MXPA05003335A

MXPA05003335A - Compuestos de exendina-4 estabilizados.

Info

Publication number: MXPA05003335A
Application number: MXPA05003335A
Authority: MX
Inventors: Knott David
Original assignee: Zealand Pharma As
Priority date: 2002-10-02
Filing date: 2003-10-02
Publication date: 2005-07-05
Also published as: AU2003268621A1; RU2005113291A; NO20051585L; EP1546200A2; PL377591A1; RU2376314C2; AU2009201477A1; JP2006517908A; WO2004035623A3; AU2003268621B2; US7544657B2; KR20050083713A; ZA200502571B; WO2004035623A2; US20090208565A1; BR0314996A; US20060194719A1; CA2500295A1

Abstract

La presente invencion describe composiciones que comprende una Exendida-4 (1-39) estabilizada y compuestos relacionados. La invencion describe agonistas de Exendida-4 estabilizados que incluyen al menos un residuo de aminoacido modificado particularmente en las posiciones G1n13, Met14, Trp25, o Asn28 de la molecula de Exendida-4 (1-39). Se describen modificaciones preferidas de productos de reaccion desaminados, hidrolizados, oxidados, o isomerizados de los residuos de aminoacido especificos correspondientes a las mismas posiciones en la molecula de Exendida-4. la invencion tambien se refiere a metodos para hacer y usar los compuestos de Exendida estabilizados, tales como para el tratamiento de diabetes.

