SK281249B6

SK281249B6 - (-)cis-4-amino-1-(2-hydroxymetyl-1,3-oxatiolán-5-yl)-(1h)- -pyrimidín-2-ón v kryštalickej forme, spôsob jeho prípravy a farmaceutický prostriedok s jeho obsahom

Info

Publication number: SK281249B6
Application number: SK1257-93A
Authority: SK
Inventors: Paul Ravenscroft; Tony Gordon Roberts
Original assignee: Glaxo Group Limited
Priority date: 1991-06-03
Filing date: 1992-06-02
Publication date: 2001-01-18
Also published as: GB9111902D0; US5905082A; DK0517145T3; SG52455A1; EP1099700A1; SK125793A3; NO301713B1; DE69232387T2; AP9200395A0; ATE212630T1; PT517145E; MX9202619A; DE69232387D1; NO922182D0; AU656379B2; JPH06211848A; BG60914B1; OA09913A; BG98254A; RU2102393C1

Abstract

(-)-cis-4-Amino-1-(2-hydroxymetyl-1,3-oxatiolán-5-yl)-(1H)- -pyrimidín-2-ón v kryštalickej forme, a to vo forme ihličkovitých alebo bipyramidálnych kryštálov. Spôsob ich prípravy a farmaceutický prostriedok s protivírusovým účinkom, ktorý túto látku obsahuje.ŕ

Description

Oblasť techniky

Vynález sa týka (-)cw-4-amino-l-(2-hydroxymetyl-l,3-oxatiolán-5-yl)-(lH)-pyrimidín-2-ónu v kryštalickej forme. Vynález sa tiež týka spôsobu výroby tejto látky a farmaceutických prostriedkov s jej obsahom, určených na liečenie vírusových infekcií.

Doterajší stav techniky

Zistilo sa, že zlúčenina vzorca (I)

NHj

známa tiež ako BCH-189 alebo NGPB-21 vykazuje antivírusovú účinnosť obzvlášť proti ľudským vírusom imúnnej deficiencie (vírusy HIV), príčinné agensy AIDS (5. AntiAids konferencia, Montreal, Kanada 5. - 9. júna 1989: Abstrakty T.C.O.l a M.C.P.63; Prihláška európskeho patentu č. 0382562). Zlúčenina vzorca (I) je racemickou zmesou dvoch enantiomérov vzorcov (I-1) a (1-2):

NH.

HOCH, W (1-2) ϋ

a bola opísaná a testovaná vo forme svojho racemátu. Jediná zlúčenina doteraz schválená na liečbu stavov zapríčinených HIV je 3'-azido-3'-deoxytymidín (AZT, zidovudin, BW 509U). Táto zlúčenina vykazuje však náchylnosť na vážne vedľajšie účinky a potom buď ju nie je možné aplikovať alebo po aplikácii musí byť z liečby stiahnutá u značného počtu pacientov. Ako dôsledok existuje trvalá potreba zaistenia zlúčenín, ktoré sú účinné voči HIV avšak so značne lepším terapeutickým indexom.

Aj keď obidva enantioméry zlúčeniny vzorca (I) sú rovnako účinné voči HIV, (-)-enantiomér má značne nižšiu cytotoxicitu ako druhý enantiomér, a preto je výhodnou zlúčeninou vo funkcii antivírusového preparátu.

(-)-Enantiomér má chemický názov (-)cu-4-amino-l-(2-hydroxymetyl-1 -3-oxatiolán-5-yl)-( 1 H)-pyrimidín-2-ón. Vykazuje absolútnu stereochémiu zlúčeniny vzorca (I-1), ktorá sa nazýva (2R,cís)-4-amino-l-(2-hydroxymetyl-l-3-oxatiolán-5-yl)-(lH)-pyrimidín-2-ón. Táto zlúčenina je známa ako 3TC.

3TC výhodne prakticky neobsahuje (+)-enantiomér, to znamená nie viac ako jeho 5 % hmotn. (+)-enantioméru, výhodne nie viac ako približne jeho 2 % hmotn. a zvlášť výhodne menej ako jeho 1 % hmotn.

Medzinárodná patentová prihláška PCT/GB91/00706, publikácia číslo WO 91/17159 opisuje prípravok 3TC, jeho antivírusovú účinnosť a použitie v medicíne. 3TC bol opísaný a pripravený ako prášok pripravený vymrazovacím sušením.

Podstata vynálezu

Podstatu vynálezu tvorí zlúčenina 3TC vo svojej kryštalickej forme, vybranej z bipyramidálných alebo ihličkovitých kryštálov.

