CN103364571B - 一种交叉配血检测方法及试条 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种交叉配血检测方法及试条，本发明的检测方法将抗人血液免疫球蛋白抗体包被在一抗体垫上。本发明的检测方法快捷简便且无需借助仪器设备，适用于即时检验（POCT），可在突发事件情况下完成交叉配血实验；本发明的试条结构简单，成本低廉、易于工业化生产。
Description
技术领域
本发明属于输血医学领域，具体涉及一种交叉配血检测方法及试条。
背景技术
交叉配血实验是确定能否输血的重要依据，是将献血人的红细胞和血清分别与受血人的血清和红细胞混合，观察有无凝集反应的试验。
交叉配血实验包括主侧和次侧两种实验。主侧实验是受血者的血浆与供血者的红细胞混合，观察有无凝集反应的试验；次侧实验是受血者的红细胞与供血者的血浆混合，观察有无凝集反应的试验。若主侧和次侧实验均不凝集时，可输血；若主侧实验发生凝集，禁止输血；主侧不凝集，次侧凝集，必要时可少量、慢速输血。
通过交叉配血试验可发现血型鉴定错误、亚型、血型不合、不规则抗体等，正确进行交叉配血实验是安全输血的基础和保障。必须保证受血者的血清中不存在与供血者红细胞上的抗原起反应并导致供血者红细胞破坏的抗体。还要确保供血者血清中不存在与患者红细胞上抗原起反应并导致受血者红细胞破坏的抗体。目的是确保患者输用了供血者的血液后能在患者体内有效的存活，避免因输注不配合的血液成份所导致的不良溶血性输血反应，来保障安全、有效输血治疗的目的。
目前市场上常用的交叉配血方法有盐水法，木瓜酶法，凝聚胺法，抗球蛋白法，微柱凝胶卡。以上几种方法除了操作繁杂以外，还必须匹配离心机等专用设备，因此上述方法不适用于即时检验（POCT），无法在突发事件情况下完成交叉配血实验。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术缺陷，提供一种交叉配血检测方法。
本发明的另一目的在于提供一种交叉配血检测试条。
本发明的技术方案如下：
一种交叉配血检测方法，将抗人血液免疫球蛋白抗体包被在一抗体垫上，并包括如下步骤：
（1）主侧反应：将该抗人血液免疫球蛋白抗体与输血者的血清、血浆或全血及供血者的血细胞或全血反应；再将未反应的红细胞去除，并观察是否有红细胞凝集；
（2）次侧反应：将该抗人血液免疫球蛋白抗体与供血者的血清、血浆或全血及输血者的血细胞或全血反应；再将未反应的红细胞去除，并观察是否有红细胞凝集。
在本发明的一个优选实施方案中，所述步骤（1）包括：在所述抗体垫上滴加输血者的血清、血浆或全血，以使所述抗人血液免疫球蛋白抗体与上述血清、血浆或全血中的不完全血液抗体结合反应；再加入供血者的血细胞或全血进行反应；用冲洗液将未反应的红细胞冲洗掉；观察抗体垫上是否有凝集的红细胞残留。优选的，所述步骤（2）包括：在所述抗体垫上滴加供血者的血清、血浆或全血，以使所述抗人血液免疫球蛋白抗体与上述血清、血浆或全血中的不完全血液抗体结合反应；再加入输血者的血细胞或全血进行反应；用冲洗液将未反应的红细胞冲洗掉；观察抗体垫上是否有凝集的红细胞残留。
在本发明的一个优选实施方案中，所述步骤（1）包括：将输血者的血清、血浆或全血与供血者的血细胞或全血混合均匀进行反应，得主侧反应液；将上述主侧反应液滴加上述抗体垫上，以使所述抗人免疫球蛋白抗体与上述主侧反应液中的不完全血液抗体结合反应；用冲洗液将未反应的红细胞冲洗掉；观察抗体垫上是否有凝集的红细胞残留。优选的，所述步骤（2）包括：将供血者的血清、血浆或全血与输血者的血细胞或全血混合均匀进行反应，得次侧反应液；将上述次侧反应液滴加上述抗体垫上，以使所述抗人免疫球蛋白抗体与上述次侧反应液中的不完全血液抗体结合反应；用冲洗液将未反应的红细胞冲洗掉；观察抗体垫上是否有凝集的红细胞残留。
