KR20190093816A - 지질 나노입자 mRNA 백신 - Google Patents

지질 나노입자 mRNA 백신

Info

Publication number
KR20190093816A
KR20190093816A KR1020197014650A KR20197014650A KR20190093816A KR 20190093816 A KR20190093816 A KR 20190093816A KR 1020197014650 A KR1020197014650 A KR 1020197014650A KR 20197014650 A KR20197014650 A KR 20197014650A KR 20190093816 A KR20190093816 A KR 20190093816A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
protein
sequence
mrna
seq
uniprotkb
Prior art date
Application number
KR1020197014650A
Other languages
English (en)
Inventor
패트릭 바움호프
마리올라 포틴-믈렉제크
레지나 하이든라이히
마이클 제이. 호프
에디쓰 야스니
산드라 라짜로
파울로 지아 칭 린
요한스 루츠
바바라 뮈
벤자민 페트슈
수잔느 라우흐
킴 엘렌 슈벤트
잉 탐
Original Assignee
큐어백 아게
아퀴타스 테라퓨틱스 인크.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 큐어백 아게, 아퀴타스 테라퓨틱스 인크. filed Critical 큐어백 아게
Publication of KR20190093816A publication Critical patent/KR20190093816A/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/21—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates
    • A61K31/215—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids
    • A61K31/22—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acyclic acids, e.g. pravastatin
    • A61K31/23—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acyclic acids, e.g. pravastatin of acids having a carboxyl group bound to a chain of seven or more carbon atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/7105—Natural ribonucleic acids, i.e. containing only riboses attached to adenine, guanine, cytosine or uracil and having 3'-5' phosphodiester links
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/145—Orthomyxoviridae, e.g. influenza virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/385—Haptens or antigens, bound to carriers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/14—Esters of carboxylic acids, e.g. fatty acid monoglycerides, medium-chain triglycerides, parabens or PEG fatty acid esters
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6921—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere
    • A61K47/6927—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores
    • A61K47/6929—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores the form being a nanoparticle, e.g. an immuno-nanoparticle
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers
    • A61K9/1272—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers with substantial amounts of non-phosphatidyl, i.e. non-acylglycerophosphate, surfactants as bilayer-forming substances, e.g. cationic lipids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/5123—Organic compounds, e.g. fats, sugars
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C211/00—Compounds containing amino groups bound to a carbon skeleton
    • C07C211/01—Compounds containing amino groups bound to a carbon skeleton having amino groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C211/20—Compounds containing amino groups bound to a carbon skeleton having amino groups bound to acyclic carbon atoms of an acyclic unsaturated carbon skeleton
    • C07C211/21—Monoamines
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C219/00—Compounds containing amino and esterified hydroxy groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C219/02—Compounds containing amino and esterified hydroxy groups bound to the same carbon skeleton having esterified hydroxy groups and amino groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton
    • C07C219/04—Compounds containing amino and esterified hydroxy groups bound to the same carbon skeleton having esterified hydroxy groups and amino groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated
    • C07C219/06—Compounds containing amino and esterified hydroxy groups bound to the same carbon skeleton having esterified hydroxy groups and amino groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated having the hydroxy groups esterified by carboxylic acids having the esterifying carboxyl groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms of an acyclic saturated carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C219/00—Compounds containing amino and esterified hydroxy groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C219/02—Compounds containing amino and esterified hydroxy groups bound to the same carbon skeleton having esterified hydroxy groups and amino groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton
    • C07C219/04—Compounds containing amino and esterified hydroxy groups bound to the same carbon skeleton having esterified hydroxy groups and amino groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated
    • C07C219/08—Compounds containing amino and esterified hydroxy groups bound to the same carbon skeleton having esterified hydroxy groups and amino groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated having at least one of the hydroxy groups esterified by a carboxylic acid having the esterifying carboxyl group bound to an acyclic carbon atom of an acyclic unsaturated carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C229/00—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C229/02—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton
    • C07C229/04—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated
    • C07C229/06—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated having only one amino and one carboxyl group bound to the carbon skeleton
    • C07C229/10—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated having only one amino and one carboxyl group bound to the carbon skeleton the nitrogen atom of the amino group being further bound to acyclic carbon atoms or to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings
    • C07C229/16—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated having only one amino and one carboxyl group bound to the carbon skeleton the nitrogen atom of the amino group being further bound to acyclic carbon atoms or to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings to carbon atoms of hydrocarbon radicals substituted by amino or carboxyl groups, e.g. ethylenediamine-tetra-acetic acid, iminodiacetic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C233/00—Carboxylic acid amides
    • C07C233/01—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
    • C07C233/16—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms having the nitrogen atom of at least one of the carboxamide groups bound to a carbon atom of a hydrocarbon radical substituted by singly-bound oxygen atoms
    • C07C233/17—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms having the nitrogen atom of at least one of the carboxamide groups bound to a carbon atom of a hydrocarbon radical substituted by singly-bound oxygen atoms with the substituted hydrocarbon radical bound to the nitrogen atom of the carboxamide group by an acyclic carbon atom
    • C07C233/18—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms having the nitrogen atom of at least one of the carboxamide groups bound to a carbon atom of a hydrocarbon radical substituted by singly-bound oxygen atoms with the substituted hydrocarbon radical bound to the nitrogen atom of the carboxamide group by an acyclic carbon atom having the carbon atom of the carboxamide group bound to a hydrogen atom or to a carbon atom of an acyclic saturated carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C233/00—Carboxylic acid amides
    • C07C233/01—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
    • C07C233/34—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms having the nitrogen atom of at least one of the carboxamide groups bound to a carbon atom of a hydrocarbon radical substituted by amino groups
    • C07C233/35—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms having the nitrogen atom of at least one of the carboxamide groups bound to a carbon atom of a hydrocarbon radical substituted by amino groups with the substituted hydrocarbon radical bound to the nitrogen atom of the carboxamide group by an acyclic carbon atom
    • C07C233/36—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms having the nitrogen atom of at least one of the carboxamide groups bound to a carbon atom of a hydrocarbon radical substituted by amino groups with the substituted hydrocarbon radical bound to the nitrogen atom of the carboxamide group by an acyclic carbon atom having the carbon atom of the carboxamide group bound to a hydrogen atom or to a carbon atom of an acyclic saturated carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C255/00—Carboxylic acid nitriles
    • C07C255/01—Carboxylic acid nitriles having cyano groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C255/24—Carboxylic acid nitriles having cyano groups bound to acyclic carbon atoms containing cyano groups and singly-bound nitrogen atoms, not being further bound to other hetero atoms, bound to the same saturated acyclic carbon skeleton
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6018—Lipids, e.g. in lipopeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/70—Multivalent vaccine
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B82—NANOTECHNOLOGY
    • B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
    • B82Y5/00—Nanobiotechnology or nanomedicine, e.g. protein engineering or drug delivery
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C2601/00—Systems containing only non-condensed rings
    • C07C2601/12—Systems containing only non-condensed rings with a six-membered ring
    • C07C2601/14—The ring being saturated
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
    • C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
    • C12N2760/16134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
    • C12N2760/16211—Influenzavirus B, i.e. influenza B virus
    • C12N2760/16234—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/20011—Rhabdoviridae
    • C12N2760/20111—Lyssavirus, e.g. rabies virus
    • C12N2760/20134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

본 발명은 mRNA를 포함하는 지질 나노입자 및 이의 의학적 용도에 관한 것이다. 본 발명의 지질 나노입자는 화학식 I, II 또는 III에 따른 양이온성 지질 및/또는 화학식 IV에 따른 PEG 지질뿐만 아니라, 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물을 포함한다. 또한, 본 발명은 특히, 인플루엔자 또는 광견병 백신 접종과 관련하여, 백신 또는 의약으로서, 상기 지질 나노입자의 용도에 관한 것이다.

