MXPA04011103A - Metodo y sistema de reaccion con un complejo de enzima-coenzima no regenerable. - Google Patents

Metodo y sistema de reaccion con un complejo de enzima-coenzima no regenerable.

Info

Publication number
MXPA04011103A
MXPA04011103A MXPA04011103A MXPA04011103A MXPA04011103A MX PA04011103 A MXPA04011103 A MX PA04011103A MX PA04011103 A MXPA04011103 A MX PA04011103A MX PA04011103 A MXPA04011103 A MX PA04011103A MX PA04011103 A MXPA04011103 A MX PA04011103A
Authority
MX
Mexico
Prior art keywords
coenzyme
enzyme
dehydrogenase
analyte
complex
Prior art date
Application number
MXPA04011103A
Other languages
English (en)
Inventor
Knappe Wolfgang-Reinhold
Original Assignee
Hoffmann La Roche
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from DE2002121840 external-priority patent/DE10221840A1/de
Priority claimed from DE2002121845 external-priority patent/DE10221845A1/de
Priority claimed from DE2002121846 external-priority patent/DE10221846A1/de
Application filed by Hoffmann La Roche filed Critical Hoffmann La Roche
Publication of MXPA04011103A publication Critical patent/MXPA04011103A/es

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
    • C12Q1/32—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase involving dehydrogenase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/001—Enzyme electrodes
    • C12Q1/002—Electrode membranes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54353—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals with ligand attached to the carrier via a chemical coupling agent
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
    • G01N33/54373—Apparatus specially adapted for solid-phase testing involving physiochemical end-point determination, e.g. wave-guides, FETS, gratings
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/582—Recycling of unreacted starting or intermediate materials

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
  • Polymerisation Methods In General (AREA)
  • Laminated Bodies (AREA)
  • Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
  • Polymers With Sulfur, Phosphorus Or Metals In The Main Chain (AREA)
  • Processes Of Treating Macromolecular Substances (AREA)
  • Manufacture Of Macromolecular Shaped Articles (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Moulding By Coating Moulds (AREA)
  • Application Of Or Painting With Fluid Materials (AREA)

Abstract

La invencion se refiere a un metodo y a un sistema de reactivos para detectar un analito en una muestra, por medio de una reaccion enzimatica que involucra el uso de un complejo de enzima-coenzima como contraparte de reaccion estequiometrico para el analito presente en la muestra.

