MX2010013460A - Un metodo para determinar rapidamente el tipo sanguineo humano abo/rh/mn y su kit de prueba. - Google Patents
Un metodo para determinar rapidamente el tipo sanguineo humano abo/rh/mn y su kit de prueba.Info
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Abstract
Un método para determinar rápidamente el tipo sanguíneo humano ABO/Rh/MN y su kit de prueba; una muestra de sangre que se va a detectar, se aplica sobre una tira de prueba revestida previamente con anticuerpos anti-A o anti-B o anti-M o anti-N, una solución de enjuague se hace gotear en un extremo de la tira de prueba, y luego se determina el grupo sanguíneo de la muestra de sangre por la presencia de eritrocitos aglutinados mantenidos en los sitios de reacción.
Description
UN MÉTODO PARA DETERMINAR RÁPIDAMENTE EL TIPO SANGUÍNEO HUMANO ABO/RH/MN Y SU KIT DE PRUEBA
CAMPO TECNICO
La presente invención se refiere a un método para detectar rápidamente el grupo sanguíneo humano ABO/Rh/MN y su kit.
ANTECEDENTES DE LA INVENCION
La clasificación del grupo sanguíneo es una técnica convencional para la agrupación de los eritrocitos de humano de acuerdo con el sistema ABO con cuatro grupos diferentes de A, B, AB y O, de acuerdo con el sistema Rh y el sistema del grupo sanguíneo MN, respectivamente. Un procedimiento general para la identificación del grupo sanguíneo es mezclar los eritrocitos que se van a detectar, con un reactivo que contiene un anticuerpo del grupo sanguíneo y, después de la reacción de lo anterior, determinar el grupo sanguíneo de los eritrocitos detectados al observar la presencia de aglutinación de eritrocitos. Dicho procedimiento comprende en primer lugar, aislar los eritrocitos del suero de un paciente, luego mezclar una cantidad apropiada de los eritrocitos con soluciones de prueba respectivas introducidas en un tubo de ensayo o portaobjetos (que contiene suero anti-A, anti-B, anti-D, anti-M o anti-N, respectivamente) y, opcionalmente agregar
reactivos adicionales que promueven la reacción inmune e incubar la reacción, luego centrifugar y agitar la mezcla de reacción seguido por la observación de la presencia de de aglutinación de eritrocitos.
Para una muestra, si la aglutinación ocurre en presencia de un reactivo anti-A, mientras que ninguna aglutinación ocurre en presencia de un reactivo anti-B, entonces la muestra de sangre se identifica como un grupo sanguíneo de A. Si la aglutinación de eritrocitos ocurre en presencia de un reactivo anti-B, mientras que ninguna aglutinación ocurre en presencia de un reactivo anti-A, entonces la muestra se identifica como un grupo sanguíneo de B. Si la aglutinación de eritrocitos ocurre tanto en presencia de un reactivo anti-A como en presencia de un reactivo anti-B, entonces la muestra se identifica como un grupo sanguíneo de AB. Si ninguna reacción de aglutinación ocurre en presencia de un reactivo anti-A o en presencia de un reactivo anti-B, entonces la muestra se identifica como un grupo sanguíneo de O. Si la aglutinación ocurre en presencia de un reactivo anti-D, entonces la muestra es el grupo sanguíneo Rh-positivo, de lo contrario, es el grupo sanguíneo Rh-negativo. Para un sistema del grupo sanguíneo MN, una muestra puede designarse para ser del grupo sanguíneo M, N o MN de acuerdo con la presencia de la aglutinación de eritrocitos.
Las tecnologías actuales utilizadas para determinar el grupo sanguíneo humano ABO/Rh/MN se pueden clasificar en dos tipos. El primer tipo se basa en la detección del antígeno del grupo sanguíneo relacionado con la membrana celular, e incluye el ensayo de aglutinación de solución salina de
eritrocitos, ensayo de neutralización, ensayo de absorción, ensayo de disociación y reacción de aglutinación mixta. El segundo tipo se basa en la detección directa del antígeno del grupo sanguíneo libre e incluye la reacción de coaglutinación y radioinmunoensayo.