Description

지질 나노입자 mRNA 백신
본 발명은 mRNA 기반 백신으로서 유용한, mRNA를 포함하는 지질 나노입자에 관한 것이다. 추가적으로, 본 발명은 mRNA를 포함하는 지질 나노입자를 포함하는 조성물 및 예컨대, 감염성 질환, 종양 또는 암 질환, 알레르기 또는 자가면역 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한, 약학적 조성물, 특히, 백신의 제조를 위한 mRNA를 포함하는 지질 나노입자 또는 조성물의 용도에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 전술한 질환의 치료 또는 예방 방법을 기술한다.
유전자 치료 및 유전자 백신 접종은 현대 의학의 가장 전도유망하고 빠르게 발전 중인 방법에 속한다. 유전자 치료 및 유전자 백신 접종은 다양한 질환 치료법에 대해 고도로 특이적이고 개별적인 옵션을 제공할 수 있다.
유전자 백신 접종은 박테리아 표면의 특징적인 구성요소, 바이러스 입자, 종양 항원 등과 같은 선택된 항원에 대해 원하는 면역 반응을 일으킬 수 있게 한다. 대체로, 백신 접종은 현대 의학의 중추적인 성과 중 하나이다. 그러나 효과적인 백신은 현재 한정된 수의 질환에만 이용될 수 있다. 따라서, 백신 접종에 의해 예방할 수 없는 감염증은 여전히 매년 수백만 명의 사람들에게 영향을 미친다.
보통, 백신은 "1세대", "2세대" 및 "3세대" 백신으로 세분될 수 있다. "1세대" 백신은 전형적으로 전 유기체(whole-organism) 백신이다. 1세대 백신은 생 약독화 병원체 또는 사 병원체, 예컨대, 바이러스, 박테리아 등을 기반으로 한다. 생 약독화 백신의 주된 단점은 생명을 위협하는 변이체로 되돌아갈 위험이 있다는 점이다. 따라서, 이러한 병원체는 약독화되었기는 하나, 여전히 본질적으로는 예측 불가능한 위험을 안고 있다. 사 병원체는 특이적인 면역 반응 생성에 있어서 원하는 만큼 효과적이지 않을 수 있다. 이러한 위험을 최소화하기 위하여, "2세대" 백신이 개발되었다. 2세대 백신은 전형적으로, 한정된 항원 또는 병원체로부터 유래된 재조합 단백질 구성요소로 구성된 하위단위 백신이다.
유전자 백신, 즉, 유전자 백신 접종을 위한 백신은 보통 "3세대" 백신으로 이해된다. 유전자 백신은 전형적으로, 생체 내에서 병원체 또는 종양 항원에 대해 특징적인 펩티드 또는 단백질(항원) 단편의 발현을 가능하게 하는 유전자 조작 핵산 분자로 이루어진다. 유전자 백신은 환자에 투여 시, 표적 세포에 의한 흡수 후에 발현된다. 투여된 핵산의 발현은 암호화된 단백질의 생산을 가져온다. 이러한 단백질이 환자의 면역계에 의해 이물질로 인식되는 경우, 면역 반응이 촉발된다.
유전자 백신 접종의 맥락에서, DNA 뿐만 아니라 RNA도 투여를 위한 핵산 분자로서 이용될 수 있다. DNA는 상대적으로 안정적이고 다루기 용이하다고 알려져 있다. 그러나 DNA 이용은 손상된 유전자의 기능 상실에서와 같은 돌연변이 유발성 사건을 잠재적으로 초래하는 투여된 DNA 단편의 환자의 게놈 내로의 원치 않는 삽입 위험을 안고 있다. 추가적인 위험으로, 항-DNA 항체의 원치 않는 생성이 알려졌다. 또 다른 단점은 DNA 투여 시 암호화된 펩티드 또는 단백질의 달성 가능한 발현 수준이 제한된다는 점인데, 생성된 mRNA가 번역될 수 있기 전에 DNA가 전사되기 위하여 핵 내로 들어가야 하기 때문이다. 다른 이유 중에서도, 투여된 DNA의 발현 수준은 DNA 전사를 조절하는 특정 전사 인자의 존재에 의존할 것이다. 이러한 인자의 부존재 하에서는 DNA 전사는 만족스러운 양의 RNA를 생산하지 못할 것이다. 그 결과, 번역된 펩티드 또는 수득된 단백질의 수준은 제한된다.
유전자 백신 접종을 위해 DNA 대신 RNA를 이용함으로써, 원치 않는 게놈 통합 및 항-DNA 항체의 생성 위험은 최소화되거나 방지된다. 그러나 RNA는 편재하는 RN아제에 의해 용이하게 분해될 수 있는 상당히 불안정한 분자 종으로 여겨진다.
프로타민과 복합체를 이룬 항원-암호화 mRNA를 포함하는 mRNA 백신은 이미 선행 기술에 설명되어 있다(예컨대, Petsch et al., Nat Biotechnol. 2012 Dec;30(12):1210-6., Schnee al., PLoS Negl Trop Dis. 2016 Jun 23;10(6):e0004746., EP1083232, WO2010/037539, WO2012/116811, WO2012/116810, 및 WO2015/024665). 또한, WO2016/176330은 상이한 항원을 암호화하는 뉴클레오시드 변형 RNA를 포함하는 지질 나노입자 조성물을 기술하고 있다.
지난 수년간 많은 발전이 이루어졌음에도 적응 면역 반응을 유발할 수 있는 mRNA 백신 접종을 위한 효율적인 방법으로, 이때, 항원의 조기 분해 또는 세포에서의 mRNA의 비효율적인 방출로 인한 mRNA의 비효율적인 번역에 의해 투여가 심하게 손상되지 않는 방법을 제공할 필요성이 당해 분야에 여전히 남아 있다. 나아가, 잠재적인 안전성 우려를 감소시키기 위하여, 그리고 백신을 제3 세계에서 감당할 수 있게 하기 위하여, mRNA 백신의 용량을 감소시킬 필요가 절실하다.
생물학적 시스템에서 원하는 반응을 초래하기 위한 핵산 전달과 관련하여서는 문제가 많다. 백신과 같은 핵산 기반의 치료제는 엄청난 가능성이 있으나, 이 가능성을 실현하기 위해서는 세포 또는 유기체 내에서 적절한 부위로 핵산을 더욱 효과적으로 전달할 필요성이 여전하다.
그러나 치료적 맥락에서의 올리고뉴클레오티드의 사용은 현재 두 가지 문제와 직면하고 있다. 첫째, 유리 RNA는 혈장에서 뉴클레아제 소화에 취약하다. 둘째, 유리 RNA는 관련된 번역 기구가 상재하는 세포 내 구획에 접근하는 능력이 제한적이다. 중성 지질, 콜레스테롤, PEG, 페길화 지질 및 올리고뉴클레오티드와 같은 다른 지질 구성요소와 양이온성 지질로부터 형성된 지질 나노입자는 혈장에서 RNA의 분해를 차단하고 올리고뉴클레오티드의 세포 흡수를 촉진하는 데 이용되었다.
올리고뉴클레오티드의 전달을 위하여 개선된 양이온성 지질 및 지질 나노입자가 여전히 필요하다. 바람직하게는, 이러한 지질 나노입자는 최적의 약물:지질 비율을 제공하고, 혈청에서 분해 및 제거로부터 핵산을 보호하고, 전신 또는 국소 전달에 적합하며, 핵산의 세포 내 전달을 제공한다. 또한, 이러한 지질-핵산 입자는 내약성이 우수해야 하고, 적절한 치료 지수를 제공하여 유효한 용량의 핵산으로의 환자 치료가 허용할 수 없는 독성 및/또는 환자에 대한 위험과 관련이 없어야 한다. 본 발명은 이러한 장점 및 관련된 장점을 제공한다.
본 발명은 mRNA를 포함하는 지질 나노입자, 또는 상기 나노입자를 포함하는 약학적 조성물 및 이의 용도를 제공한다. 본 발명에 따른 mRNA를 포함하는 지질 나노입자는
(i) 화학식 I을 갖는 양이온성 지질:
[화학식 I]
Figure pct00001
또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 호변이성체 또는 입체이성질체(화학식에서, R1a, R1b, R2a, R2b, R3a, R3b, R4a, R4b, R5, R6, R7, R8, R9, L1, L2, a, b, c, d 및 e는 본 설명에 정의된 바와 같음);
및 또는
화학식 II를 갖는 양이온성 지질:
[화학식 II]
Figure pct00002
또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 호변이성체, 전구약물 또는 입체이성질체(화학식에서, R1a, R1b, R2a, R2b, R3a, R3b, R4a, R4b, R5, R6, R7, R8, R9, L1, L2, G1, G2, G3, a, b, c 및 d는 본 설명에 정의된 바와 같음);
및/또는 바람직하게는
화학식 III을 갖는 양이온성 지질:
[화학식 III]
Figure pct00003
또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 호변이성체, 전구약물 또는 입체이성질체(화학식에서, R1 , R2 , R3, L1, L2, G1, G2 및 G3은 본 설명에 정의된 바와 같음);
및/또는 화학식 IV를 갖는 PEG 지질
[화학식 IV]
Figure pct00004
(화학식에서, R8 및 R9는 각각 독립적으로 10개 내지 30개의 탄소 원자를 함유하는 직선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 알킬 사슬로, 이 알킬 사슬은 선택적으로 1개 이상의 에스테르 결합에 의해 중단되고;
w는 30 내지 60 범위의 평균값을 가짐);
및 선택적으로 중성 지질 및/또는 스테로이드 또는 스테로이드 유사체를 포함하며, 이때, 이 mRNA 화합물은 상기 지질 나노입자에 캡슐화되거나 상기 나노입자와 회합된다.
또한, 본 발명은 상기 지질 나노입자를 포함하는 약학적 조성물 및 상기 나노입자의 제조 방법을 제공한다. 추가적인 양태에서, 본 발명은 지질 나노입자 또는 이를 포함하는 약학적 조성물의 의학적 용도에 관한 것이다.
추가적인 양태에서, 본 발명은 상기 mRNA를 포함하는 지질 나노입자를 이용하는 의학적 예방 또는 치료 방법에 관한 것이다.
정의
명확성 및 가독성을 위해, 다음의 과학적 배경 정보 및 정의가 제공된다. 이에 의해 개시된 임의의 기술적 특징은 본 발명의 각각의 모든 구현예의 일부일 수 있다. 추가적인 정의 및 설명은 이러한 개시의 맥락에서 제공될 수 있다.
달리 정의되지 않는 한, 또는 특정한 문맥이 달리 요구하지 않는 한, 본 설명에 사용된 모든 기술 용어는 당업자가 일반적으로 이해하는 바와 동일한 의미를 갖는다.
문맥이 달리 지시하거나 요구하지 않는 한, 단어 "포함하다", "포함한다" 및 "포함하는" 및 유사한 표현은 본 명세서 및 청구범위에서 "포함하나, 이에 한정되지 않는"으로서, 개방적이고 포괄적인 의미로 해석되어야 한다.
표현 "일 구현예", "구현예", "특정 구현예" 등은 특정한 특징, 성질 또는 특성, 또는 특정한 특징, 성질 또는 특성의 그룹 또는 조합이, 각각의 표현과 조합되어 지칭하는 바와 같이, 본 발명의 구현예 중 적어도 하나에 존재함을 의미한다. 본 명세서 전반에 걸쳐 다양한 곳에서 이러한 표현이 나타날 때, 이는 반드시 동일한 구현예를 지칭하는 것은 아니다. 또한, 특정한 특징, 성질 또는 특성은 1개 이상의 구현예에서 임의의 적합한 방식으로 조합될 수 있다.
단수 형태 "a", "an" 및 "the"는 문맥이 명확하게 달리 지시하지 않는 한, 복수의 언급 대상을 포함하는 것으로 이해되어야 한다.
수의 맥락에서 백분율은 각 항목의 총 수를 기준으로 이해되어야 한다. 다른 경우에서, 그리고 문맥이 달리 지시하지 않는 한, 백분율은 중량 기준 백분율(중량%)로 이해되어야 한다.
본 발명의 맥락에서, "조성물"은 소정의 성분들이, 선택적으로 임의의 추가적인 성분들과 함께, 대개 적어도 1종의 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제와, 혼입될 수 있는 임의의 유형의 조성물을 지칭한다. 따라서, 조성물은 분말 또는 과립과 같은 건조 조성물, 또는 동결건조 형태 또는 정제와 같은 고체 단위체일 수 있다. 대안적으로, 조성물은 액체 형태일 수 있고, 각각의 성분은 독립적으로 용해되거나 분산된(예컨대, 현탁 또는 유화된) 형태로 혼입될 수 있다. 바람직한 구현예 중 하나에서, 조성물은 수성 액체 담체로 재구성하기 위한 분말 또는 동결건조 형태와 같은 멸균 고체 조성물로서 제형화된다. 이러한 제형은 또한, 아래에서 더욱 상세히 설명되는 핵산 카고를 포함하는 조성물의 이러한 버전에 바람직하다.
본 설명에 사용된 "화합물"은 본질적으로 동일한 화학적 구조 및 성질을 갖는 분자로 구성된 물질인 화학 물질을 의미한다. 소분자 화합물의 경우, 이 분자는 이들의 원자 조성 및 구조적 배치와 관련하여 전형적으로 동일하다. 거대분자 또는 폴리머 화합물의 경우, 화합물의 분자는 매우 유사하지만 모든 분자가 반드시 동일한 것은 아니다. 예를 들어, 50개의 모노머 단위체로 구성되도록 지정된 폴리머의 세그먼트는 예를 들어, 48개 또는 53개 모노머 단위체를 갖는 개별 분자를 함유할 수도 있다.
간단히 리피도이드라고도 지치되는 리피도이드 화합물은 지질 유사 화합물, 즉 지질 유사 물리적 성질을 갖는 양친매성 화합물이다. 본 발명의 맥락에서, 용어 지질은 리피도이드를 포함한다고 간주된다.
다른 의미가 특정 문맥으로부터 명백하지 않는 한, 용어 "양이온성"은 각각의 구조체가 영구적으로 또는 영구적이지는 않지만 pH와 같은 특정 조건에 반응하여, 양의 하전을 갖는 것을 의미한다. 따라서, 용어 "양이온성"은 "영구적인 양이온성" 및 "양이온화 가능" 둘 다를 포함한다.
본 설명에 사용된 "영구적인 양이온성"은 각 화합물, 또는 기 또는 원자가 그 환경의 임의의 pH 값 또는 수소 이온 활성도에서 양으로 하전된 것을 의미한다. 전형적으로, 양전하는 4차 질소 원자의 존재에 기인한다. 화합물이 복수의 그러한 양전하를 보유하는 경우, 이는 영구적인 양이온성의 하위 카테고리인 영구적인 폴리양이온성으로 지칭될 수 있다.
양이온성 구성요소/화합물: 용어 "양이온성 구성요소/화합물"은 전형적으로 약 1 내지 9의 pH 값에서 양으로 하전된(양이온인) 하전 분자를 전형적으로 지칭한다. 일부 구현예에서, 양이온성 구성요소/화합물은 바람직하게는 9 이하(예컨대, 5 내지 9), 8 이하(예컨대, 5 내지 8), 7 이하(예컨대, 5 내지 7)의 pH에서 하전되며, 가장 바람직하게는 생리학적 pH 값, 예컨대, 약 7.3 내지 7.4에서 하전된다. 따라서, 본 발명의 일 구현예에 따른 양이온성 펩티드, 단백질, 다당류, 지질 또는 폴리머는 생리학적 조건 하에서, 특히 생체 내에서 세포의 생리학적 염 조건 하에서, 양으로 하전된다. 또 다른 바람직한 구현예에서, 본 발명에 따른 지질 나노입자, 양이온성 펩티드, 단백질, 다당류, 지질 또는 폴리머는 생리적인 조건 하에서, 특히 생체 내에서 세포의 생리학적 염 조건 하에서, 하전되지 않거나, 중성 전하를 갖거나 각각 전기적으로 중성이다. 양이온성 펩티드 또는 단백질은 바람직하게는 다른 아미노산 잔기보다 더 많은 수의 양이온성 아미노산, 예컨대, 더 많은 수의 Arg, His, Lys 또는 Orn을 함유(특히, Asp 또는 Glu 같은 음이온성 아미노산보다 많은 양이온성 아미노산을 함유)하거나 대부분 양이온성 아미노산 잔기로 형성된 블록을 함유한다. 표현 "양이온성"은 또한, "폴리양이온성" 구성요소/화합물을 지칭할 수 있다.
양이온성 구성요소/화합물은 또한, 양으로 하전될 수 있는 양이온성 지질을 지칭할 수 있다. 예시적인 양이온성 지질은 양전하를 보유하는 1개 이상의 아민 기를 포함한다. 바람직한 양이온성 지질은 pH에 따라 양으로 하전되거나 중성 형태로 존재할 수 있도록 이온화될 수 있다. 양이온성 지질의 이온화는 상이한 pH 조건 하에서 지질 나노입자(LNP)의 표면 전하에 영향을 미친다. 이 전하 상태는 혈장 단백질 흡수, 혈액 클리어런스(blood clearance) 및 조직 분포에 영향(Semple, S.C., et al., Adv. Drug Deliv Rev 32:3-17 (1998))뿐만 아니라, 핵산의 세포 내 전달에 매우 중요한 비-이중층 구조를 형성하는 능력(Hafez, I.M., et al., Gene Ther 8:1188-1196 (2001))에도 영향을 미칠 수 있다. 다른 곳에서 설명된 바와 같이, 제형화된 양이온성 지질의 pKa는 핵산 전달을 위한 LNP의 효율성과 관련이 있다(Jayaraman et al, Angewandte Chemie, International Edition (2012), 51(34), 8529-8533; Semple et al, Nature Biotechnology 28, 172-176 (2010) 참조). 본 발명의 일부 구현예에서, 바람직한 pKa의 범위는 약 5 내지 약 7이다.
이러한 맥락에서, 접두사 "폴리-"는 화합물의 각각의 성질을 갖는 복수의 원자 또는 기를 지칭한다. 괄호 안에 표시된 경우, 복수의 존재는 선택적이다. 예를 들어, (폴리)양이온성은 양이온성 및/또는 폴리양이온성을 의미한다. 그러나 접두어 없음이 복수를 배제하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 예를 들어, 폴리양이온성 화합물은 또한, 양이온성 화합물이며, 그렇게 지칭될 수 있다.
"양이온화 가능"은 화합물, 또는 기 또는 원자가 낮은 pH에서 양으로 하전되고, 그 환경의 보다 높은 pH에서는 하전되지 않음을 의미한다. 또한, pH 값이 결정될 수 없는 비-수성 환경에서, 양이온화 가능 화합물, 기 또는 원자는 높은 수소 이온 농도에서 양으로 하전되고, 낮은 농도 또는 활성도의 수소 이온에서는 하전되지 않는다. 이는 양이온화 가능 또는 폴리양이온화 가능 화합물의 개별적인 성질, 특히 각각의 양이온화 가능 기 또는 원자의 하전되거나 하전되지 않는 pH 또는 수소 이온 농도인 pKa에 달려 있다. 희석된 수성 환경에서, 양전하를 띠는 양이온화 가능 화합물, 기 또는 원자의 분율은 당업자에게 잘 알려져 있는 소위 핸더슨-하셀바흐 방정식(Henderson-Hasselbalch equation)을 이용하여 평가될 수 있다.
예를 들어, 일부 구현예에서, 화합물 또는 모이어티가 양이온화 가능한 경우, 약 1 내지 9, 바람직하게는 4 내지 9, 5 내지 8 또는 심지어 6 내지 8의 pH 값, 더욱 바람직하게는 9 이하, 8 이하, 7 이하의 pH 값, 가장 바람직하게는 생리학적 pH 값, 예컨대 약 7.3 내지 7.4, 즉 생리학적 조건 하에서, 특히 생체 내에서 세포의 생리학적 염 조건 하에서, 양으로 하전되는 것이 바람직하다. 다른 구현예에서, 양이온화 가능 화합물 또는 모이어티는 생리학적 pH 값, 예컨대, 약 7.0 내지 7.4에서 대부분 중성이지만, 더 낮은 pH 값에서는 양으로 하전되는 것이 바람직하다. 일부 구현예에서, 양이온화 가능 화합물 또는 모이어티의 바람직한 pKa 범위는 약 5 내지 약 7이다.
핵산: 용어 핵산은 임의의 DNA 분자 또는 RNA 분자를 의미한다. 이 용어는 폴리뉴클레오티드 및/또는 올리고뉴클레오티드에 이용될 수 있다. 본 설명에서 특정 단백질 및/또는 펩티드를 암호화하는 핵산 또는 핵산 서열이 언급되는 경우, 상기 핵산 또는 핵선 서열은 각각, 바람직하게는 적합한 숙주, 예컨대, 인간에서 그것의 발현, 즉, 특정 단백질 또는 펩티드를 암호화하는 핵산 서열의 전사 및/또는 번역을 가능하게 하는 조절 서열도 포함한다.
뉴클레오시드 변형: 본 발명의 맥락에서, 용어 뉴클레오시드 변형은 보통은 mRNA의 일부분이 아닌 뉴클레오시드, 바람직하게는 비-천연 뉴클레오시드를 포함하는 mRNA 분자 또는 화합물을 지칭한다. 특히, 이 용어는 바람직하게는 아데닌, 구아닌, 시토신, 우라실 및 일부 경우, 티민 이외의 mRNA 뉴클레오시드를 지칭한다.
펩티드: 펩티드는 적어도 2종의 아미노산 모노머로 구성된 올리고머 또는 폴리머이다. 보통 모노머는 펩티드 결합에 의해 연결된다. 용어 "펩티드"는 아미노산의 폴리머 사슬의 길이를 제한하지 않는다. 본 발명의 일부 구현예에서, 펩티드는 예를 들어, 50개 미만의 모노머 단위체를 함유할 수 있다. 전형적으로 50 내지 600개 모노머 단위체, 더욱 구체적으로는 50 내지 300개 모노머 단위체를 갖는 더 긴 펩티드 또한, 폴리펩티드라고 지칭된다.
단백질: 단백질은 전형적으로 3차원 형태 안으로 접힌 1종 이상의 펩티드 및/또는 폴리펩티드로 구성되어 생물학적 기능을 촉진한다.
유행성 인플루엔자 또는 유행성 독감: 유행성 인플루엔자는 비-인간의 (신규한) 인플루엔자 바이러스가 효율적이고 지속적인 인간 대 인간 전파 능력을 얻은 다음 전 세계적으로 확산될 때 발생할 수 있다. 전 세계적 유행병을 초래할 가능성이 있는 인플루엔자 바이러스는 "유행병 가능성이 있는 인플루엔자 바이러스" 또는 "유행성 인플루엔자 바이러스"라 지칭된다.
유행병 가능성이 있는 인플루엔자 바이러스의 예로 조류 인플루엔자 A(H5N1) 및 조류 인플루엔자 A(H7N9)가 포함되는데, 이들은 2종의 상이한 "조류 독감" 바이러스이다. 이들은 비-인간 바이러스(즉, 인간들 사이에서는 신규하며, 전 세계 일부에서 조류 사이에 돈다)여서 사람들 사이에서는 이들 바이러스에 대한 면역력이 거의 또는 전혀 없다. 이들 바이러스로의 인간 감염은 거의 발생하지 않았지만, 이들 바이러스 중 어느 하나가 쉽게 인간을 감염시켜 사람에서 사람으로 쉽게 확산될 수 있는 방식으로 바뀌게 되었을 경우, 유행성 인플루엔자가 발생할 수 있었다.
유행성 인플루엔자/독감을 위한 백신 또는 유행성 인플루엔자/독감 백신: 유해성 인플루엔자 바이러스를 대상으로 한 백신은 본 설명에서 유행성 인플루엔자/독감을 위한 백신 또는 유행성 인플루엔자/독감 백신으로 지칭된다.
독감/인플루엔자 계절: 독감 계절은 인플루엔자(독감) 발병이 널리 퍼지는 것을 특징으로 하는, 매년 반복되는 기간이다. 이 계절은 각 반구에서 그 해의 추운 반기 중에 발생한다. 인플루엔자 활성은 때때로 예측될 수 있고, 심지어 지리적으로 추적될 수 있다. 각 계절에서 주요 독감 활성의 개시는 장소에 따라 다르지만, 임의의 특정 장소에서는 이러한 가벼운 전염병은 피크까지 대개 약 3주가 소요되고, 유의미하게 감소되기까지 3주 더 소요된다. 독감 백신 접종은 독감 계절의 영향을 감소시키는 데 사용되었다; 폐렴 백신 접종은 독감 계절의 영향 및 합병증을 추가적으로 감소시킨다. 북반구와 남반구는 연중 다른 시기에 겨울이 있으므로, 실제로는 매년 두 번의 독감 계절이 있다.
계절성 인플루엔자/독감을 위한 백신 또는 계절성 인플루엔자/독감 백신: 독감 계절에 계절성으로 발생하는 인플루엔자 바이러스를 대상으로 한 백신은 본 설명에서 "계절성 인플루엔자/독감을 위한 백신 또는 계절성 인플루엔자/독감 백신"으로 지칭된다.
면역계: 면역계는 감염으로부터 유기체를 보호할 수 있다. 병원체가 유기체의 물리적 장벽을 뚫고 이 유기체로 들어가면, 선천적 면역계는 즉각적이지만, 특이적이지 않은 반응을 제공한다. 병원체가 이 선척적인 반응을 피한다면, 척추동물은 제2의 보호층인 적응 면역계를 가지고 있다. 여기서, 면역계는 감염 중에 그것의 반응을 적응시켜 병원체 인식을 향상시킨다. 그런 다음, 이 향상된 반응을 병원체가 제거된 후에 면역학적 기억의 형태로 보유하여, 이 병원체를 대면할 때마다 적응 면역계가 더 빠르고 더 강한 공격을 시작할 수 있게 한다. 이것에 따르면, 면역계는 선천적 면역계와 적응 면역계를 포함한다. 이 두 부분 각각은 소위 체액성 구성요소와 세포성 구성요소를 함유한다.
면역 반응: 면역 반응은 전형적으로 특정 항원에 대한 적응 면역계의 특이적 반응(소위 특이적 또는 적응 면역 반응) 또는 선천적 면역계의 비특이적 반응(소위 비특이적 또는 선천적 면역 반응)일 수 있다. 본 발명은 적응 면역계의 특이적 반응(적응 면역 반응)의 중심과 관련이 있다. 특히, 그것은 예컨대, 인플루엔자 바이러스 같은 바이러스에 의한 감염에 대한 적응 면역 반응에 관한 것이다. 그러나 이 특이적 반응은 추가적인 비특이적 반응(선천적 면역 반응)에 의해 뒷받침될 수 있다. 따라서, 본 발명은 또한, 효율적인 적응 면역 반응을 유발하기 위하여 선천적 및 적응 면역계의 동시 자극을 위한 화합물에 관한 것이다.
적응 면역계: 적응 면역계는 병원체 생장을 제거 또는 방지하는 매우 특수화된, 전신 세포(systemic cells) 및 과정으로 구성된다. 적응 면역 반응은 (면역을 발생시키는) 특이적 병원체를 인식 및 기억하고 병원체를 맞닥뜨릴 때마다 강한 공격을 시작하는 능력이 있는 척추동물 면역계를 제공한다. 이 면역계는 체세포 초돌연변이(증가된 빈도의 체세포 돌연변이 과정) 및 V(D)J 재조합(항원 수용체 유전자 세그먼트의 비가역적 유전적 재조합)으로 인해 적응성이 매우 높다. 이 메커니즘은 소수의 유전자가 방대한 수의 상이한 항원 수용체를 생성할 수 있게 하는데, 이러한 상이한 항원 수용체는 이후 각각의 개별적인 림프구에서 독특하게 발현된다. 유전자 재배열은 각 세포의 DNA에 비가역적 변화를 일으키기 때문에, 오래 지속되는 특이적 면역의 핵심인 기억 B 세포 및 기억 T 세포를 포함하는, 그 세포의 자손(후손) 모두는 이후 동일한 수용체 특이성을 암호화하는 유전자를 물려받게 된다. 면역 네트워크 이론은, T 세포, B 세포의 수용체의 가변 부위와, 가변 부위를 갖는 T 세포 및 B 세포에 의해 만들어진 분자 사이의 상호 작용에 기초하는, 적응 면역계가 어떻게 작동하는지에 대한 이론이다.
적응 면역 반응: 적응 면역 반응은 전형적으로 항원 특이적인 것으로 이해된다. 항원 특이성은 특이적 항원, 병원체 또는 병원체 감염 세포에 맞춘 반응의 발생을 허용한다. 이러한 맞춤형 반응을 시작하는 능력은 "기억 세포"에 의해 신체 내에서 유지된다. 병원체가 신체를 2회 이상 감염시키면, 이러한 특이적 기억 세포는 그것을 신속하게 제거하는 데 사용된다. 이러한 맥락에서, 적응 면역 반응의 첫 번째 단계는 미감작 항원 특이적 T 세포 또는 항원 제시 세포에 의한 항원 특이적 면역 반응을 유도할 수 있는 다른 면역 세포의 활성화이다. 이는 미감작 T 세포가 지속적으로 통과하는 림프 조직 및 기관에서 일어난다. 항원 제시 세포로서 역할을 할 수 있는 세포 유형은 특히 수상돌기세포, 대식세포, 및 B 세포이다. 이들 세포 각각은 면역 반응 유도에 있어서 별도의 기능을 갖는다. 수상돌기세포는 식균작용 및 대음세포작용에 의해 항원을 흡수하고, 예컨대, 외래 항원과의 접촉에 의해 자극되어 국소 림프 조직으로 이동하며, 그곳에서 성숙 수상돌기세포로 분화한다. 대식세포는 박테리아 같은 미립자 항원을 섭취하고, 감염체 또는 기타 적절한 자극에 의해 유도되어 MHC 분자를 발현한다. 수용체를 통해 가용성 단백질 항원에 결합 및 내재화하는 B 세포의 고유한 능력 또한, T 세포 유도에 중요할 수 있다. MHC 분자 상 항원의 제시는 T 세포의 활성화를 초래하고, 이는 무장(armed) 작동 T 세포로의 증식 및 분화를 유도한다. 작동 T 세포의 가장 중요한 기능은, 함께 세포 매개성 면역을 구성하는 CD8+ 세포독성 T 세포에 의한 감염 세포의 사멸 및 Th1 세포에 의한 대식세포의 활성화, 및 상이한 부류의 항체를 생산하여 체액성 면역 반응을 일으키는, Th2 및 Th1 세포에 의한 B 세포의 활성화이다. T 세포는 T 세포 수용체에 의해 항원을 인식하는데, T 세포 수용체는 항원을 직접적으로 인식하고 결합하지는 못하지만, 대신 다른 세포 표면 상의 MHC 분자에 결합된, 예를 들어, 병원체 유래 단백질 항원의, 짧은 펩티드 단편은 인식한다.
세포 면역/세포 면역 반응: 세포 면역은 전형적으로 대식세포, 자연살해 세포(NK), 항원 특이적 세포독성 T 림프구의 활성화, 그리고 항원에 대한 다양한 사이토카인의 방출과 관련이 있다. 더욱 일반적인 의미에서, 세포 면역은 항체와 관련은 없으나 면역계의 세포 활성화와 관련이 있다. 세포 면역 반응은 예를 들어, 바이러스 감염된 세포, 세포 내 박테리아가 있는 세포, 및 종양 항원을 디스플레이하는 암 세포와 같이, 표면 상에 항원의 에피토프를 디스플레이하는 신체 세포에서 세포자멸사를 유도할 수 있는 항원 특이적 세포독성 T 림프구의 활성화; 대식세포 및 자연살해 세포의 활성화 및 그에 의한 병원체 파괴; 및 세포의 자극으로 인한, 적응 면역 반응 및 선천적 면역 반응에 관련된 다른 세포 기능에 영향을 미치는 다양한 사이토카인의 방출을 특징으로 한다.
체액 면역/체액 면역 반응: 체액 면역은 전형적으로 항체 생산 및 이에 동반될 수 있는 부가적인 과정을 지칭한다. 체액 면역 반응은 전형적으로 예를 들어 Th2 활성화 및 사이토카인 생산, 배 중심 형성 및 동형 변환, 친화도 성숙 및 기억 세포 생성을 특징으로 할 수 있다. 체액 면역은 또한, 전형적으로 병원체 및 독소 중화, 전형적 보체 활성화, 및 식균작용의 옵소닌 촉진 및 병원체 제거를 포함하는, 항체의 이펙터 기능을 지칭할 수 있다.
선천적 면역계: 비특이적 면역계로도 알려져 있는 선천적 면역계는 비특이적인 방식으로 다른 유기체에 의한 감염으로부터 숙주를 방어하는 세포 및 메커니즘을 포함한다. 이는 선천적 면역계의 세포가 일반적으로 병원체를 인식하고 반응함을 의미하지만, 적응 면역계와는 달리, 오래 지속되는 면역이나 방어적인 면역을 숙주에 부여하지는 않는다. 선천적 면역계는 예를 들어 병원체 관련 분자 패턴(PAMP) 수용체, 예를 들어 Toll 유사 수용체(TLR)의 리간드 또는 기타 보조 물질, 예컨대, 리포다당류, TNF-알파, CD40 리간드, 또는 사이토카인, 모노카인, 림포카인, 인터루킨 또는 케모카인, IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-12, IL-13, IL-14, IL-15, IL-16, IL-17, IL-18, IL-19, IL-20, IL-21, IL-22, IL-23, IL-24, IL-25, IL-26, IL-27, IL-28, IL-29, IL-30, IL-31, IL-32, IL-33, IFN-알파, IFN-베타, IFN-감마, GM-CSF, G-CSF, M-CSF, LT-베타, TNF-알파, 성장 인자, 및 hGH, 인간 Toll 유사 수용체 TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, TLR9, TLR10의 리간드, 뮤린 Toll 유사 수용체 TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, TLR9, TLR10, TLR11, TLR12 또는 TLR13의 리간드, NOD 유사 수용체의 리간드, RIG-I 유사 수용체의 리간드, 면역 자극성 핵산, 면역 자극성 RNA(isRNA), CpG-DNA, 항생제, 또는 항바이러스제에 의해 활성화될 수 있다. 전형적으로 선천적 면역계의 반응은 사이토카인으로 불리는 특수한 화학 조절자를 포함하는, 화학적 인자의 생산을 통한, 감염 부위로의 면역 세포 소집; 보체 캐스케이드의 활성화; 특수한 백혈구에 의한, 기관, 조직, 혈액 및 림프에 존재하는 외래 물질의 확인 및 제거; 항원 제시로 알려져 있는 과정을 통한 적응 면역계의 활성화; 및/또는 감염체에 대한 물리적 및 화학적 장벽으로의 작용을 포함한다.
항원보강제/항원보강제 구성요소: 넓은 의미의 항원보강제 또는 항원보강제 구성요소는 전형적으로 약물 또는 백신과 같은 다른 작용제의 효과를 변경, 예를 들어 증진시킬 수 있는 (예컨대, 약물학적 또는 면역학적) 작용제 또는 조성물이다. 통상적으로 이 용어는 본 발명의 맥락에서 면역원 및/또는 다른 약학적으로 활성인 화합물에 대한 담체 또는 보조 물질로 작용하는 화합물 또는 조성물을 지칭한다. 이는 넓은 의미로 해석되며 당해 항원보강제에 혼입되거나 이와 함께 공동 투여된 항원의 면역원성을 증가시킬 수 있는 넓은 범위의 물질을 지칭한다. 본 발명의 맥락에서 항원보강제는 바람직하게는 본 발명의 활성 작용제의 특정한 면역원성 효과를 증진시킬 것이다. 전형적으로 "항원보강제" 또는 "항원보강제 구성요소"는 동일한 의미를 가지며 공통으로 사용될 수 있다. 항원보강제는 예를 들어, 면역 강화제, 항원 전달 시스템 또는 심지어 이의 조합으로 나뉠 수 있다.
용어 "항원보강제"는 전형적으로 그 자체에 의해 면역을 부여하는 작용제는 포함하지 않는 것으로 이해된다. 항원보강제는 예를 들어, 면역계에 대한 항원 제시 촉진 또는 비특이적 선천적 면역 반응 유도에 의해, 비특이적으로 면역계를 보조하여 항원 특이적 면역 반응을 증진시킨다. 나아가, 항원보강제는 바람직하게는, 예를 들어 우세한 Th2 기반의 항원 특이적 반응을 Th1 기반의 항원 특이적 반응으로 더 이동시키거나 그 반대로 함으로써, 항원 특이적 면역 반응을 예를 들어, 조절할 수 있다. 따라서, 항원보강제는 바람직하게 사이토카인 발현/분비, 항원 제시, 면역 반응의 타입 등을 조절할 수 있다.
면역자극성 RNA: 본 발명의 맥락에서 면역 자극성 RNA(isRNA)는 전형적으로 그 자체로 선천적 면역 반응을 유도할 수 있는 RNA일 수 있다. 그것은 보통 오픈 리딩 프레임을 갖지 않으며 따라서, 펩티드-항원 또는 면역원을 제공하지는 않으나, 예를 들어 특정 종류의 Toll 유사 수용체(TLR) 또는 다른 적절한 수용체와 결합하여, 선천적 면역 반응을 유도한다. 그러나 물론, 오픈 리딩 프레임을 가지며 펩티드/단백질(예를 들어 항원 기능)을 암호화하는 mRNA 또한, 선천적 면역 반응을 유도할 수 있다.
항원: 본 발명의 맥락에서, "항원"은 전형적으로, 면역계에 의해, 바람직하게는 적응 면역계에 의해 인지될 수 있고, 예를 들어 적응 면역 반응의 일부로 항체 및/또는 항원 특이적 T 세포의 형성을 통해, 항원 특이적 면역 반응을 촉발시킬 수 있는 물질을 지칭한다. 전형적으로, 항원은 MHC에 의해 T 세포에 제시될 수 있는 펩티드 또는 단백질일 수 있거나 이를 포함할 수 있다. 본 발명의 의미에서, 항원은 제공된 핵산 분자, 바람직하게는 본 설명에 정의된 바와 같은 mRNA의 번역의 산물일 수 있다. 이러한 맥락에서, 또한, 적어도 하나의 에피토프를 포함하는 펩티드 및 단백질의 단편, 변이체 및 유도체는 항원으로 이해된다.
에피토프("항원 결정기"로도 지칭됨): 본 발명의 맥락에서 단백질의 T 세포 에피토프 또는 일부는 바람직하게는 약 6개 내지 약 20개 또는 훨씬 더 긴 아미노산 길이를 갖는 단편, 예컨대, 바람직하게는 약 8개 내지 약 10개 아미노산, 예를 들어 8개, 9개, 또는 10개, (또는 심지어 11개, 또는 12개 아미노산)의 길이를 갖는, MHC 클래스 I 분자에 의해 가공되고 제시된 단편, 또는 바람직하게는 약 13개 이상의 아미노산, 예를 들어 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개, 20개 또는 훨씬 더 긴 아미노산 길이를 갖는, MHC 클래스 II 분자에 의해 가공되고 제시된 단편을 포함할 수 있는데, 이때, 이들 단편은 아미노산 서열의 임의의 일부로부터 선택될 수 있다. 이들 단편은 전형적으로 펩티드 단편 및 MHC 분자로 구성된 복합체의 형태로 T 세포에 의해 인식된다.
B 세포 에피토프는 전형적으로, 바람직하게는 5개 내지 15개 아미노산을 갖는, 더욱 바람직하게는 5개 내지 12개 아미노산을 갖는, 휠씬 더 바람직하게는 6개 내지 9개 아미노산을 갖는, 본 설명에서 정의된 바와 같은 (천연) 단백질 또는 펩티드 항원의 외부 표면에 위치한 단편으로, 그의 천연 형태로 항체에 의해 인식될 수 있다.
이러한 단백질 또는 펩티드의 에피토프는 나아가 이러한 단백질 또는 펩티드의 본 설명에서 언급된 임의의 변이체로부터 선택될 수 있다. 이러한 맥락에서, 항원 결정기는, 본 설명에 정의된 단백질 또는 펩티드의 아미노산 서열에서는 불연속적이지만 3차원 구조에서는 함께 합쳐지는 본 설명에 정의된 단백질 또는 펩티드의 세그먼트로 구성된 입체형태적 또는 불연속적 에피토프, 또는 단일 폴리펩티드 사슬로 구성된 연속적 또는 선형 에피토프일 수 있다.
백신: 백신은 전형적으로 적어도 하나의 항원 또는 항원 기능을 제공하는 예방 또는 치료 물질로 이해된다. 항원 또는 항원 기능은 신체의 적응 면역계를 자극하여 적응 면역 반응을 제공할 수 있다.
항원 제공 mRNA: 본 발명의 맥락에서 항원 제공 mRNA는 전형적으로 mRNA와 함께 제공되는 세포 또는 유기체에 의해 번역될 수 있는 적어도 하나의 오픈 리딩 프레임을 갖는 mRNA일 수 있다. 이 번역의 산물은 항원, 바람직하게 면역원으로 작용할 수 있는 펩티드 또는 단백질이다. 이 산물은 또한, 둘 이상의 면역원으로 이루어진 융합 단백질, 예를 들어 동일하거나 상이한 바이러스 단백질로부터 유래된 둘 이상의 에피토프, 펩티드 또는 단백질로 이루어지는 융합 단백질일 수 있고, 이때, 이 에피토프, 펩티드 또는 단백질은 링커 서열에 의해 연결될 수 있다.
인공 mRNA (서열): 인공 mRNA (서열)은 전형적으로, 자연적으로 발생하지 않는 mRNA 분자인 것으로 이해될 수 있다. 환언하면, 인공 mRNA 분자는 비-천연 mRNA 분자로서 이해될 수 있다. 이러한 mRNA 분자는 (자연적으로 발생하지 않는) 개별 서열 및/또는 자연적으로 발생하지 않는 다른 변경, 예컨대 뉴클레오티드의 구조적 변경으로 인해 비-천연적일 수 있다. 전형적으로, 인공 mRNA 분자는 뉴클레오티드의 원하는 인공 서열(이종 서열)에 상응하는 유전자 조작 방법에 의해 설계 및/또는 생성될 수 있다. 이러한 맥락에서, 인공 서열은 보통 자연적으로 발생하지 않을 수 있는 서열이며, 즉, 인공 서열은 적어도 하나의 뉴클레오티드가 야생형 서열과 다르다. 용어 "야생형"은 자연적으로 발생하는 서열로서 이해될 수 있다. 나아가, 용어 "인공 핵산 분자"는 "하나의 단일 분자"를 의미하는 것으로 한정되지는 않으나, 전형적으로 동일 분자의 앙상블을 포함하는 것으로 이해된다. 따라서, 이 용어는 부분표본에 함유된 복수의 동일 분자에 관한 것일 수 있다.
바이시스트론성/멀티시스트론성 mRNA: 전형적으로 둘(바이시스트론성) 또는 그보다 많은(멀티시스트론성) 오픈 리딩 프레임(ORF)(암호화 영역 또는 암호화 서열)을 가질 수 있는 mRNA. 이러한 맥락에서 오픈 리딩 프레임은 펩티드 또는 단백질로 번역될 수 있는 몇몇 뉴클레오티드 트리플릿(코돈)의 서열이다. 이러한 mRNA의 번역은 둘(바이시스트론성) 또는 그보다 많은(멀티시스트론성) 별개의 번역 산물을 생산한다(ORF가 동일하지 않은 경우). 진핵 생물 내 발현의 경우, 이러한 mRNA는 예를 들어 내부 리보솜 유입점(internal ribosomal entry site, IRES) 서열을 포함할 수 있다.
모노시스트론성 mRNA: 모노시스트론성 mRNA는 전형적으로 하나의 오픈 리딩 프레임(암호화 서열 또는 암호화 영역)만을 포함하는 mRNA일 수 있다. 이러한 맥락에서 오픈 리딩 프레임은 펩티드 또는 단백질로 번역될 수 있는 몇몇 뉴클레오티드 트리플릿(코돈)의 서열이다.
5'-CAP 구조: 5'-CAP은 전형적으로 변형된 뉴클레오티드(CAP 유사체), 특히 mRNA 분자의 5' 말단에 첨가된 구아닌 뉴클레오티드이다. 바람직하게, 5'-CAP은 5'-5'-트리포스페이트 연결을 이용하여 첨가된다(m7GpppN으로도 명명됨). 5'-CAP 구조의 추가적인 예는 글리세릴, 역전된 데옥시 비염기(abasic) 잔기(모이어티), 4',5' 메틸렌 뉴클레오티드, 1-(베타-D-에리트로퓨라노실) 뉴클레오티드, 4'-티오 뉴클레오티드, 카르보시클릭 뉴클레오티드, 1,5-언하이드로헥시톨 뉴클레오티드, L-뉴클레오티드, 알파-뉴클레오티드, 변형된 염기 뉴클레오티드, 트레오-펜토퓨라노실 뉴클레오티드, 비고리(acyclic) 3',4'-세코(seco) 뉴클레오티드, 비고리 3,4-디하이드록시부틸 뉴클레오티드, 비고리 3,5 디하이드록시펜틸 뉴클레오티드, 3'-3'-역전된 뉴클레오티드 모이어티, 3'-3'-역전된 비염기 모이어티, 3'-2'-역전된 뉴클레오티드 모이어티, 3'-2'-역전된 비염기 모이어티, 1,4-부탄디올 포스페이트, 3'-포스포라미데이트, 헥실포스페이트, 아미노헥실 포스페이트, 3'-포스페이트, 3'포스포로티오에이트, 포스포로디티오에이트, 또는 브릿징(bridging) 또는 비-브릿징 메틸포스포네이트 모이어티를 포함한다. 이들 변형된 5'-CAP 구조는 본 발명의 맥락에서 본 발명의 조성물의 mRNA 서열을 변형시키는 데 사용될 수 있다. 본 발명의 맥락에서 사용될 수 있는 추가적인 변형된 5'-CAP 구조는 CAP1(m7GpppN의 인접 뉴클레오티드의 리보스의 추가적 메틸화), CAP2(m7GpppN의 하류의 두 번째 뉴클레오티드의 리보스의 추가적 메틸화), cap3(m7GpppN의 하류의 세 번째 뉴클레오티드의 리보스의 추가적 메틸화), cap4(m7GpppN의 하류의 네 번째 뉴클레오티드의 리보스의 추가적 메틸화), ARCA(안티-역전(reverse) CAP 유사체), 변형된 ARCA(예를 들어 포스포티오에이트 변형된 ARCA), 이노신, N1-메틸-구아노신, 2'-플루오로-구아노신, 7-데아자-구아노신, 8-옥소-구아노신, 2-아미노-구아노신, LNA-구아노신 및 2-아지도-구아노신이다.
본 발명의 맥락에서, 5'-CAP 구조는 화학적 RNA 합성 또는 cCAP 유사체를 이용한 RNA 시험관 내 전사(공동 전사 캐핑)에서 형성될 수도 있고, 또는 CAP 구조는 캐핑 효소(예컨대, 상업적으로 이용 가능한 캐핑 키트)를 이용하여 시험관 내에서 형성될 수 있다.
CAP 유사체: CAP 유사체는 RNA 분자의 5' 말단에 도입될 때 번역 또는 국소화를 촉진시키며, 및/또는 RNA 분자의 분해를 방지하는 CAP 기능을 갖는 비-중합성 디-뉴클레오티드를 지칭한다. 비-중합성은 CAP 유사체가 5' 트리포스페이트를 갖지 않기 때문에 5' 말단에서만 결합되므로 주형-의존성 RNA 중합효소에 의해 3' 방향으로 연장될 수 없음을 의미한다.
CAP 유사체는 m7GpppG, m7GpppA, m7GpppC; 비메틸화된 CAP 유사체(예를 들어, GpppG); 디메틸화된 CAP 유사체(예를 들어, m2,7GpppG), 트리메틸화된 CAP 유사체(예를 들어, m2,2,7GpppG), 디메틸화된 대칭적 CAP 유사체(예를 들어, m7Gpppm7G), 또는 안티 역전 CAP 유사체(예를 들어, ARCA; m7,2'OmeGpppG, m7,2'dGpppG, m7,3'OmeGpppG, m7,3'dGpppG 및 이들의 테트라포스페이트 유도체)(Stepinski et al., 2001. RNA 7(10):1486-95)로 구성된 군으로부터 선택된 화학 구조를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
추가적인 CAP 유사체는 이전에 기술된 바 있다(US7,074,596, WO2008/016473, WO2008/157688, WO2009/149253, WO2011/015347, 및 WO2013/059475). N7-(4-클로로페녹시에틸) 치환된 디뉴클레오티드 CAP 유사체의 합성은 최근에 문헌[Kore et al. (2013) Bioorg. Med. Chem. 21(15): 4570-4]에 기술되었다.
폴리 (C) 서열: 폴리-(C) 서열은 전형적으로 시토신 뉴클레오티드의 긴 서열이며, 전형적으로 약 10 내지 약 200개 시토신 뉴클레오티드, 바람직하게 약 10 내지 약 100개 시토신 뉴클레오티드, 더욱 바람직하게 약 10 내지 약 70개 시토신 뉴클레오티드 또는 훨씬 더 바람직하게 약 20 내지 약 50개, 또는 심지어 약 20 내지 약 30개 시토신 뉴클레오티드이다. 폴리(C) 서열은 바람직하게는 핵산에 포함된 암호화 영역의 3'에 위치할 수 있다.
폴리-A-꼬리/서열: "3'-폴리(A) 꼬리 또는 폴리(A) 서열"로도 지칭되는 폴리-A-꼬리는 전형적으로 RNA의 3' 말단에 첨가된, 약 400개까지의 아데노신 뉴클레오티드, 예를 들어 약 25개 내지 약 400개, 바람직하게 약 50개 내지 약 400개, 더욱 바람직하게 약 50개 내지 약 300개, 더욱 더 바람직하게 약 50개 내지 약 250개, 가장 바람직하게 약 60개 내지 약 250개 아데노신 뉴클레오티드의, 아데노신 뉴클레오티드의 긴 서열이다. 나아가, 폴리(A) 서열, 또는 폴리(A) 꼬리는 예컨대, 대장균 또는 효모로부터 유래된 폴리(A)중합효소를 이용하여, RNA의 효소적 폴리아데닐화에 의해 시험관 내에서 생성될 수 있다.
폴리아데닐화: 폴리아데닐화는 전형적으로 RNA 분자, 예를 들어, 미성숙 mRNA와 같은 핵산 분자에 폴리(A) 서열이 첨가되는 것으로 이해된다. 폴리아데닐화는 소위 폴리아데닐화 신호에 의해 유도될 수 있다. 이 신호는 바람직하게는 폴리아데닐화될, RNA 분자와 같은 핵산 분자의 3' 말단의 뉴클레오타이드의 스트레치(stretch) 내에 위치한다. 폴리아데닐화 신호는 전형적으로 아데닌 및 우라실/티민 뉴클레오티드로 구성된 헥사머, 바람직하게는 헥사머 서열 AAUAAA를 포함한다. 다른 서열, 바람직하게는 헥사머 서열 또한, 가능하다. 폴리아데닐화는 일반적으로 (미성숙-mRNA로도 지칭되는) 프리-mRNA의 가공 중에 발생한다. 일반적으로, (프리-mRNA로부터 성숙 mRNA까지의) RNA 성숙은 폴리아데닐화 단계를 포함한다.
3'-비번역된 영역(3'-UTR): 3'-UTR은 전형적으로 mRNA의 단백질 암호화 영역(즉 오픈 리딩 프레임) 및 폴리(A) 서열 사이에 위치한 mRNA의 일부이다. mRNA의 3'-UTR은 아미노산 서열로 번역되지 않는다. 3'-UTR 서열은 일반적으로 유전자 발현 과정 중에 각각의 mRNA로 전사되는 유전자에 의해 암호화된다. 이 게놈 서열은 선택적 인트론을 포함하는 미성숙 mRNA로 먼저 전사된다. 미성숙 mRNA는 이후 성숙 과정에서 성숙 mRNA로 추가적으로 가공된다. 이러한 성숙 과정은 5'-캐핑, 선택적 인트론을 절제하는 미성숙 mRNA의 스플라이싱 및 미성숙 mRNA의 3' 말단의 폴리아데닐화와 같은 3' 말단의 변형 및 선택적 엔도- 또는 엑소뉴클레아제 절단 등의 단계를 포함한다. 본 발명의 맥락에서, 3'-UTR은 단백질 암호화 영역의 정지 코돈에 대해 3'에, 바람직하게 단백질 암호화 영역의 정지 코돈에 대해 바로 옆 3'에 위치하고, 폴리(A) 서열의 5' 쪽, 바람직하게 폴리(A) 서열에 대해 5' 바로 옆 뉴클레오티드까지 이르는 성숙 mRNA의 서열에 상응한다. 용어 "상응하는"은 3'-UTR 서열이 3'-UTR 서열을 정의하기 위해 사용된 mRNA 서열에서와 같은, RNA 서열, 또는 이러한 RNA 서열에 상응하는 DNA 서열일 수 있음을 의미한다. 본 발명의 맥락에서, 용어 "알부민 유전자의 3'-UTR"과 같은 "유전자의 3'-UTR"은 이 유전자로부터 유래된 성숙 mRNA, 즉 유전자의 전사 및 미성숙 mRNA의 성숙에 의해 수득된 mRNA의 3'-UTR에 상응하는 서열이다. 용어 "유전자의 3'-UTR"은 3'-UTR의 DNA 서열 및 RNA 서열을 포함한다.
5'-비번역된 영역(5'-UTR): 5'-UTR은 전형적으로 메신저 RNA(mRNA)의 특정한 부분으로 이해된다. 이는 mRNA의 오픈 리딩 프레임의 5'에 위치한다. 전형적으로, 5'-UTR은 전사 개시 부위에서 시작하며 오픈 리딩 프레임의 개시 코돈의 하나의 뉴클레오티드 전에서 종결한다. 5'-UTR은 조절 요소라고도 지칭되는, 유전자 발현을 제어하기 위한 요소를 포함할 수 있다. 이러한 조절 요소는 예를 들어 리보좀 결합 부위 또는 5' 말단 올리고피리미딘 트랙트(tract)일 수 있다. 5'-UTR은 예를 들어 5'-CAP의 첨가에 의해, 전사후 변형될 수 있다. 본 발명의 맥락에서, 5'-UTR은 5'-CAP 및 개시 코돈 사이에 위치한 성숙 mRNA의 서열에 상응한다. 바람직하게, 5'-UTR은 5'-CAP에 대해 3'에 위치한 뉴클레오티드로부터, 바람직하게는 5'-CAP에 대해 3' 바로 옆에 위치한 뉴클레오티드로부터, 단백질 암호화 영역의 개시 코돈에 대해 5' 위치한 뉴클레오티드까지, 바람직하게 단백질 암호화 영역의 개시 코돈에 대해 5' 바로 옆에 위치한 뉴클레오티드까지 이르는 서열에 상응한다. 성숙 mRNA의 3' 바로 옆에서 5'-CAP까지 위치한 뉴클레오티드는 전형적으로 전사 개시 부위에 상응한다. 용어 "상응하는"은 5'-UTR 서열이 5'-UTR 서열을 정의하기 위해 사용된 mRNA 서열에서와 같은, RNA 서열, 또는 이러한 RNA 서열에 상응하는 DNA 서열일 수 있음을 의미한다. 본 발명의 맥락에서, 용어 "TOP 유전자의 5'-UTR"과 같은 "유전자의 5'-UTR"은 이 유전자로부터 유래된 성숙 mRNA, 즉 유전자의 전사 및 미성숙 mRNA의 성숙에 의해 수득된 mRNA의 5'-UTR에 상응하는 서열이다. 용어 "유전자의 5'-UTR"은 5'-UTR의 DNA 서열 및 RNA 서열을 포함한다.
5' 말단 올리고피리미딘 트랙트(TOP): 5' 말단 올리고피리미딘 트랙트(TOP)는 전형적으로 특정 mRNA 분자의 5' 말단 영역과 같은 핵산 분자의 5' 말단 영역, 또는 특정한 유전자의 기능적 독립체(entity), 예를 들어 전사된 영역의 5' 말단 영역에 위치한 피리미딘 뉴클레오티드의 스트레치이다. 이 서열은 시티딘으로 시작하며, 이는 보통 전사 개시 부위에 상응하고, 보통 약 3 내지 30개 피리미딘 뉴클레오티드의 스트레치가 이어진다. 예를 들어, TOP는 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개, 20개, 21개, 22개, 23개, 24개, 25개, 26개, 27개, 28개, 29개, 30개 또는 훨씬 더 많은 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 피리미딘 스트레치 및 이에 따른 5' TOP는 TOP의 하류에 위치한 첫 번째 퓨린 뉴클레오티드에 대해 5'인 하나의 뉴클레오티드에서 종결한다. 5' 말단 올리고피리미딘 트랙트를 함유하는 메신저 RNA는 종종 TOP mRNA로 지칭된다. 따라서, 이러한 메신저 RNA를 제공하는 유전자는 TOP 유전자로 지칭된다. TOP 서열은 예를 들어, 펩티드 연장 요소 및 리보솜 단백질을 암호화하는 유전자 및 mRNA에서 발견되었다.
TOP 모티프: 본 발명의 맥락에서, TOP 모티프는 위에서 정의된 바와 같은 5' TOP에 상응하는 핵산 서열이다. 따라서, 본 발명의 맥락에서 TOP 모티프는 바람직하게 3 내지 30개 뉴클레오티드 길이를 갖는 피리미딘 뉴클레오티드의 스트레치이다. 바람직하게, TOP 모티프는 적어도 3개 피리미딘 뉴클레오티드, 바람직하게 적어도 4개 피리미딘 뉴클레오티드, 바람직하게 적어도 5개 피리미딘 뉴클레오티드, 더욱 바람직하게 적어도 6개 뉴클레오티드, 더욱 바람직하게 적어도 7개 뉴클레오티드, 가장 바람직하게 적어도 8개 피리미딘 뉴클레오티드로 구성되며, 이때, 피리미딘 뉴클레오티드의 스트레치는 바람직하게 이의 5' 말단에서 시토신 뉴클레오티드로 시작한다. TOP 유전자 및 TOP mRNA에서, TOP 모티프는 바람직하게 이의 5' 말단에서 전사 개시 부위로 시작하며 상기 유전자 또는 mRNA에서 첫 번째 퓨린 잔기에 대해 5'인 하나의 뉴클레오티드에서 종결한다. 본 발명의 의미에 있어서 TOP 모티프는 바람직하게 5'-UTR을 나타내는 서열의 5' 말단, 또는 5'-UTR을 암호화하는 서열의 5' 말단에 위치한다. 따라서, 바람직하게는, 3개 이상의 피리미딘 뉴클레오티드의 스트레치는 본 발명의 mRNA, 본 발명의 mRNA의 5'-UTR 요소, 또는 본 설명에 기술된 TOP 유전자의 5'-UTR로부터 유래된 핵산 서열과 같이, 만약 이러한 스트레치가 각각의 서열의 5' 말단에 위치하는 경우, 본 발명의 의미에 있어서 "TOP 모티프"로 불린다. 즉, 5'-UTR 또는 5'-UTR 요소의 5' 말단에 위치하지 않으나 5'-UTR 또는 5'-UTR 요소 내의 임의의 위치에 있는 3개 이상의 피리미딘 뉴클레오티드의 스트레치는 바람직하게 "TOP 모티프"로 지칭되지 않는다.
TOP 유전자: TOP 유전자는 전형적으로 5' 말단 올리고피리미딘 트랙트의 존재를 특징으로 한다. 나아가, 대부분의 TOP 유전자는 성장과 관련된 번역 조절을 특징으로 한다. 그러나 또한, 조직 특이적 번역의 조절을 갖는 TOP 유전자도 알려져 있다. 위에 정의된 바와 같이, TOP 유전자의 5'-UTR은 TOP 유전자로부터 유래된 성숙 mRNA의 5'-UTR의 서열에 상응하며, 이는 바람직하게 5'-CAP에 대해 3'에 위치한 뉴클레오티드로부터 개시 코돈에 대해 5'에 위치한 뉴클레오티드까지 이른다. TOP 유전자의 5'-UTR은 전형적으로 임의의 개시 코돈, 바람직하게 상류 AUG(uAUG) 또는 상류 오픈 리딩 프레임(uORF)을 포함하지 않는다. 여기서, 상류 AUG 또는 상류 오픈 리딩 프레임은 전형적으로, 번역되는 오픈 리딩 프레임의 개시 코돈(AUG)의 5'에 있는 AUG 및 오픈 리딩 프레임으로 이해된다. TOP 유전자의 5'-UTR은 일반적으로 다소 짧다. TOP 유전자의 5'UTR의 길이는 20개 뉴클레오티드에서 500개 뉴클레오티드까지로 다를 수 있고, 전형적으로는 약 200개 미만의 뉴클레오티드, 바람직하게 약 150개 미만의 뉴클레오티드, 더욱 바람직하게는 약 100개 미만의 뉴클레오티드이다. 본 발명의 의미에 있어서, TOP 유전자의 예시적인 5'-UTR은 국제 특허 출원 WO2013/143700(이의 개시 내용은 본 설명에 참조로 포함됨)의 서열번호 1 내지 1363, 서열번호 1395, 서열번호 1421 및 서열번호 1422에 따른 서열, 또는 이의 동종체 또는 변이체에서 위치 5의 뉴클레오티드로부터 개시 코돈(예를 들어 ATG)에 대해 5' 바로 옆에 위치한 뉴클레오티드까지 이르는 핵산 서열이다. 이러한 맥락에서 TOP 유전자의 5' UTR의 특히 바람직한 단편은 5' TOP 모티프가 없는 TOP 유전자의 5'-UTR이다. 용어 "TOP 유전자의 5' UTR"은 바람직하게는 자연 발생적인 TOP 유전자의 5'-UTR을 지칭한다.
핵산 서열, 특히 mRNA의 단편: 핵산 서열의 단편은 단편의 핵산 서열의 기초인 전장 핵산 서열에서 뉴클레오티드의 연속적인 스트레치에 상응하는 연속적인 뉴클레오티드 스트레치로 구성되며, 이는 전장 핵산 서열의 적어도 20%, 바람직하게 적어도 30%, 더욱 바람직하게 적어도 40%, 더욱 바람직하게 적어도 50%, 훨씬 더 바람직하게 적어도 60%, 훨씬 더 바람직하게 적어도 70%, 훨씬 더 바람직하게 적어도 80%, 및 가장 바람직하게 적어도 90%를 나타낸다. 본 발명의 의미에 있어서, 이러한 단편은 바람직하게는 전장 핵산 서열의 기능적 단편이다.
이러한 맥락에서, "핵산 서열의 단편", 예컨대 mRNA 서열의 단편은 바람직하게는 본 설명에 기술된 바와 같은 단백질 또는 이의 변이체의 단편을 암호화하는 핵산 서열이다. 더욱 바람직하게는, 표현 '핵산 서열의 단편'은 각각의 전장 핵산 서열과 관련하여, 적어도 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%, 바람직하게는 적어도 70%, 더욱 바람직하게는 적어도 80%, 훨씬 더 바람직하게는 적어도 85%, 훨씬 더 바람직하게는 적어도 90% 그리고 가장 바람직하게는 적어도 95% 또는 심지어 97%의 서열 동일성을 갖는 핵산 서열을 지칭한다.
핵산 서열, 특히 mRNA의 변이체: 핵산 서열의 변이체는 핵산 서열의 기초를 형성하는 핵산 서열의 변이체를 지칭한다. 예를 들어, 변이체 핵산 서열은, 변이체가 유래된 핵산 서열과 비교하여 1개 이상의 뉴클레오티드 결실, 삽입, 첨가 및/또는 치환을 나타낼 수 있다. 바람직하게, 핵산 서열의 변이체는 변이체가 유래된 핵산 서열과 적어도 40%, 바람직하게 적어도 50%, 더욱 바람직하게 적어도 60%, 더욱 바람직하게 적어도 70%, 훨씬 더 바람직하게 적어도 80%, 훨씬 더 바람직하게 적어도 90%, 가장 바람직하게 적어도 95% 동일하다. 바람직하게, 변이체는 기능적 변이체이다. 핵산 서열의 "변이체"는 이러한 핵산 서열의 10개, 20개, 30개, 50개, 75개 또는 100개 뉴클레오티드의 스트레치에 걸쳐 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99% 뉴클레오티드 동일성을 나타낼 수 있다.
안정화된 핵산, 바람직하게는 mRNA: 안정화된 핵산, 바람직하게는 mRNA는 전형적으로, 생체 내 분해(예를 들어 엑소- 또는 엔도-뉴클레아제에 의한 분해) 및/또는 생체 외 분해(예를 들어 백신 투여 전 제조 과정에 의해, 예를 들어 투여되는 백신 용액의 제조 과정에서)에 대한 내성을 증가시키는 변형을 나타낸다. RNA의 안정화는 예를 들어 5'-CAP 구조, 폴리-A-꼬리, 또는 임의의 기타 UTR 변형의 제공에 의해 달성될 수 있다. 또한, RNA의 안정화는 화학적 변형 또는 핵산의 G/C 함량의 변형에 의해 달성될 수 있다. 다양한 다른 방법이 당해 분야에 공지되어 있으며, 본 발명의 맥락에서 가능하다.
RNA 시험관 내 전사: 용어 "RNA 시험관 내 전사" 또는 "시험관 내 전사"는 RNA가 무세포 시스템(시험관 내)에서 합성되는 과정에 관한 것이다. DNA, 특히 플라스미드 DNA 벡터가 RNA 전사체 생성을 위한 주형으로 사용된다. RNA는, 본 발명에 따르면 바람직하게 선형화된 프라스미드 DNA 주형인 적합한 DNA 주형의 DNA 의존성 시험관 내 전사에 의해 수득될 수 있다. RNA 시험관 내 전사를 제어하는 프로모터는 임의의 DNA 의존성 RNA 중합효소를 위한 임의의 프로모터일 수 있다. DNA 의존성 RNA 중합효소의 특정한 예는 T7, T3 및 SP6 RNA 중합효소이다. 시험관 내 RNA 전사를 위한 DNA 주형은 핵산, 특히 시험관 내 전사되는 각각의 RNA에 상응하는 특정 cDNA의 클로닝 및 이를 시험관 내 전사를 위한 적합한 벡터, 예를 들면 플라스미드 DNA 내로 도입함으로써 수득될 수 있다. 본 발명의 바람직한 구현예에서, DNA 주형은 그것이 시험관 내에서 전사되기 전에, 적합한 제한 효소로 선형화된다. cDNA는 mRNA의 역전사 또는 화학적 합성에 의해 수득될 수 있다. 또한, 시험관 내 RNA 합성을 위한 DNA 주형은 유전자 합성에 의해 수득될 수도 있다.
시험관 내 전사 방법은 당해 분야에 공지되어 있다(예컨대, Geall et al. (2013) Semin. Immunol. 25(2): 152-159; Brunelle et al. (2013) Methods Enzymol. 530:101-14 참조). 상기 방법에 사용되는 시약은 전형적으로 다음을 포함한다:
1) 박테리오파지-암호화된 RNA 중합효소와 같이 각각의 RNA 중합효소에 대해 높은 결합 친화도를 갖는 프로모터 서열을 가진 선형화된 DNA 주형;
2) 네 가지 염기(아데닌, 시토신, 구아닌 및 우라실)를 위한 리보뉴클레오시드 트리포스페이트(NTP);
3) 선택적으로, 위에서 정의된 바와 같은 CAP 유사체(예를 들어, m7G(5')ppp(5')G (m7G));
4) 선형화된 DNA 주형 내에서 프로모터 서열에 결합할 수 있는 DNA 의존성 RNA 중합효소(예를 들어, T7, T3 또는 SP6 RNA 중합효소);
5) 선택적으로, 임의의 오염원인 리보뉴클레아제(RN아제)를 비활성화하기 위한 RN아제 억제제;
6) 선택적으로, 전사를 억제할 수 있는 피로포스페이트를 분해하기 위한 피로포스파타아제;
7) 중합효소를 위한 보조인자로서 Mg2+를 공급하는 MgCl2;
8) 적합한 pH 값을 유지하기 위한 완충액, 이는 항산화제(예컨대, DTT) 및/또는 스페르미딘과 같은 폴리아민을 최적 농도로 함유할 수 있다.
전장 단백질: 본 설명에 사용된 용어 "전장 단백질"은 전형적으로, 자연 발생적인 단백질의 전체 아미노산 서열을 실질적으로 포함하는 단백질을 지칭한다. 그럼에도, 예컨대, 단백질의 돌연변이로 인한, 아미노산의 치환 또한, 용어 전장 단백질에 포함된다.
단백질의 단편: 본 발명의 맥락에서 단백질 또는 펩티드의 "단편"은, 전형적으로, 본래(천연) 단백질의 아미노산 서열(또는 이의 암호화된 핵산 분자)에 비해, 이의 아미노산 서열(또는 이의 암호화된 핵산 분자)에 관하여 N 말단 및/또는 C 말단에 끝이 절단된, 본 설명에서 정의된 바와 같은 단백질 또는 펩티드의 서열을 포함할 수 있다. 따라서, 이러한 절단은 아미노산 수준에서, 또는 상응하여 핵산 수준에서, 발생할 수 있다. 따라서, 본 설명에 정의된 바와 같은 이러한 단편과 관련된 서열 동일성은 바람직하게는 본 설명에 정의된 바와 같은 전체 단백질 또는 펩티드, 또는 이러한 단백질 또는 펩티드의 전체 (암호화) 핵산 분자를 지칭할 수 있다.
이러한 맥락에서, 단백질의 단편은 전형적으로, 각각의 자연 발생적인 전장 단백질의 아미노산 서열과 적어도 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%, 바람직하게는 적어도 70%, 더욱 바람직하게는 적어도 80%, 훨씬 더 바람직하게는 적어도 85%, 훨씬 더 바람직하게는 적어도 90% 그리고 가장 바람직하게는 적어도 95% 또는 심지어 97%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 맥락에서 단백질 또는 펩티드의 단편은 추가로 본 설명에 정의된 바와 같은 단백질 또는 펩티드의 서열을 포함할 수 있는데, 이는 예를 들어 적어도 5개 아미노산의 길이, 바람직하게 적어도 6개 아미노산의 길이, 바람직하게 적어도 7개 아미노산, 더욱 바람직하게 적어도 8개 아미노산, 훨씬 더 바람직하게 적어도 9개 아미노산; 훨씬 더 바람직하게 적어도 10개 아미노산; 훨씬 더 바람직하게 적어도 11개 아미노산; 훨씬 더 바람직하게 적어도 12개 아미노산; 훨씬 더 바람직하게 적어도 13개 아미노산; 훨씬 더 바람직하게 적어도 14개 아미노산; 훨씬 더 바람직하게 적어도 15개 아미노산; 훨씬 더 바람직하게 적어도 16개 아미노산; 훨씬 더 바람직하게 적어도 17개 아미노산; 훨씬 더 바람직하게 적어도 18개 아미노산; 훨씬 더 바람직하게 적어도 19개 아미노산; 훨씬 더 바람직하게 적어도 20개 아미노산; 훨씬 더 바람직하게 적어도 25개 아미노산; 훨씬 더 바람직하게 적어도 30개 아미노산; 훨씬 더 바람직하게 적어도 35개 아미노산; 훨씬 더 바람직하게 적어도 50개 아미노산; 또는 가장 바람직하게 적어도 100개 아미노산을 갖는다. 예를 들어, 이러한 단편은 약 6개 내지 약 20개 또는 훨씬 더 긴 아미노산 길이를 가질 수 있다. 예컨대, 바람직하게는 약 8개 내지 약 10개 아미노산, 예를 들어 8개, 9개, 또는 10개, (또는 심지어 6개, 7개, 11개, 또는 12개 아미노산)의 길이를 갖는, MHC 클래스 I 분자에 의해 가공되고 제시된 단편, 또는 바람직하게는 약 13개 이상의 아미노산, 예를 들어 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개, 20개 또는 훨씬 더 긴 아미노산 길이를 갖는, MHC 클래스 II 분자에 의해 가공되고 제시된 단편. 이때, 이들 단편은 아미노산 서열의 임의의 일부로부터 선택될 수 있다. 이들 단편은 전형적으로 펩티드 단편 및 MHC 분자로 구성된 복합체의 형태로 T 세포에 의해 인식된다. 즉, 단편은 전형적으로 그의 천연 형태로 인식되지 않는다. 단백질 또는 펩티드의 단편은 이러한 단백질 또는 펩티드의 적어도 하나의 에피토프를 포함할 수 있다. 게다가 또한, 세포 외 도메인, 세포 내 도메인 또는 막관통 도메인 및 단백질의 단축된 또는 절단된 버전과 같이, 단백질의 도메인은 단백질의 단편을 포함하는 것으로 이해될 수 있다.
단백질의 변이체: 1개 이상의 치환, 삽입 및/또는 결실된 아미노산(들)과 같은, 1개 이상의 돌연변이(들)에서 본래 서열과 다른 아미노산 서열을 갖는, 본 발명의 맥락에서 정의된 바와 같은 단백질 또는 펩티드의 "변이체"가 발생될 수 있다. 바람직하게는, 이들 단편 및/또는 변이체는 전장 천연 단백질에 비해 동일한 생물학적 기능 또는 특이적 활성, 예를 들어 이의 특이적인 항원 특성을 갖는다. 본 발명의 맥락에서 정의된 바와 같은 단백질 또는 펩티드의 "변이체"는 그것들의 천연의, 즉, 돌연변이되지 않은 생리학적, 서열과 비교하여, 보존적인 아미노산 치환을 포함할 수 있다. 그러한 아미노산 서열뿐만 아니라, 그것들의 암호화 뉴클레오티드 서열도 특히, 본 설명에서 정의된 바와 같은 용어 변이체에 해당한다. 동일한 클래스로부터 유래한 아미노산이 서로 교환되는 치환은 보존적 치환이라 지칭된다. 특히, 이들은 지방족 곁사슬, 양전하 또는 음전하를 띤 곁사슬, 곁사슬 또는 아미노산 내 방향족 기, 수소 다리 내로 들어올 수 있는 곁사슬, 예를 들어 하이드록실 기능을 갖는 곁사슬을 갖는 아미노산이다. 이는 예를 들어 극성 곁사슬을 갖는 아미노산이 비슷한 극성 곁사슬을 갖는 또 다른 아미노산에 의해 또는, 예를 들어 소수성 곁사슬이 마찬가지로 소수성 곁사슬을 갖는 또 다른 아미노산에 의해 치환된 것을 특징으로 하는 아미노산에 의해(예를 들어 트레오닌(세린)에 의해 세린(트레오닌)이, 또는 이소류신(류신)에 의해 류신(이소루신)이) 교체되는 것을 의미한다. 특히, 3차원 구조에 변형을 일으키지 않거나 결합 영역에 영향을 미치지 않는 그러한 서열 위치에서, 삽입 및 치환이 가능하다. 삽입 또는 결실에 의한 3차 구조의 변형은 예를 들어 CD 스펙트럼(원형 디크로이즘 스펙트럼)을 이용하여 용이하게 결정될 수 있다(Urry, 1985, Absorption, Circular Dichroism and ORD of Polypeptides, in: Modern Physical Methods in Biochemistry, Neuberger et al. (ed.), Elsevier, Amsterdam).
단백질 또는 펩티드의 "변이체"는 이러한 단백질 또는 펩티드의 10개, 20개, 30개, 50개, 75개 또는 100개 아미노산의 스트레치에 걸쳐 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99% 아미노산 동일성을 나타낼 수 있다.
나아가, 핵산 분자에 의해 암호화될 수 있는, 본 설명에서 정의된 바와 같은 단백질 또는 펩티드의 변이체는 또한, 단백질 또는 펩티드의 각각의 아미노산 서열의 변화를 유발함이 없이, 즉 아미노산 서열 또는 적어도 이들의 일부가 위의 의미 내에서 1개 이상의 돌연변이에서 본래 서열과 다르지 않을 수 있는, 핵산 서열을 암호화하는 뉴클레오티드가 유전 암호의 축퇴(degeneration)에 따라 교환된, 이들 서열을 포함할 수 있다.
서열의 동일성: 예를 들어 본 설명에 정의된 핵산 서열 또는 아미노산 서열, 바람직하게는 본 설명에 정의된 폴리머 담체의 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열 또는 아미노산 서열 그 자체의 두 서열이 동일한지 백분율을 결정하기 위해, 서열들은 이후에 서로 비교되도록 정렬될 수 있다. 따라서, 예를 들어 제1 서열의 위치는 제2 서열의 상응하는 위치와 비교될 수 있다. 만약 제1 서열 내 위치가 제2 서열 내 위치의 경우에서처럼 동일한 구성요소(잔기)에 의해 차지된다면, 두 서열은 이 위치에서 동일하다. 만약 이러한 경우가 아니라면, 서열들은 이 위치에서 상이하다. 제1 서열과 비교하여 제2 서열에 삽입이 발생한 경우, 추가적인 정렬을 허용하기 위하여 제1 서열에 갭이 삽입될 수 있다. 제1 서열과 비교하여 제2 서열에 결실이 발생한 경우, 추가적인 정렬을 허용하기 위하여 제2 서열에 갭이 삽입될 수 있다. 두 서열이 동일한 정도에 대한 백분율은, 이후 하나의 서열에서 단독으로 차지되는 위치들을 포함하는 위치들의 총 숫자로 나눈 동일한 위치의 수의 함수이다. 두 서열이 동일한 정도에 대한 백분율은 수학적 알고리즘을 이용하여 결정될 수 있다. 바람직한 그러나 한정적이지 않은, 이용될 수 있는 수학적 알고리즘의 예는 문헌[Karlin et al. (1993), PNAS USA, 90:5873-5877] 또는 문헌[Altschul et al. (1997), Nucleic Acids Res., 25:3389-3402]의 알고리즘이다. 이러한 알고리즘은 BLAST 프로그램에 통합된다. 어느 정도까지 본 발명의 서열에 동일한 서열은 이 프로그램에 의해 확인될 수 있다.
단백질 또는 펩티드의 유도체: 펩티드 또는 단백질의 유도체는 전형적으로, 또 다른 분자, 예컨대, 상기 펩티드 또는 단백질로부터 유래된 분자인 것으로 이해된다. 펩티드 또는 단백질의 "유도체"는 또한, 본 발명에 사용된 펩티드 또는 단백질을 포함하는 융합체를 아우른다. 예를 들어, 이 융합체는 예를 들어, 에피토프, 예컨대, FLAG 에피토프 또는 V5 에피토프와 같은 라벨을 포함한다. 예를 들어, 에피토프는 FLAG 에피토프이다. 이러한 태그는 예를 들어, 융합 단백질 정제에 유용하다.
약학적 유효량: 본 발명의 맥락에서 약학적 유효량은 전형적으로 면역 반응을 유도하기에 충분한 양으로 이해된다.
담체/폴리머 담체: 본 발명의 맥락에서 담체는 전형적으로 또 다른 화합물의 수송 및/또는 복합체화를 촉진하는 화합물일 수 있다. 상기 담체는 상기 다른 화합물과 복합체를 형성할 수 있다. 폴리머 담체는 폴리머로 형성된 담체이다.
비히클: 개체에 약학적 조성물 또는 백신의 성분들의 투여를 촉진하기 위한 약학적 조성물 또는 백신 내에서 전형적으로 사용될 수 있는 작용제, 예컨대, 담체.
제트 주입: 본 설명에 사용된 용어 "제트 주입(jet injection)"은 무-바늘 주입 방법을 지칭하며, 이때, 적어도 하나의 본 발명의 mRNA 서열 및, 선택적으로, 추가적인 적합한 부형제를 함유하는 유체가 오리피스를 통해 주입되어, 포유동물의 피부 및, 주입 설정에 따라, 피하 조직 또는 근육 조직을 침투할 수 있는 고압의 극미세 액체 스트림을 발생시킨다. 이론상으로는, 이 액체 스트림이 피부에 구멍을 형성하며, 이를 통해 액체 스트림이 표적 조직으로 밀려 들어간다. 바람직하게는, 제트 주입은 본 발명에 따른 mRNA 서열의 피부 내, 피하 또는 근육 내 주입에 사용된다. 바람직한 구현예에서, 제트 주입은 본 발명에 따른 mRNA 서열의 근육 내 주입에 사용된다. 추가적인 바람직한 구현예에서, 제트 주입은 본 발명에 따른 mRNA 서열의 피부 내 주입에 사용된다.
발명의 상세한 설명
본 발명은 지질 나노입자(LNP)에 포함된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 mRNA가 매우 낮은 투여량 및 빈번한 투여를 요구하지 않는 투여 계획에서 암호화된 항원 펩티드 또는 단백질에 대하여 매우 효율적으로 항원 특이적인 면역 반응을 유도한다는 본 발명자들의 놀라운 발견에 기반한 것이다.
지질 나노입자(LNP)에 포함된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 본 발명의 mRNA의 추가적인 장점은 다음과 같다:
- 강한 체액 면역 반응의 유도
- B 세포 기억의 유도
- 더 신속한 면역 보호의 개시
- 유도된 면역 반응이 오래 지속됨
- 광범위한 세포성 T 세포 반응의 유도
- (국소적 및 일시적) 전염증 환경의 유도
- 전신성 사이토카인 또는 케모카인 반응의 유도 없음
- 내약성, 부작용 없음, 무독성
- 유리한 안정성 특징
- 여러 상이한 항원에 적합한 제형: 동일한 (생산) 기술을 기반으로 실현 가능한 더 큰 항원 칵테일
- 벡터 면역 없음, 즉, 복수의 (상이한) 항원에 대해 동일한 대상체에 복수 차례 백신 접종하는 기술이 이용될 수 있음
- 생산 속도, 적응성, 간단함 및 규모 확장성.
특히, 본 발명은 mRNA를 포함하는 지질 나노입자 및 이의 용도에 관한 것이다. 본 발명에 적합하도록, 지질 나노입자는 적어도 다음을 포함한다:
(i) 아래에 정의된 바와 같은 양이온성 지질 및/또는 PEG 지질; 및
(ii) 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물.
mRNA를 포함하는 지질 나노입자는 중성 지질, 스테로이드와 같은 추가적인 화합물 및 상기 화합물의 조합을 포함할 수 있다. 적합한 화합물은 아래에서 상세히 설명한다.
항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물은 mRNA 분자일 수 있다. 본 발명의 일 구현예에서, mRNA 화합물은 천연의, 그리고 비변형 mRNA이다. 본 발명의 맥락 내에서, 천연의 비변형 mRNA는 서열의 화학적 변형 또는 변경 없이, 시험관 내에서 생성된 mRNA를 포함한다.
본 발명의 대안적인 구현예에서, mRNA 화합물은 인공 mRNA를 포함한다. 본 발명의 맥락에서, 인공 mRNA는 화학적 변형, 서열 변형 또는 비천연 서열이 있는 mRNA를 포함한다.
본 발명의 바람직한 구현예에서, mRNA 화합물은 뉴클레오시드 변형을 포함하지 않는다. 특히, 염기 변형을 포함하지 않는다. 추가적인 구현예에서, mRNA 화합물은 1-메틸슈도우리딘 변형을 포함하지 않는다. 하나의 바람직한 구현예에서, mRNA는 자연적으로 존재하는 뉴클레오시드만을 포함한다. 추가적인 바람직한 구현예에서, mRNA 화합물은 임의의 화학적 변형을 포함하지 않고, 선택적으로 서열 변형을 포함한다. 본 발명의 추가적인 바람직한 구현예에서, mRNA 화합물은 자연적으로 존재하는 뉴클레오시드인 아데닌, 우라실, 구아닌 및 시토신만을 포함한다.
본 발명의 특정 구현예에 따르면, mRNA 서열은 바람직하게는 본 설명에 정의된 바와 같은, 모노-, 바이-, 또는 멀티시스트론성이다. 바이- 또는 멀티시스트론성 mRNA 내의 암호화 서열은 바람직하게는 본 설명에 정의된 바와 같은 개별적인 펩티드 또는 단백질 또는 이의 단편 또는 변이체를 암호화한다. 바람직하게는, 둘 이상의 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 암호화 서열은 아래에 정의된 바와 같이, 적어도 하나의 IRES(내부 리보솜 유입점)에 의해 바이- 또는 멀티시스트론성 mRNA에서 분리될 수 있다. 따라서, 용어 "둘 이상의 펩티드 또는 단백질을 암호화하는"은 바이- 또는 멀티시스트론성 mRNA가 본 설명에 제공된 정의 내에서 예컨대, 적어도 2개, 3개, 4개, 5개, 6개 이상의 (바람직하게는 상이한) 펩티드 또는 단백질 또는 이들의 단편 또는 변이체를 암호화할 수 있음을 의미할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 더욱 바람직하게는, 이에 한정되지 아니하고, 바이- 또는 멀티시스트론성 mRNA는 예를 들어, 본 설명에 정의된 바와 같은 적어도 2개, 3개, 4개, 5개, 6개 이상의 (바람직하게는 상이한) 펩티드 또는 단백질 또는 본 설명에 정의된 바와 같은 그것들의 단편 또는 변이체를 암호화할 수 있다. 이러한 맥락에서, 위에 정의된 바와 같은, 소위 IRES(내부 리보솜 유입점) 서열은 유일한 리보솜 결합 부위로서 기능할 수 있지만, 위에 정의된 바와 같은, 서로 독립적으로 리보솜에 의해 번역되는 몇몇 펩티드 또는 단백질을 암호화하는, 바이- 또는 멀티시스트론성 mRNA를 제공하는 역할도 할 수 있다. 본 발명에 따라 사용될 수 있는 IRES 서열의 예는 피코르나바이러스(예컨대 FMDV), 페스티바이러스(CFFV), 폴리오바이러스(PV), 뇌심근염 바이러스(ECMV), 구제역 바이러스(FMDV), C형 간염 바이러스(HCV), 고전 돼지 열병 바이러스(CSFV), 마우스 각막백반 바이러스(MLV), 원숭이 면역결핍 바이러스(SIV) 또는 귀뚜라미 마비 바이러스(CrPV)로부터 기인한 것들이다.
추가적인 구현예에 따르면, 본 발명에 따른 mRNA 서열의 적어도 하나의 암호화 서열은, 아미노산 링커 서열로 연결되거나 아미노산 링커 서열 없이 연결된 본 설명에 정의된 적어도 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개 및 그 이상의 펩티드 또는 단백질(또는 이의 단편 및 유도체)를 암호화할 수 있으며, 이때, 상기 링커 서열은 강성 링커, 가요성 링커, 절단성 링커(예컨대, 자가 절단 펩티드) 또는 이의 조합을 포함할 수 있다. 그때, 펩티드 또는 단백질은 동일하거나 상이하거나 또는 이의 조합일 수 있다. 특정 펩티드 또는 단백질 조합은 본 설명에서 설명된 바와 같이 적어도 2개의 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 상기 mRNA(본 설명에서 "멀티-항원-구성체/mRNA"라고도 지칭됨)에 의해 암호화될 수 있다.
본 발명의 특정 양태에서, 지질 나노입자는 항원 펩티드 또는 단백질, 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체를 암호화하는 mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물을 포함한다.
이들 항원 펩티드 또는 단백질은 바람직하게는 본 설명에 정의된 바와 같은, 병원성 항원, 종양 항원, 알레르기 항원 또는 자가면역 자기 항원으로부터 유래될 수 있다. 본 발명의 맥락에서, 항원 펩티드 또는 단백질은 바람직하게는 루시퍼라제를 제외한다.
병원성 항원:
그러한 병원성 항원은 개체, 특히 포유류 개체, 더욱 특별하게는 인간에 의해 면역 반응을 유발하는, 병원성 유기체, 특히 박테리아성, 바이러스성 또는 원생동물학적인 (다세포성) 병원성 유기체로부터 유래된다. 더욱 구체적으로, 병원성 항원은 바람직하게 바이러스 또는 박테리아 또는 원생동물학적인 유기체의 표면에 위치한, 표면 항원, 예를 들어, 단백질(또는 단백질의 단편, 예를 들어 표면 항원의 외부 일부분)이다.
병원성 항원은 바람직하게 다음의 병원체로부터 유래된 항원으로부터 선택되는 감염성 질병과 관련된 병원체로부터 유래되는 펩티드 또는 단백질 항원이다: 아시네토박터 바우마니(Acinetobacter baumannii), 아나플라스마 속(Anaplasma genus), 아나플라스마 파고사이토필럼(Anaplasma phagocytophilum), 브라질 구충(Ancylostoma braziliense), 십이지장충(Ancylostoma duodenale), 용혈성 아카노박테리아균(Arcanobacterium haemolyticum), 아스카리스 룸브리코이데스(Ascaris lumbricoides), 아스퍼질러스 속(Aspergillus genus), 아스트로비리다에(Astroviridae), 바베시아 속(Babesia genus), 바실러스 앤스래시스(Bacillus anthracis), 바실러스 세레우스(Bacillus cereus), 바르토넬라 헨셀라에(Bartonella henselae), BK 바이러스(BK virus), 블라스토시스티스 호미니스(Blastocystis hominis), 블라스토미세스 더마티티디스(Blastomyces dermatitidis), 보르데텔라 퍼터시스(Bordetella pertussis), 보렐리아 부르그도르페리(Borrelia burgdorferi), 보렐리아 속(Borrelia genus), 보렐리아 종(Borrelia spp), 브루셀라 속(Brucella genus), 말레이 사상충(Brugia malayi), 분야비리대 과(Bunyaviridae family), 부르크홀데리아 세파시아(Burkholderia cepacia) 및 다른 부르크홀데리아 종, 부르크홀데리아 말레이(Burkholderia mallei), 부르크홀데리아 슈도말레이(Burkholderia pseudomallei), 칼리시비리다에 과(Caliciviridae family), 캄필로박터 속(Campylobacter genus), 칸디다 알비칸스(Candida albicans), 칸디다 종(Candida spp), 클라미디아 트라코마티스(Chlamydia trachomatis), 클라미도필라 뉴모니아(Chlamydophila pneumonia), 클라미도필라 프시타시(Chlamydophila psittaci), CJD 프리온(CJD prion), 간흡충(Clonorchis sinensis), 클로스트리듐 보툴리눔(Clostridium botulinum), 클로스트리듐 디피실레(Clostridium difficile), 클로스트리듐 퍼프린젠스(Clostridium perfringens), 클로스트리듐 퍼프린젠스(Clostridium perfringens), 클로스트리듐 종(Clostridium spp), 클로스트리듐 테타니(Clostridium tetani), 콕시디오이데스 종(Coccidioides spp), 코로나바이러스(coronaviruses), 코리네박테리움 디프테리아(Corynebacterium diphtheria), 콕시엘라 부르네티(Coxiella burnetii), 크리민 콩고 출혈열 바이러스(Crimean-Congo hemorrhagic fever virus), 크립토코커스 네오포르만스(Cryptococcus neoformans), 크립토스포리디움 속(Cryptosporidium genus), 거대세포바이러스(Cytomegalovirus (CMV)), 뎅기열 바이러스(Dengue viruses (DEN-1, DEN-2, DEN-3 및 DEN-4)), 이핵아메바(Dientamoeba fragilis), 에볼라바이러스(Ebolavirus (EBOV)), 에키노코쿠스(Echinococcus genus), 에를리키아 샤펜시스(Ehrlichia chaffeensis), 에를리키아 에인지(Ehrlichia ewingii), 에를리키아 속(Ehrlichia genus), 이질아메바(Entamoeba histolytica), 엔테로코쿠스 속(Enterococcus genus), 엔테로바이러스 속(Enterovirus genus), 엔테로바이러스(Enteroviruses), 주로 콕사키(Coxsackie) A 바이러스 및 엔테로바이러스 71(EV71), 에피더모파이톤 종(Epidermophyton spp), 엡스타인-바 바이러스(Epstein-Barr Virus (EBV)), 대장균 O157:H7, O111 및 O104:H4, 파시올라 헤파티카(Fasciola hepatica) 및 파시올라 기간티카(Fasciola gigantica), FFI 프리온(FFI prion), 필라리오데아 상과(Filarioidea superfamily), 플라비바이러스(Flaviviruses), 프란시셀라 툴라렌시스(Francisella tularensis), 푸소박테륨 속(Fusobacterium genus), 게오트리쿰 칸디둠(Geotrichum candidum), 기아르디아 인테스티날리스(Giardia intestinalis), 악구충 종(Gnathostoma spp), GSS 프리온(GSS prion), 구아나리토 바이러스(Guanarito virus), 헤모필러스 듀크레이(Haemophilus ducreyi), 헤모필러스 인플루엔자(Haemophilus influenza), 헬리코박터 파이로리(Helicobacter pylori), 헤니파바이러스(Henipavirus (헨드라 바이러스 니파 바이러스(Hendra virus Nipah virus)), A형 간염 바이러스(Hepatitis A Virus), B형 간염 바이러스(Hepatitis B Virus (HBV)), C형 간염 바이러스(Hepatitis C Virus (HCV)), D형 간염 바이러스(Hepatitis D Virus), E형 간염 바이러스(Hepatitis E Virus), 헤르페스 심플렉스 바이러스 1 및 2(Herpes simplex virus 1 and 2 (HSV-1 및 HSV-2)), 히스토플라스마 캅술라튬(Histoplasma capsulatum), HIV(인간 면역결핍 바이러스(Human immunodeficiency virus)), 호르테아 워넥키(Hortaea werneckii), 인간 보카바이러스(Human bocavirus (HBoV)), 인간 헤르페스바이러스 6(Human herpesvirus 6 (HHV-6)) 및 인간 헤르페스바이러스 7(Human herpesvirus 7 (HHV-7)), 인간 메타뉴모바이러스(Human metapneumovirus (Hmpv)), 인유두종 바이러스(Human papillomavirus (HPV)), 인간 파라인플루엔자 바이러스(Human parainfluenza viruses (HPIV)), 일본 뇌염 바이러스(Japanese encephalitis virus), JC 바이러스(JC virus), 후닌 바이러스(Junin virus), 킨젤라 킨가에(Kingella kingae), 클렙시엘라 그래뉼로마티스(Klebsiella granulomatis), 쿠루 프리온(Kuru prion), 라사 바이러스(Lassa virus), 레지오넬라 뉴모필라(Legionella pneumophila), 리슈마니아 속(Leishmania genus), 렙토스피라 속(Leptospira genus), 리스테리아 모노사이토제니스(Listeria 모노cytogenes), 림프구성 맥락수막염 바이러스(Lymphocytic choriomeningitis virus (LCMV)), 마츄포 바이러스(Machupo virus), 말라세지아 종(Malassezia spp), 마부르크 바이러스(Marburg virus), 홍역 바이러스(Measles virus), 요코가와 흡충(Metagonimus yokagawai), 마이크로스포리디아 필룸(Microsporidia phylum), 몰루스쿰 콘타기오숨 바이러스(Molluscum contagiosum virus (MCV)), 유행성이하선염 바이러스(Mumps virus), 미코박테리움 레프라에(Mycobacterium leprae) 및 미코박테리움 레프로마토시스(Mycobacterium lepromatosis), 미코박테리움 튜버큘로시스(Mycobacterium tuberculosis), 미코박테리움 울서란스(Mycobacterium ulcerans), 폐렴 미코플라스마(Mycoplasma pneumonia), 네글레리아 파울러리(Naegleria fowleri), 아메리카 구충(Necator americanus), 임균(Neisseria gonorrhoeae), 나이세리아 메닝지티디스(Neisseria meningitides), 노카디아 아스테로이드(Nocardia asteroids), 노카디아 종(Nocardia spp), 온코세르카 볼부루스(Onchocerca volvulus), 오리엔티아 쯔쯔가무시(Orientia tsutsugamushi), 오르소믹소 바이러스과(Orthomyxoviridae family (인플루엔자 ((Influenza))), 브라질 파라콕시디오이디즈(Paracoccidioides brasiliensis), 폐흡충 종(Paragonimus spp), 웨스터만 폐흡충(Paragonimus westermani), 파보바이러스 B19(Parvovirus B19), 파스튜렐라 속(Pasteurella genus), 플라스모디움 속(Plasmodium genus), 뉴모시스티스 지로베시(Pneumocystis jirovecii), 폴리오바이러스(Poliovirus), 광견병 바이러스(Rabies virus), 호흡기 세포 융합 바이러스(Respiratory syncytial virus (RSV)), 리노바이러스(Rhinovirus), 리노바이러스(rhinoviruses), 리케치아 아카리(Rickettsia akari), 리케치아 속(Rickettsia genus), 리케치아 프로바제키(Rickettsia prowazekii), 리케치아 리케치(Rickettsia rickettsia), 리케치아 티피(Rickettsia typhi), 리프트 밸리 열 바이러스(Rift Valley fever virus), 로타바 이러스(Rotavirus), 루벨라 바이러스(Rubella virus), 사비아 바이러스(Sabia virus), 살모넬라 속(Salmonella genus), 사콥테스 스카비에이(Sarcoptes scabiei), SARS 코로나바이러스(SARS coronavirus), 주혈흡충 속(Schistosoma genus), 쉬겔라 속(Shigella genus), 신 놈브레 바이러스(Sin Nombre virus), 한타바이러스(Hantavirus), 스포로트릭스 쉔키(Sporothrix schenckii), 스타필로코쿠스 속(Staphylococcus genus), 스타필로코쿠스 속(Staphylococcus genus), 스트렙토코쿠스 아갈락티아(Streptococcus agalactiae), 스트렙토코쿠스 뉴모니아(Streptococcus pneumonia), 스트렙토코쿠스 피오제네스(Streptococcus pyogenes), 스트롱일로이드스 테콜라리스(Strongyloides stercoralis), 타이니아 속(Taenia genus), 타이니아 솔리움(Taenia solium), 진드기 매개 뇌염 바이러스(Tick-borne encephalitis virus (TBEV)), 개회충(Toxocara canis) 또는 고양이 회충(Toxocara cati), 톡소플라스마 곤디(Toxoplasma gondii), 트레포네마 팔리둠(Treponema pallidum), 트리키넬라 스피랄리스(Trichinella spiralis), 트리코모나스 바지날리스(Trichomonas vaginalis), 트리코파이톤 종(Trichophyton spp), 트리쿠리스 트리치우라(Trichuris trichiura), 트리파노소마 브루세이(Trypanosoma brucei), 트리파노소마 크루지(Trypanosoma cruzi), 우레아플라즈마 우레알리티쿰(Ureaplasma urealyticum), 수두 대상 포진 바이러스(Varicella zoster virus (VZV)), 수두 대상 포진 바이러스(Varicella zoster virus (VZV)), 대두창(Variola major) 또는 소두창(Variola minor), vCJD 프리온(vCJD prion), 베네주엘라 말 뇌염 바이러스(Venezuelan equine encephalitis virus), 비브리오 콜레라(Vibrio cholera), 웨스트 나일 바이러스(West Nile virus), 웨스턴 말 뇌염 바이러스(Western equine encephalitis virus), 반크로프트 사상충(Wuchereria bancrofti), 황열병 바이러스(Yellow fever virus), 여시니아 엔테로콜리티카(Yersinia enterocolitica), 여시니아 페스티스(Yersinia pestis), 및 여시니아 슈도투베르쿨로시스(Yersinia pseudotuberculosis).
이러한 맥락에서, 특히 바람직한 항원은 인플루엔자 바이러스, 호흡기 세포 융합 바이러스(RSV), 헤르페스 심플렉스 바이러스(HSV), 인유두종 바이러스(HPV), 인간 면역결핍 바이러스(HIV), 플라스모디움, 스타필로코쿠스 아우레우스, 뎅기열 바이러스, 클라미디아 트라코마티스, 거대세포바이러스(CMV), B형 간염 바이러스(HBV), 미코박테리움 튜버큘로시스, 광견병 바이러스 및 황열병 바이러스로부터 선택된 병원체로부터 유래한 항원이다.
또한, 병원성 항원(감염성 질병과 관련된 병원체로부터 유래된 항원)은 바람직하게는 다음의 항원으로부터 선택될 수 있다: 외막 단백질 A OmpA, 바이오필름 관련 단백질 Bap, 수송 단백질 MucK(아시네토박터 바우마니, 아시네토박터 감염)); 다양한 표면 당단백질 VSG, 미세소관결합 단백질 MAPP15, 트랜스 시알리다제 TSA(트리파노소마 브루세이, 아프리카 수면병(African trypanosomiasis)); HIV p24 항원, HIV 엔벨롭 단백질(Gp120, Gp41, Gp160), 다단백질 GAG, 부인자(negative factor) 단백질 Nef, 전사촉진인자(trans-activator of transcription) Tat(HIV(인간 면역결핍 바이러스), AIDS(후천성 면역결핍증후군)); 갈락토오스-억제(galactose-inhibitable) 부착 단백질 GIAP, 29 kDa 항원 Eh29, Gal/GalNAc 렉틴, 단백질 CRT, 125 kDa 면역우성(immunodominant) 항원, 단백질 M17, 부착분자(adhesin) ADH112, 단백질 STIRP(이질아메바, 아메바증); 메이저 표면 단백질(Major surface proteins) 1 내지 5(MSP1a, MSP1b, MSP2, MSP3, MSP4, MSP5), 타입 IV 분비 시스템(secreotion system) 단백질(VirB2, VirB7, VirB11, VirD4)(아나플라스마 속, 아나플라즈마증); 방어 항원 PA, 부종 인자 EF, 치사 인자 LF, S층 상동성 단백질 SLH(바실러스 앤스래시스, 탄저병); 아크라노리신, 포스포리파아제 D, 콜라겐-결합 단백질 CbpA(용혈성 아카노박테리아균, 용혈성 아카노박테리아균 감염); 뉴클레오캡시드 단백질 NP, 당단백질 전구체 GPC, 당단백질 GP1, 당단백질 GP2(후닌 바이러스, 아르헨티나 출혈열); 키틴-단백질 층 단백질, 14 kDa 표면 항원 A14, 메이저 정자(major sperm) 단백질 MSP, MSP 중합-조직화(polymerization-organizing) 단백질 MPOP, MSP 섬유 단백질 2 MFP2, MSP 중합-활성 키나제 MPAK, ABA-1-유사 단백질 ALB, 단백질 ABA-1, 표피소 CUT-1(아스카리스 룸브리코이데스, 회충증); 41 kDa 알레르겐 Asp v13, 알레르겐 Asp f3, 메이저 분생자 표면 단백질 rodlet A, 단백질가수분해효소 Pep1p, GPI 닻형 단백질 Gel1p, GPI 닻형 단백질 Crf1p(아스퍼질러스 속, 아스페르질루스증); 패밀리 VP26 단백질, VP29 단백질(아스트로비리다에, 아스트로바이러스 감염); 롭트리-관련 단백질 1 RAP-1, 메로조이트 표면 항원 MSA-1, MSA-2(a1, a2, b, c), 12D3, 11C5, 21B4, P29, 변형 에리스로사이트 표면 항원 VESA1, 정단막(Apical Membrane) 항원 1(AMA-1)(바베시아 속, 바베시아증); 용혈소, 엔테로톡신 C, PXO1-51, 글라이콜산 산화효소, ABC-운반체, 페니실린 결합 단백질, 아연 운반체 패밀리 단백질, 슈도우리딘 생성효소 Rsu, 플라스미드 복제 단백질 RepX, 올리고엔도펩티다제 F, 프로파지 막 단백질, 단백질 HemK, 편모 항원 H, 28.5-kDa 세포 표면 항원(바실러스 세레우스, 바실러스 세레우스 감염); 대형 T 항원 LT, 소형 T 항원, 캡시드 단백질 VP1, 캡시드 단백질 VP2(BK 바이러스, BK 바이러스 감염); 29 kDa-단백질, 카스파제-3-유사 항원, 당단백질(블라스토시스티스 호미니스, 블라스토시스티스 호미니스 감염); 효모 표면 부착분자 WI-1(블라스토미세스 더마티티디스, 블라스토미세스); 뉴클레오단백질 N, 중합효소 L, 매트릭스 단백질 Z, 당단백질 GP(마츄포 바이러스, 볼리비아 출혈열); 외부 표면 단백질 A OspA, 외부 표면 단백질 OspB, 외부 표면 단백질 OspC, 데코린 결합 단백질 A DbpA, 데코린 결합 단백질 B DbpB, 편모 필라멘트 41 kDa 코어 단백질 Fla, 염기성 막 단백질 A 전구체 BmpA(면역우성 항원 P39), 외부 표면 22 kDa 지질단백질 전구체(항원 IPLA7), 다양한 표면 지질단백질 vlsE(보렐리아 속, 보렐리아 감염); 보툴리눔 뉴로톡신 BoNT/A1, BoNT/A2, BoNT/A3, BoNT/B, BoNT/C, BoNT/D, BoNT/E, BoNT/F, BoNT/G, 재조합 보툴리눔 독소 F Hc 도메인 FHc(클로스트리듐 보툴리눔, 보툴리누스 중독증 (및 유아 보툴리누스증)); 뉴클레오캡시드, 당단백질 전구체(사비아 바이러스, 브라질 출혈열); 구리/아연 과산화물 제거효소 SodC, 박테리오페리틴 Bfr, 50S 리보솜 단백질 RplL, OmpA-유사 막관통 도메인 함유 단백질 Omp31, 면역성 39-kDa 단백질 M5 P39, 아연 ABC 운반체 주변세포질 아연-결합 단백질 znuA, 주변세포질 면역성 단백질 Bp26, 30S 리보솜 단백질 S12 RpsL, 글리세르알데하이드-3-인산 탈수소효소 Gap, 25 kDa 외막 면역성 단백질 전구체 Omp25, 침습 단백질 B lalB, 촉발 인자 Tig, 분자적 샤페론 DnaK, 추정 펩티딜-프로릴 시스-트랜스 이성질화효소(putative peptidyl-prolyl cis-trans isomerase) SurA, 지질단백질 Omp19, 외막 단백질 MotY Omp16, 보존된 외막 단백질 D15, 말산 탈수소효소 Mdh, 타입-IV 분비 시스템의 구성요소(T4SS) VirJ, 알려지지 않은 기능의 지질단백질 BAB1_0187(브루셀라 속, 브루셀라증); ABC 운반체 막 패밀리(LolC, OppA, and PotF), 추정 지질단백질 방출 시스템 막관통 단백질 LolC/E, 플라젤린 FliC, 부르크홀데리아 세포 내 운동성(Burkholderia intracellular motility) A BimA, 박테리아 신장 인자-Tu EF-Tu, 17 kDa OmpA-유사 단백질, boaA 암호화 단백질, boaB 암호화 단백질(부르크홀데리아 세파시아 및 다른 부르크홀데리아 종, 부르크홀데리아 감염); 미콜-전이효소(mycolyl-transferase) Ag85A, 열충격 단백질 Hsp65, 단백질 TB10.4, 19 kDa 항원, 단백질 PstS3, 열충격 단백질 Hsp70(미코박테리움 울서란스, 브룰리 궤양); 노로바이러스 메이저(major) 및 마이너(minor) 바이러스 캡시드 단백질 VP1 및 VP2, 게놈 다단백질, 사포바이러스 캡시드 단백질 VP1, 단백질 Vp3, 게놈 다단백질(칼리시비리다에 과, 칼리시비리다에 감염(노로바이러스 및 사포바이러스)); 주 외막 단백질 PorA, 플라젤린 FlaA, 표면 항원 CjaA, 피브로넥틴 결합 단백질 CadF, 아스파테이트/글루타메이트-결합 ABC 운반체 단백질 Peb1A, 단백질 FspA1, 단백질 FspA2(캄필로박터 속, 캄필로박테리아증); 글리콜 효소 에놀라제, 분비된 아스파틸 단백질 가수분해효소 SAP1-10, 글리코포스파티딜이노시톨(glycophosphatidylinositol (GPI))-연결된 세포막 단백질, 단백질 Hyr1, 보체 수용체 3-관련 단백질 CR3-RP, 부착분자 Als3p, 열충격 단백질 90 kDa hsp90, 세포 표면 소수성 단백질 CSH(대개 칸디다 알비칸스 및 다른 칸디다 종, 칸디다증); 17-kDa 항원, 단백질 P26, 삼량체 자가운반체 부착분자 TAAs, 바르토넬라 부착분자 A BadA, 가변적으로 발현된 외막 단백질 Vomps, 단백질 Pap3, 단백질 HbpA, 외피 관련 단백질가수분해효소 HtrA, 단백질 OMP89, 단백질 GroEL, 단백질 LalB, 단백질 OMP43, 디히드로리포아미드 숙시닐트랜스퍼라제(dihydrolipoamide succinyltransferase) SucB(바르토넬라 헨셀라에, 고양이찰과상감염증); 아마스티고트(amastigote) 표면 단백질-2, 아마스티고트-특이적 표면 단백질 SSP4, 크루지페인(cruzipain), 트랜스-시알리다제 TS, 트리포마스티고트(trypomastigote) 표면 당단백질 TSA-1, 보체 조절 단백질 CRP-10, 단백질 G4, 단백질 G2, 파락소네말 로드(paraxonemal rod) 단백질 PAR2, 파라플라젤라 로드 성분(paraflagellar rod component) Par1, 뮤신-연관된 표면 단백질 MPSP(트리파노소마 크루지, 샤가스 병(아메리카의 트리파노조마증)); 외피 당단백질(gB, gC, gE, gH, gI, gK, gL)(수두 대상 포진 바이러스(VZV), 수두); 메이저 외막 단백질 MOMP, 외막 단백질일 가능성이 있는 PMPC, 외막단백질 복합체 단백질 B OmcB, 열충격 단백질 Hsp60 HSP10, 단백질 IncA, 타입 III 분비 시스템으로부터 유래한 단백질, 리보뉴클레오티드 환원효소 스몰 체인(ribonucleotide reductase small chain) 단백질 NrdB, 플라스미드 단백질 Pgp3, 클라미디아의 외부 단백질 N CopN, 항원 CT521, 항원 CT425, 항원 CT043, 항원 TC0052, 항원 TC0189, 항원 TC0582, 항원 TC0660, 항원 TC0726, 항원 TC0816, 항원 TC0828(클라미디아 트라코마티스, 클라미디아); 저 칼슘 반응 단백질 E LCrE, 클라미디아의 외부 단백질 N CopN, 세린/트레오닌-단백질 키나아제 PknD, 아실-캐리어-단백질 S-말로닐 전달효소 FabD, 단일가닥 DNA-결합 단백질 Ssb, 메이저 외막 단백질 MOMP, 외막 단백질 2 Omp2, 다형성 막 단백질 패밀리(Pmp1, Pmp2, Pmp3, Pmp4, Pmp5, Pmp6, Pmp7, Pmp8, Pmp9, Pmp10, Pmp11, Pmp12, Pmp13, Pmp14, Pmp15, Pmp16, Pmp17, Pmp18, Pmp19, Pmp20, Pmp21)(클라미도필라 뉴모니아, 클라미도필라 뉴모니아 감염); 콜레라 독소 B CTB, 독소 공조절(toxin coregulated) 필린 A TcpA, 독소 공조절 필린 TcpF, 독소 공조절 필러스 생합성 단백질 F TcpF, 콜레라 엔테로톡신 서브유닛 A, 콜레라 엔테로톡신 서브유닛 B, 열-안정적 엔토로톡신 ST, 만노스-민감성 헤마클루티닌 MSHA, 외막 단백질 U 포린 ompU, 포린 B(Poring B) 단백질, 다형성 막 단백질-D(비브리오 콜레라, 콜레라); 프로피오닐-CoA 카르복실라아제 PCC, 14-3-3 단백질, 프로히비틴, 시스테인 단백질가수분해효소, 글루타티온 전이효소, 겔솔린, 카텝신 L 단백질가수분해효소 CatL, 피막 단백질 20.8 kDa TP20.8, 피막 단백질 31.8 kDa TP31.8, 리소포스파티드산 포스파타아제(lysophosphatidic acid phosphatase) LPAP, (간흡충, 간흡충증); 표면 층 단백질 SLP, 글루탐산탈수소효소 항원 GDH, 독소 A, 독소 B, 시스테인 단백질가수분해효소 Cwp84, 시스테인 단백질가수분해효소 Cwp13, 시스테인 단백질가수분해효소 Cwp19, 세포벽 단백질 CwpV, 플라젤라 단백질 FliC, 플라젤라 단백질 FliD(클로스트리듐 디피실리균, 클로스트리듐 디피실리균 감염); 리노바이러스: 캡시드 단백질 VP1, VP2, VP3, VP4; 코로나바이러스: 스프라이크(sprike) 단백질 S, 외피 단백질 E, 막 단백질 M, 뉴클레오캡시드 단백질 N(대개 리노바이러스 및 코로나바이러스, 감기(급성 바이러스 비인두염; 급성 코리자)); 프리온 단백질 Prp(CJD 프리온, 크로이츠펠트 야곱 질병 (CJD)); 외피 단백질 Gc, 외피 단백질 Gn, 뉴클레오캡시드 단백질(크림-콩고 출혈열 바이러스, 크림-콩고 출혈열(CCHF)); 독성-연관 DEAD-박스 RNA 헬리카제 VAD1, 갈락토실로만난-단백질 GalXM, 글루쿠로녹실로만난 GXM, 만노단백질 MP(크립토코커스 네오포르만스, 크립토코커스증); 산성 리보솜 단백질 P2 CpP2, 뮤신 항원 Muc1, Muc2, Muc3 Muc4, Muc5, Muc6, Muc7, 표면 부착 단백질 CP20, 표면 부착 단백질 CP23, 표면 단백질 CP12, 표면 단백질 CP21, 표면 단백질 CP40, 표면 단백질 CP60, 표면 단백질 CP15, 표면-연관된 글리코펩티드 gp40, 표면-연관된 글리코펩티드 gp15, 오시스트 벽 단백질 AB, 프로필린 PRF, 아피라아제(크립토스포리디움 속, 크립토스포리디움증); 지방산 및 레티놀 결합 단백질-1 FAR-1, 메탈로프로테아제의 조직 억제제(tissue inhibitor of metalloproteinase) TIMP(TMP), 시스테인 단백질분해효소 ACEY-1, 시스테인 단백질분해효소 ACCP-1, 표면 항원 Ac-16, 분비된 단백질 2 ASP-2, 메탈로프로테아제 1 MTP-1, 아스파티딜 단백질가수분해효소 억제제 API-1, 표면-연관된 항원 SAA-1, 성체 특이적 분비 인자 Xa 세린 단백질가수분해효소 억제인자 항응고제 AP, 카텝신 D-유사 아스파틱 단백질가수분해효소 ARR-1(대개 브라질 구충; 많은 다른 기생충, 피부 라바 이행증(CLM)); 카텝신 L-유사 단백질가수분해효소, 53/25-kDa 항원, 8kDa 패밀리 멤버, 약간의 트립신-유사 활성을 갖는 낭미충(cysticercus) 단백질 TsAg5, 육구유충(oncosphere) 단백질 TSOL18, 육구유충 단백질 TSOL45-1A, 젖산탈수소효소 A LDHA, 젖산탈수소효소 B LDHB(유구조충, 낭미충증); pp65 항원, 막 단백질 pp15, 캡시드-기부의 피막 단백질(capsid-proximal tegument protein) pp150, 단백질 M45, DNA 중합효소 UL54, 헬리카제 UL105, 당단백질 gM, 당단백질 gN, 당단백질 H, 당단백질 B gB, 단백질 UL83, 단백질 UL94, 단백질 UL99(거대세포바이러스 (CMV), 거대세포바이러스 감염); 캡시드 단백질 C, 프리멤브레인(premembrane) 단백질 prM, 막 단백질 M, 외피 단백질 E(도메인 I, 도메인 II, 도메인 II), 단백질 NS1, 단백질 NS2A, 단백질 NS2B, 단백질 NS3, 단백질 NS4A, 단백질 2K, 단백질 NS4B, 단백질 NS5(뎅기열 바이러스(DEN-1, DEN-2, DEN-3 및 DEN-4)-플라비바이러스, 뎅기열); 39 kDa 단백질(이핵아메바, 이핵아메바증); 디프테리아 독소 전구체 Tox, 디프테리아 독소 DT, 필린-특이적 소타아제(sortase) SrtA, 샤프트 필린 단백질 SpaA, 팁 필린 단백질 SpaC, 마이너 필린 단백질 SpaB, 표면 연관 단백질 DIP1281(코리네박테리움 디프테리아, 디프테리아); 당단백질 GP, 뉴클레오단백질 NP, 마이너 매트릭스 단백질 VP24, 메이저(major) 매트릭스 단백질 VP40, 전사 촉진인자 VP30, 중합효소 보조인자 VP35, RNA 중합효소 L(에볼라바이러스 (EBOV), 에볼라 출혈열); 프리온 단백질(vCJD 프리온, 변종 크로이츠펠트 야곱병(vCJD, nvCJD)); UvrABC 시스템 단백질 B, 단백질 Flp1, 단백질 Flp2, 단백질 Flp3, 단백질 TadA, 헤모글로빈 수용체 HgbA, 외막 단백질 TdhA, 단백질 CpsRA, 조절자 CpxR, 단백질 SapA, 18 kDa 항원, 외막 단백질 NcaA, 단백질 LspA, 단백질 LspA1, 단백질 LspA2, 단백질 LspB, 외부 막 성분 DsrA, 렉틴 DltA, 지질단백질 Hlp, 메이저 외막 단백질 OMP, 외막 단백질 OmpA2(헤모필러스 듀크레이, 연성하감); 아스파틸 단백질가수분해효소 1 Pep1, 포스포리파아제 B PLB, 알파-만노시다제 1 AMN1, 글루카노실트랜스페라제 GEL1, 우레아제 URE, 과산화소체 기질 단백질 Pmp1, 프롤린-풍부 항원 Pra, 인간 T-세포 반응성 단백질 TcrP(콕시디오이데스 이미티스 및 콕시디오이데스 포사다시, 콕시디오이데스증); 알레르겐 Tri r 2, 열 충격 단백질 60 Hsp60, 곰팡이 액틴 Act, 항원 Tri r2, 항원 Tri r4, 항원 Tri t1, 단백질 IV, 글리세롤-3-인산 탈수소효소 Gpd1, 오스모센서(osmosensor) HwSho1A, 오스모센서 HwSho1B, 히스티딘 키나제 HwHhk7B, 알레르겐 Mala s 1, 알레르겐 Mala s 11, 티오레독신 Trx Mala s 13, 알레르겐 Mala f, 알레르겐 Mala s(대개 트리코파이톤 종, 표피사상균 종, 말라세지아 종., 호르테아 워넥키, 피부 사상균증); 단백질 EG95, 단백질 EG10, 단백질 EG18, 단백질 EgA31, 단백질 EM18, 항원 EPC1, 항원 B, 항원 5, 단백질 P29, 단백질 14-3-3, 8-kDa 단백질, 미오필린(myophilin), 열충격 단백질 20 HSP20, 당단백질 GP-89, 지방산 결합 단백질 FAPB(에키노코쿠스 속, 에키노코 쿠스증); 메이저 표면 단백질 2 MSP2, 메이저 표면 단백질 4 MSP4, MSP 변이체 SGV1, MSP 변이체 SGV2, 외막 단백질 OMP, 외막 단백질 19 OMP-19, 메이저 항원성 단백질 MAP1, 메이저 항원성 단백질 MAP1-2, 메이저 항원성 단백질 MAP1B, 메이저 항원성 단백질 MAP1-3, Erum2510 암호화 단백질, 단백질 GroEL, 단백질 GroES, 30-kDA 메이저 외막 단백질, GE 100-kDa 단백질, GE 130-kDa 단백질, GE 160-kDa 단백질(에를리키아 속, 에를리키아 증); 분비된 항원 SagA, sagA-유사 단백질 SalA 및 SalB, 콜라겐 부착분자 Scm, 표면 단백질 Fms1(EbpA(fm), Fms5 (EbpB(fm), Fms9 (EpbC(fm) 및 Fms10, 단백질 EbpC(fm), 96 kDa 면역보호 당단백질 G1(엔테로코쿠스 속, 엔테로코쿠스 감염); 게놈 다단백질, 중합효소 3D, 바이러스 캡시드 단백질 VP1, 바이러스 캡시드 단백질 VP2, 바이러스 캡시드 단백질 VP3, 바이러스 캡시드 단백질 VP4, 단백질가수분해효소 2A, 단백질가수분해효소 3C(엔테로바이러스 속, 엔테로바이러스 감염); 외막 단백질 OM, 60 kDa 외막 단백질, 세포 표면 항원 OmpA, 세포 표면 항원 OmpB (sca5), 134 kDa 외막 단백질, 31 kDa 외막 단백질, 29.5 kDa 외막 단백질, 세포 표면 단백질 SCA4, 세포 표면 단백질 Adr1 (RP827), 세포 표면 단백질 Adr2 (RP828), 세포 표면 단백질 SCA1, 침입 단백질 invA, 세포 분할 단백질 fts, 분비 단백질 sec 0family, 독성 단백질 virB, tlyA, tlyC, 파불린-유사 단백질 Plp, 프리프로테인 전이효소 SecA, 120- kDa 표면 단백질 항원 SPA, 138 kD 복합체 항원, 메이저 100-kD 단백질(단백질 I), 세포질 내 단백질 D, 보호 표면 단백질 항원 SPA(리케치아 프로바제키, 발진 티푸스); 엡스테인-바 핵(Epstein Barr nuclear) 항원(EBNA-1, EBNA-2, EBNA-3A, EBNA-3B, EBNA-3C, EBNA-리더 단백질(EBNA-LP)), 내재 세포막 단백질(LMP-1, LMP-2A, LMP-2B), 초기 항원 EBV-EA, 막 항원 EBV-MA, 바이러스 캡시드 항원 EBV-VCA, 알칼리성 핵산가수분해효소 EBV-AN, 당단백질 H, 당단백질 gp350, 당단백질 gp110, 당단백질 gp42, 당단백질 gHgL, 당단백질 gB(엡스테인-바 바이러스 (EBV), 엡스테인-바 바이러스 감염 전염성 단핵증); 캡시드 단백질 VP2, 캡시드 단백질 VP1, 메이저 단백질 NS1(파보바이러스 B19, 에리더마 감염증(전염성 홍반); pp65 항원, 당단백질 105, 메이저 캡시드 단백질, 외피 당단백질 H, 단백질 U51(인간 헤르페스바이러스6 (HHV-6) 및 인간 헤르페스바이러스 7 (HHV-7), 돌발성 발진증); 티오레독신-글루타티온 환원효소 TGR, 카텝신 L1 및 L2, 쿠니츠-타입(Kunitz-타입) 단백질 KTM, 루신 아미노펩티다아제 LAP, 시스테인 단백질분해효소 Fas2, 사포닌-유사 단백질-2 SAP-2, 티오레독신(Thioredoxin) TPx, Prx-1, Prx-2, 카텝신 l 시스테인 단백질분해효소 CL3, 단백질가수분해효소 카텝신 L CL1, 포스포글리세르산염 키나제 PGK, 27-kDa 분비성 단백질, 60 kDa 단백질 HSP35알파, 글루타티온 전이효소 GST, 28.5 kDa 피막성 항원 28.5 kDa TA, 카텝신 B3 단백질가수분해효소 CatB3, 타입 I 시스타틴 스테핀-1, 카텝신 L5, 카텝신 L1g 및 카텝신 B, 지방산 결합 단백질 FABP, 루신 아미노펩티다아제 LAP(파시올라 헤파티카 및 파시올라 기간티카, 파시올라증); 프리온 단백질(FFI 프리온, 치명적 가족성 불면증(FFI)); 사독 알레르겐 동종체(homolog)-유사 단백질 VAL-1, 어번던트 라바 트랜스크립트(abundant larval transcript) ALT-1, 어번던트 라바 트랜스크립트 ALT-2, 티오레독신 페록시다제(Thioredoxin peroxidase) TPX, 말벌과의(vespid) 알레르겐 동종체 VAH, 티오레독신 페록시다제 2 TPX-2, 항원성 단백질 SXP(펩티데이즈 N, N1, N2, 및 N3), 활성 연관 단백질-1 ASP-1, 티오레독신 TRX, 트랜스글루타미네이즈 BmTGA, 글루타티온-S-전이효소 GST, 미오신, 말벌과의 알레르겐 동종체 VAH, 175 kDa 콜라게나제, 글리세르알데히드-3-인산 탈수소효소 GAPDH, 큐티클의 콜라겐 Col-4, 분비된 라바 산성(larval acidic) 단백질 SLAP, 키티나아제(chitinase) CHI-1, 말토오스 결합 단백질 MBP, 당분해 효소 프럭토오스-1,6-비스포스페이트 알돌레이즈 Fba, 트로포미오신 TMY-1, 네마토드 특이적 유전자 산물 OvB20, 온코시스타틴(onchocystatin) CPI-2, Cox-2(사상충 상과, 사상충증); 포스포리파제 C PLC, 열-불안정성 엔토로톡신, 이오타 독소(Iota toxin) 성분 Ib, 단백질 CPE1281, 피루베이트 페레독신 산화환원효소, 신장 인자 G EF-G, 퍼플린고라이신(perfringolysin) O Pfo, 글리세르 알데히드-3-인산 탈수소효소 GapC, 프럭토오스-비스포스페이트 알돌레이즈 Alf2, 클로스트리디움 퍼프린젠스 엔테로톡신 CPE, 알파 톡신 AT, 알파 변성독소 ATd, 엡실론-변성독소 ETd, 단백질 HP, 라지 사이토톡신 TpeL, 엔도-베타-N-아세틸글루코사미니다제 Naglu, 포스포글리세로뮤타아제 Pgm(클로스트리듐 퍼프린젠스, 클로스트리듐 퍼프린젠스에 의한 식중독); 류코톡신 lktA, 부착 FadA, 외막 단백질 RadD, 고분자량 아르기닌-결합 단백질(푸소박테륨 속, 푸소박테륨 감염); 포스포리파제 C PLC, 열-불안정성 엔테로톡신 B, 이오타 독소 성분 Ib, 단백질 CPE1281, 피루베이트 페레독신 산화환원효소(pyruvate ferredoxin oxidoreductase), 신장 인자 G EF-G, 퍼플린고라이신(perfringolysin) O Pfo, 글리세르알데히드-3-인산 탈수소효소 GapC, 프럭토오스-비스포스페이트 알돌레이즈 Alf2, 클로스트리디움 퍼프린젠스 엔테로톡신 CPE, 알파 독소 AT, 알파 변성독소 ATd, 엡실론-변성독소 ETd, 단백질 HP, 라지 사이토톡신 TpeL, 엔도-베타-N-아세틸 글루코사미니다제 Naglu, 포스포글리세로뮤타아제 Pgm(대개 클로스트리디움 퍼프린젠스; 다른 클로스트리디움 종, 가스 괴저병(클로스트리듐성 미오네크로시스)); 리파제 A, 리파제 B, 페록시다제 Dec1(게오트리쿰 칸디둠, 게오트리쿰증); 프리온 단백질(GSS 프리온, 게르스트만 슈투로이슬러 샤잉커 병(Gerstmann-StrausslerScheinker syndrome (GSS))); 시스트 벽(cyst wall) 단백질 CWP1, CWP2, CWP3, 변이체 표면 단백질 VSP, VSP1, VSP2, VSP3, VSP4, VSP5, VSP6, 56 kDa 항원, 피루베이트 페레독신 산화환원효소 PFOR, 알콜 탈수소효소 E ADHE, 알파-기아딘(alpha-giardin), 알파8-기아딘, 알파1-기아딘, 베타-기아딘, 시스테인 단백질가수분해효소, 글루타티온-S-전이효소 GST, 아르기닌 디이미나제 ADI, 프럭토오스-1,6-비스포스페이트 알돌레이즈 FBA, 기아르디아 영양체 항원 GTA(GTA1, GTA2), 오르니틴 카르복실 전이효소 OCT, 가로무늬 섬유-조립-유사 단백질 SALP, 우리딘 포스포릴-유사 단백질 UPL, 알파-튜불린, 베타-튜불린(기아르디아 인테스티날리스, 기아르디아증); ABC 운반체 패밀리 멤버(LolC, OppA, 및 PotF), 추정 지질단백질 방출 시스템 트랜스멤브레인 단백질 LolC/E, 플라젤린 FliC, 부르크홀데리아 세포 내 운동성 A BimA, 박테리아의 신장 인자-Tu EF-Tu, 17 kDa OmpA-유사 단백질, boaA 암호화 단백질(부르크홀데리아 말레이, 마비저(Glanders)); 사이클로필린 CyP, 24 kDa 3기 라바 단백질 GS24, 배출-분비 산물 ESP(40, 80, 120 및 208 kDa)(그나토스토마 스피니저룸(Gnathostoma spinigerum) 및 그나토스토마 히스피둠(Gnathostoma hispidum), 유극악구충증); 필린 단백질, 마이너 필린-연관 서브유닛 pilC, 메이저 필린 서브유닛 및 변이체 pilE, pilS, 상 변이 단백질 porA, 포린 B PorB, 단백질 TraD, 나이세리아의 외막 항원 H.8, 70kDa 항원, 메이저 외막 단백질 PI, 외막 단백질 PlA 및 PlB, W 항원, 표면 단백질 A NspA, 트랜스페린 결합 단백질 TbpA, 트랜스페린 결합 단백질 TbpB , PBP2, mtrR 암호화 단백질, ponA 암호화 단백질, 막 투과효소(membrane permease) FbpBC, FbpABC 단백질 시스템, LbpAB 단백질, 외막 단백질 Opa, 외막 운반체 FetA, 철-억제 조절자 MpeR(임균, 임균 감염증); 외막 단백질 A OmpA, 외막 단백질 C OmpC, 외막 단백질 K17 OmpK17(클렙시엘라 그래뉼로마티스, 서혜부 육아종(Donovanosis)); 피브로넥틴-결합 단백질 Sfb, 피브로넥틴/피브리노겐-결합 단백질 FBP54, 피브로넥틴-결합 단백질 FbaA, M 단백질 타입 1 Emm1, M 단백질 타입 6 Emm6, 면역글로불린-결합 단백질 35 Sib35, 표면 단백질 R28 Spr28, 과산화물제거효소 SOD, C5a 펩티다제 ScpA, 항원 I/II AgI/II, 부착분자 AspA, G-연관된 알파2-매크로글로불린-결합 단백질 GRAB, 표면 피브릴라(surface fibrillar) 단백질 M5(스트렙토코쿠스 피오제네스, A군 스트렙토코쿠스 감염); C 단백질 베타 항원, 아르기닌 디이미나아제 단백질, 부착분자 BibA, 105 kDA 단백질 BPS, 표면 항원 c, 표면 항원 R, 표면 항원 X, 트립신-저항성 단백질 R1, 트립신-저항성 단백질 R3, 트립신-저항성 단백질 R4, 표면 면역성 단백질 Sip, 표면 단백질 Rib, 류신-풍부 반복(Leucine-rich repeats) 단백 질 LrrG, 류신-풍부 반복 단백질 Srr-2, C 단백질 알파-항원 Bca, Beta 항원 Bag, 표면 항원 엡실론, 알파-유사 단백질 ALP1, 알파-유사 단백질 ALP5 표면 항원 델타, 알파-유사 단백질 ALP2, 알파-유사 단백질 ALP3, 알파-유사 단백질 ALP4, 크베타(Cbeta) 단백질 Bac(스트렙토코쿠스 아갈락티아, B군 스트렙토코쿠스 감염); 트랜스 페린-결합 단백질 2 Tbp2, 포스파테이즈 P4, 외막 단백질 P6, 펩티도글리칸-연관 지질단백질 Pal, 단백질 D, 단백질 E, 부착 및 침투 단백질 Hap, 외막 단백질 26 Omp26, 외막 단백질 P5(핌브린(Fimbrin)), 외막 단백질 D15, 외막 단백질 OmpP2, 5'-뉴클레오티드가수분해효소 NucA, 외막 단백질 P1, 외막 단백질 P2, 외막 지질단백질 Pcp, 지질단백질 E, 외막 단백질 P4, 푸쿨로키나제(fuculokinase) FucK, [Cu,Zn]-과산화물제거효소 SodC, 단백질가수분해효소 HtrA, 단백질 O145, 알파-갈락토실세라마이드(헤모필루스 인플루엔자, 헤모필루스 인플루엔자 감염); 중합효소 3D, 바이러스 캡시드 단백질 VP1, 바이러스 캡시드 단백질 VP2, 바이러스 캡시드 단백질 VP3, 바이러스 캡시드 단백질 VP4, 단백질가수분해효소 2A, 단백질가수분해효소 3C(엔테로바이러스, 주로 콕사키 A 바이러스 및 엔테로바이러스 71(EV71), 수족구병 (HFMD)); RNA 중합효소 L, 단백질 L, 당단백질 Gn, 당단백질 Gc, 뉴클레오캡시드 단백질 S, 외피 당단백질 G1, 뉴클레오단백질 NP, 단백질 N, 다단백 M(신 놈브레 바이러스, 한타바이러스, 한타바이러스 폐 증후군 (HPS)); 열충격 단백질 HspA, 열충격 단백질 HspB, 시트레이트 합성효소 GltA, 단백질 UreB, 열충격 단백질 Hsp60, 뉴트로필-활성화 단백질 NAP, 카탈라아제 KatA, 공포화(vacuolating) 사이토톡신 VacA, 우레아제 알파 UreA, 우레아제 베타 Ureb, 단백질 Cpn10, 단백질 groES, 열충격 단백질 Hsp10, 단백질 MopB, 세포독성-연관 10 kDa 단백질 CAG, 36 kDa 항원, 베타-락타마아제 HcpA, 베타락타마아제 HcpB(헬리코박터 파이로리, 헬리코박터 파이로리 감염); 내재 막 단백질, 응집하기 쉬운(aggregation-prone) 단백질, O-항원, 독소-항원 Stx2B, 독소-항원 Stx1B, 부착-항원 절편 Int28, 단백질 EspA, 단백질 EspB, 인티민(Intimin), 단백질 Tir, 단백질 IntC300, 단백질 Eae(대장균 O157:H7, O111 및 O104:H4, 용혈성 요독 증후군(HUS)); RNA 중합효소 L, 단백질 L, 당단백질 Gn, 당단백질 Gc, 뉴클레오캡시드 단백질 S, 외피 당단백질 G1, 뉴클레오단백질 NP, 단백질 N, 다단백 M (부니아바이러스 과, 신증후군 출혈열(Hemorrhagic fever with renal syndrome (HFRS))); 당단백질 G, 매트릭스 단백질 M, 뉴클레오단백질 N, 융합 단백질 F, 중합효소 L, 단백질 W, 단백질 C, 인단백질 p, 비-구조적 단백질 V (헤니파바이러스(헨드라 바이러스 니파 바이러스), 헤니파바이러스 감염); 다단백, 글라이코프로텐(glycoproten) Gp2, A형 간염 표면 항원 HBAg, 단백질 2A, 바이러스 단백질 VP1, 바이러스 단백질 VP2, 바이러스 단백질 VP3, 바이러스 단백질 VP4, 단백질 P1B, 단백질 P2A, 단백질 P3AB, 단백질 P3D(A형 간염 바이러스, A형 간염); B형 간염 표면 항원 HBsAg, B형 간염 코어 항원 HbcAg, 중합효소, 단백질 Hbx, preS2 중간(middle) 표면 단백질, 표면 단백질 L, 라지(large) S 단백질, 바이러스 단백질 VP1, 바이러스 단백질 VP2, 바이러스 단백질 VP3, 바이러스 단백질 VP4(B형 간염 바이러스(HBV), B형 간염); 외피 당단백질 E1 gp32 gp35 , 외피 당단백질 E2 NS1 gp68 gp70, 캡시드 단백질 C, 코어 단백질 Core, 다단백, 바이러스 단백질 VP1, 바이러스 단백질 VP2, 바이러스 단백질 VP3, 바이러스 단백질 VP4, 항원 G, 단백질 NS3, 단백질 NS5A, (C형 간염 바이러스, C형 간염); 바이러스 단백질 VP1, 바이러스 단백질 VP2, 바이러스 단백질 VP3, 바이러스 단백질 VP4, 라지 간염 델타 항원, 스몰 간염 델타 항원(D형 간염 바이러스, D형 간염); 바이러스 단백질 VP1, 바이러스 단백질 VP2, 바이러스 단백질 VP3, 바이러스 단백질 VP4, 캡시드 단백질 E2(E형 간염 바이러스, E형 간염); 당단백질 L UL1, 우라실-DNA 글라이코실라아제 UL2, 단백질 UL3, 단백질 UL4, DNA 복제 단백질 UL5, 포탈(portal) 단백질 UL6, 비리온 성숙(virion maturation) 단백질 UL7, DNA 헬리카제 UL8, 복제 오리진-결합 단백질 UL9, 당단백질 M UL10, 단백질 UL11, 알칼리성의 핵산말단가수분해효소 UL12, 세린-트레오닌 단백질 키나제 UL13, 피막 단백질 UL14, 티미나아제 UL15, 피막 단백질 UL16, 단백질 UL17, 캡시드 단백질 VP23 UL18, 메이저 캡시드 단백질 VP5 UL19, 멤브레인 단백질 UL20, 피막 단백질 UL21, 당단백질 H (UL22), 티민딘 키나제 UL23, 단백질 UL24, 단백질 UL25, 캡시드 단백질 P40 (UL26, VP24, VP22A), 당단백질 B(UL27), ICP18.5 단백질(UL28), 메이저 DNA-결합 단백질 ICP8(UL29), DNA 중합효소 UL30, 핵막 단백질 UL31, 외피 당단백질 UL32, 단백질 UL33, 내부 핵막 단백질 UL34, 캡시드 단백질 VP26(UL35), 라지 피막 단백질 UL36, 캡시드 조립(assembly) 단백질 UL37, VP19C 단백질(UL38), 리보뉴클레오티드 환원효소(라지 서브유닛) UL39, 리보뉴클레오티드 환원효소(스몰 서브유닛) UL40, 피막 단백질/비리온 숙주 차단 VHS 단백질(UL41), DNA 중합효소 진행성 인자 UL42, 멤브레인 단백질 UL43, 당단백질 C(UL44), 멤브레인 단백질 UL45, 피막 단백질 VP11/12 (UL46), 피막 단백질 VP13/14 (UL47), 비리온 성숙 단백질 VP16(UL48, 알파-TIF), 외피 단백질 UL49, dUTP 디포스파타아제 UL50, 피막 단백질 UL51, DNA 헬리카제/프리마아제 복합체 단백질 UL52, 당단백질 K(UL53), 전사 제어 단백질 IE63(ICP27, UL54), 단백질 UL55, 단백질 UL56, 바이러스 복제 단백질 ICP22(IE68, US1), 단백질 US2, 세린/트레오닌-단백질 키나제 US3, 당단백질 G(US4), 당단백질 J(US5), 당단백질 D(US6), 당단백질 I(US7), 당단백질 E(US8), 피막 단백질 US9, 캡시드/피막 단백질 US10, Vmw21 단백질(US11), ICP47 단백질(IE12, US12), 메이저 전사 촉진자 ICP4(IE175, RS1), E3 유비퀴틴 리가제 ICP0 (IE110), 잠복-관련(latencyrelated) 단백질 1 LRP1, 잠복-관련 단백질 2 LRP2, 신경독성 인자(neurovirulence factor) RL1 (ICP34.5), 잠복-관련 전사물(transcript) LAT(헤르페스 심플렉스 바이러스 1 및 2(HSV-1 및 HSV-2), 헤르페스 심플렉스); 열충격 단백질 Hsp60, 세포 표면 단백질 H1C, 디펩티딜펩티드 가수분해효소 타입 IV DppIV, M 항원, 70 kDa 단백질, 17 kDa 히스톤-유사 단백질(히스토플라스마 캅술라튬, 히스토플라스마증); 지방산 및 레티놀 결합 단백질-1 FAR-1, 메탈로단백질분해효소의 조직 억제자 TIMP(TMP), 시스테인 단백질분해효소 ACEY-1, 시스테인 단백질분해효소 ACCP-1, 표면 항원 Ac-16, 분비된 단백질 2 ASP-2, 메탈로단백질가수분해효소 1 MTP-1, 아스파티딜 단백질가수분해효소 억제자 API-1, 표면-연관 항원 SAA-1, 표면-연관 항원 SAA-2, 성체 특이적 분비 인자 Xa, 세린 단백질가수분해효소 억제자 항응고제 AP, 카텝신 D-유사 아스파틱 단백질가수분해효소 ARR-1, 글루타티온 S-전이효소 GST, 아스파틱 단백질가수분해효소 APR-1, 아세틸콜린에스테라제 AChE(십이지장충 및 아메리카 구충, 구충(Hookworm) 감염); 단백질 NS1, 단백질 NP1, 단백질 VP1, 단백질 VP2, 단백질 VP3(인간 보카바이러스(HBoV), 인간 보카바이러스 감염); 메이저 표면 단백질 2 MSP2, 메이저 표면 단백질 4 MSP4, MSP 변이체 SGV1, MSP 변이체 SGV2, 외막 단백질 OMP, 외막 단백질 19 OMP-19, 메이저 항원성 단백질 MAP1, 메이저 항원성 단백질 MAP1-2, 메이저 항원성 단백질 MAP1B, 메이저 항원성 단백질 MAP1-3, Erum2510 암호화 단백질, 단백질 GroEL, 단백질 GroES, 30-kDA 메이저 외막 단백질, GE 100-kDa 단백질, GE 130-kDa 단백질, GE 160-kDa 단백질(에를리키아 에인지, 인간 에인지 에를리키아증); 메이저 표면 단백질 1-5(MSP1a, MSP1b, MSP2, MSP3, MSP4, MSP5), 타입 IV 분비 시스템 단백질 VirB2, VirB7, VirB11, VirD4(아나플라스마 파고사이토필럼, 인간 과립구 아나플라즈마 증후군(HGA)); 단백질 NS1, 작은 소수성 단백질 NS2, SH 단백질, 융합 단백질 F, 당단백질 G, 매트릭스 단백질 M, 매트릭스 단백질 M2-1, 매트릭스 단백질 M2-2, 인단백질 P, 뉴클레오단백질 N, 중합효소 L(인간 메타뉴모바이러스(hMPV), 인간 메타뉴모바이러스 감염); 메이저 표면 단백질 2 MSP2, 메이저 표면 단백질 4 MSP4, MSP 변이체 SGV1, MSP 변이체 SGV2, 외막 단백질 OMP, 외막 단백질 19 OMP-19, 메이저 항원성 단백질 MAP1, 메이저 항원성 단백질 MAP1-2, 메이저 항원성 단백질 MAP1B, 메이저 항원성 단백질 MAP1-3, Erum2510 암호화 단백질, 단백질 GroEL, 단백질 GroES, 30-kDA 메이저 외막 단백질, GE 100-kDa 단백질, GE 130-kDa 단백질, GE 160-kDa 단백질(에를리키아 샤펜시스, 인간 단핵구 에를리키아 감염증); 복제 단백질 E1, 조절 단백질 E2, 단백질 E3, 단백질 E4, 단백질 E5, 단백질 E6, 단백질 E7, 단백질 E8, 메이저 캡시드 단백질 L1, 마이너 캡시드 단백질 L2(인유두종 바이러스 (HPV), 인유두종 바이러스(HPV) 감염); 융합 단백질 F, 혈구응집소-뉴라미다제(hemagglutinin-neuramidase) HN, 당단백질 G, 매트릭스 단백질 M, 인단백질 P, 뉴클레오단백질 N, 중합효소 L(인간 파라인플루엔자 바이러스(HPIV), 인간 파라인플루엔자 바이러스 감염); 혈구응집소(HA), 뉴라미니다아제 (NA), 뉴클레오단백질(NP), M1 단백질, M2 단백질, NS1 단백질, NS2 단백질 (NEP 단백질: 핵 외부 수송(nuclear export) 단백질), PA 단백질, PB1 단백질(중합효소 염기성 1 단백질), PB1-F2 단백질 및 PB2 단백질(오르소믹소 바이러스과, 인플루엔자 바이러스(독감)); 게놈 다단백질, 단백질 E, 단백질 M, 캡시드 단백질 C(일본 뇌염 바이러스, 일본 뇌염); RTX 독소, 타입 IV 필리, 메이저 필루스 서브유닛 PilA, 조절 전사 인자 PilS 및 PilR, 단백질 sigma54, 외막 단백질(킨젤라 킨가에, 킨젤라 킨가에 감염); 프리온 단백질(쿠루 프리온, 쿠루); 뉴클레오단백질 N, 중합효소 L, 매트릭스 단백질 Z, 당단백질 GP(라사 바이러스, 라사 열); 펩티도글리칸-연관 지질단백질 PAL, 60 kDa 샤페로닌 Cpn60(groEL, HspB), 타입 IV 필린 PilE, 외막 단백질 MIP, 메이저 외막 단백질 MompS, 아연 메탈로단백질분해효소 MSP(레지오넬라 뉴모필라, 레지오넬라증(레지오넬라증, 폰티악열병)); P4 핵산가수분해효소, 단백질 WD, 리보뉴클레오티드 환원효소 M2, 표면 멤브레인 당단백질 Pg46, 시스테인 단백질분해효소 CP, 포도당-조절 단백질 78 GRP-78, 단계-특이적 S 항원-유사 단백질 A2, ATPase F1, 베타-튜불린, 열충격 단백질 70 Hsp70, KMP-11, 당단백질 GP63, 단백질 BT1, 뉴클레오티드 가수분해효소 NH, 세포 표면 단백질 B1, 리보솜 단백질 P1-유사 단백질 P1, 스테롤 24-c-메틸전달효소 SMT, LACK 단백질, 히스톤 H1, SPB1 단백질, 티올 특이적 항산화제 TSA, 단백질 항원 STl1, 신호 펩티드가수분해효소 SP, 히스톤 H2B, 표면 항원 PSA-2, 시스테인 단백질분해효소 b Cpb(리슈마니아 속, 리슈마니아증); 메이저 멤브레인 단백질 I, 세린-풍부 항원-45 kDa, 10 kDa 카페로닌(caperonin) GroES, HSP kDa 항원, 아미노-옥소노나노에이트 합성효소(amino-oxononanoate synthase) AONS, 단백질 재조합효소 A RecA, 아세틸-/프로피오닐-코엔자임 A 카르복실화효소 알파, 알라닌 라세미화 효소(alanine racemase), 60 kDa 샤페로닌 2, ESAT-6-유사 단백질 EcxB(L-ESAT-6), 단백질 Lsr2, 단백질 ML0276, 헤파린-결합 혈구응집소(Heparin-binding hemagglutinin) HBHA, 열-충격 단백질 65 Hsp65, mycP1 또는 ML0041 암호화 단백질 , htrA2 또는 ML0176 암호화 단백질, htrA4 또는 ML2659 암호화 단백질, gcp 또는 ML0379 암호화 단백질, clpC 또는 ML0235 암호화 단백질(미코박테리움 레프라에 및 미코박테리움 레프로마토시스, 한센병); 외막 단백질 LipL32, 멤브레인 단백질 LIC10258, 멤브레인 단백질 LP30, 멤브레인 단백질 LIC12238, Ompa-유사 단백질 Lsa66, 표면 단백질 LigA, 표면 단백질 LigB, 메이저 외막 단백질 OmpL1, 외막 단백질 LipL41, 단백질 LigAni, 표면 단백질 LcpA, 부착 단백질 LipL53, 외막 단백질 UpL32, 표면 단백질 Lsa63, 플라젤린 FlaB1, 멤브레인 지질단백질 LipL21, 멤브레인 단백질 pL40, 렙토스피라균의 표면 부착분자 Lsa27, 외막 단백질 OmpL36, 외막 단백질 OmpL37, 외막 단백질 OmpL47, 외막 단백질 OmpL54, 아실전달효소 LpxA(렙토스피라 속, 렙토스피라증); 리스테리오리신 O 전구체 Hly(LLO), 침입-연관 단백질 Iap(P60), 리스테리오리신 조절 단백질 PrfA, 아연 메탈로 단백질분해효소 Mpl, 포스파티딜이노시톨-특이적 포스포리파제 C PLC(PlcA, PlcB), O-아세틸전달효소 Oat, ABC-운반체 투과효소 Im.G_1771, 부착 단백질 LAP, LAP 수용체 Hsp60, 부착분자 LapB, 헤몰리신 리스테리오리신 O LLO, 단백질 ActA, 인터날린 A InlA, 단백질 lnlB(리스테리아 모노사이토제니스, 리스테리아증); 외부 표면 단백질 A OspA, 외부 표면 단백질 OspB, 외부 표면 단백질 OspC, 데코린 결합 단백질 A DbpA, 데코린 결합 단백질 B DbpB, 플라젤라 필라멘트 41 kDa 코어 단백질 Fla, 염기성 멤브레인 단백질 A BmpA(면역우성 항원 P39), 외부 표면 22 kDa 지질단백질 전구체(항원 IPLA7), 다양한 표면 지질단백질 vlsE(대개 보렐리아 부르그도르페리 및 다른 보렐리아 종, 라임병(라임 보렐리아증)); 사독 알레르겐 동종체-유사 단백질 VAL-1, 어번던트 라바 트랜스크립트 ALT-1, 어번던트 라바 트랜스크립트 ALT-2, 티오레독신 페록시다제 TPX, 말벌과의 알레르겐 동종체 VAH, 티오르독신 퍼록시다제(thiordoxin peroxidase) 2 TPX-2, 항원성 단백질 SXP(펩티드 N, N1, N2, 및 N3), 활성화 관련 단백질-1 ASP-1, 티오레독신 TRX, 트랜스글루타미나아제 BmTGA, 글루타티온-S-전이효소 GST, 미오신, 말벌과의 알레르겐 동종체 VAH, 175 kDa 콜라게나제, 글리세르알데히드-3-인산 탈수소효소 GAPDH, 큐티클의 콜라겐 Col-4, 분비된 라바 산성 단백질 SLAP, 키티나아제 CHI-1, 말토오스 결합 단백질 MBP, 글리콜 효소 프럭토오스-1,6-비스포스페이트 알돌라아제 Fba, 트로포미오신 TMY-1, 네마토드 특이적 유전자 산물 OvB20, 온코시스타틴 CPI-2, 단백질 Cox-2(반크로프트 사상충 및 말레이 사상충, 림프사상충(상피병)); 당단백질 GP, 매트릭스 단백질 Z, 중합효소 L, 뉴클레오단백질 N(림프구성 맥락수막염 바이러스(LCMV), 림프구성 맥락수막염); 트롬보스폰딘-관련된 미명의 단백질(thrombospondin-related anonymous protein) TRAP, SSP2 스포로조이트(Sporozoite) 표면 단백질 2, 정단막 항원 1 AMA1, 롭트리 멤브레인 항원 RMA1, 산성 염기성 반복 항원 ABRA, 세포-트라버슬(cell-traversal) 단백질 PF, 단백질 Pvs25, 메로조이트 표면 단백질 1 MSP-1, 메로조이트 표면 단백질 2 MSP-2, 고리-감염 에리스로사이트 표면 항원 RESALiver stage 항원 3 LSA-3, 단백질 Eba-175, 세린 반복 항원 5 SERA-5, 서쿰스포로조이트(circumsporozoite) 단백질 CS, 메로조이트 표면 단백질 3 MSP3, 메로조이트 표면 단백질 8 MSP8, 에놀라아제 PF10, 헤파토사이트 에리스로사이트 단백질 17 kDa HEP17, 에리스로사이트 멤브레인 단백질 1 EMP1, 단백질 Kbeta메로조이트 표면 단백질 4/5 MSP 4/5, 열충격 단백질 Hsp90, 글루타메이트-풍부 단백질 GLURP, 메로조이트 표면 단백질 4 MSP-4, 단백질 STARP, 서쿰스포로조이트 단백질-연관 항원 전구체 CRA(플라스모디움 속, 말라리아); 뉴클레오단백질 N, 멤브레인-연관 단백질 VP24, 마이너 뉴클레오단백질 VP30, 중합효소 보조인자 VP35, 중합효소 L, 매트릭스 단백질 VP40, 외피 당단백질 GP(마부르크 바이러스, 마부르크 출혈열(MHF)); 단백질 C, 매트릭스 단백질 M, 인단백질 P, 비-구조적 단백질 V, 헤마글루티닌 당단백질 H, 중합효소 L, 뉴클레오단백질 N, 융합 단백질 F(홍역 바이러스, 홍역); ABC 운반체 패밀리(LolC, OppA, 및 PotF)의 멤버, 추정 지질단백질 방출 시스템 트랜스멤브레인 단백질 LolC/E, 플라젤린 FliC, 부르크홀데리아 세포 내 운동성 A BimA, 박테리아 신장 인자-Tu EF-Tu, 17 kDa OmpA-유사 단백질, boaA 암호화 단백질, boaB 암호화 단백질(부르크홀데리아 슈도말레이, 유비저(Melioidosis (Whitmore's disease))); 필린 단백질, 마이너 필린-연관 서브유닛 pilC, 메이저 필린 서브유닛 및 변이체 pilE, pilS, 상변이 단백질 porA, 포린 B PorB, 단백질 TraD, 나이세리아의 외막 항원 H.8, 70kDa 항원, 메이저 외막 단백질 PI, 외막 단백질 PlA 및 PlB, W 항원, 표면 단백질 A NspA, 트랜스페린 결합 단백질 TbpA, 트랜스페린 결합 단백질 TbpB , PBP2, mtrR 암호화 단백질, ponA 암호화 단백질, 멤브레인 투과효소 FbpBC, FbpABC 단백질 시스템, LbpAB 단백질, 외막 단백질 Opa, 외막 운반체 FetA, 철-억제 조절자 MpeR, 인자 H-결합 단백질 fHbp, 부착분자 NadA, 단백질 NhbA, 리프레서(repressor) FarR (수막구균성수막염 (Neisseria meningitidis), 뇌막구균 (Meningococcal disease)); 66 kDa 단백질, 22 kDa 단백질(대개 요코가와 흡충, 메타고니무스흡충증); 극성 튜브(polar tube) 단백질(글루기아(Glugea)에서 34, 75, 및 170 kD, 엔세팔리토준(Encephalitozoon)에서 35, 55 및 150kDa), 키네신-연관 단백질, RNA 중합효소 II 가장 큰 서브유닛, 유사한 또는 내재 막 단백질 YIPA, 안티-사일런스 단백질 1, 열충격 전사 인자 HSF, 단백질 키나제, 티미딘 키나제, NOP-2 유사 핵 단백질(마이크로스포리디아 필룸, 마이크로스포리 디아증); CASP8 및 FADD-유사 아폽토시스 조절자, 글루타티온 페록시다제 GPX1, RNA 헬리카제 NPH-II NPH2, Poly(A) 중합효소 촉매 서브유닛 PAPL, 메이저 외피 단백질 P43K, 초기 전사 인자 70 kDa 서브유닛 VETFS, 초기 전사 인자 82 kDa 서브유닛 VETFL, 메탈로엔도펩티다제 G1-타입, 뉴클레오시드 트리포스파타아제 I NPH1, 복제 단백질 A28-유사 MC134L, RNA 중합효소 7 kDa 서브유닛 RPO7(몰루스쿰 콘타기오숨 바이러스 (MCV), 몰루스쿰 콘타기오숨 (MC)); 매트릭스 단백질 M, 인 단백질 P/V, 작은 소수성 단백질 SH, 뉴클레오단백질 N, 단백질 V, 융합 당단백질 F, 헤마글루티닌-뉴라미니다제 HN, RNA 중합효소 L(유행성이하선염 바이러스, 유행성이하선염); 외막 단백질 OM, 세포 표면 항원 OmpA, 세포 표면 항원 OmpB(sca5), 세포 표면 단백질 SCA4, 세포 표면 단백질 SCA1, 세포질내 단백질 D, 크리스탈린 표면 층 단백질 SLP, 보호 표면 단백질 항원 SPA(리케치아 티피, 발진열(Murine typhus (Endemic typhus))); 부착분자 P1, 부착 P30, 단백질 p116, 단백질 P40, 세포골격 단백질 HMW1, 세포골격 단백질 HMW2, 세포골격 단백질 HMW3, MPN152 암호화 단백질, MPN426 암호화 단백질, MPN456 암호화 단백질, MPN-500암호화 단백질(폐렴미코플라스마, 폐렴미코플라스마); NocA, 철 의존적 조절성 단백질, VapA, VapD, VapF, VapG, 카제인 분해성 단백질가수분해효소, 필라멘트 팁-연관성 43-kDa 단백질, 단백질 P24, 단백질 P61, 15-kDa 단백질, 56-kDa 단백질(대개 노카디아 아스테로이드(Nocardia asteroides) 및 다른 노카디아 종, 노카디아증); 사독 알레르겐 동종-유사 단백질 VAL-1, 어번던트 라바 트랜스크립트 ALT-1, 어번던트 라바 트랜스크립트 ALT-2, 티오레독신 페록시다제 TPX, 말벌과의 알레르겐 일종인 VAH, 티오르독신 퍼록시다제 2 TPX-2, 항원성 단백질 SXP (펩티드 N, N1, N2, 및 N3), 활성화 연관 단백질-1 ASP-1, 티오레독신 TRX, 트랜스글루타미나아제 BmTGA, 글루타티온-S-전이효소 GST, 미오신, 말벌과의 알레르겐 일종인 VAH, 175 kDa 콜라게나제, 글리세르알데하이드-3-인산 탈수소효소 GAPDH, 큐티클 콜라겐 Col-4, 분비된 라바 산성 단백질 SLAP, 키티나아제 CHI-1, 말토오스 결합 단백질 MBP, 당분해 효소 프럭토오스-1,6-비스포스페이트 알돌라아제 Fba, 트로포미오신 TMY-1, 네마토드 특이적 유전자 산물 OvB20, 온코시스타틴 CPI-2, Cox-2(온코세르카 볼부루스, 온코세르카증(사상충증(River blindness))); 43 kDa 분비된 당단백질, 당단백질 gp0, 당단백질 gp75, 항원 Pb27, 항원 Pb40, 열 충격 단백질 Hsp65, 열충격 단백질 Hsp70, 열충격 단백질 Hsp90, 단백질 P10, 3탄당인산이성질체화효소 TPI, N-아세틸-글루코사민-결합 렉틴 파라코친, 28 kDa 단백질 Pb28(브라질 파라콕시디오이디즈, 파라콕시디오이드진균증(남아메리카 블라스토마이코시스); 28-kDa 크루지페인-유사 시스테인 단백질가수분해효소 Pw28CCP(대개 웨스터만 폐흡충 및 다른 폐흡충 종, 폐흡충증); 외막 단백질 OmpH, 외막 단백질 Omp28, 단백질 PM1539, 단백질 PM0355, 단백질 PM1417, 보수(repair) 단백질 MutL, 단백질 BcbC, 단백질 PM0305, 포름산 탈수소효소-N, 단백질 PM0698, 단백질 PM1422, DNA 자이레이즈(gyrase), 지질단백질 PlpE, 부착성 단백질 Cp39, 헴 수집 시스템(heme aquisition system) 수용체 HasR, 39 kDa 캡슐 단백질, 철-조절 OMP IROMP, 외막 단백질 OmpA87, 가는 털(fimbrial) 단백질 Ptf, 가는 털 서브유닛 단백질 PtfA, 트랜스페린 결합 단백질 Tbpl, 에스테라아제 효소 MesA, 파스튜렐라 멀토시다(Pasteurella multocida) 독소 PMT, 부착성 단백질 Cp39(파스튜렐라 속, 파스튜렐라증); "필라멘트 헤마글루티닌(filamentous hemagglutinin) FhaB, 아데닐산고리화 효소 CyaA, 퍼터시스(pertussis) 독소 서브유닛 4 전구체 PtxD, 퍼탁틴(pertactin) 전구체 Prn, 독소 서브유닛 1 PtxA, 단백질 Cpn60, 단백질 brkA, 퍼터시스 독소 서브유닛 2 전구체 PtxB, 퍼터시스 독소 서브유닛 3 전구체 PtxC, 퍼터시스 독소 서브유닛 5 전구체 PtxE, 퍼탁틴 Prn, 단백질 Fim2, 단백질 Fim3; "(보르데텔라 퍼터시스, 백일해(Whooping cough)); "F1 캡슐 항원, 독성-연관 V 항원, 분비된 이펙터(effector) 단백질 LcrV, V 항원, 외막 단백질가수분해효소 Pla, 분비된 이펙터(effector) 단백질 YopD, 추정 분비 단백질-티로신 포스파타아제 YopH, 니들(needle) 복합체 메이저 서브유닛 YscF, 단백질 키나제 YopO, 추정 자가수송체 단백질 YapF, 내막(inner membrane) ABC-운반체 YbtQ(Irp7), 추정 당 결합 단백질 YPO0612, 열충격 단백질 90 HtpG, 추정 설파타아제 단백질 YdeN, 외막(outermembrane) 지질단백질 캐리어 단백질 LolA, 분비 샤페론(chaperone) YerA, 추정 지질단백질 YPO0420, 용혈소 활성제(hemolysin activator) 단백질 HpmB, 페스티신/여시니아박틴(pesticin/yersiniabactin) 외막 수용체 Psn, 분비된 이펙터 단백질 YopE, 분비된 이펙터 단백질 YopF, 분비된 이펙터 단백질 YopK, 외막 단백질 YopN, 외막 단백질 YopM, 응집효소/피브리노리신(Coagulase/fibrinolysin) 전구체 Pla; "(여시니아 페스티스 (Yersinia pestis), 플라그(Plague)); 단백질 PhpA, 표면 부착분자 PsaA, 폐렴구균용혈소(pneumolysin) Ply, ATP-의존성 단백질가수분해효소 Clp, 리포에이트(lipoate)-단백질 리가제(ligase) LplA, 세포벽 표면 정착 단백질 psrP, 소타아제 SrtA, 글루타밀-tRNA 합성효소 GltX, 콜린 결합 단백질 A CbpA, 폐렴 쌍구균의 표면 단백질 A PspA, 폐렴쌍구균의 표면 단백질 C PspC, 6-포스포글루코네이트 탈수소효소 Gnd, 철-결합 단백질 PiaA, 뮤레인 하이드로라제(Murein hydrolase) LytB, 프로테온(proteon) LytC, 단백질가수분해효소 A1(스트렙토코쿠스 뉴모니아, 폐렴쌍구균 감염); 메이저 표면 단백질 B, 켁신(kexin)-유사 단백질가수분해효소 KEX1, 단백질 A12, 55 kDa 항원 P55, 메이저 표면 당단백질 Msg(뉴모시스티스 지로베시, 주폐포자충 폐렴(Pneumocystis pneumonia)(PCP)); 게놈 다단백질, 중합효소 3D, 바이러스 캡시드 단백질 VP1, 바이러스 캡시드 단백질 VP2, 바이러스 캡시드 단백질 VP3, 바이러스 캡시드 단백질 VP4, 단백질가수분해효소 2A, 단백질가수분해효소 3C(폴리오바이러스, 폴리오바이러스 감염증); 단백질 Nfa1, 엑센딘(exendin)-3, 분비성 리파제(secretory lipase), 카텝신 B-유사 단백질가수분해 효소, 시스테인 단백질가수분해효소, 카텝신, 페록시레독신(peroxiredoxin), 단백질 Cry1Ac(대개 네글레리아 파울러리, 원발성 아메바성 수막뇌염(PAM)); 아그노단백질(agnoporotein), 라지 T 항원, 스몰 T 항원, 메이저 캡시드 단백질 VP1, 마이너 캡시드 단백질 Vp2(JC 바이러스, 진행성다소성백질뇌염(Progressive multifocal leukoencephalopathy)); 저칼슘 반응(low calcium response) 단백질 E LCrE, 클라미디아(chlamydial) 외부 단백질 N CopN, 세린/트레오닌-단백질 키나제 PknD, 아실-캐리어-단백질 S-말로닐트랜스페라제 (malonyltransferase) FabD, 단일가닥 DNA-결합 단백질 Ssb, 메이저 외막 단백질 MOMP, 외막 단백질 2 Omp2, 다형성 멤브레인 단백질 패밀리(Pmp1, Pmp2, Pmp3, Pmp4, Pmp5, Pmp6, Pmp7, Pmp8, Pmp9, Pmp10, Pmp11, Pmp12, Pmp13, Pmp14, Pmp15, Pmp16, Pmp17, Pmp18, Pmp19, Pmp20, Pmp21)(클라미도필라 프시타시, 앵무새병); 외막 단백질 P1, 열충격 단백질 B HspB, 펩티드 ABC 운반체, GTP-결합 단백질, 단백질 IcmB, 리보핵산가수분해효소 R, 포스파타제(phosphatas) SixA, 단백질 DsbD, 외막 단백질 TolC, DNA-결합 단백 질 PhoB, ATPase DotB, 열충격 단백질 B HspB, 멤브레인 단백질Com1, 28 kDa 단백질, DNA-3-메틸아데닌 글라이코시다제(methyladenine glycosidase) I, 외막 단백질 OmpH, 외막 단백질 AdaA, 글리신 절단 시스템(glycine cleavage system) T-단백질(콕시엘라 부르네티, Q 열); 뉴클레오단백질 N, 라지 구조적(large structural) 단백질 L, 포포프로테인(phophoprotein) P, 매트릭스 단백질 M, 당단백질 G (광견병 바이러스, 광견병); 융합단백질 F, 뉴클레오단백질 N, 매트릭스 단백질 M, 매트릭스 단백질 M2-1, 매트릭스 단백질 M2-2, 포포프로테인(phophoprotein) P, 스몰 소수성(small hydrophobic) 단백질 SH, 메이저 표면 당단백질 G, 중합효소 L, 비-구조적 단백질 1 NS1, 비-구조적 단백질 2 NS2(호흡기 세포 융합 바이러스 (RSV), 호흡기 세포 융합 바이러스 감염); 게놈 다단백질, 중합효소 3D, 바이러스 캡시드 단백질 VP1, 바이러스 캡시드 단백질 VP2, 바이러스 캡시드 단백질 VP3, 바이러스 캡시드 단백질 VP4, 단백질가수분해효소 2A, 단백질가수분해효소 3C(리노바이러스, 리노바이러스 감염); 외막 단백질 OM, 세포 표면 항원 OmpA, 세포 표면 항원 OmpB (sca5), 세포 표면 단백질 SCA4, 세포 표면 단백질 SCA1, 단백질 PS120, 세포질 내(intracytoplasmic) 단백질 D, 보호성 표면 단백질 항원 SPA(리케치아 속, 리케치아 감염); 외막 단백질 OM, 세포 표면 항원 OmpA, 세포 표면 항원 OmpB(sca5), 세포 표면 단백질 SCA4, 세포 표면 단백질 SCA1, 세포질내 단백질 D(리케치아 아카리, 리케치아 두창); 외피 당단백질 GP, 중합효소 L, 뉴클레오단백질 N, 비-구조적 단백질 NSS(리프트 밸리 열 바이러스, 리프트 밸리 열(RVF)); 외막 단백질 OM, 세포 표면 항원 OmpA, 세포 표면 항원 OmpB(sca5), 세포 표면 단백질 SCA4, 세포 표면 단백질 SCA1, 세포질 내 단백질 D(리케치아 리케치(Rickettsia rickettsii), 로키산 홍반 열(Rocky mountain spotted fever)(RMSF)); "비-구조적 단백질 6 NS6, 비-구조적 단백질 2 NS2, 중간(intermediate) 캡시드 단백질 VP6, 내부(inner) 캡시드 단백질 VP2, 비-구조적 단백질 3 NS3, RNA-다이렉트(directed) RNA 중합효소 L, 단백질 VP3, 비-구조적 단백질 1 NS1, 비-구조적 단백질 5 NS5, 외부(outer) 캡시드 당단백질 VP7, 비-구조적 당단백질 4 NS4, 외부 캡시드 단백질 VP4; ; (로타바이러스, 로타바이러스 감염); 다단백 P200, 당단백질 E1, 당단백질 E2, 단백질 NS2, 캡시드 단백질 C(루벨라 바이러스, 루벨라); 샤페로닌(chaperonin) GroEL(MopA), 이노시톨 포스페이트 포스파타제(inositol phosphate phosphatase) SopB, 열 충격 단백질 HslU, 샤페론 단백질 DnaJ, 단백질 TviB, 단백질 IroN, 플라젤린 FliC, 침입(invasion) 단백질 SipC, 당단백질 gp43, 외막 단백질 LamB, 외막 단백질 PagC, 외막 단백질 TolC, 외막 단백질 NmpC, 외막 단백질 FadL, 수송 단백질 SadA, 트랜스페라제 WgaP, 이펙터 단백질 SifA, SteC, SseL, SseJ 및 SseF(살모넬라 속, 살모넬라감염증); "단백질 14, 비-구조적 단백질 NS7b, 비-구조적 단백질 NS8a, 단백질 9b, 단백질 3a, 뉴클레오단백질 N, 비-구조적 단백질 NS3b, 비-구조적 단백질 NS6, 단백질 7a, 비-구조적 단백질 NS8b, 멤브레인 단백질 M, 외피 스몰 멤브레인 단백질 EsM, 복제효소(replicase) 다단백 1a, 스파이크(spike) 당단백질 S, 복제효소 다단백 1ab; SARS 코로나바이러스, SARS(중증 급성 호흡기 증후군); 세린 단백질가수분해효소, 비전형적인 개선충(Atypical Sarcoptes) 항원 1 ASA1, 글루타티온 S-트랜스페라제 GST, 시스테인 단백질가수분해효소, 세린 단백질가수분해효소, 아포지질단백질 (사코프트 스카비에(Sarcoptes scabiei), 스카비스(Scabies)); 글루타티온 S-트랜스페라제 GST, 파라미오신(paramyosin), 헤모글로비나제(hemoglbinase) SM32, 메이저 난(egg) 항원, 14 kDa 지방산-결합 단백질 Sm14, 주요 라바 표면 항원 P37, 22,6 kDa 피막 항원, 칼페인(calpain) CANP, 트리포스페이트 이성질화효소 Tim, 표면 단백질 9B, 외부 캡시드 단백질 VP2, 23 kDa 내재 막 단백질 Sm23, Cu/Zn-과산화물제거효소(superoxide dismutase), 당단백질 Gp, 미오신(주혈흡충 속, 주혈흡충증 (Bilharziosis)); 60 kDa 샤페로닌(chaperonin), 56 kDa 타입-특이적 항원, 피루베이트 포스페이트 다이키나아제(phosphate dikinase), 4-하이드록시벤조에이트 옥타프레닐트랜스페라제(4-hydroxybenzoate octaprenyltransferase)(오리엔티아 쯔쯔가무시, 쯔쯔가무시); 탈수소효소 GuaB, 침입 단백질 Spa32, 인베이신(invasin) IpaA, 인베이신 IpaB, 인베이신 IpaC, 인베이신 IpaD, 인베이신 IpaH, 인베이신 IpaJ(쉬겔라 속, 쉬겔라증(세균성 이질(Bacillary dysentery))); 단백질 P53, 비리온 단백질 US10 동종체, 전사 제어인자(transcriptional regulator) IE63, 전사 촉진 인자(transcriptional transactivator) IE62, 단백질가수분해효소 P33, 알파 트랜스-유도 인자(trans-inducing factor) 74 kDa 단백질, 데옥시우리딘 5'-트리포스페이트 뉴클레오티도하이드롤라아제(deoxyuridine 5'-triphosphate nucleotidohydrolase), 전사 촉진 인자(transcriptional transactivator) IE4, 멤브레인 단백질 UL43 동종체, 핵의 인단백질 UL3 동종체, 핵의 단백질 UL4 핵의, 복제 원점-결합 단백질, 멤브레인 단백질 2, 인단백질 32, 단백질 57,DNA 중합효소 반응 진행성 인자(polymerase processivity factor), 포탈 단백질 54, DNA 프리마아제(primase), 피막 단백질 UL14 동종체 피막 단백질 UL21 동종체, 피막 단백질 UL55 동종체, 트리파티트 터미나아제(tripartite terminase) 서브유닛 UL33 동종체, 트리파티트 터미나아제(tripartite terminase) 서브유닛 UL15 동종체, 캡시드-결합 단백질 44, 비리온-포장(virion-packaging) 단백질 43(수두 대상 포진 바이러스(VZV), 대상포진(Shingles (Herpes zoster))); 절단된(truncated) 3'-베타 하이드록시-5-엔 스테로이드 디하이드로게나제(3-beta hydroxy-5-ene steroid dehydrogenase) 동종체, 비리온 멤브레인 단백질 A13, 단백질 A19, 단백질 A31, 절단된 단백질 A35 동종체, 단백질 A37.5 동종체, 단백질 A47, 단백질 A49, 단백질 A51, 세마포린(semaphorin)-유사 단백질 A43, 세린 단백질분해효소 억제자 1, 세린 단백질분해효소 억제자 2, 세린 단백질분해효소 억제자 3, 단백질 A6, 단백질 B15, 단백질 C1, 단백질 C5, 단백질 C6, 단백질 F7, 단백질 F8, 단백질 F9, 단백질 F11, 단백질 F14, 단백질 F15, 단백질 F16(대두창 또는 소두창, 두창(Smallpox (천연두(Variola)))); 부착분자/당 단백질 gp70, 단백질가수분해효소(스포로트릭스 쉔키, 스포로트리코시스(Sporotrichosis)); 헴-철(hemeiron) 결합 단백질 IsdB, 콜라겐 부착분자 Cna, 클럼핑 인자(clumping factor) A ClfA, 단백질 MecA, 피브로넥틴-결합 단백질 A FnbA, 엔테로톡신 타입 A EntA, 엔테로톡신 타입 B EntB, 엔테로톡신 타입 C EntC1, 엔테로톡신 타입 C EntC2, 엔테로톡신 타입 D EntD, 엔테로톡신 타입 E EntE, 독성 쇼크 증후군 독소1(Toxic shock syndrome toxin-1) TSST-1, 스태필로키나제(Staphylokinase), 페니실린 결합 단백질 2a PBP2a(MecA), 분비성 항원 SssA(스타필로코쿠스 속, 포도상구균 식중독); 헴-철 결합 단백질 IsdB, 콜라겐 부착분자 Cna, 클럼핑 인자 A ClfA, 단백질 MecA, 피브로넥틴-결합 단백질 A FnbA, 엔테로톡신 타입 A EntA, 엔테로톡신 타입 B EntB, 엔테로톡신 타입 C EntC1, 엔테로톡신 타입 C EntC2, 엔테로톡신 타입 D EntD, 엔테로톡신 타입 E EntE, 독성 쇼크 증후군 독소-1 TSST-1, 스태필로키나제, 페니실린 결합 단백질 2a PBP2a (MecA), 분비성 항원 SssA(스타필로코쿠스 속, 예를 들어, 아우레우스, 포도상구균 감염); 항원 Ss-IR, 항원 NIE, 스트롱일라스타신 (strongylastacin), Na+-K+ ATPase Sseat-6, 트로포마이신 SsTmy-1, 단백질 LEC-5, 41 kDa a항원 P5, 41-kDa 라바 단백질, 31-kDa 라바 단백질, 28-kDa 라바 단백질(스트롱일로이드 스테콜라리스, 스트롱일로이드증); 글리세로포스포디에스터 포스포디에스테라제 GlpQ (Gpd), 외막 단백질 TmpB, 단백질 Tp92, 항원 TpF1, 반복(repeat) 단백질 Tpr, 반복 단백질 F TprF, 반복 단백질 G TprG, 반복 단백질 I TprI, 반복 단백질 J TprJ, 반복 단백질 K TprK, 트레포네마(treponemal) 멤브레인 단백질 A TmpA, 지질단백질, 15 kDa Tpp15, 47 kDa 멤브레인 항원, 미니페리틴(miniferritin) TpF1, 부착분자 Tp0751, 지질단백질 TP0136, 단백질 TpN17, 단백질 TpN47, 외막 단백질 TP0136, 외막 단백질 TP0155, 외막 단백질 TP0326, 외막 단백질 TP0483, 외막 단백질 TP0956(트레포네마 팔리둠, 매독); 카텝신 L-유사 단백질가수분해효소s, 53/25-kDa 항원, 8kDa 패밀리 멤버, 미미하게 트립신-유사 활성을 갖는 낭미충(cysticercus) 단백질 TsAg5, 육구유충 단백질 TSOL18, 육구유충 단백질 TSOL45-1A, 젖산 탈수소효소 A LDHA, 젖산 탈수소효소 B LDHB(타이니아 속, 타이니아증); 파상풍 독소 TetX, 파상풍 독소 C TTC, 140 kDa S 층 단백질, 플라보단백질 베타-서브유닛 CT3, 포스포리파제(레시티나아제), 포스포캐리어(phosphocarrier) 단백질 HPr(클로스트리듐 테타니, 파상풍(Tetanus (Lockjaw))); 게놈 다단백질, 단백질 E, 단백질 M, 캡시드 단백질 C(진드기 매개 뇌염 바이러스(Tickborne encephalitis virus(TBEV)), 진드기 매개 뇌염(Tick-borne encephalitis)); 58-kDa 항원, 68-kDa 항원, 톡소카라 라바 배설-분비(Toxocara larvae excretory-secretory) 항원 TES, 32-kDa 당단백질, 당단백질 TES70, 당단백질 GP31, 배설-분비 항원 TcES-57, 장주위의 액체(perienteric fluid) 항원 Pe, 가용성 추출(soluble extract) 항원 Ex, 배설/분비 라바(excretory/secretory larval) 항원 ES, 항원 TES-120, 다단백 알레르겐 TBA-1, 카텝신 L-유사 시스테인 단백질가수분해효소 c-cpl-1, 26-kDa 단백질(개회충(Toxocara canis) 또는 고양이 회충(Toxocara cati), 톡소카라증(Toxocariasis(안구유충이행증(Ocular Larva Migrans (OLM))) 및 장기유충이행증(Visceral Larva Migrans (VLM)))); 미세간상체(microneme) 단백질(MIC1, MIC2, MIC3, MIC4, MIC5, MIC6, MIC7, MIC8), 롭트리(rhoptry) 단백질 Rop2, 롭트리 단백질(Rop1, Rop2, Rop3, Rop4, Rop5, Rop6, Rop7, Rop16, Rjop17), 단백질 SR1,표면 항원 P22, 메이저 항원 p24, 메이저 표면 항원 p30, 고밀도 과립(dense granule) 단백질(GRA1, GRA2, GRA3, GRA4, GRA5, GRA6, GRA7, GRA8, GRA9, GRA10), 28 kDa 항원, 표면 항원 SAG1, SAG2 연관 항원, 뉴클레오시드-트리포스파타제(nucleoside-triphosphatase) 1, 뉴클 레오시드-트리포스파타제 2, 단백질 Stt3, HesB-유사 도메인-포함 단백질, 장사방형(rhomboid)-유사 단백질가수분해효소 5, 톡소멥신(toxomepsin) 1(톡소플라스마 곤디, 톡소플라스모시스(Toxoplasmosis)); 43 kDa 분비된 당단백질, 53 kDa 분비된 당단백질, 파라미오신(paramyosin), 항원 Ts21, 항원 Ts87, 항원 p46000, TSL-1 항원, 카베올린(caveolin)-1 CAV-1, 49 kDa 신생 애벌레(newborn larva) 항원, 프로사포신(prosaposin) 동종체, 세린 단백질가수분해효소, 세린 단백질분해효소 억제자, 45 -kDa 당단백질 Gp45(트리키넬라 스피랄리스, 트리키넬로시스(Trichinellosis)); Myb-유사 전사 인자(Myb1, Myb2, Myb3), 부착 단백질 AP23, 부착 단백질 AP33, 부착분자 단백질 AP33-3, 부착분자s AP51, 부착 분자 AP65, 부착 단백질 AP65-1, 알파-액티닌, 키네신-연관 단백질, 테뉴린, 62 kDa 단백질분해효소, 서브틸신-유사 세린 단백질가수분해효소 SUB1, 시스테인 단백 질분해효소 유전자 3 CP3, 알파-에놀라제 Eno1, 시스테인 단백질분해효소 CP30, 열충격 단백질(Hsp70, Hsp60), 면역성 단백질 P270, (트리코모나스 바지날리스, 트리코모니아시스(Trichomoniasis)); 베타-튜불린, 47-kDa 단백질, 분비성 류코사이트(leucocyte)-유사 단백질분해효소-1 SLP-1, 50-kDa 단백질 TT50, 17 kDa 항원, 43/47 kDa 단백질(트리쿠리스 트리치우라, 편충증(Trichuriasis(편충 감염))); 단백질 ESAT-6(EsxA), 10 kDa 여과액 항원 EsxB, 분비된 항원 85-B FBPB, 피브로넥틴-결합 단백질 A FbpA (Ag85A), 세린 단백질가수분해효소 PepA, PPE 패밀리 단백질 PPE18, 피브로넥틴-결합 단백질 D FbpD, 면역성 단백질 MPT64, 분비된 단백질 MPT51, 카탈라제-페록시다제-퍼옥시니트리타아제(catalaseperoxidase-peroxynitritase) T KATG, 주변세포질 포스페이트-결합(periplasmic phosphate-binding) 지질단백질 PSTS3(PBP-3, Phos-1), 철-조절 헤파린(iron-regulated heparin) 결합 헤마글루티닌 Hbha, PPE 패밀리 단백질 PPE14, PPE 패밀리 단백질 PPE68, 단백질 Mtb72F, 단백질 Apa, 면역성의 단백질 MPT63, 주변세포질 포스페이트-결합 지질단백질 PSTS1(PBP-1), 분자적 샤페론 DnaK, 세포 표면 지질단백질 Mpt83, 지질단백질 P23, 포스페이트 수송 시스템 투과효소 단백질 pstA, 14 kDa 항원, 피브로넥틴-결합 단백질 C FbpC1, 알라닌 탈수소효소 TB43, 글루타민 합성효소 1, ESX-1 단백질, 단백질 CFP10, TB10.4 단백질, 단백질 MPT83, 단백질 MTB12, 단백질 MTB8, Rpf-유사 단백질, 단백질 MTB32, 단백질 MTB39, 크리스탈린(crystallin), 열-충격 단백질 HSP65, 단백질 PST-S(대개 미코박테리움 튜버큘로시스, 결핵); 외막 단백질 FobA, 외막 단백질 FobB, 세포 내의 성장 지점(intracellular growth locus) lglC1, 세포 내의 성장 지점 IglC2, 아미노트랜스페라제 Wbtl, 샤페로닌(chaperonin) GroEL, 17 kDa 메이저 멤브레인 단백질 TUL4, 지질단백질 LpnA, 키티나아제 패밀리 18 단백질, 이소시트레이트 탈수소효소(isocitrate dehydrogenase), Nif3 패밀리 단백질, 타입 IV 필리 글라이코실레이션(pili glycosylation) 단백질, 외막 단백질 tolC, FAD 결합 패밀리 단백질, 타입 IV 필린 멀티머 외막 단백질, 두 성분 센서(two component sensor) 단백 질 KdpD, 샤페론(chaperone) 단백질 DnaK, 단백질 TolQ(프란시셀라 툴라렌시스, 야토병(Tularemia)); "MB 항원, 우레아제, 단백질 GyrA, 단백질 GyrB, 단백질 ParC, 단백질 ParE, 지질 관련 멤브레인 단백질 LAMP, 티미딘 키나제 TK, 포스포리파제 PL-A1, 포스포리파제 PL-A2, 포스포리파제 PL-C, 표면-발현된 96-kDa 항원; "(우레아플라즈마 우레알리티쿰, 우레아플라즈마 우레알리티쿰 감염); 비-구조적 다단백, 구조적 다단백, 캡시드 단백질 CP, 단백질 E1, 단백질 E2, 단백질 E3, 단백질가수분해효소 P1, 단백질가수분해효소 P2, 단백질가수분해효소 P3(베네주엘라 말 뇌염 바이러스 , 베네주엘라 말 뇌염); 당단백질 GP, 매트릭스 단백질 Z, 중합효소 L, 뉴클레오단백질 N(구아나리토 바이러스, 베네주엘라 출혈열(Venezuelan hemorrhagic fever)); 다단백, 단백질 E, 단백질 M, 캡시드 단백질 C, 단백질가수분해효소 NS3, 단백질 NS1, 단백질 NS2A, 단백질 AS2B, 브로테인(brotein) NS4A, 단백질 NS4B, 단백질 NS5(웨스트 나일 바이러스, 웨스트 나일 열병); 캡시드 단백질 CP, 단백질 E1, 단백질 E2, 단백질 E3, 단백질가수분해효소 P2(웨스턴 말 뇌염 바이러스, 웨스턴 말 뇌염); 게놈 다단백질, 단백질 E, 단백질 M, 캡시드 단백질 C, 단백질가수분해효소 NS3, 단백질 NS1, 단백질 NS2A, 단백질 AS2B, 단백질 NS4A, 단백질 NS4B, 단백질 NS5(황열병 바이러스, 황열); 추정 Yop 표적화 단백질 YobB, 이펙터 단백질 YopD, 이펙터 단백질 YopE, 단백질 YopH, 이펙터 단백질 YopJ, 단백질 위치전이 단백질 YopK, 이펙터 단백질 YopT, 단백질 YpkA, 플라젤라 생합성(flagellar biosyntheses) 단백질 FlhA, 펩티다아제(peptidase) M48, 포타슘 유출 시스템(potassium efflux system) KefA, 전사 조절자(transcriptional regulatoer) RovA, 부착분자 Ifp, 수송체 단백질(translocator portein) LcrV, 단백질 PcrV, 인베이신 Inv, 외막 단백질 OmpF-유사 포린(porin), 부착분자 YadA, 단백질 키나제 C, 포스포리파제 C1, 단백질 PsaA, 만노실트랜스페라제-유사 단백질 WbyK, 단백질 YscU, 항원 YPMa(여시니아 슈도투베르쿨로시스, 여시니아 슈도투베르쿨로시스 감염); 이펙터 단백질 YopB, 60 kDa 샤페로닌, 단백질 WbcP, 티로신-단백질 포스파타제 YopH, 단백질 YopQ, 엔테로톡신, 갈락토시드(Galactoside) 투과효소, 환원효소 NrdE, 단백질 YasN, 인베이신 Inv, 부착분자 YadA, 외막 포린 F OmpF, 단백질 UspA1, 단백질 EibA, 단백질 Hia, 세포 표면 단백질 Ail, 샤페론 SycD, 단백질 LcrD, 단백질 LcrG, 단백질 LcrV, 단백질 SycE, 단백질 YopE, 조절자 단백질 TyeA, 단백질 YopM, 단백질 YopN, 단백질 YopO, 단백질 YopT, 단백질 YopD, 단백질가수분해효소 ClpP, 단백질 MyfA, 단백질 FilA, 및 단백질 PsaA(여시니아 엔테로콜리티카, 여시니아증(Yersiniosis)).
앞 섹션의 괄호는 항원(들)이 유래된 특정 병원체 또는 병원체 패밀리 및 병원체가 관련된 감염성 질병을 나타낸다.
인플루엔자:
본 발명의 제1 양태의 특히 바람직한 구현예에서, mRNA 화합물은 인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌(HA), 뉴라미니다제(NA), 뉴클레오단백질(NP), 매트릭스 단백질 1(M1), 매트릭스 단백질 2(M2), 비-구조적 단백질 1(NS1), 비-구조적 단백질 2(NS2), 핵 외부 수송 단백질(NEP), 중합효소 산성 단백질(PA), 중합효소 염기성 단백질 PB1, PB1-F2, 또는 중합효소 염기성 단백질 2(PB2)로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질 또는 이의 단편 또는 변이체를 암호화하는 암호화 영역을 포함하는 mRNA 서열을 포함한다.
이러한 맥락에서, 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질의 아미노산 서열은 인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌(HA), 뉴라미니다제(NA), 뉴클레오단백질(NP), 매트릭스 단백질 1(M1), 매트릭스 단백질 2(M2), 비-구조적 단백질 1(NS1), 비-구조적 단백질 2(NS2), 핵 외부 수송 단백질(NEP), 중합효소 산성 단백질(PA), 중합효소 염기성 단백질 PB1, PB1-F2, 또는 중합효소 염기성 단백질 2(PB2)로부터 유래된 임의의 펩티드 또는 단백질 또는 단편 또는 변이체로부터 또는 임의의 합성적으로 조작된 인플루엔자 바이러스 펩티드 또는 단백질로부터 선택될 수 있다.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 암호화 영역은 인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌(HA) 및/또는 뉴라미니다제(NA)로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질 또는 이의 단편 또는 변이체를 암호화한다. 이러한 맥락에서, 헤마글루티닌(HA) 및 뉴라미니다제(NA)는 동일한 인플루엔자 바이러스로부터 또는 상이한 인플루엔자 바이러스로부터 선택될 수 있다.
이러한 맥락에서, 적어도 하나의 암호화 영역이 인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌(HA), 뉴라미니다제(NA), 뉴클레오단백질(NP), 매트릭스 단백질 1(M1), 매트릭스 단백질 2(M2), 비-구조적 단백질 1(NS1), 비-구조적 단백질 2(NS2), 핵 외부 수송 단백질(NEP), 중합효소 산성 단백질(PA), 중합효소 염기성 단백질 PB1, PB1-F2, or 중합효소 염기성 단백질 2(PB2)의 적어도 하나의 전장 단백질 또는 이의 변이체를 암호화하는 것이 특히 바람직하다.
특히 바람직한 구현예에서, 적어도 하나의 암호화 영역은 인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌(HA)의 적어도 하나의 전장 단백질, 및/또는 뉴라미니다제(NA)의 적어도 하나의 전장 단백질 또는 이의 변이체를 암호화한다.
본 설명에 사용된 용어 "전장 단백질"은 전형적으로, 자연 발생적인 단백질의 전체 아미노산 서열을 실질적으로 포함하는 단백질을 지칭한다. 본 설명에 사용된 용어 "전장 단백질"은 바람직하게는 본 발명의 서열 목록에 표시된 단백질의 전장 서열, 즉, 서열 목록에 열거된 서열번호(서열번호 1 내지 30504 또는 서열번호 224269 또는 서열번호 224309) 중 임의의 하나에 의해 정의된 아미노산 서열, 또는 각각의 데이터베이스 접근 번호 하에 데이터베이스에 제공된 아미노산에 관한 것이다.
본 발명의 바람직한 서열:
이러한 맥락에서, 본 발명의 mRNA 서열의 적어도 하나의 암호화 서열은 다음으로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 것이 추가적으로 바람직하다:
인플루엔자 A 바이러스의 헤마글루티닌(HA) 단백질; 또는
인플루엔자 B 바이러스의 헤마글루티닌(HA) 단백질; 또는
인플루엔자 A 바이러스의 뉴라미니다제(NA) 단백질; 또는
인플루엔자 B 바이러스의 뉴라미니다제(NA) 단백질; 또는
이의 단편 또는 변이체, 이때, 인플루엔자 A 바이러스의 헤마글루티닌(HA) 단백질 또는 인플루엔자 B 바이러스의 헤마글루티닌(HA) 단백질 또는 인플루엔자 A 바이러스의 뉴라미니다제(NA) 단백질 또는 인플루엔자 B 바이러스의 뉴라미니다제(NA) 단백질은 본 발명의 서열 목록에 열거된 바와 같은 헤마글루티닌(HA) 단백질 또는 뉴라미니다제(NA) 단백질로부터 선택된다.
이 서열 목록은 본 발명에서 바람직한 모든 인플루엔자 A 또는 인플루엔자 B 바이러스 헤마글루티닌(HA) 단백질 및 모든 인플루엔자 A 또는 인플루엔자 B 바이러스 뉴라미니다제(NA) 단백질을 개시한다. 각각의 바람직한 항원 펩티드 또는 단백질 및 이의 암호화 서열은 숫자 식별기호 <223> 하에 나타낸 데이터 요소로 확인할 수 있다. 환언하면, 인플루엔자 A 또는 B 바이러스로부터의 각각의 바람직한 헤마글루티닌(HA) 또는 뉴라미니다제(NA) 서열은 숫자 식별기호 <223> 하의 서열 목록 엔트리를 통람하여 특정 데이터베이스 접근 번호(즉, GenBank 단백질 또는 핵산 접근 번호)를 통해 확인할 수 있다.
요약하면, 각각의 바람직한 서열은 그것의 GenBank 단백질 또는 핵산 접근 번호에 의해 표시되고, 이것은 다시 서열 목록의 일곱 개의 개별적인 바람직한 서열번호로 표시된다(단백질, 핵산 야생형, 핵산 최적화 1 내지 5). 이것은 숫자 식별기호 <223>으로부터 분명하다.
즉, 숫자 식별기호 <223> 하의 서열 목록의 소정의 GenBank 단백질 또는 핵산 접근 번호의 첫 번째 연속 엔트리는 각각의 아미노산 서열에 상응하는 서열번호(즉, 단백질 서열 야생형 서열번호)를 나타낸다.
추가적으로, 숫자 식별기호 <223> 하의 서열 목록의 GenBank 단백질 또는 핵산 접근 번호의 두 번째 연속 엔트리는 이 단백질을 암호화하는 야생형 mRNA의 핵산 서열(즉, 뉴클레오티드 서열 야생형 서열번호)에 상응한다.
또한, 숫자 식별기호 <223> 하의 서열 목록의 GenBank 단백질 또는 핵산 접근 번호의 다음의 다섯 가지의 연속 엔트리들은 서열 목록의 소정의 GenBank 단백질 또는 핵산 접근 번호에 대하여 바람직하게는 첫 번째 연속 엔트리에 의해 정의된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 단백질을 암호화하는 본 설명에 기술된 바와 같은 서열의 다섯 가지의 상이한 변형된/최적화된 핵산 서열에 상응하는 서열번호를 제공한다(즉, 최적화된 뉴클레오티드 서열 서열번호).
따라서, 소정의 GenBank 단백질 또는 핵산 접근 번호에 대한 언급은 위에 정의된 바와 같은 일곱 개의 서열의 블록에 대한 언급과 동일하다(단백질 = 1, 핵산 = 2, 최적화된 서열 = 3 내지 7).
한 가지 예는 서열 목록, 즉, 서열번호 1 숫자 식별기호 <223> 하에 언급되는 첫 번째 GenBank 단백질 또는 핵산 접근 번호: AAA16879이다. 접근 번호 AAA16879가 서열 목록 전체에 걸쳐 검색되는 경우, 위에서 기술된 바와 같이, 7종의 서열번호가 이 접근 번호에 연결된다: 서열번호 1, 서열번호 32013, 서열번호 64025, 서열번호 96037, 서열번호 128049, 서열번호 160061, 및 서열번호 192073.
위의 설명에 따르면,
서열번호 1의 경우, 숫자 식별기호 <223>은 "헤마글루티닌__인플루엔자A__AAA16879로부터 유래 및/또는 변형된 단백질 서열(wt)"을 나타내고;
서열번호 32013의 경우, 숫자 식별기호 <223>은 "헤마글루티닌__인플루엔자A__AAA16879로부터 유래 및/또는 변형된 CDS 서열(wt)"을 나타내고;
서열번호 64025의 경우, 숫자 식별기호 <223>은 "헤마글루티닌__인플루엔자A__AAA16879로부터 유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt1)"을 나타내고;
서열번호 96037의 경우, 숫자 식별기호 <223>은 "헤마글루티닌__인플루엔자A__AAA16879로부터 유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt2)"을 나타내고;
서열번호 128049의 경우, 숫자 식별기호 <223>은 "헤마글루티닌__인플루엔자A__AAA16879로부터 유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt3)"을 나타내고;
서열번호 160061의 경우, 숫자 식별기호 <223>은 "헤마글루티닌__인플루엔자A__AAA16879로부터 유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt4)"을 나타내고;
서열번호 192073의 경우, 숫자 식별기호 <223>은 "헤마글루티닌__인플루엔자A__AAA16879로부터 유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt5)"을 나타낸다.
따라서, AAA16879에 대한 언급은 위에 기술된 바와 같이 7개의 서열에 대한 언급과 동일하다(단백질 = 첫 번째 서열, 핵산 = 두 번째 서열, 다섯 가지 상이한 최적화된 서열 = 세 번째 내지 일곱 번째 서열).
제2 예는 서열 목록, 즉, 서열번호 2 숫자 식별기호 <223> 하에 언급되는 두 번째 GenBank 단백질 또는 핵산 접근 번호: "AAA16880"이다. 접근 번호 AAA16880은 서열 목록의 다음 일곱 가지 서열에 연결된다: 서열번호 2(단백질), 32014(핵산 야생형), 64026(최적화 1), 96038(최적화 2), 128050(최적화 3), 160062(최적화 4) 및 192074(최적화 5). 따라서, AAA16880에 대한 언급은 위에 기술된 바와 같이 일곱 가지 서열에 대한 언급과 동일하다.
이러한 환경에 대한 추가적인 설명은 예시 도면 20 내지 24에서 볼 수 있는데, 예시 도면 20 내지 24는 인플루엔자 A 및 B 바이러스의 헤마글루티닌(HA) 단백질 및 뉴라미니다제(NA) 단백질 및 광견병 바이러스의 당단백질을 예시함으로써 서열 목록의 구조를 보여준다:
- 인플루엔자 A 바이러스의 예시적인 헤마글루티닌(HA) 단백질(도 20);
- 인플루엔자 B 바이러스의 예시적인 헤마글루티닌(HA) 단백질(도 21);
- 인플루엔자 A 바이러스의 예시적인 뉴라미니다제(NA) 단백질(도 22);
- 인플루엔자 B 바이러스의 예시적인 뉴라미니다제(NA) 단백질(도 23);
- 광견병 바이러스의 예시적인 당단백질(도 24).
2016년 10월 26일 출원된 PCT/EP2016/075843, 즉 본 국제특허출원의 우선권 출원의 도 20 내지 24의 내용을 본 설명에서 참조하였으며, 이는 본 설명에 참조로 포함된다.
특정 구현예에서, 인플루엔자 바이러스 펩티드 또는 단백질은 인플루엔자 A, B 또는 C 바이러스 (균주)로부터 유래된다.
인플루엔자 A 바이러스는 H1, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, H11, H12, H13, H14, H15, H16, H17 및 H18로 구성된 군으로부터 선택된 헤마글루티닌(HA)을 특징으로 하는 인플루엔자 A 바이러스로부터 선택될 수 있다. 바람직하게는 인플루엔자 A 바이러스는 H1, H3, H5 또는 H9로 구성된 군으로부터 선택된 헤마글루티닌(HA)를 특징으로 하는 인플루엔자 바이러스로부터 선택된다.
또한, N1, N2, N3, N4, N5, N6, N7, N8, N9, N10, 및 N11로 구성된 군으로부터 선택된 뉴라미니다제(NA)를 특징으로 하는 인플루엔자 A 바이러스가 특히 바람직하다. 가장 바람직하게는, 인플루엔자 A 바이러스는 N1, N2, 및 N8로 구성된 군으로부터 선택된 뉴라미니다제(NA)를 특징으로 한다.
특히 바람직한 구현예에서, 인플루엔자 A 바이러스는 H1N1, H1N2, H2N2, H3N1, H3N2, H3N8, H5N1, H5N2, H5N3, H5N8, H5N9, H7N1, H7N2, H7N3, H7N4, H7N7, H7N9, H9N2, H10N8, 및 H10N7로 구성된 군으로부터, 바람직하게는 H1N1, H3N2, H5N1, 및 H5N8로부터 선택된다.
이러한 맥락에서, 본 발명의 mRNA 서열의 적어도 하나의 암호화 영역은 H1N1, H1N2, H2N2, H3N1, H3N2, H3N8, H5N1, H5N2, H5N3, H5N8, H5N9, H7N1, H7N2, H7N3, H7N4, H7N7, H7N9, H9N2, H10N8 및 H10N7로 구성된 군으로부터 선택된, 바람직하게는 H1N1, H3N2, H5N1, H5N8로부터 선택된 인플루엔자 A 바이러스의, 헤마글루티닌(HA)으로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질 및/또는 뉴라미니다제(NA)로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질 또는 이의 단편 또는 변이체를 암호화하는 것이 특히 바람직하다.
