NO170692B - Monoklonale antistoffer mot atriale, natriuretiske peptider fra mennesker - Google Patents
Monoklonale antistoffer mot atriale, natriuretiske peptider fra mennesker Download PDFInfo
- Publication number
- NO170692B NO170692B NO860804A NO860804A NO170692B NO 170692 B NO170692 B NO 170692B NO 860804 A NO860804 A NO 860804A NO 860804 A NO860804 A NO 860804A NO 170692 B NO170692 B NO 170692B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- monoclonal antibodies
- anp
- natriuretic peptides
- antibodies
- atrial
- Prior art date
Links
- 230000001746 atrial effect Effects 0.000 title claims description 6
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title description 8
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title description 8
- NSQLIUXCMFBZME-MPVJKSABSA-N carperitide Chemical class C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=CC=C1 NSQLIUXCMFBZME-MPVJKSABSA-N 0.000 claims abstract description 50
- 102000002723 Atrial Natriuretic Factor Human genes 0.000 claims abstract description 49
- 101800001288 Atrial natriuretic factor Proteins 0.000 claims abstract description 49
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims abstract description 23
- 241000700159 Rattus Species 0.000 claims abstract description 17
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims abstract description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 14
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 claims description 11
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 9
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 claims description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 7
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 7
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 6
- 108020001621 Natriuretic Peptide Proteins 0.000 claims description 6
- 102000004571 Natriuretic peptide Human genes 0.000 claims description 6
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 claims description 6
- 239000000692 natriuretic peptide Substances 0.000 claims description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 6
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 claims description 5
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 claims description 4
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 claims description 4
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 claims description 4
- 230000002792 vascular Effects 0.000 claims description 4
- -1 "y-MSH Chemical compound 0.000 claims description 3
- PQSUYGKTWSAVDQ-ZVIOFETBSA-N Aldosterone Chemical compound C([C@@]1([C@@H](C(=O)CO)CC[C@H]1[C@@H]1CC2)C=O)[C@H](O)[C@@H]1[C@]1(C)C2=CC(=O)CC1 PQSUYGKTWSAVDQ-ZVIOFETBSA-N 0.000 claims description 3
- PQSUYGKTWSAVDQ-UHFFFAOYSA-N Aldosterone Natural products C1CC2C3CCC(C(=O)CO)C3(C=O)CC(O)C2C2(C)C1=CC(=O)CC2 PQSUYGKTWSAVDQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- GXBMIBRIOWHPDT-UHFFFAOYSA-N Vasopressin Natural products N1C(=O)C(CC=2C=C(O)C=CC=2)NC(=O)C(N)CSSCC(C(=O)N2C(CCC2)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(=O)NCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C1CC1=CC=CC=C1 GXBMIBRIOWHPDT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 108010004977 Vasopressins Proteins 0.000 claims description 3
- 102000002852 Vasopressins Human genes 0.000 claims description 3
- 229960002478 aldosterone Drugs 0.000 claims description 3
- KBZOIRJILGZLEJ-LGYYRGKSSA-N argipressin Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N1)=O)N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)NCC(N)=O)C1=CC=CC=C1 KBZOIRJILGZLEJ-LGYYRGKSSA-N 0.000 claims description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 3
- 229960003726 vasopressin Drugs 0.000 claims description 3
- 102400000345 Angiotensin-2 Human genes 0.000 claims description 2
- 101800000733 Angiotensin-2 Proteins 0.000 claims description 2
- 102400000967 Bradykinin Human genes 0.000 claims description 2
- 101800004538 Bradykinin Proteins 0.000 claims description 2
- 239000000055 Corticotropin-Releasing Hormone Substances 0.000 claims description 2
- QXZGBUJJYSLZLT-UHFFFAOYSA-N H-Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-Pro-Phe-Arg-OH Natural products NC(N)=NCCCC(N)C(=O)N1CCCC1C(=O)N1C(C(=O)NCC(=O)NC(CC=2C=CC=CC=2)C(=O)NC(CO)C(=O)N2C(CCC2)C(=O)NC(CC=2C=CC=CC=2)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(O)=O)CCC1 QXZGBUJJYSLZLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 claims description 2
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 claims description 2
- 102400000243 Leu-enkephalin Human genes 0.000 claims description 2
- 108010022337 Leucine Enkephalin Proteins 0.000 claims description 2
- 102100028255 Renin Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000783 Renin Proteins 0.000 claims description 2
- 229950006323 angiotensin ii Drugs 0.000 claims description 2
- QXZGBUJJYSLZLT-FDISYFBBSA-N bradykinin Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)CCC1 QXZGBUJJYSLZLT-FDISYFBBSA-N 0.000 claims description 2
- IDLFZVILOHSSID-OVLDLUHVSA-N corticotropin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO)C1=CC=C(O)C=C1 IDLFZVILOHSSID-OVLDLUHVSA-N 0.000 claims description 2
- 229960000258 corticotropin Drugs 0.000 claims description 2
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 claims description 2
- URLZCHNOLZSCCA-UHFFFAOYSA-N leu-enkephalin Chemical compound C=1C=C(O)C=CC=1CC(N)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)NC(C(=O)NC(CC(C)C)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 URLZCHNOLZSCCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- CWWARWOPSKGELM-SARDKLJWSA-N methyl (2s)-2-[[(2s)-2-[[2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-5-amino-2-[[(2s)-5-amino-2-[[(2s)-1-[(2s)-6-amino-2-[[(2s)-1-[(2s)-2-amino-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]hexanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5 Chemical compound C([C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)OC)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N)C1=CC=CC=C1 CWWARWOPSKGELM-SARDKLJWSA-N 0.000 claims description 2
- CZGUSIXMZVURDU-JZXHSEFVSA-N Ile(5)-angiotensin II Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C([O-])=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=[NH2+])NC(=O)[C@@H]([NH3+])CC([O-])=O)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 CZGUSIXMZVURDU-JZXHSEFVSA-N 0.000 claims 1
- 238000011160 research Methods 0.000 abstract description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 abstract description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 40
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 21
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 21
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 21
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 16
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 16
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 15
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 15
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 12
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 10
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 10
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 10
- 102400001275 Atriopeptin-2 Human genes 0.000 description 9
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 9
- 108010034703 atrial natriuretic factor prohormone (103-125) Proteins 0.000 description 9
- XXPVSJGWOXCVLF-VSJANKAZSA-N atriopeptin ii Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)CN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)=O)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)C1=CC=CC=C1 XXPVSJGWOXCVLF-VSJANKAZSA-N 0.000 description 9
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 9
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 8
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 8
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 7
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 7
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 7
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 7
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 7
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 7
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 6
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 6
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 6
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 6
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 5
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 5
