MX2012011300A

MX2012011300A - Vacunas del virus de influenza y usos de las mismas.

Info

Publication number: MX2012011300A
Application number: MX2012011300A
Authority: MX
Inventors: Peter Palese; John Steele; Adolfo Garcia-Sastre; Anice C Lowen
Original assignee: Sinai School Medicine
Priority date: 2010-03-30
Filing date: 2011-03-30
Publication date: 2012-11-29
Also published as: US9708373B2; US20180002385A1; US10179806B2; CA2792537A1; WO2011123495A1; EP3248615A1; JP2017019796A; EP2552479A4; EP2552479A1; CN102939103A; AU2011235220A1; EP3900740A1; KR20130075732A; AU2011235220B2; US20130129761A1; JP2013526849A

Abstract

Se proporcionan en la presente polipéptidos del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza, composiciones que comprenden los mismos, vacunas que comprenden los mismos y métodos para su uso.

Description

VACUNAS DEL VIRUS DE INFLUENZA Y USOS DE LAS MISMAS Esta solicitud reclama el beneficio de prioridad de la Solicitud Provisional Norteamericana No. 61/319,137, presentada el 30 de Marzo de 2010, la cual se incorpora aquí por referencia en su totalidad.

Esta invención se hizo con apoyo del gobierno bajo el número de premio RC1 AI086061 de los Institutos Nacionales de la Salud (NIH) Instituto Nacional de Alergias y Padecimientos Infecciosos, número de premio U54 AI057158 del NIH, número de premio HHSN266200700010C del Departamento de Salud y Servicios Humanos de los Estados Unidos de Norteamérica, y número del premio U01 AI070469 del NIH. El gobierno tiene ciertos derechos en esta invención. 1. CAMPO DE LA INVENCIÓN Se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza, composiciones que comprenden los mismos, vacunas que comprenden las mismas y métodos de su uso. 2. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Los virus de influenza son virus ARN envueltos que pertenecen a la familia de los Orthomyxoviridae (Palese and Shaw (2007) Orthomyxoviridae: The Viruses and Their Replication, 5a ed. Fields1 Virology, editado por B.N. Fields, D.M. Knipe and P.M. Howley. Wolters Kluwer Health/Lippincott Williams & Wilkins, Filadelfia, EEUU, pl647-1689) . El huésped natural de los virus de influenza son las aves, pero los virus de influenza (incluyendo aquellos de origen aviar) también pueden infectar y causar enfermedad en humanos y otros huéspedes animales (caninos, cerdos, caballos, mamíferos del mar, y mustélidos) . Por ejemplo, el virus de influenza aviar H5N1 que circula en Asia se ha encontrado en cerdos en China e Indonesia y también ha expandido su rango de huéspedes para incluir a los gatos, leopardos, y tigres, que generalmente no han sido considerados susceptible a la influenza A (CIDRAP -Influenza Aviar: Consideraciones Agrícolas y de la Vida Silvestre) . La ocurrencia de infecciones por virus de influenza en los animales potencialmente podría dar lugar a cepas de influenza pandémicas humanas.

Los virus de influenza A y B son patógenos humanos principales, que causan un padecimiento respiratorio que varía en severidad desde una infección sub-clínica hasta una neumonía viral primaria que puede dar como resultado la muerte. Los efectos clínicos de la infección varían con la virulencia de la cepa de influenza y la exposición, historia, edad, y estado inmune del huésped. La morbilidad acumulativa y la mortalidad causadas por la influenza estacional son sustanciales debido a la tasa de ataque relativamente alta. En una estación normal, la influenza puede causar entre 3-5 millones de casos de afección severa y hasta 500,000 muertes en todo el mundo (Organización Mundial de la Salud (2003) Influenza: Estudio general; http : //www . who . int /mediacentre/factsheet s/ fs211/en/ ; Ma zo 2003) . En los Estados Unidos de Norteamérica, los virus de influenza infectan un 10-15% estimado de la población (Glezen and Couch RB (1978) Interpandemic influenza in the Houston área, 1974-76. N Engl J ed 298: 587-592; Fox et al. (1982) Influenza virus infections in Seattle families, 1975-1979. II. Pattern of infection in invaded households and relation of age and prior antibody to occurrence of infection and related illness. Am J Epidemiol 116: 228-242) y se asocian con aproximadamente 30,000 muertes cada año (Thompson W et al. (2003) Mortality Associated with Influenza and Respiratory Syncytial Virus in the United States. JAMA 289: 179-186; Belshe (2007) Translational research on vaccines: influenza as an example. Clin Pharmacol Ther 82: 745-749) .

Además de las epidemias anuales, los virus de influenza son la causa de pandemias poco frecuentes. Por ejemplo, los virus de influenza A pueden causar pandemias tales como aquellas que ocurrieron en 1918, 1957, 1968, y 2009. Debido a la falta de inmunidad preformada contra el antigeno viral principal, la hemaglutinina (HA) , la influenza pandémica puede afectar más del 50% de la población en un solo año y a menudo causa un padecimiento más severo que la influenza epidémica. Un ejemplo extremo es la pandemia de 1918, en la cual murió un estimado de 50-100 millones de personas (Johnson and Mueller (2002) Updating the Accounts: Global ortality of the 1918-1920 "Spanish" Influenza Pandemic Bulletin of the History of Medicine 76: 105-115) . Desde el surgimiento del virus de influenza aviar H5N1 altamente patógeno a finales de los 90' s (Claas et al. (1998) Human influenza A H5N1 virus related to a highly pathogenic avian influenza virus. Lancet 351: 472-7), ha habido preocupaciones de que éste pueda ser el siguiente virus pandémico.

Una forma efectiva para proteger contra la infección del virus de influenza es a través de la vacunación; sin embargo, los acercamientos de vacunación actuales se basan en lograr un buen apareamiento entre las cepas circundantes y los aislados incluidos en la vacuna. Tal apareamiento a menudo es difícil de lograr debido a una combinación de factores. Primero, los virus de influenza constantemente experimentan cambio: cada 3-5 años la cepa predominante de virus de influenza A se reemplaza por una variante que ha experimentado suficiente deriva antigénica para evadir las respuestas de los anticuerpos existentes. Los aislados a ser incluidos en las preparaciones de vacuna deben por consiguiente seleccionarse cada año con base en los esfuerzos intensivos de vigilancia de los centros que colaboran con la Organización Mundial de la Salud (OMS) . En segundo lugar, para permitir un tiempo suficiente para la manufactura y la distribución de la vacuna, las cepas se deben seleccionar aproximadamente seis meses antes de la iniciación de la estación de influenza. A menudo, las predicciones del comité de selección de la cepa de la vacuna son inexactas, dando como resultado una caída sustancial en la eficacia de la vacunación.

La posibilidad de un nuevo subtipo de virus de influenza A que se introduzca a la población humana también presenta un reto significativo para las estrategias actuales de vacunación. Debido a que es imposible predecir qué subtipo y cepa del virus de influenza causarán la siguiente pandemia, los acercamientos específicos a la cepa, actuales, no se pueden utilizar para preparar una vacuna de influenza pandémica . 3. BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN En un aspecto, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza. En ciertas modalidades, los polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza carecen de dominios de cabeza globulares como aquí se describe.

Mientras que no se pretende estar atado por alguna teoría de operación particular, se cree que el dominio cabeza globular de una hemaglutinina de la influenza comprende una o más regiones altamente inmunogénicas . Estas regiones altamente inmunogénicas podrían generar una respuesta inmune del huésped. Sin embargo, las regiones altamente inmunogénicas también podrían variar de cepa a cepa del virus de influenza.

Las modalidades aquí presentadas se basan, en parte, en el descubrimiento de que los residuos en los dominios del tallo de la hemaglutinina de la influenza son relativamente conservados e inmunogénicos, y que los anticuerpos que se enlazan a esta región pueden ser neutralizantes. Un polipéptido del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza, que carece de todo o sustancialmente todo de un dominio cabeza globular de la hemaglutinina de la influenza, se puede utilizar para generar una respuesta inmune a uno o más epitopos conservados del polipéptido del dominio del tallo. La remoción de las regiones altamente inmunogénicas del dominio cabeza globular podría exponer a uno o más epitopos del polipéptido del dominio del tallo a un sistema inmunológico del huésped. Adicionalmente , en ciertas modalidades, la eliminación de la glicosilación del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza a través de la alteración de los sitios de glicosilación ahí presentes, puede entregar las regiones conservadas del dominio del tallo más accesibles a la respuesta inmune del huésped.

Si el uno o más epitopos del polipéptido del dominio del tallo son menos inmunogénicos que las regiones altamente inmunogénicas de un dominio cabeza globular, la ausencia de un dominio cabeza globular en el polipéptido del dominio del tallo podría permitir que se desarrolle una respuesta inmune contra el uno o más epitopos del polipéptido del dominio del tallo. Ventajosamente, debido a que las secuencias de aminoácidos de los polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza podrían ser conservadas o altamente conservadas a través de los subtipos virales, una respuesta inmune contra un polipéptido del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza aquí provisto podría tener una reacción cruzada con uno o más subtipos virales aparte del subtipo correspondiente al polipéptido del dominio del tallo. Consecuentemente, los polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza aquí provistos pueden ser útiles para composiciones inmunogénicas (por ejemplo vacunas) capaces de generar respuestas inmunes contra una pluralidad de cepas del virus de influenza.

Sin estar atado por alguna teoría, los polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza aquí descritos se basan, en parte, en el descubrimiento de los inventores de polipéptidos que carecen del dominio cabeza globular de la hemaglutinina de la influenza y mantienen la estabilidad de la conformación pre-fusión de la hemaglutinina de la influenza. En un aspecto, sin estar atado por la teoría, los inventores han descubierto que el mantenimiento de los residuos de cisteína identificados como Ap y Aq en los polipéptidos de la hemaglutinina de la influenza en la FIGURA 1 contribuye a la estabilidad de la región de tallo de la hemaglutinina de la influenza. En otro aspecto, sin estar atado por la teoría, los inventores han descubierto que los polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza que mantienen la conformación pre-fusión de los polipéptidos de la hemaglutinina de la influenza son más efectivos en inducir un efecto protector en los sujetos. En ciertos aspectos, la estabilidad de la conformación pre-fusión se puede conferir introduciendo sustituciones de aminoácidos en ciertos residuos, tal como HA1 H17Y (numeración H3) . 3.1 TERMINOLOGÍA Los términos "aproximadamente" o "cifra aproximada", cuando se utilizan con respecto a una posición del aminoácido se refieren a la posición del aminoácido particular en una secuencia o cualquier aminoácido que esté dentro de cinco, cuatro, tres, dos o un residuo de esa posición del aminoácido, ya sea en una dirección N-terminal o una dirección C-terminal.

Como se utiliza aquí, el término "alrededor de" o "aproximadamente" cuando se utiliza en conjunción con un número se refiere a cualquier número dentro de 1, 5 o 10% del número referido.

El término "identidad de secuencia del aminoácido" se refiere al grado de identidad o similitud entre un par de secuencias de aminoácidos alineadas, usualmente expresado como un porcentaje. El porciento de identidad es el porcentaje de residuos de aminoácidos en una secuencia candidato que son idénticos (es decir, los residuos de aminoácidos en una posición dada en la alineación son el mismo residuo) o similares (es decir, la sustitución de aminoácidos en una posición dada en la alineación es una sustitución conservativa, como se discute debajo) al residuo de aminoácidos correspondiente en el péptido después de alinear las secuencias e introducir separaciones, si es necesario, para lograr el máximo porciento de homología de secuencias. La homología de secuencias, incluyendo los porcentajes de identidad de secuencia y similitud, se determinan utilizando técnicas de alineación de secuencias bien conocidas en el arte, preferiblemente algoritmos de computadora diseñados para este propósito, utilizando los parámetros predeterminados de dichos algoritmos de computadora o los paguetes de software que los contienen. Ejemplos no limitativos de algoritmos de computadora y paquetes de software que incorporan tales algoritmos incluyen lo siguiente. La familia de programas BLAST ilustra un ejemplo particular, no limitativo de un algoritmo matemático utilizado para la comparación de dos secuencias (por ejemplo, Karlin & Altschul, 1990, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 87:2264-2268 (modificado como en Karlin & Altschul, 1993, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 90:5873-5877), Altschul et al, 1990, J. Mol. Bíol. 215:403-410, (gue describe NBLAST y XBLAST), Altschul et al, 1997, Nucleic Acids Res. 25:3389-3402 (que describe Gapped BLAST, y PSI-Blast) . Otro ejemplo particular es el algoritmo de Myers and Miller (1988 CABIOS 4:11-17) que se incorpora en el programa ALIGN (versión 2.0) y está disponible como parte del paquete de software de alineación de secuencias GCG. También es particular el programa FASTA (Pearson .R. and Lipman D.J., Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 85:2444-2448, 1988), disponible como parte del Paquete de Análisis de Secuencias de isconsin. Ejemplos adicionales incluyen BESTFIT, el cual utiliza el algoritmo de "homología local" de Smith and aterman (Advances in Applied Mathematics, 2:482-489, 1981) para encontrar la mejor región única de similitud entre dos secuencias, y que es preferible donde las dos secuencias que se comparan son diferentes en longitud; y GAP, que alinea dos secuencias encontrando una "máxima similitud" de acuerdo con el algoritmo de Neddleman and Wunsch (J. Mol. Biol. 48:443-354, 1970), y es preferible donde las dos secuencias son aproximadamente de la misma longitud y se espera una alineación sobre la longitud completa .

"Sustitución conservativa" se refiere al reemplazo de un aminoácido de una clase con otro aminoácido de la misma clase. En modalidades particulares, una sustitución conservativa no altera la estructura o función, o ambas, de un polipéptido. Las clases de aminoácidos para los propósitos de sustitución conservativa incluyen hidrofóbicos ( et, Ala, Val, Leu, lie), hidrofílicos neutrales (Cys, Ser, Thr) , ácidos (Asp, Glu) , básicos (Asn, Gln, His, Lys, Arg) , disruptores de conformación (Gly, Pro) y aromáticos (Trp, Tyr, Phe) .

Como se utiliza aquí, los términos "padecimiento" y "desorden" se utilizan de forma intercambiable para referirse a una condición en un sujeto. En algunas modalidades, la condición es una infección viral. En modalidades especificas, un término "padecimiento" se refiere al estado patológico que resulta de la presencia del virus en una célula o un sujeto, o por la invasión de una célula o sujeto por el virus. En ciertas modalidades, la condición es un padecimiento en un sujeto, la severidad del cual se disminuye induciendo una respuesta inmune en el sujeto a través de la administración de una composición inmunogénica .

Como se utiliza aquí, el término "cantidad efectiva" en el contexto de administrar una terapia a un sujeto se refiere a la cantidad de una terapia que tiene un efecto (s) profiláctico (s) y/o terapéutico ( s ) . En ciertas modalidades, una "cantidad efectiva" en el contexto de la administración de una terapia a un sujeto se refiere a la cantidad de una terapia que es suficiente para lograr uno, dos, tres, cuatro, o más de los siguientes efectos: (i) reducir o mejorar la severidad de una infección por virus de influenza, padecimiento o síntoma asociado con la misma; (ii) reducir la duración de una infección por virus de influenza, padecimiento o síntoma asociado con la misma; (iii) prevenir la progresión de una infección por virus de influenza, padecimiento o síntoma asociado con la misma; (vi) causar la regresión de una infección por virus de influenza, padecimiento o síntoma asociado con la misma; (v) prevenir el desarrollo o comienzo de una infección por virus de influenza, padecimiento o síntoma asociado con la misma; (vi) prevenir la recurrencia de una infección por virus de influenza, padecimiento o síntoma asociado con la misma; (vii) reducir o prevenir la propagación de un virus de influenza de una célula a otra célula, un tejido a otro tejido, o un órgano a otro órgano; (ix) prevenir o reducir la propagación de un virus de influenza de un sujeto a otro sujeto; (x) reducir la falla del órgano asociada con una infección por virus de influenza; (xi) reducir la hospitalización de un sujeto; (xii) reducir la duración de la hospitalización; (xiii) incrementar la supervivencia de un sujeto con una infección por virus de influenza o padecimiento asociado con la misma; (xiv) eliminar una infección por virus de influenza o padecimiento asociado con la misma; (xv) inhibir o reducir la replicacion del virus de influenza; (xvi) inhibir o reducir la entrada de un virus de influenza en una célula (s) hospedera ( s ) ; (xviii) inhibir o reducir la replicacion del genoma del virus de influenza; (xix) inhibir o reducir la síntesis de proteínas del virus de influenza; (xx) inhibir o reducir el ensamblaje de partículas del virus de influenza; (xxi) inhibir o reducir la liberación de partículas del virus de influenza a partir de una célula (s) hospedera ( s ) ; (xxii) reducir el título del virus de influenza; y/o (xxiii) realzar o mejorar el (los) efecto(s) profiláctico ( s ) o terapéutico ( s) de otra terapia.

En ciertas modalidades, la cantidad efectiva no da como resultado la protección completa contra un padecimiento por virus de influenza, pero da como resultado un título más bajo 0 número reducido de virus de influenza en comparación a un sujeto no tratado. En ciertas modalidades, la cantidad efectiva da como resultado una reducción de 0.5 veces, 1 vez, 2 veces, 4 veces, 6 veces, 8 veces, 10 veces, 15 veces, 20 veces, 25 veces, 50 veces, 75 veces, 100 veces, 125 veces, 150 veces, 175 veces, 200 veces, 300 veces, 400 veces, 500 veces, 750 veces, o 1,000 veces o más en el título del virus de influenza con relación a un sujeto no tratado. En algunas modalidades, la cantidad efectiva da como resultado una reducción en el título del virus de influenza con relación a un sujeto no tratado de aproximadamente 1 log o más, aproximadamente 2 log o más, aproximadamente 3 log o más, aproximadamente 4 log o más, aproximadamente 5 log o más, aproximadamente 6 log o más, aproximadamente 7 log o más, aproximadamente 8 log o más, aproximadamente 9 log o más, aproximadamente 10 log o más, 1 a 3 log, 1 a 5 log, 1 a 8 log, 1 a 9 log, 2 a 10 log, 2 a 5 log, 2 a 7 log, 2 log a 8 log, 2 a 9 log, 2 a 10 log, 3 a 5 log, 3 a 7 log, 3 a 8 log, 3 a 9 log, 4 a 6 log, 4 a 8 log, 4 a 9 log, 5 a 6 log, 5 a 7 log, 5 a 8 log, 5 a 9 log, 6 a 7 log, 6 a 8 log, 6 a 9 log, 7 a 8 log, 7 a 9 log, u 8 a 9 log. Los beneficios de una reducción en el titulo, número o carga total del virus de influenza incluyen, pero no se limitan a, síntomas menos severos de la infección, menos síntomas de la infección y una reducción en la duración del padecimiento asociado con la infección.

"Hemaglutinina" y "HA" se refieren a cualquier hemaglut inina conocida por aquellos de habilidad en el arte. En ciertas modalidades, la hemaglutinina es hemaglutinina de la influenza, tal como una hemaglutinina de la influenza A, una hemaglutinina de la influenza B o una hemaglutinina de la influenza C. Una hemaglutinina típica comprende dominios conocidos por aquellos de habilidad en el arte que incluyen un péptido señal (opcional aquí), un dominio del tallo, un dominio cabeza globular, un dominio luminal (opcional aquí), un dominio transmembrana (opcional aquí) y un dominio citoplásmico (opcional aquí) . En ciertas modalidades, una hemaglutinina consiste de una sola cadena de polipépt idos , tal como HAO . En ciertas modalidades, una hemaglutinina consiste de más de una cadena de polipéptidos en asociación cuaternaria, por ejemplo HA1 y HA2. Aquellos de habilidad en el arte reconocerán que una HAO inmadura podría ser escindida para liberar un péptido señal (aproximadamente 20 aminoácidos) produciendo una hemaglutinina HAO madura. Una hemaglutinina HAO podría ser escindida en otro sitio para producir el polipéptido HA1 (aproximadamente 320 aminoácidos, incluyendo el dominio cabeza globular y una porción del dominio del tallo) y el polipéptido ??2 (aproximadamente 220 aminoácidos, incluyendo el resto del dominio del tallo, un dominio luminal, un dominio transmembrana y un dominio citoplásmico) . En ciertas modalidades, una hemaglutinina comprende un péptido señal, un dominio transmembrana y un dominio citoplásmico. En ciertas modalidades, una hemaglutinina carece de un péptido señal, es decir la hemaglutinina es una hemaglutinina madura. En ciertas modalidades, una hemaglutinina carece de un dominio transmembrana o un dominio citoplásmico, o ambos. Como se utiliza aquí, los términos "hemaglutinina" y "HA" abarcan los polipéptidos de la hemaglutinina gue se modifican por el procesamiento post-traduccional tal como la escisión del péptido señal, la formación del enlace de disulfuro, la glicosilación (por ejemplo, la glicosilación N-enlazada) , la escisión de la proteasa y la modificación de lípidos (por ejemplo la S-palmitoilación) .

"Segmento del tallo N-terminal de HA1" se refiere a un segmento de polipéptido que corresponde a la porción amino-terminal del dominio del tallo de un polipéptido HA1 de la hemaglutinina de la influenza. En ciertas modalidades, un segmento del tallo N-terminal de HA1 consiste de los residuos de aminoácidos que corresponden aproximadamente a los aminoácidos HAlN_termlnal a Ap de un dominio HA1. HAlN_terminal es el aminoácido N-terminal de HA1 como se reconoce por aquellos de habilidad en el arte. Ap es el residuo de cisteina en el segmento del tallo N-terminal de HA1 que forma o es capaz de formar un enlace de disulfuro con un residuo de cisteina en un segmento del tallo C-terminal de HA1. El residuo Ap se identifica en los polipéptidos de la hemaglutinina de la influenza A en la FIGURA 1. Los segmentos del tallo N-terminal de HA1, ejemplares, se describen aquí. En ciertas modalidades, un segmento del tallo N-terminal de HA1 consiste de los residuos de aminoácidos que corresponden aproximadamente a los aminoácidos 1-52 de HA1 de una hemaglutinina H3. Nótese que, en este sistema de numeración, 1 se refiere al aminoácido N-terminal de la proteina HAO madura, a partir del cual se ha removido el péptido señal.

"Segmento del tallo C-terminal de HA1" se refiere a un segmento de polipéptido que corresponde a la porción carboxi-terminal del dominio del tallo de un polipéptido HA1 de la hemaglutinina de la influenza. En ciertas modalidades, un segmento del tallo C-terminal de HA1 consiste de los residuos de aminoácidos que corresponden aproximadamente a los aminoácidos Aq a HAlc-terminai de un dominio HA1. HAlc-. erminai es el aminoácido C-terminal del dominio HA1 como se reconoce por aquellos de habilidad en el arte. El residuo Aq se identifica en los polipéptidos de la hemaglutinina de la influenza A en la FIGURA 1. Los segmentos del tallo C-terminal de HA1, ejemplares, se describen aquí. En ciertas modalidades, un segmento del tallo C-terminal de HA1 consiste de los residuos de aminoácidos que corresponden aproximadamente a los aminoácidos 277-346 de HA1 de una hemaglutinina H3. Nótese que, en este sistema de numeración, 1 se refiere al aminoácido N-terminal de la proteina HAO madura, a partir del cual se ha removido el péptido señal.

"Segmento del tallo corto C-terminal de HA1" se refiere a un segmento de polipéptido que corresponde a la porción carboxilo-terminal del dominio del tallo de un polipéptido HA1 de la hemaglutinina de la influenza. En ciertas modalidades, un segmento del tallo corto C-terminal de HA1 consiste de los residuos de aminoácidos que corresponden aproximadamente a los aminoácidos Bq a HAlc-terminai de un dominio HA1. El residuo Bq se identifica en los polipéptidos de la hemaglutinina de la influenza A en la FIGURA 1. Los segmentos del tallo corto C-terminal de HA1, ejemplares, se describen aquí. En ciertas modalidades, un segmento del tallo corto C-terminal de HA1 consiste de los residuos de aminoácidos que corresponden aproximadamente a los aminoácidos 305-346 de HA1 de una hemaglutinina H3. Nótese que, en este sistema de numeración, 1 se refiere al aminoácido N-terminal de la proteina HAO madura, a partir del cual se ha removido el péptido señal.

"Segmento del tallo largo N-terminal de HA1" se refiere a un segmento de polipéptido que corresponde a la porción amino-terminal del dominio del tallo de un polipéptido HAl de la hemaglutinina de la influenza. En ciertas modalidades, un segmento del tallo largo N-terminal de HAl consiste de los residuos de aminoácidos que corresponden aproximadamente a los aminoácidos HAlN-terminai a Cp de un dominio HAl. Cp es un residuo de cisteina en el segmento del tallo largo N-terminal de HAl que se enlaza o es capaz de ser enlazado a un residuo de alanina en un segmento del tallo largo C-terminal de HAl. El residuo Cp se identifica en los polipéptidos de la hemaglutinina de la influenza A en la FIGURA 1. Los segmentos del tallo largo N-terminal de HAl, ejemplares, se describen aquí. En ciertas modalidades, un segmento del tallo largo N-terminal de HAl consiste de los residuos de aminoácidos que corresponden aproximadamente a los aminoácidos 1-97 de HAl de una hemaglutinina H3. Nótese que, en este sistema de numeración, 1 se refiere al aminoácido N-terminal de la proteina HAO madura, a partir del cual se ha removido el péptido señal.

"Segmento del tallo largo C-terminal de HAl" se refiere a un segmento de polipéptido que corresponde a la porción carboxilo-terminal del dominio del tallo de un polipéptido HAl de la hemaglutinina de la influenza. En ciertas modalidades, un segmento del tallo largo C-terminal de HAl consiste de los residuos de aminoácidos que corresponden aproximadamente a los aminoácidos Cq a HAlc-terminai de un dominio HAl. Cq es un residuo de alanina en el segmento del tallo largo C-terminal de HA1 que se enlaza o es capaz de ser enlazado a un residuo de cistina en un segmento del tallo largo N-terminal de HA1. El residuo Cq se identifica en los polipéptidos de la hemaglutinina de la influenza A en la FIGURA 1. Los segmentos del tallo largo C-terminal de HA1, ejemplares, se describen aquí. En ciertas modalidades, un segmento del tallo largo C-terminal de HA1 consiste de los residuos de aminoácidos que corresponden aproximadamente a los aminoácidos 252-346 de HA1 de una hemaglutinina H3. Nótese que, en este sistema de numeración, 1 se refiere al aminoácido N-terminal de la proteina HAO madura, a partir del cual se ha removido el péptido señal.

"HA2" se refiere a un dominio del polipéptido que corresponde al dominio HA2 de un polipéptido de la hemaglutinina de la influenza conocido por aquellos de habilidad en el arte. En ciertas modalidades, un HA2 consiste de un dominio del tallo, un dominio luminal, un dominio transmembrana y un dominio citoplásmico (véase, por ejemplo, Scheiffle et al., 2007, EMBO J. 16 ( 18 ) : 5501-5508 , el contenido del cual se incorpora por referencia en su totalidad) . En ciertas modalidades, un HA2 consiste de un dominio del tallo, un dominio luminal y un dominio transmembrana. En ciertas modalidades, un HA2 consiste de un dominio del tallo y un dominio luminal; en tales modalidades, el HA2 podria ser soluble. En ciertas modalidades, un HA2 consiste de un dominio del tallo; en tales modalidades, el HA2 podria ser soluble.

Como se utiliza aquí, el término "heterólogo" en el contexto de un polipéptido, ácido nucleico o virus se refiere a un polipéptido, ácido nucleico o virus, respectivamente, que no se encuentra normalmente en la naturaleza o no se asocia normalmente en la naturaleza con un polipéptido, ácido nucleico o virus de interés. Por ejemplo, un "polipéptido heterólogo" se puede referir a un polipéptido derivado de un virus diferente, por ejemplo, un subtipo o cepa de influenza diferente, o un virus no relacionado o una especie diferente.

Como se utiliza aquí, el término "en combinación", en el contexto de la administración de dos o más terapias a un sujeto, se refiere al uso de más de una terapia (por ejemplo, más de un agente profiláctico y/o agente terapéutico) . El uso del término "en combinación" no restringe el orden en que las terapias se administran a un sujeto. Por ejemplo, una primera terapia (por ejemplo, un primer agente profiláctico o terapéutico) se puede administrar antes de (por ejemplo, 5 minutos, 15 minutos, 30 minutos, 45 minutos, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas, 12 horas, 16 horas, 24 horas, 48 horas, 72 horas, 96 horas, 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, 5 semanas, 6 semanas, 8 semanas, o 12 semanas antes), concomitantemente con, o con posterioridad a (por ejemplo, 5 minutos, 15 minutos, 30 minutos, 45 minutos, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas, 12 horas, 16 horas, 24 horas, 48 horas, 72 horas, 96 horas, 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, 5 semanas, 6 semanas, 8 semanas, o 12 semanas después) la administración de una segunda terapia a un sujeto.

Como se utiliza aqui, el término "infección" significa la invasión por, multiplicación y/o presencia de un virus en una célula o un sujeto. En una modalidad, una infección es una infección "activa", es decir, una en la cual el virus se replica en una célula o un sujeto. Tal infección se caracteriza por la propagación del virus a otras células, tejidos, y/u órganos, a partir de las células, tejidos, y/u órganos inicialmente infectados por el virus. Una infección también puede ser una infección latente, es decir, una en la cual el virus no se replica. En ciertas modalidades, una infección se refiere al estado patológico que resulta de la presencia del virus en una célula o un sujeto, o por la invasión de una célula o sujeto por el virus.

Como se utiliza aqui, el término "padecimiento por virus de influenza" se refiere al estado patológico que resulta de la presencia de un virus de influenza (por ejemplo, virus de influenza A o B) en una célula o sujeto o la invasión de una célula o sujeto por un virus de influenza. En modalidades especificas, el término se refiere a una afección respiratoria causada por un virus de influenza.

Como se utiliza aqui, las frases "sistema deficiente en IFN" o "sustrato deficiente en IFN" se refieren a sistemas, por ejemplo, células, lineas celulares y animales, tales como cerdos, ratones, pollos, pavos, conejos, ratas, etcétera, que no producen IFN o que producen bajos niveles de IFN (es decir, una reducción en la expresión de IFN de 5-10%, 10-20%, 20-30%, 30-40%, 40-50%, 50-60%, 60-70%, 70-80%, 80-90% o más cuando se compara a los sistemas competentes en IFN bajo las mismas condiciones) , no responden o responden menos efectivamente al IFN, y/o son deficientes en la actividad de uno o más genes antivirales inducidos por IFN.

Como se utiliza aquí, el término numérico "log" se refiere a logio- Como se utiliza aquí, la frase "multiplicidad de infección" o " OI" es el número promedio de partículas del virus infeccioso por célula infectada. La MOI se determina dividiendo el número de partículas agregadas del virus infeccioso (mi agregados x PFU/ml) por el número de células agregadas (mi agregados x células/ml) .

Como se utiliza aquí, el término "ácido nucleico" pretende incluir moléculas de ADN (por ejemplo, ADNc o ADN genómico) y moléculas de ARN (por ejemplo, ARNm) y análogos del ADN o ARN generado utilizando los análogos del nucleótido. El ácido nucleico puede ser de una sola hebra o de doble hebra .

" Polipéptido" se refiere a un polímero de aminoácidos unido por enlaces amida como es conocido por aquellos de habilidad en el arte. Como se utiliza aquí, el término se puede referir a una sola cadena de polipéptidos unida por enlaces amida covalentes. El término también se puede referir a múltiples cadenas de polipéptidos asociadas por interacciones no covalentes tales como los contactos iónicos, los enlaces de hidrógeno, los contactos de Van der Waals y los contactos hidrofóbicos . Aquellos de habilidad en el arte reconocerán que el término incluye polipéptidos que han sido modificados, por ejemplo mediante procesamiento post-traduccional tal como la escisión del péptido señal, la formación del enlace de disulfuro, la glicosilación (por ejemplo, la glicosilación N-enlazada) , la escisión de la proteasa y la modificación de lipidos (por ejemplo la S-palmitoilación) .

Como se utiliza aquí, los términos "previene", "prevenir" y "prevención" en el contexto de la administración de una terapia (s) a un sujeto para prevenir un padecimiento por virus de influenza se refiere a uno o más de los siguientes efectos que resultan de la administración de una terapia o una combinación de terapias: (i) la inhibición del desarrollo o comienzo de un padecimiento por virus de influenza o un síntoma del mismo; (ii) la inhibición de la recurrencia de un padecimiento por virus de influenza o un síntoma asociado con el mismo; y (iii) la reducción o inhibición en la infección por virus de influenza y/o replicación.

Como se utiliza aquí, los términos "purificado" y "aislado" cuando se utilizan en el contexto de un polipéptido (incluyendo un anticuerpo) que se obtiene a partir de una fuente natural, por ejemplo, las células, se refieren a un polipéptido que está sustancialmente libre de materiales contaminantes de la fuente natural, por ejemplo, partículas de tierra, minerales, químicos del ambiente, y/o materiales celulares de la fuente natural, tales como pero no limitados a desechos celulares, materiales de la pared celular, membranas, organelos, la masa de los ácidos nucleicos, carbohidratos, proteínas, y/o lípidos presentes en las células. De esta manera, un polipéptido que está aislado incluye preparaciones de un polipéptido que tiene menos que aproximadamente 30%, 20%, 10%, 5%, 2%, o 1% (en peso seco) de materiales celulares y/o materiales contaminantes. Como se utiliza aquí, los términos "purificado" y "aislado" cuando se utilizan en el contexto de un polipéptido (incluyendo un anticuerpo) que se sintetiza químicamente se refieren a un polipéptido que está sustancialmente libre de precursores químicos u otros químicos que están involucrados en las síntesis del polipéptido. En una modalidad específica, un polipéptido del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza se sintetiza químicamente. En otra modalidad específica, un polipéptido del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza se aisla.

Como se utiliza aquí, los términos "replicación", "replicación viral" y "replicación del virus" en el contexto de un virus se refieren a una o más, o todas las etapas de un ciclo de vida viral que dan como resultado la propagación del virus. Las etapas de un ciclo de vida viral incluyen, pero no se limitan a, la unión del virus a la superficie de la célula hospedera, la penetración o entrada de la célula hospedera (por ejemplo, a través de la endocitosis mediada por receptor o la fusión de la membrana), el desprendimiento (el proceso por medio del cual el cápside viral se remueve y degrada por enzimas virales o enzimas hospederas liberando de esta manera el ácido nucleico genómico viral) , la replicación del genoma, la síntesis del ARN mensajero viral (ARNm) , la síntesis de la proteína viral, y el ensamblaje de complejos de ribonucleoproteína viral para la replicación del genoma, el ensamblaje de partículas de · virus, la modificación post-traduccional de las proteínas virales, y la liberación de la célula hospedera mediante lisis o gemación y la adquisición de una envoltura del fosfolípido que contiene glicoproteinas virales incrustadas. En algunas modalidades, los términos "replicación", "replicación viral" y "replicación del virus" se refieren a la replicación del genoma viral. En otras modalidades, los términos "replicación", "replicación viral" y "replicación del virus" se refieren a la síntesis de proteínas virales.

"Polipéptido del dominio del tallo" se refiere a un derivado, por ejemplo un derivado diseñado, de un polipéptido de la hemaglutinina que comprende una o más cadenas de polipéptidos que conforman un dominio del tallo de la hemaglutinina . Un polipéptido del dominio del tallo podría ser una sola cadena de polipéptidos, dos cadenas de polipéptidos o más cadenas de polipéptidos. Típicamente, un polipéptido del dominio del tallo es una sola cadena de polipéptidos (es decir correspondiente al dominio del tallo de un polipéptido HAO de la hemaglutinina) o dos cadenas de polipéptidos (es decir correspondientes al dominio del tallo de un polipéptido HA1 de la hemaglutinina en asociación con un polipéptido HA2 de la hemaglutinina). En ciertas modalidades, un polipéptido del dominio del tallo se deriva de una hemaglutinina de la influenza. Los polipéptidos del dominio del tallo diseñados pueden comprender uno o más enlazadores como se describe debajo.

Como se utiliza aquí, los términos "sujeto" o "paciente" se utilizan de forma intercambiable para referirse a un animal (por ejemplo, pájaros, reptiles, y mamíferos). En una modalidad específica, un sujeto es un pájaro. En otra modalidad, un sujeto es un mamífero incluyendo un no primate (por ejemplo, un camello, burro, cebra, vaca, cerdo, caballo, cabra, oveja, gato, perro, rata, y ratón) y un primate (por ejemplo, un mono, un chimpancé, y un humano) . En ciertas modalidades, un sujeto es un animal no humano. En algunas modalidades, un sujeto es una mascota o un animal de granja. En otra modalidad, un sujeto es un humano. En otra modalidad, un sujeto es un bebé humano. En otra modalidad, un sujeto es un niño humano. En otra modalidad, un sujeto es un adulto humano. En otra modalidad, un sujeto es un humano de edad avanzada. En otra modalidad, un sujeto es un bebé humano prematuro .

Como se utiliza aqui, el término "bebé humano prematuro" se refiere a un bebé humano nacido en menos que 37 semanas de edad gestacional.

Como se utiliza aqui, el término "bebé humano" se refiere a un humano recién nacido a 1 año de edad.

Como se utiliza aqui, el término "niño humano" se refiere a un humano que tiene 1 año a 18 años de edad.

Como se utiliza aquí, el término "humano adulto" se refiere a un humano que tiene 18 años o más.

Como se utiliza aquí, el término "humano de edad avanzada" se refiere a un humano de 65 años o más.

Los términos "estructura terciaria" y "estructura cuaternaria" tienen los significados entendidos por aquellos de habilidad en el arte. La estructura terciaria se refiere a la estructura tridimensional de una sola cadena de polipéptidos. La estructura cuaternaria se refiere a la estructura tridimensional de un polipéptido que tiene múltiples cadenas de polipéptidos.

Como se utiliza aquí, los términos "terapias" y "terapia" se pueden referir a cualquier protocolo ( s ) , método (s), compuesto ( s ) , composición (es ) , formulación (es ) , y/o agente (s) que se pueda (n) utilizar en la prevención o tratamiento de una infección viral o un padecimiento o síntoma asociado con la misma. En ciertas modalidades, los términos "terapias" y "terapia" se refieren a la terapia biológica, la terapia de apoyo, y/u otras terapias útiles en el tratamiento o prevención de una infección viral o un padecimiento o síntoma asociado con la misma, conocidas por uno de habilidad en el arte. En algunas modalidades, el término "terapia" se refiere a un ácido nucleico que codifica un polipéptido del dominio del tallo de la hemaglutinina del virus de influenza, un polipéptido del dominio del tallo de la hemaglutinina del virus de influenza, o un vector o composición que comprende dicho ácido nucleico que codifica un polipéptido del dominio del tallo de la hemaglutinina del virus de influenza o un polipéptido del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza. En algunas modalidades, el término "terapia" se refiere a un anticuerpo que se enlaza específicamente a un polipéptido de la hemaglutinina del virus de influenza o un polipéptido del dominio del tallo de la hemaglutinina del virus de influenza.

Como se utiliza aquí, los términos "trata", "tratamiento", y "tratar" se refieren en el contexto de la administración de una terapia (s) a un sujeto a tratar un padecimiento por virus de influenza para obtener un efecto benéfico o terapéutico de una terapia o una combinación de terapias. En modalidades especificas, tales términos se refieren a uno, dos, tres, cuatro, cinco o más de los siguientes efectos que resultan de la administración de una terapia o una combinación de terapias: (i) la reducción o la mejora de la severidad de una infección por virus de influenza o un padecimiento o un síntoma asociado con la misma; (ii) la reducción en la duración de una infección por virus de influenza o un padecimiento o un síntoma asociado con la misma; (iii) la regresión de una infección por virus de influenza o un padecimiento o un síntoma asociado con la misma; (iv) la reducción del título de un virus de influenza; (v) la reducción en la falla del órgano asociada con una infección por virus de influenza o un padecimiento asociado con la misma; (vi) la reducción en la hospitalización de un sujeto; (vii) la reducción en la duración de la hospitalización; (viii) el incremento en la supervivencia de un sujeto; (ix) la eliminación de una infección por virus de influenza o un padecimiento o síntoma asociado con la misma; (x) la inhibición de la progresión de una infección por virus de influenza o un padecimiento o un síntoma asociado con la misma; (xi) la prevención de la propagación de un virus de influenza desde una célula, tejido, órgano o sujeto hacia otra célula, tejido, órgano o sujeto; (xii) la inhibición o reducción en la entrada de un virus de influenza en una célula(s) hospedera (s) ; (xiii) la inhibición o reducción en la replicación de un genoma del virus de influenza; (xiv) la inhibición o reducción en la síntesis de proteínas del virus de influenza; (xv) la inhibición o reducción en la liberación de partículas del virus de influenza a partir de una célula (s) hospedera ( s) ; y/o (xvi) el realce o la mejora del efecto terapéutico de otra terapia.

Como se utiliza aquí, en algunas modalidades, la frase "tipo salvaje" en el contexto de un virus se refiere a los tipos de un virus que son prevalecientes, circulantes naturalmente y que producen brotes típicos de padecimiento. En otras modalidades, el término "tipo salvaje" en el contexto de un virus se refiere a un virus parental. 4. BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS Las Figuras 1A a 1E presentan una alineación de secuencias mediante CLUSTAL de secuencias representativas de 16 subtipos de hemaglutinina del virus A de influenza (SEQ ID N0S:1-16, respectivamente).

Las Figuras 2A a 2B presentan una alineación de secuencias mediante CLUSTALW de una secuencia representativa de hemaglutinina del virus B de influenza (SEQ ID NO: 17) alineada con hemaglutininas HK68-H3N2 (SEQ ID NO: 3) y PR8-H1N1 (SEQ ID NO:l) de influenza A.

La Figura 3 presenta un listado de secuencias de hemaglutinina del virus de influenza B (SEQ ID NO: 17), notando los aminoácidos que constituyen los limites para varios segmentos del tallo N- y C-terminal y los segmentos del tallo intermedios aquí descritos.

La Figura 4 proporciona estructuras putativas de polipéptidos del dominio del tallo de la HA de la influenza A basadas en una proteina de la hemaglutinina HK68-H3N2. La Figura 4A proporciona la estructura putativa de un polipéptido del dominio del tallo de la HA de la influenza A basada en una proteina de la hemaglutinina HK68-H3N2, el segmento del tallo C-terminal SEQ ID NO: 52 y el segmento del tallo N-terminal SEQ ID NO: 36 de HA1. La Figura 4B proporciona la estructura putativa de un polipéptido del dominio del tallo corto de la HA de la influenza A basada en una proteina de la hemaglutinina HK68-H3N2, el segmento del tallo corto C-terminal SEQ ID NO: 352 y el segmento del tallo N-terminal SEQ ID NO: 36 de HA1. La Figura 4C proporciona la estructura putativa de un polipéptido del dominio del tallo largo de la HA de la influenza A basada en una proteina de la hemaglutinina HK68-H3N2, el segmento del tallo largo C-terminal SEQ ID NO: 433 y el segmento del tallo largo N-terminal SEQ ID NO: 417 de HA1.

La Figura 5 proporciona las estructuras putativas de polipéptidos del dominio del tallo de la HA de la influenza A basadas en una proteína de la hemaglut inina PR8-H1N1*. La Figura 5A proporciona la estructura putativa de un polipéptido del dominio del tallo de la HA de la influenza A basada en una proteína de la hemaglutinina PR8-H1N1, el segmento del tallo C-terminal SEQ ID NO: 34 y el segmento del tallo N-terminal SEQ ID NO: 18 de HAl. La Figura 5B proporciona la estructura putativa de un polipéptido del dominio del tallo corto de la HA de la influenza Ar el segmento del tallo corto C-terminal SEQ ID NO: 350 y el segmento del tallo N-terminal SEQ ID NO: 18 de HAl. La Figura 5C proporciona la estructura putativa de un polipéptido del dominio del tallo largo de la HA de la influenza A basada en una proteína de la hemaglutinina PR8-H1N1, el segmento del tallo largo C-terminal SEQ ID NO: 430 y el segmento del tallo largo N-terminal SEQ ID NO: 414 de HAl.

La Figura 6 proporciona estructuras putativas de polipéptidos del dominio del tallo de la HA de la influenza B. La Figura 6A proporciona una molécula de HA parcialmente sin cabeza basada en la proteína de la hemaglutinina B/Hong Kong/8/73, en la cual se retienen los primeros 94 aminoácidos del dominio HAl de la HA (SEQ ID NO:550), y donde Cys94 se enlaza directamente a Cysl43 del dominio HAl (SEQ ID NO: 553), por medio de un puente de enlace. La Figura 6B representa una molécula de HA parcialmente sin cabeza basada en la proteína de la hemaglutinina B/Hong Kong/8/73, en la cual se retienen los primeros 178 aminoácidos del dominio HAl de la HA (SEQ ID NO: 551), y donde Cysl78 se enlaza directamente a Cys272 del dominio HA1 (SEQ ID NO: 554), por medio de un puente de enlace. La Figura 6C representa una molécula de HA sin cabeza basada en la proteina de la hemaglutinina B/Hong Kong/8/73, en la cual se retienen los primeros 94 aminoácidos del dominio HA1 de la HA (SEQ ID NO: 555), y donde Cys94 se enlaza directamente a Cysl43 del dominio HA1, por medio de un puente de enlace. Los aminoácidos 143 a 178 del dominio HA1 se retienen adicionalmente ( SEQ ID NO:556), y Cysl78 se enlaza directamente a Cys272 del dominio HA1 (SEQ ID NO: 557), por medio de un puente de enlace. La Figura 6D representa una molécula de HA sin cabeza basada en la proteina de la hemaglutinina B/Hong Kong/8/73, en la cual se retienen los primeros 54 aminoácidos del dominio HA1 de la HA ( SEQ ID NO: 552), y donde Cys54 se enlaza directamente a Cys272 del dominio HAl (SEQ ID NO: 554), por medio de un puente de enlace. 5. DESCRIPCIÓN DETALLADA 5.1 POLIPÉPTIDOS Se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza. Mientras que no se pretende estar atado por alguna teoría de operación particular, se cree que los polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza son útiles para presentar una o más regiones antigénicas relativamente conservadas a un sistema inmunológico del huésped para generar una respuesta inmune que es capaz de tener una reacción cruzada con una pluralidad de cepas de influenza. Debido a que la una o más regiones antigénicas están bien conservadas a través de los subtipos de la hemaglutinina de la influenza, tal respuesta inmune podría tener una reacción cruzada con varios subtipos de polipéptidos de la hemaglutinina de la influenza de longitud completa.

Se cree que la hemaglutinina de la influenza de longitud completa presenta varios segmentos altamente antigénicos en su dominio cabeza globular. Estos segmentos altamente antigénicos podrían ser más accesibles para un sistema inmunológico del huésped o más inmunogénicos en estructura, o ambos. Se cree que un sistema inmunológico del huésped responde preferencialmente a estos segmentos altamente inmunogénicos en comparación a uno o más epítopos en el dominio del tallo de una hemaglutinina de la influenza. Adicionalmente, debido a que un dominio cabeza globular de una hemaglutinina de la influenza podría ser variable a través de subtipos y cepas virales, una respuesta inmune contra un subtipo del dominio cabeza globular podría ser limitada a los segmentos altamente antigénicos específicos de ese dominio cabeza globular. Las cepas con diferentes dominios cabeza globulares no podrían tener una reacción cruzada con la misma respuesta inmune. Como tal, la efectividad de las vacunas que presentan polipéptidos de la hemaglutinina podría ser limitada a las cepas específicas presentadas en la vacuna. Por lo tanto, una vacuna de influenza convencional, dada, es probablemente sólo efectiva contra las cepas de influenza predichas a ser virulentas durante una estación de influenza dada.

Ventajosamente, los polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza aquí provistos podrían ser útiles para generar una respuesta inmune contra múltiples cepas de influenza. Los polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza generalmente no comprenden los dominios cabeza globulares variables, altamente antigénicos, de los polipéptidos de la vacuna de influenza convencionales. De esta manera, no deberían generar respuestas inmunes limitadas a los segmentos variables de los dominios cabeza globulares. En cambio, éstos presentan uno o más epítopos en el dominio del tallo -relativamente conservado- de la hemaglutinina de la influenza. Como tal, se podrían utilizar para generar una respuesta inmune del huésped contra múltiples cepas de influenza que transportan los epítopos relativamente conservados. Consecuentemente, los polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza encuentran uso como antígenos en las composiciones, vacunas y métodos descritos debajo en detalle. Los polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza podrían ser útiles para generar una respuesta inmune del huésped contra cualquiera, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, diez, once, doce, trece, catorce, quince o dieciséis subtipos conocidos de la hemaglutinina de la influenza A o un subtipo de la hemaglutinina de la influenza A posteriormente identificado. Los polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza también podrían ser útiles para generar una respuesta inmune del huésped contra cualquier subtipo de la hemaglutinina de la influenza B ahora conocido o posteriormente identificado.

Generalmente, los polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza aquí provistos son polipéptidos que comprenden o que consisten esencialmente del dominio del tallo de un polipéptido de la hemaglutinina de la influenza. El dominio del tallo de un polipéptido de la hemaglutinina de la influenza es el dominio del tallo que es generalmente reconocido por aquellos de habilidad en el arte.

Como es conocido por aquellos de habilidad en el arte, una hemaglutinina de la influenza de longitud completa típicamente comprende un dominio HAl y un dominio HA2. El dominio del tallo se forma por dos segmentos del dominio HAl y más o todo el dominio HA2. Los dos segmentos del dominio HAl se separan, en la secuencia primaria, por un dominio cabeza globular.

En ciertas modalidades, los polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglu inina de la influenza comprenden un pequeño o ningún dominio cabeza globular de un polipéptido de la hemaglutinina de la influenza. En ciertas modalidades, unos polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza son una hemaglutinina de la influenza que le han suprimido su dominio cabeza globular mediante cualquier técnica estimada adecuada por uno de habilidad en el arte.

En ciertas modalidades, los polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza aqui descritos mantienen los residuos de cisteina identificados en los polipéptidos de la hemaglutinina de la influenza como Ap y Aq en la FIGURA 1. En ciertas modalidades, los polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza aqui descritos tienen mayor estabilidad en un pH menor que la hemaglutinina de un virus de influenza de tipo salvaje (por ejemplo, un pH menor que 5.2, menor que 5.1, menor que 5.0, o menor que 4.9, tal como 4.8, 4.7, 4.6, 4.5, 4.4., 4.3, 4.2, 4.1, 4.0, 3.9, 3.8, etcétera) . En modalidades particulares, los polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza aqui descritos experimentan cambios conformacionales de la pre-fusión a la conformación por fusión en un pH menor que la hemaglutinina de virus de influenza de tipo salvaje. En algunas modalidades, los polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza aqui descritos comprenden una o más sustituciones de aminoácidos, tal como HA1 H17Y (numeración H3) que incrementa la estabilidad de los polipéptidos en un pH bajo (por ejemplo, un pH de entre 4.9 a 5.2, 4.5 a 3.5, 3.5 a 2.5, 2.5 a 1.5, 1.5 a 0.5) . La estabilidad de los polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza se puede evaluar utilizando técnicas conocidas en el arte, tales como la sensibilidad de las moléculas de hemaglutinina a la digestión de tripsina, como se describe en, por ejemplo, Thoennes et al., 2008, Virology 370: 403-414.

Los polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza se pueden preparar de acuerdo con cualquier técnica estimada adecuada por uno de habilidad, incluyendo las técnicas descritas debajo. En ciertas modalidades, los polipéptidos del dominio del tallo se aislan.

En algunas modalidades, la estructura primaria de un polipéptido del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza comprende, en el siguiente orden: Un segmento del tallo N-terminal de HA1, un enlazador, un segmento del tallo C-terminal de HA1 y un HA2. En algunas modalidades, la estructura primaria de un polipéptido del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza comprende, en el siguiente orden: un segmento del tallo N-terminal de HA1, un enlazador, un segmento del tallo corto C-terminal de HA1 y un HA2. En algunas modalidades, la estructura primaria de un polipéptido del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza comprende, en el siguiente orden: un segmento del tallo largo N-terminal de HA1 , un enlazador, un segmento del tallo largo C-terminal de HA1 y un HA2. En algunas modalidades, el polipéptido del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza comprende en el siguiente orden: un segmento del tallo N-terminal de HAl, un enlazador, un segmento del tallo intermedio de HAl, un segundo enlazador, un segmento del tallo C-terminal de HAl y un HA2.

La secuencia primaria se podría formar por un solo polipéptido, o se podría formar por múltiples polipépt idos . Típicamente, un solo polipéptido se expresa por cualquier técnica estimada adecuada por uno de habilidad en el arte. En las modalidades de un solo polipéptido, los segmentos HAl y el HA2 está en asociación terciaria. Como es conocido por aquellos de habilidad en el arte, un solo polipéptido de la HA se podría escindir, por ejemplo mediante una proteasa, bajo condiciones de expresión apropiadas para producir dos polipéptidos en asociación cuaternaria. La escisión es típicamente entre el segmento del tallo C-terminal de HAl y el HA2. En ciertas modalidades, se proporcionan aquí dominios del tallo de la hemaglutinina de la influenza de múltiples polipéptidos, por ejemplo dos polipéptidos. En modalidades de múltiples polipéptidos, los segmentos HAl y HA2 están en asociación cuaternaria.

En ciertas modalidades, un polipéptido del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza aquí provisto es monomérico. En ciertas modalidades, un polipéptido del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza aquí provisto es multimérico. En ciertas modalidades, un polipéptido del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza aqui provisto es trimérico. Aquellos de habilidad en el arte reconocerán que los polipéptidos de la hemaglutinina de la influenza nativa son capaces de trimerización in vivo y que ciertos polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza aqui provistos son capaces de trimerización. En modalidades particulares descritas debajo, los polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza aqui provistos comprenden dominios de trimerización para facilitar la trimerización.

En ciertas modalidades, un polipéptido del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza comprende un péptido señal. Típicamente, el péptido señal se escinde durante o después de la expresión y traducción del polipéptido para producir un polipéptido del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza maduro. El péptido señal podría ser ventajoso para la expresión de los polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza. En ciertas modalidades, también se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza maduros que carecen de un péptido señal.

El HA2 de la hemaglutinina de la influenza típicamente comprende un dominio del tallo, un dominio transmembrana y un dominio citoplásmico . En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza que comprenden un dominio del tallo de HA2, un dominio luminal de HA2 , un dominio transmembrana de HA2 y un dominio citoplásmico de HA2. Tales polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza se podrían expresar como antígenos unidos a la membrana. En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza que comprenden un dominio del tallo de HA2, un dominio luminal de HA2 , y un dominio transmembrana de HA2 pero carecen de cierta parte o todo el dominio citoplásmico típico. Tales polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza se podrían expresar como antígenos unidos a la membrana. En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza que comprenden un dominio del tallo de HA2 y un dominio luminal de HA2 pero carecen tanto de un dominio transmembrana de HA2 como de un dominio citoplásmico de HA2. Tales polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza ventajosamente se podrían expresar como polipéptidos solubles. En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza que comprenden un dominio del tallo de HA2 pero carecen de un dominio luminal de HA2 , un dominio transmembrana de HA2 y un dominio citoplásmico de HA2. Tales polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglut inina de la influenza venta osamente se podrían expresar como polipéptidos solubles. En ciertas modalidades, los polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza comprenden un dominio del tallo de HA2 que tiene al menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96% o 98% de identidad de secuencia de aminoácidos a un dominio del tallo de HA2 de la influenza conocido por aquellos de habilidad en el arte. Los dominios del tallo de HA2 conocidos, ejemplares, de las hemaglutininas de la influenza A y de la influenza B conocidas se proporcionan en las tablas debajo.

También se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza que comprenden formas suprimidas de dominios del tallo de HA2 en donde hasta 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 o 1 residuos de aminoácidos se suprimen de cualquiera o ambas terminales del dominio del tallo de HA2. Adicionalmente se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza que comprenden formas alteradas de dominios del tallo de HA2 en donde hasta 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 o 1 residuos de aminoácidos se sustituyen conservativamente con otros aminoácidos. Adicionalmente se proporcionan polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza que comprenden dominios del tallo de HA2 suprimidos y alterados.

En algunas modalidades, la estructura primaria de un polipéptido del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza comprende, en el siguiente orden: un segmento del tallo N-terminal de HA1, un enlazador, un segmento del tallo C-terminal de HA1 y un HA2. El segmento del tallo N-terminal de HA1 podría ser cualquier segmento del tallo N-terminal de HA1 reconocido por uno de habilidad en el arte con base en la definición aquí provista. Típicamente, un segmento del tallo N-terminal de HA1 corresponde a un polipéptido que consiste del aminoácido N-terminal de un HA1 maduro (es decir un HA1 que carece de un péptido señal) al residuo de cisteína localizado en la secuencia en aproximadamente el residuo 52 del HA1. Este residuo de cisteína, referido aquí como Ap, es generalmente capaz de formar un puente de disulfuro con un residuo de cisteína en el segmento del tallo C-terminal de HA1. Las secuencias de 16 hemaglutininas de la influenza A representativas se presentan en la FIGURA 1, y el residuo Ap se identifica en cada una.

En ciertas modalidades, el segmento del tallo N-terminal de HA1 no termina exactamente en Ap (por ejemplo, Cys52 de una subunidad de HA1 de una hemaglutinina H3), sino en un residuo en la secuencia y en la vecindad de la estructura a Ap. Por ejemplo, en ciertas modalidades, el segmento del tallo N-terminal de HA1 termina en Ap_i, Ap-2, Ap_3, o Ap_4. En otras modalidades, el segmento del tallo N-terminal de HA1 termina en Ap+i, Ap+2, Ap+3, Ap+4 o Ap+5. El final de un segmento del tallo N-terminal de HAl se debe seleccionar en conjunción con el final del segmento del tallo C-terminal de HAl y el enlazador de modo que el dominio del tallo de HAl enlazado resultante sea capaz de formar una estructura tridimensional similar, como se describe debajo, a un dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza.

En ciertas modalidades, los polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza comprenden un segmento del tallo N-terminal de HAl que tiene al menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96% o 98% de identidad de secuencia de aminoácidos a un segmento del tallo N-terminal de HAl de la influenza conocido por aquellos de habilidad en el arte. Los segmentos del tallo N-terminal de HAl conocidos, ejemplares, se proporcionan en las tablas debajo.

También se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza que comprenden formas suprimidas de segmentos del tallo N-terminal de HAl en donde hasta 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 o 1 residuos de aminoácidos se suprimen de cualquiera o ambas terminales del segmento del tallo N-terminal de HAl. En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza que comprenden formas expandidas de segmentos del tallo N-terminal de HAl en donde 1, 2 o 3 residuos se agregan al C-terminal de los segmentos del tallo N-terminal de HAl; estos residuos agregados se podrían derivar de la secuencia de aminoácidos de un dominio cabeza globular adyacente a un segmento del tallo N-terminal de HAl. Adicionalmente se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza que comprenden formas alteradas de segmentos del tallo N-terminal de HAl en donde hasta 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 o 1 residuos de aminoácidos se sustituyen conservativamente con otros aminoácidos. Adicionalmente se proporcionan polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza que comprenden segmentos del tallo N-terminal de HAl suprimidos y alterados.

El segmento del tallo C-terminal de HAl podría ser cualquier segmento del tallo C-terminal de HAl reconocido por uno de habilidad en el arte con base en la definición aquí provista. Típicamente, un segmento del tallo C-terminal de HAl corresponde a un polipéptido que consiste del residuo de cisteína localizado en la secuencia en aproximadamente el residuo 277 de un HAl (utilizando la numeración H3) al aminoácido C-terminal del HAl. Este residuo de cisteína, referido aquí como Aq, es generalmente capaz de formar un puente de disulfuro con el residuo de cisteína Ap en el segmento del tallo N-terminal de HAl. Las secuencias de 16 hemaglutininas de la influenza A representativas se presentan en la FIGURA 1, y el residuo Aq se identifica en cada una.

En ciertas modalidades, el segmento del tallo C-terminal de HAl no inicia en Aq (por ejemplo, Cys277 de una subunidad de HAl de una hemaglutinina H3), sino en un residuo en la secuencia y en la vecindad de la estructura a Aq. Por ejemplo, en ciertas modalidades, el segmento del tallo C-terminal de HAl inicia en Aq_i, Aq_2, Aq-3, o Aq_4. En otras modalidades, el segmento del tallo C-terminal de HAl inicia en Aq+i, Aq+2, Aq+3, Aq+4 o Aq+5. El final de un segmento del tallo N-terminal de HAl se debe seleccionar en conjunción con el inicio del segmento del tallo C-terminal de HAl y el enlazador de modo que el dominio del tallo de HAl resultante sea capaz de formar una estructura tridimensional similar, como se describe debajo, a una hemaglutinina de la influenza.

En ciertas modalidades, los polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza comprenden un segmento del tallo C-terminal de HAl que tiene al menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96% o 98% de identidad de secuencia de aminoácidos a un segmento del tallo C-terminal de HAl de la influenza conocido por aquellos de habilidad en el arte. Los segmentos del tallo C-terminal de HAl conocidos, ejemplares, se proporcionan en las tablas debajo.

En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo N-terminal es Ap_i, y el inicio del segmento del tallo C-terminal es Aq_i. En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo N-terminal es Ap_2, y el inicio del segmento del tallo C-terminal es Aq_2. En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo N-terminal es Ap_3, y el inicio del segmento del tallo C-terminal es Aq-3. En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo N-terminal es Ap_4, y el inicio del segmento del tallo C-terminal es Aq-4. En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo N-terminal es Ap_5 , y el inicio del segmento del tallo C-terminal es Aq-5.

En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo N-terminal es Ap+i, y el inicio del segmento del tallo C-terminal es Aq+i . En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo N-terminal es Ap+2, y el inicio del segmento del tallo C-terminal es Aq+2. En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo N-terminal es Ap+3, y el inicio del segmento del tallo C-terminal es Aq+3. En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo N-terminal es Ap+4, y el inicio del segmento del tallo C-terminal es Aq+4. En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo N-terminal es Ap+5, y el inicio del segmento del tallo C-terminal es Aq+5 .

En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo N-terminal es Ap-i, y el inicio del segmento del tallo C-terminal es Aq+i . En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo N-terminal es Ap_2, y el inicio del segmento del tallo C-terminal es Aq+2. En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo N-terminal es Ap_3, y el inicio del segmento del tallo C-terminal es Aq+3. En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo N-terminal es Ap_4, y el inicio del segmento del tallo C-terminal es Aq+4. En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo N-terminal es Ap_5 , y el inicio del segmento del tallo C-terminal es Aq+5 .