Prvým aspektom vynálezu je príprava 3TC v kryštalickej podobe.

Pri kryštalizácii z vodných roztokov sa 3TC získa v tvare ihličkovitých kryštálov (v ďalšom tvar I). Táto forma kryštálov nie je pri tuhých dávkach farmaceutických formulácií výhodná kvôli jej fyzikálnym vlastnostiam, napríklad zlým tokovým vlastnostiam. Zistilo sa ďalej, že za určitých podmienok sa 3TC dá pripraviť vo forme v podstate bipyramidálných kryštálov (v ďalšom tvar II). Kryštalický habitus tvaru II zlepšil tokové vlastnosti, a preto je výhodný pri výrobe dávok v tuhom stave. Navyše kryštály tvaru I sú menej stabilnou polymorfnou formou a pri určitých jednotkových farmaceutických operáciách, ako je mletie môže dochádzať k premene formy I na formu II a dochádza k tvorbe nežiaducich charakteristík na výrobu tuhých dávok.

3TC v tvare bipyramidálných kryštálov má teplotu topenia vyššiu ako približne 170 °C, v čistom stave konkrétne

177 až 178 “C. 3TC forma v tvare ihličkovitých kryštálov má teplotu topenia nižšiu ako 130 °C, v čistom stave konkrétne 124 až 127 °C.

3TC vo forme II vykazuje v infračervenom spektre (IČ) charakteristické absorpčné pásy, ktoré nie sú prítomné v IČ spektre formy I. Menovite forma II vykazuje silné absorpčné pásy pri vlnočte ~920 a -850. Navyše charakteristický pás formy I pri vlnočte 1110 nie je prítomný v spektre formy II.

Forma II 3TC vykazuje ďalej charakteristickú endotermu s počiatkom pri teplote 177 až 178 °C na jej zázname z diferenciálnej skenovacej kalorimetrie (DSC). Naproti tomu forma I vykazuje charakteristickú endotermu na zázname DSC s počiatkom pri teplote 124 až 127 °C.

Ďalším aspektom vynálezu je preto získanie 3TC v tvare ihličkovitých kryštálov.

Podľa ďalšieho aspektu sa jedná o získanie 3TC v tvare bipyramidálných kryštálov.

V následnom aspekte vynálezu sa jedná o získanie 3TC v kryštalickej podobe s teplotou topenia vyššou ako 170 °C, menovite teplotou 177 až 178 °C. Podľa alternatívneho aspektu sa jedná o získanie 3TC v kryštalickej podobe s endotermou na zázname DSC so začiatkom pri teplote 177 až

178 °C.

Podľa ďalšej alternatívy sa jedná o získanie 3TC v kryštalickej podobe vykazujúcej absorpčné pásy pri vlnočte

SK 281249 Β6

IČ spektra približne -920 a -850. Obzvlášť sa jedná o získanie 3TC, ktorý popri pásoch pri týchto vlnočtoch v podstate nevykazuje pás pri vlnočte 1110 cm’¹.

3TC možno získať z jeho racemátu rozdelením na konštitučné enantioméry ľubovoľnou z metód delenia podľa súčasného stavu techniky. Výhodne možno 3TC získať z jej známeho racemátu chirálnou HPLC prostredníctvom enzymaticky sprostredkovaného enantioselektivneho katabolizmu pomocou vhodných enzýmov, ako je deamináza cytidinu alebo selektívnou enzymatickou degradáciou vhodného derivátu použitím 5'-nukleotidu. Vhodné metódy prípravy 3TC sú opísané v WO 91/17159.

3TC v tvare ihličkovitých kryštálov možno získať kryštalizáciou zlúčeniny z vodného roztoku alebo azeotropickou destiláciou s propan-l-olom.

3TC výhodne v tvare bipyramidálných kryštálov možno získať rekryštalizáciou z nevodného prostredia, obzvlášť nižšieho C₂^ alkoholu, napríklad etanolu, IMS (priemyslový denaturovaný etylalkohol) alebo propan-l-olu. Výhodným spôsobom možno bipyramidálny tvar získať z 3TC ihličkovitého tvaru jej udržiavaním v IMS alebo etanole pri zvýšenej teplote (napríklad 30 až 70 ’C, obzvlášť výhodne pri približne 50 °C) a počas vhodného času (napríklad 0,5 až tri hodiny, výhodne 1 hodinu alebo dlhšie ako 1 hodinu).

Alternatívne možno 3TC v bipyramidálnej forme získať záhrevom zlúčeniny v ihličkovitej forme nad jej teplotu topenia 124 až 127 °C, obzvlášť nad približne 170 °C, napríklad nad 177 až 178 °C a ochladením taveniny.