Description

METODO Y SISTEMA DE REACCION CON UN COMPLEJO DE ENZIMA- COENZIMA NO REGENERABLE Descripción de la Invención La invención se refiere a un método y un sistema reactivo para detectar un analito en una muestra a través de una reacción enzimática, que comprende el uso de un complejo enzima-coenzima no regenerable, en particular, reactivos estequiométricos para el analito presente en la muestra. La detección de analitos, por ejemplo, glucosa en la sangre, se conoce mediante métodos enzimáticos. Estos provocan que el analito que va a determinarse se produzca en contacto con una enzima y una coenzima adecuadas, la enzima se emplea en cantidades catalíticas. Los equivalentes redox producidos en la reducción u oxidación de la coenzima se transfieren a los mediadores que se detectan entonces electromecánicamente o fotorn tricamen e en una etapa adicional. Una calibración proporciona una unión directa entre las mediciones y la concentración del analito que va a determinarse . Sierra et al. (Anal. Chem. 69 (1997), 1471-1476) describe una determinación de la glucosa sanguínea basada en la fluorescencia intrínseca de la glucosa oxidasa. También en este método, la enzima se emplea junto con su coenzima FAD en Ref . :159706 cantidades catalíticas, con equivalentes redox que se transfieren al oxígeno como mediador. Naraynaswamy et al. (Analytical Letters 21 (7) (1988), 1165-1175) describe una medición de la fluorescencia con la glucosa deshidrogenasa y NAD para la determinación de glucosa. La enzima en este caso se emplea en cantidades catalíticas, es decir, no estequiométricas . La medición de la fluorescencia detecta el NADH libre en la solución. Es posible a través de las sustancias electroquímicamente activas (mediadores) requeridas para los sistemas de detección del arte previo para detectar los analitos que van a determinarse solo indirectamente, es decir, vía una pluralidad de reacciones químicas. Para este propósito, un ajuste complicado de las concentraciones de las sustancias involucradas para optimizar la proporción de la reacción es frecuentemente necesario. Por otra parte, existe el riesgo de que las sustancias electroquímicamente activas requeridas sean inestables en un almacenamiento prolongado. A menudo, también los mediadores tienen que emplearse con un gran exceso en relación con el sistema enzima-coenzima. La coenzima tiene una reactividad alta, por lo que la actividad enzimática disminuye marcadamente en la descomposición del mediador, incluso en cantidades pequeñas, por ejemplo, < 1% o al exponerse a las sustancias externas, por ejemplo, volatilización de las sustancias de materiales empaquetados. Esto puede provocar señales falsas en la determinación del analito. Una desventaja adicional es que el tiempo para determinar los analitos aproximadamente son de al menos unos cuantos segundos, por ejemplo, para la glucosa en la región de > 4 segundos, y los volúmenes de la muestra requeridos son mayores, por ejemplo, de menos de 0.5 µ? . El objetivo en el cual se basa la presente invención, es al menos parcialmente evitar las desventajas descritas del arte previo. Se pretende particularmente proporcionar un método rápido y no sensible para la detección enzimática de analitos, que conducen a resultados fácilmente medibles incluso en ausencia de mediadores y/o indicadores. Este objetivo se logra usando un complejo de enzima-coenzima como un reactivo estequiométrico en lugar de, como de costumbre, un catalizador. La detección de los analitos requiere solamente una etapa de reacción sencilla y es por lo tanto extremadamente rápida. Ya no es requerido el uso de mediadores e indicadores, asociados con el empleo de mezclas de reacción múltiples, con baja estabilidad y alta susceptibilidad de interferencia. Por lo tanto, un aspecto de la invención es proporcionar un método para detectar un analito en una muestra mediante una reacción enzimática, que comprende las etapas: (a) poner en contacto la muestra con un reactivo de detección que comprende un complejo de enzima-coenzima, en donde no se presenta la regeneración de la coenzima, y (b) detectar una reacción del analito a través de un cambio en el complejo de la enzima-coenzima. Un aspecto adicional de la invención es un sistema reactivo para detectar un analito en una muestra, que comprende : (a) un reactivo de detección que comprende un complejo de enzima-coenzima, en donde no tiene lugar la regeneración de la coenzima, y (b) un soporte para recibir el reactivo de detección. La presente invención elabora una cualidad simple o determinación cuantitativa de analitos posibles dentro de un tiempo de reacción muy corto de, preferiblemente, < 1 s, más preferiblemente < 0.1 s. La reacción se lleva a cabo bajo condiciones en la cual la ausencia de regeneración de la coenzima tiene lugar durante la determinación. Por otra parte, es posible para un complejo de enzima-coenzima de la molécula reaccionar solamente con una molécula sencilla del analito. Por lo tanto, la reacción se lleva a cabo en ausencia de mediadores u otras sustancias capaces de provocar la regeneración de la coenzima. El reactivo de detección comprende el complejo de enzima-coenzima en una cantidad suficiente para elaborar una determinación cualitativa y/o cuantitativa del analito posible, de acuerdo al formato de prueba deseado. En particular, para la determinación cuantitativa del analito, se emplea un complejo de enzima-coenzima en una cantidad tal que el número de moléculas que reaccionan con el complejo de enzima-coenzima tiene correlación con la concentración del analito presente en la muestra. El complejo enzima-coenzima se emplea preferiblemente en particular en al menos una cantidad estequiometrica relativa al analito presente en la muestra, preferiblemente en un exceso estequiométrico relativo al analito. En relación con la declaración "en al menos una cantidad estequiometrica" significa que, el tamaño de la muestra se ajusta en relación al número de moléculas del complejo enzima-coenzima de tal forma que, en las concentraciones del analito esperadas en la muestra, el número de moléculas del complejo de la enzima-coenzima que reacciona con el analito está correlacionada con la concentración del analito presente en la muestra. "Cantidad estequiométrica" significa preferiblemente que el número de moléculas del complejo de enzima-coenzima corresponde al número máximo de moléculas analito que se esperan en la muestra de investigación. El método y el sistema de detección permite el uso de cantidades muy pequeñas de la muestra, por ejemplo, los volúmenes de la muestra de < 1 µ?, en particular < 0.1 µ? . La muestra puede cuando sea apropiado, también diluirse antes de ponerse en contacto con el reactivo de detección.