En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo N-terminal es Ap+i, y el inicio del segmento del tallo C-terminal es Aq_i. En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo N-terminal es Ap+2, y el inicio del segmento del tallo C-terminal es Aq-2. En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo N-terminal es Ap+3, y el inicio del segmento del tallo C-terminal es Aq_3. En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo N-terminal es Ap+4, y el inicio del segmento del tallo C-terminal es Aq-4. En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo N-terminal es Ap+5, y el inicio del segmento del tallo C-terminal es Aq-5.

También se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza que comprenden formas suprimidas de segmentos del tallo C-terminal de HA1 en donde hasta 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 o 1 residuos de aminoácidos se suprimen de cualquiera o ambas terminales del segmento del tallo C-terminal de HA1. En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza que comprenden formas expandidas de segmentos del tallo C-terminal de HA1 en donde 1, 2 o 3 residuos se agregan al N-terminal de los segmentos del tallo C-terminal de HA1; estos residuos agregados se podrían derivar de la secuencia de aminoácidos de un dominio cabeza globular adyacente a un segmento del tallo C-terminal de HA1. En modalidades particulares, si se agrega un residuo al segmento del tallo C-terminal, entonces se agrega un residuo al segmento del tallo N-terminal; si se agregan dos residuos al segmento del tallo C-terminal, entonces se agregan dos residuos al segmento del tallo N-terminal; si se agregan tres residuos al segmento del tallo C-terminal, entonces se agregan tres residuos al segmento del tallo N-terminal. Adicionalmente se proporcionan aqui polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza que comprenden formas alteradas de segmentos del tallo C-terminal de HAl en donde hasta 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 o 1 residuos de aminoácidos se sustituyen conservativamente con otros aminoácidos. Adicionalmente se proporcionan polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza que comprenden segmentos del tallo C-terminal de HAl suprimidos y alterados.

Los polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza se podrían basar en (es decir podrían tener identidad de secuencia, como se describe anteriormente) cualquier hemaglutinina de la influenza conocida por aquellos de habilidad o posteriormente descubierta. En ciertas modalidades, los polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza se basan en una hemaglutinina de la influenza A. En ciertas modalidades, los polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza se basan en una hemaglutinina de la influenza A seleccionada a partir del grupo que consiste de Hl, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, Hll, H12, H13, H14, H15 y H16. En ciertas modalidades, los polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza se basan en una hemaglutinina de la influenza B, como se describe en detalle debajo.

Los segmentos del tallo N-terminal de HA1 se podrían basar en (es decir podrían tener identidad de secuencia, como se describe anteriormente) cualquier segmento del tallo N-terminal de HA1 conocido por aquellos de habilidad o posteriormente descubierto. En ciertas modalidades, los segmentos del tallo N-terminal de HA1 se basan en segmentos del tallo N-terminal de HA1 de la influenza A. En ciertas modalidades, los segmentos del tallo N-terminal de HA1 se basan en una hemaglutinina de la influenza A seleccionada a partir del grupo que consiste de Hl, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, Hll, H12, H13, H14, H15 y H16. En ciertas modalidades, el segmento del tallo N-terminal de HA1 se selecciona a partir de las SEQ ID NOS:34-49. En ciertas modalidades, el segmento del tallo N-terminal de HA1 se selecciona a partir de las SEQ ID NOS: 34-49, que tienen cada una un aminoácido suprimido de su C-terminal. En ciertas modalidades, el segmento del tallo N-terminal de HA1 se selecciona a partir de las SEQ ID NOS: 34-49, que tienen cada una dos aminoácidos suprimidos de su C-terminal. En ciertas modalidades, el segmento del tallo N-terminal de HA1 se selecciona a partir de las SEQ ID NOS: 34-49, que tienen cada una tres aminoácidos suprimidos de su C-terminal. En ciertas modalidades, el segmento del tallo N-terminal de HA1 se selecciona a partir de las SEQ ID NOS: 34-49, que tienen cada una cuatro aminoácidos suprimidos de su C-terminal. En ciertas modalidades, el segmento del tallo N-terminal de HA1 se selecciona a partir de las SEQ ID NOS: 34-49, que tienen cada una cinco aminoácidos suprimidos de su C-terminal. En ciertas modalidades, el segmento del tallo N-terminal de HA1 se selecciona a partir de las SEQ ID NOS: 177-224.

Los segmentos del tallo C-terminal de HA1 se podrían basar en (es decir podrían tener identidad de secuencia, como se describe anteriormente) cualquier segmento del tallo C-terminal de HA1 conocido por aquellos de habilidad o posteriormente descubierto. En ciertas modalidades, los segmentos del tallo C-terminal de HA1 se basan en los segmentos del tallo C-terminal de HA1 de la influenza A. En ciertas modalidades, los segmentos del tallo C-terminal de HA1 se basan en una hemaglutinina de la influenza A seleccionada a partir del grupo que consiste de Hl, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, Hll, H12, H13, H14, H15 y H16. En ciertas modalidades, el segmento del tallo C-terminal de HA1 se selecciona a partir de las SEQ ID NOS: 50-65. En ciertas modalidades, el segmento del tallo C-terminal de HA1 se selecciona a partir de las SEQ ID NOS: 50-65, que tienen cada una un aminoácido suprimido de su N-terminal. En ciertas modalidades, el segmento del tallo C-terminal de HA1 se selecciona a partir de las SEQ ID NOS: 50-65, que tienen cada una dos aminoácidos suprimidos de su N-terminal. En ciertas modalidades, el segmento del tallo C-terminal de HA1 se selecciona a partir de las SEQ ID NOS: 50-65, que tienen cada una tres aminoácidos suprimidos de su N-terminal. En ciertas modalidades, el segmento del tallo C-terminal de HA1 se selecciona a partir de las SEQ ID NOS: 50-65, que tienen cada una cuatro aminoácidos suprimidos de su N-terminal. En ciertas modalidades, el segmento del tallo C-terminal de HA1 se selecciona a partir de las SEQ ID NOS: 50-65, que tienen cada una cinco aminoácidos suprimidos de su N-terminal . En ciertas modalidades, el segmento del tallo C-terminal de HA1 se selecciona a partir de las SEQ ID NOS:226-273.

Los dominios del tallo de HA2 se podrían basar en (es decir podrían tener identidad de secuencia, como se describe anteriormente) cualquier dominio del tallo de HA2 conocido por aquellos de habilidad o posteriormente descubierto. En ciertas modalidades, los dominios del tallo de HA2 se basan en dominios del tallo de HA2 de la influenza A. En ciertas modalidades, los dominios del tallo de HA2 se basan en una hemaglutinina de la influenza A seleccionada a partir del grupo que consiste de Hl, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8 , H9, H10, Hll, H12, H13, H14, H15 y H16. En ciertas modalidades, el dominio del tallo de HA2 se selecciona a partir de las SEQ ID NOS: 66-97.

En modalidades que comprenden un péptido señal, el péptido señal se podrían basar en cualquier péptido señal del virus de influenza conocido por aquellos de habilidad en el arte. En ciertas modalidades, los péptidos señal se basan en los péptidos señal de la influenza A. En ciertas modalidades, los péptidos señal se basan en una hemaglutinina de la influenza A seleccionada a partir del grupo que consiste de Hl, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, Hll, H12, H13, H14, H15 y H16. En ciertas modalidades, el péptido señal podría ser cualquier péptido señal estimado útil por uno de habilidad en el arte. En ciertas modalidades, el péptido señal se selecciona a partir de las SEQ ID NOS: 18-33.

En modalidades que comprenden un dominio luminal, el dominio luminal se podrían basar en cualquier dominio luminal de la influenza conocido por aquellos de habilidad en el arte. En ciertas modalidades, los dominios luminales se basan en dominios luminales de la influenza A. En ciertas modalidades, los dominios luminales de HA2 se basan en una hemaglutinina de la influenza A seleccionada a partir del grupo que consiste de Hl, H2, H3, H4, H5, H6, H7 , H8, H9, H10, Hll, H12, H13, H14, H15 y H16. En ciertas modalidades, el dominio luminal podría ser cualquier dominio luminal estimado útil por uno de habilidad en el arte. En ciertas modalidades, el dominio luminal se selecciona a partir de las SEQ ID NOS: 98-113.

En modalidades que comprenden un dominio transmembrana, el dominio transmembrana se podrían basar en cualquier dominio transmembrana de la influenza conocido por aquellos de habilidad en el arte. En ciertas modalidades, los dominios transmembrana se basan en los dominios transmembrana de la influenza A. En ciertas modalidades, los dominios transmembrana de HA2 se basa en una hemaglut inina de la influenza A seleccionada a partir del grupo que consiste de Hl, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, Hll, H12, H13, H14, H15 y H16. En ciertas modalidades, el dominio transmembrana podría ser cualquier dominio transmembrana estimado útil por uno de habilidad en el arte. En ciertas modalidades, el dominio transmembrana se selecciona a partir de las SEQ ID NOS: 114-129.

En modalidades que comprenden un dominio citoplásmico , el dominio citoplásmico se podrían basar en cualquier dominio citoplásmico de la influenza conocido por aquellos de habilidad en el arte. En ciertas modalidades, los dominios citoplásmicos se basan en los dominios citoplásmicos de la influenza A. En ciertas modalidades, los dominios citoplásmicos de HA2 se basan en una hemaglut inina de la influenza A seleccionada a partir del grupo que consiste de Hl, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, Hll, H12, H13, H14, H15 y H16. En ciertas modalidades, el dominio citoplásmico podría ser cualquier dominio citoplásmico estimado útil por uno de habilidad en el arte. En ciertas modalidades, el dominio citoplásmico se selecciona a partir de las SEQ ID NOS: 130-145.

En ciertas modalidades, uno o más de los sitios de glicosilación en el dominio del tallo de la hemaglutinina se alteran o suprimen tal que la glicosilación en estos sitios no ocurrirá durante el procesamiento y la maduración del polipéptido. Aquellos de habilidad en el arte reconocerán que la HA de la influenza típicamente comprende una o más secuencias de glicosilación (por ejemplo Asn-Xaa-Ser/Thr/Cys, en donde Xaa es cualquier aminoácido aparte de Pro) . En ciertas modalidades, uno o más residuos de aminoácidos en una secuencia de glicosilación se sustituyen conservativamente con un residuo de aminoácidos que disturba la secuencia de glicosilación. En ciertas modalidades, uno o más residuos de aminoácidos en una secuencia de glicosilación se sustituyen con cualquier residuo de aminoácidos que disturbe la secuencia de glicosilación. En ciertas modalidades, uno o más residuos de asparagina en una secuencia de glicosilación se sustituyen con alanina. En una modalidad particular, la asparagina en la posición 38 de una hemaglutinina H3 se cambia a una alanina.

La Tabla 1, debajo, identifica los péptidos señal, los segmentos del tallo N-terminal de HAl, los segmentos del tallo C-terminal de HAl y los dominios HA2 de los polipéptidos de la hemaglutinina de la influenza A. Estos péptidos señal, dominios y segmentos del tallo son útiles en los polipéptidos y métodos aquí descritos .

TABLA 1. Secuencias Ejemplares de Hemaglutinina de la Influenza A La Tabla 1A, debajo, identifica los segmentos del tallo N-terminal de HA1 y los segmentos del tallo C-terminal de HA1 útiles para los polipéptidos y métodos aquí descritos.

TABLA 1A. Secuencias Ejemplares de la Hemaglutlnina de la Influenza A La Tabla 2, debajo, identifica los dominios del tallo putativos, los dominios luminales, los dominios transmembrana y los dominios citoplásmicos de los polipéptidos HA2.

TABLA 2. Secuencias Ejemplares de la Hemaglutinina de la Influenza A En ciertas modalidades, los polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza comprenden uno o más epitopos inmunogénicos en la estructura terciaria o cuaternaria de un polipéptido de la hemaglutinina de la influenza .

En ciertas modalidades, el segmento del tallo N-terminal de HA1 comprende la secuencia de aminoácidos Ai7-A18- (Xaa ) n_ 38 (SEQ ID NO: 146), en donde A1 es Y o H; Ais es H, L, o Q; (Xaa)n representa una secuencia de 18-20 residuos de aminoácidos; y A38 es H, S, Q, T o N.

En ciertas modalidades, el segmento del tallo C-terminal de HA1 comprende la secuencia de aminoácidos A291-A292 (SEQ ID NO: 147) , en donde A29i es T, S, N, D, P o K; y A292 es L, M, K o R.

En ciertas modalidades, el dominio HA2 comprende la secuencia de aminoácidos Ai8-Ai9-A2o-A2i (SEQ ID NO: 148), en donde is es V o I; A19 es D, N o A; A2o es G, y A2i es W.

En ciertas modalidades, el dominio HA2 comprende la secuencia de aminoácidos A38-A39-A40- 41-A42-A43-A44-A45-A46-A47-A48- A49-A50-A51-A52-A53-A54- 55- S6 (SEQ ID NO: 149), en donde A38 es K, Q, R, : L 0 Y; A39 es cualquier residuo de aminoácido ; A40 es cualquier residuo de aminoácido ; u es T; A42 es Q; A43 es cualquier residuo de aminoácido; A44 es A; A45 es i; A46 es D; A 7 es cualquier residuo de aminoácido ; A48 es I, V 0 M; A49 es T, Q 0 N; A50 es cualquier residuo de aminoácido ; Asi es K; A52 es V 0 L; A53 es N; A54 es cualquier residuo de aminoácido; A55 es V, I 0 L; y A56 es V 0 I.

En ciertas modalidades, los polipéptidos tallo de la influenza comprenden dos secuencias de aminoácidos seleccionadas a partir de las SEQ ID NOS: 146-149. En ciertas modalidades, los polipéptidos del dominio del tallo de la influenza comprenden tres secuencias de aminoácidos seleccionadas a partir de las SEQ ID NOS: 146-149. En ciertas modalidades, los polipéptidos del dominio del tallo de la influenza comprenden cuatro secuencias de aminoácidos seleccionadas a partir de las SEQ ID NOS: 146-149.

En ciertas modalidades, los segmentos del tallo N-terminal de HA1 se basan en una hemaglut inina de la influenza B. En ciertas modalidades, el segmento del tallo N-terminal de HA1 se selecciona a partir de las SEQ ID NOS: 154-157, presentadas en la Tabla 3 debajo.

En ciertas modalidades, los segmentos del tallo C-terminal de HA1 se basan en una hemaglutinina de la influenza B. En ciertas modalidades, el segmento del tallo C-terminal de HA1 se selecciona a partir de las SEQ ID NOS: 158-159 y 553-554, presentadas en la Tabla 3 debajo.

En ciertas modalidades, los dominios del tallo de HA2 se basan en una hemaglutinina de la influenza B. Los residuos ejemplares para el final de un segmento del tallo N-terminal y el final de un segmento del tallo C-terminal de una hemaglutinina de la influenza B se indican en la FIGURA 2. En ciertas modalidades, el dominio del tallo de HA2 es de acuerdo con la SEQ ID NO: 160, presentada en las Tablas 3 y 4 debajo.

En modalidades particulares, los limites del segmento del tallo N-terminal de HA1 del virus de influenza B y el segmento C-terminal de HA1 del virus de influenza B se definen con respecto a seis pares de residuos de aminoácidos: Arg50 y Ser277 Ala6s y Trp27i; Lys80 y Ser2n; Cys94 y Cysi43; Cysi78 y Cys272 y ys54 y Cys272. Las posiciones de estos seis pares de residuos también están resaltadas en la FIGURA 3. Los números de residuos se basan en la numeración de la B-HA a partir del virus B de influenza como se describe en el acceso al Banco de Datos de Proteínas No. 3BT6. La secuencia de aminoácidos correspondiente a la estructura de cristal de rayos X de la proteína B-HA en el acceso al Banco de Datos de Proteínas No. 3BT6 se alinea con la secuencia de aminoácidos Hl y H3 representativa y se muestra en la FIGURA 2.

En ciertas modalidades, un segmento del tallo N-terminal de HA1 del virus de influenza B inicia en el residuo 1 (con base en la numeración de una subunidad de HA1 del virus de influenza B como en el PDB archivo 3BT6) y termina en Arg50. En ciertas modalidades, un segmento del tallo N-terminal de HA1 del virus de influenza B inicia en el residuo 1 y termina en Alae6- En algunas modalidades, un segmento del tallo N-terminal de HA1 del virus de influenza B inicia en el residuo 1 y termina en Lysso En algunas modalidades, un segmento del tallo N-terminal del virus de influenza B inicia en el residuo 1 y termina en Argso- En algunas modalidades, un segmento del tallo N-terminal del virus de influenza B inicia en el residuo 1 y termina en Cys¾ . En algunas modalidades, un segmento del tallo N-terminal del virus de influenza B inicia en el residuo 1 y termina en Cysg4. En algunas modalidades, un segmento del tallo N-terminal del virus de influenza B inicia en el residuo 1 y termina en Cysi7s.

En algunas modalidades, un segmento del tallo N-terminal de HAl del virus de influenza B tiene una secuencia de aminoácidos de acuerdo con cualquiera de las SEQ ID NOS: 154-157 y 550-552, como se ilustra en la Tabla 3. En algunas modalidades, un segmento del tallo N-terminal de HAl del virus de influenza B tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96% o 98% idéntica a cualquiera de las secuencias de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID NOS:154-157 o 550-552.

En algunas modalidades, un segmento del tallo N-terminal de HAl del virus de influenza B tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96% o 98% idéntica a la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 154, que corresponde a los residuos 1-50 del HAl del virus de influenza B.

En algunas modalidades, un segmento del tallo N-terminal de HAl del virus de influenza B tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96% o 98% idéntica a la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 155, que corresponde a los residuos 1-66 del HAl del virus de influenza B.

En algunas modalidades, un segmento del tallo N-terminal de HAl del virus de influenza B tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96% o 98% idéntica a la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 156, que corresponde a los residuos 1-80 del HA1 del virus de influenza B.

En algunas modalidades, un segmento del tallo N-terminal de HA1 del virus de influenza B tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96% o 98% idéntica a la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 157, que corresponde a los residuos 1-80 del HA1 del virus de influenza B en que la lisina en la posición 80 se reemplaza con una arginina.

En algunas modalidades, un segmento del tallo N-terminal de HA1 del virus de influenza B tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96% o 98% idéntica a la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 550, que corresponde a los residuos 1-94 del HA1 del virus de influenza B.

En algunas modalidades, un segmento del tallo N-terminal de HA1 del virus de influenza B tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96% o 98% idéntica a la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 551, que corresponde a los residuos 1-178 del HA1 del virus de influenza B.

En algunas modalidades, un segmento del tallo N-terminal de HA1 del virus de influenza B tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96% o 98% idéntica a la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 552, que corresponde a los residuos 1-54 del HAl del virus de influenza B.

En algunas modalidades, un segmento del tallo C-terminal de HAl del virus de influenza B tiene una secuencia de aminoácidos que inicia en Ser277, Trp27i, Cysi.43, Cys272 en residuos correspondientes en otros subtipos de HA del virus de influenza B.

En algunas modalidades, un segmento del tallo C-terminal de HAl del virus de influenza B tiene una secuencia de aminoácidos de acuerdo con cualquiera de las SEQ ID NOS: 158-159 o 553-554, como se ilustra en la Tabla 3. En algunas modalidades, un segmento del tallo C-terminal de HAl del virus de influenza B tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96% o 98% idéntica a la SEQ ID NO: 158, que corresponde a los residuos 277-344 del HAl del virus de influenza B. En algunas modalidades, un segmento del tallo C-terminal de HAl del virus de influenza B tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96% o 98% idéntica a la SEQ ID NO:159, que corresponde a los residuos 271-344 del HAl del virus de influenza B. En algunas modalidades, un segmento del tallo C-terminal de HAl del virus de influenza B tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96% o 98% idéntica a la SEQ ID NO: 553, que corresponde a los residuos 137-344 del HAl del virus de influenza B. En algunas modalidades, un segmento del tallo C-terminal de HAl del virus de influenza B tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96% o 98% idéntica a la SEQ ID NO: 554, que corresponde a los residuos 272-344 del HAl del virus de influenza B.

En algunas modalidades, un segmento del tallo C-terminal de HAl del virus de influenza B inicia en el residuo 276, residuo 275, residuo 274, residuo 273, o residuo 272. En otras modalidades, un segmento del tallo C-terminal de HAl del virus de influenza B inicia en el residuo 278, residuo 279, residuo 280, residuo 281, o residuo 282.

En ciertas modalidades, el dominio HA2 del virus de influenza B está en asociación terciaria o cuaternaria con el dominio HAl del virus de influenza B a través del segmento N-terminal de HAl del virus de influenza B, el segmento C-terminal de HAl del virus de influenza B, o ambos.

En algunas modalidades, el segmento C-terminal de HAl del virus de influenza B y la subunidad de HA2 del virus de influenza B se enlazan de manera covalente. Por ejemplo, en su C-terminal (por ejemplo, en el residuo final de la segunda secuencia) , el segmento C-terminal de HAl del virus de influenza B se enlaza de manera covalente al dominio HA2 del virus de influenza B en tales modalidades. En algunas modalidades, el segmento C-terminal de HA1 del virus de influenza B y el dominio ??2 del virus de influenza B forman una cadena de polipéptidos continua.

En algunas modalidades, el dominio HA2 del virus de influenza B tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 160 o 161, como se ilustra en la Tabla 3 o 4. En algunas modalidades, la secuencia de aminoácidos del dominio HA2 es al menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96% o 98% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NOS:160-161.

En ciertas modalidades, los polipéptidos del dominio del tallo de la influenza B comprenden un péptido señal. El péptido señal puede ser cualquier péptido señal estimado adecuado por aquellos de habilidad en el arte, incluyendo cualquier péptido señal aquí descrito. En ciertas modalidades, el péptido señal es al menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96% o 98% idéntico a cualquiera de las SEQ ID NOS: 150-153. En ciertas modalidades, el péptido señal es de acuerdo con cualquiera de las SEQ ID NOS:150-153.

En ciertas modalidades, los polipéptidos del dominio del tallo de la influenza B comprenden un dominio luminal. El dominio luminal puede ser cualquier dominio luminal estimado adecuado por aquellos de habilidad en el arte, incluyendo cualquier dominio luminal aquí descrito. En ciertas modalidades, el luminal es al menos 60% u 80%, idéntico a la SEQ ID NO: 162. En ciertas modalidades, el dominio luminal es de acuerdo con la SEQ ID NO: 162.

En ciertas modalidades, los polipéptidos del dominio del tallo de la influenza B comprenden un dominio transmembrana. El dominio transmembrana puede ser cualquier dominio transmembrana estimado adecuado por aquellos de habilidad en el arte, incluyendo cualquier dominio transmembrana aqui descrito. En ciertas modalidades, el dominio transmembrana es al menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96% o 98% idéntico a la SEQ ID NO: 163. En ciertas modalidades, el dominio transmembrana es de acuerdo con la SEQ ID NO: 163.

En ciertas modalidades, los polipéptidos del dominio del tallo de la influenza B comprenden un dominio citoplásmico . El dominio citoplásmico puede ser cualquier dominio citoplásmico estimado adecuado por aquellos de habilidad en el arte, incluyendo cualquier dominio citoplásmico aqui descrito. En ciertas modalidades, el dominio citoplásmico es al menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96% o 98% idéntico a la SEQ ID NO: 164. En ciertas modalidades, el dominio citoplásmico es de acuerdo con la SEQ ID NO: 164.

TABLA 3 : Secuencias Ejemplares de la Hemaglutinina de la Influenza B La Tabla 4 proporciona el dominio del tallo putativo, el dominio luminal, el dominio transmembrana y el dominio citoplásmico de la HA de la influenza B.

TABLA 4 : Secuencias Ejemplares de la Hemaglutinina de la Influenza B Como se ilustra en las FIGURAS 1 y 2, los segmentos del tallo N-terminal de HAl comparten la identidad de secuencia entre la influenza A y la influenza B y adicionalmente a través de los subtipos de la influenza A. De modo semejante, los segmentos del tallo C-terminal de HAl también comparten la identidad de secuencia entre la influenza A y la influenza B y adicionalmente a través de los subtipos de la influenza A. Adicionalmente, los dominios HA2 también comparten la identidad de secuencia entre la influenza A y la influenza B y adicionalmente a través de los subtipos de la influenza A.

En algunas modalidades, el polipéptido del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza comprende en el siguiente orden: un segmento del tallo N-terminal de HA1, un enlazador, un segmento del tallo intermedio de HA1, un segundo enlazador, un segmento del tallo C-terminal de HA1 y un HA2. En algunas modalidades, el segmento del tallo N-terminal de HA1 tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96% o 98% idéntica a la SEQ ID NO: 555, como se ilustra en la Tabla 5. La SEQ ID NO: 555 corresponde a los residuos 1-94 del HA1 del virus de influenza B. En algunas modalidades, el segmento del tallo C-terminal de HA1 tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96% o 98% idéntica a la SEQ ID NO: 557, como se ilustra en la Tabla 5. La SEQ ID NO: 557 corresponde a los residuos 272-344 del HA1 del virus de influenza B. En algunas modalidades, el segmento intermedio de HA1 tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96% o 98% idéntica a la SEQ ID NO: 556, como se ilustra en la Tabla 5. La SEQ ID NO: 556 corresponde a los residuos 143-178 del HA1 del virus de influenza B. En algunas modalidades, el dominio HA2 tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96% o 98% idéntica a la SEQ ID NO: 160, como aquí se describe. En algunas modalidades, los primer y segundo enlazadores pueden ser cualquier enlazador conocido por aquellos expertos en el arte incluyendo, pero no limitado a, los enlazadores aquí descritos.

TABLA 5. Secuencias Ejemplares de la Hemaglutinina de la Influenza B En algunas modalidades, el polipéptido del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza es un polipéptido híbrido que comprende o consiste esencialmente de segmentos y/o dominios de una pluralidad de subtipos o cepas de influenza. Por ejemplo, un polipéptido del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza podría comprender segmentos del tallo N-terminal de HA1 y C-terminal de HA1 de diferentes subtipos de HA del virus de influenza A. En algunas modalidades, el segmento del tallo N-terminal de HA1 es del virus de influenza A mientras que el segmento del tallo C-terminal de HA1 es del virus de influenza B. De modo semejante, el HA2 también puede ser del virus de influenza A mientras que el segmento del tallo C-terminal y/o N-terminal de HAl es del virus de influenza B.

Se entenderá que cualquier combinación de los elementos de secuencias listados en las Tablas 1-4 o las variantes de los mismos se puede utilizar para formar los polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina HA de la presente invención.

En un polipéptido del dominio del tallo de la influenza aquí provisto, un enlazador conecta de manera covalente el segmento del tallo N-terminal de HAl al segmento del tallo C-terminal de HAl. En ciertas modalidades, el enlazador es un enlace directo. En ciertas modalidades, el enlazador es un péptido que comprende un residuo de aminoácidos, dos o menos residuos de aminoácidos, tres o menos residuos de aminoácidos, cuatro o menos residuos de aminoácidos, cinco o menos residuos de aminoácidos, diez o menos residuos de aminoácidos, 15 o menos residuos de aminoácidos, 20 o menos residuos de aminoácidos, 30 o menos residuos de aminoácidos, 40 o menos residuos de aminoácidos, o 50 o menos residuos de aminoácidos. En ciertas modalidades, el péptido enlazador comprende 50 o más residuos de aminoácidos. En ciertas modalidades, el enlazador sustancialmente carece de un dominio cabeza globular. En otras palabras, el enlazador comprende no más de 10, 9, 8, 7, 6, 5 o 4 residuos de aminoácidos secuenciales , contiguos, de la secuencia de aminoácidos de un dominio cabeza globular de la influenza. En ciertas modalidades, el enlazador es distinto a Lys-Leu-Asn-Gly-Ser-Gly-Ile-Met-Lys-Thr-Glu-Gly-Thr-Leu-Glu-Asn (SEQ ID NO: 542) . En ciertas modalidades, el enlazador es distinto a Asn-Asn-Ile-Asp-Thr o Lys-Leu-Asn-Gly-Ser-Gly-Ile-Met-Lys-Thr-Glu-Gly-Thr-Leu-Glu-Asn (SEQ ID NO: 543) . En ciertas modalidades, el enlazador es distinto a Asn-Asn-Ile-Asp-Thr (SEQ ID NO: 546) .

En ciertas modalidades, el enlazador se conecta de manera covalente, en un extremo, al C-terminal del segmento del tallo N-terminal de HA1. El péptido enlazador también se conecta de manera covalente, en el otro extremo, al N-terminal del segmento del tallo C-terminal de HA1. En ciertas modalidades, uno de los enlaces covalentes es un enlace de amida. En ciertas modalidades, ambos enlaces covalentes son enlaces de amida .

El enlazador podría ser cualquier enlazador estimado adecuado por uno de habilidad en el arte. En ciertas modalidades, el enlazador se selecciona con base en el segmento del tallo N-terminal de HA1 y el segmento del tallo C-terminal de HA1. En estas modalidades, el enlazador se podría seleccionar con programas de modelado molecular tales como InsightlI y Quanta, ambos de Accelrys. En ciertas modalidades, el enlazador es una secuencia recurrente estructural que permite la alineación estructural del segmento del tallo N-terminal de HA1 y el segmento del tallo C-terminal de HA1 que es consistente con la estructura de un dominio del tallo de la hemaglutinina como se reconoce por aquellos de habilidad en el arte. En ciertas modalidades, el enlazador se selecciona a partir de una genoteca de enlazadores candidato. En ciertas modalidades, la genoteca incluye estructuras de polipéptidos tridimensionales en una base de datos públicamente disponible tal como el Banco de Datos de Proteínas (PDB) o la Base de Datos de Estructuras Macromoleculares en el Laboratorio Europeo de Biología Molecular (EMBL) o el Instituto Europeo de Bioinformática (EBI) . En ciertas modalidades, la genoteca incluye estructuras de polipéptidos tridimensionales de registradas, asociadas con programas comerciales tales como InsightlI y Quanta, ambos de Accelrys. Adicionalmente, cualquier base de datos o colección de estructuras de proteínas o elementos estructurales se puede utilizar para seleccionar el enlazador. Bases de datos o colecciones ejemplares de elementos estructurales de proteínas incluyen pero no se limitan a la Clasificación Estructural de Proteínas (SCOP, mantenida por y disponible a través de la Universidad de Cambridge) ; la base de datos de familias de proteínas (Pfam, mantenida por y disponible a través del Instituto Wellcome Trust Sanger) ; el Recurso de Proteínas Universal (UniProt, mantenido por y disponible a través del Consorcio UniProt); el recurso Integrado para familias de proteínas (InterPro; mantenido de por y disponible a través de EMBL-EBI); la Clase, Arquitectura, Topología, superfamilia de Homólogos (CATH, mantenida por y disponible a través de Instituto de Biología Estructural y Molecular en la University College London) ; y las familias de proteínas estructuralmente similares (FSSP, mantenidas por y disponibles a través de EBI). Cualquier algoritmo estimado adecuado por uno de habilidad en el arte se puede utilizar para seleccionar el enlazador, incluyendo pero no limitado a aquellos utilizados por SCOP, CATH y FSSP. Ejemplos útiles incluyen pero no se limitan a Pymol (Delano Scientific LLC), InsightlI y Quanta (ambos de Accelrys) , MIDAS (Universidad de California, San Francisco) , SwissPDB viewer (Swiss Institute of Bioinformatics) , TOPOFIT (Northeastern University) , CBSU LOOPP (Cornell University) , y SuperPose (Universidad de Alberta, Edmonton) .

En ciertas modalidades, el enlazador es un enlace directo. En ciertas modalidades, el enlazador se selecciona a partir del grupo que consiste de Gly, Gly-Gly, Gly-Gly-Gly, Gly-Gly-Gly-Gly y Gly-Gly-Gly-Gly-Gly . En ciertas modalidades, el enlazador se selecciona a partir del grupo que consiste de Gly-Pro y Pro-Gly. En ciertas modalidades, el enlazador es un lazo de 281 vueltas, por ejemplo que tiene la secuencia ITPNGSI PNDKPFQNVNKITYGA (SEQ ID NO: 165) .

En ciertas modalidades el enlazador comprende una secuencia de glicosilación . En ciertas modalidades, el enlazador comprende una secuencia de aminoácidos de acuerdo con Asn-Xaa-Ser/Thr donde Xaa es cualquier aminoácido aparte de prolina y Ser/Thr es serina o treonina. En ciertas modalidades, el enlazador comprende la secuencia de aminoácidos Asn-Ala-Ser. En ciertas modalidades el enlazador es una secuencia de glicosilación. En ciertas modalidades, el enlazador es una secuencia de aminoácidos de acuerdo con Asn-Xaa-Ser/Thr donde Xaa es cualquier aminoácido aparte de prolina y Ser/Thr es serina o treonina. En ciertas modalidades, el enlazador es la secuencia de aminoácidos Asn-Ala-Ser.

En ciertas modalidades, los polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza son capaces de formar una estructura tridimensional que es similar a la estructura tridimensional del dominio del tallo de una hemaglutinina de la influenza nativa. La similitud estructural se podría evaluar con base en cualquier técnica estimada adecuada por aquellos de habilidad en el arte. Por ejemplo, la reacción, por ejemplo bajo condiciones de no desnaturalización, de un polipéptido del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza con un anticuerpo neutralizante o antisuero que reconoce una hemaglutinina de la influenza nativa podría indicar una similitud estructural. Los antisueros o anticuerpos neutralizantes útiles se describen en, por ejemplo Sui, et al., 2009, Nat. Struct . Mol. Biol. 16 (3) : 265-273, Ekiert et al., 26 de Febrero de 2009, Science [DOI: 10.1126/science.1171491] , y Kashyap et al., 2008, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 105 ( 16) : 5986-5991 , los contenido de los cuales se incorporan por este medio por referencia en sus totalidades. En ciertas modalidades, el anticuerpo o antisuero es un anticuerpo o antisuero que reacciona con un epítopo no contiguo (es decir, no contiguo en la secuencia primaria) que se forma por la estructura terciaria o cuaternaria de una hemaglutinina .

En ciertas modalidades, la similitud estructural se podría evaluar mediante técnicas espectroscópicas tales como dicroísmo circular, espectroscopia Raman, RMN, RMN 3D y cristalografía de ¦ rayos X. Las estructuras conocidas de la hemaglutinina de la influenza determinadas por la cristalografía de rayos X se describen en coordenadas estructurales en los archivos del Banco de Datos de Proteínas incluyendo pero no limitado a 1HGJ (una cepa HA H3N2) y 1RUZ (una cepa HA HlNl) .

En ciertas modalidades, la similitud estructural se evalúa mediante desviación RMS entre porciones superpuestas correspondientes de dos estructuras. Para crear una superposición significativa, en ciertas modalidades, las coordenadas de al menos 20 átomos correspondientes, 25 átomos correspondientes , 30 átomos correspondientes , 40 átomos correspondientes , 50 átomos correspondientes , 60 átomos correspondientes , 70 átomos correspondientes , 80 átomos correspondientes , 90 átomos correspondientes , 100 átomos correspondientes , 120 átomos correspondientes, 150 átomos correspondientes , 200 átomos correspondientes, o 250 átomos correspondientes se utilizan para calcular una desviación RMS.

En ciertas modalidades, las coordenadas de todos los átomos correspondientes en las estructuras principales del aminoácido se utilizan para calcular una desviación RMS. En ciertas modalidades, las coordenadas de todos los átomos de carbono alfa correspondientes en las estructuras principales del aminoácido se utilizan para calcular una desviación RMS. En ciertas modalidades, las coordenadas de todos los residuos idénticos correspondientes, incluyendo las cadenas laterales, se utilizan para calcular una desviación RMS.

En ciertas modalidades, las coordenadas de todos o una porción de los átomos correspondientes en un segmento N-terminal de HA1 se utilizan para calcular una desviación RMS.

En ciertas modalidades, las coordenadas de todos o una porción de los átomos correspondientes en un segmento C-terminal de HA1 se utilizan para calcular una desviación RMS. En ciertas modalidades, las coordenadas de todos o una porción de los átomos correspondientes en ambos; un segmento C-terminal y un segmento N-terminal de HA1 se utilizan para calcular una desviación RMS. En ciertas modalidades, las coordenadas de todos o una porción de los átomos correspondientes en los dominios HA2 se utilizan para calcular una desviación RMS.

En ciertas modalidades, la desviación RMS entre las estructuras de un polipéptido del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza y las porciones correspondientes de un dominio del tallo de la hemaglutinina del virus de influenza A, conocido (por ejemplo, de 1HGJ o 1RUZ) es 5 Á o menos, 4 Á o menos, 3 Á o menos, 2.5 Á o menos, 2 Á o menos, 1.5 Á o menos, 1 Á o menos, 0.75 Á o menos, 0.5 Á o menos, 0.3 Á o menos, 0.2 Á o menos, o 0.1 Á o menos. Se podría utilizar software de código abierto o comercialmente disponible para realizar las superposiciones estructurales y/o los cálculos de la desviación RMS. Ejemplos útiles incluyen pero no se limitan a Pymol (Delano Scientific LLC) , InsightlI y Quanta (ambos de Accelrys), MIDAS (Universidad de California, San Francisco), SwissPDB viewer (Swiss Institute of Bioinformatics ) , TOPOFIT (Northeastern University) , CBSU LOOPP (Cornell University) , y SuperPose (Universidad de Alberta, Edmonton) .

En ciertas modalidades, cualquier polipéptido del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza aquí provisto adicionalmente puede comprender uno o más dominios del polipéptido estimados adecuados por aquellos de habilidad en el arte. Los dominios del polipéptido útiles incluyen los dominios que facilitan la purificación, el plegamiento y la escisión de porciones de un polipéptido. Por ejemplo, una etiqueta His (His-His-His-His-His-His, SEQ ID NO:166), el epitopo FLAG u otra etiqueta de purificación puede facilitar la purificación de un polipéptido aquí provisto. Un promotor del plegamiento o dominio de trimerización de la fibritina del bacteriófago T4 puede facilitar la trimerización de los polipéptidos aquí provistos. El dominio del promotor del plegamiento pueden tener cualquier secuencia del promotor del plegamiento conocida por aquellos de habilidad en el arte (véase, por ejemplo, Papanikolopoulou et al., 2004, J. Biol. Che . 279 (10) : 8991-8998, el contenido del cual se incorpora por este medio por referencia en su totalidad) . Ejemplos incluyen GSGYIPEAPRDGQAYVRKDGE VLLSTFL (SEQ ID NO:167) . Un dominio del promotor del plegamiento puede ser útil para facilitar la trimerización de los polipéptidos solubles aquí provistos. Los sitios de escisión se pueden utilizar para facilitar la escisión de una porción de un polipéptido, por ejemplo la escisión de una etiqueta de purificación o un dominio del promotor del plegamiento o ambos. Los sitios de escisión útiles incluyen un sitio de escisión de trombina, por ejemplo uno con la secuencia LVPRGSP (SEQ ID NO:168) .

En ciertas modalidades, se proporcionan polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglut inina de la influenza que comprenden un sitio de escisión de elastasa. Aquellos de habilidad en el arte reconocerán que el sitio de escisión de tripsina en la unión entre HAl y HA2 se puede mutar a un sitio de escisión de elastasa mediante la sustitución de valina por la arginina o lisina en el sitio de escisión de HA1-HA2 en una secuencia de hemaglutinina (véase, por ejemplo, Stech et al., 2005, Nature Med. 11 ( 6) : 683-689) . Consecuentemente, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza que tienen una sustitución de valina en el C-terminal del segmento del tallo C-terminal (es decir, el C-terminal del dominio HAl) . En modalidades particulares, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza que comprenden cualquiera de las SEQ ID NOS: 50-65 o 158-159 en donde el residuo de aminoácido C-terminal, por ejemplo la arginina o lisina, de SEQ ID NOS: 50-65 o 158-159 se sustituye con un residuo de valina.

En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza que se predice son resistentes a la escisión de la proteasa en la unión entre HAl y HA2. Aquellos de habilidad en el arte deberían reconocer que la secuencia de Arg-Gly que se extiende a lo largo de HA1 y HA2 es un sitio de reconocimiento para tripsina y típicamente se escinde para la activación de la hemaglutinina. Debido a que los polipéptidos del dominio del tallo aquí descritos no necesitan activarse, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza que se predice son resistentes a la escisión de la proteasa. En ciertas modalidades, se proporciona cualquier polipéptido del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza aquí descrito en donde el sitio de la proteasa que se extiende a lo largo de HA1 y HA2 es mutado a una secuencia que es resistente a la escisión de la proteasa. En ciertas modalidades, se proporciona cualquier polipéptido del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza aquí descrito en donde el residuo C-terminal del segmento del tallo C-terminal de HA1 es cualquier residuo aparte de Lys o Arg. En ciertas modalidades, se proporciona cualquier polipéptido del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza aquí descrito en donde el residuo N-terminal del dominio HA2 es prolina. En ciertas modalidades, se proporciona cualquier polipéptido del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza aquí descrito en donde el residuo C-terminal del segmento del tallo C-terminal de HA1 es Ala y el residuo N-terminal del dominio HA2 también es Ala.

En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza que consisten de un segmento del tallo N-terminal de HA1 enlazado de manera covalente a un enlazador, a su vez enlazado de manera covalente a un segmento del tallo C-terminal de HA1 en asociación de enlace con un dominio del tallo de HA2. En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza que consisten de un segmento del tallo N-terminal de HA1 enlazado de manera covalente a un enlazador, a su vez enlazado de manera covalente a un segmento del tallo C-terminal de HA1, a su vez enlazado de manera covalente a un dominio del tallo de HA2. En ciertas modalidades, se proporcionan aqui polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza que consisten de un péptido señal enlazado de manera covalente a un segmento del tallo N-terminal de HA1 enlazado de manera covalente a un enlazador, a su vez enlazado de manera covalente a un segmento del tallo C-terminal de HA1, a su vez enlazado de manera covalente a un dominio del tallo de HA2.

En ciertas modalidades, se proporcionan aqui polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza que consisten de un segmento del tallo N-terminal de HA1 enlazado de manera covalente a un enlazador, a su vez enlazado de manera covalente a un segmento del tallo C-terminal de HA1 en asociación de enlace con un dominio del tallo de HA2 que se conecta de manera covalente a un dominio luminal de HA2. En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza que consisten de un segmento del tallo N-terminal de HA1 enlazado de manera covalente a un enlazador, a su vez enlazado de manera covalente a un segmento del tallo C-terminal de HA1, a su vez enlazado de manera covalente a un dominio del tallo de HA2 que se enlaza de manera covalente a un dominio luminal de HA2. En ciertas modalidades, se proporcionan aqui polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza que consisten de un péptido señal enlazado de manera covalente a un segmento del tallo N-terminal de HAl enlazado de manera covalente a un enlazador, a su vez enlazado de manera covalente a un segmento del tallo C-terminal de HAl, a su vez enlazado de manera covalente a un dominio del tallo de HA2 que se enlaza de manera covalente a un dominio luminal de HA2.

En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza que consisten de un segmento del tallo N-terminal de HAl enlazado de manera covalente a un enlazador, a su vez enlazado de manera covalente a un segmento del tallo C-terminal de HAl en asociación de enlace con un dominio del tallo de HA2 que se conecta de manera covalente a, en secuencia, un sitio de escisión de trombina, un dominio del promotor del plegamiento y una etiqueta His. En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza que consisten de un segmento del tallo N-terminal de HA1 enlazado de manera covalente a un enlazador, a su vez enlazado de manera covalente a un segmento del tallo C-terminal de HA1, a su vez enlazado de manera covalente a un dominio del tallo de HA2 que se enlaza de manera covalente a, en secuencia, un sitio de escisión de trombina, un dominio del promotor del plegamiento y una etiqueta His. En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza que consisten de un péptido señal enlazado de manera covalente a un segmento del tallo N-terminal de HA1 enlazado de manera covalente a un enlazador, a su vez enlazado de manera covalente a un segmento del tallo C-terminal de HA1, a su vez enlazado de manera covalente a un dominio del tallo de HA2 que se enlaza de manera covalente a, en secuencia, un sitio de escisión de trombina, un dominio del promotor del plegamiento y una etiqueta His.

En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza que consisten de un segmento del tallo N-terminal de HA1 enlazado de manera covalente a un enlazador, a su vez enlazado de manera covalente a un segmento del tallo C-terminal de HAl en asociación de enlace con un dominio del tallo de HA2 que se conecta de manera covalente a un dominio luminal de HA2 que se enlaza de manera covalente a, en secuencia, un sitio de escisión de trombina, un dominio del promotor del plegamiento y una etiqueta His. En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza que consisten de un segmento del tallo N-terminal de HA1 enlazado de manera covalente a un enlazador, a su vez enlazado de manera covalente a un segmento del tallo C-terminal de HA1, a su vez enlazado de manera covalente a un dominio del tallo de HA2 que se enlaza de manera covalente a un dominio luminal de HA2 que se conecta de manera covalente a, en secuencia, un sitio de escisión de trombina, un dominio del promotor del plegamiento y una etiqueta His. En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza que consisten de un péptido señal enlazado de manera covalente a un segmento del tallo N-terminal de HA1 enlazado de manera covalente a un enlazador, a su vez enlazado de manera covalente a un segmento del tallo C-terminal de HA1, a su vez enlazado de manera covalente a un dominio del tallo de HA2 que se enlaza de manera covalente a un dominio luminal de HA2 que se conecta de manera covalente a, en secuencia, un sitio de escisión de trombina, un dominio del promotor del plegamiento y una etiqueta His.

En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza que consisten de un segmento del tallo N-terminal de HA1 enlazado de manera covalente a un enlazador, a su vez enlazado de manera covalente a un segmento del tallo C-terminal de HA1 en asociación de enlace con un dominio del tallo de HA2 que se conecta de manera covalente a un dominio luminal de HA2 que está a su vez enlazado de manera covalente a un dominio transmembrana de HA2. En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza que consisten de un segmento del tallo N-terminal de HA1 enlazado de manera covalente a un enlazador, a su vez enlazado de manera covalente a un segmento del tallo C-terminal de HA1, a su vez enlazado de manera covalente a un dominio del tallo de HA2 que se enlaza de manera covalente a un dominio luminal de HA2 que está a su vez enlazado de manera covalente a un dominio transmembrana de HA2. En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza que consisten de un péptido señal enlazado de manera covalente a un segmento del tallo N-terminal de HA1 enlazado de manera covalente a un enlazador, a su vez enlazado de manera covalente a un segmento del tallo C-terminal de HA1, a su vez enlazado de manera covalente a un dominio del tallo de HA2 que se enlaza de manera covalente a un dominio luminal de HA2 que está a su vez enlazado de manera covalente a un dominio transmembrana de HA2.

En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza que consisten de un segmento del tallo N-terminal de HA1 enlazado de manera covalente a un enlazador, a su vez enlazado de manera covalente a un segmento del tallo C-terminal de HA1 en asociación de enlace con un dominio del tallo de HA2 que se conecta de manera covalente a un dominio luminal de HA2 que está a su vez enlazado de manera covalente a un dominio transmembrana de HA2 que está a su vez enlazado de manera covalente a un dominio citoplásmico de HA2. En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza que consisten de un segmento del tallo N-terminal de HA1 enlazado de manera covalente a un enlazador, a su vez enlazado de manera covalente a un segmento del tallo C-terminal de HA1, a su vez enlazado de manera covalente a un dominio del tallo de HA2 que se enlaza de manera covalente a un dominio luminal de HA2 que está a su vez enlazado de manera covalente a un dominio transmembrana de HA2 que está a su vez enlazado de manera covalente a un dominio citoplásmico de HA2. En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza que consisten de un péptido señal enlazado de manera covalente a un segmento del tallo N-terminal de HA1 enlazado de manera covalente a un enlazador, a su vez enlazado de manera covalente a un segmento del tallo C-terminal de HA1, a su vez enlazado de manera covalente a un dominio del tallo de HA2 que se enlaza de manera covalente a un dominio luminal de HA2 que está a su vez enlazado de manera covalente a un dominio transmembrana de HA2 que está a su vez enlazado de manera covalente a un dominio citoplásmico de HA2.

En ciertas modalidades, se proporciona aquí un polipéptido de la hemaglutinina de la influenza que tiene una secuencia seleccionada a partir del grupo que consiste de: (SEQ ID NO: 34) -LL- (SEQ ID NO: 50) - (SEQ ID NO: 66) (SEQ ID NO: 35) -LL- (SEQ ID NO: 51) - (SEQ ID NO: 67) (SEQ ID NO: 36) -LL- (SEQ ID NO: 52) - (SEQ ID NO: 68) (SEQ ID NO: 37) -LL- (SEQ ID NO: 53) - (SEQ ID NO: 69) (SEQ ID NO: 38) -LL- (SEQ ID NO: 54) - (SEQ ID NO: 70) (SEQ ID NO: 39) -LL- (SEQ ID NO: 55) - (SEQ ID NO: 71) (SEQ ID NO: 40) -LL- (SEQ ID NO: 56) - (SEQ ID NO: 72) (SEQ ID NO: 41) -LL- (SEQ ID NO: 57) - (SEQ ID NO: 73) (SEQ ID NO: 42) -LL- (SEQ ID NO: 58) - (SEQ ID NO: 74) (SEQ ID NO: 43) -LL- (SEQ ID NO: 59) - (SEQ ID NO: 75) (SEQ ID NO: 44) -LL- (SEQ ID NO: 60) - (SEQ ID NO: 76) (SEQ ID NO: 45) -LL- (SEQ ID NO: 61) - (SEQ ID NO: 77) (SEQ ID NO: 46) -LL- (SEQ ID NO: 62) - (SEQ ID NO: 78) (SEQ ID NO: 47) -LL- (SEQ ID NO: 63) - (SEQ ID NO: 79) (SEQ ID NO: 48) -LL- (SEQ ID NO: 64) - (SEQ ID NO: 80) (SEQ ID NO: 49) -LL- (SEQ ID NO: 65) - (SEQ ID NO: 81) en donde cada secuencia de arriba se enlaza a la secuencia adyacente como aquí se describe y en donde LL es un enlazador como aquí se describe. En particular, los segmentos C-terminal de HA1 se pueden enlazar de manera covalente o de manera no covalente a los dominios HA2. En ciertas modalidades, LL se selecciona a partir del grupo que consiste de un enlace directo, Gly, Gly-Gly, Gly-Gly-Gly, Gly-Gly-Gly-Gly, (Gly)n (en donde n indica cualquier número de residuos de Glicina en tanto haya flexibilidad en el enlazador peptídico; en ciertas modalidades, n es 2, 3, 4, 5, 6, o 7 residuos de Glicina), Gly-Pro, ITPNGSIPNDKPFQNVNKITYGA (SEQ ID NO: 165) y Asn-Ala-Ser .

En ciertas modalidades, se proporciona aquí un polipéptido de la hemaglutinina de la influenza que tiene una secuencia seleccionada a partir del grupo que consiste de: (SEQ ID NO: 34) -LL- (SEQ ID NO: 50) - (SEQ ID NO: 82) (SEQ ID NO: 35) -LL- (SEQ ID NO: 51) - (SEQ ID NO: 83) (SEQ ID NO: 36) -LL- (SEQ ID NO: 52) - (SEQ ID NO: 84) (SEQ ID NO: 37) -LL- (SEQ ID NO: 53) - (SEQ ID NO: 85) (SEQ ID NO: 38) -LL- (SEQ ID NO: 54) - (SEQ ID NO: 86) (SEQ ID NO: 39) -LL- (SEQ ID NO: 55) - (SEQ ID NO: 87) (SEQ ID NO: 40) -LL- (SEQ ID NO: 56) - (SEQ ID NO: 88) (SEQ ID NO: 41) -LL- (SEQ ID NO: 57) - (SEQ ID NO: 89) (SEQ ID NO: 42) -LL- (SEQ ID NO: 58) - (SEQ ID NO: 90) (SEQ ID NO: 43) -LL- (SEQ ID NO: 59) - (SEQ ID NO: 91) (SEQ ID NO: 44) -LL- (SEQ ID NO: 60) - (SEQ ID NO: 92) (SEQ ID NO: 5) -LL- (SEQ ID NO:61)-(SEQ ID NO:93), (SEQ ID NO: 46) -LL- (SEQ ID NO:62)-(SEQ ID NO:94), (SEQ ID NO: 47) -LL- (SEQ ID NO:63)-(SEQ ID NO:95), (SEQ ID NO: 48) -LL- (SEQ ID NO:64)-(SEQ ID NO:96), y (SEQ ID NO: 49) -LL- (SEQ ID NO:65)-(SEQ ID NO:97), en donde cada secuencia de arriba se enlaza a la secuencia adyacente como aquí se describe y en donde LL es un enlazador como aquí se describe. En particular, los segmentos C-terminal de HA1 se pueden enlazar de manera covalente o de manera no covalente a los dominios HA2. En ciertas modalidades, LL se selecciona a partir del grupo que consiste de un enlace directo, Gly, Gly-Gly, Gly-Gly-Gly, Gly-Gly-Gly-Gly , (Gly)n, Gly-Pro, ITPNGSIPNDKPFQNVNKITYGA (SEQ ID NO: 165) y Asn-Ala-Ser .

En ciertas modalidades, se proporciona aquí un polipéptido de la hemaglutinina de la influenza que tiene una secuencia seleccionada a partir del grupo que consiste de: (SEQ ID NO: 3 ) -LL- (SEQ ID NO:50)-(SEQ ID NO:82)-(SEQ ID NO: 98) , (SEQ ID NO: 35) -LL- (SEQ ID N0:51)-(SEQ ID NO:83)-(SEQ ID NO: 99) , (SEQ ID NO: 36) -LL- (SEQ ID NO:52)-(SEQ ID NO:84)-(SEQ ID NO: 100) , (SEQ ID NO:37) -LL- (SEQ ID NO:53)-(SEQ ID NO:85)-(SEQ ID NO:101), (SEQ ID NO: 38) -LL- (SEQ ID NO:54)-(SEQ ID NO:86)-(SEQ ID NO: 102) , (SEQ ID NO: 39) -LL- (SEQ ID NO:55)-(SEQ ID NO:87)-(SEQ ID NO: 103) , (SEQ ID NO: 0) -LL- (SEQ ID NO:56)-(SEQ ID NO:88)-(SEQ ID NO: 104 ) , (SEQ ID NO: 1) -LL- (SEQ ID NO:57)-(SEQ ID NO:89)-(SEQ ID NO: 105) , (SEQ ID NO: 2) -LL- (SEQ ID NO:58)-(SEQ ID NO:90)-(SEQ ID NO: 106), (SEQ ID NO: 43) -LL- (SEQ ID NO:59)-(SEQ ID NO:91)-(SEQ ID NO: 107) , (SEQ ID NO: 44 ) -LL- (SEQ ID NO:60)-(SEQ ID NO:92)-(SEQ ID NO: 108) , ( SEQ ID NO: 45) -LL- (SEQ ID NO:61)-(SEQ ID NO:93)-(SEQ ID NO: 109) , (SEQ ID NO: 46) -LL- (SEQ ID NO:62)-(SEQ ID NO:94)-(SEQ ID NO: 110) , (SEQ ID NO: 7) -LL- (SEQ ID NO:63)-(SEQ ID NO:95)-(SEQ ID NO: 111), (SEQ ID NO: 8) -LL- (SEQ ID NO:64)-(SEQ ID NO:96)-(SEQ ID NO:112), y (SEQ ID NO: 49) -LL- (SEQ ID NO:65)-(SEQ ID NO:97)-(SEQ ID NO: 113) , en donde cada secuencia de arriba se enlaza a la secuencia adyacente como aquí se describe y en donde LL es un enlazador como aquí se describe. En particular, los segmentos C-terminal de HAl se pueden enlazar de manera covalente o de manera no covalente a los dominios HA2. En ciertas modalidades, LL se selecciona a partir del grupo que consiste de un enlace directo, Gly, Gly-Gly, Gly-Gly-Gly, Gly-Gly-Gly-Gly , (Gly)n, Gly-Pro, ITPNGSIPNDKPFQNVNKITYGA (SEQ ID NO: 165) y Asn-Ala-Ser .

En ciertas modalidades, se proporciona aquí un polipéptido de la hemaglutinina de la influenza que tiene una secuencia seleccionada a partir del grupo que consiste de: (SEQ ID NO: 34 ) -LL- (SEQ ID NO:50)-(SEQ ID NO:82)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO:166), (SEQ ID NO: 35) -LL- (SEQ ID N0:51)-(SEQ ID NO:83)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-(SEQ ID N0:166), (SEQ ID NO: 36) -LL- (SEQ ID NO:52)-(SEQ ID NO:84)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO:166), (SEQ ID NO: 37) -LL- (SEQ ID NO:53)-(SEQ ID NO:85)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO:166), (SEQ ID NO: 38) -LL- (SEQ ID NO:54)-(SEQ ID NO:86)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO:166), (SEQ ID NO: 39) -LL- (SEQ ID NO:55)-(SEQ ID NO:87)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO:166), (SEQ ID NO: 40) -LL- (SEQ ID NO:56)-(SEQ ID NO:88)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO:166), (SEQ ID NO: 41) -LL- (SEQ ID NO:57)-(SEQ ID N0:89)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO:166), (SEQ ID NO: 2) -LL- (SEQ ID NO:58)-(SEQ ID NO:90)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO:166), (SEQ ID NO: 3) -LL- (SEQ ID NO:59)-(SEQ ID NO:91)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO:166), (SEQ ID NO: 4) -LL- (SEQ ID NO:60)-(SEQ ID NO:92)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO:166), (SEQ ID NO: 45) -LL- (SEQ ID NO:61)-(SEQ ID NO:93)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO:166), (SEQ ID NO: 46) -LL- (SEQ ID NO:62)-(SEQ ID NO:94)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO:166), (SEQ ID NO: 7) -LL- (SEQ ID NO:63)-(SEQ ID NO:95)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO:166), (SEQ ID NO: 48) -LL- (SEQ ID NO:64)-(SEQ ID NO:96)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO:166), y (SEQ ID NO: 49) -LL- (SEQ ID NO:65)-(SEQ ID NO:97)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO:166), en donde cada secuencia de arriba se enlaza a la secuencia adyacente como aquí se describe y en donde LL es un enlazador como aquí se describe. En particular, los segmentos C-terminal de HA1 se pueden enlazar de manera covalente o de manera no covalente a los dominios HA2. En ciertas modalidades, LL se selecciona a partir del grupo que consiste de un enlace directo, Gly, Gly-Gly, Gly-Gly-Gly, Gly-Gly-Gly-Gly, (Gly)n, Gly-Pro, ITPNGSIPNDKPFQNVNKITYGA (SEQ ID NO: 165) y Asn-Ala-Ser .

En ciertas modalidades, se proporciona aquí un polipéptido de la hemaglutinina de la influenza que tiene una secuencia seleccionada a partir del grupo que consiste de: (SEQ ID NO: 34 ) -LL- (SEQ I D NO:50)-(SEQ ID NO:82)-(SEQ ID NO:98)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO:166), (SEQ ID NO: 35) -LL- (SEQ ID N0:51)-(SEQ ID NO:83)-(SEQ ID NO:99)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO:166), (SEQ ID NO: 36) -LL- (SEQ I D NO:52)-(SEQ I D NO:84)-(SEQ ID NO:100)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO:166), (SEQ ID NO: 37) -LL- (SEQ ID NO:53)-(SEQ ID NO:85)-(SEQ ID NO:101)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO:166), (SEQ ID NO: 38) -LL- (SEQ ID NO:54)-(SEQ ID NO:86)-(SEQ ID NO:102)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO:166), (SEQ ID NO: 39) -LL- (SEQ ID NO:55)-(SEQ ID NO:87)-(SEQ ID NO:103)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO:166), (SEQ I D NO: 0) -LL- (SEQ ID NO:56)-(SEQ I D NO:88)-(SEQ ID NO:104)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO:166), (SEQ ID NO: 41) -LL- (SEQ ID NO:57)-(SEQ ID NO:89)-(SEQ ID NO:105)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO:165), (SEQ ID NO: 2) -LL- (SEQ ID NO:58)-(SEQ ID NO:90)-(SEQ ID NO:106)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO:166), (SEQ ID NO: 43) -LL- (SEQ ID NO:59)-(SEQ ID NO:91)-(SEQ ID NO:107)-(SEQ I D NO:168)-(SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO:166), (SEQ ID NO: 4 ) -LL- (SEQ ID NO:60)-(SEQ ID NO:92)-(SEQ ID NO:108)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO:166), (SEQ ID NO: 5) -LL- (SEQ ID NO:61)-(SEQ ID NO:93)-(SEQ ID NO:109)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO : 1 6 6 ) , (SEQ ID NO: 6) -LL- (SEQ ID NO:62)-(SEQ ID NO:94)-(SEQ ID NO:110)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO : 1 66 ) , (SEQ ID NO: 47) -LL- (SEQ ID NO:63)-(SEQ ID NO:95)-(SEQ ID NO:lll)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO:166), (SEQ ID NO: 48) -LL- (SEQ ID NO:64)-(SEQ ID NO:96)-(SEQ ID N0:112)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO : 1 66 ) , y (SEQ ID NO: 9) -LL- (SEQ ID NO:65)-(SEQ ID NO:97)-(SEQ ID N0:113)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO:166), en donde cada secuencia de arriba se enlaza a la secuencia adyacente como aquí se describe y en donde LL es un enlazador como aquí se describe. En particular, los segmentos C-terminal de HA1 se pueden enlazar de manera covalente o de manera no covalente a los dominios HA2. En ciertas modalidades, LL se selecciona a partir del grupo que consiste de un enlace directo, Gly, Gly-Gly, Gly-Gly-Gly, Gly-Gly-Gly-Gly, (Gly)n, Gly-Pro, ITPNGSIPNDKPFQNVNKITYGA (SEQ ID NO: 165) y Asn-Ala-Ser .

