MX2014008497A - Composicion farmaceutica que comprende un complejo de carga con portador polimerico y al menos y un antigeno proteinico o peptidico. - Google Patents

Composicion farmaceutica que comprende un complejo de carga con portador polimerico y al menos y un antigeno proteinico o peptidico.

Info

Publication number
MX2014008497A
MX2014008497A MX2014008497A MX2014008497A MX2014008497A MX 2014008497 A MX2014008497 A MX 2014008497A MX 2014008497 A MX2014008497 A MX 2014008497A MX 2014008497 A MX2014008497 A MX 2014008497A MX 2014008497 A MX2014008497 A MX 2014008497A
Authority
MX
Mexico
Prior art keywords
protein
antigen
arg
polymeric carrier
nucleic acid
Prior art date
Application number
MX2014008497A
Other languages
English (en)
Other versions
MX366858B (es
Inventor
Patrick Baumhof
Thomas Kramps
Söhnke Voss
Karl-Josef Kallen
Mariola Fotin-Mleczek
Original Assignee
Curevac Gmbh
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Curevac Gmbh filed Critical Curevac Gmbh
Publication of MX2014008497A publication Critical patent/MX2014008497A/es
Publication of MX366858B publication Critical patent/MX366858B/es

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/001102—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A61K39/001103—Receptors for growth factors
    • A61K39/001104—Epidermal growth factor receptors [EGFR]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/001102—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A61K39/001103—Receptors for growth factors
    • A61K39/001106—Her-2/neu/ErbB2, Her-3/ErbB3 or Her 4/ErbB4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/001102—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A61K39/001103—Receptors for growth factors
    • A61K39/001109—Vascular endothelial growth factor receptors [VEGFR]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/00113—Growth factors
    • A61K39/001135—Vascular endothelial growth factor [VEGF]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/001148—Regulators of development
    • A61K39/00115—Apoptosis related proteins, e.g. survivin or livin
    • A61K39/001151—Apoptosis related proteins, e.g. survivin or livin p53
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/001152—Transcription factors, e.g. SOX or c-MYC
    • A61K39/001153—Wilms tumor 1 [WT1]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/001154—Enzymes
    • A61K39/001156—Tyrosinase and tyrosinase related proteinases [TRP-1 or TRP-2]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/001154—Enzymes
    • A61K39/001157—Telomerase or TERT [telomerase reverse transcriptase]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/001154—Enzymes
    • A61K39/001164—GTPases, e.g. Ras or Rho
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/001166—Adhesion molecules, e.g. NRCAM, EpCAM or cadherins
    • A61K39/001168—Mesothelin [MSLN]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/001169—Tumor associated carbohydrates
    • A61K39/00117—Mucins, e.g. MUC-1
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/00118—Cancer antigens from embryonic or fetal origin
    • A61K39/001182—Carcinoembryonic antigen [CEA]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/001184—Cancer testis antigens, e.g. SSX, BAGE, GAGE or SAGE
    • A61K39/001186—MAGE
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/001184—Cancer testis antigens, e.g. SSX, BAGE, GAGE or SAGE
    • A61K39/001188—NY-ESO
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/00119—Melanoma antigens
    • A61K39/001191—Melan-A/MART
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/00119—Melanoma antigens
    • A61K39/001192—Glycoprotein 100 [Gp100]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/001193—Prostate associated antigens e.g. Prostate stem cell antigen [PSCA]; Prostate carcinoma tumor antigen [PCTA]; PAP or PSGR
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/001193—Prostate associated antigens e.g. Prostate stem cell antigen [PSCA]; Prostate carcinoma tumor antigen [PCTA]; PAP or PSGR
    • A61K39/001194—Prostate specific antigen [PSA]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/001193—Prostate associated antigens e.g. Prostate stem cell antigen [PSCA]; Prostate carcinoma tumor antigen [PCTA]; PAP or PSGR
    • A61K39/001195—Prostate specific membrane antigen [PSMA]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/145—Orthomyxoviridae, e.g. influenza virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/205—Rhabdoviridae, e.g. rabies virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/29—Hepatitis virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/35—Allergens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/645—Polycationic or polyanionic oligopeptides, polypeptides or polyamino acids, e.g. polylysine, polyarginine, polyglutamic acid or peptide TAT
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/646—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent the entire peptide or protein drug conjugate elicits an immune response, e.g. conjugate vaccines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/0008—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition
    • A61K48/0025—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition wherein the non-active part clearly interacts with the delivered nucleic acid
    • A61K48/0041—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition wherein the non-active part clearly interacts with the delivered nucleic acid the non-active part being polymeric
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A61P31/06—Antibacterial agents for tuberculosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5252—Virus inactivated (killed)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55516—Proteins; Peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55561—CpG containing adjuvants; Oligonucleotide containing adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
    • A61K2039/572—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2 cytotoxic response
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
    • A61K2039/575—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2 humoral response
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6093—Synthetic polymers, e.g. polyethyleneglycol [PEG], Polymers or copolymers of (D) glutamate and (D) lysine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/42—Proteins; Polypeptides; Degradation products thereof; Derivatives thereof, e.g. albumin, gelatin or zein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/20011—Papillomaviridae
    • C12N2710/20034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/20011—Papillomaviridae
    • C12N2710/20071—Demonstrated in vivo effect
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2730/00—Reverse transcribing DNA viruses
    • C12N2730/00011—Details
    • C12N2730/10011—Hepadnaviridae
    • C12N2730/10111—Orthohepadnavirus, e.g. hepatitis B virus
    • C12N2730/10134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2730/00—Reverse transcribing DNA viruses
    • C12N2730/00011—Details
    • C12N2730/10011—Hepadnaviridae
    • C12N2730/10111—Orthohepadnavirus, e.g. hepatitis B virus
    • C12N2730/10171—Demonstrated in vivo effect
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
    • C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
    • C12N2760/16134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
    • C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
    • C12N2760/16171—Demonstrated in vivo effect
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/20011—Rhabdoviridae
    • C12N2760/20111—Lyssavirus, e.g. rabies virus
    • C12N2760/20134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/20011—Rhabdoviridae
    • C12N2760/20111—Lyssavirus, e.g. rabies virus
    • C12N2760/20171—Demonstrated in vivo effect
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Abstract

La presente invención se dirige a una composición farmacéutica que incluye (por ejemplo para utilizarse como un adyuvante) un complejo de carga con portador polimérico, que comprende como un portador un portador polimérico formado por componentes catiónicos reticulados con disulfuro; y como una carga al menos una molécula de ácido nucleico, y al menos un antígeno que se selecciona de un antígeno proveniente de un patógeno asociado con una enfermedad infecciosa; un antígeno asociado con alergia o una enfermedad alérgica; un antígeno asociado con una enfermedad autoinmune; o un antígeno asociado con un cáncer o una enfermedad tumoral, o en cada caso un fragmento, variante y/o derivado del antígeno. La composición farmacéutica permite una inducción eficiente de una respuesta inmunitaria adaptativa dirigida contra el antígeno. La presente invención proporciona además kits, así como el uso de la composición farmacéutica o el kit como una vacuna, en particular en el tratamiento de enfermedades infecciosas, alergias, enfermedad autoinmunes y tumores o enfermedades cancerosas.

