KR20230008846A - 이중 수용체 아고니즘 작용을 갖는 폴리펩티드 유도체 및 그 용도 - Google Patents

이중 수용체 아고니즘 작용을 갖는 폴리펩티드 유도체 및 그 용도 Download PDF

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Abstract

본 발명은 폴리펩티드 유도체, 이의 변형된 유도체 또는 이의 염, 및 상기 폴리펩티드 유도체, 이의 변형된 유도체 또는 이의 염의 용도를 제공한다. 상기 폴리펩티드 유도체, 이의 변형된 유도체 또는 이의 염은 하기 일반식 I의 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함하되: 일반식 I: HX2QGTFTSDX10SKYLX15EX17X18AX20X21FX23AWLEX28X29X30이고, 상기 일반식 I의 서열에서, X2, X10, X15, X17, X18, X20, X21, X23, X28, X29, X30의 정의는 청구범위 및 명세서에 정의된 바와 같다. 본 발명의 폴리펩티드 유도체는 GC/GLP-1 수용체의 이중 작용제이고, 에너지 대사에 시너지 영향을 미치며, 혈당을 효과적으로 감소시키는 동시에 체중을 줄이고, 체지방 수준을 개선하며, 당뇨병, 비만 등 대사성 질환의 치료 분야에서 잠재적인 응용 가치를 갖는다.

Description

이중 수용체 아고니즘 작용을 갖는 폴리펩티드 유도체 및 그 용도
본 발명은 의약 생물 기술 분야에 속하는 것으로, 구체적으로 글루카곤/글루카곤 유사 펩티드-1 이중 수용체 아고니즘(agonism) 작용을 갖는 글루카곤 유도 펩티드 및 그 용도에 관한 것이다.
비만은 다양한 질환을 일으키는 위험 요소로, 이미 전 세계적인 대중 건강 문제가 되었다. 특히, 2형 당뇨병(T2DM)을 포함하는 대사 증후군, 심혈관병, 비알코올성 지방간 등 흔히 볼 수 있는 질환으로, 그 발병율과 병세의 진전은 비만과 밀접한 관계를 가진다. 여러 가지 큰 임상 연구에서, 정상 체중 사람들에 비해 심혈관 대사 다중 질환의 발병률은 BMI 25.0 ~ 29.9 kg/m2, 30.0 ~ 34.9 kg/m2 및 BMI > 35.0 kg/m2인 과체중, 비만 또는 심각한 비만인 사람들에서 각각 2배, 5배, 15배(Lancet 2, e277-e285, 2017) 높은 것을 발견하였다. 연구에 따르면, 80 ~ 90 %의 T2DM 환자가 과체중 또는 비만이고, 적절한 체중 감량(4 ~ 5 kg)은 유병률 감소, 혈당 및 불구가 되는(치사) 확률 제어를 포함하는 병세 예방 및 제어에 유리한 것으로 나타났다(Curr.Med. Res. Opin. 2011, 27 (7), 1431-1438).
음식 제어와 단련은 가장 이상적인 체중 감량 수단이지만, 일반적으로 효과가 바람직하지 못하다. 비만에 대한 약물 간섭 효능이 제한적이거나 다양한 위험이 존재하며, 심각한 심혈관 영향 및 중추 신경 작용으로 인한 정신 증상 등 부작용을 포함한다. 지금까지, 단독으로 5 ~ 10 %를 초과하는 체중 감량을 이룰 수 있는 약물은 매우 적다. T2DM 치료 약물에서 SGLT2 억제제와 GLP-1 수용체 작용제만 체중 제어에 양성 효과를 갖는다. 다이어트 수술은 효과가 현저하나, 수술 위험이 크고, 장기적인 효과는 여전히 불확실하다. 따라서, 체중을 제어하기 위한 약물은 여전히 임상에서 많이 요구되고 있으며, 1차 병증 치료 작용이 있으면서 체중을 안전하고 효과적으로 제어할 수 있는 약물이 이상적인 선택이다.
유기체의 혈당과 에너지 조절 신호 시스템은 상이한 폴리펩티드계 호르몬을 포함하는 다양한 요인에 의해 미세한 균형을 유지한다. 글루카곤원(pro-glucagon)은 158개의 아미노산을 갖는 전구체 폴리펩티드이고, 상이한 조직에서 글루카곤(GC), 글루카곤 유사 페티드-1(GLP-1), 글루카곤 유사 페티드-2(GLP-2) 및 가스트린 등 다양한 글루카곤원의 유도 펩티드로 가공되며, 이러한 호르몬은 포도당 체내 균형, 인슐린 분비, 위 배출, 장 성장 및 음식 섭취 등 다양한 생리 기능의 조절에 참여한다. 따라서, 글루카곤원에 기반한 장 호르몬의 치료는 대사 질환 분야에서 많은 관심을 받는 연구 방향으로 되었다.
GC는 글루카곤원에 대응되는 33 내지 61번 아미노산으로 이루어진 29개의 아미노산을 함유하는 유도 펩티드이고, 췌장 α세포에서 가공되어 생성되며, 유기체의 굶주림, 추위 등 스트레스 상태에서 간장에 작용하여, 당 분해 및 글루코오스 생성 작용을 통해 혈당 수준을 정상 범위로 상승시킨다. 혈당 작용 외, 동물 및 인간 시험 결과에 따르면, GC는 또한 발열, 포만감 증가, 지방 분해, 지방 산화, 케톤 생성 등 작용이 있고, 장기 투여는 체중 감량을 포함하는 에너지 대사를 개선할 수 있으나, 에너지 대사에 대한 이러한 유익한 작용은 그 고유한 당 상승 작용에 의해 적용될 수 없다.
GLP-1은 글루카곤원에 대응되는 72 내지 108번 아미노산으로 이루어진 37개의 아미노산 잔기를 함유하는 유도 펩티드이고, 유기체의 식사 반응에서 장 L세포에 의해 분비되며, 췌장 β-세포에 작용하여 인슐린 분비를 촉진하면서, 동시에 GC 수용체를 길항하여 혈당 상승을 억제한다. GLP-1 수용체 작용제는 당뇨병 환자의 고혈당 치료제로 개발되어, 혈당을 낮추는 동시에 췌도 세포를 보호 및 증식시키고, 위배출을 늦추고 음식 섭취를 억제하여, 체중을 효과적으로 감량시킬 수 있다. 7개의 GLP-1 수용체 작용제가 출시되었고, 단기적 효과가 있는 엑세나타이드(exenatide), 리라글루티드(liraglutide), 릭시세나타이드(Lixisenatide)(1 ~ 2회/일), 및 장기적 효과가 있는 알비클루타이드(Albiglutide), 둘라글루타이드(Trulicity), Byuderon, 및 세마글루타이드(semaglutide)(1회/주)가 포함된다. GLP-1 수용체 작용제 약물은 안전하고 독특한 혈당 강하 작용이 있으나, 체중 감량에 사용될 경우, 일반적으로 큰 조제량으로 사용되고, 이러한 약물은 큰 조제량에서 위장 부작용을 쉽게 일으키며, 내성이 좋지 못하고, 치료 범위가 좁다. 따라서, 더욱 내성이 있고, 혈당을 효과적으로 제어하며 체중을 감량하는 치료제가 여전히 수요되고 있다.
옥신토모듈린(Oxyntomodulin, OXM)은 글루카곤원 변역 후 변형 가공 과정에서 장에서 생성된 호르몬으로, 식사 반응에서 장 L-세포로 돌아가 GLP-1 등 호르몬과 동시에 분비된다. OXM의 급성 영향에는 위배출, 위 및 췌장의 외인성 분비 및 섭식의 억제 작용, 휴지 에너지 소모 등이 포함되고, 체중 감량 작용이 있을 수 있다. OXM의 특이적 수용체는 지금까지 명확하지 않지만, 연구에 따르면 OXM은 내인성 GCGR/GLP-1R 이중 작용제이고, 두 수용체에 대한 활성 효력은 각 수용체의 천연 리간드보다 약한 것을 발견하였다. 동물 및 인체 시험에서, OXM 말초 투여는 섭식량을 줄이고 체중을 감량할 수 있으며, 비만 대상에서 대사율과, 특히 활동과 관련된 에너지 소모를 증가시킬 수 있는 것을 발견하였다. 특히, 임상 시험에서 큰 조제량의 OXM 말초 투여는, 체중을 감량하는 동시에 오심, 구토 등 흔히 볼 수 있는 위장 부작용 발생 확률이 낮다. 따라서, OXM 또는 GLP-1/GCGR 이중 작용제에 기반한 비만증 및 비만형 당뇨병 치료에서 잠재적인 적용 가치를 나타냈으나, 지금까지 관련 약물 출시는 없다.
