CN108085314B - 一种用于核酸提取纯化的氨基化滤纸/膜及其制备方法与应用 - Google Patents

一种用于核酸提取纯化的氨基化滤纸/膜及其制备方法与应用 Download PDF

Info

Publication number
CN108085314B
CN108085314B CN201611039252.0A CN201611039252A CN108085314B CN 108085314 B CN108085314 B CN 108085314B CN 201611039252 A CN201611039252 A CN 201611039252A CN 108085314 B CN108085314 B CN 108085314B
Authority
CN
China
Prior art keywords
filter paper
membrane
amino
solution
aminated
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201611039252.0A
Other languages
English (en)
Other versions
CN108085314A (zh
Inventor
刘鹏
甘五鹏
顾寅
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hangzhou Zijing biological Co.,Ltd.
Original Assignee
Hangzhou Zijing Biological Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hangzhou Zijing Biological Co ltd filed Critical Hangzhou Zijing Biological Co ltd
Priority to CN201611039252.0A priority Critical patent/CN108085314B/zh
Publication of CN108085314A publication Critical patent/CN108085314A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN108085314B publication Critical patent/CN108085314B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
    • C12N15/1003—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor
    • C12N15/1006—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor by means of a solid support carrier, e.g. particles, polymers

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)

Abstract

本发明提供一种用于核酸提取纯化的氨基化滤纸/膜及其制备方法与应用。所述用于提取纯化核酸的氨基化滤纸/膜，其表面为氨基修饰的表面。制备方法为：对滤纸/膜进行或不进行表面氧化改性，再用氨基硅烷化试剂与所述表面氧化改性后的滤纸/膜进行硅烷化反应；或，对滤纸/膜进行或不进行表面氧化改性，浸入富含氨基的长链化合物的溶液中吸附；或，对滤纸/膜进行或不进行表面氧化改性，进行环氧基团化，与富含氨基的长链化合物发生接枝反应，得到氨基化滤纸/膜。包括上述氨基化滤纸/膜的芯片装置也属于本发明的保护范围。

