JP6980779B2

JP6980779B2 - 肝臓送達に基づく抗ウイルス性プロドラッグであるヌクレオシド環状リン酸エステル化合物およびその使用

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Publication number: JP6980779B2
Application number: JP2019520191A
Authority: JP
Inventors: 席志堅; 徐華強; 陸春平; 伍中山; 孫鋒; 張振偉
Original assignee: 浙江柏拉阿図医薬科技有限公司
Priority date: 2016-06-24
Filing date: 2017-06-23
Publication date: 2021-12-15
Anticipated expiration: 2037-06-23
Also published as: RS62144B1; ZA201808616B; PT3476854T; CN107540710A; PL3476854T3; PH12018502735A1; EP3476854B1; SG11201811516QA; KR20190022556A; HUE055833T2; EP3476854A4; ES2880391T3; US20190125771A1; KR102434764B1; CN107540710B; US10668090B2; JP2019524875A; EP3476854A1

Description

本発明は、肝臓特異的送達技術(肝臓送達)(Liver Specific Delivery (LSD))に基づく抗
ウイルス性プロドラッグであるヌクレオシド環状リン酸エステル化合物の製造および使用
、またはその光学異性体、水和物、溶媒和物、薬学的に許容される塩および医薬組成物に
関する。

B型肝炎ウイルス(HBV)、D型肝炎ウイルス(HDV)、ヒト免疫不全ウイルス(HIV)等のウイル
スは、人間の健康に重大な脅威をもたらす。B型肝炎ウイルスを例とすると、B型ウイルス
性肝炎(B型肝炎)は、B型肝炎ウイルスによって引き起こされるものであって、肝臓炎症病
変を主として、多臓器損傷を引き起こす可能性がある疾患である。世界保健機関（WTO）
の調査結果によると、世界中で約2.4億人が慢性B型肝炎感染者であり、毎年約78万人がB
型肝炎感染で死亡し、そのうち65万人がB型慢性肝炎による肝硬変および肝臓がんで死亡
し、13万人が急性B型肝炎の感染で死亡しており、世界的な健康の重要な問題となってい
る。

抗B型肝炎ウイルス薬物は、主にヌクレオチド薬、例えば、アデフォビルジピボキシル、
テノホビルジソプロキシル(TDF)、テノホビル・アラフェナミド(TAF)、エンテカビル、ラ
ミブジン、テルビブジン等である。そのメカニズムとしては、細胞内で三リン酸代謝産物
に活性化されることにより、ウイルスのDNAまたはRNAポリメラーゼの活性を阻害し、DNA
またはRNAの合成を阻止することができることにより、ウイルス複製阻害の目的が達成さ
れる。

いくつかのヌクレオチド系化合物、例えば、アデフォビル、テノホビル等は、生理学的pH
では負帯電性が高いため、経口投与の場合、膜透過性が悪く、バイオアベイラビリティが
低いとともに、胃腸管および腎臓に対する毒性副作用が増大する。この問題を克服するた
めに、エステル化してエステル系プロドラッグ、例えば、アデフォビルジピボキシル、テ
ノホビルジソプロキシル等を形成することにより、バイオアベイラビリティおよび組織分
布が向上することができる。しかし、エステル加水分解酵素が体内に広く分布しているた
め、多くの薬物は肝細胞に達する前に帯電した生物活性成分(アデホビル、テノホビル等)
に加水分解され、これらの成分は肝細胞に入りにくく、腎臓の近位尿細管に能動輸送され
、腎毒性を引き起こしやすい。

環状リン酸エステル(4-アリール-2-オキソ-1,3,2-ジオキサホスファシクロヘキサン)のよ
うな前駆体構造は、良好な肝臓特異的送達性を有し、そのメカニズムが非常に明確である
。図1に示すように、4-アリールは肝細胞におけるシトクロムP450アイソザイムファミリ
ーのCYP3Aによって特異的に触媒されて水酸基が生成され、さらに開環して負に帯電した
リン酸中間体が形成される。該中間体は細胞膜を透過しにくく細胞内に存在し、ホスホジ
エステラーゼによる触媒下で、加水分解、β-脱離反応を経てヌクレオシド一リン酸化合
物を形成し、さらにヌクレオチドキナーゼの作用下で生物学的活性を有するヌクレオチド
三リン酸化合物を形成するとともに、代謝副産物であるアリールビニルケトンは肝細胞に
大量に含まれる、フリーラジカルや過酸化物に対抗するグルタチオンとの1,4-付加反応に
より除去され、また、いまだに該付加生成物には副作用がある報告がない。

アデフォビルを活性成分として、アリールを異なる置換基で修飾したところ、アリール基
のメタ位が塩素で置換されたPradefovirは、CYP3A酵素の作用下でアデフォビルに代謝す
る速度が最も速く、3,5-ジクロロアリールの約5倍であることが発見された(US2007072146
68 B2)。

しかし、現在、活性が高く、肝臓特異的送達性が強く、かつ副作用が低いウイルス阻害化
合物は存在しない。そこで、当分野では、活性が高く、肝臓特異的送達性が強く、且つ副
作用が低い等の利点を有する新規なウイルス阻害化合物の開発が切望されている。

本発明では、抗ウイルスのヌクレオチド薬の環状リン酸エステルを合成し、その芳香環の
置換基をさらに改造することにより、肝臓特異的送達(肝臓送達)作用を有するプロドラッ
グを得ることにより、治療効果が向上する一方、副作用が減少する。

本発明の第1態様において、下式IIで表される化合物、またはその光学異性体、薬学的に
許容される塩、水和物若しくは溶媒和物を提供する。

II
式中、
R₁は、水素、アミノ基、置換または非置換のC1-C6アルキル基、置換または非置換のC3-C8
シクロアルキル基、置換または非置換のC1-C6アルコキシ基、置換または非置換のC1-C6ア
ルキルアミノ基からなる群より選択される。前記置換とは、ハロゲン、C1-C3アルキル基
、C1-C3ハロゲン化アルキル基、ニトロ基、ヒドロキシル基、アミノ基、シアノ基からな
る群より選択される1つまたは複数の置換基を有することをいう。
mは0、1、2、3、4、5である。
各R₂は、それぞれ独立してハロゲン、ニトロ基、ヒドロキシル基、アミノ基、シアノ基、
置換または非置換のC1-C6アルキル基、置換または非置換のC3-C8シクロアルキル基、置換
または非置換のC1-C6アルコキシ基、置換または非置換のC1-C6アルキルアミノ基、置換ま
たは非置換のC1-C6カルボキシル基、置換または非置換のC1-C6エステル基、置換または非
置換のC2-C6アルカノイル基、置換または非置換のC2-C6アルカノアミド基からなる群より
選択される。前記置換とは、ハロゲン、C1-C3アルキル基、C1-C3ハロゲン化アルキル基、
ニトロ基、ヒドロキシル基、アミノ基、シアノ基からなる群より選択される1つまたは複
数の置換基を有することをいう。
式II中、各キラル中心はR体またはS体である。
他の好適例において、前記リン酸エステルの環状構造において、P2とその4位の芳香族基
とは互いにシス型であり、且つP2はR体、C4はS体である。
他の好適例において、前記R₁は、H、C1-C3アルキル基、およびシクロプロピル基からなる
群より選択される。
他の好適例において、前記R₁は、H、メチル基、およびシクロプロピル基からなる群より
選択される。
他の好適例において、前記

