KR100244008B1

KR100244008B1 - 결정질 옥사티올란 유도체

Info

Publication number: KR100244008B1
Application number: KR1019920009537A
Authority: KR
Inventors: 폴레이븐스크로프트; 토니고든로버츠; 폴에반스
Original assignee: 그레이엄 브레레톤, 레슬리 에드워즈; 글락소 그룹 리미티드
Priority date: 1991-06-03
Filing date: 1992-06-02
Publication date: 2000-03-02
Also published as: SK281249B6; PT517145E; EP0517145B1; IL102073A0; CA2311988C; BG60914B1; AP9200395A0; ATE212630T1; CA2070230A1; DE69232387D1; IE921780A1; MX9202619A; GEP19991834B; JP2851480B2; JPH06211848A; TW254939B; AU656379B2; OA09913A; SG52455A1; EP1099700A1

Abstract

본 발명은 결정형, 특히 침상 또는 양추형 결정 형태의 (-)-시스-4-아미노-1-(2-히드록시메틸-1,3-옥사티올란-5-일)-(1H)-피리미딘-2-온, 그의 약제, 그의 제조 방법 및 그의 의약으로서의 용도에 관한 것이다.

Description

결정질 옥사티올란 유도체

제1도는 침상 결정 형태(형태 Ⅰ)의 3TC를 나타내는 도면.

제2도는 양추형 결정 형태(형태 Ⅱ)의 3TC를 나타내는 도면.

제3도는 결정 형태 Ⅰ의 적외선 스펙트럼을 나타내는 도면.

제4도는 결정 형태 Ⅱ의 적외선 스펙트럼을 나타내는 도면.

제5도는 결정 형태 Ⅰ의 DSC 자기 온도도.

제6도는 결정 형태 Ⅱ의 DSC 작기 온도도.

본 발명은 뉴클레오사이드 동족체 및 그의 의약으로서의 용도에 관한 것이다. 더 구체적으로 본 발명은 1,3-옥사티올란 뉴클레오사이드 동족체, 특히 그의 물리적 형태, 그의 약제 및 그의 바이러스에 의한 감염 치료 용도에 관한 것이다.

BCH-189 또는 NGPB-21로서도 공지 되어 있는 하기 식(Ⅰ)의 화합물은 특히 AIDS 원인성 물질인 인간 면역 결핍증 바이러스(HIV's)에 대해 항바이러스 활성을 갖는 것으로 기재되어 있다. (제5회 Anti-Aids Conference, 1989년 6월 5일-9일, 캐나다 몬트리올 개최 : 요약집 T.C.O.I 및 M.C.P. 63; 유럽 특허 출원 공고 제 0382562호 참조).

식(Ⅰ)의 화합물은 하기 식(Ⅰ-1) 및 (Ⅰ-2)의 2가지 에난티오머의 라세미체 혼합물이며, 그의 라세미체 형태로 기술되어 있고, 시험되었다.

현재 HIV에 의해 유발되는 질환 치료용으로 승인된 유일한 화합물은 3'-아지도-3'-데옥시티미닌 (AZT, zidovudine, BW 509U)이다. 그러나, 이 화합물은 심각한 부작용을 나타내기 때문에 사용될 수 없으며, 일단 사용되었더라도 많은 환자들에서 회수되어야 할 것이다. 결과적으로 HIV에 대해 유효하지만 현저히 나은 치료율을 수반하는 화합물을 제공할 필요성이 계속되고 있다.

식(Ⅰ)의 화합물의 에난티오머들이 HIV에 대해 균등 효능이 있다 하더라도, (-)-에난티오머는 다른 에난티오머보다 상당히 더 낮은 세포 독성을 갖기 때문에 항바이러스제로서 바람직한 화합물이다.

(-)-에난티오머의 화학명은 (-)-시스-4-아미노-1-(2-히드록시메틸-1,3-옥사티올란-5-일)-(1H)-피리미딘-2-온이다. 이것은 (2R,시스)-4-아미노-1-(2-히드록시메틸-1,3-옥사티올란-5-일)-(1H)-피리미딘-2-온으로 명명되는 식(I-1)의 화합물의 절대적인 입체화학을 갖는다. 이 화합물은 현재 3TC로서 공지되어 있다.

