JPH0394692A

JPH0394692A - 生理活性物質ｂｅ―１８２５７類

Info

Publication number: JPH0394692A
Application number: JP2140455A
Authority: JP
Inventors: Mitsuo Yano; 矢野　光夫; Masaki Ihara; 伊原　正樹; Katsuhisa Ojiri; 勝久小尻; Kenji Kawamura; 健二河村; Hiroyuki Suda; 寛之須田
Original assignee: Banyu Phamaceutical Co Ltd
Current assignee: MSD KK
Priority date: 1989-06-01
Filing date: 1990-05-30
Publication date: 1991-04-19
Anticipated expiration: 2014-02-24
Also published as: JP2861267B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】星呆上旦豊里分立本発明は医薬の分野で有用な化合物に関するものである
．さらに詳しくは，本発明は内在性の強力な血管収縮物
質エンドセリンへの拮抗作用を有する新規な物質ＢＥ−
１８２５７類，それらの製造法並びにそれらの血管拡張
剤並びに抗高血圧剤、抗急性腎不全剤、抗心筋梗塞剤，
狭心症及び抗脳血管レン縮剤としての用途に関するもの
である．さらに本発明はエンドセリン拮抗作用を有する
新規な物質ＢＥ−１８２５７類を産生ずるストレプトミ
セス属に属する微生物又はその変異株に関するものであ
る６従来の技術エンドセリンは２１個のアミノ酸から成るポリペブチド
であり、ヒト、ブタの内皮細胞より生産され、強力な血
管収縮作用及び持続的で強い昇圧作用を有することが知
られ、この血管収縮作用は血管平滑筋上の受容体との結
合により生じることが知られている。［ネイチャ−　（
Ｎａｔｕｒｅ）　，第３３２巻，第４１１頁一第４１５
頁（ｔ９８８年），フェブス・レターズ（ＦＥＢＳ　Ｌ
ｅｔｔｅｒｓ），第２３１巻，第４４０頁一第４４４頁
（１９８８年）及びバイオキミカ・バイオフィジカ・リ
サーチ・コミュニケーション（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏ
ｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．ＣｏｍＩＩｌｕｎ．），第１５４巻
，第８６８頁一第８７５頁（１９８８年）参照］。エン
ドセリンは報告によれば高血圧症、急性腎不全、心筋梗
塞及び脳血管レン縮の原因物質の一つと考えられている
［ザ・ランセット（ＴｈｅＬａｎｃｅｔ）＋第１１７９
頁一第１１８２頁（１９８８年），ヨーロピアン・ジャ
ーナル・オブ・ファーマコロジー（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａ
ｒｍａｃｏ１．），第１６２巻，第３５３頁一第３５８
頁（１９８９年〉及び第１４回日本脳卒中学会総会抄録
，第１８７頁（１９８９年）参照］．さらにエンドセリ
ンは、小腸、気管支及び子宮平滑筋をも収縮する作用を
有する［フエブス・レターズ（ＦＥＢＳ　Ｌｅｔｔｅｒ
ｓ），第２４７巻，第３３７頁一第３４０頁（１９８９
年）３９ヨーロビアン・ジャーナル・オブ・ファーマコ
ロジー（Ｅｕｒ．Ｊ，Ｐｈａｒｍａ−ｃｏ１．）＋第１
５４巻，第２２７頁一第２２８頁（１９８８年）及びパ
イオキミカ・バイオフイジカ・リサーチ・コミュニケー
ション（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃ
ｏａ＋ＩＩｌｕｎ．　），第１５９巻．第３１７頁一第
３２３頁（１９８９年）参照Ｌまた，エンドセリンの受
容体は末梢組織ばかりではなく中枢組織にも高濃度に存
在することが知られており，脳内に投与したエンドセリ
ンが動物行動の変化をもたらすことから，エンドセリン
は神経機能の調節にとっても重要な役割を持っていると
考えられている［ニューロサイエンス・レターズ（Ｎｅ
ｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ　Ｌｅｔｔｅｒｓ），第９７巻，
第２７６頁一第２７９頁（１９８９年）参照］．したがって，エンドセリン受容体へのエンドセリンの結
合を阻害する物質は，以上のようなエンドセリンの生理
作用に拮抗し医薬品として有用であると考えられるが、
このようなエンドセリン拮抗物質は未だ見出されていな
い．明が解決しようとする課題強力な平滑筋収縮作用を有する内在性の物質であるエン
ドセリンは高血圧症、急性腎不全、心筋梗塞，狭心症及
び脳血管レン縮の病因であると考えられている．したが
って、エンドセリンの作用に拮抗する物質はこれらの病
態の治療において非常に有効な手段となるので、エンド
セリン拮抗物質が切望されている．課題を解決するための手段本発明者らはエンドセリンの作用に拮抗する物質につい
て種々検索した結果、愛知県額田町内の山林の土壌より
分離採取されたストレプトミセス属に属する放線菌が，
当該活性を有する物質を産生ずることを発見した．該物
質を精製・単離して、その理化学的性状を検討した結果
、新規な化合物であることを見出して、本発明を完成さ
せた．即ち，本発明は下記の理化学的性状を有する生理
活性物質ＢＥ−１８２５７Ａ．　ＢＥ−１８２５７Ｂ．
それらの塩、それらの製造法、それらの血管拡張剤並び
に高血圧症、急性腎不全、心筋梗塞、狭心症及び脳血管
レン縮等の疾患の治療剤としての用途に関するものであ
る．さらに本発明は上記の作用を有する生理活性物質Ｂ
Ｅ−１８２５７Ａ又はＢＥ−１８２５７Ｂの産生能を有
するストレプトミセス属に属する微生物又はその変異株
に関するものである．炭素　　　水素　　　窒素（実測値）　　　６０．３２％　　７．０３％　　１４
．２３％（理論値）　　　６０．１８％　　７．０７％
　　１４．０４％ｂ）分子弐　　Ｃ，　，　ＨｏＮ，　
０，Ｃ）旋光度　　［αコＶ＝−１０．０（Ｃ，　１．
０，ジメチルスルホキシド）ｄ）融点　　　２９５℃まで明瞭な分解点（融点）を示
さない。