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 5
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 4
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 4
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 4
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101500027325 Homo sapiens Atrial natriuretic peptide Proteins 0.000 description 3
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000008485 antagonism Effects 0.000 description 3
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 3
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 3
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 3
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 3
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LPXQRXLUHJKZIE-UHFFFAOYSA-N 8-azaguanine Chemical compound NC1=NC(O)=C2NN=NC2=N1 LPXQRXLUHJKZIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960005508 8-azaguanine Drugs 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012983 Dulbecco’s minimal essential medium Substances 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N Histamine Chemical compound NCCC1=CN=CN1 NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- 241000577979 Peromyscus spicilegus Species 0.000 description 2
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 2
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 2
- 229950008486 carperitide Drugs 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 2
- 238000000151 deposition Methods 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- LNEPOXFFQSENCJ-UHFFFAOYSA-N haloperidol Chemical compound C1CC(O)(C=2C=CC(Cl)=CC=2)CCN1CCCC(=O)C1=CC=C(F)C=C1 LNEPOXFFQSENCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- CGIGDMFJXJATDK-UHFFFAOYSA-N indomethacin Chemical compound CC1=C(CC(O)=O)C2=CC(OC)=CC=C2N1C(=O)C1=CC=C(Cl)C=C1 CGIGDMFJXJATDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 2
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 2
- 108010045069 keyhole-limpet hemocyanin Proteins 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- XUWHAWMETYGRKB-UHFFFAOYSA-N piperidin-2-one Chemical compound O=C1CCCCN1 XUWHAWMETYGRKB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- XOJVVFBFDXDTEG-UHFFFAOYSA-N pristane Chemical compound CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C XOJVVFBFDXDTEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000700 radioactive tracer Substances 0.000 description 2
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 2
- QZAYGJVTTNCVMB-UHFFFAOYSA-N serotonin Chemical compound C1=C(O)C=C2C(CCN)=CNC2=C1 QZAYGJVTTNCVMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- SFLSHLFXELFNJZ-QMMMGPOBSA-N (-)-norepinephrine Chemical compound NC[C@H](O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 SFLSHLFXELFNJZ-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- CUKWUWBLQQDQAC-VEQWQPCFSA-N (3s)-3-amino-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s,3s)-1-[[(2s)-1-[(2s)-2-[[(1s)-1-carboxyethyl]carbamoyl]pyrrolidin-1-yl]-3-(1h-imidazol-5-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-methyl-1-ox Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 CUKWUWBLQQDQAC-VEQWQPCFSA-N 0.000 description 1
- TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 4-aminofolic acid Chemical compound C1=NC2=NC(N)=NC(N)=C2N=C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 208000009304 Acute Kidney Injury Diseases 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 108010064733 Angiotensins Proteins 0.000 description 1
- 102000015427 Angiotensins Human genes 0.000 description 1
- 206010003210 Arteriosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 101800001890 Atrial natriuretic peptide Proteins 0.000 description 1
- 208000037157 Azotemia Diseases 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 206010019280 Heart failures Diseases 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- 208000001953 Hypotension Diseases 0.000 description 1
- 102000018251 Hypoxanthine Phosphoribosyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 108010091358 Hypoxanthine Phosphoribosyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 102000001399 Kallikrein Human genes 0.000 description 1
- 108060005987 Kallikrein Proteins 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 1
- 101500027368 Rattus norvegicus Atriopeptin-2 Proteins 0.000 description 1
- 208000033626 Renal failure acute Diseases 0.000 description 1
- 201000011040 acute kidney failure Diseases 0.000 description 1
- 208000012998 acute renal failure Diseases 0.000 description 1
- 229960003896 aminopterin Drugs 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 108010082685 antiarrhythmic peptide Proteins 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 208000011775 arteriosclerosis disease Diseases 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 239000012131 assay buffer Substances 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000004531 blood pressure lowering effect Effects 0.000 description 1
- 238000009530 blood pressure measurement Methods 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000001364 causal effect Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000003610 charcoal Substances 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 208000020832 chronic kidney disease Diseases 0.000 description 1
- 208000022831 chronic renal failure syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 description 1
- 230000037029 cross reaction Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 229960001760 dimethyl sulfoxide Drugs 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 1
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011067 equilibration Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 210000000416 exudates and transudate Anatomy 0.000 description 1
- 210000001105 femoral artery Anatomy 0.000 description 1
- 238000012818 gel-diffusion assay Methods 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003878 haloperidol Drugs 0.000 description 1
- 210000002837 heart atrium Anatomy 0.000 description 1
- 208000019622 heart disease Diseases 0.000 description 1
- 229960001340 histamine Drugs 0.000 description 1
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000036543 hypotension Effects 0.000 description 1
- 229960000905 indomethacin Drugs 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 210000004731 jugular vein Anatomy 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 230000001452 natriuretic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960002748 norepinephrine Drugs 0.000 description 1
- SFLSHLFXELFNJZ-UHFFFAOYSA-N norepinephrine Natural products NCC(O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 SFLSHLFXELFNJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002113 octoxynol Polymers 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000004963 pathophysiological condition Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 229920002523 polyethylene Glycol 1000 Polymers 0.000 description 1
- 230000012495 positive regulation of renal sodium excretion Effects 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 150000003180 prostaglandins Chemical class 0.000 description 1
- 108010094135 rat atrial natriuretic peptide Proteins 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000033764 rhythmic process Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 229940076279 serotonin Drugs 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229960004906 thiomersal Drugs 0.000 description 1
- 208000009852 uremia Diseases 0.000 description 1
- 230000002227 vasoactive effect Effects 0.000 description 1
- 229940124549 vasodilator Drugs 0.000 description 1
- 239000003071 vasodilator agent Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 210000003368 zona glomerulosa Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
- C12N5/12—Fused cells, e.g. hybridomas
- C12N5/16—Animal cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/26—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against hormones ; against hormone releasing or inhibiting factors
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/806—Antigenic peptides or proteins
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Oppfinnelsen vedrører generelt nye piperidon-cellelinjer i spesielle hybridom-cellelinjer, som produserer monoklonale antistoffer (mAK) med spesfisitet for atriale, natriuretiske peptider (ANP), spesielt de fra mennesker og rotter, og anvendelsen av på denne måte produsert mAK som diagnostikum og for forskningsformål in vitro.