Description

i COMPUESTOS DE EXENDINA-4 ESTABILIZADOS CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a compuestos ce exendina-4 estabilizados y moléculas relacionadas. En un aspecto, la invención proporciona agonistas de exendina-4 estabilizados que incluyen al menos un residuo de aminoácido modificado particularmente en las posiciones Glni3, met!4, Trp25 o Asn28 de la molécula exendina-4 (1-39) . Las modificaciones preferidas son productos desaminados , hidrol i zados , oxidados, o isomerizados de reacción de los residuos de aminoácidos específicos que corresponden a las mismas posiciones en la molécula de exendina-4 (1-39) . También se proporcionan métodos para hacer y usar los compuestos de exendina estabilizados. La invención tiene amplio espectro de usos y proporciona compuestos de exendina-4 que tienen una mejor estabilidad cuando se comparan con las composiciones de exendina-4 previas. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Diversas hormonas que disminuyen ios niveles de glucosa en la sangre se liberan de la mucosa gastrointestinal en respuesta a la presencia y absorción de nutrientes en los intestinos. Estas incluyen gastnna, secretina, polipéptido insulinotrcf ice dependiente de la glucosa (GIP, por sus siglas en inglés) y péptido i de tipo glucagón (GLP-1) . La Ref . : 162781 sustancia más potente conocida es GLP-1 (0rskov, 1992, Diabetología 35:701-711) . El péptido 1 de tipo glucagón (GL? -1) es un producto del proglucagón, un péptido de 180 aminoácidos (Drucker, 1998, Diabetes 47:159-169) . La secuencia global del proglucagón contiene la secuencia de 29 aminoácidos del glucagón, la secuencia de 36 a 37 aminoácidos de GLP-1 y la secuencia de 34 aminoácidos del péptido 2 del tipo glucagón (GLP-2) un péptido intestinotróf ico . GLP-1 tiene diversas funciones. Es una hormona fisiológica que mejora el efecto en la secreción de insulina en humanos normales y es por lo tanto una hormona de la incretina. Además, el GLP-1 disminuye las concentraciones de glucagón, hace más lento el vaciado gástrico, estimula la biosíntesis de proinsulina y mejora la sensibilidad a la insulina (Nauck, 1997, Horm. Metab. Res. 47:1253-1258) . El péptido también mejora la capacidad de la células ß para registrar y responder a la glucosa en sujetos con tolerancia debilitada a la glucosa (Byrne, 1998, Eur . J. Clin. Invest. 28:72-78) . El efecto insul inotrópico de GLP-1 en los humanos incrementa la velocidad de desaparición de la glucosa parcialmente debido a niveles crecientes de insulina y parcialmente debido a la sensibilidad mejorada de la insulina (D'Alessio, 1994, Eur, J. Clin. Invest. 28:72-78) . Esto ha colocado a GLP-1 como un agente prometedor para el tratamiento de la diabetes tipo 2. Se han encontrado fragmentos activos de GLP-1 por ser GLP-1(7-36) y GLP-l(7-37) . Sin embargo, un problema farmacológico mayor con el GLP-1 nativo es su vida media corta. En los humanos y las ratas, el GLP-1 se degrada rápidamente por la dipeptidil peptidasa-IV dentro de GLP-1 (9-36) amida actuando como un antagonista del receptor endógeno GLP-1. Diversas estrategias que enfrentan este problema se han prepuesto, algunas usan inhibidores de DPP-IV y otras análogos resistentes a DPP-IV de GLP- 1 ( 7 - 36 ) amida . Las exendinas, otro grupo de péptidos que disminuye los niveles de glucosa en la sangre tienen algunas similitudes de secuencia (53%) con GLP-1 [7-36] NH2 (Goke et al., 1993, J. Biol . Chem. 268:19550-55) . Las exendinas se encuentran en el veneno de Helodermatidae o alojadas en lagartos. La exendina-3 está presente en el veneno de Heloderma horridum, el lagarto mexicano y la exendina-4 esta presente en el veneno de Heloderma suspectum, el monstruo de Gila. Exendina-4 difiere de exendma-3 en justamente en las posiciones 2 y 3. el ADNc que codifica la proteína precursora de exendina-4, un péptido ¦ de 47 aminoácidos fusionados a la terminación amino de exendina-4 se ha clonado y formado en secuencia (Pohl et al., 1998, J. Biol. Chem. 273:9778-9784 y W098 / 35033 ) . La exendina-4 es un agonista del receptor GLP-1 en células de msulinoma de rata aisladas (Goke et al., 1993, J. Biol. Chem. 268:19650-55). La exendina-4 al darse sistémicamente disminuye los niveles de glucosa en la sangre en un 40% en ratones diabéticos db/db (WO99/07404) . Recientemente, Grieg et al. (1999, Diabetología 42:45-50) han mostrado un efecto que disminuye la glucosa en la sangre de larga duración de una inyección intraperitoneal una vez al día de exendina-4 de ratones diabéticos ob/ob. La patente de EUA NO. 5,424,286 describe que una porción considerable de la secuencia en la terminal N es esencial con objeto de preservar la actividad insulinotrópica (exendina-481-31) y Y31-exendma-4 ( 1-31) ) mientras que una exendina truncada en la terminal N (exendina-4 (9-39) tiene propiedades inhibidoras. El uso de los agonistas exendina-3, exendina-4 y exendina se ha propuesto para el tratamiento de diabetes mellitus, la reducción de la movilidad gástrica y el retraso del vaciado gástrico y la prevención de la hiperglicemia (patente de EUA No. 5,424, 286, WO98/05351) así como para la reducción de la ingesta de alimento ( O98/30231) . Las formas de obtención de compuestos novedosos al modificar la secuencia nativas de exendina se han propuesto. Una forma es colocar los subst ituyentes lipofílicos a la molécula por ejemplo como se describen en WO 99/43708 que describe derivados de la exendina con justo un subst ituyente lipofílico colocado al residuo de aminoácidos en la terminal C. Un método importante ha sido vislumbrar análogos de exendina caracterizados por substituciones de aminoácidos y/o un truncamiento en la terminal C de la secuencia nativa de la exendina-4. Este método se representa por los compuestos de WO99/07404, W099/25727 y W099/25728. WO99/07404 describe agonistas de exendina que tienen una fórmula general 1 que define una secuencia de péptidos de 39 residuos de aminoácidos con Gly en las posiciones 4-5, Ser Lys Gim en las posiciones 11-13, Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu en las posiciones 15-21, Leu Lys Asn Gly Gly en las posiciones 26-30, Ser Gly Ala en las posiciones 32 -25 y en donde las posiciones restantes pueden ocuparse por residuos de aminoácidos de exendina de tipo silvestre o se pueden ocupar por substituciones específicas de aminoácidos. La fórmula 1 no cubre algunos agonistas o análogos de la exendina que tienen eliminaciones específicas de aminoácidos y/o que están conjugados como se describen en la presente tales como los compuestos novedosos desPro5£-exendina-4 (1-39) , exendina-4 (1-39) -K€ o desPro36 -exendina-4 ( 1 - 39 ) -Ke . WO 99/25727 describe agonistas de la exendina que tienen una fórmula general 1 que define una secuencia de péptidos de 28 hasta 38 residuos de aminoácidos con Gly en la posición 4y Ala en la posición 18 y en donde las posiciones restantes se pueden ocupar por residuos de aminoácidos de exendina de tipo silvestre o se pueden ocupar por substituciones específicas de aminoácidos. La fórmula 1 no comprende una secuencia de péptidos que tenga Ser como el aminoácido en la terminal C y agonistas o análogos de exendina que tengan eliminaciones específicas de aminoácidos y/o que sean conjugados como se describen en la presente tales como los compuestos novedosos desPro35-exendina-4 (1-39) , exendina- 4 ( 1 -39 ) - K6 o desPro36-exendina-4 (1-39) -Ké . Además, la fórmula 2 de WO 59/25727 define una secuencia de péptido similar a la fórmula 1 pero que incluye derivados de exendina que tengan un substituyente C ( 1 - 10 ) aicanoilo o cicloalquilalcanoilo en la lisina en la posición 27 o 28. Cuando se tratan niveles de glucosa en la sangre de post -prandiales inadecuados se administran frecuentemente los compuestos por ejemplo 1, 2 o 3 veces al día. La WO 99/25728 describe agonistas de la exendina que tienen una fórmula general 1 que define una secuencia de péptidos desde 28 hasta 39 residuos de aminoácidos con el Ala fijo en la posición 18 y en donde las posiciones restantes se pueden ocupar por residuos de aminoácidos de exendina de tipo silvestre o se pueden ocupar por substituciones especificadas de aminoácidos. Todos los agonistas de exendina corresponden a un análogo truncado de exendina que tiene un grado variable de substituciones de aminoácidos. La secuencia de péptidos desde 34 hasta 38 residuos de aminoácidos no tienen una terminal Ser-C. Una secuencia de péptidos de 39 residuos de aminoácidos, puede tener una terminal Ser o Tyr C pero ningunos residuos adicionales. Los agonistas o análogos de exendina que tienen eliminaciones específicas de aminoácidos y/o que son-conjugados de conformidad con la invención aquí descrita no están comprendidas por la fórmula 1. Además, la fórmula 2 define una secuencia de péptidos similar a la fórmula 1 pero que incluye derivados de exendina que tienen un subs í tuyente C ( 1 - 10) alcanoilo o cicloalquilalcanoilo en la lisina en la posición 27 ó 28. La O 99/46283 (publicada en 16.09.99) describe conjugados de péptidos que comprenden un péptido X farmacológicamente activo y una secuencia de péptido estabilizante Z de 4-20 residuos de aminoácidos enlazados covalentemente a X en donde los conjugados se caracterizan por tener una vida media incrementada comparada con la vida media de X.X que puede exendina-4 o exendina-3. Sería deseable tener composiciones de exendina que puedan suministrar una mejor estabilidad que los compuestos previos. Sería además deseable tener composiciones de exendina que puedan resistir la degradación. Tales composiciones serían especialmente útiles en entornos en donde tiempos de almacenamientos importantes se esperen y/o en donde haya un riesgo de oxidación indeseable, hidrólisis o reacciones de desaminación . BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere generalmente a compuestos estabilizados de exendina-4 y composiciones relacionadas. En un aspecto, la invención proporciona compuestos estabilizados de exendina particularmente agonistas de exendina-4 que incluyen al menos un residuo modificado de aminoácidos en las posiciones Glnl3, Metl4, Trp25 o Asn28 en la molécula exendina-4 (1-39) . También se suministran métodos de elaboración y uso estabilizadas de exendina-4. La invención tiene un amplio espectro de usos que incluyen suministrar composiciones de exendina-4 con una mejor estabilidad y propiedades de almacenamiento cuando se compara con las composiciones previas del exendina-4 y compuestos relacionados. Se ha descubierto que es posible estabilizar los compuestos de exendina-4 y composiciones relacionadas al modificar en ello aminoácidos particulares de exendina. Las modificaciones preferidas de conformidad con la invención son productos de reacción desaminados, hidrol i zados , oxidados o deisomeri zados de los residuos específicos de aminoácidos de la molécula de exendina-4 (1-39) . Tales compuestos se pueden hacer fácilmente por una o una combinación de técnicas estándar que incluyen exponer exendina-4 ( 1 - 39 ) a procedimientos de formulación farmacéuticamente aceptables, exponer la molécula a condiciones potencialmente reactivas tales como el contacto con agua, oxigeno, luz, calor o similares o proporcionar de otra manera condiciones que conduzcan a la degradación espontánea o semi -espontánea que aminoácidos que correspondan a al menos uno de Glnl3, Metl4, Trp25 o Asn28 de la molécula de exendina -4 ( 1 - 39 ) . La práctica de las modalidades preferidas de la invención proporciona ventajas substanciales. Por ejemplo, el uso de la invención puede suministrar compuestos estabilizados de exendina-4 que caractericen una actividad más confiable particularmente durante tiempos prolongados de almacenamiento. Tales moléculas estabilizadas de exendina-4 y composiciones relacionadas pueden ayudar en usos médicos que incluyen estudios clínicos y otros usos al suministrar una actividad agonista más reproducible y consistente. Esta característica de la invención es particularmente importante cuando se necesitan preparaciones (lotes) múltiples de exendina-4. Esto, es al estabilizar los compuestos de exendina-4 y moléculas relaciones de conformidad con la invención, es ahora posible mejorar la consistencia entre los lotes . Adicionalmente, el uso de la invención puede proporcionar ahora una dosificación más consistente de composiciones de exendina-4 y moléculas relacionadas. Esto es, los compuestos estabilizados de la invención son menos aptos para degradar y así pueden suministrar una actividad terapéuticamente más confiable. Esta característica de la invención es particularmente importante cuando es deseable producir exendina-4 y moléculas relacionadas que tengan una actividad relativamente consistente o una buena estabilidad en una escala moderada o mayor. Por la frase "compuesto de exendina-4 o molécula relacionada" incluyendo formas plurales significa exendina-4(1-39) o una variante análogo o derivado de la misma como se define en esta solicitud. Se ilustran exendina-4 ( 1 -39 ) y derivados de la misma que incluyen una eliminación de entre desde alrededor de 1 hasta alrededor de 5 aminoácidos que corresponden a las posiciones 34, 35, 36, 37 o 38 que la exendina-4. Opcionalmente tales derivados incluyen además al menos un péptido Z como se define en la presente. Tales compuestos o moléculas se estabilizan de acuerdo con la invención (por ejemplo un compuesto exendina-4 ( 1 - 39 ) estabilizado) al modificar al menos uno de los residuos de aminoácidos: Glnl3, Metl4, Trp25 o Asn28 de la molécula de exendina-4 (1-39) . Preferiblemente, 1 o 2 de tales aminoácidos se modifican como se discute aunque más se puede ajustarse para un uso pretendido. De esta manera en una modalidad la invención proporciona una compuesto que incluye al menos una exendina- ( 1 - 39 ) estabilizado preferiblemente 1, 2 o 3 de los mismos preferiblemente una de tales exendina - 4 ( 1 - 39 ) estabilizadas. En una modalidad, el compuesto incluye: a) una eliminación de 0 a 5 aminoácidos en las posiciones que corresponden a las posiciones de 34-38 de exendina-4 (1-39) . b) Opcionalmente al menos una secuencia del péptido Z que comprende de 4-20 unidades de aminoácidos enlazadas covalentemente al compuesto y al menos de los siguientes i) un residuo Asn que tiene una cadena lateral desaminada, un residuo Asn que tiene una cadena lateral hidrolizada, o un isómero estructural de un residuo Asp en donde el residuo Asn o Asp corresponde a la posición 28 de exendma-4, ii) un residuo de metionina oxidado que corresponde a la posición 14 de exendina-4, iii) un residuo de triptofano oxidado que corresponde a la posición 25 de exendina-4, iv) un Gln desarrimado o hidrolizado que corresponde a la posición 13 de exendina-4, y una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismc . En una modalidad el compuesto anterior, la exendina- 4 ( 1 -39) estabilizada incluye al menos un residuo de un L aminoácido o al menos un residuo de un D aminoácido. Alternativamente, el compuesto incluye combinaciones de residuos de L y D aminoácidos. En otro aspecto, la presente invención proporciona un compuesto que incluye al menos una exendina-4 ( 1 - 39 ) estabilizado preferiblemente 2, 3 o 4 de los mismos, más preferiblemente una de tales moléculas estabilizadas exendina - 4 ( 1 - 39 ) . En una modalidad, el compuesto incluye al menos uno de i) un residuo Asn que tiene una cadena lateral desaminada, un residuo Asn que tiene una cadena lateral hidrolizada o un isómero estructural de un residuo Asp en donde el residuo Asn o Asp corresponde a la posición 28 de exendina-4, ii) un residuo de metionina oxidado que corresponde a la posición 14 de exendina-4, iii) un residuo oxidado de triptofano que corresponde a la posición 25 de exendina-4, iv) un Gln desaminado o hidrolizado que corresponde a la posición 13 de exendina-4, y una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo . Se proporcionan además composiciones farmacéuticamente aceptables que incluyen al- menos 1, preferiblemente 2, 3 o 4 de las moléculas estabilizadas de exendina-4 ( 1 - 39) , más preferiblemente uno de tales compuestos. Se suministran a continuación ejemplos de tales composiciones. En otro aspecto, la invención proporciona un método de elaboración de una composición estabilizada de exendina-4 o molécula relacionada como se describe en la presente. En una modalidad, el método incluye al menos una de las siguientes etapas : a) obtener exendina-4 (1-39) o una variante, análogo o derivado del mismo y b) incubar la exendina-4 (1-39) o la variante, análogo o derivado del mismo bajo condiciones suficientes para introducir al menos uno de los siguientes análogos en el : i) un residuo Asn que tiene una cadena lateral desaminada, un residuo Asn que tiene una cadena lateral hidrolizada o un isómero estructural de un residuo Asp en donde el residuo Asn o Asp corresponde a la posición 28 de exendina-4, ii) un residuo de metionina oxidado que corresponde a la posición 14 de exendina-4, iii) un residuo de oxidado de triptofano que corresponde a la posición 25 de exendina-4, iv) un Gln desaminado o hidrolizado que corresponde a la posición 13 de exendina-4, y una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo . Se preferirá a menudo hacer las moléculas estabilizadas de exendina-4 de la invención sintéticamente o semi-sintéticamente . Un ejemplo de tal método se describe a continuación e incluye el uso de la técnica de síntesis de péptidos Merrifield En métodos particulares las modalidades anteriores incluyen además la etapa de detección de la presencia o ausencia de al menos uno de los aminoácidos (i)-(iv) . Alternativamente o además, el método puede incluir la identificación de al menos uno de los aminoácidos (i)-(iv) en la composición. Los métodos para la detección e identificación de los aminoácidos modificados se discuten a continuació . En otra modalidad, la invención caracteriza un método de elaboración del compuesto estabilizado de exendina-4 y moléculas relacionadas aquí descritas. Típicos de tales métodos incluyen al menos una de las siguientes etapas: a) obtener exendina- (1-39) o una variante, análogo o derivado del mismo, b) poner en contacto la exendina-4 (1-39) o la variante, análogo o derivado con al menos un portador farmacéu icamente aceptable o vehículo para producir una mezcla; y c) incubar la mezcla bajo condiciones suficientes para introducir al menos de los siguientes aminoácidos en ella: i) un residuo Asn que tiene una cadena lateral desaminada, un residuo Asn que tiene una cadena lateral hidrolizada o un isómero estructural de un residuo Asp en donde el residuo Asn o Asp corresponde a la posición 28 de exendina-4, ii) un residuo de metionina oxidado que corresponde a la posición 14 de exendina-4 , iii) un residuo oxidado de triptofano que corresponde a la posición 25 de exendina-4, iv) un Gln desaminado o hidrolizado que corresponde a la posición 13 de exendina-4, y una sal o solvato farmacéuticamente aceptables del mismo . Tal método puede incluir además la etapa de detectar la presencia o ausencia de al menos uno de los residuos de aminoácidos (i)-(iv) . Alternativamente o además, el método puede incluir e identificar al menos uno de los aminoácidos en la composición. En otro aspecto, la invención proporciona un método de estabilización de exendina-4 ( 1 - 39 ) o una variante, análogo o derivado del mismo. En una modalidad, el método incluye al menos una de las siguientes etapas: a) obtener exendina-4 (1-39) o una variante, análogo o derivado del mismo y b) incubar la exendina-4 (1-39) o la variante, análogo o derivado del mismo bajo condiciones suficientes para introducir al menos uno de los siguientes análogos en el : i) un residuo Asn que tiene una cadena lateral desanimada, un residuo Asn que tiene una cadena lateral hidrolizada o un isómero estructural de un residuo Asp en donde el residuo Asn o Asp corresponde a la posición 28 de exendina-4, ii) un residuo de metionina oxidado que corresponde a la posición 14 de exendina-4, iii) un residuo oxidado de triptofano que corresponde a la posición 25 de exendina-4, iv) un Gln desaminado o hidrol izado que corresponde a la posición 13 de exendina-4, y una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo. En otro aspecto, la invención proporciona un método para tratar la diabetes tipo 1 o tipo 2, síndrome de resistencia a la insulina, tolerancia disminuida a la glucosa (IGT) , obesidad, trastornos alimenticios, hipergl icemia , trastornos metabólicos y enfermedad gástrica. En una modalidad, el método incluye administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de al menos de uno de los compuestos estabilizados de exendina-4 o moléculas relacionadas aquí descritas. La invención también proporciona un método para el tratamiento de estados de enfermedad asociado con niveles elevados de glucosa en la sangre. En una modalidad el método, incluye administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de al menos de uno de los compuestos estabilizados de exendina-4 o moléculas relacionadas aquí descritas . También se proporciona un método para la regulación de los niveles de glucosa en la sangre. En una modalidad, el método incluye administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de al menos uno de los compuestos estabilizados de exendina-4 o moléculas relacionadas aquí descritas. La invención también proporciona un método para la regulación del vaciado gástrico. En una modalidad, el método incluye administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de al menos uno de los compuestos estabilizados de exendina-4 o moléculas relacionadas aquí proporcionadas. La presente invención también proporciona un método de estimulación de la liberación de insulina en un mamífero. En una modalidad, el método incluye administrar una cantidad efectiva insul inotrópica de al menos de uno de los compuestos estabilizados de exendina-4 aquí descritos. Se proporciona adicionalmente un método de disminución del nivel de glucosa en la sangre en un mamífero. En una modalidad, el método incluye administrar una cantidad de al menos uno de los compuestos estabilizados de exendina-4 o moléculas relacionadas aquí descritas en una cantidad efectiva para disminuir el nivel de glucosa en la sangre en el mamífero. La invención también proporciona un método de disminución de nivel de lípido en el plasma en un mamífero. En un ejemplo, el método incluye administrar una cantidad de al menos 1 de los compuestos estabilizados de exendina-4 aquí descritos en una cantidad efectiva para disminuir el nivel de lípidos en el plasma en el mamífero. También se proporciona un método de reducción de la mortalidad y la morbilidad después de un infarto al miocardio en una mamífero. En una modalidad, el método incluye administrar una cantidad de al menos uno de los compuestos estabilizados de exendina-4 aquí descritos en una cantidad efectiva para reducir la mortalidad y morbilidad después del infarto al miocardio. También se proporciona un método de estimulación de la liberación de insulina en una mamífero. En una modalidad, el método incluye administrar una cantidad efectiva insulinotrópica de al menos uno de los compuestos estabilizados de exendina-4 aquí proporcionados. Preferiblemente, el mamífero caracterizado en cada uno de los métodos anteriores es un primate, preferiblemente un paciente humano que necesita del tratamiento. BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La figura 1 muestra el efecto del compuesto 1 en la tolerancia a la glucosa en los ratones La figura 2 muestra el efecto del compuesto 14 en la tolerancia a la glucosa en los ratones La f igura 3 muestra el efecto del compuesto 6 en la tolerancia a la glucosa en los ratones La figura 4 muestra el efecto del compuesto 7 en la tolerancia a la glucosa en los ratones La f igura 5 muestra el efecto del compuesto 1 en la tolerancia a la glucosa en los ratones La f igura 6 muestra el efecto del compuesto 5 en la tolerancia a la glucosa en los ratones La f iqura 7 muestra el efecto del compuesto 2 en la tolerancia a la glucosa en los ratones La figura 8 detalla la influencia de los compuestos 1, 8, 9, 10 y 11 en los niveles de la glucosa en la sangre en ratones La figura 9 muestra las secuencias del compuesto 1 (des Pro" Exendina - 4 ( 1 - 39 ) - K6 ) y los compuestos estabilizados del compuesto 1, nominalmente el compuesto 2, 3, 4, 5, 6, 7, 11, 12, 13 y 14 así como los compuestos estabilizados de exendina - 4 ( 1 - 39 ) , nominalmente los compuestos 8, 9 y 10. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Como se dijo anteriormente, la invención proporciona agonistas de exendina estabilizados que incluyen al menos un residuo de aminoácido modificado particularmente en las posiciones Glnl3, Metl4, Trp25, o Asn28 de la molécula de Exendina-4 (1-39) . Las modificaciones preferidas son productos de reacción desaminados , hidrol i zados , oxidados, o isomerizados de los residuos de aminoácidos especificados de la molécula Exendina-4 (1-39) . También se proporcionan métodos para hacer y usar los compuestos de Exendina estabilizados . Los compuestos de Exendina-4 (1-39) estabilizados preferidos y sal farmacéuticamente aceptable del mismo incluyen : a) una eliminación de 0 hasta 5 aminoácidos en las posiciones que corresponden a las posiciones 34-38 de la Exendina-4, b) opcionalmente , al menos una secuencia Z de péptido que comprende 4-20 unidades de aminoácido covalentemente enlazado a la variante; y al menos uno de lo siguiente: i) un residuo Asn que tiene una cadena lateral desaminada, un residuo Asn que tiene una cadena lateral hidrolizada o un isómero estructural de un residuo Asp, en donde el residuo Asn o Asp corresponde a la posición 28 del Exendina-4, ii) un residuo de metionina oxidado que corresponde a la posición 14 del Exendina-4, iii) un residuo de triptofano oxidado que corresponde a la posición 25 de Exendina, iv) Gln desaminado o hidrolizado que corresponde a la posición 13 de la Exendina-4; y una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo. En una modalidad, el residuo Asn es un residuo de a- aspartato (Asp) o ß-aspartato ( isoaspartilo) o el residuo Asn es una imida cíclica. En otra modalidad el residuo de metionina oxidada es un sulfóxido de metioninilo o una sulfona de metioninilo. En modalidades en las cuales la imida cíclica se deriva a partir de un residuo Asp o Gln, el producto ciclizado es algunas veces referido en la presente como una aspartimida o glutimida, respectivamente. Alternativamente, o además, el residuo de triptofano oxidado incluye un grupo 3H- indol - 3 - il oxidado. Otros ejemplos incluyen un residuo de triptofano oxidado que es N-forrailcinurenina (NFK) , 3 -hidroxicinurenina (3-OH-KYN), hidroxitriptofano ÍHTRP) , o cinurenina (KYN) . En modalidades en las cuales el compuesto Exendina-4 estabilizado o la composiciones relacionada incluyen al menos un péptido Z y preferiblemente uno o dos del mismo, Z comprende al menos una unidad de aminoácido Lys, típicamente entre alrededor de 4 hasta alrededor de 20 unidades de aminoácido Lys, preferiblemente alrededor de 6 unidades de aminoácido Lys. En modalidades en las cuales el compuesto Exendina-4 estabilizado incluye un péptido Z, el péptido es enlazado covalentemente por un enlace de péptido. Para ilustrar, Z es de enlace covalente al compuesto de Exendina-4 (1-39) estabilizado, en la función de carbonilo de terminal C. Más particularmente compuestos de Exendina- 4 ( 1 - 39 ) estabilizados de conformidad con la invención son representados por las siguientes secuencias: des Pro36 [Asp28] exendina-4 (1-39) , des pro36 [isoAsp28] Exendina-4 (1-39) , des pro36 [ imida28 cíclica] Exendina-4 ( 1 - 39) , des pro36 [Met (0) 14] Exendina-4 (1-39) , des pro36 [Trp (02) 25] Exendina-4 (1-39) , des pro35 [Met (0) 14, Asp28] Exendina-4 ( 1 - 39 ) , des pro36 [Met (0) 1 , IsoAsp28] Exendina-4 (1-39) , des pro36 [Met (0) 14 , imida26 cíclica] Exendina-4 (1-39) , des pro36 [Met (0) 14 , Trp (02) 2S] Exendina-4 (1-39) , des pro35 [Met (O)14 Trp(02) 25, Asp28] Exendina-4 ( 1 - 39 ) , des pro36 [Met (O)14 Trp(02) 25 , IsoAsp28] Exendina - 4 ( 1 - 39 ) , des Pro36 [Met (O) 1 Trp(02) 25, imida28 cicl íca] exendina- 4 ( 1 - 39 ) , o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo. Con respecto a cualquiera de los compuestos de Exendina-4 (1-39) estabilizados -anteriores, los compuestos pueden también incluir un Gln desaminado o hidrolizado que corresponde a la posición 13 de la Exedina-4. En una modalidad de los compuestos anteriores, cada secuencia se enlaza en la terminación N o C a los grupos siguientes: Lys6-NH2. Preferiblemente, el grupo se enlaza a la terminación C de la secuencia. Adicionalmente compuestos de Exendina-4 (1-39) estabilizados específicos incluyen las siguientes secuencias: H- (Lys) 6-des Pro36 [Asp28] Exendina-4 (1-39) -Lys6-NH2 des Asp2S?rc36., Pro37, Pro38Exendina-4 (1-39) -NH2 , H-(Lys)s- des Pro3S, Pro37, Pro38 [Asp28] Exendina-4 (1-39) -NH: H-Asn- (Glu) 5des Pro36, Pro37, Pro38 [Asp28] Exendina-4 (1-39) -NK2, des Pro36, Pro37, Pro33 [Asp28] Exendina - 4 ( 1 - 39 ) - ( Lys ) 5 -NH2 , H- (Lys) =-??? Pro36, Pro37, Pro35 [Asp28] Exendina -4 ( 1 - 39 ) - (Lys) 6 -N¾, H-Asn- (Glu) 5- des Pro35, Pro37, Pro38 [Asp28] Exendina- 4 ( 1 - 39 ) -(Lys)€-NH2, H-(Lys)£-des Pro30 [ imida28 cíclica] Exendina-4 (1-39) -Lys6 -NH2 , des Pro35, Pro37, Pro38 [imida cíel ica28 ] Exendina- 4 ( 1 - 39 ) -NH2 , H- (Lys ) € -des Pro", Pro", ProjS [Imida cícl ica28] Exendina-4 ( 1 -39) -NH2 H-Asn- (Glu) .-des Pro36, Pro37, Pro3B[Imida cíclica28] Exendína-4(1-39) - H2, des Pro36, Pro37, Pro38 [Imida cícl ica23] Exendina-4 ( 1 - 39 )- (Lys ) 6 -NH2 , H-(Lys)6 des Pro35, Pro37, Pro38[imida cícl ica25 ] Exendina- 4 ( 1 -39) - (Lys) S-NH2, H-Asn- (Glu) 5-des Pro35, Pro37, Pro33 [Imida cíclica28] Exendina-4(1-39)- (Lys) s-NH2, H-(Lys)s-des Pro36 [Trp (02 ) 25 , Asp28] Exendina-4 ( 1 - 39 ) -Lyss -NH2 , H-des Asp28 Pro36, Pro37, Pro38 [Trp (02 ) 25] Exendina- 4 ( 1 - 39 ) -NR2 , H-(Lys)des Pro36, Pro37, Pro33 [Trp (02) 25, Asp2S] Exendina-4 ( 1 -39) -NH2, H-Asn- (Glu) 5-des Pro36, Pro37, Pro33 [Trp (02) 25 , Asp25 ] Exendina -4(l-39)-NH2, des Pro35, Pro37, Pro38 [Trp (02)2S, Asp28] Exendina-4 ( 1 - 39 ) - (Lys) 6-NK2, H-(Lys)s-des Pro36, Pro37, Pro38 [Trp (02 ) 25 , Asp2S] Exendina-4 ( 1 -39) - (Lys) S-NH2, H-Asn- (Glu) 5-des Pro35, Pro37, Pro38 [Trp (02) 25 , Asp26] Exendina -4 (1-39) - (Lys) —NH2, H-(Lys)6-des Pro36 [Trp (02 ) 25 , Imida cíel ica28 ] Exendina -4 ( 1 - 39 ) -Lys6-NH2, des Imida cíclica28 Pro36, Pro37, Pro38 [Trp (02 ) 25] Exendina-4 ( 1 -39)-NH2, H-(Lys)6-des Pro36, Pro37, Pro38 [Trp (02) 25, Imida cíclica23] Exendina-4 (1-39) -NH2 , H-Asn- (Glu) 5-des Pro36, Pro37, Pro38 [Trp (02) 25, Imida cíclica23] Exendina -4 (1-39) -NH2 , des Pro36, Pro37, Pro38 [Trp (02) 25, Imida cícl ica23 ] Exendina- 4 ( 1 -39) - (Lys) 6-NH2 , H-(Lys)6-des Pro , Pro , ProJB [Trp 25 (02 Imida cíclica28] Exendina-4 (1-39) - (Lys) 6-NH2/ H-Asn- (Glu) 5-des Pro35, Pro37, Pro38 [Trp (02) 25, Imida cíclica28] Exendina-4 (1-39) - (Lys)e-NH2, H-(Lys)s-des Pro36 [Met (O)14, Asp28] Exendina - 4 (1-39) - Lyss -NH2 des Met (O) 1Asp28 Pro36, Pro37, Pro38 Exendina-4 (1-39) -NH2, H-(Lys)des Pro36 Pro37 Pro38 [Met (O)14, Asp28] Exendina-4 (1-39) -NH2 H-Asn- (Glu) 5-des Pro36, Pro37, Pro38 [Met (0) 1 , Asp28 ] Exendina -4(1-39) -NH2, des Pro36, Pro37, Pro38 [Met (O) 14 , Asp28] Exendina- 4 ( 1 - 39 ) - ( Lys ) 8 -NH2, H-(Lys)6-des Pro36, Pro37, Pro38 [Met (O) 14 , Asp28] Exendina-4 ( 1 -39) - (Lys) S-NH2, H-Asn- (Glu) 5des Pro36, Pro37, Pro38 [Met (O) 1 , Asp28] Exendina-4 ( 1-39) - (Lys) 6-NH2, H-Lys6-des Pro36 [Met (O) 1 , Imida cícl ica26] Exendina- 4 ( 1 - 39 ) -Lys6-NH2, des Pro36, Pro37, Pro38 [Met (0) 14 , imida cícl ica28] Exendina-4 ( 1 -39) -NH2, H-(Lys)6-des Pro36, Pro37, Pro38 [Met (0) 14 , Imida cíclica28] Exendina-4 (1-39) -NH2 , H-Asn- (Glu) 5-des Pro36, Pro37, Pro38 [Met (O) 14 , imida cíclica28] Exendina-4 (1-39) -NH2 , des Pro36, Pro37, Pro38 [Met (0) 14 , imida cícl ica28] Exendina- 4 ( 1 -39) - (Lys) S-NH2, H-(Lys)€-des Pro36, Pro37, Proj8 [Met (0) 1 , imida cíclica28] Exendma-4 (1-39) - (Lys) 6-NH2, H-Asn- (Glu) 5-des Pro36, Pro37, Pro38 [Met (0) 1 , Imida cíclica23] Exendina-4 (1-39) - (Lys) 6-NH2, H-Lyss-des Pro36 [Met (0) 14 , Trp(02) 25 , Asp28] Exendina -4 ( 1 - 39 ) -Lyss-NH2, H-des Asp28 Pro36, Pro37, Pro38 [Met (0) 14 , Trp (02 ) 25 ] Exendina - 4 ( 1 -39) -NH2 , H-(Lys)6-des Pro36, Pro37, Pro38 [Met (0) 1 , Trp(02) 25, Asp23] Exendina-4 (1-39) -NH2 , H-Asn- (Glu) 5-des Pro36, Pro37, Pro38 [Met (0) 1 , Trp(02) 25 , Asp25] Exendina-4 (1-39) -NH2, des Pro36, Pro27, Pro38 [Met (0) 14 , Trp(02) 25, Asp28 ] Exendina - 4 ( 1 -39) - (Lys) 6-NH2, H-(Lys)6-des Pro36, Pro37, Pro38 [Met (0) 1 , Trp(02) 25 , Asp28] Exendina-4 (1-39) - (Lys) 6-NH2, H-Asn- (Glu) 5-des Pro36, Pro37, Pro38 [Met (0) 14 , Trp(02) 25, Asp28] Exendina-4 (1-39) - (Lys) 6-NH2, H-Lys6-des Pro36 [Met (0) 14 , Trp(02)25, Imida cíclica28] Exendina-4(1-39) -Lys6-NH2, des Imida cíclica28 Pro36, Pro37, Pro38 [Met (0) 14 , Trp (02) 25] Exendina-4 (1-39) -NH2, H-(Lys)6-des Pro36, Pro37, Pro38 [Met (0) 1 , Trp(02)25, Imida cíclica28] Exendina-4 (1-39) -NH2, H-Asn- (Glu) 5-des Pro36, Pro37, Pro38 [Met (0) 1 , Trp(02)25, imida cíclica28] Exendina-4 (1-39) -NH2, des Pro36, Pro37, Pro38 [Met (0) 14 , Trp(02) 25 , Imida cíclica28] Exendina-4 (1-39) - (Lys) 6-NH2, H-(Lys)6-des Pro36, Pro37, Pro38 [Met (0) 14 , Trp(02) 25, imida cíclica28] Exendina-4 (1-39) - (Lys)s-NH2, H-Asn- (Glu) s-des Pro36, Pro37, Pro38 [Met (0) 14 , Trp(02) 25, Imida cíclica28] Exendina-4 ( 1 - 39) - (Lys ) 6-NH2 , o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo. Con respecto a cualquiera de los compuestos de Exendina- 4 (1-39) estabilizados anteriores, los compuestos pueden también incluir un Gln desaminado o hidrolizado que corresponde a la posición 13 de la Exedina-4. Como también se describe, la invención presenta compuestos de Exendina-4 (1-39) estabilizados que incluye al menos uno de : i) un residuo Asn que tiene una cadena lateral desaminada, un residuo Asn que tiene cadena lateral hidrolizada o un isómero estructural de un residuo Asp, en donde el residuo Asn o Asp corresponde a la posición 28 de Exendin-4, ii) un residuo de metionina oxidado que corresponde a la posición 14 del Exedina-4, iii) un residuo de triptofano oxidado que corresponde a la posición 25 de Exedin-4; y iv) un Gln desaminado o hidrolizado que corresponde a la posición 13 de la Exedina-4; y una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo. Sales y solvatos También se divisan sales y solvatos farmacéuticamente aceptable de tales compuestos. Ejemplos de tales compuestos de Exendina-4 (1-39) estabil zados incluyen las siguientes secuencias: [Asp28] Exendina-4 (1-39) , [IsoAsp28] Exendina-4 (1-39) , [Imida cíclica25] Exendina-4 (1-39) , [Met (O) 14 ] Exendina-4 (1-39) , [Trp (02) 25] Exendina-4 (1-39) , [Met (O) 1 , Asp26] Exendina-4 (1-39) , [Met (0) 14, IsoAsp28] Exendina-4 (1-39) , [Met (O)14, Imida cíel ica28] Exendina- 4 ( 1 - 39 ) , [Met (0) 1 , Trp (02) 25] Exendina-4 (1-39) , [Trp (02) 25 , Asp28] Exendina-4 (1-39) , [Trp (02) 5, IsoAsp28] Exendina-4 (1-39) , [Trp(02) 25, Imida cíclica28] Exendina-4 ( 1 - 39 ) , [Met (O)14, Trp(02)25, Asp25] Exendina-4 ( 1 - 39 ) , [Met (O)14, Trp(02) 25, IsoAsp28] Exendina-4 ( 1 - 39 ) , o [Met(O)14, Trp(02) 25, Imida cíclica28] Exendina-4 (1-39) . y una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo. Con respecto a cualquiera de los compuestos de Exendina-4 (1-39) estabilizados anteriores, los compuestos pueden también incluir un Gln desaminadc c hidrolizado que corresponde a la posición 13 de la Exedina-4. Variantes L y D Los compuestos de Exendina-4 (1-39) estabilizados descritos en la presente incluyen variantes, análogos y derivados del mismo, pueden presentar al menos un aminoácido en la configuración L- o D- (o en ambas formas D- y L-) . En modalidades en las cuales al menos uno de los residuos de aminoácido es desaminado, el compuesto de Exendina-4 (1-39) estabilizado puede tener al menos un residuo de aminoácido en la forma L-, al menos un aminoácido en la forma D- , o combinaciones del mismo. Adicionalmente preferidos los compuestos de Exendina-4 (1-39) estabilizados y moléculas relacionadas de la invención presentan buena actividad biológica. Más preferidos son aquellos compuestos que exhiben al menos 70% de la actividad biológica del compuesto de Exendina-4 (1-39) no estabilizados correspondiente o molécula relacionada, más preferiblemente al menos 80%, 90% o actividad mayor a alrededor de 100% de esa actividad biológica. Los métodos para probar la actividad biológica de una variedad de compuestos de Exendina-4 (1-39) y moléculas relacionadas se han describo en WO 01/04156 (más adelante "PCT/DKO /00393" ) , solicitud EP 99610043.4 y solicitud provisional de E.U.A 60/143,591; la descripción de la cual se incorpora en la presente como referencia.