El método y sistema de detección de la invención son adecuados para determinar cualquier analito, por ejemplo, parámetros en los fluidos corporales tales como por ejemplo, sangre, suero, plasma u orina, pero también en muestras efluentes o comestibles. El método puede llevarse a cabo también como pruebas de humedad, por ejemplo, en una cuba, o como una prueba en seco en un soporte de reacción apropiado.
Los analitos que pueden determinarse son cualquier sustancia biológica o química que sean capaces de experimentar una reacción, en particular una reacción redox, con un complejo de enzima-coenzima tal como por ejemplo, glucosa, ácido láctico, ácido málico, glicerol, alcohol, colesterol, triglicérido, ácido ascórbico, cisteína, glutatión, péptidos, etc. La reacción enzimática es preferiblemente una reacción redox en la cual la coenzima en el complejo de la enzima-coenzima se reduce o se oxida. La enzima usada preferiblemente para una reacción de este tipo es una óxidoreductasa . La enzima preferiblemente usada es una deshidrogenasa , seleccionada por ejemplo a partir de una glucosa deshidrogenasa (E.C. 1. 1. 1.47), lactato deshidrogenasa (E . C .1.1.1.27 , 1.1.1.28), malato deshidrogenasa (E . C .1.1.1.37 ) , glicerol deshidrogenasa (E.C.1.1.1.6) , alcohol deshidrogenasa (E.C.1.1.1.1) o aminoácido deshidrogenasa, por ejemplo, L-amino-ácido deshidrogenasa (E.C.1.4.1.5) . Las enzimas adecuadas adicionales son las oxidadas como por ejemplo, la glucosa oxidasa (E . C .1.1.3.4 ) o el colesterol oxidasa (E . C .1.1.3.6 ) .
Para los propósitos de la presente invención son coenzimas, preferiblemente moléculas orgánicas que se enlazan covalentemente o no covalentemente a una enzima y son sustituidas, por ejemplo, oxidadas o reducidas mediante la conversión del analito. Ejemplos preferidos de coenzimas son flavina, derivados de nicotina y quinona, por ejemplo, derivados de nucleósido de flavina tales como por ejemplo, FAD, FADH2, FMN, FMNH2 , etc., nicotina, derivados de nucleósido tales como por ejemplo, NAD+, NADH/H+, NADP+, NADPH/H+, etc. o ubiquinonas tales como por ejemplo, la coenzima Q, PQQ, etc. El cambio en la coenzima a través de una reacción con el analito puede en principio detectarse de cualquier manera. Es posible en principio emplear para todos los métodos conocidos en el arte para detectar reacciones enzimáticas. Sin embargo, el cambio en la coenzima se detecta preferiblemente mediante métodos ópticos. Los métodos de detección ópticos incluyen por ejemplo, medición por absorción, fluorescencia, dicroismo circular (CD, por sus siglas en inglés) , dispersión giratoria óptica (ORD, por sus siglas en inglés) , refractometria , etc. El cambio en la coenzima se detecta preferiblemente en particular, midiendo la fluorescencia. La medición de la fluorescencia es altamente sensible y hace posible detectar aún las concentraciones bajas del analito en los sistemas miniaturizados . El método o sistema de detección de la invención puede comprender una prueba líquida, en cuyo caso el reactivo se presenta por ejemplo en la forma de una solución o suspensión en un líquido acuoso o no acuoso o como un polvo o liofilizado. Sin embargo, el método y sistema de detección de la invención comprende preferiblemente una prueba seca, en cuyo caso el reactivo se aplica a un soporte. El soporte puede comprender por ejemplo, una prueba de agotamiento que comprende un material absorbente y/o expansible que se moja mediante el líquido de muestra que va a investigarse. En una modalidad particularmente preferida, el reactivo de detección usado es un gel de matriz con un complejo de enzima-coenzima incrustado allí. La matriz de gel tiene preferiblemente un espesor de capa de < 50 µt?, en particular < 5 µp?, y se aplica a un soporte, por ejemplo, en al menos parcialmente un soporte óptimamente transparente. La matriz de gel puede ser una matriz que comprende uno o más polímeros solubles, como en los sistemas de prueba por secado conocidos (por ejemplo, AccuChek Active) , y pueden producirse mediante una aplicación de cuchilla y secante. La matriz es preferiblemente un polímero con una estructura basada en sustancias fotopolimerizables tales como por ejemplo, monómeros acrílicos, por ejemplo, acrilamida y/o ésteres acrílicos tales como diacrilato de polietilen glicol o monómeros vinilaromáticos, por ejemplo, ácido 4-vinilbencenosulfónicos o combinaciones de los mismos. Una matriz de gel de este tipo puede producirse mediante la aplicación de un líquido que contiene el reactivo; que comprende una enzima, un monómero fotopolimerizable y, cuando sea apropiado una coenzima, fotoiniciador y/o constituyentes no reactivos, por lo menos un soporte transparente parcialmente óptico, por ejemplo, para una hoja plástica e irradiar por ejemplo, con una luz UV en su lado inverso, de tal forma que la polimerización del monómero o de los monómeros tengan lugar en el soporte hasta un espesor de capa predefinido. El espesor de la capa puede controlarse añadiendo sustancias de absorción para el reactivo y/o a través de la duración o intensidad de irradiación. El reactivo líquido en exceso puede retirarse y reusarse después de la polimerización (ver por ejemplo, la figura 2) . Por otra parte, la matriz de gel puede producirse también mediante procedimientos de revestimiento convencionales en cuyo caso, el reactivo líquido se aplica a un soporte para producir el espesor deseado usando métodos adecuados, por ejemplo, usando una cuchilla y después polimerizarse completamente. Después de la inclusión mediante polimerización o incrustación en la matriz de gel, la enzima se instala en un microambiente protegido. Si la matriz de gel polimérica se retícula suficientemente, las moléculas de la enzima se presentan en una forma inmovilizada. Las sustancias de peso molecular bajo, glucosa u otros analitos o bien otras coenzimas, pueden, sin embargo, difundirse a través de la red de polímeros. La enzima puede ya sea incluirse junto con sus coenzimas mediante la polimerización en la matriz o, después de la polimerización, la matriz puede producirse en contacto con una solución de la coenzima, de manera que se forme el complejo de la enzima-coenzima apropiado. La concentración de la enzima en la matriz de gel se elige preferiblemente por ser bastante alta para una reacción estequiométrica con el analito que va a determinarse, y una probable determinación directa de la coenzima que se cambia. La reacción consiste solamente de una reacción catalítica sencilla, por ejemplo, una reacción redox que tiene lugar aproximadamente en milisegundos o microsegundos . La coenzima que se cambia por la reacción, se protege óptimamente a partir de la influencia de interferencia por medio del enlace del centro activo de la enzima y, cuando es apropiado, adicionalmente por incrustación en la matriz de gel. La invención se explica adicionalmente mediante las siguientes figuras y ejemplos.