Description

COMPOSICIÓN FARMACÉUTICA QUE COMPRENDE UN COMPLEJO DE CARGA CON PORTADOR POLIMERICO Y AL MENOS UN ANTÍGENO PROTEINICO O PEPTÍDICO CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se dirige a una composición farmacéutica que comprende un complejo de carga con un portador pclimérico y al menos un antigeno. El complejo de carga con portador polimérico de preferencia comprende un portador y una carga, en donde el portador es un componente catiónico reticulado con disulfuro y la carga al menos una molécula de ácido nucleico. Al menos el antigeno de preferencia se selecciona de un antigeno proveniente de un patógeno asociado con una enfermedad infecciosa, un antigeno asociado con alergia o una enfermedad alérgica, un antigeno asociado con una enfermedad autoinmune, o un antigeno asociado con un cáncer o una enfermedad tumoral, o en cada caso un fragmento, variante y/o derivado del antigeno. Esta composición farmacéutica inventiva por ejemplo, puede ser, una vacuna en donde el complejo de carga con portador polimérico puede servir como un adyuvante para apoyar una respuesta inmunitaria al antigeno. Por consiguiente, esta composición farmacéutica permite una inducción eficiente de una respuesta inmunitaria adaptativa dirigida contra al menos un antigeno comprendido en la misma, en particular de una respuesta inmunitaria modificada por Thl.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona además los kits o kits de partes que comprenden los componentes de la composición farmacéutica inventiva, asi como el uso de la composición farmacéutica inventiva o el kit o kit de partes inventivos como una vacuna, en particular en el tratamiento de enfermedades infecciosas, alergias, enfermedad autoinmunes y tumores o enfermedades cancerígenas. Además, la invención proporciona: (a) un complejo de carga con portador polimérico para utilizarse en terapia en combinación con al menos un antígeno o un fragmento, variante y/o derivado del mismo; y (b) al menos un antigeno o un fragmento, variante y/o derivado del mismo para utilizarse en terapia en combinación con un complejo de carga con portador polimérico, en cada caso (a) y (b) , en particular para utilizarse en la terapia de enfermedades infecciosas, alergias, enfermedad autoinmunes y tumores o enfermedades cancerígenas.
Hoy en día muchas enfermedades requieren la administración de adyuvantes para proporcionar una respuesta inmunitaria innata para apoyar una respuesta inmunitaria adaptativa, en particular en el contexto de las vacunaciones.
Algunas, aunque no necesariamente todas estas enfermedades, adicional o alternativamente requieren la administración de fármacos a base de péptidos-, proteínas-, y ácido nucleico-, por ejemplo, la transfegción de ácidos nucleicos en células o tejidos. Estos requisitos por lo general representan diferentes aspectos en el tratamiento de estas enfermedades y típicamente son difíciles de enfrentar en un procedimiento. Como consecuencia, la técnica anterior por lo general maneja estos aspectos vía procedimientos por separado.
En el contexto anterior, en general se cree que la vacunación será una de las formas más efectivas y económicas para prevenir o tratar enfermedades. No obstante, se ha probado que son difíciles de resolver los diversos problemas en el desarrollo de las vacunas: con frecuencia las vacunas son ineficientes para las personas muy jóvenes y las personas muy ancianas; es necesario que muchas vacunas se administren varias veces, y la protección que confieren se reduce con el tiempo, requiriendo administraciones de refuerzo, y, para algunas enfermedades tales como el VIH, se necesita urgentemente el desarrollo de vacunas eficientes. Como se acepta generalmente, muchas de estas vacunas se podrían habilitar o mejorar si pudieran producir una respuesta inmunitaria más fuerte y más duradera.
Por consiguiente, el desarrollo de composiciones farmacéuticas novedosas eficientes y seguras que incluyan adyuvantes para fines de vacunación que apoyen la inducción y mantenimiento de una respuesta inmunitaria adaptativa al iniciar o reforzar una respuesta inmunitaria innata paralela representa un problema desafiante principal.
Los adyuvantes usualmente se definen como compuestos que aumentan y/o modulan la inmunogenicidad intrínseca de un antígeno. Para reducir los efectos secundarios negativos, las vacunas novedosas tienen una composición más definida que con frecuencia conduce a una menor inmunogenicidad en comparación con las vacunas anteriores con célula enteras o a base de virus. Por lo tanto, se requieren adyuvantes para ayudar a que las vacunas novedosas induzcan respuestas inmunitarias potentes y persistentes, con el beneficio adicional de que son necesarias inyecciones con menos antígeno y en menor número. Actualmente resulta claro que la respuesta inmunitaria adaptativa depende del nivel y especificidad de las señales de peligro iniciales percibidas por las células inmunes innatas después de la infección o vacunación (Guy, B., (2007), Nat Rev Microbiol 5 (7 ) : 505-17. ) . En particular para los candidatos a vacunas de nueva generación, que comprenden cada vez más proteínas recombinantes bastante purificadas y, aunque muy seguras, son deficientemente inmunogénicas , se tornan cada vez más necesarios adyuvantes eficientes.
Desafortunadamente, hasta la fecha están disponibles sólo unos cuantos adyuvantes autorizados. El más prominente es Alum que se sabe será seguro, aunque también representa un adyuvante muy débil. Se han desarrollado muchos adyuvantes adicionales, por ejemplo incluyendo la administración de patógenos, CpG-nucleótidos , etc. Muchos de estos adyuvantes novedosos o "establecidos", sin embargo, no satisfacen los requerimientos anteriores, debido a que se tienen que considerar y resolver muchos problemas nuevos y emergentes. Estos problemas inter alia incluyen enfermedades infecciosas nuevas y re-emergentes, administraciones repetidas, amenaza de gripe pandémica, etc.
Además, los blancos de vacunas novedosas usualmente son más difíciles de desarrollar y -debido a sus respuestas inmunitarias adaptadas específicamente- requieren adyuvantes más potente para facilitar su éxito. Además, sigue habiendo un número significativo de patógenos importantes para los cuales en el presente incluso no se tienen vacunas efectivas. E^sto representa un blanco futuro muy desafiante. Para facilitar el desarrollo de vacunas contra estos blancos, serán necesarias composiciones farmacéuticas más potentes que incluyan adyuvantes y estos blancos. Por lo tanto, es necesario que los nuevos adyuvantes en estas composiciones ofrezca las ventajas, incluyendo más respuestas a anticuerpos heterólogos, cobertura de la diversidad de patógenos, inducción de respuestas potentes a anticuerpos funcionales, a asegurar el exterminio de patógenos o la neutralización e inducción de respuestas más efectivas a células T, oara el exterminio directo e indirecto de patógenos, en particular la inducción de células T citotóxicas que forman parte de una respuesta inmunitaria a Thl. Además, puede ser necesario que los adyuvantes alcancen efectos más pragmáticos, incluyendo una reducción de la dosis de antigenos y superar la competencia de antigenos en las vacunas de combinación. Además, el antecedente de un envejecimiento que la población, que es susceptible cada vez más a enfermedades infecciosas, serán necesarios nuevos adyuvantes para superar el deterioro natural de la respuesta inmunitaria con la edad (O' Hagan, D. T. and E. De Gregorio (2009), Droga Discov Today 14(11-12) :541-51. ) .
La revisión de O' Hagan (2009; supra) resume algunas razones para la urgente necesidad de p?????s adyuvantes efectivos por ejemplo, el requisito de menores dosis de antigenos en vacunas, la necesidad de aumentar el alcance de una respuesta inmunitaria y la actividad heteróloga, para permitir vacunas de combinación compleja, y superar la competencia antigénica, para superar la respuesta inmunitaria limitada en algunos grupos de la población, tales como los ancianos, los niños pequeños, e infantes, pacientes con enfermedades crónicas y los i nmunocompromet i dos , para aumentar la respuesta a células T efectoras y títulos de anticuerpos, para inducir respuestas protectoras más rápidamente y también para extender el periodo de respuesta al intensificar las respuestas de células B y T con memoria.
Resumiendo lo anterior, se requieren composiciones farmacéuticas novedosas eficientes y seguras que incluyan agentes inmunoestimulantes o adyuvantes, los cuales de preferencia son eficientes para inducir una respuesta inmunitaria innata, en particular para inducir la citoquina antiviral IFN-alfa; y que también sean eficientes para apoyar una respuesta inmunitaria adaptativa; segura, es decir no asociada con ninguno de los efecto a largo plazo; que sean bien tolerados; que estén disponibles vía una simple trayectoria sintética; que exhiban condiciones de almacenamiento a bajo costo (en particular liofilización factible); que requieran componentes simples y económicos ; que sean biodegradables ; que sean compatibles con muchos tipos diferentes de antígenos de vacuna; que sean capaces de co-suministrar un potenciador antigénico e inmunológico, etc.
Como ya se explicó anteriormente, los adyuvantes o agentes inmunoestimulantes usualmente actúan vía su capacidad para induci una respuesta inmunitaria innata. La forma del sistema inmunitario innato dominante de la defensa del hospedero en la mayoría de organismos y comprende barreras tales como barreras humorales y químicas entre las que se incluyen, por ejemplo, inflamación, el sistema complementario y barreras celulares. El sistema inmunitario innato típicamente se basa en un pequeño número de receptores, denominados receptores para reconocimiento de patrones. Los mismos reconocen los patrones moleculares conservados que distinguen los organismos extraños, virus similares, bacterias, hongos y parásitos, provenientes de las células del hospedero. Estos patrones moleculares patógeno-asociados (PAMP) incluyen ácidos nucleicos virales, componentes de bacterias y paredes fúngales, proteínas flagelares, y más. La primera familia de receptores para reconocimiento de patrones (receptores PAMP) estudiados en detalle fue la familia del receptor similar a Toll (TLR) . Los TLR son proteínas transmembrana que reconocen los ligandos del entorno extracelular o del lumen de endosomas. Después de la unión a ligandos realizan la transducción de la señal vía proteínas adaptadoras citoplásmicas que conducen a la activación de una respuesta de defensa del hospedero y conllevan la producción de péptídos antimicrobianos, quimioquinas y cotiquinas pre-inflamatorias , citoquinas antivirales, etc., (véase por ejemplo Meylan, E., J. Tschopp, et. al. (2006), Nature 442 (7098 ): 39-44 ) . Los componentes relevantes adicionales del sistema inmunitario incluyen, por ejemplo, los TLR endosómicos, los receptores citoplásmicos , los interferones Tipo I y los receptores citoplásmicos. Por lo tanto, los agentes inmunoestimulantes o adyuvantes se definen en la presente, de preferencia como inductores de una respuesta inmunitaria innata que activa a los receptores para reconocimiento de patrones (receptores PA P) . Mediante esto, se produce una cascada de señales, la cual, por ejemplo, puede dar por resultado en la liberación de citoquinas (por ejemplo IFN-alfa) apoyando la respuesta inmunitaria innata. Por consiguiente, se prefiere una característica de un agente inmunoestimulante o adyuvante para unirse a estos receptores y activar estos receptores PAMP. Idealmente, este agente o adyuvante adicionalmente apoya la respuesta inmunitaria adaptativa mediante, por ejemplo, la modificación de la respuesta inmunitaria de tal forma que se active la clase preferida de células Th. Dependiendo de la enfermedad o trastorno que será tratado, se puede preferir una modificación a una respuesta inmunitaria basada en Thl o, en otros casos, se puede preferir una modificación a una respuesta inmunitaria a Th2.
En la técnica anterior existen algunos candidatos de adyuvantes prometedores que cumplen con algunas, si no es que todas, las características requeridas definidas anteriormente .
Como un ejemplo, entre los nuevos adyuvantes desarrollados anteriormente, algunos oligonucleótidos de CpG ADN similares a ácidos nucleicos o ARNis (ARN inmunoestimulante ) resultaron ser candidatos prometedores para nuevos agentes inmunoestimulantes o adyuvantes, esto permite la inducción terapéutica o profiláctica de una respuesta inmunitaria innata. Detalladamente, estos adyuvantes a base de ácido nucleico usualmente tienen que ser suministrados efectivamente al sitio de acción para permitir la inducción de una respuesta inmunitaria innata efectiva sin pérdida innecesaria de la actividad del adyuvante y, en algunos casos sin la necesidad de aumentar los niveles tolerados sistémicamente anteriores del volumen administrado.
Un procedimiento para resolver este problema puede ser los transfección de células que forman parte del sistema inmunitario innato (por ejemplo, células dendítricas, células dendítricas plasmacitoideas (pDC) ) con ácidos nucleicos inmunoestimuladores que son ligandos de los receptores PAMP (por ejemplo los receptores similares a Toll (TLR) ) , y de esta forma pueden conducir a una inmunoestimulación mediante el ligando de ácido nucleico. Los procedimientos adicionales pueden ser la transfección directa de adyuvantes a base de ácido nucleico. Sin embargo, todos estos procedimientos típicamente se ven afectados por el suministro ineficiente del ácido nucleico y por consiguiente se disminuye la actividad adyuvante, en particular cuando se administran localmente .
Sin embargo, una desventaja principal de estos procedimientos con adyuvantes a base de ácido nucleico hasta hoy en día es su capacidad limitada para cruzar la membrana plasmática de células de mamífero, dando por resultado en un acceso celular deficiente y una eficacia terapéutica inadecuada. Hasta hoy en día este obstáculo representa un reto principal para las aplicaciones que se basan en la transfección de ácido nucleico, por ejemplo los desarrollos biomédicos y por consiguiente el éxito comercial de muchos productos biofarmacéuticos (véase, por ejemplo, Foerg, C. & Merkle, H.P., J Pharm Sci 97, 144-62 (2008).
La transfección de ácidos nucleicos o genes en células o tejidos se ha investigado hasta la fecha en el contexto de fines de transfección in vi tro y en el contexto de procedimientos terapéuticos génicos. Sin embargo, no está disponible ninguno de los adyuvantes hasta la fecha que se basen en estas técnicas de suministro génico que sean eficientes y seguros, en particular adyuvantes no autorizados. Esto supuestamente es debido a los requisitos complejos de adyuvantes en general en combinación con problemas de estabilidad que serán resueltos en el caso de los adyuvantes a base de ácido nucleico.
No obstante, la transfección de ácidos nucleicos o qenes en células o tejidos para producir una respuesta inmunitaria (innata y/o adaptativa) parece proporcionar un procedimiento prometedor para proporcionar nuevos adyuvantes.
Sin embargo, muchos de estos procedimientos utilizan la transfección de ácidos nucleicos o genes en células o tejidos sin el propósito de inducir una respuesta inmunitaria innata. Incluso existen algunas terapias terapéuticas génicas, que han evitado estrictamente la inducción de una respuesta inmunitaria innata. Incluso en casos raros, donde se lleva a cabo una vacunación para inducir una respuesta inmunitaria antigeno-especifica adaptativa utilizando la administración de ácidos nucleicos, por ejemplo en vacunaciones de tumores utilizando antigenos codificados de ADN o ARNm, la inducción de una respuesta inmunitaria adaptativa típicamente se lleva a cabo como una inmunización activa contra el antígeno codificado pero no como una terapia adyuvante acompañante y de esta forma puede requerir la administración adicional de un adyuvante por separado para inducir una respuesta inmunitaria innata.
Incluso si se conoce en la técnica muchos de los métodos de transfección, la transferencia o inserción de ácidos nucleicos o genes en células de un individuo todavía representa un reto principal hoy en día y todavía no se ha resuelto satisfactoriamente. Para enfrentar este problema complejo, se desarrollaron una variedad de métodos en la última década. Éstos incluyen la transfección mediante fosfato de calcio, lípidos catiónicos, polímeros catiónicos, y liposomas. Los métodos adicionales para transfección son electroporación y transducción viral.
Sin embargo, como se sabe por un experto, los sistemas para transferencia o inserción de ácidos nucleicos o genes tienen que cumplir diversos requisitos para aplicaciones in vivo que incluyen un suministro eficiente de ácido nucleico en células de un individuo con alta funcionalidad, la protección del ácido nucleico contra nucleasas que se presentan ubicuamente, la liberación del ácido nucleico en la célula, sin problemas de seguridad, la fabricación factible en una forma comercia lmente aceptable susceptible a una estabilidad a gran escala y de almacenamiento bajo condiciones de bajo costo (por ejemplo, liofilización factible) . Estos requisitos se agregaran a los requisitos complejos de un adyuvante particularmente si está en la forma de un ácido nucleico como se señaló anteriormente .
Algunas estrategias exitosas para la transferencia o inserción de ácidos nucleicos o genes disponibles hoy en día dependen del uso de vectores virales, tales como adenoviruses , virus adeno-asociados , retrovirus, y virus de herpes. Los vectores virales tienen la capacidad de suministrar una transferencia génica con alta eficiencia y la posibilidad de expresión génica a largo plazo. Sin embargo, la respuesta inmunitaria aguda ("tormenta de citoquinas " ) , la inmunogenicidad, y la mutagénesis de inserción no cubierta en ensayos clínicos de terapia génica han surgido serios problemas de seguridad acerca de algunos vectores virales utilizados comúnmente.
Otra solución al problema de la transferencia o inserción de ácidos nucleicos o genes se puede encontrar en el uso de vectores no virales. Aunque los vectores no virales no son tan eficientes como los vectores virales, muchos vectores no virales se han desarrollado para proporcionar una alternativa más segura. Los métodos para suministro de ácido nucleico no viral se han explorado utilizando procedimientos físicos (suministro de ácido nucleico libre de portadores) y químicos (suministro de ácido nucleico a base de vectores sintéticos) . Los procedimientos físicos usualmente incluyen inyección por aguja, electroporación, pistola génica, ultrasonido, y suministro hidrodinámico, emplean una fuerza física que permea la membrana celular y facilita la transferencia génica intracelular . Los procedimientos químicos típicamente utilizan compuestos de origen sintético o natural (por ejemplo, lípidos catiónicos, polímeros catiónicos, sistemas híbridos de lípidos-polímeros ) como portadores para suministrar el ácido nucleico en las células. Aunque se han realizado progresos significativos en la ciencia básica y aplicaciones de diversos sistemas para suministro de ácido nucleico no viral, la mayoría de los procedimientos no virales todavía son mucho menos eficientes que los vectores virales, en especial para el suministro de genes in vivo (véase, por ejemplo, Gao, X. , Kim, K. , & Liu, D., AAPS J 9, E92-104 (2007)).
Estos agentes de transíección, como se definió anteriormente, típicamente se han utilizado exitosamente únicamente en reacciones in vitro. Para la aplicación de ácidos nucleicos in vivo, sin embargo, se deben cumplir requisitos adicionales. Por ejemplo, los complejos entre ácidos nucleicos y agentes de transfección tienen que ser estables en soluciones salinas fisiológicas con respecto a la aglomerización . Además, estos complejos típicamente no deben interactuar con las partes del sistema complementario del hospedero y de esta forma no deben ser inmunogénicos por si mismos ya que el portador mismo no deberá inducir una respuesta inmunitaria adaptativa en el individuo. Adicionalmente, el complejo deberá proteger al ácido nucleico de la degradación extracelular temprana por las nucleasas que se presentan ubicuamente.
En las técnicas están disponibles muchos reactivos de transíección, en especial lipidos catiónicos, que muestran una excelente actividad de transfección en un cultivo celular. Sin embargo, la mayoría de estos reactivos de transfección no se desempeñan bien en presencia de suero, y sólo unos cuantos son activos in vivo. Se presenta un cambio dramático de tamaño, carga superficial, y composición de lipidos cuando los lipoplexos se exponen a la enorme cantidad de proteínas cargadas negativamente con frecuencia antipáticas y los polisacáridos que están presentes en la sangre, moco, fluido de revestimiento epitelial, o matriz de tejidos. Una vez administrados in vivo, los lipoplexos tienden a interactuar con los componentes sanguíneos cargados negativamente y forman grandes agregados que se podrían absorber sobre la superficie de los glóbulos rojos en circulación, atrapados en una capa gruesa de moco o embolizados en microvasculaturas evitando que alcancen las células blanco destinadas en la ubicación distal. Algunos incluso experimentan disolución después de que se introducen a la circulación sanguínea (véase, por ejemplo, Gao, X., Kim, K., & Liu, D., AAPS J 9, E92-104 (2007)).
Uno o más procedimientos prometedores utilizan polímeros catiónicos. Resulta que los polímeros catiónicos serán eficientes par la transfección de ácidos nucleicos, ya que pueden complejar y condensar estrechamente un ácido nucleico cargado negativamente. De esta forma, se han explorado una serie de polímeros catiónicos como portadores para un suministro génico in vitro e ín vivo. Éstos incluyen polietilenimina (PEI), poliamidoamina y dendrímeros de polipropilamina, polialilamina , dextrano catiónico, quitosán, proteínas catiónicas y péptidos catiónicos. Aunque la mayoría de polímeros catiónicos comparten la función de condensar ADN en pequeñas partículas y facilitan la absorción celular vía una endocitosis a través de interacciones carga-carga con sitios aniónicos sobre superficies celulares, su actividad de transfección y toxicidad difiere dramáticamente.
Sólo en un procedimiento en la técnica, el efecto inmunoestimulador del ARN complejado para péptidos catiónicos cortos se demostró por Fotin-Mleczek et al. (WO 2009/030481) . Estas formulaciones parecen inducir eficientemente la producción de citoquinas en células inmuno-competentes. Desafortunadamente Fotin-Mleczek et al., no evaluaron la inducción de la citoquina anti-viral preferible IFN-a mediante estos complejos. Adicionalmente, estos complejos resultaron ser inestables durante la liofilizació .
En el contexto anterior, los polímeros exhiben una mejor eficiencia de transfección con aumento de peso b molecular. Sin embargo, un aumento de peso molecular también conduce a un aumento de toxicidad del polímero catiónico. En el contexto anterior, (alto peso molecular) PEI quizá es el polímero más activo y más estudiado para la transfección de ácidos nucleicos, en particular para fines de suministro 10 génico. Desafortunadamente, exhibe la misma desventaja debido a su naturaleza no biodegradable y toxicidad. Además, aunque los poliplexos formados mediante polímeros de alto peso molecular exhiben una estabilidad mejorada bajo condiciones fisiológicas, los datos han indicado que estos polímeros Ib pueden dificultar el desempaque de vectores. Para superar este impacto negativo, Read et al. (vase Read, M.L. et al., J Gene Med. 5, 232-245 (2003); y Read, M.L. et al., Nucleic ñcicis Res 33, e86 (2005)) desarrollaron un nuevo tipo de vector sintético con base en un policatión reducible lineal 20 (RPC) preparado mediante la policondensación oxidativa del péptido Cys-Lys10-Cys . Este péptido Cys-Lysi0-Cys se puede segmentar mediante el entorno intracelular para facilitar la liberación de ácidos nucleicos. En este contexto, Read et al. (2003, supra) podrían mostrar que los poliplexos formados mediante estos RPC se desestabilizan al reducir las condiciones que permiten una liberación eficiente del ADN y ARNm. Sin embargo, al examinar la eficacia del transfección in vitro Read et al. (2003, supra) también observaron que las proporciones de N/P (átomos de nitrógeno a fósforo) de 2 fueron insatisfactorias y fueron necesarias mayores proporciones de N/P para mejorar la eficiencia de transfección. Adicionalmente , Read et al. (2003, supra) observaron que la cloroquina o el lipido catiónico DOTAP fue adicionalmente necesario para mejorar la eficiencia de transfección a niveles adecuados. Como consecuencia, Read et al. (2005, supra) incluyeron residuos de histidina en los RPC que tienen una capacidad conocida de amortiguamiento endosómico y mostraron que estos RPC ricos en histidina se pueden segmentar mediante el entorno de reducción intracelula . Este procedimiento permitió un suministro citoplásmico eficiente de una amplia gama de ácidos nucleicos, incluyendo moléculas de ADN, ARNm y ARNsi de plásmido sin el requisito de la cloroquina del agente endosomolitico .
Desafortunadamente, ni Read et al. (2003, supra) ni Read et al. (2005, supra) evaluaron si los RPC se pueden utilizar o no directamente para aplicaciones in vivo. En su estudio en 2005, se realizaron transfecciones en ausencia de suero para evitar enmascarar la capacidad de los residuos de histidina para intensificar la transferencia génica que puede haber surgido de la unión de proteínas séricas a poliplexos que restringen la porción celular. Sin embargo, experimentos preliminares indican que las propiedades de transfección de los poliplexos con RPC ricos en histidina se pueden afectar por la presencia de proteínas séricas con una disminución del 50% en células GFP positivas observadas en 10% de FCS . Para aplicaciones in vivo, Read et al. (2005, supra) propusieron modificaciones con el polímero hidrófilo poli- (N- ( 2hidroxi-propi 1 ) metacrilamida . Desafortunadamente, no pudieron evitar la agregación de los poliplexos y la unión de complejos policatiónicos a proteínas séricas. Además, se forman complejos cargados catiónicos fuertes (potencial zeta positivo) cuando complejan el ácido nucleico debido a un gran exceso del polímero catiónico que se caracteriza por la alta proporción N/P. Por consiguiente, estos complejos son sólo de uso limitado in vivo debido a su fuerte tendencia a una aglomeración inducida por sales e interacciones con contenidos séricos (opsonización) . Adicionalmente, estos complejos (cargados positivamente) pueden excitar la activación complementaria cuando se utilizan para propósitos de terapia génica. También resulta que estos complejos a base de RPC cargados positivamente muestran una traducción deficiente de la carga de ácido nucleico posterior a la administración local en la dermis.
En un procedimiento similar, Read et al. McKenzie et al. (McKenzie, D. L., K. Y. Kwok, et al. (2000), J Biol Chem 275(14) : 9970-7 and McKenzie, D. L., E. Smiley, et al. (2000), Bioconjug Chem 11(6): 901-9) desarrollaron péptidos reticulantes como agentes para suministro de genes al insertar múltiples cisteinas en péptidos sintéticos cortos. En sus estudios se examinaron la formación óptima de complejos con ADN y como resultado podrían mostrar que una proporción N/P de al menos 2 es necesaria para condensados de ADN con péptidos formados completamente. Por lo tanto, sólo los complejos cargados positivamente parecieron mostrar una condensación óptima del ADN. Contrario a estos datos, propusieron el desarrollo de complejos cargados negativamente para el suministro de genes in vivo, debido a que se mostró en estudios anteriores que la aplicación intravenosa de condensados de ADN electropositivos conduce a una rápida optonización y biodistribución no especifica al pulmón e hígado (Collard, W., T . , Evers, D., L., McKenzie, D . , L., and Rice, K. G. (2000), Carbohydr. Res. 323, 176-184) . Por lo tanto, McKenzie et al. (2000; supra) propusieron la derivación de portadores con polietilenglicol y elección de ligandos. Cabe señalar, que el procedimiento de McKenzie et al. (2300, supra) es add ci onalmente el tema de una patente (US 6,770,740 Bl), que describe particularmente la transfección de ácidos nucleicos codificantes, ácidos nucleicos anti-sentido y ribozimas.
De esta forma, la aplicación in vivo de ácidos nucleicos parece ser todavía uno de los problemas más desafiantes debido a que las proteínas en plasma con cargas aniónicas pueden no unirse específicamente a complejos cargados positivamente y eliminarlos rápidamente, por ejemplo, vía el sistema retículo-endotelial . La opsonización y activación del sistema complementario mediante complejos catiónicos son fenómenos fisiológicos adicionales que pueden participar en la disminución de la eficacia de los complejos catiónicos administrados in vivo. Esto se aplica particularmente a la administración de fármacos a base de ácido nucleico, por ejemplo, la transfección de ácidos nucleicos en células o tejidos, en particular si se pretende la expresión de una proteína o péptido codificados o la transcripción de un ARN del ácido nucleico trans fectado .
Resumiendo lo anterior, la técnica anterior no proporciona medios o métodos factibles, que permitan establecer composiciones farmacéuticas eficientes y seguras que incluyan adyuvantes para fines de vacunación, en particular si se desea una respuesta inmune modificada por Thl .
SUMARIO DE LA INVENCIÓN Por consiguiente, el objetivo de la presente invención es proporcionar estos medios o métodos que enfrenten uno o más de estos problemas.
El objetivo fundamental de la presente invención se resuelve mediante la materia de la presente invención, de preferencia mediante la materia de las reivindicaciones anexas .
Por claridad y facilidad de lectura, se proporcionan las siguientes definiciones. Cualesquiera características técnicas descritas mediante las mismas pueden formar parte de cada una y cada modalidad de la invención. En el contexto de esta descripción se pueden proporcionar definiciones y explicaciones adicionales. Ácido nucleico: El término ácido nucleicos significa típicamente cualquier molécula de ADN- o ARN- y se utiliza como sinónimo de polinucleótido . Además, en el término general "ácido nucleico" se incluyen explícitamente las modificaciones o derivados del ácido nucleico como se definen la presente. Por ejemplo, PNA también se incluye en el término "ácido nucleico".
ARN monocistrónico : Un ARN monocistrónico típicamente puede ser un ARN, de preferencia un ARNm que codifica solo para un marco de lectura abierto. Un marco de lectura abierto en este contexto es una secuencia de diversos tripletes nucleotídicos (codones) que se pueden traducir en un péptido o proteína.
ARN bi-/multicistrónico : ARN, de preferencia un ARNm que típicamente puede tener dos (bicistrónicos ) o más (multicistrónicos ) marco de lectura abiertos (ORF) . Un marco de lectura abierto, en este contexto, es una secuencia de diversos tripletes nucleotídicos (codones) que se pueden traducir en un péptido o proteína.
Estructura de remate 5f : Un remate 5' típicamente es un nucleótido modificado, en particular un nucleótido de guanina, agregados al extremo 5' de una molécula de ARN. De preferencia, el remate 5' se agrega utilizando un enlace 5'-5' -trifosfato .
Secuencia poly(C) : una secuencia poly(C) típicamente es una secuencia larga de nucleótidos de citosina, típicamente entre aproximadamente 10 hasta aproximadamente 200 nucleótidos de citidina, de preferencia aproximadamente 10 hasta aproximadamente 100 nucleótidos de citidina, de mayor preferencia aproximadamente 10 hasta aproximadamente 70 nucleótidos de citidina o incluso con la máxima preferencia aproximadamente 20 hasta aproximadamente 50 o incluso entre aproximadamente 20 hasta aproximadamente 30 nucleótidos de citidina. Una poly(C) de preferencia puede estar ubicada en el extremo 3' de la región codificante comprendida por un ácido nucleico.
Prolongación poly (A) : Una prolongación poly(A) también denominada "prolongación 3' -poly (A)" típicamente es una secuencia larga de nucleótidos de adenina de hasta aproximadamente 400 nucleótidos del adenosina, por ejemplo entre aproximadamente 25 hasta aproximadamente 400, de preferencia aproximadamente 50 hasta aproximadamente 400, de mayor preferencia aproximadamente 50 hasta aproximadamente 300, incluso con la máxima preferencia aproximadamente 50 hasta aproximadamente 250, con la máxima preferencia aproximadamente 60 hasta aproximadamente 250 nucleótidos del adenosina, agregados al extremo 3'- de un AR . Ácido nucleico estabilizado: Un ácido nucleico estabilizado, típicamente, puede ser esencialmente resistente a la degradación in vivo (por ejemplo, la degradación mediante una exo- o endo-nucleasa ) y/o una degradación ex vivo (por ejemplo, mediante el proceso de elaboración antes de la administración de una vacuna, por ejemplo, en el curso de la preparación de la solución de vacuna que será administrada) . La estabilización del ARNm por ejemplo, se puede alcanzar al proporcionar una estructura de remate 5'-, una prolongación poly(A), una prolongación poly(C), o cualquier otra modificación UTR. También se puede alcanzar mediante la modificación estructural o la modificación del contenido de G/C del ácido nucleico. En el contexto de la invención se contemplan otros diversos métodos.
Modificación de un ácido nucleico (ácido nucleico modificado) : La modificación de una molécula de ácido nucleico típicamente puede contener modificaciones estructurales, modificaciones del azúcar o modificaciones de bases. Una modificación estructural junto con la presente invención, típicamente, es una modificación en la cual los fosfatos de la estructura de los nucleótidos contenidos en la molécula de ácido nucleico se pueden modificar químicamente. Una modificación del azúcar junto con la presente invención, típicamente, puede ser una modificación química del azúcar de los nucleótidos del ácido nucleico. Además, una modificación de bases junto con la presente invención, típicamente, puede ser una modificación química de la porción de base de los nucleótidos de la molécula de ácido nucleico. Por lo tanto, un ácido nucleico modificado también se puede definir en la presente como una molécula de ácido nucleico que puede incluir análogo de nucleótidos. Además, una modificación de una molécula de ácido nucleico puede contener una modificación de lípidos. Este ácido nucleico modificado por lípidos típicamente puede comprender un ácido nucleico como se define en la presente. Esta molécula de ácido nucleico modificado por lípidos típicamente puede comprender además al menos un ligador enlazado covalentemente con esa molécula de ácido nucleico, y al menos un lípido enlazado covalentemente con el ligador respectivo. Alternativamente, la molécula de ácido nucleico modificado por lípidos puede comprender al menos una molécula de ácido nucleico como se define en la presente y al menos un lípido (bifuncional ) enlazado covalentemente (con un ligador) con esta molécula de ácido nucleico. De acuerdo con una tercera alternativa, la molécula de ácido nucleico modificado por lípidos puede comprender una molécula de ácido nucleico como se define en la presente, al menos un ligador enlazado covalentemente con esa molécula de ácido nucleico, y al menos un lípido enlazado covalentemente con el ligador respectivo, y también al menos un lípido (bifuncional ) enlazado covalentemente (sin un ligador) con esa molécula de ácido nucleico.
Una modificación de un ácido nucleico también puede comprender la modificación del contenido de G/C de la región codificante de una molécula de ácido nucleico, en especial si la molécula de ácido nucleico está en la forma de un ARNm. En este contexto, se prefiere particularmente que el contenido de G/C de la región codificante de la molécula de ácido nucleico se aumente, en comparación con el contenido de G/C de la región codificante de su secuencia codificante tipo silvestre particular, es decir el ARNm sin modificar. La secuencia del aminoácido codificada de la secuencia de ácido nucleico de preferencia no se modifica en comparación con la secuencia de aminoácido codificado del ARNm tipo silvestre particular. La modificación de contenido de G/C de la molécula de ácido nucleico, en especial si la molécula de ácido nucleico está en la forma de un ARNm o codifica para un ARNm, se basa en el hecho de que la secuencia de cualquier región del ARNm que será traducida es importante para una traducción eficiente de ese ARNm. De esta forma, la composición y la secuencia de diversos nucleótidos son importantes. En particular, las secuencias que tienen un contenido aumentado de G ( guanosina ) /C (citosina) son más estables que las secuencias que tienen un contenido aumentado de A (adenosina) /U (uracilo) . Por lo tanto, los codones de la secuencia codificante o el ARNm por lo tanto son variados en comparación con su secuencia codificante tipo silvestre o ARNm, mientras que conservan la secuencia de aminoácidos traducida, ya que incluyen una cantidad aumentada de nucleótidos de G/C. Con respeto al hecho de que diversos codones codifican para uno y el mismo aminoácido (denominada degeneración del código genético) , se puede determinar la mayoría de codones favorables para la estabilidad (denominada uso de codones alternativos) . De preferencia, el contenido de G/C de la región codificante de la molécula de ácido nucleico, en especial si el ácido nucleico está en la forma de un ARNm o codifica para un ARNm, se aumenta en al menos un 7%, de mayor preferencia en al menos un 15%, de particular preferencia en al menos un 20%, en comparación con el contenido de G/C de la región codificada del ARNm tipo silvestre. De acuerdo con una modalidad especifica, se sustituyen al menos el 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, de mayor preferencia al menos 70%, incluso con la máxima preferencia al menos 80% y con la máxima preferencia al menos 90%, 95% o incluso el 100% de los codones que se pueden sustituir en la región que codifica para una proteína o péptido, como se define en la presente, o su fragmento, variante y/o derivado de los mismos o la secuencia total de la secuencia de ARNm tipo silvestre o la secuencia codificante, aumentando con esto el contenido de G/C de la secuencia. En este contexto, en particular se prefiere aumentar el G/C de la molécula de ácido nucleico, en especial si el ácido nucleico está en la forma de un ARNm o codifica para un ARNm, al máximo (es decir 100% de los codones que se pueden sustituir) , en particular en la región codificante para una proteína, en comparación con la secuencia tipo silvestre. Además, una modificación del ácido nucleico, en especial si el ácido nucleico está en la forma de un ARNm o codifica para un ARNm, se basa en el hallazgo de que la eficacia de traducción también se determina por una frecuencia diferente en la presencia de los ARNt en las células. La frecuencia en la presencia de los ARNt en una célula, y de esta forma el uso de codones en la célula, depende de la especie de la célula de la que se deriva. Por consiguiente, una célula de levadura en general exhibe un uso diferente de codones distinto de una célula de mamíferos, tal como una célula humana. De esta forma, si están presentes los denominados "codones raros" en la molécula de ácido nucleico (con respecto al sistema de expresión respectivo), en especial si el ácido nucleico está en la forma de un ARNm o codifica para un ARNm, a un grado aumentado, la molécula de ácido nucleico modificado correspondiente se traduce a un grado significativamente más deficiente que en el caso donde están presentes codones que codifican para los ARNt relati amente "frecuentes". Por lo tanto, en especial si la molécula de ácido nucleico modificado está en la forma de un ARNm o codifica para un ARNm, la región codificante del ácido nucleico modificado de preferencia se modifica en comparación con la región correspondiente del ARNm tipo silvestre o la secuencia codificante de tal forma que al menos un codón de la secuencia tipo silvestre que codifica para un ARNt que esté relativamente raro en la célula se intercambia por un codón que codifica para un ARNt que es relativamente frecuente en la célula y porta el mismo aminoácido que ARNt reí ativamente raro. Mediante esta modificación, las secuencias de la molécula de ácido nucleico, en especial si el ácido nucleico está en la forma de un ARNm o codifica para un ARNm, se modifica de tal forma que se inserten los codones para los cuales están disponibles los ARNt que se presentan con frecuencia. En otras palabras, mediante esta modificación, todo los codones de la secuencia tipo silvestre que codifican para un ARNt que es relativamente raro en una célula en cada caso se pueden intercambiar por un codón que codifique para un ARNt que es relativamente frecuente en la célula y en la cual, en cada caso, porta el mismo aminoácido que el ARNt relativamente raro. Se conocen por un experto en la técnica los ARNt que se presentan con relativa frecuencia en la célula y los cuales, por el contrario, so presentan con relativa rareza; véase, por ejemplo, Akashi, Curr. Opin. Genet. Dev. 2001, 11(6): 660-666. En particular se prefiere que la secuencia de ácido nucleico que codifica para una proteína utilizada en la presente invención sea un codón optimizado para el uso en codones humanos. Los codones que se utilizan para el aminoácido particular, el ARNt que se presenta con mayor frecuencia, por ejemplo el codón Gly que utiliza el ARNt que se presenta con mayor frecuencia en la célula (humana), se prefieren particularmente. En este contexto, se prefiere particularmente ligar el contenido de G/C secuencial que se aumenta, en particular aumentado al máximo, en la molécula de ácido nucleico modificado, en especial si el ácido nucleico está en la forma de un ARNm o codifica para un ARNm, con los codones "frecuentes" sin modificar la secuencia de aminoácidos de la proteína codificada por la región codificante de la molécula de ácido nucleico. Esta modalidad preferida permite el suministro de un ácido nucleico traducido y estabilizado en particular eficientemente (modificado), en especial si el ácido nucleico está en la forma de un ARNm o codifica para un ARNm.
Derivativo de una molécula de ácido nucleico: Un derivado de una molécula de ácido nucleico típicamente se entiende en la presente como un ácido nucleico modificado, como se definió anteriormente.
Análogo de nucleótidos: Los análogos de nucleótidos, típicamente, son nucleótidos estructuralmente similares (análogos) a los nucleótidos de origen natural que incluye modificaciones de la estructura de fosfato, modificaciones del azúcar, o modificaciones de la nucleobase.
Modificación UTR: Una modificación UTR, típicamente, es una modificación de la región 5' y/o 3' de una molécula de ácido nucleico, en particular una molécula de ácido nucleico codificante. En la presente, "UTR" típicamente significa una "región sin traducir". Una UTR, por ejemplo, puede contener, comprender o consistir de una secuencia estabilizante (modificación UTR). Estas secuencias estabilizantes en las regiones sin traducir 5' y/o 3' pueden tener el efecto de aumentar la vida media del ácido nucleico en el citosol. Estas secuencias estabilizantes pueden tener una identidad de secuencia del 100% con las secuencias de origen natural que se presentan en virus, bacterias y eucariotas, aunque también pueden parcial o completamente sintéticas. Las secuencias sin traducir (UTR) del gen (alfa-) globina, por ejemplo de Homo sapiens o Xenopus laevis se pueden mencionar como un ejemplo de secuencias estabilizantes que se pueden utilizar para un ácido nucleico estabilizado. Otro ejemplo de una secuencia estabilizante tiene la fórmula general (C/U) CCANXCCC (U/A) PyxUC (C/U) CC que está contenida en la 3' UTR del ARN muy estable que codifica para (alfa- ) globina , colágeno tipo (I), 15-lipoxigenasa o para tirosina hidroxilasa (véase, Holcik et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA 1997, 94j_ 2410 a 2414). Estas secuencias estabilizantes por supuesto también se pueden utilizar individualmente o en combinación entre sí y también en combinación con otras secuencias estabilizantes conocidas por un experto en la técnica. En el contexto de la presente invención, una modificación UTR de preferencia significa una modificación de un ácido nucleico codificante, tal como un gen o ARNm, al agregar o intercambiar una 5'- y/o 3' -UTR, de preferencia al agregar o intercambiar una 5'- y/o 3' -UTR estabilizante, por ejemplo, como se especificó anteriormente.
Síntesis de ácido nucleico: Las moléculas de ácido nucleico utilizadas de acuerdo con la invención, como se define en la presente, se pueden preparar utilizando cualquier método conocido en la técnica, incluyendo métodos sintéticos tales como por ejemplo, síntesis en fase sólida, así como métodos in vi tro, tales como reacciones de transcripción in vitro.
Para la preparación de una molécula de ácido nucleico, en especial si el ácido nucleico está en la forma de un ARNm, una molécula de ADN correspondiente por ejemplo, se puede transcribir irj vitro. Esta matriz de ADN de preferencia comprende un promotor adecuado, por ejemplo, un promotor T7 o SP6, para transcripción in vitro, que es seguida por la secuencia deseada de nucleótidos que codifica para la molécula de ácido nucleico por ejemplo un ARNm, que será preparado, y una señal de terminación para transcripción in vitro. La molécula de ADN que forma la matriz de al menos un ARN de interés, se puede preparar mediante proliferación fermentativa y un posterior aislamiento como parte de un plásmido que se puede replicar en bacterias. Los plásmidos que se pueden mencionar como adecuados para la presente invención son, por ejemplo, los plásmidos pT7T (número de acceso GenBank U26404; Lai et al., Development 1995, 121: 2349 hasta 2360), la series pGEM®, por ejemplo pGEM®-l (número de acceso GenBank X65300; de Promega) y pSP64 (el número de acceso GenBank X65327); véase también ezei and Storts, Purification of PCR Products, en: Griffin and Griffin (ed.), PCR Technology: Current Innovation, CRC Press, Boca Ratón, FL, 2001.
Proteina: Una proteina típicamente consiste de uno o más polipéptidos plegados en forma 3-dimensional, lo que facilita una función biológica.
Péptido : Un péptido típicamente es un polímero corto de monómeros de aminoácido, ligados por enlaces péptídicos. Típicamente contienen menos de 50 unidades monoméricas. No obstante, el término péptido no es una exclusión para moléculas que tengan más de 50 unidades monoméricas. Los péptidos largos también se denominan polipéptidos, típicamente que tienen entre 50 y 600 unidades monoméricas, más específicamente entre 50 y 300 unidades monoméricas. Además un "péptido" se define en la presente también para que incluya cualquier molécula de peptidilo, incluyendo análogos peptidicos.
Análogos peptidicos : Un análogo peptídico típicamente puede comprender aminoácidos de origen natural o no natural que se pueden utilizar para los fines de la invención. Por ejemplo, pueden comprender aminoácidos seleccionados de un isóstero o un análogo quiral (D-aminoácido o L-aminoácido ) de un aminoácido. Adicionalmente , el análogo puede comprender uno o más aminoácidos, de preferencia seleccionados de hidroxiprolina, ß-alanina, ácido 2 , 3-diaminopropionico, ácido oi-aminoisobutírico, N-metilglicina (sarcosina), ornitina, citrulina, t-butilalanina, t-butilglicina, N-metilisoleucina, fenilglicina, ciclohexilalanina, norleucina, naftilalanina, piridilananina, 3-benzotienilalanina, 4-clorofenilalanina, 2-fluorofenilalanina, 3-fluorofenilalanina, 4-fluorofenilalanina , penicilamina , ácido 1 , 2 , 3 , 4-tetrahidro-t ic-isoquinolin-3-carboxílico [beta] -2-tienilalanina , sulfóxido de metionina, homoarginina , N-acetilisina, ácido 2, 4-diaminbutírico, p-aminofenilalanina, N-metilvalina, homocisteína, homoserina, ácido e-aminhexanoico , ácido d-aminvalérico , ácido 2 , 3-diaminbutírico . Un análogo peptídico, como se define en la presente, además puede contener péptidos modificados. El término incluye específicamente modificaciones en la estructura peptidica (es decir, miméticos de enlaces amida) conocidos por aquellos expertos en la técnica. Estas modificaciones incluyen modificaciones del nitrógeno de amida, a-carbono, la amida carbonilo, el reemplazo completo del enlace amida, las extensiones, supresiones o reticulaciones estructurales. Se conocen diversas modificaciones de la estructura de péptidos, incluyendo ?[0?2?], ?0?2??] , [CSNH2], ?[????], ?[?30?2], y ?[(?) o (Z) CH=CH] . En la nomenclatura utilizada anteriormente, ? indica la ausencia de un enlace amida. La estructura que reemplaza el grupo amida se especifica dentro de los corchetes. Otras modificaciones incluyen por ejemplo una sustitución N-alquilo (o arilo) (?[????¾]), o la reticulación estructural para construir lactamas y otras estructuras cíclicas, modificaciones de hidroximetilo C-terminales, modificaciones 0-modi ficadas (por ejemplo, hidroximetilbenciléter C-terminal), modificaciones N-terminales incluyendo amidas sustituidas tales como alquilanidas e hidracidas .
Síntesis de péptidos: Un péptido, un análogo peptídico, o un derivado de los mismos de preferencia se sintetiza utilizando un método químico conocido por el experto. Por ejemplo, los péptidos sintéticos se preparan utilizando técnicas conocidas de fase sólida, fase liquida, o condensación de péptidos, o cualquier combinación de los mismos, y pueden incluir aminoácidos naturales y/o no naturales. En general, los métodos de síntesis química comprenden la adición secuencial de uno o más aminoácidos a una cadena peptídica en crecimiento. Normalmente, cualquier grupo amino o carboxilo del primer aminoácido se protege mediante un grupo protector adecuado. El aminoácido protegido o derivado luego se puede ya sea unir a un soporte sólido inerte o se puede utilizar en solución al agregar el siguiente aminoácido en la secuencia que tiene el grupo complementario (amino o carboxilo) protegido adecuadamente, bajo condiciones que permitan la formación de un enlace amida. El grupo protector luego se retira del residuo de aminoácidos recién agregado y luego se agrega el siguiente aminoácido (protegido adecuadamente) etc. Después de que se hayan ligado los aminoácidos deseados en la secuencia adecuada, cualesquiera grupos protectores restantes (y cualquier soporte sólido, si se utilizaron técnicas de síntesis de fases sólidas) se retiran secuencialmente o concurrentemente, para suministrar el polipéptido final. Estos métodos son adecuados para la síntesis de un péptido utilizado para los fines de la presente invención (tal como un análogo peptídico) o un derivativo del mismo. Los grupos protectores típicos incluyen t-but iloxicarbonilo (Boc) , 9-fluorenilmetoxicarbonilo (Fmoc) benciloxicarbonilo (Cbz) ; p-toluensulfonilo (Tx) ; 2 , 4-dinitrofenilo; bencilo (Bzl) ; bí fenilisopropiloxicarboxi-carbonilo , t-amiloxicarbonilo, isoborniloxicarbonilo , o-bromobenciloxicarbonilo, ciclohexilo, isopropilo, acetilo, o-nitrofenilsulfonilo y lo semejante. Los soportes sólidos típicos son soportes poliméricos reticulados. Éstos pueden incluir polímeros a base de estireno reticulado con divinilbenceno, por ejemplo, copolíneros de divinilbenceno-hidroximetilestireno, copolíneros de divinilbenceno-cloromet ilest ireno y copolíneros de divinilbenceno-bencidrilaminopoliestireno .
Producción de péptidos o proteínas recombinantes : Un péptido o proteína o derivado de los mismos se puede producir utilizando la producción de proteínas o péptidos recombinantes. Para facilitar la producción de un péptido o proteína recombinante , al menos un ácido nucleico que codifica para el mismo de preferencia se aisla o sintetiza. Típicamente, el ácido nucleico que codifica para la proteína o péptido recombinante se aisla utilizando un método conocido tal como, por ejemplo, amplificación (por ejemplo, utilizando PCR) o se aisla de un ácido nucleico proveniente de un organismo utilizando una o más enzimas de restricción o se aisla de una biblioteca de ácidos nucleicos. Para expresar una proteína o péptido por medios recombinantes , un ácido nucleico que codifica para una proteina/péptido se coloca en conexión funcional con un promotor u otra secuencia reguladora capaz de regular la expresión en un sistema libre de células o un sistema celular. Por ejemplo, el ácido nucleico que comprende una secuencia que codifica para un péptido o proteína se coloca en conexión funcional con un promotor adecuado y se mantiene en una célula adecuada durante un tiempo y bajo condiciones suficientes para que se presente la expresión. Los vectores de expresión típicos para una expresión in vitro, una expresión libre de células o una expresión a base de células se han descrito y se conocen por el experto. En este contexto, los sistemas de expresión libres de células pueden incluir la fracción S30 de E. colí, el lisado de reticulocitos de conejo y extracto de germen de trigo y se puede seleccionar un sistema celular a partir de células bacterianas (por ejemplo E. colí), de insecto, vegetales, o mamíferas (por ejemplo, células 293, COS, CHO, 10T, células 293T) .
Péptido de señal secretora: Estos péptidos de señal son secuencias que típicamente exhiben una longitud de aproximadamente 15 hasta 30 aminoácidos y de preferencia se ubican en el término N del péptido codificado, sin estar limitados a los mismos. Los péptidos de señal, como se define en la presente, de preferencia permiten el transporte de la proteína o péptido al interior de un compartimiento celular definido, de preferencia la superficie celular, el retículo endoplásmico (ER) o el compartimiento endosomico-lisosómico.
Portador/portador polimérico: Un portador, en el contexto de la invención típicamente puede ser un compuesto que facilite el transporte y/o la complej ación de otro compuesto. Un portador polimérico típicamente es un portador que se forma de un polímero. Un portador, en el contexto de la presente invención, de preferencia es adecuado como portador para moléculas de ácido nucleico, por ejemplo, para lograr la disolución en líquidos fisiológicos aceptables, el transporte y la absorción celular de las moléculas de ácido nucleico o un vector. Por consiguiente, un portador, en el contexto de la presente invención, puede ser un componente que pueda ser adecuado para depósito y suministro de una molécula de ácido nucleico o vector. Estos portadores pueden ser, por ejemplo, portadores catiónicos o policatiónico o compuestos que puedan servir como un agente de transfección o complejación . Los portadores particularmente preferidos o portadores poliméricos en este contexto son compuestos catiónico o policatiónico, incluyendo protamina, nucleolina, espermina o espermidina, u otros péptidos o proteínas catiónicos, tales como, poli-L-l i sina (PLL), poli-arginina , polipéptidos básicos, péptidos para penetración celular (CPP) , incluyendo péptidos de unión a VIH, VIH-1 Tat (VIH) , péptidos derivados de Tat, Penetratin, péptidos derivados o análogos de VP22, HSV VP22 (Herpes simplex) , MAP, o dominios de transducción proteinica KALA (PTD), PpT620, péptidos ricos en prolina, péptidos ricos en arginina, péptidos ricos en lisina, MPG-péptido ( s ) , Pep-1, L-oligómeros , péptidos de calcitonina, péptidos derivados de antennapedia (en particular de Drosophila antennapedia), pAntp, el plsl, FGF, Lactoferrina, Transportan, Buforin-2, Bac715-24, SynB, SynB(l), pVEC, péptidos derivados de hCT, SAP, o histonas. En el contexto de la presente invención, estos portadores catiónicos o policatiónicos de preferencia son péptidos o proteínas catiónicos o policatiónicos, que de preferencia comprenden o adicionalmente están modificados para comprender al menos una porción, que sea capaz de formar un enlace disulfuro, de preferencia una porción -SH.
Componente catiónico: El término "componente catiónico" típicamente se refiere a una molécula cargada, que está cargada positivamente (catión) a un valor de pH típicamente de aproximadamente 1 hasta 9, de preferencia a un valor de pH de o por debajo de 9 (por ejemplo, 5 hasta 9), de o por debajo de 8 (por ejemplo 5 hasta 8), de o por debajo de 7 (por ejemplo, 5 hasta 7), de mayor preferencia a valores de pH fisiológico, por ejemplo, de aproximadamente 7.3 hasta 7.4. Por consiguiente, un péptido, proteina o polímero catiónico, de acuerdo con la presente invención, está cargado positivamente bajo condiciones fisiológicas, en particular bajo condiciones de sal fisiológica de la célula in vivo. Un péptido o proteína catiónico contiene un gran número de aminoácidos catiónicos, por ejemplo un gran número de Arg, His, Lys u Orn, distintos de los aminoácidos cargados negativamente o neutros. En una modalidad preferida, un péptido o proteína catiónico en el contexto de la presente invención contiene un gran número de aminoácidos catiónicos, por ejemplo un gran número de Arg, His, Lys u Orn, distinto de otros residuos. La definición "catiónico" puede también hacer referencia a componentes "policatiónicos" .
La carga de un compuesto, complejo o componente, tal como el componente catiónico o el complejo de carga con portador polimérico (a) como se define en la presente, de preferencia se determina o valora bajo condiciones fisiológicas, por ejemplo a un pH de entre aproximadamente 5.5 y 7.5, de preferencia a un pH de entre aproximadamente 6.0 y 7.4, tal como aproximadamente 7.0, a una temperatura entre aproximadamente 25°C y 40°C, de preferencia a una temperatura entre aproximadamente 35 y 38 °C, tal como aproximadamente 37 °C, a una concentración de sal fisiológica de, per ejemplo entre aproximadamente 130 y 160 mM, de preferencia entre aproximadamente 137 mM y 150 mM, tal como aproximadamente 137 mM. Las condiciones particularmente preferidas para determinar o evaluar la carga de un compuesto, complejo o componente como se define en la presente, son las condiciones encontradas en una solución de lactato Riger al 100% a 25°C.
Potencial zeta: El "potencial zeta" es un parámetro ampliamente utilizado para la carga superficial eléctrica de una partícula. Típicamente se determina al mover la partícula cargada a través de un campo eléctrico. En el contexto de la presente invención, el potencial zeta es el parámetro preferido para caracterizar la carga de una partícula, por ejemplo del complejo (A) de las composiciones farmacéuticas de acuerdo con la presente invención. De esta forma, en el contexto de la presente invención, la carga de una partícula de preferencia se determina al determinar el potencial zeta mediante el método de electroforesis de láser Doppler utilizando un instrumento Zetasizer Nano (Malvern Instruments, Malvern, UK) a 25°C y un ángulo de dispersión de 173°. La carga superficial de una partícula determinada también depende de la intensidad iónica de la matriz utilizada (por ejemplo, un tampón que contenga sal) y el pH de la solución. Por lo tanto, el potencial zeta real de un complejo (A) determinado a una proporción de cargo (N/P) puede diferir ligeramente entre diferentes tampones utilizados para inyección. Para la medición, las partículas, tales como el complejo (A) de las composiciones farmacéuticas de acuerdo con la presente invención de preferencia se suspende en una solución de lactato Ringer. La presente invención por lo tanto reivindica el uso de un complejo (A) cargado negativamente bajo las condiciones de un tampón de inyección determinado, de preferencia bajo las condiciones de una solución de lactato Ringer, evaluada mediante su potencial zeta. Una solución de lactato Ringer de acuerdo con la presente invención de preferencia contiene 130 mmol/L de iones de sodio, 109 mmol/L de iones de cloruro, 28 mmol/L de lactato, 4 mmol/L de iones de potasio y 1.5 mmol/L de iones de calcio. El sodio, cloruro, potasio y lactato típicamente provienen de NaCl (cloruro de sodio), aC3H503 (lactato de sodio) , CaCl2 (cloruro de calcio) y KC1 (cloruro de potasio) . La osmolaridad de la solución de lactato Ringer es 273 mOsm/L y el pH se ajusta a 6.5.
Cantidad farmacéuticamente efectiva: Una cantidad farmacéuticamente efectiva, en el contexto de la invención típicamente se entiende gue será una cantidad gue sea suficiente para inducir una respuesta inmunitaria.
Sistema inmunítario: El sistema inmunitario puede proteger a organismos, por ejemplo, de una infección. Si un patógeno penetra a través de una barrera física de un organismo e ingresa a este organismo, el sistema inmunitario innato proporciona una respuesta inmediata, aunque no especifica. Si los patógenos evaden esta respuesta innata, los vertebrados poseen una segunda capa de protección, el sistema inmunitario adaptativo. Aquí, el sistema inmunitario adapta su respuesta durante una infección para mejorar su reconocimiento del patógeno. Esta respuesta mejorada luego se conserva después de que el patógeno se haya eliminado, en la forma de una memoria inmunológica, y permite que el sistema inmunológico prepare ataques más rápidos y más fuertes cada vez que se encuentra este patógeno. De acuerdo con esto, el sistema inmunológico comprende el sistema inmunitario innato y el adaptativo. Cada una de estas dos partes contiene los denominados componentes humorales y celulares.
Respuesta inmunitaria: Una respuesta inmunitaria típicamente puede ser ya sea una reacción específica del sistema inmunológico adaptativo a un antígeno particular (denominada respuesta inmune específica o adaptativa) o una reacción no específica del sistema inmunitario innato (denominado respuesta inmunitaria no específica o innata) . En esencia, la invención se asocia con reacciones específicas (respuestas inmunitarias adaptativas) del sistema inmunitario adaptativo. Sin embargo, esta respuesta específica puede estar apoyada por una reacción no específica adicional (respuesta inmunitaria innata) . Por lo tanto, la invención también se relaciona con un compuesto o composición para la estimulación simultánea del sistema inmunitario innato y el adaptativo para evocar una respuesta inmunitaria adaptativa eficiente.
Respuesta inmunitaria adaptativa: La respuesta inmunitaria adaptativa se entiende típicamente que será antígeno-especí fica . La especificidad antigénica permite la generación de respuestas que se adaptan a antígenos específicos, células que expresan antígenos, patógenos o células infectadas por patógenos. La capacidad para preparar estas respuestas se mantiene en el cuerpo mediante "células de memoria". Si un patógeno infectar al cuerpo más de una vez, se utilizan estas células de memoria específicas para eliminarlo rápidamente. En este contexto, el primer paso de una respuesta inmunitaria adaptativa es la activación de las células T antígeno-específicas que no han recibido tratamiento previo o células inmunes diferentes capaces de inducir una respuesta inmunitaria antígeno-específica mediante células presentadoras de antígenos. Esto se presenta en los tejidos y órganos linfoides a través de los cuales las células T que no han recibido tratamiento previo se hacen pasar constantemente. Los tipos celulares que pueden servir como células presentadoras de antigenos son ínter alia células dendriticas, macrófagos, y células B. Cada una de estas células tiene una función distinta para producir respuestas inmunitarias . Las células dendriticas extraen antigenos mediante fagocitosis y macropinocitosis y se estimulan por el contacto con por ejemplo un antigeno extraño para migrar al tejido linfoide local, donde se diferencian en células dendriticas maduras. Los macrófagos ingieren antigenos particulados tales como bacterias y se inducen mediante agentes infecciosos u otros estímulos adecuados para expresar moléculas de MHC . La capacidad única de las células B para unir e internalizar los antígenos de proteínas solubles vía sus receptores también pueden ser importantes para inducir células T. La presentación del antígeno sobre moléculas de MHC conduce a la activación de células T lo que induce su proliferación y diferenciación en células T efectoras ramificadas. La función más importante de las células T efectoras es el exterminio de células infectadas mediante células T citotóxicas CD8+ y la activación de macrófagos mediante células Thl que conjuntamente constituyen la inmunidad suministrada por células, y la activación de células B mediante células tanto Th2 como Thl para producir diferentes clases de anticuerpos, conduciendo así a una respuesta inmunitaria humoral. Las células T reconocen un antígeno mediante sus receptores de células T que no reconocen y se unen a antígenos directamente, aunque en su lugar reconocen fragmentos cortos de péptidos, por ejemplo, de antigenos proteinicos derivados de patógenos, que se unen a moléculas de MHC sobre las superficies de otras células.
Sistema inmunitario adaptativo: El sistema inmunitario adaptativo, típicamente, está compuesto de células sistémicas bastante especializadas y los procesos que eliminan o evitan un crecimiento patogénico. La respuesta inmunitaria adaptativa, proporciona al sistema inmunitario de vertebrados con la capacidad para reconocer y recordar patógenos específicos (para generar inmunidad) , y preparar ataques más fuertes cada vez que se encuentra el patógeno. El sistema es bastante adaptable debido a una hipermutación somática (un proceso de mutaciones somáticas aceleradas), y recombinación de V(D)J (una recombinación genética irreversible de segmentos génicos de receptores antigénícos) . Este mecanismo permite que un número pequeño de genes genere un basto número de diferentes receptores antigénicos, los cuales luego se expresan únicamente sobre cada linfocito individual. Debido a que la redisposición génica conduce a un cambio irreversible en el ADN de cada célula, toda la progenie (descendencia) de esta célula luego heredarán genes que codifican para la misma especificidad del receptor, incluyendo las células B de memoria y las células T de memoria que son las claves para una inmunidad especifica de larga vida. La teoría de la red inmunitaria es una teoría de la forma en que funciona el sistema inmunitario adaptativo gue se basa en las interacciones entre las regiones variables de los receptores de las células T, las células B y de las moléculas producidas por las células T y las células B gue tienen regiones variables.
Sistema inmunitario innato: Típicamente, el sistema inmunitario innato, también conocido como sistema inmunitario no específico, se entiende que comprende las células y mecanismos que defienden al hospedero de una infección por otros organismos de una forma no específica. Esto significa que las células del sistema innato reconocen y responden a patógenos en una forma genérica, aunque a diferencia del sistema inmunitario adaptativo, no confieren una inmunidad a largo plazo o protectora al hospedero. El sistema inmunitario innato por ejemplo se puede activar mediante ligandos de receptores de patrones moleculares patógeno-asociados (PAMP), por ejemplo, receptores similares a Toll (TLR) u otras sustancias auxiliares tales como lipopolisacáridos , TNF-alfa, ligando CD40, o citoquinas, monoquinas, linfoquinas, interleuquinas o quimioquinas , IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-12, IL-13, IL-14, IL-15, IL-16, IL-17, IL-18, IL-19, IL-20, IL-21, IL-22, IL-23, IL-24, IL-25, IL-26, IL-27, IL-28, IL-29, IL-30, IL-31, IL-32, IL-33, IFN-alfa, IFN-beta, IFN-gamma, GM-CSF, G-CSF, M-CSF, LT-beta, TNF-alfa, factores de crecimiento, y hGH, un ligando del receptor similar a Toll humano TLR1 , TLR2 , TLR3 , TLR4 , TLR5, TLR6, TLR7 , TLRO , TLR9 , TLR10, un ligando del receptor similar a Toll de murino TLR1, TLR2, TLR3 , TLR4, TLR5, TLR6, TLR7 , TLR8, TLR9, TLR10, TLR11, TLR12 o TLR13, un ligando de un receptor similar a NOD, un ligando de un receptor similar a RIG-I, un ácido nucleico inmunoestimulador , un ARN inmunoestimulador (ARNis) , un CpG-ADN, un agente antibacteriano, o un agente anti-viral. Típicamente una respuesta del sistema inmunitario innato incluye incorporar células inmunes hacia los sitios de infección, a través de la producción de factores químicos, incluyendo mediadores químicos especializados, denominados citoquinas; la activación de la cascada complementaria; la identificación y eliminación de sustancias extrañas presentes en órganos, tejidos, la sangre y linfa, mediante glóbulos blancos especializados; la activación del sistema inmunitario adaptativo a través de un proceso conocido como presentación de antígenos; y/o que actúa como una barrera física y química para los agentes infecciosos.
Inmunidad celular/respuesta inmunitaria celular: inmunidad celular se relaciona típicamente con la activación de macrófagos, células citoliticas naturales (NK) , linfocitos T citotóxicos antigeno-especificos, y la liberación de diversas citoquinas en respuesta a un antigenc. En una forma más general, la inmunidad celular no está relacionada con anticuerpos sino con la activación de las células del sistema inmunitario. Una respuesta inmunitaria celular se caracteriza por ejemplo por la activación de linfocitos T citotóxicos antigeno-especificos que son capaces de inducir apoptosis en células corporales que exhiben epitopes de un antigeno sobre su superficie, tales como células infectadas por virus, células con bacterias intracelulares , y células cancerosas que exhiben antigenos tumorales; macrófagos de activación y células citoliticas naturales, que les permiten destruir patógeno; y células estimulantes para secretar una variedad de citoquinas que influyan en la función de otras células implicadas en las respuestas inmunitarias adaptativas y las respuestas inmunitarias innatas.
Inmunidad humoral/respuesta inmunitaria humoral: la inmunidad humoral se refiere típicamente a la producción de anticuerpos y los procesos accesorios que pueden acompañarla. Una respuesta inmunitaria humoral típicamente se puede por ejemplo, por la activación de Th2 y producción de citoquinas, la formación de centros germinales e intercambio de isotipos, la maduración por afinidad y generación de células de memoria. La inmunidad humoral típicamente también puede hacer referencia a las funciones efectoras de los anticuerpos, que incluyen la neutralización de patógeno y toxinas, la activación complementaria clásica, y la promoción de opsonina de fagocitosis y la eliminación de patógenos .
Antígenos : De acuerdo con la presente invención, el término "antígeno" se refiere típicamente a una sustancia que se puede reconocer por el sistema inmunitario y puede ser capaz de activar una respuesta inmunitaria antígeno-específica, por ejemplo mediante la formación de anticuerpos o células T antígeno-específicas como parte de una respuesta inmunitaria adaptativa. Típicamente, un antígeno es una proteína o péptido, aunque también puede ser un azúcar, lípido, ácido nucleico etc., estructura. En este contexto, el primer paso de una respuesta inmunitaria adaptativa es la activación de células T antígeno-específicas que no han recibido tratamiento previo mediante células presentadoras de antígenos. Esto se presenta en los tejidos y órganos linfoides a través de los cuales las células T que no han recibido tratamiento previo se hacen pasar constantemente. Los tres tipos de células que pueden servir como células presentadoras de antigenos son células dendríticas, macrófagos , y células B. Cada una de estas células tiene una función distinta para producir respuestas inmunitarias . Las células dendríticas en tejidos extraen antígenos mediante fagocitosis y macropinocitosis y se estimulan mediante una infección para que migrar al tejido linfoide local donde se diferencian en células dendríticas maduras. Los macrófagos ingieren antígenos particulados tales como bacterias y se inducen mediante agentes infecciosos para expresar moléculas clase II de MHC . La única habilidad de las células B para unirse e internalizar en antígenos de proteína solubles vía sus receptores puede ser importante para inducir células T. La presentación del antígeno sobre moléculas de MHC conduce a la activación de células T lo que induce su proliferación y diferenciación en células T efectoras armadas. La función más importante de los efectores es el exterminio de las células T infectadas mediante las células T citotóxicos CD8^ y la activación de macrófagos mediante células TH1 que conjuntamente constituyen la inmunidad suministrada a célula, y la activación de las células B mediante células tanto TH2 como TH1 para producir diferentes clases de anticuerpos, impulsando así la respuesta inmunitaria humoral. Las células T reconocen un antígeno mediante sus receptores de células T que no reconocen y se unen al antígeno directamente, sino que en su lugar reconocen los fragmentos peptídicos cortos por ejemplo de los antígenos proteínicos de patógenos que están unidos a las moléculas de MHC sobre las superficies de otras células .
Las células T pertenecen a dos clases principales que tienen diferentes funciones efectoras. Las dos clases se distinguen por la expresión de las proteínas CD4 y CD8 de superficie celular. Estos dos tipos de células T difieren en la clase de molécula de MHC que reconocen. Existen dos clases de moléculas de MHC -las moléculas clase I de MHC y clase II de MHC- que difieren en su estructura y patrón de expresión en tejidos del cuerpo. Las células T CD4+ se unen a una molécula clase II de MHC y las células T CD8+ a una molécula clase I de MHC. Las moléculas clase I de MHC y clase II de MHC tienen distintas distribuciones entre las células que reflejan las diferente funciones efectoras de las células T que los reconocen. Las moléculas clase I de MHC presentan péptidos provenientes de patógenos, comúnmente virus para las células T CD8+ que se diferencian en células T citotóxicas que están especializados para exterminar cualquier célula que reconozcan específicamente. Casi todas células expresan moléculas clase I de MHC, aunque el nivel de expresión constitutiva varia de un tipo celular al siguiente. Aunque no sólo los péptidos patogénicos provenientes de virus se presentan por moléculas clase I de MHC, también se presentan por los mismos antigenos tumorales similares a auto-antigenos. Las moléculas clase I de MHC se unen a péptidos provenientes de proteínas degradadas en el citosol y se transportan en el retículo endoplásmico . Con esto, las moléculas clase I de MHC sobre la superficie de células infectadas con virus u otros patógenos citosólicos exhiben péptidos provenientes de estos patógeno. Los CD8+ que reconocen las células T complejos de clase I de MHC:péptido se especializan para exterminar cualesquiera célula que exhiban péptidos extraños y de esta forma libran al cuerpo de las células infectadas con virus y otros patógenos citosólicos. La función principal de las células T CD4+ (células T auxiliares CD4+) que reconocen las moléculas clase II de MHC es activar otras células efectoras del sistema inmunitario. De esta forma, las moléculas clase II de MHC normalmente se encuentran linfocitos B, células dendríticas, y macrófagos, las células que participan en las respuestas inmunitarias , pero no otras células en tejido. Los macrófagos, por ejemplo, se activan para exterminar los patógenos intravesiculares que albergan, y las células B para secretar inmunoglobulinas contra moléculas extrañas. Se evita que las moléculas clase II de MHC se unan a péptidos en el retículo endoplásmico y de esta forma las moléculas clase II de MHC se unen a péptidos provenientes de proteínas que se degradan en los endosomas. Capturan los péptidos provenientes de patógenos que hayan entrado al sistema vesicular de los macrófagos, o de los antígenos internalizados por células dendríticas inmaduras o los receptores de inmunoglobulina de las células B. Los patógenos que se acumulan en grandes cantidades dentro del macrófago y las vesículas de células dendríticas tienden a estimular la diferenciación de las células TH1, mientras que los antígenos extracelulares tienden a estimular la producción de células TH2. Las células TH1 activan las propiedades microbiocidas de los macrófagos que inducen que las células B produzcan anticuerpos IgG que son muy efectivos para opsonizar los patógenos extracelulares para ingestión mediante células fagocíticas, mientras que las células TH2 inician la respuesta humoral al activar a los células B que no han recibido tratamiento previo para que secreten IgM, e inducen la producción de anticuerpos débilmente opsonizantes tales como IgGl e IgG3 (ratón) e IgG2 e IgG4 (humano) así como IgA e IgE (ratón y humano) .
Vacuna : Se entiende típicamente que una vacuna será un material profiláctico o terapéutico que proporcione al menos un antígeno o una función antigénica. El antígeno o la función antigénica pueden estimular al sistema inmunitario adaptativo del cuerpo para que proporcione una respuesta inmunitaria adaptativa.
Agente ínmunoestintuíante : El término "agente inmunoestimulante" típicamente se entiende que no incluirá agentes como por ejemplo antigeno (de cualquier estructura química), que produzcan una respuesta inmunitaria adaptiva/citotóxica, por ejemplo una respuesta inmunitaria "humoral" o "celular", en otras palabras, producen respuestas inmunitarias (que confieren inmunidad por si mismas) que se caracterizan por una respuesta especifica a las propiedades estructurales de un antigeno reconocido que será extraño por células competentes inmunes. En lugar de esto, por "agente inmunoestimulante", tipicamente se debe entender con el significado de agentes/compuestos/complejos que no activen ninguna respuesta inmunitaria adaptiva/citotóxica por si mismos, pero que puedan mejorar exclusivamente tal como una respuesta inmunitaria adaptativa/citotóxica en una forma no especifica, mediante por ejemplo la activación de los receptores "PAMP" y con esto activar la liberación de citoqumas que apoyan la respuesta inmunitaria adaptativa/citotóxica real. Por consiguiente, cualquier inmunoestimulación por los agentes (por ejemplo, antigenos) que evoquen una respuesta inmunitaria adaptativa y/o citotóxica por si mismos (confiriendo inmunidad por si mismos directa o indirectamente) tipicamente no se niega por la frase "agente inmunoestimulante" .
Adyuvante : El término "adyuvante" típicamente se entiende que no comprende agentes que confieren inmunidad por si mismos. Por consiguiente, los adyuvantes típicamente, no confieren inmunidad por sí mismos, aunque ayudan al sistema inmunitario en diversas formas para mejorar la respuesta inmunitaria antígeno-especifica mediante, por ejemplo la estimulación de la presentación de un antígeno al sistema inmunitario. Con esto, un adyuvante de preferencia puede por ejemplo, modular la respuesta inmunitaria mediante por ejemplo la modificación de la respuesta antígeno-específica a base de Thl dominante con una respuesta antígeno-especifica a base de Th2 o viceversa. Por consiguiente, los términos "agente inmunoestimulante" y "adyuvante" en el contexto de la presente invención típicamente se entiende que significan agentes, compuestos o complejos que no confieren inmunidad por sí mismos, aunque apoyan exclusivamente a la respuesta inmunitaria en una forma no específica (en contraste con una respuesta inmunitaria antígeno-especifica) mediante efectos, que modulan la respuesta antígeno-especifica (respuesta inmunitaria celular y/o humoral adaptativa) mediante medidas no específicas, por ejemplo expresión/secreción de citoquinas, presentación mejorada de antígeno, modificación de la naturaleza de las armas de la respuesta inmunitaria, etc. por consiguiente, cualesquiera agentes que evoquen por si mismos inmunidad se niegan típicamente por los términos "adyuvante" o "agente inmunoestintuíante" .
ARN inmunoestimulador : Un ARN inmunoestimulador (ARNis) en el contexto de la invención, típicamente puede ser un ARN que sea capaz de inducir una respuesta inmunitaria innata por sí mismo. Usualmente no tiene un marco de lectura abierto y de esta forma no proporciona un péptido-antígeno aunque produce una respuesta inmunitaria innata, por ejemplo mediante la unión a un tipo específico de receptores con patrones moleculares patógeno-asociados (PA P) (por ejemplo, el receptor similar a Toll (TLR) u otros receptores adecuados) . Sin embargo, por supuesto, también los ARNm que tienen un marco de lectura abierto y codifican para un péptido/proteína (por ejemplo, una función antigénica) pueden inducir una respuesta inmunitaria innata.
Fragmento de una secuencia: Un fragmento de una secuencia típicamente es una porción más corta de una secuencia de longitud total de, por ejemplo una secuencia de ácido nucleico o una secuencia de aminoácidos. Por consiguiente, un fragmento de una secuencia, típicamente, consiste en una secuencia que es idéntica al tramo correspondiente o los tramos correspondientes dentro de la secuencia de longitud total. Un fragmento preferido de una secuencia en el contexto de la presente invención, consiste en un tramo de entidades, tales como nucleótidos o aminoácidos, correspondientes a un tramo continuo de entidades en la molécula, de que se deriva el fragmento, que representa al menos 5%, de preferencia al menos 20%, de preferencia al menos 30%, de mayor preferencia al menos 40%, de mayor preferencia al menos 50%, incluso con la máxima preferencia al menos 60%, incluso con la máxima preferencia al menos 70%, y con la máxima preferencia al menos 80% de la molécula total (es decir, longitud total) de la cual se deriva el fragmento. De esta forma, por ejemplo, un fragmento de un antigeno proteinico o peptidico de preferencia corresponde a un tramo continuo de entidades en el antigeno proteinico o peptidico, de que se deriva el fragmento, que representa al menos 5%, de preferencia al menos 20%, de preferencia al menos 30%, de mayor preferencia al menos 40%, de mayor preferencia al menos 50%, incluso con la máxima preferencia al menos 60%, incluso con la máxima preferencia al menos 70%, y con la máxima preferencia al menos 80% del antigeno proteinico o peptidico total (es decir, longitud total) . En particular se prefiere que el fragmento o una secuencia sea un fragmento funcional, es decir, que el fragmento cumpla con una o más de las funciones cumplidas por la secuencia, de que se deriva el fragmento. Por ejemplo, un fragmento de un antígeno proteínico o peptídico de preferencia exhibe al menos una función antigénica (por ejemplo, es capaz de producir una reacción inmunitaria especifica contra al menos un determinante antigénico en el antigeno proteínico o peptídico) del antígeno proteínico o peptídico del que se deriva el fragmento.
Fragmentos de proteínas: "Fragmentos" de proteínas o péptidos, es decir, los fragmentos de secuencias de aminoácidos, en el contexto de la presente invención típicanente pueden comprender una secuencia de una proteína o péptido como se define en la presente, el cual, con respecto a su secuencia de aminoácido (o su molécula de ácido nucleico codificante), N-terminalmente , C-terminalmente y/o intrasecuencialmente truncado en comparación con la secuencia de aminoácidos de la proteína original (natural) (o su molécula de ácido nucleico codificado) . Esta truncación de esta forma se puede presentar ya sea a nivel del aminoácido o correspondientemente al nivel de ácido nucleico. Una identidad de secuencia con respecto a este fragmento, como se define en la presente, por lo tanto de preferencia puede hacer referencia a la proteína o péptido total, como se define en la presente o a la molécula de ácido nucleico completa (codificante) de este péptido o proteína.
Asimismo, "fragmentos" de secuencias de ácido nucleico en el contexto de la presente invención, pueden comprender una secuencia de un ácido nucleico, como se define en la presente, el cual, con respecto a su molécula de ácido nucleico 5', 3'- y/o intra-secuencialmente truncado en comparación con la molécula de ácido nucleico de la molécula de ácido nucleico original (natural) . Una identidad de secuencia con respecto a este fragmento, como se define en la presente, por lo tanto de preferencia hace referencia al ácido nucleico total como se define en la presente.
Los fragmentos preferidos de proteínas o péptidos, en el contexto de la presente invención además pueden comprender una secuencia de una proteína o péptido, como se define en la presente, que tenga una longitud entre aproximadamente 6 hasta aproximadamente 20 o incluso más aminoácidos, por ejemplo, los fragmentos según se procesan y presentan mediante las moléculas clase I MHC, de preferencia que tengan una longitud de aproximadamente 8 hasta aproximadamente 10 aminoácidos, por ejemplo 8, 9, ó 10, (o incluso 6, 7, 11, ó 12 aminoácidos), o los fragmentos según se procesan y presentan mediante las moléculas clase II de MHC, de preferencia que tengan una longitud de aproximadamente 13 o más aminoácidos, por ejemplo 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 o más aminoácidos, en donde estos fragmentos se pueden seleccionar de cualquier parte de la secuencia de aminoácidos. Estos fragmentos preferidos típicamente se reconocen por las células T en la forma de un complejo que consiste del fragmento peptídico y una molécula de MHC, es decir los fragmentos típicamente no se reconocen en su forma natural. Los fragmentos de proteínas o péptidos pueden comprender al menos un epítope de aquellas proteínas o péptidos. Además, también los dominios de una proteína, similar al dominio extracelular , el dominio intracelular o el dominio transmembrana y las reacciones acortadas o truncadas de una proteína se puede entender que comprenden un fragmento de una proteína.
Epítope : (también denominado "determinante antigénico") : Los epítopes de células T o las partes de las proteínas, en el contexto de la presente invención, pueden comprender fragmentos que tengan de preferencia una longitud entre aproximadamente 6 hasta aproximadamente 20 o incluso más aminoácidos, por ejemplo, los fragmentos según se procesan y presentan mediante la clase I de MHC, de preferencia que tengan una longitud entre aproximadamente 8 hasta aproximadamente 10 aminoácidos, por ejemplo 8, 9, ó 10, (o incluso 11, ó 12 aminoácidos) , o los fragmentos según se procesan y presentan mediante las moléculas tipo II de MHC, de preferencia que tengan una longitud de aproximadamente 13 o más aminoácidos, por ejemplo 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 ó incuso más aminoácidos, en donde estos fragmentos se pueden seleccionar de cualquier parte de la secuencia de aminoácidos. Estos fragmentos típicamente se reconocen por las células T en la forma de un complejo que consiste del fragmento peptídico y una molécula de MHC, es decir, los fragmentos típicamente no se reconocen en su forma natural.
Los epítopes de células B típicamente son fragmentos ubicados en la superficie externa de los antígenos proteínicos o peptídicos (naturales) como se define en la presente, de preferencia que tengan 5 hasta 15 aminoácidos, de mayor preferencia que tengan 5 hasta 12 aminoácidos, incluso de mayor preferencia que tengan 6 hasta 9 aminoácidos, que se pueden reconocer por los anticuerpos, es decir en su forma natural.
Estos epítopes de proteínas o péptidos además se pueden seleccionar de cualquiera de las variantes mencionadas en la presente de estas proteínas o péptidos. En este contexto, los determinantes antigénicos pueden ser epítopes conformacionales o discontinuos que están compuesto de segmentos de las proteínas o péptidos, como se define en la presente, que son discontinuos en la secuencia de aminoácidos de las proteínas o péptidos, como se define en la presente, aunque se reúnen en la estructura tridimensional o los epítopes continuos o lineales que están compuestos de una cadena polipeptídica única.
Variante : Una variante de una entidad, tal como una variante de una secuencia, por ejemplo, de una secuencia de nucleótidos o de aminoácidos, se refiere a una entidad modificada, tal como una secuencia modificada, por ejemplo una secuencia de nucleótidos o aminoácidos modificados. Por ejemplo, una variante de una secuencia puede exhibir una o más supresiones, inserciones, adiciones y/o sustituciones de nucleótidos o aminoácidos en comparación con la secuencia de la que se deriva la variante. De preferencia, una variante de una secuencia en el contexto de la presente invención es al menos 40%, de preferencia al menos 50%, de mayor preferencia al menos 60%, de mayor preferencia al menos 70%, incluso con la máxima preferencia al menos 80%, incluso con la máxima preferencia al menos 90%, con la máxima preferencia al menos de 95% idéntica a la secuencia de la variante de que se deriva. Por consiguiente, una variante de un antigeno peptidico o proteinico, en el contexto de la presente invención de preferencia es al menos 40%, de preferencia al menos 50%, de mayor preferencia al menos 60%, de mayor preferencia al menos 70%, incluso de mayor preferencia al menos 80%, incluso de mayor preferencia al menos 90%, con la máxima preferencia al menos 95% idéntica a la secuencia del antigeno proteinico o peptidico del que se deriva la variante. De preferencia, la variante es una variante funcional, es decir que la variante cumple con una o más de las funciones cumplidas por la secuencia del que se deriva la variante. Por ejemplo, una variante de un antigeno proteinico peptidico de preferencia exhibe al menos de una función antigénica (por ejemplo, es capaz de producir una reacción inmunitaria especifica contra al menos un determinante antigénico en el antigeno proteinico o peptidico) del antigeno proteinico o peptidico del que se deriva la variante.
Las "variantes" de proteínas o péptidos, como define en el contexto de la presente invención, se pueden generar, teniendo una secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia original en una o más mutaciones, tal como uno o más aminoácidos sustituidos, insertados y/o suprimidos. De preferencia, estos fragmentos y/o variantes tienen la misma función biológica o actividad específica en comparación con la proteína natural de longitud total, por ejemplo su propiedad antigénica específica. Las "variantes" de las proteínas o péptidos, como se define en el contexto de la presente invención, por ejemplo, pueden comprender sustituciones conservadoras de aminoácidos en comparación con su secuencia natural, es decir, fisiológica no mutada. Aquellas secuencias de aminoácidos, así como sus secuencias de nucleótidos codificantes, en particular están incluidas en el término variantes, como se define en la presente. Las sustituciones en las cuales los aminoácidos, que se originan de la misma clase, se intercambian por otro se denominan sustituciones conservadoras. En particular, éstos son aminoácidos que tienen cadenas laterales alifáticas, cadenas laterales cargadas positiva o negativamente, grupos aromáticos en las cadenas laterales o aminoácidos, las cadenas laterales de las cuales pueden ingresar en puentes de hidrógeno, por ejemplo, las cadenas laterales que tiene una función hidroxilo. Esto significa que, por ejemplo, un aminoácido que tenga una cadena lateral polar se reemplaza por otro aminoácido que tenga igualmente una cadena lateral polar, o, por ejemplo, un aminoácido caracterizado por una cadena lateral hidrofóbica que se sustituye por otro aminoácido que tenga asimismo una cadena lateral hidrofóbica (por ejemplo, serina (treonina) por treonina (serina) o leucina (isoleucina) por isoleucina (leucina)). Son posibles inserciones y sustituciones, en particular, en aquellas posiciones de las secuencias que no provocan modificación para la estructura tridimensional o no afectan la región de unión. Las modificaciones a una estructura tridimensional mediante inserciones o supresiones se pueden determinar fácilmente utilizando, por ejemplo espectro de CD (espectro de dicroismo circular) (Urry, 1985, Absorption, Circular Dichroism and ORD of Polypeptides , in: Modern Physical Methods in Biochemistry, Neuberger et al. (ed.), Elsevier, Amsterdam) .
Adicionalmente, las variantes de proteínas o péptidos pueden comprender análogos peptidicos, como se define en la presente. Además, las variantes de proteínas o péptidos, como se define en la presente, que se pueden codificar por una molécula de ácido nucleico, también pueden comprender aquellas secuencias, en donde los nucleótidos del ácido nucleico se intercambia de acuerdo con la degeneración del código genético, sin conducir a una alteración de la secuencia respectiva de aminoácidos de la proteína o péptido, es decir la secuencia de aminoácidos o al menos parte de la misma puede no diferir de una secuencia original en una o más mutaciones dentro del significado anterior.
Identidad de secuencia: Para determinar el porcentaje al cual dos secuencias son idénticas, por ejemplo las secuencias de ácido nucleico o las secuencias de aminoácidos, como se define en la presente, tales como las secuencias de aminoácidos codificadas por una secuencia de ácido nucleico del complejo de carga con portador polimérico o una secuencia de ácido nucleico o una secuencia de aminoácidos de un antígeno, como se define en la presente, la secuencia de ácido nucleico de carga o las secuencias de aminoácidos mismas, las secuencias se pueden alinear para que se comparen posteriormente entre si. Por lo tanto, por ejemplo, una posición de una primera secuencia se puede comparar con la posición correspondiente de la segunda secuencia. Si una posición en la primera secuencia está ocupada por el mismo componente como es el caso en una posición en la segunda secuencia, las dos secuencias son idénticas en esta posición. Si éste no es el caso, las secuencias difieren en esta posición. Si se presentan inserciones en la segunda secuencia en comparación con la primera secuencia, se pueden insertar espacios en la primera secuencia para permitir una alineación adicional. Si se presentan supresiones en la segunda secuencia en comparación con la primera secuencia, se pueden insertar espacios en la segunda secuencia para permitir una alineación adicional. El porcentaje al cual dos secuencias son idénticas luego es una función del número de posiciones idénticas dividido entre el número total de posiciones incluyendo agüellas posiciones gue están ocupadas únicamente en una secuencia. El porcentaje al cual dos secuencias son idénticas se puede determinar utilizando un algoritmo matemático. Un ejemplo preferido, aunque no limitante, de un algoritmo matemático que se pueda utilizar es el algoritmo de Karlin et al. (1993), PNAS USA, 90:5873-5877 o Altschul et al. (1997), Nucleic Acids Res., 25:3389-3402. Este algoritmo está integrado en el programa BLAST. Las secuencias gue son idénticas a las secuencias de la presente invención a un cierto grado se pueden identificar mediante este programa. Una "variante" de una proteina o péptido puede tener, por ejemplo, al menos un 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ó 99% de identidad de aminoácidos sobre un tramo de 10, 20, 30, 50, 75 ó 100 aminoácidos, de preferencia sobre la secuencia de longitud total, de esta proteina o péptido. Análogamente, una "variante" de una secuencia de ácido nucleico puede tener, por ejemplo, al menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ó 99% de identidad de nucleótidos sobre un tramo de 10, 20, 30, 50, 75 ó 100 nucleótidos, de preferencia sobre la secuencia de longitud total, de esta secuencia de ácido nucleico.
Derivado de una proteína o péptido: Un derivado de un péptido o proteína que típicamente se debe entender como una molécula que se deriva de otra molécula, tal como el péptido o proteína. Un "derivado" de un péptido o proteína también abarca fusiones que comprenden un péptido o proteína utilizado en la presente invención. Por ejemplo, la fusión comprende una marca, tal como, por ejemplo, un epítope, por ejemplo, un epítope FLAG o un epítope V5 o un epítope HA. Por ejemplo, el epítope es un epítope FLAG. Este marcador es útil para, por ejemplo, purificar la proteina de fusión. El término "derivado" de un péptido o proteina también abarca un péptido o proteina derivado tal como, por ejemplo, un péptido o proteina modificado para que contenga una o más porciones químicas distintas a un aminoácido. La porción química puede estar ligada covalentemente al péptido o proteina por ejemplo, via un residuo de aminoácido amino-terminal , un residuo de aminoácido carboxilo terminal, o en un residuo de aminoácido interno. Estas modificaciones incluyen la adición de un grupo protector o de remate sobre una porción reactiva en el péptido o proteina, la adición de una marca detectable, y otros cambios que no destruyan adversamente la actividad del compuesto peptidico o proteinico. Por ejemplo, un derivado puede comprender una porción PEG, radionúclido, látex de color, etc. Un derivado en general posee o exhibe una característica mejorada en relación con por ejemplo, una resistencia mejorada a proteasa y/o una vida media más larga y/o una transportabilidad mejorada entre células o tejidos del cuerpo humano o animal y/o efectos adversos reducidos y/o una afinidad o inmunogenicidad mejorada. La O 2010/003193 describe diversas metodologías para proporcionar derivados peptídicos o proteínicos que se pueden emplear por separado o en combinación utilizando procedimientos estándar conocidos por alguien con experiencia normal, incluyendo la derivación de una proteína o un péptido mediante por ejemplo, PEGilación, HESilación, o glicosilación .
De acuerdo con un primer aspecto, uno o más objetivos fundamentales de la presente invención se resuelven mediante una composición farmacéutica que incluye: (A) un complejo de carga con portador polimérico, que comprende : a) un portador polimérico que comprende componentes catiónicos reticulados con disulfuro, de preferencia formados mediante componentes catiónicos reticulados con disulfuro; y b) al menos de una molécula de ácido nucleico, y (B) al menos de un antígeno que se selecciona del grupo que consiste de: (i) un antígeno proveniente de un patógeno asociado con una enfermedad infecciosa; (ii) un antígeno asociado con la alergia o enfermedad alérgica; (iii) un antígeno asociado con una enfermedad autoinmune; y (iv) un antígeno asociado con un cáncer o enfermedad tumoral, o un fragmento, variante y/o derivado del antigeno .
De preferencia, el componente (B) no está ligado cova lentemente , en particular no mediante un enlace disulfuro, con el componente (A) . De esta forma, el componente (B) de preferencia no está ligado covalentemcnte , tal como mediante un enlace disulfuro, al portador polimérico y/o al menos una molécula de ácido nucleico. De preferencia, al menos un antigeno no está ligado covalentemente al complejo de carga con portador polimérico, en particular no al portador polimérico del complejo de carga con portador polimérico. Por ejemplo, de preferencia, al menos un antigeno, tal como un antigeno proteinico o peptidico, no está ligado covalentemente al complejo de carga con portador polimérico, tal como al portador polimérico, mediante un enlace disulfuro. Sin embargo, en una modalidad, en donde el componente (A) y el componente (B) están ligados vía enlaces disulfuro, este ligamiento de preferencia no se realiza via un reticulante, tal como via un reticulante de 3, 6-dioxa-l, 8-octanditiol (DODT). Además, en una modalidad, donde el componente (A) y el componente (B) están ligados via enlaces disulfuro, el componente (B) de preferencia no es ovalbúmina o un fragmento de ovalbúmina.
La ventaja de que el componente (B), por ejemplo un antigeno proteinico, no esté ligado covalentemente al portador polimérico es que la estructura del antígeno, por ejemplo el antígeno proteinico, no se alterará y se conservará su inmunogenicidad . Si el antigeno, por ejemplo el antígeno proteinico, está ligado covalentemente al portador polimérico, por ejemplo mediante enlaces disulfuro, la estructura terciaria del antígeno se puede cambiar, o incluso desnaturalizar, lo cual puede destruir la estructura de epítopes conformacionales y puede hacer que la proteína sea menos inmunogénica o no inmunogénica . Los epítopes que se reconocen por el sistema inmunitario pueden ser epítopes lineales que consisten de un tramo continuo de aminoácidos, o los epítopes conformacionales que tienen una forma tridimensional específica que consisten de los aminoácidos provenientes de distintas partes de la proteína.
Además, de preferencia, el portador polimérico, en particular los componentes catiónicos del portador polimérico, y al menos una molécula de ácido nucleico del complejo de carga con portador polimérico no están ligados covalentemente, aunque de preferencia están asociados vía otros enlaces distintos a enlaces covalentes, tales como enlaces iónicas y/o enlaces van der Waals. De esta forma, se prefiere que, en el complejo de carga con portador polimérico, sólo los componentes catiónicos estén ligados covalentemente entre si, aunque las moléculas de ácidos nucleicos están asociadas no covalentemente con el portador polimérico .
Además, en una modalidad preferida, los componentes (A) y (B) no forman una estructura micelar conjuntamente, en particular, el portador polimérico de preferencia no forma una estructura micelar.
En ciertas modalidades de todos los aspectos de la invención, el complejo de carga con portador polimérico es para utilizarse como un adyuvante. Por ejemplo, si se utiliza como un adyuvante, y/o tiene propiedades adyuvantes, como se puede determinar fácilmente por alguien con experiencia normal utilizando metodologías de rutina, e incluyendo las metodologías como se describe en la presente.
Como un primer ingrediente, la composición farmacéutica inventiva incluye (por ejemplo como un adyuvante) en al menos un complejo de carga con portador polimérico, que comprende: a) (como un portador) un portador polimérico que comprende componentes catiónicos reticulados con disulfuro, de preferencia formado mediante componentes catiónicos reticulados con disulfuro, y b) (como una carga) al menos una molécula de ácido nucleico.
El complejo de carga con portador polimérico comprendido en la composición farmacéutica inventiva permite la provisión de un adyuvante más eficiente y/o más seguro para fines de vacunación. Ventajosamente, el complejo de carga con portador polimérico es adecuado para el suministro in vivo de ácidos nucleicos, en particular por compactar y estabilizar un ácido nucleico para los fines de transfección de ácido nucleico, tal como exhibir uno o más efectos secundarios negativos reducidos de polímeros de alto peso molecular como se analizó anteriormente, tal como una biodegradabilidad deficiente o alta toxicidad, aglomeración, baja actividad de transfección in vivo, etc. El complejo de carga con portador polimérico también proporciona una transferencia mejorada de ácido nucleico in vivo en particular vía rutas intradérmicas o intramusculares, incluyendo estabilidad sérica, estabilidad de sales, eficacia de absorción, activación reducida complementaria, liberación de ácido nucleico, etc. Este complejo de carga con portador polimérico, además puede apoyar a la inducción y mantenimiento de una respuesta inmunitaria adaptativa al iniciar o reforzar una respuesta inmunitaria innata paralela. Adicionalmente, el complejo de carga con portador polimérico puede exhibir una estabilidad mejorada de almacenamiento, en particular durante la liofilización .
El complejo de carga con portador polimérico, como se definió anteriormente, comprende un componente, un portador polimérico formado mediante componentes catiónicos reticulados con disulfuro. El término "componente catiónico" típicamente se refiere a una molécula cargada que esté cargada positivamente (catión) a un valor de pH de aproximadamente 1 hasta 9, de preferencia a un valor de pH de o por debajo de 9, de o por debajo de 8, de o por debajo de 7, con la máxima preferencia a valores de pH fisiológico, por ejemplo aproximadamente 7.3 hasta 7.4. Por consiguiente, péptido catiónico, proteína o polímero de acuerdo con la presente invención, está cargado positivamente bajo condiciones fisiológicas, en particular bajo condiciones de sal fisiológica de la célula in vivo. La definición "catiónico" también puede hacer referencia a componentes "policatiónicos" .
En este concepto, los componentes catiónico que forman la base para el portador polimérico del complejo de carga con portador polimérico mediante reticulación con disulfuro, típicamente se seleccionan de cualquier péptido catiónico o policatiónico adecuado, proteína o polímero adecuado para este fin, en particular cualquier péptido, proteína o polímero catiónico o policatiónico capaz de completar un ácido nucleico como se define de acuerdo con la presente invención, y por lo tanto de preferencia condensar el ácido nucleico. El péptido, proteina o polímero catiónico o policatiónico de preferencia es una molécula lineal, sin embargo, también se pueden utilizar péptidos, proteínas o polímeros catiónicos o policatiónicos ramificados.
Cada proteína, péptido o polímero catiónico o policatiónico del portador polimérico contiene al menos una porción -SH, de mayor preferencia, al menos un residuo de cisteína y cualquier grupo químico adicional que exhiba una porción -SH, capaz de formar un ligamiento disulfuro con condensación con al menos una proteína, poliéptido o polímero catiónico o policatiónico adicional como un componente catiónico del portador polimérico como se menciona en la presente .
Cada proteína, péptido o polímero catiónico o policatiónico o cualquier componente adicional del portador polimérico de preferencia está ligado a sus componentes vecinos (proteínas péptidos, polímeros u otros componentes catiónicos) vía una reticulación con disulfuro. De preferencia, la reticulación con disulfuro es un enlace disulfuro (reversible) (-S-S-) entre al menos una proteína, péptido o polímero catiónico o policatiónico y al menos una proteína, péptido, o polímero catiónico o policatiónico adicional u otro componente del portador polimérico. La reticulación con disulfuro típicamente se forma mediante la condensación de porciones -SH- de los componentes del portador polimérico en particular de los componentes catiónicos . Esta porción -SH- puede formar parte de la estructura de la proteina, péptido o polímero catiónico o policatiónico o cualquier componente adicional del portador polimérico antes de la reticulación con disulfuro o se puede agregar antes de la reticulación con disulfuro mediante una modificación, como se define más adelante. En este contexto, los azufres adyacentes a un componente del portador polimérico, necesarios para proporcionar una enlace disulfuro, se pueden proporcionar por el componente mismo, por ejemplo mediante una porción -SH como se define en la presente o se pueden proporcionar al modificar el componente por consiguiente para exhibir una porción -SH. Estas porciones -SH típicamente se proporcionan por cada uno de los componentes, por ejemplo vía una cisteína o cualquier aminoácido adicional (modificado) o compuesto del componente, que porta una porción -SH. En caso de que el componente catiónico o cualquier componente adicional del portador polimérico sea un péptido o proteína, se prefiere que la porción -SH se proporcione por al menos un residuo de cisteína. Alternativamente, el componente del portador polimérico se puede modificar por consiguiente con una porción -SH, de preferencia vía una reacción química con un compuesto que porte una porción -SH, de tal forma que cada uno de los componentes del portador polimérico porte al menos una de estas porciones -SH. Este compuesto que porta una porción -SH puede ser por ejemplo una cisteina (adicional) o cualquier aminoácido (modificado) adicional o un compuesto del componente del portador polimérico que porte una porción -SH. Este compuesto también puede ser cualquier compuesto que no sea amino o una porción, tal como un compuesto que no sea de aminoácido o una porción, que contenga o permita introducir una porción -SH en el componente, como se define en la presente. Estos compuestos que no son amino, por ejemplo, compuestos que no son de aminoácidos, pueden estar unidos al componente del portador polimérico de acuerdo con la presente invención via reacciones químicas o la unión de los compuestos, por ejemplo, mediante la unión de un ácido 3-tiopropiónico o 2-iminotiolano (reactivo de Traut), mediante-la formación de amidas (por ejemplo, ácidos carboxílieos , ácidos sulfónicos, aminas, etc.), mediante adición Michael (por ejemplo, porciones de maleinimida, carbonilos a, ß insaturados, etc.), mediante química clic (por ejemplo, azidas o alquinas), mediante metátesis de alquenos/alquinas (por ejemplo alquenos o alquinas), formación de iminas o hidrozona (aldehidos o cetonas, hidrazinas, hidroxilaminas , aminas), reacciones de complejación (avidina, biotina, proteina G) o componentes que permitan reacciones de sustitución tipo Sn (por ejemplo, halogenalcanos , tioles, alcoholes, aminas, hidrazinas, hidrazidas, ésteres de ácido sulfónico, sales de oxifosfonio) u otras porciones químicas que se puedan utilizar en la unión de componentes adicionales. En algunos casos, la porción -SH puede estar enmascarada mediante grupos protectores durante la unión química al componente. Estos grupos protectores se conocen en la técnica y se pueden retirar después del acoplamiento químico. En cada caso, la porción -SH, por ejemplo de una cisteína o de cualquier aminoácido (modificado) o compuesto adicional, puede estar presente a los extremos terminales o internamente a cualquier posición del componente del portador polimérico. En el sentido en el que se define en la presente, cada uno de los componentes del portador polimérico, de preferencia cada uno de los componentes catiónicos del portador polimérico, típicamente exhibe al menos una porción -SH-, aunque también puede contener dos, tres, cuatro, cinco, o incluso más porciones -SH-.
En una modalidad preferida, el portador polimérico, la molécula de ácido nucleico de carga y/o el antígeno, tal como el antígeno proteínico o peptídico, no se modifican al introduci r nuevos sitios de acoplamiento por formar enlaces disulfuro, tal como al introducir nuevas porciones -SH, en particular el portador polimérico, la molécula de ácido nucleico de carga y/o el antigeno, tal como el antigeno proteinico o peptidico, de preferencia no están modificados por ditiopiridina . De esta forma, en una modalidad preferida particular, el portador polimérico, molécula de ácido nucleico de carga y/o el antigeno no comprenden ditiopiridina .
En una modalidad preferida adicional, el portador polimérico no comprende una porción de polieti lenglicol (PEG), en particular de preferencia los componentes catiónicos del portador polimérico de preferencia no comprenden una porción PEG. Sin embargo, si el portador polimérico comprende una porción PEG, el componente catiónico de preferencia no es poli-L-lisina .
Adicionalmente para la unión de los componentes catiónicos, se puede utilizar una porción -SH para unir los componentes adicionales al portador polimérico como se define en la presente, en particular un componente de aminoácido, por ejemplo, epitopes antigénicos, antigenos, anticuerpos, péptidos para penetración celular (por ejemplo TAT) , ligandos, etc. Si el portador polimérico comprende componentes adicionales además de los componentes catiónicos, se prefiere que el componente adicional no sea ovalbúmina o un fragmento de ovalbúmina, en particular, si el componente adicional es un componente de aminoácido.
En el sentido en que se definió anteriormente, el portador polimérico del complejo de carga con portador polimérico se forma mediante componentes catiónicos (o policatiónicos) reculados con disulfuro.
De acuerdo con una primera alternativa, al menos un componente catiónico (o policatiónico) del portador polimérico se puede seleccionar de péptidos o proteínas catiónicos o policatiónicos. Estos péptidos o proteínas catiónicos o policatiónicos de preferencia exhiben una longitud de aproximadamente 3 hasta 100 aminoácidos, de preferencia una longitud de aproximadamente 3 hasta 50 aminoácidos, de mayor preferencia una longitud de aproximadamente 3 hasta 25 aminoácidos, por ejemplo una longitud de aproximadamente 3 hasta 10; 5 hasta 20; 5 hasta 15; 8 hasta 15, 16 o 17; 10 hasta 15, 16, 17, 18, 19, o 20; o 15 hasta 25 aminoácidos. Alternativa o adicionalmente , estos péptidos o proteínas catiónicos o policatiónicos pueden exhibir un peso molecular entre aproximadamente 0.01 kDa hasta aproximadamente 100 kDa, incluyendo un peso molecular entre aproximadamente 0.5 kDa hasta aproximadamente 100 kDa, de preferencia entre aproximadamente 10 kDa hasta aproximadamente 50 kDa, incluso de mayor preferencia entre aproximadamente 10 kDa hasta aproximadamente 30 kDa. En este contexto, también están abarcados explícitamente los análogos y derivados de proteínas o péptidos, como se define en la presente .
En el caso específico de que el componente catiónico del portador polimérico comprenda o consista de un péptido o proteína catiónico o policatiónico, las propiedades catiónicas del péptido o proteína catiónico o policatiónico o del portador polimérico total, si el portador polimérico está compuesto de péptidos o proteínas catiónicos o policatiónicos, se pueden determinar con base en su contenido de aminoácidos catiónicos, en particular con base en su contenido de aminoácidos catiónicos en exceso sobre los aminoácidos aniónicos o neutros, y de esta forma, con base en su carga positiva neta. De preferencia, el contenido de los aminoácidos catiónicos en el péptido o proteína catiónico o policatiónico y/o el portador polimérico es al menos 10%, 20%, o 30%, de preferencia al menos 40%, de mayor preferencia al menos 50%, 60% o 70%, aunque también de preferencia al menos 80%, 90%, incluso de preferencia al menos 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o 100%, con la máxima preferencia al menos 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o 100%, o puede estar en la variación de aproximadamente 10% hasta 90%, de mayor preferencia en la variación de aproximadamente 15% hasta 75%, incluso de mayor preferencia en la variación de aproximadamente 20% hasta 50%, por ejemplo 20%, 30%, 40% o 50%, o en una variación formada por cualquiera de dos de los valores mencionados anteriormente, con la condición de que, que contenido de todos los aminoácidos, por ejemplo, los aminoácidos catiónicos, lipofilicos, hidrofilicos, aromáticos y adicionales, en el péptido o proteina catiónico o policatiónico, o en el portador polimérico total, si el portador polimérico está completamente compuesto de péptidos o proteínas catiónicos o policatiónicos , es del 100%.
En este contexto, los aminoácidos catiónicos de preferencia son los aminoácidos de origen natural Arg (Arginina) , Lys (Lisina) , His (Histidina) , y Orn (Ornitina) . Sin embargo, en un sentido más amplio, para llevar a cabo la invención también se puede contemplar cualquiera aminoácido (no natural) que porte una carga catiónica en su cadena lateral. Sin embargo, se prefieren aquellos aminoácidos catiónicos que comprendan cadenas laterales que estén cargadas positivamente bajo condiciones de pH fisiológico. En una modalidad más preferida, estos son aminoácidos Arg, Lys, y Orn.
De preferencia, estos péptidos o proteínas catiónicos o policatiónicos del portador polimérico, que comprenden o adicionalmente están modificados para comprender al una porción -SH, se selecciona de, sin estar restringidos a los mismos, péptidos o proteínas catiónicos tales como protamina, nucleolina, espermina o espermidina, oligo- o poli-L-lisina (PLL), polipéptidos básicos, oligo o poli-arginina, péptidos para penetración celular (CPPs), CPPs quiméricos, tales como Transportan, o péptidos MPG, péptidos de unión a VIH, Tat, VIH-1 Tat (VIH), péptidos derivados de Tat, miembros de la familia de penetratina, por ejemplo, penetratina, péptidos derivados de Antenapedia (en particular de Drosophila antennapedia) , pAntp, plsl, etc., derivados CPPs antimicrobianos, por ejemplo Buforin-2, Bac715-24, SynB, SynB(l), pVEC, péptidos derivados de hCT, SAP, MAP , KALA, PpTG20, Loligomera, FGF, Lactoferrina , histonas, péptidos derivados o análogos de VP22, HSV, VP22 (Herpes simplex) , MAP, KALA o dominios de transducción proteínica (PTDs, PpT620, péptidos ricos en prolina, péptidos ricos en arginina, péptidos ricos en lisina, Pep-1, L-oligómeros , péptidos de calcitonina, etc.
