CN104950115A - 基于膜结构的人abo血型反定型检测方法 - Google Patents

基于膜结构的人abo血型反定型检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种基于膜结构的人ABO血型反定型检测方法，其特征在于，该方法选用能够允许单个红细胞通过的滤膜作为核心材料，将人ABO血型抗原结合到滤膜上，滤膜的周边包围有吸水材料，检测时将待检血清或血浆滴加在滤膜表面，再用冲洗液冲洗后，再将特定的反定型指示剂细胞滴加到与之对应滤膜表面，最后使用冲洗液冲洗。本发明的有益效果是，检测时间短，结果客观。

Description

基于膜结构的人ABO血型反定型检测方法
技术领域
本发明涉及一种血型判定检测技术，特别是一种基于膜结构的人ABO血型反定型检测方法。
背景技术
血型检验已广泛应用于各级医疗机构，其中ABO血型系统和抗Rh(D)的检测已经作为常规检测。而血型检测的原理是基于抗原-抗体之间的特异性反应，进而产生细胞凝集效应。为了确保临床输血的安全，避免因为血型不相容导致的继发性溶血性输血反应，有必要对红细胞表面抗原以及血清或血浆中的抗体进行检测。而使用血型定型试剂检测红细胞表面抗原称为正定型检测；反之，使用红细胞表面抗原检测血清中相应的抗体称之为反定型检测。《中华人民共和国药典2010版》公布的健康献血员血型检测标准中明确指出，须使用国家药品监督管理当局批准的抗A、抗B血型定型试剂进行检测。而且，ABO血型检测结果，应以正、反定型法鉴定均合格为准。
而目前血型反定型临床检测中用试管法、平板法和柱凝集技术等。而试管法、平板法缺乏客观判断的依据，有时容易造成错误判断。柱凝集法的结果客观，易于标准化，目前在逐渐替代前者。但是，柱凝集法需辅助设备，耗时长，限制了在紧急状况下的应用。
发明内容
本发明的目的是为了解决上述问题，设计了一种基于膜结构的人ABO血型反定型检测方法。
实现上述目的本发明的技术方案为，一种基于膜结构的人ABO血型反定型检测方法，该方法选用能够允许单个红细胞通过的滤膜作为核心材料，将血型抗原结合到滤膜上，滤膜的周边包围有吸水材料，检测时将待检血清或血浆滴加在滤膜表面，再用冲洗液冲洗后，再将特定的反定型指示剂细胞滴加到与之对应滤膜表面，最后使用冲洗液冲洗。如果血清或者血浆中含有与滤膜上抗原发生特异性反应的抗体，则血清或血浆中抗体将被结合到滤膜上，进而与对应的反定型指示剂细胞发生抗原抗体结合，指示红细胞则会留在膜表面形成肉眼可见的红色团块；如果血清或者血浆中不含与滤膜上抗原发生特异性反应的抗体，则对应的反定型指示剂细胞则不会发生抗原抗体结合，指示剂红细胞将会随冲洗液液体渗出。操作人员可依据红细胞是否在滤膜形成肉眼可见的红色团块来判断结果，确定待测血清或者血浆的抗体，从而确定血型。
所述该方法选用能够允许单个红细胞通过的滤膜作为核心材料，而滤膜材质可以是玻璃纤维膜或硝酸纤维膜或硅酸盐颗粒等能够形成特定连续液流通道的固体，且滤膜的内径在2—20微米之间。
所述滤膜的周边包围有吸水材料，滤膜的形状为方形或者圆形，吸水材料包围滤膜的方式为全部包围或者部分包围。
所述血型抗体结合到滤膜上，血型抗原结合到滤膜上的方法为物理吸附法或者化学交联法。
所述检测时将待检血清或血浆滴加在滤膜表面，其中待检血清或血浆为体积约10—200μL的新鲜的人血清或者血浆。
所述检测时将特定的反定型指示剂红细胞滴加在与之对应的滤膜表面，其中特定的反定型指示剂红细胞可以是一组A红细胞悬液、B红细胞悬液、O红细胞悬液，也可以是一组AB型红细胞悬液、O红细胞悬液；指示剂细胞的浓度可以在0.5％-20％范围内；注意在滴加时，具有相同抗原的反定指示剂细胞和滤膜相对应。