Por ejemplo, una prueba aceptable para la actividad biológica de Exendina-4 (1-39) es la prueba de glucosa en la sangre en ratones ob/ob diabéticos descritos en la solicitud PCT/DK00/00393. Es un objeto de la invención proporcionar una composición farmacéuticamente aceptable que incluye al menos uno de los compuestos de Exendina-4 (1-39) estabilizados o moléculas relacionadas descritas en la presente. Preferiblemente, tal composición puede incluir menos que alrededor de 5 compuestos, tales como dos compuestos idénticos . Una amplia variedad de formulaciones farmacéuticamente aceptables se conocen en el campo y se han descrito en la PCT/DK00/00393 , solicitud EP 99610043.4 y solicitud provisional 60/143,591. Formulación Por ejemplo, y como se proporciona en el caso PCT/DK00/00393 , un compuesto de Exendina-4 (1-39) o molécula relacionada de conformidad con la invención se puede combinar con uno o más portadores farmacéuticamente aceptables. Tales composiciones se pueden en una forma adaptada a administración oral, parenteral (incluyendo sub-cutánea (s.c.), intravenoso (i.v.), intramuscular (i.m.), 'epidural, directa al cerebro e intraperitoneal (i.p.)), rectal, intratraqueal , intranasal, dermal , vaginal, bucal, ocular, o pulmonar, preferiblemente en una forma adaptada a administración sub-cutánea u oral, y tales composiciones se pueden preparar en una forma bien conocida en el campo. Ver generalmente descrito en "Remington's Pharmaceutical Sciences", 17. Ed. Alfonso R. Gennaro (Ed.), ark Publishmg Company, Easton, PA, U.S. A., 1985 y ediciones más recientes y en las monografías en las series "Drugs and the Pharmaceutical Sciences", Marcel Dekker. Las composiciones pueden aparecer en formas convencionales, por ejemplo, cápsulas, tabletas, aerosoles, formas de aplicación tópica, formas líquida o semi-líquida, tales como soluciones, suspensiones, dispersiones, emulsiones, micelas o liposomas. Son preferidas composiciones líquidas apropiadas para administración s.c. En una modalidad preferida, las composiciones de la presente invención se administran subcutáneamente. En una modalidad preferida alternativa, las composiciones de la presente invención se administran oralmente, y en tales casos una forma de administración preferida es una tableta o cápsula. El portador farmacéutico o diluyente empleado puede ser un sólido convencional o portador líquido. Ejemplos de portadores sólidos son lactosa, tierra alba, sucrosa, ciclodextrina, talco, gelatina, agar, pectina, acacia, estearato de magnesio, ácido esteárico o éteres de alquilo inferior de celulosa. Ejemplos de portadores líquidos son jarabe, aceite de cacahuate, aceite de olivo, fosfolípidos , esteroides, ácidos grasos, aminoácidos grasos, polioxietilen, soluciones amortiguadoras isotónicas y agua. Similarmente , el portador o diluyente puede incluir cualquier material de liberación sostenida conocido en la técnica, tales como monoestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo, solo o mezclado con una cera. Si un portador sólido se usa por administración oral, la preparación puede ser en la forma de una tableta, colocado en una cápsula de gelatina dura en forma de polvo o pele izado o esto puede ser en la forma de un trozo o pastilla. La cantidad del portador sólido variará extensamente pero usualmente será alrededor de 25 mg hasta alrededor de 1 g . Una tableta típica, la cual se puede preparar por técnicas de formado de tabletas convencional pueden contener: * Núcleo: compuesto activo (como compuesto libre de la invención o sal del mismo) 100 mg; dióxido de silicio coloidal (Aerosil) 1.5 mg; celulosa, microcristalina (Activel) 70 mg; goma de celulosa modificada (Ac-Di-Sol) 7.5 mg; estearato de magnesio. * Revestimiento: HPMC aprox. 9 mg; *Mywacett 9-40T aprox. 0.9 mg; *monoglicérido acilado usada como plastificante para película de revestimiento. Si un portador líquido se usa, la preparación puede ser en la forma de un jarabe, emulsión, cápsula de gelatina blanda o líquido inyectable estéril tal como una suspensión o solución acuosa o no acuosa. Para administración nasal, la preparación puede contener un compuesto de la presente invención, preferiblemente un conjugado, disuelto o suspendido en un portador líquido, en particular, un portador acuoso, para aplicación en aerosol. El portador puede contener aditivos tales como agentes solubilizantes, por ejemplo glicol de propileno, tensoactivos tales como sales de ácido biliar o éteres de alcohol superior de pol ioxietileno , aumentadores de absorción tales como lecitina (fosfatidilcolina) o ciclodextrina , o conservadores tales como parabinas . Un compuesto de Exendina-4 (1-39) estabilizado o molécula relacionada de la invención puede también ser administrada en una forma adecuada para inyección local o sistémica o infusión y puede, como tales, ser formulada con agua estéril o una solución de salina isotónica o glucosa. Las composiciones pueden ser esterilizadas por técnicas de esterilización convencional, las cuales son bien conocidas en la técnica. Las soluciones acuosas resultantes pueden empacarse para el uso o filtrado bajo condiciones asépticas y 1 iofil i zadas , la preparación liofilizada está combinada con la solución acuosa estéril posterior a la administración. Preferiblemente, la formulación a ser usada para dosis intravenosa, subcutánea y oral será una solución del compuesto activo en solución amortiguadora. La preparación puede producirse inmediatamente después del uso a partir de la sustancia del fármaco activo y solución amortiguadora estéril. Un método preferido de esterilización puede ser por filtración estéril de una solución hecha inmediatamente posterior al uso. El compuesto o molécula relacionada puede contener sustancias auxiliares farmacéuticamente aceptables como se requiere para las condiciones fisiológicas aproximadas, tales como agentes amortiguantes, agentes ajustadores de tonicidad y similares, por ejemplo acetato de sodio, lactato de sodio, cloruro de sodio, cloruro de potasio, cloruro de calcio, etc. Los compuestos de Exendina-4 (1-39) estabilizados y moléculas relacionadas de la invención encuentran uso en un amplio espectro de aplicaciones. Algunas se describen en WO 99/40788 (con relación a los efectos inotrópicos y diuréticos de la exendina y GLP-1) y WO 98/39022 (con respecto a un método para sedar un sujeto mamífero que tiene una activación creciente del sistema nervioso central y periférico que comprende la administración de exendina c GLP-1 o un agonista de exendina o GLP-1 al sujeto para producir un efecto sedante o ansiolítico en el sujeto); y WO 93/18786 (relacionado al tratamiento de la diabetes usando GLP-1 (7-37) o GLP-1 (7-36) amida en un régimen que comprende adicionalmente el tratamiento con un agente hipoglicémico oral, tal como sul fonilurea , que produce un efecto sinérgico fuerte) ; y WO 98/19698 (relativo al uso de análogos de GLP-1 para la regulación de la obesidad) ; WO 98/08531 (relativa al uso de GLP-1 o análogos en un método para reducir la mortalidad y morbilidad después del infarto al miocardio); WO 98/08373 (con relación al uso de GLP-1 o análogos en un método para atenuar los cambios catabólicos post -quirúrgicos y respuestas hormonales a la tensión) . Además, les compuestos de la invención son adecuados en una terapia de combinación con otros agentes antidiabéticos, tales como insulina, met formina, sulfonil ureas y tiazol idindionas , o en una terapia de combinación con otros agentes antiobesidad, tales como leptina, dexfenf luramina , anfetamina, etc. Otras formulaciones están dentro del alcance de la presente invención. Tales formulaciones incluyen pero no se limitan a, formulaciones que incluyen al menos uno de los compuestos de Exendina-4 (1-39) estabilizados descritos en la presente combinados con liposomas, microesferas y estabilizadores líquidos. Formulaciones de depósito „ que incluyen al menos uno de los compuestos de Exendina-4 (1-39) estabilizados son también conocidas. Ver patentes de E.U.A Nos. 5,407,609 y 5,654,008 para información adicional. Una formulación líquida particular adecuada para el uso con los presentes compuestos de Exendina-4 (1-39) estabilizados incluyen: alrededor de 50 mM histdina, alrededor de 100 hasta 200 nM sucrosa, manitol u ocros azúcares aceptables, 20 mM metionina, 20 mM Asparagína-glutamina o Asp, a un pH de alrededor de 5.3. El compuesto se puede disolver en casi cualquier cantidad adecuada que incluye alrededor de 50 microgramos/mL hasta alrededor de 2.5 mg/mL . En una modalidad, las composiciones farmacéu icamente aceptables descritas en la presente pueden incluir al menos una de las siguientes secuencias: des Pro3S [Asp2S] Exendina-4 (1-39) , des Pro36 [IsoAsp23] Exendina-4 (1-39) , des Pro55 [Imida cíclica28] Exendina-4 (1-39) , des Pro36 [Met (0) 14] Exendina-4 (1-39) , des Pro36 [Trp (02) 26 ] Exendina-4 (1-39) , des Pro36 [Met (0) 1 , Asp28] Exendina-4 (1-39) , des Pro3e [Met (0) 1 , IsoAsp28] Exendina-4 (1-39) , des Pro3S [Met (0) 14 , Imida cíclica28] Exendina-4 ( 1-39) , des Pro36 [Met (0) 1 , Trp (02) 25 ] Exendina-4 (1-39) , des Pro36 [Trp (02) 25 , Asp26] Exendina-4 (1-39) , des Pro36 [Trp (02) 25 , IsoAsp28] Exendina-4 (1-39) , des Pro36 [Trp (02) 5 , Imida cíclica28] Exendina-4 (1-39) , des Pro36 [Met (0) 14, Trp (02) 25] Exendina-4 (1-39) , des Pro36 [Met (0) 1 , Trp(02) 25 , Asp28] Exendina-4 ( 1-39) , des Pro36 [Met (0) 14, Trp(02) 25 , IsoAsp28] Exendina -4 (1-39) des Pro36 [Met (0) 1 , Trp(02)'5, Imida cíclica28] Exendina -o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo. Cada uno de los compuestos específicos pueden opcionalmente incluir el grupo siguiente enlazado a las terminaciones N- o C- del mismo, preferiblemente la terminación C- : -Lys6-NH2. Adicionalmente , composiciones farmacéuticamente aceptables específicas de conformidad con la invención incluyen al menos uno de los siguientes compuestos: [Asp28] Exendina-4 (1-39) , [IsoAsp28] Exendina-4 (1-39) , [Imida cíclica28] Exendina-4 (1-39) , [Met (O) 14] Exendina-4 (1-39) , [Trp (02) 25] Exendina-4 (1-39) , [Met (O)14, Asp28] Exendina-4 (1-39) [Met (O) 14, IsoAsp28] Exendina-4 (1-39) , [Met (O)14,. Imida cíclica28] Exendina-4 (1-39) , [Met (O) 14, Trp (02) 25] Exendina-4 (1-39) [Trp (02) 25 , Asp28] Exendina-4 (1-39) , [Trp(02) 25 , IspoAsp28] Exendina-4 (1-39) , [Trp(02) 25 , Imida cíclica28] Exendina-4 (1-39) , Met (O)14, Trp(02)25, Asp28] Exendina-4 (1-39) , [Met (O)14, Trp(02)25, IsoAsp28] Exendina-4 (1-39) ; y [Met(O)14, Trp(02) 25, imida cíclica28] Exendina-4 (1-39) o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo.