Alternativa o adicionalmente , estos péptidos o proteínas catiónicos o policatiónicos del portador polimérico que comprenden o están modificados adicionalmente para comprender al menos una porción-SH, se seleccionan de, sin estar restringidos a los mismos, los siguientes péptidos catiónicos que tiene la siguiente fórmula de la suma (I) : { (Arg) i; (Lys) m; (His) n; (Orn) G; (Xaa) x} ; en donde l + m + n + o + x = 3-100, y 1, m, n, u o, independientemente entre si es cualquier número seleccionado de 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21-30, 31-40, 41-50, 51-60, 61-70, 71-80, 81- 90 y 91-100 con la condición de que el contenido total de Arg (Arginina) , Lys (Lisina) , His (Histidina) y Orn (Ornitina) represente al menos el 10% de todos los aminoácidos del oligopéptido; y Xaa es cualquier aminoácido seleccionado de aminoácidos naturales (= de origen natural) o no naturales, excepto de Arg, Lys, His u Orn; y x es cualquier número seleccionado de 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21-30, 31-40, 41-50, 51-60, 61-70, 71-80, 81-90, con la condición de que el contenido total de Xaa no excede 90% de todos los aminoácidos del oligopéptido. Cualquiera de los aminoácidos Arg, Lys, His, Orn y Xaa se puede colocar en cualquier lugar del péptido. En este contexto, los péptidos o proteínas catiónicos en la variación de 7-30 aminoácidos en particular son los preferidos. Incluso los péptidos más preferidos de esta fórmula son oligo-argininas tales como por ejemplo, Arg7, Arg8, Arg9, Arg12, His3Arg9, Arg9His3, His3Arg9His3, His6Arg9His6, His3Arg4His3, His6Arg4His6, TyrSer2Arg9Ser2Tyr , ( rgLysHis ) 4 , Tyr (ArqLysHis) 2Arg, etc.
De acuerdo con una modalidad preferida particular, estos péptidos o proteínas catiónicos o policatiónicos del portador polimérico que tiene la fórmula de la suma (I) empírica como se mostró anteriormente, pueden, sin estar restringidos a la misma, comprender al menos uno del subgrupo de la formula: Arg7r Arg8, Arg9, Argi0, Argu Argi2, Argi3, Argi , Argi5-30; Lys7, Lys8, Lys9, Lysio, Lys Lys12, Lysi3, Lysi4, Lysi5-30; HÍS7R HÍSB, HÍS9, Hisio, Hisn HÍS12, HÍS13, HÍS14, HÍS15-30; Orn7, Orn8, Orn9, Orn10, Ornn 0rni2 , Orni3 , Orn1 4 , Orni5-30 .
De acuerdo con una modalidad preferida particularmente adicional, los péptidos o proteínas catiónicos o policatiónicos del portador polimérico, que tienen la fórmula de la suma (I) empírica como se mostró anteriormente y que comprende o están modificas adicionalmente para comprender al menos una porción -SH, de preferencia se pueden seleccionar de, sin estar restringidos a la misma, al menos uno del siguiente sub-grupo de formulas. Las siguientes fórmulas (al igual que con la fórmula (I) empírica) no especifican ningún orden de aminoácidos, aunque se pretende que se reflejen en las fórmulas empíricas al especificar exclusivamente el (número de) aminoácidos como componentes del péptido respectivo. Por consiguiente, como un ejemplo, la fórmula empírica Arg (7-29) Lysi pretende dar a entender que los péptidos que entran bajo esta fórmula contienen 7 hasta 19 residuos de Arg y 1 residuo de Lys de cualquier orden. Si los péptidos contienen 7 residuos de Arg y 1 residuo de Lys, se abarcan todas las variantes que tienen 7 residuos de Arg y 1 residuo de Lys. El residuo de Lys por lo tanto puede estar colocado en cualquier lugar en la secuencia larga por ejemplo de 8 aminoácidos compuestas de 7 residuos de Arg y 1 residuo de Lys. El subgrupo de preferencia comprende: Arg(4-29)Lysi, Arg (4-29) Hisi , Arg (^gOrni. , Lys (4_29) His i , Lys(4- 29)Orn1, HiS(4-29)Orn1, Arg(3-28)Lys2, Arg(3-28)His2, Arg(3-28)Orn2, Lys (3_28) His2 , Lys(3- 28)Orn2, His(3-28)Orn2, Arg(2-27)Lys3, Arg (2-27) His3 , Arg (2-27) Orn3 , Lys (2-27)His3, Lys(2_ 27)Orn3, His(2-27)Orn3, Arg(1-26)Lys4, Arg (i-26) His , Arg ,:1_26) Orn4 , Lys (i-26)His4 , Lysa- 26)Orn4, His {i-26)Orn4, Arg( 3-28)LysiHisi, Arg{3-28)LysiOrni/ Arg(3-28)HisiOrni, ArgiLysí3_ 28)Hisi, Arg(3-28)LysiHis1, Arg ?3-28) LysiOrrii , Arg(3-.28)HisiOrn1, Arg1Lys(3-28)His1, ArgiLys {3-2s)Omil Lys <3_28, HisiOrnj , ArgiLysiHis (3-28) / ArgiHis (3-28)Orni, LysiHis (3-28)Orni; Arg,2-27)Lys2Hisi, Arg (2-27)LysiHis2, Arg(2-27:.Lys20rni, Arg(2-27)LysiOrn2, Arg(2-27)His20rni, Arg (2-27) HisiOrn2 , Arg2Lys {2_27)Hisi, ArgiLy3(2-2/)His2, Arg2Lys {2-27) ?t?? , ArgiLys (2-27) Orn2, Lys,2_ 27)His20rni, Lys (2-27)HisiOrn2, Arg2LysiHis <2-27) , ArgiLys2His (2-27) , Arg2HÍ3(2-27)Orni, ArgiHis (2-27)Orn2, Lys2His (2-27) Orni , LysiHis(:2-27)Orn2; Arg,i-26)Lys3Hisi, Arg(i-26)Lys2His2, Arg(i-26)LysiHis3, Arg,i-26)Lys30rni, Arg(i-26)Lys20rn2, Arg(i-26)LysiOrn3, Arg(i_26)His30rni, Arga-25)His20rn2, Arg(i-26)HisiOrn3, Arg3Lys (i_26) Hisi , Arg2Lys¡i_ 26)His2, ArgiLys (i-26)His3, Arg3Lys (1_25) Orni , Arg2Lys (1_26¡ Orn2 , ArgiLys (i-26)Orn3, Lys n_26)His30rni, Lys (i_26) His2Orn2 , Lys.'i-26)HisiOrn3, Arg3LysiHis -26) , Arg2Lys2His (1_26) , ArgxLys3His (1_26) , Arg3His (i_26)Orn.i , Arg2His {i-26)Orn2, ArgiHis(i_26)Orn3, Lys3His;i- 26>Orni, Lys2His (i_26)Orn2, LysiHis (i-26)Orn3; Arg (2-27 jLysiHisiOrni, ArgiLys (2-27)HisiOrni, ArgiLysiHis (2_27)Orni, Arg1LysiHisiOrn(2_27) ; Arg(i-26¡Lys2HisiOrni, Arg ( 1-26) LysiHis20rni, Arg(i-26)LysiHisiOrn2, Arg2Lys(i-26)HisiOrni, ArgiLys (i-26)His20rni, Arg1Lys(i-26)HisiOrn2, Arg2LySiHís (i-26)Orrii, ArgiLys2His (1_26) Orrix, ArgiLysiHis (i-26)Orn2, Arg2LysiHisiOrn(i_26) , Arg1Lys2HisiOrn(i-26) , ArgiLysiHis20rn(i-26) ; De acuerdo con una modalidad preferida particular adicional, los péptidos o proteínas catiónico o policatiónico del portador polimérico, que tienen la fórmula de la suma (I) empírica como se mostró anteriormente y que comprenden o están modificados adicionalmente para comprender al menos una porción -SH, se pueden, sin estar restringidos a los mismos, seleccionar del subgrupo que consiste de las fórmulas genéricas Arg7 (también denominado como R7) , Arg9 (también denominado como Rg) , Argi2 (también denominado como R12) .
De acuerdo con una modalidad preferida particular adicional, el péptido o proteína catiónico o policatiónico del portador polimérico, cuando se define de acuerdo con la fórmula { (Arg ) 1; (Lys ) m; (His ) n; (Orn) G; (Xaa ) x} (fórmula (I)) como se mostró anteriormente y que comprenden o están modificados adicionalmente para comprender al menos una porción -SH, se pueden, sin estar restringidos los mismos, seleccionar de la subfórmula ( la) : { (Arg) 1; (Lys) m; (His) n; (Orn) 0; (Xaa' ) x (Cys)y} fórmula (la) en donde (Arg)i; (Lys)m; (His)n; (0rn)o; y x son como se definen en la presente, Xaa' es cualquier aminoácido seleccionado de los aminoácidos naturales (= de origen natural) o no naturales excepto de Arg, Lys, His, Orn o Cys e y es cualquier número seleccionado de 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21-30, 31-40, 41-50, 51-60, 61-70, 71-80 y 81-90, con la condición de que el contenido total de Arg (Arginina) , Lys (Lisina) , His (Histidina) y Orn (Ornitina) represente al menos el 10% de todos los aminoácidos del oligopéptido .
Esta modalidad se puede aplicar a situaciones, en donde el péptido o proteina catiónico o policatiónico del portador polimérico, por ejemplo cuando se define de acuerdo con la fórmula empírica (Arg)i; (Lys)m; (His)n; (0rn)o; (Xaa)x (fórmula (I)) como mostró anteriormente, comprende o se ha modificado con al menos una cisteina como la porción -SH en el significado anterior de tal forma que el péptido catiónico o policatiónico como el componente catiónico porte al menos una cisteina que sea capaz de formar un enlace disulfuro con otros componentes del portador polimérico.
De acuerdo con otra modalidad preferida particular, el péptido o proteina catiónico o policatiónico del portador polimérico, cuando se define de acuerdo con la fórmula { (Arg) i; (Lys) m; (His) n; (Orn) 0; (Xaa) x} (fórmula (I) ) como se mostró anteriormente, se puede, sin estar restringido a la misma, seleccionar de la subfórmula (Ib) : Cys; { (Arg) , ; (Lys) m; (His) r¡; (Orn) 0; (Xaa) ::} Cys:, (fórmula (Ib)) donde la fórmula empírica { (Arg)i; (Lys)m; (His)n; (Orn)0; (Xaa)x} (fórmula (I)) es como se define en la presente y forma un núcleo de una secuencia de aminoácidos de acuerdo con la fórmula (I) ( semi-empírica ) y en donde Cysi y Cys2 son cisternas próximas o terminales para (Arg) i; (Lys)m; (His) n; (Orn) 0; (Xaa) x. Los ejemplos ilustrativos pueden comprender cualquiera de las secuencias anteriores flanqueadas por dos Cys y las siguientes secuencias: Cys (Arg7) Cys, Cys (Arg8) Cys, Cys (Arg9 ) Cys , Cys (Argi0) Cys, Cys (Argn) Cys, Cys (Argi2 ) Cys , Cys (Argi3 ) Cys , Cys (Arg14 ) Cys , Cys (Argi5) Cys, Cys ( rgi6) Cys , Cys (Arg17 ) Cys , Cys (Arg18 ) Cys , Cys (Argi9) Cys, Cys (Arg20) Cys (SEC ID NOs:l-14) : CysArg7Cys Cys-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Cys (SEC ID NO: 1) CysArg8Cys Cys-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Cys (SEC ID NO: 2) CysArgqCys : Cys-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Cys (SEC ID NO: 3) CysArgioCys Cys-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Cys (SEC ID NO: 4) CysArgnCys Cys-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Cys (SEC ID NO: 5) CysArg12Cys : Cys-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Cys (SEC ID NO: 6) CysArgi3Cys : Cys-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Cys (SEC ID NO: 7) CysArg1 Cys : Cys-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Cys (SEC ID NO : 8) CysArgi5Cys : Cys-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Cys (SEC ID NO: 9) CysArgieCys : Cys-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Cys (SEC ID NO: 10) CysArgivCys : Cys-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Cys (SEC ID NO: 11) CysArg!sCys : Cys-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Cys (SEC ID NO: 12) CysArgigCys : Cys-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Cys (SEC ID NO: 13) CysArg2oCys : Cys-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg Cys (SEC ID NO: 14) Esta modalidad se puede aplicar a situaciones, donde el péptido o proteina catiónico o policatiónico del portador polimérico, por ejemplo cuando se define de acuerdo con la fórmula empírica (Arg) i; (Lys ) m; (His ) n; (Orn) 0; (Xaa) x (fórmula (I)) como se mostró anteriormente, se ha modificado con al menos dos cisteínas como las porciones -SH en el significado anterior de tal forma que el péptido catiónico o policatiónico del complejo de portador polimérico de carga como el componente catiónico porte al menos dos cisteínas (terminales) que sean capaces de formar un enlace de disulfuro con otros componentes del portador polimérico.
De acuerdo con una segunda alternativa, al menos un componente catiónico (o policatiónico) del portador polimérico se puede seleccionar de por ejemplo cualquier polímero catiónico o policatiónico (no peptídico) adecuado en este contexto, con la condición de que este polímero catiónico o policatiónico (no peptídico) exhiba o se modifique para que exhiba al menos una porción -SH- que proporcione un enlace disulfuro que liga el polímero catiónico o policatiónico con otro componente del portador polimérico como se define en la presente. De esta forma, asimismo como se define en la presente, el portador polimérico puede comprender los mismos o diferentes polímeros catiónico o policatiónico.
En el caso específico de que el componente catiónico del portador polimérico comprenda un polímero catiónico o policatiónico (no peptídico) las propiedades catiónicas del polímero catiónico o policatiónico (no peptídico) se pueden determinar con su contenido de cargas catiónicas en comparación con las cargas totales de los componentes del polímero catiónico. De preferencia, el contenido de cargas catiónicas, de preferencia las cargas catiónicas netas (es decir con la resta de las cargas aniónicas y neutras) , en el polímero catiónico a un pH (fisiológico) como se define en la presente, es al menos 10%, 20%, o 30%, de preferencia al menos 40%, de mayor preferencia al menos 50%, 60% o 70%, aunque también de preferencia al menos 80%, 90%, o incluso 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o 100%, de mayor preferencia al menos 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o 100%, o puede estar en la variación de aproximadamente 10% hasta 90%, de mayor preferencia en la variación de aproximadamente 30% hasta 100%, incluso de preferencia en la variación de aproximadamente 50% hasta 100%, por ejemplo 50, 60, 70, 80%, 90% o 100%, o en una variación formada por cualquier dos de los valores mencionados anteriormente, con la condición de que, el contenido de todas las cargas, por ejemplo, las cargas positivas y negativas a un pH (fisiológico) como se define en la presente, en el polímero catiónico sea del 100%.
De preferencia, el componente de catiónico (no peptidico) del portador polimérico representa un polímero catiónico o policatiónico, que exhibe típicamente un peso molecular de aproximadamente 0.1 ó 0.5 kDa hasta aproximadamente 100 kDa, de preferencia entre aproximadamente 1 kDa hasta aproximadamente 75 kDa, de mayor preferencia entre aproximadamente 5 kDa hasta aproximadamente 50 kDa, incluso con la máxima preferencia entre aproximadamen e 5 kDa hasta aproximadamente 30 kDa, o un peso molecular entre aproximadamente 10 kDa hasta aproximadamente 50 kDa, incluso con la máxima preferencia entre aproximadamente 10 kDa hasta aproximadamente 30 kDa. Adicionalmente , el polímero catiónico o policatiónico (no peptidico) típicamente exhibe al menos una porción -SH- que es capaz de formar un ligamiento disulfuro con la condensación con cualesquiera otros componentes catiónicos u otros componentes del portador polimérico como se define en la presente.
Los péptidos o proteínas catiónicos o policatiónicos se pueden preparar mediante todos los métodos conocidos por alguien con experiencia normal o mediante la producción recombinante de péptidos o proteínas o mediante síntesis de péptidos como se describe en la presente.
En el contexto anterior, el componente catiónico (no peptídico) del portador polimérico se puede seleccionar de acrilatos, acrilatos modificados, tales como pDMAEMA (poli ( dimetilaminoetilmetilacrilato ) ) , quitosana, aziridinas o 2-etil-2-oxazolina (que forman oligoetilenimina u oligoetileniminas modificadas) , polímeros obtenidos mediante la reacción de bisacrilates con aminas que forma oligobeta aminoésteres o poliamidoaminas , u otros poliésteres similares a polímeros, policarbonatos , etc. Cada molécula de estos polímeros catiónicos o policatiónicos (no peptídicos) típicamente exhibe al menos una porción -SH-, en donde se puede introducir al menos una porción -SH- en el polímero catiónico o policatiónico (no peptídico) mediante modificaciones químicas, por ejemplo, utilizando imonotiolano, ácido 3-tiopropiónico o la introducción de porciones -SH- que contengan aminoácidos, tales como cisteína o cualquier aminoácido (modificado) adicional. Estas porciones -SH- de preferencia son como ya se definieron anteriormente .
En el contexto del portador polimérico, los componentes catiónicos que forman la base para el portador polimérico mediante una reticulación con disulfuro, pueden ser iguales o diferentes entre sí. También en particular se prefiere que el portador polimérico de la presente invención comprenda mezclas de péptidos, proteínas o polímeros catiónicos y opcionalmente componentes adicionales como se define en la presente, componentes adicionales como se definen en la presente. Que están reticulados mediante enlaces disulfuro, como se describe en la presente. Los componentes catiónicos particularmente preferidos del portador polimérico en el contexto de la presente invención son péptidos o proteínas catiónicos.
En este contexto, el complejo de carga con portador polimérico debido a su portador polimérico variable ventajosamente permite combinar las propiedades deseadas de diferente péptidos, proteínas o polímeros catiónicos o policatiónicos (cortos) u otros componentes. El portador polimérico por ejemplo permite compactar eficientemente los ácidos nucleicos con el fin de una transfección eficiente de ácidos nucleicos, para terapia adyuvante, para los fines de terapia génica, para suprimir genes u otras estrategias sin pérdida de actividad, que exhiba particularmente una transfección eficiente de un ácido nucleico en diferentes líneas celulares in vitro pero una transfección particularmente in vivo. El portador polimérico y de esta forma el complejo de carga con portador polimérico además no es tóxico para las células, proporciona una liberación eficiente de su carga de ácido nucleico, es estable durante el liofilización y se puede aplicar como un agente o adyuvante inmunoestimulante . De preferencia, el complejo del polímero portador de carga puede inducir la citoquina IFN-alfa anti-viral.
En particular, el portador polimérico formado por componentes catiónicos ligados con disulfuro permite considerablemente variar su contenido peptídico o polimérico y de esta forma modular sus propiedades biofísicas/bioquímicas, en particular las propiedades catiónicas del portador polimérico, muy fácilmente y rápido, por ejemplo mediante la incorporación como componentes catiónicos los mismos o diferentes péptidos o polímeros catiónicos y opcionalmente agregar otros componentes en el portador polimérico. Incluso aunque consiste de unidades monoméricas muy pequeñas no tóxicas, el portador polimérico forma una secuencia de unión catiónica larga que proporciona una fuerte condensación de la carga de ácido nucleico y estabilidad del complejo. Bajo las condiciones de reducción del citosol (por ejemplo GSH citosólico) , el complejo se degrada rápidamente en sus componentes (catiónicos) que se degradan adicionalmente (por ejemplo, oligopéptidos ) . Esto apoya la liberación de la carga de ácido nucleico en el citosol. Debido a la degradación en pequeños oligopéptidos o polímeros en el citosol, no se observa toxicidad como la conocida para los oligopéptidos o polímeros altos moleculares, por ejemplo a partir de la poliarginina alta molecular .
Por consiguiente, el portador polimérico del complejo de carga con portador polimérico puede comprender diferente péptidos, proteínas o polímeros catiónicos o policatiónicos (cortos) seleccionados de los péptidos, proteínas o polímeros (no peptídico) catiónicos o policatiónicos como se definió anteriormente, opcionalmente junto con los componentes adicionales, como se define en la presente.
Adicionalmente, el portador polimérico del complejo de carga con portador polimérico, como se definió anteriormente, de mayor preferencia al menos uno de los diferentes péptidos o polímeros (no peptídicos) catiónicos o policatiónicos (cortos) que forman la base para el portador polimérico vía la reticulación con disulfuro, puede ser, de preferencia antes de la reticulación con disulfuro, modificado con al menos un componente adicional. Alternativamente, el portador polimérico tal como se puede modificar con al menos un componente adicional. También puede comprender opcionalmente al menos un componente adicional, que típicamente forma el disulfuro del portador polimérico junto con los otros péptidos catiónicos o policatiónicos (cortos), como se definió anteriormente, vía una reticulación con disulfuro.
Para permitir la modificación de un péptido o polímero catiónico o policatiónico (no peptídico) como se definió anteriormente, cada uno de los componentes del portador polimérico pueden (de preferencia antes incluso de la reticulación con disulfuro) también contener al menos una porción funcional adicional, que permite la unión de estos componentes adicionales, como se define en la presente. Estas porciones funcionales se pueden seleccionar de funcionalidades que permitan la unión de componentes adicionales, por ejemplo, las funcionalidades como se define en la presente, por ejemplo mediante la formación de amidas (por ejemplo, ácidos carboxilicos , ácidos sulfónicos, aminas, etc.), mediante una adición Michael (por ejemplo, porciones de maleinimida, carbonilos , ß insaturados, etc.), mediante química clic (por ejemplo, azidas o alquinas), mediante metátesis de alquenos/alquinas (por ejemplo alquenos o alquinas), formación de iminas o hidrozona (aldehidos o cetonas, hidrazinas, hidroxilaminas , aminas), reacciones de complejación (avidina, biotina, proteína G) o Componentes que permitan reacciones de sustitución tipo Sn (por ejemplo, halogenalcanos, tioles, alcoholes, aminas, hidrazinas, hidrazidas, ésteres de ácido sulfónico, sales de oxifosfonio) u otras porciones químicas que se puedan utilizar en la unión de componentes adicionales.
De acuerdo con una modalidad en particular preferida, el componente adicional que puede estar contenido en el portador polimérico o que se puede utilizar para modificar los diferentes péptidos o polímeros (no peptídicos) catiónicos o policatiónicos (cortos) que forman la base para el portador polimérico del complejo de carga con portador polimérico es un componente de aminoácido (AA) que por ejemplo puede modificar las propiedades biofísicas/bioquímicas del portador polimérico como se define en la presente. De acuerdo con la presente invención, el componente de aminoácido (AA) comprende una serie de aminoácidos de preferencia en una variación de aproximadamente 1 hasta 100, de preferencia en una variación de aproximadamente 1 hasta 50, de mayor preferencia seleccionado de una serie que comprende 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 ó 15-20, o se puede seleccionar de una variación formada por cualquiera de los dos valores mencionados anteriormente. En este contexto los aminoácidos de componente de aminoácido (AA) se pueden seleccionar independientemente entre sí. Por ejemplo, si en el portador polimérico están presentes dos o más componentes (AA) los mismos pueden ser iguales o pueden ser diferentes entre sí.
El componente de aminoácido (AA) puede contener o puede estar flanqueado (por ejemplo terminalmente ) mediante una porción que contenga -SH que permita introducir este componente (AA) vía una enlace disulfuro en el portador polimérico como se define en la presente. En el caso específico de que la porción que contiene -SH represente una cisterna, el componente de aminoácido (AA) también se puede leer como -Cys- (??) -Cys- en donde Cys representa cisteína y proporciona la porción -SH- necesaria para un enlace disulfuro. La porción que contiene -SH también se puede introducir en el componente de aminoácido (AA) utilizando cualquiera de las modificaciones o reacciones como se mostró anteriormente para el componente catiónico o cualquiera de sus componentes .
Además, el componente de aminoácido (AA) se puede proporcionar con dos porciones -SH- (o incluso más), por ejemplo en una forma representada por la fórmula HS- (AA) -SH para permitir la unión a dos funcionalidades vía enlaces disulfuro, por ejemplo, si el componente de aminoácido (AA) se utiliza como un ligador entre dos componentes adicionales (por ejemplo, como un ligador entre dos polímeros catiónicos) . En este caso, una porción -SH de preferencia está protegida en un primer paso utilizando un grupo protector como se conoce en la técnica, conduciendo a un componente de aminoácido (AA) de la fórmula grupo protector de HS-(AA)-S-. Luego, el componente de aminoácido (AA) puede estar unido a un componente adicional del portador polimérico, para formar un primeros enlace disulfuro vía la porción -SH no protegida. La porción -SH- protegida luego típicamente se desprotege y se une a una porción -SH- libre adicional de un componente adicional del portador polimérico para formar una segunda enlace disulfuro.
Alternativamente, el componente de aminoácido (AA) se puede proporcionar con otras funcionalidades como ya se describió anteriormente para los otros componentes del portador polimérico, lo cual permite la unión del componente de aminoácido (AA) a cualquiera de los componentes del portador polimérico.
En las modalidades, en donde el componente de aminoácido (AA) está ligado vía enlaces disulfuro al portador polimérico, se prefiere que el ligamiento con disulfuro no se realice vía un reticulante, tal como un reticulante de 3,6-dioxa-1, 8-octanditiol (DODT) .
De esta forma, el componente de aminoácido (AA) se puede unir a componentes adicionales del portador polimérico con o sin la utilización de un ligamiento disulfuro. La unión sin utilizar ligamiento disulfuro se puede llevar a cabo mediante cualquiera de las reacciones descritas anteriormente, de preferencia al unir el componente de aminoácido (AA) al otro componente del portador polimérico utilizando una química de amidas como se define en la presente. Si se desea o es necesario, el otro término del componente de aminoácido (AA) , por ejemplo el término N- o C, se puede utilizar para acoplar otro componente, por ejemplo un ligando L. Para este fin, el otro término del componente de aminoácido (AA) de preferencia comprende o está modificado para que comprenda una funcionalidad adicional, por ejemplo una especie de alquina (véase anteriormente) que se puede utilizar para agregar el otro componente vía, por ejemplo química clic. Si el ligando está unido vía un enlace de ácido lábil, el enlace de preferencia se extrae por fermentación en el endosoma y el portador polimérico presenta un componente de aminoácido (AA) en su superficie.
El componente de aminoácido (AA) se puede presentar como un componente adicional del portador polimérico como se definió anteriormente, por ejemplo como un ligador entre los componentes catiónicos por ejemplo, como un ligador entre un péptido catiónico y un péptido catiónico adicional, como un ligador entre un polímero catiónico y un polímero catiónico adicional, como un ligador entre un péptido catiónico y un polímero catiónico, todos de preferencia como se define en la presente, o como un componente adicional del portador polimérico, por ejemplo al unir el componente de aminoácido (AA) al portador polimérico o un componente del mismo, por ejemplo, vía cadenas laterales, porciones de -SH o vía porciones adicionales como se define en la presente, en donde el componente de aminoácido (AA) de preferencia está modificado por consiguiente.
De acuerdo con una alternativa adicional y particularmente preferida, el componente de aminoácido (AA) , se puede utilizar para modificar al portador polimérico, en particular el contenido de los componentes catiónicos en el portador polimérico como se definió anteriormente.
En este contexto se prefiere, que el contenido de componentes catiónicos en el portador polimérico sea al menos del 10%, 20%, o 30%, de preferencia al menos 40%, de mayor preferencia al menos 50%, 60% o 70%, aunque también de preferencia al menos 80%, 90%, o incluso 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o 100%, con la máxima preferencia al menos 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o 100%, o puede estar en la variación de aproximadamente 30% hasta 100%, de mayor preferencia en la variación de aproximadamente 50% hasta 100%, incluso de preferencia en la variación de aproximadamente 70% hasta 100%, por ejemplo 70, 80, 90 o 100%, o en una variación formada por cualquiera de dos de los valores mencionados anteriormente, con la condición de que el contenido de todos los componentes en el portador polimérico sea del 100%.
En el contexto de la presente invención, el componente de aminoácido (AA) se puede seleccionar de las siguientes alternativas.
De acuerdo con una primera alternativa, el componente de aminoácido (AA) puede ser un componente de aminoácido (AA) aromático. La incorporación de los aminoácidos aromáticos o secuencias como el componente de aminoácido (AA) aromático en el portador polimérico de la presente invención permite una unión diferente (segunda) del portador polimérico con el ácido nucleico debido a las interacciones de los aminoácidos aromáticos con las bases de la carga de ácido nucleico en contraste con la unión del mismo mediante secuencias catiónicas cargadas de la molécula del portador polimérico a la estructura de fosfato. Esta interacción se puede presentar por ejemplo mediante intercalaciones o mediante una unión de surco menor o mayor. Este tipo de interacción no está propensa a descompactación por participes de complejación aniónica . (por ejemplo Heparina, ácidos hialurónicos ) que se encuentran principalmente en la matriz extracelular ín vivo y también son menos susceptibles a los efectos de sales.
Para este fin, los aminoácidos en el componente de aminoácido (AA) aromático se pueden seleccionar a partir de ya sea los mismos o diferentes aminoácidos aromáticos por ejemplo seleccionados de Trp, Tyr, o Phe .
Adicionalmente, el componente de aminoácido (AA) aromático puede contener o puede estar flanqueado por una porción que contenga -SH lo que permite introducir este componente via una enlace disulfuro como una parte adicional del portador polimérico como se definió anteriormente, por ejemplo como un ligador. Esta porción que contiene -SH puede ser cualquier porción, como se define en la presente, adecuada para acoplar un componente, como se define en la presente a un componente adicional como se define en la presente. Como un ejemplo, esta porción que contiene -SH puede ser una cisterna .
Adicionalmente, el componente de aminoácido (AA) aromático puede contener o representar al menos una prolina que puede servir como un disyuntor de estructuras de secuencias más largas de Trp, Tyr y Phe en el componente de aminoácido (AA) aromático, de preferencia dos, tres o más prol inas .
De acuerdo con una segunda alternativa, el componente de aminoácido (AA) puede ser un componente de aminoácido (AA) hidrofilico (y de preferencia no cargado polar) . La incorporación de aminoácidos hidrofilico (y de preferencia no cargados polares) o las secuencias como el componente de aminoácido (AA) hidrofilico (y de preferencia no cargado polar) en el portador polimérico de la presente invención permite una unión más flexible a la carga de ácido nucleico. Esto conduce a una compactacion más efectiva de la carga de ácido nucleico y por lo tanto a una mejor protección contra nucleasas y una descompactación no deseado. Esto también permite la provisión de un portador polimérico (largo) que exhiba una carga catiónica reducida sobre el portador total y en este contexto a mejores propiedades ajustadas de unión, si se desea o es necesario.
Para este fin, los aminoácidos en el componente de aminoácido (AA) hidrofilico (y de preferencia no cargado polar) se puede seleccionar de cualquiera o diferentes aminoácidos hidrofílicos (y de preferencia no cargados polar) por ejemplo seleccionado de Thr, Ser, Asn o Gln.
Adicionalmente, el componente de aminoácido (AA) hidrofilico (y de preferencia no cargado polar) puede contener o puede estar flanqueado por una porción que contenga -SH, lo que permite introducir este componente vía una enlace disulfuro como una parte adicional de la fórmula (I) genérica anterior, por ejemplo como un ligador. Esta porción que contiene -SH puede ser cualquier porción como se describe en la presente adecuada para acoplar un componente, como se define en la presente a un componente adicional como se define en la presente. Como un ejemplo, esta porción que contiene -SH puede ser una cisteina.
Adicionalmente, el componente de aminoácido (AA) hidrofílico (y de preferencia no cargado polar) puede contener al menos una prolina que puede servir como un disyuntor de estructuras de secuencias más largas de Ser, Thr y Asn en el componente de aminoácido (AA) hidrofílico (y de preferencia no cargado polar) , de preferencia dos, tres o más prolinas .
De acuerdo con una tercera alternativa, el componente de aminoácido (AA) puede ser un componente de aminoácido (AA) lipofílico. La incorporación de aminoácidos lipofilicos o secuencias como el componente de aminoácido (AA) lipofílico en el portador polimérico de la presente invención permite una compactación más fuerte de la carga ácido nucleico y/o el portador polimérico y su carga de ácido nucleico cuando se está formando un complejo. Esto es particularmente debido a las interacciones de una o más cadenas poliméricas del portador polimérico, en particular de las secciones lipofílicas del componente de aminoácido (AA) lipofílico y la carga de ácido nucleico. Esta interacción de preferencia agregará una estabilidad adicional al complejo entre el portador polimérico y su carga de ácido nucleico. Esta estabilización se puede comparar en alguna medida con una clase de reticulación no covalente entre diferentes cadenas poliméricas . En especial en un entorno acuoso, esta interacción típicamente es fuerte y proporciona un efecto significativo .
Para este fin, los aminoácidos en el componente de aminoácido (AA) lipofílico se puede seleccionar de ya sea los mismos o diferentes aminoácidos lipofílicos por ejemplo, seleccionados de Leu, Val, lie, Ala, et .
Adicionalmente , el componente de aminoácido (AA) lipofílico puede contener o puede estar flanqueado por una porción que contenga -SH que permita introducir este componente vía una enlace disulfuro como una parte adicional del portador polimérico anterior, por ejemplo como un ligador. Esta porción que contiene -SH puede ser cualquier porción, como se define en la presente, adecuada para acoplar un componente, como se define en la presente a un componente adicional como se define en la presente. Como un ejemplo, esta porción que contiene -SH puede ser una cisteína.
Adicionalmente, el componente de aminoácido (AA) lipofílico puede contener al menos una prolina, que puede servir como un disyuntor de estructuras de secuencias más largas de Leu Val, lie, Ala y Met en el componente de aminoácido (AA) lipofílico, de preferencia dos, tres o más prolinas .
Por último, de acuerdo con una cuarta alternativa, el componente de aminoácido (AA) puede ser un componente de aminoácido (AA) básico débil. La incorporación de aminoácidos básicos débiles o las secuencias como el componente de aminoácido (AA) básico débil en el portador polimérico de la presente invención puede servir como una esponja protónica y facilita el escape endosómico (también denominado liberación endosómica) (efecto de esponja protónica). La incorporación de este componente de aminoácido (AA) básico débil de preferencia mejora la eficiencia de transfeccion.
Para este fin, los aminoácidos en el componente de aminoácido (AA) básico débil se pueden seleccionar de ya sea los mismos o diferentes aminoácidos débiles por ejemplo seleccionados de histidina o aspartato (ácido aspártico) .
Adicionalmente , el componente de aminoácido (AA) básico débil puede contener o puede estar flanqueado por una porción que contenga -SH que permite introducir este componente vía una enlace disulfuro como una parte adicional de la fórmula (I) genérica anterior, por ejemplo como un ligador. Esta porción que contiene -SH puede ser cualquier porción, como se define en la presente, adecuada para acoplar un componente como se define en la presente, a un componente adicional, como se define en la presente.
Adicionalmente, el componente de aminoácido (AA) básico débil puede contener al menos una prolina, que puede servir como un disyuntor de estructuras para secuencias más largas de histidina o aspartato (ácido aspártico) en el componente de aminoácido (AA) básico débil, de preferencia dos, tres o más prolinas.
De acuerdo con una quinta alternativa, el componente de aminoácido (AA) puede ser un péptido de señal o una secuencia de señal, una señal o secuencia de localización, un señal o secuencia de localización nuclear (NLS) , un anticuerpo, un péptido para penetración celular, (por ejemplo, TAT), etc. De preferencia, este componente de aminoácido (AA) está unido al portador polimérico o a otro componente del portador polimérico vía un enlace disulfuro (reversible) . En este contexto, el péptido de señal o la secuencia de señal, una señal o secuencia de localización, una señal o secuencia de localización nuclear (NLS) , un anticuerpo, un péptido para penetración celular, (por ejemplo, TAT), etc. comprende adicionalmente al menos una porción -SH-. En este contexto, un péptido de señal, una señal o una secuencia de localización o una señal o secuencia de localización nuclear (NLS), se pueden utilizar para dirigir el complejo de carga con portador polimérico inventivo a células blanco especificas (por ejemplo, hepatocitos o células presentadoras de antigenos) y de preferencia permite un translocalización del portador polimérico hacia un blanco especifico, por ejemplo, en la célula, en el núcleo, en el compartimiento endosómico, las secuencias para la matriz mitocondrial , las secuencias de localización para la membrana plasmática, las secuencias de localización para el aparato de Golgi, el núcleo, el citoplasma y el citoesqueleto , etc. este péptido de señal, una señal o secuencia de localización o una señal de localización nuclear se pueden utilizar para el transporte de cualquiera de los ácidos nucleicos definidos en la presente, de preferencia un ARN o un ADN, de mayor preferencia un ARNsh o un ADNp, por ejemplo en el núcleo. Sin estar limitados a los mismos, este péptido de señal, una señal o secuencia de localización o una señal de localización nuclear pueden comprender, por ejemplo, secuencias de localización para el retículo endoplásmico . Los ejemplos de péptidos de señal secretora, como se define en la presente, incluyen, sin estar limitados a los mismos, péptidos de señal de moléculas de HC clásicas o no clásicas (por ejemplo, secuencias de señal de moléculas I y II de MHC, por ejemplo de la molécula clase I de MHC HLA-A*0201), los péptidos de señal de citoquinas o inmunoglobulinas como se define en la presente, los péptidos de señal de la cadena invariante de inmunoglobulinas o anticuerpos, como se define en la presente, los péptidos de señal de Lampl, Tapasin, Erp57, Calreticulin, Calnexin, y proteínas asociadas de membrana adicionales o de proteínas asociadas con el retículo endoplásmico (ER) o el compartimiento endosómico-lisosómico . De acuerdo con la presente invención, se pueden utilizar los péptidos de señal particularmente preferidos de la molécula clase I de MHC HLA-A*0201. Este componente adicional puede estar unido por ejemplo a un polímero catiónico o a cualquier otro componente del portador polimérico, como se define en la presente. De preferencia este péptido de señal, la señal o secuencia de localización o la señal o secuencia de localización nuclear (NLS) , está unido al portador polimérico o a otro componente del portador polimérico vía un enlace disulfuro (reversible) . Para este fin, el componente (AA) comprende adicionalmente al menos una porción -SH como se define en la presente. La unión a cualquiera de los componentes del portador polimérico también se puede llevar a cabo utilizando un enlace de ácido lábil, de preferencia una cadena lateral de cualquiera de los componentes del portador polimérico que permita separar o liberar el componente adicional a menores valores de pH, por ejemplo a valores de pH fisiológicos como se define en la presente .
Adicionalmente, de acuerdo con otra alternativa, el componente de aminoácido (AA) puede ser un péptido o proteína funcional, que puede modular la funcionalidad del portador polimérico por consiguiente. Estos péptidos o proteínas funcionales, como el componente de aminoácido (AA) de preferencia comprenden cualesquiera péptidos o proteínas, como se define en la presente, por ejemplo como se define más adelante como proteínas terapéuticamente activas. De acuerdo con una alternativa, estos péptidos o proteínas funcionales pueden comprender los denominados péptidos para penetración celular (CPPs) o péptidos catiónicos para transportación. En particular se prefieren los CPP que inducen un cambio conformacxonal suministrado por el pH en el endosoma y conducen a una liberación mejorada del portador polimérico (en el complejo con un ácido nucleico) proveniente del endosoma mediante la inserción en la capa lipídica del liposoma. Estos péptidos para penetración celular (CPP) o péptidos catiónicos para transportación, puede incluir, sin estar limitados a los mismos, protamina, nucleolina, espermina o espermidina, oligo- o poli-L-lisina (PLL), polipéptidos básicos, oligo o poli-arginina, péptidos para penetración celular (CPP) , CPP quiméricos, tales como Transportan, o péptidos MPG, péptidos de unión a VIH, Tat, VIH-1 Tat (VIH) , péptidos derivados de Tat, miembros de la familia de penetratina, por ejemplo Penetratina, péptidos derivados de Antenapedia (en particular provenientes de Drosophila antennapedia) , pAntp, plsl, etc., derivados antimicrobianos CPP por ejemplo, Buforin-2, Bac715-24, SynB, SynB(l), pVEC, péptidos derivados de hCT, SAP, MAP , KALA, PpTG20, Loligomere, FGF, Lactoferrina , histonas, péptidos derivados o análogos de VP22, HSV, VP22 (Herpes simplex) , MAP, KALA o dominios para transducción proteinica (PTD, PpT620, péptidos ricos en prolina, péptidos ricos en arginina, péptidos ricos en lisina, Pep-1, L-oligómeros , péptidos de Calcitonina, etc. Este componente de aminoácido (AA) también puede estar unido a cualquier componente del portador polimérico como se define en la presente. De preferencia, está unido al portador polimérico o a otro componente del portador polimérico via un enlace disulfuro (reversible) . Para el fin anterior, el componente de aminoácido (AA) de preferencia comprende al menos una porción -SH como se define en la presente. La unión a cualquiera de los componentes del portador polimérico también se puede llevar a cabo utilizando una porción -SH o un enlace de ácido lábil, de preferencia via un cadena lateral de cualquiera de los componentes del portador polimérico que permita separar o liberar el componente adicional a menores valores de -pH, por ejemplo a valores de pH fisiológico como se define en la presente .
De acuerdo con una última alternativa, el componente de aminoácido (AA) puede consistir de cualquier péptido o proteina que pueda ejecutar cualquier función favorable en la célula. En particular se prefieren los péptidos o proteínas seleccionados de proteínas o péptidos terapéuticamente activos, provenientes de antígenos, por ejemplo, antígenos tumorales, antígenos patogénicos (antígenos animales, antígenos virales, antígenos de protozoarios , antígenos bacterianos, antígenos alérgicos), antígenos autoinmunes, o antígenos adicionales, provenientes de alérgenos, provenientes de anticuerpos, provenientes de proteínas o péptidos inmunoestimuladores , provenientes de receptores de células T antígeno-específicas , o de cualquier otra proteína o péptido adecuados para una aplicación específica (terapéutica) como se definirá más adelante para ácidos nucleicos codificantes. En particular se prefieren los epítopes peptídicos provenientes de al menos un antígeno (un antígeno proveniente de un patógeno asociado con una enfermedad infecciosa; un antígeno asociado con alergia o una enfermedad alérgica; un antígeno asociado con una enfermedad autoinmune; o un antígeno asociado con un cáncer o una enfermedad tumoral) como se define en la presente.
En caso de que el componente de aminoácido (AA) esté unido covalentemente al complejo de carga con portador polimérico, en particular al portador polimérico, el componente de aminoácido (AA) de preferencia no es ovalbúmina o un fragmento de ovalbúmina. De preferencia, el componente de aminoácido no es ovalbúmina o un fragmento de ovalbúmina.
Debido a la naturaleza peptidica del componente de aminoácido, por consiguiente también se aplica y se abarca explícitamente a la definición de péptido, proteína, o fragmento, variante y derivado del mismo.
Además, los componentes (AA) se pueden preparar mediante todos los métodos conocidos por alguien con experiencia normal o mediante la producción de péptidos o proteínas recombinantes o mediante la síntesis de péptidos como se describe en la presente.
El portador polimérico puede comprender al menos uno de los péptidos, proteínas o polímeros catiónicos o policatiónicos mencionados anteriormente o componentes adicionales, por ejemplo (AA) , en donde cualquiera de las alternativas anteriores se puede combinar entre sí, y se pueden formar al polimerizar los mismos en una reacción de condensación de polimerización vía sus porciones -SH-.
De acuerdo con otra modalidad, el portador polimérico del complejo de carga con portador polimérico o los componentes individuales de los mismos, por ejemplo de los péptidos, proteínas o polímeros catiónicos o policatiónicos mencionados anteriormente o los componentes adicionales, por ejemplo (AA) , se pueden modificar adicionalmente con un ligando, de preferencia un carbohidrato, de mayor preferencia un azúcar, incluso con la máxima preferencia mañosa. De preferencia, este ligando está unido al portador polimérico o a un componente del portador polimérico vía un enlace disulfuro (reversible) o vía una adición Michael. En caso de que el ligando esté unido por un enlace disulfuro el ligando comprende adicionalmente al menos una porción -SH-. Estos ligandos se pueden utilizar para dirigir el complejo de carga con portador polimérico hacia células blanco especificas (por ejemplo, hepatocitos o células presentadoras de antigenos). En este contexto, se prefiere en particular la mañosa como el ligando en caso de que las células dendriticas sean el blanco especialmente para vacunación o fines adyuvantes.
De acuerdo con una modalidad adicional de la invención, el complejo de carga con portador polimérico puede comprender componentes (AA) , como se definió anteriormente, que no comprenden porciones -SH. Estos componentes (AA) se pueden agregar antes o durante la reacción del comple ación de al menos una molécula de ácido nucleico. Por lo tanto, los componentes (AA) están incorporados (no covalentemente en la complejo de carga con portador polimérico sin la inclusión de los componentes (AA) en el portador polimérico mismo mediante polimerización (covalente) .
De acuerdo con una modalidad especifica, el complejo de carga con portador polimérico entero puede estar formado por una condensación de polimerización (de al menos uno) de los péptidos, proteínas o polímeros catiónicos o pol icatiónicos mencionados anteriormente o componentes adicionales, por ejemplo (AA) , vía sus porciones -SH- en un primer paso y complejar el ácido nucleico con este portador polimérico en un segundo paso. El portador polimérico de esta forma puede contener una serie de al menos uno o incluso más de los mismos o diferentes péptidos, proteínas o polímeros catiónicos o policatiónicos mencionados anteriormente, o componentes adicionales, por ejemplo (AA) , el número determinado de preferencia por la variación anterior.
De acuerdo con una modalidad específica alternativa, el complejo de carga con portador polimérico está formado al llevar a cabo la condensación de polimerización de al menos uno de los péptidos, proteínas o polímeros catiónicos o policatiónicos mencionados anteriormente o componentes adicionales, por ejemplo (AA) , vía sus porciones -SH- simultáneamente para complejar la carga de ácido nucleico con el portador polimérico (preparado in sí tu) . Asimismo, de esta forma también puede contener una serie de al menos uno o incluso más de los mismos o diferentes péptidos, proteínas o polímeros catiónicos o policatiónicos definidos anteriormente o componentes adicionales, por ejemplo (AA) , el número de preferencia determinado por la variación anterior.
El complejo de carga con portador polimérico comprende adicionalmente como una carga al menos un ácido nucleico (molécula) . En el contexto de la presente invención, esta molécula de ácido nucleico puede ser cualquier ácido nucleico adecuado, seleccionado de cualquier ADN (de cadena individual o doble cadena), de preferencia, sin estar limitados al mismo, por ejemplo ADN genómico, moléculas de ADN de cadena individual, moléculas de ADN de doble cadena, ADN codificante, cebadores de ADN, soluciones de ensayo de ADN, ADN inmunoestimulador , un oligonucleótido de ADN (corto) ( oligodesoxirribonucleótidos (cortos)), o se puede seleccionar por ejemplo de cualquier PNA (ácido nucleico peptídico) o se puede seleccionar por ejemplo de cualquier ARN (de cadena individual o de doble cadena) , de preferencia, sin estar limitado al mismos, un oligonucleótido de ARN (corto) ( oligorribonucleótido (corto)), un ARN codificante, un ARN mensajero (ARNm) , un ARN inmunoestimulador , un ARN de interferencia pequeña (ARNsi) , un ARN antisentido, un micro-ARN, un ARN nuclear pequeño (ARNsn) , un ARN (sh) de horquilla pequeña o ribointerruptores , ribozimas o aptámeros; etc. La molécula de ácido nucleico del complejo de carga con portador polimérico también puede ser un ARN ribosómico (ARNr) , un ARN de trasferencia (ARNt), un ARN mensajero (ARNm) , o un ARN viral (ARNv) . De preferencia, la molécula de ácido nucleico del complejo de carga con portador polimérico es un ARN. De mayor preferencia, la molécula de ácido nucleico del complejo de carga con portador polimérico es un ARN de cadena individual (lineal) , incluso de mayor preferencia un ARNm o un ARN inmunoestimulador . En el contexto de la presente invención, un ARNm típicamente es un ARN, que está compuesto de diversos elementos, por ejemplo, una estructura 5' -CAP óptima, una región 5'-UTR óptima, un sitio de unión ribosómica colocado en la dirección 5' seguido por una región codificante, una región 3'-UTR opcional, que puede estar seguida por una prolongación poli-A (y/o una prolongación poli-C) . Un ARNm se puede presentar con un ARN mono-, di-, o incluso multicistrónico, es decir, un ARN que porte las secuencias codificantes de uno, dos o más proteínas o péptidos . Estas secuencias codificantes en el ARNm di-, o incluso multicistrónico pueden estar separadas por al menos una secuencia IRES, por ejemplo, como se define en la presente .
Además, el ácido nucleico del complejo de carga con portador polimérico puede ser un ácido nucleico (molécula) de cadena individual o doble (al cual que también se puede denominar como ácido nucleico (molécula) debido a una asociación no covalente de dos (moléculas) de ácidos nucleicos de cadena individual) o un ácido nucleico parcialmente de doble cadena o parcialmente de cadena individual, que son al menos parcialmente auto-complementario (ambas moléculas de ácido nucleico parcialmente de doble cadena o parcialmente de cadena individual típicamente están formadas por una molécula de ácido nucleico de cadena individual más larga y una más corta o mediante dos moléculas de ácido nucleico de cadena individual, que ambos tienen igual longitud, en donde una molécula de ácido nucleico de cadena individual en parte es complementaria con la otra molécula de ácido nucleico de cadena individual y de esta forma, ambas forman una molécula de ácido nucleico de doble cadena en esta región, es decir un ácido nucleico (molécula) pardamente de doble cadena o parcialmente de cadena individual. De preferencia, el ácido nucleico (molécula) puede ser una molécula de ácido nucleico de cadena individual. Además, el ácido nucleico (molécula) puede ser una molécula de ácido nucleico circular o lineal, de preferencia una molécula de ácido nucleico lineal.
De acuerdo con una alternativa, la molécula de ácido nucleico del complejo de carga con portador polimérico puede ser un ácido nucleico codificante, por ejemplo un ADN o ARN. Este ADN o ARN codificante puede ser cualquier ADN o ARN como se define en la presente. De preferencia, este ADN o ARN codificante puede ser un ADN o ARN de cadena individual o de cadena doble, de mayor preferencia un ADN o ARN de cadena individual, y/o un ADN o ARN circular o lineal, de mayor preferencia un ADN o ARN lineal. Incluso de mayor preferencia, el ADN o ARN codificante puede ser un ADN o ARN de cadena individual (lineal) . De mayor preferencia, la molécula de ácido nucleico de acuerdo con la presente invención puede ser un ARN mensajero (ARNm) (de cadena individual (lineal)) . Este ARNm se puede presentar como un ARN mono-, di-, o incluso multicistrónico, es decir un ARN que porta las secuencias codificantes de una, dos o más proteínas o péptidos. Estas secuencias codificantes en el ARNm di-, o incluso multicistrónico pueden estar separadas por al menos una secuencia IRES, por ejemplo, como se define en la presente. Ácidos nucleicos codificantes: La molécula de ácido nucleico del complejo de carga con portador polimérico puede codificar para una proteína o un péptido que se puede seleccionar, sin estar restringido al mismo, por ejemplo, de proteínas o péptidos terapéuticamente activos, incluyendo proteínas adyuvantes, provenientes de antígenos, por ejemplo, antigenos tumorales, antígenos patogénicos (por ejemplo seleccionados de, antígenos animales, de antígenos virales, de antígenos de protozoarios , de antígenos bacterianos), antígenos alergénicos, antígenos autoinmunes , o antígenos adicionales, de alérgenos, provenientes de anticuerpos, provenientes de proteínas o péptidos inmunoestimuladores , provenientes de receptores de células T antígeno específicos, o provenientes de cualguier otra proteína o péptido adecuado para una aplicación específica (terapéutica), en donde el ácido nucleico codificante se puede transportar al interior de una célula, un tejido o un organismo y la proteína se puede expresar posteriormente en esta célula, tejido u organismo. En este contexto, el ácido nucleico adicionalmente puede codificar para un péptido de señal, como se define en la presente. a) Proteínas terapéuticamente activas En el contexto de la presente invención, las proteínas o péptidos terapéuticamente activos se pueden codificar por la molécula de ácido nucleico del complejo de carga con portador polimérico definido en la presente. Las proteínas terapéuticamente activas se definen en la presente como proteínas que tienen un efecto sobre la sanación, para evitar profilácticamente o tratar terapéuticamente una enfermedad, de preferencia como se define en la presente, o son proteínas que necesita un individuo. Éstas se pueden seleccionar de cualquier proteína recombinante o aislada de origen natural o diseñada sintéticamente conocida por un experto de la técnica anterior. Sin estar restringidas a las mismas, las proteínas terapéuticamente activas pueden comprender proteínas, capaces de estimular o inhibir la transducción de señal en la célula, por ejemplo citoquinas, linfoquinas, monoquinas, factores de crecimiento, receptores, moléculas para transducción de señal, factores de transcripción, etc.; anticoagulantes; antitrombinas ; proteínas antialérgicas; factores apoptóticos o proteínas relacionadas con apoptosis, enzimas terapéuticas activas y cualquier proteína o péptido conectado con cualquier enfermedad adquirida o cualquier enfermedad hereditaria o favorable para el tratamiento de cualquier enfermedad adquirida o cualquier enfermedad hereditaria.
Una proteína terapéuticamente activa que puede estar codificada por la molécula de ácido nucleico del complejo de carga con portador polimérico definido en la presente también puede ser una proteína adyuvante. En este contexto, una proteína adyuvante de preferencia se debe entender como cualquier proteína que sea capaz de producir una respuesta inmunitaria innata como define en la presente. De preferencia, esta respuesta inmunitaria innata comprende la activación de un receptor para reconocimiento de patrones, tal como por ejemplo un receptor seleccionado de la familia de receptores similares a Toll (TLR) , incluyendo por ejemplo un receptor similar a Toll seleccionado de TLR1 a TLR10 humano o a partir de los receptores TLR1 a TLR13 similares a Toll murinos. De mayor preferencia, la proteina adyuvante se selecciona de proteínas adyuvantes humanas o de proteínas adyuvantes patogénicas, seleccionadas del grupo que consiste de, sin estar limitadas a las mismas, proteínas bacterianas, proteínas de protozoarios, proteínas virales, o proteínas fúngales, proteínas animales, en particular provenientes de proteínas adyuvantes bacterianas. Además, también se pueden utilizar ácidos nucleicos que codifican para proteínas humanas implicadas en efectos adyuvantes (por ejemplo, ligandos de receptores para reconocimiento de patrones, receptores para reconocimiento de patrones, proteínas de las trayectorias para transducción de señal, factores de transcripción o citoquinas) . b) Antígenos La molécula de ácido nucleico del complejo de carga on portador polimérico definido en la presente alternativamente puede codificar para un antigeno. En el contexto de la presente invención, los antigenos según estén codificados por la molécula de ácido nucleico del complejo de carga con portador polimérico definido en la presente, típicamente comprenden cualquier antígeno, epítope antigénico o péptido antigénico, que quede bajo la definición anterior, de mayor preferencia los antí genos proteínicos y peptídicos, por ejemplo, antígenos tumorales, antígenos alergénicos , auto-antígenos auto-inmunes, antígenos patogénicos, etc. En particular, los antígenos según se codifican por la molécula de ácido nucleico del complejo de carga con portador polimérico definido en la presente, pueden ser antígenos generados fuera de la célula, más típicamente antígenos no derivados del organismo hospedero (por ejemplo un ser humano) por sí mismo (es decir, antígenos no propios) aunque en su lugar derivados de células hospederas fuera del organismo hospedero, por ejemplo, antígenos virales, antígenos bacterianos, antígenos fúngales, antígenos protozoarios , antígenos animales, antígenos alergénicos, etc. Los antígenos alergénicos (antígenos de alergia) típicamente son antígenos, que provocan una alergia en un ser humano y se pueden derivar de ya sea un ser humano u otras fuentes. Adicionalmente , los antígenos según se codifican por la molécula de ácido nucleico del complejo de carga con portador polimérico definido en la presente, además pueden ser antigenos generados dentro de la célula, el tejido o el cuerpo. Estos antigenos incluyen antigenos derivados del organismo hospedero (por ejemplo un ser humano) mismo, por ejemplo, antigenos tumorales, antigenos propios o auto-antigenos, tales como los antigenos propios auto-inmunes, etc., aunque también pueden ser antigenos (no propios) como se define en la presente, que se hayan derivado originalmente de células hospederas fuera del organismo hospedero, pero que se fragmentan o degradan dentro del cuerpo, tejido o célula, por ejemplo mediante una degradación (de proteasa), metabolismo, etc. En este contexto, el antigeno según se codifica por la carga de ácido nucleico comprendida en el complejo de carga con portador polimérico se define como se describe más adelante para al menos un antigeno, el segundo ingrediente de la composición farmacéutica inventiva.
En este contexto en particular se prefiere que el antigeno o un fragmento, variante y/o derivado del mismo codificado por la carga de ácido nucleico sea el mismo antigeno que al menos un antigeno, como se define en la presente, según esté comprendido en la composición farmacéutica inventiva como un segundo ingrediente. Sin embargo, en una modalidad alternativa, el antigeno o un fragmento, variante y/o derivado del mismo codificado por la carga de ácido nucleico es un antigeno diferente como al menos un antigeno como se define en la presente, según esté comprendido en la composición farmacéutica inventiva como un segundo ingrediente. En el caso especifico de que un antigeno esté codificado por la carga de ácido nucleico, la molécula de ácido nucleico junto con el portador polimérico sirve como adyuvante o agente imuno-estimulante para inducir una respuesta inmunitaria innata no especifica, mientras que el antigeno proteinico o peptidico codificado que se expresa por la carga de ácido nucleico sirve como antigeno para inducir una respuesta inmunitaria adaptativa antigeno- especifica . c) Anticuerpos De acuerdo con una alternativa adicional, la molécula de ácido nucleico del complejo de carga con portador polimérico definido en la presente puede codificar para un anticuerpo o un fragmento de anticuerpo. De acuerdo con la presente invención, este anticuerpo se puede seleccionar de cualquier anticuerpo, por ejemplo cualesquiera anticuerpos producidos recombinantemente o de origen natural, conocidos en la técnica, en particular anticuerpos adecuados para fines terapéuticos, de diagnóstico o científicos, o anticuerpos que se hayan identificado con relación a enfermedades cancerosas específicas. En la presente, el término "anticuerpo" se utiliza en su sentido más amplio y cubre específicamente anticuerpos monoclonales y policlonales (incluyendo anticuerpos agonistas, antagonista, y bloqueadores o neutralizantes) y especies de anticuerpos con especificidad poliepitópica . De acuerdo con la invención, el término "anticuerpo" comprende típicamente cualquier anticuerpo conocido en la técnica (por ejemplo anticuerpos IgM, IgD, IgG, IgA y IgE) , tales como los anticuerpos de origen natural, los anticuerpos generados mediante inmunización en un organismo hospedero, los anticuerpos que se aislaron e identificaron a partir de anticuerpos de origen natural o los anticuerpos generados por inmunización en un organismo hospedero y producidos recombinantemente mediante métodos bimoleculares conocidos en la técnica, así como anticuerpos quiméricos, anticuerpos humanos, anticuerpos humanizados, anticuerpos biespecífieos, intra-cuerpos , es decir, anticuerpos expresados en células y localizados especialmente en compartimientos celulares específicos, y fragmentos y variantes de los anticuerpos mencionados anteriormente. En general, un anticuerpo consiste de una cadena ligera y una cadena pesada que tenga dominios tanto variables como constantes. La cadena ligera consiste de un dominio variable N-terminal, VL, y un dominio constante C-terminal, CL. Por el contrario, la cadena pesada del anticuerpo IgG, por ejemplo, comprende un dominio variable N-terminal, VH y tres dominios constantes, CH1, CH2 y CH3.
En el contexto de la presente invención, los anticuerpos según estén codificados por la molécula de ácido nucleico del complejo de carga con portador polimérico definido en la presente de preferencia pueden comprender anticuerpos de longitud total, es decir, anticuerpos compuestos de las cadenas pesada total y ligera total, como se describió anteriormente. Sin embargo, los derivados de anticuerpos tales como, fragmentos de anticuerpos, variantes o aductos también pueden estar codificados por la molécula de ácido nucleico del complejo de carga con portador polimérico definido en la presente. Los fragmentos del anticuerpo de preferencia se seleccionan de fragmentos de Fab, Fab' , F(ab' )2 Fe, Facb, pFc' , Fd y Fv de los anticuerpos (de longitud total) mencionados anteriormente. En general, los fragmentos de anticuerpos se conocen en la técnica. Por ejemplo, un fragmento Fab ("fragmento, unión antigénica") está compuesto de un domino constante y uno variable de cada una de las cadenas pesada y ligera. Los dos dominios variables unen el epitope sobre antigenos específicos. Las dos cadenas están conectadas vía un ligamiento disulfuro. Un fragmento scFv ("fragmento variable de cadena individua]"), por ejemplo, consiste típicamente de los dominios variables de las cadenas ligera y pesada. Los dominios están ligados mediante un ligamiento artificial, en general un ligamiento polipeptidico tal como un péptido compuesto de 15-25 residuos de glicina, prolina y/o serina.
En el contexto de la presente se prefiere que las cadenas diferentes del anticuerpo o fragmento de anticuerpo estén codificadas por una molécula de ácido nucleico multicistrónico . Alternativamente, las diferentes cepas del anticuerpo o fragmento del anticuerpo están codificadas por diversas (secuencias) de ácidos nucleicos monocistrónicos .
ARNsi : De acuerdo con una alternativa adicional, la molécula de ácido nucleico del complejo de carga con portador polimérico definido en la presente puede estar en la forma de ARNds, de preferencia ARNsi. Un ARNds, o un ARNsi, es de particular interés junto con el fenómeno de la interferencia del AR . La técnica in vitro de interferencia de ARN (ARNi) se basa en moléculas de ARN de doble cadena (ARNds), que activan la supresión secuencia específica de la expresión génica (Zamore (2001) Nat . Struct. Biol. 9: 746-750; Sharp (2001) gene Dev. 5:485-490: Hannon (2002) Nature 41: 244-251). En la transfección de células de mamífero con ARNds largo, la activación de la proteina quinasa R y RnasaL provoca efectos no específicos, tales como, por ejemplo, una respuesta a interferones (Stark et al. (1998) Annu. Rev. Biochera. 67: 227-264; He and Katze (2002) Viral Inmunol. 15: 95-119) . Estos efectos no específicos se evitan cuando se utiliza el denominado ARNsi más corto (ARN pequeño interferido), por ejemplo 21- a 23-mer, debido a que no se activan los efectos no específicos mediante un ARNsi que es más corto que 30 bp (Elbashir et al. (2001) Nature 411: 494-498) .
La molécula de ácido nucleico del complejo de carga con portador polimérico definido en la presente de esta forma puede ser un ARN de doble cadena (ARNds) que tenga una longitud de 17 hasta 29, de preferencia de 19 hasta 25, y que de preferencia sea al menos 90%, de mayor preferencia 95% y en especial 100% (de los nucleótidos de un ARNds) complementario con una sección de la molécula de ácido nucleico de una proteína o antígeno (terapéuticamente relevante) descrito (como ingrediente activo) más adelante o de cualquier proteína adicional como se describe en la presente, una sección ya sea codificante o una no codificante, de preferencia una sección codificante. Esta (sección de la) molécula de ácido nucleico se puede denominar en la presente como una "secuencia blanco" y puede ser cualquier molécula de ácido nucleico como se define en la presente, de preferencia un ADN genómico, ADNc, un ARN, por ejemplo un ARNm, etc., 90% complementario significa que con una longitud de un ARNds descrito en la presente de, por ejemplo, 20 nucleótidos, el ARNds contiene no más de 2 nucleótidos que no muestran complementariedad con la sección correspondiente de la secuencia blanco. La secuencia del ARN de doble cadena utilizado de acuerdo con la invención, sin embargo, de preferencia es totalmente complementario en su estructura general con una sección de la secuencia blanco. En este contexto, la molécula de ácido nucleico del complejo de carga con portador polimérico puede ser un ARNds que tenga la estructura 5' - (N17-29) -3, de preferencia que tenga la estructura general 5' - (N19-25) -3' , que tenga la estructura general 5 ' - (N19-2 ) -30 , o todavía de mayor preferencia que tenga la estructura general 5' - (N21-23) _3' , en donde para cada estructura general cada N es un nucleótido (de preferencia diferente) de una sección de la secuencia blanco, de preferencia que se selecciona de un número continuo de 17 hasta 29 nucleótidos de una sección de la secuencia blanco, y que esté presente en la estructura general 5' - (Ni7_29) -3' en su orden natural. En principio, todas las secciones que tengan una longitud de 17 hasta 29, de preferencia de 19 hasta 25, pares de bases que se presentan en la secuencia blanco pueden servir para la preparación de un ARNds como se define en la presente. Igualmente, los ARNds utilizados como la molécula de ácido nucleico de complejo de carga con portador polimérico también se pueden dirigir contra las secuencias de nucleótidos de una proteina o antígeno (relevante terapéuticamente) descritos (como ingrediente activo) más adelante que no dependan de la región de codificación, en particular en la región no codificante 5' de la secuencia blanco, por ejemplo, por lo tanto, contra las regiones no codificantes de la secuencia blanco que tengan una función reguladora. La secuencia blanco del ARNds utilizada como la molécula de ácido nucleico del complejo de carga con portador polimérico por lo tanto puede depender de la región traducida y sin traducir de la secuencia blanco y/o en la región de los elementos control de una proteína o antígeno descritos más adelante. La secuencia blanco para un ARNds utilizado como la molécula de ácido nucleico del complejo de carga con portador polimérico también puede depender de la región superpuesta de la secuencia sin traducir y traducida; en particular, la secuencia blanco puede comprender al menos un nucleótido en la dirección 5' del triplete de inicio de la región codificante, por ejemplo de un ADN genómico, un ADNc, un ARN, o un ARNm, etc. Ácidos nucleicos inmunoestimuladores : a ) Ácidos nucleicos CpG inmunoestimuladores De acuerdo con otra alternativa, la molécula de ácido nucleico del complejo de carga con portador polimérico definido en la presente puede estar en el forma de un ácido nucleico CpG ( inmunoestimulador ) , en particular CpG-ARN o CpG-ADN que induce de preferencia una respuesta inmunitaria innata. Un CpG-ARN o un CpG-ADN utilizado de acuerdo con la invención puede ser un CpG-ADN de cadena individual (ss CpG-ADN), un CpG-ADN de doble cadena (ADNds ) , un CpG-ARN de cadena individual (ss CpG-ARN) o un CpG-ARN de doble cadena (ds CpG-ARN) . El ácido nucleico CpG utilizado de acuerdo con la invención de preferencia está en la forma de CpG-ARN, de mayor preferencia en la forma de CpG-ARN de cadena individual (ss CpG-ARN) . También de preferencia, estos ácidos nucleicos CpG tienen una longitud como se describió anteriormente. De preferencia los motivos CpG están sin metilar. En una modalidad preferida, el ácido nucleico CpG no es un CpG-ADN que consiste de la secuencia 5' TCCATGACGTTCCTGACGTT-3 ' ( SEC ID NO: 123), en particular si el antigeno proteinico peptidico es ovalbúmina o un fragmento de ovalbúmina. En una modalidad preferida adicional, el ácido nucleico CpG no es una secuencia que comprenda la SEC ID NO: 123. De preferencia, el ácido nucleico CpG no es un CpG-ADN. En algunas modalidades de la presente invención, el complejo de carga con portador polimérico no comprende un CpG-ADN, de preferencia no comprenda un ácido nucleico CpG . En algunas modalidades de la presente invención, la composición farmacéutica no comprende un CpG-ADN, de preferencia no comprenda un ácido nucleico CpG. bj ARN inmunoestimulador (ARNis) : Asimismo, de acuerdo con una alternativa adicional, la molécula de ácido nucleico (inmunoestimulador) del complejo de carga con portador polimérico puede estar en la forma de un ARN inmunoestimulador (ARNis), que de preferencia produce una respuesta inmunitaria innata. Este ARN inmunoestimulador puede ser cualquier ARN (de doble cadena o de cadena individual), por ejemplo un ARN codificante, como se define en la presente. De preferencia, el ARN inmunoestimulador puede ser un ARN de cadena individual, uno de doble cadena o uno parcialmente de doble cadena, de mayor preferencia un ARN de cadena individual, y/o un ARN circular o lineal, de mayor preferencia un ARN lineal. De mayor preferencia, el ARN inmunoestimulador puede ser un ARN de cadena individual (lineal). Incluso de mayor preferencia, el ARN inmunoestimulador puede ser un ARN no codificante (largo) (lineal) de cadena individual. En este contexto, se prefiere en particular que el ARNis porte un trifosfato a su extremo 5'- lo cual es el caso para ARN transcrito in vítro. Un ARN inmunoestimulador también se puede presentar como un oligonucleótido de ARN corto, como se define en la presente. Un ARN inmunoestimulador en el sentido en el que se utiliza en la presente, además se puede seleccionar de cualquier clase de moléculas de ARN, de origen natural o que se preparen sintéticamente, y que pueda inducir una respuesta inmunitaria innata y puede apoyar una respuesta inmunitaria adaptativa inducida por un antigeno. En este contexto, una respuesta inmunitaria se puede presentar en diversas formas. Un factor sustancial de una respuesta inmunitaria adecuada (adaptativa) es la estimulación de diferentes sub-poblaciones de células T. Los linfocitos T típicamente se dividen en dos sub-poblaciones, las células T auxiliares 1 (Thl) y las células T auxiliares 2 (Th2) con los cuales el sistema inmunitario es capaz de destruir patógenos intracelulares (Thl) y extracelulares (Th2) (por ejemplo, antigenos). Las dos poblaciones de células Th difieren en el patrón de las proteínas efectoras (citoquinas) producidas por los mismos. De esta forma, las células Thl ayudan a la respuesta inmunitaria celular mediante la activación de macrófagos y célula T citotóxicas. Las células Th2, por otro lado, estimulan la respuesta inmunitaria humoral mediante la estimulación de las células B para la conversión en células plasmáticas y mediante la formación de anticuerpos (por ejemplo, contra antigenos) . La proporción Thl/Th2 por lo tanto es de gran importancia en la inducción y mantenimiento de una respuesta inmunitaria adaptativa. Junto con la presente invención, la proporción de Thl/Th2 de la respuesta inmun taria (adaptativa) de preferencia se modifica en la dirección hacia la respuesta celular (respuesta a Thl) y con esto se induce una respuesta inmunitaria celular. De acuerdo con un ejemplo, el sistema inmunitario innato que puede apoyar una respuesta inmunitaria adaptativa, se puede activar mediante ligandos de los receptores similares a Toll (TLR) . Los TLR son una familia de polipéptidos con receptores para reconocimiento de patrones (PRR) altamente conservados que reconocen patrones moleculares patógeno asociados (PA P) y desempeñan una función decisiva en la inmunidad innata en mamíferos. Actualmente, se han identificado al menos trece miembros de la familia, designados TLR1-TLR13 (receptores similares a Troll: TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7 , TLR8, TLR9, TLR10, TLR11, TLR12 o TLR13). Además, se ha identificado un número de ligandos TLR específicos. Por ejemplo, se encontró que el ADN bacteriano sin metilar y los análogo sintéticos del mismo (CpG ADN) son ligandos para TLR9 (Hemmi H et ai. (2000) Nature 408:740-5; Bauer et al. (2001) Proc NatlAcadSci USA 98, 9237-42). Además, se ha reportado que los ligandos para ciertos TLR incluyen ciertas moléculas de ácido nucleico y que ciertos tipos de ARN son inmunoestimuladores en una forma independiente de la secuencia o dependiente de la secuencia, en donde estos diversos ARN inmunoestimuladores por ejemplo pueden estimular TLR3, TLR7 , o TLR8 , o los receptores intracelulares tales como RIG-I, MDA-5, etc. Por ejemplo, Lipford et al., determinaron ciertos oligorribonucleótidos que contienen G,U-como inmunoestimuladores mediante la acción vía TLR7 y TLR8 (véase la O 03/086280) . Los oligorribonucleótidos que contienen G,U- inmunoestimuladores descritos por Lipford et ai., se cree que se podrán derivar de fuentes de ARN entre las que se incluyen ribómico, ARN de transferencia, ARN mensajero, y ARN viral.
El ARN inmunoestimulador (ARNis) utilizado como la molécula de ácido nucleico del complejo de carga con portador polimérico definido en la presente de esta forma puede comprender cualquier secuencia de ARN conocida que será inmunoestimuladora, incluyendo, sin estar limitados a las mismas, las secuencias de ARN que representan y/o codifican para ligandos de los TLR, de preferencia seleccionados de miembros de la familia humana TLR1-TLR10 o miembros de la familia murina TLR1-TLR13, de mayor preferencia seleccionados de los miembros familiares (humana) TLR1-TLR10, incluso de mayor preferencia a partir de TLR7 y TLR8, los ligandos para receptores intracelulares para ARN (tales como RIG-I o DA-5, etc.) eylan, E., Tschopp, J. (2006). Receptores similares a Toll y helicasas ARN: two parallel ways to trigger antiviral responses. Mol. Cell 22, 561-569), o cualquier otra secuencia de ARN inmunoestimuladora . Además, (clases de) moléculas de ARN inmunoestimuladoras, utilizadas como la molécula de ácido nucleico del complejo de carga con portador polimérico pueden incluir cualquier otro ARN capaz de producir una respuesta inmunitaria innata. Sin estar limitados al mismo, este ARN inmunoestimulador puede incluir ARN ribosómico (ARNr) , ARN transferencia (ARNt )· , ARN mensajero (ARNm) , y ARN viral (ARNv) , de preferencia el ARN inmunoestimulador es un ARN no codificante. Este ARN inmunoestimulador puede comprender una longitud de 1000 hasta 5000, de 500 hasta 5000, de 5 hasta 5000, o de 5 hasta 1000, 5 hasta 500, 5 hasta 250, de 5 hasta 100, de 5 hasta 50 o de 5 hasta 30 nucleótidos.
De acuerdo con una modalidad en particularmente preferida, esta secuencia de ácido nucleico inmunoestimulador de preferencia es un ARN que consiste de preferencia o comprendiendo de una secuencia de ácido nucleico de la fórmula (II) o (III) : Gi ^ , (fórmula (II)) en donde : G es guanosina, uracilo o un análogo de guanosina o uracilo; X es guanosina, uracilo, adenosina, timidina, citosina o un análogo de los nucleótidos mencionados anteriormente; 1 es un número entero de 1 hasta 40, en donde; cuando 1 = 1, G es guanosina o un análogo de la misma , cuando 1 > 1, al menos 50% de los nucleótidos son guanosina o un análogo de la misma; m es un número entero y es al menos 3; en donde; cuando m = 3, X es uracilo o un análogo del mismo, cuando m > 3, se presentan al menos 3 uracilos sucesivos o análogo de uracilo; n es un número entero de 1 hasta 40, en donde; cuando n = 1, G es guanosina o un análogo de la misma, cuando n > 1 al menos 50% de los nucleótidos son guanosina o un análogo de la misma. dXraCn , (fórmula (III)) en donde: C es citosina, uracilo o un análogo de citosina o uracilo; X es guanosina, uracilo, adenosina, timidina, citosina o un análogo de los nucleótidos mencionados anteriormente ; 1 es un número entero de 1 hasta 40, en donde : cuando 1 = 1, C es citosina o un análogo de la misma, cuando 1 > 1, al menos el 50% de los nucleótidos son citosina o un análogo de la misma; m es un número entero y es al menos 3; en donde : cuando m = 3, X es uracilo o un análogo de la misma , cuando m > 3, se presentan al menos 3 uracilos sucesivos o análogo de uracilo; n es un número entero de 1 hasta 40, en donde : cuando n = 1, C es citosina o un análogo de la misma , cuando n > 1, al menos 50% de los nucleótidos son citosina o un análogo de la misma.
Los ácidos nucleicos de la fórmula (II) o (III) que se pueden utilizar en la carga de ácido nucleico del complejo de carga con portador polimérico pueden ser moléculas del ácido nucleico relativamente cortas con una longitud típica de aproximadamente 5 hasta 100 (aunque también pueden ser más largar que 100 nucleótidos para modalidades específicas, por ejemplo hasta 200 nucleótidos), de 5 hasta 90 o de 5 hasta 80 nucleótidos, de preferencia una longitud de aproximadamente 5 hasta 70, de mayor preferencia una longitud de aproximadamente 8 hasta 60 y, de mayor preferencia una longitud de aproximadamente 15 hasta 60 nucleótidos, de mayor preferencia de 20 hasta 60, con la máxima preferencia de 30 hasta 60 nucleótidos. Si el ácido nucleico del complejo de carga con ácido nucleico tiene una longitud máxima de por ejemplo 100 nucleótidos, m típicamente será <=98. El número de nucleótidos G en el ácido nucleico de la fórmula (II) se determina mediante I o n. 1 y n, independientemente entre sí, cada uno son un número entero de 1 hasta 40, en donde 1 o n = 1 G es guanosina o un análogo de la misma, y cuando 1 o n > 1 al menos el 50% de los nucleótidos son guanosina o un análogo de la misma. Por ejemplo, sin implicar ninguna limitación, cuando 1 o n = 4 d o Gn pueden ser, por ejemplo, un GUGU, GGUU, UGUG, UUGG, GUUG, GGGU, GGUG, GUGG, UGGG o GGGG, etc.; cuando 1 o n = 5 Gi o Gn pueden ser, por ejemplo, un GGGUU, GGUGU, GUGGU, UGGGU, UGGUG, UGUGG, UUGGG, GUGUG, GGGGU, GGGUG, GGUGG, GUGGG, UGGGG, o GGGGG, etc.; etc. Un nucleótido adyacente a Xm en el ácido nucleico de la fórmula (II) de acuerdo con la invención, de preferencia no es uracilo. Similarmente , el número de nucleótidos C en el ácido nucleico de la fórmula (III) de acuerdo con la invención, se determina mediante I o n. 1 y n, independientemente entre si, son cada uno un número entero de 1 hasta 40, en donde cuando 1 o n = 1 C es citosina o un análogo de la misma, y cuando 1 o n > 1 al menos 50% de los nucleótidos son citosina o un análogo de la misma. Por ejemplo, sin implicar ninguna limitación, cuando 1 o n = 4, Ci o Cn pueden ser, por ejemplo, un CUCU, CCUU, UCUC, UUCC, CÜUC, CCCU, CCUC, CUCC, UCCC o CCCC, etc.; cuando I o n = 5 Ci o Cn puede ser, por ejemplo, un CCCUU, CCUCU, CUCCU, UCCCU, UCCUC, UCUCC, UUCCC, CUCUC, CCCCU, CCCUC, CCUCC, CUCCC, UCCCC, o CCCCC, etc.; etc. Un nucleótido adyacente a Xm en el ácido nucleico de la fórmula (V) de acuerdo con la invención de preferencia no es un uracilo. De preferencia, para la fórmula (II), cuando 1 o n > 1, al menos 60%, 70%, 80%, 90% o incluso 100% de los nucleótidos son guanosina o un análogo de la misma, como se definió anteriormente. Los nucleótidos restantes a 100% (cuando la guanosina constituye menos del 100% de nucleótidos) en las secuencias de flanqueo Gl y/o Gn son uracilo o un análogo del mismo, como se definirá más adelante. También de preferencia, 1 y n, independientemente entre si, son cada uno un número entero de 2 hasta 30, de mayor preferencia un número entero de 2 hasta 20 y todavía de mayor preferencia un número entero de 2 hasta 15. El límite menor de 1 o n se puede variar si es necesario y es al menos 1, de preferencia al menos 2, de mayor preferencia al menos 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ó 10. Esta definición se aplica correspondientemente a la fórmula (III) .
De acuerdo con una modalidad particularmente preferida, un ácido nucleico de acuerdo con cualguiera de las fórmulas (II) o (III) anteriores, que se puede utilizar como ácido nucleico del complejo de carga con portador polimérico se puede seleccionar de una secuencia que consiste o que comprende cualquiera de las siguientes secuencias: - GGUUUUUUUUUUUUUUUGGG (SEC ID NO: 15) ; - GGGGGUUUUUUUUUUGGGGG (SEC ID NO: 16); - GGGGGUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUÜ'UUUUUUUUUGGGGG (SEC ID NO: 17); - GUGUGUGUGUGUUUUUUUUUUUUUUUUGUGUGUGUGUGU (SEC ID NO: 18); - GGUUGGUUGGUUUUUUUUUUUUUUUUUGGUUGGÜUGGUU (SEC ID NO: 19); - GGGGGGGGGUUUGGGGGGGG (SEC ID NO: 20 - GGGGGGGGUUUUGGGGGGGG SEC ID NO: 21) - GGGGGGGUUUUUUGGGGGGG SEC ID NO: 22) GGGGGGGUUUUUUUGGGGGG SEC ID NO: 23) GGGGGGUUUUUUUUGGGGGG SEC ID NO: 24) - GGGGGGUÜUUUUUUUGGGGG SEC ID NO: 25) - GGGGGGUUUUUUUUUUGGGG SEC ID NO: 26) - GGGGGUUUUUUUUUUUGGGG SEC ID NO: 27) - GGGGGUUUUUUUUUUUUGGG SEC ID NO: 28) GGGGUUUUUUUUUUUUUGGG SEC ID NO: 29) - GGGGUUUUUUUUUUUUUUGG SEC ID NO: 30) - GGUUUUUUUUUUUUUUUUGG SEC ID NO: 31) GUUUUUUUUUUUUUUUUUUG SEC ID NO: 32) - GGGGGGGGGGUÜUGGGGGGGGG (SEC ID NO: 33) - GGGGGGGGGUUUUGGGGGGGGG (SEC ID NO: 34) - GGGGGGGGUUUUUUGGGGGGGG (SEC ID NO: 35) - GGGGGGGGUUUUUUUGGGGGGG (SEC ID NO: 36) - GGGGGGGUUUUUUUUGGGGGGG (SEC ID NO: 37) - GGGGGGGUUUUUUUUUGGGGGG (SEC ID NO: 38) - GGGGGGGUUUUUUUUUUGGGGG (SEC ID NO: 39) - GGGGGGUUUUUUUUUÜUGGGGG (SEC ID NO: 40) - GGGGGGUUUUUUUUUUUUGGGG (SEC ID NO: 41) - GGGGGUUUUUUUUUUUUUGGGG (SEC ID NO: 42) - GGGGGUUUUUUUUUUUUUUGGG (SEC ID NO: 43) ; - GGGUUUUUUUUUUUUUUUUGGG (SEC ID NO: 44); - GGUUUUUUUUUUUUUUUUUUGG (SEC ID NO: 45); - GGGGGGGGGGGUUUGGGGGGGGGG (SEC ID NO: 46); - GGGGGGGGGGUUUUGGGGGGGGGG (SEC ID NO: 47); - GGGGGGGGGUUUUUUGGGGGGGGG (SEC ID NO: 48); - GGGGGGGGGUUUUUUUGGCCGCGG (SEC ID NO: 49) ; - GGGGGGGGUUUUUUUUGGGGGGGG (SEC ID NO: 50); - GGGGGGGGUUUUÜUUUUGGGGGGG (SEC ID NO: 51); - GGGGGGGGUUUUUUUUUUGGGGGG (SEC ID NO: 52); - GGGGGGGUUUUUUUUUUUGGGGGG (SEC ID NO: 53); - GGGGGGGUUUUUUUÜUUUUGGGGG (SEC ID NO: 54); - GGGGGGUUUUUUUUUUUUUGGGGG (SEC ID NO: 55) ; - GGGGGGUUUUUUUUUUUUUUGGGG (SEC ID NO: 56) ; - GGGGUUUUUUUUUUUUUUUUGGGG (SEC ID NO: 57); - GGGUUUUUUÜUUUUUUUUUUUGGG (SEC ID NO: 58); - GUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUÜUUG (SEC ID NO: 59); - GGUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUGG (SEC ID NO: 60); - GGGUÜUUUUUUUUUÜUUUUUUUUUUUUUUUUUUGGG (SEC ID NO: 61); - GGGGUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUGGG (SEC ID NO: 62); - GGGGGUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUGGGG (SEC ID NO: 63); - GGGGGGUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUGGGGG (SEC ID NO: 64); - GGGGGGGUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUGGGGGG (SEC ID NO: 65) ; - GGGGGGGGUUUUUUUUUUUUUUUUUÜUUUUUUUUUUUUGGGGGGG (SEC ID NO: 66) ; - GGGGGGGGGUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUGGGGGGGG (SEC ID NO: 67 ) ; - GGUUUGG (SEC ID NO: 68); - GGUUUUGG (SEC ID NO: 69); - GGUUUUUGG (SEC ID NO: 70); - GGUUUUUUGG (SEC ID NO: 71); - GGUUUUUUUGG (SEC ID NO: 72); - GGUUUUUUUUGG (SEC ID NO: 73) ; - GGUUUUUUUUUGG (SEC ID NO: 74); - GGUUUUUUUUUUGG (SEC ID NO: 75); - GGUUUUUUUUUUUGG (SEC ID NO: 76) ; - GGUUUUUUUUUUUUGG (SEC ID NO: 77); - GGUUUUUUUUUUUUUGG (SEC ID NO: 78); - GGUUUUUUUUUUUUUUGG (SEC ID NO: 79); - GGUUUUUUUUUUUUUUUGG (SEC ID NO: 80) ; - GGGUUUGGG (SEC ID NO: 81); - GGGUUUUGGG (SEC ID NO: 82); - GGGUUUUUGGG (SEC ID NO: 83); - GGGUUUUUUGGG (SEC ID NO: 84); - GGGUUUUUUUGGG (SEC ID NO: 85); - GGGUUUUUUUUGGG (SEC ID NO: 86); - GGGUUUUUUUUUGGG (SEC ID NO: 87); - GGGUUUUUUUUUUGGG ( SEC ID NO: 88); - GGGUUUUUUUUUUUGGG (SEC ID NO: 89); - GGGUUUUÜUUUUUUUGGG (SEC ID NO: 90); - GGGUUUUUUUUUUUUUGGG (SEC ID NO: 91); - GGGUUUUUUUUUUUUUUUGGGUUUUUUUUUUUUUUUGGGUUUUUUÜUUUUUUUUGGG (SEC ID NO: 92) ; - GGGUtJUUUUUUIJUUUUUUGGGGGGUUUUUUUUUUUUUUUGGG (SEC ID NO: 93) ; - GGGUUUGGGUUUGGGUUUGGGUUUGGGUUUGGGUUUGGGUUUGGGUUUGGG (SEC ID NO: 94) ; - GGUUUUUUUUUUUUUUUGGG (rico en GU corto, SEC ID NO: 95) O - CCCUUUUÜUUUUUUUUUUCCCUUUUUUUUUUUUUUUCCCUUUUÜUUUUUUUUUUCCC (SEC ID NO: 96) - CCCUUUCCCUUUCCCUUUCCCUUUCCCUUUCCCUUUCCCUUUCCCUUUCCC (SEC ID NO: 97) - CCCUUUUUUUUUUUUUUUCCCCCCUUUUUUUUUUUUUUUCCC (SEC ID NO: 98) o de una secuencia que tenga al menos el 60%, 70%, 80%, 90%, o incluso 95% de identidad de secuencia con cualquiera de estas secuencias.
De acuerdo con una modalidad en particular preferida adicional, estas secuencias de ácido nucleico inmunoestimulador , en particular ARNis, consisten o comprenden un ácido nucleico de la fórmula (IV) o (V) : (NuGi ^Nv),, (fórmula (IV) en donde : G es guanosina (guanina) , uridina (uracilo) o un análogo de guanosina (guanina) o uridina (uracilo), de preferencia guanosina (guanina) o un análogo de la misma; X es guanosina (guanina), uridina (el uracilo), adenosína (adenina) , timidina (timidina) , citidina (citosma) , o un análogo de estos nucleótidos (nucleósidos) , de preferencia uridina (uracilo) o un análogo de la misma; N es una secuencia de ácido nucleico que tiene una longitud de aproximadamente 4 hasta 50, de preferencia de aproximadamente 4 hasta 40, de mayor preferencia de aproximadamente 4 hasta 30 o 4 hasta 20 ácidos nucleicos, cada N independientemente se seleccionará de guanosina (guanina), uridina (uracilo), adenosina (adenina), timidina (timidina), citidina (citosina) o un análogo de estos nucleó-idos (nucleósidos) ; a es un número entero de 1 hasta 20, de preferencia de 1 hasta 15, con la máxima preferencia de 1 hasta 10; 1 es un número entero de 1 hasta 40, en donde cuando 1 = 1, G es guanosina (guanina) o un análogo de la misma, cuando 1 > 1, al menos 50% de estos nucleótidos (nucleósidos) es son guanosina (guanina) o un análogo de la misma ; m es un número entero y es al menos 3 ; en donde cuando m = 3, X es uridina (uracilo) o un análogo de la misma, y cuando m > 3, se presentan al menos 3 uridinas (uracilos) sucesivas o análogo de uridina (uracilo) ; n es un número entero de 1 hasta 40, en donde cuando n = 1, G es guanosina (guanina) o un análogo de la misma, cuando n > 1, al menos 50% de estos nucleótidos (nucleósidos) son guanosina (guanina) o un análogo de la misma ; u,v pueden ser independientemente entre si un número entero de 0 hasta 50, de preferencia en donde cuando u = 0, v (1, o cuando v = 0, u (1; en donde la molécula de ácido nucleico de la fórmula (IV) tiene una longitud de al menos 50 nucleótidos, de preferencia al menos 100 nucleótidos, de mayor preferencia al menos 150 nucleótidos, incluso de mayor preferencia al menos 200 nucleótidos y con la máxima preferencia al menos 250 nucleótidos.
(NuCiXmCnNv) a , (formula (V)) en donde: C es citidina (citosina), uridina (uracilo) o un análogo de citidina (citosina) o uridina (uracilo) , de preferencia citidina (citosina) o un análogo de la misma; X es guanosina (guanina) , uridina (uracilo) , adenosina (adenina) , timidina (timidina) , citidina (citosina) o un análogo de los nucleótidos (nucleósidos ) mencionados anteriormente, de preferencia uridina (uracilo) o un análogo de la misma; N es cada uno una secuencia de ácido nucleico que tiene independientemente entre sí una longitud de aproximadamente 4 hasta 50, de preferencia de aproximadamente 4 hasta 40, de mayor preferencia de aproximadamente 4 hasta 30 o 4 hasta 20 ácidos nucleicos, cada N se seleccionará independientemente de guanosina (guanina) , uridina (uracilo) , adenosina (adenina) , timidina (timidina) , citidina (citosina) o un análogo de estos nucleótidos (nucleósidos ) ; a es un número entero de 1 hasta 20, de preferencia de 1 hasta 15, con la máxima preferencia de 1 hasta 10; 1 es un número entero de 1 hasta 40, en donde cuando 1 = 1, C es citidina (citosina) o un análogo de la misma, cuando 1 > 1, al menos 50% de estos nucleótidos ( nucleósidos ) son citidina (citosina) o un análogo de la misma ; m es un número entero y es al menos 3 ; en donde cuando m = 3, X es uridina (uracilo) o un análogo de la misma, cuando m > 3, se presentan al menos 3 uridinas (uracilos) sucesivas o análogos de uridina (uracilo); n es un número entero de 1 hasta 40, en donde cuando n = 1, C es citidina (citosina) o un análogo de la misma, cuando n > 1, al menos 50% de estos nucleótidos (nucleósidos) es citidina (citosina) o un análogo de la mi sma . u, v, pueden ser independientemente entre sí un número entero de 0 hasta 50, de preferencia en donde cuando u = 0, v =1, o cuando v = 0, u =1; en donde la molécula de ácido nucleico de la fórmula (V) de acuerdo con la invención tiene una longitud de al menos 50 nucleótidos, de preferencia al menos 100 nucleótidos, de mayor preferencia al menos 150 nucleótidos, incluso de mayor preferencia al menos 200 nucleótidos y con la máxima preferencia al menos 250 nucleótidos.
Para la fórmula (V) , cualquiera de las definiciones proporcionadas anteriormente para los elementos N (es decir, Nu y Nv) y X (Xm) , en particular la estructura núcleo como se definió anteriormente, asi como para los enteros a, 1, m, n, u y v, similarmente se aplican a los elementos de la fórmula (IV) correspondientemente, en donde en la fórmula (V) la estructura núcleo se define por CiXmCn. La definición de los elementos contiguos Nu y Nv es idéntica a las definiciones proporcionadas anteriormente para Nu y Nv.
De acuerdo con una modalidad particularmente muy preferida, la molécula de ácido nucleico de acuerdo con la fórmula (IV) comprende, de preferencia consiste de, por ejemplo, cualquiera de las siguientes secuencias: UAGCGAAGCUCUUGGACCUAGGUUÜUUÜUUUUUUUUUGGGUGCGUUCCUAGAAGUACACG (SEC ID NO: 99) UAGCGAAGCUCUUGGACCUAGGUUUUUUUUUUUUUUUGGGUGCGUUCCUAGAAGUACACGA UCGCUUCGAGAACCUGGAUCCAAAAAAAAAAAAAAACCCACGCAAGGAUCUUCAUGUGC (SEC ID NO: 100) GGGAGAAAGCUCAAGCUUGGAGCAAUGCCCGCACAUUGAGGAAACCGAGUUGCAUAUCUC AGAGUAUUGGCCCCCGUGUAGGUUAUUCUUGACAGACAGUGGAGCUUAUUCACUCCCAGG AUCCGAGUCGCAÜACUACGGUACUGGUGACAGACCUAGGUCGUCAGUUGACCAGUCCGCC ACUAGACGUGAGUCCGUCAAAGCAGUUAGAUGUUACACUCUAUUAGAUC (SEC ID NO: 101) GGGAGAAAGCUCAAGCUUGGAGCAAUGCCCGCACAUUGAGGAAACCGAGUUGCAUAUCUC AGAGUAUUGGCCCCCGUGUAGGUUAUUCUUGACAGACAGUGGAGCUUAUUCACUCCCAGG AUCCGAGUCGCAUACUACGGUACUGGUGACAGACCUAGGUCGUCAGUUGACCAGUCCGCC ACUAGACGUGAGUCCGUCAAAGCAGUUAGAUGUUACACUCUAUUAGAUCUCGGAUUACAG CÜGGAAGGAGCAGGAGUAGUGUUCUUGCUCUAAGUACCGAGUGUGCCCAAUACCCGAÜCA GCUUAUUAACGAACGGCUCCUCCUCUUAGACUGCAGCGUAAGUGCGGAAUCUGGGGAUCA AAUUACUGACUGCCUGGAUUACCCUCGGACAUAUAACCUUGUAGCACGCUGUUGCUGUAU AGGUGACCAACGCCCACUCGAGUAGACCAGCUCUCUUAGUCCGGACAAUGAUAGGAGGCG CGGUCAAUCUACUUCUGGCUAGUUAAGAAUAGGCUGCACCGACCUCUAUAAGUAGCGUGU CCUCUAG (SEC ID NO: 102) GGGAGAAAGCUCAAGCUUGGAGCAAUGCCCGCACAUUGAGGAAACCGAGUUGCAUAUCUC AGAGUAUUGGCCCCCGUGUAGGUUAUUCUUGACAGACAGUGGAGCUUAUUCACUCCCAGG AUCCGAGUCGCAUACUACGGUACUGGUGACAGACCUAGGUCGUCAGUUGACCAGUCCGCC ACUAGACGUGAGUCCGUCAAAGCAGUUAGAUGUUACACUCUAUUAGAUCUCGGAUUACAG CUGGAAGGAGCAGGAGUAGUGUUCUUGCUCUAAGUACCGAGUGUGCCCAAUACCCGAUCA GCUUAUUAACGAACGGCUCCUCCUCUUAGACUGCAGCGUAAGUGCGGAAUCUGGGGAUCA AAUUACUGACUGCCUGGAUUACCCUCGGACAUAUAACCUUGUAGCACGCUGUUGCUGUAU AGGUGACCAACGCCCACUCGAGUAGACCAGCUCUCUUAGUCCGGACAAUGAUAGGAGGCG CGGUCAAUCUACUUCUGGCUAGUUAAGAAUAGGCUGCACCGACCUCUAUAAGUAGCGUG UCCUCUAGAGCUACGCAGGUUCGCAAUAAAAGCGUUGAUUAGUGUGCAUAGAACAGACC UCUUAUUCGGUGAAACGCCAGAAUGCUAAAUUCCAAUAACUCUUCCCAAAACGCGUACG GCCGAAGACGCGCGCUUAUCUUGUGUACGUUCUCGCACAUGGAAGAAUCAGCGGGCAUG GUGGUAGGGCAAUAGGGGAGCUGGGUAGCAGCGAAAAAGGGCCCCUGCGCACGUAGCUU CGCUGUUCGUCUGAAACAACCCGGCAUCCGUUGUAGCGAUCCCGUUAUCAGUGUUAUUC UUGUGCGCACUAAGAUUCAUGGUGUAGUCGACAAUAACAGCGUCUUGGCAGAUUCUGGU CACGUGCCCUAUGCCCGGGCUUGUGCCUCUCAGGUGCACAGCGAUACUUAAAGCCUUCA AGGUACUCGACGUGGGUACCGAUUCGUGACACUUCCUAAGAUUAUUCCACUGUGUUAGC CCCGCACCGCCGACCUAAACUGGUCCAAUGUAUACGCAUUCGCUGAGCGGAUCGAUAAU AAAAGCUUGAAUU (SEC ID NO: 103) GGGAGAAAGCUCAAGCUUAUCCAAGUAGGCUGGUCACCUGUACAACGUAGCCGGUAUUU UUUUUUUUUUUUUUUUUUUGACCGUCUCAAGGUCCAAGUUAGUCUGCCUAUAAAGGUGC GGAUCCACAGCUGAUGAAAGACUUGUGCGGUACGGUUAAUCUCCCCUUUUUUUUUUUUU UUUUUUUUAGUAAAUGCGUCUACUGAAUCCAGCGAUGAUGCUGGCCCAGAUC ( SEC ID NO: 104) GGGAGAAAGCUCAAGCUUAUCCAAGUAGGCUGGUCACCUGUACAACGUAGCCGGUAUUU UUUUUUUUUUUUUUUUUUUGACCGUCUCAAGGUCCAAGUUAGUCUGCCUAUAAAGGUGC GGAUCCACAGCUGAUGAAAGACUUGUGCGGUACGGUUAAUCUCCCCUUUUUUUUUUUUU UUUUUUUUAGUAAAUGCGUCUACUGAAUCCAGCGAUGAUGCUGGCCCAGAUCUUCGACC ACAAGUGCAUAUAGUAGUCAUCGAGGGUCGCCUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUGGCC CAGUUCUGAGACUUCGCUAGAGACUACAGUUACAGCUGCAGUAGUAACCACUGCGGCUA UUGCAGGAAAUCCCGUUCAGGUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUCCGCUCACUAUGAUUAA GAACCAGGUGGAGUGUCACUGCUCUCGAGGUCUCACGAGAGCGCUCGAUACAGUCCUUG GAAGAAUCUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUGUGCGACGAUCACAGAGAACUUCUAUUCA UGCAGGUCUGCUCUA (R722A o isRNA722A; SEC ID NO: 105) .
GGGAGAAAGCUCAAGCUUAUCCAAGUAGGCUGGUCACCUGUACAACGUAGCCGGUAUUU UUUUUUUUUUUUUUUUUUUGACCGUCUCAAGGUCCAAGUUAGUCUGCCUAUAAAGGUGC GGAUCCACAGCUGAUGAAAGACUUGUGCGGUACGGUUAAUCUCCCCUUUUUUUUUUUUU UUUUUUUUAGUAAAUGCGUCUACUGAAUCCAGCGAUGAUGCUGGCCCAGAUCUUCGACC ACAAGUGCAUAUAGUAGUCAUCGAGGGUCGCCUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUGGCC CAGUUCUGAGACUUCGCUAGAGACUACAGUUACAGCUGCAGUAGUAACCACUGCGGCUA UUGCAGGAAAUCCCGUUCAGGUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUCCGCUCACUAUGAUUAA GAACCAGGUGGAGUGUCACUGCUCUCGAGGUCUCACGAGAGCGCUCGAUACAGUCCUUG GAAGAAUCUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUGUGCGACGAUCACAGAGAACUUCUAUUCA UGCAGGUCUGCUCUAG (R722B o isRNA722B; SEC ID NO: 122) GGGAGAAAGCUCAAGCUUAUCCAAGUAGGCUGGUCACCUGUACAACGUAGCCGGUAUUU UUUUUUUUUUUUUUUUUUUGACCGUCUCAAGGUCCAAGUUAGUCUGCCUAUAAAGGUGC GGAUCCACAGCUGAUGAAAGACUUGUGCGGUACGGUUAAUCUCCCCUUUUUUUUUUUUU UUUUUUUUAGUAAAUGCGUCUACUGAAUCCAGCGAUGAUGCUGGCCCAGAUCUUCGACC ACAAGUGCAUAUAGUAGUCAUCGAGGGUCGCCUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUGGCC CAGUUCUGAGACUUCGCUAGAGACUACAGUUACAGCUGCAGUAGUAACCACUGCGGCUA UUGCAGGAAAUCCCGUUCAGGUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUCCGCUCACUAUGAUUAA GAACCAGGUGGAGUGUCACUGCUCUCGAGGUCUCACGAGAGCGCUCGAUACAGUCCUUG GAAGAAUCUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUGUGCGACGAUCACAGAGAACUUCUAU UCAUGCAGGUCUGCUCUAGAACGAACUGACCUGACGCCUGAACUUAUGAGCGUGCG UAUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUCCUCCCAACAAAUGUCGAUCAAUAGCUGGGC UGUUGGAGACGCGUCAGCAAAUGCCGUGGCUCCAUAGGACGUGUAGACUUCUAUÜU UUUUUUUUUUUUUUUUUUCCCGGGACCACAAAUAAUAUUCUUGCUUGGUUGGGCGC AAGGGCCCCGUAÜCAGGUCAUAAACGGGUACAUGUUGCACAGGCUCCUUUUUUUUU UUUUUUUUUUUUUUCGCUGAGUUAUUCCGGUCUCAAAAGACGGCAGACGUCAGUCG ACAACACGGUCUAAAGCAGUGCUACAAUCUGCCGUGUUCGUGUUUUUUUUUUUUUU UUUUUUGUGAACCUACACGGCGUGCACUGUAGUUCGCAAUUCAUAGGGUACCGGCU CAGAGUUAUGCCUUGGUUGAAAACUGCCCAGCAUACUUUUUUUUUUUUUUUUUUUU CAUAUUCCCAUGCUAAGCAAGGGAUGCCGCGAGUCAUGUUAAGCUUGAAUU ( SEC ID NO: 106) o una secuencia de ácido nucleico que tiene al menos 60%, de preferencia al menos 70%, de preferencia al menos 80%, de mayor preferencia al menos 90%, y con la máxima preferencia al menos 95% de identidad con cualquiera de las secuencias definidas anteriormente.
De acuerdo con otra modalidad particularmente muy preferida, la molécula de ácido nucleico de acuerdo con la fórmula (V) comprende, de preferencia consiste de, por ejemplo cualquiera de las siguientes secuencias: UAGCGAAGCUCUUGGACCUACCUUUUUUUUUUUUUUCCCUGCGUUCCUAGAAGUACACG (SEC ID NO: 107) o UAGCGAAGCUCUUGGACCUACCUUUUUUUUUUUUUUUCCCUGCGUUCCUAGAAGUACACGA UCGCÜÜCGAGAACCUGGAÜGGAAAAAAAAAAAAAAAGGGACGCAAGGAUCUUCAUGUGC (SEC ID NO: 108) o una secuencia de ácido nucleico que tiene al menos 60%, de preferencia al menos 70%, de preferencia al menos 80%, de mayor preferencia al menos 90%, y con la máxima preferencia al menos 95% de identidad con cualquiera de las secuencias definidas anteriormente.
En una modalidad preferida adicional, la molécula de ácido nucleico del complejo de carga con portador polimérico definido en la presente también se puede presentar en la forma de un ácido nucleico modificado.
De acuerdo con una primera modalidad, la molécula de ácido nucleico del complejo de carga con portador polimérico definido en la presente se puede proporcionar como un "ácido nucleico estabilizado", de preferencia como un ARN o ADN estabilizado, de mayor preferencia como un ARN que sea esencialmente resistente a una degradación in vivo (por ejemplo mediante una exo- o endo-nucleasa ) como se definió anteriormente .
De acuerdo con otra modalidad, la carga ácido nucleico del complejo de carga con portador polimérico definido en la presente se puede modificar como se define en la presente, y/o estabilizar, especialmente si la molécula de ácido nucleico está en la forma de un ácido nucleico codificante, por ejemplo un ARNm, al modificar el contenido de G/C de la molécula de ácido nucleico, en particular un ARNm, de preferencia de la región codificante del mismo como se define en la presente.
Las moléculas de ácido nucleico utilizadas en la presente como carga comprendidas en el complejo de carga con portador polimérico como se define en la presente, se pueden preparar utilizando cualquier método conocido en la técnica, incluyendo los métodos para la síntesis de ácido nucleico como se define en la presente.
Además, la presente invención abarca explícitamente las variantes y fragmentos de moléculas de ácido nucleico, como se definió en la presente, comprendidas como carga de ácido nucleico en el complejo de carga con portador polimérico .
Las moléculas de la carga de ácido nucleico particularmente preferidas, en el contexto de la presente invención son moléculas de ácido nucleico que comprenden, de preferencia que consisten de, una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con las SEC ID NOs : 105 ó 122 o una secuencia que sea al menos 60%, de preferencia al menos 70%, de preferencia al menos 80%, de mayor preferencia al menos 90%, y con la máxima preferencia al menos 95% idéntica con la SEC ID NO: 105 ó 122.
En el complejo de carga con portador polimérico, el componente catiónico del portador polimérico como se define en la presente y la carga de ácido nucleico típicamente se proporcionan en una proporción molar de aproximadamente 1 hasta 10000, de preferencia en una proporción molar de aproximadamente 5 hasta 5000, de mayor preferencia en una proporción molar de aproximadamente 10 hasta 2500, incluso con la máxima preferencia en una proporción molar de aproximadamente 25 hasta 2000, y con la máxima preferencia en una proporción molar de aproximadamente 25 hasta 1000 del portador polimérico al ácido nucleico.
Además, en el complejo de carga con portador polimérico, el componente catiónico del portador polimérico, como se define en la presente y la carga de ácido nucleico de preferencia se proporcionan en una proporción de N/P de al menos 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.75, 1, 1.5 ó 2. De preferencia, la proporción de N/P queda dentro de una variación de aproximadamente 0.1, 0.3, 0.4, 0.5, 0.75, 1.0, 1.5 o 2 hasta 20, de preferencia en un variación de aproximadamente 0.2 (0.5 ó 0.75 ó 1.0) a 12, de mayor preferencia en una proporción de N/P de aproximadamente 0.4 (0.75 ó 1.0) hasta 10, e incluso con la máxima preferencia en una proporción de N/P de aproximadamente 0.4 (0.75 ó 1.0) hasta 5. De mayor preferencia, la proporción de N/P queda en una proporción entre 0.1 y 0.9. En este contexto, la proporción de N/P es una medición de la carga iónica del componente catiónico (cadena lateral) del portador polimérico o del portador polimérico como tal. En particular, si las propiedades catiónicas del componente catiónico se generan mediante átomos de nitrógeno (por ejemplo, de las cadenas laterales de aminoácidos), la proporción de N/P expresa la proporción de los átomos de nitrógeno básico a residuos de fosfato en la estructura de nucleótido, considerando que los átomos de nitrógeno (cadena lateral) en el componente catiónico del portador polimérico contribuyen a cargas positivas y el fosfato de la estructura de fosfato del ácido nucleico contribuyen a la carga negativa. En general, un fosfato proporciona una carga negativa, por ejemplo un nucleótido en la molécula de ácido nucleico con carga proporciona una carga negativa. En los ejemplos se proporciona una fórmula. La proporción de N/P se define como la proporción de nitrógeno/fosfato (proporción de N/P) del complejo de carga con portador polimérico inventivo total. Esto típicamente es ilustrativo para el contenido/cantidad de componentes catiónicos, en el portador polimérico y las características para el contenido/cantidad de ácidos nucleicos unidos o complej ados en el complejo de carga con portador polimérico inventivo. Esto se puede calcular sobre la base de que, por ejemplo, 1 µg de ARN típicamente contiene aproximadamente 3 nmol residuos de fosfato, con la condición de que el ARN exhiba una distribución estadística de bases. Adicionalmente, el péptido 1 nmol típicamente contiene aproximadamente x residuos de nitrógeno nmol, dependientes del peso molecular y el número de sus aminoácidos ( catiónicos ) .
En este contexto, se prefiere que en el complejo de carga con portador polimérico, el componente catiónico del portador polimérico como se define en la presente y la carga de ácido nucleico se proporcionen en una proporción de N/P de al menos aproximadamente 1 o, de preferencia, de un variación de aproximadamente 1 hasta 20 para aplicaciones in vitro (por ejemplo, en el caso de las células extraídas del paciente se podría tratar in vitro con la composición farmacéutica inventiva y posteriormente administrada al paciente) .
Para aplicaciones in vivo de la composición farmacéutica inventiva, se prefiere una proporción de N/P de al menos 0.1 (0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6), de preferencia una variación de aproximadamente 0.1 (0.2, 0.3, 0.4. , 0.5, ó 0.6) hasta 1.5. Incluso de mayor preferencia es una variación de la proporción de N/P 0.1 ó 0.2 hasta 0.9 o una variación de la proporción de N/P 0.5 a 0.9.
En el caso especifico de que se pretenda la inducción de IFN-oc, se prefiere una proporción de N/P de al menos 0.1 (0.2, 0.3, 0.4, 0.5, o 0.6) o una variación de la proporción de N/P de 0.1 hasta 1 o se prefieren en mayor medida una variación de la proporción de N/P de 0.1 ó 0.2 hasta 0.9 o una variación de la proporción de N/P de 0.5 hasta 0.9. De otra manera, si se pretendiera la inducción de TNF , en particular se prefiere una proporción de N/P de 1 hasta 20.
La proporción de N/P influye significativamente en la carga superficial del complejo de carga con portador polimérico resultante. De esta forma, se prefiere que el complejo de carga con portador polimérico resultante esté cargado positivamente para aplicaciones in vitro y cargado de manera negativa o neutral para aplicaciones in vivo. La carga superficial del complejo de carga con portador polimérico resultante se puede indicar como el potencial zeta que se puede medir mediante el método de electrofor'esis Doppler utilizando un Zetasizer Nano ( alvern Instruments, Malvern, UK) . En general, una proporción de N/P menor de 1, da por resultado en un potencial zeta negativo, y una proporción de N/P superior a 1, da por resultado en un potencial zeta positivo (dentro del alcance de los errores típicos de medición) .
En algunas modalidades, la carga superficial del complejo de carga con portador polimérico, de preferencia el potencial zeta, es positivo, es decir por arriba de 0 mV, tal como por arriba de 1 mV, por arriba de 2 mV, por arriba de 4 mV, por arriba de 5 mV, o por arriba de 10 mV. En modalidades alternativas, la carga superficial del complejo de carga con portador polimérico, de preferencia el potencial zeta, es negativo, es decir por debajo de 0 mV, tal como por debajo de -1 mV, por debajo de -2 mV, por debajo de -4 mV, por debajo de -5 mV, o por debajo de -10 mV, tal como entre aproximadamente -1 mV y -50 mV, entre aproximadamente -2 mV y -40 mV, o entre aproximadamente -5 mV y -30 mV.
El complejo de carga con portador polimérico en el sentido en el que se utiliza en la presente invención, tal como para utilizarse como un adyuvante, de preferencia es capaz de activar una reacción inmunitaria (innata) no antígeno específica, (como se proporciona por el sistema inmunitario innato) , de preferencia de una forma inmunoestimulante . Una reacción inmunitaria general se puede producir de varias formas. Un factor importante para una respuesta inmunitaria adecuada es la estimulación de diferentes sub-poblaciones de celulares T. Los linfocitos T típicamente se diferencian en dos sub-poblaciones , las células T auxiliares 1 (Thl) y las células T auxiliares 2 (Th2) con las cuales el sistema inmunitario es capaz de destruir patógenos (por ejemplo, antígenos) intracelulares (Thl) y extracelulares (Th2) . Las dos poblaciones de celulares Th difieren en el patrón de las proteínas efectoras (citoquinas) producidas por los mismos. De esta forma, las células Thl ayudan a la respuesta inmunitaria celular mediante la activación de macrófagos y células T citotóxicas. Las células Th2, por otro lado, estimulan la respuesta inmunitaria humoral mediante la estimulación de células B para conversión en células plasmáticas y mediante la formación de anticuerpos (por ejemplo, contra antígenos) . La proporción de Thl/Th2 por lo tanto es de gran importancia en la respuesta inmunitaria. Junto con la presente invención, la proporción de Thl/Th2 de la respuesta inmunitaria de preferencia se desplaza por el agente inmunoestimulante , en particular, el complejo de carga con portador polimérico, en la dirección hacia la respuesta celular, es decir la respuesta a Thl, y una respuesta inmunitaria predominantemente celular que se induce mediante esto. Como se describió anteriormente, el complejo de carga con portador polimérico puede inducir una respuesta inmunitaria innata no específica, lo que puede permitir el apoyo de una respuesta inmunitaria adaptativa específica producida por el antígeno.
Determinación de la capacidad inmunoestimuladora (Innata) o adyuvante de un componente en la composición farmacéutica inventiva : Para la determinación de la capacidad inmunoestimuladora de un agente o adyuvante inmunoestimulante (en particular de un complejo de carga con un portador polimérico como se utiliza en la presente invención) se conocen en la técnica y se pueden utilizar diversos métodos. Por ejemplo, en los métodos in vitro es ventajoso utilizar compuestos por su capacidad para inducir citoquinas que (exclusivamente o al menos típicamente) forman parte del sistema inmunitario innato y con esto (como un arma adicional del sistema inmunitario) típicamente mejoran la inducción de una respuesta inmunitaria antígeno-específica provocada por un antígeno. Para este fin, por ejemplo los PBMC se pueden aislar de muestras sanguíneas y estimular con el agente o adyuvante inmunoestimulante particular. Después de la incubación, la secreción de las citoquinas deseadas (por ejemplo, como una reacción de una activación de los receptores PAMP) típicamente formará parte del sistema inmunitario innato (y no del sistema inmunitario antígeno-específico) se determina mediante ELISA. Estas citoquinas seleccionadas se pueden utilizar en la técnica como determinantes de la inducción de una respuesta inmunitaria innata en el cuerpo. En este contexto, la secreción de TNF-alfa e IFN-alfa de preferencia se mide para determinar (la respuesta inmunitaria innata) no especifica evocada por un compuesto o complejo. En especial, la IFN-alfa desempeña una función importante en la inducción de una respuesta inmunitaria no especifica después de una infección viral y se puede utilizar como un indicador de la inducción de una respuesta inmunitaria adaptativa modificada por Thl lo cual se prefiere particularmente en el contexto del tratamiento de cáncer o enfermedades tumorales. Por consiguiente, se prefiere particularmente que el compuesto o complejo inmunoestimulador probado en el análisis de selección, induzca la secreción de, por ejemplo IFN-alfa. Este compuesto o complejo luego se puede aplicar, por ejemplo, para utilizarse como un agente inmunoestimulante (se activa la respuesta inmunitaria no especifica (innata)) en terapias de vacunación .
La IFN-alfa forma parte de la familia de interferones tipo I. Los interferones Tipo I (IFN) son citoquinas pleiotropicas que son esenciales para apoyar las respuestas inmunitarias anti-virales . Inducen apoptosis de las células infectadas con virus y resistencia celular a la infección viral, además de activar las células citoliticas (NK) y las células T. los interferones Tipo I tiene efectos sobre un gran conjunto de citoquinas y quimiocinas que ínter alia influyen en la maduración de inmunocitos, que albergan, funciones efectoras y apoptosis. Típicamente, una función principal de la IFN-alfa es la inducción de un estado de cebado afectando la producción y regulación de otros mediadores, incluyendo citoquinas. Por ejemplo, la señalización de IFN-alfaP sobre-regula la producción de IFN-alfay mediante células dendríticas (DC) y células T y con esto favores la inducción y mantenimiento de células Thl. La modificación de una respuesta inmunitaria en la dirección de una respuesta inmunitaria a Thl puede hacerse particularmente importante, una vez que se utilizan vacunas proteínicas o peptídicas, debido a que estas vacunas usualmente inducen una respuesta inmunitaria basada Th2 que por consiguiente evita o disminuye la inducción de células T citotóxicas.
Por lo tanto, se prefiere que un compuesto o complejo que se utilizará como un adyuvante en el contexto de la presente invención de preferencia tenga la propiedad de modificar una respuesta inmunitaria antígeno-específica provocada por un antígeno hacia una respuesta inmunitaria basada en Thl. La dirección de una respuesta inmunitaria inducida por un antígeno usualmente se mide mediante la determinación de la inducción de diversos subtipos de anticuerpos antigeno-especificos y la inducción de células T CD8+ citotóxicas antigeno-especificas. En este contexto, el anticuerpo subtipo IgGl representa la inducción de una respuesta inmunitaria basada en Th2 y la inducción del anticuerpo subtipo IgG2a y la inducción de células T citotóxicas representan la inducción de una respuesta inmunitaria basada en Thl . La inducción de anticuerpos antigeno-especificos típicamente se determina mediante la medición del título de anticuerpos en la sangre de la vacuna mediante ELISA. La inducción de células T citotóxicas antigeno-especificas típicamente se determina mediante la medición de la secreción de IFN-gamma en esplenocitos después de la estimulación con péptidos antigeno-especificos mediante ELISPOT. En este contexto, la inducción de la secreción de IFN-gamma proporciona evidencia de que están presentes células T citotóxicas antigeno-especifico en el bazo y que especí icamente pueden atacar a las células que presenten epítopes del antígeno sobre moléculas de MHC y sobre sus superficies.
Para determinación de las propiedades benéficas de un adyuvante, típicamente se realizan vacunaciones in vivo. Con esto, es posible investigar si el adyuvante o el compuesto o complejo inmunoestimulador mejora una respuesta ' inmunitaria antígeno-especifica provocada por la vacuna y, además, puede modificar una respuesta inmunitaria antigeno- especifica en la dirección deseada para exhibir propiedades adyuvantes. Particularmente, en la inducción de una respuesta inmunitaria anti-tumoral , la inducción de una respuesta inmunitaria modificada por Thl, en especial la inducción de células T citotóxicas se cree que desempeña una función principal, debido a que se cree que la inducción de las células T citotóxica antigeno-especifico representan un pre- requisito indispensable para el combate exitoso de un tumor.
Por consiguiente, los métodos para seleccionar, probar y/o investigar un compuesto o complejos que exhiban propiedades como adyuvantes son bien conocidos en la técnica y se pueden aplicar fácilmente, por ejemplo mediante pruebas ELISA que miden la respuesta inmunitaria producida por los compuestos/complejos probados.
En otro aspecto, la presente invención se relaciona con un método para preparar una composición farmacéutica de la invención, el método comprende los pasos de: (i) proporcionar un complejo de carga con portador polimérico como se define en cualquier lugar en la presente; (ü) proporcionar un antigeno como se define en cualquier lugar en la presente; y (iii) combinar el complejo de carga con portador polimérico y el antigeno. El paso de combinación de (iii) se puede presentar brevemente antes de la administración a un paciente (tal como aproximadamente 1, 5, 15, 30 ó 60 minutos antes, hasta 72 horas antes, de la administración) , o se puede presentar durante la preparación de la composición farmacéutica. La persona con experiencia normal respectiva (por ejemplo, un doctor o un profesional de salud, o un fabricante) estarán conscientes de las metodologías rutinarias adecuadas para este paso de combinación .
En el contexto de la presente invención, un método para preparar el complejo de carga con portador polimérico como se define en la presente puede comprender los siguientes pasos : a) proporcionar al menos una proteína o péptido catiónico como se define en la y/o al menos un polímero catiónico o policatiónico y opcionalmente al menos un componente de aminoácido (AA) como se define en la presente, comprendiendo cada uno al menos una porción -SH, b) proporcionar al menos una molécula de ácido nucleico como se define en la presente, de preferencia en las proporciones mencionadas anteriormente, c) mezclar los componentes proporcionados en los pasos a) y b) , de preferencia en un entorno básico o neutro como se define en la presente, de preferencia en presencia de oxígeno o un iniciador adicional, como se define en la presente, de preferencia a un pH, a una temperatura y en un momento como se define en la presente, y con esto condensar y de esta forma polimerizar los componentes catiónicos proporcionados en el paso a) con cada uno de los otros enlaces disulfuro (en una condensación de polimerización o policondensación ) para obtener el portador polimérico y complejar la molécula de ácido nucleico proporcionada en el paso b) con los componentes catiónicos proporcionados en el paso a ) , d) opcionalmente purificar el complejo de carga con portador polimérico obtenido de acuerdo con el paso c) , de preferencia utilizando un método, como se define en la presente, e) opcionalmente la liofilización del complejo de carga con portador polimérico obtenido y de acuerdo con el paso c ) o d) .
El método para preparar el complejo de carga con portador polimérico como se describe en la presente, puede comprender una polimerización de condensación de múltiples pasos o una reacción de policondensación vía las porciones -SH de los eductos, por ejemplo, péptidos o polímeros catiónicos, como se define en la presente y opcionalmente los componentes de aminoácido (AA) adicionales en el paso c) . La polimerización de condensación o la reacción de policondensación que se presenta simultáneamente con la complejación o unión electrostática de la molécula de ácido nucleico de preferencia conduce al complejo de carga con portador polimérico en donde el portador polimérico es un polímero de condensación, en donde componentes individuales se ligan mediante enlaces disulfuro.