ｅ）分子量　　５９８ｆ）マススペクトルＦＡＢマススペクトルを第１図に示す。

［（Ｍ＋Ｈ）”″：　５９９．３２４９］ｇ）アミノ酸
組成グルタミン酸，アラニン、バリン、ロイシン，トリブト
ファンｈ）紫外線吸収スペクトルメタノール中３０ｔｌｇ／−の濃度で測定した紫外線吸
収スペクトルを第２図に示す。

ｉ）赤外線吸収スペクトルＫＢｒ錠剤法による赤外線吸収スペクトルを第３図に示
す．ｊ　）’　｝Ｉ−ＮＭＩ？スペクトルｄ．−ジメチルスルホキシド中で測定した１ＨＮＭＲス
ペクトル（３００ＭＨＺ）を第４図に示す．ｋ）”Ｃ−
ＮＭＲスペクトルｄ．−ジメチルスルホキシド中で測定した１Ｃ−ＮＭＲ
スペクトル（７５ＮＨＺ）を第５図に示す。

ｌ）溶解性水に溶けにくく、アルカリ性の水にやや溶け，ジメチル
スルホキシド等の有機溶媒に可溶．ｍ）酸性、中性、塩基性の区別　　酸性物質ｎ）Ｒｆ値
　　０．５〔メルク社製、キーゼルゲル６０Ｆ，　，　４使用、展
開溶媒：クロロホルム／メタノール／酢酸（２５　：　５　：　０．２）コ０）呈
色反応エールリッヒ反応及びライドンスミス反応において、陽
性である。

ニンヒドリン反応において、陰性である。

ｐ）物質の色　　白色粉末ＢＥ−１８２５７８の理化学的性状ａ）元素分析炭素　　　水素　　　窒素６０．８０％　　７．２１％　　１３．８０％６０．７
７％　　７．２４％　　１３．７１％Ｇ３９Ｈ３９Ｎ，
Ｏ，［α］背＝−６．９（Ｃ　１．０，ジメチルスルホキシ
ド）２９５℃まで明瞭な分解点く融点）を示さない。

ｅ）分子量　　６１２ｆ）マススペクトルＦＡＢマススペクトルを第６図に示す。

［（阿＋Ｈ）’　　＋　　６１３．３３７７コｇ）アミ
ノ酸組成グルタミン酸，アラニン，イソロイシン，ロイシン，ト
リブトファンｈ）紫外線吸収スペクトルメタノール中３０７４７ｍＡの濃度で測定した紫外線吸
収スペクトルを第７図に示す。