본 발명의 하나의 목적은 글루카곤폴리펩티드 유도체를 제공하는 것이고, 상기 폴리펩티드는 GC 천연 서열에 기반하여 설계된 변이체로서, GC/GLP-1 수용체의 이중 아고니즘 작용에 의해 에너지 대사에 시너지 영향을 미치며, 혈당을 효과적으로 낮추고, 체중을 감량하며, 체지방 수준을 개선할 수 있고, 당뇨병, 비만, 대사 증후군 및 비알코올성 지방간 등 질환의 치료에 사용될 수 있다.
본 발명의 다른 목적은 본 발명에 따른 글루카곤 폴리펩티드 유도체를 포함하는 약학 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 본 발명에 따른 글루카곤 폴리펩티드 유도체의 용도를 제공하는 것이다.
본 발명의 목적은 하기 기술적 해결수단에 의해 구현된다.
일 양태에 있어서, 본 발명은 폴리펩티드 유도체, 이의 변형된 유도체 또는 이의 염을 제공하고, 하기 일반식 I의 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
HX2QGTFTSDX10SKYLX15EX17X18AX20X21FX23AWLEX28X29X30
일반식 I
일반식 I의 서열에서,
X2는 Ser, D-Ser 또는 Aib이고;
X10은 Tyr이며;
X15는 Asp 또는 Glu이고;
X17은 Arg, Gln 또는 Lys이며;
X18은 Ala이고;
X20은 측쇄가 변형된 Lys이며;
X21은 Asp 또는 Glu이고;
X23은 Val 또는 Ile이며;
X28은 Ala, Gly 또는 Ser이고;
X29는 Gly 또는 Glu이며;
X30은 Gly 또는 존재하지 않고;
C-말단 카르복실기는 유리되거나 아미드화된다.
일부 바람직한 실시형태에 있어서, 상기 일반식 I의 서열에서,
X17은 Arg 또는 Lys이고;
X28은 Ala 또는 Ser이며;
X29는 Gly이고;
X30은 Gly이며;
또한, C-말단 카르복실기는 아미드화된다.
바람직한 실시형태에 있어서, 일반식 I의 서열에서, X2는 Aib이다.
바람직한 실시형태에 있어서, 상기 일반식 I의 서열은 하기로부터 선택된다.
SEQ.ID.NO.4 HSQGTFTSDYSKYLDERAAK*EFIAWLEAGG
SEQ.ID.NO.5 HdSQGTFTSDYSKYLEEKAAK*EFIAWLEAGG
SEQ.ID.NO.6 HdSQGTFTSDYSKYLEERAAK*EFIAWLEAGG
SEQ.ID.NO.7 HAibQGTFTSDYSKYLDERAAK*EFIAWLEAGG
SEQ.ID.NO.8 HAibQGTFTSDYSKYLEERAAK*EFIAWLEAGG
SEQ.ID.NO.9 HAibQGTFTSDYSKYLDERAAK*EFVAWLEAGG
SEQ.ID.NO.10 HSQGTFTSDYSKYLDERAAK*EFIAWLESGG
SEQ.ID.NO.11 HdSQGTFTSDYSKYLEERAAK*EFVAWLESGG
SEQ.ID.NO.12 HAibQGTFTSDYSKYLDERAAK*EFIAWLESGG
SEQ.ID.NO.13 HAibQGTFTSDYSKYLEERAAK*EFIAWLESGG
SEQ.ID.NO.14 HAibQGTFTSDYSKYLEEKAAK*EFVAWLESGG
SEQ.ID.NO.15 HAibQGTFTSDYSKYLDEKAAK*EFIAWLESGG
SEQ.ID.NOs.4 ~ 15에서, K*는 측쇄 ε-아미노기가 변형된 Lys이고, C-말단 카르복실기는 아미드화된다.
일부 바람직한 실시형태에 있어서, 상기 일반식 I의 서열에서,
X17은 Arg 또는 Lys이고;
X28은 Gly이며;
X29는 Gly이고;
X30은 존재하지 않으며;
또한, C-말단 카르복실기는 아미드화된다.
바람직한 실시형태에 있어서, 상기 일반식 I의 서열은 하기로부터 선택된다.
SEQ.ID.NO.16 HSQGTFTSDYSKYLDERAAK*EFIAWLEGG
SEQ.ID.NO.17 HdSQGTFTSDYSKYLEERAAK*EFVAWLEGG
SEQ.ID.NO.18 HAibQGTFTSDYSKYLDERAAK*EFIAWLEGG
SEQ.ID.NO.19 HAibQGTFTSDYSKYLEERAAK*EFIAWLEGG
SEQ.ID.NO.20 HAibQGTFTSDYSKYLEEKAAK*EFVAWLEGG
SEQ.ID.NO.21 HAibQGTFTSDYSKYLDEKAAK*EFIAWLEGG
SEQ.ID.NOs.16~21에서, K*는 측쇄 ε-아미노기가 변형된 Lys이고, C-말단 카르복실기는 아미드화된다.
일부 바람직한 실시형태에 있어서, 상기 일반식 I의 서열에서,
X17은 Arg 또는 Lys이고;
X28은 Gly이며;
X29는 Glu이고;
X30은 Gly이며;
또한, C-말단 카르복실기는 아미드화된다.
바람직한 실시형태에 있어서, 상기 일반식I의 서열은 하기로부터 선택된다.
SEQ.ID.NO.22 HSQGTFTSDYSKYLDERAAK*EFIAWLEGEG
SEQ.ID.NO.23 HdSQGTFTSDYSKYLEEKAAK*EFVAWLEGEG
SEQ.ID.NO.24 HAibQGTFTSDYSKYLDERAAK*EFIAWLEGEG
SEQ.ID.NO.25 HAibQGTFTSDYSKYLEERAAK*EFIAWLEGEG
SEQ.ID.NO.26 HAibQGTFTSDYSKYLEEKAAK*EFVAWLEGEG
SEQ.ID.NO.27 HAibQGTFTSDYSKYLDEKAAK*EFIAWLEGEG
SEQ.ID.NOs.22~27에서, K*는 측쇄 ε-아미노기가 변형된 Lys이고, C-말단 카르복실기는 아미드화된다.
본 발명의 일부 바람직한 실시형태에서, 상기 측쇄가 변형된 Lys는 친수성 연결 단편에 지방 아실기가 결합되는 것에 의해 상기 Lys의 측쇄 ε-아미노기가 변형된 것을 의미한다.
바람직하게는, 상기 Lys의 측쇄를 변형시키기 위한 ε-아미노기 친수성 연결 단편은 Glu, γGlu, Gly 및 Ado(8-아미노-3,6-디옥소옥탄산) 중 하나 이상으로 이루어진 단편으로부터 선택된다. 상기 친수성 연결 단편은 바람직하게 -γGlu-, -γGlu-γGlu-, -Glu-γGlu-, -γGlu-Gly-Gly-, -γGlu-Gly-γGlu-, -γGlu-Ado-Ado-, -Ado-Ado-γGlu- 또는 -γGlu-Ado-Ado-γGlu-이다.
본 발명의 바람직한 실시형태에서, 상기 지방 아실기는 C14-20의 지방 아실기이고, C14-20의 모노지방 아실기 또는 지방이산 모노아실기를 포함하며; 보다 바람직하게는 C16-18 지방 아실기이고, 가장 바람직하게는 C16 모노지방 아실기(팔미토일)이다.
다른 양태에 있어서, 본 발명은 본 발명에 따른 폴리펩티드 유도체, 이의 변형된 유도체 또는 이의 염 및 임의의 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 보조 재료를 포함하는 약학 조성물을 제공한다.
바람직하게는, 상기 약학적으로 허용 가능한 보조 재료는 담체, 희석제, 수용성 충진제, pH 조절제, 안정제, 주사용수, 삼투압 조절제 등을 포함한다.
