JPH10204068A - 新規物質ysi−40−2 - Google Patents
新規物質ysi−40−2Info
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- JPH10204068A JPH10204068A JP1354197A JP1354197A JPH10204068A JP H10204068 A JPH10204068 A JP H10204068A JP 1354197 A JP1354197 A JP 1354197A JP 1354197 A JP1354197 A JP 1354197A JP H10204068 A JPH10204068 A JP H10204068A
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- JP
- Japan
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- ysi
- medium
- cells
- culture
- antifungal
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- Pending
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- Thiazole And Isothizaole Compounds (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 強力な抗真菌活性を有し、動物細胞に対
する細胞毒性が低く、しかも、工業的大量生産の容易な
新規抗生物質及びこれを有効成分とする抗真菌剤を提供
する。 【解決手段】 上記課題は、下記の化学構造を有する新
規物質YSI−40−2、 【化1】 及び上記記載のYSI−40−2又はその塩を有効成分
とする抗真菌剤によって解決される。この新規物質はシ
ストバクター属細菌を培養することによって取得するこ
とができる。
する細胞毒性が低く、しかも、工業的大量生産の容易な
新規抗生物質及びこれを有効成分とする抗真菌剤を提供
する。 【解決手段】 上記課題は、下記の化学構造を有する新
規物質YSI−40−2、 【化1】 及び上記記載のYSI−40−2又はその塩を有効成分
とする抗真菌剤によって解決される。この新規物質はシ
ストバクター属細菌を培養することによって取得するこ
とができる。
Description
【0001】
【発明の属する技術分野】本発明は、新規物質YSI−
40−2及びこれを有効成分とする抗真菌剤に関する。
40−2及びこれを有効成分とする抗真菌剤に関する。
【0002】
【従来の技術】従来より、カンジダ属、アスペルギルス
属、トリコフィートン属等の真菌類を病原体とする真菌
症に対しては様々な抗真菌剤が用いられている。このよ
うな抗真菌剤としては現在アンホテリシン、ミコナゾー
ル、グリセオフルビン等が知られている。
属、トリコフィートン属等の真菌類を病原体とする真菌
症に対しては様々な抗真菌剤が用いられている。このよ
うな抗真菌剤としては現在アンホテリシン、ミコナゾー
ル、グリセオフルビン等が知られている。
【0003】しかしこれら従来の抗真菌薬は抗真菌活性
は有するものの、動物細胞等の真核細胞一般に対する細
胞毒性が強い。従って、使用に際して十分な量を投与す
ることが出来ず、必ずしも十分な治療効果を上げること
が出来ない。このため強力な抗真菌活性を有するととも
に、他の動物細胞等に対する細胞毒性の低い物質が要望
されていた。
は有するものの、動物細胞等の真核細胞一般に対する細
胞毒性が強い。従って、使用に際して十分な量を投与す
ることが出来ず、必ずしも十分な治療効果を上げること
が出来ない。このため強力な抗真菌活性を有するととも
に、他の動物細胞等に対する細胞毒性の低い物質が要望
されていた。
【0004】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、上述した点
に鑑みてなされたものであり、強力な抗真菌活性を有
し、動物細胞に対する細胞毒性が低く、しかも、工業的
大量生産の容易な新規抗生物質及びこれを有効成分とす
る抗真菌剤を提供することを目的とする。
に鑑みてなされたものであり、強力な抗真菌活性を有
し、動物細胞に対する細胞毒性が低く、しかも、工業的
大量生産の容易な新規抗生物質及びこれを有効成分とす
る抗真菌剤を提供することを目的とする。
【0005】
【課題を解決するための手段】本発明者は、上記目的を