在本发明的一个优选实施方案中，所述冲洗液为10mM磷酸盐缓冲液或生理盐水。
在本发明的一个优选实施方案中，所述抗人血液免疫球蛋白抗体包括抗人IgG抗体、抗人IgM抗体、抗人IgA抗体、抗人IgD抗体和抗人IgE抗体。
本发明的另一技术方案如下：
一种交叉配血检测试条，包括一底板及从左至右依次相接的设置在底板上的吸水纸、第二缓冲垫、包被有抗人血液免疫球蛋白抗体的抗体垫、第一缓冲垫和冲洗液滴加垫。
在本发明的一个优选实施方案中，所述抗人血液免疫球蛋白抗体包括抗人IgG抗体、抗人IgM抗体、抗人IgA抗体、抗人IgD抗体和抗人IgE抗体，所述抗体垫为孔径20-40μm的亲水玻璃纤维垫。
在本发明的一个优选实施方案中，所述吸水纸右边缘搭在所述第二缓冲垫的左边缘上，所述第二缓冲垫的右边缘搭在所述抗体垫的左边缘上，所述抗体垫的右边缘搭在第一缓冲垫的左边缘上，所述第一缓冲垫的右边缘搭在所述冲洗液滴加垫的左边缘上。
在本发明的一个优选实施方案中，所述抗体垫为孔径20-40μm的亲水玻璃纤维垫。
在本发明的一个优选实施方案中，所述第一缓冲垫、第二缓冲垫和冲洗液滴加垫均为孔径大于40μm的亲水玻璃纤维垫。
在本发明的一个优选实施方案中，所述底板为聚酯板。
在本发明的一个优选实施方案中，还包括一套设在所述交叉配血测试条外并与该测试条的尺寸适配的塑料卡，该塑料卡上对应所述抗体垫和所述冲洗液滴加垫处分别开设有加样孔和冲洗孔。
本发明的有益效果是：
1、本发明的交叉配血检测试条，包括一底板及从左至右依次相接的设置在底板上的吸水纸、第二缓冲垫、包被有抗人免疫球蛋白抗体的抗体垫、第一缓冲垫和冲洗液滴加垫，结构简单，成本低廉、易于工业化生产；
2、本发明的交叉配血检测方法的总的反应时间仅需2-20分钟，快捷简便且无需借助仪器设备，适用于即时检验（POCT），可在突发事件情况下完成交叉配血实验，应用于非常军事时期或重大灾难时期的输血前快速检测。
附图说明
图1为本发明的一种交叉配血检测试条的分解结构示意图。
图2为本发明的一种交叉配血检测试条的塑料卡的俯视图。
具体实施方式
以下通过具体实施方式结合附图对本发明的技术方案进行进一步的说明和描述。
实施例1
如图1和图2所示，一种交叉配血检测试条，包括一塑料卡1、一底板2及从左至右依次相接的设置在底板2上的吸水纸21、第二缓冲垫22、包被有抗人IgG抗体和抗人IgM抗体的抗体垫23、第一缓冲垫24和冲洗液滴加垫25。所述吸水纸21右边缘搭在所述第二缓冲垫22的左边缘上，所述第二缓冲垫22的右边缘搭在所述抗体垫23的左边缘上，所述抗体垫23的右边缘搭在第一缓冲垫24的左边缘上，所述第一缓冲垫24的右边缘搭在所述冲洗液滴加垫的左边缘上。所述底板2为聚酯板；所述抗体垫23为孔径20-40μm的亲水玻璃纤维垫；所述第一缓冲垫24、第二缓冲垫22和冲洗液滴加垫25均为孔径大于40μm的亲水玻璃纤维垫；所述塑料卡1套设在所述交叉配血测试条外并与该测试条的尺寸适配，其上对应所述抗体垫23和所述冲洗液滴加垫25处分别开设有加样孔11和冲洗孔12，以配合抗体垫23和冲洗液滴加垫25分别形成加样处和冲洗处。
该交叉配血检测试条的制备方法如下：
（1）在抗体垫23上固定抗体
抗人IgG抗体、抗人IgM抗体以磷酸盐缓冲液（5-20mM）稀释，在稀释后的抗体液中加入抗体固定保护剂（2-20%蔗糖、5-50%的葡萄糖组成）以便促进抗体在玻璃纤维垫上的固定和保存。按照每1.5ml稀释后的抗体铺展5cm*5cm玻璃纤维垫的比例在玻璃纤维垫上铺展抗体，然后37℃烘干并密封保存；（根据需要，还可据此包被抗人IgA抗体、抗人IgD抗体和抗人IgE抗体）