Figuras La figura 1 muestra una primera modalidad del sistema de detección de la invención. Una capa del reactivo (2) , por ejemplo, una matriz de gel con un complejo de enzima-coenzima, se aplica a un soporte (1) ópticamente transparente. El complejo de la enzima-coenzima tiene una forma tal que la regeneración de la coenzima no tiene lugar durante la determinación del analito. Una muestra (3) , por ejemplo, sangre, se coloca en la capa del reactivo. Una determinación de la reacción enzimática entre el analito contenido en la muestra (3) , y el complejo de enzima-coenzima contenido en la capa (2) del reactivo tiene lugar mediante métodos ópticos. Una luz de una fuente luminosa (4) , por ejemplo, u láser o un LED, se emite un haz de luz en la parte de atrás (a través del soporte) sobre la capa (2) del reactivo. La absorción de luz o luz fluorescente emitida atrás de la muestra se detecta en un detector (5) . Cuando sea apropiado - en particular para detectar la luz fluorescente -un elemento de filtro óptico (6) se coloca enfrente del detector para bloquear la fuga de la luz que excita la fluorescencia . La figura 2 muestra la producción de un sistema de detección de la invención. Un reactivo (12) líquido se aplica por ejemplo en una primera posición (13), para un soporte (11) ópticamente transparente, por ejemplo, una hoja de plástico. El reactivo (12) líquido se irradia en una posición secundaria desde abajo a través del soporte (11) con luz de una fuente luminosa (14) . Al mismo tiempo, el soporte se mueve en la dirección (15) identificada por la flecha. Una capa (16) del reactivo polimerizado se forma directamente en el soporte (11) . El reactivo líquido en exceso se presenta en la parte superior de la capa (16) del polímero. El espesor de la capa del reactivo polimerizado (16) puede controlarse a través de la composición del reactivo, la duración e intensidad de emisión de luz a través de las propiedades del soporte (11) . La figura 3 muestra una modalidad de un sensor basado en la fluorescencia inferior. Una capa del reactivo polimerizado, por ejemplo, una producida por el proceso continuo en la figura 2, puede cortarse y aplicarse a un soporte (21) mediante el uso de técnicas conocidas. Después de la aplicación de la muestra en el lado superior, que excita la luz (23) , por ejemplo, luz UV, se emite a partir de una fuente de luz inferior. La fluorescencia (24) , por ejemplo, luz azul generada a través de la reacción del analito con el complejo de enzima-coenzima en la capa (22) del reactivo se detecta con un detector. Es posible también para una pluralidad de reactivos (idénticos o diferentes) que van a aplicarse a un soporte. Un ejemplo de tal modalidad en la forma de un disco se muestra en la figura 4. Una pluralidad de manchas o señales (32) del reactivo se colocan en el soporte (31) ópticamente transparente . Las figuras 5A y 5B muestran la fluorescencia de un sistema de detección de la invención (glucosa deshidrogenasa y NAD+) con un incremento en la concentración de glucosa bajo una cámara de CCD. Ej emplos Ejemplo 1: Detección estequiométrica de glucosa en el sistema de la glucosa deshidrogenasa (GlucDH) /NAD+ en una cuba . 100 mg/ml de GlucDH se disuelven en una solución amortiguadora de pH 7 y se mezcla con una cantidad apropiada de NAD+ . Además de las cantidades incrementadas de glucosa, un incremento en la fluorescencia puede detectarse visualmente bajo una lámpara de rayos UV (excitación de la longitud de onda 366 nm) (figuras 5A y 5B) . La solución con el sistema de la enzima no emite fluorescencia sin la glucosa. Ni la glucosa ni el NAD+ producen alguna fluorescencia. Ejemplo 2: Detección de la glucosa en el sistema GlucDH/NAD+ en una película del polímero. Una suspensión de la siguiente sustancia se mezcló en un tubo de ensayo plástico.
Fórmula 1 0.5 mi de esta suspensión se mezclaron con 0.5 mi de una solución de GlucDH (100 mg/ml), y la mezcla se homogeneizó libre de burbujas de aire en un baño ultrasónico. La solución clara se vertió sobre una hoja de policarbonato de 125 mm de espesor tratada con corona y se iluminó con un aparato de iluminación convencional (2 dispositivos de iluminación UV Isel) durante 20 minutos. La hoja se lavó brevemente con agua y después se secó al aire. El espesor de la capa resultante fue < 2 µt?. Una solución de glucosa/NAD+ preparada recientemente (solución GKL-3, 300 mg/dl de glucosa, 1 ml/6.4 mg de NAD+) se manchó en la película. Una fluorescencia fuerte fue visible inmediatamente bajo la lámpara UV. Ejemplo 3: Adición de un absorbedor de UV para influir en el espesor de la capa.
Una capa del polímero que comprende un tinte azul (absorción máxima « 650 nm) para una mejor identificación se produjo (fórmula 2) . En un experimento adicional, un tinte amarillo se mezcló como un absorbedor de UV para la fórmula inicial (fórmula 3) . Fórmula 2 La mezcla se homogeneizó agitando y mediante un tratamiento de baño ultrasónico, se distribuyó con una pipeta en una hoja de 140 µp? de Pokalon (etapa 4, tratado con corona) y se iluminó en un dispositivo de iluminación UV (Actina U4, W. Lemmen GMBH) durante 1 minuto. El espesor de la capa resultante se midió con un calibre de tornillo de 240.5 µ??.
Fórmula 3 La mezcla se distribuyó en una hoja y después se polimerizó como se describe anteriormente. El espesor de la capa resultante se midió con un calibre de tornillo y fue de 79.3 µt? . Este experimento demuestra que es posible influir en el espesor de la capa. Con las condiciones de la reacción que no son otra cosa que la misma, el espesor de la capa sin absorbedor de UV fue de 240.5 µp? (ver arriba); solo 79.3 µp? con un absorbedor UV (Amarillo mordaz 7) . Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (21)