達成するため鋭意研究を続けた結果、シストバクター属
に属する細菌の培養物が強い抗真菌作用を有することを
見出し、この培養物から抗真菌作用物質の単離に成功し
てこれが新規物質であることを見出した。
達成するため鋭意研究を続けた結果、シストバクター属
に属する細菌の培養物が強い抗真菌作用を有することを
見出し、この培養物から抗真菌作用物質の単離に成功し
てこれが新規物質であることを見出した。
【0006】本発明は、かかる知見に基づいてなされた
ものであり、下記の化学構造を有する新規物質YSI−
40−2及びこのYSI−40−2又はその薬理学的に
許容される塩を有効成分とする抗真菌剤に関するもので
ある。
ものであり、下記の化学構造を有する新規物質YSI−
40−2及びこのYSI−40−2又はその薬理学的に
許容される塩を有効成分とする抗真菌剤に関するもので
ある。
【0007】
【化2】
【0008】
【発明の実施の形態】このような本発明に係わる新規物
質YSI−40−2を生産する生産菌としては、例えば
シストバクター属に属するシストバクター・フスカス
(Cystobacter fuscus;例えばFE
RM P−15997)が挙げられる。
質YSI−40−2を生産する生産菌としては、例えば
シストバクター属に属するシストバクター・フスカス
(Cystobacter fuscus;例えばFE
RM P−15997)が挙げられる。
【0009】YSI−40−2生産菌は一般的な微生物
の培養方法を用いて培養することが可能である。
の培養方法を用いて培養することが可能である。
【0010】培養に用いられる培地としては、YSI−
40−2生産菌が利用できる栄養源を含有するものであ
ればよい。例えば炭素源及び窒素源としてカゼイン、グ
ルテン、大豆粉、酵母エキスなどの各種タンパク質やア
ミノ酸混合物などが適している。また発酵生産に用いた
酵母や細菌の菌体あるいはグルコース、デンプン、デキ
ストリンなどの糖質類や尿素、硫酸アンモニウム、リン
酸アンモニウムなどの無機窒素源も利用可能である。ま
た培地は必要に応じて、炭酸カルシウム、リン酸ナトリ
ウム、硫酸マグネシウム等の無機塩を含有することが可
能である。培地のpHは6〜9で培養することができる
が、特に7.0〜8.5で培養することが好ましい。ま
た生産物の収量を上げる目的で培地中に各種の吸着樹脂
を添加して培養することも可能である。
40−2生産菌が利用できる栄養源を含有するものであ
ればよい。例えば炭素源及び窒素源としてカゼイン、グ
ルテン、大豆粉、酵母エキスなどの各種タンパク質やア
ミノ酸混合物などが適している。また発酵生産に用いた
酵母や細菌の菌体あるいはグルコース、デンプン、デキ
ストリンなどの糖質類や尿素、硫酸アンモニウム、リン
酸アンモニウムなどの無機窒素源も利用可能である。ま
た培地は必要に応じて、炭酸カルシウム、リン酸ナトリ
ウム、硫酸マグネシウム等の無機塩を含有することが可
能である。培地のpHは6〜9で培養することができる
が、特に7.0〜8.5で培養することが好ましい。ま
た生産物の収量を上げる目的で培地中に各種の吸着樹脂
を添加して培養することも可能である。
【0011】YSI−40−2生産菌は10℃〜38℃
で培養することができるが、特に27℃〜30℃で培養
することが最も望ましい。培養時間は通常3日〜5日で
あるが、培養条件により適宜変更することが可能であ
る。
で培養することができるが、特に27℃〜30℃で培養
することが最も望ましい。培養時間は通常3日〜5日で
あるが、培養条件により適宜変更することが可能であ
る。
【0012】培養により生成される新規物質YSI−4
0−2は、菌体内および培養上清の両方に蓄積される。
この生産菌の培養液からYSI−40−2を得るために
は微生物の代謝産物を採集するのに通常用いられる方法
を用いることが可能である。例えばYSI−40−2と
培養物中に含まれる他の物質との溶解度を利用する方
法、イオン結合力との差を利用する方法、吸着親和力の
差を利用する方法、分子量の差を利用する方法等を単独
であるいは適宜組み合わせて、または反復して使用する
ことができる。具体的には例えばYSI−40−2生産
菌の培養物及び菌体の抽出液をゲルろ過クロマトグラフ
ィー、吸着クロマトグラフィー、液体クロマトグラフィ
ー等を組み合わせて用いて精製することによりYSI−
40−2及びその他の活性成分を含む画分が得られる。
この画分を減圧濃縮して得られる固形物をさらに高速液
体クロマトグラフィーを用いて展開して精製することに
より、YSI−40−2を得ることができる。