（2）快速交叉配血检测测试条的组装：
在一宽度约5～10cm的长方形的聚酯板从底部起先贴上20mm宽的冲洗液滴加垫25，然后依次贴上10mm宽的第一缓冲垫24、10mm宽的抗体垫23、10mm宽的第二缓冲垫22和30mm宽的吸水垫。然后将各层均粘贴好的聚酯板切成4mm宽的条，即得到长约5～10cm,宽约4mm的检测试剂条，该检测试剂条转入对应尺寸的塑料卡1中。
实施例2
一种交叉配血检测方法，本实施例的检测方法的载体为实施例1所述的交叉配血检测试条，并包括主侧反应和次侧反应：
主侧反应：
（1）在加样处滴加输血者的血清、血浆或全血10-50μL，以使所述抗人IgG抗体和抗人IgM抗体与上述血清、血浆或全血中的不完全IgG抗体和不完全IgM抗体结合反应，反应时间为1-10分钟；
（2）再在加样处滴加供血者的血细胞或全血10-50μL进行反应1-10分钟；
（3）将100-250μL冲洗液（10mM磷酸盐缓冲液或生理盐水）滴加在冲洗处，吸水纸21吸附该冲洗液依次经过第一缓冲垫24、抗体垫23和第二缓冲垫22，将未反应的红细胞冲洗掉，冲洗时间为1分钟；
（4）冲洗完毕后观察是否有红细胞凝集现象；
次侧反应：
（1）在加样处滴加供血者的血清、血浆或全血10-50μL，以使所述抗人IgG抗体和抗人IgM抗体与上述血清、血浆或全血中的不完全IgG抗体和不完全IgM抗体结合反应，反应时间为1-10分钟；
（2）再在加样处滴加输血者的血细胞或全血10-50μL进行反应1-10分钟；
（3）将100-250μL冲洗液（10mM磷酸盐缓冲液或生理盐水）滴加在冲洗处，吸水纸21吸附该冲洗液依次经过第一缓冲垫24、抗体垫23和第二缓冲垫22，将未反应的红细胞冲洗掉，冲洗时间为1分钟；
（4）冲洗完毕后观察是否有红细胞凝集现象；
结果判读：
如果主侧反应和次侧反应均观察到红细胞凝集，则不可输血；
如果主侧反应和次侧反应均未观察到红细胞凝集，则可以输血；
如果主侧反应未观察到红细胞凝集，而次侧反应观察到红细胞凝集，则必要时刻少量、慢速输血。
实施例3
一种交叉配血检测方法，本实施例的检测方法的载体为实施例1所述的交叉配血检测试条：
（1）将输血者的血清、血浆或全血10-100μL与供血者的血细胞或全血10-100μL混合均匀进行反应1-10分钟，得主侧反应液；
（2）将供血者的血清、血浆或全血10-100μL与输血者的血细胞或全血10-100μL混合均匀进行反应1-10分钟，得次侧反应液；
（3）将上述主侧反应液5-50μL和次侧反应液5-50μL分别滴加在两个上述抗体垫23上或上述抗体垫23上的两个不同部位，以使所述抗人IgG抗体和抗人IgM抗体与上述主侧反应液和次侧反应液中的不完全IgG抗体和不完全IgM抗体结合反应，反应时间为1-10分钟；
（4）将100-250μL冲洗液（10mM磷酸盐缓冲液或生理盐水）滴加在所述冲洗液滴加垫25上，吸水纸21吸附该冲洗液依次经过第一缓冲垫24、抗体垫23和第二缓冲垫22，将未反应的红细胞冲洗掉，，冲洗时间为1分钟；
（5）观察抗体垫23上是否有凝集的红细胞残留：
如果主侧反应和次侧反应均观察到红细胞凝集，则不可输血；
如果主侧反应和次侧反应均未观察到红细胞凝集，则可以输血；
如果主侧反应未观察到红细胞凝集，而次侧反应观察到红细胞凝集，则必要时刻少量、慢速输血。
以上所述，仅为本发明的较佳实施例而已，故不能依此限定本发明实施的范围，即依本发明专利范围及说明书内容所作的等效变化与修饰，皆应仍属本发明涵盖的范围内。
Claims (13)
1.一种交叉配血检测方法，其特征在于：将抗人血液免疫球蛋白抗体包被在一抗体垫上，并包括如下步骤：