  1. REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones 1. Un método para detectar un analito en una muestra mediante una reacción enzimática, caracterizado porque comprende las etapas de: (a) poner en contacto la muestra con un reactivo de detección que comprende un complejo de enzima-coenzima, bajo condiciones en las cuales la regeneración de la coenzima no se presenta cuando una deshidrogenasa se usa como una enzima, y (b) detectar una reacción del analito a través de un cambio en el complejo de la coenzima-enzima.
  2. 2. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la deshidrogenasa se selecciona a partir de una glucosa deshidrogenasa (E.C.1.1.1.47) , lactato deshidrogenasa (E.C.1.1.1.27, 1.1.1.28), malato deshidrogenasa (E. C.1.1.1.37) , glicerol deshidrogenasa (E.C.1.1.1.6), alcohol deshidrogenasa (E.C.1.1.1.1) o aminoácido deshidrogenasa, por ejemplo, L-amino-ácido deshidrogenasa (E . C .1.4.1.5) .
  3. 3. El método de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque se usa una coenzima seleccionada de flavina, nicotina y derivados de quinona.
  4. 4. El método de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque la coenzima se selección de FAD, FADH2, FMN, FM H2, coenzima Q, PQQ, NAD+, NADH/H+, NADP+ y NADPH/H+ .
  5. 5. El método de conformidad con la reivindicación 1 a 4, caracterizado porque el cambio en la coenzima se detecta mediante métodos ópticos.
  6. 6. El método de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque el cambio en la coenzima se detecta mediante la medición de la absorción, fluorescencia, CD, ORD o refractometría .
  7. 7. El método de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque el cambio en la coenzima se detecta mediante la medición de la fluorescencia.
  8. 8. El método de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque una matriz de gel con un complejo de enzima-coenzima incrustado en ella, se usa como un reactivo de detección.
  9. 9. El método de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque la matriz de gel tiene un espesor de capa de < 50 µp?, en particular de < 5 µ?t? .
  10. 10. El método de conformidad con la reivindicación 8 o 9, caracterizado porque se usa una matriz de gel basada en sustancias polimerizables.
  11. 11. El método de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque se determina un analito en un fluido corporal.
  12. 12. El método de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque se lleva a cabo una determinación de glucosa en la sangre.
  13. 13. El método de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque la duración de la reacción del analito es < 5 segundos.
  14. 14. El método de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque la reacción se lleva a cabo en ausencia de mediadores capaces de reaccionar con la coenzima.
  15. 15. El método de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque el complejo de enzima-coenzima se emplea como un reactivo estequiométrico en relación al analito.
  16. 16. Un sistema reactivo para detectar un analito en una muestra caracterizado porque comprende: (a) un reactivo de detección que comprende un complejo de enzima-coenzima en una forma tal que no tiene lugar la regeneración de la coenzima, cuando se usa una deshidrogenasa como enzima, y (b) un soporte para recibir el reactivo de detección.
  17. 17. El sistema reactivo como se reivindica en la reivindicación 16, caracterizado porque el complejo de enzima-coenzima se incrusta en una matriz de gel .
  18. 18. El sistema reactivo de conformidad con la reivindicación 16 o 17, caracterizado porque el soporte comprende una estructura esencialmente plana.
  19. 19. El sistema reactivo de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 16 a 18, caracterizado porque el soporte comprende una estructura esencialmente plana.
  20. 20. El sistema reactivo de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 16 a 18, caracterizado porque el soporte comprende una pluralidad de diferentes reactivos de detección .
  21. 21. El uso de un sistema reactivo de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 16 a 20 en un método, de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1 a 15.
MXPA04011103A 2002-05-16 2003-05-16 Metodo y sistema de reaccion con un complejo de enzima-coenzima no regenerable. MXPA04011103A (es)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE2002121840 DE10221840A1 (de) 2002-05-16 2002-05-16 Verfahren zur Herstellung von Polymerschichten
DE2002121845 DE10221845A1 (de) 2002-05-16 2002-05-16 Verfahren und Reagenzsystem mit nicht-regenerierbarem Enzym-Coenzym-Komplex
DE2002121846 DE10221846A1 (de) 2002-05-16 2002-05-16 Verfahren und Reagenzsystem mit inaktiviertem Enzym
PCT/EP2003/005178 WO2003097864A1 (de) 2002-05-16 2003-05-16 Verfahren und reagenzsystem mit nicht-regenerierbarem enzym-coenzym-komplex