ｌ）赤外線吸収スペクトルＫＢｒ錠剤法による赤外線吸収スペクトルを（実測値）（理論値）ｂ）分子式Ｃ）旋光度ｄ）融点第８図に示す。

ｊ）１−ＮＭＲスペクトルｄ．−ジメチルスルホキシド中で測定した１−ＮＭＲス
ペクトル（３００Ｍ｝ＩＺ）を第９図に示す。

ｋ）”Ｃ−Ｎ肝スペクトルｄ．−ジメチルスルホキシド中で測定した１Ｃ−ＮＭＲ
スペクトル（７５Ｎｌ｛ｚ）を第１０図に示す。

ｌ）溶解性水に溶けにくく、アルカリ性の水にやや溶け、ジメチル
スルホキシド等の有機溶媒に可溶．ｆｆｌ）酸性、中性、塩基性の区別　　酸性物質ｎ）Ｒ
ｆ値　　０．５［メルク社製、キーゼルゲル６０Ｆ，　．使用，展開溶
媒：クロロホルム／メタノールｌ酢酸（２５・５：０．２）］０）呈色反応工一ルリッヒ反応及びライドンスミス反応において、陽
性である。

ニンヒドリン反応において，陰性である．ｐ）物質の色
　　白色粉末ＢＥ−１８２５７Ａ及びＢＥ−１８２５７Ｂは上述の性
状から公知物質とは明らかに区別され、新規化合物であ
ることが確認された．またエンドセリン拮抗物質ＢＥ−１８２５７類は塩の形
に変換することができる．その塩は医薬上許容し得る塩
ならばいずれでもよいが、代表的な塩としては、例えば
ナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩、カルシウ
ム塩又はマグネシウム塩等の無機塩等を挙げることがで
きる．以下、本発明のエンドセリン拮抗物質ＢＥ−１８２５７
類のエンドセリン拮抗作用について述べる．エンドセリ
ン　容体へのエンドセリン　合阻害試慧豚大動脈平滑筋組織を４℃にてｌＯ口κＭＯＰＳ　ｐ｝
ｌ７．４緩衝液中でポリトロンによりホモジエナイズす
る．ホモジネートにシヨ糖を２０％になるように加え、
１０００Ｘｇにて１５分間遠心した上澄をＩＯＯＯＯＸ
ｇにて１５分間遠心した．得られた上澄をさらに、９０
０００　Ｘ　ｇにて４０分間遠心し、得られた沈殿を５
ｍκＨＥＰＥＳ／Ｔｒｉｓ　ｐＨ７．４緩衝液中に懸濁
させ２５ｍｇ／ｍｅになるように膜分画を調製した．得られた膜分画１６ｕＱを５０ｍＭ　Ｔｒｉｓ／ＭＣＩ
　ｐＨ７．４緩衝液（以下の化合物を含む：　１０ＩＬ
Ｍ　ＣａＣｌ３９　１０μＭＭｇＣＩ３９　０．１ｍＭ
　ＰＭＳＦ，　１　μＨ　Ｐｅｐｓｔａｔｉｎ　Ａ，　
２　μＭＬｅｕｐｅｐｔｉｎ＋　ｌｍＭ　１．１０−Ｐ
ｈｅｎａｎｔｈｒｏｌｉｎｅ，　０．１％ＢＳＡ）３４
０ｄ中に懸濁させた．最終濃度が０．２μＮとなるよう
に非標識エンドセリンー１（非特異的結合用）、又は緩
衝液（全結合用），あるいはＢＥ−１８２５７類（“１
【一エンドセリンー１結合の阻害を決定するため）４成
及び１“■一エンドセリンー１（１２０００−１８００
０ｃｐｆｆｉ）４０Ｉｉを加えた．これらの混合物を２
５℃にて４時間インキユベートし、グラスフィルターＧ