En la actualidad en el ensayo de aglutinación de solución salina de eritrocitos comúnmente utilizado, la sangre de prueba se determina con su grupo sanguíneo por aglutinación de los eritrocitos inducida por la unión del anticuerpo IgG o IgM conocido al antígeno del grupo sanguíneo en la superficie de los eritrocitos frescos. Este procedimiento se utiliza ampliamente en la determinación del grupo sanguíneo (clasificación del grupo sanguíneo) para transfusión clínica de sangre. Sin embargo, este procedimiento necesita reactivos correspondientes, que deben conservarse a una temperatura baja, y además, su resultado es difícil de confirmar.
Otros procedimientos para determinar el grupo sanguíneo tienen varios inconvenientes. Por ejemplo, el ensayo de neutralización se lleva a cabo durante un período largo y tiene una sensibilidad deficiente. La prueba de disociación y la reacción de aglutinación mixta requieren operación altamente especializada con optimización complicada en cada corrida y tiene una sensibilidad deficiente. La reacción de coaglutinación comprende sensibilizar la proteína A de Staphylococcus aureus (SPA) por anticuerpos IgG, luego observar la aglutinación de Staphylococcus aureus para determinar el grupo sanguíneo de la muestra analizada, aunque este procedimiento requiere de almacenamiento complicado de los reactivos. El
radioinmunoensayo y ELISA son altamente sensibles, aunque tienen un tiempo prolongado de corrida, y por lo tanto no son adecuados para una sola muestra o para la detección in situ.
En resumen, los métodos comúnmente utilizados para la determinación del grupo sanguíneo clínico tiene una variedad de problemas tal como el tiempo prolongado de operación, trabajo intensivo de mano de obra, un resultado subjetivo con una gran variación, y la contaminación potencial. Por lo tanto, es necesario hacer una mejora sustantiva de los métodos convencionales para la determinación del grupo sanguíneo.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN
Un objetivo de la presente invención es proporcionar un método para detectar el grupo sanguíneo humano ABO/Rh/ MN, que comprende los pasos de hacer gotear una muestra de sangre que se va a probar sobre una tira de prueba revestida previamente con anticuerpo del grupo sanguíneo anti-A o anti-B o anti-D o anti-M o anti-N, hacer gotear una solución de enjuague en un extremo de la tira para transportar los eritrocitos no aglutinados junto con la solución de enjuague lejos del sitio de carga, mientras deja los eritrocitos aglutinados con el anticuerpo restante en el sitio de carga, luego determinar el grupo sanguíneo de la muestra de prueba de acuerdo con la presencia de eritrocitos aglutinados en el sito de carga.
De acuerdo con una modalidad preferida de la invención, la
muestra de sangre que se hizo gotear en la tira de prueba puede tener un volumen tan pequeño como 1-10 µ?. Dicha solución de enjuague es solución salina de regulador de fosfato (PBS) 10 mM, solución salina fisiológica u otra solución isotónica. Dicha muestra de sangre que se va a probar se hace gotear en una almohadilla de carga de la tira de prueba.
De acuerdo con una modalidad preferida de la invención, el método para inmovilizar el anticuerpo del grupo sanguíneo, por ejemplo, puede basarse en la adsorción física o entrelazado químico.
De acuerdo con una modalidad preferida de la invención, dicha muestra de sangre que se va a probar puede ser eritrocitos o sangre completa, o una suspensión de eritrocitos o sangre completa diluida con una solución isotónica tal como solución salina fisiológica o solución salina de regulador de fosfato. Además, dicha muestra de sangre incluye una muestra de sangre parcialmente hemolizada y una muestra de sangre rica en lípidos.
De acuerdo con una modalidad preferida de la invención, los resultados de prueba se pueden determinar visualmente o en virtud de un dispositivo para la recolección de fotos o una señal eléctrica.
En pocas palabras, una muestra de sangre hace contacto y reacciona con la almohadilla de carga inmovilizada con un anticuerpo del grupo sanguíneo correspondiente, es decir, la muestra de sangre sufre una reacción de unión inmunológica con el anticuerpo correspondiente en la almohadilla de carga. Después de enjuagarse con una solución de enjuague, la muestra de sangre que ha sufrido reacción de unión inmunológica se
mantiene en la almohadilla y tiene un color rojo significativo, mientras la muestra de sangre que no ha sufrido ninguna reacción de unión inmunológica se enjuaga de la almohadilla de carga por medio de la solución de enjuague y por lo tanto no aparece ningún color rojo en el sitio de carga. Por lo tanto, el grupo sanguíneo ABO/Rh/ MN de una muestra de sangre se puede determinar por medio de la aparición de la reacción inmunológica entre los eritrocitos en la muestra y el anticuerpo del grupo sanguíneo, que se determina por la presencia de la sustancia roja en la almohadilla de carga después de la reacción inmunológica entre los eritrocitos y el anticuerpo del grupo sanguíneo.
