CN102749443B - 双层微流控芯片器件及其在免疫检测中的用途 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了双层微流控芯片器件及其在免疫检测中的用途。本发明采用双层微流控芯片器件，将抗原、抗体、二抗分别通入不同的管道内，并加以真空处理，完成免疫反应。本发明的方法将抗原固定时间、抗原抗体反应时间分别缩短。将整个免疫反应，包括抗原固定、抗体反应、二抗反应，缩短到15min内，并且保证高灵敏度，能够高通量地进行免疫分析，能够同时分析多个样品中的多种成分的存在，极大地提高了分析的效率。
Description
技术领域
本发明涉及生物分析领域，尤其涉及双层微流控芯片器件及其在免疫检测中的用途。
背景技术
现有的很多疾病的检测，小分子等物质的检测，都是利用免疫反应来进行的，如艾滋病、乙肝、丙肝的初筛检测，都是通过人工制备的抗原与血液、血清样品中的抗体通过免疫反应的结合来判断抗体是否存在，以及定量的分析。常用的进行艾滋病、乙肝、丙肝的检测使用的是在96孔板中进行的酶联免疫吸附检测，过程是抗原固定，抗体与抗原的免疫反应，酶或者荧光标记的二抗与抗体的免疫反应，再通过酶标记的二抗进行显色，利用专用的酶标仪进行颜色的精确读出。这个过程需要很长的时间，抗原的固定一般需要10个小时左右，抗体和抗原的免疫反应需要3-4个小时，酶标记的二抗和抗体的免疫反应需要3-4个小时，再进行酶的显色，需要半个小时的时间完成，整个检测的过程需要1-2天来完成。对于小分子如牛奶中抗生素，激素的检测，食品中色素的检测中，一般都使用间接竞争免疫检测的方法，利用小分子作为抗原，通过和抗体的特异性免疫来检测小分子抗原的量。这个过程同样需要1-2天的时间来完成，而且一次只能检测一个样品，这种检测方法通量相对比较低，对于大量样品的检测比较难实现。尤其是同时要测试样品中含有不同的物质，每个样品需要进行很多次检测，使用的样品量也比较大。
发明内容
本发明的目的是利用特殊设计的双层微流控芯片，利用真空的辅助，进行高灵敏度，快速的免疫检测。
在本发明的一个方面，提供了一种双层微流控芯片器件，其包括：1)两块芯片，其在相对的表面上具有管道，优选地，所述两块芯片上的管道相互交叉；2)在两块芯片之间的滤膜；和3)真空设备。
在本发明一个优选的方面，所述芯片包括聚二甲基硅氧烷、聚甲基丙烯酸甲酯或聚苯乙烯的芯片。
在本发明一个优选的方面，所述滤膜为高分子滤膜，进一步优选地，所述高分子种类为聚碳酸酯、聚四氟乙烯、聚偏氟乙烯、聚苯乙烯或聚乙烯吡咯烷酮；所述滤膜的厚度为10～30μm，孔径为50～1000nm，进一步优选地，所述滤膜的厚度为30μm，孔径为220nm。
在本发明一个优选的方面，所述芯片上的管道具有50～500μm的宽度。
在本发明一个优选的方面，两块芯片上的管道相互垂直，交叉角度为90°。
在本发明一个优选的方面，所述真空设备包括：连接油泵的真空干燥器和连接水泵的真空干燥瓶，且具有0.05～0.5tor的真空度。
在本发明的第二个方面，提供了使用前述的器件进行免疫测定的方法，其包括1)将一侧芯片的管道中通入含有抗原的溶液，并抽真空；2)在另一侧芯片的管道中通入含有抗体的溶液，并抽真空；和3)结果使用荧光显微镜进行读出。其中，1)与2)为同时，1)先于2)或者2)先于1)地进行；优选地，1)先于2)进行。
在本发明一个优选的方面，上述方法还包括步骤，在抗原或抗体溶液一侧芯片的管道中通入含有二抗的溶液，并抽真空。
在本发明一个优选的方面，在抽真空步骤中，真空度为0.5tor，抽真空时间为5min；优选地，真空度为0.05tor，抽真空时间为5min。