Ｆ／Ｃにて濾過を行い、５ｍＭ　ＨＥＰＥＳ／Ｔｒｉｓ
　ｐＦＩ７．４緩衝液（０．３％ＢＳＡを含む）にて洗
浄後グラスフィルター上の放射能量の測定よりエンドセ
リン結合阻害活性を求めた，これらの検定はすべて３重
に行った．その結果，エンドセリンーｌ結合を５０％阻
害する濃度（ｒｃ．Ｌ）はＢＥ−１８２５７Ａ及びＢＥ
−１８２５７Ｂに関して各々２．３μ河及び１．４μＮ
であった．エンドセリンによる血管収縮への拮　試験ウ
サギから摘出した腸骨動脈のラセン状標本を２０ｒｄマ
グヌス管内に懸垂し，その等尺性張力を測定する方法を
用い、エンドセリンー■を累積的にマグヌス管内に投与
することにより得られる収縮（エンドセリンーｌ濃度一
収縮曲！！）に対するＢＥ−１８２５７混合物（Ａ　：
　Ｂ＝１　：　２）（１．　３あるいはｌｏＩｌｇ／ｄ
）の拮抗作用を検討した．第１１図に示すように、ＢＥ−１８２５７混合物は、エ
ンドセリンーｔｌ度一収縮曲線を用量に依存して右に移
動した．また、ＢＥ−１８２５７混合物（Ａ：Ｂ・ｔ　
：　２）（Ｌ，３あるいは１０ｔＩｇ／ｄ）単独では，
上記の血管標本に対して、収縮効果も弛緩効果も見られ
ないので、ＢＥ−１８２５７混合物はエンドセリン収縮
に対する拮抗物質であることがわかった．このようにＢＥ−１８２５７Ａ及びＢＥ−１８２５７Ｂ
は優れたエンドセリン拮抗作用を有し、医薬の分野で血
管拡張剤として有用であり，高血圧症，急性腎不全、心
筋梗塞，狭心症及び脳血管レン縮の治療薬となる．この
ような疾患の治療剤として使用する場合，．ＢＥ−１８
２５７Ａ及びＢＥ−１８２５７Ｂを各々単独で、又は組
合せて使用することができる．本発明の化合物は、当分野で公知の固体又は液体の賦形
剤の担体と混合し，非経口投与，経口投与又は外部投与
に適した医薬製剤の形で使用することができる．医薬製
剤としては、例えば注射剤、シロップ剤若しくは乳剤等
の液剤、例えば錠剤、カプセル剤若しくは粒剤等の固形
剤及び例えば軟膏，坐剤等の外用剤等が挙げられる．又
、これらの製剤には必要に応じて助剤、安定剤、＠潤剤
、乳化剤、吸収促進剤又は界面活性剤等の通常使用され
る添加剤が含まれていてもよい．添加剤としては注射用
蒸留水、リンゲル液、グルコース、シヨ糖シロップ、ゼ
ラチン，食用油、カカオ脂、エチレングリコール、シヨ
糖、とうもろこし澱粉、ステアリン酸マグネシウム又は
タルク等が挙げられる，エンドセリン拮抗物質ＢＥ−１８２５７類の投与量は、
投与方法，患者の年齢、体重、容態及び治療する患者の
血圧の程度に応じて異なるが、成人に対する代表的な投
与方法は経口投与又は非経口投与、好ましくは静脈内注
射である．成人の場合、経口投与の場合１日あたり１０
ないし５００■／ｋｇ体重、非経口投与の場合１日あた
りｌないし１００■／ｋｇ体重を１回ないし数回に分け
て投与するのが好ましい。