该检测方法还包括检测试剂盒，检测试剂盒是由检测卡以及反定型指示剂细胞组成。其中检测卡内设有能够允许单个红细胞通过的滤膜，将人ABO血型抗原结合到滤膜上，滤膜周边垫有吸水垫，吸水垫的面积要大于滤膜，且滤膜和吸水垫都通过检测试剂盒内的塑料固体结构来做固定和支撑。而反定型指示剂细胞则是具有ABO血型抗原的一组红细胞。
检测时，将待检血清或血浆滴加到检测卡的滤膜表面，微量冲洗液冲洗后，再将特定的反定型指示剂细胞滴加到与之对应的滤膜表面，最后使用冲洗液冲洗。如果血清或者血浆中含有与滤膜上抗原发生特异性反应的抗体，血清或血浆中抗体将被结合到滤膜上，进而与对应的反定型指示剂细胞发生抗原抗体结合，指示红细胞则会留在膜表面形成肉眼可见的红色团块；反之，如果血清或者血浆中不含与滤膜上抗原发生特异性反应的抗体，对应的反定型指示剂细胞不会发生抗原抗体结合，指示剂红细胞将会随冲洗液液体渗出，则滤膜上不会形成肉眼可见的红色团块。
所述冲洗液为生理盐水。
利用本发明的技术方案制作的基于膜结构的人ABO血型反定型检测方法，具有无需特殊设备，检测时间短，结果客观等优势，具有较好的临床推广价值。
附图说明
图1是本发明所述基于膜结构的人ABO血型反定型检测试剂盒的单孔结构示意图；
图中，1、试剂盒底板；2、滤膜；3、吸水垫；4、带有抗原的滤膜区域。
图2是本发明所述基于膜结构的人ABO血型反定型检测试剂盒的结构示意图；
图中，1、试剂盒底板；2、滤膜。
图3是本发明所述基于膜结构的人ABO血型反定型检测试剂盒的结构示意图的内部结构示意图；
图中，1、试剂盒底板；2、带有抗原的滤膜；3、吸水垫。
具体实施方式
下面结合附图对本发明的进行具体描述，
实施例1
一种基于膜结构的人ABO血型反定型检测方法，该方法选用能够允许单个红细胞通过的滤膜作为核心材料，将血型抗原结合到滤膜上，滤膜的周边包围有吸水材料制。检测时，将待检血清或血浆滴加到滤膜表面，冲洗液冲洗后，再将特定的反定型指示剂细胞滴加到与之对应滤膜表面，最后使用冲洗液冲洗。如果血清或者血浆中含有与滤膜上抗原发生特异性反应的抗体，血清或血浆中抗体将被结合到滤膜上，进而与对应的反定型指示剂细胞发生抗原抗体结合，指示红细胞则会留在膜表面形成肉眼可见的红色团块；如果血清或者血浆中不含与滤膜上抗原发生特异性反应的抗体，对应的反定型指示剂细胞则不会发生抗原抗体结合，指示剂红细胞将会随冲洗液液体渗出。操作人员可依据红细胞是否在滤膜形成肉眼可见的红色团块来判断结果，确定待测血清或者血浆的抗体，从而确定血型。根据所述的检测方法设计的检测试剂盒，主要包括检测卡和反定型指示剂细胞两部分。其中，检测卡内设有内径在2-20微米之间，能够允许单个红细胞通过的滤膜，将人ABO血型抗原结合到滤膜上，滤膜周边垫有吸水垫，吸水垫的面积要大于滤膜，且滤膜和吸水垫都通过检测试剂盒内的塑料固体结构来做固定和支撑，单孔结构如图1所示；而反定型指示剂细胞则是具有ABO血型抗原的一组红细胞，可以是一组A红细胞悬液、B红细胞悬液、O红细胞悬液，也可以是一组AB型红细胞悬液、O红细胞悬液，其浓度范围在0.5％-20％。而制备红细胞悬液的液体可以是生理盐水或其它等渗溶液，也可以是红细胞保存液。
实施例2
ABO血型的反定型检测试剂盒制备以及检测步骤(三种反定型指示剂细胞)
1、人ABO血型抗原的制备
分别取得1袋新鲜的人A型、B型、O型血液，经过处理得到三种血型的红细胞，使用低渗压溶液分别破碎三种(A型、B型、O型)红细胞，离心去上清，再使用相同的低渗压溶液洗涤沉淀，直至上清无色透明，收集沉淀即为红细胞膜，作为血型抗原提取物。加入抗原保护剂稀释抗原提取物。
2、人ABO血型抗原的固定