在本发明的一个优选的实施方案中，采用以下方法进行免疫分析：
1.制备特殊设计的双层微流控芯片，使用两个表面具有200μm宽度管道的聚二甲基硅氧烷的微流控芯片，中间夹一片具有220nm的孔的聚碳酸酯滤膜，两个芯片的管道垂直交叉，中间由滤膜分隔开，滤膜上下的管道中可以通入不同浓度的抗原抗体溶液，溶液中的抗原抗体可以通过滤膜的孔进行物质交换，并且在滤膜上发生免疫反应。在该过程中，蛋白质在滤膜中浓缩；
2.将一层管道中通入抗原溶液的双层微流控芯片放入真空泵中，进行抽真空，5min以后，取出芯片，此时芯片管道中的溶液会被抽干，而且抗原蛋白会固定在滤膜上，形成抗原条带；
3.在另一层管道中通入抗体或者样品溶液，此处，样品溶液为免疫检测中含有浓度未知抗体的样品，如含有抗体的血清、血浆、唾液和尿液，将通入抗体溶液的双层微流控芯片放入真空泵中，进行抽真空，5min以后，取出芯片，此时抗体或者样品溶液中的抗体会和已经固定的抗原条带完成免疫反应，并且管道中的溶液已经抽干；
4.在通入抗体的一层芯片中加入荧光、辣根过氧化物酶或者碱性磷酸酶标记的二抗溶液，放入真空泵中，进行抽真空，5min以后，取出芯片，此时荧光标记的二抗与抗体结合。并且管道中的溶液已经抽干。
5.将芯片放在荧光显微镜下观察，拍摄图像，进行荧光分析。
如图1所示，其中，上图为：两个带管道的芯片垂直交叉组装；下图为：将垂直交叉组装好的芯片放入真空干燥器中抽真空，图中，a表示带有微管道的两个芯片，b表示高分子滤膜，c表示真空干燥器。将双层芯片结合在一起后，中间夹着高分子滤膜，并且压平，此时上层和下层的微流控管道和中间的聚碳酸酯膜形成封闭的管道，可以通入液体(从管道的入口加入液体，出口抽真空，液体会被吸入管道中)，之后将整个芯片放入真空泵中抽真空。如果上下层管道中通入的是荧光标记的抗原抗体，抽真空后，抗原抗体会在交叉管道中发生反应，用荧光显微镜观察并拍照，可以得到荧光方块阵列。
本发明可以应用于以下的领域：
1.应用于快速疾病检测中，如艾滋病、乙肝、丙肝的检测中，有望实现在10min内进行十个样品的艾滋病、乙肝、丙肝的检测；
2.应用于大量样品的检测中，如牛奶中抗生素、激素含量的检测中，有望实现在20min内多个牛奶样品中抗生素、激素含量的检测。
本发明具有以下的有益效果：
1.将抗原固定时间，抗原抗体反应时间分别缩短，在一些实施方案中，能将反应时间缩短到5min内；
2.将整个免疫反应，包括抗原固定、抗体反应、二抗反应，缩短到15min内；
3.通过滤膜在真空辅助下的浓缩作用，保证检测的高灵敏度；
4.能够高通量地进行免疫分析，能够同时分析多个样品中的多种成分的存在，极大地提高了分析的效率。
附图说明
以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：
图1为芯片反应示意图；
图2为本发明实施例12中免疫反应后荧光显微镜拍摄的双层芯片的荧光图片，其中，图2a为常规孵育方法得到的结果，图2b为本发明利用真空辅助方法得到的结果。
图3为本发明实施例12中不同抗原抗体浓度得到的荧光强度(Fluorescence Intensity，FI)比较。
具体实施方式
在以下的实施例中，聚二甲基硅氧烷芯片是通过光刻技术得到与芯片形状互补的光刻模板，并使用聚二甲基硅氧烷预聚物翻模而成，所使用的聚二甲基硅氧烷为道康宁公司产品，型号为Sylgard 184；聚苯乙烯芯片和聚甲基丙烯酸甲酯芯片是通过板材进行微加工方式得到的；聚碳酸酯、聚四氟乙烯、聚偏氟乙烯、聚苯乙烯滤膜购自Whatman和Millipore等公司。
在以下的实施例中，采取了以下的抗原，抗体及二抗：
1.抗原为兔IgG(Immunoglobulin G，免疫球蛋白G)，人IgG，其得自北京博奥森生物有限公司；