En una modalidad, la composición farmacéuticamente aceptable presenta una relación de peso de cualquiera de ios compuestos de Exendina-4 (1-39) estabilizados o moléculas relacionadas descritas en la presente para Exendina-4 (1-39) o una variante, análogo o derivado del mismo que tiene menos que alrededor de 50% en-peso, menos que alrededor de 10% en peso, o en alguna instancia menos de alrededor de 1% en peso. Una relación de peso apropiada dependerá del uso dependiendo de la composición y otros parámetros tales como el grado de estabilidad necesaria. Las presentes composiciones de Exendina-4 (1-39) estabilizadas se pueden hacer fácilmente al usar una o una combinación de técnicas estándares. En uno de tales enfoques los métodos incluyen hacer/obtener Exedina-4 (1-39) o una variante, análogo o derivado del mismo; y exponer subsecuentemente o incubar la Exenma-4 (1-39) o la variante, análogo, o derivado del mismo bajo condiciones suficientes para introducir al menos uno de los siguientes aminoácidos presentes : i) un residuo Asn que tiene una cadena lateral desaminada, un residuo Asn que tiene cadena lateral hidrolizada o un isómero estructural de un residuo Asp, en donde el residuo Asn o Asp corresponde a la posición 28 de Exendin-4, ii) un residuo de metionina oxidado que corresponde a ia posición 14 del Exedina-4, iii) un residuo de triptofano oxidado que corresponde a la posición 25 de Exedina-4; iv) un Gin desaminado e hidrolizado que corresponde a ia posición 13 de la exendina 4 y una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo. Alternativamente, los compuestos estabilizados de exendina 4 (1-39) de la invención se pueden hacer por vías sintéticas de pépt dos convencionales incluyendo el uso de la síntesis de Merrifíeld . Los residuos modificados de aminoácidos de acuerdo con la invención, se pueden adquirir de proveedores comerciales (por ejemplo, Gln y Asp modificados) o se pueden hacer fácilmente usando técnicas estándar (por ejemplo, oxidación de Met y Trp) . Ver Merrifield, B. (1985) en Science 232:341. La práctica preferida de los métodos incluye además la etapa de detectar la ausencia o presencia de al menos uno de los aminoácidos (i)-(iv). Preferiblemente también tales métodos incluyen la etapa de identificar al menos uno de los aminoácidos (i)-(iv) en la composición. Los métodos adecuados para detectar las composiciones estabilizadas de exendina 4 (1-39) y moléculas relacionadas aquí descritas se conocen en el campo e incluyen pero no se limitan a, cromatografía líquida de alta resolución de fase inversa (CLAR-FI) y espectrometría de masas/cromatografía líquida (CL-EM) . Las técnicas adicionalmente adecuadas incluyen la formación convencional de secuencias de aminoácidos, mapeo de péptidos, EM/EM y fluorescencia. En otro aspecto, la invención proporciona un método de elaboración de composiciones farmacéuticamente aceptables que incluye composiciones estabilizadas de exendina 4 o moléculas relacionadas. En una modalidad, el método incluye al menos una de las siguientes etapas : a) obtener la exendina 4 (1-39) o una variante, análogo o derivado de la misma, b) poner en contacto la exendina 4 (1-39) o la variante, análogo o derivado con al menos un portador o vehículo farmacéuticamente aceptable para producir una mezcla; y c) incubar la mezcla bajo condiciones suficientes para introducir al menos uno de los siguientes aminoácidos en ella: i) un residuo Asn que tiene una cadena lateral desaminada, un residuo ASN que tiene una cadena lateral hidrolizada o un isómero estructural de un residuo Asp, en donde el residuo Asn o Asp corresponde a la posición 28 de la exendina 4, ii) un residuo oxidado de metionina que corresponde a la posición 14 de exendina 4, iii) un residuo oxidado de triptofano que corresponde a la posición 25 de exendina 4 iv) un Gln desaminado o hidrolizado que corresponde a la posición 13 de la exendina 4 y una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo. La práctica preferida de los métodos incluye además la etapa de detectar la ausencia o presencia de al menos uno de los aminoácidos (i)-(iv) . Preferiblemente también tales métodos incluyen la etapa de identificar al menos uno de los aminoácidos (i)-(iv) en la composición. Las condiciones típicas para elaborar los compuestos de exendina 4 (1-39) estabilizada y moléculas relacionadas serán generalmente suficientes para introducir al menos una de las modificaciones anteriores de aminoácidos (i)-(iii) como se describen arriba. Tales condiciones también son preferiblemente capaces de modificar la posición de glutamina 13 en la molécula de exendina 4. Los ejemplos de tales condiciones incluyen pero no se limitan a, exposición al agua, solución amortiguadora, calor, agua, vapor, oxígeno, luz, metales e iones metálicos. Tales condiciones pueden incluir hacer contacto con una diversidad de temperaturas que incluyen hacer contacto con alrededor de 1°C hasta alrededor de 80°C, preferiblemente 5°C hasta alrededor de 45°C. La temperatura ambiente (25°C) se prefiere generalmente para algunas aplicaciones. Se ha encontrado el aire por ser particularmente bueno en modificar los residuos de aminoácidos de la molécula de exendina 4. Sin embargo como se discutió, se preferirá generalmente a menudo hacer las moléculas estabilizadas de exendina 4 (1-39) por un método sintético o semi - sinté ico . Un ejemplo preferido de tal estrategia es el uso del procedimiento de síntesis de péptidos de Merrifield en un formato automat i zado . Como se discutió, la invención proporciona además un método de estabilización de exendina 4 (1-39) o una variante, análogo o derivado del mismo a partir de la degradación antes, durante o después del uso pretendido. Los métodos típicos incluyen al menos una de las siguientes etapas: a) obtener la exendina 4 (1-39) o una variante, análogo o derivado de la misma, b) incubar la exendina 4 (1-39) o la variante, análogo o derivado bajo condiciones suficientes para introducir al menos uno de los siguientes residuos de aminoácidos en ella: i) un residuo Asn que tiene una cadena lateral desaminada, un residuo Asn que tiene una cadena lateral hidrolizada o un isómero estructural de un residuo Asp, en donde el residuo Asn o Asp corresponde a la posición 28 de la exendina 4, ii) un residuo oxidado de metionina que corresponde a la posición 14 de exendina 4, iii) un residuo oxidado de triptofano que corresponde a la posición 25 de exendina 4 ív) un Gln desaminado o hidrolizado que corresponde a la posición 13 de la exendina 4 y una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo. Por ejemplo, las condiciones del método incluyen hacer contacto con al menos uno de agua, calor, vapor de agua, luz, metal, ión metálico u oxígeno. Tales condiciones pueden incluir hacer contacto con una diversidad de temperaturas que incluyen hacer conracto con alrededor de 1°C hasta alrededor de 80°C, preferiblemente 5°C hasta alrededor de 45°C. La temperatura ambiente (25°C) se prefiere generalmente para algunas aplicaciones También preferiblemente, el método incluye la etapa de identificar al menos uno de los aminoácidos (i)-(iv) en la exendina 4 (1-39) estabilizada o una variante, análogo o derivado del mismo. Opcionalmente , el método puede incluir además hacer contacto de la exendina 4 (1-39) estabilizada o una variante, análogo o derivado del mismo con al menos un portador o vehículo farmacéuticamente aceptable. Como se discutió, muchos compuestos adecuados de exendina 4 y relacionados se han descrito PCT/DKOO/00393, solicitud EP 99610043.4 y solicitud provisional de EU 60/143 , 591. Como se describe en la solicitud PCT/DKOO/00393, un tipo de compuestos de exendina 4 se dirige a un conjugado de péptidos que comprende un péptido X seleccionado del grupo que consiste de (a) una exendina que tiene al menos un 90% de homología a la exendina 4 ; (b) una variante de la exendina en donde la variante comprende una modificación seleccionada del grupo que consiste de entre una y cinco eliminaciones en las posiciones 34-39 y contiene un Lys en la posición 40 que tiene un substituyente lipofílico; o (c) GLP-1 (7-36) o GLP-l(7-37) que tiene al menos una modificación seleccionada del grupo que consiste de: (i) substitución de D-alanina, glicina o ácido alfa aminoisobutírico para alanma en la posición 8 y (ii) un substituyente lipofílico, y Z, una secuencia de péptidos de 4-20 unidades de aminoácidos enlazadas covalentemente a la variante, en donde cada unidad de aminoácido en la secuencia de péptido, Z se selecciona del grupo que consiste de Ala, Leu, Ser, Thr, Tyr, Asn, Gln, Asp, Glu, Lys, Arg, His, Met, Orn y unidades de aminoácidos de la fórmula general I -NH-CÍR1) (R2) -C(=0) - (I) en donde R1 y R2 se seleccionan del grupo que consiste de hidrógeno, alquiloCi_6, fenilo y fenilo-metílo , en donde el alquiloCi-6 está opcionalmente substituido con desde uno a tres substituyentes seleccionados de halógeno, hidroxi, amino, ciano, nitro, sulfono y carboxi , y fenilo y fenil-metilo se substituyen opcionalmente con desde uno hasta tres substituyentes seleccionados de alquiloC1-6, alqueniloC2-5 , halógeno, hidroxi, amino, ciano, nitro, sulfono y carboxi o R1 y R2 junto con el átomo de carbono al cual se enlazan forman un anillo de ciclopentilo, ciclohexilo o cicloheptilo, por ejemplo, ácido 2,4 diaminobutanoico y ácido 2,3-diaminopropanoico , con la condición de que X no es exendina 4 o exendina 3. El péptido X se caracteriza además por ser efectivo en mejorar la tolerancia a la glucosa en un mamífero diabético. Adicionalmente , la solicitud PCT/DKOO/00393 caracteriza una variante novedosa de una exendina precursora, en donde la exendina precursora tiene una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 90% de homología con la exendina 4 y en donde la variante disminuye el nivel de glucosa en la sangre en un mamífero, se enlaza a un receptor GLP-1 y tiene al menos una modificación seleccionada del grupo que consiste de (a) entre una y cinco eliminaciones en las posiciones 34-38 y (b) contiene un Lys en la posición 40 que tiene un substituyente lipofílico unido al grupo epsilon amino de la lisina. Por la frase "variante de exendina" significa una variante de un péptido precursor de exendina que tiene al menos alrededor de 90% de homología, más preferiblemente al menos alrededor de 95% de homología con la exendina 4, que tiene actividad de exendina, por ejemplo, disminuye el nivel de glucosa en la sangre en un mamífero y se enlaza al receptor GLP-1. En una modalidad preferida el péptido precursor de exendina tiene una secuencia de aminoácidos que difiere por cinco aminoácidos, preferiblemente por cuatro aminoácidos, más preferiblemente por tres aminoácidos, aún más preferiblemente por dos aminoácidos y todavía más preferiblemente por un residuo de aminoácidos de la secuencia de aminoácidos de la exendina 4(1-39). Ver la solicitud PCT/DKOO/00393 para información adicional. Las variantes, análogos y derivados de Exendina-4 adicionalmente apropiados de los mismos se han descrito en las siguientes referencias, cada una de las cuales se incorpora individualmente para referencia: Patentes E.U.A. Nos. 6,358,924; 6,344,180; 6,284,725; 6,277,819; 6,271,241; 6,268,343; 6,191,102; 6,051,689; 6,006,753; 5,846,937; 5,670,360; 5,614,492; 5,846,937; 5,545,618; 6,410,508; 6,388,053; 6,384,016; 6,329,336; 6,110,703, 5,846,747; 5,670,360; 5,631,224; 5,424,286; W098/05351; W098/30231; 099/07404, O 99/25727; WO 99/25728; o WO 99/46283. Cada uno de tales compuestos pueden estabilizarse de conformidad con esta invención por ejemplo, al exponer los compuestos a las condiciones estabilizantes descritas en la presente. Alternativamente, tales compuestos de Exendina-4 (1-39) estabilizados pueden hacerse sintéticamente usando la síntesis de Merrifield y los materiales de partida que pueden adquirirse o hacerse fácilmente. Se entenderá que las composiciones y compuestos de la invención también pueden estar en la forma de amida preferida (NK2) o en el ácido libre (OH) o en forma de una sal del mismo.