Podľa ďalšej alternatívy možno 3TC v bipyramidálnej forme pripraviť mletím alebo rozotieraním zlúčeniny v tvare ihličkovitých kryštálov.

Výhodným stavom 3TC sú bipyramidálne kryštály prakticky bez prítomnosti ihličkovitých kryštálov. Ak sa tieto kryštály získavajú rekryštalizáciou alebo stámutím v kvapalnom prostred! získa sa zlúčenina s úplnou neprítomnosťou ihličkovitých kryštálov.

3TC v kryštalickej forme možno použiť ako antivírusový prostriedok, ako je to opísané v WO91/17159, na ktorý už bolo poukázané.

3TC v kryštalickej podobe môže byť začlenený do farmaceutických formulácií na použitie vo funkcii antivirusového prostriedku, ako je to opísané v spise WO91/17159.

Prehľad obrázkov na výkresoch

Obrázok 1 znázorňuje 3TC v tvare ihličkovitých kryštálov (tvar I).

Obrázok 2 znázorňuje 3TC v tvare bipyramidálných kryštálov (tvar II).

Obrázok 3 predstavuje IČ spektrum kryštálov tvaru I.

Obrázok 4 predstavuje IČ spektrum kryštálov tvaru II.

Obrázok 5 je termogram DSC kryštálov tvaru I.

Obrázok 6 je termogram DSC kryštálov tvaru II.

Nasledujúce príklady ilustrujú vynález nie sú však mienené ako jeho obmedzenia. Všetky teploty sú udávané v°C.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Medziprodukt 1

5-metoxy-1,3-oxatiolán-2-metanolbenzoát

Roztok chloridu zinočnatého (1,6 g) v horúcom metanole (15 ml) sa pridal do miešaného roztoku merkaptoace taldehydu, dimetylacetalu (34,2 g) a benzoyloxyacetaldehydu (48,3 g) v toluéne (1300 ml), ktorý sa potom zahrieval pod refluxom v atmosfére dusíka počas 50 min. Ochladená zmes bola koncentrovaná, zriedená toluénom a filtrovaná cez diatomit. Spojené filtráty a toluén sa premyli s nasýteným vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného (2x) a soľankou, vysušili (MgSO₄) a odparili na olej, ktorý sa podrobil stĺpcovej chromatografii na SiO₂ (2 kg, Merck 9385), vylúhovali chloroformom pri získaní požadovanej zlúčeniny vo forme oleja (45,1 g) zmesi anomérov (približne 1 : 1); IH NMR (DMSO-d_ó) 3,1 - 3,3(4H), 3,42(6H), 4,4 - 4,6(4H), 5,41(1H), 5,46(1H), 5,54(1H), 5,63(1H), 7,46(4H), 7,58(2H), 8,07(4H); ymax(CHBr₃) 1717,6 cm’¹.

Medziprodukt 2 (±)-cís-l-(2-benzoyloxymetyl-1,3-oxatiolán-5-yl)-( 1 H)-pyrimidín-2-4-dión

Zmes jemne mletého uracilu (9,62 g), hexametyldisilazánu (50 ml) a síranu amónneho (30 mg) sa zahrievala v dusíku pod refluxom až do získania čistého roztoku. Tento sa ochladil a odparil na bezfarebný olej, ktorý sa rozpustil pod dusíkom v acetonitrile (100 ml). Roztok sa pridal do miešaného a v ľadovom kúpeli chladeného roztoku 5-metoxy-l,3-oxatiolán-2-metanolbenzoátu (medziprodukt 1) (19,43 g) v acetonitrile (600 ml) s pridaním trimetylsilyltrifluórmetánsulfonátu (14,7 ml). Po odstránení ľadového kúpeľa sa roztok zahrieval v refluxe pod dusíkom 45 minút. Po ochladení a odparení sa zvyšok prečistil stĺpcovou chromatografiou cez 1 kg kremičitého gélu (Merck 9385) a vylúhoval zmesou chloroformu s metanolom v pomere 9:1. Vhodné frakcie sa ochladili a odparili so získaním hrubého produktu. Tento sa frakčne kryštalizoval z minima horúceho etanolu (približne 1200 ml) so získaním uvedenej zlúčeniny (6,32 g) vo forme bielych kryštálov. IH NMR (d⁶DMSO) δ 1 l,36(lH,bs). 7,50 - 8,00 (6H,m), 6,20 (lH,t), 5,46(2H,m), 4,62(2H,m), 3,48(lH,m), 3,25(lH,m).