は、

からなる群より選択される。
他の好適例において、前記化合物は、

II-a II-b

II-c II-d
からなる群より選択される。
他の好適例において、前記式IIで表される化合物は式II-aで表さられる化合物である。
他の好適例において、前記化合物は、以下の構造を有する。

I

I-a I-b

I-c I-d

III

III-a III-b

III-c III-d

ここで、R₃、R₅はハロゲンである。
nは0、1、2、3である。
他の好適例において、前記化合物は、式I-aおよび式III-aで表される化合物である。
他の好適例において、R₃はハロゲン、R₅はF、BrまたはIであり、且つR₃≠R₅である。
他の好適例において、R₃はCl、且つR₅はFである。
他の好適例において、前記化合物は、

からなる群より選択される。
他の好適例において、前記式I、式IIおよび式IIIで表される化合物の塩は、式I、式IIお
よび式IIIで表される化合物と無機酸または有機酸とで形成される薬学的に許容される塩
である。或いは前記式I、式IIおよび式IIIで表される化合物の塩は、式I、式IIおよび式I
IIで表される化合物と塩基との反応により形成される薬学的に許容される塩である。前記
式I、式IIおよび式IIIで表される化合物またはその塩はアモルファス物質または結晶であ
る。

本発明の第2の態様は、医薬組成物を提供する。前記医薬組成物は、治療有効量の本発明
の第1の態様に記載の化合物またはその光学異性体、薬学的に許容される塩、水和物若し
くは溶媒和物;および薬学的に許容される補助剤、希釈剤または担体を含む。

本発明の第3の態様は、本発明の第1の態様に記載の化合物またはその光学異性体、薬学的
に許容される塩、水和物若しくは溶媒和物の使用;或いは本発明の第2方面に記載の医薬組
成物の使用を提供する。当該使用は、例えば、B型肝炎ウイルス(HBV)、D型肝炎ウイルス(
HDV)またはヒト免疫不全ウイルス(HIV)感染に関連する急性または慢性疾患を治療および/
または予防する医薬組成物の製造における使用である。
他の好適例において、前記B型肝炎ウイルス(HBV)、D型肝炎ウイルス(HDV)またはヒト免疫
不全ウイルス(HIV)感染に関連する急性または慢性疾患は、B型肝炎、D型肝炎またはエイ
ズからなる群より選択される。

本発明の第4の態様は、本発明の第1の態様に記載の式IIで表される化合物の製造方法を提
供する。前記方法は、以下のステップiを含む。

Va Vc II
ステップiにおいて、不活性溶媒中で式Vaで表される化合物と式Vcで表される化合物とを
縮合反応させ、式IIで表される化合物を得る。
他の好適例において、ステップiにおいて、前記反応は縮合剤の存在下で行われる。
他の好適例において、前記縮合剤は、ジシクロヘキシルカルボジイミド(DCC)からなる群
より選択される。
他の好適例において、前記縮合反応は60-100℃(80℃前後)で行われる。
他の好適例において、前記縮合反応の反応時間は1-72時間、好ましくは3-48時間、より好
ましくは6-24時間である。
他の好適例において、前記不活性溶媒は、N,N-ジメチルホルムアミド、ピリジンまたはそ
の組み合わせからなる群より選択され、好ましくはN,N-ジメチルホルムアミドとピリミジ
ンとの20:1から1:5(v/v)(好ましくは10:1から1:2(v/v))の混合溶媒である。
他の好適例において、前記式Vcで表される化合物(好ましくはキラル1,3-プロピレングリ
コール誘導体)は、以下の方法で製造される。当該方法は、以下のステップiiおよびiiiを
含む。

ステップiiにおいて、不活性溶媒(例えば、DMF)中で、HCOOH、Et₃Nおよび(S,S)-N-(p-ト
ルエンスルホニル)-1,2-ジフェニルエチレンジアミン(ジクロロ）(p-メチルイソプロピル
ベンゼン)ルテニウム（II）の存在下、40〜80^oCで

を還元反応(例えば1-5h)させ、

を得る。
ステップiiiにおいて、両性溶媒(例えばEtOH)中で、還元剤(例えば、NaBH4)と

を反応(例えば1-5h)させ、

を得る。
他の好適例において、前記

は、方法1-3からなる群より選択されるいずれかの方法で製造される。
方法1は、以下のステップiおよびiiを含む。

ステップiにおいて、両性溶媒(例えばEtOH)中で、SOCl₂と

を反応させ、

化合物を得る。
ステップiiにおいて、不活性溶媒(例えばTHF)中で、塩基(例えばLiHMDS)の存在下、酢酸
エチルと

を-60〜-20^oCで反応(例えば10〜30min)させ、

化合物を得る。
方法2は、以下のステップiを含む。

ステップiにおいて、不活性溶媒(例えばDCM)中で、SnCl₂存在下、室温下

と

反応させ、

化合物を得る。
方法3は、以下のステップiを含む。

ステップiにおいて、不活性溶媒(例えばTHF)中で、塩基(例えばカリウムt-ブトキシド)の
存在下、

と

を還流温度で一夜反応させ、

化合物を得る。

理解できるように、本発明の範囲内において、本発明の上記各技術特徴および以下に(例
えば、実施例)で具体的に説明する各技術特徴は互いに組み合わせて新しいまたは好まし
い技術案が成立することができる。ここで省略する。

図1は、肝臓送達化合物のメカニズムを示す模式図である。図2は、各肝臓送達化合物(ラセミ体)がCYP3A4酵素の作用下で代謝されて活性分子を生成する比率を示す。化合物の名称を表1に示し、全ての化合物の対応する活性代謝分子はPMPAである。図3は、肝臓送達化合物(S-シス)がCYP3A4酵素の作用下で代謝されて活性分子を生成する比率を示す。化合物の名称を表1に示す。化合物6-シスに対応する活性代謝分子はPMPA、化合物9(Pradefovir)に対応する活性代謝分子はPMEAである。図4は、ラットに30mg/kgのPA1010を胃内投与した後の、体内代謝で放出される活性分子PMPAの血漿、肝臓および腎臓における濃度-時間ヒストグラムである。化合物の名称を表1に示す。図5は、ラットに30mg/kgのPA1007を胃内投与した後の、体内代謝で放出される活性分子PMPAの血漿、肝臓および腎臓における濃度-時間ヒストグラムである。化合物の名称を表1に示す。図6は、ラットに30mg/kgのTAFを胃内投与した後の、体内代謝で放出される活性分子PMPAの血漿、肝臓および腎臓における濃度-時間ヒストグラムである。図7は、ラットに30mg/kgのTDFを胃内投与した後の、体内代謝で放出される活性分子PMPAの血漿、肝臓および腎臓における濃度-時間ヒストグラムである。備考:PMPA: (R)-9-[2-(ホスホノメトキシ)プロピル]アデニン PMEA: 9-(2-ホスホノメトキシエチル)アデニンS-シス:特に明記しない限り、リン酸エステルの環状構造におけるC4がS体であり、且つP2とその4位の芳香族基が互いにシス型であることをいう。

本発明者は鋭意研究を重ね、大量の化合物のスクリーニングを行なったところ、特定の構
造を有する式Iおよび式IIIで表される化合物(例えば、ベンゼン環部分の3位および5位は
異なるハロゲンであるもの、またはベンゼン環部分の2位および5位は異なるハロゲンであ
るもの)は意外に非常に優れた抗ウイルス活性、顕著に向上した肝臓特異的送達性(肝臓送
達)および顕著に低減した副作用を有することをを初めて発見し、この発見に基づいて本
発明に至ったものである。