2.抗体为羊抗兔IgG，兔抗人IgG，其得自北京博奥森生物有限公司；
3.二抗为FITC(Fluorescein Isothiocyanate，异硫氰酸荧光素)标记的羊抗兔IgG，其得自北京博奥森生物有限公司。
以上抗原、抗体和二抗溶液的浓度均为2mg/ml并在以下实施例中使用0.1M的磷酸盐缓冲溶液进行稀释。
实施例1
使用两个带有200μm管道的聚二甲基硅氧烷芯片，夹一片聚碳酸酯滤膜，滤膜孔径大小为220nm，两个芯片管道垂直交叉。芯片管道上层通入兔IgG作为抗原溶液，下层通入FITC标记的羊抗兔IgG抗体溶液，抗原抗体溶液分别用0.1M的磷酸盐溶液稀释到浓度为50μg/ml。在真空干燥器中使用油泵抽真空，真空度为0.1tor。抽过5min后，将芯片取出，抗原抗体反应在滤膜上完成，使用荧光显微镜观察结果并且拍摄荧光图片，显示在芯片管道交叉处的聚碳酸酯滤膜上有荧光方块，证明抗原与抗体发生了反应。
实施例2
使用两个带有200μm管道的聚二甲基硅氧烷芯片，夹一片聚碳酸酯滤膜，滤膜孔径大小为400nm，两个芯片管道垂直交叉。芯片管道上层通入兔IgG作为抗原溶液，下层通入FITC标记的羊抗兔IgG抗体溶液，抗原抗体溶液分别用0.1M的磷酸盐溶液稀释到浓度为50μg/ml。在真空干燥器中使用油泵抽真空，真空度为0.1tor。抽过5min后，将芯片取出，抗原抗体反应在滤膜上完成，使用荧光显微镜观察结果并且拍摄荧光图片，显示在芯片管道交叉处的聚碳酸酯滤膜上有荧光方块，证明抗原与抗体发生了反应。
实施例3
使用两个带有200μm管道的聚二甲基硅氧烷芯片，夹一片聚碳酸酯滤膜，滤膜孔径大小为50nm，两个芯片管道垂直交叉。芯片管道上层通入兔IgG作为抗原溶液，下层通入FITC标记的羊抗兔IgG抗体溶液，抗原抗体溶液分别用0.1M的磷酸盐溶液稀释到浓度为50μg/ml。在真空干燥器中使用油泵抽真空，真空度为0.1tor。抽过5min后，将芯片取出，抗原抗体反应在滤膜上完成，使用荧光显微镜观察结果并且拍摄荧光图片，显示在芯片管道交叉处的聚碳酸酯滤膜上有荧光方块，证明抗原与抗体发生了反应。
实施例4
使用两个带有200μm管道的聚二甲基硅氧烷芯片，夹一片聚苯乙烯滤膜，滤膜孔径大小为220nm，两个芯片管道垂直交叉。芯片管道上层通入兔IgG作为抗原溶液，下层通入FITC标记的羊抗兔IgG抗体溶液，抗原抗体溶液分别用0.1M的磷酸盐溶液稀释到浓度为50μg/ml。在真空干燥器中使用油泵抽真空，真空度为0.1tor。抽过5min后，将芯片取出，抗原抗体反应在滤膜上完成，使用荧光显微镜观察结果并拍摄荧光图片，显示在芯片管道交叉处的聚苯乙烯滤膜上有荧光方块，证明抗原与抗体发生了反应。
实施例5
使用两个带有200μm管道的聚二甲基硅氧烷芯片，夹一片聚偏氟乙烯滤膜，滤膜孔径大小为220nm，两个芯片管道垂直交叉。芯片管道上层通入兔IgG作为抗原溶液，下层通入FITC标记的羊抗兔IgG抗体溶液，抗原抗体溶液分别用0.1M的磷酸盐溶液稀释到浓度为50μg/ml。在真空干燥器中使用油泵抽真空，真空度为0.1tor。抽过5min后，将芯片取出，抗原抗体反应在滤膜上完成，使用荧光显微镜观察结果并且拍摄荧光图片，显示在芯片管道交叉处的聚偏氟乙烯滤膜上有荧光方块，证明抗原与抗体发生了反应。
实施例6
使用两个带有200μm管道的聚二甲基硅氧烷芯片，夹一片聚四氟乙烯滤膜，滤膜孔径大小为220nm，两个芯片管道垂直交叉。芯片管道上层通入兔IgG作为抗原溶液，下层通入FITC标记的羊抗兔IgG抗体溶液，抗原抗体溶液分别用0.1M的磷酸盐溶液稀释到浓度为50μg/ml。在真空干燥器中使用油泵抽真空，真空度为0.1tor。抽过5min后，将芯片取出，抗原抗体反应在滤膜上完成，使用荧光显微镜观察结果并且拍摄荧光图片，显示在芯片管道交叉处的聚四氟乙烯滤膜上有荧光方块，证明抗原与抗体发生了反应。