본 발명의 맥락에서, 본 발명에 따른 mRNA 서열의 적어도 하나의 암호화 영역에 의해 암호화된 단백질의 단편 또는 이의 변이체는 전형적으로, 바람직하게는 서열번호 1 내지 30504에 따른, 각각의 자연 발생적인 전장 단백질 또는 이의 변이체의 아미노산 서열과 적어도 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%, 바람직하게는 적어도 70%, 더욱 바람직하게는 적어도 80%, 훨씬 더 바람직하게는 적어도 85%, 훨씬 더 바람직하게는 적어도 90% 그리고 가장 바람직하게는 적어도 95% 또는 심지어 97%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
특정 구현예에서, 항원 펩티드 또는 단백질은 서열번호 1 내지 14031에 따른 인플루엔자 A 바이러스의 헤마글루티닌(HA) 단백질로부터 유래된다.
이러한 맥락에서, 본 발명의 mRNA 서열의 적어도 하나의 암호화 서열은 인플루엔자 A 바이러스의 헤마글루티닌(HA) 단백질로부터 유래되는 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질 또는 이의 단편 또는 변이체를 암호화하는 것이 추가적으로 바람직한데, 이때, 인플루엔자 A 바이러스의 헤마글루티닌(HA) 단백질은 서열 목록에 열거된 헤마글루티닌(HA) 단백질로부터 선택된다(서열번호 1 내지 32012 또는 서열번호 224269 또는 서열번호 224309 및 "본 발명의 바람직한 서열" 섹션 하의 설명 참조). 여기서, 각각의 헤마글루티닌(HA)은 상응하는 단백질의 데이터베이스 접근 번호에 의해 확인된다(단백질 또는 핵산 접근 번호(GenBank)를 나타내는 서열 목록 숫자 식별기호 <223> 참조). 각각의 단백질 또는 핵산 접근 번호(GenBank)가 서열 목록에서 추가적으로 검색되는 경우, 숫자 식별기호 <223> 하의 상기 단백질 또는 핵산 접근 번호(GenBank)를 보여주는 다음 서열번호는 상기 단백질을 암호화하는 야생형 mRNA의 핵산 서열에 상응한다. 다시 각각의 단백질 또는 핵산 접근 번호(GenBank)가 서열 목록에서 추가적으로 검색되는 경우, 숫자 식별기호 <223> 하의 각각의 단백질 또는 핵산 접근 번호를 보여주는 다음의 다섯 가지 서열번호는 바람직하게는 이전에 언급된 바와 같이 각각의 아미노산 서열을 갖는 단백질(각각의 단백질 또는 핵산 접근 번호(GenBank)를 갖는 첫 번째 엔트리)을 암호화하는 본 설명에 기술된 mRNA의 다섯 가지 변형된/최적화된 핵산 서열에 상응한다.
이러한 맥락에서 다음의 HA 단백질 서열이 특히 바람직하다:
인플루엔자 A/베트남/1203/2004(H5N1)의 HA 단백질(서열번호 13861 내지 13871)
- 인플루엔자 A/베트남/1194/2004(H5N1)의 HA 단백질; (서열번호 13859 내지 13860)
- 인플루엔자 A/홍콩/4801/2014(H3N2)의 HA 단백질(서열번호 13853 내지 13856)
- 인플루엔자 A/네덜란드/602/2009(H1N1)의 HA 단백질(서열번호 13848 내지 13850)
- 인플루엔자 A/캘리포니아/07/2009(H1N1)의 HA 단백질(서열번호 13836 내지 13844)
- 인플루엔자 A/미시간/45/2015(H1N1)의 HA 단백질(서열번호 13845 내지 13847)
특정 구현예에서, 항원 펩티드 또는 단백질은 서열번호 26398 내지 28576에 따른 인플루엔자 B 바이러스의 헤마글루티닌(HA) 단백질로부터 유래된다.
이러한 맥락에서, 본 발명의 mRNA 서열의 적어도 하나의 암호화 서열은 인플루엔자 B 바이러스의 헤마글루티닌(HA) 단백질로부터 유래되는 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질, 또는 이의 단편 또는 변이체를 암호화하는 것이 추가적으로 바람직한데, 이때, 인플루엔자 B 바이러스의 헤마글루티닌(HA) 단백질은 서열 목록에 열거된 헤마글루티닌(HA) 단백질로부터 선택된다(서열번호 1 내지 32012 또는 서열번호 224269 또는 서열번호 224309 및 "본 발명의 바람직한 서열" 섹션 하의 설명 참조). 여기서, 각각의 헤마글루티닌(HA)은 상응하는 단백질의 데이터베이스 접근 번호에 의해 확인된다(단백질 또는 핵산 접근 번호(GenBank)를 나타내는 서열 목록 숫자 식별기호 <223> 참조). 각각의 단백질 또는 핵산 접근 번호(GenBank)가 서열 목록에서 추가적으로 검색되는 경우, 숫자 식별기호 <223> 하의 상기 단백질 또는 핵산 접근 번호(GenBank)를 보여주는 다음 서열번호는 상기 단백질을 암호화하는 야생형 mRNA의 핵산 서열에 상응한다. 다시 각각의 단백질 또는 핵산 접근 번호(GenBank)가 서열 목록에서 추가적으로 검색되는 경우, 숫자 식별기호 <223> 하의 각각의 단백질 또는 핵산 접근 번호를 보여주는 다음의 다섯 가지 서열번호는 바람직하게는 이전에 언급된 바와 같이 각각의 아미노산 서열을 갖는 단백질(각각의 단백질 또는 핵산 접근 번호(GenBank)를 갖는 첫 번째 엔트리)을 암호화하는 본 설명에 기술된 mRNA의 다섯 가지 변형된/최적화된 핵산 서열에 상응한다. 이러한 맥락에서 다음의 HA 단백질 서열이 특히 바람직하다:
- 인플루엔자 B/푸켓/3037/2013의 HA 단백질(EPI540671; 서열번호 28530 내지 28532)
- 인플루엔자 B/브리즈번/60/2008의 HA 단백질(서열번호 28524 내지 28529)
추가적인 특정 구현예에서, 항원 펩티드 또는 단백질은 서열번호 14032 내지 26397, 224309, 또는 224310에 따른 인플루엔자 A 바이러스의 뉴라미니다제(NA) 단백질로부터 유래된다.
이러한 맥락에서, 본 발명의 mRNA 서열의 적어도 하나의 암호화 서열은 인플루엔자 A 바이러스의 뉴라미니다제(NA) 단백질로부터 유래되는 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질, 또는 이의 단편 또는 변이체를 암호화하는 것이 추가적으로 바람직한데, 이때, 인플루엔자 A 바이러스의 뉴라미니다제(NA) 단백질은 서열 목록에 열거된 뉴라미니다제(NA) 단백질로부터 선택된다(서열번호 1 내지 32012 또는 서열번호 224269 또는 서열번호 224309 및 "본 발명의 바람직한 서열" 섹션 하의 설명 참조). 여기서, 각각의 뉴라미니다제(NA)는 상응하는 단백질의 데이터베이스 접근 번호에 의해 확인된다(단백질 또는 핵산 접근 번호(GenBank)를 나타내는 서열 목록 숫자 식별기호 <223> 참조). 각각의 단백질 또는 핵산 접근 번호(GenBank)가 서열 목록에서 추가적으로 검색되는 경우, 숫자 식별기호 <223> 하의 상기 단백질 또는 핵산 접근 번호(GenBank)를 보여주는 다음 서열번호는 상기 단백질을 암호화하는 야생형 mRNA의 핵산 서열에 상응한다. 다시 각각의 단백질 또는 핵산 접근 번호(GenBank)가 서열 목록에서 추가적으로 검색되는 경우, 숫자 식별기호 <223> 하의 각각의 단백질 또는 핵산 접근 번호를 보여주는 다음의 다섯 가지 서열번호는 바람직하게는 이전에 언급된 바와 같이 각각의 아미노산 서열을 갖는 단백질(각각의 단백질 또는 핵산 접근 번호(GenBank)를 갖는 첫 번째 엔트리)을 암호화하는 본 설명에 기술된 mRNA의 다섯 가지 변형된/최적화된 핵산 서열에 상응한다.
이러한 맥락에서 다음의 NA 단백질 서열이 특히 바람직하다:
- 인플루엔자 A/홍콩/4801/2014(H3N2)의 NA 단백질: 서열번호 26251 내지 26254
- 인플루엔자 A/캘리포니아/7/2009(H1N1)pdm09의 NA 단백질: 서열번호 26238 내지 26243
- 인플루엔자 A/베트남/1194/2004(H5N1)의 NA 단백질: 서열번호 224310
- 인플루엔자 A/베트남/1203/2004)(H5N1)의 NA 단백질: 서열번호 26255 내지 26257
- 인플루엔자 A/네덜란드/602/2009(H1N1)의 NA 단백질: 서열번호 26246 내지 26250
- 인플루엔자 A/미시간/45/2015(H1N1)의 NA 단백질(서열번호 26244 내지 26245)
추가적인 특정 구현예에서, 항원 펩티드 또는 단백질은 서열번호 28577 내지 30504에 따른 인플루엔자 B 바이러스의 뉴라미니다제(NA) 단백질로부터 유래된다.
이러한 맥락에서, 본 발명의 mRNA 서열의 적어도 하나의 암호화 서열은 인플루엔자 B 바이러스의 뉴라미니다제(NA) 단백질로부터 유래되는 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질, 또는 이의 단편 또는 변이체를 암호화하는 것이 추가적으로 바람직한데, 이때, 인플루엔자 B 바이러스의 뉴라미니다제(NA) 단백질은 서열 목록에 열거된 뉴라미니다제(NA) 단백질로부터 선택된다(서열번호 1 내지 32012 또는 서열번호 224269 또는 서열번호 224309 및 "본 발명의 바람직한 서열" 섹션 하의 설명 참조). 여기서, 각각의 뉴라미니다제(NA)는 상응하는 단백질의 데이터베이스 접근 번호에 의해 확인된다(단백질 또는 핵산 접근 번호(GenBank)를 나타내는 서열 목록 숫자 식별기호 <223> 참조). 각각의 단백질 또는 핵산 접근 번호(GenBank)가 서열 목록에서 추가적으로 검색되는 경우, 숫자 식별기호 <223> 하의 상기 단백질 또는 핵산 접근 번호(GenBank)를 보여주는 다음 서열번호는 상기 단백질을 암호화하는 야생형 mRNA의 핵산 서열에 상응한다. 다시 각각의 단백질 또는 핵산 접근 번호(GenBank)가 서열 목록에서 추가적으로 검색되는 경우, 숫자 식별기호 <223> 하의 각각의 단백질 또는 핵산 접근 번호를 보여주는 다음의 다섯 가지 서열번호는 바람직하게는 이전에 언급된 바와 같이 각각의 아미노산 서열을 갖는 단백질(각각의 단백질 또는 핵산 접근 번호(GenBank)를 갖는 첫 번째 엔트리)을 암호화하는 본 설명에 기술된 mRNA의 다섯 가지 변형된/최적화된 핵산 서열에 상응한다.
이러한 맥락에서 다음의 NA 단백질 서열이 특히 바람직하다:
- 인플루엔자 B/브리즈번/60/2008의 NA 단백질: 서열번호 30455 내지 30460
- 인플루엔자 B/푸켓/3037/2013의 NA 단백질: 서열번호 30461 내지 30462
나아가, 이러한 맥락에서, 인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌(HA) 및/또는 뉴라미니다제(NA)로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체를 암호화하는 암호화 영역은 임의의 인플루엔자 바이러스 단리물로부터 유래된 헤마글루티닌(HA) 또는 뉴라미니다제(NA)를 암호화하는 암호화 영역을 포함하는 임의의 핵산 서열 또는 이의 단편 또는 변이체로부터 선택될 수 있다.
따라서, 바람직한 구현예에서, 본 발명은 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 mRNA 서열을 제공하며, 이때, 인플루엔자 A 바이러스의 헤마글루티닌(HA)을 암호화하는 암호화 영역은 서열 목록에 개시된 바와 같은 핵산 서열 중 임의의 하나(즉, 서열번호 32013 내지 46043; 64025 내지 78055, 224085 내지 224106, 96037 내지 110067, 128049 내지 142079, 160061 내지 174091, 192073 내지 206103; 위의 설명 및 "본 발명의 바람직한 서열" 섹션 하의 설명 참조) 또는 이들 서열 중 임의의 하나의 단편 또는 변이체를 포함하거나 이로 구성된다.
이러한 맥락에서, 본 발명에 따른 mRNA 서열은 서열 목록에 개시된 바와 같은 RNA 서열(위의 설명 및 "본 발명의 바람직한 서열" 섹션 하의 설명 참조, 서열번호 32013 내지 46043; 64025 내지 78055, 224085 내지 224106, 96037 내지 110067, 128049 내지 142079, 160061 내지 174091, 192073 내지 206103) 또는 이의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 RNA 서열로부터 선택된 RNA 서열을 포함하는 인플루엔자 A 바이러스의 헤마글루티닌(HA)을 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 것이 특히 바람직하다.
특히 바람직한 구현예에서, mRNA 서열은 다음의 RNA 서열로부터 선택된 RNA 서열을 포함하는 인플루엔자 A 바이러스의 헤마글루티닌(HA)을 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함한다:
- 인플루엔자 A/베트남/1203/2004(H5N1)의 HA 단백질을 암호화하는 mRNA, 바람직하게는 서열번호 45873 내지 45883, 77885 내지 77895, 109897 내지 109907, 141909 내지 141919, 173921 내지 173931, 205933 내지 205943에 따른 mRNA 서열.
- 인플루엔자 A/베트남/1194/2004(H5N1)의 HA 단백질을 암호화하는 mRNA, 바람직하게는 서열번호 45871, 45872, 77883, 77884, 109895, 109896, 141907, 141908, 173919, 173920, 205931, 205932에 따른 mRNA 서열.
- 인플루엔자 A/홍콩/4801/2014(H3N2)의 HA 단백질을 암호화하는 mRNA, 바람직하게는 서열번호 45865 내지 45868, 77877 내지 77877, 109889 내지 109889, 141901 내지 141901, 173913 내지 173913, 205925 내지 205925에 따른 mRNA 서열.
- 인플루엔자 A/네덜란드/602/2009(H1N1)의 HA 단백질을 암호화하는 mRNA, 바람직하게는 서열번호 45860 내지 45862, 77872 내지 77874, 109884 내지 109886, 173908 내지 173910, 205920 내지 205922에 따른 mRNA 서열.
- 인플루엔자 A/캘리포니아/07/2009(H1N1)의 HA 단백질을 암호화하는 mRNA, 바람직하게는 서열번호 45848 내지 45856, 77860 내지 77868, 109872 내지 109880, 141884 내지 141892, 173896 내지 173904, 205908 내지 205916에 따른 mRNA 서열.
- 인플루엔자 A/미시간/45/2015(H1N1)의 HA 단백질을 암호화하는 mRNA, 바람직하게는 서열번호 45857 내지 45859, 77869 내지 77871, 109881 내지 109883, 141893 내지 141895, 173905 내지 173907, 205917 내지 205919에 따른 mRNA 서열.
따라서, 바람직한 구현예에서, 본 발명은 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 mRNA 서열을 제공하는데, 이때, 인플루엔자 B 바이러스의 헤마글루티닌(HA)을 암호화하는 암호화 영역은 "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(wt)" 또는 "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt1)", "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt2)", "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt3)", "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt4)", 또는 "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt5)"로 시작하는 숫자 식별기호 <223>을 갖는 서열 목록 또는 각각 PCT/EP2016/075843의 표 2 또는 도 21의 "B열" 또는 "C열"에 개시된 핵산 서열, 서열번호 58410 내지 60588, 90422 내지 92600, 224107 내지 224112, 122434 내지 124612, 154446 내지 156624, 186458 내지 188636, 218470 내지 220648 중 임의의 하나 또는 이들 서열 중 임의의 하나의 단편 또는 변이체를 포함하거나 이로 구성된다.
이러한 맥락에서, 본 발명에 따른 mRNA 서열은 "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(wt)" 또는 "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt1)", "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt2)", "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt3)", "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt4)", 또는 "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt5)"로 시작하는 숫자 식별기호 <223>을 갖는 서열 목록 또는 각각 PCT/EP2016/075843의 표 2 또는 도 21의 "B열" 또는 "C열"에 개시된 RNA 서열, 서열번호 58410 내지 60588, 90422 내지 92600, 224107 내지 224112, 122434 내지 124612, 154446 내지 156624, 186458 내지 188636, 218470 내지 220648 중 임의의 하나 또는 이들 서열 중 임의의 하나의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 RNA 서열로부터 선택된 RNA 서열을 포함하는 인플루엔자 B 바이러스의 헤마글루티닌(HA)을 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 것이 특히 바람직하다.
특히 바람직한 구현예에서, mRNA 서열은 다음의 RNA 서열로부터 선택된 RNA 서열을 포함하는 인플루엔자 B 바이러스의 헤마글루티닌(HA)을 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함한다:
- 인플루엔자 B/푸켓/3037/2013의 HA 단백질을 암호화하는 mRNA, 바람직하게는 서열번호 60542 내지 60544, 92554 내지 92556, 124566 내지 124568, 156578 내지 156580, 188590 내지 188592, 220602 내지 220604에 따른 mRNA 서열.
- 인플루엔자 B/브리즈번/60/2008(GI: 223950973; FJ766840.1)의 HA 단백질을 암호화하는 mRNA, 바람직하게는 서열번호 60536 내지 60541, 92548 내지 92553, 124560 내지 124565, 156572 내지 156577, 188584 내지 188589, 220596 내지 220601에 따른 mRNA 서열.
따라서, 바람직한 구현예에서, 본 발명은 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 mRNA 서열을 제공하는데, 이때, 인플루엔자 A 바이러스의 뉴라미니다제(NA)를 암호화하는 암호화 영역은 "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(wt)" 또는 "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt1)", "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt2)", "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt3)", "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt4)", 또는 "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt5)"로 시작하는 숫자 식별기호 <223>을 갖는 서열 목록 또는 각각 PCT/EP2016/075843의 표 3 또는 도 22의 "B열" 또는 "C열"에 개시된 핵산 서열, 서열번호 46044 내지 58409, 224311, 224312, 78056 내지 90421, 224113, 224313 내지 224317, 110068 내지 122433, 142080 내지 154445, 174092 내지 186457, 206104 내지 218469 중 임의의 하나 또는 이들 서열 중 임의의 하나의 단편 또는 변이체를 포함하거나 이로 구성된다.
이러한 맥락에서, 본 발명에 따른 mRNA 서열은 "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(wt)" 또는 "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt1)", "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt2)", "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt3)", "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt4)", 또는 "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt5)"로 시작하는 숫자 식별기호 <223>을 갖는 서열 목록 또는 각각 PCT/EP2016/075843의 표 3 또는 도 22의 "B열" 또는 "C열"에 개시된 RNA 서열, 서열번호 46044 내지 58409, 224311, 224312, 78056 내지 90421, 224113, 224313 내지 224317, 110068 내지 122433, 142080 내지 154445, 174092 내지 186457, 206104 내지 218469 중 임의의 하나 또는 이들 서열 중 임의의 하나의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 RNA 서열로부터 선택된 RNA 서열을 포함하는 인플루엔자 A 바이러스의 뉴라미니다제(NA)를 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 것이 특히 바람직하다.
특히 바람직한 구현예에서, mRNA 서열은 다음의 RNA 서열로부터 선택된 RNA 서열을 포함하는 인플루엔자 A 바이러스의 뉴라미니다제(NA)를 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함한다:
- 인플루엔자 A/홍콩/4801/2014(H3N2)의 NA 단백질을 암호화하는 mRNA: 서열번호 58263 내지 58266, 90275 내지 90278, 122287 내지 122290, 154299 내지 154302, 186311 내지 186314, 218323 내지 218326.
- 인플루엔자 A/캘리포니아/7/2009(H1N1)pdm09의 NA 단백질을 암호화하는 mRNA: 서열번호 58250 내지 58255, 90262 내지 90267, 122274 내지 122279, 154286 내지 154291, 186298 내지 186303, 218310 내지 218315.
- 인플루엔자 A/베트남/1194/2004(H5N1)의 NA 단백질을 암호화하는 mRNA: 서열번호 224312.
- 인플루엔자 A/베트남/1203/2004)(H5N1)의 NA 단백질을 암호화하는 mRNA: 서열번호 58267 내지 58269, 90279 내지 90281, 122291 내지 122293, 154303 내지 154305, 186315 내지 186317, 218327 내지 218329.
- 인플루엔자 A/미시간/45/2015(H1N1)의 NA 단백질을 암호화하는 mRNA, 바람직하게는 서열번호 58256 내지 58257, 90268 내지 90269, 122280 내지 122281, 154292 내지 154293, 186304 내지 186305, 218316 내지 218317에 따른 mRNA 서열.
- 인플루엔자 A/네덜란드/602/2009(H1N1)의 NA 단백질을 암호화하는 mRNA, 바람직하게는 서열번호 58258 내지 58262, 90270 내지 90274, 122282 내지 122286, 154294 내지 154298, 186306 내지 186310, 218318 내지 218322에 따른 mRNA 서열.
따라서, 바람직한 구현예에서, 본 발명은 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 mRNA 서열을 제공하는데, 이때, 인플루엔자 B 바이러스의 뉴라미니다제(NA)를 암호화하는 암호화 영역은 "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(wt)" 또는 "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt1)", "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt2)", "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt3)", "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt4)", 또는 "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt5)"로 시작하는 숫자 식별기호 <223>을 갖는 서열 목록 또는 각각 PCT/EP2016/075843의 표 4 또는 도 23의 "B열" 또는 "C열"에 개시된 핵산 서열, 서열번호 60589 내지 62516, 92601 내지 94528, 124613 내지 126540, 156625 내지 158552, 188637 내지 190564, 220649 내지 222576 중 임의의 하나 또는 이들 서열 중 임의의 하나의 단편 또는 변이체를 포함하거나 이로 구성된다.
이러한 맥락에서, 본 발명에 따른 mRNA 서열은 "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(wt)" 또는 "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt1)", "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt2)", "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt3)", "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt4)", 또는 "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt5)"로 시작하는 숫자 식별기호 <223>을 갖는 서열 목록 또는 각각 PCT/EP2016/075843의 표 4 또는 도 23의 "B열" 또는 "C열"에 개시된 RNA 서열, 서열번호 60589 내지 62516, 92601 내지 94528, 124613 내지 126540, 156625 내지 158552, 188637 내지 190564, 220649 내지 222576 중 임의의 하나 또는 이들 서열 중 임의의 하나의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 RNA 서열로부터 선택된 RNA 서열을 포함하는 인플루엔자 B 바이러스의 뉴라미니다제(NA)를 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 것이 특히 바람직하다.
특히 바람직한 구현예에서, mRNA 서열은 다음의 RNA 서열로부터 선택된 RNA 서열을 포함하는 인플루엔자 B 바이러스의 뉴라미니다제(NA)를 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함한다:
- 인플루엔자 B/브리즈번/60/2008(GI: 223950973; FJ766840.1)의 NA 단백질을 암호화하는 mRNA: 서열번호 62467 내지 62472, 94479 내지 94484, 126491 내지 126496, 158503 내지 158508, 190515 내지 190520, 222527 내지 222532.
- 인플루엔자 B/푸켓/3073/2013)의 NA 단백질을 암호화하는 mRNA: 서열번호 62473 내지 62474, 94485 내지 94486, 126497 내지 126498, 158509 내지 158510, 190521 내지 190522, 222533 내지 222534.
광견병:
본 발명의 제1 양태의 특히 바람직한 구현예에서, mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물은 광견병 바이러스의 당단백질 G로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질 또는 이의 단편 또는 변이체를 암호화하는 암호화 영역을 포함한다.
이러한 맥락에서, 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질의 아미노산 서열은 광견병 바이러스의 당단백질로부터 유래된 임의의 펩티드 또는 단백질 또는 단편 또는 변이체로부터 또는 임의의 합성적으로 조작된 광견병 바이러스 펩티드 또는 단백질로부터 선택될 수 있다.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 암호화 영역은 광견병 바이러스의 당단백질로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질 또는 이의 단편 또는 변이체를 암호화한다.
이러한 맥락에서, 적어도 하나의 암호화 영역은 광견병 바이러스의 당단백질의 적어도 하나의 전장 단백질 또는 이의 변이체를 암호화하는 것이 특히 바람직하다.
본 설명에 사용된 용어 "전장 단백질"은 바람직하게는 본 발명의 서열 목록에 기재된 단백질의 전장 서열에 관한 것이다. 더욱 바람직하게는, 용어 "전장 단백질"은 바람직하게는 서열 목록에 열거된 서열번호(서열번호 30505 내지 32012) 중 임의의 하나에 의해 정의된 아미노산 서열, 또는 각각의 데이터베이스 접근 번호 하에 데이터베이스에 제공된 아미노산을 지칭한다.
이러한 맥락에서, 본 발명의 mRNA 서열의 적어도 하나의 암호화 서열은 광견병 바이러스의 당단백질로부터 유래되는 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질 또는 이의 단편 또는 변이체를 암호화하는 것이 추가적으로 바람직한데, 이때, 광견병 바이러스의 당단백질은 서열 목록에 열거된 광견병 바이러스 단백질의 당단백질로부터 선택된다(서열번호 1 내지 32012 또는 서열번호 224269 또는 서열번호 224309 및 "본 발명의 바람직한 서열" 섹션 하의 설명 참조). 여기서, 광견병 바이러스의 각각의 당단백질은 상응하는 단백질의 데이터베이스 접근 번호에 의해 확인된다(단백질 또는 핵산 접근 번호(GenBank)를 나타내는 서열 목록 숫자 식별기호 <223> 참조). 각각의 단백질 또는 핵산 접근 번호(GenBank)가 서열 목록에서 추가적으로 검색되는 경우, 숫자 식별기호 <223> 하의 상기 단백질 또는 핵산 접근 번호(GenBank)를 보여주는 다음 서열번호는 상기 단백질을 암호화하는 야생형 mRNA의 핵산 서열에 상응한다. 다시 각각의 단백질 또는 핵산 접근 번호(GenBank)가 서열 목록에서 추가적으로 검색되는 경우, 숫자 식별기호 <223> 하의 각각의 단백질 또는 핵산 접근 번호를 보여주는 다음의 다섯 가지 서열번호는 바람직하게는 이전에 언급된 바와 같이 각각의 아미노산 서열을 갖는 단백질(각각의 단백질 또는 핵산 접근 번호(GenBank)를 갖는 첫 번째 엔트리)을 암호화하는 본 설명에 기술된 mRNA의 다섯 가지 변형된/최적화된 핵산 서열에 상응한다.
이러한 맥락에서 다음의 당단백질 서열이 특히 바람직하다: 서열번호 31986, 31073, 31102.
나아가, 이러한 맥락에서, 광견병 바이러스의 당단백질로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체를 암호화하는 암호화 영역은 임의의 광견병 바이러스 단리물로부터 유래된 당단백질을 암호화하는 암호화 영역을 포함하는 임의의 핵산 서열 또는 이의 단편 또는 변이체로부터 선택될 수 있다.
따라서, 바람직한 구현예에서, 본 발명은 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 mRNA 서열을 제공하며, 이때, 광견병 바이러스의 당단백질을 암호화하는 암호화 영역은 서열 목록에 개시된 핵산 서열 중 임의의 하나(위의 설명 참조; 바람직하게는 서열번호 62517 내지 64024; 224270, 224274, 94529 내지 96036, 224271 내지 224273, 126541 내지 128048, 158553 내지 160060, 190565 내지 192072, 222577 내지 224084) 또는 이들 서열 중 임의의 하나의 단편 또는 변이체를 포함하거나 이로 구성된다.
이러한 맥락에서, 본 발명에 따른 mRNA 서열은 서열 목록에 개시된 바와 같은 RNA 서열(위의 설명 참조; 바람직하게는 서열번호 62517 내지 64024; 224270, 224274, 94529 내지 96036, 224271 내지 224273, 126541 내지 128048, 158553 내지 160060, 190565 내지 192072, 222577 내지 224084) 또는 이의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 RNA 서열로부터 선택된 RNA 서열을 포함하는 임의의 광견병 바이러스로부터 유래된 당단백질을 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 것이 특히 바람직하다.
특히 바람직한 구현예에서, mRNA 서열은 다음의 RNA 서열로부터 선택된 RNA 서열을 포함하는 광견병 바이러스의 당단백질(RABV-G)을 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함한다:
광견병 바이러스(파스퇴르 균주)의 당단백질을 암호화하는 mRNA, 바람직하게는 서열번호 63998, 96010, 128022, 160034, 192046, 224058에 따른 mRNA 서열.
에볼라:
에볼라 바이러스: 에볼라 바이러스 및 유전적으로 관련된 마버그 바이러스(Marburgvirus)는 심각한 질병을 유발하는 인간 병원체이다. 에볼라 바이러스와 마버그 바이러스는 필로 바이러스로, 이들은 음성 가닥 RNA 게놈을 특징으로 하는 외피 보유 바이러스이다. 필로바이러스 과는 세 가지 속을 포함한다: 에볼라 바이러스, 마버그 바이러스 및 쿠에바 바이러스(Cuevavirus). 쿠에바 바이러스 및 마버그 바이러스 속은 하나의 종, 즉, 각각 로비우(Lloviu) 쿠에바 바이러스(로비우 바이러스 - LLOV)와 마버그 마버그 바이러스만을 포함하며, 마버그 마버그 바이러스는 마버그 바이러스(MARV) 및 라븐(Ravn) 바이러스(RAVV)로 세분된다. 에볼라 바이러스 속은 다섯 가지의 공지된 종, 즉, 분디부교(Bundibugyo) 에볼라 바이러스(분디부교 바이러스 - BDBV), 레스톤(Reston) 에볼라 바이러스(레스톤 바이러스 - RESTV), 수단(Sudan) 에볼라 바이러스(수단 바이러스 - SUDV), 타이숲(Ta
Figure pct00005
Forest) 에볼라 바이러스(타이숲 바이러스 - TAFV)(= 코트디부아르 에볼라 바이러스) 및 자이르(Zaire) 에볼라 바이러스(에볼라 바이러스 - EBOV)를 포함한다. 쿠에바 바이러스는 박쥐로부터 분리되었으며, 인간에서의 병원체로서의 가능성은 여전히 알려지지 않았지만, 에볼라 바이러스와 마버그 바이러스는 인간 병원체로, 각각 에볼라 바이러스 병(EVD) 및 마버그 바이러스 병을 유발하며, 이는 출혈열 및 매우 높은 사망률을 특징으로 한다. 본 발명의 맥락에서, 위에 열거된 과 및 속의 바이러스에 속하거나 이와 관련이 있거나 이로부터 유래되는 임의의 바이러스, 바이러스 구성원, 바이러스 균주, 바이러스 유형, 바이러스 하위 유형, 바이러스 단리물, 바이러스 변이체, 또는 바이러스 혈청형 또는 유전자 재조합체는 "에볼라 바이러스"인 것으로 간주된다.
본 발명의 제1 양태의 특히 바람직한 구현예에서, mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물은 에볼라 바이러스 또는 마버그 바이러스 속 바이러스의 당단백질(GP) 및/또는 매트릭스 단백질 40(VP40) 및/또는 뉴클레오단백질(NP)로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체를 암호화하는 암호화 영역을 포함한다.
이러한 맥락에서, 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질의 아미노산 서열은 에볼라 바이러스의 당단백질(GP) 및/또는 매트릭스 단백질 40(VP40) 및/또는 뉴클레오단백질(NP)로부터 유래된 임의의 펩티드 또는 단백질 또는 단편 또는 변이체로부터 또는 임의의 합성적으로 조작된 에볼라 바이러스 펩티드 또는 단백질로부터 선택될 수 있다.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 암호화 영역은 에볼라 바이러스의 당단백질로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질 또는 이의 단편 또는 변이체를 암호화한다. 이러한 맥락에서, 적어도 하나의 암호화 영역은 에볼라 바이러스의 당단백질의 적어도 하나의 전장 단백질 또는 이의 변이체를 암호화하는 것이 특히 바람직하다.
이러한 맥락에서 다음의 에볼라 당단백질 아미노산 서열: 특허 출원 WO2016097065의 서열번호 1 내지 6, 또는 이들 서열의 단편 또는 변이체가 특히 바람직하다. 이러한 맥락에서, WO2016097065의 서열번호 1 내지 6 및 WO2016097065의 서열번호 1 내지 6에 관한 개시 내용은 본 설명에 참조로 포함된다.
이러한 맥락에서 다음의 에볼라 VP40 아미노산 서열: 특허 출원 WO2016097065의 서열번호 7 내지 12, 또는 이들 서열의 단편 또는 변이체가 특히 바람직하다. 이러한 맥락에서, WO2016097065의 서열번호 7 내지 12 및 WO2016097065의 서열번호 7 내지 12에 관한 개시 내용은 본 설명에 참조로 포함된다.
이러한 맥락에서 다음의 에볼라 NP 아미노산 서열: 특허 출원 WO2016097065의 서열번호 13 내지 18, 또는 이들 서열의 단편 또는 변이체가 특히 바람직하다. 이러한 맥락에서, WO2016097065의 서열번호 13 내지 18 및 WO2016097065의 서열번호 13 내지 18에 관한 개시 내용은 본 설명에 참조로 포함된다.
바람직한 구현예에서, 본 발명은 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 mRNA 서열을 제공하며, 이때, 에볼라 바이러스의 본 설명에 명시된 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 암호화 영역은 특허 출원 WO2016097065의 서열번호 20 내지 27, 또는 이들 서열의 단편 또는 변이체에 따른 핵산 서열 중 임의의 하나를 포함하거나 이로 구성된다. 이러한 맥락에서, WO2016097065의 서열번호 20 내지 27 및 WO2016097065의 서열번호 20 내지 27에 관한 개시 내용은 본 설명에 참조로 포함된다.
특히 바람직한 구현예에서, mRNA 서열은 에볼라 바이러스의 당단백질을 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함한다. 특히 바람직한 구현예에서, mRNA 서열은 에볼라 바이러스의 VP40을 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함한다. 특히 바람직한 구현예에서, mRNA 서열은 에볼라 바이러스의 NP를 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함한다.
특히 바람직한 구현예에서, mRNA 서열은 다음의 RNA 서열로부터 선택된 RNA 서열을 포함하는 에볼라 바이러스의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함한다:
- 에볼라 바이러스의 GP 단백질을 암호화하는 mRNA: 특허 출원 WO2016097065의 서열번호 37 내지 39, 또는 이들 서열의 단편 또는 변이체. 이러한 맥락에서, WO2016097065의 서열번호 37 내지 39 및 WO2016097065의 서열번호 37 내지 39에 관한 개시 내용은 본 설명에 참조로 포함된다.
- 에볼라 바이러스의 VP40을 암호화하는 mRNA: 특허 출원 WO2016097065의 서열번호 40 내지 42, 또는 이들 서열의 단편 또는 변이체. 이러한 맥락에서, WO2016097065의 서열번호 40 내지 42 및 WO2016097065의 서열번호 40 내지 42에 관한 개시 내용은 본 설명에 참조로 포함된다.
- 에볼라 바이러스의 NP를 암호화하는 mRNA: 특허 출원 WO2016097065의 서열번호 43 내지 44, 또는 이들 서열의 단편 또는 변이체. 이러한 맥락에서, WO2016097065의 서열번호 43 내지 44 및 WO2016097065의 서열번호 43 내지 44에 관한 개시 내용은 본 설명에 참조로 포함된다.
서열번호 224362에 따른 GP를 암호화하는 암호화 서열을 포함하는 mRNA 서열이 특히 바람직하다.
종양 항원:
바람직하게는, 본 발명에 따른 mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물의 적어도 하나의 암호화 서열은, 바람직하게는 본 설명에 정의된 바와 같은, 종양 항원, 또는 이의 단편 또는 변이체를 암호화하며, 이때, 종양 항원은 바람직하게는 1A01_HLA-A/m; 1A02; 5T4; ACRBP; AFP; AKAP4; 알파-액티닌-_4/m; 알파-메틸아실-코엔자임_A_라세마제(racemase); ANDR; ART-4; ARTC1/m; AURKB; B2MG; B3GN5; B4GN1; B7H4; BAGE-1; BASI; BCL-2; bcr/abl; 베타-카테닌/m; BING-4; BIRC7; BRCA1/m; BY55; 칼레티쿨린(calreticulin); CAMEL; CASP-8/m; CASPA; 카텝신_B; 카텝신_L; CD1A; CD1B; CD1C; CD1D; CD1E; CD20; CD22; CD276; CD33; CD3E; CD3Z; CD44_이소형_1; CD44_이소형_6; CD4; CD52; CD55; CD56; CD80; CD86; CD8A; CDC27/m; CDE30; CDK4/m; CDKN2A/m; CEA; CEAM6; CH3L2; CLCA2; CML28; CML66; COA-1/m; 코액토신-유사 단백질; 콜라겐_XXIII; COX-2; CP1B1; CSAG2; CT45A1; CT55; CT-_9/BRD6; CTAG2_이소형_LAGE-1A; CTAG2_이소형_LAGE-1B; CTCFL; Cten; 사이클린_B1; 사이클린_D1; cyp-B; DAM-10; DEP1A; E7; EF1A2; EFTUD2/m; EGFR; EGLN3; ELF2/m; EMMPRIN; EpCam; EphA2; EphA3; ErbB3; ERBB4; ERG; ETV6; EWS; EZH2; FABP7; FCGR3A_버전_1; FCGR3A_버전_2; FGF5; FGFR2; 피브로넥틴; FOS; FOXP3; FUT1; G250; GAGE-1; GAGE-2; GAGE-3; GAGE-4; GAGE-5; GAGE-6; GAGE7b; GAGE-8_(GAGE-2D); GASR; GnT-V; GPC3; GPNMB/m; GRM3; HAGE; 헵신(hepsin); Her2/neu; HLA-A2/m; 호메오박스(homeobox)_NKX3.1; HOM-TES-85; HPG1; HS71A; HS71B; HST-2; hTERT; iCE; IF2B3; IL10; IL-13Ra2; IL2-RA; IL2-RB; IL2-RG; IL-5; IMP3; ITA5; ITB1; ITB6; 칼리크레인(kallikrein)-2; 칼리크레인-4; KI20A; KIAA0205; KIF2C; KK-LC-1; LDLR; LGMN; LIRB2; LY6K; MAGA5; MAGA8; MAGAB; MAGE-A10; MAGE-A12; MAGE-A1; MAGE-A2; MAGE-A3; MAGE-A4; MAGE-A6; MAGE-A9; MAGE-B10; MAGE-B16; MAGE-B17; MAGE-_B1; MAGE-B2; MAGE-B3; MAGE-B4; MAGE-B5; MAGE-B6; MAGE-C1; MAGE-C2; MAGE-C3; MAGE-D1; MAGE-D2; MAGE-D4; MAGE-_E1; MAGE-E1_(MAGE1); MAGE-E2; MAGE-F1; MAGE-H1; MAGEL2; 맘마글로빈(mammaglobin)_A; MART-1/멜란(melan)-A; MART-2; MC1_R; M-CSF; 메소텔린(mesothelin); MITF; MMP1_1; MMP7; MUC-1; MUM-1/m; MUM-2/m; MYCN; MYO1A; MYO1B; MYO1C; MYO1D; MYO1E; MYO1F; MYO1G; MYO1H; NA17; NA88-A; Neo-PAP; NFYC/m; NGEP; NPM; NRCAM; NSE; NUF2; NY-ESO-1; OA1; OGT; OS-9; 오스테오칼신; 오스테오폰틴; p53; PAGE-4; PAI-1; PAI-2; PAP; PATE; PAX3; PAX5; PD1L1; PDCD1; PDEF; PECA1; PGCB; PGFRB; Pim-1_-키나제; Pin-1; PLAC1; PMEL; PML; POTEF; POTE; PRAME; PRDX5/m; PRM2; 프로스테인; 프로테이나제-3; PSA; PSB9; PSCA; PSGR; PSM; PTPRC; RAB8A; RAGE-1; RARA; RASH; RASK; RASN; RGS5; RHAMM/CD168; RHOC; RSSA; RU1; RU2; RUNX1; S-100; SAGE; SART-_1; SART-2; SART-3; SEPR; SERPINB5; SIA7F; SIA8A; SIAT9; SIRT2/m; SOX10; SP17; SPNXA; SPXN3; SSX-1; SSX-2; SSX3; SSX-4; ST1A1; STAG2; STAMP-1; STEAP-1; 서바이빈(Survivin)-2B; 서바이빈; SYCP1; SYT-SSX-1; SYT-SSX-2; TARP; TCRg; TF2AA; TGFB1; TGFR2; TGM-4; TIE2; TKTL1; TPI/m; TRGV11; TRGV9; TRPC1; TRP-p8; TSG10; TSPY1; TVC_(TRGV3); TX101; 티로시나제; TYRP1; TYRP2; UPA; VEGFR1; WT1; 및 XAGE1로 구성된 군으로부터 선택된다.
본 발명에 유용한 추가적인 항원은 본 설명의 아래에 나타내었다(유전자 명칭 다음에 단백질 접근 번호를 괄호로 나타냄):
1A01_HLA-A/m (UniProtKB: P30443); 1A02 (UniProtKB: P01892); 5T4 (UniProtKB: Q13641); ACRBP (UniProtKB: Q8NEB7); AFP (UniProtKB: P02771); AKAP4 (UniProtKB: Q5JQC9); 알파-액티닌-_4/m (UniProtKB: B4DSX0); 알파-액티닌-_4/m (UniProtKB: B4E337); 알파-액티닌-_4/m (UniProtKB: O43707); 알파-메틸아실-코엔자임_A_라세마제 (UniProtKB: A0A024RE16); 알파-메틸아실-코엔자임_A_라세마제 (UniProtKB: A8KAC3); ANDR (UniProtKB: P10275); ART-4 (UniProtKB: Q9ULX3); ARTC1/m (UniProtKB: P52961); AURKB (UniProtKB: Q96GD4); B2MG (UniProtKB: P61769); B3GN5 (UniProtKB: Q9BYG0); B4GN1 (UniProtKB: Q00973); B7H4 (UniProtKB: Q7Z7D3); BAGE-1 (UniProtKB: Q13072); BASI (UniProtKB: P35613); BCL-2 (UniProtKB: A9QXG9); bcr/abl (UniProtKB: A9UEZ4); bcr/abl (UniProtKB: A9UEZ7); bcr/abl (UniProtKB: A9UEZ8); bcr/abl (UniProtKB: A9UEZ9); bcr/abl (UniProtKB: A9UF00); bcr/abl (UniProtKB: A9UF01); bcr/abl (UniProtKB: A9UF03); bcr/abl (UniProtKB: A9UF04); bcr/abl (UniProtKB: A9UF05); bcr/abl (UniProtKB: A9UF06); bcr/abl (UniProtKB: A9UF08); 베타-카테닌/m (UniProtKB: P35222); 베타-카테닌/m (UniProtKB: Q8WYA6); BING-4 (UniProtKB: O15213); BIRC7 (UniProtKB: Q96CA5); BRCA1/m (UniProtKB: A0A024R1V0); BRCA1/m (UniProtKB: A0A024R1V7); BRCA1/m (UniProtKB: A0A024R1Z8); BRCA1/m (UniProtKB: A0A068BFX7); BRCA1/m (UniProtKB: C6YB45); BRCA1/m (UniProtKB: C6YB47); BRCA1/m (UniProtKB: G3XAC3); BY55 (UniProtKB: O95971); 칼레티쿨린 (UniProtKB: B4DHR1); 칼레티쿨린 (UniProtKB: B4E2Y9); 칼레티쿨린 (UniProtKB: P27797); 칼레티쿨린 (UniProtKB: Q96L12); CAMEL (UniProtKB: O95987); CASP-8/m (UniProtKB: Q14790); CASPA (UniProtKB: Q92851-4); 카텝신_B (UniProtKB: A0A024R374); 카텝신_B (UniProtKB: P07858); 카텝신_L (UniProtKB: A0A024R276); 카텝신_L (UniProtKB: P07711); 카텝신_L (UniProtKB: Q9HBQ7); CD1A (UniProtKB: P06126); CD1B (UniProtKB: P29016); CD1C (UniProtKB: P29017); CD1D (UniProtKB: P15813); CD1E (UniProtKB: P15812); CD20 (UniProtKB: P11836); CD22 (UniProtKB: O60926); CD22 (UniProtKB: P20273); CD22 (UniProtKB: Q0EAF5); CD276 (UniProtKB: Q5ZPR3); CD33 (UniProtKB: B4DF51); CD33 (UniProtKB: P20138); CD33 (UniProtKB: Q546G0); CD3E (UniProtKB: P07766); CD3Z (UniProtKB: P20963); CD44_이소형_1 (UniProtKB: P16070); CD44_이소형_6 (UniProtKB: P16070-6); CD4 (UniProtKB: P01730); CD52 (UniProtKB: P31358); CD52 (UniProtKB: Q6IBD0); CD52 (UniProtKB: V9HWN9); CD55 (UniProtKB: B1AP15); CD55 (UniProtKB: D3DT85); CD55 (UniProtKB: D3DT86); CD55 (UniProtKB: P08174); CD56 (UniProtKB: P13591); CD80 (UniProtKB: A0N0P2); CD80 (UniProtKB: P33681); CD86 (UniProtKB: P42081); CD8A (UniProtKB: P01732); CDC27/m (UniProtKB: G5EA36); CDC27/m (UniProtKB: P30260); CDE30 (UniProtKB: P28908); CDK4/m (UniProtKB: A0A024RBB6); CDK4/m (UniProtKB: P11802); CDK4/m (UniProtKB: Q6LC83); CDK4/m (UniProtKB: Q96BE9); CDKN2A/m (UniProtKB: D1LYX3); CDKN2A/m (UniProtKB: G3XAG3); CDKN2A/m (UniProtKB: K7PML8); CDKN2A/m (UniProtKB: L8E941); CDKN2A/m (UniProtKB: Q8N726); CEA (RefSeq: NP_004354); CEAM6 (UniProtKB: P40199); CH3L2 (UniProtKB: Q15782); CLCA2 (UniProtKB: Q9UQC9); CML28 (UniProtKB: Q9NQT4); CML66 (UniProtKB: Q96RS6); COA-1/m (UniProtKB: Q5T124); 코액토신-유사 단백질 (UniProtKB: Q14019); 콜라겐_XXIII (UniProtKB: L8EAS4); 콜라겐_XXIII (UniProtKB: Q86Y22); COX-2 (UniProtKB: Q6ZYK7); CP1B1 (UniProtKB: Q16678); CSAG2 (UniProtKB: Q9Y5P2-2); CSAG2 (UniProtKB: Q9Y5P2); CT45A1 (UniProtKB: Q5HYN5); CT55 (UniProtKB: Q8WUE5); CT-_9/BRD6 (UniProtKB: Q58F21); CTAG2_이소형_LAGE-1A (UniProtKB: O75638-2); CTAG2_이소형_LAGE-1B (UniProtKB: O75638); CTCFL (UniProtKB: Q8NI51); Cten (UniProtKB: Q8IZW8); 사이클린_B1 (UniProtKB: P14635); 사이클린_D1 (UniProtKB: P24385); cyp-B (UniProtKB: P23284); DAM-10 (UniProtKB: P43366); DEP1A (UniProtKB: Q5TB30); E7 (UniProtKB: P03129); E7 (UniProtKB: P06788); E7 (UniProtKB: P17387); E7 (UniProtKB: P06429); E7 (UniProtKB: P27230); E7 (UniProtKB: P24837); E7 (UniProtKB: P21736); E7 (UniProtKB: P26558); E7 (UniProtKB: P36831); E7 (UniProtKB: P36833); E7 (UniProtKB: Q9QCZ1); E7 (UniProtKB: Q81965); E7 (UniProtKB: Q80956); EF1A2 (UniProtKB: Q05639); EFTUD2/m (UniProtKB: Q15029); EGFR (UniProtKB: A0A0B4J1Y5); EGFR (UniProtKB: E7BSV0); EGFR (UniProtKB: L0R6G1); EGFR (UniProtKB: P00533-2); EGFR (UniProtKB: P00533); EGFR (UniProtKB: Q147T7); EGFR (UniProtKB: Q504U8); EGFR (UniProtKB: Q8NDU8); EGLN3 (UniProtKB: Q9H6Z9); ELF2/m (UniProtKB: B7Z720); EMMPRIN (UniProtKB: Q54A51); EpCam (UniProtKB: P16422); EphA2 (UniProtKB: P29317); EphA3 (UniProtKB: P29320); EphA3 (UniProtKB: Q6P4R6); ErbB3 (UniProtKB: B3KWG5); ErbB3 (UniProtKB: B4DGQ7); ERBB4 (UniProtKB: Q15303); ERG (UniProtKB: P11308); ETV6 (UniProtKB: P41212); EWS (UniProtKB: Q01844); EZH2 (UniProtKB: F2YMM1); EZH2 (UniProtKB: G3XAL2); EZH2 (UniProtKB: L0R855); EZH2 (UniProtKB: Q15910); EZH2 (UniProtKB: S4S3R8); FABP7 (UniProtKB: O15540); FCGR3A_버전_1 (UniProtKB: P08637); FCGR3A_버전_2 (CCDS: CCDS1232.1); FGF5 (UniProtKB: P12034); FGF5 (UniProtKB: Q60518); FGFR2 (UniProtKB: P21802); 피브로넥틴 (UniProtKB: A0A024R5I6); 피브로넥틴 (UniProtKB: A0A024RB01); 피브로넥틴 (UniProtKB: A0A024RDT9); 피브로넥틴 (UniProtKB: A0A024RDV5); 피브로넥틴 (UniProtKB: A6NH44); 피브로넥틴 (UniProtKB: A8K6A5); 피브로넥틴 (UniProtKB: B2R627); 피브로넥틴 (UniProtKB: B3KXM5); 피브로넥틴 (UniProtKB: B4DIC5); 피브로넥틴 (UniProtKB: B4DN21); 피브로넥틴 (UniProtKB: B4DS98); 피브로넥틴 (UniProtKB: B4DTH2); 피브로넥틴 (UniProtKB: B4DTK1); 피브로넥틴 (UniProtKB: B4DU16); 피브로넥틴 (UniProtKB: B7Z3W5); 피브로넥틴 (UniProtKB: B7Z939); 피브로넥틴 (UniProtKB: G5E9X3); 피브로넥틴 (UniProtKB: Q9H382); FOS (UniProtKB: P01100); FOXP3 (UniProtKB: Q9BZS1); FUT1 (UniProtKB: P19526); G250 (UniProtKB: Q16790); GAGE-1 (Genbank: AAA82744); GAGE-2 (UniProtKB: Q6NT46); GAGE-3 (UniProtKB: Q13067); GAGE-4 (UniProtKB: Q13068); GAGE-5 (UniProtKB: Q13069); GAGE-6 (UniProtKB: Q13070); GAGE7b (UniProtKB: O76087); GAGE-8_(GAGE-2D) (UniProtKB: Q9UEU5); GASR (UniProtKB: P32239); GnT-V (UniProtKB: Q09328); GPC3 (UniProtKB: I6QTG3); GPC3 (UniProtKB: P51654); GPC3 (UniProtKB: Q8IYG2); GPNMB/m (UniProtKB: A0A024RA55); GPNMB/m (UniProtKB: Q14956); GPNMB/m (UniProtKB: Q8IXJ5); GPNMB/m (UniProtKB: Q96F58); GRM3 (UniProtKB: Q14832); HAGE (UniProtKB: Q9NXZ2); hepsin (UniProtKB: B2ZDQ2); hepsin (UniProtKB: P05981); Her2/neu (UniProtKB: B4DTR1); Her2/neu (UniProtKB: L8E8G2); Her2/neu (UniProtKB: P04626); Her2/neu (UniProtKB: Q9UK79); HLA-A2/m (UniProtKB: Q95387); HLA-A2/m (UniProtKB: Q9MYF8); 호메오박스_NKX3.1 (UniProtKB: Q99801); HOM-TES-85 (UniProtKB: B2RBQ6); HOM-TES-85 (UniProtKB: Q9P127); HPG1 (Pubmed: 12543784); HS71A (UniProtKB: P0DMV8); HS71B (UniProtKB: P0DMV9); HST-2 (UniProtKB: P10767); hTERT (UniProtKB: O94807); iCE (UniProtKB: O00748); IF2B3 (UniProtKB: O00425); IL10 (UniProtKB: P22301); IL-13Ra2 (UniProtKB: Q14627); IL2-RA (UniProtKB: P01589); IL2-RB (UniProtKB: P14784); IL2-RG (UniProtKB: P31785); IL-5 (UniProtKB: P05113); IMP3 (UniProtKB: Q9NV31); ITA5 (UniProtKB: P08648); ITB1 (UniProtKB: P05556); ITB6 (UniProtKB: P18564); 칼리크레인-2 (UniProtKB: A0A024R4J4); 칼리크레인-2 (UniProtKB: A0A024R4N3); 칼리크레인-2 (UniProtKB: B0AZU9); 칼리크레인-2 (UniProtKB: B4DU77); 칼리크레인-2 (UniProtKB: P20151); 칼리크레인-2 (UniProtKB: Q6T774); 칼리크레인-2 (UniProtKB: Q6T775); 칼리크레인-4 (UniProtKB: A0A0C4DFQ5); 칼리크레인-4 (UniProtKB: Q5BQA0); 칼리크레인-4 (UniProtKB: Q96PT0); 칼리크레인-4 (UniProtKB: Q96PT1); 칼리크레인-4 (UniProtKB: Q9Y5K2); KI20A (UniProtKB: O95235); KIAA0205 (UniProtKB: Q92604); KIF2C (UniProtKB: Q99661); KK-LC-1 (UniProtKB: Q5H943); LDLR (UniProtKB: P01130); LGMN (UniProtKB: Q99538); LIRB2 (UniProtKB: Q8N423); LY6K (UniProtKB: Q17RY6); MAGA5 (UniProtKB: P43359); MAGA8 (UniProtKB: P43361); MAGAB (UniProtKB: P43364); MAGE-A10 (UniProtKB: A0A024RC14); MAGE-A12 (UniProtKB: P43365); MAGE-A1 (UniProtKB: P43355); MAGE-A2 (UniProtKB: P43356); MAGE-A3 (UniProtKB: P43357); MAGE-A4 (UniProtKB: A0A024RC12); MAGE-A4 (UniProtKB: P43358); MAGE-A4 (UniProtKB: Q1RN33); MAGE-A6 (UniProtKB: A8K072); MAGE-A6 (UniProtKB: P43360); MAGE-A6 (UniProtKB: Q6FHI5); MAGE-A9 (UniProtKB: P43362); MAGE-B10 (UniProtKB: Q96LZ2); MAGE-B16 (UniProtKB: A2A368); MAGE-B17 (UniProtKB: A8MXT2); MAGE-_B1 (UniProtKB: Q96TG1); MAGE-B2 (UniProtKB: O15479); MAGE-B3 (UniProtKB: O15480); MAGE-B4 (UniProtKB: O15481); MAGE-B5 (UniProtKB: Q9BZ81); MAGE-B6 (UniProtKB: Q8N7X4); MAGE-C1 (UniProtKB: O60732); MAGE-C2 (UniProtKB: Q9UBF1); MAGE-C3 (UniProtKB: Q8TD91); MAGE-D1 (UniProtKB: Q9Y5V3); MAGE-D2 (UniProtKB: Q9UNF1); MAGE-D4 (UniProtKB: Q96JG8); MAGE-_E1 (UniProtKB: Q6IAI7); MAGE-E1_(MAGE1) (UniProtKB: Q9HCI5); MAGE-E2 (UniProtKB: Q8TD90); MAGE-F1 (UniProtKB: Q9HAY2); MAGE-H1 (UniProtKB: Q9H213); MAGEL2 (UniProtKB: Q9UJ55); 맘마글로빈_A (UniProtKB: Q13296); 맘마글로빈_A (UniProtKB: Q6NX70); MART-1/멜란-A (UniProtKB: Q16655); MART-2 (UniProtKB: Q5VTY9); MC1_R (UniProtKB: Q01726); MC1_R (UniProtKB: Q1JUL4); MC1_R (UniProtKB: Q1JUL6); MC1_R (UniProtKB: Q1JUL8); MC1_R (UniProtKB: Q1JUL9); MC1_R (UniProtKB: Q1JUM0); MC1_R (UniProtKB: Q1JUM2); MC1_R (UniProtKB: Q1JUM3); MC1_R (UniProtKB: Q1JUM4); MC1_R (UniProtKB: Q1JUM5); MC1_R (UniProtKB: Q6UR92); MC1_R (UniProtKB: Q6UR94); MC1_R (UniProtKB: Q6UR95); MC1_R (UniProtKB: Q6UR96); MC1_R (UniProtKB: Q6UR97); MC1_R (UniProtKB: Q6UR98); MC1_R (UniProtKB: Q6UR99); MC1_R (UniProtKB: Q6URA0); MC1_R (UniProtKB: Q86YW1); MC1_R (UniProtKB: V9Q5S2); MC1_R (UniProtKB: V9Q671); MC1_R (UniProtKB: V9Q783); MC1_R (UniProtKB: V9Q7F1); MC1_R (UniProtKB: V9Q8N1); MC1_R (UniProtKB: V9Q977); MC1_R (UniProtKB: V9Q9P5); MC1_R (UniProtKB: V9Q9R8); MC1_R (UniProtKB: V9QAE0); MC1_R (UniProtKB: V9QAR2); MC1_R (UniProtKB: V9QAW3); MC1_R (UniProtKB: V9QB02); MC1_R (UniProtKB: V9QB58); MC1_R (UniProtKB: V9QBY6); MC1_R (UniProtKB: V9QC17); MC1_R (UniProtKB: V9QC66); MC1_R (UniProtKB: V9QCQ4); MC1_R (UniProtKB: V9QDF4); MC1_R (UniProtKB: V9QDN7); MC1_R (UniProtKB: V9QDQ6); M-CSF (UniProtKB: P09603); 메소텔린 (UniProtKB: Q13421); MITF (UniProtKB: O75030-8); MITF (UniProtKB: O75030-9); MITF (UniProtKB: O75030); MMP1_1 (UniProtKB: B3KQS8); MMP7 (UniProtKB: P09237); MUC-1 (Genbank: AAA60019); MUM-1/m (RefSeq: NP_116242); MUM-2/m (UniProtKB: Q9Y5R8); MYCN (UniProtKB: P04198); MYO1A (UniProtKB: Q9UBC5); MYO1B (UniProtKB: O43795); MYO1C (UniProtKB: O00159); MYO1D (UniProtKB: O94832); MYO1E (UniProtKB: Q12965); MYO1F (UniProtKB: O00160); MYO1G (UniProtKB: B0I1T2); MYO1H (RefSeq: NP_001094891); NA17 (UniProtKB: Q3V5L5); NA88-A (Pubmed: 10790436); Neo-PAP (UniProtKB: Q9BWT3); NFYC/m (UniProtKB: Q13952); NGEP (UniProtKB: Q6IWH7); NPM (UniProtKB: P06748); NRCAM (UniProtKB: Q92823); NSE (UniProtKB: P09104); NUF2 (UniProtKB: Q9BZD4); NY-ESO-1 (UniProtKB: P78358); OA1 (UniProtKB: P51810); OGT (UniProtKB: O15294); OS-9 (UniProtKB: B4DH11); OS-9 (UniProtKB: B4E321); OS-9 (UniProtKB: B7Z8E7); OS-9 (UniProtKB: Q13438); 오스테오칼신 (UniProtKB: P02818); 오스테오폰틴 (UniProtKB: A0A024RDE2); 오스테오폰틴 (UniProtKB: A0A024RDE6); 오스테오폰틴 (UniProtKB: A0A024RDJ0); 오스테오폰틴 (UniProtKB: B7Z351); 오스테오폰틴 (UniProtKB: F2YQ21); 오스테오폰틴 (UniProtKB: P10451); p53 (UniProtKB: P04637); PAGE-4 (UniProtKB: O60829); PAI-1 (UniProtKB: P05121); PAI-2 (UniProtKB: P05120); PAP (UniProtKB: Q06141); PAP (UniProtKB: Q53S56); PATE (UniProtKB: Q8WXA2); PAX3 (UniProtKB: P23760); PAX5 (UniProtKB: Q02548); PD1L1 (UniProtKB: Q9NZQ7); PDCD1 (UniProtKB: Q15116); PDEF (UniProtKB: O95238); PECA1 (UniProtKB: P16284); PGCB (UniProtKB: Q96GW7); PGFRB (UniProtKB: P09619); Pim-1_-키나제 (UniProtKB: A0A024RD25); Pin-1 (UniProtKB: O15428); Pin-1 (UniProtKB: Q13526); Pin-1 (UniProtKB: Q49AR7); PLAC1 (UniProtKB: Q9HBJ0); PMEL (UniProtKB: P40967); PML (UniProtKB: P29590); POTEF (UniProtKB: A5A3E0); POTE (UniProtKB: Q86YR6); PRAME (UniProtKB: A0A024R1E6); PRAME (UniProtKB: P78395); PRDX5/m (UniProtKB: P30044); PRM2 (UniProtKB: P04554); 프로스테인 (UniProtKB: Q96JT2); 프로테이나제-3 (UniProtKB: D6CHE9); 프로테이나제-3 (UniProtKB: P24158); PSA (UniProtKB: P55786); PSB9 (UniProtKB: P28065); PSCA (UniProtKB: D3DWI6); PSCA (UniProtKB: O43653); PSGR (UniProtKB: Q9H255); PSM (UniProtKB: Q04609); PTPRC (RefSeq: NP_002829); RAB8A (UniProtKB: P61006); RAGE-1 (UniProtKB: Q9UQ07); RARA (UniProtKB: P10276); RASH (UniProtKB: P01112); RASK (UniProtKB: P01116); RASN (UniProtKB: P01111); RGS5 (UniProtKB: O15539); RHAMM/CD168 (UniProtKB: O75330); RHOC (UniProtKB: P08134); RSSA (UniProtKB: P08865); RU1 (UniProtKB: Q9UHJ3); RU2 (UniProtKB: Q9UHG0); RUNX1 (UniProtKB: Q01196); S-100 (UniProtKB: V9HW39); SAGE (UniProtKB: Q9NXZ1); SART-_1 (UniProtKB: O43290); SART-2 (UniProtKB: Q9UL01); SART-3 (UniProtKB: Q15020); SEPR (UniProtKB: Q12884); SERPINB5 (UniProtKB: P36952); SIA7F (UniProtKB: Q969X2); SIA8A (UniProtKB: Q92185); SIAT9 (UniProtKB: Q9UNP4); SIRT2/m (UniProtKB: A0A024R0G8); SIRT2/m (UniProtKB: Q8IXJ6); SOX10 (UniProtKB: P56693); SP17 (UniProtKB: Q15506); SPNXA (UniProtKB: Q9NS26); SPXN3 (UniProtKB: Q5MJ09); SSX-1 (UniProtKB: Q16384); SSX-2 (UniProtKB: Q16385); SSX3 (UniProtKB: Q99909); SSX-4 (UniProtKB: O60224); ST1A1 (UniProtKB: P50225); STAG2 (UniProtKB: Q8N3U4-2); STAMP-1 (UniProtKB: Q8NFT2); STEAP-1 (UniProtKB: A0A024RA63); STEAP-1 (UniProtKB: Q9UHE8); 서바이빈-2B (UniProtKB: O15392-2); 서바이빈 (UniProtKB: O15392); SYCP1 (UniProtKB: A0A024R0I2); SYCP1 (UniProtKB: B7ZLS9); SYCP1 (UniProtKB: Q15431); SYCP1 (UniProtKB: Q3MHC4); SYT-SSX-1 (UniProtKB: A4PIV7); SYT-SSX-1 (UniProtKB: A4PIV8); SYT-SSX-2 (UniProtKB: A4PIV9); SYT-SSX-2 (UniProtKB: A4PIW0); TARP (UniProtKB: Q0VGM3); TCRg (UniProtKB: A2JGV3); TF2AA (UniProtKB: P52655); TGFB1 (UniProtKB: P01137); TGFR2 (UniProtKB: P37173); TGM-4 (UniProtKB: B2R7D1); TIE2 (UniProtKB: Q02763); TKTL1 (UniProtKB: P51854); TPI/m (UniProtKB: P60174); TRGV11 (UniProtKB: Q99601); TRGV9 (UniProtKB: A4D1X2); TRGV9 (UniProtKB: Q99603); TRGV9 (UniProtKB: Q99604); TRPC1 (UniProtKB: P48995); TRP-p8 (UniProtKB: Q7Z2W7); TSG10 (UniProtKB: Q9BZW7); TSPY1 (UniProtKB: Q01534); TVC_(TRGV3) (Genbank: M13231.1); TX101 (UniProtKB: Q9BY14-2); 티로시나제 (UniProtKB: A0A024DBG7); 티로시나제 (UniProtKB: L8B082); 티로시나제 (UniProtKB: L8B086); 티로시나제 (UniProtKB: L8B0B9); 티로시나제 (UniProtKB: O75767); 티로시나제 (UniProtKB: P14679); 티로시나제 (UniProtKB: U3M8N0); 티로시나제 (UniProtKB: U3M9D5); 티로시나제 (UniProtKB: U3M9J2); TYRP1 (UniProtKB: P17643); TYRP2 (UniProtKB: P40126); UPA (UniProtKB: Q96NZ9); VEGFR1 (UniProtKB: B5A924); WT1 (UniProtKB: A0A0H5AUY0); WT1 (UniProtKB: P19544); WT1 (UniProtKB: Q06250); XAGE1 (UniProtKB: Q9HD64).
체크포인트 억제자
음성 조절 T 세포 표면 분자가 발견되었는데, 이들은 활성화된 T 세포에서는 그것들의 활성을 약화시키기 위하여 상향 조절되어, 종양 세포의 살상에서 상기 활성화된 T 세포의 효율성을 감소시킨다. 이러한 억제성 분자는 T 세포 공동 자극 분자 CD28에 대한 그것의 상동성으로 인해 음성 공동 자극 분자라 지칭되었다. 면역 체크포인트 단백질이라고도 지칭되는 이들 단백질은 조기 활성화 신호의 감쇠, 양성 공동 자극에 대한 경쟁 및 항원 제시 세포의 직접적인 저해를 포함한 여러 경로에서 작용한다(Bour-Jordan et al., 2011. Immunol Rev. 241(1):180-205).
본 발명의 맥락에서, 체크포인트 조절자는 전형적으로, 단백질(예컨대, 항체), 우성 음성 수용체, 디코이 수용체, 또는 리간드 또는 이의 단편 또는 변이체와 같은 분자로, 면역 체크포인트 단백질의 기능을 조절하며, 예를 들어 체크포인트 억제자(또는 억제 체크포인트 분자)의 활성을 억제 또는 감소시키거나 또는 체크포인트 자극자(또는 자극 체크포인트 분자)의 활성을 촉진한다. 따라서 본 설명에 정의된 바와 같은 체크포인트 조절자는 체크포인트 분자의 활성에 영향을 미친다.
이러한 맥락에서 억제 체크포인트 분자는 체크포인트 억제자로 정의되며 동의어로 사용될 수 있다. 또한, 자극 체크포인트 분자는 체크포인트 자극자로 정의되며 동의어로 사용될 수 있다.
바람직하게는, 체크포인트 조절자는 작용성 항체, 길항성 항체, 리간드, 우성 음성 수용체, 및 디코이 수용체 또는 이의 조합으로부터 선택된다.
mRNA-암호화된 항체의 생성 및 이용 방법은 당해 분야에 공지되어 있다(예컨대, WO2008/083949 또는 PCT/EP2017/060226).
본 발명의 맥락에서 체크포인트 조절자에 의해 억제될 수 있는 바람직한 억제 체크포인트 분자는 PD-1, PD-L1, CTLA-4, PD-L2, LAG3, TIM3/HAVCR2, 2B4, A2aR, B7H3, B7H4, BTLA, CD30, CD160, CD155, GAL9, HVEM, IDO1, IDO2, KIR, LAIR1 및 VISTA이다.
본 발명의 맥락에서 체크포인트 조절자에 의해 자극될 수 있는 바람직한 자극 체크포인트 분자는 CD2, CD27, CD28, CD40, CD137, CD226, CD276, GITR, ICOS, OX40 및 CD70이다.
바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 RNA를 포함하는 약학적 조성물 또는 백신은 본 설명에 기술된 바와 같은 용도를 위한 것으로, 이때, 이 용도는, 추가적인 약학적 활성 성분으로서, PD-1 억제자, PD-L1 억제자, PD-L2 억제자, CTLA-4 억제자, LAG3 억제자, TIM3 억제자, TIGIT-억제자, OX40 자극자, 4-1BB 자극자, CD40L 자극자, CD28 자극자 및 GITR 자극자로 구성된 군으로부터 선택된 체크포인트 조절자를 포함한다.
바람직한 구현예에 따르면, 본 설명에 사용된 체크포인트 조절자는 PD-1 경로의 구성원을 표적으로 한다. PD-1 경로의 구성원은 전형적으로 PD-1 신호 전달과 관련이 있는 단백질이다. 한편, 이 군은, 예컨대, PD-1, PD-L1 및 PD-L2의 리간드 및 신호 전달 수용체 PD-1과 같이, PD-1의 상류의 PD-1 신호 전달을 유도하는 단백질을 포함한다. 다른 한편으로, 이 군은 PD-1 수용체 하류의 신호 전달 단백질을 포함한다. 본 발명의 맥락에서 PD-1 경로의 구성원으로서 PD-1, PD-L1 및 PD-L2가 특히 바람직하다.
본 발명의 맥락에서, PD-1 경로 길항제(또는 PD-1 억제자)는 바람직하게는 본 설명에서 PD-1 경로 신호 전달, 바람직하게는 PD-1 수용체에 의해 매개되는 신호 전달을 손상시킬 수 있는 화합물로서 정의된다. 따라서, PD-1 경로 길항제는 PD-1 경로 신호 전달을 길항할 수 있는, PD-1 경로의 임의의 구성원에 대한 임의의 길항제일 수 있다.
바람직한 구현예에서, 본 설명에 사용된 체크포인트 조절자는 PD-1 억제자 또는 PD-L1 억제자이며, 이때, PD-1 억제자는 바람직하게는 PD-1에 대한 길항적 항체이고, PD-L1 억제자는 바람직하게는 PD-L1에 대한 길항적 항체이다.
이러한 맥락에서, 길항제는 PD-1 경로의 임의의 구성원을 표적으로 하는 본 설명에 정의된 바와 같은 길항적 항체, 바람직하게는 PD-1 수용체, PD-L1 또는 PD-L2에 대한 길항적 항체일 수 있다. 이러한 길항적 항체 또한, 핵산에 의해 암호화될 수 있다. 또한, PD-1 경로 길항제는 PD1 리간드의 활성을 차단하는 PD-1 수용체의 단편일 수 있다. 또한, B7-1 또는 이의 단편은 PD1 길항 리간드로 작용할 수 있다. 추가적으로, PD-1 경로 길항제는 예를 들어 PD-1 및 B7-H1 또는 B7-DL 상호 작용에 의해, PD-1에 결합할 수 있으나 PD-1 신호 전달을 방해하는 아미노산 서열을 포함하는 단백질(또는 이를 암호화하는 핵산)일 수 있다(WO 2014/127917; WO2012062218).
항-PD1 항체 니볼루맙(Nivolumab)(MDX-1106/BMS-936558/ONO-4538), (Brahmer et al., 2010. J Clin Oncol. 28(19):3167-75; PMID: 20516446); 피딜리주맙(Pidilizumab)(CT-011), (Berger et al., 2008. Clin Cancer Res. 14(10):3044-51; PMID: 18483370); 펨브롤리주맙(Pembrolizumab)(MK-3475, SCH 900475); AMP-224, 및 MEDI0680(AMP-514)이 특히 바람직하다.
또한, 항-PD-L1 항체 MDX-1105/BMS-936559 (Brahmer et al. 2012. N Engl J Med. 366(26):2455-65; PMID: 22658128); 아테졸리주맙(atezolizumab)(MPDL3280A/RG7446); 둘발루맙(durvalumab)(MEDI4736); 및 아벨루맙(avelumab)(MSB0010718)이 특히 바람직하다.
또 다른 구현예에 따르면, 본 설명에 사용된 체크포인트 조절자는 OX40 자극자이다. OX40은 TNFR-상과 수용체의 구성원으로, 항원-활성화된 포유동물 CD4+ 및 CD8+ 림프구의 표면에서 발현된다. OX40 리간드(OX40L, 또한, gp34, ACT-4-L, 및 CD252로 알려져 있음)는 OX40 수용체와 특이적으로 상호 작용하는 단백질이다. 용어 OX40L은 전체 OX40 리간드, 가용성 OX40 리간드, 및 제2 모이어티, 예컨대, 단백질 도메인에 공유적으로 연결된 OX40 리간드의 기능적 활성 부분을 포함하는 융합 단백질을 포함한다. 또한, OX40L의 정의에는 자연 발생 OX4L로부터 아미노산 서열이 다양하지만 OX40 수용체에 특이적으로 결합하는 능력을 보유하는 변이체가 포함된다. 또한, OX40의 생물학적 활성을 증진시키는 변이체가 OX40L의 정의에 포함된다. OX40 효현제는 OX40의 생물학적 활성, 예를 들어 OX40에 의해 매개되는 신호 전달을 유도 또는 증진시키는 분자이다. OX40 효현제는 바람직하게 OX40에 특이적으로 결합할 수 있는 결합 분자로서 본 설명에서 정의된다. 따라서, OX40 효현제는 OX40에 결합하고 OX40 신호 전달을 자극할 수 있는 임의의 효현제일 수 있다. 이러한 맥락에서, OX40 효현제는 OX40에 결합하는 작용성 항체일 수 있다.
OX40 효현제 및 항-OX40 단일클론 항체는 WO1995/021251, WO1995/012673 및 WO1995/21915에 기술되어 있다. 인간 OX40의 세포 외 도메인에 대한 항-OX40 항체 9B12, 뮤린 항-OX40 단일클론 항체가 특히 바람직하다(Weinberg et al., 2006. J. Immunother. 29(6):575-585).
또 다른 구현예에서, 본 설명에 사용된 바와 같은 체크포인트 조절자는 항-CTLA4, 항-PD1, 항-PD-L1, 항-Vista, 항-Tim-3, 항-TIGIT, 항-LAG-3, 및 항-BTLA로 구성된 군으로부터 선택된 길항적 항체이다.
바람직하게는, 체크포인트 조절자로서 사용될 수 있는 항-CTLA4 항체는 세포독성 T 림프구 항원-4(CTLA-4)에 대한 것이다. CTLA-4는 주로 T 세포의 세포 내 구획 내에서 발현된다. T 세포 수용체(TCR)를 통한 미감작 T 세포에 대한 강력하거나 또는 오래 지속되는 자극 후, CTLA-4는 세포 표면으로 수송되어 면역 시냅스에 집중된다. CTLA-4는 이후 CD80/CD86에 대해 CD28과 경쟁하며 Akt 신호 전달에 미치는 영향을 통해 TCR 신호 전달을 하향 조절한다. 따라서 CTLA-4는 생리학적으로 신호 감쇠제로서 기능한다(Weber, J. 2010. Semin. Oncol. 37(5):430-9).
바람직한 구현예에서, 본 발명의 RNA를 포함하는 약학적 조성물 또는 백신은 본 설명에 기술된 바와 같은 용도를 위한 것으로, 이때, 이 용도는, 추가적인 약학적 활성 성분으로서, CTLA4 길항제를 포함하고, 이 CTLA 4 길항제는 바람직하게는 CTLA4에 대한 길항적 항체(항-CTLA4 항체)이다. 본 설명에 사용된 바와 같은 용어 'CTLA4 길항제'는 CTLA4의 생리학적 기능을 길항하는, 항체와 같은, 임의의 화합물을 포함한다. 본 발명의 맥락에서, 용어 '항-CTLA4 항체'는 CTLA4에 대한 길항적 항체(또는 상기 항체의 기능적 단편 또는 변이체) 또는 상기 길항적 항체(또는 이의 기능적 단편)을 암호화하는 핵산, 바람직하게는 RNA를 지칭할 수 있다. 항-CTLA4 항체의 기능적 단편 또는 변이체는 바람직하게는 CTLA4 길항제로서 작용한다. 더욱 바람직하게는, 용어 '항-CTLA4 항체'는 CTLA4에 대한 단일클론 항체(또는 이러한 항체의 기능적 단편 또는 변이체) 또는 CTLA4에 대한 단일클론 항체(또는 이러한 항체의 기능적 단편 또는 변이체)를 암호화하는 핵산을 지칭한다. 본 설명에 사용된 바와 같은 용어 '항-CTLA4 항체'는 각각 항체 중쇄 또는 항체 경쇄를 지칭할 수 있거나, 항체 쇄 둘 다(중쇄 및 경쇄)도 지칭할 수 있거나, 이들 쇄 중 임의의 하나의 단편 또는 변이체를 지칭할 수 있다. 바람직하게는, 본 설명에 사용된 바와 같은 항-CTLA4 항체의 단편 또는 변이체는 바람직하게는 본 설명에 기술된 바와 같은, 기능적 단편 또는 변이체이다.
항-CTLA-4 항체 이필리무맙(ipilimumab)(Yervoy®), 트레멜리무맙(tremelimumab), 및 AGEN-1884가 특히 바람직하다. 또한, 본 설명에 사용된 바와 같은 바람직한 항-CTLA4 항체는 BMS 734016; BMS-734016; BMS734016; MDX 010; MDX 101; MDX-010; MDX-101; MDX-CTLA-4; MDX-CTLA4; MDX010; 윈글로러(Winglore); 및 여보이(Yervoy), 또는 이들 항체 중 임의의 하나의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다.
추가적인 구현예에 따르면, 본 설명에 사용된 바와 같은 체크포인트 조절자는 표 1에 기술된 적어도 하나의 항체 또는 이의 단편 또는 변이체이다.
Figure pct00006
Figure pct00007
Figure pct00008
표준 요법
더욱 바람직하게는, 본 발명의 RNA를 포함하는 약학적 조성물 또는 백신, 이의 조합물, 또는 상기 RNA(들)를 포함하는 약학적 조성물 또는 백신을 투여 받는 대상체는 본 설명에 기술된 바와 같은 종양 또는 암 질환을 앓고 있거나 화학요법(예컨대, 1차 또는 2차 화학요법), 방사선요법, 화학방사선요법(화학요법과 방사선요법의 조합), 키나제 억제제, 항체 요법 및/또는 체크포인트 조절자(예컨대, CTLA4 억제자, PD1 경로 억제자)를 받았거나 받는 환자, 또는 위에 명시된 치료 중 하나 이상을 받은 후 부분 반응 또는 안정적인 질병을 달성한 환자이다. 더욱 바람직하게는, 대상체는 본 설명에 기술된 바와 같은 종양 또는 암 질환을 앓고 있고, 본 설명에 기술된 바와 같은 임의의 이러한 질병에 통상적으로 사용되는 화합물을 받았거나 받는 환자, 더욱 바람직하게는 체크포인트 조절자를 받거나 받은 환자이다.
다음 화합물은, 바람직하게는 표준 요법에 사용되며 본 발명의 RNA를 포함하는 약학적 조성물 또는 백신과 조합하여 적용될 수 있는 바람직한 화합물이다: 세툭시맙(Cetuximab)(얼비툭스(Erbitux)), 알부민 결합 파클리탁셀(아브락산(Abraxane)), (기메라실(gimeracil) + 오테라실(oteracil) + 테가푸르(tegafur))(TS-1), 도세탁셀(Docetaxel)(도세탁셀, 독셀(Doxel), 탁소티어(Taxotere), 도세탁셀 An, 도셀(Docel), 나녹셀(Nanoxel) M, 타우탁스(Tautax), 도세탁셀 -AS, 도세탁셀-M, 큐비다도탁스(Qvidadotax), 렐리도세(Relidoce), 탁셀로(Taxelo), 온코도셀(Oncodocel), 독소텔(Doxotel), 파캔서(Pacancer), 도세트러스트(Docetrust), 도데탁스(Dodetax), 도다부르(Dodabur), 소울락스신(Soulaxcin), 탁세돌(Taxedol), 도세핌(Docefim), 도세탁셀, 리보도셀(Ribodocel), 크리티독(Critidoc), 아소독(Asodoc), 케모독(Chemodoc), 도셀립스(Docelibbs), 도세낫(Docenat), 딘실레잔(Dincilezan), 도스트라딕시놀(Dostradixinol), 도세프레즈(Docefrez), 칼미토틱(Camitotic), 온코탁셀(Oncotaxel), 소마틱셀(Somatixel), 벨로탁셀(Belotaxel), 큐비다도탁스(Qvidadotax), 탁스세우스(Taxceus), 세타도큐어(Cetadocure), 도세탁셀 CT, 테박스터(Tevaxter), 도시레나(Docirena), 유로티어(Eurotere), 악스티어(Axtere), 셀로탁스(Celotax), 탁사닛(Taxanit), 드로바노스(Drobanos), 세타도(Cetado), 독소카드(Doxocad), 탁스세우스(Taxceus), 에지독스(Egidox), 테도카드(Tedocad), 도세카드(Docecad), 도셀렉스(Docelex), 도세탁스(Docetax), 도세탁셀, 도세티어(Docetere), 도탁스(Dotax), 탁수바(Taxuba), 모노탁셀(Monotaxel), 타세에도(Taceedo), 데탁슬(Detaxl), 도셋(Docet), 도세탁셀, 페르도탁스(Ferdotax), 윈탁셀(Wintaxel)), (테가푸르 + 우라실)(Uft, Uft E, 테푸덱스(Tefudex), 유니토랄(Unitoral), 루포랄(Luporal), 타그라실(Tagracil)), 플루오로우라실(5-FU), (기메라실 + 오테라실 + 테가푸르) ODT (TS-1 조합 OD), 블레오마이신 설페이트(테크노미시나(Tecnomicina), 시나레오(Cinaleo), 블레오마이신(Bleomycin), 블로이신(Bloicin)-S, 보나르(Bonar), 블레오신(Bleocin), 블레오마이신 설페이트, 블레오(Bleo), 블레오셀(Bleocel), 블레오텍스(Bleotex), 온코블레오(Oncobleo), 블레온코(Bleonco), 블레오솔(Bleosol), 료블(Lyoble), 블레오마이신 설페이트, 블레나막스(Blenamax), 블레오마이신(Bleomycin), 블레녹산(Blenoxane), 블레오미시나(Bleomicina), 블레오마이신 벨론(Bleomycine Bellon), 블레오프림(Bleoprim)), 카보플라틴(카보플라틴, 플라타민(Platamine) CS, 카바코드(Carbaccord), 카보플라티나(Carboplatina), 카보플라티노(Carboplatino), 파라플라틴(Paraplatin), 카보신(Carbosin), 테크노카브(Tecnocarb), 카보머크(Carbomerck), 파락트(Paract), 카보플라티네(Carboplatine) CTRS, 카보플라티네 인트셀 키모스(Carboplatine Intsel Chimos), 카보플라틴, 카보켐(Carbokem), 카보티놀(Carbotinol), 폴드카보(Fauldcarbo), 에보카브(Evocarb), 시토플라티나(Citoplatina), 플라틴(Platin)), 시프로플록사신(ciprofloxacin)(하이포플록스(Hypoflox), 유펙실(Ufexil)), 시프로플록사신 하이드로클로라이드(시프로플록사신 파마(Pharma), 프로딘(Prodin), 시프록신(Ciproxin)), 시스플라틴(시스플라틴, 스트리틴(Stritin), 이파플라(Ifapla), 아코싯(Accocit), 유니스틴(Unistin), 캔서틴(Cancertin), 시스플란(Cisplan), 시토플락스(Citoplax), 뉴옥신(Nuoxin), 플라시스(Placis), 시스플라티노(Cisplatino), 디스플라노르(Displanor), 란다(Randa), 시스플라(Cispla), 폴드시스플라(Fauldcispla), 브리플라틴(Briplatin), 플라티넥스(Platinex), 플라티놀(Platinol), 플라티넥스(Platinex), 리보플라틴(Riboplatin), 시스플라틴(Cisplatine), 플라티스틴(Platistine) CS, 플라스토신(Platosin), 아코싯(Accocit), 시스플라티노(Cisplatino)) 시클로포스파미드(엔독산(Endoxan), 시클로포스파미드), 독시플루리딘(독시플루리딘, 메이 블라디미르(May Vladimir)), 독소루비신(독소루비신 하이드로클로라이드, 아드리아마이신 RDF, 독소루비신, 독소루비신 PFS), 에피루비신, 하이드로클로라이드(브레실라(Brecila), 클로리드라토 데 에피루비시나(Cloridrato De Epirrubicina), 에피루비신, 파르모루비시나(Farmorubicina), 누오보독스(Nuovodox), 아드넥사(Adnexa), 4-에페도(Eppedo), 파비신(Favicin)), 플루오로우라실 (아기실(Agicil), 플루오로우라실, 폴드플루오르(Fauldfluor), 온코우라실(Oncourcil), 플로실(Flocil), 5 플루셀(Flucel)), 엽산 + 메토트렉세이트(트룩소폴(Truxofol)), 인간 아데노바이러스 타입 5 (재조합)(온코린(Oncorine)), 하이드록시우레아(옥시레아(Oxyrea), 두레아(Durea), 블레오스탓(Myelostat), 리보레아(Riborea), 유니드레아(Unidrea), 온드레아(Ondrea), 하이드란(Hydran), 류코셀(Leukocel), 하이드록시우레아, 하이드레아(Hydrea)), 이포스파미드(ifosfamide)(홀록산(Holoxan), 이포스파미드 EG), 레바미솔(levamisole)(지르솔(Zirsol)), 메토트렉세이트 메토트렉세이트(트라토벤(Tratoben), 메토트렉세이트, 프레섹세이트(Fresexate), 네오메토(Neometho), 폴드메트로(Fauldmetro), 메토트렉세이트 소듐, 메토셀(Methocel), 하이타스(Hytas), 메타코드(Methaccord), 메토필(Methofill), 메토트렉사토(Metotrexato), 트락사코드(Traxacord), 플라스토멧(Plastomet), 테바트렉스(Tevatrex), 메트렉스(Metrex), 카디트렉스(Caditrex), 카디트렉스(Carditrex), 빕지(Vibzi), 이뮤트렉스(Imutrex), 비오트렉세이트(Biotrexate), 메토렉스(Methorex), 메세이트(Mexate), 네오트렉세이트(Neotrexate), 온코트렉스(Oncotrex), 렘트렉스(Remtrex), 트릭실렘(Trixilem), 하이-트렉스(Hi-Trex), 메토렉스(Metorex), 트렉스(Trex), 유니트렉세이트(Unitrexate), 에베트렉삭(Ebetrexac), 폴데사토(Fauldexato), 란타렐(Lantarel), 맥스트렉스(Maxtrex), 미안트렉스(Miantrex) CS, 류마트렉스(Rheumatrex), 폴렉스(Folex), 폴렉스 PFS, 아비트렉세이트(Abitrexate), 테바메토(Tevametho), 트렉스올(Trexall), 엠덱세이트(Emthexate), 아비트렉세이트(Abitrexate), 메도우(Meadow)), 미토마이신(미토마이신 C, 미토마이신, 미톤코(Mitonco), 료밋(Lyomit)), 네다플라틴(nedaplatin)(지에바이슈(Jiebaishu), 아옥시안다(Aoxianda), 아큐플라(Aqupla)), 니메술리드(nimesulide)(니물리드(Nimulid)), 니모투주맙(nimotuzumab)(비오맙(Biomab) EGFR, 래데맙(Laedemab)), 니트로푸란토인(nitrofurantoin)(푸라트실린(Furatsilin)), 오플록사신(엔토프(Entof)), 파클리탁셀(파클리탁셀, 탁솔), 페플레오마이신 설페이트(페플레오(Pepleo)), 피시바닐(picibanil)(피시바닐(Picibanil)), 피라루비신(피라루비신 하이드로클로라이드, 테라루비신, 피노루빈), 소듐 글리시디다졸(sodium glycididazole)(CMNa), 테가푸르(유테포스(Utefos), 이카루스(Icarus), 푸트라풀(Futraful), 테가푸르 기메라실 오테라실 포타슘), 테모포핀(temoporfin)(포스칸(Foscan)), 토포테칸 하이드로클로라이드(토포테칸), 우베니멕스(ubenimex)(우베니멕스(Ubenimex)), 빈블라스틴 설페이트(빈블라스틴(Vinblastine), 빈블라스틴(Vblastin)), 빈크리스틴 설페이트(빈크리스틴(Vincristine), 빈크리스틴 설페이트(Vincristine Sulfate), 빈크리스틴(Vincristin), 수티빈(Sutivin), 빈데신 설페이트(vindesine sulfate)(엘디신(Eldisine)), 카보플라틴(카보플라틴 퀄리메드(Carboplatine Qualimed), 카보플라틴(Carboplatine), 카보플라티노(Carboplatino), 카보플라틴), 시스플라틴(시스플라틴), 도세탁셀(캄도콘(Kamdocon), 날톡세이터(Naltoxater), 도세탁셀), 플루오로우라실(플루오로우라실(Fluorouracil), 플루오로우라실레(Fluorouracile), 플루오로우라실), 메토트렉세이트(메토트렉세이트 소듐, 메세이트(Mexate), 메세이트 Aq, 비오메트록스(Biometrox), 메드사트렉세이트(Medsatrexate), 오탁셈(Otaxem)), 빈크리스틴 설페이트(온코빈(Oncovin)), 플루오로우라실, 수니티닙 말레이트(sunitinib malate), 아시트레틴(acitretin), 피브린 실란트(fibrin sealant), 세툭시맙, 세툭시맙, 엘로티닙, 시스플라틴;도세탁셀;플루오로우라실, 미공개 항암제, 게피티니브, 프라바스타틴 소듐, 시롤리무스, 미공개 화학요법, 시스플라틴;도세탁셀;플루오로우라실, 시롤리무스, 플루오로우라실; 미공개 탁산(taxane), 메틸 아미노레불리네이트 하이드로클로라이드, 시스플라틴;도세탁셀;플루오로우라실, 엘로티닙 하이드로클로라이드, 세툭시맙, 이미퀴모드, 미공개 한약, 아스피린; 에날라프릴 말리에이트, 미공개 화학요법, 세툭시맙, (기메라실 + 오테라실 + 테가푸르); 카보플라틴; 시스플라틴, 시스플라틴; 플루오로우라실; 니모투주맙, 카보플라틴;알부민 결합 파클리탁셀, 시스플라틴; 네다플라틴, 블레오마이신, 네다플라틴, 시스플라틴; 파클리탁셀, 알부민 결합 파클리탁셀, (기메라실 + 오테라실 + 테가푸르), 블레오마이신; 미공개 화학요법, 아파티닙;도세탁셀, 미공개 면역조절 보충제, BCM-95, 아미노레불린산 하이드로클로라이드, 네다플라틴, 시스플라틴; 팔리페르민(palifermin), 세툭시맙, 게피티니브, 베바시주맙, 벨라겐푸마투셀(belagenpumatucel)-L, 시스플라틴; 티라파자민(tirapazamine), 시스플라틴; 티라파자민, 시스플라틴; 젬시타빈; 파클리탁셀; 토포테칸; 비노렐빈, 시스플라틴; 플루오로우라실, 파니투무맙, 카보플라틴; 도세탁셀; 젬시타빈 하이드로클로라이드; 비노렐빈 타르트레이트, 아미포스틴; 플루오로우라실, 시스플라틴; 플루오로우라실, 카보플라틴; 파클리탁셀, 티라파자민, 시스플라틴; 에포에틴 알파, 피기투무맙, 멜팔란; 종양 괴사 인자 alf, 시스플라틴, 시스플라틴;플루오로우라실, 시스플라틴; 미공개 화학요법, 도세탁셀, 콘투수게네 라데노벡(contusugene ladenovec), 시스플라틴; 플루오로우라실;파클리탁셀, 도세탁셀, 인유두종 바이러스 [혈청형 16, 18] (2가) 백신, 이소트레티노인, 시스플라틴;플루오로우라실, 미소니다졸, 파클리탁셀, 팔리페르민, 엔도스타틴, 필로카르핀, 시스플라틴; 도세탁셀; 필그라스팀(filgrastim); 플루오로우라실; 파클리탁셀, 시스플라틴; 도세탁셀; 필그라스팀;플루오로우라실;파클리탁셀, 시스플라틴; 이리노테칸 하이드로클로라이드, 시스플라틴;젬시타빈, 시스플라틴;에피루비신;플루오로우라실; 미공개 화학요법, 메틸 아미노레불리네이트 하이드로클로라이드, 카보플라틴;파클리탁셀, 카보젠(carbogen); 이산화탄소; 니아신아미드, 시스플라틴; 플루오로우라실, 탈리모겐 라허파렙벡(talimogene laherparepvec), 에포에틴 알파, 시스플라틴;플루오로우라실;파니투무맙, 시스플라틴;플루오로우라실, 시스플라틴;플루오로우라실, 알데스류킨, 시스플라틴;플루오로우라실, 시스플라틴; 파클리탁셀, 시스플라틴;플루오로우라실, 플루오로우라실; 류코보린; 로바플라틴, 시스플라틴, 시스플라틴; 에틸 메르캅탄;이포스파미드; 메스나; 미토락톨, 독소루비신; 레바미솔, (테가푸르 + 우라실), 시스플라틴;플루오로우라실, 시스플라틴;비노렐빈, 카보플라틴;시스플라틴;젬시타빈 하이드로클로라이드, 코리네박테리움 파리움(Corynebacterium parvum);독소루비신, 카페시타빈;시스플라틴;플루오로우라실;파클리탁셀, 플루오로우라실; 류코보린; 메토트렉세이트, rAd-p53, 세툭시맙;시스플라틴;도세탁셀, PV-10, 메틸 아미노레불리네이트 하이드로클로라이드, 시스플라틴; 플루오로우라실, 파클리탁셀; 토포테칸 하이드로클로라이드, 카보플라틴; 시스플라틴; 파클리탁셀, 시스플라틴; 토포테칸 하이드로클로라이드, 시스플라틴; 에토포시드, 도세탁셀; 플루오로우라실, 아스피린, 시스플라틴; 젬시타빈, 락토바실러스 브레비스 CD2,시스플라틴;도세탁셀, 포스브레타불린 트로메타민(fosbretabulin tromethamine), 파니투무맙, 플루오로우라실, 파클리탁셀, 카보플라틴;시스플라틴;도세탁셀;플루오로우라실, 플루오로우라실, 엘로티닙 하이드로클로라이드, 시스플라틴; 미공개 화학요법; 비노렐빈, (기메라실 + 오테라실 + 테가푸르); 카보플라틴, 세툭시맙, 콘투수게네 라데노벡, 세툭시맙, 메틸 아미노레불리네이트 하이드로클로라이드, 시클로포스파미드, (기메라실 + 오테라실 + 테가푸르);시스플라틴, 알부민 결합 파클리탁셀, 카보플라틴;파클리탁셀, 시스플라틴;젬시타빈, 카페시타빈;시스플라틴, 도세탁셀, Z-100, 시스플라틴;이포스파미드;파클리탁셀, 니모투주맙, 이리노테칸 하이드로클로라이드, 셀레콕시브(celecoxib);메토트렉세이트, 뉴트리손(Nutrison), 카보플라틴; 시스플라틴; 플루오로우라실; 파클리탁셀, 시스플라틴; 파클리탁셀, 시스플라틴; 도세탁셀; 비노렐빈, 파클리탁셀,(기메라실 + 오테라실 + 테가푸르); 시스플라틴, 카보플라틴;파클리탁셀, 메틸 아미노레불리네이트 하이드로클로라이드, 아이빈(Aibin), 시스플라틴;플루오로우라실, 포르피머 소듐(porfimer sodium), 카보플라틴; 시스플라틴; 토코트리에놀; 비노렐빈, (기메라실 + 오테라실 + 테가푸르);시스플라틴;파클리탁셀, 도세탁셀, 이필리무맙, 시스플라틴, VB-4847, 셀레콕시브; 탈리도마이드, 시스플라틴; 에피루비신; 플루오로우라실, 시스플라틴; 플루오로우라실, 플루오로우라실, 카보플라틴; 파클리탁셀, 세툭시맙; 시스플라틴; 도세탁셀, 자가 사이토카인 유도된 킬러 세포, 시스플라틴;도세탁셀;플루오로우라실, 시스플라틴;에피루비신;플루오로우라실, 테르겐푸마투셀(tergenpumatucel)-L, 세툭시맙;시스플라틴;도세탁셀, 엘렌탈, 시스플라틴;니모투주맙;파클리탁셀, 에이코사펜타에노산; 미공개 영양 보충제, 팔보시클립(palbociclib), 펨브롤리주맙(키트루다(Keytruda)), 니모투주맙, 아파토르센(apatorsen) 및 다코미티닙.
종양 적응증
본 설명에 사용된 바와 같이, 용어 "종양", "암" 또는 "암 질환"은 악성 질병을 지칭하며, 이는 바람직하게는 다음으로 구성된 군으로부터 선택된다: 선낭 암종(Adenocystic carcinoma, Adenoid cystic carcinoma), 부신피질 암종(Adrenocortical carcinoma), AIDS-관련 암, AIDS-관련 림프종, 항문암, 맹장암(Appendix cancer), 성상세포종(Astrocytoma), 기저세포 암종(Basal cell carcinoma), 담관암(Bile duct cancer), 방광암(Bladder cancer), 골암(Bone cancer), 골육종(Osteosarcoma)/악성섬유조직구종(Malignant fibrous histiocytoma), 뇌줄기신경아교종(Brainstem glioma), 뇌종양, 소뇌성상세포종(cerebellar astrocytoma), 뇌성상세포종(cerebral astrocytoma)/악성뇌교종(malignant glioma), 뇌질피복세포증(ependymoma), 수모세포종(medulloblastoma), 천막위 원시 신경외배엽 종양(supratentorial primitive neuroectodermal tumors), 시각 경로 및 시상하부 신경교종(visual pathway and hypothalamic glioma), 유방암, 기관지 선종/유암종(Bronchial adenomas/carcinoids), 버킷 림프종(Burkitt lymphoma), 소아 유암종(childhood Carcinoid tumor), 위장관 유암종(gastrointestinal Carcinoid tumor), 원발 부위 미상암(Carcinoma of unknown primary), 원발성 중추신경계 림프종(primary Central nervous system lymphoma), 소아 소뇌성상세포종(childhood Cerebellar astrocytoma), 소아 뇌성상세포종(childhood Cerebral astrocytoma)/악성 뇌교종, 자궁경부암, 소아암(Childhood cancers), 만성 림프성 백혈병(Chronic lymphocytic leukemia), 대장암, 균상 식육종(Mycosis Fungoides) 및 시자리 증후군(Sezary Syndrome)을 포함한 피부 T-세포 림프종(Cutaneous T-cell lymphoma), 결합조직성 소원형세포종양(Desmoplastic small round cell tumor), 자궁내막암(Endometrial cancer), 뇌질피복 세포증(Ependymoma), 식도암(Esophageal cancer), 유잉 패밀리 종양의 육종(Sarcoma of the Ewing family of tumors), 소아 두개외 생식 세포 종양, 고환 외 생식 세포 종양(Extragonadal Germ cell tumor), 간외 담관암(Extrahepatic bile duct cancer), 안내 흑색종(Intraocular melanoma), 망막아종(Retinoblastoma), 담낭암(Gallbladder cancer), 위암(Gastric (Stomach) cancer), 위장관 유암종(Gastrointestinal Carcinoid Tumor), 위장관 간질성 종양(Gastrointestinal stromal tumor, GIST), 두개외(extracranial), 고환외(extragonadal), 또는 난소(ovarian) 생식 세포 종양, 임신 영양아층 종양(Gestational trophoblastic tumor), 뇌간의 신경교종(Glioma of the brain stem), 소아 별아교세포종, 소아 시각 경로 및 시상하부 교종, 위유암종, 모양 세포성 백혈병(Hairy cell leukemia), 두경부암, 심장암, 간세포(간) 암, 호지킨 림프종, 인유두종 바이러스(HPV) 관련 암, 하인두암, 소아 시상하부 및 시각 경로 교종(childhood Hypothalamic and visual pathway glioma), 안내 흑색종, 섬세포암종(Islet Carcinoma)(내분비 췌장), 카포시 육종(Kaposi sarcoma), 신장암(신장세포암), 후두암, 입술 및 구강암, 지방육종, 간암, 비소세포 폐암, 소세포 폐암, 림프종, AIDS 관련 림프종, 버킷 림프종, 호지킨 림프종, 비-호지킨 림프종, 일차 중추신경계 림프종, 뼈의 악성 섬유성 조직구종/골육종(Malignant Fibrous Histiocytoma of Bone/Osteosarcoma), 소아 수모세포종(Childhood Medulloblastoma), 흑색종, 안내(눈) 흑색종, 머켈세포암종(Merkel Cell Carcinoma), 성인 악성 중피종(Adult Malignant Mesothelioma), 소아 중피종(Childhood Mesothelioma), 머리 또는 목암, 구강암(mouth cancer), 소아 다발성 내분비 신생물 증후군(Childhood Multiple Endocrine Neoplasia Syndrome), 다발성 골수종/형질 세포 종양(Multiple Myeloma/Plasma Cell Neoplasm), 다발성 골수종(골수의 암), 비강암 및 부비동암(Nasal cavity and paranasal sinus cancer), 비인두암(Nasopharyngeal carcinoma), 신경모세포종(Neuroblastoma), 구강암(Oral cancer), 구인두암(Oropharyngeal cancer), 골육종/뼈의 악성 섬유조직구종(Osteosarcoma/malignant fibrous histiocytoma of bone), 난소암(Ovarian cancer), 난소 상피암(Ovarian epithelial cancer)(표면 상피-기질 종양(Surface epithelial-stromal tumor)), 난소 생식세포 종양(varian germ cell tumor), 난소 저악성 잠재성 종양(Ovarian low malignant potential tumor), 췌장암(Pancreatic cancer), 섬세포 췌장암(isleT cell Pancreatic cancer), 부비동 및 비강암(Paranasal sinus and nasal cavity cancer), 부갑상선암(Parathyroid cancer), 음경암(Penile cancer), 인두암(Pharyngeal cancer), 크롬 친화성 세포종(Pheochromocytoma), 송과체 성상세포종(Pineal astrocytoma), 송과체 배아세포종(Pineal germinoma), 소아 솔방울샘모세포종 및 원시신경외배엽 종양(childhood Pineoblastoma and supratentorial primitive neuroectodermal tumors), 뇌하수체 선종(Pituitary adenoma), 형질세포 종양형성/형질세포종/다발성 골수종(Plasma cell neoplasia/plasmocytoma/Multiple myeloma), 흉막 폐 모세포종(Pleuropulmonary blastoma), 일차 중추신경계 림프종, 전립선 암, 직장암(Rectal cancer), 신장 세포 암종(신장암), 신우 및 수뇨관의 암, 망막아세포종, 소아 횡문근육종(childhood Rhabdomyosarcoma), 침샘 암(Salivary gland cancer), 유잉 패밀리 종양의 육종(Sarcoma of the Ewing family of tumors), 카포시 육종, 연부 조직 육종(soft tissue Sarcoma), 자궁 육종(uterine Sarcoma), 피부암(비흑색종), 피부암(흑색종), 머켈 세포 피부 암종(Merkel cell Skin carcinoma), 소장암, 편평세포 암종(Squamous cell carcinoma), 잠복 원발 경부 편평 전이암(metastatic Squamous neck cancer with occult primary), 연부 조직 육종(STS), 소아 천막상 원시신경외배엽 종양(childhood Supratentorial primitive neuroectodermal tumor), 고환암(정상피종 및 비-정상피종), 인후암, 소아 흉선종(childhood Thymoma), 흉선종 및 흉선암종, 갑상선암, 소아 갑상선암, 신우 및 수뇨관의 이행세포암(Transitional cell cancer of the renal pelvis and ureter), 임신 육모성 종양, 요도암, 자궁내막암(endometrial Uterine cancer), 자궁 육종, 질암, 소아 시각 경로 및 시상하부 교종, 외음부암, 및 소아 윌름 종양(childhood Wilms tumor)(신장암).
알레르기 항원:
알레르기 또는 알레르기 질환과 관련된 항원(알레르겐 또는 알레르기 항원)은 바람직하게는 다음으로 구성된 목록으로부터 선택된 원천으로부터 유래된다:
아카루스(Acarus) 종(Aca s 1, Aca s 10, Aca s 10.0101, Aca s 13, Aca s 13.0101, Aca s 2, Aca s 3, Aca s 7, Aca s 8), 아칸토시비움(Acanthocybium) 종(Aca so 1), 아칸토세일로네마(Acanthocheilonema) 종(Aca v 3, Aca v 3.0101), 아세테스(Acetes) 종(Ace ja 1), 악티니디아(Actinidia) 종(Act a 1, Act c 1, Act c 10, Act c 10.0101, Act c 2, Act c 4, Act c 5, Act c 5.0101, Act c 8, Act c 8.0101, Act c Chitinase, Act d 1, Act d 1.0101, Act d 10, Act d 10.0101, Act d 10.0201, Act d 11, Act d 11.0101, Act d 2, Act d 2.0101, Act d 3, Act d 3.0101, Act d 3.02, Act d 4, Act d 4.0101, Act d 5, Act d 5.0101, Act d 6, Act d 6.0101, Act d 7, Act d 7.0101, Act d 8, Act d 8.0101, Act d 9, Act d 9.0101, Act d 키티나제, Act e 1, Act e 5), 아크리토시폰(Acyrthosiphon) 종(Acy pi 7, Acy pi 7.0101, Acy pi 7.0102), 아데니아(Adenia) 종(Ade v RIP), 아에데스(Aedes) 종(Aed a 1, Aed a 1.0101, Aed a 2, Aed a 2.0101, Aed a 3, Aed a 3.0101, Aed a 4, Aed a 7, Aed a 7.0101, Aed a 7.0102, Aed a 7.0103, Aed a 7.0104, Aed a 7.0105, Aed a 7.0106, Aed a 7.0107, Aed a 7.0108, Aed a 7.0109, Aed a 7.0110, Aed a 7.0111, Aed al 1, Aed al 3, Aed al 37kD, Aed v 37kD, Aed v 63kD), 아에길롭스(Aegilops) 종(Aeg ta 28, Aeg ta 알파 글리아딘(alpha_Gliadin), Aeg um 28, Aeg un 28), 아에탈로페르카(Aethaloperca) 종(Aet ro 1), 아그로피론(Agropyron) 종(Agr c 7), 아그로스티스(Agrostis) 종(Agr ca 1, Agr ca 5, Agr g 1, Agr g 4, Agr s 5), 아그로박테리움(Agrobacterium) 종(Agr sp CP4 EPSPS), 아일루로포다(Ailuropoda) 종(Ail me 포스비틴(Phosvitin), Ail me TCTP), 아익스(Aix) 종(Aix ga 1, Aix sp 1), 알레우로글리퍼스(Aleuroglyphus) 종(Ale o 1, Ale o 10, Ale o 10.0101, Ale o 10.0102, Ale o 13, Ale o 14, Ale o 2, Ale o 20, Ale o 3, Ale o 5, Ale o 7, Ale o 8, Ale o 9), 알리움(Allium) 종(All a 3, All a 알리인 리아제(Alliin lyase), All c 3, All c 30kD, All c 4, All c 알리인 리아제, All p 알리인 리아제, All s 알리인 리아제), 알너스(Alnus) 종(Aln g 1, Aln g 1.0101, Aln g 1/Bet v 1/Cor a 1 TPC7, Aln g 1/Bet v 1/Cor a 1 TPC9, Aln g 2, Aln g 4, Aln g 4.0101), 알로포첸(Alopochen) 종(Alo ae 1), 알로페쿠러스(Alopecurus) 종(Alo p 1, Alo p 5), 알테나리아(Alternaria) 종(Alt a 1, Alt a 1.0101, Alt a 1.0102, Alt a 10, Alt a 10.0101, Alt a 12, Alt a 12.0101, Alt a 13, Alt a 13.0101, Alt a 2, Alt a 3, Alt a 3.0101, Alt a 4, Alt a 4.0101, Alt a 5, Alt a 5.0101, Alt a 6, Alt a 6.0101, Alt a 7, Alt a 7.0101, Alt a 70kD, Alt a 8, Alt a 8.0101, Alt a 9, Alt a MnSOD, Alt a NTF2, Alt a TCTP, Alt ar 1, Alt arg 1, Alt b 1, Alt bl 1, Alt br 1, Alt c 1, Alt ca 1, Alt ce 1, Alt ch 1, Alt ci 1, Alt co 1, Alt cr 1, Alt ct 1, Alt cu 1, Alt cy 1, Alt d 1, Alt du 1, Alt e 1, Alt et 1, Alt eu 1, Alt ga 1, Alt gr 1, Alt j 1, Alt l 1, Alt lo 1, Alt m 1, Alt me 1, Alt mi 1, Alt mo 1, Alt o 1, Alt p 1, Alt ph 1, Alt po 1, Alt ps 1, Alt r 1, Alt s 1, Alt se 1, Alt sm 1, Alt so 1, Alt su 1, Alt t 1, Alt te 1, Alt to 1), 아마란투스(Amaranthus) 종(Ama r 2, Ama r 2.0101, Ama v 2, Ama v 2.0101, Ama v 2.0201), 암브로시아(Ambrosia) 종(Amb a 1, Amb a 1.0101, Amb a 1.0201, Amb a 1.0202, Amb a 1.0301, Amb a 1.0302, Amb a 1.0303, Amb a 1.0304, Amb a 1.0305, Amb a 1.0401, Amb a 1.0402, Amb a 1.0501, Amb a 1.0502, Amb a 10, Amb a 10.0101, Amb a 3, Amb a 3.0101, Amb a 4, Amb a 4.0101, Amb a 5, Amb a 5.0101, Amb a 6, Amb a 6.0101, Amb a 7, Amb a 7.0101, Amb a 8, Amb a 8.0101, Amb a 8.0102, Amb a 9, Amb a 9.0101, Amb a 9.0102, Amb a CPI, Amb p 1, Amb p 5, Amb p 5.0101, Amb p 5.0201, Amb t 5, Amb t 5.0101, Amb t 8), 암모데아(Ammothea) 종(Amm h 7, Amm h 7.0101), 아나다라(Anadara) 종(Ana br 1), 아나나스(Ananas) 종(Ana c 1, Ana c 1.0101, Ana c 2, Ana c 2.0101, Ana c 2.0101 (MUXF3)), 아나스(Anas) 종(Ana ca 1), 아나리카스(Anarhichas) 종(Ana l 1), 아나카디움(Anacardium) 종(Ana o 1, Ana o 1.0101, Ana o 1.0102, Ana o 2, Ana o 2.0101, Ana o 3, Ana o 3.0101), 아나스(Anas) 종(Ana p 1, Ana p 2, Ana p 3), 안겔라(Anguilla) 종(Ang a 1, Ang j 1), 아니사키스(Anisakis) 종(Ani s 1, Ani s 1.0101, Ani s 10, Ani s 10.0101, Ani s 11, Ani s 11.0101, Ani s 12, Ani s 12.0101, Ani s 2, Ani s 2.0101, Ani s 24kD, Ani s 3, Ani s 3.0101, Ani s 4, Ani s 4.0101, Ani s 5, Ani s 5.0101, Ani s 6, Ani s 6.0101, Ani s 7, Ani s 7.0101, Ani s 8, Ani s 8.0101, Ani s 9, Ani s 9.0101, Ani s CCOS3, Ani s 시토크롬 B, Ani s FBPP, Ani s NADHDS4L, Ani s NARaS, Ani s PEPB, Ani s 트로포닌), 안노아(Annona) 종(Ann c 키티나제), 아노펠레스(Anopheles) 종(Ano da 17, Ano da 17.0101, Ano da 27, Ano da 27.0101, Ano da 7, Ano da 7.0101, Ano g 7, Ano g 7.0101), 안셀(Anser) 종(Ans a 1, Ans a 2, Ans a 3, Ans in 1), 안톡산툼(Anthoxanthum) 종(Ant o 1, Ant o 1.0101, Ant o 12, Ant o 13, Ant o 2, Ant o 4, Ant o 5, Ant o 6, Ant o 7), 아피스(Apis) 종(Api c 1, Api c 1.0101, Api c 10, Api c 2, Api c 4, Api d 1, Api d 1.0101, Api d 4, Api fl 4), 아피움(Apium) 종(Api g 1, Api g 1.0101, Api g 1.0201, Api g 2, Api g 2.0101, Api g 3, Api g 3.0101, Api g 4, Api g 4.0101, Api g 5, Api g 5.0101, Api g 6, Api g 6.0101), 아피스(Apis) 종(Api m 1, Api m 1.0101, Api m 10, Api m 10.0101, Api m 11, Api m 11.0101, Api m 11.0201, Api m 13kD, Api m 2, Api m 2.0101, Api m 3, Api m 3.0101, Api m 4, Api m 4.0101, Api m 5, Api m 5.0101, Api m 6, Api m 6.0101, Api m 7, Api m 7.0101, Api m 8, Api m 8.0101, Api m 9, Api m 9.0101, Api m A1-A2, Api m A1-A2-A3, Api m 아팔부민(Apalbumin) 1, Api m 아팔부민 2, Api me 1, Api me 4), 아라키스(Arachis) 종(Ara d 2, Ara d 6, Ara f 3, Ara f 4, Ara h 1, Ara h 1.0101, Ara h 10, Ara h 10.0101, Ara h 10.0102, Ara h 11, Ara h 11.0101, Ara h 2, Ara h 2.0101, Ara h 2.0102, Ara h 2.0201, Ara h 2.0202, Ara h 3, Ara h 3.0101, Ara h 4, Ara h 4.0101, Ara h 5, Ara h 5.0101, Ara h 6, Ara h 6.0101, Ara h 7, Ara h 7.0101, Ara h 7.0201, Ara h 7.0202, Ara h 8, Ara h 8.0101, Ara h 8.0201, Ara h 9, Ara h 9.0101, Ara h 9.0201, Ara h 아글루티닌(Agglutinin), Ara h 올레오신(Oleosin) 18kD, Ara i 2, Ara i 6), 아라비답시스(Arabidopsis) 종(Ara t 3, Ara t 8, Ara t GLP), 아코살거스(Archosargus) 종(Arc pr 1), 아케오포타모비우스(Archaeopotamobius) 종(Arc s 8, Arc s 8.0101), 아에퀴펙텐(Aequipecten) 종(Arg i 1), 알가스(Argas) 종(Arg r 1, Arg r 1.0101), 아리옵시스(Ariopsis) 종(Ari fe 1), 알모라시아(Armoracia) 종(Arm r HRP), 알헤나데룸(Arrhenatherum) 종(Arr e 1, Arr e 5), 알테미시아(Artemisia) 종(Art a 1, Art ap 1), 알테미아(Artemia) 종(Art fr 1, Art fr 1.0101, Art fr 5, Art fr 5.0101), 알트로박터(Arthrobacter) 종(Art gl CO), 아코리온(Achorion) 종(Art gy 7), 아토카푸스(Artocarpus) 종(Art h 17kD, Art h 4), 아트로스피라(Arthrospira) 종(Art pl 베타_피코시아닌(beta_Phycocyanin)), 알테미시아(Artemisia) 종(Art v 1, Art v 1.0101, Art v 1.0102, Art v 1.0103, Art v 1.0104, Art v 1.0105, Art v 1.0106, Art v 1.0107, Art v 2, Art v 2.0101, Art v 3, Art v 3.0101, Art v 3.0201, Art v 3.0202, Art v 3.0301, Art v 4, Art v 4.0101, Art v 4.0201, Art v 47kD, Art v 5, Art v 5.0101, Art v 6, Art v 6.0101, Art v 60kD), 알트로데마(Arthroderma) 종(Art va 4), 아스카리스(Ascaris) 종(Asc l 3, Asc l 3.0101, Asc l 3.0102, Asc l 34kD, Asc s 1, Asc s 1.0101, Asc s 3, Asc s 3.0101, Asc s GST), 아스페길루스(Aspergillus) 종(Asp aw 글루코아밀라제, Asp c 22, Asp f 1, Asp f 1.0101, Asp f 10, Asp f 10.0101, Asp f 11, Asp f 11.0101, Asp f 12, Asp f 12.0101, Asp f 13, Asp f 13.0101, Asp f 15, Asp f 15.0101, Asp f 16, Asp f 16.0101, Asp f 17, Asp f 17.0101, Asp f 18, Asp f 18.0101, Asp f 2, Asp f 2.0101, Asp f 22, Asp f 22.0101, Asp f 23, Asp f 23.0101, Asp f 27, Asp f 27.0101, Asp f 28, Asp f 28.0101, Asp f 29, Asp f 29.0101, Asp f 3, Asp f 3.0101, Asp f 34, Asp f 34.0101, Asp f 4, Asp f 4.0101, Asp f 5, Asp f 5.0101, Asp f 56kD, Asp f 6, Asp f 6.0101, Asp f 7, Asp f 7.0101, Asp f 8, Asp f 8.0101, Asp f 9, Asp f 9.0101, Asp f AfCalAp, Asp f AT_V, Asp f 카탈라제, Asp f 키토사나제, Asp f CP, Asp f DPPV, Asp f FDH, Asp f 감마 액틴(gamma_Actin), Asp f 글루코시다제, Asp f GPI, Asp f GST, Asp f GT, Asp f IAO, Asp f IPMI, Asp f LPL1, Asp f LPL3, Asp f 만노시다제, Asp f MDH, Asp f PL, Asp f PUP, Asp f RPS3, Asp f SXR, Asp fl 13, Asp fl 13.0101, Asp fl 18, Asp fl 2, Asp fl 21, Asp fl 3, Asp fl 4, Asp fl 7, Asp fl 8, Asp fl 9, Asp me 시프로스(Seaprose), Asp n 14, Asp n 14.0101, Asp n 18, Asp n 18.0101, Asp n 25, Asp n 25.0101, Asp n 30, Asp n 글루코아밀라제, Asp n 헤미셀룰라제, Asp n 펙티나제, Asp o 13, Asp o 13.0101, Asp o 21, Asp o 21.0101, Asp o 3, Asp o 4, Asp o 7, Asp o 8, Asp o 락타제, Asp o 리파제, Asp oc 13, Asp r 1, Asp sa AP, Asp sp 글루코아밀라제, Asp sp 글루코세옥시다제, Asp sp PL, Asp sp PME, Asp sy 13, Asp v 13, Asp v 13.0101, Asp v 카탈라제 A, Asp v 에놀라제, Asp v GAPDH, Asp v MDH, Asp v SXR), 아스파라거스(Asparagus) 종(Aspa o 1, Aspa o 1.01, Aspa o 1.02, Aspa o 17kD, Aspa o 4), 아스페길루스(Aspergillus) 종(Aspe ni 2, Aspe ni 3, Aspe ni 4, Aspe ni 7, Aspe ni 8, Aspe ni 9), 아베나(Avena) 종(Ave s 1, Ave s 12, Ave s 13, Ave s 2, Ave s 4, Ave s 5, Ave s 7), 바빌로니아(Babylonia) 종(Bab ja 1), 바실러스(Bacillus) 종(Bac al 서브틸리신(Subtilisin), Bac cl 서브틸리신, Bac l 서브틸리신, Bac li aA, Bac li 서브틸리신), 박트로세라(Bactrocera) 종(Bac ol 27, Bac ol 27.0101), 바실러스(Bacillus) 종(Bac sp aA1, Bac sp aA3, Bac sp 디카르복실라제, Bac st amyM, Bac su 서브틸리신, Bac t Cry1Ab, Bac t Cry1Fa, Bac t Cry3Bb1, Bac t Cry9c), 바그레(Bagre) 종(Bag ma 1), 발리스테스(Balistes) 종(Bal ca 1), 발라너스(Balanus) 종(Bal r 1, Bal r 1.0101), 비우베리아(Beauveria) 종(Bea b Ald, Bea b Enol, Bea b f2, Bea b Hex), 버토렐레티아(Bertholletia) 종(Ber e 1, Ber e 1.0101, Ber e 2, Ber e 2.0101), 버릭스(Beryx) 종(Ber sp 1), 베툴라(Betula) 종(Bet ab 1, Bet al 1, Bet ch 1, Bet co 1, Bet da 1, Bet gr 1, Bet hu 1, Bet le 1, Bet me 1, Bet n 1, Bet p 1, Bet pa 1, Bet po 1, Bet pu 1, Bet pu 2, Bet pu 4, Bet pu 6, Bet pu 7, Bet sc 1, Bet ut 1, Bet v 1, Bet v 1 B1-B1-B1, Bet v 1 fv Mal 4x, Bet v 1.0101, Bet v 1.0102, Bet v 1.0103, Bet v 1.0201, Bet v 1.0301, Bet v 1.0401, Bet v 1.0402, Bet v 1.0501, Bet v 1.0601, Bet v 1.0602, Bet v 1.0701, Bet v 1.0801, Bet v 1.0901, Bet v 1.1001, Bet v 1.1101, Bet v 1.1201, Bet v 1.1301, Bet v 1.1401, Bet v 1.1402, Bet v 1.1501, Bet v 1.1502, Bet v 1.1601, Bet v 1.1701, Bet v 1.1801, Bet v 1.1901, Bet v 1.2001, Bet v 1.2101, Bet v 1.2201, Bet v 1.2301, Bet v 1.2401, Bet v 1.2501, Bet v 1.2601, Bet v 1.2701, Bet v 1.2801, Bet v 1.2901, Bet v 1.3001, Bet v 1.3101, Bet v 2, Bet v 2.0101, Bet v 3, Bet v 3.0101, Bet v 4, Bet v 4.0101, Bet v 6, Bet v 6.0101, Bet v 6.0102, Bet v 7, Bet v 7.0101, Bet v 8, Bet v 글루카나제), 베타(Beta) 종(Beta v 1, Beta v 1.0101, Beta v 2, Beta v 2.0101), 블라텔라(Blattella) 종(Bla g 1, Bla g 1.0101, Bla g 1.0102, Bla g 1.0103, Bla g 1.0201, Bla g 1.0202, Bla g 2, Bla g 2.0101, Bla g 2.0201, Bla g 36kD, Bla g 4, Bla g 4.0101, Bla g 4.0201, Bla g 5, Bla g 5.0101, Bla g 5.0201, Bla g 6, Bla g 6.0101, Bla g 6.0201, Bla g 6.0301, Bla g 7, Bla g 7.0101, Bla g 8, Bla g 8.0101, Bla g 9, Bla g 에놀라제, Bla g GSTD1, Bla g RACK1, Bla g TPI, Bla g 트립신, Bla g 비텔로게닌(Vitellogenin), 블라타(Blatta) 종(Bla o 1, Bla o 7), 블로미아(Blomia) 종(Blo t 1, Blo t 1.0101, Blo t 1.0201, Blo t 10, Blo t 10.0101, Blo t 10.0102, Blo t 11, Blo t 11.0101, Blo t 12, Blo t 12.0101, Blo t 12.0102, Blo t 13, Blo t 13.0101, Blo t 14, Blo t 15, Blo t 18, Blo t 19, Blo t 19.0101, Blo t 2, Blo t 2.0101, Blo t 2.0102, Blo t 2.0103, Blo t 20, Blo t 21, Blo t 21.0101, Blo t 3, Blo t 3.0101, Blo t 4, Blo t 4.0101, Blo t 5, Blo t 5.0101, Blo t 6, Blo t 6.0101, Blo t 7, Blo t 8, Blo t 9, Blo t HSP70), 봄버스(Bombus) 종(Bom ar 4, Bom hy 4, Bom p 1, Bom p 1.0101, Bom p 2, Bom p 3, Bom p 4, Bom p 4.0101, Bom t 1, Bom t 1.0101, Bom t 4, Bom t 4.0101), 봄빅스(Bombyx) 종(Bomb m 1, Bomb m 1.0101, Bomb m 7, Bomb m 7.0101, Bomb m 7.0102, Bomb m 7.0103, Bomb m 7.0104, Bomb m 7.0105, Bomb m 7.0106), 부필러스(Boophilus) 종(Boo m 1, Boo m 7, Boo m 7.0101), 보스(Bos) 종(Bos d 2, Bos d 2.0101, Bos d 2.0102, Bos d 2.0103, Bos d 3, Bos d 3.0101, Bos d 4, Bos d 4.0101, Bos d 5, Bos d 5.0101, Bos d 5.0102, Bos d 6, Bos d 6 (MDA), Bos d 6.0101, Bos d 7, Bos d 7.0101, Bos d 8, Bos d 8 alphaS1, Bos d 8 alphaS2, Bos d 8 beta, Bos d 8 kappa, Bos d alpha2I, Bos d alpha2I.0101, Bos d Chymosin, Bos d Fibrin, Bos d Gelatin, Bos d HG, Bos d Insulin, Bos d Lactoferrin, Bos d Lactoperoxidase, Bos d Myoglobin, Bos d OBP, Bos d OSCP, Bos d Phosvitin, Bos d PLA2, Bos d PRVB, Bos d Thrombin, Bos d TI, Bos gr ALA, Bos gr 미오글로빈), 보스롭스(Bothrops) 종(Bot as 1, Bot at 1), 보우테로아(Bouteloua) 종(Bou g 1), 비팅(Biting) 종(Bov ov 1), 브라마(Brama) 종(Bra du 1), 브라시카(Brassica) 종(Bra j 1, Bra j 1.0101, Bra n 1, Bra n 1.0101, Bra n 4, Bra n 7, Bra n 8, Bra n PG, Bra ni 8, Bra o 3, Bra o 3.0101, Bra r 1, Bra r 1.0101, Bra r 2, Bra r 2.0101, Bra r 3, Bra r 4, Bra r 7), 브로머스(Bromus) 종(Bro a 1, Bro a 4), 브로스메(Brosme) 종(Bro br 1), 브로머스(Bromus) 종(Bro i 1, Bro i 5, Bro i 7), 브루기아(Brugia) 종(Bru m 3, Bru m 3.0101, Bru m Bm33), 부발러스(Bubalus) 종(Bub b ALA, Bub b BLG, Bub b 카제인, Bub b 카제인 알파S1, Bub b 카제인 알파S2, Bub b 카제인 베타, Bub b 카제인 카파), 캐노하디티스(Caenorhabditis) 종(Cae b 3, Cae b 3.0101, Cae br 3, Cae br 3.0101, Cae e 3, Cae e 3.0101, Cae e 3.0102, Cae re 13, Cae re 13.0101), 카자누스(Cajanus) 종(Caj c 1), 칼리구스(Caligus) 종(Cal cl 1, Cal cl 1.0101, Cal cl 1.0102), 칼라무스(Calamus) 종(Cal le 1), 칼리넥테스(Callinectes) 종(Cal s 2), 카멜루스(Camelus) 종(Cam d ALA, Cam d 카제인, Cam d 카제인 알파S1, Cam d 카제인 알파S2, Cam d 카제인 베타, Cam d 카제인 카파), 캄포노투스(Camponotus) 종(Cam fl 7, Cam fl 7.0101), 카니스(Canis) 종(Can f 1, Can f 1.0101, Can f 2, Can f 2.0101, Can f 3, Can f 3.0101, Can f 4, Can f 4.0101, Can f 5, Can f 5.0101, Can f 6, Can f 6.0101, Can f Feld1-like, Can f Homs2-유사, Can f 포스비틴, Can f TCTP), 칸티더미스(Canthidermis) 종(Can ma 1), 캔서(Cancer) 종(Can mg 2, Can p 1), 카나비스(Cannabis) 종(Can s 3), 칸디다(Candida) 종(Cand a 1, Cand a 1.0101, Cand a 3, Cand a 3.0101, Cand a CAAP, Cand a CyP, Cand a 에놀라제, Cand a FPA, Cand a MnSOD, Cand a PGK, Cand b 2, Cand b 2.0101, Cand b FDH, Cand r 리파제), 캅시쿰(Capsicum) 종(Cap a 1, Cap a 1.0101, Cap a 17kD, Cap a 2, Cap a 2.0101, Cap a 30kD, Cap a 글루카나제, Cap ch 17kD), 카프렐라(Caprella) 종(Cap e 1), 카프라(Capra) 종(Cap h ALA, Cap h BLG, Cap h Casein, Cap h 카제인 알파S1, Cap h 카제인 알파S2, Cap h 카제인 베타, Cap h 카제인 카파, Cap h GSA), 카피툴럼(Capitulum) 종(Cap m 1), 카라시우스(Carassius) 종(Car au 1), 카피너스(Carpinus) 종(Car b 1, Car b 1.0101, Car b 1.0102, Car b 1.0103, Car b 1.0104, Car b 1.0105, Car b 1.0106, Car b 1.0107, Car b 1.0108, Car b 1.0109, Car b 1.0110, Car b 1.0111, Car b 1.0112, Car b 1.0113, Car b 1.0201, Car b 1.0301, Car b 1.0302, Car b 2, Car b 4), 카란스(Caranx) 종(Car cr 1), 카리아(Carya) 종(Car i 1, Car i 1.0101, Car i 2, Car i 4, Car i 4.0101), 카시너스(Carcinus) 종(Car ma 2), 카리오타(Caryota) 종(Car mi 2), 카리카(Carica) 종(Car p 1, Car p 키티나제, Car p 키모파파인, Car p 엔도프로티나제), 카스타네아(Castanea) 종(Cas c 24kD, Cas s 1, Cas s 1.0101, Cas s 1.0102, Cas s 1.0103, Cas s 2, Cas s 5, Cas s 5.0101, Cas s 8, Cas s 8.0101, Cas s 9, Cas s 9.0101), 카타란투스(Catharanthus) 종(Cat r 1, Cat r 1.0101, Cat r 17kD, Cat r 2), 카울로락틸러스(Caulolatilus) 종(Cau ch 1), 카비아(Cavia) 종(Cav p 1, Cav p 1.0101, Cav p 2, Cav p 2.0101, Cav p 3, Cav p 3.0101, Cav p 겔라틴, Cav p GSA), 센트로프리스티스(Centropristis) 종(Cen s 1), 세팔로폴리스(Cephalopholis) 종(Cep so 1), 카립디스(Charybdis) 종(Cha f 1, Cha f 1.0101), 세토딥페루스(Chaetodipterus) 종(Cha fa 1), 차미시파리스(Chamaecyparis) 종(Cha o 1, Cha o 1.0101, Cha o 2, Cha o 2.0101), 케노포디움(Chenopodium) 종(Che a 1, Che a 1.0101, Che a 2, Che a 2.0101, Che a 3, Che a 3.0101), 키로노머스(Chironomus) 종(Chi k 1, Chi k 10, Chi k 10.0101), 친칠라(Chinchilla) 종(Chi l 21kD_a, Chi l 21kD_b), 키오노에세테스(Chionoecetes) 종(Chi o 1, Chi o 1.0101, Chi o 2, Chi o 4, Chi o 6, Chi o 알파_액틴, Chi o SERCA), 키로노무스(Chironomus) 종(Chi t 1, Chi t 1.0101, Chi t 1.0201, Chi t 2, Chi t 2.0101, Chi t 2.0102, Chi t 3, Chi t 3.0101, Chi t 4, Chi t 4.0101, Chi t 5, Chi t 5.0101, Chi t 6, Chi t 6.0101, Chi t 6.0201, Chi t 7, Chi t 7.0101, Chi t 8, Chi t 8.0101, Chi t 9, Chi t 9.0101), 클라미스(Chlamys) 종(Chl n 1), 클로에파가(Chloephaga) 종(Chl pi 1), 콜토글리퍼스(Chortoglyphus) 종(Cho a 10), 크리소멜라(Chrysomela) 종(Chr tr 7, Chr tr 7.0101), 사이서(Cicer) 종(Cic a 2S 알부민, Cic a 알부민), 시코리움(Cichorium) 종(Cic i 1), 시멕스(Cimex) 종(Cim l 니트로포린), 시트러스(Citrus) 종(Cit l 1, Cit l 3, Cit l 3.0101), 시트룰러스(Citrullus) 종(Cit la 2, Cit la MDH, Cit la TPI), 시트러스(Citrus) 종(Cit r 3, Cit r 3.0101, Cit s 1, Cit s 1.0101, Cit s 2, Cit s 2.0101, Cit s 3, Cit s 3.0101, Cit s 3.0102, Cit s IFR), 클라도스포리움(Cladosporium) 종(Cla c 14, Cla c 14.0101, Cla c 9, Cla c 9.0101, Cla h 1, Cla h 10, Cla h 10.0101, Cla h 12, Cla h 12.0101, Cla h 2, Cla h 2.0101, Cla h 42kD, Cla h 5, Cla h 5.0101, Cla h 6, Cla h 6.0101, Cla h 7, Cla h 7.0101, Cla h 8, Cla h 8 CSP, Cla h 8.0101, Cla h 9, Cla h 9.0101, Cla h abH, Cla h GST, Cla h HCh1, Cla h HSP70, Cla h NTF2, Cla h TCTP), 클로스트리디움(Clostridium) 종(Clo hi 콜라겐분해효소, Clo t 톡소이드), 쿨루페(Clupea) 종(Clu h 1, Clu h 1.0101, Clu h 1.0201, Clu h 1.0301), 코코스(Cocos) 종(Coc n 2, Coc n 4, Coc n 5), 콕시디오이데스(Coccidioides) 종(Coc po 8), 코페아(Coffea) 종(Cof a 1, Cof a 1.0101), 콜롬바(Columba) 종(Col l PSA), 코프리너스(Coprinus) 종(Cop c 1, Cop c 1.0101, Cop c 2, Cop c 2.0101, Cop c 3, Cop c 3.0101, Cop c 4, Cop c 5, Cop c 5.0101, Cop c 6, Cop c 7, Cop c 7.0101), 코릴러스(Corylus) 종(Cor a 1, Cor a 1.0101, Cor a 1.0102, Cor a 1.0103, Cor a 1.0104, Cor a 1.0201, Cor a 1.0301, Cor a 1.0401, Cor a 1.0402, Cor a 1.0403, Cor a 1.0404, Cor a 10, Cor a 10.0101, Cor a 11, Cor a 11.0101, Cor a 12, Cor a 12.0101, Cor a 13, Cor a 13.0101, Cor a 14, Cor a 14.0101, Cor a 2, Cor a 2.0101, Cor a 2.0102, Cor a 8, Cor a 8.0101, Cor a 9, Cor a 9.0101), 코리네박테리움(Corynebacterium) 종(Cor d 톡소이드), 코릴러스(Corylus) 종(Cor he 1), 코리페나(Coryphaena) 종(Cor hi 1), 코리안드룸(Coriandrum) 종(Cor s 1, Cor s 11kD, Cor s 2), 코토네아스터(Cotoneaster) 종(Cot l 3), 크란곤(Crangon) 종(Cra c 1, Cra c 1.0101, Cra c 2, Cra c 2.0101, Cra c 4, Cra c 4.0101, Cra c 5, Cra c 5.0101, Cra c 6, Cra c 6.0101, Cra c 8, Cra c 8.0101), 크라소스트레아(Crassostrea) 종(Cra g 1), 크리세투스(Cricetus) 종(Cri c HSA), 크리벨리아(Crivellia) 종(Cri pa 1), 크로커스(Crocus) 종(Cro s 1, Cro s 1.0101, Cro s 2, Cro s 2.0101, Cro s 3, Cro s 3.01, Cro s 3.02), 크립토메리아(Cryptomeria) 종(Cry j 1, Cry j 1.0101, Cry j 1.0102, Cry j 1.0103, Cry j 2, Cry j 2.0101, Cry j 2.0102, Cry j 3, Cry j 3.1, Cry j 3.2, Cry j 3.3, Cry j 3.4, Cry j 3.5, Cry j 3.6, Cry j 3.7, Cry j 3.8, Cry j 4, Cry j AP, Cry j 키티나제, Cry j CPA9, Cry j IFR, Cry j LTP, Cry j P1-P2), 크립포넥트리아(Cryphonectria) 종(Cry p AP), 크테노세팔리데스(Ctenocephalides) 종(Cte f 1, Cte f 1.0101, Cte f 2, Cte f 2.0101, Cte f 3, Cte f 3.0101), 크테노파린고돈(Ctenopharyngodon) 종(Cte id 1), 쿠쿠미스(Cucumis) 종(Cuc m 1, Cuc m 1.0101, Cuc m 2, Cuc m 2.0101, Cuc m 3, Cuc m 3.0101, Cuc m Lec17, Cuc m MDH), 쿠커비타(Cucurbita) 종(Cuc ma 18kD, Cuc ma 2, Cuc p 2, Cuc p AscO), 쿠쿠미스(Cucumis) 종(Cuc s 2), 쿨리코이데스(Culicoides) 종(Cul n 1, Cul n 10, Cul n 11, Cul n 2, Cul n 3, Cul n 4, Cul n 5, Cul n 6, Cul n 7, Cul n 8, Cul n 9, Cul n HSP70), 쿨렉스(Culex) 종(Cul q 28kD, Cul q 35kD, Cul q 7, Cul q 7.0101, Cul q 7.0102), 쿨리코이데스(Culicoides) 종(Cul so 1), 쿠미눔(Cuminum) 종(Cum c 1, Cum c 2), 쿠프레서스(Cupressus) 종(Cup a 1, Cup a 1.0101, Cup a 1.02, Cup a 2, Cup a 3, Cup a 4, Cup a 4.0101, Cup s 1, Cup s 1.0101, Cup s 1.0102, Cup s 1.0103, Cup s 1.0104, Cup s 1.0105, Cup s 3, Cup s 3.0101, Cup s 3.0102, Cup s 3.0103, Cup s 8), 코클리오보러스(Cochliobolus) 종(Cur l 1, Cur l 1.0101, Cur l 2, Cur l 2.0101, Cur l 3, Cur l 3.0101, Cur l 4, Cur l 4.0101, Cur l ADH, Cur l GST, Cur l MnSOD, Cur l 오리진, Cur l Trx, Cur l ZPS1), 시아노첸(Cyanochen) 종(Cya cy 1), 시노스시온(Cynoscion) 종(Cyn ar 1), 시노서루스(Cynosurus) 종(Cyn cr 1, Cyn cr 5), 시노돈(Cynodon) 종(Cyn d 1, Cyn d 1.0101, Cyn d 1.0102, Cyn d 1.0103, Cyn d 1.0104, Cyn d 1.0105, Cyn d 1.0106, Cyn d 1.0107, Cyn d 1.0201, Cyn d 1.0202, Cyn d 1.0203, Cyn d 1.0204, Cyn d 10, Cyn d 11, Cyn d 12, Cyn d 12.0101, Cyn d 13, Cyn d 15, Cyn d 15.0101, Cyn d 2, Cyn d 22, Cyn d 22.0101, Cyn d 23, Cyn d 23.0101, Cyn d 24, Cyn d 24.0101, Cyn d 4, Cyn d 5, Cyn d 6, Cyn d 7, Cyn d 7.0101), 시노스시온(Cynoscion) 종(Cyn ne 1), 시노미스(Cynomys) 종(Cyn sp 리포칼린), 시프리누스(Cyprinus) 종(Cyp c 1, Cyp c 1.01, Cyp c 1.02), 다보이아(Daboia) 종(Dab ru 1), 닥틸리스(Dactylis) 종(Dac g 1, Dac g 1.01, Dac g 1.0101, Dac g 1.02, Dac g 12, Dac g 13, Dac g 2, Dac g 2.0101, Dac g 3, Dac g 3.0101, Dac g 4, Dac g 4.0101, Dac g 5, Dac g 5.0101, Dac g 7), 다마(Dama) 종(Dam d CSA), 다니오(Danio) 종(Dan re 1, Dan re 2, Dan re 알파2I, Dan re CK), 다시아티스(Dasyatis) 종(Das ak 1, Das am 1, Das sa 1), 다우커스(Daucus) 종(Dau c 1, Dau c 1.0101, Dau c 1.0102, Dau c 1.0103, Dau c 1.0104, Dau c 1.0105, Dau c 1.0201, Dau c 1.0301, Dau c 3, Dau c 4, Dau c 4.0101, Dau c CyP), 데카프테루스(Decapterus) 종(Dec ru 1), 덴드로네프티아(Dendronephthya) 종 (Den n 1, Den n 1.0101), 데마토파고이데스(Dermatophagoides) 종(Der f 1, Der f 1.0101, Der f 1.0102, Der f 1.0103, Der f 1.0104, Der f 1.0105, Der f 1.0106, Der f 1.0107, Der f 1.0108, Der f 1.0109, Der f 1.0110, Der f 10, Der f 10.0101, Der f 10.0102, Der f 11, Der f 11.0101, Der f 13, Der f 13.0101, Der f 14, Der f 14.0101, Der f 15, Der f 15.0101, Der f 16, Der f 16.0101, Der f 17, Der f 17.0101, Der f 18, Der f 18.0101, Der f 2, Der f 2.0101, Der f 2.0102, Der f 2.0103, Der f 2.0104, Der f 2.0105, Der f 2.0106, Der f 2.0107, Der f 2.0108, Der f 2.0109, Der f 2.0110, Der f 2.0111, Der f 2.0112, Der f 2.0113, Der f 2.0114, Der f 2.0115, Der f 2.0116, Der f 2.0117, Der f 20, Der f 21, Der f 22, Der f 22.0101, Der f 3, Der f 3.0101, Der f 4, Der f 5, Der f 6, Der f 6.0101, Der f 7, Der f 7.0101, Der f 8, Der f 9, Der f HSP70), 데마니서스(Dermanyssus) 종(Der g 10, Der g 10.0101), 데마토파고이데스(Dermatophagoides) 종(Der m 1, Der m 1.0101, Der p 1, Der p 1.0101, Der p 1.0102, Der p 1.0103, Der p 1.0104, Der p 1.0105, Der p 1.0106, Der p 1.0107, Der p 1.0108, Der p 1.0109, Der p 1.0110, Der p 1.0111, Der p 1.0112, Der p 1.0113, Der p 1.0114, Der p 1.0115, Der p 1.0116, Der p 1.0117, Der p 1.0118, Der p 1.0119, Der p 1.0120, Der p 1.0121, Der p 1.0122, Der p 1.0123, Der p 1.0124, Der p 10, Der p 10.0101, Der p 10.0102, Der p 10.0103, Der p 11, Der p 11.0101, Der p 13, Der p 14, Der p 14.0101, Der p 15, Der p 18, Der p 2, Der p 2.0101, Der p 2.0102, Der p 2.0103, Der p 2.0104, Der p 2.0105, Der p 2.0106, Der p 2.0107, Der p 2.0108, Der p 2.0109, Der p 2.0110, Der p 2.0111, Der p 2.0112, Der p 2.0113, Der p 2.0114, Der p 2.0115, Der p 20, Der p 20.0101, Der p 21, Der p 21.0101, Der p 23, Der p 23.0101, Der p 3, Der p 3.0101, Der p 4, Der p 4.0101, Der p 5, Der p 5.0101, Der p 5.0102, Der p 6, Der p 6.0101, Der p 7, Der p 7.0101, Der p 8, Der p 8.0101, Der p 9, Der p 9.0101, Der p 9.0102, Der p P1-P2, Der p P2-P1, Der s 1, Der s 2, Der s 3), 디안투스(Dianthus) 종(Dia c RIP), 디크라놉테리스(Dicranopteris) 종(Dic l 2S 알부민), 디오스피로스(Diospyros) 종(Dio k 17kD, Dio k 4, Dio k IFR), 디오스코레아(Dioscorea) 종(Dio p TSP), 디플로더스(Diplodus) 종(Dip ho 1), 디스티클리스(Distichlis) 종(Dis s 1, Dis s 7), 디트리마(Ditrema) 종(Dit te 1), 돌리코베스풀라(Dolichovespula) 종(Dol a 1, Dol a 2, Dol a 5, Dol a 5.0101), 돌리코스(Dolichos) 종(Dol b 아글루티닌(Agglutinin)), 돌리코베스풀라(Dolichovespula) 종(Dol m 1, Dol m 1.0101, Dol m 1.02, Dol m 2, Dol m 2.0101, Dol m 5, Dol m 5.0101, Dol m 5.02), 드로소필라(Drosophila) 종(Dro an 7, Dro an 7.0101, Dro er 7, Dro er 7.0101, Dro er 7.0102, Dro gr 7, Dro gr 7.0101, Dro gr 7.0102, Dro m 7, Dro m 7.0101, Dro m 7.0102, Dro m 7.0103, Dro m 7.0104, Dro m 7.0105, Dro m 7.0106, Dro m 7.0107, Dro m 7.0108, Dro m 7.0109, Dro m 7.0110, Dro m 7.0111, Dro m 7.0112, Dro m 7.0113, Dro m 9, Dro m MnSOD, Dro mo 7, Dro mo 7.0101, Dro pp 7, Dro pp 7.0101, Dro se 7, Dro se 7.0101, Dro si 7, Dro si 7.0101, Dro si 7.0102, Dro vi 7, Dro vi 7.0101, Dro wi 7, Dro wi 7.0101, Dro y 7, Dro y 7.0101, Dro y 7.0102, Dro y 7.0103), 에키움(Echium) 종(Ech p 시토크롬 C), 엘라이스(Elaeis) 종(Ela g 2, Ela g Bd31kD), 엘롭스(Elops) 종(Elo sa 1), 엠브렐리시아(Embellisia) 종(Emb a 1, Emb i 1, Emb nz 1, Emb t 1), 엔글라우리스(Engraulis) 종(Eng e 1), 엔테록토푸스(Enteroctopus) 종(Ent d 1), 에피네펠루스(Epinephelus) 종(Epi bl 1, Epi co 1, Epi fl 1, Epi mc 1, Epi mo 1), 에피코쿰(Epicoccum) 종(Epi p 1, Epi p 1.0101, Epi p 12kD, Epi p GST), 에피네펠루스(Epinephelus) 종(Epi po 1, Epi un 1), 에퀴세툼(Equisetum) 종(Equ a 17kD), 에쿠스(Equus) 종(Equ as 4, Equ as DSA, Equ bu 4, Equ c 1, Equ c 1.0101, Equ c 2, Equ c 2.0101, Equ c 2.0102, Equ c 3, Equ c 3.0101, Equ c 4, Equ c 4.0101, Equ c 5, Equ c 5.0101, Equ c ALA, Equ c BLG, Equ c 카제인, Equ c 카제인 베타, Equ c 카제인 카파, Equ c PRVB, Equ he 4, Equ z ZSA), 에리마크루스(Erimacrus) 종(Eri i 1, Eri i 1.0101, Eri i 1.0102), 에리오케일(Eriocheir) 종(Eri s 1, Eri s 1.0101, Eri s 2), 어위니아(Erwinia) 종(Erw ch 아스파라기나제(Asparaginase)), 에스체리키아(Escherichia) 종(Esc c 아스파라기나제(Asparaginase), Esc c 베타 GAL), 이삭스(Esox) 종(Eso l 1), 유파우시아(Euphausia) 종(Eup p 1, Eup p 1.0101), 유파시아(Euphasia) 종(Eup s 1, Eup s 1.0101), 유로글리퍼스(Euroglyphus) 종(Eur m 1, Eur m 1.0101, Eur m 1.0102, Eur m 1.0103, Eur m 10, Eur m 14, Eur m 14.0101, Eur m 2, Eur m 2.0101, Eur m 2.0102, Eur m 3, Eur m 3.0101, Eur m 4, Eur m 4.0101), 에빈니스(Evynnis) 종(Evy j 1), 파고피럼(Fagopyrum) 종(Fag e 1, Fag e 1.0101, Fag e 10kD, Fag e 19kD, Fag e 2, Fag e 2.0101, Fag e TI), 파거스(Fagus) 종(Fag s 1, Fag s 1.0101, Fag s 2, Fag s 4), 파고피럼(Fagopyrum) 종(Fag t 1, Fag t 10kD, Fag t 2, Fag t 2.0101), 펠리스(Felis) 종(Fel d 1, Fel d 1.0101, Fel d 2, Fel d 2.0101, Fel d 3, Fel d 3.0101, Fel d 4, Fel d 4.0101, Fel d 5, Fel d 5.0101, Fel d 6, Fel d 6.0101, Fel d 7, Fel d 7.0101, Fel d 8, Fel d 8.0101, Fel d IgG), 페네로페네우스(Fenneropenaeus) 종(Fen c 1, Fen c 2, Fen me 1, Fen me 1.0101), 페스투카(Festuca) 종(Fes e 1, Fes e 13, Fes e 4, Fes e 5, Fes e 7, Fes p 1, Fes p 13, Fes p 4, Fes p 4.0101, Fes p 5, Fes r 1, Fes r 5), 피커스(Ficus) 종(Fic c 17kD, Fic c 4, Fic c 피신), 포에니쿨럼(Foeniculum) 종(Foe v 1, Foe v 2), 폴시티아(Forsythia) 종(For s 1), 폴시포미아(Forcipomyia) 종(For t 1, For t 1.0101, For t 2, For t 2.0101, For t 7, For t FPA, For t 미오신, For t TPI), 프라가리아(Fragaria) 종(Fra a 1, Fra a 1.0101, Fra a 3, Fra a 3.0101, Fra a 3.0102, Fra a 3.0201, Fra a 3.0202, Fra a 3.0203, Fra a 3.0204, Fra a 3.0301, Fra a 4, Fra a 4.0101, Fra c 1), 프락시누스(Fraxinus) 종(Fra e 1, Fra e 1.0101, Fra e 1.0102, Fra e 1.0201, Fra e 12, Fra e 2, Fra e 3, Fra e 9), 프라가리아(Fragaria) 종(Fra v 1), 푸사리움(Fusarium) 종(Fus c 1, Fus c 1.0101, Fus c 2, Fus c 2.0101, Fus c 3, Fus s 1, Fus s 45kD, Fus sp 리파제), 가두스(Gadus) 종(Gad c 1, Gad c 1.0101, Gad c APDH, Gad m 1, Gad m 1.0101, Gad m 1.0102, Gad m 1.0201, Gad m 1.0202, Gad m 45kD, Gad m 겔라틴, Gad ma 1), 갈러스(Gallus) 종(Gal d 1, Gal d 1.0101, Gal d 2, Gal d 2.0101, Gal d 3, Gal d 3.0101, Gal d 4, Gal d 4.0101, Gal d 5, Gal d 5.0101, Gal d 6, Gal d 6.0101, Gal d Apo I, Gal d Apo VI, Gal d GPI, Gal d HG, Gal d IgY, Gal d L-PGDS, Gal d 오보뮤신(Ovomucin), Gal d 포스비틴(Phosvitin), Gal d PRVB, Gal la 4), 갈레리아(Galleria) 종(Gal m 18kD, Gal m 24kD), 갈러스(Gallus) 종(Gal so 4), 감마러스(Gammarus) 종(Gam s TM), 겔로니움(Gelonium) 종(Gel m RIP), 지오텔푸사(Geothelphusa) 종(Geo de 1), 글로시나(Glossina) 종(Glo m 5, Glo m 5.0101, Glo m 7, Glo m 7.0101, Glo m 7.0102, Glo m 7.0103), 글리신(Glycine) 종(Gly a Bd30K, Gly ar Bd30K, Gly ca Bd30K, Gly cl Bd30K, Gly cu Bd30K, Gly cy Bd30K), 글리시파거스(Glycyphagus) 종(Gly d 10, Gly d 10.0101, Gly d 13, Gly d 2, Gly d 2.0101, Gly d 2.0201, Gly d 2.03, Gly d 2/Lep d 2 L1, Gly d 2/Lep d 2 L2, Gly d 2/Lep d 2 L3, Gly d 2/Lep d 2 L4, Gly d 2/Lep d 2 R1, Gly d 2/Lep d 2 R2, Gly d 2/Lep d 2 R3, Gly d 2/Lep d 2 R4, Gly d 2/Lep d 2 R5, Gly d 20, Gly d 3, Gly d 5, Gly d 5.01, Gly d 5.02, Gly d 7, Gly d 8), 글리신(Glycine) 종(Gly f Bd30K, Gly l Bd30K, Gly m 1, Gly m 1.0101, Gly m 1.0102, Gly m 2, Gly m 2.0101, Gly m 2S 알부민, Gly m 3, Gly m 3.0101, Gly m 3.0102, Gly m 39kD, Gly m 4, Gly m 4.0101, Gly m 5, Gly m 5.0101, Gly m 5.0201, Gly m 5.0301, Gly m 5.0302, Gly m 50kD, Gly m 6, Gly m 6.0101, Gly m 6.0201, Gly m 6.0301, Gly m 6.0401, Gly m 6.0501, Gly m 68kD, Gly m 아글루티닌, Gly m Bd28K, Gly m Bd30K, Gly m Bd60K, Gly m CPI, Gly m EAP, Gly m TI, Gly mi Bd30K, Gly s Bd30K, Gly t Bd30K, Gly to Bd30K), 가시피움(Gossypium) 종(Gos h 비실린), 헤모필러스(Haemophilus) 종(Hae in P6), 헤마피살리스(Haemaphysalis) 종(Hae l 7, Hae l 7.0101, Hae q 7, Hae q 7.0101), 할리오티스(Haliotis) 종(Hal a 1, Hal d 1, Hal di 1, Hal di PM, Hal m 1, Hal m 1.0101, Hal r 1, Hal r 49kD, Hal ru 1), 하모니아(Harmonia) 종(Har a 1, Har a 1.0101, Har a 2, Har a 2.0101), 하페그나토스(Harpegnathos) 종(Har sa 7, Har sa 7.0101, Har sa 7.0102), 헬리안투스(Helianthus) 종(Hel a 1, Hel a 1.0101, Hel a 2, Hel a 2.0101, Hel a 2S 알부민, Hel a 3, Hel a 3.0101, Hel a 4), 헬릭스(Helix) 종(Hel ap 1, Hel as 1, Hel as 1.0101), 헬리그모소모이데스(Heligmosomoides) 종(Hel p 3, Hel p 3.0101), 헬리안투스(Helianthus) 종(Hel tu 1), 헤만티아스(Hemanthias) 종(Hem le 1), 헤미푸서스(Hemifusus) 종(Hem t 1), 헤테로데라(Heterodera) 종(Het g 3, Het g 3.0101), 헤베아(Hevea) 종(Hev b 1, Hev b 1.0101, Hev b 10, Hev b 10.0101, Hev b 10.0102, Hev b 10.0103, Hev b 11, Hev b 11.0101, Hev b 11.0102, Hev b 12, Hev b 12.0101, Hev b 13, Hev b 13.0101, Hev b 14, Hev b 14.0101, Hev b 2, Hev b 2.0101, Hev b 3, Hev b 3.0101, Hev b 4, Hev b 4.0101, Hev b 5, Hev b 5.0101, Hev b 6, Hev b 6.01, Hev b 6.02, Hev b 6.0202, Hev b 6.03, Hev b 7, Hev b 7.01, Hev b 7.02, Hev b 7.D2, Hev b 7.S2, Hev b 8, Hev b 8.0101, Hev b 8.0102, Hev b 8.0201, Hev b 8.0202, Hev b 8.0203, Hev b 8.0204, Hev b 9, Hev b 9.0101, Hev b 구연산 결합 단백질, Hev b GAPDH, Hev b HSP80, Hev b IFR, Hev b 프로테아솜 서브유닛, Hev b 로타마제(Rotamase), Hev b SPI, Hev b Trx, Hev b UDPGP), 헥사그라모스(Hexagrammos) 종(Hex ot 1), 히포글로서스(Hippoglossus) 종(Hip h 1), 히포글로소이데스(Hippoglossoides) 종(Hip pl 1), 히포글로서스(Hippoglossus) 종(Hip st 1), 히루도(Hirudo) 종(Hir me 히루딘), 홀커스(Holcus) 종(Hol l 1, Hol l 1.0101, Hol l 1.0102, Hol l 2, Hol l 4, Hol l 5, Hol l 5.0101, Hol l 5.0201), 홀록네무스(Holocnemus) 종(Hol pl 9, Hol pl 헤모시아닌(Hemocyanin)), 호마루스(Homarus) 종(Hom a 1, Hom a 1.0101, Hom a 1.0102, Hom a 1.0103, Hom a 3, Hom a 3.0101, Hom a 4, Hom a 6, Hom a 6.0101, Hom g 1, Hom g 2), 호모(Homo) 종(Hom s 1, Hom s 1.0101, Hom s 2, Hom s 2.0101, Hom s 3, Hom s 3.0101, Hom s 4, Hom s 4.0101, Hom s 5, Hom s 5.0101, Hom s AAT, Hom s ACTH, Hom s 아달리무맙(Adalimumab), Hom s ALA, Hom s 알파_액틴, Hom s 알파-갈락토시다제, Hom s APDH, Hom s 아릴설파타제(Arylsulfatase) B, Hom s 카제인, Hom s CyP A, Hom s CyP B, Hom s CyP C, Hom s DSF70, Hom s DSG3, Hom s eIF6, Hom s 에타네셉(Etanercept), Hom s 인자 IX, Hom s 인자 VII, Hom s 인자 VIII, Hom s G-CSF, Hom s 글루코세레브로시다제(Glucocerebrosidase), Hom s 글루코시다제(Glucosidase), Hom s HLA-DR-알파, Hom s HSA, Hom s 이두로니다제(Iduronidase), Hom s 이두로설파제(Idursulfase), Hom s IgA, Hom s 인슐린, Hom s 락토페린, Hom s 라미닌 감마_2, Hom s MnSOD, Hom s 옥시토신, Hom s P2, Hom s 포스비틴, Hom s 프로필린, Hom s PSA, Hom s RP1, Hom s TCTP, Hom s TL, Hom s TPA, Hom s TPO, Hom s 트랜스알돌라제(Transaldolase), Hom s Trx, Hom s 튜불린(Tubulin)-알파, Hom s/Mus m 브라실리시맙(Basiliximab), Hom s/Mus m 세툭시맙, Hom s/Mus m 세툭시맙 (Gal-Gal), Hom s/Mus m 인플릭시맙(Infliximab), Hom s/Mus m 나탈리주맙(Natalizumab), Hom s/Mus m 오말리주맙(Omalizumab), Hom s/Mus m 팔리비주맙(Palivizumab), Hom s/Mus m 리툭시맙(Rituximab), Hom s/Mus m 토실리주맙(Tocilizumab), Hom s/Mus m 트라투주맙(Trastuzumab)), 홉로스데투스(Hoplostethus) 종(Hop a 1), 홀데움(Hordeum) 종 (Hor v 1, Hor v 12, Hor v 12.0101, Hor v 13, Hor v 14, Hor v 15, Hor v 15.0101, Hor v 16, Hor v 16.0101, Hor v 17, Hor v 17.0101, Hor v 18kD, Hor v 2, Hor v 21, Hor v 21.0101, Hor v 28, Hor v 33, Hor v 4, Hor v 5, Hor v 5.0101, Hor v BDAI, Hor v BTI), 후미콜라(Humicola) 종(셀룰라제 내 Hum), 후물러스(Humulus) 종(Hum j 1, Hum j 1.0101, Hum j 10kD, Hum j 2), 후소(Huso) 종(Hus h 1), 힐로세레우스(Hylocereus) 종(Hyl un LTP), 히메노세팔러스(Hymenocephalus) 종(Hym st 1), 히페로글리페(Hyperoglyphe) 종(Hyp by 1), 히포프탈미치크스(Hypophthalmichthys) 종(Hyp mo 1), 히포프탈미크티(Hypophthalmichthy) 종(Hyp no 1), 이크탈루러스(Ictalurus) 종(Ict fu 1, Ict p 1), 임페라타(Imperata) 종(Imp c 4, Imp c 5, Imp c VIIIe1), 익소데스(Ixodes) 종(Ixo r 2, Ixo sc 7, Ixo sc 7.0101), 야수스(Jasus) 종(Jas la 1, Jas la 1.0101, Jas la 1.0102), 주글란스(Juglans) 종(Jug ca 1, Jug ca 2, Jug ci 1, Jug ci 2, Jug n 1, Jug n 1.0101, Jug n 2, Jug n 2.0101, Jug r 1, Jug r 1.0101, Jug r 2, Jug r 2.0101, Jug r 3, Jug r 3.0101, Jug r 4, Jug r 4.0101, Jug r 5), 주니페루스(Juniperus) 종(Jun a 1, Jun a 1.0101, Jun a 1.0102, Jun a 2, Jun a 2.0101, Jun a 3, Jun a 3.0101, Jun c 1, Jun o 1, Jun o 4, Jun o 4.0101, Jun r 3, Jun r 3.1, Jun r 3.2, Jun v 1, Jun v 1.0101, Jun v 1.0102, Jun v 3, Jun v 3.0101, Jun v 3.0102, Jun v 4), 카츄워너스(Katsuwonus) 종(Kat p 1), 키포서스(Kyphosus) 종(Kyp se 1), 라크노라이무스(Lachnolaimus) 종(Lac ma 1), 라체시스(Lachesis) 종(Lac mu 1), 락투카(Lactuca) 종(Lac s 1, Lac s 1.0101), 라고세팔러스(Lagocephalus) 종(Lag la 1), 라루스(Larus) 종(Lar a 1, Lar a 2, Lar a 3), 라리미크티스(Larimichthys) 종(Lar po 1), 라테스(Lates) 종(Lat c 1), 라테올라브락스(Lateolabrax) 종(Lat ja 1), 라티러스(Lathyrus) 종(Lat oc 아글루티닌), 레이오스토무스(Leiostomus) 종(Lei xa 1), 렌스(Lens) 종(Len c 1, Len c 1.0101, Len c 1.0102, Len c 1.0103, Len c 2, Len c 2.0101, Len c 3, Len c 3.0101, Len c 아글루티닌), 레오파더스(Leopardus) 종(Leo p 1), 레피도글리푸스(Lepidoglyphus) 종(Lep d 10, Lep d 10.0101, Lep d 12, Lep d 13, Lep d 13.0101, Lep d 2, Lep d 2.0101, Lep d 2.0102, Lep d 2.0201, Lep d 2.0202, Lep d 3, Lep d 39kD, Lep d 5, Lep d 5.0101, Lep d 5.0102, Lep d 5.0103, Lep d 7, Lep d 7.0101, Lep d 8, Lep d 알파 튜불린), 레포미스(Lepomis) 종(Lep gi 1), 렙토멜라노소마(Leptomelanosoma) 종(Lep i 1), 레포미스(Lepomis) 종(Lep ma 1), 레피스마(Lepisma) 종(Lep s 1, Lep s 1.0101, Lep s 1.0102), 레피오프테이러스(Lepeophtheirus) 종(Lep sa 1, Lep sa 1.0101, Lep sa 1.0102, Lep sa 1.0103), 렙타일루러스(Leptailurus) 종(Lep se 1), 레피도롬버스(Lepidorhombus) 종(Lep w 1, Lep w 1.0101), 레토세러스(Lethocerus) 종(Let in 7, Let in 7.0101, Let in 7.0102), 레우시스커스(Leuciscus) 종(Leu ce 1), 레위아(Lewia) 종(Lew in 1), 리거스트럼(Ligustrum) 종(Lig v 1, Lig v 1.0101, Lig v 1.0102, Lig v 2), 릴리움(Lilium) 종(Lil l 2, Lil l PG), 리만다(Limanda) 종(Lim fe 1), 림노넥테스(Limnonectes) 종(Lim m 1), 리물러스(Limulus) 종(Lim p 1, Lim p 1.0101, Lim p 2, Lim p LPA), 리포스셀리스(Liposcelis) 종(Lip b 1, Lip b 1.0101), 릿치(Litchi) 종(Lit c 1, Lit c 1.0101, Lit c IFR, Lit c TPI), 리토바테스(Lithobates) 종(Lit ca 1), 리토페나에우스(Litopenaeus) 종(Lit se 1, Lit v 1, Lit v 1.0101, Lit v 2, Lit v 2.0101, Lit v 3, Lit v 3.0101, Lit v 4, Lit v 4.0101), 필리아리아(Filiaria) 종(Loa lo 3, Loa lo 3.0101), 로보테스(Lobotes) 종(Lob su 1), 로커스타(Locusta) 종(Loc m 7, Loc m 7.0101), 로리고(Loligo) 종(Lol b 1, Lol e 1), 롤리움(Lolium) 종(Lol m 2, Lol m 5, Lol p 1, Lol p 1.0101, Lol p 1.0102, Lol p 1.0103, Lol p 10, Lol p 11, Lol p 11.0101, Lol p 12, Lol p 13, Lol p 2, Lol p 2.0101, Lol p 3, Lol p 3.0101, Lol p 4, Lol p 4.0101, Lol p 5, Lol p 5.0101, Lol p 5.0102, Lol p 7, Lol p CyP, Lol p FT, Lol p 레구민(Legumin)), 로노미아(Lonomia) 종(Lon o 7, Lon o 7.0101), 로포디테스(Lophodytes) 종(Lop cu 1), 로포네타(Lophonetta) 종(Lop sp 1), 루피누스(Lupinus) 종(Lup a 1, Lup a 알파_콩글루틴(Conglutin), Lup a 델타_콩글루틴, Lup a 감마_콩글루틴, Lup an 1, Lup an 1.0101, Lup an 알파_콩글루틴, Lup an 델타_콩글루틴, Lup an 감마_ 콩글루틴 , Lup l 17kD), 루트야누스(Lutjanus) 종(Lut a 1, Lut c 1, Lut cy 1, Lut gr 1, Lut gu 1, Lut jo 1), 루트라리아(Lutraria) 종(Lut p 1), 루트야누스(Lutjanus) 종 (Lut pu 1, Lut sy 1), 리코페시콘(Lycopersicon) 종(Lyc e 1, Lyc e 1.0101, Lyc e 11S 글로불린, Lyc e 2, Lyc e 2.0101, Lyc e 2.0102, Lyc e 3, Lyc e 3.0101, Lyc e 4, Lyc e 4.0101, Lyc e ARP60S, Lyc e 키티나제, Lyc e 글루카나제, Lyc e 퍼옥시다제, Lyc e PG, Lyc e PME, Lyc e PR23, Lyc e 비실린), 마코넬리코커스(Maconellicoccus) 종(Mac h 7, Mac h 7.0101), 마크루로누스(Macruronus) 종(Mac ma 1, Mac