바람직하게는, 상기 수용성 충진제는 글리콜, 저분자형 덱스트란, 소르비톨, 폴리에틸렌, 글루코오스, 락토스 및 칼락토오스를 포함하지만 이에 한정되지 않고; 상기 pH 조절제는 구연산, 인산, 젖산, 주석산, 염산 등 유기 또는 무기산 및 수산화칼륨, 수산화나트륨, 수산화암모늄, 탄산나트륨, 탄산칼륨, 탄산암모늄, 탄산수소칼륨, 탄산수소나트륨, 탄산수소암모늄염 등 생리적으로 허용 가능한 무기 염기 또는 염을 포함하지만 이에 한정되지 않으며; 상기 안정제는 EDTA-2Na, 티오황산나트륨, 메타중아황산나트륨, 아황산나트륨, 인산수소이칼륨, 탄산수소나트륨, 탄산나트륨, 아르기닌, 라이신, 글루타민산, 아스파르트산, 폴리에틸렌글리콜, 폴리비닐알코올, 폴리비닐피롤리돈, 카르복실/히드록시셀룰로오스 또는 HPC, HPC-SL, HPC-L 또는 HPMC, 시클로덱스트린, 황산도데실나트륨 또는 트리히드록시메틸아미노메탄(trihydroxymethylaminomethane)과 같은 이의 유도체를 포함하지만 이에 한정되지 않고; 상기 삼투압 조절제는 염화나트륨 또는 염화칼륨을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
바람직하게는, 본 발명에 따른 약학 조성물은 정맥, 근육 또는 피하 주사제 형태 또는 경구, 직장, 비강 투여될 수 있다. 치료 조제량 범위는 치료 대상, 치료 방식, 적응증 및 기타 요인 등에 의해 결정된다.
또 다른 양태에 있어서, 본 발명은 대사성 질환을 치료하기 위한 약물 제조에서 본 발명에 따른 폴리펩티드 유도체, 이의 변형된 유도체 또는 이의 염의 응용을 제공하되, 바람직하게는, 상기 대사성 질환은 당뇨병, 비만, 지방간, 고지혈증 및/또는 대사 증후군이며; 보다 바람직하게는, 상기 지방간은 비알코올성 지방간이다.
또 다른 양태에 있어서, 본 발명은 대사성 질환 치료 방법을 제공하되, 필요한 환자에게 치료 유효량의 본 발명에 따른 폴리펩티드 유도체, 이의 변형된 유도체 또는 이의 염, 또는 본 발명에 따른 약학 조성물을 투여하는 단계를 포함하고; 바람직하게는, 상기 대사성 질환은 당뇨병, 비만, 지방간, 고지혈증 및/또는 대사 증후군이며; 보다 바람직하게는, 상기 지방간은 비알코올성 지방간이다.
글루카곤 유도 펩티드의 구조: 내인성 GLP-1는 글루카곤원에 대응되는 72 내지 108번 아미노산으로 이루어진 37개의 아미노산 잔기(7-36/37)를 함유하는 유도 펩티드이고, 아미노산 서열은 HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR(7-36)(SEQ ID NO.1), HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRG(7-37)이며, 이의 C-말단 카르복실기는 유리되거나 아미드화된다. 내인성 GC는 글루카곤원에 대응되는 33 내지 61번 아미노산으로 이루어진 29개의 아미노산을 함유하는 유도 펩티드이고, 아미노산 서열은 HSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNT(SEQ ID NO.2)이며, C-말단 카르복실기는 유리된다. 천연 GLP-1 및 GC의 아미노산 서열은 47 %의 상동성을 갖고(Andreas Evers 등, J.Med.Chem. 2017, 60, 4293-4303), 양자의 N-말단 서열은 고도로 보존적이며, GLP-1은 이의 수용체에 대해 고도의 선택성을 가지고, GC는 아울러 GLP-1 수용체의 약한 작용제이다.
옥신토모듈린(Oxyntomodulin, OXM)은 내인성 GC/GLP-1R 이중 작용제이고, 이의 아미노산 서열은 HSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNTKRNRNNIA(SEQ ID NO.3)이며, GC의 원래 서열(1-29)과 글루카곤원 아미노산 서열82-89에 대응되는 삽입펩티드-1(IP-1, 30-37)을 포함한다. CN200980132562.9, CN201080027026.5, CN201680062196.4와 같은 OXM을 리드 서열로 하는 선행 기술 문헌에서는 GC원래 서열(1-29)의 변이체를 Exendin-4의 C-말단10펩티드(GPSSGAPPPS를 Cex로 약칭) 서열로 C-말단을 연장한다. 그러나 CN201680036771.3에서는 OXM 서열의 C-말단 삽입 펩티드 단편(KRNRNNIA)을 GGPSSG펩티드 단편으로 대체하는 설계 방안을 선택하였다. 이러한 기존 기술은 모두 GC 전장 서열(1-29)을 유지하는 기초 상에서, 몇몇 부위를 돌연변이시킨 다음 상이한 펩티드 단편으로 연장하는 설계 방식을 채택하였다.
GC 서열에 기반하여 이중 작용제를 설계할 경우, 예상하는 역가 균형을 얻기 위해, 기존 공개 자료에서는 대부분 GC 서열의 16―23 단편에 대해 GLP-1와 유사한 상응 서열의 대체, 또는 16, 17, 18, 20, 23 등 개별 부위에서의 돌연변이를 채택하였다. 그러나 GC 서열C-말단 변화는 GC/GLP-1 수용체의 식별에 매우 민감하고, 특히 GC 수용체의 활성에 매우 민감하다. 따라서, 기존 기술적 해결수단에서는 보편적으로 C-말단 27-29 단편의 원래 서열을 유지하는 것을 선택하였고, 개별 기술적 해결수단에서만 보수적인 돌연변이 조치를 채택하였으며, 예를 들어, 민감 아미노산 27Met를 Leu로 대체하고, 28Asn을 Glu 또는 Ala로 대체하였다. 폴리펩티드 서열의 장쇄 지방 아실 변형은 일반적으로 폴리펩티드의 체내 반감기를 연장하기 위한 것이나, GC/GLP-1 이중 수용체 작용제의 설계에 적용하는 경우, 적절한 부위에서의 변형은 수용체 선택성 및 활성 균형을 조절할 수 있다. 기존 기술 자료에서 채택된 보편적인 조치는 10Lys 돌연변이 잔기의 ε-측쇄에서 팔미토일을 변형시켜, 역가 균형의 강한 작용제(EC50pM)를 얻는 것이다. 하지만 본 발명자는 이러한 강한 작용제는 동물 모델 체내 약효 평가 시 장기 투여 후 당 내성 비정상적인 현상이 나타나고, 예상하는 대사 조절 목적을 달성할 수 없다는 것을 발견하였다.
본 분야에 개시된 기술 자료를 종합해보면, 장쇄 폴리펩티드의 구조 복잡성 및 이의 수용체 결합 메커니즘의 특수성으로 인해, 적절한 활성 강도와 역가비 균형의 이중 작용제의 획득은 상이한 기술 조치의 합리적인 조합으로 구현하여야 하고, 상이한 부위 아미노산 잔기의 돌연변이, 부위 변형, 라디칼 변형과 같은 폴리펩티드 구조의 변화는 모두 활성 및 역가비 균형의 변화를 초래할 수 있으며, 그 결과는 일반적으로 예측하기 어려운 것을 발견할 수 있다.
본 발명에 의해 제공되는 기술적 해결수단에 있어서, 폴리펩티드 주쇄의 설계는 GC 서열의 1-26펩티드 단편의 개별 부위에 합리적인 돌연변이를 수행한 기초 상에서 C말단을 적절하게 연장한 후, 측쇄 변형 조치를 채택하되, 예를 들어 20번 지방 아실 변형에 의해 활성 역가비가 균형적이고 용해성, 안정성이 모두 바람직한 GC/GLP-1 이중 수용체 작용제를 얻었다.
본 발명의 일부 특정 실시형태에 있어서, GC(1-26) 서열의 16-20 부위를 합리적으로 대체하였고, 예를 들어 16Ser을 Glu로 대체하고, 18Arg를 Ala 또는 Lys 등으로 대체하면 GLP-1 수용체 선택적인 돌연변이에 유리하다. 개시된 대부분의 기술적 해결수단에서 GC 서열 C-말단에 대한 보존적인 대체 방안과 상이하게, 본 발명의 바람직한 기술적 해결수단은 Glu로 27Met를 대체한 다음, Gly, Ala 등 전기적 중성 아미노산으로 28, 29 부위를 대체한다. 일반적으로, GC 서열의 C-말단 카르복실기의 유리는 활성 유지에 유리한 것으로 본다. 본 발명의 실시형태에 있어서, Glu로 27Met를 대체하여 C-말단의 전기음성도를 유지하고 활성에 대한 영향을 줄임으로써, C-말단을 아미드화하여 펩티드 서열의 안정성을 향상시킨다.
