CN111413509A - 一种新生儿血型及溶血病综合检测卡 - Google Patents

一种新生儿血型及溶血病综合检测卡 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种新生儿血型及溶血病综合检测卡,包括一血型鉴定区和一溶血三项检测区,血型鉴定区包括一ABO、RhD血型检测试条,试条从上游至下游依次设置有一冲洗区、一加样反应区、一吸水区,其特征在于,加样反应区设有A检测点、B检测点、D检测点,一滴样本可同时完成ABO、RhD血型鉴定;溶血三项检测区包括依次并排设置一新生儿红细胞直接抗球蛋白试验(DAT)检测部、一新生儿游离抗体检测部、一新生儿红细胞放散液抗体检测部,各检测部均包括一相同试条,试条从上游至下游依次设置有一冲洗区、一加样区、一反应区、一吸水区,其特征在于,反应区设有IgG抗A检测点、IgG抗B检测点,保证能够特异性检测新生儿血清中是否有来自于母亲的免疫性血型抗体,从而不需要常规液体试剂的致敏红细胞洗涤步骤,且灵敏度更高。本发明具有室温保存,无需辅助设备,操作方便,所需样本量少,检测时间短,结果易判读,不易造成污染,特异性、灵敏度高等,适合新生儿血型及溶血病的快速床边检测。

Description

一种新生儿血型及溶血病综合检测卡
技术领域
本发明属于血液检测技术领域,具体涉及一种新生儿血型及溶血病综合检测卡。
背景技术
新生儿溶血病(hemolytic disease of the newborn,HDN)是儿科最常见的急性溶血性疾病之一,是指母婴血型不合,胎儿红细胞对母体产生刺激,孕母体内形成免疫性血型抗体,主要以IgG型抗体为主,此种IgG抗体又可通过胎盘进入胎儿体内,破坏胎儿红细胞引起HDN,严重者也可出现流产、早产、死胎、溶血性黄疸、严重贫血,并可能发展成核黄疽,可造成婴儿早期死亡或使存活者留下不可逆的神经系统后遗症,给患儿及其家庭带来极大痛苦。至今发现的人类血型系统中ABO血型不合的新生儿溶血病最为多见,其次为Rh血型系统,其他血型系统导致的HDN较为少见。
中国医师协会发表的《新生儿溶血病(HDN)产后免疫血液学试验推荐方案》中明确要求检测的项目包括:1、新生儿ABO正定型、RhD血型,2、新生儿红细胞直接抗球蛋白试验(DAT)(检测新生儿红细胞上有无致敏的免疫性抗体),3、新生儿红细胞放散液抗体检测,4、新生儿血浆(血清)游离抗体检测(检测新生儿血清中有无来自于母亲的免疫性抗体),检测结果作为临床诊断和临床治疗的最重要证据之一,见表1。
表1 ABO血型不合新生儿三项试验结果分析及提示临床意义
Figure BDA0002477973100000021
《新生儿溶血病(HDN)产后免疫血液学试验推荐方案》中推荐的ABO正定型、RhD血型鉴定是采用液体试剂试管离心法,操作步骤具体:1)取试管3 支,分别注明抗-A、抗-B、抗-D,2)分别加入相应抗体试剂,3)每支试管加入患儿2%-5%红细胞悬液50ul,4)1000g,离心15s,轻轻摇动试管观察结果。其存诸多不足之处:1)液体试剂需要冷藏及冷链运输,不利于储存,2),样本需要前处理,3)需要额外的离心设备,4)需要摇动试管判读结果,人为因素影响大,不利于结果判读。另外、临床常用的血型抗原检测方法还有微柱凝胶法和固相卡法,但均存各种各样的不足,如:样本需要前处理、各抗原需要独立加样检测、成本高、检测时间长、结果判读受主观偏差影响较大、需要辅助设备等。
《新生儿溶血病(HDN)产后免疫血液学试验推荐方案》中推荐的新生儿红细胞直接抗球蛋白试验(DAT)也是采用液体试剂试管离心法,操作步骤具体:1) 将患儿红细胞用盐水洗涤3-4次后,配制2%-5%盐水悬液,2)取试管1支,加入上述悬液50ul,加入抗人球蛋白血清(抗-IgG)100ul,混合后立即以1000g离心15s,3)轻轻转动试管,将混悬液倒在玻片上,在低倍显微镜下观察结果。其同样存诸多不足之处:1)液体试剂需要冷藏及冷链运输,不利于储存,2)需要额外的离心设备,3)需要摇动试管判读结果,人为因素影响大,不利于结果判读。市面上也有用微柱凝胶法来检测,但同样存在不足,如:成本高、检测时间长、需要辅助设备等。