3TC는 실질적으로 대응하는 (+)-에난티오머가 없는 것이 바람직하다. 즉, (+)-에난티오머가 약 5 %w/w 이하, 바람직하게는 약 2 % 이하, 특히 바람직하게는 약 1 %w/w 미만 존재해야 한다.

국제 출원 제PCT/GB91/00706호, 국제 출원 공개 제W091/17159호에는 3TC의 제법, 그의 항바이러스 활성 및 그의 의약으로서의 용도가 기재되어 있다. 3TC는 국제 출원 공개 제W091/17159호에 기재된 바와 같이 동결 건조 분말로서 제조된다.

3TC는 결정질 형태로 얻어질 수 있으며, 다형성(polymorphism)을 나타내는 것으로 밝혀졌다.

따라서, 본 발명의 일면은 결정질 형태의 3TC를 제공하는 것이다.

수용액으로부터 결정화되는 3TC는 침상 결정(이하, 형태 I이라함)의 형태로 얻어진다. 이와 같은 형태의 결정은 이들의 물리적 특성, 예를 들면 불량한 유동 특성 때문에 고체 투여형으로 제제되기에는 적합하지 못하다. 또한, 특정 조건하에서 3TC가 실질적으로 양추형 결정(이하, 형태 Ⅱ라 함)으로 얻어질 수 있는 것으로 밝혀졌다. 결정 형태 Ⅱ는 개선된 유동 특성을 갖기 때문에 고체 투여형의 제조에 바람직하다. 또한, 결정 형태 I은 덜 안정한 다형성 형태이며, 밀링 등의 특정 제약적 단위 조작에 의해 형태 I에서 형태 Ⅱ로 전환될 수 있고, 고체 투여형을 제조하기에는 바람직하지 못한 특성을 갖는다.

양추형 결정 형태의 3TC는 약 170℃ 이상, 순수할 때는 특히 177 내지 178℃ 이상의 융점을 갖는다. 침상 결정 형태의 3TC는 130℃ 미만, 순수 형태일 때는 특히 124 내지 127℃의 융점을 갖는다.

형태 Ⅱ의 3TC는 적외선(i.r.) 스펙트럼에서 형태 I의 i.r. 스펙트럼에는 없는 특징적인 흡수띠를 나타낸다. 특히, 형태Ⅱ는 약 920 및 850 파수에서 강한 흡수띠를 나타낸다. 또한, 1110 파수에서 형태 I의 특징적인 흡수띠는 형태Ⅱ의 스펙트럼에 없다.

3TC의 형태 Ⅱ는 시차 주사 열량계(DSC) 프로파일에서 177 내지 178℃의 온도에서 흡열이 개시되는 특성을 보인다. 한편, I은 DSC 프로파일에서 124 내지 127℃에서 흡열이 개시되는 특성을 보인다.

따라서, 본 발명의 다른 일면에 따라, 침상 결정 형태의 3TC가 제공된다.

또한, 양추형 결정 형태의 3TC가 제공된다.

본 발명의 또 다른 일면에 따라, 융점이 170℃ 이상, 특히 177 내지 178℃이상인 결정 형태의 3TC가 제공된다. 본 발명의 선택적인 일면에 따라, DSC 프로파일에서 177 내지 178℃의 온도에서 흡열이 개시되는 결정 형태의 3TC가 제공된다.

본 발명의 다른 선택적인 일면에 따라, 적외선 스펙트럼의 약 920 및 850 파수에서 흡수띠를 갖는 결정질 형태의 3TC가 제공된다, 특히, 이 파수에서의 흡수띠 외에 1110 파수에서는 흡수띠가 존재하지 않는 3TC가 제공된다.

3TC는 그의 라세미체들을 당업계에 공지된 방법에 의해 용해시킴으로써 라세미체들을 그의 성분 에난티오머들로 분리시켜 얻을 수 있다. 특히, 3TC는 키랄 HPLC, 사이타민 데아미나제 등의 적절한 효소를 사용하는 효소 매개된 에난티오머 선택성 이화 작용, 또는 5'-뉴클레오타이드를 사용하는 적절한 유도체의 선택성 효소 분해에 의해 공지된 라세미체로부터 얻을 수 있다. 3TC의 적절한 제조 방법은 국제 특허 제W091/17159호에 기재되어 있다.