本発明のＢＥ−１８２５７Ａ及びＢＥ−１８２５７Ｂの
製造法について説明する．本発明のエンドセリン拮抗物質ＢＥ−１８２５７類の製
造に使用する微生物はエンドセリン拮抗物質ＢＥ−１８
２５７類を産生ずるものならばいずれでもよいが、例え
ば以下の菌学的性状を有する微生物を挙げることができ
る。

ｌ．形態ＢＡ１８２５７株は顕微鏡下でよく発達した気菌糸の先
端より５０箇以上の胞子の連鎖を着生し、ほぼ直ぐに伸
びている．輪生技状のもの及び菌糸の分断は認められな
い．胞子の大きさは０．５Ｘ０．８〜１．ＯＡＬｍ位の
円筒状で、菌核及び胞子のう等の特殊な器官は観察され
ない。胞子の平面は平滑である。

（以下余白）３．生育温度（イースト・麦芽寒天培地、１４日間培養
）１２℃：生育及び気菌糸形成は良好２０℃：生育及び気菌糸形成は良好２８℃：生育及び気菌糸形成は良好３７℃：生育せず４５℃；生育せず４．生理学的諸性質（１）ゼラチンの液化　　　　　　　　　　陰性（グル
コース・ペブトン・ゼラチン培地）（２）スターチの加
水分解　　　　　　　　陽性（スターチ・無機塩寒天培
地）（３）脱脂粉乳の凝固　　　　　　　　　　陰性（スキ
ムミルク培地）（４）脱脂粉乳のペブトン化　　　　　　　陽性（スキ
ムミルク培地）（５）メラニン様色素の生成　　　　　　　陰性（６）
食塩耐性　　　食塩含有量４％以下で生育（イースト・
麦芽寒天培地）５．炭素源の利用能ブリドハム・ゴドリーブ寒天を基礎培地とし、下記各種
糖を添加して、２８℃、１４日間培養した．６．細胞壁
組成ＬＬ−ジアミノピメリン酸及びグリシンが検出された．以上の菌学的性状により、ＢＡ１８２５７株はストレプ
トミセス属に属する放線菌であることが判明した．従って、本発明者らは、ＢＡ１８２５７株をストレプト
ミセス・エスピー−　ＢＡ１８２５７（Ｓｔｒｅｐｔｏ
ｍｙｃｅｓ　ｓｐ．ＢＡ１８２５７）と称することにし
た．なお、本菌株は通商産業省工業技術院微生物工業技
術研究所に寄託されており、その微工研受託番号は微工
研菌寄第１０７５１号（ＦＥＲＮ　Ｐ−１０７５１）で
ある．本発明で使用するエンドセリン拮抗物質ＢＥ−１８２５
７類を産生ずる微生物の変異株は、例えばＸ線若しくは
紫外線等の照射処理、例えばナイトロジエン・マスター
ド、アザセリン，亜硝酸，２−アミノプリン若しくはＮ
−メチルーＮ゛−ニトローＮ−ニトロソグアニジン（Ｎ
ＴＧ）等の変異誘起剤による処理、ファージ接触、形質
転換、形質導入又は接合等の通常用いられる菌種変換処
理方法によりＢＥ−１８２５７類産生菌を変異させた微
生物である．本発明のＢＥ−１８２５７類を製造するにあたり、ＢＥ
−１８２５７類の生産菌株ＢＡ１８２５７株を栄養源含
有培地に接種して好気的に発育させることにより、ＢＥ
−１８２５７Ａ及びＢＥ−１８２５７Ｂを含む培養物が
得られる．栄養源としては、放線菌の栄養源として公知
のものが使用できる．例えば、炭素源としては、市販さ
れているブドウ糖，グリセリン，麦芽糖，デンプン，庶
糖，糖蜜又はデキストリン等が単独又は混合物として用
いられる．窒素源としては、市販されている、大豆粉、
コーンスティープリカー肉エキス，酵母エキス、綿実粉
、ベブトン、小麦胚芽、魚粉、無機アンモニウム塩又は
硝酸ナトリウム等が単独又は混合物として用いられる．
無機塩としては、市販されている、炭酸カルシウム、塩
化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸マグネシウム又は各
種リン酸塩等を使用することができる．その他必要に応
じて，鉄、マンガン又は亜鉛等の重金属塩を微量添加す
ることもできる．また、発泡の著しい時には、消泡剤と
して、例えば大豆油又は亜麻仁油等の植物油、オクタデ
カノール等の高級アルコール類、各種シリコン化合物等
を適宜添加しても良い．これらのもの以外でも，該生産
菌が利用し、ＢＥ−１８２５７Ａ及びＢＥ−１８２５７
Ｂの生産に役立つものであれば、いずれも使用すること
ができる．培養方法としては、一般の微生物代謝産物の生産方法と
同様に行えばよく、固体培養でも液体培養でもよい。液
体培養の場合は、静置培養、撹拌培養、振盪培養又は通
気培養等のいずれを実施してもよいが，特に振盪培養又
は深部通気撹拌培養が好ましい．培養温度は２０℃〜３
７℃が適当であるが，２５℃〜３０℃が好ましい。好ま
しい培地のｐＨは４〜８の範囲で、培養時間は２４時間
〜１９２時間、好ましくは４８時間〜１２０時間である
．培養物から目的とするＢＥ−１８２５７Ａ及びＢＥ−
１８２５７Ｂを採取するには、微生物の生産する代謝物
の培養物から採取するのに通常使用される分離手段が適
宜利用される，　ＢＥ−１８２５７Ａ及びＢＥ−１８２
５７Ｂは培養濾液中及び菌体中に存在するので、培養濾
液又は菌体より通常の分離手段、例えば溶媒抽出法、イ
オン交換樹脂法又は吸着若しくは分配クロマトグラフィ
ー法及びゲル濾過法等を単独又は組合せて行うことによ
り精製できる．また高速液体クロマトグラフィーや薄層
クロマトグラフィーなども抽出精製に利用可能である．好ましい分離一精製の例としては次の方法が挙げられる
。まず培養液を遠心分離し、菌体を得る．得られた菌体
をメタノール又はアセトン等の有機溶媒を用いて抽出す
る。抽出物を濃縮した後、さらに酸性下で酢酸エチル等
の有機溶媒で抽出する．この有機溶媒の抽出液を濃縮乾
固した後，メタノールで洗うことによりＢＥ−１８２５
７ＡとＢＥ−１８２５７Ｂを含む粗物質が得られる．　
ＢＥ−１８２５７ＡとＢＥ−１８２５７８の分離はトリ
フルオ口酢酸を含む含水アセトニトリルを移動相とした
逆相系高速液体クロマトグラフィーを用いることによっ
て、ＢＥ−１８２５７ＡとＢＥ−１８２５７Ｂを分離す
ることができる。得られたＢＥ−１８２５７ＡとＢＥ−
１８２５７Ｂ分画は、濃縮後、それぞれ酢酸エチルで抽
出してから酢酸エチル抽出液をｅＡ縮乾固するとＢＥ−
１８２５７Ａ及びＢＥ−１８２５７Ｂの白色粉末が得ら
れる。