0−2は、菌体内および培養上清の両方に蓄積される。
この生産菌の培養液からYSI−40−2を得るために
は微生物の代謝産物を採集するのに通常用いられる方法
を用いることが可能である。例えばYSI−40−2と
培養物中に含まれる他の物質との溶解度を利用する方
法、イオン結合力との差を利用する方法、吸着親和力の
差を利用する方法、分子量の差を利用する方法等を単独
であるいは適宜組み合わせて、または反復して使用する
ことができる。具体的には例えばYSI−40−2生産
菌の培養物及び菌体の抽出液をゲルろ過クロマトグラフ
ィー、吸着クロマトグラフィー、液体クロマトグラフィ
ー等を組み合わせて用いて精製することによりYSI−
40−2及びその他の活性成分を含む画分が得られる。
この画分を減圧濃縮して得られる固形物をさらに高速液
体クロマトグラフィーを用いて展開して精製することに
より、YSI−40−2を得ることができる。
【0013】このようにして得られた新規物質YSI−
40−2は以下のような理化学的性質を有する。
40−2は以下のような理化学的性質を有する。
【0014】a)外観:無色柱状結晶 b)溶解性:ジクロロメタン、メタノール、アセトン、
酢酸エチル、に可溶。ヘキサン、水に難溶 c)融点:114〜115℃ d)旋光度:[α]25 D+109(c0.24,CHC
l3) e)紫外部吸収スペクトル(MeOH):λmax22
3(ε38200)、242(34500)、310(12
400)mm f)赤外部吸収スペクトル(CHCl3):3123、
1706、1624、1499、1457、1441、
1385、1267、1194、1150、1127、
1094、1044、969、927、828cm-1 g)1H−核磁気共鳴スペクトル(400MHz,CD
Cl3):7.87(s,1H)、7.09(s,1H)、
6.58(d,J=15.6Hz,1H)、6.41(d
d,J=15.6,7.6Hz,1H)、4.96
(s,1H)、4.17(dq,J=8.0,6.8H
z,1H)、3.81(dd,J=8.0,7.6H
z,1H)、3.66(s,3H)、3.60(s,3
H)、3.36(septet,J=6.8Hz,1H)、
3.33(s,3H)、1.44(d,J=6.8Hz,
6H)、1.22(d,J=6.8Hz,3H) h)13C−核磁気共鳴スペクトル(100MHz,CD
Cl3):178.6(s)、176.7(s)、16
7.7(s)、162.6(s)、154.3(s)、
148.6(s)、131.8(d)、125.4
(d)、115.1(d)、114.9(d)、91.
1(d)、84.4(d)、57.0(q)、55.5
(q)、50.8(q)、39.8(d)、33.3
(d)、23.1(q,2C)、14.1(q) i)質量分析:MS(FAB+、matrix;m−n
itrobenzyl−alcohol);m/z 4
23(MH+)、391、359、279(base) j)TLC:Rf=0.58(hexane−酢酸エチ
ル(2:1)) k)元素分析:C,56.82%;H,6.29%;
N,6.58% 計算値:C,56.85%;H,6.20%;N,6.
63%
酢酸エチル、に可溶。ヘキサン、水に難溶 c)融点:114〜115℃ d)旋光度:[α]25 D+109(c0.24,CHC
l3) e)紫外部吸収スペクトル(MeOH):λmax22
3(ε38200)、242(34500)、310(12
400)mm f)赤外部吸収スペクトル(CHCl3):3123、
1706、1624、1499、1457、1441、
1385、1267、1194、1150、1127、
1094、1044、969、927、828cm-1 g)1H−核磁気共鳴スペクトル(400MHz,CD
Cl3):7.87(s,1H)、7.09(s,1H)、
6.58(d,J=15.6Hz,1H)、6.41(d
d,J=15.6,7.6Hz,1H)、4.96
(s,1H)、4.17(dq,J=8.0,6.8H
z,1H)、3.81(dd,J=8.0,7.6H
z,1H)、3.66(s,3H)、3.60(s,3
H)、3.36(septet,J=6.8Hz,1H)、
3.33(s,3H)、1.44(d,J=6.8Hz,
6H)、1.22(d,J=6.8Hz,3H) h)13C−核磁気共鳴スペクトル(100MHz,CD
Cl3):178.6(s)、176.7(s)、16
7.7(s)、162.6(s)、154.3(s)、
148.6(s)、131.8(d)、125.4
(d)、115.1(d)、114.9(d)、91.