Fusjonen av musemyelomceller med miltceller fra immuniserte mus (Kohler og Milstein, Nature 256, 495-497 (1975)) var den første henvisning til muligheten å få kontinuerlige cellelinjer som produserer enhetlige (såkalte "monoklonale") antistoffer. Siden er det foretatt tallrike forsøk for å fremstille forskjellige hybridceller (såkalte "hybridomer")
og å anvende antistoffer som dannes av dem på forskjellige vitenskapelige undersøkelser (f. eks.: Current Topics in Microbiology and Immunology, vol. 81-"Lymphocyte Hybridomas", F. Melchers et al., Springer Verlag 1978, samt referanser deri, C. Barnstable et al., Cell 14, 9-20 (1978), P-Parhan, W.F. Bodmer, Nature 276, 397-399, Handbook of Experimental Immunology, 3. opplag bind 2, D.M. Vier, utgiver Blackwell 1978, Kapitel 25, Chem. Eng. News, 15-17, (1979) 9). Disse arbeider omtaler den prinsipielle teknikk til produksjon av monoklonale antistoffer ved hjelp av hybridomer.
Monoklonale antistoffer mot histokompatibilitetsantigener mot haptener, proteiner og enzymer er frembragt. Det er imidlertid ikke kjent noen monoklonale antistoffer som høyselektivt reagerer med atriale, natriuretiske peptider fra pattedyr som eksempelvis fra mennesker eller rotter.
Ved de atriale natriuretiske peptider dreier det seg om en gruppe med forskjellig kjedelengde, hvis minimalvirksomme sekvens består av 23 aminosyrer. Peptider som i tillegg inneholder N-terminalt og C-terminalt ytterligere aminosyrer, er likeledes virksomme. Peptidene oppstår ved enzymatisk innvirkning i hjerteforgården fra et forløpermolekyl på omtrent 152 aminosyrer. Det for ANP kodende gen er klonet og DNA sekvensert.
ANP induserer en kortvarig, sterk natriurese, idet det idag ikke kunne påvises noen nøyaktig tubulær angrepspunkt av stoffene. I tillegg er ANP potente vasodilatorer, som blant annet kan antagonisere påvirkningen av noradrenalin, angiotensin II, histamin og serotonin. Virkningen av ANP oppheves ikke ved hjelp av indometacin, hvilket usannsynliggjør en virkning over den endogene prostaglandinsyntesen. Blodtrykks-senkende virkninger av ANP er omtalt i two-clip hypertone rotter og SH-rotter.
På isolerte celler kunne det påvises en inhiberende virkning på aldosteron- og vasopressin-sekresjonen. Under anvendelse av konvensjonelle antistoffer lar det seg måle radioimmunologisk plasmaspeil av ANP som er avhengig av volumtilstanden av det respektive forsøksdyr. Med 125 jod-merket ANP-derivat lar det seg påvise spesifikk binding til isolerte zona glomerulosa-celler. Første eksperimenter tyder på en.fri-gjøring av kallikrein i nyrene ved hjelp av ANP. Under be-stemte betingelser kan peptidenes nyrevirkning oppheves ved forbehandling med haloperidol (Sagnella og MacGregor, Nature 399, 666-668, 1984). Virkningsspektrum av ANP gjør en kausal eller symptomatisk deltagelse av disse peptider meget sann-synlig ved kretsløpssykdommer (Hypertonie, Hypotonie, Arte-riosklerose) , ved hjertesykdommer (akutt og kronisk hjerte-insuffisiens, hjerteinfarkt, hjerterytmeforstyrrelser, coro-nar hjertesykdom) og ved nyresykdommer, (akutt og kronisk nyresvikt i løpet av forskjellige grunnsykdommer, uremie). Ved alle nevnte sykdomsbilder vil derfor kvantitativ bestemmelse av ANP i forskjellige biologiske kroppsvæsker (f. eks. blod, plasma, serum, urin, lymfe eller i cerebrospinal væske) tilkomme en stor betydning.
De med vanlig antisera målte plasmaspeil av ANP er under tiden meget høy, hvilket kan forklares ved kryssaktiviteten resp. manglende spesifitet av disse antistoffer. Faren ved bestemmel-sen av falske høye plasmaspeil i atriale natriuretiske peptider, lar seg utelukke ved anvendelsen av høyspesifikke (monoklonale) antistoffer. Dermed ville slike antistoffer ideelt være egnet for diagnostikk av alle sykdommer med endret ANP-speil.
Foreliggende oppfinnelse vedrører monoklonale antistoffer mot atriale, natriuretiske peptider fra pattedyr for anvendelse in vitro kjennetegnet ved at de ikke har noen kryssreaktivitet med andre mediatorer med karinnvirkning, henholdsvis med virkning på salt-vann-balansen.
Oppfinnelsen vedrører videre at mediatorene er angiotensin
II, Leu-enkefalin, substans P, aldosteron, ACTH, bradykinin, "Y-MSH, insulin, vasopressin og renin.
De monoklonale antistoffene ifølge oppfinnelsen er videre kjennetegnet ved at de er mot atriale, natriuretiske peptider fra rotter eller fra mennesker. Oppfinnelsen vedrører videre hybridomcellelinjer som syntetiserer og sezernerer monoklonale antistoffer mot atriale natriuretiske peptider fra pattedyr, spesielt mot de fra mennesker eller rotter. De fremstilles etter den innledningsvis nevnte metode av Kohler og Milstein. Etter immunisering av mus med en immunogen bærer som f.eks. protein bundet atrialt natriuretisk peptider, fusjoneres miltcellene fra disse mus med celler av en musmyelom-cellelinje. De derav resulterende piperidoner undersøkes systematisk på antistoffer som reagerer selektivt med de atriale natriuretiske peptider. På denne måte ble det isolert hybridomer som produserer antistoffer mot atriale natriuretiske peptider.
Hybridomer ble deponert under deponeringsnummer 850314/1 (hybridom-cellelinje som produserer mAK 11A-A11) og 850314/2 (hybridom-celielinje som produserer mAK 23 M-D9) ved European Collection of Animal Cell Cultures, PHLS, Center for Applied Microbiology and Research, Porton Down, Salisbury, SP4 OJG,
UK.
Foreliggende oppfinnelse vedrører følgelig også hybridom-cellelinjer med deponerings-nr. 850314/1 og 850314/2, som er kjennetegnet ved at de produserer de ovennevnte, monoklonale antistoffene. Antistoffene ifølge oppfinnelsen kan f.eks. anvendes til bestemmelse av speilet av atriale, natriuretiske peptider i biologiske væsker, som f.eks. blod, plasma, serum, urin, lymfe eller i cerebro-spinale væsker. Antistoffene ifølge oppfinnelsen er egnet spesielt godt for fremstilling av immunoassays. De kan imidlertid også anvendes til isolering av atriale natriuretiske peptider ved hjelp av immunadsorpsj onskromatografi.