次に実施例を挙げ、本発明を具体的に説明する。

しかしながら、本発明は実施例に限定されるものではな
く、実施例の修飾手段はもちろん，本発明によって明ら
かにされたＢＥ−１８２５７Ａ及びＢＥ−１８２５７Ｂ
の性状に基づいて、公知の手段を用いてＢＥ−１８２５
７Ａ及びＢＥ−１８２５７Ｂを生産、濃縮、抽出、精製
する方法すべてを包括する．２育斑寒天斜面培地に培養した放線菌ＢＡ１８２５７株をグリ
セリン２％、麦芽糖蜜１％、肉エキス０．２％、綿実粉
０．５％、酵母エキス０．１％、小麦胚芽０．５％、硫
酸マグネシウム０．２％、塩化ナトリウム０．２％、炭
酸カルシウム０．２％、リン酸一カリウム０．１％、硫
酸アンモニウム０．１％、硫酸第一鉄０．００１％及び
硫酸亜鉛０．００１％からなる培地（ｐＨ６．７）１０
０ｄを含む５０〇一容の三角フラスコ２本に接種し、２
８℃で７２時間、回転振盪機（毎分１８０回転）上で培
養した。

この培養液を２０−ずつ、上記の培地を１Ｑ含む５立容
の三角フラスコ５本に接種し、２８℃で９６時間、回転
振盪機（毎分１８０回転）上で培養した。培養液（５Ｑ
）を濾過法によって濾過し、得られた菌体を５０Ｍの脱
イオン水で洗浄した後、菌体にメタノール２．５Ｑを加
え室温で１時間攪拌した。濾過法によってメタノール抽
出液２．４党を得た。メタノール抽出液を約３００ｍｇ
にまで′ａ縮し、水３００ＩＩ１２を加えた。さらにＩ
Ｎ苛性ソーダを加えてｐｉ｛を８．５に謂整した後，酢
酸エチル６００−を用いて抽出した．酢酸工、チルで抽
出した水層をＩＮ塩酸を加えてｐＨ３に調整した後，酢
酸エチル７００ｍｌを用いて抽出し、酢酸エチル抽出液
を濃縮乾固して粗物質７３０ｍｇを得た．この粗物質６
０■をジメチルホルムアミド２成に溶解し、ＯＤＳカラ
ム（ガスクロ工業社製、Ｉｎｅｒｔｓｉ１　０ＤＳ、１
６．７ｘ３００ｔａｍ冫にかけ，０．２％のトリフルオ
ロ酢酸をふくむ４２％アセトニトリルを移動相とする分
取高速液体クロマトグラフイーを行い、ＢＥ−１８２５
７Ａを含む分画及びＢＥ−１８２５７Ｂを含む分画を得
た．　ＢＥ−１８２５７Ａを含む分画を８０ｒｎｌにま
で濃縮し、得られたａ縮液を酢酸エチル２００＋＋１．
を用いて抽出し、酢酸エチル抽出液を濃縮乾固してＢＥ
−１８２５７Ａの白色粉末ｌ５■を得た。同様にして、
ＢＥ−１８２５７Ｂを含む分画をｌＯＯｍＫにまで濃縮
した後、酢酸エチル３００ｍＫを用いて抽出し、酢酸エ
チル抽出液を濃縮乾固してＢＥ−１８２５７Ｂの白色粉
末３４ｍｇを得た。