新生儿溶血病(HDN)产后免疫血液学试验推荐方案》中推荐的新生儿血清游离抗体、红细胞放散液抗体检测也是采用液体试剂试管离心法,操作步骤具体: 1)取试管1支,加放散液200ul,2)加2%-5%与患儿ABO同型的标准红细胞50ul,混匀,3)37℃水浴致敏1h,4)取出,用盐水洗3次,最后1次吸干水分,每管加抗球蛋白试剂100ul,5)以1000g,离心15s,肉眼观察结果。其同样存诸多不足之处:1)液体试剂需要冷藏及冷链运输,不利于储存,2)需要额外的离心设备,3)需要长时间的致敏,4)需要繁琐的致敏红细胞的洗涤,5)需要摇动试管判读结果,人为因素影响大,不利于结果判读。由于测定过程过于复杂,大型医院基本都采用微柱凝胶卡方法,可以省去红细胞洗涤和显微镜判读结果的步骤,但是整个过程依然耗时长、步骤繁琐、费用高。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术缺陷,提供一种新生儿血型及溶血病综合检测卡。
本发明的技术方案如下:
一种新生儿血型及溶血病综合检测卡,其特征在于:包括
一血型鉴定区,包括一ABO、RhD血型检测试条,试条从上游至下游依次设置有一冲洗区、一加样反应区、一吸水区,该检测试条包括一基板和设于该基板上的一反应膜、一密封带、一吸水垫,反应膜设于该基板的中下部,密封带设于该反应膜的中部,吸水垫设于该基板的中上部并搭接于反应膜的一端之上,反应膜的一端至密封带一端之间的区域为冲洗区,反应膜位于密封带的另一端与吸水垫的一端之间的区域为加样反应区,吸水垫构成吸水区,该加样反应区上设有A 检测点、B检测点、D检测点;
一溶血三项检测区,包括一新生儿红细胞直接抗球蛋白试验(DAT)检测部、一新生儿红细胞放散液抗体检测试部、一新生儿游离抗体检测部,各检测部均包括一相同试条,试条从上游至下游依次设置有一冲洗区、一加样区、一反应区、一吸水区,该检测试条包括一基板和设于该基板上的一冲洗垫、一反应膜、一吸水垫和一密封带,反应膜设于该基板的中部,冲洗垫的一端搭接于反应膜的一端之上,吸水垫的一端搭接于反应膜的另一端之上,密封带的一部分粘贴于反应膜上,另一部分粘贴于冲洗垫上,冲洗垫靠近密封带的区域为加样区、远离密封带的区域为冲洗区,反应膜位于密封带的一端与吸水垫的一端之间的区域为反应区,吸水垫构成吸水区,该加样反应区设有IgG抗A检测点、IgG抗B检测点。
在本发明的一个优选实施方案中,还包括一外壳,该外壳对应所述ABO、 RhD血型检测试条的冲洗区、加样反应区分别开设有相应的冲洗孔、加样反应孔,该外壳对应所述溶血三项检测试条的冲洗区、加样区、反应区分别开设有相应的冲洗孔、加样孔、反应孔。
在本发明的一个优选实施方案中,所述A检测点包被固化抗A抗体,所述B检测点包被固化抗B抗体,所述D检测点包被固化抗D抗体。
在本发明的一个优选实施方案中,所述IgG抗A检测点包被固化抗-抗A 抗体,IgG抗B检测点包被固化抗B抗体。
在本发明的一个优选实施方案中,所述A检测点、B检测点、D检测点沿所述ABO、RhD血型检测试条的横向分散排列呈线性或三角形,所述IgG抗A 检测点、IgG抗B检测点沿所述溶血三项检测试条的横向分散排列呈线性。
在本发明的一个优选实施方案中,所述D检测点居中,A检测点、B检测点分列D检测点左右两边。
在本发明的一个优选实施方案中,所述反应膜为毛细管流速为 50-110sec/4cm宽的有背衬的多孔复合膜。
本发明的有益效果是:
1、本发明公开了一种新生儿血型及溶血病综合检测卡,可同时用来 ABO、RhD血型鉴定,以及新生儿溶血三项试验,作为固相试剂卡,具有诸多优势,如:室温保存,无需辅助设备,操作方便,结果易判读,检测时间短,不易造成污染,特异性、灵敏度高等,适合新生儿血型及溶血病的快速床边检测。