Como se describe en la presente en el paso a) del método para preparar el complejo de carga con portador polimérico, se proporciona al menos una proteína o péptido catiónico o policatiónico, como define en y/o al polímero catiónico o policatiónico como se define en la presente, de preferencia en las proporciones indicadas anteriormente. Estos componentes se mezclan en el paso c) con la molécula de ácido nucleico proporcionada en el paso b) , de preferencia en un entorno básico o neutro, como se define en la presente, de preferencia en presencia de oxígeno o un iniciador adicional, como se define en la presente, de preferencia a un pH, y a una temperatura y en un momento, como se define en la presente, y con esto condensar y de esta forma polimerizar estos compuestos entre sí vía enlaces disulfuro (en una condensación o policondensación de polimerización) para obtener un portador polimérico complejado con la molécula de ácido nucleico como se define en la presente.
De acuerdo con una alternativa, en el paso a) del método para preparar el complejo de carga con portador polimérico se proporcionan al menos una proteina o péptido catiónico o policatiónico y/o al menos un polímero catiónico o policatiónico, como se define en la presente, y opcionalmente al menos un componente de aminoácido (??) , se proporcionan en el paso a) como se define en la presente, y se utilizan para una condensación o policondensación de polimerización y una reacción de complejación antes de agregar el ácido nucleico del paso b) aunque utilizando las mismas condiciones de polimerización señaladas para el paso c) . El portador polimérico polimerizado y el ácido nucleico del paso b) luego se mezclan en el paso c) . De preferencia, todos los componentes se proporcionan en las proporciones indicadas anteriormente y se mezclan, de preferencia en un entorno básico o neutro como se define en la presente, de preferencia en presencia de oxígeno o un iniciador adicional como se define en la presente, de preferencia a un pH, a una temperatura y en momento, como se define en la presente. Con el mezclado y el inicio de la reacción, los componentes se condensan y de esta forma se polimerizan entre sí vía enlaces disulfuro (en una condensación o policondensación de polimerización) para obtener un portador polimérico complejado con la molécula de ácido nucleico como se define en la presente.
En ambas alternativas anteriores, diferentes portadores poliméricos, en particular diferentes péptidos y/o diferentes polímeros, se pueden seleccionar en la polimerización de condensación, como se indicó anteriormente. En este contexto, la selección de diferentes componentes del portador polimérico típicamente depende de las propiedades deseadas del portador polimérico final y la intensidad catiónica deseada del portador polimérico final. Por consiguiente, el contenido de componentes catiónicos, además se puede "diluir" o modificar en la alternativa anterior del paso a) por ejemplo al introducir un componente de aminoácido (AA) como se define en la presente, de preferencia en las proporciones definidas anteriormente. Mediante esto, se puede obtener un portador polimérico modificado, en donde el carácter catiónico de portador polimérico sin modificar típicamente permanecen en las limitaciones, como se define en la presente. Las propiedades del portador polimérico final de esta forma se pueden ajusfar según se desee con las propiedades de los componentes (AA) al insertar un componente de aminoácido (AA) como se define en la presente en el paso a) .
En el paso c) , al menos una proteína o péptido catiónico o policatiónico como se definió en la presente y/o al menos un polímero catiónico o policatiónico como se define en la presente, y opcionalmente al menos un componente de aminoácido (AA) y el al menos un ácido nucleico como se define en la presente, de preferencia están contenidos en un entorno básico o neutro en el paso a) del método inventivo para preparar el complejo de carga con portador polimérico inventivo. Este entorno básico o neutro típicamente exhibe una variación de pH entre aproximadamente 5 hasta aproximadamente 10, de preferencia un variación de pH entre aproximadamente 6 hasta aproximadamente 9, de mayor preferencia una variación de pH entre aproximadamente 7 hasta aproximadamente 8, por ejemplo aproximadamente 6.5, 7, 7.5, 8, 8.5, ó 9 o cualquier variación seleccionada a partir de cualquiera de estos dos valores mencionados anteriormente.
Además, la temperatura de la solución en el paso c) de preferencia está en un variación entre aproximadamente 5°C hasta aproximadamente 60 °C, de mayor preferencia en una variación entre aproximadamente 15 °C hasta aproximadamente 40°C, incluso de mayor preferencia en un variación de aproximadamente 20°C hasta aproximadamente 30°C, y con la máxima preferencia en un variación entre aproximadamente 20°C hasta aproximadamente 25°C, por ejemplo aproximadamente 25°C.
En el paso c) del método para preparar el complejo de carga con portador polimérico como se describe en la presente, pueden utilizar como adecuados tampones. Los tampones preferidos pueden comprender, aunque no se limitan, a los que se seleccionan de preferencia a partir de tampones de carbonato, tampones de borato, tampón de Bicina, tampón CHES, tampón CAPS, tampones que contienen Etanolamina, HEPES, tampón MOPS, tampón de fosfato, tampón PIPES, tampón Tris, tampón de tricina, tampón TAPS, y/o tampón TES como agentes amortiguadores. En particular se prefiere un tampón de carbonato.
El mezclado de los componentes, de preferencia en presencia de oxigeno, de preferencia en presencia de un entorno básico o neutro, como se define en la presente, se inicia la polimerización de condensación o reacción de policondensación y la complejacion de al menos una molécula. Para este fin, la mezcla en el paso c) de preferencia se expone a oxigeno o se puede iniciar utilizando un iniciador adicional, por ejemplo una cantidad catalítica de un agente oxidante, por ejemplo D SO, etc. con el inicio de la polimerización de condensación o reacción de policondensación de al menos una proteína o péptido catiónico o policatiónico y/o al menos un polímero catiónico o policatiónico y opcionalmente al menos un componente de aminoácido (AA) como se define en la presente, se condensan y de esta forma se polimerizan entre sí vía enlaces disulfuro (condensación o policondensacion de polimerización) . En este paso a) de la reacción de preferencia se crean polímeros lineales utilizando monómeros con al menos una porción -SH reactiva, es decir al menos una proteína o péptido catiónico o policatiónico y/o . al menos un polímero catiónico o policatiónico y opcionalmente al menos un componente de aminoácido (AA) como se define en la presente, cada componente exhibe una porción -SH- libre, como se define en la presente, por ejemplo en sus extremos terminales. Sin embargo, se pueden utilizar componentes con más de una, de preferencia dos porciones -SH- libres, lo cual puede conducir a polímeros ramificados. Simultáneamente a la reacción de polimerización, los polímeros catiónicos se unen a al menos una molécula de ácido nucleico y con esto la complejan.
De acuerdo con una alternativa, el complejo de carga con portador polimérico adicionalmente se pueden modificar con un componente (AA) como se define en la presente .
De acuerdo con un primer ejemplo, un componente (AA) (por ejemplo un ligando) está unido al componente catiónico antes de proporcionar el componente catiónico en el paso a) vía cualquier funcionalidad, como se define en la presente, por ejemplo una porción -SH. Este componente (AA) o (por ejemplo un ligando) de preferencia está unido al componente catiónico en un término de estos componentes. Si la unión se lleva a cabo vía una porción -SH, los componentes catiónicos de preferencia se proporcionan con dos (o incluso más) porciones -SH-. El componente (AA) o (por ejemplo un ligando) de preferencia porta únicamente una porción -SH. En este caso, una porción -SH del componente catiónico de preferencia está protegida en un primer paso utilizando un grupo protector como se conoce en la técnica. Luego, el componente catiónico se puede unir a un componente L para formar un primer enlace disulfuro vía la porción -SH no protegida. La porción -SH protegida del componente catiónico luego típicamente se desprotege para reacciones adicionales.
Alternativamente, el componente (AA) o (por ejemplo un ligando) mencionados anteriormente se puede utilizar en el paso c) para que se acople con los componentes catiónicos proporcionados en el paso a) anteriormente, por ejemplo, vía enlaces disulfuro sin bloquear las porciones -SH libres. Aunque en este contexto, se pueden utilizar todos los métodos conocidos por un experto o definidos en la presente para unir el componente (AA) al componente catiónico o al portador pol imérico .
Alternativamente, un componente (AA) o (por ejemplo un ligando) se pueden unir al complejo de carga con portador polimérico después del paso c) vía cualquier funcionalidad como se define en la presente, por ejemplo una porción -SH. En este contexto se prefiere que el componente (AA) (por ejemplo un ligando) esté unido vía las porciones -SH libres de los componentes del portador polimérico.
De acuerdo con el paso c) del método para preparar el complejo de carga con portador polimérico como se describe en la presente, al menos una molécula de ácido nucleico como se define en la presente se mezcla con los componentes catiónicos proporcionados en el paso b) , de preferencia en las proporciones mencionadas anteriormente. Típicamente, en el complejo de carga con portador polimérico, los componentes catiónicos como se define en la presente, y al menos una molécula de ácido nucleico se proporciona en una proporción molar de aproximadamente 5 hasta 10000, de preferencia en una proporción molar de aproximadamente 5 hasta 5000, de mayor preferencia en una proporción molar de aproximadamente 10 hasta 2500, incluso de mayor preferencia en una proporción molar de aproximadamente 10 hasta 1000 polímero catiónico a ácido nucleico. Las proporciones de N/P de preferencia como se indicaron anteriormente. En este contexto, en particular se prefiere que las proporciones de N/P se seleccionen mediante esto evitando la aglomeración y toxicidad in vivo.
En una modalidad específica, los componentes (AA) como se definió anteriormente que no comprenden porciones -SH se pueden agregar en el paso c) los cuales con esto se incorporan en el complejo de carga con portador polimérico sin polimerización mediante las porciones -SH (terminales) . Mediante esto, estos componentes (AA) típicamente no están enlazados covalentemente ni se incluyen no covalentemente en el complejo como un componente adicional. En este contexto en particular se prefiere la incorporación de al menos un antígeno o un fragmento, variante y/o derivado del mismo, proporcionado como una proteína o péptido en el complejo de carga con portador polimérico como el componente (AA) . Esta modalidad se prefiere particularmente si AA es ovalbúmina o un fragmento de ovalbúmina. De esta forma, en una modalidad particularmente preferida, si AA es ovalbúmina o un fragmento de la misma, el AA no está ligado covalentemente al complejo de carga con portador polimérico, por ejemplo, el AA no está ligado covalentemente al complejo de carga con portador polimérico mediante enlaces disulfuro.
De acuerdo con un paso d) adicional del método para preparar el complejo de carga con portador polimérico como se describe en la presente, el complejo de carga con portador polimérico obtenido de acuerdo con el paso c) opcionalmente se purifica. La purificación se puede presentar al utilizar métodos cromatográficos , tales como HPLC, FPLC, GPS, diálisis, etc.
De acuerdo con un paso e) adicional del método para preparar el complejo de carga con portador polimérico como se describe en la presente, el complejo de carga con portador polimérico obtenido de acuerdo con el paso c) o d) se liofiliza opcionalmente . Para este fin, se puede agregar cualquier crioprotector o lioprotector adecuado al complejo de carga con portador polimérico obtenido en el paso c) o d) .
El método para preparar el complejo de carga con portador polimérico como se define en la presente particularmente es adecuado para adaptar las propiedades químicas del complejo de carga con portador polimérico debido a una selección específica de sus componentes del portador polimérico evitando con esto la aglomeración y toxicidad in vivo.
Como un segundo ingrediente, la composición farmacéutica inventiva comprende al menos un antígeno seleccionado de un antígeno proveniente de un patógeno asociado con una enfermedad infecciosa; un antígeno asociado con alergia o una enfermedad alérgica; un antígeno asociado con una enfermedad autoinmune; o un antígeno asociado con un cáncer o enfermedad tumoral, o en cada caso un fragmento, variante y/o derivado del antígeno.
Al menos este antígeno se puede proporcionar como una proteína o péptido, como ácido nucleico que codifica para al menos un antígeno, o como células antigénicas, fragmentos celulares antigénicos, fracciones celulares; patógenos (virus, bacterias etc.) modificados, atenuados o inactivados (por ejemplo, químicamente o mediante irradiación) con componentes de pared celular que comprenden al menos un antigeno .
En ciertas modalidades, el antígeno incluido como un segundo ingrediente en la composición farmacéutica es un antígeno peptídico o proteínico, o un fragmento, variante y/o derivado del antígeno peptídico o proteínico. a) Antígenos provenientes de un patógeno asociado con una enfermedad infecciosa: Los antígenos provenientes de un patógeno asociado con una enfermedad infecciosa se derivan de un patógeno que esté asociado con la inducción de una enfermedad infecciosa. En ciertas modalidades, el antígeno es un antígeno péptido o proteínico, o un fragmento, variante y/o derivado del antígeno peptídico o proteínico, y/o está comprometido en, proporcionado como y/o derivado de (por ejemplo, una preparación de) un patógeno inactivado o atenuado, (por ejemplo, un virus tal como cualquiera de los descritos en la presente) . En este contexto, el antígeno (por ejemplo, peptídico o proteínico) puede estar comprendido en, proporcionado como y/o derivado de (por ejemplo, una preparación de) un patógeno atenuado o inactivado (por ejemplo, un virus tal como cualquiera de los descritos en la presente) asociado con una enfermedad infecciosa.
En modalidades alternativas de todos los aspectos de la invención, un antigeno (por ejemplo, un antigeno peptidico o proteinico) utilizado en la presente invención no es uno que esté comprendido en (por ejemplo, una preparación de) virus inactivado o atenuado (tal como cualquiera de los descritos en la presente, o cualquier patógeno descrito en la presente); y/o es uno que no se proporcione como (por ejemplo una preparación) de un virus o patógeno inactivado o atenuado; y/o uno que no se derive de (por ejemplo una preparación de) un virus o patógeno inactivado o atenuado. Por ejemplo, el antigeno utilizado en cualquier aspecto de la presente invención puede ser, o puede estar proporcionado como, un antigeno proteinico o peptidico aislado y/o purificado. Como se entenderá por la persona con experiencia normal, un antigeno aislado (y/o purificado) incluye estos antigenos que están presentes (o proporcionados) en una composición (de partida) que tengan menos de aproximadamente el 40%, 30%, 20%, 10%, 5%, 2% o 1% de componentes no deseados u otros específicos tales como otras proteínas /péptidos o impurezas .
En modalidades particulares, el antigeno (por ejemplo, proteinico o peptidico) utilizado en la presente invención, es un antigeno recombinante , por ejemplo, uno que se prepara utilizando producción recombinante, tal como utilizando aquellas metodologías descritas en la presente. En modalidades alternativas, el antígeno (por ejemplo proteinico o peptidico) utilizado en la presente invención, es un antígeno sintético, por ejemplo uno que se prepara utilizando síntesis peptídica, tal como uLilizando aquellas metodologías descritas en la presente.
Los anlígenos pro enientes de un patógeno asociado con una enfermedad infeccionsa se seleccionan de antígenos provenientes de los patógenos Acinetobacter baumanriií, Anaplasma genus, Anaplasma phagocytophilum, Ancylostoma braziliense, Ancylostoma duodenale, Arcanobacterium haemolyticum, Ascaris lumbricoides , Aspergillus genus, Astroviridae, Babesia genus, Bacillus anthracis, Bacillus cereus, Bartonella henselae, BK virus, Blastocystis hominis, Blastomyces dermatitidis , Bordetella pertussis, Borrelia burgdorferi, Borrelia genus, Borrelia spp, Brucella genus, Brugia malayi, Bunyaviridae family, Burkholderia cepacia y otras especies de Burkholderia, Burkholderia mallei, Burkholderia pseudomallei , familia Caliciviridae , género Campylobacter , Candida albicans, Candida spp, Chlamydia trachomatis , Chlamydophila pneumoniae, Chlamydophila psittaci, CJD prión, Clonorchis sinensis, Clostridium botulinum, Clostridium difficile, Clostridium perfringens, Clostridium perfringens, Clostridium spp, Clostridium tetani, Coccidioides spp, coronaviruses , Corynebacterium dipht eriae , Coxiella burnetii, virus de fiebre hemorrágica Crimean-Congo, Cryptococcus neoformans, género Cryptosporidium, Cytomegalovirus, virus del Dengue ( DEN-1 , DEN-2 , DEN-3 y DEN-4), Dientamoeba fragilis, Ebolavirus (EBOV) , género Echinococcus , Ehrlichia chaffeensis, Ehrlichia ewingii, género Ehrlichia, Entamoeba histolytica, género totalcoccus, género totalvirus, totalviruses , principalmente virus de Coxsackie A y enterovirus 71 (EV71), Epidermophyton spp, virus Epstein-Barr (EBV) , Escherichia coli 0157:H7, 0111 y O104:H4, Fasciola hepática y Fasciola gigantica, FFI prión, súperfamilia de Filarioidea, Flaviviruses, Francisella tularensis, género Fusobacterium, Geotrichum candidum, Giardia intestinalis , Gnathostoma spp, GSS prión, virus Guanarito, Haemophilus ducreyi, Haemophilus influenzae, Helicobacter pylori, Henipavirus (virus Hendra virus Nipah) , virus de Hepatitis A, virus de Hepatitis B, virus de Hepatitis C, virus de Hepatitis D, virus de Hepatitis E, virus de Herpes simplex 1 y 2 (HSV-1 y HSV-2), Histoplasma capsulatum, VIH (virus de inmunodeficiencia humana), Hortaea werneckii, bocavirus humano (HBoV) , herpesvirus humano 6 (HHV-6) y herpesvirus humano 7 (HHV-7), metapneumovirus humano (hMPV) , papilomavirus humano (HPV) , virus de parainfluenza humana (HPIV), virus de encefalitis japonesa, virus JC, virus Junin, Kingella kingae, Klebsiella granulomatis , Kuru prión, Lassa virus, Legionella pneumophila, género Leishmania, género Leptospira, monocitógenos de Listeria, virus de coriomeningitis Linfocitica (LCMV) , virus Machupo, Malassezia spp, virus Marburg, virus Sarampión, Metagonimus yokagawai, Microsporidia phylum, virus Molluscum contagiosum (MCV) , virus Paperas, ycobacterium leprae y ycobacterium lepromatosis , Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium ulcerans, Mycoplasma pneumoniae, Naegleria fowleri, Necator americanus, Neisseria gonorrhoeae, Neisseria meningitidis , Nocardia asteroides, Nocardia spp, Onchocerca volvulus, Orientia tsutsugamushi , familia Orthomyxoviridae , Paracoccidioides brasiliensis , Paragonimus spp, Paragonimus westermani, Parvovirus B19, género Pasteurella, género Plasmodium, Pneumocystis jirovecii, Poliovirus, virus de la rabia, virus sincitial respiratorio (RSV) , Rhinovirus, rhinoviruses , Rickettsia akari, género Rickettsia, Rickettsia prowazekii, Rickettsia rickettsii, Rickettsia typhi, Rift virus de fiebre Valley, Rotavirus, virus de rubéola, virus Sabia, género Salmonella, Sarcoptes scabiei, SARS coronavi us , género Schistosoma, género Shigella, virus sin Nombre, Hantavirus, Sporothrix schenckii, género Staphylococcus, género Staphylococcus , Streptococcus agalactiae, Streptococcus pneumoniae, pirógenos Streptococcus, Strongyloides stercoralis, género Taenia, Taenia solium, virus de encefalitis de la garrapata (TBEV) , Toxocara canis o Toxocara cati, Toxoplasma gondii, Treponema pallidum, Trichinella spiralis, Trichomonas vaginalis, Trichophyton spp, Trichuris trichiura, Trypanosoma brucei, Trypanosoma cruzi, Ureaplasma urealyticum, virus de varicela zoster (VZV) , virus de varicela zoster (VZV) , Varióla mayor o Varióla menor, vCJD prión, virus de encefalitis equina venezolana, Vibrio cholerae, virus de Nilo occidental, virus de encefalitis equina occidental, Wuchereria bancrofti, virus de fiebre amarilla, Yersinia totalcolitica , Yersinia pestis, y Yersinia pseudotuberculosis .
En este contexto, en particular se prefieren los antigenos provenientes de patógenos seleccionados del virus de la Rabia, virus de Hepatitis B, virus de papiloma humano (hPV) , Bacillus anthracis, virus sincitial respiratorio (RSV) , virus de herpes simplex (HSV) , virus de influenza y Mycobacterium tuberculosis.
Además, el antigeno proveniente de un patógeno asociado con una enfermedad infecciosa se puede seleccionar de los siguientes antigenos: proteina A OmpA de membrana externa, proteina Bap biopelicula asociada, proteina de transporte MucK (infecciones por Acinetobacter baumannii, Acinetobacter) ; glucoproteina VSG de superficie variable, proteina MAPP15 microtúbulo-asociada , trans-sialidasa TSA (Trypanosoma brucei, enfermedad Africana del sueño (African trypanosomiasis ) ) ; antigeno p24 de VIH, proteínas con envoltura de VIH (Gpl20, Gp41, Gpl60), poliproteína GAG, proteína Nef de factor negativo, trans-activador de transcripción Tat (VIH (virus de inmunodeficiencia humana) , AIDS (síndrome de inmunodeficiencia adquirida)); proteína GIAP de adherencia inhibitable por galactosa, antígeno de 29 kDa Eh29, lectina Gal /GalNAc , proteína CRT, antígeno inmunodominante de 125 kDa, proteína M17, adhesina ADH112, proteína STIRP (Entamoeba histolytica, Amoebiasis) ; proteínas de superficie mayor 1-5 (MSPla, MSPlb, MSP2, MSP3, MSP4, MSP5) , proteínas del sistema de secreción tipo IV (VirB2, VirB7, VirBll, VirD4) (género Anaplasma, Anaplasmosis ) ; antígeno protector PA, factor de edema EF, factor letal LF, la proteína de homología con capa S SLH (Bacillus anthracis, Anthrax) ; acranolisina , fosfolipasa D, proteína CbpA de unión a colágeno (infección por Arcanobacterium haemolyticum, Arcanobacterium haemolyticum) ; proteína con nucleocápside NP, precursor de glucoproteinas GPC, glucoproteína GP1, glucoproteína GP2 (Junin virus, fiebre hemorrágica Argentina) ; proteínas con capa proteínica de quitina, antígeno superficial A14 de 14 kDa, proteína espemática mayor MSP, proteína para organización de polimerización MSP MPOP, proteína de fibra MSP 2 MFP2, quinasa para activación de polimerización MSP MPAK, proteína similar a ABA-1 ALB, proteína ABA-1, cuticulina CUT-1 (Ascaris lumbricoides , Ascariasis ) ; alérgeno Asp vl3 de 41 kDa, alérgeno Asp f3, proteína rodlet A de superficie conidial mayor, proteasa Peplp, proteína anclada a GPI Gellp, proteína anclada a GPI Crflp (género Aspergillus, Aspergillosis ) ; proteína de la familia VP26, proteína VP29 (Astroviridae, infección por Astrovirus ) ; proteína 1 Rhoptry-asociada RAP-1, antígenos merozoitos superficiales MSA-1, MSA-2 (al, a2, b, c) , 12D3, 11C5, 21B4, P29, antígeno de superficie eritrocítica variante VESA1, antígeno 1 de membrana apical AMA-1 (género Babesia, Babesiosis); hemolisina, enterotoxina C, PXOl-51, glucolato oxidasa, transportador de ABC, proteína de unión a penicilina, proteína de la familia de transportadores de zinc, pseudouridina sintasa Rsu, proteína para replicación de plásmidos RepX, oligoendopeptidasa F, proteína de membrana profago, proteína HemK, antígeno flagelar H, antígeno de superficie celular 28.5-kDa (Bacillus cereus, infección por Bacillus cereus); antígeno T largo LT, antígeno T pequeño, proteina cápside VP1, proteína cápside VP2 (virus BK, infección por virus BK) ; proteína de 29 kDa, antígenos similares a caspasa-3, glucoproteínas ( Blastocystis hominis, infección por Blastocystis hominis) ; adhesína con superficie de levadura WI-1 (Blastomyces dermatitidis , Blastomycosis) ; nucleoproteína N, polimerasa L, proteína de matriz Z, glucoproteína GP (Machupo virus, fiebre hemorrágica Boliviana) ; proteína A de superficie externa OspA, proteína de superficie externa OspB, proteína de superficie externa OspC, proteína ? de unión a decorina DbpA, proteína B de unión a decorina DbpB, proteína núcleo Fia de 41 kDa con filamentos flagelares, precursor BmpA de la proteína A con membrana básica (antígeno inmunodominante P39), precursor de lipoproteína de 22 kDa de superficie externa (antígeno IPLA7), lipoproteína vlsE de superficie variable (género Borrelia, infección de Borrelia) ; neurotixinas de Botulinum BoNT/Al, BoNT/A2, BoNT/A3 , BoNT/B, BoNT/C, BoNT/D, BoNT/E, BoNT/F, BoNT/G, dominio FHc de la toxina F He de botulinum recombinante (Clostridium botulinum, Botulismo (y botulismo infantil) ) ; nucleocapside, precursor de glucoproteína (virus Sabia, fiebre hemorrágica Brasileña) ; superoxido dismutasa de cobre/zinc SodC, bacterioferritina Bfr, proteína ribosómica 50S RplL, proteína Omp31 que contiene dominios transmembrana similares a OmpA, proteina inmunogénica de de 39-kDa M5 P39, proteina znuA de unión a zinc periplásmico del transportador de ABC con zinc, proteina Bp26 inmunogénica periplásmica , proteina ribosómica 30S S12 RpsL, gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa Gap, precursor Omp25 de la proteina inmunogénica de membrana externa de 25 kDa, proteina B de invasión lalB, factor activador Tig, chaperona molecular DnaK, peptidil-prolil cis-transisomerasa putativa SurA, lipoproteina 0mpl9, proteina de membrana externa MotY 0mpl6, proteina de membrana externa conservada D15, malato deshidrogenasa Mdh, componente del sistema de secreción Tipo IV (T4SS) VirJ, lipoproteina de función desconocida BAB1_0187 (género Brucella, Brucellosis) ; miembros de la familia de transportadores ABC (LolC, OppA, y PotF) , proteina transmembrana LolC/E del sistema para liberación de lipoproteina putativas, flagellin FliC, motilidad intracelular de Burkholderia A BimA, factor-Tu de alargamiento bacteriano EF-Tu, proteina similar a OmpA de 17 kDa, proteina codificante boaA, proteina codificante boaB (Burkholderia cepacia and otras especies de Burkholderia, infección por Burkholderia) ; micolil-transferasa Ag85A, proteina de choque térmico Hsp65, proteina TB10.4, antigeno de 19 kDa, proteina PstS3, proteina de choque térmico Hsp70 (Mycobacterium ulcerans, Buruli ulcer); proteínas con cápside viral VP1 y VP2 de norovirus mayor y menor, poliproteína genómica, proteina con cápside Sapoviurus VP1, proteína Vp3, poliproteína genómica (familia Caliciviridae , infección por Calicivirus (Norovirus y Sapovirus)); proteína PorA de membrana externa mayor, flagellin FlaA, antígeno superficial CjaA, proteína CadF de unión a fibronectina, proteína PeblA del transportador de ABC con unión a aspartato/glutamato , proteína FspAl, proteína FspA2 (género Campylobacter , Campylobacteriosis ) ; enzima glucolítica enolasa, proteinasas aspartilo secretadas SAP1-10, proteína de pared celular ligada a glucofosfatidilinositol (GPI), proteína Hyrl, proteína relacionada con el receptor complementario 3 CR3-RP, adhesina Als3p, proteína de choque térmico 90 kDa hsp90, proteína de hidrofobicidad de superficie celular CSH (usualmente Candida albicans y otras especies de Candida, Candidiasis ) ; antígeno de 17-kDa, proteína P26, adhesinas de autotransportadores triméricos TAA, adhesina A BadA de Bartonella, proteínas Vomps de membrana externa expresadas variablemente, proteína Pap3, proteína HbpA, proteasa HtrA envolturas-asociadas, proteína OMP89, proteína GroEL, proteína LalB, proteína OMP43, dihidrolipoamida succiniltransferasa SucB (Bartonella henselae, enfermedad por arañazo de gato) ; proteína superficial-2 amastigote, proteína superficial SSP4 amastigote-específica, cruzipain, trans- sialidasa TS, glucoproteina superficial TSA-1 tripomastigote, proteina reguladora complementaria CRP-10, proteina G4, proteina G2, proteina de varilla paraxonemal PAR2, componente de varilla Parí paraflagelar , proteínas superficiales mucina-asociadas PSP (Trypanosoma cruzi, enfermedad de Chaqas (American trypanosomiasis ) ) ; glucoproteínas con envoltura (gB, gC, gE, gH, gl, gK, gL) (virus de varicela zoster (VZV) , Varicela) ; proteína de membrana externa mayor MOMP, proteína de membrana externa probable PMPC, proteína compleja de membrana externa B OmcB, proteínas de choque térmico Hsp60 HSP10, proteína IncA, proteínas provenientes del sistema de secreción tipo III, proteína de cadena pequeña de ribonucleótido reductasa NrdB, plásmido proteína Pgp3, proteína externa N de clamidia CopN, antígeno CT521, antígeno CT425, antígeno CT043, antígeno TC0052, antígeno TC0189, antígeno TC0582, antígeno TC0660, antígeno TC0726, antígeno TC0816, antígeno TC0828 (Chlamydia trachomatis, Chlamydia); proteína E de baja respuesta a calcio LCrE, proteína externa N de clamidia CopN, serina/treonina-proteína quinasa PknD, proteína con portador de acilo S-maloniltransferasa FabD, proteína de unión a ADN de cadena individual Ssb, proteína de membrana externa mayor MOMP, proteína de membrana externa 2 Omp2, familia de proteínas de membrana polimórfica (Pmpl, Pmp2, Pmp3, Pmp4, Pmp5, Pmp6, Pmp7, Pmp8, Pmp9, PmplO, Pmpll, Pmpl2, Pmpl3, Pmpl4, Pmpl5, Pmpl6, Pmpl7, Pmpl8, Pmpl9, Pmp20, Pmp21) (Chlamydophila pneumoniae, infección por Chlamydophila pneumoniae) ; toxina B de cólera CTB, toxina co-regulada pilin A TcpA, toxina corregulada pilin TcpF, proteina F TcpF para biosintesis de la toxina co-regulada pilus, subunidad A de la enterotoxina de cólera, enterotoxina subunidad B de cólera, enterotoxina estable al calor ST , hemaglutinina sensible a mañosa MSHA, proteina U Porin ompU de membrana externa, proteina Poring B, proteina D de membrana polimórfica (Vibrio cholerae, Cholera) ; propionil-CoA carboxilasa PCC, proteina 14-3-3, prohibitina, proteasas de cisteina, glutatión transferasas , gelsolina, catepsina L proteinasa CatL, Proteina tegumental 20.8 kDa TP20.8, proteina tegumental 31.8 kDa TP31.8, fosfatasa del ácido lisofosfatidico LPAP, (Clonorchis sinensis, Clonorchiasis ) ; proteínas de capa superficial SLP, antígeno de glutamato deshidrogenasa GDH, toxina A, toxina B, cisterna proteasa Cwp84, cisteina proteasa Cwpl3, cisteina proteasa Cwpl9, proteína de pared celular CwpV, proteína flagelar FliC, proteína flagelar FliD (Clostridium difficile, infección por Clostridium difficile); rinovirus: proteínas con cápside VP1, VP2, VP3, VP4; coronavirus: proteínas de espiga S, proteínas con envoltura E, proteínas de membrana M, proteínas con nucleocápside N (usualmente rinovirus y coronavirus, catarro común [Acute viral rhinopharyngitis ; Acute coryza) ) ; proteína del prión Prp (prión CJD, enfermedad de Creutzfeldt-Jakob (CJD) ) proteina con envoltura Ge, proteína con envoltura Gn, proteínas con nucleocápside (virus de fiebre hemorrágica, Crimean-Congo, fiebre hemorrágica Crimean-Congo (CCHF) ) ; helicasa de ARN con caja DEAD virulencia-asociada VAD1, proteína galactoxilomanano GalXM, glucuronoxilomanano GXM, manoproteína MP (Cryptococcus neoformans, Cryptococcosis ) ; proteína ribosómica ácida P2 CpP2, antígenos de mucina Mucl, Muc2, Muc3 Muc4, Muc5, uc6, Muc7, proteína de adherencia superficial CP20, proteína de adherencia superficial CP23, proteína superficial CP12, proteína superficial CP21, proteína superficial CP40, proteína superficial CP60, proteína superficial CP15, glucopéptidos gp40 superficie asociados, glucopéptidos gpl5 superficie asociados, proteína AB con pared de oocisto, profilina PRF, apirasa (género Cryptosporidium, Cryptosporidiosis) ; proteína-1 de unión a ácido graso y retinol FAR-1, inhibidor de tejidos de metaloproteinasa TIMP (TMP) , cisteína proteinasa ACEY-1, cisteína proteinasa ACCP-1, antígeno superficial Ac-16, proteína 2 secretada ASP-2, metaloproteasa 1 MTP-1, inhibidor de aspartilo proteasa API-1, antígeno SAA-1 superficie asociado, anticoagulante AP del inhibidor de proteasa de serina Xa del factor secretado adulto-específico, proteasa aspártica ARR-1 similar a catepsina D (usualmente Ancylostoma braziliense; otros múltiples parásitos, Cutaneous larva migrans (CLM) ) ; proteasas similares a catepsina L, antigeno de 53/25-kDa, miembros de la familia de 8kDa, proteina cisticercosa con una actividad similar a tripsina marginal TsAg5, proteina oncosfera TS0L18, proteina oncosfera TSOL45-1?, lactato deshidrogenasa A LDHA, lactato deshidrogenasa B LDHB (Taenia solium, Cisticercosis ) ; antigeno pp65, proteina membranosa ppl5, proteina con tegumento ppl50 cápside-proximal, proteina M45, ADN polimerasa UL54, helicasa UL105, glucoproteina gM, glucoproteina gN, glucoproteina H, glucoproteina B gB, proteina UL83, proteina UL94, proteina UL99 (Cytomegalovirus , infección por Cytomegalovirus); proteina C con cápside, proteina prM de premembrana, proteina M de membrana, proteina E con envoltura (dominio I, dominio II, dominio II) , proteina NS1, proteina NS2A, proteina NS2B, proteina NS3, proteina NS4A, proteina 2K, proteina NS4B, proteina NS5 (virus de Dengue (DEN-1, DEN-2, DEN-3 y DEN-4 ) - Flavivirus, fiebre por Dengue) ; proteina de 39 kDa (Dientamoeba fragilis, Dientamoebiasis ) ; precursor Tox de la toxina de difteria, toxina DT de difteria, sortasa SrtA pilin-especifica, proteina SpaApilin-varilla, proteina SpaC pilin-tip, proteina SpaB pilin-menor, proteina DIP1281 superficie asociada ( Corynebacterium diphtheriae, Diphtheria) ; glucoproteína GP, nucleoproteína NP, proteína de matriz VP24 menor, proteina de matriz VP40 mayor, activador de transcripción VP30, cofactor de polimerasa VP35, ARN polimerasa L (Ebolavirus (EBOV) , fiebre hemorrágica Ebola) ; proteina de prión (prión vCJD, enfermedad de Creutzfeldt-Jakob variante (vCJD, nvCJD) ) ; proteína B del sistema UvrABC, proteína Flpl, proteína Flp2, proteína Flp3, proteína TadA, receptor de hemoglobina HgbA, proteína de membrana externa TdhA, proteína CpsRA, regulador CpxR, proteína SapA, antígeno de 18 kDa, proteína de membrana externa NcaA, proteína LspA, proteína LspAl, proteína LspA2, proteína LspB, componente de membrana externa DsrA, lectina DltA, lipoproteína Hlp, proteína de membrana externa mayor OMP, proteína de membrana externa 0mpA2 (Haemophilus ducreyi, Chancroide) ; aspartilo proteasa 1 Pepl, fosfolipasa B PLB, alfa-mannosidasa 1 A N1, glucanosiltransferasa GEL1, ureasa URE, proteína de matriz peroxisomal Pmpl, antígeno rico en prolina Pra, proteína reactiva de células T humanas TcrP (Coccidioides immitis y Coccidíoides posadasii, Coccidioidomycosis ) ; alérgeno Tri r 2, proteína 60 de chogue térmico Hsp60, actina fungal Act, antígeno Tri r2, antígeno Tri r4 , antígeno Tri ti, proteína IV, glicerol-3-fosfato deshidrogenasa Gpdl, osmosensor HwSholA, osmosensor HwSholB, histidina quinasa HwHhk7B, alérgeno Mala s 1, alérgeno Mala s 11, tioredoxina Trx Mala s 13, alérgeno Mala f, alérgeno Mala s (usualmente Trichophyton spp, Epidermophyton spp., Malassezia spp., Hortaea erneckii, Dermatofitosis ) ; proteina EG95, proteína EG10, proteina EG18, proteina EgA31, proteina EM18, antigeno EPC1, antígeno B, antígeno 5, proteína P29, proteína 14-3-3, proteína de 8-kDa, miofilina, proteína 20 de choque térmico HSP20, glucoproteína GP-89, proteína de unión a ácido graso FAPB (género Echinococcus , Echinococcosis ) ; proteína superficial mayor 2 MSP2, proteína superficial mayor 4 MSP4, variante MSP SGV1, variante MSP SGV2, proteína de membrana externa OMP, proteína de membrana externa 19 OMP-19, proteína antigénica mayor MAPI, proteína antigénica mayor MAP1-2, proteína antigénica mayor MAP1B, proteína antigénica mayor MAP1-3, proteína codificante Erum2510, proteína GroEL, proteína GroES, proteínas de membrana externa mayor de 30-kDA, proteína GE de 100-kDa, proteína GE de 130-kDa, proteína GE de 160-kDa (género Ehrlichia, Ehrlichiosis ) ; antígeno secretado SagA, proteínas similares a sagA SalA y SalB, colágeno adhesina Scm, proteínas superficiales Fmsl (EbpA(fm), Fms5 (EbpB(fm), Fms9 ¡EpbC(fm) y FmslO, proteína EbpC(fm), glucoproteína inmunoprotectora Gl de 96 kDa (género Enterococcus , infección por Enterococcus); poliproteína genómica, polimerasa 3D, proteína de cápside viral VP1, proteína de cápside viral VP2, proteína de cápside viral VP3, proteína de cápside viral VP4, proteasa 2A, proteasa 3C (género Enterovirus, infección por enterovirus ) ; proteínas de membrana externa OM, proteína de membrana externa de 60 kDa, antígeno de superficie celular OmpA, antígeno de superficie celular OmpB (sca5), proteína de membrana externa de 134 kDa, proteína de membrana externa de 31 kDa, proteína de membrana externa de 29.5 kDa, proteína de superficie celular SCA4, proteína de superficie celular Adrl (RP827), proteína de superficie celular Adr2 (RP828), proteína de superficie celular SCA1, proteína de invasión invA, proteína de división celular fts, familia sec 0 de proteínas de secreción, proteínas de virulencia virB, tlyA, tlyC, proteína similar a parvulina Plp, preproteína translocasa SecA, antígeno de proteína superficial SPA de 120-kDa, antígeno complejo de 138 kD, proteína mayor de 100-kD (proteína I), proteína intracitoplásmica D, antígeno de proteína superficial protectora SPA (Rickettsia prowazekii, Tifus epidémico); antígenos nucleares Epstein-Barr (EBNA-1, EBNA-2, EBNA-3A, EBNA-3B, EBNA-3C, proteína líder de EBNA (EBNA-LP) ) , proteínas membranosas latentes (LMP-1, L P-2A, LMP-2B) , antígeno temprano EBV-EA, antígeno de membrana EBV-MA, antígeno con cápside viral EBV-VCA, nucleasa alcalina EBV-A , glucoproteína H, glucoproteína gp350, glucoproteína gpllO, glucoproteína gp42, glucoproteína gHgL, glucoproteína gB (virus Epstein-Barr (EBV) , Mononucleosis infecciosa por el virus de Epstein-Barr) ; proteína con cápaside VP2, proteina con cápside VP1, proteína mayor NSl (Parvovirus B19, Erythema infectiosum (quinta enfermedad)); antígeno pp65, glucoproteína 105, proteína con cápside mayor, glucoproteína con envoltura H, proteína U51 (herpesvirus humano 6 (HHV-6) y herpesvirus humano 7 (HHV-7), Exanthem subitum) ; tioredoxin-glutatión reductasa TGR, catepsinas Ll y L2, proteína tipo Kunitz KT , leucina aminopeptidasa LAP, cisterna proteinasa Fas2, proteína 2 similar a saposina SAP-2, Lioredoxin peroxidasas TPx, Prx-1, Prx-2, catepsina 1 cisteína proteinasa CL3, proteasa catepsina L CL1, fosfoglicerato quinasa PGK, proteína secretora de 27-kDa, proteína HSP35alfa de 60 kDa, glutatión transferasa GST, antígeno tegumental TA de 28.5 kDa, catepsina B3 proteasa CatB3, cistatina stefina-1 Tipo I, catepsina L5, catepsina Llg y catepsina B, proteina de unión a ácido graso FABP, leucina aminopept idasas LAP (Fasciola hepática y Fasciola gigantica, Fasciolosis ) ; proteína de prión (prión FFI, insomnia familiar fatal (FFI)); proteína similar al homólogo alérgeno venom VAL-1, transcripción larval abundante ALT-1, transcripción larval abundante ALT-2, tioredoxin peroxidasa TPX, homólogo alérgeno de véspido VAH, tiordoxin peroxidasa 2 TPX-2, proteína antigénica SXP (péptidos N, NI, N2 , y N3), protein-1 activación asociada ASP-1, Tioredoxina TRX, transglutaminasa BmTGA, glutatión-S-transferasas GST, miosina, homólogo alérgeno de véspido VAH, colagenasa de 175 kDa, gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa GAPDH, colágeno cuticular Col-4, proteínas ácidas larvales secretadas SLAP, quitinasa CHI-1, proteína de unión a maltosa MBP, enzima glucolítica fructosa-1 , 6-bisfosfato aldolasa Fba, tropomiosina TMY-1, producto génico específico de nematodos OvB20, oncocistat ina CPI-2, Cox-2 ( superfamilia de Filarioidea, Filariasis ) ; fosfolipasa C PLC, enterotoxina B termo lábil, componente de toxina Iota Ib, proteína CPE1281, piruvato ferredoxin oxidoreductasa , factor de alargamiento G EF-G, perfringolisina 0 Pfo, gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa GapC, Fructosa-bisfosfato aldolasa Alf2, clostridium perfringens enterotoxina CPE, toxina alfa AT, toxoide alfa ATd, eps ilón-toxoide ETd, proteína HP, citotoxina larga TpeL, endo-beta-N-acetilglucosaminidasa Naglu, fosfogliceromutasa Pgm (Clostridium perfringens, envenenamiento de alimentos por Clostridium perfringens); leucotoxina lktA, FadA de adhesión, proteína de membrana externa RadD, proteína de unión a arginina de alto peso molecular (género Fusobacterium, infección por Fusobacterium) ; fosfolipasa C PLC, enterotoxina B termo- lábil, componente Ib de toxina Iota, proteína CPE1281, piruvato ferredoxin oxidoreductasa, factor de alargamiento G EF-G, perfringolisina O Pfo, gliceraldehido-3-fosfato deshidrogenasa GapC, fructosa-bisfosfato aldolasa Alf2, clostridium perfringens enterotoxina CPE, toxina alfa AT, toxoide alfa ATd, epsilón-toxoide ETd, proteina HP, citotoxina larga TpeL, endo-beta-N-acetilglucosaminidasa Naglu, fosfogliceromutasa Pgm (usualmente Clostridium perfringens; otras especies de Clostridium, gangrena gaseosa (Clostridial myonecrosis ) ) ; lipasa A, lipasa B, peroxidasa Decl (Geotrichum candidum, Geotrichosis ) ; proteina de prión (prión GSS, síndrome de Gerstmann-Straussler-Scheinker (GSS) ) ; proteínas de pared quística CWP1, CWP2, CWP3 , proteína superficial variante VSP, VSP1, VSP2, VSP3 , VSP4, VSP5, VSP6, antígeno de 56 kDa, piruvato ferredoxin oxidorreductasa PFOR, alcohol deshidrogenasa E ADHE, alfa-giardina, alfa8-giardina , alfal-guiardina, beta-giardina, cisteína proteasas, glutatión-S-transferasa GST, arginina deiminasa ADI, fructosa-1 , 6-bisfosfato aldolasa FBA, antígenos giardia tropozoito GTA (GTAl, GTA2), ornitincarboxil transferasa OCT, proteína similar a aseblina de fiebre estriada SALP, proteína similar a uridina fosforilo UPL, alfa-tubulina, beta-tubulina (Giardia intestinalis , Giardiasis ) ; miembros de la familia de transportadores ABC (LolC, OppA, y PotF) , proteina transmembrana del sistema para liberación de lipoproteinas putativas LolC/E, flagelina FliC, motilidad intracelular de Burkholderia A BimA, factor-Tu de alargamiento bacteriano EF-Tu, proteina similar a OmpA de 17 kDa, proteina codificante boaA (Burkholderia mallei, Glanders) ; cyclophilin CyP, proteina de larvas en tercera etapa de 24 kDa GS24, productos de excreción-secreción ESPs (40, 80, 120 y 208 kDa) (Gnathostoma spinigerum y Gnathostoma hispidum, Gnathostomiasis ) ; proteínas pilin, subunidad pilC pilin-asociada menor, subunidad y variantes pilE pilin mayor, pilS, proteína porA de variación de fase, Porina B PorB, proteína TraD, antígéno de membrana externa Neisserial H.8, antígeno de 70kDa, proteína de membrana externa mayor PI, proteínas de membrana externa PIA y P1B, antígeno , proteína superficial A NspA, proteína de unión a transferrina TbpA, proteína de unión transferrina TbpB, PBP2, proteína codificante de mtrR, proteína codificante de ponA, permeasa membranosa FbpBC, sistema de proteínas FbpABC, proteínas LbpAB, proteína de membrana externa Opa, transportador de membrana externa FetA, regulador reprimido por hierro MpeR (Neisseria gonorrhoeae, Gonorrhea); proteína de membrana externa A OmpA, proteína de membrana externa C OmpC, proteína de membrana externa K17 OmpK17 (Klebsiella granulomatis , Granuloma inguinale ( Donovanosis ) ) ; proteína de unión a fibronectina Sfb, proteína de unión a fibronectina/fibrinógeno FBP54, proteína de unión a fibronectina FbaA, proteína M tipo 1 Emml, proteína tipo 6 Emm6, proteina 35 de unión a inmunoglobulina Sib35, proteína superficial R28 Spr28, superóxido dismutasa SOD, C5a peptidasa ScpA, antígeno I/II Agl/II, adhesina AspA, proteína de unión a alpha2-macroglobulina G-relacionada GRAB, proteína fibrilar superficial M5 (Streptococcus pyogenes, infección streptococcal Grupo A) ; antígeno C proteína ß, proteínas de arginina desiminasa, adhesina BibA, proteína BPS de 105 kDA, antígenos superficiales c, antígeno superficiales R, antígeno superficiales X, proteína resistente a tripsina Rl, proteína resistente a tripsina R3, proteína resistente a tripsina R , proteína inmunogénica superficial Sip, proteína superficial Rib, proteína de repeticiones rica en leucina LrrG, proteína de repetición rica en serina Srr-2, C alfa-antígeno de proteína Bca, antígeno Beta Bag, antígeno superficial Epsilón, proteína similar a alfa ALP1, proteína similar a alfa ALP5 delta antígeno superficial, proteína similar a alfa ALP2, proteína similar a alfa ALP3, proteína similar a alfa ALP4, proteína C beta Bac (Streptococcus agalactiae, infección streptococcal del Grupo B) ; proteína de unión a transferrina 2 Tbp2, fosfatasa P4, proteína de membrana externa P6, lipoproteína péptidoglucano-asociada Pal, proteína D, proteína E, proteína de adherencia y penetración Hap, proteína de membrana externa 26 Omp26, proteína de membrana externa P5 (Fimbrin), proteína de membrana externa D15, proteína de membrana externa 0mpP2, 5 ' -nucleotidasa NucA, proteína de membrana externa Pl, proteína de membrana externa P2, lipoproteína de membrana externa Pcp, Lipoproteína E, proteína de membrana externa P4, fuculoquinasa FucK, [Cu, Zn] -superóxido dismutasa SodC, proteasa HtrA, proteína 0145, alfa-galactosilceramida (Haemophilus influenzae, infección por Haemophilus influenzae) ; polimerasa 3D, proteína con cápside viral VP1, proteína con cápside viral VP2, proteína con cápside viral VP3, proteína con cápside viral VP4, proteasa 2A, proteasa 3C ( Enterovirus , principalmente virus Coxsackie A y enterovirus 71 (EV71), enfermedad de manos, pies y boca (HFMD) ) ; polimerasa L de ARN, proteína L, glucoproteína Gn, glucoproteína Ge, proteína nucleocáps ide S, glucoproteína con envoltura Gl, nucleoproteína NP, proteína N, poliproteína M (virus Sin Nombre, Hantavirus, síndrome pulmonar por Hantavirus (HPS) ) ; proteína de choque térmico HspA, proteína de choque térmico HspB, citrato sintasa GltA, proteína UreB, proteína de choque térmico Hsp60, proteína para activación de neutrófilos NAP, catalasa KatA, citotoxina vacuolizante VacA, ureasa alfa UreA, ureasa beta Ureb, proteína CpnlO, proteína groES, proteína de choque térmico HsplO, proteína MopB, proteína CAG de 10 kDa citotoxicidad-asociada , antígeno de 36 kDa, beta-lactamasa HcpA, Beta-lactamasa HcpB (Helicobacter pylori, infección por Helicobacter pylori); proteínas de membrana integral, proteínas propensas a agregación, 0-antígeno, toxina-antígenos Stx2B, toxina-antígeno StxlB, fragmento del antígeno de adhesión Int28, proteína EspA, proteína EspB, Intimina, proteína Tir, proteína IntC300, proteína Eae (Escherichia coli 0157:H7, 0111 y O104:H4, síndrome Hemolítico-urémico (HUS)); ARN polimerasa L, proteína L, glucoproteína Gn, glucoproteína Ge, proteína con nucleocápside S, glucoproteína con envoltura Gl, nucleoproteína NP, proteína N, poliproteína M (familia de Bunyaviridae , fiebre hemorrágica con síndrome renal (HFRS) ) ; glucoproteína G, proteína matrix M, nucleoproteína N , proteína de fusión F, polimerasa L, proteína W, proteína C, fosfoproteína P, proteína no estructural V (Henipavirus (virus Hendra virus Ñipan) , infecciones por Henipavirus) ; poliproteína, glucoproteína Gp2, antígeno superficial de hepatitis A HBAg, proteína 2A, proteína viral VP1, proteína viral VP2, proteína viral VP3, proteína viral VP , proteína P1B, proteína P2A, proteína P3AB, proteína P3D (virus de Hepatitis A, Hepatitis A) ; antígeno superficial de hepatitis B HBsAg, antígeno núcleo de Hepatitis B HbcAg, polimerasa, proteína Hbx, proteína de superficie media preS2, proteína superficial L, proteína S larga, proteína viral VP1, proteína viral VP2, proteína viral VP3, proteína viral VP4 (virus de Hepatitis B, Hepatitis B) ; glucoproteína con envoltura El gp32 gp35, glucoproteína con envoltura E2 NS1 gp68 gp70, proteína C con cápside, proteína núcleo Core, poliproteína, proteína viral VPl, proteína viral VP2, proteína viral VP3, proteína viral VP4, antígeno G, proteína NS3, proteína NS5A, (virus de Hepatitis C, Hepatitis C) ; proteína viral VPl, proteína viral VP2, proteína viral VP3, proteína viral VP4, antígeno delta largo de hepaptitis, antígeno delta pequeño de hepaptitis (virus de Hepatitis D, Hepatitis D) ; proteína viral VPl, proteína viral VP2, proteína viral VP3, proteína viral VP4, proteína E2 con cápside (virus de Hepatitis E, Hepatitis E) ; glucoproteína L UL1, uracil-ADN glucosilasa UL2, proteína UL3, proteína UL4, proteína para replicación de ADN UL5, proteína portal UL6, proteína para maduración de viriones UL7 , ADN helicasa UL8, proteína de unión al origen de replicación-UL9, glucoproteína M UL10, proteína ULll, exonucleasa alcalina UL12, serina-treonina proteína quinasa UL13, proteína con tegumento UL14, terminasa UL15, proteína con tegumento UL16, proteína ÜL17, proteína VP23 con cápside UL18, proteína UL19 con cápside mayor VP5, proteína de membrana UL20, proteína con tegumento U121, Glucoproteína H (UL22), Timidina Quinasa UL23, proteína UL24, proteína UL25, proteína con cápside P40 (UL26, VP24, VP22A) , glucoproteína B (UL27), proteina ICP18.5 (UL28), proteína de unión a ADN mayor ICP8 (UL29), ADN polimerasa UL30, proteína de matriz nuclear UL31, glucoproteína con envoltura UL32, proteína UL33, proteína de membrana nuclear interna UL34, proteína VP26 con cápside (UL35), proteína con tegumento larga UL36, proteína UL37 de ensamble con cápside, proteína VP19C (UL38), ribonucleótido reductasa (subunidad larga) UL39, ribonucleótido reductasa (Subunidad pequeña) UL40, proteína con tegumento/proteína VHS de interrupción en hospederos viriónicos (UL41), factor de procesabilidad de ADN polimerasa UL42, proteína membranosa UL43, glucoproteína C (UL44), proteína membranosa UL45, proteína con tegumento VP11/12 (UL46) , proteína con tegumento VP13/14 (UL47), proteína para maduración de viriones VP16 (UL48, Alpha-TIF) , proteína con envoltura UL49, dUTP difosfatasa UL50, proteína con tegumento UL51, proteína del complejo de ADN helicasa/primasa UL52, glucoproteína K (UL53), proteína para regulación transcripcional IE63 (ICP27, UL54), proteína UL55, proteína UL56, proteína para replicación viral ICP22 (IE68, US1), proteína US2, serina/treonina-proteína quinasa US3, glucoproteína G (US4), gGlucoproteína J (US5), glucoproteína D (US6) , glucoproteína I ( US7 ) , glucoproteína E (US8), proteína con tegumento US9, proteína con cápside/tegumento US10, proteína Vm 21 (US11), proteína ICP47 (IE12, US12), activador transcripcional mayor ICP4 (IE175, S1), E3 ubiquitina ligasa ICPO (IE110), proteina 1 latencia relacionada LRP1, proteina 2 latencia relacionada LRP2, factor RL1 de neurovirulencia (ICP34.5), transcripción latencia asociada LAT (virus de Herpes simplex 1 y 2 (HSV-1 y HSV-2), Herpes simplex); proteina de choque térmico Hsp60, proteina de superficie celular H1C, dipcptidilpeptidasa tipo IV DppIV, antigeno M, proteina de 70 kDa, proteina similar a histona de 17 kDa (Histoplasma capsulatum, Histoplasmosis) ; proteína-1 de unión a ácido graso y retinol FAR-1, inhibidor de tejidos de metaloproteinasa TIMP (TMP) , cisterna proteinasa ACEY-1, cisterna proteinasa ACCP-1, antigeno superficial Ac-16, proteina secretada 2 ASP-2, metaloproteasa 1 MTP-1, inhibidor de aspartilo proteasa API-1, antigeno superficie-asociado SAA-1, antigeno superficie-asociado SAA-2, factor Xa secretado adulto-especifico, anticoagulante del inhibidor de serina proteasa AP, proteasa aspártica similar a catepsina D ARR-1, glutatión S-transferasa GST, proteasa aspártica APR-1, aceti lcolinesterasa AChE (Ancylostoma duodenale y Necator americanus, infección por Hookworm) ; proteina NS1, proteina NP1, proteina VP1, proteina VP2, proteina VP3 (bocavirus Humano (HBoV) , infección por bocavirus humano) ; proteina superficial mayor 2 MSP2, proteina superficial mayor 4 MSP4, variante MSP SGV1, variante MSP SGV2, proteína de membrana externa OMP, proteína de membrana externa 19 OMP-19, proteína antigénica mayor MAPI, proteína antigénica mayor MAP1-2, proteína antigénica mayor MAP1B, proteína antigénica mayor MAP1-3, proteína codificante Erum2510, proteína GroEL, proteína GroES, proteínas de membrana externa mayor de 30-kDA, proteína GE de 100-kDa, proteína GE de 130-kDa, proteína GE de 160-kDa (Ehrlichia ewingii, Human ewingii ehrlichiosis ) ; proteínas de superficie mayor 1-5 (MSPla, MSPlb, MSP2, MSP3 , MSP4, MSP5), proteínas del sistema de secreción tipo IV VirB2, VirB7, VirBll, VirD4 (Anaplasma phagocytophilum, anaplasmosis ganulocítica humana (HGA) ) ; proteína NS1, proteína hidrofóbica pequeña NS2, proteín SH, proteína de fusión F, glucoproteína G, proteína de matriz M, proteínas matriz M2-1, proteínas matriz M2-2, fosfoproteína P, nucleoproteína N, polimerasa L (metapneumovirus humano (hMPV) , infección por metapneumovirus humano); proteína de superficie mayor 2 MSP2, proteínas de superficie mayor 4 MSP4, variante MSP SGV1, variante MSP SGV2 , proteína de membrana externa OMP, proteína de membrana externa 19 OMP-19, proteína antigénica mayor MAPI, proteína antigénica mayor MAP1-2, proteína antigénica mayor MAP1B, proteína antigénica mayor MAP1-3, proteína codificante Erum2510, proteína GroEL, proteína GroES, proteínas de membrana externa mayor de 30-kDA, proteínas GE de 100-kDa, proteíans GE de 130-kDa, proteína GE de 160-kDa (Ehrlichia chaffeensis, monocytic ehrlichiosis humana); proteína de replicación El, proteína reguladora E2, proteína E3, proteína E4, proteína E5, proteína E6, proteína E7, proteína E8, proteína Ll con cápside mayor, proteína Le con cápside menor (papilomavirus humano (HPV) , infección por papilomavirus humano (HPV) ) ; proteína de fusión F, hemaglutinina-neuramidasa HN, glucoproteína G, proteínas matriz M, fosfoproteína P, nucleoproteína N, polimerasa L (virus de parainfluenza humana (HPIV) , infección por el virus de parainfluenza humana); "hemaglutinina HA, neuraminidasa NA, nucleoproteína NP, proteínas matriz MI, proteína de matriz M2, proteína NS1, complejo de polimerasa PA, PB1, PB2, proteína de exportación nuclear NEP; (familia de Orthomyxoviridae, Influenza (gripe) ) ; poliproteína genómica, proteína E, proteína M, proteína C con cápside (virus de encefalitis japonesa, encefalitis japonesa); toxina RTX, pili tipo IV, subunidad PilA de pilus mayor, factores de transcripción reguladora PilS y PilR, proteína sigma54, proteínas de membrana externa (Kingella kingae, infección por Kingella kingae) ; proteína de prión (prión Kuru, Kuru) ; nucleoproteína N, polimerasa L, proteínas matriz Z, glucoproteína GP (virus Lassa, fiebre de Lassa) ; lipoproteína PAL péptidoglican-asociada, chaperonina Cpn60 de 60 kDa (groEL, HspB) , pilin PilE tipo IV, proteína de membrana externa MIP, proteina de membrana externa mayor MompS, metaloproteinasa de zinc MSP (Legionella pneumophila, Legionelosis (enfermedad del legionario, fiebre Pontiac) ) ; P4 nucleasa, proteína WD, ribonucleótido reductasa M2, glucoproteína de membrana superficial Pg46, cisteína proteinasa CP, proteína 78 glucosa-regulada GRP-78, proteína A2 similar al antígeno S etapa-específica, ATPasa Fl, beta-tubulina, proteína de choque térmico 70 Hsp70, KMP-11, glucoproteína GP63, proteína BTl, nucleósido hidrolasa NH, proteína de superficie celular Bl, proteína Pl similar a la proteína ribosómica Pl, esterol 24-c-metiltransferasa SMT, proteína LACK, histona Hl, proteína SPB1, antioxidante TSA tiol específico, antígeno proteínico STll, peptidasa de señal SP, histona H2B, antígeno superficial PSA-2, cisteína proteinasa b Cpb (género Leishmania, Leishmaniasis ) ; proteína de membrana mayor I, antígeno rico en serina -45 kDa, caperonina de 10 kDa GroES, antígeno de HSP kDa, amino-oxononanoato sintasa AONS, proteína recombinasa A RecA, Acetil-/propionil-coenzima A carboxilasa alfa, alanina racemasa, chaperonina 2 de 60 kDa, proteína similar a ESAT-6 EcxB (L-ESAT-6) , proteína Lsr2, proteína ML0276, hemaglutinina de unión a heparina HBHA, proteína de chogue térmico 65 Hsp65, mycPl o proteína codificante L0041, htrA2 o proteina codificante ML0176, htrA4 o proteína codificante ML2659, gcp o proteína codificante ML0379, clpC o proteína codificante ML0235 (Mycobacterium leprae y Mycobacterium lepromatosis , Leprosy) ; proteína de membrana externa LipL32, proteína de membrana LIC10258, proteína de membrana LP30, proteína de membrana LIC12238, proteína similar a Ompa Lsa66, proteína superficial LigA, proteína superficial LigB, proteína de membrana externa mayor OmpLl, proteína de membrana externa LipL41, proteína LigAni, proteína superficial LcpA, proteína de adhesión LipL53, proteína de membrana externa UpL32, proteína superficial Lsa63, flagelina FlaBl, lipoproteína de membrana LipL21, proteína de membrana pL40, adhesina superficial leptospiral Lsa27, proteina de membrana externa OmpL36, proteína de membrana externa OmpL37, proteína de membrana externa OmpL47, proteína de membrana externa OmpL54, acyltransferasa LpxA (género Leptospira, Leptospirosis ) ; precursor de listeriolisina O Hly (LLO) , proteína Iap invasión-asociada (P60), proteína reguladora de Listeriolisina PrfA, metaloproteinasa de Zinc Mpl, fosfolipasa C fsfatidil-inositol específica PLC (PlcA, PlcB) , O-acetiltransferasa Oat, permeasa del transportador de ABC Im.G_1771, proteína de adhesión LAP, receptor LAP Hsp60, adhesina LapB, hemolisina listeriolisina O LLO, proteína ActA, Internalina A InlA, proteína lnlB (Listeria monocytogenes , Listeriosis ) ; proteína de superficie externa A OspA, proteína de superficie externa OspB, proteína de superficie externa OspC, proteína A de unión a decorina DbpA, proteína B de unión a decorina DbpB, proteína núcleo Fia de 41 kDa con filamento flagelar, proteína A de membrana básica BmpA (antígeno ínmunodominante P39) , precursor de lipoproteínas de 22 kDa de superficie externa (antígeno IPLA7), lipoproteína vlsE de superficie variable (usualmente Borrelia burgdorferi y otras especies de Borrelia, enfermedad de Lyme (Lyme borreliosis ) ) ; proteína VAL-1 similar al homólogo alérgeno de veneno, transcripción larval abundante ALT-1, transcripción larval abundante ALT-2, tioredoxina peroxidasa PX, homólogo alérgeno de véspido VAH, tiordoxina peroxidasa 2 TPX-2, proteína antigénica SXP (péptidos N, NI, N2, y N3), activación asociada proteína-1 ASP-1, tioredoxina TRX, transglutaminasa BmTGA, glutatión-S-transferasas GST, miosina, homólogo alérgeno de véspido VAH, colagenasa de 175 kDa, gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa GAPDH, colágeno cuticular Col-4, proteínas ácidas larval secretadas SLAP, quitinasa CHI-1, proteína de unión a maltosa MBP, enzima glucolítica fructosa-1 , 6-bisfosfato aldolasa Fba, tropomiosina TMY-1, producto génico nematodo específico OvB20, oncocistatina CPI-2, proteína Cox-2 (Wuchereria bancrofti y Brugia malayi, Filariasis linfática (Elefantiasis)); glucoproteína GP, proteínas matriz Z, polimerasa L, nucleoproteína N (virus de Coriomeningitis linfocítica (LCMV) , Coriomeningitis linfocítica) ; proteína TRAP anónima trombospondina-relacionada, proteína superficial 2 de esporozoitos SSP2, antígeno 1 de membrana apical AMA1, antígeno de membrana roptri RMA1, antígeno de repetición básica ácida ABRA, proteína PF transversal celular, proteína Pvs25, proteína superficial 1 de merozoitos MSP-1, proteína superficial 2 de merozoitos MSP-2, antígeno de superficie eritrocítica anillo-infectada antígeno 3 de etapa RESALiver LSA-3, proteína Eba-175, antígeno 5 para repetición de serina SERA-5, proteína CS de circumporozoitos, proteína superficial 3 de merozoitos MSP3, proteína superficial 8 de merozoitos MSP8, enolasa PF10, proteína de hepatocitos eritrocitos HEP17 de 17 kDa, proteína 1 de membrana eritrocítica EMP1, proteína superficial de la proteína de Kbetamerozoitos 4/5 MSP 4/5 proteína de choque térmico Hsp90, proteína rica en glutamato GLURP, proteína superficial 4 de merozoitos MSP-4, proteína STARP, precursor antigénico proteína-relacionado de circumsporozoitos CRA (género Plasmodium, Malaria) ; nucleoproteína N, proteína VP24 membrana-asociada, nucleoproteína menor VP30, cofactor de polimerasa VP35, polimerasa L, proteínas matriz VP40, glucoproteína GP con envoltura (virus Marburg, fiebre hemorrágica por Marburg (MHF) ) ; proteina C, proteínas matriz M, fosfoproteina P, protelna V no estructural, glucoproteina H de hemaglutinina, polimerasa L, nucleoproteína N, proteina de fusión F (virus de sarampión, sarampión) ; miembros de la familia de transportadores ABC (LolC, OppA, y PotF) , proteína transmembrana del sistema para liberación de lipoproteínas putativas LolC/E, flagelina FliC, motilidad A intracelular de Burkholderia BimA, factor-Tu de alargamiento bacteriano EF-Tu, proteína similar a OmpA de 17 kDa, proteína codificante boaA, proteína codificante boaB (Burkholderia pseudomallei, elioidosis (enfermedad de hitmore) ) ; proteínas pilin, subunidad pilC pilin-asociada menor, subunidad pilE pilin mayor y variantes, pilS, proteína de variación de fase porA, Porina B PorB, proteína TraD, antígeno de membrana externa Neisserial H.8, antígeno de 70k Da, proteína de membrana externa mayor PI, proteínas de membrana externa PIA y P1B, antígeno , proteína superficial A NspA, proteína de unión a transferrina TbpA, proteína de unión a transferrina TbpB, PBP2, proteína codificante mtrR, proteína codificante ponA, permeasa de membrana FbpBC, sistema de proteínas FbpABC, proteínas LbpAB, proteína de membrana externa Opa, transportador de membrana externa FetA, regulador reprimido por hierro MpeR, proteína fHbp de unión al factor H, adhesina NadA, proteína NhbA, represor FarR (Neisseria meningitidis , enfermedad eningococcal ) ; proteina de 66 kDa, proteina de 22 kDa (usualmente Metagonimus yokagawai, Metagonimiasis) ; proteínas tubulares polares (34, 75, y 170 kDa en Glugea, 35, 55 y 150 kDa en Encephalitozoon) , proteína quinesina-relacionada, subunidad más larga de ARN polimerasa II, proteína YIPA de membrana similar a integral, proteína 1 anit-lentificación, factor de transcripción de choque térmico HSF, proteína quinasa, timidina quinasa, proteína nucleolar similar a NOP-2 (Microsporidia phylum, Microsporidiosis ) ; reglador de apoptosis similar a CASP8 y FADD, glutatión peroxidasa GPX1, ARN helicasa NPH-II NPH2, subunidad catalítica de polimerasa poly(A) PAPL, proteína con envoltura mayor P43K, subunidad de 70 kDa del factor de transcripción temprana VETFS, subunidad de 82 kDa del factor de transcripción temprana VETFL, metaloendopeptidasa tipo Gl, nucleósido trifosfatasa I NPH1, MC134L similar a la proteína de replicación A28, subunidad de 7 kDa de ARN polimeasa RP07 (virus Molluscum contagiosum ( CV) , Molluscum contagiosum ( C) ) ; proteínas matriz Mr fosfoproteína P/V, proteína hidrofóbica pequeña SH, nucleoproteína N, proteína V, glucoproteína de fusión F, hemaglutinina-neuraminidasa HN, ARN polimerasa L (virus de paperas, paperas); proteína de membranas externa OM, antígeno de superficie celular OmpA, antígeno de superficie celular OmpB (sca5) , proteína de superficie celular SCA4, proteina de superficie celular SCA1, proteina intracitoplásmica D, proteina de capa superficial cristalina SLP, antigeno proteinico de superficie protectora SPA (Rickettsia typhi, tifus murino (tifus Endémico)); adhesina Pl, adhesión P30, proteina pll6, proteina P40, proteina citoesquelética HMWl, proteina citoesquelética HMW2, proteina citoesquelética HMW3, proteina codificante MPN152, proteina codificante MPN426, proteina codificante MPN456, proteina codificante MPN-500 (Mycoplasma pneumoniae, Mycoplasma pneumonía) ; NocA, proteína reguladora dependiente de hierro, VapA, VapD, VapF, VapG, proteasa caseinolítica, proteína de 43-kDa tip-asociada con filamentos, proteína P24, proteína P61, proteína de 15-kDa, proteína de 56-kDa (usualmente Nocardia asteroides y otras especies de Nocardia, Nocardiosis ) ; proteína similar al homólogo alérgeno de veneno VAL-1 , transcripción larval abundante ALT-1, transcripción larval abundante ALT-2, tioredoxina peroxidasa PX, homólogo alérgeno de véspido VAH, tiordoxina peroxidasa 2 TPX-2, proteína antigénica SXP (péptidos N, NI, N2, y N3), proteína- 1 activación asociada ASP-1, Tioredoxina TRX, transglutaminasa BmTGA, glutatión-S-transferasas GST, miosina, homólogo de alérgeno de véspido VAH, colagenasa de 175 kDa, gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa GAPDH, colágeno cuticular Col-4, Proteínas Acidas Larvales Secretadas SLAP, quitinasa CHI-1, proteína de unión a maltosa MBP, enzima glucolítica fructosa-1, 6-bisfosfato aldolasa Fba, tropomiosina TMY-1, producto génico nematodo específico OvB20, oncocistatina CPI-2, Cox-2 (Onchocerca volvulus, Onchocerciasis (River blindness)); glucoproteína secretada de 43 kDa, glucoproteína gpO, glucoproteína gp75, antígeno Pb27, antígeno Pb40, proteína de choque térmico Hsp65, proteína de choque térmico Hsp70, proteína de choque térmico Hsp90, proteína PIO, triosefosfato isomerasa TPI, lectina paracoccin de unión a N-acetil-glucosamina , proteína Pb28 de 28 kDa ( Paracoccidioides brasiliensis , Paracoccidioidomycosis (blastomicosis Sud-Americana ) ) ; cisteína proteasa similar a cruzipaina de 28-kDa Pw28CCP (usualmente Paragonimus westerrnani y otras especies de Paragonimus, Paragonimiasis ) ; proteína de membrana externa OmpH, proteína de membrana externa Omp28, proteína PM1539, proteína PM0355, proteína PM1417, proteína de reparación MutL, proteína BcbC, proteína P 0305, formiato deshidrogenasa-N, proteína PM0698, proteína PM1422, ADN girasa, lipoproteína PlpE, proteína adhesiva Cp39, receptor del sistema de hemo-adquisición HasR, proteína capsular de 39 kDa, OMP hierro-regulada IROMP, proteína de membrana externa OmpA87, proteína fimbrial Ptf, proteína subunitaria fimbrial PtfA, proteína de unión a transferrina Tbpl, enzima esterasa MesA, toxina de Pasteurella multocida P T, proteina adhesiva Cp39 (género Pasteurella, Pasteurellosis) ; "hemaglutinina filamentosa FhaB, adenilato ciclasa CyaA, precursor de la subunidad 4 de la toxina pertusís PtxD, precursor pertactina Prn, subunidad 1 de toxina PtxA, proteina Cpn60, proteina brkA, precursor de la subunidad 2 de la toxina de pertussis PtxB, precursor de la subunidad 3 de la toxina pertussis PtxC, precursor de la subunidad 5 de la toxina pertussis PtxE, pertactina Prn, proteina Fim2, proteina Fim3; (Bordetella pertussis, Pertussis (tosferina) ) ; antigeno capsular Fl, antigeno virulencia-associado V, proteina efectora secretada LcrV, antigeno V, proteasa de membrana externa Pía, proteina efectora secretada YopD, proteina-tirosina fosfatasa putativa secretada YopH, subunidad mayor del complejo por punción YscF, proteina quinasa YopO, proteina autotransportadora putativa YapF, transportador de ABC de membrana interna YbtQ (Irp7), proteina de unión a azúcar putativa YPO0612, proteina de cheque térmico 90 HtpG, proteina de sulfatasa putativa YdeN, proteina portadora de lipoproteina de membrana externa LolA, chaperona de secreción YerA, lipoproteina putativa YPO0420, proteina activadora de hemolisina HpmB, receptor de membrana externa de pesticina/yersiniabactina Psn, proteina efectora secretada YopE, proteina efectora secretada YopF, proteina efectora secretada YopK, proteina de membrana externa YopN, proteina de membrana externa Yop , precursor de Coagulasa/fibrinolisina Pía; (Yersinia pestis, Plaga) ; proteina PhpA, adhesina superficial PsaA, pneumolisina Ply, proteasa dependiente de ATP Clp, ligasa de la lipoato-proteina LplA, proteína anclada de superficie a paredes celulares psrP, sortasa SrtA, glutamil-ARNt sintetasa GltX, proteina A de unión a colina CbpA, proteína A de superficie pneumococcal PspA, proteína C de superficie pneumococcal PspC, 6-fosfogluconato deshidrogenasa Gnd, proteína de unión a hierro PiaA, Murein hidrolasa LytB, proteon LytC, proteasa Al ( Streptococcus pneumoniae, infección Pneumococcal) ; proteína B de superficie mayor, proteasa KEX1 similar a quexina, proteína A12, antígeno P55 de 55 kDa, glucoproteína de superfcie mayor Msg ( Pneumocystis jirovecii, Pneumocystis pneumonía (PCP)); poliproteína genómica, polimerasa 3D, proteína VP1 con cápside viral, proteína VP2 con cápside viral, proteína VP3 con cápside viral, proteína VP4 con cápside viral, proteasa 2A, proteasa 3C (Poliovirus, Poliomyelitis ) ; proteína Nfal, exendin-3, lipasa secretora, proteasa similar a catepsina B, cisteína proteasa, catepsina, peroxiredoxina, proteína CrylAc (usualmente Naegleria fowleri, meningoencephalitis amebiana primaria (PAM)); agnoproteína , antígeno T grande, antígeno T pequeño, proteína con cápside mayor VP1, proteína con cápside menor Vp2 (virus JC, leucoencefalopatía multifocal progresiva) ; proteína E de respuesta a calcio bajo LCrE, proteína externa de clamidia N CopN, serina/treonina-proteína quinasa PknD, proteína portadora de acilo S-maloniltransferasa FabD, proteína de unión a ADN de cadena individual Ssb, proteína de membrana externa mayor MOMP, proteína 2 de membrana externa 0mp2, famil ia de proteína de membrana polimórfica (Pmpl, Pmp2 , Pmp3, Pmp4, Pmp5, Pmp6, Pmp7, Pmp8, Pmp9, PmplO, Pmpll, Pmpl2, Pmpl3, Pmpl4, Pmpl5, Pmpl6, Pmpl7, Pmpl8, Pmpl9, Pmp20, Pmp21) (Chlamydophila psittaci, Psittacosis ) ; proteína de membrana externa Pl, proteína de choque térmico B HspB, transportador ABC peptídico, proteína de unión a GTP, proteína IcmB, ribonucleasa R, fosfatasa SixA, proteína DsbD, proteína de membrana externa TolC, proteína de unión a ADN PhoB, ATPase DotB, proteína de choque térmico B HspB, proteína de membrana Comí, proteína de 28 kDa, ADN-3-metiladenina glucosidasa I, proteína de membrana externa OmpH, proteína de membrana externa AdaA, proteína T para el sistema de segmentación de glicina (Coxiella burnetii, fiebre Q) ; nucleoproteína N, proteína estructural grande L, posfoproteína P, proteínas matriz M, glucoproteína G (virus de la rabia, rabia) ; proteína de fusión F, nucleoproteína N, proteína de matriz M, proteína de matriz M2-1, proteína de matriz 2-2, fosfoproteína P, proteína hidrofóbica pequeña SH, glucoproteína G de superficie mayor, polimerasa L, proteína 1 no estructural NS1, proteína 2 no estructural NS2 (virus sincitial respiratorio (RSV) , infección por el virus sincitial respiratorio) ; poliproteína genóraica, polimerasa 3D, proteína con cápside viral VP1, proteína con cápside viral VP2, proteína con cápside viral VP3, proteína con cápside viral VP4, proteasa 2A, proteasa 3C (Rhinovirus, infección por Rhinovirus); proteínas de membrana externa OM, antígeno de superficie celular OmpA, antígeno de superficie celular OmpB (sca5), proteína de superficie celular SCA4, proteína de superficie celular SCA1, proteína PS120, proteína intracítoplásmica D, antígeno de proteína superficial protectora SPA (género Rickettsia, infección por Rickettsial ) ; proteínas de membrana externa OM, antígeno de superficie celular OmpA, antígeno de superficie celular OmpB (sca5), proteína de superficie celular SCA4, proteína de superficie celular SCA1, proteína intracítoplásmica D (Rickettsia akari, Rickettsialpox) ; glucoproteína GP con envoltura, polimerasa L, nucleoproteína N, proteína no estructural NSS (virus de fiebre Rift Valley, fiebre de Rift Valley (RVF) ) ; proteínas de membrana externa OM, antígeno de superficie celular OmpA, antígeno de superficie celular OmpB (sca5), proteínas de superficie celular SCA4, proteínas de superficie celular SCA1, proteína D intracítoplásmica (Rickettsia rickettsii, fiebre maculosa de las montañas rocosas (RMSF) ) ; proteína 6 no estructural NS6, proteina 2 no estructural NS2, proteina VP6 con cápside intermediaria, proteína VP2 con cápside interna, proteína 3 no estructural NS3, ARN polxmerasa L ARN-dirigida, proteína VP3, proteína 1 no estructural NS1, proteína 5 no estructural NS5, glucoproteína VP7 con cápside externa, glucoproteína 4 no estructural NS4, proteína VP4 con cápside externa; (Rotavirus, infección por Rotavirus); poliproteína P200, glucoproteína El, glucoproteína E2, proteína NS2, proteína C con cápside (virus Rubella, Rubéola); chaperonina GroEL ( opA) , inositol fosfato fosfatasa SopB, proteína de choque térmico HslU, proteína chaperona DnaJ, proteína TviB, proteína IroN, flagelina FliC, proteína de invasión SipC, glucoproteína gp43, proteína de membrana externa LamB, proteína de membrana externa PagC, proteína de membrana externa TolC, proteína de membrana externa NmpC, proteína de membrana externa FadL, proteína para transportación SadA, transferasa WgaP, proteínas efectoras SifA, SteC, SseL, SseJ y SseF (género Salmonella, Salmonellosis ) ; proteína 14, proteína no estructural NS7b, proteína no estructural NS8a, proteína 9b, proteína 3a, nucleoproteína N, proteína no estructural NS3b, proteína no estructural NS6, proteína 7a, proteína no estructural NS8b, proteína de membrana M, proteína de membrana pequeña con envoltura EsM, poliproteína replicasa la, glucoproteina de espiga S, poliproteína replicasa lab; (SARS coronavirus, SARS (síndrome Respiratorio Agudo Severo) ) ; serina proteasa, Antígeno 1 Atypical Sarcoptes ASA1 , glutatión S-transferasas GST, cisteína proteasa, serina proteasa, apolipoproteína (Sarcoptes scabiei, Scabies); glutatión S-transferasas GST, paramiosina, hemoglobinasa SM32, antígeno de huevo mayor, proteína de unión con ácido graso de 14 kDa Sml4, antígeno superficial larval mayor P37, antígeno tegumental de 226 kDa, calpaina CANP, trifosfato isomerasa Tim, proteína superficial 9B, proteína VP2 con cápside externa, proteína de membrana integral Sm23 de 23 kDa, Cu/Zn-superóxido dismutasa, glucoproteina Gp, miosina (género Schistosoma, Schistosomiasis (Bilharziosis ) ) ; chaperonina de 60 kDa, antígeno tipo específico de 56 kDa, piruvato fosfato diquinasa, 4 -hidroxibenzoato octapreniltransferasa (Orientia tsutsugamushi , tifus de los matorrales); deshidrogenasa GuaB, proteína de invasión Spa32, invasina IpaA, invasina IpaB, invasina IpaC, invasina IpaD, invasin IpaH, invasin IpaJ (género Shigella, Shigellosis (discinteria bcilar)); proteína P53, homólogo de la proteína viriónica US10, regulador transcripcional IE63, transactivador transcripcional IE62, proteasa P33, proteína de 74 kDa del factor alfa trans- inductor desoxiuridina 5 ' -trifosfato nucleotidohidrolasa , transactivador transcripcional IE4, homólogo de la proteina de membrana UL43, homólogo de la fosfoproteina nuclear UL3, homólogo de la proteina nuclear UL4, proteina de unión al origen de replicación, proteina de membrana 2, fosfoproteina 32, proteina 57, factor de procesabilidad de ADN polimerasa, proteina portal 54, ADN primasa, homólogo de la proteina UL14 con tegumento, homólogo de la proteina UL21 con tegumento, homólogo de la proteina UL55 con tegumento, homólogo de la terminasa subunitaria UL33 tripartita, homólogo de la terminasa subunidad UL15 tripartito, proteina de unión con cápside 44, proteina de empacamiento viriónico 43 (virus de varicela zoster (VZV) , Shingles (Herpes zoster) ) ; homólogos de deshidrogenasa esteroidea 3-beta hidroxi-5-eno truncado, proteina de membrana viriónica A13, proteina A19, proteina A31, homólogo de la proteina truncada A35, homólogo de la proteina A37.5, proteina A47, proteina A49, proteina A51, proteina A43 similar a semaforina, inhibidor 1 de serina proteinasa, inhibidor 2 de serina proteinasa, inhibidor 3 de serina proteinasa, proteina A6, proteina B15, proteina Cl, proteina C5, proteina C6, proteina F7 , proteina F8, proteina F9, proteina Fll, proteina F14, proteina F15, proteina F16 (Varióla mayor o Varióla menor, Viruela (Varióla) ) ; adhesina/glucoproteina gp70, proteasas (Sporothrix schenckii, Sporotrichosis) ; proteína de unión hemo-hierro IsdB, colágeno adhesina Cna, factor A de agregación ClfA, proteina MecA, proteína A de unión a fibronectina FnbA, enterotoxina tipo A EntA, enterotoxina tipo B EntB, enterotoxina tipo C EntCl, enterotoxina tipo C EntC2, enterotoxina tipo D EntD, enterotoxina tipo E EntE, toxina-1 del síndrome de chogue tóxico TSST-1, Estafiloquinasa, proteína 2a de unión penicilina PBP2a (MecA) , antígeno secretor SssA (género Staphylococcus , envenenamiento de alimentos Staphylococcal ) ; proteina de unión a hemo-hierro IsdB, colágeno adhesina Cna, factor A de agregación ClfA, proteína MecA, proteínaA de unión a fibronectina FnbA, enterotoxina tipo A EntA, enterotoxina tipo B EntB, enterotoxina tipo C EntCl, enterotoxina tipo C EntC2, enterotoxina tipo D EntD, enterotoxina tipo E EntE, toxina-1 de síndrome de choque tóxico TSST-1, Stafiloquinasa, proteína 2a de unión a penicilina PBP2a (MecA) , antígeno secretor SssA (género Staphylococcus, infección Staphylococcal) ; antígeno Ss-IR, antígeno NIE, estrongilastacina , Na+- + ATPasa Sseat-6, tropomisina SsTmy-1, proteína LEC-5, antígeno P5 de 41 kDa, proteína larval de 41-kDa, proteína larval de 31-kDa, proteína larval de 28-kDa ( Strongyloides stercoralis, Strongyloidiasis); glicerofosfodiéster fosfodiesterasa GlpQ (Gpd) , proteína de membrana externa TmpB, proteína Tp92, antígeno TpFl, proteina de repetición Tpr, proteina F de repetición TprF, proteina G de repetición TprG, proteina I de repetición Tprl, proteina J de repetición Tp J, proteina K de repetición TprK, proteina A de membrana treponemal TmpA, lipoproteina , Tppl5 de 15 kDa, antigeno de membrana de 47 kDa, miniferritina TpFl, adhesina Tp0751, lipoproteina TP0136, proteina TpN17, proteina TpN47, proteina de membrana externa TP0136, proteina de membrana externa TP0155, proteina de membrana externa TP0326, proteina de membrana externa TP0483, proteina de membrana externa TP0956 (Treponema pallidum, Syphilis); proteasas similares a Catepsina L, antigeno de 53/25-kDa, miembros de la familia de 8kDa, proteina cisticercosa con una actividad similar a tripsina margina TsAg5, proteina oncosférica TSOL18, proteina oncosférica TSOL45-1A, lactato deshidrogenasa A LDHA, lactato deshidrogenasa B LDHB (género Taenia, Taeniasis); toxina del tétanos TetX, toxina del tétanos C TTC, proteina de capa S de 140 kDa, beta-subunidad CT3 de flavoproteina , fosfolipasa ( lecitinasa ) , fosfoportador proteina HPr (Clostridium tetani, Tétanos (Lockjaw)); poliproteina genómica, proteina E, proteina M, proteina C con cápside (virus de encefalitis portada por garraparas (TBEV) , encefalitis portada por garrapatas); antigeno de 58-kDa, antigenos de 68-kDa, antigeno excretor-secretor de larvas Toxocara TES, glucoproteína de 32-kDa, glucoproteína de TES-70, glucoproteína de GP31, antigeno excretor-secretor TcES-57, antígeno de fluido perientérico Pe, antigenos de extracto soluble Ex, antigenos larvales excretores/secretores ES, antigeno TES-120, alérgeno poliproteinico TBA-1, cisteina proteasa similar a catepsina L c-cpl-1, proteina de 26-kDa (Toxocara canis o Toxocara cati, Toxocariasis (Ocular Larva Migrans (OLM) y Visceral Larva Migrans (VLM) ) ) ; proteínas microneme (MIC1, MIC2, MIC3, MIC4, MIC5, IC6, MIC7, MIC8), proteína roptri Rop2, proteínas roptri (Ropl, Rop2, Rop3, Rop4, Rop5, Rop6, Rop7, Ropl6, Rjopl7), proteína SR1, antígeno superficial P22, antígeno mayor p24, antígeno superficial mayor p30, proteínas de gránulo denso (GRA1, GRA2 , GRA3, GRA4, GRA5, GRA6, GRA7 , GRA8, GRA9, GRA10), antígeno de 28 kDa, antígeno superficial SAG1, antígeno relacionado SAG2, nucleósido-trifosfatasa 1, nucleósido-trifosfatasa 2, proteína Stt3, proteína que contiene el dominio similar a HesB, proteasa similar a romboide 5, toxomepsina 1 (Toxoplasma gondii, Toxoplasmosis ) ; glucoproteína secretada de 43 kDa, glucoproteína secretada de 53 kDa, paramiosina, antígeno Ts21, antígeno Ts87, antígeno p46000, antígenos TSL-1, caveolina-1 CAV-1, antígeno de larvas recién nacidas de 49 kDa, homólogo de prosaposína, serina proteasa, inhibidor de serina proteinasa, glucoproteína Gp45 de 45 kDa (Trichinella spiralis, Trichinellosis ) ; factores transcripcionales similares a Myb (Mybl, Myb2, Myb3), proteina de adhesión AP23, proteina de adhesión AP33, proteina de adhesión AP33-3, adhesinas AP51, adhesina AP65, proteina de adhesión AP65-1, alfa-actinina , proteina asociada con quinesina, teneurina, proteinasa de 62 kDa, serina proteasa similar a subtilisina SUBI, gen 3 de cisteina proteinasa CP3, alfa-enolasa Enol, cisteina proteinasa CP30, proteínas de choque térmico (Hsp70, Hsp60), proteina inmunogénica P270, (Trichomonas vaginalis, Trichomoniasis ) ; beta-tubulina , proteína de 47-kDa, proteínasa-1 similar a leucocito secretor SLP-1, proteína TT50 de 50-kDa, antígeno de 17 kDa, proteína de 43/47 kDa (Trichuris trichiura, Trichuriasis (infección por gusano látigo) ) ; proteína ESAT-6 (EsxA) , antígeno de filtrado de 10 kDa EsxB, antígeno secretado 85-B FBPB, proteína A de unión fibronectina FbpA (Ag85A) , serina proteasa PepA, proteína PPE de la familia PPE18, proteína D de unión fibronectina FbpD, proteína inmunogénica PT64, proteína secretada MPT51, catalasa-peroxidasa-peroxinitritasa T KATG, lipoproteína de unión a fosfato periplásmico PSTS3 (PBP-3, Phos-1) , hemaglutinina de unión a heparina regulada por hierro Hbha, proteína PPE de la familia PPE14, proteína PPE de la familia PPE68, proteína tb72F, proteína Apa, proteína inmunogénica MPT63, lipoproteína de unión a fosfatro periplásmico PSTS1 (PBP-1), chaperona molecular DnaK, lipoproteína de superficie celular Mpt83, lipoproteína P23, proteína de permeasa del sistema de transporte de fosfato pstA, antígeno de 14 kDaf proteína C de unión fibronectina FbpCl, Alanina deshidrogenasa TB43, Glutamina sintetasa 1, proteína ESX-1, proteína CFP10, proteína TB10.4, proteína MPT83, proteína MTB12, proteína MTB8, proteínas similares a Rpf, proteína MTB32, proteína MTB39, cristalina, proteína de choque térmico HSP65, proteína PST-S (usualmente Mycobacterium tuberculosis, Tuberculosis); proteína de membrana externa FobA, proteína de membrana externa FobB, locus de crecimiento intracelular lglCl, locus de crecimiento intracelular IglC2, aminotransferasa btl, chaperonina GroEL , proteína de membrana mayor TUL4 de 17 kDa, lipoproteína LpnA, proteína de la familia de quitinasa 18, ísocitrato deshidrogenasa, proteína de la familia Nif3, proteína de glucosilación pili tipo IV, proteína de membrana externa tolC, proteína de la familia de unión a FAD, proteína de membrana externa multimérica de pilin tipo IV, proteína sensora de dos componentes KdpD, proteína chaperona DnaK, proteína TolQ (Francisella tularensis, Tularemia) ; antígeno MB, ureasa, proteína GyrA, proteína GyrB, proteína ParC, proteína ParE, proteína de membranas asociadas con lípidos LAMP, timidina quinasa K, fosfolipasa PL-Al, fosfolipasa PL-A2, fosfolipasa PL-C, antigeno superficie-expresado de 96 kDa; (Ureaplasma urealyticum, infección por Ureaplasma urealyticum) ; poliproteina no estructural, poliproteina estructural, proteina con cápside CP, proteina El, proteina E2, proteina E3, proteasa Pl, proteasa P2, proteasa P3 (virus de encefalitis equina Venezolana, encefalitis quina venezolana) ; glucoproteina GP, proteínas matriz Z, polimerasa L, nucleoproteína N (virus Guanarito, fiebre hemorrágica Venezolana); poliproteina, proteína E, proteína , proteína con cápside C, proteasa NS3, proteína NS1, proteína NS2A, proteína AS2B, proteína NS4A, proteína NS4B, proteína NS5 (virus del Nilo Occidental, fibre del Nilo Occidental) proteína CP con cápside, proteína El, proteína E2, proteína E3, proteasa P2 (virus de encefalitis equina occidental, encefalitis equina occidental); poliproteina genómica, proteína E, proteína , proteína con cápside C, proteasa NS3, proteína NS1, proteína NS2A, proteína AS2B, proteína NS4A, proteína NS4B, proteína NS5 (virus de fiebre amarilla, fiebre amarilla); proteína blanco Yop putativa YobB, proteína efectora YopD, proteína efectora YopE, proteína YopH, proteína efectora YopJ, proteína de translocación proteínica YopK, proteína efectora YopT, proteína YpkA, proteína de bíosíntesis flagelar FlhA, peptidasa M48, sistema de flujo de potasio KefA, regulador transcripcional RovA, adhesina Ifp, porteína translocadora LcrV, proteína PcrV, invasina Inv, porina similar a OmpF de la proteína de membrana externa, adhesina YadA, proteína quinasa C, fosfolipasa Cl, proteína PsaA, proteína siilar a manosiltransferasa WbyK, proteína YscU, antígeno YPMa (Yersinia pseudotuberculosis , infección por Yersinia pseudotuberculosis); proteína efectora YopB, chaperonina de 60 kDa, proteína bcP, fosfatasa de la proteína tirosina YopH, proteína YopQ, enterotoxina, Galactosido permeasa, reductasa NrdE, proteína YasN, Invasina Inv, adhesina YadA, porina F de membrana externa OmpF, proteína UspAl, proteína EibA, proteína Hia, proteína de superficie celular Ail, chaperona SycD, proteína LcrD, proteína LcrG, proteína LcrV, proteína SycE, proteína YopE, proteína reguladora TyeA, proteína YopM, proteína YopN, proteína YopO, proteína YopT, proteína YopD, proteasa ClpP, proteína MyfA, proteína FilA, y proteína PsaA (Yersinia totalcolitica , Yersiniosis) . (entre paréntesis se encuentran el patógeno o patógenos particulares de los cuales se derivan los antígenos y la enfermedad infecciosa con la cual está asociado el antígeno) En modalidades específicas de acuerdo con la presente invención, en particular se prefieren los siguientes antígenos de patógenos asociados con una enfermedad infecciosa : • La nucleoproteína (N) , la fosfoproteína (P), la proteína de matriz (M) , la glucoproteína (G) , y la polimerasa de ARN viral (L) , en cada caso del virus de la Rabias; • el antígeno superficial de Hepatitis B (HBsAg) , el antígeno núcleo de Hepatitis B (HbcAg) , la AD polimerasa del virus de Hepatitis B, la proteína HBx, la proteína superficial media preS2, la proteína S grande, la proteína viral VP1, la proteína viral VP2, la proteína viral VP3, y la proteína viral VP4, en cada caso del virus de Hepatitis B; • la proteína El, la proteína E2, la proteína E3, la D otsína E4r la proteíns E5, la o oLeí a E6 , i¿ proteína E7, la proteína E8, la proteína Ll, y la proteína L2, en cada caso del virus de papiloma humano (hPV) ; el antígeno protector (PA), el factor de edema (EF) , el factor letal (LF) , y las proteínas de homología de capa S (SLH) , en cada caso de Bacillus anthracis; la proteína de fusión (F) , la proteína con nucleocápside (N) , la fosfoproteína (P), la proteína de matriz (M) , la glucoproteina (G) , la proteina grande (L; ARN polimerasa) , la proteina 1 no estructural (NS1), la proteina 2 no estructural (NS2), la proteina hidrofóbica pequeña (SH) , el factor de alargamiento M2-1, y la proteina para regulación de transcripción M2-2, en cada caso del virus sincitial respiratorio (RSV) ; la glucoproteina L (UL1), la uracil-ADN glucosidasa UL2, la proteina UL3, la proteina UL4, la proteina para replicación de ADN UL5, la proteina portal UL6, la proteina para maduración de viriones UL7, ADN helicasa UL8, proteina de unión al origen de replicación UL9, glucoproteina (UL10), la proteina de ULll, la exonucleasa alcalina UL12, la proteina quinasa de serina-treonina UL13, la proteina con tegumento UL14, la terminasa (UL15) , la proteina con tegumento UL16, la proteina UL17, la proteina VP23 con cápside (UL18), la proteina VP5 con cápside mayor (UL19), la proteina de membrana UL20, la proteina con tegumento UL21, la glucoproteina H (UL22), la timidina quinasa UL23, la proteina UL24, la proteina UL25, la proteina P40 con cápside (UL26, VP24, VP22A) , la glucoproteina B (UL27), la proteina ICP18.5 (UL28), la proteina de unión a ADN mayor ICP8 (UL29) , la ADN polimerasa UL30, la proteina de matriz nuclear UL31, la glucoproteina UL32 con envoltura, la proteína UL33, la proteína de membrana nuclear interna UL34, la proteína VP26 con cápside (UL35), la proteína UL36 con tegumento grande, la proteína UL37 de ensamble con cápside, la proteína VP19C (UL38), la ribonucleót ido reductasa (subunidad grande) UL39, la ribonucleótido reductasa (subunidad pequeña) UL40, la proteína VHS de interrupción de la proteína con tegumento/hospedero viriónico (UL41), el factor de procesabilidad de la ADN polimerasa UL42, la proteína de membrana UL43, la glucoproteína C (UL44), la proteína de membrana UL45, las proteínas VPll/12 con tegumento (UL46) , la proteína VP13/14 con tegumento (UL47), la proteína para maduración de viriones VP16 ÍUL48, alfa-TIF) , la proteína UL49 con envoltura, la dUTP difosfatasa UL50, la proteína UL51 con tegumento, la proteína del complejo de ADN helicasa/primasa UL52, la glucoproteína K (UL53), la proteína de regulación transcripcional IE63 (ICP27, UL54), la proteína UL55, la proteína UL56, la proteína de replicación viral ICP22 (IE68, US1), la proteína US2, la proteína quinasa de serina/treonina US3, la glucoproteína G (US4), la glucoproteína J (US5), la glucoproteína D (US6) , la glucoproteína I (ÜS7), la glucoproteína E (US8) , la proteína US9 con tegumento, la proteína US10 con capside/tegumento, la proteina Vmw21 (US11), la proteína ICP47 (IE12, US12), el activador transcripcional mayor ICP4 (IE175, RSl), la ligasa de E3 ubiquitina ICPO (IE110), la proteína 1 relacionada con latencia (LRP1), la proteina 2 relacionada con latencia (LRP2), el factor de neurovirulencia RL1 (ICP34.5), y la transcripción asociada con latencia (LAT), en cada caso del virus de Herpes simplex (HSV) ; o la proteína ESAT-6, la proteína ESX-l, la proteína CFP10, la proteína TB10.4, la proteína MPT63, la proteína MPT64, la proteína MPT83, la proteína MTB12, la proteína MTB8, la proteína AG85A, la proteína AG85B, las proteínas similares a Rpf, la proteína KATG, la proteína PPE18 , la proteína MTB32, la proteína MTB39, la cristalina, la proteína HSP65, la proteína PST-S, y la proteína HBHA, el antígeno filtrado de 10 kDa EsxB, la serina proteasa PepA, la proteína de unión a fibronectina D FbpD, la proteína secretada PT51, la lipoproteína de unión a fosfato periplásmico PSTS1 (PBP-1), la lipoproteína de unión a fosfato periplásmico PSTS3 (PBP-3, Phos-1), la proteína de la familia PPE PPE14, la proteína de la familia PPE PPE68 , la proteína MTB72F, la chaperona molecular DnaK, la lipoproteina de superficie celular PT83, la lipoproteina P23, proteina permeasa del sistema de transporte de fosfato PstA, el antigeno de 14 kDa, proteina C de unión a fibronectina FbpCl, la alanina deshidrogenasa TB43, y la glutamina sintetasa 1, en cada caso de Mycobacterium tuberculosis. b) Antigenos asociados con alergia o una enfermedad alérgica (antigenos alergénicos o alérgenos): De acuerdo con otra modalidad, una clase adicional de antigenos comprende antigenos alergénicos. Estos antigenos alergénicos se pueden seleccionar de antigenos derivados de diferentes fuentes, por ejemplo de animales, plantas, hongos, bacterias, etc., Las fuentes de alérgenos en este contexto incluyen, por ejemplo pastos, pólenes, mohos, fármacos, o muchos activadores ambientales, etc. Los antigenos alergénicos típicamente pertenecen a diferentes clases de compuestos, tales como ácidos nucleicos y sus fragmentos, proteínas o péptidos y sus fragmentos, carbohidratos, polisacáridos , azúcares, lípidos, fosfolípidos , etc. De particular interés en el contexto de la presente invención son los antígenos proteínicos o peptídicos y sus fragmentos o epítopes, o los ácidos nucleicos o sus fragmentos, en particular los ácidos nucleicos y sus fragmentos, que codifican para estos antigenos proteinicos o peptidicos y sus fragmentos o epitopes.
En modalidades alternativas, el antigeno es un antigeno peptidico o proteinico, o un fragmento, variante y/o derivado del antigeno peptidico o proteinico, tal como un antigeno peptidico o proteinico comprendido en una preparación extraída de la fuente. En modalidades alternativas, un antígeno peptidico o proteinico utilizado en la presente invención no está comprendido en una preparación extraída de la fuente, y/o es uno que no se obtuvo a partir de una preparación extraída de la fuente.
Los antígenos asociados con alergia o una enfermedad alérgica (alérgenos) se prefiere que se deriven de una fuente seleccionada de la lista que consiste de: Acarus spp (Acá s 1, Acá s 10, Acá s 10.0101, Acá s 13, Acá s 13.0101, Acá s 2, Acá s 3, Acá s 7, Acá s 8), Acanthocybium spp (Acá so 1) , Acanthocheilonema spp (Acá v 3, Acá v 3.0101), Acetes spp (Ace ja 1), Actinidia spp (Act a 1, Act c 1, Act c 10, Act c 10.0101, Act c 2, Act c 4, Act c 5, Act c 5.0101, Act c 8, Act c 8.0101, Act c Chitinase, Act d 1, Act d 1.0101, Act d 10, Act d 10.0101, Act d 10.0201, Act d 11, Act d 11.0101, Act d 2, Act d 2.0101, Act d 3, Act d 3.0101, Act d 3.02, Act d 4, Act d 4.0101, Act d 5, Act d 5.0101, Act d 6, Act d 6.0101, Act d 7, Act d 7.0101, Act d 8, Act d 8.0101, Act d 9, Act d 9.0101, Act d Chitxnase, Act e 1, Act e 5), Acyrthosiphon spp (Acy pi 7, Acy pi 7.0101, Acy pi 7.0102), Adenia spp (Ade v RIP) , Aedes spp (Aed a 1, Aed a 1.0101, Aed a 2, Aed a 2.0101, Aed a 3, Aed a 3.0101, Aed a 4, Aed a 7, Aed a 7.0101, Aed a 7.0102, Aed a 7.0103, Aed a 7.0104, Aed a 7.0105, Aed a 7.0106, Aed a 7.0107, Aed a 7.0108, Aed a 7.0109, Aed a 7.0110, Aed a 7.0111, Aed al 1, Aed al 3, Aed al 37kD, Aed v 37kD, Aed v 63kD) , Aegilops spp (Aeg ta 28, Aeg ta alpha_Gliadin, Aeg um 28, Acg un 28), Aethaloperca spp (Aet ro 1), Agropyron spp (Agr c 7), Agrostis spp (Agr ca 1, Agr ca 5, Agr g 1, Agr g 4, Agr s 5), Agrobacterium spp (Agr sp CP4 EPSPS) , Ailuropoda spp (Ail me Phosvitin, Ail me TCTP) , Aix spp (Aix ga 1, Aix sp 1), Aleuroglyphus spp (Ale o 1, Ale o 10, Ale o 10.0101, Ale o 10.0102, Ale o 13, Ale o 14, Ale o 2, Ale o 20, Ale o 3, Ale o 5, Ale o 7, Ale o 8, Ale o 9), Allium spp (Ail a 3, All a Alliin lyase, All c 3, All c 30kD, All c 4, All c Alliin lyase, All p Alliin lyase, All s Alliin lyase), Alnus spp (Aln g 1, Aln g 1.0101, Aln g 1/Bet v 1/Cor a 1 TPC7, Aln g 1/Bet v 1/Cor a 1 TPC9, Aln g 2, Aln g 4, Aln g 4.0101), Alopochen spp (Alo ae 1), Alopecurus spp (Alo p 1, Alo p 5), Alternaría spp (Alt a 1, Alt a 1.0101, Alt a 1.0102, Alt a 10, Alt a 10.0101, Alt a 12, Alt a 12.0101, Alt a 13, Alt a 13.0101, Alt a 2, Alt a 3, Alt a 3.0101, Alt a 4, Alt a 4.0101, Alt a 5, Alt a 5.0101, Alt a 6, Alt a 6.0101, Alt a 7, Alt a 7.0101, Alt a 70kD, Alt a 8, Alt a 8.0101, Alt a 9, Alt a MnSOD, Alt a NTF2, Alt a TCTP, Alt ar 1, Alt arg 1, Alt b 1, Alt bl 1, Alt br 1, Alt c 1, Alt ca 1, Alt ce 1, Alt ch 1, Alt ci 1, Alt co 1, Alt cr 1, Alt ct 1, Alt cu 1, Alt cy 1, Alt d 1, Alt du 1, Alt e 1, Alt et 1, Alt eu 1, Alt ga 1, Alt gr 1, Alt j 1, Alt 1 1, Alt lo 1, Alt m 1, Alt me 1, Alt mi 1, Alt mo 1, Alt o 1, Alt p 1, Alt ph 1, Alt po 1, Alt ps 1, Alt r 1, Alt s 1, Alt se 1, Alt sm 1, Alt so 1, Alt su 1, Alt t 1, Alt te 1, Alt to 1), Amaranthus spp (Ama r 2, Ama r 2.0101, Ama v 2, Ama v 2.0101, Ama v 2.0201), Ambrosia spp (Amb a 1, Amb a 1.0101, Amb a 1.0201, Amb a 1.0202, Amb a 1.0301, Amb a 1.0302, Amb a 1.0303, Amb a 1.0304, Amb a 1.0305, Amb a 1.0401, Amb a 1.0402, Amb a 1.0501, Amb a 1.0502, Amb a 10, Amb a 10.0101, Amb a 3, Amb a 3.0101, Amb a 4, Amb a 4.0101, Amb a 5, Amb a 5.0101, Amb a 6, Amb a 6.0101, Amb a 7, Amb a 7.0101, Amb a 8, Amb a 8.0101, Amb a 8.0102, Amb a 9, Amb a 9.0101, Amb a 9.0102, Amb a CPI, Amb p 1, Amb p 5, Amb p 5.0101, Amb p 5.0201, Amb t 5, Amb t 5.0101, Amb t 8), Ammothea spp (Amm h 7, Amm h 7.0101), Anadara spp (Ana br 1), Ananas spp (Ana c 1, Ana c 1.0101, Ana c 2, Ana c 2.0101, Ana c 2.0101 (MUXF3 ) ) , Anas spp (Ana ca 1), Anarhichas spp (Ana 1 1), Anacardium spp (Ana o 1, Ana o 1.0101, Ana o 1.0102, Ana o 2, Ana o 2.0101, Ana o 3, Ana o 3.0101), Anas spp (Ana p 1, Ana p 2, Ana p 3), Anguilla spp (Ang a 1, Ang j 1) , Anisakis spp (Ani s 1, Ani s 1.0101, Ani s 10, Ani s 10.0101, Ani s 11, Ani s 11.0101, Ani s 12, Ani s 12.0101, Ani s 2, Ani s 2.0101, Ani s 24kD, Ani s 3, Ani s 3.0101, Ani s 4, Ani s 4.0101, Ani s 5, Ani s 5.0101, Ani s 6, Ani s 6.0101, Ani s 7, Ani s 7.0101, Ani s 8, Ani s 8.0101, Ani s 9, Ani s 9.0101, Ani s CCOS3, Ani s Cytochrome B, Ani s FBPP, Ani s NADHDS4L, Ani s NARaS, Ani s PEPB, Ani s Troponin) , Annona spp (Ann c Chitinase), Anopheles spp (Ano da 17, Ano da 17.0101, Ano da 27, Ano da 27.0101, Ano da 7, Ano da 7.0101, Ano g 7, Ano g 7.0101), Anser spp (Ans a 1, Ans a 2, Ans a 3, Ans in 1) , Anthoxanthum spp (Ant o 1, Ant o 1.0101, Ant o 12, Ant o 13, Ant o 2, Ant o 4, Ant o 5, Ant o 6, Ant o 7) , Apis spp (Api c 1, Api c 1.0101, Api c 10, Api c 2, Api c 4, Api d 1, Api d 1.0101, Api d 4, Api fl 4), Apium spp (Api g 1, Api g 1.0101, Api g 1.0201, Api g 2, Api g 2.0101, Api g 3, Api g 3.0101, Api g 4, Api g 4.0101, Api g 5, Api g 5.0101, Api g 6, Api g 6.0101) , Apis spp (Api m 1, Api m 1.0101, Api m 10, Api m 10.0101, Api m 11, Api m 11.0101, Api m 11.0201, Api m 13kD, Api m 2, Api m 2.0101, Api rn 3, Api m 3.0101, Api m 4, Api m 4.0101, Api m 5, Api m 5.0101, Api m 6, Api m 6.0101, Api m 7, Api m 7.0101, Api m 8, Api m 8.0101, Api m 9, Api m 9.0101, Api m A1-A2, Api m A1-A2-A3, Api m Apalbumin 1, Api m Apalbumin 2, Api me 1, Api me 4), Arachis spp (Ara d 2, Ara d 6, Ara f 3, Ara f 4, Ara h 1, Ara h 1.0101, Ara h 10, Ara h 10.0101, Ara h 10.0102, Ara h 11, Ara h 11.0101, Ara h 2, Ara h 2.0101, Ara h 2.0102, Ara h 2.0201, Ara h 2.0202, Ara h 3, Ara h 3.0101, Ara h 4, Ara h 4.0101, Ara h 5, Ara h 5.0101, Ara h 6, Ara h 6.0101, Ara h 7, Ara h 7.0101, Ara h 7.0201, Ara h 7.0202, Ara h 8, Ara h 8.0101, Ara h 8.0201, Ara h 9, Ara h 9.0101, Ara h 9.0201, Ara h Agglutinin, Ara h Oleosin 18kD, Ara i 2, Ara i 6), Arabidopsis spp (Ara t 3, Ara t 8, Ara t GLP) , Archosargus spp (Are pr 1), Archaeopotamobius spp (Are s 8, Are s 8.0101), Aequipecten spp (Arg i 1), Argas spp (Arg r 1, Arg r 1.0101), Ariopsis spp (Ari fe 1), Armoracia spp (Arm r HRP) , Arrhenatherum spp (Arr e 1, Arr e 5), Artemisia spp (Art a 1, Art ap 1), Artemia spp (Art fr 1, Art fr 1.0101, Art fr 5, Art fr 5.0101), Arthrobacter spp (Art gl CO) , Achorion spp (Art gy 7), Artocarpus spp (Art h 17kD, Art h 4), Arthrospira spp (Art pl beta_Phycocyanin) , Artemisia spp (Art v 1, Art v 1.0101, Art v 1.0102, Art v 1.0103, Art v 1.0104, Art v 1.0105, Art v 1.0106, Art v 1.0107, Art v 2, Art v 2.0101, Art v 3, Art v 3.0101, Art v 3.0201, Art v 3.0202, Art v 3.0301, Art v 4, Art v 4.0101, Art v 4.0201, Art v 47kD, Art v 5, Art v 5.0101, Art v 6, Art v 6.0101, Art v 60kD) , Arthroderma spp (Art va 4), Ascaris spp (Ase 1 3, Ase 1 3.0101, Ase 1 3.0102, Ase 1 34kD, Ase s 1, Ase s 1.0101, Ase s 3, Ase s 3.0101, Ase s GST), Aspergillus spp (Asp aw Glucoanylase , Asp c 22, Asp f 1, Asp f 1.0101, Asp f 10, Asp f 10.0101, Asp f 11, Asp f 11.0101, Asp f 12, Asp f 12.0101, Asp f 13, Asp f 13.0101, Asp f 15, Asp f 15.0101, Asp f 16, Asp f 16.0101, Asp f 17, Asp f 17.0101, Asp f 18, Asp f 18.0101, Asp f 2, Asp f 2.0101, Asp f 22, Asp f 22.0101, Asp f 23, Asp f 23.0101, Asp f 27, Asp f 27.0101, Asp f 28, Asp f 28.0101, Asp f 29, Asp f 29.0101, Asp f 3, Asp f 3.0101, Asp f 34, Asp f 34.0101, Asp f 4, Asp f 4.0101, Asp f 5, Asp f 5.0101, Asp f 56kD, Asp f 6, Asp f 6.0101, Asp f 7, Asp f 7.0101, Asp f 8, Asp f 8.0101, Asp f 9, Asp f 9.0101, Asp f AfCalAp, Asp f AT_V, Asp f Catalase, Asp f Chitosanase, Asp f CP, Asp f DPPV, Asp f FDH, Asp f gamma_Actin, Asp f Glucosídase, Asp f GPI, Asp f GST, Asp f GT, Asp f IAO, Asp f IPMI, Asp f LPL1, Asp f LPL3, Asp f Mannosidase, Asp f MDH, Asp f PL, Asp f PUP, Asp f RPS3, Asp f SXR, Asp fl 13, Asp fl 13.0101, Asp fl 18, Asp fl 2, Asp fl 21, Asp fl 3, Asp fl 4, Asp fl 7, Asp fl 8, Asp fl 9, Asp me Seaprose, Asp n 14, Asp n 14.0101, Asp n 18, Asp n 18.0101, Asp n 25, Asp n 25.0101, Asp n 30, Asp n Glucoamylase , Asp n Hemicellulase , Asp n Pectinase, Asp o 13, Asp o 13.0101, Asp o 21, Asp o 21.0101, Asp o 3, Asp o 4, Asp o 7, Asp o 8, Asp o Lactase, Asp o Lipase, Asp oc 13, Asp r 1, Asp sa AP, Asp sp Glucoamylase, Asp sp Glucoseoxidase, Asp sp PL, Asp sp PME, Asp sy 13, Asp v 13, Asp v 13.0101, Asp v Catalase A, Asp v Enolase, Asp v GAPDH, Asp v MDH, Asp v SXR) , Asparagus spp (Aspa o 1, Aspa o 1.01, Aspa o 1.02, Aspa o 17kD, Aspa o 4), Aspergillus spp (Aspe ni 2, Aspe ni 3, Aspe ni 4, Aspe ni 7, Aspe ni 8, Aspe ni 9) , Avena spp (Ave s 1, Ave s 12, Ave s 13, Ave s 2, Ave s 4, Ave s 5, Ave s 7), Babylonia spp (Bab ja 1), Bacillus spp (Bac al Subtilisin, Bac el Subtilisin, Bac 1 Subtilisin, Bac li aA, Bac li Subtilisin), Bactrocera spp (Bac ol 27, Bac ol 27.0101), Bacillus spp (Bac sp aAl, Bac sp aA3, Bac sp Decarboxylase, Bac st amyM, Bac su Subtilisin, Bac t CrylAb, Bac t CrylFa, Bac t Cry3Bbl, Bac t Cry9c) , Bagre spp (Bag ma 1), Balistes spp (Bal ca 1), Balanus spp (Bal r 1, Bal r 1.0101), Beauveria spp (Bea b Aid, Bea b Enol, Bea b f2, Bea b Hex) , Bertholletia spp (Ber e 1, Ber e 1.0101, Ber e 2, Ber e 2.0101), Beryx spp (Ber sp 1), Betula spp (Bet ab 1, Bet al 1, Bet ch 1, Bet co 1, Bet da 1, Bet gr 1, Bet hu 1, Bet le 1, Bet me 1, Bet n 1, Bet p 1, Bet pa 1, Bet po 1, Bet pu 1, Bet pu 2, Bet pu 4, Bet pu 6, Bet pu 7, Bet se 1, Bet ut 1, Bet v 1, Bet v 1 B1-B1-B1, Bet v 1 fv Mal 4x, Bet v 1.0101, Bet v 1.0102, Bet v 1.0103, Bet v 1.0201, Bet v 1.0301, Bet v 1.0401, Bet v 1.0402, Bet v 1.0501, Bet v 1.0601, Bet v 1.0602, Bet v 1.0701, Bet v 1.0801, Bet v 1.0901, Bet v 1.1001, Bet v 1.1101, Bet v 1.1201, Bet v 1.1301, Bet v 1.1401, Bet v 1.1402, Bet v 1.1501, Bet v 1.1502, Bet v 1.1601, Bet v 1.1701, Bet v 1.1801, Bet v 1.1901, Bet v 1.2001, Bet v 1.2101, Bet v 1.2201, Bet v 1.2301, Bet v 1.2401, Bet v 1.2501, Bet v 1.2601, Bet v 1.2701, Bet v 1.2801, Bet v 1.2901, Bet v 1.3001, Bet v 1.3101, Bet v 2, Bet v 2.0101, Bet v 3, Bet v 3.0101, Bet v 4, Bet v 4.0101, Bet v 6, Bet v 6.0101, Bet v 6.0102, Bet v 7, Bet v 7.0101, Bet v 8, Bet v Glucanase), Beta spp (Beta v 1, Beta v 1.0101, Beta v 2, Beta v 2.0101), Blattella spp (Bla g 1, Bla g 1.0101, Bla g 1.0102, Bla g 1.0103, Bla g 1.0201, Bla g 1.0202, Bla g 2, Bla g 2.0101, Bla g 2.0201, Bla g 36kD, Bla g 4, Bla g 4.0101, Bla g 4.0201, Bla g 5, Bla g 5.0101, Bla g 5.0201, Bla g 6, Bla g 6.0101, Bla g 6.0201, Bla g 6.0301, Bla g 7, Bla g 7.0101, Bla g 8, Bla g 8.0101, Bla g 9, Bla g Enolase, Bla g GSTD1, Bla g RACK1, Bla g TPI, Bla g Trypsin, Bla g Vitellogenin) , Blatta spp (Bla o 1, Bla o 7), Blomia spp (Blo t 1, Blo t 1.0101, Blo t 1.0201, Blo t 10, Blo t 10.0101, Blo t 10.0102, Blo t 11, Blo t 11.0101, Blo t 12, Blo t 12.0101, Blo t 12.0102, Blo t 13, Blo t 13.0101, Blo t 14, Blo t 15, Blo t 18, Blo t 19, Blo t 19.0101, Blo t 2, Blo t 2.0101, Blo t 2.0102, Blo t 2.0103, Blo t 20, Blo t 21, Blo t 21.0101, Blo t 3, Blo t 3.0101, Blo t 4, Blo t 4.0101, Blo t 5, Blo t 5.0101, Blo t 6, Blo t 6.0101, Blo t 7, Blo t 8, Blo t 9, Blo t HSP70) , Bombus spp (Bom ar 4, Bom hy 4, Bom p 1, Bom p 1.0101, Bom p 2, Bom p 3, Bom p 4, Bom p 4.0101, Bom t 1, Bom t 1.0101, Bom t 4, Bom t 4.0101), Bombyx spp (Bomb m 1, Bomb m 1.0101, Bomb m 7, Bomb m 7.0101, Bomb m 7.0102, Bomb m 7.0103, Bomb m 7.0104, Bomb m 7.0105, Bomb m 7.0106), Boophilus spp (Boo m 1, Boo m 7, Boo m 7.0101), Bos spp (Bos d 2, Bos d 2.0101, Bos d 2.0102, Bos d 2.0103, Bos d 3, Bos d 3.0101, Bos d 4, Bos d 4.0101, Bos d 5, Bos d 5.0101, Bos d 5.0102, Bos d 6, Bos d 6 (MDA) , Bos d 6.0101, Bos d 7, Bos d 7.0101, Bos d 8, Bos d 8 alphaSl, Bos d 8 alphaS2, Bos d 8 beta, Bos d 8 kappa, Bos d alpha2l, Bos d alpha2I .0101, Bos d Chymosin, Bos d Fibrin, Bos d Gelatin, Bos d HG, Bos d Insulin, Bos d Lactoferrin, Bos d Lactoperoxidase, Bos d Myoglobin, Bos d OBP, Bos d OSCP, Bos d Phosvitin, Bos d PLA2, Bos d PRVB, Bos d Thrombin, Bos d TI, Bos gr ALA, Bos gr Myoglobin), Bothrops spp (Bot as 1, Bot at 1), Bouteloua spp (Bou g 1) , Biting spp (Bov ov 1) , Brama spp (Bra du 1) , Brassica spp (Bra j 1, Bra j 1.0101, Bra n 1, Bra n 1.0101, Bra n 4, Bra n 7, Bra n 8, Bra n PG, Bra ni 8, Bra o 3, Bra o 3.0101, Bra r 1, Bra r 1.0101, Bra r 2, Bra r 2.0101, Bra r 3, Bra r 4, Bra r 7) , Bromus spp (Bro a 1, Bro a 4) , Brosme spp (Bro br 1), Bromus spp (Bro i 1, Bro i 5, Bro i 7), Brugia spp (Bru m 3, Bru m 3.0101, Bru m Bm33), Bubalus spp (Bub b ALA, Bub b BLG, Bub b Casein, Bub b Casein alphaSl, Bub b Casein alphaS2, Bub b Casein beta, Bub b Casein kappa), Caenorhabditis spp (Cae b 3, Cae b 3.0101, Cae br 3, Cae br 3.0101, Cae e 3, Cae e 3.0101, Cae e 3.0102, Cae re 13, Cae re 13.0101), Cajanus spp (Caj c 1), Caligus spp (Cal el 1, Cal el 1.0101, Cal el 1.0102), Calamus spp (Cal le 1) , Callinectes spp (Cal s 2), Camelus spp (Cam d ALA, Cam d Casein, Cam d Casein alphaSl, Cam d Casein alphaS2, Cam d Casein beta, Cam d Casein kappa) , Camponotus spp (Cam fl 7, Cam fl 7.0101), Canis spp (Can f 1, Can f 1.0101, Can f 2, Can f 2.0101, Can f 3, Can f 3.0101, Can f 4, Can f 4.0101, Can f 5, Can f 5.0101, Can f 6, Can f 6.0101, similar a Can f Feldl, similar a Can f Homs2, Can f Phosvitin, Can f TCTP) , Canthidermis spp (Can ma 1), Cáncer spp (Can mg 2, Can p 1), Cannabis spp (Can s 3), Candida spp (Cand a 1, Cand a 1.0101, Cand a 3, Cand a 3.0101, Cand a CAAP, Cand a CyP, Cand a Enolase, Cand a FPA, Cand a MnSOD, Cand a PGK, Cand b 2, Cand b 2.0101, Cand b FDH, Cand r Lipase), Capsicum spp (Cap a 1, Cap a 1.0101, Cap a 17kD, Cap a 2, Cap a 2.0101, Cap a 30kD, Cap a Glucanase, Cap ch 17kD) , Caprella spp (Cap e 1), Capra spp (Cap h ALA, Cap h BLG, Cap h Casein, Cap h Casein alphaSl, Cap h Casein alphaS2, Cap h Casein beta, Cap h Casein kappa, Cap h GSA) , Capitulum spp (Cap m 1), Carassius spp (Car au 1), Carpinus spp (Car b 1, Car b 1.0101, Car b 1.0102, Car b 1.0103, Car b 1.0104, Car b 1.0105, Car b 1.0106, Car b 1.0107, Car b 1.0108, Car b 1.0109, Car b 1.0110, Car b 1.0111, Car b 1.0112, Car b 1.0113, Car b 1.0201, Car b 1.0301, Car b 1.0302, Car b 2, Car b 4), Caranx spp (Car cr 1), Carya spp (Car i 1, Car i 1.0101, Car i 2, Car i 4, Car i 4.0101), Carcinus spp (Car ma 2), Caryota spp (Car mi 2), Carica spp (Car p 1, Car p Chitinase, Car p Chymopapain, Car p Endoproteinase ) , Castanea spp (Cas c 24kD, Cas s 1, Cas s 1.0101, Cas s 1.0102, Cas s 1.0103, Cas s 2, Cas s 5, Cas s 5.0101, Cas s 8, Cas s 8.0101, Cas s 9, Cas s 9.0101), Catharanthus spp (Cat r 1, Cat r 1.0101, Cat r 17kD, Cat r 2), Caulolatilus spp (Cau ch 1), Cavia spp (Cav p 1, Cav p 1.0101, Cav p 2, Cav p 2.0101, Cav p 3, Cav p 3.0101, Cav p Gelatin, Cav p GSA) , Centropristis spp (Cen s 1) , Cephalopholis spp (Cep so 1), Charybdis spp (Cha f 1, Cha f 1.0101), Chaetodipterus spp (Cha fa 1), Chamaecyparis spp (Cha o 1, Cha o 1.0101, Cha o 2, Cha o 2.0101), Chenopodium spp (Che a 1, Che a 1.0101, Che a 2, Che a 2.0101, Che a 3, Che a 3.0101), Chironomus spp (Chi k 1, Chi k 10, Chi k 10.0101), Chinchilla spp (Chi 1 21kD_a, Chi 1 21kD_b) , Chionoecetes spp (Chi o 1, Chi o 1.0101, Chi o 2, Chi o 4, Chi o 6, Chi o alpha_Actin, Chi o SERCA) , Chironomus spp (Chi t 1, Chi t 1.0101, Chi t 1.0201, Chi t 2, Chi t 2.0101, Chi t 2.0102, Chi t 3, Chi t 3.0101, Chi t 4, Chi t 4.0101, Chi t 5, Chi t 5.0101, Chi t 6, Chi t 6.0101, Chi t 6.0201, Chi t 7, Chi t 7.0101, Chi t 8, Chi t 8.0101, Chi t 9, Chi t 9.0101), Chlamys spp (Chi n 1), Chloephaga spp (Chi pi 1) , Chortoglyphus spp (Cho a 10), Chrysomela spp (Chr tr 7, Chr tr 7.0101), Cicer spp (Cic a 2S Albumin, Cic a Albumin), Cichorium spp (Cic i 1), Cimex spp (Cim 1 Nitrophorin) , Citrus spp (Cit 1 1, Cit 1 3, Cit 1 3.0101), Citrullus spp (Cit la 2, Cit la DH, Cit la TPI), Citrus spp (Cit r 3, Cit r 3.0101, Cit s 1, Cit s 1.0101, Cit s 2, Cit s 2.0101, Cit s 3, Cit s 3.0101, Cit s 3.0102, Cit s IFR) , Cladosporium spp (Cía c 14, Cía c 14.0101, Cía c 9, Cía c 9.0101, Cía h 1, Cía h 10, Cía h 10.0101, Cía h 12, Cía h 12.0101, Cía h 2, Cía h 2.0101, Cía h 42kD, Cía h 5, Cía h 5.0101, Cía h 6, Cía h 6.0101, Cía h 7, Cía h 7.0101, Cía h 8, Cía h 8 CSP, Cía h 8.0101, Cía h 9, Cía h 9.0101, Cía h abH, Cía h GST , Cía h HChl, Cía h HSP70, Cía h NTF2, Cía h TCTP) , Clostridium spp (Cío hi Collagenase, Cío t Toxoid) , Clupea spp (Clu h 1, Clu h 1.0101, Clu h 1.0201, Clu h 1.0301), Cocos spp (Coc n 2, Coc n 4, Coc n 5), Coccidioides spp (Coc po 8), Coffea spp (Cof a 1, Cof a 1.0101), Columba spp (Col 1 PSA) , Coprinus spp (Cop c 1, Cop c 1.0101, Cop c 2, Cop c 2.0101, Cop c 3, Cop c 3.0101, Cop c 4, Cop c 5, Cop c 5.0101, Cop c 6, Cop c 7, Cop c 7.0101), Corylus spp (Cor a 1, Cor a 1.0101, Cor a 1.0102, Cor a 1.0103, Cor a 1.0104, Cor a 1.0201, Cor a 1.0301, Cor a 1.0401, Cor a 1.0402, Cor a 1.0403, Cor a 1.0404, Cor a 10, Cor a 10.0101, Cor a 11, Cor a 11.0101, Cor a 12, Cor a 12.0101, Cor a 13, Cor a 13.0101, Cor a 14, Cor a 14.0101, Cor a 2, Cor a 2.0101, Cor a 2.0102, Cor a 8, Cor a 8.0101, Cor a 9, Cor a 9.0101), Corynebacterium spp (Cor d Toxoid) , Corylus spp (Cor he 1), Coryphaena spp (Cor hi 1), Coriandrum spp (Cor s 1, Cor s llkD, Cor s 2), Cotoneaster spp (Cot 1 3), Crangon spp (Cra c 1, Cra c 1.0101, Cra c 2, Cra c 2.0101, Cra c 4, Cra c 4.0101, Cra c 5, Cra c 5.0101, Cra c 6, Cra c 6.0101, Cra c 8, Cra c 8.0101), Crassostrea spp (Cra g 1), Cricetus spp (Cri c HSA) , Crivellia spp (Cri pa 1) , Crocus spp (Cro s 1, Cro s 1.0101, Cro s 2, Cro s 2.0101, Cro s 3, Cro s 3.01, Cro s 3.02), Cryptomeria spp (Cry j 1, Cry j 1.0101, Cry j 1.0102, Cry j 1.0103, Cry j 2, Cry j 2.0101, Cry j 2.0102, Cry j 3, Cry j 3.1, Cry j 3.2, Cry j 3.3, Cry j 3.4, Cry j 3.5, Cry j 3.6, Cry j 3.7, Cry j 3.8, Cry j 4, Cry j AP, Cry j Chitinase, Cry j CPA9, Cry j IFR, Cry j LTP, Cry j P1-P2), Cryphonectria spp (Cry p AP) , Ctenocephalides spp (Cte f 1, Cte f 1.0101, Cte f 2, Cte f 2.0101, Cte f 3, Cte f 3.0101) , Ctenopharyngodon spp (Cte id 1), Cucumis spp (Cuc m 1, Cuc m 1.0101, Cuc m 2, Cuc m 2.0101, Cuc m 3, Cuc m 3.0101, Cuc m Lecl7, Cuc m MDH) , Cucúrbita spp (Cuc ma 18kD, Cuc ma 2, Cuc p 2, Cuc p AscO) , Cucumis spp (Cuc s 2) , Culicoides spp (Cul n 1, Cul n 10, Cul n 11, Cul n 2, Cul n 3, Cul n 4, Cul n 5, Cul n 6, Cul n 7, Cul n 3, Cul n 9, Cul n HSP70), Culex spp (Cul q 28kD, Cul q 35kD, Cul q 7, Cul q 7.0101, Cul q 7.0102), Culicoides spp (Cul so 1), Cuminum spp (Cum c 1, Cum c 2), Cupressus spp (Cup a 1, Cup a 1.0101, Cup a 1.02, Cup a 2, Cup a 3, Cup a 4, Cup a 4.0101, Cup s 1, Cup s 1.0101, Cup s 1.0102, Cup s 1.0103, Cup s 1.0104, Cup s 1.0105, Cup s 3, Cup s 3.0101, Cup s 3.0102, Cup s 3.0103, Cup s 8), Cochliobolus spp (Cur 1 1, Cur 1 1.0101, Cur 1 2, Cur 1 2.0101, Cur 1 3, Cur 1 3.0101, Cur 1 4, Cur 1 4.0101, Cur 1 ADH, Cur 1 GST, Cur 1 MnSOD, Cur 1 Oryzin, Cur 1 Trx, Cur 1 ZPS1), Cyanochen spp (Cya cy 1), Cynoscion spp (Cyn ar 1), Cynosurus spp (Cyn cr 1, Cyn cr 5), Cynodon spp (Cyn d 1, Cyn d 1.0101, Cyn d 1.0102, Cyn d 1.0103, Cyn d 1.0104, Cyn d 1.0105, Cyn d 1.0106, Cyn d 1.0107, Cyn d 1.0201, Cyn d 1.0202, Cyn d 1.0203, Cyn d 1.0204, Cyn d 10, Cyn d 11, Cyn d 12, Cyn d 12.0101, Cyn d 13, Cyn d 15, Cyn d 15.0101, Cyn d 2, Cyn d 22, Cyn d 22.0101, Cyn d 23, Cyn d 23.0101, Cyn d 24, Cyn d 24.0101, Cyn d 4, Cyn d 5, Cyn d 6, Cyn d 7, Cyn d 7.0101), Cynoscion spp (Cyn ne 1) , Cynomys spp (Cyn sp Lipocalin) , Cyprinus spp (Cyp c 1, Cyp c 1.01, Cyp c 1.02), Daboia spp (Dab ru 1), Dactylis spp (Dac g 1, Dac g 1.01, Dac g 1.0101, Dac g 1.02, Dac g 12, Dac g 13, Dac g 2, Dac g 2.0101, Dac g 3, Dac g 3.0101, Dac g 4, Dac g 4.0101, Dac g 5, Dac g 5.0101, Dac g 7), Dama spp (Dara d CSA), Danio spp (Dan re 1, Dan re 2, Dan re alpha2l, Dan re CK) , Dasyatis spp (Das ak 1, Das am 1, Das sa 1), Daucus spp (Dau c 1, Dau c 1.0101, Dau c 1.0102, Dau c 1.0103, Dau c 1.0104, Dau c 1.0105, Dau c 1.0201, Dau c 1.0301, Dau c 3, Dau c 4, Dau c 4.0101, Dau c CyP) , Decapterus spp (Dec ru 1) , Dendronephthya spp (Den n 1, Den n 1.0101), Dermatophagoides spp (Der f 1, Der f 1.0101, Der f 1.0102, Der f 1.0103, Der f 1.0104, Der f 1.0105, Der f 1.0106, Der f 1.0107, Der f 1.0108, Der f 1.0109, Der f 1.0110, Der f 10, Der f 10.0101, Der f 10.0102, Der f 11, Der f 11.0101, Der f 13, Der f 13.0101, Der f 14, Der f 14.0101, Der f 15, Der f 15.0101, Der f 16, Der f 16.0101, Der f 17, Der f 17.0101, Der f 18, Der f 18.0101, Der f 2, Der f 2.0101, Der f 2.0102, Der f 2.0103, Der f 2.0104, Der f 2.0105, Der f 2.0106, Der f 2.0107, Der f 2.0108, Der f 2.0109, Der f 2.0110, Der f 2.0111, Der f 2.0112, Der f 2.0113, Der f 2.0114, Der f 2.0115, Der f 2.0116, Der f 2.0117, Der f 20, Der f 21, Der f 22, Der f 22.0101, Der f 3, Der f 3.0101, Der f 4, Der f 5, Der f 6, Der f 6.0101, Der f 7, Der f 7.0101, Der f 8, Der f 9, Der f HSP70), Dermanyssus spp (Der g 10, Der g 10.0101), Dermatophagoides spp (Der m 1, Der m 1.0101, Der p 1, Der p 1.0101, Der p 1.0102, Der p 1.0103, Der p 1.0104, Der p 1.0105, Der p 1.0106, Der p 1.0107, Der p 1.0108, Der p 1.0109, Der p 1.0110, Der p 1.0111, Der p 1.0112, Der p 1.0113, Der p 1.0114, Der p 1.0115, Der p 1.0116, Der p 1.0117, Der p 1.0118, Der p 1.0119, Der p 1.0120, Der p 1.0121, Der p 1.0122, Der p 1.0123, Der p 1.0124, Der p 10, Der p 10.0101, Der p 10.0102, Der p 10.0103, Der p 11, Der p 11.0101, Der p 13, Der p 14, Der p 14.0101, Der p 15, Der p 18, Der p 2, Der p 2.0101, Der p 2.0102, Der p 2.0103, Der p 2.0104, Der p 2.0105, Der p 2.0106, Der p 2.0107, Der p 2.0108, Der p 2.0109, Der p 2.0110, Der p 2.0111, Der p 2.0112, Der p 2.0113, Der p 2.0114, Der p 2.0115, Der p 20, Der p 20.0101, Der p 21, Der p 21.0101, Der p 23, Der p 23.0101, Der p 3, Der p 3.0101, Der p 4, Der p 4.0101, Der p 5, Der p 5.0101, Der p 5.0102, Der p 6, Der p 6.0101, Der p 7, Der p 7.0101, Der p 8, Der p 8.0101, Der p 9, Der p 9.0101, Der p 9.0102, Der p P1-P2, Der p P2-P1, Der s 1, Der s 2, Der s 3) , Diant us spp (Dia c RIP) , Dicranopteris spp (Dic 1 2S Albumin) , Diospyros spp (Dio k 17kD, Dio k 4, Dio k IFR) , Dioscorea spp (Dio p TSP) , Diplodus spp (Dip ho 1), Distichlis spp (Dis s 1, Dis s 7), Ditrema spp (Dit te 1), Dolichovespula spp (Dol a 1, Dol a 2, Dol a 5, Dol a 5.0101), Dolichos spp (Dol b Agglutinin) , Dolichovespula spp (Dol m 1, Dol m 1.0101, Dol m 1.02, Dol m 2, Dol m 2.0101, Dol m 5, Dol m 5.0101, Dol m 5.02), Drosophila spp (Dro an 7, Dro an 7.0101, Dro er 7, Dro er 7.0101, Dro er 7.0102, Dro gr 7, Dro gr 7.0101, Dro gr 7.0102, Dro m 7, Dro m 7.0101, Dro m 7.0102, Dro m 7.0103, Dro m 7.0104, Dro m 7.0105, Dro m 7.0106, Dro m 7.0107, Dro m 7.0108, Dro m 7.0109, Dro m 7.0110, Dro m 7.0111, Dro m 7.0112, Dro m 7.0113, Dro m 9, Dro m MnSOD, Dro mo 7, Dro mo 7.0101, Dro pp 7, Dro pp 7.0101, Dro se 7, Dro se 7.0101, Dro si 7, Dro si 7.0101, Dro si 7.0102, Dro vi 7, Dro vi 7.0101, Dro wi 7, Dro wi 7.0101, Dro y 7, Dro y 7.0101, Dro y 7.0102, Dro y 7.0103), Echium spp (Ech p Cytochrome C) , Elaeis spp (Ela g 2, Ela g Bd31kD) , Elops spp (Elo sa 1), Embellisia spp (Emb a 1, Emb i 1, Emb nz 1, Emb t 1) , Engraulis spp (Eng e 1), Enteroctopus spp (Ent d 1), Epinephelus spp (Epi bl 1, Epi co 1, Epi fl 1, Epi me 1, Epi mo 1) , Epicoccum spp (Epi p 1, Epi p 1.0101, Epi p 12kD, Epi p GST) , Epinephelus spp (Epi po 1, Epi un 1), Equisetum spp (Equ a 17kD) , Equus spp (Equ as 4, Equ as DSA, Equ bu 4, Equ c 1, Equ c 1.0101, Equ c 2, Equ c 2.0101, Equ c 2.0102, Equ c 3, Equ c 3.0101, Equ c 4, Equ c 4.0101, Equ c 5, Equ c 5.0101, Equ c ALA, Equ c BLG, Equ c Casein, Equ c Casein beta, Equ c Casein kappa, Equ c PRVB, Equ he 4, Equ z ZSA) , Erimacrus spp (Eri i 1, Eri i 1.0101, Eri i 1.0102), Eriocheir spp (Eri s 1, Eri s 1.0101, Eri s 2), Erwinia spp (Erw ch Asparaginase) , Escherichia spp (Esc c Asparaginase, Esc c beta GAL), Esox spp (Eso 1 1), Euphausia spp (Eup p 1, Eup p 1.0101), Euphasia spp (Eup s 1, Eup s 1.0101), Euroglyphus spp (Eur m 1, Eur m 1.0101, Eur m 1.0102, Eur m 1.0103, Eur m 10, Eur m 14, Eur m 14.0101, Eur m 2, Eur m 2.0101, Eur m 2.0102, Eur m 3, Eur m 3.0101, Eur m 4, Eur m 4.0101), Evynnis spp (Evy j 1), Fagopyrum spp (Fag e 1, Fag e 1.0101, Fag e lOkD, Fag e 19kD, Fag e 2, Fag e 2.0101, Fag e TI), Fagus spp (Fag s 1, Fag s 1.0101, Fag s 2, Fag s 4) , Fagopyrum spp (Fag t 1, Fag t 10kD, Fag t 2, Fag t 2.0101), Felis spp (Fel d 1, Fel d 1.0101, Fel d 2, Fel d 2.0101, Fel d 3, Fel d 3.0101, Fel d 4, Fel d 4.0101, Fel d 5, Fel d 5.0101, Fel d 6, Fel d 6.0101, Fel d 7, Fel d 7.0101, Fel d 8, Fel d 8.0101, Fel d IgG) , Fenneropenaeus spp (Fen c 1, Fen c 2, Fen me 1, Fen me 1.0101), Festuca spp (Fes e 1, Fes e 13, Fes e 4, Fes e 5, Fes e 7, Fes p 1, Fes p 13, Fes p 4, Fes p 4.0101, Fes p 5, Fes r 1, Fes r 5) , Ficus spp (Fie c 17kD, Fie c 4, Fie c Ficin) , Foeniculum spp (Foe v 1, Foe v 2), Forsythia spp (For s 1), Forcipomyia spp (For t 1, For t 1.0101, For t 2, For t 2.0101, For t 7, For t FPA, For t Myosin, For t TPI), Fragaria spp (Fra a 1, Fra a 1.0101, Fra a 3, Fra a 3.0101, Fra a 3.0102, Fra a 3.0201, Fra a 3.0202, Fra a 3.0203, Fra a 3.0204, Fra a 3.0301, Fra a 4, Fra a 4.0101, Fra c 1), Fraxinus spp (Fra e 1, Fra e 1.0101, Fra e 1.0102, Fra e 1.0201, Fra e 12, Fra e 2, Fra e 3, Fra e 9), Fragaria spp (Fra v 1), Fusarium spp (Fus c 1, Fus c 1.0101, Fus c 2, Fus c 2.0101, Fus c 3, Fus s 1, Fus s 45kD, Fus sp Lipase) , Gadus spp (Gad c 1, Gad c 1.0101, Gad c APDH, Gad m 1, Gad m 1.0101, Gad m 1.0102, Gad m 1.0201, Gad m 1.0202, Gad m 45kD, Gad m Gelatin, Gad ma 1), Gallus spp (Gal d 1, Gal d 1.0101, Gal d 2, Gal d 2.0101, Gal d 3, Gal d 3.0101, Gal d 4, Gal d 4.0101, Gal d 5, Gal d 5.0101, Gal d 6, Gal d 6.0101, Gal d Apo I, Gal d Apo VI, Gal d GPI, Gal d HG, Gal d IgY, Gal d L-PGDS, Gal d Ovomucm, Gal d Phosvitin, Gal d PRVB, Gal la 4), Gallería spp (Gal m 18kD, Gal m 24kD), Gallus spp (Gal so 4), Gammarus spp (Gam s TM) , Gelonium spp (Gel m RIP) , Geothelphusa spp (Geo de 1), Glossina spp (Glo m 5, Glo m 5.0101, Glo m 7, Glo m 7.0101, Glo m 7.0102, Glo m 7.0103), Glycine spp (Gly a Bd30K, Gly ar Bd30K, Gly ca Bd30K, Gly el