Ｘ里Ｌ包医本：Ｒ明に記載するＢＥ−１８２５７Ａ及びＢＥ−１８
２５７Ｂは、最近新しく発見された内在性の血管収縮物
質エンドセリンに対して強い拮抗作用を有することから
、エンドセリンが関与する血管収縮作用に拮抗する薬剤
として、ひいてはヒトの血管拡張剤並びに高血圧症、急
性腎不全、心筋梗塞、狭心症及び脳血管レン縮の治療薬
として有用である．

【図面の簡単な説明】

第Ｌ図及び第６図は各々ＢＥ−１８２５７Ａ及びＢＥ−
１８２５７８のＦＡＢマススペクトルの図である．第２
図及び第７図は、各々メタノール中で測定したＢＥ−１
８２５７Ａ及びＢＥ−１８２５７Ｂの紫外線吸収スペク
トルである．第３図及び第８図は各々ＫＢｒ錠剤法によ
るＢＥ−１８２５７Ａ及びＢＥ−１８２５７Ｂの赤外吸
収スペクトルの図である．第４図及び第９図は各々ｄ．
−ジメチルスルホキシド中で測定したＢＥ−１８２５７
Ａ及びＢＥ−１８２５７Ｂの’　Ｈ−ＮＭＲ（３００Ｍ
Ｉ｛ｚ）スペクトルの図である。第５図及び第１０図は各々ｄ．−ジメチルスルホキシド
中で測定したＢＥ−１８２５７Ａ及びＢＥ−１８２５７
８のｌ′Ｃ−ＮＭＲ（７５Ｍ｝Ｉｚ）スペクトルの図で
ある，第１１図は，摘出ウサギ腸骨動脈標本におけるエ
ンドセリンーｌによる動脈血管の収縮作用に対する各種
濃度におけるＢＥ−１８２５７類の抑制作用を示す図で
あり、該図中、●−●はＢＥ−１８２５７混合物の非存
在下時すなわち対照の場合を、○−○はＢＥ−１８２５
７混合物の濃度が１４／一である場合を、ローロはＢＥ
−１８２５７混合物の濃度が３４ｌｒｄ．である場合を
，△一△はＢＥ−１８２５７混合物の濃度がＬｏ／４ｇ
／ｍｇである場合の線図をそれぞれ示す．