2、本发明的血型鉴定区包括一ABO、RhD血型检测试条,试条构造简单,反应膜上包被固化特异性血型抗体,A检测点包被固化抗A抗体、B检测点包被固化抗B抗体、D检测点包被固化抗D抗体,一滴样本可同时完成ABO、RhD 血型鉴定,样本无需前处理,操作简单,只需1滴冲洗液,检测时间短至1min。
3、本发明的溶血三项检测区包括一新生儿红细胞直接抗球蛋白试验(DAT)检测部、一新生儿红细胞放散液抗体检测试部、一新生儿游离抗体检测部,各检测部均包括一相同试条,反应膜上包被固化特异性血型二抗,IgG抗A检测点包被固化抗-抗A抗体、IgG抗B检测点包被固化抗-抗B抗体,保证能够特异性检测新生儿血清中来自于母亲的免疫性血型抗体,有效屏蔽样本中其它非抗 A、抗B抗体的干扰,从而不需要像常规液体试剂的致敏红细胞洗涤步骤,而且灵敏度更高,且能够同时鉴定IgG抗A抗体和IgG抗B,不像常规液体试剂和微柱凝胶卡只能分开独立检测。
4、本发明所使用的反应膜均为大孔径,确保单个红细胞能通过,因此, ABO、RhD血型鉴定时直接全血加样,无需样本前处理,新生儿溶血三项检测时直接使用标准红细胞作为指示剂,从而不需像传统免疫层析试条一样的抗原制备、提取和指示剂标记步骤,简化了产品的转化生产工艺。
5、本发明反应膜上包被抗体均呈点状,各检测点沿试条的宽度方向分散排列,可避免在毛细流向上相互干扰,降低了样本流经反应膜时的空间位阻,同时可以缩短反应区的长度,极大地缩短了检测时间,冲洗液滴加后,1-3min 可判读结果。
附图说明
图1为本发明的外观结构示意图。
图2为本发明的ABO、RhD血型检测试条的立体结构分解示意图。
图3为本发明的溶血三项检测试条的立体结构分解示意图。
图4为本发明实施例2至4中的检测结果判读图。
具体实施方式
以下通过具体实施方式结合附图对本发明的技术方案进行进一步的说明和描述。
实施例1
一种新生儿血型及溶血病综合检测卡,包括一外壳1、一ABO、RhD血型检测试条4和三溶血三项检测试条5。
如图1、2、3所示,一ABO、RhD血型检测试条4和外壳1构成一血型鉴定区2,三溶血三项检测试条5和外壳1分别构成新生儿红细胞直接抗球蛋白试验 (DAT)检测部31、一新生儿游离抗体检测部32、一新生儿红细胞放散液抗体检测部33,检测部31、检测部32和检测部33构成一溶血三项检测区3。
ABO、RhD血型检测试条4,从上游至下游依次设置有一冲洗区421、一加样反应区422、一吸水区441,包括一基板41和设于该基板41上的一反应膜42、一密封带43、一吸水垫44,反应膜42设于该基板41的中下部,密封带43设于该反应膜42的中部,吸水垫44设于该基板41的中上部并搭接于反应膜42的一端之上,反应膜42的一端至密封带43一端之间的区域为冲洗区421,反应膜42 位于密封带43的另一端与吸水垫44的一端之间的区域为加样反应区422,吸水垫44构成吸水区441,该加样反应区422上设有A检测点401、B检测点403、 D检测点402;外壳1在血型鉴定区2设有依次对应ABO、RhD血型检测试条4 冲洗区421、加样反应区422的冲洗孔21、加样反应孔22。
溶血三项检测试条5,从上游至下游依次设置有一冲洗区531、一加样区532、一反应区520、一吸水区551,包括一基板51和设于该基板51上的一冲洗垫53、一反应膜52、一吸水垫55和一密封带54,反应膜52设于该基板51的中部,冲洗垫53的一端搭接于反应膜52的一端之上,吸水垫55的一端搭接于反应膜52 的另一端之上,密封带54的一部分粘贴于反应膜52上,另一部分粘贴于冲洗垫 53上,冲洗垫53靠近密封带54的区域为加样区532、远离密封带54的区域为冲洗区531,反应膜52位于密封带54的一端与吸水垫55的一端之间的区域为反应区520,吸水垫55构成吸水区551,该反应区520设有IgG抗A检测点521、 IgG抗B检测点522;外壳1在溶血三项检测区3设有依次对应溶血三项检测试条5冲洗区531、加样区532、反应区520的冲洗孔301、加样孔302、反应孔 303。