Otro objetivo de la presente invención es proporcionar un kit utilizado para llevar a cabo el método de detección anterior, que consiste en una tira de prueba, una solución de enjuague y un medio recolector de sangre, en donde la tira de prueba consiste en una almohadilla de enjuague, una almohadilla de carga, una almohadilla amortiguadora, una almohadilla de absorción, una cinta adhesiva a prueba de agua y una hoja de poliéster como respaldo.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS
La figura 1 muestra una tira de detección rápida ilustrativa para el grupo sanguíneo ABO en el kit de detección del grupo sanguíneo de la presente invención.
La figura 2 muestra una vista de desmontaje de una tira de detección rápida ilustrativa para el grupo sanguíneo ABO en el kit de detección del grupo sanguíneo de la presente invención, que comprende una almohadilla de enjuague 1 , una cinta adhesiva a prueba de agua 2, una almohadilla de carga 3 fija con el anticuerpo del grupo sanguíneo, una almohadilla amortiguadora 4, una almohadilla de absorción 5 y una hoja de respaldo de poliéster 6.
La figura 3 muestra una tira de detección rápida ilustrativa para el grupo sanguíneo Rh en el kit de la presente invención, que comprende una almohadilla de enjuague 1 , una cinta adhesiva a prueba de agua 2, una almohadilla de carga 3 fija con el anticuerpo anti-D, una almohadilla amortiguadora 4 y una almohadilla de absorción 5.
La figura 4 muestra una tira de detección rápida ilustrativa para el grupo sanguíneo MN en el kit de detección del grupo sanguíneo de la presente invención.
La figura 5 muestra una reacción esquemática después de hacer gotear la muestra de sangre positiva en una almohadilla de fibra de vidrio fija con un anticuerpo del grupo sanguíneo, en donde 1 indica los eritrocitos, 2
indica anticuerpos del grupo sanguíneo y 3 indica una almohadilla de carga de fibra de vidrio.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN
La presente invención se refiere a un método para la detección rápida del grupo sanguíneo ABO/Rh/MN de una muestra de sangre humana que se va a probar y su kit.
En un primer aspecto, la presente invención proporciona un método para detectar el grupo sanguíneo ABO/Rh/MN de una muestra de sangre de humano que se va a probar, que comprende los pasos de hacer gotear una muestra de sangre que se va a probar en una tira de prueba prefijada con un anticuerpo del grupo sanguíneo anti-A o anti-B o anti-D o anti-M o anti-N, hacer gotear una solución de enjuague en un extremo de la tira para transportar los eritrocitos no aglutinados junto con la solución de enjuague lejos del sitio de carga, mientras deja los eritrocitos aglutinados con el anticuerpo restante en el sitio de carga, luego determinar el grupo sanguíneo de la muestra de prueba de acuerdo con la presencia de eritrocitos aglutinados en el sitio de reacción.
De acuerdo con una modalidad preferida de la invención, dicha muestra de sangre que se va a probar puede ser eritrocitos o sangre completa, o una suspensión de eritrocitos o sangre completa diluida con una solución isotónica tal como solución salina fisiológica o solución salina de
?
regulador de fosfato (PBS). Además, dicha muestra de sangre puede incluir una muestra de sangre parcialmente hemolizada y una muestra de sangre rica en lípidos.
De acuerdo con una modalidad preferida de la invención, el volumen de la muestra de sangre que se hizo gotear en la tira de prueba no es mayor a 10 µ?. Dicha solución de enjuague es solución salina de regulador de fosfato 10 mM, solución salina fisiológica u otras.
De acuerdo con una modalidad preferida de la invención, el método para fijar el anticuerpo del grupo sanguíneo, por ejemplo, puede basarse en la adsorción física o entrelazado químico.