Publications (1)

Publication Number Publication Date
MXPA04011103A true MXPA04011103A (es) 2005-02-14

Family

ID=29553736

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
MXPA04011220A MXPA04011220A (es) 2002-05-16 2003-05-16 Metodo para producir capas polimericas.
MXPA04011103A MXPA04011103A (es) 2002-05-16 2003-05-16 Metodo y sistema de reaccion con un complejo de enzima-coenzima no regenerable.

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
MXPA04011220A MXPA04011220A (es) 2002-05-16 2003-05-16 Metodo para producir capas polimericas.

Country Status (15)

Country Link
US (3) US8846132B2 (es)
EP (3) EP1504115A1 (es)
JP (4) JP2005532796A (es)
KR (2) KR101164048B1 (es)
CN (2) CN100439513C (es)
AT (1) ATE345396T1 (es)
AU (3) AU2003232790A1 (es)
BR (2) BR0311175A (es)
CA (2) CA2486950C (es)
DE (1) DE50305687D1 (es)
DK (1) DK1504113T3 (es)
ES (1) ES2275095T3 (es)
HK (2) HK1081599A1 (es)
MX (2) MXPA04011220A (es)
WO (3) WO2003097864A1 (es)

Families Citing this family (37)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101164048B1 (ko) * 2002-05-16 2012-07-18 에프. 호프만-라 로슈 아게 비-재생성 효소-보조효소 복합체를 포함하는 방법 및 시약시스템
DE10325699B3 (de) * 2003-06-06 2005-02-10 Roche Diagnostics Gmbh System zur Analyse einer zu untersuchenden Probe und Verwendung eines solchen Systems
DE102004007983A1 (de) * 2004-02-18 2005-09-08 Roche Diagnostics Gmbh Testelement mit Einschicht-Reaktionsfilm
DE102004051830B4 (de) * 2004-10-25 2007-12-13 Roche Diagnostics Gmbh Multifunktionales Referenzsystem bei Analytbestimmungen durch Fluoreszenz
US20060281187A1 (en) 2005-06-13 2006-12-14 Rosedale Medical, Inc. Analyte detection devices and methods with hematocrit/volume correction and feedback control
DE102005035461A1 (de) 2005-07-28 2007-02-15 Roche Diagnostics Gmbh Stabile NAD/NADH-Derivate
EP1928302B1 (en) 2005-09-30 2012-08-01 Intuity Medical, Inc. Fully integrated wearable or handheld monitor
US8801631B2 (en) 2005-09-30 2014-08-12 Intuity Medical, Inc. Devices and methods for facilitating fluid transport
CA2564666A1 (en) * 2005-10-25 2007-04-25 F. Hoffmann-La Roche Ag Fluorescence spectroscopy in absorbing media
GB0526051D0 (en) 2005-12-21 2006-02-01 Oxford Biosensors Ltd Cholesterol sensor
EP1830177A1 (de) * 2006-03-02 2007-09-05 F. Hoffman-la Roche AG Integriertes Testelement
US20100056740A1 (en) * 2006-06-14 2010-03-04 Brigham Young University Adsorption-resistant acrylic copolymer for fluidic devices
EP2022859A1 (de) * 2007-08-01 2009-02-11 Roche Diagnostics GmbH Verfahren und Vorrichtung zur Bestimmung der Konzentration eines Analyten mittels Fluoreszenzmessung
EP2093284A1 (de) 2008-02-19 2009-08-26 F.Hoffmann-La Roche Ag Stabilisierung von Dehydrogenasen mit stabilen Coenzymen
EP2293719B1 (en) 2008-05-30 2015-09-09 Intuity Medical, Inc. Body fluid sampling device -- sampling site interface
DK3639744T3 (da) 2008-06-06 2022-02-21 Intuity Medical Inc Blodglukosemåler og fremgangsmåde til anvendelse
EP2299903B1 (en) 2008-06-06 2021-01-27 Intuity Medical, Inc. Detection meter and mode of operation
MX2011000417A (es) 2008-07-11 2011-07-28 Universal Biosensors Pty Ltd Sensor mejorado para inmunoanalisis.
EP2226007A1 (de) 2009-02-19 2010-09-08 Roche Diagnostics GmbH Testelementmagazin mit abgedeckten Testfeldern
EP2398388B1 (de) 2009-02-19 2020-04-08 Roche Diabetes Care GmbH Platzsparende magazinierung analytischer hilfsmittel
EP2398909B1 (de) 2009-02-19 2015-07-22 F. Hoffmann-La Roche AG Schnelle reaktionskinetik von enzymen mit niedriger aktivität in trockenen chemieschichten
EP2226008A1 (de) 2009-02-19 2010-09-08 Roche Diagnostics GmbH Verfahren zur Herstellung eines analytischen Magazins
EP2292751A1 (de) 2009-08-20 2011-03-09 Roche Diagnostics GmbH Stabilisierung von Enzymen mit stabilen Coenzymen
WO2011065981A1 (en) 2009-11-30 2011-06-03 Intuity Medical, Inc. Calibration material delivery devices and methods
EP2362207A1 (de) * 2010-01-28 2011-08-31 F. Hoffmann-La Roche AG Messsystem und Messverfahren insbesondere zur Blutzuckerbestimmung
CN104905799B (zh) 2011-04-12 2018-06-08 霍夫曼-拉罗奇有限公司 分析辅件
US9752990B2 (en) 2013-09-30 2017-09-05 Honeywell International Inc. Low-powered system for driving a fuel control mechanism
CA2843945C (en) 2011-08-03 2022-06-21 Intuity Medical, Inc. Devices and methods for body fluid sampling and analysis
EP2620507A1 (en) 2012-01-25 2013-07-31 Roche Diagnostics GmbH Method for the evaluation of the quality of a test element
KR101728597B1 (ko) 2012-04-19 2017-04-19 에프. 호프만-라 로슈 아게 혈액 내 분석물 농도를 결정하는 방법 및 디바이스
DE102013104906B4 (de) * 2013-05-13 2015-06-25 Brandenburgische Technische Universität Cottbus-Senftenberg Wasserfreie Immobilisierung von Enzymen
CN105247069A (zh) 2013-06-04 2016-01-13 豪夫迈·罗氏有限公司 用于fret的新化合物及与其相关的方法
CN106687812A (zh) * 2014-08-05 2017-05-17 贝克顿·迪金森公司 用于分析血液样品中的葡萄糖‑6‑磷酸脱氢酶活性的方法和组合物
KR102273051B1 (ko) 2014-10-21 2021-07-06 삼성디스플레이 주식회사 정공 수송용 재료 및 이를 이용한 유기 발광 소자
EP3339431A1 (en) 2016-12-22 2018-06-27 Roche Diabetes Care GmbH Glucose dehydrogenase variants with improved properties
EP3856139A1 (de) * 2018-09-24 2021-08-04 Fraunhofer Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V. MAßGESCHNEIDERTE SCHICHTEN AUS CELLULOSE-DISPERSIONEN ZUM NACHWEIS VON ANALYTEN
US11579093B2 (en) * 2020-04-22 2023-02-14 SciLogica Corp. Optical component