优选的,设于加样反应区422的A检测点包被固化抗A抗体、B检测点包被固化抗B抗体、D检测点包被固化抗D抗体,设于反应区520的IgG抗A检测点包被固化抗-抗A抗体、IgG抗B检测点包被固化抗B抗体。
外壳1为塑料材质,优选PS、ABS和PET中的一种,采用上海金标的定制塑料卡;吸水垫44、55为吸水材料,优选采用棉浆纸,采用上海金标SX-42或奥格 XJ-420、XJ-440、XJ-520中的任一种吸水纸;反应膜42、52为大孔径的多孔复合膜,优选毛细管流速为50-110sec/4cm宽的有背衬的多孔复合膜,采用Schleicher&Schuell的AE99或FF85.100;冲洗垫53为亲水多孔载体,优选玻璃纤维,采用Ahlstrom的8975;基板41、51为聚酯板,采用上海金标的带黏胶专用聚酯板;密封带43、54为带有粘胶的PP带、PE带、ABS带或PET带,采用四维精密的不规格度透明胶带。
抗A抗体、抗B抗体、抗D抗体,采用Merck的相应血型抗体;抗-抗A抗体、抗-抗B抗体为特异性血型二抗,分别特异性免疫结合IgG抗A抗体、IgG抗B抗体,采用武汉新跃瑞安的相应血型二抗。
实施例2
用实施例1的一种新生儿血型及溶血病综合检测卡来鉴定新生儿红细胞血型,具体包括如下步骤:
(1)加样:添加待检新生儿EDTA抗凝/枸橼酸钠抗凝静脉血10ul在血型鉴定区的加样反应孔22。
(2)加冲洗液:加样后等待10秒钟,添加40-80ul冲洗液在血型鉴定区的冲洗孔21。
(3)结果判读:加冲洗液后等待1分钟,在加样反应孔22判读结果,检测点显红色,为阳性反应,例如:A检测点显红色,即血型为A型,B检测点显红色,即血型为B型,D检测点显红色,即血型为D型;检测点不显色,为阴性反应。具体结果解释参见附图4。
实施例3
用实施例1的一种新生儿血型及溶血病综合检测卡来检测新生儿红细胞上有无致敏的免疫性抗体,即,红细胞直接抗球蛋白试验(DAT),具体包括如下步骤:
(1)样本制备:将新生儿红细胞用生理盐水洗涤3-4次后,配制10%生理盐水悬液。
(2)加样:添加上述样本10ul在新生儿红细胞直接抗球蛋白试验(DAT)检测部的加样孔302。
(3)加冲洗液:加样后等待10秒钟,添加40-80ul冲洗液在新生儿红细胞直接抗球蛋白试验(DAT)检测部的冲洗孔301。
(4)结果判读:加冲洗液后等待1分钟,在反应孔303判读结果,检测点显红色,为阳性反应,例如:抗A检测点显红色,即红细胞被IgG抗A抗体致敏,抗B检测点显红色,即红细胞被IgG抗B抗体致敏;检测点不显色,为阴性反应。具体结果解释参见附图4。
实施例4
用实施例1的一种新生儿血型及溶血病综合检测卡来检测新生儿红细胞放散液抗体,进一步验证新生儿红细胞上是否存在致敏的免疫性抗体,具体包括如下步骤:
(1)放散液制备:采用物理方法(改变温度条件)将新生儿红细胞致敏抗体放散至生理盐水中,得到含致敏抗体的放散液,操作步骤参见《新生儿溶血病 (HDN)免疫血液学试验推荐方案》。
(2)加放散液样:添加上述样本10ul在新生儿红细胞放散液抗体检测部的加样孔302。
(3)加AB型标准红细胞:添加上10%生理盐水悬液的AB型红细胞10ul 在新生儿红细胞放散液抗体检测部的加样孔302。
(4)加冲洗液:加AB型标准红细胞后等待5分钟,添加40-80ul冲洗液在新生儿红细胞放散液抗体检测部的冲洗孔301。
(5)结果判读:加冲洗液后等待1分钟,在反应孔303判读结果,检测点显红色,为阳性反应,例如:抗A检测点显红色,即放散液中存在IgG抗A抗体,进一步说明红细胞被IgG抗A抗体致敏,抗B检测点显红色,即放散液中存在IgG 抗B抗体,进一步说明红细胞被IgG抗B抗体致敏;检测点不显色,为阴性反应。具体结果解释参见附图4。