일반적으로, 천연 서열에 대한 가능한 적은 변화는 상동성 유지에 유리하지만, 내인성 글루카곤원 서열의 설계에 수많은 약물가능성(druggability) 난제가 존재한다: N-말단 디펩티드는 체내의 디펩티딜펩티다제(Dipeptidyl peptidase)에 의해 식별되어 가수분해되면서 불활성화됨으로써, 혈장 반감기가 짧아지고(≤12min); 물리적 성질이 불안정하며, 즉 등전점(pI) 7.6으로 중성이고, 소수성이며, 용해성이 좋지 않고, 용액에서 쉽게 집결되어 침전되며; 서열에는 Met, Asp, Asn 등이 쉽게 산화되거나 라세미화되는 아미노산이 존재하여 화학적 성질이 불안정해진다.
본 발명의 바람직한 실시형태에 있어서, 상기 폴리펩티드 서열의 2Ser은 통상적으로 Aib 또는 D-Ser로 대체되어, 대사 안정성을 향상시키고, 폴리펩티드 활성의 지속적인 발휘를 보장한다. 이와 동시에, 본 발명의 바람직한 실시형태에 있어서, 또한 GC 서열 중의 민감 아미노산을 대체하는 바, 예를 들어 15, 21번의 Asp를 Glu로 대체한다.
상기 조정된 폴리펩티드 서열은 서열C-말단의 음전하 수량이 증가되고, pI값이 감소되어, 생리적 조건에서 펩티드의 용해성 향상 및 화학적 안정성의 향상에 유리하다.
지방 아실 라디칼 및 코넥손 구조와 변형 부위는 동시에 화합물의 활성에 영향을 미친다. 본 발명의 실시형태에 있어서, 펩티드 서열 20번 Lys의 측쇄에서 친수성 연결 암을 통해 지방 아실기를 변형시킨다. 본 발명의 일부 실시형태에서, 상기 친수성 연결 암은 -γ-Glu-, -γ-Glu-γ-Glu-이거나, 다른 일부 실시형태에서는 -Ado-Ado-γ-Glu-이다. 상기 지방 아실기는 C14-20의 지방 아실기이고, 바람직하게는 C14-20의 모노지방 아실기 또는 지방이산 모노아실기이다. 일부 바람직한 실시형태에 있어서, 상기 지방 아실기는 C16 또는 C18 모노지방 아실기이다.
본 발명은 GLP-1/글루카곤 이중 수용체 아고니즘 작용을 갖는 펩티드를 제공하고, 본 발명에 따른 구조 설계를 통해, 상기 펩티드는 다음과 같은 활성 특성을 갖는다. 본 발명에 의해 제공되는 폴리펩티드는 GLP-1R/GCGR 각 수용체의 천연 리간드보다 적어도 0.1 %의 수용체 아고니즘 활성을 갖고, 예를 들어 본 발명의 실시예에서 EC50(nM)으로 나타내는 활성을 갖는다. 본 발명에 의해 제공되는 화합물의 EC50(nM)값은 내인성 리간드(GLP-1)의 10-2 ~ 102배를 포함하지만 이에 한정되지 않고, 바람직한 활성 강도는 내인성 리간드(GLP-1)에 해당되거나, 내인성 리간드(GLP-1)보다 1 ~ 10배, 예를 들어 2, 3, 6 또는 10배 약하거나 강하고, 또는10 ~100배 강하다. 글루카곤 수용체(GCGR)에 대한 아고니즘 활성 강도는 EC50(nM)값으로 나타내고, 내인성 리간드(GC)와 같거나 내인성 리간드의 1 ~ 103배이다. 바람직한 실시형태에 있어서, 본 발명의 화합물은 GLP-1 수용체에 대한 아고니즘 작용이 글루카곤 수용체에 대한 아고니즘 작용보다 강하거나, 또는 두 수용체에 대한 아고니즘 작용 강도가 같다. GLP-1 및 글루카곤 수용체에 대한 상대적 활성 강도는 역가비(GLP-1REC50/ GCGREC50)로 나타낼 수 있고, 즉, 본 발명에 의해 제공되는 일반식 I의 서열을 포함하는 폴리펩티드에 의한 GLP-1/글루카곤 수용체의 역가비는 10:1 내지 1:100을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 본 발명의 바람직한 실시형태에 있어서, 상기 비율은 10:1 ~ 1:10 범위에 속하고, 보다 바람직한 범위는 5:1 ~ 1:10이다.
본 발명에 의해 제공되는 일반식 I의 서열을 갖는 폴리펩티드 유도체의 기본적인 펩티드 사슬은 본 분야의 공지된 방법에 의해 제조하여 얻을 수 있다.
1) 통상적인 고상 또는 액삭 방법에 의해 단계적 또는 단편 조립에 의해 합성하는 방법;
2) 숙주 세포에서 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 작제물을 발현하고, 숙주 세포 배양물에서 발현 산물을 회수하는 방법;
3) 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 작제물의 무세포 체외 발현에 영향을 주고, 발현 산물을 회수하는 방법;
또는 방법 1), 2) 또는 3)의 임의의 조합으로 펩티드 단편을 얻은 후, 이러한 단편을 연결하여 타깃 펩티드를 얻는다.
본 발명에 의해 제공되는 실시형태에 있어서, 바람직하게는, Fmoc 고상 합성 방법을 이용하여 타깃 펩티드를 제조하여 얻고, 상기 기술은 당업자에게 공지되어 있다.
치환기는 상기 펩티드 합성 단계를 통해 단계적으로 합성하여 도입될 수 있다. 적절한 보호기의 치환기, 예를 들어, Fmoc-8-아미노-3,6디옥사옥탄산, 및 Fmoc-γ-Glu-OtBu를 사용한다. 지방쇄 부분의 도입, 특히 지방이산 모노아실기는 C18, C20 알칸산 모노tert-부틸에스테르를 포함하지만 이에 한정되지 않는 것으로 구현할 수 있다. 각각의 결합 단계 후, 반응되지 않은 중간체는 과량의 아세트산 무수물(Acetic anhydride)과 피리딘으로 차단할 수 있다. 변형 가능한 Lys의 ε-아미노기는 Mtt 또는 Dde로 보호할 수 있다.
정제: 접합 반응 후, 본 분야에 공지된 적합한 방법으로 타깃 산물을 분리할 수 있다. 적합한 방법으로는 초미세 여과, 투석법 또는 크로마토그래피법 등을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 본 발명의 실시형태에서, 바람직하게 제조형 고성능 액체 크로마토그래피법으로 정제한다.
수용체 활성 측정: 본 발명의 실시형태에서, GLP-1/GC 수용체에 의해 매개되는 체외 cAMP의 영향에 의한 GLP-1/GC 수용체에 대한 상기 폴리펩티드의 작용을 평가하였다.
체중 및 혈당에 대한 조절 작용: 본 발명의 실시형태에 있어서, 정상적인 마우스 당 부하 모델의 단일 투여와 고지방식이 비만형 당뇨병 마우스(Dio) 모델의 연속 투여를 이용하여 본 발명에 의해 제공되는 폴리펩티드가 혈당 및 체중에 미치는 영향을 평가하였다.
본 발명의 실험 결과에 따르면, 본 발명의 기술적 해결수단에 의해 제공되는 화합물에 의한 GLP-1 수용체(GLP-1R)의 활성은 내인성 GLP-1과 같고, GC 수용체(GCGR)에 대해 일정한 활성을 보류하였으며, 역가비는 적절한 범위 내에 있다. 단순한 GLP-1 수용체 작용제와 비교하여, 본 발명의 기술적 해결수단에 의해 제공되는 화합물은 혈당을 효과적으로 감소시키면서, 체중 감량을 현저하게 촉진하고 체중 증가를 방지하며, 간장 지방 병변과 인슐린 저항성을 역전시키거나 완화할 수 있고, 복잡한 대사 증후군에 대해 예기치 못한 여러 가지 이점을 나타낸다.
아래, 도면에 결부하여 본 발명에 따른 실시형태에 대해 상세하게 설명한다.
도 1은 화합물 dgc016, dgc005, dgc020이 DIO마우스의 체중에 미치는 영향을 나타낸다.
도 2는 23일 동안 화합물 dgc005, dgc016, dgc020의 연속 투여가 DIO모델 마우스 간장 병변에 미치는 영향을 나타내고; 여기서, 도 2a는 블랭크 대조군의 간장 병리학 절편 검사도를 나타내며, 도 2b는 모델 대조군의 간장 병리학 절편 검사도를 나타내고, 도 2c는 양성 대조 약물군의 간장 병리학 절편 검사도를 나타내며, 도 2d는 화합물 dgc005군의 간장 병리학 절편 검사도를 나타내고, 도 2e는 화합물 dgc016군의 간장 병리학 절편 검사도를 나타내며, 도 2f는 화합물 dgc020군의 간장 병리학 절편 검사도를 나타낸다.
도 3은 13일 동안 화합물 dgc003, dgc004, dgc010, dgc017의 연속 투여가 DIO모델 마우스의 체중에 미치는 영향을 나타낸다.