实施例7
使用两个带有200μm管道的聚二甲基硅氧烷芯片，夹一片聚乙烯吡咯烷酮滤膜，滤膜孔径大小为220nm，两个芯片管道垂直交叉。芯片管道上层通入兔IgG作为抗原溶液，下层通入FITC标记的羊抗兔IgG抗体溶液，抗原抗体溶液分别用0.1M的磷酸盐溶液稀释到浓度为50μg/ml。在真空干燥器中使用油泵抽真空，真空度为0.1tor。抽过5min后，将芯片取出，抗原抗体反应在滤膜上完成，使用荧光显微镜观察结果并拍摄荧光图片，显示在芯片管道交叉处的聚乙烯吡咯烷酮滤膜上有荧光方块，证明抗原与抗体发生了反应。
实施例8
使用两个带有200μm管道的聚甲基丙烯酸甲酯芯片，夹一片聚碳酸酯滤膜，滤膜孔径大小为220nm，两个芯片管道垂直交叉。芯片管道上层通入兔IgG作为抗原溶液，下层通入FITC标记的羊抗兔IgG抗体溶液，抗原抗体溶液分别用0.1M的磷酸盐溶液稀释到浓度为50μg/ml。在真空干燥器中使用油泵抽真空，真空度为0.1tor。抽过5min后，将芯片取出，抗原抗体反应在滤膜上完成，使用荧光显微镜观察结果并且拍摄荧光图片，显示在芯片管道交叉处的聚碳酸酯滤膜上有荧光方块，证明抗原与抗体发生了反应。
实施例9
使用两个带有200μm管道的聚苯乙烯芯片，夹一片聚碳酸酯滤膜，滤膜孔径大小为220nm，两个芯片管道垂直交叉。芯片管道上层通入兔IgG作为抗原溶液，下层通入FITC标记的羊抗兔IgG抗体溶液，抗原抗体溶液分别用0.1M的磷酸盐溶液稀释到浓度为50μg/ml。在真空干燥器中使用油泵抽真空，真空度为0.1tor。抽过5min后，将芯片取出，抗原抗体反应在滤膜上完成，使用荧光显微镜观察结果并且拍摄荧光图片，显示在芯片管道交叉处的聚碳酸酯滤膜上有荧光方块，证明抗原与抗体发生了反应。
实施例10
使用两个带有200μm管道的聚二甲基硅氧烷芯片，夹一片聚碳酸酯滤膜，滤膜孔径大小为220nm，两个芯片管道垂直交叉。芯片管道上层通入兔IgG作为抗原溶液，下层通入FITC标记的羊抗兔IgG抗体溶液，抗原抗体溶液分别用0.1M的磷酸盐溶液稀释到浓度为50μg/ml。在真空抽滤瓶中使用水泵抽真空，真空度为0.1tor。抽过5min后，将芯片取出，抗原抗体反应在滤膜上完成，使用荧光显微镜观察结果并且拍摄荧光图片，显示在芯片管道交叉处的聚碳酸酯滤膜上有荧光方块，证明抗原与抗体发生了反应。
实施例11
使用两个带有200μm管道的聚二甲基硅氧烷芯片，夹一片聚碳酸酯滤膜，滤膜孔径大小为220nm，两个芯片管道垂直交叉。芯片管道上层通入兔IgG作为抗原溶液，下层通入FITC标记的羊抗兔IgG抗体溶液，抗原抗体溶液分别用0.1M的磷酸盐溶液稀释到浓度为50μg/ml。在真空干燥器中使用油泵抽真空，真空度为0.05tor。抽过5min后，将芯片取出，抗原抗体反应在滤膜上完成，使用荧光显微镜观察结果并且拍摄荧光图片，显示在芯片管道交叉处的聚碳酸酯滤膜上有荧光方块，证明抗原与抗体发生了反应。
实施例12