For forskning av betydningen av ANP under forskjellige fysiologiske og patofysiologiske betingelser, er dyreeksperi-mentelle undersøkelser ubetinget nødvendige. Forutsetningen for disse arbeider, og for alle arbeider til farmakologien av ANP, er spesifikke og sensible prøver til kvantitativ bestemmelse i kroppsvæsker.
Antistoffer ifølge oppfinnelsen kan f.eks. anvendes in vitro for bestemmelse av atriale, natriuretiske peptider i biologiske væsker eller i blod, plasma, serum, urin, lymfe eller i den cerebro-spinale væsken.
Antistoffene kan også anvendes in vitro for fremstilling av immunanalyser og for isolering av atriale, natriuretiske peptider ved hjelp av immunadsorpsjonskromatografi. For fysiologiske og farmakologiske eksperimenter er antistoffene ifølge oppfinnelsen også meget godt egnet.
Fremstillingen av hybridomene omfatter generelt følgende trinn: A) Immunisering av pattedyr med immunogene bærere, spesielt immunogent bæreprotein (f.eks. Keyhole Limpet Hemocyanin) bundet atrialt natriuretisk peptid som eksempelvis fra mennesker eller rotter (KLH-ANP). Hunn Balb/c-mus egner seg hertil som brukbare, imidlertid kan det også anvendes andre musestammer. Immuniseringsskjerna og konsentrasjonen KLH-ANP bør velges således at det dannes et tilstrekkelig antall antigenstimulerte lymfocytter. Tre immuniseringer i avstander på 14 dager med 100 pg KLH-ANP/mus ved injeksjon i fosfatbufferet fysiologisk kokesalt-oppløsning viser seg effektiv. B) Utvinning av milten fra immuniserte pattedyr (f.eks.
mus), og fremstilling av en miltcellesuspensjon i et egnet medium. Omtrent 1 ml medium/milt er tilstrekkelig. De eksperimentelle teknikker hertil er kj ent. C) Fusjon av de suspenderte miltceller med myelomceller fra en egnet cellelinje (f. eks. musmyelom PX63Ag(), idet man anvender en egnet fusjonspromotor. (f. eks. polyetylenglykol). Foretrukkede fusjonspromotorer er polyetylen-glykoler av midlere molekylvekt mellom 1000 og 4000
(f. eks. kommersielt oppnåelig PEG 1000 etc). Imidler-til kan det også anvendes andre kjente fusjonspromotorer. Foretrukket er et forhold på ca. 10 miltceller/myelomceller. Et samlet volum på ca. 0,5 - 1,0 ml fUSjons-medium er tilstrekkelig for 10 ok miltceller. Det er kjent og oppnåelig mange myelomcelle fra mus, f. eks. fra vitenskapelige institutter eller celledeponeringsinstitusjoner. Den anvendte cellelinje skal fortrinnsvis ha en genetisk effekt således at ikke-fusjonerte myelomceller dør
i et seleksjonsmedium, mens hybrider overlever. Hyppigst benyttes 8-azaguanin-resistente cellelinjer som mangler enzymet hypoxantin-, guanin- fosforibosyl-transferase,
og som derfor ikke er voksedyktig i et HAT-medium, (hypoxantin, aminoperin, tymidin), (science 143:709, 1964). Fotrinnsvis bør de anvendte myelomcellelinjer også være
av "non-secreting"-typen for at de ikke selv danner antistoffer eller H- resp. L-kjeder av immunglobuliner. I visse tilfeller kan imidlertid sezernerende myelomceller være av fordel.
D) Fusjonsblandingen (milt- og myelomceller) fortynnes og kultiveres i enkeltkar i et selektivt medium således at de ikke fusjonerte celler ikke formerer seg og dør i løpet av 1-2 uker. De enkelte fusjonerte celler isoleres, idet fortynningsmidlets volum innstilles således at et bestemt tall celler (ca. 1-4) kommer i det enkelte kar (f. eks. hver fordypning av mikrotiterplaten). E) Undersøkelser på nærvær av antistoffer hos atriale natriuretiske peptider i hvert kar. F) Seleksjon (f. eks. ved limiterende fortynning) og kloning av hybridomene som produserer de ønskede antistoffer.
Er engang de ønskede hybridomene selektert og klonet kan man produsere antistoffene på to forskjellige måter. Monoklonale antistoffer av meget høy renhet får man når man kultiverer hybridomene i et egnet medium over en viss tid, og utvinner antistoffer fra det overstående. Et egnet medium på den opti-male kulturvarighet er enkelt å bestemme. Denne in-vitro-teknikk gir monoklonale antistoffer som bare er forurenset med små mengder av proteiner fra det heterologiske serum (f. eks. føtalt kalveserum).
For å fremstille en vesentlig høyere konsentrasjon av monoklonale antistoffer med bare litt mindre renhet, kan man inji-sere de utvalgte hybridomene i mus - fortrinnsvis en syngen eller semisyngen - intraperitonealt. Dette fører i musen etter en inkubasjonstid til dannelse av en tumor som frigjør høye antistoffkonsentrasjoner (5-20 mg/ml) i blodet og i det peri-toneale exsudat (Ascites) av vertsdyret. Når også disse mus har normale antistoffer i blod og i ascites, så er deres konsentrasjoner sammenlignet med mAK meget liten. De således " utvunnede monoklonale antistoffer har en høy titer (de. er aktive i fortynninger på 10 eller lavere), og forholdet mellom spesifikke og ikke-spesifikke immunglobulin utgjør ca. 20:1.
Eksempel 1
Fremstilling av monoklonale antistoffer mot atriale natriuretiske peptider fra mennesker og rotter.
Fremstilling av det til immunisering anvendte antigen.
Som antigen ble det anvendt et konjugat av humant a-ANP resp. atriopeptid II av rotte (firma Bachem) og Keyhole Limpet Hemocyanin (KLH, Pacific Biomarin Supply Comp.). Til fremstillingen KLH og humant a-ANP resp. atriopeptin II blandet i molart forhold på 1:1 og buffret fysiologisk ved en konsentrasjon på 2 mg/ml i fosfat. Kokesaltoppløsning blandet med glutaraldehyd. Sluttkonsentrasjonen av glutaraldehyd i reaksjonsblandingen utgjorde 0,25 %. Etter en times inkuba-sjon ved .værelsestemperatur ble proteinkonjugatene dialy-sert ved 4°C flere ganger mot fosfat buffret fysiologisk kokesaltoppløsning.
Immunisering av Balb/ c- mus.