도 4는 조제량에 따라 21일 동안 화합물 dgc005, dgc016의 투여가 DIO모델 마우스의 체중에 미치는 영향을 나타낸다.
아래 구체적인 실시예에 결부하여 본 발명을 추가로 설명하고자 한다. 본 실시예는 본 발명을 설명하기 위한 것일 뿐, 임의의 방식으로 본 발명의 내용을 한정하기 위한 것이 아니다.
아미노산 약칭의 설명:
Gly: 글리신(G)
Ala: 알라닌(A)
Val: 발린(V)
Leu: 류신(L)
Phe: 페닐알라닌(F)
Trp: 트립토판(W)
Ser: 세린(S)
Thr: 트레오닌(T)
Glu: 글루타민산(E)
Gln: 글루타민(Q)
Asp: 아스파르트산(D)
Asn: 아스파라긴(N)
Tyr: 티로신(Y)
Arg: 아르기닌(R)
Lys: 리신(K)
His: 히스티딘(H)
Aib: α-아미노이소부티르산
Ado: 8-아미노-3,6-디옥사옥탄산
시약 약칭의 설명:
Boc: Tert-부틸옥시카르보닐기
Tert-Bu: Tert-부틸기
DCM: 디클로로메탄
DIC: 디이소프로필카보디이미드(Diisopropylcarbodiimide)
Fmoc: 9-플루오레닐메틸옥시카르보닐기 (9-fluorenylmethyloxycarbonyl)
HoBt: 1-히드록시벤조트리아졸(1-Hydroxybenzotriazole)
HBTU: 2-(1H-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸-우로늄헥사플루오르포스페이트(2-(1H-benzotriazol-1-yl)-1,1,3,3-tetramethyluronium Hexafluorophosphate)
HATU: O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸-우로늄헥사플루오르포스페이트(O-(7-Azabenzotriazol-1-yl)-N,N,N',N'-tetramethyluronium Hexafluorophosphate)
Mtt: 4-메틸트리페닐메틸
NMP: N-메틸피롤리돈 (N-Methylpyrrolidone)
DMF: 디메틸포름아미드(Dimethylformamide)
Pbf: 2,2,4,6,7-펜타메틸디히드로벤조푸란(2,2,4,6,7-Pentamethyldihydrobenzofuran)
Dde: 1-(4,4-디메틸-2,6-디옥소시클로헥실리덴)-3-메틸-부틸(1-(4,4-Dimethyl-2,6-dioxocyclohexylidene)-3-methyl-butyl)
Trt: 트리페닐메틸(Triphenylmethyl)
EDT: 에탄디티올(Ethanedithiol)
TFA: 트리플루오르아세트산(trifluoroacetic acid)
TIS: 트리이소프로필실란(Triisopropylsilane)
FBS: 소태아혈청
실시예 1
본 발명에 의해 제공되는 폴리펩티드의 기본적인 선형 서열과 측쇄 변형 유도 펩티드는 하기 통상적인 방법에 의해 제조된다.
1) 합성: Fmoc 전략을 이용하되, PSI200형 폴리펩티드 합성기를 사용하여 하기 단계에 따라 단계적으로 합성한다.
a) 활성제 시스템 존재 하에서 수지 고상 담체와 Fmoc로 보호되는 C-말단 아미노산을 결합하여 Fmoc-아미노산-수지를 얻되; 여기서, C-말단 아미드화 폴리펩티드 합성은 Rink Amide AM, Rink Amide, Rink MBHA 등과 같은 아미노수지를 사용하며; Fmoc-아미노산과 수지 비율(mol/mol)은 3 ~ 5:1이고, 결합 활성제는 HOBT/DIC 또는 HOBT/HBTU/DIEA이다.
b) 펩티드 사슬의 연장: 고상 합성법을 통해 펩티드 서열 아미노산 순서에 따라 아미노산을 연결하여, N-단과 측쇄가 보호된 펩티드-수지 결합물을 얻고; 측쇄 아미노산에 대해 다음과 같은 보호 조치를 취한다. 트립토판은 Boc, 글루탐산은 OtBu, 리신은 Boc, 글루타민은 Trt, 티로신은 tBu, 세린은 Trt 또는 tBu, 아스파르트산은 OtBu, 트레오닌은 tBu, 시스테인은 Trt, 아르기닌은 Pbf로 보호하고, 히스티딘의 α-아미노기는 Boc로 보호하며, 측쇄는 Trt 또는 Boc로 보호하고, 변형 가능한 리신의 ε-아미노기는 Dde로 보호한다. 사용된 결합 활성제는 HOBT/DIC, HOBT/HBTU/DIEA 및 HOBT/HATU/DIEA이고, 닌히드린법으로 반응 종점을 검착하며, 탈보호제는 20 %의 피페리진이 함유된 NMP(DMF) 용액이다.
c) 리신의 ε-아미노기 탈보호:
상기 단계에서 합성 완료된 완전 보호 폴리펩티드-수지를 NMP-DCM(1:1V/V)로 3회 세척하고, 새로 제조된 2.0 %의 수화히드라진의 NMP 용액을 넣어, 실온에서 12.0분 동안 교반하여, 여과하며, 2회 반복하고, 수지를 DCM 및 NMP로 각각 3회 세척한다.
d) 리신 측쇄의 변형:
리신의 ε-아미노기 탈보호 완료 후, 비율에 따라(수지: 연결기 1:4-5 (mol/mol)) Fmoc-Ado 또는 Fmoc-γ-Glu(tBu) 및 HOBt/HBTU, DIEA를 넣어, 2.0 ~ 4.0시간 동안 교반하여 반응시키고, Fmoc로부터 탈보호되며, 같은 방법으로 계속하여 필요한 사슬 길이의 연결 암과 지방 아실기를 연결한다. 2회 반복 후 여전히 반응이 완료되지 않으면, 과량의 아세트산 무수물/피리딘을 넣어 차단하고, 계속하여 다음 반응을 진행시킨다.
e) 폴리펩티드의 분해: 완전 보호 펩티드-수지를 먼저 NMP로 세척한 후, DCM로 3 ~ 6회 세척하여 NMP를 제거하고, TFA/EDT/TIS/H2O(92.5:2.5:2.5:2.5v/v) 용액을 넣어, 실온에 놓아 질소 가스 보호 하에서 90분 동안 교반하며, 탈보호 및 탈수지를 수행한다. 흡인여과하여 여액을 얻고, 과량의 차가운 에틸에테르로 조폴리펩티드를 침전시키며, 원심분리하여 침전을 수집하고, 다시 소량의 에틸에테르로 침전을 세척하며, 진공에서 건조시켜 폴리펩티드 조품을 얻는다.
2) 정제: 폴리펩티드 조품을 물 또는 10 ~ 15 %의 아세토니트릴(10 ~ 50 mg/ml)에 용해시키고, 제조형 HPLC법, C8 또는 C18 크로마토그래피 컬럼을 사용하여, 아세토니트릴-물-트리플루오르아세트산 시스템에 의해 분리하여 정제하고, 농축, 동결건조시켜 폴리펩티드 순품(순도 ≥ 97 %)을 얻는다.
상기 방법으로 제조하고, 질량 스펙트럼으로 확증하여 하기 표 1에 나타낸 구조의 폴리펩티드 유도체를 얻었다.
Figure pct00001
Figure pct00002
실시예 2 GLP-1/GC 수용체에 대한 작용
GLP-1/GC 수용체에 의해 매개된 체외 cAMP에 미치는 영향으로 GLP-1/GC 수용체에 대한 상기 폴리펩티드의 작용을 평가한다.
GLP-1R, GCGR를 안정적으로 발현하는 HEK293세포주는 GLP-1R 작용제와 GCGR 작용제의 선별에 사용된다.
피시험 샘플의 조제: 화합물을 100 μM의 저장액으로 조제하고, 단계적으로 1 μM, 100 nM, 10 nM, 1 nM, 10 ~ 1 nM, 10 ~ 2 nM, 10 ~ 3 nM, H2O의 작업 농도로 희석한다.
양성 대조의 조제:
GLP-1:
저장 방법: 0.1 %의 BSA초순수물로 용해한 1 mM의 저장액으로 -80℃에서 밀폐하여 보관한다.
작업 농도: 1 μM, 100nM, 10nM, 1nM, 10-1 nM, 10-2 nM, 10-3 nM 및 H2O(각각의 웰에는 모두 0.1 %의 BSA가 함유됨)이다.
글루카곤(GC):
저장 방법: 1 mM의 DMSO으로, -80℃에서 밀폐하여 보관한다.