Family Cites Families (40)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BE638336A (es) * 1964-12-21 1964-02-03
CS164231B2 (es) * 1972-09-28 1975-11-07
IL57570A (en) * 1978-06-22 1982-07-30 Miles Lab Method and reagent for specific binding assay with a prosthetic group as a label component
US4238565A (en) 1978-06-22 1980-12-09 Miles Laboratories, Inc. Specific binding assay with a prosthetic group as a label component
AT367796B (de) * 1979-10-29 1982-07-26 List Hans Verfahren zur bestimmung einer stoffkonzentration in einer loesung
US4451568A (en) * 1981-07-13 1984-05-29 Battelle Memorial Institute Composition for binding bioactive substances
DE3332144A1 (de) * 1982-09-06 1984-03-08 Konishiroku Photo Industry Co., Ltd., Tokyo Analytisches element
GB8429165D0 (en) * 1983-12-06 1984-12-27 Ici Plc Dry film resists
US4820399A (en) * 1984-08-31 1989-04-11 Shimadzu Corporation Enzyme electrodes
GB8608435D0 (en) 1986-04-07 1986-05-14 Cranfield Inst Of Tech Specific binding assays
JPH0710896B2 (ja) 1987-04-30 1995-02-08 第一工業製薬株式会社 高分子量カチオン性アクリル系重合体の製造方法
GB8718430D0 (en) * 1987-08-04 1987-09-09 Ici Plc Sensor
AU602277B2 (en) * 1988-02-10 1990-10-04 Miles Inc. Self-indicating and improved resolution analyses employing stoichiometric chemical substraction
US5340722A (en) * 1988-08-24 1994-08-23 Avl Medical Instruments Ag Method for the determination of the concentration of an enzyme substrate and a sensor for carrying out the method
US5296305A (en) * 1990-05-11 1994-03-22 Esslior International (Compagnie Generale D'optique) Method of fabricating a lens made of transparent polymer with modulated refracting index
GB9022304D0 (en) * 1990-10-15 1990-11-28 Ares Serono Res & Dev Ltd Assay technique
JP2977265B2 (ja) * 1990-11-19 1999-11-15 旭化成工業株式会社 感光性エラストマー構成体
DE4118880C2 (de) * 1991-06-08 1998-12-17 Fraunhofer Ges Forschung Verfahren zur selektiven Bestimmung der Konzentration gelöster Substanzen in enzymatischen Reaktionen
JPH06506019A (ja) * 1991-12-18 1994-07-07 シメッド　ライフ　システムズ　インコーポレイテッド 潤滑性ポリマーネットワーク
DE59307720D1 (de) * 1992-03-23 1998-01-08 Siemens Ag Biosensor
JPH07115997A (ja) 1993-08-31 1995-05-09 Iatron Lab Inc Ｇｐｔ測定用試薬
JPH07115998A (ja) 1993-08-31 1995-05-09 Iatron Lab Inc Ｇｏｔ測定用試薬
US5447847A (en) * 1993-09-02 1995-09-05 Nissui Pharmaceutical Co., Ltd. Quantitative determination of pyruvic acid and quantitative analysis for component of living body making use of such determination
GB9404805D0 (en) * 1994-03-11 1994-04-27 Minnesota Mining & Mfg Novel developing agents for (photo)thermographic systems
JP2986712B2 (ja) * 1995-05-01 1999-12-06 キヤノン株式会社 化学センサ、それを用いた塩化物イオン濃度の測定装置及び測定方法
US5691205A (en) * 1994-06-23 1997-11-25 Canon Kabushiki Kaisha Fluorometric analysis of chloride ion and chemical sensor therefor
DE4424179C2 (de) 1994-07-08 1998-09-10 Biotechnolog Forschung Gmbh UV-polymerisierbare Enzympaste zur Herstellung von Dickschicht-Biosensoren und damit hergestellte Dickschicht-Biosensoren
JPH09248200A (ja) * 1996-03-13 1997-09-22 Nissho Corp グルコース測定用試薬
US5863650A (en) * 1997-05-05 1999-01-26 Bioengineered Materials, Inc. Interfacial coatings
JP2000035413A (ja) 1998-07-16 2000-02-02 Sapporo Imuno Diagnostic Laboratory:Kk 脱水素酵素と補酵素を用いたバイオセンサ
AT409307B (de) 1999-01-12 2002-07-25 Hoffmann La Roche Optisch-chemischer sensor
JP3869601B2 (ja) 1999-11-26 2007-01-17 株式会社トクヤマ ホモシステインの測定方法
US6635412B2 (en) * 2000-07-11 2003-10-21 Martin A. Afromowitz Method for fabricating 3-D structures with smoothly-varying topographic features in photo-sensitized epoxy resists
WO2002052045A1 (en) 2000-12-26 2002-07-04 Aviva Biosciences Active and biocompatible platforms prepared by polymerization of surface coating films
US20030087178A1 (en) * 2001-04-20 2003-05-08 Adrian Lungu Photopolymerizable element for use as a flexographic printing plate and a process for preparing the plate from the element
KR101164048B1 (ko) * 2002-05-16 2012-07-18 에프. 호프만-라 로슈 아게 비-재생성 효소-보조효소 복합체를 포함하는 방법 및 시약시스템
US7553615B2 (en) 2005-07-28 2009-06-30 Roche Diagnostics Operations, Inc. Compounds, methods, complexes, apparatuses and uses relating to stabile forms of NAD/NADH
EP1964927A1 (de) 2007-02-27 2008-09-03 F. Hoffmann-La Roche AG Chinone als Mediatoren für photometrische Teste
US20080219807A1 (en) 2007-03-05 2008-09-11 Van Der Meulen Peter Semiconductor manufacturing process modules
EP2022859A1 (de) 2007-08-01 2009-02-11 Roche Diagnostics GmbH Verfahren und Vorrichtung zur Bestimmung der Konzentration eines Analyten mittels Fluoreszenzmessung