n 1), 마크룰라(Maclura) 종(Mac po 17kD), 마크로브라키움(Macrobrachium) 종(Mac ro 1, Mac ro 1.0101, Mac ro 헤모시아닌), 마크로퍼스(Macropus) 종(Macr s 젤라틴), 말러스(Malus) 종(Mal d 1, Mal d 1.0101, Mal d 1.0102, Mal d 1.0103, Mal d 1.0104, Mal d 1.0105, Mal d 1.0106, Mal d 1.0107, Mal d 1.0108, Mal d 1.0109, Mal d 1.0201, Mal d 1.0202, Mal d 1.0203, Mal d 1.0204, Mal d 1.0205, Mal d 1.0206, Mal d 1.0207, Mal d 1.0208, Mal d 1.0301, Mal d 1.0302, Mal d 1.0303, Mal d 1.0304, Mal d 1.0401, Mal d 1.0402, Mal d 1.0403, Mal d 2, Mal d 2.0101, Mal d 3, Mal d 3.0101, Mal d 3.0102, Mal d 3.0201, Mal d 3.0202, Mal d 3.0203, Mal d 4, Mal d 4.0101, Mal d 4.0102, Mal d 4.0201, Mal d 4.0202, Mal d 4.0301, Mal d 4.0302), 마피기아(Malpighia) 종(Mal g 4, Mal g Hevein), 말러스(Malus) 종(Mal p 1), 말라세지아(Malassezia) 종(Mala f 2, Mala f 2.0101, Mala f 3, Mala f 3.0101, Mala f 4, Mala f 4.0101, Mala g 10, Mala s 1, Mala s 1.0101, Mala s 10, Mala s 10.0101, Mala s 11, Mala s 11.0101, Mala s 12, Mala s 12.0101, Mala s 13, Mala s 13.0101, Mala s 5, Mala s 5.0101, Mala s 6, Mala s 6.0101, Mala s 7, Mala s 7.0101, Mala s 8, Mala s 8.0101, Mala s 9, Mala s 9.0101), 마니홋(Manihot) 종(Man e 5, Man e 5.0101, Man e FPA, Man e GAPDH), 만기페라(Mangifera) 종(Man i 1, Man i 14kD, Man i 2, Man i 3, Man i 3.01, Man i 3.02, Man i 키티나제), 마서페나에우스(Marsupenaeus) 종(Mar j 1, Mar j 1.0101, Mar j 2, Mar j 4), 마트리카리아(Matricaria) 종(Mat c 17kD), 메코포다(Mecopoda) 종(Mec e 7), 메갈로브라마(Megalobrama) 종(Meg am 2, Meg am CK), 메가투라(Megathura) 종(Meg c 헤모시아닌(Hemocyanin)), 메갈롭스(Megalops) 종(Meg sp 1), 멜라노글라무스(Melanogrammus) 종(Mel a 1), 멜레아그리스(Meleagris) 종(Mel g 1, Mel g 2, Mel g 3, Mel g PRVB, Mel g TSA), 멜리세투스(Melicertus) 종(Mel l 1), 멘티실허스(Menticirrhus) 종(Men am 1), 멜쿠리알리스(Mercurialis) 종(Mer a 1, Mer a 1.0101), 멜루시우스(Merluccius) 종(Mer ap 1, Mer au 1, Mer bi 1, Mer ca 1, Mer ga 1, Mer hu 1), 멜란기우스(Merlangius) 종(Mer me 1), 멜루시우스(Merluccius) 종(Mer mr 1, Mer pa 1, Mer po 1, Mer pr 1, Mer se 1), 메리오네스(Meriones) 종(Mer un 23kD), 메타히지움(Metarhizium) 종(Met a 30), 메타페네옵시스(Metapenaeopsis) 종(Met ba 1), 메타페네우스(Metapenaeus) 종(Met e 1, Met e 1.0101, Met e 2), 메테세퀘이아(Metasequoia) 종(Met gl 2), 메타페네우스(Metapenaeus) 종(Met j 1, Met j 2), 메타네프롭스(Metanephrops) 종(Met ja 1), 메타페네옵시스(Metapenaeopsis) 종(Met la 1), 메타네프롭스(Metanephrops) 종(Met t 2), 마이크로메시스티우스(Micromesistius) 종(Mic po 1), 마이크로포고니아스(Micropogonias) 종(Mic un 1), 미마클라미스(Mimachlamys) 종(Mim n 1), 모몰디카(Momordica) 종(Mom c RIP), 모루스(Morus) 종(Mor a 17kD, Mor a 4), 모로네(Morone) 종(Mor am 1), 모러스(Morus) 종(Mor n 3, Mor n 3.0101), 모로네(Morone) 종(Mor sa 1, Mor sc 1), 머질(Mugil) 종(Mug c 1), 무레놀레피스(Muraenolepis) 종(Mur mi 1), 무사(Musa) 종(Mus a 1, Mus a 1.0101, Mus a 2, Mus a 2.0101, Mus a 3, Mus a 3.0101, Mus a 4, Mus a 4.0101, Mus a 5, Mus a 5.0101, Mus a 5.0102), 무스(Mus) 종(Mus m 1, Mus m 1.0101, Mus m 1.0102, Mus m 2, Mus m Gelatin, Mus m IgG, Mus m MSA, Mus m 무로모납(Muromonab), Mus m 포스비틴(Phosvitin)), 무스텔라(Mustela) 종(Mus p 17kD), 무사(Musa) 종(Mus xp 1, Mus xp 2, Mus xp 5), 미크테로페르카(Mycteroperca) 종(Myc bo 1, Myc mi 1, Myc ph 1), 미셀리오프토라(Myceliophthora) 종(Myc sp 락카제(Laccase)), 미르메시아(Myrmecia) 종(Myr p 1, Myr p 1.0101, Myr p 2, Myr p 2.0101, Myr p 2.0102, Myr p 3, Myr p 3.0101), 미틸러스(Mytilus) 종(Myt e 1, Myt g 1, Myt g PM), 미주스(Myzus) 종(Myz p 7, Myz p 7.0101), 네모헤두스(Nemorhedus) 종(Nae go Hya), 네카터(Necator) 종(Nec a 칼레티쿨린(Calreticulin)), 네밉테루스(Nemipterus) 종(Nem vi 1), 네오사토리아(Neosartorya) 종(Neo fi 1, Neo fi 22), 네오첸(Neochen) 종(Neo ju 1), 네오스코나(Neoscona) 종(Neo n 7, Neo n 7.0101), 네펠리엄(Nephelium) 종(Nep l GAPDH), 네프롭스(Nephrops) 종(Nep n 1, Nep n DF9), 넵투니아(Neptunea) 종(Nep po 1, Nep po 1.0101), 니코티아나(Nicotiana) 종(Nic t 8, Nic t 오스모틴(Osmotin), Nic t 빌린(Villin)), 님비아(Nimbya) 종(Nim c 1, Nim s 1), 니포스트롱길루스(Nippostrongylus) 종(Nip b Ag1), 닉티세부스(Nycticebus) 종(Nyc c 1), 옥토퍼스(Octopus) 종(Oct f 1, Oct l 1, Oct v 1, Oct v 1.0101, Oct v PM), 오시우러스(Ocyurus) 종(Ocy ch 1), 올레아(Olea) 종(Ole e 1, Ole e 1.0101, Ole e 1.0102, Ole e 1.0103, Ole e 1.0104, Ole e 1.0105, Ole e 1.0106, Ole e 1.0107, Ole e 10, Ole e 10.0101, Ole e 11, Ole e 11.0101, Ole e 11.0102, Ole e 12, Ole e 13, Ole e 2, Ole e 2.0101, Ole e 3, Ole e 3.0101, Ole e 36kD, Ole e 4, Ole e 4.0101, Ole e 5, Ole e 5.0101, Ole e 6, Ole e 6.0101, Ole e 7, Ole e 7.0101, Ole e 8, Ole e 8.0101, Ole e 9, Ole e 9.0101), 옴마스트레페스(Ommastrephes) 종(Omm b 1, Omm b 1.0101), 온코힌츄스(Oncorhynchus) 종(Onc ke 1, Onc ke 18 kD, Onc ke 알파2I, Onc ke 비텔로게닌(Vitellogenin), Onc m 1, Onc m 1.0101, Onc m 1.0201, Onc m 알파2I, Onc m 프로타민(Protamine), Onc m 비텔로게닌(Vitellogenin), Onc ma 1, Onc ma FPA, Onc ma FSA, Onc ma TPI, Onc n 1), 온코셀카(Onchocerca) 종(Onc o 3, Onc o 3.0101), 온코힌츄스(Oncorhynchus) 종(Onc ts 1), 온코셀카(Onchocerca) 종(Onc v 3, Onc v 3.0101), 오라토스퀼라(Oratosquilla) 종(Ora o 1, Ora o 1.0101), 오레오크로미스(Oreochromis) 종(Ore a 1, Ore mo 1, Ore mo 2, Ore mo FPA, Ore mo SCAF7145, Ore ni 1, Ore ni 18kD, Ore ni 45kD), 올니토니서스(Ornithonyssus) 종(Orn sy 10, Orn sy 10.0101, Orn sy 10.0102), 올리토라구스(Oryctolagus) 종(Ory c 1, Ory c 1.0101, Ory c 2, Ory c 카제인, Ory c 포스비틴(Phosvitin), Ory c RSA), 오리자(Oryza) 종(Ory s 1, Ory s 1.0101, Ory s 11, Ory s 12, Ory s 12.0101, Ory s 13, Ory s 14, Ory s 17kD, Ory s 19kD, Ory s 2, Ory s 23, Ory s 3, Ory s 7, Ory s aA_TI, Ory s GLP52, Ory s GLP63, Ory s 글리옥살라제(Glyoxalase) I, Ory s NRA), 오스트리아(Ostrya) 종(Ost c 1, Ost c 1.0101), 오비스(Ovis) 종(Ovi a ALA, Ovi a BLG, Ovi a 카제인, Ovi a 카제인 알파S1, Ovi a 카제인 알파S2, Ovi a 카제인 베타, Ovi a 카제인 카파, Ovi a 포스비틴, Ovi a SSA), 파키콘딜라(Pachycondyla) 종(Pac c 3), 파그루스(Pagrus) 종(Pag m 1, Pag pa 1), 팜푸스(Pampus) 종(Pam ar 1, Pam c 1), 판달루스(Pandalus) 종(Pan b 1, Pan b 1.0101), 판가시우스(Pangasius) 종(Pan bo 1), 판둘루스 종(Pan e 1, Pan e 1.0101, Pan e 4), 파눌리루스(Panulirus) 종(Pan h 1, Pan hy 1), 팡가시우스(Pangasius) 종(Pan hy 18kD, Pan hy 45kD), 파눌리루스 종(Pan j 1), 판테라(Panthera) 종(Pan l 1, Pan o 1, Pan p 1), 파눌리루스 종(Pan s 1, Pan s 1.0101), 판테라 종(Pan t 1), 판(Pan) 종(Pan tr TCTP), 파파벌(Papaver) 종(Pap s 17kD, Pap s 2, Pap s 34kD), 파필리오(Papilio) 종(Pap xu 7, Pap xu 7.0101, Pap xu 7.0102), 파라리크티스(Paralichthys) 종(Par a 1), 파라실루러스(Parasilurus) 종(Par as 1, Par c 1), 파라리토데스(Paralithodes) 종(Par c 1.0101, Par c 1.0102, Par f 1), 파테니움(Parthenium) 종(Par h 1), 파리에타리아(Parietaria) 종(Par j 1, Par j 1.0101, Par j 1.0102, Par j 1.0103, Par j 1.0201, Par j 2, Par j 2.0101, Par j 2.0102, Par j 3, Par j 3.0101, Par j 3.0102, Par j 4, Par j 4.0101, Par j J1-J2), 파라리크티스(Paralichthys) 종(Par le 1), 파리에타리아(Parietaria) 종(Par m 1, Par o 1, Par o 1.0101), 파라리크티스 종(Par ol 1, Par ol 알파2I), 파라후초(Parahucho) 종(Par pe 비텔로게닌(Vitellogenin)), 파시플로라(Passiflora) 종(Pas e 키티나제, Pas e 헤베인(Hevein)), 파스팔룸(Paspalum) 종(Pas n 1, Pas n 1.0101, Pas n 13), 피티노펙텐(Patinopecten) 종(Pat y 1), 페디쿨러스(Pediculus) 종(Ped h 7, Ped h 7.0101), 페네우스(Penaeus) 종(Pen a 1, Pen a 1.0101, Pen a 1.0102, Pen a 1.0102 (103-117), Pen a 1.0102 (109-123), Pen a 1.0102 (1-15), Pen a 1.0102 (115-129), Pen a 1.0102 (121-135), Pen a 1.0102 (127-141), Pen a 1.0102 (13-27), Pen a 1.0102 (133-147), Pen a 1.0102 (139-153), Pen a 1.0102 (145-159)), 파펜테페네우스(Farfantepenaeus) 종(Pen a 1.0102 (151-165)), 페네우스(Penaeus) 종(Pen a 1.0102 (157-171), Pen a 1.0102 (163-177), Pen a 1.0102 (169-183), Pen a 1.0102 (175-189), Pen a 1.0102 (181-195), Pen a 1.0102 (187-201), Pen a 1.0102 (193-207), Pen a 1.0102 (19-33), Pen a 1.0102 (199-213), Pen a 1.0102 (205-219), Pen a 1.0102 (211-225), Pen a 1.0102 (217-231), Pen a 1.0102 (223-237), Pen a 1.0102 (229-243)), 파펜테페네우스 종(Pen a 1.0102 (235-249)), 페네우스 종(Pen a 1.0102 (241-255), Pen a 1.0102 (247-261), Pen a 1.0102 (253-267), Pen a 1.0102 (25-39), Pen a 1.0102 (259-273), Pen a 1.0102 (265-279), Pen a 1.0102 (270-284), Pen a 1.0102 (31-45), Pen a 1.0102 (37-51), Pen a 1.0102 (43-57), Pen a 1.0102 (49-63)), 파펜테페네우스 종(Pen a 1.0102 (55-69)), 페네우스 종(Pen a 1.0102 (61-75), Pen a 1.0102 (67-81), Pen a 1.0102 (7-21), Pen a 1.0102 (73-87), Pen a 1.0102 (79-93), Pen a 1.0102 (85-99), Pen a 1.0102 (91-105), Pen a 1.0102 (97-111), Pen a 1.0103), 페니실리움(Penicillium) 종(Pen b 13, Pen b 13.0101, Pen b 26, Pen b 26.0101, Pen c 1, Pen c 13, Pen c 13.0101, Pen c 18, Pen c 19, Pen c 19.0101, Pen c 2, Pen c 22, Pen c 22.0101, Pen c 24, Pen c 24.0101, Pen c 3, Pen c 3.0101, Pen c 30, Pen c 30.0101, Pen c 32, Pen c 32.0101, Pen c MnSOD, Pen ch 13, Pen ch 13.0101, Pen ch 18, Pen ch 18.0101, Pen ch 20, Pen ch 20.0101, Pen ch 31, Pen ch 31.0101, Pen ch 33, Pen ch 33.0101, Pen ch 35, Pen ch 35.0101, Pen ch MnSOD), 페네우스 종(Pen i 1, Pen i 1.0101, Pen m 1, Pen m 1.0101, Pen m 1.0102, Pen m 2, Pen m 2.0101, Pen m 3, Pen m 3.0101, Pen m 4, Pen m 4.0101, Pen m 6, Pen m 6.0101), 페니실리움 종(Pen o 18, Pen o 18.0101), 페네우스 종(Pena o 1, Pena o 1.0101), 페리플라네타(Periplaneta) 종(Per a 1, Per a 1.0101, Per a 1.0102, Per a 1.0103, Per a 1.0104, Per a 1.0105, Per a 1.0201, Per a 10, Per a 10.0101, Per a 2, Per a 3, Per a 3.0101, Per a 3.0201, Per a 3.0202, Per a 3.0203, Per a 4, Per a 5, Per a 6, Per a 6.0101, Per a 7, Per a 7.0101, Per a 7.0102, Per a 7.0103, Per a 9, Per a 9.0101, Per a 카텝신(Cathepsin), Per a FABP, Per a 트립신, Per f 1, Per f 7, Per f 7.0101), 페르나(Perna) 종(Per v 1), 페르세아(Persea) 종(Pers a 1, Pers a 1.0101, Pers a 4), 페트로셀리눔(Petroselinum) 종(Pet c 1, Pet c 2, Pet c 3), 팔라리스(Phalaris) 종(Pha a 1, Pha a 1.0101, Pha a 5, Pha a 5.0101, Pha a 5.02, Pha a 5.03, Pha a 5.04), 파세울러스(Phaseolus) 종(Pha v 3, Pha v 3.0101, Pha v 3.0201, Pha v aAI, Pha v aAI.0101, Pha v 키티나제, Pha v PHA, Pha v 파세올린(Phaseolin)), 플레움(Phleum) 종(Phl p 1, Phl p 1.0101, Phl p 1.0102, Phl p 11, Phl p 11.0101, Phl p 12, Phl p 12.0101, Phl p 12.0102, Phl p 12.0103, Phl p 13, Phl p 13.0101, Phl p 2, Phl p 2.0101, Phl p 3, Phl p 3.0101, Phl p 3.0102, Phl p 4, Phl p 4.0101, Phl p 4.0102, Phl p 4.0201, Phl p 4.0202, Phl p 4.0203, Phl p 4.0204, Phl p 5, Phl p 5.0101, Phl p 5.0102, Phl p 5.0103, Phl p 5.0104, Phl p 5.0105, Phl p 5.0106, Phl p 5.0107, Phl p 5.0108, Phl p 5.0109, Phl p 5.0201, Phl p 5.0202, Phl p 5.0203, Phl p 5.0204, Phl p 5.0205, Phl p 5.0206, Phl p 5.0207, Phl p 6, Phl p 6.0101, Phl p 6.0102, Phl p 7, Phl p 7.0101, Phl p P1-P2-P5-P6, Phl p P2-P6, Phl p P5-P1, Phl p P6-P2), 피닉스(Phoenix) 종(Pho d 2, Pho d 2.0101, Pho d 40kD, Pho d 90kD), 포도퍼스(Phodopus) 종(Pho s 21kD), 포마(Phoma) 종(Pho t 1), 프라그미테스(Phragmites) 종(Phr a 1, Phr a 12, Phr a 13, Phr a 4, Phr a 5), 피토락카(Phytolacca) 종(Phy a RIP), 핌피넬라(Pimpinella) 종(Pim a 1, Pim a 2), 피나(Pinna) 종(Pin a 1), 파이퍼(Piper) 종(Pip n 14kD, Pip n 28kD), 피숨(Pisum) 종(Pis s 1, Pis s 1.0101, Pis s 1.0102, Pis s 2, Pis s 2.0101, Pis s 5, Pis s 아글로티닌, Pis s 알부민), 피스타시아(Pistacia) 종(Pis v 1, Pis v 1.0101, Pis v 2, Pis v 2.0101, Pis v 2.0201, Pis v 3, Pis v 3.0101, Pis v 4, Pis v 4.0101, Pis v 5, Pis v 5.0101), 플라타너스(Platanus) 종(Pla a 1, Pla a 1.0101, Pla a 2, Pla a 2.0101, Pla a 3, Pla a 3.0101, Pla a 8), 플라티크티스(Platichthys) 종(Pla f 1), 플란타고(Plantago) 종(Pla l 1, Pla l 1.0101, Pla l 1.0102, Pla l 1.0103, Pla l 시토크롬 C), 플라타너스(Platanus) 종(Pla oc 1, Pla or 1, Pla or 1.0101, Pla or 2, Pla or 2.0101, Pla or 3, Pla or 3.0101, Pla or 4, Pla or CyP, Pla r 1), 플렉트로포머스(Plectropomus) 종(Ple ar 1), 플레오스포라(Pleospora) 종(Ple h 1), 플렉트로포머스 종(Ple le 1), 플로디아(Plodia) 종(Plo i 1, Plo i 1.0101, Plo i 2, Plo i 2.0101), 포아(Poa) 종(Poa p 1, Poa p 1.0101, Poa p 10, Poa p 12, Poa p 13, Poa p 2, Poa p 4, Poa p 5, Poa p 5.0101, Poa p 6, Poa p 7), 폴리스테스(Polistes) 종(Pol a 1, Pol a 1.0101, Pol a 2, Pol a 2.0101, Pol a 5, Pol a 5.0101, Pol d 1, Pol d 1.0101, Pol d 1.0102, Pol d 1.0103, Pol d 1.0104, Pol d 4, Pol d 4.0101, Pol d 5, Pol d 5.0101, Pol e 1, Pol e 1.0101, Pol e 2, Pol e 4, Pol e 4.0101, Pol e 5, Pol e 5.0101, Pol f 5, Pol f 5.0101, Pol g 1, Pol g 1.0101, Pol g 2, Pol g 4, Pol g 5, Pol g 5.0101, Pol he MLT, Pol m 5, Pol m 5.0101), 폴리페딜럼(Polypedilum) 종(Pol n 1), 폴리시페스(Pollicipes) 종(Pol po 1), 폴라키우스(Pollachius) 종(Pol vi 1), 폴리비아(Polybia) 종(Poly p 1, Poly p 1.0101, Poly p 2, Poly p 5, Poly s 5, Poly s 5.0101), 포마토머스(Pomatomus) 종(Pom sa 1), 폰고(Pongo) 종(Pon ab HSA), 폰타스타커스(Pontastacus) 종(Pon l 4, Pon l 4.0101, Pon l 7, Pon l 7.0101), 포르터너스(Portunus) 종(Por s 1, Por s 1.0101, Por s 1.0102, Por tr 1, Por tr 1.0101), 프로토토니아(Protortonia) 종(Pro ca 38kD), 프로컴바루스(Procumbarus) 종(Pro cl 1, Pro cl 1.0101, Pro cl 21kD), 프로소피스(Prosopis) 종(Pro j 20kD), 프루너스(Prunus) 종(Pru ar 1, Pru ar 1.0101, Pru ar 3, Pru ar 3.0101, Pru av 1, Pru av 1.0101, Pru av 1.0201, Pru av 1.0202, Pru av 1.0203, Pru av 2, Pru av 2.0101, Pru av 3, Pru av 3.0101, Pru av 4, Pru av 4.0101, Pru c 1, Pru d 1, Pru d 2, Pru d 3, Pru d 3.0101, Pru d 4, Pru du 1, Pru du 2, Pru du 2S 알부민, Pru du 3, Pru du 3.0101, Pru du 4, Pru du 4.0101, Pru du 4.0102, Pru du 5, Pru du 5.0101, Pru du 6, Pru du 6.0101, Pru du 6.0201, Pru du 콩글루틴(Conglutin), Pru p 1, Pru p 1.0101, Pru p 2, Pru p 2.0101, Pru p 2.0201, Pru p 2.0301, Pru p 3, Pru p 3.0101, Pru p 3.0102, Pru p 4, Pru p 4.0101, Pru p 4.0201, Pru sa 3), 실로시베(Psilocybe) 종(Psi c 1, Psi c 1.0101, Psi c 2, Psi c 2.0101), 소롭테스(Psoroptes) 종(Pso o 1, Pso o 10, Pso o 10.0101, Pso o 11, Pso o 13, Pso o 14, Pso o 2, Pso o 21, Pso o 3, Pso o 5, Pso o 7), 푸마(Puma) 종(Pum c 1), 푸니카(Punica) 종(Pun g 3), 피루스(Pyrus) 종(Pyr c 1, Pyr c 1.0101, Pyr c 3, Pyr c 3.0101, Pyr c 4, Pyr c 4.0101, Pyr c 5, Pyr c 5.0101, Pyr py 2), 퀘르커스(Quercus) 종(Que a 1, Que a 1.0101, Que a 1.0201, Que a 1.0301, Que a 1.0401, Que a 2, Que a 4), 라키센트론(Rachycentron) 종(Rac ca 1), 라나(Rana) 종(Ran e 1, Ran e 1.0101, Ran e 2, Ran e 2.0101), 라니나(Ranina) 종(Ran ra 1), 랑지펠(Rangifer) 종(Ran t BLG), 라투스(Rattus) 종(Rat n 1, Rat n 1.0101, Rat n 카제인, Rat n 겔라틴, Rat n IgG, Rat n 포스비틴, Rat n RSA, Rat n 트랜스페린), 리조뮤콜(Rhizomucor) 종(Rhi m AP), 리조푸스(Rhizopus) 종(Rhi nv Lipase, Rhi o Lipase), 롬봅리테스(Rhomboplites) 종(Rho au 1), 로도토룰라(Rhodotorula) 종(Rho m 1, Rho m 1.0101, Rho m 2, Rho m 2.0101), 리시너스(Ricinus) 종(Ric c 1, Ric c 1.0101, Ric c 2, Ric c 3, Ric c 8, Ric c RIP), 리풀러스(Rivulus) 종(Riv ma 1), 로비니아(Robinia) 종(Rob p 2, Rob p 4, Rob p 글루카나제), 로사(Rosa) 종(Ros r 3), 로이스토니아(Roystonea) 종(Roy e 2), 루버스(Rubus) 종(Rub i 1, Rub i 1.0101, Rub i 3, Rub i 3.0101, Rub i 키티나제, Rub i CyP), 사카로미세스(Saccharomyces) 종(Sac c 카르복시펩티다제 Y, Sac c CyP, Sac c 에놀라제, Sac c 글루코시다제, Sac c 인버타제, Sac c MnSOD, Sac c P2, Sac c 프로필린), 살베리누스(Salvelinus) 종(Sal f 1), 살솔라(Salsola) 종(Sal k 1, Sal k 1.0101, Sal k 1.0201, Sal k 1.0301, Sal k 1.0302, Sal k 2, Sal k 2.0101, Sal k 3, Sal k 3.0101, Sal k 4, Sal k 4.0101, Sal k 4.0201, Sal k 5, Sal k 5.0101), 살베리누스 종(Sal le 비텔로게닌), 살모 종(Sal s 1, Sal s 1.0101, Sal s 1.0201, Sal s 2, Sal s 2.0101, Sal s 겔라틴), 삼부커스(Sambucus) 종(Sam n 1), 샌더(Sander) 종(San lu 1), 사포나리아(Saponaria) 종(Sap o RIP), 사디놉스(Sardinops) 종(Sar m 1), 사키디오니스(Sarkidiornis) 종(Sar ml 1), 살디나(Sardina) 종(Sar p 1), 살콥테스(Sarcoptes) 종(Sar s 1, Sar s 14, Sar s 3, Sar s GST, Sar s PM), 살디놉스(Sardinops) 종(Sar sa 1, Sar sa 1.0101), 스키스토소마(Schistosoma) 종(Sch j GST, Sch j PM, Sch j Sj22, Sch j Sj67, Sch ma Sm20, Sch ma Sm21, Sch ma Sm22, Sch ma Sm31), 시아에놉스(Sciaenops) 종(Sci oc 1), 스콤버(Scomber) 종(Sco a 1), 스콤베모루스(Scombermorus) 종(Sco ca 1), 스콤베로모루스(Scomberomorus) 종(Sco g 1), 스콤버 종(Sco j 1, Sco ma 1, Sco s 1), 스콜로펜드라(Scolopendra) 종(Sco y 7, Sco y 7.0101), 실라(Scylla) 종(Scy o 1, Scy o 1.0101, Scy o 2, Scy pa 1, Scy pa 2, Scy s 1, Scy s 1.0101, Scy s 2), 세바스테스(Sebastes) 종(Seb fa 1, Seb in 1, Seb m 1, Seb m 1.0101, Seb m 1.0201), 세칼레(Secale) 종(Sec c 1, Sec c 12, Sec c 13, Sec c 2, Sec c 20, Sec c 20.0101, Sec c 20.0201, Sec c 28, Sec c 3, Sec c 4, Sec c 4.0101, Sec c 4.0201, Sec c 5, Sec c 5.0101, Sec c aA_TI, Sec c aA_TI.0101), 세네시오(Senecio) 종(Sen j MDH, Sen j PL), 세피아(Sepia) 종(Sep e 1, Sep e 1.0101), 세피오테우티스(Sepioteuthis) 종(Sep l 1, Sep l 1.0101), 세피아 종(Sep m 1), 세리올라(Seriola) 종(Ser d 1, Ser la 1), 세게스테스(Sergestes) 종(Ser lu 1), 세리올라(Seriola) 종(Ser q 1, Ser ri 1), 세사뭄(Sesamum) 종(Ses i 1, Ses i 1.0101, Ses i 2, Ses i 2.0101, Ses i 3, Ses i 3.0101, Ses i 4, Ses i 4.0101, Ses i 5, Ses i 5.0101, Ses i 6, Ses i 6.0101, Ses i 7, Ses i 7.0101, Ses i 8), 시겔라(Shigella) 종(Shi bo GST, Shi dy GST), 시물리아(Simulia) 종(Sim vi 1, Sim vi 2, Sim vi 3, Sim vi 4, Sim vi 70kD), 시나피스(Sinapis) 종(Sin a 1, Sin a 1.0101, Sin a 1.0104, Sin a 1.0105, Sin a 1.0106, Sin a 1.0107, Sin a 1.0108, Sin a 2, Sin a 2.0101, Sin a 3, Sin a 3.0101, Sin a 4, Sin a 4.0101), 시노노바쿨라(Sinonovacula) 종(Sin c 1, Sin c 1.0101), 솔레놉시스(Solenopsis) 종(Sol g 2, Sol g 2.0101, Sol g 3, Sol g 3.0101, Sol g 4, Sol g 4.0101, Sol g 4.0201, Sol i 1, Sol i 1.0101, Sol i 2, Sol i 2.0101, Sol i 3, Sol i 3.0101, Sol i 4, Sol i 4.0101), 솔레노세라(Solenocera) 종(Sol me 1), 솔레놉시스(Solenopsis) 종(Sol r 1, Sol r 2, Sol r 2.0101, Sol r 3, Sol r 3.0101, Sol s 2, Sol s 2.0101, Sol s 3, Sol s 3.0101, Sol s 4), 솔레아(Solea) 종(Sol so 1, Sol so TPI), 솔라눔(Solanum) 종(Sola t 1, Sola t 1.0101, Sola t 2, Sola t 2.0101, Sola t 3, Sola t 3.0101, Sola t 3.0102, Sola t 4, Sola t 4.0101, Sola t 8, Sola t Glucanase), 솔검(Sorghum) 종(Sor b 1, Sor h 1, Sor h 1.0101, Sor h 12, Sor h 7), 스파루스(Sparus) 종(Spa a 1), 스피나(Sphyrna) 종(Sph ti 1), 스피룰리나(Spirulina) 종(Spi mx 베타_피코시아닌(Phycocyanin)), 스피나시아(Spinacia) 종(Spi o 2, Spi o RuBisCO), 스퀼라(Squilla) 종(Squ ac 1, Squ ac 1.0101, Squ o 1, Squ o 1.0101), 스타필로코커스(Staphylococcus) 종(Sta a FBP, Sta a SEA, Sta a SEB, Sta a SEC, Sta a SED, Sta a SEE, Sta a TSST), 스타키보트리스(Stachybotrys) 종(Sta c 3, Sta c 3.0101, Sta c 셀룰라제, Sta c 용혈소, Sta c SchS34, Sta c 스타키라제(Stachyrase) A), 스템필리움(Stemphylium) 종(Ste b 1, Ste c 1, Ste v 1), 스톨레포러스(Stolephorus) 종(Sto i 1), 스트루티오(Struthio) 종(Str c 1, Str c 2, Str c 3), 스트렙토코커스(Streptococcus) 종(Str dy 스트렙토키나제(Streptokinase)), 스트렙토미세스(Streptomyces) 종(Str g 프로나제(Pronase)), 스트렙토코커스(Streptococcus) 종(Str pn PspC), 스트롱길로센트로투스(Strongylocentrotus) 종(Str pu 18kD, Str pu 비텔로게닌(Vitellogenin)), 스트렙토코커스 종(Str py SPEA, Str py SPEC, Str py 스트렙토키나제), 스트롱길로이데스(Strongyloides) 종(Str st 45kD), 스트렙토미세스(Streptomyces) 종(Str v PAT), 스틸레라(Styela) 종(Sty p 1), 수이다시아(Suidasia) 종(Sui m 1, Sui m 13, Sui m 2, Sui m 3, Sui m 5, Sui m 5.01, Sui m 5.02, Sui m 5.03, Sui m 6, Sui m 7, Sui m 8, Sui m 9), Sus 종(Sus s ACTH, Sus s ALA, Sus s 아밀라제, Sus s BLG, Sus s 카제인, Sus s 카제인 알파S1, Sus s 카제인 알파S2, Sus s 카제인 베타, Sus s 카제인 카파, Sus s 겔라틴, Sus s HG, Sus s 인슐린, Sus s 리파제, Sus s 펩신, Sus s 포스비틴, Sus s PRVB, Sus s PSA, Sus s TCTP), 신텔로포데우마(Syntelopodeuma) 종(Syn y 7, Syn y 7.0101), 시링가(Syringa) 종(Syr v 1, Syr v 1.0101, Syr v 1.0102, Syr v 1.0103, Syr v 2, Syr v 3, Syr v 3.0101), 타바너스(Tabanus) 종(Tab y 1, Tab y 1.0101, Tab y 2, Tab y 2.0101, Tab y 5, Tab y 5.0101), 타도나(Tadorna) 종(Tad ra 1), 탈라로미세스(Talaromyces) 종(Tal st 22, Tal st 3, Tal st 8), 타락사쿰(Taraxacum) 종(Tar o 18kD), 탁소디움(Taxodium) 종(Tax d 2), 테게나리아(Tegenaria) 종(Teg d 헤모시아닌(Hemocyanin)), 텔라도사기아(Teladorsagia) 종(Tel ci 3), 타우메토포에아(Thaumetopoea) 종(Tha p 1, Tha p 1.0101, Tha p 2, Tha p 2.0101), 테라그라(Theragra) 종(The c 1), 테모미세스(Thermomyces) 종(The l 리파제, The sp 리파제, The sp 자일라나제(Xylanase)), 툰너스(Thunnus) 종(Thu a 1, Thu a 1.0101, Thu a 콜라겐, Thu al 1, Thu at 1, Thu o 1, Thu o 콜라겐), 투자(Thuja) 종(Thu oc 3, Thu p 1), 툰너스 종(Thu t 1, Thu to 1), 타이시테스(Thyrsites) 종(Thy at 1), 타이로피거스(Thyrophygus) 종(Thy y 7, Thy y 7.0101), 토다로데스(Todarodes) 종(Tod p 1, Tod p 1.0101, Tod p 1.0102), 톡소프테라(Toxoptera) 종(Tox c 7, Tox c 7.0101), 톡소카라(Toxocara) 종(Tox ca TES120, Tox ca TES26, Tox ca TES30), 톡소플라스마(Toxoplasma) 종(Tox g HSP70), 트라키페네우스(Trachypenaeus) 종(Tra c 1), 트라키노투스(Trachinotus) 종(Tra ca 1), 트라츄러스(Trachurus) 종(Tra j 1, Tra j 젤라틴, Tra tr 젤라틴), 트리티쿰(Triticum) 종(Tri a 1, Tri a 10kD, Tri a 12, Tri a 12.0101, Tri a 12.0102, Tri a 12.0103, Tri a 12.0104, Tri a 13, Tri a 14, Tri a 14.0101, Tri a 14.0201, Tri a 15, Tri a 15.0101, Tri a 18, Tri a 18.0101, Tri a 19, Tri a 19.0101, Tri a 2, Tri a 21, Tri a 21.0101, Tri a 23kd, Tri a 25, Tri a 25.0101, Tri a 26, Tri a 26.0101, Tri a 27, Tri a 27.0101, Tri a 28, Tri a 28.0101, Tri a 29, Tri a 29.0101, Tri a 29.0201, Tri a 3, Tri a 30, Tri a 30.0101, Tri a 31, Tri a 31.0101, Tri a 32, Tri a 32.0101, Tri a 33, Tri a 33.0101, Tri a 34, Tri a 34.0101, Tri a 35, Tri a 35.0101, Tri a 36, Tri a 36.0101, Tri a 37, Tri a 37.0101, Tri a 4, Tri a 4.0101, Tri a 4.0201, Tri a 5, Tri a 7, Tri a aA_SI, Tri a 알파_글리아딘, Tri a bA, Tri a Bd36K, Tri a 베타_글리아딘, Tri a 키티나제, Tri a CM16, Tri a DH, Tri a 엔도키티나제(Endochitinase), Tri a 감마_글리아딘, Tri a 게르민(Germin), Tri a 글리아딘, Tri a GST, Tri a LMW Glu, Tri a LMW-GS B16, Tri a LMW-GS P42, Tri a LMW-GS P73, Tri a LTP2, Tri a 오메가2_글리아딘, Tri a 퍼옥시다제, Tri a 퍼옥시다제 1, Tri a SPI, Tri a TLP, Tri a 트리틴, Tri a XI), 트리티라키움(Tritirachium) 종(Tri al 프로테이나제 K), 트리볼리움(Tribolium) 종(Tri ca 17, Tri ca 17.0101, Tri ca 7, Tri ca 7.0101), 트리코스트롱길루스(Trichostrongylus) 종(Tri co 3, Tri co 3.0101), 트리코피톤(Trichophyton) 종(Tri eq 4), 트리고넬라(Trigonella) 종(Tri fg 1, Tri fg 2, Tri fg 3, Tri fg 4), 트리코산테스(Trichosanthes) 종(Tri k RIP), 트리키우러스(Trichiurus) 종(Tri le 1), 트리티쿰(Triticum) 종(Tri m 퍼옥시다제), 트리코피톤(Trichophyton) 종(Tri me 2, Tri me 4), 트리세툼(Trisetum) 종(Tri p 1, Tri p 5), 트리키넬라(Trichinella) 종(Tri ps 3, Tri ps 3.0101), 트리코피톤(Trichophyton) 종(Tri r 2, Tri r 2.0101, Tri r 4, Tri r 4.0101), 트리코더마(Trichoderma) 종(Tri rs 셀룰라제), 트리티쿰 종(Tri s 14), 트리코피톤(Trichophyton) 종(Tri sc 2, Tri sc 4, Tri so 2), 트리키넬라(Trichinella) 종(Tri sp 3, Tri sp 3.0101, Tri sp 3.0102, Tri sp 3.0103, Tri sp 3.0104, Tri sp 3.0105, Tri sp 3.0106), 트리코피톤(Trichophyton) 종(Tri t 1, Tri t 1.0101, Tri t 4, Tri t 4.0101), 트리티쿰(Triticum) 종(Tri td 14, Tri td aA_TI), 트리코데마(Trichoderma) 종(Tri v 셀룰라제), 트리코피톤(Trichophyton) 종(Tri ve 4), 트리아토마(Triatoma) 종(Tria p 1, Tria p 1.0101), 트리플로키톤(Triplochiton) 종(Trip s 1), 터보(Turbo) 종(Tur c 1, Tur c PM), 티로파거스(Tyrophagus) 종(Tyr p 1, Tyr p 10, Tyr p 10.0101, Tyr p 10.0102, Tyr p 13, Tyr p 13.0101, Tyr p 2, Tyr p 2.0101, Tyr p 24, Tyr p 24.0101, Tyr p 3, Tyr p 3.0101, Tyr p 4, Tyr p 5, Tyr p 5.01, Tyr p 5.02, Tyr p 5.03, Tyr p 7, Tyr p 알파 튜불린), 유로클라디움(Ulocladium) 종(Ulo a 1, Ulo at 1, Ulo b 1, Ulo c 1, Ulo co 1, Ulo cu 1, Ulo mu 1, Ulo ob 1, Ulo se 1, Ulo su 1, Ulo tu 1), 언시아(Uncia) 종(Unc u 1), 유로피시스(Urophycis) 종(Uro te 1), 백시니움(Vaccinium) 종(Vac m 3), 바로아(Varroa) 종(Var j 13kD), 베네루피스(Venerupis) 종(Ven ph 1, Ven ph 1.0101), 베스풀라(Vespula) 종(Ves f 1, Ves f 2, Ves f 5, Ves f 5.0101, Ves g 1, Ves g 2, Ves g 5, Ves g 5.0101, Ves m 1, Ves m 1.0101, Ves m 2, Ves m 2.0101, Ves m 5, Ves m 5.0101, Ves m MLT, Ves p 1, Ves p 2, Ves p 5, Ves p 5.0101, Ves s 1, Ves s 1.0101, Ves s 2, Ves s 5, Ves s 5.0101, Ves v 1, Ves v 1.0101, Ves v 2, Ves v 2.0101, Ves v 2.0201, Ves v 3, Ves v 3.0101, Ves v 5, Ves v 5.0101, Ves v 5-Pol a 5, Ves vi 5, Ves vi 5.0101), 베스파(Vespa) 종(Vesp c 1, Vesp c 1.0101, Vesp c 2, Vesp c 5, Vesp c 5.0101, Vesp c 5.0102, Vesp m 1, Vesp m 1.0101, Vesp m 5, Vesp m 5.0101, Vesp ma 1, Vesp ma 2, Vesp ma 5, Vesp ma MLT, Vesp v MLT), 비기나(Vigna) 종(Vig r 1, Vig r 1.0101, Vig r 17kD, Vig r 5, Vig r 8S 글로불린, Vig r 알부민, Vig r 베타-콩글리시닌(Conglycinin)), 비티스(Vitis) 종(Vit v 1, Vit v 1.0101, Vit v 4, Vit v 5, Vit v 글루카나제(Glucanase), Vit v TLP), 시피아스(Xiphias) 종(Xip g 1, Xip g 1.0101, Xip g 25kD), 제아(Zea) 종(Zea m 1, Zea m 1.0101, Zea m 11, Zea m 12, Zea m 12.0101, Zea m 12.0102, Zea m 12.0103, Zea m 12.0104, Zea m 12.0105, Zea m 13, Zea m 14, Zea m 14.0101, Zea m 14.0102, Zea m 2, Zea m 20S, Zea m 22, Zea m 25, Zea m 25.0101, Zea m 27kD Zein, Zea m 3, Zea m 4, Zea m 5, Zea m 50kD Zein, Zea m 7, Zea m 키티나제, Zea m G1, Zea m G2, Zea m PAO, Zea m Zm13), 제우스(Zeus) 종(Zeu fa 1), 지지퍼스(Ziziphus) 종(Ziz m 1, Ziz m 1.0101), 조아세스(Zoarces) 종(Zoa a ISP III), 지고필럼(Zygophyllum) 종(Zyg f 2).
이러한 맥락에서, 괄호 안의 용어는 특정 원천으로부터의 특정한 바람직한 알레르기 항원(알레르겐)을 나타낸다.
가장 바람직하게는, 알레르기 항원은 바람직하게는 원천(예컨대, 식물(예컨대, 풀 또는 나무), 천연 생성물(예컨대, 우유, 견과 등), 진균 원천(예컨대, 아스퍼질러스) 또는 박테리아 원천 또는 동물 원천 또는 동물 독(예를 들어 고양이, 개, 벌의 독 등)으로부터, 바람직하게는 목초 화분(예를 들어 호밀의 화분), 나무 화분(예를 들어 개암나무, 자작나무, 알더(alder), 애쉬(ash)의 화분), 꽃 화분, 허브 화분(예를 들어 머그워트의 화분), 집먼지 진드기(예를 들어 Der f 1, Der p 1, Eur m 1, Der m 1 Der f 2, Der p 2, Eur m 2, Tyr p 2, Lep d 2), 곰팡이(예를 들어 아크레모니움(Acremonium), 아스퍼질러스(Aspergillus), 클라도스포리움(Cladosporium), 후자리움(Fusarium), 뮤코(Mucor), 페니실리움(Penicillium), 리조푸스(Rhizopus), 스타키보트리스(Stachybotrys), 트리코데마(Trichoderma), 또는 알테나리아(Alternaria)의 알레르겐), 동물(예를 들어 고양이의 Fel d1, Fel d 2, Fel d3, 또는 Fel d4), 식품(예컨대, 생선(예를 들어 농어, 대구, 도다리), 해산물(예를 들어 게, 랍스터, 새우), 계란, 밀, 견과류(예를 들어 땅콩, 아몬드, 캐슈, 호두), 콩, 우유, 등의 알레르겐) 또는 곤충 독액(예를 들어 말벌(wasps), 벌(bees), 호넷(hornets), 개미, 모기, 또는 진드기로부터의 알레르겐)으로 구성된 목록으로부터 선택된 원천으로부터 유래된다.
자가면역 자가항원(autoimmune self-antigens):
자가면역 자가항원, 즉, 자가면역 질환과 관련된 항원 또는 자가항원(autoantigens)은 다음의 기관 시스템 중 적어도 하나 이상에 영향을 미치는 자가면역 질환과 관련이 있을 수 있다: 순환계, 소화계, 내분비계, 분비계, 면역계, 표피(integumentary)계, 근육계, 신경계, 생식계, 호흡계, 골격계, 바람직하게는 심혈관계, 신경내분비계, 근골격계 또는 위장계와 관련이 있을 수 있다. 여기서, 순환계는 심장, 혈액 및 혈관과 함께 몸과 폐 사이에 혈액을 펌핑하고 흘려보낼 수 있게 하는 기관계이다. 소화계는 타액선, 식도, 위, 간, 담낭, 췌장, 내장, 결장, 직장 및 항문으로 음식을 소화 및 가공할 수 있게 한다. 내분비계는 시상하부, 뇌하수체(pituitary) 또는 뇌하수체(pituitary gland), 송과체 또는 송과선, 갑상선, 부갑상선 및 부신선(adrenal glands)과 같은 내분비선에 의해 만들어진 호르몬을 사용하여 체내에서 소통을 가능하게 한다. 배설계는 신장, 요관, 방광 및 요도를 포함하며, 체액 균형, 전해질 균형 및 소변 배출에 관여한다. 면역계는 조직 및 혈류 사이에서의 림프 전달에 연루된 구조를 포함하며, 림프 및 림프절 및 혈관은 면역계의 세포성 및 체액성 구성 요소의 전달을 담당할 수 있다. 면역계는 질병을 유발하는 작용제 방어를 담당하며, 무엇보다도 백혈구, 편도선, 아데노이드, 흉선 및 비장을 포함한다. 표피계는 피부, 모발 및 손톱을 포함한다. 근육계는 뼈, 연골, 인대 및 힘줄을 포함하는 골격계와 함께 근육 운동을 가능하게 하고, 구조적 뒷받침을 제공한다. 신경계는 정보의 수집, 전달 및 처리를 담당하며, 뇌, 척수 및 신경을 포함한다. 생식계는 난소, 난관(fallopian tubes), 자궁, 질, 유선, 고환, 정관, 정낭, 전립선 및 음경과 같은 생식 기관을 포함한다. 호흡계는 호흡에 사용되는 기관인 인두, 후두, 기관, 기관지, 폐 및 횡격막을 포함하며 순환계와 함께 작용한다.
자가면역 자가항원(자가면역 질환과 관련된 항원 또는 자가항원)은 애디슨병(자가면역 부신염, 애디슨 질병), 원형 탈모증, 애디슨 빈혈증(비에르머 질병), 자가면역 용혈성 빈혈(AIHA), 콜드(cold) 타입의 자가면역 용혈성 빈혈(AIHA) (한냉혈구응집소 질병, 콜드 자가면역 용혈성 빈혈(AIHA)(한랭응집소 질병), (CHAD)), 웜(warm) 타입의 자가면역 용혈성 빈혈(AIHA)(웜　AIHA, 웜 자가면역 용혈성 빈혈(AIHA)), 자가면역 용혈성 도나스-란트스타이너 빈혈(발작성한랭혈색소뇨증), 휴즈 증후군(APS), 아테롬성 동맥 경화증, 자가면역 관절염, 측두근 동맥염, 타카야수 동맥염(타카야수 질병, 대동맥궁 질병), 측두 동맥염/거세포동맥염, 자가면역 만성위염, 자가면역 불임, 자가면역 내이 질병(AIED), 바제도병(바제도 질병(Morbus Basedow)), 베크테레브병(베크테레브 질병(Morbus Bechterew), 강직성 척추염(ankylosing spondylitis, spondylitis ankylosans)), 베체트 증후군(베체트 질병(Morbus Behcet)), 자가면역 염증성 장 질환을 포함하는 장 질환(궤양성 대장염(크론병(Morbus Crohn, Crohn's disease))을 포함), 심근증, 특히 자가면역 심근증, 특발성 팽창 심근증(DCM), 스프루 피부염(글루텐 매개 장질환), 만성 피로 면역 장애 증후군(CFIDS), 만성 염증성 탈수초성 다발성 신경병증(CIDP), 만성 다발성 관절염, 처그-스트라우스 증후군, 반흔성유천포창, 코간 증후군, CREST 증후군 (피부석회화, 레이노드 현상, 식도의 운동 장애, 스크레로닥틸리아 및 모세혈관확장을 갖는 증후군), 크론병(크론 질병(Morbus Crohn), 궤양성 대장염), 피부 자가면역 질환 중, 포진성 피부염, 피부근염, 당뇨, 제1형 당뇨병(제1형 당뇨, 인슐린 의존성 당뇨병), 제2형 당뇨병(제2형 당뇨), 필수 혼합된 한성글로불린혈증, 필수 혼합된 한성글로불린혈증, 섬유근육통, 섬유근염, 굿파스튜어 증후군(항-GBM 매개 사구체 신염), 대숙주성 이식편병, 기엥 바레 증후군(GBM, 다발성신경근염), 혈액 자가면역 질환, 하시모토 갑상선염, 혈우병, 후천적 혈우병, 간염, 자가면역 간염, 특히 만성 간염의 자가면역 형태, 특발성 폐섬유증(IPF), 특발 혈소판감소 자색반증, 면역-혈소판감소성자반병(워호프 질병(Morbus Werlhof); ITP), IgA 신장해, 불임, 자가면역 불임, 소아 류머티스 관절염(스틸 질병(Morbus Still), 스틸 증후군), 람베르트 이튼 증후군, 편평태선, 경화성태선, 홍반성 낭창, 전신 홍반성 낭창(SLE), 홍반성 낭창(원반 형태), 라임 관절염(라임병, 보렐리아 관절염), 메니에르병(메니에르병(Morbus Meniere)); 혼합결합조직병(MCTD), 다발성 경화증(MS, 뇌척수염 전파, 샤콧 병), 중증 근무력증(근무력증, MG), 근염, 다발성근염, 신경 자가면역 질환, 신경엽, 심상성천포창, 수포성류천포창, 흉터 형성 류천포창; 결절성다발성동맥염(결절성동맥주위염), 다연골염(전연골염), 다분비선성(자가면역) 증후군 (PGA 증후군, 슈밋 증후군), 류마티스성 다발근육통, 일차 감마글로불린 결여증, 원발담즙성간경변 PBC, 일차 자가면역 담관염), 진행성 전신성 경화증(PSS), 건선, 심상성 건선, 레이노 현상, 라이터 증후군(라이터 질병(Morbus Reiter), 요도 결합 활액 증후군)), 류마티스 관절염(RA, 만성 다발성 관절염, 관절의 류마티스성 질병, 류마티스성 열), 유육종증(보엑 질병(Morbus Boeck), 베스니어-보엑-샤우만 질병), 강직인간 증후군, 피부경화증, 경피증, 쇼그렌 증후군, 교감성 안염; 일시적 글루텐 불내성, 장기 이식 거부, 포도막염, 자가면역 포도막염, 맥관염, 백반(Vitiligo), (백반(leucoderma), 백반(piebold skin)), 및 베게너병(베게너 질병(Morbus Wegner), 베게너 육아종증)으로부터 선택된 자가면역 질병과 관련된 자가 항원으로부터 선택된다.
자가면역 자가항원으로 작용하는 이러한 단백질 및 기타 단백질은, 스스로 포유동물, 예를 들어 인간에 의해 발현되며 건강한 대상체에서는 일어나지 않는, 원치 않는 면역 반응을 유발하는 자가 항원으로 백신 접종을 통해 이들이 대상체, 특히 포유동물, 더욱 특별하게는 인간을 치료하기 위한 것이므로, 치료적으로 이해된다. 따라서, 이러한 자가항원으로 작용하는 단백질은 전형적으로 포유동물, 특히 인간 기원의 것이다.
이러한 맥락에서 특히 바람직한 자가면역 자가항원(자가(auto) 항원)은 다음으로부터 선택된다:
- 다발성 경화증(MS)과 관련된 경우, 수초 염기성 단백질(MBP), 단백지질 단백질(PLP), 및 미엘린 올리고덴드로사이트 당단백질(MOG);
- 제1형 당뇨병과 관련된 경우에, CD44, 인슐린전구물질, 프로인슐린, 인슐린, 글루탐산 디카르복실라제(GAD65), 티로신 인산가수분해효소-유사 인슐린종 항원 2(IA2), 아연 수송체((ZnT8), 및 열충격 단백질 60(HSP60);
- 자가면역 포도막염과 관련된 광수용체 간 레티노이드 결합 단백질(interphotoreceptor retinoid-binding protein, IRBP);
- 중증 근무력증과 관련된 경우, 아세틸콜린 수용체 AchR, 및 인슐린-유사 성장 인자-1 수용체(IGF-1R);
- 류마티스성 열과 관련된 베타-용혈성 스트렙토코커스(슈도-자가항원)로부터의 M-단백질;
- 관절염과 관련된 대식세포 이동 억제 인자;
- 쇼그렌 증후군과 관련된 경우, Ro/La RNP 복합체, 알파- 및 베타-포드린, 섬 세포 자가항원, 폴리(ADP)리보스 중합효소(PARP), NuMA, NOR-90, Ro60 자가항원, 및 p27 항원;
- 홍반성 낭창과 관련된 경우, Ro60 자가항원, 저밀도 지질단백질, U-1 작은 핵 리보핵산단백질 복합체(B/B', D1, D2, D3, E, F, G)의 Sm 항원, 및 RNP 리보핵산단백질;
- 아테롬성 동맥경화증과 관련된 경우, oxLDL, 베타(2)GPI, HSP60/65, 및 oxLDL/베타(2)GPI;
- 특발성 팽창 심근증(DCM)과 관련된 심장 베타(1)-아드레날린 수용체;
- 근염과 관련된 히스티딜-tRNA 합성효소(HisRS);
- 경피증 질병과 관련된 토포이성질화효소 I.
나아가, 다른 구현예에서, 상기 자가면역 자가항원은 상기 자가면역 질환(본 설명에 정의된 임의의 자가면역 질환과 같은) 내 자가면역 반응에 관련된 면역 세포에 의해 발현되는 예를 들어 IL-17, 열충격 단백질, 및/또는 유전자형 병원체성 T 세포 또는 케모카인 수용체와 같은, 각각의 자가면역 질환과 관련이 있다.
바람직하게는, 본 발명에 따른 mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물의 적어도 하나의 암호화 영역은 서열 목록(또는 PCT/EP2016/075843의 각각 표 1 내지 5 또는 도 20 내지 24)에 개시된 핵산 서열 중 임의의 하나, 또는 상기 핼산 서열 중 임의의 하나의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%, 바람직하게는 적어도 70%, 더욱 바람직하게는 적어도 80%, 훨씬 더 바람직하게는 적어도 85%, 훨씬 더 바람직하게는 적어도 90%, 및 가장 바람직하게는 적어도 95% 또는 심지어 97%의 서열 동일성을 갖는, 적어도 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개 이상의 핵산 서열을 포함한다.
바람직하게는, 본 설명에 정의된 바와 같은 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 mRNA 서열은 전형적으로 약 50개 내지 약 20000개, 또는 100개 내지 약 20000개 뉴클레오티드, 바람직하게는 약 250개 내지 약 20000개 뉴클레오티드, 더욱 바람직하게는 약 500개 내지 약 10000개, 훨씬 더 바람직하게는 약 500개 내지 약 5000개의 길이를 포함한다.
추가적인 구현예에 따르면, 본 발명에 따른 mRNA 서열은 본 설명에 정의된 바와 같은 인공 mRNA 서열이다.
추가적인 구현예에 따르면, 본 발명에 따른 mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물은 변형된 mRNA 서열, 바람직하게는 본 설명에 기술된 바와 같은 변형된 mRNA 서열이다. 이러한 맥락에서, 본 설명에 정의된 바와 같은 변형은 바람직하게는 본 발명에 따른 mRNA 서열의 안정화를 가져온다. 따라서, 더욱 바람직하게는, 본 발명은 본 설명에 정의된 바와 같은 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 안정화된 mRNA 서열을 제공한다.
일 구현예에 따르면, 본 발명의 mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물은, 따라서, "안정화된 mRNA 서열", 다시 말하면, (예컨대, 엑소- 또는 엔도-뉴클레아제에 의한) 생체 내 분해에 대해 필수적으로 내성인 mRNA로서 제공될 수 있다. 이러한 안정화는 예를 들어, 본 발명의 mRNA의 변형된 포스페이트 백본에 의해, 달성될 수 있다. 본 발명과 관련된 백본 변형은 mRNA에 함유된 뉴클레오티드의 백본의 포스페이트가 화학적으로 변형되는 변형이다. 이러한 관련성으로 바람직하게 사용될 수 있는 뉴클레오티드는 예를 들어, 포스포로티오에이트 변형된 포스페이트 백본, 바람직하게는 포스페이트 백본에 함유된 포스페이트 산소 중 적어도 하나가 황 원자로 교체된 포스포로티오에이트 변형된 포스페이트 백본을 함유한다. 안정화된 mRNA는 예를 들어: 전하를 띤 포스포네이트 산소가 알킬 또는 아릴 기로 교체된 알킬 및 아릴 포스포네이트와 같은 비-이온성 포스페이트 유사체, 또는 전하를 띤 산소 잔기가 알킬화된 형태로 존재하는 포스포디에스테르 및 알킬포스포트리에스테르를 추가로 포함할 수 있다. 이러한 백본 변형은 전형적으로 메틸포스포네이트, 포스포라미데이트 및 포스포로티오에이트(예를 들어 시티딘-5'-O-(1-티오포스페이트))로 구성된 군으로부터의 변형을 포함할 수 있으나, 임의의 제한을 내포하지는 않는다.
다음에서, 바람직하게 본 설명에 정의된 바와 같은 mRNA를 "안정화"할 수 있는 특정한 변형을 기술하였다.
화학적 변형:
본 설명에 사용된 용어 "mRNA 변형"은 백본 변형뿐만 아니라 당 변형 또는 염기 변형도 포함하는 화학적 변형을 지칭할 수 있다.
이러한 맥락에서, 본 설명에 정의된 바와 같은 변형된 mRNA(서열)는 뉴클레오티드 유사체/변형, 예를 들어 백본 변형, 당 변형 또는 염기 변형을 함유할 수 있다. 본 발명과 관련된 백본 변형은 본 설명에 정의된 mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물에 함유된 뉴클레오티드의 백본의 포스페이트가 화학적으로 변형되는 변형이다. 본 발명과 관련된 당 변형은 본 설명에 정의된 mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물의 뉴클레오티드의 당의 화학적 변형이다. 나아가, 본 발명과 관련된 염기 변형은 mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물의 뉴클레오티드의 염기의 화학적 변형이다. 이러한 맥락에서, 뉴클레오티드 유사체 또는 변형은 바람직하게는 전사 및/또는 번역을 위해 적용 가능한 뉴클레오티드 유사체로부터 선택된다.
당 변형:
본 설명에 기술된 바와 같은 mRNA 서열을 포함하는 변형된 mRNA 화합물 내로 혼입될 수 있는 변형된 뉴클레오시드 및 뉴클레오티드는 당 모이어티에서 변형될 수 있다. 예를 들어, 2' 하이드록실 기(OH)는 다수의 상이한 "옥시" 또는 "데옥시" 치환기로 변형되거나 교체될 수 있다. "옥시"-2' 하이드록실 기 변형의 예로는 알콕시 또는 알릴옥시(-OR, 예를 들어, R = H, 알킬, 시클로알킬, 아릴, 아르알킬, 헤테로아릴 또는 당); 폴리에틸렌글리콜(PEG), -O(CH2CH2O)nCH2CH2OR; 동일한 리보스 당의 4' 탄소에, 예를 들어 메틸렌 가교에 의해, 2'하이드록실이 연결된 "잠긴(locked)" 핵산(LNA); 및 아미노 기(-O-아미노, 이때, 아미노 기, 예를 들어 NRR은 알킬아미노, 디알킬아미노, 헤테로사이클릴, 아릴아미노, 디아릴아미노, 헤테로아릴아미노, 또는 디헤테로아릴 아미노, 에틸렌 디아민, 폴리아미노일 수 있음) 또는 아미노알콕시를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
"데옥시" 변형은 수소, 아미노(예를 들어 NH2; 알킬아미노, 디알킬아미노, 헤테로사이클릴, 아릴아미노, 디아릴아미노, 헤테로아릴 아미노, 디헤테로아릴 아미노, 또는 아미노산)를 포함하거나; 아미노 기가 링커를 통해 당에 부착될 수 있으며, 이때, 링커는 원자 C, N, 및 O 중 하나 이상을 포함한다.
당 기는 또한, 리보스 내 상응하는 탄소에 비해 반대의 입체 화학적 배치를 갖는 하나 이상의 탄소를 함유할 수 있다. 따라서, 변형된 mRNA는 예를 들어 당과 같은 아라비노스를 함유하는 뉴클레오티드를 포함할 수 있다.
백본 변형:
포스페이트 백본은 본 설명에 기술된 바와 같은 mRNA 서열을 포함하는 변형된 mRNA 화합물 내로 혼입될 수 있는, 변형된 뉴클레오시드 및 뉴클레오티드에서 추가적으로 변형될 수 있다. 백본의 포스페이트 기는 산소 원자 중 하나 이상을 다른 치환기로 교체함으로써 변형될 수 있다. 또한, 변형된 뉴클레오시드 및 뉴클레오티드는 비변형된 포스페이트 모이어티의 본 설명에 기술된 변형된 포스페이트로의 완전한 교체를 포함할 수 있다. 변형된 포스페이트 기의 예로는 포스포로티오에이트, 포스포로셀레네이트, 보라노 포스페이트, 보라노 포스페이트 에스테르, 하이드로겐 포스포네이트, 포스포로아미데이트, 알킬 또는 아릴 포스포네이트 및 포스포트리에스테르를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 포스포로디티오에이트는 황에 의해 교체된 양쪽 비-연결 산소를 갖는다. 포스페이트 링커는 또한, 연결 산소의 질소(가교된 포스포로아미데이트), 황(가교된 포스포로티오에이트) 및 탄소(가교된 메틸렌-포스포네이트)로의 치환에 의해 변형될 수 있다.
염기 변형:
본 설명에 기술된 바와 같은 mRNA 서열을 포함하는 변형된 mRNA 화합물 내로 혼입될 수 있는 변형된 뉴클레오시드 및 뉴클레오티드는 핵염기 모이어티에서 추가적으로 변형될 수 있다. mRNA에서 발견된 핵염기의 예로는 아데닌, 구아닌, 시토신 및 우라실을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 예를 들어, 본 설명에 기술된 뉴클레오시드 및 뉴클레오티드는 메이저 그루브(major groove) 페이스에서 화학적으로 변형될 수 있다. 일부 구현예에서, 메이저 그루브 화학적 변형은 아미노 기, 티올 기, 알킬 기, 또는 할로 기를 포함할 수 있다.
본 발명의 특히 바람직한 구현예에서, 뉴클레오티드 유사체/변형은 바람직하게는 2-아미노-6-클로로퓨린리보사이드-5'-트리포스페이트, 2-아미노퓨린-리보사이드-5'-트리포스페이트; 2-아미노아데노신-5'-트리포스페이트, 2'-아미노-2'-데옥시시티딘-트리포스페이트, 2-티오시티딘-5'-트리포스페이트, 2-티오우리딘-5'-트리포스페이트, 2'-플루오로티미딘-5'-트리포스페이트, 2'-O-메틸-이노신-5'-트리포스페이트 4-티오우리딘-5'-트리포스페이트, 5-아미노알릴시티딘-5'-트리포스페이트, 5-아미노알릴우리딘-5'-트리포스페이트, 5-브로모시티딘-5'-트리포스페이트, 5-브로모우리딘-5'-트리포스페이트, 5-브로모-2'-데옥시시티딘-5'-트리포스페이트, 5-브로모-2'-데옥시우리딘-5'-트리포스페이트, 5-요오도시티딘-5'-트리포스페이트, 5-요오도-2'-데옥시시티딘-5'-트리포스페이트, 5-요오도우리딘-5'-트리포스페이트, 5-요오도-2'-데옥시우리딘-5'-트리포스페이트, 5-메틸시티딘-5'-트리포스페이트, 5-메틸우리딘-5'-트리포스페이트, 5-프로피닐-2'-데옥시시티딘-5'-트리포스페이트, 5-프로피닐-2'-데옥시우리딘-5'-트리포스페이트, 6-아자시티딘-5'-트리포스페이트, 6-아자우리딘-5'-트리포스페이트, 6-클로로퓨린리보사이드-5'-트리포스페이트, 7-데아자아데노신-5'-트리포스페이트, 7-데아자구아노신-5'-트리포스페이트, 8-아자아데노신-5'-트리포스페이트, 8-아지도아데노신-5'-트리포스페이트, 벤지미다졸-리보사이드-5'-트리포스페이트, N1-메틸아데노신-5'-트리포스페이트, N1-메틸구아노신-5'-트리포스페이트, N6-메틸아데노신-5'-트리포스페이트, O6-메틸구아노신-5'-트리포스페이트, 슈도우리딘-5'-트리포스페이트, 또는 퓨로마이신-5'-트리포스페이트, 잔토신-5'-트리포스페이트로부터 선택되는 염기 변형으로부터 선택된다. 특히 바람직한 것은 5-메틸시티딘-5'-트리포스페이트, 7-데아자구아노신-5'-트리포스페이트, 5-브로모시티딘-5'-트리포스페이트, 및 슈도우리딘-5'-트리포스페이트로 구성된 염기 변형된 뉴클레오티드의 군으로부터 선택된 염기 변형에 대한 뉴클레오티드이다.
일부 구현예에서, 변형된 뉴클레오시드는 피리딘-4-온 리보뉴클레오시드, 5-아자-우리딘, 2-티오-5-아자-우리딘, 2-티오우리딘, 4-티오-슈도우리딘, 2-티오-슈도우리딘, 5-하이드록시우리딘, 3-메틸우리딘, 5-카르복시메틸-우리딘, 1-카르복시메틸-슈도우리딘, 5-프로피닐-우리딘, 1-프로피닐-슈도우리딘, 5-타우리노메틸우리딘, 1-타우리노메틸-슈도우리딘, 5-타우리노메틸-2-티오-우리딘, 1-타우리노메틸-4-티오-우리딘, 5-메틸-우리딘, 1-메틸-슈도우리딘, 4-티오-1-메틸-슈도우리딘, 2-티오-1-메틸-슈도우리딘, 1-메틸-1-데아자-슈도우리딘, 2-티오-1-메틸-1-데아자-슈도우리딘, 디하이드로우리딘, 디하이드로슈도우리딘, 2-티오-디하이드로우리딘, 2-티오-디하이드로슈도우리딘, 2-메톡시우리딘, 2-메톡시-4-티오-우리딘, 4-메톡시-슈도우리딘, 및 4-메톡시-2-티오-슈도우리딘을 포함한다.
일부 구현예에서, 변형된 뉴클레오시드는 5-아자-시티딘, 슈도이소시티딘, 3-메틸-시티딘, N4-아세틸시티딘, 5-포밀시티딘, N4-메틸시티딘, 5-하이드록시메틸시티딘, 1-메틸-슈도이소시티딘, 피롤로-시티딘, 피롤로-슈도이소시티딘, 2-티오-시티딘, 2-티오-5-메틸-시티딘, 4-티오-슈도이소시티딘, 4-티오-1-메틸-슈도이소시티딘, 4-티오-1-메틸-1-데아자-슈도이소시티딘, 1-메틸-1-데아자-슈도이소시티딘, 제부라린(zebularine), 5-아자-제부라린, 5-메틸-제부라린, 5-아자-2-티오-제부라린, 2-티오-제부라린, 2-메톡시-시티딘, 2-메톡시-5-메틸-시티딘, 4-메톡시-슈도이소시티딘 및 4-메톡시-l-메틸-슈도이소시티딘을 포함한다.
다른 구현예에서, 변형된 뉴클레오시드는 2-아미노퓨린, 2, 6-디아미노퓨린, 7-데아자-아데닌, 7-데아자-8-아자-아데닌, 7-데아자-2-아미노퓨린, 7-데아자-8-아자-2-아미노퓨린, 7-데아자-2,6-디아미노퓨린, 7-데아자-8-아자-2,6-디아미노퓨린, 1-메틸아데노신, N6-메틸아데노신, N6-이소펜틸아데노신, N6-(시스-하이드록시이소펜틸)아데노신, 2-메틸티오-N6-(시스-하이드록시이소펜테닐) 아데노신, N6-글리시닐카르바모일아데노신, N6-트레오닐카르바모일아데노신, 2-메틸티오-N6-트레오닐 카르바모일아데노신, N6,N6-디메틸아데노신, 7-메틸아데닌, 2-메틸티오-아데닌, 및 2-메톡시-아데닌을 포함한다.
다른 구현예에서, 변형된 뉴클레오시드는 이노신, 1-메틸-이노신, 위오신, 위부토신, 7-데아자-구아노신, 7-데아자-8-아자-구아노신, 6-티오-구아노신, 6-티오-7-데아자-구아노신, 6-티오-7-데아자-8-아자-구아노신, 7-메틸-구아노신, 6-티오-7-메틸-구아노신, 7-메틸이노신, 6-메톡시-구아노신, 1-메틸구아노신, N2-메틸구아노신, N2,N2-디메틸구아노신, 8-옥소-구아노신, 7-메틸-8-옥소-구아노신, 1-메틸-6-티오-구아노신, N2-메틸-6-티오-구아노신, 및 N2,N2-디메틸-6-티오-구아노신을 포함한다.
일부 구현예에서, 뉴클레오티드는 메이저 그루브 페이스에서 변형될 수 있으며 우라실의 C-5에서 수소의 메틸 기 또는 할로 기로의 교체를 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 변형된 뉴클레오시드는 5'-O-(1-티오포스페이트)-아데노신, 5'-O-(1-티오포스페이트)-시티딘, 5'-O-(1-티오포스페이트)-구아노신, 5'-O-(1-티오포스페이트)-우리딘 또는 5'-O-(1-티오포스페이트)-슈도우리딘이다.
추가적인 특정 구현예에서, 변형된 mRNA는 6-아자-시티딘, 2-티오-시티딘, α-티오-시티딘, 슈도-이소-시티딘, 5-아미노알릴-우리딘, 5-요오도-우리딘, N1-메틸-슈도우리딘, 5,6-디하이드로우리딘, α-티오-우리딘, 4-티오-우리딘, 6-아자-우리딘, 5-하이드록시-우리딘, 데옥시-티미딘, 5-메틸-우리딘, 피롤로-시티딘, 이노신, α-티오-구아노신, 6-메틸-구아노신, 5-메틸-시티딘, 8-옥소-구아노신, 7-데아자-구아노신, N1-메틸-아데노신, 2-아미노-6-클로로-퓨린, N6-메틸-2-아미노-퓨린, 슈도-이소-시티딘, 6-클로로-퓨린, N6-메틸-아데노신, α-티오-아데노신, 8-아지도-아데노신, 7-데아자-아데노신으로부터 선택된 뉴클레오시드 변형을 포함할 수 있다.
본 발명의 매우 구체적인 구현예에서, mRNA 화합물은 위에 기술된 바와 같은 염기 변형을 포함하지 않는다.
지질 변형:
추가적인 구현예에 따르면, 본 설명에 정의된 바와 같은 mRNA 서열을 포함하는 변형된 mRNA 화합물은 지질 변형을 함유할 수 있다. 이러한 지질 변형된 mRNA는 전형적으로 본 설명에 정의된 mRNA를 포함한다. 본 설명에 정의된 이러한 지질 변형된 mRNA는 전형적으로 mRNA와 공유 결합된 적어도 하나의 링커, 및 각각의 링커와 공유 결합된 적어도 하나의 지질을 추가적으로 포함한다. 대안적으로, 지질 변형된 mRNA는 본 설명에 정의된 적어도 하나의 mRNA 및 그 mRNA와 (링커 없이) 공유 결합된 적어도 하나의 (이기능성) 지질을 포함한다. 제3의 대안에 따르면, 지질 변형된 mRNA는 본 설명에 정의된 mRNA 분자, 그 mRNA와 공유 결합된 적어도 하나의 링커, 및 각각의 링커에 공유 결합된 적어도 하나의 지질, 및 또한, 그 mRNA와 (링커 없이) 공유 결합된 적어도 하나의 (이기능성) 지질을 포함한다. 이러한 맥락에서, 지질 변형은 선형 mRNA 서열의 말단에 존재하는 것이 특히 바람직하다.
서열 변형:
G/C 함량 변형:
또 다른 구현예에 따르면, mRNA를 포함하는 지질 나노입자는, 변형될 수 있으며 따라서 mRNA 서열의, 바람직하게는 본 발명의 mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물의 적어도 하나의 암호화 영역의, 구아노신/시토신(G/C) 함량을 변형시킴으로서 안정화될 수 있는, mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물을 포함한다.
본 발명의 특히 바람직한 구현예에서, 본 발명의 mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물의 암호화 영역의 G/C 함량은, 각각의 야생형 mRNA, 즉, 비변형 mRNA의 암호화 영역의 G/C 함량과 비교하여, 변형되고, 특히 증가된다. mRNA에 의해 암호화된 아미노산 서열은 각각의 야생형 mRNA에 의해 암호화된 아미노산 서열과 비교하여 바람직하게는 변형되지 않는다. 본 발명의 mRNA 서열의 이러한 변형은, 번역될 임의의 mRNA 영역의 서열이 그 mRNA의 효율적인 번역에 중요하다는 사실을 기초로 한다. 따라서, mRNA의 조성 및 다양한 뉴클레오티드의 서열이 중요하다. 특히, 증가된 G(구아노신)/C(시토신) 함량을 갖는 서열은 증가된 A(아데노신)/U(우라실) 함량을 갖는 서열보다 더욱 안정적이다. 따라서, 본 발명에 따르면, 이 mRNA의 코돈은 각각의 야생형 mRNA와 비교하여 다양하지만, 번역된 아미노산 서열은 보유하며, 그 결과 증가된 양의 G/C 뉴클레오티드를 포함한다. 여러 코돈이 하나의, 동일한 아미노산을 암호화한다는 사실과 관련하여(소위 유전자 암호의 축퇴), 안정성을 위하여 가장 바람직한 코돈이 결정될 수 있다(소위 대안적 코돈 사용빈도). mRNA에 의해 암호화되는 아미노산에 따라, 야생형 서열과 비교하여 mRNA 서열의 변형에는 다양한 가능성이 있다. 오로지 G 또는 C 뉴클레오티드만을 함유하는 코돈에 의해 암호화되는 아미노산의 경우, 코돈의 변형은 필수적이지 않다. 따라서, Pro(CCC 또는 CCG), Arg(CGC 또는 CGG), Ala(GCC 또는 GCG) 및 Gly(GGC 또는 GGG)에 대한 코돈은 A 및 U가 존재하지 않으므로 변형을 필요로 하지 않는다. 대조적으로, A 및/또는 U 뉴클레오티드를 함유하는 코돈은 동일한 아미노산을 암호화하지만 A 및/또는 U를 포함하지 않는 다른 코돈의 치환에 의해 변형될 수 있다. 이들의 예는 다음과 같다: Pro에 대한 코돈은 CCU 또는 CCA에서 CCC 또는 CCG로 변형될 수 있으며; Arg에 대한 코돈은 CGU 또는 CGA 또는 AGA 또는 AGG에서 CGC 또는 CGG로 변형될 수 있으며; Ala에 대한 코돈은 GCU 또는 GCA에서 GCC 또는 GCG로 변형될 수 있으며; Gly에 대한 코돈은 GGU 또는 GGA에서 GGC 또는 GGG로 변형될 수 있다. 다른 경우에서, A 또는 U 뉴클레오티드가 코돈으로부터 제거될 수는 없지만, 낮은 함량의 A 및/또는 U 뉴클레오티드를 함유하는 코돈을 사용함으로써 A 및 U 함량을 감소시킬 수 있다. 이들의 예는 다음과 같다: Phe에 대한 코돈은 UUU에서 UUC로 변형될 수 있으며; Leu에 대한 코돈은 UUA, UUG, CUU 또는 CUA에서 CUC 또는 CUG로 변형될 수 있으며; Ser에 대한 코돈은 UCU 또는 UCA 또는 AGU에서 UCC, UCG 또는 AGC로 변형될 수 있으며; Tyr에 대한 코돈은 UAU에서 UAC로 변형될 수 있으며; Cys에 대한 코돈은 UGU에서 UGC로 변형될 수 있으며; His에 대한 코돈은 CAU에서 CAC로 변형될 수 있으며; Gln에 대한 코돈은 CAA에서 CAG로 변형될 수 있으며; Ile에 대한 코돈은 AUU 또는 AUA에서 AUC로 변형될 수 있으며; Thr에 대한 코돈은 ACU 또는 ACA에서 ACC 또는 ACG로 변형될 수 있으며; Asn에 대한 코돈은 AAU에서 AAC로 변형될 수 있으며; Lys에 대한 코돈은 AAA에서 AAG로 변형될 수 있으며; Val에 대한 코돈은 GUU 또는 GUA에서 GUC 또는 GUG로 변형될 수 있으며; Asp에 대한 코돈은 GAU에서 GAC로 변형될 수 있으며; Glu에 대한 코돈은 GAA에서 GAG로 변형될 수 있으며; 정지 코돈 UAA는 UAG 또는 UGA로 변형될 수 있다. 반면, Met(AUG) 및 Trp(UGG)에 대한 코돈의 경우, 서열 변형의 가능성은 없다. 특정한 야생형 mRNA(즉 본래 서열)와 비교하여 본 발명의 mRNA 서열의 G/C 함량을 증가시키기 위하여, 위에 열거된 치환이 독립적으로 또는 모든 가능한 조합으로 이용될 수 있다. 따라서, 예를 들어, 야생형 서열에 존재하는 Thr에 대한 모든 코돈은 ACC(또는 ACG)로 변형될 수 있다. 그러나 바람직하게는, 예를 들어, 위의 치환 가능성의 조합이 사용된다:
본래 서열(야생형 mRNA)에서 Thr을 암호화하는 모든 코돈의 ACC(또는 ACG)로의 치환 및
본래 Ser을 암호화하는 모든 코돈의 UCC(또는 UCG 또는 AGC)로의 치환;
본래 서열에서 Ile을 암호화하는 모든 코돈의 AUC로의 치환 및
본래 Lys을 암호화하는 모든 코돈의 AAG로의 치환 및
본래 Tyr을 암호화하는 모든 코돈의 UAC로의 치환;
본래 서열에서 Val을 암호화하는 모든 코돈의 GUC(또는 GUG)로의 치환 및
본래 Glu를 암호화하는 모든 코돈의 GAG로의 치환 및
본래 Ala을 암호화하는 모든 코돈의 GCC(또는 GCG)로의 치환 및
본래 Arg을 암호화하는 모든 코돈의 CGC(또는 CGG)로의 치환;
본래 서열에서 Val을 암호화하는 모든 코돈의 GUC(또는 GUG)로의 치환 및
본래 Glu를 암호화하는 모든 코돈의 GAG로의 치환 및
본래 Ala을 암호화하는 모든 코돈의 GCC(또는 GCG)로의 치환 및
본래 Gly을 암호화하는 모든 코돈의 GGC(또는 GGG)로의 치환 및
본래 Asn을 암호화하는 모든 코돈의 AAC로의 치환;
본래 서열에서 Val을 암호화하는 모든 코돈의 GUC(또는 GUG)로의 치환 및
본래 Phe을 암호화하는 모든 코돈의 UUC로의 치환 및
본래 Cys을 암호화하는 모든 코돈의 UGC로의 치환 및
본래 Leu을 암호화하는 모든 코돈의 CUG(또는 CUC)로의 치환 및
본래 Gln을 암호화하는 모든 코돈의 CAG로의 치환 및
본래 Pro을 암호화하는 모든 코돈의 CCC(또는 CCG)로의 치환; 등.
바람직하게는, 본 발명의 mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물의 암호화 영역의 G/C 함량은, 본 설명에 정의된 바와 같은 항원 또는 이의 단편 또는 변이체를 암호화하는 야생형 RNA의 암호화 영역의 G/C 함량과 비교하여, 적어도 7%, 더욱 바람직하게는 적어도 15%, 특별히 바람직하게는 적어도 20% 증가된다. 특정 구현예에 따르면, 본 설명에 정의된 바와 같은 펩티드 또는 단백질 또는 이의 단편 또는 변이체 또는 야생형 mRNA 서열의 전체 서열을 암호화하는 영역 내의 치환 가능한 코돈의 적어도 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 더욱 바람직하게는 적어도 70 %, 훨씬 더 바람직하게는 적어도 80% 및 가장 바람직하게는 적어도 90%, 95% 또는 심지어 100%가 치환되며, 그에 의해 상기 서열의 GC/함량을 증가시킨다. 이러한 맥락에서, 야생형 서열과 비교하여, 바람직하게는 본 발명에 따른 mRNA 서열의 적어도 하나의 암호화 영역의, 본 발명의 mRNA 서열의 G/C 함량을 최대치(즉 치환 가능한 코돈의 100%)까지 증가시키는 것이 특히 바람직하다. 본 발명에 따르면, 본 발명의 mRNA 서열의 추가적인 바람직한 변형은, 번역 효율이 세포에서의 상이한 tRNA의 존재 빈도에 의해서도 결정된다는 발견을 기초로 한다. 따라서, 소위 "드문 코돈"이 본 발명의 mRNA 서열에서 증가된 정도로 존재할 경우, 상응하는 변형된 mRNA 서열은 상대적으로 "흔한" tRNA를 암호화하는 코돈이 존재하는 경우보다는 현저하게 낮은 정도로 번역된다. 본 발명에 따르면, 본 발명의 변형된 mRNA 서열에서, 본 설명에 정의된 바와 같은 펩티드 또는 단백질 또는 이의 단편 또는 변이체를 암호화하는 영역은 야생형 mRNA의 상응하는 영역에 비해 변형되며, 그 결과, 세포에서 상대적으로 드문 tRNA를 암호화하는 야생형 서열의 적어도 하나의 코돈이, 세포에서 상대적으로 흔한 tRNA를 암호화하고 상대적으로 드문 tRNA와 동일한 아미노산을 수송하는 코돈으로 교환된다. 이러한 변형에 의해, 본 발명의 mRNA의 서열이 변형되어, 빈번하게 발생하는 tRNA가 가능한 코돈이 삽입된다. 환언하면, 본 발명에 따르면, 이러한 변형에 의해, 세포에 상대적으로 드문 tRNA를 암호화하는 야생형 서열의 모든 코돈은, 각 경우에 세포에서 상대적으로 흔한 tRNA를 암호화하며 각 경우에 상대적으로 드문 tRNA와 동일한 아미노산을 수송하는 코돈으로 교환될 수 있다. 세포에서 상대적으로 빈번하게 존재하는 tRNA 및 대조적으로 상대적으로 드문 tRNA는 당업자에게 공지되어 있다; 예를 들어 Akashi, Curr. Opin. Genet. Dev. 2001, 11(6): 660-666 참조. 특정 아미노산을 위하여 가장 흔하게 존재하는 tRNA를 사용하는 코돈, 예를 들어 (인간) 세포에 가장 흔하게 존재하는 tRNA를 사용하는 Gly 코돈이 특히 바람직하다. 본 발명에 따르면, mRNA의 암호화 영역에 의해 암호화된 단백질의 아미노산 서열을 변형시키지 않으면서, 본 발명의 변형된 mRNA 서열에서 증가된, 특히 최대화된, 순차적 G/C 함량을 "흔한" 코돈과 연결시키는 것이 특히 바람직하다. 이러한 바람직한 구현예는, 본 발명의 특히 효율적으로 번역되고 안정화된 (변형된) mRNA 서열 제공을 가능하게 한다. 위에 기술된 본 발명의 변형된 mRNA(증가된 G/C 함량; tRNA의 교환)의 결정은 (개시된 내용이 본 발명에 전체 범위에 포함되는) WO02/098443에 설명된 컴퓨터 프로그램을 이용하여 수행될 수 있다. 이 컴퓨터 프로그램을 이용하여, 임의의 원하는 mRNA 서열의 뉴클레오티드 서열은 유전자 암호 또는 이의 축퇴적 특성의 도움으로 변형될 수 있으며, 그 결과, 최대 G/C 함량은, 세포에서 가능한 한 흔하게 존재하는 tRNA를 암호화하는 코돈의 사용과 조합되어, 비변형 서열과 비교하여 바람직하게는 변형되지 않은, 변형된 mRNA 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열을 생산한다. 대안적으로, 본래 서열과 비교하여 G/C 함량만을 또는 코돈 사용빈도만을 변경하는 것도 가능하다. 비주얼 베이직 6.0의 소스 코드(사용된 개발 환경: Microsoft Visual Studio Enterprise 6.0 with Servicepack 3) 또한, WO02/098443에 기술되어 있다. 본 발명의 추가적인 바람직한 구현예에서, 본 발명의 mRNA 서열의 리보솜 결합 부위의 환경에서 A/U 함량은 각각의 야생형 mRNA의 리보솜 결합 부위의 환경에서 A/U 함량에 비해 증가된다. 이러한 변형(리보솜 결합 부위 주변에서의 증가된 A/U 함량)은 mRNA에 대한 리보솜 결합 효율을 증가시킨다. 리보솜 결합 부위에 대한 리보솜의 효과적인 결합(코작(Kozak) 서열: 서열번호 224307 또는 서열번호 224308, AUG는 개시 코돈을 형성함)은 결국 mRNA의 효율적인 번역 효과를 나타낸다. 본 발명의 추가적인 구현예에 따르면, 본 발명의 mRNA 서열은 잠재적으로 불안정화하는 서열 요소에 대해 변형될 수 있다. 특히, 이러한 mRNA 서열의 암호화 영역 및/또는 5' 및/또는 3' 비번역된 영역은 각각의 야생형 mRNA에 비해 불안정화 서열 요소를 함유하지 않도록 변형될 수 있으며, 변형된 mRNA의 암호화된 아미노산 서열은 바람직하게는 각각의 야생형 mRNA에 비해 변형되지 않는다. 예를 들어, 진핵생물 mRNA의 서열에서는, 신호 단백질이 결합하여 생체 내에서 mRNA의 효소적 분해를 조절하는 불안정화 서열 요소(DSE)가 존재한다는 점이 알려져 있다. 따라서, 변형된 mRNA 서열의 추가적인 안정화를 위하여, 선택적으로 본 설명에 정의된 바와 같은 적어도 하나의 펩티드 또는 단백질 또는 이의 단편 또는 변이체를 암호화하는 영역에서, 야생형 mRNA의 상응하는 영역에 비해 하나 이상의 이러한 변형이 수행될 수 있으며, 그 결과 불안정화 서열 요소는 그 안에 전혀 또는 실질적으로 전혀 함유되지 않는다. 본 발명에 따르면, 비번역된 영역(3'- 및/또는 5'-UTR)에 존재하는 DSE 또한, 이러한 변형에 의해 본 발명의 mRNA 서열로부터 제거될 수 있다. 이러한 불안정화 서열은, 예를 들어 다수의 불안정한 mRNA의 3'-UTR 섹션에 존재하는 AU-풍부 서열(AURES)이다(Caput et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1986, 83: 1670 내지 1674). 따라서, 본 발명의 mRNA 서열은 본 발명의 mRNA 서열이 이러한 불안정화 서열을 함유하지 않도록 각각의 야생형 mRNA에 비해 바람직하게는 변형된다. 이는 가능한 엔도뉴클레아제에 의해 인식되는 이러한 서열 모티브, 예를 들어 트랜스페린 수용체를 암호화하는 유전자의 3'-UTR 세그먼트에 함유된 서열 GAACAAG에도 적용된다(Binder et al., EMBO J. 1994, 13: 1969 내지 1980). 이들 서열 모티브는 또한, 바람직하게는 본 발명의 mRNA 서열에서 제거된다.
바람직한 구현예에 따르면, 본 발명은 mRNA를 포함하는 지질 나노입자를 제공하는데, 이때, mRNA는 적어도 하나의 암호화 서열을 포함하는 본 설명에 정의된 바와 같은 mRNA 서열을 포함하며, 이 암호화 영역은 "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt1)", "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt2)", "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt3)", "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt4)", 또는 "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt5)"로 시작하는 숫자 식별기호 <223>을 갖는 서열 목록 또는 각각 PCT/EP2016/075843의 표 1 내지 5 또는 도 20 내지 24의 "C열"에 개시된 (변형된) RNA 서열 중 임의의 하나 또는 이들 서열 중 임의의 하나의 단편 또는 변이체를 포함하거나 이로 구성된다.
특히 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명은 mRNA를 포함하는 지질 나노입자를 제공하는데, 이때, mRNA는 인플루엔자 A 바이러스의 헤마글루티닌(HA)으로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 본 설명에 정의된 바와 같은 mRNA 서열을 포함하며, 이 암호화 영역은 서열번호 64025 내지 78055, 224085 내지 224106, 192073 내지 206103에 따른 (변형된) RNA 서열 중 임의의 하나 또는 이들 서열 중 임의의 하나의 단편 또는 변이체를 포함하거나 이로 구성된다.
추가적인 특히 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명은 mRNA를 포함하는 지질 나노입자를 제공하는데, 이때, mRNA는 인플루엔자 B 바이러스의 헤마글루티닌(HA)으로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 본 설명에 정의된 바와 같은 mRNA 서열을 포함하며, 이 암호화 영역은 서열번호 90422 내지 92600, 224107 내지 224112, 218470 내지 220648에 따른 (변형된) RNA 서열 중 임의의 하나 또는 이들 서열 중 임의의 하나의 단편 또는 변이체를 포함하거나 이로 구성된다.
추가적인 특히 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명은 mRNA를 포함하는 지질 나노입자를 제공하는데, 이때, mRNA는 인플루엔자 A 바이러스의 뉴라미니다제(NA)로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 본 설명에 정의된 바와 같은 mRNA 서열을 포함하며, 이 암호화 영역은 서열번호 78056 내지 90421, 224113, 224313 내지 224317, 206104 내지 218469에 따른 (변형된) RNA 서열 중 임의의 하나 또는 이들 서열 중 임의의 하나의 단편 또는 변이체를 포함하거나 이로 구성된다.
추가적인 특히 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명은 mRNA를 포함하는 지질 나노입자를 제공하는데, 이때, mRNA는 인플루엔자 B 바이러스의 뉴라미니다제(NA)로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 본 설명에 정의된 바와 같은 mRNA 서열을 포함하며, 이 암호화 영역은 서열번호 92601 내지 94528, 220649 내지 222576에 따른 (변형된) RNA 서열 중 임의의 하나 또는 이들 서열 중 임의의 하나의 단편 또는 변이체를 포함하거나 이로 구성된다.
추가적인 특히 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명은 mRNA를 포함하는 지질 나노입자를 제공하는데, 이때, mRNA는 광견병 바이러스의 당단백질로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 본 설명에 정의된 바와 같은 mRNA 서열을 포함하며, 이 암호화 영역은 서열번호 94529 내지 96036, 224271 내지 224273, 222577 내지 224084에 따른 (변형된) RNA 서열 중 임의의 하나 또는 이들 서열 중 임의의 하나의 단편 또는 변이체를 포함하거나 이로 구성된다.
추가적인 바람직한 구현예에서, 본 발명에 따른 mRNA 서열의 적어도 하나의 암호화 영역은 서열번호 64025 내지 96036, 192073 내지 224084에 따른 (변형된) RNA 서열 중 임의의 하나 또는 이들 서열 중 임의의 하나의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%, 바람직하게는 적어도 70%, 더욱 바람직하게는 적어도 80%, 훨씬 더 바람직하게는 적어도 85%, 훨씬 더 바람직하게는 적어도 90% 및 가장 바람직하게는 적어도 95% 또는 심지어 97%의 서열 동일성을 갖는 RNA 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
특히 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명에 따른 mRNA 서열의 적어도 하나의 암호화 영역은 서열번호 64025 내지 96036, 192073 내지 224084에 따른 (변형된) RNA 서열 중 임의의 하나 또는 이들 서열 중 임의의 하나의 단편 또는 변이체와 적어도 80%의 서열 동일성을 갖는 RNA 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
인간 코돈 사용빈도에 적합화된 서열:
본 발명에 따르면, 본 발명의 mRNA를 포함하는 지질 나노입자의 mRNA 안에 포함된 mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물의 추가적인 바람직한 변형은, 동일한 아미노산을 암호화하는 코돈이 전형적으로 상이한 빈도로 발생한다는 발견을 기반으로 한다. 본 발명에 따르면, 본 발명의 mRNA 서열을 포함하는 변형된 mRNA 화합물에서, 본 설명에 정의된 바와 같은 암호화 영역은 바람직하게는, 각각의 야생형 mRNA의 상응하는 암호화 영역에 비해, 동일한 아미노산을 암호화하는 코돈의 빈도가 예컨대, 표 1a(인간 코돈 사용빈도 표)에 나타난 바와 같이 인간 코돈 사용빈도에 따른 그 코돈의 자연 발생적인 빈도에 상응하도록 변형된다.
예를 들어, 본 발명에 따른 mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물의 적어도 하나의 암호화 영역에 의해 암호화된 아미노산 서열에 존재하는 아미노산 알라닌(Ala)의 경우, 야생형 암호화 영역은 바람직하게는 코돈 "GCC"가 0.40의 빈도로 사용되고, 코돈 "GCT"가 0.28의 빈도로 사용되고, 코돈 "GCA"가 0.22의 빈도로 사용되고, 코돈 "GCG"가 0.10의 빈도로 사용되는 등의 방식으로 적합화된다(표 1a 참조).
[표 1a]
Figure pct00009
바람직한 구현예에 따르면, 본 발명은 mRNA를 포함하는 지질 나노입자를 제공하는데, 이때, mRNA는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 본 설명에 정의된 바와 같은 mRNA 서열을 포함하며, 이 암호화 영역은 서열번호 128049 내지 160060에 따른 (변형된) RNA 서열 중 임의의 하나 또는 이들 서열 중 임의의 하나의 단편 또는 변이체를 포함하거나 이로 구성된다.
특히 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명은 mRNA를 포함하는 지질 나노입자를 제공하는데, 이때, mRNA는 인플루엔자 A 바이러스의 헤마글루티닌(HA)으로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 본 설명에 정의된 바와 같은 mRNA 서열을 포함하며, 이 암호화 영역은 서열번호 128049 내지 142079에 따른 (변형된) RNA 서열 중 임의의 하나 또는 이들 서열 중 임의의 하나의 단편 또는 변이체를 포함하거나 이로 구성된다.
추가적인 특히 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명은 mRNA를 포함하는 지질 나노입자를 제공하는데, 이때, mRNA는 인플루엔자 B 바이러스의 헤마글루티닌(HA)으로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 본 설명에 정의된 바와 같은 mRNA 서열을 포함하며, 이 암호화 영역은 서열번호 154446 내지 156624에 따른 (변형된) RNA 서열 중 임의의 하나 또는 이들 서열 중 임의의 하나의 단편 또는 변이체를 포함하거나 이로 구성된다.
추가적인 특히 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명은 mRNA를 포함하는 지질 나노입자를 제공하는데, 이때, mRNA는 인플루엔자 A 바이러스의 뉴라미니다제(NA)로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 본 설명에 정의된 바와 같은 mRNA 서열을 포함하며, 이 암호화 영역은 서열번호 142080 내지 154445에 따른 (변형된) RNA 서열 중 임의의 하나 또는 이들 서열 중 임의의 하나의 단편 또는 변이체를 포함하거나 이로 구성된다.
추가적인 특히 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명은 mRNA를 포함하는 지질 나노입자를 제공하는데, 이때, mRNA는 인플루엔자 B 바이러스의 뉴라미니다제(NA)로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 본 설명에 정의된 바와 같은 mRNA 서열을 포함하며, 이 암호화 영역은 서열번호 156625 내지 158552에 따른 (변형된) RNA 서열 중 임의의 하나 또는 이들 서열 중 임의의 하나의 단편 또는 변이체를 포함하거나 이로 구성된다.
추가적인 특히 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명은 mRNA를 포함하는 지질 나노입자를 제공하는데, 이때, mRNA는 광견병 바이러스의 당단백질로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 본 설명에 정의된 바와 같은 mRNA 서열을 포함하며, 이 암호화 영역은 서열번호 158553 내지 160060에 따른 (변형된) RNA 서열 중 임의의 하나 또는 이들 서열 중 임의의 하나의 단편 또는 변이체를 포함하거나 이로 구성된다.
추가적인 특히 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명은 mRNA를 포함하는 지질 나노입자를 제공하는데, 이때, mRNA는 에볼라 바이러스로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 본 설명에 정의된 바와 같은 mRNA 서열을 포함하며, 이 암호화 영역은 특허 출원 WO2016097065의 서열번호 20 내지 44에 따른 (변형된) RNA 서열 중 임의의 하나 또는 이들 서열의 단편 또는 변이체를 포함하거나 이로 구성된다. 이러한 맥락에서, WO2016097065의 서열번호 20 내지 44 및 WO2016097065의 서열번호 20 내지 44에 관한 개시 내용은 본 설명에 참조로 포함된다.
추가적인 바람직한 구현예에서, 본 발명에 따른 mRNA 서열의 적어도 하나의 암호화 영역은 서열번호 128049 내지 160060에 따른 (변형된) RNA 서열 중 임의의 하나 또는 이들 서열 중 임의의 하나의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%, 바람직하게는 적어도 70%, 더욱 바람직하게는 적어도 80%, 훨씬 더 바람직하게는 적어도 85%, 훨씬 더 바람직하게는 적어도 90% 및 가장 바람직하게는 적어도 95% 또는 심지어 97%의 서열 동일성을 갖는 RNA 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
특히 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명에 따른 mRNA 서열의 적어도 하나의 암호화 영역은 서열번호 128049 내지 160060에 따른 (변형된) RNA 서열 중 임의의 하나 또는 이들 서열 중 임의의 하나의 단편 또는 변이체와 적어도 80%의 서열 동일성을 갖는 RNA 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
코돈-최적화된 서열:
위에 기술된 바와 같이, 본 발명에 따르면, 세포에서 상대적으로 드문 tRNA를 암호화하는 야생형 서열의 모든 코돈은, 세포에서 상대적으로 흔한 tRNA를 암호화하며 각 경우에 상대적으로 드문 tRNA와 동일한 아미노산을 수송하는 코돈으로 교환되는 것이 바람직하다. 따라서, 가장 빈번한 코돈이 각각의 암호화된 아미노산에 대해 사용되는 것이 특히 바람직하다(표 1a "인간 코돈 사용빈도 표" 참조, 가장 빈번한 코돈은 별표로 표시됨). 이러한 최적화 절차는 코돈 적합화 지수(CAI)를 증가시키며 궁극적으로 CAI를 최대화한다. 본 발명의 맥락에서, 증가된 또는 최대화된 CAI를 갖는 서열은 전형적으로 "코돈-최적화된" 서열 및/또는 CAI 증가된 및/또는 최대화된 서열로 지칭된다. 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물은 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하며, 이때, 이 암호화 영역/서열은 본 설명에 기술된 바와 같이 코돈-최적화된다. 더욱 바람직하게는, 적어도 하나의 암호화 서열의 코돈 적합화 지수(CAI)는 적어도 0.5, 적어도 0.8, 적어도 0.9 또는 적어도 0.95이다. 가장 바람직하게는, 적어도 하나의 암호화 서열의 코돈 적합화 지수(CAI)는 1이다.
예를 들어, 본 발명에 따른 RNA의 적어도 하나의 암호화 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열에 존재하는 아미노산인 알라닌(Ala)의 경우, 야생형 암호화 서열은 가장 빈번한 인간 코돈 "GCC"가 상기 아미노산에 대해 항상 사용되는 방식으로 적합화되며, 또는 아미노산 시스테인(Cys)에 대해, 야생형 서열은 가장 빈번한 인간 코돈 "TGC"가 상기 아미노산에 항상 사용되는 방식으로 적합화되는 것 등이다.
바람직한 구현예에 따르면, 본 발명은 mRNA를 포함하는 지질 나노입자를 제공하는데, 이때, mRNA는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 본 설명에 정의된 바와 같은 mRNA 서열을 포함하며, 이 암호화 영역은 서열번호 160061 내지 192072에 따른 (변형된) RNA 서열 중 임의의 하나 또는 이들 서열 중 임의의 하나의 단편 또는 변이체를 포함하거나 이로 구성된다.
특히 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명은 mRNA를 포함하는 지질 나노입자를 제공하는데, 이때, mRNA는 인플루엔자 A 바이러스의 헤마글루티닌(HA)으로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 본 설명에 정의된 바와 같은 mRNA 서열을 포함하며, 이 암호화 영역은 서열번호 160061 내지 174091에 따른 (변형된) RNA 서열 중 임의의 하나 또는 이들 서열 중 임의의 하나의 단편 또는 변이체를 포함하거나 이로 구성된다.
추가적인 특히 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명은 mRNA를 포함하는 지질 나노입자를 제공하는데, 이때, mRNA는 인플루엔자 B 바이러스의 헤마글루티닌(HA)으로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 본 설명에 정의된 바와 같은 mRNA 서열을 포함하며, 이 암호화 영역은 서열번호 186458 내지 188636에 따른 (변형된) RNA 서열 중 임의의 하나 또는 이들 서열 중 임의의 하나의 단편 또는 변이체를 포함하거나 이로 구성된다.
추가적인 특히 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명은 mRNA를 포함하는 지질 나노입자를 제공하는데, 이때, mRNA는 인플루엔자 A 바이러스의 뉴라미니다제(NA)로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 본 설명에 정의된 바와 같은 mRNA 서열을 포함하며, 이 암호화 영역은 서열번호 174092 내지 186457에 따른 (변형된) RNA 서열 중 임의의 하나 또는 이들 서열 중 임의의 하나의 단편 또는 변이체를 포함하거나 이로 구성된다.
추가적인 특히 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명은 mRNA를 포함하는 지질 나노입자를 제공하는데, 이때, mRNA는 인플루엔자 B 바이러스의 뉴라미니다제(NA)로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 본 설명에 정의된 바와 같은 mRNA 서열을 포함하며, 이 암호화 영역은 서열번호 188637 내지 190564에 따른 (변형된) RNA 서열 중 임의의 하나 또는 이들 서열 중 임의의 하나의 단편 또는 변이체를 포함하거나 이로 구성된다.
추가적인 특히 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명은 mRNA를 포함하는 지질 나노입자를 제공하는데, 이때, mRNA는 광견병 바이러스의 당단백질로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 본 설명에 정의된 바와 같은 mRNA 서열을 포함하며, 이 암호화 영역은 서열번호 190565 내지 192072에 따른 (변형된) RNA 서열 중 임의의 하나 또는 이들 서열 중 임의의 하나의 단편 또는 변이체를 포함하거나 이로 구성된다.
추가적인 바람직한 구현예에서, 본 발명에 따른 mRNA 서열의 적어도 하나의 암호화 영역은 서열번호 160061 내지 192072에 따른 (변형된) RNA 서열 중 임의의 하나 또는 이들 서열 중 임의의 하나의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%, 바람직하게는 적어도 70%, 더욱 바람직하게는 적어도 80%, 훨씬 더 바람직하게는 적어도 85%, 훨씬 더 바람직하게는 적어도 90% 및 가장 바람직하게는 적어도 95% 또는 심지어 97%의 서열 동일성을 갖는 RNA 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
특히 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명에 따른 mRNA 서열의 적어도 하나의 암호화 영역은 서열번호 160061 내지 192072에 따른 (변형된) RNA 서열 중 임의의 하나 또는 이들 서열 중 임의의 하나의 단편 또는 변이체와 적어도 80%의 서열 동일성을 갖는 RNA 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
C-최적화된 서열:
또 다른 구현예에 따르면, 본 발명의 mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물은 mRNA 서열의, 바람직하게는 mRNA 서열의 암호화 영역의, 시토신(C) 함량을 변형, 바람직하게 증가시킴으로써 변형될 수 있다.
본 발명의 특히 바람직한 구현예에서, 본 발명의 mRNA 서열의 암호화 영역의 C 함량은, 각각의 야생형 mRNA, 즉 비변형 mRNA의 암호화 영역의 C 함량과 비교하여, 변형되고, 바람직하게는 증가된다. 본 발명의 mRNA 서열의 적어도 하나의 암호화 영역에 의해 암호화된 아미노산 서열은 각각의 야생형 mRNA에 의해 암호화된 아미노산 서열과 비교하여 바람직하게는 변형되지 않는다.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 변형된 mRNA 서열은 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70% 또는 80%, 또는 적어도 90%의 이론적으로 가능한 최대 시토신-함량 또는 심지어 최대한의 시토신-함량이 달성되도록 변형된다.
더욱 바람직한 구현예에서, "시토신 함량 최적화 가능한" 표적 mRNA 야생형 서열의 코돈의 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 심지어 100%는 야생형 서열에 존재하는 것보다 높은 시토신-함량을 갖는 코돈으로 교체된다.
더욱 바람직한 구현예에서, 야생형 암호화 서열의 일부 코돈은, 상대적으로 빈번한 tRNA에 대한 치환된 코돈이 본래 야생형 코돈의 상대적으로 드문 tRNA와 동일한 아미노산을 수송한다면, 세포에서 상대적으로 드문 tRNA에 대한 코돈이 세포에서 상대적으로 빈번한 tRNA에 대한 코돈으로 교환되도록 추가적으로 변형될 수 있다. 바람직하게는, 상대적으로 드문 tRNA에 대한 모든 코돈은, 임의의 시토신을 함유하지 않는 코돈에 의해 독점적으로 암호화되는 아미노산을 암호화하는 코돈을 제외하고, 또는 동일한 수의 시토신을 각각 함유하는 두 개의 코돈에 의해 암호화되는 글루타민(Gln)을 제외하고, 세포에서 상대적으로 빈번한 tRNA에 대한 코돈에 의해 교체된다.
본 발명의 더욱 바람직한 구현예에서, 변형된 표적 mRNA는 적어도 80%, 또는 적어도 90%의 이론적으로 가능한 최대 시토신-함량 또는 심지어 최대 시토신-함량이 세포에서 상대적으로 빈번한 tRNA를 암호화하는 코돈에 의해 달성되도록 변형되는데, 이때, 이 아미노산 서열은 불변인 채로 있다.
유전자 암호의 자연 발생적인 축퇴성으로 인해, 둘 이상의 코돈이 특정 아미노산을 암호화할 수 있다. 따라서, 20개의 자연 발생적인 아미노산 중 18개가 둘 이상의 코돈에 의해(Tryp 및 Met는 예외), 예를 들어, 2개의 코돈에 의해(예를 들어 Cys, Asp, Glu), 3개의 코돈에 의해(예를 들어 Ile), 4개의 코돈에 의해(예를 들어 Al, Gly, Pro) 또는 6개의 코돈에 의해(예를 들어 Leu, Arg, Ser), 암호화된다. 그러나 동일한 아미노산을 암호화하는 모든 코돈이 생체 내 조건 하에 같은 빈도로 활용되는 것은 아니다. 각 단일 유기체에 따라, 전형적인 코돈 사용빈도 프로파일이 성립된다.
본 발명의 맥락 내에서 사용된 용어 "시토신 함량-최적화 가능 코돈"은 동일한 아미노산을 암호화하는 다른 코돈에 비해 낮은 함량의 시토신을 나타내는 코돈을 지칭한다. 따라서, 동일한 아미노산을 암호화하며 그 코돈 내에서 더 많은 수의 시토신을 나타내는 또 다른 코돈에 의해 교체될 수 있는 임의의 야생형 코돈은 시토신-최적화 가능(C-최적화 가능)한 것으로 간주된다. 야생형 암호화 영역 내의 특정 C-최적화된 코돈에 의한 C-최적화 가능 야생형 코돈의 임의의 이러한 치환은 그것의 전체 C-함량을 증가시키고 C-풍부 변형된 mRNA 서열을 반영한다. 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 mRNA 서열, 바람직하게는 본 발명의 mRNA 서열의 적어도 하나의 암호화 영역은, 모든 잠재적으로 C-최적화 가능한 코돈에 대하여 C-최적화된 코돈을 함유하는 C-최대화된 RNA 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 따라서, 이론적으로 교체 가능한 C-최적화 가능 코돈의 100% 또는 전부는 바람직하게는 암호화 영역의 전체 길이에 걸쳐 C-최적화된 코돈으로 교체된다.
이러한 맥락에서, 시토신-함량 최적화 가능 코돈은 동일한 아미노산을 암호화하는 다른 코돈에 비해 적은 수의 시토신을 함유하는 코돈이다.
코돈 GCG, GCA, GCU 중 임의의 코돈은 아미노산 Ala를 암호화하며, 이는 동일한 아미노산을 암호화하는 코돈 GCC에 의해 교환될 수 있으며, 및/또는
Cys를 암호화하는 UGU는 동일한 아미노산을 암호화하는 코돈 UGC에 의해 교환될 수 있으며, 및/또는
Asp를 암호화하는 코돈 GAU는 동일한 아미노산을 암호화하는 코돈 GAC에 의해 교환될 수 있으며, 및/또는
Phe를 암호화하는 코돈 UUU는 동일한 아미노산을 암호화하는 코돈 UUC에 의해 교환될 수 있으며, 및/또는
Gly를 암호화하는 코돈 GGG, GGA, GGU 중 임의의 코돈은 동일한 아미노산을 암호화하는 코돈 GGC에 의해 교환될 수 있으며, 및/또는
His를 암호화하는 코돈 CAU는 동일한 아미노산을 암호화하는 코돈 CAC에 의해 교환될 수 있으며, 및/또는
Ile를 암호화하는 코돈 AUA, AUU 중 임의의 코돈은 코돈 AUC에 의해 교환될 수 있으며, 및/또는
Leu를 암호화하는 코돈 UUG, UUA, CUG, CUA, CUU 중 임의의 코돈은 동일한 아미노산을 암호화하는 코돈 CUC에 의해 교환될 수 있으며, 및/또는
Asn을 암호화하는 코돈 AAU는 동일한 아미노산을 암호화하는 코돈 AAC에 의해 교환될 수 있으며, 및/또는
Pro를 암호화하는 코돈 CCG, CCA, CCU 중 임의의 코돈은 동일한 아미노산을 암호화하는 코돈 CCC에 의해 교환될 수 있으며, 및/또는
Arg를 암호화하는 코돈 AGG, AGA, CGG, CGA, CGU 중 임의의 코돈은 동일한 아미노산을 암호화하는 코돈 CGC에 의해 교환될 수 있으며, 및/또는
Ser을 암호화하는 코돈 AGU, AGC, UCG, UCA, UCU 중 임의의 코돈은 동일한 아미노산을 암호화하는 코돈 UCC에 의해 교환될 수 있으며, 및/또는
Thr을 암호화하는 코돈 ACG, ACA, ACU 중 임의의 코돈은 동일한 아미노산을 암호화하는 코돈 ACC에 의해 교환될 수 있으며, 및/또는
Val을 암호화하는 코돈 GUG, GUA, GUU 중 임의의 코돈은 동일한 아미노산을 암호화하는 코돈 GUC에 의해 교환될 수 있으며, 및/또는
Tyr을 암호화하는 코돈 UAU는 동일한 아미노산을 암호화하는 코돈 UAC에 의해 교환될 수 있다.
위의 임의의 경우에서, 시토신의 수는 교환된 코돈당 1씩 증가된다. 암호화 영역의 모든 (C-최적화 가능한 코돈에 상응하는) 비 C-최적화된 코돈의 교환은 C-최대화된 암호화 서열을 초래한다. 본 발명의 맥락에서, 본 발명에 따른 mRNA 서열의 적어도 하나의 암호화 영역 내 C-최적화되지 않은 코돈의 적어도 70%, 바람직하게는 적어도 80%, 더욱 바람직하게는 적어도 90%는 C-최적화된 코돈으로 교체된다.
이는 일부 아미노산의 경우, C-최적화된 코돈으로 교체된 C-최적화 가능한 코돈의 백분율은 70% 미만인 반면, 암호화 영역의 모든 C-최적화 가능한 야생형 코돈의 적어도 70%의 C-최적화의 전체 백분율을 충족시키기 위하여, 다른 아미노산의 경우, 교체된 코돈의 백분율은 70%보다 높은 것이 바람직할 수 있다.
바람직하게는, 본 발명의 C-최적화된 mRNA 서열에서, 임의의 주어진 아미노산에 대한 적어도 50%의 C-최적화 가능한 야생형 코돈은 C-최적화된 코돈에 의해 교체되며, 예를 들어 임의의 변형된 C-풍부 mRNA 서열은 바람직하게는 위에 언급된 아미노산 Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr, Val 및 Tyr 중 임의의 하나를 암호화하는 C-최적화 가능한 야생형 코돈 위치에, 적어도 50%, 바람직하게는 적어도 60% C-최적화된 코돈을 함유한다.
이러한 맥락에서, 시토신 함량 최적화 가능한 것은 아니지만 적어도 두 개의 코돈에 의해 암호화되는 아미노산을 암호화하는 코돈이 임의의 추가적인 선별 과정 없이 이용될 수 있다. 그러나 세포, 예를 들어 인간 세포에서 상대적으로 드문 tRNA를 암호화하는 야생형 서열의 코돈은 세포에서 상대적으로 빈번한 tRNA를 암호화하는 코돈으로 교환될 수 있으며, 이때, 이들 둘 다는 동일한 아미노산을 암호화한다. 따라서, Glu를 암호화하는 상대적으로 드문 코돈 GAA는 동일한 아미노산을 암호화하는 상대적으로 빈번한 코돈 GAG로 교체될 수 있으며, 및/또는
Lys를 암호화하는 상대적으로 드문 코돈 AAA는 동일한 아미노산을 암호화하는 상대적으로 빈번한 코돈 AAG로 교체될 수 있으며, 및/또는
Gln을 암호화하는 상대적으로 드문 코돈 CAA는 동일한 아미노산을 암호화하는 상대적으로 빈번한 코돈 CAG로 교체될 수 있다.
이러한 맥락에서, 각각 오직 하나의 코돈에 의해서만 암호화되는 아미노산 Met (AUG) 및 Trp(UGG)은 불변인 채로 있다. 정지 코돈은 시토신-함량 최적화되지 않으나, 상대적으로 드문 정지 코돈인 앰버(amber), 오커(ochre)(UAA, UAG)는 상대적으로 빈번한 정지 코돈 오팔(opal)(UGA)로 교체될 수 있다.
야생형 mRNA 서열에 비해 변형된 mRNA 서열의 시토신-함량을 최적화하기 위하여, 위에 열거된 단일 치환은 개별적으로 뿐만 아니라 모든 가능한 조합으로도 사용될 수 있다.
따라서, 본 설명에 정의된 바와 같은 적어도 하나의 암호화 서열은 각각의 야생형 mRNA의 암호화 영역에 비해, 적어도 둘 이상의 코돈에 의해 암호화되는 아미노산(이들 코돈 중 하나는 하나의 추가적인 시토신을 포함하고, 이러한 코돈은 하나의 추가적인 시토신을 포함하는 C-최적화된 코돈에 의해 교환될 수 있음)이 바람직하게는 야생형 서열에 비해 변경되지 않는 방식으로 바뀔 수 있다.
바람직한 구현예에 따르면, 본 발명은 mRNA를 포함하는 지질 나노입자를 제공하는데, 이때, mRNA는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 본 설명에 정의된 바와 같은 mRNA 서열을 포함하며, 이 암호화 영역은 서열번호 96037 내지 128048에 따른 (변형된) RNA 서열 중 임의의 하나 또는 이들 서열 중 임의의 하나의 단편 또는 변이체를 포함하거나 이로 구성된다.
특히 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명은 mRNA를 포함하는 지질 나노입자를 제공하는데, 이때, mRNA는 인플루엔자 A 바이러스의 헤마글루티닌(HA)으로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 본 설명에 정의된 바와 같은 mRNA 서열을 포함하며, 이 암호화 영역은 서열번호 96037 내지 110067에 따른 (변형된) RNA 서열 중 임의의 하나 또는 이들 서열 중 임의의 하나의 단편 또는 변이체를 포함하거나 이로 구성된다.
추가적인 특히 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명은 mRNA를 포함하는 지질 나노입자를 제공하는데, 이때, mRNA는 인플루엔자 B 바이러스의 헤마글루티닌(HA)으로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 본 설명에 정의된 바와 같은 mRNA 서열을 포함하며, 이 암호화 영역은 서열번호 122434 내지 124612에 따른 (변형된) RNA 서열 중 임의의 하나 또는 이들 서열 중 임의의 하나의 단편 또는 변이체를 포함하거나 이로 구성된다.
추가적인 특히 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명은 mRNA를 포함하는 지질 나노입자를 제공하는데, 이때, mRNA는 인플루엔자 A 바이러스의 뉴라미니다제(NA)로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 본 설명에 정의된 바와 같은 mRNA 서열을 포함하며, 이 암호화 영역은 서열번호 110068 내지 122433에 따른 (변형된) RNA 서열 중 임의의 하나 또는 이들 서열 중 임의의 하나의 단편 또는 변이체를 포함하거나 이로 구성된다.
추가적인 특히 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명은 mRNA를 포함하는 지질 나노입자를 제공하는데, 이때, mRNA는 인플루엔자 B 바이러스의 뉴라미니다제(NA)로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 본 설명에 정의된 바와 같은 mRNA 서열을 포함하며, 이 암호화 영역은 서열번호 124613 내지 126540에 따른 (변형된) RNA 서열 중 임의의 하나 또는 이들 서열 중 임의의 하나의 단편 또는 변이체를 포함하거나 이로 구성된다.
추가적인 특히 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명은 mRNA를 포함하는 지질 나노입자를 제공하는데, 이때, mRNA는 광견병 바이러스의 당단백질로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 본 설명에 정의된 바와 같은 mRNA 서열을 포함하며, 이 암호화 영역은 서열번호 126541 내지 128048에 따른 (변형된) RNA 서열 중 임의의 하나 또는 이들 서열 중 임의의 하나의 단편 또는 변이체를 포함하거나 이로 구성된다.
추가적인 바람직한 구현예에서, 본 발명에 따른 mRNA 서열의 적어도 하나의 암호화 영역은 서열번호 96037 내지 128048에 따른 (변형된) RNA 서열 중 임의의 하나 또는 이들 서열 중 임의의 하나의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%, 바람직하게는 적어도 70%, 더욱 바람직하게는 적어도 80%, 훨씬 더 바람직하게는 적어도 85%, 훨씬 더 바람직하게는 적어도 90% 및 가장 바람직하게는 적어도 95% 또는 심지어 97%의 서열 동일성을 갖는 RNA 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
특히 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명에 따른 mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물의 적어도 하나의 암호화 영역은 서열번호 96037 내지 128048에 따른 (변형된) RNA 서열 중 임의의 하나 또는 이들 서열 중 임의의 하나의 단편 또는 변이체와 적어도 80%의 서열 동일성을 갖는 RNA 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
특히 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명은 mRNA를 포함하는 지질 나노입자를 제공하며, 이때, mRNA는 본 설명에 정의된 바와 같은 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 mRNA 서열을 포함하며, 이때, mRNA 서열의 적어도 하나의 암호화 영역의 G/C 함량은 상응하는 야생형 mRNA의 상응하는 암호화 영역의 G/C 함량에 비해 증가되며, 및/또는
mRNA 서열의 적어도 하나의 암호화 영역의 C 함량은 상응하는 야생형 mRNA의 상응하는 암호화 영역의 C 함량에 비해 증가되며, 및/또는
mRNA 서열의 적어도 하나의 암호화 영역의 코돈은 인간 코돈 사용빈도에 적합화되며, 이때, 코돈 적합화 지수(CAI)는 바람직하게는 mRNA 서열의 적어도 하나의 암호화 영역에서 증가되거나 최대화되며,
mRNA 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열은 상응하는 야생형 mRNA에 의해 암호화된 아미노산 서열과 비교하여 바람직하게는 변형되지 않는다.
5'-CAP 구조:
본 발명의 또 다른 바람직한 구현예에 따르면, 본 설명에 정의된 바와 같은 변형된 mRNA 서열은 소위 "5' CAP 구조"의 첨가에 의해 변형될 수 있으며, 이는 바람직하게는 본 설명에 기술된 mRNA를 안정화시킨다. 5'-CAP은 일반적으로 성숙 mRNA의 5'-말단을 "캡(cap)"하는 독립체, 전형적으로는 변형된 뉴클레오티드 독립체이다. 5'-CAP은 전형적으로 변형된 뉴클레오티드에 의해, 특히 구아닌 뉴클레오티드의 유도체에 의해 형성될 수 있다. 바람직하게는, 5'-CAP은 5'-5'-트리포스페이트 연결을 통해 5'-말단에 연결된다. 5'-CAP은 메틸화될 수 있으며, 예를 들어 m7GpppN로 될 수 있으며, 이때, N은 5'-CAP을 수송하는 핵산의 말단 5' 뉴클레오티드, 전형적으로 mRNA의 5'-말단이다. m7GpppN은 5'-CAP 구조로, 이는 중합효소 II에 의해 전사된 mRNA에 자연적으로 존재하며, 따라서 이러한 맥락에서, 바람직하게는 변형된 mRNA에 포함된 변형으로 고려되지 않는다. 따라서, 본 발명의 변형된 mRNA 서열은 5'-CAP으로 m7GpppN을 포함할 수 있으나, 추가적으로 변형된 mRNA 서열은 전형적으로 본 설명에 정의된 바와 같은 적어도 하나의 추가적 변형을 포함한다.
5'-CAP 구조의 추가적인 예는 글리세릴, 역전된 데옥시 비염기(abasic) 잔기(모이어티), 4',5' 메틸렌 뉴클레오티드, 1-(베타-D-에리트로퓨라노실) 뉴클레오티드, 4'-티오 뉴클레오티드, 카르보시클릭 뉴클레오티드, 1,5-언하이드로헥시톨 뉴클레오티드, L-뉴클레오티드, 알파-뉴클레오티드, 변형된 염기 뉴클레오티드, 트레오-펜토퓨라노실 뉴클레오티드, 비고리(acyclic) 3',4'-세코(seco) 뉴클레오티드, 비고리 3,4-디하이드록시부틸 뉴클레오티드, 비고리 3,5 디하이드록시펜틸 뉴클레오티드, 3'-3'-역전된 뉴클레오티드 모이어티, 3'-3'-역전된 비염기 모이어티, 3'-2'-역전된 뉴클레오티드 모이어티, 3'-2'-역전된 비염기 모이어티, 1,4-부탄디올 포스페이트, 3'-포스포라미데이트, 헥실포스페이트, 아미노헥실 포스페이트, 3'-포스페이트, 3'포스포로티오에이트, 포스포로디티오에이트, 또는 브릿징(bridging) 또는 비-브릿징 메틸포스포네이트 모이어티를 포함한다. 이들 변형된 5'-CAP 구조는 이러한 맥락에서 적어도 하나의 변형으로 간주된다.
특히 바람직한 변형된 5'-CAP 구조는 cap1(m7G의 인접 뉴클레오티드의 리보스의 메틸화), cap2(m7G 하류의 두 번째 뉴클레오티드의 리보스의 추가적 메틸화), cap3(m7G의 하류의 세 번째 뉴클레오티드의 리보스의 추가적 메틸화), cap4(m7G의 하류의 네 번째 뉴클레오티드의 리보스의 추가적 메틸화), ARCA(안티-역전 CAP 유사체), 변형된 ARCA(예를 들어 포스포티오에이트 변형된 ARCA), 이노신, N1-메틸-구아노신, 2'-플루오로-구아노신, 7-데아자-구아노신, 8-옥소-구아노신, 2-아미노-구아노신, LNA-구아노신 및 2-아지도-구아노신이다. 따라서, 본 발명에 따른 RNA는 바람직하게는 5'-CAP 구조를 포함한다.
폴리(A) 서열/꼬리:
추가적인 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물은 전형적으로 약 10개 내지 200개 아데노신 뉴클레오티드, 바람직하게는 약 10개 내지 100개 아데노신 뉴클레오티드, 더욱 바람직하게는 약 40개 내지 80개 아데노신 뉴클레오티드 또는 훨씬 더 바람직하게는 약 50개 내지 70개 아데노신 뉴클레오티드의 3'-말단 상의 폴리-A 꼬리를 함유할 수 있다.
바람직하게는, 본 발명의 mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물의 폴리(A) 서열은 RNA 시험관 내 전사에 의해 DNA 주형으로부터 유래된다. 대안적으로, 폴리(A) 서열은 또한, DNA 전구체(progenitor)로부터 필연적으로 전사되지 않으면서, 통상적인 화학적 합성 방법에 의해 시험관 내에서 수득될 수도 있다. 나아가, 폴리(A) 서열, 또는 폴리(A) 꼬리는 상업적으로 이용 가능한 폴리아데닐화 키트 및 당해 분야에 공지된 상응하는 프로토콜을 이용하여 본 발명에 따른 RNA의 효소적 폴리아데닐화에 의해 생성될 수 있다.
대안적으로, 본 설명에 기술된 바와 같은 mRNA는 선택적으로, 특정한 단백질 인자(예를 들어 절단 및 폴리아데닐화 특이성 인자(CPSF), 절단 촉진 인자(CstF), 절단 인자 I 및 II(CF I 및 CF II), 폴리(A) 중합효소(PAP))에 의해 (전사된) RNA로 폴리아데닐화를 전달하는 신호로서 본 설명에 정의된 폴리아데닐화 신호를 포함한다. 이러한 맥락에서, NN(U/T)ANA 공통 서열을 포함하는 공통 폴리아데닐화 신호가 바람직하다. 특히 바람직한 양태에서, 폴리아데닐화 신호는 다음 서열 중 하나를 포함한다: AA(U/T)AAA 또는 A(U/T)(U/T)AAA(이때, 우리딘은 보통 RNA에 존재하며 티미딘은 보통 DNA에 존재한다).
폴리(C) 서열:
추가적인 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물은 전형적으로 약 10개 내지 200개 시토신 뉴클레오티드, 바람직하게는 약 10개 내지 100개 시토신 뉴클레오티드, 더욱 바람직하게는 약 20개 내지 70개 시토신 뉴클레오티드 또는 훨씬 더 바람직하게는 약 20개 내지 60개 또는 심지어 약 10개 내지 40개 시토신 뉴클레오티드의 3'-말단 상의 폴리(C) 꼬리를 함유할 수 있다.
한 가지 바람직한 구현예에서, mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물은, 바람직하게는 5'-방향에서 3'-방향으로, 다음을 포함한다:
a) 5'-CAP 구조, 바람직하게는 m7GpppN;
b) 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역,
c) 선택적으로, 폴리(A) 서열, 바람직하게는 64개 아데노신을 포함하는 폴리(A) 서열;
d) 선택적으로, 폴리(C) 서열, 바람직하게는 30개 시토신을 포함하는 폴리(C) 서열.
더욱 바람직한 구현예에서, mRNA 서열은 바람직하게는 5'-방향에서 3'-방향으로 다음을 포함한다:
a) 5'-CAP 구조, 바람직하게는 m7GpppN;
b) 인플루엔자 또는 광견병 바이러스의 단백질로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질 또는 이의 단편 또는 변이체를 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역,
c) 선택적으로, 폴리(A) 서열, 바람직하게는 64개 아데노신을 포함하는 폴리(A) 서열;
d) 선택적으로, 폴리(C) 서열, 바람직하게는 30개 시토신을 포함하는 폴리(C) 서열.
특히 바람직한 구현예에서, mRNA 서열은 바람직하게는 5'-방향에서 3'-방향으로 다음을 포함한다:
a) 5'-CAP 구조, 바람직하게는 m7GpppN;
b) 바람직하게는 "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(wt)" 또는 "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt1)", "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt2)", "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt3)", "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt4)", 또는 "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt5)"로 시작하는 숫자 식별기호 <223>을 갖는 서열 목록 또는 각각 PCT/EP2016/075843의 표 1 내지 5 또는 도 20 내지 24의 "B열" 또는 "C열"에 개시된 핵산 서열, 또는 서열번호 32013 내지 64024, 또는 서열번호 64025 내지 224084 중 임의의 하나 또는 이들 서열 중 임의의 하나의 단편 또는 변이체를 포함하거나 이로 구성되는, 인플루엔자 바이러스 또는 광견병 바이러스의 단백질로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질 또는 이의 단편 또는 변이체를 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역,
c) 선택적으로, 폴리(A) 서열, 바람직하게는 64개 아데노신을 포함하는 폴리(A) 서열;
d) 선택적으로, 폴리(C) 서열, 바람직하게는 30개 시토신을 포함하는 폴리(C) 서열.
UTR:
바람직한 구현예에서, 본 발명에 따른 mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물은 적어도 하나의 5'- 또는 3'-UTR 요소를 포함한다. 이러한 맥락에서, UTR 요소는, 임의의 자연 발생적인 유전자의 5'- 또는 3'-UTR로부터 유래되거나 유전자의 5'- 또는 3'-UTR의 단편, 동종체 또는 변이체로부터 유래되는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 바람직하게는, 본 발명에 따라 사용된 5'- 또는 3'-UTR 요소는 본 발명의 mRNA 서열의 적어도 하나의 암호화 영역에 대해 이종성이다. 자연 발생적인 유전자로부터 유래된 5'- 또는 3'-UTR 요소가 바람직하긴 하지만, 합성적으로 조작된 UTR 요소 또한, 본 발명의 맥락에서 사용될 수 있다.
3'-UTR 요소:
용어 "3'-UTR 요소"는 전형적으로 3'-UTR로부터 유래되거나 3'-UTR의 변이체로부터 유래된 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 핵산 서열을 지칭한다. 본 발명의 의미에 있어서 3'-UTR 요소는 RNA, 바람직하게는 mRNA의 3'-UTR을 나타낼 수 있다. 따라서, 본 발명의 의미에 있어서, 바람직하게는, 3'-UTR 요소는 RNA, 바람직하게는 mRNA의 3'-UTR일 수 있고, 또는 RNA의 3'-UTR에 대한 전사 주형일 수 있다. 따라서, 3'-UTR 요소는 바람직하게는 RNA의 3'-UTR, 바람직하게는 mRNA의 3'-UTR, 예컨대, 유전자 조작된 벡터 구성체의 전사에 의해 수득된 mRNA의 3'-UTR에 상응하는 핵산 서열이다. 바람직하게는, 3'-UTR 요소는 3'-UTR 기능을 충족시키거나 3'-UTR의 기능을 충족시키는 서열을 암호화한다.
바람직하게는, 적어도 하나의 3'-UTR 요소는 척삭동물 유전자, 바람직하게는 척추동물 유전자, 더욱 바람직하게는 포유동물 유전자, 가장 바람직하게는 인간 유전자의 3'-UTR로부터, 또는 척삭동물 유전자, 바람직하게는 척추동물 유전자, 더욱 바람직하게는 포유동물 유전자, 가장 바람직하게는 인간 유전자의 3'-UTR의 변이체로부터 유래된 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
바람직하게는, 본 발명의 mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물은 (안정적인 mRNA를 제공하는) 증진된 반감기를 갖는 mRNA와 관련된 유전자로부터 유래될 수 있는 3'-UTR 요소, 예를 들어, 아래에서 정의되고 설명되는 3'-UTR 요소를 포함한다. 바람직하게는, 3'-UTR 요소는, 바람직하게는 안정적인 mRNA를 암호화하는 유전자의 3'-UTR로부터, 또는 상기 유전자의 동종체, 단편 또는 변이체로부터 유래되는 핵산 서열이다.
특히 바람직한 구현예에서, 3'-UTR 요소는 특허 출원 WO2013/143700(이의 개시 내용은 본 설명에 참조로 포함됨)의 서열번호 1369 내지 1390에 따른 알부민 유전자, α-글로빈 유전자, β-글로빈 유전자, 티로신 하이드록실라제 유전자, 리폭시게나제 유전자 및 콜라겐 알파 유전자, 예컨대, 콜라겐 알파 1(I) 유전자로 구성된 군으로부터 선택된 유전자의 3'-UTR로부터, 또는 알부민 유전자, α-글로빈 유전자, β-글로빈 유전자, 티로신 하이드록실라제 유전자, 리폭시게나제 유전자 및 콜라겐 알파 유전자, 예컨대, 콜라겐 알파 1(I) 유전자로 구성된 군으로부터 선택된 유전자의 3'-UTR의 변이체로부터, 또는 이의 동종체, 단편 또는 변이체로부터, 유래되는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 특히 바람직한 구현예에서, 3'-UTR 요소는 서열번호 224301 또는 서열번호 224303 또는 상응하는 RNA 서열인 서열번호 224300 또는 서열번호 224304에 따른 알부민 유전자, 바람직하게는 척추동물 알부민 유전자, 더욱 바람직하게는 포유동물 알부민 유전자, 가장 바람직하게는 인간 알부민 유전자의 3'-UTR로부터 유래되는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
인간 알부민 3'-UTR 서열번호 224301
CATCACATTTAAAAGCATCTCAGCCTACCATGAGAATAAGAGAAAGAAAATGAAGATCAAAAGCTTATTCATCTGTTTTTCTTTTTCGTTGGTGTAAAGCCAACACCCTGTCTAAAAAACATAAATTTCTTTAATCATTTTGCCTCTTTTCTCTGTGCTTCAATTAATAAAAAATGGAAAGAATCT (특허 출원 WO2013/143700의 서열번호 1369에 상응함).
이러한 맥락에서, 본 발명에 따른 mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물은 특허 출원 WO2013/143700의 서열번호 1369 내지 1390에 따른 핵산 또는 이의 단편, 동종체 또는 변이체로부터 유래된 상응하는 RNA 서열을 포함하는 3'-UTR 요소를 포함하는 것이 특히 바람직하다.
가장 바람직하게는, 3'-UTR 요소는 서열번호 224303에 따른 인간 알부민 유전자의 단편으로부터 유래된 핵산 서열을 포함한다.
알부민7 3'-UTR
CATCACATTTAAAAGCATCTCAGCCTACCATGAGAATAAGAGAAAGAAAATGAAGATCAATAGCTTATTCATCTCTTTTTCTTTTTCGTTGGTGTAAAGCCAACACCCTGTCTAAAAAACATAAATTTCTTTAATCATTTTGCCTCTTTTCTCTGTGCTTCAATTAATAAAAAATGGAAAGAACCT (특허 출원 WO2013143700의 서열번호 1376에 상응하는 서열번호 224303).
이러한 맥락에서, 본 발명에 따른 mRNA 서열의 3'-UTR 요소는 서열번호 224302 또는 서열번호 224304에 나타난 바와 같이, 서열번호 224301 또는 서열번호 224303에 따른 핵산의 상응하는 RNA 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것이 특히 바람직하다.
또 다른 특히 바람직한 구현예에서, 3'-UTR 요소는 서열번호 224291, 224293, 224295, 224297 또는 상응하는 RNA 서열인 서열번호 224292, 224294, 224296, 224298에 따른 α- 또는 β-글로빈 유전자, 바람직하게는 척추동물 α- 또는 β-글로빈 유전자, 더욱 바람직하게는 포유동물 α- 또는 β-글로빈 유전자, 가장 바람직하게는 인간 α- 또는 β-글로빈 유전자의 3'-UTR로부터 유래되는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
호모 사피엔스 헤모글로빈, 알파 1(HBA1)의 3'-UTR
GCTGGAGCCTCGGTGGCCATGCTTCTTGCCCCTTGGGCCTCCCCCCAGCCCCTCCTCCCCTTCCTGCACCCGTACCCCCGTGGTCTTTGAATAAAGTCTGAGTGGGCGGC (특허 출원 WO2013/143700의 서열번호 1370에 상응하는 서열번호 224291).
호모 사피엔스 헤모글로빈, 알파 2(HBA2)의 3'-UTR
GCTGGAGCCTCGGTAGCCGTTCCTCCTGCCCGCTGGGCCTCCCAACGGGCCCTCCTCCCCTCCTTGCACCGGCCCTTCCTGGTCTTTGAATAAAGTCTGAGTGGGCAG (특허 출원 WO2013/143700의 서열번호 1371에 상응하는 서열번호 224293).
호모 사피엔스 헤모글로빈, 베타(HBB)의 3'-UTR
GCTCGCTTTCTTGCTGTCCAATTTCTATTAAAGGTTCCTTTGTTCCCTAAGTCCAACTACTAAACTGGGGGATATTATGAAGGGCCTTGAGCATCTGGATTCTGCCTAATAAAAAACATTTATTTTCATTGC (특허 출원 WO2013/143700의 서열번호 1372에 상응하는 서열번호 224295).
예를 들어, 3'-UTR 요소는 중심인, α-글로빈 유전자의, 예컨대, 인간 α-글로빈 유전자의, 또는 α-글로빈 유전자의 동종체, 단편, 또는 변이체의, 바람직하게는 서열번호 224297에 따른, 3'-UTR의 α-복합체 결합 부분을 포함하거나 이로 구성될 수 있다.
중심인, α-글로빈 유전자의 3'-UTR의 α-복합체 결합 부분(본 설명에서 "muag"라고도 지칭됨)
GCCCGATGGGCCTCCCAACGGGCCCTCCTCCCCTCCTTGCACCG (특허 출원 WO2013/143700의 서열번호 1393에 상응하는 서열번호 224297).
이러한 맥락에서, 본 발명에 따른 mRNA 서열의 3'-UTR 요소는 서열번호 224298에 나타난 바와 같은 서열번호 224297에 따른 핵산 서열, 또는 이의 동종체, 단편 또는 변이체의 상응하는 RNA 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것이 특히 바람직하다.
용어 "[…] 유전자의 3'-UTR로부터 유래되는 핵산 서열"은 바람직하게는 […] 유전자의 3'-UTR 서열 또는 이의 일부에 기초하는 핵산 서열, 예컨대, 알부민 유전자, α-글로빈 유전자, β-글로빈 유전자, 티로신 하이드록실라제 유전자, 리폭시게나제 유전자, 또는 콜라겐 알파 유전자, 예컨대, 콜라겐 알파 1(I) 유전자의, 바람직하게는 알부민 유전자의 3'-UTR 또는 이의 일부에 기초하는 핵산 서열을 지칭한다. 이 용어는 전체 3'-UTR 서열에 상응하는 서열, 즉 유전자의 전장 3'-UTR 서열, 및 유전자, 예컨대, 알부민 유전자, α-글로빈 유전자, β-글로빈 유전자, 티로신 하이드록실라제 유전자, 리폭시게나제 유전자, 또는 콜라겐 알파 유전자, 예컨대, 콜라겐 알파 1(I) 유전자, 바람직하게는 알부민 유전자의 3'-UTR 서열의 단편에 상응하는 서열을 포함한다.
용어 "[…] 유전자의 3'-UTR의 변이체로부터 유래되는 핵산 서열"은 바람직하게는 유전자의 3'-UTR 서열의 변이체, 예컨대, 알부민 유전자, α-글로빈 유전자, β-글로빈 유전자, 티로신 하이드록실라제 유전자, 리폭시게나제 유전자, 또는 콜라겐 알파 유전자, 예컨대, 콜라겐 알파 1(I) 유전자의 3'-UTR의 변이체, 또는 위에 기술된 바와 같은 이의 일부에 기초하는 핵산 서열을 지칭한다. 이 용어는 유전자의 3'-UTR의 변이체의 전체 서열, 즉, 유전자의 전장 변이체 3'-UTR 서열에 상응하는 서열 및 유전자의 변이체 3'-UTR 서열의 단편에 상응하는 서열을 포함한다. 이러한 맥락에서 단편은 바람직하게는, 전장 변이체 3'-UTR의 적어도 20%, 바람직하게는 적어도 30%, 더욱 바람직하게는 적어도 40%, 더욱 바람직하게는 적어도 50%, 훨씬 더 바람직하게는 적어도 60%, 훨씬 더 바람직하게는 적어도 70%, 훨씬 더 바람직하게는 적어도 80%, 및 가장 바람직하게는 적어도 90%를 나타내는, 전장 변이체 3'-UTR 내의 뉴클레오티드의 연속적인 스트레치에 상응하는 연속적인 뉴클레오티드 스트레치로 구성된다. 본 발명의 의미에 있어서, 이러한 변이체의 단편은 바람직하게는 본 설명에 기술된 바와 같은 변이체의 기능적 단편이다.
바람직한 구현예에 따르면, 본 발명에 따른 mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물은, 바람직하게는 본 설명에 정의된 바와 같이, 5'-CAP 구조 및/또는 적어도 하나의 3'-비번역된 영역 요소(3'-UTR 요소)를 포함한다. 더욱 바람직하게는, 이 RNA는 본 설명에 정의된 바와 같은 5'-UTR 요소를 더 포함한다.
한 가지 바람직한 구현예에서, mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물은, 바람직하게는 5'-방향에서 3'-방향으로, 다음을 포함한다:
a) 5'-CAP 구조, 바람직하게는 m7GpppN;
b) 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역,
c) 선택적으로 3'-UTR 요소, 바람직하게는 알파 글로빈 유전자로부터 유래되는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된 3'-UTR 요소, 바람직하게는 서열번호 224298에 나타난 바와 같이 서열번호 224297에 따른 핵산 서열, 이의 동종체, 단편 또는 변이체의 상응하는 RNA 서열을 포함하는 3'-UTR 요소;
d) 선택적으로, 폴리(A) 서열, 바람직하게는 64개 아데노신을 포함하는 폴리(A) 서열;
e) 선택적으로, 폴리(C) 서열, 바람직하게는 30개 시토신을 포함하는 폴리(C) 서열.
바람직한 구현예에서, mRNA 서열은 바람직하게는 5'-방향에서 3'-방향으로 다음을 포함한다:
a) 5'-CAP 구조, 바람직하게는 m7GpppN;
b) 바람직하게는 인플루엔자 바이러스 또는 광견병 바이러스의 단백질로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질 또는 이의 단편 또는 변이체를 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역,
c) 선택적으로 3'-UTR 요소, 바람직하게는 알파 글로빈 유전자로부터 유래되는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된 3'-UTR 요소, 바람직하게는 서열번호 224298에 나타난 바와 같이 서열번호 224297에 따른 핵산 서열, 이의 동종체, 단편 또는 변이체의 상응하는 RNA 서열을 포함하는 3'-UTR 요소;
d) 선택적으로, 폴리(A) 서열, 바람직하게는 64개 아데노신을 포함하는 폴리(A) 서열;
e) 선택적으로, 폴리(C) 서열, 바람직하게는 30개 시토신을 포함하는 폴리(C) 서열.
특히 바람직한 구현예에서, mRNA 서열은 바람직하게는 5'-방향에서 3'-방향으로 다음을 포함한다:
a) 5'-CAP 구조, 바람직하게는 m7GpppN;
b) 바람직하게는 "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(wt)" 또는 "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt1)", "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt2)", "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt3)", "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt4)", 또는 "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt5)"로 시작하는 숫자 식별기호 <223>을 갖는 서열 목록 또는 각각 PCT/EP2016/075843의 표 1 내지 5 또는 도 20 내지 24의 "B열" 또는 "C열"에 개시된 핵산 서열, 또는 서열번호 32013 내지 64024, 또는 서열번호 64025 내지 224084 중 임의의 하나 또는 이들 서열 중 임의의 하나의 단편 또는 변이체를 포함하거나 이로 구성되는, 바람직하게는 인플루엔자 바이러스 또는 광견병 바이러스의 단백질로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질 또는 이의 단편 또는 변이체를 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역,
c) 선택적으로 3'-UTR 요소, 바람직하게는 알파 글로빈 유전자로부터 유래되는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된 3'-UTR 요소, 바람직하게는 서열번호 224298에 나타난 바와 같이 서열번호 224297에 따른 핵산 서열, 이의 동종체, 단편 또는 변이체의 상응하는 RNA 서열을 포함하는 3'-UTR 요소;
d) 선택적으로, 폴리(A) 서열, 바람직하게는 64개 아데노신을 포함하는 폴리(A) 서열;
e) 선택적으로, 폴리(C) 서열, 바람직하게는 30개 시토신을 포함하는 폴리(C) 서열; 및
5'-UTR 요소:
특히 바람직한 구현예에서, mRNA 서열을 포함하는 적어도 하나의 mRNA 화합물은 적어도 하나의 5'-비번역된 영역 요소(5'-UTR 요소)를 포함한다. 바람직하게는, 적어도 하나의 5'-UTR 요소는 TOP 유전자의 5'-UTR로부터 유래되거나 TOP 유전자의 5'-UTR의 단편, 동종체 또는 변이체로부터 유래되는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
5'-UTR 요소는 위에 정의된 바와 같이 TOP 모티프 또는 5'-TOP를 포함하지 않는 것이 특히 바람직하다.
일부 구현예에서, TOP 유전자의 5'-UTR로부터 유래되는 5'-UTR 요소의 핵산 서열은 그것의 3'-말단에서 그것이 유래되는 유전자 또는 mRNA의 개시 코돈(예컨대, A(U/T)G)의 상류로 위치 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10에 위치한 뉴클레오티드로 끝난다. 따라서, 5'-UTR 요소는 단백질 암호화 영역의 어떠한 부분도 포함하지 않는다. 따라서, 바람직하게는, 적어도 하나의 mRNA 서열의 유일한 단백질 암호화 부분은 암호화 영역에 의해 제공된다.
TOP 유전자의 5'-UTR로부터 유래된 핵산 서열은 바람직하게는 진핵생물 TOP 유전자, 바람직하게는 식물 또는 동물 TOP 유전자, 더욱 바람직하게는 척삭동물 TOP 유전자, 훨씬 더 바람직하게는 척추동물 TOP 유전자, 가장 바람직하게는 포유동물 TOP 유전자, 예컨대, 인간 TOP 유전자로부터 유래된다.
예를 들어, 5'-UTR 요소는 바람직하게는 특허 출원 WO2013/143700(이의 개시 내용은 본 설명에 참조로 포함됨)의 서열번호 1 내지 1363, 서열번호 1395, 서열번호 1421 및 서열번호 1422로 구성된 군으로부터, 특허 출원 WO2013/143700의 서열번호 1 내지 1363, 서열번호 1395, 서열번호 1421 및 서열번호 1422의 동종체로부터, 이의 변이체로부터, 또는 바람직하게는 상응하는 RNA 서열로부터 선택된 핵산 서열로부터 유래되는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된 5'-UTR 요소로부터 선택된다. 용어 "특허 출원 WO2013/143700의 서열번호 1 내지 1363, 서열번호 1395, 서열번호 1421 및 서열번호 1422의 동종체"는 특허 출원 WO2013/143700의 서열번호 1 내지 1363, 서열번호 1395, 서열번호 1421 및 서열번호 1422에 따른 서열에 대해 상동인, 호모 사피엔스 이외의 다른 종의 서열을 지칭한다.
바람직한 구현예에서, 본 발명에 따른 mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물의 5'-UTR 요소는 특허 출원 WO2013/143700의 서열번호 1 내지 1363, 서열번호 1395, 서열번호 1421 및 서열번호 1422로부터, 특허 출원 WO2013/143700의 서열번호 1 내지 1363, 서열번호 1395, 서열번호 1421 및 서열번호 1422의 동종체로부터, 이의 변이체로부터, 또는 상응하는 RNA 서열로부터 선택된 핵산 서열의 뉴클레오티드 위치 5(즉, 서열에서 위치 5에 위치한 뉴클레오티드)로부터 (서열의 3'-말단에 위치한) 개시 코돈에 대해 5' 바로 옆의 뉴클레오티드 위치, 예컨대, ATG 서열에 대해 5' 바로 옆의 뉴클레오티드 위치까지 이르는 핵산 서열로부터 유래되는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 5'-UTR 요소는 특허 출원 WO2013/143700의 서열번호 1 내지 1363, 서열번호 1395, 서열번호 1421 및 서열번호 1422로부터, 특허 출원 WO2013/143700의 서열번호 1 내지 1363, 서열번호 1395, 서열번호 1421 및 서열번호 1422의 동종체로부터, 이의 변이체로부터, 또는 상응하는 RNA 서열로부터 선택된 핵산 서열의 5'-TOP에 대해 3' 바로 옆의 뉴클레오티드 위치로부터 (서열의 3'-말단에 위치한) 개시 코돈에 대해 5' 바로 옆의 뉴클레오티드 위치, 예컨대, ATG 서열에 대해 5' 바로 옆의 뉴클레오티드 위치까지 이르는 핵산 서열로부터 유래되는 것이 특히 바람직하다.
특히 바람직한 구현예에서, 5'-UTR 요소는 리보솜 단백질을 암호화하는 TOP 유전자의 5'-UTR로부터 또는 리보솜 단백질을 암호화하는 TOP 유전자의 5'-UTR의 변이체로부터 유래되는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 예를 들어, 5'-UTR 요소는, 바람직하게는 5'-TOP 모티프가 결여된, 본 설명에 기술된 바와 같은, 특허 출원 WO2013/143700의 서열번호 67, 170, 193, 244, 259, 554, 650, 675, 700, 721, 913, 1016, 1063, 1120, 1138, 및 1284 내지 1360, 상응하는 RNA 서열, 이의 동종체, 또는 이의 변이체 중 임의의 것에 따른 핵산 서열의 5'-UTR로부터 유래되는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 위에 기술된 바와 같이, 위치 5로부터 (서열의 3'-말단에 위치한) ATG에 대해 5' 바로 옆의 뉴클레오티드까지 이르는 서열은 상기 서열의 5'-UTR에 상응한다.
바람직하게는, 5'-UTR 요소는 리보솜 큰 단백질(ribosomal Large protein, RPL)을 암호화하는 TOP 유전자의 5'-UTR로부터 또는 리보솜 큰 단백질(RPL)을 암호화하는 TOP 유전자의 5'-UTR의 동종체 또는 변이체로부터 유래되는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 예를 들어, 5'-UTR 요소는, 바람직하게는 5'-TOP 모티프가 결여된, 본 설명에 기술된 바와 같은, 특허 출원 WO2013/143700의 서열번호 67, 259, 1284 내지 1318, 1344, 1346, 1348 내지 1354, 1357, 1358, 1421 및 1422, 상응하는 RNA 서열, 이의 동종체, 또는 이의 변이체 중 임의의 것에 따른 핵산 서열의 5'-UTR로부터 유래되는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
특히 바람직한 구현예에서, 5'-UTR 요소는 리보솜 단백질 라지(Large) 32 유전자의 5'-UTR로부터, 바람직하게는 척추동물 리보솜 단백질 라지 32(L32) 유전자로부터, 더욱 바람직하게는 포유동물 리보솜 단백질 라지 32(L32) 유전자로부터, 가장 바람직하게는 인간 리보솜 단백질 라지 32(L32) 유전자로부터, 또는 리보솜 단백질 라지 32 유전자의 5'-UTR의 변이체로부터, 바람직하게는 척추동물 리보솜 단백질 라지 32(L32) 유전자로부터, 더욱 바람직하게는 포유동물 리보솜 단백질 라지 32(L32) 유전자로부터, 가장 바람직하게는 인간 리보솜 단백질 라지 32(L32) 유전자로부터 유래되는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되며, 이때, 바람직하게는 5'-UTR 요소는 상기 유전자의 5'-TOP을 포함하지 않는다.
따라서, 특히 바람직한 구현예에서, 5'-UTR 요소는 서열번호 224287 또는 서열번호 224288에 따른 핵산 서열(5'-말단 올리고피리미딘 트랙트가 결여된 인간 리보솜 단백질 라지 32의 5'-UTR: GGCGCTGCCTACGGAGGTGGCAGCCATCTCCTTCTCGGCATC; 특허 출원 WO2013/143700의 서열번호 1368에 상응함) 또는 바람직하게는 상응하는 RNA 서열에 대해 적어도 약 40%, 바람직하게는 적어도 약 50%, 바람직하게는 적어도 약 60%, 바람직하게는 적어도 약 70%, 더욱 바람직하게는 적어도 약 80%, 더욱 바람직하게는 적어도 약 90%, 훨씬 더 바람직하게는 적어도 약 95%, 훨씬 더 바람직하게는 적어도 약 99%의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 또는 적어도 하나의 5'-UTR 요소는 서열번호 224287에 따른 핵산 서열 또는 더욱 바람직하게는 상응하는 RNA 서열(서열번호 224288)에 대해 적어도 약 40%, 바람직하게는 적어도 약 50%, 바람직하게는 적어도 약 60%, 바람직하게는 적어도 약 70%, 더욱 바람직하게는 적어도 약 80%, 더욱 바람직하게는 적어도 약 90%, 훨씬 더 바람직하게는 적어도 약 95%, 훨씬 더 바람직하게는 적어도 약 99%의 동일성을 갖는 핵산 서열의 단편을 포함하거나 이로 구성되며, 이때, 바람직하게는, 이 단편은 위에 기술된 바와 같다. 즉, 전장 5'-UTR의 적어도 20% 등을 나타내는 연속적인 뉴클레오티드 스트레치이다. 바람직하게는, 이 단편은 적어도 약 20개 뉴클레오티드 이상, 바람직하게는 적어도 약 30개 뉴클레오티드 이상, 더욱 바람직하게는 적어도 약 40개 뉴클레오티드 이상의 길이를 나타낸다. 바람직하게는, 단편은 본 설명에 기술된 바와 같은 기능적 단편이다.
일부 구현예에서, 본 발명에 따른 mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물은 5'-UTR 요소를 포함하며, 5'-UTR 요소는 RPSA, RPS2, RPS3, RPS3A, RPS4, RPS5, RPS6, RPS7, RPS8, RPS9, RPS10, RPS11, RPS12, RPS13, RPS14, RPS15, RPS15A, RPS16, RPS17, RPS18, RPS19, RPS20, RPS21, RPS23, RPS24, RPS25, RPS26, RPS27, RPS27A, RPS28, RPS29, RPS30, RPL3, RPL4, RPL5, RPL6, RPL7, RPL7A, RPL8, RPL9, RPL10, RPL10A, RPL11, RPL12, RPL13, RPL13A, RPL14, RPL15, RPL17, RPL18, RPL18A, RPL19, RPL21, RPL22, RPL23, RPL23A, RPL24, RPL26, RPL27, RPL27A, RPL28, RPL29, RPL30, RPL31, RPL32, RPL34, RPL35, RPL35A, RPL36, RPL36A, RPL37, RPL37A, RPL38, RPL39, RPL40, RPL41, RPLP0, RPLP1, RPLP2, RPLP3, RPLP0, RPLP1, RPLP2, EEF1A1, EEF1B2, EEF1D, EEF1G, EEF2, EIF3E, EIF3F, EIF3H, EIF2S3, EIF3C, EIF3K, EIF3EIP, EIF4A2, PABPC1, HNRNPA1, TPT1, TUBB1, UBA52, NPM1, ATP5G2, GNB2L1, NME2, UQCRB로부터 선택된 척추동물 TOP 유전자, 예컨대, 포유동물, 예컨대, 인간 TOP 유전자의 5'-UTR로부터, 또는 이의 동종체 또는 변이체로부터 유래되는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되며, 이때, 바람직하게는 5'-UTR 요소는 상기 유전자의 TOP 모티프 또는 5'-TOP를 포함하지 않고, 선택적으로 5'-UTR 요소는 그것의 5'-말단에서 5'-말단 올리고피리미딘 트랙트(TOP)의 하류의 위치 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10에 위치한 뉴클레오티드로 시작하며, 또한 선택적으로 TOP 유전자의 5'-UTR로부터 유래되는 5'-UTR 요소는 그것의 3'-말단에서, 그것이 유래되는 유전자의 개시 코돈(A(U/T)G)의 상류의 위치 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10에 위치한 뉴클레오티드로 끝난다.
더욱 특히 바람직한 구현예에서, 5'-UTR 요소는 리보솜 단백질 라지 32 유전자(RPL32), 리보솜 단백질 라지 35 유전자(RPL35), 리보솜 단백질 라지 21 유전자(RPL21), ATP 합성효소, H+ 수송(transporting), 미토콘드리아 F1 복합체, 알파 서브유닛 1, 심근 (ATP5A1) 유전자, 하이드록시스테로이드 (17-베타)　디하이드로게나제　4 유전자(HSD17B4), 안드로겐 유도된 1 유전자(AIG1), 시토크롬 c 옥시다제 서브유닛　VIc 유전자(COX6C), 또는 N-아실스핑고신 아미도하이드롤라제(애시드 세라미다제) 1 유전자(ASAH1)의 5'-UTR로부터 또는 이의 변이체로부터, 바람직하게는 척추동물 리보솜 단백질 라지 32 유전자(RPL32), 척추동물 리보솜 단백질 라지 35 유전자(RPL35), 척추동물 리보솜 단백질 라지 21 유전자(RPL21), 척추동물 ATP 합성효소, H+ 수송, 미토콘드리아 F1 복합체, 알파 서브유닛 1, 심근 (ATP5A1) 유전자, 척추동물 하이드록시스테로이드 (17-베타)　디하이드로게나제　4 유전자(HSD17B4), 척추동물 안드로겐 유도된 1 유전자(AIG1), 척추동물 시토크롬 c 옥사다제 서브유닛 VIc 유전자(COX6C), 또는 척추동물 N-아실스핑고신 아미도하이드롤라제(애시드 세라미다제) 1 유전자(ASAH1)로부터 또는 이의 변이체로부터, 더욱 바람직하게는 포유동물 리보솜 단백질 라지 32 유전자(RPL32), 리보솜 단백질 라지 35 유전자(RPL35), 리보솜 단백질 라지 21 유전자(RPL21), 포유동물 ATP 합성효소, H+ 수송, 미토콘드리아 F1 복합체, 알파 서브유닛 1, 심근 (ATP5A1) 유전자, 포유동물 하이드록시스테로이드 (17-베타)　디하이드로게나제　4 유전자(HSD17B4), 포유동물 안드로겐 유도된 1 유전자(AIG1), 포유동물 시토크롬 c 옥사다제 서브유닛 VIc 유전자(COX6C), 또는 포유동물 N-아실스핑고신 아미도하이드롤라제(애시드 세라미다제) 1 유전자(ASAH1)로부터 또는 이의 변이체로부터, 가장 바람직하게는 인간 리보솜 단백질 라지 32 유전자(RPL32), 인간 리보솜 단백질 라지 35 유전자(RPL35), 인간 리보솜 단백질 라지 21 유전자(RPL21), 인간 ATP 합성효소, H+ 수송, 미토콘드리아 F1 복합체, 알파 서브유닛 1, 심근 (ATP5A1) 유전자, 인간 하이드록시스테로이드 (17-베타)　디하이드로게나제　4 유전자(HSD17B4), 인간 안드로겐 유도된 1 유전자(AIG1), 인간 시토크롬 c 옥사다제 서브유닛 VIc 유전자(COX6C), 또는 인간 N-아실스핑고신 아미도하이드롤라제(애시드 세라미다제) 1 유전자(ASAH1)로부터 또는 이의 변이체로부터 유래되는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되며, 이때, 바람직하게는 5'-UTR 요소는 상기 유전자의 5'-TOP를 포함하지 않는다.
따라서, 특히 바람직한 구현예에서, 5'-UTR 요소는 특허 출원 WO2013/143700의 서열번호 1368 또는 서열번호 1412 내지 1420에 따른 핵산 서열 또는 상응하는 RNA 서열에 대해 적어도 약 40%, 바람직하게는 적어도 약 50%, 바람직하게는 적어도 약 60%, 바람직하게는 적어도 약 70%, 더욱 바람직하게는 적어도 약 80%, 더욱 바람직하게는 적어도 약 90%, 훨씬 더 바람직하게는 적어도 약 95%, 훨씬 더 바람직하게는 적어도 약 99%의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 또는 적어도 하나의 5'-UTR 요소는 특허 출원 WO2013/143700의 서열번호 1368 또는 서열번호 1412 내지 1420에 따른 핵산 서열에 대해 적어도 약 40%, 바람직하게는 적어도 약 50%, 바람직하게는 적어도 약 60%, 바람직하게는 적어도 약 70%, 더욱 바람직하게는 적어도 약 80%, 더욱 바람직하게는 적어도 약 90%, 훨씬 더 바람직하게는 적어도 약 95%, 훨씬 더 바람직하게는 적어도 약 99%의 동일성을 갖는 핵산 서열의 단편을 포함하거나 이로 구성되며, 이때, 바람직하게는, 이 단편은 위에 기술된 바와 같다. 즉, 전장 5'-UTR의 적어도 20% 등을 나타내는 연속적인 뉴클레오티드 스트레치이다. 바람직하게는, 이 단편은 적어도 약 20개 뉴클레오티드 이상, 바람직하게는 적어도 약 30개 뉴클레오티드 이상, 더욱 바람직하게는 적어도 약 40개 뉴클레오티드 이상의 길이를 나타낸다. 바람직하게는, 단편은 본 설명에 기술된 바와 같은 기능적 단편이다.
따라서, 특히 바람직한 구현예에서, 5'-UTR 요소는 서열번호 224289(5'-말단 올리고피리미딘 트랙트가 결여된 ATP5A1의 5'-UTR: GCGGCTCGGCCATTTTGTCCCAGTCAGTCCGGAGGCTGCGGCTGCAGAAGTACCGCCTGCGGAGTAACTGCAAAG; 특허 출원 WO2013/143700의 서열번호 224289에 상응함) 또는 바람직하게는 상응하는 RNA 서열(서열번호 224290)에 대해 적어도 약 40%, 바람직하게는 적어도 약 50%, 바람직하게는 적어도 약 60%, 바람직하게는 적어도 약 70%, 더욱 바람직하게는 적어도 약 80%, 더욱 바람직하게는 적어도 약 90%, 훨씬 더 바람직하게는 적어도 약 95%, 훨씬 더 바람직하게는 적어도 약 99%의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 또는 적어도 하나의 5'-UTR 요소는 서열번호 224289에 따른 핵산 서열 또는 더욱 바람직하게는 상응하는 RNA 서열(서열번호 224290)에 대해 적어도 약 40%, 바람직하게는 적어도 약 50%, 바람직하게는 적어도 약 60%, 바람직하게는 적어도 약 70%, 더욱 바람직하게는 적어도 약 80%, 더욱 바람직하게는 적어도 약 90%, 훨씬 더 바람직하게는 적어도 약 95%, 훨씬 더 바람직하게는 적어도 약 99%의 동일성을 갖는 핵산 서열의 단편을 포함하거나 이로 구성되며, 이때, 바람직하게는, 이 단편은 위에 기술된 바와 같다. 즉, 전장 5'-UTR의 적어도 20% 등을 나타내는 연속적인 뉴클레오티드 스트레치이다. 바람직하게는, 이 단편은 적어도 약 20개 뉴클레오티드 이상, 바람직하게는 적어도 약 30개 뉴클레오티드 이상, 더욱 바람직하게는 적어도 약 40개 뉴클레오티드 이상의 길이를 나타낸다. 바람직하게는, 단편은 본 설명에 기술된 바와 같은 기능적 단편이다.
바람직하게는, 적어도 하나의 5'-UTR 요소 및 적어도 하나의 3'-UTR 요소는 위에 기술된 적어도 하나의 mRNA 서열로부터 단백질 생산을 증가시키기 위하여 상승적으로 작용한다.
바람직한 구현예에 따르면, 본 발명에 따른 mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물은, 바람직하게는 5'-방향에서 3'-방향으로, 다음을 포함한다:
a) 5'-CAP 구조, 바람직하게는 m7GpppN;
b) 선택적으로 바람직하게는 TOP 유전자의 5'-UTR로부터 유래되는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된 5'-UTR 요소, 더욱 바람직하게는 서열번호 224288에 나타난 바와 같이 서열번호 224287에 따른 핵산 서열, 이의 동종체, 단편 또는 변이체의 상응하는 RNA 서열을 포함하거나 이로 구성된 5'-UTR 요소;
c) 바람직하게는 "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(wt)" 또는 "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt1)", "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt2)", "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt3)", "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt4)", 또는 "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt5)"로 시작하는 숫자 식별기호 <223>을 갖는 서열 목록 또는 각각 PCT/EP2016/075843의 표 1 내지 5 또는 도 20 내지 24의 "B열" 또는 "C열"에 개시된 핵산 서열, 또는 서열번호 32013 내지 64024, 또는 서열번호 64025 내지 224084 중 임의의 하나 또는 이들 서열 중 임의의 하나의 단편 또는 변이체를 포함하거나 이로 구성되는, 바람직하게는 인플루엔자 바이러스 또는 광견병 바이러스의 단백질로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질 또는 이의 단편 또는 변이체를 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역,
d) 선택적으로 안정적인 mRNA를 제공하는 유전자로부터 유래되는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된 3'-UTR 요소, 바람직하게는 서열번호 224291, 224293, 224295, 224297, 224299, 224301 또는 224303에 따른 핵산 서열, 바람직하게는 서열번호 224297 또는 서열번호 224303에 따른 핵산 서열, 또는 이의 동종체, 단편 또는 변이체의 상응하는 RNA 서열을 포함하거나 이로 구성된 3'-UTR 요소;
e) 선택적으로 폴리(A) 서열, 바람직하게는 64개 아데노신을 포함하는 폴리(A) 서열; 및
f) 선택적으로 폴리(C) 서열, 바람직하게는 30개 시토신을 포함하는 폴리(C) 서열.
히스톤 스템-루프:
특히 바람직한 구현예에서, 본 발명에 따른 mRNA 화합물의 mRNA 서열은 히스톤 스템-루프 서열/구조를 포함한다. 이러한 히스톤 스템-루프 서열은 바람직하게는 WO2012/019780(이의 개시 내용은 본 설명에 참조로 포함됨)에 개시된 히스톤 스템-루프 서열로부터 선택된다.
본 발명 내에서 사용되기에 적합한 히스톤 스템-루프는 바람직하게는 다음의 화학식 V 또는 VI 중 적어도 하나로부터 선택된다:
[화학식 V](스템 경계 요소가 없는 스템-루프 서열)
Figure pct00010
[화학식 VI](스템 경계 요소가 있는 스템-루프 서열)
Figure pct00011
(화학식에서, 스템1 또는 스템2 경계 요소 N1-6은 1 내지 6, 바람직하게는 2 내지 6, 더욱 바람직하게는 2 내지 5, 훨씬 더 바람직하게는 3 내지 5, 가장 바람직하게는 4 내지 5 또는 5 N의 연속 서열이며, 이때, 각 N은 A, U, T, G 및 C로부터 선택된 뉴클레오티드 또는 이의 뉴클레오티드 유사체로부터 서로 독립적으로 선택되며;
스템1[N0-2GN3-5]은 요소 스템2와 역상보적 또는 부분 역상보적이며, 5 내지 7 뉴클레오티드 사이의 연속 서열이며;
N0-2는 0 내지 2, 바람직하게는 0 내지 1, 더욱 바람직하게는 1 N의 연속 서열이며, 이때, 각 N은 A, U, T, G 및 C로부터 선택된 뉴클레오티드 또는 이의 뉴클레오티드 유사체로부터 서로 독립적으로 선택되며;
N3-5는 3 내지 5, 바람직하게는 4 내지 5, 더욱 바람직하게는 4 N의 연속 서열이며, 이때, 각 N은 A, U, T, G 및 C로부터 선택된 뉴클레오티드 또는 이의 뉴클레오티드 유사체로부터 서로 독립적으로 선택되며, 및
G는 구아노신 또는 이의 유사체이며, 스템2에서 이의 상보적인 뉴클레오티드 시티딘이 구아노신에 의해 교체되는 경우, 선택적으로 시티딘 또는 이의 유사체로 교체될 수 있으며;
루프 서열[N0-4(U/T)N0-4]은 요소 스템1 및 스템2 사이에 위치하고, 3 내지 5 뉴클레오티드, 더욱 바람직하게는 4 뉴클레오티드의 연속 서열이며;
각각의 N0-4는 0 내지 4, 바람직하게는 1 내지 3, 더욱 바람직하게는 1 내지 2 N의 서로 독립적인 연속 서열이며, 이때, 각 N은 A, U, T, G 및 C로부터 선택된 뉴클레오티드 또는 이의 뉴클레오티드 유사체로부터 서로 독립적으로 선택되며;
U/T는 우리딘, 또는 선택적으로 티미딘을 나타내며;
스템2[N3-5CN0-2]는 요소 스템1과 역상보적 또는 부분 역상보적이며, 5 내지 7 뉴클레오티드 사이의 연속 서열이며;
N3-5는 3 내지 5, 바람직하게는 4 내지 5, 더욱 바람직하게는 4 N의 연속 서열이며, 이때, 각 N은 A, U, T, G 및 C로부터 선택된 뉴클레오티드 또는 이의 뉴클레오티드 유사체로부터 서로 독립적으로 선택되며;
N0-2는 0 내지 2, 바람직하게는 0 내지 1, 더욱 바람직하게는 1 N의 연속 서열이며, 이때, 각 N은 A, U, T, G 또는 C로부터 선택된 뉴클레오티드 또는 이의 뉴클레오티드 유사체로부터 서로 독립적으로 선택되며;
C는 시티딘 또는 이의 유사체이며, 스템1에서 이의 상보적인 뉴클레오시드 구아노신이 시티딘에 의해 교체되는 경우, 선택적으로 구아노신 또는 이의 유사체로 교체될 수 있으며;
스템1 및 스템2는 서로 염기쌍을 형성하여 역상보적 서열을 형성할 수 있으며, 이때, 염기쌍 형성은, 예를 들어 뉴클레오티드 A 및 U/T 또는 G 및 C의 왓슨-크릭 염기쌍 형성에 의해, 또는 비 왓슨-크릭 염기쌍 형성, 예를 들어 워블 염기쌍 형성, 역 왓슨-크릭 염기쌍 형성, 훅스틴 염기쌍 형성, 역 훅스틴 염기쌍 형성에 의해 스템1과 스템2 사이에서 일어날 수 있거나, 스템1 및 스템2는 서로 염기쌍을 형성하여 부분 역상보적 서열을 형성할 수 있는데, 이때, 하나의 스템 내의 하나 이상의 염기들은 다른 스템의 역상보적 서열 내에 상보적 염기를 갖지 않는다는 점에 기초하여, 불완전 염기쌍 형성이 스템1과 스템2 사이에서 일어날 수 있다).
추가적인 바람직한 구현예에서, 본 발명의 mRNA 화합물의 mRNA 서열은 다음 특정 화학식 Va 또는 VIa 중 적어도 하나에 따른 적어도 하나의 히스톤 스템-루프 서열을 포함할 수 있다:
[화학식 Va](스템 경계 요소가 없는 스템-루프 서열)
Figure pct00012
[화학식 VIa](스템 경계 요소가 있는 스템-루프 서열)
Figure pct00013
(화학식에서, N, C, G, T 및 U는 위에 정의된 바와 같음).
추가적인 더욱 특히 바람직한 구현예에서, 본 발명의 조성물의 적어도 하나의 mRNA는 다음 특정 화학식 Vb 또는 VIb 중 적어도 하나에 따른 적어도 하나의 히스톤 스템-루프 서열을 포함할 수 있다:
[화학식 Vb](스템 경계 요소가 없는 스템-루프 서열)
Figure pct00014
[화학식 VIb](스템 경계 요소가 있는 스템-루프 서열)
Figure pct00015
(화학식에서, N, C, G, T 및 U는 위에 정의된 바와 같음).
특히 바람직한 히스톤 스템-루프 서열은 (서열번호 224305에 따른) 서열 CAAAGGCTCTTTTCAGAGCCACCA 또는 더욱 바람직하게는 (서열번호 224306에 따른) 상응하는 RNA 서열 CAAAGGCUCUUUUCAGAGCCACCA이다.
위의 변형 중 임의의 변형은 본 발명의 mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물에 적용될 수 있고, 나아가 본 발명의 맥락에서 사용된 바와 같은 임의의 mRNA에 적용될 수 있으며, 적절하거나 필요한 경우, 이들 변형의 조합이 각각의 mRNA 서열에서 서로를 방해하지 않는다면, 임의의 조합으로 서로 조합될 수 있다. 당업자라면 이에 따라 선택할 수 있을 것이다.
본 설명에 정의된 바와 같은 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는, 본 발명에 따른 mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물은 바람직하게는 5'-UTR 및/또는 바람직하게는 적어도 하나의 히스톤 스템-루프를 함유하는 3'-UTR을 포함할 수 있다. 본 발명에 따른 mRNA 서열의 3'-UTR은 바람직하게는 본 설명에 정의된 바와 같은 폴리(A) 및/또는 폴리(C) 서열도 포함한다. 3'-UTR의 단일 요소들은 본 발명의 mRNA 서열의 서열을 따라 5'에서 3'으로 임의의 순서로 그 안에 존재할 수 있다. 또한, 본 설명에 기술된 바와 같은 추가적인 요소, 예컨대, 본 설명에 정의된 바와 같은(예컨대, 글로빈 유전자의 UTR로부터 유래된) 안정화 서열, IRES 서열 등도 함유될 수 있다. 이 요소 각각은 또한, 본 발명에 따른 mRNA 서열에서 적어도 1회(특히 디시스트론성 또는 멀티시스트론성 구성체), 바람직하게는 2회 이상 반복될 수도 있다. 예로서, 단일 요소들은 본 발명에 따른 mRNA 서열에 다음 순서로 존재할 수 있다:
5' - 암호화 영역 - 히스톤 스템-루프 - 폴리(A)/(C) 서열 - 3'; 또는
5' - 암호화 영역 - 폴리(A)/(C) 서열 - 히스톤 스템-루프 - 3'; 또는
5' - 암호화 영역 - 히스톤 스템-루프 - 폴리아데닐화 신호 - 3'; 또는
5' - 암호화 영역 - 폴리아데닐화 신호 - 히스톤 스템-루프 - 3'; 또는
5' - 암호화 영역 - 히스톤 스템-루프 - 히스톤 스템-루프 - 폴리(A)/(C) 서열 - 3'; 또는
5' - 암호화 영역 - 히스톤 스템-루프 - 히스톤 스템-루프 - 폴리아데닐화 신호 - 3'; 또는
5' - 암호화 영역 - 안정화 서열 - 폴리(A)/(C) 서열 - 히스톤 스템-루프 - 3'; 또는
5' - 암호화 영역 - 안정화 서열 - 폴리(A)/(C) 서열 - 폴리(A)/(C) 서열 - 히스톤 스템-루프 - 3'; 등.
추가적인 구현예에 따르면, 본 발명의 mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물은 바람직하게는 다음의 구조적 요소 중 적어도 하나를 포함한다: 5'- 및/또는 3'- 비번역된 영역 요소(UTR 요소), 특히, 바람직하게는 TOP 유전자의 5'-UTR로부터 또는 이의 단편, 동종체 또는 변이체로부터 유래되는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 5'-UTR 요소, 또는 바람직하게는 안정적인 mRNA를 제공하는 유전자로부터 또는 이의 동종체, 단편 또는 변이체로부터 유래 가능할 수 있는 5'- 및/또는 3'-UTR 요소; 히스톤-스템-루프 구조, 바람직하게는 그것의 3' 비번역된 영역 내의 히스톤-스템-루프; 5'-CAP 구조; 폴리-A 꼬리; 또는 폴리(C) 서열.
일 구현예에서, mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물은, 바람직하게는 5'-방향에서 3'-방향으로, 다음을 포함한다:
a) 5'-CAP 구조, 바람직하게는 m7GpppN;
b) 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역,
c) 선택적으로 알파 글로빈 유전자로부터 유래되는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된 3'-UTR 요소, 바람직하게는 서열번호 224291, 224293, 또는 224297에 따른, 바람직하게는 서열번호 224297에 따른 핵산 서열, 또는 이의 동종체, 단편 또는 변이체의 상응하는 RNA 서열을 포함하는 3'-UTR 요소;
d) 선택적으로, 폴리(A) 서열, 바람직하게는 64개 아데노신을 포함하는 폴리(A) 서열;
e) 선택적으로, 폴리(C) 서열, 바람직하게는 30개 시토신을 포함하는 폴리(C) 서열; 및
f) 선택적으로, 히스톤 스템-루프, 바람직하게는 서열번호 224306에 따른 RNA 서열을 포함하는 히스톤 스템-루프.
특히 바람직한 구현예에서, mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물은, 바람직하게는 5'-방향에서 3'-방향으로, 다음을 포함한다:
a) 5'-CAP 구조, 바람직하게는 m7GpppN;
b) 바람직하게는 "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(wt)" 또는 "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt1)", "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt2)", "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt3)", "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt4)", 또는 "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt5)"로 시작하는 숫자 식별기호 <223>을 갖는 서열 목록 또는 각각 PCT/EP2016/075843의 표 1 내지 5 또는 도 20 내지 24의 "B열" 또는 "C열"에 개시된 핵산 서열, 또는 서열번호 32013 내지 64024, 또는 서열번호 64025 내지 224084 중 임의의 하나 또는 이들 서열 중 임의의 하나의 단편 또는 변이체를 포함하거나 이로 구성되는, 인플루엔자 바이러스 또는 광견병 바이러스의 단백질로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질 또는 이의 단편 또는 변이체를 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역,
c) 선택적으로 알파 글로빈 유전자로부터 유래되는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된 3'-UTR 요소, 바람직하게는 서열번호 224291, 224293, 또는 224297에 따른, 바람직하게는 서열번호 224297에 따른 핵산 서열, 또는 이의 동종체, 단편 또는 변이체의 상응하는 RNA 서열을 포함하는 3'-UTR 요소;
d) 선택적으로, 폴리(A) 서열, 바람직하게는 64개 아데노신을 포함하는 폴리(A) 서열;
