KR870008033A - 핵산분자의 정량과 정량에 사용되는 시약키트 - Google Patents

핵산분자의 정량과 정량에 사용되는 시약키트 Download PDF

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KR870008033A
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Abstract

내용 없음

Description

핵산분자의 정량과 정량에 사용되는 시약키트
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음

Claims (13)

  1. 주어진 단위당 주어진 헥산분자의 수가, 단위당 여러 전사체 내에 잠재적으로 존재하는 시험용 헥산 분자의 수를 동일 단위당 우세하게 존재하는 선택된 표준헥산의 수와 비교함으로써 결정되는 것을 특징으로 하는, 센드위치 교잡법이나 용액교잡법에 의한 헥산분자 정량법.
  2. 제 1 항에 있어서,
    a) 필요한 경우, 시료내에 존재하는 헥산이 교잡반응에 관여할 수 있는 형태로 주어지는 것을 특징으로 하는 방법.
    b) 시료내에 존재하는 헥산이 교잡반응을 잠재적으로 방해하는 어떤 종류의 헥산으로, 필요한 경우, 교잡시험을 방해할 수 없는 형태로 만드는 것을 특징으로 하는 방법.
    c) 시료내에 존재하는 헥산을, 분할되지 않았거나 또는 필요한 경우 분할된 형태로써, 여러 전사체 내에 잠재적으로 존재하는 헥산과 충분한 상동성을 가진 적어도 하나 이상의 시험용 탐침페어 및 여러 전사체 내에 우세하게 일정수로 존재하는 헥산과 충분한 상동성을 가진 적어도 하나 이상의 적당하게 선택된 표준 탐침페어와 접촉시킴을 특징으로 하는 방법;
    상기 시험용 탐침페어 및 표준 탐침페어에 있어서, 검출탐침을 검출 가능하며 적당한 표지로 표지시키거나, 포획탐침을 적당한 담체에 고착시키거나, 결과로 얻어진 교잡생성물의 분리가 가능하게 되는 물질에 포획탐침을 고착시킴을 특징으로 하는 방법;
    d) 교잡반응이나 반응이 일어난 후에 필요한 경우, 시험용 교잡생성물과 표준 교잡생성물을 분리하고, 전술한 바와 같이 부착시킨 표지를 측정함을 특징으로 하는 방법;
    주어진 단위당 헥산분자의 수를 시험용 헥산의 수 및 표준헥산의 수와 비교함으로써 결정하는 것을 특징으로 하는 방법.
  3. 제 1 및 제 2 항에 있어서, 시험을 헥산 및 표준 헥산이 DNA임을 특징으로 하는 방법.
  4. 제 1 및 2항에 있어서, 시험용 헥산이 RNA이고, 표준 헥산이 DNA임을 특징으로 하는 방법.
  5. 제 1 및 2항에 있어서, 시험용 헥산 및 표준 헥산이 RNA임을 특징으로 하는 방법.
  6. 제 1 및 2항에 있어서, 시험용 헥산이 DNA이고 표준 헥산이 RNA임을 특징으로 하는 방법.
  7. 제1,2,3 및 4항에 있어서, 표준 탈침페어의 검출 탐침과 포획탐침을 단독으로 또는 시험용 탐침페어와 함께, 분할되지 않았거나 혹은 필요한 경우 분할되어 있는 헥산 시료와 접촉시킴을 특징으로 하는 방법.
    전술한 검출탐침은 인간의 C-Ki-ras Ⅰ유전자의 HindⅢ 단편중 1.1kb Bg1 Ⅱ- BglⅡ 단편으로 구성된 재조합 플라스미드이며, 상기의 HindⅢ 단편은 pBR322 플라스미드내로 클론되어 있는 것이고, BglⅡ-BglⅡ 단편은 pBR322 플라스미드의 BamH Ⅰ 제한효소의 제한 부위내로 서브클론되어 있는 것이다.