En modalidades en las cuales uno o más de los compuestos de Exendina-4 (1-39) estabilizados y moléculas relacionadas se usan terapéuticamente, tal uso típicamente involucra la administración de una o más de las composiciones farmacéuticamente aceptables descritas en la presente. Tal composición puede combinarse con al menos uno de Exendina-4, Exendina-3, o derivados, análogos o variantes de los mismos junto con una cantidad apropiada de un vehículo y/o estabilizador. En una modalidad, tal enfoque involucra administrar la composición (por ejemplo, como una formulación de depósito, formulación líquida, con microesferas o liposomas, i.v.) para proporcionar una dosis de alrededor de O.lpg/kg, hasta 1.000 mg/kg de peso corporal. La cantidad de la composición a usarse dependerá de los parámetros de reconocimiento que incluyen la edad, severidad de la enfermedad, peso corporal total, sexo y otros factores. Un "péptido" como se usa en la presente, es cualquier compuesto producido por la formación de amida entre un grupo carboxilo de un aminoácido y un grupo amino de otro. Los enlaces amida en los péptidos pueden llamarse enlaces péptidos. La palabra péptido usualmente aplica a los compuestos cuyos enlaces amida se forman entre C-I de un aminoácido y N-2 de otro (algunas veces llamados enlaces eupéptidos) , pero incluye compuestos con residuos unidos por otros enlaces amida (algunas veces llamados enlaces isopéptidos) . Los péptidos con algunos más de alrededor de 10-20 residuos pueden también llamarse ol igopépt idos y péptidos con más de 20 residuos se llaman pol ipépt idos . Los polipéptidos de secuencias específicas de más de alrededor de 50 residuos se conocen usualmente como proteínas. Una "secuencia de polipéptido natural" como se usa en la presente se refiere a una secuencia de polipéptido que consiste de residuos de aminoácido L naturales y que es capaz de expresarse por una célula hospedadora recombinante . Los compuestos X en la presente son todos secuencia de péptido de 40 residuos de aminoácido o menos. "GLP-i" como se usa en la presente incluye GLP-l(7-37)-OH, GLP-1 (7-37) -NH2, GLP - 1 ( 7 - 36 ) -OH , y GLP- 1 ( 7-36) -NH2. Las moléculas se relacionan con Exendina-4 si reconocen análogos, derivados, o variantes del mismo como se describe en la presente y en la PCT/DK00/00393 , solicitud EP 99610043.4, y solicitud provisional E.U.A. 60/143,591. Otras de tales moléculas se han descrito en las siguientes solicitudes de patente de E.U.A. : 6,358,924; 6,344,180; 6,284,725; 6,277,819; 6,271,241; 6,268,343; 6,191,102; 6,051,689; 6,006,753; 5,846,937; 5,670,360; 5,614,492; ,846,937; 5,545,618; 6,410,508; 6,388,053; 6,384,016; 6,329,336; 6,110,703; 5,846,747; 5,670,360; 5,631,224; 5,424,286; WO98/05351; WO98/30231; WO99/07404, WO 99/25727; WO 99/25728; y WO 99/46283, por ejemplo. "Agonista" se refiere a una substancia endógena o un fármaco que puede interactuar con un receptor e iniciar una respuesta fisiológica o una farmacológica característica de tal receptor (contracción, relajación, secreción, activación de enzima, etc) . "Antagonista" se refiere a un fármaco o un compuesto que se opone a los efectos fisiológicos de otro. Al nivel receptor, es una entidad química que se opone a las respuestas asociadas con el receptor normalmente inducido por otro agente bioactivo. "Agonista parcial" se refiere a un agonista, que no es capaz de inducir la activación máxima de una población receptora, sin tener en cuenta la cantidad de fármaco aplicado. Un "agonista parcial" puede llamarse "agonista con eficacia intrínseca intermedia" en un tejido dado. Por otro lado, un agonista parcial puede antagonizar el efecto de un agonista compleco que actúa en el mismo receptor. "Receptor" se refiere a una molécula o estructura polimérica en o sobre una célula que reconoce específicamente y une el compuesto que actúa como mensajero molecular (neurotransmisor , hormona, linfocina, lectina, fármaco, etc) .