e) 선택적으로, 폴리(C) 서열, 바람직하게는 30개 시토신을 포함하는 폴리(C) 서열; 및
f) 선택적으로, 히스톤 스템-루프, 바람직하게는 서열번호 224306에 따른 RNA 서열을 포함하는 히스톤 스템-루프.
또 다른 특히 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명에 따른 mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물은, 바람직하게는 5'-방향에서 3'-방향으로, 다음을 포함한다:
a) 5'-CAP 구조, 바람직하게는 m7GpppN;
b) TOP 유전자의 5'-UTR로부터 유래되는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된 5'-UTR 요소, 바람직하게는 서열번호 224288 또는 서열번호 224290에 나타난 바와 같이 서열번호 224287 또는 서열번호 224289에 따른 핵산 서열, 이의 동종체, 단편 또는 변이체의 상응하는 RNA 서열을 포함하거나 이로 구성된 5'-UTR 요소;
c) 바람직하게는 "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(wt)" 또는 "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt1)", "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt2)", "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt3)", "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt4)", 또는 "유래 및/또는 변형된 CDS 서열(opt5)"로 시작하는 숫자 식별기호 <223>을 갖는 서열 목록 또는 각각 PCT/EP2016/075843의 표 1 내지 5 또는 도 20 내지 24의 "B열" 또는 "C열"에 개시된 핵산 서열, 또는 서열번호 32013 내지 64024, 또는 서열번호 64025 내지 224084 중 임의의 하나 또는 이들 서열 중 임의의 하나의 단편 또는 변이체를 포함하거나 이로 구성되는, 바람직하게는 인플루엔자 바이러스 또는 광견병 바이러스의 단백질로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질 또는 이의 단편 또는 변이체를 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역,
d) 선택적으로 안정적인 mRNA를 제공하는 유전자로부터 유래되는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된 3'-UTR 요소, 바람직하게는 서열번호 224302 또는 서열번호 224304에 나타난 바와 같은 서열번호 224301 또는 서열번호 224303에 따른 핵산 서열, 이의 동종체, 단편 또는 변이체의 상응하는 RNA 서열을 포함하거나 이로 구성된 3'-UTR 요소;
e) 선택적으로 폴리(A) 서열, 바람직하게는 64개 아데노신을 포함하는 폴리(A) 서열;
f) 선택적으로 폴리(C) 서열, 바람직하게는 30개 시토신을 포함하는 폴리(C) 서열; 및
g) 선택적으로, 히스톤 스템-루프, 바람직하게는 서열번호 224306에 따른 RNA 서열을 포함하는 히스톤 스템-루프.
특히 바람직한 구현예에서, 본 발명에 따른 mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물은 다음의 mRNA 서열(또는 다음의 RNA 서열과 동일하거나 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 RNA 서열)을 포함한다:
인플루엔자 A HA:
- 서열번호 224198 내지 224201, 224203 내지 224210에 따른 인플루엔자 A/베트남/1194/2004(H5N1)의 HA 단백질을 암호화하는 mRNA.
- 서열번호 224181 내지 224194에 따른 인플루엔자 A/홍콩/4801/2014(H3N2)의 HA 단백질을 암호화하는 mRNA.
- 서열번호 224163 내지 224175에 따른 인플루엔자 A/네덜란드/602/2009(H1N1)의 HA 단백질을 암호화하는 mRNA.
- 서열번호 224117 내지 224126, 224129, 224130, 224131, 224132에 따른 인플루엔자 A/캘리포니아/07/2009(H1N1)의 HA 단백질을 암호화하는 mRNA.
- 서열번호 224133 내지 224142 내지 224162에 따른 인플루엔자 A/미시간/45/2015(H1N1)pdm09-유사 바이러스의 HA 단백질을 암호화하는 mRNA.
인플루엔자 B HA:
- 서열번호 224246 내지 224255, 224256, 224257에 따른 인플루엔자 B/푸켓/3037/2013에 따른 HA 단백질을 암호화하는 mRNA.
- 서열번호 224236 내지 224245에 따른 인플루엔자 B/브리즈번/60/2008(GI: 223950973; FJ766840.1)의 HA 단백질을 암호화하는 mRNA.
인플루엔자 A NA:
- 서열번호 224319 내지 224323에 따른 인플루엔자 A/캘리포니아/07/2009(H1N1)의 NA 단백질을 암호화하는 mRNA.
- 서열번호 224324 내지 224325에 따른 인플루엔자 A/미시간/45/2015(H1N1)pdm09-유사 바이러스의 NA 단백질을 암호화하는 mRNA.
- 서열번호 224326 내지 224335에 따른 인플루엔자 A/네덜란드/602/2009(H1N1)의 NA 단백질을 암호화하는 mRNA.
- 서열번호 224336 내지 224339에 따른 인플루엔자 A/홍콩/4801/2014(H3N2)의 NA 단백질을 암호화하는 mRNA.
- 서열번호 224342 내지 224343에 따른 인플루엔자 A/베트남/1194/2004(H5N1)의 NA 단백질을 암호화하는 mRNA.
- 서열번호 224344 내지 224345에 따른 인플루엔자 A/베트남/1203/2004(H5N1)의 NA 단백질을 암호화하는 mRNA.
인플루엔자 B NA:
- 서열번호 224348 내지 224349에 따른 인플루엔자 B/브리즈번/60/2008(GI: 223950973; FJ766840.1)의 NA 단백질을 암호화하는 mRNA.
- 서열번호 224350 내지 224351에 따른 인플루엔자 B/푸켓/3037/2013의 NA 단백질을 암호화하는 mRNA.
가장 바람직한 mRNA 서열은 다음을 포함한다:
서열번호 1 내지 14031에 따른 인플루엔자 A 바이러스의 헤마글루티닌(HA)으로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질 또는 이의 단편 또는 변이체를 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 mRNA 서열.
서열번호 32013 내지 46043, 64025 내지 78055, 224085 내지 224106, 96037 내지 110067, 128049 내지 142079, 160061 내지 174091, 192073 내지 206103에 따른 RNA 서열 또는 이의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 mRNA 서열.
서열번호 26398 내지 28576에 따른 인플루엔자 B 바이러스의 헤마글루티닌(HA)으로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질 또는 이의 단편 또는 변이체를 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 mRNA 서열.
서열번호 58410 내지 60588, 90422 내지 92600, 224107 내지 224112, 122434 내지 124612, 154446 내지 156624, 186458 내지 188636, 218470 내지 220648에 따른 RNA 서열 또는 이의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 mRNA 서열.
서열번호 14032 내지 26397, 224309, 또는 224310에 따른 인플루엔자 A 바이러스의 뉴라미니다제(NA)로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질 또는 이의 단편 또는 변이체를 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 mRNA 서열.
서열번호 110068 내지 122433, 78056 내지 90421, 224113, 224313 내지 224317, 110068 내지 122433, 142080 내지 154445, 174092 내지 186457, 206104 내지 218469에 따른 RNA 서열 또는 이의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 mRNA 서열.
서열번호 28577 내지 30504에 따른 인플루엔자 B 바이러스의 뉴라미니다제(NA)로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질 또는 이의 단편 또는 변이체를 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 mRNA 서열.
서열번호 60589 내지 62516, 92601 내지 94528, 124613 내지 126540, 156625 내지 158552, 188637 내지 190564, 220649 내지 222576에 따른 RNA 서열 또는 이의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 mRNA 서열.
광견병 바이러스의 당단백질 G(RAV-G, RAVBV-G 또는 RABV-G), 뉴클레오단백질 N(RAV-N), 포스포단백질 P(RAV-P), 매트릭스 단백질 M(RAV-M) 또는 RNA 중합효소 L(RAV-L)로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질 또는 이의 단편, 변이체를 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 mRNA 서열.
서열번호 30505 내지 32012에 따른 광견병 바이러스의 당단백질 G(RAV-G, RAVBV-G 또는 RABV-G)로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질 또는 이의 단편 또는 변이체를 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 mRNA 서열.
서열번호 62517 내지 64024, 224270, 224274, 94529 내지 96036, 224271 내지 224273, 126541 내지 128048, 158553 내지 160060, 190565 내지 192072, 222577 내지 224084에 따른 RNA 서열 또는 이의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 RNA 서열로부터 선택된 적어도 하나의 RNA 서열을 포함하는 mRNA 서열.
신호 펩티드:
또 다른 특히 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명에 따른 mRNA 서열은 추가적으로 또는 대안적으로 분비 신호 펩티드를 암호화할 수 있다. 이러한 신호 펩티드는 전형적으로 약 15개 내지 약 30개 아미노산의 길이를 나타내며 바람직하게는 암호화된 펩티드의 N-말단에 위치하는 서열이나, 이에 한정되지 않는다. 본 설명에 정의된 바와 같은 신호 펩티드는 바람직하게는 한정된 세포 구획, 바람직하게는 세포 표면, 소포체(ER) 또는 엔도좀-리소좀(endosomal-lysosomal) 구획 내로 적어도 하나의 mRNA 서열에 의해 암호화된 항원, 항원 단백질 또는 항원 펩티드의 수송을 가능하게 한다. 본 설명에 정의된 바와 같은 분비 신호 펩티드 서열의 예는 전형적인 또는 비-전형적인 MHC-분자(예를 들어, MHC I 및 II 분자의 신호 서열, 예컨대, MHC 클래스 I 분자 HLA-A*0201의 신호 서열), 본 설명에 정의된 바와 같은 사이토카인 또는 면역 글로불린의 신호 서열, 본 설명에 정의된 바와 같은 면역 글로불린 또는 항체의 불변 사슬의 신호 서열, Lamp1, 타파신, Erp57, 칼레티쿨린, 칼넥신, 및 추가적인 막 관련 단백질 또는 소포체(ER) 또는 엔도좀-리소좀 구획과 관련된 단백질의 신호 서열을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 가장 바람직하게는, MHC 클래스 I 분자 HLA-A*0201의 신호 서열이 본 발명에 따라 이용될 수 있다. 예를 들어, HLA-A로부터 유래된 신호 펩티드가 바람직하게는 본 설명에 정의된 바와 같은 암호화된 항원 또는 이의 단편 또는 변이체의 분비를 촉진하기 위하여 이용된다. 더욱 바람직하게는, HLA-A 신호 펩티드가 본 설명에 정의된 바와 같은 암호화된 항원 또는 이의 단편 또는 변이체에 융합된다.
mRNA의 생산:
본 발명에 따른 mRNA는 예컨대, 고체상 RNA 합성과 같은 합성 방법뿐만 아니라, 특히 실시예에 기술된 바와 같은, RNA 시험관 내 전사 반응과 같은 시험관 내 방법도 포함하는 당해 분야에 공지된 임의의 방법을 이용하여 제조될 수 있다.
언급한 바와 같이, 본 발명에 따른 mRNA 화합물은 지질 나노입자에 캡슐화되거나 지질 나노입자와 회합된다.
LNP라고도 지칭되는 용어 "지질 나노입자"는 1종 이상의 지질, 예를 들어, 화학식 I, II 또는 III의 지질을 포함하는, 대략 나노미터(예컨대, 1 내지 1,000 nm)의 적어도 하나의 규모를 갖는 입자를 지칭한다. 일부 구현예에서, 이러한 지질 나노입자는 양이온성 지질(예컨대, 화학식 I, II 또는 III의 지질) 및, 중성 지질, 하전된 지질, 스테로이드 및 폴리머 접합 지질(예컨대, 화학식 IV의 페길화 지질과 같은 페길화 지질)로부터 선택된 1종 이상의 부형제를 포함한다. 일부 구현예에서, mRNA 또는 이의 부분은 지질 나노입자의 지질 부분에, 또는 지질 나노입자의 일부 또는 모든 지질 부분에 의해 둘러싸인 수성 공간에 캡슐화되어, 효소적 분해 또는, 숙주 유기체 또는 세포의 메커니즘, 예컨대, 부정적인 면역 반응에 의해 유도된 기타 원하지 않는 효과로부터 mRNA 또는 이의 부분을 보호한다. 일부 구현예에서, mRNA 또는 이의 부분은 지질 나노입자와 회합된다.
본 발명의 맥락에서, 지질 나노입자는 임의의 특정 형태에 한정되지 않으며, 예컨대, 수성 환경에서 및/또는 핵산 화합물의 존재 하에서, 양이온성 지질 및 선택적으로 1종 이상의 추가적인 지질이 조합될 때 생성된 임의의 형태를 포함하는 것으로 해석해야 한다. 예를 들어, 리포솜, 지질 복합체, 리포플렉스(lipoplex) 등은 지질 나노입자의 범위 내에 있다.
다양한 구현예에서, 지질 나노입자는 약 30 nm 내지 약 150 nm, 약 40 nm 내지 약 150 nm, 약 50 nm 내지 약 150 nm, 약 60 nm 내지 약 130 nm, 약 70 nm 내지 약 110 nm, 약 70 nm 내지 약 100 nm, 약 80 nm 내지 약 100 nm, 약 90 nm 내지 약 100 nm, 약 70 내지 약 90 nm, 약 80 nm 내지 약 90 nm, 약 70 nm 내지 약 80 nm, 또는 약 30 nm, 35 nm, 40 nm, 45 nm, 50 nm, 55 nm, 60 nm, 65 nm, 70 nm, 75 nm, 80 nm, 85 nm, 90 nm, 95 nm, 100 nm, 105 nm, 110 nm, 115 nm, 120 nm, 125 nm, 130 nm, 135 nm, 140 nm, 145 nm, 또는 150 nm의 평균 직경을 가지며, 실질적으로 무독성이다. 일부 구현예에서, mRNA는 지질 나노입자에 존재할 때, 수용액에서 뉴클레아제로의 분해에 저항한다. 본 설명에 사용된 바와 같이, 평균 직경은 동적 광산란에 의해 결정한 z-평균값으로 표현될 수 있다.
LNP는 1개 이상의 핵산 분자가 부착되거나 1개 이상의 핵산 분자가 캡슐화되는 입자를 형성할 수 있는 임의의 지질을 포함할 수 있다. 용어 "지질"은 지방산의 유도체(예컨대, 에스테르)이며 일반적으로 물에는 불용성이나 여러 유기 용매에는 가용성인 것을 특징으로 하는 유기 화합물 군을 지칭한다. 지질은 보통 적어도 세 개의 부류로 나뉜다: (1) 지방과 오일뿐만 아니라 왁스도 포함하는 "단순 지질"; (2) 인지질 및 당지질을 포함하는 "복합 지질"; 및 (3) 스테로이드 같은 "유도 지질".
일 구현예에서, mRNA를 포함하는 LNP는 본 설명에 정의된 바와 같은 1종 이상의 양이온성 지질 및 1종 이상의 안정화 지질을 포함한다. 안정화 지질은 중성 지질 및 페길화 지질을 포함한다.
언급된 바와 같이, LNP는 양이온성 지질을 포함한다. 양이온성 지질은 바람직하게는 양이온화 가능하다. 즉, 양이온성 지질은 pH가 이 지질의 이온화 가능한 기의 pKa 아래로 낮아짐에 따라 양성화되지만, 더 높은 pH 값에서는 점진적으로 더욱 중성이다. 양으로 하전될 때, 이 지질은 음으로 하전된 핵산과 회합할 수 있다. 일부 구현예에서, 양이온성 지질은 pH 감소 시 양전하를 띠는 쌍성 이온성 지질을 포함한다. LNP는 1개 이상의 핵산 분자가 부착되거나 1개 이상의 핵산 분자가 캡슐화되는 입자를 형성할 수 있는 임의의 지질을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, LNP는 임의의 추가적인 양이온성 또는 양이온화 가능한 지질, 즉, 생리적인 pH와 같은 선택적인 pH에서 순 양전하(net positive charge)를 보유하는 다수의 지질 종 중 임의의 것을 포함할 수 있다. 이러한 지질은 N,N-디올레일-N,N-디메틸암모늄 클로라이드(DODAC); N-(2,3-디올레일옥시)프로필)-N,N,N-트리메틸암모늄 클로라이드(DOTMA); N,N-디스테아릴-N,N-디메틸암모늄 브로마이드(DDAB); N-(2,3디올레오일옥시)프로필)-N,N,N-트리메틸암모늄 클로라이드(DOTAP); 3-(N-(N′,N′디메틸아미노에탄)-카바모일)콜레스테롤(DC-Chol), N-(1-(2,3-디올레오일옥시)프로필)N-2-(스페르민카복사미도)에틸)-N,N-디메틸암모늄 트리플루오로아세테이트(DOSPA), 디옥타데실아미도글리실 카복시스페르민(DOGS), 1,2-디올레오일-3-디메틸암모늄 프로판(DODAP), N,N-디메틸-2,3-디올레오일옥시)프로필아민(DODMA), 및 N-(1,2디미리스틸옥시프로프-3-일)-N,N-디메틸-N-하이드록시에틸 암모늄 브로마이드(DMRIE)를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
추가적으로, 본 발명에 사용될 수 있는 다수의 상업적인 양이온성 지질 제제가 이용 가능하다. 이에는 예를 들어, 리포펙틴(LIPOFECTIN®)(DOTMA 및 1,2-디올레오일-sn-3포스포에탄올아민(DOPE)을 포함하는 상업적으로 이용 가능한 양이온성 리포솜, GIBCO/BRL, 미국 뉴욕주 그랜드 아일랜드); 리포펙타민(LIPOFECTAMINE®)(N-(1-(2,3디올레일옥시)프로필)-N-(2-(스페르민카복사미도)에틸)-N,N-디메틸암모늄 트리플루오로아세테이트(DOSPA) 및 (DOPE)를 포함하는 상업적으로 이용 가능한 양이온성 리포솜, GIBCO/BRL); 및 트랜스펙탐(TRANSFECTAM®)(에탄올 중 디옥타데실아미도글리실 카복시스페르민(DOGS)을 포함하는 상업적으로 이용 가능한 양이온성 지질, 프로메가 코포레이션(Promega Corp.), 미국 위스콘신 주 매디슨)이 포함된다. 다음의 지질은 양이온성이며, 생리학적 pH 미만에서는 양전하를 갖는다: DODAP, DODMA, DMDMA, 1,2-디리놀레일옥시-N,N-디메틸아미노프로판(DLinDMA), 1,2-디리놀레닐옥시-N,N-디메틸아미노프로판(DLenDMA).
일 구현예에서, 추가적인 양이온성 지질은 아미노 지질이다. 본 발명에 유용한 적합한 아미노 지질로는 전체가 본 설명에 참조로 포함된 WO2012/016184에 기술된 것들을 포함한다. 대표적인 아미노 지질은 1,2-디리놀레이옥시-3-(디메틸아미노)아세토옥시프로판(DLin-DAC), 1,2-디리놀레이옥시-3모르폴리노프로판(DLin-MA), 1,2-디리놀레오일-3-디메틸아미노프로판(DLinDAP), 1,2-디리놀레일티오-3-디메틸아미노프로판(DLin-S-DMA), 1-리놀레오일-2-리놀레일옥시-3디메틸아미노프로판(DLin-2-DMAP), 1,2-디리놀레일옥시-3-트리메틸아미노프로판클로라이드 염(DLin-TMA.Cl), 1,2-디리놀레오일-3-트리메틸아미노프로판클로라이드 염(DLin-TAP.Cl), 1,2-디리놀레일옥시-3-(N-메틸피페라지노)프로판(DLin-MPZ), 3-(N,N디리놀레일아미노)-1,2-프로판디올(DLinAP), 3-(N,N-디올레일아미노)-1,2-프로판디올(DOAP), 1,2-디리놀레일옥소-3-(2-N,N-디메틸아미노)에톡시프로판(DLin-EG-DMA), 및 2,2-디리놀레일-4-디메틸아미노메틸-[1,3]-디옥솔란(DLin-K-DMA)을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
적합한 아미노 지질은 다음 화학식을 갖는 것들을 포함한다:
Figure pct00016
(화학식에서, R1 및 R2는 동일하거나 상이하고, 독립적으로 선택적으로 치환된 C10-C24 알킬, 선택적으로 치환된 C10-C24 알케닐, 선택적으로 치환된 C10-C24 알키닐, 또는 선택적으로 치환된 C10-C24 아실이고;
R3 및 R4는 동일하거나 상이하고, 독립적으로 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬, 선택적으로 치환된 C2-C6 알케닐, 또는 선택적으로 치환된 C2-C6 알키닐이거나, R3 및 R4는 연결되어 4 내지 6개의 탄소 원자 및 질소 및 산소로부터 선택된 1 또는 2개의 헤테로원자의 선택적으로 치환된 헤테로고리를 형성할 수 있고;
R5는 부존재하거나 존재하며, 존재 시, 수소 또는 C1-C6 알킬이고; m, n, 및 p는 동일하거나 상이하고, m, n, 및 p가 동시에 0이 아니라는 단서 하에 독립적으로 0 또는 1이고; q는 0, 1, 2, 3, 또는 4이고;
Y 및 Z는 동일하거나 상이하고, 독립적으로는 O, S, 또는 NH임). 일 구현예에서, R1 및 R2는 각각 리놀레일이고, 아미노 지질은 디리놀레일 아미노 지질이다. 일 구현예에서, 아미노 지질은 디리놀레일 아미노 지질이다.
대표적인 유용한 디리놀레일 아미노 지질은 다음 화학식을 갖는다:
Figure pct00017
(화학식에서, n은 0, 1, 2, 3, 또는 4임).
일 구현예에서, 양이온성 지질은 DLin-K-DMA이다. 일 구현예에서, 양이온성 지질은 DLin-KC2-DMA(n이 2인 위의 DLin-K-DMA)이다.
일 구현예에서, LNP는 다음을 포함한다:
(i) 아래에 정의된 바와 같은 화학식 I의 양이온성 지질 성분
[화학식 I]
Figure pct00018
또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 호변이성체, 전구약물 또는 입체이성질체, 및
(ii) 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물로서, 상기 지질 나노입자에 캡슐화되거나 상기 지질 나노입자와 회합되는 것인 mRNA 화합물. mRNA 화합물, mRNA 서열 및 항원 펩티드 또는 단백질과 관련하여, 위의 각각의 옵션 및 선호성을 포함하는 이들 특징에 대한 설명을 참조한다. 바람직한 구현예 중 하나에서, mRNA 화합물은 뉴클레오시드 변형을 포함하지 않는다. 또 다른 구현예에서, mRNA 화합물은 염기 변형을 전혀 포함하지 않는다. 추가적인 구현예에서, mRNA 화합물은 1-메틸슈도우리딘 변형을 포함하지 않는다. 추가적인 구현예에서 mRNA 화합물은 자연적인 뉴클레오시드인 아데닌, 구아닌, 시토신 및 우라실만을 포함한다. 또한, 양이온성 지질이 아래 정의된 바와 같은 화합물 I-6인 경우, 지질 나노입자는 인플루엔자 PR8 또는 Cal/7/2009 헤마글루티닌 또는 HIV-1 CD4-독립성 R3A 외피 단백질을 암호화하는 비변형, 1-메틸슈도우리딘 변형 또는 코돈 최적화된 mRNA를 캡슐화하는, 약 50:10:38.5:1.5의 비율로 화합물 I-6, DSPC, 콜레스테롤 및 화학식 IVa의 PEG 지질을 포함하는 지질 나노입자가 아니다.
화학식 I과 관련하여,
L1 및 L2는 각각 독립적으로 -O(C=O)-, -(C=O)O- 또는 탄소-탄소 이중 결합이고;
R1a 및 R1b는, 각 경우에, 독립적으로 (a) H 또는 C1-C12 알킬, 또는 (b) R1a는 H 또는 C1-C12 알킬이고, R1b는 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께, 인접한 R1b 및 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께 쓰여 탄소-탄소 이중 결합을 형성하고;
R2a 및 R2b는, 각 경우에, 독립적으로 (a) H 또는 C1-C12 알킬, 또는 (b) R2a는 H 또는 C1-C12 알킬이고, R2b는 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께, 인접한 R2b 및 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께 쓰여 탄소-탄소 이중 결합을 형성하고;
R3a 및 R3b는, 각 경우에, 독립적으로 (a) H 또는 C1-C12 알킬, 또는 (b) R3a는 H 또는 C1-C12 알킬이고, R3b는 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께, 인접한 R3b 및 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께 쓰여 탄소-탄소 이중 결합을 형성하고;
R4a 및 R4b는, 각 경우에, 독립적으로 (a) H 또는 C1-C12 알킬, 또는 (b) R4a는 H 또는 C1-C12 알킬이고, R4b는 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께, 인접한 R4b 및 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께 쓰여 탄소-탄소 이중 결합을 형성하고;
R5 및 R6은 각각 독립적으로 메틸 또는 시클로알킬이고;
R7은, 각 경우에, 독립적으로 H 또는 C1-C12 알킬이고;
R8 및 R9는 각각 독립적으로 C1-C12 알킬이거나; R8 및 R9는, 그것들이 부착되는 질소 원자와 함께, 하나의 질소 원자를 포함하는 5, 6 또는 7원 헤테로고리를 형성하고;
a 및 d는 각각 독립적으로 0 내지 24의 정수이고;
b 및 c는 각각 독립적으로 1 내지 24의 정수이고;
e는 1 또는 2이다.
화학식 I의 일부 구현예에서, R1a, R2a, R3a 또는 R4a 중 적어도 하나는 C1-C12 알킬이거나, L1 또는 L2 중 적어도 하나는 -O(C=O)- 또는 -(C=O)O-이다. 다른 구현예에서, R1a 및 R1b는, a가 6일 때 이소프로필이 아니거나 a가 8일 때 n-부틸이 아니다.
화학식 I의 추가적인 일부 구현예에서, R1a, R2a, R3a 또는 R4a 중 적어도 하나는 C1-C12 알킬이거나, L1 또는 L2 중 적어도 하나는 -O(C=O)- 또는 -(C=O)O-이고;
R1a 및 R1b는, a가 6일 때 이소프로필이 아니거나 a가 8일 때 n-부틸이 아니다.
화학식 I의 다른 구현예에서, R8 및 R9는 각각 독립적으로 비치환 C1-C12 알킬이거나; R8 및 R9는, 그것들이 부착되는 질소 원자와 함께, 하나의 질소 원자를 포함하는 5, 6 또는 7원 헤테로고리를 형성한다.
화학식 I의 일부 구현예에서, L1 또는 L2 중 임의의 하나는 -O(C=O)- 또는 탄소-탄소 이중 결합일 수 있다. L1 및 L2는 각각 -O(C=O)-일 수 있거나, 각각 탄소-탄소 이중 결합일 수 있다.
화학식 I의 일부 구현예에서, L1 또는 L2 중 하나는 -O(C=O)-이다. 다른 구현예에서, L1 및 L2 둘 다 -O(C=O)-이다.
화학식 I의 일부 구현예에서, L1 또는 L2 중 하나는 -(C=O)O-이다. 다른 구현예에서, L1 및 L2 둘 다 -(C=O)O-이다.
화학식 I의 일부 다른 구현예에서, L1 또는 L2 중 하나는 탄소-탄소 이중 결합이다. 다른 구현예에서, L1 및 L2 둘 다 탄소-탄소 이중 결합이다.
화학식 I의 추가적인 다른 구현예에서, L1 또는 L2 중 하나는 -O(C=O)-이고, L1 또는 L2 중 나머지는 -(C=O)O-이다. 더 많은 구현예에서, L1 또는 L2 중 하나는 -O(C=O)-이고, L1 또는 L2 중 나머지는 탄소-탄소 이중 결합이다. 또한, 더 많은 구현예에서, L1 또는 L2 중 하나는 -(C=O)O-이고, L1 또는 L2 중 나머지는 탄소-탄소 이중 결합이다.
명세서 전체에 걸쳐 사용된 "탄소-탄소" 이중 결합은 다음 구조 중 하나를 지칭하는 것으로 이해된다:
Figure pct00019
또는
Figure pct00020
이때, Ra 및 Rb는, 각 경우에, 독립적으로 H 또는 치환기이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, Ra 및 Rb는, 각 경우에, 독립적으로 H, C1-C12 알킬 또는 시클로알킬, 예를 들어 H 또는 C1-C12 알킬이다.
다른 구현예에서, 화학식 I의 지질 화합물은 다음 구조 Ia를 갖는다:
[Ia]
Figure pct00021
다른 구현예에서, 화학식 I의 지질 화합물은 다음 구조 Ib를 갖는다:
[Ib]
Figure pct00022
또 다른 구현예에서, 화학식 I의 지질 화합물은 다음 구조 Ic를 갖는다:
[Ic]
Figure pct00023
화학식 I의 지질 화합물의 일부 구현예에서, a, b, c 및 d는 각각 독립적으로 2 내지 12의 정수 또는 4 내지 12의 정수이다. 다른 구현예에서, a, b, c 및 d는 각각 독립적으로 8 내지 12 또는 5 내지 9의 정수이다. 일부 특정 구현예에서, a는 0이다. 일부 구현예에서, a는 1이다. 다른 구현예에서, a는 2이다. 더 많은 구현예에서, a는 3이다. 또 다른 구현예에서, a는 4이다. 일부 구현예에서, a는 5이다. 다른 구현예에서, a는 6이다. 더 많은 구현예에서, a는 7이다. 또 다른 구현예에서, a는 8이다. 일부 구현예에서, a는 9이다. 다른 구현예에서, a는 10이다. 더 많은 구현예에서, a는 11이다. 또 다른 구현예에서, a는 12이다. 일부 구현예에서, a는 13이다. 다른 구현예에서, a는 14이다. 더 많은 구현예에서, a는 15이다. 또 다른 구현예에서, a는 16이다.
화학식 I의 일부 다른 구현예에서, b는 1이다. 다른 구현예에서, b는 2이다. 더 많은 구현예에서, b는 3이다. 또 다른 구현예에서, b는 4이다. 일부 구현예에서, b는 5이다. 다른 구현예에서, b는 6이다. 더 많은 구현예에서, b는 7이다. 또 다른 구현예에서, b는 8이다. 일부 구현예에서, b는 9이다. 다른 구현예에서, b는 10이다. 더 많은 구현예에서, b는 11이다. 또 다른 구현예에서, b는 12이다. 일부 구현예에서, b는 13이다. 다른 구현예에서, b는 14이다. 더 많은 구현예에서, b는 15이다. 또 다른 구현예에서, b는 16이다.
화학식 I의 일부 더 많은 구현예에서, c는 1이다. 다른 구현예에서, c는 2이다. 더 많은 구현예에서, c는 3이다. 또 다른 구현예에서, c는 4이다. 일부 구현예에서, c는 5이다. 다른 구현예에서, c는 6이다. 더 많은 구현예에서, c는 7이다. 또 다른 구현예에서, c는 8이다. 일부 구현예에서, c는 9이다. 다른 구현예에서, c는 10이다. 더 많은 구현예에서, c는 11이다. 또 다른 구현예에서, c는 12이다. 일부 구현예에서, c는 13이다. 다른 구현예에서, c는 14이다. 더 많은 구현예에서, c는 15이다. 또 다른 구현예에서, c는 16이다.
화학식 I의 일부 특정 다른 구현예에서, d는 0이다. 일부 구현예에서, d는 1이다. 다른 구현예에서, d는 2이다. 더 많은 구현예에서, d는 3이다. 또 다른 구현예에서, d는 4이다. 일부 구현예에서, d는 5이다. 다른 구현예에서, d는 6이다. 더 많은 구현예에서, d는 7이다. 또 다른 구현예에서, d는 8이다. 일부 구현예에서, d는 9이다. 다른 구현예에서, d는 10이다. 더 많은 구현예에서, d는 11이다. 또 다른 구현예에서, d는 12이다. 일부 구현예에서, d는 13이다. 다른 구현예에서, d는 14이다. 더 많은 구현예에서, d는 15이다. 또 다른 구현예에서, d는 16이다.
화학식 I의 일부 다른 다양한 구현예에서, a와 d는 동일하다. 일부 다른 구현예에서, b와 c는 동일하다. 일부 다른 특정 구현예에서, a와 d는 동일하고, b와 c는 동일하다.
화학식 I에서 a와 b의 합 및 c와 d의 합은 원하는 특성을 갖는 화학식 I의 지질을 수득하기 위하여 달라질 수 있는 인자이다. 일 구현예에서, a와 b는 그것들의 합이 14 내지 24 범위의 정수가 되도록 선택된다. 다른 구현예에서, c와 d는 그것들의 합이 14 내지 24 범위의 정수가 되도록 선택된다. 추가적인 구현예에서, a와 b의 합 및 c와 d의 합은 동일하다. 예를 들어, 일부 구현예에서, a와 b의 합 및 c와 d의 합은 둘 다 동일한 정수로, 이는 14 내지 24 범위일 수 있다. 또한, 추가적인 구현예에서, a. b, c 및 d는 a와 b의 합 및 c와 d의 합이 12이 이상이 되도록 선택된다.
화학식 I의 일부 구현예에서, e는 1이다. 다른 구현예에서, e는 2이다.
화학식 I의 R1a, R2a, R3a 및 R4a에서의 치환기는 특별히 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, R1a, R2a, R3a 및 R4a는 각 경우에 H이다. 일부 다른 구현예에서, R1a, R2a, R3a 및 R4a 중 적어도 하나는 C1-C12 알킬이다. 일부 다른 구현예에서, R1a, R2a, R3a 및 R4a 중 적어도 하나는 C1-C8 알킬이다. 일부 다른 구현예에서, R1a, R2a, R3a 및 R4a 중 적어도 하나는 C1-C6 알킬이다. 전술한 구현예 중 일부에서, C1-C8 알킬은 메틸, 에틸, n-프로필, 이소-프로필, n-부틸, 이소-부틸, tert-부틸, n-헥실 또는 n-옥틸이다.
화학식 I의 일부 구현예에서, R1a, R1b, R4a 및 R4b는 각 경우에 C1-C12 알킬이다.
화학식 I의 추가적인 구현예에서, R1b, R2b, R3b 및 R4b 중 적어도 하나는 H이거나, R1b, R2b, R3b 및 R4b는 각 경우에 H이다.
화학식 I의 일부 구현예에서, R1b는 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께, 인접한 R1b 및 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께 쓰여 탄소-탄소 이중 결합을 형성한다. 전술한 일부 구현예에서, R4b는 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께, 인접한 R4b 및 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께 쓰여 탄소-탄소 이중 결합을 형성한다.
화학식 I의 R5 및 R6에서의 치환기는 전술한 구현예에서 특별히 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, R5 또는 R6 중 하나 또는 둘 다는 메틸이다. 일부 다른 구현예에서, R5 또는 R6 중 하나 또는 둘 다는 시클로알킬, 예를 들어, 시클로헥실이다. 이들 구현예에서, 시클로알킬은 치환될 수 있거나 비치환될 수 있다. 일부 다른 구현예에서, 시클로알킬은 C1-C12 알킬, 예를 들어 tert-부틸로 치환된다.
R7에서의 치환기는 화학식 I의 전술한 구현예에서 특별히 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, 적어도 하나의 R7은 H이다. 일부 다른 구현예에서, R7은 각 경우에 H이다. 일부 다른 구현예에서, R7은 C1-C12 알킬이다.
전술한 화학식 I의 일부 다른 구현예에서, R8 또는 R9 중 하나는 메틸이다. 다른 구현예에서, R8 및 R9 둘 다 메틸이다.
화학식 I의 일부 상이한 구현예에서, R8 및 R9는, 그것들이 부착되는 질소 원자와 함께, 5, 6 또는 7원 헤테로고리를 형성한다. 전술한 일부 구현예에서, R8 및 R9는, 그것들이 부착되는 질소 원자와 함께, 5원 헤테로고리, 예를 들어, 피롤리디닐 고리를 형성한다.
다양한 상이한 구현예에서, 화학식 I의 지질은 아래 표 7("대표적인 화학식 I의 지질")에 기재된 구조 중 하나를 갖는다.
Figure pct00024
Figure pct00025
Figure pct00026
Figure pct00027
Figure pct00028
Figure pct00029
Figure pct00030
일부 구현예에서, LNP는 화학식 I의 지질, 본 설명에 정의된 바와 같은 mRNA 화합물 및, 중성 지질, 스테로이드 및 페길화 지질로부터 선택된 1종 이상의 부형제를 포함한다. 일부 구현예에서, 화학식 I의 지질은 화합물 I-5이다. 일부 구현예에서, 화학식 I의 지질은 화합물 I-6이다.
또 다른 구현예에서, 지질 나노입자는 (i) 아래에 정의된 바와 같은 화학식 II의 구조를 갖는 양이온성 지질:
[화학식 II]
Figure pct00031
또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 호변이성체, 전구약물 또는 입체이성질체, 및 (ii) 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물로서, 상기 지질 나노입자에 캡슐화되거나 상기 지질 나노입자와 회합되는 것인 mRNA 화합물. mRNA 화합물, mRNA 서열 및 항원 펩티드 또는 단백질과 관련하여, 위의 각각의 옵션 및 선호성을 포함하는 이들 특징에 대한 설명을 참조한다. 바람직한 구현예 중 하나에서, mRNA 화합물은 뉴클레오시드 변형을 포함하지 않는다. 또 다른 구현예에서, mRNA 화합물은 염기 변형을 전혀 포함하지 않는다. 추가적인 구현예에서, mRNA 화합물은 1-메틸슈도우리딘 변형을 포함하지 않는다. 추가적인 구현예에서 mRNA 화합물은 자연적으로 존재하는 뉴클레오시드인 아데닌, 구아닌, 시토신 및 우라실만을 포함한다.
화학식 II는 추가적으로 다음과 같이 정의된다:
L1 및 L2는 각각 독립적으로 -O(C=O)-, -(C=O)O-, -C(=O)-, -O-, -S(O)x-, -S-S-, -C(=O)S-, -SC(=O)-, -NRaC(=O)-, -C(=O)NRa-, -NRaC(=O)NRa, -OC(=O)NRa-, -NRaC(=O)O-, 또는 직접적인 결합이고;
G1은 C1-C2 알킬렌, -(C=O)- , -O(C=O)-, -SC(=O)-, -NRaC(=O)- 또는 직접적인 결합이고;
G2는 -C(=O)-, -(C=O)O-, -C(=O)S-, -C(=O)NRa 또는 직접적인 결합이고;
G3은 C1-C6 알킬렌이고;
Ra는 H 또는 C1-C12 알킬이고;
R1a 및 R1b는, 각 경우에, 독립적으로: (a) H 또는 C1-C12 알킬; 또는 (b) R1a는 H 또는 C1-C12 알킬이고, R1b는 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께, 인접한 R1b 및 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께 쓰여 탄소-탄소 이중 결합을 형성하고;
R2a 및 R2b는, 각 경우에, 독립적으로: (a) H 또는 C1-C12 알킬; 또는 (b) R2a는 H 또는 C1-C12 알킬이고, R2b는 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께, 인접한 R2b 및 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께 쓰여 탄소-탄소 이중 결합을 형성하고;
R3a 및 R3b는, 각 경우에, 독립적으로: (a) H 또는 C1-C12 알킬; 또는 (b) R3a는 H 또는 C1-C12 알킬이고, R3b는 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께, 인접한 R3b 및 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께 쓰여 탄소-탄소 이중 결합을 형성하고;
R4a 및 R4b는, 각 경우에, 독립적으로: (a) H 또는 C1-C12 알킬; 또는 (b) R4a는 H 또는 C1-C12 알킬이고, R4b는 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께, 인접한 R4b 및 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께 쓰여 탄소-탄소 이중 결합을 형성하고;
R5 및 R6은 각각 독립적으로 H 또는 메틸이고;
R7은 C4-C20 알킬이고;
R8 및 R9는 각각 독립적으로 C1-C12 알킬이거나; R8 및 R9는, 그것들이 부착되는 질소 원자와 함께, 5, 6 또는 7원 헤테로고리를 형성하고;
a, b, c 및 d는 각각 독립적으로 1 내지 24의 정수이고;
x는 0, 1 또는 2이다.
화학식 II의 일부 구현예에서, L1 및 L2는 각각 독립적으로 -O(C=O)-, -(C=O)O- 또는 직접적인 결합이다. 다른 구현예에서, G1 및 G2는 각각 독립적으로 -(C=O)- 또는 직접적인 결합이다. 일부 상이한 구현예에서, L1 및 L2는 각각 독립적으로 -O(C=O)-, -(C=O)O- 또는 직접적인 결합이고; G1 및 G2는 각각 독립적으로 -(C=O)- 또는 직접적인 결합이다.
화학식 II의 일부 상이한 구현예에서, L1 및 L2는 각각 독립적으로 -C(=O)-, -O-, -S(O)x-, -S-S-, -C(=O)S-, -SC(=O)-, -NRa-, -NRaC(=O)-, -C(=O)NRa-, -NRaC(=O)NRa, -OC(=O)NRa-, -NRaC(=O)O-, -NRaS(O)xNRa-, -NRaS(O)x- 또는 -S(O)xNRa-이다.
화학식 II의 전술한 구현예 중 다른 구현예에서, 지질 화합물은 다음 구조 IIA 또는 IIB 중 하나를 갖는다:
Figure pct00032
[IIA] 또는
Figure pct00033
[IIB].
화학식 II의 일부 구현예에서, 지질 화합물은 구조 IIA를 갖는다. 다른 구현예에서, 지질 화합물은 구조 IIB를 갖는다.
화학식 II의 전술한 구현예 중 임의의 구현예에서, L1 또는 L2 중 하나는 -O(C=O)-이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, L1 및 L2 각각은 -O(C=O)-이다.
화학식 II의 일부 상이한 구현예에서, L1 또는 L2 중 하나는 -(C=O)O-이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, L1 및 L2 각각은 -(C=O)O-이다.
화학식 II의 상이한 구현예에서, L1 또는 L2 중 하나는 직접적인 결합이다. 본 설명에 사용된 "직접적인 결합"은 해당 기(예컨대, L1 또는 L2)가 부존재함을 의미한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, L1 및 L2 각각은 직접적인 결합이다.
화학식 II의 다른 상이한 구현예에서, R1a 및 R1b의 적어도 한 번의 존재에 대하여, R1a는 H 또는 C1-C12 알킬이고, R1b는 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께, 인접한 R1b 및 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께 쓰여 탄소-탄소 이중 결합을 형성한다.
화학식 II의 또 다른 상이한 구현예에서, R4a 및 R4b의 적어도 한 번의 존재에 대하여, R4a는 H 또는 C1-C12 알킬이고, R4b는 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께, 인접한 R4b 및 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께 쓰여 탄소-탄소 이중 결합을 형성한다.
화학식 II의 더 많은 구현예에서, R2a 및 R2b의 적어도 한 번의 존재에 대하여, R2a는 H 또는 C1-C12 알킬이고, R2b는 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께, 인접한 R2b 및 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께 쓰여 탄소-탄소 이중 결합을 형성한다.
화학식 II의 다른 상이한 구현예에서, R3a 및 R3b의 적어도 한 번의 존재에 대하여, R3a는 H 또는 C1-C12 알킬이고, R3b는 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께, 인접한 R3b 및 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께 쓰여 탄소-탄소 이중 결합을 형성한다.
화학식 II의 다양한 다른 구현예에서, 지질 화합물은 다음 구조 IIC 또는 IID 중 하나를 갖는다:
Figure pct00034
[IIC]
또는
Figure pct00035
[IID],
(화학식에서, e, f, g 및 h는 각각 독립적으로 1 내지 12의 정수이다).
화학식 II의 일부 구현예에서, 지질 화합물은 구조 IIC를 갖는다. 다른 구현예에서, 지질 화합물은 구조 IID를 갖는다.
구조 IIC 또는 IID의 다양한 구현예에서, e, f, g 및 h는 각각 독립적으로 4 내지 10의 정수이다.
화학식 II의 일부 구현예에서, a, b, c 및 d는 각각 독립적으로 2 내지 12의 정수 또는 4 내지 12의 정수이다. 다른 구현예에서, a, b, c 및 d는 각각 독립적으로 8 내지 12 또는 5 내지 9의 정수이다. 일부 특정 구현예에서, a는 0이다. 일부 구현예에서, a는 1이다. 다른 구현예에서, a는 2이다. 더 많은 구현예에서, a는 3이다. 또 다른 구현예에서, a는 4이다. 일부 구현예에서, a는 5이다. 다른 구현예에서, a는 6이다. 더 많은 구현예에서, a는 7이다. 또 다른 구현예에서, a는 8이다. 일부 구현예에서, a는 9이다. 다른 구현예에서, a는 10이다. 더 많은 구현예에서, a는 11이다. 또 다른 구현예에서, a는 12이다. 일부 구현예에서, a는 13이다. 다른 구현예에서, a는 14이다. 더 많은 구현예에서, a는 15이다. 또 다른 구현예에서, a는 16이다.
화학식 II의 일부 구현예에서, b는 1이다. 다른 구현예에서, b는 2이다. 더 많은 구현예에서, b는 3이다. 또 다른 구현예에서, b는 4이다. 일부 구현예에서, b는 5이다. 다른 구현예에서, b는 6이다. 더 많은 구현예에서, b는 7이다. 또 다른 구현예에서, b는 8이다. 일부 구현예에서, b는 9이다. 다른 구현예에서, b는 10이다. 더 많은 구현예에서, b는 11이다. 또 다른 구현예에서, b는 12이다. 일부 구현예에서, b는 13이다. 다른 구현예에서, b는 14이다. 더 많은 구현예에서, b는 15이다. 또 다른 구현예에서, b는 16이다.
화학식 II의 일부 구현예에서, c는 1이다. 다른 구현예에서, c는 2이다. 더 많은 구현예에서, c는 3이다. 또 다른 구현예에서, c는 4이다. 일부 구현예에서, c는 5이다. 다른 구현예에서, c는 6이다. 더 많은 구현예에서, c는 7이다. 또 다른 구현예에서, c는 8이다. 일부 구현예에서, c는 9이다. 다른 구현예에서, c는 10이다. 더 많은 구현예에서, c는 11이다. 또 다른 구현예에서, c는 12이다. 일부 구현예에서, c는 13이다. 다른 구현예에서, c는 14이다. 더 많은 구현예에서, c는 15이다. 또 다른 구현예에서, c는 16이다.
화학식 II의 일부 특정 구현예에서, d는 0이다. 일부 구현예에서, d는 1이다. 다른 구현예에서, d는 2이다. 더 많은 구현예에서, d는 3이다. 또 다른 구현예에서, d는 4이다. 일부 구현예에서, d는 5이다. 다른 구현예에서, d는 6이다. 더 많은 구현예에서, d는 7이다. 또 다른 구현예에서, d는 8이다. 일부 구현예에서, d는 9이다. 다른 구현예에서, d는 10이다. 더 많은 구현예에서, d는 11이다. 또 다른 구현예에서, d는 12이다. 일부 구현예에서, d는 13이다. 다른 구현예에서, d는 14이다. 더 많은 구현예에서, d는 15이다. 또 다른 구현예에서, d는 16이다.
화학식 II의 일부 구현예에서, e는 1이다. 다른 구현예에서, e는 2이다. 더 많은 구현예에서, e는 3이다. 또 다른 구현예에서, e는 4이다. 일부 구현예에서, e는 5이다. 다른 구현예에서, e는 6이다. 더 많은 구현예에서, e는 7이다. 또 다른 구현예에서, e는 8이다. 일부 구현예에서, e는 9이다. 다른 구현예에서, e는 10이다. 더 많은 구현예에서, e는 11이다. 또 다른 구현예에서, e는 12이다.
화학식 II의 일부 구현예에서, f는 1이다. 다른 구현예에서, f는 2이다. 더 많은 구현예에서, f는 3이다. 또 다른 구현예에서, f는 4이다. 일부 구현예에서, f는 5이다. 다른 구현예에서, f는 6이다. 더 많은 구현예에서, f는 7이다. 또 다른 구현예에서, f는 8이다. 일부 구현예에서, f는 9이다. 다른 구현예에서, f는 10이다. 더 많은 구현예에서, f는 11이다. 또 다른 구현예에서, f는 12이다.
화학식 II의 일부 구현예에서, g는 1이다. 다른 구현예에서, g는 2이다. 더 많은 구현예에서, g는 3이다. 또 다른 구현예에서, g는 4이다. 일부 구현예에서, g는 5이다. 다른 구현예에서, g는 6이다. 더 많은 구현예에서, g는 7이다. 또 다른 구현예에서, g는 8이다. 일부 구현예에서, g는 9이다. 다른 구현예에서, g는 10이다. 더 많은 구현예에서, g는 11이다. 또 다른 구현예에서, g는 12이다.
화학식 II의 일부 구현예에서, h는 1이다. 다른 구현예에서, e는 2이다. 더 많은 구현예에서, h는 3이다. 또 다른 구현예에서, h는 4이다. 일부 구현예에서, e는 5이다. 다른 구현예에서, h는 6이다. 더 많은 구현예에서, h는 7이다. 또 다른 구현예에서, h는 8이다. 일부 구현예에서, h는 9이다. 다른 구현예에서, h는 10이다. 더 많은 구현예에서, h는 11이다. 또 다른 구현예에서, h는 12이다.
화학식 II의 일부 다른 다양한 구현예에서, a와 d는 동일하다. 일부 다른 구현예에서, b와 c는 동일하다. 일부 다른 특정 구현예에서, a와 d는 동일하고, b와 c는 동일하다.
화학식 II의 a와 b의 합 및 c와 d의 합은 원하는 특성을 갖는 지질을 수득하기 위하여 달라질 수 있는 인자이다. 일 구현예에서, a와 b는 그것들의 합이 14 내지 24 범위의 정수가 되도록 선택된다. 다른 구현예에서, c와 d는 그것들의 합이 14 내지 24 범위의 정수가 되도록 선택된다. 추가적인 구현예에서, a와 b의 합 및 c와 d의 합은 동일하다. 예를 들어, 일부 구현예에서, a와 b의 합 및 c와 d의 합은 둘 다 동일한 정수로, 이는 14 내지 24 범위일 수 있다. 또한, 추가적인 구현예에서, a. b, c 및 d는 a와 b의 합 및 c와 d의 합이 12이 이상이 되도록 선택된다.
화학식 II의 R1a, R2a, R3a 및 R4a에서의 치환기는 특별히 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, R1a, R2a, R3a 및 R4a 중 적어도 하나는 H이다. 일부 구현예에서, R1a, R2a, R3a 및 R4a는 각 경우에 H이다. 일부 다른 구현예에서, R1a, R2a, R3a 및 R4a 중 적어도 하나는 C1-C12 알킬이다. 일부 다른 구현예에서, R1a, R2a, R3a 및 R4a 중 적어도 하나는 C1-C8 알킬이다. 일부 다른 구현예에서, R1a, R2a, R3a 및 R4a 중 적어도 하나는 C1-C6 알킬이다. 전술한 구현예 중 일부에서, C1-C8 알킬은 메틸, 에틸, n-프로필, 이소-프로필, n-부틸, 이소-부틸, tert-부틸, n-헥실 또는 n-옥틸이다.
화학식 II의 일부 구현예에서, R1a, R1b, R4a 및 R4b는 각 경우에 C1-C12 알킬이다.
화학식 II의 추가적인 구현예에서, R1b, R2b, R3b 및 R4b 중 적어도 하나는 H이거나, R1b, R2b, R3b 및 R4b는 각 경우에 H이다.
화학식 II의 일부 구현예에서, R1b는 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께, 인접한 R1b 및 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께 쓰여 탄소-탄소 이중 결합을 형성한다. 전술한 일부 구현예에서, R4b는 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께, 인접한 R4b 및 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께 쓰여 탄소-탄소 이중 결합을 형성한다.
화학식 II의 R5 및 R6에서의 치환기는 전술한 구현예에서 특별히 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, R5 또는 R6 중 하나는 메틸이다. 다른 구현예에서, R5 또는 R6 각각은 메틸이다.
화학식 II의 R7에서의 치환기는 전술한 구현예에서 특별히 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, R7은 C6-C16 알킬이다. 일부 다른 구현예에서, R7은 C6-C9 알킬이다. 이들 구현예 중 일부에서, R7은 -(C=O)ORb, -O(C=O)Rb, -C(=O)Rb, -ORb, -S(O)xRb, -S-SRb, -C(=O)SRb, -SC(=O)Rb, -NRaRb, -NRaC(=O)Rb, -C(=O)NRaRb, -NRaC(=O)NRaRb, -OC(=O)NRaRb, -NRaC(=O)ORb, -NRaS(O)xNRaRb, -NRaS(O)xRb 또는 -S(O)xNRaRb로 치환되며,
이때, Ra는 H 또는 C1-C12 알킬이고; Rb는 C1-C15 알킬이고; x는 0, 1 또는 2이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, R7은 -(C=O)ORb 또는 -O(C=O)Rb로 치환된다.
화학식 II의 전술한 구현예 중 다양한 구현예에서, Rb는 분지형 C1-C15 알킬이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, Rb는 다음 구조 중 하나를 갖는다:
Figure pct00036
;
Figure pct00037
;
Figure pct00038
;
Figure pct00039
;
Figure pct00040
; 또는
Figure pct00041
.
전술한 화학식 II의 일부 다른 구현예에서, R8 또는 R9 중 하나는 메틸이다. 다른 구현예에서, R8 및 R9 둘 다 메틸이다.
화학식 II의 일부 상이한 구현예에서, R8 및 R9는, 그것들이 부착되는 질소 원자와 함께, 5, 6 또는 7원 헤테로고리를 형성한다. 전술한 일부 구현예에서, R8 및 R9는, 그것들이 부착되는 질소 원자와 함께, 5원 헤테로고리, 예를 들어, 피롤리디닐 고리를 형성한다. 전술한 일부 상이한 구현예에서, R8 및 R9는, 그것들이 부착되는 질소 원자와 함께, 6원 헤테로고리, 예를 들어, 피페라지닐 고리를 형성한다.
화학식 II의 전술한 지질의 또 다른 구현예에서, G3은 C2-C4 알킬렌, 예를 들어, C3 알킬렌이다.
다양한 상이한 구현예에서, 지질 화합물은 아래 표 8("대표적인 화학식 II의 지질")에 기재된 구조 중 하나를 갖는다.
Figure pct00042
Figure pct00043
Figure pct00044
Figure pct00045
Figure pct00046
Figure pct00047
일부 구현예에서, LNP는 화학식 II의 지질, 위에 기술된 바와 같은 mRNA 화합물 및, 중성 지질, 스테로이드 및 페길화 지질로부터 선택된 1종 이상의 부형제를 포함한다. 일부 구현예에서, 화학식 II의 지질은 화합물 II-9이다. 일부 구현예에서, 화학식 II의 지질은 화합물 II-10이다. 일부 구현예에서, 화학식 II의 지질은 화합물 II-11이다. 일부 구현예에서, 화학식 II의 지질은 화합물 II-12이다. 일부 구현예에서, 화학식 II의 지질은 화합물 II-32이다.
추가적인 구현예에서, LNP는 (i) 아래에서 추가적으로 정의된 화학식 III의 양이온성 지질:
[화학식 III]
Figure pct00048
또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 호변이성체, 전구약물 또는 입체이성질체, 및 (ii) 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물로서, 상기 지질 나노입자에 캡슐화되거나 상기 지질 나노입자와 회합되는 것인 mRNA 화합물. mRNA 화합물, mRNA 서열 및 항원 펩티드 또는 단백질과 관련하여, 위의 각각의 옵션 및 선호성을 포함하는 이들 특징에 대한 설명을 참조한다. 바람직한 구현예 중 하나에서, mRNA 화합물은 뉴클레오시드 변형을 포함하지 않는다. 또 다른 구현예에서, mRNA 화합물은 염기 변형을 전혀 포함하지 않는다. 추가적인 구현예에서, mRNA 화합물은 1-메틸슈도우리딘 변형을 포함하지 않는다. 또한, 추가적인 구현예에서 mRNA 화합물은 자연적인 뉴클레오시드인 아데닌, 구아닌, 시토신 및 우라실만을 포함한다.
화학식 III은 추가적으로 다음과 같이 정의된다:
L1 또는 L2 중 하나는 -O(C=O)-, -(C=O)O-, -C(=O)-, -O-, -S(O)x-, -S-S-, -C(=O)S-, SC(=O)-, -NRaC(=O)-, -C(=O)NRa-, -NRaC(=O)NRa-, -OC(=O)NRa- 또는 -NRaC(=O)O-이고, L1 또는 L2 중 나머지는 -O(C=O)-, -(C=O)O-, -C(=O)-, -O-, -S(O)x-, -S-S-, -C(=O)S-, SC(=O)-, -NRaC(=O)-, -C(=O)NRa-, -NRaC(=O)NRa-, -OC(=O)NRa- 또는 -NRaC(=O)O- 또는 직접적인 결합이고;
G1 및 G2는 각각 독립적으로 비치환 C1-C12 알킬렌 또는 C1-C12 알케닐렌이고;
G3은 C1-C24 알킬렌, C1-C24 알케닐렌, C3-C8 시클로알킬렌, C3-C8 시클로알케닐렌이고;
Ra는 H 또는 C1-C12 알킬이고;
R1 및 R2는 각각 독립적으로 C6-C24 알킬 또는 C6-C24 알케닐이고;
R3은 H, OR5, CN, -C(=O)OR4, -OC(=O)R4 또는 -NR5C(=O)R4이고;
R4는 C1-C12 알킬이고;
R5는 H 또는 C1-C6 알킬이고;
x는 0, 1 또는 2이다.
화학식 III의 전술한 구현예 중 일부 구현예에서, 지질은 다음 구조 IIIA 또는 IIIB 중 하나를 갖는다:
Figure pct00049
[IIIA] 또는
Figure pct00050
[IIIB]
이때,
A는 3 내지 8원 시클로알킬 또는 시클로알킬렌 고리이고;
R6은, 각 경우에, 독립적으로 H, OH 또는 C1-C24 알킬이고;
n은 1 내지 15 범위의 정수이다.
화학식 III의 전술한 구현예 중 일부 구현예에서, 지질은 구조 IIIA를 갖고, 다른 구현예에서, 지질은 구조 IIIB를 갖는다.
화학식 III의 다른 구현예에서, 지질은 다음 구조 IIIC 또는 IIID 중 하나를 갖는다:
Figure pct00051
[IIIC] 또는
Figure pct00052
[IIID]
이때, y 및 z는 각각 독립적으로 1 내지 12 범위의 정수이다.
화학식 III의 전술한 구현예 중 임의의 구현예에서, L1 또는 L2 중 하나는 -O(C=O)-이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, L1 및 L2 각각은 -O(C=O)-이다. 임의의 전술한 구현예 중 일부 상이한 구현예에서, L1 및 L2는 각각 독립적으로 -(C=O)O- 또는 -O(C=O)-이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, L1 및 L2 각각은 -(C=O)O-이다.
화학식 III의 일부 상이한 구현예에서, 지질은 다음 구조 IIIE 또는 IIIF 중 하나를 갖는다:
Figure pct00053
[IIIE] 또는
Figure pct00054
[IIIF].
화학식 III의 전술한 구현예 중 일부 구현예에서, 지질은 다음 구조 IIIG, IIIH, IIII 또는 IIIJ 중 하나를 갖는다:
Figure pct00055
[IIIG];
Figure pct00056
[IIIH];
Figure pct00057
[IIII] 또는
Figure pct00058
[IIIJ].
화학식 III의 전술한 구현예 중 일부 구현예에서, n은 2 내지 12 범위의 정수, 예를 들어, 2 내지 8 또는 2 내지 4 범위의 정수이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, n은 3, 4, 5 또는 6이다. 일부 구현예에서, n은 3이다. 일부 구현예에서, n은 4이다. 일부 구현예에서, n은 5이다. 일부 구현예에서, n은 6이다.
화학식 III의 전술한 구현예 중 일부 다른 구현예에서, y 및 z는 각각 독립적으로 2 내지 10 범위의 정수이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, y 및 z는 각각 독립적으로 4 내지 9 또는 4 내지 6 범위의 정수이다.
화학식 III의 전술한 구현예 중 일부 구현예에서, R6은 H이다. 전술한 구현예 중 다른 구현예에서, R6은 C1-C24 알킬이다. 다른 구현예에서, R6은 OH이다.
화학식 III의 일부 구현예에서, G3은 치환되지 않는다. 다른 구현예에서, G3은 치환되지 않는다. 다양한 상이한 구현예에서, G3은 선형 C1-C24 알킬렌 또는 선형 C1-C24 알케닐렌이다.
화학식 III의 일부 다른 전술한 구현예에서, R1 또는 R2, 또는 둘 다는 C6-C24 알케닐이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, R1 및 R2 각각은, 독립적으로 다음 구조를 갖는다:
Figure pct00059
,
이때,
R7a 및 R7b는, 각 경우에, 독립적으로 H 또는 C1-C12 알킬이고;
a는 2 내지 12의 정수이고,
R7a, R7b 및 a는 각각, R1 및 R2가 각각 독립적으로 6 내지 20개 탄소 원자를 포함하도록 선택된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, a는 5 내지 9 또는 8 내지 12 범위의 정수이다.
화학식 III의 전술한 구현예 중 일부 구현예에서, R7a 중 적어도 하나의 경우는 H이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, R7a는 각 경우에 H이다. 전술한 구현예 중 다른 상이한 구현예에서, R7b 중 적어도 하나의 경우는 C1-C8 알킬이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, C1-C8 알킬은 메틸, 에틸, n-프로필, 이소-프로필, n-부틸, 이소-부틸, tert-부틸, n-헥실 또는 n-옥틸이다.
화학식 III의 상이한 구현예에서, R1 또는 R2, 또는 둘 다는 다음 구조 중 하나를 갖는다:
Figure pct00060
;
Figure pct00061
;
Figure pct00062
;
Figure pct00063
;
Figure pct00064
;
Figure pct00065
;
Figure pct00066
;
Figure pct00067
;
Figure pct00068
;
Figure pct00069
.
화학식 III의 전술한 구현예 중 일부에서, R3은 OH, CN, -C(=O)OR4, -OC(=O)R4 또는 -NHC(=O)R4이다. 일부 구현예에서, R4는 메틸 또는 에틸이다.
다양한 상이한 구현예에서, 화학식 III의 양이온성 지질은 아래 표 9("대표적인 화학식 III의 화합물")에 기재된 구조 중 하나를 갖는다.
Figure pct00070
Figure pct00071
Figure pct00072
Figure pct00073
Figure pct00074
일부 구현예에서, LNP는 화학식 III의 지질, 본 설명에 기술된 바와 같은 mRNA 화합물 및, 중성 지질, 스테로이드 및 페길화 지질로부터 선택된 1종 이상의 부형제를 포함한다. 일부 구현예에서, 화학식 III의 지질은 화합물 III-3이다. 일부 구현예에서, 화학식 III의 지질은 화합물 III-7이다.
본 발명의 맥락 내에서, LNP-III-3은 위의 표에 따른 양이온성 지질 화합물 III-3을 포함하는 본 설명에 정의된 지질 나노입자를 의미한다. 다른 지질 나노입자는 유사한 형태로 언급된다.
일부 구현예에서, 화학식 I, II 또는 III의 양이온성 지질은 LNP의 총 지질 함량에 비해, 약 30 내지 약 95 몰 퍼센트의 양으로 LNP에 존재한다. 2종 이상의 양이온성 지질이 LNP 내에 혼입되는 경우, 그러한 퍼센트는 조합된 양이온성 지질에 적용된다. 일 구현예에서, 양이온성 지질은 약 30 내지 약 70 몰 퍼센트의 양으로 LNP에 존재한다. 일 구현예에서, 양이온성 지질은 각각 약 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59 또는 60 몰 퍼센트와 같이, 약 40 내지 약 60 몰 퍼센트의 양으로 LNP에 존재한다.
본 발명의 일부 구현예에서, LNP는 위에 기술된 임의의 지질의 조합물 또는 혼합물을 포함한다.
바람직한 구현예 중 하나에서, 지질 나노입자는 다음 군으로부터 선택된 양이온성 지질을 포함한다:
Figure pct00075
추가적인 구현예에서, 본 발명은 다음을 포함하는 mRNA를 포함하는 지질 나노입자에 관한 것이다:
(i) 화학식 IV를 갖는 PEG 지질:
[화학식 IV]
Figure pct00076
(화학식에서, R8 및 R9는 각각 독립적으로 10개 내지 30개의 탄소 원자를 함유하는 직선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 알킬 사슬로, 이 알킬 사슬은 선택적으로 1개 이상의 에스테르 결합에 의해 중단되고;
w는 30 내지 60 범위의 평균값을 가짐); 및
(ii) 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물로서, 상기 지질 나노입자에 캡슐화되거나 상기 지질 나노입자와 회합되는 것인 mRNA 화합물. mRNA 화합물, mRNA 서열 및 항원 펩티드 또는 단백질과 관련하여, 위의 각각의 옵션 및 선호성을 포함하는 이들 특징에 대한 설명을 참조한다. 바람직한 구현예 중 하나에서, mRNA 화합물은 뉴클레오시드 변형을 포함하지 않는다. 또 다른 구현예에서, mRNA 화합물은 염기 변형을 전혀 포함하지 않는다. 추가적인 구현예에서, mRNA 화합물은 1-메틸슈도우리딘 변형을 포함하지 않는다. 또한, PEG 지질이 화합물 IVa인 경우, 지질 나노입자는 인플루엔자 PR8 또는 Cal/7/2009 헤마글루티닌 또는 HIV-1 CD4-독립성 R3A 외피 단백질을 암호화하는 비변형, 1-메틸슈도우리딘 변형 또는 코돈 최적화된 mRNA를 캡슐화하는, 약 50:10:38.5:1.5의 비율로 화합물 I-6, DSPC, 콜레스테롤 및 PEG 지질 IVa를 포함하는 지질 나노입자가 아니다.바람직한 구현예 중 하나에서, 지질 나노입자는 (i) 위에 정의된 바와 같은 화학식 I, II 또는 III에 따른 양이온성 지질, (ii) 본 설명에 기술된 바와 같은 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물, 및 (iii) 화학식 IV의 PEG 지질을 포함하며; 이때, mRNA 화합물은 상기 지질 나노입자 내에 캡슐화되거나 상기 지질 나노입자와 회합된다.
영구적 양이온성 지질 또는 리피도이트의 양은 또한, 핵산 카고의 양을 고려하여 선택되어야 한다. 일 구현예에서, 이러한 양은 약 0.1 내지 약 20 범위의 나노입자(들)의 N/P 비율 또는 조성물의 N/P 비율을 초래하도록 선택된다. 이러한 맥락에서, N/P 비율은 지질 또는 리피도이드의 염기성 질소 함유 기의 질소 원자("N") 대 카고로 사용되는 핵산의 포스페이트 기("P")의 몰 비율로 정의된다. N/P 비율은 RNA가 통계적인 염기 분포를 나타낼 경우, 예를 들어, 1 μg RNA는 전형적으로 약 3 nmol 포스페이트 잔기를 함유한다는 것에 근거하여 계산될 수 있다. 리피드 또는 리피도이드의 "N" 값은 그것의 분자량 및 영구적 양이온성 및 (존재할 경우) 양이온화 가능 기의 상대적인 함량에 기반하여 계산될 수 있다.
그러한 낮은 N/P 비율은 일반적으로 그러한 담체-카고 복합체, 또는 핵산 부하 나노입자의 성능 및 생체 내 효능에 불리하다고 여겨진다. 그러나 본 발명자들은 그러한 N/P 비율이 본 발명의 맥락에서, 특히, 나노입자의 국소 또는 혈관 외 투여를 의도할 때, 실제로는 유용함을 발견하였다. 여기서, 각각의 나노입자는 효능이 있으며, 동시에 내약성이 좋은 것으로 밝혀졌다.
일부 구현예에서, LNP는 형성 중에 입자의 형성을 안정화하는 1종 이상의 추가적인 지질을 포함한다.
적합한 안정화 지질은 중성 지질 및 음이온성 지질을 포함한다. 용어 "중성 지질"은 생리학적 pH에서 하전되지 않은 또는 중성의 쌍성 이온성 형태로 존재하는 다수의 지질 종 중 임의의 하나를 지칭한다. 대표적인 중성 지질에는 디아실포스파티딜콜린, 디아실포스파티딜에탄올아민, 세라마이드, 스핑고마이엘린, 디하이드로 스핑고마이엘린, 세팔린 및 세레브로사이드가 포함된다.
예시적인 중성 지질에는 예를 들어, 디스테아로일포스파티딜콜린(DSPC), 디올레오일포스파티딜콜린(DOPC), 디팔미토일포스파티딜콜린(DPPC), 디올레오일포스파티딜글리세롤(DOPG), 디팔미토일포스파티딜글리세롤(DPPG), 디올레오일-포스파티딜에탄올아민(DOPE), 팔미토일올레오일포스파티딜콜린(POPC), 팔미토일올레오일-포스파티딜에탄올아민(POPE) 및 디올레오일-포스파티딜에탄올아민4-(N-말레이미도메틸)-시클로헥산-1카복실레이트 (DOPE-mal), 디팔미토일 포스파티딜 에탄올아민(DPPE), 디미리스토일포스포에탄올아민(DMPE), 디스테아로일-포스파티딜에탄올아민(DSPE), 16-O-모노메틸 PE, 16-O-디메틸 PE, 18-1-트랜스 PE, 1-스테아로일-2-올레오일포스파티딜에탄올 아민(SOPE), 및 1,2-디엘라이도일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민(트랜스DOPE)이 포함된다. 일 구현예에서, 중성 지질은 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3포스포콜린(DSPC)이다.
일부 구현예에서, LNP는 DSPC, DPPC, DMPC, DOPC, POPC, DOPE 및 SM으로부터 선택된 중성 지질을 포함한다. 다양한 구현예에서, 중성 지질에 대한 양이온성 지질(예컨대, 화학식 I, II 또는 III의 지질)의 몰 비율은 약 2:1 내지 약 8:1 범위이다.
다양한 구현예에서, LNP는 스테로이드 또는 스테로이드 유사체를 더 포함한다. "스테로이드"는 다음 탄소 골격을 포함하는 화합물이다:
Figure pct00077
일부 구현예에서, 스테로이드 또는 스테로이드 유사체는 콜레스테롤이다. 이들 구현예 중 일부 구현예에서, 콜레스테롤에 대한 양이온성 지질(예컨대, 화학식 I, II 또는 III의 지질)의 몰 비율은 약 5:1 내지 약 1:1 범위이다.
용어 "음이온성 지질"은 생리학적 pH에서 음으로 하전된 임의의 지질을 지칭한다. 이러한 지질에는 포스파티딜글리세롤, 카디오리핀, 디아실포스파티딜세린, 디아실포스파티드산, N도데카노일포스파티딜에탄올아민, N-석시닐포스파티딜에탄올아민, N글루타릴포스파티딜에탄올아민, 리실포스파티딜글리세롤, 팔미토일올레이올포스파티딜글리세롤(POPG), 및 중성 지질에 연결된 다른 음이온성 변형 기가 포함된다.
일부 구현예에서, LNP는 당지질(예컨대, 모노시알로강글리오사이드 GM1)을 포함한다.
일부 구현예에서, LNP는 폴리머 접합 지질을 포함한다. 용어 "폴리머 접합 지질"은 지질 부분과 폴리머 부분 둘 다를 포함하는 분자를 지칭한다. 폴리머 접합 지질의 예는 페길화 지질이다. 용어 "페길화 지질"은 지질 부분과 폴리에틸렌 글리콜 부분 둘 다를 포함하는 분자를 지칭한다. 페길화 지질은 당해 분야에 공지되어 있고, 1-(모노메톡시-폴리에틸렌글리콜)-2,3-디미리스토일글리세롤(PEG-s-DMG) 등을 포함한다.
일부 구현예에서, LNP는 추가적인 안정화 지질을 포함하는데, 이는 폴리에틸렌 글리콜-지질(페길화 지질)이다. 적합한 폴리에틸렌 글리콜지질에는 PEG-변형된 포스파티딜에탄올아민, PEG-변형된 포스파티드산, PEG-변형된 세라마이드(예컨대, PEG-CerC14 또는 PEG-CerC20), PEG-변형된 디알킬아민, PEG-변형된 디아실글리세롤, PEG-변형된 디알킬글리세롤이 포함된다. 대표적인 폴리에틸렌 글리콜-지질에는 PEG-c-DOMG, PEG-c-DMA, 및 PEG-s-DMG가 포함된다. 일 구현예에서, 폴리에틸렌 글리콜-지질은 N-[(메톡시 폴리(에틸렌 글리콜)2000)카바밀]-1,2-디미리스틸옥슬프로필-3-아민(PEG-c-DMA)이다. 일 구현예에서, 폴리에틸렌 글리콜-지질은 PEG-c-DOMG)이다. 다른 구현예에서, LNP는 페길화 디아실글리세롤 (PEG-DAG), 예컨대 1-(모노메톡시-폴리에틸렌글리콜)-2,3-디미리스토일글리세롤(PEG-DMG), 페길화 포스파티딜에탄올로아민(PEG-PE), PEG 석시네이트 디아실글리세롤(PEG-S-DAG), 예컨대, 4-O-(2',3'-디(테트라데카노일옥시)프로필-1-O-(ω-메톡시(폴리에톡시)에틸)부탄디오에이트(PEG-S-DMG), 페길화 세라마이드(PEG-cer), 또는 PEG 디알콕시프로필카바메이트, 예컨대 ω-메톡시(폴리에톡시)에틸-N-(2,3디(테트라데칸옥시)프로필)카바메이트 또는 2,3-디(테트라데칸옥시)프로필-N-(ω-메톡시(폴리에톡시)에틸)카바메이트를 포함한다. 다양한 구현예에서, 페길화 지질에 대한 양이온성 지질의 몰 비율은 약 100:1 내지 약 25:1 범위이다.
언급된 바와 같이, mRNA를 포함하는 지질 나노입자는 화학식 IV의 구조를 갖는 페길화 지질:
[화학식 IV]
Figure pct00078
또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 호변이성체 또는 입체이성질체를 포함할 수 있는데, 화학식에서,
R8 및 R9는 각각 독립적으로 10개 내지 30개의 탄소 원자를 함유하는 직선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 알킬 사슬로, 이 알킬 사슬은 선택적으로 1개 이상의 에스테르 결합에 의해 중단되고; w는 30 내지 60 범위의 평균값을 갖는다.
페길화 지질 IV의 전술한 구현예 중 일부 구현예에서, R8 및 R9는, w가 42일 때, 둘 다 n-옥타데실이 아니다. 일부 다른 구현예에서, R8 및 R9는 각각 독립적으로 10개 내지 18개 탄소 원자를 함유하는 직선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 알킬 사슬이다. 일부 구현예에서, R8 및 R9는 각각 독립적으로 12개 내지 16개 탄소 원자를 함유하는 직선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 알킬 사슬이다. 일부 구현예에서, R8 및 R9는 각각 독립적으로 12개 탄소 원자를 함유하는 직선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 알킬 사슬이다. 일부 구현예에서, R8 및 R9는 각각 독립적으로 14개 탄소 원자를 함유하는 직선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 알킬 사슬이다. 다른 구현예에서, R8 및 R9는 각각 독립적으로 16개 탄소 원자를 함유하는 직선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 알킬 사슬이다. 또한, 더 많은 구현예에서, R8 및 R9는 각각 독립적으로 18개 탄소 원자를 함유하는 직선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 알킬 사슬이다. 또 다른 구현예에서, R8은 12개 탄소 원자를 함유하는 직선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 알킬 사슬이고, R9는 14개 탄소 원자를 함유하는 직선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 알킬 사슬이다.
다양한 구현예에서, w는 IV의 PEG 부분이 약 400 내지 약 6000 g/mol의 평균 분자량을 갖도록 선택되는 범위에 걸쳐 있다. 일부 구현예에서, 평균 w는 약 50이다.
바람직한 구현예에서, R8 및 R9는 포화 알킬 사슬이다.
더욱 바람직한 구현예에서, PEG 지질은 화학식 IVa의 지질로서
Figure pct00079
[IVa],
화학식에서 n은 30 내지 60 범위, 예컨대, 약 30±2, 32±2, 34±2, 36±2, 38±2, 40±2, 42±2, 44±2, 46±2, 48±2, 50±2, 52±2, 54±2, 56±2, 58±2, 또는 60±2의 평균값을 갖는다. 가장 바람직한 구현예에서, n은 약 49이다.
다른 구현예에서, 페길화 지질은 다음 구조 중 하나를 갖는다:
Figure pct00080
이때, n은 페길화 지질의 평균 분자량이 약 2500g/mol이 되도록 선택된 정수이며, 가장 바람직하게는 n은 약 49이다.
일부 구현예에서, PEG 지질은 나노입자의 총 지질 함량에 비해, 약 1 내지 약 10 몰 퍼센트의 양으로 LNP에 존재한다. 일 구현예에서, PEG 지질은 약 1 내지 약 5 몰 퍼센트의 양으로 LNP에 존재한다. 일 구현예에서, PEG 지질은 약 1 몰 퍼센트 또는 약 1.5 몰 퍼센트로 LNP에 존재한다.
일부 구현예에서, LNP는 LNP를 세포 또는 세포 집단으로 표적화할 수 있는 1개 이상의 표적화 모이어티를 포함한다. 예를 들어, 일 구현예에서, 표적화 모이어티는 LNP를 세포 표면 상에서 발견되는 수용체로 유도하는 리간드이다.
일부 구현예에서, LNP는 1개 이상의 내재화 도메인을 포함한다. 예를 들어, 일 구현예에서, LNP는 세포에 결합하여 LNP의 내재화를 유도하는 1개 이상의 도메인을 포함한다. 예를 들어, 일 구현예에서, 1개 이상의 내재화 도메인은 세포 표면 상에서 발견되는 수용체에 결합하여 수용체 매개성 LNP의 흡수를 유도한다. 일부 구현예에서, LNP는 생체 내에서 생체 분자와 결합할 수 있으며, 생체 내에서 LNP-결합된 생체 분자는 세포 표면 수용체에 의해 인식되어 내재화를 유도할 수 있다. 예를 들어, 일 구현예에서, LNP는 전신성(systemic) ApoE와 결합하며, 이는 LNP 및 회합된 카고의 흡수를 초래한다.
다른 예시적인 LNP 및 이의 제조는 당해 분야, 예를 들어, 미국 특허 출원 공개 번호 US20120276209, Semple et al., 2010, Nat Biotechnol., 28(2):172-176; Akinc et al., 2010, Mol Ther., 18(7): 1357-1364; Basha et al., 2011, Mol Ther, 19(12): 2186-2200; Leung et al., 2012, J Phys Chem C Nanomater Interfaces, 116(34): 18440-18450; Lee et al., 2012, Int J Cancer., 131(5): E781-90; Belliveau et al., 2012, Mol Ther nucleic Acids, 1: e37; Jayaraman et al., 2012, Angew Chem Int Ed Engl., 51(34): 8529-8533; Mui et al., 2013, Mol Ther Nucleic Acids. 2, e139; Maier et al., 2013, Mol Ther., 21(8): 1570-1578; 및 Tam et al., 2013, Nanomedicine, 9(5): 665-74에 기술되어 있으며, 이들 각각은 그 전체가 본 설명에 참조로 포함된다.
바람직한 구현예에서, 지질 나노입자는 약 30 nm 내지 약 150 nm, 약 40 nm 내지 약 150 nm, 약 50 nm 내지 약 150 nm, 약 60 nm 내지 약 130 nm, 약 70 nm 내지 약 110 nm, 약 70 nm 내지 약 100 nm, 약 80 nm 내지 약 100 nm, 약 90 nm 내지 약 100 nm, 약 70 내지 약 90 nm, 약 80 nm 내지 약 90 nm, 약 70 nm 내지 약 80 nm, 또는 약 30 nm, 35 nm, 40 nm, 45 nm, 50 nm, 55 nm, 60 nm, 65 nm, 70 nm, 75 nm, 80 nm, 85 nm, 90 nm, 95 nm, 100 nm, 105 nm, 110 nm, 115 nm, 120 nm, 125 nm, 130 nm, 135 nm, 140 nm, 145 nm, 또는 150 nm의 평균 직경을 가지며, 실질적으로 무독성이다. 언급된 바와 같이, 평균 직경은 동적 광산란에 의해 결정한 z-평균값에 상응할 수 있다.
본 발명의 또 다른 바람직한 구현예에서, 지질 나노입자는 각각 약 50 nm 내지 약 300 nm, 또는 약 60 nm 내지 약 250 nm, 약 60 nm 내지 약 150 nm, 또는 약 60 nm 내지 약 120 nm 범위의 유체 역학적 직경을 갖는다.
일부 구현예에서, mRNA는 지질 나노입자에 존재할 때, 수용액에서 뉴클레아제로의 분해에 저항한다.
지질 나노입자 내의 mRNA의 총량은 다양하며, 총 지질에 대한 mRNA w/w 비율에 따라 정의될 수 있다. 본 발명의 일 구현예에서, 총 지질에 대한 mRNA 비율은 0.06 w/w 미만, 바람직하게는 0.03 내지 0.04 w/w이다.
일부 구현예에서, LNP는 화학식 I, II 또는 III의 지질, 위에 정의된 바와 같은 mRNA 화합물, 중성 지질, 스테로이드 및 페길화 지질을 포함한다. 일부 구현예에서, 화학식 I의 지질은 화합물 I-6, 또는 화학식 III의 지질은 화합물 III-3이고, 중성 지질은 DSPC이고, 스테로이드는 콜레스테롤이며, 페길화 지질은 화학식 IVa의 화합물이다.
일부 구현예에서, LNP는 LNP를 세포 또는 세포 집단으로 표적화할 수 있는 1개 이상의 표적화 모이어티를 포함한다. 예를 들어, 일 구현예에서, 표적화 모이어티는 LNP를 세포 표면 상에서 발견되는 수용체로 유도하는 리간드이다.
일부 구현예에서, LNP는 1개 이상의 내재화 도메인을 포함한다. 예를 들어, 일 구현예에서, LNP는 세포에 결합하여 LNP의 내재화를 유도하는 1개 이상의 도메인을 포함한다. 예를 들어, 일 구현예에서, 1개 이상의 내재화 도메인은 세포 표면 상에서 발견되는 수용체에 결합하여 수용체 매개성 LNP의 흡수를 유도한다. 일부 구현예에서, LNP는 생체 내에서 생체 분자와 결합할 수 있으며, 생체 내에서 LNP-결합된 생체 분자는 세포 표면 수용체에 의해 인식되어 내재화를 유도할 수 있다. 예를 들어, 일 구현예에서, LNP는 전신성(systemic) ApoE와 결합하며, 이는 LNP 및 회합된 카고의 흡수를 초래한다.
특히, 본 발명은 다음의 비제한적인 특정 구현예에 관한 것이다.
바람직한 구현예에서, 본 발명은 위에 정의된 바와 같은 화학식 I, II 또는 II에 따른 양이온성 지질 및 위에 정의된 바와 같은 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물을 포함하는, mRNA를 포함하는 지질 나노입자에 관한 것으로, 이때, 양이온성 지질이 화학식 I-6인 경우, 지질 나노입자는 인플루엔자 PR8 또는 Cal/7/2009 헤마글루티닌 또는 HIV-1 CD4-독립성 R3A 외피 단백질을 암호화하는 비변형, 1-메틸슈도우리딘 변형 또는 코돈 최적화 mRNA를 캡슐화하는, 약 50:10:38.5:1.5의 비율로 화학식 I-6, DSPC, 콜레스테롤 및 화학식 IVA의 PEG 지질을 포함하는 지질 나노입자가 아니다.
더욱 바람직한 구현예는 위에 정의된 바와 같은 화학식 IV에 따른 PEG 지질 및 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물을 포함하는, mRNA를 포함하는 지질 나노입자에 관한 것으로, 이때, 양이온성 지질이 화학식 I-6인 경우, 지질 나노입자는 인플루엔자 PR8 또는 Cal/7/2009 헤마글루티닌 또는 HIV-1 CD4-독립성 R3A 외피 단백질을 암호화하는 비변형, 1-메틸슈도우리딘 변형 또는 코돈 최적화 mRNA를 캡슐화하는, 약 50:10:38.5:1.5의 비율로 화학식 I-6, DSPC, 콜레스테롤 및 화학식 IVa의 PEG 지질을 포함하는 지질 나노입자가 아니다.
특정 바람직한 구현예에서, 본 발명은 화학식 I, II 또는 III에 따른 양이온성 지질, 화학식 IV에 따른 PEG-지질, 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물, 스테로이드 및 중성 지질을 포함하는 mRNA를 포함하는 지질 나노입자에 관한 것으로, 이때, 바람직하게는, 양이온성 지질이 화학식 I-6인 경우, 지질 나노입자는 인플루엔자 PR8 또는 Cal/7/2009 헤마글루티닌 또는 HIV-1 CD4-독립성 R3A 외피 단백질을 암호화하는 비변형, 1-메틸슈도우리딘 변형 또는 코돈 최적화 mRNA를 캡슐화하는, 약 50:10:38.5:1.5의 비율로 화학식 I-6, DSPC, 콜레스테롤 및 화학식 IVa의 PEG 지질을 포함하는 지질 나노입자가 아니고, 바람직하게는 항원 펩티드 또는 단백질은 병원성 항원, 종양 항원, 알레르기 항원 또는 자가면역 자기항원 또는 이의 단편 또는 변이체로부터 유래되고, 더욱 바람직하게는 병원성 항원은 인플루엔자 또는 광견병 바이러스로부터 유래된다.
추가적인 바람직한 구현예에서, 본 발명은 다음을 포함하는, mRNA를 포함하는 지질 나노입자에 관한 것이다:
Figure pct00081
Figure pct00082
로부터 선택된 양이온성 지질,
다음 구조를 갖는 PEG 지질:
Figure pct00083
(이때, n은 30 내지 60 범위, 바람직하게는 약 49의 평균값을 가짐), 선택적으로 중성 지질, 바람직하게는 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포콜린(DSPC) 및 선택적으로 스테로이드, 바람직하게는 콜레스테롤(이때, 양이온성 지질 대 DSPC의 몰 비율은 약 2:1 내지 8:1 범위이고, 양이온성 지질 대 콜레스테롤의 몰 비율은 선택적으로 약 2:1 내지 1:1 범위임).
한 가지 바람직한 구현예에서, 본 발명은 다음을 포함하는, mRNA를 포함하는 지질 나노입자에 관한 것이다: 화학식 I, II 또는 III을 갖는 양이온성 지질 및/또는 화학식 IV를 갖는 PEG 지질, 선택적으로 중성 지질, 바람직하게는 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포콜린(DSPC) 및 선택적으로 스테로이드, 바람직하게는 콜레스테롤(이때, 양이온성 지질 대 DSPC의 몰 비율은 선택적으로 약 2:1 내지 8:1 범위이고, 양이온성 지질 대 콜레스테롤의 몰 비율은 선택적으로 약 2:1 내지 1:1 범위임) 및 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 mRNA 서열을 포함하는 mRNA 조성물(이때, mRNA 서열은 추가적으로 바람직하게는 5'에서 3' 방향으로 다음의 요소를 포함함:
a) 5'-CAP 구조, 바람직하게는 m7GpppN,
b) 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역,
c) 폴리(A) 꼬리, 바람직하게는 10 내지 200, 10 내지 100, 40 내지 80 또는 50 내지 70개 아데노신 뉴클레오티드로 구성된 폴리(A) 꼬리,
d) 선택적으로 폴리(C) 꼬리, 바람직하게는 10 내지 200, 10 내지 100, 20 내지 70, 20 내지 60 또는 10 내지 40개 시토신 뉴클레오티드로 구성된 폴리(C) 꼬리, 및
e) 선택적으로 히스톤 스템-루프,
f) 및 선택적으로 3'-UTR 요소).
더욱 바람직한 구현예에서, 본 발명은 다음을 포함하는, mRNA를 포함하는 지질 나노입자에 관한 것이다:
Figure pct00084
로부터 선택된 양이온성 지질,
및/또는 다음 구조를 갖는 PEG 지질:
Figure pct00085
(이때, n은 30 내지 60 범위, 바람직하게는 약 49의 평균값을 가짐),
및 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물(이때, 바람직하게는 항원 펩티드 또는 단백질은 병원성 항원, 종양 항원, 알레르기 항원 또는 자가면역 자가항원 또는 이의 단편 또는 변이체로부터 유래되고, 더욱 바람직하게는 이 항원은 인플루엔자 또는 광견병 바이러스로부터 유래됨),
선택적으로 중성 지질, 바람직하게는 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포콜린(DSPC) 및 선택적으로 스테로이드, 바람직하게는 콜레스테롤(이때, 양이온성 지질 대 DSPC의 몰 비율은 약 2:1 내지 8:1 범위이고, 양이온성 지질 대 콜레스테롤의 몰 비율은 선택적으로 약 2:1 내지 1:1 범위임)(이때, mRNA 서열은 선택적으로 다음을 포함함:
a) 5'-CAP 구조, 및/또는
b) 폴리(A) 서열, 및/또는
c) 폴리(C) 서열).
더욱 바람직한 구현예에서, mRNA 서열은 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 암호화 영역을 포함하며, 이때, mRNA 서열은 서열의 G/C 함량 변형, 코돈 변형, 코돈 최적화 또는 C-최적화로부터 선택된 서열 변형을 포함한다.
특정 바람직한 구현예에서, 본 발명은 다음을 포함하는, mRNA를 포함하는 지질 나노입자에 관한 것이다:
Figure pct00086
로부터 선택된 양이온성 지질,
선택적으로 다음 구조를 갖는 PEG 지질:
Figure pct00087
(이때, n은 30 내지 60 범위, 바람직하게는 약 49의 평균값을 가짐),
및 mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물
선택적으로 중성 지질, 바람직하게는 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포콜린(DSPC) 및
선택적으로 스테로이드, 바람직하게는 콜레스테롤(이때, 양이온성 지질 대 DSPC의 몰 비율은 약 2:1 내지 8:1 범위이고, 양이온성 지질 대 콜레스테롤의 몰 비율은 선택적으로 약 2:1 내지 1:1 범위임),
(이때, mRNA 서열은 추가적으로 바람직하게는 5'에서 3' 방향으로 다음 요소를 포함함:
a) 5'-CAP 구조, 바람직하게는 m7GpppN,
b) 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역(바람직하게는 항원 펩티드 또는 단백질은 병원성 항원, 종양 항원, 알레르기 항원 또는 자가면역 자가항원 또는 이의 단편 또는 변이체로부터 유래되고, 더욱 바람직하게는 병원성 항원은 인플루엔자 또는 광견병 바이러스로부터 유래됨),
c) 폴리(A) 꼬리, 바람직하게는 10 내지 200, 10 내지 100, 40 내지 80 또는 50 내지 70개 아데노신 뉴클레오티드로 구성된 폴리(A) 꼬리,
d) 선택적으로 폴리(C) 꼬리, 바람직하게는 10 내지 200, 10 내지 100, 20 내지 70, 20 내지 60 또는 10 내지 40개 시토신 뉴클레오티드로 구성된 폴리(C) 꼬리, 및
e) 선택적으로 히스톤 스템-루프,
f) 및 선택적으로 3'-UTR 요소).
특정 바람직한 구현예에서, mRNA를 포함하는 본 발명에 따른 (약학적) 조성물 또는 백신은 지질 나노입자를 포함하며, 지질 나노입자는 대략 50:10:38.5:1.5, 바람직하게는 47.5:10:40.8:1.7 또는 더욱 바람직하게는 47.4:10:40.9:1.7의 몰 비율(즉, 에탄올에 용해된, 양이온성 지질, DSPC, 콜레스테롤 및 PEG-지질의 비율(mol%))을 갖는다.
특히 바람직한 구현예에서, 지질 나노입자는 위에 기술된 바와 같은 mRNA를 포함하는 지질 나노입자로, 이때, 바람직하게는 항원 펩티드 또는 단백질은 인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌(HA), 뉴라미니다제(NA), 뉴클레오단백질(NP), 매트릭스 단백질 1(M1), 매트릭스 단백질 2(M2), 비-구조적 단백질 1(NS1), 비-구조적 단백질 2(NS2), 핵 외부 수송 단백질(NEP), 중합효소 산성 단백질(PA), 중합효소 염기성 단백질 PB1, PB1-F2, 또는 중합효소 염기성 단백질 2(PB2), 또는 이의 단편 또는 변이체로부터 유래된다. 더욱 바람직하게는 항원 펩티드 또는 단백질은 인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌(HA) 또는 뉴라미니다제(NA) 또는 이의 단편 또는 변이체로부터 유래된다. 훨씬 더 바람직하게는 항원 펩티드 또는 단백질은 인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌(HA)의 적어도 하나의 전장 단백질 및/또는 뉴라미니다제(NA)의 적어도 하나의 전장 단백질 또는 이의 변이체이다. 추가적인 바람직한 구현예에서, 인플루엔자 바이러스는 인플루엔자 A, B 또는 C 바이러스로부터 선택된다. 특히 바람직한 구현예에서, 인플루엔자 A 바이러스는 H1, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, H11, H12, H13, H14, H15, H16, H17 및 H18로 구성된 군으로부터 선택된 헤마글루티닌(HA)를 특징으로 하는 인플루엔자 바이러스로부터 선택되고/선택되거나, 인플루엔자 A 바이러스는 N1, N2, N3, N4, N5, N6, N7, N8, N9, N10, 및 N11로 구성된 군으로부터 선택된 뉴라미니다제(NA)를 특징으로 하는 인플루엔자 바이러스로부터 선택된다. 바람직하게는, 인플루엔자 A 바이러스는 H1N1, H1N2, H2N2, H3N1, H3N2, H3N8, H5N1, H5N2, H5N3, H5N8, H5N9, H7N1, H7N2, H7N3, H7N4, H7N7, H7N9, H9N2, 및 H10N7로 구성된 군으로부터 선택되고, 바람직하게는 H1N1, H3N2, H5N1로부터 선택된다. 가장 바람직하게는, mRNA 서열은 인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌(HA) 또는 이의 단편 또는 변이체로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질 및 인플루엔자 바이러스의 뉴라미니다제(NA) 또는 이의 단편 또는 변이체로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함한다. 특히 바람직한 구현예에서, mRNA 서열은 H1N1, H1N2, H2N2, H3N1, H3N2, H3N8, H5N1, H5N2, H5N3, H5N8, H5N9, H7N1, H7N2, H7N3, H7N4, H7N7, H7N9, H9N2, 및 H10N7로 구성된 군으로부터, 바람직하게는 H1N1, H3N2, H5N1로부터 선택된 인플루엔자 A 바이러스의 헤마글루티닌(HA)으로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질 및/또는 뉴라미니다제(NA)로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질 또는 이의 단편 또는 변이체를 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함한다.
또한, 본 발명은 다음 단계를 포함하는 상기 나노입자의 제조 방법에 관한 것이다:
(i) 위에 정의된 바와 같은 화학식 I의 양이온성 지질
[화학식 I]
Figure pct00088
또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 호변이성체, 전구약물 또는 입체이성질체,
및/또는 위에 정의된 바와 같은 화학식 II의 양이온성 지질
[화학식 II]
Figure pct00089
또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 호변이성체, 전구약물 또는 입체이성질체,
및/또는 위에 정의된 바와 같은 화학식 III의 양이온성 지질
[화학식 III]
Figure pct00090
또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 호변이성체, 전구약물 또는 입체이성질체;
및/또는
b) 위에 정의된 바와 같은 화학식 IV를 갖는 PEG 지질:
[화학식 II]
Figure pct00091
;
c) 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 mRNA 서열을 포함하는 적어도 하나의 mRNA 화합물; 및
d) 선택적으로 스테로이드; 및
e) 선택적으로 중성 지질;을 제공하는 단계
(ii) 양이온성 지질 및/또는 PEG 지질 및 선택적으로 중성 지질 및/또는 스테로이드 또는 스테로이드 유도체를 에탄올에 용해시키는 단계;
(iii) 에탄올성 지질 용액을 mRNA 폴리뉴클레오티드를 포함하는 수용액과 혼합하는 단계
(iv) 에탄올을 제거하여 mRNA 폴리뉴클레오티드를 캡슐화하거나 mRNA 폴리뉴클레오티드와 회합하는 지질 나노입자를 형성하는 단계; 및 선택적으로
(v) 지질 나노입자를 분리 또는 정제하는 단계.
에탄올은 지질 또는 형성하는 지질 나노입자에 부정적으로 영향을 미치지 않는 임의의 적합한 방법에 의해 제거될 수 있다. 본 발명의 일 구현예에서, 에탄올은 투석에 의해 제거된다. 대안적인 구현예에서, 에탄올은 정용여과에 의해 제거된다.
지질 나노입자의 분리 및 선택적인 정제 또한, 임의의 적합한 방법에 의해 수행될 수 있다. 바람직하게는, 지질 나노입자는 여과되고, 더욱 바람직하게는 지질 나노입자는 멸균 필터를 통한 여과에 의해 분리 또는 정제된다.
또한, 본 발명은 본 발명에 따른 적어도 하나의 지질 나노입자를 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다. 지질 나노입자는 본 설명에 정의된 바와 같은 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 서열을 포함하는 mRNA 화합물을 포함할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, mRNA 서열은 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화한다. 본 발명의 대안적인 구현예에서, mRNA 서열은 둘 이상의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화한다.
본 발명의 일 구현예에서, 약학적 조성물은 본 발명에 따른 지질 나노입자를 포함하며, 이때, 지질 나노입자는 둘 이상의 mRNA 화합물을 포함하는데, mRNA 화합물 각각은 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 상이한 mRNA 서열을 포함한다.
본 발명의 대안적인 구현예에서, 약학적 조성물은 제2의 지질 나노입자를 포함하며, 이때, 제2 지질 나노입자에 포함된 mRNA 화합물은 제1 지질 나노입자에 포함된 mRNA 화합물과 상이하다.
추가적인 양태에서, 본 발명은 mRNA를 포함하는 지질 나노입자를 포함하는 조성물에 관한 것으로, 이때, mRNA는 본 설명에 정의된 바와 같은 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 mRNA 서열 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함한다. 본 발명에 따른 조성물은 바람직하게는 약학적 조성물로서 또는 백신으로서 제공된다.
바람직한 구현예에 따르면, 본 발명에 따른 (약학적) 조성물 또는 백신은 위에 정의된 바와 같은 적어도 하나의 mRNA 서열을 포함하는 적어도 하나의 mRNA를 포함하는, mRNA를 포함하는 지질 나노입자를 포함하며, 이때, 적어도 하나의 mRNA 서열의 적어도 하나의 암호화 영역은, 바람직하게는 본 발명의 서열 목록 또는 각각 PCT/EP2016/075843의 표 1 내지 5 또는 도 20 내지 24에 개시된 바와 같은, 인플루엔자 바이러스 또는 광견병 바이러스의 단백질, 바람직하게는 헤마글루티닌(HA) 또는 뉴라미니다제(NA) 단백질 또는 당단백질 중 임의의 하나로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질, 또는 이들 단백질 중 임의의 하나의 단편 또는 변이체로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화한다.
바람직하게는, 본 발명에 따른 (약학적) 조성물 또는 백신은 위에 정의된 바와 같은 적어도 하나의 mRNA 서열을 포함하는 적어도 하나의 mRNA를 포함하는, mRNA를 포함하는 지질 나노입자를 포함하며, 이때, 적어도 하나의 mRNA 서열의 적어도 하나의 암호화 서열은 바람직하게는 서열 목록 또는 각각 PCT/EP2016/075843의 표 1 내지 4 또는 도 20 내지 23에서 정의된 바와 같은 인플루엔자 바이러스의 단백질, 바람직하게는 헤마글루티닌(HA) 또는 뉴라미니다제(NA) 단백질 중 임의의 하나, 또는 이의 단편 또는 변이체로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되며, 이때, 인플루엔자 바이러스의 단백질로부터 유래된 단백질은 바람직하게는 서열 목록 또는 각각 PCT/EP2016/075843의 표 1 내지 4 또는 도 20 내지 23에서 정의된 아미노산 서열, 바람직하게는 서열 목록 또는 각각 PCT/EP2016/075843의 표 1 내지 4 또는 도 20 내지 23의 서열번호 1 내지 30504 중 임의의 하나, 또는 이들 서열 중 임의의 하나의 단편 또는 변이체를 포함하거나 이로 구성된다. 대안적으로, 항원 펩티드 또는 단백질은 광견병 바이러스로부터, 바람직하게는, 광견병 바이러스의 당단백질로부터, 바람직하게는 서열 목록 또는 각각 PCT/EP2016/075843의 표 5 또는 도 24에 개시된 아미노산 서열 중 임의의 하나를 포함하거나 이로 구성된, 바람직하게는 서열 목록의 서열번호 30505 내지 32012 중 임의의 하나, 또는 이들 서열 중 임의의 하나의 단편 또는 변이체를 포함하거나 이로 구성된 광견병 바이러스로부터 유래된다.
바람직하게는, 본 발명에 따른 (약학적) 조성물 또는 백신은 위에 정의된 바와 같은 적어도 하나의 mRNA 서열을 포함하는 적어도 하나의 mRNA를 포함하는, mRNA를 포함하는 지질 나노입자를 포함하며, 이때, mRNA 서열의 적어도 하나의 암호화 서열은 인플루엔자 바이러스 또는 광견병 바이러스의 단백질로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질, 또는 이의 단편 또는 변이체를 암호화하는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되며, 인플루엔자 바이러스 또는 광견병 바이러스의 단백질로부터 유래된 항원 펩티드 또는 단백질은 바람직하게는, 서열 목록, 바람직하게는 서열번호 1 내지 32012, 또는 각각 PCT/EP2016/075843의 표 1 내지 5 또는 도 20 내지 24의 "A열"에 개시된 아미노산 서열 중 임의의 하나, 또는 이들 서열 중 임의의 하나의 단편 또는 변이체와 적어도 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%, 바람직하게는 적어도 70%, 더욱 바람직하게는 적어도 80%, 훨씬 더 바람직하게는 적어도 85%, 훨씬 더 바람직하게는 적어도 90% 및 가장 바람직하게는 적어도 95% 또는 심지어 97%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
더욱 바람직하게는, 본 발명에 따른 (약학적) 조성물 또는 백신은 위에 정의된 바와 같은 적어도 하나의 mRNA 서열을 포함하는 적어도 하나의 mRNA를 포함하는, mRNA를 포함하는 지질 나노입자를 포함하며, 이때, 적어도 하나의 mRNA 서열의 적어도 하나의 암호화 서열은 인플루엔자 바이러스 또는 광견병 바이러스의 단백질로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질, 또는 이의 단편 또는 변이체를 암호화하는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되며, 이때, 인플루엔자 바이러스 또는 광견병 바이러스의 단백질로부터 유래된 항원 펩티드 또는 단백질은 바람직하게는, 서열 목록, 바람직하게는 서열번호 1 내지 32012, 또는 각각 PCT/EP2016/075843의 표 1 내지 5 또는 도 20 내지 24의 "A열"에 개시된 아미노산 서열 중 임의의 하나, 또는 이들 서열 중 임의의 하나의 단편 또는 변이체와 적어도 80%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
바람직한 구현예에서, 본 발명에 따른 (약학적) 조성물 또는 백신은 위에 정의된 바와 같은 적어도 하나의 mRNA 서열을 포함하는 적어도 하나의 mRNA를 포함하는, mRNA를 포함하는 지질 나노입자를 포함하며, 이때, 적어도 하나의 mRNA 서열의 적어도 하나의 암호화 서열은 서열목록, 바람직하게는 서열번호 32013 내지 64024 또는 서열번호 64025 내지 224084, 또는 PCT/EP2016/075843의 표 1 내지 5 또는 도 20 내지 24의 "B"열 또는 "C"열에 개시된 핵산 서열 중 임의의 하나, 또는 이들 서열 중 임의의 하나의 단편 또는 변이체를 포함하거나 이로 구성된다.
또 다른 구현예에 따르면, 본 발명에 따른 (약학적) 조성물 또는 백신은 위에 정의된 바와 같은 적어도 하나의 mRNA 서열을 포함하는 적어도 하나의 mRNA를 포함하는, mRNA를 포함하는 지질 나노입자를 포함하며, 이때, 적어도 하나의 mRNA 서열의 적어도 하나의 암호화 서열은 서열목록, 바람직하게는 서열번호 32013 내지 64024 또는 서열번호 64025 내지 224084, 또는 각각 PCT/EP2016/075843의 표 1 내지 5 또는 도 20 내지 24의 "B열" 또는 "C열"에 개시된 핵산 서열 중 임의의 하나, 또는 이들 서열 중 임의의 하나의 단편 또는 변이체와 적어도 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%, 바람직하게는 적어도 70%, 더욱 바람직하게는 적어도 80%, 훨씬 더 바람직하게는 적어도 85%, 훨씬 더 바람직하게는 적어도 90% 및 가장 바람직하게는 적어도 95% 또는 심지어 97%의 서열 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
특히 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명에 따른 (약학적) 조성물 또는 백신은 위에 정의된 바와 같은 적어도 하나의 mRNA 서열을 포함하는 적어도 하나의 mRNA를 포함하는, mRNA를 포함하는 지질 나노입자를 포함하며, 이때, 적어도 하나의 mRNA 서열의 적어도 하나의 암호화 서열은 서열목록, 바람직하게는 서열번호 32013 내지 64024 또는 서열번호 64025 내지 224084, 또는 각각 PCT/EP2016/075843의 표 1 내지 5 또는 도 20 내지 24의 "B열" 또는 "C열"에 개시된 핵산 서열 중 임의의 하나, 또는 이들 서열 중 임의의 하나의 단편 또는 변이체와 적어도 80%의 서열 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
더욱 바람직하게는, 본 발명에 따른 (약학적) 조성물 또는 백신은 위에 정의된 바와 같은 적어도 하나의 mRNA 서열을 포함하는 적어도 하나의 mRNA를 포함하는, mRNA를 포함하는 지질 나노입자를 포함하며, 이때, 적어도 하나의 mRNA 서열의 적어도 하나의 암호화 서열은 서열목록, 또는 각각 PCT/EP2016/075843의 표 1 내지 5 또는 도 20 내지 24의 "C열", 또는 서열번호 64025 내지 224084에 개시된 핵산 서열 중 임의의 하나, 또는 이들 서열 중 임의의 하나의 단편 또는 변이체를 포함하거나 이로 구성된다.
본 발명의 맥락에서, (약학적) 조성물 또는 백신은, 바람직하게는 본 설명에 정의된 바와 같은 인플루엔자 바이러스 또는 광견병 바이러스의 단백질 또는 이의 단편 또는 변이체로부터 유래된, 본 설명에 정의된 바와 같은 항원 펩티드 또는 단백질 중 1종 이상을 암호화하는 mRNA를 포함하는, mRNA를 포함하는 지질 나노입자를 포함할 수 있다.
따라서, 본 발명에 따른 (약학적) 조성물 또는 백신은 바람직하게는 인플루엔자 바이러스 또는 광견병 바이러스의 단백질 또는 이의 단편 또는 변이체로부터 유래된, 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 적어도 하나의 mRNA 서열을 포함하는 적어도 하나의 mRNA를 포함하는, mRNA를 포함하는 지질 나노입자를 포함할 수 있으며, 이때, 적어도 하나의 mRNA 서열의 적어도 하나의 암호화 영역은 예컨대, 본 설명에 정의된 인플루엔자 바이러스의 단백질 또는 이의 단편 또는 변이체로부터 유래된, 하나의 특정 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화한다.
대안적으로, 본 발명의 (약학적) 조성물 또는 백신은 본 발명에 따른 적어도 하나의 mRNA 서열을 포함하는 적어도 하나의 mRNA 화합물을 포함하는, mRNA를 포함하는 지질 나노입자를 포함할 수 있는데, 이때, 적어도 하나의 mRNA 서열은 예컨대, 본 설명에 정의된 바와 같은 인플루엔자 바이러스의 단백질 또는 이의 단편 또는 변이체로부터 유래된, 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개의 별개의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화한다.
이러한 맥락에서, (약학적) 조성물 또는 백신에 포함된 적어도 하나의 mRNA 화합물은 본 설명에 정의된 바와 같은 바이- 또는 멀티시스트론성 mRNA로, 이는 예컨대, 인플루엔자 바이러스의 단백질로부터 유래된, 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개의 별개의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 것이 특히 바람직하다. 예컨대, 둘 이상의 mRNA 서열을 포함하는 조성물과 같은, 이러한 구현예들 사이의 혼합물 또한, 예상되는데, 이때, 적어도 하나의 mRNA 서열은 모노시스트론성일 수 있고, 적어도 하나의 다른 mRNA 서열은 바이- 또는 멀티시스트론성일 수 있다.
따라서, 본 발명에 따른 (약학적) 조성물 또는 백신은, 바람직하게는 그 안에 포함된 mRNA 서열의 적어도 하나의 암호화 서열은, 본 설명에 정의된 바와 같은 핵산 서열들의 임의의 조합을 포함할 수 있다.
바람직하게는, (약학적) 조성물 또는 백신은 복수의 또는 둘 이상의 본 발명에 따른 mRNA 서열을 포함하는, mRNA를 포함하는 지질 나노입자를 포함하며, 이때, 각각의 mRNA 서열은 인플루엔자 바이러스의 단백질 또는 이의 단편 또는 변이체로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함한다.
특히 바람직한 구현예에서, 조성물은 바람직하게는 본 설명에 정의된 바와 같은 인플루엔자 바이러스의 단백질 또는 이의 단편 또는 변이체로부터 유래된, 바람직하게는 인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌(HA) 또는 뉴라미니다제(NA) 또는 이의 단편 또는 변이체로부터 유래된, 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 각각 암호화하는 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 6, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 또는 100개의 상이한 mRNA 서열을 포함한다.
가장 바람직한 구현예에서, 조성물은 바람직하게는 본 설명에 정의된 바와 같은 인플루엔자 바이러스의 단백질 또는 이의 단편 또는 변이체로부터 유래된, 바람직하게는 인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌(HA) 또는 뉴라미니다제(NA) 또는 이의 단편 또는 변이체로부터 유래된, 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 각각 암호화하는 4개의 상이한 mRNA 서열을 포함한다.
이러한 맥락에서, 각각의 mRNA 서열은 동일한 병원체, 예컨대, 인플루엔자 바이러스의 단백질로부터 유래된 적어도 하나의 상이한 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 것이 특히 바람직하며, 이때, 항원 펩티드 또는 단백질은 동일한 병원체, 예컨대, 인플루엔자 바이러스의 상이한 단백질로부터 유래되는 것이 특히 바람직하다. 바람직하게는, 조성물은 적어도 두 개의 mRNA 서열을 포함하며, 이때, 적어도 하나의 mRNA 서열은 인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌(HA)으로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하고, 적어도 하나의 mRNA 서열은 동일한 인플루엔자 바이러스의 뉴라미니다제(NA)로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화한다.
또 다른 바람직한 구현예에서, 각각의 mRNA 서열은 상이한 병원체, 예컨대, 인플루엔자 바이러스의 단백질로부터 유래된 적어도 하나의 상이한 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화한다. 바람직하게는 각각의 mRNA 서열은 상이한 인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌(HA) 및/또는 뉴라미니다제(NA)로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화한다.
바람직하게는, 본 발명에 따른 (약학적) 조성물 또는 백신은 인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌(HA) 및/또는 뉴라미니다제(NA)로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 각각 암호화하는 복수의 mRNA 서열을 포함하며, 이때, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 6, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 또는 100종의 상이한 인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌(HA) 및/또는 뉴라미니다제(NA)로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질은 복수의 mRNA 서열에 의해 암호화된다.
이러한 맥락에서, (약학적) 조성물 또는 백신은 인플루엔자 A 바이러스 H1의 단백질, 바람직하게는 헤마글루티닌(HA) 및/또는 뉴라미니다제(NA)로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 mRNA 서열, 인플루엔자 A 바이러스 H3의 단백질, 바람직하게는 헤마글루티닌(HA) 및/또는 뉴라미니다제(NA)로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 mRNA 서열, 인플루엔자 A 바이러스 H5의 단백질, 바람직하게는 헤마글루티닌(HA) 및/또는 뉴라미니다제(NA)로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 mRNA 서열, 및 선택적으로, 인플루엔자 A 바이러스 H7의 단백질, 바람직하게는 헤마글루티닌(HA) 및/또는 뉴라미니다제(NA)로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 mRNA 서열, 및/또는 선택적으로, 인플루엔자 A 바이러스 H9의 단백질, 바람직하게는 헤마글루티닌(HA) 및/또는 뉴라미니다제(NA)로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물을 포함하는, 적어도 하나의 mRNA를 포함하는 지질 나노입자를 포함하는 것이 특히 바람직하다.
바람직하게는, (약학적) 조성물 또는 백신은 인플루엔자 A 바이러스 H1의 헤마글루티닌(HA)으로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 mRNA 서열 및/또는 뉴라미니다제(NA)로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 mRNA 서열, 인플루엔자 A 바이러스 H3의 헤마글루티닌(HA)으로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 mRNA 서열 및/또는 뉴라미니다제(NA)로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 mRNA 서열, 인플루엔자 A 바이러스 H5의 헤마글루티닌(HA)으로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 mRNA 서열 및/또는 뉴라미니다제(NA)로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 mRNA 서열, 및 선택적으로, 인플루엔자 A 바이러스 H7의 헤마글루티닌(HA)으로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 mRNA 서열 및/또는 뉴라미니다제(NA)로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 mRNA 서열, 및/또는 선택적으로, 인플루엔자 A 바이러스 H9의 헤마글루티닌(HA)으로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 mRNA 서열 및/또는 뉴라미니다제(NA)로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물을 포함하는, 적어도 하나의 mRNA를 포함하는 지질 나노입자를 포함한다.
특정 구현예에서, (약학적) 조성물 또는 백신은 인플루엔자 A 바이러스 H1N1의 헤마글루티닌(HA)으로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 mRNA 서열 및/또는 뉴라미니다제(NA)로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 mRNA 서열, 인플루엔자 A 바이러스 H3N2의 헤마글루티닌(HA)으로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 mRNA 서열 및/또는 뉴라미니다제(NA)로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 mRNA 서열, 인플루엔자 A 바이러스 H5N1의 헤마글루티닌(HA)으로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 mRNA 서열 및/또는 뉴라미니다제(NA)로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물을 포함하는, 적어도 하나의 mRNA를 포함하는 지질 나노입자를 포함한다.
추가적으로, (약학적) 조성물 또는 백신은 바람직하게는 본 발명에 따른 mRNA를 포함하는 지질 나노입자에 캡슐화되거나 회합된, 적어도 하나의 인플루엔자 B 바이러스의 헤마글루티닌(HA)으로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 mRNA 서열 및/또는 뉴라미니다제(NA)로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물을 포함하는, 적어도 하나의 mRNA를 포함하는 지질 나노입자를 더 포함한다.
이러한 맥락에서, (약학적) 조성물 또는 백신은 인플루엔자
- A/네덜란드/602/2009 및/또는 A/캘리포니아/7/2009,
- A/홍콩/4801/2014,
- B/브리즈번/60/2008, 및
- A/베트남/1203/2004;
또는 인플루엔자
- A/캘리포니아/07/2009 (H1N1),
- A/홍콩/4801/2014 (H3N2),
- B/브리즈번/60/2008,
- B/푸켓/3073/2013,
- 및 선택적으로 A/미시간/45/2015 (H1N1)pdm09-유사 바이러스의 헤마글루티닌(HA)으로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질 및/또는 뉴라미니다제(NA)로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 복수의 mRNA 서열을 포함하는 mRNA를 포함하는, mRNA를 포함하는 지질 나노입자를 포함하는 것이 특히 바람직하다.
더욱 바람직한 구현예에서, 약학적 조성물 또는 백신은 본 발명에 따른 mRNA를 포함하는 지질 나노입자에 캡슐화되거나 이와 회합된, 위에서 정의된 바와 같은, 인플루엔자 바이러스로부터 유래된 적어도 4개의 상이한 mRNA 서열을 포함한다.
바람직하게는 이러한 맥락에서 mRNA 서열(들)은 다음의 표 11("바람직한 RNA 서열")의 RNA 서열을 포함하거나 이로 구성된다:
Figure pct00092
특히 바람직한 구현예에서, 약학적 조성물 또는 백신은 위에 정의된 바와 같은 mRNA 화합물을 포함하는 지질 나노입자를 포함하는 4가 인플루엔자 백신이다.
(예를 들어, 4가 칵테일 제조를 위하여) 다음의 단백질 서열을 암호화하는 mRNA의 조합물이 이러한 맥락에서 특히 바람직하다:
- (바람직하게는 서열번호 13853, 13854, 13855 및 13856으로 구성된 군으로부터 선택된) 인플루엔자 A/홍콩/4801/2014(H3N2)의 HA 단백질; 및/또는
- (바람직하게는 서열번호 13836, 13837, 13838, 13839, 13840, 13841, 13842, 13843, 및 13844로 구성된 군으로부터 선택된) 인플루엔자 A/캘리포니아/07/2009(H1N1)의 HA 단백질; 및/또는
- (바람직하게는 서열번호 28530, 28531 및 28532로 구성된 군으로부터 선택된) 인플루엔자 B/푸켓/3037/2013(EPI540671)의 HA 단백질; 및/또는
- (바람직하게는 서열번호 28524, 28525, 28526, 28527, 28528, 및 28529로 구성된 군으로부터 선택된) 인플루엔자 B/브리즈번/60/2008의 HA 단백질.
(예를 들어, 3가 칵테일 제조를 위하여) 다음의 단백질 서열을 암호화하는 mRNA의 조합물이 이러한 맥락에서 더욱 특히 바람직하다:
- (바람직하게는 서열번호 26251, 26252, 26253 및 26254로 구성된 군으로부터 선택된) 인플루엔자 A/홍콩/4801/2014(H3N2)의 NA 단백질; 및/또는
- (바람직하게는 서열번호 26238, 26239, 26240, 26241, 26242, 및 26243으로 구성된 군으로부터 선택된) 인플루엔자 A/캘리포니아/7/2009(H1N1)pdm09의 NA 단백질; 및/또는
- (바람직하게는 서열번호 30455, 30456, 30457, 30458, 30459, 및 30460으로 구성된 군으로부터 선택된) 인플루엔자 B/브리즈번/60/2008의 NA 단백질.
(예를 들어, 4가 칵테일 제조를 위하여) 다음의 단백질 서열을 암호화하는 mRNA의 조합물이 이러한 맥락에서 훨씬 더 특히 바람직하다:
- (바람직하게는 서열번호 13848, 13849 및 13850으로 구성된 군으로부터 선택된) 인플루엔자 A/네덜란드/602/2009(H1N1)의 HA 단백질; 및/또는
- (바람직하게는 서열번호 13853, 13854, 13855 및 13856으로 구성된 군으로부터 선택된) 인플루엔자 A/홍콩/4801/2014(H3N2)의 HA 단백질; 및/또는
- (바람직하게는 서열번호 28524, 28525, 28526, 28527, 28528 및 28529로 구성된 군으로부터 선택된) 인플루엔자 B/브리즈번/60/2008의 HA 단백질; 및/또는
- (바람직하게는 서열번호 13859 및 13860으로 구성된 군으로부터 선택된) 인플루엔자 A/베트남/1194/2004(H5N1)의 HA 단백질.
(예를 들어, 7가 칵테일 제조를 위하여) 다음의 단백질 서열을 암호화하는 mRNA의 조합물이 이러한 맥락에서 또한, 특히 바람직하다:
- (바람직하게는 서열번호 13853, 13854, 13855 및 13856으로 구성된 군으로부터 선택된) 인플루엔자 A/홍콩/4801/2014(H3N2)의 HA 단백질; 및/또는
- (바람직하게는 서열번호 13836, 13837, 13838, 13839, 13840, 13841, 13842, 13843, 및 13844로 구성된 군으로부터 선택된) 인플루엔자 A/캘리포니아/07/2009(H1N1)의 HA 단백질; 및/또는
- (바람직하게는 서열번호 28530, 28531 및 28532로 구성된 군으로부터 선택된) 인플루엔자 B/푸켓/3037/2013(EPI540671)의 HA 단백질; 및/또는
- (바람직하게는 서열번호 28524, 28525, 28526, 28527, 28528 및 28529로 구성된 군으로부터 선택된) 인플루엔자 B/브리즈번/60/2008의 HA 단백질; 및/또는
- (바람직하게는 서열번호 26251, 26252, 26253 및 26254로 구성된 군으로부터 선택된) 인플루엔자 A/홍콩/4801/2014(H3N2)의 NA 단백질; 및/또는
- (바람직하게는 서열번호 26238, 26239, 26240, 26241, 26242, 및 26243으로 구성된 군으로부터 선택된) 인플루엔자 A/캘리포니아/7/2009(H1N1)pdm09의 NA 단백질; 및/또는
- (바람직하게는 서열번호 30455, 30456, 30457, 30458, 30459, 및 30460으로 구성된 군으로부터 선택된) 인플루엔자 B/브리즈번/60/2008의 NA 단백질.
본 발명에 따른 조성물은 또한, 적합한 약학적으로 허용 가능한 항원보강제 및 부형제를 포함할 수 있다. 바람직한 구현예에서, 항원보강제는 바람직하게는 조성물의 면역자극 특성을 증진시키기 위하여 첨가된다. 이러한 맥락에서, 항원보강제는 본 발명에 따른 조성물의 투여 및 전달을 지원하기에 적합한 임의의 화합물로 이해될 수 있다. 나아가, 이러한 항원보강제는, 선천적 면역계의 면역 반응, 즉 비-특이적 면역 반응을 개시하거나 증가시킬 수 있으나, 이에 얽매이지 않는다. 환원하면, 투여 시, 본 발명에 따른 조성물은 전형적으로, 본 발명의 조성물에 함유된 본 발명의 mRNA의 적어도 하나의 암호화 영역에 의해 암호화되는 본 설명에 정의된 바와 같은 항원 또는 이의 단편 또는 변이체로 인하여 적응 면역 반응을 개시한다. 추가적으로, 본 발명에 따른 조성물은 본 발명에 따른 조성물에 본 설명에 정의된 바와 같은 항원보강제를 첨가함으로써 (지원하는) 선천적 면역 반응을 생성할 수 있다.
이러한 항원보강제는 당업자에게 공지되어 있으며, 본 발명의 경우에 적합한, 즉, 포유동물에서 면역 반응의 유도를 지원하는 임의의 항원보강제로부터 선택될 수 있다. 바람직하게는, 항원보강제는 다음으로 구성된 군으로부터 선택될 수 있으나, 이에 한정되지 않는다: TDM, MDP, 무라밀 디펩타이드(muramyl dipeptide), 플루론(pluronics), 알룸 용액(alum solution), 알루미늄 하이드록사이드, ADJUMERTM(폴리포스파젠(polyphosphazene)); 알루미늄 포스페이트 겔; 조류(algae) 유래 글루칸; 알가물린(algammulin); 알루미늄 하이드록사이드 겔(알룸(alum)); 고 단백질-흡착 알루미늄 하이드록사이드 겔; 저점도 알루미늄 하이드록사이드 겔; AF 또는 SPT(스쿠알렌(5%), 트윈 80(0.2%), 플루론(Pluronic) L121(1.25%), 인산염 완충 식염수의 에멀젼, pH 7.4); AVRIDINETM(프로판디아민); BAY R1005TM((N-(2-데옥시-2-L-류실아미노-b-D-글루코피라노실)-N-옥타데실-도데카노일-아미드 하이드로아세테이트); CALCITRIOLTM(1-알파,25-디하이드록시-비타민 D3); 칼슘 포스페이트 겔; CAPTM(칼슘 포스페이트 나노입자); 콜레라 완전독소(cholera holotoxin), 콜레라-독소-A1-단백질-A1-단백질-A-D-단편 융합 단백질, 콜레라 독소의 서브유닛 B; CRL 1005(블록 코폴리머 P1205); 사이토카인-함유 리포솜; DDA(디메틸디옥타데실암모늄 브로마이드); DHEA(데하이드로에피안드로스테론); DMPC(디미리스토일포스파티딜콜린); DMPG(디미리스토일포스파티딜글리세롤); DOC/알룸 복합체(데옥시콜산 소듐 염); 프로인트 완전 항원보강제; 프로인트 불완전 항원보강제; 감마 이눌린; 게르부 항원보강제(Gerbu adjuvant)(i) N-아세틸글루코사미닐-(P1-4)-N-아세틸무라밀-L-알라닐-D-글루타민(GMDP), ii) 디메틸디옥타데실암모늄 클로라이드(DDA), iii) 아연-L-프롤린 염 복합체(ZnPro-8)의 혼합물; GM-CSF); GMDP(N-아세틸글루코사미닐-(b1-4)-N-아세틸무라밀-L-알라닐-D-이소글루타민); 이미퀴모드(imiquimod)(1-(2-메티프로필)-1H-이미다조[4,5-c]퀴놀린-4-아민); ImmTherTM(N-아세틸글루코사미닐-N-아세틸무라밀-L-Ala-D-isoGlu-L-Ala-글리세롤 디팔미테이트); DRV(탈수-재수 소낭(dehydration-rehydration vesicle)으로부터 제조된 면역리포솜; 인터페론-감마; 인터루킨-1베타; 인터루킨-2; 인터루킨-7; 인터루킨-12; ISCOMSTM; ISCOPREP 7.0.3.TM; 리포솜; LOXORIBINETM(7-알릴-8-옥소구아노신); LT 5 구강 항원보강제(대장균 불안정한 장내독소-독소전구물질); 임의의 조성물의 마이크로스피어 및 마이크로입자; MF59TM; (스쿠알렌-수 에멀젼(squalene-water emulsion)); MONTANIDE ISA 51TM(정제된 불완전 프로인트 항원보강제); MONTANIDE ISA 720TM(대사 가능한 오일 항원보강제); MPLTM(3-Q-데사실-4'-모노포스포릴 지질 A); MTP-PE 및 MTP-PE 리포솜((N-아세틸-L-알라닐-D-이소글루타미닐-L-알라닌-2-(1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-(하이드록시포스포릴옥시))-에틸아미드, 모노소듐 염); MURAMETIDETM(Nac-Mur-L-Ala-D-Gln-OCH3); MURAPALMITINETM 및 D-MURAPALMITINETM(Nac-Mur-L-Thr-D-isoGIn-sn-글리세롤디팔미토일); NAGO(뉴라미니다제-갈락토오스 산화효소); 임의의 조성물의 나노스피어 또는 나노입자; NISV(비이온성 계면활성제 소낭); PLEURANTM(β-글루칸); PLGA, PGA 및 PLA(젖산 및 글리콜산의 호모- 및 코-폴리머; 마이크로스피어/나노스피어); PLURONIC L121TM; PMMA(폴리메틸 메타크릴레이트); PODDSTM(프로테이노이드 마이크로스피어); 폴리에틸렌 카바메이트 유도체; 폴리-rA: 폴리-rU(폴리아데닐산-폴리우리딜산 복합체); 폴리소르베이트 80(트윈 80); 단백질 코클리트(protein cochleate)(Avanti Polar Lipids, Inc., Alabaster, AL); STIMULONTM(QS-21); Quil-A(Quil-A 사포닌); S-28463(4-아미노-오텍-디메틸-2-에톡시메틸-1H-이미다조[4,5-c]퀴놀린-1-에탄올); SAF-1TM("신텍스(Syntex) 항원보강제 제형"); 센다이(Sendai) 프로테오리포솜 및 센다이 함유 지질 매트릭스; 스판-85(소르비탄 트리올리에이트(sorbitan trioleate)); Specol(마르콜(Marcol) 52, 스판 85 및 트윈 85의 에멀젼); 스쿠알렌 또는 Robane®(2,6,10,15,19,23-헥사메틸테트라코산 및 2,6,10,15,19,23-헥사메틸-2,6,10,14,18,22-테트라코사헥산); 스테아릴티로신(옥타데실티로신 하이드로클로라이드); Theramid®(N-아세틸글루코사미닐-N-아세틸무라밀-L-Ala-D-isoGlu-L-알라디팔미톡시프로필아미드); 테로닐(Theronyl)-MDP(TermurtideTM 또는 [thr 1]-MDP; N-아세틸무라밀-L-트레오닐-D-이소글루타민); Ty 입자(Ty-VLP 또는 바이러스-유사 입자); 월터-리드(Walter-Reed) 리포솜)(알루미늄 하이드록사이드에 흡착된 지질 A를 함유하는 리포좀), 및 어쥬-포스(Adju-phos), 알하이드로겔(Alhydrogel), 리하이드라겔(Rehydragel)과 같은, Pam3Cys, 특히 알루미늄 염을 포함하는 지질펩티드; CFA, SAF, IFA, MF59, 프로백스(Provax), 타이터맥스(TiterMax), 몬타니드(Montanide), 백스펙틴(Vaxfectin)를 포함하는 에멀젼; 옵티백스(Optivax)(CRL1005), L121, 폴록사머(Poloaxmer)4010) 등을 포함하는 코폴리머; 스텔스(Stealth)를 포함하는 리포솜, BIORAL을 포함하는 코클리트(cochleates); QS21, Quil A, Iscomatrix, ISCOM을 포함하는 식물 유래 항원보강제; 토마틴(Tomatine)을 포함하는 공동자극(costimulation)에 적절한 항원보강제, PLG, PMM, 이눌린을 포함하는 바이오폴리머; 로물티드(Romurtide), DETOX, MPL, CWS, 만노스, CpG 핵산 서열 CpG7909, 인간 TLR 1-10의 리간드, 뮤린 TLR 1-13의 리간드, ISS-1018, 35 IC31, 이미다조퀴놀린, 앰플리젠(Ampligen), Ribi529, IMOxine, IRIV, VLP, 콜레라 독소, 열에 불안정한 독소, Pam3Cys, 플라젤린(Flagellin), GPI 앵커, LNFPIII/Lewis X, 항균 펩티드, UC-1V150, RSV 융합 단백질, cdiGMP를 포함하는 미생물 유래의 항원보강제; 및 CGRP 뉴로펩티드를 포함하는 길항제로서 적합한 항원보강제.
특히 바람직한 항원보강제는 GM-CSF, IL-12, IFNγ, 위에 정의된 바와 같은 임의의 면역자극성 핵산, 바람직하게는 면역자극성 RNA, CpG DNA 등과 같은, Th1-면역 반응의 유도 또는 미감작 T 세포의 성숙을 지원하는 항원보강제로부터 선택될 수 있다.
더욱 바람직한 구현예에서, 본 발명의 조성물이 항원-제공 mRNA 이외에도 다음을 포함하는 군으로부터 선택되는 추가적인 성분을 함유하는 것 또한, 가능하다: 추가적인 항원(예컨대, 펩티드 또는 단백질 형태의) 또는 추가적인 항원을 암호화하는 핵산; 추가적인 면역치료제; 1종 이상의 보조 물질; 또는 인간 톨(Toll)-유사 수용체에 대한 결합 친화도(리간드 처럼)로 인해 면역자극성인 것으로 알려져 있는 임의의 추가적인 화합물; 및/또는 항원보강제 핵산, 바람직하게는 면역자극성 RNA(isRNA).
본 발명의 조성물은 원하는 경우, 면역원성 또는 면역자극 능력을 증가시키기 위하여 1종 이상의 보조 물질을 추가적으로 함유할 수 있다. 본 설명에 정의된 바와 같은 mRNA 및 본 발명의 조성물에 선택적으로 함유될 수 있는 보조 물질의 상승 작용이 이에 의해 바람직하게 달성된다. 보조 물질의 다양한 유형에 따라, 다양한 메커니즘이 이러한 측면에서 고려될 수 있다. 예를 들어, 수지상 세포(DC)의 성숙을 허용하는 화합물, 예를 들어, 리포다당류, TNF-알파 또는 CD40 리간드가 적합한 보조 물질의 제1 부류를 형성한다. 일반적으로, "위험 신호"(LPS, GP96 등) 또는 표적화된 방식으로 면역 반응이 증진 및/또는 영향받을 수 있게 하는 사이토카인, 예컨대, GM-CFS의 방식으로, 면역계에 영향을 미치는 임의의 작용제를 보조 물질로서 사용하는 것이 가능하다. 특히 바람직한 보조 물질은 IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-12, IL-13, IL-14, IL-15, IL-16, IL-17, IL-18, IL-19, IL-20, IL-21, IL-22, IL-23, IL-24, IL-25, IL-26, IL-27, IL-28, IL-29, IL-30, IL-31, IL-32, IL-33, IFN-알파, IFN-베타, IFN-감마, GM-CSF, G-CSF, M-CSF, LT-베타 또는 TNF-알파, hGH와 같은 성장 인자 같은, 선천적 면역 반응을 더욱 촉진하는 모노카인, 림포카인, 인터루킨 또는 케모카인과 같은 사이토카인이다.
나아가, 적합한 항원보강제는 화학식 GlXmGn(이때, G는 구아노신, 우라실 또는 구아노신 또는 우라실의 유사체이고; X는 구아노신, 우라실, 아데노신, 티미딘, 시토신 또는 위에 언급된 뉴클레오티드의 유사체이고; l은 1 내지 40의 정수이고, l = 1일 때 G는 구아노신 또는 이의 유사체이고, l >1일 때 뉴클레오티드의 적어도 50%는 구아노신 또는 이의 유사체이고; m은 정수이고, 적어도 3이며; m = 3일 때 X는 우라실 또는 이의 유사체이고, m >3일 때 적어도 3개의 연속적인 우라실 또는 우라실의 유사체가 존재하며; n은 1 내지 40의 정수이고, n = 1일 때 G는 구아노신 또는 이의 유사체이고, n >1일 때 적어도 50%의 뉴클레오티드는 구아노신 또는 이의 유사체임) 또는 화학식 (NuGlXmGnNv)a(이때, G는 구아노신(구아닌), 우리딘(우라실) 또는 구아노신(구아닌) 또는 우리딘(우라실)의 유사체, 바람직하게는 구아노신(구아닌) 또는 이의 유사체; X는 구아노신(구아닌), 우리딘(우라실), 아데노신(아데닌), 티미딘(티민), 시티딘(시토신), 또는 이들 뉴클레오티드(뉴클레오시드)의 유사체, 바람직하게는 우리딘(우라실) 또는 이의 유사체; N은 약 4 내지 50, 바람직하게는 약 4 내지 40, 더욱 바람직하게는 약 4 내지 30 또는 4 내지 20개 핵산 길이를 갖는 핵산 서열로, 각각의 N은 독립적으로 구아노신(구아닌), 우리딘(우라실), 아데노신(아데닌), 티미딘(티민), 시티딘(시토신) 또는 이들 뉴클레오티드(뉴클레오시드)의 유사체로부터 선택됨; a는 1 내지 20, 바람직하게는 1 내지 15, 가장 바람직하게는 1 내지 10의 정수; l은 1 내지 40의 정수로서, I = 1일 때, G는 구아노신(구아닌) 또는 이의 유사체이고, l >1일 때, 적어도 50%의 이러한 뉴클레오티드(뉴클레오시드)는 구아노신(구아닌) 또는 이의 유사체이고; m은 정수이고, 적어도 3이고; 이때, m = 3일 때, X는 우리딘(우라실) 또는 이의 유사체이고, m >3일 때, 적어도 3개의 연속적인 우리딘(우라실) 또는 우리딘(우라실)의 유사체가 존재하며; n은 1 내지 40의 정수로서, n = 1일 때, G는 구아노신(구아닌) 또는 이의 유사체이고, n >1일 때, 적어도 50%의 이러한 뉴클레오티드(뉴클레오시드)는 구아노신(구아닌) 또는 이의 유사체이고; u,v는 서로로부터 독립적으로 0 내지 50의 정수일 수 있고, 바람직하게는 u = 0일 때, v ≥ 1, 또는 v = 0일 때, u ≥ 1임)을 갖는 핵산으로부터 선택될 수 있으며; 화학식 (NuGlXmGnNv)a의 핵산 분자는 적어도 50개 뉴클레오티드, 바람직하게는 적어도 100개 뉴클레오티드, 더욱 바람직하게는 적어도 150개 뉴클레오티드, 훨씬 더 바람직하게는 적어도 200개 뉴클레오티드 및 가장 바람직하게는 적어도 250개 뉴클레오티드의 길이를 갖는다.
나아가, 적합한 항원보강제는 화학식 ClXmCn(이때, C는 시토신, 우라실 또는 시토신 또는 우라실의 유사체이고; X는 구아노신, 우라실, 아데노신, 티미딘, 시토신 또는 위에 언급된 뉴클레오티드의 유사체이고; l은 1 내지 40의 정수이고, l = 1일 때 C는 시토신 또는 이의 유사체이고, l >1일 때 뉴클레오티드의 적어도 50%는 시토신 또는 이의 유사체이고; m은 정수이고, 적어도 3이며; m = 3일 때 X는 우라실 또는 이의 유사체이고, m >3일 때 적어도 3개의 연속적인 우라실 또는 우라실의 유사체가 존재하며; n은 1 내지 40의 정수이고, n = 1일 때 C는 시토신 또는 이의 유사체이고, n >1일 때 적어도 50%의 뉴클레오티드는 시토신 또는 이의 유사체임)을 갖는 핵산으로부터 선택될 수 있다.
이러한 맥락에서, WO2008/014979 및 WO2009/095226의 개시 내용 또한, 본 설명에 참조로 포함된다.
추가적인 양태에서, 본 발명은 백신을 제공하는데, 이 백신은 본 설명에 정의된 바와 같은 암호화 영역을 포함하는 mRNA 서열을 포함하는 적어도 하나의 mRNA 화합물을 포함하는 본 발명에 따른 mRNA를 포함하는 지질 나노입자를 기반으로 한다. 본 발명에 따른 백신은 바람직하게는 본 설명에 정의된 바와 같은 (약학적) 조성물이다.
따라서, 본 발명에 따른 백신은 본 설명에 기술된 (약학적) 조성물과 동일한 성분을 기반으로 한다. 여기까지, 본 설명에 제공된 바와 같은 (약학적) 조성물에 대한 설명이 적용될 수 있다. 바람직하게는, 본 발명에 따른 백신은 본 설명에 정의된 바와 같은 적어도 하나의 mRNA 서열을 포함하는, 적어도 하나의 mRNA를 포함하는 지질 나노입자 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함한다. 백신이 mRNA를 포함하는 지질 나노입자에 캡슐화된 (본 발명에 따른 복수의 RNA 서열로서, 각각이 바람직하게는 별개의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 것인 RNA 서열과 같은) 둘 이상의 mRNA 서열을 포함하는 구현예에서, 이 백신은 물리적으로 별도의 형태로 제공될 수 있고, 별도의 투여 단계에 의해 투여될 수 있다. 본 발명에 따른 백신은 본 설명에 기술된 바와 같은 (약학적) 조성물로서, 특히 mRNA 서열들이 하나의 단일 조성물에 의해 제공되는 것에 해당할 수 있다. 그러나 본 발명의 백신은 물리적으로 분리되어 제공될 수도 있다. 예를 들어, 백신이 본 설명에 정의된 바와 같은 mRNA를 포함하는 지질 나노입자에 캡슐화된 둘 이상의 mRNA 서열/종을 포함하는 구현예에서, 이러한 RNA 종은, 각각이 별개의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는, 각각이 적어도 하나의 mRNA 종/서열(예컨대, 세 개의 별개의 mRNA 종/서열)을 함유할 수 있는, 예를 들어, 2, 3, 4, 5 또는 6종의 별도의 조성물이 제공되도록, 제공될 수 있으며, 이는 조합될 수 있거나 조합되지 않을 수 있다. 또한, 본 발명의 백신은 적어도 2종의 별개의 조성물의 조합물일 수 있으며, 각각의 조성물은 본 설명에 정의된 항원 펩티드 또는 단백질 중 적어도 하나를 암호화하는 적어도 하나의 mRNA를 포함한다. 대안적으로, 백신은 적어도 하나의 mRNA, 바람직하게는 적어도 2, 3, 4, 5, 6종 이상의 mRNA(각각은 본 설명에 정의된 항원 펩티드 또는 단백질 중 하나를 암호화함)의 조합물로서 제공될 수 있다. 백신은 사용 전에 조합되어 하나의 단일 조성물을 제공할 수 있거나, 본 설명에 정의된 바와 같은 mRNA를 포함하는 지질 나노입자에 캡슐화된 항원 펩티드 또는 단백질 중 임의의 것을 암호화하는 별개의 mRNA 서열/종을 투여하기 위하여 2회 이상의 투여가 요구되도록 백신이 사용될 수 있다. 백신이 전형적으로 본 설명에 정의된 항원 조합물을 암호화하는 적어도 2종의 mRNA 서열을 포함하는 적어도 하나의 mRNA를 포함하는 지질 나노입자를 함유하는 경우, 예컨대, (모든 mRNA 종/서열을 합하는) 1회의 단일 투여에 의해, 적어도 2회의 별도의 투여에 의해, 투여될 수 있다. 따라서, (하나의 mRNA 종을 함유하는) 별도의 독립체로서 또는 (둘 이상의 mRNA 종을 함유하는) 조합된 독립체로서 제공된, 본 설명에 정의된 바와 같은 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질 또는 항원의 임의의 조합(및 선택적으로 추가적인 항원)을 암호화하는 모노-, 바이- 또는 멀티시스트론성 mRNA의 임의의 조합은 본 발명에 따른 백신으로 이해된다. 본 발명의 백신의 특히 바람직한 구현예에 따르면, 적어도 하나의 항원, 바람직하게는 전체로서 본 발명의 조성물에 의해 암호화된 적어도 2, 3, 4, 5, 6종 이상의 항원의 본 설명에 정의된 바와 같은 조합물은, 별도로 투여되는 개별적인 (모노시스트론성) mRNA로서 제공된다.
본 발명에 따른 (약학적) 조성물과 같이, 백신의 독립체들은 액체 및 또는 건조(예컨대, 동결 건조) 형태로 제공될 수 있다. 그것들은 추가적인 성분, 특히 약학적 사용을 가능하게 하는 추가적인 성분을 함유할 수 있다. 백신 또는 (약학적) 조성물은 예컨대, 부가적으로 약학적으로 허용 가능한 담체 및/또는 추가적인 보조 물질 및 첨가제 및/또는 항원보강제를 함유할 수 있다.
백신 또는 (약학적) 조성물은 전형적으로 지질 나노입자 내에 캡슐화되고/캡슐화되거나 지질 나노입자와 회합된, 본 설명에 정의된 바와 같은 항원 펩티드 또는 단백질 또는 이의 단편 또는 변이체 또는 항원의 조합물을 암호화하는, 본 설명에 정의된 바와 같은 본 발명에 따른 mRNA 화합물의 안전하고 유효한 양을 포함한다. 본 설명에 사용된 "안전하고 유효한 양"은 암 또는 암과 관련된 질병 또는 장애의 긍정적인 변형을 유의미하게 유도하기에 충분한 mRNA의 양을 의미한다. 그러나 동시에 "안전하고 유효한 양"은 심각한 부작용을 방지할 만큼, 즉, 이점과 위험 사이의 합리적인 관계를 허용할 만큼 충분히 작다. 이러한 한계의 결정은 전형적으로 합리적인 의학적 판단의 범위 내에 있다. 본 발명의 백신 또는 (약학적) 조성물과 관련하여, 표현 "안전하고 유효한 양"은 바람직하게는 과도하거나 손상을 주는 면역 반응이 얻어지지 않을 뿐만 아니라, 바람직하게는 측정 가능한 수준 미만의 이러한 면역 반응도 얻어지지 않는 방식으로 적응 면역계를 자극하기에 적합한 mRNA(및 따라서, 암호화된 항원)의 양을 의미한다. 나아가, 바이- 또는 심지어 멀티시스트론성 mRNA는 동일한 양의 모노시스트론성 mRNA 사용에 비해 암호화된 항원(들)의 현저하게 높은 발현을 유도할 수 있으므로, 본 설명에 정의된 바와 같은 (약학적) 조성물 또는 백신의 mRNA의 이러한 "안전하고 유효한 양"은 mRNA의 유형, 예를 들어 모노시스트론성, 바이- 또는 심지어 멀티시스트론성 mRNA에 따라 선택될 수 있다. 나아가, 위에 정의된 바와 같은 (약학적) 조성물 또는 백신의 mRNA의 "안전하고 유효한 양"은 동반 의사의 지식 및 경험 안에서, 치료되는 특정 병태 및 또한, 치료되는 환자의 연령 및 신체 상태, 병태의 중증도, 치료 기간, 병행 요법, 사용되는 특정한 약학적으로 허용 가능한 담체의 특성, 및 유사한 인자와 관련하여 다양할 것이다. 본 발명에 따른 백신 또는 조성물은 약학적 조성물로서 또는 백신으로서 인간을 위하여 및 수의과적 목적을 위하여서도 본 발명에 따라 사용될 수 있다.
바람직한 구현예에서, 본 발명에 따른 (약학적) 조성물, 백신 또는 부분품의 키트의 mRNA를 포함하는 지질 나노입자는 동결 건조 형태로 제공된다. 바람직하게는, 동결 건조된, mRNA를 포함하는 지질 나노입자는 투여 전에, 유리하게는 수성 담체, 예를 들어 링거-락테이트 용액, 링거 용액, 인산염 완충 용액에 기반한 적합한 완충액에 재구성된다. 바람직한 구현예에서, 본 발명에 따른 (약학적) 조성물, 백신 또는 부분품의 키트는 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6종 이상의 mRNA 화합물을 함유하며, 이는 단일 종의 지질 나노입자로서, 또는 각각의 LNP 종에 대해 별도로, 선택적으로 동결 건조 형태로 (선택적으로 적어도 1종의 추가적인 첨가제와 함께) 제공될 수 있고, 이는 각각의 (모노시스트론성) mRNA의 개별적인 투여가 가능하도록 바람직하게는 사용 전에 (링거-락테이트 용액과 같은) 적합한 완충액에 별도로 재구성된다.
본 발명에 따른 백신 또는 (약학적) 조성물은 전형적으로 약학적으로 허용 가능한 담체를 함유할 수 있다. 본 설명에 사용된 표현 "약학적으로 허용 가능한 담체"는 바람직하게는 본 발명의 백신의 액체 또는 비 액체 기초를 포함한다. 본 발명의 백신이 액체 형태로 제공되는 경우, 담체는 물, 전형적으로 발열원 불포함 물; 등장성 식염수 또는 완충 (수)용액, 예를 들어 인산염, 시트르산염 등 완충 용액일 것이다. 특히 본 발명의 백신의 주사를 위하여, 물 또는 바람직하게는, 소듐 염, 바람직하게는 적어도 50 mM의 소듐 염, 칼슘 염, 바람직하게는 적어도 0,01 mM의 칼슘 염, 및 선택적으로 포타슘 염, 바람직하게는 적어도 3 mM의 포타슘염을 함유하는, 완충액, 더욱 바람직하게는 수성 완충액이 사용될 수 있다. 바람직한 구현예에 따르면, 소듐, 칼슘 및, 선택적으로, 포타슘 염은 그들의 할로겐화물, 예를 들어 염화물, 요오드화물, 또는 브롬화물의 형태로, 수산화물, 탄산염, 탄산수소염, 또는 황산염 등의 형태로 존재할 수 있다. 소듐 염의 예는 예컨대, NaCl, NaI, NaBr, Na2CO3, NaHCO3, Na2SO4를 포함하며, 선택적인 포타슘 염의 예는 예컨대, KCl, KI, KBr, K2CO3, KHCO3, K2SO4를 포함하며, 칼슘 염의 예는 예컨대, CaCl2, CaI2, CaBr2, CaCO3, CaSO4, Ca(OH)2를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 나아가, 전술된 양이온의 유기 음이온이 완충액에 함유될 수 있다. 더욱 바람직한 구현예에 따르면, 위에서 정의된 바와 같은 주사 목적에 적합한 완충액은 소듐 클로라이드(NaCl), 칼슘 클로라이드(CaCl2) 및 선택적으로 포타슘 클로라이드(KCl)로부터 선택된 염을 함유할 수 있으며, 이때, 추가적인 음이온이 클로라이드에 추가하여 존재할 수 있다. CaCl2는 또한, KCl 같은 또 다른 염에 의해 교체될 수 있다. 전형적으로, 주사 완충액 내 염은 적어도 50 mM 소듐 클로라이드(NaCl), 적어도 3 mM 포타슘 클로라이드(KCl) 및 적어도 0.01 mM 칼슘 클로라이드(CaCl2)의 농도로 존재한다. 주사 완충액은 특정한 기준 매질과 관련하여 고장성, 등장성 또는 저장성일 수 있다. 즉, 완충액은 특정한 기준 매질과 관련하여 높거나, 동일거나 낮은 염 함량을 가질 수 있으며, 이때, 바람직하게는 삼투 또는 다른 농도 효과로 인한 세포의 손상을 초래하지 않는, 앞에서 언급된 이러한 염 농도가 사용될 수 있다. 기준 매질은 혈액, 림프, 시토졸 액체, 또는 기타 체액과 같은, 예를 들어 "생체 내" 방법이 존재하는 액체, 또는 예를 들어, 일반적인 완충액 또는 액체와 같은 "시험관 내" 방법에서 기준 매질로서 사용될 수 있는 액체이다. 이러한 통상적인 완충액 또는 액체는 당업자에게 공지되어 있다.
그러나 1종 이상의 융화성(compatible) 고체 또는 액체 충전제 또는 희색제 또는 캡슐화 화합물 또한, 사용될 수 있으며, 이는 사람에 투여하기에 적합하다. 본 설명에 사용된 바와 같은 용어 "융화성"은 본 발명의 백신의 구성 요소가 전형적인 사용 조건 하에 본 발명의 백신의 약학적인 효과를 실질적으로 감소시킬 수 있는 상호 작용이 일어나지 않는 방식으로, 본 설명에 정의된 바와 같은 본 발명에 따른 mRNA와 혼합될 수 있음을 의미한다. 물론, 약학적으로 허용 가능한 담체, 충전제 및 희석제는 치료될 사람에게 투여하기에 적합하도록 반드시 충분히 높은 순도 및 충분히 낮은 독성을 가져야 한다. 약학적으로 허용 가능한 담체, 충전제 또는 이의 구성 요소로서 사용될 수 있는 화합물의 일부 예는 예를 들어, 락토스, 글루코스, 트레할로스 및 수크로스와 같은 당류; 예를 들어, 옥수수 전분 또는 감자 전분과 같은 전분; 덱스트로스; 예를 들어, 소듐 카복시메틸셀룰로오스, 에틸셀룰로오스, 셀룰로오스 아세테이트와 같은 셀룰로오스 및 이의 유도체; 트라가칸스 분말; 맥아; 젤라틴; 수지(tallow); 예를 들어 스테아르산, 마그네슘 스테아레이트와 같은 고체 활택제; 칼슘 설페이트; 예를 들어 땅콩유, 목화씨유, 참깨유, 올리브유, 옥수수유 및 테오브로마(theobroma) 유래 오일과 같은 식물성 오일; 예를 들어 폴리프로필렌 글리콜, 글리세롤, 소르비톨, 만니톨 및 폴리에틸렌글리콜과 같은 폴리올; 알긴산이다.
약학적으로 허용 가능한 담체의 선택은 원칙적으로 본 발명에 따른 약학적 조성물 또는 백신이 투여되는 방법에 의해 결정된다. 조성물 또는 백신은 예를 들어, 전신으로 또는 국소적으로 투여될 수 있다. 전신 투여 경로는 일반적으로 예를 들어, 경피, 구강, 피하, 정맥 내, 근육 내, 동맥 내, 피내 및 복강 내 주사를 포함하는 비경구 경로 및/또는 비강 투여 경로를 포함한다. 국소 투여를 위한 경로는 일반적으로 예를 들어, 국부 투여 경로를 포함하나, 피내, 경피, 피하, 또는 근육 내 주사 또는 병소 내, 두개 내, 폐 내, 심장 내 및 설하 주사도 포함한다. 더욱 바람직하게는, 본 발명에 따른 조성물 또는 백신은 피내, 피하, 또는 근육 내 경로에 의해, 바람직하게는 무-바늘 및/또는 바늘 주사일 수 있는 주사에 의해 투여될 수 있다. 따라서 조성물/백신은 바람직하게는 액체 또는 고체 형태로 제형화된다. 투여되는 본 발명에 따른 백신 또는 조성물의 적합한 양은 통상적인 실험에 의해, 예컨대, 동물 모델을 이용하여 결정될 수 있다. 이러한 모델은, 임의의 제한을 내포하지 않고, 토끼, 양, 마우스, 랫트, 개 및 비-인간 영장류 모델을 포함한다. 주사를 위한 바람직한 단위 투여 형태는 물, 생리 식염수 또는 이의 혼합물의 멸균 용액을 포함한다. 이러한 용액의 pH는 약 7.4와 같은, 생리적으로 허용 가능한 pH까지 조정되어야 한다. 주사에 적합한 담체는 하이드로겔, 제어 방출 또는 지연 방출을 위한 장치, 폴리락트산 및 콜라겐 매트릭스를 포함한다. 국부 적용을 위한, 적합한 약학적으로 허용 가능한 담체는 로션, 크림, 겔 등에 사용하기에 적합한 담체를 포함한다. 본 발명의 조성물 또는 백신이 경구로 투여될 경우, 정제, 캡슐 등은 바람직한 단위 투여 형태이다. 구강 투여를 위해 사용될 수 있는 단위 투여 형태의 제조를 위한 약학적으로 허용 가능한 담체는 선행 기술에 잘 알려져 있다. 이의 선택은 본 발명의 목적에 중요하지 않은 맛, 비용 및 저장성과 같은 2차적인 고려 사항에 의존할 수 있으며, 당업자에 의해 어려움 없이 이루어질 수 있다.
본 발명의 백신 또는 조성물은 면역원성을 더욱 증가시키기 위하여 추가적으로 1종 이상의 보조 물질을 함유할 수 있다. 위에 기술된 바와 같은 본 발명의 백신 또는 조성물과 함께 선택적으로 공동으로 제형화(또는 분리하여 제형화)될 수 있는, 본 발명의 조성물에 함유된 mRNA 및 보조 물질의 상승 작용은 바람직하게는 이에 의해 달성된다. 보조 물질의 다양한 유형에 따라, 다양한 메커니즘이 이러한 측면에서 역할을 할 수 있다. 예를 들어, 수지상 세포(DC)의 성숙을 허용하는 화합물, 예를 들어, 리포다당류, TNF-알파 또는 CD40 리간드가 적합한 보조 물질의 제1 부류를 형성한다. 일반적으로, "위험 신호"(LPS, GP96 등) 또는 표적화된 방식으로 본 발명에 따른 면역 자극성 항원보강제에 의해 생성된 면역 반응이 증진 및/또는 영향받을 수 있게 하는 사이토카인, 예컨대, GM-CFS의 방식으로, 면역계에 영향을 미치는 임의의 작용제를 보조 물질로서 사용하는 것이 가능하다. 특히 바람직한 보조 물질은 - 암호화된 적어도 하나의 항원에 의한 적응 면역 반응의 유도에 추가된 - IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-12, IL-13, IL-14, IL-15, IL-16, IL-17, IL-18, IL-19, IL-20, IL-21, IL-22, IL-23, IL-24, IL-25, IL-26, IL-27, IL-28, IL-29, IL-30, IL-31, IL-32, IL-33, INF-알파, IFN-베타, INF-감마, GM-CSF, G-CSF, M-CSF, LT-베타 또는 TNF-알파, hGH와 같은 성장 인자 같은, 선천적 면역 반응을 촉진하는 모노카인, 림포카인, 인터루킨 또는 케모카인과 같은 사이토카인이다. 바람직하게는, 이러한 면역원성을 증가시키는 작용제 또는 화합물은 별도로 제공되며(본 발명의 백신 또는 조성물과 함께 공동으로 제형화되지 않음) 개별적으로 투여된다.
본 발명의 백신 또는 조성물에 포함될 수 있는 추가적인 첨가제는 예를 들어 트윈(Tween)과 같은 유화제; 예를 들어 소듐 라우릴 설페이트와 같은 습윤제; 착색제; 맛을 부여하는 작용제, 약학적 담체; 정제 형성제; 안정화제; 항산화제; 보존제이다.
본 발명의 백신 또는 조성물은 또한, 추가적으로 인간 Toll-유사 수용체 TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, TLR9, TLR10에 대한 이의 결합 친화도(리간드로서)로 인하여, 또는 뮤린 Toll-유사 수용체 TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, TLR9, TLR10, TLR11, TLR12 또는 TLR13에 대한 이의 결합 친화도(리간드로서)로 인하여 면역을 자극하는 것으로 알려져 있는 임의의 추가적인 화합물을 함유할 수 있다.
이러한 맥락에서 본 발명의 백신 또는 조성물에 첨가될 수 있는 또 다른 부류의 화합물은 CpG 핵산, 특히 CpG-RNA 또는 CpG-DNA일 수 있다. CpG-RNA 또는 CpG-DNA는 단일 가닥 CpG-DNA(ss CpG-DNA), 이중 가닥 CpG-DNA(dsDNA), 단일 가닥 CpG-RNA(ss CpG-RNA) 또는 이중 가닥 CpG-RNA(ds CpG-RNA)일 수 있다. CpG 핵산은 바람직하게는 CpG-RNA의 형태, 더욱 바람직하게는 단일 가닥 CpG-RNA(ss CpG-RNA의 형태이다. CpG 핵산은 바람직하게는 적어도 하나 이상의 (유사분열 촉진) 시토신/구아닌 디뉴클레오티드 서열(들)(CpG 모티프(들))을 함유한다. 제1의 바람직한 대안에 따르면, 이들 서열에 함유된 적어도 하나의 CpG 모티프, 즉, CpG 모티프의 C(시토신) 및 G(구아닌)은 비메틸화된다. 이들 서열에 선택적으로 함유되는 모든 추가적인 시토신 또는 구아닌은 메틸화되거나 비메틸화될 수 있다. 그러나 더욱 바람직한 대안에 따르면, CpG 모티프의 C(시토신) 및 G(구아닌)은 메틸화된 형태로 존재할 수도 있다.
본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 또한, 본 설명에 정의된 바와 같은 mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물 및 위에 정의된 바와 같은 화학식 I, II, III 또는 IV에 따른 적어도 하나의 지질을 포함하는 키트, 특히 부분품의 키트를 제공한다. 추가적인 구현예에서, 키트는 위에 정의된 바와 같은 지질 나노입자 또는 위에 정의된 바와 같은 지질 나노입자를 포함하는 (약학적) 조성물, 및/또는 본 발명에 따른 백신, 선택적으로 용해를 위한 액체 비히클 및 선택적으로, mRNA를 포함하는 지질 나노입자, 조성물 및/또는 백신의 투여 및 투여량에 대한 정보가 있는 기술 설명서를 포함한다. 기술 설명서는 mRNA를 포함하는 지질 나노입자, 조성물 및/또는 백신의 투여 및 투여량에 관한 정보를 포함할 수 있다. 이러한 키트, 바람직하게는 부분품의 키트는, 예를 들어, 위에서 언급된 임의의 적용 또는 용도를 위하여, 바람직하게는 인플루엔자 바이러스 감염 또는 이에 관련된 질병 또는 장애의 치료 또는 예방을 위한 (본 발명의 의약, 바람직하게는 백신의 제조를 위한) 본 발명에 따른 지질 나노입자의 용도를 위하여 적용될 수 있다. 키트는 또한, 인플루엔자 바이러스 감염 또는 이에 관련된 질병 또는 장애의 치료 또는 예방을 위한 (본 발명의 백신의 제조를 위한) 본 설명에 정의된 바와 같은 지질 나노입자, 조성물 또는 백신의 용도를 위하여 적용될 수 있는데, 이때, 지질 나노입자, 조성물 및/또는 백신은 위에서 정의된 바와 같은 포유동물에서의 면역 반응을 유도 또는 증진시킬 수 있다. 이러한 키트는 추가적으로 인플루엔자 바이러스 감염 또는 이에 관련된 질병 또는 장애의 치료 또는 예방을 조절, 바람직하게는 유도, 예컨대, 위에 정의된 바와 같은 포유동물에서의 면역 반응을 유도 또는 증진시키기 위하여, 및 바람직하게는 인플루엔자 바이러스 감염 또는 이에 관련된 질병 또는 장애의 치료 또는 예방을 지원하기 위하여 (본 발명의 백신의 제조를 위한) 본 설명에 정의된 바와 같은 지질 나노입자, 조성물 또는 백신의 용도를 위하여 적용될 수 있다. 키트의 특별한 형태로서, 부분품의 키트는 본 설명에 기술된 바와 같은 1종 이상의 동일하거나 상이한 조성물 및/또는 1종 이상의 동일하거나 상이한 백신을 키트의 상이한 부분품 안에 포함할 수 있다. 부분품의 키트는 또한, 키트의 상이한 부분품 안에 본 발명에 따른 (예를 들어 하나의) 조성물, (예를 들어 하나의) 백신 및/또는 mRNA를 포함하는 지질 나노입자를 포함할 수 있다. 예컨대, 키트의 각각의 부분품은 바람직하게는 별도의 항원을 암호화하는, 본 설명에 정의된 바와 같은, mRNA를 포함하는 지질 나노입자를 포함한다. 바람직하게는, 키트 또는 부분품의 키트는 본 발명에 따른 mRNA를 용해시키기 위한 비히클을 부분품으로서 포함하며, 이 비히클은 선택적으로는 링거-락테이트 용액이다. 임의의 위의 키트는 위에 정의된 바와 같은 치료 또는 예방에 사용될 수 있다.
이 양태의 또 다른 구현예에서, 본 발명에 따른 키트는 추가적으로 적어도 하나의 항원보강제를 함유할 수 있다. 추가적인 구현예에서, 본 발명에 따른 키트는 추가적으로 적어도 하나의 추가적인 약학적 활성 성분, 바람직하게는 암 또는 관련 장애의 치료 및/또는 예방에 적합한 치료적 화합물을 함유할 수 있다. 나아가, 또 다른 구현예에서, 키트는 추가적으로 바늘, 어플리케이터, 패치, 주사 장치를 포함한, 본 발명에 따른 조성물 또는 백신의 투여에 필수적이거나 적합한 부분품 및/또는 장치를 함유할 수 있다.
추가적인 양태에서, 본 발명은 mRNA를 포함하는 지질 나노입자 또는 약학적 조성물의 의약으로서의 용도에 관한 것이다. 대안적인 구현예에서, 본 발명은 약학적 조성물 또는 mRNA를 포함하는 지질의 의약의 제조에 있어서의 용도에 관한 것이다. 특히, 상기 의약은 이를 필요로 하는 대상체의 면역 반응을 치료적으로 또는 예방적으로 유발하기 위한 것이다.
바람직한 구현예에서, 의약은 암 또는 종양 질병, 감염성 질병, 알레르기, 또는 자가면역 질환 또는 이에 관련된 장애의 예방 또는 치료를 위한 것이다.
특히, 의약은 대상체, 바람직하게는 척추동물의 치료를 위한 것이다. 바람직한 구현예에서, 대상체는 포유동물, 바람직하게는 염소, 소, 돼지, 개, 고양이, 당나귀, 원숭이, 유인원, 설치류, 예컨대, 마우스, 햄스터, 토끼 및, 특히, 인간을 포함하는 군으로부터 선택된 포유동물이다.
특히 바람직한 구현예에서, 의약은 백신, 바람직하게는 종양, 인플루엔자 또는 광견병 백신이다. 특정 구현예에서, 의약은 광견병 치료에 사용되는 광견병 백신이다.
의약은 임의의 적합한 방법으로 투여될 수 있다. 바람직하게는 의약은 비경구 투여, 특히 주사를 위한 것이다.
또한, 본 발명은 위에 정의된 바와 같은 지질 나노입자 또는 위에 정의된 바와 같은 약학적 조성물을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 이를 필요로 하는 대상체에서 면역 반응을 유발하는 방법에 관한 것이다.
추가적인 양태에서, 본 발명은 위에 정의된 바와 같은 지질 나노입자 또는 위에 정의된 바와 같은 약학적 조성물을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 이를 필요로 하는 대상체의 암 또는 종양 질병, 감염성 질병, 알레르기, 또는 자가면역 질환 또는 이에 관련된 장애의 예방 또는 치료 방법에 관한 것이다.
본 발명의 일 양태에 따르면, mRNA를 포함하는 지질 나노입자, (약학적) 조성물 또는 백신은 암 또는 종양 질병, 감염성 질병, 알레르기, 또는 자가면역 질환 또는 이에 관련된 장애의 치료 또는 예방을 위하여 (의약의 제조를 위하여) 본 발명에 따라 이용될 수 있다. 이러한 맥락에서, 인플루엔자 바이러스 또는 광견병 바이러스 감염의 치료 또는 예방이 특히 바람직하다.
나아가, 필요로 하는 대상체에 약학적 유효량의 본 발명에 따른 mRNA를 포함하는 지질 나노입자, (약학적) 조성물 또는 백신을 투여함으로써, 바람직하게는 본 설명에 정의된 바와 같은, 암 또는 종양 질병, 감염성 질병, 알레르기, 또는 자가면역 질환 또는 이에 관련된 장애를 치료 또는 예방하는 방법 또한, 본 발명에 포함된다. 이러한 방법은 전형적으로 본 발명의 mRNA를 포함하는 지질 나노입자, 조성물 또는 백신을 제조하는 선택적인 제1 단계, 및 (약학적 유효량의) 상기 조성물 또는 백신을 필요로 하는 환자/대상체에 투여하는 것을 포함하는, 제2의 단계를 포함한다. 이를 필요로 하는 대상체는 전형적으로 포유동물일 것이다. 본 발명의 맥락에서, 포유동물은 바람직하게는 염소, 소, 돼지, 개, 고양이, 당나귀, 원숭이, 유인원, 설치류, 예컨대, 마우스, 햄스터, 토끼 및, 특히, 인간을 포함하나 이에 한정되지 않는 군으로부터 선택된다. 본 발명의 일부 구현예에서, 대상체는 새, 바람직하게는 닭이다.
이러한 맥락에서, 인플루엔자 바이러스 또는 광견병 바이러스 감염 또는 이에 관련된 장애의 치료 또는 예방 방법이 바람직하게는 본 발명에 포함된다.
본 발명은 또한, 바람직하게는 암 또는 종양 질병, 감염성 질병, 알레르기, 또는 자가면역 질환 또는 이에 관련된 장애, 바람직하게는 본 설명에 정의된 바와 같은 인플루엔자 바이러스 또는 광견병 바이러스 감염 또는 관련된 병태의 치료 또는 예방을 위하여, 바람직하게는 포유동물에서 면역 반응을 유도하기 위한, 본 발명에 따른 mRNA를 포함하는 지질 나노입자, 조성물 또는 백신의 용도에 관한 것이다.
나아가, 본 발명은 본 설명에 정의된 바와 같은 포유동물에서 면역 반응을 조절하기 위한, 바람직하게는 유도 또는 증진시키기 위한, 더욱 바람직하게는 인플루엔자 바이러스 감염 또는 이에 관련된 질병 또는 장애를 예방 및/또는 치료하기 위한, 본 설명에 정의된 바와 같은 본 발명에 따른 mRNA를 포함하는 지질 나노입자, (약학적) 조성물 또는 백신의 용도를 포함한다. 이러한 맥락에서, 인플루엔자 바이러스 감염의 치료 또는 예방의 지원은 뉴라미니다제 억제제(예컨대, 오셀타미비르(oseltamivir) 및 자나미비르(zanamivir)) 및 M2 단백질 억제제(예컨대, 아다만탄 유도체)와 같은 항바이러스제를 이용한 요법 및 본 설명에 정의된 바와 같은 RNA 또는 약학적 조성물을 이용한 요법과 같은 통상적인 인플루엔자 치료 방법의 임의의 조합일 수 있다. 인플루엔자 바이러스 감염의 치료 또는 예방의 지원은 또한, 본 설명에 정의된 임의의 다른 구현예에서도 예상될 수 있다. 따라서, 임의의 다른 접근법과의 공동 치료법, 바람직하게는 위의 치료적 접근법 중 1종 이상, 특히 항바이러스제와 조합한, 본 발명에 따른 mRNA를 포함하는 지질 나노입자, (약학적) 조성물 또는 백신의 임의의 사용은 본 발명의 범위 내에 있다.
투여를 위하여, 바람직하게는 임의의 투여 경로가 본 설명에 정의된 바와 같이 이용될 수 있다. 특히, 본 발명에 따른 mRNA를 포함하는 지질 나노입자에 의해 암호화된 항원을 기반으로 하여 적응 면역 반응을 유도하거나 증진시킴으로써, 본 설명에 정의된 바와 같은 인플루엔자 바이러스 감염 또는 이에 관련된 질병 또는 장애의 치료 또는 예방에 적합한 투여 경로가 사용된다. 따라서, 본 발명에 따른 조성물 및/또는 백신의 투여는 본 설명에 정의된 바와 같은 또 다른 조성물 및/또는 백신의 투여 전에, 투여와 동시에, 및/또는 그 후에 발생할 수 있으며, 이러한 또 다른 조성물 및/또는 백신은 - 또한 - 상이한 항원 또는 항원의 조합을 암호화하는 또 다른 mRNA를 포함하는 지질 나노입자 또는 mRNA를 포함하는 지질 나노입자의 조합을 함유할 수 있는데, 이때, 본 발명에 따른 mRNA 서열에 의해 암호화된 각각의 항원은 바람직하게는 인플루엔자 바이러스 감염 및 이에 관련된 질병 또는 장애의 치료 또는 예방에 적합하다. 이러한 맥락에서, 본 설명에 정의된 바와 같은 치료는 또한, 인플루엔자 바이러스 감염과 관련된 질병 및 이에 관련된 질병 또는 장애의 조절을 포함할 수 있다.
본 발명의 이 양태의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명에 따른 (약학적) 조성물 또는 백신은 주사에 의해 투여된다. 당해 분야에 공지된 임의의 적합한 주사 기술이 사용될 수 있다. 바람직하게는, 본 발명의 조성물은 주사에 의해, 바람직하게는 무-바늘 주사, 예를 들어, 제트 주입에 의해 투여된다.
일 구현예에서, 본 발명의 조성물은 본 설명에 정의된 바와 같은 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12종 이상의 mRNA를 포함하며, 이들 각각은 바람직하게는 별도로, 바람직하게는 무-바늘 주사에 의해 주입된다. 대안적으로, 본 발명의 조성물은 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12종 이상의 mRNA를 포함하며, 이때, 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12종 이상의 mRNA는 혼합물로서, 바람직하게는 본 설명에 정의된 바와 같은 주사에 의해, 투여된다.
추가적인 양태에서, 본 발명은 항원 또는 항원의 조합물에 대한 대상체의 면역화 방법에 관한 것이다.
본 설명에 정의된 바와 같은 항원 또는 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12종 이상의 항원의 조합물에 대한 대상체의 면역화를 위한 면역화 프로토콜은 전형적으로 본 발명에 따른 (약학적) 조성물 또는 백신의 일련의 단일 용량 또는 투여량을 포함한다. 본 설명에 사용된 바와 같은 단일 투여량은 초기/최초 용량, 제2 용량 또는 임의의 추가적인 용량을 지칭하며, 이는 바람직하게는 각각 면역 반응을 "증대(boost)"시키기 위하여 투여된다. 이러한 맥락에서, 각각의 단일 투여량은 바람직하게는 본 설명에 정의된 바와 같은 동일한 항원 또는 항원들의 동일한 조합물의 투여를 포함하며, 이때, 두 단일 투여량의 투여 사이의 간격은 적어도 하루, 바람직하게는 2, 3, 4, 5, 6 또는 7일에서, 적어도 1주, 바람직하게는 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8주까지 다양할 수 있다. 단일 투여량 사이의 간격은 면역화 프로토콜의 경과에 걸쳐 일정하거나 다를 수 있다. 예를 들어, 간격은 프로토콜의 초반에서 더 짧을 수 있고, 말미로 갈수록 더 길 수 있다. 단일 투여량의 총 수 및 단일 투여량 사이의 간격에 따라, 면역화 프로토콜은 일정 기간에 걸쳐 연장될 수 있으며, 이는 바람직하게는 적어도 1주일, 더욱 바람직하게는 수 주일(예를 들어 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12주), 훨씬 더 바람직하게는 수 개월(예를 들어 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 18 또는 24개월) 지속된다. 각각의 단일 투여량은 바람직하게는 본 설명에 정의된 바와 같은 항원, 바람직하게는 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12종 이상의 항원의 조합물의 투여를 포함하며, 따라서, 적어도 1회 주사, 바람직하게는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12회의 주사를 수반할 수 있다. 일부 사례에서, 본 발명에 따른 조성물 또는 백신은 전형적으로 1회 주사에서 단일 투여량으로서 투여된다. 이 경우, 본 발명에 따른 백신은 본 설명에 정의된 바와 같은 별개의 항원을 암호화하는 별도의 mRNA 제형을 포함하며, 단일 투여량의 투여 중에 수행되는 주사의 최소 횟수는 백신의 분리된 성분들의 수에 상응한다. 일부 구현예에서, 단일 투여량의 투여는 백신(예를 들어, 본 설명에 정의된 바와 같은 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 mRNA를 포함하는, 특정 RNA 제형)의 각 성분을 위하여 2회 이상의 주사를 포함할 수 있다. 예를 들어, 백신의 개별적인 성분의 총 부피의 일부는 다른 신체 부분으로 주사될 수 있으며, 따라서 2회 이상의 주사를 수반한다. 더욱 구체적인 예에서, 각각이 상이한 두 신체 부분으로 투여되는, 4종의 분리된 mRNA 제형을 포함하는 백신의 단일 투여량은 8회의 주사를 포함한다. 전형적으로, 단일 투여량은 백신의 모든 성분을 관리하는 데 필요한 모든 주사를 포함하며, 이때, 단일 성분은 위에서 개략한 바와 같이, 2회 이상의 주사를 수반할 수 있다. 이 경우, 본 발명에 따른 백신의 단일 투여량의 투여가 2회 이상의 주사를 포함할 경우, 주사는 필수적으로 동시에 또는 함께, 즉 전형적으로 의사가 단일 주사 단계를 잇따라 수행하는 데 필요한 시간 프레임 내에서 시차를 둔 방식으로, 수행된다. 따라서, 단일 투여량의 투여는 바람직하게는 수 분, 예를 들어 2, 3, 4, 5, 10, 15, 30 또는 60분의 시간에 걸쳐 연장된다.
본 설명에 정의된 바와 같은 mRNA를 포함하는 지질 나노입자, 본 발명에 따른 (약학적) 조성물 또는 백신의 투여는 시차를 둔 치료로 수행될 수 있다. 시차 치료는 예컨대, 예컨대, 인플루엔자 바이러스 감염 또는 이에 관련된 질병 또는 장애의 통상적인 치료법 이전의, 이와 동시의, 및/또는 이후의, mRNA를 포함하는 지질 나노입자, 조성물 또는 백신의 투여일 수 있다. 예컨대, 인플루엔자 바이러스 감염 또는 이에 관련된 질병 또는 장애의 치료 또는 예방에 적합한 요법 또는 치료제의 투여 전에, 이와 동시에 및/또는 이후에 mRNA를 포함하는 지질 나노입자, 조성물 또는 백신의 투여에 의할 수 있다. 이러한 시차 치료는 예를 들어 키트, 바람직하게는 본 설명에 정의된 바와 같은 부분품의 키트를 이용하여 수행될 수 있다.
시차 치료는 추가적으로 또는 대안적으로 또한, 본 설명에 정의된 바와 같은 mRNA를 포함하는 지질 나노입자, 본 발명에 따른 (약학적) 조성물 또는 백신의 투여를, 바람직하게는 조성물 또는 백신의 일부를 형성하는, 본 설명에 정의된 바와 같은 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 mRNA 또는 이의 단편 또는 변이체가 바람직하게는 동일한 본 발명의 조성물 또는 백신의 일부를 형성하는, 위에 정의된 바와 같은 또 다른 mRNA를 포함하는 지질 나노입자와 병행하여, 또는 이전에 또는 이후에 투여되는 형태로 포함할 수 있다. 바람직하게는, (모든 mRNA를 포함하는 지질 나노입자의) 투여는 1시간 이내, 더욱 바람직하게는 30분 이내, 훨씬 더 바람직하게는 15, 10, 5, 4, 3, 또는 2분 이내 또는 심지어 1분 이내에 일어난다. 이러한 시차 치료는 예를 들어 키트, 바람직하게는 본 설명에 정의된 바와 같은 부분품의 키트를 이용하여 수행될 수 있다.
바람직한 구현예에서, 본 발명의 약학적 조성물 또는 백신은 반복적으로 투여되며, 이때, 각각의 투여는 바람직하게는 본 발명의 조성물 또는 백신의 적어도 하나의 mRNA를 포함하는 지질 나노입자의 개별적인 투여를 포함한다. 각각의 투여 시점에, 적어도 하나의 mRNA는 2회 이상(예를 들어 2회 또는 3회) 투여될 수 있다. 본 발명의 특히 바람직한 구현예에서, 위에 정의된 바와 같은 mRNA를 포함하는 지질 나노입자에 캡슐화되거나 이와 회합된 (각각이 본 설명에 정의된 바와 같은 항원 중 별개의 항원을 암호화하는) 적어도 2, 3, 4, 5, 6종 이상의 mRNA 서열로서, 이러한 mRNA 서열은 동일하거나 상이한 지질 나노입자의 mRNA 화합물의 일부인, mRNA 서열은 각각의 시점에서 투여되며, 이때, 각각의 mRNA는 주사에 의해 2회 투여되며, 사지에 걸쳐 분산된다.
다음의 반응식은 화학식 I, II 또는 III의 지질을 제조하는 방법을 예시한다.
일반 반응식 1
Figure pct00093
화학식 I의 지질의 구현예(예컨대, 화합물 A-5)는 일반 반응식 1("방법 A")에 따라 제조될 수 있는데, 이때, R은 포화 또는 불포화 C1-C24 알킬 또는 포화 또는 불포화 시클로알킬이며, m은 0 또는 1이고, n은 1 내지 24의 정수이다. 일반 반응식 1을 참조하면, 구조 A-1의 화합물은 상업적 공급원으로부터 구입할 수 있거나, 당업자에게 친숙한 방법에 따라 제조될 수 있다. A-1, A-2 및 DMAP의 혼합물을 DCC로 처리하여 브롬화물 A-3을 제공한다. 브롬화물 A-3, 염기(예컨대, N,N-디이소프로필에틸아민) 및 N,N-디메틸디아민 A-4의 혼합물을 임의의 필수적인 워크업 및 또는 정제 단계 후에 A-5를 생산하기에 충분한 온도와 시간에서 가열한다.
일반 반응식 2
Figure pct00094
화학식 I의 화합물의 다른 구현예(예컨대, 화합물 B-5)는 일반 반응식 2("방법 B")에 따라 제조될 수 있는데, 이때, R은 포화 또는 불포화 C1-C24 알킬 또는 포화 또는 불포화 시클로알킬이며, m은 0 또는 1이고, n은 1 내지 24의 정수이다. 일반 반응식 2에 나타난 바와 같이, 구조 B-1의 화합물은 상업적 공급원으로부터 구입할 수 있거나, 당업자에게 친숙한 방법에 따라 제조될 수 있다. B-1(1 당량)의 용액을 산 염화물 B-2(1 당량) 및 염기(예컨대, 트리에틸아민)으로 처리한다. 미정제 생성물을 산화제(예컨대, 피리디늄 클로로크로메이트)로 처리하고, 중간 생성물 B-3을 회수한다. 그 후, 미정제 B-3, 산(예컨대, 아세트산) 및 N,N-디메틸아미노아민 B-4의 용액을 환원제(예컨대, 소듐 트리아세톡시보로하이드라이드)로 처리하여 임의의 필수적인 워크업 및/또는 정제 후에 B-5를 수득한다.
출발 물질 A-1 및 B-1이 포화 메틸렌 탄소만을 포함하는 것으로 위에는 도시되었지만, 탄소-탄소 이중 결합을 포함하는 출발 물질 또한, 탄소-탄소 이중 결합을 포함하는 화합물의 제조에 활용될 수 있음을 주의해야 한다.
일반 반응식 3
Figure pct00095
화학식 I의 지질의 상이한 구현예(예컨대, 화합물 C-7 또는 C9)는 일반 반응식 3("방법 C")에 따라 제조될 수 있는데, 이때, R은 포화 또는 불포화 C1-C24 알킬 또는 포화 또는 불포화 시클로알킬이며, m은 0 또는 1이고, n은 1 내지 24의 정수이다. 일반 반응식 3을 참조하면, 구조 C-1의 화합물은 상업적 공급원으로부터 구입할 수 있거나, 당업자에게 친숙한 방법에 따라 제조될 수 있다.
일반 반응식 4
Figure pct00096