Medziprodukt 3 (±)-cís-4-amino-l -(2-benzoyloxymetyl-1,3-oxatiolán-5-yl)-(1 H)-pyrimidín-2-ón

Spôsob (a)

Suspenzia cytozínu (20,705 g) a síranu amónneho (niekoľko mg) v hexametyldisilazáne (110 ml) sa miešala a zahrievala 2,5 hodiny v refluxe pod dusíkom. Rozpúšťadlo sa odstránilo odparením a tuhý zvyšok sa rozpustil v suchom acetonitrile (350 ml). Roztok sa pomocou ohybnej ihly preniesol do miešaného a v ľadovom kúpeli chladeného roztoku 5-metoxy-l,3-oxatiolánu-2-metanolbenzoátu (medziprodukt I) (43,57 g) v acetonitrile (650 ml) pod dusíkom. K roztoku sa pridal trimetylsilyltrifluórmetánsulfonát (33 ml) a roztok sa nechal zahriať na teplotu miestnosti (1,5 hodiny) a potom sa cez noc zahrieval pod refluxom. Zvyšková zmes sa koncentrovala, zriedila s nasýteným vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného (500 ml) a potom extrahovala octanom etylnatým (3 x 500 ml). Spojené extrakty sa premyli vodou (2x250 ml) a soľankou (250 ml), vysušili (MgSO₄) a potom sa odparili na penu, ktorá sa podrobila stĺpcovej chromatografii na kremičitom géli (600 g, Merck 7734), vylúhovala sa zmesou octanu etylnatého a metanolu, aby sa získala zmes anomérov (približne 1:1, 31,59 g). Zmes sa kryštalizovala z vody (45 ml) a etanolu (9,0 ml) a získala sa tuhá látka (10,23 g), ktorá sa rekryšta

SK 281249 Β6 lizovala z etanolu (120 ml) a vody (30 ml) so získaním uvažovanej zlúčeniny vo forme bielej tuhej látky (9,26 g); Xmax(MeOH) 229,4 mm (E^l%610); 272,4 mm(E^1%293);'H NMR (DMSO d6) δ 3,14(1H), 3,5O(1H), 4,07(2H), 5,52(1H), 5,66(1H), 6,28(1H), 7,22(2H), 7,56(2H), 7,72(2H), 8,10(2H).

Spôsob (b)

Oxychlorid fosforečný (7,0 ml) sa po kvapkách pridával do suspenzie 1,2,4-triazolu (11,65 g) v acetonitrile (120 ml) udržiavanej v ľadovom kúpeli a potom udržiavajúc vnútornú teplotu pod 15 °C sa po kvapkách pridáva trietylamín (22,7ml). Po 10 minútach sa pomaly pridáva roztok (±)-cw-l-(2-benzoyloxymetyl-l ,3-oxatiolán-5-yl)-(lH)-pyrimidín-2,4-diónu (medziprodukt 2) (6,27 g) v acetonitrile 330 ml). Miešanie beží pri teplote miestnosti cez noc. Zmes sa ochladí ľadovým kúpeľom a pomaly sa pridá trietylamín (30 ml) a následne voda (21 ml). Výsledný roztok sa odparí a zvyšok sa rozdelí medzi nasýtený roztok hydrogenuhličitanu sodného (400 ml) a chloroformu (3 x 200 ml). Spojené chloroformevé extrakty sa vysušia síranom horečnatým, odfiltrujú a odparia na surový zvyšok (9,7 g). Zvyšok sa rozpustí v 1,4-dioxáne (240 ml) za prídavku koncentrovaného vodného roztoku amoniaku (s. g. 0,880, 50 ml). Po 1,5 hodine sa roztok odparí a zvyšok sa rozpustí v metanole. Vyvolá sa tým precipitácia tuhej fázy, ktorá sa odfiltruje. Materský roztok sa prečistí stĺpcovou chromatografiou na kremičitom géli (Merck 9385, 600 g). Vhodné frakcie sa premyjú a odparia, čím sa získa uvažovaná zlúčenina (2,18 g) identická so zlúčeninou získanou spôsobom (a).