Hunn-Balb/c-mus ble intraperitonealt immunisert med 100 yg/KLH-ANP-konjugat i 0,2 ml komplett Freudsk adjuvans. 14 dager senere fikk dyrene igjen 100 yg antigene intraperitonealt i inkomplett Freudsk adjuvans. To ytterligere immuniseringer foregår intravenøst i 14 dagers avstander med resp. 5 0 yg antigen i 100 yg fosfatbuffer kokesaltoppløsning/dyr. Tre dager etter siste antigeninngivning ble milten fjernet fra dyrene.
Preparering av en miltcellesuspensjon.
Fra de uttatte milt ble det fremstilt enkeltsuspensjoner i-det organene ble presset gjennom en sikt av rustfritt stål. Cellene ble overført i Dulbeccos Minimal Essential Medium (DMED), som var supplementert med 4,5 g/l glukose, 100 en-heter/ml penicillin og 100 yg/ml streptomycin. Cellene ble vasket tre ganger med DMEF og deretter resuspendert i ønsket konsentrasjon i samme medium. Vanligvis utvinnes ca. 10 Q celler/ milt.
Preparering av myelomceller.
De her anvendte myelomcellelinje X63Ag8.653 er et subklon av musemyelomcellelinje P3-X63-Ag8, som ikke uttrykker tunge eller lette kjeder av immunglobeliner. (J. of Imm. 123:1543-1550 (1980)). Cellene er sensitive ovenfor 20 yg/ml 8-azaguanin og kan ikke vokse i medier som inneholder hypoxantin, aminoperin og tymidin (HAT). De ble kultivert i DMEM som var supplementert med 4,5 g/l glykose, 2 0 mM gluta-min, 1000 enheter/ml penicillin, 100 yg strepotmycin, og 10 % føtal kalveserum (komplett medium). Myelomcellene var ved fusjoneringstidspunktet i den logaritmiske fase av cellefor-meringen.
Cellefusjon.
Miltcellesuspensjonene ble satt til myelomcellene i DMEM
uten serum med et forhold på 10:1 og sentrifugert 10 minutter ved 200 g i begere med røntgen. Etter avsetning av cellene ble det overstående forsiktig dekantert. Cellene ble in-kubert med 2 ml av en oppløsning av polyetylenglykol av molekylvekt 200 0 (fortynnet til 30 % W/W med DMEM, pH 7,6) i 1 minutt ved 37°C. Deretter ble det tilsatt 20 ml DMEM, hvorpå cellene forsiktig ble resuspendert noen minutter. Det ble igjen sentrifugert 5 minutter ved 200 g og cellepelleten sus-pendert i HAT-medium i en konsentrasjon på o 10 6celler/ ml, hvorpå de ble fordelt i 1 ml deler på Costarplater.
Seleksjonering og dyrking av hybridomer.
Etter cellefusjonen ble cellene kultivert i HAT-medium (hypoxantin, aminopterin, tymidin) ved 37°C med 5 % C02 i en fuktig atmosfære. Etter noen uker ble overstående fra hybridomcellekulturene undersøkt på nærvær av anti-ANP-akti-vitet ved hjelp av tilsvarende enzymimmunoassays (se neden-for) .
De hybridomcellelinjer som viste positive resultater i anti-ANP-prøven ble valgt til kloning.
Derved ble hybridomene underkastet en "limiting-Dilution"-Teknikk hvor det i 96 mikrotiterfordypninger ble utsådd i gjennomsnittlig 0,5 celler/fordypning idet 10 musetymocyter/ fordypning ble tilsatt som "Feeder-celler". De etter denne kloningsfremgangsmåten ennå anti-ANP-antistoffene produserende celler ble formert, innfrosset og oppbevart i flytende nitro-gen i komplett medium som inneholdt 25 % føtalt kalveserum samt 7,5 % dimetylsulfoksyd.
Fremstilling av store mengder monoklonale antistoffer.
Klonede hybridomer ble injisert i mus som var blitt forbehandlet intraperitonealt ved intraperitoneal injeksjon, med 0,5 ml pristan for å kunne utvinne antistoff og Ascites-væske etter ca. 10-15 dager. Antistoffaktiviteten i Ascites-væsken ble bestemt i radioaktiv bindingsinhibitorprøve (se eksempel 3).
Bestemmelse av anti- ANP- aktiviteten i kulturoverstående.
100 ym kulturoverstående ble hatt på mikrotiterplater hvor-til det var absorbert konjugat av bovint serumalbumin og humant a-ANP resp. atriopeptin II av rotte (5 yg/ml) tre timer ved værelsestemperatur, og derpå var blitt vasket med vann fem ganger. Kanin-antimus-immunoglobin som var koblet med peroksydase ble derpå tilsatt, deretter ble platene inku-bert 2 timer ved værelsestemperatur. Etter fem gangers vask-
ing med destillert vann ble det tilsatt for enzymet egnet substratbuffer og konsentrasjonen av det dannede farvede pro-dukt ble bestemt med et egnet fotometer for mikrotiterplater.
Eksempel 2
Karakterisering av det monoklonale antistoff mot atriale, natriuretiske peptider.
Type- bestemmelse av det monoklonale antistoff .
Klassen og underklassen av det her omtalte monoklonale antistoff ble analysert. Antistoffet ble anriket fra det kulturoverstående ved felling med ammoniumsulfat (40 %-ig metning) og partielt renset. Under anvendelse av klassespesifikke antimus-immunglobulin-antisera, ble immunglobulin-klassen bestemt i Ouchterlony geldiffusjonsprøven. Det monoklonale antistoff 23M-D9 mot ANP fra mennesker fører til IgGj-klassen. Det monoklonale antistoff 11A-A11 mot atripeptin II hører likeledes til I G,-klassen,
g
Kryssreaksjon av antistoffer med forskjellige andre peptider.
Kryssaktiviteten av det monoklonale antistoff mot humant ANP med forskjellige andre peptider, ble fastslått ved hjelp av
en radioimmunologisk bindingsinhibisjonsprøve. Prøven gjenn-omføres i en spesiell assaybuffer (0,02 M natrium-fosfat,
0,15 M NaCl, 0,01 % tiomersal, 0,1 % gelatin, 0,01 % BSA og 0,1 % triton-X 100, pH 7,4). Radioaktivt merket <125>jod-a-125
human-ANP (aminosyre 1-28) fra mennesker resp. ' jod-atriopeptin II av rotte (Amersham Buchler) inkuberes sammen med antistoffer i egnet fortynning i 16-48 timer ved 4°C. Det samlede volum utgjør 500 yl. Ved binding-inhibisjonsprøven inneholder prøveblandingen ved samme volum i tillegg umerkede antigener resp. de forskjellige inhibitorer i forskjellig konsentrasjoner. Ved slutten av inkubasjonen adsorberes det ikke til antistoffer bundede, radioaktive merkete <125>jod-anti-
gen (human-a-ANP med aminosyrene 1-28 resp, atriopeptin II
fra rotte) etter tilsetning av en aktiv kullsuspensjon (0,02
M natriumfosfat, 2 % norit-A-aktivkull, 0,02 % dextran 60,
0,1 % BSA og inM Na^-EDTA, pH 7,4) og etterfølgende inkuba-sjon på 20 minutter på is til kulde. Deretter sedimenteres aktivkullet med sentrifugering i 10 minutter ved 3600 g, og radioaktiviteten bestemmes i det overstående. Målt ble konsentrasjonene av forskjellige peptider som er nødvendig for å fortrenge 50 % av <125->jod-antigenet fra antistoffer. Som det fremgår av fig. 1 og 2, reagerer antistoffene høyspesi-fikt med atriale peptider fra mennesker og rotte. Kryssreaktiviteten av andre til regulering av salt-vann-balansen deltagende mediatorer lar seg ikke påvise. Likeså uvirksomme var forskjellige vasoaktive stoffer (se tabell 1 og 2).
