NO180377B - Analogifremgangsmåte ved fremstilling av aktive 1,3-oksatiolannukleosidanaloger - Google Patents

Analogifremgangsmåte ved fremstilling av aktive 1,3-oksatiolannukleosidanaloger Download PDF

Info

Publication number
NO180377B
NO180377B NO920018A NO920018A NO180377B NO 180377 B NO180377 B NO 180377B NO 920018 A NO920018 A NO 920018A NO 920018 A NO920018 A NO 920018A NO 180377 B NO180377 B NO 180377B
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
compound
cis
enantiomer
oxathiolan
hydroxymethyl
Prior art date
Application number
NO920018A
Other languages
English (en)
Other versions
NO920018L (no
NO920018D0 (no
Inventor
Jonathan Alan Victor Coates
Ian Martin Mutton
Charles Richard Penn
Richard Storer
Christopher Williamson
Original Assignee
Iaf Biochem Int
Glaxo Group Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=10675345&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=NO180377(B) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Iaf Biochem Int, Glaxo Group Ltd filed Critical Iaf Biochem Int
Publication of NO920018L publication Critical patent/NO920018L/no
Publication of NO920018D0 publication Critical patent/NO920018D0/no
Publication of NO180377B publication Critical patent/NO180377B/no

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7068—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/506—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D411/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having oxygen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D411/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having oxygen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D411/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having oxygen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Description