实施例5
用实施例1的一种新生儿血型及溶血病综合检测卡来检测新生儿血清游离抗体,目的是检测新生儿血清中有无来自于母亲的免疫性抗体,具体包括如下步骤:
(1)加样:添加待检新生儿血清/血浆10ul在新生儿游离抗体检测部的加样孔302。
(2)加AB型标准红细胞:添加上10%生理盐水悬液的AB型红细胞10ul 在新生儿游离抗体检测部的加样孔302。
(3)加冲洗液:加AB型标准红细胞后等待5分钟,添加40-80ul冲洗液在新生儿游离抗体检测部的冲洗孔301。
(4)结果判读:加冲洗液后等待1分钟,在反应孔303判读结果,检测点显红色,为阳性反应,例如:抗A检测点显红色,即血清/血浆中存在游离的IgG 抗A抗体,抗B检测点显红色,即血清/血浆中存在游离的IgG抗B抗体;检测点不显色,为阴性反应。具体结果解释参见附图4。
以上所述,仅为本发明的较佳实施例而已,故不能依此限定本发明实施的范围,即依本发明专利范围及说明书内容所作的等效变化与修饰,例如:溶血三项检测试条的检测点包被固化抗人IgG抗体,皆应仍属本发明涵盖的范围内。

Claims (7)

1.一种新生儿血型及溶血病综合检测卡,其特征在于:包括
一血型鉴定区,包括一ABO、RhD血型检测试条,试条从上游至下游依次设置有一冲洗区、一加样反应区、一吸水区,该检测试条包括一基板和设于该基板上的一反应膜、一密封带、一吸水垫,反应膜设于该基板的中下部,密封带设于该反应膜的中部,吸水垫设于该基板的中上部并搭接于反应膜的一端之上,反应膜的一端至密封带一端之间的区域为冲洗区,反应膜位于密封带的另一端与吸水垫的一端之间的区域为加样反应区,吸水垫构成吸水区,该加样反应区上设有A检测点、B检测点、D检测点;
一溶血三项检测区,包括一新生儿红细胞直接抗球蛋白试验(DAT)检测部、一新生儿游离抗体检测部、一新生儿红细胞放散液抗体检测部,各检测部均包括一相同试条,试条从上游至下游依次设置有一冲洗区、一加样区、一反应区、一吸水区,该检测试条包括一基板和设于该基板上的一冲洗垫、一反应膜、一吸水垫和一密封带,反应膜设于该基板的中部,冲洗垫的一端搭接于反应膜的一端之上,吸水垫的一端搭接于反应膜的另一端之上,密封带的一部分粘贴于反应膜上,另一部分粘贴于冲洗垫上,冲洗垫靠近密封带的区域为加样区、远离密封带的区域为冲洗区,反应膜位于密封带的一端与吸水垫的一端之间的区域为反应区,吸水垫构成吸水区,该加样反应区设有IgG抗A检测点、IgG抗B检测点。
2.如权利要求1所述的一种新生儿血型及溶血病综合检测卡,其特征在于:还包括一外壳,该外壳对应所述ABO、RhD血型检测试条的冲洗区、加样反应区分别开设有相应的冲洗孔、加样反应孔,该外壳对应所述溶血三项检测试条的冲洗区、加样区、反应区分别开设有相应的冲洗孔、加样孔、反应孔。
3.如权利要求1所述的一种新生儿血型及溶血病综合检测卡,其特征在于:所述A检测点包被固化抗A抗体,所述B检测点包被固化抗B抗体,所述D检测点包被固化抗D抗体。
4.如权利要求1所述的一种新生儿血型及溶血病综合检测卡,其特征在于:所述IgG抗A检测点包被固化抗-抗A抗体,IgG抗B检测点包被固化抗B抗体。
5.如权利要求1、4所述的一种新生儿血型及溶血病综合检测卡,其特征在于:所述A检测点、B检测点、D检测点沿所述ABO、RhD血型检测试条的横向分散排列呈线性或三角形,所述IgG抗A检测点、IgG抗B检测点沿所述溶血三项检测试条的横向分散排列呈线性。
6.如权利要求5所述的一种新生儿血型及溶血病综合检测卡,其特征在于:所述D检测点居中,A检测点、B检测点分列D检测点左右两边。
7.如权利要求1所述的一种新生儿血型及溶血病综合检测卡,其特征在于:所述反应膜为毛细管流速为50-110sec/4cm宽的有背衬的多孔复合膜。
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