1(d)、84.4(d)、57.0(q)、55.5
(q)、50.8(q)、39.8(d)、33.3
(d)、23.1(q,2C)、14.1(q) i)質量分析:MS(FAB+、matrix;m−n
itrobenzyl−alcohol);m/z 4
23(MH+)、391、359、279(base) j)TLC:Rf=0.58(hexane−酢酸エチ
ル(2:1)) k)元素分析:C,56.82%;H,6.29%;
N,6.58% 計算値:C,56.85%;H,6.20%;N,6.
63%
【0015】上記の分析結果から構造を次のようにして
決定した。まず、質量分析スペクトルおよび元素分析値
より分子式はC20−H26−04−S2である。1H
−核磁気共鳴スペクトル、13C−核磁気共鳴スペクト
ル、二次元COSYスペクトル、及び1H−13C COS
Yスペクトルから、四級炭素以外の部分構造が推定され
た。四級炭素(6個)やヘテロ原子(7個)により分断され
たこれら部分構造のつながりは、HMBCスペクトルに
より推定できた。ビチアゾール構造(下記構造式)は、上
記核磁気共鳴スペクトルデータより推定されたが、my
xothiazol(1)とのNMRの比較から確認でき
たことから本物質の構造を決定した。赤外吸収スペクト
ルもこの構造を支持する。 (上記(1):The Journal of Antib
iotics;1474〜1479(1980))
決定した。まず、質量分析スペクトルおよび元素分析値
より分子式はC20−H26−04−S2である。1H
−核磁気共鳴スペクトル、13C−核磁気共鳴スペクト
ル、二次元COSYスペクトル、及び1H−13C COS
Yスペクトルから、四級炭素以外の部分構造が推定され
た。四級炭素(6個)やヘテロ原子(7個)により分断され
たこれら部分構造のつながりは、HMBCスペクトルに
より推定できた。ビチアゾール構造(下記構造式)は、上
記核磁気共鳴スペクトルデータより推定されたが、my
xothiazol(1)とのNMRの比較から確認でき
たことから本物質の構造を決定した。赤外吸収スペクト
ルもこの構造を支持する。 (上記(1):The Journal of Antib
iotics;1474〜1479(1980))
【0016】
【化3】
【0017】以上のような性質を有するYSI−40−
2は各種真菌類に対し強い抗菌活性を有する。カンジダ
等の酵母類及びアスペルギルス等の糸状菌類のいずれに
対しても抗菌活性を有する。
2は各種真菌類に対し強い抗菌活性を有する。カンジダ
等の酵母類及びアスペルギルス等の糸状菌類のいずれに
対しても抗菌活性を有する。
【0018】この抗菌活性は抗生物質の抗菌スペクトル
を求める方法に従って測定することができ、通常はYS
I−40−2の濃度を変えた寒天平板の希釈列を作成
し、そこに各種の菌を植え付けて最小生育阻止濃度を求
めることによって行なう。寒天平板の培地にはポテトデ
キストロース寒天培地、2%麦芽エキス寒天培地等を用
いればよい。
を求める方法に従って測定することができ、通常はYS
I−40−2の濃度を変えた寒天平板の希釈列を作成
し、そこに各種の菌を植え付けて最小生育阻止濃度を求
めることによって行なう。寒天平板の培地にはポテトデ
キストロース寒天培地、2%麦芽エキス寒天培地等を用
いればよい。
【0019】従って、YSI−40−2は抗真菌剤とし
て利用する事が可能である。即ちYSI−40−2を有
効成分とする低毒性の真菌症治療剤として有用である。
て利用する事が可能である。即ちYSI−40−2を有
効成分とする低毒性の真菌症治療剤として有用である。
【0020】このYSI−40−2は経口、非経口で投
与する事ができる。
与する事ができる。
【0021】経口投与の場合は、錠剤、カプセル剤、エ
リキシル剤等の剤型に、非経口投与の場合は、無菌溶液
剤、懸濁溶剤等の剤型に調製することが望ましい。投与
量は疾病の種類、程度、患者の年齢や体重等の因子によ
り適宜変更することが可能であるが、ヒトに対しては
0.1mg〜100mgの範囲で投与することが望まし
い。
リキシル剤等の剤型に、非経口投与の場合は、無菌溶液
剤、懸濁溶剤等の剤型に調製することが望ましい。投与