使用两个带有200μm管道的聚二甲基硅氧烷芯片，夹一片聚碳酸酯滤膜，滤膜孔径大小为220nm，两个芯片管道垂直交叉。芯片管道上层通入兔IgG作为抗原溶液，抗原溶液用0.1M的磷酸盐溶液分别稀释到浓度为200、100、50、25和12.5μg/ml，即稀释比例分别为1∶10、1∶20、1∶40、1∶80和1∶160。在真空干燥器中使用油泵抽真空，真空度为0.1tor。抽过5min后，将芯片取出，下层通入FITC标记的羊抗兔IgG抗体溶液，抗体溶液用0.1M的磷酸盐溶液分别稀释到浓度为200、100、50和25μg/ml，即分别稀释1∶10、1∶20、1∶40和1∶80。在真空干燥器中使用油泵抽真空5min，真空度为0.1tor。将芯片取出，抗原抗体反应在滤膜上完成，使用荧光显微镜观察结果并且拍摄荧光图片(图2a)，显示在芯片管道交叉处的聚碳酸酯滤膜上有荧光方块，证明抗原与抗体发生了反应。本实施例对于本发明方法的灵敏度与常规方法进行比较。常规方法中使用与上述浓度相同的兔IgG作为抗原溶液通入上层后37℃孵育0.5h，使用注射器将抗原溶液抽出，在下层通入同浓度的FITC标记的羊抗兔IgG抗体溶液，37℃孵育0.5h，使用注射器将抗体溶液抽出，抗原抗体反应在滤膜上完成，使用荧光显微镜观察结果并且拍摄荧光图片(图2b)，显示在芯片管道交叉处的聚碳酸酯滤膜上有荧光方块，证明抗原与抗体发生了反应。将图2中的荧光图像进行荧光数值分析，使用图像分析软件(Image Pro Plus)，对荧光数值进行归一化(以最高值为100％)统计，得到抗原抗体浓度不同时荧光强度比较，如图3所示，说明使用真空辅助的方法检测的灵敏度比常规方法高4倍。
实施例13
使用两个带有200μm管道的聚二甲基硅氧烷芯片，夹一片聚碳酸酯滤膜，滤膜孔径大小为220nm，两个芯片管道垂直交叉。芯片管道上层通入人IgG作为抗原溶液，抗原溶液用0.1M的磷酸盐溶液稀释到浓度为50μg/ml。在真空干燥器中使用油泵抽真空，真空度为0.1tor。抽过5min后，将芯片取出，下层通入兔抗人IgG抗体溶液，抗体溶液用0.1M的磷酸盐溶液稀释到浓度为50μg/ml。在真空干燥器中使用油泵抽真空5min，真空度为0.1tor。将芯片取出，在上层通入FITC标记的羊抗兔IgG抗体溶液，抗体溶液用0.1M的磷酸盐溶液稀释到浓度为50μg/ml。在真空干燥器中使用油泵抽真空5分钟，真空度为0.1tor。将芯片取出，抗原抗体反应在滤膜上完成，使用荧光显微镜观察结果并拍摄荧光图片，显示在芯片管道交叉处的聚碳酸酯滤膜上有荧光方块，证明抗原与抗体发生了反应。
实施例14
使用两个带有50μm管道的聚二甲基硅氧烷芯片，夹一片聚碳酸酯滤膜，滤膜孔径大小为220nm，两个芯片管道垂直交叉。芯片管道上层通入兔IgG作为抗原溶液，下层通入FITC标记的羊抗兔IgG抗体溶液，抗原抗体溶液分别用0.1M的磷酸盐溶液稀释到浓度为50μg/ml。在真空干燥器中使用油泵抽真空，真空度为0.1tor。抽过5min后，将芯片取出，抗原抗体反应在滤膜上完成，使用荧光显微镜观察结果并且拍摄荧光图片，显示在芯片管道交叉处的聚碳酸酯滤膜上有荧光方块，证明抗原与抗体发生了反应。
实施例15
使用两个带有500μm管道的聚二甲基硅氧烷芯片，夹一片聚碳酸酯滤膜，滤膜孔径大小为220nm，两个芯片管道交叉。芯片管道上层通入兔IgG作为抗原溶液，下层通入FITC标记的羊抗兔IgG抗体溶液，抗原抗体溶液分别用0.1M的磷酸盐溶液稀释到浓度为50μg/ml。在真空干燥器中使用油泵抽真空，真空度为0.1tor。抽过5min后，将芯片取出，抗原抗体反应在滤膜上完成，使用荧光显微镜观察结果并且拍摄荧光图片，显示在芯片管道交叉处的聚碳酸酯滤膜上有荧光方块，证明抗原与抗体发生了反应。
实施例16
使用两个带有200μm管道的聚二甲基硅氧烷芯片，夹一片聚碳酸酯滤膜，滤膜孔径大小为220nm，两个芯片管道垂直交叉。芯片管道上层通入兔IgG作为抗原溶液，下层通入FITC标记的羊抗兔IgG抗体溶液，抗原抗体溶液分别用0.1M的磷酸盐溶液稀释到浓度为50μg/ml。在真空干燥器中使用油泵抽真空，真空度为0.5tor。抽过5min后，将芯片取出，抗原抗体反应在滤膜上完成，使用荧光显微镜观察结果并且拍摄荧光图片，显示在芯片管道交叉处的聚碳酸酯滤膜上有荧光方块，证明抗原与抗体发生了反应。