Medziprodukt 4 (±)-cw-4-amino-1 -(2-hydroxymetyl-1,3-oxatiolán-5-yl)-(1 H)-pyrimidín-2-ón

Suspenzia cA-4-amino-1 -(2-benzoyloxymetyl-1,3-oxatiolán-5-yl)-(lH)-pyrimidín-2-ón (medziprodukt 3) (8,19 g) sa zmiešala so živicou Amberlite IRA-400 (OH) (8,24) v metanole (250 ml) a miešala sa za záhrevu pod refluxom 1,25 hodiny. Tuhá látka sa oddelila filtráciou a premyla metanolom. Spojené filtráty sa odparili. Zvyšok sa spracoval s octanom etylnatým (80 ml). Výsledná biela látka získaná filtráciou predstavovala požadovanú zlúčeninu (5,09 g), 1H NMR(DMSO-d₆) 3,04 (1H), 3,40 (1H), 3,73(2H), 5,18(1H), 5,29(1H), 5,73(1H), 6,21(1H), 7,19(2H), 7,81(1H).

Medziprodukt 5 (-)-c/s-4-amino-l-(2-hydroxymetyl-l,3-oxatioIán-5-yl)-(1 H)-pyrimidín-2-ón (i) Tri 50 ml banky so živnou pôdou (Oxoid Ltd) sa naočkovali plnou slučkou, každá predstavujúca Escherichia coli (ATCC 23848) zoškrabané zo živnej agarovej doštičky. Banky sa inkubovali cez noc pri 37 °C za miešania pri 250 otáčok/min. a potom sa každá banka použila na očkovanie 41 CDD média (kyselina glutámová, 3 g/1; MgSO₄, 0,2 g/1; K₂SO₄, 2,5 g/1; NaCl, 2,3 g/1; Na₂HPO₄.2H₂O, 1,1 g/1; NaH₂PO₄.2H₂O, 0,6 g/1; cytidín, 1,2 g/1) v sedem litrovom fermenteri. Kultúiy sa fermentovali pri 750 otáčok/min., 37 °C a aerácii 41/min. Po 24 hodinovom raste sa bunky zhromaždili odstredením (5000 g, 30 minút) s výťažkom 72 g vlhkej hmoty. Bunkové pelety sa resuspendo vali v 300 ml 20 mM pufru Tris HC1 (pH 7,5) a rozptýlili ultrazvukom (4 x 45 sekúnd). Zvyšky buniek sa odstránili odstredením (30 000 g, 30 minút) a proteín zo supematantu sa precipitoval prídavkom síranu amónneho do 75 %-ného nasýtenia. Precipitát sa odstredil (30 000 g, 30 minút) a pelety sa resuspendovali v 25 ml pufru HEPES (100 mm, pH 7,0) obsahujúceho síran amónny (75 %-né nasýtenie). Enzymatický roztok sa pripravil odstreďovaním pri 12 000 otáčok/min. počas 30 minút. Supematant sa vyradil a pelety sa rozpustili v pufri Tris HC1 (pH 7,0; 100 mM) na pôvodný objem.

(ii) Medziprodukt 4 (115 mg sa rozpustilo vo vode (100 ml) za miešania. Pridal sa enzymatický roztok (0,5 ml) a zmes sa udržiavala pri konštantnom pH neustálym pridávaním HC1 (25 mM). Konverzia sa sledovala chirálnou HPLC, ktorá ukázala, že sa prednostne deaminoval (+)-enantiomér substrátu. Po 22 hodinách bol (+)-enantiomér substrátu úplne odstránený RT 12,5 min.) a pH roztoku sa nastavilo na 10,5 pridaním koncentrovaného roztoku hydroxidu sodného.

Roztok pripravený uvedeným spôsobom sa eluoval stĺpcom Sephadexu QAE (A25; Pharmacia; 30X 1,6 cm) s dopredu nastaveným pH na 11. Stĺpec sa premyl vodou (200 ml) a potom HC1 (0,1 M). Odobraté frakcie (40 ml) sa analyzovali pri reverznej fázovej HPLC. Frakcie 5 až 13 s nezreagovaným (-)-enantiomérom substrátu sa spojili a ich pH sa nastavilo pomocou HC1 na 7,5. Frakcia 47, obsahujúca deamínový produkt sa nastavila na pH 7,5 zriedeným NaOH. Analýza chirálnou HPLC ukázala, že materiál je zmesou pozostávajúcou z jedného enantioméru (RT 10,2 min.) ako hlavnej zložky s druhým enantiomérom (RT 8,5 min.) ako zložkou s nižším zastúpením (e.e približne 90 %).

(iii) Cyklus (ii) sa zopakoval vo väčšom rozsahu. Zlúčenina z príkladu 1 (363 mg) v 250 ml vody sa inkubovala enzýmovým roztokom (0,5 ml) pripraveným, ako bolo uvedené v cykle (i). Ďalšie príslušné množstvá (0,5 ml) enzýmu sa pridali po 18 a 47 hodinách. Reakčná zmes sa miešala 70 hodín a potom sa nechala stáť ďalších 64 hodín. Analýza chirálnou HPLC indikovala, že (+) enantiomér substrátu bol úplne deaminovaný a výsledný roztok sa nastavil na pH 10,5 pomocou NaOH.