量は疾病の種類、程度、患者の年齢や体重等の因子によ
り適宜変更することが可能であるが、ヒトに対しては
0.1mg〜100mgの範囲で投与することが望まし
い。
【0022】またYSI−40−2は、薬理学的に許容
される塩として調製することができ、また調剤上必要
な、賦形剤、結合剤、防腐剤、緩衝剤、酸化防止剤、香
料等を用いて調製することが可能である。
される塩として調製することができ、また調剤上必要
な、賦形剤、結合剤、防腐剤、緩衝剤、酸化防止剤、香
料等を用いて調製することが可能である。
【0023】
【実施例】以下、本発明の実施例を説明するが、本発明
はこれに限定されるものではない。
はこれに限定されるものではない。
【0024】1.YSI−40−2の製造;下記の組成
を有するシード培地を調製し、その100mlを500
ml容三角フラスコに注入し加熱蒸気滅菌した(120
℃,20分)。これにシストバクター ・フスカス(FERM P−15997)を一白金耳接
種し、28℃で3日間旋回振盪培養(180rpm)し
た。
を有するシード培地を調製し、その100mlを500
ml容三角フラスコに注入し加熱蒸気滅菌した(120
℃,20分)。これにシストバクター ・フスカス(FERM P−15997)を一白金耳接
種し、28℃で3日間旋回振盪培養(180rpm)し
た。
【0025】 [シード培地組成] カジトン(ディフコ社製) 10g/l 乾燥酵母(エビオス、アサヒビール製) 5g/l 麦芽エキス(ディフコ社製) 2g/l 酵母エキス(ディフコ社製) 1g/l MgSO4・7H2O 1g/l 寒天(ディフコ社製) 0.5g/l Hepes 10g/l Mg3(PO4)2・7H2O 3g/l (pH7.2)
【0026】次に下記の組成を有する生産培地を調製
し、その100mlを500ml容三角フラスコに注入
し、加熱蒸気滅菌(120℃,20分)した。これに上
述のシード培養液5mlを接種し、28℃で4日間旋回
培養(180rpm)した。
し、その100mlを500ml容三角フラスコに注入
し、加熱蒸気滅菌(120℃,20分)した。これに上
述のシード培養液5mlを接種し、28℃で4日間旋回
培養(180rpm)した。
【0027】 [生産培地組成] カジトン(ディフコ社製) 10g/l 乾燥酵母(エビオス、アサヒビール製) 5g/l 麦芽エキス(ディフコ社製) 2g/l 酵母エキス(ディフコ社製) 1g/l MgSO4・7H2O 1g/l 寒天(ディフコ社製) 0.5g/l Hepes 10g/l Mg3(PO4)2・7H2O 3g/l 吸着樹脂SP207(三菱化学製) 20g/l (pH7.2)
【0028】得られた生産培地の培養液から以下の手順
でYSI−40−2の単離を行った。
でYSI−40−2の単離を行った。
【0029】即ちこの培養液2.5Lを遠心分離にかけ
上清を除去し、湿菌体と吸着樹脂を得た。これにメタノ
ール200ml及びアセトン800mlを加えて、3日
間室温で静置して活性物質を抽出した。次いでろ過によ
って菌体及び吸着樹脂を除去したアセトン(1L)を減
圧濃縮し粗抽出物(8.2g)を得た。このものをメタ
ノール−水(6:4)100mlに溶解し、ジクロロメ
タン50mlで3回抽出し濃縮してジクロロメタン可溶
部(1.6g)を得た。これをシリカゲル(フジシリシ
アBW820MH,16g)のカラムクロマトグラフィ
ーに供した。溶離液として酢酸エチル、次いでメタノー
ルで溶出した。このうち酢酸エチル溶出画分(780m
g)をシリカゲルの中圧液体クロマトグラフィー(野村
化学(株)Develosil−LOP60,24IDx
360m)により分離した。溶離液として酢酸エチル
−ヘキサン系混液(酢酸エチル10%→100%,90
分の直線グラジエント)を用い、酢酸エチル(52〜6
2%)溶出画分(72mg)を分取した。これをヘキサ
ン−酢酸エチル(20:1)より再結晶し、YSI−4
0−2(31.6mg)を純粋で得た。
上清を除去し、湿菌体と吸着樹脂を得た。これにメタノ
ール200ml及びアセトン800mlを加えて、3日
間室温で静置して活性物質を抽出した。次いでろ過によ