En un aspecto adicional, la presente invención proporciona un kit utilizado para el método de detección anterior, que consiste en una tira de prueba, una solución de enjuague y un medio recolector de sangre, en donde la tira de prueba consiste en una almohadilla de enjuague, una almohadilla de carga, una almohadilla amortiguadora, una almohadilla de absorción, una cinta adhesiva a prueba de agua y una hoja de poliéster como respaldo (véase figura 1).
De acuerdo con una modalidad preferida de la invención, dicha almohadilla de enjuague, almohadilla de carga, almohadilla amortiguadora y almohadilla de absorción están hechas de materiales poliméricos porosos que tienen un tamaño de poro, como fibra de vidrio, en donde el tamaño de poro permite que atraviese al menos un sólo eritrocito. En vista del material seleccionado, la almohadilla de enjuague, la almohadilla de carga y la
almohadilla amortiguadora algunas veces se menciona en general como almohadilla de fibra de vidrio.
De acuerdo con una modalidad preferida de la invención, la muestra de sangre que se va a probar se hace gotear en la almohadilla de carga, y dicha solución de enjuague se hace gotear en la almohadilla de enjuague. La almohadilla de carga es un soporte poroso fijo con un anticuerpo del grupo sanguíneo. Además, el método para fijar el anticuerpo del grupo sanguíneo se puede basar en la adsorción física o entrelazado químico.
De acuerdo con una modalidad preferida de la invención, la muestra de sangre puede ser una muestra de sangre parcialmente hemolizada o muestra se sangre rica en lípidos de sangre.
De acuerdo con una modalidad preferida de la invención, los resultados de prueba se pueden determinar visualmente o en virtud de un dispositivo para recolectar y leer fotos o señales eléctricas. Específicamente, utilizando el kit de la presente invención, el procedimiento para la detección del grupo sanguíneo humano ABO/Rh/MN comprende:
1) Fijar directa o indirectamente el anticuerpo del grupo sanguíneo humano ABO/Rh/ MN en la almohadilla de carga 3 (figura 2): fijar el anticuerpo del grupo sanguíneo en la almohadilla de fibra de vidrio con un tamaño de poro al utilizar adsorción física o entrelazado químico. El método seleccionado de fijación física o química tiene poco efecto sobre la actividad biológica de los anticuerpos. Además, el anticuerpo fijo se complementa con un agente protector de proteínas, que puede seleccionarse del grupo que
consiste en albúmina de suero de bovino, suero de ternera, peptona, sacarosa, polivinilpirrolidona, y sus combinaciones.
Diluir el anticuerpo monoclonal del grupo sanguíneo humano ABO/Rh/MN del título elevado con solución salina de regulador de fosfato 5 mM a un título adecuado, agregar un agente protector de anticuerpos para facilitar la fijación y conservar el anticuerpo en la almohadilla de fibra de vidrio. Un mejorador de reacción puede agregarse en la solución del anticuerpo diluido para promover la reacción inmune subsiguiente. La aplicación del anticuerpo diluido en la almohadilla de fibra de vidrio pre-activada en una relación de 1.5 mi de anticuerpo por 5 cm ? 5 cm de almohadilla de fibra y luego conservar en el sello después de secar a 37°C.
2) Hacer gotear la muestra de prueba en la almohadilla de carga 3, seguido por el goteo de la solución de enjuague en la almohadilla de enjuague 2 (véase figura 3). Después de cargar la muestra y hacer gotear la solución de enjuague, ocurre una reacción de unión inmune y se presenta el resultado.
3) Después de completar la reacción y además enjuagar, determinar el grupo sanguíneo de la muestra de prueba de acuerdo con la presencia de residuos rojos en la almohadilla de carga.