Bd30K, Gly cu Bd30K, Gly cy Bd30K) , Glycyphagus spp (Gly d 10, Gly d 10.0101, Gly d 13, Gly d 2, Gly d 2.0101, Gly d 2.0201, Gly d 2.03, Gly d 2/Lep d 2 Ll, Gly d 2/Lep d 2 L2 , Gly d 2/Lep d 2 L3, Gly d 2/Lep d 2 L4, Gly d 2/Lep d 2 Rl, Gly d 2/Lep d 2 R2 , Gly d 2/Lep d 2 R3, Gly d 2/Lep d 2 R4 , Gly d 2/Lep d 2 R5, Gly d 20, Gly d 3, Gly d 5, Gly d 5.01, Gly d 5.02, Gly d 7, Gly d 8), Glycine spp (Gly f Bd30K, Gly 1 Bd30K, Gly m 1, Gly m 1.0101, Gly m 1.0102, Gly m 2, Gly m 2.0101, Gly m 2S Albumin, Gly m 3, Gly m 3.0101, Gly m 3.0102, Gly m 39kD, Gly m 4, Gly m 4.0101, Gly m 5, Gly m 5.0101, Gly m 5.0201, Gly m 5.0301, Gly m 5.0302, Gly m 50kD, Gly m 6, Gly m 6.0101, Gly m 6.0201, Gly m 6.0301, Gly m 6.0401, Gly m 6.0501, Gly m 68kD, Gly m Agglutinin, Gly m Bd28K, Gly m Bd30K, Gly m Bd60K, Gly m CPI, Gly m EAP, Gly m TI, Gly mi Bd30K, Gly s Bd30K, Gly t Bd30K, Gly to Bd30K) , Gossypium spp (Gos h Vicilin) , Haemophilus spp (Hae in P6) , Haemaphysalis spp (Hae 1 7, Hae 1 7.0101, Hae q 7, Hae q 7.0101), Haliotis spp (Hal a 1, Hal d 1, Hal di 1, Hal di PM, Hal m 1, Hal m 1.0101, Hal r 1, Hal r 49kD, Hal ru 1) , Harmonía spp (Har a 1, Har a 1.0101, Har a 2, Har a 2.0101), Harpegnathos spp (Har sa 7, Har sa 7.0101, Har sa 7.0102) , Helianthus spp (Hel a 1, Hel a 1.0101, Hel a 2, Hel a 2.0101, Hel a 2S Albumin, Hel a 3, Hel a 3.0101, Hel a 4), Helix spp (Hel ap 1, Hel as 1, Hel as 1.0101), Heligmosomoides spp (Hel p 3, Hel p 3.0101), Helianthus spp (Hel tu 1), Hemanthias spp (Hem le 1), Hemifusus spp (Hem t 1), Heterodera spp (Het g 3, Het g 3.0101), Hevea spp (Hev b 1, Hev b 1.0101, Hev b 10, Hev b 10.0101, Hev b 10.0102, Hev b 10.0103, Hev b 11, Hev b 11.0101, Hev b 11.0102, Hev b 12, Hev b 12.0101, Hev b 13, Hev b 13.0101, Hev b 14, Hev b 14.0101, Hev b 2, Hev b 2.0101, Hev b 3, Hev b 3.0101, Hev b 4, Hev b 4.0101, Hev b 5, Hev b 5.0101, Hev b 6, Hev b 6.01, Hev b 6.02, Hev b 6.0202, Hev b 6.03, Hev b 7, Hev b 7.01, Hev b 7.02, Hev b 7.D2, Hev b 7.S2, Hev b 8, Hev b 8.0101, Hev b 8.0102, Hev b 8.0201, Hev b 8.0202, Hev b 8.0203, Hev b 8.0204, Hev b 9, Hev b 9.0101, Hev b Citrate binding Protein, Hev b GAPDH, Hev b HSP80, Hev b IFR, Hev b Proteasome subunit, Hev b Rotamase, Hev b SPI, Hev b Trx, Hev b UDPGP) , Hexagrammos spp (Hex ot 1), Hippoglossus spp (Hip h 1), Hippoglossoides spp (Hip pl 1), Hippoglossus spp (Hip st 1), Hirudo spp (Hir me Hirudin) , Holcus spp (Hol 1 1, Hol 1 1.0101, Hol 1 1.0102, Hol 1 2, Hol 1 4, Hol 1 5, Hol 1 5.0101, Hol 1 5.0201), Holocnemus spp (Hol pl 9, Hol pl Hemocyanin) , Homarus spp (Hom a 1, Hom a 1.0101, Hom a 1.0102, Hom a 1.0103, Hom a 3, Hom a 3.0101, Hom a 4, Hom a 6, Hom a 6.0101, Hom g 1, Hom g 2), Homo spp (Hom s 1, Hom s 1.0101, Hom s 2, Hom s 2.0101, Hom s 3, Hom s 3.0101, Hom s 4, Hom s 4.0101, Hom s 5, Hom s 5.0101, Hom s AAT, Hom s ACTH , Hom s Adalimumab, Hom s ALA, Hom s alpha_Actin, Hom s alpha-Galactosidase, Hom s APDH, Hom s Arylsulfatase B, Hom s Casein, Hom s CyP A, Hom s CyP B, Hom s CyP C, Hom s DSF70, Hom s DSG3, Hom s eIF6, Hom s Etanercept, Hom s Factor IX, Hom s Factor VII, Hom s Factor VIII, Hom s G-CSF, Hom s Glucocerebrosidase, Hom s Glucosidase, Hom s HLA-DR-alpha, Hom s HSA, Hom s Iduronidase, Hom s Idursulfase, Hom s IgA, Hom s Insulin, Hom s Lactoferrin, Hom s Laminin gamma_2, Hom s MnSOD, Hom s Oxytocin, Hom s P2, Hom s Phosvitin, Hom s Profilin, Hom s PSA, Hom s RP1, Hom s TCTP, Hom s TL, Hom s TPA, Hom s TPO, Hom s Transaldolase , Hom s Trx, Hom s Tubulin-alpha , Hom s/Mus m Basiliximab, Hom s/Mus m Cetuximab, Hom s/Mus m Cetuximab (Gal-Gal) , Hom s/Mus m Infliximab, Hom s/Mus m Natalizumab, Hom s/Mus m Omalizumab, Hom s/Mus m Palivizumab, Hom s/Mus m Rituximab, Hom s/Mus m Tocilizumab, Hom s/Mus m Trastuzumab) , Hoplostethus spp (Hop a 1), Hordeum spp (Hor v 1, Hor v 12, Hor v 12.0101, Hor v 13, Hor v 14, Hor v 15, Hor v 15.0101, Hor v 16, Hor v 16.0101, Hor v 17, Hor v 17.0101, Hor v 18kD, Hor v 2, Hor v 21, Hor v 21.0101, Hor v 28, Hor v 33, Hor v 4, Hor v 5, Hor v 5.0101, Hor v BDAI, Hor v BTI), Humicola spp (Hum in Cellulase) , Humulus spp (Hum j 1, Hum j 1.0101, Hum j lOkD, Hum j 2), Huso spp (Hus h 1), Hylocereus spp (Hyl un LTP) , Hymenocephalus spp (Hym sL 1), Hyperoglyphe spp (Hyp by 1), Hypophthalmichthys spp (Hyp mo 1) , Hypophthalmichthy spp (Hyp no 1) , Ictalurus spp (Ict fu 1, Ict p 1), Imperata spp ( Imp c 4, Imp c 5, Imp c VlIIel), Ixodes spp (Ixo r 2, Ixo se 7, Ixo se 7.0101), Jasus spp (Jas la 1, Jas la 1.0101, Jas la 1.0102), Juglans spp (Jug ca 1, Jug ca 2, Jug ci 1, Jug ci 2, Jug n 1, Jug n 1.0101, Jug n 2, Jug n 2.0101, Jug r 1, Jug r 1.0101, Jug r 2, Jug r 2.0101, Jug r 3, Jug r 3.0101, Jug r 4, Jug r 4.0101, Jug r 5), Juniperus spp (Jun a 1, Jun a 1.0101, Jun a 1.0102, Jun a 2, Jun a 2.0101, Jun a 3, Jun a 3.0101, Jun c 1, Jun o 1, Jun o 4, Jun o 4.0101, Jun r 3, Jun r 3.1, Jun r 3.2, Jun v 1, Jun v 1.0101, Jun v 1.0102, Jun v 3, Jun v 3.0101, Jun v 3.0102, Jun v 4), Katsuwonus spp (Kat p 1), Kyphosus spp (Kyp se 1), Lachnolaimus spp (Lac ma 1) , Lachesis spp (Lac mu 1) , Lactuca spp (Lac s 1, Lac s 1.0101), Lagocephalus spp (Lag la 1), Larus spp (Lar a 1, Lar a 2, Lar a 3), Larimichthys spp (Lar po 1), Lates spp (Lat c 1), Lateolabrax spp (Lat ja 1), Lathyrus spp (Lat oc Agglutinin) , Leiostomus spp (Lei xa 1), Lens spp (Len c 1, Len c 1.0101, Len c 1.0102, Len c 1.0103, Len c 2, Len c 2.0101, Len c 3, Len c 3.0101, Len c Agglutinin), Leopardus spp (Leo p 1), Lepidoglyphus spp (Lep d 10, Lep d 10.0101, Lep d 12, Lep d 13, Lep d 13.0101, Lep d 2, Lep d 2.0101, Lep d 2.0102, Lep d 2.0201, Lep d 2.0202, Lep d 3, Lep d 39kD, Lep d 5, Lep d 5.0101, Lep d 5.0102, Lep d 5.0103, Lep d 7, Lep d 7.0101, Lep d 8, Lep d alpha Tubulin), Lepomis spp (Lep gi 1), Leptomelanosoma spp (Lep i 1), Lepomis spp (Lep ma 1), Lepisma spp (Lep s 1, Lep s 1.0101, Lep s 1.0102), Lepeophtheirus spp (Lep sa 1, Lep sa 1.0101, Lep sa 1.0102, Lep sa 1.0103), Leptailurus spp (Lep se 1), Lepidorhombus spp (Lep 1, Lep w 1.0101), Lethocerus spp (Let in 7, Let in 7.0101, Let in 7.0102), Leuciscus spp (Leu ce 1), Lewia spp (Lew in 1), Ligustrum spp (Lig v 1, Lig v 1.0101, Lig v 1.0102, Lig v 2), Lilium spp (Lil 1 2, Lil 1 PG) , Limanda spp (Lim fe 1) , Limnonectes spp (Lim m 1) , Limulus spp (Lim p 1, Lim p 1.0101, Lim p 2, Lim p LPA) , Liposcelis spp (Lip b 1, Lip b 1.0101) , Litchi spp (Lit c 1, Lit c 1.0101, Lit c IFR, Lit c TPI), Lithobates spp (Lit ca 1), Litopenaeus spp (Lit se 1, Lit v 1, Lit v 1.0101, Lit v 2, Lit v 2.0101, Lit v 3, Lit v 3.0101, Lit v 4, Lit v 4.0101), Filiaría spp (Loa lo 3, Loa lo 3.0101), Lobotes spp (Lob su 1), Locusta spp (Loe m 7, Loe m 7.0101), Loligo spp (Lol b 1, Lol e 1), Lolium spp (Lol m 2, Lol m 5, Lol p 1, Lol p 1.0101, Lol p 1.0102, Lol p 1.0103, Lol p 10, Lol p 11, Lol p 11.0101, Lol p 12, Lol p 13, Lol p 2, Lol p 2.0101, Lol p 3, Lol p 3.0101, Lol p 4, Lol p 4.0101, Lol p 5, Lol p 5.0101, Lol p 5.0102, Lol p 7, Lol p CyP, Lol p FT , Lol p Legumin) , Lonomia spp (Lon o 7, Lon o 7.0101), Lophodytes spp (Lop cu 1), Lophonetta spp (Lop sp 1), Lupinus spp (Lup a 1, Lup a alpha_Conglutin, Lup a delta_Conglutin, Lup a gamma_Conglutin, Lup an 1, Lup an 1.0101, Lup an alpha_Conglutin, Lup an delta_Conglutin, Lup an gamma_Conglutin, Lup 1 17kD), Lutjanus spp (Lut a 1, Lut c 1, Lut cy 1, Lut gr 1, Lut gu 1, Lut jo 1), Lutraria spp (Lut p 1), Lutjanus spp (Lut pu 1, Lut sy 1), Lycopersicon spp (Lyc e 1, Lyc e 1.0101, Lyc e 11S Globulin, Lyc e 2, Lyc e 2.0101, Lyc e 2.0102, Lyc e 3, Lyc e 3.0101, Lyc e 4, Lyc e 4.0101, Lyc e ARP60S, Lyc e Chitinase, Lyc e Glucanase, Lyc e Pcroxidase, Lyc e PG, Lyc e PME, Lyc e PR23, Lyc e Vicilin) , Maconellicoccus spp (Mac 7, Mac h 7.0101), Macruronus spp (Mac ma 1, Mac n 1), Madura spp (Mac po 17kD) , Macrobrachium spp (Mac ro 1, Mac ro 1.0101, Mac ro Hemocyanin) , Macropus spp (Macr s Gelatin) , Malus spp (Mal d 1, Mal d 1.0101, Mal d 1.0102, Mal d 1.0103, Mal d 1.0104, Mal d 1.0105, Mal d 1.0106, Mal d 1.0107, Mal d 1.0108, Mal d 1.0109, Mal d 1.0201, Mal d 1.0202, Mal d 1.0203, Mal d 1.0204, Mal d 1.0205, Mal d 1.0206, Mal d 1.0207, Mal d 1.0208, Mal d 1.0301, Mal d 1.0302, Mal d 1.0303, Mal d 1.0304, Mal d 1.0401, Mal d 1.0402, Mal d 1.0403, Mal d 2, Mal d 2.0101, Mal d 3, Mal d 3.0101, Mal d 3.0102, Mal d 3.0201, Mal d 3.0202, Mal d 3.0203, Mal d 4, Mal d 4.0101, Mal d 4.0102, Mal d 4.0201, Mal d 4.0202, Mal d 4.0301, Mal d 4.0302), Malpighia spp (Mal g 4, Mal g Hevein) , Malus spp (Mal p 1) , Malassezia spp (Mala f 2, Mala f 2.0101, Mala f 3, Mala f 3.0101, Mala f 4, Mala f 4.0101, Mala g 10, Mala s 1, Mala s 1.0101, Mala s 10, Mala s 10.0101, Mala s 11, Mala s 11.0101, Mala s 12, Mala s 12.0101, Mala s 13, Mala s 13.0101, Mala s 5, Mala s 5.0101, Mala s 6, Mala s 6.0101, Mala s 7, Mala s 7.0101, Mala s 8, Mala s 8.0101, Mala s 9, Mala s 9.0101), Manihot spp (Man e 5, Man e 5.0101, Man e FPA, Man e GAPDH) , Mangifera spp (Man i 1, Man i 14kD, Man i 2, Man i 3, Man i 3.01, Man i 3.02, Man i Chitinase) , Marsupenaeus spp (Mar j 1, Mar j 1.0101, Mar j 2, Mar j 4), Matricaria spp (Mat c 17kD) , Mecopoda spp (Mee e 7), Megalobrama spp (Meg am 2, Meg am CK) , Megathura spp (Meg c Hemocyanin) , Megalops spp (Meg sp 1), Melanogrammus spp (Mel a 1), Meleagris spp (Mel g 1, Mel g 2, Mel g 3, Mel g PRVB, Mel g TSA) , Melicertus spp (Mel 1 1), Menticirrhus spp (Men am 1), Mercurialis spp (Mer a 1, Mer a 1.0101), Merluccius spp (Mer ap 1, Mer au 1, Mer bi 1, Mer ca 1, Mer ga 1, Mer hu 1), Merlangius spp (Mer me 1) , Merluccius spp (Mer mr 1, Mer pa 1, Mer po 1, Mer pr 1, Mer se 1), Meriones spp (Mer un 23kD) , Metarhizium spp (Met a 30), Metapenaeopsis spp (Met ba 1), Metapenaeus spp (Met e 1, Met e 1.0101, Met e 2), Metasequoia spp (Met gl 2), Metapenaeus spp (Met j 1, Met j 2), Metanephrops spp (Met ja 1) , Metapenaeopsis spp (Met la 1), Metanephrops spp (Met t 2) , Micromesistius spp (Mic po 1), Micropogonias spp (Mic un 1), Mimachlamys spp (Mim n 1), Momordica spp (Mona c RIP) , Morus spp (Mor a 17kD, Mor a 4), Morone spp (Mor am 1), Morus spp (Mor n 3, Mor n 3.0101), Morone spp (Mor sa 1, Mor se 1) , Mugil spp (Mug c 1), Muraenolepis spp (Mur mi 1), Musa spp (Mus a 1, Mus a 1.0101, Mus a 2, Mus a 2.0101, Mus a 3, Mus a 3.0101, Mus a 4, Mus a 4.0101, Mus a 5, Mus a 5.0101, Mus a 5.0102), Mus spp (Mus m 1, Mus na 1.0101, Mus ra 1.0102, Mus m 2, Mus m Gelatin, Mus m IgG, Mus m MSA, Mus m Muromonab, Mus m Phosvitin) , Mustela spp (Mus p 17kD) , Musa spp (Mus xp 1, Mus xp 2, Mus xp 5) , Mycteroperca spp (Myc bo 1, Myc mi 1, Myc ph 1), Myceliophthora spp (Myc sp Lacease), Myrmecia spp (Myr p 1, Myr p 1.0101, Myr p 2, Myr p 2.0101, Myr p 2.0102, Myr p 3, Myr p 3.0101), Mytilus spp (Myt e 1, Myt g 1, Myt g PM) , Myzus spp (Myz p 7, Myz p 7.0101), Nemorhedus spp (Nae go Hya) , Necator spp (Nec a Calreticulin) , Nemipterus spp ( em vi 1), Neosartorya spp (Neo fi 1, Neo fi 22), Neochen spp (Neo ju 1), Neoscona spp (Neo n 7, Neo n 7.0101), Nephelium spp (Nep 1 GAPDH) , Nephrops spp (Nep n 1, Nep n DF9), Neptúnea spp (Nep po 1, Nep po 1.0101), Nicotiana spp (Nic t 8, Nic t Osmotin, Nic t Villin) , Nimbya spp (Nira c 1, Nim s 1), Nippostrongylus spp (Nip b Agl), Nycticebus spp (Nyc c 1), Octopus spp (Oct f 1, Oct 1 1, Oct v 1, Oct v 1.0101, Oct v PM) , Ocyurus spp (Ocy ch 1), Olea spp (Ole e 1, Ole e 1.0101, Ole e 1.0102, Ole e 1.0103, Ole e 1.0104, Ole e 1.0105, Ole e 1.0106, Ole e 1.0107, Ole e 10, Ole e 10.0101, Ole e 11, Ole e 11.0101, Ole e 11.0102, Ole e 12, Ole e 13, Ole e 2, Ole e 2.0101, Ole e 3, Ole e 3.0101, Ole e 36kD, Ole e 4, Ole e 4.0101, Ole c 5, Ole e 5.0101, Ole e 6, Ole e 6.0101, Ole e 7, Ole e 7.0101, Ole e 8, Ole e 8.0101, Ole e 9, Ole e 9.0101), Ommastreph.es spp (Omm b 1, Omm b 1.0101), Oncorhynchus spp (Onc ke 1, Onc ke 18 kD, Onc ke alpha2I, Onc ke Vitellogenin, Onc m 1, Onc m 1.0101, Onc m 1.0201, Onc m alpha2I, Onc m Protamine, Onc m Vitellogenin, Onc ma 1, Onc ma FPA, Onc ma FSA, Onc ma TPI, Onc n 1) , Onchocerca spp (Onc o 3, Onc o 3.0101), Oncorhynchus spp (Onc ts 1), Onchocerca spp (Onc v 3, Onc v 3.0101), Oratosquilla spp (Ora o 1, Ora o 1.0101), Oreochromis spp (Ore a 1, Ore mo 1, Ore mo 2, Ore mo FPA, Ore mo SCAF7145, Ore ni 1, Ore ni 18kD, Ore ni 45kD), Ornithonyssus spp (Orn sy 10, Orn sy 10.0101, Orn sy 10.0102), Oryctolagus spp (Ory c 1, Ory c 1.0101, Ory c 2, Ory c Casein, Ory c Phosvitin, Ory c RSA) , Oryza spp (Ory s 1, Ory s 1.0101, Ory s 11, Ory s 12, Ory s 12.0101, Ory s 13, Ory s 14, Ory s 17kD, Ory s 19kD, Ory s 2, Ory s 23, Ory s 3, Ory s 7, Ory s aA_TI , Ory s GLP52, Ory s GLP63, Ory s Glyoxalase I, Ory s NRA) , Ostrya spp (Ost c 1, Ost c 1.0101), Ovis spp (Ovi a ALA, Ovi a BLG, Ovi a Casein, Ovi a Casein alphaSl, Ovi a Casein alphaS2, Ovi a Casein beta, Ovi a Casein kappa, Ovi a Phosvitin, Ovi a SSA) , Pachycondyla spp (Pac c 3), Pagrus spp (Pag m 1, Pag pa 1), Pampus spp ( Pam ar 1, Pam c 1), Pandalus spp (Pan b 1, Pan b 1.0101), Pangasius spp (Pan bo 1), Pandalus spp (Pan e 1, Pan e 1.0101, Pan e 4) , Panulirus spp (Pan h 1, Pan hy 1) , Pangasius spp (Pan hy 18kD, Pan hy 45kD) , Panulirus spp (Pan j 1), Panthera spp (Pan 1 1, Pan o 1, Pan p 1) , Panulirus spp (Pan s 1, Pan s 1.0101), Panthera spp (Pan t 1), Pan spp (Pan tr TCTP) , Papaver spp (Pap s 17kD, Pap s 2, Pap s 34kD) , Papilio spp (Pap xu 7, Pap xu 7.0101, Pap xu 7.0102), Paralichthys spp (Par a 1), Parasilurus spp (Par as 1, Par c 1), Paralithodes spp (Par c 1.0101, Par c 1.0102, Par f 1), Parthenium spp (Par h 1), Parietaria spp (Par j 1, Par j 1.0101, Par j 1.0102, Par j 1.0103, Par j 1.0201, Par j 2, Par j 2.0101, Par j 2.0102, Par j 3, Par j 3.0101, Par j 3.0102, Par j 4, Par j 4.0101, Par j J1-J2), Paralichthys spp (Par le 1), Parietaria spp (Par m 1, Par o 1, Par o 1.0101), Paralichthys spp (Par ol 1, Par ol alpha2l), Parahucho spp (Par pe Vitellogenin) , Passiflora spp (Pas e Chitinase, Pas e Hevein) , Paspalum spp (Pas n 1, Pas n 1.0101, Pas n 13), Patinopecten spp (Pat y 1), Pediculus spp (Ped h 7, Ped h 7.0101), Penaeus spp (Pen a 1, Pen a 1.0101, Pen a 1.0102, Pen a 1.0102 (103-117), Pen a 1.0102 (109-123), Pen a 1.0102 (1-15), Pen a 1.0102 (115-129), Pen a 1.0102 (121-135), Pen a 1.0102 (127-141), Pen a 1.0102 (13-27), Pen a 1.0102 (133-147), Pen a 1.0102 (139-153), Pen a 1.0102 (145-159)), Fa rfantepenaeus spp (Pen a 1.0102 (151-165)), Penaeus spp (Pen a 1.0102 (157-171), Pen a 1.0102 (163-177), Pen a 1.0102 (169-183), Pen a 1.0102 (175-189), Pen a 1.0102 (181-195), Pen a 1.0102 (187-201), Pen a 1.0102 (193-207), Pen a 1.0102 (19-33), Pen a 1.0102 (199-213), Pen a 1.0102 (205-219), Pen a 1.0102 (211-225), Pen a 1.0102 (217-231), Pen a 1.0102 (223-237), Pen a 1.0102 (229-243)), Farfantepenaeus spp (Pen a 1.0102 (235-249)), Penaeus spp (Pen a 1.0102 (241-255), Pen a 1.0102 (247-261), Pen a 1.0102 (253-267), Pen a 1.0102 (25-39), Pen a 1.0102 (259-273), Pen a 1.0102 (265-279), Pen a 1.0102 (270-284), Pen a 1.0102 (31-45), Pen a 1.0102 (37-51), Pen a 1.0102 (43-57), Pen a 1.0102 (49-63)), Farfantepenaeus spp (Pen a 1.0102 (55-69)), Penaeus spp (Pen a 1.0102 (61- 75), Pen a 1.0102 (67-81), Pen a 1.0102 (7-21), Pen a 1.0102 (73-87), Pen a 1.0102 (79-93), Pen a 1.0102 (85-99), Pen a 1.0102 (91-105), Pen a 1.0102 (97-111), Pen a 1.0103), Penicillium spp (Pen b 13, Pen b 13.0101, Pen b 26, Pen b 26.0101, Pen c 1, Pen c 13, Pen c 13.0101, Pen c 18, Pen c 19, Pen c 19.0101, Pen c 2, Pen c 22, Pen c 22.0101, Pen c 24, Pen c 24.0101, Pen c 3, Pen c 3.0101, Pen c 30, Pen c 30.0101, Pen c 32, Pen c 32.0101, Pen c MnSOD, Pen ch 13, Pen ch 13.0101, Pen ch 18, Pen ch 18.0101, Pen ch 20, Pen ch 20.0101, Pen ch 31, Pen ch 31.0101, Pen ch 33, Peri ch 33.0101, Pen ch 35, Pen ch 35.0101, Pen ch MnSOD) , Penaeus spp (Pen i 1, Pen i 1.0101, Pen m 1, Pen m 1.0101, Pen m 1.0102, Pen m 2, Pen m 2.0101, Pen m 3, Pen m 3.0101, Pen m 4, Pen m 4.0101, Pen m 6, Pen m 6.0101), Penicillium spp (Pen o 18, Pen o 18.0101), Penaeus spp (Pena o 1, Pena o 1.0101), Periplaneta spp (Per a 1, Per a 1.0101, Per a 1.0102, Per a 1.0103, Per a 1.0104, Per a 1.0105, Per a 1.0201, Per a 10, Per a 10.0101, Per a 2, Per a 3, Per a 3.0101, Per a 3.0201, Per a 3.0202, Per a 3.0203, Per a 4, Per a 5, Per a 6, Per a 6.0101, Per a 7, Per a 7.0101, Per a 7.0102, Per a 7.0103, Per a 9, Per a 9.0101, Per a Cathepsin, Per a FABP, Per a Trypsin, Per f 1, Per f 7, Per f 7.0101), Perna spp (Per v 1), Persea spp (Pers a 1, Pers a 1.0101, Pers a 4), Petroselinum spp (Pet c 1, Pet c 2, Pet c 3), Phalaris spp (Pha a 1, Pha a 1.0101, Pha a 5, Pha a 5.0101, Pha a 5.02, Pha a 5.03, Pha a 5.04), Phaseolus spp (Pha v 3, Pha v 3.0101, Pha v 3.0201, Pha v aAI, Pha v aAI.0101, Pha v Chitinase, Pha v PHA, Pha v Phaseolin) , Phleum spp (Phl p 1, Phl p 1.0101, Phl p 1.0102, Phl p 11, Phl p 11.0101, Phl p 12, Phl p 12.0101, Phl p 12.0102, Phl p 12.0103, Phl p 13, Phl p 13.0101, Phl p 2, Phl p 2.0101, Phl p 3, Phl p 3.0101, Phl p 3.0102, Phl p 4, Phl p 4.0101, Phl p 4.0102, Phl p 4.0201, Phl p 4.0202, Phl p 4.0203, Phl p 4.0204, Phl p 5, Phl p 5.0101, Phl p 5.0102, Phl p 5.0103, Phl p 5.0104, Phl p 5.0105, Phl p 5.0106, Phl p 5.0107, Phl p 5.0108, Phl p 5.0109, Phl p 5.0201, Phl p 5.0202, Phl p 5.0203, Phl p 5.0204, Phl p 5.0205, Phl p 5.0206, Phl p 5.0207, Phl p 6, Phl p 6.0101, Phl p 6.0102, Phl p 7, Phl p 7.0101, Phl p Pl-P2-P5-P6, Phl p P2-P6, Phl p P5-P1, Phl p P6-P2), Phoenix spp (Pho d 2, Pho d 2.0101, Pho d 40kD, Pho d 90kD) , Phodopus spp ( Pho s 21kD) , Phoma spp ( Pho t 1), Phragmites spp (Phr a 1, Phr a 12, Phr a 13, Phr a 4, Phr a 5), Phytolacca spp ( Phy a RIP) , Pimpinella spp (Pim a 1, Pim a 2), Pinna spp (Pin a 1) , Piper spp (Pip n 14kD, Pip n 28kD), Pisum spp (Pis s 1, Pis s 1.0101, Pis s 1.0102, Pis s 2, Pis s 2.0101, Pis s 5, Pis s Agglutinin, Pis s Albumin) , Pistacia spp (Pis v 1, Pis v 1.0101, Pis v 2, Pis v 2.0101, Pis v 2.0201, Pis v 3, Pis v 3.0101, Pis v 4, Pis v 4.0101, Pis v 5, Pis v 5.0101), Platanus spp (Pía a 1, Pía a 1.0101, Pía a 2, Pía a 2.0101, Pía a 3, Pía a 3.0101, Pía a 8), Platichthys spp (Pía f 1) , Plantago spp (Pía 1 1, Pía 1 1.0101, Pía 1 1.0102, Pía 1 1.0103, Pía 1 Cytochrome C) , Platanus spp (Pía oc 1, Pía or 1, Pía or 1.0101, Pía or 2, Pía or 2.0101, Pía or 3, Pía or 3.0101, Pía or 4, Pía or CyP, Pía r 1), Plectropomus spp (Pie ar 1), Pleospora spp (Pie h 1), Plectropomus spp (Pie le 1), Plodia spp (Pío i 1, Pío i 1.0101, Pío i 2, Pío i 2.0101), Poa spp (Poa p 1, Poa p 1.0101, Poa p 10, Poa p 12, Poa p 13, Poa p 2, Poa p 4, Poa p 5, Poa p 5.0101, Poa p 6, Poa p 7), Polistes spp (Pol a 1, Pol a 1.0101, Pol a 2, Pol a 2.0101, Pol a 5, Pol a 5.0101, Pol d 1, Pol d 1.0101, Pol d 1.0102, Pol d 1.0103, Pol d 1.0104, Pol d 4, Pol d 4.0101, Pol d 5, Pol d 5.0101, Pol e 1, Pol e 1.0101, Pol e 2, Pol e 4, Pol e 4.0101, Pol e 5, Pol e 5.0101, Pol f 5, Pol f 5.0101, Pol g 1, Pol g 1.0101, Pol g 2, Pol g 4, Pol g 5, Pol g 5.0101, Pol he MLT, Pol m 5, Pol m 5.0101), Polypedilum spp (Pol n 1) , Pollic pes spp (Pol po 1), Pollachius spp (Pol vi 1), Polybia spp (Poly p 1, Poly p 1.0101, Poly p 2, Poly p 5, Poly s 5, Poly s 5.0101), Pomatomus spp (Pom sa 1), Pongo spp (Pon ab HSA) , Pontastacus spp (Pon 1 4, Pon 1 4.0101, Pon 1 7, Pon 1 7.0101), Portunus spp (Por s 1, Por s 1.0101, Por s 1.0102, Por tr 1, Por tr 1.0101), Protortonia spp (Pro ca 38kD) , Procumbarus spp (Pro el 1, Pro el 1.0101, Pro el 21kD), Prosopis spp (Pro j 20kD) , Prunus spp (Pru ar 1, Pru ar 1.0101, Pru ar 3, Pru ar 3.0101, Pru av 1, Pru av 1.0101, Pru av 1.0201, Pru av 1.0202, Pru av 1.0203, Pru av 2, Pru av 2.0101, Pru av 3, Pru av 3.0101, Pru av 4, Pru av 4.0101, Pru c 1, Pru d 1, Pru d 2, Pru d 3, Pru d 3.0101, Pru d 4, Pru du 1, Pru du 2, Pru du 2S Albumin, Pru du 3, Pru du 3.0101, Pru du 4, Pru du 4.0101, Pru du 4.0102, Pru du 5, Pru du 5.0101, Pru du 6, Pru du 6.0101, Pru du 6.0201, Pru du Conglutin, Pru p 1, Pru p 1.0101, Pru p 2, Pru p 2.0101, Pru p 2.0201, Pru p 2.0301, Pru p 3, Pru p 3.0101, Pru p 3.0102, Pru p 4, Pru p 4.0101, Pru p 4.0201, Pru sa 3), Psilocybe spp (Psi c 1, Psi c 1.0101, Psi c 2, Psi c 2.0101), Psoroptes spp (Pso o 1, Pso o 10, Pso o 10.0101, Pso o 11, Pso o 13, Pso o 14, Pso o 2, Pso o 21, Pso o 3, Pso o 5, Pso o 7), Puma spp (Pum c 1), Púnica spp ( Pun g 3), Pyrus spp ( Pyr c 1, Pyr c 1.0101, Pyr c 3, Pyr c 3.0101, Pyr c 4, Pyr c. 4.0101, Pyr c 5, Pyr c 5.0101, Pyr py 2), Quercus spp (Que a 1, Que a 1.0101, Que a 1.0201, Que a 1.0301, Que a 1.0401, Que a 2, Que a 4), Rachycentron spp (Rae ca 1), Rana spp (Ran e 1, Ran e 1.0101, Ran e 2, Ran e 2.0101), Ranina spp (Ran ra 1), Rangifer spp (Ran t BLG) , Rattus spp (Rat n 1, Rat n 1.0101, Rat n Casein, Rat n Gelatin, Rat n IgG, Rat n Phosvitin, Rat n RSA, Rat n Transferrin) , Rhi zomucor spp (Rhi m AP) , Rhizopus spp (Rhi nv Lipase, Rhi o Lipase) , Rhomboplites spp (Rho au 1) , Rhodotorula spp (Rho m 1, Rho m 1.0101, Rho m 2, Rho m 2.0101), Ricinus spp (Ric c 1, Ric c 1.0101, Ric c 2, Ric c 3, Ric c 8, Ric c RIP) , Rivulus spp (Riv ma 1), Robinia spp (Rob p 2, Rob p 4, Rob p Glucanase) , Rosa spp (Ros r 3) , Roystonea spp (Roy e 2), Rubus spp (Rub i 1, Rub i 1.0101, Rub i 3, Rub i 3.0101, Rub i Chitinase, Rub i CyP) , Saccharomyces spp (Sac c Carboxypeptidase Y, Sac c CyP, Sac c Enolase, Sac c Glucosidase, Sac c Invertase, Sac c MnSOD, Sac c P2, Sac c Profilin) , Salvelinus spp (Sal f 1), Salsola spp (Sal k 1, Sal k 1.0101, Sal k 1.0201, Sal k 1.0301, Sal k 1.0302, Sal k 2, Sal k 2.0101, Sal k 3, Sal k 3.0101, Sal k 4, Sal k 4.0101, Sal k 4.0201, Sal k 5, Sal k 5.0101), Salvelinus spp (Sal le Vitellogenin) , Salmo spp (Sal s 1, Sal s 1.0101, Sal s 1.0201, Sal s 2, Sal s 2.0101, Sal s Gelatin) , Sambucus spp (Sam n 1), Sander spp (San lu 1), Saponaria spp (Sap o RIP) , Sardinops spp (Sar m 1) , Sarkidiornis spp (Sar mi 1), Sardina spp (Sar p 1), Sarcoptes spp (Sar s 1, Sar s 14, Sar s 3, Sar s GST, Sar s PM) , Sardinops spp (Sar sa 1, Sar sa 1.0101), Schistosoma spp (Sch j GST, Sch j PM, Sch j Sj22, Sch j Sj67, Sch ma Sm20, Sch ma Sm21, Sch ma Sm22, Sch ma Sm31), Sciaenops spp (Sci oc 1) , Scomber spp (Seo a 1), Scombermorus spp (Seo ca 1), Scomberomorus spp (Seo g 1), Scomber spp (Seo j 1, Seo ma 1, Seo s 1), Scolopendra spp (Seo y 7, Seo y 7.0101), Scylla spp (Scy o 1, Scy o 1.0101, Scy o 2, Scy pa 1, Scy pa 2, Scy s 1, Scy s 1.0101, Scy s 2), Sebastes spp (Seb fa 1, Seb in 1, Seb m 1, Seb m 1.0101, Seb m 1.0201), Sécale spp (Sec c 1, Sec c 12, Sec c 13, Sec c 2, Sec c 20, Sec c 20.0101, Sec c 20.0201, Sec c 28, Sec c 3, Sec c 4, Sec c 4.0101, Sec c 4.0201, Sec c 5, Sec c 5.0101, Sec c aA_TI, Sec c aA_TI.0101), Senecio spp (Sen j DH, Sen j PL) , Sepia spp (Sep e 1, Sep e 1.0101), Sepioteuthis spp (Sep 1 1, Sep 1 1.0101), Sepia spp (Sep m 1), Serióla spp (Ser d 1, Ser la 1), Sergestes spp (Ser lu 1), Serióla spp (Ser q 1, Ser ri 1), Sesamum spp (Ses i 1, Ses i 1.0101, Ses i 2, Ses i 2.0101, Ses i 3, Ses i 3.0101, Ses i 4, Ses i 4.0101, Ses i 5, Ses i 5.0101, Ses i 6, Ses i 6.0101, Ses i 7, Ses i 7.0101, Ses i 8), Shigella spp (Shi bo GST, Shi dy GST) , Simulia spp (Sim vi 1, Sim vi 2, Sim vi 3, Sim vi 4, Sim vi 70kD) , Sinapis spp (Sin a 1, Sin a 1.0101, Sin a 1.0104, Sin a 1.0105, Sin a 1.0106, Sin a 1.0107, Sin a 1.0108, Sin a 2, Sin a 2.0101, Sin a 3, Sin a 3.0101, Sin a 4, Sin a 4.0101), Sinonovacula spp (Sin c 1, Sin c 1.0101), Solenopsis spp (Sol g 2, Sol g 2.0101, Sol g 3, Sol g 3.0101, Sol g 4, Sol g 4.0101, Sol g 4.0201, Sol i 1, Sol i 1.0101, Sol i 2, Sol i 2.0101, Sol i 3, Sol i 3.0101, Sol i 4, Sol i 4.0101), Solenocera spp (Sol me 1) , Solenopsis spp (Sol r 1, Sol r 2, Sol r 2.0101, Sol r 3, Sol r 3.0101, Sol s 2, Sol s 2.0101, Sol s 3, Sol s 3.0101, Sol s 4), Solea spp (Sol so 1, Sol so TPI), Solanum spp (Sola t 1, Sola t 1.0101, Sola t 2, Sola t 2.0101, Sola t 3, Sola t 3.0101, Sola t 3.0102, Sola t 4, Sola t 4.0101, Sola t 8, Sola t Glucanase) , Sorghum spp (Sor b 1, Sor h 1, Sor h 1.0101, Sor h 12, Sor h 7), Sparus spp (Spa a 1) , Sphyrna spp (Sph ti 1) , Spirulina spp (Spi mx beta_Phycocyanin) , Spinacia spp (Spi o 2, Spi o RuBisCO) , Squilla spp (Squ ac 1, Squ ac 1.0101, Squ o 1, Squ o 1.0101), Staphylococcus spp (Sta a FBP, Sta a SEA, Sta a SEB, Sta a SEC, Sta a SED, Sta a SEE, Sta a TSST), StachyboLrys spp (Sta c 3, Sta c 3.0101, Sta c Cellulase, Sta c Hemolysin, Sta c SchS34, Sta c Stachyrase A), Stemphylium spp (Ste b 1, Ste c 1, Ste v 1), Stolephorus spp (Sto i 1), Struthio spp (Str c 1, Str c 2, Str c 3), Streptococcus spp (Str dy Streptokinase), Streptomyces spp (Str g Pronase) , Streptococcus spp (Str pn PspC) , Strongylocentrotus spp (Str pu 18kD, Str pu Vitellogenin) , Streptococcus spp (Str py SPEA, Str py SPEC, Str py Streptokinase), Strongyloides spp (Str st 45kD) , Streptomyces spp (Str v PAT) , Styela spp (Sty p 1), Suidasia spp (Sui m 1, Sui m 13, Sui m 2, Sui m 3, Sui m 5, Sui m 5.01, Sui m 5.02, Sui m 5.03, Sui m 6, Sui m 7, Sui m 8, Sui m 9) , Sus spp (Sus s ACTH, Sus s ALA, Sus s Amylase, Sus s BLG, Sus s Casein, Sus s Casein alphaSl, Sus s Casein alphaS2, Sus s Casein beta, Sus s Casein kappa, Sus s Gelatin, Sus s HG, Sus s Insulin, Sus s Lipase, Sus s Pepsin, Sus s Phosvitin, Sus s PRVB, Sus s PSA, Sus s TCTP) , Syntelopodeuma spp (Syn y 7, Syn y 7.0101), Syringa spp (Syr v 1, Syr v 1.0101, Syr v 1.0102, Syr v 1.0103, Syr v 2, Syr v 3, Syr v 3.0101), Tabanus spp (Tab y 1, Tab y 1.0101, Tab y 2, Tab y 2.0101, Tab y 5, Tab y 5.0101), Tadorna spp (Tad ra 1), Talaromyces spp (Tal st 22, Tal st 3, Tal st 8), Taraxacum spp (Tar o 18kD) , Taxodium spp (Tax d 2), Tegenaria spp (Teg d Hemocyanin) , Teladorsagia spp (Tel ci 3) , Thaumetopoea spp (Tha p 1, Tha p 1.0101, Tha p 2, Tha p 2.0101), Theragra spp (The c 1), Thermomyces spp (The 1 Lipase, The sp Lipase, The sp Xylanase) , Thunnus spp (Thu a 1, Thu a 1.0101, Thu a Collagen, Thu al 1, Thu at 1, Thu o 1, Thu o Collagen), Thuja spp (Thu oc 3, Thu p 1), Thunnus spp (Thu t 1, Thu to 1), Thyrsites spp (Thy at 1), Thyrophygus spp (Thy y 7, Thy y 7.0101), Todarodes spp (Tod p 1, Tod p 1.0101, Tod p 1.0102), Toxoptera spp (Tox c 7, Tox c 7.0101), Toxocara spp (Tox ca TES120, Tox ca TES26, Tox ca TES30), Toxoplasma spp (Tox g HSP70), Trachypenaeus spp (Tra c 1), Trachinotus spp (Tra ca 1) , Trachurus spp (Tra j 1, Tra j Gelatin, Tra tr Gelatin) , Triticum spp (Tri a 1, Tri a lOkD, Tri a 12, Tri a 12.0101, Tri a 12.0102, Tri a 12.0103, Tri a 12.0104, Tri a 13, Tri a 14, Tri a 14.0101, Tri a 14.0201, Tri a 15, Tri a 15.0101, Tri a 18, Tri a 18.0101, Tri a 19, Tri a 19.0101, Tri a 2, Tri a 21, Tri a 21.0101, Tri a 23kd, Tri a 25, Tri a 25.0101, Tri a 26, Tri a 26.0101, Tri a 27, Tri a 27.0101, Tri a 28, Tri a 28.0101, Tri a 29, Tri a 29.0101, Tri a 29.0201, Tri a 3, Tri a 30, Tri a 30.0101, Tri a 31, Tri a 31.0101, Tri a 32, Tri a 32.0101, Tri a 33, Tri a 33.0101, Tri a 34, Tri a 34.0101, Tri a 35, Tri a 35.0101, Tri a 36, Tri a 36.0101, Tri a 37, Tri a 37.0101, Tri a 4, Tri a 4.0101, Tri a 4.0201, Tri a 5, Tri a 7, Tri a aA_SI, Tri a alpha_Gliadin, Tri a bA, Tri a Bd36K, Tri a beta_Gliadin, Tri a Chitinase, Tri a CM16, Tri a DH, Tri a Endochitinase, Tri a gamma_Gliadin, Tri a Germin, Tri a Gliadin, Tri a GST, Tri a LM Glu, Tri a LMW-GS B16, Tri a LMW-GS P42, Tri a LMW-GS P73, Tri a LTP2, Tri a omega2_Gliadin, Tri a Peroxidase, Tri a Peroxidase 1, Tri a SPI, Tri a TLP, Tri a Tritin, Tri a XI), Tritirachium spp (Tri al Proteinase K) , Tribolium spp (Tri ca 17, Tri ca 17.0101, Tri ca 7, Tri ca 7.0101), Trichostrongylus spp (Tri co 3, Tri co 3.0101), Trichophyton spp (Tri eq 4), Trigonella spp (Tri fg 1, Tri fg 2, Tri fg 3, Tri fg 4), Trichosanthes spp (Tri k RIP) , Trichiurus spp (Tri le 1), Triticum spp (Tri m Peroxidase), Trichophyton spp (Tri me 2, Tri me 4), Trisetum spp (Tri p 1, Tri p 5), Trichinella spp (Tri ps 3, Tri ps 3.0101), Trichophyton spp (Tri r 2, Tri r 2.0101, Tri r 4, Tri r 4.0101), Trichoderma spp (Tri rs Cellulase) , Triticum spp (Tri s 14), Trichophyton spp (Tri se 2, Tri se 4, Tri so 2), Trichinella spp (Tri sp 3, Tri sp 3.0101, Tri sp 3.0102, Tri sp 3.0103, Tri sp 3.0104, Tri sp 3.0105, Tri sp 3.0106), Trichophyton spp (Tri t 1, Tri t 1.0101, Tri t 4, Tri t 4.0101), Triticum spp (Tri td 14, Tri td aA_TI ) , Trichoderma spp (Tri v Cellulase) , Trichophyton spp (Tri ve 4), Triatoma spp (Tria p 1, Tria p 1.0101), Triplochiton spp (Trip s 1), Turbo spp (Tur c 1, Tur c PM) , Tyrophagus spp (Tyr p 1, Tyr p 10, Tyr p 10.0101, Tyr p 10.0102, Tyr p 13, Tyr p 13.0101, Tyr p 2, Tyr p 2.0101, Tyr p 24, Tyr p 24.0101, Tyr p 3, Tyr p 3.0101, Tyr p 4, Tyr p 5, Tyr p 5.01, Tyr p 5.02, Tyr p 5.03, Tyr p 7, Tyr p alpha Tubulin) , Ulocladium spp (Ulo a 1, Ulo at 1, Ulo b 1, Ulo c 1, Ulo co 1, Ulo cu 1, Ulo mu 1, Ulo ob 1, Ulo se 1, Ulo su 1, Ulo tu 1), Uncía spp (Une u 1), Urophycis spp (Uro te 1), Vaccinium spp (Vac m 3), Varroa spp (Var j 13kD) , Venerupis spp (Ven ph 1, Ven ph 1.0101), Vespula spp (Ves f 1, Ves f 2, Ves f 5, Ves f 5.0101, Ves g 1, Ves g 2, Ves g 5, Ves g 5.0101, Ves m 1, Ves m 1.0101, Ves m 2, Ves m 2.0101, Ves m 5, Ves m 5.0101, Ves m MLT, Ves p 1, Ves p 2, Ves p 5, Ves p 5.0101, Ves s 1, Ves s 1.0101, Ves s 2, Ves s 5, Ves s 5.0101, Ves v 1, Ves v 1.0101, Ves v 2, Ves v 2.0101, Ves v 2.0201, Ves v 3, Ves v 3.0101, Ves v 5, Ves v 5.0101, Ves v 5-Pol a 5, Ves vi 5, Ves vi 5.0101), Vespa spp (Vesp c 1, Vesp c 1.0101, Vesp c 2, Vesp c 5, Vesp c 5.0101, Vesp c 5.0102, Vesp m 1, Vesp m 1.0101, Vesp m 5, Vesp m 5.0101, Vesp ma 1, Vesp ma 2, Vesp ma 5, Vesp ma MLT, Vesp v MLT), Vigna spp (Vig r 1, Vig r 1.0131, Vig r 17kD, Vig r 5, Vig r 8S Globulin, Vig r Albumin, Vig r beta-Conglycinin) , Vitis spp (Vit v 1, Vit v 1.0101, Vit v 4, Vit v 5, Vit v Glucanase, Vit v TLP) , Xiphias spp (Xip g 1, Xip g 1.0101, Xip g 25kD) , Zea spp (Zea m i, Zea m 1.0101, Zea m 11, Zea m 12, Zea m 12.0101, Zea m 12.0102, Zea m 12.0103, Zea m 12.0104, Zea m 12.0105, Zea m 13, Zea m 14, Zea m 14.0101, Zea m 14.0102, Zea m 2, Zea m 20S, Zea m 22, Zea m 25, Zea m 25.0101, Zea m 27kD Zein, Zea m 3, Zea m 4, Zea m 5, Zea m 50kD Zein, Zea m 7, Zea m Chitinase, Zea m Gl, Zea m G2, Zea m PAO, Zea m Zml3) , Zeus spp (Zeu fa 1), Ziziphus spp (Ziz m 1, Ziz m 1.0101), Zoarces spp (Zoa a ISP III), Zygophyllum spp (Zyg f 2) .
En este contexto, los términos entre paréntesis indican los alérgenos preferidos particulares provenientes de la fuente particular.
De mayor preferencia, el antigeno asociado con alergia o una enfermedad alérgica de preferencia se deriva de una fuente seleccionada de la lista que consiste de polen de pasto (por ejemplo, polen de centeno), polen de árboles (por ejemplo, polen de avellano, abedul, aliso, fresno), polen de flores, polen de hierbas (por ejemplo, polen de artemisa) , ácaro del polvo (por ejemplo Der f 1, Der p 1, Eur m 1, Der m 1 Der f 2, Der p 2, Eur m 2, Tyr p 2, Lep d 2) , moho (por ejemplo, alérgenos de Acremonium, Aspergillus, Cladosporium, Fusarium, Mucor, Penicillium, Rhizopus, Stachybotrys , Trichoderma, o Alternaría), animales (por ejemplo, Fel di, Fel d2, Fel d3, o Fel d4 de gatos), alimentos (por ejemplo alérgenos de pescado (por ejemplo róbalo, bacalao, platija), mariscos (por ejemplo, cangrejo, langosta, camarones), huevo, trigo, fruto seco (por ejemplo, cacahuetes, almendras, anacardos, nueces), soya, leche, etc.) o veneno de insecLos (por ejemplo, alérgenos provenientes del veneno de avispas, abejas, avispones, hormigas, mosquitos, o garrapatas) . c) Antígenos asociados con una enfermedad autoinmune: Los antígenos asociados con una enfermedad autoinmune de preferencia se seleccionan de autoantígenos asociados con enfermedades autoinmunes seleccionadas de enfermedad de Addison (adrenalitis autoinmune, Morbus Addison) , alopecia areata, anemia de Addison (Morbus Biermer) , anemia hemolítica autoinmune (AIHA) , anemia hemolitica autoinmune (AIHA) del tipo resfriado (enfermedad por hemaglutinina de resfriado, anemia hemolítica autoinmune por resfriado (AIHA) (enfermedad por aglutinina de resfriado) , (CHAD) ) , anemia hemolítica autoinmune (AIHA) del tipo cálido (AIHA cálida, anemia hemolítica autoinmune cálida (AIHA) ) , anemia Donath-Landsteiner hemolítica autoinmune (hemoglobinuria por resfriado paroxismal) , síndrome antifosfolípidico (APS) , aterosclerosis , artritis autoinmune, arteritis temporalis, Takayasu arteriitis (enfermedad de Takayasu, enfermedad del arco aórtico) , arteritis/arteritis por células gigantes, gastritis crónica autoinmune, infertilidad autoinmune, enfermedad del oido interno autoinmune (AIED) , enfermedad de Basedow (Morbus Basedow) , enfermedad de Bechterew (Morbus Bechterew, espondilitis anquilosante, spondylitis ankylosans), síndrome de Behcet (Morbus Behcet), enfermedad intestinal incluyendo una enfermedad intestinal inflamatoria autoinmune (incluyendo colitis ulcerosa (Morbus Crohn, enfermedad de Crohn) , cardiomiopatía, en particular cardiomiopatía autoinmune, cardiomiopatía dilatada idiopática (DCM) , dermatitis de sprue celiaco (enteropatía producida por gluten) , síndrome de disfunción inmune por fatiga crónica (CFIDS) , polineuropatía desmielinizante inflamatoria crónica (CIDP) , poliartritis crónica, síndrome de Churg-SLrauss, penfigoides cicatricial, síndrome de Cogan, síndrome CREST (síndrome con Calcinosis cutis, fenómeno de Raynaud, trastornos de motilidad de esófago, sklerodaktylia y teleangiectasia) , enfermedad de Crohn (Morbus Crohn, colitis ulcerosa) , enfermedades de autoinmunes dermatológicas, durante la dermatitis herpetiformis , dermatomiositis , Diabetes, Diabetes mellitus Tipo 1 (diabetes tipo I, Diabetes mellitus dependiente de insulina) , Diabetes mellitus Tipo 2 (diabetes Tipo II) , crioglobulinemia mezclada esencial, crioglobulinemia mezclada esencial, fibromialgia, fibromiositis , síndrome de Goodpasture (glomerulonefritis producida por anti-GBM) , enfermedad de injerto contra hospedero, síndrome de Guillain-Barré (GBM, Poliradiculoneuritis ) , enfermedades autoinmunes hematológicas , tiroiditis de Hashimoto, hemofilia, hemofilia adquirida, hepatitis, hepatitis autoinmune, formas particularmente autoinmunes de hepatitis crónica, fibrosis pulmonar idiopática (IPF), purpura trombocitopénica idiopática, purpura inmuno-trombocitopénica (Morbus Werlhof; ITP) , nefropatía IgA, infertilidad, infertilidad autoinmune, artritis reumatoide juvenil (Morbus Still, síndrome de Still), síndrome de Lambert-Eaton, liquen plano, liquen escleroso, lupus eritematoso, lupus sistémico eritematoso (SLE) , lupus eritematoso (forma discoidal) , artritis de Lime (enfermedad de Lime, borrelia artritis), enfermedad de Ménieré (Morbus Ménieré) enfermedad mixta del tejido conjuntiva (MCTD) , esclerosis múltiple (MS, encefalomielitis disemina, enfermedad de Charcot) , Myasthenia gravis (miastenia, MG) , miosits, polimiositis , enfermedades autoinmunes neurales, neurodermitis , penfigoide vulgaris, penfigoide ampolloso, penfigoide para formación de cicatrices; poliarteritis nodosa (periarteiitis nodosa) , policondritis (pancondritis ) , síndrome poliglandular (autoinmune) (síndrome de PGA, síndrome de Schmidt) , Polimialgia reumática, agamaglobulinemia primaria, cirrosis biliar primaria PBC, colangitis autoinmune primaria) , esclerosis sistémica progresiva (PSS), Psoriasis, Psoriasis vulgaris, fenómenos de Raynaud, síndrome de Reiter ( orbus Reiter, síndrome del sinovial conjuntivo uretral)), artritis reumatoide (RA, poliartritis crónica, enfermedad reumática de las articulaciones, fiebre reumática), sarcoidosis (Morbus Boeck, enfermedad de Besnier-Boeck-Schaumann) , síndrome de persona rígida, Esclerodermia , escleroderma, síndrome de Sjógren, oftálmia simpática; intolerancia transitoria a gluten, rechazo a órganos trasplantados, uveitis, uveitis autoinmune, Vasculitis, Vitíligo, (leucoderma, piel piebold) , y la enfermedad de Wegner (Morbus Wegner, granulomatosis de Wegner) .
En este contexto en particular se prefieren los autoantígenos seleccionados de: • proteína de mielina básica (MBP) , proteína proteolipídica (PLP), y glucoproteína de mielina oligodendrocítica ( OG) , en cada caso asociadas con esclerosis múltiple (MS) ; • CD44, preproinsulina , proinsulina, insulina, decaroxilasa de ácido glutámico (GAD65), antígeno 2 de insulinoma similar a tirosina fosfatasa (IA2), transportador de zinc ((ZnT8), y proteina 60 de choque térmico (HSP60), en cada caso asociado con diabetes Tipo I; proteina de unión al ínterfotorreceptor retinoide (IRBP) asociada con uveitis autoinmune; receptor del acetilcolina AchR, y receptor del factor-1 de crecimiento similar a insulina (IGF-1R), en cada caso asociados con Myasthenia gravis; proteina M proveniente de estreptococos beta-hemolíticos (pseudo-autoantígeno ) asociada con fiebre reumática ; factor inhibidor de la migración de macrófagos asociados con artritis; complejo de Ro/La RNP, alfa- y beta-fodrina , autoantigeno células insulares, poly (ADP) ribosa polimerasa (PARP), NuMA, NOR-90, autoantigeno R06O, y antígeno p27, en cada caso asociado con el síndrome de Sj ógren; autoantigeno R06O, lipoproteínas de baja densidad, antígenos Sm del complejo de ribonucleoproteína nuclear pequeña U-l (B/B' , DI, D2, D3, E, F, G) , y ribonucleoproteínas RNP, en cada caso asociado con lupus eritematoso; oxLDL, beta (2) GPI, HSP60/65, y oxLDL/beta (2) GPI, en cada caso asociado con Atherosclerosis; • receptor beta ( 1 ) -adrenérgico cardiaco con cardiomiopatia dilatada idiopática (DCM) ; • histidil-ARNt sintetasa (HisRS) asociada con miositis; • topoisomerasa I asociada con la enfermedad de escleroderma .
Además, en otras modalidades, el antigeno está asociado con una enfermedad autoinmune respectiva, similar a por ejemplo IL-17, proteínas de choque térmico, y/o cualquier célula T patogénica idiotípica o un receptor de quimioquina que se expresa mediante células inmunes implicadas en la respuesta autoinmune en la enfermedad autoinmune (tal como cualesquiera de las enfermedades autoinmunes descritas en la presente) . d) Antigenos asociados con un cáncer o una enfermedad tumoral ("antigenos tumorales") : Los "antígenos tumorales" en este contexto son antígenos que de preferencia están ubicados en la superficie de las células (tumoral). Los antígenos tumorales también se pueden seleccionar de proteínas, que se sobre-expresan en células tumorales en comparación con una célula normal.
Además, los antígenos tumorales también incluyen los antigenos expresados en células que no se degeneran por si mismos (u originalmente no por si mismas) aunque están asociados con el tumor supuesto. Los antigenos que están conectados con los vasos que suministran tumores o la (re) formación de los mismos, en particular aquellos antigenos que están asociados con la neovascularizacion, por ejemplo, los factores de crecimiento, tales como VEGF, bFGF etc., también se incluyen en la presente. Los antigenos conectados con un tumor incluyen además los antigenos provenientes de células o tejidos, típicamente que se incrustan en el tumor. Además, algunas sustancias (usualmente proteínas o péptidos) se expresan en pacientes que padecen (con conocimiento o sin conocimiento) de una enfermedad cancerosa y que se presentan en concentraciones aumentadas en los fluidos corporales de los pacientes. Estas sustancias también se denominan como "antígenos tumorales", sin embargo no son los antígenos en el significado estricto de una sustancia para inducir una respuesta inmunitaria. La clase de antígenos tumorales se pueden dividir además en antígenos tumor-específicos (TSA) y antígenos tumor-asociados (TAA) . Los TSA sólo se pueden presentar por células tumorales y nunca por células "sanas" normales. Típicamente resultan de una mutación tumor- específicas. Los TAA que son más comunes, usualmente se presentan en células tanto tumorales como sanas. Estos antígenos se reconocen y la célula presentadora de antígenos se puede destruir mediante células T citotóxicas. Adicionalmente, los antigenos tumorales también se pueden presentar en la superficie de un tumor en la forma de, por ejemplo, un receptor mutado. En este caso, se pueden reconocer por anticuerpos. Los antigenos tumorales particularmente preferidos se seleccionan del grupo que consiste de 5T4, 707-AP, 9D7, AFP, AlbZIP HPG1, alfa-5-beta-1-integrina, alfa-5-beta-6-integrina, alfa-actinin-4/m, racemasa de la alfa-metilacil-coenzima A, ART-4, ARTCl/m, B7H4, BAGE-1, BCL-2, bcr/abl, beta-catenina/m, BING-4, BRCAl/m, BRCA2/m, CA 15-3/CA 27-29, CA 19-9, CA72-4, CA125, calreticulina, CAMEL, CASP-8/m, catepsina B, catepsina L, CD19, CD20, CD22, CD25, CDE30, CD33, CD4 , CD52, CD55, CD56, CD80, CDC27/m, CDK4/m, CDKN2A/m, CEA, CLCA2 , CML28, CML66, COA-l/m, proteina similar a coactosina, colasa XXIII, COX-2, CT-9/BRD6, Cten, ciclina Bl, ciclina Di, cyp-B, CYPB1, DAM-10, DAM-6, DEK-CAN, EFTUD2 /m, EGFR, ELF2/m, EMMPRIN, EpCam, EphA2, EphA3, ErbB3, ETV6-AML1, EZH2, FGF-5, FN, Frau-1, G250, GAGE-1, GAGE-2, GAGE-3, GAGE-4 , GAGE-5, GAGE-6, GAGE7b, GAGE-8 , GDEP, GnT-V, gplOO, GPC3, GPNMB/m, HAGE, HAST-2, hepsin, Her2/neu, HERV-K-MEL, HLA-A*0201-R17l , HLA-All/m, HLA-A2 m, HNE, homeobox NKX3.1, HOM-TES-14 /SCP-1 , HO -TES-85 , HPV-E6, HPV-E7 , HSP70-2M, HST-2, hTERT, iCE, IGF-1R, IL-13Ra2, IL-2R, IL-5, receptor de laminina inmadura, kallikrein-2, kallikrein-4 , Ki67, KIAA0205, KIAA0205/m, KK-LC-1, K-Ras/m, LAGE-A1, LDLR-FUT, MAGE-A1, MAGE-A2, MAGE-A3 , MAGE-A4, AGE-A6, MAGE-A9 , AGE-A10, MAGE-A12, MAGE-B1, MAGE-B2, MAGE-B3, MAGE-B4, MAGE-B5, MAGE-B6, AGE-B10 , MAGE-B16, MAGE-B17, MAGE-C1, MAGE-C2 , MAGE-C3, MAGE-Dl, MAGE-D2, MAGE-D4, MAGE-E1, MAGE-E2, AGE-F1, AGE-H1, MAGEL2, mamaglobina A, MART-l/melan-A, MART-2, MART-2/m, proteína de matriz 22, MC1R, M-CSF, MEl/m, mesotelina, MG50/PXDN, MMP11, MN/CA IX-antigeno, MRP-3, MUC-1, MUC-2, MUM-l/m, MUM-2/m, MUM-3/m, clase I/m de miosina, NA88-A, N-acetilglucosaminiltransferasa-V, Neo-PAP, Neo-PAP/m, NFYC/m, NGEP, NMP22, NP /ALK, N-Ras/m, NSE, NY-ESO-1, NY-ESO-B, OA1, OFA-iLRP, OGT, OGT/m, OS-9, OS-9/m, osteocalcina , osteopontina, pl5, bcr-abl menor pl90, p53, p53/m, PAGE-4, PAI-1, PAI-2, PAP, PART-1, PATE, PDEF, Pim-l-Kinase , Pin-1, Pml/PARalpha, POTE, PRAME, PRDX5/m, proteina, proteinasa-3 , PSA, PSCA, PSGR, PSM, PSMA, PTPRK/m, RAGE-1, RBAF600/m, RHAMM/CD168, RUI, RU2, S-100, SAGE, SART-1, SART-2, SART-3, SCC, SIRT2/m, Spl7, SSX-1, SSX-2 /HOM-MEL-40 , SSX-4, STAMP-1, STEAP, survivina, survivina-2B, SYT-SSX-1, SYT-SSX-2, TA-90, TAG-72, TARP, TEL-AML1, TGFbeta, TGFbetaRII, TGM-4, TPI/m, TRAG-3, TRG, TRP-1, TRP-2/6b, TRP/INT2, TRP-p8, tirosinasa, UPA, VEGF, VEGFR1, VEGFR-2 /FLK-1 , y WT1. Estos antigenos tumorales de preferencia se pueden seleccionar del grupo que consiste de p53, CA125, EGFR, Her2/neu, hTERT, PAP, MAGE-A1, MAGE-A3 , Mesotelina, MUC-1, NY-ESO-1, GP100, MART-1 , Tirosinasa, PSA, PSCA, PSMA VEGF, VEGFR1, VEGFR2, Ras, CEA o WT1, y de mayor preferencia a partir de PAP, NY-ESO-1, MAGE-A3, WT1, y MUC-1.
En este contexto, y para ciertas modalidades de todos los aspectos de la presente invención, el antigeno asociado con un cáncer o una enfermedad tumoral, no incluye (x) una inmunoglobulina idiotipica (un anticuerpo idiotipico o un receptor idiotipico de células B) ; o (y) un receptor idiotipico de células T, y opcionalmente no es un fragmento, variante y/o derivado de este antigeno.
Además, al menos un antigeno, si se proporciona como antigeno proteinico o peptidico, en ciertas modalidades no es el antigeno modelo ovalbúmina o un fragmento de Ovalbúmina, tal como la ovalbúmina derivada del péptido SIINFEKL (SEC ID NO: 116) .
Al menos un antigeno en la composición farmacéutica inventiva se puede proporcionar como una proteina o péptido o se puede codificar por un ácido nucleico, por ejemplo, un ADN (por ejemplo, un ADN plasmidico o un ADN viral), o un ARN (por ejemplo, un ARNm o un ARN viral) . De preferencia, al menos un antigeno se proporciona como una proteina o péptido, o un fragmento, variante y/o derivado del antigeno proteinico o peptidico. En ciertas modalidades, el antigeno proteinico o peptidico (o un fragmento, variante y/o derivado del antigeno proteinico o peptidico) está comprendido en, proporcionado como o derivado de una muestra definida, por ejemplo una muestra que tenga un número conocido y/o la composición de componentes. Por ejemplo, el antigeno proteinico o peptidico no está comprendido en; o no está proporcionado como; ni está derivado de, en cada caso una mezcla de (por ejemplo no definida) otros componentes, esta mezcla será una preparación de un virus o patógeno inactivado o atenuado (tal como, en cualquier caso, cualquiera de los descritos en la presente) . Por ejemplo, el antigeno utilizado en cualquier aspecto de la presente invención puede ser, o se puede proporcionar como, un antigeno peptidico o proteinico aislado y/o purificado. Se entenderá por la persona con experiencia normal, que un antigeno aislado, (y/o purificado) incluye los antigenos que estén presentes (o proporcionados) en una composición (de partida) que tenga menos de aproximadamente el 40%, 30%, 20%, 10%, 5%, 2% o 1% de otros componentes no deseados o específicos tales como otras proteínas/péptidos o impurezas.
Los antígenos proteínicos o peptídicos, por ejemplo, se pueden preparar como sigue.
Los antígenos proteínicos o peptidicos como se describieron anteriormente, se pueden preparar utilizando métodos para producción recombinante , tales como aquellos descritos en la presente, o por ejemplo con la ayuda de métodos de biología molecular conocidos por alguien con experiencia normal. Este antígeno se puede describir, como aplicable, como un "antígeno proteínico recombinante" y/o un "antígeno proteínico recombinante".
Alternativamente, una proteína o péptido, como se describió anteriormente (por ejemplo, los fragmentos, dominios, epítopes o antígenos proteínicos y/o análogos peptidicos) se pueden preparar utilizando métodos para síntesis de péptido tales como aquellos descritos en la presente, o por ejemplo, con otras metodologías conocidas por alguien con experiencia normal. Este antígeno se puede describir, como aplicable, como un "antígeno proteínico sintético" y/o un "antígeno peptídico sintético".
En caso de que se proporcione al menos un antígeno como antígeno proteínico o peptídico (o un fragmento, variante y/o derivado del mismo), el antígeno peptídico o proteínico se puede proporcionar en una primera alternativa en un componente por separado de la composición farmacéutica inventiva. En este caso al menos un antígeno proteínico o peptídico no forma parte del complejo de carga con portador polimérico o en otras palabras: en caso de que el complejo de carga con portador polimérico no incluya al menos un antigeno. En una segunda alternativa, al menos un antigeno proteinico o peptidico se puede proporcionar como un componente del complejo de carga con portador polimérico. En este caso, el antigeno peptidico o proteinico se puede agregar al complejo de carga con portador polimérico durante el paso de polimerización c) del método para preparar el complejo de carga con portador polimérico como se describe en la presente. De esta forma, el antigeno proteinico o peptidico se integra en el complejo de carga con portador polimérico. En este contexto, en particular se prefiere que el antigeno proteinico o peptidico porte al menos una porción -SH para polimerización con los otros componentes del portador polimérico en el complejo de carga con portador polimérico. Además, en una alternativa adicional, se proporciona un antigeno proteinico o peptidico como un componente del portador polimérico del complejo de carga con portador polimérico y al menos un antigeno proteinico o peptidico adicional (el mismo o uno diferente) se proporciona en un componente por separado de la composición farmacéutica inventiva que no forme parte del complejo de carga con portador polimérico.
Adicionalmente, al menos un antigeno (o un fragmento, variante y/o derivado del mismo) se puede proporcionar en la composición farmacéutica inventiva en la forma de ácidos nucleicos que codifiquen para al menos un antigeno (o fragmentos, variantes y/o derivado del mismo).
En este contexto, los ácidos nucleicos que codifican para al menos un antigeno (o los fragmentos, variantes y/o derivados del mismo) se definen, como se describió anteriormente para la carga de ácido nucleico comprendida en el complejo de carga con portador polimérico utilizado como un adyuvante en la composición farmacéutica inventiva. Por lo tanto, también se abarcan explícitamente los fragmentos, variantes, derivado y modificaciones de un ácido nucleico, como se define en la presente.
Al menos un antigeno (o un fragmento, variante y/o derivado del mismo) se proporciona en la composición farmacéutica inventiva en la forma de ácidos nucleicos que codifican para al menos un antigeno (o los fragmentos, variantes y/o derivados del mismo) , se puede preparar con todos los métodos para síntesis de ácidos nucleicos conocidos por un experto. En particular se prefieren los métodos para la síntesis de ácidos nucleicos, como se define en la presente .
También en este caso existen dos alternativas. La primera alternativa proporciona el ácido nucleico que codifica para al menos un antigeno como parte del complejo de carga con portador polimérico (por ejemplo, como una molécula de carga de ácido nucleico) y la segunda alternativa proporciona el ácido nucleico que codifica para al menos un antigeno como un componente por separado de la composición farmacéutica inventiva. De esta forma, en este caso, el ácido nucleico que codifica para al menos un antigeno no forma parte del complejo de carga con portador polimérico.
En una modalidad adicional de la presente invención, al menos un antigeno (o un fragmento, variante y/o derivado del mismo) codificado por ácido nucleico se puede proporcionar como parte del (adyuvante) complejo de carga con portador polimérico (por ejemplo, como la carga de ácido nucleico que codifica para al menos un antigeno) y adicionalmente se puede proporcionar un antigeno codificado por un ácido nucleico en un componente por separado que no forma parte del complejo de carga con portador polimérico.
La invención proporciona además la alternativa de que al menos se proporciona un antigeno como un ácido nucleico (como parte del complejo de carga con portador polimérico o no) y que al menos se proporciona un antigeno adicional como el antigeno proteinico o peptidico (como parte del complejo de carga con portador polimérico o no) .
Como una modalidad adicional, al menos un antigeno si se proporciona como proteina o péptido o como un ácido nucleico que codifica para al menos un antigeno, además puede comprender o codificar para un péptido de señal, como se define en la presente.
Como un ingrediente adicional la composición farmacéutica puede comprender al menos un componente farmacéuticamente activo adicional. Un componente farmacéuticamente activo junto con esto es un compuesto que tenga un efecto terapéutico para curar, disminuir o evitar una indicación particular, de preferencia un tumor o enfermedades cancerosas, una enfermedad autoinmune, alergias o enfermedades infecciosas. Estos compuestos incluyen, sin implicar ninguna limitación, péptidos o proteínas, de preferencia como se define en la presente, ácidos nucleicos, de preferencia como se define en la presente, compuestos orgánicos o inorgánicos de bajo peso molecular (terapéuticamente activos) (el peso molecular es menor de 5000, de preferencia menor de 1000), azúcares, antigenos o anticuerpos, de preferencia como se define en la presente, los agentes terapéuticos ya se conoce en la técnica anterior, células antigénicas, fragmentos celulares antigénicos, fracciones celulares; componentes de pared celular (por ejemplo, polisacáridos) , patógenos (virus, bacterias etc.) modificados, atenuados o desactivados (por ejemplo, químicamente o mediante irradiación) , adyuvantes, de preferencia como se define en la presente, etc.
Además, la composición farmacéutica inventiva puede comprender un portador y/o vehículo farmacéuticamente aceptable. En el contexto de la presente invención, un portador farmacéuticamente aceptable típicamente incluye la base líquida o no líquida de la composición farmacéutica. Si se proporciona la composición farmacéutica en forma líquida, el portador típicamente será agua libre de pirógenos; solución salina isotónica o soluciones tamponadas (acuosas), por ejemplo, fosfato, citrato, etc., soluciones tamponadas. El tampón para inyección puede ser hipertónico, isotónico o hipotónico con referencia al medio de referencia específico, es decir el tampón puede tener un mayor, idéntico o menor contenido de sal con referencia al medio de referencia específico, en donde de preferencia se pueden utilizar estas concentraciones de las sales mencionadas anteriormente, que no conduzcan al daño de células debido a osmosis u otros efectos de concentración. Los medios de referencia son, por ejemplo , líquidos que se presenten en métodos n in vivo", tales como sangre, linfa, líquidos citosólicos, u otros líquidos corporales, o por ejemplo líquidos, que se pueden utilizar como medios de referencia en métodos "ín vitro" , tales como tampones o líquidos comunes. Estos tampones o líquidos comunes se conocen por un experto.
Sin embargo, también se pueden utilizar uno o más materiales de rellenos o diluyentes sólidos o líquidos compatibles o compuestos encapsulantes para la composición farmacéutica, que sean adecuados para administración a un paciente que será tratado. El término "compatible" en el sentido en el que se utiliza en la presente significo que estos constituyentes de la composición farmacéutica son capaces de ser mezclados con el complejo de carga con portador polimérico como se define en la presente de tal forma que no se presente una interacción que pudiera reducir sustancialmente la efectividad farmacéutica de la composición farmacéutica bajo condiciones típicas de uso. Los portadores, materialesde relleno y diluyentes farmacéuticamente aceptables, por supuesto deben tener una pureza suficientemente alta y una toxicidad suficientemente baja para que sean adecuados para la administración a una persona que será tratada. Algunos ejemplos de compuestos que se pueden utilizar como como portadores, materiales de relleno o constituyentes farmacéuticamente aceptables de los mismos son azúcares, tales como, por ejemplo, lactosa, glucosa y sacarosa; almidones, tales como, por ejemplo, almidón de maíz o almidón de papa; celulosa y sus derivados, tales como, por ejemplo, carboximetilcelulosa de sodio, etilcelulosa , acetato de celulosa; tragacanto en polvo; malta; gelatina; sebo; glidantes sólidos, tales como, por ejemplo, ácido esteárico, estearato de magnesio; sulfato de calcio; aceites vegetales, tales como, por ejemplo, aceite de cacahuate, aceite de semilla de algodón, aceite de ajonjoli, aceite de oliva, aceite de maíz y aeite proveniente de cacao; polioles, tales como, por ejemplo, polipropilenglicol , glicerol, sorbitol, manitol y polietilenglicol; ácido alginico.
De acuerdo con una modalidad especifica, la composición farmacéutica inventiva puede comprender un adyuvante (adicional) . En este contexto, un adyuvante se puede entender como cualquier compuesto, que sea adecuado para iniciar o aumentar una respuesta inmunitaria del sistema inmunitario innato, es decir, una respuesta inmunitaria no especifica. En otras palabras, cuando administra, la composición farmacéutica típicamente produce una respuesta inmunitaria innata debido al adyuvante, opcionalmente contenido en la misma. Este adyuvante se puede seleccionar de cualquier adyuvante conocido por un experto y es adecuado para el presente caso, es decir que apoya la inducción de una respuesta inmunitaria innata en un mamífero.
La composición farmacéutica inventiva se puede administrar oral, parenteral, o mediante aerosol para inhalación, tópica, rectal, nasal, bucal, vaginalmente o vía un reservorio implantado. El término parenteral en el sentido en el que se utiliza en la presente, incluye técnicas de inyección o infusión subcutánea, intravenosa, intramuscular, intra-articular , intranodal, intrasinovial, intraexternal, intratecal, intrahepática , intralesional, intracranial , transdérmica, intradérmica , intrapulmonar, intraperitoneal , intracardial , intra-arterial y sublingual.
De preferencia, la composición farmacéutica inventiva se puede administrar mediante inyección parenteral, de mayor preferencia mediante técnicas de inyección subcutánea, intravenosa, intramuscular, intra-articular, intranodal, intrasinovial, intraexternal, intratecal, intrahepática, intralesional, intracraneal, transdérmica, intradérmica, intrapulmonar, intraperitoneal, intracardial, intra-arterial, y sublingual o vía infusión. En particular se prefiere la inyección intradérmica, subcutánea intramuscular. Las formas inyectables estériles de las composiciones farmacéuticas pueden ser una suspensión acuosa u oleaginosa. Estas suspensiones se pueden formular de acuerdo con técnicas conocidas en este campo utilizando agentes dispersantes o humectantes adecuados y agentes de suspensión. La preparación inyectable estéril también puede ser una solución o suspensión inyectable estéril en un diluyente o solvente parenteralmente aceptable no tóxico, por ejemplo, como una solución en 1 , 3-butandiol . Entre los vehículos y solventes aceptables que se pueden emplear se encuentran el agua, solución de Ringer y solución isotónica de cloruro de sodio. Además, se emplean convencionalmente aceites estériles, aceites grasos como un solvente o medio de suspensión. Para este fin, se puede emplear cualquier aceite graso insípido incluyendo mono- o di-glicéridos sintéticos. En la preparación de soluciones inyectables son útiles ácidos grasos, tales como, ácido oleico y sus derivados de glicérido, como son los aceites farmacéuticamente aceptables naturales, tales como aceite de oliva o aceite de ricino, en especial en sus versiones polioxietiladas . Estas soluciones o suspensiones oleosas también pueden contener un diluyente o dispersante alcohólico de cadena larga, tal como carboximetilcelulosa o agentes dispersantes similares que se utilizan comúnmente en la formulación de las formas de dosificación farmacéuticamente aceptable incluyendo emulsiones y suspensiones. Otro tensioactivos comúnmente utilizados, tales como Tweens, Spans y otros agentes emulsionantes o intensificadores de biodisponibilidad que se utilizan comúnmente en la elaboración de las formas de dosificación sólida, líquida u otros farmacéuticamente aceptables, también se pueden utilizar para los propósitos de formulación de la composición farmacéutica.
La composición farmacéutica inventiva, como se define en la presente, también se puede administrar oralmente en cualquier forma de dosificación oralmente aceptable incluyendo, de manera enunciativa, cápsulas, tabletas, suspensiones o soluciones acuosas. En el caso de las tabletas para uso oral, los portadores comúnmente utilizados incluyen lactosa y almidón de maíz. También se agregan típicamente agentes lubrificantes, tales como estearato de magnesio. Para administración oral en una forma de cápsula, los diluyentes útiles incluyen lactosa y almidón de maíz deshidratado. Cuando se requieren para uso oral suspensiones acuosas, el ingrediente activo, es decir el complejo de carga con portador polimérico, se combina con agentes emulsionantes y de suspensión. Si se desea, también se pueden agregar ciertos agentes edulcorantes, saborizantes o colorantes.
La composición farmacéutica inventiva, también se puede administrar tópicamente, en especial cunado el blanco de tratamiento incluya áreas u órganos a los que tenga fácil acceso mediante una aplicación tópica, por ejemplo, incluyendo las enfermedades de la piel o de cualquier otro tejido epitelial accesible. Las formulaciones tópicas adecuadas se preparan fácilmente para cada una de estas áreas u órganos. Para aplicaciones tópicas, la composición farmacéutica se puede formular en un ungüento adecuado, que contenga el complejo de carga con portador polimérico suspendido o disuelto en uno o más portadores. Los portadores para administración tópica incluyen, de manera enunciativa, aceite mineral, petrolato liquido, petrolato blanco, propilenglicol , polioxietileno, compuesto de poliox propileno, cera emulsionante y agua. Alternativamente, la composición farmacéutica se puede formular en una loción o crema adecuada. En el contexto de la presente invención, los portadores adecuados incluyen, de manera enunciativa, aceite mineral, monoestearato de sorbitan, polisorbate 60, cera de cetilésteres , alcohol cetearilico, 2-octildodecanol , alcohol bencílico y agua.
La composición farmacéutica inventiva típicamente comprende una "cantidad segura y efectiva" de los componentes de la composición farmacéutica, en particular del complejo de carga con portador polimérico como se define en la presente o el ácido nucleico como tal. En el sentido en el que se utiliza en la presente, una "cantidad segura y efectiva" significa una cantidad del complejo de carga con portador polimérico como tal que sea suficiente para inducir significativamente una modificación positiva de una enfermedad o trastorno, como se define en la presente. Al mismo tiempo, sin embargo, una "cantidad segura y efectiva" es tan pequeña que evite efectos secundarios serios y permita una relación acertada entre ventaja y riesgo. La determinación de estos limites típicamente queda dentro del alcance del juicio médico acertado. Una "cantidad segura y efectiva" de los componentes de la composición farmacéutica, en particular del complejo de carga con portador polimérico de al menos un antígeno como se define en la presente, variará adicionalmente junto con la condición particular que será tratada y también con la edad y condición física del paciente que será tratado, el peso corporal, la salud general, el sexo, la dieta, tiempo de administración, la velocidad de excreción, la combinación de fármacos, la actividad del complejo de carga con portador polimérico o el antígeno, la gravedad de la condición, la duración del tratamiento, la naturaleza de la terapia asociada, del portador farmacéuticamente aceptable particular, y factores similares, dentro del conocimiento y experiencia del doctor asociado. La composición farmacéutica se puede utilizar para un ser humano y también para fines médicos veterinarios, de preferencia para fines médicos humanos, como una composición farmacéutica en general o como una vacuna.
La composición farmacéutica inventiva adicionalmente puede contener una o más sustancias auxiliares para aumentar su capacidad de inmunogenicidad o inmunoestimuladora, si se desea. Una acción sinérgica del complejo de carga con portador polimérico (adyuvante), como se define en la presente y de una sustancia auxiliar, que opcionalmente puede estar contenida en la composición farmacéutica inventiva como se define en la presente, de preferencia se alcanza con esto. Dependiendo de los diversos tipos de sustancias auxiliares, con respecto a esto se pueden tomar en consideración diversos mecanismos. Por ejemplo, los compuestos que permiten la maduración de células dendriticas (DC), por ejemplo, lipopolisacáridos , TNF-alfa o el ligando CD40, forman una primera clase de sustancias auxiliares adecuadas. En general, es posible utilizar como sustancia auxiliar cualquier agente que influye en el sistema inmunitario en la forma de una "señal de peligro" (LPS, GP96, etc.) o citoquinas, tales como GM-CFS que permitan que se mejore y/o influya una respuesta inmunitaria de una manera dirigida. En particular las sustancias auxiliares preferidas son citoquinas, tales como monoquinas, linfoquinas, interleuquinas o quimioquinas que estimulen adicionalmente la respuesta inmunitaria innata tales como IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-12, IL-13, IL-14, IL-15, IL-16, IL-17, IL-18, IL-19, IL-20, IL-21, IL-22, IL-23, IL-24, IL-25, IL-26, IL-27, IL-28, IL-29, IL-30, IL-31, IL-32, IL-33, INF-alfa, IFN-beta, INF-gamma, GM-CSF, G-CSF, M-CSF, LT-beta o TNF-alfa, factores de crecimiento tales como hGH.
Los aditivos adicionales que se pueden incluir en la composición farmacéutica inventiva son emulsionantes, tales como, por ejemplo, Tween®; agentes humectantes, tales como, por ejemplo, laurilsulfato de sodio; agentes colorantes; agentes para impartición de sabor, portadores farmacéuticos; agentes formadores de tabletas; estabilizantes; antioxidante; conservadores.
La composición farmacéutica inventiva adicionalmente también puede contener cualquier compuesto adicional que se sabe será inmunoestimulante debido a su afinidad de unión (como ligandos) a los receptores similares a Toll humano TLR1 , TLR2, TLR3, TLR4 , TLR5, TLR6, TLR7 , TLR8 , TLR9, TLR10, o debido a su afinidad de unión (como ligando) a receptores similares a Toll murino TLRl, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7 , TLR8, TLR9, TLR10, TLRl 1 , TLR12 o TLR13.
La composición farmacéutica inventiva adicional o alternativamente también puede contener un ARN inmunoestimulador , es decir un ARN derivado de un ARN inmunoestimulador que active o aumente una respuesta inmunitaria (innata) . De preferencia, este ARN inmunoestimulador en general puede ser como se definió anteriormente .
Otra clase de compuestos, que se pueden agregar a la composición farmacéutica inventiva en este contexto pueden ser ácidos nucleicos CpG, en particular CpG-ARN o CpG-ADN. Un CpG-ARN o CpG-ADN puede ser un CpG-ADN de cadena individual (ss CpG-ADN), un CpG-ADN de doble cadena (ADNds), un CpG-ARN de cadena individual (ss CpG-ARN) o un CpG-ARN de doble cadena (ds CpG-ARN) . El ácido nucleico CpG de preferencia está en la forma de CpG-ARN, de mayor preferencia en la forma de CpG-ARN de cadena individual (ss CpG-ARN) . El ácido nucleico CpG de preferencia contiene al menos una o más secuencias de dinucleótidos de citosina/guanina (mitogénicas ) (motivos CpG) . De acuerdo con una primera alternativa preferida, al menos un motivo de CpG contenido en estas secuencias, es decir la C (citosina) y la G (guanina) del motivo CpG, está sin metilar. Todas las citosinas o guaninas adicionales contenidas opcionalmente en estas secuencias pueden estar ya sea metiladas o sin metilar. Sin embargo, de acuerdo con una alternativa preferida adicional, la C (citosina) y la G (guanina) del motivo CpG también pueden estar presentes en forma metilada.
En el contexto de la presente invención, la carga del ácido nucleico en el complejo de carga con portador polimérico comprendido en la composición farmacéutica inventiva de preferencia es como se definió anteriormente. De mayor preferencia, el ácido nucleico del complejo de carga con portador polimérico, de preferencia contenido en la composición farmacéutica, típicamente es un ácido nucleico inmunoestimulador como se define en la presente, por ejemplo un CpG-ADN o un ARN inmunoestimulador (ARNis) , de preferencia un ARNis. Alternativa o adicionalmente , el ácido nucleico del complejo de carga con portador polimérico, de preferencia contenido en la composición farmacéutica, es una secuencia de ácido nucleico codificante como se define en la presente, de preferencia un ADNc o un ARNm, de mayor preferencia que codifica para una proteína adyuvante de preferencia, como se define en la presente. En este contexto, el complejo de carga con portador polimérico, típicamente inicia una respuesta inmunitaria innata en el paciente que será tratado.
En una modalidad específica en este contexto, se prefiere que la proteína adyuvante sea un componente del complejo de carga con portador polimérico y, de preferencia, del portador polimérico.
De acuerdo con un aspecto adicional, la presente invención también proporciona kits, en particular kits de partes, que comprenden componentes individuales o en combinación con ingredientes adicionales opcionales, e incluyen (como un primer componente) : (A) un complejo de carga con portador polimérico, que comprende: a) (como un portador) un portador polimérico que contiene componentes catiónicos reticulados con disulfuro, de preferencia formados mediante componentes catiónicos reticulados con disulfuro; y b) (como una carga) al menos una molécula de ácido nucleico, y (como un segundo componente) : (B) al menos de un antigeno que se selecciona de: (i) un antigeno proveniente de un patógeno asociado con una enfermedad infecciosa; (ii) un antigeno asociado con alergia o una enfermedad alérgica; (iii) un antigeno asociado con una enfermedad autoinrnune ; o (iv) un antigeno asociado con un cáncer o una enfermedad tumoral, en donde en algunas modalidades el antigeno asociado con un cáncer o una enfermedad tumoral es distinto de un antigeno que comprende: (x) una inmunoglobulina idiotipica (por ejemplo un anticuerpo idiotipico o un receptor idiotipico de células B) ; y/o (y) al menos un receptor idiotipico de células T, o un fragmento, variante y/o derivado del antigeno; en cada caso como se define en cualquier lugar en la presente, y opcionalmente las instrucciones técnicas con la información sobre la administración y dosificación del complejo de carga con portador polimérico y al menos un antigeno. Estos kits, de preferencia kits de partes, se pueden aplicar, por ejemplo, para cualquiera de las aplicaciones o usos como se define en la presente. Estos kits, cuando se presentan como un kit de partes, además pueden contener cada componente de la composición farmacéutica inventiva en una parte diferente del kit.
En -ciertas modalidades de los kits de la presente invención, el antigeno está comprendido en una vacuna.
La presente invención proporciona además diversas aplicaciones y usos de la composición farmacéutica inventiva (por ejemplo la vacuna adyuvante) o de los kits o kits de partes que comprenden la misma como se define en cualquier lugar en la presente.
En este contexto, la presente invención también proporciona un método para transferir y/o tratar una célula, un tejido o un organismo, aplicando a administrando con esto la composición farmacéutica inventiva en particular para fines terapéuticos. En este contexto, típicamente después de preparar la composición farmacéutica inventiva, la composición farmacéutica inventiva de preferencia se administra a una célula, un tejido o un organismo, de preferencia utilizando cualquiera de los modos de administración como se describe en la presente. El método para transferir y/o tratar una célula se puede llevar a cabo in vitro, in vivo o ex vivo.
Además, la presente invención proporciona el uso de una composición farmacéutica o de los kits o kits de partes en cada caso, como definido en cualquier lugar en la presente, en terapia y/o como un medicamento, de preferencia como una vacuna tal como una vacuna adyuvante.
También, en ciertas modalidades de todos los aspectos de la presente invención, al menos un antigeno no se selecciona de: (x) una inmunoglobulina idiotipica (un anticuerpo idiotipico o un receptor idiotipico de células B) ; o (y) al menos un receptor idiotipico de células T; y opcionalmente no es un fragmento, variante y/o derivado de este antigeno.
En este aspecto de la presente invención, en particular se prefiere el uso de la composición farmacéutica inventiva o de los kits o kits de partes que comprenden la misma como se define en la presente en el tratamiento de enfermedades infecciosas, alergias o enfermedades alérgicas, enfermedades autoinmunes y cáncer o el enfermedades tumorales, en cada caso como se define en cualquier lugar en la presente.
En este contexto, las enfermedades infecciosas de preferencia son enfermedades por infecciones virales, bacterianas o por protozoarios . Estas enfermedades infecciosas, de preferencia las enfermedades infecciosas (virales, bacterianas o protozoarios), típicamente se seleccionan de la lista que consiste de infecciones por Acinetobacter , enfermedad africana del sueño (African trypanosomiasís ) , SIDA (síndrome de inmunodeficiencia adquirida) , Amebiasis, Anaplasmosis , Anthrax, Appendicitis , infecciones por Arcanobacterium haemolyticum, fiebre hemorrágica Argentina, Ascariasis, Aspergillosis , infecciones por Astrovirus, pie de atleta, Babesiosis, infecciones por Bacillus cereus, meningitis bacteriana, pneumonía bacteriana, vaginosis bacteriana (BV) , infecciones por Bacteroides, Balantidiasis , infecciones por Baylisascaris , Bilharziosis , infecciones por virus BK, piedra negra, infecciones por Blastocystis hominis, Blastomycosis , fiebre hemorrágica Boliviana, infecciones por Borrelia ( Borreliosis ) , Botulismo (y botulismo infantil) , Tenia bovino, fiebre hemorrágica Brasileña, Brucellosis, infecciones por Burkholderia , úlcera Buruli, infecciones por Calicivirus (Norovirus y Sapovirus), Campylobacteriosis, Candidiasis (Candidosís ) , infecciones por Tenia Canina, enfermedad de arañazo de gato, enfermedad de Chagas (tripanosomiasis Americana) , Chancroide, Varicela, infecciones por Chlamydia, infecciones por Chlamydia trachomatis , infecciones por Chlamydophila pneumoniae, Colera, Cromoblastomicosis , bubo Climático, Clonorcquiasis, infecciones difíciles por Clostridium, Coccidioidomycosis , resfriado, fiebre por garrapata del Colorado (CTF) , resfriado común ( rinofaringit is viral aguda; coriza aguda), Condyloma acuminata, Conj unctivit is , enfermedad de Creutzfeldt-Jakob (CJD) , fiebre hemorrágica Crimean-Congo (CCHF) , Cryptococcosis, Cryptosporidiosis , larva migrans cutánea (CLM) , Leishmaniosis cutánea, Ciclosporiasis , Cisticercosis , infecciones por Citomegalovirus , fiebre del dengue, Dermatofitosis , Dientamoebiasis , Difteria, Difilobotriasis, Donavanosis, Dracunculiasis , meningoencefalit is de principio de verano (FSME) , fiebre hemorrágica por Ebola, Echinococcosis, Ehrlichiosis , enterobiasis (infecciones por oxiuros), infecciones por enterococcus, infecciones por enterovirus, tifus epidémico, Epiglottitis , Mononucleosis infecciosa por el virus Epstein-Barr , Eritema infecciosa (quinta enfermedad) , Exanthem subitum, Fasciolopsiasis , Fasciolosis, insomnia familiar fatal (FFI), quinta enfermedad, Filariasis, Envenenamiento por pescado (Ciguatera), Tenia de pescado, gripe, envenenamiento de alimentos por Clostridium perfringens, Tenia del zorro, infecciones amébicas de crecimiento libre, infecciones por Fusobacterium, gangrena gaseosa, Geotrichosis , síndrome de Gerstmann-Stráussler-Scheinker (GSS), Giardiasis, Glanders, Gnathostomiasis , Gonorrea, Granuloma inguinal ( Donovanosis ) , infecciones por estreptococos del Grupo A, infecciones por estreptococos del Grupo B, infecciones por influenza hemofilica, enfermedad de manos pies y boca (HFMD) , síndrome pulmonar por antavirus (HPS) , infecciones por Helicobacter pylori, síndrome hemolítico-urémico (HUS) , fiebre hemorrágica con síndrome renal (HFRS), infecciones por Henipavirus, Hepatitis A, Hepatitis B, Hepatitis C, Hepatitis D, Hepatitis E, Herpes simplex, Herpes simplex tipo I, Herpes simplex tipo II, Herpes zoster, Histoplasmosis, Verrugas huecas, infecciones por anquilostoma, infecciones por bocavirus humano, erliquiosis ewingii humana, anaplasmosis granulocítica humana (HGA) , infecciones por metapneumovirus humano, erliquiosis monocítica humana, infecciones por papilomavirus humano (HPV) , infecciones por el virus de parainfluenza humano, Hymenolepiasis , Influenza, Isosporiasis , encefalitis Japanesa, enfermedad de Kawasaki, Keratitis, infecciones por Kingella kingae, Kuru, Lambliasis (Giardiasis) , fiebre Lassa, Legionellosis (enfermedad del legionario, fiebre Pontiac) , Leishmaniasis , Lepra, Leptospirosís , Piojo, Listeriosis, Lyme borreliosis, enfermedad de Lyme, Filariasis linfática (Elefantiasis), Coriomeningitis linfocítica, Malaria, Fiebre hemorrágica de Marburg (MHF) , virus arburg, Sarampión, Melioidosis (enfermedad de hitmore) , Meningitis, enfermedad Meningococcal , Metagonimiasis, Microsporidiosis , Tenia Miniatura, Miscarriage (inflamación prostática) , Molluscum contagiosum (MC) , Mononucleosis , Paperas, Tifus murino (tifus endémico) , Mycetoma, Mycoplasma hominis, Mycoplasma pneumonía, Myiasis, dermatitis por pañal/pañal desechable, conjunctivitis neonatal (Ophthalmia neonatorum) , sepsis neonatal ( Chorioamnionitis ) , Nocardiosis, infecciones por el virus Noma, Norwalk, Onchocerciasis (ceguera de los rios) , Osteomyelitis , Otitis media, Paracoccidioidomycosis (blastomicosis Sudamericana) , Paragonimiasis , Paratyphus, Pasteurellosis , Pediculosis capitis (piojos de la cabeza), Pediculosis corporis (piojos del cuerpo) , Pediculosis pubis (piojos púbicos, piojos cangrejo), enfermedad inflamatoria pélvica (PID), Pertusis (tosferina) , fiebre glandular de Pfeiffer, Plaga, infecciones Pneumococcal , Pneumocystis pneumonía (PCP) , Pneumonía, Polio (cojera infantil) , Poliomielitis, Tenia Porcina, infecciones por Prevotella, meningoencefalitis amébica primaria ( PAM) , leucoencefalopatía multifocal progresiva, Pseudo-croup, Psittacosis, fiebre Q, fiebre de conejo, Rabias, fiebre por mordida de ratas, síndrome de Reiter, infecciones por virus sincitial respiratorio (RSV) , Rhinosporidiosis , infecciones por Rhinovirus, infecciones por Rickettsial, Rickettsialpox, fiebre de Rift Valley (RVF) , fiebre maculosa de las montañas rocosas (RMSF), infecciones por Rotavirus, Rubéola, Salmonella paratyphus, Salmonella typhus, Salmonelosis , SARS (síndrome respiratorio agudo severo), Sarna, fiebre por escarlatina, esquistosomiasis (Bilharziosis ) , tifus de los matorrales, Sepsis, Shigelosis (Disinteria bacilar), herpes, viruela (Varióla) , chancro suave, Sporotricosis , envenenamiento de alimentos por estafilococos, infecciones estafilocósicas , Estrongiloidiasis, sífilis, Teniasis, Tétanos, fiebre del tercer día, encefalitis portada por garrapatas, Tinea barbae (foliculitis de la Barber) , Tinea capitis (tiña del cuerpo cabelludo), Tinea corporis (tiña del cuerpo) , Tinea cruris (tiña inguinal) , Tinea manuum (tiña de la mano) , Tinea nigra, Tinea pedis (Pie de atleta) , Tinea unguium (Onicomicosis ) , Tinea versicolor (Pitiriasis versicolor) , Toxocariasis (Ocular Larva Migrans (OLM) y Visceral Larva Migrans (VLM) ) , Toxoplasmosis, Triquinelosis, Tricomoniasis , Tricuriasis (infecciones por trichiura) , Tripper, Trypanosomiasis (enfermedad del sueño) , enfermedad de Tsutsugamushi , Tuberculosis, Tularemia, Tifo, fiebre por Tifo, infecciones por Ureaplasma urealyticum, Vaginitis (Colpitis), enfermedad de Creutzfeldt-Jakob variante (vCJD, nvCJD) , Encefalitis equino venezolana, fiebre hemorrágica venezolana, neumonía viral, Leishmaniosis Visceral, verrugas, fiebre del Nilo occidental, encefalitis equina occidental, piedra blanca (Tiña blanca), tosferina, manchas por hongos de levadura, fiebre amarilla, infecciones por Yersinia pseudotuberculosis , Yersiniosis, y Zygomycosis.
Las alergias o enfermedades alérgicas de preferencia se seleccionan de alergia polen (alergia contra el polen del pasto, polen de árboles (por ejemplo, polen de avellano, abedul, aliso, fresno) , polen de flores, polen de hierbas (por ejemplo, polen de artemisa), alergia a ácaros del polvo, alergia al moho (por ejemplo, alergia contra Acremonium, Aspergillus, Cladosporium, Fusarium, Mucor, Penicillium, Rhizopus, Stachybotrys , Trichoderma, o Alternaría) , alergia a las mascotas (alergia contra los animales; por ejemplo, contra gatos, perros, caballos), alergia por alimentos (por ejemplo, alergia contra pescados (por ejemplo, lubina, bacalao, platija), mariscos (por ejemplo, cangrejo, langosta, camarones), huevos, trigo, frutas secas (por ejemplo, cacahuetes, almendras, anacardos, nueces), soya, leche, etc.) o alergia a picaduras de insectos (alergia contra el veneno de insectos, por ejemplo, el veneno de avispas, abejas, avispones, hormigas, mosquitos, o garrapatas ) .
De acuerdo con otra modalidad específica, las enfermedades como se definen en la presente comprenden enfermedades autoinmunes, como se define en lo siguiente. Las enfermedades autoinmunes de preferencia se seleccionan de enfermedad de Addison (adrenalitis autoinmune, Morbus Addison) , alopecia areata, anemia de Addison (Morbus Biermer) , anemia hemolitica autoinmune (AIHA) , anemia hemolitica autoinmune (AIHA) del tipo frió (enfermedad por hemaglutinina de resfriado, anemia hemolitica autoinmune de resfriado (AIHA) (enfermedad por aglutinina de resfriado) , (CHAD) ) , anemia hemolitica autoinmune (AIHA) del tipo cálido (AIHA cálido, anemia hemolitica autoinmune cálida (AIHA) ) , anemia de Donath-Landsteiner hemolitica autoinmune ( hemoglobinuria paroxismal por frió) , síndrome antifosfolipídico (APS), aterosclerosis, artritis autoinmune, arteritis temporalis, Takayasu arteriitis (enfermedad de Takayasu, enfermedad del arco aórtica) , arteritis temporal/arteritis de células gigantes, gastritis crónica autoinmune, infertilidad autoinmune, enfermedad autoinmune del oído interno (AIED) , enfermedad de Basedow (Morbus Basedow) , enfermedad de Bechterew (Morbus Bechterew, espondilitis anquilosante, spondylitis ankylosans), síndrome de Behcet (Morbus Behcet) , enfermedad intestinal incluyendo enfermedad inflamatoria autoinmune del intestino (incluyendo colitis ulcerosa (Morbus Crohn, enfermedad de Crohn) , cardiomiopatía, en particular cardiomiopatía autoinmune, cardiomiopatia dilatada idiopática (DCM) , dermatitis por sprue celiaco (enteropatia producida por gluten) , síndrome de disfunción inmune por fatiga crónica (CFIDS) , polineuropatia desmielinazante inflamatoria crónica (CIDP) , poliartritis crónica, síndrome de Churg-Strauss , penfigoide cicatricial, síndrome de Cogan, síndrome de CREST (síndrome con Calcinosis cutis, fenómeno de Raynaud, trastornos de movilidad del esófago, sklerodaktylia y teleangiectasia ) , enfermedad de Crohn ( orbus Crohn, colitis ulcerosa) , enfermedades de autoinmunes dermatológicas durante herpetiformis dermatitis, dermatomiositis, Diabetes, Diabetes mellitus Tipo 1 (diabetes tipo I, Diabetes mellitus dependiente de insulina), Diabetes mellitus Tipo 2 (diabetes tipo II), crioglobulinemia mezclada esencial, crioglobulinemia mixta esencial, fibromialgia , fibromiositis , síndrome de Goodpasture (glomerulonefritis producida por anti-GBM) , enfermedad de hospedero contra injerto, síndrome de Guillain-Barré (GBM, Poliradikuloneuritis ) , enfermedades autoinmunes haematológicas, tiroiditis de Hashimoto, hemofilia, hemofilia adquirida, hepatitis, hepatitis autoinmune, formas particularmente autoinmunes de hepatitis crónicas, fibrosis pulmonar idiopática (IPF), purpura trombocitopénica idiopática, purpura inmuno-trombocitopénica (Morbus erlhof; ITP) , nefropatia IgA, infertilidad, infertilidad autoinmune, artritis reumatoide juvenil (Morbus Still, síndrome de Still), síndrome de Lambert-Eaton, liquen plano, liquen escleroso, lupus eritematoso, lupus eritematoso sistémico (SLE), lupus eritematoso (forma discoidal), artritis de Lyme (enfermedad de Lyme, borrelia artritis) , enfermedad de Ménieré (Morbus Ménieré); enfermedad mixta del tejido conectivo (MCTD) , esclerosis múltiple (MS, encefalomielitis disceminada, enfermedad de Charcot), Myasthenia gravis (myasthenia, MG) , miositis, polimiositis , enfermedades autoinmunes neurales, neurodermitis , pemphigus vulgaris, penfigoide ampolloso, penfigoide formador de cicatrices; poliarteritis nodosa (periarteiitis nodosa), polichondritis (panchondritis) , síndrome poliglandular (autoinmune) (síndrome PGA, síndrome de Schmidt), polimialgia reumática, agamaglobulinemia primaria, cirrosis biliar primaria PBC, colangitis autoinmune primaria) , esclerosis sistémica progresiva (PSS) , Psoriasis, Psoriasis vulgaris, fenómenos de Raynaud, síndrome de Reiter (Morbus Reiter, síndrome sinovial conjuntivo uretral) , artritis reumatoide (RA, poliartritis crónica, enfermedad reumática de las articulaciones, fiebre reumática) , sarcoidosis (Morbus Boeck, enfermedad de Besnier-Boeck-Schaumann ) , síndrome de cuerpo rígido, Sclerodermia , Scleroderma, síndrome de Sjógren, oftalmía simpática; intolerancia transitoria por gluten, rechazo a órganos trasplantados, uveitis, uveitis autoinmune, Vasculitis, Vitiligo ( leucoderma , piel piebold) , y enfermedad de Wegner (Morbus Wegner, granulomatosis de Wegner) .
Además, el cáncer o las enfermedades tumorales de preferencia se seleccionan de melanomas, melanomas malignos, carcinomas de colon, linfomas, sarcomas, blastomas, carcinomas renales, tumores gastrointestinales, gliomas, tumores prostáticos, cáncer de vejiga, tumores rectales, cáncer del estómago, cáncer del esófago, cáncer pancreático, cáncer del hígado, carcinomas mamarios (cáncer de mama), cáncer uterino, cáncer cérvico, leucemia mieloide aguda (A L) , leucemia linfoide aguda (ALL) , leucemia mieloide crónica (CML) , leucemia linfocítica crónica (CLL) , hepatomas, diversos tumores virus-inducidos tales como, por ejemplo, carcinomas inducidos por el virus de papiloma (por ejemplo, carcinoma cervical = cáncer cervical), adenocarcinomas , tumores inducidos por virus de herpes (por ejemplo, linfoma de Burkitt, linfoma de células B inducido por EBV) , tumores inducidos por heptatitis B (carcinomas hepatocelulares), linfomas inducidas por HTLV-1- y HTLV-2-, neuroma acústica, carcinomas pulmonares (= cáncer de pulmón = carcinoma bronquial) , carcinomas pulmonares de célula pequeña, cáncer faríngeo, carcinoma anal, glioblastoma, carcinoma rectal, astrocitoma, tumores cerebrales, retinoblastoma, basalioma, metástasis cerebral, meduloblastomas, cáncer vaginal, cáncer pancreático, cáncer testicular, síndrome de Hodgkin, meningiomas, enfermedad de Schneeberger, tumor de hipófisis, Mycosis fungoides, carcinoides, neurinoma, espinalioma, linfoma de Burkitt, cáncer de la laringe, cáncer renal, timoma, carcinoma del cuerpo, cáncer óseo, linfomas que no son de Hodgkin, cáncer uretral, síndrome CUP, tumores de la cabeza/cuello, oligodendroglioma , cáncer bulbar, cáncer intestinal, carcinoma de colon, carcinoma esofágico (= cáncer esofágico) , intervención de verrugas, tumores del intestino delgado, craniofaringeomas , carcinoma ovárico, tumores genitales, cáncer ovárico (= carcinoma ovárico) , carcinoma pancreático (= cáncer pancreático) , carcinoma endometrial, metástasis hepática, cáncer de pene, cáncer de la lengua, cáncer de la vesícula biliar, leucemia, plasmocitoma, tumor de párpados, cáncer de próstata (= tumores de prostáticos ) , etc .
En un aspecto adicional, la presente invención proporciona un complejo de carga con un portador polimérico como se define en cualquier lugar en la presente, tal como uno que comprende: a) (como un portador) un portador polimérico que comprende componentes catiónicos reticulados con disulfuro, de preferencia formados mediante componentes catiónicos reticulados con disulfuro; y b) (como una carga) al menos una molécula de ácido nucleico; para utilizarse en terapia en combinación con al menos un antigeno, de preferencia un antigeno proteinico o peptidico o un fragmento, variante y/o derivado del mismo, en cada caso, como se define en cualquier lugar en la presente, en particular en el tratamiento de enfermedades infecciosas, alergias o enfermedades alérgicas, enfermedad autoinmunes y cáncer o enfermedades tumorales, como se definió anteriormente .
Adicionalmente , la presente invención proporciona al menos un antigeno, de preferencia un antigeno proteinico o peptidico o un fragmento, variante y/o derivado del mismo, en cada caso como se define en cualquier lugar en la presente, para utilizarse en terapia en combinación con un complejo de carga con un portador polimérico como se define en cualquier lugar en la presente, tal como uno que comprende: a) (como un portador) un portador polimérico que comprende componentes catiónicos reticulados con disulfuro, de preferencia formados mediante componentes catiónicos reticulados con disulfuro, y b) (como una carga) al menos una molécula de ácido nucleico, en particular en el tratamiento de enfermedades infecciosas, alergias o enfermedades alérgicas, enfermedad autoinmunes y cáncer o enfermedades tumorales, como se definió anteriormente.
En ciertas modalidades de los aspectos de la presente invención, el antigeno está comprendido en una vacuna, tal como una vacuna disponible comercialmente .
En este contexto, "en combinación" significa que los diferentes componentes (el complejo de carga con portador polimérico y al menos un antigeno, o un fragmento, variante y/o derivado del mismo) se pueden proporcionar con untamente en la misma composición, o se pueden formular por separado en diferentes composiciones, es decir, una composición que comprenda o que represente el complejo de carga con portador polimérico como se definió en la presente, y una composición adicional que comprenda al menos un antigeno, o un fragmento, variante y/o derivado del mismo como se define en la presente. Si se proporciona en diferentes composiciones, el complejo de carga con portador polimérico y al menos un antigeno o un fragmento, variante y/o derivado del mismo se pueden administrar por separado en el momento (de una forma en tiempos escalonados) y/o se pueden administrar en diferentes sitios de administración y/o diferentes rutas de administración. Esto significa que el complejo de carga con portador polimérico se puede administrar, por ejemplo antes de, concurrente o posterior a al menos un antigeno, o fragmento, variante y/o derivado del mismo, o viceversa. La administración posterior incluye que cada compuesto utilizado en la terapia se administra en un término de aproximadamente 48 horas, 24 horas, 12 horas, 8 horas, 6 horas, 4 horas, 2 horas, 1 hora, 30 minutos, 15 minutos o 5 minutos entre si.
En un aspecto adicional, la presente invención proporciona un empaque farmacéutico, que incluye: (A) un complejo de carga con portador polimérico, que comprende : a) (como un portador) un portador polimérico que comprende componentes catiónicos reticulados con disulfuro, de preferencia formados mediante componentes catiónicos reticulados con disulfuro, y b) (como una carga) al menos una molécula de ácido nucleico, como se define en cualquier lugar en la presente; y (B) las instrucciones que describan el uso del complejo de carga con portador polimérico en terapia en combinación con al menos un antigeno o fragmento, variante y/o derivado del mismo como se define en cualquier lugar en la presente.
El empaque farmacéutico puede comprender además al menos un antígeno o fragmento, variante y/o derivado del mismo como se define en cualquier lugar en la presente.
Además, la presente invención proporciona en una modalidad adicional un empaque farmacéutico, que incluye: (A) al menos de un antigeno o fragmento, variante y/o derivado del mismo, en cada caso como se define en cualquier lugar en la presente; y (B) las instrucciones para describir el uso del antigeno o fragmento, variante y/o derivado del mismo en terapia en combinación con un complejo de carga con un portador polimérico como se define en cualquier lugar en la presente .
El empaque farmacéutico puede comprender además un complejo de carga con portador polimérico, que comprende: a) (como un portador) un portador polimérico que comprende componentes catiónicos reticulados con disulfuro, de preferencia formados mediante componentes catiónicos reticulados con disulfuro, y b) (como una carga) al menos una molécula de ácido nucleico, como se define en cualquier lugar en la presente. En este contexto, la invención proporciona además el uso de los componentes incluidos en los paquetes farmacéuticos definidos anteriormente en el tratamiento de la enfermedad (indicación particular) seleccionada de una enfermedad infecciosa, una alergia o enfermedad alérgica, una enfermedad autoinmune o un cáncer o una enfermedad tumoral, como se definió anteriormente. La enfermedad respectiva puede ser una como se describe en cualquier lugar en la presente.
En la presente invención, si no se indica de otra manera, se pueden combinar entre si las diferentes características alternativas y modalidades, cuando sea adecuado .
Tomadas conjuntamente, en una modalidad preferida, la invención se relaciona con: una composición farmacéutica que comprende: un complejo de carga con un portador polimérico; y al menos de un antigeno proteinico o peptidico; o un fragmento, variante y/o derivado del antigeno proteinico o peptidico; en donde el complejo de carga comprende; un portador polimérico; de preferencia un portador polimérico que comprende componentes catiónicos reticulados con disulfuro, de preferencia formados por los componentes catiónicos reticulados con disulfuro, ; de mayor preferencia uno o más péptidos de acuerdo con la fórmula (I) (Arg) i; (Lys) m; (His) n; (Orn) Q; (Xaa) x como se definió anteriormente de mayor preferencia de acuerdo con la subfórmula (IA) o (IB) de la misma como se definió anteriormente; y al menos una molécula de ácido nucleico; de preferencia una molécula que comprenda ácido nucleico, de preferencia que consista de una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con la fórmula (II) GiXmGn, la fórmula (III) CiXmCn, la fórmula (IV) (NuGiXmGnNv) a o la fórmula (V) (NuCiXmCnNv) a como se definió anteriormente, tal como una molécula de ácido nucleico que comprende o que consiste de una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con cualquiera de las SEC ID NOs : 15-108 y 122 o una secuencia que es al menos 60%, de preferencia al menos 70%, de preferencia al menos 80%, de mayor preferencia al menos 90%, y con la máxima preferencia al menos 95% idéntica a cualquiera de las SEC ID NOs: 15-108 y 122, por ejemplo una molécula de ácido nucleico que comprende o consiste de una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con las SEC ID NOs: 105 ó 122 o una secuencia que sea al menos 60%, de mayor preferencia al menos 70%, de preferencia al menos 80%, de mayor preferencia al menos 90%, y con la máxima preferencia al menos 95% idéntica con las SEC ID NOs: 105 ó 122; o una molécula de ácido nucleico que codifica para un antigeno, de mayor preferencia una molécula de ácido nucleico que codifica para un antigeno que es el mismo antigeno que al menos un antigeno proteinico o peptídico.
En una modalidad preferida adicional, la invención se relaciona con: una composición farmacéutica que comprende: un complejo de carga con un portador polimérico; y al menos de un antígeno proteinico o peptídico; o un fragmento, variante y/o derivado de antígeno proteinico o peptídico; en donde el complejo de carga con portador polimérico comprende: un portador polimérico; de preferencia un portador polimérico que comprende componentes catiónicos reticulados con disulfuro, de preferencia formados por los componentes catiónicos reticulados con disulfuro; de mayor preferencia uno o más péptidos de acuerdo con la fórmula (I) (Arg) lf- (Lys ) m; (His ) n; (Orn) Q; (Xaa ) x como se definió anteriormente, de mayor preferencia de acuerdo con las subfórmula (IA) o (IB) de la misma, como se definió anteriormente ; y al menos una molécula de ácido nucleico; de preferencia un molécula de ácido nucleico que comprende, de preferencia que consiste de una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con la fórmula (II) GiXmGn, la fórmula (III) C]XmCn, la fórmula (IV) (NuGiXmGnNv) a o la fórmula (V) (NuCiXmCnNv) a como se definió anteriormente, tal como una molécula de ácido nucleico que comprende o que consiste de una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con cualquiera de las SEC ID NOs: 15-108 y 122 o una secuencia que es al menos 60%, de preferencia al menos 70%, de preferencia al menos 80%, de mayor preferencia al menos 90%, y con la máxima preferencia al menos 95% idéntica con cualquiera de las SEC ID NOs: 15-108 y 122, por ejemplo una molécula de ácido nucleico que comprende o que consiste de una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con las SEC ID NOs: 105 ó 122 o una secuencia que sea al menos 60%, de preferencia al menos 70%, de preferencia al menos 80%, de mayor preferencia al menos 90%, y con la máxima preferencia al menos 95% idéntica con las SEC ID NOs: 105 ó 122; o una molécula de ácido nucleico que codifica para un antigeno, de mayor preferencia una molécula de ácido nucleico que codifica para un antigeno que es el mismo antigeno como al menos un antigeno proteinico o peptidico; y en donde el antígeno proteinico o peptidico; o el fragmento, variante y/o derivado del antigeno proteinico o peptidico se seleccionan de; un antigeno proveniente de un patógeno asociado con una enfermedad infecciosa; un antigeno asociado con alergia o una enfermedad alérgica; un antigeno asociado con una enfermedad autoinmune; un antigeno asociado con un cáncer o una enfermedad tumoral .
En una modalidad preferida adicional, la invención se relaciona con una composición farmacéutica que comprende: un complejo de carga con un portador polimérico; y al menos de un antigeno proteinico o peptídico; o un fragmento, variante y/o derivado de antigeno proteinico o peptídico; en donde el complejo de carga con portador polimérico comprende: un portador polimérico; de preferencia un portador polimérico que comprende componentes catiónicos reticulados con disulfuro, de preferencia formados por los componentes catiónicos reticulados con disulfuro; de mayor preferencia uno o más péptidos de acuerdo con la fórmula (I) (Arg ) i ; (Lys ) m; ( His ) n; ( Orn ) Q; (Xaa ) x como se definió anteriormente, de mayor preferencia de acuerdo con la subfórmula (IA) o (IB) de la misma como se definió anteriormente ; y al menos una molécula de ácido nucleico; de preferencia un molécula de ácido nucleico que comprende, de preferencia que consiste de una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con la fórmula (II) GiXmGn, la fórmula (III) CiXmCn, la fórmula (IV) (NuGjXmGnNv) a o la fórmula (V) (NuCiXmCnNv) a como se definió anteriormente, como una molécula de ácido nucleico que comprende o que consiste de una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con cualquiera de las SEC ID NOs : 15-108 y 122 o una secuencia que es al menos 60%, de preferencia al menos 70%, de preferencia al menos 80%, de mayor preferencia al menos 90%, y con la máxima preferencia al menos 95% idéntica con cualquiera de las SEC ID NOs: 15-108 y 122, por ejemplo una molécula de ácido nucleico que comprende o que consiste de una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con las SEC ID NOs: 105 ó 122 o una secuencia que es al menos 60%, de preferencia al menos 70%, de preferencia al menos 80%, de mayor preferencia al menos 90%, y con la máxima preferencia al menos 95% idéntica con las SEC ID NOs: 105 ó 122; o una molécula de ácido nucleico que codifica para un antigeno, de mayor preferencia una molécula de ácido nucleico que codifica para un antigeno que es el mismo antígeno como al menos un antígeno proteínico o peptídico; en donde el antigeno proteínico o peptídico; o el fragmento, variante y/o derivado de antígeno proteínico o peptídico se seleccionan de: un antígeno proveniente de un patógeno asociado con una enfermedad infecciosa; un antígeno asociado con alergia o una enfermedad alérgica ; un antígeno asociado con una enfermedad autoinmune; un antígeno asociado con un cáncer o una enfermedad tumoral ; y de preferencia en donde el antígeno proteínico o peptídico y/o el fragmento, variante y/o derivado del antígeno proteínico o peptídico no está incluido en el complejo de carga con portador polimérico.
En una modalidad preferida adicional, la invención se relaciona con: una composición farmacéutica que comprende: un complejo de carga con un portador polimérico; y al menos de un antígeno proteínico o peptídico; o un fragmento, variante y/o derivado de antígeno proteínico o peptídico; en donde el complejo de carga con portador polimérico comprende: un portador polimérico; de preferencia un portador polimérico que comprende componentes catiónicos reticulados con disulfuro, de preferencia formados por los componentes catiónicos reticulados con disulfuro; de mayor preferencia uno o más péptidos de acuerdo con la fórmula (I) (Arg)i,- (Lys)m; (His)n; (0rn)O (Xaa)x como se definió anteriormente, de mayor preferencia de acuerdo con la subfórmula (IA) o (IB) de la misma como se definió anteriormente; y al menos una molécula de ácido nucleico; de preferencia un molécula de ácido nucleico que comprende, de preferencia que consiste de una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con la fórmula (II) G!XmGn, la fórmula (III) C]XmCn, la fórmula (IV) (NuGiXmGnNv) a o la fórmula (V) (NuCiXraCnNv) a como se definió anteriormente, tal como una molécula de ácido nucleico que comprende o que consiste de una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con cualquiera de las SEC ID NOs : 15-108 y 122 o una secuencia que es al menos 60%, de preferencia al menos 70%, de preferencia al menos 80%, de mayor preferencia al menos 90%, y con la máxima preferencia al menos 95% idéntica con cualquiera de las SEC ID NOs: 15-108 y 122, por ejemplo una molécula de ácido nucleico que comprende o que consiste de una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con las SEC ID NOs: 105 ó 122 o una secuencia que es al menos 60%, de preferencia al menos 70%, de preferencia al menos 80%, de mayor preferencia al menos 90%, y con la máxima preferencia al menos 95% idéntica con las SEC ID NOs: 105 ó 122; o una molécula de ácido nucleico que codifica para un antigeno, de mayor preferencia una molécula de ácido nucleico que codifica para un antigeno que es el mismo antigeno como al menos un antigeno proteínico o peptidico; en donde el antígeno proteínico o peptidico; o el fragmento, variante y/o derivado de antígeno proteínico o peptidico se selecciona de un antígeno proveniente de un patógeno asociado con una enfermedad infecciosa ; un antígeno proveniente de un patógeno asociado con una enfermedad infecciosa; un antígeno asociado con alergia o una enfermedad alérgica; un antígeno asociado con una enfermedad autoinmune; un antígeno asociado con un cáncer o una enfermedad tumoral ; de preferencia, un antígeno proveniente de un patógeno asociado con una enfermedad infecciosa; de mayor preferencia un antígeno proveniente de un patógeno seleccionado del virus de la Rabia, virus de Hepatitis B, virus de papiloma humano (hPV) , Bacillus anthracis, virus sincitial respiratorio (RSV) , virus de Herpes simplex (HSV) , virus de Influenza y Mycobacterium tuberculosis ; de mayor preferencia un antigeno proveniente de un patógeno seleccionado del virus de la Rabia, virus de Hepatitis B, virus de papiloma humano (hPV) ; y de preferencia en donde el antigeno proteinico o peptidico y/o el fragmento, variante y/o derivado del antigeno proteinico o peptidico no está incluido en el complejo de carga con portador polimérico.
En una modalidad preferida adicional, la invención se relaciona con: una composición farmacéutica que comprende: un complejo de carga con un portador polimérico; y al menos de un antigeno proteinico o peptidico; o un fragmento, variante y/o derivado de antigeno proteinico o peptidico; en donde el complejo de carga con portador polimérico comprende: un portador polimérico; de preferencia un portador polimérico que comprende componentes catiónicos reticulados con disulfuro, de preferencia formados por los componentes catiónicos reticulados con disulfuro; de mayor preferencia uno o más péptidos de acuerdo con la fórmula (I) (Arg) ( Lys ) n; (His ) n; (Orn) Q; (Xaa) x como se definió anteriormente, de mayor preferencia de acuerdo con la subfórmula (IA) o (IB) de la misma como se definió anteriormente ; y al menos una molécula de ácido nucleico; de preferencia un molécula de ácido nucleico que comprende, de preferencia que consiste de una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con la fórmula (II) GiXmGn, la fórmula (III) CiXmCn, la fórmula (IV) (NuGiXmG=Nv) a o la fórmula (V) (NuCiXmCnNv) a como se definió anteriormente, tal como una molécula de ácido nucleico que comprende o que consiste de una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con cualquiera de las SEC ID NOs : 15-108 y 122 o una secuencia que es al menos 60%, de preferencia al menos 70%, de preferencia al menos 80%, de mayor preferencia al menos 90%, y con la máxima preferencia al menos 95% idéntica con cualquiera de las SEC ID NOs: 15-108 y 122, por ejemplo una molécula de ácido nucleico que comprende o que consiste de una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con las SEC ID NOs: 105 ó 122 o una secuencia que sea al menos 60%, de preferencia al menos 70%, de preferencia al menos 80%, de mayor preferencia al menos 90%, y con la máxima preferencia al menos 95% idéntica con las SEC ID NOs: 105 ó 122; o una molécula de ácido nucleico que codifica para un antígeno, de mayor preferencia una molécula de ácido nucleico que codifica para un antigeno que es el mismo antígeno como al menos un antígeno proteínico o peptídico; y en donde el antigeno proteínico o peptídico o el fragmento, variante y/o derivado de antígeno proteínico o peptídico se selecciona de un antígeno proveniente de un patógeno asociado con una enfermedad infecciosa; un antígeno asociado con alergia o una enfermedad alérgica ; un antígeno asociado con una enfermedad autoinmune; un antígeno asociado con un cáncer o una enfermedad tumoral ; de preferencia un antígeno proveniente de un patógeno asociado con una enfermedad infecciosa; de mayor preferencia un antígeno proveniente de un patógeno seleccionado del virus de la Rabia, virus de Hepatitis B, virus de papiloma humano (hPV) , Bacillus anthracis, virus sincitial respiratorio (RSV) , virus de Herpes simplex (HSV) , virus de Influenza y Mycobacterium tuberculosis ; incluso de mayor preferencia un antigeno virus de la Rabia, de mayor preferencia un antigeno de virus de la rabia que se selecciona de la nucleoproteina (N) , la fosfoproteina (P), la proteina de matriz (M) , la glucoproteina (G) , y la Polimerasa de ARN viral (L) ; y de preferencia en donde el antigeno proteinico o peptidico y/o el fragmento, variante y/o derivado de antigeno proteinico o peptidico no está incluido en el complejo de carga con portador polimérico.
En una modalidad preferida adicional, la invención se relaciona con: una composición farmacéutica que comprende: un complejo de carga con un portador polimérico; y al menos de un antigeno proteinico o peptidico; o un fragmento, variante y/o derivado de antigeno proteinico o peptidico; en donde el complejo de carga con portador polimérico comprende: un portador polimérico; de preferencia un portador polimérico que comprende componentes catiónicos reticulados con disulfuro, de preferencia formados por los componentes catiónicos reticulados con disulfuro; de mayor preferencia uno o más péptidos de acuerdo con la fórmula (I) (Arg)i; (Lys)m; (His)n; (Orn)0; (Xaa)x como se definió anteriormente, de mayor preferencia de acuerdo con la subfórmula (IA) o (IB) de la misma, como se definió anteriormente, tal como una molécula de ácido nucleico que comprende o que consiste de una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con cualquiera de las SEC ID NOs : 15-108 y 122 o una secuencia que es al menos 60%, de preferencia al menos 70%, de preferencia al menos 80%, de mayor preferencia al menos 90%, y con la máxima preferencia al menos 95% idéntica con cualquiera de las SEC ID NOs: 15-108 y 122, por ejemplo una molécula de ácido nucleico que comprende o que consiste de una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con las SEC ID NOs: 105 ó 122 o una secuencia que es al menos 60%, de preferencia al menos 70%, de preferencia al menos 80%, de mayor preferencia al menos 90%, y con la máxima preferencia al menos 95% idéntica con las SEC ID NOs: 105 ó 122; y al menos una molécula de ácido nucleico; de preferencia un molécula de ácido nucleico que comprende, de preferencia que consiste de una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con la fórmula (II) GiXmGn, la fórmula (III) CiXmCn, la fórmula (IV) (NuGiXmGnNv) a o la fórmula (V) (NuCiXmCnNv) a como se definió anteriormente; o una molécula de ácido nucleico que codifica para un antigeno, de mayor preferencia una molécula de ácido nucleico que codifica para un antigeno que es el mismo antigeno que al menos un antigeno proteinico o peptídico; y en donde el antígeno proteinico o peptídico o el fragmento, variante y/o derivado de antígeno proteinico o peptídico se selecciona de un antígeno proveniente de un patógeno asociado con una enfermedad infecciosa; un antígeno asociado con alergia o una enfermedad alérgica ; un antígeno asociado con una enfermedad autoinmune; un antígeno asociado con un cáncer o una enfermedad tumoral ; de preferencia un antígeno proveniente de un patógeno asociado con una enfermedad infecciosa; de mayor preferencia un antígeno proveniente de un patógeno seleccionado del virus de la Rabia, virus de Hepatitis B, virus de papiloma humano (hPV) , Bacillus anthracis, virus sincitial respiratorio (RSV) , virus de Herpes simplex (HSV) , virus de Influenza y ycobacterium tuberculosis ; incluso de mayor preferencia un antígeno proveniente del virus de Hepatitis B, con la máxima preferencia un antígeno proveniente del virus Hepatitis B que se selecciona del antígeno superficial de Hepatitis B (HBsAg) , antígeno núcleo de Hepatitis B (HbcAg) , la ADN polimeasa del virus de Hepatitis B, la proteina HBx, la. proteina de superficie media preS2, la proteina S grande, la proteina viral VP1, la proteina viral VP2, la proteina viral VP3, y la proteina viral VP4; y de mayor preferencia, en donde el antigeno proteinico o peptidico y/o el fragmento, variante y/o derivado de antigeno proteinico o peptidico no está incluido en el complejo de carga con portador polimérico .
En una modalidad preferida adicional, la invención se relaciona con: una composición farmacéutica que comprende: un complejo de carga con un portador polimérico; y al menos de un antigeno proteinico o peptidico; o un fragmento, variante y/o derivado de antigeno proteinico o peptidico; en donde el complejo de carga con portador polimérico comprende: un portador polimérico; de preferencia un portador polimérico que comprende componentes catiónicos reticulados con disulfuro, de preferencia formados por los componentes catiónicos reticulados con disulfuro; de mayor preferencia uno o más péptidos de acuerdo con la fórmula (I) (Arg) x; (Lys ) m; (His ) n; (Orn) Q; (Xaa ) x como se definió anteriormente, de mayor preferencia de acuerdo con la subfórnula (IA) o (IB) de la misma, como se definió anteriormente ; y al menos una molécula de ácido nucleico; de preferencia un molécula de ácido nucleico que comprende, de preferencia que consiste de una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con la fórmula (II) GiXmGn, la fórmula (III) CiXmCn, la fórmula (IV) (NuGjXmGnNv) a o la fórmula (V) (NuCiXmCnNv) a como se definió anteriormente, tal como una molécula de ácido nucleico que comprende o que consiste de una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con cualquiera de las SEC ID NOs : 15-108 y 122 o una secuencia que es al menos 60%, de preferencia al menos 70%, de preferencia al menos 80%, de mayor preferencia al menos 90%, y con la máxima preferencia al menos 95% idéntica con cualquiera de las SEC ID NOs: 15-108 y 122, por ejemplo una molécula de ácido nucleico que comprende o que consiste de una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con las SEC ID NOs: 105 ó 122 o una secuencia que es al menos 60%, de preferencia al menos 70%, de preferencia al menos 80%, de mayor preferencia al menos 90%, y con la máxima preferencia al menos 95% idéntica con las SEC ID NOs: 105 ó 122; o una molécula de ácido nucleico que codifica para un antigeno, de mayor preferencia una molécula de ácido nucleico que codifica para un antigeno que es el mismo antigeno que al menos un antigeno proteinico o peptidico; y en donde el antigeno proteinico o peptidico o el fragmento, variante y/o derivado de antigeno proteinico o peptidico se selecciona de un antigeno proveniente de un patógeno asociado con una enfermedad infecciosa ; un antigeno asociado con alergia o una enfermedad alérgica ; un antigeno asociado con una enfermedad autoinmune; un antigeno asociado con un cáncer o una enfermedad tumoral ; de preferencia un antigeno proveniente de un patógeno asociado con una enfermedad infecciosa; de mayor preferencia un antigeno proveniente de un patógeno seleccionado del virus de la Rabia, virus de Hepatitis B, virus de papiloma humano (hPV) , Bacillus anthracis, virus sincitial respiratorio (RSV) , virus de Herpes simplex (HSV) , virus de Influenza y Mycobacterium tuberculosis ; incluso de mayor preferencia un antigeno proveniente del virus de Influenza, de mayor preferencia un antigeno proveniente del virus de Influenza que se selecciona de la Hemaglutinina (HA) , la Neuraminidasa (NA) , la Nucleoproteína (NP) , la proteína MI, la proteína M2, la proteína NS1, la proteína NS2 (la proteína NEP: proteína de exportación nuclear) , la proteína PA, la proteína PB1 (proteína de polimerasa básica 1), la proteína PB1-F2 y la proteína PB2 del virus de Influenza; y de preferencia en donde el antígeno proteínico o peptídico y/o el fragmento, variante y/o derivado de antígeno proteínico o peptídico no está incluido en el complejo de carga con portador polimérico.
En una modalidad preferida adicional, la invención se relaciona con: una composición farmacéutica que comprende: un complejo de carga con un portador polimérico; y al menos de un antígeno proteínico o peptídico; o un fragmento, variante y/o derivado de antígeno proteínico o peptídico; en donde el complejo de carga con portador polimérico comprende: un portador polimérico; de preferencia un portador polimérico que comprende componentes catiónicos reticulados con disulfuro, de preferencia formados por los componentes catiónicos reticulados con disulfuro; de mayor preferencia uno o más péptidos de acuerdo con la fórmula (I) (Arg) i; (Lys)m; (His) n; (Orn) o; (Xaa) x como se definió anteriormente, de mayor preferencia de acuerdo con la subfórmula (IA) o (IB) de la misma, como se definió anteriormente; y al menos una molécula de ácido nucleico; de preferencia un molécula de ácido nucleico que comprende, de preferencia que consiste de una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con la fórmula (II) GiXmGn, la fórmula (III) CiXmCn, la fórmula (IV) (NuGiXmGnNv) a o la fórmula (V) (NuCiXmCnNv) a como se definió anteriormente, como una molécula de ácido nucleico que comprende o que consiste de una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con cualquiera de las SEC ID NOs : 15-108 y 122 o una secuencia que es al menos 60%, de preferencia al menos 70%, de preferencia al menos 80%, de mayor preferencia al menos 90%, y con la máxima preferencia al menos 95% idéntica con cualquiera de las SEC ID NOs: 15-108 y 122, por ejemplo una molécula de ácido nucleico que comprende o que consiste de una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con las SEC ID NOs: 105 ó 122 o una secuencia que es al menos 60%, de preferencia al menos 70%, de preferencia al menos 80%, de mayor preferencia al menos 90%, y con la máxima preferencia al menos 95% idéntica con las SEC ID NOs: 105 ó 122; o una molécula de ácido nucleico que codifica para un antigeno, de mayor preferencia una molécula de ácido nucleico que codifica para un antigeno que es el mismo antigeno que al menos un antigeno proteinico o peptidico; y en donde el antigeno proteinico o peptidico; o el fragmento, variante y/o derivado de antigeno proteinico o peptidico se selecciona de un antigeno proveniente de un patógeno asociado con una enfermedad infecciosa ; un antigeno asociado con alergia o una enfermedad alérgica ; un antigeno asociado con una enfermedad autoinmune; un antigeno asociado con un cáncer o una enfermedad tumoral ; de preferencia un antigeno proveniente de un patógeno asociado con una enfermedad infecciosa; de preferencia un antigeno proveniente de un patógeno seleccionado del virus de la Rabia, virus de Hepatitis B, virus de papiloma humano (hPV) , Bacillus anthracis, virus sincitial respiratorio (RSV) , virus de Herpes simplex (HSV) , virus de Influenza y Mycobacterium tuberculosis ; de mayor preferencia un antigeno proveniente del virus de papiloma humano (hPV) , incluso de mayor preferencia un antígeno proveniente del virus de papiloma humano (hPV) que se selecciona de la proteina El, la proteina E2, la proteina E3, la proteina E4, la proteina E5, la proteina E6, la proteina E7, la proteina E8, la proteina Ll, y la proteina L2; y de preferencia en donde el antigeno proteinico o peptidico y/o el fragmento, variante y/o derivado de antigeno proteinico o peptidico no está incluido en el complejo de carga con portador polimérico.