Also Published As

Publication number Publication date
BR0309947B1 (pt) 2013-11-26
BR0309947A (pt) 2005-03-01
KR20040106530A (ko) 2004-12-17
MXPA04011220A (es) 2005-02-14
US8846132B2 (en) 2014-09-30
EP1504116A1 (de) 2005-02-09
CN1653190A (zh) 2005-08-10
CA2493918C (en) 2012-08-28
US20050214891A1 (en) 2005-09-29
EP1504113B1 (de) 2006-11-15
DK1504113T3 (da) 2007-03-05
CA2486950C (en) 2013-07-30
KR20040106531A (ko) 2004-12-17
CN1653189B (zh) 2010-12-15
US7951581B2 (en) 2011-05-31
JP4656938B2 (ja) 2011-03-23
JP2005528896A (ja) 2005-09-29
CN1653189A (zh) 2005-08-10
AU2003240260B2 (en) 2008-05-22
AU2003232790A1 (en) 2003-12-02
AU2003240260A1 (en) 2003-12-02
AU2003240666A1 (en) 2003-12-02
CN100439513C (zh) 2008-12-03
EP1504113A2 (de) 2005-02-09
US7341830B2 (en) 2008-03-11
AU2003240666B2 (en) 2009-04-23
JP2005528897A (ja) 2005-09-29
WO2003097859A3 (de) 2004-02-26
WO2003097863A1 (de) 2003-11-27
DE50305687D1 (de) 2006-12-28
BR0311175A (pt) 2005-03-15
CA2486950A1 (en) 2003-11-27
JP2009275233A (ja) 2009-11-26
JP2005532796A (ja) 2005-11-04
US20080182324A1 (en) 2008-07-31
KR101002194B1 (ko) 2011-01-13
HK1081599A1 (en) 2006-05-19
JP5118288B2 (ja) 2013-01-16
EP1504115A1 (de) 2005-02-09
ATE345396T1 (de) 2006-12-15
CA2493918A1 (en) 2003-11-27
ES2275095T3 (es) 2007-06-01
WO2003097864A1 (de) 2003-11-27
KR101164048B1 (ko) 2012-07-18
US20060099327A1 (en) 2006-05-11
HK1081600A1 (en) 2006-05-19
WO2003097859A2 (de) 2003-11-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CA2493918C (en) Method and reagent system with non-regenerable enzyme-coenzyme complex
JP3342077B2 (ja) 分析物の分光光度定量分析のための改良酸化カツプリング染料
US20060121547A1 (en) Diffusion layer for an enzyme-based sensor application
JP2003232789A (ja) 安定化したテトラゾリウム試薬組成物およびこれを使用するための方法
JP6059244B2 (ja) 試料中の少なくとも１つの分析物を検出するための分析装置
JP2005528896A5 (es)
US20030164024A1 (en) Biosensor and method for production thereof
JP2015535077A (ja) デバイスおよびアミノアシドパシーの検出のためにデバイスを用いる方法
JPH01128797A (ja) 酵素活性の定量法
EP3126493B1 (en) High load enzyme immobilisation by crosslinking
JP3867081B2 (ja) 酸化還元指示薬としてのアミン−ｎ−オキサイドによるアナライトの蛍光測定
Capitán-Vallvey et al. Single-use optical sensor for the determination of iron in water and white wines
DE10221845A1 (de) Verfahren und Reagenzsystem mit nicht-regenerierbarem Enzym-Coenzym-Komplex
de Marcos et al. Comparative study of polymeric supports as the base of immobilisation of chemically modified enzymes
DE10221846A1 (de) Verfahren und Reagenzsystem mit inaktiviertem Enzym

Legal Events

Date Code Title Description
FG Grant or registration