Para una tira de prueba del grupo sanguíneo ABO, después de enjuagar la reacción, si se mantiene una cantidad considerable de sustancia roja en la almohadilla de carga que contiene el anticuerpo anti-A, esto indica que la muestra de sangre se captura por el anticuerpo anti-A y por lo tanto
ocurre la reacción de aglutinación entre los mismos (es decir, la reacción positiva), si no se mantiene una cantidad considerable de sustancia roja en la almohadilla de carga que contiene el anticuerpo anti-A, esto indica que no ocurre una reacción de aglutinación entre la muestra de sangre y el anticuerpo anti-A (es decir, la reacción negativa), si se mantiene una cantidad considerable de sustancia roja en la almohadilla de carga que contiene el anticuerpo anti-B tras enjuagar la reacción completada, esto indica que ocurre una reacción de aglutinación entre la muestra de sangre y el anticuerpo anti-B, si no se mantiene una cantidad considerable de sustancia roja en la almohadilla de carga que contiene el anticuerpo anti-B tras el enjuague de la reacción completada, esto indica que no ocurre una reacción de aglutinación entre la muestra de sangre y el anticuerpo anti-B. Por lo tanto, se puede determinar que, de acuerdo con los resultados de prueba, una muestra de sangre que produce la reacción de aglutinación con anticuerpos tanto anti-A como anti-B es de un grupo sanguíneo AB, una muestra de sangre que produce reacción de aglutinación sólo con el anticuerpo anti-A es de un grupo sanguíneo A; si una muestra de sangre que produce la reacción de aglutinación sólo con el anticuerpo anti-B es del grupo sanguíneo B, y una muestra de sangre que no produce reacción de aglutinación con anticuerpo anti-A o anti-B es del grupo sanguíneo O.
Para una tira de prueba del grupo sanguíneo Rh, después de enjuagar la reacción, si se mantiene una cantidad considerable de sustancia roja en la almohadilla de carga que contiene el anticuerpo anti-D, esto indica
que ocurre la reacción de aglutinación entre la muestra de sangre y el anticuerpo anti-D; mientras que si no se mantiene una cantidad considerable de sustancia roja en la almohadilla de carga que contiene el anticuerpo anti-D, esto indica que no ocurre reacción de aglutinación entre la muestra de sangre y el anticuerpo anti-D. Por lo tanto, se puede determinar que, de acuerdo con los resultados de prueba, una muestra de sangre que produce la reacción de aglutinación con el anticuerpo anti-D es del grupo sanguíneo Rh-positivo, mientras que una muestra de sangre que no produce reacción de aglutinación con el anticuerpo anti-D es del grupo sanguíneo Rh-negativo.
Para una tira de prueba del grupo sanguíneo MN, después de enjuagar la reacción, si se mantiene una cantidad considerable de sustancia roja en la almohadilla de carga que contiene el anticuerpo anti-M, esto indica que la muestra de sangre se captura por el anticuerpo anti-M y por lo tanto ocurre la reacción de aglutinación entre los mismos; si no se mantiene una cantidad considerable de sustancia roja en la almohadilla de carga que contiene el anticuerpo anti-M, esto indica que no ocurre una reacción de aglutinación entre la muestra de sangre y el anticuerpo anti-M; si se mantiene una cantidad considerable de sustancia roja en la almohadilla de carga que contiene el anticuerpo anti-N, esto indica que ocurre una reacción de aglutinación entre la muestra de sangre y el anticuerpo anti-N. Por lo tanto, se puede determinar que, de acuerdo con los resultados de prueba, una muestra de sangre que produce la reacción de aglutinación con anticuerpos tanto anti-M como anti-N es de un grupo sanguíneo MN; una muestra de sangre que
!
produce reacción de aglutinación sólo con el anticuerpo anti-M es de un grupo sanguíneo M; y una muestra de sangre que produce la reacción de aglutinación sólo con el anticuerpo anti-N es del grupo sanguíneo N.
De acuerdo con una modalidad preferida de la presente invención, dicha tira de prueba rápida consiste en un respaldo, una almohadilla de enjuague, una almohadilla de carga, una almohadilla amortiguadora, una almohadilla de absorción y una cinta adhesiva a prueba de agua. La almohadilla de enjuague, la almohadilla de carga, la almohadilla amortiguadora, la almohadilla de absorción y la cinta adhesiva a prueba de agua se fijan secuencialmente al respaldo. El borde de la almohadilla de carga se traslapa en el borde de la almohadilla de enjuague, el borde de la almohadilla amortiguadora se traslapa en el borde de la almohadilla de carga, el borde de la almohadilla de absorción se traslapa en el borde la almohadilla amortiguadora, mientras la cinta adhesiva a prueba de agua se aplica en los bordes traslapados de la almohadilla de enjuague y la almohadilla de carga para evitar que la solución de enjuague se desborde de la almohadilla de carga. El respaldo puede hacerse de, pero no limitarse a, un material de poliéster.