Foreliggende oppfinnelse vedrører analogifremgangsmåte ved fremstilling av den terapeutisk aktive (-)-enantiomeren, eventuelt inneholdende en liten mengde av (+)-enantiomeren, av cis-4-amino-l-(2-hydroksymetyl-l,3-oksatiolan-5-yl)-(1H)-pyrimidin-2-on eller et farmasøytisk akseptabelt derivat derav. Oppfinnelsen er særpreget ved det som er angitt i kravets karakteriserende del.
Forbindelsen er nyttig i behandlingen av virale infeksjoner.
Forbindelsen med formel (I)
også kjent som BCH-189 eller NGPB-21 er blitt omtalt med antiviral aktivitet, spesielt mot de humane immunsviktviruser (HIV), som forårsaker AIDS (5th Anti-Aids Con-ference, Montreal, Canada 5th-9th June 1989: Abstracts T.C.0.1. and M.C.P. 63; Europa-patentsøknadsskrift nr. 03 82 562). Forbindelsen med formel (I) er en racemisk blanding av de to enantiomerer med formler (I-l) og (1-2):
og ble beskrevet og undersøkt i form av sitt racemat. Den eneste forbindelse som for tiden er godkjent for behandling av lidelser forårsaket av HIV, er 3'-azido-3'-deoksytymidin (AZT, "zidovudine", BW 509U). Men denne forbindelse har
tydelige bivirkninger og kan således enten ikke anvendes, eller når de engang er blitt anvendt, må de trekkes tilbake hos et betydelig antall pasienter. Følgelig er det et kontinuerlig behov for å frembringe forbindelser som er effektive mot HIV, men med en innebygget betydelig bedre terapeutisk indeks.
Vi har nå overraskende funnet at enantiomerer av forbindelsen med formel (I) er like potente mot HIV, men at en av enantiomerene ((-)-enantiomeren) har betydelig lavere cytotoksisitet enn den andre enantiomer. Således frembringes i oppfinnelsen (-)- (eller den levorotatoriske) enantiomeren av forbindelsen med formel (I) og farmasøytisk akseptable derivater derav. (-)-Enantiomeren har det kjemiske navn (-)-cis-4-amino-l-(2-hydroksymetyl-l,3-oksatiolan-5-yl)-(1H)-pyrimidin-2-on (i det følgende forbindelse A). Den har den absolutte stereokjemi som forbindelsen med formel (I-l), hvilken har navnet (2R,cis)-4-amino-l-(2-hydroksymetyl-l,3-oksatiolan-5-yl)-(1H)-pyrimidin-2-on.
Fortrinnsvis frembringes forbindelse A ialt vesentlig fri for den tilsvarende (+)-enantiomer, dvs. ikke mer enn ca. 5 vekt% av (+)-enantiomeren, fortrinnsvis ikke mer enn ca. 2 vekt%, mest foretrukket mindre enn ca. 1 vekt% er tilstede.
Med "et farmasøytisk akseptabelt derivat" menes ethvert farmasøytisk akseptabelt salt, ester, eller salt av slike estere, av forbindelse (A) eller enhver annen forbindelse som ved administrasjon til mottageren er istand til å frembringe (direkte eller indirekte) forbindelse (A) eller en antiviralt aktiv metabolitt eller en rest derav.
Det vil være underforstått av fagfolk at forbindelse (A) kan modifiseres for å gi farmasøytisk akseptable salter derav, på funksjonelle grupper i både basisdelen og på hydroksymetylgruppen i oksatiolanringen. Modifisering av alle slike funksjonelle grupper er innbefattet innenfor omfanget av oppfinnelsen. Men av spesiell interesse er farmasøytisk akseptable derivater erholdt ved modifisering av 2-hydroksymetylgruppen i oksatiolanringen.
Foretrukne estere av forbindelse (A) omfatter forbindelsene hvor hydrogenet i 2-hydroksymetylgruppen er erstattet med en acylfunksjon
hvor ikke-karbonyldelen R av esteren er valgt fra hydrogen, rettkjedet eller forgrenet alkyl (f.eks. metyl, etyl, n-propyl, t-butyl, n-butyl), alkoksyalkyl (f.eks. metoksymetyl), aralkyl (f.eks. benzyl), aryloksyalkyl (f.eks. fenoksymetyl), aryl (f.eks. fenyl eventuelt substituert med halogen, Cj.4-alkyl eller C^-alkoksy) ; sulfonatestere, såsom alkyl- eller aralkylsulfonyl (f.eks. metansulfonyl); aminosyreestere (f.eks. L-valyl eller L-isoleucyl) og mono-, di- eller tri-fosfatestere.
Med hensyn til ovennevnte estere inneholder, hvis intet annet er sagt, enhver tilstedeværende alkyldel med fordel 1 til 16 karbonatomer, spesielt 1 til 4 karbonatomer. Enhver tilstedeværende aryldel i slike estere omfatter med fordel en fenylgruppe.
Særlig kan disse estere være en CM6-alkylester, en usub-stituert benzylester eller en benzylester substituert med minst et halogen (brom, klor, fluor eller jod), C^-alkyl, Cj.g-alkoksy, nitro eller trifluormetylgrupper.
Farmasøytisk akseptable salter av forbindelse (A) omfatter salter avledet fra farmasøytisk akseptable uorganiske og organiske syrer og baser. Eksempler på egnede syrer omfatter saltsyre, hydrobromsyre, svovelsyre, salpetersyre, perklorsyre, fumarsyre, maleinsyre, fosforsyre, glykolsyre, melkesyre, salicylsyre, ravsyre, toluen-p-sulfonsyre, vinsyre, eddiksyre, sitronsyre, metansulfonsyre, maursyre, benzosyre, malonsyre, naftalen-2-sulfonsyre og benzensulfonsyre. Andre syrer, såsom oksalsyre, mens de i seg selv ikke er farmasøytisk akseptable, kan være nyttige som mellomprodukter ved fremstilling av forbindelsene og deres farmasøytisk akseptable syreaddisjonssalter.
Salter avledet fra egnede baser omfatter alkalimetall-(f.eks. natrium-), jordalkalimetall- (f.eks. magnesium-), ammonium- og NR4- (hvor R er Cj.4-alkyl) -salter.
Henvisninger i det følgende til en forbindelse fremstilt ifølge oppfinnelsen omfatter både forbindelse (A) og dens farmasøytisk akseptable derivater.
Forbindelsene fremstilt ifølge oppfinnelsen har enten i seg selv antiviral aktivitet og/eller metaboliseres til slike forbindelser. Særlig er disse forbindelser effektive til å hemme forøkelsen av retroviruser, inklusive humane retroviruser, såsom humane immunsviktviruser (HIV), som forårsaker AIDS.
Forbindelsene fremstilt ifølge oppfinnelsen er også nyttige ved behandling av AIDS-relaterte tilstander, såsom AIDS-relatert kompleks (ARC), progressiv generalisert lymfødemo-pati (PGL), AIDS-relaterte neurologiske tilstander (såsom demens eller tropisk paraparesis), anti-HIV-antistoff-positive og HIV-positive tilstander, Kaposi's sarkom, "thrombocytopenia purpurea" og forekommende ledsagende infeksjoner, for eksempel "Pneumocystis carinii".
Forbindelsene fremstilt ifølge oppfinnelsen er også nyttige ved forhindring av utvikling til klinisk sykdom hos personer som er anti-HIV-antistoff- eller HIV-antigen-positive og ved forebygging etter utsettelse for HIV.
Forbindelse (A) eller farmasøytisk akseptable derivater derav kan også anvendes for å forhindre viral kontaminering av fysiologiske væsker, såsom blod eller sæd in vitro.
Det vil forstås av personer som er trenet i faget, at henvisninger her til behandling omfatter profylakse samt behandling av etablerte infeksjoner eller symptomer.
Det vil videre forstås at mengden av en forbindelse fremstilt ifølge oppfinnelsen som er nødvendig for anvendelse ved behandling, vil variere ikke bare med den spesielle forbindelse som er valgt, men også med administra-sjonsformen, den behandlede tilstands natur og alder og tilstand hos pasienten og vil avgjøres ifølge den behand-lende leges eller veterinærs skjønn. Men vanligvis vil en passende dose være i området fra ca. 0,1 til ca. 750 mg/kg kroppsvekt pr. dag, fortrinnsvis i området mellom 0,5 og 60 mg/kg/dag, mest foretrukket i området fra 1 til
20 mg/kg/dag.
Den ønskede dose kan med fordel presenteres i en enkeltdose eller som oppdelte doser administrert ved passende inter-valler, for eksempel som to, tre, fire eller flere under-doser per dag.
Forbindelsen administreres med fordel i enhetsdoseringsform, for eksempel inneholdende 10 til 1500 mg, fortrinnsvis 20 til 1000 mg, mest foretrukket 50 til 700 mg av aktiv ingrediens per enhetsdoseringsform.
Ideelt bør den aktive ingrediens administreres for å oppnå toppkonsentrasjoner i plasma av den aktive forbindelse på fra ca. 1 til ca. 75 /iM, fortrinnsvis ca. 2 til ca. 50 ^M, mest foretrukket ca. 3 til ca. 30 mM. Dette kan oppnås for eksempel ved intravenøs injeksjon av en 0,1 til 5% løsning av den aktive ingrediens, eventuelt i salin, eller oralt administrert som en stor pille som inneholder ca. 1 til 100 mg av den aktive ingrediens. Ønskede blodnivåer kan opprettholdes ved kontinuerlig infusjon for å gi ca. 0,01 til ca. 5,0 mg/kg/time eller ved intermitterende infusjoner som inneholder ca. 0,4 til ca. 15 mg/kg av den aktive ingrediens.
Mens det er mulig å administrere, for terapeutisk anvendelse, en forbindelse fremstilt ifølge oppfinnelsen som rå-kjemikalium, er det å foretrekke å presentere den aktive ingrediens som en farmasøytisk formulering.
Farmasøytiske formuleringer omfatter slike som er egnet for oral, rektal, nasal, topikal (inklusive bukkal og sub-lingual), vaginal eller parenteral (inklusive intramus-kulær, sub-cutan og intravenøs) administrasjon i en form som er egnet for administrering ved inhalering eller in-sufflering. Formuleringene kan, hvor det er ønskelig, med fordel presenteres i adskilte doseringsenheter og kan fremstilles ved enhver metode som er velkjent i farmasien. Alle metoder inkluderer trinnet å bringe den aktive forbindelse i kontakt med flytende bærerstoffer eller finfordelte faste bærerstoffer eller begge, og deretter, hvis nødven-dig, å forme produktet til den ønskede formulering.
Farmasøytiske formuleringer egnede for oral administrering kan med fordel presenteres som separate enheter, såsom kapsler, kasjéer eller tabletter som hver inneholder en forutbestemt mengde av den aktive ingrediens; som et pulver eller granuler; som en oppløsning, en suspensjon eller som en emulsjon. Den aktive ingrediens kan også presenteres som en stor pille, et avføringsmiddel eller en pasta. Tabletter og kapsler for oral administrering kan inneholde konvensjonelle eksipienser, såsom bindemiddel, fyllstoffer, smøremidler, disintegranter eller fuktemidler. Tablettene kan være belagt ifølge metoder som er velkjent i faget. Orale flytende preparater kan være i form av for eksempel vandige eller oljeaktige suspensjoner, oppløsninger, emulsjoner, siruper eller eliksirer, eller kan presenteres som et tørt produkt for oppblanding med vann eller med et annet egnet løsningsmiddel før bruk. Slike flytende preparater kan inneholde konvensjonelle tilsetningsstoffer, såsom sus-pender ingsmidler, emulgeringsmidler, ikke-vandige bærerstoffer (som kan omfatte spiselige oljer), eller konserveringsmidler .
Forbindelsene fremstilt ifølge oppfinnelsen kan også formuleres for parenteral administrasjon (f.eks. ved injeksjon, såsom en stor injeksjon eller kontinuerlig injeksjon) og kan presenteres i enhetsdoseform i ampuller, forhåndsfylte sprøyter, infusjon i små volumer eller i flerdose-beholdere med et tilsatt konserveringsmiddel. Forbindelsene kan ha slike former som suspensjoner, løsninger eller emulsjoner i oljeaktige eller vandige bærerstoffer, og kan inneholde formuleringsmidler såsom suspenderings-, stabiliserings- og/eller dispergeringsmidler. Alternativt kan den aktive ingrediens være i pulverform, erholdt ved antiseptisk isolering av sterilt fast stoff eller ved lyofilisering fra en løsning, for oppblanding med et egnet bærerstoff, f.eks. sterilt, pyrogenfritt vann, før bruk.
For topisk administrering til overhuden kan forbindelsene fremstilt ifølge oppfinnelsen formuleres som salver, kremer eller lotioner, eller som et transdermalt plaster. Salver og kremer kan for eksempel formuleres med en vandig eller oljeaktig basis med tilsetning av egnede fortyknings-og/eller geleringsmidler. Lotioner kan formuleres med en vandig eller oljeaktig basis og vil som regel også inneholde et eller flere emulgeringsmidler, stabiliserings-midler, dispergeringsmidler, suspenderingsmidler, fortyk-ningsmidler eller farvestoffer.
Formuleringer egnet for topisk administrering i munnen omfatter pastiller som inneholder den aktive ingrediens i en aromabasis, vanligvis sakkarose og akasie eller tragant; pastiller inneholdende den aktive ingrediens i en inert base såsom gelatin og glycerin eller sakkarose og akasie; og munnvask inneholdende den aktive ingrediens i et egnet flytende bærerstoff.