Por "varían" e de Exendina" de la presente invención, se entenderá una variante de un péptido de Exendina precursor que tiene al menos alrededor de 90% de homología a la Exendina-4 y aún más preferiblemente tiene al menos alrededor de 95% de homología con la Exendina-4 (1-39) , que tiene actividad de Exendina, por ejemplo, reduce el nivel de glucosa en la sangre en un mamífero y une al receptor GLP-1. La "Exendina-4" como se usa en la presente se refiere a la secuencia de aminoácido de la Exendina-4 (1-39) la cual se describe en la Patente E.U.A. No. 5,424,286, SEQ ID NO : 2 , y Exendina-4 (1-40) cono se describe por Chen S Drucker en The Journal of Biological Chemistry, Vol . 272, No. 7, pp . 4108-15 que difiere sólo en que tiene glicina en la posición 40 como el residuo de aminoácido de terminal C. La homología de la Exendina precursora se determina como el grado de identidad entre dos secuencias de proteína que indican la derivación de la primera secuencia de la segunda. La homología puede ser apropiadamente determinada por medio de programas de computadora conocidos en el arte tales como GAP proporcionado en el paquete de programa GCG (Manual de Programa para el Paquete Wisconsin, Versión 8, Agosto 1994, Genetics Computer Group, 575 Science Drive, Madison, Wisconsin, EUA 53711) (Needleman, 3. B. and Wunsch, C. D . , (1970) , J. Mol . Biol . 48 : 443 - 453) . Lo que se establece a continuación para comparación de secuencia de polipéptido pueed usarse: penalización de creación GAP de 3.0 y penalización de extensión GAP de 0.1. Por "Met (O) " de la presente invención se pretende que signifique un sulfóxido de metionina o sulfona met ionina . Por "Trp (02) " de la presente invención se pretende que signifique N-formilcinurenina, un residuo de triptofano que experimenta la dioxidación.

"Sales" incluye sales farmacéuticamente aceptables, tales como sales de adición acidas y sales básicas . Los ejemplos de sales de adición ácidas son sales de clorohidrato , sales de sodio, sales de bromohidrato , etc. Los ejemplos de sales básicas son sales donde el catión se selecciona de metales alcalinos, tales como sodio y potasio, metales a 1 c a 1 i no t é r e o s , tales como iones de calcio y amonio TN(R3)3 (R4) , donde R3 y R4 designa independientemente Ci_6 - alquilo opcionalmente substituido, C2-G-alquenilo opcionalmente substituido, arilo opcionalmente substituido, o heteroarilo opcionalmente substituido. Otros ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables son; por ejemplo, aquellas descritas en "Remington's Pha rma c eu t i c a 1 Sciences" 17. Ed . Alfonso R. Ger.naro (Ed.) , Mark Publishing Company, Easton, PA, E.U.A., 1985 y ediciones más reciente, y en la Encyclopedia of Pharmaceutical Technology . Las designaciones de letra sencilla y triple para los aminoácidos se usan intercambiablemente. Por ejemplo, se apreciará que Lys y K se refieren a lisina, Asp y D se refieren a ácido aspértico, Glu y E se refieren a ácido glutámico, etc. Una descripción completa de las designaciones de aminoácidos puede encontrarse en Alberts, B. et al. en Molecular Biolcgy of the Cell, 2da Ed. Garland Publishing, Inc. (New York) (1989) . Los siguientes Ejemplos son ilustrativos y no limitantes del alcance de la presente invención. EJEMPLO 1 : Estabilización de Exendina-4 y moléculas relacionadas por isomerización y/u oxidación estructural. Las composiciones farmacéuticas de Exendina-4 (1-39) o una variante, análogo, o derivado del mismo o soluciones acuosas de Exendina-4 (1-39) o una variante, análogo, o derivado · del mismo, pueden estabilizarse por oxidación o isomerización funcional en varios puntos en la secuencia de Exendina-4 (1-39) . El almacenamiento de la Exendina-4 (1-39) o una variante, análogo, ' o derivado del mismo en una solución acuosa a una temperatura de entre alrededor de 0°C y alrededor de 50°C, más particularmente entre alrededor de 4°C y temperatura ambiente, puede inducir una reconfiguración estructural en el residuo de 28 -L-Asparaginilo del péptido de Exendina-4 (1-39) . Las soluciones acuosas apropiadas no se limitan particularmente y pueden incluir composiciones farmacéuticas acuosas que pueden tener uno o más aditivos adicionales para facilitar la administración a un paciente o para estabilizar o solubilizar la Exendina-4 (1-39) o una variante, análogo, o derivado del mismo. No obstante que no se apega a la teoría, una trayectoria sintética a través de la cual la reconfiguración estructural del residuo de 28 -L-Asparaginilo (estructura A) que puede ocurrir, se presenta en el Esquema de Reacción 1. El residuo de 28 -L-Asparaginilo experimenta la desaminación en un medio acuoso para formar un residuo de imida cíclico, que se describe como (estructura B) . la hidrólisis reversible de la imida cíclica lleva a la formación de un residuo tanto de L-aspartilo (estructura C) como de un residuo de L-isoAspartilo (estructura D) . Cada reacción de hidrólisis es reversible, de manera que uno o más compuestos de Exendina estabilizados tienen el residuo imida cíclica 28, residuo de L-aspartilo 28 o residuo de 28 -L- isoAspartilo puede presentarse en la solución acuosa. quema de Reacción Estructura A Estructura C Estructura D Los productos de oxidación se forman al incubar una solución acuosa de Exendina-4 (1-39) o un compuesto de Exendina-4 (1-39) en presencia de un oxidante tal como dioxígeno . Típicamente, las composiciones farmacéuticas de la presente invención, que se exponen al dioxígeno molecular durante el procesamiento, o almacenación, son susceptibles a la oxidación de los residuos de 14-metionina o 25-triptofan.

Una ruta no limitante para la oxidación del residuo 14-metionina se presenta durante la oxidación en presencia de dioxígeno molecular. Se produce el sulfóxido de 14 -metionina por la reacción de Exendina-4 (1-39) en solución acuosa con la mitad de un equivalente de dioxígeno molecular. La exposición adicional del compuesto de Exendma estabilizado que tiene el sulfóxido de 1 -met ionina , resulta en la formación de sulfona de 14-metionina en la cual el residuo de 14 -metionina se ha oxidado por un equivalente de dioxígeno. El residuo de 25 - triptof no de Exendina-4 (1-39) o una variante, análogo, o derivado de Exendina-4 (1-39) puede oxidarse por 0.5, 1, 1.5, 2 o más equivalentes de dioxígeno molecular. Los productos de triptofano oxidado comunes incluyen hidroxitriptofano, N- formilcinuranina, cmuranina, y 3 -hidroxicinuranina . Bajo condiciones de almacenamiento o incubación normales de alrededor de 0°C hasta alrededor de 25°C, un equivalente de dioxígeno molecular oxida el trsiduo de 25-triptofan de Exendina-4 (1-39) o una variante de Exendina-4 (1-39) para formar un compuesto Exendina-4 (1-39) que tiene un residuo de 25 -N- formilcinuranina . EJEMPLO 2 : Síntesis del Compuesto 5, 6 y 14 (derivados estabilizados del compuesto 1) El compuesto 1 (des Pro36 Exendina-4 (1-39) -K6) tiene la estructura mostrada en la Figura 1 y se hace usando la técnica de Merrifield. Ver la solicitud PCT/DKOO/00393, por ejemplo, para más información.