En una modalidad preferida adicional, la invención se relaciona con: una composición farmacéutica que comprende: un complejo de carga con un portador polimérico; y al menos de un antigeno proteinico o peptidico; o un fragmento, variante y/o derivado de antigeno proteinico o peptidico; en donde el complejo de carga con portador polimérico comprende: un portador polimérico; de preferencia un portador polimérico que comprende componentes catiónicos reticulados con disulfuro, de preferencia formados por los componentes catiónicos reticulados con disulfuro; de mayor preferencia uno o más péptidos de acuerdo con la fórmula (I) (Arg) i; (Lys ) m; (His) n; (Orn) 0; (Xaa) x como se definió anteriormente, de mayor preferencia de acuerdo con la subfórmula (IA) o (IB) de la misma, como se definió anteriormente ; y al menos una molécula de ácido nucleico; de preferencia un molécula de ácido nucleico que comprende, de preferencia que consiste de una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con la fórmula (II) GiXmGn, la fórmula (III) CiXmCn, la fórmula (IV) (NuGiXmGnNv) a o la fórmula (V) (NuCiXmCnNv) a como se definió anteriormente, como una molécula de ácido nucleico que comprende o que consiste de una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con cualquiera de las SEC ID NOs : 15-108 y 122 o una secuencia que es al menos 60%, de preferencia al menos 70%, de preferencia al menos 80%, de mayor preferencia al menos 90%, y con la máxima preferencia al menos 95% idéntica con cualquiera de las SEC ID NOs: 15-108 y 122, por ejemplo una molécula de ácido nucleico que comprende o que consiste de una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con las SEC ID NOs: 105 ó 122 o una secuencia que es al menos 60%, de preferencia al menos 70%, de preferencia al menos 80%, de mayor preferencia al menos 90%, y con la máxima preferencia al menos 95% idéntica con las SEC ID NOs: 105 ó 122; o una molécula de ácido nucleico que codifica para un antígeno, de mayor preferencia una molécula de ácido nucleico que codifica para un antigeno que es el mismo antigeno que al menos un antigeno proteinico o peptidico; y en donde el antigeno proteinico o peptidico; o el fragmento, variante y/o derivado de antigeno proteinico o peptidico se selecciona de un antigeno proveniente de un patógeno asociado con una enfermedad infecciosa ; un antigeno asociado con alergia o una enfermedad alérgica ; un antigeno asociado con una enfermedad autoinmune; un antigeno asociado con un cáncer o una enfermedad tumoral ; de preferencia un antigeno proveniente de un patógeno asociado con una enfermedad infecciosa; de preferencia un antigeno proveniente de un patógeno seleccionado del virus de la Rabia, virus de Hepatitis B, virus de papiloma humano (hPV) , Bacillus anthracis, virus sincitial respiratorio (RSV), virus de Herpes simplex (HSV) , virus de Influenza y ycobacterium tuberculosis ; de mayor preferencia un antigeno del Bacillus anthracis, incluso de mayor preferencia un antigeno de Bacillus anthracis que se selecciona del antigeno protector (PA), factor del edema (EF) , factor letal (LF) , y las proteínas de homología con capa S (SLH) ; y de preferencia en donde el antígeno proteínico o peptídico y/o el fragmento, variante y/o derivado de antígeno proteínico o peptídico no está incluido en el complejo de carga con portador polimérico.
En una modalidad preferida adicional, la invención se relaciona con: una composición farmacéutica que comprende: un complejo de carga con un portador polimérico; y al menos de un antígeno proteínico o peptídico; o un fragmento, variante y/o derivado de antígeno proteínico o peptídico; en donde el complejo de carga con portador polimérico comprende: un portador polimérico; de preferencia un portador polimérico que comprende componentes catiónicos reticulados con disulfuro, de preferencia formados por los componentes catiónicos reticulados con disulfuro; de mayor preferencia uno o más péptidos de acuerdo con la fórmula (I) (Arg) x; (Lys ) m; (His ) n; (Orn) Q; (Xaa ) x como se definió anteriormente, de mayor preferencia de acuerdo con la subfórmula (IA) o (IB) de la misma, como se definió anteriormente ; y al menos una molécula de ácido nucleico; de preferencia un molécula de ácido nucleico que comprende, de preferencia que consiste de una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con la fórmula (II) GiXmGn, la fórmula (III) CiXmCn, la fórmula (IV) (NuGiXmGnNv) a o la fórmula (V) (NuCiXmCnNv) a como se definió anteriormente, como una molécula de ácido nucleico que comprende o que consiste de una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con cualquiera de las SEC ID NOs : 15-108 y 122 o una secuencia que es al menos 60%, de preferencia al menos 70%, de preferencia al menos 80%, de mayor preferencia al menos 90%, y con la máxima preferencia al menos 95% idéntica con cualquiera de las SEC ID NOs: 15-108 y 122, por ejemplo una molécula de ácido nucleico que comprende o que consiste de una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con las SEC ID NOs: 105 ó 122 o una secuencia que es al menos 60%, de preferencia al menos 70%, de preferencia al menos 80%, de mayor preferencia al menos 90%, y con la máxima preferencia al menos 95% idéntica con las SEC ID NOs: 105 ó 122; o una molécula de ácido nucleico que codifica para un antigeno, de mayor preferencia una molécula de ácido nucleico que codifica para un antigeno que es el mismo antigeno que al menos un antigeno proteínico o peptidico; y en donde el antígeno proteínico o peptídico; o el fragmento, variante y/o derivado de antígeno proteínico o peptídico se selecciona de un antígeno proveniente de un patógeno asociado con una enfermedad infecciosa ; un antígeno asociado con alergia o una enfermedad alérgica ; un antígeno asociado con una enfermedad autoinmune; un antígeno asociado con un cáncer o una enfermedad tumoral ; de preferencia un antígeno proveniente de un patógeno asociado con una enfermedad infecciosa; de mayor preferencia un antígeno proveniente de un patógeno seleccionado del virus de la Rabia, virus de Hepatitis B, virus de papiloma humano (hPV) , Bacillus anthracis, virus sincitial respiratorio (RSV) , virus de Herpes simplex (HSV) , virus de Influenza y Mycobacterium tuberculosis ; incluso de mayor preferencia un antígeno proveniente del virus sincitial respiratorio (RSV) ; de mayor preferencia un antígeno proveniente del virus sincitial respiratorio (RSV) que se selecciona de la proteína fusión (F), la nucleocápside (N) la proteína, la fosfoproteína (P), la proteína de matriz (M) , la glucoproteina (G) , la proteína grande (L; ARN polimerasa) , la proteína 1 no estructural (NS1), la proteina 2 no estructural ( S2) , la proteína hidrofóbica pequeña (SH) , el factor de alargamiento M2-1, y la proteína para regulación de transcripción M2-2; y de preferencia en donde el antígeno proteínico o peptídico y/o el fragmento, variante y/o derivado de antígeno proteínico o peptídico no está incluido en el complejo de carga con portador polimérico.
En una modalidad preferida adicional, la invención se relaciona con: una composición farmacéutica que comprende: un complejo de carga con un portador polimérico; y al menos de un antígeno proteínico o peptídico; o un fragmento, variante y/o derivado de antígeno proteínico o peptídico; en donde el complejo de carga con portador polimérico comprende: un portador polimérico; de preferencia un portador polimérico que comprende componentes catiónicos reticulados con disulfuro, de preferencia formados por los componentes catiónicos reticulados con disulfuro; de mayor preferencia uno o más péptidos de acuerdo con la fórmula (I) (Arg) i ; (Lys ) m; (His ) n; (Orn) Q; (Xaa) x como se definió anteriormente, de mayor preferencia de acuerdo con la subfórmula (IA) o (IB) de la misma, como se definió anteriormente ; y al menos una molécula de ácido nucleico; de preferencia un molécula de ácido nucleico que comprende, de preferencia que consiste de una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con la fórmula (II) GiXmGn, la fórmula (III) CiXmCn, la fórmula (IV) (NuG]XmGnNv) a o la fórmula (V) (NuC]XmCnNv) a como se definió anteriormente, como una molécula de ácido nucleico que comprende o que consiste de una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con cualquiera de las SEC ID NOs : 15-108 y 122 o una secuencia que es al menos 60%, de preferencia al menos 70%, de preferencia al menos 80%, de mayor preferencia al menos 90%, y con la máxima preferencia al menos 95% idéntica con cualquiera de las SEC ID NOs: 15-108 y 122, por ejemplo una molécula de ácido nucleico que comprende o que consiste de una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con las SEC ID NOs: 105 ó 122 o una secuencia que es al menos 60%, de preferencia al menos 70%, de preferencia al menos 80%, de mayor preferencia al menos 90%, y con la máxima preferencia al menos 95% idéntica con las SEC ID NOs: 105 ó 122; o una molécula de ácido nucleico que codifica para un antígeno, de mayor preferencia una molécula de ácido nucleico que codifica para un antigeno que es el mismo antigeno que al menos un antigeno proteinico o peptidico; y en donde el antigeno proteinico o peptidico; o el fragmento, variante y/o derivado de antigeno proteinico o peptidico se selecciona de un antigeno proveniente de un patógeno asociado con una enfermedad infecciosa ; un antigeno asociado con alergia o una enfermedad alérgica ; un antigeno asociado con una enfermedad autoinmune; un antigeno asociado con un cáncer o una enfermedad tumoral ; de preferencia un antigeno proveniente de un patógeno asociado con una enfermedad infecciosa; de mayor preferencia un antigeno proveniente de un patógeno seleccionado del virus de la Rabia, virus de Hepatitis B, virus de papiloma humano (hPV) , Bacillus anthracis, virus sincitial respiratorio (RSV) , virus de Herpes simplex (HSV) , virus de Influenza y Mycobacterium tuberculosis ; incluso de mayor preferencia un antigeno proveniente del virus de Herpes simplex (HSV) ; de mayor preferencia un antigeno proveniente del virus de Herpes simplex (HSV) que se selecciona de la glucoproteina L (UL1), uracil-ADN glucosidasa UL2, proteína UL3, proteína UL4, proteína para replicación de ADN UL5, proteína portal UL6, proteína para maduración de viriones UL7, el helicase de ADN UL8, la Repetición la proteína origen-obligatoria UL9, glucoproteina M (UL10), la proteína UL11, la exonucleasa alcalina UL12, serina-treonina proteína quinasa UL13, la proteína con tegumento UL14, la terminasa (UL15) , la proteína con tegumento UL16, la proteína de UL17, la proteína de Cápside VP23 (UL18), la proteína del cápside Mayor VP5 (UL19), la proteína de membrana UL20, la proteína con tegumento UL21, la glucoproteina H (UL22) , la timidina Quinasa UL23, la proteína UL24, la proteína UL25, la proteína de cápside P40 (UL26, VP24, VP22A) , la glucoproteina B (UL27), la proteína de ICP18.5 (UL28), la proteína de unión a ADN mayor ICP8 (UL29), la polimerasa de ADN UL30, la proteína de matriz nuclear UL31, la glucoproteina UL32 con envoltura, la proteína de UL33, la proteína de la membrana nuclear interna UL34, la proteína VP26 con cápside (UL35), la proteína UL36 con tegumento grande, la proteína UL37 de ensamble con cápside, la proteína VP19C (UL38), la ribonucleótido reductasa (subunidad grande) UL39, la ribonucleótido reductasa (subunidad pequeña) UL40, la proteína con tegumento/proteína VHS de interrupción en hospederos viriónicos (UL41) , el factor de procesabilidad de ADN polimerasa UL42, la proteína membranosa UL43, la glucoproteina C (UL44), la proteína membranosa UL45, la proteína con tegumento VPll/12 (UL46) , la proteína con tegumento VP13/14 (UL47), la proteína para maduración de viriones VP16 (UL48, Alpha-TIF) , la proteína con envoltura UL49, la dUTP difosfatasa UL50, la proteína con tegumento UL51, la proteína del complejo de ADN helicasa/primasa UL52, la glucoproteina K (UL53), la proteína para regulación transcripcional IE63 (ICP27, UL54), la proteína UL55, la proteína UL56, la proteína para replicación viral ICP22 (IE68, US1) , la proteína US2, serina/treonina-proteína quinasa US3, la glucoproteina G (US4), glucoproteina J (US5), la glucoproteina D (US6), la glucoproteina I (US7), la glucoproteina E (US8), la proteína con tegumento US9, la proteína con cápside/tegumento US10, la proteína Vmw21 (US11), la proteína ICP47 (IE12, US12), el activador transcripcional mayor ICP4 (IE175, RS1), la E3 ubiquitina ligasa ICPO (IE110), la proteína 1 latencia relacionada (LRP1) , la proteína 2 latencia relacionada (LRP2), el factor RL1 de neurovirulencia (ICP34.5) y la transcripción latencia asociada (LAT) ; y de preferencia en donde el antígeno proteínico o peptídico y/o el fragmento, variante y/o derivado de antígeno proteínico o peptidico no está incluido en el complejo de carga con portador polimérico.
En una modalidad preferida adicional, la invención se relaciona con: una composición farmacéutica que comprende: un complejo de carga con un portador polimérico; y al menos de un antigeno proteínico o peptidico; o un fragmento, variante y/o derivado de antígeno proteínico o peptidico; en donde el complejo de carga con portador polimérico comprende: un portador polimérico; de preferencia un portador polimérico que comprende componentes catiónicos reticulados con disulfuro, de preferencia formados por los componentes catiónicos reticulados con disulfuro; de mayor preferencia uno o más péptidos de acuerdo con la fórmula (I) (Arg) i ; (Lys ) m; (His ) n; (Orn) Q; (Xaa ) x como se definió anteriormente, de mayor preferencia de acuerdo con la subfórmula (IA) o (IB) de la misma, como se definió anteriormente ; y al menos una molécula de ácido nucleico; de preferencia un molécula de ácido nucleico que comprende, de preferencia que consiste de una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con la fórmula (II) G!XmGn, la fórmula (III) CiXmCn, la fórmula (IV) (NuG]XmGnNv) a o la fórmula (V) (NuCiXmCnNv) a como se definió anteriormente, como una molécula de ácido nucleico que comprende o que consiste de una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con cualquiera de las SEC ID NOs : 15-108 y 122 o una secuencia que es al menos 60%, de preferencia al menos 70%, de preferencia al menos 80%, de mayor preferencia al menos 90%, y con la máxima preferencia al menos 95% idéntica con cualquiera de las SEC ID NOs: 15-108 y 122, por ejemplo una molécula de ácido nucleico que comprende o que consiste de una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con las SEC ID NOs: 105 ó 122 o una secuencia que es al menos 60%, de preferencia al menos 70%, de preferencia al menos 80%, de mayor preferencia al menos 90%, y con la máxima preferencia al menos 95% idéntica con las SEC ID NOs: 105 ó 122; o una molécula de ácido nucleico que codifica para un antigeno, de mayor preferencia una molécula de ácido nucleico que codifica para un antigeno que es el mismo antigeno que al menos un antigeno proteinico o peptidico; y en donde el antigeno proteinico o peptidico o el fragmento, variante y/o derivado de antigeno proteinico o peptidico se selecciona de un antigeno proveniente de un patógeno asociado con una enfermedad infecciosa ; un antígeno asociado con alergia o una enfermedad alérgica ; un antígeno asociado con una enfermedad autoinmune; un antígeno asociado con un cáncer o una enfermedad tumoral ; de preferencia un antígeno proveniente de un patógeno asociado con una enfermedad infecciosa; de mayor preferencia un antígeno proveniente de un patógeno seleccionado del virus de la Rabia, virus de Hepatitis B, virus de papiloma humano (hPV) , Bacillus anthracis, virus sincitial respiratorio (RSV) , virus de Herpes simplex (HSV) , y Mycobacterium tuberculosis; incluso de mayor preferencia un antígeno de la Mycobacterium tuberculosis; de mayor preferencia un antígeno de Mycobacterium tuberculosis que se selecciona de la proteína de ESAT-6, la proteína de ESX-1, la proteína de CFP10, la proteína de TB10.4, la proteína de MPT63, la proteína de MPT64, la proteína de MPT83, la proteína de MTB12, la proteína de MTB8 , la proteína de AG85A, la proteína de AG85B, las proteínas similares a Rpf, la proteína de KATG, la proteína de PPE18 , la proteína de MTB32, la proteína de MTB39, la cristalina, la proteína de HSP65, la proteína de PST-S, y la proteína de HBHA, el antígeno filtrado de 10 kDa EsxB, la serina proteasa PepA, la proteína de unión a fibronectina D FbpD, la proteína secretada MPT51, la lipoproteina de unión a fosfato periplásmico PSTS1 (PBP-1), la lipoproteina de unión a fosfato periplásmico PSTS3 (PBP-3, Phos-1), la proteína de la familia PPE PPE14 , la proteína de la familia PPE PPE68 , la proteína MTB72F, la chaperona molecular DnaK, la lipoproteina de superficie celular MPT83, la lipoproteina P23, la proteína permeasa del sistema de transporte de fosfato PstA, el antígeno 14 kDa, la proteína C de unión a fibronectina FbpCl, la alanina deshidrogenasa TB43, y la glutamina sintasa 1; y de preferencia en donde el antígeno proteínico o peptídico y/o fragmento, variante y/o derivado de antígeno proteínico o peptídico no está incluido en el complejo de carga con portador polimérico.
En una modalidad preferida adicional, la invención se relaciona con: una composición farmacéutica que comprende: un complejo de carga con un portador polimérico; y al menos de un antígeno proteínico o peptídico; o un fragmento, variante y/o derivado de antígeno proteínico o peptídico; en donde el complejo de carga con portador polimérico comprende: un portador polimérico; de preferencia un portador polimérico que comprende componentes catiónicos reticulados con disulfuro, de preferencia formados por los componentes catiónicos reticulados con disulfuro; de mayor preferencia uno o más péptidos de acuerdo con la fórmula (I) (Arg) i; (Lys ) m; (His ) n; (Orn) 0; (Xaa) x como se definió anteriormente, de mayor preferencia de acuerdo con la subfórmula (IA) o (IB) de la misma, como se definió anteriormente; y al menos una molécula de ácido nucleico; de preferencia un molécula de ácido nucleico que comprende, de preferencia que consiste de una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con la fórmula (II) GiXmGn, la fórmula (III) CiXmCn, la fórmula (IV) (NuGiXmGnNv) a o la fórmula (V) ( uC:XmCnNv) a como se definió anteriormente, como una molécula de ácido nucleico que comprende o que consiste de una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con cualquiera de las SEC ID NOs : 15-108 y 122 o una secuencia que es al menos 60%, de preferencia al menos 70%, de preferencia al menos 80%, de mayor preferencia al menos 90%, y con la máxima preferencia al menos 95% idéntica con cualquiera de las SEC ID NOs: 15-108 y 122, por ejemplo una molécula de ácido nucleico que comprende o que consiste de una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con las SEC ID NOs: 105 ó 122 o una secuencia que es al menos 60%, de preferencia al menos 70%, de preferencia al menos 80%, de mayor preferencia al menos 90%, y con la máxima preferencia al menos 95% idéntica con las SEC ID NOs: 105 ó 122; o una molécula de ácido nucleico que codifica para un antigeno, de mayor preferencia una molécula de ácido nucleico que codifica para un antigeno que es el mismo antigeno que al menos un antigeno proteinico o peptidico; y en donde el antigeno proteinico o peptidico o el fragmento, variante y/o derivado de antigeno proteinico o peptidico se selecciona de un antigeno proveniente de un patógeno asociado con una enfermedad infecciosa ; un antigeno asociado con alergia o una enfermedad alérgica; un antigeno asociado con una enfermedad autoinmune; un antigeno asociado con un cáncer o una enfermedad tumoral ; de preferencia un antigeno proteinico o peptidico que son asociado con alergia o una enfermedad alérgica y derivaron de una fuente seleccionaron de la lista que consiste de: el polen de pasto, el polen de árboles, polen de flores, polen de hierbas, ácaro del polvo, moho, animales, alimentos, y veneno del insecto, de preferencia el polen de árbol, el polen de flor, polen de hierba polvo ácaro, alimento, y veneno de insecto, con la máxima preferencia un alérgeno como se listó anteriormente; y de preferencia en donde el antigeno proteinico o peptidico y/o fragmento, variante y/o derivado de antigeno proteinico o peptidico no está incluido en el complejo de carga con portador polimérico.
En una modalidad preferida adicional, la invención se relaciona con: una composición farmacéutica que comprende: un complejo de carga con un portador polimérico; y al menos de un antigeno proteinico o peptidico; o un fragmento, variante y/o derivado de antigeno proteinico o peptidico; en donde el complejo de carga con portador polimérico comprende: un portador polimérico; de preferencia un portador polimérico formado por los componentes catiónicos reticulados con disulfuro; de mayor preferencia uno o más péptidos de acuerdo con la fórmula (I) (Arg) ±; (Lys) m; (His) n; (Orn) 0; (Xaa) x como se definió anteriormente, de mayor preferencia de acuerdo con la subfórmula (IA) o (IB) de la misma, como se definió anteriormente; y al menos una molécula de ácido nucleico; de preferencia un molécula de ácido nucleico que comprende, de preferencia que consiste de una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con la fórmula (II) GiXmGn, la fórmula (III) CiXmCn, la fórmula (IV) (NuGiXmGnNv) a o la fórmula (V) (NuCiXmCnNv) a como se definió anteriormente, como una molécula de ácido nucleico que comprende o que consiste de una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con cualquiera de las SEC ID NOs : 15-108 y 122 o una secuencia que es al menos 60%, de preferencia al menos 70%, de preferencia al menos 80%, de mayor preferencia al menos 90%, y con la máxima preferencia al menos 95% idéntica con cualquiera de las SEC ID NOs: 15-108 y 122, por ejemplo una molécula de ácido nucleico que comprende o que consiste de una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con las SEC ID NOs: 105 ó 122 o una secuencia que es al menos 60%, de preferencia al menos 70%, de preferencia al menos 80%, de mayor preferencia al menos 90%, y con la máxima preferencia al menos 95% idéntica con las SEC ID NOs: 105 ó 122; o una molécula de ácido nucleico que codifica para un antigeno, de mayor preferencia una molécula de ácido nucleico que codifica para un antigeno que es el mismo antigeno que al menos un antigeno proteinico o peptidico; y en donde el antigeno proteinico o peptidico; o el fragmento, variante y/o derivado de antigeno proteinico o peptidico se selecciona de un antigeno proveniente de un patógeno asociado con una enfermedad infecciosa ; un antigeno asociado con alergia o una enfermedad alérgica ; un antigeno asociado con una enfermedad autoinmune; un antigeno asociado con un cáncer o una enfermedad tumoral ; de preferencia un antigeno asociado con una enfermedad autoinmune; de mayor preferencia un antigeno asociado con la esclerosis múltile (MS) ; diabetes Tipo I; la uveitis autoinmune; la Myasthenia gravis; la fiebre reumática; la artritis; el síndrome de Sjógren; el lupus eritematoso; aterosclerosis ; la cardiomiopatía dilatada idiopática (DCM); miositis o escleroderma ; incluso de mayor preferencia un antígeno seleccionado de mielina que comprende proteína de mielina básica (MBP) , proteína proteolipídica (PLP), y glucoproteína de mielina oligodendrocítica (MOG) , CD44, preproinsulina, proinsulina, insulina, la decroxilasa de ácido glutámico (GAD65), antígeno 2 de insulinoma similar a tirosina fosfatasa (IA2), transportador de zinc ((ZnT8), y proteina 60 de choque térmico (HSP60), proteina de unión al ínterfotorreceptor retinoide (IRBP), receptor del aetilcolina AchR, y receptor del factor-1 de crecimiento similar a insulina (IGF-lR), proteína M proveniente de estreptococos beta-hemolíticos (pseudo-autoantígeno ) , factor inhibidor de la migración de macrófagos, complejo de Ro/La RNP, alfa- y beta-fodrina , autoantígeno células insulares, poly (ADP ) ribosa polimerasa (PARP) , NuMA, NOR-90, autoantígeno Ro60, y antígeno p27, autoantígeno de Ro60, lipoproteínas de baja densidad, los antigenos Sm del complejo de ríbonucleoproteina nuclear pequeña U-l (?/?' , DI, D2, D3, E, F, G) , y ribonucleoproteínas RNP, oxLDL, beta(2)GPI, HSP60/65, y oxLDL/beta ( 2 ) GPI , el receptor del beta ( 1 ) -adrenérgico cardíaco, histidil-ARNt sintetasa (HisRS) , topoisomerasa I, IL-17; o proteínas de choque térmico; y de preferencia en donde el antígeno proteínico o peptídico y/o el fragmento, variante y/o derivado de antígeno proteínico o peptídico no está incluido en el complejo de carga con portador polimérico.
El antígeno proporcionado está asociado con una enfermedad autoinmune, y se puede preferir además si el antígeno es un idiotipo de inmunoglobulina o un idiotipo del receptor de células T de una célula linfoide, de preferencia de una célula B o una célula T. Estas células linfoides, por ejemplo las células B o las células T pueden ser responsables de la destrucción de células corporales, tales como por ejemplo, células beta-pancreáticas, si se programan erróneamente para reconocer y luchar con los auto-epitopes del cuerpo. En este contexto, se puede entender que un idiotipo de inmunoglobulina será un péptido o proteina que tenga la forma molecular particular de la región variable de una inmunoglobulina expresada por un tipo particular de células B. Este idiotipo se puede utilizar como un antigeno para producir una respuesta inmunitaria dirigida contra este tipo particular de células B, por ejemplo contra células B malignas. Un idiotipo del receptor de células T se puede entender que será un péptido o proteina que tenga la forma molecular particular de la región variable de un receptor de células T expresado por un tipo particular de células T. Este idiotipo se puede utilizar como un antigeno para producir una respuesta inmunitaria dirigida contra este tipo particular de células T, por ejemplo contra células T malignas. La composición farmacéutica inventiva se puede utilizar, por ejemplo, para vacunación contra estas células linfoides mal programadas. Por ejemplo, el tratamiento de un paciente que padece de una enfermedad autoinmune, tal como por ejemplo, diabetes, enfermedad de Crohn, esclerosis múltiple o lo semejante, se puede presentar por la destrucción de células linfoides con mal funcionamiento que atacan al propio cuerpo y la posterior vacunación con la composición farmacéutica inventiva .
En una modalidad preferida adicional, la invención se relaciona con: una composición farmacéutica que comprende: un complejo de carga con un portador polimérico; y al menos de un antigeno proteinico o peptidico; o un fragmento, variante y/o derivado de antigeno proteinico o peptidico; en donde el complejo de carga con portador polimérico comprende: un portador polimérico; de preferencia un portador polimérico que comprende componentes catiónicos reticulados con disulfuro, de preferencia formados por los componentes catiónicos reticulados con disulfuro; de mayor preferencia uno o más péptidos de acuerdo con la fórmula (I) (Arg) i; (Lys) m; (His) n; (Orn) 0; (Xaa) x como se definió anteriormente, de mayor preferencia de acuerdo con la subfórmula (IA) o (IB) de la misma, como se definió anteriormente ; y al menos una molécula de ácido nucleico; de preferencia un molécula de ácido nucleico que comprende, de preferencia que consiste de una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con la fórmula (II) GiXmGn, la fórmula (III) CiXmCn la fórmula (IV) (NuG]XmGnNv) a o la fórmula (V) ( uCjXmCnNv) a como se definió anteriormente, como una molécula de ácido nucleico que comprende o que consiste de una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con cualquiera de las SEC ID NOs : 15-108 y 122 o una secuencia que es al menos 60%, de preferencia al menos 70%, de preferencia al menos 80%, de mayor preferencia al menos 90%, y con la máxima preferencia al menos 95% idéntica con cualquiera de las SEC ID NOs: 15-108 y 122, por ejemplo una molécula de ácido nucleico que comprende o que consiste de una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con las SEC ID NOs: 105 ó 122 o una secuencia que es al menos 60%, de preferencia al menos 70%, de preferencia al menos 80%, de mayor preferencia al menos 90%, y con la máxima preferencia al menos 95% idéntica con las SEC ID NOs: 105 ó 122; o una molécula de ácido nucleico que codifica para un antígeno, de mayor preferencia una molécula de ácido nucleico que codifica para un antígeno que es el mismo antígeno que al menos un antígeno proteínico o peptidico; y en donde el antígeno proteínico o peptidico o el fragmento, variante y/o derivado de antígeno proteinico o peptídico se selecciona de un antigeno proveniente de un patógeno asociado con una enfermedad infecciosa ; un antigeno asociado con alergia o una enfermedad alérgica ; un antigeno asociado con una enfermedad autoinmune; un antigeno asociado con un cáncer o una enfermedad tumoral ; de preferencia un antigeno asociado con un cáncer o una enfermedad tumoral, de mayor preferencia un antigeno seleccionado de p53, CA125, EGFR, Her2/neu, hTERT, PAP, MAGE-Al, MAGE-A3, Mesothelin, MUC-1, NY-ESO-1, GP100, MERCADO-1, Tyrosinase, PSA, PSCA, PSMA VEGF, VEGFR1 , VEGFR2 , Ras, CEA y WT1; y de preferencia en donde el antigeno proteinico o peptídico y/o el fragmento, variante y/o derivado de antígeno proteinico o peptídico no está incluido en el complejo de carga con portador polimérico.
En cada una de estas modalidades, el complejo de carga con portador polimérico de preferencia es para utilizarse como un adyuvante, en donde, de mayor preferencia, al menos una molécula de ácido nucleico es un ácido nucleico inmunoestimulador como se define en la presente, incluso de mayor preferencia al menos una molécula de ácido nucleico es ARN, de mayor preferencia un ARN inmunoestimulador (ARNis) . Las cargas de ácido nucleico particularmente preferidas, en el contexto de la presente invención son moléculas de ácido nucleico que comprenden o que consisten de una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con las SEC ID NOs: 105 ó 122 o una secuencia de ácido nucleico que sea al menos 60%, de preferencia al menos 70%, de preferencia al menos 80%, de mayor preferencia al menos 90%, y con la máxima preferencia al menos 95% idéntica con las SEC ID NOs: 105 ó 122.
Además, en cada una de estas modalidades, el complejo de carga con portador polimérico puede ser un complejo de carga con un portador polimérico en donde los componentes catiónicos del portador polimérico y la carga de moléculas de ácido nucleico y el complejo de carga con portador polimérico se proporciona en una proporción de N/P en la variación de 0.1-20, o en la variación de 0.1-5, o en la variación de 0.1-1, o en la variación de 0.5-0.9.
En alguna modalidad, se puede preferir, que el complejo de carga con portador polimérico comprenda un portador polimérico, de preferencia un portador polimérico formado por componentes catiónicos reticulados con disulfuro, y al menos una molécula de ácido nucleico, que la composición farmacéutica no es una composición que comprende un complejo de carga con portador polimérico formado por el péptido catiónico reticulado con disulfuro CR12C como un portador y ARNis722A (SEC ID NO: 105) o ARNis722B (SEC ID NO: 122) como la carga ácido nucleico para la ovalbúmina de la vacuna proteinica (proteina OVA) .
En algunas modalidades, se puede preferir, que el complejo de carga con portador polimérico comprenda un portador polimérico, de preferencia un portador polimérico formado por componentes catiónicos reticulados con disulfuro, y al menos una molécula de ácido nucleico, que la composición farmacéutica no sea una composición que comprenda un complejo de carga con portador polimérico formado por el péptido de catiónicos reticulado con disulfuro CR12C como un portador y ARNis722A (SEC ID NO: 105) o ARNis722B (SEC ID NO: 122) como la carga de ácido nucleico para la vacuna peptidica Ovalbúmina-especifica SIINFEKL.
Por consiguiente, en algunas modalidades, se puede preferir que la composición farmacéutica no sea una composición que comprenda un complejo de carga con portador polimérico formado por el péptido catiónico reticulado con disulfuro CR12C (SEC ID NO: 6) como el portador y ARNis722A (SEC ID NO: 105) o ARNis722B (SEC ID NO: 122) como la carga de ácido nucleico y un antigeno que es ovalbúmina (proteina de OVA) (SEC ID NO: 117) .
En algunas modalidades, se puede preferir adi cionalmente, que la composición farmacéutica comprenda un comple]o de carga con portador polimérico que comprende un portador polimérico formado por componentes catiónicos reticulados con disulfuro y al menos una molécula de ácido nucleico que al menos un antigeno no sea un antigeno asociado con un cáncer o una enfermedad tumoral, en particular linfoma o una enfermedad asociada con linfoma, en donde el antigeno es un idiotipo de inmunoglobulina de un glóbulo linfoide o un idiotipo receptor de células T de un glóbulo linfoide o un fragmento, variante y/o derivado de este idiotipo de inmunoglobulina o del idiotipo receptor de células T.
En este contexto, se puede entender que un idiotipo de inmunoglobulina será un péptido o proteina que tenga la forma molecular particular de la región variable de una inmunoglobulina expresada por un tipo particular de células B. Este idiotipo se puede utilizar como antigeno por producir una respuesta inmunitaria dirigida contra este tipo particular de células B, por ejemplo contra células B malignas. Un idiotipo receptor de células T se puede entender que será un péptido o proteina que tenga la forma molecular particular de la región variable de un receptor de células T expresadas por un tipo particular de células T. Este idiotipo se puede utilizar como antigeno para producir una respuesta inmunitaria dirigida contra este tipo particular de células , por ejemplo contra células T malignas.
En algunas modalidades, se puede preferir, que la composición farmacéutica comprenda un complejo de carga con portador polimérico que comprenda un portador polimérico formado por componentes catiónicos reticulados con disulfuro y al menos una molécula de ácido nucleico que al menos un antigeno asociado con un cáncer o una enfermedad tumoral no sea un antigeno asociado con linfoma, de preferencia que no sea un linfoma del células B, un linfoma de células T o un linfoma que no sea de Hodgkin.
En algunas modalidades se puede preferir, que la composición farmacéutica comprenda un complejo de carga con portador polimérico que comprenda un portador polimérico formado por componentes catiónicos reticulados con disulfuro y al menos una molécula de ácido nucleico que al menos un antigeno asociado con un cáncer o una enfermedad tumoral no sea un antigeno derivado de una célula maligna, de preferencia que no sea de una célula B maligna o una célula T mal igna .
En algunas modalidades adicionales, se puede preferir que la composición farmacéutica pueda no comprender un componente adicional distinto a los componentes A) y B) , de preferencia no otro componente de ARNm (distinto del comprendido por los componentes A) , de preferencia, la composición farmacéutica pueden no comprender ningún ARNm en absoluto .
En algunas modalidades adicionales, se puede preferir, que la composición farmacéutica comprenda un ARNm (distinto del ácido nucleico del componente A) , el ARNm pueden no ser un ARNm que codifique para un péptido o antigeno de acuerdo con B) , además se prefiere que el ARNm no pueda no ser un ARNm que codifique para ovalbúmina, PSMA, Luciferasa o STEAP.
En algunas modalidades adicionales, se puede preferir, que la composición farmacéutica contenga un ARNm (distinto del ácido nucleico del componente A) , en particular un ARNm que codifique para un péptido o antigeno de acuerdo con B) , y/o ARNm que codifique para ovalbúmina, PSMA, Luciferasa o STEAP, el ARNm puede no estar complejado con protamina, de preferencia no en una proporción de 2:1 ó 4:1 o entre 2:1 y 4:1.
En algunas modalidades adicionales, se puede preferir que la composición farmacéutica reivindicada pueda no ser utilizada para el tratamiento de carcinoma de páncreas o carcinoma pulmonar que no sea de células pequeñas.
En algunas modalidades adicionales, se puede preferir, que la composición farmacéutica comprenda un ARNm (distinto del ácido nucleico del componente A) , que el ARNm no sea un ARNm libre.
En algunas modalidades adicionales, se puede preferir, que la composición farmacéutica comprenda un ARNm (distinto del ácido nucleico del componente A) , que el ARNm pueda no ser complejado con protamina.
En algunas modalidades adicionales, se puede preferir, que la composición farmacéutica comprenda un ARNm libre que el ARNm pueda no codificar para una proteina terapéuticamente activa y pueda no codificar para un anticuerpo y pueda no codificar para un antigeno.
En algunas modalidades adicionales, se puede preferir que con respecto al componente A) de la composición farmacéutica inventiva que a) pueda no ser protamina.
En algunas modalidades adicionales, se puede preferir que con respecto al componente A) de la composición farmacéutica inventiva, que la proteina portadora pueda no ser protamina.
En algunas modalidades adicionales, se puede preferir, que a) del componente A) sea protamina, a) no está presente en una proporción de 1:2 ó 1:4 o entre 1:2 y 1:4, con respecto a b) del componente A) .
En algunas modalidades adicionales, se puede preferir, que la proteina portadora del componente A) sea protamina, la proteina portadora no esté presente en una proporción de 1:2 ó 1:4 con respecto al ácido nucleico del componente A) .
En algunas modalidades adicionales, se puede preferir, que con respecto al componente A) el ácido nucleico no sea un ARNm.
En algunas modalidades adicionales, se puede preferir, que el ácido nucleico del componente A) sea un ARNm, que el ARNm no codifique para ovalbúmina, PS A, Luciferasa o STEAP.
En algunas modalidades adicionales, se puede preferir, que el ácido nucleico, es decir b) , del componente A) sea ARNm; que el ARNm no sea ARNm libre, pero que se compleje exclusivamente con la proteina portadora de a) .
En algunas modalidades adicionales, el componente (B) no es ovalbúmina o un fragmento de ovalbúmina. De preferencia, la composición farmacéutica, el kit, o el empaque farmacéutico de acuerdo con la presente invención no comprenda ovalbúmina o un fragmento de ovalbúmina o una secuencia de ácido nucleico que codifique para ovalbúmina o que codifique para un fragmento de ovalbúmina.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS Se pretende que las siguientes figuras ilustren la invención adicionalmente . No se pretende que limiten la materia de la invención.
Figura 1: Muestra la curva de correlación en bruto de los complejos de carga con portador polimérico formados por los péptidos catiónicos reticulados con disulfuro CR12C y CR7C como un portador después de la liofilización en comparación con los complejos con péptidos catiónicos sin polimerización como un portador (R12 y R7) mediante dispersión de luz dinámica utilizando un Zetasizer Nano (Malvern Instruments, Malvern, UK) . Los diámetros hidrodinámicos se midieron con complejos recién preparados y con complejos reconstituidos después de la liofilización. La proporción en masa del péptido:ARN fue 1:2. Como resultado se puede mostrar que los complejos de carga con portador polimérico que comprenden péptidos que contienen cisteina como los componentes catiónicos que conducen a una polimerización del portador polimérico mediante enlaces disulfuro no cambian de tamaño contrario a los complejos formados por péptidos sin polimerización que aumentan de tamaño y por lo tanto no son estables durante el paso liofilización . Por lo tanto, los complejos con péptidos polimerizados como portadores poliméricos muestran propiedades ventajosas para la liofilización.
Figura 2: Muestra el potencial Zeta de los complejos de carga con portador polimérico formados por el péptido catiónico reticulado con disulfuro CR12C y R722 como la carga de ácido nucleico a diferentes proporciones p/p. Como se puede observar, el potencial zeta cambia de positivo a negativo cuando se cambia la proporción p/p del péptido en exceso a una proporción 1:1 (péptido/ARN) .
Figura 3A: Muestra la secreción de la citoquina hlFNa (in vi tro) en los hPBMC después de la estimulación con los complejos de carga con portador polimérico formados por el péptido catiónico reticulado con disulfuro CRi2C y el CpG 2216 como la carga de ácido nucleico en una proporción en masa de 1:2.5 (p/p) (CRi2C/CpG 2216) . Como se puede observar, los complejos de carga con portador polimérico conducen a un aumento en la liberación de citoquina hlFNa en el hPBMCs en comparación con la carga de ácido nucleico sola del péptido catiónico solo .
Figura 3B: Muestra la secreción de la citoquina hTNFa {in vitro) en los hPBMC después de la estimulación con los complejos de carga con portador polimérico formados por el péptido de catiónico reticulado con disulfuro CRi2C y el CpG 2216 como la carga de ácido nucleico en una proporción en masa de 1:2.5 (p/p) (CRi2C/CpG 2216) . Como se puede observar, los complejos de carga con portador polimérico no conducen a un aumento en la liberación de la citoquina hTNFa en los hPBMC en comparación con la carga con ácido nucleico sola o el péptido catiónico solo .
Figura 4A: Muestra la secreción de la citoquina hlFNa {in vítro) en los hPBMC después de la estimulación con los complejos de carga con portador polimérico formados por el péptido catiónico reticulado con disulfuro CR12C y el ARNm R491 que codifica para luciferasa como la carga de ácido nucleico en una proporción en masa de 1:2 (p/p) (CRi2C/R491) . Como se puede observar, los complejos de carga con portador polimérico conducen a un aumento en la liberación de citoquina hlFNa en los hPBMC en comparación con la carga con ácido nucleico sola o el péptido catiónico solo.
Figura 4B: Muestras la secreción de la citoquina hTNFa (in vitro) en los hPBMC después de la estimulación con los complejos de carga con portador polimérico formados por el péptido catiónico reticulado con disulfuro CRi2C y el ARNm R491 que codifica para luciferasa como la carga de ácido nucleico en una proporción en masa de 1:2 (p/p) (CR12C/R491) . Como se puede observar, los complejos de carga con portador polimérico conducen a un aumento en la liberación de la citoquina hTNFa en los hPBMC en comparación con la carga con ácido nucleico sola o el péptido catiónico solo.
Figura 5A: Muestra la secreción de la citoquina hlFNa (in vi tro) en los hPBMC después de la estimulación con los complejos de carga con portador polimérico formados por el péptido catiónico reticulado con disulfuro CR12C y un oligonucleót ido de ARN rico en GU corto (rico en GU corto) como la carga de ácido nucleico en una proporción en masa de 1:2.5 (p/p) ( CRi2C/rico en GU corto) . Como se puede observar, los complejos de carga con portador polimérico conducen a un aumento en la liberación de citoquina hlFNa en los hPBMC en comparación con la carga con ácido nucleico sola o el péptido catiónico solo.
Figura 5B: Muestra la secreción de la citoquina hTNFa (in vitro) en los hPBMC después de la estimulación con complejos de carga con portador polimérico formados por el péptido catiónico reticulado con disulfuro CR12C y un Oligonucleótido de ARN rico en GU corto (rico en GU corto) como la carga de ácido nucleico en una proporción de masa de 1:2.5 (p/p) (CRi2C/rico en GU corto) . Como se puede observar, los complejos de carga con portador polimérico conducen a un aumento en la liberación de la citoquina hTNFa en los hPBMC en comparación con la carga con ácido nucleico sola o el péptido catiónico solo.
Figura 6A: Muestra la secreción de la citoquina hlFNa (ín vitro) en los hPBMC después de la estimulación con complejos de carga con portador polimérico formados por el péptido catiónico reticulado con disulfuro CR7C y el ARNis rico en GU no codificante largo R722 como la carga de ácido nucleico. Como se puede observar, los complejos de carga con portador polimérico (CR7C/R722) conduce a un aumento de citoquina de la liberación hlFNa en los hPBMC en comparación con los complejos de carga (R7/R722) formados por el péptido no polimerizado R7.
Figura 6B: Muestra la secreción de la citoquina hTNFa (ir¡ vitro) en los hPBMC después de la estimulación con complejos de carga con portador polimérico formados por el péptido catiónico reticulado con disulfuro CR7C y el ARNis rico en GU no codificante largo R722 como la carga de ácido nucleico. Como se puede observar, los complejos de carga con portador polimérico (CR7C/R722) sólo conducen a un aumento débil de citoquina de la liberación hTNFa en los hPBMC en comparación con los complejos con carga de portadores (R7/R722) formados por el péptido no polimerizado R7.
Figura 7A: Muestra la secreción de citoquina hlFNa {in vítro) en los hPBMC después de la estimulación con complejos de carga con portador polimérico formados por el péptido catiónico reticulado con disulfuro CR9C y el ARNis rico en GU no codificante largo R722 como la carga de ácido nucleico. Como se puede observar, los complejos de carga con portador polimérico inventivos (CR9C/R722) conduce a un aumento de citoquina de la liberación hlFNa en los hPBMC en comparación con los complejos de carga con portadores (R9/R722) formados por el péptido no polimerizado Rg.
Figura 7B : Muestra la secreción de citoquina hTNFa (ín vitro) en los hPBMC después de la estimulación con complejos de carga con portador polimérico formados por el péptido catiónico reticulado con disulfuro CR9C y el ARNis rico en GU no codificante largo R722 como la carga de ácido nucleico. Como se puede observar, los complejos de carga con portador polimérico (CR9C/R722) no conduce a un aumento en la liberación de la citoquina hTNFa en los hPBMC en comparación con los complejos de carga con portador (R9/R722) formados por el péptido no polimerizado Rg.
Figura 8A: Muestra la secreción de citoquina del hlFNa {in vitro) en los hPBMC después de la estimulación con complejos de carga con portador polimerico formados por el péptido catiónico reticulado con disulfuro CR12C y el ARNis R722 como la carga de ácido nucleico a diferentes proporciones p/p. Como se puede observar, los complejos de carga con portador polimérico conducen a un aumento en la liberación de citoquina hlFNa en los hPBMC en comparación con la carga con ácido nucleico sola o el péptido catiónico solo.
Figura 8B: Muestras la secreción de citoquina hTNFa (in vitro) en los hPBMC después de la estimulación con complejos de carga con portador polimérico formados por el péptido catiónico reticulado con disulfuro CRi2C y el ARNis R722 como la carga de ácido nucleico a diferentes proporciones p/p. Como se puede observar, los complejos de carga con portador polimérico conducen a un aumento en la liberación de citoquina hTNFa en los hPBMC en comparación con la carga con ácido nucleico sola o el péptido catiónico solo.
Figura 9A: Muestra la secreción de citoquina hlFNa (in vitro) en los hPB C después de la estimulación con complejos del portador poliméricos formados por el péptido catiónico CH6R4H6C, CH3RH3C y CHK7HC y el ARNis R722 como la carga de ácido nucleico a las proporciones de N/P diferentes. Como se puede observar, los complejos de carga con portador polimérico conducen a un aumento en la liberación de citoquina hlFNa en los hPBMC en comparación con la carga con ácido nucleico sola o el péptido catiónico solo.
Figura 9B: Muestra la secreción de citoquina hTNFa (in vitro) en los hPBMC después de la estimulación con complejos del portador poliméricos formados por los péptidos catiónicos reticulados con disulfuro CH6R4H6C, CH3R4H3C y CHK7HC y el ARNis R722 como la carga de ácido nucleico a las proporciones de N/P diferentes. Como se puede observar, los complejos de carga con portador polimérico conducen a un aumento en la liberación de citoquina hTNFa en los hPBMC en comparación con la carga con ácido nucleico sola o el péptido catiónico solo. Los complejos de carga polimérica particularmente con una proporción mayor de N/P o igual a 1 dan por resultado en la secreción de TNFalpha.
Figura 10: Muestra el efecto {in vivo) de la adición del complejo de carga con portador polimérico formado por el péptido catiónico reticulado con disulfuro CRi2C como portador y el ARNis R722 como la carga de ácido nucleico para el antígeno proteínico ovalbúmina (proteína OVA) para utilizarse como un adyuvante en experimentos de inoculación en tumores.
Para este fin, 7 ratones hembra C57BL/6 por grupo se vacunaron tres veces durante dos semanas con 5 pg de proteína de ovalbúmina combinada con 45 µg de CRi2C/R722 (1:2; p/p) . Para comparación, los ratones se inyectaron sin los complejos de carga polimérica.
Como se puede observar, el complejo de carga con portador polimérico desaceleró en gran medida el crecimiento de tumores en comparación con el antígeno proteínico solo, lo cual no tuvo efecto sobre el crecimiento de tumores en comparación con el control con tampón.
Figura 11: Muestra el efecto (in vivo) de la adición del complejo de carga con portador polimérico formado por el péptido catiónico reticulado con disulfuro CRi2C como portador y el ARNis R722 como la carga de ácido nucleico para el antígeno proteínico ovalbúmina (proteína OVA) para utilizarse como un adyuvante en la inducción de anticuerpos IgG2a ovalbúmina-específicos . Para este fin, 5 ratones hembra C57BL/6 por grupo se vacunaron tres veces en un término de dos semanas con 5 µg de proteina de ovalbúmina combinada con 45 pg de CRi2C/R722 (1:2; p/p) . Para comparación, los ratones se inyectaron sin los complejos de carga polimérica.
Como se puede observar, el complejo de carga con portador polimérico aumenta en gran medida la respuesta a células B lo cual prueba las propiedades adyuvantes benéficas de los complejos de carga con portador polimérico, en particular con respecto a la inducción de una respuesta inmunitaria modificada por Thl .
Figura 12: Muestra el efecto (in vivo) de la adición del complejo de carga con portador polimérico formado por el péptido catiónico reticulado con disulfuro CR12C como portador y el ARNis R722 como la carga de ácido nucleico para el antigeno proteinico ovalbúmina ¡proteina OVA) o el antigeno peptidico ovalbúmina- especifico SI INFEKL para utilizarse como un adyuvante en la inducción de células T citotóxicas ovalbúmina- especificas .
Para este fin, 5 ratones hembra C57BL/6 por grupo se vacunaron tres veces en un término de dos semanas con 5 ]iq de proteina de ovalbúmina o 50 }ig del péptido SI INFEKEL combinado con 45 pg de CR12C/R722 (1:2; p/p) . Por comparación, los ratones se inyectó sin los complejos de carga poliméricos .
Como se puede observar, el complejo de carga con portador polimérico aumentó en gran medida la inducción de células T citotóxicas ovalbúmina-especí ficas en comparación con la vacunación con la proteina o el péptido solos, lo cual prueba adicionalmente las propiedades adyuvantes benéficas del complejo de carga con portador polimérico, en particular con respecto a la inducción de una respuesta inmunitaria modificada por Thl.
Figura 13: Muestra el efecto (in vivo) de la adición del complejo de carga con portador polimérico formado por el péptido catiónico reticulado con disulfuro CRi2C como portador y el ARNis R722 como la carga de ácido nucleico para la vacuna Rabipur® (que comprende el virus inactivado de la Rabia) para utilizarse como un adyuvante en la inducción de los anticuerpos IgG Rabia- específicos (como se representa por OD 405nm) .
Para este fin, 8 ratones hembra BALB/c se inyectaron intramuscularmente con 0.1, 0.01, y 0.001 veces la dosis humana de Rabipur® y 30 g de R722 y 8.1 µq de CR12C (3.7:1 p/p) . 21 días después de la inmunización, se extrajeron muestras de sangre y se analizaron para los anticuerpos IgG totales dirigidos contra el virus de la Rabia.
Como se puede observar, la complejo de carga con portador polimérico aumenta en gran medida la inducción de anticuerpos IgG Rabia-específicos en comparación con la vacunación con Rabipur® solo, lo cual prueba adicionalmente las propiedades adyuvantes benéficas del complejo de carga con portador polimérico.
Figura 14: Muestra el efecto {in vivo) de la adición del complejo de carga con portador polimérico formado por el péptido catiónico reticulado con disulfuro CRi2C como portador y el ARNis R722 como la carga de ácido nucleico para la vacuna Rabipur® o HDC (que comprende el virus inactivado de la Rabia) para utilizarse como un adyuvante en la inducción de células T citotóxicas Rabia-específicas (como se representa por el número de puntos en el análisis ELISPOT) .
Para este fin 5 ratones de hembra BALB/c se inyectaron intramuscularmente con 0.01 veces la dosis humana de Rabipur© o HDC y 30 de R722 y 8.1 pg de CR12C (3.7:1 p/p) . 5 días después de la inmunización, los ratones se sacrificaron, se retiraron los bazos y se aislaron los espelenocitos .
Como se puede observar, el complejo de carga con portador polimérico aumenta en gran medida la inducción de células T citotóxicas Rabia-específicas en comparación con la vacunación con Rabipur® o HDC solos, lo cual prueba adicionalmente las propiedades adyuvantes benéficas del complejo de carga con portador polimérico, en particular con respecto a la inducción de una respuesta inmunitaria modificada por Thl .
Figura 15: Muestra el efecto (in vivo) de la adición del complejo de carga con portador polimérico formado por el péptido catiónico reticulado con disulfuro CR12C como portador y el ARNis R722 como la carga de ácido nucleico para la vacuna Rabipur® (que comprende el virus inactivado de la Rabia) para utilizarse como un adyuvante en la inducción de anticuerpos IgG Rabia- específicos. Además muestra el efecto del complejo de carga con portador polimérico en la inducción de anticuerpos con alta afinidad para el antígeno (como se representa por el % de IgG unido) .
Para este fin, 8 ratones hembra BALB/c se inyectaron intramuscularmente con 0.01 veces la dosis humana de Rabipur® y 30 ug de R722 y 8.1 g de CR12C (3.7:1 p/p) . 7 y 21 días después de la inmunización, se extrajeron muestras sanguíneas y se analizaron para anticuerpos IgG totales dirigidos contra el virus de la Rabia. Para examinar la actividad de los anticuerpos generados dirigidos contra el virus de la Rabia, durante el desempeño de la ELISA, los anticuerpos unidos se lavaron con una concentración cada vez mayor de urea. Como se puede observar, el complejo de carga con portador polimérico aumenta en gran medida la inducción de anticuerpos de IgG Rabia-especificos con alta afinidad para el antigeno en comparación con la vacunación con Rabipur® solo, lo cual prueba adicionalmente las propiedades adyuvantes benéficas del complejo de carga con portador polimérico, en particular con respecto a la inducción de anticuerpos con alta afinidad.
Figura 16: Muestra el efecto (in vivo) de la adición del complejo de carga con portador polimérico formado por el péptido catiónico reticulado con disulfuro CR12C como portador y el ARNis R722 como la carga de ácido nucleico para la vacuna HDC (que comprende el virus inactivado de la Rabia) para utilizarse como un adyuvante en la inducción de los anticuerpos neutralizantes del virus de la Rabia (como se representa por IU/ml) .
Para este fin 8 ratones hembra BALB/c se inyectaron intramuscularmente con 0.01 veces la dosificación humana de HDC y 30 µg de R722 y 15 yg de CRi2C (2:1 p/p) . 21 días después de la inmunización, se extrajeron muestras sanguíneas y se analizó la neutralización del virus .
Como se puede observar, el complejo de carga con portador polimérico aumenta en gran medida el título de anticuerpos neutralizantes en comparación con la vacunación con HDC solo, lo cual prueba adicionalmente las propiedades del adyuvante beneficiosas del complejo de carga con portador polimérico.
Figura 17: Muestra el efecto [ín vivo) de la adición del complejo de carga con portador polimérico formado por el péptido catiónico reticulado con disulfuro CRi2C como portador y el ARNis R722 como la carga de ácido nucleico para la vacuna de gripe porciona Pandemrix® (que comprende el virus inactivado de influenza H1N1) para utilizarse como un adyuvante en la inducción de anticuerpos de IgG2a influenza-específicos H1N1.
Para este fin 5 ratones hembra BALB/c se inyectaron intramuscularmente con 0.1 g de Pandemrix® y 30 xq de R722 y 15 pg de CRi2C (2:1 p/p) . 14 días después de la inmunización se extrajeron muestras sanguíneas y analizaron para la inducción de anticuerpos IgG2a dirigidos contra el virus influenza H1N1 (como se representa por OD 405nm) .
Como se puede observar, el complejo de carga con portador polimérico aumenta en gran medida la inducción de anticuerpos IgG2a Influenza-específicos en comparación con la vacunación con Panemrix® solo, lo cual prueba adicionalmente las propiedades del adyuvante beneficiosas del complejo de carga con portador polimérico, en particular respecto a la inducción de una respuesta inmunitaria modificada por Thl.
Figura 18: Muestra el efecto (in vivo) de la adición del complejo de carga con portador polimérico formado por el péptido catiónico reticulado con disulfuro CR12C como portador y el ARNis R722 como la carga de ácido nucleico para la vacuna de influenza A(HlNl)pdm09 Celvapan© (que comprende el virus inactivado de influenza A (H1N1 ) pdm09 ) para utilizarse como un adyuvante en la inducción de células T citotóxicas A(HlNl)pdm09 específicas (como se representa por el número de puntos en el análisis ELISPOT) .
Para este fin 5 ratones hembra BALB/c se inyectaron intramuscularmente con 0.1 pg de Celvapan© y 15 g de R722 y 7.5 ug de CR12C (2:1 p/p) . 6 días después de que la inmunización los ratones se sacrificaron, se retiraron los bazos y se aislaron los esplenocitos .
Como se puede observar, el complejo de carga con portador polimérico aumenta en gran medida la inducción de células T citotóxicas A ( HlNl ) pdmO 9-especi ficas en comparación con la vacunación con Celvapan© solo, lo cual prueba adicionalmente las propiedades adyuvantes benéficas del complejo de carga con portador polimérico, en particular con respecto a la inducción de una respuesta inmunitaria modificada por Thl .
Figura 19: Muestra el efecto {in vivo) de la adición del complejo de carga con portador polimérico formado por el péptido catiónico reticulado con disulfuro CR12C como portador y el ARNis R722 como la carga de ácido nucleico para la vacuna de influenza estacional Begrivac® (gue comprende las cepas de virus inactivado de Influenza estacional como se recomienda por la HO) para utilizarse como un adyuvante en la inducción de anticuerpos IgG2a influenza-específicos (como se representa por OD 405nm) .
Para este fin 8 ratones hembra BALB/c se inyectaron intramuscularmente con 0.1 µg de Begrivac® y 30 µg de R722 y 15 pg de CR12C (2:1 p/p) . 28 días después de la inmunización se extrajeron muestras sanguíneas y analizaron para los anticuerpos IgG2a dirigidos contra el virus de Influenza.
Como se puede observar, la complejo de carga con portador polimérico aumenta en gran medida la inducción- de anticuerpos IgG2a Influenza-específicos en comparación con la vacunación con Begrivac® sola, lo cual prueba adicionalmente las propiedades adyuvantes benéficas del complejo de carga con portador polimérico, en particular con respecto a la inducción de una respuesta inmunitaria modificada por Thl.
Figura 20: Muestra el efecto (in vivo) de la adición del complejo de carga con portador polimérico formado por el péptido catiónico reticulado con disulfuro CRi2C como portador y el ARNis R722 como la carga de ácido nucleico para la vacuna para Hepatitis B Engerix©-B (que comprende el antigeno superficial de Hepatitis B recombinante (HBsAg) ) para utilizarse como un adyuvante en la inducción de anticuerpos HBsAG específicos (como se representa por fluorescencia) .
Para este fin 8 ratones hembra BALB/c se inyectaron intramuscularmente con 0.5 \iq de Engerix®-B y 6.25 pg de R722 y 1.7 g de CRi2C (3.7:1 p/p) . 28 días después de la inmunización se extrajeron muestras sanguíneas y analizaron para anticuerpos IgG2a dirigidos contra el HBsAGg Como se puede observar, el complejo de carga con portador polimérico aumenta en gran medida la inducción de anticuerpos IgG2a HBsAg-específicos en comparación con la vacunación con Engerix®-B sola, lo cual prueba adicionalmente las propiedades adyuvantes benéficas del complejo de carga con portador polimérico, en particular con respecto a la inducción de una respuesta inmunitaria modificada por Thl.
Figura 21: Muestra el efecto {in vivo) de la adición del complejo de carga con portador polimérico formado por el péptido catiónico reticulado con disulfuro CR12C como portador y el ARNis R722 como la carga de ácido nucleico para un péptido derivado del 16 de papiloma humano (HPV16) para utilizarse como un adyuvante en la inducción de células T citotóxicas HPV16 E7 especificas (como se representa por el número de puntos en el análisis ELISPOT) .
Para este fin 5 ratones hembra C57BL/6 se inyectaron intradérmicamente con 100 µ? del péptido E7aa43-77 derivado de HPV16 E7 y 50 g de R722 y 25 \iq de CR12C (2:1 p/p) . 8 días después de la inmunización, los ratones se sacrificaron, se retiraron los bazos y se asilaron los esplenocitos .
Como se puede observar, el complejo de carga con portador polimérico aumenta en gran medida la inducción de células T citotóxicas HPV16 E7 especificas para vacunación con el péptido solo, lo cual prueba adicionalmente las propiedades adyuvantes benéficas del complejo de carga con portador polimérico, en particular con respecto a la inducción de una respuesta inmunitaria modificada por Thl.
Figura 22: Muestra el efecto (in vivo) de la adición del complejo de carga con portador polimérico formado por el péptido catiónico reticulado con disulfuro CR12C como portador y el ARNis R722 como la carga de ácido nucleico para un péptido derivado del virus 16 de papiloma humano (HPV16) para utilizarse como un adyuvante en la inducción de células T citotóxicas HPV16 E7 especificas (como se representa por el número de puntos en el análisis ELISPOT) .
Para este fin, 5 ratones hembra C57BL/6 se inyectaron intradérmicamente con 100 µ? del péptido E7aa43-77 derivó de HPV16 E7 y 50 g de R722 y 25 ug de CR12C (2:1 p/p) . Además, los ratones se inyectaron con el complejo de carga con portador polimérico que comprende adicionalmente el péptido antigénico E7aa43-77. Siete días después de la inmunización, los ratones se sacrificaron, se retiraron los bazos y se aislaron los esplenocitos .
Como se puede observar, el complejo de carga con portador polimérico aumenta en gran medida la inducción de células T citotóxicas HPV16 E7-especificas en comparación con la vacunación con el péptido solo. Además, los resultados muestran que la inclusión del péptido antigénico en el complejo de carga con portador polimérico mejora adicionalmente la inducción de células T citotóxicas HPV16 E7-especificas . Por tanto, también este experimento prueba las propiedades adyuvantes benéficas del complejo de carga con portador polimérico, en particular con respecto a la inducción de una respuesta inmunitaria modificada por Thl .
Figura 23: Muestra el efecto (in vivo) de la adición del complejo de carga con portador polimérico formado por el péptido catiónico reticulado con disulfuro CR12C como portador y el ARNis R722 como la carga de ácido nucleico para la proteina NY-ESO-1 humanA para utilizarse como un adyuvante en la inducción de células T citotóxicas NY-ESO-1 especificas (como se representa por el número de puntos en el análisis ELISPOT) .
Para este fin 5 ratones hembra C57BL/6 se inyectaron intramuscularmente con 5 pg de la proteina NY-ESO-1 y 30 µq de R722 y 15 g de CR12C (2:1 p/p) 2 veces en un término de 15 días. 7 días después de la última inmunización, los ratones se sacrificaron, se retiraron los bazos y se aislaron los esplenocitos .
Como se puede observar, el complejo de carga con portador polimérico aumenta en gran medida la inducción de células T citotóxicas NY-ESO-l-especifico en comparación con la vacunación con la proteína sola, lo cual prueba adicionalmente las propiedades adyuvantes benéficas del complejo de carga con portador polimérico, en particular respecto a la inducción de una respuesta inmunitaria modificada por Thl .
Figura 24: Muestra el efecto (in vivo) de la adición del complejo de carga con portador polimérico formado por el péptido catiónico reticulado con disulfuro CRi2C como portador y el ARNis R722 como la carga de ácido nucleico para la vacuna Rabipur® (que comprende el virus inactivado de la Rabia) para utilizarse como un adyuvante para la intensificación de la protección contra la infección por inoculación del virus letal. Para este fin, 8 ratones hembra BALB/c se inyectaron intramuscularmente con 0.001 veces la dosificación humana de Rabipur® y 3 pg de R722 y 0.81 pg de CR12C ¡3.7:1 p/p) . 37 días después de la vacunación, los ratones se infectaron con una dosis letal del virus de la Rabia de la cepa del virus de inoculación (CVS) utilizando un LD50 de 25 veces (dosifica letal del 50%) .
Como se puede observar, el complejo de carga con portador polimérico aumenta en gran medida la supervivencia de los ratones contra la infección letal por el virus de la Rabias en comparación con la vacunación con Rabipur® sola, lo cual prueba adicionalmente las propiedades del adyuvante beneficiosas del complejo de carga con portador polimérico .
Figuras 25A, 25B y 25C: Muestran el efecto (in vivo) de la adición del complejo de carga con portador polimérico formado por el péptido catiónico reticulado con disulfuro CR12C como portador y el ARNis R722 como la carga de ácido nucleico para el péptido de E7aa43-77 de cadena larga derivado del virus 16 de papiloma humano (HPV16) para utilizarse como un adyuvante en el experimentos de inoculación en tumores.
Para este fin, 8 ratones C57BL/6 por grupo se inocularon en el dia 1 con lxlO5 células TC-1 gue expresan la proteina HPV E6 y E7. La vacunación inició en el dia 7 después de la inoculación en el tumor (volumen tumoral medio 31-48 mm3) . Los ratones se vacunaron intradérmicamente 5 veces (en el dia 8, 12, 15, 19 y 22) con 5 pg o 50 ig del péptido E7 combinado con 50 g de CRi2C/R722 (1:2; p/p) . Para comparación, los ratones se inyectaron con los complejos de carga polimérica solos.
Como se puede observar, el complejo de carga con portador polimérico combinado con el péptido E7aa43-77 de E7 derivado de HPV-16 incluso perjudica el crecimiento de tumores en comparación con el complejo de carga con portador polimérico solo.
Figura 26: Muestra el efecto {in vivo) de la adición del complejo de carga con portador polimérico formado por el péptido catiónico reticulado con disulfuro CR12C como portador y el ARNis R722 como la carga de ácido nucleico para el péptido E7aa43-77 de E7 derivado del virus 16 de papiloma humano (HPV16) para utilizarse como un adyuvante en experimentos de inoculación en tumores .
Para este fin, 8 ratones C57BL/6 por grupo se inocularon en el dia 1 con lxlO5 células TC-1. La vacunación inició en el dia 7 después de la inoculación en el tumor (volumen mediano del tumor 31-48 mm3) . Los ratones se vacunaron intradérmicamente 5 veces (en el dia 8, 12, 15, 19 y 22) con 5 ug o 50 g del péptido E7aa43-77 de E7 combinado con 50 de CR12C/R722 (1:2; p/p) . Para comparación, los ratones se inyectaron con el péptido E7 o los complejos de carga polimérica solos. La inyección con tampón PBS sirvió como control negativo .
Como se puede observar, el complejo de carga con portador polimérico combinado con el péptido e E7 derivado de HPV-16 mejoró en gran medida la supervivencia de los ratones portadores de tumores (tiempo medio de supervivencia de 44.5 dias para 50 pg del péptido E7 + 50 pg del complejo de carga con portador polimérico; el tiempo medio de supervivencia de 22 días 5 \ig del péptido E7 + 50 pg del complejo de carga con portador polimérico) en comparación con el péptido E7 o 50 complejo de carga con portador polimérico solo.
Figura 27: Muestra el efecto (in vivo) de la adición del complejo de carga con portador polimérico formado por el péptido catiónico reticulado con disulfuro CRi2C como portador y el ARNis R722 como la carga de ácido nucleico para el péptido E7aa43-77 de E7 derivado del virus 16 de papiloma humano (HPV16) para utilizarse como un adyuvante en experimentos de inoculación en tumores .
Para este fin, 13 ratones C57BL/6 por grupo se vacunaron intradérmicamente una vez a la semana durante cuatro semanas con el complejo de carga con portador polimérico formado por el péptido catiónico reticulado con disulfuro CR12C como portador y el ARNis R722 como la carga de ácido nucleico y el péptido E7 como se indica en la Figura. Ocho semanas después de la cuarta vacunación, 5 ratones /grupo , se sacrificaron, se aislaron los esplenocitos y se determinó la frecuencia de las células T CD8+ antigeno-especificas mediante tinción pentamérica de HPV y citometría de flujo de acuerdo con el ejemplo 13.
Como se puede observar, el complejo de carga con portador polimérico combinado con el péptido E7aa43-77 de E7 derivado de HPV-16 dio por resultado en un aumento estadísticamente significativo de las células T CD8+ antígeno-especificas para los ratones vacunados con 50 µq del péptido de E7 solo (p=0.0007 para 5 µq del péptido E7 y p = 0.0002 50 \ig del péptido E7; se evaluaron las diferencias estadísticas entre los grupos mediante prueba T no pareada) . De esta forma, la combinación del complejo de carga con portador polimérico combinada con el péptido E7 derivado de HPV-16 induce una respuesta potente de células T CD8+ con menoría .
Figura 28: Muestra el efecto (in vivo) de la adición del complejo de carga con portador polimérico formado por el péptido catiónico reticulado con disulfuro CRi2C como portador y el ARNis R722 como la carga de ácido nucleico para el péptido E7 de E7aa43-77 derivado del virus 16 de papiloma humano (HPV16) para utilizarse como un adyuvante en experimentos de inoculación en tumores .
Para este fin, 13 ratones C57BL/6 por grupo se vacunaron intradérmicamente una vez a la semana durante cuatro semanas con el complejo de carga con portador polimérico formado por el péptido catiónico reticulado con disulfuro CRi2C como portador y el ARNis R722 como la carga de ácido nucleico y el péptido E7 como se indica en la figura. Ocho semanas después de la cuarta vacunación 8 ratones/grupo se inocularon con lxlO5 TC-1 células tumorales y se monitoreó el crecimiento de tumores .
Como se puede observar, el complejo de carga con portador polimérico combinado con el péptido E7 de E7aa43-77 derivado de HPV-16 da por resultado en un retraso drástico del crecimiento del tumor (4 respuestas completas para 5 pg del péptido E7 + 50 pg de 50 pg del complejo de carga con portador polimérico; 7 respondedores completos para 50 pg del péptido E7 + 50 pg de 50 pg del complejo de carga con portador polimérico) . De esta forma, la combinación del complejo de carga con portador polimérico combinado con el péptido E7 derivado de HPV-16 induce una potente respuesta de células T CD8+ con memoria, uras 29A y 29B: Muestran el efecto (in vivo) de la adición del complejo de carga con portador polimérico formado por el péptido catiónico reticulado con disulfuro CR12C como portador y el ARNis R722 como la carga de ácido nucleico para la vacuna de influenza estacional Mutagrip® (que comprende cepas inactivadas del virus de Influenza estacional según se como recomendado por la WHO) para utilizarse como un adyuvante en la inducción de títulos para la inhibición de hemaglutinina (HI) influenza especifica (como se representa por el titulo HI) .
Para este fin, 8 ratones hembra BALB/c se inyectaron intramuscularmente con 0.45 pg o 0.045 pg de Mutagrip® y 5 pg R722 + 1.35 pg de CRi2C (3.7:1, p/p) . 21 días después de la inmunización se extrajeron muestras sanguíneas y se determinaron los títulos HI en los sueros. El título HI se utiliza ampliamente como un parámetro sustituto de la eficacia de la vacuna de influenza con un título HI de =1:40 definido comúnmente como el límite protector en seres humanos.
Como se puede observar, el complejo de carga con portador polimérico aumenta en gran medida la inducción de los títulos HI HINl-especí fieos de influenza A (a) y los títulos HI H3N2-especí fieos (B) en comparación con la vacunación con Mutagrip® sola, que demuestra adicionalmente las propiedades adyuvantes benéficas del complejo de carga con portador polimérico.
Figura 30: Muestra el efecto (in vivo) de la adición del complejo de carga con portador polimérico formado por el péptído catiónico reticulado con disulfuro CRi2C como portador y el ARNis R722 como la carga de ácido nucleico para la vacuna de influenza estacional Mutagrip® (que comprende cepas inactivadas del virus de Influenza estacional como se recomienda por la WHO) para utilizarse como un adyuvante en la inducción de anticuerpos IgG2a influenza-específicos (como se representa por el título IgG2a) .
Para este fin, 8 ratones hembra BALB/c se inyectaron intramuscularmente con 4.5 pg o 0.045 pg de Mutagrip© y 5 pg de R722 + 1.35 µg de CR12C (3.7:1 p/p) . 21 días después de la inmunización se extrajeron muestras sanguíneas y analizaron para anticuerpos IgG2a dirigidos contra el virus H1N1 de la Influenza A.
Como se puede observar, el complejo de carga con portador polimérico aumenta en gran medida la inducción de anticuerpos IgG2a HINl-especificos de influenza A en comparación con la vacunación con Mutagrip® sola, lo cual demuestra adicionalmente las propiedades adyuvantes benéficas del complejo de carga con portador polimérico, en particular con respecto al ahorro de dosis de la vacuna de influenza estacional.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Ejemplos Se pretende que los siguientes ejemplos ilustren la invención adicionalmente. Los mismos no están destinados a limitar la materia de la invención a los mismos. 1. Reactivos : Péptidos catiónicos como el componente catiónico del portador polimérico: R7: Arg-Arg--Arg--Arg--Argg---AArrgg---AArrgg (Arg7) (SEC ID NO: 109) CR7C: Cys-Arg--Arg--Arg--Arg--Arg--Arg cg-Cys (CysArg7Cys) (SEC ID NO: 1) R9: Arg-Arg--Arg--Arg--Arg--Arg--Arg NO: lio; ) R12 : Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg (Argl2) (SEC ID NO: 111) CR9C: Cys-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Cys (Cys- Arg9-Cys) (SEC ID NO: 2) CRi2C: Cys-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg- Arg-Cys (Cys-Argl2-Cys ) (SEC ID NO: 6) Ácidos nucleicos como carga del complejo de carga con portador polimérico: 1180: ARNm que codifica para luciferasa (SEC ID NO: 112) GGGAGAAAGCUUGAGGAUGGAGGACGCCAAGAACAUCAAGAAGGGCCCGGCGCCCUUCUAC CCGCUGGAGGACGGGACCGCCGGCGAGCAGCUCCACAAGGCCAÜGAAGCGGUACGCCCUGG UGCCGGGCACGAÜCGCCUUCACCGACGCCCACAUCGAGGUCGACAUCACCUACGCGGAGUA CUUCGAGAUGAGCGUGCGCCUGGCCGAGGCCAUGAAGCGGUACGGCCUGAACACCAACCAC CGGAUCGUGGUGUGCUCGGAGAACAGCCUGCAGUUCUUCAUGCCGGUGCUGGGCGCCCUCU UCAUCGGCGUGGCCGUCGCCCCGGCGAACGACAUCUACAACGAGCGGGAGCUGCUGAACAG CAUGGGGAUCAGCCAGCCGACCGUGGUGUUCGUGAGCAAGAAGGGCCUGCAGAAGAUCCUG AACGUGCAGAAGAAGCUGCCCAUCAUCCAGAAGAUCAUCAUCAUGGACAGCAAGACCGACU ACCAGGGCUUCCAGUCGAUGUACACGUUCGUGACCAGCCACCUCCCGCCGGGCUUCAACGA GUACGACUUCGUCCCGGAGAGCUUCGACCGGGACAAGACCAUCGCCCUGAUCAUGAACAGC AGCGGCAGCACCGGCCUGCCGAAGGGGGUGGCCCUGCCGCACCGGACCGCCUGCGUGCGCU UCUCGCACGCCCGGGACCCCAUCUUCGGCAACCAGAUCAUCCCGGACACCGCCAUCCUGAG CGUGGUGCCGUUCCACCACGGCUUCGGCAUGUUCACGACCCUGGGCUACCUCAUCUGCGGC UUCCGGGUGGUCCUGAUGUACCGGUUCGAGGAGGAGCUGUUCCUGCGGAGCCUGCAGGACU ACAAGAUCCAGAGCGCGCUGCUCGUGCCGACCCUGUUCAGCUUCUUCGCCAAGAGCACCCU GAUCGACAAGUACGACCUGUCGAACCUGCACGAGAUCGCCAGCGGGGGCGCCCCGCUGAGC AAGGAGGUGGGCGAGGCCGUGGCCAAGCGGUUCCACCUCCCGGGCAUCCGCCAGGGCUACG GCCUGACCGAGACCACGAGCGCGAUCCUGAUCACCCCCGAGGGGGACGACAAGCCGGGCGC CGUGGGCAAGGUGGUCCCGUUCUUCGAGGCCAAGGUGGUGGACCUGGACACCGGCAAGACC CUGGGCGUGAACCAGCGGGGCGAGCÜGUGCGUGCGGGGGCCGAUGAUCAUGAGCGGCUACG UGAACAACCCGGAGGCCACCAACGCCCUCAUCGACAAGGACGGCUGGCUGCACAGCGGCGA CAUCGCCUACUGGGACGAGGACGAGCACUUCUUCAUCGUCGACCGGCUGAAGUCGCUGAUC AAGUACAAGGGCUACCAGGUGGCGCCGGCCGAGCUGGAGAGCAUCCUGCUCCAGCACCCCA ACAUCUUCGACGCCGGCGUGGCCGGGCUGCCGGACGACGACGCCGGCGAGCUGCCGGCCGC GGUGGUGGUGCUGGAGCACGGCAAGACCAUGACGGAGAAGGAGAUCGUCGACUACGUGGCC AGCCAGGUGACCACCGCCAAGAAGCUGCGGGGCGGCGUGGUGUUCGUGGACGAGGUCCCGA AGGGCCUGACCGGGAAGCUCGACGCCCGGAAGAUCCGCGAGAUCCUGAUCAAGGCCAAGAA GGGCGGCAAGAUCGCCGUGUAAGACUAGUUAUAAGACUGACUAGCCCGAUGGGCCUCCCAA CGGGCCCUCCUCCCCUCCUUGCACCGAGAUUAAUAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA AAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAUAUUCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC CCCCCCCCCCUCUAG (R1180) R722A: ARN rico en GU es no codificante largo (SEC ID NO: 105) R722B: ARN rico en GU es no codificante largo (SEC ID NO: 122) R491: ARNm que codifica para luciferasa (SEC ID NO. 113) GGGAGAAAGCUUGAGGAUGGAGGACGCCAAGAACAUCAAGAAGGGCCCGGCGCCCUUCUAC CCGCUGGAGGACGGGACCGCCGGCGAGCAGCUCCACAAGGCCAUGAAGCGGUACGCCCUGG UGCCGGGCACGAUCGCCUUCACCGACGCCCACAUCGAGGUCGACAUCACCUACGCGGAGUA CUUCGAGAUGAGCGUGCGCCUGGCCGAGGCCAUGAAGCGGUACGGCCUGAACACCAACCAC CGGAUCGUGGUGUGCUCGGAGAACAGCCUGCAGUUCUUCAUGCCGGUGCUGGGCGCCCUCU UCAUCGGCGÜGGCCGUCGCCCCGGCGAACGACAUCUACAACGAGCGGGAGCUGCUGAACAG CAUGGGGAUCAGCCAGCCGACCGUGGUGUUCGUGAGCAAGAAGGGCCUGCAGAAGAUCCUG AACGUGCAGAAGAAGCUGCCCAUCAUCCAGAAGAUCAUCAUCAUGGACAGCAAGACCGACU ACCAGGGCUUCCAGUCGAUGUACACGUUCGUGACCAGCCACCUCCCGCCGGGCUUCAACGA GUACGACUUCGÜCCCGGAGAGCUUCGACCGGGACAAGACCAUCGCCCUGAUCAUGAACAGC AGCGGCAGCACCGGCCUGCCGAAGGGGGUGGCCCUGCCGCACCGGACCGCCUGCGUGCGCU UCUCGCACGCCCGGGACCCCAUCUUCGGCAACCAGAUCAUCCCGGACACCGCCAUCCUGAG CGUGGUGCCGUUCCACCACGGCUUCGGCAUGUUCACGACCCUGGGCUACCUCAUCUGCGGC UUCCGGGUGGUCCUGAUGUACCGGUUCGAGGAGGAGCUGUUCCUGCGGAGCCUGCAGGACU ACAAGAUCCAGAGCGCGCUGCUCGUGCCGACCCUGÜÜCAGCUUCUUCGCCAAGAGCACCCU GAUCGACAAGUACGACCUGUCGAACCUGCACGAGAUCGCCAGCGGGGGCGCCCCGCUGAGC AAGGAGGUGGGCGAGGCCGUGGCCAAGCGGUUCCACCUCCCGGGCAUCCGCCAGGGCUACG GCCUGACCGAGACCACGAGCGCGAUCCUGAUCACCCCCGAGGGGGACGACAAGCCGGGCGC CGUGGGCAAGGUGGUCCCGUUCUUCGAGGCCAAGGUGGUGGACCUGGACACCGGCAAGACC CUGGGCGUGAACCAGCGGGGCGAGCUGUGCGUGCGGGGGCCGAUGAUCAUGAGCGGCUACG UGAACAACCCGGAGGCCACCAACGCCCUCAUCGACAAGGACGGCUGGCUGCACAGCGGCGA CAUCGCCUACUGGGACGAGGACGAGCACÜUCUUCAÜCGUCGACCGGCUGAAGUCGCUGAUC AAGUACAAGGGCUACCAGGUGGCGCCGGCCGAGCUGGAGAGCAUCCUGCUCCAGCACCCCA ACAUCUUCGACGCCGGCGUGGCCGGGCUGCCGGACGACGACGCCGGCGAGCUGCCGGCCGC GGUGGUGGUGCUGGAGCACGGCAAGACCAUGACGGAGAAGGAGAUCGUCGACUACGUGGCC AGCCAGGUGACCACCGCCAAGAAGCUGCGGGGCGGCGUGGUGUUCGUGGACGAGGUCCCGA AGGGCCUGACCGGGAAGCUCGACGCCCGGAAGAUCCGCGAGAUCCUGAUCAAGGCCAAGAA GGGCGGCAAGAUCGCCGUGUAAGACUAGUUAUAAGACUGACUAGCCCGAUGGGCCUCCCAA CGGGCCCUCCUCCCCUCCUUGCACCGAGAUUAAUAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA AAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAUAUUCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC CCCCCCCCCCUCUAGACAAUUGGAAUU (R491) CpG 2216: Oligonucleotido CpG gggggacgatcgtcgggggg (SEC ID NO: 114) Rico en GU corto: oligonucleótido de AR rico en GU gguuuuuuuuuuuuuuuggg (SEC ID NO. 115) Los experimentos que indican el uso de la carga ácido nucleico R722 se han realizado con las secuencias R722A y/o R722B.
Antigenos y epitopes: Péptido derivado de ovalbúmina SIINFEKL (SEC ID NO: 116) Ovalbúmina : MGS IGAASMEFCFDVFKELKVHHANENI YCPIAIMSALAMVYLGAKDSTRTQINKVVRF DKLPGFGDSIEAQCGTSVNVHSSLRDILNQITKPNDVYSFSLASRLYAEERYPILPEYLQ CVKELYRGGLEPINFQTAADQARELINSWVESQTNGIIRNVLQPSSVDSQTAMVLVNAIV FKGL EKAFKDEDTQAMPFRVTEQESKPVQMMYQIGLFRVASMASEKMKILELPFASGTM S LVLLPDEVSGLEQLES IINFEKL E SSNV EERKIKVYLPRMKMEEKYNLTSVLMA MGITDVFSSSANLSGISSAESLKISQAVHAAHAEINEAGREVVGSAEAGVDAASVSEEFR ADHPFLFCIKHIATNAVLFFGRCVSP (SEC ID NO: 117) HPV16 E7 aa43-77: GQAEPDRAHYNIVTFCCKCDSTLRLCVQSTHVDIR (SEC ID NO: 118) HPV16 E7 aa48-57: DRAHYNIVTF (SEC ID NO: 119) HPV16 E7 aa49-57 (H-2 Db) : RAHYNIVTF (SEC ID NO: 120) NY-ESO-1 : MQAEGRGTGGSTGDADGPGGPGIPDGPGGNAGGPGEAGATGGRGPRGA GAARASGPGGGAPRGPHGGAASGLNGCCRCGARGPESRLLEFYLAMPF ATPMEAELARRSLAQDAPPLPVPGVLLKEFTVSGNILTIRLTAADHRQ LQLSISSCLQQLSLLMWITQCFLPVFLAQPPSGQRR (SEC ID NO: 121) 2. Preparación de secuencias de ácido nucleico : Para los ejemplos de la presente, se prepararon y utilizaron secuencias de ácido nucleico como se indica en el ejemplo 1, para la formación de los complejos de carga con portador polimérico polimerizados o para los complejos de carga con portador polimérico no polimerizados para comparación. Estos complejos de carga con portador polimérico se utilizaron para transacción in vitro e in vivo, para inmunoestimulación in vitro y para caracterizaciones de partículas .
De acuerdo con una primera preparación, las secuencias de ADN, que codifican para las secuencias de ARN correspondientes, se prepararon las secuencias R1180, R722 y de R491. Las secuencias de los ARN correspondientes se muestran en el listado de secuencia (SEC ID NOs : 112, 105, y 113) .
Las secuencias ricas en GU cortas y los oligonucleotidos CpG 2216, se prepararon mediante síntesis en fase sólida automática por medio de química de fosforamidita .
Las secuencias se muestran en el listado de secuencias (SEC ID NOs : 115 y 114 ) .
Transcripción in vitro: Los plásmidos de ADN respectivos preparados de acuerdo con el Ejemplo 2 para R1180, R722 y R491 se transcribieron in vitro utilizando T7 -polimerasa (T7-Opti mRNA Kit, CureVac, Tübingen, Alemania) siguiendo las instrucciones del fabricante. Posteriormente, el ARNm se purificó utilizando PureMessenger ( (CureVac, Tübingen, Alemania) . 3. Síntesis de complejos de carga con portador polimérico : Las secuencias de ácido nucleico definidas anteriormente en el Ejemplo 1 se mezclaron con los componentes catiónicos como se define en el Ejemplo 1. Por lo tanto, la cantidad indicada de la secuencia de ácido nucleico se mezcló con el componente catiónico respectivo en proporciones en masa como se indica, formando con esto un complejo. Si se usaran componentes catiónicos polimerizantes , de acuerdo con la presente invención la polimerización de los componentes catiónicos se lleva a cabo simultáneamente con la complejacion de la carga de ácido nucleico. Después de esto, se ajustó la solución resultante con agua a un volumen final de 50 µ? e se incubó durante 30 min. a temperatura ambiente. Las proporciones diferentes del componente catiónico/ácido nucleico utilizadas en los experimentos se muestran en la Tabla 1.
Tabla 1 proporción de N/P = es una medida de la carga iónica del componente catiónico del portador polimérico o del portador polimérico como tal. En caso de que las propiedades catiónicas del componente catiónico se proporcionen mediante átomos de nitrógeno, la proporción de N/P es la proporción de átomos de nitrógeno básico a residuos de fosfato, considerando que los átomos de nitrógeno confieren cargas positivas y el fosfato de la estructura de fosfato del ácido nucleico confiere la carga negativa.
N/P de preferencia se calcula mediante la siguiente fórmula : N/P = pmol [ARN] *proporción*AS catiónico g ARN *3*1000 Como un ejemplo, se aplicó el ARN R722 de acuerdo con la SEC ID NO: 122 que tuvo un peso molecular de 186 kDa. Por lo tanto, 1 pg del ARN R722 confiere 5.38 pmol de ARN. 4. Estimulación de citoquinas en los hPBMC : Las células de HPBMC provenientes de la sangre periférica de donadores sanos se aislaron utilizando un gradiente Ficoll y se lavaron posteriormente con lXPBS (solución salina amortiguada con fosfato). Las células luego se sembraron en placas microtituladoras de 96 pocilios (200xl03/pocillos) . Las células hPBMC se incubaron durante 24 h con 10 µ? del complejo de carga con portador polimérico a partir del Ejemplo 3 que contuvo la cantidad indicada de ácido nucleico en medio X-VIVO 15 (BioWhittaker) . Se midió el efecto inmunoestimulador al detectar la producción de citoquinas de los hPBMC (factor alfa de necrosis tumoral de interferón alfa) . Por lo tanto, se incubaron durante la noche (o/n) placas microtituladortas de ELISA (Nunc Maxisorb) con tampón de unión (0.02% de NaN3, 15 mm de Na2C03, 15 mm de NaHCC>3, pH 9.7), conteniendo adicionalmente un anticuerpo citoquina especifico. Las células luego se bloquearon con lXPBS, que contuvo 1% de BSA (albúmina de suero bovina) . Se agregó sobrenadante celular y se incubó durante 4 h a 37°C. Posteriormente, la placa microtituladora se lavó con lXPBS, que contuvo 0.05% de Tween-20 y luego se incubó con un anticuerpo secundario marcado con biotina (BD Pharmingen, Heidelberg, Alemania) . A la placa se agregó peroxidasa de rábano picante acoplada con estreptavidina . Luego, la placa se lavó nuevamente con lXPBS, que contuvo 0.05% de Tween-20 y se agregó como un sustrato ABTS (ácido 2 , 2 ' -azino-bis ( 3-etil-benztiazolin-6-sulfónico) . La cantidad de citoquinas se determinó al medir la absorción a 405 nm (OD 405) utilizando una curva estándar con citoquinas recombinantes (BD Pharmingen, Heidelberg, Alemania) con el lector Sunrise ELISA de Tecan (Crailsheim, Alemania) . En las figuras 3A, 3B, 4A, 4B, 5A, 5B, 6A, 6B, 7A, 7B, 8A, 8B y 9A, 9B, se muestran los resultados respectivos. 5. Mediciones de potencial zeta : El potencial zeta de los complejos de carga con portador polimérico se evaluó mediante el método de electroforesxs Doppler con láser utilizando un Zetasizer Nano (Malvern Instruments, Malvern, UK) . La medición se realizó a 25°C y se utilizó un ángulo de dispersión de 173°. En la figura 2 se muestran los resultados. 6. Estabilidad de los complejos después de la liofilización Los diámetros hidrodinámicos de los complejos de carga con portador polimérico como se prepararon anteriormente, se midieron mediante dispersión de luz dinámica utilizando un Zetasizer Nano (Malvern Instruments, Malvern, UK) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Las mediciones se realizaron a 25°C en tampón analizado mediante un método acumulante para obtener los diámetros hidrodinámicos y los índices de polidispersidad de los complejos de carga con portador poliméricos . Los complejos de carga con portador polimérico se encontraron como se indica en el Ejemplo 3 y se midieron los diámetros hidrodinámicos con complejos recién preparados y con complejos reconstituidos después de la liofilización . En la figura 1, se muestran los resultados respectivos del experimento. 7. Experimen'bos de inmunización: a) Inmunización con ovalbúmina o SIINFEKL: Para inmunización, las vacunas de la proteína de ovalbúmina (OVA) (5 pg) o el péptido ovalbúmina-específico SIINFEKL (50 µq) se combinaron con los complejos de carga poliméricos R722/CRi2C (en una proporción de 2:1 p/p) (30 pg de R722/15 pg de CRi2C) como un adyuvante y se inyectaron intradérmicamente en ratones hembra C57BL/6 (7 ratones por grupo para la inoculación en tumores y 5 ratones por grupo para la detección de una respuesta inmunitaria) . La vacunación se repitió 2 veces en 2 semanas. Para comparación, los ratones se inyectaron solo con los antígenos. b) Inmunización con la vacuna de la Rabia: Para inmunización, la vacuna Rabipur® o HDC (ambas comprendieron virus inactivados de la Rabia) (0.1, 0.01 y 0.001 veces la dosificación humana) se combinó con los complejos de carga polimérica R722/CRi2C (en una proporción de 3.7:1 p/p) (30 µg de R722/8.1 g de CRi2C) como un adyuvante y se inyectó intramuscularmente en ratones hembra Balb/c (5 ó 8 ratones por grupo; como se indica) . Para comparación, los ratones se inyectaron con Rabipur® o HDC solas. c) Inmunización con la vacuna de Influenza A(HlNl)pdm09 (gripe porcina): Para inmunización, la vacuna Pandemrix© o Celvapan© (ambas comprendieron el virus inactivado de la Influenza A (H1N1 ) pdmO 9 ) (0.1 g/dosis) se combinó con los complejos de carga poliméricas R722/CRi2C (en una proporción de 2:1 p/p) (15 g de R722/7.5 ]iq de CRi2C para Celvapan® y 30 µ? de R722/15 µq de CRi2C para Pandemrix©) como adyuvante y se inyectó intramuscularmente en ratones hembra Balb/c (5 ratones por grupo) . Para comparación, los ratones se inyectaron con Pandemrix® o Celvapan® solas. d) Inmunización con la vacuna de influenza estacional : Para la inmunización la vacuna de influenza estacional Begrivac® (comprendió cepas inactivadas del virus de Influenza según se recomienda por la HO; temporada 2009/2010) (0.1 g/dosis) se combinó con los complejos de carga polimérica R722/ CRi2C (en una proporción de 2:1 p/p) (30 ]iq de R722/15 de CR12C ) como adyuvante y se inyectó intramuscularmente en ratones hembra de Balb/c (8 ratones por grupo) . Para comparación, los ratones se inyectaron Begrivac® sola . e) Inmunización con la vacuna de Hepatitis B: Para inmunización la vacuna de Hepatitis B Engerix®-B (comprendió el antigeno superficial de Hepatitis B recombinante) (0.5 pg/dosis) se combinó con los complejos de carga polimérica R722/CRi2C (en una proporción de 3.7:1 p/p) (6.25 iq de R722/1.7 µq de CR12C ) como adyuvante y se inyectó intramuscularmente en ratones hembra Balb/c (8 ratones por grupo) . Para comparación, los ratones se inyectaron con Engerix©-B sola. f) Inmunización con el péptido E7-derivado del virus 16 de papiloma humano (HPV16) : Para inmunización, el péptidoaa43-77 E7 derivado de HPV16 (100 pg/dosis) se combinó con los complejos de carga poliméricos R722/CRi2C (en una proporción de 2:1 p/p) (50 g de R722/25 µg de CRj_2C) como adyuvante y se inyectó intradérmicamente en ratones hembra C57BL/6 (5 ratones por grupo) . Para comparación los ratones se inyectaron con péptido solo.
En un experimento adicional (figura 22) el péptido aa43-77 E7 derivado de HPV (100 µ?/ ?e?e) se combinó con los complejos de carga poliméricos R722/CRi2C (en una proporción de 2:1 p/p) (50 µ? de R722/25 µ? de CR12C) durante el paso de la polimerización c) del método para preparar la carga con el portador polimérico complejada como se definió anteriormente. Por lo tanto, el péptido derivado de HPV forma parte del complejo de carga con portador polimérico y está indicado como E7 aa43-77 /R722 /CR12C . Para comparación en este experimento adicional, los ratones se inyectaron con el péptido solo (E7 aa43-77) y la composición farmacéutica inventiva que comprende el péptido E7 aa43-77 como antigeno y el complejo de carga con portador polimérico como adyuvante, en donde el complejo de carga con portador polimérico no comprendió el antigeno (E7 aa43-77 + R722/CRi2C) . g) Inmunización con la proteina NY-ESO-1 Para inmunización, la proteina NY-ESO-1 del antigeno tumoral (5 µg/dosis) se combinó con los complejos de carga poliméricos R722/CRi2C (en una proporción de 2:1 p/p) (30 µg de R722 15 g de CR12C) como adyuvante y se inyectó 2 veces en un término de 15 días intramuscularmente en ratones hembra C57BL/6 (5 ratones por grupo) . Para comparación, los ratones se inyectaron con la proteina sola. 8. Detección de una respuesta inmunitaria antigeno- especifica (respuesta inmunitaria de células B) : a) Detección de anticuerpos dirigidos contra ovalbúmina : La detección de un respuesta inmunitaria antigeno especifica (respuesta inmunitaria de células B) se llevó a cabo al detectar los anticuerpos antigeno-especificos . Por lo tanto, las muestras sanguíneas se extrajeron de ratones vacunados 5 días después de la última vacunación y se prepararon sueros. Placas MaxiSorb (Nalgene Nunc International) se recubrieron con la proteína de ovalbúmina Gallus gallus. Después de bloquear con lXPBS que contuvo 0.05% de Tween-20 y 1% de BSA las placas se incubaron con suero diluido de ratón. Posteriormente, se agregó un anticuerpo secundario acoplado con biotina (Anti-ratón-IgG2a Pharmingen) . Después de lavar, la placa se incubó con peroxidasa-estreptavidina de rábano picante y posteriormente se midió la conversión del sustrato ABTS (ácido 2,2'-azino-bis (3-etil-benztiazolin-6-sulfónico) . En la figura 11, se muestran los resultados de esta inducción de anticuerpos con la vacunación con una composición farmacéutica inventiva. b) Detección de anticuerpos dirigidos contra el virus de la Rabia: La detección de una respuesta inmunitaria antigeno especifica (respuesta inmunitaria de células B) se llevó a cabo al detectar anticuerpos IgG totales específicos del virus de la Rabia. Por lo tanto, se extrajeron muestras sanguíneas de ratones vacunados 7 y 21 días después de la vacunación y se prepararon sueros. Las placas MaxiSorb (Nalgene Nunc International) se recubrieron con la vacuna de las rabias disponible comercialmente que contuvo el virus inactivado (HDC; 1:10000) . Después de bloquear con lXPBS que contuvo 0.05% de T een-20 y 1% de BSA las placas se incubaron con suero diluido de ratón. Posteriormente, se agregó un anticuerpo secundario acoplado con peroxidasa de rábano picante (Anti-ratón-IgG Pharmingen) . Después de lavar, la placa se desarrollaron utilizando ABTS y posteriormente se midió la conversión del sustrato de ABTS (ácido 2,2'-azino-bis ( 3-et il-benzt iazolin-6-sulfónico) . En la figura 13, se muestran los resultados de esta inducción de anticuerpos con la vacunación con una composición farmacéutica inventiva. c) Determinación de la afinidad de anticuerpos dirigidos contra el virus de la Rabia: La detección de anticuerpos IgG totales dirigidos contra el virus de la Rabia se llevó a cabo como se describe de conformidad con b) con las diferencias de que los sueros de ratón sólo se probaron a una dilución de 1:40. Además, después de la incubación con el suero de ratón, las placas se lavaron con una concentración cada vez mayor de urea (6, 7 y 8 M de urea) . Mediante lavando con urea, sólo se pueden detectar los anticuerpos con una alta afinidad al antigeno. En la figura 15, se muestran los resultados de esta inducción de anticuerpos en la vacunación con una composición farmacéutica inventiva. d) Detección de anticuerpos dirigidos contra el virus de Influenza A(HlNl)pdm09 (gripe porcina) : La detección de una respuesta inmunitaria antigeno especifica (respuesta inmunitaria de células B) se llevó a cabo al detectar los anticuerpos IgG2a específicos del virus de Influenza A ( HlNl ) pdmO 9. Por lo tanto, se extrajeron muestras sanguíneas provenientes de ratones vacunados 14 días después de la vacunación y se prepararon sueros. Placas MaxiSorb (Nalgene Nunc International) se recubrieron con el virus inactivado A(HlNl)pdm09 de Influenza A/California/7/09 (NIBSC, UK) (a 1 µ?/???) . Después de bloquear con lxPBS que contuvo 0.05% de Tween-20 y 1% de BSA, las placas se incubaron con suero diluido de ratón. Posteriormente, se agregó un anticuerpo secundario acoplado con biotina (Anti-ratón-IgG2a Pharmingen) . Después del lavado, la placa se incubó con peroxidasa-estreptavidina de rábano picante y posteriormente se midió la conversión del sustrato ABTS (ácido 2 , 2 ' -azino-bis ( 3-etil-benzt iazolin-6-sulfónico) para determinar la inducción de anticuerpos IgG2a. En la figura 17, se muestran los resultados de esta inducción de anticuerpos con la vacunación con una composición farmacéutica inventiva. e) Detección de anticuerpos dirigidos contra cepas del virus de influenza estacional; La detección de una respuesta inmunitaria antigeno especifica (respuesta inmunitaria de células B) se llevó a cabo mediante la detección de anticuerpos IgG2a específicos del virus de Influenza. Por lo tanto, se extrajeron muestras sanguíneas provenientes de ratones vacunados 28 días después de la vacunación y se prepararon sueros. Placas MaxiSorb (Nalgene Nunc International) se recubrieron con Influvac 2009/10® (a 5 µq/ml) que contuvo los mismos antígenos de Influenza viral como la vacuna de Influenza utilizada para la vacunación. Después de bloquear con lxPBS que contuvo 0.05% de Tween-20 y 1% de BSA las placas se incubaron con suero diluido de ratón. Posteriormente, se agregó un anticuerpo secundario acoplado con biotina (Anti-ratón-IgG2a Pharmingen) . Después de lavar, la placa se incubó con peroxidasa-estreptavidina de rábano picante y posteriormente se midió la conversión del sustrato ABTS (ácido 2,2'-azino-bis ( 3-etil-benztiazolin-6-sulfónico) para determinar la inducción de anticuerpos IgG2a. En la figura 19, se muestran los resultados de esta inducción de anticuerpos en la vacunación con una composición farmacéutica inventiva. f) Detección de anticuerpos dirigidos contra el antigeno superficial de Hepatitis B (HBsAg) : La detección de un respuesta inmunitaria antigeno especifica (respuesta inmunitaria de células B) se llevó a cabo al detectar anticuerpos IgG2a HBsAG específicos. Por lo tanto, se extrajeron muestras sanguíneas provenientes de ratones vacunados 28 días después de la vacunación y se prepararon sueros. Placas axiSorb (Nalgene Nunc International) se recubrieron con el antígeno superficial de Hepatitis B recombinante (HBsAG) (Aldevron, USA) (1 g/ml) . Después de bloquear con 1XPBS que contuvo 0.05% de Tween-20 y 1% de BSA las placas se incubaron con suero diluido de ratón.
Posteriormente, se agregó un anticuerpo secundario acoplado con biotina (Anti-ratón-IgG2a Pharmingen) . Después de lavar, la placa se incubó con peroxidasa-estreptavidina de rábano picante y posteriormente se midió la conversión del sustrato ABTS (ácido 2 , 2' -azino-bis ( 3-etil-benzthiazolin-6-sulfónico) para determinar la inducción de anticuerpos IgG2a. En la figura 20, se muestran los resultados de esta inducción de anticuerpos en la vacunación con una composición farmacéutica inventiva . 9. Detección de una respuesta inmunitaria celular antigeno-especifica mediante ELISPOT: a) Detección de una respuesta a células T citotóxicas dirigida contra ovalbúmina: 5 días después de la última vacunación, los ratones se sacrificaron, se retiraron los bazos y se aislaron los esplenocitos . Para la detección de INFgamma se incubó una placa de multiselección con recubrimiento (Millipore) durante la noche con tampón de recubrimiento (tampón de Carbonato-Bicarbonato 0.1 M, pH 9.6 10.59 g/1 Na2C03, 8.4g /l NaHC03) que comprendió el anticuerpo contra INFy (BD Pharmingen, Heidelberg, Alemania) . Al siguiente dia, se agregaron 1 X 106 células/pocilio y se re-estimularon con 1 g/pocillo del péptido relevante (SIINFEKL de ovalbúmina) ; péptido irrelevante (Connexin = péptido control) o tampón sin péptido. Después, las células se incubaron durante 24h a 37°C. Al siguiente día, las placas se lavaron 3 veces con PBS, una vez con agua y una vez con PBS/0.05% de Tween-20 y después se incubaron con un anticuerpo secundario con biotina durante ll-24h a 4°C. Luego, las placas se lavaron con PBS/0.05% de Tween-20 y se incubaron durante 2h a temperatura ambiente con fosfatasa alcalina acoplada a estreptavidina en tampón de bloqueo. Después de lavar con PBS/0.05% de Tween-20, el sustrato (fosfato de 5-bromo-4-cloro-3-indolilo/Nitro Blue Tetrazolium Liquid Substrate System from Sigma Aldrich, Taufkirchen, Alemania) se agregó a la placa y se podría detectar visualmente la conversión del sustrato. La reacción luego se detuvo mediante lavando de las placas con agua. Las placas secas luego se leyeron mediante un lector de placas ELISPOT. Para la visualización de los niveles maculares, los números se corrigieron mediante sustracción de imagen de fondo. En la figura 12, se muestran los resultados de esta inducción de células T citotóxicas específicas con la vacunación con una composición farmacéutica inventiva. b) Detección de una respuesta a células T citotóxicas dirigida contra el virus de la Rabia: 5 días después de la vacunación, los ratones se sacrificaron, se retiraron los bazos y se aislaron los esplenocitos . Para la detección de INFgamma se incubó durante la noche una placa para multiselección de recubrimiento (Millipore) con tampón de recubrimiento (tampón de carbonato/bicarbonato 0.1 M, pH 9.6, 10.59 g/1 de Na2C03, 8.4g/l de NaHC03) que comprende el anticuerpo contra INFy (BD Pharmingen, Heidelberg, Alemania) . Al siguiente día, se agregaron 5 X 105 células/pocilio y se re-estimularon con el virus inactivado de la Rabia (Rabipur® 1:100 o HDC 1:100)) o tampón sin péptido (BSA) . Después, las células se incubaron durante 24h a 37°C. Al siguiente día, las placas se lavaron 3 veces con PBS, durante 5 minutos con agua y una vez con PBS/0.05% de Tween-20 y después se incubaron con un anticuerpo secundario acoplado con biotina durante ll-24h a 4°C. Luego las placas se lavaron con PBS/0.05% de Tween-20 y se incubaron durante 2h a temperatura ambiente con fosfatasa alcalina acoplada con estreptavidina en tampón de bloqueo. Después de lavar con PBS/0.05% de Tween-20 se agregó a la placa el sustrato (fosfato de 5-bromo-4 -cloro-3-indolilo/Nitro Blue Tetrazolium Liquid Substrate System from Sigma Aldrich, Taufkirchen, Alemania) y se podría detectar visualmente la conversión del sustrato. La reacción se detuvo mediante el lavado de las placas con agua. Las placas secas luego se leyeron mediante un lector de placas ELISPOT. Para la visualización de los niveles maculares, los números se corrigieron mediante sustracción de imagen. En la figura 14, se muestran los resultados de esta inducción de células T citotóxicas especificas con la vacunación con una composición farmacéutica inventiva. c) Detección de una respuesta a células T citotóxicas dirigía contra gripe porcina ( ( H1N1 ) pdmO 9 ) : 6 días después de la vacunación, los ratones se sacrificaron, se retiraron los bazos y se aislaron los esplenocitos . Para la detección de INFgamma se incubó durante la noche una placa para multiselección de recubrimiento (Millipore) con tampón de recubrimiento (tampón de carbonato/bicarbonato 0.1 M, pH 9.6, 10.59 g/1 de Na2C03, 8.4g/l de aHC03) que comprendió el anticuerpo contra INFy (BD Pharmingen, Heidelberg, Alemania) . Al siguiente día, se agregaron 5 X 10D células /pocilio y se re-estimularon con el virus inactivado (H1N1 ) pdm09 de Influenza A/California/7/09 (NIBSC, UK) (a 10 g/ml) o tampón sin péptido (BSA) . Después, las células se incubaron durante 24h a 37°C. Al siguiente día, las placas se lavaron 3 veces con PBS, durante 5 minutos con agua y una vez con PBS/0.05% de Tween-20 y después se incubaron con un anticuerpo secundario acoplado con biotina durante ll-24h a 4°C. Luego las placas se lavaron con PBS/0.05% de Tween-20 y se incubaron durante 2h a temperatura ambiente con fosfatasa alcalina acoplada con estreptavidina en tampón de bloqueo. Después de lavar con PBS/0.05% de Tween-20 se agregó a la placa el sustrato (fosfato de 5-bromo-4-cloro-3-indolilo/Nitro Blue Tetrazolium Liquid Substrate System from Sigma Aldrich, Taufkirchen, Alemania) y se podría detectar visualmente la conversión del sustrato. La reacción luego se detuvo mediante el lavado de las placas con agua. Las placas secas luego se leyeron mediante un lector de placas ELISPOT. Para la visualización de los niveles maculares, los números se corrigieron mediante sustracción de imagen. En la figura 18, se muestran los resultados de esta inducción de células T citotóxicas específicas con la vacunación con una composición farmacéutica inventiva. d) Detección de una respuesta a células T citotóxicas dirigida contra la proteína E7 del virus 16 de papiloma humano (HPV16) : 8 días después de la vacunación, los ratones se sacrificaron, se retiraron los bazos y se aislaron los esplenocitos . Para la detección de INFgamma se incubó durante la noche una placa para multiselección de recubrimiento (Millipore) con tampón de recubrimiento (tampón de carbonato/bicarbonato 0.1 M, pH 9.6, 10.59 g/1 de Na2C03, 8.4g/l de NaHC03) que comprendió el anticuerpo contra INFy (BD Pharmingen, Heidelberg, Alemania) . Al siguiente día, se agregaron 5 X 105 células/pocilio y se re-estimularon con diferentes péptidos derivados de E7 (E7 aa43-77, E748-57, E7 aa49-57) (1 µg/ml), un péptido irrelevante (péptido LacZ H-2 Ld) o tampón sin péptido (DMSO) . Después, las células se incubaron durante 24h a 37 °C. Al siguiente día, las placas se lavaron 3 veces con PBS, durante 5 minutos con agua y una vez con PBS/0.05% de Tween-20 y después se incubaron con un anticuerpo secundario acoplado con biotina durante ll-24h a 4°C. Luego las placas se lavaron con PBS/0.05% de Tween-20 y se incubaron durante 2h a temperatura ambiente con fosfatasa alcalina acoplada con estreptavidina en tampón de bloqueo. Después de lavar con PBS/0.05% de Tween-20 se agregó a la placa el sustrato (fosfato de 5-bromo-4-cloro-3-indolilo/Nitro Blue Tetrazolium Liquid Substrate System from Sigma Aldrich, Taufkirchen, Alemania) y se podría detectar visualmente la conversión del sustrato. La reacción luego se detuvo mediante el lavado de las placas con agua. Las placas secas luego se leyeron mediante un lector de placas ELISPOT. Para la visualización de los niveles maculares, los números se corrigieron mediante sustracción de imagen. En la figura 21, se muestran los resultados de esta inducción de células T citotóxicas específicas con la vacunación con una composición farmacéutica inventiva, incluyendo un antígeno peptidico proveniente de un patógeno asociado con una enfermedad infecciosa para el antigeno peptidico E7aa43-77 no incluido en el complejo con carga polimérica, y adicionalmente para el antigeno peptidico E7aa43-77 cuando se incluyó en el complejo de carga polimérica en la figura 22. e) Detección de una respuesta a células T citotóxicas dirigida contra el antígeno tumoral NY-ESO-1 : 7 días después de la vacunación, los ratones se sacrificaron, se retiraron los bazos y se aislaron los esplenocitos . Para la detección de INFgamma se incubó durante la noche una placa para multiselección de recubrimiento (Millipore) con tampón de recubrimiento (tampón de carbonato/bicarbonato 0.1 M, pH 9.6, 10.59 g/1 de Na2C03, 8.4g/l de NaHCC>3) que comprendió el anticuerpo contra INFy (BD Pharmingen, Heidelberg, Alemania) . Al siguiente día, se agregaron 5 X 106 células/pocilio y se re-estimularon con una biblioteca de epítopes de NY-ESO-1 gue comprendió los epítopes predichos MHC I y MHC II. Después, las células se incubaron durante 24h a 37°C. Al siguiente día, las placas se lavaron 3 veces con PBS, una vez con agua y una vez con PBS/0.05% de Tween-20 y después se incubaron con un anticuerpo secundario acoplado con biotina durante ll-24h a 4°C. Luego, las placas se lavaron con PBS/0.05% de Tween-20 y se incubaron durante 2h a temperatura ambiente con fosfatasa alcalina acoplada con estreptavidina en tampón de bloqueo. Después de lavar con PBS/0.05% de Tween-20 se agregó a la placa el sustrato (fosfato de 5-bromo-4-cloro-3-indolilo/Nitro Blue Tetrazolium Liquid Substrate System from Sigma Aldrich, Taufkirchen, Alemania) y se podría detectar visualmente la conversión del sustrato. La reacción luego se detuvo mediante el lavado de las placas con agua. Las placas secas luego se leyeron mediante un lector de placas ELISPOT. Para la visualización de los niveles maculares, los números se corrigieron mediante sustracción de imagen. En la figura 23, se muestran los resultados de esta inducción de células T citotóxicas específicas con la vacunación con una composición farmacéutica inventiva, incluyendo al menos un antígeno tumoral . 10. Inoculación de tumores: Una semana después de la última vacunación, se implantaron subcutáneamente en los ratones vacunados 1 x 106 células E.G7-0VA (células tumorales que expresan establemente ovalbúmina) . El crecimiento tumoral se monitoreó al medir el tamaño del tumor en 3 dimensiones utilizando un calibrador. En la figura 10 se muestran los resultados de esta inducción una respuesta anti-tumoral con la vacunación con una composición farmacéutica inventiva. 11. Prueba para neutralización de virus : La detección de la respuesta a anticuerpos neutralizantes de virua (respuesta inmunitaria de células B especificas) se llevó a cabo por medio del ensayo para neutralización de virus. Por lo tanto, se extrajeron muestras sanguíneas de ratones vacunados 21 días después de la vacunación y se prepararon en suero. Estos sueros se utilizaron en una prueba para neutralización de virus con anticuerpos fluorescentes (FAVN) utilizando la cepa para inoculación de virus (CVS) adaptada al cultivo celular del virus de la Rabia como se recomendó por la OIE (Organización Mundial para la Salud Animal) y se describió primero en Cliquet F. , Aubert M. & Sagne L. (1998); J. Inmunol. Methods, 212, 79-87. En resumen, se probarán los sueros inactivados por calor como cuadruplicados en diluciones en serie doble como cuadruplicados para el potencial de neutralizar 100 TCID50 (dosis infecciosas de cultivo de tejidos al 50%) de CVS en 50 µ? de volumen. Por lo tanto, se incubaron diluciones séricas con el virus durante 1 hora a 37°C (en una incubadora de humedad con 5% de CO2) y posteriormente se agregaron células BHK-21 tratadas con tripsina (4 X 105 células /mi ; 50 µ? por pocilio) . Los cultivos de células infectadas se incubaron durante 48 horas en una incubadora húmeda a 37 °C y 5% de CO? . La infección de las células se analizó después de la fijación de las células utilizando 80% de acetona a temperatura ambiente utilizando el conjugado anti-rabia FITC. Las placas se lavaron dos veces utilizando PBS y se retiró el exceso de PBS . Los cultivos celulares se marcaron como positivos o negativos para la presencia del virus de la Rabia. Las células marcadas negativas en los pocilios con sueros tratados representan la neutralización del virus de la Rabia. Cada una de las pruebas FAVN incluyó suero estándar WHO o OIE (suero de referencia positivo) que sirvió como referencia para la estandarización del ensayo. La actividad de neutralización de los sueros de prueba se calculó con referencia al suero estándar y se mostró como unidades internacionales/ml (IU/ml). En la figura 16, se muestran los resultados de este experimento. 12. Infección de ratones mediante inoculación del virus de la rabia: 37 dias después de una inmunización intramuscular individual de ratones utilizando 0.001 veces la dosificación humana de Rabipur® y 3 µ? de R722 y 0.81 µg de CRi2C (3.7:1 p/p) todos los ratones en el experimento se infectaron utilizando LD50 25 veces de la cepa CVS del virus de la Rabias intracranealmente (i.c). Los ratones se monitorearon para síntomas específicos de la enfermedad de la rabia y el desarrollo de peso corporal. En la figura 24, se muestran los resultados de este experimento. 13. Inoculación de tumores con células TC-1 (mención del crecimiento tumoral y supervivencia de los animales en un ámbito terapéutico) : Ocho ratones C57BL/6 por grupo se inocularon en el día 1 con 1 X 105 células TC-1 que expresaron la proteína HPV E6 y E7. La vacunación inició en el día 7 después de la inoculación del tumor (volumen tumoral medio 31-48 rain3) . Los ratones se vacunaron intradérmicamente 5 veces (en el día 8, 12, 15, 19 y 22) con 5 pg o 50 µq del péptido E7 combinado con 50 pg de CRi2C/R722 (1:2; p/p). Para comparación, los ratones se inyectaron con los complejos de carga polimérica solos .
El complejo de carga con portador polimérico combinado con el péptido E7aa43-77 de E7 derivado de HPV-16 incluso afectó el crecimiento de tumores en comparación con el complejo de carga con portador polimérico solo (figuras 25A, 25B y 25C) .
El complejo de carga con portador polimérico combinado con el péptido E7 derivado de HPV-16 mejoró en gran medida la supervivencia de ratones portadores de tumores (tiempo medio de supervivencia de 44.5 días para 50 pg del péptido E7 + 50 µ? del complejo de carga con portador polimérico; tiempo medio de supervivencia de 22 dias para 5 g del péptido E7 + 50 pg del complejo de carga con portador polimérico) en comparación con el péptido E7 o 50 del complejo de carga con portador polimérico solo (Figura 26) . 1 . Inoculación de tumores con células TC-1 (inducción de una respuesta de células T con memoria) : Trece ratones C57BL/6 por grupo se vacunaron intradérmicamente una vez a la semana durante cuatro semanas (en los dias 0, 7, 14 y 21) con el complejo de carga con portador polimérico formado por el péptido catiónico reticulado con disulfuro CR12C como portador y el ARNis R722 como la carga de ácido nucleico y el péptido E7.
Ocho semanas después de la cuarta vacunación, 5 ratones/grupo se sacrificaron, se aislaron los esplenocitos y se determinó la frecuencia de las células T CD8+ antigeno-específicas mediante tinción pentamérica de HPV y citométría de flujo de acuerdo con el Ejemplo 15.
El complejo de carga con portador polimérico combinado con el péptido E7aa43-77 de E7 derivado de HPV-16 dio por resultado en un aumento estadísticamente significativo de las células T CD8+ antígeno-específicas para los ratones vacunados con 50 iq del péptido de E7 solo (p=0.0007 para 5 pg del péptido E7 y p = 0.0002 50 µ? del péptido E7; se evaluaron las diferencias estadísticas entre los grupos mediante prueba T no pareada) . De esta forma, la combinación del complejo de carga con portador polimérico combinada con el péptido E7 derivado de HPV-16 induce una respuesta potente de células T CD8+ con memoria (Figura 27) .
Ocho semanas después de la cuarta vacunación 8 ratones /grupo se inocularon con 1 x 105 células tumorales TC-1 y se monitoreo el crecimiento de tumores.
El complejo de carga con portador polimérico combinado con el péptido E7 de E7aa43-77 derivado de HPV-16 dio por resultado en un retraso drástico de crecimiento de tumores (4 respuestas completas para 5 iq del péptido E7 + 50 \iq de 50 µg del complejo de carga con portador polimérico; 7 respondedores completos para 50 µg del péptido E7 + 50 vq de 50 pg del complejo de carga con portador polimérico) . De esta forma, la combinación del complejo de carga con portador polimérico combinado con el péptido E7 derivado de HPV-16 indujo una potente respuesta de células T CD8+ con memoria (Figura 28) 15. Detección de respuestas inmunitarias celulares antigeno-especificas mediante tinción con pentameros : Se sembraron esplenocitos recién aislados en placas de 96 pocilios (2 X 106 células/pocilio) y se tiñeron con Fc-Block (1:100, anti-CDl6/CD32 ; BD Biosciences) . Después de una incubación de 20 minutos, se agregó el H-2Db-RAHYNIVTF-pentámero (HPV 16 E7 49-57 ) -Pentámero-PE ( ??µ?/pocillo) y las células se incubaron durante 30 minutos adicionales a 4°C. Después de lavar, las células se tiñeron con los siguientes anticuerpos: CD19-FITC (1:200), CD8-PerCP-Cy5.5 (1:200), KLRGl-PECy7 (1:200), CD44-APC (1:100), CD127-eFluor450 (1:100) (eBioscience) y CD3-APC-Cy7 (1:200) (BD Biosciences). Se utilizó Aqua Dye para distinguir las células vivas/muertas ( Invitrogen) . Las células se recolectaron utilizando un citómetro de flujo Canto II (Beckton Dickinson) . Los datos de la citometria de flujo se analizaron utilizando el software FlowJo (Tree Star, Inc.) . Se realizó un análisis estadístico utilizando el software GraphPad Prism, Versión 5.01. Las diferencias estadísticas entre grupos se evaluaron mediante prueba t no pareada con corrección de Welch. 16. Inmunización con influenza estacional y detección de anticuerpos : Para la inmunización, la vacuna de influenza estacional Mutagrip® (comprendió cepas inactivadas del virus de Influenza como se recomendó por · la HO; temporada 2011/2012) (4.5, 0.45 y 0.045 ]iq) se combinó con los complejos de carga polimérica R722/CRi2C (en una proporción de 3.7:1 p/p) (5 µq de R722/1.35 yg de CRi2C) como adyuvante y se inyectó intramuscularmente en ratones hembra Balb/c (8 ratones por grupo) . Para comparación, los ratones se inyectaron con Mutagrip® sola.
La detección de una respuesta inmunitaria antigeno-especifica (respuesta inmunitaria de células B) se llevó a cabo al detectar títulos de medición de hemaglutinina (HI) del virus de Influenza. Por lo tanto, se extrajeron muestras sanguíneas provenientes de ratones vacunados 21 días después de la vacunación y los sueros se inactivaron con calor, se incubaron con caolín, y se pre-adsorbieron para glóbulos rojos de pollo. Para el análisis de HI), 50µ1 de diluciones dobles de sueros pre-tratados se incubaron con Influenza inactivada de A/California/7 /2009 H1N1 o Influenza A/Victoria/210/2009 H3N2 (ambos NIBSC) y 50µ1 de 0.5% de glóbulos rojos de pollo. En las figuras 29A y 29B, se muestran los resultados de esta inducción de títulos de HI con la vacunación con una composición farmacéutica inventiva.
La detección de una respuesta inmunitaria antigeno-especifica (respuesta inmunitaria de células B) se llevó a cabo al detectar anticuerpos IgG2a específicos del virus de Influenza. Por lo tanto, se extrajeron muestras sanguíneas provenientes de ratones vacunados 21 días después de la vacunación y se prepararon en suero. Placas MaxiSorb (Nalgcne Nunc International) se recubrieron con influenza inactivada A/California/7/2009 HlNl (NIBSC, Potters Bar, UK) a 1 yg/ml. Después de bloquear con lXPBS que contuvo 0.05% de Tween-20 y 1% de BSA, las placas se incubaron con suero diluido de ratón. Posteriormente, se agregó un anticuerpo secundario acoplado a biotina (Anti-ratón-IgG2a Pharmingen) . Después de lavar, la placa se incubó con peroxidasa-estreptavidina de rábano picante y posteriormente se midió la conversión del sustrato ABTS (ácido 2 , 2 ' -azino-bis ( 3-etil-benztiazolin-6-sulfónico) para determinar la inducción de anticuerpos IgG2a. En la figura 30, se muestran los resultados de esta inducción de anticuerpos en la vacunación con una composición farmacéutica inventiva.