De acuerdo con una modalidad preferida de la presente invención, el término "fijar un anticuerpo" es equivalente a "inmovilizar un anticuerpo" y significa fijar (inmovilizar) el anticuerpo anti-A o anti-B o anti-D o anti M o anti-N en un soporte tal como una almohadilla de fibra de vidrio que tiene un tamaño de poro u otro soporte que tiene un tamaño de poro similar,
por ejemplo por medio de entrelazado físico o químico. Antes de la fijación, el anticuerpo se puede diluir en una relación a la luz del título del anticuerpo, con el fin de lograr una concentración adecuada que se pueda utilizar. El anticuerpo se puede fijar en la almohadilla de fibra de vidrio (almohadilla de carga), por ejemplo, al sumergir o aplicar de manera uniforme o rociar, posteriormente someter a secado por congelamiento u otro secado. Dicho anticuerpo puede tratarse previamente con glutaraldehído como agente de entrelazado.
De acuerdo con una modalidad preferida de la presente invención, dicha muestra de sangre que se va a probar puede ser eritrocitos o sangre completa, o una suspensión de eritrocitos diluidos con una solución isotónica tal como solución salina de regulador de fosfato 10 mM (PBS) y solución salina fisiológica (generalmente diluida a 2-50%). Una muestra de sangre parcialmente hemolizada o rica en lípidos de la sangre también puede ser aplicable para el kit de la presente invención.
Una muestra de prueba de sangre completa o eritrocitos diluida o no diluida puede agregarse a la almohadilla de carga fija con un anticuerpo del grupo sanguíneo, después de permitir la reacción de unión inmunológica, la almohadilla de carga se enjuaga con una solución de enjuague. Dicha solución de enjuague puede ser solución salina de regulador de fosfato 10 mM (PBS) u otra. Después de permitir la reacción inmune, la presencia de eritrocitos aglutinados puede observarse fácilmente, o los resultados de prueba de las muestras en lote pueden ser leídos por un dispositivo para
recolectar y leer la señal óptica o eléctrica.
Para la detección del grupo sanguíneo ABO, pueden practicarse las operaciones del método de la presente en dos tiras de prueba que se forman por separado y en paralelo en la misma hoja de respaldo de poliéster y se fija en la almohadilla de carga respectivamente con el anticuerpo del grupo sanguíneo anti-A o anti-B.
Para la detección del grupo sanguíneo MN, pueden practicarse las operaciones del método de la presente en dos tiras de prueba que se forman por separado y en paralelo en la misma hoja de respaldo de poliéster y se fija en la almohadilla de carga respectivamente con el anticuerpo del grupo sanguíneo anti-M o anti-N.
El kit de detección rápida para el grupo sanguíneo ABO/Rh/MN de la presente invención es adecuado para analizar el grupo sanguíneo en un banco de sangre, recolección de sangre de campo y autoprueba casera para el grupo sanguíneo ABO/Rh/MN. La identificación rápida y creíble del grupo sanguíneo se puede lograr utilizando la reacción inmune rápida y una sencilla lectura de los resultados. El método de la presente es fácil de realizar y no se necesita un reactivo adicional, tal como reactivo de globulina anti-humana. En el método de la presente, el volumen de carga de la muestra de sangre no puede ser mayor que 10 µ?, y la duración total no podrá ser superior a 2 minutos.
El método para la rápida detección del grupo sanguíneo humano ABO/Rh/MN de la presente invención y el kit del mismo se basan en el
principio de inmunocromatografía, en donde la determinación del grupo sanguíneo se hace por la presencia de la sustancia roja debido a la aglutinación de eritrocitos tras la reacción de antígeno-anticuerpo de la sustancia del grupo sanguíneo. El método de la presente es fácil de realizar y evita varios defectos de los métodos comunes existentes para la detección del grupo sanguíneo en la técnica. El método de la presente es adecuado tanto para la detección de la muestra individual como para la detección de las muestras múltiples, especialmente para la detección del grupo sanguíneo ABO/Rh/MN en el sitio de recolección de la sangre y auto-detección casera del grupo sanguíneo. En combinación con un dispositivo relevante, el método de la presente se puede utilizar para el análisis rápido de la población del grupo sanguíneo ABO/Rh/ MN en el lote en un banco de sangre.
EJEMPLOS
Los siguientes ejemplos pretenden ilustrar adicionalmente la presente invención y estos ejemplos no limitarán de ninguna forma la presente invención. Cualesquiera cambios y modificaciones realizados a la presente invención por los expertos en la técnica estarán incluidos dentro del alcance contenido en las cláusulas anexas sin la desviación del espíritu de la invención.