Alrededor de 458 mg del compuesto 1 se disolvió en NH4HCO3 100 m pH 7.9 hasta una concentración de 10 mg/mL. La solución se incubó a 40°C durante 6 días para rendir aproximadamente 20% El compuesto 5, 10 % del Compuesto 14 y 50% del Compuesto 6. El producto estabilizado del Compuesto 5 y el Compuesto 6 puede purificarse por elución isocrática RP-CLAR preparativa o usando un gradiente, respectivamente. La identificación se realiza por tiempo de retención relativo en combinación con Secuenciado de aminoácido y CL-E (ESI+/T0F) . EJEMPLO 3 : Síntesis del Compuesto 7 (derivado estabilizado del compuesto 1) Alrededor de 424 mg del Compuesto 1 se disolvió en NH4HCO3 100 mM pH 7.9 hasta una concentración de 10 mg/mL. La solución se incubó a 40°C durante 5 días para rendir aproximadamente 20% del Compuesto 5, 60% del Compuesto 6. El compuesto 6 se purificó por RP-CLAR preparativa. Aproximadamente 100 mg del Compuesto 6 se obtiene y se liofilizó. Alrededor de 100 mg del Compuesto 6 se reconstituyó en solución amortiguadora NaH2P0 100 mM y se ajuste hasta pH 5.3 con NaOH hasta una concentración de 5 mg/mL. La solución se incubó a 40°C durante 5 días para proporcionar aproximadamente 40% del Compuesto 7. El producto estabilizado del Compuesto 7 puede purificarse por gradiente de elución de RP-CLAR preparativa. La identificación se realiza por tiempo de retención relativo en combinación con CL-EM (ESI+/TOF) . EJEMPLO 4 : Síntesis de los Compuestos 3 y 4 (un derivado estabilizado del Compuesto 1) El compuesto 1 se hace como se describe. Se disolvió (10 mg) en solución amortiguadora de citrato 50 mM que contiene 3% (p/v) de D-manitol hasta una concentración de 100 µ9/?t^. La solución se incubó a 25°C durante al menos 6 días y se expuso a luz con longitud de onda media de 350 nm . Los productos estabilizados del Compuesto 3 y 4 pueden purificarse por RP-CLAR preparativa. La identificación se realiza por tiempo de retención relativo en combinación con mapeo péptido por CL-EM (ESIVTOF) de. digestión de tríptico y EM/EM más detección de fluorescencia. EJEMPLO 5 : Síntesis del Compuesto 2 (derivado estabilizado del compuesto 1) El compuesto 1 se hace como se describe. Se disolvió (100 mg) en 10 mL de agua pura hasta una concentración de 10 mg/mL y se expuso a H202 al agregar 2.3 mL de H202 al 3.5%. La solución se incubó a 25°C durante 1 día para rendir aproximadamente 100% del Compuesto 2. El producto estabilizado del Compuesto 2 puede purificarse por RP-CLAR preparativa. La identificación se realiza por tiempo de retención relativo en combinación con mapeo péptido por CL-EM (ESI+/TOF) de digestión de tríptico y EM/E más detección de fluorescencia. EJEMPLO 6 : Síntesis de Péptido Síntesis del Péptido del Compuesto 8. H-His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Glu- et-Glu-Glu-Glu-Ala-Val -Arg-Leu-Phe- Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-NH2 ( [Glu13] Exendina-4-NH2 en TentaGel S-RAM. La resina TentaGel S - RAM seca (0.23 mmol/g, 1,0 g) se colocó en un recipiente de polietileno equipado con un filtro de polipropileno para filtración y se expandió durante dos horas en DMF (5 mi ) . El grupo Fmoc se removió de conformidad con el procedimiento descrito arriba, y el péptido de conformidad con la secuencia se ensambla como se describe bajo "Batchwise peptide synthesis on TentaGel S-RAM resms [Due Larsen, B. and Holm, A. (1998) J. Pept . Res. 52, 470] . Después de completar la síntesis, la res ina -pépt ido se lavó con DMF (3x5 mi, 1 minuto cada uno) , DCM (3x5 mi, 1 minuto cada une) , éter de dietilo (3x5 mi, 1 minuto cada uno) y se secó in vacuo. El péptido se desdobló de la resina por tratamiento con 95% ácido trif luoroacético y etanditiol al 5% v/v a temperatura ambiente durante 2 horas. Las resinas filtradas se lavaron con TFA al 95%-agua y los filtrados y lavados se diluyeron al agregar agua. La mezcla resultante se extrajo 3 veces con éter y finalmente se secó por congelado. El péptido crudo se purificó por CLAR preparativa. El producto purificado se encontró que es homogéneo y la pureza se encontró que es mejor al 95%. La identidad del péptido se confirmó por ES-EM ( Pm encontrado 4185.17 y calculado 4185.01) . Síntesis del Péptido del Compuesto 9, H-His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Glu-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asp-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-NH- ([Glu13, Asp:e] Exendina-4 -NH2) en TentaGel S -RAM . La resina TentaGel S-RAM seca (C.23 mmol/g, 1,0 g) se colocó en un recipiente de polietileno equipado con un filtro de polipropileno para filtración y se expandió durante dos horas en DMF (5 mi) . El grupo Fmoc se removió de conformidad ccn el procedimiento descrito arriba, y el péptido de conformidad con la secuencia se ensambla como se describe bajo "Batch ise peptide synthesis on TentaGel S-RAM resins [Due Larsen, 3. and Hoim, A. (1998) J. Pept . Res. 52,470] . Después de completar la síntesis, la resina-péptido se lavó con DMF (3x5 ML, 1 minuto cada uno) , DCM (3x5 mi, 1 minuto cada uno) , éter de dietilo (3x5 mi, 1 minuto cada uno) y se secó in vacuo. El péptido se desdobló de la resina por tratamiento con ácido trifluoroacético al 95% y etanditiol al 5% v/v a temperatura ambiente durante 2 horas. Las resinas filtradas se lavaron con TFA al 95%-agua y los filtrados y lavados se diluyeron al agregar agua. La mezcla resultante se extrajo 3 veces con éter y finalmente se secó por congelado. El péptido crudo se purificó por CLAR preparativa. El producto purificado se encontró que es homogéneo y la pureza se encontró que es mejor al 95%. La identidad del péptido se confirmó por ES-EM (Pm encontrado 4186.25 y calculado 4186.18) . Síntesis del Péptido del Compuesto 10, H-His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe- Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asp-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-NH2 ( [Asp28] Exendina-4-NH2) en TentaGel S - RAM . La resina TentaGel S-RAM seca (0.23 mmol/g, 1,0 g) se colocó en un recipiente de polietileno equipado con un filtro de polipropileno para filtración y se expandió durante dos horas en DMF (5 mi) . El grupo Fmoc se removió de conformidad con el procedimiento descrito arriba, y el péptido de conformidad con la secuencia se ensambla como se describe bajo "Batchwise peptide synthesis on TentaGel S-RAM resins [Due Larsen, B. and Holm, A. (1998) J. Pept . Res. 52,470] . Después de completar la síntesis, la resina-péptido se lavó con DMF (3x5 mi, 1 minuto cada uno) , DCM (3x5 ML , 1 minuto cada uno) , éter de dietilo (3x5 mi, 1 minuto cada uno) y se secó in vacuo. El péptido se desdobló de la resina por tratamiento con ácido tri f luoroacético al 95% y etanditiol al 5% v/v a temperatura ambiente durante 2 horas. Las resinas filtradas se lavaron con TFA al 95%-agua y los filtrados y lavados se diluyeron al agregar agua. La mezcla resultante se extrajo 3 veces con éter y finalmente se secó por congelado. El péptido crudo se purificó por CLAR preparativa. El producto purificado se encontró que es homogéneo y la pureza se encontró que es mejor al 95%. La identidad del péptido se confirmó por ES-EM (Pm encontrado 4185.38 y calculado 4185.01) . Síntesis del Péptido del Compuesto 11. H-His -Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr- Ser-Asp-Leu- Ser-Lys -Glu-Met -Glu-Glu-Glu-Ala-Val -Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Ser-Lys-Lys -Lys-Lys -Lys -Lys -NH2 (des Pro36- [Glu13] Exendina-4- (Lys) 6-NH2) en TentaGel S -RAM . La resina TentaGel S-RAM seca (0.23 mmol/g, 1,0 g) se colocó en un recipiente de polietileno equipado con un filtro de polipropileno para filtración y se expandió durante dos horas en DMF (5 mi) . El grupo Fmoc se removió de conformidad con el procedimiento descrito arriba, y el péptido de conformidad con la secuencia se ensambla como se describe bajo "Batchwise peptide synthesis on TentaGel S-RAM resins [Due Larsen, B. and Holm, A. (1998) J. Pept . Res. 52, 470].

Después de completar la síntesis, la resina-péptido se lavó con DMF (3x5 mi, 1 minuto cada uno) , DCM (3x5 mi, 1 minuto cada uno) , éter de dietilo (3x5 mi, 1 minuto cada uno) y se secó in vacuo. El péptido se desdobló de la resina por tratamiento con ácido trifluoroacético al 95% y etanditiol al 5% v/v a temperatura ambiente durante 2 horas. Las resinas filtradas se lavaron con TFA al 95%-agua y los filtrados y lavados se diluyeron al agregar agua. La mezcla resultante se extrajo 3 veces con éter y finalmente se secó por congelado. El péptido crudo se purificó por CLAR preparativa. El producto purificado se encontró que es homogéneo y la pureza se encontró que es mejor al 95%. La identidad del péptido se confirmó por ES-EM (Pm encontrado 4855.72 y calculado 4855.52) . Síntesis del Péptido del Compuesto 12, H-His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Met (0) -Glu-Glu-Glu-Ala-Val -Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala- Pro-Pro-Ser-Lys -Lys-Lys-Lys-Lys -Lys -NH2 (des Pro36 - [Met (O) 14] Exendina-4 - (Lys ) 6 -NH2 ) en TentaGel S -RAM . La resina TentaGel S-RAM seca (0.23 mmol/g, 1,0 g) se colocó en un recipiente de polietileno equipado con un filtro de polipropileno para filtración y se expandió durante dos horas en DMF (5 mi) . El grupo Fmoc se removió de conformidad con el procedimiento descrito arriba, y el péptido de conformidad con la secuencia se ensambla como se describe bajo "Batchwise peptide synthesis on TentaGel S- A resins [Due Larsen, B. and Holm, A. (1998) J. Pep . Res. 52,470]. El sulfóxido de metionina se incorporó como Fmoc -Me (O) -OH (Adquirido de Bachem) de conformidad con los procedimientos de acoplamiento descritos [Due Larsen, B. and Holm, A. (1998) J. Pept. Res. 52, 470] . Después de completar la síntesis, el péptido-resina se lavó con D F (3x5 mi, 1 minuto cada uno), DCM (3x5 mi, 1 minuto cada uno), éter de dietilo (3x5 mi, 1 minuto cada uno) y se secó in vacuo. El péptido se desdobló de la resina por tratamiento con ácido trifluoroacético al 95% y etanditiol al 5% v/v a temperatura ambiente durante 2 horas. Las resinas filtradas se lavaron con TFA al 95%-agua y los filtrados y lavados se diluyeron al agregar agua. La mezcla resultante se extrajo 3 veces con éter y finalmente se secó por congelado. El péptido crudo se purificó por CLAR preparativa. El producto purificado se encontró que es homogéneo y la pureza se encontró que es menor al 95%. La identidad del péptido se confirmó por ES-EM (Pm encontrado 4870.88 y calculado 4870.53). Síntesis del Péptido del Compuesto 13, H-His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Met (02) -Glu-Glu-Glu-Ala-Val -Arg-Leu-Phe- Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala - Pro - Pro-Ser- Lys-Lys -Lys -Lys-Lys -Lys - H2 (des Pro36- [Met (02) 4] Exendina-4 - (Lys) 6-NH2) en TentaGel S-RAM. La resina TentaGel S-RAM seca (0.23 mmol/g, 1,0 g) se colocó en un recipiente de polietileno equipado con un filtro de polipropileno para filtración y se expandió durante dos horas en D F (5 mi) . El grupo Fmoc se removió de conformidad con el procedimiento descrito arriba, y el péptido de conformidad con la secuencia se ensambla como se describe bajo "Batchwise peptide synthesis on TentaGel S-RA resins [Due Larsen, B. and Holm, A. (1998) J. Pept . Res. 52,470] . La sulfona metionina se incorporó como Fmoc-Met (02) -OH (Adquirido de Bachem) de conformidad con los procedimientos de acoplamiento descritos [Due Larsen, B. and Holm, A. (1998) J. Pept. Res. 52, 470] . Después de completar la síntesis, el péptido- resina se lavó con DMF (3x5 mi, 1 minuto cada uno), DCM (3x5 mi, 1 minuto cada uno) , éter de dietilo (3x5 mi, 1 minuto cada uno) y se secó in vacuo. El péptido se desdobló de la resina por tratamiento con ácido trifluoroacético al 95% y etanditiol al 5% v/v a temperatura ambiente durante 2 horas. Las resinas filtradas se lavaron con TFA al 95%-agua y los filtrados y lavados se diluyeron al agregar agua. La mezcla resultante se extrajo 3 veces con éter y finalmente se secó por congelado. El péptido crudo se purificó por CLAR preparativa. El producto purificado se encontró que es homogéneo y la pureza se encontró que es mejor al 95%. La identidad del péptido se confirmó por ES-EM (Pm encontrado 4886.68 y calculado 4886.53) .

S5 Prueba Oral de Tolerancia a la Glucosa (OGTT, por sus siglas en inglés) El efecto antidiabético de los presentes compuestos se probó en la prueba oral de tolerancia a la glucosa (OGTT) . En corto, los animales ayunaron durante la noche, y las muestras sanguíneas se tomaron de la punta de la cola y se midió el nivel de glucosa. La concentración (mM) de glucosa en la sangre entera se analizó por el método de oxidasa de glucosa inmovilizado usando una gota de sangre (< 5 µ? ; Elite Autoanalyser , Bayer, Dinamarca) siguiendo el manual del fabricante. Los animales se mantienen en ayuno a través de la prueba. Inmediatamente después de que el compuesto o vehículo de prueba de la muestra sanguínea inicial (nivel de glucosa sanguíneo en ayuno) se administró i.p. Cincuenta minutos después, se dio una dosis oral de glucosa ((1 g/kg) Sigma, St . Louis, MO, E.U.A.)), se disolvió en solución amortiguadora (pH = 7.40) , y los animales se regresaron a sus jaulas hogar (tiempo = 0) . Los niveles de glucosa sanguínea (BG) se midieron al tiempo = 30 minutos, tiempo = 60 minutos, y tiempo = 120 minutos para el Compuesto 1, 8, 9, 10 y 11 y adicionalmente tiempo = 240 minutos para los Compuestos 1, 2, 5, 6, 7 y 14. Para analizar los efectos de los compuestos de prueba en la tolerancia de glucosa oral la diferencia absoluta en BG de la línea base (BG ayunado) se calculó para cada punto de tiempo. El área bajo la curva (AUC) (Figura 1-8) para el experimento completo (AUC0_120 min) ° (AUC0-24o r.:r.) se determinó usando el método trapezoide. Antes de iniciar la serie de experimentos, se usa un OGTT para estratificar los animales en grupos de 9-10 animales que exhibe tolerancias a la glucosa similares en todos los grupos. Los animales que exhiben la excesiva excursión de glucosa 30 minutos después de la carga de glucosa (BG > 33 mmol/1) se excluyeron del estudio . Resultados de la prueba de tolerancia a la glucosa Los resultados de la prueba de tolerancia a la glucosa se ilustran en las figuras 1-4. Los valores ED50 calculados se presentan en la Tabla 1.

Tabla 1: muestra el ED50 con base en los ajustes de la curva la relación de desviación estándar (SDr) .

El ajuste de los datos obtenidos después del tratamiento con el Compuesto 1 se ilustra en la Figura 1. El ED50 y SDr calculado se muestra en la Tabla 1.

El a] usté de los datos obtenidos después del tratamiento con el Compuesto 14 se ilustra en la Figura 2. El ED50 y SDr calculado se muestra en la Tabla 1. El ajuste de los datos obtenidos después del tratamiento con el Compuesto 6 se ilustra en la Figura 3. El ED50 y SDr calculado se muestra en la Tabla 1. El ajuste de los datos obtenidos después del tratamiento con el Compuesto 7 se ilustra en la Figura 4. El ED50 y SDr calculado se muestra en la Tabla 1. En otro conjunto de experimento, el Compuesto 1, Compuesto 2 y el Compuesto 5 se probaron como se describe arriba. Los resultados se ilustran en las Figuras 5, 6 y 7. los valores ED50 se resumen en la Tabla 2.