って菌体及び吸着樹脂を除去したアセトン(1L)を減
圧濃縮し粗抽出物(8.2g)を得た。このものをメタ
ノール−水(6:4)100mlに溶解し、ジクロロメ
タン50mlで3回抽出し濃縮してジクロロメタン可溶
部(1.6g)を得た。これをシリカゲル(フジシリシ
アBW820MH,16g)のカラムクロマトグラフィ
ーに供した。溶離液として酢酸エチル、次いでメタノー
ルで溶出した。このうち酢酸エチル溶出画分(780m
g)をシリカゲルの中圧液体クロマトグラフィー(野村
化学(株)Develosil−LOP60,24IDx
360m)により分離した。溶離液として酢酸エチル
−ヘキサン系混液(酢酸エチル10%→100%,90
分の直線グラジエント)を用い、酢酸エチル(52〜6
2%)溶出画分(72mg)を分取した。これをヘキサ
ン−酢酸エチル(20:1)より再結晶し、YSI−4
0−2(31.6mg)を純粋で得た。
【0030】2.抗真菌活性試験 YSI−40−2の抗真菌活性を寒天希釈平板法を用い
て求めた。YSI−40−2は少量のメタノールで溶解
した後ポテトデキストロース液体培地で等倍希釈系列を
作製した。その0.1mlを加熱溶解したポテトデキス
トロース寒天培地0.9mlと混合し、24ウェルプレ
ート(コーニング社)へ分注した。被検菌であるカンジダ
属及びサッカロマイセス属はポテトデキストロース液体
培地(ディフコ社)で一晩培養した後、約104/mlに
なるよう培地で希釈した。アスペルギルス属及びトリコ
デルマ属はポテトデキストロース寒天培地(ディフコ
社)上で十分生育させた後胞子を集め、約104/ml
になるよう培地で希釈した。このような調製した被検菌
を上記の抗生物質含有培地に接種し、25℃で2晩培養
し生育の認められない最小濃度(MIC)を求めた。
て求めた。YSI−40−2は少量のメタノールで溶解
した後ポテトデキストロース液体培地で等倍希釈系列を
作製した。その0.1mlを加熱溶解したポテトデキス
トロース寒天培地0.9mlと混合し、24ウェルプレ
ート(コーニング社)へ分注した。被検菌であるカンジダ
属及びサッカロマイセス属はポテトデキストロース液体
培地(ディフコ社)で一晩培養した後、約104/mlに
なるよう培地で希釈した。アスペルギルス属及びトリコ
デルマ属はポテトデキストロース寒天培地(ディフコ
社)上で十分生育させた後胞子を集め、約104/ml
になるよう培地で希釈した。このような調製した被検菌
を上記の抗生物質含有培地に接種し、25℃で2晩培養
し生育の認められない最小濃度(MIC)を求めた。
【0031】結果を表1に示す。
【0032】
【表1】
【0033】表1から明らかなようにYSI−40−2
は優れた抗真菌活性を有することがわかった。
は優れた抗真菌活性を有することがわかった。
【0034】3.各種動物細胞に対する毒性評価 [試験例1]YSI−40−2のHCT−116細胞(ヒ
ト大腸癌)に対する細胞増殖阻害活性を、MTT法によ
り測定した。
ト大腸癌)に対する細胞増殖阻害活性を、MTT法によ
り測定した。
【0035】RPMI 1640培地(GIBCO社
製)、10%牛胎児血清からなる培地(以下培地Aとい
う)で4.0×104個/mlに調整した各種細胞を0.
1mlずつ96穴マイクロタイタープレートの各穴に分
注した。該プレートを炭酸ガスインキュベーター内で3
7℃,20時間培養後、これに培地Aにより適宜希釈し
た検体(試験化合物)0.025mlずつを加え、炭酸
ガスインキュベーター内で37℃,72時間培養した。
これにダルベッコPBS(−)(ニッスイ社製)にて5m
g/mlに調製したMTT溶液を0.01mlずつ加
え、37℃,3時間炭酸ガスインキュベーター内で培養
した。次いで、0.01N塩酸/20%SDSを0.0
5mlずつ加えて生じた結晶を溶解後、マイクロプレー
トリーダーにより570nmの吸光度を測定した。無処
理細胞と既知濃度の検体で処理した細胞の吸光度を比較
することにより、細胞の増殖を50%阻害する検体濃度
(IC50)を算出した。試験例1の結果を表2に示す。
製)、10%牛胎児血清からなる培地(以下培地Aとい
う)で4.0×104個/mlに調整した各種細胞を0.