En ciertas modalidades, se proporciona aquí un polipéptido de la hemaglutinina de la influenza que tiene una secuencia seleccionada a partir del grupo que consiste de: (SEQ ID NO: 177) -LL- (SEQ ID NO:226)-(SEQ ID NO:66), (SEQ ID NO: 178) -LL- (SEQ ID NO: 227) - (SEQ ID NO: 66) (SEQ ID NO: 179) -LL- SEQ ID NO: 228)- (SEQ ID NO: 66) (SEQ ID NO: 180) -LL- SEQ ID NO: 229) - (SEQ ID NO: 67) (SEQ ID NO: 181) -LL- (SEQ ID NO: 230) - (SEQ ID NO: 67) (SEQ ID NO: 182) -LL- ( SEQ ID NO: 231) - (SEQ ID NO: 67) (SEQ ID NO: 183) -LL- ( SEQ ID NO: 232) - (SEQ ID NO: 68) (SEQ ID NO: 184) -LL- (SEQ ID NO: 233) - (SEQ ID NO: 68) (SEQ ID NO: 185) -LL- (SEQ ID NO: 234) - (SEQ ID NO: 68) (SEQ ID NO: 186) -LL- ( SEQ ID NO: 235) - (SEQ ID NO: 69) (SEQ ID NO: 187) -LL- (SEQ ID NO: 236) - (SEQ ID NO: 69) (SEQ ID NO: 188) -LL- (SEQ ID NO: 237) - (SEQ ID NO: 69) (SEQ ID NO: 189) -LL- (SEQ ID NO: 238) - (SEQ ID NO: 70) (SEQ ID NO: 190) -LL- (SEQ ID NO: 239) - (SEQ ID NO: 70) (SEQ ID NO: 191) -LL- (SEQ ID NO: 240) - (SEQ ID NO: 70) (SEQ ID NO: 192) -LL- ( SEQ ID NO: 241) - (SEQ ID NO: 71) (SEQ ID NO: 193) -LL- ( SEQ ID NO: 242) - (SEQ ID NO: 71) (SEQ ID NO: 194) -LL- ( SEQ ID NO: 243) - (SEQ ID NO: 71) (SEQ ID NO: 195) -LL- ( SEQ ID NO: 244) - (SEQ ID NO: 72) (SEQ ID NO: 196) -LL- (SEQ ID NO: 245) - (SEQ ID NO: 72) (SEQ ID NO: 197) -LL- (SEQ ID NO: 246) - (SEQ ID NO: 72) (SEQ ID NO: 198) -LL- ( SEQ ID NO: 247) - (SEQ ID NO: 73) (SEQ ID NO: 199) -LL- (SEQ ID NO: 248) - (SEQ ID NO: 73) (SEQ ID NO: 200) -LL- (SEQ ID NO: 249) - (SEQ ID NO: 73) (SEQ ID NO: 201) -LL- (SEQ ID NO: 250) - (SEQ ID NO: 74) (SEQ ID NO: 202) -LL- ( SEQ ID NO: 251) - (SEQ ID NO: 74) (SEQ ID NO -LL- (SEQ ID NO: 252 - (SEQ ID NO: 4 (SEQ ID NO -LL- ( SEQ ID NO:253 - (SEQ ID NO: 75 (SEQ ID NO -LL- (SEQ ID NO: 254 - (SEQ ID NO: 75 (SEQ ID NO -LL- (SEQ ID NO: 255 - ( SEQ ID NO: 75 (SEQ ID NO -LL- (SEQ ID NO: 256 - (SEQ ID NO: 76 (SEQ ID NO -LL- ( SEQ ID NO: 257 - (SEQ ID NO: 76 (SEQ ID NO -LL- (SEQ ID NO: 258 - (SEQ ID NO: 76 (SEQ ID NO -LL- (SEQ ID NO: 259 - (SEQ ID NO: 77 (SEQ ID NO -LL- (SEQ ID NO: 260 - (SEQ ID NO: 77 (SEQ ID NO -LL- (SEQ ID NO: 261 - (SEQ ID NO: 77 (SEQ ID NO -LL- ( SEQ ID NO:262 - (SEQ ID NO: 78 (SEQ ID NO -LL- (SEQ ID NO: 263 - (SEQ ID NO: 78 (SEQ ID NO -LL- (SEQ ID NO: 264 - (SEQ ID NO: 78 (SEQ ID NO -LL- (SEQ ID NO: 265 - (SEQ ID NO: 79 (SEQ ID NO -LL- (SEQ ID NO: 266 - (SEQ ID NO: 79 (SEQ ID NO -LL- ( SEQ ID NO: 267 - ( SEQ ID NO: 79 (SEQ ID NO -LL- (SEQ ID NO: 268 - (SEQ ID NO: 80 (SEQ ID NO -LL- (SEQ ID NO: 269 - (SEQ ID NO: 80 (SEQ ID NO -LL- (SEQ ID NO: 270 - (SEQ ID NO: 80 ( SEQ ID NO -LL- (SEQ ID NO: 271 - (SEQ ID NO: 81 (SEQ ID NO -LL- (SEQ ID NO: 272 - (SEQ ID NO: 81 (SEQ ID NO -LL- (SEQ ID NO: 273 - (SEQ ID NO: 81 (SEQ ID NO -LL- (SEQ ID NO: 313 - (SEQ ID NO: 66 (SEQ ID NO 34)-LL-(SEQ ID NO:314)- (SEQ ID NO: 66) , (SEQ ID NO 315)-LL-(SEQ ID NO:316) - (SEQ ID NO: 66) , (SEQ ID NO: 308) -LL- (SEQ ID NO:52)-(SEQ ID NO:68), (SEQ ID NO: 36) - LL- (SEQ ID NO:309)-(SEQ ID NO:68), y (SEQ ID NO: 310) - LL- (SEQ ID NO:311)-(SEQ ID NO:68), en donde cada secuencia de arriba se enlaza a la secuencia adyacente como aquí se describe y en donde LL es un enlazador como aquí se describe. En particular, los segmentos C-terminal de HA1 se pueden enlazar de manera covalente o de manera no covalente a los dominios HA2. En ciertas modalidades, LL se selecciona a partir del grupo que consiste de un enlace directo, Gly, Gly-Gly, Gly-Gly-Gly, Gly-Gly-Gly-Gly, (Gly)n, Gly-Pro, ITPNGSIPNDKPFQNVNKITYGA (SEQ ID NO: 165) y Asn-Ala-Ser .

En ciertas modalidades, se proporciona aquí un polipéptido de la hemaglutinina de la influenza que tiene una secuencia seleccionada a partir del grupo que consiste de: (SEQ ID NO: 154) -LL- (SEQ ID NO:158)-(SEQ ID NO:160), (SEQ ID NO: 155) -LL- (SEQ ID NO:159)-(SEQ ID NO:160), (SEQ ID NO: 156) - LL- (SEQ ID NO:158)-(SEQ ID NO : 1 60 ) , (SEQ ID NO: 157) -LL- (SEQ ID NO:158)-(SEQ ID NO:160), (SEQ ID NO: 550) -LL- (SEQ ID NO:553)-(SEQ ID NO:160), (SEQ ID NO: 551) - LL- (SEQ ID NO:554)-(SEQ ID NO:160), y (SEQ ID NO: 552) -LL - (SEQ ID NO:555)-(SEQ ID NO:160), en donde cada secuencia de arriba se enlaza a la secuencia adyacente como aquí se describe y en donde LL es un enlazador como aquí se describe. En particular, los segmentos C-terminal de HAl se pueden enlazar de manera covalente o de manera no covalente a los dominios HA2. En ciertas modalidades, LL se selecciona a partir del grupo que consiste de un enlace directo, Gly, Gly-Gly, Gly-Gly-Gly, Gly-Gly-Gly-Gly , (Gly)n, Gly-Pro, ITPNGSIPNDKPFQNVNKITYGA (SEQ ID NO: 165) y Asn-Ala-Ser .

En ciertas modalidades, se proporciona aquí un polipéptido de la hemaglutinina de la influenza que tiene una secuencia seleccionada a partir del grupo que consiste de: (SEQ ID NO: 154) -LL-(SEQ ID NO:158)-(SEQ ID NO:161), (SEQ ID NO: 155) -LL- (SEQ ID NO:159)-(SEQ ID NO:161), (SEQ ID NO: 156) -LL- (SEQ ID NO:158)-(SEQ ID NO:161), (SEQ ID NO: 157) -LL- (SEQ ID NO:158)-(SEQ ID NO: 161), (SEQ ID NO: 550) -LL- (SEQ ID NO:553)-(SEQ ID N0:161), (SEQ ID NO: 551) -LL- (SEQ ID NO:554)-(SEQ ID NO:161), (SEQ ID NO: 552) -LL- (SEQ ID NO:555)-(SEQ ID NO:161), y (SEQ ID NO: 555) -LL- (SEQ ID NO : 556 ) -LL- ( SEQ ID NO:557)-(SEQ ID NO: 161) , en donde cada secuencia de arriba se enlaza a la secuencia adyacente como aquí se describe y en donde LL es un enlazador como aquí se describe. En particular, los segmentos C-terminal de HAl se pueden enlazar de manera covalente o de manera no covalente a los dominios HA2. En ciertas modalidades, LL se selecciona a partir del grupo que consiste de un enlace directo, Gly, Gly-Gly, Gly-Gly-Gly, Gly-Gly-Gly-Gly , (Gly)n, Gly-Pro, ITPNGSIPNDKPFQNVNKITYGA (SEQ ID NO: 165) y Asn-Ala-Ser .

En ciertas modalidades, se proporciona aquí un polipéptido de la hemaglutinina de la influenza que tiene una secuencia seleccionada a partir del grupo que consiste de: (SEQ ID NO: 154) -LL- (SEQ ID NO:158)-(SEQ ID N0:161 )-(SEQ ID NO: 162) , (SEQ ID NO: 155) -LL- (SEQ ID NO:159)-(SEQ ID NO:161)-(SEQ ID NO: 162) , (SEQ ID NO: 156) -LL- (SEQ ID NO:158)-(SEQ ID NO:161)-(SEQ ID NO: 162) , (SEQ ID NO: 157) -LL- (SEQ ID NO:158)-(SEQ ID NO:161)-(SEQ ID NO: 162) , (SEQ ID NO: 550) -LL- (SEQ ID NO:553)-(SEQ ID NO:161)-(SEQ ID NO: 162) , (SEQ ID NO: 551) -LL- (SEQ ID NO:554)-(SEQ ID NO:161)-(SEQ ID NO: 162) , (SEQ ID NO: 552) -LL- (SEQ ID NO:555)-(SEQ ID NO:161)-(SEQ ID NO:162), y (SEQ ID NO: 555) -LL- (SEQ ID NO: 556) -LL- (SEQ ID NO:557)-(SEQ ID NO:161)-(SEQ ID N0.162), en donde cada secuencia de arriba se enlaza a la secuencia adyacente como aquí se describe y en donde LL es un enlazador como aquí se describe. En particular, los segmentos C-terminal de HA1 se pueden enlazar de manera covalente o de manera no covalente a los dominios HA2. En ciertas modalidades, LL se selecciona a partir del grupo que consiste de un enlace directo, Gly, Gly-Gly, Gly-Gly-Gly, Gly-Gly-Gly-Gly , (Gly)n, Gly-Pro, ITPNGSIPNDKPFQNVNKITYGA (SEQ ID NO: 165) y Asn-Ala-Ser.

En ciertas modalidades, se proporciona aquí un polipéptido de la hemaglutinina de la influenza que tiene una secuencia seleccionada a partir del grupo que consiste de: (SEQ ID NO: 154) -LL- (SEQ ID NO:158)-(SEQ ID N0:161)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-SEQ ID NO:166), (SEQ ID NO: 155) -LL- (SEQ ID NO:159)-(SEQ ID NO:161)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-SEQ ID NO:166), (SEQ ID NO: 156) -LL- (SEQ ID NO:158)-(SEQ ID NO:161)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-SEQ ID NO:166), (SEQ ID NO: 157) -LL- (SEQ ID NO:159)-(SEQ ID NO:161)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-SEQ ID NO:166), (SEQ ID NO: 550) -LL- (SEQ ID NO:553)- (SEQ ID NO:161)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-SEQ ID NO:166), (SEQ ID NO: 551) -LL- (SEQ ID NO:554)-(SEQ ID NO:161)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-SEQ ID NO:166), (SEQ ID NO: 552) -LL- (SEQ ID NO:555)-(SEQ ID NO:161)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO: 167)-SEQ ID NO:166), y (SEQ ID NO: 555) -LL- (SEQ ID NO : 556) -LL- (SEQ ID NO:557)-(SEQ ID NO:161)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-SEQ ID NO:166), en donde cada secuencia de arriba se enlaza a la secuencia adyacente como aquí se describe y en donde LL es un enlazador como aquí se describe. En particular, los segmentos C-terminal de HA1 se pueden enlazar de manera covalente o de manera no covalente a los dominios HA2. En ciertas modalidades, LL se selecciona a partir del grupo que consiste de un enlace directo, Gly, Gly-Gly, Gly-Gly-Gly, Gly-Gly-Gly-Gly , (Gly)n, Gly-Pro, ITPNGSIPNDKPFQNVNKITYGA (SEQ ID NO: 165) y Asn-Ala-Ser .

En ciertas modalidades, se proporciona aquí un polipéptido de la hemaglutinina de la influenza que tiene una secuencia seleccionada a partir del grupo que consiste de: (SEQ ID NO: 154) -LL- (SEQ ID NO:158)-(SEQ ID NO:161 )-(SEQ ID NO:162)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO:166), ( SEQ ID NO: 155) -LL- (SEQ ID NO:159)-(SEQ ID NO:161)-(SEQ ID NO:162)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO:166), (SEQ ID NO: 156) -LL- (SEQ ID NO:158)-(SEQ ID NO:161)-(SEQ ID NO:162)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO:166), y (SEQ ID NO: 15 ) -LL- (SEQ ID NO:159)-(SEQ ID NO:161)-(SEQ ID NO:162)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO:166) , (SEQ ID NO: 550) -LL- (SEQ ID NO:553)-(SEQ ID NO:161)-(SEQ ID NO:162)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO:166), (SEQ ID NO: 551) -LL- (SEQ ID NO:554)-(SEQ ID NO:161)-(SEQ ID NO:162)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO:166), (SEQ ID NO: 552) -LL- (SEQ ID NO:555)-(SEQ ID NO:161)-(SEQ ID NO:162)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO:166), y (SEQ ID NO: 555) -LL- (SEQ ID NO: 556) -LL- (SEQ ID NO:557)-(SEQ ID NO:161)-(SEQ ID NO:162)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO : 167 ) - ( SEQ ID NO: 166) , en donde cada secuencia de arriba se enlaza a la secuencia adyacente como aquí se describe y en donde LL es un enlazador como aquí se describe. En particular, los segmentos C-terminal de HA1 se pueden enlazar de manera covalente o de manera no covalente a los dominios HA2. En ciertas modalidades, LL se selecciona a partir del grupo que consiste de un enlace directo, Gly, Gly-Gly, Gly-Gly-Gly, Gly-Gly-Gly-Gly, (Gly) n, Gly-Pro, ITPNGSIPNDKPFQNVNKITYGA (SEQ ID NO: 165) y Asn-Ala-Ser .

En ciertas modalidades, los polipéptidos de la hemaglutinina de la influenza aquí descritos no comprenden los polipéptidos que tienen la secuencia de aminoácidos de ya sea Thr-Gly-Leu-Arg-Asn (SEQ ID NO: 544) o Gly-Ile-Thr-Asn-Lys-Val-Asn-Ser-Val-Ile-Glu-Lys (SEQ ID NO: 545) . En ciertas modalidades, los polipéptidos de la hemaglutinina de la influenza aqui descritos no comprenden los polipéptidos que tienen la secuencia de aminoácidos de Thr-Gly-Leu-Arg-Asn (SEQ ID NO: 544) y Gly-Ile-Thr-Asn-Lys-Val-Asn-Ser-Val-Ile-Glu-Lys (SEQ ID NO:545) . En ciertas modalidades, los polipéptidos de la hemaglutinina de la influenza aqui descritos no comprenden los polipéptidos que tienen la secuencia de aminoácidos de ya sea Thr-Gly- et-Arg-Asn (SEQ ID NO: 547) o Gln-Ile-Asn-Gly-Lys-Leu-Asn-Arg-Leu-Ile-Glu-Lys (SEQ ID NO: 548) . En ciertas modalidades, los polipéptidos de la hemaglutinina de la influenza aqui descritos no comprenden los polipéptidos que tienen la secuencia de aminoácidos de Thr-Gly-Met-Arg-Asn (SEQ ID NO: 547) y Gln-Ile-Asn-Gly-Lys-Leu-Asn-Arg-Leu-Ile-Glu-Lys (SEQ ID NO:548) . En ciertas modalidades, los polipéptidos de la hemaglutinina de la influenza aqui descritos no comprenden los polipéptidos que tienen la secuencia de aminoácidos de ya sea Thr-Gly-Met-Arg-Asn (SEQ ID NO: 547) o Gln-Ile-Asn-Gly-Lys-Leu-Asn-Arg-Val-Ile-Glu-Lys (SEQ ID NO: 549) . En ciertas modalidades, los polipéptidos de la hemaglutinina de la influenza aquí descritos no comprenden los polipéptidos que tienen la secuencia de aminoácidos de Thr-Gly-Met-Arg-Asn (SEQ ID NO: 547) y Gln-Ile-Asn-Gly-Lys-Leu-Asn-Arg-Val-Ile-Glu-Lys (SEQ ID NO: 549) .

En ciertas modalidades, los polipéptidos de la hemaglutinina de la influenza aquí descritos no se reconocen por el anticuerpo C179 (producido por el hibridoma FERM BP-4517; clones vendidos por Takara Bio, Inc. (Otsu, Shiga, Japón) ) o por el anticuerpo AI3C (FERM BP-4516) . 5.1.1 POLIPÉPTIDOS DEL DOMINIO DEL TALLO CORTO DE LA HEMAGLUTININA DE LA INFLUENZA En ciertas modalidades, el polipéptido del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza es un polipéptido del dominio del tallo corto de la hemaglutinina de la influenza. La estructura primaria típica de un polipéptido del dominio del tallo corto de la hemaglutinina de la influenza aquí provisto comprende, en el siguiente orden: un segmento del tallo N-terminal de HA1, un enlazador, un segmento del tallo corto C-terminal de HA1 y un HA2. La secuencia primaria se puede formar por un solo polipéptido, o se puede formar por múltiples polipéptidos. Típicamente, un solo polipéptido se expresa por cualquier técnica estimada adecuada por uno de habilidad en el arte. En las modalidades de un solo polipéptido, los segmentos HA1 y el HA2 están en asociación terciaria. Como es conocido por aquellos de habilidad en el arte, un solo polipéptido de la HA se puede escindir, por ejemplo por una proteasa, bajo condiciones de expresión apropiadas para producir dos polipéptidos en asociación cuaternaria. La escisión es típicamente entre el segmento del tallo corto C-terminal de HA1 y el HA2. En ciertas modalidades, se proporcionan aquí múltiples polipéptidos. En modalidades de múltiples polipéptidos, los segmentos HA1 y HA2 están en asociación cuaternaria.

En ciertas modalidades, un polipéptido del dominio del tallo corto de la hemaglutinina de la influenza aquí provisto es monomérico. En ciertas modalidades, un polipéptido del dominio del tallo corto de la hemaglutinina de la influenza aquí provisto es multimérico. En ciertas modalidades, un polipéptido del dominio del tallo corto de la hemaglutinina de la influenza aquí provisto es trimérico. Aquellos de habilidad en el arte reconocerán que los polipéptidos de la hemaglutinina de la influenza nativa son capaces de trimerización in vivo y que ciertos polipéptidos del dominio del tallo corto de la hemaglutinina de la influenza aquí provistos son capaces de trimerización. En las modalidades particulares descritas debajo, los polipéptidos del dominio del tallo corto de la hemaglutinina de la influenza aquí provistos comprenden dominios de trimerización para facilitar la trimerización.

En ciertas modalidades, un polipéptido del dominio del tallo corto de la hemaglutinina de la influenza comprende un péptido señal. Típicamente, el péptido señal se escinde durante o después de la expresión y traducción del polipéptido para producir un polipéptido del dominio del tallo corto de la hemaglutinina de la influenza maduro. El péptido señal puede ser ventajoso para la expresión de los polipéptidos del dominio del tallo corto de la hemaglutinina de la influenza. En ciertas modalidades, también se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo corto de la hemaglutinina de la influenza maduros que carecen de un péptido señal.

El HA2 de la hemaglutinina de la influenza típicamente comprende un dominio del tallo, un dominio transmembrana y un dominio citoplásmico . En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo corto de la hemaglut inina de la influenza que comprenden un dominio del tallo de HA2, un dominio luminal de HA2 , un dominio transmembrana de HA2 y un dominio citoplásmico de HA2. En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo corto de la hemaglutinina de la influenza que comprenden un dominio del tallo de HA2 , un dominio luminal de HA2, y un dominio transmembrana de HA2 pero carecen de cierta parte o todo el dominio citoplásmico típico. En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo corto de la hemaglutinina de la influenza que comprenden un dominio del tallo de HA2 y un dominio luminal de HA2 pero carecen tanto de un dominio transmembrana de HA2 como de un dominio citoplásmico de HA2. En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo corto de la hemaglutinina de la influenza que comprenden un dominio del tallo de HA2 pero carecen de un dominio luminal de HA2, un dominio transmembrana de HA2 y un dominio citoplásmico de HA2. En ciertas modalidades, los polipéptidos del dominio del tallo corto de la hemaglutinina de la influenza comprenden un dominio del tallo de HA2 que tiene al menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96% o 98% de identidad de secuencia de aminoácidos a un dominio del tallo de HA2 de la influenza conocido por aquellos de habilidad en el arte. Los dominios del tallo de HA2 conocidos, ejemplares, de las hemaglutininas de la influenza A y de la influenza B conocidas se proporcionan en las Tablas de arriba.

También se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo corto de la hemaglut inina de la influenza que comprenden formas suprimidas de dominios del tallo de HA2 en donde hasta 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 o 1 residuos de aminoácidos se suprimen de cualquiera o ambas terminales del dominio del tallo de HA2. Adicionalmente se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo corto de la hemaglutinina de la influenza que comprenden formas alteradas de dominios del tallo de HA2 en donde hasta 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 o 1 residuos de aminoácidos se sustituyen conservativamente con otros aminoácidos. Adicionalmente se proporcionan polipéptidos del dominio del tallo corto de la hemaglutinina de la influenza que comprenden dominios del tallo de HA2 suprimidos y alterados.

El segmento del tallo N-terminal de HAl puede ser cualquier tallo N-terminal de HAl aquí provisto. Los segmentos del tallo N-terminal de HAl conocidos, ejemplares, se proporcionan en las Tablas debajo.

El segmento del tallo corto C-terminal de HAl puede ser cualquier segmento del tallo corto C-terminal de HAl reconocido por uno de habilidad en el arte con base en la definición aquí provista. Típicamente, un segmento del tallo corto C-terminal de HAl corresponde a un polipéptido que consiste del residuo de cisteína localizado en la secuencia en aproximadamente el residuo 305 de un HAl (utilizando la numeración H3) al aminoácido C-terminal del HAl. Este residuo de cisteina, referido aqui como Bq, es capaz de ser enlazado a un residuo de cisteina Ap en el segmento del tallo N-terminal de HAl. Las secuencias de 16 hemaglutininas de la influenza A representativas se presentan en la FIGURA 1, y el residuo Bq se identifica en cada una.

En ciertas modalidades, el segmento del tallo corto C-terminal de HAl no inicia en Bq (por ejemplo, Cys277 de una subunidad de HAl de una hemaglut inina H3), sino en un residuo en la secuencia y en la vecindad de la estructura a Bq. Por ejemplo, en ciertas modalidades, el segmento del tallo corto C-terminal de HAl inicia en Bq_i, Bq_2, Bq_3, o Bq_4. En otras modalidades, el segmento del tallo corto C-terminal de HAl inicia en Bq+i, Bq+2, 3q+3, Bq+4 o Bq+5. El final de un segmento del tallo N-terminal de HAl se debe seleccionar en conjunción con el inicio del segmento del tallo corto C-terminal de HAl y el enlazador de modo que el dominio del tallo de HAl resultante sea capaz de formar una estructura tridimensional similar, como se describe debajo, a una hemaglutinina de la influenza .

En ciertas modalidades, los polipéptidos del dominio del tallo corto de la hemaglutinina de la influenza comprenden un segmento del tallo corto C-terminal de HAl que tiene al menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96% o 98% de identidad de secuencia de aminoácidos a un segmento del tallo corto C-terminal de HA1 de la influenza conocido por aquellos de habilidad en el arte. Los segmentos del tallo corto C-terminal de HA1 conocidos, ejemplares, se proporcionan en las Tablas debajo.

En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo N-terminal es Ap-i, y el inicio del segmento del tallo corto C-terminal es Bq_i. En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo N-terminal es Ap.2, y el inicio del segmento del tallo corto C-terminal es Bq_2. En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo N-terminal es Ap.3, y el inicio del segmento del tallo corto C-terminal es Bq_3. En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo N-terminal es Ap_ 4, y el inicio del segmento del tallo corto C-terminal es Bq-4. En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo N-terminal es Ap_5, y el inicio del segmento del tallo corto C-terminal es Bq-5.

En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo N-terminal es ??+?, y el inicio del segmento del tallo corto C-terminal es Bq+i . En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo N-terminal es Ap+2, y el inicio del segmento del tallo corto C-terminal es Bq+2. En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo N-terminal es Ap+3, y el inicio del segmento del tallo corto C-terminal es Bq+3. En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo N-terminal es Ap+4f y el inicio del segmento del tallo corto C-terminal es Bq+4. En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo N-terminal es Ap+5, y el inicio del segmento del tallo corto C-terminal es Bq+5.

En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo N-terminal es Ap_i, y el inicio del segmento del tallo corto C-terminal es Bq+i . En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo N-terminal es Ap_2, y el inicio del segmento del tallo corto C-terminal es Bq+2. En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo N-terminal es Ap_3, y el inicio del segmento del tallo corto C-terminal es Bq+3. En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo N-terminal es Ap_ 4, y el inicio del segmento del tallo corto C-terminal es Bq+4. En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo N-terminal es Ap_5, y el inicio del segmento del tallo corto C-terminal es Bq+s.

En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo N-terminal es Ap (es decir, el final del segmento del tallo N-terminal es Cisteina), y el inicio del segmento del tallo C-terminal es Aq (es decir, inicio del segmento del tallo C-terminal es Cisteina) . En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo N-terminal es Ap+i, y el inicio del segmento del tallo corto C-terminal es Bq_i. En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo N-terminal es Ap+2, y el inicio del segmento del tallo corto C-terminal es Bq_2. En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo N-terminal es Ap+3, y si inicio del segmento del tallo corto C-terminal es Bq_ 3. En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo N-terminal es Ap+4, y el inicio del segmento del tallo corto C-terminal es Bq_4. En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo N-terminal es Ap+5, y el inicio del segmento del tallo corto C-terminal es Bq_5.

También se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo corto de la hemaglut inina de la influenza que comprenden formas suprimidas de segmentos del tallo corto C-terminal de HA1 en donde hasta 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 o 1 residuos de aminoácidos se suprimen de cualquiera o ambas terminales del segmento del tallo corto C-terminal de HA1. En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo corto de la hemaglut inina de la influenza que comprenden formas expandidas de segmentos del tallo corto C-terminal de HA1 en donde 1, 2 o 3 residuos se agregan al N-terminal de los segmentos del tallo corto C-terminal de HA1. En modalidades particulares, si se agrega un residuo al segmento del tallo corto C-terminal, entonces se agrega un residuo al segmento del tallo N-terminal; si se agregan dos residuos al segmento del tallo corto C-terminal, entonces se agregan dos residuos al segmento del tallo N-terminal; si se agregan tres residuos al segmento del tallo corto C-terminal, entonces se agregan tres residuos al segmento del tallo N-terminal. Adicionalmente se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo corto de la hemaglutinina de la influenza que comprenden formas alteradas de segmentos del tallo corto C-terminal de HA1 en donde hasta 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 o 1 residuos de aminoácidos se sustituyen conservativamente con otros aminoácidos. Adicionalmente se proporcionan polipéptidos del dominio del tallo corto de la hemaglutinina de la influenza que comprenden segmentos del tallo corto C-terminal de HA1 suprimidos y alterados.

Los polipéptidos del dominio del tallo corto de la hemaglutinina de la influenza se pueden basar en (es decir, pueden tener identidad de secuencia, como se describe anteriormente) cualquier hemaglutinina de la influenza conocida por aquellos de habilidad o posteriormente descubierta. En ciertas modalidades, los polipéptidos del dominio del tallo corto de la hemaglutinina de la influenza se basan en una hemaglutinina de la influenza A. En ciertas modalidades, los polipéptidos del dominio del tallo corto de la hemaglutinina de la influenza se basan en una hemaglutinina de la influenza A seleccionada a partir del grupo que consiste de Hl, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, Hll, H12, H13, H14, H15 y H16. En ciertas modalidades, los polipéptidos del dominio del tallo corto de la hemaglutinina de la influenza se basan en una hemaglutinina de la influenza B, como se describe en detalle debajo.

Los segmentos del tallo N-terminal de HA1 se pueden basar en (es decir, pueden tener identidad de secuencia, como se describe anteriormente) cualquier segmento del tallo N-terminal de HA1 conocido por aquellos de habilidad o posteriormente descubierto. En ciertas modalidades, los segmentos del tallo N-terminal de HA1 se basan en los segmentos del tallo N-terminal de HA1 de la influenza A. En ciertas modalidades, los segmentos del tallo N-terminal de HA1 se basan en una hemaglutinina de la influenza A seleccionada a partir del grupo que consiste de Hl, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, Hll, H12, H13, H14, H15 y H16. En ciertas modalidades, el segmento del tallo N-terminal de HA1 se selecciona a partir de las SEQ ID NOS:34-49. En ciertas modalidades, el segmento del tallo N-terminal de HA1 se selecciona a partir de las SEQ ID NOS: 34-49, que tienen cada una un aminoácido suprimido de su C-terminal. En ciertas modalidades, el segmento del tallo N-terminal de HA1 se selecciona a partir de las SEQ ID NOS: 34-49, que tienen cada una dos aminoácidos suprimidos de su C-terminal. En ciertas modalidades, el segmento del tallo N-terminal de HA1 se selecciona a partir de las SEQ ID NOS: 34-49, que tienen cada una tres aminoácidos suprimidos de su C-terminal. En ciertas modalidades, el segmento del tallo N-terminal de HA1 se selecciona a partir de las SEQ ID NOS: 34-49, que tienen cada una cuatro aminoácidos suprimidos de su C-terminal. En ciertas modalidades, el segmento del tallo N-terminal de HA1 se selecciona a partir de las SEQ ID NOS: 34-49, que tienen cada una cinco aminoácidos suprimidos de su C-terminal. En ciertas modalidades, el segmento del tallo N-terminal de HA1 se selecciona a partir de las SEQ ID NOS: 177-224.

Los segmentos del tallo corto C-terminal de HA1 se pueden basar en (es decir, pueden tener identidad de secuencia, como se describe anteriormente) cualquier segmento del tallo corto C-terminal de HA1 conocido por aquellos de habilidad o posteriormente descubierto. En ciertas modalidades, los segmentos del tallo corto C-terminal de HA1 se basan en los segmentos del tallo corto C-terminal de HA1 de la influenza A. En ciertas modalidades, los segmentos del tallo corto C-terminal de HA1 se basan en una hemaglut inina de la influenza A seleccionada a partir del grupo que consiste de Hl, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, Hll, H12, H13, H14, H15 y H16. En ciertas modalidades, el segmento del tallo corto C-terminal de HA1 se selecciona a partir de las SEQ ID NOS: 350-365. En ciertas modalidades, el segmento del tallo corto C-terminal de HA1 se selecciona a partir de las SEQ ID NOS: 350-365, que tienen cada una un aminoácido suprimido de su N-terminal. En ciertas modalidades, el segmento del tallo corto C-terminal de HA1 se selecciona a partir de las SEQ ID NOS: 350-365, que tienen cada una dos aminoácidos suprimidos de su N-terminal. En ciertas modalidades, el segmento del tallo corto C-terminal de HA1 se selecciona a partir de las SEQ ID NOS: 350-365, que tienen cada una tres aminoácidos suprimidos de su N-terminal. En ciertas modalidades, el segmento del tallo corto C-terminal de HA1 se selecciona a partir de las SEQ ID NOS: 350-365, que tienen cada una cuatro aminoácidos suprimidos de su N-terminal. En ciertas modalidades, el segmento del tallo corto C-terminal de HAl se selecciona a partir de las SEQ ID NOS: 350-365, que tienen cada una cinco aminoácidos suprimidos de su N-terminal. En ciertas modalidades, el segmento del tallo corto C-terminal de HAl se selecciona a partir de las SEQ ID NOS:366-413.

Los dominios del tallo de HA2 se pueden basar en (es decir, pueden tener identidad de secuencia, como se describe anteriormente) cualquier dominio del tallo de HA2 conocido por aquellos de habilidad, más tarde descubierto o aquí descrito. En ciertas modalidades, los dominios del tallo de HA2 se basan en dominios del tallo de HA2 de la influenza A. En ciertas modalidades, los dominios del tallo de HA2 se basan en una hemaglut inina de la influenza A seleccionada a partir del grupo que consiste de Hl, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, Hll, H12, H13, H14, H15 y H16. En ciertas modalidades, el dominio del tallo de HA2 se selecciona a partir de las SEQ ID NOS: 66-97.

En modalidades que comprenden un péptido señal, el péptido señal se puede basar en cualquier péptido señal de la influenza conocido por aquellos de habilidad en el arte o aquí descrito. En ciertas modalidades, los péptidos señal se basan en péptidos señal de la influenza A.

En modalidades que comprenden un dominio luminal, el dominio luminal se puede basar en cualquier dominio luminal de la influenza conocido por aquellos de habilidad en el arte o aqui descrito.

En modalidades que comprenden un dominio transmembrana, el dominio transmembrana se puede basar en cualquier dominio transmembrana de la influenza conocido por aquellos de habilidad en el arte o aqui descrito.

En modalidades que comprenden un dominio citoplásmico, el dominio citoplásmico se puede basar en cualquier dominio citoplásmico de la influenza conocido por aquellos de habilidad en el arte o aqui descrito.

En ciertas modalidades, uno o más de los sitios de glicosilación en el dominio del tallo corto de la hemaglutinina se alteran o suprimen tal que la glicosilación en estos sitios no ocurrirá durante el procesamiento y la maduración del polipéptido. Aquellos de habilidad en el arte reconocerán que la HA de la influenza típicamente comprende una o más secuencias de glicosilación (por ejemplo Asn-Xaa-Ser/Thr/Cys, en donde Xaa es cualquier aminoácido aparte de Pro). En ciertas modalidades, uno o más residuos de aminoácidos en una secuencia de glicosilación se sustituyen conservativamente con un residuo de aminoácidos que disturba la secuencia de glicosilación . En ciertas modalidades, uno o más residuos de aminoácidos en una secuencia de glicosilación se sustituyen con cualquier residuo de aminoácidos que disturbe la secuencia de glicosilación. En ciertas modalidades, uno o más residuos de asparagina en una secuencia de glicosilación se sustituyen con alanina. En una modalidad particular, la asparagina en la posición 38 de una hemaglutinina H3 se cambia a una alanina.

La Tabla 6, debajo, identifica los péptidos señal, los segmentos del tallo N-terminal de HAl, los segmentos del tallo corto C-terminal de HAl y los dominios HA2 de los polipéptidos de la hemaglutinina de la influenza A. Estos péptidos señal, segmentos del tallo y dominios son útiles en los polipéptidos y métodos aquí descritos.

TABLA 6. Secuencias Ejemplares de Péptidos del Dominio del Tallo Corto de la Hemaglutinina de la Influenza A La Tabla 6A, debajo, identifica los segmentos del tallo terminal de HA1 y los segmentos del tallo corto C-terminal HA1 útiles para los polipéptidos y métodos aquí descritos.

TABLA 6A. Secuencias Ejemplares de Péptidos del Dominio del Tallo Corto de la Hemaglutinina de la Influenza A Subtipo de HA Segmento del Tallo Segmento del Tallo (Genbank No.) N-Terminal de HA1 C-Terminal de HA1 H3 QDLPGNDNSTATLCLGH PKWKQNTLKLATGMRNVPEKQTR HAVPNGTLVKT1TDDQ1E HK68-H3N2 VTNATELVQSSSTGK.1 [SEQ ID NO:372] (EF409245) [SEQ ID NO: 183] PDB: 1 HGJ Sin Cys H3 QDLPGNDNSTATLCLGH KYVKQNTLKLATGMRNVPEKQTR HAVPNGTLVKTITDDQ1E HK.68-H3N2 VTNATELVQSSSTGK.1 [SEQ ID NO:373] (EF409245) [SEQ ID NO: 184] PDB: 1 HGJ Sin Cys ? 1 H3 QDLPGNDNSTATLCLGH YVKQNTLKLATGMRNVPEKQTR HAVPNGTLVKTITDDQIE HK68-H3N2 VTNATELVQSSSTG [SEQ ID NO:374] (EF409245) [SEQ ID NO: 1 85] PDB: 1HGJ Sin Cys ?3 H4 QNYTGNPVIC GHHAV PRYVKQGSLKLATGMRNIPEKASR ANGTMV TLADDQVEV (D90302) VTAQELVESQNLPEL [SEQ ID NO:375] Sin Cys [SEQ ID NO: 186] H4 QNYTGNPVICMGHHAV RYVKQGSLKLATGMRN1PEKASR ANGTMVKTLADDQVEV (D90302) VTAQELVESQNLPEL [SEQ ID NO:376] Sin Cys ?1 [SEQ ID NO: 1 87] En ciertas modalidades, los polipéptidos del dominio del tallo corto de la hemaglut inina de la influenza comprenden uno o más epitopos inmunogénicos en la estructura terciaria o cuaternaria de un polipéptido de la hemaglutinina de la influenza .

En ciertas modalidades, el segmento del tallo N-terminal de HA1 comprende la secuencia de aminoácidos A17-A18- (Xaa ) n-A3g (SEQ ID NO: 146), en donde A17 es Y o H; Ais es H, L, o Q; (Xaa)n representa una secuencia de 18-20 residuos de aminoácidos; y A38 es H, S, Q, T o N.

En ciertas modalidades, el dominio HA2 comprende la secuencia de aminoácidos Ai8-Ai9-A2o_ 2i (SEQ ID NO: 148), en donde Ais es V o I; ??9 es D, N o A; A20 es G, y A2i es W.

En ciertas modalidades, el dominio HA2 comprende secuencia de aminoácidos A38-A39-A4o-A 1-A42-A43-A44-A45-A46-A47-A49-A50-A5i-A52-A53-A54-A55-A56 (SEQ ID NO: 149), en donde A38 es K, Q, R, L 0 Y; A39 es cualquier residuo de aminoácido ; A40 es cualquier residuo de aminoácido ; «i es T; A42 es Q; A43 es cualquier residuo de aminoácido; A44 es A; A45 es I; 46 es D; A47 es cualquier residuo de aminoácido; 48 es I, V 0 M; A49 es T, Q 0 N; A50 es cualquier residuo de aminoácido; A51 es K; A52 es V 0 L; A53 es N; A54 es cualquier residuo de aminoácido; A55 es V, I 0 L; y A56 es V o I .

Como se ilustra en las FIGURAS 1 y 2, los segmentos del tallo N-terminal de HA1 comparten la identidad de secuencia entre la influenza A y la influenza B y adicionalmente a través de los subtipos de la influenza A. De modo semejante, los segmentos del tallo corto C-terminal de HA1 también comparten la identidad de secuencia entre la influenza A y la influenza B y adicionalmente a través de los subtipos de la influenza A. Adicionalmente, los dominios HA2 también comparten la identidad de secuencia entre la influenza A y la influenza B y adicionalmente a través de los subtipos de la influenza A.

En algunas modalidades, el polipéptido del dominio del tallo corto de la hemaglut inina de la influenza es un polipéptido híbrido que comprende o consiste esencialmente de segmentos y/o dominios de una pluralidad de subtipos o cepas de influenza. Por ejemplo, un polipéptido del dominio del tallo corto de la hemaglut inina de la influenza puede comprender segmentos del tallo corto C-terminal de HA1 y N-terminal de HA1 de diferentes subtipos de HA del virus de influenza A. En algunas modalidades, el segmento del tallo N-terminal de HA1 es del virus de influenza B mientras que el segmento del tallo corto C-terminal de HA1 es del virus de influenza A. De modo semejante, el HA2 y el segmento del tallo corto C-terminal de HA1 también pueden ser del virus de influenza A mientras que la N-terminal de HA1 es del virus de influenza B.

Se entenderá que cualquier combinación de los elementos de secuencias listados en las Tablas 2, 4, 5 y las secuencias listadas bajo las columnas "Péptido señal", "segmento del tallo N-terminal de HA1 " , y "Dominio HA2 " de la Tabla 3 o las variantes de los mismos se pueden utilizar para formar los polipéptidos del dominio del tallo de la hemaglut inina HA de la presente invención.

En un polipéptido del dominio del tallo corto de la hemaglutinina de la influenza aquí provisto, un enlazador conecta de manera covalente el segmento del tallo N-terminal de HA1 al segmento del tallo corto C-terminal de HA1. El enlazador puede ser cualquier enlazador estimado adecuado por uno de habilidad en el arte incluyendo, pero no limitado a, aquellos enlazadores aquí descritos.

En ciertas modalidades, los polipéptidos del dominio del tallo corto de la hemaglutinina de la influenza son capaces de formar una estructura tridimensional que es similar a la estructura tridimensional del dominio del tallo de una hemaglutinina de la influenza nativa. La similitud estructural se puede evaluar con base en cualquier técnica estimada adecuada por aquellos de habilidad en el arte incluyendo, pero no limitado a, aquellas técnicas aquí descritas.

En ciertas modalidades, cualquier polipéptido del dominio del tallo corto de la hemaglutinina de la influenza aquí provisto adicionalmente puede comprender uno o más dominios del polipéptido estimados adecuados por aquellos de habilidad en el arte. Los dominios del polipéptido útiles incluyen dominios que facilitan la purificación, el plegamiento y la escisión de porciones de un polipéptido. Por ejemplo, una etiqueta His (His-His-His-His-His-His , SEQ ID NO: 166), el epitopo FLAG u otra etiqueta de purificación puede facilitar la purificación de un polipéptido aqui provisto. Un promotor del plegamiento o dominio de trimerización de la fibritina del bacteriófago T4 puede facilitar la trimerización de los polipéptidos aqui provistos. El dominio del promotor del plegamiento pueden tener cualquier secuencia del promotor del plegamiento conocida por aquellos de habilidad en el arte (véase, por ejemplo, Papanikolopoulou et al., 2004, J. Bíol. Chem. 279 (10) : 8991-8998, el contenido del cual se incorpora por este medio por referencia en su totalidad) . Ejemplos incluyen GSGYI PEAPRDGQAYVRKDGEWVLLSTFL (SEQ ID NO: 167) . Un dominio del promotor del plegamiento puede ser útil para facilitar la trimerización de los polipéptidos solubles aqui provistos. Los sitios de escisión se pueden utilizar para facilitar la escisión de una porción de un polipéptido, por ejemplo la escisión de una etiqueta de purificación o un dominio del promotor del plegamiento o ambos. Los sitios de escisión útiles incluyen un sitio de escisión de trombina, por ejemplo uno con la secuencia LVPRGSP (SEQ ID NO:168) .

En ciertas modalidades, se proporcionan polipéptidos del dominio del tallo corto de la hemaglut inina de la influenza que comprenden un sitio de escisión de elastasa como aqui se describe. En modalidades particulares, se proporcionan aqui polipéptidos del dominio del tallo corto de la hemaglutinina de la influenza que comprenden cualquiera de las SEQ ID NOS: 350-365 en donde el residuo de aminoácido C-terminal, por ejemplo la arginina o la lisina, de SEQ ID NOS:350-365 se sustituye con un residuo de valina.

En ciertas modalidades, se proporcionan aqui polipéptidos del dominio del tallo corto de la hemaglutinina de la influenza que se predice son resistentes a la escisión de la proteasa en la unión entre HA1 y HA2. En ciertas modalidades, se proporciona cualquier polipéptido del dominio del tallo corto de la hemaglutinina de la influenza aqui descrito en donde el sitio de la proteasa que se extiende a lo largo de HA1 y HA2 es mutado a una secuencia que es resistente a la escisión de la proteasa. En ciertas modalidades, se proporciona cualquier polipéptido del dominio del tallo corto de la hemaglutinina de la influenza aqui descrito en donde el residuo C-terminal del segmento del tallo corto C-terminal de HA1 es cualquier residuo aparte de Lys o Arg . En ciertas modalidades, se proporciona cualquier polipéptido del dominio del tallo corto de la hemaglutinina de la influenza aqui descrito en donde el residuo N-terminal del dominio HA2 es prolina. En ciertas modalidades, se proporciona cualquier polipéptido del dominio del tallo corto de la hemaglutinina de la influenza aquí descrito en donde el residuo C-terminal del segmento del tallo corto C-terminal de HAl es Ala y el residuo N-terminal del dominio HA2 también es Ala.

En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo corto de la hemaglutinina de la influenza que consisten de un segmento del tallo N-terminal de HAl enlazado de manera covalente a un enlazador, a su vez enlazado de manera covalente a un segmento del tallo corto C-terminal de HAl en asociación de enlace con un dominio del tallo de HA2. En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo corto de la hemaglutinina de la influenza que consisten de un segmento del tallo N-terminal de HAl enlazado de manera covalente a un enlazador, a su vez enlazado de manera covalente a un segmento del tallo corto C-terminal de HAl, a su vez enlazado de manera covalente a un dominio del tallo de HA2. En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo corto de la hemaglutinina de la influenza que consisten de un péptido señal enlazado de manera covalente a un segmento del tallo N-terminal de HAl enlazado de manera covalente a un enlazador, a su vez enlazado de manera covalente a un segmento del tallo corto C-terminal de HAl, a su vez enlazado de manera covalente a un dominio del tallo de HA2.

En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo corto de la hemaglutinina de la influenza que consisten de un segmento del tallo N-terminal de HAl enlazado de manera covalente a un enlazador, a su vez enlazado de manera covalente a un segmento del tallo corto C-terminal de HAl en asociación de enlace con un dominio del tallo de HA2 que se conecta de manera covalente a un dominio luminal de HA2. En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo corto de la hemaglutinina de la influenza que consisten de un segmento del tallo N-terminal de HAl enlazado de manera covalente a un enlazador, a su vez enlazado de manera covalente a un segmento del tallo corto C-terminal de HAl, a su vez enlazado de manera covalente a un dominio del tallo de HA2 que se enlaza de manera covalente a un dominio luminal de HA2. En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo corto de la hemaglutinina de la influenza que consisten de un péptido señal enlazado de manera covalente a un segmento del tallo N-terminal de HAl enlazado de manera covalente a un enlazador, a su vez enlazado de manera covalente a un segmento del tallo corto C-terminal de HAl, a su vez enlazado de manera covalente a un dominio del tallo de HA2 que se enlaza de manera covalente a un dominio luminal de HA2.

En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo corto de la hemaglutinina de la influenza que consisten de un segmento del tallo N-terminal de HA1 enlazado de manera covalente a un enlazador, a su vez enlazado de manera covalente a un segmento del tallo corto C-terminal de HA1 en asociación de enlace con un dominio del tallo de HA2 que se conecta de manera covalente a, en secuencia, un sitio de escisión de trombina, un dominio del promotor del plegamiento y una etiqueta His. En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo corto de la hemaglutinina de la influenza que consisten de un segmento del tallo N-terminal de HA1 enlazado de manera covalente a un enlazador, a su vez enlazado de manera covalente a un segmento del tallo corto C-terminal de HA1, a su vez enlazado de manera covalente a un dominio del tallo de HA2 que se enlaza de manera covalente a, en secuencia, un sitio de escisión de trombina, un dominio del promotor del plegamiento y una etiqueta His. En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo corto de la hemaglutinina de la influenza que consisten de un péptido señal enlazado de manera covalente a un segmento del tallo N-terminal de HA1 enlazado de manera covalente a un enlazador, a su vez enlazado de manera covalente a un segmento del tallo corto C-terminal de HA1, a su vez enlazado de manera covalente a un dominio del tallo de HA2 que se enlaza de manera covalente a, en secuencia, un sitio de escisión de trombina, un dominio del promotor del plegamiento y una etiqueta His.

En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipeptidos del dominio del tallo corto de la hemaglutinina de la influenza que consisten de un segmento del tallo N-terminal de HA1 enlazado de manera covalente a un enlazador, a su vez enlazado de manera covalente a un segmento del tallo corto C-terminal de HA1 en asociación de enlace con un dominio del tallo de ??2 que se conecta de manera covalente a un dominio luminal de HA2 que se enlaza de manera covalente a, en secuencia, un sitio de escisión de trombina, un dominio del promotor del plegamiento y una etiqueta His. En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo corto de la hemaglutinina de la influenza que consisten de un segmento del tallo N-terminal de HA1 enlazado de manera covalente a un enlazador, a su vez enlazado de manera covalente a un segmento del tallo corto C-terminal de HA1, a su vez enlazado de manera covalente a un dominio del tallo de HA2 que se enlaza de manera covalente a un dominio luminal de HA2 que se conecta de manera covalente a, en secuencia, un sitio de escisión de trombina, un dominio del promotor del plegamiento y una etiqueta His. En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo corto de la hemaglutinina de la influenza que consisten de un péptido señal enlazado de manera covalente a un segmento del tallo N-terminal de HAl enlazado de manera covalente a un enlazador, a su vez enlazado de manera covalente a un segmento del tallo corto C-terminal de HA1, a su vez enlazado de manera covalente a un dominio del tallo de ??2 que se enlaza de manera covalente a un dominio luminal de HA2 que se conecta de manera covalente a, en secuencia, un sitio de escisión de trombina, un dominio del promotor del plegamiento y una etiqueta His.

En ciertas modalidades, se proporcionan aqui polipéptidos del dominio del tallo corto de la hemaglutinina de la influenza que consisten de un segmento del tallo N-terminal de HA1 enlazado de manera covalente a un enlazador, a su vez enlazado de manera covalente a un segmento del tallo corto C-terminal de HA1 en asociación de enlace con un dominio del tallo de HA2 que se conecta de manera covalente a un dominio luminal de HA2 que está a su vez enlazado de manera covalente a un dominio transmembrana de HA2. En ciertas modalidades, se proporcionan aqui polipéptidos del dominio del tallo corto de la hemaglutinina de la influenza que consisten de un segmento del tallo N-terminal de HA1 enlazado de manera covalente a un enlazador, a su vez enlazado de manera covalente a un segmento del tallo corto C-terminal de HA1, a su vez enlazado de manera covalente a un dominio del tallo de HA2 que se enlaza de manera covalente a un dominio luminal de HA2 que está a su vez enlazado de manera covalente a un dominio transmembrana de HA2. En ciertas modalidades, se proporcionan aqui polipéptidos del dominio del tallo corto de la hemaglutinina de la influenza que consisten de un péptido señal enlazado de manera covalente a un segmento del tallo N-terminal de HA1 enlazado de manera covalente a un enlazador, a su vez enlazado de manera covalente a un segmento del tallo corto C-terminal de HA1, a su vez enlazado de manera covalente a un dominio del tallo de HA2 que se enlaza de manera covalente a un dominio luminal de HA2 que está a su vez enlazado de manera covalente a un dominio transmembrana de HA2.

En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo corto de la hemaglutinina de la influenza que consisten de un segmento del tallo N-terminal de HA1 enlazado de manera covalente a un enlazador, a su vez enlazado de manera covalente a un segmento del tallo corto C-terminal de HA1 en asociación de enlace con un dominio del tallo de HA2 que se conecta de manera covalente a un dominio luminal de HA2 que está a su vez enlazado de manera covalente a un dominio transmembrana de HA2 que está a su vez enlazado de manera covalente a un dominio citoplásmico de HA2. En ciertas modalidades, se proporcionan aqui polipéptidos del dominio del tallo corto de la hemaglutinina de la influenza que consisten de un segmento del tallo N-terminal de HA1 enlazado de manera covalente a un enlazador, a su vez enlazado de manera covalente a un segmento del tallo corto C-terminal de HA1, a su vez enlazado de manera covalente a un dominio del tallo de HA2 que se enlaza de manera covalente a un dominio luminal de HA2 que está a su vez enlazado de manera covalente a un dominio transmembrana de HA2 que está a su vez enlazado de manera covalente a un dominio citoplásmico de HA2. En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo corto de la hemaglut inina de la influenza que consisten de un péptido señal enlazado de manera covalente a un segmento del tallo N-terminal de HA1 enlazado de manera covalente a un enlazador, a su vez enlazado de manera covalente a un segmento del tallo corto C-terminal de HA1, a su vez enlazado de manera covalente a un dominio del tallo de HA2 que se enlaza de manera covalente a un dominio luminal de HA2 que está a su vez enlazado de manera covalente a un dominio transmembrana de HA2 que está a su vez enlazado de manera covalente a un dominio citoplásmico de HA2.

En ciertas modalidades, se proporciona aquí un polipéptido del tallo corto de la hemaglutinina de la influenza que tiene una secuencia seleccionada a partir del grupo que consiste de: ( SEQ ID NO: 34 ) -LL- (SEQ ID NO:350)-(SEQ ID NO:66), (SEQ ID NO: 35) -LL- (SEQ ID NO:351)-(SEQ ID NO:67) , (SEQ ID NO: 36) -LL- (SEQ ID NO:352)-(SEQ ID NO:68), (SEQ ID NO: 37) -LL- (SEQ ID NO:353)-(SEQ ID NO:69), (SEQ ID NO: 38) -LL- (SEQ ID NO:354)-(SEQ ID NO:70), (SEQ ID NO: 39) -LL- (SEQ ID NO:355)-(SEQ ID NO:71), (SEQ ID NO: 40) -LL- (SEQ ID NO:356)-(SEQ ID NO:72), (SEQ ID NO: 41) -LL- (SEQ ID NO:357)-(SEQ ID NO:73) (SEQ ID NO: 42) -LL- (SEQ ID NO:358)-(SEQ ID NO:74) (SEQ ID NO: 43) -LL- (SEQ ID NO:359)-(SEQ ID NO:75) (SEQ ID NO: 44) -LL- (SEQ ID NO:360)-(SEQ ID NO:76) (SEQ ID NO: 45) -LL- (SEQ ID NO:361)-(SEQ ID NO:77) (SEQ ID NO: 46) -LL- (SEQ ID NO:362)-(SEQ ID NO:78) (SEQ ID NO: 7) -LL- (SEQ ID NO:363)-(SEQ ID NO:79) (SEQ ID NO: 48) -LL- (SEQ ID NO:364)-(SEQ ID NO:80) (SEQ ID NO: 49) -LL- (SEQ ID NO:365)-(SEQ ID NO:81) en donde cada secuencia de arriba se enlaza a la secuencia adyacente como aquí se describe y en donde LL es un enlazador como aquí se describe. En particular, los segmentos C-terminal de HA1 se pueden enlazar de manera covalente o de manera no covalente a los dominios HA2. En ciertas modalidades, LL se selecciona a partir del grupo que consiste de un enlace directo, Gly, Gly-Gly, Gly-Gly-Gly, Gly-Gly-Gly-Gly , (Gly)n (en donde n es cualquier número de residuos de Glicina en tanto haya flexibilidad en el enlazador peptídico; en ciertas modalidades, n es 2, 3, 4, 5, 6, o 7 residuos de Glicina), Gly-Pro, ITPNGSI PNDKPFQNVNKITYGA (SEQ ID NO: 165) y Asn-Ala-Ser .

En ciertas modalidades, se proporciona aquí un polipéptido del tallo corto de la hemaglutinina de la influenza que tiene una secuencia seleccionada a partir del grupo que consiste de: (SEQ ID NO: 34) -LL- (SEQ ID NO: 350) - (SEQ ID NO: 82) (SEQ ID NO: 35) -LL- (SEQ ID NO: 351) -(SEQ ID NO: 83) (SEQ ID NO: 36) -LL- (SEQ ID NO: 352) -(SEQ ID NO: 84) (SEQ ID NO: 37) -LL- (SEQ ID NO: 353) -(SEQ ID NO: 85) (SEQ ID NO: 38) -LL- (SEQ ID NO: 354) - (SEQ ID NO: 86) (SEQ ID NO: 39) -LL- (SEQ ID NO: 355) "(SEQ ID NO: 87) (SEQ ID NO: 40) -LL- (SEQ ID NO: 356) - (SEQ ID NO: 88) (SEQ ID NO: 41) -LL- (SEQ ID NO: 357) - (SEQ ID NO: 89) (SEQ ID NO: 42) -LL- (SEQ ID NO: 358) - (SEQ ID NO: 90) (SEQ ID NO: 43) -LL- (SEQ ID NO: 359) - (SEQ ID NO: 91) (SEQ ID NO: 44) -LL- (SEQ ID NO: 360) - (SEQ ID NO: 92) (SEQ ID NO: 45) -LL- (SEQ ID NO: 361) - (SEQ ID NO: 93) (SEQ ID NO: 46) -LL- (SEQ ID NO: 362) -(SEQ ID NO: 94) (SEQ ID NO: 47) -LL- (SEQ ID NO: 363) "(SEQ ID NO: 95) (SEQ ID NO: 48) -LL- (SEQ ID NO: 364 ) - (SEQ ID NO: 96) (SEQ ID NO: 49) -LL- (SEQ ID NO: 365) - (SEQ ID NO: 97) en donde cada secuencia de arriba se enlaza a la secuencia adyacente como aquí se describe y en donde LL es un enlazador como aquí se describe. En particular, los segmentos C-terminal de HA1 se pueden enlazar de manera covalente o de manera no covalente a los dominios HA2. En ciertas modalidades, LL se selecciona a partir del grupo que consiste de un enlace directo, Gly, Gly-Gly, Gly-Gly-Gly, Gly-Gly-Gly-Gly, (Gly)n, Gly-Pro, ITPNGSIPNDKPFQNVNKITYGA (SEQ ID NO: 165) y Asn-Ala-Ser .

En ciertas modalidades, se proporciona aqui un polipéptido del tallo corto de la hemaglutinina de la influenza que tiene una secuencia seleccionada a partir del grupo que consiste de: (SEQ ID NO: 3 ) -LL- (SEQ ID NO:350)-(SEQ ID NO:82)-(SEQ ID NO: 98) , (SEQ ID NO: 35) -LL- (SEQ ID NO:351)-(SEQ ID NO:83)-(SEQ ID NO: 99) , (SEQ ID NO: 36) -LL- (SEQ ID NO:352)-(SEQ ID NO:84)-(SEQ ID NO.100), (SEQ ID NO: 37) -LL- (SEQ ID NO:353)-(SEQ ID NO:85)-(SEQ ID NO: 101) , (SEQ ID NO: 38) -LL- (SEQ ID NO:354)-(SEQ ID NO:86)-(SEQ ID NO: 102) , (SEQ ID NO: 39) -LL- (SEQ ID NO : 355 ) - (SEQ ID NO: 87) -(SEQ ID NO: 103) , (SEQ ID NO: 40) -LL- (SEQ ID NO:356)-(SEQ ID NO:88)-(SEQ ID NO: 104 ) , (SEQ ID NO: 41) -LL- (SEQ ID NO:357)-(SEQ ID NO:89)-(SEQ ID NO: 105) , (SEQ ID NO: 42) -LL- (SEQ ID NO:358)-(SEQ ID NO:90)-(SEQ ID NO: 106) , (SEQ ID NO: 43) -LL- (SEQ ID NO:359)-(SEQ ID NO:91)-(SEQ ID NO: 107) , (SEQ ID NO: 44 ) -LL- (SEQ ID NO:360)-(SEQ ID NO:92)-(SEQ ID NO: 108) , (SEQ ID NO: 45) -LL- (SEQ ID NO:361)-(SEQ ID NO:93)-(SEQ ID NO: 109) , (SEQ ID NO: 46) -LL- (SEQ ID NO:362)-(SEQ ID NO:94)-(SEQ ID NO:110), (SEQ ID NO: 7) -LL- (SEQ ID NO:363)-(SEQ ID NO:95)-(SEQ ID NO: 111) , (SEQ ID NO: 48) -LL- (SEQ ID NO:364)-(SEQ ID NO:96)-(SEQ ID NO:112), y (SEQ ID NO: 49) -LL- (SEQ ID NO:365)-(SEQ ID NO:97)-(SEQ ID NO: 113) , en donde cada secuencia de arriba se enlaza a la secuencia adyacente como aquí se describe y en donde LL es un enlazador como aquí se describe. En particular, los segmentos del tallo corto C-terminal de HAl se pueden enlazar de manera covalente o de manera no covalente a los dominios HA2. En ciertas modalidades, LL se selecciona a partir del grupo que consiste de un enlace directo, Gly, Gly-Gly, Gly-Gly-Gly, Gly-Gly-Gly-Gly, (Gly)n, Gly-Pro, ITPNGSIPNDKPFQNVNKITYGA (SEQ ID NO: 165) y Asn-Ala-Ser.