(1)主侧反应：将该抗人血液免疫球蛋白抗体与输血者的血清、血浆或全血及供血者的血细胞或全血反应；再将未反应的红细胞去除，并观察是否有红细胞凝集；
(2)次侧反应：将该抗人血液免疫球蛋白抗体与供血者的血清、血浆或全血及输血者的血细胞或全血反应；再将未反应的红细胞去除，并观察是否有红细胞凝集；
所述抗人血液免疫球蛋白抗体包括抗人IgG抗体、抗人IgM抗体、抗人IgA抗体、抗人IgD抗体和抗人IgE抗体。
2.如权利要求1所述的一种交叉配血检测方法，其特征在于：步骤(1)包括：在所述抗体垫上滴加输血者的血清、血浆或全血，以使所述抗人血液免疫球蛋白抗体与上述血清、血浆或全血中的不完全血液抗体结合反应；再加入供血者的血细胞或全血进行反应；用冲洗液将未反应的红细胞冲洗掉；观察抗体垫上是否有凝集的红细胞残留。
3.如权利要求2所述的一种交叉配血检测方法，其特征在于：步骤(2)包括：在所述抗体垫上滴加供血者的血清、血浆或全血，以使所述抗人血液免疫球蛋白抗体与上述血清、血浆或全血中的不完全血液抗体结合反应；再加入输血者的血细胞或全血进行反应；用冲洗液将未反应的红细胞冲洗掉；观察抗体垫上是否有凝集的红细胞残留。
4.如权利要求1所述的一种交叉配血检测方法，其特征在于：步骤(1)包括：将输血者的血清、血浆或全血与供血者的血细胞或全血混合均匀进行反应，得主侧反应液；将上述主侧反应液滴加所述抗体垫上，以使所述抗人血液免疫球蛋白抗体与上述主侧反应液中的不完全血液抗体结合反应；用冲洗液将未反应的红细胞冲洗掉；观察抗体垫上是否有凝集的红细胞残留。
5.如权利要求4所述的一种交叉配血检测方法，其特征在于：步骤(2)包括：将供血者的血清、血浆或全血与输血者的血细胞或全血混合均匀进行反应，得次侧反应液；将上述次侧反应液滴加所述抗体垫上，以使所述抗人血液免疫球蛋白抗体与上述次侧反应液中的不完全血液抗体结合反应；用冲洗液将未反应的红细胞冲洗掉；观察抗体垫上是否有凝集的红细胞残留。
6.如权利要求2至5中任一权利要求所述的一种交叉配血检测方法，其特征在于：所述冲洗液为10mM磷酸盐缓冲液或生理盐水。
7.如权利要求1至5中任一权利要求所述的一种交叉配血检测方法，其特征在于：所述抗体垫为孔径20-40μm的亲水玻璃纤维垫。
8.一种交叉配血检测试条，其特征在于：包括一底板及从左至右依次相接的设置在底板上的吸水纸、第二缓冲垫、包被有抗人血液免疫球蛋白抗体的抗体垫、第一缓冲垫和冲洗液滴加垫，所述抗人血液免疫球蛋白抗体包括抗人IgG抗体、抗人IgM抗体、抗人IgA抗体、抗人IgD抗体和抗人IgE抗体。
9.如权利要求8所述的一种交叉配血检测试条，其特征在于：所述吸水纸右边缘搭在所述第二缓冲垫的左边缘上，所述第二缓冲垫的右边缘搭在所述抗体垫的左边缘上，所述抗体垫的右边缘搭在第一缓冲垫的左边缘上，所述第一缓冲垫的右边缘搭在所述冲洗液滴加垫的左边缘上。
10.如权利要求8所述的一种交叉配血检测试条，其特征在于：所述抗体垫为孔径20-40μm的亲水玻璃纤维垫。
11.如权利要求8所述的一种交叉配血检测试条，其特征在于：所述第一缓冲垫、第二缓冲垫和冲洗液滴加垫均为孔径大于40μm的亲水玻璃纤维垫。
12.如权利要求8所述的一种交叉配血检测试条，其特征在于：所述底板为聚酯板。
13.如权利要求8至12中任一权利要求所述的一种交叉配血检测试条，其特征在于：还包括一套设在所述交叉配血检测试条外并与该检测试条的尺寸适配的塑料卡，该塑料卡上对应所述抗体垫和所述冲洗液滴加垫处分别开设有加样孔和冲洗孔。
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