EJEMPLO 1
La preparación de las tiras de prueba del kit para la detección del grupo sanguíneo humano ABO v los pasos de detección de la misma
(1) Fijar el anticuerpo del grupo sanguíneo (anticuerpo anti-A, anti-B) en la almohadilla de carga:
Los anticuerpos monoclonales anti-A y anti-B de alto titulo (suministrados por Changchun Brother Biotech Co., Ltd) se diluyeron respectivamente con solución salina de regulador de fosfato 5 mM a 1 mi con un título final de 64. Un agente protector de fijación de anticuerpos que consiste en albúmina de suero de bovino al 5%, sacarosa al 5%, PVP al 5% y suero de ternera al 5% en PBS se agregó a la solución de anticuerpo diluido, a fin de promover la fijación y conservación del anticuerpo en la almohadilla de fibra de vidrio. El anticuerpo diluido se dispersó sobre una almohadilla de fibra de vidrio pre-activada en una relación de 1.5 mi del anticuerpo diluido por 5 cm x 5 cm de la almohadilla de fibra de vidrio, y el anticuerpo entonces se secó a 37°C y se conservó en el sello.
(2) Ensamblar las tiras de prueba rápida:
Una almohadilla de fibra de vidrio de enjuague con un ancho de
20 mm se fija en el centro de una hoja de respaldo de poliéster con un ancho de aproximadamente 5-10 cm, posteriormente se fijan secuencialmente en ambos lados una almohadilla de carga con un ancho de 10 mm, una
almohadilla amortiguadora y una almohadilla de absorción con un ancho de 30 mm, y finalmente se fija de manera adhesiva la porción traslapada de la almohadilla de enjuague y la almohadilla de carga con una cinta adhesiva a prueba de agua, para evitar que se desprendan las almohadillas fijas y evitar que se disperse la solución de enjuague. A continuación, se corta en tiras la hoja de poliéster fija con dichas almohadillas con un ancho de 5 mm, y por lo tanto se obtienen tiras de prueba con una longitud de aproximadamente 5-10 cm y un ancho de aproximadamente 5 mm (véase figura 1 y figura 2).
(3) Detectar la muestra:
5 µ? de una muestra de sangre completa se hicieron gotear en la almohadilla de carga de la tira de prueba. Después de hacer gotear la muestra de prueba, se hicieron gotear 5 gotas de una solución de enjuague lentamente y a una velocidad uniforme en la almohadilla de enjuague 2. El color de la almohadilla de carga se observó después de la cromatografía de la solución de enjuague. Que una cantidad sustancial de sustancia roja permanezca en la almohadilla de carga 3 indica una reacción positiva; mientras que ninguna cantidad sustancial de sustancia roja en la almohadilla de carga 3 indica una reacción negativa. En combinación con el conocimiento sobre la relación del anticuerpo del grupo sanguíneo ABO y la reacción de eritrocitos, es fácil determinar el grupo sanguíneo de la muestra de prueba. Alternativamente, se puede leer el residuo rojo en la almohadilla de carga por medio de una señal de foto o el sistema recolector de señales eléctricas, posteriormente los
resultados pueden ser determinados de forma automática para analizar rápidamente el grupo sanguíneo ABO de muestras de sangre en lote.
EJEMPLO 2
La preparación de las tiras de prueba del kit para la detección del grupo sanguíneo humano Rh y los pasos de detección de la misma
(1) Fijar el anticuerpo del grupo sanguíneo (anticuerpo anti-D) en la almohadilla de carga:
Un anticuerpo monoclonal anti-D de alto título (suministrado por
MILLIPORE Corp.) se diluyó con solución salina de regulador de fosfato 5 mM a 1 mi con un título final de 32. Un agente protector de fijación de anticuerpos que consiste en albúmina al 5%, sacarosa al 5%, PVP al 5% y suero de ternera al 5% en PBS se agregó a la solución de anticuerpo diluido, a fin de promover la fijación y conservación del anticuerpo en la almohadilla de fibra de vidrio. Un mejorador de reacción (Tween 20 al 2% y Tritón X-100 al 2% en PBS) se agregó adicionalmente para promover la reacción inmune subsiguiente. El anticuerpo diluido se dispersó sobre la almohadilla de fibra de vidrio pre-activada en una relación de 1.5 mi del anticuerpo diluido por 5 cm ? 5 cm de la almohadilla de fibra, y el anticuerpo entonces se secó a 37°C y se conservó en el sello (véase figura 3).