用語
本明細書で用いられる用語「C1-C6アルキル基」は、1〜6炭素原子を有する直鎖状または
分枝状のアルキル基、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチ
ル基、イソブチル基、sec-ブチル基、tert-ブチル基または類似基である。
本明細書で用いられる用語「C2-C6アルカノイル基」は、1〜6炭素原子を有する直鎖状ま
たは分枝状のアルキル-カルボニルの構造のような置換基、例えば、アセチル基、プロピ
オニル基、ブチリル基または類似基である。
本明細書で用いられる用語「C1-C6アルキルアミノ基」は、1〜6炭素原子を有する直鎖状
または分枝状アルキル-アミノの構造のような置換基、例えば、メチルアミノ基、ジメチ
ルアミノ基、エチルアミノ基、プロピルアミノ基、ジエチルアミノ基または類似基である
。
用語「ハロゲン」は、F、Cl、BrおよびIである。
本発明において、用語「有する」、「包含する」または「含む」とは、各成分が本発明の
混合物または組成物に同時に用いられることができることを意味する。そのため、用語「
主に...からなる」および「...からなる」は、用語「含有する」の意味に含まられる。
本発明において、用語「薬学的に許容される」成分は、ヒトおよび/または動物に適用さ
れるものであって、過度の副作用(例えば、毒性、刺激およびアレルギー反応)がなく、合
理的な利益/リスク比を有する物質である。
本発明において、用語「有効量」とは、治療剤の目的疾患または状況を治療、緩和、予防
する量、或いは検出可能な治療または予防効果を示す量をいう。ある受験体に対する正確
な有効量は、該受験体の体型、健康状況、病状の性質および程度、並びに投与される治療
剤および/または治療剤の組み合わせに依存する。したがって、正確な有効量を事前に指
定することは無意味である。しかし、与えられた状況では、該有効量は臨床医師によって
通常の実験で確定されることができる。
本明細書において、特に明記しない限り、用語「置換」とは、基における1つまたは複数
の水素原子がハロゲン、C1-C3アルキル基、C1-C3ハロゲン化アルキル基、ニトロ基、ヒド
ロキシル基、アミノ基、シアノ基からなる群より選択される置換基で置き換えられること
を意味する。
特に明記しない限り、本発明における全ての化合物は、全ての光学異性体、例えば、単一
のキラル化合物または異なるキラル化合物の混合物(即ち、ラセミ体)を含むことを意図し
ている。本発明の全ての化合物において、各キラル炭素原子は、R体若しくはS体、または
R体とS体の混合物のいずれかであることができる。
本明細書で用いられる用語「本発明の化合物」とは、式IIで表される化合物である。該用
語は、式IIで表される化合物の各結晶形、薬学的に許容される塩、水和物または溶媒和物
をさらに含む。
本明細書で用いられる用語「薬学的に許容される塩」とは、本発明の化合物と酸または塩
基で形成した薬物に適用される塩である。薬学的に許容される塩には、無機塩および有機
塩が含まれる。好ましい塩は、本発明の化合物と酸で形成した塩である。塩形成に適する
酸は、塩酸、臭化水素酸、フッ化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等の無機酸、ギ酸、酢酸、
プロピオン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、乳酸、リンゴ酸
、酒石酸、クエン酸、ピクリン酸、メタンスルホン酸、ベンジルメタンスルホン酸、ベン
ゼンスルホン酸等の有機酸、およびアスパラギン酸、グルタミン酸などの酸性アミノ酸を
含むが、これらに限定されない。

本発明におけるいくつかの化合物は、水または有機溶媒で結晶または再結晶させて溶媒和
物を形成することができる。本発明の溶媒和物には、化学量論的溶媒和物、例えば水和物
等、および低圧昇華乾燥法で製造するときに形成する可変量の水を含む化合物が含まれる
。

理解できるように、製造された本発明の化合物には、様々な熱力学的に安定な異性体、例
えば、互変異性体、配座異性体、メソ化合物、および鏡像または非鏡像関係を有する光学
異性体等が含まれる場合がある。これらの変形は、本発明の開示を読めば当業者には明ら
かになるであろう。

式Iおよび式IIIで表される化合物およびその製造
肝臓特異的送達メカニズムにより抗ウイルスのヌクレオチド薬を肝細胞において集中して
放出できる効率的で低毒性のプロドラッグを提供するために、本発明者は、式IIの好適化
合物である式Iおよび式IIIで表される化合物を製造する。

II
ここで、
R₁は、水素、アミノ基、置換または非置換のC1-C6アルキル基、置換または非置換のC3-C8
シクロアルキル基、置換または非置換のC1-C6アルコキシ基、置換または非置換のC1-C6ア
ルキルアミノ基からなる群より選択される。前記置換とは、ハロゲン、C1-C3アルキル基
、C1-C3ハロゲン化アルキル基、ニトロ基、ヒドロキシル基、アミノ基、シアノ基からな
る群より選択される1つまたは複数の置換基を有することをいう。
mは、0、1、2、3、4、5である。
各R₂は、それぞれ独立してハロゲン、ニトロ基、ヒドロキシル基、アミノ基、シアノ基、
置換または非置換のC1-C6アルキル基、置換または非置換のC3-C8シクロアルキル基、置換
または非置換のC1-C6アルコキシ基、置換または非置換のC1-C6アルキルアミノ基、置換ま
たは非置換のC1-C6カルボキシル基、置換または非置換のC1-C6エステル基、置換または非
置換のC2-C6アルカノイル基、置換または非置換のC2-C6アルカノアミド基からなる群より
選択される。
前記置換とは、ハロゲン、C1-C3アルキル基、C1-C3ハロゲン化アルキル基、ニトロ基、ヒ
ドロキシル基、アミノ基、シアノ基からなる群より選択される1つまたは複数の置換基を
有することをいう。
式II中、各キラル中心はR体またはS体である。
好適実施例において、前記

は、

からなる群より選択される。

好ましい式IIで表される化合物は、下式Iで表される構造を有する。

I

I-a I-b

I-c I-d
他の好適例において、前記式I化合物は式I-aで表される化合物である。
他の好適例において、前記リン酸エステルの環状構造におけるP2と4位の芳香族基とは互
いにシス型であり、且つP2はR体、C4はS体である。
他の好適例において、前記R₁は、H、C1-C3アルキル基、およびシクロプロピル基からなる
群より選択される。
他の好適例において、前記R₁は、H、メチル基、およびシクロプロピル基からなる群より
選択される。
より好ましい場合では、R₃はCl、R₅はFであり、或いは、R₃はCl、R₅はBrであり、或いは
、R₃はCl、R₅はClである。
他の好適例において、前記光学異性体には、互変異性体、シス-トランス異性体、配座異
性体、メソ化合物、および鏡像または非鏡像関係を有する光学異性体が含まれる。
他の好適例において、前記化合物は、