화학식 II의 화합물의 구현예(예컨대, 화합물 D-5 및 D-7)는 일반 반응식 4("방법 D")에 따라 제조될 수 있는데, 이때, R1a, R1b, R2a, R2b, R3a, R3b, R4a, R4b, R5, R6, R8, R9, L1, L2, G1, G2, G3, a, b, c 및 d는 본 설명에 정의된 바와 같고, R7'는 R7 또는 C3-C19 알킬을 나타낸다. 일반 반응식 1을 참조하면, 구조 D-1 및 D-2의 화합물은 상업적 공급원으로부터 구입할 수 있거나, 당업자에게 친숙한 방법에 따라 제조될 수 있다. D-1 및 D-2의 용액을 환원제(예컨대, 소듐 트리아세톡시보로하이드라이드)로 처리하여 임의의 필수적인 워크업 후에 D-3을 수득한다. D-3 및 염기(예컨대, 트리메틸아민, DMAP)의 용액을 아실 클로라이드 D-4(또는 카르복시산 및 DCC)로 처리하여 임의의 필수적인 워크업 및/또는 정제 후에 D-5를 수득한다. D-5는 LiAlH4 D-6로 환원되어 임의의 필수적인 워크업 및/또는 정제 후 D-7을 제공할 수 있다.
일반 반응식 5
Figure pct00097
화학식 II의 지질의 구현예(예컨대, 화합물 E-5)는 일반 반응식 5("방법 E")에 따라 제조될 수 있는데, 이때, R1a, R1b, R2a, R2b, R3a, R3b, R4a, R4b, R5, R6, R7, R8, R9, L1, L2, G3, a, b, c 및 d는 본 설명에 정의된 바와 같다. 일반 반응식 2을 참조하면, 구조 E-1 및 E-2의 화합물은 상업적 공급원으로부터 구입할 수 있거나, 당업자에게 친숙한 방법에 따라 제조될 수 있다. (과량의) E-1, E-2 및 염기(예컨대, 포타슘 카보네이트)의 혼합물을 가열하여 임의의 필수적인 워크업 후 E-3을 수득한다. E-3 및 염기(예컨대, 트리메틸아민, DMAP)의 용액을 아실 클로라이드 E-4(또는 카르복시산 및 DCC)로 처리하여 임의의 필수적인 워크업 및/또는 정제 후에 E-5를 수득한다.
일반 반응식 6
Figure pct00098
화학식 II의 화합물의 다른 구현예(예컨대, F-9)는 일반 반응식 6(방법 F)에 따라 제조된다. 일반 반응식 6에 도시된 바와 같이, 적절히 보호된 케톤(F-1)을 환원적 아민화 조건 하에서 아민 F-2와 반응시켜 F-3을 수득한다. F-3의 산 염화물 F-4와의 아실화는 아실화 생성물 F-5를 생성한다. F-5 상의 알코올 보호 기 제거에 이은, F-7 및/또는 F-8 및 적당한 활성화 시약(예컨대, DCC)과의 반응은 원하는 화합물 F-9를 생성한다.
일반 반응식 7
Figure pct00099
일반 반응식 7은 화학식 III의 지질의 제조를 위한 예시적인 방법(방법 G)을 제공한다. 일반 반응식 7의 G1, G3, R1 및 R3은 화학식 III에 대하여 본 설명에서 정의한 바와 같고, G1'는 G1의 탄소 하나가 더 짧은 동종체를 지칭한다. 구조 G-1의 화합물은 구입되거나 당해 분야에 공지된 방법에 따라 제조된다. 적당한 축합 조건(예컨대, DCC) 하에서의 디올 G-2와의 G-1의 반응은 에스테르/알코올 G-3을 생성하며, 이는 그 후 알데히드 G-4로 산화될 수 있다(예컨대, PCC). 환원적 아민화 조건 하에서 아민 G-5와 G-4의 반응은 화학식 III의 지질을 생성한다.
화학식 III의 지질의 제조를 위한 다양한 대안적인 전략이 당업자에게 이용 가능하다는 점을 유의해야 한다. 예를 들어, 화학식 III의 기타 지질로서, L1 및 L2는 에스테르 이외의 것인 지질은 적당한 출발 물질을 이용하는 유사한 방법에 따라 제조될 수 있다. 또한, 일반 반응식 6은 화학식 III의 지질의 제조를 도시하는데, 이때, G1 및 G2는 동일하다. 그러나 이는 본 발명의 요구되는 양태는 아니며, G1 및 G2가 상이한 화합물을 생성하기 위하여 위의 반응식에 대한 변형이 가능하다.
본 설명에 기술된 방법에서, 중간 화합물의 기능 기는 적합한 보호 기로 보호되어야 할 필요가 있을 수 있음을 당업자는 인정할 것이다. 이러한 기능 기에는 하이드록시, 아미노, 머캅토 및 카르복시산이 포함된다. 하이드록시를 위한 적합한 보호 기에는 트리알킬실릴 또는 디아릴알킬실릴(예를 들어, t-부틸디메틸실릴, t-부틸디페닐실릴 또는 트리메틸실릴), 테트라하이드로피라닐, 벤질 등이 포함된다. 아미노, 아미디노 및 구아니디노를 위한 적합한 보호 기에는 t-부톡시카보닐, 벤질옥시카보닐 등이 포함된다. 머캅토를 위한 적합한 보호 기에는 -C(O)-R"(여기서 R"은 알킬, 아릴 또는 아릴알킬), p-메톡시벤질, 트리틸 등이 포함된다. 카복시산을 위한 적합한 보호 기에는 알킬, 아릴 또는 아릴알킬 에스테르가 포함된다. 보호 기는 당업자에게 공지되어 있으며 본 설명에 기술된 바와 같은 일반적인 기술에 따라 부가되거나 제거될 수 있다. 보호 기의 사용은 문헌[Green, T.W. and P.G.M. Wutz, Protective Groups in Organic Synthesis (1999), 3rd Ed., Wiley]에 상세하게 기술되어 있다. 당업자가 인정하는 바와 같이, 보호 기는 또한, 왕(Wang) 수지, 링크(Rink) 수지 또는 2-클로로트리틸-클로라이드 수지와 같은 폴리머 수지일 수 있다.
지질 나노입자 조성물의 제조:
LNP는 다음과 같이 제조하였다. 양이온성 지질, DSPC, 콜레스테롤 및 PEG-지질을 에탄올에 용해시켰다. 지질 나노입자(LNP)를 대략 10:1 내지 30:1의 총 지질 대 mRNA 중량비로 제조하였다. 간략하게는, mRNA를 10 내지 50mM 시트르산 완충액, pH 4에 0.05 내지 0.2 mg/mL까지 희석시켰다. 시린지 펌프를 이용하여 15 ml/분을 초과하는 전체 유속으로 에탄올성 지질 용액을 mRNA 수용액과 약 1:5 내지 1:3(vol/vol)의 비율로 혼합하였다. 그 후, 에탄올을 제거하고, 외부 완충액을 투석에 의해 PBS로 교체하였다. 마지막으로, 지질 나노입자를 0.2 μm 공극 멸균 필터로 여과시켰다. 맬번 제타사이저 나노(Malvern Zetasizer Nano, 맬번(Malvern), 영국)를 이용한 준탄성 광산란으로 결정한 지질 나노입자의 입자 크기는 70 내지 90 nm 직경이었다.
항목
1항. 다음을 포함하는 지질 나노입자:
(i) 화학식 I을 갖는 양이온성 지질:
[화학식 I]
Figure pct00100
또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 호변이성체, 전구약물 또는 입체이성질체(화학식에서,
L1 및 L2는 각각 독립적으로 O(C=O), (C=O)O 또는 탄소-탄소 이중 결합이고;
R1a 및 R1b는, 각 경우에, 독립적으로 (a) H 또는 C1-C12 알킬, 또는 (b) R1a는 H 또는 C1-C12 알킬이고, R1b는 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께, 인접한 R1b 및 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께 쓰여 탄소-탄소 이중 결합을 형성하고;
R2a 및 R2b는, 각 경우에, 독립적으로 (a) H 또는 C1-C12 알킬, 또는 (b) R2a는 H 또는 C1-C12 알킬이고, R2b는 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께, 인접한 R2b 및 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께 쓰여 탄소-탄소 이중 결합을 형성하고;
R3a 및 R3b는, 각 경우에, 독립적으로 (a) H 또는 C1-C12 알킬, 또는 (b) R3a는 H 또는 C1-C12 알킬이고, R3b는 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께, 인접한 R3b 및 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께 쓰여 탄소-탄소 이중 결합을 형성하고;
R4a 및 R4b는, 각 경우에, 독립적으로 (a) H 또는 C1-C12 알킬, 또는 (b) R4a는 H 또는 C1-C12 알킬이고, R4b는 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께, 인접한 R4b 및 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께 쓰여 탄소-탄소 이중 결합을 형성하고;
R5 및 R6은 각각 독립적으로 메틸 또는 시클로알킬이고;
R7은, 각 경우에, 독립적으로 H 또는 C1-C12 알킬이고;
R8 및 R9는 각각 독립적으로 C1-C12 알킬이거나; R8 및 R9는, 그것들이 부착되는 질소 원자와 함께, 하나의 질소 원자를 포함하는 5, 6 또는 7원 헤테로고리를 형성하고;
a 및 d는 각각 독립적으로 0 내지 24의 정수이고;
b 및 c는 각각 독립적으로 1 내지 24의 정수이고;
e는 1 또는 2임);
(ii) 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물로서, 이 mRNA 화합물은 선택적으로 뉴클레오시드 변형을 포함하지 않고, 특히 염기 변형을 포함하지 않으며,
mRNA 화합물은 상기 지질 나노입자에 캡슐화되거나 상기 지질 나노입자와 회합되는 것인 mRNA 화합물.
2항. 다음을 포함하는 지질 나노입자:
(i) 화학식 II를 갖는 양이온성 지질:
[화학식 II]
Figure pct00101
또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 호변이성체, 전구약물 또는 입체이성질체(화학식에서,
L1 및 L2는 각각 독립적으로 O(C=O) , (C=O)O , C(=O) , O , S(O)x , S S , C(=O)S , SC(=O) , NRaC(=O) , C(=O)NRa , NRaC(=O)NRa, OC(=O)NRa , NRaC(=O)O , 또는 직접적인 결합이고;
G1은 C1-C2 알킬렌, -(C=O) , -O(C=O) , SC(=O) , -NRaC(=O)- 또는 직접적인 결합이고
G2는 -C(=O) , (C=O)O-, C(=O)S-, C(=O)NRa 또는 직접적인 결합이고;
G3은 C1-C6 알킬렌이고;
Ra는 H 또는 C1-C12 알킬이고;
R1a 및 R1b는, 각 경우에, 독립적으로: (a) H 또는 C1-C12 알킬; 또는 (b) R1a는 H 또는 C1-C12 알킬이고, R1b는 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께, 인접한 R1b 및 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께 쓰여 탄소-탄소 이중 결합을 형성하고;
R2a 및 R2b는, 각 경우에, 독립적으로: (a) H 또는 C1-C12 알킬; 또는 (b) R2a는 H 또는 C1-C12 알킬이고, R2b는 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께, 인접한 R2b 및 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께 쓰여 탄소-탄소 이중 결합을 형성하고;
R3a 및 R3b는, 각 경우에, 독립적으로: (a) H 또는 C1-C12 알킬; 또는 (b) R3a는 H 또는 C1-C12 알킬이고, R3b는 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께, 인접한 R3b 및 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께 쓰여 탄소-탄소 이중 결합을 형성하고;
R4a 및 R4b는, 각 경우에, 독립적으로: (a) H 또는 C1-C12 알킬; 또는 (b) R4a는 H 또는 C1-C12 알킬이고, R4b는 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께, 인접한 R4b 및 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께 쓰여 탄소-탄소 이중 결합을 형성하고;
R5 및 R6은 각각 독립적으로 H 또는 메틸이고;
R7은 C4-C20 알킬이고;
R8 및 R9는 각각 독립적으로 C1-C12 알킬이거나; R8 및 R9는, 그것들이 부착되는 질소 원자와 함께, 5, 6 또는 7원 헤테로고리를 형성하고;
a, b, c 및 d는 각각 독립적으로 1 내지 24의 정수이고;
x는 0, 1 또는 2임);
(ii) 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물로서, 이 mRNA 화합물은 선택적으로 뉴클레오시드 변형을 포함하지 않고, 특히 염기 변형을 포함하지 않으며;
mRNA 화합물은 상기 지질 나노입자에 캡슐화되거나 상기 지질 나노입자와 회합되는 것인 mRNA 화합물.
3항. 다음을 포함하는 지질 나노입자:
(i) 화학식 III을 갖는 양이온성 지질:
[화학식 III]
Figure pct00102
또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 호변이성체, 전구약물 또는 입체이성질체
(화학식에서,
L1 또는 L2는 각각 독립적으로 -O(C=O)-, -(C=O)O-, -C(=O)-, -O-, -S(O)x-, -S-S-, C(=O)S-, SC(=O)-, -NRaC(=O)-, -C(=O)NRa-, NRaC(=O)NRa , -OC(=O)NRa- 또는 NRaC(=O)O-, 바람직하게는 L1 또는 L2는 -O(C=O)- 또는 -(C=O)O-이고;
G1 및 G2는 각각 독립적으로 비치환된 C1-C12 알킬렌 또는 C1-C12 알케닐렌이고;
G3은 C1-C24 알킬렌, C1-C24 알케닐렌, C3-C8 시클로알킬렌, 또는 C3-C8 시클로알케닐렌이고;
Ra는 H 또는 C1-C12 알킬이고;
R1 및 R2는 각각 독립적으로 C6-C24 알킬 또는 C6-C24 알케닐이고;
R3은 H, OR5, CN, C(=O)OR4, OC(=O)R4 또는 -NR5C(=O)R4이고;
R4는 C1-C12 알킬이고;
R5는 H 또는 C1-C6 알킬이고;
x는 0, 1 또는 2임);
(ii) 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물로서, 이 mRNA 화합물은 선택적으로 뉴클레오시드 변형을 포함하지 않고, 특히 염기 변형을 포함하지 않으며;
mRNA 화합물은 상기 지질 나노입자에 캡슐화되거나 상기 지질 나노입자와 회합되는 것인 mRNA 화합물.
4항. 다음을 포함하는 지질 나노입자:
(i) 화학식 IV를 갖는 PEG 지질:
[화학식 IV]
Figure pct00103
(화학식에서, R8 및 R9는 각각 독립적으로 10개 내지 30개의 탄소 원자를 함유하는 직선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 알킬 사슬로, 이 알킬 사슬은 선택적으로 1개 이상의 에스테르 결합에 의해 중단되고;
w는 30 내지 60 범위의 평균값을 가짐); 및
(ii) 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물로서, 이 mRNA 화합물은 선택적으로 뉴클레오시드 변형을 포함하지 않고, 특히 염기 변형을 포함하지 않으며;
mRNA 화합물은 상기 지질 나노입자에 캡슐화되거나 상기 지질 나노입자와 회합되는 것인 mRNA 화합물.
5항. 제1항 내지 제3항 중 임의의 한 항에 있어서,
(iii) 화학식 IV를 갖는 PEG 지질:
[화학식 IV]
Figure pct00104
(화학식에서, R8 및 R9는 각각 독립적으로 10개 내지 30개의 탄소 원자를 함유하는 직선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 알킬 사슬로, 이 알킬 사슬은 선택적으로 1개 이상의 에스테르 결합에 의해 중단되고;
w는 30 내지 60 범위의 평균값을 가짐)을 추가적으로 포함하는 지질 나노입자.
6항. 제3항 또는 제5항에 있어서, 양이온성 지질은 화학식 III의 화합물이고,
L1 및 L2는 각각 독립적으로 -O(C=O)- 또는 (C=O)-O-이고;
G3은 C1-C24 알킬렌 또는 C1-C24 알케닐렌이고;
R3은 H 또는 OR5인, 지질 나노입자.
7항. 제3항, 제5항 또는 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 양이온성 지질은 화학식 III의 화합물이고,
L1 및 L2는 각각 독립적으로 -O(C=O)- 또는 (C=O)-O-이고;
R1 및 R2는 각각 독립적으로 다음 구조 중 하나를 갖는 것인, 지질 나노입자:
Figure pct00105
8항. 제3항 또는 제5항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 양이온성 지질은 화학식 III의 화합물이고, R3은 OH인, 지질 나노입자.
9항. 제1항 내지 제3항 또는 제5항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 양이온성 지질은 구조 I-1 내지 I-41, II-1 내지 II-34 또는 III-1 내지 III-36, 또는 표 7: 대표적인 화학식 I의 지질, 표 8: 대표적인 화학식 II의 지질, 또는 표 9: 대표적인 화학식 III의 지질로부터 선택되는 것인, 지질 나노입자.
10항. 제1항 내지 제3항 또는 제5항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 양이온성 지질은 다음으로부터 선택되는 것인, 지질 나노입자:
Figure pct00106
11항. 제4항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, PEG 지질에서, R8 및 R9는 포화 알킬 사슬인, 지질 나노입자.
12항. 제11항에 있어서, PEG 지질은
Figure pct00107
,
이때, n은 30 내지 60 범위의 평균값을 갖는 것인, 지질 나노입자.
13항. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, mRNA 화합물은 적어도 하나의 화학적 변형을 포함하고, mRNA 화합물은 바람직하게는 뉴클레오시드 변형을 포함하지 않으며, 상기 뉴클레오시드 변형은 선택적으로 염기 변형이고, 상기 염기 변형은 선택적으로 1-메틸슈도우리딘 변형인 것인, 지질 나노입자.
14항. 제13항에 있어서, 화학적 변형은 당 변형, 백본 변형 및 지질 변형을 포함하는 군으로부터 선택되는 것인, 지질 나노입자.
15항. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, mRNA 서열은 인공 mRNA 서열인 것인, 지질 나노입자.
16항. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 mRNA 서열의 암호화 영역은 서열 변형을 포함하는 것인, 지질 나노입자.
17항. 제16항에 있어서, 서열 변형은 서열의 G/C 함량 변형, 코돈 변형, 코돈 최적화 또는 C-최적화로부터 선택되는 것인, 지질 나노입자.
18항. 제17항에 있어서, mRNA 서열의 암호화 영역의 G/C 함량은 야생형 mRNA의 상응하는 암호화 서열의 G/C 함량과 비교하여 증가되거나, mRNA 서열의 암호화 영역의 C 함량은 야생형 mRNA의 상응하는 암호화 서열의 C 함량과 비교하여 증가되거나, mRNA 서열의 암호화 영역의 코돈 사용빈도는 인간 코돈 사용빈도에 적합화되거나, 코돈 적합화 지수(CAI)는 mRNA 서열의 암호화 영역에서 증가되거나 최대화되며, mRNA 서열의 암호화된 아미노산 서열은 바람직하게는 야생형 mRNA의 암호화된 아미노산 서열과 비교하여 변형되지 않는, 지질 나노입자.
19항. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, mRNA 서열은 추가적으로 다음을 포함하는 것인, 지질 나노입자:
a) 5'-CAP 구조, 및/또는
b) 폴리(A) 서열, 및/또는
c) 폴리(C) 서열.
20항. 제19항에 있어서, mRNA 서열은 폴리(A) 서열을 포함하고, 폴리(A) 서열은 약 25 내지 약 400개 아데노신 뉴클레오티드의 서열, 바람직하게는 약 50 내지 약 400개 아데노신 뉴클레오티드의 서열, 더욱 바람직하게는 약 50 내지 약 300개 아데노신 뉴클레오티드의 서열, 훨씬 더 바람직하게는 약 50 내지 약 250개 아데노신 뉴클레오티드의 서열, 가장 바람직하게는 약 60 내지 약 250개 아데노신 뉴클레오티드의 서열을 포함하는 것인, 지질 나노입자.
21항. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, mRNA 서열은 적어도 하나의 히스톤 스템 루프를 추가적으로 포함하는 것인, 지질 나노입자.
22항. 제21항에 있어서, 적어도 하나의 히스톤 스템-루프는 다음 화학식 V 또는 VI에 따른 핵산 서열을 포함하는 것인, 지질 나노입자:
[화학식 V](스템 경계 요소가 없는 스템-루프 서열)
Figure pct00108
[화학식 VI](스템 경계 요소가 있는 스템-루프 서열)
Figure pct00109
(화학식에서,
스템1 또는 스템2 경계 요소 N1-6은 1 내지 6, 바람직하게는 2 내지 6, 더욱 바람직하게는 2 내지 5, 훨씬 더 바람직하게는 3 내지 5, 가장 바람직하게는 4 내지 5 또는 5 N의 연속 서열이며, 이때, 각 N은 A, U, T, G 및 C로부터 선택된 뉴클레오티드 또는 이의 뉴클레오티드 유사체로부터 서로 독립적으로 선택되며;
스템1[N0-2GN3-5]은 요소 스템2와 역상보적 또는 부분 역상보적이며, 5 내지 7 뉴클레오티드 사이의 연속 서열이며;
N0-2는 0 내지 2, 바람직하게는 0 내지 1, 더욱 바람직하게는 1 N의 연속 서열이며, 이때, 각 N은 A, U, T, G 및 C로부터 선택된 뉴클레오티드 또는 이의 뉴클레오티드 유사체로부터 서로 독립적으로 선택되며;
N3-5는 3 내지 5, 바람직하게는 4 내지 5, 더욱 바람직하게는 4 N의 연속 서열이며, 이때, 각 N은 A, U, T, G 및 C로부터 선택된 뉴클레오티드 또는 이의 뉴클레오티드 유사체로부터 서로 독립적으로 선택되며, 및
루프 서열[N0-4(U/T)N0-4]은 요소 스템1 및 스템2 사이에 위치하고, 3 내지 5 뉴클레오티드, 더욱 바람직하게는 4 뉴클레오티드의 연속 서열이며;
각각의 N0-4는 0 내지 4, 바람직하게는 1 내지 3, 더욱 바람직하게는 1 내지 2 N의 서로 독립적인 연속 서열이며, 이때, 각 N은 A, U, T, G 및 C로부터 선택된 뉴클레오티드 또는 이의 뉴클레오티드 유사체로부터 서로 독립적으로 선택되며;
U/T는 우리딘, 또는 선택적으로 티미딘을 나타내며;
스템2[N3-5CN0-2]는 요소 스템1과 역상보적 또는 부분 역상보적이며, 5 내지 7 뉴클레오티드 사이의 연속 서열이며;
N3-5는 3 내지 5, 바람직하게는 4 내지 5, 더욱 바람직하게는 4 N의 연속 서열이며, 이때, 각 N은 A, U, T, G 및 C로부터 선택된 뉴클레오티드 또는 이의 뉴클레오티드 유사체로부터 서로 독립적으로 선택되며;
N0-2는 0 내지 2, 바람직하게는 0 내지 1, 더욱 바람직하게는 1 N의 연속 서열이며, 이때, 각 N은 A, U, T, G 및 C로부터 선택된 뉴클레오티드 또는 이의 뉴클레오티드 유사체로부터 서로 독립적으로 선택되며;
C는 시티딘 또는 이의 유사체이며, 스템1에서 이의 상보적인 뉴클레오티드 구아노신이 시티딘에 의해 교체되는 경우, 선택적으로 구아노신 또는 이의 유사체로 교체될 수 있음).
23항. 제21항 또는 제22항에 있어서, 적어도 하나의 히스톤 스템 루프는 서열번호 224305에 따른 핵산 서열 및/또는 가장 바람직하게는 서열번호 224306에 따른 RNA 서열을 포함하는 것인, 지질 나노입자.
24항. 제19항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, mRNA 서열은 바람직하게는 10 내지 200, 10 내지 100, 40 내지 80 또는 50 내지 70개 아데노신 뉴클레오티드를 포함하는 폴리(A) 서열 및/또는 바람직하게는 10 내지 200, 10 내지 100, 20 내지 70, 20 내지 60 또는 10 내지 40개 시토신 뉴클레오티드를 포함하는 폴리(C) 서열을 포함하는 것인, 지질 나노입자.
25항. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, mRNA 서열은 바람직하게는 5'에서 3' 방향으로 다음 요소를 포함하는 것인, 지질 나노입자:
a) 5'-CAP 구조, 바람직하게는 m7GpppN,
b) 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역,
c) 폴리(A) 꼬리, 바람직하게는 10 내지 200, 10 내지 100, 40 내지 80 또는 50 내지 70개 아데노신 뉴클레오티드로 구성된 폴리(A) 꼬리,
d) 선택적으로 폴리(C) 꼬리, 바람직하게는 10 내지 200, 10 내지 100, 20 내지 70, 20 내지 60 또는 10 내지 40개 시토신 뉴클레오티드로 구성된 폴리(C) 꼬리, 및
g) 선택적으로 히스톤 스템-루프, 바람직하게는 서열번호 224306에 따른 RNA 서열을 포함하는 히스톤 스템-루프.
26항. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, mRNA 서열은 3'-UTR 요소를 포함하는 것인, 지질 나노입자.
27항. 제26항에 있어서, 적어도 하나의 3'-UTR 요소는 안정적인 mRNA를 제공하는 유전자의 3'-UTR로부터 또는 이의 동종체, 단편 또는 변이체로부터 유래되는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 지질 나노입자.
28항. 제26항 또는 제27항에 있어서, 3'-UTR 요소는 바람직하게는 서열번호 224297에 따른 핵산 서열, 이의 동종체, 단편 또는 변이체의 상응하는 RNA 서열을 포함하는, α-글로빈 유전자의 3'-UTR로부터 유래된 핵산 서열을 포함하는 것인, 지질 나노입자.
29항. 제26항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 3'-UTR 요소는 척추동물 알부민 유전자의 3'-UTR로부터 또는 이의 변이체로부터, 바람직하게는 포유동물 알부민 유전자의 3'-UTR로부터 또는 이의 변이체로부터, 더욱 바람직하게는 인간 알부민 유전자의 3'-UTR로부터 또는 이의 변이체로부터, 훨씬 더 바람직하게는 GenBank 접근 번호 NM_000477.5에 따른 인간 알부민 유전자의 3'-UTR로부터 또는 이의 단편 또는 변이체로부터 유래되는 핵산 서열을 포함하는 것인, 지질 나노입자.
30항. 제26항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 3'-UTR 요소는 서열번호 224301 또는 224303에 따른 핵산 서열로부터, 바람직하게는 상응하는 RNA 서열, 또는 이의 동종체, 단편 또는 변이체로부터 유래되는 것인, 지질 나노입자.
31항. 제1항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, mRNA 서열은 바람직하게는 5'에서 3' 방향으로 다음 요소를 포함하는 것인, 지질 나노입자:
a) 5'-CAP 구조, 바람직하게는 m7GpppN,
b) 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역,
c) 알파 글로빈 유전자로부터 유래되는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된 3'-UTR 요소, 바람직하게는 서열번호 224297에 따른 핵산 서열, 이의 동종체, 단편 또는 변이체의 상응하는 RNA 서열을 포함하는 3'-UTR 요소;
d) 폴리(A) 꼬리, 바람직하게는 10 내지 200, 10 내지 100, 40 내지 80 또는 50 내지 70개 아데노신 뉴클레오티드로 구성된 폴리(A) 꼬리,
e) 선택적으로 폴리(C) 꼬리, 바람직하게는 10 내지 200, 10 내지 100, 20 내지 70, 20 내지 60 또는 10 내지 40개 시토신 뉴클레오티드로 구성된 폴리(C) 꼬리, 및
f) 선택적으로, 히스톤 스템-루프, 바람직하게는 서열번호 224306에 따른 RNA 서열을 포함하는 히스톤 스템-루프.
32항. 제1항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, mRNA 서열은 5'-UTR 요소를 포함하는 것인, 지질 나노입자.
33항. 제32항에 있어서, 5'-UTR 요소는 바람직하게는 5'TOP 모티프가 결여된, TOP 유전자의 5'-UTR로부터, 바람직하게는 상응하는 RNA 서열, 이의 동종체, 단편, 또는 변이체로부터 유래되는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 지질 나노입자.
34항. 제33항에 있어서, 5'-UTR 요소는 바람직하게는 5'TOP 모티프가 결여된, 리보솜 단백질을 암호화하는 TOP 유전자의 5'-UTR로부터, 바람직하게는 상응하는 RNA 서열로부터 또는 이의 동종체, 단편 또는 변이체로부터 유래되는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 지질 나노입자.
35항. 제34항에 있어서, 5'-UTR 요소는 바람직하게는 5'TOP 모티프가 결여된, 그리고 더욱 바람직하게는 서열번호 224287에 따른 핵산 서열의 상응하는 RNA 서열을 포함하거나 이로 구성된, 리보솜 큰 단백질(RPL)을 암호화하는 TOP 유전자의 5'-UTR로부터 또는 이의 동종체, 단편 또는 변이체로부터 유래되는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 지질 나노입자.
36항. 제35항에 있어서, TOP 유전자의 5'-UTR로부터 유래되는 5'-UTR 요소는 서열번호 224287 또는 224289에 따른 핵산 서열의 상응하는 RNA 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 지질 나노입자.
37항. 제1항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, mRNA 서열은 바람직하게는 5'에서 3' 방향으로 다음 요소를 포함하는 것인, 지질 나노입자:
a) 5'-CAP 구조, 바람직하게는 m7GpppN,
b) 바람직하게는 서열번호 224287 또는 224289에 따른 핵산 서열, 이의 동종체, 단편 또는 변이체의 상응하는 RNA 서열을 포함하거나 이로 구성된, TOP 유전자의 5'-UTR로부터 유래되는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된 5'-UTR 요소;
c) 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역;
d) 바람직하게는 서열번호 224303에 따른 핵산 서열, 이의 동종체, 단편 또는 변이체의 상응하는 RNA 서열을 포함하는, 알부민 유전자로부터 유래되는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된 3'-UTR 요소;
e) 폴리(A) 꼬리, 바람직하게는 10 내지 200, 10 내지 100, 40 내지 80 또는 50 내지 70개 아데노신 뉴클레오티드로 구성된 폴리(A) 꼬리,
f) 선택적으로 폴리(C) 꼬리, 바람직하게는 10 내지 200, 10 내지 100, 20 내지 70, 20 내지 60 또는 10 내지 40개 시토신 뉴클레오티드로 구성된 폴리(C) 꼬리, 및
g) 선택적으로 히스톤 스템-루프, 바람직하게는 서열번호 224306에 따른 RNA 서열을 포함하는 히스톤 스템-루프.
38항. 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 항원 펩티드 또는 단백질은 병원성 항원, 종양 항원, 알레르기 항원 또는 자가면역 자가항원 또는 이의 단편 또는 변이체로부터 유래되는 것인, 지질 나노입자.
39항. 제38항에 있어서, 병원성 항원은 인플루엔자 또는 광견병 바이러스로부터 유래되는 것인, 지질 나노입자.
40항. 제39항에 있어서, 항원 펩티드 또는 단백질은 인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌(HA), 뉴라미니다제(NA), 뉴클레오단백질(NP), 매트릭스 단백질 1(M1), 매트릭스 단백질 2(M2), 비-구조적 단백질 1(NS1), 비-구조적 단백질 2(NS2), 핵 외부 수송 단백질(NEP), 중합효소 산성 단백질(PA), 중합효소 염기성 단백질 PB1, PB1-F2, 또는 중합효소 염기성 단백질 2(PB2), 또는 이의 단편 또는 변이체로부터 유래되는 것인, 지질 나노입자.
41항. 제40항에 있어서, 항원 펩티드 또는 단백질은 인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌(HA) 또는 뉴라미니다제(NA) 또는 이의 단편 또는 변이체로부터 유래되는 것인, 지질 나노입자.
42항. 제41항에 있어서, 항원 펩티드 또는 단백질은 인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌(HA)의 적어도 하나의 전장 단백질 및/또는 뉴라미니다제(NA)의 적어도 하나의 전장 단백질 또는 이의 변이체인, 지질 나노입자.
43항. 제39항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 인플루엔자 바이러스는 인플루엔자 A, B 또는 C 바이러스로부터 선택되는 것인, 지질 나노입자.
44항. 제43항에 있어서, 인플루엔자 A 바이러스는 H1, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, H11, H12, H13, H14, H15, H16, H17 및 H18로 구성된 군으로부터 선택된 헤마글루티닌(HA)을 특징으로 하는 인플루엔자 바이러스로부터 선택되는 것인, 지질 나노입자.
45항. 제43항 또는 제44항에 있어서, 인플루엔자 A 바이러스는 N1, N2, N3, N4, N5, N6, N7, N8, N9, N10, 및 N11로 구성된 군으로부터 선택된 뉴라미니다제(NA)를 특징으로 하는 인플루엔자 바이러스로부터 선택되는 것인, 지질 나노입자.
46항. 제43항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 인플루엔자 A 바이러스는 H1N1, H1N2, H2N2, H3N1, H3N2, H3N8, H5N1, H5N2, H5N3, H5N8, H5N9, H7N1, H7N2, H7N3, H7N4, H7N7, H7N9, H9N2, 및 H10N7로 구성된 군으로부터 선택되고, 바람직하게는 H1N1, H3N2, H5N1로부터 선택되는 것인, 지질 나노입자.
47항. 제39항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, mRNA 서열은 인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌(HA) 또는 이의 단편 또는 변이체로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질 및 인플루엔자 바이러스의 뉴라미니다제(NA) 또는 이의 단편 또는 변이체로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 것인, 지질 나노입자.
48항. 제39항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, mRNA 서열은 H1N1, H1N2, H2N2, H3N1, H3N2, H3N8, H5N1, H5N2, H5N3, H5N8, H5N9, H7N1, H7N2, H7N3, H7N4, H7N7, H7N9, H9N2, 및 H10N7로 구성된 군으로부터, 바람직하게는 H1N1, H3N2, H5N1로부터 선택된 인플루엔자 A 바이러스의 헤마글루티닌(HA)으로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질 및/또는 뉴라미니다제(NA)로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질 또는 이의 단편 또는 변이체를 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 것인, 지질 나노입자.
49항. 제39항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, mRNA 서열은 서열번호 1 내지 14031에 따른 인플루엔자 A 바이러스의 헤마글루티닌(HA)으로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질 또는 이의 단편 또는 변이체를 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 것인, 지질 나노입자.
50항. 제39항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서, mRNA 서열은 서열번호 32013 내지 46043, 64025 내지 78055, 96037 내지 110067, 128049 내지 142079, 160061 내지 174091, 192073 내지 206103에 따른 RNA 서열 또는 이의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 RNA 서열로부터 선택된 적어도 하나의 RNA 서열을 포함하는 것인, 지질 나노입자.
51항. 제39항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, mRNA 서열은 서열번호 26398 내지 28576에 따른 인플루엔자 B 바이러스의 헤마글루티닌(HA)으로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질 또는 이의 단편 또는 변이체를 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 것인, 지질 나노입자.
52항. 제39항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, mRNA 서열은 서열번호 58410 내지 60588, 90422 내지 92600, 122434 내지 124612, 154446 내지 156624, 186458 내지 188636, 218470 내지 220648에 따른 RNA 서열 또는 이의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 RNA 서열로부터 선택된 적어도 하나의 RNA 서열을 포함하는 것인, 지질 나노입자.
53항. 제39항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서, mRNA 서열은 서열번호 14032 내지 26397에 따른 인플루엔자 A 바이러스의 뉴라미니다제(NA)로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질 또는 이의 단편 또는 변이체를 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 것인, 지질 나노입자.
54항. 제39항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, mRNA 서열은 서열번호 46044 내지 58409, 78056 내지 90421, 110068 내지 122433, 142080 내지 154445, 174092 내지 186457, 206104 내지 218469에 따른 RNA 서열 또는 이의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 RNA 서열로부터 선택된 적어도 하나의 RNA 서열을 포함하는 것인, 지질 나노입자.
55항. 제39항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, mRNA 서열은 서열번호 28577 내지 30504에 따른 인플루엔자 B 바이러스의 뉴라미니다제(NA)로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질 또는 이의 단편 또는 변이체를 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 것인, 지질 나노입자.
56항. 제39항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서, mRNA 서열은 서열번호 60589 내지 62516, 92601 내지 94528, 124613 내지 126540, 156625 내지 158552, 188637 내지 190564, 220649 내지 222576에 따른 RNA 서열 또는 이의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 RNA 서열로부터 선택된 적어도 하나의 RNA 서열 또는 RNA 서열의 혼합물을 포함하는 것인, 지질 나노입자.
57항. 제39항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, mRNA 서열은 광견병 바이러스의 당단백질 G(RAV-G, RAVBV-G 또는 RABV-G), 뉴클레오단백질 N(RAV-N), 포스포단백질 P(RAV-P), 매트릭스 단백질 M(RAV-M) 또는 RNA 중합효소 L(RAV-L)로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질 또는 이의 단편, 변이체를 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 것인, 지질 나노입자.
58항. 제39항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, mRNA 서열은 서열번호 30505 내지 32012에 따른 광견병 바이러스의 당단백질 G(RAV-G, RAVBV-G 또는 RABV-G)로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질 또는 이의 단편 또는 변이체를 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 것인, 지질 나노입자.
59항. 제39항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, mRNA 서열은 서열번호 62517 내지 64024, 94529 내지 96036, 126541 내지 128048, 158553 내지 160060, 190565 내지 192072, 222577 내지 224084에 따른 RNA 서열 또는 이의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 RNA 서열로부터 선택된 적어도 하나의 RNA 서열을 포함하는 것인, 지질 나노입자.
60항. 제1항 내지 제59항 중 어느 한 항에 있어서, mRNA 화합물은 적어도 두 개의 mRNA 서열을 포함하며, 이때, 적어도 두 개의 mRNA 서열은 2종의 상이한 항원 펩티드 및/또는 단백질을 암호화하는 것인, 지질 나노입자.
61항. 제1항 내지 제59항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 2종의 상이한 mRNA 화합물을 포함하며, 각각의 화합물은 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 mRNA 서열을 포함하는 것인, 지질 나노입자.
62항. 제1항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서,
(iv) 중성 지질; 및/또는
(v) 스테로이드 또는 스테로이드 유사체를 추가적으로 포함하는, 지질 나노입자.
63항. 제62항에 있어서, 중성 지질은 디스테아로일포스파티딜콜린(DSPC), 디올레오일포스파티딜콜린(DOPC), 디팔미토일포스파티딜콜린(DPPC), 디올레오일포스파티딜글리세롤(DOPG), 디팔미토일포스파티딜글리세롤(DPPG), 디올레오일-포스파티딜에탄올아민(DOPE), 팔미토일올레오일포스파티딜콜린(POPC), 팔미토일올레오일-포스파티딜에탄올아민(POPE) 및 디올레오일-포스파티딜에탄올아민4-(N-말레이미도메틸)-시클로헥산-1카복실레이트 (DOPE-mal), 디팔미토일 포스파티딜 에탄올아민(DPPE), 디미리스토일포스포에탄올아민(DMPE), 디스테아로일-포스파티딜에탄올아민(DSPE), 16-O-모노메틸 PE, 16-O-디메틸 PE, 18-1-트랜스 PE, 1-스테아로일-2-올레오일포스파티딜에탄올 아민(SOPE), 및 1,2-디엘라이도일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민(트랜스DOPE)을 포함하는 군으로부터 선택되는 것인, 지질 나노입자.
64항. 제63항에 있어서, 중성 지질은 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포콜린(DSPC)이고, 양이온성 지질 대 DSPC의 몰 비율이 선택적으로 약 2:1 내지 8:1의 범위인 것인, 지질 나노입자.
65항. 제62항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서, 스테로이드는 콜레스테롤이고, 양이온성 지질 대 콜레스테롤의 몰 비율은 선택적으로 약 2:1 내지 1:1의 범위인 것인, 지질 나노입자.
66항. 다음 단계를 포함하는 제5항 내지 제67항 중 어느 한 항에 따른 지질 나노입자의 제조 방법:
(i) a) 위에 정의된 바와 같은 화학식 I의 양이온성 지질
[화학식 I]
Figure pct00110
또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 호변이성체, 전구약물 또는 입체이성질체,
및/또는
위에 정의된 바와 같은 화학식 II의 양이온성 지질
[화학식 II]
Figure pct00111
또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 호변이성체, 전구약물 또는 입체이성질체,
및/또는
위에 정의된 바와 같은 화학식 III의 양이온성 지질
[화학식 III]
Figure pct00112
또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 호변이성체, 전구약물 또는 입체이성질체;
및/또는
b) 위에 정의된 바와 같은 화학식 IV를 갖는 PEG 지질:
[화학식 IV]
Figure pct00113
;
c) 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 mRNA 서열을 포함하는 적어도 하나의 mRNA 화합물로서, 선택적으로 뉴클레오시드 변형을 포함하지 않고, 특히 염기 변형을 포함하지 않는 mRNA 화합물;
d) 선택적으로 스테로이드; 및
e) 선택적으로 중성 지질;을 제공하는 단계
(ii) 양이온성 지질 및/또는 PEG 지질 및 선택적으로 중성 지질 및/또는 스테로이드 또는 스테로이드 유도체를 에탄올에 용해시키는 단계;
(iii) 에탄올성 지질 용액을 mRNA 폴리뉴클레오티드를 포함하는 수용액과 혼합하는 단계
(iv) 에탄올을 제거하는 단계; 및 선택적으로
(v) 지질 나노입자를 분리 또는 정제하는 단계.
67항. 제66항에 있어서, 단계 (iv)에서 에탄올은 투석 또는 정용여과에 의해 제거되는 것인, 방법.
68항. 제66항 또는 제67항에 있어서, 단계 (v)에서 지질 나노입자는 여과에 의해, 바람직하게는 멸균 필터를 통한 여과에 의해 정제되는 것인, 방법.
69항. 제1항 내지 제65항 중 어느 한 항에 따른 적어도 하나의 지질 나노입자를 포함하는 약학적 조성물.
70항. 제69항에 있어서, 제1항 내지 제65항 중 어느 한 항에 따른 적어도 제1 및 제2의 지질 나노입자를 포함하며, 이때, 제2 지질 나노입자에 포함된 mRNA 화합물은 제1 지질 나노입자에 포함된 mRNA 화합물과 상이한 것인, 약학적 조성물.
71항. 제69항 또는 제70항에 있어서, 약학적으로 허용 가능한 항원보강제 또는 부형제를 추가적으로 포함하는 약학적 조성물.
72항. 의약으로서의 용도를 위한 제1항 내지 제65항 중 어느 한 항에 따른 지질 나노입자 또는 제69항 내지 제71항 중 어느 한 항에 따른 약학적 조성물.
73항. 제72항에 있어서, 의약은 이를 필요로 하는 대상체의 면역 반응을 치료적으로 또는 예방적으로 발생시키기 위한 것인, 지질 나노입자 또는 약학적 조성물.
74항. 제72항 또는 제73항에 있어서, 의약은 암 또는 종양 질병, 감염성 질병, 알레르기, 또는 자가면역 질환 또는 이에 관련된 장애의 예방 또는 치료를 위한 것인, 지질 나노입자 또는 약학적 조성물.
75항. 제72항 내지 제74항 중 어느 한 항에 있어서, 의약은 백신인, 지질 나노입자 또는 약학적 조성물.
76항. 제75항에 있어서, 의약은 종양, 인플루엔자 또는 광견병 백신인, 지질 나노입자 또는 약학적 조성물.
77항. 제76항에 있어서, 의약은 광견병 치료에 사용되는 광견병 백신인, 지질 나노입자 또는 약학적 조성물.
78항. 제72항 내지 제77항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체는 척추동물, 바람직하게는 포유동물인 것인, 지질 나노입자 또는 약학적 조성물.
79항. 제72항 내지 제78항 중 어느 한 항에 있어서, 의약은 비경구 투여를 위한 것이며, 비경구 투여는 주사를 포함하는 것인, 지질 나노입자 또는 약학적 조성물.
80항. 제78항 내지 제79항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체는 새, 바람직하게는 닭, 또는 포유동물, 바람직하게는, 염소, 소, 돼지, 개, 고양이, 당나귀, 원숭이, 유인원, 설치류, 예컨대, 마우스, 햄스터, 토끼 및, 특히, 인간을 포함하는 군으로부터 선택되는 포유동물인, 지질 나노입자 또는 약학적 조성물.
81항. 제1항 내지 제65항 중 어느 한 항에 따른 지질 나노입자 또는 제69항 내지 제72항 중 어느 한 항에 따른 약학적 조성물을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 이를 필요로 하는 대상체에서 면역 반응을 발생시키는 방법.
82항. 제1항 내지 제65항 중 어느 한 항에 따른 지질 나노입자 또는 제69항 내지 제72항 중 어느 한 항에 따른 약학적 조성물을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 이를 필요로 하는 대상체의 암 또는 종양 질병, 감염성 질병, 알레르기, 또는 자가면역 질환 또는 이에 관련된 장애의 예방 또는 치료 방법.
다음에 나타낸 도면은 단지 설명적인 것으로, 본 발명을 추가적인 방법으로 기술할 것이다. 이러한 도면은 본 발명을 이에 한정하는 것으로 해석되어서는 안 된다.
도 1a 및 1b: 복강 내 루시페린 주사 후 24h 후(도 1a)와 48h 후(도 1b)의 마우스의 생물발광 영상화 결과를 보여준다. mRNA의 LMP 제형은 동일한 양의 비제형화된 mRNA와 비교하여 근육 내 적용 후 현저히 증가된, 용량 의존적인 단백질 발현을 초래하였다.
도 2a 내지 2g: 기관 용해물에서 근육 내 주사 후 48h에 측정된 PpLuc 발현을 보여준다. 개별적인 기관으로부터의 루시퍼라제 상대 발광 단위(Relative Light Units, RLU)를 각 그룹에 대해 보고하였다(도 2a = 뇌, 도 2b = 심장, 도 2c = 신장, 도 2d = 간, 도 2e = 폐, 도 2f = 근육, 도 2g = 비장).
도 3a 및 3b: 3종의 상이한 LNP-제형화된 HA-mRNA로의 프라임 백신 접종 21일 후(도 3a) 및 부스트 백신 접종 14일 후(도 3b)의 HI 역가를 보여준다. 파선은 통상적으로 정의된 1:40의 보호 HI 역가를 나타낸다.
도 4a 내지 4d: 3종의 상이한 LNP-제형화된 HA-mRNA로의 프라임 백신 접종 21일 후 및 부스트 백신 접종 14일 후 및 부스트 백신 접종 14일 후의 ELISA 분석 결과를 보여준다(IgG1 서브타입 프라임 후 21일은 도 4a에 나타내었고, IgG1 서브타입 부스트 후 14일은 도 4b에 나타내었고, IgG2a 서브타입 프라임 후 21일은 도 4c에 나타내었고, IgG2a 서브타입 부스트 후 14일은 도 4d에 나타내었다).
도 5a 내지 5c: 세포 내 사이토카인 염색을 이용한, 항원-특이적인 T 세포의 유도 후의 T 세포 분석 결과를 보여준다. 도 5a는 IFNу/TNFα 생성 CD4 T 세포를 보여주고, 도 5b는 IFNу/TNFα 생성 CD8 T 세포를 보여주며, 도 5c는 IFNу/CD107+ 생성 CD8 T 세포를 보여준다.
도 6a 및 6b: 3종의 상이한 LNP-제형화된 HA-mRNA로의 프라임 백신 접종 21일 후(도 6a) 및 부스트 백신 접종 14일 후(도 6b)의 HI 역가를 보여준다. 파선은 통상적으로 정의된 1:40의 보호 HI 역가를 나타낸다.
도 7a 내지 7d: 3종의 상이한 LNP-제형화된 HA-mRNA로의 프라임 백신 접종 21일 후 및 부스트 백신 접종 14일 후 및 부스트 백신 접종 14일 후의 ELISA 분석 결과를 보여준다(IgG1 서브타입 프라임 후 21일은 도 7a에 나타내었고, IgG1 서브타입 부스트 후 14일은 도 7b에 나타내었고, IgG2a 서브타입 프라임 후 21일은 도 7c에 나타내었고, IgG2a 서브타입 부스트 후 14일은 도 7d에 나타내었다).
도 8a 내지 8c: 세포 내 사이토카인 염색을 이용한, 항원-특이적인 T 세포의 유도 후의 T 세포 분석 결과를 보여준다. 도 8a는 IFNу/TNFα 생성 CD4 T 세포를 보여주고, 도 5b는 IFNу/TNFα 생성 CD8 T 세포를 보여주며, 도 8c는 IFNу/CD107+ 생성 CD8 T 세포를 보여준다.
도 9a 및 9b: 1 μg LNP-제형화된 HA-mRNA만을 이용한, 3종의 상이한 LNP-제형화된 HA-mRNA로의 프라임 백신 접종 21일 후(도 6a) 및 부스트 백신 접종 14일 후(도 6b)의 HI 역가를 보여준다. 파선은 통상적으로 정의된 1:40의 보호 HI 역가를 나타낸다.
도 10a 내지 10d: 3종의 상이한 LNP-제형화된 HA-mRNA로의 프라임 백신 접종 21일 후 및 부스트 백신 접종 14일 후 및 부스트 백신 접종 14일 후의 ELISA 분석 결과를 보여준다(IgG1 서브타입 프라임 후 21일은 도 10a에 나타내었고, IgG1 서브타입 부스트 후 14일은 도 10b에 나타내었고, IgG2a 서브타입 프라임 후 21일은 도 10c에 나타내었고, IgG2a 서브타입 부스트 후 14일은 도 10d에 나타내었다).
도 11: 엘리스팟(Elispot)을 이용하여 IFNу 생성에 의해 측정한 T 세포 면역 반응을 보여준다.
도 12: LNP-III-3-제형화된 HA-암호화 mRNA로의 NHP의 근육 내 백신 접종 후의 항체 역가 분석 결과를 보여준다.
도 13: LNP-III-3-제형화된 RABV-G-암호화 mRNA로의 NHP의 근육 내 백신 접종 후의 광견병 바이러스 중화 역가(VNT)를 보여준다.
도 14: LNP-III-3-제형화된 HA-mRNA로의 백신 접종 후의 HI-역가 분석을 보여준다.
도 15a 내지 15d: LNP-III-3-제형화된 HA-mRNA로의 백신 접종 후 사이토카인 분석 결과를 보여준다(도 15a = IFNу, 도 15b = IL-6, 도 15c = IL-8, 도 15d = TNF).
도 16a 및 16b: LNP-III-3-제형화된 RABV-G-암호화 mRNA로의 마우스의 근육 내 백신 접종 후 광견병 바이러스 중화 역가(VNT)를 보여준다(도 16a = VNT 21일; 도 16b = VNT 35일).
도 17a 내지 17c: 35일차의 5 μg, 1 μg 및 0.5 μg LNP-제형화된 mRNA로의 2회 면역화된 마우스의 T 세포 분석 결과를 보여준다(도 17a는 IFNу/TNFα 생성 CD4 T 세포를 보여주고, 도 17b는 IFNу/TNFα 생성 CD8 T 세포를 보여주며, 도 17c는 IFNу/CD107+ 생성 CD8 T 세포를 보여준다). 음성 DMSO 대조군은 그래프에서 파선으로 표시되었다.
도 18a 내지 18d: 간 손상 분석 결과, 즉, 1일차와 21일차의 AST 수준(도 18a-18b) 및 1일차와 21일차의 ALT 수준(도 18c-18d)의 결정 결과를 보여준다.
도 19a 내지 19d: 특정 인플루엔자 바이러스, 즉, 인플루엔자 A/캘리포니아/7/2009(H1N1; 도 19a), 인플루엔자 A/홍콩/4801/2014(H3N2; 도 19b), 인플루엔자 B/브리즈번/60/2008(B; 도 19c) 및 인플루엔자 A/베트남/1203/2004(H5N1; 도 19d)에 대한 IgG2a 항체를 검출하여 HA-특이적인 면역 반응(B-세포 면역 반응)의 검출을 보여준다.
도 20: 인플루엔자 A 바이러스의 예시적인 헤마글루티닌(HA) 단백질을 보여준다(섹션 "본 발명의 바람직한 서열"; 범례: 첫째 열: 단백질 또는 핵산 접근 번호(GenBank); 둘째 열(A): 단백질 서열 야생형 서열번호; 셋째 열(B): 뉴클레오티드 서열 야생형 서열번호; 넷째 열(C): 최적화된 뉴클레오티드 서열 서열번호 참조).
도 21: 인플루엔자 B 바이러스의 예시적인 헤마글루티닌(HA) 단백질을 보여준다(섹션 "본 발명의 바람직한 서열"; 범례: 첫째 열: 단백질 또는 핵산 접근 번호(GenBank); 둘째 열(A): 단백질 서열 야생형 서열번호; 셋째 열(B): 뉴클레오티드 서열 야생형 서열번호; 넷째 열(C): 최적화된 뉴클레오티드 서열 서열번호 참조).
도 22: 인플루엔자 A 바이러스의 예시적인 뉴라미니다제(NA) 단백질을 보여준다(섹션 "본 발명의 바람직한 서열"; 범례: 첫째 열: 단백질 또는 핵산 접근 번호(GenBank); 둘째 열(A): 단백질 서열 야생형 서열번호; 셋째 열(B): 뉴클레오티드 서열 야생형 서열번호; 넷째 열(C): 최적화된 뉴클레오티드 서열 서열번호 참조).
도 23: 인플루엔자 B 바이러스의 예시적인 뉴라미니다제(NA) 단백질을 보여준다(섹션 "본 발명의 바람직한 서열"; 범례: 첫째 열: 단백질 또는 핵산 접근 번호(GenBank); 둘째 열(A): 단백질 서열 야생형 서열번호; 셋째 열(B): 뉴클레오티드 서열 야생형 서열번호; 넷째 열(C): 최적화된 뉴클레오티드 서열 서열번호 참조).
도 24: 광견병 바이러스의 예시적인 당단백질을 보여준다(섹션 "본 발명의 바람직한 서열"; 범례: 첫째 열: 단백질 또는 핵산 접근 번호(GenBank); 둘째 열(A): 단백질 서열 야생형 서열번호; 셋째 열(B): 뉴클레오티드 서열 야생형 서열번호; 넷째 열(C): 최적화된 뉴클레오티드 서열 서열번호 참조).
도 25: RiLa(a) 또는 인플루스플릿(b)을 주사한 대조군과 비교하여, 상이한 인플루엔자 항원을 암호화하는 4종의 mRNA의 조합물을 백신 접종한 마우스(c-f)의 인플루엔자 H1N1(A/캘리포니아/7/2009)에 특이적인 전체 IgG1 및 IgG2 항체의 존재를 보여준다. 각각의 설정(a-f)에 대해, 3가지 상이한 시점을 나타내었다(d21, d35, 및 d49). 백신 접종 계획은 표 A 참조. 실험에 대한 상세한 설명은 실시예 12에 제공된다.
도 26: RiLa(a) 또는 인플루스플릿(b)을 주사한 대조군과 비교하여, 상이한 인플루엔자 항원을 암호화하는 4종의 mRNA의 조합물을 백신 접종한 마우스(c-f)의 인플루엔자 H1N1(A/캘리포니아/7/2009)에 특이적인 HI 역가를 보여준다. 각각의 설정(a-f)에 대해, 3가지 상이한 시점을 나타내었다(d21, d35, 및 d49). 백신 접종 계획은 표 A 참조. 실험에 대한 상세한 설명은 실시예 12에 제공된다.
도 27: RiLa(a) 또는 인플루스플릿(b)을 주사한 대조군과 비교하여, 상이한 인플루엔자 항원을 암호화하는 4종의 mRNA의 조합물을 백신 접종한 마우스(c-f)의 인플루엔자 H3N2(A/홍콩/4801/2014)에 특이적인 전체 IgG1 및 IgG2 항체의 존재를 보여준다. 각각의 설정(a-f)에 대해, 3가지 상이한 시점을 나타내었다(d21, d35, 및 d49). 백신 접종 계획은 표 A 참조. 실험에 대한 상세한 설명은 실시예 12에 제공된다.
도 28: RiLa(a) 또는 인플루스플릿(b)을 주사한 대조군과 비교하여, 상이한 인플루엔자 항원을 암호화하는 4종의 mRNA의 조합물을 백신 접종한 마우스(c-f)의 인플루엔자 H3N2(A/홍콩/4801/2014)에 특이적인 HI 역가를 보여준다. 각각의 설정(a-f)에 대해, 3가지 상이한 시점을 나타내었다(d21, d35, 및 d49). 백신 접종 계획은 표 A 참조. 실험에 대한 상세한 설명은 실시예 12에 제공된다.
도 29: RiLa(a) 또는 인플루스플릿(b)을 주사한 대조군과 비교하여, 상이한 인플루엔자 항원을 암호화하는 4종의 mRNA의 조합물을 백신 접종한 마우스(c-f)의 인플루엔자 B(B/브리즈번/60/2008)에 특이적인 전체 IgG1 및 IgG2 항체의 존재를 보여준다. 각각의 설정(a-f)에 대해, 3가지 상이한 시점을 나타내었다(d21, d35, 및 d49). 백신 접종 계획은 표 A 참조. 실험에 대한 상세한 설명은 실시예 12에 제공된다.
도 30: RiLa(a) 또는 인플루스플릿(b)을 주사한 대조군과 비교하여, 상이한 인플루엔자 항원을 암호화하는 4종의 mRNA의 조합물을 백신 접종한 마우스(c-f)의 인플루엔자 B(B/푸켓/3073/2013)에 특이적인 전체 IgG1 및 IgG2 항체의 존재를 보여준다. 각각의 설정(a-f)에 대해, 3가지 상이한 시점을 나타내었다(d21, d35, 및 d49). 백신 접종 계획은 표 A 참조. 실험에 대한 상세한 설명은 실시예 12에 제공된다.
도 31: 상이한 인플루엔자 항원을 암호화하는 4종의 mRNA의 조합물로의 마우스 백신 접종(c-f)이 H1N1(A/캘리포니아/7/2009), H3N2(A/홍콩/4801/2014), 인플루엔자 B(B/브리즈번/60/2008), 인플루엔자 B(B/푸켓/3073/2013)(각각 1-4)에 대하여 CD4+ T-세포 반응을 유도하였음을 보여준다. 대조군으로, 세포를 완충액으로 자극하였다(5). 추가적인 대조군으로, 마우스에 Rila(a) 또는 인플루스플릿(b)을 주사하였다. 백신 접종 계획은 표 A 참조. 실험에 대한 상세한 설명은 실시예 12에 제공된다.
도 32: 상이한 인플루엔자 항원을 암호화하는 4종의 mRNA의 조합물로의 마우스 백신 접종(c-f)이 H1N1(A/캘리포니아/7/2009)(1)에 대하여 CD8+ T-세포 반응을 유도하였음을 보여준다. 대조군으로, 세포를 완충액으로 자극하였다(5). 추가적인 대조군으로, 마우스에 Rila(a) 또는 인플루스플릿(b)을 주사하였다. 백신 접종 계획은 표 A 참조. 실험에 대한 상세한 설명은 실시예 12에 제공된다.
도 33: RiLa(a) 또는 플루아릭스(b)를 주사한 대조군과 비교하여, 상이한 인플루엔자 항원을 암호화하는 4종의 mRNA의 조합물을 백신 접종한 마우스(c-e)의 인플루엔자 H1N1(A/캘리포니아/7/2009)에 특이적인 전체 IgG1 및 IgG2 항체의 존재를 보여준다. 각각의 설정(a-e)에 대해, 3가지 상이한 시점을 나타내었다(d21, d35, 및 d49). 백신 접종 계획은 표 B 참조. 실험에 대한 상세한 설명은 실시예 13에 제공된다.
도 34: RiLa(a) 또는 플루아릭스(b)를 주사한 대조군과 비교하여, 상이한 인플루엔자 항원을 암호화하는 4종의 mRNA의 조합물을 백신 접종한 마우스(c-e)의 인플루엔자 H1N1(A/캘리포니아/7/2009)에 특이적인 HI 역가를 보여준다. 각각의 설정(a-e)에 대해, 3가지 상이한 시점을 나타내었다(d21, d35, 및 d49). 백신 접종 계획은 표 B 참조. 실험에 대한 상세한 설명은 실시예 13에 제공된다.
도 35: RiLa(a) 또는 플루아릭스(b)를 주사한 대조군과 비교하여, 상이한 인플루엔자 항원을 암호화하는 4종의 mRNA의 조합물을 백신 접종한 마우스(c-e)의 인플루엔자 H3N2(A/홍콩/4801/2014)에 특이적인 전체 IgG1 및 IgG2 항체의 존재를 보여준다. 각각의 설정(a-e)에 대해, 3가지 상이한 시점을 나타내었다(d21, d35, 및 d49). 백신 접종 계획은 표 B 참조. 실험에 대한 상세한 설명은 실시예 13에 제공된다.
도 36: RiLa(a) 또는 플루아릭스(b)를 주사한 대조군과 비교하여, 상이한 인플루엔자 항원을 암호화하는 4종의 mRNA의 조합물을 백신 접종한 마우스(c-e)의 인플루엔자 H3N2(A/홍콩/4801/2014)에 특이적인 HI 역가를 보여준다. 각각의 백신 접종 설정(a-e)에 대해, 3가지 상이한 시점을 나타내었다(d21, d35, 및 d49). 백신 접종 계획은 표 B 참조. 실험에 대한 상세한 설명은 실시예 13에 제공된다.
도 37: RiLa(a) 또는 플루아릭스(b)를 주사한 대조군과 비교하여, 상이한 인플루엔자 항원을 암호화하는 4종의 mRNA의 조합물을 백신 접종한 마우스(c-e)의 인플루엔자 B(B/브리즈번/60/2008)에 특이적인 전체 IgG1 및 IgG2 항체의 존재를 보여준다. 각각의 설정(a-e)에 대해, 3가지 상이한 시점을 나타내었다(d21, d35, 및 d49). 백신 접종 계획은 표 B 참조. 실험에 대한 상세한 설명은 실시예 13에 제공된다.
도 38: RiLa(a) 또는 플루아릭스(b)를 주사한 대조군과 비교하여, 상이한 인플루엔자 항원을 암호화하는 4종의 mRNA의 조합물을 백신 접종한 마우스(c-e)의 인플루엔자 H5N1(A/베트남/1203/2004)에 특이적인 전체 IgG1 및 IgG2 항체의 존재를 보여준다. 각각의 설정(a-e)에 대해, 3가지 상이한 시점을 나타내었다(d21, d35, 및 d49). 백신 접종 계획은 표 B 참조. 실험에 대한 상세한 설명은 실시예 13에 제공된다.
도 39: 상이한 인플루엔자 항원을 암호화하는 4종의 mRNA의 조합물로의 마우스 백신 접종(c-e)이 H1N1(A/캘리포니아/7/2009), H3N2(A/홍콩/4801/2014), 인플루엔자 B(B/브리즈번/60/2008), H5N1(A/베트남/1203/2004)(각각 1-4)에 대하여 CD4+ T-세포 반응을 유도하였음을 보여준다. 대조군으로, 세포를 완충액으로 자극하였다(5). 추가적인 대조군으로, 마우스에 Rila(a) 또는 인플루스플릿(b)을 주사하였다. 백신 접종 계획은 표 B 참조. 실험에 대한 상세한 설명은 실시예 13에 제공된다.
도 40: 상이한 인플루엔자 항원을 암호화하는 4종의 mRNA의 조합물로의 마우스 백신 접종(c-f)이 H1N1(A/캘리포니아/7/2009), H5N1(A/베트남/1203/2004)(1 및 2)에 대하여 CD8+ T-세포 반응을 유도하였음을 보여준다. 대조군으로, 세포를 완충액으로 자극하였다(3). 추가적인 대조군으로, 마우스에 Rila(a) 또는 인플루스플릿(b)을 주사하였다. 백신 접종 계획은 표 B 참조. 실험에 대한 상세한 설명은 실시예 13에 제공된다.
도 41: RiLa(a) 또는 인플루스플릿(Influsplit®)(b)를 주사한 대조군과 비교한, 인플루엔자 N1(A/캘리포니아/7/2009) 뉴라미니다제(c 및 d)를 암호화하는 LNP 제형화된 mRNA로 백신 접종한 마우스의 혈청 샘플의, 결합하는 인플루엔자 N1(A/캘리포니아/7/2009) 뉴라미니다제 특이적 항체의 존재 및 ELLA 역가(50% 억제 역가)를 보여준다. 백신 접종 계획은 표 C 참조. 실험에 대한 상세한 설명은 실시예 14에 제공된다.
도 42: 인플루엔자 N1(A/캘리포니아/7/2009) 뉴라미니다제를 암호화하는 mRNA로의 마우스 백신 접종이 뉴라미니다제에 대한 CD4+ T-세포 반응을 유도하였음을 보여준다(c 및 d). 대조군으로, 마우스에 RiLa(a) 또는 인플루스플릿®(b)을 주사하였다. 백신 접종 계획은 표 C 참조. 실험에 대한 상세한 설명은 실시예 14에 제공된다.
도 43: 인플루엔자 N1(A/캘리포니아/7/2009) 뉴라미니다제를 암호화하는 mRNA로의 마우스 백신 접종이 뉴라미니다제에 대한 CD8+ T-세포 반응을 유도하였음을 보여준다(c 및 d). 대조군으로, 마우스에 RiLa(a) 또는 인플루스플릿®(b)을 주사하였다. 백신 접종 계획은 표 C 참조. 실험에 대한 상세한 설명은 실시예 14에 제공된다.
도 44: RAVBV-G를 암호화하는 LNP 제형화된 mRNA가 전염증 환경을 유도함을 보여준다. 4가지의 상이한 시점(4h, 14h, 24h, 및 96h)에 대한 근육에서의 사이토카인 수준을 나타내었다(TNF, IL6). 화살표는 LNP-제형화된 mRNA로 백신 접종한 마우스에 대한 데이터 시리즈를 나타낸다. 값은 6개 샘플의 평균을 SD와 함께 나타낸 것이다. 실험에 대한 상세한 설명은 실시예 15에 제공된다.
도 45: RAVBV-G를 암호화하는 LNP 제형화된 mRNA가 전염증 환경을 유도함을 보여준다. 4가지의 상이한 시점(4h, 14h, 24h, 및 96h)에 대한 dLN에서의 사이토카인 수준을 나타내었다(TNF, IL6). 화살표는 LNP-제형화된 mRNA로 백신 접종한 마우스에 대한 데이터 시리즈를 나타낸다. 값은 6개 샘플의 평균을 SD와 함께 나타낸 것이다. 실험에 대한 상세한 설명은 실시예 15에 제공된다.
도 46: RAVBV-G를 암호화하는 LNP 제형화된 mRNA로의 근육 내 백신 접종 후 TNF의 전신 방출이 없었음을 보여준다. 4가지의 상이한 시점(4h, 14h, 24h, 및 96h)에 대한 혈청에서의 사이토카인 수준을 나타내었다(TNF, IL6). 화살표는 LNP-제형화된 mRNA로 백신 접종한 마우스에 대한 데이터 시리즈를 나타낸다. 값은 6개 샘플의 평균을 SD와 함께 나타낸 것이다. 실험에 대한 상세한 설명은 실시예 15에 제공된다.
도 47: RAVBV-G를 암호화하는 LNP 제형화된 mRNA가 전염증 환경을 유도함을 보여준다. 4가지의 상이한 시점(4h, 14h, 24h, 및 96h)에 대한 근육에서의 케모카인 수준을 나타내었다(MIP-1베타, CXCL9). 화살표는 LNP-제형화된 mRNA로 백신 접종한 마우스에 대한 데이터 시리즈를 나타낸다. 값은 6개 샘플의 평균을 SD와 함께 나타낸 것이다. 실험에 대한 상세한 설명은 실시예 15에 제공된다.
도 48: RAVBV-G를 암호화하는 LNP 제형화된 mRNA가 전염증 환경을 유도함을 보여준다. 4가지의 상이한 시점(4h, 14h, 24h, 및 96h)에 대한 dLN에서의 케모카인 수준을 나타내었다(MIP-1베타, CXCL9). 화살표는 LNP-제형화된 mRNA로 백신 접종한 마우스에 대한 데이터 시리즈를 나타낸다. 값은 6개 샘플의 평균을 SD와 함께 나타낸 것이다. 실험에 대한 상세한 설명은 실시예 15에 제공된다.
도 49: RAVBV-G를 암호화하는 LNP 제형화된 mRNA가 전염증 환경을 유도함을 보여준다. 4가지의 상이한 시점(4h, 14h, 24h, 및 96h)에 대한 혈청에서의 케모카인 수준을 나타내었다(MIP-1베타, CXCL9). 화살표는 LNP-제형화된 mRNA로 백신 접종한 마우스에 대한 데이터 시리즈를 나타낸다. 값은 6개 샘플의 평균을 SD와 함께 나타낸 것이다. 실험에 대한 상세한 설명은 실시예 15에 제공된다.
도 50a 및 50b: LNP 제형화된 F*mRNA가 dLN 내의 선천적 및 적응 면역 세포의 수의 증가 및 활성화를 유도함을 보여준다. 도 50a에서, 3가지 상이한 시점(4h, 24h, 및 48h)에 대한 CD4+ T 세포, NK 세포, CD11b+ Gr1+ 세포(단핵구 및 과립구)의 수 및 dLN 내 총 세포를 나타내었다. 도 50b에서, 3가지 상이한 시점(4h, 24h, 및 48h)에 대한 활성화 마커 CD69를 발현하는 CD4+ T 세포, CD8+ T 세포, B 세포 및 NK 세포의 빈도를 나타내었다. 화살표는 LNP-제형화된 mRNA를 주사한 마우스에 대한 데이터 시리즈를 나타낸다. 값은 6개 샘플의 평균을 SD와 함께 나타낸 것이다. 실험에 대한 상세한 설명은 실시예 15에 제공된다.
도 51: RABV-G를 암호화하는 LNP 제형화된 mRNA로의 원숭이 백신 접종은 단일 근육 내 백신 접종 후 광견병 바이러스 중화 역가(VNT)를 유도함을 보여준다. 백신 접종 전("투여 전") 및 1차 백신 접종("프라임 후") 후 2가지 mRNA 농도를 나타내었다(1 μg 및 10 μg). 파선은 VNT에 대한 통상적으로 정의된 보호 역가를 나타낸다. 실험에 대한 상세한 설명은 실시예 16에 제공된다.
도 52: RABV-G를 암호화하는 LNP 제형화된 mRNA로의 원숭이의 백신 접종 후(0일 프라임 백신 접종, 28일 부스트 백신 접종) VNT의 동역학을 보여준다. 파선은 VNT에 대한 통상적으로 정의된 보호 역가를 나타낸다. 실험에 대한 상세한 설명은 실시예 16에 제공된다.
도 53: 부스트 전("회상 전") 및 부스트 백신 접종 후("회상 후") 2가지 mRNA 농도를 나타내었다(1 μg 및 10 μg). 파선은 VNT에 대한 통상적으로 정의된 보호 역가를 나타낸다. 실험에 대한 상세한 설명은 실시예 16에 제공된다.
도 54: LNP 제형화된 RAVBV-G mRNA 백신은 NHP에서 허가된 백신보다 광견병에 대해 더 강한 기능적 면역 반응을 유도한다. 0일 또는 28일에 LNP 제형화된 RABV-G mRNA, 또는 0일 또는 28일(1회 부스트)에 불활성화된 광견병 바이러스 백신 라비푸어(Rabipur®)로 백신 접종한 NHP(각 그룹당 n = 수컷 2, 암컷 2)의 혈청 중 광견병 VNT. 파선은 VNT에 대한 통상적으로 정의된 보호 역가를 나타낸다. 실험에 대한 상세한 설명은 실시예 16에 제공된다.
도 55: LNP 제형화된 RAVBV-G mRNA 백신은 원숭이에서 RABV-G 특이적인 CD4+ T 세포를 유도한다. 마지막 백신 접종(35일) 7일 후, 혈액 내 RABV-G-특이적인 IFNγ+/IL-2+ CD4+ 세포의 빈도를 나타내었다. PBMC는 RABV-G 단백질을 커버하는 중복 펩티드 라이브러리(RABV-G 펩티드)로 자극 또는 비자극(매질)시키고, ICS에 의해 분석하였다. 실험에 대한 상세한 설명은 실시예 16에 제공된다.
도 56: LNP 제형화된 RAVBV-G mRNA 백신은 원숭이에서 RABV-G 특이적인 CD8+ T 세포를 유도한다. 마지막 백신 접종(35일) 7일 후, 혈액 내 RABV-G-특이적인 IFNγ+/GrzB+ CD8 T 세포의 빈도를 나타내었다. PBMC는 RABV-G 단백질을 커버하는 중복 펩티드 라이브러리(RABV-G 펩티드)로 자극 또는 비자극(매질)시키고, ICS에 의해 분석하였다. 실험에 대한 상세한 설명은 실시예 16에 제공된다.
도 57: H1N1 또는 H3N2 균주의 인플루엔자 HA 항원을 암호화하는 LNP 제형화된 mRNA로의 원숭이 백신 접종은 단일 근육 내 백신 접종 후 기능적인 항체를 유도함을 보여준다. 백신 접종 전("투여 전") 및 1차 백신 접종 후("프라임 후")의 HI 역가를 나타내었다. 파선은 HI에 대한 통상적으로 정의된 보호 역가를 나타낸다. 실험에 대한 상세한 설명은 실시예 17에 제공된다.
도 58: H1N1 HA를 암호화하는 LNP 제형화된 mRNA로의 원숭이의 백신 접종(0일 프라임 백신 접종, 28일 부스트 백신 접종) 후 HI 역가(평균과 SEM)의 동역학을 보여준다. 544일까지의 HI 역가의 시간 경과를 나타내었다. 파선은 HI에 대한 통상적으로 정의된 보호 역가를 나타낸다. 삼각형: 10 μg을 백신 접종한 원숭이에 대한 데이터 포인트; 사각형: 1 μg을 백신 접종한 원숭이에 대한 데이터 포인트. 실험에 대한 상세한 설명은 실시예 17에 제공된다.
도 59: LNP 제형화된 H3N2-HA mRNA 백신은 NHP에서 허가된 백신보다 인플루엔자에 대해 더 강한 기능적 면역 반응을 유도하였다. LNP 제형화된 H3N2-HA mRNA 또는 보강 백신 플루아드(Fluad®)로 0일 및 28일 백신 접종한 NHP의 혈청 내 H3N2-HI 역가를 나타내었다. 파선은 HI에 대한 통상적으로 정의된 보호 역가를 나타낸다. 실험에 대한 상세한 설명은 실시예 17에 제공된다.
도 60: LNP 제형화된 H3N2-HA mRNA 백신은 원숭이에서 H3N2 특이적인 CD4+ T 세포를 유도한다. PBMC는 H3N2-HA 단백질을 커버하는 중복 펩티드 라이브러리(H3N2-HA 펩티드)로 자극 또는 비자극(매질)시키고, ICS에 의해 분석하였다. 도 60a: 마지막 백신 접종(35일) 7일 후, 혈액 내 H3N2-HA-특이적인 IFNγ+/IL-2+ CD4+ 세포의 빈도를 나타내었다. 도 60b: 마지막 백신 접종(35일) 7일 후, 혈액 내 H3N2-HA-특이적인 TNFα+/IL-2+ CD4+ 세포의 빈도를 나타내었다. 실험에 대한 상세한 설명은 실시예 17에 제공된다.
도 61a 및 61b: LNP-III-3-제형화된 RABV-G-암호화 mRNA로의 마우스의 근육 내 백신 접종 후 광견병 바이러스 중화 역가(VNT)를 보여준다(도 60a = VNT 21일; 도 60b = VNT 35일). 실험에 대한 상세한 설명은 실시예 7에 제공된다.
도 62a 및 62b: 3개월 동안 5℃에 보관된 LNP를 적용하는, LNP-III-3-제형화된 RABV-G-암호화 mRNA로의 마우스의 근육 내 백신 접종 후 광견병 바이러스 중화 역가(VNT)를 보여준다(도 60a = VNT 21일; 도 60b = VNT 35일). 실험에 대한 상세한 설명은 실시예 20에 제공된다.
도 63a 내지 63d: LNP 제형화된 4가 mRNA 백신으로의 흰족제비의 백신 접종은 기능적 항체를 유도함을 보여준다. 각각 0일, 21일, 35일 및 49일에 측정한, 표시된 그룹(그룹 a-d)에 대해 나타낸 데이터. 도 63a: HA A/캘리포니아/07/09에 대한 HI 역가; 도 63a: HA A/홍콩/4801/2014에 대한 HI 역가; 도 63c: HA B/브리즈번/60/2008에 대한 HI 역가; 도 63d: HA B/푸켓/3073/2013에 대한 MN 역가. 플루아드가 HA B/푸켓을 함유하지 않으므로, 양성 대조군(그룹 D, 플루아드)은 도시하지 않았다. 실험에 대한 상세한 설명은 실시예 22에 제공된다.
도 64: LNP 제형화된 3가 NA mRNA 백신으로의 마우스 백신 접종은 결합 인플루엔자 NA 항체를 유도함을 보여준다. ELLA(50% 억제 역가)를 나타내었다. 도 64a는 표시된 그룹에 대한 인플루엔자 N1 A/캘리포니아/7/2009에 대한 ELLA 역가를 보여준다; 도 64b는 표시된 그룹에 대한 인플루엔자 N1 A/홍콩/4801/2014에 대한 ELLA 역가를 보여준다; 도 64c는 표시된 그룹에 대한 NA B/브리즈번/60/2008에 대한 ELLA 역가를 보여준다. 1=mRNA 백신, 2=대조군; 3=완충액 대조군. 실험에 대한 상세한 설명은 실시예 24에 제공된다.
도 65: LNP 제형화된 7가 HA/NA mRNA 백신으로 백신 접종한 마우스의 H1N1 A/캘리포니아/7/2009의 HA에 특이적인 전체 IgG1 및 IgG2a 항체의 존재를 보여준다. 각각의 설정(그룹 1-6)에 대해, 3가지 상이한 시점을 나타내었다(d21, d35, 및 d49)(ELISA). 실험에 대한 상세한 설명은 실시예 25에 제공된다.
도 66: LNP 제형화된 7가 HA/NA mRNA 백신으로 백신 접종한 마우스의 H3N2 A/홍콩/4801/2014의 HA에 특이적인 전체 IgG1 및 IgG2a 항체의 존재를 보여준다. 각각의 설정(그룹 1-6)에 대해, 3가지 상이한 시점을 나타내었다(d21, d35, 및 d49)(ELISA). 실험에 대한 상세한 설명은 실시예 25에 제공된다.
도 67: 7가 HA/NA mRNA 백신으로 백신 접종한 마우스의 B/브리즈번/60/2008의 HA에 특이적인 전체 IgG1 및 IgG2a 항체의 존재를 보여준다(ELISA). 각각의 설정(그룹 1-6)에 대해, 3가지 상이한 시점을 나타내었다(d21, d35, 및 d49). 실험에 대한 상세한 설명은 실시예 25에 제공된다.
도 68: LNP 제형화된 7가 HA/NA mRNA 백신으로 백신 접종한 마우스의 B/푸켓/3073/2013의 HA에 특이적인 전체 IgG1 및 IgG2a 항체의 존재를 보여준다(ELISA). 각각의 설정(그룹 1-그룹 6)에 대해, 3가지 상이한 시점을 나타내었다(d21, d35, 및 d49). 실험에 대한 상세한 설명은 실시예 25에 제공된다.
도 69: LNP 제형화된 7가 HA/NA mRNA 백신으로 백신 접종한 마우스의 H1N1A/캘리포니아/7/2009의 NA에 대해 특이적인 항체의 존재를 보여준다(ELISA). 각각의 설정(그룹 1-그룹 6)에 대해, 3가지 상이한 시점을 나타내었다(d21, d35, 및 d49). 도 69a: H1N1A/캘리포니아/7/2009의 NA에 대해 특이적인 항체; 도 69b: H3N2 A/홍콩/4801/2014의 NA에 대해 특이적인 항체; 도 69c: B/브리즈번/60/2008의 NA에 대해 특이적인 항체. 실험에 대한 상세한 설명은 실시예 25에 제공된다.
도 70: LNP 제형화된 7가 HA/NA mRNA 백신으로의 마우스 백신 접종은 기능적 항체를 유도함을 보여준다. 49일에 측정한, 표시된 그룹(그룹 1-그룹 6)에 대해 나타낸 데이터. 도 63a: HA A/캘리포니아/07/09에 대한 HI 역가; 도 63a: HA A/HongKong/4801/2014에 대한 HI 역가. 실험에 대한 상세한 설명은 실시예 25에 제공된다.
도 71: LNP 제형화된 GP(에볼라) mRNA 백신이 마우스에서 강한 IgG1 및 IgG2a 항체 반응을 유도함을 보여준다. 실험에 대한 상세한 설명은 실시예 26에 제공된다.
도 72: LNP 제형화된 mRNA 백신이 피하로 투여될 때, 강하고 오래 가는 HI-역가를 유도함을 보여준다. 실험에 대한 상세한 설명은 실시예 27에 제공된다.
도 73: 1 μg LNP 제형화된 Ova mRNA(성분 A) 및 32 μg 프로타민 제형화된 Ova mRNA(성분 B)로의 백신 접종 후 7일차의 혈액 내에서의 Ova-특이적 CD8 양성 T 세포의 비교를 보여준다. 1 μg LNP 제형화된 Ova mRNA(성분 A)는 피내 적용 후 더 높은 수준의 순환하는 항원-특이적 CD8 양성 T 세포를 유도한다. 실험에 대한 상세한 설명은 실시예 28에 제공된다.
도 74: 1 μg의 LNP 제형화된 Ova mRNA(성분 A) 및 32 μg 프로타민 제형화된 Ova mRNA(성분 B)로의 백신 접종한 동물을 부스팅한 후 21일차의 혈액 내에서의 Ova-특이적 CD8 양성 T 세포의 비교를 보여준다. 1 μg의 LNP 제형화된 Ova mRNA(성분 A)는 피내 적용 후 부스트 가능한 수준의 순환하는 항원-특이적 CD8 양성 T 세포를 유도한다. 실험에 대한 상세한 설명은 실시예 28에 제공된다.
도 75: 1 μg LNP 제형화된 Ova mRNA(성분 A) 및 32 μg 프로타민 제형화된 Ova mRNA(성분 B)로의 백신 접종 후, 혈액 내에서의 다기능 Ova-특이적 CD8 양성 T 세포의 비교를 보여준다. 1 μg LNP 제형화된 Ova mRNA 백신(성분 A)은 피내 적용 후 높은 수준의 다기능 CD8 양성 T 세포를 유도한다. 실험에 대한 상세한 설명은 실시예 28에 제공된다.
도 76: 1 μg LNP 제형화된 Ova mRNA(성분 A) 및 32 μg 프로타민 제형화된 Ova-mRNA(성분 B)로의 백신 접종 후 Ova-특이적 IgG2c 역가의 비교를 보여준다. 1 μg LNP 제형화된 Ova mRNA 백신(성분 A)은 피내 적용 후 증가된 OVA-특이적 IgG2c 역가를 초래한다. 실험에 대한 상세한 설명은 실시예 28에 제공된다.
도 77: 1 μg LNP 제형화된 Ova mRNA(성분 A) 및 관련 없는 LNP 제형화된 PpLuc mRNA(성분 B)로의 백신 접종 후, 종양을 품은 마우스의 종양 성장 중앙값의 비교를 보여준다. 1 μg LNP 제형화된 Ova mRNA(성분 A)는 관련 없는 mRNA(성분 B)로의 다른 치료와 비교하여 종양 부피 중앙값을 강하게 감소시켰다. 실험에 대한 상세한 설명은 실시예 29에 제공된다.
도 78: 1 μg LNP 제형화된 Ova mRNA(성분 A) 및 관련 없는 LNP 제형화된 PpLuc mRNA(성분 B)로의 백신 접종 후 종양 접종된 마우스의 전체 생존 비교를 보여준다. 1 μg LNP 제형화된 Ova mRNA(성분 A)는 다른 치료(성분 B 및 완충액)와 비교하여 종양 접종된 마우스의 생존을 강하게 증가시켰다. 실험에 대한 상세한 설명은 실시예 29에 제공된다.
도 79: 두 가지 체크포인트 억제자 항-PD1 및 항-CTLA4와 조합하여, 1 μg LNP 제형화된 Trp2 mRNA(성분 A) 및 관련 없는 LNP 제형화된 PpLuc mRNA(성분 B)로의 백신 접종 후, 종양을 품은 마우스의 종양 성장 중앙값의 비교를 보여준다. 체크포인트 억제자 또는 대조 항체와 조합한 1 μg LNP 제형화된 Trp2 mRNA(성분 A)는 관련 없는 mRNA(성분 B)로의 다른 치료와 비교하여 종양 부피 중앙값을 강하게 감소시켰다. 실험에 대한 상세한 설명은 실시예 30에 제공된다.
도 80: 두 가지 체크포인트 억제자 항-PD1 및 항-CTLA4와 조합하여, 1 μg LNP 제형화된 Trp2 mRNA(성분 A) 및 관련 없는 LNP 제형화된 PpLuc mRNA(성분 B)로의 백신 접종 후 종양 접종된 마우스의 생존 비교를 보여준다. 1 μg LNP 제형화된 Trp2 mRNA(성분 A)는 다른 치료(체크포인트 억제자 또는 대조 항체와 조합한 성분 B)와 비교하여 종양 접종된 마우스의 생존을 증가시켰다. 실험에 대한 상세한 설명은 실시예 30에 제공된다.
실시예
다음 실험예를 참조하여 추가적으로 본 발명을 상세하게 설명한다. 이러한 실시예는 오로지 설명의 목적을 위해서만 제공되는 것으로, 달리 명시되지 않는 한, 제한하려는 것이 아니다. 따라서, 본 발명은 절대로 다음의 실시예로 한정되는 것으로 해석되어서는 안 되며, 오히려 본 설명에 제공된 교시의 결과로서 명백해지는 임의의 및 모든 변형을 포괄하는 것으로 해석되어야 한다.
추가적인 설명 없이, 당업자라면 전술한 설명 및 다음의 실례가 되는 예를 이용하여, 본 발명을 고안하고 활용하며 청구된 방법을 실현할 수 있다. 따라서, 다음의 작용예는 본 발명의 바람직한 구현예를 구체적으로 가리키며, 어떠한 방식으로든 본 개시의 나머지 부분을 제한하는 것으로 해석되지 않는다.
실시예 1: mRNA 구성체의 제조
본 실시예를 위하여, 상이한 단백질을 암호화하는 DNA 서열을 제조하고, 이후의 RNA 시험관 내 전사 반응에 사용하였다. 안정화를 위하여 GC-최적화된 서열을 도입함으로써 야생형 암호화 DNA 서열을 변형함으로써 단백질을 암호화하는 DNA 서열을 제조하였다. 서열을 유래된 pUC19 벡터 내로 도입하였다. 추가적인 안정화 및/또는 증가된 번역을 위하여, UTR 요소를 암호화 영역의 5'- 및/또는 3'으로 도입하였다.
다음의 mRNA 구성체를 실시예에서 사용하였다:
포티누스 피랄리스(Photinus pyralis, 반딧불이) 루시퍼라제:
- 32L4 리보솜 단백질로부터 유래된 5'-TOP-UTR - PpLuc를 암호화하는 GC-풍부 암호화 서열 - 알부민 유전자로부터 유래된 3'-UTR - 64개 아데노신의 스트레치 - 30개 시토신의 스트레치 - 히스톤 스템-루프 서열(서열번호 224286).
인플루엔자 헤마글루티닌(HA):
- 32L4 리보솜 단백질로부터 유래된 5'-TOP-UTR - 인플루엔자 A/캘리포니아/07/2009(H1N1)의 HA를 암호화하는 GC-풍부 암호화 서열 - 알부민 유전자로부터 유래된 3'-UTR - 64개 아데노신의 스트레치 - 30개 시토신의 스트레치 - 히스톤 스템-루프 서열(서열번호 224118)
- 인플루엔자 A/캘리포니아/07/2009(H1N1)의 HA를 암호화하는 GC-풍부 암호화 서열 - 인간 알파 글로빈으로부터 유래된 3'-UTR(muag) - 64개 아데노신의 스트레치 - 30개 시토신의 스트레치 - 히스톤 스템-루프 서열(서열번호 224117)
- 인플루엔자 A/홍콩/4801/2014(H3N2)의 HA를 암호화하는 GC-풍부 암호화 서열 - 인간 알파 글로빈으로부터 유래된 3'-UTR(muag) - 64개 아데노신의 스트레치 - 30개 시토신의 스트레치 - 히스톤 스템-루프 서열(서열번호 224181)
- 인플루엔자 B/브리즈번/60/2008의 HA를 암호화하는 GC-풍부 암호화 서열 - 인간 알파 글로빈으로부터 유래된 3'-UTR(muag) - 64개 아데노신의 스트레치 - 30개 시토신의 스트레치 - 히스톤 스템-루프 서열(서열번호 224236).
- 인플루엔자 A/베트남/1203/2004(H5N1)의 HA를 암호화하는 GC-풍부 암호화 서열 - 인간 알파 글로빈으로부터 유래된 3'-UTR(muag) - 64개 아데노신의 스트레치 - 30개 시토신의 스트레치 - 히스톤 스템-루프 서열(서열번호 224200).
- 인플루엔자 A/네덜란드/602/2009(H1N1)의 HA를 암호화하는 GC-풍부 암호화 서열 - 인간 알파 글로빈으로부터 유래된 3'-UTR(muag) - 64개 아데노신의 스트레치 - 30개 시토신의 스트레치 - 히스톤 스템-루프 서열(서열번호 224166).
- 인플루엔자 B/브리즈번/60/2008의 HA를 암호화하는 GC-풍부 암호화 서열 - 인간 알파 글로빈으로부터 유래된 3'-UTR(muag) - 64개 아데노신의 스트레치 - 30개 시토신의 스트레치 - 히스톤 스템-루프 서열(서열번호 224236).
- 인플루엔자 B/푸켓/3073/2013의 HA를 암호화하는 GC-풍부 암호화 서열 - 인간 알파 글로빈으로부터 유래된 3'-UTR(muag) - 64개 아데노신의 스트레치 - 30개 시토신의 스트레치 - 히스톤 스템-루프 서열(서열번호 224246).
인플루엔자 뉴라미니다제(NA):
- 인플루엔자 A/캘리포니아/07/2009(H1N1)의 NA를 암호화하는 GC-풍부 암호화 서열 - 인간 알파 글로빈으로부터 유래된 3'-UTR(muag) - 64개 아데노신의 스트레치 - 30개 시토신의 스트레치 - 히스톤 스템-루프 서열(서열번호 224318).
- 인플루엔자 A/홍콩/4801/2014(H3N2)의 NA를 암호화하는 GC-풍부 암호화 서열 - 인간 알파 글로빈으로부터 유래된 3'-UTR(muag) - 64개 아데노신의 스트레치 - 30개 시토신의 스트레치 - 히스톤 스템-루프 서열(서열번호 224336).
- 인플루엔자 B/브리즈번/60/2008의 NA를 암호화하는 GC-풍부 암호화 서열 - 인간 알파 글로빈으로부터 유래된 3'-UTR(muag) - 64개 아데노신의 스트레치 - 30개 시토신의 스트레치 - 히스톤 스템-루프 서열(서열번호 224348).
광견병:
- RABV-G A: 파스퇴르 균주의 당단백질(RABV-G)을 암호화하는 GC-풍부 암호화 서열(GenBank 접근 번호: AAA47218.1) - 인간 알파 글로빈으로부터 유래된 3'-UTR(muag) - 64개 아데노신의 스트레치 - 30개 시토신의 스트레치 - 히스톤 스템-루프 서열(서열번호 224276).
- RABV-G B: 32L4 리보솜 단백질로부터 유래된 5'-TOP-UTR - 파스퇴르 균주의 당단백질(RABV-G)을 암호화하는 GC-풍부 암호화 서열(GenBank 접근 번호: AAA47218.1) - 알부민 유전자로부터 유래된 3'-UTR - 64개 아데노신의 스트레치 - 30개 시토신의 스트레치 - 히스톤 스템-루프 서열(서열번호 224280).
에볼라:
- 에볼라 바이러스의 GP: ZEBOV 시에라리온 2014의 당단백질을 암호화하는 GC-풍부 암호화 서열; 32L4 리보솜 단백질로부터 유래된 5'-TOP-UTR - 알부민 유전자로부터 유래된 3'-UTR(서열번호 224362).
수득된 플라스미드 DNA 구성체를 당해 분야에 공지된 일반적인 프로토콜을 이용하여 박테리아(에스케리치아 콜라이)에서 형질전환 및 증식시켰다. 이후, EcoRI를 이용하여 DNA 플라스미드를 효소적으로 선형화하고, 적합한 완충액 조건 하에서 뉴클레오티드 혼합물 및 CAP 유사체(m7GpppG)의 존재 하에 시험관 내 런-오프 전사(in vitro run-off transcription)로 DNA 의존성 T7 RNA 중합효소를 이용하여 전사시킨다. 수득된 mRNA를 퓨어메신저(PureMessenger®, 큐어백(CureVac), 독일 튀빙겐 소재; WO2008/077592 A1)를 이용하여 정제하고, 추가적인 실험에 사용하였다. NHP에 프로타민 제형으로서 RABV-G A 및 LNP 제형으로서 RABV-G B를 투여하였다. 상이한 인플루엔자 단백질/항원을 암호화하는 둘 이상의 mRNA를 포함하는 화합물 또한, PCT 출원 PCT/EP2016/082487에 개시된 절차에 따라 생성할 수 있다.
예시 LNP 제형
PCT 공개 번호 WO 2015/199952, WO 2017/004143 및 WO 2017/075531(이의 전체 개시 내용은 본 설명에 참조로 포함됨)에 개시된 일반적인 절차에 따라 지질 나노입자, 양이온성 지질 및 폴리머 접합 지질(PEG-지질)을 제조하고 시험하였다. 이온화 가능한 아미노 지질(양이온성 지질), 인지질, 콜레스테롤 및 페길화 지질을 이용하여 지질 나노입자(LNP)-제형화된 mRNA를 제조하였다. LNP는 다음과 같이 제조하였다. 대략 50:10:38.5:1.5 또는 47.5:10:40.8:1.7의 몰 비율로 양이온성 지질, DSPC, 콜레스테롤 및 PEG-지질을 에탄올에 용해시켰다. 실시예를 위한 LNP는 예를 들어, 양이온성 지질 화합물 III-3 및 전술한 성분들을 포함하였다. 화합물 III-3을 포함하는 지질 나노입자(LNP)를 0.03 내지 0.04 w/w의 mRNA 대 총 지질의 비율로 제조하였다. 간략하게는, mRNA를 10 내지 50mM 시트르산 완충액, pH 4에 0.05 내지 0.2 mg/mL까지 희석시켰다. 시린지 펌프를 이용하여 15 ml/분을 초과하는 전체 유속으로 에탄올성 지질 용액을 mRNA 수용액과 약 1:5 내지 1:3(vol/vol)의 비율로 혼합하였다. 그 후, 에탄올을 제거하고, 외부 완충액을 투석에 의해 PBS로 교체하였다. 마지막으로, 지질 나노입자를 0.2 μm 공극 멸균 필터로 여과시켰다. 맬번 제타사이저 나노(Malvern Zetasizer Nano, 맬번(Malvern), 영국)를 이용한 준탄성 광산란으로 결정한 지질 나노입자의 입자 직경 크기는 60 내지 90 nm였다. 본 명세서에 언급된 기타 양이온성 지질 성분의 경우, 제형화 방법은 비슷하다.
실시예 2: LNP-제형화된 mRNA의 근육 내 적용 후 Ppluc 발현
BALB/c 마우스에사의 루시퍼라제(Ppluc) 발현을 경골근 내로의 근육 내 주사(i.m.) 후 24h 및 48h에 결정하였다.
따라서, Ppluc를 암호화하는 0.1 μg, 1 μg 및 10 μg mRNA를 LNP 제형화하여 표 I에 따른 각각의 LNP-제형을 생성하였다. 대조군으로서 비제형화된 Ppluc mRNA(10 μg 및 1 μg)가 기능하였다. 표 I에 나타낸 계획에 따라 0h의 시점에서, 그룹당 네 마리의 마우스를 Ppluc mRNA로 형질감염시켰다.
[표 I]
Figure pct00114
28h 및 48h 후, 복강 내 루시페린 주사 10분 후에 IVIS 루미나(Lumina) II 영상화 시스템으로 60초의 노출 시간을 이용하여 마우스의 생체 내 생물발광 영상화를 수행하였다. 관심 영역의 광자 유속(광자/초)을 측정하여 생물발광 값을 정량화하였다. 48시간 후, 마우스를 희생시켜, 근육, 폐, 간, 비장, 뇌, 신장 및 심장을 수집하고, 드라이아이스에 급속 냉동시키고(shock frozen), 추가적인 분석을 위해 -80℃에 보관하였다. 조직 용해기(퀴아젠(Qiagen), 독일 힐덴 소재)에서 기관 샘플을 최대 속도로 3분 동안 용해시켰다. 그 후 800 μl의 용해 완충액을 첨가하고, 생성된 용액을 조직 용해기에서 최대 속도로 6분 더 용해시켰다. 4℃, 13500 rpm에서 10분 원심분리 한 후, 상등액을 루시페린 완충액(25 mM 글리실글리신, 15 mM MgSO4, 5 mM ATP, 62.5 μM 루시페린)과 혼합하고, 카멜레온 플레이트 판독기(하이덱스(Hidex))를 이용하여 발광을 검출하였다.
결과:
도 1a 및 도 1b에서 볼 수 있는 바와 같이, mRNA의 LNP 제형은 근육 내 적용 후, 24h(도 1a) 및 48h(도 1b) 후, 동일한 양의 비제형화된 mRNA와 비교하여 현저히 증가된 단백질 발현을 가져왔다. 용량 의존적인 Ppluc의 발현이 관찰되었다.
도 2a 내지 2g에 나타난 바와 같이, 근육 내 주사 후 48h에 기관 용해물에서 Ppluc 발현이 측정되었다. 각 그룹에 대해개별적인 기관으로부터의 루시퍼라제 상대 발광 단위(RLU)를 보고하였다. 예상대로, 주사 부위에서 강한 루시퍼라제 발현이 관찰되었다. 특히, 최고 용량의 10 μg LNP-제형화된 mRNA에서만, 루시퍼라제 발현이 비장에서 검출되었고, 경미한 정도로 간, 신장 및 폐에서 검출되었다(도 2a = 뇌, 도 2b = 심장, 도 2c = 신장, 도 2d = 간, 도 2e = 폐, 도 2f = 근육, 도 2g = 비장).
실시예 3: LNP-제형화된 mRNA의 근육 내(i.m.) 적용 후 면역원성
근육 내(i.m.) 적용 후 면역원성 시험을 위해 LNP 제형화된 HA-mRNA를 사용하였다. 구체적으로, 위에 기술된 바와 같이, GC-풍부 H1N1(네덜란드 2009)-HA mRNA 서열을 LNP 제형으로서 적용하였다.
백신 접종을 위해, 표 II에 나타낸 백신 접종 계획에 따라 8마리의 BALB/c 마우스의 두 다리(다리당 25 μl)의 경골근에 근육 내 주사하였다. 명백하게, 인플루엔자 HA를 암호화하는 10 μg mRNA를 (위에 기술된 바와 같이) LNP-제형화하여 백신 접종을 위한 각각의 LNP-제형을 수득하였다; 비제형화된 mRNA(10 μg)가 대조군으로 기능하였다.
[표 II]
Figure pct00115
0일에 프라임 백신 접종이 실시되었다. 완충액으로 백신 접종한 동물이 음성 대조군으로 역할을 하였다. 21일에 안구 뒤 공동으로부터 혈액 샘플을 수집하고, 부스트 백신 접종이 실시되었다. 35일 후, 마우스를 희생시키고, 추가적인 분석을 위해 혈액 및 기관 샘플(비장)을 수집하였다. 35일에 비장세포를 단리하고, T 세포 분석을 위해 HA 펩티드 라이브러리로 자극하였다.
면역원성 분석을 위하여, 프라임 3주 후 및 부스트 2주 후, 혈청에서 혈구응집반응 억제(Hemagglutination inhibition, HI) 역가를 분석하였다. 세포 내 염색 및 유세포분석에 의해 활성화된, HA-특이적인, 다기능 CD4+ 및 CD8+ T 세포(IFN-γ+/TNF+)의 빈도를 측정하였다. 항체 역가 결정을 위하여 ELISA를 적용하였다.
혈구응집반응 억제 분석:
기능적 항-HA 항체 역가 분석을 위하여 혈구응집반응 억제(HI) 분석을 이용하였다. 마우스 혈청을 열 불활성화(56℃, 30분)시키고, 카올린(칼 로스(Carl Roth), 독일)과 인큐베이션 시키고, 닭 적혈구(CRBC; 로만 티어주흐트(Lohmann Tierzucht), 독일)에 사전 흡수시켰다. 사전 처리된 혈청의 2배 희석액 50 μl를 불활성화 인플루엔자 A/캘리포니아/7/2009(H1N1) 바이러스 4혈구응집 단위(HAU)와 45분 동안 인큐베이션 하고, 50 μl 0.5% CRBC를 첨가하였다. 혈구응집반응을 억제할 수 있는 혈청의 최고 희석배수의 역수에 의해 HI 역가를 결정하였다.
ELISA:
인플루엔자 특이적인 IgG1 및 IgG2a 항체를 검출함으로써 항원-특이적 면역 반응(B-세포 면역 반응)의 검출을 수행하였다. 따라서, 프라임 후 21일 및 부스트 후 14일의 백신 접종된 마우스로부터 혈액 샘플을 채취하고, 혈청을 준비하였다. MaxiSorb 플레이트(날진 눈크 인터내셔널(Nalgene Nunc International))를 불활성화 바이러스로 코팅하였다. 0.05% 트윈-20 및 1% BSA를 함유하는 1xPBS로 블로킹한 후, 플레이트를 (지시된 바와 같이) 희석된 마우스 혈청과 인큐베이션 시켰다. 이후, 비오틴 커플링된 2차 항체(항-마우스-IgG1 및 IgG2a, 파민젠(Pharmingen))를 첨가하였다. 세척 후, 플레이트를 호스래디쉬 퍼옥시다제-스트렙타비딘과 인큐베이션 시키고, 이후에 ABTS 기질(2,2'-아지노-비스(3-에틸-벤즈티아졸린-6-설폰산)의 전환을 측정하였다.
세포 내 사이토카인 염색:
부스트 14일 후에 세포 내 사이토카인 염색(ICS)을 이용하여 항원-특이적인 T 세포의 유도를 결정하였다. 백신 접종한 마우스와 대조군 마우스로부터 비장세포를 단리하고, 단백질 수송 억제제 브레펠딘(Brefeldin) A를 함유하는 골지플러그(GolgiPlug)(BD 바이오사이언스)의 존재 하에 37℃에서 6시간 동안 HA 펩티드 라이브러리(펩믹스(PepMix™) 인플루엔자 A(HA/캘리포니아(H1N1)), JPT) 및 항-CD28 항체(BD 바이오사이언스(Biosciences))로 자극하였다. 자극 후, 제조사의 설명서에 따라, 세포를 세척하고, 사이토픽스/사이토펌(Cytofix/Cytoperm) 시약(BD 바이오사이언스)을 이용하여 세포 내 사이토카인을 염색하였다. 염색을 위해 다음 항체를 사용하고: CD8-APC H7(1:100), CD4-BD 호라이즌(Horizon) V450(1:200)(BD 바이오사이언스), Thy1.2-FITC(1:300), TNFα-PE(1:100), IFN-γ-APC(1:100)(이바이오사이언스(eBioscience)), 1:100으로 희석된 FcγR-블록과 인큐베이션 시켰다. 아쿠아 염료(Aqua Dye)를 이용하여 생세포/사세포를 구분하였다(인비트로젠(Invitrogen)). 칸토(Canto) II 유세포분석기(BD 바이오사이언스)를 이용하여 세포를 획득하고, 플로우조(FlowJo) 소프트웨어(트리 스타(Tree Star))를 이용하여 유세포분석 데이터를 분석하였다.
결과:
혈구응집반응 억제(HI) 분석 결과:
LNP-제형화된 HA-mRNA는 도 3a로부터 명백하듯 프라임 백신 접종 후 이미 높은 HI 역가를 초래하였다. 즉, 10 μg 용량으로 HA mRNA를 포함하는 모든 3종의 상이한 LNP가 프라임 백신 접종 21일 후 1:40의 임계치를 초과하는 HI 역가를 유도하였다. 대조적으로, 비제형화된 mRNA는 1:40의 임계치에 이르지 않았다. 도 3b(부스트 백신 접종 후 14일)로부터 명백하듯 부스트 백신 접종 후 HI 역가는 훨씬 더 증가하였다. 파선은 통상적으로 정의된 1:40의 보호 HI 역가를 나타낸다.
ELISA 분석 결과:
LNP-제형화된 HA-mRNA는 비제형화된 mRNA와 비교할 때, 프라임 백신 접종 21일 후 및 부스트 백신 접종 14일 후 도 4a 내지 도 4d로부터 명백하듯 단일 근육 내 주사 후에 이미 IgG1 및 IgG2a 서브타입에서 현저히 더 높은 기능적 항체 역가를 유도하였다.
T 세포 분석 결과:
도 5a 내지 5c로부터 명백하듯, LNP-제형화된 HA-mRNA가 비제형화된 mRNA에 비해 더 높은 수준의 항원-특이적인 다기능 CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포를 유의미하게 유도하였음이 관찰되었다. 매질 대조군은 예상대로 반응을 전혀 유발하지 않았다.
실시예 4: LNP-제형화된 mRNA의 피내(i.d.) 적용 후 면역원성
피내(i.d.) 적용 후 면역원성 시험을 위해 LNP 제형화된 HA-mRNA를 사용하였다. 구체적으로, 위에 기술된 바와 같이, LNP-제형화된 GC-풍부 H1N1(네덜란드 2009)-HA mRNA 서열을 적용하였다.
따라서, 표 III에 나타낸 백신 접종 계획에 따라 그룹당 8마리의 마우스를 각각 피내 백신 접종하였다. 명백하게, 10 μg HA-mRNA를 (위에 기술된 바와 같이) LNP-제형화하여 백신 접종을 위한 각각의 LNP-제형을 수득하였다; 비제형화된 HA mRNA(10 μg)가 대조군으로 기능하였다.
[표 III]
Figure pct00116
0일의 시점에, 그룹당 8마리의 마우스에 프라임 백신 접종을 실시하였다. 21일에 혈액 샘플을 수집하였고, 부스트 백신 접종이 실시되었다. 35일 후, 마우스를 희생시키고, 추가적인 분석을 위해 혈액 및 기관 샘플(비장)을 수집하였다.
면역원성 분석을 위하여, HI 역가를 측정하였다. 항체 역가 결정을 위하여 ELISA를 적용하였다. 추가적으로, CD4 T 세포 면역 반응(IFNу/TNFα 생성 CD4 T 세포) 및 CD8 T 세포 면역 반응(IFNу/TNFα 생성 CD8 T 세포 및 CD107+ IFNу 생성 CD8 T 세포)를 부스트 백신 접종 14일 후 평가하였다. 세포 내 사이토카인 염색(ICS)을 이용하여 항원-특이적인 T 세포의 유도를 결정하였다. 위에 기술된 바와 같이 분석을 수행하였다.
결과:
혈구응집반응 억제(HI) 분석 결과:
LNP-제형화된 HA-mRNA는 도 6a로부터 명백하듯, 비제형화된 mRNA와 비교하여, 프라임 백신 접종 후 이미 매우 높은 HI 역가를 초래하였다. 도 6b로부터 명백하듯 부스트 백신 접종 후 HI 역가는 훨씬 더 증가하였다.
ELISA 분석 결과:
LNP-제형화된 HA-mRNA는 비제형화된 mRNA와 비교할 때, 도 7a 내지 도 7d로부터 명백하듯 단일 피내 주사 후에 이미 IgG1 및 IgG2a 서브타입에서 현저히 더 높은 기능적 항체 역가를 유도하였다.
T 세포 분석 결과:
도 8a 내지 8c로부터 명백하듯, LNP-제형화된 HA-mRNA가 비제형화된 mRNA에 비해 더 높은 수준의 항원-특이적인 다기능 CD4+ T 및 CD8+ T 세포를 유의미하게 유도하였음이 관찰되었다. 매질 대조군은 예상대로 반응을 전혀 유발하지 않았다.
실시예 5: 1 μg LNP-제형화된 mRNA의 근육 내(i.m.) 적용 후 면역원성
다음 실시예에서, 위에 기술된 바와 같이 근육 내(i.m.) 적용 후 면역원성을 시험하기 위하여 1 μg 양의 HA-mRNA(H1N1(네덜란드 2009)-HA mRNA 서열 LNP 제형을 이용하였다.
따라서, 표 IV에 나타낸 백신 접종 계획에 따라 그룹당 8마리의 BALB/c 마우스를 각각 한 다리에 근육 내로 백신 접종하였다. 명백하게, 1 μg HA-mRNA를 (위에 기술된 바와 같이) LNP-제형화하여 백신 접종을 위한 각각의 LNP-제형을 수득하였다; 비제형화된 HA mRNA(10 μg)가 대조군으로 기능하였다.
[표 IV]
Figure pct00117
0일의 시점에, 그룹당 8마리의 마우스에 프라임 백신 접종을 실시하였다. 21일에 혈액 샘플을 수집하였고, 부스트 백신 접종이 실시되었다. 35일 후, 마우스를 희생시키고, 추가적인 분석을 위해 혈액 및 기관 샘플(비장)을 수집하였다.
면역원성 분석을 위하여, HI 역가를 측정하였다. 항체 역가 결정을 위하여 ELISA를 적용하였다. 나아가, 동결된 비장세포를 HA 중복 펩티드 라이브러리로 자극하고, 엘리스팟을 이용하여 IFNу 생성을 측정함으로써 T 세포 면역 반응을 평가하였다.
결과:
면역원성 분석 결과:
1 μg LNP-제형화된 HA-mRNA는 도 9a로부터 명백하듯 프라임 백신 접종 후 이미 1:40의 임계값을 초과하는 HI 역가를 유도하였다. 도 9b로부터 명백하듯 부스트 백신 접종 후 HI 역가는 훨씬 더 증가하였다.
ELISA 분석 결과:
1 μg LNP-제형화된 HA-mRNA는 비제형화된 mRNA와 비교할 때, 단일 근육 내 주사 후에 이미 IgG1 및 IgG2a 서브타입에서 현저히 더 높은 기능적 항체 역가를 유도하였다(도 10a 내지 도 10d 참조).
T 세포 분석 결과:
1 μg LNP-제형화된 HA-mRNA는 비제형화된 mRNA와 비교하여 증가된 IFNу 생성을 초래하였다. 매질 대조군은 예상대로 반응을 전혀 유발하지 않았다(도 11 참조).
실시예 6: 원숭이의 HA-mRNA 및 RABV-G mRNA 백신 접종
광견병 mRNA 백신은 파스퇴르 균주의 당단백질(RABV-G)을 암호화하였다(GenBank 접근 번호: AAA47218.1). 동일한 ORF를 포함하나, 상이한 UTR을 포함하는 최적화된 mRNA 구성체(RABV-G A 및 B)를 이용하였다. 프로타민-제형화된 RABV-G mRNA 백신은 RABV-G mRNA A를 포함하였다. 비제형화 또는 LNP-제형화된 RABV-G mRNA 백신은 달리 지시되지 않는 한, (위에 기술된 바와 같이) RABV-G mRNA B를 포함하였다.
프로타민RNA 제형
프로타민 복합체화된 mRNA("RNActive® 제형")의 제조를 위하여, 수득된 항원 mRNA 구성체를 생체 내 백신 접종 실험에 사용하기 전에 프로타민과 복합체화시켰다. mRNA 복합체 형성은 2:1의 중량 비율의 50% 유리 mRNA 및 50% 프로타민 복합체 형성된 mRNA의 혼합물로 구성된다. 먼저, 프로타민-링거 락테이트 용액을 mRNA에 첨가하여 mRNA를 프로타민과 복합체를 형성시킨다. 10분 동안 인큐베이션 한 후, 복합체가 안정적으로 생성되었을 때, 유리 mRNA를 첨가하고, 백신의 최종 농도를 링거 락테이트 용액으로 조정하였다.
이전 실시예에서 제조된 LNP 제형화된 HA-mRNA 및 RABV-G mRNA 백신을 백신 접종을 위해 사용하였다. 네 마리의 미경산부 및 비임신 시노몰구스 원숭이(Macaca fascicularis)에 1일과 29일에 LNP-III-3-제형화된 HA-mRNA 또는 RABV-G mRNA(1 μg 또는 10 μg, 위에 기술된 바와 같은 mRNA) 또는 프로타민-제형화된 HA-mRNA 또는 RABV-G mRNA(240 μg)를 넙다리 두갈래 근 내로 근육 내 주사(500 μl)하여 백신 접종하였다. 음성 대조군으로 완충액을 주사하였다. 0일, 29일 및 50일에 넙다리 정맥으로부터 혈청 샘플을 수집하였다.
0일, 29일 및 50일에 항원-특이적인 면역 반응의 검출을 수행하였다.
혈구응집반응 억제 분석:
기능적 항-HA 항체 역가 분석을 위하여 혈구응집반응 억제(HI) 분석을 이용하였다. 비-인간 영장류(non-human primate, NHP) 혈청을 37℃에서 밤새 수용체 파괴 효소(RDEII, 덴카 세이켄(Denka Seiken), 일본 소재)와 인큐베이션 시키고, 불활성화시키고(56℃, 60분), 카올린과 인큐베이션 시켰다. 사전 처리된 혈청의 2배 희석액 50 μl를 불활성화 인플루엔자 A/캘리포니아/7/2009(H1N1) 바이러스 4혈구응집 단위(HAU)와 45분 동안 인큐베이션 하고, 50 μl 0.5% CRBC를 첨가하였다. 혈구응집반응을 억제할 수 있는 혈청의 최고 희석배수의 역수에 의해 HI 역가를 결정하였다.
항체 분석:
코팅을 위한 불활성화 A/캘리포니아/7/2009(H1N1) 바이러스(1 μg/ml) 및 검출 항체로서 항-인간 총 IgG-HRP(이뮤노리서치(ImmunoResearch))를 이용하여 ELISA에 의해 NHP 혈청 중 HA-특이적인 IgG 역가를 측정하였다. WHO 프로토콜에 따라 FAVN 시험(fluorescent antibody virus neutralization test, 형광 항체 바이러스 중화 시험) 및 표준 접종 바이러스 CVS-11을 이용하여 유로비어(Eurovir®)(하이지엔-레이버(Hygiene-Labor) GmbH, 독일 소재)에 의해 혈청 중 항-광견병 바이러스 중화 역가(VNT)를 분석하였다.
사이토카인 분석:
염증 바이오마커(G-CSF, IFNγ, IL-1β, IL-2, IL 4, IL-5, IL-6, IL-8 및 TNF)를 결정하기 위하여 투여 전 및 투여 후 6시간과 24시간에 모든 NHP로부터 HA 면역화를 위해서는 1일과 29일에, RABV-G 면역화를 위해서는 1일에, NHP의 혈액 샘플을 수집하였다. 루미넥스(Luminex) 기반의 PRCYTOMAG-40K 키트(MD 밀리포어(MILLIPORE))를 이용하여 혈장을 분석하였다.
체온:
각 투여 직전 및 각 투여 후 0.5, 2, 6 및 24시간에 직장 측정에 의해 NHP의 체온을 결정하였다.
결과:
일반적인 결과로서, 1 μg의, LNP-III-3-제형화된 mRNA 용량의 단일 근육 내 투여는 놀랍게도 두 가지 적응증 광견병 및 인플루엔자에서 모든 백신 접종한 비-인간 영장류에서 보호 항체 역가를 유도하였다.
항체 역가 분석 결과:
중화 항체 역가 분석 결과를 도 12에 나타내었다. LNP-III-3-제형화된 HA-암호화 mRNA로의 NHP의 근육 내 백신 접종은 놀랍게도, LNP-III-3-제형화된 HA-mRNA로의 프라임 백신 접종 후에 이미 용량 의존적인 방식으로 중화 항체의 강한 유도를 초래하였다.
광견병 바이러스 중화 역가(VNT) 결과:
도 13에 나타난 바와 같이, LNP-III-3-제형화된 RABV-G-암호화 mRNA로의 NHP의 근육 내 백신 접종은 겨우 1 μg LNP-III-3 제형화된 RABV-G mRNA로의 프라임 백신 접종 후에 이미 놀랍게도 용량 의존적인 방식으로 중화 항체의 강한 유도를 이끌어, 프라임 백신 접종 후에는 >1 IU/ml(중앙값) 및 부스트 백신 접종 후에는 대략 50 IU/ml(중앙값)의 VNT를 보여주었다(WHO가 규정한 0.5 IU/ml의 항체 역가 이상의 VNT는 보호의 상관 관계로 간주됨). 10 μg LNP-III-3-제형화된 RABV-G-mRNA로의 단일 백신 접종은 17 IU/ml의 항체 역가 중앙값을 유도하였다. 제2의 백신 접종 후, 역가는 419 UI/ml의 중앙값에 이르렀다.
HI-역가 결과:
LNP-III-3-제형화된 HA-mRNA는 도 14로부터 명백하듯, 프라임 백신 접종 후 이미 매우 높은 HI 역가를 초래하였다. 상세하게는, 10 μg LNP-III-3-제형화된 HA-mRNA로의 백신 접종은 모든 동물에서 1:40 이상의 HI 역가를 유도하였는데, 1:40 이상의 HI 역가는 인간에서 보호적인 것으로 간주된다. 다시, 도 14로부터 명백하듯, 2차(부스트) 백신 접종 후 HI 역가는 훨씬 더 증가하였다.
1 μg의 LNP-III-3-제형화된 HA-mRNA를 받은 동물은 4마리 중 3마리에서 보호 역가에 도달하기 위하여 제2의 백신 접종을 요구하였으나, 240 μg 프로타민-제형화된 HA-mRNA를 받는 동물들은 검출 가능한 HI 역가를 전혀 나타내지 않았다.
사이토카인 분석 결과:
LNP-III-3-제형화된 mRNA로의 백신 접종 후 전신 사이토카인 농도는 IL-1β, IL 4, IL-5, IL-6, IFN-γ 및 TNF의 경우에는 검출 수준 미만에 머무르거나, IL-2, IL-8 및 G-CSF의 경우 증가하지 않았다(도 15a 내지 도 15d). 중요하게도, 더 낮은 농도의 전염증성 사이토카인 TNF, IFN-γ 및 IL-6은 인간에서 일반적으로 내약성이 우수한 프로타민-제형에 비해 LNP-제형에 의해 유도되었다.
체온 결과 및 기타 결과:
비-인간 영장류에서 LNP-III-3-제형화된 mRNA의 근육 내 적용은 체온 또는 체중에 아무런 영향을 미치지 않았다[데이터 미도시]. LNP-III-3-제형화된 HA-mRNA를 받는 각 그룹의 4마리 중 1마리에서 주사 부위가 경미한 홍반 및/또는 부종만을 나타냈는데, 이는 주사 후 24 내지 96시간에는 치유되었고, RABV-G-mRNA 제형으로의 백신 접종 후 주사 부위 반응은 없었다[데이터 미도시]. 요약하면, LNP-III-3-제형화된 mRNA는 NHP에 의한 내약성이 우수하였다.
실시예 7: 낮은 용량의 LNP-제형화된 RABV-G mRNA의 근육 내(i.m.) 적용 후 면역원성
근육 내(i.m.) 적용 후 면역원성 시험을 위해 0.5 μg 양의 LNP 제형화된 RABV-G-mRNA를 사용하였다. 사용된 서열을 서열번호 224276에 나타내었다.
따라서, BALB/c 마우스에 표 Va에 나타낸 백신 접종 계획에 따라 한 다리에 근육 내로 각각 백신을 접종하였다. 비제형화된 RABV-G mRNA(40 μg)는 대조군으로 역할을 하였다.
[표 Va]
Figure pct00118
0일의 시점에, 그룹당 8마리의 마우스에 프라임 백신 접종을 실시하고, 하루 뒤에 혈액 샘플을 채취하였다. 21일에 혈액 샘플을 수집하였고, 부스트 백신 접종이 실시되었다. 프라임 및 부스트 백신 접종을 상이한 다리, 즉, 각각 왼쪽 다리와 오른쪽 다리에 수행하였다. 35일 후, 마우스를 희생시키고, 추가적인 분석을 위해 혈액 및 기관 샘플(비장 및 간)을 수집하였다.
면역원성 분석을 위해, VNT는 이전에 기술된 바와 같이 측정하였다. 즉, WHO 프로토콜에 따라 FAVN 시험(형광 항체 바이러스 중화 시험) 및 표준 접종 바이러스 CVS-11을 이용하여 유로비어(Eurovir®)(하이지엔-레이버 GmbH, 독일 소재)에 의해 혈청 중 항-광견병 바이러스 중화 역가(VNT)를 분석하였다.
CD4 T 세포 면역 반응(IFNу/TNFα 생성 CD4 T 세포) 및 CD8 T 세포 면역 반응(IFNу/TNFα 생성 CD8 T 세포 및 CD107+ IFNу 생성 CD8 T 세포)를 평가하였다. 전에 기술된 바와 같이 분석을 수행하였다. 5 μg LNP로 백신 접종한 동물 또는 완충액 대조군으로부터의 간 시편의 조직학을 검사하였다. d1 및 d21에 채취한 혈청 샘플에서 ALT/AST의 혈청 수준을 조사하였다. mfd 디아그노스틱스(Diagnostics) GmbH(독일 소재)가 AST/ALT 및 간을 분석하였다.
결과:
광견병 바이러스 중화 역가(VNT) 결과:
도 16a 및 도 16b에 나타난 바와 같이, LNP-III-3-제형화된 RABV-G-암호화 mRNA로의 마우스의 근육 내 백신 접종은 놀랍게도 이미 0.5 μg LNP-III-3-제형화된 RABV-G-mRNA로의 프라임 백신 접종 후에 이미 용량 의존적인 방식으로 중화 항체의 강한 유도를 초래하였다. 0.5 IU/ml의 WHO 표준은 그래프에서 파선으로 표시되었다. 따라서, 5 μg, 1 μg의 용량 및 놀랍게도 0.5 μg LNP-III-3-제형화된 RABV-G mRNA 또한, 프라임 백신 접종 후, 40 μg 비제형화된 mRNA에 비해 유의미하게 더 높은 반응을 유도하였다(도 16a). 0.05 μg 및 0.01 μg LNP-III-3-제형화된 mRNA로의 프라임 백신 접종 후 어떠한 VNT도 유도되지 않았다. 0.1 μg LNP-III-3-제형화된 mRNA는 프라임 백신 접종 후 10마리 중 5마리에서 WHO 표준 이상인 VNT를 유도하였다. VNT는 부스트 백신 접종 후 한층 더 증가하였다(도 16b).
도 16a/16b의 VNT 수준은 훨씬 더 높은 것으로 보이지만, 실험적 VNT 검출을 통해 제한되었으므로(희석된 샘플이 여전히 포화 상태인 것으로 보임), 비슷한 실험을 수행하였고, 새로운 VNT 분석을 생성하였다(표 Vb에 나타낸 백신 접종 계획 참조). PBS 완충액이 대조군으로서 역할을 하였다.
[표 Vb]
Figure pct00119
도 61a 및 도 61b에서 증명된 바와 같이, LNP-III-3-제형화된 RABV-G-암호화 mRNA로의 마우스의 근육 내 백신 접종은 놀랍게도 이미 0.1 μg, 0.3 μg 및 0.9 μg LNP-III-3-제형화된 RABV-G-mRNA로의 프라임 백신 접종 후에 이미 용량 의존적인 방식으로 중화 항체의 강한 유도를 초래하였다. 0.5 IU/ml의 WHO 표준은 그래프에서 파선으로 표시되었다. 따라서, 0.1 μg, 0.3 μg 및 0.9 μg LNP-III-3-제형화된 RABV-G mRNA의 용량은 프라임 백신 접종 후, 비제형화된 mRNA로의 이전의 실험에 비해 유의미하게 더 높은 반응을 유도하였다. VNT는 부스트 백신 접종 후 한층 더 증가하였다(도 60b; 데이터는 중앙값을 표시한다 - 만-휘트니(Mann-Whitney)로 검증).
결과:
T 세포 분석 결과:
도 17a 내지 17c로부터 명백하듯, 5 μg, 1 μg 및 0.5 μg으로 2회 면역화된 마우스에서 T 세포 반응이 관찰되었다. 따라서, 이미 0.5 μg LNP-제형화된 mRNA가 비제형화된 mRNA에 비해 높은 수준의 항원-특이적인 다기능 CD4+ T 및 CD8+ T 세포를 유의미하게 유도하였다. 그래프의 파선에 의해 나타난 바와 같이, 예상대로 음성 DMSO 대조군은 전혀 반응을 생성하지 않았다.
간 손상 분석 결과:
RABV-G LNP 5 μg mRNA 및 완충액 투여 대조군 동물의 조직학을 수행하였다. 시험한 동물에서 어떠한 병리학적 결과도 관찰되지 않았다. 최고 용량의 LNP(5 μg)로의 백신 접종 후 1일에 AST 수준이 증가되었으나, 시간 경과에 따라 감소하였으며, 21일에는 배경 수준까지 되돌아갔다(도 18a 내지 18d 참조). 파선은 표준 뮤린 AST/ALT 수준을 나타낸다. 일부 동물만이 21일차에 상승된 AST 수준을 나타내었고, 모든 다른 동물에서는 AST/ALT 수준은 병리학적 결과를 나타내지 않았다.
실시예 8: 4종의 상이한 인플루엔자 바이러스의 HA를 암호화하는 mRNA의 조합물로의 백신 접종 실험
백신 접종을 위해, 그룹당 9마리의 마우스에 4종의 상이한 인플루엔자 바이러스 균주: A/캘리포니아/7/2009(H1N1), A/홍콩/4801/2014(H3N2), B/브리즈번/60/2008(B) 및 A/베트남/1203/2004(H5N1)의 HA를 암호화하는 LNP 제형화된 mRNA를 포함하는 조성물로 2회 근육 내에 주사하였다. 따라서, 4종의 mRNA를 1:1:1:1의 비율로 혼합한 다음, 위에 기술된 바와 같이 제형화하였다. 대조군으로, 인플루엔자 A 서브타입 바이러스 및 타입 B 바이러스에 의해 유발된 질병 예방을 위한 능동면역법용으로 지정된 4종의 상이한 불활성화 인플루엔자 바이러스 균주(A/캘리포니아/7/2009, A/스위스/9715293/2013, B/푸켓/3073/2013, 및 B/브리즈번/60/2008)를 포함하는 스플릿 바이러스 백신인 플루아릭스 4가 2015-2016을 주사하였다. 음성 대조군으로 링거 락테이트 완충액을 주사하였다.
특정 인플루엔자 바이러스에 대한 IgG2a 항체를 검출함으로써 HA-특이적인 면역 반응(B-세포 면역 반응)의 검출을 수행하였다. 따라서, 백신 접종 3주 후에 백신 접종된 마우스로부터 혈액 샘플을 채취하고, 혈청을 준비하였다. MaxiSorb 플레이트(날진 눈크 인터내셔널)를 특정 재조합 HA 단백질로 코팅하였다. 0.05% 트윈-20 및 1% BSA를 함유하는 1xPBS로 블로킹한 후, 플레이트를 (지시된 바와 같이) 희석된 마우스 혈청과 인큐베이션 시켰다. 이후, 비오틴 커플링된 2차 항체(항-마우스-IgG2a, 파민젠)를 첨가하였다. 세척 후, 플레이트를 호스래디쉬 퍼옥시다제-스트렙타빈과 인큐베이션 시키고, 이어서 앰플렉스(Amplex) 울트라레드 시약(인비트로젠)을 첨가한 후, 형광 생성물을 정량화하였다.
결과:
도 19a 내지 도 19d에 나타난 결과는 상이한 인플루엔자 A 바이러스에 대한 HA-특이적인 IgG 항체는 각각 상이한 인플루엔자 A 바이러스(인플루엔자 A/캘리포니아/7/2009(H1N1; 도 19a), 인플루엔자 A/홍콩/4801/2014(H3N2; 도 19b), 인플루엔자 B/브리즈번/60/2008(B, 도 19c) 및 인플루엔자 A/베트남/1203/2004(H5N1, 도 19d))의 HA 항원을 암호화하는 4종의 상이한 mRNA를 포함하는 LNP 기반의 백신으로의 단일 근육 내 백신 접종 후에 검출될 수 있음을 증명한다.
이러한 데이터는 mRNA 암호화된, 예컨대, 상이한 인플루엔자 바이러스의, 항원들이 하나의 조성물/백신 내에 조합될 수 있음을 증명한다.
플루아릭스와 대조적으로, LNP-III-3 제형화 mRNA 다가 백신은 모든 서브타입에 대해 미감작 동물에서 IgG2a 항체 반응을 유도하였으며, 낮은 용량의 mRNA는 놀랍게도 단일 근육 내 주사 후에 마우스에서 면역원성을 나타내었다.
실시예 9: 상이한 인플루엔자 바이러스의 HA 및 NA를 암호화하는 mRNA의 조합물로의 백신 접종 실험
백신 접종을 위하여, 그룹당 8마리의 마우스에 4종의 상이한 인플루엔자 바이러스 균주: A/캘리포니아/7/2009(H1N1) 및/또는 A/네덜란드/602/2009(H1N1), A/홍콩/4801/2014(H3N2), B/브리즈번/60/2008 및 A/베트남/1203/2004(H5N1)의 HA 및 3종의 상이한 인플루엔자 바이러스 균주: A/캘리포니아/7/2009(H1N1), A/홍콩/4801/2014(H3N2), 및 B/브리즈번/60/2008의 NA를 암호화하는 LNP 제형화된 mRNA를 포함하는 조성물을 근육 내 주사한다.
또 다른 백신 접종 실험에서는, 그룹당 8마리의 마우스에 인플루엔자 A/캘리포니아/7/2009(H1N1) 및/또는 A/네덜란드/602/2009(H1N1), A/홍콩/4801/2014(H3N2), B/브리즈번/60/2008 및 B/푸켓/3073/2013(H5N1)의 HA 및 3종의 상이한 인플루엔자 바이러스 균주: A/캘리포니아/7/2009(H1N1), A/홍콩/4801/2014(H3N2), 및 B/브리즈번/60/2008의 NA를 암호화하는 mRNA 서열을 포함하는 조성물을 근육 내 주사한다.
대조군으로, 인플루엔자 A 서브타입 바이러스 및 타입 B 바이러스에 의해 유발된 질병 예방을 위한 능동면역법용으로 지정된 4종의 상이한 불활성화 인플루엔자 바이러스 균주(A/캘리포니아/7/2009, A/홍콩/4801/2014, B/푸켓/3073/2013, 및 B/브리즈번/60/2008)를 포함하는 스플릿 바이러스 백신인 인플루백(Influvac®) 4가 2016-2017을 주사한다. 음성 대조군으로 링거 락테이트 완충액을 주사한다.
위에 기술된 특정 인플루엔자 바이러스에 대한 IgG2a 항체를 검출함으로써 HA-특이적인 면역 반응(B-세포 면역 반응)의 검출을 수행한다.
특정 인플루엔자 바이러스에 대한 NA-특이적인 면역 반응(B-세포 면역 반응)을 NA 억제 분석(NAI)을 이용하여 결정한다.
실시예 10: 화합물 I-3의 합성
메틸렌 클로라이드(20mL) 중 6-(2'-헥실데카노일옥시)헥산-1-알(2.4g), 아세트산(0.33g) 및 4-아미노부탄-1-올(0.23g)의 용액을 2시간 동안 소듐 트리아세톡시보로하이드라이드(1.3 g)으로 처리하였다. 이 용액을 중탄산나트륨 수용액으로 세척하였다. 유기상을 무수 황산마그네슘으로 건조하고, 여과하고, 용매를 제거하였다. 잔류물을 메탄올/메틸렌 클로라이드(0 내지 8/100 내지 92%) 구배를 이용하여 실리카겔 컬럼으로 통과시켜, 무색 오일로서 화합물 3을 수득하였다(0.4 g).
실시예 11: 대표적인 PEG 지질의 합성
n이 페길화 지질의 에틸렌 옥사이드 반복 단위의 중심에 가까운 페길화 지질 IVa("PEG-DMA")를 제조하였다.
IVa-1 및 IVa-2의 합성:
실온에서 톨루엔(50 mL) 중 미리스트산(6 g, 26 mmol)의 용액에 옥살릴 클로라이드(39 mmol, 1.5당량, 5 g)를 첨가하였다. 따라서, 39 mmol의 옥살릴 클로라이드는 출발물질인 미리스트산(26 mmole x 1.5 = 39 mmole)에 대해 1.5몰 당량이다. 생성된 혼합물을 70℃에서 2h 동안 가열한 후, 혼합물을 농축하였다. 잔류물을 톨루엔에 흡수시키고, 다시 농축하였다. 시린지를 통해 잔류 오일을 10℃에서 농축 암모니아 용액(20 mL)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 물로 세척하였다. 백색 고체를 진공에서 건조시켰다. 원하는 생성물을 백색 고체로서 수득하였다(3.47 g, 15 mmol, 58.7%).
IVa-3의 합성:
THF(70 mL) 중 20-2(3.47 g, 15 mmol)의 현탁액에 RT에서 30분 동안 리튬 암모늄 하이드라이드(1.14 g, 30 mmol)를 소량씩 첨가하였다. 그런 다음, 혼합물을 가열하여 밤새 약하게 환류시켰다(65℃의 오일 욕조). 혼합물을 5℃까지 냉각시키고, 소듐 설페이트 9 수화물을 첨가하였다. 혼합물을 2h 동안 교반하고, 셀라이트 층으로 여과하고, 15%의 DCM 중 MeOH(200 mL)로 세척하였다. 여과액과 세척액을 합하고 농축하였다. 잔류 고체를 진공에서 건조시켰다. 원하는 생성물을 백색 고체로서 수득하였다(2.86 g 13.4 mmol, 89.5%).
IVa-4의 합성:
실온에서 벤젠(40 mL) 및 DMF(1방울) 중 미리스트산(3.86 g, 16.9 mmol)의 용액에 옥살릴 클로라이드(25.35 mmol, 1.5당량, 3.22 g)를 첨가하였다. 따라서, 25.35 mmol의 옥살릴 클로라이드는 출발물질인 미리스트산에 대해 1.5몰 당량이다(16.9 mmol x 1.5 = 25.35 mmol). 혼합물을 실온에서 1.5h 동안 교반하였다. 60℃에서 30분 동안 가열하였다. 혼합물을 농축하였다. 잔류물을 톨루엔에 흡수시키고, 다시 농축하였다. 잔류 오일(담황색)을 20 mL의 벤젠에 흡수시키고, 시린지를 통해 10℃에서 벤젠(40 mL) 중 20-3(2.86 g 13.4 mmol) 및 트리에틸아민(3.53 mL, 1.5당량)의 용액에 첨가하였다. 따라서, 3.53 mL의 트리에틸아민은 13.4 mmol의 20-3에 대하여 1.5몰 당량이다. 즉, 이 단계의 출발 물질과 비교하여 이 시약은 50% 몰 과량이다. 첨가 후, 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고, 20% H2SO4로 pH 6 내지 7까지 조정하였다. 혼합물을 여과하고, 물로 세척하였다. 연한 색의 고체가 수득되었다. 메탄올로부터 미정제 생성물을 재결정화하였다. 이는 원하는 생성물을 미색 고체로 제공하였다(5.65 g, 13 mmol, 100%).
IVa-5의 합성:
THF(60 mL) 중 20-4(5.65 g, 13 mmol)의 현탁액에 RT에서 30분 동안 리튬 암모늄 하이드라이드(0.99g, 26mmol)를 소량씩 첨가하였다. 그런 다음, 혼합물을 가열하여 밤새 약하게 환류시켰다. 혼합물을 0℃까지 냉각시키고, 소듐 설페이트 9 수화물을 첨가하였다. 혼합물을 2h 동안 교반한 다음, 셀라이트 패드 및 실리카겔로 여과하고, 에테르로 먼저 세척하였다. 여과액은 흐려졌고, 침전이 형성되었다. 여과는 백색 고체를 제공하였다. MeOH로부터 고체를 재결정화하였고, 무색의 결정성 고체(2.43 g)가 수득되었다.
그런 다음, 셀라이트 패드와 실리카겔을 5%의 DCM 중 MeOH(400mL)에 이어 1%의 트리에틸아민 함유 DCM 중 MeOH 10%(300 mL)로 세척하였다. 원하는 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 농축하였다. 백색 고체가 수득되었다. MeOH로부터 고체를 재결정화하였고, 무색의 결정성 고체가 수득되었다(0.79 g). 위의 2종의 고체(2.43 g 및 0.79 g)를 합하고, 진공에서 건조시켰다(3.20 g, 60%). 1HNMR (7.27ppm, CDCl3) δ: 2.58 (t-유사, 7.2Hz, 4H), 1.52-1.44 (m, 4H), 1.33-1.24 (m, 44H), 0.89 (t-유사, 6.6 Hz, 6H), 2.1-1.3 (매우 광범위함, 1H).
Iva의 합성:
DCM(100mL) 중 20-5(7 mmol, 2.87 g) 및 트리에틸아민(30 mmol, 4.18 mL)의 용액에 DCM(120mL) 중 mPEG-NHS(NOF로부터, 5.0 mmol, 9.97 g, PEG MW 대략 2,000, n = 약 45)의 용액을 첨가하였다. 24h 후, 반응 용액을 물(300 mL)로 세척하였다. 수성 상을 DCM으로 2회 추출하였다(100mL x 2). DCM 추출물을 합하고, 염수로 세척하였다(100 mL). 유기상을 황산나트륨으로 건조하고, 여과하고, 부분적으로 농축하였다. 농축된 용액(대략 300 mL)을 대략 15C에서 냉각시켰다. 여과는 백색 고체를 제공하였다(1.030 g, 미반응 출발 아민). 여과물에 Et3N(1.6 mmol, 0.222 mL, 4당량) 및 무수아세트산(1.6 mmol, 164 mg)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 3h 동안 교반한 다음, 고체가 되도록 농축하였다. 잔류 고체를 실리카겔 상의 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다(DCM 중 0 내지 8% 메탄올). 이는 원하는 생성물을 백색 고체로 제공하였다(9.211 g). 1HNMR (7.27ppm, CDCl3) δ: 4.19 (s, 2H), 3.83-3.45 (m, 180200H), 3.38 (s, 3H), 3.28 (t-유사, 7.6 Hz, 2H, CH2N), 3.18 (t-유사, 7.8 Hz, 2H, CH2N), 1.89 (s, 6.6 H, 물), 1.58-1.48 (m, 4H), 1.36-1.21 (m, 48-50H), 0.88 (t-유사, 6.6 Hz, 6H).
실시예 12: 상이한 인플루엔자 바이러스의 HA를 암호화하는 LNP-III-3 제형화 mRNA의 조합물로의 백신 접종 실험
암컷 BALB/c 마우스를 LNP-III-3 제형화 mRNA 백신 조성물로 근육 내(i.m.) 면역화하였으며, 용량, 적용 경로 및 백신 접종 일정은 표 A에 나타낸 바와 같다(실시예 1에 따른 mRNA 서열). 음성 대조군으로, 한 그룹의 마우스에 완충액(링거 락테이트, Rila)을 주사하였다. 양성 대조군으로, 한 그룹의 마우스에 허가된 인플루엔자 백신(인플루스플릿(Influsplit®) 테트라 2016/2017; A/캘리포니아/07/2009, A/홍콩/4801/2014, B/브리즈번/60/2008, B/푸켓/3073/2013))으로 백신 접종하였다. 모든 동물에 0일과 21일에 각각의 조성물을 주사하였다. 결합 항체 역가(ELISA 이용) 및 차단 항체 역가(HI 분석 이용)의 결정을 위하여 21일, 35일 및 49일에 혈액 샘플을 수집하였다. 49일에 단리한 비장세포를 이용하여 세포 내 사이토카인 염색(ICS)에 의해 T 세포 반응을 분석하였다. 수행한 실험에 대한 상세한 설명을 아래에 제공하였다.
[표 A]
Figure pct00120
12.1. ELISA에 의한 항 HA 단백질 특이적 IgG1 및 IgG2a 항체의 결정:
ELISA 분석은 필수적으로 당해 분야에 일반적으로 공지된 바와 같이 또는 위에 기술된 바와 같이 수행하였다. (표 A에 표시된 바와 같이) mRNA 백신 조성물에 포함된 각 항원에 대해 ELISA를 수행하였다. 결과를 도 25(H1N1(A/캘리포니아/7/2009)), 도 27(H3N2(A/홍콩/4801/2014)), 도 29(인플루엔자 B(B/브리즈번/60/2008)) 및 도 30(인플루엔자 B(B/푸켓/3073/2013))에 나타내었다.
12.2. 혈구응집반응 억제 분석(HI):
96-웰 플레이트에서, 수득된 혈청을 HA H1N1 항원(A/캘리포니아/07/2009(H1N1); NIBSC) 또는 HA H3N2 항원 및 적혈구(4% 적혈구; 로만 티어주흐트)와 혼합하였다. HA 중화 항체의 존재 하에, 적혈구의 혈구응집반응의 억제가 관찰될 수 있다. 혈구응집반응의 가시적인 억제를 가져온 최저 수준의 역가의 혈청이 분석 결과였다. 결과를 도 26((H1N1(A/캘리포니아/7/2009)) 및 도 28(H3N2(A/홍콩/4801/2014))에 나타내었다.
12.3. T-세포 반응의 검출:
당해 분야에 공지된 표준 프로토콜에 따라 백신 접종된 마우스로부터 비장세포르 단리하였다. 간략하게는, 분리된 비장을 세포 스트레이너로 분쇄하고, PBS/1%FBS에 세척하고, 적혈구 용해를 시켰다. PBS/1%FBS로의 광범위한 세척 단계 이후, 비장세포를 96-웰 플레이트에 시딩하였다(웰당 2x106개 세포). CD8+ T-세포 반응을 결정하기 위하여 H1N1(A/캘리포니아/07/2009)의 중복 15합체 펩티드의 풀(pool)로 세포를 자극하거나, CD4+ T 세포 반응을 결정하기 위하여 재조합 HA 단백질로 세포를 자극하였다. 자극 후, 제조사의 설명서에 따라, 세포를 세척하고, 사이토픽스/사이토펌(Cytofix/Cytoperm) 시약(BD 바이오사이언스)을 이용하여 세포 내 사이토카인을 염색하였다. 다음의 항체를 염색에 이용하였고: CD3-FITC(1:100), CD8-PE-Cy7(1:200), TNF-PE(1:100), IFNγ-APC(1:100)(이바이오사이언스), CD4-BD 호라이즌 V450(1:200)(BD 바이오사이언스), 1:100으로 희석된 Fcγ-블록과 인큐베이션 시켰다. 아쿠아 염료(Aqua Dye)를 이용하여 생세포/사세포를 구분하였다(인비트로젠(Invitrogen)). 칸토 II 유세포 분석기(벡톤 디킨슨(Beckton Dickinson))를 이용하여 세포를 수득하였다. 플로우조 소프트웨어 패키지(트리 스타(Tree Star, Inc.))를 이용하여 유세포 분석 데이터를 분석하였다. CD4+ T-세포에 대한 결과를 도 31에 나타내었고, CD8+ T-세포에 대한 결과를 도 32에 나타내었다.
결과:
결과는 IgG1 및 IgG2a 항체가 LNP 제형화 mRNA 조합 백신으로의 백신 접종 후에 검출될 수 있었음을 보여준다. 특히, 각각의 조합물에 포함된 모든 mRNA 암호화된 항원의 경우, 특이적인 IgG1및 IgG2a 항체들이 검출될 수 있어, 도 25(H1N1(A/캘리포니아/7/2009)), 도 27(H3N2(A/HongKong/4801/2014)), 도 29(인플루엔자 B(B/브리즈번/60/2008)) 및 도 30(인플루엔자 B(B/푸켓/3073/2013))에 나타난 바와 같이, 각각의 조성물에 포함된 모든 mRNA가 단백질로 번역되어 마우스에서 체액성 면역 반응을 촉발시킴을 증명한다. 허가된 인플루스플릿(Influsplit®) 백신으로 백신 접종된 마우스와 비교하여, 반응은 모든 시험한 항원에 대해 더 강하거나 적어도 동일하게 강했다.
H1N1(A/캘리포니아/7/2009) 및 H3N2(A/홍콩/4801/2014)에 대한 기능적 중화 항체가 증명되었다(도 26 및 도 28 참조). 허가된 인플루스플릿(Influsplit®) 백신으로 백신 접종된 마우스와 비교하여, 기능적 중화 항체의 유도는 mRNA 조합 백신의 경우, 더욱 두드러지고, 더욱 오래 지속되었다. 특히, 시험한 mRNA 조합 백신은 종종 1회의 면역화 후에도 이미 >40의 HI 역가에 이르렀다.
도 31은 시험한 인플루엔자 mRNA 조합물이 모든 항원에 대해 면역화된 마우스의 비장에서 활발한 CD4+ IFNγ/TNF-α T-세포 반응을 자극하였음을 보여준다.
도 32는 시험한 인플루엔자 mRNA 조합물이 H1N1(A/캘리포니아/07/2009)에 대해 나타난 바와 같이 면역화된 마우스의 비장에서 활발한 CD8+ IFN-γ/TNF-α T-세포 반응을 자극한 반면, 특히, 허가된 인플루스플릿(Influsplit®) 백신은 CD8+ T-세포 반응을 유도하지 않았음을 보여준다.
종합하면, 데이터는 상이한 인플루엔자 바이러스(A 타입과 B 타입)로부터 유래된 HA 항원에 대한 LNP 제형화 mRNA 기반의 조합 백신이 강하고 오래 가는 체액성 면역 반응 및 T-세포 매개성 면역 반응을 유도함을 증명한다.
실시예 13: 상이한 인플루엔자 바이러스의 HA를 암호화하는 LNP-III-3 제형화 mRNA의 조합물로의 백신 접종 실험
암컷 BALB/c 마우스를 LNP-III-3 제형화 mRNA 백신 조성물로 근육 내(i.m.) 면역화하였으며, 용량, 적용 경로 및 백신 접종 일정은 표 B에 나타낸 바와 같다(실시예 1에 따른 mRNA 서열). 음성 대조군으로, 한 그룹의 마우스에 완충액(링거 락테이트, Rila)을 주사하였다. ). 양성 대조군으로, 한 그룹의 마우스에 허가된 인플루엔자 백신(플루아릭스(Fluarix®); A/캘리포니아/07/2009, A/스위스/9715293/2013, B/브리즈번/60/2008, B/푸켓/3073/2013))으로 백신 접종하였다. 모든 동물에 0일과 21일에 백신 접종하였다. 결합 항체 역가(ELISA 이용), 차단 항체 역가(HI 분석 이용)의 결정 및 바이러스 중화 역가(VNT)의 결정을 위하여 21일, 35일 및 49일에 혈액 샘플을 수집하였다. 49일에 단리한 비장세포를 이용하여 세포 내 사이토카인 염색(ICS)에 의해 T 세포 반응을 분석하였다. 수행한 실험에 대한 상세한 설명을 아래에 제공하였다.
[표 B]
Figure pct00121
13.1. ELISA에 의한 항 HA 단백질 특이적 IgG1 및 IgG2a 항체의 결정:
ELISA 분석은 필수적으로 당해 분야에 일반적으로 공지된 바와 같이 또는 위에 기술된 바와 같이 수행하였다. (표 B에 표시된 바와 같이) mRNA 백신 조성물에 포함된 각 항원에 대해 ELISA를 수행하였다. 결과를 도 33(H1N1(A/캘리포니아/7/2009)), 도 35(H3N2(A/홍콩/4801/2014)), 도 37(인플루엔자 B(B/브리즈번/60/2008)) 및 도 38(H5N1(A/베트남/1203/2004))에 나타내었다.
13.2. 혈구응집반응 억제 분석(HI) 및 바이러스 중화 분석:
위에 기술된 바와 같이 HI-분석을 수행하였다. 결과를 도 34((H1N1(A/캘리포니아/7/2009)) 및 도 36(H3N2(A/홍콩/4801/2014))에 나타내었다.
13.3. T-세포 반응의 검출:
당해 분야에 공지된 표준 프로토콜에 따라 백신 접종된 마우스로부터 비장세포르 단리하였다. 필수적으로 실시예 12에 기술된 바와 같이 ICS 실험을 수행하였다. CD4+ T-세포에 대한 결과를 도 39에 나타내었고, CD8+ T-세포에 대한 결과를 도 40에 나타내었다.
결과:
결과는 IgG1 및 IgG2a 항체가 LNP 제형화 mRNA 조합 백신으로의 백신 접종 후에 검출될 수 있었음을 보여준다. 특히, 각각의 조합물에 포함된 모든 mRNA 암호화된 항원의 경우, 특이적인 IgG1및 IgG2a 항체들이 검출될 수 있어, 도 33(H1N1(A/캘리포니아/7/2009)), 도 35(H3N2(A/HongKong/4801/2014)), 도 37(인플루엔자 B(B/브리즈번/60/2008)) 및 도 38(H5N1(A/베트남/1203/2004))에 나타난 바와 같이, 각각의 조성물에 포함된 모든 mRNA가 단백질로 번역되어 마우스에서 체액성 면역 반응을 촉발시킴을 증명한다. 허가된 플루아릭스(Fluarix®) 백신으로 백신 접종된 마우스와 비교하여, 반응은 종종 모든 시험한 항원에 대해, 심지어는 시험한 최저 mRNA 백신 용량에 대해, 더 강하거나 적어도 동일하게 강했다.
H1N1(A/캘리포니아/7/2009) 및 H3N2(A/홍콩/4801/2014)에 대한 기능적 중화 항체가 증명되었다(도 34 및 도 36 참조). 허가된 플루아릭스(Fluarix®) 백신으로 백신 접종된 마우스와 비교하여, 기능적 중화 항체의 유도는 mRNA 조합 백신의 경우, 더욱 두드러지고, 더욱 오래 지속되었다. 특히, 시험한 mRNA 조합 백신은 최고의 시험 용량에 대해 1회의 면역화 후에도 이미 >40의 HI 역가에 이르렀다.
도 39는 시험한 인플루엔자 mRNA 조합물이 모든 항원에 대해 면역화된 마우스의 비장에서 활발한 CD4+ IFNγ/TNF-α T-세포 반응을 자극하였음을 보여주며, 플루아릭스(Fluarix®)에 대해 관찰된 바와 같이 더 높은 반응이었다.
도 40은 시험한 인플루엔자 mRNA 조합물이 H1N1(A/캘리포니아/07/2009) 및 H5N1(A/베트남/1203/2004)에 대해 나타난 바와 같이 면역화된 마우스의 비장에서 활발한 CD8+ IFN-γ/TNF-α T-세포 반응을 자극한 반면, 특히, 허가된 플루아릭스(Fluarix®) 백신은 CD8+ T-세포 반응을 유도하지 않았음을 보여준다.
종합하면, 데이터는 상이한 인플루엔자 바이러스(A 타입과 B 타입)로부터 유래된 HA 항원에 대한 LNP 제형화 mRNA 기반의 조합 백신이 강하고 오래 가는 체액성 면역 반응 및 T-세포 매개성 면역 반응을 유도함을 증명한다.
실시예 14: 인플루엔자 바이러스의 뉴라미니다제NA1을 암호화하는 LNP-III-3 제형화 mRNA로의 백신 접종 실험:
암컷 BALB/c 마우스를 LNP-III-3 제형화 mRNA 백신 조성물로 근육 내(i.m.) 면역화하였으며, 용량, 적용 경로 및 백신 접종 일정은 표 C에 나타낸 바와 같다(실시예 1에 따른 mRNA 서열). 음성 대조군으로, 한 그룹의 마우스에 완충액(링거 락테이트, Rila)을 주사하였다. 양성 대조군으로, 한 그룹의 마우스에 인플루스플릿 테트라(Influsplit Tetra®) 2016/2017(A/캘리포니아/7/2009(H1N1); A/홍콩/4801/2014(H3N2); B/브리즈번/60/2008; B/푸켓/3073/2013)로 근육 내 주사하였다. 모든 동물에 0일과 21일에 백신 접종하였다. 면역 반응의 결정을 위하여 21일, 35일 및 49일에 혈액 샘플을 수집하였다. 49일에 단리한 비장세포를 이용하여 세포 내 사이토카인 염색(ICS)에 의해 T 세포 반응을 분석하였다.
[표 C]
Figure pct00122
14.1. N1 NA(A/캘리포니아/7/2009)에 대한 면역 반응의 결정:
필수적으로 이전에 당해 분야에서 기술된 바와 같이 수행된, 효소 결합된 렉틴 분석법(ELLA)를 이용하여 필수적으로 분석하였다. 대형 당단백질 기질인 페투인으로 코팅된 96 웰 플레이트에서 ELLA를 수행하였다. NA는 페투인으로부터 말단의 시알산을 절단하여, 끝에서 두 번째 당인 갈락토오스를 노출시킨다. 땅콩 응집소(PNA)는 갈락토오스에 대한 특이성을 갖는 렉틴이며, 따라서 탈시알화 정도를 PNA-호스래디쉬 퍼옥시다아제 접합체를 이용하고, 이어서 발색성의 퍼옥시다아제 기질을 첨가하여 정량화할 수 있다. 측정되는 광학 말도는 NA 활성에 비례한다. 기능적 NA 억제성(NI) 항체 역가를 측정하기 위하여, 혈청의 단계별 희석액을 페투인 코팅된 플레이트에 A/캘리포니아/7/2009(H1N1) 바이러스(트리톤-X-100으로 사전 처리됨)와 인큐베이션 시켰다. NA 활성의 ≥50% 억제를 초래하는 최고 혈청 희석 배수의 역수를 NI 항체 역가로 정한다. 결과를 도 41에 나타내었다.
T-세포 반응을 결정하기 위하여, 필수적으로 위에 개략된 바와 같이, ICS 실험을 수행하였다. 세포를 NA 특이적인 펩티드 혼합물로 자극하고, CD8+ T-세포 반응 및 CD4+ T-세포 반응을 결정하였다. 결과를 도 42(CD4+) 및 도 43(CD4+)에 나타내었다.
결과:
도 41에 나타난 바와 같이, 강하고 특이적인 기능적 면역 반응이 NA1 A/캘리포니아/2009를 암호화하는 LNP 제형화 mRNA로 백신 접종된 마우스에서 검출될 수 있었던 반면, 인플루스플릿(Influsplit®) 백신을 주사한 마우스에 대해서는 약한 반응만을 확인할 수 있었다.
도 42 및 도 43에 나타난 바와 같이, 시험한 NA1 mRNA 백신은 표시된 바와 같이 면역화된 마우스의 비장에서 활발한 CD4+ 및 CD8+ T-세포 반응을 자극한 반면, 특히, 허가된 인플루스플릿(Influsplit®) 백신은 CD+ T-세포 반응을 유도하지 않았다.
실시예 15: 마우스에서 광견병 바이러스 항원을 암호화하는 LNP-III-3 제형화 mRNA로의 백신 접종 실험 및 마우스에서 전염증성 환경 및 LNP-III-3 제형화 형광 표지된 mRNA(F*-mRNA)의 주사의 평가 및 배출 림프절(draining lymph-node, dLN)에서의 조성물 및 면역 세포의 활성화 상태의 분석.
F*-mRNA는 라벨링으로 인해 단백질로 번역될 수 없는, 형광 표지된 PpLuc mRNA(60%-UTP-40%-5-아미노알릴-UTP)에 상응한다(서열번호 224286).
선천적 면역계의 활성화는 백신 접종 후 효율적인 적응 면역 반응의 시작에 필요하다. 따라서, 본 발명에 따른 본 발명의 LNP-III-3-제형화된 mRNA를 대상으로 마우스에서 LNP-제형화된 RABV-G mRNA의 근육 내 투여 후 전염증성 사이토카인 및 케모카인을 (일시적으로) 유도하는 효능에 대해 시험하였다.
BALB/c 마우스(n=6/그룹)를 10 μg 비제형화된 (mRNA) 또는 LNP-제형화된 RABV-G-mRNA(mRNA/LNP), 또는 완충액 대조군으로 근육 내 백신 접종하였다. 근육 내 적용 4h, 14h, 24h 및 96h 후, 근육 조직, dLN 및 혈청 샘플을 분리하고, 혈구계산용 비드 분석(Cytometric Bead Array, CBA)으로 단백질 용해물 및 혈청에서 사이토카인 및 케모카인 함량을 측정하였다. 결과를 도 44 내지 도 49에 나타내었다.
전염증성 환경이 활성화 및 면역 세포 조성의 변화로 발현되는지를 설명하기 위하여, dLN의 백혈구 수와 활성화 상태를 분석하였다. 임의의 관찰된 효과가 mRNA-암호화된 단백질과 무관함을 확실히 하기 위하여, 번역될 수 없는 형광 표지된 mRNA(F*-mRNA)를 사용하였다. BALB/c 마우스(n=3/그룹)의 두 다리에 10 μg 비제형화된 (F*mRNA) 또는 LNP-제형화된 F*mRNA(F*mRNA/LNP), 또는 완충액을 근육 내 주사하였다. 우측과 좌측의 dLN을 근육 내 적용 4h, 24h 및 48h 후에 분리하고, 유세포 분석으로 따로따로 분석하였다. dLN의 각 세포 집단의 수(50a) 및 활성화된 면역 세포의 빈도(50b)를 도 50a/b에 나타내었다.
결과:
도 44 내지 46에 나타난 바와 같이, LNP-제형화된 RABV-G mRNA는 눈에 띄는, 그러나 일시적인 전염증성 사이토카인 TNF 및 IL-6의 방출을 유도하였고, 피크 농도는 주사 후 16h에서 나타났다. 접근법의 안전성을 위하여 중요하게도, 사이토카인 방출은 국소적이었고, (혈청 중) TNF의 전신 방출은 전혀 관찰되지 않았다. 일시적으로, 주사 부위에 비해 10배 더 낮은 IL-6 농도가 혈청에서 검출되었는데, 이는 주사 후 96h에 기준선까지 되돌아갔다(도 46 참조).
도 47 내지 도 49에 나타난 바와 같이, LNP-제형화된 RABV-G mRNA는 확연하지만 일시적인 전염증성 케모카인의 방출을 유도한다. 강하게 상향 조절된 케모카인 중에는 대식세포, 단핵구 및 NK 세포의 주화성에 있어서 중심이 되는 역할을 하는 MIP-1β 및 염증 부위로 T 세포, NK 세포 및 NKT 세포를 모으는 CXCL-9가 있었다. 또한, 단핵구, 대식세포, 수지상 세포 및 호중구와 같은 다양한 면역 세포를 유인하는 MCP-1, MIP-1α, 및 CXCL1 농도의 일시적인 상승이 있었다. . 또한, 위에 기술된 케모카인의 혈청 농도의 일시적인 증가가 관찰되었는데, 주사 부위 또는 dLN에서 검출된 것들과 비교하여 훨씬 더 낮은 정도였다.
도 50a 및 도 50b에 나타난 바와 같이, LNP-제형화된 F*-mRNA의 근육 내 주사는, 비제형화된 F*-mRNA의 주사 후에는 부존재하였던, 세포질의 강한 증가를 유도하였다. 세포 수의 가장 강한 상승은 주사 후 24h에서 관찰되었으나, NK 세포의 경우, 시간 경과에 따라 증가하였다. 주로 단핵구 및 과립구로 구성된 CD11b+ Gr1+ 세포가 최대 규모의 백혈구 증가 이유가 되었다. dLN의 세포질의 증가는 적응 면역계 및 선천적 면역계의 강한 활성화에 수반되었으며, 이는 주사 후 24시간에 피크를 이루었는데, 이때, 90%를 초과하는 T 및 B 세포가 활성화 마커인 CD69를 발현하였다.
종합하면, 이러한 결과는 LNP-제형화된 mRNA 백신의 근육 내 주사는 광범위하지만 일시적인 국소적 면역자극성 환경을 유도하며, 이는 강한 적응 면역 반응의 유도와 관련이 있음을 시사한다.
실시예 16: 비-인간 영장류에서 광견병 바이러스 항원을 암호화하는 LNP-III-3 제형화 mRNA로의 백신 접종 실험:
이전 실시예에서 제조된 LNP-III-3 제형화 RABV-G mRNA 백신을 백신 접종을 위해 사용하였다.
시노몰구스 원숭이(Macaca fascicularis)를 이용한 연구는 스페인의 산타 페르페투아 데 모고다(Santa Perpetua de Mogoda)의 Envigo CRS, S.A.U.에서 수행되었다. 동물은 베트남 기원으로, 감금되어 사육되었고, 미경산부였으며, 임신하지 않았다. 동물은 2.5 내지 3.5세의 연령 및 2.2 내지 3.3 kg의 체중에서 처리를 시작하였다. NHP에 0일과 28일에 넙다리 두갈래 근 내로 500 μl의 단일 용량을 근육 내 백신 접종하였다. 허가된 인간 광견병 백신 라비푸어(Rabipur®, 노바티스(Novartis))로의 백신 접종을 NHP에서 근육 내로 수행하였고, 노출 전 예방 일정에 따른 최대 인간 용량을 0일과 7일에, 또는 감소된 일정으로 0일과 28일에 수행하였다. 백신 접종된 원숭이의 VNT를 위에 기술된 바와 같이 분석하였다. 위에 기술된 바와 같이 T-세포 반응(CD 4+ 및 CD8+)을 분석하였다. 결과를 도 51 내지 도 55에 나타내었다.
결과:
도 51은 1 μg LNP-제형화된 RABV-G-mRNA로의 단일 근육 내 면역화가 이미 프라임 백신 접종 후 28일의 모든 동물에서 0.5 IU/ml의 보호 역가 이상으로 활발한 VNT를 유도하였음을 보여준다. 관찰된 면역원성은 용량 의존적이어서, 10배 더 높은 mRNA 용량은 10배 더 높은 VNT를 초래하였다.
도 52는 관찰된 1차 반응이 28일에 수행된 RABV-G-mRNA으로의 제2의 백신 접종으로 증대될 수 있으며, VNT의 20배 증가를 가져옴을 보여준다. 6개월 동안의 항체 역가 모니터링은, 초기 하락 후 역가가 10 μg mRNA 용량의 경우 약 40 IU/ml, 그리고 1 μg mRNA 용량의 경우 약 4 IU/ml의 보호 수준에서 안정화되었음을 증명하였다.
도 53은 B 세포 기억의 존재를 보여준다. B 세포 기억의 존재를 증명하기 위하여, 백신 접종을 완료하고 5개월 후에 제3의 백신 접종(회상 백신 접종)을 수행하였고, 5일 후에 VNT를 측정하였다. 두 용량 그룹에서 VNT의 매우 급격한 10배 증가가 관찰되어, mRNA 백신에 의한 강한 회상-반응의 유도를 증명한다.
도 54는 LNP-제형화된 RABV-G-mRNA 백신이 단일 백신 접종 후, 0.5 IU/ml을 초과하는 보호 중화 항체 역가를 유도하였음을 보여주는데, 이는 허가된 광견병 백신 라비푸어(Rabipur®)의 최대 인간 용량과 비교하여 비슷하거나 그보다 더 높았다. 단일 백신 접종 4주 후, mRNA 백신 접종된 원숭이에 대해 측정한 평균 VNT는 라비푸어(Rabipur®) 백신 접종된 원숭이와 비교하여 극적으로 증가하였다. 28일의 부스트 백신 접종은 VNT 수준을 더 증가시켜, mRNA 백신 접종된 원숭이의 경우 1000 IU/ml까지 이르러, 라비푸어(Rabipur®)에 의해 유도된 VNT를 10배 능가하였다. 이러한 데이터는 LNP-제형화된 RABV-G-mRNA 백신의 2회 주사로의 백신 접종이 광견병 바이러스 감염에 대하여 보호를 유도하기에 충분함을 시사한다. 100 μg 용량의 LNP-제형화된 RABV-G-mRNA의 경우, 단일 투여조차 보호적, 지속적 항체 역가를 유도하는 데 충분할 수 있다. 이는 3회 적용되어야 하는 최첨단의 광견병 백신인 라비푸어(Rabipur®)보다 특히 유리하다.
도 55 및 도 56은 본 발명의 LNP-제형화된 RABV-G mRNA 백신이 백신 접종 후, 라비푸어(Rabipur®) 백신 접종된 동물에서는 관찰되지 않았던 효과인 특이적인 세포 반응을 유도하였음을 보여준다. RABV-G-특이적인 IFN-γ+/IL-2+ CD4+ T 세포(도 55)는 두 mRNA 백신 용량에서 관찰된 반면, RABV-G-특이적인 IFN-γ+/GrzB+ CD8+ T 세포(도 56)는 100 μg 용량을 받는 동물에서 검출되었다. 특히, 적은 세포 반응만이 라비푸어(Rabipur®)를 받은 원숭이에서 관찰되었다.
실시예 17: 비-인간 영장류에서 인플루엔자 H1N1 또는 인플루엔자 H3N2 HA 항원을 암호화하는 LNP-III-3 제형화 mRNA로의 백신 접종 실험:
이전 실시예에 기술된 바와 같은 LNP-III-3 제형화 HA-mRNA 인플루엔자 A/캘리포니아/7/2009(H1N1) 또는 HA-mRNA 인플루엔자 A/홍콩/4801/2014(H3N2) 백신을 백신 접종을 위해 사용하였다.
시노몰구스 원숭이(Macaca fascicularis)를 이용한 연구는 스페인의 산타 페르페투아 데 모고다(Santa Perpetua de Mogoda)의 Envigo CRS, S.A.U.에서 수행되었다. 동물은 베트남 기원으로, 감금되어 사육되었고, 미경산부였으며, 임신하지 않았다. 동물은 2.5 내지 3.5세의 연령 및 2.2 내지 3.3 kg의 체중에서 처리를 시작하였다. NHP에 10 μg 의 H1N1-HA 또는 H3N2-HA 백신을 접종하였고, 혈구응집반응 억제(HI) 분석에 의해 각각의 바이러스에 대한 기능적 항체를 측정하였다. 대조군으로, 한 그룹의 동물에게 최대 인간 용량의 플루아드(Fluad®)를 백신 접종하였다.
미감작 NHP에 0일과 28일에 넙다리 두갈래 근 내로 10 μg의 H1N1-HA 또는 H3N2-HA 백신의 500 μl의 단일 용량을 근육 내 백신 접종하였다. 각각의 바이러스에 대한 기능적 항체를 혈구응집반응 억제(HI) 분석에 의해 측정하였다.. 결과를 도 57 내지 도 59에 나타내었다. 위에 기술된 바와 같이 T-세포 반응을 분석하였다. 결과를 도 60a 및 도 60b에 나타내었다.
결과:
도 57은 10 μg LNP-제형화된 H1N1-HA mRNA 또는 H3N2-HA mRNA로의 단일 근육 내 면역화가 이미 프라임 백신 접종 후 28일의 모든 동물에서 1:40의 역가 이상의 HI 역가를 유도하였음을 보여주며, 이는 인간에서 보호적인 것으로 간주된다.
도 58은 관찰된 1차 반응이 28일의 각각의 H1N1-HA mRNA으로의 제2의 백신 접종으로 증대될 수 있으며, 측정된 HI 역가의 강한 증가를 가져옴을 보여준다. 12개월을 초과하는 기간 동안(544일)의 항체 역가의 모니터링은 초기 감소 후, 역가가 약 640의 보호적 H1N1 HI-역가에서 안정화됨을 증명하였다. 중요하게도, 모든 백신 접종된 동물은 프라임 백신 접종 1년 후의 관찰 기간의 종료 시까지 보호 한계를 명확히 초과하는 HI 역가를 유지하여, H1N1 HA 항원 특이적 체액성 면역 반응이 현저하게 오래 지속됨을 확인시켜 준다.
도 59는 LNP-제형화된 H3N2-HA mRNA 백신이 강력한 독감 백신인 플루아드(Fluad®)(시즌 2016/17; 인플루엔자 균주 H1N1, H3N2 및 B/브리즈번의 표면 항원 HA 및 뉴라미니다제뿐만 아니라, 항원보강제 MF59C.1도 포함함)와 비슷한 반응으로 단일 백신 접종 후 보호적 H3N2-HI 역가를 유도함을 보여준다. 단일 용량의 LNP 제형화 mRNA 백신은 최대 인간 용량의 플루아드에 의해 유도된 역가와 비슷한, 보호적 H3N2-HI 역가를 유도하기에 충분하였다. 제2의 용량은 HI 역가를 더 증가시켰으며, LNP 제형화 H3N2-HA mRNA 백신에 대해 훨씬 강한 효과를 나타냈다.
도 60a 및 60b는 본 발명의 LNP-제형화된 H3N2-HA mRNA 백신이 백신 접종 후, 플루아드 백신 접종된 동물에서는 관찰되지 않았던 효과인 특이적인 IFN-γ+/IL-2+ CD4+ T-세포 반응 및 TNFα+/IL-2+ CD4+ T-세포 반응을 유도하였음을 보여준다.
실시예 18: 비-인간 영장류에서 상이한 인플루엔자 항원을 암호화하는 mRNA의 조합물로의 백신 접종 실험
비-인간 영장류(NHP)를 LNP-III-3 제형화 mRNA 백신으로 면역화하며(그룹당 6마리의 동물), 용량, 적용 경로 및 백신 접종 일정은 표 D에 나타낸 바와 같다(바람직하게는 실시예 1에 따른 mRNA 서열). 백신으로는 4종의 HA 항원을 포함하는 mRNA 조성물을 사용하거나("4가 HA") 7종의 HA+NA 항원을 포함하는 mRNA 조성물(4종의 HA, 3종의 NA; 7가 또는 "7가 HA+NA")을 사용한다. 모든 동물에 0일과 28일에 백신 접종한다. 항체 반응의 결정을 위하여 0일, 14일, 28일, 56일, 77일 및 84일에 혈액 샘플을 수집한다. 단리한 비장세포를 이용하여 세포 내 사이토카인 염색(ICS)에 의해 T 세포 반응을 분석한다. 면역 반응의 분석은 필수적으로 위에 기술된 바와 같이 수행되었다(ELLA, HI 분석, ELISA, ICS, VNT).
[표 D]
Figure pct00123
실시예 19: LNP-III-3 제형화 인플루엔자 mRNA 백신의 임상 개발
인플루엔자 mRNA 백신 조성물의 안전성 및 효능을 증명하기 위하여, 무작위, 이중맹검, 위약-대조 임상 시험(I상)이 개시된다.
임상 개발을 위해, GMP-등급 RNA는 WO 2016/180430 A1에 상세히 기술된 바와 같이 DNA 수준 및 RNA 수준에 대한 다양한 품질 관리를 수행하는 확립된 GMP 과정을 이용하여 생산된다.
임상 시험에서, 인간 지원자(성인 대상체, 연령 18 내지 45세)에 본 설명에 명시된 바와 같은 하나의 인플루엔자 항원을 암호화하는 하나의 mRNA를 포함하는 mRNA 조성물("1가", H3N2 A/홍콩/4801/2014), 또는 본 설명에 명시된 바와 같은 4종의 HA 인플루엔자 항원을 포함하는 mRNA 조성물("4가 HA"), 또는 본 설명에 명시된 바와 같은 4종의 HA 및 3종의 NA 인플루엔자 항원을 포함하는 mRNA 조성물("7가 HA+NA") 또는 본 설명에 명시된 바와 같은 복수의 HA 및 복수의 NA 인플루엔자 항원을 포함하는 mRNA 조성물("다가 HA+NA")을 적어도 2회 근육 내(i.m.) 주사한다. 또한, 노인 지원자 그룹을 치료한다(연령이 65세가 넘는 노인). 연구 설계는 아래 표 E 내지 표 H에 나타내었다.
[표 E]
Figure pct00124
[표 F]
Figure pct00125
[표 G]
Figure pct00126
[표 H]
Figure pct00127
본 발명에 따른 인플루엔자 백신 조성물의 안전성 프로파일을 평가하기 위하여, 투여 후 대상체를 모니터링한다(바이탈 사인, 백신 부위 내약성 평가, 혈액학적 분석).
면역화의 효능은 HI-역가 및 ELLA 분석의 결정에 의해 분석한다. 혈액 샘플은 기저선으로서 0일과 완료된 백신 접종 후에 수집한다. 기능적 항체에 대해 혈청을 분석한다(HI 분석, ELLA, VNT(FAVN 시험)). 또한, 세계동물보건기구(World Organization for Animal Health)가 권장한 바와 같이 세포 배양에 적합화된 접종 바이러스(challenge virus) 균주 CVS 11을 이용한 신속한 형광 병소(foci) 억제 시험을 이용하여 초기 VNT의 존재를 분석하기 위하여 RFFIT 분석을 수행한다. 간략하게는, CVS의 100 조직 배양 감염 용량 50%를 중화할 수 있는 가능성에 대해 열 불활성화된 혈청을 단계별 2배 희석으로 시험하였다. 단계별 희석액을 바이러스와 (5% CO2와 함께 물 재킷 인큐베이터에서) 37℃에서 약 70분 동안 인큐베이션 한다. 웰당 30,000개 BHK-21 세포를 첨가한다. 감염된 세포 배양액을 22시간 동안 37℃ 및 5% CO2에서 인큐베이션 한다. -20℃에서 10분 동안 80% 아세톤/20% PBS를 이용하여 세포를 고정시키고, FITC가 접합된 항-광견병 글로불린을 이용하여 염색하였다. 플레이트를 PBS를 이용하여 2회 세척하고, 과량의 PBS를 제거한다. FITC-양성 신호에 의해 검출된 광견병 바이러스의 존재에 대해 세포 배양액을 양성 또는 음성으로 기록한다. 혈청 처리된 웰에서 음성으로 기록된 세포는 광견병 바이러스의 중화를 나타낸다. 각각의 RFFIT 시험은 WHO 또는 OIE 표준 혈청(양성 기준 혈청)을 포함하는데, 이는 분석의 표준화를 위한 기준으로 역할을 한다. 시험 항체의 중화 활성을 WHO가 제공한 표준 혈청을 참조하여 계산하고, 국제 단위/ml(IU/ml)로 표시한다.
나아가, 건강한 대상체의 부분 집합을 경구 투여에 의해 생 인플루엔자 바이러스 또는 위약으로 시험 감염시킨다. 인플루엔자 관련 질병, 감염 및 면역 반응의 증상에 대해 시험 감염 후 대상체를 추적한다.
실시예 20: 5℃에서 3개월간 보관된 LNP(LNP-III-3)의 안정성
5℃에서 3개월간 보관된 LNP-III-3 제형화 RABV-G mRNA의 면역원성 및 반응원성을 비교하기 위하여, 부스트 백신 접종 2주 후 기능적 항체 및 세포성 면역 반응을 포함한, 체액성 반응을 결정함으로써 면역원성을 평가하였다(표 J 참조).
위에 기술된 바와 같이 바이러스 중화 분석에 의해 RABV-G-특이적 항체 역가를 결정하였다.
[표 J]
Figure pct00128
도 62a 및 도 62b로부터 명백하듯, 놀랍게도 LNP의 안정성은 5℃에서 3개월 동안 보관 후에 부정적으로 영향을 받지 않았다. 즉, 이러한 LNP는 생체 내에서 미미한 효과만을 보여주었고, 프라임 백신 접종 후 및 부스트 백신 접종 후 매우 높은 VNT를 생성하기에 충분하였다.
실시예 21: LNP(LNP-III-3)의 독성 분석
이 실시예의 목적은 본 발명의 LNP(LNP-III-3)의 독성을 평가하는 것이었다. 이를 위하여, 상이한 mRNA 용량(예를 들어, 1 μg, 10 μg, 40 μg, 100 μg, 또는 200 μg)으로 상이한 동물 모델(예컨대, 마우스, 랫트, 또는 토끼)에서 몇몇 생체 내 독성 연구를 수행하였다. 결과는 본 발명의 LNP가 유의미한 생체 내 독성을 전혀 나타내지 않음을 보여주며, 이는 국소 반응, 통증, 음식 섭취량, 체중, 기관 중량, 임상 화학(즉, 유해한 시험 물질 관련 변화가 관찰되지 않음) 및 혈액학(즉, 유해한 시험 물질 관련 변화가 관찰되지 않음)의 분석에 의해 증명되었다. 홍반 및 부종과 같은 사소한 국소 반응, 즉, 보통 1 내지 3일 이내에 발생하는 백신에 대한 정상적인 반응만이 예를 들어, 10 μg 및 100 μg을 백신 접종한 동물 중 소수에서 발견되었다.
실시예 22: 흰족제비에서 상이한 인플루엔자 바이러스의 HA를 암호화하는 LNP-III-3 제형화 mRNA의 조합물로의 백신 접종 실험:
흰족제비(Mustela putorius furo; 6 내지 12개월령)를 본 설명에서 "4가 mRNA 백신"이라 지칭되는, H1N1 A/캘리포니아/07/2009, H3N2 A/홍콩/4801/2014, HA B/브리즈번/60/2008, 및 HA B/푸켓/3073/2013을 암호화하는 mRNA 구성체를 포함하는 LNP-III-3 제형화 mRNA 백신 조성물로 근육 내(i.m.) 면역화하였다. 각각의 mRNA 서열은 실시예 1에 따른다. 양성 대조군으로, 한 그룹의 흰족제비를 허가된 인플루엔자 백신(플루아드 테트라 2016/2017)으로 백신 접종하였다. 모든 동물에 0일과 21일에 각각의 조성물을 주사하였다. (위에 기술된 바와 같은 HI 분석 및 MN 분석을 이용한) 각각의 암호화된 항원에 대한 차단 항체 역가의 결정을 위하여 혈액 샘플을 0일, 21일, 35일 및 49일에 수집하였다. 결과를 도 63에 나타내었다.
[표 K]
Figure pct00129
결과:
도 63에 나타난 바와 같이, 각 암호화된 항원에 대해 차단 항체 역가가 검출되었다. 도 63a 및 도 63b는 H1N1 and H3N2에 대하여, 명확한 용량 반응이 관찰 가능하였으며, 모든 시험한 그룹의 경우, 2차 백신 접종 후에 보호 HI 역가(>40)가 유도되었음을 보여준다. 특히, 160 μg 그룹과 80 μg 그룹의 경우, 보호 HI 역가는 프라임 백신 접종 후에 이미 달성되었다. 도 63c 및 도 63d는 160 μg 농도의 경우 B/브리즈번에 대해 보호 HI 역가 또한, 검출 가능하였음을 보여준다. B/푸켓에 대해 MN 역가가 관찰되었다(도 63d).
종합하면, 이 결과는 본 설명에 사용된 4가 mRNA 백신이 모든 4종의 항원에 대해 기능적 항체 반응을 유도함을 증명한다. 나아가, 항체 반응은 허가된 백신 플루아드에 대해 관찰된 항체 반응과 비슷하여, 본 발명의 LNP-제형화된 백신의 막대한 잠재력을 보여준다.
실시예 23: 흰족제비에서 상이한 인플루엔자 바이러스의 HA를 암호화하는 LNP-III-3 제형화 mRNA의 조합물로의 시험감염(challenge) 백신 접종 실험:
흰족제비(Mustela putorius furo; 6 내지 12월령)를 실시예 22의 LNP-III-3 제형화 4가 mRNA 백신으로 근육 내(i.mi.) 면역화한다. 양성 대조군으로, 그룹들에 플루아드 테트라 2016/2017로 백신 접종한다. 음성 대조군으로, 그룹들에 위약을 주사한다. 각 그룹의 경우, 6마리의 동물을 처리한다(표 L의 "면역화 단계").
인플루엔자 바이러스로 지난 계절 감염을 시뮬레이션 하기 위하여, 일부 그룹 또한, 인플루엔자 바이러스로의 백신 접종 실험 전에 감염시킨다. 그룹 5 내지 8은 H3N2 A/후쿠이/20/2004 바이러스로 감염시키고, 그룹 13 내지 16은 B/매사추세츠/2/2012 야마가타 계통으로 감염시켰다(표 L의 "프라임 단계" 참조).
면역화 후, 흰족제비를 인플루엔자 바이러스로 기관 내 시험감염시킨다. 그룹 5 내지 8은 HA A/네덜란드/602/2009 바이러스로 시험감염시켰고, 그룹 13 내지 16은 B/브리즈번/60/2008 빅토리아 계통으로 시험감염시켰다(표 L의 "시험감염 단계" 참조). 바이러스 시험 감염 1 내지 3일 후, 흰족제비를 대상으로 바이러스 부하(코, 목, 스왑) 및 건강 파라미터(열, 체중)를 분석하였다. 바이러스 시험 감염 4일 후, 동물을 안락사시키고, 면역 반응을 분석하였다(HI 역가, IgG, Mn 등).
[표 L]
Figure pct00130
실시예 24: 3종의 상이한 NA 항원을 암호화하는 LNP-III-3 제형화 mNRA(3가 NA mRNA 백신)로의 백신 접종 실험
실시예 14에서 예시적으로 나타난 바와 같이, 뉴라미니다제를 암호화하는 LNP-III-3 제형화 mRNA는 강하고 효과적인 면역 반응을 유도한다. 본 실시예에서는, 인플루엔자 A/캘리포니아/07/2009(H1N1)의 NA를 암호화하는 mRNA, 인플루엔자 A/홍콩/4801/2014(H3N2)의 NA를 암호화하는 mRNA 및 인플루엔자 B/브리즈번/60/2008의 NA를 암호화하는 mRNA를 포함하는 3가 mRNA 백신이 접종되었다(본 설명에서 "3가 NA mRNA 백신"이라 지칭됨). 각각의 mRNA 서열은 실시예 1에 따른다.
아래 표 M에 제공된 바와 같은 계획에 따라, 암컷 BALB/c 마우스에 0일과 21일에 양성 대조군으로 3가 NA mRNA 백신인 인플루스플릿 테트라(2016/2017) 또는 완충액 대조군(RiLa)를 주사하였다. 특이적인 항체 역가의 결정을 위하여 혈청 샘플을 채취하였다(ELLA 분석, 실시예 14에 따라 수행됨). ELLA 분석 결과를 도 64에 나타내었다.
[표 M]
Figure pct00131
실시예 25: 3종의 상이한 NA 항원 및 4종의 상이한 HA 항원을 암호화하는 LNP-III-3 제형화 mNRA(7가 mRNA 백신)로의 백신 접종 실험
위의 실시예에서 예시적으로 나타난 바와 같이, LNP-III-3 제형화 4가 HA mRNA 백신 및 3가 NA mRNA 백신은 각각의 암호화된 항원에 대하여 강하고 효과적인 면역 반응을 유도한다. 본 실시예에서, 3종의 상이한 NA 항원(인플루엔자 A/캘리포니아/07/2009(H1N1)의 NA를 암호화하는 mRNA, 인플루엔자 A/홍콩/4801/2014(H3N2)의 NA를 암호화하는 mRNA 및 인플루엔자 B/브리즈번/60/2008의 NA를 암호화하는 mRNA를 백신 접종하였다) 및 4종의 상이한 HA 항원(인플루엔자 A/캘리포니아/07/2009(H1N1)의 HA를 암호화하는 mRNA, 인플루엔자 A/홍콩/4801/2014(H3N2)의 HA를 암호화하는 mRNA, 및 인플루엔자 B/브리즈번/60/2008의 HA를 암호화하는 mRNA 및 인플루엔자 B의 HA를 암호화하는 mRNA)을 암호화하는 LNP-III-3 제형화 mRNA 조성물을 백신 접종하였다(본 설명에서 "7가 HA/NA mRNA 백신"라 지칭됨). 각각의 mRNA 서열은 실시예 1에 따른다.
암컷 BALB/c 마우스에 0일과 21일에 LNP-III-3 제형화 4가 HA mRNA 백신, LNP-III-3 제형화 3가 NA mRNA 백신, 또는 LNP-III-3 제형화 7가 HA/NA mRNA 백신을 근육 내 주사하였다. 양성 대조군으로, 한 그룹의 마우스에 인플루스플릿 테트라 2016/2017을 주사하였다. 음성 대조군으로, 한 그룹의 마우스에 RiLa 완충액을 주사하였다. 면역 반응(HI 역가, ELISA) 분석을 위한 혈청 샘플을 21일, 35일, 49일에 수집하였다(분석은 위에 기술된 바와 같이 수행됨). 비장세포는 49일에 수집하였다(ICS). 실험 세부 사항을 표 N에 제공하였다. ELISA 및 HI-역가 결과를 도 65 내지 도70에 나타내었다.
[표 N]
Figure pct00132
결과:
결과는 LNP-III-3 제형화 7가 HA/NA mRNA 백신이 백신 접종된 마우스에서 강하고 효과적인 면역 반응을 유도함을 보여준다.
도 65 내지 도 68: 4종의 HA 항원 각각에 대한 총 IgG1 및 IgG2a의 존재를 보여준다. 중요: 4가 HA mRNA 백신을 접종한 마우스에서 검출된 면역 반응 사이에서 어떠한 차이도 검출되지 않아, NA 항원을 암호화하는 추가적인 mRNA 구성체의 첨가가 7가 mRNA 백신의 효능을 감소시키지 않았음을 보여준다.
도 69: 3종의 NA 항원 각각에 대한 특이적인 항체의 존재를 보여준다. 중요: 3가 NA mRNA 백신을 접종한 마우스에서 검출된 면역 반응 사이에서 어떠한 차이도 검출되지 않아, HA 항원을 암호화하는 추가적인 mRNA 구성체의 첨가가 7가 mRNA 백신의 효능을 감소시키지 않았음을 보여준다.
도 70: LNP 제형화된 7가 HA/NA mRNA 백신으로의 마우스 백신 접종은 기능적 항체를 유도함을 보여준다.
실시예 26: 에볼라 GP를 암호화하는 LNP-III-3 제형화 mRNA로의 백신 접종 실험
에볼라 바이러스의 당단백질 GP를 암호화하는 mRNA(ZEBOV GP 시에라리온 2014)를 이용하여 본 실시예에서, 본 발명의 mRNA LNP-III-3 제형을 확립된 mRNA 백신(프로타민 제형; 실시예 6)과 비교하였다.
에볼라 바이러스의 GP를 암호화하는 mRNA(서열번호 224362)의 프로타민 제형은 실시예 6에서 기술된 바와 같다. 에볼라 바이러스의 GP를 암호화하는 mRNA(서열번호 224362)의 LNP 제형은 위에서 기술된 바와 같다.
마우스에서 에볼라 GP mRNA 백신의 면역원성:
암컷 BALB/c 마우스에 0일과 21일에 에볼라 바이러스의 GP를 암호화하는 LNP-III-3 제형화 mRNA(RNA ID "R3875"; 근육 내(i.m.)) 또는 에볼라 바이러스의 GP를 암호화하는 프로타민 제형화 mRNA(RNA ID "R3875"; 피내(i.d.))를 주사하였다. 음성 대조군으로, 한 그룹의 마우스에 RiLa 완충액을 주사하였다. IgG 종점 역가의 분석(ELISA)을 위한 혈청 샘플을 35일에 수집하였다. 코팅을 위한 (막관통 도메인이 결여된) 재조합 ZEBOV 메잉가 GP 단백질을 이용하여 ELISA를 수행하였다. ELISA 결과를 도 71에 나타내었다. 백신 접종 실험의 개요를 표 O에 제공하였다.
[표 O]
Figure pct00133
결과:
도 71은 에볼라 바이러스의 GP를 암호화하는 LNP-III-3 제형화 mRNA가 마우스에서(근육 내 적용) 강한 체액성 면역 반응을 유도함을 보여준다. 확립된 프로타민 mRNA 백신 포맷(피내 적용)과 비교하여, 비슷한 면역 반응에 필요한 mRNA 양은 극적으로 감소될 수 있었다. 나아가, LNP-III-3 제형화 mRNA 백신은 근육 내로 적용될 수 있는데, 이는 예방 백신을 위한 중요한 특징이다(예컨대, 인간 대상체에서 백신의 용이하고 절대 안전한 근육 내 적용).
실시예 27: 피하 투여된 H3N2를 암호화하는 LNP-III-3 제형화 mRNA로의 백신 접종 실험
이전의 실시예에서 기술된 바와 같이, LNP-III-3 제형화 mRNA 백신은 근육 내로 또는 피내로 투여될 때(예컨대, 실시예 4 참조) 강하고 효과적인 면역 반응을 유도한다. 다른 적합한 투여 경로를 위한 본 발명의 백신 포맷의 효과를 평가하기 위하여, 피하 주사를 시험하였다.
비-인간 영장류(시노몰구스 원숭이, Macaca fascicularis)에 인플루엔자 A/홍콩/4801/2014 H3N2를 암호화하는 LNP-III-3 제형화 mRNA(실시예 1에 따른 mRNA)를 주사하였다. 세 그룹에 상이한 백신 용량(10 μg, 50 μg, 10 0μg)으로 피하(sc) 백신 접종하였고, 한 대조군은 근육 내로 백신 접종하였다. 0일, 28일, 49일 및 70일의 HI 역가를 본 설명에 기술된 바와 같이 결정하였다. 실험 결과를 도 72에 나타내었다. 백신 접종 실험의 개요를 표 P에 제공하였다.
[표 P]
Figure pct00134
결과: 도 72에 나타난 바와 같이, 본 발명의 LNP-III-3 제형화 mRNA 백신 포맷은 피하 투여 시 암호화된 항원에 대해 강한 보호 항체 역가를 유도한다. 중요하게도, HI 역가는 근육 내 투여를 통해 달성된 것과 비슷하였다. 나아가, 보호 역가는 이미 1회 투여(28일) 후에 달성되었다. 안정적인 보호 역가는 50 μg 및 100 μg에 대해 피하 백신 접종된 동물에 대해 검출되었다. 위를 요약하자면, 결과는 본 발명의 LNP-III-3 제형화 mRNA 백신 포맷이 피내, 근육 내 및 피하 투여에도 적합하다는 점을 증명한다.
실시예 28: LNP-III-3 제형화 OVA mRNA 백신으로의 백신 접종 실험
백신 접종을 위해 그룹당 9마리의 마우스(C57 BL/6)에 1 μg LNP 제형화 Ova mRNA(성분 A) 및 32 μg 프로타민 제형화 Ova mRNA(성분 B)를 3주 이내에 3회 피내 주사하였고, 음성 대조군으로 RiLa를 주사하였다(표 Q 참조).
순환하는 항원-특이적인 CD8 양성 T 세포의 수준을 7일과 21일에 OVA-특이적인 덱스트라머(dextramer, CD8 양성 세포의 항원 특이적인 T 세포 수용체에 결합함)로 측정하였다. 1 μg LNP 제형화된 Ova mRNA(성분 A) 백신은 피내 적용 후 높고 부스트 가능한 수준의 순환하는 항원-특이적인 CD8 양성 T 세포를 유도한다(도 73 및 도 74 참조).
[표 Q]
Figure pct00135
세포 내 사이토카인 염색(ICS)에 의해 다기능 항원-특이적인 CD8 양성 T 세포(IFNу/TNFα)의 수준을 측정하였다. 따라서, 마지막 백신 접종 일주일 후에 백신 접종된 마우스로부터 비장세포를 단리하고, CD8 양성 T 세포를 OVA 특이적인 펩티드(SIINFEKL 및 TEWTSSNVMEERKIKV)로 자극하였다(도 75 참조). 도 75는 1 μg LNP 제형화된 Ova mRNA 백신(성분 A)이 프로타민 제형화된 Ova mRNA(성분 B)와 비교하여 피내 적용 후 높은 수준의 다기능 CD8 양성 T 세포를 유도함을 보여준다.
OVA-특이적인 IgG2c 역가를 검출함으로써 B-세포 면역 반응의 검출을 수행하였다. 따라서, 마지막 백신 접종 1주일 후에 백신 접종된 마우스로부터 혈청 샘플을 채취하고, ELISA로 분석하였다. 1 μg의 LNP-제형화된 OVA-mRNA 백신은 프로타민 제형화된 Ova mRNA와 비교하여 피내 적용 후 증가된 OVA-특이적인 IgG2c 역가를 초래한다(도 76 참조).
결과는 본 발명의 LNP-III-3 제형화 mRNA 백신 포맷이 생체 내에서 항-종양 반응을 유도하기에 적합하며, 따라서 종양에 대한 백신 접종에 사용될 수 있음을 증명한다.
실시예 29: LNP-III-3 제형화 OVA mRNA 백신으로의 종양 시험 감염 실험
C57BL/6 마우스에 실험 0일에 오른쪽 옆구리에 마우스당 3x105 E.G7-OVA 세포(100μl PBS의 부피에)를 피하(s.c.) 주사하였다. 피내(i.d.) 요법은 4일에 시작되었고, 3주 동안 1주일에 2회 계속되었다. 마우스에 1 μg OVA mRNA 및 관련 없는 LNP에 제형화된 PpLuc mRNA를 주사하였다. 주사 절차로 인한 항-종양 효과를 제어하기 위하여, 마우스에 완충액(RiLa)을 주사하였다.
실험 결과를 도 77 및 도 78에 나타내었는데, 이때, 도 77은 종양 성장에 미치는 본 발명의 조성물의 영향을 보여주며, 도 78은 생존에 미치는 본 발명의 조성물의 영향을 보여준다.
캘리퍼를 이용하여 3차원으로 종양 크기를 측정함으로써 종양 성장을 모니터링하였다. 다음 식에 따라 종양 부피를 계산하였다:
Figure pct00136
도 77의 결과는 본 발명의 성분 A(LNP 제형화된 Ova mRNA)가 관련 없는 mRNA(성분 B)로의 다른 처리와 비교하여 종양 부피 중앙값을 강하게 감소시켰음을 보여준다. 또한, 도 78의 결과는 본 발명의 성분 A(LNP 제형화된 Ova mRNA)가 다른 처리(성분 B 및 완충액)와 비교하여 종양 접종된 마우스의 생존을 강하게 증가시켰음을 보여준다.
[표 R]
Figure pct00137
이 결과는 본 발명의 LNP-III-3 제형화 mRNA 백신 포맷이 종양 백신 접종에 적합하다는 것을 증명한다.
실시예 30: 체크포인트 억제자와 조합한 LNP-III-3 제형화 내생 종양 관련 항원 mRNA 백신으로의 백신 접종 실험
C57BL/6 마우스에 실험 0일에 오른쪽 옆구리에 마우스당 1x105개 B16.F10 세포(뮤린 흑색종 세포주)를 피하(s.c.) 주사하였다. 종양 접종 후 6일에, 마우스에 LNP 제형화된 Trp2 mRNA(성분 A) 및 관련없는 LNP 제형화된 PpLuc mRNA(성분 B)로 피내 백신을 접종하였다. 또한, 면역 체크포인트 억제자 항-PD1(클론: RMP1-14) 및 항-CTLA4(클론: 9H10)(둘 다 바이오엑스셀(BioXCell))를 복강 내(i.p.) 투여하였고, 종양 크기 중앙값 및 생존율을 분석하였다. 체크포인트 억제자로 인한 항-종양 효과를 배제하기 위하여, 마우스에 성분 B 및 대조군 항체(랫트 IgG2a, 바이오엑스셀(BioXCell)를 주사하였다.
mTrp2에 대한 백신 및 체크포인트 억제자 항-PD1 및 항-CTLA4를 처리한 종양을 품은 마우스는, 체크포인트 억제자 항-PD1 및 항-CTLA4 또는 대조군 항체와 조합한 관련 없는 mRNA(성분 B)로의 다른 처리와 비교하여, 지연된 종양 성장 및 증가된 생존을 보여준다(도 79 및 도 80 참조).
[표 S]
Figure pct00138
이 결과는 본 발명의 LNP-III-3 제형화 mRNA 백신 포맷이 항-종양 치료법을 위한 체크포인트 억제자와의 조합에 적합하다는 것을 증명한다.