Claims

【特許請求の範囲】

（１）下記の理化学的性状を有する生理活性物質ＢＥ−
１８２５７Ａ又はその塩。ａ）元素分析炭素　水素　窒素（実測値）６０．３２％７．０３％１４．２３％（理論
値）６０．１８％７．０７％１４．０４％ｂ）分子式Ｃ
＿３＿９Ｈ＿４＿２Ｎ＿６Ｏ＿７ｃ）旋光度［α］＿Ｄ
＾２＾０＝−１０．０（Ｃ１．０，ジメチルスルホキシ
ド）ｄ）融点２９５℃まで明瞭な分解点（融点）を示さない
。ｅ）分子量５９８ｆ）マススペクトルＦＡＢマススペクトルを第１図に示す。［（Ｍ＋Ｎ）＾＋：５９９．３２４９］ｇ）アミノ酸組成グルタミン酸、アラニン、バリン、ロイシン、トリプトファンｈ）紫外線吸収スペクトルメタノール中３０μｇ／ｍｌの濃度で測定した紫外線吸
収スペクトルを第２図に示す。ｉ）赤外線吸収スペクトルＫＢｒ錠剤法による赤外線吸収スペクトルを第３図に示
す。ｊ）＾１Ｈ−ＮＭＲスペクトルｄ＿３−ジメチルスルホキシド中で測定した＾１Ｈ−Ｎ
ＭＲスペクトル（３００ＭＨｚ）を第４図に示す。ｋ）＾１＾３Ｃ−ＮＭＲスペクトルｄ＿６−ジメチルスルホキシド中で測定した＾１＾３Ｃ
−ＮＭＲスペクトル（７５ＭＨｚ）を第５図に示す。ｌ）溶解性水に溶けにくく、アルカリ性の水にやや溶け、ジメチルスルホキシド等の有機溶媒に可溶。ｍ）酸性、中性、塩基性の区別酸性物質ｎ）Ｒｆ値０．５［メルク社製、キーゼルゲル６０Ｆ＿２＿５＿４使用、
展開溶媒：クロロホルム／メタノール／酢酸（２５：５：０．２）］ｏ）呈色反応エールリッヒ反応及びライドンスミス反応において、陽性である。ニンヒドリン反応において、陰性である。ｐ）物質の色白色粉末
（２）下記の理化学的性状を有する生理活性物質ＢＥ−
１８２５７Ｂ又はその塩。ａ）元素分析炭素水素窒素（実測値）６０．８０％７．２１％１３．８０％（理論
値）６０．７７％７．２４％１３．７１％ｂ）分子式Ｃ
＿３＿１Ｈ＿４＿４Ｎ＿６Ｏ＿７ｃ）旋光度［α］＿Ｄ
＾２＾０＝−６．９（Ｃ１．０，ジメチルスルホキシド
）ｄ）融点２９５℃まで明瞭な分解点（融点）を示さない
。ｅ）分子量６１２ｆ）マススペクトルＦＡＢマススペクトルを第６図に示す。［（Ｍ＋Ｈ）＾＋：６１３．３３７７］ｇ）アミノ酸組成グルタミン酸、アラニン、イソロイシン、ロイシン、トリプトファンｈ）紫外線吸収スペクトルメタノール中３０μｇ／ｍｌの濃度で測定した紫外線吸
収スペクトルを第７図に示す。ｉ）赤外線吸収スペクトルＫＢｒ錠剤法による赤外線吸収スペクトルを第８図に示
す。ｊ）＾１−ＮＭＲスペクトルｄ＿６−ジメチルスルホキシド中で測定した＾１Ｈ−Ｎ
ＭＲスペクトル（３００ＭＨｚ）を第９図に示す。ｋ）＾１＾３Ｃ−ＮＭＲスペクトルｄ＿６−ジメチルスルホキシド中で測定した＾１＾３Ｃ
−ＮＭＲスペクトル（７５ＭＨｚ）を第１０図に示す。ｌ）溶解性水に溶けにくく、アルカリ性の水にやや溶け、ジメチルスルホキシド等の有機溶媒に可溶。ｍ）酸性、中性、塩基性の区別酸性物質ｎ）Ｒｆ値０．５［メルク社製、キーゼルゲル６０Ｆ＿２＿５＿４使用、
展開溶媒：クロロホルム／メタノール／酢酸（２５：５：０．２）］ｏ）呈色反応エールリッヒ反応及びライドンスミス反応において、陽性である。ニンヒドリン反応において、陰性である。ｐ）物質の色白色粉末
（３）生理活性物質ＢＥ−１８２５７Ａ、ＢＥ−１８２
５７Ｂ又はそれらの塩の製造法において、ストレプトミ
セス属に属し、かつ生理活性物質ＢＥ−１８２５７Ａ又
はＢＥ−１８２５７Ｂの産生能を有する微生物を培地に
培養し、培養中に該ＢＥ−１８２５７Ａ及びＢＥ−１８
２５７Ｂを蓄積せしめ、これを分離採取することを特徴
とする生理活性物質ＢＥ−１８２５７Ａ、ＢＥ−１８２
５７Ｂ又はそれらの塩の製造法。
（４）生理活性物質ＢＥ−１８２５７Ａ、ＢＥ−１８２
５７Ｂ、それらの塩又はそれらの混合物を有効成分とす
る血管拡張剤。
（５）生理活性物質ＢＥ−１８２５７Ａ、ＢＥ−１８２
５７Ｂ、それらの塩又はそれらの混合物を有効成分とす
る、ヒトの高血圧症、急性腎不全、心筋梗塞、狭心症及
び脳血管レン縮の治療剤。
（６）生理活性物質ＢＥ−１８２５７Ａ又はＢＥ−１８
２５７Ｂの産生能を有するストレプトミセス属に属する
微生物又はその変異株。
（７）生理活性物質ＢＥ−１８２５７Ａ又はＢＥ−１８
２５７Ｂの産生能を有するストレプトミセス属に属する
微生物がストレプトミセス・エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏ
ｍｙｃｅｓｓｐ、）ＢＡ１８２５７株又はその変異株で
あることを特徴とする第６請求項記載の微生物。