Eksempel 3
Anvendelse av det monoklonale antistoff mot atriale natriuretiske peptider.
Påvisning av ANP-immunreaktivitet i biologiske væsker og
vev med monoklonale antistoffer.
Antigener i høy fortynning lar seg bestemme kvantitativt
ved hjelp av radioimmunoassays. Det nødvendige for denne prøve er høyspesifikke antistoffer og et radioaktivt merket antigen. Bindingen av det radioaktivt merkete, antigen til antistoffer lar seg dosisavhenge inhibere av det ikke radioaktive antigen. Inkuberes definerte forskjellige konsentrasjoner av ikke radioaktivt antigen ved konstante konsentrasjoner av antistoffer, og radioaktivt merkete, antigener så lar det seg på denne måte oppstille en karakteristisk målekurve. Fig. 1 viser en slik målekurve, nemlig fortrengning
125
av det radioaktivt merkete antigen ( jod-human-a-ANP, aminosyrer 1-28) av mAK, 23M-D9 forskjellige atriopeptiner, resp. deres derivater. Derved ble bindingen av det radioaktive antigen til antistoffer oppført i % mot konsentrasjonen av ikke merket antigen, resp. dets fragmenter i fmol/ml. Her betyr
Prøven ble gjennomført med ascitesvæske i en sluttfortynning på 1:1500000 som omtalt i teksten. Prøven med kulturoverstående gir like resultater, bare er den anvendbare fortynning mindre rundt faktoren 500 til 1000. Dette eksperiment viser tydelig av ANP-fragment (aminosyrene 18-28) ikke er i stand til å fortrenge radioaktivt merkete antigener fra antistoffer. Antistoff har altså ingen kryssreaktivitet med dette fragment. Ukjente mengder antigener i oppløsning kan bestemmes ved hjelp av denne målingen. En radioimmunoassay baserende på det her omtalte monoklonale antistoff og <125>^od-human-a-ANP (aminosyren 1-28) som Tracer muliggjør påvisning i biologiske væsker og vevekstrakter inntil konsentrasjon på 20 pg/ml, hvilket omtrent tilsvarer en mengde på 6 fmol/ml (se fig. 1).
Fig. 2 viser likeledes gjennomført eksperiment med mAK 11A-All, som reagerer spesifikt med atriopeptin på rotte. Her betyr
Oppføringen er den samme som på fig. 1.
Prøven ble gjennomført med ascitesvæske i en sluttfortynning på 1:1250000 som omtalt i teksten. Prøven med kulturoverstående gir samme resultater, bare er den anvendbare fortynning mindre rundt faktoren 500 til 1000. Dette eksperiment viser tydelig at ANP-fragmentet (aminosyre 13-28) ikke er i stand til å fortrenge det radioaktive merkete antigen fra antistoffene. Antistoffene har altså ingen kryssreaktivitet med dette fragment. Ukjente mengder antigen i oppløs-ning kan bestemmes ved hjelp av denne målekurve. Et radioimmunoassay basert på det her omtalte monoklonale antistoff og <125>uod-atriopeptin III som Tracer muliggjør påvisningen i bioloigiske væsker og vevekstrakter inntil konsentrasjoner på 20 pg/ml, hvilket omtrent tilsvarer en mengde på 6 fmol/ml, (se fig. 2) .
Med de omtalte monoklonale antistoffer er det ved siden av den hver viste radioimmunologiske fremgangsmåten også gjennom-førbart andre former av immunoassay (f. eks. Elisa, Chemo-luminescens).
Eksempel 4
Antagonisering av in- vivo- effekten av atriopeptin j rotte.
Det ble anvendt hann Wistar-rotter (legemsvekt 240-270 g) som aften før forsøksdagen ble satt fastende men hadde fri til-gang av drikkevann. Preparering av forsøk foregikk i ina-cin-narkose (100 mg/lg i.p.). Etter trachetomie og injeksjon av 1 mg/kg atrolin i.p., ble det for blodtrykksmåling lagt et plastik-kateter i arteria femoralis til injeksjon resp. infusjon av oppløsninger innbundet et plastik-kateter i vena jugularis, samt lagt et blærekateter. Etter avslutning av prepareringen fikk rotten en injeksjon på 5 ml/kg 0,9 %-ig NaCl-oppløsning, og deretter for varigheten av et forsøk en infusjon av samme oppløsning (1,2 ml/timer). Fors-øksdyrenes rektaltemperatur ble ved varmestråle holdt på 37 - 1°C. Etter forløp av en 1 times equilibreringstid ble urinen samlet i ...på forhånd veide kar, som resp. ble vekslet etter 10 resp. 20 minutter. Konsentrasjonen av Na<+> og K+ i urinen ble bestemt flammefotometrisk (Instrumentation Labratory, Lexington, Mass. USA). Antistoff-væskes inneholdt i 1 ml
0,9 %-ig NaCl-oppløsning 100 yl sterilfiltrert ascitesoppløs-ning, og 0,1 % storfeserumalbumin. Syntetisk atriopeptin II
(Firma Bachem) ble likeledes injisert i en vandig oppløsning, ved 0,9 % NaCl og 0,1 % storfeserumalbumin. Injeksjonsvolum-ene utgjorde i alle tilfellene 1 ml/kg kroppsvekt. Forforsøk hadde vist at bolusinjeksjon av 1 ml/kg legemsvekt, 0,19 %-ig NaCl-oppløsning med 0,1 % storfeserumalbumin bare lite på-virker urinvolumet og natriumutskillelse. Etter forsøkenes avslutning ble det fra hver rotte tatt arteriell blodprøve til kontroll av syre-base-status. 10 ug/kg atriopeptin II fører i de første 10 minutter etter bolusinjeksjon til en sterk økning av urinvolumene og natriumutskillelse (se fig. 3 og 4). Denne økning slutter i de derpå følgende samleperioder hurtig, og lar seg etter 1 time ved fornyet dosisinjeksjon på 10 yg/kg legemsvekt ANP i.v. godt reprodusere. Ved bolusinjeksjonen av 100 yl/kg legemsvekt antistoffholdig ascitisvæske (antistoffer 11A-A11) 5 minutter for annen ANP-injeksjon lar økningen av urinvolum og natriumutskillelse seg omtrent fullstendig undertrykke. Fig. 3 og 4 viser resultatene i detalj. På ordinatene er det oppført samletiden (samleperiode) i minutter mot utskillelse av urin i yl/min (fig. 3a og 3b) resp. natriumutskillelse i ymol/min (fig. 4a og 4b). Fig. 3a: Urinvolum etter togangers bolusinjeksjon av 10 yg/kg
atriopeptin II (ANP), n = 4,
Fig. 3b: Antagonisering av effekten av 10 yg/kg atriopeptin II ved hjelp av mAK mot ANP: 5 minutter før annen injeksjon ANP ble det gitt en bolusinjeksjon av 100 yl/kg antistoff holdig ascitisvæske (AK), n = 4,
Fig. 4a: Natriumutskillelse etter to ganger bolusinjeks jon
av 10 yg/kg atriopeptin II (ANP) n = 4,
Fig. 4b: Antagonisering av effekten av 20 yg/kg atriopeptin II ved hjelp av mAK mot ANP: 5 minutter før annen injeksjon av ANP ble det gitt en bolusinjeksjon på 100 yl/kg antistoffholdig ascitisvæske (AK), n = 4.