침상 결정 형태의 3TC는 화합물을 수용액으로부터 결정화시키거나 또는 프로판-1-올과 함께 공비증류시킴으로써 얻을 수 있다.

바람직한 양추형 결정 형태의 3TC는 비수용성 매질, 특히 저급 C_2-6알콜, 예를 들면, 에탄올, IMS(공업용 메틸화 주정) 또는 프로판-1-올로 재결정화시킴으로써 얻을 수 있다. 바람직한 방법에서, 양추형 3TC는 침상형의 3TC를 공업용 메틸화 주정(IMS) 또는 에탄올에서 승온(예, 30 내지 70℃, 바람직하게는 약 50℃)에서 적절한 시간 (예, 0.5 내지 3시간, 특히 약 1시간 이상) 동안 숙성시킴으로써 얻을 수 있다.

별법으로, 양추형 3TC는 융점이 124 내지 127℃ 이상인 침상형 화합물을 특히, 170℃ 이상, 예를 들면 177 내지 178℃ 이상으로 가열한 후, 융융물을 냉각시킴으로써 얻을 수 있다.

다른 방법으로, 양추형 3TC는 침상 결정 형태의 화합물을 분쇄 또는 밀링시킴으로써 얻을 수 있다.

3TC는 양추형 결정 형태이고, 실질적으로 침상 결정이 없는 것이 바람직하다. 화합물을 액체 매질에서 재결정화 또는 숙성시킴으로써 얻어지는 이들 결정은 일반적으로 침상 결정이 없이 얻어질 것이다.

결정질 형태의 3TC는 국제 특허 출원 공개 제W091/17159호에 기재된 바의 항바이러스제로서 사용될 수 있으며, 본 명세서에 참고로 기재한다.

결정질 형태의 3TC는 국제 특허 출원 공개 제W091/17159호에 기재된 바의 항바이러스제로서 사용하기 위한 제제로서 제형될 수 있다.

하기 실시예들은 본 발명을 설명하지만, 이들로써만 제한되지 않는다. 온도는 모두 ℃이다.

[중간체 1]

5-메톡시-1,3-옥사티올란-2-메탄올, 벤조에이트

뜨거운 메탄올 15ml 중의 염화 아연 1.6g의 용액을 톨루엔 1300ml 중의 메르캅토아세트알데히드, 디메틸 아세탈 34.2g 및 벤조일옥시 아세트알데히드 48.3g의 교반 용액에 첨가한 후, 질소 분위기 하에 50분 동안 환류 온도까지 가열하였다. 냉각된 혼합물을 농축시키고, 약간의 톨루엔으로 희석하고 규조토(Kiesulguhr)를 통해 여과하였다. 한데 모은 여액 및 톨루엔을 포화 중탄산나트륨 수용액으로 2회 세척하고, 염수로 세척하고 MgSO₄로 건조시키고, 증발시켜 오일을 얻고, 이 오일을 클로로포름을 용출제로 사용하여 실리카(Merck 9385) 2kg 상에서 컬럼 크로마토그래피시켜 오일인 아노머들의 혼합물(약 1:1)로서 표제 화합물 45.1g을 얻었다.

¹H NMR(DMSO-d₆) δ3.1-3.3(4H), 3.42(6H), 4.4-4.6(4H), 5.41(1H), 5.46(1H), 5.54(1H), 5.63(1H), 7,46(4H), 7.58(4H), 8.07(4H); γmax (CHBr₃)1717.6㎝^-1.

중간체 2

(±)시스-1-(2-벤조일옥시메틸-1,3-옥사티올란-5-일)-(1H)-피리미딘-2,4-디온

미세 분쇄된 우라실 9.62g, 핵사메틸 디실라잔 50ml 및 황산 암모늄 30㎎의 혼합물을 투명한 용액이 될 때까지 질소 분위기 하에 환류 온도에서 가열하였다. 이 용액을 냉각시킨 후 증발시켜 무색 오일을 얻고, 이 오일을 질소 분위기 하에 아세토니트릴 100ml에 용해시켰다. 이 용액을 아세토니트릴 600ml 중의 5-메톡시-1,3-옥사티올란-2-메탄올, 벤조에이트(중간체 1) 19.43g의 교반 용액에 첨가하고, 트리메틸 실릴 트리플루오로메탄술포네이트 14,7ml를 첨가하였다. 얼음조를 제거하고 용액을 질소 분위기하에 환류온도에서 45분 동안 가열하였다. 냉각시킨 후 증발시키고, 잔류물을 클로로포름/메탄올 9:1을 용출제로 사용하여 실리카겔(Merck 9385) 1kg 상에서 컬럼 크로마토그래피시켜 정제하였다. 적절한 분획물을 냉각시키고 증발시켜 조악한 잔류물을 얻었다. 이 잔류물을 뜨거운 메탄올 최소량(약 1200ml)으로 분별 결정시켜 백색 결정으로서 표제 화합물 6.32g을 얻었다.