Tabla 2: ED50 con base en los ajustes. El cálculo de la relación de desviación estándar (SDr) se presenta arriba.

El ajuste de los datos obtenidos después del tratamiento con el Compuesto 1 se ilustra en la Figura 5. El ED50 y SDr calculado se muestra en la Tabla 2.

El ajuste de los datos obtenidos después del tratamiento con el Compuesto 5 se ilustra en la Figura 6. El ED50 y SDr calculado se muestra en la Tabla 2. El ajuste de los datos obtenidos después del tratamiento con el Compuesto 2 se ilustra en la Figura 7. El ED50 y SDr calculado se muestra en la Tabla 1. En conclusión, los Compuestos anteriores todos muestran efecto anti -diabético al incrementar significativamente la tolerancia a la glucosa en los ratones db/db como se muestra por la reducción en AUC0-120 minu os o AUC0-240 minutos (ilustrado en las figuras 1-8) . Todas las soluciones probadas tiene efecto positivo en la tolerancia a la glucosa en dosis arriba de 0.01 nmol/kg. De esta manera, la administración de los compuestos de prueba produce una reducción dependiente de la dosis de la glucosa sanguínea que sigue a una carga de glucosa . La invención descrita y reivindicada en la presente no se limita en el alcance por las modalidades específicas descritas en la presente, ya que estas modalidades se pretende como ilustraciones de varios aspectos de la invención. Cualesquiera de las modalidades equivalentes se pretende que estén dentro del alcance de esta invención. Sin embargo, varias modificaciones de la invención además de aquellas mostradas y descritas en la presente serán aparentes para aquellos expertos en el arte a partir de la descripción anterior. Tales modificaciones también se pretenden que caigan dentro del alcance de las reivindicaciones adjuntas. Varias referencias se citan en la presente, la descripción de las cuales se incorpora para referencia en sus totalidades. Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones 1. Una composición caracterizada porque comprende una exendina 4(1-39) estabilizada que comprende: (a) una eliminación de 0 a 5 aminoácidos en las posiciones que corresponden a la posición 34-38 de la exendina 4 y (b) un residuo de alf -aspartato (Asp) o beta-aspartato ( isoaspart ilo) en una posición que corresponde al residuo Asn en la posición 28 de la exendina 4 (c) opcionalmente : (i) un residuo oxidado de metionina en una posición que corresponde a la posición 14 de la exendina 4; y/o (ii) un residuo oxidado de triptofano en una posición que corresponde a la posición 25 de la exendina 4; y/o (iii) un Gln desaminado o hidrolizado que corresponde a la posición 13 de la exendina 4; y/o (d) opcionalmente al menos una secuencia de péptido Z de 4-20 residuos de aminoácidos enlazados covalentemente en la exendina estabilizada; o una sal o solvato farmacéuticamente aceptables del mismo. 2. La composición de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque: (a) el residuo oxidado de metionina es un sulfóxido de metioninilo o una metioninil sulfona; y/o (b) el residuo oxidado de triptofano comprende un grupo oxidado 3H- mdol - 3 - ilo ; y/o (c) el residuo oxidado de triptofano es N-formilcinurenina (NFK) , 3 -hidroxicinurenina (3-OH-KYN) , hidroxitriptofano ÍHTRP) o cinurenina (KYN) . 3. La composición de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque Z comprende entre alrededor de 4 a alrededor de 20 unidades de aminoácido Lys. 4. La composición de conformidad con la reivindicación 3, caracterizada porque Z comprende 6 unidades de aminoácido Lys . 5. La composición de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el compuesto estabilizado de exendina 4(1-39) y Z se enlazan por un enlace de péptido. 6. La composición de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque Z se enlaza covalentemente al compuesto estabilizado de exendina 4 (1-39) en la función de carbonilo de la terminal C. 7. La composición de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el compuesto estabilizado de exendina 4 (1-39) comprende alguna de las siguientes secuencias: des Pro:¿ [Asp23] exendina-4 (1-39) , des pro" [isoAsp28] Exer.dina-4 (1-39) , des pro35 [Met (0) 14 , Asp28 ] Exendina - 4 ( 1 - 39 ) , des pro36 [Met (0) 14 , IsoAsp28] Exendina-4 (1-39) , des pro36 [Trp(02) 25 , Asp2B] Exendina-4 ( 1 - 39) , des pro36 [Trp(02)25, IsoAsp28] Exendina-4 ( 1 - 39 ) , des pro36 [Met (O) 1 Trp(02) 25, Asp28] Exendina -4 ( 1 - 39 ) , des pro36 [Met (O)14 Trp(02)25, I soAsp28] Exendina^4 ( 1 - 39 ) 8. La composición de conformidad con la reivindicación 7, caracterizada porque comprende además el siguiente grupo ligado a la terminación C del compuesto: -Lys6-NH2. 9. La composición de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el compuesto de exendina 4(1-39) estabilizada comprende alguna de las siguientes secuencias: H- (Lys) 6-des Pro36 [Asp28] Exendina-4 (1-39) -Lys6-NH2 des Asp26Pro3S, Pro37, Pro38Exendina - 4 (1-39) -NH2, H-(Lys)6-des Pro35, Pro37, Pro38 [Asp28] Exendina-4 (1-39) -NH2 H-Asn- (Glu) 5des Pro35, Pro37, Pro38 [Asp26] Exendina-4 (1- 39) -NH2, des Pro36, Pro37, Pro33 [Asp28] Exendina-4 ( 1 - 39 )- (Lys) 6 -NH2 , H-Lys)6-des Pro36, Pro37, Pro38 [Asp28] Exendina -4 (1 - 39 ) - (Lys) 6-NH2, H-Asn-Glu);- des Pro36, Pro37, Pro38 [Asp28 ] Exendina - 4 ( 1 -39) - (Lys) S-NH2,

H-(Lys)5-des Pro35 [Trp (02 ) 25 , Asp28] Exendina-4 ( 1 - 39 ) -Lys6 -NH2, H-des Asp28 Pro36, Pro37, Pro38 [Trp (02) 25] Exendina-4 (1-39) - NH2, H-(Lys)des Pro36, Pro37, Pro38 [Trp (02) 25 , Asp26] Exendma-4(l-39)-NH2, H-Asn- (Glu) 5-des Pro36, Pro37, Pro38 [Trp (O,) 25 ,
Asp26] Exendina-4 (1-39) -NH2, des Pro36, Pro37, Pro38 [Trp (02) 26 , Asp28] Exendina -4 ( 1 - 39 ) - (Lys) 6- H2, H-(Lys)s-des Pro36, Pro37, Pro38 [Trp (02 ) 25 , Asp28] Exendina- 4(1-39)- (Lys) 6-NH2, H-Asn- (Glu) 5-des Pro36, Pro37, Pro38 [Trp Asp26] Exendina-4 (1-39) (Lys) 6-NH2,
H-(Lys)6-des Pro36 [Trp (02) 25 , Imida cíclica28] Exendina-4 ( 1 -39) -Lys6-NH2, des Met (0) 1Asp28 Pro36, Pro37, Pro38 Exendina-4 ( 1 - 39 ) -NH2 , H- (Lys) des Pro36 Pro37 Pro38 [Met (O)14, Asp28] Exendina-4 ( 1 -39) -NH2, H-Asn- (Glu) 5-des Pro36, Pro37, Pro38 [Met (O) 1 ,
Asp28] Exendina-4 (1-39) -NH2, des Pro36, Pro37, Pro38 [Met (O) 14 , Asp28] Exendina-4 ( 1 - 39 ) -(Lys) 8-NH2, H-(Lys)6-des Pro36, Pro37, Pro38 [Met (0) 14 , Asp28] Exendina -4(1-39)- (Lys) 6-NH2, H-Asn-(Glu)5 des Pro35, Pro37, Pro38 [Met (0) 1 ,
Asp28] Exendina-4 (1-39) - (Lys) 6-NH2, des Pro36, Pro37, Pro38 [Met (0) 14 , Asp28] Exendina-4 ( 1 - 39 ) - (Lys)6-NH2, H- (Lys) 6-des Pro36, Pro37, Pro38 [Met (O) 14 , Asp28 ] Exendina -4 (1-39) - (Lys) 6- H2, H-Asn- (Glu) 5-des Pro36, Pro37, Pro38 [Met (O) 1 ,
Asp28] Exendina-4 (1-39) - (Lys) 6-NH2,
H-Lyss-des Pro36 [Met (0) 1 , Trp(02) 25, Asp28] Exendina-4 ( 1 -39) -Lys6-NH2, H-des Asp2E Pro36, Pro37, Pro38 [Met (O) 1 ,
Trp (02) 25] Exendina-4 (1-39) -NH2 , H- (Lys) e-des Pro36, Pro37, Pro38 [Met (O) 14 , Trp (02) 25 ,
Asp28] Exendina-4 (1-39) -NH2, H-Asn- (Glu) 5-des Pro36, Pro37, Pro38 [Met (0) 1 , Trp(02)25, Asp28] Exendina-4 (1-39) -NH2, des Pro36, Pro37, Pro38 [Met (O) 14 , Trp(02) 25, Asp28] Exendina-4 (1-39) - (Lys) 6-NH2, H-(Lys)6-des Pro36, Pro37, Pro38 [Met (O) 14 , Trp (02) 25 Asp28] Exendina-4 (1-39) - (Lys) 6-NH2, H-Asn- (Glu) s-des Pro36, Pro37, Pro38 [Met (0) 14 , Trp (02) 25, Asp28] Exendina-4 (1-39) - (Lys) S-NH2, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptables del mismo.
10. La composición de conformidad con la reivindicación
I, caracterizada porque los residuos de aminoácidos tienen una configuración L, una configuración D, o la composición incluye una mezcla de residuos de L y D-aminoácidos . 11. La composición de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizada porque comprende además un portador farmacéuticamente aceptable. 12. La composición de conformidad con la reivindicación
II, caracterizada porque la composición comprende una formulación de depósito, microesferas , liposomas o la composición incluye una formulación líquida estabilizada.
13. La composición farmacéuticamente aceptable de conformidad con la reivindicación 11, caracterizada porque la composición comprende al menos uno de los siguientes compuestos : des Pro36 [Asp28] exendina-4 (1-39) , des pro36 [isoAsp28] Exendina-4 (1-39) , des pro36 [Met (0) 14] Exendina-4 (1-39) , des pro35 [Trp(02) 25] Exendina- 4 ( 1 - 39 ) , des pro36 [Met (O) 1 Asp28] Exendina-4 ( 1 - 39 ) , des pro36 [Met (O)14 IsoAsp28] Exendina- 4 ( 1 - 39 ) , des pro36 [Met [0) 14 Trp (02 ) 25] Exendina-4 ( 1 - 39 ) des pro36 [Trp; o2 ) 2 S , Asp28] Exendina-4 ( 1 -39) , des pro36 [Trp !02) 25, IsoAsp28] Exendina-4 (1-39) , des pro36 [Met (0) 1 Trp (02) 25] Exendina-4 (1-39) des pro36 [Met(O)14 Trp(02)25, Asp28] Exendina-4 (1-39) des pro36 [Met(O)14 Trp(02)25, I soAsp28] Exendina-4 ( 1 - 39 )
14. La composición de conformidad con la reivindicación 13, caracterizada porque comprende además el siguiente grupo ligado a la terminación C del compuesto: -Lyss-NH2.
15. Un método para la elaboración de la composición de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1 a 14, caracterizado porque comprende al menos una de las siguientes etapas : a) obtener la exendina 4 (1-39) o una variante, análogo o derivado de la misma, b) incubar la exendina 4 (1-39) o la variante, análogo o derivado de la misma bajo condiciones suficientes para introducir al menos uno de los siguientes aminoácidos en ella: i) un residuo Asn que tiene una cadena lateral desaminada, un residuo Asn que tiene una cadena lateral hidrolizada o un isómero estructural de un residuo Asp, en donde el residuo Asn o Asp corresponde a la posición 28 de la exendina 4, y opcionalmente ii) un residuo oxidado de metionina que corresponde a la posición 14 de exendina 4, y/o iii) un residuo oxidado de triptofano que corresponde a la posición 25 de exendina 4; y/o iv) un Gln desaminado o hidrol izado que corresponde a la posición 13 de la exendina 4.
16. El método de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque comprende además la etapa de detección de la presencia o ausencia de al menos uno de los aminoácidos (i) - (iv) . 17-. El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque comprende además la etapa de identificación de al menos uno de los aminoácidos (i)-(iv) en la composición. 18. El método de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque las condiciones incluyen poner en contacto con al menos uno de agua, calor, luz, metal, iones de metal, vapor de agua u oxígeno. 19. El método de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque las condiciones incluyen además poner en contacto con alrededor de la temperatura ambiente (25°C) . 20. El método de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado porque las condiciones incluyen además poner en contacto con aire. 21. Una composición de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1 a 14 , caracterizada porque es para su uso en terapia. 22. El uso de una composición de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1 a 14 para la preparación de un medicamento para el tratamiento de la diabetes tipo 1 o tipo 2, síndrome de resistencia a insulina, tolerancia debilitada a la glucosa (IGT), obesidad, trastornos alimenticios, hipergl icemia , trastornos metabólicos y enfermedad gástrica, estados de enfermedad asociados con niveles elevados de glucosa en la sangre, regulación de los niveles de glucosa en la sangre, regulación del vaciado gástrico, estimulación de la liberación de insulina .