    포획탐침은 인간의 c-Ki-ras Ⅰ 유전자의 HindⅢ 단편 중 0.5kb BglⅡ-HindⅢ 단편으로 구성된 재조합 파아지아며, 상기의 HindⅢ 단편은 pBR322 플라스미드 내로 클론되어 있는 것이고, Bg1Ⅱ-HindⅢ 단편은 BamHⅠ과 HindⅢ 제한효소의 제한부위 사이에서 M13mp10과 M13mpll 파아지 벡터 내로 서브클론되어 있는 것이다.
  8. 제1,2,3 및 4항에 있어서, 표준 탐침페어의 검출탐침과 포획탐침을 단독으로 또는 시험용 탐침페어와 함께, 분할되지 않았거나 혹은 필요한 경우 분할되어 있는 핵산 시료와 접촉시킴을 특징으로 하는 방법.
    전술한 검출탐침은 마우스메탈로티오닌 유전자중 프로모터 인자 부위의 업스트립(upstream)에서 유래한 1.2kb EcoRⅠ(HindⅢ) 단편으로 구성된 제조합 플라스미드이고, 상기의 단편은 EcoRⅠ과 HindⅢ 제한효소의 제한부위 사이에서 pAT153 플라스미드내로 서브클론되어 있는 것이다.
    포획탐침은 메탈로티오닌 유전자의 프로모터인자 부위와 그 업스트립부위에서 유래한 0.8kb KpnⅠ-Bg1Ⅱ 단편으로 구성된 재조합파아지이며, 상기의 단편은 KpnⅠ과 BamHⅠ 제한효소의 제한부위 사이에서 M13mp18과 M13mp19 파아지벡터내로 서브클론되어 있는 것이다.
  9. 제1,2,3,6,7 및 8항에 있어서, c-myc 종양형성유전자의 증폭도 및/또는 이 유전자에 해당되는 mRNA분자의 수를 결정하기 위하여, 시험용 탐침페어의 검출탐침과 포획탐침을 단독으로 또는 표준탐침 페어과 함께, 분할되지 않았거나 혹은 필요한 경우 분할되어 있는 핵산시료와 접촉시킴을 특징으로 하는 방법.
    전술한 검출탐침은 c-myc 유전자의 3.7kb HindⅢ-XbaⅠ 단편으로 구성된 제조합 플라스미드이면, 상기 단편은 Hind Ⅲ제한효소의 제한부위에서 pBR322 플라스미드 내로 서브클론되어 있는 것이다.
    포획탐침은 c-myc 유전자의 1.1kb Xba I-Pst I 단편으로 구성된 재조합파아지아며, 상기의 단편은 Xba I 및 Pst I 제한효소의 제한부위 사이에서 M13 mp10과 M13 mp11 벡터내로 서브클론되어 있는 것이다.
  10. 제1,2,3,6,7 및 8항에서 디하이드로 플레이트 리덕타아제 또는 DHFR 유전자의 증폭도 및/또는 이유전자에 해당되는 mRNA 분자의 수를 결정하기 위하여, 시험용 탐침페어의 검출탐침과 포획탐침을 단독으로 또는 표준 탐침페어와 함께, 분할되지 않았거나 혹은 필요한 경우 분할되어 있는 핵산시료와 접촉시킴을 특징으로 하는 방법.
    전술한 검출탐침은 pMTVdhfr 플라스미드의 DHFR 유전자로 코딩하기 위해 0.75kd Hind Ⅲ-BglⅡ 단편으로 구성시킨 제조합 플라스미드이고, 상기의 단편은
    HindⅢ 및 BamHⅠ 제한효소의 제한부위 사이에서 pAT153 플라스 미드백터로 서브클론되어 있는 것이다. 포획탐침은 pMTVdhfr 플라스미드 중 MMTV 유전자 부위의 1.4kb HindⅢ 단편으로 구성된 재조합파아지이며, 상기의 단편은 HindⅢ 제한효소의 제한부위에서 M13 mp18 및 M13 mp19 파아지벡터내로 서브클론되어 있는 것이다.
  11. 키트가 적어도 한가지 이상의 시험용 탐침페어와 적어도 한가지 이상의 표준 탐침페어를 포함하고, 시험용 탐침페어와 표준 탐침페어의 양쪽에 있어서 검출탐침과 포획탐침을 포함함을 특징으로 하는 정량용 시약키트.
    전술한 검출탐침은 적당한 표지로 표지된 것이고, 포획탐침은 적당한 담체에 고착되어 있거나 혹은 샌드위치교잡생성물의 분리가 가능한 물질에 포획탐침을 부착하기도 한다.