Farmasøytiske formuleringer egnet for rektal administrering hvor bærerstoffet er et fast stoff er mest foretrukket presentert som enhetsdosesuppositorier. Egnede bærerstoffer omfatter kakaosmør og andre materialer som normalt anvendes i faget, og suppositoriene kan med fordel dannes ved blanding av den aktive forbindelse med de(t) bløtgjorte eller smeltede bærerstoff(er), etterfulgt av avkjøling og forming i støpeformer.
Formuleringer egnet for vaginal administrering kan presenteres som pessarier, tamponger, kremer geler, pastaer, skum eller sprayer som i tillegg til den aktive ingrediens inneholder slike bærerstoffer som er kjent i faget for å være velegnet.
For intranasal administrering kan forbindelsene fremstilt ifølge oppfinnelsen anvendes som flytende spray eller dispergerbart pulver eller i drops.
Drops kan formuleres med en vandig eller ikke-vandig basis som også omfatter ett eller flere dispergerende midler, solubiliseringsmidler eller suspenderingsmidler. Flytende sprayer leveres med fordel fra trykkforpakninger.
For administrering ved inhalering leveres forbindelsene fremstilt ifølge oppfinnelsen med fordel fra en insufflator, forstøver eller en trykkforpakning eller et annet egnet middel for å levere en aerosolspray. Trykkforpakninger kan inneholde et egnet drivstoff, såsom diklordifluormetan, triklorfluormetan, diklortetrafluoretan, karbondioksyd eller annen egnet gass. I tilfelle trykkaerosol kan dose-ringen bestemmes ved å påsette en ventil for å gi en opp-målt mengde.
Alternativt for administrering ved inhalering eller in-sufflering, kan forbindelsene fremstilt ifølge oppfinnelsen ha form av en tørr pulversammensetning, f.eks. en pul-verblanding av forbindelsen og en egnet pulverbasis såsom laktose eller stivelse. Pulversammensetningen kan presenteres i enhetsdose-form, f.eks. i kapsler eller patroner eller i f.eks. gelatin- eller blæretrekkende plasterfor-pakninger, fra hvilke pulveret kan administreres ved hjelp av en inhalator eller insufflator.
Når ønskelig kan de ovennevnte formuleringer, fremstilt for å gi langvarig frigivelse av den aktive ingrediens, anvendes.
Farmasøytiske sammensetninger kan også inneholde andre aktive ingredienser såsom antimikrobiske midler eller konserveringsmidler.
Forbindelsene fremstilt ifølge oppfinnelsen kan også anvendes sammen med andre terapeutiske midler, for eksempel andre antiinfeksjonsmidler. Særlig kan forbindelsene fremstilt ifølge oppfinnelsen anvendes sammen med kjente antivirale midler.
Egnede terapeutiske midler for anvendelse i slike kombi-nasjoner omfatter acykliske nukleosider, såsom acyklovir eller ganciklovir, interferoner, såsom a-, £>- eller 7-interferon, renale ekskresjonsinhibitorer, såsom proben-ecid, nucleosidtransportinhibitorer, såsom dipyridamol, 2', 3'-dideoksynukleosider, såsom AZT, 2',3'-dideoksy-cytidin, 2',3'-dideoksyadenosin, 2',3'-dideoksyinosin, 2', 3'-dideoksytymidin, 2',3'-dideoksy-2',3'-didehydrotymi-din og 2',3'-dideoksy-didehydrocytidin, immunomodulatorer, såsom interleukin II (IL2) og granulocyktmakrofagkoloni-stimulerende faktor (GM-CSF), erytropoetin, ampligen, tymomodulin, tymopentin, foskarnet, ribavirin og in-hibitorer av HIV-binding til CD4-reseptorer, f.eks. løselig CD4, CD4-fragmenter, CD4-hybridmolekyler, glycosylasjons-inhibitorer, såsom 2-deoksy-D-glukose, castanospermini og 1-deoksynoj irimycin.
De enkelte komponenter i slike sammensetninger kan administreres enten sekvensielt eller samtidig i separate eller sammensatte farmasøytiske formuleringer.
Når forbindelse (A) eller et farmasøytisk akseptabelt derivat derav anvendes i kombinasjon med et annet terapeutisk middel som er aktivt mot samme virus, kan dosen av hver forbindelse være enten den samme eller forskjellig fra dosen når forbindelsen anvendes alene. Egnede doser vil lett anslås av personer trenet i faget.
Forbindelse (A) og dens farmasøytisk akseptable derivater kan fremstilles ved enhver fremgangsmåte kjent i faget for fremstilling av forbindelser med analog struktur, for eksempel som beskrevet i Europa-patentsøknadsskrift nr. 0382562.
Det vil forstås av personer trenet i faget at for enkelte metoder beskrevet nedenfor kan den ønskede stereokjemi av forbindelse (A) erholdes enten ved å begynne med et optisk rent utgangsmateriale eller ved å oppløse den racemiske blanding ved ethvert passende trinn i syntesen. For alle fremgangsmåtenes del kan det optisk rene ønskede produkt erholdes ved oppløsning av sluttproduktet av hver reaksjon.
I en slik fremgangsmåte (A) omsettes et 1,3-oksatiolan med formel (VIII) hvor den anomeriske gruppe L er en erstattbar gruppe, med en egnet base. Egnede grupper L omfatter -OR hvor R er en alkylgruppe, f.eks. en Cj.6-alkylgruppe såsom metyl, eller R er en acylgruppe, f.eks. en Cj.6-alkylgruppe, såsom acetyl eller halogen, for eksempel jod, brom eller klor.
Forbindelsene med formel VIII omsettes med fordel med cytosin eller en egnet pyrimidin-base-forløper derav (tid-ligeres silylert med et silyleringsmiddel såsom heksametyldisilazan) i et kompatibelt løsningsmiddel, såsom metylenklorid, idet man anvender en Lewis syre, såsom titantetraklorid, en tinn(IV)forbindelse, såsom SnCl4, eller trimetylsilystriflat.
1,3-0ksatiolanene med formel (VIII) kan fremstilles for eksempel ved å omsette et aldehyd med formel (VII) med et mercaptoacetal med formel (VI) i et kompatibelt organisk løsningsmiddel, såsom toluen i nærvær av en syrekata-lysator, for eksempel en Lewissyre, såsom sinkklorid.
Mercaptoacetalene i formel (VI) kan fremstilles ved fremgangsmåter kjent i faget, for eksempel G. Hesse og I. Jorder: Chem. Ber. 85, 924-932 (1952) .
Aldehydene med formel (VII) kan fremstilles ved fremgangsmåter kjent i faget, for eksempel E.G. Halloquist og H. Hibbert, Can. J. Research, 8., 129-136 (1933) . Med fordel kan det rå aldehyd (VII) renses ved omdannelse til det krystallinske bisulfit-addisjonsaddukt og påfølgende ny-omdannelse til det frie aldehyd.
I en andre prosess (B) erholdes forbindelse (A) ved base-interkonversjon av en forbindelse med formel (IX)
hvor B er en base som kan omdannes til cytosin. Slik inter-konversjon kan utføres enten ved enkel kjemisk transforma-sjon (f.eks. omdannelsen av uracilbase til cytosin) eller ved en enzymatisk omdannelse med en deoksyribosyltrans-ferase. Slike metoder og betingelser for baseinterkon-versjon er velkjent i faget nukleosidkjemi.
I en tredje fremgangsmåte (C) kan en forbindelse med formel
(XI)
omdannes til forbindelse (A) ved konversjon av den anomeriske NH2-gruppe til cytosinbasen ved metoder som er velkjent i nukleosidkjemien.
Mange av reaksjonene som er beskrevet ovenfor, er blitt inngående beskrevet i forbindelse med nukleosidsynteser, for eksempel i "Nucleoside Analogs - Chemistry, Biology and Medical Applications", R.T. Walker et. al., eds., Plenum Press, New York (1979) på sidene 165-192; T. Ueda i "Chemistry of Nucleosides and Nucleotides", Vol. I, L.B. Townsend ed., Plenum Press, New York (1988) på sidene 165-192.
Det vil være underforstått at ovennevnte reaksjoner kan fordre anvendelse av, eller med fordel kan anvendes på, utgangsmaterialer som har beskyttede funksjonelle grupper, og avblokkering kan således være nødvendig som et mellom-liggende eller avsluttende trinn for å få den ønskede forbindelse. Blokkering og avblokkering av funksjonelle grupper kan utføres med konvensjonelle midler. Således kan for eksempel aminogrupper blokkeres av en gruppe valgt fra aralkyl (f.eks. benzyl), acyl, aryl (f.eks. 2,4-dinitrofen-yl) eller silyl; påfølgende fjerning av den beskyttende gruppe kan utføres etter ønske ved hydrolyse eller hydro-genolyse, alt etter forholdene, under anvendelse av stan-dard betingelser. Hydroksylgrupper kan blokkeres med enhver konvensjonell hydroksylblokkerende gruppe, f.eks. som beskrevet i "Protective Groups in Organic Chemistry", Ed. J.F.W. McOmie, Plenum Press (1973) eller "Protective Groups in Organic Synthesis" av Theodora W. Greene, John Wiley and Sons (1981). Eksempler på egnede hydroksylbeskyttende grupper omfatter grupper utvalgt fra alkyl (f.eks. metyl, t-butyl eller metoksymetyl), aralkyl (f.eks. benzyl, di-fenylmetyl eller trifenylmetyl), heterocykliske grupper såsom tetrahydropyranyl, acyl (f.eks. acetyl eller benzoyl) og silylgrupper såsom trialkylsilyl (f.eks. t-butyldimetyl-silyl). De hydroksylbeskyttende grupper kan fjernes ved konvensjonelle metoder. Således kan for eksempel alkyl, silyl, acyl og heterocykliske grupper fjernes ved solvolyse, f.eks. ved hydrolyse under sure eller basiske betingelser. Aralkylgrupper såsom trifenylmetyl kan på samme måte fjernes ved solvolyse, f.eks. ved hydrolyse under sure betingelser. Aralkylgrupper såsom benzyl kan avspaltes for eksempel ved behandling med BF3/eterat og eddiksyrean-hydrid, etterfulgt av fjerning av acetatgrupper således dannet på et egnet trinn i syntesen. Silylgrupper kan også med fordel fjernes med en kilde av fluorid-ioner såsom tetra-n-butylammoniumfluorid.
I de ovennevnte fremgangsmåter erholdes forbindelse (A) som regel som en blanding av cis- og trans- isomerer, hvorav cis-isomeren er forbindelsen av interesse.
Disse isomerer kan separeres ved fysikalske midler, f.eks. kromatografi på kiselgel eller ved fraksjonell krystal-lisering, enten direkte eller på et egnet derivat derav, f.eks. acetater (fremstilt for eksempel med eddiksyre-anhydrid) etterfulgt, etter separering, av omdannelse tilbake til moderproduktet (f.eks. ved deacetylering med metanolsk ammoniakk).
Farmasøytisk akseptable salter av forbindelsen fremstilt ifølge oppfinnelsen kan fremstilles som beskrevet i US-patent nr. 4.383.114. Således kan for eksempel, når det er ønskelig å fremstille et syreaddisjonssalt av forbindelse
(A), produktet fra alle ovennevnte fremgangsmåter omdannes til et salt ved behandling av den resulterende frie base
med en egnet syre under anvendelse av konvensjonelle metoder. Farmasøytisk akseptable syreaddisjonssalter kan fremstilles ved å omsette den frie base med en egnet syre, eventuelt i nærvær av et egnet løsningsmiddel, såsom en ester (f.eks. etylacetat) eller en alkohol (f.eks. metanol, etanol eller isopropanol). Uorganiske basiske salter kan fremstilles ved å omsette moderforbindelsen med en egnet base såsom et alkoksyd (f.eks. natriummetoksyd), eventuelt i nærvær av et løsningsmiddel såsom en alkohol (f.eks. metanol). Farmasøytisk akseptable salter kan også fremstilles fra andre salter, medregnet andre farmasøytisk akseptable salter, av forbindelse (A) ved konvensjonelle fremgangsmåter .
Forbindelse (A) kan omdannes til et farmasøytisk akseptabelt fosfat eller annet ester ved reaksjon med et fosfor-yleringsmiddel, såsom P0C13, eller et egnet ester-ifiseringsmiddel, såsom et syrehalogenid eller anhydrid, etter behov. En ester eller et salt av forbindelse (A) kan omdannes til moderforbindelsen for eksempel ved hydrolyse.
Resolusjon av sluttproduktet, eller et mellomprodukt eller utgangsmateriale for dette, kan utføres ved enhver egnet fremgangsmåte kjent innen faget: jfr. for eksempel "Stereo-chemistry of Carbon Compounds" av E.L. Eliel, McGraw Hill
(1962) og "Tables of Resolving Agents" av S.H. Wilen.
således kan for eksempel forbindelse (A) erholdes ved chiral HPLC under anvendelse av en egnet stasjonær fase såsom acetylert /3-cyklodekstrin eller cellulosetriacetat og et egnet løsningsmiddel, såsom alkohol, f.eks. etanol, eller en vandig løsning av for eksempel trietylammoniumacetat. Alternativt kan forbindelsene oppløses ved enzym-enantioselektiv katabolisme med et egnet enzym, såsom cytidindeaminase eller selektiv enzymatisk degradering av et egnet derivat under anvendelse av en 5'-nukleotidase. Når oppløsningen utføres enzymatisk, kan enzymet anvendes enten i oppløsning eller, mer fordelaktig, i immobilisert form. Enzymer kan immobiliseres ved enhver fremgangsmåte som er kjent innen faget, for eksempel ved adsorpsjon på en harpiks såsom Eupergit C.
Oppfinnelsen vil bli nærmere beskrevet ved følgende eksempler. Alle temperaturer er i grader Celcius.
MELLOMPRODUKT 1
5- Metoksy- l, 3- oksatiolan- 2- metanolbenzoat