Description

一种用于核酸提取纯化的氨基化滤纸/膜及其制备方法与 应用
技术领域
本发明涉及一种用于核酸提取纯化的氨基化滤纸/膜及其制备方法与应用。
背景技术
基因分析如基于Sanger法的DNA测序、病原体检测、短串联重复序列(ShortTandem Repeat,STR)分析在卫生保健、食品安全、司法科学等领域发挥着越来越重要的作用。为了进一步推动基因分析的发展，结合微流控技术，实现低成本、快速、自动化、现场调度、高通量、以及避免交叉污染的检测是十分必要的。
基因分析的过程通常包括核酸提取纯化、核酸靶序列的扩增、靶序列扩增产物的分离三个步骤。核酸提取作为整个基因分析过程的第一步决定了集成化的系统能处理什么样的样品、提供给下游分析步骤的DNA模板的质量高低。
传统的核酸提取纯化方法包括液-液提取纯化法、固相提取纯化(SPE)法。酚-氯仿提取法就是一种液-液核酸提取法，涉及有毒试剂且操作繁琐；固相提取方法主要就是将核酸吸附到二氧化硅、玻璃、硅藻土、甚至表面修饰后的塑料等固体物质表面从而实现提取纯化的，这些固体物质可以采用不同的形式，包括分离柱、微球、粉末、磁珠等。固相核酸提取方法相对而言，更适合移植到微流控芯片上进行核酸提取纯化。自从上世纪90年代以来，基于固相提取原理的微流控芯片样品制备技术已经取得了显著的发展。但是这些微流控核酸样品制备芯片仍然有很多不足之处，如成本高、操作繁琐等缺点，使这些微流控集成芯片的应用一直停留在学术界。
为了克服这些问题，实现简单、快速、低成本、自动化的微流控芯片核酸提取纯化过程，微流控研究人员将DNA提取作为要攻克的关键点和主要目标之一。它的研究过程，对实现基因分析全过程的芯片全集成和缩型化(即微全分析系统)，促进基因分析的进一步推广应用具有十分重要的作用。
发明内容
本发明的目的之一是提供一种能够高速、高效、样品消耗少和成本低的用于提取纯化核酸的氨基化滤纸/膜及其制备方法。
所述用于提取纯化核酸的氨基化滤纸/膜，其表面为氨基修饰的表面。
其中，所述滤纸/膜指的是滤纸或膜。
所述滤纸/膜的材质包括但不限于玻璃纤维、陶瓷、硝酸纤维和棉纤维。
所述用于提取纯化核酸的氨基化滤纸/膜是通过下述方法(一)、方法(二)或方法(三)制备得到的：
方法(一)：
直接用氨基硅烷化试剂对滤纸/膜进行硅烷化反应，或，首先对滤纸/膜进行表面氧化改性得到表面氧化改性后的滤纸/膜，再用氨基硅烷化试剂与所述表面氧化改性后的滤纸/膜进行硅烷化反应，
从而在所述滤纸/膜的表面修饰上氨基，得到氨基化滤纸/膜；
方法(二)：
直接将滤纸/膜浸入富含氨基的长链化合物的溶液中吸附，或，首先对滤纸/膜进行表面氧化改性得到表面氧化改性后的滤纸/膜，再将所述表面氧化改性后的滤纸/膜浸入富含氨基的长链化合物的溶液中吸附，
从而在所述滤纸/膜的表面修饰上氨基，得到氨基化滤纸/膜；
方法(三)：
将所述滤纸/膜的表面直接进行环氧基团化得到表面环氧基团化的滤纸/膜，或，首先对滤纸/膜进行表面氧化改性得到表面氧化改性后的滤纸/膜，然后对所述表面氧化改性后的滤纸/膜的表面进行环氧基团化得到表面环氧基团化的滤纸/膜，
再将其置于富含氨基的长链化合物的溶液中，发生接枝反应，从而在所述滤纸/膜的表面修饰上氨基，得到氨基化滤纸/膜。
上述方法(一)中，所述表面氧化改性为将所述滤纸/膜进行臭氧处理，或通氧条件下Plasma处理。
其中，所述臭氧处理的时间为5-120分钟；所述通氧条件下Plasma处理的时间为5-300s。
所述氨基硅烷化试剂可选自下述至少一种：3-氨丙基三乙氧基硅烷((3-aminopropyl)triethoxysilane，简称APTES)、3-氨丙基二乙氧基甲基硅烷((3-aminopropyl)diethoxymethylsilane，简称APDMS)和3-氨丙基乙氧基二甲基硅烷((3-aminopropyl)ethoxydimethylsilane，简称APEMS)。
上述硅烷化反应包括但不限于用氨基硅烷化试剂在溶液中反应、氨基硅烷化试剂气相沉积。
其中，所述用氨基硅烷化试剂在溶液中反应的时间为10分钟-10小时,反应温度为10℃-65℃,反应过程中可以添加催化剂如醋酸。
其中，所述氨基硅烷化试剂的溶液中的溶剂可为水，也可为乙醇、异丙醇等有机试剂。
所述氨基硅烷化试剂的溶液中氨基硅烷化试剂的浓度为0.005％-5％(质量百分含量)，具体可为0.5％、1％。
所述氨基硅烷化试剂气相沉积的操作为：将烧杯放入到120℃-180℃的烘箱中烘烤至少10min，然后在烧杯中滴加100微升氨基硅烷化试剂，立刻放入滤纸/膜，并立即将烧杯用盖子盖严。
上述方法(二)中，所述表面氧化改性为将所述滤纸/膜进行臭氧处理，或通氧条件下Plasma处理。
其中，所述臭氧处理的时间为5-120分钟；所述通氧条件下Plasma处理的时间为5-300s。
所述富含氨基的长链化合物包括但不限于壳聚糖、多聚赖氨酸、多聚组氨酸、聚亚乙基亚胺或聚烯丙基胺等其它富含氨基的长链化合物，具体可为壳聚糖。
所述富含氨基的长链化合物的溶液为水相，所述富含氨基的长链化合物的溶液中富含氨基的长链化合物的浓度为0.001％-0.5％(质量百分含量)，具体可为0.05％、0.025％、0.03％。
所述吸附的温度为10℃-35℃，时间为0.5h-30h。
上述方法(三)中，所述环氧基团化的操作为：将滤纸/膜或表面氧化改性后的滤纸/膜置于环氧基硅烷化试剂的溶液中反应，或进行环氧基硅烷化试剂气相沉积，得到所述表面环氧基团化的滤纸/膜。
其中，所述环氧基硅烷化试剂的溶液的溶剂可为水，也可为乙醇、异丙醇等有机相。
所述环氧基硅烷化试剂可选自下述至少一种：(3-Glycidyloxypropyl)trimethoxysilane(简称GPTMS)、(3-Glycidoxypropyl)dimethylethoxysilane(简称GPDMES)和(3-Glycidoxypropyl)dimethoxymethylsilane(简称GPDMMS)。
所述反应的条件为：反应温度为10℃-65℃,反应时间10分钟-10小时,可以添加催化剂如醋酸。
所述气相沉积的操作为：将烧杯放入到120℃-180℃的烘箱中烘烤至少10min，然后在烧杯中滴加100微升氨基硅烷化试剂，立刻放入滤纸/膜，并立即将烧杯用盖子盖严。
所述富含氨基的长链化合物包括但不限于壳聚糖、多聚赖氨酸、多聚组氨酸、聚亚乙基亚胺或聚烯丙基胺等其它富含氨基的长链化合物。
所述富含氨基的长链化合物的溶液为水相；所述富含氨基的长链化合物的溶液中富含氨基的长链化合物的浓度为0.001％-0.5％(质量百分含量)。