使用化学方法处理活化滤膜，将稀释后的抗原提取物滴加到1.5cm×1.5cm滤膜的中心，然后37℃烘干处理并密封保存。
3、人ABO血型反定型检测卡的组装
在一带有3个孔(孔径为0.5cm)的长方形的塑料板背部贴上3片带有不同抗原的1.5cm×1.5cm滤膜，使聚酯版上的孔与滤膜上的中心对应。然后将2.5cm宽的吸水纸贴在滤膜的两侧或周边。滤膜和吸水纸都是使用防水胶黏贴在聚酯版上，防止加样和冲洗过程滤膜和吸水纸脱落或串位置，最后扣上后盖，根据不同血型抗原膜的位置，贴好对应的AB O血型检测标签，检测盒具体结构以及内部结构如图2图3所示。
4、反定型指示剂细胞的制备
取三种(A型、B型、O型)新鲜的红细胞，使用红细胞保存液、生理盐水或者其他等渗溶液稀释至所需浓度，装瓶，贴好标签，备用。
5、样品检测
在3个反定型检测孔处分别滴加10—200μL待检新鲜血清或血浆样品，血清或血浆可以冲洗或不冲洗，根据情况而定；再在3个样品检测孔处分别滴加10-200μL的A型、B型、O型指示剂细胞，其中A型指示剂细胞检测带有A型抗原滤膜反应孔，B型指示剂细胞检测带有B型抗原滤膜反应孔，O型指示剂细胞检测带有O型抗原滤膜反应孔，等待30s至1min后，缓慢加入200—1000μL的反应冲洗液。待冲洗液被吸水纸吸收后，观察样品检测孔的颜色。
在样品检测孔上有显著的红色物质残留为阳性反应，加样垫上没有红色物质残留为阴性反应。滤膜上的ABO血型抗原可以特异性结合血清或血浆中的A、B、D抗体结合，进而与通过的反定型指示剂细胞反应，阳性反应可以确定血浆中含有与之抗原对应的抗体，从而可以确定血清中含有的抗体类型，间接测定样品的血型。
实施例3
ABO血型的反定型检测试剂盒制备以及检测步骤(两种反定型指示剂细胞)
1、人ABO血型抗原的制备
分别取得1袋新鲜的人A型、B型、O型血液，经过处理得到三种血型的红细胞，使用低渗压溶液分别破碎三种(A型、B型、O型)红细胞，离心去上清，再使用相同的低渗压溶液洗涤沉淀，直至上清无色透明，收集沉淀即为红细胞膜，作为血型抗原提取物。加入抗原保护剂稀释抗原提取物。
2、人ABO血型抗原的固定
使用化学方法处理活化滤膜，将稀释后的抗原提取物滴加到1.5cm×1.5cm滤膜的中心，然后37℃烘干处理并密封保存。
3、人ABO血型反定型检测卡的组装
在一带有3个孔(孔径为0.5cm)的长方形的塑料板背部贴上3片带有不同抗原的1.5cm×1.5cm滤膜，使聚酯版上的孔与滤膜上的中心对应。然后将2.5cm宽的吸水纸贴在滤膜的两侧或周边。滤膜和吸水纸都是使用防水胶黏贴在聚酯版上，防止加样和冲洗过程滤膜和吸水纸脱落或串位置，最后扣上后盖，根据不同血型抗原膜的位置，贴好对应的AB O血型检测标签。检测盒具体结构以及内部结构如图2、图3所示。
4、反定型指示剂细胞的制备
取两种(A B型、O型)新鲜的红细胞，使用红细胞保存液、生理盐水或者其他等渗溶液稀释至所需浓度，装瓶，贴好标签，备用。
5、样品检测
在3个反定型检测孔处分别滴加10—200μL待检新鲜血清或血浆样品，血清或血浆可以冲洗或不冲洗，根据情况而定；再在3个样品检测孔处分别滴加10—200μL A B型、O型指示剂细胞，其中A B型指示剂细胞检测带有A型抗原滤膜反应孔和带有B型抗原滤膜反应孔，O型指示剂细胞检测带有O型抗原滤膜反应孔，等待30s至1min后，缓慢加入200-1000μL的反应冲洗液。待冲洗液被吸水纸吸收后，观察样品检测孔的颜色。
在样品检测孔上有显著的红色物质残留为阳性反应，加样垫上没有红色物质残留为阴性反应。滤膜上的ABO血型抗原可以特异性结合血清或血浆中的A、B、D抗体结合，进而与通过的反定型指示剂细胞反应，阳性反应可以确定血浆中含有与之抗原对应的抗体，从而可以确定血清中含有的抗体类型，间接测定样品的血型。