En ciertas modalidades, se proporciona aquí un polipéptido del tallo corto de la hemaglutinina de la influenza que tiene una secuencia seleccionada a partir del grupo que consiste de: (SEQ ID NO: 34 ) -LL- (SEQ ID NO:350)-(SEQ ID NO:82)-(SEQ ID O: 168) - (SEQ ID NO: 1 67 ) - (SEQ ID NO: 166) , (SEQ ID NO: 35) -LL - (SEQ ID NO : 351) - (SEQ ID NO: 83 ) - (SEQ ID O: 168) - (SEQ ID NO: 167) - (SEQ ID NO: 166) , (SEQ ID NO: 36) -LL - (SEQ ID NO : 352) - (SEQ ID NO: 84)- (SEQ ID O: 168) - (SEQ ID NO: 1 67 ) - (SEQ ID NO: 166) , (SEQ ID NO: 37) -LL - (SEQ ID NO : 353) - (SEQ ID NO: 85) - (SEQ ID O: 168) - (SEQ ID NO: 167 ) - (SEQ ID NO: 166) , (SEQ ID NO: 38) -LL - (SEQ ID NO : 35 ) - (SEQ ID NO: 8 6 ) - (SEQ ID O: 168) - (SEQ ID NO: 167) - (SEQ ID NO: 166) , (SEQ ID NO: 39) -LL - (SEQ ID NO : 355) - (SEQ ID NO: 87 ) - (SEQ ID O: 168) - (SEQ ID NO: 167) - (SEQ ID NO: 166) , ( SEQ ID NO: 40) -LL - (SEQ ID NO : 356) - (SEQ ID NO: 88) - (SEQ ID O: 168 ) - (SEQ ID NO: 167) - (SEQ ID NO: 166) , (SEQ ID NO: 41) -LL - (SEQ ID NO : 357) - (SEQ ID NO: 89) - (SEQ ID O: 168) - (SEQ ID NO: 1 67 ) - ( SEQ ID NO: 166) , (SEQ ID NO: 42) -LL - (SEQ ID NO : 358) - (SEQ ID NO: 90 ) - ( SEQ ID O: 168) - (SEQ ID NO: 167) - (SEQ ID NO: 166) , (SEQ ID NO: 43) -LL - (SEQ ID NO : 359) - (SEQ ID NO: 91)- (SEQ ID O: 168) - (SEQ ID NO: 167) - (SEQ ID NO: 166) , (SEQ ID NO: 44 ) -LL - (SEQ ID NO : 360) - (SEQ ID NO: 92 ) - (SEQ ID O: 168) - (SEQ ID NO: 167) - (SEQ ID NO: 166) , (SEQ ID NO: 45) -LL - (SEQ ID NO : 361) - (SEQ ID NO: 93 ) - (SEQ ID O: 168) - (SEQ ID NO: 1 67 ) - (SEQ ID NO: 166) , (SEQ ID NO: 46) -LL - (SEQ ID NO : 362) - (SEQ ID NO: 94) - ( SEQ ID O: 168) - (SEQ ID NO: 167 ) - (SEQ ID NO: 166) , (SEQ ID NO: 47) -LL- (SEQ ID NO:363)-(SEQ ID NO:95)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO:166), (SEQ ID NO : 48 ) -LL- ( SEQ ID NO:364)-(SEQ ID NO:96)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO:166), y (SEQ ID NO: 49) -LL- (SEQ ID NO:365)-(SEQ ID NO:97)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO:166), en donde cada secuencia de arriba se enlaza a la secuencia adyacente como aquí se describe y en donde LL es un enlazador como aquí se describe. En particular, los segmentos del tallo corto C-terminal de HA1 se pueden enlazar de manera covalente o de manera no covalente a los dominios HA2. En ciertas modalidades, LL se selecciona a partir del grupo que consiste de un enlace directo, Gly, Gly-Gly, Gly-Gly-Gly, Gly-Gly-Gly-Gly, (Gly)n, Gly-Pro, ITPNGSIPNDKPFQNVNKITYGA (SEQ ID NO: 165) y Asn-Ala-Ser.

En ciertas modalidades, se proporciona aquí un polipéptido del tallo corto de la hemaglutinina de la influenza que tiene una secuencia seleccionada a partir del grupo que consiste de: (SEQ ID NO: 34) -LL- (SEQ ID NO:350)-(SEQ ID NO:82)-(SEQ ID NO:98)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO:166), (SEQ ID NO: 35) -LL- (SEQ ID NO:351)-(SEQ ID NO:83)-(SEQ ID NO:99)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO:166), ( SEQ ID NO: 36) -LL- (SEQ ID NO:352)-(SEQ ID NO:84)-(SEQ ID NO:100)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO:166), (SEQ ID NO: 37) -LL-(SEQ ID NO:353)-(SEQ ID NO:85)-(SEQ ID O: 101) - (SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-(SEQ ID N0.166), (SEQ ID NO: 38) -LL-(SEQ ID NO:354)-(SEQ ID NO:86)-(SEQ ID O: 102) - (SEQ ID NO: 168) - (SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO:166), (SEQ ID NO: 39) -LL-(SEQ ID NO:355)-(SEQ ID NO:87)-(SEQ ID O: 103) - (SEQ ID NO: 168) - (SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO:166), (SEQ ID NO: 40) -LL-(SEQ ID NO:356)-(SEQ ID NO:88)-(SEQ ID O: 104) - (SEQ ID NO: 168) - (SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO:166), (SEQ ID NO: 41) -LL-(SEQ ID NO:357)-(SEQ ID NO:89)-(SEQ ID O: 105) -(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO: 166), (SEQ ID NO: 42) -LL-(SEQ ID NO:358)-(SEQ ID NO:90)-(SEQ ID O: 106) - (SEQ ID NO: 168) - (SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO:166), (SEQ ID NO: 43) -LL-(SEQ ID NO:359)-(SEQ ID NO:91)-(SEQ ID O: 107) - (SEQ ID NO: 168 ) - (SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO:166), (SEQ ID NO: 44) -LL-(SEQ ID NO:360)-(SEQ ID NO:92)-(SEQ ID O: 108 ) - (SEQ ID NO: 168) - (SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO:166), (SEQ ID NO: 45) -LL-(SEQ ID NO:361)-(SEQ ID NO:93)-(SEQ ID O: 109) - (SEQ ID NO: 168) - (SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO:166), (SEQ ID NO: 46) -LL-(SEQ ID NO:362)-(SEQ ID NO:94)-(SEQ ID O: 110) -(SEQ ID NO: 168) - (SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO:166), (SEQ ID NO: 47) -LL-(SEQ ID NO:363)-(SEQ ID NO:95)-(SEQ ID O: 111) - (SEQ ID NO: 168) - (SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO:166), (SEQ ID NO: 48) -LL-(SEQ ID NO:364)-(SEQ ID NO:96)-(SEQ ID O: 112) - (SEQ ID NO: 168) - (SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO:166), y (SEQ ID NO: 49) -LL-(SEQ ID NO:365)-(SEQ ID NO:97)-(SEQ ID N0:113)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-(SEQ ID ?0:1ßß), en donde cada secuencia de arriba se enlaza a la secuencia adyacente como aquí se describe y en donde LL es un enlazador como aquí se describe. En particular, los segmentos del tallo corto C-terminal de HAl se pueden enlazar de manera covalente o de manera no covalente a los dominios HA2. En ciertas modalidades, LL se selecciona a partir del grupo que consiste de un enlace directo, Gly, Gly-Gly, Gly-Gly-Gly, Gly-Gly-Gly-Gly, Gly, (Gly)n, Gly-Pro, ITPNGSI P DKPFQNV KI YGA (SEQ ID NO: 165) y Asn-Ala-Ser.

En ciertas modalidades, se proporciona aquí un polipéptido del tallo corto de la hemaglutinina de la influenza que tiene una secuencia seleccionada a partir del grupc ' que consiste de: (SEQ ID NO: 177) -LL- (SEQ ID NO: 366) - (SEQ ID NO: 66) (SEQ ID NO: 178) -LL- (SEQ ID NO: 367) - (SEQ ID NO: 66) (SEQ ID NO: 179) -LL- (SEQ ID NO: 368) - (SEQ ID NO: 66) (SEQ ID NO: 180) -LL- (SEQ ID NO: 369) - (SEQ ID NO: 67) (SEQ ID NO: 181) -LL- (SEQ ID NO: 370) - (SEQ ID NO: 67) (SEQ ID NO: 182) -LL- (SEQ ID NO: 371) - (SEQ ID NO: 67) (SEQ ID NO: 183) -LL- (SEQ ID NO: 372) - (SEQ ID NO: 68) (SEQ ID NO: 184) -LL- ( SEQ ID NO: 373) - (SEQ ID NO: 68) (SEQ ID NO: 185) -LL- (SEQ ID NO: 374) - (SEQ ID NO: 68) (SEQ ID NO: 186) -LL- (SEQ ID NO: 375) - (SEQ ID NO: 69) (SEQ ID NO: 187) -LL- (SEQ ID NO: 376) - (SEQ ID NO: 69) (SEQ ID NO: 188 LL (SEQ ID NO: 377 (SEQ ID NO: 69 (SEQ ID NO: 189 LL (SEQ ID NO: 378 (SEQ ID NO: 70 ; (SEQ ID NO: 190 LL (SEQ ID NO: 379 (SEQ ID NO: 70 (SEQ ID NO: 191 LL (SEQ ID NO: 380 (SEQ ID NO: 70 (SEQ ID NO: 192 LL (SEQ ID NO: 381 (SEQ ID NO: 71 ; (SEQ ID NO: 193 LL (SEQ ID NO: 382 (SEQ ID NO: 71 (SEQ ID NO: 194 LL (SEQ ID NO: 383 (SEQ ID NO: 71 (SEQ ID NO: 195 LL (SEQ ID NO: 384 (SEQ ID NO: 72 (SEQ ID NO: 196 LL (SEQ ID NO: 385 (SEQ ID NO: 72 (SEQ ID NO: 197 LL (SEQ ID NO: 386 (SEQ ID NO: 72 (SEQ ID NO: 198 LL (SEQ ID NO: 387 (SEQ ID NO: 73; (SEQ ID NO: 199 LL (SEQ ID NO: 388 (SEQ ID NO: 73; (SEQ ID NO:200 LL (SEQ ID NO: 389 (SEQ ID NO: 73; (SEQ ID NO:201 LL (SEQ ID NO: 390 (SEQ ID NO: 74 (SEQ ID NO:202 LL (SEQ ID NO: 391 (SEQ ID NO: 74 (SEQ ID NO:203 LL (SEQ ID NO: 392 (SEQ ID NO: 74 (SEQ ID NO : 204 LL (SEQ ID NO: 393 (SEQ ID NO : 5 ; (SEQ ID NO:205 LL (SEQ ID NO: 394 (SEQ ID NO: 75 (SEQ ID NO:206 LL (SEQ ID NO: 395 (SEQ ID NO: 75; (SEQ ID NO:207 LL (SEQ ID NO: 396 (SEQ 'ID NO: 76; (SEQ ID NO: 208 LL (SEQ ID NO: 397 (SEQ ID NO: 76¡ (SEQ ID NO:209 LL (SEQ ID NO: 398 (SEQ ID NO: 76; (SEQ ID NO: 210 LL (SEQ ID NO: 399 (SEQ ID NO: 77 (SEQ ID NO: 211 LL (SEQ ID NO: 400 (SEQ ID NO: 77; (SEQ ID NO:212 LL (SEQ ID NO: 401 (SEQ ID NO: 77 (SEQ ID NO: 213) -LL- ( SEQ ID NO: 402) - (SEQ ID NO: 78) , (SEQ ID NO: 214) -LL- ( SEQ ID NO: 403) - (SEQ ID NO: 78) , (SEQ ID NO: 215) -LL- (SEQ ID NO: 404) - (SEQ ID NO: 78) , (SEQ ID NO: 216) -LL- (SEQ ID NO: 405) - (SEQ ID NO: 79) , (SEQ ID NO: 217) -LL- (SEQ ID NO: 406) - (SEQ ID NO: 79) , (SEQ ID NO: 218) -LL- (SEQ ID NO: 407) - (SEQ ID NO: 79) , (SEQ ID NO: 219) -LL- (SEQ ID NO: 408) - (SEQ ID NO: 80) , (SEQ ID NO: 220) -LL- (SEQ ID NO: 409) - (SEQ ID NO: 80) , (SEQ ID NO: 221) -LL- (SEQ ID NO: 410) - (SEQ ID NO: 80) , (SEQ ID NO: 222) -LL- (SEQ ID NO: 411) - (SEQ ID NO: 81) , (SEQ ID NO: 223) -LL- (SEQ ID NO: 412) - (SEQ ID NO: 81) , (SEQ ID NO: 224) -LL- (SEQ ID NO: 413) - (SEQ ID NO: 81) , en donde cada secuencia de arriba se enlaza a la secuencia adyacente como aquí se describe y en donde LL es un enlazador como aquí se describe. En particular, los segmentos del tallo corto C-terminal de HA1 se pueden enlazar de manera covalente o de manera no covalente a los dominios HA2. En ciertas modalidades, LL se selecciona a partir del grupo que consiste de un enlace directo, Gly, Gly-Gly, Gly-Gly-Gly, Gly-Gly-Gly-Gly, (Gly)n, Gly-Pro, ITPNGSIPNDKPFQNVNKITYGA (SEQ ID NO: 165) y Asn-Ala-Ser. 5.1.2 POLIPÉPTIDOS DEL DOMINIO DEL TALLO LARGO DE LA HEMAGLUTININA DE LA INFLUENZA En ciertas modalidades, el polipéptido del dominio del tallo de la hemaglut inina de la influenza es un polipéptido del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza. La estructura primaria típica de un polipéptido del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza aquí provisto comprende, en el siguiente orden: un segmento del tallo largo N-terminal de HA1, un enlazador, un segmento del tallo largo C-terminal de HA1 y un HA2. La secuencia primaria se puede formar por un solo polipéptido, o se puede formar por múltiples polipéptidos. Típicamente, un solo polipéptido se expresa por cualquier técnica estimada adecuada por uno de habilidad en el arte. En las modalidades de un solo polipéptido, los segmentos HA1 y el HA2 están en asociación terciaria. Como es conocido por aquellos de habilidad en el arte, un solo polipéptido de la HA se puede escindir, por ejemplo por una proteasa, bajo condiciones de expresión apropiadas para producir dos polipéptidos en asociación cuaternaria. La escisión es típicamente entre el segmento del tallo corto C-terminal de HA1 y el HA2. En ciertas modalidades, se proporcionan aquí múltiples polipéptidos. En modalidades de múltiples polipéptidos, los segmentos HA1 y HA2 están en asociación cuaternaria.

En ciertas modalidades, un polipéptido del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza aquí provisto es monomérico. En ciertas modalidades, un polipéptido del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza aquí provisto es multimérico. En ciertas modalidades, un polipéptido del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza aquí provisto es trimérico. Aquellos de habilidad en el arte reconocerán que los polipéptidos del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza nativa son capaces de trimerización in vivo y que ciertos polipéptidos del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza aquí provistos son capaces de trimerización. En modalidades particulares descritas debajo, los polipéptidos del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza aquí provistos comprenden dominios de trimerización para facilitar la trimerización.

En ciertas modalidades, un polipéptido del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza comprende un péptido señal. En ciertas modalidades, también se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza maduros que carecen de un péptido señal.

En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza que comprenden un dominio del tallo de HA2, un dominio luminal de HA2 , un dominio transmembrana de HA2 y un dominio citoplásmico de HA2. En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza que comprenden un dominio del tallo de HA2, un dominio luminal de HA2 , y un dominio transmembrana de HA2 pero carecen de cierta parte o todo el dominio citoplásmico típico. En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza que comprenden un dominio del tallo de HA2 y un dominio luminal de HA2 pero carecen tanto de un dominio transmembrana de HA2 como de un dominio citoplásmico de HA2. En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza que comprenden un dominio del tallo de HA2 pero carecen de un dominio luminal de HA2 , un dominio transmembrana de HA2 y un dominio citoplásmico de HA2. En ciertas modalidades, los polipéptidos del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza comprenden un dominio del tallo de HA2 que tiene al menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96% o 98% de identidad de secuencia de aminoácidos a un dominio del tallo de HA2 de la influenza conocido por aquellos de habilidad en el arte. Los dominios del tallo de HA2 conocidos, ejemplares, de las hemaglutininas de la influenza A conocidas se proporcionan en las Tablas debajo.

También se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza que comprenden formas suprimidas de dominios del tallo de HA2 en donde hasta 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 o 1 residuos de aminoácidos se suprimen de cualquiera o ambas terminales del dominio del tallo de HA2. Adicionalmente se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza que comprenden formas alteradas de dominios del tallo de HA2 en donde hasta 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 o 1 residuos de aminoácidos se sustituyen conservativamente con otros aminoácidos. Adicionalmente se proporcionan polipéptidos del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza que comprenden dominios del tallo de HA2 suprimidos y alterados.

El segmento del tallo largo N-terminal de HA1 puede ser cualquier segmento del tallo largo N-terminal de HA1 reconocido por uno de habilidad en el arte con base en la definición aquí provista. Típicamente, un segmento del tallo largo N-terminal de HA1 corresponde a un polipéptido que consiste del aminoácido N-terminal de un HA1 maduro (es decir, un HA1 que carece de un péptido señal) al residuo de cisteína localizado en la secuencia en aproximadamente el residuo 97 del HA1 (utilizando la numeración H3) . Este residuo de cistina, referido aquí como Cp, es generalmente capaz de ser enlazado a un residuo de cisteína Cq en el segmento del tallo largo C-terminal de HA1. Las secuencias de 16 hemaglutininas de la influenza A representativas se presentan en la FIGURA 1, y el residuo Cp se identifica en cada una.

En ciertas modalidades, el segmento del tallo largo N-terminal de HA1 no termina exactamente en Cp (por ejemplo, C sg de una subunidad de HAl de una hemaglutinina H3), sino en un residuo en la secuencia y en la vecindad de la estructura a Cp. Por ejemplo, en ciertas modalidades, el segmento del tallo largo N-terminal de HAl termina en Cp-i, Cp-2, Cp-3, o Cp-4. En otras modalidades, el segmento del tallo largo N-terminal de HAl termina en Cp÷i, Cp+2, Cp+3, Cp+4 o Cp+5. El final de un segmento del tallo largo N-terminal de HAl se debe seleccionar en conjunción con el final del segmento del tallo largo C-terminal de HAl y el enlazador de modo que el dominio del tallo de HAl enlazado resultante sea capaz de formar una estructura tridimensional similar, como se describe debajo, a un dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza.

En ciertas modalidades, los polipéptidos del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza comprenden un segmento del tallo largo N-terminal de HAl que tiene al menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96% o 98% de identidad de secuencia de aminoácidos a un segmento del tallo largo N-terminal de HAl de la influenza conocido por aquellos de habilidad en el arte. Los segmentos del tallo largo N-terminal de HAl conocidos, ejemplares, se proporcionan en las Tablas debaj o .

También se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza que comprenden formas suprimidas de segmentos del tallo largo N-terminal de HAl en donde hasta 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 o 1 residuos de aminoácidos se suprimen de cualquiera o ambas terminales del segmento del tallo largo N-terminaí de HAl. En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo largo de la hemaglut inina de la influenza que comprenden formas expandidas de segmentos del tallo largo N-terminal de HAl en donde 1, 2 o 3 residuos se agregan al C-terminal de los segmentos del tallo largo N-terminal de HAl; estos residuos agregados se pueden derivar de la secuencia de aminoácidos de un dominio cabeza globular adyacente a un segmento del tallo largo N-terminal de HAl. Adicionalmente se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza que comprenden formas alteradas de segmentos del tallo largo N-terminal de HAl en donde hasta 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 o 1 residuos de aminoácidos se sustituyen conservativamente con otros aminoácidos. Adicionalmente se proporcionan polipéptidos del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza que comprenden segmentos del tallo largo N-terminal de HAl suprimidos y alterados.

El segmento del tallo largo C-terminal de HAl puede ser cualquier segmento del tallo largo C-terminal de HAl reconocido por uno de habilidad en el arte con base en la definición aquí provista. Típicamente, un segmento del tallo largo C-terminal de HAl corresponde a un polipéptido que consiste del residuo de alanina localizado en la secuencia en aproximadamente el residuo 252 de un HAl (utilizando la numeración H3) al aminoácido C-terminal del HAl. Este residuo de alanina, referido aquí como Cq, es generalmente capaz de ser enlazado a un residuo de cisteina Cp en el segmento del tallo largo N-terminal de HAl. Las secuencias de 16 hemaglutininas de la influenza A representativas se presentan en la FIGURA 1, y el residuo Cq se identifica en cada una.

En ciertas modalidades, el segmento del tallo largo C-terminal de HAl no inicia en Cq (por ejemplo, Ala252 de una subunidad de HAl de una hemaglutinina H3), sino en un residuo en la secuencia y en la vecindad de la estructura a Cq. Por ejemplo, en ciertas modalidades, el segmento del tallo largo C-terminal de HAl inicia en Cq_i, Cq-2, Cq-3, o Cq- . En otras modalidades, el segmento del tallo largo C-terminal de HAl inicia en Cq+i, Cq+2, Cq+3, Cq+4 o Cq+5. El final de un segmento del tallo largo N-terminal de HAl se debe seleccionar en conjunción con el inicio del segmento del tallo largo C-terminal de HAl y el enlazador de modo que el dominio del tallo de HAl resultante sea capaz de formar una estructura tridimensional similar, como se describe debajo, a una hemaglutinina de la influenza.

En ciertas modalidades, los polipéptidos del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza comprenden un segmento del tallo largo C-terminal de HAl que tiene al menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96% o 98% de identidad de secuencia de aminoácidos a un segmento del tallo largo C-terminal de HAl de la influenza conocido por aquellos de habilidad en el arte. Los segmentos del tallo largo C-terminal de HAl conocidos, ejemplares, se proporcionan en las Tablas deba o .

En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo largo N-terminal es Cp-i, y el inicio del segmento del tallo largo C-terminal es Cq_i. En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo largo N-terminal es ??-2, y el inicio del segmento del tallo largo C-terminal es Cq-2. En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo largo N-terminal es Cp_3, y el inicio del segmento del tallo largo C-terminal es Cq-3. En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo largo N-terminal es Cp_4, y el inicio del segmento del tallo largo C-terminal es Cq_4. En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo largo N-terminal es Cp-5, y el inicio del segmento del tallo largo C-terminal es Cq-5.

En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo largo N-terminal es Cp+1, y el inicio del segmento del tallo largo C-terminal es Cq+i . En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo largo N-terminal es Cp+2, y el inicio del segmento del tallo largo C-terminal es Cq+2. En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo largo N-terminal es Cp+3, y el inicio del segmento del tallo largo C-terminal es Cq+3. En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo largo N-terminal es Cp+4, y el inicio del segmento del tallo largo C-terminal es Cq+4. En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo largo N-terminal es Cp+5, y el inicio del segmento del tallo largo C-terminal es Cq+5.

En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo largo N-terminal es Cp_i, y el inicio del segmento del tallo largo C-terminal es Cq+i. En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo largo N-terminal es Cp-2, y el inicio del segmento del tallo largo C-terminal es Cq+2. En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo largo N-terminal es Cp_3, y el inicio del segmento del tallo largo C-terminal es Cq+3. En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo largo N-terminal es Cp_4, y el inicio del segmento del tallo largo C-terminal es Cq+4. En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo largo N-terminal es Cp_5, y el inicio del segmento del tallo largo C-terminal es Cq+s.

En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo largo N-terminal es Cp+i, y el inicio del segmento del tallo largo C-terminal es Cq_i. En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo largo N-terminal es Cp+2, y el inicio del segmento del tallo largo C-terminal es Cq-2. En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo largo N-terminal es Cp+3, y el inicio del segmento del tallo largo C-terminal es Cq-3. En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo largo N-terminal es Cp+4, y el inicio del segmento del tallo largo C-terminal es Cq_4. En ciertas modalidades, el final del segmento del tallo largo N-terminal es Cp+5 , y el inicio del segmento del tallo largo C-terminal es Cq_5.

También se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza que comprenden formas suprimidas de segmentos del tallo largo C-terminal de HA1 en donde hasta 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 o 1 residuos de aminoácidos se suprimen de cualquiera o ambas terminales del segmento del tallo largo C-terminal de HA1. En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza que comprenden formas expandidas de segmentos del tallo largo C-terminal de HA1 en donde 1, 2 o 3 residuos se agregan al N-terminal de los segmentos del tallo largo C-terminal de HA1; estos residuos agregados se pueden derivar de la secuencia de aminoácidos de un dominio cabeza globular adyacente a un segmento del tallo largo C-terminal de HA1. En modalidades particulares, si se agrega un residuo al segmento del tallo largo C-terminal, entonces se agrega un residuo al segmento del tallo largo N-terminal; si se agregan dos residuos al segmento del tallo largo C-terminal, entonces se agregan dos residuos al segmento del tallo largo N-terminal; si se agregan tres residuos al segmento del tallo largo C-terminal, entonces se agregan tres residuos al segmento del tallo largo N-terminal. Adicionalmente se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza que comprenden formas alteradas de segmentos del tallo largo C-terminal de HAl en donde hasta 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 o 1 residuos de aminoácidos se sustituyen conservativamente con otros aminoácidos. Adicionalmente se proporcionan polipéptidos del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza que comprenden segmentos del tallo largo C-terminal de HAl suprimidos y alterados.

Los polipéptidos del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza se pueden basar en (es decir, pueden tener identidad de secuencia, como se describe anteriormente) cualquier hemaglutinina de la influenza conocida por aquellos de habilidad o posteriormente descubierta. En ciertas modalidades, los polipéptidos del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza se basan en una hemaglutinina de la influenza A. En ciertas modalidades, los polipéptidos del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza se basan en una hemaglutinina de la influenza A seleccionada a partir del grupo que consiste de Hl, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, Hll, H12, H13, H14, H15 y H16. En ciertas modalidades, los polipéptidos del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza se basan en una hemaglutinina de la influenza B, como se describe en detalle debajo.

Los segmentos del tallo largo N-terminal de HAl se pueden basar en (es decir, pueden tener identidad de secuencia, como se describe anteriormente) cualquier segmento del tallo largo N-terminal de HAl conocido por aquellos de habilidad o posteriormente descubierto. En ciertas modalidades, los segmentos del tallo largo N-terminal de HAl se basan en los segmentos del tallo largo N-terminal de HAl de la influenza A. En ciertas modalidades, los segmentos del tallo largo N-terminal de HAl se basan en una hemaglutinina de la influenza A seleccionada a partir del grupo que consiste de Hl, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, Hll, H12, H13, H14, H15 y H16. En ciertas modalidades, el segmento del tallo largo N-terminal de HAl se selecciona a partir de las SEQ ID NOS: 414-429. En ciertas modalidades, el segmento del tallo largo N-terminal de HAl se selecciona a partir de las SEQ ID NOS: 414-429, que tienen cada una un aminoácido suprimido de su C-terminal . En ciertas modalidades, el segmento del tallo largo N-terminal de HAl se selecciona a partir de las SEQ ID NOS: 414-429, que tienen cada una dos aminoácidos suprimidos de su C-terminal. En ciertas modalidades, el segmento del tallo largo N-terminal de HAl se selecciona a partir de las SEQ ID NOS: 414-429, que tienen cada una tres aminoácidos suprimidos de su C-terminal. En ciertas modalidades, el segmento del tallo largo N-terminal de HAl se selecciona a partir de las SEQ ID NOS: 414-429, que tienen cada una cuatro aminoácidos suprimidos de su C-terminal. En ciertas modalidades, el segmento del tallo largo N-terminal de HAl se selecciona a partir de las SEQ ID NOS: 414-429, que tienen cada una cinco aminoácidos suprimidos de su C-terminal. En ciertas modalidades, el segmento del tallo largo N-terminal de HAl se selecciona a partir de las SEQ ID NOS:446-493.

Los segmentos del tallo largo C-terminal de HAl se pueden basar en (es decir, pueden tener identidad de secuencia, como se describe anteriormente) cualquier segmento del tallo largo C-terminal de HAl conocido por aquellos de habilidad o posteriormente descubierto. En ciertas modalidades, los segmentos del tallo largo C-terminal de HAl se basan en segmentos del tallo largo C-terminal de HAl de la influenza A. En ciertas modalidades, los segmentos del tallo largo C-terminal de HAl se basan en una hemaglut inina de la influenza A seleccionada a partir del grupo que consiste de Hl, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, Hll, H12, H13, H14, H15 y H16. En ciertas modalidades, el segmento del tallo largo C-terminal de HAl se selecciona a partir de las SEQ ID NOS: 430-445. En ciertas modalidades, el segmento del tallo largo C-terminal de HAl se selecciona a partir de las SEQ ID NOS: 430-445, que tienen cada una un aminoácido suprimido de su N-terminal. En ciertas modalidades, el segmento del tallo largo C-terminal de HAl se selecciona a partir de las SEQ ID NOS: 430-445, que tienen cada una dos aminoácidos suprimidos de su N-terminal. En ciertas modalidades, el segmento del tallo largo C-terminal de HAl se selecciona a partir de las SEQ ID NOS: 430-445, que tienen cada una tres aminoácidos suprimidos de su N-terminal. En ciertas modalidades, el segmento del tallo largo C-terminal de HA1 se selecciona a partir de las SEQ ID NOS: 430-445, que tienen cada una cuatro aminoácidos suprimidos de su N-terminal. En ciertas modalidades, el segmento del tallo largo C-terminal de HA1 se selecciona a partir de las SEQ ID NOS: 30-445, que tienen cada una cinco aminoácidos suprimidos de su N-terminal. En ciertas modalidades, el segmento del tallo largo C-terminal de HA1 se selecciona a partir de las SEQ ID NOS : 494-541.

Los dominios del tallo de HA2 se pueden basar en (es decir, pueden tener identidad de secuencia, como se describe anteriormente) cualquier dominio del tallo de HA2 conocido por aquellos de habilidad, más tarde descubierto, o aquí descrito. En ciertas modalidades, los dominios del tallo de HA2 se basan en dominios del tallo de HA2 de la influenza A. En ciertas modalidades, los dominios del tallo de HA2 se basan en una hemaglutinina de la influenza A seleccionada a partir del grupo que consiste de Hl, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, Hll, H12, H13, H14, H15 y H16. En ciertas modalidades, el dominio del tallo de HA2 se selecciona a partir de las SEQ ID NOS: 66-97.

En modalidades que comprenden un péptido señal, el péptido señal se puede basar en cualquier péptido señal de la influenza conocido por aquellos de habilidad en el arte o aquí descrito. En ciertas modalidades, el péptido señal se selecciona a partir de las SEQ ID NOS: 18-33.

En modalidades que comprenden un dominio luminal, el dominio luminal se puede basar en cualquier dominio luminal de la influenza conocido por aquellos de habilidad en el arte o aqui descrito. En ciertas modalidades, el dominio luminal se selecciona a partir de las SEQ ID NOS: 98-113.

En modalidades que comprenden un dominio transmembrana, el dominio transmembrana se puede basar en cualquier dominio transmembrana de la influenza conocido por aquellos de habilidad en el arte o aqui descrito. En ciertas modalidades, el dominio transmembrana se selecciona a partir de las SEQ ID NOS: 114-129.

En modalidades que comprenden un dominio citoplásmico, el dominio citoplásmico se puede basar en cualquier dominio citoplásmico de la influenza conocido por aquellos de habilidad en el arte o aqui descrito. En ciertas modalidades, el dominio citoplásmico se selecciona a partir de las SEQ ID NOS: 130-145.

En ciertas modalidades, uno o más de los sitios de glicosilación en el dominio del tallo de la hemaglutinina se alteran o suprimen tal que la glicosilación en estos sitios no ocurrirá durante el procesamiento y la maduración del polipéptido. Aquellos de habilidad en el arte reconocerán que la HA de la influenza típicamente comprende una o más secuencias de glicosilación (por ejemplo Asn-Xaa-Ser/Thr/Cys , en donde Xaa es cualquier aminoácido aparte de Pro) . En ciertas modalidades, uno o más residuos de aminoácidos en una secuencia de glicosilación se sustituyen conservativamente con un residuo de aminoácidos que disturba la secuencia de glicosilación. En ciertas modalidades, uno o más residuos de aminoácidos en una secuencia de glicosilación se sustituyen con cualquier residuo de aminoácidos que disturbe la secuencia de glicosilación. En ciertas modalidades, uno o más residuos de asparagina en una secuencia de glicosilación se sustituyen con alanina. En una modalidad particular, la asparagina en la posición 38 de una hemaglutinina H3 se cambia a una alanina.

La Tabla 7, debajo, identifica los péptidos señal, los segmentos del tallo largo N-terminal de HAl, los segmentos del tallo largo C-terminal de HAl y los dominios HA2 de los polipéptidos de la hemaglutinina de la influenza A. Estos péptidos señal, segmentos del tallo y dominios son útiles en los polipéptidos y métodos aquí descritos.

TABLA 7. Secuencias Ejemplares de Péptidos del Dominio del Tallo Largo de la Hemaglutinina de la Influenza A Subtipo de HA Péptido Segmento del Tallo Segmento del Tallo (Genbank No.) Señal Largo N-Terminal Largo C-Terminal Dominio HA2 de HAl de HA1 Hl MKAN DTICIGYHANN APMYAFALSR GLFGA1AGF1EGGW LLVLL STDTVDTVLE GFGSGIITSNA TGMIDGWYGYHHQ PR8-H1 N 1 CALAA KNVTVTHSVN S HECNTKCQ NEQGSGYAADQKST ADA LLEDSHNGKL TPLGAINSSLP QNA1NG1TNKVNTVI (EF467821.1) CRLKGIAPLQL YQN IHPVTIGE EKMNIQFTAVGKEF [SEQ ID GKCNIAGWLL CPKYVRSAKL NKLEKRMENLNKK N0: 18] GNPECDPLLPV RMVTGLRNNP VDDGFLDIWTYNAE RSWSY1VETPN SIQSR LLVLLENERTLDFH SENG1C DSNVKNLYEKVKSQ [SEQ ID LKNNAKEIGNGCFE [SEQ ID NO:430] FYHKCDNECMESVR NO:414] NGTYDYPKYSEESK LNREKVDGVKLES MG1YQILAIYSTVAS SLVLLVSLGAISFW MCSNGSLQCRICI [SEQ ID NO:66] H2 MAI1Y DQ1C1GYHSNN APEYGFRISKR GLFGAIAGFIEGGW LILLFT STEKVDTILER GSSGIMKTEGT QGMIDGWYGYHHS (Ll 1 136) AVRG NVTVTHAQN1 LEN NDQGSGYAADKEST LEKTHNGKLC CETKCQTPLG QKAIDGTTNRVNSVI [SEQ ID KLNG1PPLELG A1NTTLPFHNV EK NTQFEAVGKEF NO: 19] DCS1AGWLLG HPLT1GECPKY SNLEKRLENLNKKM NPECDRLLTVP VKSERLVLAT EDGFLDVWTYNAE EWSYIMEKEN GLRNVPQIESR LLVLMENERTLDFH PRNGLC DSNVKNLYDRVRM [SEQ ID QLRDNAKELGNGCF [SEQ ID NO:431] EFYHKCDDECMNS NO:415] VK GTYDYPKYEEE SKLNRNEIKGVKLS NMGVYQILAIYATV AGSLSLA1MIAGISL WMCSNGSLQCR1CI [SEQ ID NO:67] Subtipo de HA Péptido Segmento del Tallo Segmento del Tallo (Genbank No.) Señal Largo N-Terminal Largo C-Terminal Dominio HA 2 de HA1 de HA1 H5 MERJV DQ1CIGYHAN APRYAYKJVK GLFGAIAGFIEGGW LLLAI KSTKQVDTIM KGDSAÍMKSG QGMVDGWYGYHH (X07826) VSLVK EKNVTVTHAQ LAYGNCDTKC SNEQGSGYAADKES S DILERTHNGKL QTPVGEINSSM TQKA1DGITNKVNS1 CSLNGVKPLIL PFHN1HPHTIG IDKMNTRFEAVGKE [SEQ ID RDCSVAGWLL ECPKYVKSDR FNNLERRVENLNKK NO:22] GNPMCDEFLN LVLATGLRNV MEDGFLDVWTYNV LPEWLY1VEK PQRKKR ELLVLMENERTLDF DNPÍNSLC [SEQ ID HDSNVNNLYDKVR NO:434] LQL DN ARE LGNGC [SEQ ID FEFYHKCDNECMES NO:418] VRNGTYDYPQYSEE ARLNREEISGVKLES MGVYQI LSIYSTVAS SLALAJ JAGLSFW MCSNGSLQCRICI [SEQ ID NO 70] H6 M1A11V DKJC1GYHAN APWYAFRFVS GLFGAIAGFIEGGW VAILA NSTTQIDTILE TSNKGAVFKS TGMIDGWYGYHHE (D90303) TAGRS KNVTVTHSVE NLPIENCDATC NSQGSGYAADREST LLENQKEERF QTVAGVLRTN QKAVDGITNKVNSTI [SEQ ID CK1LKKAPLDL .TFQNVSPLW1 DKMNTQFEAVDHE NO:23] I GCT1EGW1LG GECPKYVKSE FSNLERRIDNLNf R NPQCDLLLGD SLRLATGLRN MEDGFLDVWTY A QSWSYIVERPT VPQ1ETR ELLVLLENERTLDL AQNGIC HDANVKNLYERVK [SEQ ID SQLRDNAMILGNGC [SEQ ID NO:435] FEFWHKCDDECMES NO:419] VKNGTYDYPKYQD ESKLNRQE1 ESVKLE SLGVYQILAIYSTVS SSLVLVGLIIAVGLW MCSNGSMQCRJCI [SEQ ID NO:71] Subtipo de HA Péptido Segmento del Tallo Segmento del Tallo (Gcnbank No.) Señal Largo N-Terminal Largo C-Terminal Dominio HA2 deHAl de ??1 H7 MNTQI DKJCLGHHAV APNRASFLRG GLFGA1AGFIENGW LVFAL SNGT VNTLT KSMG1QSDVQ EGLVDGWYGFRHQ (M24457) VAVIP ERGVEVVNAT VDANCEGECY NAQGEGTAADY S TNA ETVERTN1P J HSGGT1TSRLP TQSA1DQITGKLNRL CSKGK-RTTDL FQN1NSRAVG 1E TNQQFELIDNEF [SEQ D GQCGLLGTITG CPRYVKQES TEVEKQIGNL1NWT NO:24] PPQCDQFLEFS LLLATGMKNV KDS1TEVWSYNAEL1 ADLIIERREGN PEPS RK R VAMENQHT1DLADS DVC EM RLYERVRKQL [SEQ ID RENAEEDGTGCFEIF [SEQ TD NO:436] H CDDDCMAS1RNN NO:420] TYDH S YR EEAMQ NRIQIDPVKLSSGY DVILWFSFGASCFLL LA1AMGLVF1CVKJM GNMRCT1CI [SEQ ID NO:72] H8 MEKFI DRJCIGYQSNN APEFGYLL G GLFGALAGFIEGGWS AJATL STDTVNTL1EQ ESYGRI1QNED1 GM1DGWYGFHHSN (D90304) ASTNA NVPVTQTMEL P1GNCNTKCQT SEGTGMAADQ ST Y VETE HPAYC YAGAÍNSSKPF QEAID TTN VNNIV NTDLGAPLEL QNASRHYMGE D MNREFEVV HEF [SEQ ID RDCKJEAVIYG CP YVK ASL SEVE JUNM1NDKJD NO:25] NPKCDIHLKJD RLAVGLRNTP DQIEDLWAYNAELL QGWSY1VERP SVEPR VLLENQKTLDEHDS SAPEGMC NVKNLFDEV _RRLS [SEQ ID A AIDAGNGCFD1L [SEQ ID NO:437] HKCDNECMETI NG NO:421] TYDH EYEEEAKLE RS .INGVK.LEENTT YI ILS1YSTVAASLC LAJLIAGGLILGMQN GSCRCMFC1 [SEQ ID NO:73] Subtipo de HA Péptido Segmento del Tallo Segmento del Tallo (Genbank No.) Señal Largo N-Terminal Largo C-Terminal Dominio HA2 de HAl de HAl H9 METK DKICIGYQSTN APWYGHVLT GLFGAIAGFIEGGWP AJIAAL STETVDTLTES GESHGRILKTD GLVAGWYGFQHSN (D90305) LMVTA NVPVTHTKEL LNNGNCVVQC DQGVGMAADKGST ANA LHTEHNGMLC QTEK.GGLNTT QKAIDKITSKVNNI1 ATDLGHPLILD LPFHNISKYAF DKMNKQYEVIDHEF [SEQ ID TCTIEGLIYGN GNCPKYVGVK NELEARLNMI NKI NO:26] PSCDILLGGKE SLKLPVGLRN DDQIQD1WAYNAEL WSYTVERSSA VPAVSSR LVLLENQKTLDEHD VNGMC ANVNNL YN K VKR A [SEQ ID LGSNAVEDGNGCFE [SEQ ID NO:438] LYHKCDDQCMETIR NO:422] NGTYDRQKYQEESR LERQKIEGVKLESEG TYKJLTIYSTVASSL VLAMGFAAFLFWA MSNGSCRCN1CI [SEQ ID NO:74] H10 MYKV LDRICLGHHA APSRVSKLTG GLFGA1AGFIENGW VV1IAL VANGTIVKTL RDLGIQSEALI EGMVDGWYGFRHQ (M21647) LGAVK TNEQEEVTNA DNSCESKCFW NAQGTGQAADYKS G TETVESTNLN RGGSINTKLPF TQAAIDQITGKLNRL KLCMKGRSYK QNLSPRTVGQ LEKTNTEFESIESEFS [SEQ ID DLGNCHPVGM CPKYVNQRSL ETEHQIGNVINWTK NO:27] LIGTPVCDPHL LLATGMRNVP DS1TDIWTYNAELLV TGTWDTL1ERE EVVQGR AMENQHTIDMADSE NAIAHC MLNLYERVRKQLR [SEQ ID QNAEEDGKGCFEIY [SEQ ID NO:439] HTCDDSCMES1RNN NO:423] TYDHSQYREEALLN RLNINPVKLSSGYK DIILWFSFGESCFVL LAVVMGLVFFCLKN GNMRCTIC1 [SEQ ID NO:75] Subtipo de HA Péptido Segmento del Tallo Segmento del Tallo (Cenbank No.) Señal Largo N-Terminal Largo C-Terminal Dominio HA2 de HAl de HA1 Hl l MEKTL DE1CIGYLSNN APRYAFEIVSV GLFGAIAGFIEGGWP LFAAIF STD VDTIIEN GNG LFRSEL GLINGWYGFQHRDE (D90306) LCVKA NVTVTSSVEL NIESCSTKCQT EGTG1AADKESTQ VETEHTGSFCS E1GG1NTN SF AIDQITS VNNIVDR [SEQ ID TNG QPISLGD HNVHR TIGD MNTNFESVQHEFSEI NO:28] CSFAGW1LGN CPKYVNVKSL EERJNQLSKHVDDS PMCDELIGKTS KLATGPRNVP VVDIWSY AQLLVL WSYIVE PNPT A1ASR LENE TLDLHDSNV NGIC RNLHEKVRRMLKD NAKDEGNGCFTFYH [SEQ ID [SEQ ID CDN CIERVRNGT NO:424] NO:440] YDH EFEEESKINR QEIEGVKXDSSGNV YKILS1YSCIASSLVL AAL1MGFMFWACS NGSCRCTICI [SEQ ID NO:76] H12 MEKFII DKJC1GYQTNN APEYGHLITG GLFGAIAGFIEGGWP LSTVL STETVNTLSEQ SHGRILKNN GLVAGWYGFQHQN (D90307) AASFA NVPVTQVEEL LPMGQCVTEC AEGTG1AADRDSTQ Y VHRGTDPILCG QLNEGVMNTS RAIDNMQNKLNNVI TELGSPLVLDD PFQNTS HYI DKMN QFEVVNHE [SEQ ID CSLEGL1LGNP GKCPKY1PSGS FSEVESRINM1NSKJ NO:29] KCDLYLNGRE LKLAIGLRNVP DDQITD1WAY AEL WSY1VERP E QVQDR LVLLENQKTLDEHD MEGVC ANVRNLHDRVRRV [SEQ ID LRENAIDTGDGCFE1 [SEQ ID NO:441] LHKCDNNCMDTIRN NO:425] GTYNH JEYEEESKI ERQ VNGV LEENS TYKJLS1YSSVASSL VLLLM1IGGF1FGCQ NGNVRCTFCI [SEQ ID NO:77] Subtipo de HA Péptido Segmento del Tallo Segmento del Tallo (Genbank No.) Señal Largo N-Terminal Largo C-Terminal Dominio HA2 de HA1 de HA1 H13 MALN DRICVGYLSTN APRYGYI1EEY GLFGAIAGFIEGGWP VIATL SSERVDTLLEN GKGRIFQSRIR GLINGWYGFQHQNE (D90308) TL1SVC GVPVTSSIDLIE MSRCNT CQT QGTGIAADKESTQK VHA TNHTGTYCSL SVGGINTNRTF AIDQITTKJNNIID M NGVSPVHLGD QNID .NALGD NGNYDSIRGEFNQV [SEQ ID CSFEGW1VGN CP YIKSGQLK E RI MLADRIDDA NO:30] PACTSNFG1 E LATGLRNVPAI VTDIWSYNAKLLVL WSYLÍEDPAAP SNR LENDKTLDMHDAN HGLC V NLHEQVRREL D [SEQ ID NAJDEGNGCFELLH [SEQ ID NO:442] CNDSCM ETIRNGT NO:426] YDHTEYAEES LKR QEIDG1KLKSEDNVY KALSIYSCIASSVVL VGL1LSFIMWACSSG NCRFNVCI [SEQ ID NO:78] H14 MIALIL Q1TNGTTGNPI1 APRGHY 1SKS GLFG Al AG FIENG W VALAL CLGHHAVENG T STVLKSDK QGLIDGWYGFRHQ (M35997) SHTAY TSV TLTDNH RIGSCTSPCLT N AEGTGT A A DL ST S VEVVSAKELV DKGSTQSD PF QAAIDQ1 GKLNRLI ETNHTDELCPS QNVSR1A1GNC E TNE YHQIE EF [SEQ ID PLKLVDGQDC P YV QGSLM EQVEGRIQDLE YV NO:31] ULINGALGSPG LATGMR PG EDTKJDLWSYNAEL CDRLQDTTWD QAK LVALENQHTIDVTD VF1ERPTAVDT SEMN LFERVRRQL C [SEQ ID RENAEDQGNGCFEI NO:443] FHQCDN CIESIRNG [SEQ ID TYDHNIYRDEAINN NO:427] RJKFNPVTLTMGY DI1LWISFSMSCFVF VALILGFVLWACQN GN1RCQICI [SEQ ID NO:79] Subtipo de HA Péptido Segmento del Tallo Segmento del Tallo (Genbank No.) Señal Largo N-Terminal Largo C -Terminal Dominio HA2 de HAl de HAl H15 MNTQI D JCLGHHAV APDRATFLRS GLFGAIAGFIENGW IVILVL ANGTKVNTLT NAPSGIEYNG EGLIDGWYGFRHQN (L43917) GLSMV ERGVEVVNAT KSLGIQSDAQI AQGQGTAADYKST S ETVEITGIDK.V DESCEGECFYS QAAIDQ1TG LNRLI CTKGftKAVDL GGT1NSPLPFQ EK N QFELIDNEFT [SEQ JD GSCGILGTÍIGP NIDSRAVGKC EVEQQ1GNVINWTR NO:32] PQCDLHLEF PRYV QSSLPL DSLTEÍWSYNAELL ADLIIERRNSS ALGM NVPEK VAMENQHT1DLADS DIC 1RTR EMN LYERVRRQL RENAEEDGTGCFEIF [SEQ ID [SEQ ID HRCDDQCMES1RNN NO:428] NO:444] TYNHTEYRQEALQN RIM1NPVKLSSGYKD VILWFSFGASCVML LA1AMGLJFMCV N GNLRCTTCl [SEQ ID NO:80] H16 MM1K D JCIGYLSNN APRYGYI1E Y GLFGAIAGFIEGGWP VLYFLI SSDTVDTLTEN GTGRIFQSGVR GLINGWYGFQHQNE (EU293865) IVLGR GVPVTSSVDL MARCNTKCQT QGTGIAADKASTQ YSKA VETNHTGTYC SLGGINTNKTF ATNE ITTKINNI I E .M SLNG1SP1HLG QNIERNALGD NGNYDSIRGEFNQV [SEQ ID DCSFEGWIVG CP Y1 SGQL EKJUNMLADRVDDA NO:33] NPSCATN1NIR LATGLRNVPSI VTD1WSYNAKLLVL EWSYLIEDPN GER LENDRTLDLHDANV APNKFC RNLHDQV RALK.S [SEQ ID NA1DEGDGCFNLLH [SEQ ID NO:445] CNDSCMETIRNGT NO:429] YNHEDYREESQL R QEIEGI LKTEDNVY VLSIYSCIASS1VLV GLILAF1MWACSNG SCRFNVCI [SEQ ID NO:81 ] La Tabla 7A, debajo, identifica los segmentos del tallo largo N-terminal de HA1 y los segmentos del tallo largo C- terminal de HA1 útiles para los polipéptidos y métodos aquí descritos .

TABLA 7A. Secuencias Ejemplares del Dominio del Tallo Largo la Hemaglutinina de la Influenza A En ciertas modalidades, los polipéptidos del dominio del tallo largo de la hemaglut inina de la influenza comprenden uno o más epitopos inmunogénicos en la estructura terciaria o cuaternaria de un polipéptido del dominio del tallo largo de la hemaglut inina de la influenza.

En ciertas modalidades, el segmento del tallo largo N-terminal de HA1 comprende la secuencia de aminoácidos A17-A18-(Xaa)n-A38 (SEQ ID NO: 146), en donde A17 es Y o H; Ais es H, L, o Q; (Xaa)n representa una secuencia de 18-20 residuos de aminoácidos; y A38 es H, S, Q, T o N.

En ciertas modalidades, el segmento del tallo largo C-terminal de HA1 comprende la secuencia de aminoácidos A291- 292 (SEQ ID NO: 147), en donde A29i es T, S, N, D, P o K; y A292 es L, M, K o R.

En ciertas modalidades, el dominio HA2 comprende la secuencia de aminoácidos 18-Ai9-A2o-A2i (SEQ ID NO:148), en donde Ais es V o I; Aig es D, N o A; A2o es G, y A2i es W.

En ciertas modalidades, el dominio HA2 comprende la secuencia de aminoácidos ?38 -?39-?4 ?-?4 ?-?42-?43-?44-?45-?4d-?47 -?48-A49-A50-A5i-A52-A53-A54-A55-A56 (SEQ ID NO: 149), en donde A38 es K, Q, R, : L o Y; A39 es cualquier residuo de aminoácido; A40 es cualquier residuo de aminoácido; A41 es T; A42 es Q; A43 es cualquier residuo de aminoácido; A44 es A; A45 es I; A46 es D; A47 es cualquier residuo de aminoácido ; A48 es I, V o M; A49 es T, Q o N; A50 es cualquier residuo de aminoácido; A5i es K; A52 es V o L; A53 es N; A54 es cualquier residuo de aminoácido; A55 es V, I o L; y A56 es V o I.

En ciertas modalidades, los polipéptidos del dominio del tallo de la influenza comprenden dos secuencias de aminoácidos seleccionadas a partir de las SEQ ID NOS: 146-149. En ciertas modalidades, los polipéptidos del dominio del tallo de la influenza comprenden tres secuencias de aminoácidos seleccionadas a partir de las SEQ ID NOS: 146-149. En ciertas modalidades, los polipéptidos del dominio del tallo de la influenza comprenden cuatro secuencias de aminoácidos seleccionadas a partir de las SEQ ID NOS: 146-149.

Como se ilustra en las FIGURAS 1 y 2, los segmentos del tallo largo N-terminal de HA1 comparten la identidad de secuencia entre la influenza A y la influenza B y adicionalmente a través de los subtipos de la influenza A. De modo semejante, los segmentos del tallo largo C-terminal de HA1 también comparten la identidad de secuencia entre la influenza A y la influenza B y adicionalmente a través de los subtipos de la influenza A. Adicionalmente, los dominios HA2 también comparten la identidad de secuencia entre la influenza A y la influenza B y adicionalmente a través de los subtipos de la influenza A.

En algunas modalidades, el polipéptido del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza es un polipéptido híbrido que comprende o consiste esencialmente de segmentos y/o dominios de una pluralidad de subtipos o cepas de influenza. Por ejemplo, un polipéptido del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza puede comprender segmentos del tallo largo C-terminal de HA1 y N-terminal de HA1 de diferentes subtipos de HA del virus de influenza A. En algunas modalidades, el segmento del tallo largo N-terminal de HA1 es del virus de influenza A mientras que el segmento del tallo largo C-terminal de HA1 es del virus de influenza B. De modo semejante, el HA2 también puede ser del virus de influenza A mientras que el segmento del tallo largo C-terminal y/o N-terminal de HA1 es del virus de influenza B.

Se entenderá que cualquier combinación de los elementos de secuencias listados en las Tablas 2-4, 6, 6a o las variantes de los mismos se puede utilizar para formar los polipéptidos del dominio del tallo largo de la hemaglutinina HA de la presente invención.

En un polipéptido del dominio del tallo de la influenza aquí provisto, un enlazador conecta de manera covalente el segmento del tallo largo N-terminal de HA1 al segmento del tallo largo C-terminal de HA1. El enlazador puede ser cualquier enlazador estimado adecuado por uno de habilidad en el arte incluyendo, pero no limitado a, aquellos enlazadores aquí descritos.

En ciertas modalidades, los polipéptidos del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza son capaces de formar una estructura tridimensional que es similar a la estructura tridimensional del dominio del tallo de una hemaglutinina de la influenza nativa. La similitud estructural se puede evaluar con base en cualquier técnica estimada adecuada por aquellos de habilidad en el arte incluyendo, pero no limitado a, aquellas técnicas aquí descritas.

En ciertas modalidades, cualquier polipéptido del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza aquí provisto adicionalmente puede comprender uno o más dominios del polipéptido estimados adecuados por aquellos de habilidad en el arte. Los dominios del polipéptido útiles incluyen los dominios que facilitan la purificación, el plegamiento y la escisión de porciones de un polipéptido. Por ejemplo, una etiqueta His (His-His-His-His-His-His, SEQ ID NO:166), el epítopo FLAG u otra etiqueta de purificación puede facilitar la purificación de un polipéptido aquí provisto. Un promotor del plegamiento o dominio de trimeri zación de la fibritina del bacteriófago T4 puede facilitar la trimeri zación de los polipéptidos aquí provistos. El dominio del promotor del plegamiento pueden tener cualquier secuencia del promotor del plegamiento conocida por aquellos de habilidad en el arte (véase, por ejemplo, Papanikolopoulou et al., 2004, J. Biol.

Chem. 279 (10) : 8991-8998, el contenido del cual se incorpora por este medio por referencia en su totalidad) . Ejemplos incluyen GSGYI PEAPRDGQAYVRKDGEWVLLSTFL (SEQ ID NO: 167) . Un dominio del promotor del plegamiento puede ser útil para facilitar la trimerización de los polipéptidos solubles aquí provistos. Los sitios de escisión se pueden utilizar para facilitar la escisión de una porción de un polipéptido, por ejemplo la escisión de una etiqueta de purificación o un dominio del promotor del plegamiento o ambos. Los sitios de escisión útiles incluyen un sitio de escisión de trombina, por ejemplo uno con la secuencia LVPRGSP (SEQ ID NO:168) .

En ciertas modalidades, se proporcionan polipéptidos del dominio del tallo largo de la hemaglut inina de la influenza que comprenden un sitio de escisión de elastasa como aqui se describe. En modalidades particulares, se proporcionan aqui polipéptidos del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza que comprenden cualquiera de las SEQ ID NOS: 430-445 en donde el residuo de aminoácido C-terminal, por ejemplo la arginina o la lisina, de SEQ ID NOS: 430-445 se sustituye con un residuo de valina.

En ciertas modalidades, se proporcionan aqui polipéptidos del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza que se predice son resistentes a la escisión de la proteasa en la unión entre HA1 y HA2. Aquellos de habilidad en el arte deberían reconocer que la secuencia Arg-Gly que se extiende a lo largo de HA1 y HA2 es un sitio de reconocimiento para tripsina y típicamente se escinde para la activación de la hemaglutinina. Debido a que los polipéptidos del dominio del tallo aquí descritos no necesitan activarse, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza que se predice son resistentes a la escisión de la proteasa. En ciertas modalidades, se proporciona cualquier polipéptido del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza aquí descrito en donde el sitio de la proteasa que se extiende a lo largo de HA1 y HA2 es mutado a una secuencia que es resistente a la escisión de la proteasa. En ciertas modalidades, se proporciona cualquier polipéptido del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza aquí descrito en donde el residuo C-terminal del segmento del tallo largo C-terminal de HA1 es cualquier residuo aparte de Lys o Arg . En ciertas modalidades, se proporciona cualquier polipéptido del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza aquí descrito en donde el residuo N-terminal del dominio HA2 es prolina. En ciertas modalidades, se proporciona cualquier polipéptido del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza aquí descrito en donde el residuo C-terminal del segmento del tallo largo C-terminal de HA1 es Ala y el residuo N-terminal del dominio HA2 también es Ala. En ciertas modalidades, se proporciona cualquier polipéptido del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza aquí descrito en donde el residuo N-terminal del dominio HA2 es cualquier residuo aparte de glicina.

En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza que consisten de un segmento del tallo largo N-terminal de HAl enlazado de manera covalente a un enlazador, a su vez enlazado de manera covalente a un segmento del tallo largo C-terminal de HAl en asociación de enlace con un dominio del tallo de HA2. En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza que consisten de un segmento del tallo largo N-terminal de HAl enlazado de manera covalente a un enlazador, a su vez enlazado de manera covalente a un segmento del tallo largo C-terminal de HAl, a su vez enlazado de manera covalente a un dominio del tallo de HA2. En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza que consisten de un péptido señal enlazado de manera covalente a un segmento del tallo largo N-terminal de HAl enlazado de manera covalente a un enlazador, a su vez enlazado de manera covalente a un segmento del tallo largo C-terminal de HAl, a su vez enlazado de manera covalente a un dominio del tallo de HA2.

En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza que consisten de un segmento del tallo largo N-terminal de HAl enlazado de manera covalente a un enlazador, a su vez enlazado de manera covalente a un segmento del tallo largo C-terminal de HAl en asociación de enlace con un dominio del tallo de HA2 que se conecta de manera covalente a un dominio luminal de HA2. En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza que consisten de un segmento del tallo largo N-terminal de HAl enlazado de manera covalente a un enlazador, a su vez enlazado de manera covalente a un segmento del tallo largo C-terminal de HAl, a su vez enlazado de manera covalente a un dominio del tallo de HA2 que se enlaza de manera covalente a un dominio luminal de HA2. En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza que consisten de un péptido señal enlazado de manera covalente a un segmento del tallo largo N-terminal de HAl enlazado de manera covalente a un enlazador, a su vez enlazado de manera covalente a un segmento del tallo largo C-terminal de HAl, a su vez enlazado de manera covalente a un dominio del tallo de HA2 que se enlaza de manera covalente a un dominio luminal de HA2.

En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza que consisten de un segmento del tallo largo N-terminal de HAl enlazado de manera covalente a un enlazador, a su vez enlazado de manera covalente a un segmento del tallo largo C-terminal de HAl en asociación de enlace con un dominio del tallo de HA2 que se conecta de manera covalente a, en secuencia, un sitio de escisión de trombina, un dominio del promotor del plegamiento y una etiqueta His. En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza que consisten de un segmento del tallo largo N-terminal de HAl enlazado de manera covalente a un enlazador, a su vez enlazado de manera covalente a un segmento del tallo largo C-terminal de HAl, a su vez enlazado de manera covalente a un dominio del tallo de HA2 que se enlaza de manera covalente a, en secuencia, un sitio de escisión de trombina, un dominio del promotor del plegamiento y una etiqueta His. En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza que consisten de un péptido señal enlazado de manera covalente a un segmento del tallo largo N-terminal de HAl enlazado de manera covalente a un enlazador, a su vez enlazado de manera covalente a un segmento del tallo largo C-terminal de HAl, a su vez enlazado de manera covalente a un dominio del tallo de HA2 que se enlaza de manera covalente a, en secuencia, un sitio de escisión de trombina, un dominio del promotor del plegamiento y una etiqueta His.

En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza que consisten de un segmento del tallo largo N-terminal de HAl enlazado de manera covalente a un enlazador, a su vez enlazado de manera covalente a un segmento del tallo largo C-terminal de HAl en asociación de enlace con un dominio del tallo de HA2 que se conecta de manera covalente a un dominio luminal de HA2 que se enlaza de manera covalente a, en secuencia, un sitio de escisión de trombina, un dominio del promotor del plegamiento y una etiqueta His. En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza que consisten de un segmento del tallo largo N-terminal de HAl enlazado de manera covalente a un enlazador, a su vez enlazado de manera covalente a un segmento del tallo largo C-terminal de HAl, a su vez enlazado de manera covalente a un dominio del tallo de HA2 que se enlaza de manera covalente a un dominio luminal de HA2 que se conecta de manera covalente a, en secuencia, un sitio de escisión de trombina, un dominio del promotor del plegamiento y una etiqueta His. En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza que consisten de un péptido señal enlazado de manera covalente a un segmento del tallo largo N-terminal de HAl enlazado de manera covalente a un enlazador, a su vez enlazado de manera covalente a un segmento del tallo largo C-terminal de HAl, a su vez enlazado de manera covalente a un dominio del tallo de HA2 que se enlaza de manera covalente a un dominio luminal de HA2 que se conecta de manera covalente a, en secuencia, un sitio de escisión de trombina, un dominio del promotor del plegamiento y una etiqueta His.

En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza que consisten de un segmento del tallo largo N-terminal de HAl enlazado de manera covalente a un enlazador, a su vez enlazado de manera covalente a un segmento del tallo largo C-terminal de HAl en asociación de enlace con un dominio del tallo de HA2 que se conecta de manera covalente a un dominio luminal de HA2 que está a su vez enlazado de manera covalente a un dominio transmembrana de HA2. En ciertas modalidades, se proporcionan aqui polipéptidos del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza que consisten de un segmento del tallo largo N-terminal de HAl enlazado de manera covalente a un enlazador, a su vez enlazado de manera covalente a un segmento del tallo largo C-terminal de HAl, a su vez enlazado de manera covalente a un dominio del tallo de HA2 que se enlaza de manera covalente a un dominio luminal de HA2 que está a su vez enlazado de manera covalente a un dominio transmembrana de HA2. En ciertas modalidades, se proporcionan aqui polipéptidos del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza que consisten de un péptido señal enlazado de manera covalente a un segmento del tallo largo N-terminal de HAl enlazado de manera covalente a un enlazador, a su vez enlazado de manera covalente a un segmento del tallo largo C-terminal de HAl, a su vez enlazado de manera covalente a un dominio del tallo de HA2 que se enlaza de manera covalente a un dominio luminal de HA2 que está a su vez enlazado de manera covalente a un dominio transmembrana de HA2.

En ciertas modalidades, se proporcionan aqui polipéptidos del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza que consisten de un segmento del tallo largo N-terminal de HAl enlazado de manera covalente a un enlazador, a su vez enlazado de manera covalente a un segmento del tallo largo C-terminal de HAl en asociación de enlace con un dominio del tallo de HA2 que se conecta de manera covalente a un dominio luminal de HA2 que está a su vez enlazado de manera covalente a un dominio transmembrana de HA2 que está a su vez enlazado de manera covalente a un dominio citoplásmico de HA2. En ciertas modalidades, se proporcionan aqui polipéptidos del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza que consisten de un segmento del tallo largo N-terminal de HAl enlazado de manera covalente a un enlazador, a su vez enlazado de manera covalente a un segmento del tallo largo C-terminal de HAl, a su vez enlazado de manera covalente a un dominio del tallo de HA2 que se enlaza de manera covalente a un dominio luminal de HA2 que está a su vez enlazado de manera covalente a un dominio transmembrana de HA2 que está a su vez enlazado de manera covalente a un dominio citoplásmico de HA2. En ciertas modalidades, se proporcionan aquí polipéptidos del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza que consisten de un péptido señal enlazado de manera covalente a un segmento del tallo largo N-terminal de HA1 enlazado de manera covalente a un enlazador, a su vez enlazado de manera covalente a un segmento del tallo largo C-terminal de HA1, a su vez enlazado de manera covalente a un dominio del tallo de HA2 que se enlaza de manera covalente a un dominio luminal de HA2 que está a su vez enlazado de manera covalente a un dominio transmembrana de HA2 que está a su vez enlazado de manera covalente a un dominio citoplásmico de HA2.