所述接枝反应的温度为10℃-35℃，时间为0.5h-30h。
上述氨基化滤纸/膜在提取纯化核酸中的应用也属于本发明的保护范围。
本发明的另一目的是提供一种包括上述氨基化滤纸/膜的微流控芯片装置。
本发明所提供的芯片装置为塑料或玻璃等材料制成的芯片，至少包括氨基化滤纸/膜的上游部分、氨基化滤纸/膜、氨基化滤纸/膜的下游部分三部分，即以氨基化滤纸/膜为核心，分别在其上、下游部分构建上、下游微流体管道。
所述上、下游微流体管道的宽度为0.01到10毫米之间，深度为0.01毫米到5毫米之间。
所述氨基化滤纸/膜的厚度为0.01毫米到5毫米之间，其形状为包括但不限于圆形、半圆形、月牙型、扇形、椭圆形、方形或菱形。
所述三部分结构包括但不限于三层结构、两层结构、一层结构。
所述芯片装置通过热压键合、超声键合、化学键合、粘合剂粘合或胶粘等方式，将氨基化滤纸/膜封装在上、下游微流体管道之间。
上述包括上述氨基化滤纸/膜的芯片装置在提取纯化核酸中的应用也属于本发明的保护范围。
所述芯片装置用于提取纯化核酸时，提取纯化的试剂流经该芯片装置的方式为包括但不限于与氨基化滤纸/膜平面垂重的贯穿式(如图2所示)、与氨基化滤纸/膜平面同一面的填料式(如图3所示)。
核酸提取纯化的试剂依次通过上、下游管道流经所述氨基化滤纸/膜，实现核酸的捕获、清洗，从而达到核酸提取纯化的功能，提取的核酸通过主要静电吸附、部分物理缠绕方式固定在滤纸的纤维表面，可以直接用于基因检测的下游扩增反应、分离检测，也可以先洗脱下来，然后再用于后继的核酸扩增反应、分离检测。
所述芯片装置中，构建氨基化滤纸/膜的上、下游的芯片所用的塑料包括单不限于聚甲基丙烯酸甲酯片基(PMMA)、聚二甲基硅氧烷(PDMS)、聚碳酸酯片基(PC)、和/或聚苯乙烯片基(PS)。
本发明的核酸纯化提取技术优点在于：提取操作简单，易于与微流控芯片集成；提取的核酸质量高，能用于多重扩增；成本低；提取的核酸浓缩在滤纸中，易于与下游操作集成。
附图说明
图1为表面氨基修饰的滤纸/膜示意图。
图2为提取试剂贯穿式流过网状纤维表面氨基修饰的滤纸/膜示意图。
图3为提取试剂填料式流过网状纤维表面氨基修饰的滤纸/膜示意图。
图4为Fusion 5滤纸在进行壳聚糖修饰前后的捕获效率对比。
图5为直径3mm的壳聚糖修饰Fusion 5滤纸的捕获效率与最大捕获量。
图6为玻璃纤维、Fusion 5滤纸对全血样品的捕获量。
图7为基于壳聚糖修饰Fusion 5滤纸微流控芯片结构示意图。
图8为基于壳聚糖修饰Fusion 5滤纸微流控芯片分解图。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明进行说明，但本发明并不局限于此。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法；下述实施例中所用的试剂、生物材料等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
以下实施例采用Fusion 5、玻璃纤维、或棉纤维的滤纸或滤膜
实施例1、滤纸表面氨基硅烷化
1、配制1％的APTES的乙醇溶液；
2、Fusion 5滤纸不进行预处理；
3、将未进行预处理的滤纸直接浸没在1％的APTES的乙醇溶液中，30℃、以120rpm的速度摇动的条件下浸泡6小时；停止浸泡，将滤纸用去离子水洗涤、取出滤纸放于烘箱中60℃烘干，所得的滤纸的纤维表面修饰有氨基，如图1所示。
实施例2、滤纸表面氨基硅烷化
1、配制2.5％的APTES的乙醇溶液；
2、Fusion 5滤纸进行预处理：将滤纸在通氧条件下Plasma处理20s；；
3、将预处理后的滤纸直接浸没在2.5％的APTES的乙醇溶液中，30℃、以120rpm的速度摇动的条件下浸泡3小时；停止浸泡，将滤纸用去离子水洗涤、取出滤纸放于烘箱中60℃烘干，所得的滤纸的纤维表面修饰有氨基，如图1所示。
实施例3、滤纸表面氨基硅烷化
1、配制0.5％的APTES的乙醇溶液；
2、滤纸进行预处理：将滤纸在臭氧环境下处理1h；
3、将预处理后的滤纸浸没在0.5％的APTES的乙醇溶液中，25℃、以120rpm的速度摇动的条件下浸泡1.5小时；停止浸泡，将滤纸用去离子水洗涤、取出滤纸放于烘箱中60℃烘干，所得的滤纸的纤维表面修饰有氨基，如图1所示。
实施例4、对滤纸不进行预处理，直接在滤纸纤维上吸附壳聚糖，制备壳聚糖修饰的滤纸
配制0.05％(质量百分含量)的壳聚糖的PBS缓冲液，pH值调为6.0，作为壳聚糖反应液；滤纸不进行预处理，直接浸泡在0.05％(质量百分含量)壳聚糖反应液中，吸附壳聚糖高分子，25℃、以120rpm的速度摇动的条件下浸泡3小时；停止浸泡，将滤纸用去离子水洗涤、取出滤纸放于烘箱中60℃烘干，即得壳聚糖修饰的滤纸，滤纸的纤维表面修饰有氨基，如图1所示。
实施例5、对滤纸不进行预处理，直接在滤纸纤维上吸附多聚赖氨酸，制备多聚赖氨酸修饰的滤纸
配制0.025％(质量百分含量)的多聚赖氨酸(分子量为15-30万)的PBS缓冲液，作为多聚赖氨酸反应液；滤纸不进行预处理，直接浸泡在0.025％(质量百分含量)多聚赖氨酸反应液中，吸附多聚赖氨酸高分子，25℃、以120rpm的速度摇动的条件下浸泡3小时；停止浸泡，将滤纸用去离子水洗涤、取出滤纸放于烘箱中60℃烘干，即得多聚赖氨酸修饰的滤纸，滤纸的纤维表面修饰有氨基，如图1所示。
实施例6对滤纸先进行预处理，然后在滤纸纤维上吸附上壳聚糖，制备壳聚糖修饰滤纸
1、预处理滤纸：将滤纸在通氧条件下Plasma处理40s；
2、滤纸预处理后吸附壳聚糖高分子：配制0.03％(质量百分含量)的壳聚糖的PBS缓冲液，pH值调为6.0，作为壳聚糖反应液；将预处理后的滤纸浸泡在0.03％(质量百分含量)壳聚糖反应液中，吸附壳聚糖高分子，25℃、以120rpm的速度摇动的条件下浸泡8h；停止浸泡，将滤纸用去离子水洗涤、取出滤纸放于烘箱中60℃烘干，即得壳聚糖修饰的滤纸，滤纸的纤维表面修饰有氨基，如图1所示。
实施例7对滤纸先进行预处理，然后在滤纸纤维上吸附上多聚赖氨酸，制备多聚赖氨酸修饰的滤纸
1、预处理滤纸：将滤纸在通氧条件下Plasma处理45s；
2、滤纸预处理后吸附壳聚糖高分子：配制0.025％(质量百分含量)的壳聚糖的PBS缓冲液，pH值调为6.0，作为壳聚糖反应液；将预处理的滤纸浸泡在0.025％(质量百分含量)壳聚糖反应液中，吸附壳聚糖高分子，30℃、以120rpm的速度摇动的条件下浸泡16h；停止浸泡，将滤纸用去离子水洗涤、取出滤纸放于烘箱中60℃烘干，即得壳聚糖修饰的滤纸，滤纸的纤维表面修饰有氨基，如图1所示。