Roztok bol naplnený do toho istého stĺpca QAE a eluoval sa ako v cykle (i). Frakcie 2 až 6, obsahujúce zmes reziduálneho substrátu a deaminovaného produktu sa spojili. Frakcie 7 až 13 obsahujúce reziduálny substrát ((-)enantiomér) sa spojili a pH sa nastavilo na 7,5. Frakcie 25 až 26 obsahujúce deaminovaný produkt sa spojili a neutralizova- li.

Frakcie 2 až 6 sa re-eluovali cez ten istý stĺpec QAE. Frakcie 3 až 11 z tohto druhého stĺpca obsahovali nczreagovaný substrát ((-)-enantiomér). Frakcia 70 obsahovala deaminový produkt.

(iv) Oddelené frakcie z cyklov (ii) a (iii) sa spojili a ich pH sa nastavilo na 7,5. Tento roztok sa eluoval cez stĺpec XAD-16 (40 x 2,4 cm), pripravený vo vode. Stĺpec sa premyl vodou a potom eluoval zmesou acetónu a vody (1 : 4, objemové pomery). Frakcie obsahujúce požadovaný (-)-enatiomér sa spojili a vysušili vymrazovaním za vzniku bieleho prášku (190 mg).

SK 281249 Β6

Použité metódy HPLC:

1. Reverzná fázovo analytická HPLC

Stĺpec:

Eluant:

Flow:

Detekcia:

Retenčný čas:

Capital Cartrige

Spherisorb ODS-2 (5uM)

150 x 4,6 mm

Dihydrogenfosforečnan amónny (50 mM)+ 5 % MeCN

1,5 ml/min.

UV, 270 nm

BCH 189 5,5 min.

: deaminovaný BCH-189 8,1 min.

2. Chirálno analytická HPLC

Stĺpec:

Eluant:

Flow: Detekcia:

Retenčný čas:

Cyclobond I Acetyl

250 x 4,6 mm

0,2 % octan trietylamónny (pH 7,2) 1,0 ml/min.

UV, 270 nm

BCH 189 11,0 a 12,5 min.

: deaminovaný BCH-189 8,5 a

10,2 min.

(biokonverzia sa zisťovala sledovaním straty piku pri

12,5 min., a akumulovaného produktu pri 10,2 min.).

Príklad 1

Suspenzia medziproduktu 5 (64,8 g) vo vode (200 ml) sa zahriala na 45 °C za získania roztoku. Roztok sa ochladil na30°C.

Produkt vykryštalizoval ako nemiešateľná hmota. Táto sa podrvila a suspenzia sa miešala 1 hodinu pri približne 10 °C. Produkt sa izoloval filtráciou a premyl etanolom (IMS; 2 x 30 ml), potom sa sušil 24 hodín pri 45 °C vo vákuu so získaním 3TC vo forme I (jemné ihličkovité kryštály).

Zlúčenina vykazovala IČ spektrum a DSC termogram rovnaké, aké sa nachádzajú na obrázkoch 3 a 5.

Príklad 2

Suspenzia zlúčeniny z príkladu 1 (10 g) v priemyselnom metylovanom alkohole (IMS; 200 ml; 20 objemov) sa pod refluxom zahrievala do vzniku čistého roztoku. Roztok sa za horúca odfiltroval a filtrát sa destiloval pri atmosférickom tlaku až na zvyškový objem 100 ml (10 objemov). Roztok sa očkoval s autentickým materiálom² a nechal ochladiť z 80 °C na 25 °C počas jednej hodiny. Kryštalizácia začala pri 79 °C. Suspenzia sa miešala pri 15 °C počas 1 hodiny. Produkt sa oddelil filtráciou a premyl pomocou IMS (10 ml; 1 objem). Sušenie vo vákuu pri 50 °C poskytlo požadovanú zlúčeninu ako zhluky bipyramíd (8,42 g), bod topenia 179 až 181 °C. (-)-cw-4-amino-l-(2-hydroxymetyl-1,3-2-oxatiolán-5-yl)-( 1 H)-pyrimidín-2-ón.

Skúškou zistené: 041,9, H=4,85, N=18,35%

CsHj [NjOjS vyžaduje: 041,9, H=4,8, N=18,3 %

Zlúčenina vykazuje IČ spektrum a DSC termogram rovnaké, aké sú uvedené na obrázkoch 4 a 6.