实施例17
使用两个带有200μm管道的聚二甲基硅氧烷芯片，夹一片聚碳酸酯滤膜，滤膜孔径大小为220nm，两个芯片管道垂直交叉。芯片管道上层通入人IgG作为抗原溶液，抗原溶液用0.1M的磷酸盐溶液稀释到浓度为50μg/ml。在真空干燥器中使用油泵抽真空，真空度为0.1tor。抽过5min后，将芯片取出，下层通入未知浓度的样品溶液，需要测量样品中兔抗人IgG的抗体浓度，同时在其他管道中通入已知浓度的兔抗人IgG抗体溶液，抗体溶液用0.1M的磷酸盐溶液稀释到浓度为200、100、50、25和12.5μg/ml。在真空干燥器中使用油泵抽真空5min，真空度为0.1tor。将芯片取出，在上层通入FITC标记的羊抗兔IgG抗体溶液，抗体溶液用0.1M的磷酸盐溶液稀释到浓度为50μg/ml。在真空干燥器中使用油泵抽真空5分钟，真空度为0.1tor。将芯片取出，抗原抗体反应在滤膜上完成，使用荧光显微镜观察结果并拍摄荧光图片，显示在芯片管道交叉处的聚碳酸酯滤膜上有荧光方块，证明抗原与抗体发生了反应。将未知浓度样品溶液的荧光与已知浓度的兔抗人IgG溶液反应产生的荧光进行比较，得到未知浓度样品溶液的浓度。
Claims (17)
1.一种双层微流控芯片器件，其特征在于包括：
1)两块芯片，其在相对的表面上具有管道，所述两块芯片上的管道相互交叉；
2)在两块芯片之间的滤膜；和
3)真空设备。
2.如权利要求1所述的器件，其特征在于所述芯片包括聚二甲基硅氧烷、聚甲基丙烯酸甲酯或聚苯乙烯的芯片。
3.如权利要求1所述的器件，其特征在于所述滤膜为高分子滤膜。
4.如权利要求3所述的器件，其特征在于所述高分子种类为聚碳酸酯、聚偏氟乙烯、聚四氟乙烯、聚乙烯吡咯烷酮或聚苯乙烯。
5.如权利要求1所述的器件，其特征在于所述芯片上的管道具有50～500μm的宽度。
6.如权利要求1或5所述的器件，其特征在于两块芯片上的管道相互垂直，交叉角度为90°。
7.如权利要求1或3所述的器件，其特征在于所述滤膜的厚度为10～30μm，孔径为50～1000nm。
8.如权利要求4所述的器件，其特征在于所述滤膜的厚度为10～30μm，孔径为50～1000nm。
9.如权利要求7所述的器件，其特征在于，所述滤膜的厚度为30μm，孔径为220nm。
10.如权利要求8所述的器件，其特征在于，所述滤膜的厚度为30μm，孔径为220nm。
11.如权利要求1所述的器件，其特征在于所述真空设备包括：连接油泵的真空干燥器和连接水泵的真空干燥瓶，且具有0.05tor～0.5tor的真空度。
12.使用如权利要求1-11任一项所述的器件进行免疫测定的方法，其特征在于包括：
1)将一侧芯片的管道中通入含有抗原的溶液，并抽真空；
2)在另一侧芯片的管道中通入含有抗体的溶液，并抽真空；和
3)结果使用荧光显微镜进行读出。
13.如权利要求12所述的方法，其特征在于：1)与2)为同时，1)先于2)或者2)先于1)地进行。
14.如权利要求13所述的方法，其特征在于：1)先于2)进行。
15.如权利要求12-14中任一项所述的方法，其特征在于在1)和2)之后还包括步骤，在抗原或抗体溶液一侧芯片的管道中通入含有二抗的溶液，并抽真空。
16.如权利要求12所述的方法，其特征在于在抽真空步骤中，真空度为0.5tor，抽真空时间为5min。
17.如权利要求12所述的方法，其特征在于真空度为0.05tor，抽真空时间为5min。
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