または

シストランス
からなる群より選択される。
別の好ましい式IIで表される化合物は、下式IIIで表される構造を有する。

III

III-a III-b

III-c III-d
ここで、各基は前記と同義である。
他の好適例において、前記式III化合物は式III-aで表される化合物である。
他の好適例において、前記P2とリン酸エステルの環状構造における4位の芳香族基とは互
いにシス型であり、且つP2はR体、C4はS体である。
他の好適例において、前記R₁は、H、C1-C3アルキル基、およびシクロプロピル基からなる
群より選択される。
他の好適例において、前記R₁は、H、メチル基、およびシクロプロピル基からなる群より
選択される。
より好ましい場合では、R₃はCl、R₅はFであり、或いはR₃はCl、R₅はBrであり、或いはR₃
はCl、R₅はClである。
他の好適例において、前記光学異性体には、互変異性体、シス-トランス異性体、配座異
性体、メソ化合物および鏡像または非鏡像関係を有する光学異性体が含まれる。
他の好適例において、前記化合物は、

または

シストランス
からなる群より選択される。

化合物の製造方法(式IIIで表される化合物を例とする)
N,N-ジメチルホルムアミドおよびピリジン(5:1)の溶液に一リン酸誘導体Va、1,3-プロピ
レングリコール誘導体Vdおよびジシクロヘキシルカルボジイミドを加え、80℃前後に昇温
し、16h反応させる。反応終了後、反応液を減圧下で回転蒸発することで有機溶媒を除去
し、粗生成物を酢酸エチルに溶解し、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥さ
せ、減圧蒸発により溶媒を除去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーを行うことで、
一般式IIで表される化合物を得る。

Va Vd III
ここで、各反応物は市販により入手してもよいか、または市販の原料を用いて当分野の通
常方法により製造してもよい。

本発明の好適実施例において、前記1,3-プロピレングリコール誘導体Vd(好ましくはキラ
ルの1,3-プロピレングリコール誘導体)は以下の方法で製造される。

該方法は、
不活性溶媒(例えば、DMF)中で、HCOOH、Et₃Nおよび(S,S)-N-(p-トルエンスルホニル)-1,2
-ジフェニルエチレンジアミン(ジクロロ）(p-メチルイソプロピルベンゼン)ルテニウム（
II）の存在下、40〜80^oCで

を還元反応(例えば、1-5h)させ、

を得るステップiと、
両性溶媒(例えば、EtOH)中で還元剤(例えば、NaBH₄)と

を反応(例えば、1-5h)させ、

を得るステップiiと、
を含む。

他の好適例において、前記

は下記方法1-3から選択されるいずれかの方法で製造される。
方法1は、以下のステップiおよびステップiiを含む。

ステップiにおいて、両性溶媒(例えば、EtOH)中でSOCl₂と

を反応させ、

化合物を得る。
ステップiiにおいて、不活性溶媒(例えば、THF)中で、塩基(例えば、LiHMDS)の存在下、
酢酸エチルと

を-60〜-20^oCで反応(例えば、10〜30min)させ、

化合物を得る。
方法2は、以下のステップiを含む。

ステップiにおいて、不活性溶媒(例えば、DCM)中で、SnCl₂の存在下、室温で

と

を反応させ、

化合物を得る。
方法3は、以下のステップiを含む。

ステップiにおいて、不活性溶媒(例えば、THF)中で、塩基(例えば、カリウムt-ブトキシ
ド) の存在下、

と

を還流温度下で一夜反応させ、

化合物を得る。

理解できるように、前記製造方法は式IIIで表される化合物を例とするものに過ぎず、当
業者であれば、原料を置き換えて式Iおよび式IIで表される化合物を容易に製造すること
ができる。

医薬組成物および投与方法
本発明の化合物は優れたB型肝炎ウイルス(HBV)に対する阻害活性を有するため、本発明の
化合物およびその様々な結晶形、薬学的に許容される無機または有機塩、水和物または溶
媒和物、および本発明の化合物を主要な活性成分として含有する医薬組成物は、B型肝炎
ウイルスによる疾患の治療、予防および緩和に適用できる。従来技術によれば、本発明の
化合物は、HBV、HDVおよびHIV等の感染による疾患の治療に適用できる。

本発明の医薬組成物は、安全有効量の本発明の化合物またはその薬理学的に許容される塩
、および薬理学的に許容される賦形剤または担体を含む。「安全有効量」とは、重篤な副
作用が発生することなく、病状を顕著に改善するのに十分である化合物の量をいう。通常
、医薬組成物には0.1-1000mgの本発明の化合物/剤を含むが、好ましくは、0.5-100mgの本
発明の化合物/剤を含む。好ましくは、前記「剤」はカプセルまたは錠剤である。

「薬学的に許容される担体」とは、1種または複数種の相容性のある固体または液体フィ
ラーまたはゲル物質をいう。こういう単体は、ヒトに適用され、且つ十分に高い純度およ
び十分に低い毒性を有する必要がある。ここで、「相容性」とは、組成物における各成分
および本発明の化合物は化合物の効果を顕著に低下させずに互いにブレンドすることがで
きることをいう。薬学的に許容される担体の例には、セルロースおよびその誘導体(例え
ば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースナトリウム、セルロース
アセテート等)、ゼラチン、タルク、固体潤滑剤(例えば、ステアリン酸、ステアリン酸マ
グネシウム)、硫酸カルシウム、植物油(例えば、大豆油、ごま油、ピーナッツ油、オリー
ブ油等)、ポリオール(例えば、プロピレングリコール、グリセリン、マンニトール、ソル
ビトール等)、乳化剤(例えば、トゥイーン（登録商標）)、湿潤剤(例えば、デシル硫酸ナ
トリウム)、着色剤、香味剤、安定剤、酸化防止剤、防腐剤、パイロジェンフリー水等が
含まれる。

本発明の化合物または医薬組成物の投与方式は特に制限されないが、代表的な投与方式は
、経口投与、直腸投与、非経口投与(静脈内投与、筋肉内投与または皮下投与)、および局
所投与を含むが、これらに限定されない。特に好ましくは経口投与である。

経口投与に用いられる固体剤形には、カプセル剤、錠剤、丸剤、散剤および顆粒剤が含ま
れる。これらの固体剤形のうち、活性化合物は少なくとも1種の通常の不活性賦形剤(また
は担体)、例えば、クエン酸ナトリウムまたはリン酸二カルシウムと混合され、或いは以
下の成分と混合される。すなわち、(a)フィラーまたは相溶化剤、例えば、デンプン、ラ
クトース、スクロース、グルコース、マンニトールおよびケイ酸;(b)接着剤、例えば、ヒ
ドロキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、ショ糖お
よびアカシア;(c) 湿潤剤、例えば、グリセリン;(d) 崩壊剤、例えば、寒天、炭酸カルシ
ウム、ジャガイモデンプンまたはタピオカデンプン、アルギン酸、特定の複合ケイ酸塩、
および炭酸ナトリウム;(e)溶解遅延剤、例えば、パラフィン;(f) 吸収促進剤、例えば、
第四級アミン化合物;(g)湿潤剤、例えば、セチルアルコールおよびグリセリルモノステア
レート;(h)吸着剤、例えば、カオリン;および(i)潤滑剤、例えば、タルク、ステアリン酸
カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、デシル硫酸ナト
リウム、またはその混合物である。カプセル剤、錠剤および丸剤には、緩衝剤が含まれて
もよい。