滤纸纤维表面(通过表面改性或不进行表面改性)，与富含氨基的聚合物高分子壳聚糖、多聚赖氨酸、多聚组氨酸、聚亚乙基亚胺或聚烯丙基胺上的部分氨基发生静电吸附作用从而使滤纸上纤维表面吸附上这类富含氨基的聚合物高分子。吸附在纤维上的每个富含氨基的聚合物高分子上还剩下多数氨基，从而使滤纸纤维表面形成三维的氨基，与滤纸中的三维纤维一起构建滤纸中三维的氨基。
以氨基化滤纸构建核酸提取微流控芯片的提取腔室，可以采用样品或试剂以贯穿式(如图2所示)流过腔室中的修饰滤纸，也可以采用填料式(如图3所示)流过腔室中的氨基化滤纸。
实施例8、滤纸纤维表面先环氧基硅烷化，然后接枝壳聚糖分子
1、滤纸不进行预处理，直接进行滤纸纤维表面环氧化：配制0.5％的GPTS的异丙醇溶液，将预处理的滤纸浸泡在0.5％的GPTS的异丙醇中50℃、以120rpm的速度摇动的条件下浸泡16h；停止浸泡，用异丙醇清洗两次，25℃晾干或60℃烘干；
2、共价接枝壳聚糖分子：配制0.025％(质量百分含量)的壳聚糖的1*PBS缓冲液，pH值调为6.0，作为壳聚糖反应液；将表面环氧化的滤纸浸泡在0.025％(质量百分含量)壳聚糖反应液中，吸附壳聚糖高分子，30℃、以120rpm的速度摇动的条件下浸泡16h；停止浸泡，将滤纸用去离子水洗涤、取出滤纸放于烘箱中60℃烘干，即得壳聚糖修饰的滤纸，滤纸的纤维表面修饰有氨基，如图1所示。
实施例9、滤纸纤维表面先环氧基硅烷化，然后接枝壳聚糖分子
1、预处理滤纸：将滤纸在通氧条件下Plasma处理60s；
2、滤纸纤维表面环氧化：配制2.5％的GPTS的异丙醇溶液，将预处理的滤纸浸泡在2.5％的GPTS的异丙醇中50℃、以120rpm的速度摇动的条件下浸泡16h；停止浸泡，用异丙醇清洗两次，25℃晾干或60℃烘干；
3、共价接枝壳聚糖分子
配制0.05％(质量百分含量)的壳聚糖的PBS缓冲液，pH值调为6.0，作为壳聚糖反应液；将表面环氧化的滤纸浸泡在0.0 5％(质量百分含量)壳聚糖反应液中，吸附壳聚糖高分子，30℃、以120rpm的速度摇动的条件下浸泡16h；停止浸泡，将滤纸用去离子水洗涤、取出滤纸放于烘箱中60℃烘干，即得壳聚糖修饰的滤纸，滤纸的纤维表面修饰有氨基，如图1所示。
实施例10、滤纸纤维表面先环氧基硅烷化，然后接枝壳聚糖分子
1、配制5％(质量百分含量)GPTMS乙醇溶液作为环氧基硅烷化反应液，将滤纸浸泡在5％的GPTMS乙醇溶液中，以55℃、120rpm条件下反应4h；停止浸泡，用乙醇清洗两次；
2、配制0.05％(质量百分含量)壳聚糖的PBS溶液，pH调为6.0，作为壳聚糖反应液；将滤纸浸泡在壳聚糖反应液中，吸附壳聚糖高分子，以30℃、120rpm的条件反应16h；停止浸泡，将滤纸用去离子水洗涤、取出滤纸放于烘箱中60℃烘干，即得壳聚糖修饰的滤纸，滤纸的纤维表面修饰有氨基，如图1所示。
实施例11、滤纸纤维表面先环氧基硅烷化，然后接枝壳聚糖分子
1、滤纸纤维表面环氧化：配制0.5％(质量百分含量)的GPTMS的乙醇溶液，将滤纸浸泡在0.5％的GPTMS乙醇溶液中，以50℃、120rpm条件下反应4h；停止浸泡，用乙醇清洗两次；
2、共价接枝壳聚糖分子：配制0.05％(质量百分含量)的壳聚糖PBS溶液，pH调为6.0，作为壳聚糖反应液；将表面环氧化处理后的滤纸浸泡在0.05％(质量百分含量)的壳聚糖反应液中，吸附壳聚糖高分子，以30℃、120rpm的条件反应16h；停止浸泡，将滤纸用去离子水洗涤、取出滤纸放于烘箱中60℃烘干，即得壳聚糖修饰的滤纸，滤纸的纤维表面修饰有氨基，如图1所示。
实施例12、滤纸纤维表面先环氧基硅烷化，然后接枝壳聚糖分子
1、预处理滤纸：将滤纸在臭氧处理5h；
2、滤纸纤维表面环氧化:配制2％的GPTS的异丙醇溶液，将预处理的滤纸浸泡在2％的GPTS的异丙醇中50℃、以120rpm的速度摇动的条件下浸泡16h；停止浸泡，用异丙醇清洗两次，25℃晾干或60℃烘干；
3、共价接枝壳聚糖分子:配制0.025％(质量百分含量)的壳聚糖的PBS缓冲液，pH值调为6.0，作为壳聚糖反应液；将表面环氧化的滤纸浸泡在0.025％(质量百分含量)壳聚糖反应液中，吸附壳聚糖高分子，30℃、以120rpm的速度摇动的条件下浸泡16h；停止浸泡，将滤纸用去离子水洗涤、取出滤纸放于烘箱中60℃烘干，即得壳聚糖修饰的滤纸，滤纸的纤维表面修饰有氨基，如图1所示。
实施例13、滤纸表面先环氧基硅烷化，然后接枝多聚赖氨酸分子
滤纸不进行预处理，直接进行滤纸纤维表面环氧化
1、配制0.5％的GPTS的异丙醇溶液，将预处理的滤纸浸泡在0.5％的GPTS的异丙醇中50℃、以120rpm的速度摇动的条件下浸泡16h；停止浸泡，用异丙醇清洗两次，25℃晾干或60℃烘干；
2、共价接枝多聚赖氨酸分子
配制0.05％(质量百分含量)的多聚赖氨酸(分子量为15-30万)的1*PBS缓冲液，作为多聚赖氨酸反应液；将表面环氧化的滤纸，浸泡在0.05％(质量百分含量)多聚赖氨酸反应液中，吸附多聚赖氨酸高分子，25℃、以120rpm的速度摇动的条件下浸泡3小时；停止浸泡，将滤纸用去离子水洗涤、取出滤纸放于烘箱中60℃烘干，即得多聚赖氨酸修饰的滤纸，滤纸的纤维表面修饰有氨基，如图1所示。
实施例14、滤纸表面先环氧基硅烷化，然后接枝多聚赖氨酸分子
1、滤纸进行预处理：将滤纸在通氧条件下Plasma处理30s；
2、进行滤纸纤维表面环氧化：配制1.5％的GPTS的异丙醇溶液，将预处理的滤纸浸泡在1.5％的GPTS的异丙醇中50℃、以120rpm的速度摇动的条件下浸泡16h；停止浸泡，用异丙醇清洗两次，25℃晾干或60℃烘干；
3、共价接枝多聚赖氨酸分子
配制0.025％(质量百分含量)的多聚赖氨酸(分子量为7-15万)的PBS缓冲液，作为多聚赖氨酸反应液；将表面环氧化的滤纸，浸泡在0.025％(质量百分含量)多聚赖氨酸反应液中，吸附多聚赖氨酸高分子，25℃、以120rpm的速度摇动的条件下浸泡16小时；停止浸泡，将滤纸用去离子水洗涤、取出滤纸放于烘箱中60℃烘干，即得多聚赖氨酸修饰的滤纸，滤纸的纤维表面修饰有氨基，如图1所示。
实施例15、滤纸表面先环氧基硅烷化，然后接枝多聚赖氨酸分子
1、滤纸进行预处理：将滤纸臭氧处理3h；
2、进行滤纸纤维表面环氧化：配制2.5％的GPTS的异丙醇溶液，将预处理的滤纸浸泡在2.5％的GPTS的异丙醇中55℃、以120rpm的速度摇动的条件下浸泡3h；停止浸泡，用异丙醇清洗两次，25℃晾干或60℃烘干；
3、共价接枝多聚赖氨酸分子