¹H NMR(d₆DMSO) δ11.36(1H, bs.), 7.50-8.00(6H, m), 6.20(1H, t), 5.46(2H, m), 4.62(2H, m), 3.48(1H, m),3.25(1H, m).

[중간체 3]

(±)-시스-4-아미노-1-(2-벤조일옥시메틸-1,3-옥사티올란-5-일)-(1H)-피리미딘-2-온

[방법(a)]

헥사메틸 디실라잔 110ml 중의 시토신 20.705g 및 황산 암모늄 수 ㎎의 현탁액을 질소 분위기 하에 환류 온도에서 2.5시간 동안 가열하였다. 용매를 증발시켜 제거하고, 잔류 고체를 무수 아세토니트릴 350ml중에 용해시켰다. 이 용액을 질소 분위기 하에 가요성 침상술을 이용하여 얼음으로 냉각시킨 아세토니트릴 650ml 중의 5-메톡시-1,3-옥사티올란-2-메탄올, 벤조에이트(중간체 I) 43.57g의 교반 용액에 전이시켰다. 트리메틸실릴 트리플루오로메탄술포네이트 33ml를 첨가하고, 용액을 상온까지 1.5 시간 동안 가온한 후, 철야 환류 온도까지 가열하였다. 잔류 혼합물을 농축시키고, 포화 중탄산 나트륨 수용액 500ml로 희석시킨후, 에틸 아세테이트로 500ml씩 3회 추출하였다. 한데 모은 추출물을 물로 250ml씩 2회, 염수 250ml로 세척하고, MgSO₄로 건조시킨 후, 증발시켜 발포체를 얻고, 이 발포체를 에틸 아세테이트-메탄올 혼합물을 용출제로 사용하여 실리카(Merck 7734) 600g 상에서 컬럼 크로마토그래피시켜 아노머들의 혼합물(약 1:1) 31.59g을 얻었다. 이 혼합물을 물 45ml 및 에탄올 9.0ml로 결정화시켜 고체 10.23g을 얻고, 이 고체를 에탄올 120ml 및 물 30ml로 재결정화시켜 백색 고체로서 표제 화합물 9.26g을 얻었다.

λmax (MeOH) 229.4㎜(E^1%610); 272.4㎜ (E^1%1㎝ 1㎝293);

¹H NMR(DMSO d₆) δ3.14(1H), 3.50(1H), 4.07(2H), 5.52(1H), 5.66(1H), 6.28(1H), 7.22(2H), 7.56(2H), 7.72(2H), 8.10(2H).

[방법 (b)]

옥시염화 인 7.0ml를 얼음으로 냉각시킨 아세토니트릴 120ml 중의 1,2,4-트리아졸 11.65g의 교반 현탁액에 적가한 후, 내부 온도를 15℃ 이하로 유지하고, 트리에틸아민 22.7ml를 적가하였다. 10분 후, 아세토니트릴 330ml 중의 (±)-시스-1-(2-벤조일옥시메틸-1,3-옥사티올란-5-일)-(1H)-피리미딘-2,4-디온(중간체 2) 6.27g의 용액을 서서히 첨가하였다. 이어서, 실온에서 철야 교반을 계속하였다. 혼합물을 얼음조를 사용하여 냉각시키고 트리에틸아민 30ml, 이어서 물 21ml를 서서히 첨가하였다.생성된 용액을 증발시키고, 잔류물을 포화 중탄산 나트륨 용액 400ml와 클로로포름 3 x 200ml 사이에 분배시켰다. 한데 모은 클로로포름 추출물을 황산 마그네슘으로 건조시키고, 여과하고, 증발시켜 조악한 잔류물 9.7g을 얻었다. 잔류물 1,4-디옥산 240ml에 용해시키고 진한 암모니아 수용액 (s.g 0.880) 50ml를 첨가하였다. 1.5 시간 후, 용액을 증발시키고, 잔류물을 메탄올에 용해시켰다. 이로 인해 침전된 고체를 여과하였다. 모액을 실리카겔(Merk 9385) 600g 상에서 컬럼 크로마토그래피시켜 정제하였다. 적절한 분획물을 증발시켜 엷은 황갈색 고체로서 방법(a)에 의해 얻은 것과 동일한 표제 화합물 2.18g을 얻었다.