작업 농도: 1 μM, 100nM, 10nM, 1nM, 10-1 nM, 10-2 nM, 10-3 nM 및 DMSO(각각의 웰에는 모두 0.1 %의 DMSO가 함유됨)이다.
시약과 의기:
주요 시약: DMEM 배지(GIBCO, Cat No: 12800017)이고;
cAMP 검출 키트(PerkinElmer, Cat No: TRF0264)이다.
주요 의기: Envision 2104다기능 마이크로웰플레이트 리더(PerkinElmer)이다.
실험 단계:
1) 테스트될 화합물을 무혈청 용액(0.1 %의 BSA,0.5 mM의 IBMX 함유)으로 작업 농도의 2배로 조제하였다.
2) 세포를 소화시키고, 세포를 무혈청 배양액으로 현탁하며(0.5 mM의 IBMX 함유), 계수하고, 1000세포/5 μl/웰로 384웰플레이트에 넣은 후, 5 μl의 테스트될 화합물을 넣어, 빛 없이 30분 동안 반응시켰다.
3) 반응 종료 후, cAMP 검출 기질을 넣어, 실온에서 빛 없이 60분 동안 반응시켰다.
4) 반응 종료 후, Envision2104 다기능 마이크로웰플레이트 리더로 검출하고, 최종적으로 리딩된 수치는 OD665 nm 및 OD615 nm에서의 비의 값이다.
5) Origin 소프트로 50 %의 유효 농도(EC50)를 계산하였다.
Figure pct00003
Figure pct00004
표 2에 나타낸 체외 수용체 아고니즘 활성 결과에 따르면, 본 발명의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 유도체는 GLP-1/GC 수용체의 이중 아고니즘 활성을 갖고, 폴리펩티드 유도체의 역가비는 적절한 범위 내에 있는 것으로 나타났다.
실시예 3 실시예 1화합물의 혈당 강하 작용
정상적인 마우스 단일 투여 당 부하 시험에 의해 실시예 1의 화합물의 혈당 강하 작용을 평가하였다.
방법: 쿤밍종 마우스(웅성, 체중 범위는 20 ~ 22 g임)를 배리어 환경 동물방 내에서 3일 동안 적응성 사육시킨 후, 그룹당 5마리씩 블랭크 대조군, 모델 대조군, 양성 대조군 및 피시험 화합물군으로 나누어 6시간 동안 금식시켰다. 블랭크 대조군과 모델 대조군에는 생리 식염수를 투여하고, 피시험 화합물군과 양성 대조군 투여 조제량은 30 nmol/kg 이며, 양성 대조 약물은 세마글루타이드(semaglutide)이다. 투여 60분 후 모델 대조군, 양성 대조군 및 피시험 화합물군은 각각 2.5 g/kg(0.01 mL·g-1 체중)으로 포도당을 위내 직접 투여하고, 블랭크 대조군은 증류수를 투여하여, 당 부하 후 30분째의 혈당값을 측정하였다. 결과는 표 3과 같다.
Figure pct00005
결과에 따르면, 모델 대조군 대비, 피시험 화합물은 투여 조제량에서 정상적인 마우스 당 부하 혈당 상승에 현저한 억제 작용이 있고(P＜0.01), 화합물 dgc005, dgc016 및 dgc006의 억제 작용이 양성 대조 약물과 같은 것으로 나타났다.
실시예 4
비만 모델 마우스에 대한 화합물 dgc005, dgc016, dgc020의 여러 회 투여의 치료 작용
시험 방법:
C57BL/6J Gpt마우스(쟝수 젬파마텍 유한회사(Jiangshu Gempharmatech Co., Ltd)에서 구입)(6 ~ 8주령), H10060 고지방사료(베이징 HFK 바이오과학 유한회사(Beijing HFK Bioscience Co., Ltd)에서 구입) 사육 음식으로 비만(DIO)을 유도하며, 블랭크 대조군(n=5)은 표준 사료로 사육하고, 구입 후 11주 사육하였다. 첫 투여 하루 전, 모델군은 체중에 따라 그룹당 5마리씩 5그룹으로 무작위로 그룹을 나누되(체중 범위 39.5 ~ 49.5 g), 각각 모델 대조군, 양성 대조군, 피시험 화합물군(dgc005, dgc016, dgc020)이고, 매일 피하 주사 투여하며, 블랭크 대조군, 모델 대조군은 매일 생리 식염수를 피하 주사하고, 총 23일 투여하며, 양성 대조 약물과 피시험 화합물 투여 조제량은 모두 30 nmol/kg이고, 각 그룹의 투여 용적은 모두 0.005 mL/g 체중이다. 매회 투여 전 체중을 칭량하고, 2일 간격으로 72시간 식사량을 칭량하였다. 마지막 투여 전 16시간 동안 금식시켜, 공복 혈당값을 측정하고, 눈가 정맥총에서 혈액을 채취하여 트리글리세리드, 총 콜레스테롤을 측정하며; 간장을 취하여 병리학 절편 관찰을 수행하였다.
결과:
1. 체중에 미치는 영향: 도 1을 참조 바란다. 투여 3일째부터 모든 피시험 화합물 체중 하강 폭은 양성 대조 약물과 비교하여 현저하게 구분되고, 지속적으로 감소된다. 투여 1일째와 비교하여, 피시험 화합물 dgc005, dgc016, dgc020 마지막 투여 전 금식하지 않은 체중 하강 폭은 각각 27 %, 29.3 %, 25.0 %이고, 양성 대조 약물의 하강 폭은 20.9 %이다. 투여 조제량에서 피시험 화합물의 체중 감량 작용은 양성 대조 약물보다 우수한 것을 설명한다.
2. 여러 회 투여가 공복 혈당에 미치는 영향: 표 4를 참조 바란다.
Figure pct00006
표 4 결과에 따르면, 피시험 화합물을 23일 동안 연속 투여하면, 공복 혈당에 대한 개선 작용은 양성 대조 약물과 같은 것으로 나타났다.
3. 섭식량에 미치는 영향: 표 5를 참조 바란다. 피시험 샘플군의 72시간 식사량은 모델 대조군 대비 상이한 정도로 감소하였고, 7일째부터 72시간 식사량은 점차 증가는 추세를 나타낸다.
Figure pct00007
4. 혈지에 미치는 영향: 표 6을 참조 바란다. 화합물 dgc005군은 일정한 총 콜레스테롤(TC) 강하 작용을 나타내고(모델 대조군 대비 P＜0.05이고, 양성 대조군 대비 P＜0.05이며, 블랭크 대조군 대비 통계학적 차이가 없음), 동시에 트리글리세리드(TG)를 현저하게 감소시킨다(모델 대조군 대비 P＜0.01이고, 양성 대조군 대비 P＜0.05이며, 블랭크 대조군 대비 P＜0.01임). 화합물 dgc016군은 트리글리세리드를 감소시키는 작용을 나타낸다(모델 대조군 대비 P＜0.01이고, 양성 대조군 대비 통계학적 차이가 없으며, 블랭크 대조군 대비 P＜0.01임).
Figure pct00008
5. 간장 병리학 절편 검사:
각 그룹의 C576L/6마우스 간장을 12 %의 포름알데히드 용액으로 고정하여 표본은 만들고, 조직 덩어리를 다듬어, 구배 알콜로 탈수시키며, 파라핀에 포매하고, HE로 염색한 후, 광학현미경으로 검사하였다.
결과:
블랭크 대조군: 2마리의 동물 간소엽 구조가 완전하고, 간세포색 배열이 정연하며, 간세포 형태가 뚜렷하고, 포털 영역 및 간질에서 명확한 병리적 변화를 관찰하지 못하였다(도 2a 참조).
모델 대조군: 2마리의 동물에서 중증의 병변을 볼 수 있다: 미만성 간세포 액포가 변성되고, 일부 혈관 주위 단일 핵세포가 침윤되었다(2/2, 중증)(도 2b 참조).
양성 대조 약물군: 2마리의 동물에서 경증 내지 중등 병변을 볼 수 있다: 소량 내지 다수의 간세포 액포가 변성되고, 여기서, 1마리의 동물의 일부 혈관 주위 단일 핵세포가 침윤되며, 또한 부분 간세포 병변도 보인다(1/2, 경증, 1/2, 중등)(도 2c 참조).
화합물 dgc005군: 2마리의 동물 간소엽 구조가 완전하고, 간세포색 배열이 정연하며, 간세포 형태가 뚜렷하고, 포털 영역 및 간질에서 명확한 병리적 변화를 관찰하지 못하였다(도 2d 참조).