固体剤形、例えば、錠剤、ピル、カプセル剤、丸剤および顆粒剤は、コーティングおよび
シェル、例えば、ケーシングその他の当分野で周知されている材料で製造されてもよい。
これらの剤形は不透明剤を含んでもよい。また、このような組成物における活性化合物ま
たは化合物の放出は、遅延の方式により消化管の特定の部分で放出されてもよい。用いら
れる包埋成分の例は、重合物質およびワックス物質である。必要な場合、活性化合物は、
前記賦形剤のうちの1種または複数種とマイクロカプセルを形成してもよい。

経口投与に用いられる液体剤形は、薬学的に許容されるエマルジョン、溶液、懸濁液、シ
ロップまたはチンキを含む。活性化合物に加えて、液体剤形には、当分野で通常に用いら
れている不活性希釈剤、例えば、水または他の溶媒、可溶化剤および乳化剤、例えば、エ
タノール、イソプロパノール、エチルカーボネート、酢酸エチル、プロピレングリコール
、1,3-ブタンジオール、ジメチルホルムアミドおよび油、特に、綿実油、落花生油、トウ
モロコシ胚芽油、オリーブ油、ひまし油およびごま油またはこれらの混合物等が含まれて
もよい。

これらの不活性希釈剤に加えて、組成物には、助剤、例えば、湿潤剤、乳化剤、懸濁剤、
甘味剤、香味剤および香料を含んでもよい。
活性化合物に加えて、懸濁液には、懸濁剤、例えば、エトキシル化イソステアリルアルコ
ール、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビタンエステル、微結晶セルロース、
アルミニウムメトキシド、寒天またはこれらの混合物等を含んでもよい。

非経口注射に用いられる組成物は、生理学的に許容される滅菌水溶液または非水溶液、分
散液、懸濁液またはエマルジョン、および無菌注射溶液若しくは分散液に改めに溶解する
ための滅菌粉末を含んでもよい。適切な水性および非水性担体、希釈剤、溶媒または賦形
剤は、水、エタノール、ポリオールおよびその適切な混合物を含む。

局所投与に用いられる本発明の化合物の剤形には、軟膏剤、散剤、貼付剤、噴霧剤および
吸入剤が含まれる。活性成分は、無菌条件下で生理学的に許容される担体および任意の防
腐剤、緩衝剤、または必要に応じて推進剤と混合される。

本発明化合物は、単独して投与されてもよいか、または他の薬学的に許容される化合物と
併用されてもよい。

医薬組成物を使用する場合に、安全有効量の本発明の化合物を、治療を必要とする哺乳動
物(例えば、ヒト)に用いる。投与用量は、薬学的な有効量である。体重が60kgのヒトの場
合、毎日の用量は、通常0.2〜1000mgであり、好ましくは0.5〜500mgである。無論、熟練
した医師に理解できるように、具体的な用量は、投与経路、患者の健康状態等の要因を考
慮した上で決定するものである。

本発明は、以下の利点を有する。
(1)肝臓特異的送達技術(肝臓送達)性が強い。また、化合物は肝細胞におけるシトクロムP
450アイソザイムファミリーのCYP3Aのみによって特異的に触媒され、活性分子を形成する
。当該活性分子は、負帯電性が高く、肝臓から排出されにくいため、肝臓における濃度が
より高く、特異的送達の効果を達成できる。
(2)活性が高い。肝臓特異的送達性により、より多くの薬物が肝臓に存在できるため、抗
ウイルス活性は大幅に向上する。
(3)副作用が低い。同じ用量のプロドラッグは、肝臓で代謝されて活性分子を生成する量
が非常に少ないため、腎臓毒性、骨毒性が大幅に減少する。

以下、具体的な実施例により本発明をさらに説明する。理解できるように、これらの実施
例は、本発明を説明するものに過ぎず、本発明の範囲を制限しない。以下の実施例におい
て具体的な条件が明記されない実験方法は、通常の条件または製造業者の推奨条件によれ
ばよい。特に明記しない限り、百分率および部は、重量によるものである。

実施例1 (2R)-9-{2-[(4S)-4-(3-クロロ-2-フルオロフェニル)-2-オキソ-1,3,2-ジオキサ
ホスファシクロヘキサン-2-イル]メトキシプロピル}アデニンの製造
(R)-9-[2-(ホスホノメトキシ)プロピル]-アデニン(84mg, 0.294mmol)をN,N-ジメチルホル
ムアミド(15mL)およびピリジン(3mL)に溶解し、それぞれジシクロヘキシルカルボジイミ
ド(182mg, 0.882mmol)および(S)-3-(3-クロロ-2-フルオロフェニル)-1,3-プロピレングリ
コール(60mg, 0.294mmol)を加え、反応混合物を80度前後に加熱し、16h反応させた。反応
終了後、反応液を減圧下で回転蒸発して有機溶媒を除去し、粗生成物を酢酸エチルに溶解
し、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧蒸発により溶媒を除去し
、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(ジクロロメタン:メタノール=20:1〜10:1)
を行うことで、白色固体を得た。収率:41%，R_f=0.4(ジクロロメタン:メタノール=10:1)，
¹H NMR (400MHz, DMSO-d₆) δ: 8.071-8.227(m, 2H), 7.202-7.661(m, 5H), 5.837-5.961
(m, 1H), 4.549-4.603(m, 1H), 3.935-4.356(m, 6H), 1.914-2.119(m, 2H), 1.105-1.198
(m, 3H)ppm.

実施例2 (2R)-9-{2-[(4S)-4-(3-クロロ-5-フルオロフェニル)-2-オキソ-1,3,2-ジオキサ
ホスファシクロヘキサン-2-イル]メトキシプロピル}アデニンの製造
実施例1の方法と同様に、(R)-9-[2-(ホスホノメトキシ)プロピル]-アデニン(84mg, 0.294
mmol)、ジシクロヘキシルカルボジイミド(182mg, 0.882mmol)および(S)-3-(3-クロロ-5-
フルオロフェニル)-1,3-プロピレングリコール(60mg, 0.294mmol)を反応させ、35mg白色
固体を得た。収率:26%，R_f=0.4(ジクロロメタン:メタノール=10:1)，¹H NMR (400MHz, DM
SO-d₆): δ: 8.045-8.163(m, 2H), 7.173-7.455(m, 5H), 5.621-5.681 (m, 1H), 4.228-4
.271 (m, 1H), 4.001-4.059 (m, 6H), 1.952-2.109 (m, 2H), 1.097-1.196 (m, 3H)ppm.

実施例3 (2R)-9-{2-[(4S)-4-(3-クロロ-4-フルオロフェニル)-2-オキソ-1,3,2-ジオキサ
ホスファシクロヘキサン-2-イル]メトキシプロピル}アデニンの製造
実施例1の方法と同様に、(R)-9-[2-(ホスホノメトキシ)プロピル]-アデニン(118mg, 0.41
2mmol)、ジシクロヘキシルカルボジイミド(254.6mg, 1.236mmol)および(S)-3-(3-クロロ-
4-フルオロフェニル)-1,3-プロピレングリコール(84mg, 0.412mmol)を反応させ、71mg白
色固体を得た。収率:37.8%，R_f=0.4(ジクロロメタン:メタノール=10:1)，¹H NMR (400MHz
, DMSO-d₆): δ:8.056-8.151(m, 2H), 7.552-7.584(m, 1H), 7.205-7.493(m, 4H), 5.556
-5.618(m, 1H), 4.427-4.502(m, 1H), 3.922-4.303(m, 6H), 1.813-2.016(m, 2H), 1.095
-1.193(m, 3H)ppm.