[중간체 4]

(±)-(시스)-4-아미노-1-(2-히드록시메틸-1,3-옥사티올란-5-일)-(1H)-피리미딘-2-온

메탄올 250ml 중의 (시스)-4-아미노-1-(2-벤조일옥시메틸-1,3-옥사티올란-5-일)-(1H)-피리미딘-2-온(중간체 3) 8.19g 및 앰버라이트 IRA-400(OH) 수지 8.24g의 현탁액을 교반하고 환류 온도까지 1시간 15분 동안 가열하였다. 고체를 여과시켜 제거한 후 메탄올로 세척하였다. 한데 모은 여액을 증발시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트 80ml로 처리하였다. 생성된 백색 고체를 여과시켜 수집하여 표제 화합물 5.09g을 얻었다.

¹H NMR(DMSO d₆) δ 3.04(1H), 3.40(1H), 3.73(2H), 5.18(1H), 5.29(1H), 5.73(1H), 6.21(1H), 7.19(2H), 7.81(1H).

[중간체 5]

(-)-시스-4-아미노-1-(2-히드록시메틸-1,3-옥사티올란-5-일)-(1H)-피리미딘-2-온

(i) 영양 배지[옥소이드사(Oxoid Ltd.)제품]가 들어있는 3개의 50ml 플라스크에, 영양 한천 플레이트로부터 긁어 모은 각각의 대장균 (E. Coil ATCC 23848)을 루프를 사용하여 1회 접종시켰다. 플라스크를 250 회전/분으로 진탕시키면서 37℃에서 철야 배양시킨 후에, 각각의 플라스크 내의 용액을 7 L 발효기중의 CDD 배지(글루탐산, 3 g/L; MgSO₄, 0.2 g/L; K₂SO₄, 2.5 g/L ; NaC1, 2.3 g/L; Na₂HPO₄2H₂O, 1.1 g/L; NaH₂PO₄2H₂O, 0.6 g/L; 사이티딘, 1.2 g/L) 4 L를 접종하는데 사용하였다. 배양액을 4 L/분으로 통기시키면서 37 ℃에서 750 회전/분으로 발효시켰다. 24시간 동안 성장시킨 후에, 세포를 원심분리(5000 g, 30분)로 수거하여 72 g(습윤 중량)을 얻었다. 세포 펠렛을 20 mM 트리스 HCI 완충액(pH 7.5) 300 ml 중에서 재현탁시키고, 초음파(45초, 4회)로 처리하여 파괴하였다. 세포 잔류물을 원심분리(30,000 g, 30분)로 제거하고, 상충액 중의 단백질을 황산암모늄(75 % 포화)을 첨가시킴으로써 침전시켰다. 침전물을 원심 분리(30,000 g, 30분)시켜서 수거하고, 펠렛을 황산암모늄(75 % 포화)을 함유하는 HEPES 완충액(100 mM, pH 7.0) 25ml 중에 재현탁시켰다. 효소 용액을 12,000 rpm으로 30분 동안 원심분리시킴으로서 제조하였다. 상층액을 버리고, 펠렛을 트리스 HCI 완충액 (pH 7.0; 100 mM) 중에 용해시켜 원래의 부피로 만들었다.

(ii) 중간체 4(115 ㎎)를 물(100 ml)중에 용해시키고, 교반시켰다. 효소 용액(0.5 ml)을 첨가시키고, 혼합물을 HCI(25 mM)을 연속적으로 첨가시켜 일정한 pH에서 유지시켰다. 전환은 기질의 (+)에난티오머가 우선적으로 탈아미노화되는 것을 나타내는 키랄 HPLC에 의하여 모니터하였다. 22시간 후에, 기질의 (+)에난티오머 (실은 12.5)를 완전히 제거하고, 용액을 진한 수산화나트륨 용액을 첨가하여 pH 10.5 조정하였다.