En løsning av sinkklorid (1,6 g) i varm metanol (15 ml) ble tilsatt til en omrørt løsning av merkaptoacetaldehyd-di-metylacetat (34,2 g) og benzoyloksyacetaldehyd (48,3 g) i toluen (1300 ml), som deretter ble oppvarmet til tilbake-løpstemperaturen under nitrogen i 50 minutter. Den ned-kjølte løsning ble konsentrert, fortynnet med litt toluen og deretter filtrert gjennom "Kieselguhr". De sammenslåtte filtrater og toluen ble vasket med vandig mettet natrium-bikarbonatløsning (x2) og saltvann, tørket (MgSOJ , deretter inndampet til en olje som ble underkastet kolonnekromatografi på kisel (2 kg, Merck 93 85), eluert med kloroform for å gi tittelproduktet som en olje (45,1 g), en blanding av anomerer (ca. 1:1); 1H NMR (DMSO-d6) , 3,1-3,3 (4H), 3,42 (6H), 4,4-4,6 (4H), 5,41 (1H), 5,46 (1H), 5,54 (1H), 5,63 (1H), 7,46 (4H) , 7,58 (2H) , 8,07 (4H) ; 7^
(CHBr3) 1717,6 cm1.
MELLOMPRODUKT 2
f ±)- cis- 1- f 2- benzovloksymetyl- l, 3- oksatiolan- 5- yl)-( 1H)-pyrimidin- 2- 4- dion
En blanding av finmalt uracil (9,62 g), heksametyldisilazan (50 ml) og ammoniumsulfat (30 mg) ble oppvarmet med til-bakeløp under nitrogen til en klar løsning var oppnådd. Denne ble avkjølt og deretter inndampet til en farveløs olje, som ble oppløst, under nitrogenatmosfære, i acetonitril (100 ml) . Løsningen ble tilsatt til en omrørt isav-kjølt løsning av 5-metoksy-l,3-oksatiolan-2-metanol-benzoat (mellomprodukt 1) (19,43 g) i acetonitril (600 ml), og trimetylsilyl-trifluormetansulfonat (14,7 ml) ble tilsatt. Isbadet ble fjernet, og løsningen ble oppvarmet under tilbakeløp under nitrogen i 45 minutter. Etter avkjøling og inndamping ble residuet renset ved kolonnekromatografi over 1 kg kiselgel (Merck 93 85) idet man eluerte med kloroform/- metanol 9:1. De egnede fraksjoner ble avkjølt og inndampet, hvilket gav et råprodukt. Dette ble fraksjonert krystallisert fra den minimale mengde av varm metanol (ca.
1200 ml) for å gi titelproduktet (6,32 g) som hvite kry-staller. 1H NMR (d<6>DMS0) 7 11,36 (lH,bs), 7,50-8,00 (6H,m), 6,20 (lH,t), 5,46 (2H,m), 4,62 (2H,m), 3,48 (lH,m), 3,25 (lH,m).
MELLOMPRODUKT 3
( ±)-( cis )- 4- amino- l-( 2- benzoyloksymetyl- l, 3- oksatiolan- 5-yl)-( 1H)- pyrimidin- 2- on
Metode ( a)
En suspensjon av cytosin (20,705 g) og ammoniumsulfat (noen få mg) i heksametyldisilazan (110 ml) ble omrørt og oppvarmet under tilbakeløp i 2% time, under nitrogen. Løsnings-middelet ble fjernet ved inndamping, og det gjenværende faste stoff ble oppløst i tørt acetonitril (350 ml). Denne løsning ble overført under anvendelse av fleksibel nål-teknikk til en omrørt, isavkjølt løsning av 5-metoksy-l,3-oksatiolan-2-metanol-benzoat (mellomprodukt 1) (43,57 g) i acetonitril (650 ml) under nitrogen. Trimetylsilyltrifluor-metansulfonat (33 ml) ble tilsatt, løsningen fikk anta omgivelsestemperatur (1% timer), deretter ble den oppvarmet til tilbakeløpstemperatur i 1 døgn. Den resterende blanding ble konsentrert, fortynnet med mettet vandig natriumbikar-bonatløsning (500 ml), deretter ekstrahert med etylacetat (3x500 ml). De sammenslåtte ekstrakter ble vasket med vann (2x250 ml) og saltvann (250 ml) , tørket (MgS04) og inndampet til et skum som ble underkastet kolonnekromatografi på kisel (600 g, Merck 7734), eluert med etylacetat-metanol-blandinger for å gi en blanding av anomerer (ca. 1:1; 31,59 g). Løsningen ble krystallisert fra vann (45 ml) og etanol (9,0 ml) for å gi et fast stoff (10,23 g), hvilket ble krystallisert fra etanol (120 ml) og vann (30 ml) for å gi titelproduktet som et hvitt fast stoff (9,26 g);
(MeOH) 229,4 mm (E1/0^ 610); 272,4 mm (E11%OT 293); 1H NMR (DMSO d6) , S 3,14 (1H), 3,50 (1H), 4,07 (2H) , 5,52 (1H), 5,66 (1H), 6,28 (1H), 7,22 (2H), 7,56 (2H), 7,72 (2H), 8,10 (2H) .
Metode ( b)
Fosforoksyklorid (7,0 ml) ble tilsatt dråpevis til en omrørt, iskjølet suspensjon av 1,2,4-triazol (11,65 g) i acetonitril (12 0 ml). Deretter, mens man holdt den indre temperatur under 15°C, ble trietylamin (22,7 ml) tilsatt dråpevis. Etter 10 minutter ble en løsning av (±)-(cis)-l-(2-benzoyloksymetyl-l,3-oksatiolan-5-yl)-(1H)-pyrimidin-2,4-dion (mellomprodukt 2) (6,27 g) i acetonitril (330 ml) langsomt tilsatt. Omrøringen ble deretter fortsatt ved værelsestemperatur over natten. Løsningen ble avkjølt ved hjelp av et isbad, og trietylamin (30 ml) ble tilsatt langsomt, etterfulgt av vann (21 ml). Den resulterende løsning ble inndampet, og residuet ble fordelt mellom mettede natriumbikarbonatløsning (400 ml) og kloroform (3x200 ml). De sammenslåtte kloroformekstrakter ble tørket over magnesiumsulfat, filtrert og inndampet for å gi et råprodukt (9,7 g). Residuet ble oppløst i 1,4-dioksan (24 0 ml) og konsentrert vandig ammoniakkløsning (s.g. 0,880, 50 ml) ble tilsatt. Etter 1% time ble løsningen inndampet, og residuet ble oppløst i metanol. Dette forårsaket feining av et fast stoff, hvilket ble avfiltrert. Modervæskene ble renset ved kolonnekromatografi over kiselgel (Merck 9385, 600 g). Egnede fraksjoner ble slått sammen og inndampet for å gi titelproduktet som et beige fast stoff (2,18 g), identisk med det som ble erholdt med metode (a) .
Eksempel 1
( ± )-( cis)- 4- Amino- 1-( 2- hydroksymetyl- l, 3- oksatiolan- 5- yl)-( 1H)- pvrimidin- 2- on
En suspensjon av (cis)-4-amino-l-(2-benzoyloksymetyl-l,3-oksatiolan-5-yl)-(1H)-pyrimidin-2-on (mellomprodukt 3)
(8,19 g) og Amberlite IRA-400 (OH) harpiks (8,24 g) i metanol (250 ml) ble omrørt og oppvarmet til tilbakeløps-temperaturen i 1% time. Faste stoffer ble fjernet ved filtrering og deretter vasket med metanol. De sammenslåtte filtrater ble fordampet. Residuet ble trituert med etylacetat (80 ml). Det resulterende hvite faste stoff ble samlet ved filtrering for å gi titelproduktet (5,09 g), 1H NMR (DMSO-d6) 3,04 (1H), 3,40 (1H), 3,73 (2H) , 5,18 (1H), 5,29 (1H), 5,73 (1H), 6,21 (1H), 7,19 (2H), 7,81 (1H).
Eksempel 2
Chiral HPLC separering av enantiomerene av ( ±)-( cis)- 4-amino- 1-( 2- hydroksymetyl- l, 3- oksatiolan- 5- yl)-( 1H)- pyri-midin- 2- on
(A) Det racemiske produkt fra eksempel 1 (25 mg) ble utsatt for forberedende HPLC under følgende betingelser: Kolonne: Merck Hibar cellulosetriacetat,
250x10 mm, 10 n;
Elueringsmiddel: Etanol;
Flytehastighet: 3 ml/min;
Deteksjon: UV, 270 nm;
Temperatur: Omgivelsens.
Fordamping av de egnede, sammenslåtte fraksjoner ga (2R,cis)-4-amino-l-(2-hydroksymetyl-l,3-oksatiolan-5-yl)-(1H)-pyrimidin-2-on (6,8 mg, dvs. ca. 100%) og (2S,cis)-4-amino-l-(2-hydroksymetyl-l,3-oksatiolan-5-yl)-(1H)-pyrimidin-2-on (3,6 mg, dvs. ca. 90%). (B) Det racemiske produkt fra eksempel 1 (26 mg) ble utsatt for forberedende HPLC under følgende betingelser:
Kolonne: ASTEC cyklobond-I-acetyl,
2 50x4,6 mm;
Elueringsmiddel: 0,2% Trietylammoniumacetat (fremstilt ved å tilsette iseddik til 0,2% trietylamin i vann, til en slutlig pH på 7,2);
Flytehastighet: 2 ml/min;
Deteksjon: UV, 3 00 nm;
Temperatur: Omgivelsens.
Fordamping av egnede fraksjoner ga ubehandlet (2R,cis)-4-amino-l-(2-hydroksymetyl-l,3-oksatiolan-5-yl)-(1H)-pyrimidin-2-on (25 mg) og ubehandlet (2S,cis)-4-amino-l-(2-hydroksymetyl-l,3-oksatiolan-5-yl)-(1H)-pyrimidin-2-on (17 mg). Disse fraksjoner ble hver for seg utsatt for videre forberedende HPLC under følgende betingelser:
Kolonne: ASTEC cyklobond-I-acetyl,
250x4,6 mm;
Elueringsmiddel: 15 mM ammoniumacetat, pH 6,8;
Flytehastighet: 0,5 ml/min;
Deteksjon: UV, 300 nm;
Temperatur: 5°C.
Fordamping av de egnede sammenslåtte fraksjoner ga (2R,cis)-4-amino-l-(2-hydroksymetyl-l,3-oksatiolan-5-yl)-(1H)-pyrimidin-2-on (5,0 mg, dvs. ca. 91%) og (2 S,cis)-4-amino-l-(2-hydroksymetyl-1,3-oksatiolan-5-yl)-(1H)-pyrimidin-2-on (7,6 mg, dvs. ca. 96%).
Eksempel 3
(-)- cis- 4- Amino- 1-( 2- hydroksvmetvl- l, 3- oksatiolan- 5- yl)-( 1H)- pyrimidin- 2- on
(i) f ±)- cis- 4- Amino- l-( 2- hydroksymetyl- l, 3- oksatiolan- 5-yl)-( 1H)- pyrimidinon, dihydro<g>enfosfat, ammoniumsalt
En kald (0°), omrørt suspensjon av (±)-cis-4-amino-l-(2-hydroksymetyl-1,3-oksatiolan-5-yl)-(1H)-pyrimidin-2-on (1,00 g) (eksempel 1) i tørr trimetylfosfat (20 ml) ble behandlet med fosforoksyklorid (2,44 ml), og blandingen ble omrørt ved 0°C i 3 5 minutter og deretter ble reaksjonen stoppet i isvann (60 g). Den kalde blanding ble justert til pH 2,5 ved tilsetning av vandig N-natriumhydroksyd, deretter overført til en kullkolonne (10 g, DARCO), hvilken ble eluert med vann, deretter med etanol-vandig ammoniakk. Fraksjoner inneholdende ubehandlet monofosfat ble slått sammen og konsentrert. Den resulterende løsning ble over-ført til en kolonne som inneholdt 25 g DEAE Sephadex A-25 (HC03-f orm). Eluering ble foretatt med en gradient av vann (120 ml) til 0,1 M-NH4HC03 (240 ml), deretter 0,2, 0,3 og 4M NH4HC03 (120, 240, 400 ml hver) . Egnede fraksjoner ble sammenslått og konsentrert. Den resterende løsning ble fortynnet med vann (40 ml) og frysetørket for å gi titelproduktet som et hvitt fast stoff (1,37 g) ;Xmax (pH 6 buffer), 271,0 nm ( E\% cm 190); lE NMR (D20) 6 3,23 (1H) , 3,55 (1H), 4,0-4,2 (2H), 5,43 (1H), 6,07 (1H), 6,33 (1H), 8,08 (1H) •
(ii) ( 2R, cis)- 4- Amino- l-( 2- hydroksymetvl- l, 3- oksatiolan-5- yl)- f1H)- pyrimidin- 2- on og ( 2S, cis)- 4- amino- l-( 2-hydroksymetyl- 1, 3- oksatiolan- 5- yl)-( 1H)- pyrimidin-2- on
5'-Nukleotidase (fra "crotalus atrox venom") (EC 3.1.3.5)
(60 mg ved 17 enheter/mg) ble tilsatt til en løsning av (±)-cis-4-amino-(2-hydroksymetyl-l,3-oksatiolan-5-yl)-(1H)-
pyrimidin-2-on, 6'-dihydrogenfosfat, ammoniumsalt (1,35 g) i buffer [30 ml, fremstilt fra glycin (526 mg) og mag-nesiumklorid (190 mg) i vann (100 ml)] og blandingen ble inkubert ved 37°C i 2,5 timer. Mere enzym (20 mg) ble tilsatt, og inkubasjonen ble fortsatt i ytterligere 3,5 timer. Den resulterende blanding ble påført til en kolonne DEAE Sephadex A-25 (HC03-form) . Eluering ble foretatt med vann (160 ml), deretter 0,1, 0,2, 0,3 og 0,4M NH4HC03
(200 ml hver). Egnede fraksjoner inneholdende den først eluerte komponent ble sammenslått og inndampet, residuet ble utsatt for kolonnekromatografi på kisel (60 g, Merck 7734) og eluert med kloroformmetanolblandinger. Inndamping av de egnede fraksjoner fra metanoletylacetat ga ((+)-(cis)-4-amino-l-(2-hydroksymetyl-l,3-oksatiolan-5-yl)-(1H)-pyrimidin-2-on som et hvitt fast stoff (0,30 g) -
[a]D<21>+137° (cl.04 MeOH) ; 'H NMR (DMSO) 8 3,04 (1H) , 3,40 (1H), 3,73 (2H), 5,18 (1H), 5,29 (1H), 5,73 (1H), 6,21 (1H), 7,19 (2H), 7,81 (1H).
Egnede fraksjoner fra Sephadex-kolonnen, inneholdende den andre eluerte komponent, ble sammenslått og inndampet. Residuet ble oppløst i vann (30 ml), behandlet med alkalin fosfatase (fra Escherichia coli) [EC 3.1.3.1] (1,5 ml ved 416 enheter/ml), deretter inkubert ved 37°C i en time. Løsningsmiddelet ble fjernet ved fordamping og residuet ble utsatt for kolonnekromatografi på kisel (60 g, Merck 7734) og eluert med kloroform-metanol-blandinger. Inndamping av de egnede fraksjoner fra metanol-etylacetat ga (-)-(cis)-4-amino-1-(2-hydroksymetyl-l,3-oksatiolan-5-yl)-(1H)-pyrimi-din-2-on som et hvitt fast stoff (0,32 g) ; [a]D<21->132°
(cl.08, MeOH); <*>H NMR (DMSO) S 3,04 (1H), 3,40 (1H) , 3,73 (2H), 5,18 (1H), 5,29 (1H), 5,73 (1H), 6,21 (1H), 7,19 (2H), 7,81 (1H).
Eksempel 4