En ciertas modalidades, se proporciona aquí un polipéptido del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza que tiene una secuencia seleccionada a partir del grupo que consiste de: (SEQ ID NO: 414) -LL- (SEQ ID NO:430)-(SEQ ID NO:66), (SEQ ID NO: 415) -LL- (SEQ ID NO:431)-(SEQ ID NO:67), ( SEQ ID NO: 16) -LL- (SEQ ID NO:432)-(SEQ ID NO:68), (SEQ ID NO: 417) -LL- (SEQ ID NO:433)-(SEQ ID NO:69), (SEQ ID NO: 418) -LL- (SEQ ID NO:434)-(SEQ ID NO:70), (SEQ ID NO: 419) -LL- (SEQ ID NO:435)-(SEQ ID N0:71), (SEQ ID NO: 420) -LL- (SEQ ID NO: 436) - (SEQ ID NO: 72) (SEQ ID NO: 421) -LL- (SEQ ID NO: 437) - (SEQ ID NO: 73) (SEQ ID NO: 422) -LL- (SEQ ID NO: 438) - (SEQ ID NO: 74) (SEQ ID NO: 423) -LL- (SEQ ID NO: 439) - (SEQ ID NO: 75) (SEQ ID NO: 424) -LL- (SEQ ID NO: 440) - (SEQ ID NO: 76) ( SEQ ID NO: 425) -LL- (SEQ ID NO: 441) - (SEQ ID NO: 77) (SEQ ID NO: 426) -LL- (SEQ ID NO: 442) - (SEQ ID NO: 78) (SEQ ID NO: 427) -LL- (SEQ ID NO: 443) - (SEQ ID NO: 79) (SEQ ID NO: 428) -LL- (SEQ ID NO: 444) - (SEQ ID NO: 80) (SEQ ID NO: 429) -LL- (SEQ ID NO: 445) - (SEQ ID NO: 81) en donde cada secuencia de arriba se enlaza a la secuencia adyacente como aquí se describe y en donde LL es un enlazador como aquí se describe. En particular, los segmentos del tallo largo C-terminal de HAl se pueden enlazar de manera covalente o de manera no covalente a los dominios HA2. En ciertas modalidades, LL se selecciona a partir del grupo que consiste de un enlace directo, Gly, Gly-Gly, Gly-Gly-Gly, Gly-Gly-Gly-Gly, (Gly)n (en donde n es cualquier número de residuos de Glicina en tanto haya flexibilidad en el enlazador peptidico; en ciertas modalidades, n es 2, 3, 4, 5, 6, o 7 residuos de Glicina), Gly-Pro, ITPNGSI PNDKPFQNVNKITYGA (SEQ ID NO: 165) y Asn-Ala-Ser .

En ciertas modalidades, se proporciona aquí un polipéptido del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza que tiene una secuencia seleccionada a partir del grupo que consiste de: (SEQ ID NO: 414) -LL- (SEQ ID NO: 430) - (SEQ ID NO: 82) (SEQ ID NO: 415) -LL- (SEQ ID NO: 431) - (SEQ ID NO: 83) (SEQ ID NO: 416) -LL- (SEQ ID NO: 432) - (SEQ ID NO: 84) (SEQ ID NO: 417) -LL- (SEQ ID NO: 433) - (SEQ ID NO: 85) (SEQ ID NO: 418) -LL- (SEQ ID NO: 434) - (SEQ ID NO: 86) (SEQ ID NO: 419) -LL- (SEQ ID NO: 435) - (SEQ ID NO: 87) (SEQ ID NO: 420) -LL- (SEQ ID NO: 436) - (SEQ ID NO: 88) (SEQ ID NO: 421) -LL- (SEQ ID NO: 437) - (SEQ ID NO: 89) (SEQ ID NO: 422) -LL- (SEQ ID NO: 438) - (SEQ ID NO: 90) (SEQ ID NO: 423) -LL- (SEQ ID NO: 439) - (SEQ ID NO: 91) (SEQ ID NO: 424) -LL- (SEQ ID NO: 440) - (SEQ ID NO: 92) (SEQ ID NO: 425) -LL- (SEQ ID NO: 441) - (SEQ ID NO: 93) (SEQ ID NO: 426) -LL- (SEQ ID NO: 442) - (SEQ ID NO: 94) (SEQ ID NO: 427) -LL- (SEQ ID NO: 443) - (SEQ ID NO: 95) (SEQ ID NO: 428) -LL- (SEQ ID NO: 444 )- (SEQ ID NO: 96) (SEQ ID NO: 429) -LL- (SEQ ID NO: 445) - (SEQ ID NO: 97) en donde cada secuencia de arriba se enlaza a la secuencia adyacente como aquí se describe y en donde LL es un enlazador como aquí se describe. En particular, los segmentos del tallo largo C-terminal de HA1 se pueden enlazar de manera covalente o de manera no covalente a los dominios HA2. En ciertas modalidades, LL se selecciona a partir del grupo que consiste de un enlace directo, Gly, Gly-Gly, Gly-Gly-Gly, Gly-Gly-Gly-Gly, (Gly)n, Gly-Pro, ITPNGSIPNDKPFQNVNKITYGA (SEQ ID NO: 165) y Asn-Ala-Ser.

En ciertas modalidades, se proporciona aquí un polipéptido del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza que tiene una secuencia seleccionada a partir del grupo que consiste de: (SEQ ID NO: 414) -LL- (SEQ ID NO: 430) - (SEQ ID NO: 82) - (SEQ ID NO: 98) , (SEQ ID NO: 415) -LL- (SEQ ID NO: 431) - (SEQ ID NO: 83) - (SEQ ID NO: 99) , (SEQ ID NO: 416) -LL- (SEQ ID NO: 432) - (SEQ ID NO: 84) - (SEQ ID NO: 100) , (SEQ ID NO: 417) -LL- (SEQ ID NO: 433) - (SEQ ID NO: 85) - (SEQ ID NO: 101) , (SEQ ID NO: 418) -LL- (SEQ ID NO: 434) - (SEQ ID NO: 86) - (SEQ ID NO: 102) , (SEQ ID NO: 419) -LL- (SEQ ID NO: 435) - (SEQ ID NO: 87) - (SEQ ID NO: 103) , (SEQ ID NO: 420) -LL- (SEQ ID NO: 436) - (SEQ ID NO: 88) - (SEQ ID NO: 104) , (SEQ ID NO: 421) -LL- (SEQ ID NO: 437) - (SEQ ID NO: 89) - (SEQ ID NO: 105) , (SEQ ID NO: 422) -LL- (SEQ ID NO: 438) - (SEQ ID NO: 90) - (SEQ ID NO: 106) , ( SEQ ID NO: 423) -LL- (SEQ ID NO: 439) - (SEQ ID NO: 91) - (SEQ ID NO: 107) , (SEQ ID NO: 424) -LL- (SEQ ID NO:440)-(SEQ ID NO:92)-(SEQ ID NO: 108) , (SEQ ID NO: 425) -LL- (SEQ ID NO:441)-(SEQ ID NO:93)-(SEQ ID NO: 109) , (SEQ ID NO: 426) -LL- (SEQ ID NO:442)-(SEQ ID NO:94)-(SEQ ID NO: 110) , (SEQ ID NO: 427) -LL- (SEQ ID NO:443)-(SEQ ID NO:95)-(SEQ ID NO: 111) , (SEQ ID NO: 428) -LL- (SEQ ID NO:444)-(SEQ ID NO:96)-(SEQ ID NO: 112) , y (SEQ ID NO: 429) -LL- (SEQ ID NO:445)-(SEQ ID NO:97)-(SEQ ID NO: 113) , en donde cada secuencia de arriba se enlaza a la secuencia adyacente como aquí se describe y en donde LL es un enlazador como aquí se describe. En particular, los segmentos del tallo largo C-terminal de HA1 se pueden enlazar de manera covalente o de manera no covalente a los dominios HA2. En ciertas modalidades, LL se selecciona a partir del grupo que consiste de un enlace directo, Gly, Gly-Gly, Gly-Gly-Gly, Gly-Gly-Gly-Gly, (Gly)n, Gly-Pro, ITPNGSIPNDKPFQNVNKITYGA (SEQ ID NO: 165) y Asn-Ala-Ser.

En ciertas modalidades, se proporciona aquí un polipéptido del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza que tiene una secuencia seleccionada a partir del grupo que consiste de: ( SEQ ID NO: 414) -LL-(SEQ ID NO: 430) - (SEQ ID NO:82)-(SEQ ID O: 168) - (SEQ ID NO: 167) - (SEQ ID NO: 166) , (SEQ ID NO: 415) -LL-(SEQ ID NO: 431) - (SEQ ID NO:83)-(SEQ ID O: 168) - (SEQ ID NO: 167) - (SEQ ID NO: 166) , (SEQ ID NO: 416) -LL-(SEQ ID NO: 432) - (SEQ ID NO:84)-(SEQ ID O: 168) - (SEQ ID NO: 167 ) - (SEQ ID NO: 166) , (SEQ ID NO: 417) -LL-(SEQ ID NO: 433) - (SEQ ID NO:85)-(SEQ ID O: 168 ) - (SEQ ID NO: 167) - (SEQ ID NO: 166) , (SEQ ID NO: 418) -LL-(SEQ ID NO: 434) - (SEQ ID NO:86)-(SEQ ID O: 168) - (SEQ ID NO: 167) - (SEQ ID NO: 166) , (SEQ ID NO: 419) -LL-(SEQ ID NO: 35) - (SEQ ID NO:87)-(SEQ ID O: 168) - (SEQ ID NO: 167) - (SEQ ID NO: 166) , (SEQ ID NO: 420) -LL-(SEQ ID NO: 36) - (SEQ ID NO:88)-(SEQ ID O: 168) - (SEQ ID NO: 167 ) - (SEQ ID NO: 166) , (SEQ ID NO: 421) -LL-(SEQ ID NO: 37 ) - (SEQ ID NO:89)-(SEQ ID O: 168) - (SEQ ID NO: 167 ) - (SEQ ID NO: 166) , (SEQ ID NO: 422) -LL-(SEQ ID NO: 438) - (SEQ ID NO:90)-(SEQ ID O: 168) - (SEQ ID NO: 167) - (SEQ ID NO: 166) , (SEQ ID NO: 423) -LL-(SEQ ID NO: 39) - (SEQ ID NO:91)-(SEQ ID O: 168) - (SEQ ID NO: 167) - (SEQ ID NO: 166) , (SEQ ID NO: 424) -LL-(SEQ ID NO: 440) - (SEQ ID NO:92)-(SEQ ID O: 168) - (SEQ ID NO: 167) - (SEQ ID NO: 166) , (SEQ ID NO: 425) -LL-(SEQ ID NO: 441) - (SEQ ID NO:93)-(SEQ ID O: 168) - (SEQ ID NO: 167) - (SEQ ID NO: 166) , (SEQ ID NO: 426) -LL-(SEQ ID NO: 442) - (SEQ ID NO:94)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO:166), (SEQ ID NO: 427) -LL- (SEQ ID NO:443)-(SEQ ID NO:95)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO:166), (SEQ ID NO: 428 ) -LL- (SEQ ID NO:444)-(SEQ ID NO:96)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO:166), y (SEQ ID NO: 29) -LL- (SEQ ID NO:445)-(SEQ ID NO:97)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO:166), en donde cada secuencia de arriba se enlaza a la secuencia adyacente como aquí se describe y en donde LL es un enlazador como aquí se describe. En particular, los segmentos del tallo largo C-terminal de HA1 se pueden enlazar de manera covalente o de manera no covalente a los dominios HA2. En ciertas modalidades, LL se selecciona a partir del grupo que consiste de un enlace directo, Gly, Gly-Gly, Gly-Gly-Gly, Gly-Gly-Gly-Gly, (Gly)n, Gly-Pro, ITPNGSIPNDKPFQNVNKITYGA (SEQ ID NO: 165) y Asn-Ala-Ser.

En ciertas modalidades, se proporciona aquí un polipéptido del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza que tiene una secuencia seleccionada a partir del grupo que consiste de: (SEQ ID NO: 414) -LL- (SEQ ID NO:430)-(SEQ ID NO:82)-(SEQ ID NO:98)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO:166), (SEQ ID NO: 415) -LL- (SEQ ID NO:431)-(SEQ ID NO:83)-(SEQ ID NO:99)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO: 166) , (SEQ ID NO: 416) -LL- (SEQ ID NO:432)-(SEQ ID NO:84)-(SEQ ID O: 100) - (SEQ ID NO: 168) - (SEQ ID NO: 167) - (SEQ ID NO: 166) (SEQ ID NO: 417)-LL-(SEQ ID NO:433)-(SEQ ID NO: 85) - (SEQ ID O: 101) - (SEQ ID NO:168) - (SEQ ID NO: 167) - (SEQ ID NO: 166) (SEQ ID NO: 418)-LL-(SEQ ID NO:434)-(SEQ ID NO: 86) - (SEQ ID O: 102) - (SEQ ID NO: 168) - (SEQ ID NO: 167 ) - (SEQ ID NO: 166) (SEQ ID NO: 419)-LL-(SEQ ID NO:435)-(SEQ ID NO: 87) - SEQ ID O: 103) - (SEQ ID NO: 168) - (SEQ ID NO: 167) - (SEQ ID NO: 166) (SEQ ID NO: 420) -LL- (SEQ ID NO:436)-(SEQ ID NO: 88) - ( SEQ ID O: 104 ) - (SEQ ID NO: 168) - (SEQ ID NO: 167) - (SEQ ID NO: 166) (SEQ ID NO: 421)-LL-(SEQ ID NO:437)-(SEQ ID NO: 89) - (SEQ ID O: 105) - (SEQ ID NO: 168) - (SEQ ID NO: 167 ) - (SEQ ID NO: 166) (SEQ ID NO: 422)-LL-(SEQ ID NO: 438) -(SEQ ID NO: 90) - (SEQ ID O: 106) - (SEQ ID NO: 168 ) - (SEQ ID NO: 167) - (SEQ ID NO: 166) (SEQ ID NO: 423) -LL- (SEQ ID NO:439)-(SEQ ID NO: 91)- (SEQ ID O: 107) - (SEQ ID NO: 168) - (SEQ ID NO: 167) - (SEQ ID NO: 166) (SEQ ID NO: 424)-LL-(SEQ ID NO:440)-(SEQ ID NO: 92) - ( SEQ ID O: 108) - (SEQ ID NO: 168) - (SEQ ID NO: 167) - (SEQ ID NO: 166) (SEQ ID NO: 425) -LL- (SEQ ID NO:441)-(SEQ ID NO: 93) - ( SEQ ID O: 109) - (SEQ ID NO: 168) - (SEQ ID NO: 167) - (SEQ ID NO: 166) (SEQ ID NO: 426) -LL- (SEQ ID NO: 442) -(SEQ ID NO: 94) - (SEQ ID O: 110) - (SEQ ID NO: 168) - (SEQ ID NO: 167) - (SEQ ID NO 166) (SEQ ID NO: 427)-LL-(SEQ ID NO:443)-(SEQ ID NO: 95)- (SEQ ID O: 111) - (SEQ ID NO: 168) - (SEQ ID NO: 167 ) - (SEQ ID NO: 166) (SEQ ID NO: 428) -LL- (SEQ ID NO:444)-(SEQ ID NO: 96) - (SEQ ID O: 112) - (SEQ ID NO: 168) - (SEQ ID NO: 167) - (SEQ ID NO 166) , y ( SEQ ID NO: 429) -LL- (SEQ ID NO:445)-(SEQ ID NO:97)-(SEQ ID NO:113)-(SEQ ID NO:168)-(SEQ ID NO:167)-(SEQ ID NO: 166), en donde cada secuencia de arriba se enlaza a la secuencia adyacente como aquí se describe y en donde LL es un enlazador como aquí se describe. En particular, los segmentos del tallo largo C-terminal de HA1 se pueden enlazar de manera covalente o de manera no covalente a los dominios HA2. En ciertas modalidades, LL se selecciona a partir del grupo que consiste de un enlace directo, Gly, Gly-Gly, Gly-Gly-Gly, Gly-Gly-Gly-Gly, (Gly)n, Gly-Pro, ITPNGSIPNDKPFQNVNKITYGA (SEQ ID NO: 165) y Asn-Ala-Ser.

En ciertas modalidades, se proporciona aquí un polipéptido del dominio del tallo largo de la hemaglutinina de la influenza que tiene una secuencia seleccionada a partir del grupo que consiste de: (SEQ ID NO: 446) -LL- ( SEQ ID NO: 494) - (SEQ ID NO: 66) , (SEQ ID NO: 447) -LL- (SEQ ID NO: 495) - (SEQ ID NO: 66) , (SEQ ID NO: 448) -LL- (SEQ ID NO: 496) - (SEQ ID NO: 66) , (SEQ ID NO: 449) -LL- (SEQ ID NO: 497) - (SEQ ID NO: 67) , (SEQ ID NO: 450) -LL- (SEQ ID NO: 498) - (SEQ ID NO: 67) , (SEQ ID NO: 451) -LL- (SEQ ID NO: 499) - (SEQ ID NO: 67) , (SEQ ID NO: 452) -LL- (SEQ ID NO: 500) - (SEQ ID NO: 68) , (SEQ ID NO: 453) -LL- (SEQ ID NO: 501) - (SEQ ID NO: 68) , (SEQ ID NO: 454) -LL- (SEQ ID NO: 502) - (SEQ ID NO: 68) , (SEQ ID NO: 455) -LL- (SEQ ID NO: 503) - (SEQ ID NO: 69) , (SEQ ID NO: 56 -LL- SEQ ID NO: 504 (SEQ ID NO: 69 (SEQ ID NO: 457 -LL- SEQ ID NO:505 (SEQ ID NO: 69 (SEQ ID NO: 458 -LL- SEQ ID NO: 506 (SEQ ID NO : 70 (SEQ ID NO: 459 -LL- SEQ ID NO: 507 (SEQ ID NO: 70 (SEQ ID NO: 460 ¦LL- SEQ ID NO:508 (SEQ ID NO: 70 (SEQ ID NO: 461 ¦LL- SEQ ID NO: 509 (SEQ ID NO: 71 (SEQ ID NO: 462 -LL- SEQ ID NO: 510 (SEQ ID NO: 71 (SEQ ID NO: 63 -LL- SEQ ID NO: 511 (SEQ ID NO: 71 (SEQ ID NO: 64 -LL- SEQ ID NO: 512 (SEQ ID NO: 72 (SEQ ID NO: 465 ¦LL- SEQ ID NO: 513 (SEQ ID NO: 72 (SEQ ID NO: 466 -LL- SEQ ID NO:514 (SEQ ID NO: 72 (SEQ ID NO: 467 -LL- SEQ ID NO: 515 (SEQ ID NO: 73 (SEQ ID NO: 468 -LL- SEQ ID NO: 516 (SEQ ID NO: 73 ( SEQ ID NO: 469 -LL- SEQ ID NO: 517 (SEQ ID NO: 73 (SEQ ID NO: 70 -LL- SEQ ID NO: 518 (SEQ ID NO: 74 (SEQ ID NO: 71 -LL- SEQ ID NO:519 (SEQ ID NO: 74 (SEQ ID NO: 472 -LL- SEQ ID NO:520 (SEQ ID NO: 74 ( SEQ ID NO: 73 -LL- SEQ ID NO: 521 (SEQ ID NO: 75 (SEQ ID NO: 74 -LL- SEQ ID NO:522 (SEQ ID NO: 75 (SEQ ID NO: 75 -LL- SEQ ID NO: 523 (SEQ ID NO: 75 (SEQ ID NO: 76 -LL- SEQ ID NO:524 (SEQ ID NO: 76) (SEQ ID NO: 477 -LL- SEQ ID NO: 525 (SEQ ID NO: 76; (SEQ ID NO: 478 -LL- SEQ ID NO: 526 (SEQ ID NO: 76; (SEQ ID NO: 479 -LL- SEQ ID NO:527 (SEQ ID NO: 77 (SEQ ID NO: 480 -LL- SEQ ID NO:528 (SEQ ID NO: 77 (SEQ ID NO: 481) -LL- (SEQ ID NO: 529) - (SEQ ID NO: 77) (SEQ ID NO: 482) -LL- (SEQ ID NO: 530) - (SEQ ID NO: 78) (SEQ ID NO: 483) -LL- (SEQ ID NO: 531) - (SEQ ID NO: 78) (SEQ ID NO: 484) -LL- (SEQ ID NO: 532) - (SEQ ID NO: 78) (SEQ ID NO: 485) -LL- (SEQ ID NO: 533) - (SEQ ID NO: 79) (SEQ ID NO: 486) -LL- (SEQ ID NO: 534) - (SEQ ID NO: 79) (SEQ ID NO: 487) -LL- (SEQ ID NO: 535) - (SEQ ID NO: 79) (SEQ ID NO: 488) -LL- (SEQ ID NO: 536) - (SEQ ID NO: 80) (SEQ ID NO: 489) -LL- (SEQ ID NO: 537) - (SEQ ID NO: 80) (SEQ ID NO: 490) -LL- (SEQ ID NO: 538) - (SEQ ID NO: 80) (SEQ ID NO: 491) -LL- (SEQ ID NO: 539) - (SEQ ID NO: 81) (SEQ ID NO: 492) -LL- (SEQ ID NO: 540) - (SEQ ID NO: 81) ( SEQ ID NO: 493) -LL- (SEQ ID NO: 541) - (SEQ ID NO: 81) en donde cada secuencia de arriba se enlaza a la secuencia adyacente como aquí se describe y en donde LL es un enlazador como aquí se describe. En particular, los segmentos del tallo largo C-terminal de RAI se pueden enlazar de manera covalente o de manera no covalente a los dominios HA2. En ciertas modalidades, LL se selecciona a partir del grupo que consiste de un enlace directo, Gly, Gly-Gly, Gly-Gly-Gly, Gly-Gly-Gly-Gly, (Gly)n, Gly-Pro, ITPNGSIPNDKPFQNVNKITYGA (SEQ ID NO: 165) y Asn-Ala-Ser. 5.2 ÁCIDOS NUCLEICOS QUE CODIFICAN POLIPÉPTIDOS DEL DOMINIO DEL TALLO DE LA HEMAGLUTININA DE LA INFLUENZA Se proporcionan aquí ácidos nucleicos que codifican un polipéptido del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza. En una modalidad especifica, se proporciona aquí un ácido nucleico que codifica un polipéptido del dominio del tallo de la hemaglutinina del virus de influenza. En otra modalidad específica, se proporciona aquí un ácido nucleico que codifica un polipéptido del dominio del tallo corto de la hemaglutinina del virus de influenza. En otra modalidad específica, se proporciona aquí un ácido nucleico que codifica un polipéptido del dominio del tallo largo de la hemaglutinina del virus de influenza. Debido a la degeneración del código genético, aquí se comprende cualquier ácido nucleico que codifique un polipéptido del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza aquí descrito (incluyendo los polipéptidos del dominio del tallo corto de la hemaglutinina del virus de influenza y los polipéptidos del dominio del tallo largo de la hemaglutinina del virus de influenza) . En ciertas modalidades, los ácidos nucleicos correspondientes a los ácidos nucleicos del virus de influenza existentes de manera natural que codifican un segmento del tallo N-terminal de HA1, un segmento del tallo C-terminal de HA1, el dominio HA2, el dominio luminal, el dominio transmembrana, y/o el dominio citoplásmico se utilizan para producir un polipéptido del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza.

También se proporcionan aquí ácidos nucleicos capaces de hibridar a un ácido nucleico que codifica un polipéptido del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza (incluyendo los polipéptidos del dominio del tallo corto de la hemaglutinina del virus de influenza y los polipéptidos del dominio del tallo largo de la hemaglutinina del virus de influenza) . En ciertas modalidades, se proporcionan aquí ácidos nucleicos capaces de hibridar a un fragmento de un ácido nucleico que codifica un polipéptido del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza. En otras modalidades, se proporcionan aquí ácidos nucleicos capaces de hibridar a la longitud completa de un ácido nucleico que codifica un polipéptido del dominio del tallo de la hemaglutinina de la influenza. Los parámetros generales para las condiciones de hibridación para los ácidos nucleicos se describen en Sambrook et al., Molecular Cloning - A Laboratory Manual (2a Ed.), Vols. 1-3, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, Nueva York (1989), y en Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, vol. 2, Current Protocols Publishing, Nueva York (1994) . La hibridación se puede realizar bajo condiciones de alta severidad, condiciones de media severidad, o condiciones de baja severidad. Aquellos de habilidad en el arte entenderán que las condiciones de baja, media y alta severidad son dependientes de múltiples factores todos de los cuales interactúan y también- son dependientes de los ácidos nucleicos en cuestión. Por ejemplo, las condiciones de alta severidad pueden incluir temperaturas dentro de la temperatura de fusión de 5°C del ácido (s) nucleico (s), una baja concentración de sal (por ejemplo, menos de 250 m ) , y una alta concentración de co-solvente (por ejemplo, 1-20% de co-solvente, por ejemplo, DMSO) . Las condiciones de baja severidad, por otra parte, pueden incluir temperaturas de más de 10°C debajo de la temperatura de fusión del ácido (s) nucleico (s), una alta concentración de sal (por ejemplo, más de 1000 nM) y la ausencia de co-solventes .

En algunas modalidades, se aisla un ácido nucleico que codifica un polipéptido del dominio del tallo de la hemaglutinina del virus de influenza. En ciertas modalidades, un ácido nucleico "aislado" se refiere a una molécula de ácido nucleico que se separa de otras moléculas de ácido nucleico que están presentes en la fuente natural del ácido nucleico. En otras palabras, el ácido nucleico aislado puede comprender ácidos nucleicos heterólogos que no están asociados con éste en la naturaleza. En otras modalidades, un ácido nucleico "aislado", tal como una molécula de ADNc, puede estar sustancialmente libre de otro material celular, o medio de cultivo cuando se produce mediante técnicas recombinantes, o sustancialmente libre de precursores químicos u otros químicos cuando se sintetiza químicamente. El término "sustancialmente libre de material celular" incluye las preparaciones de ácido nucleico en que el ácido nucleico se separa de los componentes celulares de las células a partir de las cuales se aisla o se produce de manera recombinante . De esta manera, el ácido nucleico que está sustancialmente libre de material celular incluye las preparaciones de ácido nucleico que tienen menos que aproximadamente 30%, 20%, 10%, o 5% (en peso seco) de otros ácidos nucleicos. El término "sustancialmente libre de medio de cultivo" incluye las preparaciones de ácido nucleico en que el medio de cultivo representa menos que aproximadamente 50%, 20%, 10%, o 5% del volumen de la preparación. El término "sustancialmente libre de precursores químicos u otros químicos" incluye las preparaciones en las cuales el ácido nucleico se separa de los precursores químicos u otros químicos que están involucrados en la síntesis del ácido nucleico. En modalidades específicas, tales preparaciones del ácido nucleico tienen menos que aproximadamente 50%, 30%, 20%, 10%, 5% (en peso seco) de compuestos o precursores químicos aparte del ácido nucleico de interés .

Adicionalmente, se proporcionan aquí ácidos nucleicos que codifican los componentes individuales de un polipéptido del dominio del tallo de la hemaglut inina de la influenza. En modalidades específicas, se proporcionan los ácidos nucleicos que codifican un segmento del tallo N-terminal de HA1, un segmento del tallo C-terminal de HA1 y/o el dominio HA2. Los ácidos nucleicos que codifican los componentes de un polipéptido del dominio del tallo de la hemaglut inina de la influenza se pueden ensamblar utilizando las técnicas de biología molecular estándar conocidas por uno de habilidad en el arte. 5.3 EXPRESIÓN DE POLIPÉPTIDOS DEL DOMINIO DEL TALLO DE HEMAGLUTININA DE INFLUENZA Se proporcionan en la presente vectores, incluyendo vectores de expresión, que contienen un ácido nucleico que codifica un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza. En una modalidad específica, el vector es un vector de expresión que es capaz de dirigir la expresión del ácido nucleico que codifica un polipéptido del dominio del tallo de la hemaglutinina de influenza. Los ejemplos no limitativos de vectores de expresión incluyen, pero no están limitados a, plásmidos y vectores virales, tal como retrovirus de replicación defectuosa, adenovirus, virus adeno-asociados y baculovirus .

En algunas modalidades, se proveen en la presente vectores de expresión que codifican componentes de un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza (por ejemplo, el segmento del tallo N-terminal de HA1, un segmento del tallo C-terminal de HA1 y/o un HA2 ) . Tales vectores pueden utilizarse para expresar los componentes en una o más células huésped y los componentes pueden aislarse y conjugarse conjuntamente con un enlace utilizando técnicas conocidas para un experto en la técnica.

Un vector de expresión comprende un ácido nucleico que codifica un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza en una forma adecuada para la expresión del ácido nucleico en una célula huésped. En una modalidad especifica, un vector de expresión incluye una o más secuencias reguladoras, seleccionadas en base a las células huésped a utilizarse para la expresión, la cual se enlaza operablemente al ácido nucleico a expresarse. Dentro de un vector de expresión, se pretende que "enlazado operablemente" signifique que un ácido nucleico de interés se enlace a la(s) secuencia (s) reguladora ( s ) de manera que permite la expresión del ácido nucleico (por ejemplo, en un sistema de transcripción/traducción in vitro o en una célula huésped cuando el vector se introduce en la célula huésped) . Las secuencias reguladoras incluyen promotores, mejoradores y otros elementos para el control de la expresión (por ejemplo, señales de poliadenilación) . Las secuencias reguladoras incluyen aquéllas que dirigen la expresión constitutiva de un ácido nucleico en muchos tipos de células huésped, aquéllas que dirigen la expresión del ácido nucleico solamente en ciertas células huésped (por ejemplo, secuencias reguladoras de tejido especifico), y aquéllas que dirigen la expresión del ácido nucleico tras su estimulación con un agente particular (por ejemplo, secuencias reguladoras inducibles) . Se apreciará por aquéllos expertos en la técnica que el diseño del vector de expresión puede depender de factores tales como la elección de la célula huésped a transformarse, el nivel de expresión de la proteina deseada, etc. Se pretende que el término "célula huésped" incluya una célula objetivo particular transformada o transfectada con un ácido nucleico y la progenie o progenie potencial de tal célula. La progenie de tal célula puede no ser idéntica a la célula parental transformada o transfectada con el ácido nucleico debido a mutaciones o influencias ambientales que puedan ocurrir en las generaciones subsiguientes o la integración del ácido nucleico en el genoma de la célula huésped.

Los vectores de expresión se pueden diseñar para la expresión de un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza utilizando células procariotas (por ejemplo, E. coli) o eucariotas (por ejemplo, células de insectos (utilizando vectores de expresión de baculovirus, ver, por ejemplo, Treanor et al., 2007, JAMA, 297 ( 14 ) : 1577-1582 incorporada como referencia en la presente en su totalidad) , células de levaduras, células de plantas, células de algas o células de mamíferos) . Los ejemplos de células huésped de mamíferos incluyen, pero no están limitados a, células Crucell Per.C6, células Vero, células CHO, células VERY, células BHK, células HeLa, células COS, células MDCK, células 293, células 3T3 ó células WI38. En ciertas modalidades, las células huésped son células de mieloma, por ejemplo, células NSO, célula 45.6 TG1.7, células 9B5 del clon AF-2, células 9B5 del clon AF-2, células J558L, células MOPC 315, células PC-11, células NCI-H929, células HP, células NS0/1, células P3 NS1 Ag4, células P3/NSl/l-Ag4-l, células P3U1, células P3X63Ag8, células P3X63Ag8.653 , células P3X63Ag8U.l, células RP I 8226, células Sp20-Agl4, células U266B1, células X63AG8.653, células Y3.Ag.l.2.3, y células YO. Los ejemplos no limitativos de células de insectos incluyen Sf9, Sf21, Trichoplusia ni, Spodoptera frugiperda y Bombyx morí. En una modalidad particular, un sistema de cultivo de células de mamífero (por ejemplo células de ovario de hámster chino o células de riñon de hámster bebé) se utiliza para la expresión de un polipéptido del dominio del tallo de hemaglut inina de influenza. En otra modalidad, se utiliza un sistema de cultivo de células de plantas para la expresión de un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza. Ver, por ejemplo, las Patentes Norteamericanas Nos. 7,504,560; 6,770,799; 6,551,820; 6,136,320; 6,034,298; 5,914,935; 5,612,487; y 5,484,719, y la publicación de solicitud de patente norteamericana Nos. 2009/0208477, 2009/0082548, 2009/0053762, 2008/0038232, 2007/0275014 y 2006/0204487 para células de plantas y métodos para la producción de proteínas que utilizan sistemas de cultivo de células de planta.

Un vector de expresión se puede introducir en células huésped a través de técnicas convencionales de transformación o transfección . Tales técnicas incluyen, pero no están limitadas a, co-precipitación con fosfato de calcio o cloruro de calcio, transfección mediada con DEAE-dextrano, lipofección, y electroporación . Se pueden encontrar métodos adecuados para transformar o transfectar células huésped en Sambrook et al., 1989, Molecular Cloning - A Laboratory Manual, 2nd Edition, Cold Spring Harbor Press, New York, y otros manuales de laboratorio. En ciertas modalidades, una célula huésped se transfecta temporalmente con un vector de expresión que contiene un ácido nucleico que codifica un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza. En otras modalidades, una célula huésped se transfecta de manera estable con un vector de expresión que contiene un ácido nucleico que codifica un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza.

Para la transfección estable de células de mamífero, se sabe que, dependiendo del vector de expresión y técnica de transfección utilizada, solamente una pequeña fracción de células puede integrar el ADN extraño o donante en su genoma. A fin de identificar y seleccionar estos integrantes, un ácido nucleico que codifica un marcador seleccionable (por ejemplo, para la resistencia a los antibióticos) generalmente se introduce en las células huésped junto con el ácido nucleico de interés. Los ejemplos de marcadores seleccionables incluyen aquéllos que confieren resistencia a los fármacos, tal como G418, higromicina y metotrexato. Las células transíectadas de manera estable con el ácido nucleico introducido se pueden identificar mediante selección de fármacos (por ejemplo, las células que han incorporado el gen marcador seleccionable sobrevivirán, mientras que las demás células morirán) .

Como una alternativa a la expresión recombinante de un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza que utiliza un célula huésped, un vector de expresión que contiene un ácido nucleico que codifica un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza se puede transcribir y traducir in vitro utilizando, por ejemplo, secuencias reguladoras del promotor T7 y polimerasa T7. En una modalidad especifica, un sistema de transcripción/traducción, tal como Promega TNT®, o un lisado celular o extracto de células que comprenden los componentes necesarios para la transcripción y traducción puede utilizarse para producir un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza.

Una vez que se ha producido un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza, el mismo puede aislarse o purificarse mediante cualquier método conocido en la técnica para el aislamiento o purificación de una proteina, por ejemplo, mediante cromatografía (por ejemplo, intercambio de iones, afinidad, particularmente mediante afinidad al antígeno especifico, mediante la Proteina A, y cromatografía de columna de exclusión molecular) , centrifugación, solubilidad diferencial, o mediante otra técnica estándar para el aislamiento o purificación de proteínas. En ciertas modalidades, un polipéptido del dominio del tallo de hemaglut inina de influenza puede conjugarse con proteínas heterólogas, por ejemplo, un complejo mayor de histocompatibilidad (MHC) con o sin proteínas de choque térmico (por ejemplo, HsplO, Hsp20, Hsp30, Hsp40, Hsp60, Hsp70, Hsp90, ó HsplOO) . En ciertas modalidades, un polipéptido del dominio del tallo de hemaglut inina de influenza puede conjugarse con moléculas inmunomoduladoras, tales como las proteínas que pudieran dirigir el polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza a células inmunes tales como las células B (por ejemplo, C3d) o células T. En ciertas modalidades, un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza pueden conjugarse con proteínas que estimulen el sistema inmune innato tal como el interferón tipo 1, interferón alfa, beta, o gamma, factores estimulantes de colonias tales como el factor estimulante de colonias de granulocitos-macrófagos (GM-CSF) , interleucina (IL)-l, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-12, IL-15, IL-18, IL-21, IL-23, factor de necrosis tumoral (TNF)-p, T F , B7.1, B7.2, 4-1BB, ligando CD40 (CD40L) , y CD40 inducible con fármacos (ÍCD40) .

De acuerdo con esto, se proveen en la presente métodos para producir un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza. En una modalidad, el método comprende cultivar una célula huésped que contiene un ácido nucleico que codifica el polipéptido en un medio adecuado de tal manera que se produzca el polipéptido. En algunas modalidades, el método comprende además aislar el polipéptido del medio o la célula huésped. 5.4 VECTORES DEL VIRUS DE INFLUENZA En un aspecto, se proveen en la presente, virus de influenza que contienen un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza. En una modalidad especifica, el polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza se incorpora en los viriones del virus de la influenza. Los virus de la influenza pueden conjugarse con porciones que dirijan los virus a tipos de células particular, tales como células inmunes. En algunas modalidades, los viriones del virus de la influenza se han incorporado en los mismos o expresan un polipéptido heterólogo además de un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza. El polipéptido heterólogo puede sr un polipéptido que tenga actividad inmunopotenciadora, o que dirija el virus de la influenza a un tipo de célula particular, tal como un anticuerpo que se una a un antigeno o un tipo de célula especifica o un ligando que se una un receptor especifico en un tipo de célula especifica.

Los virus de la influenza que contienen un polipeptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza pueden producirse suministrando in trans el polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza durante la producción de viriones utilizando técnicas conocidas para alguien de experiencia en la técnica, tal como genética inversa y rescate auxiliar libre de plásmidos. Alternativamente, la replicación de un virus de influenza parental que comprende un genoma creado genéticamente para expresar un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza en células susceptibles a infección con el virus en donde la función de la hemaglutinina se provee in trans, producirá virus de la influenza descendientes que contienen el polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza.

En otro aspecto, se proveen en el presente virus de la influenza que comprenden un genoma creado genéticamente para expresar un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza. En una modalidad especifica, el genoma de un virus de influenza parental se crea genéticamente para codificar un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza, el cual es expresado por el virus de influenza descendiente. En otra modalidad especifica, el genoma de un virus de influenza parental que se diseña genéticamente para codificar un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza el cual se expresa e incorpora en los viriones del virus de influenza descendiente. Por consiguiente, el virus influenza de descendiente resultante de la replicación del virus de influenza parental contiene un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza. Los viriones del virus de influenza parental pueden tener incorporado en los mismos un polipéptido de hemaglutinina del virus de influenza que es del mismo tipo o de un tipo diferente, subtipo o cepa del virus de la influenza. Alternativamente, los viriones del virus de influenza parental pueden tener incorporado en los mismos una porción que sea capaz de remplazar funcionalmente una o más de las actividades del polipéptido de hemaglutinina del virus de influenza (por ejemplo, las actividades fusogénicas y/o de unión del receptor de la hemaglutinina del virus de influenza). En ciertas modalidades, una o más de las actividades del polipéptido de hemaglutinina del virus de influenza se provee mediante una proteina de fusión que comprende (i) un ectodominio de un polipéptido heterólogo al virus de la influenza fusionado a (ii) un dominio de transmembrana, o un dominio de transmembrana y un dominio citoplásmico de un polipéptido de hemaglutinina del virus de influenza. En una modalidad especifica, los viriones del virus de influenza parental pueden tener incorporado en los mismos una proteina de fusión que comprende (i) un ectodominio de un polipéptido de unión/fusogénico receptor de un agente infeccioso diferente al del virus de la influenza fusionado a (ii) un dominio de transmembrana, o un dominio de transmembrana y un dominio citoplásmico de una hemaglutinina del virus de influenza. Para una descripción de proteínas de fusión que proveen una o más actividades de un polipéptido de hemaglutinina del virus de la influenza y métodos para la producción de virus de la influenza creados genéticamente para expresar tales proteínas de fusión, ver, por ejemplo, la Publicación de solicitud de patente internacional No. WO 2007/064802, publicada el 7 de Junio de 2007, que se incorpora en la presente como referencia en su totalidad.

En algunas modalidades, los viriones del virus de influenza parental tienen incorporado en los mismos un polipéptido heterólogo. En ciertas modalidades, el genoma de un virus de influenza parental se crea genéticamente para codificar un polipéptido heterólogo y un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza, que son expresados por el virus de influenza descendiente. En modalidades específicas, el polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza, el polipéptido heterólogo o ambos se incorporan en viriones del virus de influenza descendiente .

El polipéptido heterólogo puede ser un polipéptido que dirija el virus de influenza a un tipo de célula particular, tal como un anticuerpo que reconozca un antígeno en un tipo de célula específica o un ligando que se a una un receptor específico en un tipo de célula específica. En algunas modalidades, el polipéptido objetivo remplaza la función de reconocimiento de célula objetivo del virus. En una modalidad específica, el polipéptido heterólogo dirige el virus de influenza a los mismos tipos de células que el virus de influenza infecta por naturaleza. En otras modalidades específicas, el polipéptido heterólogo dirige el virus de influenza descendiente a células inmunes, tales como las células B, células T, macrófagos o células dendríticas. En algunas modalidades, el polipéptido heterólogo reconoce y se une a marcadores de las células específicas de células que presentan antígenos, tales como las células dendríticas (por ejemplo, tal como el CD44) . En una modalidad, el polipéptido heterólogo es CD-SIGN que dirige el virus a células dendríticas. En otra modalidad, el polipéptido heterólogo es un anticuerpo (por ejemplo, un anticuerpo de una sola cadena) que dirige el virus a una célula inmune, que pueda fusionarse con un dominio de transmembrana de otro polipéptido de modo que el mismo se incorpore en el virión del virus de la influenza. En algunas modalidades, el anticuerpo es un anticuerpo CD20, un anticuerpo CD34, o un anticuerpo contra DEC-205. Las técnicas para crear genéticamente virus para expresar polipéptidos con funciones objetivo que son conocidas en la técnica. Ver, por ejemplo, Yang et al., 2006, PNAS 103: 11479-11484 y Publicación de solicitud de patente de Estados Unidos No. 20080019998, publicada el 24 de Enero de 2008, y No. 20070020238, publicada el 25 de Enero de 2007, el contenido de cada una de las cuales se incorpora en la presente en su totalidad.

En otra modalidad, el polipéptido heterólogo es una proteina de adhesión viral. Los ejemplos no limitativos de los virus cuya(s) proteina (s) de adhesión se pueden utilizar en este aspecto son virus seleccionados del grupo de: virus de la fiebre de Lassa, virus de Hepatitis B, virus de la Rabia, virus de la enfermedad de Newcastle (NDV) , un retrovirus tal como el virus de inmunodeficiencia humana, virus de encefalitis transmitida por garrapatas, virus de vaccinia, virus del herpes, poliovirus, alfavirus tales como el virus de la Selva del Semliki, virus del Rio Ross, y virus Aura (los cuales comprenden glicoproteinas de superficie tal como El, E2, y E3) , virus de la enfermedad de Borna, virus Hantaan, espumavirus, y virus de SARS-CoV.

En una modalidad, puede utilizarse una glicoproteina de superficie de flavivirus, tal como la proteina E del virus del Dengue (DV) . En algunas modalidades, se utiliza una glicoproteina del virus de Sindbis de la familia de alfavirus (K. S. Wang, R. J. Kuhn, E . G. Strauss, S. Ou, J. H. Strauss, J. Virol. 66, 4992 (1992)). En ciertas modalidades, el polipéptido heterólogo se deriva de una proteína HN o F de NDV; un virus de inmunodeficiencia humana (VIH) gpl60 (o un producto del mismo, tal como gp41 o gpl20); un antígeno superficial del virus de hepatitis B (HBsAg) ; una glicoproteína del virus de herpes (por ejemplo, gD, gE) ; o VP1 de poliovirus.

En otra modalidad, el polipéptido heterólogo se deriva de cualquier sistema objetivo no viral conocido en la técnica. En ciertas modalidades, se utiliza una proteína de un patógeno no viral tal como una bacteria intracelular o protozoos. En algunas modalidades, el polipéptido bacteriano se provee mediante, por ejemplo, Chlamydia, Rikettsia, Coxelia, Listeria, Brucella, o Legionella. En algunas modalidades, se provee un polipéptido de protozoos por ejemplo, mediante especies Plasmodia, Leishmania spp. , Toxoplasma gondii, o Trypanosoma cruzi. Otros sistemas objetivo ejemplificantes se describen en Waehler et al., 2007, "Engineering targeted viral vectors for gene therapy", Nature Reviews Genetics 8: 573-587, la cual se incorpora en la presente en su totalidad.

En ciertas modalidades, el polipéptido heterólogo expresado por un virus de influenza tiene actividad inmunopotenciadora (inmuno-estimulación) . Los ejemplos no limitativos de polipéptidos inmunopotenciadores incluyen, pero no están limitados a, moléculas de estimulación, citocinas, quimiocinas, anticuerpos y otros agentes tales como los ligandos Flt-3. Los ejemplos específicos de polipéptidos con actividad inmuno potenciadora incluyen: interferón tipo 1, interferón alfa, beta, o gamma, factores estimulantes de colonias tales como el factor estimulante de colonias de granulocitos-macrófagos (GM-CSF) , interleucina (IL)-l, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-12, IL-15, IL-18, IL-21, IL-23, factor de necrosis tumoral (??G)-ß, TNFa, B7.1, B7.2, 4-1BB, ligando CD40 (CD40L) , y CD40 inducible con fármacos ( ÍCD40 ) (ver, por ejemplo, Hanks, B. A., et al. 2005. Nat Med 11:130-137, la cual se incorpora en la presente como referencia en su totalidad) .

Puesto que el genoma de los virus de influenza A y B consiste de ocho (8) segmentos de polaridad negativa, de una sola hebra (los virus de influenza C consisten de siete (7) segmentos de polaridad negativa, de una sola hebra) , el genoma de un virus de influenza parental puede crearse genéticamente para expresar un polipéptido del dominio del tallo de hemaglut inina de influenza (y cualquier otro polipéptido, tal como un polipéptido heterólogo) utilizando un segmento recombinante y técnicas conocidas para un experto en la técnica, tal como genética inversa y rescate de plásmidos libres auxiliares. En una modalidad, el segmento recombinante comprende un ácido nucleico que codifica el polipéptido del dominio del tallo de hemaglut inina de influenza asi como las señales de incorporación 3' y 5' las cuales son requeridas para una apropiada replicación, transcripción y empaque de los ARNvs (Fujii et al., 2003, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 100:2002-2007; Zheng, et al., 1996, Virology 217:242-251, ambas de las cuales se incorpora como referencia en la presente en su totalidad. En una modalidad especifica, el segmento recombinante utiliza las secuencias no codificantes y/o no traducidas 3' y 5' de segmentos del virus de influenza que son de diferente tipo o del mismo tipo, subtipo o cepa que el virus de influenza parental. En algunas modalidades, el segmento recombinante comprende la región no codificante 3' de un polipéptido de hemaglutinina del virus de influenza, las regiones no traducidas de un polipéptido de hemaglutinina del virus de influenza, y la región no codificante 5' de un polipéptido de hemaglutinina del virus de influenza. En modalidades especificas, el segmento recombinante comprende las secuencias no codificantes y/o no traducidas 3' y 5' del segmento HA de un virus de influenza que es del mismo tipo, subtipo o cepa que el tipo, subtipo o cepa del virus de influenza que el segmento del tallo N-terminal de HA1, el segmento del tallo corto C-terminal de HA1 y/o el HA2 de un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza. En ciertas modalidades, el segmento recombinante que codifica el polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza puede remplazar el segmento HA de un virus de influenza parental. En algunas modalidades, el segmento recombinante que codifica el polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza puede remplazar el gen NS1 del virus de influenza parental. En algunas modalidades, el segmento recombinante que codifica el polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza puede remplazar el gen NA del virus de influenza parental. Las cepas del virus de influenza e emplificantes que se pueden utilizar para expresar los polipéptidos del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza incluyen Ann Arbor/1/50, A/Puerto Rico/8/34, A/South Dakota/6/2007 , A/Uruguay/716/2007 , y B/Brisbane/60/2008.

En algunas modalidades, el genoma de un virus de influenza parental puede crearse genéticamente para expresar un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza utilizando un segmento recombinante que sea bicistrónico . Las técnicas bicistrónicas permiten que la ingeniería genética codifique secuencias de múltiples proteínas en un solo ARNm a través del uso de secuencias del sitio interno de entrada al ribosoma (IRES) . Las secuencias IRES dirigen el reclutamiento interno de ribosomas a la molécula de ARN y permiten una traducción corriente abajo de una manera de capa independiente. De manera concisa, una región codificante de una proteína se inserta en el marco de lectura abierta (ORF) de una segunda proteína. La inserción es flanqueada por un IRES y cualquier secuencia de señal no traducida necesaria para una expresión y/o función apropiada. La inserción no debe alterar el ORE, poliadenilación o promotores de transcripción de la segunda proteina (ver, por ejemplo, García-Sastre et al., 1994, J. Virol. 68:6254-6261 y García-Sastre et al., 1994 Dev. Biol. Stand. 82:237-246, cada uno de los cuales se incorpora en la presente como referencia en su totalidad) . Ver también, por ejemplo, la Patente Norteamericana No. 6,887,699, Patente Norteamericana No. 6,001,634, Patente Norteamericana No. 5,854,037 y Patente Norteamericana No. 5,820,871, cada una de las cuales se incorpora en la presente como referencia en su totalidad. Cualquier IRES conocida en la técnica o descrita en la presente puede utilizarse de acuerdo con la invención (por ejemplo, la IRES del gen BiP, nucleótidos 372 a 592 de la entrada HUMGRP78 de la base de datos GenBank; o la IRES del virus de encefalomiocarditis (EMCV) , nucleótidos 1430-2115 de entrada CQ867238 de la base de datos GenBank) . Por consiguiente, en ciertas modalidades, un virus de influenza parental se crea genéticamente para contener un segmento de ARN bicistrónico que exprese el polipéptido del dominio del tallo de hemaglut inina de influenza y otro polipéptido, tal como el gen expresado por el virus de influenza parental. En algunas modalidades, el gen del virus de influenza parental es el gen HA. En algunas modalidades, el gen del virus de influenza parental es el gen NA. En algunas modalidades, el gen de virus de influenza parental es el gen NS1.

Las técnicas conocidas para un experto en la técnica pueden utilizarse para producir un virus de influenza que contenga un polipéptido del dominio del tallo de hemaglut inina de influenza y un virus de influenza que comprenda un genoma creado genéticamente para expresar un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza. Por ejemplo, pueden utilizarse técnicas de genética inversa para generar tal virus de influenza. De manera concisa, las técnicas de genética inversa generalmente involucran la preparación de ARNs virales recombinantes sintéticos que contienen las regiones no codificantes de la hebra negativa, ARN viral que sean esenciales para el reconocimiento mediante polimerasas virales y para empacar las señales necesarias para generar un virión maduro. Los ARNs recombinantes se sintetizan a partir de un ADN plantilla recombinante y se reconstituyen in vitro con complejo de polimerasa viral purificada para formar ribonucleoproteinas recombinantes (RNPs) que se puedan utilizar para transfectar células. Una transfección más eficiente se logra si las proteínas de polimerasa viral se presentan durante la transcripción de los ARNs sintéticos ya sea in vitro o in vivo. Las RNPs recombinantes sintéticas se pueden rescatar en partículas de virus infecciosas. Las técnicas mencionadas anteriormente se describen en la Patente Norteamericana No. 5,166,057 expedida el 24 de Noviembre de 1992; en la Patente Norteamericana No. 5,854,037 expedida el 29 de Diciembre -de 1998; en la Publicación de Patente Europea EP 0702085A1, publicada el 20 de Febrero de 1996; en la Solicitud de Patente Norteamericana No. de Serie 09/152,845; en las Publicaciones de Patente Internacional PCT WO 97/12032 publicada el 3 de Abril de 1992; WO 96/34625 publicada el 7 de Noviembre de 1996; en la Publicación de Patente Europea EP A780475; WO 99/02657 publicada el 21 de Enero de 1999; WO 98/53078 publicada el 26 de Noviembre de 1998; WO 98/02530 publicada el 22 de Enero de 1998; WO 99/15672 publicada el 1 de Abril de 1999; WO 98/13501 publicada el 2 de Abril 2 de 1998; WO 97/06270 publicada el 20 de Febrero de 1997; y EPO 780 475A1 publicada el 25 de Junio de 1997, cada una de las cuales se incorpora como referencia en su totalidad.

Alternativamente, puede utilizarse la tecnología de plásmidos libres auxiliares para producir un virus de influenza que contenga un polipéptido del dominio del tallo de hemaglu inina de influenza y un virus de influenza que comprenda un genoma creado genéticamente para expresar un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza. De manera concisa, los ADNcs de longitud completa de segmentos virales se amplifican utilizando PCR con iniciadores que incluyen sitios de restricción únicos, que permitan la inserción del producto PCR en el vector del plásmido (Flandorfer et al., 2003, J. Virol . 77:9116-9123; Nakaya et al., 2001, J. Virol. 75:11868-11873; ambas de las cuales se incorporan en la presente como referencia en su totalidad) . El vector del plásmido se diseña de modo que se exprese un transcripto negativo exacto (ARNv sentido) . Por ejemplo, el vector del plásmido puede diseñarse para posicionar el producto PCR entre un promotor de polimerasa I de ARN humano truncado y una secuencia de ribozima del virus de hepatitis delta de tal manera que se produzca un transcripto negativo exacto (ARNv sentido) a partir del promotor de la polimerasa I. Los vectores de plásmidos separados que comprenden cada segmento viral asi como los vectores de expresión que comprenden las proteínas virales necesarias pueden transfectarse en células que lleven a la producción de partículas virales recombinantes . En otro ejemplo, pueden utilizarse vectores de plásmido a partir de los cuales se expresen tanto el ARN genómico viral como el ARNm que codifica las proteínas virales necesarias. Para una descripción detallada de la tecnología de plásmidos libres auxiliares ver, por ejemplo, la Publicación Internacional No. WO 01/04333; Patentes Norteamericanas Nos. 6,951,754, 7,384,774, 6,649,372, y 7,312,064; Fodor et al., 1999, J. Virol. 73:9679-9682; Quinlivan et al., 2005, J. Virol. 79:8431-8439; Hoffmann et al., 2000, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 97:6108-6113; y Neumann et al., 1999, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 96:9345-9350, las cuales se incorporan en la presente como referencia en su totalidad.

Los virus de influenza descritos en la presente pueden propagarse en cualquier substrato que permita desarrollar el virus a titulaciones que permitan su uso de acuerdo con los métodos descritos en la presente. En una modalidad, el substrato permite desarrollar los virus a titulaciones comparables con las determinadas para los correspondientes virus de fenotipo silvestre. En ciertas modalidades, el substrato es uno que es biológicamente relevante para el virus de influenza o para el virus del cual se deriva la función HA. En una modalidad especifica, un virus de influenza atenuado en virtud de, por ejemplo, una mutación en el gen NS1, puede propagarse en un substrato carente de IFN. Por ejemplo, puede utilizarse un substrato carente de IFN puede ser uno que sea defectuoso en su capacidad de producir o responder al interferón, o es uno el cual es un substrato carente de IFN para el crecimiento de cualquier número de virus que puedan requerir un ambiente de crecimiento carente del interferón. Ver, por ejemplo, las Patentes Norteamericanas Nos. 6,573,079, expedida el 3 de Junio de 2003, 6,852,522, expedida el 8 de Febrero de 2005, y 7,494,808, expedida el 24 de Febrero de 2009, el contenido completo de cada una de las cuales se incorpora en la presente como referencia en su totalidad.

Los virus de influenza descritos en la presente pueden aislarse y purificarse mediante cualquier método conocido para aquellos expertos en la técnica. En una modalidad, el virus se remueve del cultivo celular y se separa de los componentes celulares, típicamente mediante procedimientos de clarificación bien conocidos, por ejemplo, tal como centrifugación de gradiente y cromatografía de columna, y pueden purificarse adicionalmente cuando se desee utilizando procedimiento bien conocidos para aquellos expertos en la técnica, por ejemplo, ensayos en placa.

En ciertas modalidades, los virus de influenza, o polipéptidos , genes o segmentos de genoma del virus de influenza para usarse como se describe en la presente se obtienen o derivan de un virus de influenza A. En ciertas modalidades, los virus de influenza, o polipéptidos, genes o segmentos de genoma del virus de influenza para usarse como se describe en la presente se obtienen o derivan de un sólo subtipo o cepa del virus de influenza A. En otras modalidades, los virus de influenza, o polipéptidos, genes o segmentos de genoma del virus de influenza para usarse como se describe en la presente se obtienen o derivan de dos o más subtipos o cepas del virus de influenza A.

En algunas modalidades, los virus de influenza, o polipéptidos, genes o segmentos de genoma del virus de influenza para usase como se describe en la presente se obtienen o derivan de un virus de influenza B. En ciertas modalidades, los virus de la influenza, o polipéptidos, genes o segmentos de genoma del virus de influenza para usarse como se describe en la presente se obtienen o derivan de un sólo subtipo o cepa del virus de influenza B. En otras modalidades, los virus de influenza, o polipéptidos , genes o segmentos de genoma del virus de influenza para usarse como se describe en la presente se obtienen o derivan de dos o más subtipos o cepas del virus de influenza B. En otras modalidades, los virus de influenza, o polipéptidos, genes o segmentos de genoma del virus de influenza para usarse como se describe en la presente se obtienen o derivan de una combinación de subtipos o cepas del virus de influenza A y la influenza B.

En algunas modalidades, los virus de influenza, o polipéptidos, genes o segmentos de genoma del virus de influenza para usarse como se describe en la presente se obtienen o derivan de un virus de influenza C. En ciertas modalidades, los virus de influenza, o polipéptidos, genes o segmentos de genoma del virus de influenza para usarse como se describe en la presente se obtienen o derivan de un sólo subtipo o cepa del virus de influenza C. En otras modalidades, los virus de influenza, o polipéptidos, genes o segmentos de genoma del virus de influenza para usarse como se describe en la presente se obtienen o derivan de dos o más subtipos o cepas del virus de influenza C. En otras modalidades, los virus de influenza, o polipéptidos, genes o segmentos de genoma del virus de influenza para usarse como se describe en la presente se obtienen o derivan de una combinación de subtipos o cepas del virus de influenza C y virus de la influenza A y/o virus de influenza B.

Los ejemplos no limitativos de los virus de influenza A incluyen el s'ubtipo H10N4, subtipo H10N5, subtipo H10N7, subtipo H10N8, subtipo H10N9, subtipo H11N1, subtipo H11N13, subtipo H11N2, subtipo H11N4 , subtipo H11N6, subtipo H11N8, subtipo H11N9, subtipo H12N1, subtipo H12N4, subtipo H12N5, subtipo H12N8, subtipo H13N2, subtipo H13N3, subtipo H13N6, subtipo H13N7, subtipo H14N5, subtipo H14N6, subtipo H15N8, subtipo H15N9, subtipo H16N3, subtipo H1N1, subtipo H1N2, subtipo H1N3, subtipo H1N6, subtipo H1N9, subtipo H2N1, subtipo H2N2, subtipo H2N3, subtipo H2N5, subtipo H2N7, subtipo H2N8, subtipo H2N9, subtipo H3N1, subtipo H3N2, subtipo H3N3, subtipo H3N4, subtipo H3N5, subtipo H3N6, subtipo H3N8, subtipo H3N9, subtipo H4N1, subtipo H4N2, subtipo H4N3, subtipo H4N4 , subtipo H4N5, subtipo H4N6, subtipo H4N8, subtipo H4N9, subtipo H5N1, subtipo H5N2, subtipo H5N3, subtipo H5N4, subtipo H5N6, subtipo H5N7, subtipo H5N8, subtipo H5N9, subtipo H6N1, subtipo H6N2, subtipo H6N3, subtipo H6N4, subtipo H6N5, subtipo H6N6, subtipo H6N7, subtipo H6N8, subtipo H6N9, subtipo H7N1, subtipo H7N2, subtipo H7N3, subtipo H7N4 , subtipo H7N5, subtipo H7N7, subtipo H7N8, subtipo H7N9, subtipo H8N4, subtipo H8N5, subtipo H9N1, subtipo H9N2, subtipo H9N3, subtipo H9N5, subtipo H9N6, subtipo H9N7, subtipo H9N8, y subtipo H9N9.