  12. 제 11항에서, c-myc 종양형성 유전자의 증폭도 및/또는 이 유전자에 해당되는 mRNA 분자의 수를 결정하는데 사용되는 시험용 탐침페어의 검출탐침이 c-myc 유전자의 3.7kb HindⅢ-XbaⅠ 제한단편으로 구성된 재조합 플라스미드(상기의 단편은 HindⅢ 제한효소의 제한부위에서 pBR322 플라스미드내로 서브클론되어 있는 것이다.)이고, 시험용 탐침페어의 포획탐침이 c-myc 유전자의 1.1kb Xba I-Pst I 단편으로 구성된 재조합 파아지(상기의 단편은 Xba I 과 Pst I 제한효소의 제한부위 사이에서 M13 mp10 및 M13 mp11 파아지 벡터내로 서브클론되어 있는 것이다.)이며,
    표준탐침페어의 검출탐침은 인간의 c-Ki-ras I 유전자의 HindⅢ 단편의 1.1kb BglⅡ-BglⅡ 단편 (상기의 HindⅢ 단편은 pBR322 플라스미드내로 클론되어 있는 것이고, BglⅡ-BglⅡ 단편은 BamH I 제한효소의 제한부위에서 pBR322 플라스미드내로 서브클론되어 있는 것이다.)이고, 표준탐침페어의 포획탐침은 c-Ki-ras I 유전자의 HindⅢ 단편 중 0.5kb BglⅡ-HindⅢ 단편으로 구성된 재조합 파아지(상기의 HindⅢ 단편은 c-Ki-ras I 유전자의 pBR322 플라스미드내로 서브클론되어 있는 것이고 BglⅡ-HindⅢ 단편은 BamH I 과 HindⅢ 제한효소의 제한부위 사이에서 M13 mp10과 M13 mp11파아지 벡터내로 서브클론되어 있는 것이다.)임을 특징으로 하는 시약키트.
  13. 제 11 항에서, 디하이드로폴레이트 리덕타아제 또는 DHFR 유전자의 증폭도 및/또는 이유전자에 해당되는 mRNA 분자의 수를 결정하는데 사용되는 시험용 탐침페어의 검출탐침이 pMTVdhfr 플라스미드의 DHFR 유전자로 코딩하기 위해 0.75kb HindⅢ-BglⅡ 단편으로 구성시킨 재조합 플라스미드(상기의 단편은 HindⅢ와 BamH I 제한효소의 제한부위 사이에서 pAT153 플라스미드벡터내로 서브클론되어 있는 것이다.)이고, 시험용 탐침페어의 포획탐침이 pMTVdhfr 플라스미드의 MMTV 유전자 부위의 1.4kb HindⅢ 단편으로 구성된 재조합 파아지(상기의 단편은 HindⅢ 제한효소의 제한부위에서 M13 mp18과 M13 mp19 파아지벡터 내로 서브클론되어 있는 것이다.)이며, 표준 탐침페어의 검출탐침은 마우스메탈로티오닌 유전자 중 프로모터 인자부위의 업스트립에서 유래한 1.2kb EcoR I-Kpn I 단편(상기의 단편은 EcoR I 과 HindⅢ
    제한효소의 제한부위 사이에서 pAT153 플라스미드내로 서브클론되어 있는 것이다.)이고, 표준탐침페어의 포획탐침은 메탈로 티오닌 유전자의 프로모터 인자 부위와 기 업스트립 부위에 의해 형성된 메탈로티오닌 유전자의 0.8kb Kpn I-Bgl Ⅱ 단편으로 구성되어 있는 재조합파아지(상기의 단편은 Kpn I과 BamH I 제한효소의 제한부위 사이에서 M13 mp18 과 M13 mp19 파아지벡터 내로 서브클론 되어 있는 것이다.)임을 특징으로 하는 시약키트.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
KR870001680A 1986-02-27 1987-02-26 핵산분자의 정량과 정량에 사용되는 시약키트 KR870008033A (ko)

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