Otros pasos fueron similares a los de la preparación de las tiras de prueba del kit para la detección del grupo sanguíneo humano ABO y los
pasos de detección de la misma.
EJEMPLO 3
La preparación de las tiras de prueba del kit para la detección del grupo sanguíneo humano MN v los pasos de detección de la misma
La preparación de las tiras de prueba del kit de detección para el grupo sanguíneo humano MN y los pasos de detección de los mismos son los mismos que aquellos en la preparación de las tiras de prueba del kit de detección del grupo sanguíneo humano Rh y los pasos de detección de los mismos, salvo que el anticuerpo fijo en la tira de prueba se reemplazó con anticuerpo anti-M y anti-N (véase figura 4).
EJEMPLO 4
La comparación del método de la presente para la detección del grupo sanguíneo con los métodos convencionales existentes.
Se detectó el grupo sanguíneo en 1500 individuos de la población general (donadores de sangre) en doble ciego, utilizando los métodos convencionales para la detección del grupo sanguíneo de forma paralela junto con y los métodos de la presente y su kit. Los resultados mostraron que los resultados de detección del método de la presente estuvieron en consistencia al 100% con aquellos del método conocido con
base en la aglutinación en suspensión de eritrocitos. Además, el método de la presente se puede aplicar a las muestras en una mayor escala, tal como la muestra de sangre parcialmente hemolizada y muestra de sangre rica en lípidos. Además, el método de la presente evita los defectos del método común existente. para la identificación clínica del grupo sanguíneo, tal como el tiempo prolongado de operación, el trabajo intensivo de mano de obra, resultado subjetivo con una gran variación debido al operador y la contaminación potencial.
Claims (9)
1.- Un método para detectar el grupo sanguíneo humano ABO/Rh/MN, que comprende los pasos de hacer gotear una muestra de sangre en una tira de prueba revestida previamente con anticuerpo anti-A o anti-B o anti-D o anti-M o anti-N, hacer gotear una solución de enjuague en un extremo de la tira de prueba para transportar los eritrocitos no aglutinados junto con la solución de enjuague lejos del sitio de carga, mientras deja los eritrocitos aglutinados con el anticuerpo restante en el sitio de carga, luego determinar el grupo sanguíneo de la muestra de acuerdo con la presencia de eritrocitos aglutinados en el sitio de reacción.
2. - El método de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque la muestra de sangre puede ser eritrocitos o sangre completa o eritrocitos o sangre completa diluida con solución salina fisiológica o solución salina de regulador de fosfato isotónica.
3. - El método de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque la muestra de sangre puede incluir una muestra de sangre que se hemoliza parcialmente o es rica en lípidos.
4. - El método de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque el anticuerpo se fija en la tira de prueba por adsorción física o entrelazado químico.
5.- El método de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque la presencia de la aglutinación en el sitio de reacción puede determinarse visualmente o al utilizar un dispositivo que recolecta la señal óptica o señal eléctrica.
6.- Un kit para llevar a cabo el método de la reivindicación 1.
7. - El kit de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado además porque consiste en una tira de prueba, una solución de enjuague y un medio recolector de sangre, en donde la tira de prueba consiste en una almohadilla de enjuague, una almohadilla de carga, una almohadilla amortiguadora, una almohadilla de absorción, una cinta adhesiva a prueba de agua y una hoja de poliéster como respaldo.
8. - El kit de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado además porque la almohadilla de enjuague, la almohadilla de carga, la almohadilla amortiguadora y la almohadilla de absorción que forman la tira de prueba están hechas de un material polimérico poroso que tiene un tamaño de poro apropiado para que atraviese al menos un eritrocito.
9. - El kit de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado además porque la muestra de sangre se hace gotear en la almohadilla de carga fija con un anticuerpo del grupo sanguíneo, y una solución de enjuague isotónica se hace gotear en la almohadilla de enjuague, luego se observa la presencia de eritrocitos aglutinados en la almohadilla de carga para determinar el grupo sanguíneo de la muestra de sangre.
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