上述技术方案仅体现了本发明技术方案的优选技术方案，本技术领域的技术人员对其中某些部分所可能做出的一些变动均体现了本发明的原理，属于本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种基于膜结构的人ABO血型反定型检测方法，其特征在于，该方法选用能够允许单个红细胞通过的滤膜作为核心材料，将ABO血型抗原结合到滤膜上，滤膜的周边包围有吸水材料，检测时将待检血清或血浆滴加在滤膜表面，再用冲洗液冲洗后，再将特定的反定型指示剂细胞滴加到与之对应滤膜表面，最后使用冲洗液冲洗。如果血清或者血浆中含有与滤膜上抗原发生特异性反应的抗体，则血清或血浆中抗体将被结合到滤膜上，进而与对应的反定型指示剂细胞发生抗原抗体结合，指示红细胞则会留在膜表面形成肉眼可见的红色团块；如果血清或者血浆中不含与滤膜上抗原发生特异性反应的抗体，则对应的反定型指示剂细胞则不会发生抗原抗体结合，指示剂红细胞将会随冲洗液液体渗出。操作人员可依据红细胞是否在滤膜形成肉眼可见的红色团块来判断结果，确定待测血清或者血浆的抗体，从而确定血型。
2.根据权利要求1所述的基于膜结构的人ABO血型反定型检测方法，其特征在于，所述该方法选用能够允许单个红细胞通过的滤膜作为核心材料，而滤膜材质可以是玻璃纤维膜或硝酸纤维膜或硅酸盐颗粒等能够形成特定连续液流通道的固体，且滤膜的内径在2—20微米之间。
3.根据权利要求1所述的基于膜结构的人ABO血型反定型检测方法，其特征在于，所述滤膜的周边包围有吸水材料，滤膜的形状为方形或者圆形，吸水材料包围滤膜的方式为全部包围或者部分包围。
4.根据权利要求1所述的基于膜结构的人ABO血型反定型检测方法，其特征在于，所述血型抗体结合到滤膜上，血型抗原结合到滤膜上的方法为物理吸附法或者化学交联法。
5.根据权利要求1所述的基于膜结构的人ABO血型反定型检测方法，其特征在于，所述检测时将待检血清或血浆滴加在滤膜表面，其中待检血清或血浆为体积约10—200μL的新鲜的人血清或者血浆。
6.根据权利要求1所述的基于膜结构的人ABO血型反定型检测方法，其特征在于，所述检测时将特定的反定型指示剂红细胞滴加在与之对应的滤膜表面，其中特定的反定型指示剂红细胞可以是一组A红细胞悬液、B红细胞悬液、O红细胞悬液，也可以是一组AB型红细胞悬液、O红细胞悬液；指示剂细胞的浓度可以在0.5％-20％之间。注意在滴加时，具有相同抗原的反定指示剂细胞和滤膜相对应。
7.根据权利要求1所述的基于膜结构的人ABO血型反定型检测方法，其特征在于，该检测方法还包括检测试剂盒，检测试剂盒是由检测卡以及反定型指示剂细胞组成。其中检测卡内设有能够允许单个红细胞通过的滤膜，将人ABO血型抗原结合到滤膜上，滤膜周边垫有吸水垫，吸水垫的面积要大于滤膜，且滤膜和吸水垫都通过检测试剂盒内的塑料固体结构来做固定和支撑。而反定型指示剂细胞则是具有ABO血型抗原的一组红细胞。
检测时，将待检血清或血浆滴加到检测卡的滤膜表面，微量冲洗液冲洗后，再将特定的反定型指示剂细胞滴加到与之对应的滤膜表面，最后使用冲洗液冲洗。如果血清或者血浆中含有与滤膜上抗原发生特异性反应的抗体，血清或血浆中抗体将被结合到滤膜上，进而与对应的反定型指示剂细胞发生抗原抗体结合，指示红细胞则会留在膜表面形成肉眼可见的红色团块；反之，如果血清或者血浆中不含与滤膜上抗原发生特异性反应的抗体，对应的反定型指示剂细胞不会发生抗原抗体结合，指示剂红细胞将会随冲洗液液体渗出，则滤膜上不会形成肉眼可见的红色团块。
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