상기 생성된 용액을 QAE Sephadex 컬럼(A25:Pharmacia; 30 x 1.6 ㎝)을 통하여 용출시키고, pH 11로 미리 평형화시켰다. 컬럼을 물(200 ml)로 세척한 후에, 이어서 HCI(0.1 M)로 세척하였다. 분획물(40 ml)을 취하여 역상 HPLC로 분석하였다. 기질의 미반응 (-)에난티오머를 함유하는 제5-13 분획물을 혼합하고 HCI을 사용하여 pH 7.5로 조정하였다. 탈아미노화된 생성물을 함유하는 제47 분획물을 묽은 NzOH를 사용하여 pH 7.5로 조정하였다. 키랄 HPLD에 의한 분석은 이 물질이 주성분으로서 1개의 에난티오머(RT 10.2분)와 부성분으로서 다른 에난티오머(RT 8.5분)로 이루어진 혼합물(대략 90 %)이었다는 것을 나타낸다.

(iii) 상기 단계(ii)를 대규모로 반복하였다. 물 250ml 중의 중간체 5의 화합물(363 ㎎)을 단계(i)에서와 같이 제조한 효소 용액(0.5 ml)을 사용하여 배양하였다. 효소의 분액(0.5 ml)을 18 및 47시간 후에 더 첨가하였다. 반응 혼합물을 70시간 동안 교반시킨 후에, 64시간 더 방치시켰다. 키랄 HPLC에 의한 분석은 기질의 (+)에난티오머가 완전히 탈아미노화되었다는 것을 나타내었고, 생성된 용액을 NaOH를 사용하여 pH 10.5로 조정하였다.

상기 용액을 동일한 QAE 컬럼 상에 채우고, 단계(i)에서와 같이 용출시켰다. 잔류 기질 및 탈아미노화된 생성물의 혼합물을 함유하는 제2-6 분획물을 벌크(bulk)시켰다. 잔류 기질((-)에난티오머)을 함유하는 제7-13 분획물을 벌크시키고 pH 7.5로 조정하였다. 탈아미노화된 생성물을 함유하는 제25-26 분획물을 벌크시켜서 중성화시켰다.

상기 제2-6 분획물을 동일한 QAE 컬럼을 통하여 재용출시켰다. 이러한 제2 컬럼으로부터의 제3-11 분획물은 미반응 기질[(-)에닌티오머]을 함유하였다. 제 70분획물은 탈아미노화된 생성물을 함유하였다.

(iv) 단계(ii) 및 (iii)으로부터 분할된 기질 분획물을 혼합시키고, pH 7.5로 조정하였다. 이 용액을 물 중에서 패킹된 XAD-16(40 x 2.4 ㎝) 컬럼을 통하여 용출시켰다. 컬럼을 물로 세척하고, 이어서 아세톤:물(1:4 v/v)을 사용하여 용출시켰다. 목적하는 (-)에난티오머를 함유하는 분획물을 벌크시키고, 동결 건조시켜서 백색 분말 190 ㎎을 얻었다.

상기 사용된 HPLC 방법은 다음과 같았다 :

1. 역상 분석 HPLC

컬럼 : 주요 카트리지

Spherisorb ODS-2(5 ㎛) 150 x 4.6㎜

용출제 : 인산이수소 암노늄 (50 ㎛) + 5% MeCN

유속 : 1.5 ml/분

검출 : UV. 270 ㎚

체류시간 : BCH 189 5.5분

탈아미노화된 BCH-189 8.1 분

2. 키랄 분석 HPLC

컬럼 : 시클로본드 1 아세틸 250 x 4.6 ㎜

용출제 : 0.2% 트리에틸암모늄 아세테이트(pH 7.2)

유속 : 1.0 ml/분

검출 : UV.270 ㎚

체류시간 : BCH 189 11.0 및 12.5분

탈아미노화된 BCH-189 8.5 및 10.2분

(생물학적 전환은 12.5분에 정점의 손실 및 10.2분에 축

적된 생성물을 계속하여 추적하였음)

[실시예 1]

물 200 ml 중의 중간체 5(64.8 g)의 현탁액을 45 ℃ 까지 가열하여 용액을 얻었다. 이 용액을 30 ℃로 냉각시켰다.

