, vyznačující se tím, že se sloučenina nechá krystalizovat z vodného roztoku.

7. Způsob výroby (-)cis^l-amino-l-(2-hydroxymethyl-l,3-oxathiolan-5-yl)-(lH)-pyrimidin-2-onu v krystalické formě podle nároku 4, vyznačující se tím, že se azeotropně destiluje vodný roztok této látky s propan-l-olem.

8. Způsob výroby (-)cis-4-amino-l-(2-hydroxymethyl-l,3-oxathiolan-5-yl)-(lH)-pyrimidin-2-onu v krystalické formě podle nároku 1, vyznačující se tím, že se uvedená látka nechá překrystalovat z nevodného prostředí.

9. Způsob podle nároku 8 pro výrobu bipyramidálních krystalků, vyznačující se tím, že se jako nevodné prostředí užije alkohol o 2 až 6 atomech uhlíku.

10. Způsob podle nároku 9, vyznačující se tím, že se jako nevodné prostředí užije ethanol nebo průmyslový ethanol, denaturovaný methylalkoholem.

11. Způsob výroby (-)cis-4-amino-l-(2-hydroxymethyl-l,3-oxathiolan-5-yl)-(lH)-pyrimidin-2-onu ve formě bipyramidálních krystalků podle nároku 2, vyznačující se tím, že se sloučenina nechá stát ve formě jehličkovitých krystalků v ethanolu nebo v denaturovaném průmyslovém ethanolu při teplotě 30 až 70 °C.

12. Farmaceutický prostředek pro léčení virových infekcí, vyznačující se tím, že obsahuje (~)cis^l-amino-l-(2-hydroxymethyl-l,3-oxathiolan-5-yl)-(lH)-pyrimidin-2-on v krystalické formě podle nároku 1 a farmaceutický nosič.

13. Farmaceutický prostředek podle nároku 12, vyznačující se tím, že má formu, vhodnou pro perorální podání.

- 10CZ 284513 B6

14. Farmaceutický prostředek podle nároku 12 nebo 13, vyznačující se tím, žerná formu tablety nebo kapsle.