Antistoffene antagoniserer altså den natriuretiske virkning av atriopeptin II in vivo.
Tabell 1
Undersøkelse av kryssreaktiviteten av mAK 23 M-D9 med andre endogene mediatorer med karvirkning resp. med virkning på salt-vannbalansen.
Tabell 2
Undersøkelse av kryssreaktivitet av mAK 11A-A11 med andre endogene mediatorer med karvirkningen resp. med virkning på salt-vann-balanse.
Claims (9)
1.
Monoklonale antistoffer mot atriale, natriuretiske peptider fra pattedyr, for anvendelse in vitro karakterisert ved at de ikke har noen kryssreaktivitet med andre mediatorer med karinnvirkning, henholdsvis med virkning på salt-vann-balansen.
2.
Monoklonale antistoffer ifølge krav 1, karakterisert ved at mediatorene er angiotensin II, Leu-enkefalin, substans P, aldosteron, ACTH, bradykinin, "y-MSH, insulin, vasopressin og renin.
3-
Monoklonale antistoffer ifølge krav 1 og 2, karakterisert ved at de er mot atriale,natriuretiske peptider fra rotte.
4.
Monoklonale antistoffer ifølge krav 1 og 2, karakterisert ved at de er mot ateriale, natriuretiske peptider fra mennesker.
5.
Hybridomcellelinjer, med deponeringsnr ECACC 850314/1 og 850314/2, karakterisert ved at de produserer monoklonale antistoffer ifølge kravene 1 til 4.
6.
Anvendelse av monoklonale antistoffer in vitro ifølge krav 1 til 4, for bestemmelse av atriale, natriuretiske peptider i biologiske væsker.
7.
Anvendelse av monoklonale antistoffer in vitro ifølge kravene 1 til 4, for bestemmelse av atriale, natriuretiske peptider i blod, plasma, serum, urin, lymfe eller i den cerebro-spinale væsken.
8.
Anvendelse av monoklonale antistoffer in vitro ifølge kravene 1 til 4, for fremstilling av immunanalyser.
9.
Anvendelse av monoklonale antistoffer in vitro ifølge krav 1 til 4, for isolering av atriale, natriuretiske peptider ved hjelp av immunadsorpsjonskromatografi.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19853509958 DE3509958A1 (de) | 1985-03-20 | 1985-03-20 | Monoklonale antikoerper gegen atriale, natriuretische peptide vom menschen |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO860804L NO860804L (no) | 1986-09-22 |
| NO170692B true NO170692B (no) | 1992-08-10 |
| NO170692C NO170692C (no) | 1992-11-18 |
Family
ID=6265723
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO860804A NO170692C (no) | 1985-03-20 | 1986-03-04 | Monoklonale antistoffer mot atriale, natriuretiske peptider fra mennesker |
Country Status (17)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5156977A (no) |
| EP (1) | EP0195331B1 (no) |
| JP (2) | JPH0648994B2 (no) |
| KR (1) | KR940010021B1 (no) |
| CN (1) | CN1017349B (no) |
| AT (1) | ATE75754T1 (no) |
| AU (1) | AU570838B2 (no) |
| CA (1) | CA1340391C (no) |
| DE (2) | DE3509958A1 (no) |
| DK (1) | DK165955C (no) |
| ES (1) | ES8801945A1 (no) |
| FI (1) | FI90988C (no) |
| GR (1) | GR860732B (no) |
| IL (1) | IL78172A (no) |
| NO (1) | NO170692C (no) |
| PT (1) | PT82215B (no) |
| ZA (1) | ZA862029B (no) |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA1335082C (en) * | 1987-09-01 | 1995-04-04 | Hiroo Imura | Monoclonal antibody recognizing -hanp and a reagent for immunoassay of -hanp |
| JP2724315B2 (ja) * | 1988-02-29 | 1998-03-09 | 塩野義製薬株式会社 | α−ＡＮＰを認識するモノクローナル抗体およびα−ＡＮＰの免疫学的測定法 |
| CA1339210C (en) * | 1988-05-31 | 1997-08-05 | John Lewicki | Recombinant techniques for production of novel natriuretic and vasodilator peptides |
| JP2561513B2 (ja) * | 1988-07-04 | 1996-12-11 | 塩野義製薬株式会社 | γ−ＡＮＰを認識するモノクローナル抗体 |
| JP2665850B2 (ja) * | 1991-11-14 | 1997-10-22 | 塩野義製薬株式会社 | ｈＢＮＰのＣ端を認識するモノクロ−ナル抗体 |
| AU2493499A (en) * | 1998-02-03 | 1999-08-16 | Trustees Of Columbia University In The City Of New York, The | Determination of the amount of hlhbeta core fragment in a sample from a subject and uses thereof |
| ATE403158T1 (de) * | 1999-01-29 | 2008-08-15 | Roche Diagnostics Gmbh | Verfahren zum nachweis von n-terminalem probnp |
| US6949282B2 (en) | 2000-07-07 | 2005-09-27 | Delphi Technologies, Inc. | Contoured crushable composite structural members and methods for making the same |
| WO2017218911A1 (en) | 2016-06-17 | 2017-12-21 | Abbott Laboratories | BIOMARKERS TO PREDICT NEW ONSET HEART FAILURE WITH PRESERVED EJECTION FRACTION (HFpEF) |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4376110A (en) * | 1980-08-04 | 1983-03-08 | Hybritech, Incorporated | Immunometric assays using monoclonal antibodies |
| US4451570A (en) * | 1981-03-26 | 1984-05-29 | The Regents Of The University Of California | Immunoglobulin-secreting human hybridomas from a cultured human lymphoblastoid cell line |
| US4659678A (en) * | 1982-09-29 | 1987-04-21 | Serono Diagnostics Limited | Immunoassay of antigens |
| JPH0794473B2 (ja) * | 1984-03-02 | 1995-10-11 | サントリー株式会社 | 新規なペプチド及びこれを有効成分とする利尿剤 |