Claims (22)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN Habiendo descrito el presente invento, se considera como una novedad y, por lo tanto, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes REIVINDICACIONES :
1. Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende: (A) un complejo de carga con portador polimérico, que comprende: a) un portador polimérico que comprende componentes catiónicos reticulados con disulfuro, de preferencia formados por los componentes catiónicos reticulados con disulfuro, como un portador; y b) al menos de una molécula de ácido nucleico como una carga, y (B) al menos de un antigeno proteinico o peptidico de que se seleccionan del consistir de grupo: (i) un antigeno proveniente de un patógeno asociado con una enfermedad infecciosa; (ii) un antigeno asociado con alergia o una enfermedad alérgica; (iii) un antigeno asociado con una enfermedad autoinmune; y (iv) un antigeno asociado con un cáncer o enfermedad del tumor o un fragmento, variante y/o derivado de antigeno proteinico o peptidico.
2. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el componente (B) no está ligado covalentemente al componente (a).
3. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1 ó 2, caracterizada porque el antigeno proteinico o peptidico proviene de un patógeno seleccionado de la lista que consiste de: virus de la Rabia, virus de Hepatitis B, virus de papiloma humano (hPV) , Bacillus anthracis, virus sincitial respiratorio (RSV) , virus de Herpes simplex (HSV) , virus de Influenza y Mycobacterium tuberculosis .
4. La composición farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-3, caracterizada porque el antigeno proteinico o peptidico se selecciona de la lista que consiste de: • la Hemaglutinina (HA) , la Neuraminidasa (NA) , la Nucleoproteina (NP) , la proteina MI, la proteina M2, la proteina NSl, la proteina NS2 (la proteina NEP: proteina de exportación nuclear) , la proteina PA, la proteina PB1 (proteina de polimerasa básica 1), la proteina PB1-F2 y la proteina PB2 del virus de In luenza ; la nucleoproteina (N) , la fosfoproteina (P) , la proteína de matriz (M) , la glucoproteína (G) , y la Polimerasa de ARN viral (L) ; antígeno superficial de Hepatitis B (HBsAg) , antígeno núcleo de Hepatitis B (HbcAg) , la ADN polimeasa del virus de Hepatitis B, la proteína HBx, la proteína de superficie media preS2, la proteína S grande, la proteína viral VP1, la proteína viral VP2, la proteína viral VP3, y la proteína viral VP4, en cada caso del virus de Hepatitis B; la proteína de El, la proteína de E2, la proteína de E3, la proteína de E4, la proteína de E5, la proteína de E6, la proteína de E7, la proteína de E8, la proteína de Ll, y la proteína de L2, en cada caso de virus de papiloma humano (hPV) ; el antígeno protector (PA), el factor del edema (EF) , el factor letal (LF) , y las proteínas de homología de capa S (SLH) , en cada caso de Bacillus anthracis; la proteína de fusión (F), la proteína con nucleocápside (N) la fosfoproteina (P), la proteína de matriz (M) , la glucoproteína (G) , la proteína grande (L; ARN polimerasa) , la proteína 1 no estructural (NS1) , la proteína 2 no estructural (NS2), la proteína hidrofóbica pequeña (SH), el factor de alargamiento M2-1, y la proteína para regulación de transcripción M2-2, en cada caso de virus sincitial respiratorio (RSV) ; la glucoproteína L (UL1), la uracil-ADN glucosidasa UL2, la proteina UL3, la proteína UL4, la proteína para replicación de ADN UL5, la proteína portal UL6, la proteína para maduración de viriones UL7, la ADN helicasa UL8, la prot4eína de unión al origen de replicción UL9, la glucoproteína (UL10), la proteína de UL11, la exonucleasa alcalina UL12, la proteína quinasa de serina-treonina UL13, la proteína con tegumento UL14, la terminasa (UL15) , la proteína con tegumento UL16, la proteína de UL17, la proteína VP23 con cápside (UL18), la proteína VP5 con cápside mayor VP5 (UL19), proteína de membrana UL20, la proteína con tegumento UL21, la glucoproteína H (UL22) , la timidina Quinasa UL23, la proLeína UL24, la proteína UL25, la proteína P40 con cápside (UL26, VP24, VP22A) , la glucoproteína B (UL27), la proteína ICP18.5 (UL28), la proteína de unión a ADN mayor ICP8 (UL29) , la ADN polimerasa UL30, la proteína de de matriz nuclear UL31, la glucoproteína UL32 con envoltura, la proteína UL33, la proteína de membrana nuclear interna UL34, la proteína VP26 con cápside (UL35) , la proteína UL36 con tegumento grande, la proteina UL37 de ensamble con cápside, la proteina VP19C (UL38), la ribonucleótido reductasa (subunidad grande) UL39, la ribonucleótido reductasa (subunidad pequeña) UL40, la proteina VHS de interrupción de la proteina con tegumento /hospedero viriónico (UL41) , el factor de procesabilidad de la ADN polimerasa UL42, la proteina de membrana UL43, la glucoproteina C (UL44), la proteina de membrana UL45, las proteínas VP11/12 con tegumento (UL46), la proteína VP13/14 con tegumento (UL47), la proteína para maduración de viriones VP16 (UL48, Alfa-TIF) , la proteína UL49 con envoltura, la dUTP difosfatasa UL50, la proteína UL51 con tegumento, la proteína del complejo de ADN helicasa/primasa UL52, la glucoproteina K (UL53) , la proteína de regulación transcripcional IE63 (ICP27, UL54), la proteína UL55, la proteína UL56, la proteína de replicación viral ICP22 (IE68, US1), la proteína US2, la proteína quinasa de serina/treonina US3, la glucoproteina G (US4), la glucoproteina J (US5), la glucoproteina D (US6) , la glucoproteina I (US7), la glucoproteina E (US8), la proteína US9 con tegumento, la proteína US10 con capside/tegumento, la proteína Vmw21 (US11), la proteína ICP47 (IE12, US12), el activador transcripcional mayor ICP4 (IE175, RS1) , la ligasa de E3 ubiquitina ICPO (IE110), la proteína 1 relacionada con latencia (LRP1), la proteína 2 relacionada con latencia (LRP2), el factor de neurovirulencia RL1 (ICP34.5), y la transcripción asociada con latencia (LAT) , en cada caso del virus de Herpes simplex (HSV) ; o la proteína ESAT-6, la proteína ESX-1, la proteína CFP10, la proteína TB10.4, la proteína MPT63, la proteína MPT64, la proteína MPT83, la proteína MTB12, la proteína TB8, la proteína AG85A, la proteína AG85B, las proteínas similares a Rpf, la proteína KATG, la proteína PPE18 , la proteína MTB32, la proteína MTB39 , la cristalina, la proteína HSP65, la proteína PST-S, y la proteína HBHA, el antígeno filtrado de 10 kDa EsxB, la serina proteasa PepA, la proteína de unión a fibronectina D FbpD, la proteína secretada PT51, la lipoproteína de unión a fosfato periplásmico PSTS1 ¡PBP-1), la lipoproteína de unión a fosfato periplásmico PSTS3 (PBP-3, Phos-1), la proteína de la familia PPE PPE14, la proteína de la familia PPE PPE68, la proteína MTB72F, la chaperona molecular DnaK, la lipoproteína de superficie celular MPT83, la lipoproteína P23, proteína permeasa del sistema de transporte de fosfato PstA, el antígeno de 14 kDa, la proteína C de unión a fibronectina FbpCl, la alanina deshidrogenase TB43, y la glutamina sintetasa 1, en cada caso de Mycobacterium tuberculosis.
5. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1 ó 2, caracterizada porque el antígeno proteinico o peptidico está asociado con una alergia o una enfermedad alérgica y se deriva de una fuente seleccionada de la lista que consiste de: polen de césped, polen de árbol, polen de flor, polen de hierba, ácaro del polvo, moho, animales, alimento, y veneno de insecto.
6. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1 ó 2, caracterizada porque el antígeno proteinico o peptidico está asociado con una enfermedad autoinmune y se selecciona de la lista que consiste de: · proteína de mielina básica (MBP) , proteína proteolipídica (PLP), y glucoproteína de mielina oligodendrocítica (MOG) , en cada caso asociadas con esclerosis múltiple (MS) ; CD44, preproinsulina, proinsulina, insulina, decaroxilasa de ácido glutámico (GAD65) , antígeno 2 de msulinoma similar a tirosina fosfatasa (IA2), transportador de zinc ( (ZnT8) , y proteína 60 de choque térmico (HSP60) , en cada caso asociado con diabetes Tipo I; proteina de unión al interfotorreceptor retinoide (IRBP) asociada con uveitis autoinmune; receptor del acetilcolina AchR, y receptor del factor-1 de crecimiento similar a insulina (IGF-1R) , en cada caso asociados con Myasthenia gravis; proteina M proveniente de estreptococos beta-hemolíticos (pseudo-autoantigeno) asociada con fiebre reumática; factor inhibidor de la migración de macrófagos asociados con artritis; complejo de Ro/La RNP, alfa- y beta-fodrina, autoantigeno células insulares, poly (ADP) ribosa polimerasa (PARP) , NuMA, NOR-90, autoantigeno R06O, y antigeno p27, en cada caso asociado con el síndrome de Sj ógren; autoantigeno R06O, lipoproteínas de baja densidad, antígenos Sm del complejo de ribonucleoproteína nuclear pequeña U-l (B/B' , DI, D2, D3, E, F, G) , y ribonucleoproteinas RNP, en cada caso asociado con lupus eritematoso; oxLDL, beta(2)GPI, HSP60/65, y oxLDL/beta (2 ) GPI , en cada caso asociado con Atherosclerosis; receptor beta ( 1 ) -adrenérgico cardíaco con cardiomiopatía dilatada idiopática (DCM); • histidil-ARNt sintetasa (HisRS) asociada con miositis; • topoisomerasa I asociada con la enfermedad de escleroderma ; IL-17; o proteínas de choque térmico.
7. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1 ó 2, caracterizada porque el antígeno proteínico o peptídico está asociado con un cáncer o una enfermedad tumoral y se selecciona de la lista que consiste de: p53, CA125, EGFR, Her2/neu, hTERT, PAP, MAGE-A1 , MAGE-A3, Mesothelin, MUC-1, NY-ESO-1, GP100, MERCADO-1, Tyrosinase, PSA, PSCA, PSMA VEGF, VEGFR1 , VEGFR2 , Ras, CEA y T1.
8. La composición farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizada porque el complejo de carga con portador polimérico es para utilizarse como un adyuvante.
9. La composición farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, caracterizada porque la carga molecular de ácido nucleico es un ácido nucleico inmunoestimulador .
10. La composición farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, caracterizada porque la molécula de ácido nucleico es ARN; de preferencia en donde la carga molecular de ácido nucleico es un ARN inmunoestimulador (ARNis) .
11. La composición farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, caracterizada porque los componentes catiónicos del portador polimérico y la carga molecular de ácido nucleico comprendida en el complejo de carga con portador polimérico se proporciona en una proporción de N/P en la variación de 0.1-20, o en la variación de 0.1-5, o en la variación de 0.1-1, o en la variación de 0.5-0.9.
12. La composición farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, caracterizada porque los componentes catiónicos del portador polimérico comprendidos en el complejo de carga con portador polimérico son péptidos catiónicos.
13. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 12, caracterizada porque los péptidos del catiónico se seleccionan de los péptidos de acuerdo con la fórmula ( I ) : { (Arg) i; (Lys) m; (His) n; (Orn) c; (Xaa) x} ; en donde l + m + n + o + x = 3-100, y 1, m, n, u o = independientemente entre si es cualquier número seleccionado de 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21-30, 31-40, 41-50, 51-60, 61-70, 71-80, 81-90 y 91-100 con la condición de que el contenido general de Arg, Lys, His y Orn represente al menos el 10% de todos los aminoácidos del péptido catiónico; y Xaa es cualquier aminoácido seleccionado de aminoácidos naturales (= de origen natural) o no naturales, excepto de Arg, Lys, His u Orn; y x = cualquier número seleccionado de 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21-30, 31-40, 41-50, 51-60, 61-70, 71-80, 81-90, con la condición de que el contenido general de Xaa no excede el 90% de todos los aminoácidos del péptido catiónico, o los péptidos catiónicos se seleccionan de los péptidos de acuerdo con la subfórmula (Illa) : { (Arg)i (Lys)m; (His)n; (Orn)0; (Xaa' )K(Cys)y} o los péptidos catiónicos proveniente de los péptidos de acuerdo con la subfórmula (Ib) Cysi { (Arg) !,· (Lys) m; (His) n; (Orn) 0; (Xaa) x} Cys2 en donde (Arg)].; (Lys)m; (His)n; (0rn)o; y x son como se definió anteriormente; Xaa' es cualquier aminoácido seleccionado de aminoácidos naturales (= de origen natural) o no naturales excepto de Arg, Lys, His, Orn; o Cys y y es cualquier número seleccionado de 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21-30, 31-40, 41-50, 51-60, 61-70, 71-80, y 81-90, con la condición de que el contenido general de Arg (Arginina), Lys (Lisina) , His (Histidina) y Orn (Ornitina) represente al menos el 10% de todos los aminoácidos del oligopéptido y en donde Cysl y Cys2 sean cisternas próximas o terminales para (Arg)i; (Lys)m; (His)n; (Orn)0; (Xaa)x.
14. La composición farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, caracterizada porque el complejo de carga con portador polimérico no incluye el antigeno proteinico o peptidico.
15. Un kit o un kit de partes caracterizado porque comprende : a) un complejo de carga con un portador polimérico como define de conformidad con las reivindicaciones 1, 2, o cualquiera de las reivindicaciones 8 a 14; y b) al menos de un antigeno proteinico o peptidico o fragmento, variante y/o derivado del mismo como se define de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7.
16. La composición farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, o el kit o kit de partes de conformidad con la reivindicación 15, para utilizarse como una vacuna.
17. Un complejo de carga con un portador polimérico como define de conformidad con la reivindicación 1, 2, o cualquiera de las reivindicaciones 8 a 14 para utilizarse en terapia en combinación con al menos un antigeno proteinico o peptidico o un fragmento, variante y/o derivado del mismo como se define de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7.
18. Un antigeno proteinico o peptidico o fragmento, variante y/o derivado del mismo como se define de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 para utilizarse en terapia en combinación con un complejo de carga con un portador polimérico, como define de conformidad con las reivindicaciones 1, 2, o cualquiera de las reivindicaciones 8 a 14.
19. El complejo de carga con portador polimérico de conformidad con la reivindicación 17, para utilizarse en la terapia de; o el antigeno proteinico o peptidico o fragmento, variante y/o derivado del mismo de conformidad con la reivindicación 18, para utilizarse en la terapia de: (i) una enfermedad infecciosa; (ii) una alergia o una enfermedad alérgica; (iii) una enfermedad autoinmune ; o (iv) un cáncer o una enfermedad tumoral.
20. Un empaque farmacéutico, que incluye: (A) un complejo de carga con un portador polimérico como se define de conformidad con la reivindicación 1, 2, o cualquiera de las reivindicaciones 8 a 14; y (B) las instrucciones que describen el uso del complejo de carga con portador polimérico en terapia en combinación con al menos un antigeno proteinico o peptidico o fragmento, variante y/o derivado del mismo como se define de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7.
21. Un empaque farmacéutico, que incluye: (A) al menos de un antigeno proteinico o peptidico o fragmento, variante y/o derivado del mismo como define de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 ; y (B) las instrucciones que describen el uso del antigeno proteinico o peptidico o un fragmento, variante y/o derivado del mismo en terapia en combinación con un complejo de carga con portador polimérico como se define de conformidad con la reivindicación 1, 2, o cualquiera de las reivindicaciones 8 a 14.
22. El empaque farmacéutico de conformidad con la 20 ó 21, caracterizado porque las instrucciones describen además el uso en la terapia de: (i) una enfermedad infecciosa; (ii) una alergia o una enfermedad alérgica; (iii) una enfermedad autoinmune; o (iv) un cáncer o una enfermedad tumoral.
MX2014008497A 2012-01-31 2013-01-31 Composicion farmaceutica que comprende un complejo de carga con portador polimerico y al menos y un antigeno proteinico o peptidico. MX366858B (es)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/EP2012/000420 WO2013113326A1 (en) 2012-01-31 2012-01-31 Pharmaceutical composition comprising a polymeric carrier cargo complex and at least one protein or peptide antigen
PCT/EP2013/000291 WO2013113501A1 (en) 2012-01-31 2013-01-31 Pharmaceutical composition comprising a polymeric carrier cargo complex and at least one protein or pepide antigen