1mlずつ96穴マイクロタイタープレートの各穴に分
注した。該プレートを炭酸ガスインキュベーター内で3
7℃,20時間培養後、これに培地Aにより適宜希釈し
た検体(試験化合物)0.025mlずつを加え、炭酸
ガスインキュベーター内で37℃,72時間培養した。
これにダルベッコPBS(−)(ニッスイ社製)にて5m
g/mlに調製したMTT溶液を0.01mlずつ加
え、37℃,3時間炭酸ガスインキュベーター内で培養
した。次いで、0.01N塩酸/20%SDSを0.0
5mlずつ加えて生じた結晶を溶解後、マイクロプレー
トリーダーにより570nmの吸光度を測定した。無処
理細胞と既知濃度の検体で処理した細胞の吸光度を比較
することにより、細胞の増殖を50%阻害する検体濃度
(IC50)を算出した。試験例1の結果を表2に示す。
【0036】[試験例2]YSI−40−2のK562細
胞(ヒト慢性骨髄性白血病)に対する細胞増殖阻害活性
を、MTT法により測定した。
胞(ヒト慢性骨髄性白血病)に対する細胞増殖阻害活性
を、MTT法により測定した。
【0037】RPMI 1640培地(GIBCO社
製)、10%牛胎児血清からなる培地(以下培地Aとい
う)で4.0×104個/mlに調整した各種細胞を0.
1mlずつ96穴マイクロタイタープレートの各穴に分
注した。これに培地Aにより適宜希釈した検体(試験化
合物)0.025mlずつを加え、炭酸ガスインキュベ
ーター内で37℃,72時間培養した。以下、試験例1
と同様にしてMTT法により細胞の増殖を50%阻害す
る検体濃度(IC50)を算出した。試験例2の結果を表
2に示す。
製)、10%牛胎児血清からなる培地(以下培地Aとい
う)で4.0×104個/mlに調整した各種細胞を0.
1mlずつ96穴マイクロタイタープレートの各穴に分
注した。これに培地Aにより適宜希釈した検体(試験化
合物)0.025mlずつを加え、炭酸ガスインキュベ
ーター内で37℃,72時間培養した。以下、試験例1
と同様にしてMTT法により細胞の増殖を50%阻害す
る検体濃度(IC50)を算出した。試験例2の結果を表
2に示す。
【0038】表2の結果よりYSI−40−2は比較的
微弱な細胞毒性を有していた。
微弱な細胞毒性を有していた。
【0039】
【表2】
【0040】
【発明の効果】以上の説明から明らかなように、本発明
によれば抗真菌効果にすぐれ細胞毒性が比較的弱い新規
物質YSI−40−2の提供が可能になるという効果を
奏する。この抗生物質は通常の微生物培養法で生産する
ことができ、抽出、精製にも特別の方法を用いないので
工業的な大量生産が可能である。
によれば抗真菌効果にすぐれ細胞毒性が比較的弱い新規
物質YSI−40−2の提供が可能になるという効果を
奏する。この抗生物質は通常の微生物培養法で生産する
ことができ、抽出、精製にも特別の方法を用いないので
工業的な大量生産が可能である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 小鹿 一 愛知県名古屋市千種区不老町(番地なし) 名古屋大学内 (72)発明者 坂神 洋次 愛知県名古屋市千種区不老町(番地なし) 名古屋大学内
Claims (2)
- 【請求項1】 下記の化学構造を有する新規物質YSI
−40−2 【化1】 - 【請求項2】 請求項1記載のYSI−40−2又はそ
の塩を有効成分とする抗真菌剤
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP1354197A JPH10204068A (ja) | 1997-01-28 | 1997-01-28 | 新規物質ysi−40−2 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP1354197A JPH10204068A (ja) | 1997-01-28 | 1997-01-28 | 新規物質ysi−40−2 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH10204068A true JPH10204068A (ja) | 1998-08-04 |
Family
ID=11836021
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP1354197A Pending JPH10204068A (ja) | 1997-01-28 | 1997-01-28 | 新規物質ysi−40−2 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPH10204068A (ja) |
-
1997
- 1997-01-28 JP JP1354197A patent/JPH10204068A/ja active Pending
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