配制0.03％(质量百分含量)的多聚赖氨酸(分子量为7-15万)的1*PBS缓冲液，作为多聚赖氨酸反应液；将表面环氧化的滤纸，浸泡在0.03％(质量百分含量)多聚赖氨酸反应液中，吸附多聚赖氨酸高分子，30℃、以120rpm的速度摇动的条件下浸泡16小时；停止浸泡，将滤纸用去离子水洗涤、取出滤纸放于烘箱中60℃烘干，即得多聚赖氨酸修饰的滤纸，滤纸的纤维表面修饰有氨基，如图1所示。
实施例16、用于氨基化滤纸制备核酸提取用芯片装置
1.本实施例中采用的实施例9制备的基于氨基化滤纸的核酸提取微流控芯片的结构示意图见图7，分解图见图8。
该芯片由上层芯片1和下层芯片3以及尼龙滤网2和氨基化滤纸8组成，构成一个核酸提取结构单元。其具体结构为：上层芯片上游设置有一个通孔用于进样，一个细胞裂解腔室，其中包含尼龙滤膜用于承载核酸样本，下游设置一个通孔用于出样(命名为出样孔7)。上下层芯片微管道结构采用机加工方式获得，横截面均呈矩形、宽度均为1毫米、深度均为0.5毫米，所述滤纸的形状为圆形(其直径为3毫米)、厚度为0.15毫米、孔径为20微米，所述上层基片和所述下层基片的材质均为塑料(聚甲基丙烯酸甲酯)。尼龙滤膜和氨基化滤纸形状为圆形。
上下层芯片及尼龙滤膜、氨基化滤纸通过热压方式组装在一起，芯片装置组装完毕后，出样孔连接外部针泵。
2.本核酸提取芯片工作流程为：首先在尼龙滤膜2上滴加样本，再以外部针泵作为驱动力，通过进样孔4通入裂解液到尼龙滤膜腔室，完成裂解后，将裂解产物泵经过氨基化滤纸8，再通过进样孔4泵入超纯水去，清洗后即可完成核酸捕获富集，捕获完成后取出滤纸用于后续实验，如定量PCR扩增等；也可于核酸提取芯片上灌装PCR mix，于芯片上完成PCR扩增。
实施例17、Fusion 5滤纸修饰前后的捕获效率以及3mm直径的Fusion 5圆片的最大核酸捕获量测定
1、组装芯片，构建Fusion 5滤纸核酸提取芯片
Fusion 5滤纸在芯片中结构要保证提取试剂贯穿式流过滤纸的网状纤维表面，如图2所示，滤纸/膜的网状纤维表面修饰有壳聚糖分子。
2、核酸捕获
在Fusion 5滤纸表面滴加2μL的25ngλDNA(分子量为48Kb)的MES溶液(pH为4.99)，然后200μL超纯水清洗1次；
3、定量PCR计算实施例9中制备的壳聚糖分子修饰的Fusion 5的捕获效率
定量PCR在伯乐(Bio-Rad)的iQ5系统(Bio-Rad,Hercules,CA)里进行荧光定量PCR。定量PCR体系的体积为25μL，包括一对引物各0.425μL(10μM)，12.5μL的Power 2×SYBRreal-time PCR premixture(BioTeke)，0.125μL 50μg/μL BSA，11.525μL去离子水，以及静电吸附捕获有λDNA模板的滤纸片。捕获效率和最大捕获两结果如图4、图5所示。
由图4可知：壳聚糖分子修饰滤纸后，DNA的捕获效率大大增强。
实施例18、实施例6中制备的壳聚糖修饰的玻璃纤维膜或Fusion 5滤纸对全血的捕获，结果如图6所示
1、组装芯片，构建玻璃纤维膜或Fusion 5滤纸的核酸提取芯片
玻璃纤维膜在芯片中结构要保证提取试剂填料式(如图3所示)流过玻璃纤维膜或Fusion 5滤纸的网状纤维表面，如图3所示，玻璃纤维膜或Fusion 5滤纸的网状纤维表面修饰有壳聚糖分子；
2、核酸捕获
以外部针泵作为驱动力，首先在尼龙滤膜2上滴加2μL血样本；再经进样孔4通入50μL的CTAB溶液，裂解后将裂解产物泵入氨基化滤纸8处，再通入200μL超纯水，即可完成核酸捕获富集，捕获完成后取出滤纸用于后续定量PCR实验。
3、定量PCR计算壳聚糖分子修饰的Fusion 5的捕获效率
定量PCR在伯乐(Bio-Rad)的iQ5系统(Bio-Rad,Hercules,CA)里进行荧光定量PCR。定量PCR体系的体积为25μL，包括一对引物各0.425μL(10μM)，12.5μL的Power 2×SYBRreal-time PCR premixture(BioTeke)，0.125μL 50μg/μL BSA，11.525μL去离子水，以及静电吸附捕获有人DNA的滤纸片。
4、定量PCR计算壳聚糖分子修饰的Fusion 5的捕获效率
定量PCR在伯乐(Bio-Rad)的iQ5系统(Bio-Rad,Hercules,CA)里进行荧光定量PCR。定量PCR体系的体积为25μL，包括一对引物各0.425μL(10μM)，12.5μL的Power 2×SYBRreal-time PCR premixture(BioTeke)，0.125μL 50μg/μL BSA，11.525μL去离子水，以及静电吸附捕获有λDNA模板的玻璃纤维膜或Fusion5滤纸片。
玻璃纤维膜、Fusion 5滤纸捕获人全血的捕获效率结果如图6所示，0.2μL人全血捕获核酸分别为4.7ng、4.3ng。
本发明基于壳聚糖修饰Fusion 5滤纸设计了核酸提取微流控芯片。芯片结构如图7所示，芯片结构分为上下两层：上层芯片(1所示)设有设置至少4个通孔(4，6,7,8所示)，其中两个作为加样孔(4所示)和出样孔(7所示)；加样孔通过下层芯片(3所示)一侧的上游导流槽(5所示)与滤网(2所示)相连通；出样孔通过下层芯片一侧的下游导流槽(9所示)与氨基化滤纸(8所示)相连通；滤网和滤纸通过上层芯片一侧的导流槽(6所示)相连通。导流槽接近滤网和滤纸的一端的形状与所使用滤网和滤纸形状相应，可为圆形、椭圆形、方形或菱形等。
所述上游导流槽5和所述下游导流槽9的宽度均为0.005-50毫米(如1毫米)，深度均为0.005-50毫米(如0.5毫米)。上下游导流槽的横截面形状可为矩形，也可以是其他几何形状。
具体可通过如下方法中的任意一种将所述滤纸夹持在上层芯片和下层芯片之间：热压、粘合剂粘合、物理键合或化学键合。
所述芯片的材质可为如下材料中的至少一种：硅、陶瓷、玻璃、塑料、硅树脂和树脂。
常见的塑料材料包括：聚酰胺(PA)、聚对苯二甲酸丁二醇酯(PBT)、聚碳酸酯(PC)、聚乙烯(PE)、聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)、聚甲醛(POM)、聚丙烯(PP)、聚苯乙烯二乙醚(PPE)、聚苯乙烯(PS)、聚砜(PSU)、聚醚醚酮(PEEK)、聚二甲基硅氧烷(PDMS)、环烯烃共聚物(COC)、硅树脂(Silicone)等。
基于壳聚糖修饰滤纸的加工方式根据芯片所用材料不同而不同。硅、玻璃和陶瓷可以通过各种湿法或干法刻蚀来加工，塑料、树脂等可以通过浇注、模压、刻蚀或机加工等方法加工。