実施例4 (2R)-9-{2-[(4S)-4-(5-クロロ-2-フルオロフェニル)-2-オキソ-1,3,2-ジオキサ
ホスファシクロヘキサン-2-イル]メトキシプロピル}アデニンの製造
実施例1の方法と同様に、(R)-9-[2-(ホスホノメトキシ)プロピル]-アデニン(112mg, 0.39
mmol)、ジシクロヘキシルカルボジイミド(242mg, 1.176mmol)および(S)-3-(5-クロロ-2-
フルオロフェニル)-1,3-プロピレングリコール(80mg, 0.39mmol)を反応させ、60mg白色固
体を得た。収率:38%，R_f=0.3(ジクロロメタン:メタノール=10:1)，¹H NMR (400MHz, DMSO
-d₆): δ: 8.048-8.225(m, 2H), 7.182-7.545(m, 5H), 5.825-5.911(m, 1H), 4.536-4.59
3(m, 1H), 3.971-4.339(m, 6H), 1.893-2.172(m, 2H), 1.103-1.196(m, 3H)ppm.
(2R)-9-{2-[(4S)-4-(5-クロロ-2-フルオロフェニル)-2-オキソ-1,3,2-ジオキサホスファ
シクロヘキサン-2-イル]メトキシプロピル}アデニン(15.66g)を以下の条件下でキラルカ
ラムクロマトグラフィーを行うことで、4-シス(PA1010)異性体:(2R)-9-{2-[(2R，4S)-4-(
5-クロロ-2-フルオロフェニル)-2-オキソ-1,3,2-ジオキサホスファシクロヘキサン-2-イ
ル]メトキシプロピル}アデニン(9.69g)を得た。¹H NMR (400MHz, Methanol-D4): δ: 8.1
9 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.43 – 7.34 (m, 2H), 7.19 – 7.11 (m, 1H), 5
.86 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 4.70 – 4.60 (m, 1H), 4.46 – 4.26 (m, 3H), 4
.16 – 4.08 (m, 1H), 4.05 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 2.16 – 2.08 (m, 2H), 1
.30 (d, J = 6.2 Hz, 3H).ppm.
カラム:CHIRALPAK ADH
移動相:エタノール:アセトニトリル=90:10(V/V)
波長:UV254nm
温度:25度

実施例5 (2R)-9-{2-[(4S)-4-(4-ピリジン)-2-オキソ-1,3,2-ジオキサホスファシクロヘキ
サン-2-イル]メトキシプロピル}アデニンの製造
実施例1の方法と同様に、(R)-9-[2-(ホスホノメトキシ)プロピル]-アデニン(112mg, 0.39
mmol)、ジシクロヘキシルカルボジイミド(242mg, 1.176mmol)および(S)-3-(4-ピリジン)-
1,3-プロピレングリコール(80mg, 0.39mmol)を反応させ、70mg白色固体を得た。収率:39%
，R_f=0.4(ジクロロメタン:トリエチルアミン:メタノール=10:1:0.1)，¹H NMR (400MHz, D
MSO-d₆): δ: 8.595-8.629(m, 1H), 8.545(d, J=4.8 HZ, 1H), 8.070-8.169(m, 2H), 7.2
13-7.350(m, 4H), 5.591-5.662(m, 1H), 4.483-4.559(m, 1H), 3.913-4.345(m, 6H), 1.9
13-2.114(m, 2H), 1.100-1.178(m, 3H)ppm.

実施例6 (2R)-9-{2-[(2R，4S)-4-(3-クロロ-5-フルオロフェニル)-2-オキソ-1,3,2-ジオ
キサホスファシクロヘキサン-2-イル]メトキシプロピル}アデニンおよび(2R)-9-{2-[(2S
，4S)-4-(3-クロロ-5-フルオロフェニル)-2-オキソ-1,3,2-ジオキサホスファシクロヘキ
サン-2-イル]メトキシプロピル}アデニンの製造
(2R)-9-{2-[(4S)-4-(3-クロロ-5-フルオロフェニル)-2-オキソ-1,3,2-ジオキサホスファ
シクロヘキサン-2-イル]メトキシプロピル}アデニン(410.7mg)を、以下の条件下でキラル
カラムクロマトグラフィーを行うことで、トリエチルアミン:(2R)-9-{2-[(2R，4S)-4-(3-
クロロ-5-フルオロフェニル)-2-オキソ-1,3,2-ジオキサホスファシクロヘキサン-2-イル]
メトキシプロピル}アデニン(220.2mg)（¹H NMR (400MHz, CDCl₃): δ:8.350(S, 1H), 7.9
30(S, 1H), 7.074-7.100(m, 2H), 6.890 (d, J=8.8 Hz, 1H), 5.735 (s, 2H), 5.585(d,
J=10.4 Hz, 1H), 4.655-4.711(m, 1H), 4.343-4.429(m, 2H), 4.157-4.212(m, 1H), 3.97
0-4.059(m, 2H), 3.801-3.860 (m, 1H), 2.014-2.108 (m, 2H), 1.316 (d, J=6.4 Hz,3H)
ppm.）および(2R)-9-{2-[(2S，4S)-4-(3-クロロ-5-フルオロフェニル)-2-オキソ-1,3,2-
ジオキサホスファシクロヘキサン-2-イル]メトキシプロピル}アデニン(166.2mg)（¹H NMR
(400MHz, CDCl₃): δ:8.372(m, 1H), 7.905(s, 1H), 7.011-7.157(m, 3H), 5.899(s, 2H
), 5.432(d, J=11.2 Hz, 1H), 3.897-4.410(m, 7H), 2.141-2.249(m, 1H), 1.763-1.800(
m, 1H), 1.337(d, J=6.4 Hz, 3H)ppm.）を得た。
カラム:CHIRALPAK ADH
移動相:エタノール:アセトニトリル=90:10(V/V)
波長:UV254nm
温度:25度

対照例7 (2R)-9-{2-[(4S)-4-(3-クロロフェニル)-2-オキソ-1,3,2-ジオキサホスファシク
ロヘキサン-2-イル]メトキシプロピル}アデニンの製造
実施例1の方法と同様に、(R)-9-[2-(ホスホノメトキシ)プロピル]-アデニン(660mg,2.419
mmol)、ジシクロヘキシルカルボジイミド(1.5g, 7.257mmol)および(S)-3-(3-クロロフェ
ニル)-1,3-プロピレングリコール(450mg, 2.419mmol)を反応させ、400mg白色固体を得た
。収率:38%，R_f=0.5(ジクロロメタン:メタノール=10:1)，¹H NMR (400MHz, DMSO-d₆): δ
: 7.872-8.296(m, 2H), 7.211-7.269(m, 4H), 6.019-6.077(m, 2H), 5.523-5.550 (m, 1H
), 4.261-4.357 (m, 1H), 3.773-4.156(m, 6H), 1.907-1.990 (m, 2H), 1.236-1.354(m,
3H)ppm）.