Príklad 3

Suspenzia produktu z príkladu 1 (20,0 g) v priemyselnom metylovanom alkohole (IMS; 100 ml; 5 objemov) sa pomaly miešala pri 50 °C počas hodiny.

Malá vzorka (približne 100 mg) sa po odobratí vysušila vo vákuu pri 50 °C a vyšetrila mikroskopicky a pomocou diferenciálnej skenovacej kalorimetrie (DSC).

Vzorka predstavovala 100 % formy II (bipyramidálny habit).

Suspenzia sa miešala pri 50 °C ďalšie 2 hodiny a znova sa odobrala vzorka. Mikroskopia neukázala žiadnu zmenu.

Suspenzia sa miešala pri 50 °C počas 22 hodín a potom sa ochladila na 20 °C a miešala 1 hodinu.

Suspenzia sa odfiltrovala a produkt sa premyl s IMS (20 ml, 1 objem) a vysušil vo vákuu pričom sa získala biela kryštalická látka (17,13 g) (-)-ci.v-4-amino-l-(2-hydroxymetyl-l,3-oxatiolán-5-yl)-(lH)-pyrimidín-2-ón, bod topenia 180 až 181 °C.

Skúškou zistené: C=41,85, H=4,85, N=18,13%

C₈H_nN₃O₃S vyžaduje: C=41,9, H=4,8, N=18,3%

Zlúčenina vykazuje IČ spektrum a DSC termogram rovnaké aké sú uvedené na obrázkoch 4 a 6.

Príklad 4

Kryštalografické údaje formy II

Kryštalograflcké údaje: C₈H_nN₃O₃S, M=229,26 Tetragonálna sústava, a = b = 8,749(3), c = 26,523(9), V = 2030(2) A³ (spresnením zo 14 automaticky centrovaných difrakcií, lambda=l,54184 A).

priestorová grupa P4₃2>2 (No.96), z = 8, D_c= 1,50 g.cnf³. F(000)=960, m(Cu/Kct) = 27,5 cm’¹.

Rozmery kryštálu 0,48 x 0,32 x 0,30 mm.

Monokryštály formy II (bezfarebné bipyramídy) sa skúmali pomocou rtg.-difrakcie. Na difraktometri Siemens R³m/V s monochromatizovaným žiarením Cu/Κα pri použití skenu 2J/w sa celkove zmeralo 1651 difrakcií (3<2J<115 °C). Štruktúra sa vyriešila pomocou priamych metód a nevodíkové atómy sa spresnili anizotropne. Vodíkové atómy spojené s uhlíkom sa idealizovali (C-H=0,96 A) a umožnil sa ich pohyb okolo materských atómov uhlíka. Tri vodíkové atómy na -NH₂ a -OH skupinách sa lokalizovali na základe diferenciálnej Fourierovej mapy. Všetky vodíkové atómy sa spresnili izotropné. Spresnenie konvergovalo na hodnotu R=0,068, R_w=0,069, w ‘=[s²(F)+0,005[F]²]. Maximálna reziduálna elektrónová hustota bola 0,45 eA‘³. Absolútna chiralita sa potvrdila Rogerovým eta testom [h=0,99(9)].

Príklad 5

Farmaceutické prostriedky (a) 100 mg tablety zložky na 1 tabletu

3TC (forma II) 100,0 mg mikrokryštalická celulóza NF 189,5 mg sodný glykolát škrobu NF 9,0 mg stearan horečnatý NF___________1.5 mg celková hmotnosť 300,0 mg

3TC (forma II), mikrokryštalická celulóza a sodný glykolát škrobu sa sitovali a miešali vo V-miešači približne 15 minút. Potom sa pridal sitovaný stearan horečnatý a miešanie pokračovalo ďalšie 2 minúty.

Zmes sa stláčala v štandardnom tabletovacom zariadení a potiahli sa tenkým filmom vodnej suspenzie „sivej Opadry“ s cieľom získať esteticky prijateľné tablety.

(b) 300 mg tablety zložky na 1 tabletu

3TC (forma II) 300,0 mg mikrokryštalická celulóza NF 279,0 mg sodný glykolát škrobu NF 18,0 mg stearan horečnatý NF___________1,5 mg celková hmotnosť 600,0 mg

Tablety sa pripravili, ako je uvedené v prípade (a).