| JPS60184098A (ja) * | 1984-03-02 | 1985-09-19 | Suntory Ltd | 新規なペプチド及びこれを有効成分とする利尿剤 |
| US4596769A (en) * | 1984-03-05 | 1986-06-24 | Temple University | Monoclonal antibodies to peptidoglycan and methods of preparing same |
| WO1985004870A1 (en) * | 1984-04-19 | 1985-11-07 | Biotechnology Research Partners, Ltd. | Novel atrial natriuretic/vasodilator polypeptides |
| US4666829A (en) * | 1985-05-15 | 1987-05-19 | University Of California | Polypeptide marker for Alzheimer's disease and its use for diagnosis |
-
1985
- 1985-03-20 DE DE19853509958 patent/DE3509958A1/de not_active Withdrawn
-
1986
- 1986-03-04 NO NO860804A patent/NO170692C/no not_active IP Right Cessation
- 1986-03-08 DE DE8686103100T patent/DE3685145D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1986-03-08 EP EP86103100A patent/EP0195331B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1986-03-08 AT AT86103100T patent/ATE75754T1/de not_active IP Right Cessation
- 1986-03-15 CN CN86101671A patent/CN1017349B/zh not_active Expired
- 1986-03-17 IL IL78172A patent/IL78172A/xx unknown
- 1986-03-18 AU AU54914/86A patent/AU570838B2/en not_active Expired
- 1986-03-18 PT PT82215A patent/PT82215B/pt not_active IP Right Cessation
- 1986-03-18 FI FI861128A patent/FI90988C/fi not_active IP Right Cessation
- 1986-03-18 CA CA000504379A patent/CA1340391C/en not_active Expired - Fee Related
- 1986-03-19 KR KR1019860002012A patent/KR940010021B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1986-03-19 GR GR860732A patent/GR860732B/el unknown
- 1986-03-19 ES ES553154A patent/ES8801945A1/es not_active Expired
- 1986-03-19 DK DK127686A patent/DK165955C/da not_active IP Right Cessation
- 1986-03-19 ZA ZA862029A patent/ZA862029B/xx unknown
- 1986-03-20 JP JP61061055A patent/JPH0648994B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1989
- 1989-03-14 US US07/323,527 patent/US5156977A/en not_active Expired - Lifetime
-
1994
- 1994-01-14 JP JP6014950A patent/JPH0746999B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK175655B1 (da) | Polypeptidanalog til en kryptisk hGPllb-determinant, monoklonal antistofsammensætning, antistofsammensætning, hybridom, diagnostisk system i form af et sæt, fremgangsmåde til dannelse af et monoklonalt antistof, fremgangsmåde til detektering..... | |
| US5036003A (en) | Antibodies to VPF | |
| AU672028B2 (en) | Peptides containing respective amino acid sequences selected from among those of lipoprotein(a) and apolipoprotein(a), antibodies respectively recognizing these amino acid sequences, and method of assaying with these antibodies | |
| DK165326B (da) | Monoklonale antistoffer mod humanrenin og derivater deraf samt fremgangsmaade til deres fremstilling, hybridoma-cellelinier samt fremgangsmaade til deres fremstilling, anvendelse af de monoklonale antistoffer og deres derivater samt testsaet indeholdende antistofferne og/eller deres derivater | |
| JPH05184384A (ja) | ｈＢＮＰのＣ端を認識するモノクロ−ナル抗体 | |
| NO170692B (no) | Monoklonale antistoffer mot atriale, natriuretiske peptider fra mennesker | |
| EP0580859A1 (en) | Anti-eda monoclonal antibody | |
| JPH02117699A (ja) | ユニークなエラスターゼ誘発フイブリノーゲン切断部位抗原 | |
| ES2304782T3 (es) | Anticuerpos monoclonales para determinacion inmunologica selectiva de formas de lamininas de alto peso molecular, intactas en fluidos corporales. | |
| WO1997023509A1 (fr) | ANTICORPS MONOCLONAL, ANTI COMPLEXE 'Xa . TFPI' ET SON UTILISATION | |
| CA1334076C (en) | Monoclonal antibody recognizing atrial natriuretic polypeptide | |
| DK175750B1 (da) | Monoklonale antistoffer, der genkender gamma-atrialt natriuretisk polypeptid, hybridomceller, der producerer sådanne antistoffer, og fremstilling og anvendelse deraf | |
| DK174151B1 (da) | Monoklonalt antistof, hybridoma og reagens til immunoanalyse af alfa-hANP | |
| JPH05304953A (ja) | 抗トロンビン結合性物質モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ | |
| CN118005798B (en) | Anti-vitamin K2Antibodies and uses thereof | |
| Dzau et al. | Monoclonal antibodies binding renal renin. | |
| WO1993001209A1 (en) | Proteins s polypeptides and uses thereof | |
| JP4037933B2 (ja) | 抗ヒトカルシトニンモノクローナル抗体 | |
| US5516643A (en) | Immunochemical assays for cancer-associated SCM-recognition factor | |
| JPH08157500A (ja) | Ｆａｓ抗原の定量法 | |
| NUSSBERGER et al. | A monoclonal antibody specific for the carboxy-terminus of angiotensin II | |
| JP2969647B2 (ja) | モノクローナル抗体、それからなる阻害剤及びそれを用いた測定方法 | |
| CN118005798A (zh) | 一种抗维生素k2抗体及其应用 | |
| Capiaumont et al. | Assay of a seric human hexapeptide (HWESAS) using a monoclonal antibody and ELISA | |
| JPH0387200A (ja) | モノクローナル抗体 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM1K | Lapsed by not paying the annual fees |