対照例8 (2R)-9-{2-[(4S)-4-(3,5-二クロロフェニル)-2-オキソ-1,3,2-ジオキサホスファ
シクロヘキサン-2-イル]メトキシプロピル}アデニンの製造
実施例1の方法と同様に、(R)-9-[2-(ホスホノメトキシ)プロピル]-アデニン(84mg, 0.294
mmol)、ジシクロヘキシルカルボジイミド(182mg, 0.882mmol)および(S)-3-(3,5-二クロロ
フェニル)-1,3-プロピレングリコール(60mg, 0.294mmol)を反応させ、62mg白色固体を得
た。収率:45%，R_f=0.4(ジクロロメタン:メタノール=10:1)，¹H NMR (400MHz, CDCl₃): δ
:8.346-8.378(m, 1H), 7.909-7.939(m, 1H), 7.351-7.363(m, 1H), 7.265-7.268 (m, 1H)
, 7.178-7.181 (m, 1H), 5.770-5.825(m, 2H), 5.399-5.588 (m, 1H), 3.808-4.428(m, 7
H), 2.025-2.085(m, 2H), 1.306-1.349(m, 3H)ppm.

対照例9 (2R)-9-{2-[(2R,4S)-4-(3-クロロフェニル)-2-オキソ-1,3,2-ジオキサホスファ
シクロヘキサン-2-イル]メトキシエチル}アデニンの製造
文献「J,Am,Chem,Soc,2004,126,5154-5163」に開示された技術に従って製造した。¹H NMR
(400MHz, CDCl₃): δ:8.352(s, 1H), 7.907(s, 1H), 7.285-7.354(m, 3H), 7.106(d, J=
6.8 Hz, 1H), 5.802(s, 2H), 5.591(d, J=10.8Hz, 1H), 4.624-4.681(m, 1H), 4.443-4.4
68(m, 2H), 4.235-4.321(m, 1H), 3.899-4.031(m, 4H), 1.980-2.109(m, 2H)ppm.

表1 各実施例で製造された化合物を下表に示す。

備考:特に明記しない限り、本明細書におけるPA1010はPA1010-シス、PA1007はPA1007-シ
スを指す。

実施例11 インビトロでのCYP3A4酵素による代謝により生成された活性分子の評価
測定方法
濃度0.1μMのプロドラッグが濃度1mg/mlのヒト組換えCYP3A4酵素(CYPEX)の作用下で代謝
されて活性分子(PMPAまたはPMEA)を形成する効率を測定することにより評価した。この酵
素触媒反応は、体積500μl、濃度0.1M、pH値7.4のTris-HCl緩衝溶液中で行われ、反応系
には5mM塩化マグネシウムおよび1mM NADPHも含まれる。反応混合物を37℃の恒温振盪水浴
に置き、0、7、17、30分間インキュベートした後、取り出し、1.5倍体積のメタノールを
加えて反応を停止させた。Eppendorf卓上遠心機により最大回転速度13,600rpmで20分間遠
心分離した。上清を取り、窒素ブロワーで乾燥させた後、新たに移動相A(5mM酢酸アンモ
ニウムおよび0.05%ギ酸v/vを含有する水溶液)に溶解した。得られた試料をLC-MS/MS (Wat
ers, Acquity UPLC HSS T3 column)で分析した。

表2 インビトロでのCYP3A4酵素による代謝により生成された活性分子の量

結果分析:化合物1、2、3、4、5、7、8はSラセミ体構造であり、6、9はS-cis構造である。
表2は30分間の酵素代謝の結果、図2および図3は代謝動的結果である。表2から、Sラセミ
体構造では、化合物2は、代謝されて活性代謝分子PMPAを生成する比率が最も高く、13.29
%であるのに対し、対照例7、8は、それぞれ8.67%および1.01%であることが明らかであっ
た。

化合物2を光学分割したところ、S-シス(化合物6-シス)の代謝比率は27.36%であって、対
応するSインビトロラセミ体(化合物2)よりも高かった。

前記結果から分かるように、本発明の化合物2は、他の構造の化合物よりも約50%高かった
。3位と5位がともにClである化合物8に比べて、本発明化合物2(3位および5位が異なる塩
素ClおよびFである)の活性は約13倍高かった。
活性が最も高い化合物2を光学分割してシス生成物6-シスを得た。光学分割して得られたS
-シス化合物では、現在臨床研究中の同じ種類の化合物Pradefovir(化合物9, S-シス)に比
べれ、本発明の化合物6-cisの活性も約57.5%高かった。

実施例12 インビトロでのヒト肝ミクロソームによる代謝により生成された活性分子の評
価
測定方法
本試験に用いられるヒト肝ミクロソームはIn Vitro Technologies(IVT)社から購入された
バッチ番号SSP X008070であって、150人のドナーの肝臓組織から抽出した混合肝ミクロソ
ームである。製品説明書に当該パッチの肝ミクロソームのCYP3A4の代謝活性が1.734nmol/
mg/min(テストステロンが代謝されて6-βテストステロンを生成する速度)であることが記
載されている。試験化合物（浙江柏柏拉阿圖医薬科技有限公司製）をメタノールに溶解し
、濃度25mMの保存液に作製した。酵素触媒反応は、100μl反応液(100mM Tris-HCl，5mM M
gCl₂，pH7.4)中で行われた。試験化合物の濃度は25μM，ヒト肝ミクロソームの濃度は2mg
/mlであった。NADPH(最終濃度2mM)を加えて反応を開始させた。恒温振盪水浴内で5min反
応させた直後、1.5倍体積のアセトニトリルを加えて反応を停止させた。Eppendorf卓上遠
心機により最大回転速度13,600rpmで20分間遠心分離した。上清を取り、窒素ブロワーで
乾燥させた後、新たに移動相A(5mM酢酸アンモニウムおよびv/v 0.05%を含有する水溶液)
に溶解した。得られた試料をLC-MS/MS(Waters, Acquity UPLC HSS T3 column)で定量分析
した。

表3 試験化合物がインビトロでヒト肝ミクロソームにより代謝されてPMPAまたはPMEAを
生成する速度

注:HLMはヒト肝ミクロソームの略称である。

結果分析:化合物1、2、3、4、7はSラセミ体構造であり、4-シス、6-シスおよび9はS-シス
構造出会った。表3は、5min内でヒト肝ミクロソームによる代謝によりPMPAまたはPMEAを
生成する平均速度である。
表3から分かるように、Sラセミ体構造では、化合物2および4が代謝されて活性代謝分子PM
PAを生成する速度が最も早く、それぞれ46.8 pmol/min/mg HLMおよび48.8 pmol/min/mg H
LMであった。
化合物2を光学分割してS-シス(化合物6-シス)を得た。得られたS-シス(化合物6-シス)は
代謝によりPMPAを生成する速度が75.8pmol/min/mg HLMであって、他の対応するSインビト
ロラセミ体(化合物2)よりも高かった。
对化合物4を光学分割してS-シス(4-シス)を得た。得られたS-シス(4-シス)は代謝
によりPMPAを生成する速度が170pmol/min/mg HLMであって、他の対応するSインビトロラ
セミ体(化合物4)よりも高かった。

前記結果から分かるように、ヒト肝ミクロソームの触媒作用下で、本発明の化合物2およ
び化合物4は、他の構造の化合物よりも活性代謝分子PMPAに変換する速度が速かった。活
性が最も高い化合物2および化合物4を光学分割したところ、シス生成物6-シスおよび4-シ
スを得た。光学分割されたS-シス化合物は、現在臨床研究中の同じ種類の化合物Pradefov
ir(化合物9,S-シス)に比べて、より速く代謝されて活性分子を生成することができ、且つ
4-シスは6-シスよりも顕著に優れており、前者は代謝によりPMPAを生成する速度が校舎の
2.2倍であり、化合物9がPMEAを生成する速度の8.3倍であった。
前記結果から分かるように、ベンゼン環部分が5-Clと2-Fで置換された化合物4、およびベ
ンゼン環部分が5-Fと3-Clで置換された化合物2は、他の化合物よりも顕著に優れた代謝活
性を有し、ベンゼンの3,5位および2,5位がハロゲンで非対称に置換された化合物は、肝臓
送達化合物のヒト肝ミクロソームによる活性化速度を改善できることを示している。