Claims (8)

1.一种制备用于提取纯化核酸的氨基化滤纸/膜的方法，为：
a） 首先对滤纸/膜进行表面氧化改性得到表面氧化改性后的滤纸/膜，再用氨基硅烷化试剂与所述表面氧化改性后的滤纸/膜进行硅烷化反应，
从而在所述滤纸/膜的表面修饰上氨基，得到氨基化滤纸/膜； 或
b) 首先对滤纸/膜进行表面氧化改性得到表面氧化改性后的滤纸/膜，再将所述表面氧化改性后的滤纸/膜浸入富含氨基的长链化合物的溶液中吸附，
从而在所述滤纸/膜的表面修饰上氨基，得到氨基化滤纸/膜；或
c）将滤纸/膜的表面直接进行环氧基团化得到表面环氧基团化的滤纸/膜， 或，首先对滤纸/膜进行表面氧化改性得到表面氧化改性后的滤纸/膜，然后对所述表面氧化改性后的滤纸/膜的表面进行环氧基团化得到表面环氧基团化的滤纸/膜，
再将其置于富含氨基的长链化合物的溶液中，发生接枝反应，从而在所述滤纸/膜的表面修饰上氨基，得到氨基化滤纸/膜。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述方法中，所述表面氧化改性为将滤纸/膜进行臭氧处理或通氧条件下Plasma处理。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述方法中，所述氨基硅烷化试剂选自下述至少一种：3-氨丙基三乙氧基硅烷、3-氨丙基二乙氧基甲基硅烷和3-氨丙基乙氧基二甲基硅烷；
所述硅烷化反应为氨基硅烷化试剂在溶液中反应或氨基硅烷化试剂气相沉积；
其中，所述氨基硅烷化试剂的溶液中的溶剂为水，或乙醇、异丙醇；
所述氨基硅烷化试剂的溶液中氨基硅烷化试剂的浓度为，以质量百分含量计，0.005%-5%；
所述氨基硅烷化试剂气相沉积的操作为：烧杯放入到120℃-180℃的烘箱中烘烤至少10 min，然后在烧杯中滴加100 微升氨基硅烷化试剂，立刻放入滤纸/膜，并立即将烧杯用盖子盖严。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述方法中，所述富含氨基的长链化合物为壳聚糖、多聚赖氨酸、多聚组氨酸、聚亚乙基亚胺或聚烯丙基胺；
所述富含氨基的长链化合物的溶液为水相，所述富含氨基的长链化合物的溶液中富含氨基的长链化合物的浓度为，以质量百分含量计，0.001%-0.5%；
所述吸附的温度为10℃-35℃，时间为0.5 h-30 h。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述方法中，所述环氧基团化的操作为：将滤纸/膜或表面氧化改性后的滤纸/膜置于环氧基硅烷化试剂的溶液中反应，或进行环氧基硅烷化试剂气相沉积，得到所述表面环氧基团化的滤纸/膜；
所述环氧基硅烷化试剂选自下述至少一种：(3-Glycidyloxypropyl)trimethoxysilane、(3-Glycidoxypropyl)dimethylethoxysilane和(3-Glycidoxypropyl)dimethoxymethylsilane；
所述环氧基硅烷化试剂的溶液的溶剂为水，或乙醇、异丙醇；
所述反应的条件为：反应温度为10℃-65℃, 反应时间10分钟-10小时；
所述气相沉积的操作为：烧杯放入到120℃-180℃的烘箱中烘烤至少10 min，然后在烧杯中滴加100 微升氨基硅烷化试剂，立刻放入滤纸/膜，并立即将烧杯用盖子盖严；
所述富含氨基的长链化合物为壳聚糖、多聚赖氨酸、多聚组氨酸、聚亚乙基亚胺或聚烯丙基胺；
所述富含氨基的长链化合物的溶液为水相，所述富含氨基的长链化合物的溶液中富含氨基的长链化合物的浓度为，以质量百分含量计，0.001%-0.5%。
6.权利要求1-5中任一项所述的方法制备得到的氨基化滤纸/膜。
7.权利要求6所述的氨基化滤纸/膜在提取纯化核酸中的应用。
8.包括权利要求6所述的氨基化滤纸/膜的微流控芯片装置。
CN201611039252.0A 2016-11-21 2016-11-21 一种用于核酸提取纯化的氨基化滤纸/膜及其制备方法与应用 Active CN108085314B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201611039252.0A CN108085314B (zh) 2016-11-21 2016-11-21 一种用于核酸提取纯化的氨基化滤纸/膜及其制备方法与应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201611039252.0A CN108085314B (zh) 2016-11-21 2016-11-21 一种用于核酸提取纯化的氨基化滤纸/膜及其制备方法与应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN108085314A CN108085314A (zh) 2018-05-29
CN108085314B true CN108085314B (zh) 2021-11-09