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. (-)cis-4-Amino-1 -(2-hydroxymetyl-1,3-oxatiolán-5-yl)-(lH)-pyrimidín-2-ón v kryštalickej forme, vybranej z bipyramidálných alebo ihličkových kryštálov.
2. (-)-cis-4-Amino-1 -(2-hydroxymetyl-1,3-oxatiolán-5-yl)-(lH)-pyrimidín-2-ón podľa nároku 1 vo forme bipyramidálných kryštálov.
3. Kryštalická forma podľa nároku 1 alebo 2, ktorá má teplotu topenia 170 až 178 °C.
4. Kryštalická forma podľa nároku 2 alebo 3, ktorá má teplotu topenia 177 až 178 °C.
5. Kryštalická forma podľa ľubovoľného z nárokov 2 až 4, majúca v infračervenom spektre absorpčné pásy pri vlnočtoch 920 a 850 cm'¹.
6. Kryštalická forma podľa ľubovoľného z nárokov 2 až 5, ktorej absorpčný pás v infračervenom spektre pri vlnočte 1110 cm'¹ chýba.
7. Kryštalická forma podľa ľubovoľného z nárokov 1 až 6, ktorá na zázname diferenciálnej skenovacej kalorimetrie vykazuje endotermický úsek s počiatkom pri teplote 177 až 178 °C.
8. (-)-cis-4-Amino-1 -(2-hydroxymetyl-1,3-oxatiolán-5-yl)-(lH)-pyrimidín-2-ón podľa nároku 1 vo forme ihličkovitých kryštálov.
9. Kryštalická forma podľa nároku 8, ktorá má teplotu topenia 127 až 130 °C.
10. Kryštalická forma podľa nároku 8 alebo 9, ktorá má teplotu topenia 124 až 127 °C.
11. Kryštalická forma podľa nárokov 8 až 10, ktorá na zázname diferenciálnej skenovacej kalorimetrie vykazuje endotermický úsek s počiatkom pri teplote 124 až 127 “C.
12. Kryštalická forma podľa nárokov 8 až 11, ktorá vykazuje v infračervenom spektre absorpčný pás pri vlnočte 1110 cm’¹.
13. Spôsob prípravy zlúčeniny (-)-cis-4-amino-l-(2-hydroxymetyl-1,3-oxatiolán-5-yl)-( lH)-pyrimidín-2-ón v kryštalickej forme podľa nároku 1, vyznačujúci sa t ý m , že zahŕňa kryštalizáciu zlúčeniny z vodného roztoku.
14. Spôsob prípravy zlúčeniny (-)-cis-4-amino-l-(2-hydroxymetyl-l,3-oxatiolán-5-yl)-(lH)-pyrimidín-2-ón v kryštalickej forme podľa nároku 8až 12, vyznačujúci sa tým, že vodný roztok tejto zlúčeniny sa podrobí azeotropickej destilácii s propán-1-olom.
15. Spôsob prípravy zlúčeniny (-)-cis-4-amino-l-(2-hydroxymetyl-1,3 -oxatiolán-5 -yl)-( 1 H)-pyrimidín-2-ón v kryštalickej forme podľa nároku 1, vyznačujúci sa t ý m , že sa uvedená látka nechá prekryštalizovať z nevodného prostredia.
16. Spôsob podľa nároku 15 na prípravu bipyramidálnych kryštálov, vyznačujúci sa tým, že sa ako nevodné prostredie použije C₂.₆ alkohol.
17. Spôsob podľa nároku 16, vyznačujúci sa t ý m , že ako nevodné prostredie sa použije etanol alebo priemyselný etanol denaturovaný metanolom.
18. Spôsob prípravy zlúčeniny (-)-cis-4-amino-l-(2-hydroxymetyl-l,3-oxatiolán-5-yl)-(lH)-pyrimidín-2-ón vo forme bipyramidálných kryštálov podľa nároku 2, vyzná č u j ú c i sa tým, že zlúčenina vo forme ihličkovitých kryštálov sa ponechá stáť v etanole alebo priemyselnom etanole denaturovanom metanolom pri teplote 30 až 70 °C.
19. Farmaceutický prostriedok na liečenie vírových infekcií, vyznačujúci sa tým, že zahŕňa (-)-cis-4-amino- l-(2-hydroxymetyl-1,3 -oxatiolán-5-yl)-( 1H)-pyrimidín-2-ón v kryštalickej forme podľa nároku 1, a jej farmaceutický prijateľný nosič.
20. Farmaceutický prostriedok podľa nároku 19, vyzná č u j ú c i sa tým, že je vo forme vhodnej na orálne podávanie.
21. Farmaceutický prostriedok podľa nároku 19 alebo 20, vyznačujúci sa tým, že je vo forme tabliet alebo kapsúl.