実施例13 肝臓送達化合物実験
1. 方法
1.1. 動物実験
雄性SDラット（体重180〜300g）は上海西普爾-必凱実験動物有限公司によって提供された
。雄性動物を3日以上環境に適応させ、実験前夜に断水せずに12時間断食させた。PA1010(
4-シス化合物)、PA1007(6-シス化合物)、TAFおよびTDFの溶液剤(生理食塩水)を調製した
。投与前に動物の体重が実験要求を満たすか否かを確認した。12匹のラットを選び、2匹/
群で6群に分けた。30mg/kgの薬液を胃内投与し、それぞれ0.5h、1h、3h、6h、12hおよび2
4h後に、二酸化炭素ガスでラットを安楽死させた後、サンプルを採取した。具体的には、
心臓から採血してヘパリン抗凝固チューブに保存し、4℃下、6000rpmで5min遠心分離した
後、上清血漿を取って氷中で保存し、ラットの腎臓および肝臓組織を摘出し、4℃に予冷
した生理食塩水で洗浄し、水を取り除いて氷中で保存した。実験後、サンプルを-80℃の
冷蔵庫に保蔵した。

1.2. PA1010、PA1007、TAFおよびTDFの一リン酸代謝物である(PMPA)の生物学的サンプ
ルにおける含有量の測定
サンプル前処理
氷浴中で、腎臓および肝臓組織と5倍体積の生理食塩水とを十分に破砕して均一に混合し
、組織ホモジネートサンプルを得た。100μLのラット血漿または組織ホモジネートサンプ
ルを取り、100μLの10%トリクロロ酢酸沈殿剤(内部標準物質50 ng/mLアデフォビルを含有
;メタノール:アセトニトリル=50:50，v/v)とを均一に混合した。4°C下、6000rpmで5分間
遠心分離した後、全ての上清を取って、SPEマイクロ抽出プレート(MCX mElution Plate 3
0mm, Waters)で処理し、最後に5%アンモニア・メタノール溶液で溶出洗脱し、75μLの上
清を取って384ウェルプレートに入れ、1.0μLのサンプルを注入して分析した。

クロマトグラフィー-質量分析条件
LC-MS/MS-AJ (Triple Quad 5500, AB SCIEX)を用いてサンプルを分析した。カラム:Acqui
ty UPLC HSS T3 (2.1×50mm，1.8μm);カラム温度:40^OC;流速:0.5mL/minであった。移動
相A:0.1%ギ酸水溶液、移動相B:アセトニトリル溶液であった。表4に示す条件でグラジエ
ント溶出法によりサンプルを分離した。対応する内部標準物質の質量分析条件は、エレク
トロスプレーイオン化（ESI）陽イオンモード、多重反応モニタリング(MRM)のモニタリン
グイオン対m/z:288/176(PMPA)，274/162(PMEA);毛細管電圧:3.0 kV、温度:500°C;脱溶
媒ガス流:1000L/h;走査時間:0.025秒;衝突エネルギー:25Vであった。

表4 PMPA液相溶出グラジエント条件

1.3 データ分析
PMPAの血漿、肝臓および腎臓における濃度-時間のヒストグラムを作製した。PMPAの組織
濃度-時間曲線下面積(AUC0-t)は、WinNonLin6.2.1(Pharsight, CA)の非コンパートメント
モデルの対数-線形台形法によりフィッティング計算された。PMPAの肝臓-腎臓比および肝
血比は、それらのAUC0-t比値である。

2. 結果
ラットに30mg/Kgの薬液を胃内投与した後の肝臓組織分布の結果は、PA1010が代謝されて
放出した活性分子PMPAが対応する時点のTAFおよびTDF(p<0.01，図4、6、7)よりも顕著に
高いことを示している。WinNonLin6.2.1により薬物血中濃度−時間曲線下面積をフィッテ
ィングした。表5に示すように、各試験薬が放出したPMPAの肝臓暴露量はPA1010>TAF>PA10
07>TDFであり、そのうち、PA1010が放出したPMPAの肝臓暴露量は、それぞれTAFの1.5倍(2
22692h・ng/g:148407h・ng/g)およびTDFの2.9倍(222692h・ng/g:78050h・ng/g)であった
。この結果は、より少ない容量であっても、PA1010はTDFおよびTAFと同等の臨床治療効果
に達することができることを示している。また、PA1010およびPA1007が体内で生成したPM
PAの腎臓暴露量は、いずれもTAFおよびTDFが放出したPMPA(表5)よりも顕著に低かった。
以上の結果から明らかであるように、同じ容量の場合、PA1010およびPA1007は、TAFおよ
びTDFよりも高い肝臓-腎臓比率(図4-7および表5)を示しめしており、TDFおよびTAFから放
出したPMPAが腎臓への集中は臨床段階の腎毒性を引き起こす主因である。この結果は、同
じ容量の場合、PA1010およびPA1007は、いずれもTDFおよびTAFによる臨床上の腎毒性を効
果的に減少できることを示している。

表5 ラットに30mg/kgのPA1007、PA1010、TAF、TDFを胃内投与した後の、体内代謝で放出
した活性分子(PMPA)の血漿、肝臓および腎臓における暴露量、すなわち、濃度-時間曲線
下面積(AUC0-t)(h*ng/g)

以上の結果から明らかなように、本発明の式Iおよび式IIIで表される化合物はより高い活
性およびより高い肝臓送達性を有するため、治療に必要な容量は低くなり、より高い安全
性または低い副作用を有し、PMPAの臨床上の治療指数が大幅に向上する。

本発明に掲げる全ての文献は、各文献が単独して参考として援用されるように、本出願に
おいて参考として援用される。また、理解できるように、本発明に記載の内容に基づいて
、当業者は本発明に対して様々な変更または修正を行うことができ、これらの同等態様は
同様に本出願の特許請求の範囲に含まれる。

Claims

以下の構造式で表されることを特徴とするS-シス構造の化合物、またはその薬学的に許容される塩、水和物若しくは溶媒和物。
治療有効量の請求項1に記載の化合物、その薬学的に許容される塩、水和物若しくは溶媒和物、および薬学的に許容される補助剤、希釈剤または担体を含むことを特徴とする医薬組成物。
B型肝炎ウイルス(HBV)、D型肝炎ウイルス(HDV)またはヒト免疫不全ウイルス(HIV)の感染に関連する急性または慢性疾患を治療するための請求項1に記載の化合物、その薬学的に許容される塩、水和物若しくは溶媒和物、或いは請求項２に記載の医薬組成物の使用。
前記B型肝炎ウイルス(HBV)、D型肝炎ウイルス(HDV)またはヒト免疫不全ウイルス(HIV)の感染に関連する急性または慢性疾患は、B型肝炎、D型肝炎またはエイズからなる群より選択されることを特徴とする請求項３に記載の使用。