화합물 dgc016군: 2마리의 동물 간소엽 구조가 완전하고, 간세포색 배열이 정연하며, 간세포 형태가 뚜렷하고, 포털 영역 및 간질에서 명확한 병리적 변화를 관찰하지 못하였다(도 2e 참조).
화합물 dgc020군: 2只마리의 동물 간소엽 구조가 완전하고, 간세포색 배열이 정연하며, 간세포 형태가 뚜렷하고, 포털 영역 및 간질에서 명확한 병리적 변화를 관찰하지 못하였다(도 2f 참조).
결론:
현미경 검사 결과로부터 알 수 있다시피, 블랭크 대조군 대비, 본 시험의 모델 대조군 간장에서, 상이한 정도의 간세포 액포가 변성되고, 일부 혈관 주위 단일 핵세포가 침윤되며, 양성 대조 약물군 간장에서 상기 병변을 볼 수 있고, 병변 정도는 경증 내지 중등 병변으로 현저히 감소되며, 이는 본 모델 간장 병변에 대해 일정한 치료 효과가 있는 것을 나타낸다. 본 발명의 피시험 화합물군은 간소엽 구조가 완전하고, 간세포색 배열이 정연하며, 간세포 형태가 뚜렷하고, 포털 영역 및 간질에서 명확한 병리적 변화를 관찰하지 못하였으며, 블랭크 대조군과 차이가 없고, 본 발명의 피시험 화합물은 본 모델 간장 병변에 대해 치료 효과가 현저한 것을 나타낸다.
실시예 5
2주 동안 화합물 dgc003, dgc004, dgc010, dgc017 투여가 DIO모델 마우스의 체중에 미치는 영향
방법: H10060고지방사료 사육 음식으로 비만(DIO) C57BL/6N마우스를 유도하고, 대조군(n=5)은 표준 사료를 사용하였다. 첫 투여 하루 전, 모델군은 그룹당 5마리씩 6그룹으로 무작위로 그룹을 나누고(체중 범위 40.5 ~ 50.5 g), 각각 모델 대조군, 양성 대조군, 피시험 화합물군(dgc003, dgc004, dgc010, dgc017)이며, 매일 1회 피하 주사 투여하고, 블랭크 대조군, 모델 대조군은 매일 생리 식염수를 피하 주사하며, 총 14일 투여하고, 양성 대조 약물과 피시험 화합물투여 조제량은 모두 30 nmol/kg이며, 각 그룹의 투여 용적은 모두 0.005 mL/g 체중이다. 매회 투여 전 체중을 칭량하고, 2일 간격으로 72시간 식사량을 칭량하였다.
결과: 도 3을 참조 바란다. 2주 동안 연속 투여하고, 양성 대조 약물은 투여 1 ~ 5일에 체중이 현저히 감소되며, 그 후 감소 추세가 느리고, 피시험 화합물군은 5일 후 양성 대조 약물의 하강 폭과 현저하게 구분되며, 지속적으로 감소되는 추세를 보이고, 마지막 투여 dgc003, dgc004, dgc010, dgc017군의 하강 폭은 각각 16.7 %, 19.9 %, 16.4 %, 15.9 %이며, 양성 대조 약물의 12.9 %보다 크다.
실시예 6
조제량에 따라 화합물 dgc005, dgc016의 여러 회 투여가 DIO마우스의 체중, 혈당에 미치는 영향
방법:
40마리의 C57BL/6N마우스(베이징 HFK 바이오과학 유한회사)로서, 모델군(n=35)은 H10060고지방사료 사육 음식으로 비만(DIO)을 유도하고, 블랭크 대조군(n=5) 은 표준 사료로 사육하며, 모두 36주 사육하였다. 첫 투여 당일, 모델군은 체중에 따라 그룹당 5마리씩 7그룹으로 무작위로 그룹을 나누되(체중 범위 45 ~ 60 g), 각각 모델 대조군, 양성 대조군(세마글루타이드, semaglutide)-10 nmol/kg, 양성 대조군-30 nmol/kg, dgc005-10 nmol/kg, dgc005-30 nmol/kg, dgc016-10 nmol/kg, dgc016-30 nmol/kg, 양성 대조군 및 피시험 화합물군이고, 매일 피하 주사 투여하며, 블랭크 대조군, 모델 대조군은 매일 생리 식염수를 피하 주사하고, 총 22일 투여하였다(각 그룹의 투여 용적은 모두 0.005 mL/g체중). 매회 투여 전 체중을 칭량하고, 2일 간격으로 72시간 식사량을 칭량하였다. 마지막 투여 전 16시간 동안 금식시키고, 투여 후30분 동안 포도당 용액(1 g/kg, 투여 용적은 0.01 mL/g체중)을 위내 직접투여하여 당 내성 시헝을 수행하며, 당 투여 후 0.5시간에 혈당값을 측정하였다.
결과:
1) 체중에 미치는 영향: 결과는 도 4를 참조 바란다. 모델 대조군 대비, 양성 대조군 및 피시험 화합물군은 투여 2일째부터 지속적인 체중 감량이 나타나고, 피시험 화합물의 큰조제량군은 3일째부터, 낮은 조제량군은 4일째부터 양성 대조 약물 하강 폭보과 현저히 구분되며, 투여 21일째 피시험 화합물 각 그룹의 금식하지 않은 체중 하강 폭은 해당 조제량의 양성 대조군보다 모두 우수하였다. 결과는 표 7과 같다.
Figure pct00009
2) 혈당에 미치는 영향:
마지막 투여 전, 피시험 화합물 각 조제량군은 모두 동물 투여 전 공복 혈당 값을 감소시킬 수 있고, 당 부하 후 0.5시간, 피시험 화합물 각 조제량군은 동물 당 부하 혈당값 상승에 현저한 억제 작용을하며(모델 대조군 대비 P＜0.01이고, 양성 대조군, 블랭크 대조군 대비 통계학적으로 차이가 없음),피시험 화합물 장기 투여는 양성 대조 약물과 같은 혈당 강하 작용이 있는 것을 설명한다. 결과는 표 8을 참조 바란다.
Figure pct00010
Sequence Listing <110> Tianjin Institute of Pharmaceutical Research Co., LTD. <120> Polypeptide Derivative Having Dual Receptor Agonistic Action and Use Thereof <130> EIC21310009P-US <150> 2020103882080 <151> 2020-5-9 <160> 27 <170> SIPOSequenceListing 1.0 <210> 1 <211> 30 <212> PRT <213> GLP-1 <400> 1 His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg 20 25 30 <210> 2 <211> 29 <212> PRT <213> Glucagon <400> 2 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 3 <211> 37 <212> PRT <213> Oxyntomodulin(Glucagon) <400> 3 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys Arg Asn 20 25 30 Arg Asn Asn Ile Ala 35 <210> 4 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> BINDING <222> (20)..(20) <223> The side chain of Lys is modified <400> 4 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Glu Ala Gly Gly 20 25 30 <210> 5 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> MUTAGEN <222> (2)..(2) <223> Serine is D-Ser <220> <221> BINDING <222> (20)..(20) <223> The side chain of Lys is modified <400> 5 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Glu Glu 1 5 10 15 Lys Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Glu Ala Gly Gly 20 25 30 <210> 6 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> MUTAGEN <222> (2)..(2) <223> Serine is D-Ser <220> <221> BINDING <222> (20)..(20) <223> The side chain of Lys is modified <400> 6 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Glu Glu 1 5 10 15 Arg Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Glu Ala Gly Gly 20 25 30 <210> 7 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> MUTAGEN <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> BINDING <222> (20)..(20) <223> The side chain of Lys is modified <400> 7 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Glu Ala Gly Gly 20 25 30 <210> 8 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> MUTAGEN <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> BINDING <222> (20)..(20) <223> The side chain of Lys is modified <400> 8 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Glu Glu 1 5 10 15 Arg Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Glu Ala Gly Gly 20 25 30 <210> 9 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> MUTAGEN <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> BINDING <222> (20)..(20) <223> The side chain of Lys is modified <400> 9 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Ala Ala Lys Glu Phe Val Ala Trp Leu Glu Ala Gly Gly 20 25 30 <210> 10 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> BINDING <222> (20)..(20) <223> The side chain of Lys is modified <400> 10 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Glu Ser Gly Gly 20 25 30 <210> 11 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> MUTAGEN <222> (2)..(2) <223> Serine is D-Ser <220> <221> BINDING <222> (20)..(20) <223> The side chain of Lys is modified <400> 11 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Glu Glu 1 5 10 15 Arg Ala Ala Lys Glu Phe Val Ala Trp Leu Glu Ser Gly Gly 20 25 30 <210> 12 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> MUTAGEN <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> BINDING <222> (20)..(20) <223> The side chain of Lys is modified <400> 12 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Glu Ser Gly Gly 20 25 30 <210> 13 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> MUTAGEN <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> BINDING <222> (20)..(20) <223> The side chain of Lys is modified <400> 13 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Glu Glu 1 5 10 15 Arg Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Glu Ser Gly Gly 20 25 30 <210> 14 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> MUTAGEN <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> BINDING <222> (20)..(20) <223> The side chain of Lys is modified <400> 14 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Glu Glu 1 5 10 15 Lys Ala Ala Lys Glu Phe Val Ala Trp Leu Glu Ser Gly Gly 20 25 30 <210> 15 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> MUTAGEN <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> BINDING <222> (20)..