(-)- cis- 4- Amino- l-( 2- hydroksymetyl- l, 3- oksatiolan- 5- yl)-( 1H)- pyrimidin- 2- on (i) Tre 50 ml-kolber med næringsbuljong (Oxoid Ltd) ble inokkulert med hver sin løkkke med Escherichia coli (ATCC 23848) skrapet fra en næringsagarplate. Kolbene ble inkubert over natten ved 37°C med rysting ved 250 rev/min og deretter ble hver kolbe anvendt for å inokkulere 4 1 CDD-medium (glutamsyre, 3 g/l; MgS04, 0,2 g/l: K2S04, 2,5 g/l; NaCl, 2,3 g/l, Na2HP042H,0, 1,1 g/l, NaH2P042H20 0,6 g/l cytidin, 1,2 g/l) i en 7 liters fermenterer- Kulturene ble fermentert ved 750 rev/min, 37°C med gjennomlufting ved 4 l/min. Etter vekst i 2 4 timer ble cellene oppsamlet ved sentrifugering (5000 g, 30 minutter) for å gi 72 g våtvekt. Cellebunnfallet ble suspendert på nytt i 3 00 ml 2 0 mM Tris-HCl-buffer (pH 7,5) og sprengt ved sonikasjon (4x45 sekun-der) . Cellerestene ble fjernet ved sentrifugering (30.000 g, 30 minutter), og proteinet i supernatanten ble felt ved å tilsette ammoniumsulfat til 75% metning. Felnin-gen ble samlet ved sentrifugering (30.000 g, 30 minutter), og bunnfallet ble resuspendert i 25 ml HEPES-buffer (100 mM, pH 7,0) som inneholdt ammoniumsulfat (75% metning) . Enzym-løsningen ble fremstilt ved sentrifugering ved 12.000 rpm i 3 0 minutter. Supernatantet ble kastet, og bunnfallet oppløst i Tris-HCl-buffer (pH 7,0; 100 mM) til det opprinnelige volum. (ii) Produktet fra eksempel 1 (115 mg) ble oppløst i vann (100 ml) og omrørt. Enzym-løsning (0,5 ml) ble tilsatt, og blandingen ble holdt ved konstant pH ved kontinuerlig tilsetning av HC1 (25 mM). Konversjonen ble overvåket ved chiral HPLC, hvilken viste at (+)-enantiomeren i substratet fortrinnsvis var deaminert. Etter 22 timer var (+)-enantiomeren i substratet (RT 12,5 min) helt fjernet, og løsningen ble innstilt til pH 10,5 ved å tilsette kons. natriumhydroksyd.
Løsningen fremstilt ovenfor ble eluert gjennom en kolonne med QAE Sephadex (A25; Pharmacia; 30x1,5 cm), forhånds-innstilt til pH 11. Kolonnen ble vasket med vann (200 ml) og deretter med HCl (0,1 m). Fraksjoner 5-13, som inneholdt den ureagerte (-)-enantiomer i substratet, ble slått sammen og innstilt til pH 7,5 med HCl.
Fraksjon 47, som inneholdt deaminert produkt, ble innstilt til pH 7,5 med fort. NaOH. Analyse ved chiral HPLC viste at dette material var en blanding, som bestod av en enantiomer (RT 10,2 min) som hovedkomponent med den andre enantiomer (RT 8,5 min) som bikomponent (dvs ca. 90%). (iii) Trinn (ii) ovenfor ble gjentatt i større skala. Forbindelsen fra eksempel 1 (3 63 mg) i 250 ml vann ble inkubert med enzym-løsning (0,5 ml), fremstilt som i trinn (i). Ytterligere alikvoter (0,5 ml) med enzym ble tilsatt etter 18 og 47 timer. Reaksjonsblandingen ble omrørt i 70 timer, deretter fikk den stå i ytterligere 64 timer. Analyse ved chiral HPLC viste at (+)-enantiomeren i substratet var blitt fullstendig deaminert, og den resulterende løs-ning ble innstilt til pH 105, med NaOH.
Løsningen ovenfor ble påført på samme QAE-kolonne og eluert som i trinn (i). Fraksjoner 2-6, som inneholdt en blanding av det gjenværende substrat og deaminerte produkt, ble slått sammen. Fraksjoner 7-13, som inneholdt det gjenværende substrat ((-)-enantiomeren), ble slått sammen og innstilt til pH 7,5. Fraksjoner 25-2 6, som inneholdt et deaminert produkt, ble slått sammen og nøytralisert.
Fraksjoner 2-6 ovenfor ble eluert på nytt gjennom samme QAE-kolonne. Fraksjoner 3-11 fra denne andre kolonne inneholdt ureagert substrat ((-)-enantiomeren). Fraksjon 70 inneholdt det deaminerte produkt. (iv) De oppløste substatfraksjoner fra trinn (ii) og (iii) ble slått sammen og innstilt til pH 7,5. Denne løs-ning ble eluert gjennom en kolonne XAD-16 (40x2,4 cm), pakket i vann. Kolonnen ble vasket med vann, og deretter eluert med acetonrvann (1:4 vektdeler).
1. Revers-fase analytisk HPLC
Kolonne: "Capital Cartridge
Spherisorb ODS-2" (5uM)
150x4,6 mm
Elueringsmiddel: Ammoniumdihydrogenfosfat (50 mM) +
5% MeCN
Flytehastighet: 1,5 ml/min
Deteksjon: UV, 270 nm
Retensjonstider: BCH 18 9: 5,5 min
Deaminert BCH-189: 8,1 min
2. Chiral analytisk HPLC
Kolonne: Cyklobond I acetyl
250x4,6 mm
Elueringsmiddel: 0,2% Trietylammoniumacetat
(pH 7,2)
Flytehastighet: 1,0 ml/min
Deteksjon: UV, 270 nm
Retensjonstider: BCH 189: 11,0 og 12,5 min Deaminert BCH-189: 8,5 og 10,2 min
(Bioomdannelsen ble fulgt ved å overvåke tapet av kurve-toppen etter 12,5 min, og omsamling av produktet etter 10, 2 min).
Eksempel 5
(-)- cis- 4- Amino- l-( 2- hydroksymetyl- l, 3- oksatiolan- 5- yl)-( 1H)- pyrimidin- 2- on
En løkke med E. coli B-celler (ATCC 32848) skrapet fra en brønn med næringsagar ble brukt for å inokkulere to Florence-kolber son hver inneholdt 250 ml næringsbuljong. Kulturen ble inkubert ved 37°C med rysting (250 rev/min, 5 cm kast) i 18 timer. Dette ble deretter anvendt for å inokkulere 40 1 CDD-medium med cytidin, i en 70 1 fermenterer.
Betingelsene for fermenteringen var som følger: 40 l/min lufting, 750 rev/min omrøringshastighet ved en temperatur på 37°C. Tre Rushton-påskyndere ble anbragt på fermente-reren. Fermenteringen fikk gå i 18 timer før oppsamling under anvendelse av en kontinuerlig sentrifuge. Celle-pastaen (150 g nettovekt) ble frosset ved -20°C før celleknusingen.
CDD- medium
Fremstilt med destillert vann. Sterilisert ved 121°C i 30 minutter. Cytidin (1,2 g/l) ble filtersterilisert og tilsatt før inokkuleringen.
Den frosne cellepasta (150 g) ble tint og suspendert i
750 ml 100 mM Hepes (N-[2-hydroksyetyl]piperazin-N'-[2-etansulfonsyre])-buffer (pH 7,5) som inneholdt 1 mM etylendiamintetraeddiksyre (natriumsalt) og 1 mM ditio-treitol (disrupsjonsbuffer). Cellene ble knust ved å la suspensjonen passere gjennom en Manton-Gaulin-homogenisator som opererte ved 7500 psi (= 527,3 kg/cm2) . Dette ble gjort tre ganger under kjøling av suspensjonen til ca. 5°C etter hver passering gjennom homogenisatoren. Homogenatet ble klaret ved sentrifugering (1400 g; 60 min). Cytidinde-
aminase-aktiviteten ble adsorbert på en Q-Sepharose-kolonne (490 mg pakningsvolum) forhåndsekvilibrert med 50 mM Tris-(hydroksymetyl)metylamin (pH 7,5) som inneholdt 1 mM natri-umklorid. De sammenslåtte aktive fraksjoner (210 ml) ble påført på en fenyl-Sepharose-kolonne (490 ml pakningsvolum) , forhåndsekvilibrert med prøvebufferen inneholdende 3,2 m ammoniumsulfat. Det bundne enzym ble eluert med en gradient av minskende ammoniumsulfat-konsentrasjon. Frak-sjonene som inneholdt cytidin-deaminase-aktivieteten ble slått sammen (695 ml), og det delvis rensede enzym ble deretter utfelt med 80% ammoniumsulfat. Etter sentrifugering (1400 g; 60 min) ble bunnfallet igjen suspendert i 54 ml supernatant fra ovenstående og lagret ved 4°C.
6,2 ml av denne løsning ble sentrifugert (18000 g, 90 min), og bunnfallet ble oppløst i 24 ml 0,5 m kaliumfosfat-buffer (pH 7,5). Suspensjonen ble dialysert over natten mot 1 m kaliumfosfat-buffer (pH 7,5). Retentatet (20 ml) ble deretter fortynnet med et like stort volum destillert vann. Til 35 ml av denne løsning ble tørre Eupergit C-perler tilsatt (lg), og blandingen fikk stå ved værelsestemperatur i 150-300 timer (bestemt ved å måle den resterende cytidin-deaminase-aktivitet i løsningen). Det immobiliserte enzym ble vasket med 100 mM Tris/HCl-buffer (pH 7,0) inneholdende 1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0,5 m NaCl og 500 ppm p-hydroksy-benzosyreetylester (lagringsbuffer). Det immobiliserte enzym (2,7 g våtvekt) ble lagret i denne buffer ved 4°C inntil det trengtes for biotransformasjon.
Produktet fra eksempel 1 (3g) ble oppløst i 500 ml destillert vann i en magnetisk omrørt 1 1-kolbe. Bioomdannelsen ble utført ved 32°C i et pH-stat. pH ble holdt konstant på 7,0 ved å tilsette IM eddiksyre. 1 g våtvekt av de immobiliserte enzym-perler ble vasket med destillert vann før reaksjonen startet. Omdannelsen ble overvåket ved chiral-HPLC, hvilken viste at (+)-enantiomeren av substratet fortrinnsvis ble deaminert. Mot slutten av reaksjonen (72 timer) ble enzym-perlene avfiltrert, og filtratet ble anvendt for å isolere den ønskede (-)-enantiomer.
pH i reaksjonsblandingen ble innstilt til pH 10,5 med ammoniakkløsning (lm), og løsningen ble påført på Duolite A113-superharpiks i OH-cyklusen (50 ml; 0,4 kolonnevolum per time). Uridinanalogen ble adsorbert på harpiksen, og (-)-enantiomeren passerte rett igjennom. Litt (-)-enantiomer som var igjen på harpiksen ble fjernet ved å vaske med 0,04% ammoniakkløsning (2 kolonnevolum; strømningshastighet 0,8 kolonnevolum/time).
pH i de anvendte løsninger og vaskeløsninger (600 ml) ble innstilt til pH 7,0 med konsentrert svovelsyre, og løs-ningen ble påført på XAD16-harpiks (50 ml; strømningshas-tighet 1,4 kolonnevolum/time). Kolonnen ble vasket med destillert vann (2,5 kolonnevolum, strømningshastighet 2 kolonnevolum/time), og (-)-enantiomeren ble eluert med aceton:vann 1:3 (strømningshastighet 1,5
kolonnevolum/time).
Fraksjonen som inneholdt mesteparten av (-)-enantiomeren (4 kolonnevolumer) ble konsentrert på en Buchi-inndamper til et litet volum før filtrering gjennom en Nr. 3 glass-sinter. Den filtrerte løsning ble frysetørket og gav 1,2 g av titelproduktet, identisk med produktet erholdt i eksempel 4.
Eksempel 6
Tablettformulering
A. Følgende formulering fremstilles ved våtgranulering av ingredienser med en løsning av providon i vann, tørk-ing og siktning, etterfulgt av tilsetning av magnesiumstearat og pressing.
B. Følgende formulering fremstilles ved direkte pressing;
laktosen er av direkte kompressjonstype.
C. (Kontrollert frigivelsesformulering).
Formuleringen fremstilles ved våtgranulering av ingrediensene (nedenfor) med en løsning av providon i vann, tørking og siktning, etterfulgt av tilsetning av magnesiumstearat og kompressjon.
Eksempel 7
Kapselformulering
En kapselformulering fremstilles ved å blande ingrediensene nedenfor og fylle dem på en todelt hårdgelatinkapsel.
Eksempel 8
Iniuserbar formulering
Aktiv ingrediens 0,200 g
Natriumhydroksydløsning, 0,1 m q.s til en pH runt 11.
Sterilt vann q.s. til 10 ml
Den aktive ingrediens suspenderes i litt av vannet (hvilket kan varmes), og pH innstilles til ca. 11 med en løsning av natriumhydroksyd. Satsen fylles deretter opp til volumet og filtreres gjennom et steriliserende membranfilter i en sterilt 10 ml glass-ampulle og lukkes med steril lukning og forsegling.
Eksempel 9
En femtedel av det hårde fettet smeltes i en trykk-koker
ved maksimalt 45°C. Den aktive ingrediens siktes gjennom en 200 /xm sikt og tilsettes til den smeltede basis under omrø-ring, under anvendelse av en hurtigomrører, inntel en glatt dispersjon oppnås. Idet man holder blandingen ved 45°C,
tilsettes det resterende hårde fett til suspensjonen, og det røres for å sikre en homogen blanding. Hele suspensjonen las passere gjennom en 250 fira. rustfri stålsikt og,
under kontinuerlig omrøring, får den avkjøles til 40°C. Ved en temperatur på 38°C til 40°C, fylles 2,02 g av blandingen i egnede, 2 ml plastformer. Suppositoriene får avkjøles til værelsestemperatur.
Eksempel 10
Biologisk aktivitet
Antiviral aktivitet
Den antivirale aktivitet av forbindelsene fra eksempel 2 ble bestemt mot tre stammer av HIV-1 og en stamme av HIV-2 i følgende cellelinjer: JM-celler, en semi-moden T-cell-linje avledet fra en pasi-ent med lymfoblastisk leukemi, infisert med HIV-l-stamme GB8.
C8166-celler, en human T-lymfoblastoisk cellelinje, infisert med HIV-l-stamme RF.
MT-4-celler, en human T-celle leukemi-cellelinje, infisert med HIV-l-stamme RF
CEM-celler, en human T-lymfoblastisk cellelinje, infisert med HIV-l-stammer RF og U455, eller HIV-2-stamme ROD.
Antivirale aktiviteter i C8166, JM, og CEM-celler ble bestemt ved hemning av syncytium-dannelse (Tochikura et al, Virology, 164, 542-546) og i MT-4-celler ved hemning av formazanomdannelse (Baba et al; (1987) Biochem Biophys Res Commun., 142, 128-134; Mossman (1983) J. Immun. Meth.; 65, 55-57). Antivirale aktiviteter ble også bestemt ved å analysere mengden av HIV p24-antigen syntetisert i nærvær og fravær av enantiomerer.
Resultatene vises i nedenstående tabeller 1 og 2.
B- cytotoksisitet
Cytotoksisitetene av forbindelsene fra eksempel 2, den racemiske forbindelse (BCH-189; eksempel 1) og en 50/50-blanding av de to enantiomerer ble bestemt i fem CD4-cellelinjer: H9, JM, CEM, C8166 og U937.
Forbindelser for testen ble fortynnet i serie fra 100 /xg/ml til 0,3 jug/ml (sluttkonsentrasjoner) i 96 brønnmikro-titerplater. 3,6xl0<4> celler ble inokkulert i hver brønn i platene, inklusive medikamentfrie kontrollceller. Etter inkubasjon ved 3 7°C i 5 dager, ble de levende celletall bestemt ved å fjerne en prøve av cellesuspensjon og telle trypea-blått-ekskluderende celler i et hemocytometer.
Resultatene vises i tabell 3.