Family

ID=62170781

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201611039252.0A Active CN108085314B (zh) 2016-11-21 2016-11-21 一种用于核酸提取纯化的氨基化滤纸/膜及其制备方法与应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108085314B (zh)

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108795929A (zh) * 2018-07-06 2018-11-13 大连元和健路医学检验实验室有限公司 一种dna分子筛柱子的制备方法
CN110343182A (zh) * 2019-07-04 2019-10-18 苏州贝蒂克生物技术有限公司 一种基于基底表面的醛基修饰方法及验证其蛋白固定效果的方法
CN111073811A (zh) * 2019-12-24 2020-04-28 深圳市华迈生物医疗科技有限公司 一种用于实时荧光核酸扩增检测的微流控芯片及检测方法
CN111474359B (zh) * 2020-04-22 2021-04-30 北京倍肯恒业科技发展股份有限公司 一种多联检测胶体金免疫层析试纸条的制备方法及应用
CN112378723A (zh) * 2020-11-19 2021-02-19 深圳市易瑞生物技术股份有限公司 一种用于分离和浓缩目标物的样品垫及其用途
CN112982012B (zh) * 2021-02-09 2022-05-10 杭州梓晶生物有限公司 一种聚丙烯酰胺衍生物修饰滤纸及其在核酸分离富集中的应用
CN112940922A (zh) * 2021-02-19 2021-06-11 清华大学 一种全集成病原体核酸检测微流控芯片
CN113671176A (zh) * 2021-08-02 2021-11-19 卢青松 一种目标物免疫层析试纸
CN115387156B (zh) * 2022-07-19 2024-05-03 中国航天员科研训练中心 一种硅基材料抗菌性保护膜的制备方法
CN117467658A (zh) * 2022-07-22 2024-01-30 友康生物科技(北京)股份有限公司 核酸提取和检测的方法及装置

Citations (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1950506A (zh) * 2003-12-30 2007-04-18 新加坡科技研究局 核酸纯化芯片
CN101633742A (zh) * 2009-09-01 2010-01-27 博奥生物有限公司 氨基塑料基片及其制备方法与应用
CN101654654A (zh) * 2009-09-16 2010-02-24 华东师范大学 一种以混合筛分介质修饰dna微流控芯片微通道的方法
CN101912768A (zh) * 2010-07-07 2010-12-15 葛志强 吸附储存dna的介质和制备方法
CN101956000A (zh) * 2010-07-19 2011-01-26 博奥生物有限公司 可控释放生物分子的方法及可控释放生物分子的生物芯片
CN102053160A (zh) * 2009-11-06 2011-05-11 上海交通大学附属第一人民医院 一种同时多细胞捕获的微流控细胞芯片
CN102276863A (zh) * 2009-09-01 2011-12-14 博奥生物有限公司 一种氨基塑料基片及其制备方法与应用
CN102749443A (zh) * 2011-04-22 2012-10-24 国家纳米科学中心 双层微流控芯片器件及其在免疫检测中的用途
CN103255195A (zh) * 2012-02-20 2013-08-21 中国科学院大连化学物理研究所 一种基于薄膜纤维材料微流控芯片的细胞分析技术
CN103484353A (zh) * 2012-06-12 2014-01-01 清华大学 基于滤纸的生物大分子提取装置
CN103602583A (zh) * 2013-11-07 2014-02-26 苏州汶颢芯片科技有限公司 一种集成式多功能微流控芯片
CN104312913A (zh) * 2014-10-17 2015-01-28 复旦大学附属华山医院 整合全血核酸提取、扩增即可视化检测肿瘤基因突变的微流控芯片及其应用
CN104998705A (zh) * 2015-08-17 2015-10-28 山东省科学院海洋仪器仪表研究所 一种滤纸引导三明治微流控芯片及其加工方法
CN105879936A (zh) * 2016-03-31 2016-08-24 苏州市博纳泰科生物技术有限公司 全血过滤及定量移取微流控芯片
CN110857904A (zh) * 2018-08-22 2020-03-03 厦门大学 从全血样本中获取血浆的方法、滤血器及微流控芯片