(20) <223> The side chain of Lys is modified <400> 15 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Lys Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Glu Ser Gly Gly 20 25 30 <210> 16 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> BINDING <222> (20)..(20) <223> The side chain of Lys is modified <400> 16 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Glu Gly Gly 20 25 <210> 17 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> MUTAGEN <222> (2)..(2) <223> Serine is D-Ser <220> <221> BINDING <222> (20)..(20) <223> The side chain of Lys is modified <400> 17 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Glu Glu 1 5 10 15 Arg Ala Ala Lys Glu Phe Val Ala Trp Leu Glu Gly Gly 20 25 <210> 18 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> MUTAGEN <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> BINDING <222> (20)..(20) <223> The side chain of Lys is modified <400> 18 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Glu Gly Gly 20 25 <210> 19 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> MUTAGEN <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> BINDING <222> (20)..(20) <223> The side chain of Lys is modified <400> 19 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Glu Glu 1 5 10 15 Arg Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Glu Gly Gly 20 25 <210> 20 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> MUTAGEN <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> BINDING <222> (20)..(20) <223> The side chain of Lys is modified <400> 20 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Glu Glu 1 5 10 15 Lys Ala Ala Lys Glu Phe Val Ala Trp Leu Glu Gly Gly 20 25 <210> 21 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> MUTAGEN <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> BINDING <222> (20)..(20) <223> The side chain of Lys is modified <400> 21 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Lys Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Glu Gly Gly 20 25 <210> 22 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> BINDING <222> (20)..(20) <223> The side chain of Lys is modified <400> 22 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Glu Gly Glu Gly 20 25 30 <210> 23 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> MUTAGEN <222> (2)..(2) <223> Serine is D-Ser <220> <221> BINDING <222> (20)..(20) <223> The side chain of Lys is modified <400> 23 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Glu Glu 1 5 10 15 Lys Ala Ala Lys Glu Phe Val Ala Trp Leu Glu Gly Glu Gly 20 25 30 <210> 24 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> MUTAGEN <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> BINDING <222> (20)..(20) <223> The side chain of Lys is modified <400> 24 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Glu Gly Glu Gly 20 25 30 <210> 25 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> MUTAGEN <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> BINDING <222> (20)..(20) <223> The side chain of Lys is modified <400> 25 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Glu Glu 1 5 10 15 Arg Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Glu Gly Glu Gly 20 25 30 <210> 26 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> MUTAGEN <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> BINDING <222> (20)..(20) <223> The side chain of Lys is modified <400> 26 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Glu Glu 1 5 10 15 Lys Ala Ala Lys Glu Phe Val Ala Trp Leu Glu Gly Glu Gly 20 25 30 <210> 27 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> MUTAGEN <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> BINDING <222> (20)..(20) <223> The side chain of Lys is modified <400> 27 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Lys Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Glu Gly Glu Gly 20 25 30

Claims (14)

  1. 하기 일반식 I의 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함하는 폴리펩티드 유도체, 이의 변형된 유도체 또는 이의 염에 있어서,
    HX2QGTFTSDX10SKYLX15EX17X18AX20X21FX23AWLEX28X29X30
    일반식 I
    상기 일반식 I의 서열에서,
    X2는 Ser, D-Ser 또는 Aib이고;
    X10은Tyr이며;
    X15는 Asp 또는 Glu이고;
    X17은 Arg, Gln 또는 Lys이며;
    X18은 Ala이고;
    X20은 측쇄가 변형된 Lys이며;
    X21은 Asp 또는 Glu이고;
    X23은 Val 또는 Ile이며;
    X28은 Ala, Gly 또는 Ser이고;
    X29는 Gly 또는 Glu이며;
    X30은 Gly 또는 존재하지 않고;
    또한, C-말단 카르복실기는 유리되거나 아미드화된 폴리펩티드 유도체, 이의 변형된 유도체 또는 이의 염.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 일반식 I의 서열에서,
    X17은 Arg 또는 Lys이고;
    X28은 Ala 또는 Ser이며;
    X29는 Gly이고;
    X30은 Gly이며;
    또한, C-말단 카르복실기는 아미드화된 것을 특징으로 하는 폴리펩티드 유도체, 이의 변형된 유도체 또는 이의 염.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 일반식 I의 서열에서, X2는 Aib인 것을 특징으로 하는 폴리펩티드 유도체, 이의 변형된 유도체 또는 이의 염.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 일반식 I의 서열에서,
    X17은 Arg 또는 Lys이고;
    X28은 Gly이며;
    X29는 Gly이고;
    X30은 존재하지 않으며;
    또한, C-말단 카르복실기는 아미드화된 것을 특징으로 하는 폴리펩티드 유도체, 이의 변형된 유도체 또는 이의 염.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 일반식 I의 서열에서,
    X17은 Arg 또는 Lys이고;
    X28은 Gly이며;
    X29는 Glu이고;
    X30은 Gly이며;
    또한, C-말단 카르복실기는 아미드화된 것을 특징으로 하는 폴리펩티드 유도체, 이의 변형된 유도체 또는 이의 염.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 폴리펩티드의 서열은 SEQ ID NOs. 4-27 중 어느 하나로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 폴리펩티드 유도체, 이의 변형된 유도체 또는 이의 염.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 측쇄가 변형된 Lys는 친수성 연결 단편에 지방 아실기가 결합되는 것에 의해 상기 Lys의 측쇄 ε-아미노기가 변형된 것을 의미하는 것을 특징으로 하는 폴리펩티드 유도체, 이의 변형된 유도체 또는 이의 염.
  8. 제7항에 있어서,
    상기 친수성 연결 단편은 Glu, γGlu, Gly 및 Ado(8-아미노-3,6-디옥소옥탄산) 중 하나 이상으로 이루어진 군으로부터 선택되는 단편인 것을 특징으로 하는 폴리펩티드 유도체, 이의 변형된 유도체 또는 이의 염.
  9. 제8항에 있어서,
    상기 친수성 연결 단편은 -γGlu-, -γGlu-γGlu-, -Glu-γGlu-, -γGlu-Gly-Gly-, -γGlu-Gly-γGlu-, -γGlu-Ado-Ado-, -Ado-Ado-γGlu- 또는 -γGlu-Ado-Ado-γGlu-인 것을 특징으로 하는 폴리펩티드 유도체, 이의 변형된 유도체 또는 이의 염.
  10. 제7항 또는 제8항에 있어서,
    상기 지방 아실기는 C14-20의 지방 아실기이고, 바람직하게는 C14-20의 모노지방 아실기 또는 지방이산 모노아실기인 것을 특징으로 하는 폴리펩티드 유도체, 이의 변형된 유도체 또는 이의 염.
  11. 제10항에 있어서,
    상기 지방 아실기는 C16-18 지방 아실기인 것을 특징으로 하는 폴리펩티드 유도체, 이의 변형된 유도체 또는 이의 염.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 따른 폴리펩티드 유도체, 이의 변형된 유도체 또는 이의 염 및 임의의 하나 또는 여러가지 약학적으로 허용 가능한 보조 재료를 포함하는 약학 조성물.
  13. 대사성 질환, 바람직하게는, 상기 대사성 질환은 당뇨병, 비만, 지방간, 고지혈증 및/또는 대사 증후군이고; 보다 바람직하게는, 상기 지방간은 비알코올성 지방간인 대사성 질환을 치료하기 위한 약물 제조에서 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 따른 폴리펩티드 유도체, 이의 변형된 유도체 또는 이의 염의 응용.
  14. 필요한 환자에게 치료 유효량의 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 따른 폴리펩티드 유도체, 이의 변형된 유도체 또는 이의 염, 또는 제12항에 따른 약학 조성물을 투여하는 단계를 포함하고; 바람직하게는, 상기 대사성 질환은 당뇨병, 비만, 지방간, 고지혈증 및/또는 대사 증후군이고; 보다 바람직하게는, 상기 지방간은 비알코올성 지방간인 대사성 질환 치료 방법.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
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