Claims (88)

  1. 다음을 포함하는 지질 나노입자:
    (i) 화학식 III을 갖는 양이온성 지질:
    [화학식 III]
    Figure pct00139

    또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 호변이성체, 전구약물 또는 입체이성질체(화학식에서,
    L1 또는 L2는 각각 독립적으로 -O(C=O)-, -(C=O)O-, -C(=O)-, -O-, -S(O)x-, -S-S-, -C(=O)S-, -SC(=O)-, -NRaC(=O)-, -C(=O)NRa-, -NRaC(=O)NRa-, -OC(=O)NRa- 또는 -NRaC(=O)O-, 바람직하게는 L1 또는 L2는 -O(C=O)- 또는 -(C=O)O-이고;
    G1 및 G2는 각각 독립적으로 비치환 C1-C12 알킬렌 또는 C1-C12 알케닐렌이고;
    G3은 C1-C24 알킬렌, C1-C24 알케닐렌, C3-C8 시클로알킬렌, 또는 C3-C8 시클로알케닐렌이고;
    Ra는 H 또는 C1-C12 알킬이고;
    R1 및 R2는 각각 독립적으로 C6-C24 알킬 또는 C6-C24 알케닐이고;
    R3은 H, OR5, CN, -C(=O)OR4, -OC(=O)R4 또는 -NR5C(=O)R4이고;
    R4는 C1-C12 알킬이고;
    R5는 H 또는 C1-C6 알킬이고;
    x는 0, 1 또는 2임);
    (ii) 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물로서, 이 mRNA 화합물은 선택적으로 뉴클레오시드 변형을 포함하지 않고, 특히 염기 변형을 포함하지 않으며;
    mRNA 화합물은 상기 지질 나노입자에 캡슐화되거나 상기 지질 나노입자와 회합되는 것인 mRNA 화합물.
  2. 다음을 포함하는 지질 나노입자:
    (i) 화학식 IV를 갖는 PEG 지질:
    [화학식 IV]
    Figure pct00140