Los ejemplos específicos de las cepas del virus de influenza A incluyen, pero no están limitados a: A/sw/Iowa/15/30 (H1N1); A/WSN/33 (H1N1); A/eq/Prague/1/56 (H7N7); A/PR/8/34; A/mallard/ Potsdam/178 -4 /83 (H2N2); A/herring gull DE/712/88 (H16N3) ; A/sw/Hong Kong/168/1993 (H1N1); A/mallard/Alberta/211/98 (H1N1); A/shorebird/Delaware/168/06 (H16N3) ; A/sw/Netherlands/25/80 (H1N1); A/sw/Germany/2/81 (H1N1); A/sw/Hannover/1/81 (H1N1); A/sw/Potsdam/1/81 (H1N1); A/sw/Potsdam/15/81 (H1N1); A/sw/Potsdam/268/81 (H1N1); A/sw/Finistere/2899/82 (H1N1); A/sw/Potsdam/35/82 (H3N2); A/sw/Cote d ' Armor/3633/84 (H3N2); A/sw/Gent/1/84 (H3N2); A/sw/Netherlands/12/85 (H1N1); A/sw/Karrenzien/2/87 (H3N2); A/sw/Schwerin/103/89 (H1N1); A/turk.ey/Germany/3/91 (H1N1); A/sw/Germany/8533/91 (H1N1); A/sw/Belgium/220/92 (H3N2); A/sw/Gent /V230/92 (H1N1); A/sw/Leipzig/145/92 (H3N2); A/sw/Re220/92hp (H3N2); A/sw/Bakum/909/93 (H3N2); A/sw/Schleswig-Holstein/1/93 (H1N1); A/sw/Scotland/419440/94 (H1N2); A/sw/Bakum/5/95 (H1N1); A/sw/Best/5C/96 (H1N1); A/sw/England/17394/96 (H1N2); A/sw/Jena/5/96 (H3N2) ; A/sw/Oedenrode/7C/96 (H3N2); A/sw/Lohne/1/97 (H3N2) A/sw/Cote d ' Armor/790 / 97 (H1N2); A/sw/Bakum/1362/98 (H3N2); A/sw/Italy/1521/98 (H1N2); A/sw/Italy/1553-2/98 (H3N2); A/sw/Italy/1566/98 (H1N1); A/sw/Italy/1589/98 (H1N1); A/sw/Bakum/8602/99 (H3N2); A/sw/Cotes d' Armor/604/99 (H1N2); A/sw/Cote d ' Armor/1482/99 (H1N1); A/sw/Gent/7625/99 (H1N2); A/Hong Kong/1774/99 (H3N2); A/sw/Hong Kong/5190/99 (H3N2); A/sw/Hong Kong/5200/99 (H3N2); A/sw/Hong Kong/5212/99 (H3N2); A/sw/Ille et Villaine/1455/99 (H1N1); A/sw/Italy/1654-1/99 (H1N2); A/sw/Italy/203 /99 (H1N1); A/sw/Italy/2064/99 (H1N2); A/sw/Berlin 1578/00 (H3N2); A/sw/Bakum/1832/00 (H1N2); A/sw/Bakum/1833/00 (H1N2); A/sw/Cote d'Armor/800/00 (H1N2); A/sw/Hong Kong/7982/00 (H3N2); A/sw/Italy/1081/00 (H1N2); A/sw/Belzig/2/01 (H1N1); A/sw/Belzig/54/01 (H3N2); A/sw/Hong Kong/9296/01 (H3N2); A/sw/Hong Kong/9745/01 (H3N2); A/sw/Spain/33601/01 (H3N2); A/sw/Hong Kong/1144/02 (H3N2); A/sw/Hong Kong/1197/02 (H3N2); A/sw/Spain/39139/02 (H3N2); A/sw/Spain/42386/02 (H3N2); A/Switzerland/8808/2002 (H1N1); A/sw/Bakum/1769/03 (H3N2); A/sw/Bissendorf/IDT1864/03 (H3N2); A/sw/Ehren/IDT2570/03 (H1N2); A/sw/Gescher/IDT2702/03 (H1N2); A/sw/Haselünne/2617/03hp (H1N1); A/sw/L6ningen/IDT2530/03 (H1N2); A/sw/IVD/IDT2674/03 (H1N2); A/sw/Nordkirchen/IDT1993/03 (H3N2); A/s /Nordwalde/IDT2197 /03 (H1N2); A/sw/Norden/IDT2308/03 (H1N2); As/w/Spain/50047/03 (H1N1); A/sw/Spain/51915/03 (H1N1); A/sw/Vechta/2623/03 (H1N1); A/sw/Visbek/IDT2869/03 (H1N2); A/sw/Waltersdorf/IDT2527/03 (H1N2); A/sw/Damme/IDT2890/04 (H3N2); A/sw/Geldern/IDT2888/04 (H1N1); A/sw/Granstedt/IDT3475/04 (H1N2); A/sw/Greven/IDT2889/04 (H1N1); A/sw/Gudensberg/IDT2930/04 (H1N2); A/sw/Gudensberg/IDT2931/04 (H1N2); A/sw/Lohne/IDT3357/04 (H3N2); A/sw/Nortrup/lDT3685/04 (H1N2); A/sw/Seesen/lDT3055/04 (H3N2); A/sw/Spain/53207/04 (H1N1); A/s /Spain/54008/04 (H3N2); A/sw/Stolzenau/IDT3296/04 (H1N2); A/sw/ edel/IDT2965/04 (H1N1); A/sw/Bad Griesbach/IDT4191/05 (H3N2); A/sw/Cloppenburg/IDT4777/05 (H1N2); A/sw/Dótlingen/IDT3780/05 (H1N2); A/sw/Dotlingen/IDT4735/05 (H1N2); A/s /Egglham/IDT5250/05 (H3N2); A/s /Harkenblek/IDT4097/05 (H3N2) ; A/sw/Hertzen/IDT4317/05 (H3N2); A/sw/Krogel/IDT4192/05 (H1N1); A/sw/Laer/IDT3893/05 (H1N1); A/sw/Laer/IDT4126/05 (H3N2); A/sw/Merzen/IDT4114 /05 (H3N2); A/sw/Muesleringen-S. /IDT4263/05 (H3N2); A/sw/Osterhofen/IDT4004/05 (H3N2); A/sw/Sprenge/IDT3805/05 (H1N2); A/sw/Stadtlohn/IDT3853/05 (H1N2); A/sw/Voglarn/IDT4096/05 (H1N1); A/sw/Wohlerst/IDT4093/05 (H1N1); A/sw/Bad Griesbach/IDT560 /06 (H1N1); A/sw/Herzlake/IDT5335/06 (H3N2); A/sw/Herzlake/IDT5336/06 (H3N2); A/sw/Herzlake/IDT5337 /06 (H3N2); y A/wild boar/Germany/R169/2005 (H3N2) .

Otros ejemplos específicos de las cepas del virus de influenza A incluyen, pero no están limitados a: A/Toronto/3141/2009 (H1N1); A/Regensburg/D6/2009 (H1N1); A/Bayern/62/2009 (H1N1); A/Bayern/62/2009 (H1N1); A/Bradenburg/19/2009 (H1N1); A/Bradenburg/20/2009 (H1N1); A/Distrito Federal/2611/2009 (H1N1); A/Mato Grosso/2329/2009 (H1N1); A/Sao Paulo/1454/2009 (H1N1); A/Sao Paulo/2233/2009 (H1N1) ; A/Stockholm/37/2009 (H1N1); A/Stockholm/41/2009 (H1N1) ; A/Stockholm/45/2009 (H1N1) ; A/swine/Alberta/OTH-33-1/2009 (H1N1); A/swine/Alberta/OTH-33-14 /2009 (H1N1); A/swine/Alberta/OTH-33-2/2009 (H1N1); A/swine/Alberta/OTH-33- 21/2009 (H1N1); A/swine/Alberta/OTH-33-22/2009 (H1N1); A/swine/Alberta/OTH-33-23/2009 (H1N1) ; A/swine/Alberta/OTH-33-24/2009 (H1N1); A/swine/Alberta/OTH-33-25/2009 (H1N1); A/swine/Alberta/OTH-33-3/2009 (HlNl); A/swine/Alberta/OTH-33-7/2009 (HlNl); A/Bei ing/502/2009 (H1N1) ; A/Firenze/10/2009 (HlNl); A/Hong Kong/2369/2009 (HlNl); A/Italy/85/2009 (H1N1); A/Santo Domingo/572N/2009 (HlNl) ; A/Catalonia/385/2009 (H1N1); A/Catalonia/386/2009 (H1N1) A/Catalonia/387/2009 (H1N1) ; A/Catalonia/390/2009 (H1N1) A/Catalonia/394/2009 (H1N1) ; A/Catalonia/397/2009 (H1N1) A/Catalonia/398/2009 (H1N1) ; A/Catalonia/399/2009 (H1N1) ; A/Sao Paulo/2303/2009 (H1N1) ; A/Akita/1/2009 (H1N1) ; A/Castro/JXP/2009 (H1N1) ; A/Fukushima/1/2009 (H1N1) A/Israel/276/2009 (H1N1) ; A/Israel/277/2009 (H1N1) ; A/Israel/70/2009 (H1N1) ; A/Iwate/1/2009 (H1N1) ; A/Iwate/2/2009 (H1N1) ; A/Kago5hima/1/2009 (HlNl); A/Osaka/180/2009 (H1N1); A/Puerto Montt/Bio87/2009 (H1N1) ; A/Sao Paulo/2303/2009 (H1N1) ; A/Sapporo/1/2009 (H1N1) ; A/Stockholm/30/2009 (H1N1) ; A/Stockholm/31/2009 (H1N1) ; A/Stockholm/32/2009 (H1N1) ; A/Stockholm/33/2009 (H1N1) ; A/Stockholm/ 34/2009 (H1N1) ; A/Stockholm/35/2009 (H1N1) ; A/Stockholm/36/2009 (H1N1) ; A/Stockholm/38/2009 (H1N1) ; A/Stockholm/39/2009 (H1N1) ; A/Stockholm/40/2009 (H1N1; ) A/Stockholm/42/2009 (H1N1) ; A/Stockholm/43/2009 (H1N1) ; A/Stockholm/44/2009 (H1N1) ; A/Utsunomiya/2/2009 (H1N1) ; A/WRAIR/0573N/2009 (H1N1); y A/Zhejiang/DTID-ZJU01/2009 (H1N1) .

Los ejemplos no limitativos de los virus de influenza B incluyen la cepa Aichi/5/88, cepa Akita/27 /2001 , cepa Akita/5/2001, cepa Alaska/16/2000, cepa Alaska/1777/2005, cepa Argentina/69/2001, cepa Arizona/146/2005, cepa Arizona/148/2005, cepa Bangkok/163/90, cepa Bangkok/34/99, cepa Bangkok/460/03, cepa Bangkok/54/99, cepa Barcelona/215/03, cepa Beij ing/15/84 , cepa Beijing/184/93, cepa Beij ing/243/97 , cepa Beij ing/43/75 , cepa Beij ing/5/76, cepa Beijing/76/98, cepa Belgium/WV 106/2002, cepa Belgium/ V 107/2002, cepa Belgium/WV 109/2002, cepa Belgium/WV 114/2002, cepa Belgium/WV 122/2002, cepa Bonn/43, cepa Brazil/952/2001, cepa Bucharest/795/03, cepa Buenos Aires/161/00), cepa Buenos Aires/9/95, cepa Buenos Aires/SW16/97 , cepa Buenos Aires/VL518/99, cepa Canada/ 6 /2001 , cepa Canada/464 /2002 , cepa Chaco/366/00, cepa Chaco/Rl 13/00 , cepa Cheju/303/03, cepa Chiba/447/98, cepa Chongqing/3/2000, cepa clinical isolate SAI Thailand/2002, cepa clinical isolate SA10 Thailand/2002 , cepa clinical isolate SA100 Philippines/2002, cepa clinical isolate SA101 Philippines/2002, cepa clinical isolate SA110 Philippines/2002), cepa clinical isolate SA112 Philippines/2002, cepa clinical isolate SA113 Philippines/2002, cepa clinical isolate SA114 Philippines/2002, cepa clinical isolate SA2 Thailand/2002, cepa clinical isolate SA20 Thailand/2002, cepa clinical isolate SA38 Philippines/2002, cepa clinical isolate SA39 Thailand/2002, cepa clinical isolate SA99 Philippines/2002, cepa CNIC/27/2001, cepa Colorado/2597/2004, cepa Cordoba/VA418/99, cepa Czechoslovakia/16/89, cepa Czechoslovakia/69/90 , cepa Daeku/10/97, cepa Daeku/45/97, cepa Daeku/47/97, cepa Daeku/9/97, cepa B/Du/4/78, cepa B/Durban 39/98, cepa Durban/43/98 , cepa Durban/4 /98 , cepa B/Durban 52/98, cepa Durban/55/98 , cepa Durban/56/98 , cepa England/1716/2005, cepa England/2054/2005) , cepa England/23/04 , cepa Finland/154 /2002 , cepa Finland/159/2002, cepa Finland/160/2002, cepa Finland/161/2002 , cepa Finland/162/03, cepa Finland/162/2002 , cepa Finland/162 / 91 , cepa Finland/164/2003, cepa Finland/172/91 , cepa Finland/173/2003, cepa Finland/176/2003 , cepa Finland/184/91, cepa Finland/188/2003, cepa Finland/190/2003, cepa Finland/220/2003, cepa Finland/WV5/2002 , cepa Fuj ian/36/82, cepa Geneva/5079/03, cepa Genoa/11/02, cepa Genoa/2/02, cepa Genoa/21/02, cepa Genova/54/02, cepa Genova/55/02, cepa Guangdong/05/9 , cepa Guangdong/08/93, cepa Guangdong/5/94 , cepa Guangdong/55/89, cepa Guangdong/8/93, cepa Guangzhou/7/97, cepa Guangzhou/86/ 92 , cepa Guangzhou/87 /92 , cepa Gyeonggi/592/2005, cepa Hannover/2/90, cepa Harbin/07 / 94 , cepa Hawaii/10/20C1 , cepa Hawaii/1990/2004 , cepa Hawaii/38/2001, cepa Hawaii/9/2001 , cepa Hebei/19/94, cepa Hebei/3/94), cepa Henan/22/97, cepa Hiroshima/23/2001, cepa Hong Kong/110/99, cepa Hong Kong/1115/2002 , cepa Hong Kong/112/2001, cepa Hong Kong/123/2001 , cepa Hong Kong/1351/2002, cepa Hong Kong/1434/2002, cepa Hong Kong/147/99, cepa Hong Kong/156/99, cepa Hong Kong/157/99, cepa Hong Kong/22/2001, cepa Hong Kong/22/89, cepa Hong Kong/336/2001, cepa Hong Kong/666/2001 , cepa Hong Kong/9/89, cepa Houston/1/91 , cepa Houston/1/96, cepa Houston/2/96, cepa Hunan/4/72, cepa Ibaraki/2/85, cepa ncheon/297/2005, cepa India/3/89, cepa India/77276/2001 , cepa Israel/95/03 , cepa Israel/ V187/2002, cepa Japan/1224/2005, cepa Jiangsu/10/03, cepa Johannesburg/ 1/ 99 , cepa Johannesburg/96/01, cepa Kadoma/1076/99, cepa Kadoma/122/99, cepa Kagoshima/15/94 , cepa Kansas/22992/99, cepa Khazkov/224/91, cepa Kobe/1/2002, cepa, cepa Kouchi/193/99, cepa Lazio/1/02, cepa Lee/40, cepa Leningrad/129/91, cepa Lissabon/2 /90 ) , cepa Los Angeles/1/02, cepa Lusaka/270/99, cepa Lyon/1271/96, cepa Malaysia/83077/2001, cepa Maputo/1/99, cepa Mar del Plata/595/99, cepa Maryland/1/01 , cepa Memphis/1/01 , cepa Memphis/12/97-? A, cepa Michigan/22572/99, cepa Mie/1/93, cepa Milano/1/01, cepa Minsk/318/90, cepa Moscow/3/03, cepa Nagoya/20/99, cepa Nanchang/1/00, cepa Nashville/107/93, cepa Nashville/45/91, cepa Nebraska/2/01, cepa Netherland/801/90, cepa Netherlands/429/98, cepa New York/1/2002, cepa NIB/48/90, cepa Ningxia/45/83, cepa Norway/1/84, cepa Oman/16299/2001, cepa Osaka/1059/97, cepa Osaka/983/97-V2 , cepa Oslo/1329/2002, cepa Oslo/1846/2002, cepa Panamá/ 45 / 90 , cepa Paris/329/90, cepa Parma/23/02, cepa Perth/211/2001, cepa Peru/1364/200 , cepa Philippines/5072/2001, cepa Pusan/270/99, cepa Quebec/173/98, cepa Quebec/465/98 , cepa Quebec/7/01, cepa Roma/1/03, cepa Saga/S172/99, cepa Seoul/13/95, cepa Seoul/37/91, cepa Shangdong/7/97 , cepa Shanghai/361/2002), cepa Shiga/T30/98, cepa Sichuan/379/99, cepa Singapore/222/79, cepa Spain/WV27/2002 , cepa Stockholm/10/90 , cepa Switzerland/5441/90, cepa Taiwan/0409/00, cepa Taiwan/0722/02, cepa Taiwan/97271/2001, cepa Tehran/80/02 , cepa Tokyo/6/98, cepa Trieste/28/02, cepa Ulan Ude/4/02, cepa United Kingdom/34304/99, cepa USSR/100/83, cepa Victoria/103/89, cepa Vienna/1/99, cepa Wuhan/356/2000 , cepa WV194/2002, cepa Xuanwu/23/82, cepa Yamagata/1311/2003 , cepa Yamagata/K500/2001, cepa Alaska/12/96, cepa GA/86, cepa NAGASAKI/1/87, cepa Tokyo/942/96, y cepa Rochester/02/2001.

Los ejemplos no limitativos de los virus de influenza C incluyen la cepa Aichi/1/81, cepa Ann Arbor/1/50, cepa Aomori/74, cepa California/78, cepa England/83, cepa Greece/79, cepa Hiroshima/246/2000, cepa Hiroshima/252/2000, cepa Hyogo/1/83, cepa Johannesburg/66, cepa Kanagawa/1/76, cepa Kyoto/1/79, cepa Mississippi/80, cepa Miyagi/1/97, cepa Miyagi/5/2000 , cepa Miyagi/9/96, cepa Nara/2/85, cepa New Jersey/76, cepa pig/Beijing/115/81, cepa Saitama/3/2000 ) , cepa Shizuoka/79, cepa Yamagata/2/98, cepa Yamagata/6/2000 , cepa Yamagata/9/96, cepa BERLIN/1/85, cepa ENGLAND/892 / 8 , cepa GREAT LAKES/1167/54 , cepa JJ/50, cepa PIG/BEIJING/10/81 , cepa PIG/BEIJING/439/82), cepa TAYLOR/1233/47 , y cepa C/YAMAGATA/10/81.

En ciertas modalidades, los virus de influenza provistos en la presente tienen un fenotipo atenuado. En modalidades especificas, el virus de influenza atenuado se basa en el virus de influenza A. En otras modalidades, el virus de influenza atenuado se basa en el virus de influenza B. En aún otras modalidades, el virus de influenza atenuado se basa en el virus de influenza C. En otras modalidades, el virus de influenza atenuado puede comprender genes o segmentos de genoma de una o más cepas o subtipos del virus de influenza A, influenza B, y/o influenza C. En algunas modalidades, el virus de estructura atenuado comprende genes de un virus de influenza A y un virus de influenza B.

En modalidades especificas, se desea una atenuación del virus de influenza de tal manera que el virus siga siendo, al menos parcialmente, infeccioso y se pueda replicar in vivo, aunque solamente genere titulaciones bajas que den como resultado niveles subclinicos de infección que no sean patógenos. Tales virus atenuados se adecúan especialmente para las modalidades descritas en la presente en donde el virus o una composición inmunógena del mismo se administra a un sujeto para inducir una respuesta inmune. La atenuación del virus de influenza se puede lograr de acuerdo a cualquier método conocido en la técnica, tal como, por ej emplo, seleccionando mutantes virales generados mediante mutagénesis química, mutación del genoma mediante ingeniería genética, seleccionando virus re-ordenadores que contienen segmentos con función atenuada, o seleccionando mutantes de virus condicionales (por ejemplo, virus adaptados al frío) . Alternativamente, ' pueden utilizarse virus de influenza atenuados de origen natural como estructuras del virus de influenza para los vectores del virus de influenza.

En una modalidad, un virus de influenza puede atenuarse, al menos en parte, en virtud de sustituir el gen HA del virus de influenza parental con un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza descrito en la presente. En algunas modalidades, un virus de influenza puede atenuarse, al menos en parte, creando genéticamente el virus de influenza que exprese un gen NS1 que imparta la capacidad del virus de antagonizar la respuesta del interferón celular (IFN). Los ejemplos de los tipos de mutaciones que se pueden introducir en el gen NS1 del virus de influenza incluyen eliminaciones, sustituciones, inserciones y combinaciones de los mismos. Una o más mutaciones se pueden introducir en cualquier parte en todo el gen NS1 (por ejemplo, el N-terminal, el C-terminal o en alguna parte en el medio) y/o el elemento regulador del gen NS1. En una modalidad, un virus de influenza atenuado comprende un genoma que tiene una mutación en un gen NS1 del virus de influenza que resulta en una eliminación que consiste de 5, preferiblemente 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 75, 80, 85, 90, 95, 99, 100, 105, 110, 115, 120, 125, 126, 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160, 165, 170 ó 175 residuos de aminoácidos del C-terminal de NS1, o una eliminación de entre 5-170, 25-170, 50-170, 100-170, 100-160, ó 105-160 residuos de aminoácidos del C-terminal. En otra modalidad, un virus de influenza atenuado comprende un genoma que tiene una mutación en un gen NS1 del virus de influenza de tal manera que el mismo codifique una proteina NS1 de los residuos de aminoácidos 1-130, residuos de aminoácidos 1-126, residuos de aminoácidos 1-120, residuos de aminoácidos 1-115, residuos de aminoácidos 1-110, residuos de aminoácidos 1-100, residuos de aminoácidos 1-99, residuos de aminoácidos 1-95, residuos de aminoácidos 1-85, residuos de aminoácidos 1-83, residuos de aminoácidos 1-80, residuos de aminoácidos 1-75, residuos de aminoácidos 1-73, residuos de aminoácidos 1-70, residuos de aminoácidos 1-65, o residuos de aminoácidos 1-60, en donde el aminoácido N-terminal es el número 1. Para ejemplos de mutaciones NSl y virus de influenza que comprendan un NSl mutado, ver, por ejemplo, las Patentes Norteamericanas Nos. 6,468,544 y 6,669,943; y Li et al., 1999, J. Infect. Dis. 179:1132-1138, cada una de las cuales se incorpora como referencia en la presente en su totalidad. 5.5 VECTORES DE VIRUS DISTINTOS A LA INFLUENZA En un aspecto, se proveen en la presente, virus distintos a los de la influenza que contienen un polipéptido del dominio del tallo de hemaglut inina de influenza. En una modalidad especifica, el polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza se incorpora en los viriones del virus de distinto al de la influenza. Los virus distintos a los de la influenza pueden conjugarse con porciones que dirijan los virus a tipos de células particulares, tales como células inmunes. En algunas modalidades, los viriones del virus distinto al de la influenza tienen incorporado en los mismos o expresan un polipéptido heterólogo además de un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza. El polipéptido heterólogo puede ser un polipéptido que tenga actividad inmunopotenciadora , o que dirija el virus distinto al de la influenza a un tipo de célula particular, tal como un anticuerpo que reconozca un antigeno en un tipo de célula específica o un ligando que se una a un receptor especifico en un tipo de célula especifica. Ver la Sección 5.4 supra para los ejemplos de tales polipéptidos heterologos.

Los virus distintos al de la influenza que contienen un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza pueden producirse suministrando in trans el polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza durante la producción de viriones utilizando técnicas conocidas para un experto en la técnica. Alternativamente, la replicación de un virus distinto al de la influenza parental que comprende un genoma creado genéticamente para expresar un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza en células susceptibles a infección con el virus en donde se provee la función de la hemaglutinina in trans producirá virus descendientes que contienen el polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza.

Puede utilizarse cualquier tipo, subtipo o cepa de virus que incluya, pero no está limitado a, cepas de origen natural, variantes o mutantes, virus mutagenizados, re-ordenadores y/o virus genéticamente modificados como un vector de virus distinto al de la influenza. En una modalidad especifica, el virus distinto al de la influenza parental no es un virus de origen natural. En otra modalidad especifica, el virus distinto al de la influenza parental es un virus genéticamente creado. En ciertas modalidades, se prefiere un virus con envoltura para la expresión de un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza unido a la membrana descrito en la presente.

En una modalidad ejemplificante, el vector del virus distinto al de la influenza es un virus de la enfermedad de Newcastle (NDV) . En otra modalidad, el vector del virus distinto al de la influenza es un virus de vaccinia. En otras modalidades no limitativas ejemplificantes el vector del virus distinto al de la influenza es adenovirus, virus adeno-asociado (AAV) , virus de hepatitis B, retrovirus (tal como, por ejemplo, un gamma-retrovirus tal como el genoma del Virus de Células Madre de Ratón (MSCV) o Virus de Leucemia Murina (MLV) , por ejemplo, virus de leucemia murina Moloney, onco-retrovirus, o lentivirus), un alfavirus (por ejemplo, virus de la encefalitis equina de Venezuela), un rhabdovirus, tal como el virus de la estomatitis vesicular o los virus de papiloma, poxvirus (tal como, por ejemplo virus de vaccinia, un vector MVA-T7, o viruela aviar), metaneumovirus, virus de sarampión, virus de herpes, tal como virus de herpes simple, o espumavirus. Ver, por ejemplo, Lawrie y Tumin, 1993, Cur. Opin. Genet. Develop. 3, 102-109 (vectores retrovirales ) ; Bett et al., 1993, J. Virol. 67, 5911 (vectores adenovirales ) ; Zhou et al., 1994, J. Exp. Med. 179, 1867 (vectores de virus adeno-asociados); Dubensky et al., 1996, J. Virol. 70, 508-519 (vectores virales de la familia pox (causante de pústulas) incluyendo el virus de vaccinia y el virus de viruela aviar y vectores virales del género alfa-virus tal como los derivados de los Virus de Sindbis y Virus de la Selva del Semliki) ; Patente Norteamericana No. 5,643,576 (virus de la encefalitis equina de Venezuela); WO 96/34625 (VSV) ; Ohe et al., 1995, Human Gene Therapy 6, 325-333; Woo et al., WO 94/12629; Xiao & Brandsma, 1996, Nucleic Acids. Res. 24, 2630-2622 (virus de papiloma); y Bukreyev y Collins, 2008, Curr Opin Mol Ther. 10:46-55 (NDV) , cada una de las cuales se incorpora como referencia en su totalidad.

En una modalidad especifica, el vector del virus distinto al de la influenza es NDV. Cualquier tipo, subtipo o cepa de NDV puede servir como la estructura que se crea genéticamente para expresar un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza, que incluye pero no está limitada a, cepas de origen natural, variantes o mutantes, virus mutagenizados , re-ordenadores y/o virus genéticamente creados. En una modalidad especifica, el NDV que sirve como la estructura para la ingeniería genética es una cepa de origen natural. En ciertas modalidades, el NDV que sirve como la estructura para la ingeniería genética es una cepa lítica. En otras modalidades, el NDV que sirve como la estructura para ingeniería genética es una cepa no lítica. En ciertas modalidades, el NDV que sirve como la estructura para ingeniería genética es la cepa lentogénica. En algunas modalidades, el NDV que sirve como la estructura para ingeniería genética es una cepa mesogénica. En otras modalidades, el NDV que sirve como la estructura para ingeniería genética es la cepa velogénica. Los ejemplos específicos de cepas de NDV incluyen, pero no están limitadas a, la cepa 73-T, cepa Ulster, cepa MTH-68, cepa Italien, cepa Hickman, cepa PV701, cepa Hitchner Bl, cepa La Sota, cepa YG97, cepa MET95, y cepa F48E9. En una modalidad específica, el NDV que sirve como la estructura para ingeniería genética es la cepa Hitchner Bl. En otra modalidad específica, el NDV que sirve como la estructura para ingeniería genética es la cepa La Sota.

En una modalidad, el NDV utilizado como la estructura para un vector del virus distinto al de la influenza se crea genéticamente para expresar una proteína F modificada en la cual el sitio de escisión de la proteína F se remplaza con una que contenga uno o dos residuos de arginina extra, que permitan activar el sitio de escisión mutante mediante proteasas ubicuamente expresadas de la familia furina. Los ejemplos específicos de NDVs que expresan tal proteína F modificada incluyen, pero no están limitados a, rNDV/F2aa y rNDV/F3aa. Para una descripción de mutaciones introducidas en una proteína F de NDV para producir una proteína F modificada con un sitio de escisión mutado, ver, por ejemplo, Park et al. (2006) "Engineered viral vaccine constructs with dual specificity: Avian influenza and Newcastle disease". PNAS USA 103: 8203-2808, la cual se incorpora en la presente como referencia en su totalidad.

En una modalidad, el vector del virus distinto al de la influenza es un poxvirus . Un vector de poxvirus puede basarse en cualquier miembro de la familia poxviridae, en particular, un virus de vaccinia o un virus avipox {por ejemplo, tal como viruela del canario, viruela aviar, etc.) que provee secuencias adecuadas para vectores de vaccinia. En una modalidad especifica, el vector poxviral es un vector del virus de vaccinia. Los virus de vaccinia adecuados incluyen, pero no están limitados a, la cepa Copenhagen (VC-2) (Goebel, et al., Virol 179: 247-266, 1990; Johnson, et al., Virol. 196: 381-401, 1993), cepa Copenhagen modificada (NYVAC) (Patente Norteamericana No. 6,265,189), la cepa WYETH y la cepa Ankara modificada (MVA) (Antoine, et al., Virol. 244: 365-396, 1998). Otros poxvirus adecuados incluyen cepas de viruela aviar tal como los vectores ALVAC y TROVAC que proveen propiedades deseables y son altamente atenuados (ver, por ejemplo, la Patente Norteamericana No. 6,265,189; Tartaglia et al., In AIDS Research Reviews, Koff, et al., eds . , Vol. 3, Marcel Dekker, N.Y., 1993; y Tartaglia et al., 1990, Reviews in Immunology 10: 13-30, 1990).

Los métodos para crear genéticamente virus distintos al de la influenza que expresen un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza, son bien conocidos en la técnica, como son los métodos para atenuar, propagar, y aislar y purificar tales virus. Para tales técnicas con respecto a los vectores de NDV, ver, por ejemplo, la Publicación Internacional WO 01/04333; Patentes Norteamericanas Nos. 7,442,379, 6,146,642, 6,649,372, 6,544,785 y 7,384,774; Swayne et al. (2003) . Avian Dis . 47:1047-1050; y Swayne et al. (2001) . J. Virol. 11868-11873, cada una de las cuales se incorpora como referencia en su totalidad. Para tales técnicas con respecto a los poxvirus, ver, por ejemplo, Piccini, et al., Methods of Enzymology 153: 545-563, 1987; Publicación Internacional No. WO 96/11279; Patente Norteamericana No. 4,769,330; Patente Norteamericana No. 4,722,848; Patente Norteamericana No. 4,769,330; Patente Norteamericana No. 4,603,112; Patente Norteamericana No. 5,110,587; Patente Norteamericana No. 5, 174, 993; EP 83 286; EP 206 920; Mayr et al., Infection 3: 6-14, 1975; y Sutter y oss, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 89: 10847-10851, 1992. En ciertas modalidades, se atenúa el virus distinto al de la influenza.

Las consideraciones ejemplificantes para la selección de un vector de virus distinto al de la influenza, particularmente para usarse en composiciones para su administración a un sujeto, son seguras, de baja toxicidad, estabilidad, especificidad de tipo celular, e inmunogenicidad, particularmente, ant igenicidad del polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza expresado por el vector del virus distinto al de la influenza. 5.6 PARTÍCULAS SIMILARES A VIRUS Y VIROSOMAS Los polipéptidos del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza se pueden incorporar en vectores de partículas similares a virus (VLP) . Las VLPs generalmente comprenden un polipéptido ( s ) viral (es) típicamente derivado (s) de una proteína (s) estructura ( s ) de un virus. En algunas modalidades, las VLPs no son capaces de replicarse. En ciertas modalidades, las VLPs pueden carecer del genoma completo de un virus o comprender una porción del genoma de un virus. En algunas modalidades, las VLPs no son capaces de infectar una célula. En algunas modalidades, las VLPs expresan en su superficie una o más de las porciones objetivo virales (por ejemplo, glicoproteína superficial del virus) o no virales (por ejemplo, anticuerpo o proteína) conocidas para un experto en la técnica o descritas en la presente. En algunas modalidades, las VLPs comprenden un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza y una proteína estructural viral, tal como el gen gag de VIH. En una modalidad específica, las VLPs comprenden un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza y un polipéptido del gag de VIH, tal como se describe en el Ejemplo 2 en la Sección 6.2 posterior .

Se han descrito métodos para producir y caracterizar VLPs recombinantemente producidas, basados en varios virus, incluyendo el virus de la influenza (Bright et al. (2007) Vaccine. 25:3871), virus de papiloma humano tipo 1 (Hagnesee et al. (1991) J. Virol. 67:315), virus de papiloma humano tipo 16 (Kirnbauer et al. Proc. Nati. Acad. Sci. (1992)89:12180), VIH-1 (Haffer et al, (1990) J. Virol. 64:2653), y hepatitis A (Winokur (1991) 65:5029), cada una de las cuales se incorpora en la presente en su totalidad. Los métodos para expresar VLPs que contienen proteínas de NDV se proveen por Pantua et al. (2006) J. Virol. 80:11062-11073, y en la Publicación de solicitud de Patente Norteamericana No. 20090068221, publicada el 12 de Marzo 2009, cada una de las cuales se incorpora en su totalidad en la presente.

En una modalidad específica, puede incorporarse un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza en un virosoma. Un virosoma que contiene un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza puede producirse utilizando técnicas conocidas para aquellos expertos en la técnica. Por ejemplo, un virosoma puede producirse alterando un virus purificado, extrayendo el genoma, y re-ensamblando las partículas con proteínas virales (por ejemplo, un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza) y los lipidos para formar partículas de lipidos que contienen proteínas virales. 5 . 7 VECTORES BACTERIANOS En una modalidad especifica, pueden crearse genéticamente bacterias que expresen un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza descrito en la presente. Las bacterias adecuadas para la expresión de un dominio del tallo de la hemaglutinina del virus de la influenza incluyen, pero no están limitados a, Listeria, Salmonella, Shigella sp., Mycobacterium tuberculosis, E. coli, Neisseria meningitides, Brucella abortus, Brucella melitensis , Borrelia burgdorferi, y Francisella tularensis . En una modalidad especifica, se atenúan las bacterias creadas genéticamente para expresar un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza. Las técnicas para la producción de bacterias creadas genéticamente para expresar un polipéptido heterólogo son conocidas en la técnica y se pueden aplicar a la expresión de un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza. Ver, por ejemplo, la Publicación de Solicitud de Patente Norteamericana No. 20080248066, publicada el 9 de Octubre 9 de 2008, y Publicación de Solicitud de Patente Norteamericana No. 20070207171, publicada el 6 de Septiembre de 2007, cada una de las cuales se incorpora como referencia en la presente en su totalidad. 5.8 VECTORES DE PLANTAS Y ALGAS En ciertas modalidades, las plantas (por ejemplo, las plantas del género Nicotiana) pueden crearse genéticamente para expresar un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza descrito en la presente. En modalidades especificas, las plantas se diseñan genéticamente para expresar un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza descrito en la presente a través de un procedimiento de agro-infiltración utilizando métodos conocidos en la técnica. Por ejemplo, los ácidos nucleicos que codifican un gen de interés, por ejemplo, un gen que codifique el polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza descrito en la presente, se introducen en una cepa de Agrobacterium. Subsecuentemente la cepa se desarrolla en un cultivo liquido y las bacterias resultantes se lavan y suspenden en una solución amortiguadora. Las plantas se exponen entonces (por ejemplo, a través de inyección o inmersión) al Agrobacterium que comprende los ácidos nucleicos que codifican un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza descrito en la presente de tal manera que el Agrobacterium transforme el gen de interés en una porción de las células de plantas. El polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza es expresado temporalmente por la planta y se puede aislar utilizando los métodos bien conocidos en la técnica y descritos en la presente. (Para ejemplos específicos ver Shoji et al., 2008, Vaccine, 26 (23) : 2930-293 ; y D'Aoust et al., 2008, J. Plant Biotechnology , 6 ( 9 ) : 930-940 ) . En una modalidad específica, la planta es una planta de tabaco (es decir, Nicotiana tabacum) .

En otra modalidad específica, la planta es un miembro de la familia de la planta de tabaco (por ejemplo, Nicotiana benthamiana ) .

En otras modalidades, las algas (por ejemplo, Chlamydomonas reinhardtii) puede crearse genéticamente para expresar un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza descrito en la presente (ver, por ejemplo, Rásala et al., 2010, Plant Biotechnology Journal (Publicada en línea el 7 de Marzo de 2010) ) . 5.9 GENERACIÓN DE ANTICUERPOS CONTRA EL POLIPÉPTIDO DEL DOMINIO DEL TALLO DE HEMAGLUTININA DE INFLUENZA Los polipéptidos del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza, ácidos nucleicos que codifican tales polipéptidos, o vectores que comprendan tales ácidos nucleicos o polipéptidos descritos en la presente pueden utilizarse para producir anticuerpos neutralizantes contra la influenza, por ejemplo, contra la región del vástago del polipéptido de hemaglutinina del virus de influenza. En una modalidad específica, los polipéptidos del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza, ácidos nucleicos que codifican tales polipéptidos, o vectores que comprenden tales ácidos nucleicos o polipéptidos descritos en la presente pueden administrarse a un sujeto no humano (por ejemplo, un ratón, conejo, rata, cobayo, etc.) para inducir una respuesta inmune que incluya la producción de anticuerpos los cuales puedan aislarse utilizando técnicas conocidas para un experto en la técnica (por ejemplo, cromatografía por inmunoafinidad, centrifugación, precipitación, etc.) .

Alternativamente, los polipéptidos del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza descritos en la presente pueden utilizarse para seleccionar los anticuerpos de las genotecas de anticuerpos. Por ejemplo, un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza, aislado, puede inmovilizarse en un soporte sólido (por ejemplo, un gel de sílice, una resina, una película de plástico derivada, una perla de vidrio, algodón, una perla de plástico, una perla de poliestireno, un gel de alúmina, o un polisacárido, una perla magnética), y se detecta para unirse a los anticuerpos. Como una alternativa, los anticuerpos pueden inmovilizarse en un soporte sólido y se selecciona para unirse al polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza. Puede utilizarse cualquier ensayo de selección, tal como en ensayo de cribado o selección, ELISA, resonancia de plasmón superficial, u otro ensayo de detección de anticuerpos conocido en la técnica para seleccionar los anticuerpos que se unen al dominio del tallo de la hemaglutinina de influenza. La genoteca de anticuerpos seleccionados puede ser una genoteca de anticuerpos comercialmente disponible, una genoteca generada in vitro, o una genoteca obtenida identificando y clonando o aislando los anticuerpos de un individuo infectado con influenza. En modalidades particulares, la genoteca de anticuerpos es generada de un sobreviviente de un ataque de virus de influenza. Las genotecas de anticuerpos pueden generarse de acuerdo con métodos conocidos en la técnica. En una modalidad particular, la genoteca de anticuerpos es generada clonando los anticuerpos y utilizando los mismos en genotecas de exposición de fagos o una genoteca de exposición de fagémidos.

Los anticuerpos identificados en los métodos descritos en la presente pueden analizarse para neutralizar la actividad y falta de auto-reactividad utilizando los ensayos biológicos conocidos en la técnica o descritos en la presente. En una modalidad, un anticuerpo aislado de un animal no humano o una genoteca de anticuerpos neutraliza un polipéptido de hemaglutinina de más de un subtipo de influenza. En algunas modalidades, un anticuerpo producido o identificado utilizando un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza, un ácido nucleico que codifica tal polipéptido, o un vector que codifica tal ácido nucleico o polipéptido neutraliza un virus de influenza H3. En algunas modalidades, un anticuerpo producido o identificado utilizando un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza, un ácido nucleico que codifique tal polipéptido, o un vector que comprenda tal ácido nucleico o polipéptido que neutralice 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, ó 16 ó más subtipos o cepas del virus de influenza. En una modalidad, el anticuerpo neutralizante neutraliza uno o más virus de influenza A y uno o más virus de influenza B. En modalidades particulares, el anticuerpo neutralizante no es, o no se une al mismo epitope que CR6261, CR6325, CR6329, CR6307, CR6323, 2A, D7 , D8, FIO, G17, H40, A66, D80, E88, E90, H98, C179 (producidos por el hibridoma FERM BP-4517; clones vendidos por Takara Bio, Inc. (Otsu, Shiga, Japón)), ABC (FERM BP-4516) o cualquier otro anticuerpo descrito en Ekiert DC et al. (2009) Antibody Recognition of a Highly Conserved Influenza Virus Epitope. Science (publicado en Science Express el 26 de Febrero de 2009); Kashyap et al. (2008) Combinatorial antibody librarles from survivors of the Turkish H5N1 avian influenza outbreak reveal virus neutralization strategies. Proc Nati Acad Sci U S A 105: 5986-5991; Sui et al. (2009), Structural and functional bases for broad-spectrum neutralization of avian and human influenza A viruses. Nat Struct Mol Biol 16: 265-273; Patentes Norteamericanas Nos. 5,589,174, 5,631,350, 6,337,070, y 6,720,409; Solicitud Internacional No. PCT/US2007/068983 publicada como la Publicación Internacional No. WO 2007/134237; Publicación Internacional No. PCT/US2008/075998 publicada como Publicación Internacional No. WO 2009/036157; Publicación Internacional PCT/EP2007/059356 publicada como Publicación Internacional No. WO 2008/028946; y la Solicitud Internacional No.

PCT/US2008/085876 publicada como la Publicación Internacional No. WO 2009/079259. En otras modalidades, el anticuerpo neutralizante no es un anticuerpo descrito en Wang et al. (2010) "Broadly Protective Monoclonal Antibodies against H3 Influenza Viruses following Sequential Immunization with Different Hemagglut inins" , PLOS Pathogens 6(2) : 1-9. En modalidades particulares, el anticuerpo neutralizante no utiliza el segmento Ig VH1-69. En algunas modalidades, la interacción del anticuerpo neutralizante con el antigeno no es mediada exclusivamente por la cadena pesada.

Los anticuerpos identificados o producidos utilizando un polipéptido del dominio del tallo de hemaglut inina de influenza, un ácido nucleico que codifica tal polipéptido, o un vector que comprende tal ácido nucleico o polipéptido incluyen moléculas de inmunoglobulina y porciones inmunológicamente activas de moléculas de inmunoglobulina, es decir, moléculas que contienen un sitio de unión de antigeno que se una específicamente a un polipéptido de hemaglut inina . Las moléculas de inmunoglobulina pueden ser de cualquier tipo (por ejemplo, IgG, IgE, IgM, igD, igA e igY) , clase (por ejemplo, IgGi, IgG2, IgG3, IgG4, IgAj. e IgA2) o subclase de molécula de inmunoglobulina. Los anticuerpos incluyen, pero no están limitados a, anticuerpos monoclonales, anticuerpos multi-especí fieos , anticuerpos humanos, anticuerpos humanizados, anticuerpos quiméricos, Fvs de una sola cadena, (scFv), anticuerpos de una sola cadena, fragmentos Fab, fragmentos F(ab'), Fvs enlazados a disulfuro (sdFv), y anticuerpos anti-idiotipicos (anti-Id) (incluyendo, por ejemplo, anticuerpos anti-Id hasta anticuerpos producidos o identificados utilizando un método descrito en la presente) , y fragmentos de unión de epitopes de cualquiera de los anteriores .

Los anticuerpos producidos o identificados utilizando un polipéptido del dominio del tallo de hemaglut inina de influenza, ácidos nucleicos que codifican tal polipéptido o un vector que comprende tal ácido nucleico o polipéptido puede utilizarse en inmuno-ensayos de diagnóstico, inmunoterapia pasiva, y degeneración de anticuerpos anti-idiotipicos. Los anticuerpos antes de utilizarse en inmunoterapia pasiva pueden modificarse, por ejemplo, los anticuerpos pueden quimerizarse o humanizarse. Ver, por ejemplo, las Patentes Norteamericanas Nos. 4,444,887 y 4,716,111; y Publicación Internacional Nos. WO 98/46645, WO 98/50433, WO 98/24893, WO 98/16654, WO 96/34096, WO 96/33735, y WO 91/10741, cada una de las cuales se incorpora en la presente como referencia en su totalidad, para revisiones sobre la generación de anticuerpos quiméricos y humanizados. Además, la capacidad de los anticuerpos de neutralizar polipéptidos de hemaglutinina y la especificidad de los anticuerpos de los polipéptidos pueden analizarse antes de utilizar los anticuerpos en inmunoterapia pasiva. Ver la Sección 5.11 infra para una discusión respecto al uso de anticuerpos neutralizantes para la prevención o tratamiento de la enfermedad causada por la infección por virus de influenza.

Los anticuerpos producidos o identificados utilizando un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza, un ácido nucleico que codifica tal polipéptido, o un vector que comprende tal ácido nucleico o polipéptido puede utilizarse para monitorear la eficacia de una terapia y/o avance de la enfermedad. Cualquier sistema de inmunoensayo conocido en la técnica puede utilizarse para este propósito que incluye, pero no están limitado a, sistemas de ensayo competitivos y no competitivos utilizando técnicas tales como radioinmunoensayos , ELISA (análisis de inmunoabsorción ligado a enzimas) , inmunoensayos "sándwich" o de intercalación, reacciones de precipitina, reacciones de precipitina con difusión de gel, ensayos de inmunodifusión, ensayos de aglutinación, ensayos de fijación complementaria, ensayos inmuno-radiométricos , inmunoensayos fluorescentes, inmunoensayos con proteina A y ensayos con inmunoelectroforesis , por nombrar sólo unos pocos.

Los anticuerpos producidos o identificados utilizando un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza, un ácido nucleico que codifique tal polipéptido, o un vector que comprenda tal ácido nucleico o polipéptido puede utilizarse en la producción del anticuerpo antiidiotipico . El anticuerpo antiidiot ípico puede entonces a su vez utilizarse para inmunización, a fin de producir una subpoblación de anticuerpos que se unan un antigeno particular de influenza, por ejemplo, un epitope neutralizante de un polipéptido de hemaglut inina (Jerne, 1974, Ann . Immunol . (Paris) 125c: 373; Jerne et al., 1982, E BO J. 1:234, incorporada en la presente como referencia en su totalidad. 5.10 ESTIMULACIÓN DE CÉLULAS CON POLIPÉPTIDO DEL DOMINIO DEL TALLO DE HEMAGLUTININA DE INFLUENZA En otro aspecto, se proveen en la presente métodos para estimular células ex vivo con un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza descrito en la presente. Tales células, por ejemplo, pueden utilizarse células dendriticas, in vitro para generar anticuerpos contra el polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza o pueden administrarse en si a un sujeto, por ejemplo, mediante una técnica de transferencia adoptiva conocida en el arte. Ver, por ejemplo, la Publicación de Solicitud Patente Norteamericana No. 20080019998, publicada el 24 de Enero de 2008, la cual se incorpora en la presente como referencia en su totalidad, para una descripción de las técnicas de transferencia adoptivas. En ciertas modalidades, cuando las células que han sido estimuladas ex vivo con un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza descrito en la presente, se administran a un sujeto, las células no son células de mamífero (por ejemplo, las células CB-1) .

En un ejemplo no limitativo, un vector, por ejemplo, un vector del virus de influenza, creado genéticamente para expresar un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza descrito en la presente se puede utilizar para generar células dendríticas (DCs) que expresen el polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza y exhiban propiedades inmunoestimuladoras dirigidas contra un polipéptido de hemaglutinina del virus de influenza. Tales DCs pueden utilizarse para expandir las células T de la memoria y son potentes estimuladores de las células T, incluyendo clones del polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza-linfocito T citotóxico específico. Ver Strobel et al., 2000, Human Gene Therapy 11:2207-2218, la cual se incorpora en la presente como referencia en su totalidad.

Un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza descrito en la presente puede suministrarse a una célula objetivo de cualquiera manera que permita al polipéptido entrar en contacto con la célula objetivo, por ejemplo, una DC, y suministrar el polipéptido a la célula objetivo. En ciertas modalidades, el polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza se suministra a un sujeto, como se describe en la presente. En algunas de tales modalidades, las células en contacto con el polipéptido pueden aislarse. y propagarse.

En ciertas modalidades, un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza se suministra a una célula objetivo in vitro. Las técnicas conocidas para un experto en la técnica pueden utilizarse para suministrar el polipéptido a las células objetivo. Por ejemplo, las células pueden ponerse en contacto con el polipéptido en un plato para cultivo de tejido, tubo u otro contenedor. El polipéptido puede suspenderse en medios y agregarse a los pozos para un plato de cultivo, tubo u otro contenedor. Los medios que contienen el polipéptido pueden agregarse antes de la colocación en placas de las células o después de que las células se hayan colocado en placas. Las células objetivo preferiblemente se incuban con el polipéptido durante una cantidad suficiente de tiempo para permitir al polipéptido entrar en contacto con las células. En ciertas modalidades, las células se incuban con el polipéptido durante aproximadamente 1 hora o más, aproximadamente 5 horas o más, aproximadamente 10 horas o más, aproximadamente 12 horas o más, aproximadamente 16 horas o más, aproximadamente 24 horas o más, aproximadamente 48 horas o más, aproximadamente de 1 hora hasta aproximadamente 12 horas, aproximadamente de 3 horas hasta aproximadamente 6 horas, aproximadamente de 6 horas hasta aproximadamente 12 horas, aproximadamente de 12 horas hasta aproximadamente 24 horas, o aproximadamente de 24 horas hasta aproximadamente 48 horas. En ciertas modalidades, cuando el polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza es un virus, el contacto de las células objetivo comprende infectar las células con el virus .

Las células objetivo pueden ser de cualquier especie, incluyendo, por ejemplo, humanos, ratones, ratas, conejos y cobayos. En algunas modalidades, las células objetivo son DCs obtenidas de un sujeto sano o un sujeto con necesidad del tratamiento. En ciertas modalidades, las células objetivo son DCs obtenidas de un sujeto en el cual se desea estimular una respuesta inmune al polipéptido. Los métodos para obtener células de un sujeto son bien conocidos en la técnica. 5.11 COMPOSICIONES Los ácidos nucleicos, vectores, polipéptidos , bacterias, anticuerpos, o células descritos en la presente (algunas veces referidos en la presente como "compuestos activos") pueden incorporarse en composiciones. En una modalidad especifica, las composiciones son composiciones farmacéuticas, tales como composiciones inmunógenas (por ejemplo, formulaciones de vacuna) . Las composiciones farmacéuticas provistas en la presente pueden ser de cualquier forma que permita administrar la composición a un sujeto. En una modalidad especifica, las composiciones farmacéuticas son adecuadas para administración veterinaria y/o humana. Las composiciones pueden utilizarse en métodos para prevenir o tratar una enfermedad por virus de influenza .

En una modalidad, una composición farmacéutica comprende un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza, en una mezcla con un portador farmacéuticamente aceptable. En otra modalidad, una composición farmacéutica comprende un ácido nucleico que codifica un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza descrito en la presente, en una mezcla con un portador farmacéuticamente aceptable. En otra modalidad, una composición farmacéutica comprende un vector de expresión que comprende un ácido nucleico que codifica un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza, en una mezcla con un portador farmacéuticamente aceptable. En otra modalidad, una composición farmacéutica comprende un virus de influenza o virus distinto al de la influenza que contiene un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza, en una mezcla con un portador farmacéuticamente aceptable. En otra modalidad, una composición farmacéutica comprende un virus de influenza o virus distinto al de la influenza que tiene un genoma. creado genéticamente para expresar un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza, en mezcla con un portador farmacéuticamente aceptable. En otra modalidad, una composición farmacéutica comprende una partícula similar a virus o virosoma que contiene un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza, en una mezcla con un portador farmacéuticamente aceptable. En otra modalidad, una composición farmacéutica comprende una bacteria que expresa o creada genéticamente para expresar un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza, en una mezcla con un portador farmacéuticamente aceptable. En otra modalidad, una composición farmacéutica comprende células estimuladas con un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza, en una mezcla con un portador farmacéuticamente aceptable .

En algunas modalidades, una composición farmacéutica puede comprender una o más terapias diferentes además de un compuesto activo.

Cuando se utiliza en la presente, el término "farmacéuticamente aceptable" significa aprobado por una agencia reguladora del gobierno federal o estatal o listado en la Farmacopea de Estados Unidos u otra farmacopea generalmente reconocida para su uso en animales, y más particularmente en humanos. El término "portador" se refiere a un diluyente, adyuvante, excipiente, o vehículo con el cual se administra la composición farmacéutica. También pueden emplearse soluciones salinas y soluciones acuosas de dextrosa y glicerol como portadores líquidos, particularmente para soluciones inyectables. Los excipientes adecuados incluyen almidón, glucosa, lactosa, sacarosa, gelatina, malta, arroz, harina, caliza, gel de sílice, estearato de sodio, monoestearato de glicerol, talco, cloruro de sodio, lecha descremada deshidratada, glicerol, propileno, glicol, agua, etanol y similares. Los ejemplos de portadores farmacéuticos adecuados se describen en "Remington's Pharmaceutical Sciences" de E.W. Martin. La formulación deberá adecuarse al modo de administración .

En una modalidad especifica, las composiciones farmacéuticas se formulan para adecuarse a la ruta de administración prevista para un sujeto. Por ejemplo, la composición farmacéutica puede formularse para adecuarse a la administración parenteral, oral, intradérmica , transdérmica, colorectal, intraperitoneal , y rectal. En una modalidad especifica, la composición farmacéutica puede formularse para administración intravenosa, oral, intraperitoneal, intranasal, intratraqueal, subcutánea, intramuscular, tópica, intradérmica, transdérmica o pulmonar.

En ciertas modalidades, pueden utilizarse polímeros biodegradables , tales como el etileno-acetato de vinilo, polianhídridos, polietilenglicol ( PEGilación) , polímeros de polimetil-metacrilato, poliláctidos , poli (láctido-co-glicólidos), ácido poliglicólico, colágeno, poliortoésteres, y ácido poliláctico, como portadores. En algunas modalidades, los compuestos activos se preparan con portadores que incrementen la protección del compuesto contra su rápida eliminación del cuerpo, tal como una formulación de liberación controlada, incluyendo implantes y sistemas de suministro micro-encapsulado. Los métodos para la preparación de tales formulaciones serán evidentes para aquellos expertos en la técnica. También pueden utilizarse liposomas o micelas como portadores farmacéuticamente aceptables. Estos se pueden preparar de acuerdo a los métodos conocidos para aquellos expertos en la técnica, por ejemplo, como se describe en la Patente Norteamericana No. 4,522,811. En ciertas modalidades, las composiciones farmacéuticas comprenden uno o más adyuvantes.

En modalidades especificas, las composiciones inmunógenas descritas en la presente son formulaciones monovalentes. En otras modalidades, las composiciones inmunógenas descritas en la presente son formulaciones multivalentes . En un ejemplo, una formulación multivalente comprende uno o más vectores que expresan un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza derivado de un polipéptido de hemaglutinina del virus de influenza A y uno o más vectores que expresen un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza derivado de un polipéptido de hemaglutinina del virus de influenza B. En otro ejemplo, una formulación multivalente comprende un vector que expresa un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza derivado de un antigeno H3 del virus de influenza A y un vector que expresa un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza derivado del antigeno Hl del virus de influenza A. En otro ejemplo, una formulación multivalente comprende un vector que expresa un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza derivado de un antigeno H3 del virus de influenza A, un vector que expresa un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza derivado de un antigeno Hl del virus de influenza A, y un vector que expresa un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza derivado de un antigeno HA del virus de influenza B. En ciertas modalidades, una formulación multivalente puede comprender uno o más diferentes polipéptidos del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza expresados utilizando un solo vector.

En ciertas modalidades, las composiciones farmacéuticas descritas en la presente adicionalmente comprenden un conservador, por ejemplo, timerosal derivado de mercurio. En una modalidad especifica, las composiciones farmacéuticas descritas en la presente comprenden 0.001% a 0.01% de timerosal. En otras modalidades, las composiciones farmacéuticas descritas en la presente no comprenden un conservador. En una modalidad especifica, se utiliza timerosal durante la fabricación de una composición farmacéutica descrita en la presente y el timerosal se remueve a través de las etapas de purificación subsiguientes a la producción de la composición farmacéutica, es decir, la composición farmacéutica contiene trazas de timerosal (<0.3 g de mercurio por dosis después de la purificación; tales composiciones farmacéuticas se consideran productos libres de timerosal) .

En ciertas modalidades, las composiciones farmacéuticas descritas en la presente adicionalmente comprenden proteína de huevo (por ejemplo, ovalbúmina u otras proteínas de huevo) . La cantidad de proteína de huevo en las composiciones farmacéuticas descritas en la presente puede variar desde aproximadamente 0.0005 hasta aproximadamente 1.2 µ? de proteína de huevo a 1 mi de composición farmacéutica. En otras modalidades, las composiciones farmacéuticas descritas en la presente no comprenden proteína de huevo.

En ciertas modalidades, las composiciones farmacéuticas descritas en la presente adicionalmente comprenden uno o más agentes antimicrobianos (por ejemplo, antibióticos) que incluyen, pero no están limitados a gentamicina, neomicina, polimixina (por ejemplo, polimixina B) , y kanamicina, estreptomicina. En otras modalidades, las composiciones farmacéuticas descritas en la presente no comprenden ningún antibiótico.

En ciertas modalidades, las composiciones farmacéuticas descritas en la presente adicionalmente comprenden uno o más componentes utilizados para inactivar un virus, por ejemplo, formalina o formaldehído o un detergente tal como desoxicolato de sodio, octoxinol 9 (Tritón X-100), y octoxinol 10. En otras modalidades, las composiciones farmacéuticas descritas en la presente no comprenden ningún componente utilizado para inactivar un virus.

En ciertas modalidades, las composiciones farmacéuticas descritas en la presente adicionalmente comprenden gelatina. En otras modalidades, las composiciones farmacéuticas descritas en la presente no comprenden gelatina.

En ciertas modalidades, las composiciones farmacéuticas descritas en la presente comprenden adicionalmente uno o más amortiguadores, por ejemplo, amortiguador de fosfato y amortiguador de glutamato de fosfato de sacarosa. En otras modalidades, las composiciones farmacéuticas descritas en la presente no comprenden amortiguadores.

En ciertas modalidades, las composiciones farmacéuticas descritas en la presente comprenden adicionalmente una o más sales, por ejemplo, cloruro de sodio, cloruro de calcio, fosfato de sodio, glutamato de monosodio, y sales de aluminio (por ejemplo, hidróxido de aluminio, fosfato de aluminio, alum (sulfato de potasio-aluminio), o una mezcla de tales sales de aluminio) . En otras modalidades, las composiciones farmacéuticas descritas en la presente no comprenden sales.

En modalidades específicas, las composiciones farmacéuticas descritas en la presente son vacunas del virus de influenza bajas en aditivos, es decir, las composiciones farmacéuticas no comprenden uno o más aditivos comúnmente encontrados en vacunas del virus de influenza. Se han descrito vacunas de influenza bajas en aditivos (ver, por ejemplo, la Solicitud Internacional No. PCT/IB2008/002238 publicada como la Publicación Internacional No. WO 09/001217 la cual se incorpora en la presente como referencia en su totalidad) .

Las composiciones farmacéuticas descritas en la presente se pueden incluir en un contenedor, paquete, o dosificador junto con instrucciones para su administración.

Las composiciones farmacéuticas descritas en la presente se pueden almacenar antes de usarse, por ejemplo, las composiciones farmacéuticas pueden almacenarse congeladas (por ejemplo, aproximadamente a -20°C o aproximadamente a -70°C) ; almacenarse en condiciones de refrigeración (por ejemplo, aproximadamente a 4°C); o almacenarse a temperatura ambiente (ver la Solicitud Internacional No. PCT/IB2007/001149 publicada como la Publicación Internacional No. WO 07/110776, la cual se incorpora en la presente como referencia en su totalidad, para métodos de almacenamiento de composiciones que comprenden vacunas contra la influenza sin refrigeración) .

En ciertas modalidades, cuando el compuesto activo en una composición farmacéutica descrita en la presente es una célula creada genéticamente para expresar un polipéptido del dominio del tallo de hemaglut inina de influenza, las células en la composición farmacéutica no son células de mamífero (por ejemplo, las células CB-1) . 5.11.1 Vacunas de Subunidades En una modalidad especifica, se proveen en la presente vacunas de subunidades que comprenden un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza descrito en la presente. En algunas modalidades, una vacuna de subunidades comprende un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza y una o más glicoproteinas superficiales (por ejemplo, neuraminidasa del virus de la influenza), otras porciones o adyuvantes objetivo. En modalidades especificas, una vacuna de subunidades comprende un solo polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza. En otras modalidades, una vacuna de subunidades comprende dos, tres, cuatro o más polipéptidos del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza. En modalidades especificas, el (los) polipéptido (s) del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza utilizado (s) en una vacuna de subunidades no está unido a la membrana, es decir, la misma es soluble .

En ciertas modalidades, se proveen en la presente vacunas de subunidades que comprenden aproximadamente 10 µg hasta aproximadamente 60 \iq de uno o más polipéptidos del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza descritos en la presente, desde aproximadamente 0.001% hasta 0.01% de timerosal, aproximadamente de 0.1 g hasta aproximadamente 1.0 jjg de proteína de huevo de pollo, de aproximadamente 1.0 hasta aproximadamente 5.0 de polimixina, de aproximadamente 1.0 ? hasta aproximadamente 5.0 µ? de neomicina, de aproximadamente 0.1 ? hasta aproximadamente 0.5 µ? de betapropiolactona , y aproximadamente .001 hasta aproximadamente .05% en p/v de etoxilato de nonilfenol por dosis .

En una modalidad especifica, una vacuna de subunidades provista en la presente comprende o consiste de una dosis de 0.5 mi que comprende 45 µg del (los) polipéptido ( s ) del dominio del tallo de hemaglut inina de influenza provisto (s) en la presente, = 1.0 µ? de mercurio (de timerosal) , = 1.0 µg de proteína de huevo de pollo (es decir, ovalbúmina), = 3.75 µg de polimixina, y = 2.5 µ? de neomicina. En algunas modalidades, una vacuna en subunidades provista en la presente adicionalmente comprende o consiste de no más de 0.5 µg de betapropiolactona, y no más de 0.015% en p/v de etoxilato de nonilfenol por dosis. En algunas modalidades, la vacuna de subunidades de dosis de 0.5 se empaca en una jeringa precargada .

En una modalidad específica, una vacuna de subunidades provista en la préseme consiste de un vial de dosis múltiples de 5.0 mi (0.5 mi por dosis) que comprende 45 µg de polipéptido ( s ) del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza provisto (s) en la presente, 25.0 µg de mercurio (de timerosal), = 1.0 µg de proteína de huevo de pollo (es decir, ovalbúmina) , = 3.75 \iq de polimixina, y = 2.5 pg de neomicina. En algunas modalidades, una vacuna de subunidades provista en la presente adicionalmente comprende o consiste de no más de 0.5 de betapropiolactona, y no más de 0.015% en p/v de etoxilato de nonilfenol por dosis.