Publications (2)

Publication Number Publication Date
MX2014008497A true MX2014008497A (es) 2014-10-14
MX366858B MX366858B (es) 2019-07-26

Family

ID=47631406

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
MX2014008497A MX366858B (es) 2012-01-31 2013-01-31 Composicion farmaceutica que comprende un complejo de carga con portador polimerico y al menos y un antigeno proteinico o peptidico.

Country Status (14)

Country Link
US (2) US20150118264A1 (es)
EP (2) EP2809353B1 (es)
JP (1) JP6175451B2 (es)
KR (1) KR102095606B1 (es)
CN (2) CN104080481A (es)
AU (1) AU2013214572B2 (es)
BR (1) BR112014017525A8 (es)
CA (1) CA2856615C (es)
ES (1) ES2820872T3 (es)
IN (1) IN2014DN05848A (es)
MX (1) MX366858B (es)
RU (1) RU2617058C2 (es)
SG (2) SG10201606325SA (es)
WO (2) WO2013113326A1 (es)

Families Citing this family (203)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009030254A1 (en) 2007-09-04 2009-03-12 Curevac Gmbh Complexes of rna and cationic peptides for transfection and for immunostimulation
US20110053829A1 (en) 2009-09-03 2011-03-03 Curevac Gmbh Disulfide-linked polyethyleneglycol/peptide conjugates for the transfection of nucleic acids
EP2955230A1 (en) 2010-07-30 2015-12-16 CureVac AG Complexation of nucleic acids with disulfide-crosslinked cationic components for transfection and immunostimulation
EP3578205A1 (en) 2010-08-06 2019-12-11 ModernaTX, Inc. A pharmaceutical formulation comprising engineered nucleic acids and medical use thereof
WO2012019630A1 (en) 2010-08-13 2012-02-16 Curevac Gmbh Nucleic acid comprising or coding for a histone stem-loop and a poly(a) sequence or a polyadenylation signal for increasing the expression of an encoded protein
RU2013120302A (ru) 2010-10-01 2014-11-20 Модерна Терапьютикс, Инк. Сконструированные нуклеиновые кислоты и способы их применения
US20130287808A1 (en) * 2010-11-05 2013-10-31 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) Vaccines for preventing meningococcal infections
WO2012113413A1 (en) * 2011-02-21 2012-08-30 Curevac Gmbh Vaccine composition comprising complexed immunostimulatory nucleic acids and antigens packaged with disulfide-linked polyethyleneglycol/peptide conjugates
WO2012116714A1 (en) 2011-03-02 2012-09-07 Curevac Gmbh Vaccination in elderly patients
JP2014511687A (ja) 2011-03-31 2014-05-19 モデルナ セラピューティクス インコーポレイテッド 工学操作された核酸の送達および製剤
US9464124B2 (en) 2011-09-12 2016-10-11 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
US9428535B2 (en) 2011-10-03 2016-08-30 Moderna Therapeutics, Inc. Modified nucleosides, nucleotides, and nucleic acids, and uses thereof
LT2791160T (lt) 2011-12-16 2022-06-10 Modernatx, Inc. Modifikuotos mrnr sudėtys
US9133525B2 (en) 2012-01-26 2015-09-15 Luc Montagnier Detection of DNA sequences as risk factors for HIV infection
WO2013113325A1 (en) * 2012-01-31 2013-08-08 Curevac Gmbh Negatively charged nucleic acid comprising complexes for immunostimulation
WO2013120499A1 (en) 2012-02-15 2013-08-22 Curevac Gmbh Nucleic acid comprising or coding for a histone stem-loop and a poly (a) sequence or a polyadenylation signal for increasing the expression of an encoded pathogenic antigen
WO2013120500A1 (en) 2012-02-15 2013-08-22 Curevac Gmbh Nucleic acid comprising or coding for a histone stem-loop and a poly(a) sequence or a polyadenylation signal for increasing the expression of an encoded tumour antigen
WO2013120497A1 (en) 2012-02-15 2013-08-22 Curevac Gmbh Nucleic acid comprising or coding for a histone stem-loop and a poly(a) sequence or a polyadenylation signal for increasing the expression of an encoded therapeutic protein
WO2013120498A1 (en) 2012-02-15 2013-08-22 Curevac Gmbh Nucleic acid comprising or coding for a histone stem-loop and a poly(a) sequence or a polyadenylation signal for increasing the expression of an encoded allergenic antigen or an autoimmune self-antigen
CA2866955A1 (en) 2012-03-27 2013-10-03 Curevac Gmbh Artificial nucleic acid molecules
DK2831241T3 (da) 2012-03-27 2017-11-06 Curevac Ag Kunstige nukleinsyremolekyler til forbedret protein- eller peptidekspression.
KR20140139101A (ko) 2012-03-27 2014-12-04 큐어백 게엠바하 5''top utr을 포함하는 인공 핵산 분자
US9254311B2 (en) 2012-04-02 2016-02-09 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of proteins
US9283287B2 (en) 2012-04-02 2016-03-15 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
US9192651B2 (en) 2012-04-02 2015-11-24 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of secreted proteins
US9572897B2 (en) 2012-04-02 2017-02-21 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
CN104736563A (zh) 2012-07-27 2015-06-24 国家健康与医学研究院 Cd147作为受体用于脑膜炎球菌至血管内皮的菌毛介导的粘附
WO2014081507A1 (en) 2012-11-26 2014-05-30 Moderna Therapeutics, Inc. Terminally modified rna
SG10201710473VA (en) 2013-02-22 2018-02-27 Curevac Ag Combination of vaccination and inhibition of the pd-1 pathway
EP2971010B1 (en) 2013-03-14 2020-06-10 ModernaTX, Inc. Formulation and delivery of modified nucleoside, nucleotide, and nucleic acid compositions
EP2971161B1 (en) 2013-03-15 2018-12-26 ModernaTX, Inc. Ribonucleic acid purification
EP2971165A4 (en) 2013-03-15 2016-11-23 Moderna Therapeutics Inc DISSOLUTION OF DNA FRAGMENTS IN MRNA MANUFACTURING METHODS
US10590161B2 (en) 2013-03-15 2020-03-17 Modernatx, Inc. Ion exchange purification of mRNA
US10138507B2 (en) 2013-03-15 2018-11-27 Modernatx, Inc. Manufacturing methods for production of RNA transcripts
US8980864B2 (en) 2013-03-15 2015-03-17 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods of altering cholesterol levels
JP7019233B2 (ja) 2013-07-11 2022-02-15 モデルナティエックス インコーポレイテッド ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質をコードする合成ポリヌクレオチドおよび合成ｓｇＲＮＡを含む組成物ならびに使用方法
EP3024936B1 (en) 2013-07-25 2019-09-04 Exicure, Inc. Spherical nucleic acid-based constructs as immunostimulatory agents for prophylactic and therapeutic use
AU2014306603B2 (en) 2013-08-13 2020-03-12 Northwestern University Peptide conjugated particles
WO2015024669A1 (en) 2013-08-21 2015-02-26 Curevac Gmbh Combination vaccine
KR102354389B1 (ko) 2013-08-21 2022-01-20 큐어백 아게 Rna―암호화된 단백질의 발현을 증가시키는 방법
BR112016001192A2 (pt) 2013-08-21 2017-08-29 Curevac Ag Vacina contra a raiva
ES2747762T3 (es) 2013-08-21 2020-03-11 Curevac Ag Vacuna contra el virus respiratorio sincitial (RSV)
AU2014315287A1 (en) 2013-09-03 2015-03-12 Moderna Therapeutics, Inc. Chimeric polynucleotides
EP3041938A1 (en) 2013-09-03 2016-07-13 Moderna Therapeutics, Inc. Circular polynucleotides
EP3052106A4 (en) 2013-09-30 2017-07-19 ModernaTX, Inc. Polynucleotides encoding immune modulating polypeptides
EP3052511A4 (en) 2013-10-02 2017-05-31 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotide molecules and uses thereof
CA2926218A1 (en) 2013-10-03 2015-04-09 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides encoding low density lipoprotein receptor
CA2925021A1 (en) 2013-11-01 2015-05-07 Curevac Ag Modified rna with decreased immunostimulatory properties
CN103695539A (zh) * 2013-12-12 2014-04-02 苏州科技学院 一种用家蚕生殖腺的体外培养来检测壬基酚毒性的方法
SG10201903381TA (en) 2013-12-30 2019-05-30 Curevac Ag Artificial nucleic acid molecules
US11254951B2 (en) 2014-12-30 2022-02-22 Curevac Ag Artificial nucleic acid molecules
CA2927254C (en) 2013-12-30 2023-10-24 Curevac Ag Artificial nucleic acid molecules
SG10201805660WA (en) 2013-12-30 2018-08-30 Curevac Ag Methods for rna analysis
US10307472B2 (en) 2014-03-12 2019-06-04 Curevac Ag Combination of vaccination and OX40 agonists
US10369216B2 (en) 2014-04-01 2019-08-06 Curevac Ag Polymeric carrier cargo complex for use as an immunostimulating agent or as an adjuvant
CN106659803A (zh) 2014-04-23 2017-05-10 摩登纳特斯有限公司 核酸疫苗
CN106535876B (zh) 2014-06-04 2020-09-11 埃克西奎雷股份有限公司 免疫调节剂通过脂质体球形核酸的多价递送以用于预防或治疗应用
BR112016026980B1 (pt) 2014-06-10 2022-05-03 Curevac Real Estate Gmbh Método para sintetizar uma molécula de rna de uma dada sequência
EP3157573A4 (en) 2014-06-19 2018-02-21 Moderna Therapeutics, Inc. Alternative nucleic acid molecules and uses thereof
EP3160938B1 (en) 2014-06-25 2020-09-16 Acuitas Therapeutics Inc. Novel lipids and lipid nanoparticle formulations for delivery of nucleic acids
JP2017522028A (ja) 2014-07-16 2017-08-10 モデルナティエックス インコーポレイテッドＭｏｄｅｒｎａＴＸ，Ｉｎｃ． 環状ポリヌクレオチド
EP3169693B1 (en) 2014-07-16 2022-03-09 ModernaTX, Inc. Chimeric polynucleotides
US20170210788A1 (en) 2014-07-23 2017-07-27 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of intrabodies
CA2968531A1 (en) 2014-11-21 2016-05-26 Northwestern University The sequence-specific cellular uptake of spherical nucleic acid nanoparticle conjugates
GB201421692D0 (en) * 2014-12-05 2015-01-21 Iquar Ltd Vaccines based on hepatitis B core antigens
EP4241784A3 (en) 2014-12-12 2023-11-15 CureVac SE Artificial nucleic acid molecules for improved protein expression
US10653768B2 (en) 2015-04-13 2020-05-19 Curevac Real Estate Gmbh Method for producing RNA compositions
US10780054B2 (en) 2015-04-17 2020-09-22 Curevac Real Estate Gmbh Lyophilization of RNA
AU2016251687C1 (en) 2015-04-22 2023-07-27 CureVac SE RNA containing composition for treatment of tumor diseases
WO2016172219A1 (en) * 2015-04-24 2016-10-27 The Arizona Board Of Regents On Behalf Of The University Of Arizona Methods and compositions for inhibition of toll-like receptors (tlrs)-mediated inflammation
EP3289101B1 (en) 2015-04-30 2021-06-23 CureVac AG Immobilized poly(n)polymerase
DK3294885T3 (da) 2015-05-08 2020-08-10 Curevac Real Estate Gmbh Fremgangsmåde til at fremstille rna
CA2975816A1 (en) * 2015-05-15 2016-11-24 Curevac Ag Prime-boost regimens involving administration of at least one mrna construct
SG11201708540VA (en) 2015-05-20 2017-12-28 Curevac Ag Dry powder composition comprising long-chain rna
EP3297682B1 (en) 2015-05-20 2021-07-14 CureVac AG Dry powder composition comprising long-chain rna
PT4108769T (pt) 2015-05-29 2023-10-10 Curevac Mfg Gmbh Um método para produção e purificação de rna, compreendendendo pelo menos um passo de filtração por fluxo tangencial
US11608513B2 (en) 2015-05-29 2023-03-21 CureVac SE Method for adding cap structures to RNA using immobilized enzymes
EP3313829B1 (en) 2015-06-29 2024-04-10 Acuitas Therapeutics Inc. Lipids and lipid nanoparticle formulations for delivery of nucleic acids
WO2017009376A1 (en) 2015-07-13 2017-01-19 Curevac Ag Method of producing rna from circular dna and corresponding template dna
ES2910425T3 (es) 2015-09-17 2022-05-12 Modernatx Inc Compuestos y composiciones para la administración intracelular de agentes terapéuticos
WO2017049286A1 (en) 2015-09-17 2017-03-23 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides containing a morpholino linker
WO2017064146A1 (en) 2015-10-12 2017-04-20 Curevac Ag Automated method for isolation, selection and/or detection of microorganisms or cells comprised in a solution
JP2018530587A (ja) 2015-10-16 2018-10-18 モデルナティエックス インコーポレイテッドＭｏｄｅｒｎａＴＸ，Ｉｎｃ． ｍＲＮＡキャップ類似体およびｍＲＮＡキャッピングの方法
WO2017066789A1 (en) 2015-10-16 2017-04-20 Modernatx, Inc. Mrna cap analogs with modified sugar
WO2017066791A1 (en) 2015-10-16 2017-04-20 Modernatx, Inc. Sugar substituted mrna cap analogs
ES2914225T3 (es) 2015-10-16 2022-06-08 Modernatx Inc Análogos de cap de ARNm con enlace de fosfato modificado
WO2017066782A1 (en) 2015-10-16 2017-04-20 Modernatx, Inc. Hydrophobic mrna cap analogs
US20180303929A1 (en) * 2015-10-22 2018-10-25 Moderna TX, Inc. Herpes simplex virus vaccine
HRP20230209T1 (hr) 2015-10-28 2023-04-14 Acuitas Therapeutics Inc. Novi lipidi i lipidne formulacije nanočestica za isporuku nukleinskih kiselina
EP3373965A1 (en) 2015-11-09 2018-09-19 CureVac AG Rotavirus vaccines
CN108778308A (zh) 2015-12-22 2018-11-09 库瑞瓦格股份公司 生产rna分子组合物的方法
SI3394030T1 (sl) 2015-12-22 2022-04-29 Modernatx, Inc. Sestave za doziranje sredstev v celice
WO2017109161A1 (en) 2015-12-23 2017-06-29 Curevac Ag Method of rna in vitro transcription using a buffer containing a dicarboxylic acid or tricarboxylic acid or a salt thereof
SG10201913630YA (en) 2016-02-17 2020-03-30 Curevac Ag Zika virus vaccine
CN108779074A (zh) 2016-03-01 2018-11-09 分子传递有限公司 植物病毒移动蛋白和其使用方法
WO2017149139A1 (en) 2016-03-03 2017-09-08 Curevac Ag Rna analysis by total hydrolysis
CN109715203A (zh) * 2016-03-14 2019-05-03 雷德生物科技股份公司 用于治疗hsv的手段和方法
KR101881013B1 (ko) * 2016-03-15 2018-07-23 경희대학교 산학협력단 톡소포자충 바이러스-유사입자, 이를 제조하기 위한 벡터, 및 이의 제조 방법
KR101881014B1 (ko) * 2016-04-15 2018-07-23 경희대학교 산학협력단 톡소포자충 바이러스-유사입자, 이를 제조하기 위한 벡터, 및 이의 제조 방법
KR101835697B1 (ko) 2016-04-19 2018-03-08 경희대학교 산학협력단 간흡충 바이러스-유사입자, 이를 제조하기 위한 벡터, 및 이의 제조방법
US11596699B2 (en) 2016-04-29 2023-03-07 CureVac SE RNA encoding an antibody
US11141474B2 (en) 2016-05-04 2021-10-12 Curevac Ag Artificial nucleic acid molecules encoding a norovirus antigen and uses thereof
EP3452101A2 (en) 2016-05-04 2019-03-13 CureVac AG Rna encoding a therapeutic protein
MX2018013919A (es) 2016-06-09 2019-04-15 Curevac Ag Portadores hibridos para cargas de acido nucleico.
CA3027201A1 (en) 2016-06-14 2017-12-21 Modernatx, Inc. Stabilized formulations of lipid nanoparticles
MA45496A (fr) 2016-06-17 2019-04-24 Hoffmann La Roche Molécules d'acide nucléique pour la réduction de l'arnm de padd5 ou pad7 pour le traitement d'une infection par l'hépatite b
CA3025812A1 (en) * 2016-08-19 2018-02-22 Curevac Ag Rna for cancer therapy
US11364304B2 (en) 2016-08-25 2022-06-21 Northwestern University Crosslinked micellar spherical nucleic acids
EP3538067A1 (en) 2016-11-08 2019-09-18 Modernatx, Inc. Stabilized formulations of lipid nanoparticles
JP7078620B2 (ja) * 2016-11-16 2022-05-31 イミュノミック セラピューティックス， インコーポレイテッド アレルギーの治療のための核酸
WO2018096179A1 (en) 2016-11-28 2018-05-31 Curevac Ag Method for purifying rna
EP4035659A1 (en) 2016-11-29 2022-08-03 PureTech LYT, Inc. Exosomes for delivery of therapeutic agents
EP3551034A1 (en) 2016-12-07 2019-10-16 Progenity, Inc. Gastrointestinal tract detection methods, devices and systems
EP3551230A1 (en) 2016-12-08 2019-10-16 CureVac AG Rna for treatment or prophylaxis of a liver disease
WO2018104540A1 (en) 2016-12-08 2018-06-14 Curevac Ag Rnas for wound healing
AU2017378406A1 (en) 2016-12-14 2019-06-13 Biora Therapeutics, Inc. Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with an immunosuppressant
WO2018112237A1 (en) 2016-12-14 2018-06-21 Progenity Inc. Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with an il-6r inhibitor
BR112019011689A2 (pt) 2016-12-14 2019-10-22 Progenity Inc tratamento de uma doença do trato gastrointestinal com um inibidor de tnf
US11033490B2 (en) 2016-12-14 2021-06-15 Progenity, Inc. Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with a JAK inhibitor and devices
EP3554541B1 (en) 2016-12-14 2023-06-07 Biora Therapeutics, Inc. Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with a chemokine/chemokine receptor inhibitor
US20200315540A1 (en) 2016-12-14 2020-10-08 Progenity, Inc. Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with an il-1 inhibitor
US11134889B2 (en) 2016-12-14 2021-10-05 Progenity, Inc. Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with a SMAD7 inhibitor
EP3554540B1 (en) 2016-12-14 2023-08-02 Biora Therapeutics, Inc. Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with an il-12/il-23 inhibitor released using an ingestible device
US11426566B2 (en) 2016-12-14 2022-08-30 Biora Therapeutics, Inc. Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with a TLR modulator
TW201834710A (zh) 2016-12-14 2018-10-01 美商寶珍那提公司 以整合素抑制劑治療胃腸道疾病
EP3558354A1 (en) 2016-12-23 2019-10-30 CureVac AG Lassa virus vaccine
US11524066B2 (en) 2016-12-23 2022-12-13 CureVac SE Henipavirus vaccine
US11141476B2 (en) 2016-12-23 2021-10-12 Curevac Ag MERS coronavirus vaccine
US20190076460A1 (en) * 2017-02-22 2019-03-14 Enyu Ding An mRNA cancer vaccine encoding human GM-CSF fused to multiple tandem epitopes
HUE060693T2 (hu) 2017-03-15 2023-04-28 Modernatx Inc Vegyület és készítmények terápiás szerek intracelluláris bejuttatására
US11969506B2 (en) 2017-03-15 2024-04-30 Modernatx, Inc. Lipid nanoparticle formulation
AU2018240515A1 (en) 2017-03-24 2019-08-01 CureVac SE Nucleic acids encoding CRISPR-associated proteins and uses thereof
EP3601531B1 (en) 2017-03-30 2023-06-07 Biora Therapeutics, Inc. Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with live biotherapeutics
EP3600249A1 (en) 2017-03-30 2020-02-05 Progenity Inc. Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with a chst15 inhibitor
US20210138213A1 (en) 2017-03-30 2021-05-13 Progenity, Inc. Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with an immune modulatory agent released using an ingestible device
WO2018183932A1 (en) 2017-03-30 2018-10-04 Progenity Inc. Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with a il-13 inhibitor
WO2018183931A1 (en) 2017-03-30 2018-10-04 Progenity Inc. Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with il-10 or an il-10 agonist
US11357856B2 (en) 2017-04-13 2022-06-14 Acuitas Therapeutics, Inc. Lipids for delivery of active agents
AU2018256867A1 (en) 2017-04-27 2019-11-14 The Johns Hopkins University Nucleoside-modified mRNA-lipid nanoparticle lineage vaccine for hepatitis C virus
US11696954B2 (en) 2017-04-28 2023-07-11 Exicure Operating Company Synthesis of spherical nucleic acids using lipophilic moieties
CA3061612A1 (en) 2017-04-28 2018-11-01 Acuitas Therapeutics, Inc. Novel carbonyl lipids and lipid nanoparticle formulations for delivery of nucleic acids
CN107412731B (zh) * 2017-05-17 2020-06-05 广州弘宝元生物科技有限公司 Ul43蛋白在制备预防和治疗线粒体功能障碍的药物中的应用
WO2018232120A1 (en) 2017-06-14 2018-12-20 Modernatx, Inc. Compounds and compositions for intracellular delivery of agents
MA49421A (fr) 2017-06-15 2020-04-22 Modernatx Inc Formulations d'arn
BR112019028280A2 (pt) 2017-07-04 2020-07-14 Curevac Ag moléculas de ácido nucleico
KR101964751B1 (ko) * 2017-07-05 2019-04-02 경희대학교 산학협력단 톡소포자충 바이러스-유사입자, 이를 유효성분으로 포함하는 백신 조성물, 이를 제조하기 위한 벡터, 및 이의 제조 방법
CO2017007377A1 (es) * 2017-07-25 2019-01-31 Instituto Nac De Salud Antígenos recombinantes de giardia, purificación de anticuerpos policlonales igg e igy anti-giardia y detección de giardia
WO2019036363A1 (en) 2017-08-14 2019-02-21 Progenity Inc. TREATMENT OF GASTROINTESTINAL TRACT DISEASE WITH GLATIRAMER OR A PHARMACEUTICALLY ACCEPTABLE SALT THEREOF
JP7355731B2 (ja) 2017-08-16 2023-10-03 アクイタス セラピューティクス インコーポレイテッド 脂質ナノ粒子製剤における使用のための脂質
US11542225B2 (en) 2017-08-17 2023-01-03 Acuitas Therapeutics, Inc. Lipids for use in lipid nanoparticle formulations
WO2019036030A1 (en) 2017-08-17 2019-02-21 Acuitas Therapeutics, Inc. LIPIDS FOR USE IN LIPID NANOPARTICLE FORMULATIONS
US20200362382A1 (en) 2017-08-18 2020-11-19 Modernatx, Inc. Methods of preparing modified rna
US11602557B2 (en) 2017-08-22 2023-03-14 Cure Vac SE Bunyavirales vaccine
WO2019046809A1 (en) 2017-08-31 2019-03-07 Modernatx, Inc. METHODS OF MANUFACTURING LIPID NANOPARTICLES
SG11202003461TA (en) 2017-10-16 2020-05-28 Hoffmann La Roche NUCLEIC ACID MOLECULE FOR REDUCTION OF PAPD5 AND PAPD7 mRNA FOR TREATING HEPATITIS B INFECTION
SG11202003247RA (en) 2017-11-08 2020-05-28 Curevac Ag Rna sequence adaptation
EP3723796A1 (en) 2017-12-13 2020-10-21 CureVac AG Flavivirus vaccine
WO2019118919A1 (en) * 2017-12-15 2019-06-20 Flagship Pioneering, Inc. Compositions comprising circular polyribonucleotides and uses thereof
US11525158B2 (en) 2017-12-21 2022-12-13 CureVac SE Linear double stranded DNA coupled to a single support or a tag and methods for producing said linear double stranded DNA
CN108101966B (zh) * 2017-12-26 2020-10-27 暨南大学 基于细胞穿膜肽的氧化还原敏感多肽及其在疫苗载体中的应用
WO2020061367A1 (en) 2018-09-19 2020-03-26 Modernatx, Inc. Compounds and compositions for intracellular delivery of therapeutic agents
JP2022501367A (ja) 2018-09-20 2022-01-06 モデルナティエックス インコーポレイテッドModernaTX, Inc. 脂質ナノ粒子の調製及びその投与方法
CN113840621A (zh) * 2018-10-24 2021-12-24 德国癌症研究公共权益基金会 疫苗接种及抗体生成平台
CN109468294A (zh) * 2018-11-06 2019-03-15 青岛古高生物科技有限公司 一种血红素-GroEL复合体及其制备方法和应用
RU2742580C2 (ru) * 2018-12-26 2021-02-08 федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи» Министерства здравоохранения Российской Федерации Фармацевтическая композиция на основе PLGA для индукции эффективного мукозального иммунного ответа
MX2021009245A (es) 2019-01-31 2021-11-12 Modernatx Inc Metodos de preparacion de nanoparticulas lipidicas.
MX2021009236A (es) 2019-01-31 2021-11-12 Modernatx Inc Agitadores vorticiales y metodos, sistemas y aparatos asociados de estos.
CN109701008B (zh) * 2019-02-18 2022-06-21 山东兴瑞生物科技有限公司 针对单纯疱疹病毒的治疗性dc复合疫苗及其制备方法
KR102184153B1 (ko) * 2019-02-25 2020-11-30 부산대학교 산학협력단 고분자 지지체 기반의 인플루엔자 바이러스 유사 구조체 및 이의 제조방법
EP4006057A4 (en) * 2019-07-11 2023-08-09 Xiamen University COMPLEX FOR INTRACELLULAR DELIVERY OF MOLECULES
CN110364226B (zh) * 2019-08-16 2021-03-26 复旦大学 一种用于辅助生殖供精策略的遗传风险预警方法和系统
US11241493B2 (en) 2020-02-04 2022-02-08 Curevac Ag Coronavirus vaccine
US11576966B2 (en) 2020-02-04 2023-02-14 CureVac SE Coronavirus vaccine
CN111249444B (zh) * 2020-03-10 2023-04-07 西北大学 一种用于抑制白色念珠菌的制剂
AU2021254312B2 (en) 2020-04-09 2024-01-11 Suzhou Abogen Biosciences Co., Ltd. Lipid nanoparticle composition
TW202204622A (zh) 2020-04-09 2022-02-01 大陸商蘇州艾博生物科技有限公司 針對冠狀病毒之核酸疫苗
CN111551729B (zh) * 2020-04-27 2021-02-09 浙江正熙生物技术股份有限公司 藻红蛋白免疫荧光探针制备方法
JP2023532707A (ja) 2020-06-30 2023-07-31 スージョウ・アボジェン・バイオサイエンシズ・カンパニー・リミテッド 脂質化合物及び脂質ナノ粒子組成物
EP4182297A1 (en) 2020-07-16 2023-05-24 Acuitas Therapeutics, Inc. Cationic lipids for use in lipid nanoparticles
AU2021328980A1 (en) 2020-08-20 2023-03-09 Suzhou Abogen Biosciences Co., Ltd. Lipid compounds and lipid nanoparticle compositions
CN112321679B (zh) * 2020-09-30 2022-10-14 四川大学 一种用于抑制真菌生物膜的寡肽及其应用
AU2021405281A1 (en) 2020-12-22 2023-07-06 CureVac SE Rna vaccine against sars-cov-2 variants
CN112831917A (zh) * 2020-12-30 2021-05-25 淄博华士元环保科技有限公司 Pbc/pla/tp复合抗菌敷料的制备方法
WO2022152109A2 (en) 2021-01-14 2022-07-21 Suzhou Abogen Biosciences Co., Ltd. Lipid compounds and lipid nanoparticle compositions
CN116615472A (zh) 2021-01-14 2023-08-18 苏州艾博生物科技有限公司 聚合物缀合的脂质化合物和脂质纳米颗粒组合物
CN112725488B (zh) * 2021-02-04 2023-03-24 吉林大学 埃利希氏体病和莱姆病双重荧光定量pcr引物及试剂盒
CN113046328B (zh) * 2021-04-13 2023-07-25 吉林大学 一株化脓隐秘杆菌噬菌体及其医用用途
CN113144182B (zh) * 2021-04-22 2023-03-10 成都欧林生物科技股份有限公司 一种幽门螺杆菌口服缓释疫苗及其制备与应用
KR102490748B1 (ko) * 2021-05-14 2023-01-20 주식회사 레메디 화물분자 수송 도메인 rmad1, 이의 변이체, 재조합 화물분자 및 이를 이용한 화물분자 수송 방법
WO2022247755A1 (en) 2021-05-24 2022-12-01 Suzhou Abogen Biosciences Co., Ltd. Lipid compounds and lipid nanoparticle compositions
TW202328067A (zh) 2021-09-14 2023-07-16 美商雷納嘉德醫療管理公司 環狀脂質及其使用方法
WO2023044343A1 (en) 2021-09-14 2023-03-23 Renagade Therapeutics Management Inc. Acyclic lipids and methods of use thereof
CN116064598B (zh) 2021-10-08 2024-03-12 苏州艾博生物科技有限公司 冠状病毒的核酸疫苗
WO2023056917A1 (en) 2021-10-08 2023-04-13 Suzhou Abogen Biosciences Co., Ltd. Lipid compounds and lipid nanoparticle compositions
AR127312A1 (es) 2021-10-08 2024-01-10 Suzhou Abogen Biosciences Co Ltd Compuestos lipídicos ycomposiciones de nanopartículas lipídicas
WO2023122752A1 (en) 2021-12-23 2023-06-29 Renagade Therapeutics Management Inc. Constrained lipids and methods of use thereof
WO2023196931A1 (en) 2022-04-07 2023-10-12 Renagade Therapeutics Management Inc. Cyclic lipids and lipid nanoparticles (lnp) for the delivery of nucleic acids or peptides for use in vaccinating against infectious agents
US20240139312A1 (en) * 2022-05-27 2024-05-02 Design-Zyme LLC Universal adjuvant for nasal, oral, and intramuscular delivery of vaccines
WO2024037578A1 (en) 2022-08-18 2024-02-22 Suzhou Abogen Biosciences Co., Ltd. Composition of lipid nanoparticles
CN115925822B (zh) * 2022-09-01 2024-01-09 广州源博医药科技有限公司 一种重组蛋白及其在制备呼吸道合胞病毒疫苗中的应用
CN116769786A (zh) * 2022-09-07 2023-09-19 贵州大学 飞蝗气味结合蛋白LmOBP11基因及其编码蛋白与应用
CN116376848A (zh) * 2022-12-13 2023-07-04 中国水产科学研究院黄海水产研究所 一种卤虫病毒及其检测方法和应用
CN117209574B (zh) * 2023-07-28 2024-03-29 中国科学院动物研究所 特异针对蝗科害虫改造的高毒力罗伯茨绿僵菌及其制备方法和应用

Family Cites Families (121)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3906092A (en) 1971-11-26 1975-09-16 Merck & Co Inc Stimulation of antibody response
US4415732A (en) 1981-03-27 1983-11-15 University Patents, Inc. Phosphoramidite compounds and processes
US4401796A (en) 1981-04-30 1983-08-30 City Of Hope Research Institute Solid-phase synthesis of polynucleotides
US4373071A (en) 1981-04-30 1983-02-08 City Of Hope Research Institute Solid-phase synthesis of polynucleotides
DE3314999A1 (de) 1983-04-26 1985-03-14 Behringwerke Ag, 3550 Marburg Verwendung des diterpen-derivates forskolin zur immunstimulation
US5663163A (en) 1987-09-07 1997-09-02 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Cephem compounds and processes for preparation thereof
CA1320446C (en) 1988-06-20 1993-07-20 William A. Carter Modulation of lymphokine-resistant cellular states by dsrnas
ATE147630T1 (de) 1989-10-11 1997-02-15 Hem Pharma Corp Schutz gegen schock infolge einer schädigung durch doppelsträngige rna's
DE69400208T2 (de) 1993-01-25 1996-11-28 Hybridon Inc Olionukleotidalkylphosphonate und -phosphonothioate
JPH08510720A (ja) 1993-01-27 1996-11-12 アフィマックス テクノロジーズ ナームロゼ フェンノートシャップ 経皮的薬物送り出しのための組成物及び方法
US5516652A (en) 1993-10-06 1996-05-14 Merck Frosst Canada Inc. DNA encoding prostaglandin receptor IP
CA2184375C (en) 1994-03-18 2006-05-02 Sergei M. Gryaznov Oligonucleotide n3'-p5' phosphoramidates: synthesis and compounds; hybridization and nuclease resistance properties
WO1995026204A1 (en) 1994-03-25 1995-10-05 Isis Pharmaceuticals, Inc. Immune stimulation by phosphorothioate oligonucleotide analogs
US5874560A (en) 1994-04-22 1999-02-23 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Melanoma antigens and their use in diagnostic and therapeutic methods
ES2366201T3 (es) 1994-07-15 2011-10-18 University Of Iowa Research Foundation Oligonucleótidos inmunmoduladores.
US6239116B1 (en) 1994-07-15 2001-05-29 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules
US7148205B2 (en) * 1995-12-13 2006-12-12 Mirus Bio Corporation Intravascular delivery of non-viral nucleic acid
US6689757B1 (en) 1996-02-12 2004-02-10 M.L. Laboratories Plc Methods for vaccination and vaccines therefor
US6090391A (en) 1996-02-23 2000-07-18 Aviron Recombinant tryptophan mutants of influenza
ES2241042T3 (es) 1996-10-11 2005-10-16 The Regents Of The University Of California Conjugados de polinucleotido inmunoestimulador/ molecula inmunomoduladora.
EP0839912A1 (en) 1996-10-30 1998-05-06 Instituut Voor Dierhouderij En Diergezondheid (Id-Dlo) Infectious clones of RNA viruses and vaccines and diagnostic assays derived thereof
GB9623051D0 (en) 1996-11-06 1997-01-08 Schacht Etienne H Delivery of DNA to target cells in biological systems
EP0855184A1 (en) 1997-01-23 1998-07-29 Grayson B. Dr. Lipford Pharmaceutical composition comprising a polynucleotide and an antigen especially for vaccination
US6406705B1 (en) 1997-03-10 2002-06-18 University Of Iowa Research Foundation Use of nucleic acids containing unmethylated CpG dinucleotide as an adjuvant
WO1998047913A2 (en) 1997-04-18 1998-10-29 The University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey Inhibition of hiv-1 replication by a tat rna-binding domain peptide analog
ATE432348T1 (de) 1997-06-06 2009-06-15 Univ California Inhibitoren von immunstimulatorischen dna sequenz aktivität
EP1374894A3 (en) 1997-06-06 2004-09-22 Dynavax Technologies Corporation Immunostimulatory oligonucleotides, compositions thereof and methods of use thereof
US20040006034A1 (en) 1998-06-05 2004-01-08 Eyal Raz Immunostimulatory oligonucleotides, compositions thereof and methods of use thereof
US6589940B1 (en) 1997-06-06 2003-07-08 Dynavax Technologies Corporation Immunostimulatory oligonucleotides, compositions thereof and methods of use thereof
ES2283070T3 (es) 1997-09-05 2007-10-16 The Regents Of The University Of California Utilizacion de oligonucleotidos inmunoestimulantes para la prevencion o tratamiento del asma.
US6096307A (en) 1997-12-11 2000-08-01 A. Glenn Braswell Compositions for immunostimulation containing Echinacea angustofolia, bromelain, and lysozyme
EP1067956B1 (en) 1998-04-03 2007-03-14 University Of Iowa Research Foundation Methods and products for stimulating the immune system using immunotherapeutic oligonucleotides and cytokines
AU3758199A (en) 1998-04-23 1999-11-08 Regents Of The University Of Michigan, The Peptides for efficient gene transfer
US7138103B2 (en) 1998-06-22 2006-11-21 Immunomedics, Inc. Use of bi-specific antibodies for pre-targeting diagnosis and therapy
WO2000075304A1 (fr) 1999-06-08 2000-12-14 Aventis Pasteur Oligonucleotide immunostimulant
CA2312385A1 (en) 1999-06-22 2000-12-22 Daiso Co., Ltd. Process for producing erythro-3-amino-2-hydroxybutyric acid derivatives
US6514948B1 (en) 1999-07-02 2003-02-04 The Regents Of The University Of California Method for enhancing an immune response
WO2001004135A2 (en) 1999-07-13 2001-01-18 The Regents Of The University Of Michigan Crosslinked dna condensate compositions and gene delivery methods
US6770740B1 (en) 1999-07-13 2004-08-03 The Regents Of The University Of Michigan Crosslinked DNA condensate compositions and gene delivery methods
US20030104622A1 (en) 1999-09-01 2003-06-05 Robbins Paul D. Identification of peptides that facilitate uptake and cytoplasmic and/or nuclear transport of proteins, DNA and viruses
ATE289630T1 (de) 1999-09-09 2005-03-15 Curevac Gmbh Transfer von mrnas unter verwendung von polykationischen verbindungen
AT409085B (de) * 2000-01-28 2002-05-27 Cistem Biotechnologies Gmbh Pharmazeutische zusammensetzung zur immunmodulation und herstellung von vakzinen
CA2398756A1 (en) 2000-01-31 2001-08-02 Eyal Raz Immunomodulatory polynucleotides in treatment of an infection by an intracellular pathogen
AU2001249622B2 (en) 2000-03-30 2007-06-07 Massachusetts Institute Of Technology RNA sequence-specific mediators of RNA interference
US20040052763A1 (en) 2000-06-07 2004-03-18 Mond James J. Immunostimulatory RNA/DNA hybrid molecules
ES2332444T3 (es) 2000-06-22 2010-02-05 University Of Iowa Research Foundation Combinacion de cpg y anticuerpos dirigidos contra cd19, cd20, cd22 o cd40 para el tratamiento o prevencion de cancer.
ES2273852T3 (es) 2000-06-23 2007-05-16 Wyeth Holdings Corporation Proteinas v de morbillivirus modificadas.
US6376704B1 (en) 2000-06-28 2002-04-23 3M Innovative Properties Company Naphthyoxyalkyl(meth)acrylates with high refractive indices and low glass transition temperatures
US6716434B1 (en) 2000-09-19 2004-04-06 Daniel R. Ansley Composition and method for immunostimulation in non- mammalian vertebrates
GB0025577D0 (en) 2000-10-18 2000-12-06 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
CA2329858A1 (en) * 2000-12-11 2002-06-11 President And Fellows Of Harvard College Expression cloning of protein targets for phospholipids
US7371387B2 (en) * 2001-02-21 2008-05-13 Genitrix Llc Vaccine compositions and methods of modulating immune responses
CA2443338A1 (en) 2001-04-02 2002-10-10 University Of South Florida Lps-responsive chs1/beige-like anchor gene and therapeutic applications thereof
EP2842964A1 (de) 2001-06-05 2015-03-04 Curevac GmbH Virtuelles Verfahren zur Ermittlung einer modifzierten mRNA-Sequenz
US7785610B2 (en) 2001-06-21 2010-08-31 Dynavax Technologies Corporation Chimeric immunomodulatory compounds and methods of using the same—III
JP2005525992A (ja) 2001-06-25 2005-09-02 イサム・リサーチ・デベロツプメント・カンパニー・オブ・ザ・ヘブルー・ユニバーシテイ・オブ・エルサレム 生物学的物質を充填した小胞の調製法およびそれらの様々な使用
AR045702A1 (es) 2001-10-03 2005-11-09 Chiron Corp Composiciones de adyuvantes.
DE10148886A1 (de) 2001-10-04 2003-04-30 Avontec Gmbh Inhibition von STAT-1
WO2003035836A2 (en) 2001-10-24 2003-05-01 Hybridon Inc. Modulation of immunostimulatory properties of oligonucleotide-based compounds by optimal presentation of 5' ends
US7276489B2 (en) 2002-10-24 2007-10-02 Idera Pharmaceuticals, Inc. Modulation of immunostimulatory properties of oligonucleotide-based compounds by optimal presentation of 5′ ends
DE10162480A1 (de) 2001-12-19 2003-08-07 Ingmar Hoerr Die Applikation von mRNA für den Einsatz als Therapeutikum gegen Tumorerkrankungen
WO2003059381A2 (en) 2002-01-18 2003-07-24 Curevac Gmbh Immunogenic preparations and vaccines on the basis of mrna
US7741297B2 (en) 2002-02-04 2010-06-22 Oncothyreon Inc. Immunostimulatory, covalently lipidated oligonucleotides
CN102133407A (zh) 2002-03-01 2011-07-27 图兰恩教育基金管理人 治疗剂或细胞毒性剂与生物活性肽的偶联物
US8153141B2 (en) 2002-04-04 2012-04-10 Coley Pharmaceutical Gmbh Immunostimulatory G, U-containing oligoribonucleotides
DE10229872A1 (de) 2002-07-03 2004-01-29 Curevac Gmbh Immunstimulation durch chemisch modifizierte RNA
EP1393745A1 (en) 2002-07-29 2004-03-03 Hybridon, Inc. Modulation of immunostimulatory properties of oligonucleotide-based compounds by optimal presentation of 5'ends
CA2508985A1 (en) 2002-12-23 2004-07-15 Dynavax Technologies Corporation Branched immunomodulatory compounds and methods of using the same
KR101123489B1 (ko) 2003-01-16 2012-03-28 이데라 파마슈티칼즈, 인코포레이티드 개질된 면역자극성 디뉴클레오티드를 이용한 올리고뉴클레오티드-기재 화합물의 면역자극 특성의 조절
WO2004092329A2 (en) 2003-04-08 2004-10-28 Galenica Pharmaceuticals, Inc. Semi-synthetic saponin analogs with carrier and immune stimulatory activities for dna and rna vaccines
EP1617872A4 (en) 2003-04-10 2011-09-07 3M Innovative Properties Co METHODS AND COMPOSITIONS FOR ENHANCING AN IMMUNE RESPONSE
EP1641820B1 (en) 2003-06-30 2008-05-28 Université de Lausanne Rasgap derived peptide for selectively killing cancer cells
RU2375076C2 (ru) * 2003-07-10 2009-12-10 Цитос Биотехнологи Аг Укомплектованные вирусоподобные частицы
DE10335833A1 (de) 2003-08-05 2005-03-03 Curevac Gmbh Transfektion von Blutzellen mit mRNA zur Immunstimulation und Gentherapie
EP1654363B1 (en) 2003-08-05 2010-12-15 AVI BioPharma, Inc. Oligonucleotide analog and method for treating flavivirus infections
AU2004275876B2 (en) 2003-09-25 2011-03-31 Coley Pharmaceutical Gmbh Nucleic acid-lipophilic conjugates
DE10346721A1 (de) 2003-10-08 2005-05-04 Holger Kalthoff Oligonukleotide, diese enthaltende Mittel und deren Verwendung
US20050215501A1 (en) 2003-10-24 2005-09-29 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Methods and products for enhancing epitope spreading
KR101138131B1 (ko) 2003-12-08 2012-04-23 이데라 파마슈티칼즈, 인코포레이티드 작은 올리고뉴클레오티드-기초 화합물에 의한 면역자극특성의 조절
CA2551094A1 (en) 2003-12-22 2005-07-14 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Methods and compositions for identifying rna-binding proteins
AU2005230938A1 (en) 2004-02-19 2005-10-20 Coley Pharmaceutical Gmbh Immunostimulatory viral RNA oligonucleotides
CA2567789A1 (en) 2004-06-08 2006-08-03 Coley Pharmaceutical Gmbh Abasic oligonucleotide as carrier platform for antigen and immunostimulatory agonist and antagonist
WO2006046978A2 (en) 2004-06-28 2006-05-04 Argos Therapeutics, Inc. Cationic peptide-mediated transformation
DE102004035227A1 (de) 2004-07-21 2006-02-16 Curevac Gmbh mRNA-Gemisch zur Vakzinierung gegen Tumorerkrankungen
DE102004042546A1 (de) 2004-09-02 2006-03-09 Curevac Gmbh Kombinationstherapie zur Immunstimulation
US20080193468A1 (en) 2004-09-08 2008-08-14 Children's Medical Center Corporation Method for Stimulating the Immune Response of Newborns
CN101198353A (zh) * 2005-04-14 2008-06-11 昆士兰大学 免疫调节组合物和其应用
CA2609788A1 (en) 2005-04-26 2006-11-02 Coley Pharmaceutical Gmbh Modified oligoribonucleotide analogs with enhanced immunostimulatory activity
DE102005023170A1 (de) 2005-05-19 2006-11-23 Curevac Gmbh Optimierte Formulierung für mRNA
EP2298829B1 (en) 2005-05-31 2017-09-20 École Polytechnique Fédérale de Lausanne (EPFL) Triblock copolymers for cytoplasmic delivery of gene-based drugs
EP1764107A1 (en) 2005-09-14 2007-03-21 Gunther Hartmann Compositions comprising immunostimulatory RNA oligonucleotides and methods for producing said RNA oligonucleotides
EP1924284A1 (en) 2005-09-14 2008-05-28 Hartmann, Gunther Compositions comprising immunostimulatory rna oligonucleotides and methods for producing said rna oligonucleotides
JP2009511034A (ja) 2005-10-12 2009-03-19 キャンサー・リサーチ・テクノロジー・リミテッド 免疫異常を治療するための方法および組成物
US8101741B2 (en) 2005-11-02 2012-01-24 Protiva Biotherapeutics, Inc. Modified siRNA molecules and uses thereof
US7470674B2 (en) 2005-11-07 2008-12-30 Idera Pharmaceuticals, Inc. Immunostimulatory properties of oligonucleotide-based compounds comprising modified immunostimulatory dinucleotides
ES2536103T3 (es) 2005-11-25 2015-05-20 Zoetis Belgium S.A. Oligorribonucleótidos inmunoestimuladores
WO2007069068A2 (en) 2005-12-16 2007-06-21 Diatos Cell penetrating peptide conjugates for delivering nucleic acids into cells
AU2007239095B2 (en) 2006-01-09 2012-05-03 The Regents Of The University Of California Immunostimulatory combinations for vaccine adjuvants
DE102006007433A1 (de) 2006-02-17 2007-08-23 Curevac Gmbh Adjuvanz in Form einer Lipid-modifizierten Nukleinsäure
EP2027158B1 (en) 2006-05-02 2012-09-19 Carviar ApS Method for immunizing an avian species
EP2046954A2 (en) 2006-07-31 2009-04-15 Curevac GmbH NUCLEIC ACID OF FORMULA (I): GIXmGn, OR (II): CIXmCn, IN PARTICULAR AS AN IMMUNE-STIMULATING AGENT/ADJUVANT
DE102006035618A1 (de) 2006-07-31 2008-02-07 Curevac Gmbh Nukleinsäure der Formel (I): GlXmGn, insbesondere als immunstimulierendes Adjuvanz
AU2007286059A1 (en) 2006-08-18 2008-02-21 Mdrna, Inc. Dicer substrate RNA peptide conjugates and methods for RNA therapeutics
DE102006061015A1 (de) 2006-12-22 2008-06-26 Curevac Gmbh Verfahren zur Reinigung von RNA im präparativen Maßstab mittels HPLC
DE102007001370A1 (de) 2007-01-09 2008-07-10 Curevac Gmbh RNA-kodierte Antikörper
TR201000668T1 (tr) 2007-07-31 2010-06-21 The Board Of Supervisors Of Louisiana State University And Agricultural And Mechanical College Neoplasti̇k veya enfeksi̇yoz bozukluklara yöneli̇k i̇mmunoprofi̇laksi̇ veya i̇mmünoterapi̇ i̇çi̇n poli̇pepti̇d-nüklei̇k asi̇t konjugati
WO2009030254A1 (en) 2007-09-04 2009-03-12 Curevac Gmbh Complexes of rna and cationic peptides for transfection and for immunostimulation
WO2009046739A1 (en) 2007-10-09 2009-04-16 Curevac Gmbh Composition for treating prostate cancer (pca)
WO2009046738A1 (en) 2007-10-09 2009-04-16 Curevac Gmbh Composition for treating lung cancer, particularly of non-small lung cancers (nsclc)
WO2009053700A1 (en) 2007-10-23 2009-04-30 Cancer Research Technology Limited Modification of nucleic acid-containing biological entities
US20110038888A1 (en) 2008-01-10 2011-02-17 Peter Emtage Adjuvant compositions comprising poly-ic and a cationic polymer
KR101483715B1 (ko) 2008-01-31 2015-01-19 큐어백 게엠바하 면역증강제／애주번트인 화학식（ＮｕＧｌＸｍＧｎＮｖ）ａ를 포함하는 핵산 및 이의 유도체
CA2730316A1 (en) 2008-07-11 2010-01-14 Phylogica Limited Peptide inhibitors of cd40l signaling and uses therefor
WO2010037408A1 (en) 2008-09-30 2010-04-08 Curevac Gmbh Composition comprising a complexed (m)rna and a naked mrna for providing or enhancing an immunostimulatory response in a mammal and uses thereof
US20110053829A1 (en) * 2009-09-03 2011-03-03 Curevac Gmbh Disulfide-linked polyethyleneglycol/peptide conjugates for the transfection of nucleic acids
WO2011069529A1 (en) 2009-12-09 2011-06-16 Curevac Gmbh Mannose-containing solution for lyophilization, transfection and/or injection of nucleic acids
EP2955230A1 (en) 2010-07-30 2015-12-16 CureVac AG Complexation of nucleic acids with disulfide-crosslinked cationic components for transfection and immunostimulation
US20120058154A1 (en) * 2010-08-20 2012-03-08 Selecta Biosciences, Inc. Synthetic nanocarrier vaccines comprising peptides obtained or derived from human influenza a virus m2e
WO2012113413A1 (en) * 2011-02-21 2012-08-30 Curevac Gmbh Vaccine composition comprising complexed immunostimulatory nucleic acids and antigens packaged with disulfide-linked polyethyleneglycol/peptide conjugates
WO2013113325A1 (en) 2012-01-31 2013-08-08 Curevac Gmbh Negatively charged nucleic acid comprising complexes for immunostimulation
ES2719598T3 (es) 2012-05-25 2019-07-11 Curevac Ag Inmovilización reversible y/o liberación controlada de ácidos nucleicos contenidos en nanopartículas mediante revestimientos poliméricos (biodegradables)

Also Published As

Publication number Publication date
US11690910B2 (en) 2023-07-04
EP3656402A1 (en) 2020-05-27
MX366858B (es) 2019-07-26
BR112014017525A2 (pt) 2018-05-15
KR102095606B1 (ko) 2020-04-01
US20200085943A1 (en) 2020-03-19
RU2617058C2 (ru) 2017-04-19
CA2856615A1 (en) 2013-08-08
JP2015510504A (ja) 2015-04-09
IN2014DN05848A (es) 2015-05-22
JP6175451B2 (ja) 2017-08-02
CN104080481A (zh) 2014-10-01
US20150118264A1 (en) 2015-04-30
AU2013214572A1 (en) 2014-06-12
SG11201402562YA (en) 2014-09-26
CN110279853A (zh) 2019-09-27
AU2013214572B2 (en) 2017-08-17
SG10201606325SA (en) 2016-12-29
WO2013113501A1 (en) 2013-08-08
EP2809353A1 (en) 2014-12-10
EP2809353B1 (en) 2020-07-01
RU2014135475A (ru) 2016-03-27
ES2820872T3 (es) 2021-04-22
BR112014017525A8 (pt) 2022-07-12
CA2856615C (en) 2020-11-24
WO2013113326A1 (en) 2013-08-08
KR20140120933A (ko) 2014-10-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11690910B2 (en) Pharmaceutical composition comprising a polymeric carrier cargo complex and at least one protein or peptide antigen
US20190008954A1 (en) Negatively charged nucleic acid comprising complexes for immunostimulation
US20210251898A1 (en) Lipid nanoparticle mrna vaccines
EP3294326B1 (en) Prime-boost regimens involving administration of at least one mrna construct
JP6820226B2 (ja) 高齢患者におけるワクチン接種
EP2809354B1 (en) Negatively charged nucleic acid comprising complexes for immunostimulation
EA041756B1 (ru) ВАКЦИНЫ НА ОСНОВЕ мРНК В ЛИПИДНЫХ НАНОЧАСТИЦАХ

Legal Events

Date Code Title Description
HC Change of company name or juridical status

Owner name: ARLANXEO DEUTSCHLAND GMBH

FG Grant or registration