    (화학식에서, R8 및 R9는 각각 독립적으로 10개 내지 30개의 탄소 원자를 함유하는 직선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 알킬 사슬로, 이 알킬 사슬은 선택적으로 1개 이상의 에스테르 결합에 의해 중단되고;
    w는 30 내지 60 범위의 평균값을 가짐); 및
    (ii) 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물로서, 이 mRNA 화합물은 선택적으로 뉴클레오시드 변형을 포함하지 않고, 특히 염기 변형을 포함하지 않으며;
    mRNA 화합물은 상기 지질 나노입자에 캡슐화되거나 상기 지질 나노입자와 회합되는 것인 mRNA 화합물.
  3. 다음을 포함하는 지질 나노입자:
    (i) 화학식 I을 갖는 양이온성 지질:
    [화학식 I]
    Figure pct00141

    또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 호변이성체, 전구약물 또는 입체이성질체
    (화학식에서,
    L1 및 L2는 각각 독립적으로 -O(C=O)-, -(C=O)O- 또는 탄소-탄소 이중 결합이고;
    R1a 및 R1b는, 각 경우에, 독립적으로 (a) H 또는 C1-C12 알킬, 또는 (b) R1a는 H 또는 C1-C12 알킬이고, R1b는 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께, 인접한 R1b 및 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께 쓰여 탄소-탄소 이중 결합을 형성하고;
    R2a 및 R2b는, 각 경우에, 독립적으로 (a) H 또는 C1-C12 알킬, 또는 (b) R2a는 H 또는 C1-C12 알킬이고, R2b는 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께, 인접한 R2b 및 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께 쓰여 탄소-탄소 이중 결합을 형성하고;
    R3a 및 R3b는, 각 경우에, 독립적으로 (a) H 또는 C1-C12 알킬, 또는 (b) R3a는 H 또는 C1-C12 알킬이고, R3b는 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께, 인접한 R3b 및 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께 쓰여 탄소-탄소 이중 결합을 형성하고;
    R4a 및 R4b는, 각 경우에, 독립적으로 (a) H 또는 C1-C12 알킬, 또는 (b) R4a는 H 또는 C1-C12 알킬이고, R4b는 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께, 인접한 R4b 및 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께 쓰여 탄소-탄소 이중 결합을 형성하고;
    R5 및 R6은 각각 독립적으로 메틸 또는 시클로알킬이고;
    R7은, 각 경우에, 독립적으로 H 또는 C1-C12 알킬이고;
    R8 및 R9는 각각 독립적으로 C1-C12 알킬이거나; R8 및 R9는, 그것들이 부착되는 질소 원자와 함께, 하나의 질소 원자를 포함하는 5, 6 또는 7원 헤테로고리를 형성하고;
    a 및 d는 각각 독립적으로 0 내지 24의 정수이고;
    b 및 c는 각각 독립적으로 1 내지 24의 정수이고;
    e는 1 또는 2임);
    및 (ii) 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물로서, 이 mRNA 화합물은 선택적으로 뉴클레오시드 변형을 포함하지 않고, 특히 염기 변형을 포함하지 않으며,
    mRNA 화합물은 상기 지질 나노입자에 캡슐화되거나 상기 지질 나노입자와 회합되는 것인 mRNA 화합물.
  4. 다음을 포함하는 지질 나노입자:
    (i) 화학식 II를 갖는 양이온성 지질:
    [화학식 II]
    Figure pct00142

    또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 호변이성체, 전구약물 또는 입체이성질체
    (화학식에서,
    L1 및 L2는 각각 독립적으로 -O(C=O)-, -(C=O)O-, -C(=O)-, -O-, -S(O)x-, -S-S-, -C(=O)S-, -SC(=O)-, -NRaC(=O)-, -C(=O)NRa-, -NRaC(=O)NRa-, -OC(=O)NRa-, -NRaC(=O)O-, 또는 직접적인 결합이고;
    G1은 C1-C2 알킬렌, -(C=O)- , -O(C=O)-, -SC(=O)-, -NRaC(=O)- 또는 직접적인 결합이고
    G2는 -C(=O)- , -(C=O)O-, -C(=O)S-, -C(=O)NRa- 또는 직접적인 결합이고;
    G3은 C1-C6 알킬렌이고;
    Ra는 H 또는 C1-C12 알킬이고;
    R1a 및 R1b는, 각 경우에, 독립적으로: (a) H 또는 C1-C12 알킬; 또는 (b) R1a는 H 또는 C1-C12 알킬이고, R1b는 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께, 인접한 R1b 및 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께 쓰여 탄소-탄소 이중 결합을 형성하고;
    R2a 및 R2b는, 각 경우에, 독립적으로: (a) H 또는 C1-C12 알킬; 또는 (b) R2a는 H 또는 C1-C12 알킬이고, R2b는 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께, 인접한 R2b 및 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께 쓰여 탄소-탄소 이중 결합을 형성하고;
    R3a 및 R3b는, 각 경우에, 독립적으로: (a) H 또는 C1-C12 알킬; 또는 (b) R3a는 H 또는 C1-C12 알킬이고, R3b는 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께, 인접한 R3b 및 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께 쓰여 탄소-탄소 이중 결합을 형성하고;
    R4a 및 R4b는, 각 경우에, 독립적으로: (a) H 또는 C1-C12 알킬; 또는 (b) R4a는 H 또는 C1-C12 알킬이고, R4b는 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께, 인접한 R4b 및 그것이 결합되는 탄소 원자와 함께 쓰여 탄소-탄소 이중 결합을 형성하고;
    R5 및 R6은 각각 독립적으로 H 또는 메틸이고;
    R7는 C4-C20 알킬이고;
    R8 및 R9는 각각 독립적으로 C1-C12 알킬이거나; R8 및 R9는, 그것들이 부착되는 질소 원자와 함께, 5, 6 또는 7원 헤테로고리를 형성하고;
    a, b, c 및 d는 각각 독립적으로 1 내지 24의 정수이고;
    x는 0, 1 또는 2임);
    및 (ii) 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 mRNA 서열을 포함하는 mRNA 화합물로서, 이 mRNA 화합물은 선택적으로 뉴클레오시드 변형을 포함하지 않고, 특히 염기 변형을 포함하지 않으며;
    mRNA 화합물은 상기 지질 나노입자에 캡슐화되거나 상기 지질 나노입자와 회합되는 것인 mRNA 화합물.
  5. 제1항, 제3항 또는 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    (iii) 화학식 IV를 갖는 PEG 지질:
    [화학식 IV]
    Figure pct00143

    (화학식에서, R8 및 R9는 각각 독립적으로 10개 내지 30개의 탄소 원자를 함유하는 직선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 알킬 사슬로, 이 알킬 사슬은 선택적으로 1개 이상의 에스테르 결합에 의해 중단되고;
    w는 30 내지 60 범위의 평균값을 가짐)을 추가적으로 포함하는 지질 나노입자.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 양이온성 지질은 화학식 III의 화합물이고,
    L1 및 L2는 각각 독립적으로 -O(C=O)- 또는 (C=O)-O-이고;
    G3은 C1-C24 알킬렌 또는 C1-C24 알케닐렌이고;
    R3은 H 또는 OR5인, 지질 나노입자.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 양이온성 지질은 화학식 III의 화합물이고,
    L1 및 L2는 각각 독립적으로 -O(C=O)- 또는 (C=O)-O-이고;
    R1 및 R2는 각각 독립적으로 다음 구조 중 하나를 갖는 것인, 지질 나노입자:
    Figure pct00144
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 양이온성 지질은 화학식 III의 화합물이고, R3은 OH인, 지질 나노입자.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 양이온성 지질은 구조 I-1 내지 I-41, II-1 내지 II-34 또는 III-1 내지 III-36으로부터 선택되는 것인, 지질 나노입자:
    Figure pct00145

    Figure pct00146

    Figure pct00147

    Figure pct00148

    Figure pct00149

    Figure pct00150

    Figure pct00151

    또는
    Figure pct00152

    Figure pct00153

    Figure pct00154

    Figure pct00155

    Figure pct00156

    Figure pct00157

    또는
    Figure pct00158

    Figure pct00159

    Figure pct00160

    Figure pct00161

    Figure pct00162
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 양이온성 지질은 다음으로부터 선택되는 것인, 지질 나노입자:
    Figure pct00163
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, PEG 지질에서 R8 및 R9는 포화 알킬 사슬인, 지질 나노입자.
  12. 제11항에 있어서, PEG 지질은
    Figure pct00164
    이며,

    이때, n은 30 내지 60 범위의 평균값을 갖는 것인, 지질 나노입자.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, mRNA 화합물은 적어도 하나의 화학적 변형을 포함하고, mRNA 화합물은 바람직하게는 뉴클레오시드 변형을 포함하지 않으며, 상기 뉴클레오시드 변형은 선택적으로 염기 변형이고, 상기 염기 변형은 선택적으로 1-메틸슈도우리딘 변형인 것인, 지질 나노입자.
  14. 제13항에 있어서, 화학적 변형은 당 변형, 백본 변형 및 지질 변형을 포함하는 군으로부터 선택되는 것인, 지질 나노입자.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, mRNA 서열은 인공 mRNA 서열인 것인, 지질 나노입자.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 mRNA 서열의 암호화 영역은 서열 변형을 포함하는 것인, 지질 나노입자.
  17. 제16항에 있어서, 서열 변형은 서열의 G/C 함량 변형, 코돈 변형, 코돈 최적화 또는 C-최적화로부터 선택되는 것인, 지질 나노입자.
  18. 제17항에 있어서, mRNA 서열의 암호화 영역의 G/C 함량은 야생형 mRNA의 상응하는 암호화 서열의 G/C 함량과 비교하여 증가되거나, mRNA 서열의 암호화 영역의 C 함량은 야생형 mRNA의 상응하는 암호화 서열의 C 함량과 비교하여 증가되거나, mRNA 서열의 암호화 영역의 코돈 사용빈도는 인간 코돈 사용빈도에 적합화되거나, 코돈 적합화 지수(CAI)는 mRNA 서열의 암호화 영역에서 증가되거나 최대화되며, mRNA 서열의 암호화된 아미노산 서열은 바람직하게는 야생형 mRNA의 암호화된 아미노산 서열과 비교하여 변형되지 않는, 지질 나노입자.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, mRNA 서열은 추가적으로 다음을 포함하는 것인, 지질 나노입자:
    a) 5'-CAP 구조, 및/또는
    b) 폴리(A) 서열, 및/또는
    c) 폴리(C) 서열.
  20. 제19항에 있어서, mRNA 서열은 폴리(A) 서열을 포함하고, 폴리(A) 서열은 약 25 내지 약 400개 아데노신 뉴클레오티드의 서열, 바람직하게는 약 50 내지 약 400개 아데노신 뉴클레오티드의 서열, 더욱 바람직하게는 약 50 내지 약 300개 아데노신 뉴클레오티드의 서열, 훨씬 더 바람직하게는 약 50 내지 약 250개 아데노신 뉴클레오티드의 서열, 가장 바람직하게는 약 60 내지 약 250개 아데노신 뉴클레오티드의 서열을 포함하는 것인, 지질 나노입자.
  21. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, mRNA 서열은 적어도 하나의 히스톤 스템 루프를 추가적으로 포함하는 것인, 지질 나노입자.
  22. 제21항에 있어서, 적어도 하나의 히스톤 스템-루프는 다음 화학식 V 또는 VI에 따른 핵산 서열을 포함하는 것인, 지질 나노입자:
    [화학식 V](스템 경계 요소가 없는 스템-루프 서열)
    Figure pct00165

    [화학식 VI](스템 경계 요소가 있는 스템-루프 서열)
    Figure pct00166

    (화학식에서, 스템1 또는 스템2 경계 요소 N1-6은 1 내지 6, 바람직하게는 2 내지 6, 더욱 바람직하게는 2 내지 5, 훨씬 더 바람직하게는 3 내지 5, 가장 바람직하게는 4 내지 5 또는 5 N의 연속 서열이며, 이때, 각 N은 A, U, T, G 및 C로부터 선택된 뉴클레오티드 또는 이의 뉴클레오티드 유사체로부터 서로 독립적으로 선택되며;
    스템1[N0-2GN3-5]은 요소 스템2와 역상보적 또는 부분 역상보적이며, 5 내지 7 뉴클레오티드 사이의 연속 서열이며;
    N0-2는 0 내지 2, 바람직하게는 0 내지 1, 더욱 바람직하게는 1 N의 연속 서열이며, 이때, 각 N은 A, U, T, G 및 C로부터 선택된 뉴클레오티드 또는 이의 뉴클레오티드 유사체로부터 서로 독립적으로 선택되며;
    N3-5는 3 내지 5, 바람직하게는 4 내지 5, 더욱 바람직하게는 4 N의 연속 서열이며, 이때, 각 N은 A, U, T, G 및 C로부터 선택된 뉴클레오티드 또는 이의 뉴클레오티드 유사체로부터 서로 독립적으로 선택되며, 및
    루프 서열[N0-4(U/T)N0-4]는 요소 스템1 및 스템2 사이에 위치하고, 3 내지 5 뉴클레오티드, 더욱 바람직하게는 4 뉴클레오티드의 연속 서열이며;
    각각의 N0-4는 0 내지 4, 바람직하게는 1 내지 3, 더욱 바람직하게는 1 내지 2 N의 서로 독립적인 연속 서열이며, 이때, 각 N은 A, U, T, G 및 C로부터 선택된 뉴클레오티드 또는 이의 뉴클레오티드 유사체로부터 서로 독립적으로 선택되며;
    U/T는 우리딘, 또는 선택적으로 티미딘을 나타내며;
    스템2[N3-5CN0-2]는 요소 스템1과 역상보적 또는 부분 역상보적이며, 5 내지 7 뉴클레오티드 사이의 연속 서열이며;
    N3-5는 3 내지 5, 바람직하게는 4 내지 5, 더욱 바람직하게는 4 N의 연속 서열이며, 이때, 각 N은 A, U, T, G 및 C로부터 선택된 뉴클레오티드 또는 이의 뉴클레오티드 유사체로부터 서로 독립적으로 선택되며;
    N0-2는 0 내지 2, 바람직하게는 0 내지 1, 더욱 바람직하게는 1 N의 연속 서열이며, 이때, 각 N은 A, U, T, G 및 C로부터 선택된 뉴클레오티드 또는 이의 뉴클레오티드 유사체로부터 서로 독립적으로 선택되며, 및
    C는 시티딘 또는 이의 유사체이며, 스템1에서 이의 상보적인 뉴클레오티드 구아노신이 시티딘에 의해 교체되는 경우, 선택적으로 구아노신 또는 이의 유사체로 교체될 수 있음).
  23. 제21항 또는 제22항에 있어서, 적어도 하나의 히스톤 스템 루프는 서열번호 224305에 따른 핵산 서열 및/또는 가장 바람직하게는 서열번호 224306에 따른 RNA 서열을 포함하는 것인, 지질 나노입자.
  24. 제19항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, mRNA 서열은 바람직하게는 10 내지 200, 10 내지 100, 40 내지 80 또는 50 내지 70개 아데노신 뉴클레오티드를 포함하는 폴리(A) 서열 및/또는 바람직하게는 10 내지 200, 10 내지 100, 20 내지 70, 20 내지 60 또는 10 내지 40개 시토신 뉴클레오티드를 포함하는 폴리(C) 서열을 포함하는 것인, 지질 나노입자.
  25. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, mRNA 서열은 바람직하게는 5'에서 3' 방향으로 다음 요소를 포함하는 것인, 지질 나노입자:
    a) 5'-CAP 구조, 바람직하게는 m7GpppN,
    b) 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역,
    c) 폴리(A) 꼬리, 바람직하게는 10 내지 200, 10 내지 100, 40 내지 80 또는 50 내지 70개 아데노신 뉴클레오티드로 구성된 폴리(A) 꼬리,
    d) 선택적으로 폴리(C) 꼬리, 바람직하게는 10 내지 200, 10 내지 100, 20 내지 70, 20 내지 60 또는 10 내지 40개 시토신 뉴클레오티드로 구성된 폴리(C) 꼬리, 및
    g) 선택적으로 히스톤 스템-루프, 바람직하게는 서열번호 224306에 따른 RNA 서열을 포함하는 히스톤 스템-루프.
  26. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, mRNA 서열은 3'-UTR 요소를 포함하는 것인, 지질 나노입자.
  27. 제26항에 있어서, 적어도 하나의 3'-UTR 요소는 안정적인 mRNA를 제공하는 유전자의 3'-UTR로부터 또는 이의 동종체, 단편 또는 변이체로부터 유래되는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 지질 나노입자.
  28. 제26항 또는 제27항에 있어서, 3'-UTR 요소는 바람직하게는 서열번호 224297에 따른 핵산 서열, 이의 동종체, 단편 또는 변이체의 상응하는 RNA 서열을 포함하는, α-글로빈 유전자의 3'-UTR로부터 유래된 핵산 서열을 포함하는 것인, 지질 나노입자.
  29. 제26항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 3'-UTR 요소는 척추동물 알부민 유전자의 3'-UTR로부터 또는 이의 변이체로부터, 바람직하게는 포유동물 알부민 유전자의 3'-UTR로부터 또는 이의 변이체로부터, 더욱 바람직하게는 인간 알부민 유전자의 3'-UTR로부터 또는 이의 변이체로부터, 훨씬 더 바람직하게는 GenBank 접근 번호 NM_000477.5에 따른 인간 알부민 유전자의 3'-UTR로부터 또는 이의 단편 또는 변이체로부터 유래되는 핵산 서열을 포함하는 것인, 지질 나노입자.
  30. 제26항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 3'-UTR 요소는 서열번호 224301 또는 224303에 따른 핵산 서열로부터, 바람직하게는 상응하는 RNA 서열, 또는 이의 동종체, 단편 또는 변이체로부터 유래되는 것인, 지질 나노입자.
  31. 제1항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, mRNA 서열은 바람직하게는 5'에서 3' 방향으로 다음 요소를 포함하는 것인, 지질 나노입자:
    a) 5'-CAP 구조, 바람직하게는 m7GpppN,
    b) 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역,
    c) 알파 글로빈 유전자로부터 유래되는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된 3'-UTR 요소, 바람직하게는 서열번호 224297에 따른 핵산 서열, 이의 동종체, 단편 또는 변이체의 상응하는 RNA 서열을 포함하는 3'-UTR 요소;
    d) 폴리(A) 꼬리, 바람직하게는 10 내지 200, 10 내지 100, 40 내지 80 또는 50 내지 70개 아데노신 뉴클레오티드로 구성된 폴리(A) 꼬리,
    e) 선택적으로 폴리(C) 꼬리, 바람직하게는 10 내지 200, 10 내지 100, 20 내지 70, 20 내지 60 또는 10 내지 40개 시토신 뉴클레오티드로 구성된 폴리(C) 꼬리, 및
    f) 선택적으로, 히스톤 스템-루프, 바람직하게는 서열번호 224306에 따른 RNA 서열을 포함하는 히스톤 스템-루프.
  32. 제1항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, mRNA 서열은 5'-UTR 요소를 포함하는 것인, 지질 나노입자.
  33. 제32항에 있어서, 5'-UTR 요소는 바람직하게는 5'-TOP 모티프가 결여된, TOP 유전자의 5'-UTR로부터, 바람직하게는 상응하는 RNA 서열, 이의 동종체, 단편, 또는 변이체로부터 유래되는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 지질 나노입자.
  34. 제33항에 있어서, 5'-UTR 요소는 바람직하게는 5'TOP 모티프가 결여된, 리보솜 단백질을 암호화하는 TOP 유전자의 5'-UTR로부터, 바람직하게는 상응하는 RNA 서열로부터 또는 이의 동종체, 단편 또는 변이체로부터 유래되는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 지질 나노입자.
  35. 제34항에 있어서, 5'-UTR 요소는 바람직하게는 5'-TOP 모티프가 결여된, 그리고 더욱 바람직하게는 서열번호 224287에 따른 핵산 서열의 상응하는 RNA 서열을 포함하거나 이로 구성된, 리보솜 큰 단백질(RPL)을 암호화하는 TOP 유전자의 5'-UTR로부터 또는 이의 동종체, 단편 또는 변이체로부터 유래되는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 지질 나노입자.
  36. 제35항에 있어서, TOP 유전자의 5'-UTR로부터 유래되는 5'-UTR 요소는 서열번호 224287 또는 224289에 따른 핵산 서열의 상응하는 RNA 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 지질 나노입자.
  37. 제1항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, mRNA 서열은 바람직하게는 5'에서 3' 방향으로 다음 요소를 포함하는 것인, 지질 나노입자:
    a) 5'-CAP 구조, 바람직하게는 m7GpppN,
    b) 바람직하게는 서열번호 224287 또는 224289에 따른 핵산 서열, 이의 동종체, 단편 또는 변이체의 상응하는 RNA 서열을 포함하거나 이로 구성된, TOP 유전자의 5'-UTR로부터 유래되는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된 5'-UTR 요소;
    c) 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역;
    d) 바람직하게는 서열번호 224303에 따른 핵산 서열, 이의 동종체, 단편 또는 변이체의 상응하는 RNA 서열을 포함하는, 알부민 유전자로부터 유래되는 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성된 3'-UTR 요소;
    e) 폴리(A) 꼬리, 바람직하게는 10 내지 200, 10 내지 100, 40 내지 80 또는 50 내지 70개 아데노신 뉴클레오티드로 구성된 폴리(A) 꼬리,
    f) 선택적으로 폴리(C) 꼬리, 바람직하게는 10 내지 200, 10 내지 100, 20 내지 70, 20 내지 60 또는 10 내지 40개 시토신 뉴클레오티드로 구성된 폴리(C) 꼬리, 및
    g) 선택적으로 히스톤 스템-루프, 바람직하게는 서열번호 224306에 따른 RNA 서열을 포함하는 히스톤 스템-루프.
  38. 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 항원 펩티드 또는 단백질은 병원성 항원, 종양 항원, 알레르기 항원 또는 자가면역 자가항원 또는 이의 단편 또는 변이체로부터 유래되는 것인, 지질 나노입자.
  39. 제38항에 있어서, 병원성 항원은 인플루엔자 또는 광견병 바이러스로부터 유래되는 것인, 지질 나노입자.
  40. 제39항에 있어서, 항원 펩티드 또는 단백질은 인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌(HA), 뉴라미니다제(NA), 뉴클레오단백질(NP), 매트릭스 단백질 1(M1), 매트릭스 단백질 2(M2), 비-구조적 단백질 1(NS1), 비-구조적 단백질 2(NS2), 핵 외부 수송 단백질(NEP), 중합효소 산성 단백질(PA), 중합효소 염기성 단백질 PB1, PB1-F2, 또는 중합효소 염기성 단백질 2(PB2), 또는 이의 단편 또는 변이체로부터 유래되는 것인, 지질 나노입자.
  41. 제40항에 있어서, 항원 펩티드 또는 단백질은 인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌(HA) 또는 뉴라미니다제(NA) 또는 이의 단편 또는 변이체로부터 유래되는 것인, 지질 나노입자.
  42. 제41항에 있어서, 항원 펩티드 또는 단백질은 인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌(HA)의 적어도 하나의 전장 단백질 및/또는 뉴라미니다제(NA)의 적어도 하나의 전장 단백질 또는 이의 변이체인, 지질 나노입자.
  43. 제39항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 인플루엔자 바이러스는 인플루엔자 A, B 또는 C 바이러스로부터 선택되는 것인, 지질 나노입자.
  44. 제43항에 있어서, 인플루엔자 A 바이러스는 H1, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, H11, H12, H13, H14, H15, H16, H17 및 H18로 구성된 군으로부터 선택된 헤마글루티닌(HA)을 특징으로 하는 인플루엔자 바이러스로부터 선택되는 것인, 지질 나노입자.
  45. 제43항 또는 제44항에 있어서, 인플루엔자 A 바이러스는 N1, N2, N3, N4, N5, N6, N7, N8, N9, N10, 및 N11로 구성된 군으로부터 선택된 뉴라미니다제(NA)를 특징으로 하는 인플루엔자 바이러스로부터 선택되는 것인, 지질 나노입자.
  46. 제43항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 인플루엔자 A 바이러스는 H1N1, H1N2, H2N2, H3N1, H3N2, H3N8, H5N1, H5N2, H5N3, H5N8, H5N9, H7N1, H7N2, H7N3, H7N4, H7N7, H7N9, H9N2, 및 H10N7로 구성된 군으로부터 선택되고, 바람직하게는 H1N1, H3N2, H5N1로부터 선택되는 것인, 지질 나노입자.
  47. 제39항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, mRNA 서열은 인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌(HA) 또는 이의 단편 또는 변이체로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질 및 인플루엔자 바이러스의 뉴라미니다제(NA) 또는 이의 단편 또는 변이체로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 것인, 지질 나노입자.
  48. 제39항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, mRNA 서열은 H1N1, H1N2, H2N2, H3N1, H3N2, H3N8, H5N1, H5N2, H5N3, H5N8, H5N9, H7N1, H7N2, H7N3, H7N4, H7N7, H7N9, H9N2, 및 H10N7로 구성된 군으로부터, 바람직하게는 H1N1, H3N2, H5N1로부터 선택된 인플루엔자 A 바이러스의 헤마글루티닌(HA)으로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질 및/또는 뉴라미니다제(NA)로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질 또는 이의 단편 또는 변이체를 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 것인, 지질 나노입자.
  49. 제39항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, mRNA 서열은 서열번호 1 내지 14031 또는 서열번호 224309 또는 224310에 따른 인플루엔자 A 바이러스의 헤마글루티닌(HA)으로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질 또는 이의 단편 또는 변이체를 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 것인, 지질 나노입자.
  50. 제39항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서, mRNA 서열은 서열번호 32013 내지 46043, 64025 내지 78055, 224085 내지 224106, 96037 내지 110067, 128049 내지 142079, 160061 내지 174091, 192073 내지 206103에 따른 RNA 서열 또는 이의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 RNA 서열로부터 선택된 적어도 하나의 RNA 서열을 포함하는 것인, 지질 나노입자.
  51. 제39항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, mRNA 서열은 서열번호 26398 내지 28576에 따른 인플루엔자 B 바이러스의 헤마글루티닌(HA)으로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질 또는 이의 단편 또는 변이체를 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 것인, 지질 나노입자.
  52. 제39항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, mRNA 서열은 서열번호 58410 내지 60588, 90422 내지 92600, 224107 내지 224112, 122434 내지 124612, 154446 내지 156624, 186458 내지 188636, 218470 내지 220648에 따른 RNA 서열 또는 이의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 RNA 서열로부터 선택된 적어도 하나의 RNA 서열을 포함하는 것인, 지질 나노입자.
  53. 제39항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서, mRNA 서열은 서열번호 14032 내지 26397, 224309, 또는 224310에 따른 인플루엔자 A 바이러스의 뉴라미니다제(NA)로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질 또는 이의 단편 또는 변이체를 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 것인, 지질 나노입자.
  54. 제39항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, mRNA 서열은 서열번호 46044 내지 58409, 224311, 224312, 78056 내지 90421, 224113, 224313 내지 224317, 110068 내지 122433, 142080 내지 154445, 174092 내지 186457, 206104 내지 218469에 따른 RNA 서열 또는 이의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 RNA 서열로부터 선택된 적어도 하나의 RNA 서열을 포함하는 것인, 지질 나노입자.
  55. 제39항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, mRNA 서열은 서열번호 28577 내지 30504에 따른 인플루엔자 B 바이러스의 뉴라미니다제(NA)로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질 또는 이의 단편 또는 변이체를 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 것인, 지질 나노입자.
  56. 제39항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서, mRNA 서열은 서열번호 60589 내지 62516, 92601 내지 94528, 124613 내지 126540, 156625 내지 158552, 188637 내지 190564, 220649 내지 222576에 따른 RNA 서열 또는 이의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 RNA 서열로부터 선택된 적어도 하나의 RNA 서열 또는 RNA 서열의 혼합물을 포함하는 것인, 지질 나노입자.
  57. 제39항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, mRNA 서열은 광견병 바이러스의 당단백질 G(RAV-G, RAVBV-G 또는 RABV-G), 뉴클레오단백질 N(RAV-N), 포스포단백질 P(RAV-P), 매트릭스 단백질 M(RAV-M) 또는 RNA 중합효소 L(RAV-L)로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질 또는 이의 단편, 변이체를 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 것인, 지질 나노입자.
  58. 제39항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, mRNA 서열은 서열번호 30505 내지 32012에 따른 광견병 바이러스의 당단백질 G(RAV-G, RAVBV-G 또는 RABV-G)로부터 유래된 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질 또는 이의 단편 또는 변이체를 암호화하는 적어도 하나의 암호화 영역을 포함하는 것인, 지질 나노입자.
  59. 제39항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, mRNA 서열은 서열번호 62517 내지 64024, 224270, 224274, 94529 내지 96036, 224271 내지 224273, 126541 내지 128048, 158553 내지 160060, 190565 내지 192072, 222577 내지 224084에 따른 RNA 서열 또는 이의 단편 또는 변이체와 동일하거나 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 RNA 서열로부터 선택된 적어도 하나의 RNA 서열을 포함하는 것인, 지질 나노입자.
  60. 제1항 내지 제59항 중 어느 한 항에 있어서, mRNA 서열은 서열번호 224085 내지 224106, 224114 내지 224235, 224085 내지 224106, 224114 내지 224235, 224107 내지 224112, 224236 내지 224263, 224107 내지 224112, 224107 내지 224112, 224236 내지 224263, 224113, 224264 내지 224266, 224309 내지 224347, 224309, 224310, 224311, 224312, 224113, 224313 내지 224317, 224113, 224311 내지 224317, 224264 내지 224266, 224318 내지 224347, 224348 내지 224357, 224348 내지 224357, 224270 내지 224284, 224270, 224271 내지 224273, 224270 내지 224273, 224274 내지 224284, 224358 내지 224362, 224358, 224359, 224360, 224359, 224360, 224361, 224362, 224363, 224364에 따른 RNA 서열과 동일하거나 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 RNA 서열, 바람직하게는 서열번호 224114 내지 224235, 224236 내지 224263, 224264 내지 224266, 224318 내지 224347, 224348 내지 224357, 224274 내지 224284, 224361, 224362, 224363, 224364에 따른 적어도 하나의 암호화 영역, 가장 바람직하게는 서열번호 224118, 서열번호 224117, 서열번호 224181, 서열번호 224236, 서열번호 224200, 서열번호 224166, 서열번호 224236, 서열번호 224246, 서열번호 224318, 서열번호 224336, 서열번호 224348, 서열번호 224276, 서열번호 224280에 따른 적어도 하나의 암호화 영역, 또는 이의 단편 또는 변이체를 포함하는 것인, 지질 나노입자.
  61. 제1항 내지 제60항 중 어느 한 항에 있어서, mRNA 화합물은 적어도 두 개의 mRNA 서열을 포함하며, 이때, 적어도 두 개의 mRNA 서열은 2종의 상이한 항원 펩티드 및/또는 단백질을 암호화하는 것인, 지질 나노입자.
  62. 제1항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 2종의 상이한 mRNA 화합물을 포함하며, 각각의 화합물은 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 mRNA 서열을 포함하는 것인, 지질 나노입자.
  63. 제1항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서,
    (iv) 중성 지질; 및/또는
    (v) 스테로이드 또는 스테로이드 유사체를 추가적으로 포함하는, 지질 나노입자.
  64. 제1항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, 중성 지질은 디스테아로일포스파티딜콜린(DSPC), 디올레오일포스파티딜콜린(DOPC), 디팔미토일포스파티딜콜린(DPPC), 디올레오일포스파티딜글리세롤(DOPG), 디팔미토일포스파티딜글리세롤(DPPG), 디올레오일-포스파티딜에탄올아민(DOPE), 팔미토일올레오일포스파티딜콜린(POPC), 팔미토일올레오일-포스파티딜에탄올아민(POPE) 및 디올레오일-포스파티딜에탄올아민4-(N-말레이미도메틸)-시클로헥산-1카복실레이트 (DOPE-mal), 디팔미토일 포스파티딜 에탄올아민(DPPE), 디미리스토일포스포에탄올아민(DMPE), 디스테아로일-포스파티딜에탄올아민(DSPE), 16-O-모노메틸 PE, 16-O-디메틸 PE, 18-1-트랜스 PE, 1-스테아로일-2-올레오일포스파티딜에탄올 아민(SOPE), 및 1,2-디엘라이도일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민(트랜스DOPE)을 포함하는 군으로부터 선택되는 것인, 지질 나노입자.
  65. 제1항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서, 중성 지질은 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포콜린(DSPC)이고, 양이온성 지질 대 DSPC의 몰 비율이 선택적으로 약 2:1 내지 8:1의 범위인 것인, 지질 나노입자.
  66. 제1항 내지 제65항 중 어느 한 항에 있어서, 스테로이드는 콜레스테롤이고, 양이온성 지질 대 콜레스테롤의 몰 비율은 선택적으로 약 2:1 내지 1:1의 범위인 것인, 지질 나노입자.
  67. 다음 단계를 포함하는 제1항 내지 제66항 중 어느 한 항에 따른 지질 나노입자의 제조 방법:
    (i) a) 위에 정의된 바와 같은 화학식 I의 양이온성 지질
    [화학식 I]
    Figure pct00167

    또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 호변이성체, 전구약물 또는 입체이성질체,
    및/또는
    위에 정의된 바와 같은 화학식 II의 양이온성 지질
    [화학식 II]
    Figure pct00168

    또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 호변이성체, 전구약물 또는 입체이성질체,
    및/또는
    위에 정의된 바와 같은 화학식 III의 양이온성 지질
    [화학식 III]
    Figure pct00169

    또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 호변이성체, 전구약물 또는 입체이성질체;
    및/또는
    b) 위에 정의된 바와 같은 화학식 IV를 갖는 PEG 지질:
    [화학식 IV]
    Figure pct00170
    ;
    c) 적어도 하나의 항원 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 mRNA 서열을 포함하는 적어도 하나의 mRNA 화합물로서, 선택적으로 뉴클레오시드 변형을 포함하지 않고, 특히 염기 변형을 포함하지 않는 mRNA 화합물;
    d) 선택적으로 스테로이드; 및
    e) 선택적으로 중성 지질;을 제공하는 단계
    (ii) 양이온성 지질 및/또는 PEG 지질 및 선택적으로 중성 지질 및/또는 스테로이드 또는 스테로이드 유도체를 에탄올에 용해시키는 단계;
    (iii) 에탄올성 지질 용액을 mRNA 폴리뉴클레오티드를 포함하는 수용액과 혼합하는 단계
    (iv) 에탄올을 제거하는 단계; 및 선택적으로
    (v) 지질 나노입자를 분리 또는 정제하는 단계.
  68. 제67항에 있어서, 단계 (iv)에서 에탄올은 투석 또는 정용여과에 의해 제거되는 것인, 방법.
  69. 제67항 또는 제68항에 있어서, 단계 (v)에서 지질 나노입자는 여과에 의해, 바람직하게는 멸균 필터를 통한 여과에 의해 정제되는 것인, 방법.
  70. 제1항 내지 제66항 중 어느 한 항에 따른 적어도 하나의 지질 나노입자를 포함하는 약학적 조성물.
  71. 제70항에 있어서, 제1항 내지 제66항 중 어느 한 항에 따른 적어도 제1 및 제2의 지질 나노입자를 포함하며, 이때, 제2 지질 나노입자에 포함된 mRNA 화합물은 제1 지질 나노입자에 포함된 mRNA 화합물과 상이한 것인, 약학적 조성물.
  72. 제70항 또는 제71항에 있어서, 약학적으로 허용 가능한 항원보강제 또는 부형제를 추가적으로 포함하는 약학적 조성물.
  73. 의약으로서의 용도를 위한 제1항 내지 제66항 중 어느 한 항에 따른 지질 나노입자 또는 제70항 내지 제72항 중 어느 한 항에 따른 약학적 조성물.
  74. 제73항에 있어서, 의약은 이를 필요로 하는 대상체의 면역 반응을 치료적으로 또는 예방적으로 발생시키기 위한 것인, 지질 나노입자 또는 약학적 조성물.
  75. 제73항 또는 제74항에 있어서, 의약은 암 또는 종양 질병, 감염성 질병, 알레르기, 또는 자가면역 질환 또는 이에 관련된 장애의 예방 또는 치료를 위한 것인, 지질 나노입자 또는 약학적 조성물.
  76. 제73항 내지 제75항 중 어느 한 항에 있어서, 의약은 백신인, 지질 나노입자 또는 약학적 조성물.
  77. 제73항 내지 제76항 중 어느 한 항에 있어서, 의약은 종양, 인플루엔자 또는 광견병 백신인, 지질 나노입자 또는 약학적 조성물.
  78. 제73항 내지 제77항 중 어느 한 항에 있어서, 의약은 광견병 치료에 사용되는 광견병 백신인, 지질 나노입자 또는 약학적 조성물.
  79. 제73항 내지 제78항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체는 척추동물, 바람직하게는 포유동물인 것인, 지질 나노입자 또는 약학적 조성물.
  80. 제73항 내지 제79항 중 어느 한 항에 있어서, 의약은 비경구 투여를 위한 것이며, 비경구 투여는 주사를 포함하는 것인, 지질 나노입자 또는 약학적 조성물.
  81. 제73항 내지 제80항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체는 새, 바람직하게는 닭, 또는 포유동물, 바람직하게는, 염소, 소, 돼지, 개, 고양이, 당나귀, 원숭이, 유인원, 설치류, 예컨대, 마우스, 햄스터, 토끼 및, 특히, 인간을 포함하는 군으로부터 선택되는 포유동물인, 지질 나노입자 또는 약학적 조성물.
  82. 제1항 내지 제66항 중 어느 한 항에 따른 지질 나노입자 또는 제70항 내지 제72항 중 어느 한 항에 따른 약학적 조성물을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 이를 필요로 하는 대상체에서 면역 반응을 발생시키는 방법.
  83. 제1항 내지 제66항 중 어느 한 항에 따른 지질 나노입자 또는 제70항 내지 제72항 중 어느 한 항에 따른 약학적 조성물을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 이를 필요로 하는 대상체의 암 또는 종양 질병, 감염성 질병, 알레르기, 또는 자가면역 질환 또는 이에 관련된 장애의 예방 또는 치료 방법.
  84. 제1항 내지 제66항 중 어느 한 항에 있어서, 지질 나노입자는 47.4:10:40.9:1.7(양이온성 지질, DSPC, 콜레스테롤 및 PEG-지질)의 몰 비율(mol%)을 갖는 것인, 지질 나노입자.
  85. 제1항 내지 제66항 중 어느 한 항에 있어서, 다음을 포함하는 지질 나노입자:
    (i) (바람직하게는 서열번호 13853, 13854, 13855 및 13856으로 구성된 군으로부터 선택된) 인플루엔자 A/홍콩/4801/2014(H3N2)의 HA 단백질을 암호화하는 mRNA; 및/또는
    (ii) (바람직하게는 서열번호 13836, 13837, 13838, 13839, 13840, 13841, 13842, 13843, 및 13844로 구성된 군으로부터 선택된) 인플루엔자 A/캘리포니아/07/2009(H1N1)의 HA 단백질을 암호화하는 mRNA; 및/또는
    (iii) (바람직하게는 서열번호 28530, 28531 및 28532로 구성된 군으로부터 선택된) 인플루엔자 B/푸켓/3037/2013(EPI540671)의 HA 단백질을 암호화하는 mRNA; 및/또는
    (iv) (바람직하게는 서열번호 28524, 28525, 28526, 28527, 28528, 및 28529로 구성된 군으로부터 선택된) 인플루엔자 B/브리즈번/60/2008의 HA 단백질을 암호화하는 mRNA.
  86. 제1항 내지 제66항 중 어느 한 항에 있어서, 다음을 포함하는 지질 나노입자:
    (i) (바람직하게는 서열번호 26251, 26252, 26253 및 26254로 구성된 군으로부터 선택된) 인플루엔자 A/홍콩/4801/2014(H3N2)의 NA 단백질을 암호화하는 mRNA; 및/또는
    (ii) (바람직하게는 서열번호 26238, 26239, 26240, 26241, 26242, 및 26243으로 구성된 군으로부터 선택된) 인플루엔자 A/캘리포니아/7/2009(H1N1)pdm09의 NA 단백질을 암호화하는 mRNA; 및/또는
    (iii) (바람직하게는 서열번호 30455, 30456, 30457, 30458, 30459, 및 30460으로 구성된 군으로부터 선택된) 인플루엔자 B/브리즈번/60/2008의 NA 단백질을 암호화하는 mRNA.
  87. 제1항 내지 제66항 중 어느 한 항에 있어서, 다음을 포함하는 지질 나노입자:
    (i) (바람직하게는 서열번호 13848, 13849 및 13850으로 구성된 군으로부터 선택된) 인플루엔자 A/네덜란드/602/2009(H1N1)의 HA 단백질을 암호화하는 mRNA; 및/또는
    (ii) (바람직하게는 서열번호 13853, 13854, 13855 및 13856으로 구성된 군으로부터 선택된) 인플루엔자 A/홍콩/4801/2014(H3N2)의 HA 단백질을 암호화하는 mRNA; 및/또는
    (iii) (바람직하게는 서열번호 28524, 28525, 28526, 28527, 28528, 및 28529로 구성된 군으로부터 선택된) 인플루엔자 B/브리즈번/60/2008의 HA 단백질을 암호화하는 mRNA; 및/또는
    (iv) (바람직하게는 서열번호 13859 및 13860으로 구성된 군으로부터 선택된) 인플루엔자 A/베트남/1194/2004(H5N1)의 HA 단백질을 암호화하는 mRNA.
  88. 제1항 내지 제66항 중 어느 한 항에 있어서, 다음을 포함하는 지질 나노입자:
    (i) (바람직하게는 서열번호 13853, 13854, 13855 및 13856으로 구성된 군으로부터 선택된) 인플루엔자 A/홍콩/4801/2014(H3N2)의 HA 단백질을 암호화하는 mRNA; 및/또는
    (ii) (바람직하게는 서열번호 13836, 13837, 13838, 13839, 13840, 13841, 13842, 13843, 및 13844로 구성된 군으로부터 선택된) 인플루엔자 A/캘리포니아/07/2009(H1N1)의 HA 단백질을 암호화하는 mRNA; 및/또는
    (iii) (바람직하게는 서열번호 28530, 28531 및 28532로 구성된 군으로부터 선택된) 인플루엔자 B/푸켓/3037/2013(EPI540671)의 HA 단백질을 암호화하는 mRNA; 및/또는
    (iv) (바람직하게는 서열번호 28524, 28525, 28526, 28527, 28528, 및 28529로 구성된 군으로부터 선택된) 인플루엔자 B/브리즈번/60/2008의 HA 단백질을 암호화하는 mRNA; 및/또는
    (v) (바람직하게는 서열번호 26251, 26252, 26253 및 26254로 구성된 군으로부터 선택된) 인플루엔자 A/홍콩/4801/2014(H3N2)의 NA 단백질을 암호화하는 mRNA; 및/또는
    (vi) (바람직하게는 서열번호 26238, 26239, 26240, 26241, 26242 및 26243으로 구성된 군으로부터 선택된) 인플루엔자 A/캘리포니아/7/2009(H1N1)pdm09의 NA 단백질을 암호화하는 mRNA; 및/또는
    (vii) (바람직하게는 서열번호 30455, 30456, 30457, 30458, 30459, 및 30460으로 구성된 군으로부터 선택된) 인플루엔자 B/브리즈번/60/2008의 NA 단백질을 암호화하는 mRNA.
KR1020197014650A 2016-10-26 2017-10-26 지질 나노입자 mRNA 백신 KR20190093816A (ko)

Applications Claiming Priority (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EPPCT/EP2016/075843 2016-10-26
EP2016075843 2016-10-26
EPPCT/EP2016/075929 2016-10-27
EP2016075929 2016-10-27
EPPCT/EP2017/064066 2017-06-09
EP2017064066 2017-06-09
PCT/EP2017/077517 WO2018078053A1 (en) 2016-10-26 2017-10-26 Lipid nanoparticle mrna vaccines

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20190093816A true KR20190093816A (ko) 2019-08-26

Family

ID=60331575

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020197014650A KR20190093816A (ko) 2016-10-26 2017-10-26 지질 나노입자 mRNA 백신

Country Status (12)

Country Link
US (2) US20200163878A1 (ko)
EP (1) EP3532094A1 (ko)
JP (2) JP7289265B2 (ko)
KR (1) KR20190093816A (ko)
CN (1) CN110352071A (ko)
AU (2) AU2017350488B2 (ko)
BR (1) BR112019008481A2 (ko)
CA (1) CA3040337A1 (ko)
IL (2) IL301800A (ko)
MX (1) MX2019004913A (ko)
SG (1) SG11201903460QA (ko)
WO (1) WO2018078053A1 (ko)

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2022225368A1 (ko) 2021-04-22 2022-10-27 (주)인벤티지랩 지질 나노입자의 제조 방법 및 이의 제조 장치
KR20220145788A (ko) 2021-04-22 2022-10-31 (주)인벤티지랩 지질 나노입자의 제조 방법 및 이의 제조 장치
WO2023075527A1 (ko) * 2021-10-29 2023-05-04 주식회사 아이큐어비앤피 지질 나노입자 및 세포 투과성을 갖는 신규 펩타이드의 복합체
WO2024091037A1 (ko) * 2022-10-27 2024-05-02 에스티팜 주식회사 폐를 표적장기로 하는 생분해성 지질나노입자 약물 전달 제형 및 이의 활용
WO2024101618A1 (ko) * 2022-11-08 2024-05-16 주식회사 삼양홀딩스 양이온성 지질 및 이의 제조방법
WO2024106715A1 (ko) * 2022-11-16 2024-05-23 주식회사 삼양홀딩스 양이온성 지질 및 이의 제조방법

Families Citing this family (218)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BR112015018989B1 (pt) 2013-02-22 2023-11-14 Curevac Ag Combinação de vacina/inibidor da via de pd-1, inibidor da via de pd-1 e vacina de rna
MX369469B (es) 2013-08-21 2019-11-08 Curevac Ag Vacuna contra el virus respiratorio sincitial.
PT3134131T (pt) 2014-04-23 2022-03-24 Modernatx Inc Vacinas de ácidos nucleicos
CA2953341C (en) 2014-06-25 2023-01-24 Acuitas Therapeutics Inc. Lipids and lipid nanoparticle formulations for delivery of nucleic acids
ES2791152T3 (es) 2014-12-12 2020-11-03 Curevac Ag Moléculas de ácido nucleico artificiales para una expresión proteica mejorada
WO2016180430A1 (en) 2015-05-08 2016-11-17 Curevac Ag Method for producing rna
CN107873055B (zh) 2015-05-29 2021-09-17 库瑞瓦格房地产有限公司 包括至少一个切向流过滤步骤的产生和纯化rna的方法
WO2017004143A1 (en) 2015-06-29 2017-01-05 Acuitas Therapeutics Inc. Lipids and lipid nanoparticle formulations for delivery of nucleic acids
US11364292B2 (en) 2015-07-21 2022-06-21 Modernatx, Inc. CHIKV RNA vaccines
US11458205B2 (en) 2015-08-04 2022-10-04 Duke University Genetically encoded intrinsically disordered stealth polymers for delivery and methods of using same
SI3350157T1 (sl) 2015-09-17 2022-04-29 Modernatx, Inc. Sestave za doziranje terapevtskih sredstev v celice
EP3362576A1 (en) 2015-10-12 2018-08-22 CureVac AG Automated method for isolation, selection and/or detection of microorganisms or cells comprised in a solution
CA3002922A1 (en) 2015-10-22 2017-04-27 Modernatx, Inc. Human cytomegalovirus vaccine
MD3718565T2 (ro) 2015-10-22 2022-09-30 Modernatx Inc Vaccinuri împotriva virusului respirator
EP3364950A4 (en) 2015-10-22 2019-10-23 ModernaTX, Inc. VACCINES AGAINST TROPICAL DISEASES
KR20180094859A (ko) 2015-10-22 2018-08-24 모더나티엑스, 인크. 수두 대상포진 바이러스 (vzv)를 위한 핵산 백신
US20180289792A1 (en) 2015-10-22 2018-10-11 ModernaTX. Inc. Sexually transmitted disease vaccines
AU2016343803B2 (en) 2015-10-28 2021-04-29 Acuitas Therapeutics, Inc. Novel lipids and lipid nanoparticle formulations for delivery of nucleic acids
US11413346B2 (en) 2015-11-09 2022-08-16 Curevac Ag Rotavirus vaccines
EP3964200A1 (en) 2015-12-10 2022-03-09 ModernaTX, Inc. Compositions and methods for delivery of therapeutic agents
US11752213B2 (en) 2015-12-21 2023-09-12 Duke University Surfaces having reduced non-specific binding and antigenicity
EP3701963A1 (en) 2015-12-22 2020-09-02 CureVac AG Method for producing rna molecule compositions
WO2017109161A1 (en) 2015-12-23 2017-06-29 Curevac Ag Method of rna in vitro transcription using a buffer containing a dicarboxylic acid or tricarboxylic acid or a salt thereof
EP3416683A1 (en) 2016-02-17 2018-12-26 CureVac AG Zika virus vaccine
US11920174B2 (en) 2016-03-03 2024-03-05 CureVac SE RNA analysis by total hydrolysis and quantification of released nucleosides
US11467156B2 (en) 2016-06-01 2022-10-11 Duke University Nonfouling biosensors
KR20190029576A (ko) 2016-06-09 2019-03-20 큐어백 아게 핵산 카고용 하이브리드 담체
MA46584A (fr) 2016-10-21 2019-08-28 Modernatx Inc Vaccin contre le cytomégalovirus humain
WO2018089851A2 (en) 2016-11-11 2018-05-17 Modernatx, Inc. Influenza vaccine
WO2018096179A1 (en) 2016-11-28 2018-05-31 Curevac Ag Method for purifying rna
EP3808380A1 (en) 2016-12-08 2021-04-21 CureVac AG Rna for treatment or prophylaxis of a liver disease
US11542490B2 (en) 2016-12-08 2023-01-03 CureVac SE RNAs for wound healing
US11141476B2 (en) 2016-12-23 2021-10-12 Curevac Ag MERS coronavirus vaccine
EP3558354A1 (en) 2016-12-23 2019-10-30 CureVac AG Lassa virus vaccine
EP3558355A2 (en) 2016-12-23 2019-10-30 CureVac AG Henipavirus vaccine
WO2018132732A1 (en) 2017-01-12 2018-07-19 Duke University Genetically encoded lipid-polypeptide hybrid biomaterials that exhibit temperature triggered hierarchical self-assembly
EP3573649A4 (en) * 2017-01-27 2020-12-30 The Henry M. Jackson Foundation for the Advancement of Military Medicine, Inc. VACCINE COMPOSITIONS OF HERPESVIRUS ENVELOPE PROTEIN COMBINATIONS INTENDED TO INDUCE AN IMMUNE RESPONSE
ES2911186T3 (es) 2017-03-15 2022-05-18 Modernatx Inc Formas cristalinas de aminolípidos
WO2018170270A1 (en) 2017-03-15 2018-09-20 Modernatx, Inc. Varicella zoster virus (vzv) vaccine
US11969506B2 (en) 2017-03-15 2024-04-30 Modernatx, Inc. Lipid nanoparticle formulation
MA52262A (fr) 2017-03-15 2020-02-19 Modernatx Inc Vaccin à large spectre contre le virus de la grippe
US11752206B2 (en) * 2017-03-15 2023-09-12 Modernatx, Inc. Herpes simplex virus vaccine
MA47787A (fr) 2017-03-15 2020-01-22 Modernatx Inc Vaccin contre le virus respiratoire syncytial
US20200030432A1 (en) 2017-03-17 2020-01-30 Modernatx, Inc. Zoonotic disease rna vaccines
BR112019015244A2 (pt) 2017-03-24 2020-04-14 Curevac Ag ácidos nucleicos codificando proteínas associadas a crispr e usos dos mesmos
US20230241207A1 (en) * 2017-04-03 2023-08-03 Neon Therapeutics, Inc. Protein antigens and uses thereof
MA48047A (fr) 2017-04-05 2020-02-12 Modernatx Inc Réduction ou élimination de réponses immunitaires à des protéines thérapeutiques administrées par voie non intraveineuse, par exemple par voie sous-cutanée
US11357856B2 (en) 2017-04-13 2022-06-14 Acuitas Therapeutics, Inc. Lipids for delivery of active agents
US11820728B2 (en) 2017-04-28 2023-11-21 Acuitas Therapeutics, Inc. Carbonyl lipids and lipid nanoparticle formulations for delivery of nucleic acids
WO2018213320A1 (en) 2017-05-15 2018-11-22 Duke University Recombinant production of hybrid lipid-biopolymer materials that self-assemble and encapsulate agents
EP3630964A4 (en) 2017-05-31 2021-03-03 Ultragenyx Pharmaceutical Inc. THERAPEUTIC AGENTS FOR GLYCOGEN STORAGE DISEASE TYPE III
US11786607B2 (en) 2017-06-15 2023-10-17 Modernatx, Inc. RNA formulations
WO2019006374A1 (en) 2017-06-30 2019-01-03 Duke University ORDER AND DISORDER AS A DESIGN PRINCIPLE FOR STIMULI-SENSITIVE BIOPOLYMER NETWORKS
KR20200024905A (ko) 2017-07-04 2020-03-09 큐어백 아게 신규 핵산 분자
EP3664840A1 (en) * 2017-08-10 2020-06-17 Yisheng Biopharma (Singapore) Pte. Ltd. A composition for treating and/or preventing hepatitis b virus infection and the use thereof
US11639329B2 (en) 2017-08-16 2023-05-02 Acuitas Therapeutics, Inc. Lipids for use in lipid nanoparticle formulations
WO2019036028A1 (en) 2017-08-17 2019-02-21 Acuitas Therapeutics, Inc. LIPIDS FOR USE IN LIPID NANOPARTICULAR FORMULATIONS
WO2019036030A1 (en) 2017-08-17 2019-02-21 Acuitas Therapeutics, Inc. LIPIDS FOR USE IN LIPID NANOPARTICLE FORMULATIONS
CN111246854A (zh) 2017-08-17 2020-06-05 宾夕法尼亚大学理事会 编码单纯疱疹病毒糖蛋白的修饰mrna疫苗及其用途
CA3073018A1 (en) * 2017-08-17 2019-02-21 Acuitas Therapeutics, Inc. Lipids for use in lipid nanoparticle formulations
MA50751A (fr) * 2017-08-18 2020-06-24 Modernatx Inc Vaccins à base d'arnm efficaces
US11602557B2 (en) 2017-08-22 2023-03-14 Cure Vac SE Bunyavirales vaccine
US11744801B2 (en) 2017-08-31 2023-09-05 Modernatx, Inc. Methods of making lipid nanoparticles
US10653767B2 (en) 2017-09-14 2020-05-19 Modernatx, Inc. Zika virus MRNA vaccines
WO2019092153A1 (en) 2017-11-08 2019-05-16 Curevac Ag Rna sequence adaptation
EP3723796A1 (en) 2017-12-13 2020-10-21 CureVac AG Flavivirus vaccine
WO2019122371A1 (en) 2017-12-21 2019-06-27 Curevac Ag Linear double stranded dna coupled to a single support or a tag and methods for producing said linear double stranded dna
MA54676A (fr) 2018-01-29 2021-11-17 Modernatx Inc Vaccins à base d'arn contre le vrs
BR112020020933A2 (pt) * 2018-04-17 2021-04-06 Curevac Ag Moléculas de rna de rsv inovadoras e composições para vacinação
AU2019277361A1 (en) * 2018-05-30 2020-12-17 Translate Bio, Inc. Messenger RNA vaccines and uses thereof
EP3813874A1 (en) 2018-06-27 2021-05-05 CureVac AG Novel lassa virus rna molecules and compositions for vaccination
EP3814507A4 (en) * 2018-06-27 2022-07-06 Medicago Inc. INFLUENZA VIRUS HEMAGGLUTININ MUTANTS
EP3829622A4 (en) 2018-08-02 2022-05-11 Duke University DUAL AGONIST FUSION PROTEINS
US20210170005A1 (en) * 2018-08-15 2021-06-10 University Of Florida Research Foundation, Inc. Methods of sensitizing tumors to treatment with immune checkpoint inhibitors
WO2020051220A1 (en) 2018-09-04 2020-03-12 The Board of the Regents of the University of Texas System Compositions and methods for organ specific delivery of nucleic acids
EP3846822A4 (en) 2018-09-04 2022-07-06 The Board Of Regents Of The University Of Texas System COMPOSITIONS AND METHODS FOR ORGAN-SPECIFIC DELIVERY OF NUCLEIC ACIDS
JP7411258B2 (ja) * 2018-09-18 2024-01-11 ユニベルシテイト ゲント 治療用ナノ粒子およびその使用方法
FI3864163T3 (fi) 2018-10-09 2024-05-03 Univ British Columbia Koostumukset ja järjestelmät, joihin sisältyvät transfektiokompetentit vesikkelit, joissa ei ole orgaanisia liuottimia eikä pesuaineita, sekä niihin liittyvät menetelmät
JP2022505234A (ja) * 2018-10-18 2022-01-14 アクイタス セラピューティクス インコーポレイテッド 活性剤の脂質ナノ粒子送達のための脂質
KR20210081325A (ko) * 2018-10-19 2021-07-01 노우스콤 아게 경골어류 불변 사슬 암 백신
EP3879590A4 (en) 2018-11-08 2021-12-29 FUJIFILM Corporation Laminated piezoelectric element and electro-acoustic transducer
KR102077772B1 (ko) * 2018-11-29 2020-02-17 주식회사 바이오앱 광견병 예방용 백신 조성물 및 이의 제조 방법
ES2960692T3 (es) 2018-12-06 2024-03-06 Arcturus Therapeutics Inc Composiciones y métodos para el tratamiento de la deficiencia de ornitina transcarbamilasa
BR112021009422A2 (pt) 2018-12-21 2021-10-26 Curevac Ag Rna para vacinas contra malária
AU2020205717A1 (en) * 2019-01-11 2021-08-12 Acuitas Therapeutics, Inc. Lipids for lipid nanoparticle delivery of active agents
CA3125511A1 (en) 2019-02-08 2020-08-13 Curevac Ag Coding rna administered into the suprachoroidal space in the treatment of ophthalmic diseases
EP3927372A4 (en) * 2019-02-21 2023-01-25 Centivax, Inc. OPTIMIZED VACCINE COMPOSITIONS AND METHODS OF PRODUCTION
AU2020260280B2 (en) * 2019-04-15 2023-06-29 Global Life Sciences Solutions Canada Ulc Nonviral modification of t cell gene expression
CN110124019B (zh) * 2019-04-22 2022-09-23 海南医学院 细菌化肿瘤细胞疫苗及其制备方法
JP2022538797A (ja) * 2019-06-14 2022-09-06 ディーエヌエーライト セラピューティクス， インコーポレイテッド 生物学的送達ビヒクルのための組成物及び方法
WO2020254535A1 (en) 2019-06-18 2020-12-24 Curevac Ag Rotavirus mrna vaccine
US11512314B2 (en) 2019-07-12 2022-11-29 Duke University Amphiphilic polynucleotides
WO2021028439A1 (en) 2019-08-14 2021-02-18 Curevac Ag Rna combinations and compositions with decreased immunostimulatory properties
MX2022003269A (es) 2019-09-19 2022-07-04 Modernatx Inc Compuestos lipidicos de cola ramificada y composiciones para la administracion intracelular de agentes terapeuticos.
JP2022548320A (ja) 2019-09-23 2022-11-17 オメガ セラピューティクス， インコーポレイテッド アポリポタンパク質ｂ（ａｐｏｂ）遺伝子発現をモジュレートするための組成物および方法
US11987791B2 (en) 2019-09-23 2024-05-21 Omega Therapeutics, Inc. Compositions and methods for modulating hepatocyte nuclear factor 4-alpha (HNF4α) gene expression
US20230090515A1 (en) 2019-12-20 2023-03-23 Curevac Ag Lipid nanoparticles for delivery of nucleic acids
US11241493B2 (en) 2020-02-04 2022-02-08 Curevac Ag Coronavirus vaccine
US11576966B2 (en) 2020-02-04 2023-02-14 CureVac SE Coronavirus vaccine
CA3160511A1 (en) 2020-02-04 2021-08-12 Susanne RAUCH Coronavirus vaccine
BR112022015666A2 (pt) * 2020-02-14 2022-09-27 Etherna Immunotherapies Nv Vacinas intranasais de mrna
US11642407B2 (en) 2020-02-28 2023-05-09 Massachusetts Institute Of Technology Identification of variable influenza residues and uses thereof
CN113151312B (zh) * 2020-03-02 2022-12-09 中国科学院微生物研究所 新型冠状病毒SARS-CoV-2 mRNA疫苗及其制备方法和应用
JP2023517644A (ja) 2020-03-09 2023-04-26 アークトゥラス・セラピューティクス・インコーポレイテッド コロナウイルスワクチン組成物及び方法
AU2021234302A1 (en) 2020-03-11 2022-11-10 Omega Therapeutics, Inc. Compositions and methods for modulating forkhead box p3 (foxp3) gene expression
TW202204622A (zh) 2020-04-09 2022-02-01 大陸商蘇州艾博生物科技有限公司 針對冠狀病毒之核酸疫苗
EP4132478A1 (en) 2020-04-09 2023-02-15 Finncure Oy Mimetic nanoparticles for preventing the spreading and lowering the infection rate of novel coronaviruses
JP2023529522A (ja) 2020-04-09 2023-07-11 スージョウ・アボジェン・バイオサイエンシズ・カンパニー・リミテッド 脂質ナノ粒子組成物
GB202307565D0 (en) 2020-04-22 2023-07-05 BioNTech SE Coronavirus vaccine
EP4139331A1 (en) * 2020-04-22 2023-03-01 Medicago Inc. Suprastructure comprising modified influenza hemagglutinin with reduced interaction with sialic acid
BR112022024248A2 (pt) 2020-05-29 2023-10-10 CureVac SE Vacinas de combinação à base de ácido nucleico
JP2023530133A (ja) * 2020-06-19 2023-07-13 インターベット インターナショナル ベー． フェー． 遺伝子の特定の順序を有する核酸構築物を含むブタインフルエンザａウイルスワクチン
CN115697398A (zh) * 2020-06-19 2023-02-03 英特维特国际股份有限公司 包含两种不同rna复制子颗粒的甲型猪流感病毒疫苗
AU2021296914A1 (en) * 2020-06-26 2023-01-19 Carisma Therapeutics Inc. mRNA transfection of immune cells
US20220002716A1 (en) * 2020-07-02 2022-01-06 Life Technologies Corporation Trinucleotide cap analogs, preparation and uses thereof
CN116096702A (zh) 2020-07-16 2023-05-09 爱康泰生治疗公司 用于脂质纳米颗粒的阳离子脂质
EP4172194A1 (en) 2020-07-31 2023-05-03 CureVac SE Nucleic acid encoded antibody mixtures
CN114073762B (zh) * 2020-08-12 2023-07-21 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 一种含有Omp19和VirB8蛋白的布鲁氏菌病双组分疫苗
CN114073677B (zh) * 2020-08-20 2023-06-09 深圳深信生物科技有限公司 一种脂质纳米颗粒
US11406703B2 (en) 2020-08-25 2022-08-09 Modernatx, Inc. Human cytomegalovirus vaccine
CA3170743A1 (en) 2020-08-31 2022-03-03 Susanne RAUCH Multivalent nucleic acid based coronavirus vaccines
TW202233232A (zh) * 2020-11-06 2022-09-01 法商賽諾菲公司 遞送mRNA疫苗的脂質奈米顆粒
US20240041785A1 (en) * 2020-11-16 2024-02-08 BioNTech SE Compositions and methods for stabilization of lipid nanoparticle mrna vaccines
AU2021377746A1 (en) 2020-11-16 2023-06-08 BioNTech SE Pharmaceutical compositions comprising particles and mrna and methods for preparing and storing the same
CA3198742A1 (en) 2020-11-16 2022-05-19 Steffen Panzner Lnp compositions comprising rna and methods for preparing, storing and using the same
WO2022218503A1 (en) 2021-04-12 2022-10-20 BioNTech SE Lnp compositions comprising rna and methods for preparing, storing and using the same
CN117098541A (zh) 2020-11-25 2023-11-21 阿卡格拉医药公司 用于递送核酸的脂质纳米粒及相关使用方法
CN112480217B (zh) * 2020-11-30 2022-04-08 广州阿格纳生物医药制造有限公司 基于SARS-CoV-2的S抗原蛋白的疫苗和组合物
US20230015616A1 (en) * 2020-11-30 2023-01-19 Argorna Pharmaceuticals Ltd Coronavirus vaccines and uses thereof
MX2023007574A (es) 2020-12-22 2023-09-29 CureVac SE "vacuna de arn contra variantes de sars-cov-2.
WO2022137133A1 (en) 2020-12-22 2022-06-30 Curevac Ag Rna vaccine against sars-cov-2 variants
WO2022135993A2 (en) 2020-12-22 2022-06-30 Curevac Ag Pharmaceutical composition comprising lipid-based carriers encapsulating rna for multidose administration
CN112741078B (zh) * 2020-12-24 2022-03-25 山东省海洋科学研究院(青岛国家海洋科学研究中心) 一种大泷六线鱼精子生产性冷冻保存方法
WO2022150717A1 (en) * 2021-01-11 2022-07-14 Modernatx, Inc. Seasonal rna influenza virus vaccines
WO2022155195A1 (en) * 2021-01-12 2022-07-21 Peranteau William Ionizable lipid nanoparticles for in utero mrna delivery
CA3170747A1 (en) 2021-01-27 2022-08-04 Moritz THRAN Method of reducing the immunostimulatory properties of in vitro transcribed rna
CN113144186B (zh) * 2021-02-09 2023-09-29 中国医学科学院医学生物学研究所 一种水痘-带状疱疹疫苗组合物及其制备方法和应用
IL305644A (en) * 2021-03-05 2023-11-01 Modernatx Inc VLP enteroviral vaccines
EP4313938A1 (en) * 2021-03-24 2024-02-07 Modernatx, Inc. Branched tail lipid compounds and compositions for intracellular delivery of therapeutic agents
US20240181037A1 (en) 2021-03-26 2024-06-06 Glaxosmithkline Biologicals Sa Immunogenic compositions
EP4312988A2 (en) 2021-03-31 2024-02-07 CureVac SE Syringes containing pharmaceutical compositions comprising rna
EP4319803A1 (en) 2021-04-08 2024-02-14 Vaxthera SAS Coronavirus vaccine comprising a mosaic protein
CN115197079A (zh) * 2021-04-08 2022-10-18 厦门赛诺邦格生物科技股份有限公司 一种聚乙二醇化脂质及其修饰的脂质体、含该脂质体的药物组合物及其制剂和应用
CA3215103A1 (en) 2021-04-12 2022-10-20 Steffen Panzner Rna compositions comprising a buffer substance and methods for preparing, storing and using the same
AU2022258335A1 (en) * 2021-04-13 2023-11-23 Modernatx, Inc. Respiratory virus combination vaccines
US20240216289A1 (en) * 2021-04-30 2024-07-04 Trustees Of Tufts College Lipidoid nanoparticles for the treatment of diseases and disorders
EP4334446A1 (en) 2021-05-03 2024-03-13 CureVac SE Improved nucleic acid sequence for cell type specific expression
CN113354742A (zh) * 2021-05-10 2021-09-07 重庆市畜牧科学院 一种布鲁氏杆菌基因工程亚单位疫苗及其制备方法和应用
WO2022245888A1 (en) * 2021-05-19 2022-11-24 Modernatx, Inc. Seasonal flu rna vaccines and methods of use
WO2022244825A1 (ja) 2021-05-19 2022-11-24 第一三共株式会社 インフルエンザウイルス核酸脂質粒子ワクチン
CN114149337B (zh) 2021-07-07 2022-04-29 天津键凯科技有限公司 一种用于核酸递送的新型可电离脂质及其lnp组合物
WO2023283359A2 (en) 2021-07-07 2023-01-12 Omega Therapeutics, Inc. Compositions and methods for modulating secreted frizzled receptor protein 1 (sfrp1) gene expression
CN113264842B (zh) 2021-07-21 2022-03-01 苏州科锐迈德生物医药科技有限公司 一种脂质化合物及包含其的脂质载体、核酸脂质纳米粒组合物和药物制剂
CN115403761A (zh) 2021-07-23 2022-11-29 天津键凯科技有限公司 一种多元甘醇修饰的脂质化合物及其制备方法和应用
EP4377331A2 (en) 2021-07-30 2024-06-05 CureVac SE Mrnas for treatment or prophylaxis of liver diseases
CN113577258B (zh) * 2021-07-31 2024-04-16 山东兴瑞生物科技有限公司 一种双靶点mRNA疫苗及其制备方法
CN117940158A (zh) 2021-09-03 2024-04-26 库瑞瓦格欧洲公司 用于核酸递送的包含磷脂酰丝氨酸的新型脂质纳米颗粒
CN118043466A (zh) 2021-09-03 2024-05-14 葛兰素史克生物有限公司 自扩增信使核糖核酸中核苷酸碱基的取代
IL309505A (en) 2021-09-03 2024-02-01 CureVac SE Lipid nanoparticles for nucleic acid delivery
AU2022354253A1 (en) * 2021-09-28 2024-05-02 Seqirus Inc. Ionizable cationic compounds for messenger rna delivery
WO2023057596A1 (en) * 2021-10-06 2023-04-13 Leon-Nanodrugs Gmbh Method for preparing lipid nanoparticles
WO2023056912A1 (en) * 2021-10-08 2023-04-13 Suzhou Abogen Biosciences Co., Ltd. Nucleic acid vaccines for vzv
CN117440943A (zh) * 2021-10-15 2024-01-23 厦门赛诺邦格生物科技股份有限公司 含氮的阳离子脂质及其应用
KR20240090727A (ko) 2021-10-22 2024-06-21 세일 바이오메디슨스, 인크. Mrna 백신 조성물
WO2023073228A1 (en) 2021-10-29 2023-05-04 CureVac SE Improved circular rna for expressing therapeutic proteins
WO2023077170A1 (en) * 2021-11-01 2023-05-04 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding integrin beta-6 and methods of use thereof
CA3237139A1 (en) * 2021-11-05 2023-05-11 Sanofi Hybrid multivalent influenza vaccines comprising hemagglutinin and neuraminidase and methods of using the same
AU2022398450A1 (en) 2021-11-23 2024-06-06 Sail Biomedicines, Inc. A bacteria-derived lipid composition and use thereof
CN114099546A (zh) * 2021-12-06 2022-03-01 武汉汉密顿生物科技股份有限公司 一种基因修饰的人脐带间充质干细胞制剂在制备治疗糖尿病肾病药物中的应用
WO2023122080A1 (en) 2021-12-20 2023-06-29 Senda Biosciences, Inc. Compositions comprising mrna and lipid reconstructed plant messenger packs
CN114196556B (zh) * 2021-12-31 2023-08-01 重庆大学 一种高毒力蝗绿僵菌菌株及其构建方法
CN114957027B (zh) * 2022-01-13 2023-05-19 北京悦康科创医药科技股份有限公司 一种阳离子脂质化合物、包含其的组合物及用途
WO2023136689A1 (ko) * 2022-01-17 2023-07-20 에스티팜 주식회사 생분해성 에스터 결합을 포함하는 이온화 가능한 지질 및 이를 포함하는 지질나노입자
WO2023144193A1 (en) 2022-01-25 2023-08-03 CureVac SE Mrnas for treatment of hereditary tyrosinemia type i
WO2023147090A1 (en) 2022-01-27 2023-08-03 BioNTech SE Pharmaceutical compositions for delivery of herpes simplex virus antigens and related methods
WO2023144330A1 (en) 2022-01-28 2023-08-03 CureVac SE Nucleic acid encoded transcription factor inhibitors
CN116514671A (zh) * 2022-01-30 2023-08-01 康希诺生物股份公司 一种用于核酸递送的新型可电离脂质及其lnp组合物和疫苗
DE102022115653A1 (de) 2022-02-02 2023-08-03 Mslsolutions Gmbh Verfahren zur Medikament- und Impfstoffherstellung
WO2023148303A1 (de) 2022-02-02 2023-08-10 Mslsolutions Gmbh Verfahren zur medikament- und impfstoffherstellung
TW202342753A (zh) * 2022-02-09 2023-11-01 大陸商蘇州艾博生物科技有限公司 狂犬病核酸疫苗
WO2023154451A1 (en) 2022-02-10 2023-08-17 Christiana Care Gene Editing Institute, Inc. Methods for lipid nanoparticle delivery of crispr/cas system
CN114921481B (zh) * 2022-02-25 2024-01-30 上海赛伦生物技术股份有限公司 一种狂犬病病毒修饰性mRNA疫苗及其制备方法
WO2023165681A1 (en) 2022-03-01 2023-09-07 BioNTech SE Rna lipid nanoparticles (lnps) comprising a polyoxazoline and/or polyoxazine polymer
WO2023172547A1 (en) * 2022-03-11 2023-09-14 National Health Research Institutes Nucleic acid-lipid nanoparticle and method using the same
CN114848808B (zh) * 2022-03-24 2023-04-25 四川大学 基于阳离子脂多肽及细胞因子的免疫增强剂及制法、应用
WO2023193892A1 (en) 2022-04-05 2023-10-12 BioNTech SE Nucleic acid compositions comprising an inorganic polyphosphate and methods for preparing, storing and using the same
WO2023196914A1 (en) * 2022-04-08 2023-10-12 Modernatx, Inc. Influenza nucleic acid compositions and uses thereof
WO2023201270A2 (en) 2022-04-13 2023-10-19 Caribou Biosciences, Inc. Therapeutic applications of crispr type v systems
WO2023201432A1 (en) * 2022-04-20 2023-10-26 Sunshine Biopharma Inc. Composition for the inhibition of nrf2 and uses thereof in cancer therapy
WO2023230295A1 (en) 2022-05-25 2023-11-30 BioNTech SE Rna compositions for delivery of monkeypox antigens and related methods
WO2023227608A1 (en) 2022-05-25 2023-11-30 Glaxosmithkline Biologicals Sa Nucleic acid based vaccine encoding an escherichia coli fimh antigenic polypeptide
WO2023242817A2 (en) 2022-06-18 2023-12-21 Glaxosmithkline Biologicals Sa Recombinant rna molecules comprising untranslated regions or segments encoding spike protein from the omicron strain of severe acute respiratory coronavirus-2
WO2023250427A2 (en) * 2022-06-22 2023-12-28 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Formulations for modulating myc expression
CN114989182B (zh) * 2022-06-23 2023-06-23 尧唐(上海)生物科技有限公司 脂质化合物、包含其的组合物及应用
US11878055B1 (en) 2022-06-26 2024-01-23 BioNTech SE Coronavirus vaccine
WO2024011033A1 (en) 2022-07-07 2024-01-11 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Immunogens and methods for inducing an immune response
CN115094573B (zh) * 2022-07-18 2024-03-22 南通大学 一种抗菌纳米敷料及其制备方法
WO2024028325A1 (en) 2022-08-01 2024-02-08 BioNTech SE Nucleic acid compositions comprising amphiphilic oligo ethylene glycol (oeg)-conjugated compounds and methods of using such compounds and compositions
CN114989027B (zh) * 2022-08-03 2023-01-31 深圳市瑞吉生物科技有限公司 用于递送核酸的阳离子脂质化合物和组合物及用途
WO2024031051A1 (en) 2022-08-05 2024-02-08 Life Technologies Corporation Lipids for nucleic acid delivery
CN116769786A (zh) * 2022-09-07 2023-09-19 贵州大学 飞蝗气味结合蛋白LmOBP11基因及其编码蛋白与应用
WO2024054882A1 (en) * 2022-09-09 2024-03-14 Spark Therapeutics, Inc. Enhancing non-viral dna delivery and expression
WO2024063789A1 (en) 2022-09-23 2024-03-28 BioNTech SE Compositions for delivery of malaria antigens and related methods
WO2024063788A1 (en) 2022-09-23 2024-03-28 BioNTech SE Compositions for delivery of malaria antigens and related methods
WO2024064931A1 (en) 2022-09-23 2024-03-28 BioNTech SE Compositions for delivery of liver stage antigens and related methods
WO2024064934A1 (en) 2022-09-23 2024-03-28 BioNTech SE Compositions for delivery of plasmodium csp antigens and related methods
WO2024068545A1 (en) 2022-09-26 2024-04-04 Glaxosmithkline Biologicals Sa Influenza virus vaccines
WO2024089229A1 (en) 2022-10-28 2024-05-02 CureVac SE Improved formulations comprising lipid-based carriers encapsulating rna
WO2024089638A1 (en) 2022-10-28 2024-05-02 Glaxosmithkline Biologicals Sa Nucleic acid based vaccine
WO2024102434A1 (en) 2022-11-10 2024-05-16 Senda Biosciences, Inc. Rna compositions comprising lipid nanoparticles or lipid reconstructed natural messenger packs
WO2024119098A1 (en) * 2022-12-02 2024-06-06 Prime Medicine, Inc. Lipid nanoparticle (lnp) delivery systems and formulations
WO2024133160A1 (en) 2022-12-19 2024-06-27 Glaxosmithkline Biologicals Sa Hepatitis b compositions
WO2024131717A1 (zh) * 2022-12-21 2024-06-27 南京吉迈生物技术有限公司 一种阳离子脂质材料的制备及应用
WO2024133635A1 (en) 2022-12-23 2024-06-27 Biontech Delivery Technologies Gmbh Composition
CN116785424B (zh) * 2023-08-17 2023-11-03 山东兴瑞生物科技有限公司 一种mRNA多价流感疫苗及其制备方法
CN117511969B (zh) * 2024-01-04 2024-03-19 华南农业大学 一种mRNA、制备方法、用途和疫苗
GB202404607D0 (en) 2024-03-29 2024-05-15 Glaxosmithkline Biologicals Sa RNA formulation
CN118085043A (zh) * 2024-04-17 2024-05-28 成都康华生物制品股份有限公司 结核分枝杆菌多免疫原抗原、编码其的多核苷酸、应用

Family Cites Families (38)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5821332A (en) 1993-11-03 1998-10-13 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Receptor on the surface of activated CD4+ T-cells: ACT-4
US5759546A (en) 1994-02-04 1998-06-02 Weinberg; Andrew D. Treatment of CD4 T-cell mediated conditions
US6242566B1 (en) 1994-02-10 2001-06-05 Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Ligand (ACT-4-L) to a receptor on the surface of activated CD4+ T-cells
DE69923840T2 (de) 1999-09-09 2006-04-06 Curevac Gmbh Transfer von mRNAs unter Verwendung von polykationischen Verbindungen
DE50214200D1 (de) 2001-06-05 2010-03-25 Curevac Gmbh Stabilisierte Tumorantigen-mRNA mit erhöhtem G/C-Gehalt
US7074596B2 (en) 2002-03-25 2006-07-11 Board Of Supervisors Of Louisiana State University And Agricultural And Mechanical College Synthesis and use of anti-reverse mRNA cap analogues
EP1912679A4 (en) * 2005-06-15 2009-07-29 Massachusetts Inst Technology AMINOUS LIPIDS AND ITS USES
CA2659301A1 (en) 2006-07-28 2008-02-07 Applera Corporation Dinucleotide mrna cap analogs
JP2010507361A (ja) 2006-07-31 2010-03-11 キュアバック ゲーエムベーハー 具体的には免疫刺激剤／アジュバントとしての、一般式（Ｉ）：ＧｌＸｍＧｎ、または一般式（ＩＩ）：ＣｌＸｍＣｎで表される核酸
DE102006061015A1 (de) 2006-12-22 2008-06-26 Curevac Gmbh Verfahren zur Reinigung von RNA im präparativen Maßstab mittels HPLC
DE102007001370A1 (de) 2007-01-09 2008-07-10 Curevac Gmbh RNA-kodierte Antikörper
CN104072561B (zh) 2007-06-19 2017-12-22 路易斯安那州州立大学及农业机械学院管理委员会 信使rna帽的抗‑反向硫代磷酸类似物的合成和用途
US9226959B2 (en) 2008-01-31 2016-01-05 Curevac Ag Nucleic acids comprising formula (NuGlXmGnNv)a and derivatives thereof as immunostimulating agent/adjuvant
PL215513B1 (pl) 2008-06-06 2013-12-31 Univ Warszawski Nowe boranofosforanowe analogi dinukleotydów, ich zastosowanie, czasteczka RNA, sposób otrzymywania RNA oraz sposób otrzymywania peptydów lub bialka
WO2010037408A1 (en) 2008-09-30 2010-04-08 Curevac Gmbh Composition comprising a complexed (m)rna and a naked mrna for providing or enhancing an immunostimulatory response in a mammal and uses thereof
EP2281579A1 (en) 2009-08-05 2011-02-09 BioNTech AG Vaccine composition comprising 5'-Cap modified RNA
CN107028886A (zh) 2009-11-04 2017-08-11 不列颠哥伦比亚大学 含有核酸的脂质粒子及相关的方法
US9254327B2 (en) * 2010-05-10 2016-02-09 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for delivery of active agents
WO2012016184A2 (en) 2010-07-30 2012-02-02 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for delivery of active agents
WO2012019630A1 (en) * 2010-08-13 2012-02-16 Curevac Gmbh Nucleic acid comprising or coding for a histone stem-loop and a poly(a) sequence or a polyadenylation signal for increasing the expression of an encoded protein
US9029315B2 (en) 2010-11-11 2015-05-12 The University Of Hong Kong Soluble PD-1 variants, fusion constructs, and uses thereof
WO2012116715A1 (en) 2011-03-02 2012-09-07 Curevac Gmbh Vaccination in newborns and infants
WO2012116714A1 (en) 2011-03-02 2012-09-07 Curevac Gmbh Vaccination in elderly patients
US8969545B2 (en) 2011-10-18 2015-03-03 Life Technologies Corporation Alkynyl-derivatized cap analogs, preparation and uses thereof
US20140308304A1 (en) * 2011-12-07 2014-10-16 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipids for the delivery of active agents
WO2013143555A1 (en) * 2012-03-26 2013-10-03 Biontech Ag Rna formulation for immunotherapy
MX358706B (es) 2012-03-27 2018-08-31 Curevac Ag Moleculas de acido nucleico artificiales que comprenden un top 5´utr.
CA2884870C (en) * 2012-08-13 2022-03-29 Massachusetts Institute Of Technology Amine-containing lipidoids and uses thereof
BR112015018989B1 (pt) 2013-02-22 2023-11-14 Curevac Ag Combinação de vacina/inibidor da via de pd-1, inibidor da via de pd-1 e vacina de rna
BR112016001192A2 (pt) 2013-08-21 2017-08-29 Curevac Ag Vacina contra a raiva
PT3134131T (pt) * 2014-04-23 2022-03-24 Modernatx Inc Vacinas de ácidos nucleicos
CA2953341C (en) * 2014-06-25 2023-01-24 Acuitas Therapeutics Inc. Lipids and lipid nanoparticle formulations for delivery of nucleic acids
EP3233113A1 (en) 2014-12-16 2017-10-25 CureVac AG Ebolavirus and marburgvirus vaccines
US20180303925A1 (en) 2015-04-27 2018-10-25 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Nucleoside-Modified RNA For Inducing an Adaptive Immune Response
WO2016180430A1 (en) 2015-05-08 2016-11-17 Curevac Ag Method for producing rna
WO2017004143A1 (en) 2015-06-29 2017-01-05 Acuitas Therapeutics Inc. Lipids and lipid nanoparticle formulations for delivery of nucleic acids
SI3350157T1 (sl) * 2015-09-17 2022-04-29 Modernatx, Inc. Sestave za doziranje terapevtskih sredstev v celice
AU2016343803B2 (en) 2015-10-28 2021-04-29 Acuitas Therapeutics, Inc. Novel lipids and lipid nanoparticle formulations for delivery of nucleic acids

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2022225368A1 (ko) 2021-04-22 2022-10-27 (주)인벤티지랩 지질 나노입자의 제조 방법 및 이의 제조 장치
KR20220145788A (ko) 2021-04-22 2022-10-31 (주)인벤티지랩 지질 나노입자의 제조 방법 및 이의 제조 장치
WO2023075527A1 (ko) * 2021-10-29 2023-05-04 주식회사 아이큐어비앤피 지질 나노입자 및 세포 투과성을 갖는 신규 펩타이드의 복합체
WO2024091037A1 (ko) * 2022-10-27 2024-05-02 에스티팜 주식회사 폐를 표적장기로 하는 생분해성 지질나노입자 약물 전달 제형 및 이의 활용
WO2024101618A1 (ko) * 2022-11-08 2024-05-16 주식회사 삼양홀딩스 양이온성 지질 및 이의 제조방법
WO2024106715A1 (ko) * 2022-11-16 2024-05-23 주식회사 삼양홀딩스 양이온성 지질 및 이의 제조방법

Also Published As

Publication number Publication date
AU2017350488A1 (en) 2019-05-02
MX2019004913A (es) 2019-09-16
AU2022235588A1 (en) 2023-03-02
WO2018078053A1 (en) 2018-05-03
IL266194B2 (en) 2023-09-01
IL301800A (en) 2023-05-01
SG11201903460QA (en) 2019-05-30
JP2020504764A (ja) 2020-02-13
US20200163878A1 (en) 2020-05-28
JP2023109965A (ja) 2023-08-08
IL266194B1 (en) 2023-05-01
AU2017350488B2 (en) 2022-06-23
IL266194A (en) 2019-06-30
CN110352071A (zh) 2019-10-18
BR112019008481A2 (pt) 2020-03-03
EP3532094A1 (en) 2019-09-04
JP7289265B2 (ja) 2023-06-09
US20210251898A1 (en) 2021-08-19
CA3040337A1 (en) 2018-05-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2017350488B2 (en) Lipid nanoparticle mRNA vaccines
US20230210965A1 (en) PRIME-BOOST REGIMENS INVOLVING ADMINISTRATION OF AT LEAST ONE mRNA CONSTRUCT
US20200085943A1 (en) Pharmaceutical composition comprising a polymeric carrier cargo complex and at least one protein or peptide antigen
US20190008954A1 (en) Negatively charged nucleic acid comprising complexes for immunostimulation
US20220218622A1 (en) Ionizable lipids and methods of manufacture and use thereof
EP2809354B1 (en) Negatively charged nucleic acid comprising complexes for immunostimulation
EA041756B1 (ru) ВАКЦИНЫ НА ОСНОВЕ мРНК В ЛИПИДНЫХ НАНОЧАСТИЦАХ
CN116917266A (zh) 可离子化脂质及其制造和使用方法

Legal Events

Date Code Title Description
AMND Amendment
AMND Amendment
AMND Amendment
E902 Notification of reason for refusal
AMND Amendment
E601 Decision to refuse application
AMND Amendment
X601 Decision of rejection after re-examination