En una modalidad especifica, la vacuna de subunidades se prepara utilizando el virus de la influenza que se propagó en huevos de pollo embrionados (es decir, los componentes de la vacuna de subunidades (por ejemplo, un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina ) se aislan del virus que se propagó en huevos de pollo embrionados). En otra modalidad especifica, la vacunas de subunidades se prepara utilizando el virus de influenza que no se propagó en los huevos de pollo embrionados (es decir, los componentes de la vacuna de subunidades (por ejemplo, un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina ) se aislan del virus que no se propagó en huevos de pollo embrionados). En otra modalidad especifica, la vacuna de subunidades se prepara utilizando el virus de influenza que no se propagó en células de mamífero, por ejemplo, células humanas inmortalizadas (ver, por ejemplo, la Solicitud Internacional No. PCT/EP2006/067566 publicada como la Publicación Internacional No. WO 07/045674 la cual se incorpora en la presente como referencia en su totalidad) o células de riñon canino tales como las células MDCK (ver, por ejemplo, la Solicitud Internacional No. PCT/IB2007 /003536 publicada como la Publicación Internacional No. WO 08/032219 la cual se incorpora en la presente como referencia en su totalidad) (es decir, los componentes de la vacuna de subunidades (por ejemplo, un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina ) se aislan del virus que se propagó en células de mamífero) . En otra modalidad específica, el (los) polipéptido ( s ) del dominio del tallo de hemaglutinina en una vacuna de subunidades se preparan utilizando un vector de expresión, por ejemplo, un vector viral, vector de planta o un vector bacteriano (es decir, el (los) polipéptido ( s ) del dominio del tallo de hemaglutinina en la vacuna de subunidades se obtienen/aislan de un vector de expresión) . 5.11.2 Vacunas con Virus Vivos En una modalidad, se proveen en la presente composiciones inmunógenas (por ejemplo, vacunas) que comprenden un virus vivo que contiene un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza. En otra modalidad, se proveen en la presente composiciones inmunógenas (por ejemplo, vacunas) que comprenden un virus vivo que se crea genéticamente para codificar un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza, el cual es expresado por el virus descendiente producido en los sujetos administrados con las composiciones. En modalidades específicas, el polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza está limitado por membrana. En otras modalidades específicas, el polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina del virus de influenza no está limitado por membrana, es decir, soluble. En modalidades particulares, el virus vivo es un virus de influenza, tal como se describe en la Sección 5.4, supra . En otras modalidades, el virus vivo es un virus distinto al de la influenza, tal como se describe en la Sección 5.5, supra. En algunas modalidades, se atenúa el virus vivo. En algunas modalidades, una composición inmunógena comprende dos, tres, cuatro o más virus vivos que contienen o creados genéticamente para expresar dos, tres, cuatro o más diferentes polipéptidos del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza.

En ciertas modalidades, se proveen en la presente composiciones inmunógenas (por ejemplo, vacunas) que comprenden aproximadamente 105 hasta aproximadamente 1010 unidades del foco fluorescente (FFU) del virus de influenza atenuado vivo que contiene uno o más polipéptidos del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza descritos en la presente, de aproximadamente 0.1 hasta aproximadamente 0.5 mg de glutamato monosódico, de aproximadamente 1.0 hasta aproximadamente 5.0 mg de gelatina de procina hidrolizada, de aproximadamente 1.0 hasta aproximadamente 5.0 mg de arginina, de aproximadamente 10 hasta aproximadamente 15 mg de sacarosa, de aproximadamente 1.0 hasta aproximadamente 5.0 mg de fosfato de potasio dibásico, de aproximadamente 0.5 hasta aproximadamente 2.0 mg de fosfato de potasio monobásico, y de aproximadamente 0.001 hasta aproximadamente 0.05 µg/ml de sulfato de gentamicina por dosis. En algunas modalidades, las composiciones inmunógenas (por ejemplo, las vacunas) se empacan como atomizadores precargados que contienen dosis únicas de 0.2 mi.

En una modalidad especifica, se proveen en la presente composiciones inmunógenas (por ejemplo, las vacunas) que comprenden 106'5 a 107"5 FFU de virus de influenza atenuado vivo que contiene uno o más polipéptidos del dominio del tallo de hemaglut inina de influenza descritos en la presente, 0.188 mg de glutamato monosódico, 2.0 mg de gelatina de procina hidrolizada, 2.42 mg de arginina, 13.68 mg de sacarosa, 2.26 mg de fosfato de potasio dibásico, 0.96 mg de fosfato de potasio monobásico, y < 0.015 pg/ml de sulfato de gentamicina por dosis. En algunas modalidades, las composiciones inmunógenas (por ejemplo, las vacunas) se empacan como atomizadores precargados que contienen dosis únicas de 0.2 mi.

En una modalidad especifica, el virus vivo que contiene un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza se propaga en huevos de pollo embrionados antes de su uso en una composición inmunógena descrita en la presente. En otra modalidad especifica, el virus vivo que contiene un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza no se propaga en huevos de pollo embrionados antes de su uso en una composición inmunógena descrita en la presente. En otra modalidad especifica, el virus vivo que contiene un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza se propaga en células de mamífero, por ejemplo, células humanas inmortalizadas (ver, por ejemplo, la Solicitud Internacional No. PCT/EP2006/067566 publicada como la Publicación Internacional No. WO 07/045674 la cual se incorpora en la presente como referencia en su totalidad) o células de riñon canino tal como las células DCK (ver, por ejemplo, la Solicitud Internacional No. PCT/IB2007/003536 publicada como la Publicación Internacional No. WO 08/032219 la cual se incorpora en la presente como referencia en su totalidad) antes de su uso en una composición inmunógena descrita en la presente.

Una composición inmunógena que comprende un virus vivo para su administración a un sujeto, puede preferirse debido a que la multiplicación del virus en el sujeto puede llevar a un estímulo prolongado de índole y magnitud similares a las que se presentan en infecciones naturales, y por lo tanto, confieren inmunidad sustancial duradera. 5.11.3 Vacunas con Virus Inacti ados En una modalidad, se proveen en la presente composiciones inmunógenas (por ejemplo, las vacunas) que comprenden un virus inactivado que contiene un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza. En modalidades específicas, el polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza está limitado por la membrana. En modalidades particulares, el virus inactivado es un virus de influenza, tal como se describe en la Sección 5.4, supra . En otras modalidades, el virus inactivo es un virus distinto al de la influenza, tal como se describe en la Sección 5.5, supra. En algunas modalidades, una composición inmunógena comprende dos, tres, cuatro o más virus inactivados que contienen dos, tres, cuatro o más diferentes polipéptidos del dominio del tallo de hemaglut inina de influenza. En ciertas modalidades, las composiciones inmunógenas con virus inactivado comprenden uno o más adyuvantes.

Las técnicas conocidas para un experto en la técnica pueden utilizarse para inactivar virus que contienen un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza. Los métodos comunes utilizan formalina, calor, o detergente para la inactivación. Ver, por ejemplo, la Patente Norteamericana No. 6,635,246, la cual se incorpora en la presente como referencia en su totalidad. Otros métodos incluyen aquéllos descritos en las Patentes Norteamericanas Nos. 5,891,705; 5,106,619 y 4,693,981, las cuales se incorporan en la presente como referencia en su totalidad.

En ciertas modalidades, se proveen en la presente composiciones inmunógenas (por ejemplo, vacunas) que comprenden virus de influenza inactivado de tal manera que cada dosis de la composición inmunógena comprenda de aproximadamente 15 hasta aproximadamente 60 µ? del polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza descrito en la presente, de aproximadamente 1.0 hasta aproximadamente 5.0 mg de cloruro de sodio, de aproximadamente 20 hasta aproximadamente 10 g de fosfato de sodio monobásico, de aproximadamente 100 hasta aproximadamente 500 µg de fosfato de sodio dibásico, de aproximadamente 5 hasta aproximadamente 30 µg de fosfato de potasio monobásico, de aproximadamente 5 hasta aproximadamente 30 µg de cloruro de potasio, y de aproximadamente .5 hasta aproximadamente 3.0 µg de cloruro de calcio. En algunas modalidades, las composiciones inmunógenas (por ejemplo, las vacunas) se empacan como dosis únicas de 0.25 mi ó 0.5 mi. En otras modalidades, las composiciones inmunógenas (por ejemplo, las vacunas) se empacan como formulaciones de dosis múltiples.

En ciertas modalidades, se proveen en la presente composiciones inmunógenas (por ejemplo, las vacunas) que comprende el virus de influenza inactivado de tal manera que cada dosis de la composición inmunógena comprenda de aproximadamente 15 hasta aproximadamente 60 µg del polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza descrito en la presente, de aproximadamente 0.001% hasta 0.01% de timerosal, de aproximadamente 1.0 hasta aproximadamente 5.0 mg de cloruro de sodio, de aproximadamente 20 hasta aproximadamente 100 µg de fosfato de sodio monobásico, de aproximadamente 100 hasta aproximadamente 500 g de fosfato de sodio dibásico, de aproximadamente 5 hasta aproximadamente 30 pg de fosfato de potasio monobásico, de aproximadamente 5 hasta aproximadamente 30 pg de cloruro de potasio, y de aproximadamente 0.5 hasta aproximadamente 3.0 g de cloruro de calcio por dosis. En algunas modalidades, las composiciones inmunógenas (por ejemplo, las vacunas) se empacan como dosis únicas de 0.25 mi o 0.5 mi. En otras modalidades, las composiciones inmunógenas (por ejemplo, las vacunas) se empacan como formulaciones de dosis múltiples.

En una modalidad especifica, las composiciones inmunógenas (por ejemplo, las vacunas) provistas en la presente se empacan como dosis únicas de 0.25 mi y comprenden 22.5 pg del polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza descrito en la presente, 2.05 mg de cloruro de sodio, 40 g de fosfato de sodio monobásico, 150 g de fosfato de sodio dibásico, 10 g de fosfato de potasio monobásico, 10 µ? de cloruro de potasio, y 0.75 g de cloruro de calcio por dosis .

En una modalidad específica, las composiciones inmunógenas (por ejemplo, las vacunas) provistas en la presente se empacan como dosis únicas de 0.5 mi y comprenden 45 pg del polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza descrito en la presente, 4.1 mg de cloruro de sodio, 80 \ig de fosfato de sodio monobásico, 300 µq de fosfato de sodio dibásicó, 20 de fosfato de potasio monobásico, 20 pg de cloruro de potasio, y 1.5 µg de cloruro de calcio por dosis .

En una modalidad especifica, las composiciones inmunógenas (por ejemplo, las vacunas) se empacan como formulaciones de dosis múltiples que comprenden o consisten de 5.0 mi de vacuna (0.5 mi por dosis) y comprenden 24.5 g de mercurio (de timerosal), 45 g del polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza descrito en la presente, 4.1 mg de cloruro de sodio, 80 g de fosfato de sodio monobásico, 300 µ? de fosfato de sodio dibásico, 20 µg de fosfato de potasio monobásico, 20 µg de cloruro de potasio, y 1.5 µg de cloruro de calcio por dosis.

En una modalidad específica, el virus inactivado que contiene un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza se propagó en huevos de pollo embrionados antes de su inactivación y subsecuente uso en una composición inmunógena descrita en la presente. En otra modalidad especifica, el virus inactivado que contiene un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza no se propagó en huevos de pollo embrionados antes de su inactivación y subsecuente uso en una composición inmunógena descrita en la presente. En otra modalidad específica, el virus inactivado que contiene un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza se propagó en células de mamífero, por ejemplo, células humanas inmortalizadas (ver, por ejemplo, la Solicitud Internacional No. PCT/EP2006/067566 publicada como la Publicación Internacional No. WO 07/045674 la cual se incorpora en la presente como referencia en su totalidad) o células de riñon canino tales como las células MDCK (ver, por ejemplo, la Solicitud Internacional No. PCT/IB2007/003536 publicada como la Publicación Internacional No. WO 08/032219 la cual se incorpora en la presente como referencia en su totalidad) antes de su inactivación y subsecuente uso en una composición inmunógena descrita en la presente . 5.11.4 Vacunas de Virus Fraccionado En una modalidad, una composición inmunógena que comprende un polipéptido del dominio del tallo de hemaglut inina de influenza es una vacuna de virus fraccionado. En algunas modalidades, la vacuna de virus fraccionado contiene dos, tres, cuatro o más diferentes polipéptidos del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza. En ciertas modalidades, el polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza está/estaba limitado por la membrana. En ciertas modalidades, las vacunas de virus fraccionado comprenden uno o más adyuvantes.

Las técnicas para producir vacunas de virus fraccionado son conocidas para aquellos expertos en la técnica. A manera de ejemplo no limitativo, una vacuna fraccionada del virus de influenza puede prepararse utilizando partículas inactivadas deterioradas con detergentes. Un ejemplo de una vacuna de virus fraccionado que se puede adaptar para usarse de acuerdo con los métodos descritos en la presente es el Fluzone®, Vacuna contra el Virus de la Influenza (Zonal Purified, Subvirion) para uso intramuscular, la cual se formula como una suspensión estéril preparada de virus de influenza propagados en huevos de pollo embrionados. Los fluidos que contienen virus se cosechan y se inactivan con formaldehído . El virus de influenza se concentra y purifica en una solución de gradiente de sacarosa lineal utilizando una centrífuga de flujo continuo. El virus se deteriora entonces químicamente utilizando un surfactante no iónico, octoxinol-9, (Tritón® X-100 - Una marca comercial registrada de Union Carbide, Co.) produciendo un "virus fraccionado". El virus fraccionado se purifica entonces adicionalmente a través de medios químicos y se suspende en solución de cloruro de sodio isotónico amortiguado con fosfato de sodio.

En ciertas modalidades, se proveen en la presente vacunas con virus fraccionado que comprenden aproximadamente de 10 pg hasta aproximadamente 60 \.g de uno más polipéptidos del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza descritos en la presente, de aproximadamente 0.01 hasta aproximadamente 1.0 mg de octoxinol-10 (TRITON X-100®, de aproximadamente 0.5 hasta 0.5 mg de succinato de hidrógeno de -tocoferil, de aproximadamente 0.1 hasta 1.0 mg de polisorbato 80 (Tween 80), de aproximadamente 0.001 hasta aproximadamente 0.003 pg de hidrocortisona, de aproximadamente 0.05 hasta aproximadamente 0.3 pg de sulfato de gentamicina, de aproximadamente 0.5 hasta aproximadamente 2.0 de proteina de huevo de pollo (ovalbúmina) , de aproximadamente 25 hasta 75 pg de formaldehido, y de aproximadamente 25 hasta 75 g de desoxicolato de sodio.

En una modalidad especifica, una vacuna con virus fraccionado provista en la presente comprende o consiste de una dosis de 0.5 mi que comprende 45 pg de polipéptido ( s ) del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza provisto (s) en la presente, < 0.085 mg de octoxinol-10 (TRITON X-100®, = 0.1 mg de succinato hidrogenado de a-tocoferil, = .415 mg de polisorbato 80 (Tween 80), < 0.0016 pg de hidrocortisona, < 0.15 pg de sulfato de gentamicina, = 1.0 de proteina de huevo de pollo (ovalbúmina) , = 50 pg de formaldehido, y = 50 pg de desoxicolato de sodio. En algunas modalidades, la vacuna de subunidades de dosis de 0.5 mi se empaca en una jeringa precargada.

En una modalidad especifica, la vacuna con virus fraccionado se prepara utilizando el virus de influenza que se propagó en huevos de pollo embrionados. En otra modalidad especifica, la vacuna con virus fraccionado se prepara utilizando virus de influenza que no se propagó en huevos de pollo embrionados . En otra modalidad especifica, la vacuna con virus fraccionado se prepara utilizando el virus de influenza que se propagó en células de mamífero, por ejemplo, células humanas inmortalizadas (ver, por ejemplo, la Solicitud Internacional No. PCT/EP2006/067566 publicada como la Publicación Internacional No. WO 07/045674 la cual se incorpora como referencia en su totalidad) o células de riñon canino tales como las células MDCK (ver, por ejemplo, la Solicitud Internacional No. PCT/IB2007/003536 publicada como WO 08/032219 la cual se incorpora en la presente como referencia en su totalidad) . 5.11.5 Adyuvantes En ciertas modalidades, las composiciones descritas en la presente comprenden, o se administran en combinación con, un adyuvante. El adyuvante para administración en combinación con una composición descrita en la presente puede administrarse antes, concomitantemente con, o después de la administración de dicha composición. En algunas modalidades, el término "adyuvante" se refiere a un compuesto que cuando se administra en conjunción con o como parte de una composición descrita en la presente aumenta, mejora y/o refuerza la respuesta inmune a un polipéptido del dominio del tallo de hemaglut inina de influenza, aunque cuando el compuesto se administra solo no genera una respuesta inmune al polipéptido. En algunas modalidades, el adyuvante genera una respuesta inmune al polipéptido y no produce una alergia u otra reacción adversa. Los adyuvantes pueden mejorar una respuesta inmune mediante varios mecanismos incluyendo, por ejemplo, reclutamiento de linfocitos, estimulación de células B y/o T, y estimulación de macrófagos .

En ciertas modalidades, un adyuvante aumenta la respuesta intrínseca al polipéptido del dominio del tallo de hemaglut inina de influenza sin causar cambios conformacionales en el polipéptido que afecten la forma cualitativa de la respuesta. Los ejemplos específicos de adyuvantes incluyen, pero no están limitados a, sales de aluminio (alum) (tales como hidróxido de aluminio, fosfato de aluminio y sulfato de aluminio) , monofosforil-lípido A 3-des-o-acilado (MPL) (ver GB 2220211), MF59 (Novartis), AS03 (GlaxoSmithKline ) , AS04 (GlaxoSmithKline), polisorbato 80 (T een 80; ICL Americas, Inc.), compuestos de imidazopiridina (ver la Solicitud Internacional No. PCT/US2007/064857 , publicada como Publicación International No. W02007 /l 09812 ) , compuestos de imidazoquinoxalina (ver la Solicitud Internacional No. PCT/US2007/064858, publicada como Publicación Internacional No. WO2007/109813) y saponinas, tales como QS21 (ver Kensil et al., en Vaccine Design: The Subunit and Adjuvant Approach (eds. Powell & Newman, Plenum Press, NY, 1995) ; Patente Norteamericana No. 5,057,540) . En algunas modalidades, el adyuvante es adyuvante de Freund (completo o incompleto) .

Otros adyuvantes son emulsiones de aceite en agua (tales como aceite de escualeno o cacahuate) , opcionalmente en combinación con inmunoestimulantes, tales como el lipido A de monofosforilo (ver Stoute et al., N. Engl . J. Med . 336, 86-91 (1997)) . Otro adyuvante es CpG (Bioworld Today, Nov. 15, 1998) . Tales adyuvantes se pueden utilizar con o sin otros agentes inmunoestimulantes específicos tales como MPL ó 3-DMP, QS21, aminoácidos poliméricos o monoméricos tales como ácido poliglutémico o polilisina, u otros agentes inmunopotenciadores descritos en la Sección 5.4, supra . Se deberá entender que las diferentes formulaciones del polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza pueden comprender diferentes adyuvantes o pueden comprender el mismo adyuvante. 5.12 USOS PROFILÁCTICOS Y TERAPÉUTICOS En un aspecto, se proporcionan en la presente métodos para inducir una respuesta inmune en un sujeto que utiliza un compuesto activo, es decir, un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza descrito en la presente, un ácido nucleico que codifica tal polipéptido, un vector (por ejemplo, un vector viral, o una bacteria) que contiene o expresa tal polipéptido, o células estimuladas con tal polipéptido. En una modalidad específica, un método para inducir una respuesta inmune a un polipéptido de hemaglutinina del virus de influenza en un sujeto, comprende administrar a un sujeto en necesidad del mismo una cantidad efectiva de un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza o una composición inmunógena del mismo. En otra modalidad, un método para inducir una respuesta inmune a un polipéptido de hemaglutinina del virus de influenza en un sujeto, comprende administrar a un sujeto en necesidad del mismo una cantidad efectiva de un ácido nucleico que codifica un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza o una composición inmunógena del mismo. En otra modalidad, un método para inducir una respuesta inmune a un polipéptido de hemaglutinina del virus de influenza en un sujeto comprende administrar a un sujeto en necesidad del mismo una cantidad efectiva de un vector viral que contiene o expresa un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza o una composición inmunógena del mismo. En aún otra modalidad, un método para inducir una respuesta inmune a un polipéptido de hemaglutinina del virus de influenza en un sujeto comprende administrar a un sujeto en necesidad del mismo una cantidad efectivo de células estimuladas con un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza o una composición farmacéutica del mismo. En ciertas modalidades, un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza utilizado en el método es un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza purificado derivado de una célula de mamífero, una planta de célula, o una célula de insecto.

En una modalidad especifica, un método para inducir una respuesta inmune a un polipéptido de hemaglutinina del virus de influenza en un sujeto comprende administrar a un sujeto en necesidad del mismo una vacuna de subunidades descrita en la presente. En otra modalidad, un método para inducir una respuesta inmune a un polipéptido de hemaglutinina del virus de influenza en un sujeto comprende administrar a un sujeto en necesidad del mismo una vacuna con virus vivo descrita en la presente. En modalidades particulares, la vacuna con virus vivo comprende un virus atenuado. En otra modalidad, un método para inducir una respuesta inmune a un polipéptido de hemaglutinina del virus de influenza en un sujeto comprende administrar a un sujeto en necesidad del mismo una vacuna con virus inactivado descrito en la presente. En otra modalidad, un método para inducir una respuesta inmune a un polipéptido de hemaglutinina del virus de influenza en un sujeto comprende administrar a un sujeto en necesidad del mismo una vacuna con virus fraccionado descrito en la presente. En otra modalidad, un método para inducir una respuesta inmune a un polipéptido de hemaglutinina del virus de influenza en un sujeto comprende administrar a un sujeto en necesidad del mismo una vacuna de partículas similares a virus descrita en la presente. En otra modalidad, un método para inducir una respuesta inmune a un polipéptido de hemaglutinina de influenza comprende administrar a un sujeto en necesidad del mismo un virosoma descrito en la presente. En otra modalidad, un método para inducir una respuesta inmune a un polipéptido de hemaglutinina de influenza comprende administrar a un sujeto en necesidad del mismo una bacteria que expresa o creada genéticamente para expresar un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza o una composición del mismo. En ciertas modalidades, un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza utilizado en el método es un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza purificado derivado de una célula de mamífero, una célula de planta, o una célula de insecto.

En algunas modalidades, la respuesta inmune inducida por un compuesto activo o una composición descrita en la presente es efectiva para prevenir y/o tratar una infección por virus de influenza causada por cualquier subtipo o cepa del virus de la influenza. En ciertas modalidades, la respuesta inmune inducida por un compuesto activo o una composición descrita en la presente es efectiva para prevenir y/o tratar una infección por virus de influenza causada por un subtipo del virus de influenza que pertenece a un grupo HA (por ejemplo, el Grupo 1, el cual comprende Hl, H2 , H5, H6, H8, H9, Hll, H12, H13, y H16) y no el otro grupo HA (por ejemplo, el Grupo 2, el cual comprende H3, H4, H7, H10, H14, y H15) . Por ejemplo, la respuesta inmune inducida puede ser efectiva para prevenir y/o tratar una infección por virus de influenza causada por un virus de influenza que pertenece al grupo HA que consiste de Hll, H13, H16, H9, H8, H12, H6, Hl, H5 y H2. Alternativamente, la respuesta inmune inducida puede ser efectiva para prevenir y/o tratar una infección por virus de influenza causada por un virus de influenza que pertenece al grupo HA que consiste de H3, H4, H14, H10, H15 y H7. En algunas modalidades, la respuesta inmune inducida por un compuesto activo o una composición descrita en la presente es efectiva para prevenir y/o tratar una infección por virus de influenza causada por uno, dos, tres, cuatro o cinco subtipos del virus de la influenza. En ciertas modalidades, la respuesta inmune inducida por un compuesto activo o una composición descrita en la presente es efectiva para prevenir y/o tratar una infección por virus de influenza causada por seis, siete, ocho, nueve, diez, once, doce, trece, catorce o quince subtipos del virus de la influenza. En algunas modalidades, la respuesta inmune inducida por un compuesto activo o una composición descrita en la presente es efectiva para prevenir y/o tratar una infección por virus de influenza causada por una o más variantes dentro del mismo subtipo del virus de influenza.

En algunas modalidades, la respuesta inmune inducida por un compuesto activo o una composición descrita en la presente es efectiva para prevenir y/o tratar una infección por virus de influenza causada por ambos subtipos H1N1 y H2N2. En otras modalidades, la respuesta inmune inducida por un compuesto activo o una composición descrita en la presente no es efectiva para prevenir y/o tratar una infección por virus de influenza causada por ambos subtipos H1N1 y H2N2. En algunas modalidades, la respuesta inmune inducida por un compuesto activo o una composición descrita en la presente es efectiva para prevenir y/o tratar una infección por virus de influenza causada por los subtipos H1N1, H2N2 y H3N2. En algunas modalidades, la respuesta inmune inducida por un compuesto activo o una composición descrita en la presente es efectiva para prevenir y/o tratar una infección por virus de influenza causada por los subtipos H3N2. En otras modalidades, la respuesta inmune inducida por un compuesto activo o una composición descrita en la presente no es efectiva para prevenir y/o tratar una infección por virus de influenza causada por los subtipos H3N2.

En algunas modalidades, la respuesta inmune inducida por un compuesto activo o una composición descrita en la presente es efectiva para prevenir y/o tratar una enfermedad por virus de influenza causada por cualquier subtipo o cepa del virus de influenza. En ciertas modalidades, la respuesta inmune inducida por un compuesto activo o una composición descrita en la presente es efectiva para prevenir y/o tratar una enfermedad por virus de influenza causada por un subtipo del virus de influenza que pertenece a un grupo HA y no al otro grupo HA. Por ejemplo, la respuesta inmune inducida puede ser efectiva para prevenir y/o tratar una enfermedad por virus de influenza causada por un virus de influenza que pertenece al grupo HA que consiste de Hll, H13, H16, H9, H8, H12, H6, Hl, H5 y H2. Alternativamente, la respuesta inmune inducida puede ser efectiva para prevenir y/o tratar una enfermedad por virus de influenza causada por un virus de influenza que pertenece al grupo HA que consiste de H3, H4, H14, H10, H15 y H7. En algunas modalidades, la respuesta inmune inducida por un compuesto activo o una composición descrita en la presente es efectiva para prevenir y/o tratar una enfermedad por virus de influenza causada por cualquiera de uno, dos, tres, cuatro o cinco subtipos del virus de influenza. En ciertas modalidades, la respuesta inmune inducida por un compuesto activo o una composición descrita en la presente es efectiva para prevenir y/o tratar una enfermedad por virus de influenza causada por cualquiera de seis, siete, ocho, nueve, diez, once, doce, trece, catorce o quince subtipos del virus de la influenza. En algunas modalidades, la respuesta inmune inducida por un compuesto activo o una composición descrita en la presente es efectiva para prevenir y/o tratar una enfermedad por virus de influenza causada por una o más variantes dentro del mismo subtipo del virus de influenza.

En algunas modalidades, la respuesta inmune inducida por un compuesto activo o una composición descrita en la presente es efectiva para reducir los síntomas resultantes de una enfermedad/infección por virus de influenza. Los síntomas de la enfermedad/infección por virus de influenza incluyen, pero no están limitados a, dolores en el cuerpo (especialmente articulaciones y garganta), fiebre, náusea, jaquecas, ojos irritados, fatiga, garganta irritada, ojos o piel enrojecidos, y dolor abdominal.

En algunas modalidades, la respuesta inmune inducida por un compuesto activo o una composición descrita en la presente es efectiva para reducir la hospitalización de un sujeto que padece una enfermedad/infección por virus de influenza. En algunas modalidades, la respuesta inmune inducida por un compuesto activo o una composición descrita en la presente es efectiva para reducir la duración de la hospitalización de un sujeto que padece una enfermedad/infección por virus de influenza .

En otro aspecto, se proveen en la presente métodos para prevenir y/o tratar una infección por virus de influenza en un sujeto que utiliza un compuesto activo (por ejemplo, un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza descrito en la presente, un ácido nucleico que codifica tal polipéptido, un vector que contiene o expresa tal polipéptido, o células estimuladas con tal polipéptido) o una composición descrita en la presente. En una modalidad, un método para prevenir o tratar una infección por virus de influenza en un sujeto comprende administrar a un sujeto en necesidad del mismo un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza, un ácido nucleico que codifica tal polipéptido, un vector que contiene o expresa tal polipéptido, o una composición de cualquiera de los citados anteriormente. En una modalidad especifica, un método para prevenir o tratar una infección por virus de influenza en un sujeto comprende administrar a un sujeto en necesidad del mismo una vacuna de subunidades, una vacuna con virus vivo, una vacuna con virus inactivado, una vacuna de virus fraccionado o una vacuna de partículas similares a virus.

En otro aspecto, se proveen en la presente métodos para prevenir y/o tratar una enfermedad por virus de influenza en un sujeto que utiliza un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza descrito en la presente, un ácido nucleico que codifica tal polipéptido, un vector que contiene o expresa tal polipéptido, o células estimuladas con tal polipéptido .

En una modalidad específica, un método para prevenir o tratar una enfermedad por virus de influenza en un sujeto comprende administrar a un sujeto en necesidad del mismo una cantidad efectiva de un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza o una composición inmunógena del mismo. En otra modalidad, un método para prevenir o tratar una enfermedad por virus de influenza en un sujeto comprende administrar a un sujeto en necesidad del mismo una cantidad efectiva de un ácido nucleico que codifica un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza o una composición inmunógena del mismo. En otra modalidad, un método para prevenir o tratar una enfermedad por virus de influenza en un sujeto comprende administrar a un sujeto en necesidad del mismo una cantidad efectiva de un vector viral que contiene o expresa un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza o una composición inmunógena del mismo. En aún otra modalidad, un método para prevenir o tratar una enfermedad por virus de influenza en un sujeto comprende administrar a un sujeto en necesidad del mismo una cantidad efectiva de células estimuladas con un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza o una composición farmacéutica del mismo.

En una modalidad especifica, un método para prevenir o tratar una enfermedad por virus de influenza en un sujeto comprende administrar a un sujeto en necesidad del mismo una vacuna de subunidades descrita en la presente. En otra modalidad, un método para prevenir o tratar una enfermedad por virus de influenza en un sujeto comprende administrar a un sujeto en necesidad del mismo una vacuna con virus vivo descrita en la presente. En otras modalidades particulares, la vacuna con virus vivo comprende un virus atenuado. En otra modalidad, un método para prevenir o tratar una enfermedad por virus de influenza en un sujeto comprende administrar a un sujeto en necesidad de la misma una vacuna con virus inactivado descrita en la presente. En otra modalidad, un método para prevenir o tratar una enfermedad por virus de influenza en un sujeto comprende administrar a un sujeto en necesidad de la misma una vacuna con virus fraccionado descrita en la presente. En otra modalidad, un método para prevenir o tratar una enfermedad por virus de influenza comprende administrar a un sujeto en necesidad de la misma una vacuna de partículas similares a virus descrita en la presente. En otra modalidad, un método para prevenir o tratar una enfermedad por virus de influenza en un sujeto, comprende administrar a un sujeto en necesidad del mismo un virosoma descrito en la presente. En otra modalidad, un método para prevenir o tratar una enfermedad por virus de influenza en un sujeto que comprende administrar a un sujeto en necesidad de la misma una bacteria que exprese o creada genéticamente para expresar un polipéptido del dominio del tallo de hemaglut inina de influenza o una composición del mismo.

En otro aspecto, se proveen en la presente métodos para prevenir y/o tratar una enfermedad por virus de influenza en un sujeto administrando los anticuerpos neutralizantes descritos en la presente. En una modalidad específica, un método para prevenir o tratar una enfermedad por virus de influenza en un sujeto comprende administrar a un sujeto en necesidad del mismo una cantidad efectiva de un anticuerpo neutralizante descrito en la presente, o una composición farmacéutica del mismo. En modalidades particulares, el anticuerpo neutralizante es un anticuerpo monoclonal . En ciertas modalidades, el anticuerpo neutralizante no es CR6261, CR6325, CR6329, CR6307, CR6323, 2A, D7, D8 , FIO, G17, H40, ?66, D80, E88, E90, H98, C179 (FERM BP-4517), AI3C (FER BP-4516) o cualquier otro anticuerpo descrito en Ekiert DC et al. (2009) Antibody Recognition of a Highly Conserved Influenza Virus Epitope. Science (publicada en Science Express el 26 de Febrero de 2009); Kashyap et al. (2008) Combinatorial antibody librarles from survivors of the Turkish H5N1 avian influenza outbreak reveal virus neutralization strategies. Proc Nati Acad Sci U S A 105: 5986-5991; Sui et al. (2009), Structural and functional bases for broad-spectrum neutralization of avian and human influenza A viruses. Nat Struct Mol Biol 16: 265-273; Patentes Norteamericanas Nos. 5,589,174, 5,631,350, 6,337,070, y 6,720,409; Solicitud Internacional No. PCT/US2007/068983 publicada como Publicación Internacional No. WO 2007/134237; Solicitud Internacional No. PCT/US2008/075998 publicada como Publicación Internacional No. WO 2009/036157; Solicitud Internacional No. PCT/EP2007 /059356 publicada como Publicación Internacional No. WO 2008/028946; y Solicitud Internacional No. PCT/US2008/085876 publicada como Publicación Internacional No. WO 2009/079259. En otras modalidades, el anticuerpo neutralizante no es un anticuerpo descrito en Wang et al. (2010) "Broadly Protective Monoclonal Antibodies against H3 Influenza Viruses following Sequential Immunization with Different Hemagglutinins" , PLOS Pathogens 6(2) :l-9.

En ciertas modalidades, los métodos para prevenir o tratar una enfermedad o infección por virus de influenza en un sujeto (por ejemplo, un animal humano o no humano) provisto en la presente da como resultado una reducción en la replicación del virus de la influenza en el sujeto que se mide mediante ensayos in vivo e in vitro conocidos para aquellos expertos en la técnica y descritos en la presente. En algunas modalidades, la replicación del virus de la influenza se reduce aproximadamente a 1 log o más, aproximadamente 2 logs o más, aproximadamente 3 logs o más, aproximadamente 4 logs o más, aproximadamente 5 logs o más, aproximadamente 6 logs o más, aproximadamente 7 logs o más, aproximadamente 8 logs o más, aproximadamente 9 logs o más, aproximadamente 10 logs o más, 1 a 3 logs, 1 a 5 logs, 1 a 8 logs, 1 a 9 logs, 2 a 10 logs, 2 a 5 logs, 2 a 7 logs, 2 logs a 8 logs, 2 a 9 logs, 2 a 10 logs 3 a 5 logs, 3 a 7 logs, 3 a 8 logs, 3 a 9 logs, 4 a 6 logs, 4 a 8 logs, 4 a 9 logs, 5 a 6 logs, 5 a 7 logs, 5 a 8 logs, 5 a 9 logs, 6 a 7 logs, 6 a 8 logs, 6 a 9 logs, 7 a 8 logs, 7 a 9 logs, u 8 a 9 logs. 5.12.1 Terapias de combinación En varias modalidades, un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza descrito en la presente, un ácido nucleico que codifica tal polipéptido, un vector (por ejemplo, un vector viral o una bacteria) que contiene o expresa tal polipéptido, células estimuladas con tal polipéptido, o un anticuerpo neutralizante pueden administrarse a un sujeto en combinación con una o más de otras terapias (por ejemplo, terapias antivirales, antibacterianas, o inmunomoduladoras ) . En algunas modalidades, una composición farmacéutica (por ejemplo, una composición inmunógena) descrita en la presente puede administrarse a un sujeto en combinación con una o más terapias. Una o más de terapias diferentes pueden ser benéficas en el tratamiento o prevención de una enfermedad por virus de influenza o puede mejorar un síntoma o condición asociada con una enfermedad por virus de influenza. En algunas modalidades, una o más terapias diferentes son calmantes, medicaciones anti-fiebre, o terapias que alivian o ayudan con la respiración. En ciertas modalidades, las terapias se administran con intervalos de menos de 5 minutos, con intervalos de menos de 30 minutos, intervalo de 1 hora, intervalo de aproximadamente 1 hora hasta aproximadamente 2 horas, intervalo de aproximadamente 2 horas hasta aproximadamente 3 horas, intervalo de aproximadamente 3 horas hasta aproximadamente 4 horas, intervalo de aproximadamente 4 horas hasta aproximadamente 5 horas, intervalo de aproximadamente 5 horas hasta aproximadamente 6 horas, intervalo de aproximadamente 6 horas hasta aproximadamente 7 horas, intervalo de aproximadamente 7 horas hasta aproximadamente 8 horas, intervalo de aproximadamente 8 horas hasta aproximadamente 9 horas, intervalo de aproximadamente 9 horas hasta aproximadamente 10 horas, intervalo de aproximadamente 10 horas hasta aproximadamente 11 horas, intervalo de aproximadamente 11 horas hasta aproximadamente 12 horas, intervalo de aproximadamente 12 horas hasta 18 horas, intervalo de 18 horas hasta 24 horas, intervalo de 24 horas hasta 36 horas, intervalo de 36 horas hasta 48 horas, intervalo de 48 horas hasta 52 horas, intervalo de 52 horas hasta 60 horas, intervalo de 60 horas hasta 72 horas, intervalo de 72 horas hasta 84 horas, intervalo de 84 horas hasta 96 horas, o intervalo de 96 horas hasta 120 horas. En modalidades especificas, se administran dos o más terapias dentro de la misma visita del paciente.

Cualquier agente anti-viral bien conocido para un experto en la técnica puede utilizarse en combinación con un compuesto activo o composición farmacéutica descrita en la presente. Los ejemplos no limitativos de agentes anti-virales incluyen proteínas, polipéptidos , péptidos, proteínas de fusión, anticuerpos, moléculas de ácido nucleico, moléculas orgánicas, moléculas inorgánicas, y moléculas pequeñas que inhiben y/o reducen la adhesión de un virus a su receptor, la internalización de un virus en una célula, la replicación de un virus, o liberación del virus de una célula. En particular, los agentes anti-virales incluyen, pero no están limitados a, análogos de nucleósido (por ej emplo, zidovudina, aciclovir, gangciclovir , vidarabina, idoxuridina, trifluridina , y ribavirina), foscarnet, amantadina, peramivir, rimantadina, saquinavir, indinavir, ritonavir, alfa-interferones y otros interferones , AZT, zanamivir (Relenza®) , y oseltamivir (Tamiflu®) . Otros agentes anti-virales incluyen vacunas contra el virus de la influenza, por ejemplo, Fluarix® (GlaxoSmitfiKline) , FluMist® (Medlmmune Vaccines), Fluvirin® (Chiron Corporation) , Flulaval® (GlaxoSmitfiKline) , Afluria® (CSL Biotherapies Inc.), Agriflu® (Novartis) o Fluzone® (Aventis Pasteur) .

En modalidades especificas, el agente anti-viral es un agente inmunomodulador que es especifico para un antigeno viral. En modalidades particulares, el antigeno viral es un polipéptido del virus de influenza diferente a un polipéptido de hemaglutinina . En otras modalidades, el antigeno viral es un polipéptido de hemaglutinina del virus de influenza.

Puede utilizarse cualquier agente anti-bacteriano conocido para un experto en la técnica en combinación con un compuesto activo o composición farmacéutica descrita en la presente. Los ejemplos no limitativos de agentes antibacterianos incluyen Amikacina, Amoxicilina, Amoxicilina-ácido clavulánico, Anfotericina B, Ampicilina, Ampicilina-sulbactam, Apramicina, Azitromicina , Aztreonam, Bacitracina, Bencilpenicilina, Caspofungina, Cefaclor, Cefadroxilo, Cefalexina, Cefalotina, Cefazolina, Cefdinir, Cefepima, Cefixima, Cefmenoxima, Cefoperazona , Cefoperazona-sulbactam, Cefotaxima, Cefoxitina, Cefpiroma, Cefpodoxima, Cefpodoxima-ácido clavulánico, Cefpodoxima-sulbactam, Cefprozil, Cefquinoma, Ceftazidima, Ceftibutina, Ceftiofur, Ceftobiprol, Ceftriaxon, Cefuroxima, Cloramfenicol , Florfenicol, Ciprofloxacin, Claritromicina, Clinafloxacina, Clindamicina , Cloxacilina, Colistin, Cotrimoxazol (Trimtoprim/sulfametoxazol ) , Dalbavancina , Dalfopristin/Quinopristin, Daptomicina , Dibekacina, Dicloxacilina, Doripenem, Doxiciclina, Enrofloxacina, Ertapenem, Eritromicina , Flucloxacilina, Fluconazol, Flucitosin, Fosfomicina , Ácido fusidico, Garenoxacina , Gatifloxacina, Gemifloxacina, Gentamicina, Imipenem, Itraconazol, Kanamicina, Ketoconazol, Levofloxacina, Lincomicina, Linezolid, Loracarbef, ecillnam (amdinocilina) , Meropenem, Metronidazol , Meziocilina, Mezlocilina-sulbactam, Minociclina, oxifloxacina , Mupirocina, Ácido nalidixico, Neomicina, Netilmicina, Nitrofurantoina , Norfloxacina, Ofloxacina, Oxacilina, Pefloxacina, Penicilina V, Piperacilina, Piperacilina-sulbactam, Piperacilina-tazobactam, Rifampicina, Roxitromicina , Esparfloxacina , Espectinomicina, Espiramicina , Estreptomicina, Sulbactam, Sulfametoxazol, Teicoplanina, Telavancina, Telitromicina, Temocilina, Tetraciclina , Ticarcilina, Ticarcilina-ácido clavulánico, Tigeciclina, Tobramicina, Trimetoprim, Trovafioxacin, Tilosin, Vancomicina, Virginiamicina , y Voriconazol.

En algunas modalidades, una terapia de combinación comprende inmunización activa con un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza, o uno o más vectores descritos en las Secciones 5.2-5.7 e inmunización pasiva con uno o más de los anticuerpos neutralizantes descritos en la Sección 5.9. En algunas modalidades, una terapia de combinación comprende inmunización con uno o más de los vectores descritos en las Secciones 5.2-5.7 y la administración de células (por ejemplo, mediante transferencia adoptiva) descrita en la Sección 5.9.

En algunas modalidades, una terapia de combinación comprende la administración de dos o más de los diferentes vectores descritos en las Secciones 5.2-5.7. En un ejemplo, uno o más vectores que expresan un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza derivado de un polipéptido de hemaglutinina del virus de influenza A y uno o más vectores que expresan un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza derivado de un polipéptido de hemaglutinina del virus de influenza B se administran en combinación. En algunas modalidades, una terapia de combinación comprende la administración de un vector que expresa un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza derivado de un antigeno H3 del virus de influenza A y un vector que expresa un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza derivado de un antigeno Hl del virus de influenza A. En algunas modalidades, la terapia de combinación comprende la administración de un vector que expresa un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza derivado de un antígeno H3 del virus de influenza A, un vector que expresa un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza derivado de un antigeno Hl del virus de influenza A, y un vector que expresa un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza de un polipéptido de hemaglutinina del virus de influenza B.

En algunas modalidades, una terapia de combinación comprende inmunización activa con un compuesto activo que induce una respuesta inmune a uno, dos, tres, o más subtipos HA en un grupo HA (por ejemplo, el Grupo 1) en combinación con un compuesto activo que induce una respuesta inmune a uno, dos, tres, o más subtipos HA en el otro grupo HA (por ejemplo, el Grupo 2 ) .

En algunas modalidades, una terapia de combinación comprende inmunización activo con dos o más polipéptidos del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza descritos en las Secciones 5.1.1-5.1.2. En algunas modalidades, una terapia de combinación comprende inmunización activa con dos o más polipéptidos del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza descritos en la Sección 5.1. 5.12.2 Poblaciones de Pacientes En ciertas modalidades, un compuesto activo o composición descrita en la presente pueden administrarse a un sujeto sin tratamiento previo, es decir, un sujeto que no tiene una enfermedad causada por una infección por virus de influenza o que no ha estado y no está actualmente infectado con una infección por virus de influenza. En una modalidad, un compuesto activo o composición descrita en la presente se administra a un sujeto sin tratamiento previo que está en riesgo de adquirir una infección por virus de influenza. En una modalidad, un compuesto activo o composición descrita en la presente se administra a un sujeto que no tiene una enfermedad causada por el virus de influenza especifico, o no ha estado y no está infectado con el virus de influenza especifico al cual el polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza induce una respuesta inmune. Un compuesto activo o composición descrita en la presente también puede administrarse a un sujeto que está y/o ha sido infectado con el virus de influenza u otro tipo, subtipo o cepa del virus de influenza al cual el polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza induce una respuesta inmune .

En ciertas modalidades, un compuesto activo o composición descrita en la presente se administra a un paciente que ha sido diagnosticado con una infección por virus de influenza. En algunas modalidades, un compuesto activo o composición descrita en la presente se administra a un paciente infectado con un virus de influenza antes de que los síntomas se manifiesten o los síntomas se vuelvan severos (por ejemplo, antes de que el paciente requiera hospitalización) . En algunas modalidades, un compuesto activo o composición descrita en la presente se administra a un paciente que está infectado o ha sido diagnosticado con un tipo diferente del virus de influenza al del virus de influenza del cual se derivó el polipéptido del dominio del tallo de HA del compuesto activo o composición .

En ciertas modalidades, un compuesto activo o composición descrito en la presente se administra a un paciente que puede o está infectado con un virus de influenza que pertenece al mismo grupo HA que el del polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza. En ciertas modalidades, un compuesto activo o composición descrita en la presente se administra a un paciente que puede estar o esta infectado con un virus de influenza del mismo subtipo que el del polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza.

En algunas modalidades, un sujeto al que se administra un compuesto activo o composición descrita en la presente es un animal. En ciertas modalidades, el animal es un ave. En ciertas modalidades, el animal es un canino. En ciertas modalidades, el animal es un felino. En ciertas modalidades, el animal es un caballo. En ciertas modalidades, el animal es una vaca. En ciertas modalidades, el animal es un mamífero, por ejemplo, un caballo, cerdo, ratón, o primate, preferiblemente un humano.

En ciertas modalidades, un sujeto al que se administra un compuesto activo o composición descrita en la presente es un humano adulto. En ciertas modalidades, un sujeto al que se administra un compuesto activo o composición descrita en la presente es un humano adulto de más de 50 años de edad. En ciertas modalidades, un sujeto al que se administra un compuesto activo o composición descrita en la presente es un sujeto humano anciano.

En ciertas modalidades, un sujeto al que se administra un compuesto activo o composición descrita en la presente es un niño humano. En ciertas modalidades, un sujeto al que se administra un compuesto activo o composición descrita en la presente es un humano infante. En ciertas modalidades, un sujeto al cual un compuesto activo o composición descrita en la presente se administra no es un infante de menos de 6 meses de edad. En una modalidad específica, un sujeto al que se administra un compuesto activo o composición descrita en la presente es de 2 años de edad o más joven.

En modalidades específicas, un sujeto al que se administra un compuesto activo o composición descrita es cualquier infante o niño mayor de 6 meses de edad y cualquier adulto mayor de 50 años de edad. En otras modalidades, el sujeto es un individuo que está gestante. En otra modalidad, el sujeto es un individuo que puede estar o estará gestante durante la temporada de la influenza (por ejemplo, de Noviembre a Abril) . En modalidades especificas, un sujeto al que se administra un compuesto activo o composición descrita en la presente es una mujer que ha dado a luz 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 u 8 semanas antes.

En algunas modalidades, el sujeto humano al que se administra un compuesto activo o composición descrita en la presente es cualquier individuo con riesgo incrementado de infección o enfermedad por virus de influenza que resulta de una infección por virus de influenza (por ejemplo, un individuo inmunocompromet ido o inmunodeficiente ) . En algunas modalidades, el sujeto humano al que se administra un compuesto activo o composición descrita en la presente es cualquier individuo en contacto cercano con un individuo con riesgo incrementado de infección o enfermedad por virus de influenza resultante de la infección por virus de influenza (por ejemplo, individuos con sistema inmune comprometido o inmunosupresión ) .

En algunas modalidades, el sujeto humano al que se administra un compuesto activo o composición descrita en la presente es un individuo afectado por cualquier condición que incremente la susceptibilidad a la infección por virus de influenza o complicaciones o enfermedad resultante de la infección por virus de influenza. En otras modalidades, un compuesto activo o composición descrita en la presente se administra a un sujeto en el cual una infección por virus de influenza tiene el potencial de incrementar las complicaciones de otra condición por la que el individuo se vea afectado por, o por la cual los mismos estén en riesgo. En modalidades particulares, tales condiciones que incrementen la susceptibilidad a complicaciones por virus de influenza o por las cuales el virus de influenza incremente las complicaciones asociadas con la condición son, por ejemplo, condiciones que afectan el pulmón, tal como fibrosis quistica, enfisema, asma, o infecciones bacterianas (por ejemplo, infecciones causadas por Haemophilus influenzae, Streptococcus pneumoniae, Legionella pneu ophila , y Chlamydia trachomatus) ; enfermedad cardiovascular (por ejemplo, enfermedad cardiaca congénita, insuficiente cardiaca congestiva, y enfermedad arterial coronaria); enfermedades endocrinas (por ejemplo, diabetes), condiciones neurológicas y neuro-evolutivas (por ejemplo, enfermedades del cerebro, la médula espinal, el nervio periférico, y musculares (tales como parálisis cerebral, epilepsia (enfermedades epilépticas), apoplejía, discapacidad intelectual (por ejemplo, retraso mental) , distrofia muscular, y lesión de la médula espinal) ) .

En algunas modalidades, el sujeto humano al que se administra un compuesto activo o composición descrita en la presente es un individuo que reside en un hogar social, tal como una casa de reposa. En algunas modalidades, el sujeto humano al que se administra un compuesto activo o composición descrita en la presente trabaja en, o consume una cantidad significativa de tiempo en, un hogar social, por ejemplo, una casa de reposo. En algunas modalidades, el sujeto humano al que se administra un compuesto activo o composición descrita en la presente es un trabajador sano del cuidado de la salud (por ejemplo, un doctor o enfermera) . En algunas modalidades, el sujeto humano al que se administra un compuesto activo o composición descrita en la presente es un fumador. En una modalidad especifica, el sujeto humano al que se administra un compuesto activo o composición descrita en la presente tiene sistema inmune comprometido o inmunosupresión .

Además, los sujetos en riesgo incrementado de desarrollar complicaciones de influenza a los que se pueden administrar un compuesto activo o composición descrita en la presente incluyen: cualquier individuo que pueda transmitir virus de influenza a aquéllos en alto riesgo de complicaciones, tales como, por ejemplo, miembros de grupos familiares con individuos en alto riesgo, que incluyen grupos familiares que incluirán infantes menores de 6 meses, individuos que están en contacto con infantes menores a 6 meses de edad, o individuos que estarán en contacto con individuos que viven en casas de reposo u otras instalaciones de atención a largo plazo; individuos con enfermedades prolongadas de los pulmones, corazón, o circulación; individuos con enfermedades metabólicas (por ejemplo, diabetes); individuos con enfermedades del riñon; individuos con enfermedades de la sangre (incluyendo anemia o enfermedad de las células falciformes ) ; individuos con sistemas inmunes debilitados (incluyendo la inmunosupresión causada por medicaciones, malignidades tales como el cáncer, trasplante de órganos, o infección por VIH) ; niños que recibieron terapia con aspirina a largo plazo (y por lo tanto tienen mayor posibilidad de desarrollar síndrome de Reye si están infectados con influenza) .

En otras modalidades, los sujetos con administración de un compuesto activo o composición descrita en la presente incluyen individuos sanos de seis meses de edad o mayores, que: planean viajar a países extranjeros y áreas donde pueden ocurrir brotes de gripe, tal como, por ejemplo, los trópicos y el Hemisferio Sur de Abril a Septiembre; viajar como parte de grupos grandes de turistas organizados que pueden incluir personas de áreas del mundo donde están circulante virus de influenza; ir a la escuela o universidad y residir en dormitorios, o residir en ambientes institucionales; o que desean reducir su riesgo de enfermarse de influenza.

En algunas modalidades, un sujeto para el cual la administración de un compuesto activo o composición descrita en la presente está contraindicada incluyen cualquier individuo para el cual esté contraindicada la vacunación contra la influenza, tal como: infantes menores de seis meses de edad; e individuos que hayan tenido una reacción anafiláctica (reacciones alérgicas que causen dificultad para respiración, la cual frecuentemente es seguida por chogue) a huevos, productos a base de huevo, u otros componentes utilizados en la producción de la formulación inmunógena . En ciertas modalidades, cuando la administración de un compuesto activo o composición descrita en la presente está contraindicada debido a uno o más componentes utilizados en la producción de la formulación inmunógena (por ejemplo, debido a la presencia de huevo o productos a base de huevo) , el compuesto activo o composición puede producirse de manera que no incluya el componente que causa que la administración de un compuesto activo o composición esté contraindicada (por ejemplo, el compuesto activo o composición puede producirse sin el uso de huevos o productos a base de huevo) .

En algunas modalidades, puede ser aconsejable no administrar una vacuna con virus vivo a una o más de las siguientes poblaciones de pacientes: humanos ancianos; infantes menores de 6 meses de edad; individuos gestantes; infantes por debajo de la edad de 1 año; niños por debajo de la edad de 2 años; niños por debajo de la edad de 3 años; niños por debajo de la edad de 4 años; niños por debajo de la edad de 5 años; adultos por debajo de la edad de 20 años; adultos por debajo de la edad de 25 años; adultos por debajo de la edad de 30 años; adultos por debajo de la edad de 35 años; adultos por debajo de la edad de 40 años; adultos por debajo de la edad de 45 años; adultos por debajo de la edad de 50 años; humanos ancianos por arriba de la edad de 70 años; humanos ancianos por arriba de la edad de 75 años; humanos ancianos por arriba de la edad de 80 años; humanos ancianos por arriba de la edad de 85 años; humanos ancianos por arriba de la edad de 90 años; humanos ancianos por arriba de la edad de 95 años; niños y adolescentes (2-17 años de edad) que reciben aspirina o medicaciones que contienen aspirina, debido a las complicaciones asociadas con la aspirina y las infecciones por virus de influenza de tipo silvestre en este grupo de edad; individuos con un historial de asma u otras enfermedades reactivas de las vias respiratorias; individuos con condiciones médicas subyacentes crónicas que pueden predisponerlos a infecciones severas infecciones por influenza; individuos con un historial de síndrome de Guillain-Barre ; individuos con enfermedades graves serias con fiebre; o individuos que están moderada o gravemente enfermos. Para tales individuos, puede preferirse la administración de vacunas con virus inactivado, vacunas de virus fraccionado, vacunas de subunidades, virosomas, partículas similares a virus o los vectores no virales descritos en la presente. En ciertas modalidades, los sujetos a los que preferiblemente se administra una vacuna con virus vivo pueden incluir niños y adolescentes sanos, de edades de 2-17 años, y adultos sanos, de edades de 18-49.

En ciertas modalidades, una formulación inmunógena que comprende una vacuna con virus vivo no se da concurrentemente con otras vacunas con virus vivo. 5.13 MODOS DE ADMINISTRACIÓN 5.13.1 Rutas de Suministro Un compuesto activo o composición descrita en la presente puede suministrarse a un sujeto mediante una variedad de rutas. Estos incluyen, pero no se limitan a, rutas intranasal, intratraqueal, oral, intradérmica , intramuscular, intraperitoneal , transdérmica, intravenosa, conjuntival y subcutánea. En algunas modalidades, una composición se formula para administración tópica, por ejemplo, para su aplicación en la piel. En modalidades específicas, la ruta de administración es nasal, por ejemplo, como parte de un atomizador nasal. En ciertas modalidades, una composición se formula para administración intramuscular. En algunas modalidades, una composición se formula para administración subcutánea. En ciertas modalidades, una composición no se formula para su administración por inyección. En modalidades específicas para vacunas con virus vivo, la vacuna se formula para su administración mediante una ruta diferente a la inyección.

En casos donde el antigeno es un vector viral, un vector de partículas similares a virus, o un vector bacteriano, por ejemplo, puede ser preferible para introducir una composición inmunógena a través de la ruta de infección natural del virus o bacteria estructural del cual se derivó el vector. Alternativamente, puede ser preferible introducir un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza a través de la ruta de infección natural del virus de influenza del cual se deriva el polipéptido. La capacidad de un antígeno, particularmente un vector viral, para inducir una respuesta inmune celular y secretoria vigorosa se puede utilizar de manera ventajosa. Por ejemplo, la infección del tracto respiratorio por un vector viral puede inducir una fuerte respuesta inmune secretoria, por ejemplo, en el sistema urogenital, con protección concomitante contra un virus de influenza. Además, en una modalidad preferida, puede ser deseable introducir las composiciones farmacéuticas en los pulmones mediante cualquier ruta adecuada. La administración pulmonar también se puede emplear, por ejemplo, mediante el uso de un inhalador o nebulizador, y la formulación con un agente para aerosol que se utiliza como un atomizador.

En una modalidad específica, una vacuna de subunidades se administra intramuscularmente . En otra modalidad, un virus de influenza vivo o vacuna contra NDV vivo se administra intranasalmente . En otra modalidad, una vacuna de vacuna con virus inactivado, o una vacuna contra virus de influenza fraccionado se administra intramuscularmente . En otra modalidad, una vacuna con virus de NDV inactivado o una vacuna contra el virus NDV fraccionado se administra intramuscularmente. En otra modalidad, una partícula similar a virus o composición de la misma se administra intramuscularmente .

En algunas modalidades, las células estimuladas con un polipéptido del dominio del tallo de hemaglut inina de influenza in vitro puede introducirse (o re-introducirse) en un sujeto que utiliza técnicas conocidas para un experto en la técnica. En algunas modalidades, las células se pueden introducir en la dermis, bajo la dermis, o en la corriente sanguínea periférica. En algunas modalidades, las células introducidas en un sujeto preferiblemente son células derivadas de ese sujeto, para evitar una respuesta inmune adversa. En otras modalidades, las células también que se pueden utilizar se derivan de un huésped donador que tiene un fondo inmune similar. Otras células también se pueden utilizar, incluyendo aquéllas diseñadas para evitar una respuesta inmunógena adversa. 5.13.2 Dosificación y Frecuencia de Administración La cantidad de un compuesto activo o composición la cual será efectiva en el tratamiento y/o prevención de una infección por virus de influenza o una enfermedad por virus de influenza dependerá de la naturaleza de la enfermedad, y se puede determinar mediante técnicas clínicas estándar.

La dosis precisa a emplearse en la formulación también dependerá de la ruta de administración, y la seriedad de la infección o enfermedad causada por la misma, y deberá decidirse de acuerdo al criterio del practicante y de cada una de las circunstancias del sujeto. Por ejemplo, las dosis efectivas también pueden variar dependiendo del medio de administración, sitio objetivo, estado fisiológico del paciente (incluyendo edad, peso corporal, salud), si el paciente es humano o un animal, otras mediciones administradas, y si el tratamiento es profiláctico o terapéutico. Usualmente, el paciente es un humano aunque también se pueden tratar mamíferos no humanos incluyendo mamíferos transgénicos . Las dosificaciones de tratamiento son óptimamente tituladas para optimizar la seguridad y la eficacia .

En ciertas modalidades, se emplea un ensayo in vitro para ayudar a identificar rangos de dosificación óptima. Las dosis efectivas pueden extrapolarse de curvas de respuesta a la dosis derivada de sistemas de análisis con modelo animal o in vitro .

Las dosis ejemplificantes para ácidos nucleicos que codifican polipéptidos del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza varían desde aproximadamente 10 ng hasta 1 g, de 100 ng a 100 mg, de 1 pg a 10 mg, ó de 30-300 pg de ácido nucleico, por ejemplo, el ADN, por paciente.

En ciertas modalidades, las dosis ejemplificantes para polipéptidos del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza (por ejemplo, como se proporcionan en las vacunas de virus fraccionado y vacunas de subunidades) varían de aproximadamente 5 pg a 100 mg, de 15 pg a 50 mg, de 15 pg a 25 mg, de 15 pg a 10 mg, de 15 pg a 5 mg, de 15 g a 1 mg, de 15 pg a 100 pg, de 15 pg a 75 pg, de 5 pg a 50 pg, de 10 pg a 50 pg, de 15 pg a 45 pg, de 20 pg a 40 pg, o de 25 a 35 pg por kilogramo del paciente. En otras modalidades, las dosis ejemplificantes para polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza varían de aproximadamente 1 pg a 50 mg, 5 pg a 50 mg, 1 pg a 100 mg, 5 pg a 100 mg, 15 pg a 50 mg, 15 pg a 25 mg, 15 pg a 10 mg, 15 pg a 5 mg, 15 pg a 1 mg, 15 pg a 100 pg, 15 pg a 75 pg, 5 pg a 50 pg, 10 pg a 50 pg, 15 pg a 45 pg, 20 pg a 40 pg, ó 25 a 35 pg de polipéptidos del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza por dosis.

Las dosis para vectores virales infeccioso pueden variar de 10-100, o más, viriones por dosis. En algunas modalidades, las dosificaciones adecuadas de un vector de virus son de 102, 5 x 102, 103, 5 x 103, 104, 5 x 104, 105, 5 x 105, 106, 5 x 106, 107, 5 x 107, 108, 5 x 108, 1 x 109, 5 x 109, 1 x 1010, 5 x 1010, 1 x 1011, 5 x 1011 ó 1012 pfu, y se pueden administrar a un sujeto una vez, dos veces, tres o más veces con intervalos tan frecuentes como sea necesario.

En ciertas modalidades, las dosis ejemplificantes para VLPs varían de aproximadamente 0.01 pg hasta aproximadamente 100 mg, de aproximadamente 0.1 pg hasta aproximadamente 100 mg, de aproximadamente 5 pg hasta aproximadamente 100 mg, de aproximadamente 15 pg hasta aproximadamente 50 mg, de aproximadamente 15 pg hasta aproximadamente 25 mg, de aproximadamente 15 pg hasta aproximadamente 10 mg, de aproximadamente 15 pg hasta aproximadamente 5 mg, de aproximadamente 15 pg hasta aproximadamente 1 mg, de aproximadamente 15 pg hasta aproximadamente 100 pg, de aproximadamente 15 pg hasta apro imadamente 75 g, de aproximadamente 5 pg hasta aproximadamente 50 g. de aproximadamente 10 pg hasta aproximadamente 50 g, de aproximadamente 15 pg hasta aproximadamente 45 g, de aproximadamente 20 pg hasta aproximadamente 40 pg, o de aproximadamente 25 hasta aproximadamente 35 pg por kilogramo del paciente. En otras modalidades, las dosis ejemplificantes para polipéptidos del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza varían de aproximadamente 1 pg hasta aproximadamente 50 mg, de aproximadamente : 5 pg hasta aproximadamente 50 mg , de aproximadamente 1 pg hasta aproximadamente 100 mg, de aproximadamente 5 hasta aproximadamente 100 mg, de aproximadamente 15 g hasta aproximadamente 50 mg , de aproximadamente 15 hasta aproximadamente 25 mg , de aproximadamente 15 hasta aproximadamente 10 mg , de aproximadamente 15 pg hasta i aproximadamente 5 mg , de aproximadamente 15 ug hasta i aproximadamente 1 mg , de aproximadamente 15 ug hasta aproximadamente 100 ug , de aproximadamente 15 yg hasta aproximadamente 75 ug , de apro imadamente 5 g hasta aproximadamente 50 g , de aproximadamente 10 g hasta aproximadamente 50 µq , de aproximadamente 15 g hasta aproximadamente 45 pg , de aproximadamente 20 ug hasta aproximadamente 40 vg, o de aproximadamente 25 hasta aproximadamente 35 µq de polipéptidos del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza por dosis, y se pueden administrar a un sujeto una vez, dos veces, tres veces o más veces con intervalos tan frecuentes como sea necesario .