이 생성물을 미교반 물질로서 결정화시켰다. 이 물질을 파쇄시키고 현탁액을 약 10 ℃에서 1시간 동안 교반하였다.

생성물을 여과시켜 단리하고 에탄올(IMS; 2 x 30 ml)로 세척한 후, 45 ℃에서 24시간 동안 진공 건조시켜 형태 I(미세침상 결정)로서 3TC를 얻었다.

화합물의 i.r. 스펙트럼 및 DSC 자기 온도도는 각각 제3 및 5도와 같다.

[실시예 2]

공업용 메틸화 주정 중의 실시예1의 화합물 10.0 g의 현탁액을 환류 온도까지 가열하여 투명한 용액을 얻었다. 용액을 고온에서 여과하고, 여액을 잔류 용액이 100 ml(10볼륨)로 될 때까지 대기압에서 증류하였다. 용액에 진정 물질을 첨가하여 1시간에 걸쳐 80 내지 25 ℃로 냉각시켰다. 79 ℃에서 결정화되기 시작하였다. 현탁액을 15 ℃에서 1시간 동안 교반하였다. 생성물을 여과시켜 단리하고 IMS 100 ml(1볼륨)로 세척하였다. 50 ℃에서 진공 건조시켜 양추형 응집물로서 표제 화합물 8.42 g을 얻었다. 융점 179-181 ℃, (-)-시스-4-아미노-1-(2-히드록시메틸-1,3-옥사티올란-5-일)-)(1H)-피리미딘-2-온, C₈H₁₁N₃O₃S에 대한 원소분석치

실측치 C, 41,9; H, 4.85; N, 18.35

이론치 C, 41.9; H, 4.8; N, 18.3%

이 화합물의 i.r. 스펙트럼 및 DSC 자기 온도도는 각각 제4도 및 제6도와 같다.

[실시예 3]

공업용 메틸화 주정(IMS) 100 ml(5볼륨) 중의 실시예 1의 생성물 20.0 g의 현탁액을 50 ℃에서 1시간 동안 서서히 교반하였다.

소량의 시료(약 100 ㎎)을 제거하고, 50 ℃에서 진공 건조시키고 현미경검사법(microscopy) 및 시차 주사 열량계(DSC)로 조사하였다.

시료는 100 % 형태 Ⅱ (양추형)였다.

현탁액을 50 ℃에서 추가로 2시간 동안 교반하고 시료를 제거하였다. 현미경검사법은 변화를 나타내지 않았다.

현탁액을 50 ℃에서 22시간 동안 교반한 후, 20 ℃로 냉각시키고 1시간 동안 교반하였다.

현탁액을 여과하고 생성물을 IMS 200 ml(1볼륨)로 세척하고 진공 건조시켜 백색 결정질 고체로서 (-)-시스-4-아미노-1-(2-히드록시메틸-1,3-옥사티올란-5-일)-(H)-치리미딘-2-온 17.13 g을 얻었다. 융점 180-181 ℃ C₈H₁₁N₃O₃S에 대한 원소분석치

실측지 C, 41.85; H, 4.85; N, 18.3

이론치 C, 41.9; H, 4.8; N, 18.3%

생성물의 i.r. 스펙트럼 및 DSC 자기 온도도는 각각 제4도 및 제6도와 같다.

[실시예 4]

형태 Ⅱ에 대한 X-레이 결정학

결정 데이타

C₈H₁₁N₃O₃S, 분자량=229.26 사각형, a=b=8.749(3), c=26.523(9)A V=2030(2)A³

(14 자동 중심 반사에 대한 회절계기 각의 최소 면적 세분에 의해)

스페이스 그룹 P4₃2₁2 (제96호), z=8, Dc=1.50 g ㎝^-3

F(000)=960, m(Cu-Ka)=27.5 ㎝^-1

결정 데이타의 치수 0.48 x 0.32 x 0.30 ㎜

형태 Ⅱ(무색 양추형)의 단일 결정을 X-레이 회절에 의해 조사하였다. 단색화된 Cu-Ka 방사선을 사용하는 시이멘스(Siemen) R³m/V 회절계기에서 2J/W 스캔을 사용하여 총 1651의 반사가 측정되었다. (3〈2J,115 ℃). 구조는 직접적인 방법 또는 비등방성으로 정제된 수소 이외의 원자에 의해 밝혀졌다. 탄소에 부착된 수소 원자를 이상화(CH=0.96 A)시키고 모 탄소 원자에 결합시켰다. -NH₂및 -OH기의 3개의 H를 계차 푸리에(Fourier) 맵에 위치시켰다. 모든 H 원자는 비등방성으로 정제되었다. R=0.068, Rw=0.069, W^-1=[S²(F)+0.005 [F]²]로 수렴되었다. 최고 잔류 전자 밀도는 0.45 eA^-3이었다. 절대 키랄성은 로저스(Rogers') 에타 시험 [h=0.99(9)]을 사용하여 확인하였다.