Claims (1)

  1. Analogifremgangsmåte ved fremstilling av den terapeutisk aktive (-)-enantiomeren, eventuelt inneholdende en liten mengde av (+)-enantiomeren, av cis-4-amino-l-(2-hydroksymetyl-l , 3-oksatiolan-5-yl)-(1H)-pyrimidin-2-on eller et farmasøytisk akseptabelt derivat derav,karakterisert veda) å separere (-)-enantiomeren fra en blanding inneholdende (+)- og (-)-enantiomerene av cis-4-amino-l-(2-hydroksymetyl-l,3-oksatiolan-5-yl)-(1H)-pyrimidin-2-on eller et farmasøytisk akseptabelt derivat derav, hvor separeringen utføres ved chiral HPLC eller ved enzym-frem-kalt enantioselektiv katabolisme, b) for fremstilling av en blanding av (-)-enantiomeren av cis-4-amino-l-(2-hydroksymetyl-l,3-oksatiolan-5-yl)-(1H)-pyrimidin-2-on eller et farmasøytisk akseptabelt derivat derav og (+)-enantiomeren av cis-4-amino-l-(2-hydroksymetyl-l, 3-oksatiolan-5-yl) - (1H) -pyrimidin-2-on eller et farmasøytisk akseptabelt derivat derav, hvor (+)-enantiomeren er tilstede i mengder som ikke overskrider 5 vekt%, å separere blandingen fra en første blanding inneholdende (+)- og (-)-enantiomerene av cis-4-amino-l-(2-hydroksymetyl-1,3-oksatiolan-5-yl)-(1H) -pyrimidin-2-on eller et farmasøytisk akseptabelt derivat derav, hvor separeringen utføres ved chiral HPLC eller ved enzyme-frem-kalt enantioselektiv katabolisme.
NO920018A 1990-05-02 1992-01-02 Analogifremgangsmåte ved fremstilling av aktive 1,3-oksatiolannukleosidanaloger NO180377B (no)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB909009861A GB9009861D0 (en) 1990-05-02 1990-05-02 Chemical compounds
PCT/GB1991/000706 WO1991017159A1 (en) 1990-05-02 1991-05-02 1,3-oxathiolane nucleoside analogues