En una modalidad, una vacuna inactivada se formula de tal manera que la misma contenga de aproximadamente 5 pg hasta aproximadamente 50 g. de aproximadamente 10 g hasta aproximadamente 50 de aproximadamente 15 pg hasta aproximadamente 100 ug , de aproximadamente 15 g hasta aproximadamente 75 pg de aproximadamente 15 g hasta apro imadamente 50 g de aproximadamente 15 g hasta aproximadamente 30 ug, de aproximadamente 20 pg hasta aproximadamente 50 U9r de aproximadamente 25 pg hasta aproximadamente 40 µq, de aproximadamente 25 g hasta aproximadamente 35 pg de un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza. Tal vacuna puede contener una combinación de uno o más polipéptidos del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza, por ejemplo uno o más polipéptidos del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza de un virus de la influenza A y uno o más polipéptidos del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza de un virus de influenza B. En algunas modalidades, los polipéptidos del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza derivados de, por ejemplo, A/H1N1, A/H3N2, y polipéptidos de hemaglutinina B se incluyen en una vacuna inactivada trivalente (TIV) , formulada de tal manera que una dosis de 0.5 mL contenga 15 pg de cada polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza. En una modalidad, una vacuna contra influenza atenuada viva (LAIV) se formula de tal manera que una dosis de 0.2 mL contenga ^Q6'5"7"5 unidades focales fluorescentes de virus de influenza atenuados vivos de tres cepas que expresan al menos un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza.

En ciertas modalidades, un compuesto activo o composición se administra a un sujeto una vez como una dosis única. En ciertas modalidades, un compuesto activo o composición se administra a un sujeto como una dosis única seguida por una segunda dosis 3 a 6 semanas después. De acuerdo con estas modalidades, pueden administrarse inoculaciones de refuerzo al sujeto en intervalos de 6 a 12 meses después de la segunda inoculación. En ciertas modalidades, las inoculaciones de refuerzo pueden utilizar un compuesto activo o composición diferente. En algunas modalidades, la administración del mismo compuesto activo o composición puede repetirse y las administraciones pueden estar separadas por al menos 1 dia, 2 días, 5 días, 10 días, 15 días, 30 días, 45 días, 2 meses, 75 días, 3 meses o al menos 6 meses. En ciertas modalidades, un compuesto activo o composición se administra a un sujeto como una dosis única una vez por año.

En modalidades específicas para su administración a niños, dos dosis de un compuesto activo o composición, dadas con al menos con un intervalo de un mes, se administran a un niño. En modalidades específicas para la administración en adultos, se da una dosis única. En otra modalidad, dos dosis de un compuesto activo o composición, dadas con al menos un intervalo de un mes, se administran a un adulto. En otra modalidad, a un niño más pequeño (seis meses a nueve años de edad) puede administrarse un compuesto activo o composición por primera vez en dos dosis dadas con intervalo de un mes. En una modalidad particular, un niño que recibió solamente una dosis en su primer año de vacunación deberá recibir dos dosis en el siguiente año. En algunas modalidades, se prefieren dos dosis administradas con un intervalo de 4 semanas para niños de 2-8 años de edad a los que se administra una vacuna contra la influenza, por ejemplo, una formulación inmunógena descrita en la presente, por primera vez. En ciertas modalidades, para niños de 6-35 meses de edad, puede preferirse la mitad de dosis (0.25 mi), en contrate con 0.5 mi los cuales pueden preferirse para sujetos por arriba de tres años de edad.

En modalidades particulares, un compuesto activo o composición se administra a un sujeto en el otoño o invierno, es decir, antes o durante la temporada de la influenza en cada hemisferio. En una modalidad, a los niños se les administra su primera dosis al principio de la temporada, por ejemplo, al finalizar Septiembre o a principios de Octubre, de modo que la segunda dosis se pueda dar antes del apogeo de la temporada de la influenza.

Para inmunización pasiva con un anticuerpo, la dosificación varia de aproximadamente 0.0001 a 100 mg/kg, y más usualmente de 0.01 a 5 mg/kg, del peso corporal del paciente. Por ejemplo, las dosificaciones pueden ser de 1 mg/kg de peso corporal ó 10 mg/kg de peso corporal o dentro del rango de 1-10 mg/kg o en otras palabras, 70 mg ó 700 mg o dentro del rango de 70-700 mg, respectivamente, para un paciente de 70 kg. Un régimen de tratamiento e emplificante conlleva la administración una vez por cada dos semanas o una vez al mes o una vez cada 3 a 6 meses durante un periodo de un año o por más de varios años, o intervalos de varios años. En algunos métodos, dos o más anticuerpos monoclonales con diferentes especificidades de unión se administran simultáneamente, en cuyo caso la dosificación de cada anticuerpo administrado cae dentro del rango indicado. El anticuerpo usualmente se administra en múltiples ocasiones. Los intervalos entre dosificaciones únicas pueden ser semanales, mensuales o anuales. Los intervalos también pueden ser irregulares como se indica por la medición de los niveles en sangre de anticuerpos para el polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza en el paciente. 5.14 ENSAYOS BIOLÓGICOS 5.14.1 Ensayos para Analizar la Actividad del Polipéptido del Dominio del Tallo de Hemaglutinina de Influenza Los ensayos para analizar la expresión de un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza en un vector descrito en la presente pueden realizarse utilizando cualquier ensayo conocido en la técnica. Por ejemplo, un ensayo para la incorporación en un vector viral comprende desarrollar el virus como se describe en esta sección o Secciones 5.4 a 5.5, purificando las partículas virales mediante centrifugación a través de una almohadilla de sacarosa, y subsecuente análisis de la expresión del polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza mediante un inmunoensayo, tal como transferencia de Western, utilizando métodos bien conocidos en la técnica.

En una modalidad, se examina el apropiado plegamiento y funcionalidad de un polipéptido del dominio del tallo de hemaglut inina de influenza descrito en la presente analizando su capacidad de unirse específicamente a un anticuerpo neutralizante dirigido a un polipéptido de hemaglutinina del virus de influenza, tal como la región del tallo del polipéptido, utilizando cualquier ensayo para la interacción ant icuerpo-antígeno conocida en la técnica. Los anticuerpos neutralizantes para usarse en tales ensayos incluyen, por ejemplo, los anticuerpos neutralizantes descritos en Ekiert DC et al., 2009, Science Express, 26 de Febrero de 2009; Kashyap et al., 2008, Proc Nati Acad Sci U S A 105: 5986-5991; Sui et al. 2009, Nature Structural and Molecular Biology, 16:265-273; Wang et al., 2010, PLOS Pathogens 6(2): 1-9; Patentes Norteamericanas Nos. 5,589,174, 5,631,350, 6,337,070, y 6,720,409; Solicitud Internacional No. PCT/US2007/068983 publicada como la Publicación Internacional No. O 2007/134237; Solicitud Internacional No. PCT/US2008/075998 publicada como Publicación Internacional No. WO 2009/036157; Solicitud Internacional PCT/EP2007/059356 publicada como Publicación Internacional No. WO 2008/028946; y Solicitud Internacional No. PCT/US2008/085876 publicada como la Publicación Internacional No. WO 2009/079259. Estos anticuerpos incluyen CR6261, CR6325, CR6329, CR6307, CR6323, 2?, D7, D8, FIO, G17, H40, A66, D80, E88, E90, H98, C179 ( FERM BP-4517), AI3C ( FERM BP-4516), entre otros.

En otra modalidad, se examina el apropiado plegamiento de un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza descrito en la presente mediante la determinación de la estructura o conformación del polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza utilizando cualquier método conocido en la técnica tal como, por ejemplo, NMR, métodos cristalográficos con rayos X, o métodos de predicción de la estructura secundaria, por ejemplo, dicroismo circular. 5.14.2 Ensayos para Examinar la Actividad de los Anticuerpos Generados utilizando el Polipéptido del Dominio del Tallo de Hemaglutinina de Influenza Los anticuerpos descritos en la presente pueden caracterizarse en una variedad de maneras conocidas para un experto en la técnica (por ejemplo ELISA, exhibición por resonancia de Plasmón Superficial (BlAcore) , transferencia de Western, inmunofluorescencia, inmunotinción y/o ensayos en microneutralización) . En algunas modalidades, se examina la capacidad de unirse específicamente a un polipéptido de hemaglutinina del virus de influenza de los anticuerpos, o un vector que comprenda dicho polipéptido. Tal ensayo puede realizarse en solución (por ejemplo, Houghten, 1992, Bio/Techniques 13:412 421), en perlas (Lam, 1991, Nature 354:82 84), en fragmentos (Fodor, 1993, Nature 364:555 556), en bacterias (Patente Norteamericana No. 5,223,409), en esporas (Patentes Norteamericanas Nos. 5,571,698; 5,403,484; y 5,223,409), en plásmidos (Culi et al., 1992, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 89: 1865 1869) o en fago (Scott and Smith, 1990, Science 249:386 390; Cwirla et al., 1990, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 87:6378 6382; y Felici, 1991, J. Mol. Biol. 222:301 310) (cada una de estas referencias se incorpora en la presente en su totalidad como referencia) .

Se puede examinar la unión especifica de un anticuerpo al polipéptido de hemaglutinina del virus de influenza y la reacción cruzada con otros antigenos mediante cualquier método conocido en la técnica. Los inmunoensayos que se pueden utilizar para analizar la unión especifica y reacción cruzada incluyen, pero no están limitados a, sistemas de ensayo competitivos y no competitivos que utilizan técnicas tales como transferencias de Western, radioinmunoensayos , ELISA (análisis de inmunoabsorción ligado a enzimas), inmunoensayos "sándwich", ensayos de inmunoprecipitación, reacciones de precipitina, reacciones de precipitina con difusión de gel, ensayos de inmunodifusión, ensayos de aglutinación, ensayos de fijación de complemento, ensayos inmuno-radiométricos , inmunoensayos fluorescentes, inmunoensayos con proteina A, por nombrar sólo unos pocos. Tales ensayos son rutinarios y bien conocidos en la técnica (ver, por ejemplo, Ausubel et al., eds . , 1994, Current Protocols in Molecular Biology, Vol . 1, John Wiley & Sons, Inc., New York, que se incorpora como referencia en la presente en su totalidad) .

La afinidad de unión de un anticuerpo a un polipéptido de hemaglutinina del virus de influenza y la constante de disociación de una interacción anticuerpo-antigeno se puede determinar mediante ensayos de unión competitiva. Un ejemplo de un ensayo de unión competitiva es un radioinmunoensayo que comprende la incubación del antigeno etiquetado (por ejemplo, 3H o 125I) con el anticuerpo de interés en la presencia de cantidades aumentativas del antigeno no etiquetado, y la detección del anticuerpo unido al antígeno etiquetado. La afinidad del anticuerpo para un polipéptido de hemaglutinina del virus de influenza y las constantes de disociación de unión se pueden determinar a partir de los datos mediante análisis con gráfica de Scatchard. La competición con un segundo anticuerpo también se puede determinar utilizando radioinmunoensayos . En este caso, una polipéptido de hemaglutinina del virus de influenza se incuba con el anticuerpo de análisis conjugado con un compuesto etiquetado (por ejemplo, H o I) en la presencia de cantidades aumentativas de un segundo anticuerpo no etiquetado.

En ciertas modalidades, la afinidad de unión de anticuerpos y las constantes de relación se miden utilizando el Sistema KinExA 3000 (Sapidyne Instruments, Boise, ID). En algunas modalidades, el análisis con resonancia de plasmón superficial (por ejemplo, cinética BIAcore) se utiliza para determinar las constantes de asociación y disociación de unión de los anticuerpos a un polipéptido de hemaglutinina del virus de influenza. El análisis de cinética BIAcore comprende analizar la unión y disociación del polipéptido de hemaglutinina del virus de influenza de fragmentos con anticuerpos inmovilizados a un polipéptido de hemaglutinina del virus de influenza en su superficie. Un estudio de cinética BIAcore típico involucra la inyección de 250 µ?? de un reactivo de anticuerpo (mAb, Fab) a concentración variable en amortiguador HBS que contiene 0.005% de Tween-20 sobre una superficie de fragmentos del sensor, sobre la cual se ha inmovilizado el polipéptido de hemaglutinina del virus de influenza. La relación de flujo se mantiene constante a 75 L/min. Los datos de disociación se recolectan durante 15 min o más cuando es necesario. Después de cada ciclo de inyección/disociación, el anticuerpo unido se remueve de la superficie del polipéptido de hemaglutinina del virus de influenza utilizando pulsos de 1 min breves de ácido diluido, típicamente HC1 1C-100 mM, aunque se emplean otros regeneradores cuando las circunstancias lo justifican. Más específicamente, para la medición de las relaciones de asociación, kon, y disociación, koff, el polipéptido se inmoviliza directamente sobre la superficie de fragmento sensor a través del uso de químicas de acoplamiento con amina estándar, particularmente el método EDC/NHS (EDC = N-dietilaminopropil ) -carbodiimida ) . En breve, una solución de 5-100 nM del polipéptido en NaOAc 10 mM, pH de 4 ó pH de 5 se prepara y se pasa sobre la superficie activada con EDC/NHS hasta aproximadamente 30-50 RUs del valor del polipéptido se inmovilizan. Después de esto, los ésteres activos sin reaccionar se "tapan" con una inyección de Et-NH2 1M. Una superficie en blanco, que no contiene polipéptido, se prepara bajo condiciones de inmovilización idénticas para propósitos de referencia. Una vez que se ha preparado una superficie apropiada, se prepara una serie de diluciones adecuadas de cada uno de los reactivos de anticuerpos en HBS/Tween-20 , y se pasa tanto sobre el polipéptido como las superficies celulares de referencia, las cuales están conectadas en serie. El rango de concentraciones de anticuerpos que se preparan varia, dependiendo de cuál constante de unión de equilibrio, KD, se estima que es. Como se describe anteriormente, el anticuerpo unido se remueve después de cada ciclo de inyección/disociación utilizando un regenerador apropiado.

La actividad neutralizante de un anticuerpo se puede determinar utilizando cualquier ensayo conocido para un experto en la técnica. Se puede examinar la capacidad de inhibir la unión de un virus de influenza de los anticuerpos descritos en la presente, o cualquier otra composición que comprenda el polipéptido de hemaglutinina del virus de influenza (por ejemplo, una VLP, liposoma, o extracto detergente), a su receptor de células huésped (es decir, ácido siálico) utilizando técnicas conocidas para aquellos expertos en la técnica. Por ejemplo, las células que expresan receptores del virus de influenza se puede poner en contacto con una composición que comprenda el polipéptido de hemaglutinina del virus de influenza en la presencia o ausencia del anticuerpo y la capacidad del anticuerpo de inhibir la unión del antigeno, se puede medir, por ejemplo, mediante citometria de flujo o un ensayo de cintilación. La composición que comprende un polipéptido de hemaglutinina del virus de influenza o el anticuerpo se puede etiquetar con un compuesto detectable tal como una etiqueta radioactiva (por ejemplo, 32P, 35S, y 125I) o una etiqueta fluorescente (por ejemplo, isocianato de fluoresceina, rodamina, ficoeritrina, ficocianina, aloficocianina , o-ftaldehido y fluorescamina) para permitir la detección de una interacción entre la composición que comprende un polipéptido de hemaglutinina del virus de influenza y un receptor celular. Alternativamente, la capacidad de los anticuerpos de inhibir la unión de un polipéptido de hemaglutinina del virus de influenza a su receptor se puede determinar en ensayos libres de células. Por ejemplo, se puede determinar una composición que comprende un polipéptido de hemaglutinina del virus de influenza se puede poner en contacto con un anticuerpo y la capacidad del anticuerpo de inhibir la unión de la composición que comprende un polipéptido de hemaglutinina del virus de influenza a un receptor celular. En una modalidad especifica, el anticuerpo se inmoviliza en un soporte sólido y la composición que comprende un polipéptido de hemaglutinina del virus de influenza se etiqueta con un compuesto detectable. Alternativamente, una composición que comprende un polipéptido de hemaglutinina del virus de influenza se inmoviliza sobre un soporte sólido y el anticuerpo se etiqueta con un compuesto detectable. En ciertas modalidades, se determina la capacidad de un anticuerpo de inhibir la unión de un polipéptido de hemaglutinina del virus de la influenza a un receptor celular examinando el porcentaje de inhibición de unión del anticuerpo en relación a un control (por ejemplo, un anticuerpo conocido por inhibir la unión del polipéptido de hemaglutinina del virus de influenza al receptor celular) .

En otras modalidades, un anticuerpo adecuado para usarse en los métodos descritos en la presente no inhibe la unión del receptor del virus de la influenza, incluso todavía se encuentra que es neutralizante en un ensayo descrito en la presente. En algunas modalidades, un anticuerpo adecuado para usarse de acuerdo con los métodos descritos en la presente reduce o inhibe la fusión de la membrana huésped al virus en un ensayo conocido en la técnica o descrito en la presente.

En una modalidad, se examina la fusión de la membrana huésped al virus en un ensayo in vi tro utilizando un virus de influenza que contiene un reportero y una célula huésped capaz de infectarse con el virus. Un anticuerpo inhibe la fusión si la actividad del reportero es inhibida o reducida en comparación con un control negativo (por ejemplo, la actividad del reportero en la presencia de un anticuerpo de control o en la ausencia del anticuerpo) .

En una modalidad, la fusión de la membrana huésped al virus es detectada utilizando un sistema modelo de fusión celular. En un ensayo de fusión celular ejemplificante, las células (por ejemplo, las células HeLa) se transfectan con un plásmido que codifica un polipéptido de hemaglut inina de influenza y se ponen en contacto y se exponen a un amortiguador que permita la función de fusión de polipéptidos de hemaglutinina (por ejemplo, amortiguador de pH 5.0) en la presencia de un anticuerpo. Un anticuerpo es neutralizante si se reduce o inhibe la formación de sincitios en comparación con un control negativo (por ejemplo, formación de sincitios en la presencia de un anticuerpo de control o en la ausencia del anticuerpo) .

En otras modalidades, la fusión de la membrana huésped al virus se examina utilizando un ensayo a base de liposomas in vitro. En un ensayo e emplificante, el receptor de células huésped es reconstituido en liposomas que contienen la mitad de un reportero. El polipéptido de hemaglutinina de influenza es reconstituido en otro conjunto de liposomas que contienen la otra mitad de un reportero. Cuando las dos poblaciones de liposomas se mezclan conjuntamente, la fusión es detectada mediante la reconstitución del reportero, por ejemplo, una reacción enzimática que se puede detectar colorimétricamente . El anticuerpo inhibe la fusión si la actividad del reportero se reduce o inhibe en comparación con la actividad del reportero en un ensayo realizado en la ausencia del anticuerpo o en la presencia de un anticuerpo de control. En ciertas modalidades, la capacidad de un anticuerpo de inhibir la fusión se determina evaluando el porcentaje de fusión en la presencia del anticuerpo en relación al porcentaje de fusión en la presencia de un control. 5.14.3 Ensayos para Analizar la Actividad de las Células Estimuladas En las células estimuladas de acuerdo con los métodos descritos en la presente puede analizarse, por ejemplo, la integración, transcripción y/o expresión del polinucleótido o gen (es) de interés, el número de copias del gen integrado, y la ubicación de la integración. Tal análisis puede llevarse a cabo en cualquier momento y puede llevarse a cabo mediante cualquier método conocido en la técnica. En otras modalidades, la estimulación exitosa de la célula objetivo con un polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza descrito en la presente se determina detectando la producción de anticuerpos neutralizantes contra el polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza utilizando métodos conocidos en la técnica o descritos en la presente.

En ciertas modalidades, en sujetos en los cuales se administran las células estimuladas, por ejemplo, las DCs, se puede analizar la ubicación de las células, la expresión de un polinucleótido suministrado al vector o gen que codifica el polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza, la estimulación de una respuesta inmune (por ejemplo, la producción de anticuerpos neutralizantes contra el polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza) , y/o monitorear los síntomas asociados con la infección por virus de influenza o una enfermedad asociada con la misma mediante cualquier método conocido en la técnica o descrito en la presente.

Se pueden utilizar ensayos con reporteros para determinar la especificidad del objetivo del polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza. Por ejemplo, una población mixta de células de médula ósea se puede obtener de un sujeto y cultivarse in vitro. El polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza se puede administrar a la población mixta de células de médula ósea, y la expresión de un gen reportero asociado con el polipéptido del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza se puede examinar en las células cultivadas. En algunas modalidades, al menos aproximadamente 50%, de manera más preferible al menos aproximadamente 60%, 70%, 80% ó 90%, todavía de manera más preferible al menos aproximadamente 95% de células estimuladas en la población de células mixtas son células dendríticas. 5.14.4 Ensayos de la Actividad Anti iral Se puede examinar in vitro la actividad antiviral de los anticuerpos descritos en la presente o composiciones de los mismos. En una modalidad, se analiza in vitro el efecto en el crecimiento de un virus de la influenza de los anticuerpos o composiciones de los mismos. El crecimiento del virus de influenza se puede examinar mediante cualquier método conocido en la técnica o descrito en la presente (por ejemplo en cultivo celular) . En una modalidad específica, las células infectadas a una MOI de 0.0005 y 0.001, 0.001 y 0.01, 0.01 y 0.1, 0.1 y 1, ó 1 y 10, o una MOI de 0.0005, 0.001, 0.005, 0.01, 0.05, 0.1, 0.5, 1, 5 ó 10 e incubarse con medios libres de suero suplementados . Las titulaciones virales se determinan en el sobrenadante mediante placas de hemaglutinina o cualquier otro ensayo viral descrito en la presente. Las células en las cuales se pueden examinar las titulaciones virales incluyen, pero no están limitadas a, células EFK-2, células Vero, células MDCK, células endoteliales de la vena umbilical humana primaria (HUVEC) , línea de células epiteliales humanas H292 y células HeLa . Los ensayos in vitro incluyen aquéllos que miden la replicación viral alterada (como se determina, por ejemplo, mediante formación de placas) o la producción de proteínas virales (como se determina, por ejemplo, mediante análisis de transferencia de Western) o ARNs virales (como se determina, por ejemplo, mediante RT-PCR o análisis de transferencia de Northern) en células cultivadas in vitro utilizando métodos los cuales son bien conocidos en la técnica o descritos en la presente.

En un ejemplo no limitativo, una unicapa de la linea de células objetivo de mamífero es infectada con diferentes cantidades (por ejemplo, multiplicidad de 3 unidades de formación de placa (pfu) ó 5 pfu) de virus (por ejemplo, influenza) y subsecuentemente cultivarse en la presencia o ausencia de varias diluciones de anticuerpos (por ejemplo, 0.1 pg/ml, 1 pg/ml, 5 pg/ml, ó 10 pg/ml) . Los cultivos infectados se cosechan 48 horas o 72 horas post-infección y se titulan mediante ensayos de placa estándar conocidos en la técnica en la línea de células objetivo apropiadas (por ejemplo, células Vero) .

En un ejemplo no limitativo de ensayo de hemaglutinación, las células se ponen en contacto con un anticuerpo y se infectan concurrente o subsecuentemente con el virus (por ejemplo, a una OI de 1 ) y el virus se incuba bajo condiciones que permiten la replicación del virus (por ejemplo, 20-24 horas) . Los anticuerpos preferiblemente se presentan durante todo el transcurso de la infección. La replicación viral y liberación de partículas virales se determina entonces mediante ensayos de hemaglutinación utilizando 0.5% de glóbulos rojos de pollo. Ver, por ejemplo, Kashyap et al., PNAS USA 105: 5986-5991. En algunas modalidades, un compuesto se considera un inhibidor de replicación viral si él mismo reduce la replicación viral al menos a 2 pozos de HA, lo cual igual aproximadamente una reducción del 75% en la titulación viral. En modalidades especificas, un inhibidor reduce la titulación viral en este ensayo al 50% o más, al 55% o más, al 60% o más, al 65% o más, al 70% o más, al 75% o más, al 80% o más, al 85% o más, al 90% o más, o al 95% o más. En modalidades especificas un inhibidor da como resultado una reducción de aproximadamente a 1 log o más, aproximadamente 2 logs o más, aproximadamente 3 logs o más, aproximadamente 4 logs o más, aproximadamente 5 logs o más, aproximadamente 6 logs o más, aproximadamente 7 logs o más, aproximadamente 8 logs o más, aproximadamente 9 logs o más, aproximadamente 10 logs o más, 1 a 3 logs, 1 a 5 logs, 1 a 8 logs, 1 a 9 logs, 2 a 10 logs, 2 a 5 logs, 2 a 7 logs, 2 logs a 8 logs, 2 a 9 logs, 2 a 10 logs 3 a 5 logs, 3 a 7 logs, 3 a 8 logs, 3 a 9 logs, 4 a 6 logs, 4 a 8 logs, 4 a 9 logs, 5 a 6 logs, 5 a 7 logs, 5 a 8 logs, 5 a 9 logs, 6 a 7 logs, 6 a 8 logs, 6 a 9 logs, 7 a 8 logs, 7 a 9 logs, u 8 a 9 logs en titulación del virus de la influenza en el sujeto. La reducción logarítmica en la titulación del virus de influenza puede compararse con un control negativo, en comparación con otro tratamiento, o en comparación con la titulación en el paciente antes de la administración del anticuerpo. 5.14.5 Ensayos de Citotoxicidad Muchos ensayos bien conocidos en la técnica se pueden utilizar para examinar la viabilidad de las células (infectadas o no infectadas) o líneas celulares después de su exposición a un compuesto activo o una composición del mismo y, por consiguiente, determinar la citotoxicidad del compuesto o composición. Por ejemplo, la proliferación celular se puede examinar midiendo la incorporación de Bromodesoxiuridina (BrdU) (Ver, por ejemplo, Hoshino et al., 1986, Int. J. Cáncer 38, 369; Campana et al., 1988, J. Immunol . Meth. 107:79), incorporación de timidina (3H) {Ver por ejemplo, Chen, J., 1996, Oncogene 13:1395-403; Jeoung, J. , 1995, J. Biol . Chem. 270:18367 73), mediante conteo celular directo, o detectando cambios en la transcripción, traducción o actividad de genes conocidos tales como los proto-oncogenes (por ejemplo, fos, myc) o marcadores del ciclo celular (Rb, cdc2, ciclina A, DI, D2 , D3, E, etc.) . Los niveles de tal proteína y ARNm y la actividad se pueden determinar mediante cualquier método bien conocido en la técnica. Por ejemplo, la proteína se puede cuantificar mediante métodos de inmunodiagnóstico conocidos tales como ELISA, transferencia de Western o inmunoprecipitación utilizando anticuerpos, incluyendo anticuerpos comercialmente disponibles. El ARNm se puede cuantificar utilizando métodos que sean conocidos y habituales en la técnica, por ejemplo, utilizando análisis Northern, protección con RNasa, o reacción en cadena de polimerasa en relación con transcripción inversa. La viabilidad celular se puede examinar utilizando tinción de azul de tripano u otros marcadores de muerte o viabilidad celular conocidos en la técnica. En una modalidad especifica, el nivel de ATP celular se mide para determinar la viabilidad celular.

En modalidades específicas, la viabilidad celular se mide en períodos de tres días y siete días utilizando un ensayo estándar en la técnica, tal como el Kit de Ensayo CellTiter-Glo (Promega) que mide los niveles de ATP intracelular . Una reducción en el ATP celular es indicativa de un efecto citotóxico. En otra modalidad específica, la viabilidad celular se puede medir en el ensayo de absorción del rojo neutro. En otras modalidades, la observación visual de cambios morfológicos puede incluir agrandamiento, granularidad, células con bordes irregulares, una apariencia membranosa, redondeado, desprendimiento de la superficie del pozo, u otros cambios. A estos cambios se da una designación de T (100% tóxico), PVH (parcialmente tóxico-muy pesado-80%), PH (parcialmente tóxico-pesado-60% ) , P (parcialmente tóxico-40%), Ps (parcialmente tóxico-ligero-20% ) , ó 0 (sin toxicidad-0% ) , que se ajustan el grado de citotoxidad visto. Una concentración inhibidora de células del 50% (citotóxica) (IC50) se determina mediante el análisis de regresión de estos datos.

En una modalidad especifica, las células utilizadas en el ensayo de citotoxicidad son células animales, incluyendo células primarias y lineas celulares. En algunas modalidades, las células son células humanas. En ciertas modalidades, la citotoxidad se examina en una o más de las siguientes lineas celulares: U937, una linea de células monociticas humanas; células mononucleares de sangre periférica primaria (PBMC); Huh7, una linea celular de hepatoblastoma humano; 293T, una linea celular de riñon embrionario humano; y THP-1, células monociticas. En ciertas modalidades, la citotoxicidad se examina en una o más de las siguientes lineas celulares: MDCK, MEF, Huh 7.5, Detroit, o células epiteliales tráqueo-bronquiales humanas (HTBE) .

Se puede analizar la toxicidad in vivo de los compuestos activos o composiciones de los mismos en modelos animales. Por ejemplo, los modelos animales, descritos en la presente y/u otros conocidos en la técnica, utilizados para analizar las actividades de compuestos activos también se puede utilizar para determinar la toxicidad in vivo de estos compuestos. Por ejemplo, se administra a los animales un rango de concentraciones de compuestos activos. Subsecuentemente, se monitorea la letalidad, pérdida de peso o la falta de aumentar de peso, y/o niveles de marcadores de suero de los animales con el transcurso del tiempo que pueden ser indicativos de daño en el tejido (por ejemplo, nivel de creatina-fosfocinasa como un indicador del daño general en el tejido, nivel de transaminasa de ácido oxálico-glutámico o transamínasa de ácido pirúvico como indicadores de posible daño en el hígado) . Estos ensayos in vivo también pueden adaptarse para analizar la toxicidad de diversos modos y/o régimen de administración además de las dosificaciones.

La toxicidad y/o eficacia de un compuesto activo se puede determinar mediante procedimientos farmacéuticos estándar en cultivos celulares o animales experimentales, por ejemplo, para determinar la LD50 (la dosis letal al 50% de la población) y la ED50 (la dosis terapéuticamente efectiva en el 50% de la población) . La proporción de dosis entre los efectos tóxicos y terapéuticos es el índice terapéutico y se puede expresar como la proporción LD50/ED50. Se prefiere un compuesto activo que exhiba grandes índices terapéuticos. Aunque puede utilizarse un compuesto activo que exhiba efectos secundarios tóxicos, se debe tener cuidado en diseñar un sistema de suministro que dirija tales agentes al sitio de tejido afectado con el fin de minimizar el daño potencial a las células no infectadas y, así, reducir los efectos secundarios.

Los datos obtenidos de los ensayos con cultivo celular y estudios en animales se pueden utilizar al formular un rango de dosificación de un compuesto activo para usarse en humanos. La dosificación de tales agentes se encuentra preferiblemente dentro de un rango de concentraciones circulantes que incluyen la ED50 con poco o nada de toxicidad. La dosificación puede variar dentro de este rango dependiendo de la forma de dosificación empleada y la ruta de administración utilizada. Para cualquier compuesto activo utilizado en un método descrito en la presente, la dosis efectiva se puede estimar inicialmente a partir de los ensayos en cultivo celular. Una dosis puede formularse en modelos animales para lograr un rango de concentración circulante en plasma que incluye la IC50 (es decir, la concentración del compuesto de prueba que logra una inhibición media-máxima de los síntomas) que se determina en el cultivo celular. Tal información se puede utilizar para determinar con más exactitud las dosis útiles en humanos. Los niveles en plasma pueden medirse, por ejemplo, mediante cromatografía de líquidos de alto rendimiento. Se provee en la presente, información adicional concerniente a la determinación de la dosificación.

Además, cualquier ensayo conocido para aquellos expertos en la técnica se puede utilizar para evaluar la utilidad profiláctica y/o terapéutica de los compuestos activos y composiciones descritas en la presente, por ejemplo, midiendo la infección viral o una condición o síntomas asociados con los mismos. 5.14.6 Actividad Antiviral In vivo Preferiblemente se examina in vivo la actividad terapéutica o profiláctica deseada de los compuestos activos y composiciones de los mismos antes de usarse en humanos. Por ejemplo, se pueden utilizar ensayos in vivo para determinar si es preferible administrar un compuesto activo o composición del mismo y/u otra terapia. Por ejemplo, para examinar el uso de un compuesto activo o composición del mismo para prevenir una enfermedad por virus de influenza, la composición se puede administrar antes de que el animal se infecte con virus de influenza. Alternativamente, o además, un compuesto activo o composición del mismo se puede administrar al animal al mismo tiempo que el animal está infectado con el virus de la influenza. Para examinar el uso de un compuesto activo o composición del mismo para tratar una infección por virus de influenza o enfermedad asociada con la mismo, el compuesto o composición puede administrarse después de infectar al animal con el virus de la influenza. En una modalidad especifica, un compuesto activo o composición del mismo se administra al animal más de una vez.

Se puede analizar la actividad antiviral de los compuestos activos y composiciones de los mismos en sistemas de modelo animal que incluyen, pero no están limitados a, ratas, ratones, pollos, vacas, monos, cerdos, cabras, ovejas, perros, conejos, cobayos, etc. En una modalidad especifica, los compuestos activos y composiciones de los mismos se analizan en un sistema de modelo de ratón. Tales sistemas de modelo se utilizan ampliamente y son bien conocidos para un experto. En una modalidad especifica, los compuestos activos y composiciones de los mismos se analizan en un sistema de modelo de ratón. Los ejemplos no limitativos de modelos animales para el virus de la influenza se proveen en esta sección.

En general, los animales se infectan con el virus de la influenza y concurrente o subsecuentemente se tratan con un compuesto activo o composición del mismo, o placebo. Alternativamente, los animales se tratan con un compuesto activo o composición del mismo o placebo y subsecuentemente se infectan con el virus de la influenza. Se puede analizar la replicación viral de las muestras obtenidas de estos animales (por ejemplo, suero, orina, esputo, semen, saliva, saliva, plasma, o muestra de tejido) a través de métodos bien conocidos en la técnica, por ejemplo, aquéllos que miden las titulaciones virales alteradas (como se determina, por ejemplo, mediante formación de placas), la producción de proteínas virales (como se determina, por ejemplo, mediante transferencia de Western, ELISA, o análisis de citometria de flujo) o la producción de ácidos nucleicos virales (como se determina, por ejemplo, mediante RT-PCR o análisis de transferencia Northern) . Para la cuantificación del virus en muestras de tejido, las muestras de tejido se homogenizan en solución salina amortiguada con fosfato (PBS), y las diluciones de homogenados clarificados se absorben durante 1 hora a 37°C en unicapas de células (por ejemplo, células Vero, CEF o MDCK) . En otros ensayos, se realizan evaluaciones histopatológicas después de la infección, preferiblemente evaluaciones del (los) órgano (s), el virus es conocido por dirigir la infección. La inmunohistoquímica del virus se puede realizar utilizando un anticuerpo monoclonal especifico viral.

El efecto de un compuesto activo o composición del mismo en la virulencia de un virus también se puede determinar utilizando en ensayos in vivo en los cuales la titulación del virus en un sujeto infectado administrado con un compuesto activo o composición del mismo, la duración de la supervivencia de un sujeto infectado administrado con un compuesto activo o composición del mismo, la respuesta inmune en un sujeto infectado administrado con un compuesto activo o composición del mismo, el número, duración y/o severidad de los síntomas en un sujeto infectado administrado con un compuesto activo o composición del mismo, y/o el período de tiempo antes de la aparición de uno o más síntomas en un sujeto infectado administrado con un compuesto activo o composición del mismo, se examina. Las técnicas conocidas para un experto en la técnica se pueden utilizar para medir tales efectos. En ciertas modalidades, un compuesto activo o composición del mismo da como resultado una reducción de 0.5 veces, 1 vez, 2 veces, 4 veces, 6 veces, 8 veces, 10 veces, 10 veces, 15 veces, 20 veces, 25 veces, 50 veces, 75 veces, 100 veces, 125 veces, 150 veces, 175 veces, 200 veces, 300 veces, 400 veces, 50 veces, 750 veces, ó 1,000 veces o una reducción mayor en la titulación del virus de influenza en relación a un sujeto no tratado. En algunas modalidades, un compuesto activo o composición del mismo da como resultado una reducción en la titulación del virus de la influenza en relación a un sujeto no tratado de aproximadamente 1 log o más, aproximadamente 2 logs o más, aproximadamente 3 logs o más, aproximadamente 4 logs o más, aproximadamente 5 logs o más, aproximadamente 6 logs o más, aproximadamente 7 logs o más, aproximadamente 8 logs o más, aproximadamente 9 logs o más, aproximadamente 10 logs o más, 1 a 3 logs, 1 a 5 logs, 1 a 8 logs, 1 a 9 logs, 2 a 10 logs, 2 a 5 logs, 2 a 7 logs, 2 logs a 8 logs, 2 a 9 logs, 2 a 10 logs 3 a 5 logs, 3 a 7 logs, 3 a 8 logs, 3 a 9 logs, 4 a 6 logs, 4 a 8 logs, 4 a 9 logs, 5 a 6 logs, 5 a 7 logs, 5 a 8 logs, 5 a 9 logs, 6 a 7 logs, 6 a 8 logs, 6 a 9 logs, 7 a 8 logs, 7 a 9 logs, u 8 a 9 logs.

Se han descrito modelos de animales con virus de influenza, tales como el hurón, ratón, cobayo, mico ardilla, macaco, y pollo, desarrollados para usarse para analizar agentes antivirales contra el virus de la influenza. Ver, por ejemplo, Sidwell et al., Antiviral Res., 2000, 48:1-16; Lowen A.C. et al. PNAS . , 2006, 103: 9988-92; y McCauley et al., Antiviral Res., 1995, 27:179-186 y Rimmelzwann et al., Avian Diseases, 2003, 47:931-933. Para modelos de influenza en ratones, los ejemplos no limitativos de parámetros que se pueden utilizar para examinar la actividad antiviral de los compuestos activos administrados a los ratones infectados con influenza incluyen la muerte asociada con la neumonía, incremento de glicoproteina de ácido al en suero, peso del animal, virus en el pulmón examinado con hemaglut inina , virus en el pulmón examinado mediante ensayos de placa, y cambio histopatológico en el pulmón. Se lleva a cabo un análisis estadístico para calcular la significancia (por ejemplo, un valor P de 0.05 ó menor) .

En otros ensayos, se realizan evaluaciones histopatológicas después de la infección de un sujeto del modelo animal. Se pueden examinar los cambios epiteliales y la inflamación subepitelial de los cornetes nasales y la tráquea. Pueden examinarse los cambios epiteliales bronquiolares y la inflamación peribronquiolar en los bronquiolos grandes, medios, y pequeños o terminales de los pulmones. También se pueden evaluar los cambios inflamatorios en los alveolos. Los bronquiolos medios se califican en una escala de 0 a 3+ como sigue: 0 (normal: revestidos por células epiteliales columnares altas con bordes apicales ciliados y núcleos pseudoestratificados básales; inflamación mínima) ; 1+ (capa epitelial columnar y uniforme en el contorno con tan sólo proliferación ligeramente incrementada; cilios aún visibles en muchas células) ; 2+ (cambios prominentes en la capa epitelial que varía de atenuación a proliferación marcada; células desorganizadas y contorno de capa irregular en el borde lumínico); 3+ (capa epitelial marcadamente deteriorada y desorganizada con células necróticas visibles en el lumen; algunos bronquiolos atenuados y otros en proliferación reactiva marcada) .

La tráquea se califica en una escala de 0 a 2.5+ como sigue: 0 (normal: Revestida por células epiteliales columnares medianas a altas con borde apical ciliado, núcleos básales y pseudoestratificados . Citoplasma evidente entre el borde apical y el núcleo. Foco pequeño ocasional con células escamosas); 1+ (metaplasia escamosa focal de la capa epitelial) ; 2 + (metaplasia escamosa difusa de gran parte de la capa epitelial, los cilios puede ser focalmente evidente); 2.5+ (metaplasia escamosa difusa con muy pocos cilios evidentes) .

Se realiza una inmunohistoquímica del virus utilizando un anticuerpo monoclonal específico viral (por ejemplo anticuerpos monoclonales de NP, N o HN específico) . El manchado se califica de 0 a 3+ como sigue: 0 (sin células infectadas) ; 0.5+ (pocas células infectadas); 1+ (pocas células infectadas, como células individuales ampliamente separadas); 1.5+ (pocas células infectadas, como formas individuales ampliamente separadas y en pequeñas agrupaciones) ; 2+ (número moderados de células infectadas, que usualmente afectan agrupaciones de células adyacentes en porciones de los bronquiolos de revestimiento de capas epiteliales, o en pequeños focos sublobulares en los alveolos); 3+ (numerosas células infectadas, que afectan la mayor parte de la capa epitelial en los bronquiolos, o extendidas en grandes focos sublobulares en los alveolos).

En un ejemplo, la capacidad de inducir lesiones pulmonares y causar infección en un modelo animal de infección por virus se compara utilizando virus de fenotipo silvestre y virus prototipo. Las lesiones pulmonares se pueden evaluar mediante inspección visual como un porcentaje de lóbulos de pulmón que están sanos. Los animales se someten a eutanasia 5 días p.i. mediante administración intravenosa de pentobarbital , y sus pulmones se remueven en su totalidad. El porcentaje de la superficie de cada lóbulo pulmonar que es afectado por lesiones macroscópicas se estima visualmente. Los porcentajes se promedian para obtener un valor medio de los 7 lóbulos pulmonares de cada animal. En otros ensayos, se pueden analizar las torundas nasales para determinar la carga o titulación de virus. Las torundas se pueden tomar durante la necropsia para determinar la carga viral post-infección .

En una modalidad, el virus se cuantifica en muestras de tejido. Por ejemplo, las muestras de tejido se homogeneizan en solución salina amortiguada con fosfato (PBS), y diluciones de homogenados clarificados adsorbidos durante 1 h a 37°C en unicapas de células (por ejemplo, células MDCK) . Las unicapas infectadas se superponen entonces con una solución de medio esencial mínimo que contiene 0.1% de albúmina de suero de bovino (BSA) , 0.01% de DEAE-dext rano , 0.1% de NAHC03, y 1% de agar. Las placas se incuban de 2 a 3 días hasta que se puedan visualizar las placas. Los ensayos en dosis infecciosas de cultivo de tejido (TCID) para titular el virus de muestras infectadas con PR8 se llevan a cabo como sigue. Las unicapas confluentes de células (por ejemplo, células MDCK) en placas de 96 pozos se incuban con diluciones logarítmicas de homogenados de tejido clarificado en los medios. Dos a tres días después de la inoculación, se examina el crecimiento viral de las alícuotas de 0.05 mi de cada pozo mediante ensayo de hemaglutinación (ensayo HA) . 5.14.6.1.1 Ensayos en Humanos En una modalidad, un compuesto activo o composición del mismo que modula la replicación de un virus de influenza se examinan en sujetos humanos infectados. De acuerdo con esta modalidad, un compuesto activo o composición del mismo se administra al sujeto humano, y el efecto del compuesto activo o composición en la replicación viral se determina, por ejemplo, analizando el nivel del virus o ácidos nucleicos virales en una muestra biológica (por ejemplo, suero o plasma) . Un compuesto activo o composición del mismo que altera la replicación del virus se puede identificar comparando el nivel de replicación del virus en un sujeto o grupo de sujetos tratados con un control con aquél en un sujeto o grupo de sujetos tratados con un compuesto activo o composición del mismo. Alternativamente, las alteraciones en la replicación viral se pueden identificar comparando el nivel de la replicación del virus en un sujeto o grupo de sujetos antes y después de la administración de un compuesto activo o composición del mismo. Se pueden utilizar técnicas conocidas para aquellos expertos en la técnica para obtener la muestra biológica y analizar el ARNm o expresión de proteina.

En otra modalidad, el efecto de un compuesto activo o composición del mismo en la severidad de uno o más síntomas asociados con una infección/enfermedad por virus de influenza se examinan en un sujeto infectado. De acuerdo con esta modalidad, un compuesto activo o composición del mismo o un control se administra a un sujeto humano que padece una infección por virus de influenza y se determina el efecto del compuesto activo o composición en uno o más síntomas de la infección por virus. Un compuesto activo o composición del mismo que reduce uno o más síntomas se puede identificar comparando los sujetos tratados con un control con los sujetos tratados con el compuesto activo o composición. En otra modalidad, un compuesto activo o composición del mismo se administra a un sujeto humano sano y se monitorea su eficacia como una vacuna (por ejemplo, se monitorea la aparición de síntomas de infección por virus de influenza en el sujeto; la capacidad del virus de la influenza de infectar al sujeto; y/o una reducción en/ausencia de uno o más síntomas asociados con la infección por virus de influenza) . Se pueden utilizar técnicas conocidas para los médicos familiarizados con enfermedades infecciosas para determinar si un compuesto activo o composición del mismo reduce uno o más síntomas asociados con la enfermedad por virus de influenza. 5.15 KITS O EQUIPOS Se proporciona en la presente un paquete o kit farmacéutico que comprende uno o más contenedores rellenados con uno o más de los ingredientes de las composiciones farmacéuticas descritas en la presente, tales como uno o más de los compuestos activos provistos en la presente. Opcionalmente asociado con tal (es) contenedor (es ) puede ser una notificación en la forma prescrita por una agencia gubernamental que regula la fabricación, el uso o venta de fármacos o productos biológicos, la cual notificación refleja la aprobación de la agencia de fabricación, uso o venta para administración humana.

Los kits o equipos abarcados por la presente se pueden utilizar en los métodos anteriores. En una modalidad, un kit comprende un compuesto activo descrito en la presente, preferiblemente uno o más polipéptidos del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza, en uno o más contenedores. En ciertas modalidades, un kit comprende una vacuna descrita en la presente, por ejemplo, una vacuna con virus fraccionado, una vacuna de subunidades, una vacuna con virus de influenza inactivado, o una vacuna con virus de influenza vivo. 6. EJEMPLOS 6.1 EJEMPLO 1: POLIPÉPTIDOS DEL DOMINIO DEL TALLO DE HEMAGLUTININA DE INFLUENZA Tabla 8. Resumen de constructos El presente ejemplo proporciona polipéptidos útiles en la Tabla 8 que se pueden preparar de acuerdo con los métodos descritos en la presente.

Todas las publicaciones, patentes y solicitudes de patente citados en esta especificación se incorporan en la presente como referencia como si cada publicación individual o solicitud de patente fuera especifica e individualmente indicada se incorporará como referencia. Aunque la invención citada anteriormente ha sido descrita con cierto detalle a manera de ilustración y ejemplo para propósitos de claridad de entendimiento, será fácilmente evidente para aquellos expertos en la técnica en vista de las enseñanzas de esta invención que pueden hacerse ciertos cambios y modificaciones a la misma sin apartarse del espíritu o alcance de las reivindicaciones anexas .

Claims

REIVINDICACIONES

1. - Un polipéptido caracterizado porque comprende: a. un dominio HA1 de la hemaglutinina de influenza que comprende un segmento del tallo N-terminal de HA1 covalentemente enlazado a un enlace de 1 a 50 residuos heterólogos que está a su vez covalentemente enlazado a un segmento del tallo corto C-terminal de HA1; dicho dominio HA1 en asociación terciaria o cuaternaria con b. un dominio HA2 de hemaglutinina de influenza.

2. - Un polipéptido caracterizado porque comprende: a. un dominio HA1 de hemaglutinina de influenza que comprende un segmento del tallo largo N-terminal de HA1 enlazado covalentemente a un enlace de 1 a 50 residuos heterólogos que a su vez está covalentemente enlazado a un segmento del tallo largo C-terminal de HA1; dicho dominio HA1 en asociación terciaria o cuaternaria con b. un dominio HA2 de hemaglutinina de influenza.

3. - Un polipéptido caracterizado porque comprende: a. un dominio HA1 de hemaglutinina de influenza que comprende un segmento del tallo N-terminal de HA1 enlazado covalentemente a un enlace de 1 a 50 residuos heterólogos que a su vez está covalentemente enlazado a un segmento del tallo C-terminal de HA1 ; dicho dominio HA1 en asociación terciaria o cuaternaria con b. un dominio HA2 de hemaglutinina de influenza, en donde la secuencia de aminoácidos del segmento del tallo N-terminal de HA1 es al menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96% o 98% idéntico a una de las secuencias de aminoácidos de la SEQ ID NO: 550-552, en donde la secuencia de aminoácidos del segmento del tallo C-terminal de HA1 es al menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96% o 98% idéntica a una de las secuencias de aminoácidos de la SEQ ID NO: 553-554, y en donde la secuencia de aminoácidos del dominio HA2 es al menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96% o 98% idéntica a una de las secuencias de aminoácidos de la SEQ ID NO: 160.

4.- Un polipéptido caracterizado porque comprende: a. un dominio HA1 de hemaglut inina de influenza que comprende, enlazado en el siguiente orden: un segmento del tallo N-terminal de HA1, un primer enlace de 1 a 50 residuos heterólogos , un segmento del tallo intermedio de HA1, un segundo enlace de 1 a 50 residuos heterólogos y un segmento del tallo C-terminal de HA1; dicho dominio HA1 en asociación terciaria o cuaternaria con b. un dominio HA2 de hemaglutinina de influenza, en donde la secuencia de aminoácidos del segmento del tallo N-terminal de HA1 es al menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96% o 98% idéntica a la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 555, en donde la secuencia de aminoácidos del segmento del tallo intermedio de HA1 es al menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96% o 98% idéntica a la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 556, en donde la secuencia de aminoácidos del segmento del tallo N-terminal de HAl es al menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96% o 98% idéntica a la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 557, y en donde la secuencia de aminoácidos del dominio HA2 es al menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96% o 98% idéntica a la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 160.

5. - El polipéptido de las reivindicaciones 1-4, caracterizado porque el dominio HAl entra en contacto con el dominio HA2.

6. - El polipéptido de la reivindicación 1, caracterizado porque el segmento del tallo corto C-terminal de HAl se enlaza covalentemente al dominio HA2.

7. - El polipéptido de la reivindicación 2, caracterizado porque el segmento del tallo largo C-terminal de HAl se enlaza covalentemente al dominio HA2.

8. - El polipéptido de cualquiera de las reivindicaciones 1-4, caracterizado porque tiene una estructura terciaria o cuaternaria que tiene una desviación RMS de 0-5 Á de la estructura terciaria o cuaternaria del correspondiente polipéptido de IRUZ.

9. - El polipéptido de cualquiera de las reivindicaciones 1-4, caracterizado porque une selectivamente el anticuerpo neutralizante capaz de unir una hemaglutinina de influenza.

10.- El polipéptido de cualquiera de las reivindicaciones 1-4, caracterizado porque las secuencias de aminoácidos del dominio HA1 es al menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96% o 98% idéntica a las secuencias de aminoácidos de los correspondientes dominios de una HAl de un Hl, H2 , H3, H4 , H5, H6, H7, H8, H9, H10, Hll, H12, H13, H14, H15 ó H16 de influenza A.

11. - El polipéptido de cualquiera de las reivindicaciones 1-4, caracterizado porque la secuencia de aminoácidos del dominio HA2 es al menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96% o 98% idéntica a la secuencia de aminoácidos de un HA2 de un Hl, H2, H3, H4, H5, H6, H7 , H8, H9, H10, Hll, H12, H13, H14, H15 ó H16 de la influenza A.

12. - El polipéptido de cualquiera de las reivindicaciones 1-4, caracterizado porque la secuencia de aminoácidos del dominio HA2 es al menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96% o 98% idéntica a la secuencia de aminoácidos de un H2 de una influenza A H3.

13. - El polipéptido de cualquiera de las reivindicaciones 1-4, caracterizado porque la secuencia de aminoácidos del dominio HA2 es al menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96% o 98% idéntica a la secuencia de aminoácidos de un H2 de una influenza A Hl.

14. - El polipéptido de la reivindicación 1, caracterizado porque la secuencia de aminoácidos del segmento del tallo N-terminal de HAl consiste de una secuencia que es al menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96% o 98% idéntica a los residuos 1-52 de un HA1 de una influenza A H3.

15. - El polipéptido de la reivindicación 1, caracterizado porque la secuencia de aminoácidos del segmento del tallo corto C-terminal de HA1 consiste de una secuencia que es al menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96% o 98% idéntica a los residuos 305-326 de un HA1 de una influenza A H3.

16. - El polipéptido de la reivindicación 1, caracterizado porque la secuencia de aminoácidos del segmento del tallo N-terminal de HA1 consiste de una secuencia que es al menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96% o 98% idéntica a los residuos 1-46 de un HA1 de una influenza A Hl.

17. - El polipéptido de la reivindicación 1, caracterizado porque la secuencia de aminoácidos del segmento del tallo corto C-terminal de HA1 consiste de una secuencia que es al menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96% o 98% idéntica a los residuos 306-237 de un HA1 de una influenza A Hl.

18. - El polipéptido de la rei indicación 2, caracterizado porque la secuencia de aminoácidos del segmento del tallo largo N-terminal de HA1 consiste de una secuencia que es al menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96% o 98% idéntica a los residuos 1-97 de un HA1 de una influenza A H3.

19. - El polipéptido de la reivindicación 2, caracterizado porque la secuencia de aminoácidos del segmento del tallo largo C-terminal de HA1 consiste de una secuencia que es al menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96% o 98% idéntica a los residuos 253-326 de un HA1 de una influenza A H3.

20. - El polipéptido de la reivindicación 2, caracterizado porque la secuencia de aminoácidos del segmento del tallo largo N-terminal de HA1 consiste de una secuencia que es al menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96% o 98% idéntica a los residuos 1-94 de un HA1 de una influenza A Hl .

21. - El polipéptido de la reivindicación 1, caracterizado porque la secuencia de aminoácidos del segmento del tallo largo C-terminal de HA1 consiste de una secuencia que es al menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96% o 98% idéntica a los residuos 254-327 de un HA1 de una influenza A Hl.

22. - El polipéptido de la reivindicación 1, caracterizado porque el segmento del tallo N-terminal de HA1 comprende un residuo de cisteina covalentemente enlazado a un residuo de cisteina del segmento del tallo corto C-terminal de HA1 a través de un puente de disulfuro.

23. - El polipéptido de cualquiera de las reivindicaciones 1-2, caracterizado porque el segmento del tallo N-terminal de HA1 comprende la secuencia de aminoácidos Ai7- i8- (Xaa ) ?-?38 ( SEQ ID NO: 146), en donde Ai es Y o H; Ai8 es H, L, o Q; (Xaa)n representa una secuencia de 18-20 residuos de aminoácidos; y A38 es H, S, Q, T o N.

24. - El polipéptido de cualquiera de la reivindicación 2, caracterizado porque el segmento del tallo C-terminal de HA1 comprende la secuencia de aminoácidos A291-A292, en donde A291 es T, S, N, D, P o K; y A292 es L, M, K o R.

25. - El polipéptido de cualquiera de las reivindicaciones 1-2, caracterizado porque el dominio HA2 comprende la secuencia de aminoácidos 18-Ai9-A2o- 2i, en donde Ais es V o I; A19 es D, N o A; A20 es G, y A2i es W.

26. - El polipéptido de cualquiera de las reivindicaciones 1-2, caracterizado porque el dominio HA2 comprende la secuencia de aminoácidos A38-A39-A4o-A4i-A42-A43-A44-A45-A46-A47-A48-A<j9-A50-A5i-A52-A53-A54- 55-A5S (SEQ ID NO: 149), en donde A38 es K, Q, R, L o Y; A39 es cualquier residuo de aminoácido; A40 es cualquier residuo de aminoácido; A41 es T; A42 es Q; A43 es cualquier residuo de aminoácido; A4 es A; A45 es I; A46 es D; A47 es cualquier residuo de aminoácido; A48 es I, V o M; A49 es T, Q o N; A50 es cualquier residuo de aminoácido; A51 es K; A52 es V o L; A53 es N; A54 es cualquier residuo de aminoácido; A55 es V, I o L; y A56 es V o I .

27. - El polipéptido de cualquiera de las reivindicaciones 1-4, caracterizado porque dicho enlace es de 1 a 40, 1 a 30 residuos, 1 a 20 residuos, 1 a 10 residuos, 1 a 5 residuos, 1 a 4 residuos, 1 a 3 residuos, 1 a 2 residuos o 1 residuo.

28. - El polipéptido de cualquiera de las reivindicaciones 1-4, caracterizado porque dicho enlace se selecciona del grupo que consiste de GG, PG, GGG, GGGG, GGGGG, ITPNGSIPNDKPFQNVNKITYGA, ÑAS y una unión directa.

29. - Un ácido nucleico caracterizado porque codifica el polipéptido de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 28.

30. - Una célula que expresa el ácido nucleico de la reivindicación 29.

31. - Un virus caracterizado porque comprende un genoma creado genéticamente para expresar el ácido nucleico de la reivindicación 29.

32. - Un virus caracterizado porque comprende el polipéptido de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 28.

33. - El virus de la reivindicación 31 ó 32, caracterizado porque el virus es un virus de influenza.

34. - El virus de la reivindicación 32, caracterizado porque es un virus de influenza A.

35. - El virus de la reivindicación 32, caracterizado porque es un virus de influenza B.

36.- El virus de la reivindicación 31 ó 32, caracterizado porque el virus es un virus de la enfermedad de Newcastle (NDV) , un virus de vaccinia, un adenovirus, un virus adeno-asociado (AAV) , o un retrovirus.

37. - El virus de la reivindicación 32, caracterizado porque está inactivado o fraccionado.

38. - El virus de la reivindicación 33, caracterizado porque está inactivado o fraccionado.

39. - Una partícula similar a virus caracterizada porque comprende el polipéptido de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 28.

40. - Una composición inmunóqena caracterizada porque comprende el polipéptido de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 28.

41. - Una composición inmunógena caracterizada porque comprende el virus de la reivindicación 31 y un portador farmacéuticamente aceptable.

42.- Una composición inmunogena caracterizada porque comprende el virus de la reivindicación 31 y un portador farmacéuticamente aceptable.

43.- Una composición inmunogena caracterizada porque comprende el virus de la reivindicación 33.

44.- Una composición inmunogena caracterizada porque comprende el virus de la reivindicación 35 y un portador farmacéuticamente aceptable.

45.- Una composición inmunogena caracterizada porque comprende el virus de la reivindicación 36 y un portador farmacéuticamente aceptable.

46.- Una composición inmunogena de la reivindicación 44, caracterizada porque comprende además un adyuvante.

47.- Una composición inmunogena de la reivindicación 46, caracterizada porque comprende además un adyuvante.

48.- Una composición inmunogena caracterizada porque comprende la partícula similar a virus de la reivindicación 39 y un portador farmacéuticamente aceptable.

49.- Un método para inmunizar un sujeto caracterizado porque comprende administrar al sujeto una cantidad efectiva de la composición inmunogena de la reivindicación 40.

50.- Un método para inmunizar un sujeto caracterizado porque comprende administrar al sujeto una cantidad efectiva de la composición inmunogena de la reivindicación 42.

51. - Un método para inmunizar un sujeto caracterizado porque comprende administrar al sujeto una cantidad efectiva de la composición inmunogena de la reivindicación 43.

52. - Un método para inmunizar un sujeto caracterizado porque comprende administrar al sujeto una cantidad efectiva de la composición inmunogena de la reivindicación 44.

53. - Un método para inmunizar un sujeto caracterizado porque comprende administrar al sujeto una cantidad efectiva de la composición inmunogena de la reivindicación 45.

54.- Un método para inmunizar un sujeto caracterizado porque comprende administrar al sujeto una cantidad efectiva de la composición inmunogena de la reivindicación 45.

55. - Un método para inmunizar un sujeto caracterizado porque comprende administrar al sujeto una cantidad efectiva de la composición inmunogena de la reivindicación 47.

56. - Un método para inmunizar un sujeto caracterizado porque comprende administrar al sujeto una cantidad efectiva de la composición inmunogena de la reivindicación 48.

57. - El método de la reivindicación 49, caracterizado porque el sujeto es un humano.

58. - El método de la reivindicación 50, caracterizado porque el sujeto es un humano.

59. - El método de la reivindicación 51, caracterizado porque el sujeto es un humano.

60.- El método de la reivindicación 52, caracterizado porque el sujeto es un humano.

61. - El método de la reivindicación 53, caracterizado porque el sujeto es un humano.

62. - El método de la reivindicación 54, caracterizado porque el sujeto es un humano.

63. - El método de la reivindicación 55, caracterizado porque el sujeto es un humano.

64. - El método de la reivindicación 56, caracterizado porque el sujeto es un humano.

65.- El método de la reivindicación 50, caracterizado porque la composición inmunógena se administra de manera intramuscular o intranasal al sujeto.

66. - Un método para prevenir una enfermedad por virus de influenza, caracterizado porque comprende administrar a un sujeto una cantidad efectiva de la composición inmunógena de la reivindicación 40.

67. - Un método para tratar una infección por virus de influenza o una enfermedad por virus de influenza, caracterizado porque comprende administrar a un sujeto una cantidad efectiva de la composición inmunógena de la reivindicación 40.

68. - Un método para prevenir una enfermedad por virus de influenza, caracterizado porque comprende administrar a un sujeto una cantidad efectiva de la composición inmunógena de la reivindicación 43.

69. - Un método para tratar una infección por virus de influenza o una enfermedad por virus de influenza, caracterizado porque comprende administrar a un sujeto una cantidad efectiva de la composición inmunógena de la reivindicación 43.

70. - El método de la reivindicación 66, caracterizado porque el sujeto es un humano.

71. - El método de la reivindicación 67, caracterizado porque el sujeto es un humano.

72.- El método de la reivindicación 68, caracterizado porque el sujeto es un humano.

73.- El método de la reivindicación 69, caracterizado porque el sujeto es un humano. RESUMEN DE LA INVENCIÓN Se proporcionan en la presente polipéptidos del dominio del tallo de hemaglutinina de influenza, composiciones que comprenden los mismos, vacunas que comprenden los mismos y métodos para su uso.