[실시예 5]

제제

(a) 100 ㎎ 정제

정제 1개의 성분

3TC (형태 Ⅱ) 100.0 ㎎

미세결정질 셀룰로오스 NF 189.5 ㎎

나트륨 전분 글리콜레이트 NF 9.0 ㎎

스테아르산 마그네슘 NF 1.5 ㎎

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총량 300.0 ㎎

3TC (형태 Ⅱ), 미세결정질 셀룰로오스 및 나트륨 전분 글리콜레이트를 체질 하고 V-혼합기 중에서 약 15분 동안 혼합하였다. 이어서, 체질된 스테아르산 마그네슘을 첨가하고 추가로 2분 동안 혼합을 계속하였다.

혼합물을 표준 타정 장치 내에서 압축시킨 후, 회색 오파드리(Opadry)의 수성 현탁액으로 필름 코팅시켜 촉각적으로 허용되는 정제를 얻었다.

(b) 300 ㎎ 정제

정제 1개의 성분

3TC (형태 Ⅱ) 300.0 ㎎

미세결정질 셀룰로오스 NF 279.0 ㎎

나트륨 전분 글리콜레이트 NF 18.0 ㎎

스테아르산 마그네슘 NF 1.5 ㎎

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총량 600.0 ㎎

정제는 상기 (a)에 기재된 바와 같이 제조하였다.

Claims

양추형 결정 형태의 (-)-시스-4-아미노-1-(2-히드록시메틸-1,3-옥사티올란-5-일)-(1H)-피리미딘-2-온.
제1항에 있어서, 융점이 170 ℃ 이상인 결정질 형태.
제2항 또는 2항에 있어서, 융점이 177 내지 178 ℃인 결정질 형태.
제1항 또는 2항에 있어서, 적외선 스펙트럼의 920 및 850 파수에서 흡수띠를 가지는 결정질 형태.
제1항 또는 2항에 있어서, 시차 주사 열량계 프로파일에서 177 내지 178 ℃에서 흡열이 개시되는 결정질 형태.
제2도에 나타낸 결정질 형태 (-)-시스-4-아미노-1-(2-히드록시메틸-1,3-옥사티올란-5-일)-(1H)-피리미딘-2-온.
제4도에 나타낸 적외선 스펙트럼을 갖는 결정질 형태의 (-)-시스-4-아미노-1-(2-히드록시메틸-1,3-옥사티올란-5-일)-(1H)-피리미딘-2-온.
비수성 매질로부터 재결정화시키는 것으로 이루어진, 양추형 결정질 형태의 (-)-시스-4-아미노-1-(2-히드록시메틸-1,3-옥사티올란-5-일)-(1H)-피리미딘-2-온의 제조 방법.
제8항에 있어서, 비수성 매질이 C_2-6알콜일 방법.
제8항 또는 9항에 있어서, 비수성 매질이 에탄올 및 공업용 메틸화 주정으로부터 선택되는 방법.
침상 결정 형태의 화합물을 에탄올 또는 공업용 메틸화 주정 중에서 승온에서 숙성시키는 것으로 이루어진, 양추형 결정 형태의 (-)-시스-4-아미노-1-(2-히드록시메틸-1,3-옥사티올란-5-일)-(1H)-피리미딘-2-온의 제조방법.
양추형 결정질 형태의 (-)-시스-4-아미노-1-(2-히드록시미틸-1,3-옥사티올란-5-일)-(1H)-피리미딘-2-온 및 그의 제약상 허용되는 담체로 이루어진 항균성 약제.
제12항에 있어서, 경구 투여용으로 적절한 형태의 항균성 약제.
제12항 또는 13항에 있어서, 정제 또는 캡슐제 형태의 향균성 약제.