Publications (3)

Publication Number Publication Date
NO920018L NO920018L (no) 1992-01-02
NO920018D0 NO920018D0 (no) 1992-01-02
NO180377B true NO180377B (no) 1996-12-30

Family

ID=10675345

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO920018A NO180377B (no) 1990-05-02 1992-01-02 Analogifremgangsmåte ved fremstilling av aktive 1,3-oksatiolannukleosidanaloger

Country Status (35)

Country Link
US (3) US6180639B1 (no)
EP (2) EP0625150A1 (no)
JP (3) JP2927546B2 (no)
KR (1) KR960007532B1 (no)
CN (3) CN1036196C (no)
AP (1) AP182A (no)
BG (1) BG60679B1 (no)
CA (2) CA2059263C (no)
CZ (1) CZ288499B6 (no)
EG (1) EG19958A (no)
FI (1) FI111722B (no)
GB (1) GB9009861D0 (no)
GE (1) GEP19991705B (no)
HK (1) HK1043940B (no)
HU (2) HUT64335A (no)
IE (1) IE911482A1 (no)
IL (1) IL98025A (no)
MA (1) MA22144A1 (no)
MD (1) MD809C2 (no)
MY (1) MY109796A (no)
NO (1) NO180377B (no)
NZ (1) NZ238017A (no)
OA (1) OA09559A (no)
PL (1) PL167682B1 (no)
PT (1) PT97520B (no)
RO (1) RO112616B1 (no)
RU (1) RU2099338C1 (no)
SG (1) SG46383A1 (no)
SK (1) SK283430B6 (no)
TN (1) TNSN91029A1 (no)
TW (2) TW366346B (no)
UA (1) UA40589C2 (no)
WO (1) WO1991017159A1 (no)
YU (1) YU78291A (no)
ZA (1) ZA913293B (no)

Families Citing this family (82)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7119202B1 (en) 1989-02-08 2006-10-10 Glaxo Wellcome Inc. Substituted-1,3-oxathiolanes and substituted-1,3-dioxolanes with antiviral properties
US5466806A (en) * 1989-02-08 1995-11-14 Biochem Pharma Inc. Processes for preparing substituted 1,3-oxathiolanes with antiviral properties
US6175008B1 (en) 1988-04-11 2001-01-16 Biochem Pharma Inc. Processes for preparing substituted 1,3-oxathiolanes with antiviral properties
PT674634E (pt) * 1989-02-08 2003-09-30 Iaf Biochem Int Processos para preparar 1,3-oxatiolanos substituidos com propriedades antivirais
US5914331A (en) * 1990-02-01 1999-06-22 Emory University Antiviral activity and resolution of 2-hydroxymethyl-5-(5-fluorocytosin-1-yl)-1,3-oxathiolane
US5204466A (en) * 1990-02-01 1993-04-20 Emory University Method and compositions for the synthesis of bch-189 and related compounds
US6069252A (en) * 1990-02-01 2000-05-30 Emory University Method of resolution and antiviral activity of 1,3-oxathiolane nucleoside enantiomers
US6703396B1 (en) 1990-02-01 2004-03-09 Emory University Method of resolution and antiviral activity of 1,3-oxathiolane nuclesoside enantiomers
US5276151A (en) * 1990-02-01 1994-01-04 Emory University Method of synthesis of 1,3-dioxolane nucleosides
US5925643A (en) * 1990-12-05 1999-07-20 Emory University Enantiomerically pure β-D-dioxolane-nucleosides
US5444063A (en) * 1990-12-05 1995-08-22 Emory University Enantiomerically pure β-D-dioxolane nucleosides with selective anti-Hepatitis B virus activity
IL100502A (en) * 1991-01-03 1995-12-08 Iaf Biochem Int PHARMACEUTICAL PREPARATIONS CONTAINING CIS-4-AMINO-1-) 2-HYDROXIMETHIL-1,3-OXETYOLEN-5-IL (-
US5817667A (en) * 1991-04-17 1998-10-06 University Of Georgia Research Foudation Compounds and methods for the treatment of cancer
DK0513917T4 (da) * 1991-05-16 2001-06-25 Glaxo Group Ltd Antivirale kombinationer indeholdende nukleosidanaloger
GB9110874D0 (en) * 1991-05-20 1991-07-10 Iaf Biochem Int Medicaments
ZA923641B (en) * 1991-05-21 1993-02-24 Iaf Biochem Int Processes for the diastereoselective synthesis of nucleosides
GB9111902D0 (en) * 1991-06-03 1991-07-24 Glaxo Group Ltd Chemical compounds
GB9116601D0 (en) * 1991-08-01 1991-09-18 Iaf Biochem Int 1,3-oxathiolane nucleoside analogues
US6177435B1 (en) 1992-05-13 2001-01-23 Glaxo Wellcome Inc. Therapeutic combinations
GB9215178D0 (en) * 1992-07-16 1992-08-26 Glaxo Group Ltd Antiviral combinations
GB9215176D0 (en) * 1992-07-16 1992-08-26 Glaxo Group Ltd Antiviral combinations
GB9226927D0 (en) * 1992-12-24 1993-02-17 Iaf Biochem Int Dideoxy nucleoside analogues
GB9311709D0 (en) * 1993-06-07 1993-07-21 Iaf Biochem Int Stereoselective synthesis of nucleoside analogues using bicycle intermediate
US20020120130A1 (en) 1993-09-10 2002-08-29 Gilles Gosselin 2' or 3' -deoxy and 2', 3' -dideoxy-beta-L-pentofuranonucleo-side compounds, method of preparation and application in therapy, especially as anti- viral agents
US5587362A (en) * 1994-01-28 1996-12-24 Univ. Of Ga Research Foundation L-nucleosides
IL113432A (en) * 1994-04-23 2000-11-21 Glaxo Group Ltd Process for the diastereoselective synthesis of nucleoside analogues
IL115156A (en) 1994-09-06 2000-07-16 Univ Georgia Pharmaceutical compositions for the treatment of cancer comprising 1-(2-hydroxymethyl-1,3-dioxolan-4-yl) cytosines
US5703058A (en) * 1995-01-27 1997-12-30 Emory University Compositions containing 5-fluoro-2',3'-didehydro-2',3'-dideoxycytidine or a mono-, di-, or triphosphate thereof and a second antiviral agent
US6391859B1 (en) 1995-01-27 2002-05-21 Emory University [5-Carboxamido or 5-fluoro]-[2′,3′-unsaturated or 3′-modified]-pyrimidine nucleosides
US5808040A (en) * 1995-01-30 1998-09-15 Yale University L-nucleosides incorporated into polymeric structure for stabilization of oligonucleotides
MY115461A (en) * 1995-03-30 2003-06-30 Wellcome Found Synergistic combinations of zidovudine, 1592u89 and 3tc
AU722214B2 (en) 1995-06-07 2000-07-27 Centre National De La Recherche Scientifique (Cnrs) Nucleosides with anti-hepatitis B virus activity
GB9605293D0 (en) * 1996-03-13 1996-05-15 Glaxo Group Ltd Medicaments
NZ333099A (en) 1996-06-25 2000-06-23 Glaxo Group Ltd synergistic combinations comprising 141W94, zidovudine and 3TC for use in the treatment of HIV
US5753789A (en) * 1996-07-26 1998-05-19 Yale University Oligonucleotides containing L-nucleosides
US6113920A (en) * 1996-10-31 2000-09-05 Glaxo Wellcome Inc. Pharmaceutical compositions
IT1290447B1 (it) * 1997-03-28 1998-12-03 Zambon Spa Derivati 1,3-ossatiolanici ad attivita' antivirale
RU2439069C2 (ru) 1998-08-12 2012-01-10 Гайлид Сайенсиз, Инк. Способ получения 1,3-оксатиолановых нуклеозидов
US6979561B1 (en) 1998-10-09 2005-12-27 Gilead Sciences, Inc. Non-homogeneous systems for the resolution of enantiomeric mixtures
ATE287268T1 (de) 1998-11-02 2005-02-15 Gilead Sciences Inc Kombinationstherapie zur behandlung von hepatitis b infektionen
JP2002533470A (ja) 1998-12-23 2002-10-08 シャイアー・バイオケム・インコーポレイテッド 抗ウイルス性ヌクレオシド類似体
GB9909154D0 (en) * 1999-04-22 1999-06-16 Nippon Glaxo Limited Pharmaceutical formulation
US6432966B2 (en) 1999-10-29 2002-08-13 Smithkline Beecham Corporation Antiviral combinations
US6436948B1 (en) 2000-03-03 2002-08-20 University Of Georgia Research Foundation Inc. Method for the treatment of psoriasis and genital warts
CA2690137C (en) 2001-03-01 2012-11-13 Gilead Sciences, Inc. Polymorphic and other crystalline forms of cis-ftc
US6720000B2 (en) * 2001-03-19 2004-04-13 Three Rivers Pharmaceutical, Llc Process for producing wet ribavirin pellets
US6649607B2 (en) 2001-05-18 2003-11-18 Vela Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for treating or preventing convulsions or seizures
US6600044B2 (en) 2001-06-18 2003-07-29 Brantford Chemicals Inc. Process for recovery of the desired cis-1,3-oxathiolane nucleosides from their undesired trans-isomers
CN1585631A (zh) * 2001-11-02 2005-02-23 桑多斯公司 制备快速溶解的高填量利巴韦林组合物的方法
US7538094B2 (en) * 2002-09-19 2009-05-26 Three Rivers Pharmacueticals, Llc Composition containing ribavirin and use thereof
CA2505130C (en) * 2002-11-08 2009-10-06 Glaxo Group Limited Pharmaceutical compositions
ATE398455T1 (de) 2003-01-14 2008-07-15 Gilead Sciences Inc Zusammensetzungen und verfahren zur antiviralen kombinationstherapie
FR2855822B1 (fr) * 2003-06-05 2005-07-22 Univ Grenoble 1 Acides nucleiques en tant que nouveaux selecteurs chiraux specifiques
GB0317009D0 (en) 2003-07-21 2003-08-27 Univ Cardiff Chemical compounds
TWI471145B (zh) 2005-06-13 2015-02-01 Bristol Myers Squibb & Gilead Sciences Llc 單一式藥學劑量型
TWI375560B (en) 2005-06-13 2012-11-01 Gilead Sciences Inc Composition comprising dry granulated emtricitabine and tenofovir df and method for making the same
LV13544B (en) 2005-08-15 2007-05-20 Grindeks As Pharmaceutical composition containing reverse transcriptase inhibitor and meldonium
CN100360528C (zh) * 2005-08-31 2008-01-09 四川大学 4-氨基-1-(2-羟甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基)-2(1h)-嘧啶酮的制备方法
JP5184511B2 (ja) 2006-04-18 2013-04-17 ルピン・リミテッド 新しい結晶形態のラミブジン
US20100196273A1 (en) * 2007-02-12 2010-08-05 Board Of Regents, University Of Texas System Novel agent for in vivo pet imaging of tumor proliferation
BRPI0823520A2 (pt) 2007-06-12 2013-12-17 Concert Pharmaceuticals Inc Composto derivado de azapeptídeos e composição farmacêutica contendo o mesmo
WO2009069011A1 (en) 2007-11-29 2009-06-04 Ranbaxy Laboratories Limited Process for the preparation of substituted 1,3-oxathiolanes
EP2222311B1 (en) * 2007-12-20 2013-03-27 N.V. Nutricia Liquid nucleotides/nucleosides-containing product
EP2318398A4 (en) 2008-09-01 2011-12-07 Hetero Research Foundation PROCESS FOR PREPARING A POLYMORPHIC FORM OF LAMIVUDIN
SG172363A1 (en) 2008-12-23 2011-07-28 Pharmasset Inc Synthesis of purine nucleosides
CL2009002207A1 (es) 2008-12-23 2011-02-18 Gilead Pharmasset Llc Compuestos derivados de 3-hidroxi-5-(9h-purin-9-il)tetrahidrofuran-2-il, inhibidor de la replicacion de arn viral dependiente de arn; composicion farmaceutica; uso para el tratamiento de hepatitis c.
WO2010075517A2 (en) 2008-12-23 2010-07-01 Pharmasset, Inc. Nucleoside analogs
WO2010082128A1 (en) 2009-01-19 2010-07-22 Aurobindo Pharma Limited Process for the preparation of cis-nucleoside derivative
KR20170078868A (ko) 2010-01-27 2017-07-07 비이브 헬쓰케어 컴퍼니 항바이러스 치료
CA2789078A1 (en) 2010-02-12 2011-08-18 Merck Sharp & Dohme Corp. Preparation of lamivudine form i
CN102167696B (zh) 2010-02-25 2013-09-18 南京正大天晴制药有限公司 拉米夫定草酸盐及其制备方法
AP3515A (en) 2010-03-31 2016-01-11 Gilead Pharmasset Llc Nucleoside phosphoramidates
CN102234269B (zh) * 2010-04-29 2015-09-16 重庆医药工业研究院有限责任公司 拉米夫定的工业化制备方法
US20130115237A1 (en) 2010-06-09 2013-05-09 Vaccine Technologies, Incorporated Therapeutic immunization in hiv infected subjects to augment antiretroviral treatment
CN103209987B (zh) 2010-09-22 2017-06-06 艾丽奥斯生物制药有限公司 取代的核苷酸类似物
WO2013142124A1 (en) 2012-03-21 2013-09-26 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Solid forms of a thiophosphoramidate nucleotide prodrug
US9012427B2 (en) 2012-03-22 2015-04-21 Alios Biopharma, Inc. Pharmaceutical combinations comprising a thionucleotide analog
WO2013168066A1 (en) 2012-05-05 2013-11-14 Lupin Limited An improved process for the manufacture of lamivudine form i.
US9227990B2 (en) 2012-10-29 2016-01-05 Cipla Limited Antiviral phosphonate analogues and process for preparation thereof
CN103315963A (zh) * 2013-06-21 2013-09-25 北京阜康仁生物制药科技有限公司 一种稳定的拉米夫定颗粒剂
US11116737B1 (en) 2020-04-10 2021-09-14 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Methods of using probenecid for treatment of coronavirus infections
US20230218644A1 (en) 2020-04-16 2023-07-13 Som Innovation Biotech, S.A. Compounds for use in the treatment of viral infections by respiratory syndrome-related coronavirus

Family Cites Families (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4211773A (en) * 1978-10-02 1980-07-08 Sloan Kettering Institute For Cancer Research 5-Substituted 1-(2'-Deoxy-2'-substituted-β-D-arabinofuranosyl)pyrimidine nucleosides
JPS5668674A (en) 1979-11-08 1981-06-09 Shionogi & Co Ltd 5-fluorouracil derivative
IT1212737B (it) * 1983-05-06 1989-11-30 Daniele Gatti Derivati pirimidinici ad azione antivirale.
NZ216172A (en) * 1985-05-15 1989-08-29 Wellcome Found Nucleosides and pharmaceutical compositions
DE3529263A1 (de) 1985-08-16 1987-02-19 Hoechst Ag Verfahren zur herstellung von 2-oxo-1,3-dioxolanen
CA1327000C (en) 1987-08-07 1994-02-15 David L.J. Tyrrell Antiviral therapy for hepatitis b
US4997926A (en) 1987-11-18 1991-03-05 Scripps Clinic And Research Foundation Deaminase-stable anti-retroviral 2-halo-2',3'-dideoxy
US5047407A (en) 1989-02-08 1991-09-10 Iaf Biochem International, Inc. 2-substituted-5-substituted-1,3-oxathiolanes with antiviral properties
US5466806A (en) * 1989-02-08 1995-11-14 Biochem Pharma Inc. Processes for preparing substituted 1,3-oxathiolanes with antiviral properties
NZ228645A (en) * 1988-04-11 1991-09-25 Iaf Biochem Int 1,3-dioxolane derivatives substituted in the 5th position by a purine or pyrimidine radical; treatment of viral infections
GB8815265D0 (en) 1988-06-27 1988-08-03 Wellcome Found Therapeutic nucleosides
DE3827134A1 (de) 1988-08-10 1990-03-15 Bayer Ag Substituierte triazolyl- bzw. imidazolyl-hydroxyalkyldioxolane, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung als mikrobizide, oxiranyldioxolane, dioxolanylketone, oxiranylketone und (alpha)-halogenketone als zwischenprodukte und verfahren zu deren herstellung
NZ233197A (en) 1989-04-13 1991-11-26 Richard Thomas Walker Aromatically substituted nucleotide derivatives, intermediates therefor and pharmaceutical compositions
DE69033252T2 (de) 1989-06-27 1999-12-09 The Wellcome Foundation Ltd., Greenford Therapeutische nukleoside
IE902574A1 (en) 1989-07-17 1991-02-27 Univ Birmingham Antiviral pyrimidine nucleosides
IE74701B1 (en) 1989-10-04 1997-07-30 Univ Birmingham Further antiviral pyrimidine nucleosides
US5039567A (en) 1989-12-04 1991-08-13 Supracor Systems, Inc. Resilient panel having anisotropic flexing characteristics and method of making same
US5204466A (en) * 1990-02-01 1993-04-20 Emory University Method and compositions for the synthesis of bch-189 and related compounds
DK0513917T4 (da) 1991-05-16 2001-06-25 Glaxo Group Ltd Antivirale kombinationer indeholdende nukleosidanaloger
US5869461A (en) 1995-03-16 1999-02-09 Yale University Reducing toxicity of L-nucleosides with D-nucleosides

Also Published As

Publication number Publication date
JP2927546B2 (ja) 1999-07-28
SK283430B6 (sk) 2003-07-01
IL98025A0 (en) 1992-06-21
RO112616B1 (ro) 1997-11-28
CN1326743A (zh) 2001-12-19
MY109796A (en) 1997-07-30
NO920018L (no) 1992-01-02
NO920018D0 (no) 1992-01-02
WO1991017159A1 (en) 1991-11-14
US6180639B1 (en) 2001-01-30
TNSN91029A1 (fr) 1992-10-25
EP1062950A3 (en) 2003-05-02
KR960007532B1 (ko) 1996-06-05
EP0625150A1 (en) 1994-11-23
SG46383A1 (en) 1998-02-20
EG19958A (en) 1996-10-31
MD809C2 (ro) 1998-07-31
AP182A (en) 1992-06-30
GB9009861D0 (en) 1990-06-27
HU210803A9 (en) 1995-07-28
AU7771991A (en) 1991-11-27
PL293181A1 (no) 1993-02-08
RU2099338C1 (ru) 1997-12-20
ZA913293B (en) 1992-02-26
CA2337748A1 (en) 1991-11-14
CZ288499B6 (en) 2001-06-13
TWI222448B (en) 2004-10-21
HK1043940B (zh) 2005-03-24
US20030004175A1 (en) 2003-01-02
IE911482A1 (en) 1991-11-06
PL167682B1 (pl) 1995-10-31
HU9200302D0 (en) 1992-04-28
CN1108655A (zh) 1995-09-20
PT97520A (pt) 1992-01-31
BG95705A (bg) 1993-12-24
CS125191A3 (en) 1992-01-15
CN1058214A (zh) 1992-01-29
JP2000128787A (ja) 2000-05-09
FI111722B (fi) 2003-09-15
CA2059263C (en) 2001-04-10
HK1043940A1 (en) 2002-10-04
AP9100255A0 (en) 1991-07-31
MD809B2 (en) 1997-08-31
YU78291A (sh) 1994-06-10
MA22144A1 (fr) 1991-12-31
HUT64335A (en) 1993-12-28
CN1056145C (zh) 2000-09-06
UA40589C2 (uk) 2001-08-15
BG60679B1 (bg) 1995-12-29
NZ238017A (en) 1994-06-27
KR920702682A (ko) 1992-10-06
JPH1180153A (ja) 1999-03-26
CN1036196C (zh) 1997-10-22
GEP19991705B (en) 1999-08-05
OA09559A (fr) 1993-01-31
PT97520B (pt) 1998-08-31
TW366346B (en) 1999-08-11
IL98025A (en) 1996-10-16
JPH05501117A (ja) 1993-03-04
JP3062475B2 (ja) 2000-07-10
CN1154500C (zh) 2004-06-23
FI916165A0 (fi) 1991-12-30
US20050250950A1 (en) 2005-11-10
CA2059263A1 (en) 1991-11-03
EP1062950A2 (en) 2000-12-27
AU651345B2 (en) 1994-07-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
NO180377B (no) Analogifremgangsmåte ved fremstilling av aktive 1,3-oksatiolannukleosidanaloger
CA2682254C (en) 1,3-oxathiolane nucleoside analogues
CA2070230C (en) Crystalline oxathiolane derivatives
NO301690B1 (no) Farmasöytisk kombinasjonspreparat med antiviral virkning
AU651345C (en) 1,3-oxathiolane nucleoside analogues
FI111723B (fi) Menetelmä valmistaa cis-4-amino-1-(2-hydroksimetyyli-1,3-oksatiolan-5- yyli)-(1H)-pyrimidin-2-onin (-)enantiomeeriä käytettäväksi virustenvastaisena aineena
SI9110782A (sl) 1,3-oksatiolanski nukleozidni analogi

Legal Events

Date Code Title Description
FC2A Withdrawal, rejection or dismissal of laid open patent application