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8043632B2 (en) * 2003-08-18 2011-10-25 E. I. Du Pont De Nemours And Company Process for making antimicrobial articles by reacting chitosan with amino-reactive polymer surfaces
CN102284253A (zh) * 2011-06-13 2011-12-21 北京工业大学 一种有机/无机中空纤维复合膜的组装方法
CN105435656B (zh) * 2014-07-22 2017-10-03 中国石油化工股份有限公司 一种复合纳滤膜及其制备方法
CN105968215B (zh) * 2016-03-31 2018-12-28 北京理工大学 一种纳米纤维素接枝氨基酸的方法在超滤膜方面的应用
CN105727760B (zh) * 2016-03-31 2018-08-03 北京理工大学 一种氨基酸接枝复合纤维素的抗污染超滤膜及其制备方法

Patent Citations (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1950506A (zh) * 2003-12-30 2007-04-18 新加坡科技研究局 核酸纯化芯片
CN101633742A (zh) * 2009-09-01 2010-01-27 博奥生物有限公司 氨基塑料基片及其制备方法与应用
CN102276863A (zh) * 2009-09-01 2011-12-14 博奥生物有限公司 一种氨基塑料基片及其制备方法与应用
CN101654654A (zh) * 2009-09-16 2010-02-24 华东师范大学 一种以混合筛分介质修饰dna微流控芯片微通道的方法
CN102053160A (zh) * 2009-11-06 2011-05-11 上海交通大学附属第一人民医院 一种同时多细胞捕获的微流控细胞芯片
CN101912768A (zh) * 2010-07-07 2010-12-15 葛志强 吸附储存dna的介质和制备方法
CN101956000A (zh) * 2010-07-19 2011-01-26 博奥生物有限公司 可控释放生物分子的方法及可控释放生物分子的生物芯片
CN102749443A (zh) * 2011-04-22 2012-10-24 国家纳米科学中心 双层微流控芯片器件及其在免疫检测中的用途
CN103255195A (zh) * 2012-02-20 2013-08-21 中国科学院大连化学物理研究所 一种基于薄膜纤维材料微流控芯片的细胞分析技术
CN103484353A (zh) * 2012-06-12 2014-01-01 清华大学 基于滤纸的生物大分子提取装置
CN103602583A (zh) * 2013-11-07 2014-02-26 苏州汶颢芯片科技有限公司 一种集成式多功能微流控芯片
CN104312913A (zh) * 2014-10-17 2015-01-28 复旦大学附属华山医院 整合全血核酸提取、扩增即可视化检测肿瘤基因突变的微流控芯片及其应用
CN104998705A (zh) * 2015-08-17 2015-10-28 山东省科学院海洋仪器仪表研究所 一种滤纸引导三明治微流控芯片及其加工方法
CN105879936A (zh) * 2016-03-31 2016-08-24 苏州市博纳泰科生物技术有限公司 全血过滤及定量移取微流控芯片
CN110857904A (zh) * 2018-08-22 2020-03-03 厦门大学 从全血样本中获取血浆的方法、滤血器及微流控芯片

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
氨基改性聚硅氧烷复合膜的透气性能;张淑斌;《合成纤维》;20111231;第4卷;第30-32页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN108085314A (zh) 2018-05-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN108085314B (zh) 一种用于核酸提取纯化的氨基化滤纸/膜及其制备方法与应用
EP2215103B1 (en) Method for purifying nucleic acids
CN103282121B (zh) 用于核酸提取和分级分离的微流体装置
CN107185612B (zh) 一种应用于外泌体捕获的微流体芯片及其制备方法
US20240082838A1 (en) Nucleic acid extraction and purification cartridges
Cunha et al. Sample preparation for lab-on-a-chip systems in molecular diagnosis: a review
CA2512071A1 (en) Methods and apparatus for pathogen detection and analysis
CN101613660B (zh) 检测和分析病原体的方法和设备
US20120230887A1 (en) Devices and methods for interfacing microfluidic devices with macrofluidic devices
WO2013185467A1 (zh) 基于滤纸的生物大分子提取装置
CN105980846B (zh) 包括聚(酸)膜分离基质的旋转柱及其制造和使用的方法
CN100494960C (zh) 一种生物样品微型富集芯片及其制作方法
Kim et al. On-site extraction and purification of bacterial nucleic acids from blood samples using an unpowered microfluidic device
CN108102881A (zh) 具有微结构阵列的微流控芯片及核酸固相纯化提取方法
CN104561286A (zh) 一种新型聚合酶链反应微流体芯片控制系统及其制备方法
WO2015140740A1 (en) Device and method for separating a fluid mixture such as blood
KR20130066293A (ko) 핵산 추출용 미세유동 칩, 이를 포함하는 핵산 추출 장치, 및 이를 이용하는 핵산 추출 방법
JP2013509578A (ja) 異種アッセイの洗浄方法及び装置としてのサイフォン吸引
KR101915675B1 (ko) 초고속 핵산 추출 장치, 및 이를 이용하는 핵산 추출 방법
RU2631934C1 (ru) Сорбционная композитная мембрана и биосепарирующее устройство для выделения днк
Nguyen et al. An aptameric microfluidic system for specific purification, enrichment, and mass spectrometric detection of biomolecules
WO2021100801A1 (ja) 核酸の分離方法、検出方法、核酸精製カラム及びその製造方法
Chen et al. Silica-based solid phase extraction of DNA on a microchip

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
TA01 Transfer of patent application right

Effective date of registration: 20210907

Address after: 310018 2a20, building 2, No. 339, Baiyang street, Qiantang new area, Hangzhou, Zhejiang

Applicant after: Hangzhou Zijing biological Co.,Ltd.

Address before: 100084 Beijing Haidian District Beijing 100084 box 82 box, Tsinghua University Patent Office

Applicant before: TSINGHUA University

TA01 Transfer of patent application right
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant