BR112021009422A2

BR112021009422A2 - Rna para vacinas contra malária

Info

Publication number: BR112021009422A2
Application number: BR112021009422-9A
Authority: BR
Inventors: Kim Ellen SCHWENDT; Benjamin Petsch; Nicole Roth
Original assignee: Curevac Ag
Priority date: 2018-12-21
Filing date: 2019-12-20
Publication date: 2021-10-26
Also published as: US20220040281A1; WO2020128031A2; CN113453707A; AU2019410737A1; CA3118034A1; EP3897702A2; WO2020128031A3

Abstract

rna para vacinas contra malária. a presente invenção refere-se a um rna codificante para uma vacina contra malária. o rna codificante compreende pelo menos uma região não transladada heteróloga (utr), de preferência uma 3-utr e/ou uma 5-utr, e uma região codificadora codificando pelo menos um peptídio ou proteína antigênica derivada de um parasita da malária, em particular om uma proteína antigênica derivada da proteína circunsporozoíta (csp) de um parasita da malária (por exemplo, plasmoidum falciparum). a presente invenção também é dirigida a compostos e vacinas compreendendo o referido rna codificante associado a um carreador polimérico, uma proteína ou peptídio policatiônico, ou uma nanopartícula lipídica (lnp). ainda, a invenção refere-se a um kit, particularmente um kit de partes compreendendo o rna codificante, ou a composição, ou a vacina. a invenção também é dirigida a um método para o tratamento ou a prevenção de malária, e ao primeiro e segundo usos médicos do rna codificante, da composição, da vacina, e do kit.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "RNA PARA VACINAS CONTRA MALÁRIA". Introdução

[0001] A presente invenção refere-se a um RNA codificante para uma vacina contra malária. O RNA codificante compreende pelo me- nos uma região não transladada heteróloga (UTR), de preferência uma 3'-UTR e/ou uma 5"-UTR, e uma região codificadora codificando pelo menos um peptídio ou proteína antigênica derivada de um parasita da malária, em particular pelo menos proteína antigênica derivada da pro- teína circunspozoroíta (CSP) de um parasita da malária (por exemplo, Plasmodium falciparum). A presente invenção também se refere a composições e vacinas compreendendo o referido RNA codificante as- sociado a um carreador polimérico, uma proteína ou peptídio policatiô- nico, ou uma nanopartícula lipídica (LNP). Ainda, a invenção refere-se a um kit, particularmente um kit de partes compreendendo o RNA codi- ficante, ou a composição, ou a vacina. A invenção também se refere a um método de tratamento ou prevenção da malária, e ao primeiro e segundo usos médicos do RNA codificante, da composição, da vacina, e do kit.

[0002] As infecções por malária causam cerca de 200 milhões de casos clínicos, e cerca de 500.000 a 600.000 mortes por ano.

[0003] Malária é uma doença infecciosa transportada por mosqui- tos, causada por parasitas protozoários do gênero Plasmodium. Os mosquitos Anopheles transmitem malária, e eles podem ter sido infec- tados pelo sangue de uma refeição anterior tirado de uma pessoa in- fectada. Quando um mosquito pica uma pessoa infectada, uma peque- na quantidade de sangue é ingerida e contém parasitas da malária. Existem quatro tipos principais de parasitas da malária que infectam os seres humanos: Plasmodium falciparum, Plasmodium vivax, Plasmodi- um malariae, e Plasmodium ovale. Destes, Falciparum Malaria é o tipo 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12283/12614 mais letal.

[0004] Muitos parasitas da malária são agora imunes às drogas mais comuns usadas para tratamento da doença. De acordo com a ini- ciativa da Agenda de Pesquisa para a Erradicação da Malária ("Mala- ria Eradication Research Agenda"), a erradição da malária só será possível através de uma vacinação eficaz. No entanto, o candidato à vacina contra malária mais avançado, RTS,S, apresentou resultados modestos em termos de extensão e duração da proteção durante en- saios clínicos fase 3 (RTS,S Clinical Trials Partnership, 2015). À RTS,S contém uma partícula semelhante a vírus formulada que abran- ge os domínios central e carboxil-terminal da proteína circunspozoroíta (CSP) fundida a um antígeno de superfície do vírus da hepatite B. À RTS,S protege aproximadamente 30% a 50% das crianças contra a doença clínica por um período de tempo limitado. Diversos estudos já motraram que a RTS,S induz respostas de anticorpos protetores e res- postas de células T CD4+, mas apenas respostas de células T CD8+ desprezíveis. No entanto, como as células T CD8+ são um importante mecanismo imunológico protetor contra infecções intracelulares causa- das por parasitas da malária, uma vacina contra malária eficaz deve induzir respostas de células T CD8+ fortes. A RTS,S foi ainda desen- volvida com o objetico de aumentar a eficácia vacinal gerando uma vacina mais imunogênica de partículas à base de CSP (esta vacina tipo RTS,S de próxima geração é denominada R21) (Collins, Katharine A., et al. "Enhancing protective immunity to malaria with a highly immu- nogenic virus-like particle vaccine." Scientific reports 7 (2017): 46621). O principal aprimoramento é que, ao contrário da RTS,S, as partículas de R21 são formadas a partir uma única proteína de fusão de CSP- antígeno de superfície da hepatite B (HBsAg), e isto resulta em uma vacina composta de uma proporção muito mais alta de CSP do que na RTS,S. Estudos pré-clínicos requeriam adjuvantes (Abisco-100 e Ma- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12284/12614 trix-M) ou vetores virais à base de TRAP para induzir respostas imuno- lógicas efetivas e protetoras, especialmente para a indução de respos- tas de células T CD8+ CSP-específicas. Os adjuvantes geralmente in- duzem reações nos tecidos ou outros efeitos colaterais indesejados. À avaliação de Fase | da primeira administração em humanos do novo candiato à vacina anti-esporozoíta da malária, R21 no adjuvante ma- trix-M, em voluntários do Reino Unido e Burkinabe mostra imunogeni- cidade equiparável à RTS,S/ASO01B, mesmo quando administrada em uma dose cinco vezes mais baixa de 10 ug nas populações inglesa e africana.

[0005] Por conseguinte, o uso de uma CSP de comprimento mais integral como antígeno deve induzir respostas humorais e celulares mais amplas dos anticorpos em relação à vacina de RTS,S truncada. Além disso, uma CSP de comprimento mais integral pode oferecer epí- topos de células T adicionais, levando à imunidade celular aumentada, o que poderia aumentar potencialmente a proteção contra malária. Além disso, anticorpos contra uma porção da região N-terminal incluin- do R1 apresentaram risco reduzido de doenças (Bongfen, Silayuv E., et al. "The N-terminal domain of Plasmodium falciparum circumspozoroite protein — represents a target of protective immunity." Vaccine 27.2 (2009): 328-335). No entanto, a produção de uma vacina contra malá- ria que é baseada em uma CSP de comprimento mais integral não é viável com as atuais tecnologias de vacina do estado da técnica (por exemplo, vacinas à base de proteínas).

[0006] Os problemas reportados na produção da proteína CSP de comprimento integral podem ser devidos a propriedades únicas do pa- rasita P. falciparum, que incluem um genoma extremamente rico em A/T com muitas repetições de lisina e de arginina, e proteínas que con- têm múltiplas ligações dissulfeto. A expressão de proteínas da malária em sistemas bacterianos, tal como E.coli, geralmente resulta em ex- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12285/12614 pressão insolúvel que requer purificação a partir de corpos de inclusão e etapas para reenrolar a proteína. Noe et al desenvolveram um candi- dato à vacina à base de CSP recombinante de comprimento integral (rCSP) contra malária causada pelo P. falciparum adequada para pro- dução segundo as Boas Práticas de Produção (CGMP) em vigor, utili- zando uma nova plataforma de expressão de Pseudomonas de alto rendimento (Noe, Amy R,, et al. "A full-length Plasmodium falciparum recombinant circumspozoroite protein expressed by Pseudomonas fluo- rescens platform as a malaria vaccine candidate." PloS one 9.9 (2014): e107764). A rCSP, quando formulada com vários adjuvantes, induziu respostas dos anticorpos antígeno-específicas), assim como respostas de células T CD4+ e conferiu proteção em camundongos. Além disso, regimes de primeira dose/dose de reforço heterólogas com rCSP adju- vantada e uma CSP com um vetor de adenovírus tipo 35 (Ad35CS) apresentaram melhoras modestas em provocar respostas de células T CSP-específicas e proteção contra malária. Adjuvantes geralmente in- duzem reações dos tecidos ou outros efeitos colaterais indesejados.

[0007] Resumindo o acima exposto, o fornecimento de uma vacina eficaz contra malária continua sendo uma necessidade médica não sa- tisfeita de suma importância para a saúde global.

[0008] Uma vacina eficaz contra malária não só deve induzir res- postas imunológicas humorais fortes, mas também devem induzir re- postas de células T CD8+. Portanto, uma vacina eficaz contra malária deve, de forma ideal, apresentar uma CSP de comprimento mais inte- gral para cobrir também os epítopos de células T na região N-terminal para uma forte indução de uma resposta de células T CD8+. Tal vacina contra malária deve, de forma ideal, ser produzida de maneira eficien- te, confiável, e escalável para garantir o abastecimento global. Além disso, uma nova vacina deve permitir uma produção de baixo custo. Além disso, a vacina contra malária deve ser bem tolerada sem possí- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12286/12614 veis efeitos colaterais e de preferência sem o uso de adjuvantes.

[0009] Os objetos descritos acima são resolvidos pela matéria rei- vindicada, isto é, inter alia, pelo fornecimento de um RNA codifica para uma vacina contra malária.

[0010] Notavelmente, uma vacina contra malária à base de RNA apresenta algumas vantagens superiores em relação, por exemplo, a vacinas à base de DNA. Como geralmente se sabe na literatura, a transfecção de DNA pode levar a problemas graves. Por exemplo, a aplicação de DNA apresenta o risco de integração no genoma do hos- pedeiro que pode influenciar a expressão dos genes do hospedeiro, ou pode desencadear a expressão de um oncogene via, por exemplo, a destruição de um gene supressor de tumor. Além disso, uma vacina de DNA teria que atravessas diversas barreiras membranares para chegar ao núcleo, ao passo que uma vacina à base de RNA não teria que atravessar a barreira até o núcleo e é transladada diretamente no cito- plasma.

[0011] Vantajosamente, o RNA pode ser produzido em grande es- cala, e possibilita a produção de uma vacina contra malária à base de RNA codificando, por exemplo, uma CSP de comprimento mais inte- gral.

[0012] Ainda, seria desejável que tal composição ou vacina à base de RNA tivesse pelo menos algumas das seguintes características vantajosas: — Translação melhorada dos construtos de RNA codificante no sítio de injeção (por exemplo, músculo); — Indução muito eficiente de respostas imunológicas antí- geno-específicas contra a proteína CSP codificada em dosagens e po- sologias muito baixas; — Adequabilidade para imunização materna; — Adequabilidade para vacinação de crianças e/ou recém- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12287/12614 nascidos; — Adequabilidade para administração intramuscular; — Indução de resposta imunológica humoral específica e funcional contra malária (por exemplo, CSP de um parasita da malá- ria); — Indução de respostas de células T celulares amplas e funcionais contra malária (por exemplo, CSP de um parasita da malá- ria); — Indução de memória de células B específicas contra ma- lária (por exemplo, CSP de um parasita da malária); — Início rápido da proteção imunológica contra malária (por exemplo, CSP de um parasita da malária); — Longevidade das respostas imunológicas induzidas con- tra malária (por exemplo, CSP de um parasita da malária); — Sem indução excessiva de resposta de citocinas ou qui- miocinas sistêmicas depois da aplicação da vacina contra malária; o que poderia levar a uma reatogenicidade elevada indesejada mediante vacinação; — Boa tolerabilidade, sem efeitos colaterais, sem toxicidade da vacina contra malária; — Sem aumento da infecção por malária devido à vacina- ção; — Características de estabilidade vantajosas da vacina de RNA contra malária; — Velocidade, adaptabilidade, simplicidade e escalabilida- de da produção de vacinas contra malária.

- Esquema de vacinação vantajoso que requer apenas uma ou duas vacinações para proteção suficiente.

'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12288/12614

Definições

[0013] Para fins de clareza e legibilidade, oferecemos as seguintes definições. Qualquer atributo técnico mencionado para essas defini- ções pode ser lido em toda e qualquer modalidade da invenção. Defi- nições e explicações adicionais podem estar especificamente apresen- tadas no contexto dessas modalidades.

[0014] Percentagem no contexto de números deve ser interpretada em relação ao número total dos respectivos itens. Em outros itens, e menos que indicado em contrário pelo contexto, percentagem deve ser entendida como percentagem em peso (% em peso).

[0015] Resposta imunológica adaptativa: O termo "respostas imu- nológicas adaptativa" conforme usado neste pedido será reconhecido e entendido pelo especialista na técnica, e, exemplo, destina-se a indicar uma resposta antígeno-específica do sistema imunológico (do sistema imunológico adaptativo). A especificidade para antígenos permite a geração de respostas que são adaptadas para patógenos específicos ou células infectadas por patógenos. A capacidade de instalar estas respostas adaptadas normalmente é mantida no corpo por "células de memória" (células B). No contexto da invenção, o antígeno é fornecido pela sequência codificadora de RNA codificando pelo menos um peptí- dio ou proteína antigênica (por exemplo, CSP).

[0016] Antígeno: O termo "antígeno" conforme usado neste pedido será reconhecido e entendido pelo especialista na técnica, e, por exemplo, destina-se a indicar uma substância que pode ser reconheci- da pelo sistema imunológico, de preferência pelo sistema imunológico adaptativo, e é capaz de desencadear uma resposta imunológica antí- geno-específica, por exemplo, pela formação de anticorpos e/ou célu- las T antígeno-específicas como parte de uma resposta imunológica adaptativa. Tipicamente, um antígeno pode ser ou pode compreender um peptídio ou proteína que pode ser apresentada pela MHC a células 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12289/12614

T. Também fragmentos, variantes e derivados de peptídios ou proteni- nas derivadas de, por exemplo, CSP compreendendo pelo menos um epítopo são entendidos como antígenos no contexto da invenção. No contexto da presente invenção, um antígeno pode ser o produto de translação de um RNA codificante apresentado como especificado nes- te pedido.

[0017] Peptídio ou proteína antigênica: O termo "peptídio ou prote- ína antigênica" ou "peptídio ou proteína imunogênica" serão reconheci- dos e entendidos pelo especialista na técnica, e, por exemplo, desti- nam-se a indicar um peptídio, proteína (ou poliproteína) derivada de uma proteína/poliproteína (antigênica ou imunogênica) que estimula a resposta imunológica adaptativa do corpo para fornecer uma resposta imunológica adaptativa. Portanto, um peptídio ou proteína antigêni- ca/imunogênica compreende pelo menos um epítopo (definido neste pedido) ou antígeno (definido neste pedido) da proteína da qual ele de- riva (por exemplo, proteína CSP de um parasita da malária).

[0018] Catiônico: A menos que nitidamente especificado em con- trário pelo contexto, o termo "catiônico" significa que a respectiva es- trutura conté uma carga positiva, seja de forma permanente ou não permanente, porém em resposta a determinadas condições tal como pH. Assim, o termo "catiônico" cobre tanto "permanentemente catiôni- co" quanto "cationizável".

[0019] Cationizável: O termo "cationizável" conforme usado neste pedido significa que um composto, ou grupo ou átomo, é positivamente carregado em um pH mais baixo e não carregado em um pH mais alto do seu ambiente. Também em ambientes não aquosos onde não é possível determinar o valor do pH, um composto, grupo ou átomo cati- onizável é positivamente carregado em uma alta concentração de íons de hidrogênio e não carregado em uma baixa concentração ou ativida- de de íons de hidrogênio. Isto depende das propriedades individuais do 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12290/12614 composto cationizável ou policationizável, em particular do pKa do respectivo grupo ou átomo cationizável, em cujo pH ou concentração de íons de hidrogênio ele é carregado ou não carregado. Em ambien- tes aquosos diluídos, a fração de compostos, grupos ou átomos catio- nizáveis contendo uma carga positiva pode ser estimado pela chamada equação de Henderson-Hasselbalch que é bastante conhecida pelo especialista na técnica. Por exemplo, em algumas modalidades, se um composto ou porção for cationizável, é preferível que ele seja positi- vamente carregado em um valor de pH de cerca de 1 a 9, de preferên- cia 4 a 9, 5a 8 ou ainda 6 a 8, mais preferivelmente um valor de pH abaixo de 9, ou abaixo de 8, abaixo de 7, mais preferivelmente em va- lores de pH fisiológico, por exemplo, cerca de 7.3 a 7.4, i.e., em condi- ções fisiológicas, particularmente em condições salinas fisiológicas da célula in vivo. Em outras modalidades, é preferível que o composto ou porção cationizável seja predominantemente neutra em valores de pH fisiológico, por exemplo, cerca de 7.0-7.4, mas que fique positivamente carregada em valores de pH mais baixos. Em algumas modalidades, a faixa de pKa preferida do composto ou porção cationizável varia de cerca de 5 a cerca de 7.

[0020] Sequência codificadora/região codificadora: Os termos "se- quência codificadora" ou "região codificadora" e a abreviação "cds" cor- respondente serão reconhecidos e entendidos pelo especialista na técni- ca, e, por exemplo, destinam-se a indicar uma sequência de diversos tri- pletos de nucleotídeos que podem transladados para um peptídio ou pro- teína. Uma sequência codificadora no contexto da presente invenção é de preferência uma sequência de RNA, consistindo em um número de nucle- otídeos que pode ser dividido por três, que começa com um códon de iní- cio e que de preferência termina com um códon de terminação.

[0021] Composto: Conforme usado neste pedido, um "composto" significa uma substância química, que é um material consistindo em 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12291/12614 moléculas tendo essencialmente a mesma estrutura química e as mesmas propriedades. Para um composto molecular pequeno, as mo- léculas são tipicamente idênticas em termos de sua composição atô- mica e configuração estrutural. Para um composto macromolecular ou polimérico, as moléculas de um composto são bastante similares, mas nem todas elas são necessariamente idênicas. Por exemplo, um seg- mento de um polímero que é designado como consistindo em 50 uni- dades monoméricas também pode conter moléculas individuais com, por exemplo, 48 ou 53 unidades monoméricas.

[0022] Derivado de: O termo "derivado de" conforme usado em to- do o presente relatório descritivo no contexto de um ácido nucleico, i.e., para um ácido nucleico "derivado de" (outro) ácido nucleico, signi- fica que o ácido nucleico, que é derivado de (outro) ácido nucleico, compartilha, por exemplo, pelo menos 60%, 70%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de identidade de sequência com o áci- do nucleico do qual ele deriva. O especialista na técnica sabe que a identidade de sequência é tipicamente calculada para os mesmos tipos de ácidos nucleicos, i.e., para sequências de DNA ou para sequências de RNA. Assim sendo, fica entendido que, se um DNA é "derivado de" um RNA ou se um RNA é "derivado de" um DNA, em uma primeira etapa a sequência de RNA é convertida na sequência de DNA corres- pondente (em particular por substituição das uracilas (U) por timidinas (T) em toda a sequência) ou, vice-versa, a sequência de DNA é con- vertida na sequência de DNA correspondente (em particular por substi- tuição de T por U em toda a sequência). Depois disso, a identidade de sequência das sequências de DNA ou a identidade de sequência das sequências de RNA é determinada. De preferência, um ácido nucleico "derivado de" um ácido nucleico também se refere ao ácido nucleico que é modificado em relação ao ácido nucleico do qual ele deriva, por 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12292/12614 exemplo, para aumentar a estabilidade do RNA ainda mais e/ou para prolongar e/ou aumentar a produção de proteínas. No contexto de se- quências de aminoácidos (por exemplo, peptídios ou proteínas antigê- nicas) o termo "derivado de" significa que a sequência de aminoácidos que é derivada de (outra) sequência de aminoácidos compartilha, por exemplo, pelo menos 60%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 291%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da qual deriva.

[0023] Assim sendo, fica entendido que, se um peptídio ou proteí- na antigênica é "derivada de" CSP, o peptídio ou proteína antigênica que é "derivada da" referida CSP pode representar uma variante ou fragmento da referida respectiva proteína CSP. Além disso, o peptídio ou proteína antigênica que é "derivada da" referida CSP pode diferente na sequência de aminoácidos, compartilhamento uma determinada percentagem de identidade como definido acima.

[0024] Epítopo: O termo "epítopo" (também denominado "determi- nante antigênico" na literatura) conforme usado neste pedido será re- conhecido e entendido pelo especialista na técnica, e, por exemplo, destina-se a indicar epítopos de células T e epítopos de células B. os epítopos de células T ou partes dos peptídios ou proteínas antigênicas podem compreender fragmentos de preferência tendo um comprimento de cerca de 6 a cerca de 20 ou ainda mais aminoácidos, por exemplo, fragmentos processados e apresentados por moléculas de MHC classe |, de preferência tendo um comprimento de cerca de 8 a cerca de 10 aminoácidos, por exemplo, 8, 9, ou 10, (ou ainda 11, ou 12 aminoáci- dos), ou fragmentos processados e apresentados por moléculas de MHC classe |, de preferência tendo um comprimento de cerca de 13 a cerca de 20 ou ainda mais aminoácidos, onde estes fragmentos podem ser selecionados de qualquer parte da sequência de aminoácidos. Es- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12293/12614 tes fragmentos são tipicamente reconhecidos pelas células T na forma de um complexo que consiste em fragmento peptídico e uma molécula de MHC, i.e., os fragmentos tipicamente não são reconhecidos em sua forma nativa. Epítopos de células B tipicamente são fragmentos locali- zados na superfície externa de antígenos proteicos ou pepíticos (nati- vos), de preferência tendo 5 a 15 aminoácidos, mais preferivelmente tendo 5 a 12 aminoácidos, even mais preferivelmente tendo 6 a 9 ami- noácidos, que podem ser reconhecidos por anticorpos, i.e., em sua forma nativa. Tais epítopos de proteínas ou peptídos podem ainda ser selecionados dentre qualquer uma das variantes aqui mencionadas de tais proteínas ou peptídios. Neste contexto os determinantes antigêni- cos podem ser epítopos conformacionais ou descontínuos que são compostos de segmentos das proteínas ou peptídios definidos neste pedido que são descontínuos na sequência de aminoácidos das prote- íÍnas ou peptídios definidos neste pedido, mas são unidos na estrutura tridimensional ou epítopos contínuos ou lineares que são compostos de uma cadeia polipeptídica. No contexto da presente invenção, um epí- topo pode ser o produto de translação de um RNA codificante apresen- tado e especificado neste pedido.

[0025] Fragmento: O termo "fragmento" conforme usado em todo o presente relatório descritivo no contexto de uma sequência de ácidos nucleicos (por exemplo, sequência de RNA) ou uma sequência de ami- noácidos pode ser tipicamente uma porção mais curta de uma sequên- cia de comprimento integral de, por exemplo, uma sequência de ácidos nucleicos ou uma sequência de aminoácidos. Por conseguinte, um fra- gmento, tipicamente, consiste em uma sequência que é idêntica ao trecho correspondente dentro da sequência de comprimento integral. Um fragmento preferido de uma sequência, no contexto da presente invenção, consiste em um trecho de entidades contínuo, tal como nu- cleotídeos ou aminoácidos correspondentes a um trecho de entidades 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12294/12614 contínuo na molécula da qual fragmento deriva, que representa pelo menos 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% da mo- lécula total (i.e., comprimento integral da qual o fragmento deriva (por exemplo, CSP de um parasita da malária). O termo "fragmento" con- forme usado em todo o presente relatório descritivo no contexto de pro- teínas ou peptídios pode, tipicamente, compreender uma sequência de uma proteína ou peptídio definida neste pedido que é, em termos de sua sequência de aminoácidos, truncada no terminal N e/ou no termi- nal C em relação à sequência de aminoácidos da proteína original. Tal truncamento pode, portanto, ocorrer no nível de aminoácidos ou cor- respondente no nível de ácidos nucleicos. Uma identidade de sequên- cia em relação a tal fragmento definido neste pedido pode, portanto, de preferência indicar a proteína ou petídio inteiro como definido neste pedido ou a molécula de ácido nucleico (codificante) inteira de tal pro- teína ou peptídio. No contexto de antígenos tal fragmento pode ter um comprimento de cerca de 6 a cerca de 20 ou ainda mais aminoácidos, por exemplo, fragmentos processados e apresentados por moléculas de MHC classe |, de preferência tendo um comprimento de cerca de 6 a cerca de 12 aminoácidos, por exemplo, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 aminoá- cidos, ou fragmentos processados e apresentados por moléculas de MHC classe |, de preferência tendo um comprimento de cerca de 13 ou mais aminoácidos, por exemplo, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 ou ainda mais aminoácidos, onde estes fragmentos podem ser seleci- onados de qualquer parte da sequência de aminoácidos. Estes frag- mentos são tipicamente reconhecidos pelas células T na forma de complexo que consiste no fragmento peptídico e uma molécula de MHC. Fragmentos de proteínas ou peptídios podem compreender pelo menos um epítopo dessas proteínas ou peptídios.

[0026] Heterólogo: Os termos "heterólogo" ou "sequência heteról- ga" conforme usado em todo o presente relatório descritivo no contexto 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12295/12614 de uma sequência de ácidos nucleicos ou de uma sequência de ami- noácidos refere-se a uma sequência (por exemplo, DNA, RNA, amino- ácido) será reconhecido e entendido pelo especialista na técnica, e re- fere-se a uma sequência que é derivada de um outro gene, de um ou- tro alelo, de uma outra espécie. Entende-se que duas sequências são tipicamente "heterólogas" se elas não forem derivadas do mesmo gene ou no mesmo alelo. L.e., embora sequências heterólogas possam ser derivadas do mesmo organismo, elas não ocorrem naturalmente (na natureza) na mesma molécula de ácido nucleico, tal como, por exem- plo, no mesmo RNA ou proteína.

[0027] Resposta imunológica humoral: Os termos "imunidade hu- moral" ou "resposta imunológica humoral" será reconhecido e entendi- do pelo especialista na técnica, e, por exemplo, destina-se a indicar produção de anticorpos mediada por células B e opcionalmente a pro- cessos acessórios que acompanham a produção de anticorpos. Uma resposta imunológica humoral pode ser tipicamente caracterizada, por exemplo, pela ativação de Th2 e produção de citocinas, formação de centros germinais e mudança de isótipo, maturação da afinidade e ge- ração de células de memória. Imunidade humoral também pode se re- ferir às funções efetoras dos anticorpos, que incluem neutralização de patógenos e toxinas, ativação clássica do complemento, e promoção de fagocitose pela opsonina e eliminação de patógenos.

[0028] Identidade (de uma sequência): O termo "identidade" con- forme usado em todo o presente relatório descritivo no contexto de uma sequência de ácidos nucleicos ou de uma sequência de aminoá- cidos será reconhecido e entendido pelo especialista na técnica, e, por exemplo, destina-se a indicar a percentagem em que duas sequências são idênticas. Para determinar a percentagem em que duas sequên- cias são idênticas, por exemplo, sequências de ácidos nucleicos ou sequências de aa definidas neste pedido, de preferência sequências 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12296/12614 de aa codificadas pela sequência de ácidos nucleicos como definido neste pedido e as próprias sequências de aa, as sequências podem ser alinhadas para serem subsequentemente comparadas uma com a outra. Portanto, por exemplo, uma posição de uma primeira sequência pode ser comparada com a posição correspondente de uma segunda sequência. Se uma posição na primeira sequência for ocupada pelo mesmo resíduo que uma posição da segunda sequência, as duas se- quências são idênticas nessa posição. Se este não for o caso, as se- quências diferem nessa posição. Se ocorrerem inserções na segunda sequência em comparação com a primeira sequência, hiatos podem inseridos na primeira sequência para permitir novo alinhamento. Se ocorrerem deleções na segunda sequência em comparação com a primeira sequência, hiatos podem inseridos na segunda sequência pa- ra permitir novo alinhamento. A percentagem em que duas sequências são idênticas é então função do número de posições idênticas dividido pelo número total de posições incluindo aquelas que são ocupadas apenas uma sequência. A percentagem em que duas sequências são idênticas pode ser determinada por meio de um algoritmo, por exem- plo, um algoritmo integrado no programa BLAST.

[0029] Imunógeno, imunogênico: Os termos "imunógeno" ou "imu- nogênico" será reconhecido e entendido pelo especialista na técnica, e, por exemplo, destina-se a indicar um composto que é capaz de es- timular/induzir uma resposta imunológica. De preferência, um imunó- geno é um peptídio, polipeptídio, ou proteína. Um imunógeno no senti- do da presente invenção é o produto da translação de um RNA apre- sentado, compreendendo pelo menos uma sequência codificadora co- dificando pelo menos peptídio ou proteína antigênica derivada de CSP como definido neste pedido. Tipicamente, um imunógeno provoca uma resposta imunológica adaptativa.

[0030] Resposta imunológica: O termo "resposta imunológica" será 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12297/12614 reconhecido e entendido pelo especialista na técnica, e, por exemplo, destina-se a indicar uma reação específica do sistema imunológico adaptativo a um antígeno particular (a chamada resposta imunológica específica ou adaptativa) ou uma reação inespecífica do sistema imu- nológico inato (a chamada resposta imunológica inespecífica ou inata), ou uma combinação das mesmas.

[0031] Sistema imunológico: O termo "sistema imunológico" será reconhecido e entendido pelo especialista na técnica, e, por exemplo, destina-se a indicar um sistema do organismo que pode proteger o or- ganismo contra infecções. Se um patógeno consegue atravessar uma barreira física de um organismo e entrar neste organismo, o sistema imunológico inato apresenta uma resposta imediata, porém inespecifi- ca. Se os patógenos escapam desta resposta imunológica, os verte- brados possuem uma segunda camada de proteção, o sistema imuno- lógico adaptativo. Aqui, o sistema imunológico adapta sua resposta durante uma infecção para melhorar seu reconhecimento do patógeno. Esta resposta melhorada fica então retida depois que o patógeno é eliminado, na forma de uma memória imunológica, e permite que o sis- tema imunológico adaptativo instale ataques mais rápidos e mais for- tes toda vez que este patógeno for encontrado. Assim sendo, o sistema imunológico compreende o sistema imunológico inato e o adaptativo. Cada uma destas partes contém tipicamente os chamados componen- tes humorais e celulares.

[0032] Sistema imunológico inato: O termo "sistema imunológico inato" (também conhecido como sistema imunológico inespecífico) se- rá reconhecido e entendido pelo especialista na técnica, e, por exem- plo, destina-se a indicar um sistema compreendendo tipicamente as células e os mecanismos que defendem o hospedeiro contra infecções por outros organismos de maneira inespecífica. Isto significa que as células do sistema inato podem reconhecer e responder aos patógenos 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12298/12614 de forma genérica, mas, ao contrário do sistema imunológico adaptati- vo, ele não confere imunidade duradoura ou protetora ao hospedeiro. O sistema imunológico inato pode ser, por exemplo, ativado por ligan- tes de receptores Toll-like (TLRs) ou outras substâncias auxiliares tal como lipopolissacarídeos, TNF-alfa, ligando CDA40, ou citocinas, mo- nocinas, linfocinas, interleucinas ou quimiocinas, IL-1 a 11-33, IFN-alfa, IFN-beta, IFN-gama, GM-CSF, G-CSF, M-CSF, LT-beta, TNF-alfa, fa- tores de crescimento, e hGH, um ligando de um receptor Toll-like hu- mano (por exemplo, TLR1 a TLR10), um ligando de um receptor Toll- like murino, (por exemplo, TLR1 a TLR13), um ligando de um receptor NOD-like, um ligando de um receptor RIG-I like, um ácido nucleico imunoestimulante, um RNA imunoestimulante (iSRNA), um CpG-DNA, um agente antibacteriano, ou um agenet antiviral.

[0033] Composto lipidoide: Um composto lipidoide, também sim- plesmene denominado lipidoide, é um composto semelhante a lipídio, ie., um composto anfifílico com propriedades físicas semelhantes às de lipídios. No contexto da presente invenção considera-se que o ter- mo lipídio abrange compostos lipidoides.

[0034] Vacina monovalente, composição monovalente: Os termos "vacina monovalente", "composição monovalente" "vacina univalente" ou "composição univalente" serão reconhecidos e entendidos pelo es- pecialista na técnica, e, por exemplo, destinam-se a indicar uma com- posição ou uma vacina compreendendo apenas um antígeno de um patógeno (por exemplo, CSP de um parasita da malária). Por conse- guinte, a referida vacina ou composição compreende apenas uma es- pécie de RNA codificando um único antígeno de um único organismo. O termo "vacina monovalente" inclui a imunização contra uma única valência. No contexto da invenção, uma vacina ou composição mono- valente contra malária compreenderia um RNA codificante codificando um único peptídio ou proteína antigênica derivada de um parasita da 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12299/12614 malária específico (por exemplo, CSP de um parasita da malária).

[0035] Ácidos nucleicos: Os termos "ácido nucleico" ou "molécula de ácido nucleico" será reconhecido e entendido pelo especialista na técnica, e, por exemplo destina-se a indicar uma molécula compreen- dendo, de preferência consistindo em componentes ácidos nucleicos. O termo molécula de ácido nucleico de preferência refere-se a molécu- las de DNA ou de RNA. Ele é de preferência usado como sinônimo do termo polinucleotídeo. De preferência, um ácido nucleico ou uma mo- lécula de ácido nucleico é um polímero compreendendo ou consistindo em monômeros de nucleotídeo, que são covalentemente ligados entre si por ligações fosfodiéster de um esqueleto de açúcar/fosfato. O termo "molécula de ácido nucleico" também abrange moléculas de ácido nu- cleico modificadas, tal como moléculas de DNA ou de RNA modifica- das nas bases, modificadas nos açúcares ou modificadas no esquele- to, como definido neste pedido.

[0036] Sequência de ácidos nucleicos/ sequência de RNA/ se- quência de aminoácidos: Os termos "sequência de aminoácidos", "se- quência de RNA" ou “sequência de aminoácidos" serão reconhecidos e entendidos pelo especialista na técnica, e, por exemplo, referem-se a uma ordem particular e individual da sucessão de seus nucleotídeos ou aminoácidos, respectivamente.

[0037] Permanentemente catiônico: O termo "permanentemente catiônico" conforme usado neste pedido será reconhecido e entendido pelo especialista na técnica, e significa, por exemplo, que o respectivo composto, ou grupo ou átomo, é positivamente carregado em qualquer valor de pH ou atividade dos íons de hidrogênio de seu ambiente. Tipi- camente, a carga positiva resulta da presença de um átomo de nitro- gênio quaternário. Quando um composto carrega uma pluralidade de tais cargas positivas, pode-se dizer que é permanentemente policatiô- nico, que é uma subcategoria de permanentemente catiônico.

'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12300/12614

[0038] Quantidade farmaceuticamente eficaz: Os termos "quanti- dade farmaceuticamente eficaz" ou "quantidade eficaz" serão reconhe- cidos e entendidos pelo especialista na técnica, e, por exemplo, desti- nam-se a indicar uma quantidade de um composto (por exemplo, o RNA da invenção) que é suficiente para induzir um feito farmacêutico, tal como, no contexto da invenção, uma resposta imunológica contra um antígeno da malária.

[0039] Vacina polivalente/multivalente, composição polivalen- te/multivalente: Os termos "vacina polivalente", "composição polivalen- te", "vacina multivalente" ou "composição multivalente" serão reconhe- cidos e entendidos pelo especialista na técnica, e, por exemplo, desti- nam-se a indicar uma composição ou uma vacina compreendendo an- tígenos de mais de uma cepa de um parasita da malária, ou compre- endendo diferentes antígenos do mesmo parasita da malária, ou qual- quer combinação destas. Os termos descrevem que a referida vacina ou composição tem mais de uma valência. No contexto da invenção, uma vacina polivalente contra malária compreenderia RNA codificando peptídios ou proteínas antigênicas derivadas de diversas espécies dife- rentes de parasitas da malária ou compreendendo RNA codificando diferentes antígenos da mesma espécie de parasita da malária, ou uma combinação destes. Em uma modalidade preferida, uma vacina ou composição polivalente contra malária compreende mais de uma, de preferência 2, 3, 4 ou ainda mais espécies diferentes de RNA codi- ficante codificando pelo menos um peptídio ou proteína da malária (por exemplo, CSP de Plasmodium falciparum 3D7, e CSP de Plasmodium falciparum NF54, e CSP de Plasmodium falciparum GB4). Métodos para a produção de vacinas polivalentes de RNA estão revelados no pedido de patente publicado WO2017/1090134A1.

[0040] RNA estabilizado: O termo "RNA estabilizado" refere-se a uma molécula de RNA que é modificada de modo a ser mais estável à 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12301/12614 desintegração ou degradação, por exemplo, por fatores ambientais ou por digestão enzimática, tal como por degradação por exo- ou endonu- cleases, do que a molécula de RNA sem a modificação. De preferên- cia, um RNA estabilizado no contexto da presente invenção é estabili- zado em uma célula, tal como uma célula procariótica ou eucariótica, de preferência uma célula de mamífero, tal como uma célula humana. O efeito de estabilização também pode ser exercido fora das células, por exemplo, em uma solução tampão etc., por exemplo, em um pro- cesso de produção de uma composição farmacêutica compreendendo a molécula de ácido nucleico estabilizada.

[0041] Respostas de células T: Os termos "imunidade celular" ou "resposta imunológica celular" ou "respostas de células T celulares" conforme usado neste pedido serão reconhecidos e entendidos pelo especialista na técnica, e, por exemplo, destinam-se a indicar a ativa- ção de macrófagos, células exterminadoras naturais (NK), linfócitos T citotóxicos antígeno-específicos, e a liberação de várias citocinas em resposta a um antígeno. Em termos mais gerais, a imunidade celular não se baseia nos anticorpos, mas na ativação de células do sistema imunológico. Tipicamente, uma resposta imunológica celular pode ser caracterizada, por exemplo, pela ativação de linfócitos T citotóxicos antígeno-específicos que são capazes de induzir a apoptose em célu- las, por exemplo, células imunes específicas como células dendríticas ou outras células, apresentando epítopos de antígenos estranhos em sua superfície. No contexto da invenção, o antígeno é apresentado pe- lo RNA codificando pelo menos um peptídio ou proteína antigênica de- rivada de CSP. Adequadamente, o RNA codificante, a composição, a vacina, provocam vantajosamente respostas de células T celulares contra os antígenos codificados da malária.

[0042] Variante (de uma sequência): O termo "variante" conforme usado em todo o presente relatório descritivo no contexto de uma se- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12302/12614 quência de ácidos nucleicos será reconhecido e entendido pelo espe- cialista na técnica, e, por exemplo, destina-se a indicar uma variante de uma sequência de ácidos nucleicos derivada de uma outra sequên- cia de ácidos nucleicos. Por exemplo, uma variante de uma sequência de ácidos nucleicos pode apresentar uma ou mais deleções, inserções, adições e/ou substituições de nucleotídeos em relação à sequência de ácidos nucleicos da qual a variante deriva. Uma variante de uma se- quência de ácidos nucleicos pode ser pelo menos 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, ou 95% idêntica à sequência de ácidos nucleicos da qual a variante deriva. A variante é uma variante funcional no sentido de que a variante conserva pelo menos 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, ou 95% ou mais da função da sequência da qual ela deriva. Uma "variante" de uma sequência de ácidos nucleicos pode ter pelo menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 99% de identidade de nucleotídeos em um trecho de pelo menos 10, 20, 30, 50, 75 ou 100 nucleotídeos de tal sequência de ácidos nucleicos.

[0043] O termo "variante" conforme usado em todo o presente rela- tório descritivo no contexto de proteínas ou peptídios, por exemplo, destina-se a indicar uma variante de proteína ou peptídio tendo uma sequência de aminoácidos que difere da sequência original em uma ou mais mutações/substituições, tal como um ou mais aminoácidos substi- tuídos, inseridos e/ou deletados. De preferência, estes fragmentos e/ou variantes possuem a mesma propriedade antigênica específica ou uma propriedade antigênica específica equiparável (variantes imunogêni- cas, variantes antigênicas). "Variantes" das proteínas ou peptídios de- finidos neste pedido podeme compreender substituições aminoacídicas conservativas em relação a sua sequência nativa, i.e., fisiológica não mutada. Estas sequências de aminoácidos assim como suas sequên- cias de nucleotídeos codificadoras em particular se enquadram no ter- mo variantes como definido neste pedido. Substituições nas quais ami- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12303/12614 noácidos, que originam da mesma classe, são trocados um por outro são chamadas de substituiçõesd conservativas. Em particular, estes são aminoácidos tendo cadeias laterais alifáticas, cadeias laterais po- sitiva ou negativamente carregadas, grupos aromáticos nas cadeias laterais ou aminoácidos, cujas cadeias laterais podem entrar em pon- tes de hidrogênio, por exemplo, cadeias laterais que possuem uma função hidroxila. Isto significa que, por exemplo, um aminoácido tendo uma cadeia lateral polar é substituído por outro aminoácido tendo tam- bém uma cadeia lateral polar, ou, por exemplo, um aminoácido carac- terizado por uma cadeia lateral hidrófoba é substituído por outro ami- noácido tendo também uma cadeia lateral hidrófoba (por exemplo, se- rina (treonina) por treonina (serina) ou leucina (isoleucina) por isoleuci- na (leucina)). Inserções e substituições são possíveis, em particular, naquelas posições das sequências que não causam nenhuma modifi- cação na estrutura tridimensional ou não afetam a região de ligação. As modificações e uma estrutura tridimensional por inserções ou dele- ções podem ser facilmente determinadas, por exemplo, usando espec- tros de CD (espectros de dicroismo circular). Uma "variante" de uma proteína ou peptídio pode ter pelo menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 99% de identidade de aminoácidos em um trecho de pelo menos 10, 20, 30, 50, 75 ou 100 aminoácidos de tal proteína ou peptí- dio. De preferência, uma variante de uma proteína compreende uma variante funcional da proteína, o que significa, no contexto da invenção, que a variante exerce essencilamente a mesma, ou pelo menos 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% da imunogenicidade que a proteína da qual ela deriva.

[0044] Trato de oligopirimidina 5'-terminal (TOP), TOP-UTR: O termo "trato de oligopirimidina 5'-terminal (TOP)" deve ser entendido como um trecho de nucleotídeos pirimidina localizado na região 5"- terminal de uma molécula de ácido nucleico, tal como a região 5”- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12304/12614 terminal de determinadas moléculas de RNA ou a região 5'-terminal de uma entidade funcional, por exemplo, a região transcrita, de certos ge- nes.

A sequência começa com uma citidina, que normalmente corres- ponde ao sítio de início de transcrição, é seguida por um trecho de normalmente cerca de 3 a 30 nucleotídeos pirimidina.

Por exemplo, o TOP pode compreender 3-30 ou ainda mais nucleotídeos.

O trecho de pirimidinas e assim o 5"-TOP termina com um nucleotídeo 5' para o primeiro nucleotídeo purina localizado a jusante do TOP.

RNA mensa- geiro que contém um trato de oligopirimidina 5"-terminal geralmente é chamado de TOP mRNA.

Por conseguinte, genes que apresentam tais RNAs mensageiros são chamados de TOP genes.

O termo "motivo TOP" ou "motivo 5"-TOP" deve ser entendido como uma sequência de ácidos nucleicos que corresponde a um 5-TOP definido acima.

Assim, um motivo TOP no contexto da presente invenção é de preferência um trecho de nucleotídeos pirimidina tendo um comprimento de 3-30 nu- cleotídeos.

De preferência, o motivo TOP consiste em pelo menos 3 nucleotídeos pirimidina, de preferência pelo menos 4 nucleotídeos pi- rimidina, de preferência pelo menos 5 nucleotídeos pirimidina, mais preferivelmente pelo menos 6 nucleotídeos, mais preferivelmente pelo menos 7 nucleotídeos, mais preferivelmente pelo menos 8 nucleotí- deos pirimidina, onde o trecho de nucleotídeos pirimidina de preferên- cia começa em sua extremidade 5' com um nucleotídeo citosina.

Nos TOP genes e TOP mRNAs, o motivo TOP de preferência começa em sua extremidade 5' com o sítio de início de transcrição e termina com um nucleotídeo 5' para o primeiro resíduo purina no referido gene ou MRNA.

Um motivo TOP no contexto da presente invenção fica de pre- ferência localizado na extremidade 5' de uma sequência que represen- ta uma 5-UTR ou na extremidade 5' de uma sequência que codifica uma 5'-UTR.

Assim sendo, de preferência, um trecho de 3 ou mais nu- cleotídeos pirimidina é chamado de "motivo TOP" no contexto da pre- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12305/12614 sente invenção se este trecho estiver localizado na extremidade 5' de uma sequência respectiva, tal como o RNA, um elemento 5-UTR do RNA, ou a sequência de RNA que é derivada dentre a 5-UTR de um TOP gene descrito neste pedido. Em outras palavras, um trecho de 3 ou mais nucleotídeos pirimidina, que não está localizado na extremida- de 5' de uma 5-UTR ou de um elemento 5-UTR, mas sim em qualquer parte de uma 5-UTR ou de um elemento 5"-UTR, de preferência não é chamado de "motivo TOP". Em algumas modalidades, a sequência de aminoácidos de um elemento 5"-UTR, que é derivado de uma 5-UTR de um TOP gene, termina em sua extremidade 3' com um nucleotídeo localizado na posição 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 a montante do códon de início (por exemplo, A(U/T)G) do gene ou RNA do qual ele deriva. Assim sendo, um elemento 5-UTR não compreendem parte alguma da sequência codificadora de proteína. Assim, de preferência, a única par- te codificante de proteína da pelo menos uma sequência de ácidos nu- cleicos, particularmente da sequência de RNA, é apresentada pela se- quência codificadora.

Breve Descrição da Invenção

[0045] A presente invenção baseia-se na surpreendente descober- to dos inventores de que pelo menos um peptídio ou proteína derivada da CSP de um parasita da malária codificada pelo RNA da invenção pode ser eficientemente expressa em uma célula de mamífero. De forma ainda mais inesperada, os inventores demonstraram que o RNA codificante da invenção pode induzir respostas imunológicas funcionais específicas em, por exemplo, camundongos (vide, por exemplo, Exemplo 2 e 3). Através de diferentes otimizações no desenho de an- tígeno de CSP, as respostas imunológicas poderiam ser ainda melho- radas. Elementos heterólogos como, por exemplo, domínios trans- membrana heterólogos, peptídios sinal secretores, epítopos auxiliares T, ou domínios de conglomeração de antígenos resultaram em respos- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12306/12614 tas imunológicas aumentadas (vide, por exemplo, Exemplos 7, 8, e 9). Além disso, a otimização no desenho do mRNA (combinações de UTR melhoradas, uso do análogo cap 1, etc) poderia aumentar efetivamente as respostas imunológicas: principalmente respostas imunológicas ba- seadas nas células T (vide Exemplos 11, 12 e 13. Vantajosamente, o referido RNA codificante da invenção induz respostas imunológicas antígeno-éspecíficas muito eficientes contra a CSP codificada (respos- tas humoral e celular). Ainda, o RNA codificante da invenção compre- endido em nanopartículas lipídicas (LNPs) induz de forma muito efici- ente respostas imunológicas antígeno-éspecíficas contra CSP em do- sagens e regime de dosagem muito baixos (vide, por exemplo, Exem- plo 2,3, 6-13). Por conseguinte, o RNA codificante, e a composi- ção/vacina compreendendo o referido RNA codificante da invenção são adequados para provocar uma resposta imunológica contra CSP de um parasita da malária em um indivíduo mamífero. O RNA codifi- cante e a composição/vacina compreendendo o referido RNA codifi- cante são adequados para uso como uma vacina, por exemplo, como uma vacina humana.

[0046] Em um primeiro aspecto, a presente invenção apresenta um RNA codificante, de preferência um RNA codificante para uma vacina, compreendendo pelo menos uma região não transladada 5' (UTR) e/ou pelo menos uma região não transladada 3' (UTR), e pelo menos uma sequência codificadora operacionalmente ligada à referida 3-UTR e/ou 5'-UTR codificando pelo menos uma proteína codificante derivada da CSP de um parasita da malária, ou um fragmento imunogênico ou va- riante imunogênica do mesmo.

[0047] Em um segundo aspecto, a presente invenção apresenta uma composição, de preferência uma composição imunogênica, com- preendendo o RNA codificante do primeiro aspecto. Adequadamente, a composição pode compreender o RNA codificante do primeiro aspecto 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12307/12614 complexado, encapsulado, ou associado a um ou mais lipídios, for- mando assim nanopartículas lipídicas.

[0048] Em um terceiro aspecto, a presente invenção apresenta uma vacina contra malária onde a vacina compreende o RNA codifi- cante do primeiro aspecto ou a composição do segundo aspecto.

[0049] Em um quarto aspecto, a presente invenção apresenta um kit ou kit de partes, onde o referido kit ou kit de partes compreende o RNA codificante do primeiro aspecto, e/ou a composição do segundo aspecto, e/ou a vacina do terceiro aspecto.

[0050] A invenção refere-se ainda a um método de tratamento ou prevenção de malária em um indivíduo, primeiro e segundo usos médi- cos do RNA codificante, composições, e vacinas. Ainda, a invenção está voltada para um kit, particularmente para um kit de partes, com- preendendo o RNA codificante, composições, e vacinas. Também são apresentados métodos de produção do RNA codificante, da composi- ção ou da vacina. Descrição Detalhada da Invenção

[0051] A presente invenção foi depositada junto com uma listagem de sequências em formato eletrônico, que faz parte da descrição do presente pedido (padrão OMPI ST.25). As informações contidas na lis- tagem de sequências estão aqui incorporadas em sua íntegra a título de referência. Quando se faz referência a uma "SEQ ID NO", indica-se a sequência de ácidos nucleicos ou a sequência de aminoácidos (aa) correspondentes na listagem de sequências tendo o respectivo identifi- cador. Para muitas sequências, a listagem de sequências também apresenta informações detalhadas adicionais, por exemplo, referentes a certos aspectos estruturais, otimizações de sequências, identificado- res no GenBank, ou informações detalhadas adicionais referentes à capacidade de codificação. Em particular, tais informações estão apre- sentadas no identificador numérico <223> na listagem de sequências 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12308/12614 no padrão OMPI ST.25. Por conseguinte, as informações apresentadas no apresentadas no referido identificador numérico <223> estão expli- citamente incluídas neste pedido em sua íntegra e devem ser entendi- das como parte integrante da descrição da invenção em questão. RNA codificante para vacinação:

[0052] Em um primeiro aspecto, a invenção refere-se a um RNA codificante, de preferência um RNA codificante para uma vacina, com- preendendo a) pelomenos uma região não transladada 5' heteróloga (5-UTR) e/ou pelo menos uma região não transladada 3' heteróloga (3-UTR); e b) pelomenos uma sequência codificadora operacional- mente ligada à referida 3-UTR e/ou 5-UTR encoding pelo menos uma proteína antigênica, de preferência derivada da proteína circunspozoro- ita (CSP) de um parasita da malária, ou um fragmento imunogênico ou variante imunogênica do mesmo.

[0053] Os termos "RNA codificante" conforme usado neste pedido será reconhecido e entendido pelo especialista na técnica, e, por exemplo, destinam-se a indicar um RNA compreendendo uma sequên- cia codificadora ("cds") compreendendo diversos tripletos de nucleotí- deos, onde a referida cds pode ser transladada para um peptídio ou proteína.

[0054] O termo "RNA codificante para uma vacina" conforme usa- do neste pedido deve ser entendido como um RNA codificante tendo certos atributos vantajosos que deixam o RNA adequado para adminis- tração in vivo a um indivíduo, por exemplo, um ser humano. Além dis- so, um "RNA codificante para uma vacina" é de preferência exresso, que é transladado para uma proteína, quando administrado a um indi- víduo, por exemplo, um ser humano. Além disso, o "RNA codificante para uma vacina" de preferência induz uma resposta imunológica es- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12309/12614 pecífica contra a proteína codificada depois da administração em um indivíduo, por exemplo, um ser humano.

[0055] De preferência, administração intramuscular ou intradérmica do referido "RNA codificante para uma vacina" resulta na expressão do antígeno de CSP codificado em um indivíduo.

[0056] O termo "fragmento imunogênico" ou "variante imunogêni- ca" deve ser entendido como um fragmento/variante do antígeno cor- respondente (por exemplo, CSP) que é capaz de provocar uma respos- ta imunológica em um indivíduo.

[0057] Em geral, o RNA da invenção pode ser composto de uma região codificadora de proteína (também denominada sequência codi- ficadora "cds", ou "ORF"), e regiões não transladadas 5'- e/ou 3' (UTRs). A 3-UTR é de sequência e tamanho variáveis; ela cobre entre o códon de término e a cauda de poli(A). O importante é que a sequên- cia de 3-UTR ancora diversos motivos reguladores que determinam o turnover do RNA, a estabilidade e a localização, e assim controla mui- tos aspectos da regulação pós-transcricional. Na aplicação médica de RNA (por exemplo, aplicações em imunoterapia, vacinação), a regula- ção da translação de RNA para proteína é de suma importância para a segurança e eficácia terapêuticas. Os presentes inventores descobri- ram de forma surpreendente que certos construtos de RNA possibili- tam a expressão rápida e transitória de grandes quantidades de peptí- dios ou proteínas antigênicas de CSP. Ainda, as referidas moléculas de RNA induzem, quando administradas a um indivíduo, uma resposta imunológica equilibrada, compreendendo imunidade tanto celular quan- to humoral. Por conseguinte, o RNA codificante apresentado neste pe- dido é particularmente útila e adequado para várias aplicações in vivo, incluindo a vacinação contra parasitas da malária, e podem, por con- seguinte, ser um componente adequado de uma vacina para tratamen- to e/ou prevenção de malária.

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Parasitas da malária:

[0058] Conforme usado neste pedido, o termo "parasita da malá- ria" refere-se qualquer parasita protozoário capaz de causar malária em um indivíduo.

[0059] Tipicamente, a malária é causada por espécies de protozo- ários parasitas do gênero Plasmodium (NCBI Taxonomy ID: 5820), ou do subgênero Plasmodium (NCBI Taxonomy ID: 418103)). Por conse- guinte, a espécie Plasmodium será entendida e reconhecida como "pa- rasitas da malária" pelo especialista na técnica. O termo "Plasmodium" refere-se a qualquer espécie no gênero ou subgênero de Plasmodium, e não se limita a qualquer espécie, sub-espécie, cepa, variante, ou iso- lado particular, etc. Por conseguinte, o termo "Plasmodium" pode indi- car uma espécie de Plasmodium, uma sub-espécie de Plasmodium, uma cepa de Plasmodium, uma variante de Plasmodium, um isolado de Plasmodium de qualquer origem. Preferido é um "Plasmodium" que pode causar uma doença em seres humanos ou animais, por exemplo, pelo menos sintomas leves associados à malária.

[0060] Em modalidades preferidas, pelo menos uma proteína anti- gênica da invenção pode ser derivada de qualquer dos parasitas da malária selecionados dentre Plasmodium falciparum (Pf), Plasmodium knowlesi (Pk), Plasmodium ovale (Po), Plasmodium simiovale (Ps), e Plasmodium vivax (Pv). Em modalidades preferidas, o parasita da ma- lária é Plasmodium falciparum (Pf), Plasmodium malariae (Pm). Plas- modium ovale curtisi (Poc), Plasmodium ovale wallikeri (Pow), Plas- modium berghei (Pb).

[0061] De acordo com várias modalidades, a sequência codificado- ra do RNA do primeiro aspecto compreende ou consiste em uma se- quência de ácidos nucleicos codificando uma proteína antigênica deri- vada de qualquer um dos parasitas da malária apresentados na Lista 1 abaixo. Nela, cada um dos parasitas da malária adequados, em parti- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12311/12614 cular, para cada uma das espécies de Plasmodium adequadas (por exemplo, Plasmodium falciparum (Pf), Plasmodium knowlesi (Pk), Plasmodium ovale (Po), Plasmodium simiovale (Ps), e Plasmodium vivax (Pv)), a respectiva NCBI Taxonomy ID ("NCBI-ID") está indicada. Lista 1: Parasitas da malária / espécie e sub-espécie de Plasmodium com as respectivas NCBI Taxonomy IDs:

[0062] Espécie: Plasmodium falciparum (Pf) (parasita da malária P. falciparum) (5833); Sub-espécie: Pf 303.1 (1245013); Pf 309.1 (1245014), Pf 311 (57265), Pf 318.1 (1245015), Pf 326.1 (1245016), Pf

327.1 (1245017), Pf 365.1 (1245018), Pf 366.1 (1245019), Pf 377.1 (1245020), Pf 383.1 (1245021), Pf 397.1 (1245022), Pf 398.1 (1245023), Pf 3D7 (36329), Pf 58.1 (1245012), Pf 7G8 (57266), PfÍ 803 H2 (1226433), Pf 87 239 (685969), Pf B1E4 6273 2clone2 (1226423), Pf CAMP/Malásia (5835), Pf CDC/Honduras (5836), Pf Cp803 (1226435), Pf D10 (478861), Pf D6 (478860), Pf Dd2 (57267), Pf FC27/Papua Nova Guiné (5837), Pf FcB1/Colômbia (186763), Pf FCBR/Colômbia (33631), Pf FCC-2/Hainan (478862), Pf FCH-5 (1036724), Pf FCH/4 (132416), Pf FOM17/Senegal (5845), Pf FCR- 3/Gambia (5838), Pf Fid3/Índia (70152), Pf GB4 (5833), Pf HB3 (137071), Pf IGH-CR14 (580059), Pf IMR143 (57268), Pf WELLCOME (5848), Pf K1 (5839), Pf KF1916 (57269), Pf LES (5840), PÍ Mad20/Papua Nova Guiné (5841), Pf Mad71/Papua Nova Guiné (70154), Pf MaliPS096 E11 (1036727), Pf ML-14 (685970), PfÍ MLW.2745 (1226410), Pf MLW.2749 (1226408), Pf MLW.2786 (1226411), Pf MLW.2788 (1226413), Pf MLW.2861 (1226420), PfÍ MLW.2927 (1226417), Pf MLW.2928 (1226415) Pf MLW.2929 (1226421), Pf MLW.2941 (1226418), Pf MLW.2953 (1226419), Pf MLW.2955 (1226412) Pf MLW.2965 (1226414), Pf MLW.2970 (1226409), Pf MLW.2979 (1226422), Pf MLW.2998 (1226416), Pf NF135/5.C10 (1036726), Pf NF54 (5843), Pf NF7/Gana (5842), Pf 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12312/12614

Nig32/Nigéria (70150), Pf P27.02 (871297), Pf P51.02 (871296), Pf Pa- lo Alto/Uganda (57270), Pf RAJ116 (580058), Pf RO-33 (5834), Pf San- ta Lucia (478859), Pf Senegal V34.04 (478863), Pf SenP05.02 (871286), Pf SenPO08.04 (871278), Pf SenPO09.04 (871279), PÍ SenP11.02 (871276), Pf SenP19.04 (871277), Pf SenP26.04 (871275), Pf SenP31.01 (871284), Pf SenP60.02 (871285), Pf SenTO02.09 (1107494), Pf SenT015.09.c (1226430), Pf SenTO016.10.d (1226436), Pf SenT021.09 (1107495), Pf SenT021.10.d (1226437), Pf SenT029.09 (1107496), Pf SenTO032.09 (1107493), Pf SenTO033.09 (1107497), Pf SenTO42.09.c. (1226427), Pf SenTO46.09c (1226434), PÍ SenTO47.09.c (1226425), Pf SenTO49.10d (1226438), PÍ SenTO61.10.d (1226439) Pf SenTO65.10.d (1226440), PÍ SenTO69.10.d (1226441) Pf SenTO/76.10d (1226442), PÍ SenTO077.09.c (1226426), Pf SenTO/79.09c (1226424), PÍ SenTO079.10.d (1226443), Pf SenTO86.09 (1107498), Pf SenT090.09 (1107499), Pf SenT092.09.c (1226431), Pf SenT104.10.d (1226444), Pf SenT106.09.d (1226445) Pf SenT108.10.d (1226446), Pí SenT109.09.c (1226429), Pf SenT111.09 (1107500), Pf SenT111.10.d (1226447), Pf SenT112.09 (1107501), Pf SenT112.10.d (1226448), Pf SenT116.09.d (1226449) Pf SenT117.09d (1226450), PÍ SenT118.10.d (1226451), Pf SenT121.09.d (1226452), Pf SenT123.09 (1107502), Pf SenT125.10.d (1226453), Pf SenT126.10.d (1226454), Pf SenT127.09 (1107503), Pf SenT128.09 (1107504), Pf SenT131.10.d (1226455), Pf SenT131.11.d (1226456), Pf SenT135.09 (1107505), Pf SenT135.10.d (1226457), Pf SenT137.09 (1107506), Pf SenT139.09.d (1226458), Pf SenT142.09 (1107507), Pf SenT145.10.d (1226459), Pf SenT147.09.d (1226460), Pf SenT148.09 (1107508), Pf SenT149.09 (1107509), Pf SenT151.09 (1107510), Pf SenT153.09.c (1226428), Pf SenT155.10.d (1226461) Pf SenT1I61.09d (1226462), PÍ SenT161.10.d (1226726), Pf SenT162.10.d (1226463), Pf SenT165.09 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12313/12614

(1107511), Pf SenT166.09 (1107512), Pf SenT183.10.d (1226464), Pf SenT184.10.d (1226465), Pf SenT250.08.c (1226432), Pf SenT26.04 (871281), Pf SenT28.04 (871280), Pf SenV34.04 (871283), Pí SenV35.04 (871282), Pf T4/Tailândia (5846), Pf TAK 9 (57276), PÍf Tanzânia (2000708) (1036725), Pf Th10.04 DIO (871287), PÍ Th105.07 (871292), Pf Th113.09 (871299), Pf Th130.09 (871298), Pf Th15.04 (871294), Pf Th230.08 (871290), Pf Th231.08 (871289), PÍf Th232.08 (871288), Pf Th74.08 (871293), Pf THTN/Thailand (70151), Pf UGK 396.1 (1050250), Pf UGK 408.2 (1050252), Pf UGK 432.4 (1050253), Pf UGK 443.2 (1050251), Pf UGK 659.1 (1050254), Pf UGK

661.1 (1050255), Pf UGK 674.4 (1050256), Pf UGK 707.3 (1050257), Pf UGK 730.2 (1050258), Pf UGK 815.1 (1050259), Pf UGT5.1 (1237627), Pf V1 (5847), Pf V42.05 (871295), Pf V92.05 (871291), Pf Vietnam Oak-Knoll (FVO) (1036723), Pf VS/1 (478864), Pf W2mef (5833); Espécie: Plasmodium knowlesi (Pk) (5850); Sub-espécie: Pk H (5851), PK Nuri (5852); Espécie: Plasmodium malariae (Pm) (5858); Espécie: P. cf. malariae (196059); Espécie: Plasmodium cf. malariae tipo 2 (1583084); Espécie: Plasmodium ovale (Po) (malaria parasite P. ovale) (36330); Sub-espécie: P. ovale curtisi (Poc) (864141), Po Nigé- ria 1/CDC (573885), P. ovale wallikeri (Pow) (864142); Espécie: Plas- modium cf. ovale (943109); Espécie: Plasmodium simiovale (35085); Espécie: P. vivax (Pv) (parasita da malária P. vivax) (5855); Sub- espécie: Pv Brasil | (1033975), Pv Índia VII (1077284), Pv 1Q07 (882766), Pv Mauritânia | (1035515), Pv Coreia do Norte (1035514), Pv Sal-1 (126793), Pv Belém (31273); Espécie: P. cf. vivax (943110); Es- pécie: P. cf. vivax EKgor1179 SGA2.9 (1318701); Espécie: P. cf. vivax EKgor514 SGA2.6 (1318700); Espécie: P. cf. vivax FP-2013 (1329927); Espécie: P. vivax-like sp. (27990)

[0063] Em modalidades preferidas, a protína antigênica do primei- ro aspecto pode ser derivada de Plasmodium falciparum (NCBI-ID 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12314/12614

5833, ou respectiva sub-espécie de acordo com a Lista 1), em particu- lar, de Plasmodium falciparum 3D7 (NCBI-ID 36329), ou Pf NF54 (5843). Antígenos de malária adequados:

[0064] A invenção refere-se a um RNA codificante, onde o referido RNA codificante compreende uma sequência codificadora codificando pelo menos uma proteína antigênica derivada de um parasita da malá- ria como definido acima, ou um fragmento imunogênica ou uma varian- te imunogênica de uma proteína antigênica derivada de um parasita da malária.

[0065] Adequadamente, pelo menos uma proteína antigênica pode ser derivada da proteína circunspozoroíta (CSP), antígeno de estágio do fígado 1 (LSA1), proteína 1 da superfície de merozoíta (MSP1), an- tígeno 1 de membrana apical (AMA1), proteína adesiva relacionada à trombospondina (TRAP), VAR2CSA, antígeno de superfície de gameta (Pfs230), proteína de superfície de ooquinete (Pfs28), antígeno de es- tágio sexual (pfs25), proteína alvo de bloqueio de transmissão (Pfs45/48), homólogo 5 da proteína de ligação de reticulóticos (RH5), proteína interatuante RH5 (Ripr), proteína 1 de membrana de eritróci- tos (EMP1), proteína de superfície 2 de esporozoítas (SSP2), ou com- binações, ou fragmentos imunogênicos, ou variantes imunogênicas de qualquer um destes.

[0066] As proteínas antigênicas adequadas, por exemplo, AMA1, EMP1, MSP1, SSP2, ou TRAP, podem ser derivadas das proteínas de acordo com a Tabela 3 do documento WO2017/07062A4, o conteúdo da Tabela 3 do documento WO2017/070624, em particular, os números de acesso NCBI apresentados na Tabela 3 do documento WO?2017/070624 estando aqui incluídos a título de referência.

[0067] Em modalidades preferidas, pelo menos uma proteína anti- gênica pode ser derivada da proteína circunspozoroíta (CSP) de um 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12315/12614 parasita da malária, ou um fragmento imunogênico ou variante imuno- gênica do mesmo.

[0068] A CSP é uma proteína multifuncional, que forma uma ca- mada densa sobre a superfície do esporozoíta de um parasita da malá- ria. Sua estrutura global é altamente conservada em todas as espécies de Plasmodium, consistindo em uma região de repetição central flan- queada por um domínio NH2-terminal contendo um sítio de clivagem proteolítica conservado, e um domínio de adesão celular C-terminal, o domínio de repetição de trombospondina (TSR). Já foi proposto na lite- ratura que as regiões N- e C-terminais da CSP têm um papel funcional durante a saída de oócitos, invasão de glândulas salivares, saída do sítio de inoculação, e localização para hepatócitos e invasão de hepa- tócitos. Depois de sua liberação dos oócitos, o terminal N da CSP me- deia a adesão a glândulas salivares e, no hospedeiro mamífero, a re- gião oculta a TSR, mantendo o esporozoíta em um estado migratório. No fígado, um evento de clivagem proteolítica regulado leva à remoção do terceiro terminal N da proteína expondo a TSR, um evento que pode ser crítico para a invasão eficiente de hepatócitos por esporozoítas.

[0069] Como a CSP é expressa na superfície do esporozoíta de um parasita da malária, a CSP pode representar um alvo importante para a imunidade mediada por anticorpos. Por conseguinte, a CSP (ou fragmentos, variantes da mesma) é usada como um antígeno no con- texto da invenção.

[0070] Sequências de aminoácidos de CSP adequadas podem ser derivadas de qualquer CSP apresentada na Lista 2 (números de aces- so NCBI de proteínas). Lista 2: Números de acesso NCBI de proteínas de angígenos da malá- ria adequados:

[0071] XP 001351122.1, BAM84949.1, BAD73956.1, AAA29551.1, AAAZ9554.1, BAM84958.1, BAN59428.1, ACO49408.1, ACO49420.1, 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12316/12614

ACO49498.1, ACO49505.1, AAAZ9576.1, AAA2Z9545.1, AAN87576.1, AAN87620.1, BANS9401.1, BAM85068.1, BAM84914.1, BAM84865.1, ACO49446.1, ACO49503.1, ACO49504.1, ADF48458.1, AAA29543.1, AAAZ9571.1, AAN87622.1, BANS9407.1, BAM85010.1, BAN59429.1, BAMB85085.1, BAM84895.1, ACO49368.1, ACO49378.1, ACO49457.1, ACO49467.1, ACO49541.1, ACO49544.1, AAN87575.1, BAM84946.1, BAMB84947.1, BANS59412.1, BANS9422.1, BANS59424.1, BAM84878.1, ACO49384.1, ACO49490.1, ACO49538.1, ACO49540.1, ARA29562.1, BAMB84952.1, BANS59425.1, BAM85007.1, BAM85089.1, BAM85102.1, AAAZ9555.1, BAM84798.1, ADF48375.1, ACO49542.1, ACO49545.1, AAAZ9574.1, AAW59565.1, AAAZ9552.1, BAD73952.1, BAM84944.1, BAMB84957.1, BAM85032.1, BAM85062.1, BAM85093.1, BAM84896.1, BAMB84907.1, BAM84756.1, BAM84758.1, ACO49480.1, ACO49517.1, AAN87591.1, AAN87590.1, BAM84820.1, AAAZ9550.1, BAM84917.1, BAMB84954.1, BAM85044.1, BAM85045.1, BAM84987.1, BAM84993.1, BAMB84805.1, BAM84750.1, BAM85260.1, BAM85298.1, AAN87614.1, ACO49328.1, ACO49339.1, ACO49493.1, AGR53780.1, AAN87605.1, AAN87598.1, AAN87611.1, AAN87589.1, BAM85131.1, BAM85145.1, AAN87606.1, BAM84921.1, BAM84929.1, BAM84935.1, BAM85103.1, BAMB84801.1, BAM84804.1, BAM84806.1, BAM84753.1, BAM84757.1, BAMB84759.1, BAM84763.1, BAM84764.1, BAM84768.1, BAM84770.1, BAMB84775.1, BAM84778.1, BAM84779.1, BAM84781.1, BAM84789.1, BAMB84792.1, BAM84797.1, AAN87602.1, AAN87587.1, ACO49330.1, AGR53782.1, AAN87609.1, AAN87613.1, BAM85120.1, BAM84840.1, BAMB84799.1, BAM84800.1, BAM84765.1, BAM84771.1, BAM84773.1, BAMB84783.1, BAM84785.1, BAM84790.1, ACO49332.1, BAM84829.1, BAMB84956.1, BAM84795.1, AAN87588.1, ADF48384.1, BAM84833.1, BAMB84831.1, AAN87582.1, BAM84782.1, AAN87583.1, AAN87593.1, AAN87594.1, AAN87592.1, AGR53781.1, BAM84819.1, BAM84821.1, BAMB84808.1, BAM84814.1, BAM84838.1, BAM84839.1, BAM84802.1, 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12317/12614

BAMB84803.1, AAN87579.1, AAN87578.1, AAN87607.1, AAN87608.1, AAN87595.1, AAN87618.1, AAN87585.1, AAN87577.1, BAM84815.1, BAMB84816.1, BAM84812.1, BAM84834.1, BAM84835.1, BAM84822.1, BAMB84823.1, BAM84824.1, BAM84825.1, BAM84826.1, BAM84832.1, BAD73957.1, BAM84752.1, BAM84762.1, BAM84774.1, BAM84777.1, BAMB84786.1, BAM84796.1, AAN87599.1, AAN87581.1, BAM84810.1, BAMB84811.1, BAM84836.1, BAM84827.1, BAM84748.1, BAM8A4749.1, BAMB84751.1, BAM84761.1, BAM84776.1, BAM84794.1, AAN87580.1, AAN87610.1, AAN87619.1, AAN87617.1, AAN87616.1, AAN87600.1, AAN87597.1, AAN87596.1, AAN87615.1, AHF20622.1, XP 002259002.1, AFD97213.1, AFG25469.1, AFD97209.1, AFD97205.1, AFD97206.1, AFD97212.1, AFD97214.1, AFD97210.1, AFD97211.1, AHF20628.1, ADX31295.1, AHF20648.1, AHF20646.1, AFD97208.1, ADN94497.1, ADN94542.1, AHF20661.1, AHF20662.1, AHF20644.1, AFG25481.1, AHF20657.1, ADN94498.1, AHF20637.1, AFD97227.1, AHF20638.1, AHF20666.1, AHF20664.1, AHF20669.1, ADNS94489.1, AHF20658.1, AHF20656.1, AFD97232.1, AFD97225.1, ADNS94493.1, AHF20651.1, AHF20655.1, ADN94538.1, ADN94539.1, AFG25472.1, AFG25474.1, AFG25479.1, ADN94494.1, ADN94507.1, ADN94522.1, AHF20649.1, AHF20650.1, AHF20668.1, AHF20617.1, AHF20670.1, AHF20615.1, AFG25470.1, AHF20639.1, ADN94495.1, AFG25463.1, AFG25464.1, ADN94508.1, AFG25471.1, AFG25478.1, AHF20663.1, ADN94519.1, AFD97223.1, ADN94525.1, ADN94503.1, AHF20634.1, AHF20635.1, AHF20630.1, AFG25480.1, AHHO2601.1, AHHO2602.1, ADN94540.1, AHF20652.1, AHF20665.1, AHF20620.1, AHF20621.1, AHF20623.1, ACD86467.1, ADN94491.1, ADN94521.1, ADN94529.1, ADN94527.1, AFG25482.1, ADN94501.1, AHF20624.1, AHF20625.1, AFG25467.1, ADN94515.1, AFG25476.1, AFD97238.1, AFD97243.1, AHF20645.1, ADN94510.1, AFD97233.1, AFD97240.1, AFG25477.1, ADN94524.1, ADN94485.1, ADN94487.1, ADN94523.1, 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12318/12614

ADN94520.1, AFG25473.1, AHF20667.1, AHF20618.1, AHF20619.1, ADN94505.1, ADN94486.1, ADN94511.1, AFG25475.1, AHF20642.1, AHF20641.1, AHF20632.1, AHF20626.1, ADN94509.1, AHF20653.1, AFD97207.1, ADN94514.1, AFD97239.1, ADN94490.1, ADN94528.1, AFD97222.1, ADN94512.1, ADN94502.1, AFD97229.1, ADN94513.1, CAAO5623.1, AAAZ9557.1, SCN12386.1, SCN12386.1, SBT79431.1, SBTOO0176.1, SBT84923.1, SBS83173.1, SBT35133.1, SBT34702.1, SBT72933.1, ADB92551.1, XP 001613068.1, SGX77278.1, AHL69650.1, AGNO5257.1, AGNO5240.1, ADB92533.1, ADB92538.1, AHL69649.1, AGNO5254.1, ADB92534.1, ADB92542.1, ADB92553.1, ADB92546.1, ADB92547.1, ADB92548.1, ADB92531.1, AHL69647.1, AGNO5236.2, AGNO5238.1, ANS71607.1, ANS71618.1, ANS71628.1, ADB92539.1, ADB92540.1, ADB92543.1, ADB92544.1, ADB92545.1, AHL69652.1, AGNO5250.1, AGNO5252.1, AHL69651.1, ADB92550.1, AGNO5267.1, ADB92541.1, ADB92554.1, ADB92528.1, AGNO5255.1, AGNO5273.2, ANS71590.1, AGNO5249.1, AGNO5241.2, AGNO05234.2, AGNO5258.1, AGNO5271.1, AGNO5268.1, ANS71594.1, ANS71602.1, ANS71608.1, ANS71611.1, ANS71617.1, ANS71630.1, AGNO5247.1, AGNO5260.1, AGNO5266.1, ANS71599.1, ANS71604.1, ANS71615.1, ANS71589.1, ADB92552.1, ADB92555.1, XP 022712148.1.

[0072] Por conseguinte, cada uma das sequências de aminoácidos para CSP abrangidas pelos números de acesso da Lista 2, e variantes correspondentes tendo mais de 80%, 95%, 90%, 95% de identidade com cada uma das sequências de aminoácidos abrangidas pelos nú- meros de acesso da Lista 2, está aqui incluída como parte da descri- ção. Ainda, fragmentos das sequências de aminoácidos abrangidas pelos números de acesso da Lista 2, por exemplo, fragmentos corres- pondentes tendo mais de 60%, 70%, 80%, 90% do comprimento das sequências de aminoácidos abrangidas pelos números de acesso da Lista 2, estão aqui incluídos como parte da descrição.

'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12319/12614

[0073] Em várias modalidades, cada uma das sequências de ami- noácidos para CSP sendo idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica a qualquer uma das SEQ ID NOs: 1-36, 2081- 2120, 2481-2886, 8742-8753, 10080-10085, ou um fragmento imuno- gênico ou uma variante imunogênica de qualquer uma destas sequên- cias pode ser a "pelo menos uma proteína antigênica derivada da pro- teína circunspozoroíta (CSP) de um parasita da malária" da invenção. Informações adicionais sobre cada uma destas sequências de aminoá- cidos adequadas codificando proteínas derivadas de parasitas da ma- lária também podem ser obtidas a partir da listagem de sequências, em particular dos detalhes apresentados neste pedido no identificador <223> como explicando mais adiante.

[0074] Deve-se observar que quando se faz referência a resíduos aminoacídicos (aa) e suas posições em uma CSP, qualquer numera- ção usada neste pedido - a menos que indicado em contrário - refere- se à posição do respectivo aminoacídico em uma CSP corresponden- tes do Plasmodium falciparum 3D7 (cepa NCBI-ID 36329) de acordo com a SEQ ID NO: 1. As respectivas posições aminoacídicas, em toda a descrição, indicadas de forma exemplificativa para a CSP do Plas- modium falciparum 3D7 (XP 001351122.1, XM 001351086.1; aqui abreviado "Pf(3D7)"). O especialista na técnica naturalmente será ca- paz de adaptar os ensinamentos referentes à CSP do Pf(3D7) a toda e qualquer CSP apresentada neste pedido, em particular a toda e qual- quer CSP apresentada na Lista 2, de preferência a todo e qualquer fragmento de CSP apresentado na listagem de sequências (por exem- plo, SEQ ID NOs: 1-36, 2081-2120, 2481-2886, 8742-8753, 10080- 10085).

[0075] A CSP de comprimento integral do Plasmodium falciparum 3D7 consiste em 397 aminoácidos, compreendendo os seguintes ele- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12320/12614 mentos ou regiões (indicados pela posição aminoacídica) (maiores in- formações podem ser encontradas em Doud, Michael B., et al. "Unex- pected fold in the circumspozoroite protein target of malaria vaccines." Proceedings of the National Academy of Sciences 109.20 (2012): 7817-7822):

E1) CSP de comprimento integral: aminoácido 1-397;

E2) Sequência sinal secretora / peptídio sinal (SP): ami- noácido 1-18;

E3) Região RI + região de repetição de NANP: aminoáci- do 93-272;

E4) Região de repetição central: aminoácido 105-272;

E5) Região de repetição de NANP: aminoácido 98-272

E6) Fragmento EcCSP: aminoácido 27-384;

E7) Fragmento PpCSP: aminoácido 74-383;

E8) Região RI: aminoácido 93-97;

E9) Fragmento RTS,S: aminoácido 207-395;

E10) Região RiIII, região de epítopo Th2R v1: aminoácido 310-327;

E11) Região RIlIl + região TSR (RIl+): aminoácido 310-374;

E12) Região TSR v3: aminoácido 319-375;

E13) Região TSR v1: aminoácido 326-374;

E14) Região TSR v2: aminoácido 328-374;

E15) Região RIl+ v1: aminoácido 330-347;

E16) Região RIl+ v2: aminoácido 330-351;

E17) Âncora de glicosilfosfatidilinositol (GPI): aminoácido 375-397;

E18) CSP-delSP-delTSR(v2)-delGPI: aminoácido 19-325;

E19) CSP-delTSR(v2)-delGPI: aminoácido 1-325;

E20) CSP-delSP-delGPl: aminoácido 19-374;

E21) CSP-delSP: aminoácido 19-397;

'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12321/12614

E22) CSP delGPl: aminoácido 1-374; E23) Região RiIIl, região de epítopo Th2R v2: aminoácido 309-327; E24) Região de epítopo Th3R v2: aminoácido 346-366; E25) Região de epítopo Th3R + CS.T3 v2: aminoácido 346-376; E26) Região de epítopo Th3R v2: aminoácido 346-365; E27) Região de epítopo Th3R + CS.T3 v2: aminoácido 346-375.

[0013] De preferência, sempre que se fizer referência a uma prote- ína CSP no contexto da invenção, deve ficar entendido que pelo menos um dos elementos E1 a E27 acima, ou pelo menos um fragmento dos elementos E1 a E27 acima está presente. Por conseguinte, o RNA co- dificante da invenção encodes pelo menos um dos elementos E1 a E27 descritos acima, ou um fragmento imunogênico, ou uma variante imu- nogênica dos mesmos.

[0014] A CSP de Plasmodium falciparum 3D7 compreende diver- sos epítopos descritos, por exemplo, sítio de ligação do anticorpo 3A1 (aminoácido 69-74), sítio de ligação do anticorpo 2C3 (aminoácido 75- 94), sítio de ligação do anticorpo 3H10/3B4 (aminoácido 95-100) etc. Em modalidades preferidas, o RNA codificante da invenção codifica pelo menos um epítopo de CSP, por exemplo, um dos epítopos exem- plificados acima.

[0015] Fragmentos de proteínas adequados derivados da CSP de Pf(3D7), e sequênias de RNA codificante correspondentes codificando os referidos fragmentos estão apresentados na Tabela 3 (coluna A: descrição de fragmentos com indicação da posição aminoacídica em relação à proteína de comprimento integral; coluna B: sequências de aminoácidos correspondentes). Exemplos de fragmentos de proteínas preferidos incluem, porém sem limitação, CSP(1-397), CSP(19-397), 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12322/12614

CSP(19-384), and CSP(199-377).

[0016] Em modalidades preferidas, pelo menos uma proteína anti- gênica derivada da proteína circunspozoroíta (CSP) de um parasita da malária compreende um trecho de sequência de aminoácidos derivado de CSP com um comprimento de mais de 180 aminoácidos, 200 ami- noácidos, 220 aminoácidos, 240 aminoácidos, 260 aminoácidos, 280 aminoácidos, 300 aminoácidos, 320 aminoácidos, 340 aminoácidos, 360 aminoácidos, 380 aminoácidos, 390 aminoácidos, onde o trecho de aminoácidos é de preferência derivado da CSP de Plasmodium fal- ciparum 3D7.

[0017] Mais preferivelmente, pelo menos uma proteína antigênica derived from proteína circunspozoroíta (CSP) de um parasita da malá- ria compreende um trecho de sequência de aminoácidos derivado de CSP com um comprimento de 300, 301, 302, 303, 304, 305, 306, 307, 308, 309, 310, 311, 312, 313, 314, 315, 316, 317, 318, 319, 320, 321, 322, 323, 324, 325, 326, 327, 328, 329, 330, 331, 332, 333, 334, 335, 336, 337, 338, 339, 340, 341, 342, 343, 344, 345, 346, 347, 348, 349, 350, 351, 352, 353, 354, 355, 356, 357, 358, 359, 360, 361, 362, 363, 364, 365, 366, 367, 368, 369, 370, 371, 372, 373, 374, 375, 376, 377, 378, 379, 380, 381, 382, 383, 384, 385, 386, 387, 388, 389, 390, 391, 392, 393, 394, 395, 396, 397 aminoácidos, onde o trecho de aminoáci- dos é de preferência derivado de CSP de Plasmodium falciparum 3D7.

[0018] Em modalidades preferidas, pelo menos uma proteína anti- gênica derivada da proteína circunspozoroíta (CSP) de um parasita da malária compreende um trecho de sequência de aminoácidos derivado de CSP, onde o referido trecho corresponde a pelo menos 75% da CSP de comprimento integral, 80% da CSP de comprimento integral, 85% da CSP de comprimento integral, 86% da CSP de comprimento integral, 87% da CSP de comprimento integral, 88% da CSP de com- primento integral, 89% da CSP de comprimento integral, 90% da CSP 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12323/12614 de comprimento integral, 91% da CSP de comprimento integral, 92% da CSP de comprimento integral, 93% da CSP de comprimento inte- gral, 94% da CSP de comprimento integral, 95% da CSP de compri- mento integral, 96% da CSP de comprimento integral, 97% da CSP de comprimento integral, 98% da CSP de comprimento integral, 99% da CSP de comprimento integral, onde o trecho de aminoácidos é de pre- ferência derivado de CSP de Plasmodium falciparum 3D7, onde a CSP de comprimento integral (isto é, 100% de comprimento integral) tem um comprimento de 397 aminoácidos.

[0019] "Corresponde a" neste contexto deve ser entendido como uma sequência de aminoácidos sendo idêntica, ou pelo menos 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% idêntica a uma sequência de aminoácidos da CSP, em particular a uma sequência de aminoácidos de CSP derivada de Plasmodium falciparum 3D7.

[0020] Neste contexto, de preferência, uma CSP de comprimento integral pode ser usada como antígeno adequado e pode ser de prefe- rência derivada de qualquer um dos números NCBI de Acesso de Pro- teínas apresentados na Lista 2. Em modalidades preferidas da inven- ção, a CSP de comprimento integral de Plasmodium falciparum 3D7 (SEQ ID NO: 1) é adequadamente usada.

[0021] Em modalidades preferidas, uma CSP de comprimento mais integral pode ser usada como antígeno adequado e pode ser de preferência derivada de qualquer um dos números NCBI de Acesso de Proteínas apresentados na Lista 2 ou pode ser selecionada de qual- quer uma dentre as SEQ ID NO: 1-36, 2481-2886. Em modalidades preferidas da invenção, uma CSP de comprimento mais integral de Plasmodium falciparum 3D7 derivada da SEQ ID NO: 1 é adequada- mente usada.

[0022] O termo "CSP de comprimento mais integral" deve ser en- tendido como uma sequência de aminoácidos de CSP que em termos 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12324/12614 de comprimento é mais próxima da sequência de aminoácidos de comprimento integral em comparação com um fragmento RTS,S (CSP(207-395); SEQ ID NO: 2112). Por conseguinte, uma "CSP de comprimento mais integral" compreende mais de 190 aminoácidos, 200 aminoácidos, 220 aminoácidos, 240 aminoácidos, 260 aminoáci- dos, 280 aminoácidos, 300 aminoácidos, 320 aminoácidos, 340 ami- noácidos, 360 aminoácidos, 380 aminoácidos, 390 aminoácidos deri- vados de CSP, de preferência derivados da CSP de Plasmodium falci- parum 3D7. Em outras palavras, uma "CSP de comprimento mais inte- gral" compreende um trecho de sequência de aminoácidos derivado de CSP, onde o referido trecho corresponde a pelo menos 75% da CSP de comprimento integral, 80% da CSP de comprimento integral, 85% da CSP de comprimento integral, 86% da CSP de comprimento inte- gral, 87% da CSP de comprimento integral, 88% da CSP de compri- mento integral, 89% da CSP de comprimento integral, 90% da CSP de comprimento integral, 91% da CSP de comprimento integral, 92% da CSP de comprimento integral, 93% da CSP de comprimento integral, 94% da CSP de comprimento integral, 95% da CSP de comprimento integral, 968% da CSP de comprimento integral, 97% da CSP de com- primento integral, 98% da CSP de comprimento integral, 99% da CSP de comprimento integral.

[0023] A CSP de comprimento mais integral como um antígeno induz respostas humorais e especialmente celulares de anticorpos mais amplas em relação, por exemplo, à CSP truncada (por exemplo, Pf-CSP(199-377) Ligante(PVTN) HBsAg). A CSP de comprimento mais integral pode apresentar epítopos de células T adicionais, levan- do à imunidade celular aumentada, o que poderia aumentar potencial- mente a proteção contra malária (vide, por exemplo, Exemplo 6, 7, 8).

[0024] As SEQ ID NOs: 1-36, 2081-2120, 2481-2886, 8742-8753, 10080-10085 posseum proteínas CSP adequadas derivadas de parasi- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12325/12614 tas da malária; as sequências de RNA codficante correspondentes co- dificando as referidas proteínas CSP estando apresentadas na Tabela A. Informações adicionais sobre cada destas sequências de aminoáci- dos adequadas codificando proteínas derivadas de parasitas da malá- ria também podem ser obtidas a partir da listagem de sequências, em particular dos detalhes apresentados neste pedido no identificador <223> como explicado mais adiante.

[0025] De acordo com uma outra modaliade preferida, o RNA codi- ficante da invenção codifica pelo menos um peptídio ou proteína anti- gênica da malária derivada de CPS como definido acima e adicional- mente pelo menos um outro elemento peptídico ou proteico heterólogo.

[0026] Adequadamente, pelo menos um outro elemento peptídico ou proteico heterólogo pode promover a secreção peptídio ou proteína antigênica secretada da invenção (por exemplo, via sequências sinal secretoras), promover a ancoragem do peptídio ou proteína antigênica codificada da invenção na membrana plasmática (por exemplo, via elementos transmembrana), promover a formação de complexos de antígenos (por exemplo, via domínios de multimerização), promover a formação de partículas semelhantes a vírus (sequência de formação de VLP). Além disso, o RNA codificante pode adicionalmente codificar elementos ligantes peptídicos, peptídios autoclivante, sequências adju- vantes imunológicas ou sequências direcionadoras de células dendríti- cas. Domínios de multimerização adequados podem ser selecionados da lista de sequências de aminoácidos de acordo com as SEQ ID NOs: 1116-1167 do pedido de patente WO2017/081082, ou fragmentos ou variantes destas sequências. Elementos de trimerização e tetrameriza- ção podem ser selecionados dentre, por exemplo, zíperes de leucina geneticamente modificados (peptídio espiral enrolado a-helicoidal ge- neticamente modificado que adota um estado trimérico paralelo), do- mínio de dobra da fibritina do fago enterobacteriano T4, GCNA4pll, 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12326/12614

GCNA4-pLI, e p53. Neste contexto, domínios de dobra da fibritina do fago enterobacteriano T4, GCN4pll, GCNA4-pLI, e p53 são preferidos. Elementos transmembrana adequados podem ser selecionados da lis- ta de sequências de aminoácidos de acordo com as SEQ ID NOs: 1228-1343 do pedido de patente WO2017/081082, ou fragmentos ou variantes destas sequências. Sequências formadoras de VLP adequa- das podem ser selecionadas da lista de sequências de aminoácidos de acordo com as SEQ ID NOs: 1168-1227 do pedido de patente WO?2017/081082, ou fragmentos ou variantes destas sequências. Ligan- tes peptídicos adequados podem ser selecionados da lista de sequên- cias de aminoácidos de acordo com as SEQ ID NOs: 1509-1565 do pedido de patente WO2017/081082, ou fragmentos ou variantes destas sequências. Peptídios autoclivantes adequados podem ser seleciona- dos da lista de sequências de aminoácidos de acordo com as SEQ ID NOs: 1434-1508 do pedido de patente WO2017/081082, ou fragmentos ou variantes destas sequências. Sequências adjuvantes imunológicas adequadas podem ser selecionadas da lista de sequências de aminoá- cidos de acordo com as SEQ ID NOs: 1360-1421 do pedido de patente WO?2017/081082, ou fragmentos ou variantes destas sequências. Se- quências formadoras de células dendríticas (DCs) adequadas podem ser selecionadas da lista de sequências de aminoácidos de acordo com as SEQ ID NOs: 1344-1359 do pedido de patente WO2017/081082, ou fragmentos ou variantes destas sequências. Peptídios sinal secretores adequados podem ser selecionados da lista de sequências de aminoá- cidos de acordo com as SEQ ID NOs: 1-1115 e SEQ ID NO: 1728 do pedido de patente WO2017/081082, ou fragmentos ou variantes destas sequências.

[0027] Adequadamente, pelo menos um RNA codificante da inven- ção encodes pelo menos um peptídio ou proteína antigênico da malá- ria derivada de CPS definido acima e adicionalmente pelo menos um 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12327/12614 ou mais elemento peptídico ou proteico heterólogo selecionado dentre um peptídio sinal secretor heterólog, um elemento ligante peptídico, um epítopo auxiliar, um domínio de conglomeração de antígenos, ou um domínio transmembrana.

[0028] Em modalidades preferidas, o RNA codificante da invenção codifica adicionalmente peptídios sinal secretores heterólogos.

[0029] Nas modalidades em que o RNA codificante da invenção codifica adicionalmente peptídios sinal secretores heterólogos, é parti- cularmente preferível e adequado gerar uma proteína de fusão com- preendendo uma sequência sinal N-terminal heteróloga e um peptídio ou proteína C-terminal derivada de CPS, onde o referido peptídio ou proteína C-terminal derivada de CPS de preferência não possui o pep- tídio sinal secretor N-terminal endógeno. Por conseguinte, no contexto de proteínas CSP, é adequado remover pelo menos os 18 primeiros aminoácidos (que representam a sequência sinal secretora da CSP) e fundir uma sequência sinal N-terminal heteróloga ao antígeno de CSP. Tais construtos podem, de forma ideal, aumentar a secreção da proteí- na CSP (que é codificada pelo RNA do primeiro aspecto).

[0030] Peptídios sinal secretores adequados podem ser selecionados da lista de sequências de aminoácidos de acordo com as SEQ ID NOs: 1- 1115 e SEQ ID NO: 1728 do pedido de patente WO2017/081082, ou fragmentos ou variantes destas sequências, onde os peptídios sinal se- cretores funidos N-terminalmente a uma proteína CSP (ou fragmento) não possuem a sequência sinal secretora endógena.

[0031] Em algumas modalidades, o peptídio sinal é selecionado den- tre: SEQ ID NOs: 423-427 do pedido de patente WO2017/070624A1 ou um fragmento ou variante de qualquer uma destas sequências. Neste contexto SEQ ID NOs: 423-427, do pedido de patente WO2017/ 070624A1, a descrição referente às mesmas estando aqui incorporada a título de referência.

'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12328/12614

[0032] Nas modalidades particularmente preferidas, o peptídio si- nal é derivado de SPARC humana (HsSSPARC) de acordo com a SEQ ID NO: 6208. Nas modalidades particularmente preferidas, o peptídio sinal é derivado de insulina humana isoforma 1 (Hslns-iso1) de acordo com a SEQ ID NO: 6207. Nas modalidades particularmente preferidas, o peptídio sinal é derivado da albumina humana (HsALB) de acordo com a SEQ ID NO: 6205. Nas modalidades particularmente preferidas, o peptídio sinal é derivado da IgE de acordo com a SEQ ID NO: 6206.

[0033] Nas modalidades particularmente preferidas o peptídio sinal secretor é ou é derivado de HsALB, onde a sequência de aminoácidos do referido peptídio sinal heterólogo é idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica à sequência de aminoácidos SEQ ID NO: 6205, ou fragmento ou variante de qualquer um destes.

[0034] Nas modalidades em que o RNA codificante da invenção codifica adicionalmente peptídios sinal secretores heterólogos, é parti- cularmente preferível e adequado gerar uma proteína de fusão com- preendendo um peptídio sinal secretor N-terminal heterólogo e um pep- tídio ou proteína C-terminal derivada de CSP onde o referido peptídio ou proteína C-terminal derivada de CSP de preferência não possui um peptídio sinal secretor N-terminal endógeno (por exemplo, falta a CSP(1-18)). Construtos compreendendo um peptídio sinal secretor N- terminal podem melhorar, de forma ideal, a secreção da proteína da malária, de preferência a proteína CSP (que é codificada pelo RNA codificante do primeiro aspecto). Por conseguinte, secreção aumenta- da do antígeno, de preferência a proteína CSP, depois de administra- ção do RNA codificante do primeiro aspecto, pode ser vantajosa para a indução de uma resposta imunológica contra a proteína antigênica co- dificada de Plasmodium (vide, por exemplo, Exemplo 8, Figura 13B, o grupo 5 em comparação com o grupo 6).

'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12329/12614

[0035] Por conseguinte, em várias modalidades qualquer fragmen- to de CSP definido pelas SEQ ID NOs: 2081-2120, 10080-10085 pode compreender adicionalmente uma sequência sinal secretora heterólo- ga, de preferência uma sequência sinal secretora definida acima, para gerar um antígeno de CSP que é secretado in vivo. Em particular, qualquer fragmento de CSP definido pelas SEQ ID NOs: 2081-2120, 10080-10085 pode compreender adicionalmente uma sequência sinal secretora heteróloga N-terminal de SEQ ID NOs: 6205-6208.

[0036] Exemplos de construtos de CSP compreendendo uma se- quência sinal secretora heteróloga incluem, porém sem limitação, HsALB Pf-CSP(19-397), Hslns-iso1 Pf-CSP(19-397), HSSPARC Pf- CSP(19-397), IgE Pf-CSP(19-397), HsALB Pf-CSP(19-152), HsALB Pf-CSP(19-192), HSALB Pf-CSP(19-272), HSALB Pf-CSP(19- 272) Ligante(AAY) Pf-CSP(310-327) Ligante(AAY) Pf-CSP(346-375), HsALB Pf-CSP(19-272) Ligante(AAY) Pf-CSP(346- 365) Ligante(AAY) P2, HsALB Pf-CSP(19-272) Ligante(AAY) Pf- CSP(346-365) Ligante(AAY) PADRE, HsALB Pf-CSP(19- 272) Ligante(G4S) PFf-CSP(310-327) Ligante(G4S) Pf-CSP(346-375), HsALB Pf-CSP(19-272) Ligante(G4S) PFf-CSP(310-327) Pf-CSP(346- 375), HsALB Pf-CSP(19-325), HsALB Pf-CSP(19-384), HsALB Pf- CSP(19-384) TM domínio HA, HsALB Pf-CSP(82-397), HsALB Pf- CSP(93-192), HsALB Pf-CSP(93-272)) HsALB Pf-CSP(93-397), HsALB Pf-CSP(98-192), HSALB Pf-CSP(98-272), HSALB Pf-CSP(98- 374), HsALB Pf-CSP(98-397), HsALB Pf-CSP(199- 377) Ligante(PVTN) HBsAg, HsALB Pf-CSP(19- 272) Ligante(PVTN) HBsAg, HsALB Pf-CSP(19- 272) Ligante(AAY) Pf-CSP(346- 365) Ligante(AAY) PADRE Ligante(PVTN) HBsAg, HsALB Pf- CSP(19-384) Ligante(PVTN) HBsAg, HsALB Pf-CSP(19- 384) Ligante(SGG) Ferritin, HsALB Pf-CSP(93- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12330/12614

384) Ligante(PVTN) HBsAg, HsALB Pf-CSP(19- 272) Ligante(AAY) Pf-CSP(346-375) Ligante(AAY) Pf-CSP(310-327), HsALB Pf-CSP(19-272) Ligante(AAY) Pf-CSP(346- 375) Ligante(AAY) Pf-CSP(310-327) Ligante(AAY) PADRE, HsALB Pf-CSP(19-272) Ligante(AAY) Pf-CSP(310- 327) Ligante(AAY) Pf-CSP(346-375) Ligante(AAY) PADRE, HsALB Pf-CSP(19-272) Ligante(AAY) Pf-CSP(310- 327) Ligante(AAY) Pf-CSP(346- 375) Ligante(AAY) PADRE Ligante(AAY) P2, HsALB Pf-CSP(19- 272) Ligante(AAY) Pf-CSP(310-327) Ligante (AAY) Pf-CSP(346- 397), HsALB Pb-CSP(24-340), Hslns-iso1 Pb-CSP(24-340), HsSSPARC Pb-CSP(24-340), IgE Pb-CSP(24-340), onde HsALB Pf- CSP(19-397), HsALB Pf-CSP(19-384), HsALB Pf-CSP(19-384) TM domínio HA, e HsALB Pf-CSP(199-377) HBsAg são particularmente preferidos. As sequências de aminoácidos para cada um dos constru- tos listados acima podem ser encontradas na Tabela 1.

[0037] Em modalidades preferidas, o RNA codificante da invenção codifica adicionalmente um elemento ligante peptídico heterólogo.

[0038] Por conseguinte, o RNA codificante da invenção pode com- preender pelo menos uma proteína CSP ou fragmento definido acima e pelo menos um elemento ligante peptídico, onde o ligante peptídico pode ser selecionado da lista de sequências de aminoácidos de acordo com as SEQ ID NOs: 1509-1565 do pedido de patente WO?2017/081082, ou frgmentos ou variantes destas sequências.

[0039] Nas modalidades particularmente preferidas, o elemento ligante peptídico heterólogo é selecionado dentre as SEQ ID NOs: 6241-6244, 10141, 10147.

[0040] Em modalidades adequadas, o RNA codificante da inven- ção codifica regiões C-terminais parcialmente truncadas. A deleção de regiões parciais da região C-terminal pode proteger contra influências 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12331/12614 indesejadas de regiôses, perturbando respostas imunológicas apropri- adas. É preferível que, nestas proteínas CSP truncadas C-terminais, epítopos de células T derivados de CSP continuem presentes. Estes epítopos de cassete de expressão são adequadamente combinados com sequências de ligante heterólogas descritas acima. Regiões de epítopos de células T adequadas e preferidas são, por exemplo, Th2R: CSP(309-327), Th2R: CSP(310-327), Th3aR: CSP(346-366), Th3R: CSP(346-365), Th3R + CS.T3: CSP(346-375), Th3R + CS.T3: CSP(346-376). O domínio aTSR da CSP contém diversos epítopos de células T, um dos quais, (CS).T3, é responsável por uma resposta de células T CD4+ que está correlacionada com proteção. Os outros epí- topos de células T, Th2R and Th3R, são regiões polimórficas do aTSR (Doud, Michael B., et al. "Unexpected fold in the circumspozoroite pro- teín target of malaria vaccines." Proceedings of the National Academy of Sciences 109.20 (2012): 7817-7822). Epítopos auxiliares de células T preferidos derivados de CSP C-terminal são selecionados dentre as sequências de aminoácidos de acordo com as SEQ ID NOs: 2100, 2101, 2102, 2113, 10083, 10084.

[0041] A deleção de regiões parciais da região C-terminal e a combinação de epítopos de células T com ligantes heterólogos podem aumentar as respostas imunológicas (vide Exemplo 9, Fig 14 e 15). As diferenças na localização relativa e na escolha do epítopo de células T influenciam o tipo e a direção das respostas imunológicas. Algumas combinações resultam respostas humorais aumentadas (por exemplo, construtos com terminal C AAY-CSP(310-327)-AAY-CSP(346-375) e AAY-CSP(346-365)-AAY-CSP(346-375)), outras em respostas de célu- las T CD4+ e/ou CD8+ (por exemplo, AAY-CSP(310-327)-AAY- CSP(346-375) e G4S-CSP(310-327)-CSP(346-375) aumentadas.

[0042] Exemplos de extremidades C-terminais preferidas incluem, porém sem limitação, —Ligante(AAY) Pf-CSP(310- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12332/12614

327) Ligante(AAY) Pf-CSP(346-375), —Ligante(AAY) Pf-CSP(346- 365) Ligante(AAY) PADRE, —Ligante(AAY) Pf-CSP(310- 327) Ligante(AAY) Pf-CSP(346-375), —Ligante(G4S) Pf-CSP(310- 327) PI-CSP(346-375), —Ligante(G4S) Pf-CSP(310- 327) Ligante(G4S) Pf-CSP(346-375).

[0043] Exemplos de construtos de CSP compreendendo um ele- mento ligante peptídico heterólogo incluem, porém sem limitação, Pf- CSP Ligante(G4SG4) TM domínio HA, Pf-CSP(199- 377) Ligante(PVTN) HBsAg, Pf-CSP(199- 387) Ligante(PVTN) HBsAg, HsALB Pf-CSP(19- 272) Ligante(AAY) Pf-CSP(310-327) Ligante(AAY) Pf-CSP(346-375), HsALB Pf-CSP(19-272) Ligante(AAY) Pf-CSP(346- 365) Ligante(AAY) P2, HsALB Pf-CSP(19-272) Ligante(AAY) Pf- CSP(346-365) Ligante(AAY) PADRE, HsALB Pf-CSP(19- 272) Ligante(G4S) Pf-CSP(310-327) Ligante(G4S) Pf-CSP(346-375), HsALB Pf-CSP(19-272) Ligante(G4S) Pf-CSP(310-327) Pf-CSP(346- 375), HsALB Pf-CSP(199-377) Ligante(PVTN) HBsAg, LumSynt Ligante(GGS4-GGG) Pf-CSP(19-397), HsALB Pf-CSP(19- 272) Ligante(PVTN) HBsAg, HsALB Pf-CSP(19- 272) Ligante(AAY) Pf-CSP(346- 365) Ligante(AAY) PADRE Ligante(PVTN) HBsAg, HsALB Pf- CSP(19-384) Ligante(PVTN) HBsAg, HsALB Pf-CSP(19- 384) Ligante(SGG) Ferritin, HsALB Pf-CSP(93- 384) Ligante(PVTN) HBsAg, HsALB Pf-CSP(19- 272) Ligante(AAY) Pf-CSP(346-375) Ligante(AAY) Pf-CSP(310-327), HsALB Pf-CSP(19-272) Ligante(AAY) Pf-CSP(346- 375) Ligante(AAY) Pf-CSP(310-327) Ligante(AAY) PADRE, HsALB Pf-CSP(19-272) Ligante(AAY) Pf-CSP(310- 327) Ligante(AAY) Pf-CSP(346-375) Ligante(AAY) PADRE, HsALB Pf-CSP(19-272) Ligante(AAY) Pf-CSP(310- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12333/12614

327) Ligante(AAY) Pf-CSP(346- 375) Ligante(AAY) PADRE Ligante(AAY) P2, HsALB Pf-CSP(19- 272) Ligante(AAY) Pf-CSP(310-327) Ligante (AAY) Pf-CSP(346- 397), Pb-CSP Ligante(G4SG4) TM domínio HA. As sequências de aminoácidos para cada um dos construtos listados acima podem ser encontradas na Tabela 1.

[0044] Exemplos de construtos de CSP compreendendo pelo me- nos um epítopo auxiliar de célula T derivado de CSP são HsALB Pf- CSP(19-272) Ligante(AAY) Pf-CSP(310-327) Ligante(AAY) Pf- CSP(346-375) — HsALB Pf-CSP(19-272) Ligante(AAY) Pf-CSP(346- 365) Ligante(AAY) P2, HsALB Pf-CSP(19-272) Ligante(AAY) Pf- CSP(346-365) Ligante(AAY) PADRE, HsALB Pf-CSP(19- 272) Ligante(G4S) PFf-CSP(310-327) Ligante(G4S) Pf-CSP(346-375), HsALB Pf-CSP(19-272) Ligante(G4S) PFf-CSP(310-327) Pf-CSP(346- 375), HsALB Pf-CSP(19-272) Ligante(AAY) Pf-CSP(346- 365) Ligante(AAY) PADRE Ligante(PVTN) HBsAg, HsALB Pf- CSP(19-272) Ligante(AAY) Pf-CSP(346-375) Ligante(AAY) Pf- CSP(310-327), - HsALB Pf-CSP(19-272) Ligante(AAY) Pf-CSP(346- 375) Ligante(AAY) Pf-CSP(310-327) Ligante(AAY) PADRE, HsALB Pf-CSP(19-272) Ligante(AAY) Pf-CSP(310- 327) Ligante(AAY) Pf-CSP(346-375) Ligante(AAY) PADRE, HsALB Pf-CSP(19-272) Ligante(AAY) Pf-CSP(310- 327) Ligante(AAY) Pf-CSP(346- 375) Ligante(AAY) PADRE Ligante(AAY) P2, HsALB Pf-CSP(19- 272) Ligante(AAY) Pf-CSP(310-327) Ligante (AAY) Pf-CSP(346- 397).

[0045] Em modalidades preferidas, o RNA codificante da invenção codifica adicionalmente pelo menos um epítopo auxiliar heterólogo. Um epítopo auxiliar heterólogo pode aumentar a resposta imunológica do RNA codificando CSP.

'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12334/12614

[0046] Nas modalidades particularmente preferidas, o epítopo au- xiliar heterólogo é derivado do peptídio auxiliar P2 de acordo com a SEQ ID NO: 6272. Nas modalidades particularmente preferidas, o epí- topo auxiliar é derivado do epítopo auxiliar PADRE de acordo com a SEQ ID NO: 6273. Nas modalidades particularmente preferidas, o epí- topo auxiliar é derivado de HBsAg (surface antigen of Hepatitis B virus) de acordo com a SEQ ID NO: 6274.

[0047] Nas modalidades, o epítopo auxiliar é ou é derivado de P2 da toxina tetânica, de PADRE, ou de HBsAg, onde a sequência de aminoácidos do referido epítopo auxiliar é idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica a qualquer uma das amino acid se- quences SEQ ID NOs: 6272, 6273, ou 6274, ou fragmento ou variante de qualquer um destes.

[0048] De preferência, o referido epítopo auxiliar heterólogo fica localizado no terminal C de um antígeno de CSP como definido acima.

[0049] De preferência, a sequência de aminoácidos do epítopo au- xiliar P2 da toxina tetânica de acordo com a SEQ ID NO: 6272 (Gen- Bank X04436.1 ou NC 004565.1 derivado de Kovacs-Nolan et al.; PMID 16978788; P2: aa 830-844) pode servir de base para desenhos vantajosos do RNA codificante inventivo. Já foi demonstrado que a in- clusão de P2 em angítenos influencia bastante as respostas de anti- corpos a epítopos de células B pouco imunogênicas. A adição de uma sequência codificando um epítopo auxiliar P2 pode ser particularmente eficaz no aumento da resposta imunológica em uma abordagem de vacina à base de mRNA.

[0050] De preferência, o epítopo auxiliar é um epítopo de ligação de pan HLA DR (PADRE) ou um fragmento, variante ou derivado do mesmo de acordo com a SEQ ID NO: 6273. PADRE é um epítopo de células T CDA4 auxiliares imunodominantes. As células T CD4+ desem- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12335/12614 penham um papel importante na geração de respostas imunológicas de células T CD8+ efetores e células T de memória. A resposta imuno- lógica de células T CD4+, e, por conseguinte, a resposta de células T CD8+ antígeno-específicas correspondentes, pode ser aumentada co- dificando pelo menos uma proteína antigênica de Plasmodium definida neste pedido e adicionalmente pelo menos o epítopo de ligação pan HLA DR (PADRE) do epítopo auxiliar heterólogo. A adição de uma se- quência codificando um epítopo auxiliar PADRE pode ser particular- mente eficaz no aumento da resposta imunológica em uma abordagem de vacina à base de mMRNA.

[0051] De preferência, pelo menos um epítopo auxiliar é derivado de HBsAg (antígeno de superfície do vírus da hepatite B) de acordo com a SEQ ID NO: 6274 ou um fragmento, variante ou derivado da mesma. HBsAg compreende diversos epítopos auxiliares de células T CDA (vide, por exemplo, Desombere, Isabelle, et al. "Characterization of the T cell recognition of hepatitis B surface antigen (HBsAg) by good and poor responders to hepatitis B vaccines." Clinical & Experimental Immunology 122.3 (2000): 390-399). As células T CD4+ desempenham um papel importante na geração de respostas imunológicas de células T CD8+ T efetoras e de células T de memória. A resposta imunológica de células T CD4+, e, por conseguinte, a resposta de células T CD8+ antígeno-específicas correspondentes, pode ser aumentada codifican- do pelo menos uma proteína antigênica de Plasmodium definida neste pedido e adicionalmente pelo menos um dos epítopos auxiliares deri- vados de HBsAg). A adição de uma sequência codificando um epítopo auxiliar HBsAg pode ser particularmente eficaz no aumento da respos- ta imunológica em uma abordagem de vacina à base de mRNA.

[0052] Exemplos de construtos de CSP compreendendo um epíto- po auxiliar heterólogo incluem, porém sem limitação, HsALB Pf- CSP(19-272) Ligante(AAY) Pf-CSP(346-365) Ligante(AAY) PADRE, 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12336/12614

HsALB Pf-CSP(19-272) Ligante(AAY) Pf-CSP(346- 365) Ligante(AAY) PADRE Ligante(PVTN) HBsAg, HsALB Pf- CSP(19-272) Ligante(AAY) Pf-CSP(346-375) Ligante(AAY) Pf- CSP(310-327) Ligante(AAY) PADRE, HsALB Pf-CSP(19- 272) Ligante(AAY) Pf-CSP(310-327) Ligante(AAY) Pf-CSP(346- 375) Ligante(AAY) PADRE, HsALB Pf-CSP(19- 272) Ligante(AAY) Pf-CSP(310-327) Ligante(AAY) Pf-CSP(346- 375) Ligante(AAY) PADRE Ligante(AAY) P2, HsALB Pf-CSP(19- 272) Ligante(AAY) Pf-CSP(346-365) Ligante(AAY) P2, Pf-CSP(199- 377) Ligante(PVTN) HBsAg, Pf-CSP(199- 387) Ligante(PVTN) HBsAg, HsALB Pf-CSP(199- 377) Ligante(PVTN) HBsAg, HsALB Pf-CSP(19- 272) Ligante(PVTN) HBsAg, HsALB Pf-CSP(19- 384) Ligante(PVTN) HBsAg, HsALB Pf-CSP(93- 384) Ligante(PVTN) HBsAg matriz carreadora. As sequências de aminoácidos para cada um dos construtos listados acima podem ser encontradas na Tabela 1.

[0053] Um domínio ou fragmento de HBsAg (antígeno de superfície do vírus da hepatite B, por exemplo, de acordo com a SEQ ID NO: 6274) pode compreender um ou mais epítopos auxiliares T, mas, além disso, a proteína ou um fragmento da mesma pode funcionar como um domínio de conglomeração de antígenos ou como um domínio de mul- timerização.

[0054] Em outras modalidades preferidas, o RNA codificante da invenção codifica adicionalmente um domínio de conglomeração de antígenos ou domínio de multimerização heterólogo.

[0055] Adequadamente, o domínio de conglomeração de antígenos (domínio de multimerização ou porção de arcabouço) é ou é derivado dentre ferritina, lumazina-sintase (LS), antígeno de superfície do vírus da hepatite B (HBsAg) ou encapsulina.

'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12337/12614

[0056] Domínios de conglomeração de antígenos de proteínas de arcabouço podem, por exemplo, aumentar a imunogenicidade de um antígeno, por exemplo, alterando a estrutura do antígeno, alterando a absorção e o processamento ao antígeno, e/ou fazendo com que o an- tígeno se ligue a um parceiro de ligação. Em algumas modalidades, a porção arcabouço é uma proteína que pode se automontar em nano- partículas de proteína que são altamente simétricas, estáveis, e estru- turalmente organizadas, com diâmetros de 10-150 nm, uma faixa de tamanhos bastante adequada para interações ótimas com várias célu- las do sistema imunológico. Em algumas modalidades, proteínas virais ou partículas semelhantes a vírus podem ser usadas para formar estru- turas de nanopartícula adequadas.

[0057] Em modalidades preferidas, o domínio de conglomeração de antígenos (domínio de multimerização) é ou é derivado de antígeno de superfície do vírus da hepatite B (HBsAg), ferritina ou lumazina- sintase, onde as sequências de aminoácidos do referido domínio de conglomeração de antígenos são idênticas ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idênticas a qualquer uma das sequências de ami- noácidos de acordo com as SEQ ID NOs: 6274, 10153, 10162, ou um fragmento ou variante de qualquer uma destas.

[0058] Nas modalidades em que o RNA codificante da invenção codifica adicionalmente um domínio de conglomeração de antígenos heterólogo, é particularmente preferido e adequado gerar uma proteína de fusão compreendendo um domínio de conglomeração de antígenos heterólogo, opcionalmente um elemento ligante, e um peptídio ou pro- teína derivada de CSP. Construtos compreendendo um domínio de conglomeração de antígenos podem melhorar a conglomeração de an- tígenos e, portanto, podem promover respostas imunológicas, por exemplo, por mútiplos eventos de ligação que ocorrem simultaneamen- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12338/12614 te entre os antígenos conglomerados e os receptores de células hos- pedeiras (vide maiores detalhes em López-Sagaseta, Jacinto, et al. "Self-assembling protein nanoparticles in the design of vaccines". Computational and structural biotechnology journal 14 (2016):58-68). Adicionalmente, tais construtos podem compreender ainda uma se- quência sinal secretora N-terminal (definida acima). Por exemplo, em algumas modalidades, a porção arcabouço é um antígeno de superfí- cie da hepatite B (HBsAg). O HBsAg forma partículas esféricas. A adi- ção de um fragmento do de antígeno de superfície da sequência do vírus da hepatite B (HBsAg) pode ser particularmente efetiva em au- mentar a resposta imunológica em uma abordagem de vacina à base de mRNA.

[0059] Nas modalidades particularmente preferidas, HBsAg é usa- do para promover a conglomeração de antígenos e pode, portanto, promover respostas imunológicas do RNA codificando o antígeno de Plasmodium, de preferência CSP ou um fragmento ou derivado do mesmo.

[0060] Nas modalidades particularmente preferidas, o domínio de conglomeração de antígenos (domínio de multimerização) é ou é deri- vado dentre antígeno de superfície do vírus da hepatite B (HBsAg), on- de as sequências de aminoácidos do referido domínio de conglomera- ção de antígenos são de preferência idênticas ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idênticas à sequência de aminoácidos de acordo com a SEQ ID NO: 6274, um fragmento ou variante de qual- quer uma destas.

[0061] Lumazina sintase (LS, LumSynth) é uma enzima com pro- priedades formadoras de partículas, presente em uma ampla varieda- de de organismos e envolvida na biossíntese da riboflavina. Jardine et al reportaram suas tentativas de melhorar a imunorreatividade da 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12339/12614 gp120 recombinante contra infecção pelo através da inclusão de luma- zina sintase (LS) para a otimização de candidatos a vacinas (Jardine, Joseph, et al. "Rational HIV immunogen design to target specific ger- mline B cell receptors". Science 340.6133 (2013):711-716).

[0062] Nas modalidades particularmente preferidas, a lumazina- sintase é usada para promover a conglomeração de antígenos e pode, portanto, promover respostas imunológicas do RNA codificando o antí- geno Plasmodium, de preferência CSP ou um fragmento ou derivado do mesmo.

[0063] Nas modalidades particularmente preferidas, o domínio de conglomeração de antígenos (domínio de multimerização) é ou é deri- vado de lumazina-sintase (LS), onde as sequências de aminoácidos do referido domínio de conglomeração de antígenos são de preferência idênticas ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idênticas à se- quência de aminoácidos de acordo com a SEQ ID NO: 10153, um fra- gmento ou variante de qualquer uma destas.

[0064] Ferritina é uma proteína cuja função principal é o armaze- namento intracelular de ferro. Quase todos os organismos vivos produ- zem ferritina que é feita de 24 subunidades, cada uma composta de um feito de quatro hélices alfa, que automontam em uma estrutura quater- nária com simetria octaédrica. Suas propriedades de automontagem em nanopartículas são bastante adequadas para transportar e expor antígenos.

[0065] Nas modalidades particularmente preferidas, a ferritina é usada para promover a conglomeração de antígenos e pode, portanto, promover respostas imunológicas do RNA codificando o antígeno de Plasmodium, de preferência CSP ou um fragmento ou variante do mesmo.

[0066] Nas modalidades particularmente preferidas, o domínio de 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12340/12614 conglomeração de antígenos (domínio de multimerização) é ou é deri- vado dentre ferritina onde as sequências de aminoácidos do referido domínio de conglomeração de antígenos são de preferência idênticas ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idênticas à sequência de aminoácidos de acordo com a SEQ ID NO: 10162), um fragmento ou variante de qualquer uma destas.

[0067] Encapsulina, uma nova nanoparticula semelhante a uma gaiola de proteína isolada da termófila Thermotoga maritima, também pode ser usada como uma plataforma para os presentes antígeno na superífice de nanopartículas de automontagem. A encapsulina é mon- tada a partir de 60 cópias de monômeros de 31 kDa idênticos.

[0068] Exemplos adequados de construtos de CSP compreenden- do um domínio de conglomeração de antígenos heterólogo incluem, porém sem limitação, HSALB Pf-CSP(19-384) Ligante(SGG) Ferritin, LumSynt Ligante(GGS4-GGG) Pf-CSP(19-397), Pf-CSP(199- 377) Ligante(PVTN) HBsAg, Pf-CSP(199- 387) Ligante(PVTN) HBsAg, HsALB Pf-CSP(199- 377) Ligante(PVTN) HBsAg, HsALB Pf-CSP(19- 272) Ligante(PVTN) HBsAg, HsALB Pf-CSP(19- 272) Ligante(AAY) Pf-CSP(346- 365) Ligante(AAY) PADRE Ligante(PVTN) HBsAg, HsALB Pf- CSP(19-384) Ligante(PVTN) HBsAg, HsALB Pf-CSP(93- 384) Ligante(PVTN) HBsAg. As sequências de aminoácidos para ca- da um dos construtos listados acima podem ser encontradas na Tabela

1.

[0069] Outros domínios de multimerização/domínio de conglome- ração de antígenos adequados podem ser selecionados da lista de se- quências de aminoácidos de acordo com SEQ ID NOs: 1116-1167 do pedido de patente WO2017/081082, ou fragmentos ou variantes destas 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12341/12614 sequências.

[0070] Em modalidades preferidas, o RNA codificante da invenção codifica adicionalmente pelo menos um domínio transmembrana hete- rólogo.

[0071] Nas modalidades particularmente preferidas, o domínio transmembrana heterólogo é derivado de um domínio transmembrana de HA de acordo com a SEQ ID NOs: 6302.

[0072] De preferência, o referido domínio transmembrana heteró- logo fica localizado no terminal C de um antígeno de CSP definido acima.

[0073] Exemplos de construtos de CSP compreendendo um domí- nio transmembrana heterólogo são Pf-CSP Ligante(G4SG4) TM do- mínio HA e HsALB Pf-CSP(19-384) TM domínio HA. O Exemplo 7 mostra que mMRNA codificando CSP compreendendo um domínio transmembrana heterólogo induz humoral and respostas imunológicas celulares (Figuras 10 e 11). As sequências de aminoácidos para cada um dos construtos listados acima podem ser encontradas na Tabela 1.

[0074] Elementos peptídicos ou proteicos heterólogos adequados que podem ser fundidos a um antígeno de CSP definido neste pedido e as sequências codificadoras de RNA correspondentes codificando os referidos elementos estão apresentados na Tabela 4.

[0075] Por conseguinte, como descrito acima, pelo menos uma proteína antigênica derivada de CSP de um parasita da malária pode compreender, de preferência da direção N-terminal para a direção C- terminal: a) opcionalmente, uma sequência sinal secretora N- terminal heteróloga selecionada dentre as SEQ ID NOs: 6205-6208 ou fragmentos ou variantes do mesmo, onde a SEQ ID NO: 6205 e parti- cularmente preferida e b) pelo menos uma proteína antigênica derivada de CSP, 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12342/12614 de preferência qualquer uma das sequências de aminoácidos selecio- nadas dentre SEQ ID NOs: 1-36, 2081-2120, 2481-2886, 8742-8753, 10080-10085, ou fragmentos ou variantes do mesmo, e c) opcionalmente, pelo menos um epítopo auxiliar heteró- logo selecionado dentre as SEQ ID NOs: 6272, 6273, ou 6274, ou fra- gmentos ou variantes do mesmo, e d) opcionalmente, pelo menos um domínio de conglomera- ção de antígenos heterólogo selecionado dentre as SEQ ID NOs: 6274, 10153, 10162, ou fragmentos ou variantes do mesmo, e e) opcionalmente, pelo menos um domínio transmembrana heterólogo selecionado dentre a SEQ ID NOs: 6302 ou fragmentos ou variantes do mesmo.

[00139] Ainda, a), b),c), d) e/ou e) podem ser conectados via pelo menos um elemento ligante peptídico selecionado dentre as SEQ ID NOs: 6241-6244, 10141, 10147.

[00140] Uma descrição detalhada de construtos da proteína CSP particularmente preferidos e adequadas estão apresentada na Tabela 1 (para uma vista esquemática vide coluna E da Tabela 1 e Figura 26).

[00141] Na Tabela 1 todas as referências feitas a resíduos aminoa- cídicos (aa) e suas posições em uma proteína CSP referem-se à posi- ção do respectivo resíduo aa em uma proteína CSP correspondente de Pf(3D7) (SEQ ID NO: 1). Ademais, as abreviações usadas para des- crever os desenhos adequados de antígenos de CSP da Tabela 1 tam- bém estão usadas em toda a descrição da invenção (como descrito acima) assim como na listagem de sequências ST25. a coluna A da Tabela 1 apresenta uma rápida descrição de desenhos adequados de antígenos de CSP. A coluna B da Tabela 1 indica o trecho ou trechos de aminoácidos para cada um dos respectivos desenhos de antígenos correspondentes à CSP de comprimento integral de referência (SEQ ID 'etição 870210044043, de 14/05/2021, pág. 12343/12614

NO: 1). A coluna C da Tabela 1 indica a percentagem da sequência de aminoácidos que corresponde à CSP de comprimento integral de refe- rência (SEQ ID NO: 1). A coluna D da Tabela 1 apresenta s SEQ ID NOs das proteínas dos respectivos desenhos de antígenos de CSP derivados de Pf(3D7). Notavelmente, a descrição da invenção inclui explicitamente as informações apresentadas no identificador <223> da listagem de sequências ST25 do presente pedido ("L" significa Ligan- te"). A coluna E da Tabela 1 associa o desenho de antígenos de CSP a sua respectiva vista esquemática mostrada na Figura 26. Sequências de RNA preferidas codificando os construtos da Tabela 1 estão apre- sentadas na Tabela 5. Tabela 1: Desenhos preferidos de antígenos de CSP RN La Pf-CSP aa1-397 100,0 |1 1 o PI-CSP(1-374) aa1l-374 94,21 Pi PI-CSP(1-325) aa1-325 81,86 8 1) HsALB Pf-CSP(19-397) aa19-397 95,47 Hslns-iso1 Pf-CSP(19-397) aa19-397 95,47 HsSPARC Pf-CSP(19-397) aa19-397 95,47 jê 2) IgE Pf-CSP(19-397) aa19-397 95,47 Pf-CSP Ligante(G4SG4) TM domínio HA aa1-397 100,0 o Pf-CSP(199-377) Ligante(PVTN) HBsAg aa199-377 45,09 je a) Pf-CSP(199-387) Ligante(PVTN) HBsAg aa199-387 47,61 jão |) HsALB Pf-CSP(19-152) aa19-152 33,75 HsALB Pf-CSP(19-192) aa19-192 43,83 HsALB Pf-CSP(19-272) aa19-272 63,98 HsALB Pf-CSP(19-272) Ligante(AAY) PfF-CSP | aa19-272, aa310- |76,07 [14 16 (310-327) Ligante(AAY) Pf-CSP(346-375) 327, aa346-375 HsALB Pf-CSP(19-272) Ligante(AAY) Pf- aa19-272, aa346- |69,02 [15 24 CSP(346-365) Ligante(AAY) P2 365 HsALB Pf-CSP(19-272) Ligante(AAY) Pf- aa19-272, aa346- |69,02 [16 23 CSP(346-365) Ligante(AAY) PADRE 365 HsALB Pf-CSP(19-272) Ligante(G4S) Pf- aa19-272, aa310- [76,07 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12344/12614

CSP(310-327) Ligante(G4S) Pf-CSP(346-375) [327, aa346-375 IL IT [| |

HsALB Pf-CSP(19-272) Ligante(G4S) Pf- aa19-272, aa310- |76,07 [18 18

CSP(310-327) Pr-CSP(346-375) 327, aa346-375

HsALB Pf-CSP(19-325) aa19-325 77,33 jig |)

HsALB Pf-CSP(19-384) aa19-384 92,19 jo ja

HsALB Pf-CSP(19-384) TM domínio HA aa19-384 92,19

HsALB Pf-CSP(82-397) aa82-397 79,60

HsALB Pf-CSP(93-192) aa9g3-192 25,19 jaã |)

HsALB Pf-CSP(93-272) aa9g3-272 45,34 ja

HsALB Pf-CSP(93-397) aag3-397 76,83

HsALB Pf-CSP(98-192) aa9g8-192 23,93 jag

HsALB Pf-CSP(98-272) aa9g8-272 44,08 EN

HsALB Pf-CSP(98-374) aa9g8-374 69,77 jas |)

HsALB Pf-CSP(98-397) aa9g8-397 75,57

HsALB Pf-CSP(199- aa199-377 45,09 |30 5

377) Ligante(PVTN) HBsAg

LumSynt Ligante(GGS4-GGG) Pf-CSP(19- — |aa19-397 95,47 [8742 |28

397)

HsALB Pf-CSP(19- aa19-272 63,98 [8743 |7

272) Ligante(PVTN) HBsAg

HsALB Pf-CSP(19-272) Ligante(AAY) Pf- aa19-272, aa346- |69,02 [8744 |26

CSP(346- 365

365) Ligante(AAY) PADRE Ligante(PVTN) H

BsAg

HsALB Pf-CSP(19- aa19-384 92,19 [8745

384) Ligante(PVTN) HBsAg

HsALB Pf-CSP(19- aa19-384 92,19 [8746 |27

384) Ligante(SGG) Ferritin

HsALB Pf-CSP(93- aa93-384 73,55 |8747

384) Ligante(PVTN) HBsAg

HsALB Pf-CSP(19-272) Ligante(AAY) Pf- aa19-272, aa346- |73,55 [8749 |22

CSP(346-375) Ligante(AAY) Pf-CSP(310-327) | 375, aa310-327

HsALB Pf-CSP(19-272) Ligante(AAY) Pf- aa19-272, aa346- |73,55 |8750 |25

CSP(346-375) Ligante(AAY) Pf-CSP(310- 375, aa310-327

327) Ligante(AAY) PADRE

HsALB Pf-CSP(19-272) Ligante(AAY) Pf- aa19-272, aa310- |73,55 [8751 [19

CSP(310-327) Ligante(AAY) Pf-CSP(346- 327, aa346-375

375) Ligante(AAY) PADRE

HsALB Pf-CSP(19-272) Ligante(AAY) Pf- aa19-272, aa310- |73,55 | 8752 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12345/12614

[00142] Em várias modalidades, o RNA do primeiro aspecto com- preende pelo menos uma sequência codificadora codificando pelo me- nos um peptídio ou proteína antigênica compreendendo ou consistindo em pelo menos uma sequência de aminoácidos sendo idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica a qualquer uma das SEQ ID NOs: 1-36, 2081-2120, 2481-2886, 8742-8753, 10080-10085, ou um fragmento imunogênico ou uma variante imunogênica de qualquer uma destas sequências. Informações adicionais sobre cada uma dessas sequências de aminoácidos adequadas codificando antígenos de CSP também podem ser obtidas a partir da listagem de sequências, em par- ticular dos detalhes apresentados neste pedido no identificador <223> como explicado a seguir.

[00143] Em modalidades preferidas, o RNA do primeiro aspecto compreende pelo menos uma sequência codificadora codificando pelo menos um peptídio ou proteína antigênica compreendendo ou consis- tindo em pelo menos uma sequência de aminoácidos sendo idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica a qualquer uma das SEQ ID NOs: 1, 31, 2081, 2481-2886, ou um fragmento imunogênico ou uma variante imunogênica de qualquer uma destas sequências. In- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12346/12614 formações adicionais sobre cada uma dessas sequências de aminoá- cidos adequadas codificando antígenos de CSP também podem ser obtidas a partir da listagem de sequências, em particular dos detalhes apresentados neste pedido no identificador <223> como explicado a seguir.

[00144] Nas modalidades particularmente preferidas, o RNA do pri- meiro aspecto compreende pelo menos uma sequência codificadora codificando pelo menos um peptídio ou proteína antigênica compreen- dendo ou consistindo em pelo menos uma sequência de aminoácidos sendo idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica a qualquer uma das SEQ ID NO: 1-36, 8742-8753 (vide, por exemplo, Tabela 1), ou um fragmento imunogênico ou uma variante imunogênica de qualquer uma destas sequências. Informações adicionais sobre ca- da uma dessas sequências de aminoácidos adequadas codificando antígenos de CSP também podem ser obtidas a partir da listagem de sequências, em particular dos detalhes apresentados neste pedido no identificador <223> como explicado a seguir.

[00145] Em outras modalidades, o RNA do primeiro aspecto com- preende pelo menos uma sequência codificadora codificando pelo me- nos um peptídio ou proteína antigênica compreendendo ou consistindo em pelo menos uma sequência de aminoácidos sendo idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica a qualquer uma das SEQ ID NOs: 13-17 do pedido de patente WO2017/070624A1 ou um frag- mento ou variante de qualquer uma destas sequências. Neste contexto SEQ ID NOs: 13-17, do pedido de patente WO2017/070624A1, e a descrição referentes às mesmas encontra-se aqui incorporada a título de referência.

[00146] Em várias modalidades, o RNA do primeiro aspecto com- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12347/12614 preende pelo menos uma sequência codificadora codificando pelo me- nos um peptídio ou proteína antigênica derivada da proteína circunspo- zoroíta (CSP) de um parasita da malária, ou um fragmento imunogêni- co ou variante imunogênica do mesmo, onde a sequência de aminoá- cidos é mutada/substituída para deletar pelo menos um sítio de glicosi- lação previsto ou potencial.

[00147] Pode ser adequado no contexto da invenção que os sítios de glicosilação na sequência de aminoácidos codificada sejam muta- dos/substituídos, o que significa que os aminoácidos codificados que podem ser glicosilados, por exemplo, depois da translação do RNA codificante após administração in vivo, sejam trocados por um aminoá- cido diferente. Por conseguinte, no nível de ácido nucleico, códons co- dificando asparagina previstos de serem glicosilados (sítios de N glico- silação) são substituídos por códons codificando glutamina.

[00148] Por mutação/substituição dos aminoácidos relevantes, é possível prevenir a glicosilação. Neste contexto pelo menos um códon codificando uma asparagina, arginina, serina, treonina, tirosina, lisina, prolina ou triptofano é modificado de maneira que um aminoácido dife- rente seja codificado pelo mesmo deletando pelo menos um sítio de glicosilação previsto ou potencial. Os sítios de glicosilação previstos podem ser previstos usando redes neurais artificiais que examinam a sequência quanto a sítios de glicosilação comuns, por exemplo, sítios de N-glicosilação podem ser previstos por meio do servidor NetNGlyc

1.0.

[00149] Em modalidades preferidas, pelo menos uma proteína anti- gênica derived da proteína circunspozoroíta (CSP) de um parasita da malária, ou um fragmento imunogênico ou variante imunogênica do mesmo, é mutada para deletar pelo menos um sítio de glicosilação previst ou potencial, por exemplo, asparagina (N) é substituída por uma glutamina (Q). Por conseguinte, no nível de ácido nucleico, a sequên- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12348/12614 cia de ácidos nucleicos é modificada para codifica Q em vez de N em sítios de N-glicosilação previstos, por exemplo, emsítios de N- glicosilação previstos da proteína SCP codificada, ou um fragmento, variante ou derivado da mesma. Neste contexto o termo "CSP mutada" significa que pelo menos um sítio de glicosilação (previsto) é mutado.

[00150] Em várias modalidades, a sequência de aminoácidos da pelo menos uma proteína antigênica derivada da proteína circunspozo- roíta (CSP) de um parasita da malária, ou um fragmento imunogênico ou variante imunogênica do mesmo é mutada para deletar todos os sítios de glicosilação previstos ou potencais. Sequências codificadoras adequadas:

[00151] De acordo com modalidades preferidas, o RNA codificante compreende pelo menos uma sequência codificadora codificando pelo menos um peptídio ou proteína antigênica derivada da CSP definida neste pedido, ou fragmentos e variantes da mesma. Neste contexto, qualquer sequência codificadora codificando pelo menos um peptídio ou proteína antigênica derivada de CSP, de preferência derivada da CSP de Pf(3D7), ou fragmentos e variantes da mesma pode ser enten- dida como sequência codificadora adequada e, portanto, pode estar compreendida no RNA codificante do primeiro aspecto.

[00152] Em modalidades preferidas, o RNA codificante do primeiro aspecto pode compreender ou consistir em pelo menos uma sequência codificadora codificando pelo menos um peptídio ou proteína antigêni- ca derivada da CSP definida neste pedido, de preferência codificando qualquer uma das SEQ ID NOs: 1-36, 2081-2120, 2481-2886, 8742- 8753, 10080-10085 ou fragmentos ou variantes das mesmas.

[00153] Deve ficar entendido que, no nível de ácidos nucleicos, qualquer sequência de ácidos nucleicos, em particular, qualquer se- quência de RNA que codifique uma sequência de aminoácidos sendo idêntica às SEQ ID NOs: 1-36, 2081-2120, 2481-2886, 8742-8753, 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12349/12614

10080-10085 ou fragmentos ou variantes do mesmo, ou qualquer se- quência de ácidos nucleicos (por exemplo, sequência de DNA, se- quência de RNA) que codifique sequências de ácidos nucleicos sendo pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idênticas a qualquer uma das SEQ ID NOs: 1-36, 2081-2120, 2481-2886, 8742-8753, 10080- 10085 ou fragmentos ou variantes do mesmo, pode ser selecionada e, por conseguinte, ser entendida como sequência codificadora adequada e, portanto, pode estar compreendida no RNA codificante do primeiro aspecto.

[00154] Em modalidades preferidas, o RNA codificante do primeiro aspecto pode compreender ou consistir em pelo menos uma sequência codificadora codificando qualquer uma das SEQ ID NO: 1-36, 8742- 8753 ou fragmentos ou variantes das mesmas. Deve ficar entendido que, no nível de ácidos nucleicos, qualquer sequência de ácidos nu- cleicos, em particular, qualquer sequência de RNA que codifique uma sequência de aminoácidos sendo idêntica às SEQ ID NO: 1-36, 8742- 8753 ou fragmentos ou variantes do mesmo, ou qualquer sequência de ácidos nucleicos (por exemplo, sequência de DNA, sequência de RNA) que codique sequências de aminoácidos sendo pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica a qualquer uma das SEQ ID NO: 1-36, 8742-8753 ou fragmentos ou variantes do mesmo, pode ser seleciona- da e, por conseguinte, ser entendida como sequência codificadora adequada e, portanto, pode estar compreendida no RNA codificante do primeiro aspecto.

[00155] Em outras modalidades, o RNA codificante do primeiro as- pecto pode compreender ou consistir em pelo menos uma sequência codificadora codificando qualquer uma das SEQ ID NOs: 13-17 do pe- dido de patente WO2017/070624A1 ou fragmentos ou variantes das 'etição 870210044043, de 14/05/2021, pág. 12350/12614 mesmas. Deve ficar entendido que, no nível de ácidos nucleicos, qual- quer sequência de ácidos nucleicos, em particular, qualquer sequência de RNA que codifique uma sequência de aminoácidos sendo idêntica às SEQ ID NOs: 13-17 do pedido de patente WO2017/070624A1 ou fragmentos ou variantes do mesmo, ou qualquer sequência de ácidos nucleicos (por exemplo, sequência de DNA, sequência de RNA) que codifique sequências de aminoácidos sendo pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 291%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica a qualquer uma das SEQ ID NOs: 13-17 do pedido de patente WO2017/070624A1 ou fragmentos ou variantes do mesmo, pode ser selecionada e, por conseguinte, ser entendida como sequência codificadora adequada e, portanto, pode estar com- preendida no RNA codificante do primeiro aspecto.

[00156] Em modalidades preferidas, o RNA codificante do primeiro aspecto compreende uma sequência codificadora que compreende pe- lo menos uma sequência de ácidos nucleicos sendo idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica às SEQ ID NOs: 37-328, 2121-2480, 2887-6134, 8754-8855, 10086-10139 ou um fragmento ou variante de qualquer uma destas sequências. Informações adicionais sobre cada uma destas sequências de ácidos nucleicos adequadas codificadoras também podem ser obtidas a partir da listagem de se- quências, em particular dos detalhes apresentados neste pedido no identificador <223>.

[00157] Nas modalidades particularmente preferidas, o RNA codifi- cante do primeiro aspecto compreende uma sequência codificadora que compreende pelo menos uma sequência de ácidos nucleicos sen- do idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica às SEQ ID NOs: 37-328, 8754-8855, ou um fragmento ou variante de 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12351/12614 qualquer uma destas sequências. Informações adicionais sobre cada uma destas sequências de ácidos nucleicos adequadas codificadoras também podem ser obtidas a partir da listagem de sequências, em par- ticular dos detalhes apresentados neste pedido no identificador <223>.

[00158] Em outras modalidades preferidas, o RNA codificante do primeiro aspecto compreende uma sequência codificadora que com- preende pelo menos uma sequência de ácidos nucleicos sendo idênti- ca ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 294%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica às SEQ ID NOs: 37, 40, 41, 71, 77, 107, 113, 143, 149, 179, 185, 215, 221, 251, 257, 287, 293, 323, 2121, 2161, 2201, 2241, 2281, 2321, 2361, 2401, 2441, 2887-6134, ou um fragmento ou variante de qualquer uma des- tas sequências. Informações adicionais sobre cada uma destas se- quências de ácidos nucleicos adequadas codificadoras também podem ser obtidas a partir da listagem de sequências, em particular dos deta- lhes apresentados neste pedido no identificador <223>.

[00159] Em outras modalidades preferidas, o RNA codificante do primeiro aspecto compreende uma sequência codificadora que com- preende pelo menos uma sequência de ácidos nucleicos sendo idênti- ca ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 294%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica às SEQ ID NOs: 44, 80, 116, 152, 188, 224, 260, 296, 8755, ou um fragmento ou variante de qualquer uma destas sequências (codificndo HSALB Pf- CSP(19-397)). Informações adicionais sobre cada uma destas sequên- cias de ácidos nucleicos adequadas codificadoras também podem ser obtidas a partir da listagem de sequências, em particular dos detalhes apresentados neste pedido no identificador <223>.

[00160] Em modalidades preferidas, o RNA codificante do primeiro aspecto é um RNA artificial.

[00161] O termo "RNA artificial" conforme usado neste pedido refe- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12352/12614 re-se a um RNA que não ocorre naturalmente. Em outras palavras, um RNA artificial deve ser entendido como uma molécula de ácido nuclei- co não natural. Tais moléculas de RNA podem ser não naturais por causa de sua sequência individual (por exemplo, sequência codificado- ra com teor de G/C modificado, UTRs) e/ou por causa de outras modi- ficações, por exemplo, modificações estruturais de nucleotídeos. Tipi- camente, um RNA artificial pode ser desenhado e/ou generado por modificação genética para corresponder a uma sequência artificial de nucleotídeos (i.e., sequência heteróloga). Neste contexto um RNA arti- ficial é uma sequência que não pode ocorrer naturalmente, i.e., ela di- fere da sequência do tipo selvagem em pelo menos um nucleotídeo. O termo "RNA artificial" não se limita a indicar "uma única molécula", e entende-se que ele compreende um conjunto de moléculas essencial- mente idênticas. Por conseguinte, ele pode indicar uma pluralidade de moléculas de RNA essencialmente idênticas. O RNA da invenção é de preferência um RNA artificial.

[00162] Em modalidades preferidas, o RNA codificante do primeiro aspecto é um RNA artificial modificado e/ou estabilizado.

[00163] De acordo com modalidades preferidas, o RNA da presente invenção pode ser assim apresentado como um "RNA artificial estabili- zado" ou "RNA codificante estabilizado", quer dizer, um RNA que apre- senta maior resistência à degradação in vivo e/ou um RNA que apre- senta maior estabilidade in vivo, e/ou um RNA que apresenta melhor translatabilidade in vivo. A seguir estão descritas modificações ade- quadas específicas neste contexto que são adequadamente para "es- tabilizar" o RNA.

[00164] Tal estabilização pode ser efetuada apresentando um "RNA seco" e/ou um "RNA purificado" especificado neste pedido. Alternati- vamente ou adicionalmente, tal estabilização pode ser efetuada, por exemplo, por um esqueleto fosfato modificado do RNA codificante da 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12353/12614 presente invenção. Uma modificação no esqueleto em relação à pre- sente invenção é uma modificação na qual os fosfatos do esqueleto dos nucleotídeos contidos no RNA são quimicamente modificados. Nu- cleotídeos que podem ser de preferência usados neste contexto con- têm, por exemplo, um esqueleto fosfato modificado com fosforotioate, de preferência pelo menos um dos oxigênios do fosfato contidos no esqueleto fosfato sendo substituídos por um átomo de enxofre. RNAs estabilizados podem incluir ainda, por exemplo: análogos não iônicos de fosfato, tal como, por exemplo, alquila e aril fosfonatos, nos quais o oxigênio carregado do fosfonato é substituído por um grupo alquila ou arila, ou fosfodiésteres e alquilfosfotriésteres, nos quais o resíduo oxi- gênio carregado está presente na forma alquilada. Tais modificações no esqueleto incluem tipicamente, porém sem limitação, modificações do grupo consistindo em metilfosfonatos, fosforamidatos e fosforotioa- tos (por exemplo, citidina-5/-O-(1-tiofosfato)).

[00165] A seguir, estão descritas modificações adequadas que são capazes de "estabilizar" o RNA da invenção.

[00166] De acordo com as modaliades, o RNA é um RNA modifica- do, onde a modificação refere-se a modificações químicas compreen- dendo modificações no esqueleto assim como modificações em açúca- res ou modificações em bases.

[00167] Um RNA modificado pode compreender análogos/modifica- ções nucleotídicos, por exemplo, modificações no esqueleto, modifica- ções em açúcares ou modificações em bases. Uma modificação no esqueleto no contexto da invenção é uma modificação na qual os fosfa- tos do esqueleto dos nucleotídeos do RNA são quimicamente modifi- cados. Uma modificação em açúcares no contexto da invenção é uma modificação química do açúcar dos nucleotídeos do RNA.

[00168] Além disso, uma modificação em bases no contexto da in- venção é uma modificação química da porção base dos nucleotídeos 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12354/12614 of the RNA. Neste contexto, os análogos ou modificações nucleotídicos são de preferência selecionados dentre análogos nucleotídeos que po- dem ser aplicados para transcrição e/ou translação.

[00169] Nas modalidades particularmente preferidas, os análo- gos/modificações nucleotídicos que podem ser incorporados em um RNA modificado descrito neste pedido são de preferência seleciona- dos dentre 2-amino-6-cloropurinarribosídeo-5'-trifosfato, 2- Aminopurina-ribosídeo-5'-trifosfato; 2-aminoadenosina-5'"-trifosfato, 2'- Amino-2'-desoxicitidina-trifosfato, 2-tiocitidina-5'-trifosfato, 2-tiouridina- B5'-trifosfato, 2'-Fluorotimidina-5'-trifosfato, 2'-O-Metil-inosina-5'- trifosfato 4-tiouridina-5'-trifosfato, 5-aminoalilcitidina-5'-trifosfato, 5- aminoaliluridina-5'-trifosfato, 5-bromocitidina-5'-trifosfato, 5- bromouridina-5'-trifosfato, — 5-Bromo-2'-desoxicitidina-5'-trifosfato, 5- Bromo-2'-desoxiuridina-5'-trifosfato, 5-iodocitidina-5'-trifosfato, 5-lodo- 2'-desoxicitidina-5'-trifosfato, B-iodouridina-5'-trifosfato, — 5-lodo-2"- desoxiuridina-5'-trifosfato, 5-metilcitidina-5'-trifosfato, 5-metiluridina-5”- trifosfato, 5-propinil-2'-desoxicitidina-5'-trifosfato, 5-propinil-2'- desoxiuridina-5'-trifosfato, 6-azacitidina-5'-trifosfato, 6-azauridina-5”- trifosfato, 6-cloropurinarribosídeo-S'-trifosfato, 7-desaza-adenosina-5'- trifosfato, 7-desazaguanosina-5'"-trifosfato, 8-aza-adenosina-5'- trifosfato, 8-azidoadenosina-5'"-trifosfato, benzimidazol-ribosídeo-5'- trifosfato, N1-metiladenosina-5'-trifosfato, N1-metilguanosina-5"- trifosfato, N6-metiladenosina-5'-trifosfato, O6-metilguanosina-5"- trifosfato, pseudouridina-5'"-trifosfato, ou puromicina-5'"-trifosfato, xanto- sina-5'-trifosfato. Dá-se preferência particular aos nucleotídeos para modificações em bases selecionados do grupo de nucleotídeos com base modificada consistindo em 5-metilcitidina-5'-trifosfato, 7- desazaguanosina-S'-trifosfato, 5-bromocitidina-5'-trifosfato, e pseudou- ridina-5'-trifosfato, piridin-4-one ribonucleoside, 5-aza-uridina, 2-tio-5- aza-uridina, 2-tiouridina, 4-tio-pseudouridina, 2-tio-pseudouridina, 5- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12355/12614 hidroxiuridina, 3-metiluridina, 5-carboximetil-uridina, 1-carboximetil- pseudouridina, 5-propinil-uridina, 1-propinil-pseudouridina, 5- taurinometiluridina, 1-taurinometil-pseudouridina, 5-taurinometil-2-tio- uridina, 1-taurinometil-4-tio-uridina, 5-metil-uridina, 1-metil- pseudouridina, 4-tio-1-metil-pseudouridina, 2-tio-1-metil-pseudouridina, 1-metil-1-desaza-pseudouridina, 2-tio-1-metil-1-desaza-pseudouridina, di-hidrouridina, di-hidropseudouridina, 2-tio-di-hidrouridina, 2-tio-di- hidropseudouridina, 2-metoxiuridina, 2-metoxi-4-tio-uridina, 4-metoxi- pseudouridina, e 4-metoxi-2-tio-pseudouridina, 5-aza-citidina, pseudo- isocitidina, 3-metil-citidina, N4-acetilcitidina, 5-formilcitidina, N4- metilcitidina, 5-hidroximetilcitidina, 1-metil-pseudoisocitidina, pirrolo- citidina, pirrolo-pseudoisocitidina, 2-tio-citidina, 2-tio-5-metil-citidina, 4- tio-pseudoisocitidina, 4-tio-1-metil-pseudoisocitidina, 4-tio-1-metil-1- desaza-pseudoisocitidina, 1-metil-1-desaza-pseudoisocitidina, zebula- rina, 5-aza-zebularina, 5-metil-zebularina, 5-aza-2-tio-zebularina, 2-tio- zebularina, — 2-metoxi-citidina, — 2-metoxi-5-metil-citidina, — 4-metoxi- pseudoisocitidina, e 4-metoxi-1-metil-pseudoisocitidina, 2-aminopurina, 2, 6-diaminopurina, 7-desaza-adenina, 7-desaza-8-aza-adenina, 7- desaza-2-aminopurina, 7-desaza-8-aza-2-aminopurina, 7-desaza-2,6- diaminopurina, 7-desaza-8-aza-2,6-diaminopurina, 1-metiladenosina, N6-metiladenosina, N6-isopenteniladenosina, N6-(cis-hidroxi- isopentenil)adenosina, 2-metiltio-N6-(cis-hidroxi-isopentenil) adenosi- na, N6-glicinilcarbamoiladenosina, N6-treonilcarbamoiladenosina, 2- metiltio-N6-treonil carbamoiladenosina, N6,N6-dimetiladenosina, 7- metiladenina, 2-metiltio-adenina, e 2-metoxi-adenina, inosina, 1-metil- inosina, wiosina, wibutosina, 7-desaza-guanosina, 7-desaza-8-aza- guanosina, 6-tio-guanosina, 6-tio-7-desaza-guanosina, 6-tio-7-desaza- 8-aza-guanosina, — 7-metil-guanosina, — 6-tio-7-metil-guanosina, — 7- metilinosina, 6-metoxi-guanosina, 1I-metilguanosina, N2- metilguanosina, N2,N2-dimetilguanosina, 8-oxo-guanosina, 7-metil-8- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12356/12614 oxo-guanosina, 1-metil-6-tio-guanosina, N2-metil-6-tio-guanosina, e N2,N2-dimetil-6-tio-guanosina, 5'-O-(1-tiofosfato)-adenosina, 5'-O-(1- tiofosfato)-citidina, = 5'-O-(1-tiofosfato)-guanosina, — 5'-O-(1-tiofosfato)- uridina, 5'-O-(1-tiofosfato)-pseudouridina, 6-aza-citidina, 2-tio-citidina, alfa-tio-citidina, Pseudo-iso-citidina, 5-aminoalil-uridina, 5-iodo-uridina, N1-metil-pseudouridina, — 5,6-di-hidrouridina, — alfa-tio-uridina, —4-tio- uridina, 6-aza-uridina, 5-hidroxi-uridina, desoxi-timidina, 5-metil-uridina, Pirrolo-citidina, inosina, alfa-tio-guanosina, 6-metil-guanosina, 5-metil- citdina, 8-oxo-guanosina, 7-desaza-guanosina, Ni-metil-adenosina, 2- amino-6-Cloro-purina, N6-metil-2-amino-purina, Pseudo-iso-citidina, 6- Cloro-purina, N6-metil-adenosina, — alfa-tio-adenosina, — 8-azido- adenosina, 7-desaza-adenosina.

[00170] Em algumas modalidades, pelo menos uma modificação química é selecionada dentre pseudouridina, Ni-metilpseudouridina, N1-etilpseudouridina, 2-tiouridina, 4'-tiouridina, 5-metilcitosina, 5- metiluridina, 2-tio-1-metil-1-desaza-pseudouridina, 2-tio-1-metil- pseudouridina, 2-tio-5-aza-uridina, 2-tio-di-hidropseudouridina, 2-tio-di- hidrouridina, — 2-tio-pseudouridina, 4-metoxi-2-tio-pseudouridina, 4- metoxi-pseudouridina, 4-tio-1-metil-pseudouridina, 4-tio-pseudouridina, B-aza-uridina, di-hidropseudouridina, 5-metoxiuridina e 2'-O-metil uridi- na.

[00171] Em algumas modalidades, 100% do uracil na sequência codificadora tem uma modificação química, de preferência a modifica- ção química está na posição 5 do uracila.

[00172] Particularmente preferidas no contexto da invenção são pseudouridina (w), Ni-metilpseudouridina (m1iy), 5-metilcitosina, e 5- metoxiuridina. Por conseguinte, o RNA do primeiro aspecto pode com- preender pelo menos um nucleotídeo modificado selecionado dentre pseudouridina (ww), Ni-metilpseudouridina (m1iy), 5-metilcitosina, e 5- metoxiuridina.

'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12357/12614

[00173] Em modalidades preferidas, o RNA compreende pelo me- nos uma sequência codificadora códon-modificada.

[00174] Em modalidades preferidas, a sequência de aminoácidos codificada pela pelo menos uma sequência codificadora códon- modificada de preferência não é modificada em relação à sequência de aminoácidos codificada pela sequência codificadora do tipo selvagem correspondente.

[00175] O termo "sequência codificadora códon-modificada" refere- se a uma sequência codificadora que difere em pelo menos um códon (tripletos de nucleotídeos codificando um aminoácido) em relação à sequência codificadora do tipo selvagem correspondentes. Adequada- mente, uma sequência codificadora códon-modificada no contexto da invenção pode apresentar maior resistência à degradação in vivo e/ou maior estabilidade in vivo, e/ou maior translatabilidade in vivo. Modifi- cações de códons em seu sentido mais amplo fazem uso da degenera- ção do código genético em que múltiplos códons podem codificar o mesmo aminoácido e podem ser usados intercambiavelmente (cf. Ta- bela 2) para otimizar/modifica a sequência codificadora para as aplica- ções in vivo descritas acima.

[00176] Nas modalidades particularmente preferidas do primeiro aspecto, pelo menos uma sequência é uma sequência codificadora có- don-modificada, onde a sequência codificadora códon-modificada é selecionada dentre uma sequência codificadora C-maximizada, uma sequência codificadora CAl-maximizada, uma sequência codificadora adaptada ao uso de códons humanos, uma sequência codificadora teor de G/C-modificada, e uma sequência codificadora G/C-otimizada, ou qualquer combinação das mesmas, ou qualquer combinação das mesmas.

[00177] Em modalidades preferidas, o RNA pode ser modificado, onde o teor de C da pelo menos uma sequência codificadora pode ser 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12358/12614 aumentado, de preferência maximizado, em relação ao teor de C da sequência codificadora do tipo selvagem correspondente (aqui deno- minada "sequência codificadora C-maximizada"). A sequência de ami- noácidos codificada pela sequência codificadora C-maximizada do RNA de preferência não é modificada em relação à sequência de ami- noácidos codificada pela respectiva sequência de ácidos nucleicos co- dificadora do tipo selvagem. A geração de uma sequência de ácidos nu- cleicos C-maximida pode ser adequadamente realizada por meio de um método de modificação de acordo com o documento WO2015/062738. Neste contexto, a descrição do documento WO2015/062738 está incluí- da neste pedido a título de referência. Em todo o relatório descritivo, incluindo o identificador <223> da listagem de sequências, as sequên- cias codificadoras C-maximizdas estão indicadas pela abreviação "opt2".

[00178] Nas modalidades, o RNA pode ser modificado, onde o teor de G/C da pelo menos uma sequência codificadora pode ser modifica- do em relação ao teor de G/C da sequência codificadora do tipo selva- gem correspondente (aqui denominada "sequência codificadora teor de G/C-modificada"). Neste contexto, os termos "otimização de G/C" ou "modificação do teor de G/C" referem-se a um RNA que compreende a modified, de preferência um número aumentado de nucleotídeos gua- nosina e/ou citosina em relação à sequência de RNA do tipo selvagem correspondente. Tal número aumentado pode ser produzido por substi- tuição de códons contendo nucleotídeos adenosina ou timidina por có- dons contendo nucleotídeos guanosina ou citosina. Vantajosamente, sequências de RNA tendo um teor aumentado de G (guanosina)/C (ci- tosina) são mais estáveis que sequências tendo um teor aumentado de A (adenosina)/U (uracil). A sequência de aminoácidos codificada pela sequência codificadora teor de G/C-modificada do RNA de preferência não é modificada em relaçãop à sequência aminoacídica codificada 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12359/12614 pela respectiva sequência do tipo selvagem. De preferência, o teor de G/C da sequência codificadora da sequência de RNA é aumentado em pelo menos 10%, 20%, 30%, de preferência em pelo menos 40% em relação ao teor de G/C da sequência codificadora da sequência de RNA do tipo selvagem correspondente.

[00179] Em modalidades preferidas, o RNA pode ser modificado, onde o teor de G/C da pelo menos uma sequência codificadora pode ser otimizado em relação ao teor de G/C da sequência codificadora do tipo selvagem correspondente (aqui denominada "sequência codifica- dora teor de G/C-otimizado"). "Otimizado" neste contexto refere-se a uma sequência codificadora onde o teor de G/C é de preferência au- mentado até essencialmente o teor de G/C mais alto possível. A se- quência de aminoácidos codificada pela sequência codificadora teor de G/C-otimizado do RNA de preferência não é modificada em relação à sequência de aminoácidos codificada pela respectiva sequência codifi- cadora do tipo selvagem. A produção de uma sequência de RNA teor de G/C-otimizada pode ser realizada por meio de um método de otimi- zação de teor de G/C de acordo com o documento WO2002/098443. Neste contexto, a descrição do documento WO2002/098443 está inclu- ída em sua íntegra na presente invenção. Em todo o relatório descriti- vo, incluidno o identificaor <223> da listagem de sequências, as se- quências G/C-otimizadas estão indicadas pelas abreviações "opt1, opt5, opt6, opt11".

[00180] Nas modalidades, o RNA pode ser modificado, onde os có- dons na pelo menos uma sequência codificadora podem ser adaptados para uso de códons humanos (aqui denominada "sequência codificado- ra adaptada ao uso de códons humanos). Os códons codificando o mesmo aminoácido ocorrem em frequências diferentes em um indiví- duo, por exemplo, um ser humano. Por conseguinte, a sequência codi- ficadora do RNA é de preferência modificada de modo que a frequên- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12360/12614 cia dos códons codificando o mesmo aminoácido corresponda à fre- quência de ocorrência natural daquele códon de acordo com o uso de códons humanos, por exemplo, como mostrado na Tabela 2. Por exemplo, no caso do aminoácido Ala, a sequência codificadora do tipo selvagem é de preferência adaptada de maneira que o códon "GCC" é usado com uma frequência de 0,40, o códon "GCT" é usado com uma frequência de 0,28, o códon "GCA" é usado com uma frequência de 0,22 e o códon "GCG" é usado com uma frequência de 0,10 etc. (vide Tabela 2). Por conseguinte, tal procedimento (como exemplificado pa- ra Ala) é aplicado para cada aminoácido codificado pela sequência co- dificadora do RNA para obter sequências adaptadas ao uso de códons humanos.

Em todo o relatório descritivo, incluidno o identificaor <223> da listagem de sequências, sequências codificadoras adaptadas ao uso de códons humanos estão indicadas pela abreviação "opt3". Tabela 2: Tabela de uso de códons humanos com as frequências indi- cadas para cada aminoácido

[aminoácido Teódon Treguência T [Avinoáeido [ódor [Feguêncis | e es for me es forr ae je fr me en e er os e er dos ae ee fi me elas & e pe o jashs os ee fas an em o e fo a asa oz — e eso fossas as or [a eo foss ag oco lots a ea da a es on me me e ori e me fas as ese os [8 es fo e jar dom [er e jo se ace fos —

'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12361/12614

[aminoácido Teódon Treguência T [Avinoáeido [códor [Feguêncis | & er fo e res los & eee e mb e er e e eres E er e eb) E e mr as dor E ee E Fr e ee mr aros E em & e ) os e o a er io E e e eb e ms a elo E em e e ) e ep e e o E Free qr e ) ee ee fa mn medos E Fr e eb e fa ss mo dom FE er E Tee ) *: códon humano mais frequente

[00181] Nas modalidades, o RNA pode ser modificado, onde o índi- ce de adaptação de códons (CAI) pode ser aumentado ou de preferên- cia maximizado nea pelo menos uma sequência codificadora (doravan- te denominada "sequência codificadora com CAI maximizado"). Por conseguinte, é preferível que todos os códons da sequência de ácidos nucleicos do tipo selvagem que são relativamente raros em, por exem- plo, uma célula humana, sejam trocados por um códon respectivo que é frequente em, por exemplo, uma célula humana, onde o códon fre- quente codifica o mesmo aminoácido que o códon relativamente raro. Adequadamente, são usados os códons mais frequentes para cada aminoácido codificado (vide Tabela 2, os códons humanos mais fre- quentes estão assinalados com asteristocs). Adequadamente, o RNA 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12362/12614 do primeiro aspecto compreende pelo menos uma sequência codifica- dora, onde o índice de adaptação de códons (CAI) da pelo menos uma sequência codificadora é pelo menos 0,5, pelo menos 0,8, pelo menos 0,9 ou pelo menos 0,95. Mais preferivelmente, onde o índice de adap- tação de códons (CAI) da pelo menos uma sequência codificadora é 1. Por exemplo, no caso do aminoácido Ala, a sequência codificadora do tipo selevagem é adaptada de maneira que o códon humano mais fre- quente "GCC" seja sempre usado para o referido aminoácido. Por con- seguinte, tal procedimento (como exemplificado para Ala) é aplicado para cada aminoácido codificado pela sequência codificadora do RNA para obter sequências com CAI maximizado. Em toda a incluindo o identificador <223> da listagem de sequências, as sequências codifi- cadoras com CAI maximizado estão indicadas pela abreviação "opt4".

[00182] Em modalidades preferidas, o RNA do primeiro aspecto compreende pelo menos uma sequência codificadora compreendendo uma sequência de ácidos nucleicos códon-modificada que é idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica a uma se- quência de ácidos nucleicos códon-modificada selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 41-328, 2161-2480, 3293-6134, 8754- 8855, 10092-10139 ou um fragmento ou variante de qualquer uma des- tas sequências. Informações adicionais sobre cada uma destas se- quências de ácidos nucleicos adequadas codificadoras também podem ser obtidas a partir da listagem de sequências, em particular dos deta- lhes apresentados neste pedido no identificador <223>.

[00183] Nas modalidades particularmente preferidas, o RNA do pri- meiro aspecto compreende pelo menos uma sequência codificadora compreendendo uma sequência de ácidos nucleicos códon-modificada que é idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica a 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12363/12614 uma sequência de ácidos nucleicos códon-modificada selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 41-328, 8754-8855 ou um frag- mento ou variante de qualquer uma destas sequências. Informações adicionais sobre cada uma destas sequências de ácidos nucleicos adequadas codificadoras também podem ser obtidas a partir da lista- gem de sequências, em particular dos detalhes apresentados neste pedido no identificador <223>.

[00184] Em modalidades preferidas, o RNA codificante do primeiro aspecto compreende pelo menos uma sequência codificadora compre- endendo uma sequência de ácidos nucleicos códon-modificada que é idêntica ou pelo menos 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idên- tica a qualquer uma das sequências de ácidos nucleicos G/C- otimizadas de acordo com as SEQ ID NOs: 41-112, 2161-2240, 3293- 3698, 8754-8783, 10092-10103 ou um fragmento ou variante de qual- quer uma destas sequências ("opt1"). Informações adicionais sobre cada uma destas sequências de ácidos nucleicos adequadas codifica- doras também podem ser obtidas a partir da listagem de sequências, em particular dos detalhes apresentados neste pedido no identificador <223>.

[00185] Nas modalidades particularmente preferidas, o RNA codifi- cante do primeiro aspecto compreende pelo menos uma sequência co- dificadora compreendendo uma sequência de ácidos nucleicos códon- modificada que é idêntica ou pelo menos 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica a qualquer uma das sequências de ácidos nu- cleicos G/C-otimizadas de acordo com as SEQ ID NOs: 41-112, 8754- 8783 ou um fragmento ou variante de qualquer uma destas sequências ("opt1"). Informações adicionais sobre cada uma destas sequências de ácidos nucleicos adequadas codificadoras também podem ser obtidas 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12364/12614 a partir da listagem de sequências, em particular dos detalhes apre- sentados neste pedido no identificador <223>.

[00186] Nas modalidades particularmente preferidas, o RNA codifi- cante do primeiro aspecto compreende pelo menos uma sequência co- dificadora compreendendo uma sequência de ácidos nucleicos códon- modificada que é idêntica ou pelo menos 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica a qualquer uma das sequências de ácidos nu- cleicos G/C-otimizadas de acordo com as SEQ ID NOs: 44, 80, 8755, ou um fragmento ou variante de qualquer uma destas sequências ("opt1"). Informações adicionais sobre cada uma destas sequências de ácidos nucleicos adequadas codificadoras também podem ser obtidas a partir da listagem de sequências, em particular dos detalhes apre- sentados neste pedido no identificador <223>.

[00187] Como apresentado acima, o RNA codificante do primeiro aspecto compreende pelo menos uma sequência codificadora compre- endendo um sequência de ácidos nucleicos codificando uma CSP de um parasita da malária. De preferência a referida CSP é uma CSP de comprimento mais integral como definida neste pedido, mais preferi- velmente uma CSP de comprimento integral como definida neste pedi- do. A referida CSP é de preferência derivada de Plasmodium falci- parum (Pf). Alternativamente, a CSP pode ser derivada de Plasmodium knowlesi (Pk), Plasmodium malariae (Pm), Plasmodium ovale curtisi (Poc), Plasmodium ovale wallikeri (Pow), Plasmodium ovale (Po), Plasmodium vivax (Pv), Plasmodium berghei (Pb).

[00188] Proteínas CSP e sequências codificadoras de parasitas da malária estão apresentados na Tabela A. Nela, as linhas 1-7 corres- pondem à CSP derivada da espécie de parasita da malária indicada. À respectiva espécie está apresentada na Coluna A (abreviações, vide, por exemplo, Lista 1). A coluna B da Tabela A apresenta a SEQ ID NO 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12365/12614 das sequências de aminoácidos correspondentes, a coluna C da Tabe- la A apresenta a SEQ ID NO das sequências codificadoras de RNA do tipo selvagem correspondentes, e a coluna D-J da Tabela A apresenta a SEQ ID NO das sequências codificadoras códon-modificadas para cada fragmento (na seguinte ordem: "opt1", "opt2", "opt3", "opt4", "opt5", "opt6", "opt11"). Informações adicionais sobre each of these sui- table sequences também podem ser obtidas a partir da listagem de sequências, em particular dos detalhes apresentados neste pedido no identificador <223>. 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12366/12614

Tabela A: Antígenos de CSP e respectivas sequências codificadoras:

AN 1 Pf, Pk, Pm, 1,31, 2081, |37,40,2121, |[41,71, 77,107, 113, 143, | 149, 179, [| 185, 215, | 221, 251, [257,287, | 293,323, Poc, Pow, Po, | 2481-2886 | 2887-3292 2161, 2201, 3293- | 2241, 2281, 2321, 2361, 2401, 2441, Pv, Pb 3698 3699- 4105- 4511- 4917- 5323- 5729- 4104 4510 4916 5322 5728 6134 2 Pf 1, 2081, 37, 2121, 41, 77, 2161, 2201, [113, 149, 185, 221, 257, 293, 2481-2688 | 2887-3094 3293-3500 2241, 2281, 2321, 2361, 2401, 2441, 3699- 4105- 4511- 4917- 5323- 5729- 3906 4312 4718 5124 5530 5936 3 PK 2689-2813 3095-3219 3501-3625 3907- 4313- 4719- 5125- 5531- 5937- & ss lo Rs me sm Jo 4 Pm 2814-2818 [3220-3224 3626-3630 4032- 4438- 4844- 5250- 5656- 6062- ? Rara Poc, Pow, Po /2819-2824 |3225-3230 3631-3636 4037- 4443- 4849- 5255- 5661- 6067- ss o is a um fa a Pv 2825-2885 3231-3291 3637-3697 4043- 4449- 4855- 5261- 5667- 6073- a ss im ss o fa e 7 31, 2886 40, 3292 71, 107, 3698 14, 179, 215, 251, 287, 323, O o e sm fm 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12367/12614

[00189] Fragmentos de CSP, por exemplo, os fragmentos descritos acima (E1-E27) estão apresentados na Tabela 3. Nela, cada linha (li- nha 1-46) corresponde a um determinado fragmento de CSP derivado de Pf(3D7), onde por exemplo, a linha 1 representa a CSP de compri- mento integral.

Todas as posições aminoacídicas descritas nas pre- sentes descrições estão dadas em relação às posições aminoacídicas da CSP de Pf(3D7) (linha 1, a coluna B, SEQ ID NO: 1). A Coluna A da Tabela 3 apresenta uma descrição dos fragmentos, com uma indica- ção da posição aminoacídica em relação à proteína de comprimento integral.

Por exemplo, as sequências apresentadas na linha 4 "CSP(19-397) CSP-delSP" referem-se a um fragmento de CSP vari- ando da posição aminoacídica 19 até a posição aminoacídica 397, ca- racterizada pelo fato de o construto não conter o peptídio sinal ("delSP"). A Coluna B da Tabela 3 apresenta a SEQ ID NO das se- quências de aminoácidos correspondentes, a coluna C da Tabela 3 apresenta a SEQ ID NO das sequências codificadoras de RNA do tipo selvagem correspondentes, e a coluna D da Tabela 3 apresenta a SEQ ID NO das sequências codificadoras códon-modificadas para cada fra- gmento (na seguinte ordem: "opt1", "opt1", "opt2", "opt3", "opt4", "opt5", "opt6", "opt11"). Informações adicionais sobre cada uma destas se- quências adequadas também podem ser obtidas a partir da listagem de sequências, em particular dos detalhes apresentados neste pedido no identificador <223>. 'etição 870210044043, de 14/05/2021, pág. 12368/12614

Tabela 3: Fragmentos de CSP e respectivas sequências codificadoras:

EN fesprs sm eSPasSPasTSRMATASDAT ans [2720 [2569 2200, 2200, 2200 2826 2996 2E06 266 Ee as or AZ DA DS E SN AAA a eee a rs SAS 2 DN AE AS ANAS — ' 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12369/12614

E CCE E Era 5a 5 : 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12370/12614

CCO A 8 & 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12371/12614

[00190] Elementos heterólogos adequados no contexto da invenção, por exemplo, os elementos descritos acima (peptídios sinal secretores, epítopos auxiliares, etc.) estão apresentados na Tabela 4. Nela, cada |i- nha (linha 1-16) corresponde a um determinado elemento heterólogo. Co- luna A da Tabela 4 apresenta uma descrição dos fragmentos. Por exem- plo, as sequências apresentadas na linha 3 "peptídio sinal HSALB" refe- rem-se a um peptídio sinal heterólogo derivado de uma proteína albumina humana. A coluna B da Tabela 4 apresenta a SEQ ID NO das sequências de aminoácidos correspondentes, a coluna C da Tabela 4 apresenta a SEQ ID NO das sequências codificadoras de RNA do tipo selvagem cor- respondentes, e a coluna D da Tabela 4 apresenta a SEQ ID NO das se- quências codificadoras códon-modificadas para cada fragmento ("opt1", "opt1", "opt2", "opt3", "opt4", "opt5", "opt6", "opt11"). Informações adicio- nais sobre cada uma destas sequências adequadas também podem ser obtidas a partir da listagem de sequências, em particular dos detalhes apresentados neste pedido no identificador <223>. Tabela 4: Elementos heterólogos e respectivas sequências codificadoras: a E E O 1 peptídio sinal HSALB [6205 |6209 6213, 10140, 6217, 6221, 6225, 6229, uu uv 3 — |peptídiosinal Hsins- /6207 |6211 |6215,6219, 6223, 6227, 6231, 6235, 6239 a 4 — |peptídio si- 6208 |6212 |6216, 6220, 6224, 6228, 6232, 6236, 6240 [E [ee eee er ese [E ee ee ee [eee a | as — [E eee e | ese [5 esse roer ore — [16 [smetasaao Tor romeo 11 j|P2 6272 |6275 |6278, 6281, 6284, 6287, 6290, 6293, 6296,

AAA 12 |PADRE 6273 |6276 |6279, 6282, 6285, 6288, 6291, 6294, 6297, o DS SS 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12372/12614

E E O 6301 6311 |Lumazina Sintase 10153 10154, 10155, 10156, 10157, 10158, es e esTaTe 10169, 10170, 10171

[00191] Em várias modalidades, o RNA codificante da invenção compreende pelo menos uma sequência codificadora compreendendo uma sequência de ácidos nucleicos compreendendo pelo menos uma das seguintes sequências de ácidos nucleicos, de preferência na dire- ção de 5' para 3': a) opcionalmente, pelo menos uma sequência de ácidos nucleicos codificando uma sequência sinal secretora heteróloga sele- cionada dentre as SEQ ID NOs: 6209-6240, 10140, ou fragmentos ou variantes do mesmo, e, opcionalmente, b) pelomenos uma sequência de ácidos nucleicos codifi- cando uma proteína antigênica derivada de CSP, de preferência qual- quer uma das sequências de ácidos nucleicos selecionadas dentre as SEQ ID NOs: 37-328, 2121-2480, 2887-6134, 8754-8855, 10086- 10139, ou fragmentos ou variantes do mesmo, e c) opcionalmente, pelo menos uma sequência de ácidos nucleicos codificando um epítopo auxiliar heterólogo selecionada den- tre as SEQ ID NOs: 6275, 6276, 6277, 6278, 6281, 6284, 6287, 6290, 6293, 6296, 6299, 6279, 6282, 6285, 6288, 6291, 6294, 6297, 6300, 6280, 6283, 6286, 6289, 6292, 6295, 6298, 6301, ou fragmentos ou variantes do mesmo, d) opcionalmente, pelo menos uma sequência de ácidos nucleicos codificando um domínio de conglomeração de antígenos he- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12373/12614 terólogo selecionada dentre as SEQ ID NOs: 6277, 6280, 6283, 6286, 6289, 6292, 6295, 6298, 6301, 10154, 10155, 10156, 10157, 10158, 10159, 10160, 10161, 10163, 10164, 10165, 10166, 10167, 10168, 10169, 10170, 10171 ou fragmentos ou variantes do mesmo, e) opcionalmente, pelo menos uma sequência de ácidos nucleicos codificando um domínio transmembrana heterólogo selecio- nada dentre as SEQ ID NOs: 6303-63110u fragmentos ou variantes do mesmo.

[00192] Ainda, a), b), c), d), e e) podem ser conectadas com ele- mentos ligantes, de preferência via pelo menos uma sequência de áci- dos nucleicos codificando um elemento ligante selecionado dentre as SEQ ID NOs: 6245-6271, 10142-10146, 10148-10152 ou fragmentos ou variantes do mesmo.

[00193] Sequências codificadoras particularmente preferidas e ade- quadas do RNA codificante do primeiro aspecto estão apresentadas na Tabela 5. Nela, cada linha (linha 1-41) corresponde a um determinado construto de CSP da invenção. A coluna A da Tabela 5 apresenta uma descrição dos construtos de CSP (cf. Tabela 1). A coluna B da Tabela apresenta a SEQ ID NOs das sequências de aminoácidos corres- pondentes (cf. Tabela 1). A coluna C da Tabela 5 apresenta a SEQ ID NOs das sequências codificadoras de opt1 RNA correspondentes, a coluna D da Tabela 5 apresenta a SEQ ID NOs das sequências codifi- cadoras de "opt2" RNA correspondentes, a coluna E da Tabela 5 apre- senta a SEQ ID NOs das sequências codificadoras de "opt3" RNA cor- respondentes, a coluna F da Tabela 5 apresenta a SEQ ID NOs das sequências codificadoras de "opt4" RNA correspondentes, a coluna G da Tabela 5 apresenta a SEQ ID NOs das sequências codificadoras de "opt5" RNA correspondentes, a coluna G da Tabela 5 apresenta a SEQ ID NOs das sequências codificadoras de "opt5" RNA correspondentes, 'etição 870210044043, de 14/05/2021, pág. 12374/12614 a coluna H da Tabela 5 apresenta a SEQ ID NOs das sequências codi- ficadoras de "opt6" RNA correspondentes, a coluna | da Tabela 5 apre- senta a SEQ ID NOs das sequências codificadoras de "opt11" RNA correspondentes.

Informações adicionais sobre cada uma destas se- quências codificadoras adequadas também podem ser obtidas a partir da listagem de sequências, em particular dos detalhes apresentados neste pedido no identificador <223>. 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12375/12614

Tabela 5: Sequências codificadoras preferidas da invenção EEE EE FER) spears ro 15 1 PROSP IamelASGA TEIA RR a asa ras re rr le lr o | osrEImDEmPTTAE e aa me 1 as as o HsALB Pf-CSP(19-272) Ligante(AAY) Pf-CSP(310-327) Ligante [14 [54,90,8766 [126 [162 [198 [/234 /|/270 |306 Imeem o o o 1 SS HsALB Pf-CSP(19-272) Ligante(AAY) PF-CSP(346-365) Ligante [15 [55,91 127 [163 |199 |235 |277 [307

EO ANNA 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12376/12614 e O COCO E EE FE E

RREO HsALB Pf-CSP(19-272) Ligante(G4S) Pfr-CSP(310-327) Ligante [17 [57,93 129 [165 [201 [237 273 [309 [ota pregação AA O SO 1 1 1 SS 1 1 HsALB Pf-CSP(19-272) Ligante(G4S) Pr-CSP(310-327) Pf- 18 58,94 130 [166 [202 238 |/274 [310 faspçaaio me SPSS 15 VS ES SS ES 1 8 * 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12377/12614

E Be o er 6 AR o HsALB PF-CSP(19-272) Ligante(AAY) PF-CSP(346- 8744 [8757,8758, [8786 [8798 [8810 [8822 [8834 |8846 Lomani pace gama eo ae 1 A PA º9P) HsALB PF-CSP(19-384) Ligante(PVTN) HBsAÃg 8745 [8759,8760, [8787 [8799 [8811 [8823 [8835 |8847 [OSCAÔSSS SS Seta ema eta jr 5a Vêm 1% 16ê 1toê HsALB PF-CSP(19-384) Ligante(SGG) Ferritin 8746 [8761,8762, [8788 8800 [8812 [8824 8836 |8848 [OSCAÔSSSSS Set elo 1 15 Vem 1eêl 146 1a) HsALB PF-CSP(93-384) Ligante(PVTN) HBsAÃg 8747 [8763,8764, [8789 8801 [8813 [8825 8837 |8849 [OSCAÔSS=ÕS Seta emo en 1 jm Vem 1eEl 16é 1 te) HsALB PF-CSP(19-272) Ligante(AAY) PF-CSP(346- 8749 [8767,8779 [8791 8803 [8815 [8827 [8839 [8851 o [1a eme eram o 1 A AA Oo PAS PS oa HsALB PF-CSP(19-272) Ligante(AAY) PF-CSP(346- 8750 [8768,8780 [8/92 8804 [8816 [8828 [8840 |8852 ? [75 Lemenio osmose iam nes o 1º PÔ) HsALB PF-CSP(19-272) Ligante(AAY) PF-CSP(310- 8751 [8769,8781 [8793 8805 [8817 [8829 [8841 8853 [527 Lemmelio rosnasars lama nes o 1 E) HsALB PF-CSP(19-272) Ligante(AAY) PF-CSP(310- 8752 [8770,8782 [8/94 8806 [8818 [8830 [8842 |8854 327) Ligante(AAY) PF-CSP(346- 375) Ligante(AAY) PADRE Ligante(AAY) P2 HsALB PF-CSP(19-272) Ligante(AAY) PF-CSP(310-327) Ligante [8753 [8771,8783 |8795 [8807 [8819 8831 [8843 [8855 (ca 1

'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12378/12614

Elementos de RNA, elementos de mRNA:

[00194] Nas modalidades, o RNA codificante do primeiro aspecto pode ser monocistrônico, bicistrônico, ou multicistrônico.

[00195] O termo "monocistrônico" será reconhecido e entendido pe- lo especialista na técnica e, por exemplo, destina-se a indicar um RNA que compreende apenas uma sequência codificadora. Os termos "bi- cistrônico" ou "multicistrônico" conforme usado neste pedido será reco- nhecido e entendido pelo especialista na técnica e, por exemplo, desti- nam-se a indicar um RNA that que pode ter duas (bicistrônico) ou mais (multicistrônico) sequências codificadoras.

[00196] Em modalidades preferidas, o RNA codificante do primeiro aspecto é monocistrônico.

[00197] Nas modalidades, o RNA codificante é monocistrônico e a sequência codificadora do referido RNA codifica pelo menos dois pep- tídios ou proteínas antigênicas diferentes derivadas de um parasita da malária (por exemplo, Plasmodium CSP). Por conseguinte, a referida cs pode codificar pelo menos dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito e mais peptídios ou proteínas antigênicas derivas de um parasita da ma- lária (por exemplo, Plasmodium CSP), ligados com ou sem uma se- quência le ligante de aminoácidos, onde a referida sequência de ligan- te pode compreender ligantes rigidos, ligantes flexíveis, ligantes clivá- veis, ou uma combinação dos mesmos. Tais construtos são denomina- dos, neste pedido, "construtos multiantígenos".

[00198] Nas modalidades, o RNA codificante pode ser bicistrônico ou multicistrônico e compreende pelo menos duas sequências codifi- cadoras, onde as pelo menos duas sequências codificadoras codificam dois ou mais peptídios ou proteínas antigênicas diferentes derivadas de um parasita da malária (por exemplo, Plasmodium CSP). Por con- seguinte, as sequências codificadoras em um RNA bicistrônico ou mul- ticistrônico codificam adequadamente peptídios ou proteínas antigêni- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12379/12614 cas distintas definidas neste pedido ou fragmentos imunogênicos ou variantes imunogênicas dos mesmos. De preferência, as sequências codificadoras nos referidos construtos bicistrônicos ou multicistrônicos podem ser separadas por pelo menos uma sequência de IRES (sítio interno de entrada do ribossoma). Portanto, o termo "codificando dois ou mais peptídios ou proteínas antigênicas" pode significa, porém sem limitação, que o RNA bicistrônico ou multicistrônico RNA codifica, por exemplo, pelo menos dois, três, quatro, cinco, seis ou mais peptídios ou proteínas antigênicas (de preferência diferentes) de diferentes para- sitas da malária. Alternativamente, o RNA bicistrônico ou multicistrôni- co pode codificar, por exemplo, pelo menos dois, três, quatro, cinco, seis ou mais peptídios ou proteínas antigênicas (de preferência diferen- tes) derivadas do mesmo parasita da malária. Neste contexto, sequên- cias IRES adequadas podem ser selecionadas da lista de sequência de ácidos nucleicos de acordo com as SEQ ID NOs: 1566-1662 do pedido de patente WO2017/081082, ou fragmentos ou variantes destas sequências. Neste contexto, a descrição do documento WO2017/081082 rereferntes a sequências IRES encontra-se aqui incorporada a título de referência.

[00199] Deve ficar entendido que, no contexto da invenção, certas combinações de sequências codificadoras podem ser geradas por qualquer combinação de construtos de RNA monocistrônicos, bicistrô- nicos e multicistrônicos e/ou construtos multiantigênicos para obter uma omp codificando múltiplos peptídios ou proteínas antigênicas defi- nidos neste pedido.

[00200] De preferência, o RNA codificante do primeiro aspecto tipi- camente compreende cerca de 50 a cerca de 20000 nucleotídeos, ou cerca de 500 a cerca de 10000 nucleotídeos, ou cerca de 1000 a cerca de 10000 nucleotídeos, or de preferência cerca de 1000 a cerca de 5000 nucleotídeos, ou ainda mais preferivelmente cerca de 1000 a cer- ca de 2500 nucleotídeos.

'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12380/12614

[00201] De acordo com modalidades preferidas, o RNA codificante do primeiro aspecto pode ser um mRNA, um RNA auto-replicante, um RNA circular, ou um RNA replicon.

[00202] Nas modalidades, o RNA codificante do primeiro aspecto é um RNA circular. Conforme usado neste pedido, "circular RNA" ou "cir- CcRNAs" devem ser enendidos como um construto de polinucleotídeo circular que codifica pelo menos um peptídio ou proteína antigênica definida neste pedido. Por conseguinte, em modalidades preferidas, o referido circRNA compreende pelo menos uma sequência codificadora codificando pelo menos uma proteína antigênica derivada de um para- sita da malária (por exemplo, Plasmodium CSP), ou um fragmento imunogênico ou uma variante imunogênica da mesma. A produção de CircºRNA pode ser feita por meio de vários métodos apresentados na literatura. Por conseguinte, métodos para a produção de RNA circular estão apresenados nos documentos US6210931, US5773244, WO1992/ 001813, WO2015/034925 e WO2016/011222 aqui incorporados a título de referência.

[00203] Nas modalidades, o RNA codificante é um RNA replicon. O termo "RNA replicon" será reconhecido e entendido pelo especialista na técnica e, por exemplo, destina-se a indicar um RNA auto-replicante otimizado. Tais construtos podem incluir elementos de replicase deri- vados de, por exemplo, alfavírus (por exemplo, SFV, SIN, VEE, ou RRV) e a substituição das proteínas virais estruturais com o ácido nu- cleico de interesse. Alternativamente, a replicase pode ser apresenta- da em um construto de RNA codificante independente. A jusante da replicase pode estar um promotor subgenônico que controla a replica- ção do RNA replicon.

[00204] Em modalidades preferidas, o RNA codificante do primeiro aspecto é um mRNA.

[00205] Os termos "RNA" e "mMRNA" será reconhecido e entendido 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12381/12614 pelo especialista na técnica e, por exemplo, destina-se a indicar uma molécula de ácido ribonucleico, i.e., um polímero consistindo em nu- cleotídeos. Estes nucleotídeos geralmente são monômeros de adeno- sina-monofosfato, uridina-monofosfato, guanosina-monofosfato e citidi- na-monofosfato que estão conectados entre si ao longo de um chama- do esqueleto. O esqueleto é formado por ligações fosfodiéster entre o açúcar, i.e., ribose, de uma primeira porção e uma porção fosfato de um segundo monômero adjacente. A sucessão específica dos monô- meros é chamada de sequência de RNA. O mRNA (RNA mensageiro) normalmente apresenta a sequência de nucleotídeos que pode ser transladada para uma sequência de aminoácidos de um peptídio ou proteína particular.

[00206] No contexto da invenção, o RNA codificante, de preferência o MRNA do primeiro aspecto, pode apresentar pelo menos uma se- quência codificadora codificando um antígeno derivado de um parasita da malária que é transladado para um antígeno funcional depois da administração (por exemplo, depois da administração a um indivíduo, por exemplo, um indivíduo humano). Por conseguinte, o RNA codifican- te, de preferência o MRNA, é adequado para uma vacina, de preferên- cia para uma vacina contra malária.

[00207] —Adequadamente, o RNA pode ser modificado pela adição de uma estrutura 5'-cap, que de preferência estabiliza o RNA e/ou me- lhora a expressão do antígeno codificado.

[00208] O RNA pode ser adequadamente modificado pela adição de uma estrutura 5'-cap, que de preferência estabiliza o RNA descrito nes- te pedido e/ou melhora a expressão do antígeno codificado e/ou reduz a estimulação do sistema imunológico inato (depois de administrado a um indivíduo). Uma estrutura 5'-cap é de particular importância nas modalidades em que o RNA é um RNA codificante linear, por exemplo, um mRNA ou um RNA replicon codificante linear.

'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12382/12614

[00209] Por conseguinte, em modalidades preferidas, o RNA, em particular o mMRNA do primeiro aspecto compreende uma estrutura 5'- cap, de preferência m7G (m7G(5')ppp(5')G), capO, cap1, cap2, uma estrutura capO modificada ou uma estrutura cap1 modificada.

[00210] Nas modalidades particularmente preferidas, o MRNA do primeiro aspecto compreende a cap1.

[00211] O termo "estrutura 5-cap" conforme usado neste pedido será reconhecido e entendido pelo especialista na técnica e, por exemplo, destina-se a indicar um nucleotídeo modificado em 5', parti- cularmente um nucleotídeo guanina, posicionado na extremidade 5' de uma molécula de RNA, por exemplo, uma molécula de mRNA. De pre- ferência, a estrutura 5' é conectada via uma ligação 5'-5"-trifosfato ao RNA.

[00212] Estruturas 5'-cap que podem ser adequadas no contexto da presente invenção são capO (metilação da primeira nucleobase, por exemplo, m7GpppN), cap1 (metilação adicional da ribose do nucleotí- deo adjacente de m7GpppN), cap2 (metilação adicional da ribose do 2º nucleotídeo a jusante do m7GpppN), cap3 (metilação adicional da ribose do 3º nucleotídeo a jusante do m7GpppN), cap4 (metilação adi- cional da ribose do 4º nucleotídeo a jusante do m7GpppN), ARCA (análogo tipo cap anti-reverso), ARCA modificado (por exemplo, ARCA modificado com fosfoticato), inosina, N1i-metil-guanosina, 2'-fluoro- guanosina, 7-desaza-guanosina, 8-0x0-guanosina, 2-amino-guanosina, LNA-guanosina, e 2-azido-guanosina.

[00213] Uma estrutura 5'-cap (capO ou cap1) pode ser formada por síntese química de RNA ou por transcrição in vitro de RNA (capeamen- to co-transcricional) usando análogos tipo cap.

[00214] O termo "análogo tipo cap" conforme usado neste pedido será reconhecido e entendido pelo especialista na técnica e, exemplo, destina-se a indicar um dinucleotídeo ou trinucleotídeo não polimerizá- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12383/12614 vel que tem uma funcionalidade cap que facilita a translação ou locali- zação, e/ou previne a degradação de uma molécula de ácido nucleico, particularmente de uma molécula de RNA, quando incorporada na ex- tremidade 5' da molécula de ácido nucleico. Não polimerizável significa que o análogo tipo cap será incorporado apenas no terminal 5' por não ter um 5' trifosfato e, portanto, não poder ser estendido na direção 3' por uma polimerase dependente do molde, particularmente, por uma RNA polimerase dependente do molde. Exemplos de análogos tipo cap incluem, porém sem limitação, uma estrutura química selecionada do grupo que consiste em m7GpppG, m7GpppA, m7GpppC; análogos tipo cap não metilados (por exemplo, GpppG); análogos tipo cap dimetila- dos (por exemplo, m2,7GpppG), análogos tipo cap trimetilados (por exemplo, m2,2,7GpppG), análogos tipo cap simétricos dimetilados (por exemplo, m7Gpppm7G), ou análogos tipo cap anti-reverso (por exem- plo, ARCA; m7,2OmeGpppG, m7,2dGpppG, m7,3OmeGpppG, m7,3'dGpppG e seus derivados tipo tetrafosfato). Outros análogos tipo cap já foram descritos (WO2008/016473, WO2008/157688, WO2009/ 149253, WO2011/015347, e WO2013/059475). Outros análogos tipo cap adequados neste contexto estão descritos nos documentos WOZ2017/066793, WO2017/066781, WO2017/066791, WO2017/066789, WOZ2017/053297, WO2017/066782, WO2018/075827 e WO2017/066797 onde as descrições referentes a análogos tipo cap encontram-se aqui incorporadas a título de referência.

[00215] Nas modalidades, uma estrutura cap1 modificada é gerada usando um análogo tipo cap trinucleotíco descrito nos documentos WOZ2017/053297, WO2017/066793, WO2017/066781, WO2017/066791, WOZ2017/066789, WOZ2017/066782, WOZ2018/075827 e WO2017/

066797. Em particular, quaisquer estruturas cap deriváveis da estrutura revelada nas reivindicações 1-5 do documento WO2017/053297 po- dem ser adequadamente usadas para gerar co-transcricionalmente 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12384/12614 uma estrutura cap1 modificada. Ainda, quaisquer estruturas cap deri- váveis da estrutura revelada na reivindicação 1 ou na reivindicação 21 do documento WO2018/075827 podem ser adequadamente usadas para gerar co-transcricionalmente uma estrutura cap1 modificada.

[00216] Em modalidades preferidas, a estrutura 5'-cap pode ser adequadamente adicionada co-transcricionalamente usando um análo- go tipo cap trinucleotídico definido neste pedido em uma reação de transcrição in vitro de RNA definida neste pedido.

[00217] Nas modalidades particularmente preferidas, o RNA codifi- cante, em particular o mMRNA do primeiro aspecto compreende uma estrutura cap1. Como mostrado na seção Exemplos, a presença de uma estrutura cap1 é de particular importância uma vez que a indução de uma resposta imunológica específica contra CSP da malária pode- ria ser aumentada (vide Exemplos 11 e 12).

[00218] —Análogos tipo cap preferidos são os análogos tipo cap dinu- cleotídicos m7G(5')ppp(5')G (m7G) ou 3-O-Me-m7G(5')ppp(5')G para geração co-transcricional de estruturas capO. Outros análogos tipo cap preferidos são os análogos tipo cap trinucleotídicos m7G(5')ppp(5') (2'OMeA)PpG ou m7G(5')ppp(5')(2' OMeG)pG para geração co-transcri- cional de estruturas cap1.

[00219] Em outras modalidades, a estrutura 5'-cap é formada via capeamento enzimático usando enzimas de capeamento (por exemplo, enzimas de capeamento do vírus vacínia e/ou 2'-O metiltransferases cap-dependentes) para geração de estruturas capO ou cap1 ou cap2. À estrutura 5'-cap (capO ou cap1) pode ser adicionada usando enzimas de capeamento imobilizadas e/ou 2-O metiltransferases cap- dependentes por meio de métodos e meios revelados no documento WO?2016/193226.

[00220] Em modalidades preferidas, cerca de 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% (da espécie) do RNA codificante compreende uma es- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12385/12614 trutura cap1 determinada por meio de um ensaio de capeamento. Em modalidades preferidas, menos de cerca de 20%, 15%, 10%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1% (da espécie) do RNA codificante não compreende uma estrutura cap1 determinada por meio de um ensaio de capeamento. Em modalidades preferidas, menos de cerca de 20%, 15%, 10%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1% (da espécie) do RNA codificante compreende uma estrutura capO determinada por meio de um ensaio de capeamento. Em modalidades preferidas, menos de cerca de 20%, 15%, 10%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1% (da espécie) do RNA codificante compreende uma estrutura cap1 intermediário determinada por meio de um ensaio de capeamento.

[00221] O termo "espécie de RNA codificante" não se limita a indi- car "uma única molécula", mas entende-se que compreende um con- junto de moléculas de RNA essencialmente idênticas. Por conseguinte, ele pode referir-se a uma pluralidade de moléculas de RNA codificante essencialmente idênticas.

[00222] Para determinação do grau de capeamento ou da presença de intermediários de cap1, pode ser usado um ensaio de capeamento como aquele descrito no pedido PCT publicado WO2015/101416, em particular, como descrito nas reivindicações 27 a 46 do pedido PCT publicado WOZ2015/101416. Outros ensaios de capeamento que po- dem ser usados para determinar o grau de capeamento do RNA codifi- cante estão descritos no documento PCT/EP2018/08667, ou nos pedi- dos PCT publicados WO2014/152673 e WO2014/152659.

[00223] Em modalidades preferidas, o RNA codificante compreende uma estrutura cap m7G(5')ppp(5')(2º/OMeA). Em tais modalidades, o RNA codificante compreende um cap m7G 5”-terminal, e uma metila- ção adicional da ribose do nucleotídeo adjacente de m7GpppN, neste caso, uma adenosina 2'/O metilada. De preferência, cerca de 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% (da espécie) do RNA codificante compre- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12386/12614 ende tal estrutura cap1 segundo determinado por meio de um ensaio de capeamento.

[00224] Em outras modalidades preferidas, o RNA codificante do primeiro aspecto compreende estrutura cap m7G(5')ppp(5')(2' OMeG). Em tais modalidades, o RNA codificante compreende um cap m7G 5"- terminal, e uma metilação adicional da ribose do nucleotídeo adjacente de m7GpppN, neste caso, uma guanosina 2'/O metilada. De preferên- cia, cerca de 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% (da espécie) do RNA codificante compreende tal estrutura cap1 segundo determinado por meio de um ensaio de capeamento.

[00225] Em uma modalidade particularmente preferida, o RNA do primeiro aspecto compreende uma estrutura cap1, onde a referida es- trutura cap1 pode ser formada enzimaticamente ou co-transcricional- mente (por exemplo, usando m7G(5')ppp(5')(2º OMeA), ou análogos de m7G(5')ppp(5')(2'/ OMeG)).

[00226] Em modalidades preferidas, o RNA do primeiro aspecto compreende uma estrutura cap m7G(5')ppp(5')(2º/ OMeA). Em tais mo- dalidades, o RNA codificante compreende um cap m7G 5”-terminal, e uma metilação adicional da ribose do nucleotídeo adjacente de m7GpppN, neste caso, uma adenosina 2'O metilada.

[00227] Em outras modalidades preferidas, o RNA do primeiro as- pecto compreende uma estrutura cap m7G(5')ppp(5')(2'OMeG). Em tais modalidades, o RNA codificante compreende a 5' terminal m7G cap, e uma metilação adicional da ribose do nucleotídeo adjacente, neste caso, uma guanosina 2'O metilada.

[00228] “Por conseguinte, quando sequências de RNA ou de mMRNA adequadas são mencionadas no contexto da invenção, o primeiro nu- cleotídeo da referida sequência de RNA ou mRNA, isto é, o nucleotí- deo a jusante da estrutura m7G(5')ppp, pode ser uma guanosina 2/O metilada ou uma adenosina 2'O metilada.

'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12387/12614

[00229] Nas modalidades, o teor de A/U no ambiente do sítio de li- gação de ribossomas do RNA codificante pode ser aumentado em re- lação ao teor de A/U no ambiente do sítio de ligação de ribossomas de seu respectivo ácido nucleico do tipo selvagem. Esta modificação (um teor de A/U aumentado em torno do sítio de ligação de ribossoma) au- menta a eficiência de ligação de ribossomas ao ácido nucleico, de pre- ferência ao RNA. Uma ligação efetiva dos ribossomas ao sítio de liga- ção de ribossomas, por sua vez, tem o efeito de uma translação efici- ente do RNA.

[00230] Por conseguinte, em uma modalidade particularmente pre- ferida, o RNA codificante compreende um sítio de ligação de ribosso- mas, também denominado "sequência Kozak" idêntico ou pelo menos 80%, 85%, 90%, 95% idêntica a qualquer uma das the sequences SEQ ID NOs: 6175, 6176, ou fragmentos ou variantes do mesmo.

[00231] Em modalidades preferidas, o RNA da invenção compreen- de pelo menos uma sequência de poli(N), por exemplo, pelo menos uma sequência de poli(A), pelo menos uma sequência de poli(U) se- quence, pelo menos uma sequência de poli(C), ou combinações das mesmas.

[00232] Em modalidades preferidas, o RNA da invenção compreen- de pelo menos uma sequência de poli(A).

[00233] Os termos "sequência de poli(A)", "cauda de poli(A)" ou "cauda de 3'-poli(A)" conforme usados neste pedido serão reconheci- dos e entendidos pelo especialista na técnica, e destinam-se, por exemplo, a indicar uma sequência de nucleotídeos adenosina, tipica- mente localizada na extremidade 3' de um RNA, de até cerca de 1000 nucleotídeos adenosina. De preferência, a referida sequência de po- Ili(A) é essencialmente homopolimérica, por exemplo, uma sequência de poli(A) de, por exemplo, 100 nucleotídeos adenosina tem essenci- almente o comprimento de 100 nucleotídeos. Em outras modalidades, 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12388/12614 a sequência de poli(A) pode ser interrompida por pelo menos um nu- cleotídeo diferente de um nucleotídeo adenosina, por exemplo, uma sequência de poli(A) de, por exemplo, 100 nucleotídeos adenosina po- de ter um comprimento de mais de 100 um nucleotídeos (compreen- dendo 100 nucleotídeos adenosina e adicionalmente o referido pelo menos um nucleotídeo diferente de um nucleotídeo adenosina nucleo- tide).

[00234] A sequência de poli(A), adequadamente localizada a jusan- te da 3-UTR definida neste pedido, pode compreender cerca de 10 a cerca de 500 nucleotídeos adenosina, cerca de 10 a cerca de 200 nu- cleotídeos adenosina, cerca de 40 a cerca de 200 nucleotídeos adeno- sina, ou cerca de 40 a cerca de 150 nucleotídeos adenosina. Adequa- damente, o comprimento da sequência de poli(A) pode ser de pelo menos cerca de ou ainda mais de cerca de 10, 50, 64, 75, 100, 200, 300, 400, ou 500 nucleotídeos adenosina. Adequadamente, a sequên- cia de poli(A) do RNA do primeiro aspecto pode ser suficientemente comprida para ligar pelo menos 2, 3, 4, 5 ou mais monômeros das pro- teínas de ligação de poliA. Em modalidades preferidas, a sequência de poli(A) compreende cerca de 50 a cerca de 250 adenosinas. Em uma modalidade particularmente preferida, a sequência de poli(A) compre- ende cerca de 64 nucleotídeos adenosina. Em outras modalidades par- ticularmente preferidas, a sequência de poli(A) compreende cerca de 75 nucleotídeos adenosina.

[00235] Em modalidades preferidas, o RNA codificante compreende pelo menos uma sequência de poli(A) compreendendo cerca de 30 a cerca de 200 nucleotídeos adenosina. Em modalidades preferidas, a sequência de poli(A) compreende cerca de 64 nucleotídeos adenosina (A64). Nas modalidades particularmente preferidas, a sequência de poli(A) compreende cerca de 100 nucleotídeos adenosina (A100). Em modalidades preferidas, a sequência de poli(A) compreende cerca de 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12389/12614

150 nucleotídeos adenosina.

[00236] A sequência de poli(A) definida neste pedido fica adequa- damente localizada no terminal 3' do RNA codificante. Por conseguin- te, é preferível que o nucleotídeo 3'-terminal do RNA codificante (isto é, o último nucleotídeo 3'-terminal na cadeia polinucleotídica) seja o nu- cleotídeo A 3'-terminal da pelo menos uma sequência de poli(A). O termo "localizada no terminal 3" deve ser entendido como estando lo- calizado exatamente no terminal 3' - em outros palavras, o terminal 3' do RNA codificante consiste uma sequência de poli(A) terminando com um nucleotídeo. Exemplos de sequências tendo um terminal 3' consis- tindo em uma sequência de poli(A) são, por exemplo, SEQ ID NOs: 8013-8741, 9774-10079. Para outros exemplos de sequências tendo uma sequência de poli(A) localizada (exatamente) no terminal 3' vide também Tabela 9 (coluna "extremidade 3"" com hSL-A100) ou Tabela 6B, a coluna H. A presença de uma sequência de poli(A) exatamente no terminal 3' do RNA codificante codificando uma proteína antigênica da malária (por exemplo, CSP) é vantajosa já que toda vacina de MRNA compreendendo uma extremidade 3' com hSL-A100 induz res- postas imunológicas humoral e celular muito fortes (vide Exemplo 13).

[00237] De preferência, a sequência de poli(A) do RNA é obtida a partir de um molde de DNA durante a transcrição in vitro do RNA. Em outras modalidades, a sequência de poli(A) é obtida in vitro por métodos comuns de síntese química sem ser necessariamente transcrita a partir de um molde de DNA. Em outras modalidades, sequências de poli(A) são geradas por poliadenilação enzimática do RNA (depois da transcrição in vitro do RNA) usando kits de poliadenilação comercialmente disponíveis e protocolos correspondentes conhecidos na literatura ou, alternativamen- te, usando poli(A)polimerases imobilizadas, por exemplo, usando um método e meios descritos no documento WO2016/174271.

[00238] “Nas modalidades, o RNA pode compreender uma sequência 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12390/12614 de poli(A) derivada de um molde de DNA e pode compreender pelo me- nos uma sequência de poli(A) adicional gerada por poliadenilação enzi- múática, por exemplo, como descrito no documento WO2016/091391.

[00239] “Nas modalidades em que é usada a poliadenilação enzimá- tica de RNA, deve ficar entendido que as sequências de RNA ou MRNA, por exemplo, apresentadas na listagem de sequências, podem adicionalmente compreender cerca de 30 a cerca de 500 nucleotídeos adenosina.

[00240] Em modalidades preferidas, o RNA pode compreender pelo menos uma sequência de poli(C).

[00241] O termo "sequência de poli(C)" conforme usado neste pedi- do será reconhecido e entendido pelo especialista na técnica, e desti- na-se a indicar, por exemplo, uma sequência de nucleotídeos citosina, tipicamente localizada na estremidade 3' de um RNA, de até cerca de 200 nucleotídeos citosina.

[00242] Em modalidades preferidas, a sequência de poli(C), ade- quadamente localizada no terminal 3' a jusante de uma 3-UTR definida neste pedido, compreende cerca de 10 a cerca de 200 nucleotídeos citosina, cerca de 10 a cerca de 100 nucleotídeos citosina, cerca de 20 a cerca de 70 nucleotídeos citosina, cerca de 20 a cerca de 60 nucleo- tídeos citosina, ou cerca de 10 a cerca de 40 nucleotídeos citosina. Em uma modalidade particularmente preferida, a sequência de poli(C) compreende cerca de 30 nucleotídeos citosina.

[00243] De preferência, a sequência de poli(C) na sequência de RNA da presente invenção é derivada de molde de DNA por transcri- ção in vitro de RNA. Em outras modalidades, a sequência de poli(C) é obtida in vitro por métodos comuns de síntese química, ou enzimati- camente, sem ser necessariamente transcrita a partir de um molde de DNA.

[00244] Em outras modalidades, o RNA da invenção não compre- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12391/12614 ende uma sequência de poli(C) definida neste pedido.

[00245] Em outras modalidades, o RNA codificante da invenção compreende uma sequência de poli(A) definida neste pedido, de prefe- rência A100 localizada (exatamente) no terminal 3', e não compreende uma sequência de poli(C).

[00246] Em uma modalidade particularmente preferida, o RNA codi- ficante da invenção compreende uma estrutura cap1 definida neste pe- dido e pelo menos uma sequência de poli(A) definida neste pedido. De preferência, a referida estrutura cap1 pode ser obtida por capeamento co-transcricional como definido neste pedido, e a referida sequência de poli(A) está de preferência (exatamente) no terminal 3".

[00247] Em modalidades preferidas, o RNA do primeiro aspecto compreende pelo menos uma alça-tronco (sequência) de histona.

[00248] O termo "alça-tronco de histona" (abreviado "hSL", por exem- plo, na listagem de sequências) conforme usado neste pedido será re- conhecido e entendido pelo especialista na técnica, e destina-se indi- car, por exemplo sequências de ácidos nucleicos que são predominan- te encontradas em mRNAs de histona. Sequências de alça-tronco de histona exemplificativas estão descritas em Lopez et al. (Davila Lopez et al, (2008), RNA, 14(1)).

[00249] “Sequências/estruturas de alça-tronco de histona podem ser adequadamente selecionadas dentre as sequências de alça-tronco de histona reveladas no documento WO2012/019780, a descrição referen- te a sequências de alça-tronco de histona/ estruturas de alça-tronco de histona estando aqui incorporada a título de referência. Uma sequência de alça-tronco de histona que pode ser usada na presente invenção pode ser de preferência derivada das fórmulas (i) ou (Il) do documento WO?2012/019780. De acordo com uma outra modalidade preferida, o RNA definido neste pedido pode compreender pelo menos uma sequência de alça-tronco de histona derivada de pelo menos uma das fórmulas (a) 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12392/12614 ou (lla) específicas do pedido de patente WO2012/019780.

[00250] Em uma modalidade particularmente preferida, o RNA da invenção compreende pelo menos uma sequência de alça-tronco de histona, onde a referida sequência de alça-tronco de histona compre- ende uma sequência de ácidos nucleicos idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idên- tica às SEQ ID NOs: 6173 ou 6174, ou fragmentos ou variantes do mesmo.

[00251] Em outras modalidades, o RNA do primeiro aspecto não compreende uma alça-tronco de histona definida neste pedido.

[00252] Nas modalidades, o RNA da invenção compreende um elemento de sequência 3 -terminal. O referido elemento de sequência 3”-terminal compreende uma sequência de poli(A) e uma sequência de alça-tronco de histona, onde o referido elemento de sequência fica lo- calizado no terminal 3' do RNA da invenção.

[00253] — Por conseguinte, o RNA da invenção pode compreender um elemento de sequência 3-terminal compreendendo ou consistindo em uma sequência de ácidos nucleicos sendo idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica às SEQ ID NOs: 6179-6200, 10173-10196, ou um fragmento ou variante das mesmas.

[00254] Em várias modalidades, o RNA pode compreender um ele- mento de sequência 5'-terminal de acordo com as SEQ ID NOs: 6177, 6178, ou um fragmento ou variante das mesmas. Tal um elemento de sequência 5'-terminal compreende, por exemplo, um sítio de ligação para RNA polimerase T7. Ainda, o primeiro nucleotídeo da referida se- quência de início 5'-terminal pode de preferência compreender uma metilação 2'O, por exemplo, guanosina 2'O metilada ou uma adenosina 2'O metilada.

[00255] Nas modalidades, o RNA pode compreender um elemento 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12393/12614 de sequência que representa um sítio de clivagem para uma molécula de ácido nucleico catalítica, onde a molécula de ácido nucleico catalíti- ca pode ser uma ribozima ou uma DNAzima. Os referidos elementos podem, por exemplo, possibilitar a análise da eficiência/qualidade de capeamento do RNA como descrito no documento WO2015/101416, ou possibilitar a análise do comprimento/qualidade das sequências de poli(N) do RNA como descrito no documento WO2017/001058. Um sítio de clivagem para uma molécula de ácido nucleico catalítica pode ser localizado próximo ao terminal 5' do RNA (isto é, cerca de 1,2,3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 1-30, 1-20, 5-15 nucleotídeos a partir da estrutura de cap 5' terminal). Alternativamente, ou adicionalmente, um sítio de clivagem para uma molécula de ácido nucleico catalítica descrita aci- ma também pode ser posicionado próximo ao terminal 3' do RNA (isto é, cerca de 50-300, 50-200, 50-150 nucleotídeos a partir do terminal 3'). Os referidos elementos podem, por exemplo, possibilitar a análise da eficiência/qualidade das sequências de poli(N) do RNA como des- crito no documento WO2017/001058.

UTRs:

[00256] O RNA da invenção pode ser composto de uma região codi- ficadora de proteína ("sequência codificadora" ou "cds"), e 5-UTR e/ou 3'-UTR. Notavelmente, as UTRs podem ancorar elementos de sequên- cias reguladoras que determinam o turnover, a estabilidade e a locali- zação do RNA. Além disso, as UTRs podem ancorar elementos de se- quências que melhoram a translação. Em aplicações médicas de RNA, a translação do RNA para pelo menos um peptídio ou proteína é de extrema importância para a eficácia terapêutica. Determinadas combi- nações de 3-UTRs e/ou 5-UTRs podem melhorar a expressão de se- quências codificadoras operacionalmente ligadas codificando peptídios ou proteínas da invenção. Moléculas de RNA que ancoram as referidas combinações de UTRs permitem vantajosamente a expressão rápida e 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12394/12614 transitória de peptídios ou proteínas antigênicos depois de sua admi- nistração a um indivíduo, de preferência de preferência depois de ad- ministração intramuscular. Por conseguinte, o RNA codificante com- preendendo determinadas combinações de 3-UTRs e/ou 5-UTRs apresentadas neste pedido é particularmente adequado para adminis- tração como uma vacina, em particular, adequado para administração no músculo, derme, ou epiderme de um indivíduo.

[00257] — Adequadamente, o RNA do primeiro aspecto pode compre- ender pelo menos uma 5"-UTR heteróloga e/ou pelo menos uma 3'”- UTR heteróloga. As referidas 5-UTRs ou 3-UTRs heterólogas podem ser derivadas de genes de ocorrência natural ou podem ser genetica- mente modificadas. Em modalidades preferidas, o RNA do primeiro aspecto compreende pelo menos uma sequência codificadora operaci- onalmente ligada pelo menos uma 3'-UTR (heteróloga) e/ou pelo me- nos uma 5"-UTR (heteróloga).

[00258] Em modalidades preferidas, pelo menos um RNA compre- ende pelo menos uma 3'-UTR heteróloga.

[00259] O termo "regão não transladada 3"" ou "3-UTR" ou "elemen- to de 3-UTR" será reconhecido e entendido pelo especialista na técni- ca, e destina-se, por exemplo, a indicar uma parte de uma molécula de ácido nucleico localizada 3' (i.e., a jusante) de uma sequência codifica- dora e que não é transladada para uma proteína. Uma 3-UTR pode fazer parte de um RNA, por exemplo, um mRNA, localizado entre uma cds e uma sequência de poli(A) terminal. Uma 3-UTR pode compreen- der elementos para controle da expressão gênica, também chamados elementos reguladores. Tais elementos reguladores podem ser, por exemplo, sítios de ligação de ribossomas, sítios de ligação de miRNA etc.

[00260] De preferência o RNA compreende uma 3'-UTR, que pode ser derivada de um gene que se refere a um RNA com meia-vida au- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12395/12614 mentada (i.e., que proporciona um RNA estável).

[00261] Em algumas modalidades, uma 3-UTR compreende um ou mais de um sinal de poliadenilação, um sítio de ligação para proteínas que afetam a estabilidade de localização de um RNA em uma célula, um ou mais miRNA ou sítios de ligação para miRNAs.

[00262] — MicroRNAs (00 mIiRNA) são RNAs não codificantes de 19- nucleotídeos de comprimento que se ligam à 3-UTR de moléculas de ácido nucleico e infra-regulam a expressão gênica reduzindo a es- tbilidade da molécula de ácido nucleico ou inibindo a translação. Por exemplo, sabe-se que os microRNAs regularam o RNA, e assim a ex- pressão de proteínas, por exemplo, no fígado (miR-122), coração (miR- Id, miR-149), células endoteliais (miR-17-92, miR-126), tecido adiposo (let-7, miR-30c), rim (mMIR-192, miR-194, miR-204), células mieloides (MIR-142-3p, miR-142-5p, miR-16, miR-21, miR-223, miR-24, miR-27), músculo (miR-133, miR-206, miR-208), e células epiteliais do pulmão (let-7, miR-133, miR-126). O RNA da invenção pode compreender uma ou mais sequências alvo de microRNA, sequências de microRNA, ou sementes de microRNA. Tais sequências podem, por exemplo, corres- ponder a qualquer microRNA conhecido tal como aqueles ensinados na Publicação US US2005/0261218 e na Publicação US US2005/0059005, cujas íntegras encontram-se aqui incorporadas a título de referência.

[00263] Por conseguinte, o miRNA ou os sítios de ligação para MIiRNAs definidos acima, podem ser removidos de uma 3-UTR ou in- troduzidos em uma 3”-UTR para ajustar a expressão do RNA aos tipos de célula ou tecidos desejados.

[00264] Em modalidades preferidas do primeiro aspecto, o RNA compreende pelo menos uma 3'-UTR heteróloga, onde pelo menos uma 3'”-UTR heteróloga compreende uma sequência de ácidos nuclei- cos derivada de uma 3-UTR de um gene selecionado dentre PSMB3, ALB7, alfa-globina (denominada "muag"), CASP1, COX6B1, GNAS, 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12396/12614

NDUFA1 and RPS9, ou de um homólogo, um fragmento ou uma vari- ante de qualquer um destes genes.

[00265] —Preferidas no contexto da invenção são sequências de áci- dos nucleicos derivadas de uma 3-UTR de uma alfa-globina (denomi- nada "muag"), um gene de ALB7, ou de um gene de PSMB3, ou de um homólogo, um fragmento ou uma variante de qualquer um destes ge- nes.

[00266] Em modalidades preferidas a 3-UTR do RNA codificante compreende uma sequência de ácidos nucleicos derivada de uma 3'- UTR de um gene de PSMB3.

[00267] Nas modalidades, o RNA pode compreender uma 3-UTR derivada de um gene de ALB7, onde a referida 3-UTR derivada de um gene de ALB7 compreende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos sendo idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica às SEQ ID NOs: 6169 ou 6170 ou um fragmento ou uma vari- ante das mesmas.

[00268] Nas modalidades, o RNA pode compreender uma 3-UTR derivada de um gene de alfa-globina, onde a referida 3-UTR derivada de um gene de alfa-globina ("'muag") compreende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos sendo idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica às SEQ ID NOs: 6171 ou 6172 ou um fragmento ou uma variante das mesmas.

[00269] Em modalidades preferidas, o RNA pode compreender uma 3'-UTR derivada de um gene de PSMB3, onde a referida 3-UTR deri- vada de um gene de PSMB3 compreende ou consiste em uma se- quência de ácidos nucleicos sendo idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica às SEQ ID NOs: 6157 ou 6158 ou um fra- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12397/12614 gmento ou uma variante das mesmas.

[00270] Nas modalidades, o RNA pode compreender uma 3-UTR derivada de um gene de CASP1, onde a referida 3-UTR derivada de um gene de CASP1 compreende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos sendo idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica às SEQ ID NOs: 6159 ou 6160 ou um fragmento ou uma variante das mesmas.

[00271] Nas modalidades, o RNA pode compreender uma 3-UTR derivada de um gene de COX6B1, onde a referida 3-UTR derivada de um gene de COX6B1 compreende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos sendo idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica às SEQ ID NOs: 6161 ou 6162 ou um fragmento ou uma variante das mesmas.

[00272] Nas modalidades, o RNA pode compreender uma 3-UTR derivada de um gene de GNAS, onde a referida 3-UTR derivada de um gene de GNAS compreende ou consiste em uma sequência de áci- dos nucleicos sendo idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica às SEQ ID NOs: 6163 ou 6164 ou um fragmento ou uma variante das mesmas.

[00273] Nas modalidades, o RNA pode compreender uma 3-UTR derivada de um gene de NDUFA1, onde a referida 3-UTR derivada de um gene de NDUFA1 compreende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos sendo idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica às SEQ ID NOs: 6165 ou 6166 ou um fragmento ou uma variante das mesmas.

[00274] Nas modalidades, o RNA pode compreender uma 3-UTR 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12398/12614 derivada de um gene de RPS9, onde a referida 3-UTR derivada de um gene de RPS9 compreende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos sendo idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica às SEQ ID NOs: 6167 ou 6168 ou um fragmento ou uma vari- ante das mesmas.

[00275] — Por conseguinte, o RNA codificante do primeiro aspecto po- de adequadamente compreender pelo menos uma 3-UTR compreen- dendo ou consistindo em uma sequência de ácidos nucleicos sendo idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica às SEQ ID NOs: 6157 a 6172 ou um fragmento ou uma variante das mesmas.

[00276] Em outras modalidades, o RNA do primeiro aspecto com- preende uma 3'-UTR descrita no documento WO2016/107877, a des- crição do documento WO2016/107877 referente a sequências de 3”- UTR estando aqui incorporada a título de referência. 3-UTRs adequa- das são as SEQ ID NOs: 1 e 24 e as SEQ ID NOs: 49 a 318 do docu- mento WO2016/107877, ou fragmentos ou variantes destas sequências. Por conseguinte, as 3-UTRs do RNA podem compreender ou consistir em uma sequência de RNA correspondete da sequência de ácidos nu- cleicos de acordo com as SEQ ID NOs: 1 a 24 e com as SEQ ID NOs: 49 a 318 do documento WO2016/107877. Em outras modalidades, o RNA do primeiro aspecto compreende uma 3'-UTR descrita no docu- mento WO2017/036580, a descrição do documento WO2017/036580 referente a sequências de 3-UTR estando aqui incorporada a título de referência. 3-UTRs adequadas são as SEQ ID NOs: 152 a 204 do do- cumento WO2017/036580, ou fragmentos ou variantes destas sequên- cias. Por conseguinte, a 3-UTR do RNA pode compreender ou consis- tir em uma sequência de RNA correspondente da sequência de ácidos nucleicos de acordo com as SEQ ID NOs: 152 a 204 do documento 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12399/12614

WO?2017/036580. Em outras modalidades, o RNA do primeiro aspecto compreende uma 3'-UTR descrita no documento WO2016/022914, a descrição do documento WO2016/022914 referente a sequências de 3'-UTR estando aqui incorporada a título de referência. 3-UTRs parti- cularmente preferidas são sequências de ácidos nucleicos de acordo com as SEQ ID NOs: 20 a 36 do documento WO2016/022914, ou frg- mentos ou variantes destas sequências. Neste contexto, é particular- mente preferível que a 3-UTR do RNA compreenda ou consista em uma sequência de RNA correspondente da sequência de ácidos nu- cleicos de acordo com as SEQ ID NOs: 20 a 36 do documento WO2016/022914.

[00277] Em modalidades preferidas, the pelo menos one RNA com- preende pelo menos uma 5'-UTR heteróloga.

[00278] Os termos "região não transladada 5"" ou "5'-UTR" ou "ele- mento de 5-UTR" será reconhecido e entendido pelo especialista na técnica, e destinam-se a indicar, por exemplo uma parte de molécula de ácido nucleico localizada 5' (i.e., "a montante") de uma sequência codificadora e que não é transladada para proteína. Uma 5-UTR pode fazer parte de um RNA localizado 5' da sequência codificadora. Tipi- camente, uma 5-UTR começa com o sítio de início de transcrição e termina antes do códon de início da sequência codificadora. Uma 5'- UTR pode compreender elementos de controle de expressão gênica, também chamados elementos reguladores. Tais elementos regulado- res podem ser, por exemplo, sítios de ligação de ribossomas, sítios de ligação de mIRNA etc. A 5-UTR pode ser modificada pós- transcricionalmente, por exemplo, por adição enzimática ou pós- transcricional de uma estrutura 5'-cap (definida acima).

[00279] De preferência o RNA compreende uma 5'-UTR, que pode ser derivada de um gene que se refere a um RNA com meia-vida au- mentada (i.e., proporciona um RNA estável).

'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12400/12614

[00280] Em algumas modalidades, uma 5-UTR compreende um ou mais de um sítio de ligação para proteínas que afetam a estabilidade da localização de um RNA em uma célula, ou um ou mais more miRNA ou sítios de ligação para miRNAs.

[00281] Por conseguinte, o miRNA ou os sítios de ligação para MIRNAs definidos acima podem ser removidos de uma 5-UTR ou in- troduzidos em uma 5"-UTR para ajustar a expressãoa do RNA aos ti- pos de células ou tecidos desejados.

[00282] Em modalidades preferidas do primeiro aspecto, o RNA compreende pelo menos uma 5'-UTR heteróloga, onde pelo menos uma 5'-UTR heteróloga compreende uma sequência de ácidos nuclei- cos derivada de uma 5-UTR de um gene selecionado dentre HSD17B4, RPL32, ASAH1, ATPSA1, MP68, NDUFAA4, NOSIP, RPL31, SLC7A3, TUBB4B, and UBQLN?2, ou de um homólogo, um fragmento ou uma variante de qualquer um destes genes.

[00283] Particularmente preferidos no contexto da invenção são se- quências de ácidos nucleicos derivadas de uma 5-UTR de um gene de HSD17B4, um gene de a SLC7A3, ou um um gene de RPL32, ou de um homólogo, um fragmento ou uma variante de qualquer um destes genes.

[00284] Em modalidades preferidas a 5-UTR do RNA codificante compreende uma sequência de ácidos nucleicos derivada de uma 5"- UTR um gene de SLC7A3.

[00285] Nas modalidades particularmente preferidas a 5-UTR do RNA codificante compreende uma sequência de ácidos nucleicos deri- vada de uma 5-UTR de um gene de HSD17B4.

[00286] Nas modalidades, o RNA pode compreender uma 5-UTR derivada de um gene de RPL32, onde a referida 5-UTR derivada de um gene de RPL32 compreende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos sendo idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12401/12614

87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica às SEQ ID NOs: 6155 ou 6156 ou um fragmento ou uma variante das mesmas.

[00287] Em modalidades preferidas, o RNA pode compreender uma 5'-UTR derivada de um gene de HSD17BA, onde a referida 5-UTR de- rivada de um gene de HSD17B4 compreende ou consiste em uma se- quência de ácidos nucleicos sendo idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica às SEQ ID NOs: 6135 ou 6136 ou um fra- gmento ou uma variante das mesmas.

[00288] Nas modalidades, o RNA pode compreender uma 5-UTR derivada de um gene de ASAH1, onde a referida 5-UTR derivada de um gene de ASAH1 compreende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos sendo idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica às SEQ ID NOs: 6137 ou 6138 ou um fragmento ou uma variante das mesmas.

[00289] Nas modalidades, o RNA pode compreender uma 5-UTR derivada de um gene de ATP5A1, onde a referida 5-UTR derivada de um gene de ATPSA1 compreende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos sendo idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica às SEQ ID NOs: 6139 ou 6140 ou um fragmento ou uma variante das mesmas.

[00290] Nas modalidades, o RNA pode compreender uma 5-UTR derivada de um gene de MP68, onde a referida 5-UTR derivada de um gene de MP68 compreende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos sendo idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica às SEQ ID NOs: 6141 ou 6142 ou um fragmento ou uma vari- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12402/12614 ante das mesmas.

[00291] Nas modalidades, o RNA pode compreender uma 5-UTR derivada de um gene de NDUFAA, onde a referida 5-UTR derivada de um gene de NDUFA4 compreende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos sendo idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica às SEQ ID NOs: 6143 ou 6144 ou um fragmento ou uma variante das mesmas.

[00292] Nas modalidades, o RNA pode compreender uma 5-UTR derivada de um gene de NOSIP, onde a referida 5-UTR derivada de um gene de NOSIP compreende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos sendo idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica às SEQ ID NOs: 6145 ou 6146 ou um fragmento ou uma variante das mesmas.

[00293] Nas modalidades, o RNA pode compreender uma 5-UTR derivada de um gene de RPL31, onde a referida 5-UTR derivada de um gene de RPL31 compreende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos sendo idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica às SEQ ID NOs: 6147 ou 6148 ou um fragmento ou uma variante das mesmas.

[00294] Em modalidades preferidas, o RNA pode compreender uma 5'-UTR derivada de um gene de SLC7A3, onde a referida 5-UTR deri- vada de um gene de SLC7A3 compreende ou consiste em uma se- quência de ácidos nucleicos sendo idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica às SEQ ID NOs: 6149 ou 6150 ou um fra- gmento ou uma variante das mesmas.

[00295] Nas modalidades, o RNA pode compreender uma 5-UTR 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12403/12614 derivada de um gene de TUBBA4B, onde a referida 5-UTR derivada de um gene de TUBB4B compreende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos sendo idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica às SEQ ID NOs: 6151 ou 6152 ou um fragmento ou uma variante das mesmas.

[00296] Nas modalidades, o RNA pode compreender uma 5-UTR derivada de um gene de UBQLN?2, onde a referida 5-UTR derivada de um gene de UBQLN2 compreende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos sendo idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica às SEQ ID NO: 6153 ou 6154 ou um fragmento ou uma variante das mesmas.

[00297] — Por conseguinte, o RNA do primeiro aspecto pode adequa- damente compreender pelo menos uma 5-UTR compreendendo ou consistindo em uma sequência de ácidos nucleicos sendo idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica às SEQ ID NOs: 6135-6156 ou um fragmento ou uma variante das mesmas.

[00298] Em outras modalidades, o RNA do primeiro aspecto com- preende uma 5'-UTR descrita no documento WO2013/143700, a des- crição do documento WO2013/143700 referente a sequências de 5"- UTR estando aqui incorporada a título de referência. 5-UTRs particu- larmente preferidas são sequências de ácidos nucleicos derivadas das SEQ ID NOs: 1-1363, SEQ ID NO: 1395, SEQ ID NO: 1421 e da SEQ ID NO: 1422 do documento WO2013/143700, ou fragmentos ou varian- tes destas sequências. Neste contexto, é preferível que a 5-UTR do RNA compreenda ou consista em uma sequência de RNA correspon- dente da sequência de ácidos nucleicos de acordo com as SEQ ID NOs: 1-1363, SEQ ID NO: 1395, SEQ ID NO: 1421 e SEQ ID NO: 1422 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12404/12614 do documento WOZ2013/143700. Em outras modalidades, o RNA do primeiro aspecto compreende uma 5'-UTR descrita no documento WO?2016/107877, a descrição do documento WO2016/107877 referen- te a sequências de 5-UTR estando aqui incorporada a título de refe- rência. 5-UTRs particularmente preferidas são sequências de ácidos nucleicos de acordo com as SEQ ID NOs: 25 a 30 e SEQ ID NOs: 319 a 382 do documento WO2016/107877, ou fragmentos ou variantes des- tas sequências.

Neste contexto, é particularmente preferível que a 5'- UTR do RNA compreenda ou consista em uma sequência de DNA cor- respondente da sequência de ácidos nucleicos de acordo com as SEQ ID NOs: 25 a 30 e SEQ ID NOs: 319 a 382 do documento WO?2016/107877. Em outras modalidades, o RNA do primeiro aspecto compreende uma 5'-UTR descrita no documento WO2017/036580, a descrição do documento WO2017/036580 referente a sequências de 5'-UTR estando aqui incorporada a título de referência. 5-UTRs parti- cularmente preferidas são sequências de ácidos nucleicos de acordo com as SEQ ID NOs: 1 a 151 do documento WO2017/036580, ou frg- mentos ou variantes destas sequências.

Neste contexto, é particular- mente preferível que a 5-UTR do RNA compreenda ou consista em uma sequência de RNA correspondente da sequência de ácidos nu- cleicos de acordo com as SEQ ID NOs: 1 a 151 do documento WO?2017/036580. Em outras modalidades, o RNA do primeiro aspecto compreende uma 5'-UTR descrita no documento WO2016/022914, a descrição do documento WO2016/022914 referente a sequências de 5'-UTR estando aqui incorporada a título de referência. 5-UTRs parti- cularmente preferidas são sequências de ácidos nucleicos de acordo com as SEQ ID NOs: 3 a 19 do documento WO2016/022914, ou frg- mentos ou variantes destas sequências.

Neste contexto, é particular- mente preferível que a 5-UTR do RNA compreenda ou consista em uma sequência de RNA correspondente da sequência de ácidos nu- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12405/12614 cleicos de acordo com as SEQ ID NOs: 3 a 19 do documento WO2016/022914.

[00299] —Adequadamente, em modalidades preferidas, o RNA do primeiro aspecto compreende pelo menos uma sequência codificadora codificando pelo menos um peptídio ou proteína derivada de um para- sita da malária, operacionalmente ligada a uma 3-UTR e/ou uma 5'- UTR selecionada dentre as seguintes combinações de SUTR/38UTR ("também denominadas desenhos de mRNA'"):

[00300] a1 (HSD1I7B4/PSMB3) a-2 (NDUFA4/PSMB3), a-3 (SLC7A3/PSMB3), a-4º (NOSIP/PSMB3), a-5 (MP68/PSMB3), b-1 (UBQLN2/RPS9), b-2 (ASAH1I/RPS9), b-3à (HSD17B4/RPS9), b-4 (HSD17B4/CASP1), b-5 (NOSIP/COX6B1), c-1 (NDUFA4/RPS9), c-2 (NOSIP/NDUFA1), c-3 (NDUFA4/COX6B1), c-4 (NDUFA4 /NDUFA1), c-5 (ATPSA1/PSMB3), d-1 (Rpl31/PSMB3), d-2 (ATPSA1/CASP1), d-3 (SLC7A3/GNAS), d-4 (HSD17B4/NDUFA1), d-5 (Slc7a3/Ndufa1), e-1 (TUBB4B/RPS9), e-2 (RPL31/RPS9) e-3 (MP68/RPS9) e+4 (NOSIP/RPS9), e-5 (ATPSA1/RPS9), e-6 (ATPSA1I/COX6B1), f-1 (ATP5A1/GNAS), f-2 (ATPSA1/NDUFA1), f-3 (HSD17B4/COX6B1), f-4 (HSD17B4/GNAS), f-5 (MP68/COX6B1), g-1º (MP68/NDUFA1), g-2 (NDUFA4/CASP1), g-3 (NDUFA4/GNAS), g-4 (NOSIP/CASP1), g-5 (RPL31/CASP1), h-1º (RPL31/COX6B1), h-2 (RPL31/GNAS), h-3 (RPL31/NDUFA1), h-4 (Slc7a3/CASP1), h-5 (SLC7A3/COX6B1), i-1 (SLC7A3/RPS9), i-2 (RPL32/ALB7), i-2 (RPL32/ALB7), ou i-3 (gene de ar-globina).

[00301] Nas modalidades particularmente preferidas do primeiro aspecto, o RNA compreende pelo menos uma sequência codificadora especificada neste pedido codificando pelo menos um peptídio ou pro- teína derivada de um parasita da malária, onde a referida sequência codificadora é operacionalmente ligada a uma 5-UTR selecionada dentre HSD17B4 e uma 3-UTR selecionad dentre PSMB3 (desenho a- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12406/12614

1 de mMRNA (HSD17B4/PSMB3)).

[00302] Em modalidades preferidas do primeiro aspecto, o RNA compreende pelo menos uma sequência codificadora especificada neste pedido codificando pelo menos um peptídio ou proteína derivada de um parasita da malária, onde a referida sequência codificadora é operacionalmente ligada a uma 5-UTR selecionada dentre SLC7A3 and e 3-UTR selecionada dentre PSMB3 (desenho a-3à de mMRNA (SLC7A3/PSMB3)).

[00303] “Por conseguinte, o RNA do primeiro aspecto compreende pelo menos uma sequência codificadora codificando pelo menos um peptídio ou proteína definida neste pedido, onde a administração do referido RNA resulta na expressão e/ou atividade do peptídio ou prote- ína codificada no indivíduo, onde a referida sequência codificadora de- finida neste pedido é operacionalmente ligada a uma 5"-UTR e/ou 3”- UTR, onde adequadamente - a referida 5-UTR derivada de um gene de HSD17B4 com- preende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos sendo idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idênti- ca às SEQ ID NOs: 6135 ou 6136 ou um fragmento ou uma varian- te das mesmas; - a referida 5-UTR derivada de um gene de ASAH1 compreende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos sendo idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica às SEQ ID NOs: 6137 ou 6138 ou um fragmento ou uma variante das mesmas; - a referida 5-UTR derivada de um gene de ATP5A1 compreende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos sendo idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica às SEQ 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12407/12614

ID NOs: 6139 ou 6140 ou um fragmento ou uma variante das mesmas;

- a referida 5-UTR derivada de um gene de MP68 com- preende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos sendo idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica às SEQ ID NOs: 6141 ou 6142 ou um fragmento ou uma variante das mesmas;

- a referida 5-UTR derivada de um gene de NDUFA4 compreende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos sendo idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica às SEQ ID NOs: 6143 ou 6144 ou um fragmento ou uma variante das mesmas;

- a referida 5-UTR derivada de um gene de NOSIP compreende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos sendo idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica às SEQ ID NOs: 6145 ou 6146 ou um fragmento ou uma variante das mesmas;

- a referida 5-UTR derivada de um gene de RPL31 compreende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos sendo idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica às SEQ ID NOs: 6147 ou 6148 ou um fragmento ou uma variante das mesmas;

- a referida 5-UTR derivada de um gene de RPL32 compreende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos sendo idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica às SEQ ID NOs: 6155 ou 6156 ou um fragmento ou uma variante das mesmas;

- a referida 5-UTR derivada de um gene de SLC7A3 compreende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos sendo idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica às SEQ

'etição 870210044043, de 14/05/2021, pág. 12408/12614

ID NOs: 6149 ou 6150 ou um fragmento ou uma variante das mesmas;

- a referida 5-UTR derivada de um gene de TUBB4B compreende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos sendo idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica às SEQ ID NOs: 6151 ou 6152 ou um fragmento ou uma variante das mesmas;

- a referida 5-UTR derivada de um gene de UBQLN2 compreende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos sendo idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica às SEQ ID NO: 6153 or 6154 ou um fragmento ou uma variante das mesmas;

- a referida 3-UTR derivada de um gene de PSMB3 compreende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos sendo idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica às SEQ ID NOs: 6157 ou 6158 ou um fragmento ou uma variante das mesmas;

- a referida 3-UTR derivada de um gene de CASP1 compreende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos sendo idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica às SEQ ID NOs: 6159 ou 6160 ou um fragmento ou uma variante das mesmas;

- a referida 3-UTR derivada de um gene de COX6B1 compreende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos sendo idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica às SEQ ID NOs: 6161 ou 6162 ou um fragmento ou uma variante das mesmas;

- a referida 3-UTR derivada de um gene de GNAS compreende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos sendo idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica às SEQ

'etição 870210044043, de 14/05/2021, pág. 12409/12614

ID NOs: 6163 ou 6164 ou um fragmento ou uma variante das mesmas; - a referida 3-UTR derivada de um gene de NDUFA1 compreende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos sendo idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica às SEQ ID NOs: 6165 ou 6166 ou um fragmento ou uma variante das mesmas; - a referida 3-UTR derivada de um gene de RPS9 com- preende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos sendo idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica às SEQ ID NOs: 6167 ou 6168 ou um fragmento ou uma variante das mesmas; - a referida 3-UTR derivada de um gene de ALB7 com- preende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos sendo idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica às SEQ ID NOs: 6169 ou 6170 ou um fragmento ou uma variante das mesmas; - a referida 3-UTR derivada de um gene de alfa-globina compreende ou consiste em uma sequência de ácidos nucleicos sendo idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica às SEQ ID NOs: 6171 ou 6172 ou um fragmento ou uma variante das mesmas. MRNA adequado para vacina contra malária:

[00304] Em várias modalidades do primeiro aspecto, o RNA codifi- cante, de preferência MRNA compreende, de preferência da direção 5' para a direção 3', os seguintes elementos: A) uma estrutura 5'-cap, de preferência como especificada neste pedido; B) um elemento de início 5'-terminal, de preferência como especificado neste pedido; C) opcionalmente, um sítio de clivagem para uma molécula 'etição 870210044043, de 14/05/2021, pág. 12410/12614 de ácido nucleico catalítica, de preferência como especificado neste pedido; D) opcionalmente, uma 5-UTR, de preferência como espe- cificada neste pedido; F) um sítio de ligação de ribossomas, de preferência como especificado neste pedido; E) pelo menos uma sequência codificadora, de preferência como especificada neste pedido; F) uma 3-UTR, de preferência como especificada neste pedido; G) opcionalmente, uma sequência de poli(A), de preferên- cia como especificada neste pedido; H) opcionalmente, uma sequência de poli(C), de preferên- cia como especificada neste pedido; |) opcionalmente, uma alça-trono de histona de preferên- cia como especificada neste pedido; J) opcionalmente, um elemento de sequência 3 -terminal, de preferência como especificado neste pedido.

[00305] Em modalidades preferidas do primeiro aspecto, o RNA co- dificante, de preferência MRNA compreende os seguintes elementos de preferência na direção de 5' para 3": A) uma estrutura 5-cap selecionada dentre m7G(5'), m7G(5')ppp(5')(2!/OMeA), ou m7G(5')ppp(5')(2'OMeG); B) um elemento de ínicio 5'-terminal selecionado dentre as SEQ ID NOs: 6177 ou 6178 ou fragmentos ou variantes do mesmo; C) opcionalmente, um sítio de clivagem para uma molécula de ácido nucleico catalítica, de preferência como especificado neste pedido; D) opcionalmente, uma 5-UTR selecionada dentre as SEQ ID NOs: 6135-6156 ou fragmentos ou variantes do mesmo; 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12411/12614

F) um sítio de ligação de ribossomas selecionado dentre as SEQ ID NOs: 6175, 6176 ou fragmentos ou variantes do mesmo; E) pelo menos uma sequência codificadora selecionada dentre as SEQ ID NOs: 37-328, 2121-2480, 2887-6134, 8754-8855, 10086-10139 ou fragmentos ou variantes do mesmo; F) uma 3"-UTR selecionada dentre as SEQ ID NOs: 6157 to 6172; G) opcionalmente, uma sequência de poli(A) compreen- dendo cerca de 50 a cerca de 500 adenosinas; H) opcionalmente, uma sequência de poli(C) compreen- dendo cerca de 10 a cerca de 100 citosinas; |) opcionalmente, uma alça-tronco de histona seleciona- da denre as SEQ ID NOs: 6173 ou 6174; J) opcionalmente, um elemento de sequência 3-terminal SEQ ID NOs: 6179-6200, 10173-10196.

[00306] Em outras modalidades preferidas do primeiro aspecto, o RNA codificante, de preferência MRNA compreende os seguintes ele- mentos: A) uma estrutura 5-cap selecionada dentre m7G(5'), m7G(5')ppp(5')(2!/OMeA), ou m7G(5')ppp(5')(2'OMeG); B) um elemento de início 5'-terminal selecionada dentre as SEQ ID NOs: 6177 ou 6178 ou fragmentos ou variantes do mesmo; C) um elemento de 3-UTR e/ou 5-UTR de acordo com a- 1, a-2, a-3, a-4, a-5, b-1, b-2, b-3, b-4, b-5, c-1, c-2, c-3, c-4, c-5, d-1, d- 2, d-3, d-4, d-5, e-1, e-2, e-3, e-4, e-5, e-6, f-1, f-2, f-3, f-4, f-5, g-1, g-2, 9-3, g-4, g-5, h-1, h-2, h-3, h-4, h-5, i-1, i-2, ou i-3, como especificado neste pedido, onde a-1, a-3, i-2, i-3 são preferidos; D) um sítio de ligação de ribossomas selecionado dentre as SEQ ID NOs: 6175, 6176 ou fragmentos ou variantes do mesmo; E) pelomenos uma sequência codificadora selecionada 'etição 870210044043, de 14/05/2021, pág. 12412/12614 dentre as SEQ ID NOs: 37-328, 8754-8855 ou fragmentos ou variantes do mesmo; G) uma sequência de poli(A) compreendendo cerca de 50 a cerca de 500 adenosinas, de preferência cerca de 64 or 100 adeno- sinas; H) opcionalmente, uma sequência de poli(C) compreen- dendo cerca de 10 a cerca de 100 citosinas, de preferência cerca de citosinas; |) opcionalmente, uma alça-tronco de histona seleciona- da dentre as SEQ ID NOs: 6173 or 6174.

[00307] Nas modalidades particularmente preferidas do primeiro aspecto, o RNA codificante, de preferência MRNA compreende os se- guintes elementos: A) uma estrutura 5-cap selecionada dentre m7G(5'), m7G(5')ppp(5')(2!/OMeA), ou m7G(5')ppp(5')(2'OMeG); B) um elemento de início 5'-terminal selecionada dentre as SEQ ID NOs: 6177 or 6178 ou fragmentos ou variantes do mesmo; C) um elemento de 3-UTR e/ou 5-UTR de acordo com a- 1, a-3, 1-2, i-3; D) um sítio de ligação de ribossomas selecionado dentre as SEQ ID NOs: 6175, 6176 ou fragmentos ou variantes do mesmo; E) pelomenos uma sequência codificadora selecionada dentre as SEQ ID NOs: 44, 80, 116, 152, 188, 224, 260, 296, 8755 (HsSALB Pf-CSP(19-397)) ou fragmentos ou variantes do mesmo; G) uma sequência de poli(A) compreendendo cerca de 50 a cerca de 500 adenosinas, de preferência cerca de 64 ou 100 adeno- sinas; H) opcionalmente, uma sequência de poli(C) compreen- dendo cerca de 10 a cerca de 100 citosinas, de preferência cerca de 30 citosinas; 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12413/12614

|) opcionalmente, uma alça-tronco de histona seleciona- da dentre as SEQ ID NOs: 6173 or 6174.

[00308] As sequências de aminoácidos, sequências codificadoras e sequências de mRNA preferidas da invenção estão apresentadas nas Tabelas 6A e 6B. Nestas, cada linha representa um construto de CSP específico adequado da invenção, onde a descrição do construto de CSP está indicada na coluna A, as SEQ ID NOs da sequência de ami- noácidos está apresentada na coluna B. Os respectivos números de acesso e outras informações estão apresentados no identificador <223> das respectivas SEQ ID NOs na listagem de sequências.

[00309] As SEQ ID NOs correspondentes das sequências codifica- doras codificando os respectivos construtos de CSP estão apresenta- das na coluna C das Tabelas 6A e 6B (cds do tipo selvagem) e D (opt1, opt2, opt3, opt4, opt5, opt11 cds). Informações adicionais estão apresentadas no identificador <223> da respectiva SEQ ID NO na lis- tagem de sequências.

[00310] Paraa Tabela 6A, as sequências de RNA correspondentes compreendendo sequências codificadoras preferidas estão apresenta- das nas colunas E a H, onde a coluna E ("a-1") apresenta sequências de RNA com a vantajosa combinação de UTR "a-1" definida neste pe- dido, e onde a coluna F ("i-2") apresenta sequências de RNA com a vantajosa combinação de "i-2" definida neste pedido, e onde a coluna G ("i-3") apresenta sequências de RNA com a vantajosa combinação de "i-3" definida neste pedido, e onde coluna H ("a-3") apresenta se- quências de RNA com a vantajosa combinação de "a-3" definida neste pedido.

'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12414/12614

Tabela 6A: Construtos de mRNA preferidos codificando a CSP

E E E E PF-CSP 1 137 [41,77,113,149, |329,333,369,405,441,477, |[913,917,953, 1497, 1501, 1537, 1573, 1609, |6312, 6315, 6345, 6375, 185, 221, 257, 2093 — | 513, 549, 585, 621, 625, 661, |989, 1025, 1061, | 1645, 1681, 1717, 1753, 1789, | 6405, 6435, 6465, 6495, 697, 733, 769, 805, 841, 877, | 1097, 1133, 1169, | 1793, 1829, 1865, 1901, 1937, | 6525, 6798, 6801, 6831, 6555, 6558, 6588, 6618, 6648, | 1205, 1209, 1245, | 1973, 2009, 2045, 7041, 7044, | 6861, 6891, 6921, 6951, 6678, 6708, 6738, 6768, 7284, | 1281, 1317, 1353, | 7074, 7104, 7134, 7164, 7194, | 6981, 7011, 7527, 7530, 7287, 7317, 7347, 1377, 7407, | 1389, 1425, 1461 | 7224, 7254, 7770, 7773, 7803, | 7560, 7590, 7620, 7650, 7437, 7467, 7497, 8013, 8016, 7833, 7863, 7893, 7923, 7953, | 7680, 7710, 7740, 8256, 8046, 8076, 8106, 8136, 8166, 7983, 8499, 8502, 8532, 8562, | 8259, 8289, 8319, 8349, 8196, 8226 8592, 8622, 8652, 8682, 8712 |8379, 8409, 8439, 8469 PRrCSP(1-374) |2 [38 [42,78,114,150, [330,334,370,406,442,478, |914,918, 954, 1498, 1502, 1538, 1574, 1610, [63713, 6316, 6346, 6376, o 186, 222, 258, 204 | 514, 550, 586, 622, 626, 662, |990, 1026, 1062, |1646, 1682, 1718, 1754, 1790, | 6406, 6436, 6466, 6496, 8 698, 734, 770, 806, 842, 878, | 1098, 1134, 1170, | 1794, 1830, 1866, 1902, 1938, | 6526, 6799, 6802, 6832, N 6556, 6559, 6589, 6619, 6649, | 1206, 1210, 1246, | 1974, 2010, 2046, 7042, 7045, | 6862, 6892, 6922, 6952, 6679, 6709, 6739, 6769, 7285, | 1282, 1318, 1354, | 7075, 7105, 7135, 7165, 7195, | 6982, 7012, 7528, 7531, 7288, 7318, 7348, 7378, 7408, | 1390, 1426, 1462 |7225, 7255, 7771, 7774, 7804, |7561, 7591, 7621, 7651, 7438, 7468, 7498, 8014, 8017, 7834, 7864, 7894, 7924, 7954, | 7681, 7711, 7741, 8257, 8047, 8077, 8107, 8137, 8167, 7984, 8500, 8503, 8533, 8563, | 8260, 8290, 8320, 8350, 8197, 8227 8593, 8623, 8653, 8683, 8713 |8380, 8410, 8440, 8470 PrCSP(1-325) [3 [39 [43,79,115,151, [331,335,371,407,443,479, |915,919,955, 1499, 1503, 1539, 1575, 1611, |6314, 6317, 6347, 6377, 187, 223, 259, 2905 |515, 551, 587, 623, 627, 663, /991,1027, 1063, |1647, 1683, 1719, 1755, 1791, | 6407, 6437, 6467, 6497, 699, 735, 771, 807, 843, 879, | 1099, 1135, 1171, | 1795, 1831, 1867, 1903, 1939, | 6527, 6800, 6803, 6833, 6557, 6560, 6590, 6620, 6650, | 1207, 1211, 1247, | 1975, 2011, 2047, 7043, 7046, | 6863, 6893, 6923, 6953, 6680, 6710, 6740, 6770, 7286, | 1283, 1319, 1355, | 7076, 7106, 7136, 7166, 7196, | 6983, 7013, 7529, 7532, 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12415/12614

A E E E o 7289, 7319, 7349, 7379, 7409, [1391, 1427, 1463 |7226,7256, 7772, 7775, 7805, | 7562, 7592, 7622, 7652, 7439, 7469, 7499, 8015, 8018, 7835, 7865, 7895, 7925, 7955, | 7682, 7712, 7742, 8258, 8048, 8078, 8108, 8138, 8168, 7985, 8501, 8504, 8534, 8564, | 8261, 8291, 8321, 8351, 8198, 8228 8594, 8624, 8654, 8684, 8714 |8381,8411, 8441, 8471 HsALB Pf- 4 44, 80, 8755, 116, 336, 372, 408, 444, 480, 516, 920, 956, 992, 1504, 1540, 1576, 1612, 1648, |6318, 6348, 6378, 6408, CSP(19-397) 152, 188, 224, 260, |552, 588, 628, 664, 700, 736, | 1028, 1064, 1100, | 1684, 1720, 1756, 1796, 1832, | 6438, 6468, 6498, 6528, 296 772, 808, 844, 880, 8857, 1136, 1172, 1212, | 1868, 1904, 1940, 1976, 2012, | 8959, 6804, 6834, 6864, 6561, 6591, 6621, 6651, 6681, | 1248, 1284, 1320, | 2048, 9061, 7047, 7077, 7107, | 6894, 6924, 6954, 6984, 6711, 6741, 6771, 9163, 7290, | 1356, 1392, 1428, |7137, 7167, 7197, 7227, 7257, | 7014, 9265, 7533, 7563, 7320, 7350, 7380, 7410, 7440, | 1464 9367, 7776, 7806, 7836, 7866, | 7593, 7623, 7653, 7683, 7470, 7500, 9469, 8019, 8049, 7896, 7926, 7956, 7986, 9673, |7713, 7743, 9571, 8262, - 8079, 8109, 8139, 8169, 8199, 8505, 8535, 8565, 8595, 8625, | 8292, 8322, 8352, 8382, LR 8229, 9775 8655, 8685, 8715, 9979 8412, 8442, 8472, 9877 8 Hslns-iso1 Pf- |5 45,81, 117, 153, 337, 373, 409, 445, 481, 517, /921,957, 993, 1505, 1541, 1577, 1613, 1649, | 6319, 6349, 6379, 6409, ? CSP(19-397) 189, 225, 261, 297 — | 553, 589, 629, 665, 701, 737, |1029, 1065, 1101, | 1685, 1721, 1757, 1797, 1833, | 6439, 6469, 6499, 6529, 773, 809, 845, 881, 6562, 1137, 1173, 1213, | 1869, 1905, 1941, 1977, 2013, | 6805, 6835, 6865, 6895, 6592, 6622, 6652, 6682, 6712, | 1249, 1285, 1321, | 2049, 7048, 7078, 7108, 7138, | 6925, 6955, 6985, 7015, 6742, 6772, 7291, 7321, 7351, | 1357, 1393, 1429, |7168, 7198, 7228, 7258, 7777, | 7534, 7564, 7594, 7624, 7381, 7411, 7441, 7471, 7501, [1465 7807, 7837, 7867, 7897, 7927, | 7654, 7684, 7714, 7744, 8020, 8050, 8080, 8110, 8140, 7957, 7987, 8506, 8536, 8566, | 8263, 8293, 8323, 8353, 8170, 8200, 8230 8596, 8626, 8656, 8686, 8716 8383, 8413, 8443, 8473 HsSPARC Pf- 46, 82, 118, 154, 338, 374, 410, 446, 482, 518, 922, 958, 994, 1506, 1542, 1578, 1614, 1650, |6320, 6350, 6380, 6410, CSP(19-397) 190, 226, 262, 298 | 554, 590, 630, 666, 702, 738, | 1030, 1066, 1102, | 1686, 1722, 1758, 1798, 1834, | 6440, 6470, 6500, 6530, 774, 810, 846, 882, 6563, 1138, 1174, 1214, | 1870, 1906, 1942, 1978, 2014, | 6806, 6836, 6866, 6896, etição 870210044043, de 14/05/2021, pág. 12416/12614

A E E E o 6593, 6623, 6653, 6683, 6713, | 1250, 1286, 1322, | 2050, 7049, 7079, 7109, 7139, |6926, 6956, 6986, 7016, 6743, 6773, 7292, 7322, 7352, | 1358, 1394, 1430, |7169,7199, 7229, 7259, 7778, |7535, 7565, 7595, 7625, 7382, 7412, 7442, 7472, 7502, | 1466 7808, 7838, 7868, 7898, 7928, | 7655, 7685, 7715, 7745, 8021, 8051, 8081, 8111, 8141, 7958, 7988, 8507, 8537, 8567, | 8264, 8294, 8324, 8354, 8171, 8201, 8231 8597, 8627, 8657, 8687, 8717 | 8384, 8414, 8444, 8474 IgE PfCSP(19- |7 47,83, 119, 155, 339, 375, 411, 447, 483, 519, 923, 959, 995, 1507, 1543, 1579, 1615, 1651, |6321, 6351, 6381, 6411, 397) 191, 227, 263, 299 — | 555, 591, 631, 667, 703, 739, |1031, 1067, 1103, | 1687, 1723, 1759, 1799, 1835, | 6441, 6471, 6501, 6531, 775, 811, 847, 883, 6564, 1139, 1175, 1215, | 1871, 1907, 1943, 1979, 2015, | 6807, 6837, 6867, 6897, 6594, 6624, 6654, 6684, 6714, | 1251, 1287, 1323, | 2051, 7050, 7080, 7110, 7140, | 6927, 6957, 6987, 7017, 6744, 6774, 7293, 7323, 7353, | 1359, 1395, 1431, |7170, 7200, 7230, 7260, 7779, |7536, 7566, 7596, 7626, 7383, 7413, 7443, 7473, 7503, | 1467 7809, 7839, 7869, 7899, 7929, | 7656, 7686, 7716, 7746, - 8022, 8052, 8082, 8112, 8142, 7959, 7989, 8508, 8538, 8568, | 8265, 8295, 8325, 8355, & 8172, 8202, 8232 8598, 8628, 8658, 8688, 8718 |8385, 8415, 8445, 8475 8 Pf- 48, 84, 120, 156, 340, 376, 412, 448, 484, 520, 924, 960, 996, 1508, 1544, 1580, 1616, 1652, | 6322, 6352, 6382, 6412, ? CSP Ligante(G4 192, 228, 264, 300 | 556, 592, 632, 668, 704, 740, |1032, 1068, 1104, | 1688, 1724, 1760, 1800, 1836, | 6442, 6472, 6502, 6532, SG4) TM domí- 776, 812, 848, 884, 6565, 1140, 1176, 1216, | 1872, 1908, 1944, 1980, 2016, | 6808, 6838, 6868, 6898, nio HA 6595, 6625, 6655, 6685, 6715, | 1252, 1288, 1324, | 2052, 7051, 7081, 7111, 7141, |6928, 6958, 6988, 7018, 6745, 6775, 7294, 7324, 7354, | 1360, 1396, 1432, |7171,7201,7231,7261, 7780, |7537, 7567, 7597, 7627, 7384, 7414, 7444, 7474, 7504, | 1468 7810, 7840, 7870, 7900, 7930, | 7657, 7687, 7717, 7747, 8023, 8053, 8083, 8113, 8143, 7960, 7990, 8509, 8539, 8569, | 8266, 8296, 8326, 8356, 8173, 8203, 8233 8599, 8629, 8659, 8689, 8719 |8386, 8416, 8446, 8476 Pf-CSP(199- 49, 85, 121, 157, 341, 377, 413, 449, 485, 521, 925, 961, 997, 1509, 1545, 1581, 1617, 1653, |6323, 6353, 6383, 6413, 377) Ligante(PV 193, 229, 265, 301 |557, 593, 633, 669, 705, 741, 1033, 1069, 1105, | 1689, 1725, 1761, 1801, 1837, | 6443, 6473, 6503, 6533, TN) HBsAg 777, 813, 849, 885, 6566, 1141, 1177, 1217, | 1873, 1909, 1945, 1981, 2017, | 6809, 6839, 6869, 6899, etição 870210044043, de 14/05/2021, pág. 12417/12614

FE E Ea PA 6596, 6626, 6656, 6686, 6716, | 1253, 1289, 1325, | 2053, 7052, 7082, 7112, 7142, | 6929, 6959, 6989, 7019, 6746, 6776, 7295, 7325, 7355, | 1361, 1397, 1433, |7172, 7202, 7232, 7262, 7781, |7538, 7568, 7598, 7628, 7385, 7415, 7445, 7475, 7505, | 1469 7811, 7841, 7871, 7901, 7931, | 7658, 7688, 7718, 7748, 8024, 8054, 8084, 8114, 8144, 7961, 7991, 8510, 8540, 8570, | 8267, 8297, 8327, 8357, 8174, 8204, 8234 8600, 8630, 8660, 8690, 8720 |8387, 8417, 8447, 8477 Pf-CSP(199- 10 50, 86, 122, 158, 342, 378, 414, 450, 486, 522, |926, 962, 998, 1510, 1546, 1582, 1618, 1654, | 6324, 6354, 6384, 6414, 387) Ligante(PV 194, 230, 266, 302 | 558, 594, 634, 670, 706, 742, 1034, 1070, 1106, | 1690, 1726, 1762, 1802, 1838, | 6444, 6474, 6504, 6534, TN) HBsAg 778, 814, 850, 886, 6567, 1142, 1178, 1218, | 1874, 1910, 1946, 1982, 2018, | 6810, 6840, 6870, 6900, 6597, 6627, 6657, 6687, 6717, | 1254, 1290, 1326, | 2054, 7053, 7083, 7113, 7143, | 6930, 6960, 6990, 7020, 6747, 6777, 7296, 7326, 7356, | 1362, 1398, 1434, |7173, 7203, 7233, 7263, 7782, |7539, 7569, 7599, 7629, 7386, 7416, 7446, 7476, 7506, | 1470 7812, 7842, 7872, 7902, 7932, | 7659, 7689, 7719, 7749, - 8025, 8055, 8085, 8115, 8145, 7962, 7992, 8511, 8541, 8571, | 8268, 8298, 8328, 8358, Ss 8175, 8205, 8235 8601, 8631, 8661, 8691, 8721 8388, 8418, 8448, 8478 8 HsALB Pf- EE 51,87, 123, 159, 343, 379, 415, 451, 487, 523, —|927, 963, 999, 1511, 1547, 1583, 1619, 1655, | 6325, 6355, 6385, 6415, ? CSP(19-152) 195, 231, 267, 303 — | 559, 595, 635, 671, 707, 743, 1035, 1071, 1107, |1691, 1727, 1763, 1803, 1839, | 6445, 6475, 6505, 6535, 779, 815, 851, 887, 6568, 1143, 1179, 1219, | 1875, 1911, 1947, 1983, 2019, | 6811, 6841, 6871, 6901, 6598, 6628, 6658, 6688, 6718, | 1255, 1291, 1327, | 2055, 7054, 7084, 7114, 7144, | 6931, 6961, 6991, 7021, 6748, 6778, 7297, 7327, 7357, | 1363, 1399, 1435, | 7174, 7204, 7234, 7264, 7783, | 7540, 7570, 7600, 7630, 7387, 7417, T447, 7477, 7507, [1471 7813, 7843, 7873, 7903, 7933, | 7660, 7690, 7720, 7750, 8026, 8056, 8086, 8116, 8146, 7963, 7993, 8512, 8542, 8572, | 8269, 8299, 8329, 8359, 8176, 8206, 8236 8602, 8632, 8662, 8692, 8722 8389, 8419, 8449, 8479 HsALB Pf- 12 52, 88, 124, 160, 344, 380, 416, 452, 488, 524, 928, 964, 1000, 1512, 1548, 1584, 1620, 1656, | 6326, 6356, 6386, 6416, CSP(19-192) 196, 232, 268, 304 — | 560, 596, 636, 672, 708, 744, 1036, 1072, 1108, | 1692, 1728, 1764, 1804, 1840, | 6446, 6476, 6506, 6536, 780, 816, 852, 888, 6569, 1144, 1180, 1220, | 1876, 1912, 1948, 1984, 2020, | 6812, 6842, 6872, 6902, 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12418/12614

A E E E o 6599, 6629, 6659, 6689, 6719, | 1256, 1292, 1328, | 2056, 7055, 7085, 7115, 7145, |6932, 6962, 6992, 7022, 6749, 6779, 7298, 7328, 7358, | 1364, 1400, 1436, |7175, 7205, 7235, 7265, 7784, | 7541, 7571, 7601, 7631, 7388, 7418, 7448, 7478, 7508, | 1472 7814, 7844, 7874, 7904, 7934, | 7661, 7691, 7721, 7751, 8027, 8057, 8087, 8117, 8147, 7964, 7994, 8513, 8543, 8573, | 8270, 8300, 8330, 8360, 8177, 8207, 8237 8603, 8633, 8663, 8693, 8723 8390, 8420, 8450, 8480 HsALB Pf- 13 53, 89, 125, 161, 345, 381, 417, 453, 489, 525, 929, 965, 1001, 1513, 1549, 1585, 1621, 1657, |6327, 6357, 6387, 6417, CSP(19-272) 197, 233, 269, 305 | 561, 597, 637, 673, 709, 745, |1037, 1073, 1109, | 1693, 1729, 1765, 1805, 1841, | 6447, 6477, 6507, 6537, 781, 817, 853, 889, 6570, 1145, 1181, 1221, | 1877, 1913, 1949, 1985, 2021, | 6813, 6843, 6873, 6903, 6600, 6630, 6660, 6690, 6720, | 1257, 1293, 1329, | 2057, 7056, 7086, 7116, 7146, | 6933, 6963, 6993, 7023, 6750, 6780, 7299, 7329, 7359, | 1365, 1401, 1437, |7176, 7206, 7236, 7266, 7785, | 7542, 7572, 7602, 7632, 7389, 7419, 7449, 7479, 7509, [1473 7815, 7845, 7875, 7905, 7935, | 7662, 7692, 7722, 7752, - 8028, 8058, 8088, 8118, 8148, 7965, 7995, 8514, 8544, 8574, | 8271, 8301, 8331, 8361, Ss 8178, 8208, 8238 8604, 8634, 8664, 8694, 8724 /8391,8421, 8451, 8481 3 HsALB Pf- 14 54, 90, 8766, 126, 346, 382, 418, 454, 490, 526, 930, 966, 1002, 1514, 1550, 1586, 1622, 1658, | 6328, 6358, 6388, 6418, ? CSP(19- 162, 198, 234, 270, |562, 598, 638, 674, 710, 746, |1038, 1074, 1110, | 1694, 1730, 1766, 1806, 1842, | 6448, 6478, 6508, 6538, 272) Ligante(AA 306 782, 818, 854, 890, 8868, 1146, 1182, 1222, | 1878, 1914, 1950, 1986, 2022, | 8970, 6814, 6844, 6874, Y) Pf-CSP(310- 6571, 6601, 6631, 6661, 6691, | 1258, 1294, 1330, | 2058, 9072, 7057, 7087, 7117, | 6904, 6934, 6964, 6994, 327) Ligante(AA 6721, 6751, 6781, 9174, 7300, | 1366, 1402, 1438, | 7147, 7177, 7207, 7237, 7267, | 7024, 9276, 7543, 7573, Y) Pf-CSP(346- 7330, 7360, 7390, 7420, 7450, | 1474 9378, 7786, 7816, 7846, 7876, | 7603, 7633, 7663, 7693, 375) 7480, 7510, 9480, 8029, 8059, 7906, 7936, 7966, 7996, 9684, |7723, 7753, 9582, 8272, 8089, 8119, 8149, 8179, 8209, 8515, 8545, 8575, 8605, 8635, | 8302, 8332, 8362, 8392, 8239, 9786 8665, 8695, 8725, 9990 8422, 8452, 8482, 9888 HsALB Pf- 15 55, 91, 127, 163, 347, 383, 419, 455, 491, 527, 931, 967, 1003, 1515, 1551, 1587, 1623, 1659, |6329, 6359, 6389, 6419, ame | fesratas fuera mer fomenta fue ma ve em ss fun am em eia, etição 870210044043, de 14/05/2021, pág. 12419/12614 e e E 272) Ligante(AA o 783, 819, 855, 891, 6572, 1147, 1183, 1223, | 1879, 1915, 1951, 1987, 2023, | 6815, 6845, 6875, 6905, Y) Pf-CSP(346- 6602, 6632, 6662, 6692, 6722, | 1259, 1295, 1331, | 2059, 7058, 7088, 7118, 7148, | 6935, 6965, 6995, 7025, 365) Ligante(AA 6752, 6782, 7301, 7331, 7361, | 1367, 1403, 1439, |7178, 7208, 7238, 7268, 7787, | 7544, 7574, 7604, 7634, Y) P2 7391, 7421, 7451, 7481, 7511, [1475 7817, 7847, 7877, 7907, 7937, | 7664, 7694, 7724, 7754, 8030, 8060, 8090, 8120, 8150, 7967, 7997, 8516, 8546, 8576, |8273, 8303, 8333, 8363, 8180, 8210, 8240 8606, 8636, 8666, 8696, 8726 8393, 8423, 8453, 8483 HsALB Pf- 16 56, 92, 128, 164, 348, 384, 420, 456, 492, 528, 932, 968, 1004, 1516, 1552, 1588, 1624, 1660, | 6330, 6360, 6390, 6420, CcSsP(19- 200, 236, 272, 308 | 564, 600, 640, 676, 712, 748, | 1040, 1076, 1112, | 1696, 1732, 1768, 1808, 1844, | 6450, 6480, 6510, 6540, 272) Ligante(AA 784, 820, 856, 892, 6573, 1148, 1184, 1224, | 1880, 1916, 1952, 1988, 2024, | 6816, 6846, 6876, 6906, Y) Pf-CSP(346- 6603, 6633, 6663, 6693, 6723, | 1260, 1296, 1332, | 2060, 7059, 7089, 7119, 7149, | 6936, 6966, 6996, 7026, 365) Ligante(AA 6753, 6783, 7302, 7332, 7362, | 1368, 1404, 1440, |7179, 7209, 7239, 7269, 7788, | 7545, 7575, 7605, 7635, = Y) PADRE 7392, 7422, 7452, 7482, 7512, [1476 7818, 7848, 7878, 7908, 7938, | 7665, 7695, 7725, 7755, Ss 8031, 8061, 8091, 8121, 8151, 7968, 7998, 8517, 8547, 8577, | 8274, 8304, 8334, 8364, S 8181, 8211, 8241 8607, 8637, 8667, 8697, 8727 8394, 8424, 8454, 8484 ? HsALB Pf- 17 57, 93, 129, 165, 349, 385, 421, 457, 493, 529, —/933, 969, 1005, 1517, 1553, 1589, 1625, 1661, | 6331, 6361, 6391, 6421, CcSsP(19- 201, 237, 273, 309 — |565, 601, 641, 677, 713, 749, |1041,1077, 1113, | 1697, 1733, 1769, 1809, 1845, | 6451, 6481, 6511, 6541, 272) Ligante(G4 785, 821, 857, 893, 6574, 1149, 1185, 1225, | 1881, 1917, 1953, 1989, 2025, | 6817, 6847, 6877, 6907, S) Pf-CSP(310- 6604, 6634, 6664, 6694, 6724, | 1261, 1297, 1333, | 2061, 7060, 7090, 7120, 7150, | 6937, 6967, 6997, 7027, 327) Ligante(G4 6754, 6784, 7303, 7333, 7363, | 1369, 1405, 1441, |7180, 7210, 7240, 7270, 7789, | 7546, 7576, 7606, 7636, S) Pf-CSP(346- 7393, 7423, 7453, 7483, 7513, [1477 7819, 7849, 7879, 7909, 7939, | 7666, 7696, 7726, 7756, 375) 8032, 8062, 8092, 8122, 8152, 7969, 7999, 8518, 8548, 8578, | 8275, 8305, 8335, 8365, 8182, 8212, 8242 8608, 8638, 8668, 8698, 8728 8395, 8425, 8455, 8485 HsALB Pf- 18 58, 94, 130, 166, 350, 386, 422, 458, 494, 530, 934, 970, 1006, 1518, 1554, 1590, 1626, 1662, | 6332, 6362, 6392, 6422, eme 1 É iseteaoo mca sa amaro [nm mta am va ima om om [ess sam co 00 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12420/12614

A E E E E 272) Ligante(G4 o 786, 822, 858, 894, 6575, 1150, 1186, 1226, | 1882, 1918, 1954, 1990, 2026, | 6818, 6848, 6878, 6908, S) Pf-CSP(310- 6605, 6635, 6665, 6695, 6725, | 1262, 1298, 1334, | 2062, 7061, 7091, 7121, 7151, |6938, 6968, 6998, 7028, 327) Pf 6755, 6785, 7304, 7334, 7364, | 1370, 1406, 1442, |7181,7211,7241,7271,7790, |7547, 7577, 7607, 7637, CSP(346-375) 7394, 7424, 7454, 7484, 7514, [1478 7820, 7850, 7880, 7910, 7940, | 7667, 7697, 7727, 7757, 8033, 8063, 8093, 8123, 8153, 7970, 8000, 8519, 8549, 8579, | 8276, 8306, 8336, 8366, 8183, 8213, 8243 8609, 8639, 8669, 8699, 8729 8396, 8426, 8456, 8486 HsALB Pf- 19 59, 95, 131, 167, 351, 387, 423, 459, 495, 531, 935, 971, 1007, 1519, 1555, 1591, 1627, 1663, |6333, 6363, 6393, 6423, CSP(19-325) 203, 239, 275, 311 | 567,603, 643, 679, 715, 751, 1043, 1079, 1115, | 1699, 1735, 1771, 1811, 1847, | 6453, 6483, 6513, 6543, 787, 823, 859, 895, 6576, 1151, 1187, 1227, | 1883, 1919, 1955, 1991, 2027, | 6819, 6849, 6879, 6909, 6606, 6636, 6666, 6696, 6726, | 1263, 1299, 1335, | 2063, 7062, 7092, 7122, 7152, | 6939, 6969, 6999, 7029, 6756, 6786, 7305, 7335, 7365, | 1371, 1407, 1443, |7182, 7212, 7242, 7272, 7791, |7548, 7578, 7608, 7638, - 7395, 7425, 7455, 7485, 7515, | 1479 7821, 7851, 7881, 7911, 7941, | 7668, 7698, 7728, 7758, 8 8034, 8064, 8094, 8124, 8154, 7971, 8001, 8520, 8550, 8580, | 8277, 8307, 8337, 8367, 8 8184, 8214, 8244 8610, 8640, 8670, 8700, 8730 |8397, 8427, 8457, 8487 ? HsALB Pf- 20 60, 96, 132, 168, 352, 388, 424, 460, 496, 532, 936, 972, 1008, 1520, 1556, 1592, 1628, 1664, | 6334, 6364, 6394, 6424, CSP(19-384) 204, 240, 276, 312 | 568, 604, 644, 680, 716, 752, | 1044, 1080, 1116, | 1700, 1736, 1772, 1812, 1848, | 6454, 6484, 6514, 6544, 788, 824, 860, 896, 6577, 1152, 1188, 1228, | 1884, 1920, 1956, 1992, 2028, | 6820, 6850, 6880, 6910, 6607, 6637, 6667, 6697, 6727, | 1264, 1300, 1336, | 2064, 7063, 7093, 7123, 7153, | 6940, 6970, 7000, 7030, 6757, 6787, 7306, 7336, 7366, | 1372, 1408, 1444, |7183, 7213, 7243, 7273, 7792, | 7549, 7579, 7609, 7639, 7396, 7426, 7456, 7486, 7516, | 1480 7822, 7852, 7882, 7912, 7942, | 7669, 7699, 7729, 7759, 8035, 8065, 8095, 8125, 8155, 7972, 8002, 8521, 8551, 8581, | 8278, 8308, 8338, 8368, 8185, 8215, 8245 8611, 8641, 8671, 8701, 8731 |8398, 8428, 8458, 8488 HsALB Pf- 21 61, 97, 133, 169, 353, 389, 425, 461, 497, 533, 937, 973, 1009, 1521, 1557, 1593, 1629, 1665, |6335, 6365, 6395, 6425, [asma] | lnsatares fmieeeamimrs font [van ma e vem foca css cos, etição 870210044043, de 14/05/2021, pág. 12421/12614

A E E domínio HA o 789, 825, 861, 897, 6578, 1153, 1189, 1229, | 1885, 1921, 1957, 1993, 2029, | 6821, 6851, 6881, 6911, 6608, 6638, 6668, 6698, 6728, | 1265, 1301, 1337, | 2065, 7064, 7094, 7124, 7154, | 6941, 6971, 7001, 7031, 6758, 6788, 7307, 7337, 7367, | 1373, 1409, 1445, | 7184, 7214, 7244, 7274, 7793, |7550, 7580, 7610, 7640, 7397, 7427, 7457, 7487, 7517, | 1481 7823, 7853, 7883, 7913, 7943, |7670, 7700, 7730, 7760, 8036, 8066, 8096, 8126, 8156, 7973, 8003, 8522, 8552, 8582, | 8279, 8309, 8339, 8369, 8186, 8216, 8246 8612, 8642, 8672, 8702, 8732 |8399, 8429, 8459, 8489 HsALB Pf- 22 62, 98, 134, 170, 354, 390, 426, 462, 498, 534, 938, 974, 1010, 1522, 1558, 1594, 1630, 1666, | 6336, 6366, 6396, 6426, CSP(82-397) 206, 242, 278, 314 — |570,606, 646, 682, 718, 754, |1046, 1082, 1118, | 1702, 1738, 1774, 1814, 1850, | 6456, 6486, 6516, 6546, 790, 826, 862, 898, 6579, 1154, 1190, 1230, | 1886, 1922, 1958, 1994, 2030, | 6822, 6852, 6882, 6912, 6609, 6639, 6669, 6699, 6729, | 1266, 1302, 1338, | 2066, 7065, 7095, 7125, 7155, | 6942, 6972, 7002, 7032, 6759, 6789, 7308, 7338, 7368, | 1374, 1410, 1446, |7185, 7215, 7245, 7275, 7794, |7551, 7581, 7611, 7641, = 7398, 7428, 7458, 7488, 7518, | 1482 7824, 7854, 7884, 7914, 7944, |7671, 7701, 7731, 7761, 8 8037, 8067, 8097, 8127, 8157, 7974, 8004, 8523, 8553, 8583, | 8280, 8310, 8340, 8370, 8 8187, 8217, 8247 8613, 8643, 8673, 8703, 8733 |8400, 8430, 8460, 8490 ? HsALB Pf- 23 63, 99, 135, 171, 355, 391, 427, 463, 499, 535, 939, 975, 1011, 1523, 1559, 1595, 1631, 1667, |6337, 6367, 6397, 6427, CSP(93-192) 207, 243, 279, 315 |571,607, 647, 683, 719, 755, 1047, 1083, 1119, | 1703, 1739, 1775, 1815, 1851, | 6457, 6487, 6517, 6547, 791, 827, 863, 899, 6580, 1155, 1191, 1231, | 1887, 1923, 1959, 1995, 2031, | 6823, 6853, 6883, 6913, 6610, 6640, 6670, 6700, 6730, | 1267, 1303, 1339, | 2067, 7066, 7096, 7126, 7156, | 6943, 6973, 7003, 7033, 6760, 6790, 7309, 7339, 7369, | 1375, 1411, 1447, |7186, 7216, 7246, 7276, 7795, |7552, 7582, 7612, 7642, 7399, 7429, 7459, 7489, 7519, | 1483 7825, 7855, 7885, 7915, 7945, | 7672, 7702, 7732, 7762, 8038, 8068, 8098, 8128, 8158, 7975, 8005, 8524, 8554, 8584, | 8281, 8311, 8341, 8371, 8188, 8218, 8248 8614, 8644, 8674, 8704, 8734 |8401, 8431, 8461, 8491 HsALB Pf- 24 64, 100, 136, 172, 356, 392, 428, 464, 500, 536, 940, 976, 1012, 1524, 1560, 1596, 1632, 1668, | 6338, 6368, 6398, 6428, amesia |] lnrsaess Imimeementa fome [10 mo ma e ve foca css en cs, etição 870210044043, de 14/05/2021, pág. 12422/12614

FE Eee PA 792, 828, 864, 900, 6581, 1156, 1192, 1232, | 1888, 1924, 1960, 1996, 2032, | 6824, 6854, 6884, 6914, 6611, 6641, 6671, 6701, 6731, | 1268, 1304, 1340, | 2068, 7067, 7097, 7127, 7157, | 6944, 6974, 7004, 7034, 6761, 6791, 7310, 7340, 7370, | 1376, 1412, 1448, |7187, 7217, 7247, 7277, 7796, |7553, 7583, 7613, 7643, 7400, 7430, 7460, 7490, 7520, | 1484 7826, 7856, 7886, 7916, 7946, |7673, 7703, 7733, 7763, 8039, 8069, 8099, 8129, 8159, 7976, 8006, 8525, 8555, 8585, | 8282, 8312, 8342, 8372, 8189, 8219, 8249 8615, 8645, 8675, 8705, 8735 | 8402, 8432, 8462, 8492 HsALB Pf- 25 65, 101, 137, 173, 357, 393, 429, 465, 501, 537, 941, 977, 1013, 1525, 1561, 1597, 1633, 1669, | 6339, 6369, 6399, 6429, CSP(93-397) 209, 245, 281, 317 | 573, 609, 649, 685, 721, 757, | 1049, 1085, 1121, | 1705, 1741, 1777, 1817, 1853, | 6459, 6489, 6519, 6549, 793, 829, 865, 901, 6582, 1157, 1193, 1233, | 1889, 1925, 1961, 1997, 2033, | 6825, 6855, 6885, 6915, 6612, 6642, 6672, 6702, 6732, | 1269, 1305, 1341, | 2069, 7068, 7098, 7128, 7158, | 6945, 6975, 7005, 7035, 6762, 6792, 7311, 7341, 7371, [1377, 1413, 1449, |7188,7218, 7248, 7278, 7797, | 7554, 7584, 7614, 7644, = 7401, 7431, 7461, 7491, 7521, [1485 7827, 7857, 7887, 7917, 7947, | 7674, 7704, 7734, 7764, o 8040, 8070, 8100, 8130, 8160, 7977, 8007, 8526, 8556, 8586, |8283, 8313, 8343, 8373, 3 8190, 8220, 8250 8616, 8646, 8676, 8706, 8736 8403, 8433, 8463, 8493 ? HsALB Pf- 26 66, 102, 138, 174, 358, 394, 430, 466, 502, 538, 942, 978, 1014, 1526, 1562, 1598, 1634, 1670, | 6340, 6370, 6400, 6430, CSP(98-192) 210, 246, 282, 318 | 574, 610, 650, 686, 722, 758, | 1050, 1086, 1122, | 1706, 1742, 1778, 1818, 1854, | 6460, 6490, 6520, 6550, 794, 830, 866, 902, 6583, 1158, 1194, 1234, | 1890, 1926, 1962, 1998, 2034, | 6826, 6856, 6886, 6916, 6613, 6643, 6673, 6703, 6733, | 1270, 1306, 1342, | 2070, 7069, 7099, 7129, 7159, | 6946, 6976, 7006, 7036, 6763, 6793, 7312, 7342, 7372, |1378, 1414, 1450, |7189, 7219, 7249, 7279, 7798, |7555, 7585, 7615, 7645, 7402, 7432, 7462, 7492, 7522, | 1486 7828, 7858, 7888, 7918, 7948, | 7675, 7705, 7735, 7765, 8041, 8071, 8101, 8131, 8161, 7978, 8008, 8527, 8557, 8587, | 8284, 8314, 8344, 8374, 8191, 8221, 8251 8617, 8647, 8677, 8707, 8737 | 8404, 8434, 8464, 8494 HsALB Pf- 27 67, 103, 139, 175, 359, 395, 431, 467, 503, 539, 943, 979, 1015, 1527, 1563, 1599, 1635, 1671, | 6341, 6371, 6401, 6431, (csmeeara É É lamas meneame so [rmiam ni [vo va ima os om fesnesceicor 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12423/12614

A E E o 795, 831, 867, 903, 6584, 1159, 1195, 1235, | 1891, 1927, 1963, 1999, 2035, | 6827, 6857, 6887, 6917, 6614, 6644, 6674, 6704, 6734, | 1271, 1307, 1343, | 2071, 7070, 7100, 7130, 7160, | 6947, 6977, 7007, 7037, 6764, 6794, 7313, 7343, 7373, | 1379, 1415, 1451, |7190, 7220, 7250, 7280, 7799, |7556, 7586, 7616, 7646, 7403, 7433, 7463, 7493, 7523, | 1487 7829, 7859, 7889, 7919, 7949, |7676, 7706, 7736, 7766, 8042, 8072, 8102, 8132, 8162, 7979, 8009, 8528, 8558, 8588, | 8285, 8315, 8345, 8375, 8192, 8222, 8252 8618, 8648, 8678, 8708, 8738 |8405, 8435, 8465, 8495 HsALB Pf- 28 68, 104, 140, 176, 360, 396, 432, 468, 504, 540, 944, 980, 1016, 1528, 1564, 1600, 1636, 1672, | 6342, 6372, 6402, 6432, CSP(98-374) 212, 248, 284, 320 —|576,612, 652, 688, 724, 760, |1052, 1088, 1124, | 1708, 1744, 1780, 1820, 1856, | 6462, 6492, 6522, 6552, 796, 832, 868, 904, 6585, 1160, 1196, 1236, | 1892, 1928, 1964, 2000, 2036, | 6828, 6858, 6888, 6918, 6615, 6645, 6675, 6705, 6735, | 1272, 1308, 1344, | 2072, 7071, 7101,7131, 7161, | 6948, 6978, 7008, 7038, 6765, 6795, 7314, 7344, 7374, | 1380, 1416, 1452, |7191,7221,7251, 7281, 7800, |7557, 7587, 7617, 7647, = 7404, 7434, 7464, 7494, 7524, | 1488 7830, 7860, 7890, 7920, 7950, | 7677, 7707, 7737, 7767, Ss 8043, 8073, 8103, 8133, 8163, 7980, 8010, 8529, 8559, 8589, | 8286, 8316, 8346, 8376, 8 8193, 8223, 8253 8619, 8649, 8679, 8709, 8739 |8406, 8436, 8466, 8496 ? HsALB Pf- 29 69, 105, 141, 177, 361, 397, 433, 469, 505, 541, 945, 981, 1017, 1529, 1565, 1601, 1637, 1673, | 6343, 6373, 6403, 6433, CSP(98-397) 213, 249, 285, 321 |577,613, 653, 689, 725, 761, 1053, 1089, 1125, | 1709, 1745, 1781, 1821, 1857, | 6463, 6493, 6523, 6553, 797, 833, 869, 905, 6586, 1161, 1197, 1237, | 1893, 1929, 1965, 2001, 2037, | 6829, 6859, 6889, 6919, 6616, 6646, 6676, 6706, 6736, | 1273, 1309, 1345, | 2073, 7072, 7102, 7132, 7162, | 6949, 6979, 7009, 7039, 6766, 6796, 7315, 7345, 7375, | 1381, 1417, 1453, |7192, 7222, 7252, 7282, 7801, |7558, 7588, 7618, 7648, 7405, 7435, 7465, 7495, 7525, | 1489 7831, 7861, 7891, 7921, 7951, |7678, 7708, 7738, 7768, 8044, 8074, 8104, 8134, 8164, 7981, 8011, 8530, 8560, 8590, | 8287, 8317, 8347, 8377, 8194, 8224, 8254 8620, 8650, 8680, 8710, 8740 |8407, 8437, 8467, 8497 HsALB Pf- 30 70, 106, 8765, 142, |362, 398, 434, 470, 506, 542, 946, 982, 1018, 1530, 1566, 1602, 1638, 1674, | 6344, 6374, 6404, 6434, am | femeas Imememe re re. fome na [mo me ne se em fusca en aim etição 870210044043, de 14/05/2021, pág. 12424/12614

EEE E oC 377) Ligante(PV o 322 798, 834, 870, 906, 8867, 1162, 1198, 1238, | 1894, 1930, 1966, 2002, 2038, | 8969, 6830, 6860, 6890, TN) HBsAg 6587, 6617, 6647, 6677, 6707, | 1274, 1310, 1346, | 2074, 9071, 7073, 7103, 7133, | 6920, 6950, 6980, 7010, 6737, 6767, 6797, 9173, 7316, | 1382, 1418, 1454, |7163, 7193, 7223, 7253, 7283, | 7040, 9275, 7559, 7589, 7346, 7376, 7406, 7436, 7466, | 1490 9377, 7802, 7832, 7862, 7892, | 7619, 7649, 7679, 7709, 7496, 7526, 9479, 8045, 8075, 7922, 7952, 7982, 8012, 9683, |7739, 7769, 9581, 8288, 8105, 8135, 8165, 8195, 8225, 8531, 8561, 8591, 8621, 8651, | 8318, 8348, 8378, 8408, 8255, 9785 8681, 8711, 8741, 9989 8438, 8468, 8498, 9887 LumSynt Ligante | 8742 8754, 8772, 8784, 8856, 8874, 8886, 8898, 8910, 9060, 9078, 9090, 9102, 9114, | 8958, 8976, 8988, 9000, (GGS4- 8796, 8808, 8820, 8922, 8934, 8946, 9162, 9180, 9126, 9138, 9150, 9366, 9384, | 9012, 9024, 9036, 9048, GGG) Pf- 8832, 8844 9192, 9204, 9216, 9228, 9240, 9396, 9408, 9420, 9432, 9444, | 9264, 9282, 9294, 9306, CSP(19-397) 9252, 9468, 9486, 9498, 9510, 9456, 9672, 9690, 9702, 9714, | 9318, 9330, 9342, 9354, = 9522, 9534, 9546, 9558, 9774, 9726, 9738, 9750, 9762, 9978, | 9570, 9588, 9600, 9612, & 9792, 9804, 9816, 9828, 9840, 9996, 10008, 10020, 10032, 9624, 9636, 9648, 9660, S 9852, 9864 10044, 10056, 10068 9876, 9894, 9906, 9918, ? 9930, 9942, 9954, 9966 HsALB Pf- 8743 8756, 8773, 8785, 8858, 8875, 8887, 8899, 8911, 9062, 9079, 9091, 9103, 9115, | 8960, 8977, 8989, 9001, CcSsP(19- 8797, 8809, 8821, 8923, 8935, 8947, 9164, 9181, 9127, 9139, 9151, 9368, 9385, | 9013, 9025, 9037, 9049, 272) Ligante(PV 8833, 8845 9193, 9205, 9217, 9229, 9241, 9397, 9409, 9421, 9433, 9445, | 9266, 9283, 9295, 9307, TN) HBsAg 9253, 9470, 9487, 9499, 9511, 9457, 9674, 9691, 9703, 9715, |9319, 9331, 9343, 9355, 9523, 9535, 9547, 9559, 9776, 9727, 9739, 9751, 9763, 9980, | 9572, 9589, 9601, 9613, 9793, 9805, 9817, 9829, 9841, 9997, 10009, 10021, 10033, 9625, 9637, 9649, 9661, 9853, 9865 10045, 10057, 10069 9878, 9895, 9907, 9919, 9931, 9943, 9955, 9967 [PEA a] erm, JamemeeamaR E avmranmo oro ore ares, faser a0 eoom s00 | 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12425/12614

EP E] AE o CSP(19- o 8786, 8798, 8810, 8924, 8936, 8948, 8860, 9165, 9128, 9140, 9152, 9064, 9369, | 9014, 9026, 9038, 9050, 272) Ligante(AA 8822, 8834, 8846 9182, 9194, 9206, 9218, 9230, 9386, 9398, 9410, 9422, 9434, | 8962, 9267, 9284, 9296, Y) Pf-CSP(346- 9242, 9254, 9166, 9471, 9488, 9446, 9458, 9370, 9675, 9692, | 9308, 9320, 9332, 9344, 365) Ligante(AA 9500, 9512, 9524, 9536, 9548, 9704, 9716, 9728, 9740, 9752, | 9356, 9268, 9573, 9590, Y) PADRE Liga 9560, 9472, 9777, 9794, 9806, 9764, 9676, 9981, 9998, 9602, 9614, 9626, 9638, nte(PVTN) HBsA 9818, 9830, 9842, 9854, 9866, 10010, 10022, 10034, 10046, |9650, 9662, 9574, 9879, g 9778 10058, 10070, 9982 9896, 9908, 9920, 9932, 9944, 9956, 9968, 9880 HsALB Pf- 8745 8759, 8760, 8775, 8861, 8877, 8889, 8901, 8913, 9065, 9081, 9093, 9105, 9117, | 8963, 8979, 8991, 9003, CcSsP(19- 8787, 8799, 8811, 8925, 8937, 8949, 8862, 9167, 9129, 9141, 9153, 9066, 9371, | 9015, 9027, 9039, 9051, 384) Ligante(PV 8823, 8835, 8847 9183, 9195, 9207, 9219, 9231, 9387, 9399, 9411, 9423, 9435, | 8964, 9269, 9285, 9297, = TN) HBsAg 9243, 9255, 9168, 9473, 9489, 9447, 9459, 9372, 9677, 9693, | 9309, 9321, 9333, 9345, R 9501, 9513, 9525, 9537, 9549, 9705, 9717, 9729, 9741, 9753, | 9357, 9270, 9575, 9591, 8 9561, 9474, 9779, 9795, 9807, 9765, 9678, 9983, 9999, 9603, 9615, 9627, 9639, ? 9819, 9831, 9843, 9855, 9867, 10011, 10023, 10035, 10047, |9651, 9663, 9576, 9881, 9780 10059, 10071, 9984 9897, 9909, 9921, 9933, 9945, 9957, 9969, 9882 HsALB Pf- 8746 8761, 8762, 8776, 8863, 8878, 8890, 8902, 8914, 9067, 9082, 9094, 9106, 9118, | 8965, 8980, 8992, 9004, CcSsP(19- 8788, 8800, 8812, 8926, 8938, 8950, 8864, 9169, 9130, 9142, 9154, 9068, 9373, | 9016, 9028, 9040, 9052, 384) Ligante(SG 8824, 8836, 8848 9184, 9196, 9208, 9220, 9232, 9388, 9400, 9412, 9424, 9436, | 8966, 9271, 9286, 9298, G) Ferritina 9244, 9256, 9170, 9475, 9490, 9448, 9460, 9374, 9679, 9694, | 9310, 9322, 9334, 9346, 9502, 9514, 9526, 9538, 9550, 9706, 9718, 9730, 9742, 9754, | 9358, 9272, 9577, 9592, 9562, 9476, 9781, 9796, 9808, 9766, 9680, 9985, 10000, 9604, 9616, 9628, 9640, 9820, 9832, 9844, 9856, 9868, 10012, 10024, 10036, 10048, | 9652, 9664, 9578, 9883, 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12426/12614

FB EPE e gg 2 | 9782 10060, 10072, 9986 9898, 9910, 9922, 9934, A O fran rare: HsALB Pf- 8747 8763, 8764, 8777, 8865, 8879, 8891, 8903, 8915, 9069, 9083, 9095, 9107, 9119, | 8967, 8981, 8993, 9005, CSP(93- 8789, 8801, 8813, 8927, 8939, 8951, 8866, 9171, 9131, 9143, 9155, 9070, 9375, | 9017, 9029, 9041, 9053, 384) Ligante(PV 8825, 8837, 8849 9185, 9197, 9209, 9221, 9233, 9389, 9401, 9413, 9425, 9437, | 8968, 9273, 9287, 9299, TN) HBsAg 9245, 9257, 9172, 9477, 9491, 9449, 9461, 9376, 9681, 9695, | 9311, 9323, 9335, 9347, 9503, 9515, 9527, 9539, 9551, 9707, 9719, 9731, 9743, 9755, | 9359, 9274, 9579, 9593, 9563, 9478, 9783, 9797, 9809, 9767, 9682, 9987, 10001, 9605, 9617, 9629, 9641, 9821, 9833, 9845, 9857, 9869, 10013, 10025, 10037, 10049, 9653, 9665, 9580, 9885, 9784 10061, 10073, 9988 9899, 9911, 9923, 9935, 9947, 9959, 9971, 9886 — HsALB Pf- 8749 8767, 8779, 8791, 8869, 8881, 8893, 8905, 8917, 9073, 9085, 9097, 9109, 9121, | 8971, 8983, 8995, 9007, & CSP(19- 8803, 8815, 8827, 8929, 8941, 8953, 9175, 9187, 9133, 9145, 9157, 9379, 9391, | 9019, 9031, 9043, 9055, Ss 272) Ligante(AA 8839, 8851 9199, 9211, 9223, 9235, 9247, 9403, 9415, 9427, 9439, 9451, | 9277, 9289, 9301, 9313, = Y) Pf-CSP(346- 9259, 9481, 9493, 9505, 9517, 9463, 9685, 9697, 9709, 9721, | 9325, 9337, 9349, 9361, 375) Ligante(AA 9529, 9541, 9553, 9565, 9787, 9733, 9745, 9757, 9769, 9991, | 9583, 9595, 9607, 9619, Y) PFf-CSP(310- 9799, 9811, 9823, 9835, 9847, 10003, 10015, 10027, 10039, 9631, 9643, 9655, 9667, 327) 9859, 9871 10051, 10063, 10075 9889, 9901, 9913, 9925, 9937, 9949, 9961, 9973 HsALB Pf- 8750 8768, 8780, 8792, 8870, 8882, 8894, 8906, 8918, 9074, 9086, 9098, 9110, 9122, | 8972, 8984, 8996, 9008, CSP(19- 8804, 8816, 8828, 8930, 8942, 8954, 9176, 9188, 9134, 9146, 9158, 9380, 9392, | 9020, 9032, 9044, 9056, 272) Ligante(AA 8840, 8852 9200, 9212, 9224, 9236, 9248, 9404, 9416, 9428, 9440, 9452, | 9278, 9290, 9302, 9314, Y) Pf-CSP(346- 9260, 9482, 9494, 9506, 9518, 9464, 9686, 9698, 9710, 9722, | 9326, 9338, 9350, 9362, 375) Ligante(AA 9530, 9542, 9554, 9566, 9788, 9734, 9746, 9758, 9770, 9992, | 9584, 9596, 9608, 9620, 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12427/12614

EEE E Ea Y) Pf-CSP(310- o 9800, 9812, 9824, 9836, 9848, 10004, 10016, 10028, 10040, |9632, 9644, 9656, 9668, 327) Ligante(AA 9860, 9872 10052, 10064, 10076 9890, 9902, 9914, 9926, Y) PADRE 9938, 9950, 9962, 9974 HsALB Pf- 8751 8769, 8781, 8793, 8871, 8883, 8895, 8907, 8919, 9075, 9087, 9099, 9111, 9123, | 8973, 8985, 8997, 9009, CcSsP(19- 8805, 8817, 8829, 8931, 8943, 8955, 9177, 9189, 9135, 9147, 9159, 9381, 9393, | 9021, 9033, 9045, 9057, 272) Ligante(AA 8841, 8853 9201, 9213, 9225, 9237, 9249, 9405, 9417, 9429, 9441, 9453, | 9279, 9291, 9303, 9315, Y) Pf-CSP(310- 9261, 9483, 9495, 9507, 9519, 9465, 9687, 9699, 9711, 9723, | 9327, 9339, 9351, 9363, 327) Ligante(AA 9531, 9543, 9555, 9567, 9789, 9735, 9747, 9759, 9771, 9993, | 9585, 9597, 9609, 9621, Y) Pf-CSP(346- 9801, 9813, 9825, 9837, 9849, 10005, 10017, 10029, 10041, | 9633, 9645, 9657, 9669, 375) Ligante(AA 9861, 9873 10053, 10065, 10077 9891, 9903, 9915, 9927, Y) PADRE 9939, 9951, 9963, 9975 = HsALB Pf- 8752 8770, 8782, 8794, 8872, 8884, 8896, 8908, 8920, 9076, 9088, 9100, 9112, 9124, | 8974, 8986, 8998, 9010, & CcSsP(19- 8806, 8818, 8830, 8932, 8944, 8956, 9178, 9190, 9136, 9148, 9160, 9382, 9394, | 9022, 9034, 9046, 9058, Ss 272) Ligante(AA 8842, 8854 9202, 9214, 9226, 9238, 9250, 9406, 9418, 9430, 9442, 9454, | 9280, 9292, 9304, 9316, ? Y) Pf-CSP(310- 9262, 9484, 9496, 9508, 9520, 9466, 9688, 9700, 9712, 9724, | 9328, 9340, 9352, 9364, 327) Ligante(AA 9532, 9544, 9556, 9568, 9790, 9736, 9748, 9760, 9772, 9994, | 9586, 9598, 9610, 9622, Y) Pf-CSP(346- 9802, 9814, 9826, 9838, 9850, 10006, 10018, 10030, 10042, |9634, 9646, 9658, 9670, 375) Ligante(AA 9862, 9874 10054, 10066, 10078 9892, 9904, 9916, 9928, Y). PADRE Liga 9940, 9952, 9964, 9976 nte(AAY) P2 HsALB Pf- 8753 8771, 8783, 8795, 8873, 8885, 8897, 8909, 8921, 9077, 9089, 9101, 9113, 9125, | 8975, 8987, 8999, 9011, CcSsP(19- 8807, 8819, 8831, 8933, 8945, 8957, 9179, 9191, 9137, 9149, 9161, 9383, 9395, | 9023, 9035, 9047, 9059, 272) Ligante(AA 8843, 8855 9203, 9215, 9227, 9239, 9251, 9407, 9419, 9431, 9443, 9455, | 9281, 9293, 9305, 9317, Y) Pf-CSP(310- 9263, 9485, 9497, 9509, 9521, 9467, 9689, 9701, 9713, 9725, | 9329, 9341, 9353, 9365, 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12428/12614

EEE E E 327) Ligante o 9533, 9545, 9557, 9569, 9791, 9737, 9749, 9761, 9773, 9995, | 9587, 9599, 9611, 9623, (AAY) Pf- 9803, 9815, 9827, 9839, 9851, 10007, 10019, 10031, 10043, | 9635, 9647, 9659, 9671, CSP(346-397) 9863, 9875 10055, 10067, 10079 9893, 9905, 9917, 9929, 9941, 9953, 9965, 9977 Pb-CSP 31 40 71,107, 143, 179, 332, 363, 399, 435, 471, 507, 916, 947, 983, 1500, 1531, 1567, 1603, 1639, 215, 251, 287, 323 |543,579,615, 624, 655, 691, 1019, 1055, 1091, | 1675, 1711, 1747, 1783, 1792, 727, 763, 799, 835, 871, 907 1127, 1163, 1199, | 1823, 1859, 1895, 1931, 1967, 1208, 1239, 1275, | 2003, 2039, 2075 1311, 1347, 1383, 1419, 1455, 1491 Pb- 32 72, 108, 144, 180, 364, 400, 436, 472, 508, 544, 948, 984, 1020, 1532, 1568, 1604, 1640, 1676, = CSP Ligante(G4 216, 252, 288, 324 — |580,616, 656, 692, 728, 764, |1056, 1092, 1128, | 1712, 1748, 1784, 1824, 1860, S SG4) TM domí- 800, 836, 872, 908 1164, 1200, 1240, | 1896, 1932, 1968, 2004, 2040, Ss nio HA 1276, 1312, 1348, | 2076 ? 1384, 1420, 1456, 1492 HsALB Pb- 33 73, 109, 145, 181, 365, 401, 437, 473, 509, 545, 949, 985, 1021, 1533, 1569, 1605, 1641, 1677, CSP(24-340) 217, 253, 289, 325 |581,617, 657, 693, 729, 765, 1057, 1093, 1129, | 1713, 1749, 1785, 1825, 1861, 801, 837, 873, 909 1165, 1201, 1241, | 1897, 1933, 1969, 2005, 2041, 1277, 1313, 1349, |2077 1385, 1421, 1457, 1493 Hsins-iso1 Pb- |34 74, 110, 146, 182, 366, 402, 438, 474, 510, 546, 950, 986, 1022, 1534, 1570, 1606, 1642, 1678, (osmara É É lramameas ane amora [om meme |O | 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12429/12614

FE EE Po PA 802, 838, 874, 910 1166, 1202, 1242, | 1898, 1934, 1970, 2006, 2042, 1278, 1314, 1350, |2078 1386, 1422, 1458, 1494 HsSPARC Pb- 35 75, 111, 147, 183, 367, 403, 439, 475, 511, 547, 951, 987, 1023, 1535, 1571, 1607, 1643, 1679, CSP(24-340) 219, 255, 291, 327 | 583, 619, 659, 695, 731, 767, |1059, 1095, 1131, | 1715, 1751, 1787, 1827, 1863, 803, 839, 875, 911 1167, 1203, 1243, | 1899, 1935, 1971, 2007, 2043, 1279, 1315, 1351, |2079 1387, 1423, 1459, 1495 IgE Pb-CSP(24- | 36 76, 112, 148, 184, 368, 404, 440, 476, 512, 548, 952, 988, 1024, 1536, 1572, 1608, 1644, 1680, = 340) 220, 256, 292, 328 | 584, 620, 660, 696, 732, 768, | 1060, 1096, 1132, | 1716, 1752, 1788, 1828, 1864, & 804, 840, 876, 912 1168, 1204, 1244, | 1900, 1936, 1972, 2008, 2044, Ss 1280, 1316, 1352, | 2080 ? 1388, 1424, 1460, 1496 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12430/12614

[00311] As sequências de aminoácidos, as sequências codificado- res, e as sequências de mRNA preferidas da invenção estão apresen- tadas nas Tabelas 6A e 6B. Nelas, cada linha representa um construto de CSP adequado específico da invenção, onde a descrição do cons- truto de CSP está indicada na coluna A, as SEQ ID NOs da sequência de aminoácidos estão apresentadas na coluna B. Os respectivos nú- meros de acesso e outras informações estão apresentadas no identifi- cador <223> das respectivas SEQ ID NOs na listagem de sequências.

[00312] As SEQ ID NOs correspondentes das sequências codifica- doras codificando os respectivos construtos de CSP estão apresenta- das na coluna C das Tabelas 6A e 6B (cds do tipo selvagem) e D (opt1, opt2, opt3, opt4, opt5, opt11 cds). Informações adicionais estão apresentadas no identificador <223> da respectiva SEQ ID NO na lis- tagem de sequências.

[00313] Paraa Tabela 6B, as sequências de RNA correspondentes compreendendo uma extremidade 3'/terminal 3' preferida estão apre- sentadas nas colunas E a H, onde a coluna E apresenta sequências de RNA com a vantajosa extremidade 3'/terminal 3' "AG4-N5-C30-hSL-N5" definida neste pedido, e onde a coluna F apresenta sequências de RNA com a vantajosa extremidade 3' "hSL-A64-N5" definida neste pe- dido, e onde a coluna G apresenta sequências de RNA com a vantajo- sa extremidade 3'/terminal 3' "RSL-A100-N5" definida neste pedido, e onde a coluna H apresenta sequências de RNA com a vantajosa ex- tremidade 3'/terminal 3' "hSL-A100" definida neste pedido.

'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12431/12614

Tabela 6B: Construtos de mRNA preferidos codificando a CSP E | P-CSP 1 137 [41,77,113,149,185, |329,333, 369, 405, 441, 477, | 6555, 6558, 6588, 7284, 7287, 7317, 7347, |8013, 8016, 8046, 8076, 221, 257, 293 513, 549, 585, 621, 625, 661, | 6618, 6648, 6678, 7377, 7407, 7437, 7467, |8106,8136, 8166, 8196, 697, 733, 769, 805, 841, 877, | 6708, 6738, 6768, 7497, 7527, 7530, 7560, |8226, 8256, 8259, 8289, 913, 917, 953, 989, 1025, — | 6798, 6801, 6831, 7590, 7620, 7650, 7680, |8319, 8349, 8379, 8409, 1061, 1097, 1133, 1169, 6861, 6891, 6921, 7710, 7740, 7770, 7773, | 8439, 8469, 8499, 8502, 1205, 1209, 1245, 1281, 6951, 6981, 7011, 7803, 7833, 7863, 7893, | 8532, 8562, 8592, 8622, 1317, 1353, 1389, 1425, 7041, 7044, 7074, 7923, 7953, 7983 8652, 8682, 8712 1461, 1497, 1501, 1537, 7104, 7134, 7164, 1573, 1609, 1645, 1681, 7194, 7224, 7254 1717, 1753, 1789, 1793, 1829, 1865, 1901, 1937, 1973, 2009, 2045, 6312, a 6315, 6345, 6375, 6405, O 6435, 6465, 6495, 6525 Ss PrCSP(1-374) |2 [38 |42,78,114,150,186, |330,334,370,406,442, 478, | 6556, 6559, 6589, 7285, 7288, 7318, 7348, |8014, 8017, 8047, 8077, - 222, 258, 294 514, 550, 586, 622, 626, 662, | 6619, 6649, 6679, 7378, 7408, 7438, 7468, |8107,8137, 8167, 8197, 698, 734, 770, 806, 842, 878, | 6709, 6739, 6769, 7498, 7528, 7531, 7561, | 8227, 8257, 8260, 8290, 914, 918, 954, 990, 1026, — | 6799, 6802, 6832, 7591, 7621, 7651, 7681, |8320, 8350, 8380, 8410, 1062, 1098, 1134, 1170, 6862, 6892, 6922, 7711, 7741, 7771, 1774, | 8440, 8470, 8500, 8503, 1206, 1210, 1246, 1282, 6952, 6982, 7012, 7804, 7834, 7864, 7894, |8533, 8563, 8593, 8623, 1318, 1354, 1390, 1426, 7042, 7045, 7075, 7924, 7954, 7984 8653, 8683, 8713 1462, 1498, 1502, 1538, 7105, 7135, 7165, 1574, 1610, 1646, 1682, 7195, 7225, 7255 1718, 1754, 1790, 1794, 1830, 1866, 1902, 1938, 1974, 2010, 2046, 6313, 6316, 6346, 6376, 6406, 6436, 6466, 6496, 6526 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12432/12614

BE E ER | Pf-CSP(1-325) |3 39 /|43,79,115,151,187, |331,335,371,407,443,479, 6557, 6560, 6590, 7286, 7289, 7319, 7349, |8015, 8018, 8048, 8078, 223, 259, 295 515, 551, 587, 623, 627, 663, | 6620, 6650, 6680, 7379, 7409, 7439, 7469, |8108, 8138, 8168, 8198, 699, 735, 771, 807, 843, 879, | 6710, 6740, 6770, 7499, 7529, 7532, 7562, |8228, 8258, 8261, 8291, 915, 919, 955, 991, 1027, 6800, 6803, 6833, 7592, 7622, 7652, 7682, |8321,8351, 8381, 8411, 1063, 1099, 1135, 1171, 6863, 6893, 6923, 7712, 7742, 7772, 7775, | 8441, 8471, 8501, 8504, 1207, 1211, 1247, 1283, 6953, 6983, 7013, 7805, 7835, 7865, 7895, |8534, 8564, 8594, 8624, 1319, 1355, 1391, 1427, 7043, 7046, 7076, 7925, 7955, 7985 8654, 8684, 8714 1463, 1499, 1503, 1539, 7106, 7136, 7166, 1575, 1611, 1647, 1683, 7196, 7226, 7256 1719, 1755, 1791, 1795, 1831, 1867, 1903, 1939, 1975, 2011, 2047, 6314, 6317, 6347, 6377, 6407, 6437, 6467, 6497, 6527 a HsALB Pf-CSP |4 44, 80, 8755, 116, 152, |336, 372, 408, 444, 480, 516, | 6561, 6591, 6621, 7290, 7320, 7350, 7380, |8019, 8049, 8079, 8109, = (19-397) 188, 224, 260, 296 552, 588, 628, 664, 700, 736, | 6651, 6681, 6711, 7410, 7440, 7470, 7500, |8139, 8169, 8199, 8229, S 772, 808, 844, 880, 8857, 6741, 6771, 9163, 9469, 7533, 7563, 7593, |9775, 8262, 8292, 8322, ? 920, 956, 992, 1028, 1064, — | 6804, 6834, 6864, 7623, 7653, 7683, 7713, |8352, 8382, 8412, 8442, 1100, 1136, 1172, 1212, 6894, 6924, 6954, 7743, 9571, 7776, 7806, |8472, 9877, 8505, 8535, 1248, 1284, 1320, 1356, 6984, 7014, 9265, 7836, 7866, 7896, 7926, |8565, 8595, 8625, 8655, 1392, 1428, 1464, 1504, 7047, 7077, 7107, 7956, 7986, 9673 8685, 8715, 9979 1540, 1576, 1612, 1648, 7137, 7167, 7197, 1684, 1720, 1756, 1796, 7227, 7257, 9367 1832, 1868, 1904, 1940, 1976, 2012, 2048, 9061, 6318, 6348, 6378, 6408, 6438, 6468, 6498, 6528, 8959 Hsilns-iso1 Pf- |5 45, 81, 117, 153, 189, — |337, 373, 409, 445, 481, 517, | 6562, 6592, 6622, 7291, 7321, 7351, 7381, |8020, 8050, 8080, 8110, CSP(19-397) 225, 261, 297 553, 589, 629, 665, 701, 737, | 6652, 6682, 6712, 7411, 7441, 7471, 7501, |8140, 8170, 8200, 8230, etição 870210044043, de 14/05/2021, pág. 12433/12614

FEED AEE, A EEE O 16 | 773, 809, 845, 881, 921, 957, | 6742, 6772, 6805, 7534, 7564, 7594, 7624, |8263, 8293, 8323, 8353, 993, 1029, 1065, 1101, 1137, | 6835, 6865, 6895, 7654, 7684, 7714, 7744, |8383, 8413, 8443, 8473, 1173, 1213, 1249, 1285, 6925, 6955, 6985, 7777, 7807, 7837, 7867, |8506, 8536, 8566, 8596, 1321, 1357, 1393, 1429, 7015, 7048, 7078, 7897, 7927, 7957, 7987 8626, 8656, 8686, 8716 1465, 1505, 1541, 1577, 7108, 7138, 7168, 1613, 1649, 1685, 1721, 7198, 7228, 7258 1757, 1797, 1833, 1869, 1905, 1941, 1977, 2013, 2049, 6319, 6349, 6379, 6409, 6439, 6469, 6499, 6529 HsSPARC Pf- 46, 82, 118, 154, 190, 338, 374, 410, 446, 482, 518, | 6563, 6593, 6623, 7292, 7322, 7352, 7382, |8021, 8051, 8081, 8111, CSP(19-397) 226, 262, 298 554, 590, 630, 666, 702, 738, | 6653, 6683, 6713, 7412, 7442, 7472, 7502, |8141, 8171, 8201, 8231, 774, 810, 846, 882, 922, 958, | 6743, 6773, 6806, 7535, 7565, 7595, 7625, |8264, 8294, 8324, 8354, br 994, 1030, 1066, 1102, 1138, | 6836, 6866, 6896, 7655, 7685, 7715, 7745, |8384, 8414, 8444, 8474, Mm 1174, 1214, 1250, 1286, 6926, 6956, 6986, 7778, 7808, 7838, 7868, | 8507, 8537, 8567, 8597, Ss 1322, 1358, 1394, 1430, 7016, 7049, 7079, 7898, 7928, 7958, 7988 8627, 8657, 8687, 8717 - 1466, 1506, 1542, 1578, 7109, 7139, 7169, 1614, 1650, 1686, 1722, 7199, 7229, 7259 1758, 1798, 1834, 1870, 1906, 1942, 1978, 2014, 2050, 6320, 6350, 6380, 6410, 6440, 6470, 6500, 6530 IgE Pf-CSP(19- |7 47, 83, 119, 155, 191, 339, 375, 411, 447, 483, 519, | 6564, 6594, 6624, 7293, 7323, 7353, 7383, |8022, 8052, 8082, 8112, 397) 227, 263, 299 555, 591, 631, 667, 703, 739, | 6654, 6684, 6714, 7413, 7443, 7473, 7503, |8142, 8172, 8202, 8232, 775, 811, 847, 883, 923, 959, | 6744, 6774, 6807, 7536, 7566, 7596, 7626, |8265, 8295, 8325, 8355, 995, 1031, 1067, 1103, 1139, | 6837, 6867, 6897, 7656, 7686, 7716, 7746, |8385, 8415, 8445, 8475, 1175, 1215, 1251, 1287, 6927, 6957, 6987, 7779, 7809, 7839, 7869, |8508, 8538, 8568, 8598, 1323, 1359, 1395, 1431, 7017, 7050, 7080, 7899, 7929, 7959, 7989 8628, 8658, 8688, 8718 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12434/12614

FE II ED AE EE EE EEE 16 | 1467, 1507, 1543, 1579, 7110, 7140, 7170, 1615, 1651, 1687, 1723, 7200, 7230, 7260 1759, 1799, 1835, 1871, 1907, 1943, 1979, 2015, 2051, 6321, 6351, 6381, 6411, 6441, 6471, 6501, 6531 Pf- 48, 84, 120, 156, 192, 340, 376, 412, 448, 484, 520, | 6565, 6595, 6625, 7294, 7324, 7354, 7384, |8023, 8053, 8083, 8113, CSP Ligante(G4 228, 264, 300 556, 592, 632, 668, 704, 740, | 6655, 6685, 6715, 7414, 7444, 7474, 7504, |8143, 8173, 8203, 8233, SG4) TM domí- 776, 812, 848, 884, 924, 960, | 6745, 6775, 6808, 7537, 7567, 7597, 7627, |8266, 8296, 8326, 8356, nio HA 996, 1032, 1068, 1104, 1140, | 6838, 6868, 6898, 7657, 7687, 7717, 7747, |8386, 8416, 8446, 8476, 1176, 1216, 1252, 1288, 6928, 6958, 6988, 7780, 7810, 7840, 7870, |8509, 8539, 8569, 8599, 1324, 1360, 1396, 1432, 7018, 7051, 7081, 7900, 7930, 7960, 7990 8629, 8659, 8689, 8719 1468, 1508, 1544, 1580, 7111, 7141, 7171, br 1616, 1652, 1688, 1724, 7201, 7231, 7261 & 1760, 1800, 1836, 1872, Ss 1908, 1944, 1980, 2016, - 2052, 6322, 6352, 6382, 6412, 6442, 6472, 6502, 6532 Pf-CSP(199- 49, 85, 121, 157, 193, 341, 377, 413, 449, 485, 521, | 6566, 6596, 6626, 7295, 7325, 7355, 7385, | 8024, 8054, 8084, 8114, 377) Ligante(PV 229, 265, 301 557, 593, 633, 669, 705, 741, | 6656, 6686, 6716, 7415, 7445, 7475, 7505, |8144, 8174, 8204, 8234, TN) HBsAg 777, 813, 849, 885, 925, 961, | 6746, 6776, 6809, 7538, 7568, 7598, 7628, |8267, 8297, 8327, 8357, 997, 1033, 1069, 1105, 1141, | 6839, 6869, 6899, 7658, 7688, 7718, 7748, | 8387, 8417, 8447, 8477, 1177, 1217, 1253, 1289, 6929, 6959, 6989, 7781, 7811, 7841, 7871, |8510, 8540, 8570, 8600, 1325, 1361, 1397, 1433, 7019, 7052, 7082, 7901, 7931, 7961, 7991 8630, 8660, 8690, 8720 1469, 1509, 1545, 1581, 7112, 7142, 7172, 1617, 1653, 1689, 1725, 7202, 7232, 7262 1761, 1801, 1837, 1873, 1909, 1945, 1981, 2017, 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12435/12614

FE As E ED AE | |)I:TTIEJE EE À 2053, 6323, 6353, 6383, 6413, 6443, 6473, 6503, 6533 PresPrise- — [10 50, 86, 122, 158, 194, —|342, 378, 414, 450, 486, 522, | 6567, 6597, 6627, 7296, 7326, 7356, 7386, | 8025, 8055, 8085, 8115, 387) Ligante(PV 230, 266, 302 558, 594, 634, 670, 706, 742, | 6657, 6687, 6717, 7416, 7446, 7476, 7506, | 8145, 8175, 8205, 8235, TN) HBsAg 778, 814, 850, 886, 926, 962, | 6747, 6777, 6810, 7539, 7569, 7599, 7629, |8268, 8298, 8328, 8358, 998, 1034, 1070, 1106, 1142, | 6840, 6870, 6900, 7659, 7689, 7719, 7749, |8388, 8418, 8448, 8478, 1178, 1218, 1254, 1290, 6930, 6960, 6990, 7782, 7812, 7842, 7872, |8511, 8541, 8571, 8601, 1326, 1362, 1398, 1434, 7020, 7053, 7083, 7902, 7932, 7962, 7992 | 8631, 8661, 8691, 8721 1470, 1510, 1546, 1582, 7113, 7143, 7173, 1618, 1654, 1690, 1726, 7203, 7233, 7263 1762, 1802, 1838, 1874, 1910, 1946, 1982, 2018, 2054, 6324, 6354, 6384, a 6414, 6444, 6474, 6504, DP 6534 Ss HsALB Pf- n 51,87, 123, 159, 195, —|343,379,415, 451, 487, 523, | 6568, 6598, 6628, 7297, 7327, 7357, 7387, |8026, 8056, 8086, 8116, - CSP(19-152) 231, 267, 303 559, 595, 635, 671, 707, 743, | 6658, 6688, 6718, 7417, 7447, T4T7, T507, | 8146, 8176, 8206, 8236, 779, 815, 851, 887, 927, 963, | 6748, 6778, 6811, 7540, 7570, 7600, 7630, |8269, 8299, 8329, 8359, 999, 1035, 1071, 1107, 1143, | 6841, 6871, 6901, 7660, 7690, 7720, 7750, |8389, 8419, 8449, 8479, 1179, 1219, 1255, 1291, 6931, 6961, 6991, 7783, 7813, 7843, 7873, |8512, 8542, 8572, 8602, 1327, 1363, 1399, 1435, 7021, 7054, 7084, 7903, 7933, 7963, 7993 | 8632, 8662, 8692, 8722 1471, 1511, 1547, 1583, 7114, 7144, 7174, 1619, 1655, 1691, 1727, 7204, 7234, 7264 1763, 1803, 1839, 1875, 1911, 1947, 1983, 2019, 2055, 6325, 6355, 6385, 6415, 6445, 6475, 6505, 6535 [ER e | sas 66 55 550 176 152 166 58 [osoo c599 6000. — 7206. 7928 7356. Tous, (soar sos con etvr. | 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12436/12614

E EEE E E E o RE CSP(19-192) 16 | 232, 268, 304 560, 596, 636, 672, 708, 744, | 6659, 6689, 6719, 7418, 7448, 7478, 7508, |8147, 8177, 8207, 8237, 780, 816, 852, 888, 928, 964, | 6749, 6779, 6812, 7541, 7571, 7601, 7631, |8270, 8300, 8330, 8360, 1000, 1036, 1072, 1108, 6842, 6872, 6902, 7661, 7691, 7721,7751, |8390, 8420, 8450, 8480, 1144, 1180, 1220, 1256, 6932, 6962, 6992, 7784, 7814, 7844, 7874, |8513, 8543, 8573, 8603, 1292, 1328, 1364, 1400, 7022, 7055, 7085, 7904, 7934, 7964, 7994 8633, 8663, 8693, 8723 1436, 1472, 1512, 1548, 7115, 7145, 7175, 1584, 1620, 1656, 1692, 7205, 7235, 7265 1728, 1764, 1804, 1840, 1876, 1912, 1948, 1984, 2020, 2056, 6326, 6356, 6386, 6416, 6446, 6476, 6506, 6536 HsALB Pf- 13 53, 89, 125, 161, 197, 345, 381, 417, 453, 489, 525, | 6570, 6600, 6630, 7299, 7329, 7359, 7389, |8028, 8058, 8088, 8118, CSP(19-272) 233, 269, 305 561, 597, 637, 673, 709, 745, | 6660, 6690, 6720, 7419, 7449, 7479, 7509, |8148, 8178, 8208, 8238, br 781, 817, 853, 889, 929, 965, | 6750, 6780, 6813, 7542, 7572, 7602, 7632, |8271, 8301, 8331, 8361, (Sa 1001, 1037, 1073, 1109, 6843, 6873, 6903, 7662, 7692, 7722, 7752, |8391, 8421, 8451, 8481, Ss 1145, 1181, 1221, 1257, 6933, 6963, 6993, 7785, 7815, 7845, 7875, |8514, 8544, 8574, 8604, - 1293, 1329, 1365, 1401, 7023, 7056, 7086, 7905, 7935, 7965, 7995 8634, 8664, 8694, 8724 1437, 1473, 1513, 1549, 7116, 7146, 7176, 1585, 1621, 1657, 1693, 7206, 7236, 7266 1729, 1765, 1805, 1841, 1877, 1913, 1949, 1985, 2021, 2057, 6327, 6357, 6387, 6417, 6447, 6477, 6507, 6537 HsALB Pf- 14 54, 90, 8766, 126, 162, | 346, 382, 418, 454, 490, 526, | 6571, 6601, 6631, 7300, 7330, 7360, 7390, |8029, 8059, 8089, 8119, CSP(19- 198, 234, 270, 306 562, 598, 638, 674, 710, 746, | 6661, 6691, 6721, 7420, 7450, 7480, 7510, |8149, 8179, 8209, 8239, 272) Ligante(AA 782, 818, 854, 890, 8868, 6751, 6781, 9174, 9480, 7543, 7573, 7603, |9786, 8272, 8302, 8332, Y) PFf-CSP(310- 930, 966, 1002, 1038, 1074, |6814, 6844, 6874, 7633, 7663, 7693, 7723, |8362, 8392, 8422, 8452, 327) Ligante(AA 1110, 1146, 1182, 1222, 6904, 6934, 6964, 7753, 9582, 7786, 7816, |8482, 9888, 8515, 8545, 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12437/12614

EEE AE E E E Y) Pf-CSP(346- 16 | 1258, 1294, 1330, 1366, 6994, 7024, 9276, 7846, 7876, 7906, 7936, |8575, 8605, 8635, 8665, 375) 1402, 1438, 1474, 1514, 7057, 7087, 7117, 7966, 7996, 9684 8695, 8725, 9990 1550, 1586, 1622, 1658, 7147, 7177, 7207, 1694, 1730, 1766, 1806, 7237, 7267, 9378 1842, 1878, 1914, 1950, 1986, 2022, 2058, 9072, 6328, 6358, 6388, 6418, 6448, 6478, 6508, 6538, 8970 HsALB Pf- 15 55, 91, 127, 163, 199, 347, 383, 419, 455, 491, 527, | 6572, 6602, 6632, 7301, 7331, 7361, 7391, |8030, 8060, 8090, 8120, CSP(19- 235, 271, 307 563, 599, 639, 675, 711, 747, | 6662, 6692, 6722, 7421, 7451, 7481,7511, |[8150, 8180, 8210, 8240, 272) Ligante(AA 783, 819, 855, 891, 931, 967, | 6752, 6782, 6815, 7544, 7574, 7604, 7634, 8273, 8303, 8333, 8363, Y) Pf-CSP(346- 1003, 1039, 1075, 1111, 6845, 6875, 6905, 7664, 7694, 7724, 7754, |8393, 8423, 8453, 8483, 365) Ligante(AA 1147, 1183, 1223, 1259, 6935, 6965, 6995, 7787, 7817, 7847, 7877, |8516, 8546, 8576, 8606, ra Y) P2 1295, 1331, 1367, 1403, 7025, 7058, 7088, 7907, 7937, 7967, 7997 8636, 8666, 8696, 8726 DD 1439, 1475, 1515, 1551, 7118, 7148, 7178, Ss 1587, 1623, 1659, 1695, 7208, 7238, 7268 - 1731, 1767, 1807, 1843, 1879, 1915, 1951, 1987, 2023, 2059, 6329, 6359, 6389, 6419, 6449, 6479, 6509, 6539 HsALB Pf- 16 56, 92, 128, 164, 200, 348, 384, 420, 456, 492, 528, | 6573, 6603, 6633, 7302, 7332, 7362, 7392, |8031, 8061, 8091, 8121, CSP(19- 236, 272, 308 564, 600, 640, 676, 712, 748, | 6663, 6693, 6723, 7422, 7452, 7482, 7512, |8151, 8181, 8211, 8241, 272) Ligante(AA 784, 820, 856, 892, 932, 968, | 6753, 6783, 6816, 7545, 7575, 7605, 7635, |8274, 8304, 8334, 8364, Y) Pf-CSP(346- 1004, 1040, 1076, 1112, 6846, 6876, 6906, 7665, 7695, 7725, 7755, |8394, 8424, 8454, 8484, 365) Ligante(AA 1148, 1184, 1224, 1260, 6936, 6966, 6996, 7788, 7818, 7848, 7878, |8517, 8547, 8577, 8607, Y) PADRE 1296, 1332, 1368, 1404, 7026, 7059, 7089, 7908, 7938, 7968, 7998 8637, 8667, 8697, 8727 1440, 1476, 1516, 1552, 7119, 7149, 7179, 1588, 1624, 1660, 1696, 7209, 7239, 7269 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12438/12614

EF II ED IE LEE EEE EEE 16 | 1732, 1768, 1808, 1844, 1880, 1916, 1952, 1988, 2024, 2060, 6330, 6360, 6390, 6420, 6450, 6480, 6510, 6540 HsALB Pf- 17 57, 93, 129, 165, 201, 349, 385, 421, 457, 493, 529, | 6574, 6604, 6634, 7303, 7333, 7363, 7393, |8032, 8062, 8092, 8122, CSP(19- 237, 273, 309 565, 601, 641, 677, 713, 749, | 6664, 6694, 6724, 7423, 7453, 7483, 7513, |8152, 8182, 8212, 8242, 272) Ligante(G4 785, 821, 857, 893, 933, 969, | 6754, 6784, 6817, 7546, 7576, 7606, 7636, |8275, 8305, 8335, 8365, S) PFf-CSP(310- 1005, 1041, 1077, 1113, 6847, 6877, 6907, 7666, 7696, 7726, 7756, |8395, 8425, 8455, 8485, 327) Ligante(G4 1149, 1185, 1225, 1261, 6937, 6967, 6997, 7789, 7819, 7849, 7879, |8518, 8548, 8578, 8608, S) Pf-CSP(346- 1297, 1333, 1369, 1405, 7027, 7060, 7090, 7909, 7939, 7969, 7999 8638, 8668, 8698, 8728 375) 1441, 1477, 1517, 1553, 7120, 7150, 7180, 1589, 1625, 1661, 1697, 7210, 7240, 7270 1733, 1769, 1809, 1845, a 1881, 1917, 1953, 1989, - 2025, 2061, 6331, 6361, Ss 6391, 6421, 6451, 6481, o 6511, 6541 HsALB Pf- 18 58, 94, 130, 166, 202, 350, 386, 422, 458, 494, 530, | 6575, 6605, 6635, 7304, 7334, 7364, 7394, |8033, 8063, 8093, 8123, CSP(19- 238, 274, 310 566, 602, 642, 678, 714, 750, | 6665, 6695, 6725, 7424, 7454, 7484, 7514, |[8153, 8183, 8213, 8243, 272) Ligante(G4 786, 822, 858, 894, 934, 970, | 6755, 6785, 6818, 7547, 7577, 7607, 7637, |8276, 8306, 8336, 8366, S) PFf-CSP(310- 1006, 1042, 1078, 1114, 6848, 6878, 6908, 7667, 7697, 7727, 7757, |8396, 8426, 8456, 8486, 327) Pf- 1150, 1186, 1226, 1262, 6938, 6968, 6998, 7790, 7820, 7850, 7880, |8519, 8549, 8579, 8609, CSP(346-375) 1298, 1334, 1370, 1406, 7028, 7061, 7091, 7910, 7940, 7970, 8000 8639, 8669, 8699, 8729 1442, 1478, 1518, 1554, 7121,7151,7181, 1590, 1626, 1662, 1698, 7211, 7241,7271 1734, 1770, 1810, 1846, 1882, 1918, 1954, 1990, 2026, 2062, 6332, 6362, 6392, 6422, 6452, 6482, 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12439/12614

E RN o A OBA HsALB Pf- 19 59, 95, 131, 167, 203, 351, 387, 423, 459, 495, 531, | 6576, 6606, 6636, 7305, 7335, 7365, 7395, |8034, 8064, 8094, 8124, CSP(19-325) 239, 275, 311 567, 603, 643, 679, 715, 751, | 6666, 6696, 6726, 7425, 7455, 7485, 7515, |8154, 8184, 8214, 8244, 787, 823, 859, 895, 935, 971, | 6756, 6786, 6819, 7548, 7578, 7608, 7638, |8277, 8307, 8337, 8367, 1007, 1043, 1079, 1115, 6849, 6879, 6909, 7668, 7698, 7728, 7758, |8397, 8427, 8457, 8487, 1151, 1187, 1227, 1263, 6939, 6969, 6999, 7791, 7821, 7851, 7881, |8520, 8550, 8580, 8610, 1299, 1335, 1371, 1407, 7029, 7062, 7092, 7911, 7941, 7971, 8001 |8640, 8670, 8700, 8730 1443, 1479, 1519, 1555, 7122, 7152, 7182, 1591, 1627, 1663, 1699, 7212, 7242, 7272 1735, 1771, 1811, 1847, 1883, 1919, 1955, 1991, 2027, 2063, 6333, 6363, 6393, 6423, 6453, 6483, a 6513, 6543 Á HsALB Pf- 20 60, 96, 132, 168, 204, 352, 388, 424, 460, 496, 532, | 6577, 6607, 6637, 7306, 7336, 7366, 7396, 8035, 8065, 8095, 8125, o CSP(19-384) 240, 276, 312 568, 604, 644, 680, 716, 752, | 6667, 6697, 6727, 7426, 7456, 7486, 7516, |8155, 8185, 8215, 8245, N 788, 824, 860, 896, 936, 972, | 6757, 6787, 6820, 7549, 7579, 7609, 7639, |8278, 8308, 8338, 8368, 1008, 1044, 1080, 1116, 6850, 6880, 6910, 7669, 7699, 7729, 7759, |8398, 8428, 8458, 8488, 1152, 1188, 1228, 1264, 6940, 6970, 7000, 7792, 7822, 7852, 7882, |8521, 8551, 8581, 8611, 1300, 1336, 1372, 1408, 7030, 7063, 7093, 7912, 7942, 7972, 8002 | 8641, 8671, 8701, 8731 1444, 1480, 1520, 1556, 7123, 7153, 7183, 1592, 1628, 1664, 1700, 7213, 7243, 7273 1736, 1772, 1812, 1848, 1884, 1920, 1956, 1992, 2028, 2064, 6334, 6364, 6394, 6424, 6454, 6484, 6514, 6544 HsALB Pf- 21 61, 97, 133, 169, 205, 353, 389, 425, 461, 497, 533, | 6578, 6608, 6638, 7307, 7337, 7367, 7397, |8036, 8066, 8096, 8126, CSP(19-384) TM 241,277,313 569, 605, 645, 681, 717, 753, | 6668, 6698, 6728, 7427, 7457, T487, 7517, |8156, 8186, 8216, 8246, domínio HA 789, 825, 861, 897, 937, 973, | 6758, 6788, 6821, 7550, 7580, 7610, 7640, |8279, 8309, 8339, 8369, etição 870210044043, de 14/05/2021, pág. 12440/12614

FED AEE, EE EEE O 16 | 1009, 1045, 1081, 1117, 6851, 6881, 6911, 7670, 7700, 7730, 7760, |8399, 8429, 8459, 8489, 1153, 1189, 1229, 1265, 6941, 6971, 7001, 7793, 7823, 7853, 7883, |8522, 8552, 8582, 8612, 1301, 1337, 1373, 1409, 7031, 7064, 7094, 7913, 7943, 7973, 8003 8642, 8672, 8702, 8732 1445, 1481, 1521, 1557, 7124, 7154, 7184, 1593, 1629, 1665, 1701, 7214, 7244, 7274 1737, 1773, 1813, 1849, 1885, 1921, 1957, 1993, 2029, 2065, 6335, 6365, 6395, 6425, 6455, 6485, 6515, 6545 HsALB Pf- 22 62, 98, 134, 170, 206, 354, 390, 426, 462, 498, 534, | 6579, 6609, 6639, 7308, 7338, 7368, 7398, | 8037, 8067, 8097, 8127, CSP(82-397) 242, 278, 314 570, 606, 646, 682, 718, 754, | 6669, 6699, 6729, 7428, 7458, 7488, 7518, |8157, 8187, 8217, 8247, 790, 826, 862, 898, 938, 974, | 6759, 6789, 6822, 7551, 7581, 7611, 7641, |8280, 8310, 8340, 8370, 1010, 1046, 1082, 1118, 6852, 6882, 6912, 7671, 7701, 7731, 7761, |8400, 8430, 8460, 8490, br 1154, 1190, 1230, 1266, 6942, 6972, 7002, 7794, 7824, 7854, 7884, |8523, 8553, 8583, 8613, o 1302, 1338, 1374, 1410, 7032, 7065, 7095, 7914, 7944, 7974, 8004 8643, 8673, 8703, 8733 Ss 1446, 1482, 1522, 1558, 7125, 7155, 7185, - 1594, 1630, 1666, 1702, 7215, 7245, 7275 1738, 1774, 1814, 1850, 1886, 1922, 1958, 1994, 2030, 2066, 6336, 6366, 6396, 6426, 6456, 6486, 6516, 6546 HsALB Pf- 23 63, 99, 135, 171, 207, 355, 391, 427, 463, 499, 535, | 6580, 6610, 6640, 7309, 7339, 7369, 7399, |8038, 8068, 8098, 8128, CSP(93-192) 243, 279, 315 571, 607, 647, 683, 719, 755, | 6670, 6700, 6730, 7429, 7459, 7489, 7519, |8158, 8188, 8218, 8248, 791, 827, 863, 899, 939, 975, | 6760, 6790, 6823, 7552, 7582, 7612, 7642, |8281, 8311, 8341, 8371, 1011, 1047, 1083, 1119, 6853, 6883, 6913, 7672, 7702, 7732, 7762, |8401, 8431, 8461, 8491, 1155, 1191, 1231, 1267, 6943, 6973, 7003, 7795, 7825, 7855, 7885, |8524, 8554, 8584, 8614, 1303, 1339, 1375, 1411, 7033, 7066, 7096, 7915, 7945, 7975, 8005 8644, 8674, 8704, 8734 1447, 1483, 1523, 1559, 7126, 7156, 7186, 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12441/12614

FE II ED AI E LEE EE IE EEE 16 | 1595, 1631, 1667, 1703, 7216, 7246, 7276 1739, 1775, 1815, 1851, 1887, 1923, 1959, 1995, 2031, 2067, 6337, 6367, 6397, 6427, 6457, 6487, 6517, 6547 HsALB Pf- 24 64, 100, 136, 172, 208, | 356, 392, 428, 464, 500, 536, | 6581, 6611, 6641, 7310, 7340, 7370, 7400, |8039, 8069, 8099, 8129, CSP(93-272) 244, 280, 316 572, 608, 648, 684, 720, 756, | 6671, 6701, 6731, 7430, 7460, 7490, 7520, |8159, 8189, 8219, 8249, 792, 828, 864, 900, 940, 976, | 6761, 6791, 6824, 7553, 7583, 7613, 7643, |8282, 8312, 8342, 8372, 1012, 1048, 1084, 1120, 6854, 6884, 6914, 7673, 7703, 7733, 7763, |8402, 8432, 8462, 8492, 1156, 1192, 1232, 1268, 6944, 6974, 7004, 7796, 7826, 7856, 7886, |8525, 8555, 8585, 8615, 1304, 1340, 1376, 1412, 7034, 7067, 7097, 7916, 7946, 7976, 8006 8645, 8675, 8705, 8735 1448, 1484, 1524, 1560, 7127, 7157, 7187, 1596, 1632, 1668, 1704, 7217, 7247, 7277 > 1740, 1776, 1816, 1852, e: 1888, 1924, 1960, 1996, Ss 2032, 2068, 6338, 6368, - 6398, 6428, 6458, 6488, 6518, 6548 HsALB Pf- 25 65, 101, 137, 173, 209, | 357, 393, 429, 465, 501, 537, | 6582, 6612, 6642, 7311, 7341, 7371, 7401, |8040, 8070, 8100, 8130, CSP(93-397) 245, 281, 317 573, 609, 649, 685, 721, 757, | 6672, 6702, 6732, 7431, 7461, 7491, 7521, |8160,8190, 8220, 8250, 793, 829, 865, 901, 941, 977, | 6762, 6792, 6825, 7554, 7584, 7614, 7644, |8283, 8313, 8343, 8373, 1013, 1049, 1085, 1121, 6855, 6885, 6915, 7674, 7704, 7734, 7764, |8403, 8433, 8463, 8493, 1157, 1193, 1233, 1269, 6945, 6975, 7005, 7797, 7827, 7857, 7887, |8526, 8556, 8586, 8616, 1305, 1341, 1377, 1413, 7035, 7068, 7098, 7917, 7947, 7977, 8007 8646, 8676, 8706, 8736 1449, 1485, 1525, 1561, 7128, 7158, 7188, 1597, 1633, 1669, 1705, 7218, 7248, 7278 1741, 1777, 1817, 1853, 1889, 1925, 1961, 1997, 2033, 2069, 6339, 6369, 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12442/12614

EE ED AE, IJ EEE Ea | 6399, 6429, 6459, 6489, E O o ERR HsALB Pf- 26 66, 102, 138, 174, 210, |358, 394, 430, 466, 502, 538, | 6583, 6613, 6643, 7312, 7342, 7372, 7402, |8041, 8071, 8101, 8131, CSP(98-192) 246, 282, 318 574, 610, 650, 686, 722, 758, | 6673, 6703, 6733, 7432, 7462, 7492, 7522, |8161,8191, 8221, 8251, 794, 830, 866, 902, 942, 978, | 6763, 6793, 6826, 7555, 7585, 7615, 7645, |8284, 8314, 8344, 8374, 1014, 1050, 1086, 1122, 6856, 6886, 6916, 7675, 7705, 7735, 7765, | 8404, 8434, 8464, 8494, 1158, 1194, 1234, 1270, 6946, 6976, 7006, 7798, 7828, 7858, 7888, |8527, 8557, 8587, 8617, 1306, 1342, 1378, 1414, 7036, 7069, 7099, 7918, 7948, 7978, 8008 | 8647, 8677, 8707, 8737 1450, 1486, 1526, 1562, 7129, 7159, 7189, 1598, 1634, 1670, 1706, 7219, 7249, 7279 1742, 1778, 1818, 1854, 1890, 1926, 1962, 1998, 2034, 2070, 6340, 6370, 6400, 6430, 6460, 6490, s 6520, 6550 2 HsALB Pf- 27 67, 103, 139, 175, 211, |359, 395, 431, 467, 503, 539, | 6584, 6614, 6644, 7313, 7343, 7373, 7403, |8042, 8072, 8102, 8132, S CSP(98-272) 247, 283, 319 575, 611, 651, 687, 723, 759, | 6674, 6704, 6734, 7433, 7463, 7493, 7523, |8162, 8192, 8222, 8252, ? 795, 831, 867, 903, 943, 979, | 6764, 6794, 6827, 7556, 7586, 7616, 7646, |8285, 8315, 8345, 8375, 1015, 1051, 1087, 1123, 6857, 6887, 6917, 7676, 7706, 7736, 7766, |8405, 8435, 8465, 8495, 1159, 1195, 1235, 1271, 6947, 6977, 7007, 7799, 7829, 7859, 7889, |8528, 8558, 8588, 8618, 1307, 1343, 1379, 1415, 7037, 7070, 7100, 7919, 7949, 7979, 8009 — | 8648, 8678, 8708, 8738 1451, 1487, 1527, 1563, 7130, 7160, 7190, 1599, 1635, 1671, 1707, 7220, 7250, 7280 1743, 1779, 1819, 1855, 1891, 1927, 1963, 1999, 2035, 2071, 6341, 6371, 6401, 6431, 6461, 6491, 6521, 6551 HsALB Pf- 28 68, 104, 140, 176, 212, |360, 396, 432, 468, 504, 540, | 6585, 6615, 6645, 7314, 7344, 7374, 7404, |8043, 8073, 8103, 8133, CSP(98-374) 248, 284, 320 576, 612, 652, 688, 724, 760, | 6675, 6705, 6735, 7434, 7464, 7494, 7524, |8163, 8193, 8223, 8253, 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12443/12614

EE ED AE LE EE E a | 796, 832, 868, 904, 944, 980, | 6765, 6795, 6828, 7557, 7587, 7617, 7647, |8286,8316, 8346, 83706, 1016, 1052, 1088, 1124, 6858, 6888, 6918, 7677, 1707, 7737, 1767, | 8406, 8436, 8466, 8496, 1160, 1196, 1236, 1272, 6948, 6978, 7008, 7800, 7830, 7860, 7890, |8529, 8559, 8589, 8619, 1308, 1344, 1380, 1416, 7038, 7071, 7101, 7920, 7950, 7980, 8010 | 8649, 8679, 8709, 8739 1452, 1488, 1528, 1564, 7131, 7161, 7191, 1600, 1636, 1672, 1708, 7221, 7251, 7281 1744, 1780, 1820, 1856, 1892, 1928, 1964, 2000, 2036, 2072, 6342, 6372, 6402, 6432, 6462, 6492, 6522, 6552 HsALB Pf- 29 69, 105, 141, 177, 213, |361, 397, 433, 469, 505, 541, | 6586, 6616, 6646, 7315, 7345, 7375, 7405, |8044, 8074, 8104, 8134, CSP(98-397) 249, 285, 321 577, 613, 653, 689, 725, 761, | 6676, 6706, 6736, 7435, 7465, 7495, 7525, |8164, 8194, 8224, 8254, 797, 833, 869, 905, 945, 981, | 6766, 6796, 6829, 7558, 7588, 7618, 7648, |8287, 8317, 8347, 8377, s 1017, 1053, 1089, 1125, 6859, 6889, 6919, 7678, 7708, 7738, 7768, | 8407, 8437, 8467, 8497, Mm 1161, 1197, 1237, 1273, 6949, 6979, 7009, 7801, 7831, 7861, 7891, |8530, 8560, 8590, 8620, Ss 1309, 1345, 1381, 1417, 7039, 7072, 7102, 7921, 7951, 7981, 8011 | 8650, 8680, 8710, 8740 - 1453, 1489, 1529, 1565, 7132, 7162, 7192, 1601, 1637, 1673, 1709, 7222, 7252, 7282 1745, 1781, 1821, 1857, 1893, 1929, 1965, 2001, 2037, 2073, 6343, 6373, 6403, 6433, 6463, 6493, 6523, 6553 HsALB Pf- 30, 70, 106, 8765, 142, 178, | 362, 398, 434, 470, 506, 542, | 6587, 6617, 6647, 7316, 7346, 7376, 7406, |8045, 8075, 8105, 8135, CSsP(199- 874 214, 250, 286, 322 578, 614, 654, 690, 726, 762, | 6677, 6707, 6737, 7436, 7466, 7496, 7526, |8165, 8195, 8225, 8255, 377) Ligante(PV | 8 798, 834, 870, 906, 8867, — | 6767, 6797, 9173, 9479, 7559, 7589, 7619, |9785, 8288, 8318, 8348, TN) HBsAg 946, 982, 1018, 1054, 1090, | 6830, 6860, 6890, 7649, 7679, 7709, 7739, |8378, 8408, 8438, 8468, 1126, 1162, 1198, 1238, 6920, 6950, 6980, 7769, 9581, 7802, 7832, |8498, 9887, 8531, 8561, 1274, 1310, 1346, 1382, 7010, 7040, 9275, 7862, 7892, 7922, 7952, |8591, 8621, 8651, 8681, 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12444/12614

FA E ED LAI LL IE E E À 1418, 1454, 1490, 1530, 7073, 7108, 7133, 7982, 8012, 9683 8711, 8741, 9989 1566, 1602, 1638, 1674, 7163, 7193, 7223, 1710, 1746, 1782, 1822, 7253, 7283, 9377 1858, 1894, 1930, 1966, 2002, 2038, 2074, 9071, 6344, 6374, 6404, 6434, 6464, 6494, 6524, 6554, 8969 LumSynt Ligante | 874 8754, 8772, 8784, 8796, | 8856, 8874, 8886, 8808, 9162, 9180, 9192, 9468, 9486, 9498, 9510, |9774, 9792, 9804, 9816, (GGS4- 2 8808, 8820, 8832, 8844 | 8910, 8922, 8934, 8946,, — |9204, 9216, 9228, 9522, 9534, 9546, 9558, |9828, 9840, 9852, 9864, GGG) Pr 9060, 9078, 9090, 9102, 9240, 9252, 9264, 9570, 9588, 9600, 9612, | 9876, 9894, 9906, 9918, CSP(19-397) 9114, 9126, 9138, 9150, 9282, 9294, 9306, 9624, 9636, 9648, 9660, | 9930, 9942, 9954, 9966, 8958, 8976, 8988, 9000, 9318, 9330, 9342, 9672, 9690, 9702, 9714, |9978, 9996, 10008, 9012, 9024, 9036, 9048 9354, 9366, 9384, 9726, 9738, 9750, 9762 | 10020, 10032, 10044, s 9396, 9408, 9420, 10056, 10068 o 9432, 9444, 9456 Ss HsALB Pf- 874 8756, 8773, 8785, 8797, | 8858, 8875, 8887, 8809, 9164, 9181, 9193, 9470, 9487, 9499, 9511, |9776, 9793, 9805, 9817, - CcsP(19- 3 8809, 8821, 8833, 8845 | 8911, 8923, 8935, 8947,, — |9205, 9217, 9229, 9523, 9535, 9547, 9559, | 9829, 9841, 9853, 9865, 272) Ligante(PV 9062, 9079, 9091, 9103, 9241, 9253, 9266, 9572, 9589, 9601, 9613, | 9878, 9895, 9907, 9919, TN) HBsAg 9115, 9127, 9139, 9151, 9283, 9295, 9307, 9625, 9637, 9649, 9661, | 9931, 9943, 9955, 9967, 8960, 8977, 8989, 9001, 9319, 9331, 9343, 9674, 9691, 9703, 9715, |9980, 9997, 10009, 9013, 9025, 9037, 9049 9355, 9368, 9385, 9727, 9739, 9751, 9763 | 10021, 10033, 10045, 9397, 9409, 9421, 10057, 10069 9433, 9445, 9457 HsALB Pf- 874 8757, 8758, 8774, 8786, | 8859, 8876, 8888, 8900, 9165, 9182, 9194, 9471, 9488, 9500, 9512, |9777, 9794, 9806, 9818, CcsP(19- 4 8798, 8810, 8822, 8834, | 8912, 8924, 8936, 8948, 9206, 9218, 9230, 9524, 9536, 9548, 9560, | 9830, 9842, 9854, 9866, 272) Ligante(AA 8846 8860, , 9063, 9080, 9092, — | 9242, 9254, 9166, 9472, 9573, 9590, 9602, |9778, 9879, 9896, 9908, Y) PI-CSP(346- 9104, 9116, 9128, 9140, 9267, 9284, 9296, 9614, 9626, 9638, 9650, |9920, 9932, 9944, 9956, 365) Ligante(AA 9152, 9064, 8961, 8978, 9308, 9320, 9332, 9662, 9574, 9675, 9692, | 9968, 9880, 9981, 9998, Y)- PADRE Liga 8990, 9002, 9014, 9026, 9344, 9356, 9268, 9704, 9716, 9728, 9740, | 10010, 10022, 10034, 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12445/12614

E EEE AE E EE ER nte(PVTN) HBsA 16 | 9038, 9050, 8962 9369, 9386, 9398, 9752, 9764, 9676 10046, 10058, 10070, g 9410, 9422, 9434, 9982 9446, 9458, 9370 HsALB Pf- 874 8759, 8760, 8775, 8787, | 8861, 8877, 8889, 8901, 9167, 9183, 9195, 9473, 9489, 9501, 9513, |9779, 9795, 9807, 9819, CSP(19- 5 8799, 8811, 8823, 8835, | 8913, 8925, 8937, 8949, 9207, 9219, 9231, 9525, 9537, 9549, 9561, 9831, 9843, 9855, 9867, 384) Ligante(PV 8847 8862, , 9065, 9081, 9093, 9243, 9255, 9168, 9474, 9575, 9591, 9603, |9780, 9881, 9897, 9909, TN) HBsAg 9105, 9117, 9129, 9141, 9269, 9285, 9297, 9615, 9627, 9639, 9651, 9921, 9933, 9945, 9957, 9153, 9066, 8963, 8979, 9309, 9321, 9333, 9663, 9576, 9677, 9693, |9969, 9882, 9983, 9999, 8991, 9003, 9015, 9027, 9345, 9357, 9270, 9705, 9717, 9729, 9741, |10011, 10023, 10035, 9039, 9051, 8964 9371, 9387, 9399, 9753, 9765, 9678 10047, 10059, 10071, 9411, 9423, 9435, 9984 9447, 9459, 9372 HsALB Pf- 874 8761, 8762, 8776, 8788, | 8863, 8878, 8890, 8902, 9169, 9184, 9196, 9475, 9490, 9502, 9514, |9781, 9796, 9808, 9820, a CSP(19- 6 8800, 8812, 8824, 8836, | 8914, 8926, 8938, 8950, 9208, 9220, 9232, 9526, 9538, 9550, 9562, |9832, 9844, 9856, 9868, o 384) Ligante(SG 8848 8864, , 9067, 9082, 9094, 9244, 9256, 9170, 9476, 9577, 9592, 9604, |9782, 9883, 9898, 9910, Ss G) Ferritina 9106, 9118, 9130, 9142, 9271, 9286, 9298, 9616, 9628, 9640, 9652, 9922, 9934, 9946, 9958, NM 9154, 9068, 8965, 8980, 9310, 9322, 9334, 9664, 9578, 9679, 9694, |9970, 9884, 9985, 10000, = 8992, 9004, 9016, 9028, 9346, 9358, 9272, 9706, 9718, 9730, 9742, |10012, 10024, 10036, 9040, 9052, 8966 9373, 9388, 9400, 9754, 9766, 9680 10048, 10060, 10072, 9412, 9424, 9436, 9986 9448, 9460, 9374 HsALB Pf- 874 8763, 8764, 8777, 8789, | 8865, 8879, 8891, 8903, 9171, 9185, 9197, 9477, 9491, 9503, 9515, |9783, 9797, 9809, 9821, CSP(93- 7 8801, 8813, 8825, 8837, | 8915, 8927, 8939, 8951, 9209, 9221, 9233, 9527, 9539, 9551, 9563, 9833, 9845, 9857, 9869, 384) Ligante(PV 8849 8866, , 9069, 9083, 9095, 9245, 9257, 9172, 9478, 9579, 9593, 9605, |9784, 9885, 9899, 9911, TN) HBsAg 9107, 9119, 9131, 9143, 9273, 9287, 9299, 9617, 9629, 9641, 9653, 9923, 9935, 9947, 9959, 9155, 9070, 8967, 8981, 9311, 9323, 9335, 9665, 9580, 9681, 9695, 9971, 9886, 9987, 10001, 8993, 9005, 9017, 9029, 9347, 9359, 9274, 9707, 9719, 9731, 9743, /10013, 10025, 10037, 9041, 9053, 8968 9375, 9389, 9401, 9755, 9767, 9682 10049, 10061, 10073, 9413, 9425, 9437, 9988 9449, 9461, 9376 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12446/12614

E E HsALB Pf- 874 8767, 8779, 8791, 8803, | 8869, 8881, 8893, 8905, 9175, 9187, 9199, 9481, 9493, 9505, 9517, |9787, 9799, 9811, 9823, CsP(19- 9 8815, 8827, 8839, 8851 | 8917, 8929, 8941, 8953,, — |9211,9223, 9235, 9529, 9541, 9553, 9565, |9835, 9847, 9859, 9871, 272) Ligante(AA 9073, 9085, 9097, 9109, 9247, 9259, 9277, 9583, 9595, 9607, 9619, |9889, 9901, 9913, 9925, Y) Pr-CSP(346- 9121, 9133, 9145, 9157, 9289, 9301, 9313, 9631, 9643, 9655, 9667, |9937, 9949, 9961, 9973, 375) Ligante(AA 8971, 8983, 8995, 9007, 9325, 9337, 9349, 9685, 9697, 9709, 9721, | 9991, 10003, 10015, Y) PF-CSP(310- 9019, 9031, 9043, 9055 9361, 9379, 9391, 9733, 9745, 9757, 9769 | 10027, 10039, 10051, 327) 9403, 9415, 9427, 10063, 10075 9439, 9451, 9463 HsALB Pf- 875 8768, 8780, 8792, 8804, | 8870, 8882, 8894, 8906, 9176, 9188, 9200, 9482, 9494, 9506, 9518, |9788, 9800, 9812, 9824, CsP(19- o 8816, 8828, 8840, 8852 | 8918, 8930, 8942, 8954,, — | 9212, 9224, 9236, 9530, 9542, 9554, 9566, |9836, 9848, 9860, 9872, 272) Ligante(AA 9074, 9086, 9098, 9110, 9248, 9260, 9278, 9584, 9596, 9608, 9620, |9890, 9902, 9914, 9926, Y) Pr-CSP(346- 9122, 9134, 9146, 9158, 9290, 9302, 9314, 9632, 9644, 9656, 9668, |9938, 9950, 9962, 9974, 375) Ligante(AA 8972, 8984, 8996, 9008, 9326, 9338, 9350, 9686, 9698, 9710, 9722, |9992, 10004, 10016, a Y) PF-CSP(310- 9020, 9032, 9044, 9056 9362, 9380, 9392, 9734, 9746, 9758, 9770 | 10028, 10040, 10052, o 327) Ligante(AA 9404, 9416, 9428, 10064, 10076 D Y) PADRE 9440, 9452, 9464 S HsALB Pf- 875 8769, 8781, 8793, 8805, | 8871, 8883, 8895, 8907, 9177, 9189, 9201, 9483, 9495, 9507, 9519, |9789, 9801, 9813, 9825, ? CsP(19- 1 8817, 8829, 8841, 8853 | 8919, 8931, 8943, 8955,, — | 9213, 9225, 9237, 9531, 9543, 9555, 9567, |9837, 9849, 9861, 9873, 272) Ligante(AA 9075, 9087, 9099, 9111, 9249, 9261, 9279, 9585, 9597, 9609, 9621, | 9891, 9903, 9915, 9927, Y) PF-CSP(310- 9123, 9135, 9147, 9159, 9291, 9303, 9315, 9633, 9645, 9657, 9669, |9939, 9951, 9963, 9975, 327) Ligante(AA 8973, 8985, 8997, 9009, 9327, 9339, 9351, 9687, 9699, 9711, 9723, | 9993, 10005, 10017, Y) Pr-CSP(346- 9021, 9033, 9045, 9057 9363, 9381, 9393, 9735, 9747, 9759, 9771 | 10029, 10041, 10053, 375) Ligante(AA 9405, 9417, 9429, 10065, 10077 Y) PADRE 9441, 9453, 9465 HsALB Pf- 875 8770, 8782, 8794, 8806, | 8872, 8884, 8896, 8908, 9178, 9190, 9202, 9484, 9496, 9508, 9520, |9790, 9802, 9814, 9826, CsP(19- 2 8818, 8830, 8842, 8854 | 8920, 8932, 8944, 8956,, — | 9214,9226, 9238, 9532, 9544, 9556, 9568, |9838, 9850, 9862, 9874, 272) Ligante(AA 9076, 9088, 9100, 9112, 9250, 9262, 9280, 9586, 9598, 9610, 9622, |9892, 9904, 9916, 9928, Y) PF-CSP(310- 9124, 9136, 9148, 9160, 9292, 9304, 9316, 9634, 9646, 9658, 9670, |9940, 9952, 9964, 9976, 327) Ligante(AA 8974, 8986, 8998, 9010, 9328, 9340, 9352, 9688, 9700, 9712, 9724, |9994, 10006, 10018, Y) Pr-CSP(346- 9022, 9034, 9046, 9058 9364, 9382, 9394, 9736, 9748, 9760, 9772 | 10030, 10042, 10054, eetição 870210044043, de 14/05/2021, pág. 12447/12614

E RE E E E E 375) Ligante(AA 16 | 9406, 9418, 9430, 10066, 10078 Y). PADRE Liga 9442, 9454, 9466 nte(AAY) P2 HsALB Pf- 875 8771, 8783, 8795, 8807, | 8873, 8885, 8897, 8909, 9179, 9191, 9203, 9485, 9497, 9509, 9521, |9791, 9803, 9815, 9827, CSP(19- 3 8819, 8831, 8843, 8855 | 8921, 8933, 8945, 8957, , 9215, 9227, 9239, 9533, 9545, 9557, 9569, 9839, 9851, 9863, 9875, 272) Ligante(AA 9077, 9089, 9101, 9113, 9251, 9263, 9281, 9587, 9599, 9611, 9623, | 9893, 9905, 9917, 9929, Y) PFf-CSP(310- 9125, 9137, 9149, 9161, 9293, 9305, 9317, 9635, 9647, 9659, 9671, |9941, 9953, 9965, 9977, 327) Ligante 8975, 8987, 8999, 9011, 9329, 9341, 9353, 9689, 9701, 9713, 9725, 9995, 10007, 10019, (AAY) Pf- 9023, 9035, 9047, 9059 9365, 9383, 9395, 9737, 9749, 9761, 9773 10031, 10043, 10055, CSP(346-397) 9407, 9419, 9431, 10067, 10079 9443, 9455, 9467 Pb-CSP 31 40 71,107, 143, 179,215, |332, 363, 399, 435, 471, 507, 251, 287, 323 543, 579, 615, 624, 655, 691, a 727, 763, 799, 835, 871, 907, o 916, 947, 983, 1019, 1055, 3 1091, 1127, 1163, 1199, DD) 1208, 1239, 1275, 1311, = 1347, 1383, 1419, 1455, 1491, 1500, 1531, 1567, 1603, 1639, 1675, 1711, 1747, 1783, 1792, 1823, 1859, 1895, 1931, 1967, 2003, 2039, 2075 Pb- 32 72, 108, 144, 180, 216, | 364, 400, 436, 472, 508, 544, CSP Ligante(G4 252, 288, 324 580, 616, 656, 692, 728, 764, SG4) TM domí- 800, 836, 872, 908, 948, 984, nio HA 1020, 1056, 1092, 1128, 1164, 1200, 1240, 1276, 1312, 1348, 1384, 1420, 1456, 1492, 1532, 1568, 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12448/12614

FE ED AE, E IJ EEE EEE | 1604, 1640, 1676, 1712, 1748, 1784, 1824, 1860, 1896, 1932, 1968, 2004, 2040, 2076 HsALB Pb- 33 73, 109, 145, 181, 217, |365, 401, 437, 473, 509, 545, CSP(24-340) 253, 289, 325 581, 617, 657, 693, 729, 765, 801, 837, 873, 909, 949, 985, 1021, 1057, 1093, 1129, 1165, 1201, 1241, 1277, 1313, 1349, 1385, 1421, 1457, 1493, 1533, 1569, 1605, 1641, 1677, 1713, 1749, 1785, 1825, 1861, 1897, 1933, 1969, 2005, s 2041, 2077 3 Hsilns-iso1 Pb- [34 74, 110, 146, 182, 218, | 366, 402, 438, 474, 510, 546, S CSP(24-340) 254, 290, 326 582, 618, 658, 694, 730, 766, ? 802, 838, 874, 910, 950, 986, 1022, 1058, 1094, 1130, 1166, 1202, 1242, 1278, 1314, 1350, 1386, 1422, 1458, 1494, 1534, 1570, 1606, 1642, 1678, 1714, 1750, 1786, 1826, 1862, 1898, 1934, 1970, 2006, 2042, 2078 HsSSPARC Pb- |35 75, 111, 147, 183, 219, |367, 403, 439, 475, 511, 547, CSP(24-340) 255, 291, 327 583, 619, 659, 695, 731, 767, 803, 839, 875, 911, 951, 987, 1023, 1059, 1095, 1131, 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12449/12614

FL II ED IEEE SL EE EEE EEE

16 | 1167, 1203, 1243, 1279, 1315, 1351, 1387, 1423, 1459, 1495, 1535, 1571, 1607, 1643, 1679, 1715, 1751, 1787, 1827, 1863, 1899, 1935, 1971, 2007, 2043, 2079

IgE Pb-CSP(24- |36 76, 112, 148, 184, 220, | 368, 404, 440, 476, 512, 548, 340) 256, 292, 328 584, 620, 660, 696, 732, 768,

804, 840, 876, 912, 952, 988, 1024, 1060, 1096, 1132, 1168, 1204, 1244, 1280, 1316, 1352, 1388, 1424, 1460, 1496, 1536, 1572, > 1608, 1644, 1680, 1716, oo 1752, 1788, 1828, 1864, Ss 1900, 1936, 1972, 2008, - 2044, 2080

'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12450/12614

[00314] Em modalidades preferidas, o RNA codificante compreende ou consiste em uma sequência de RNA que é idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica a uma sequência de ácidos nu- cleicos selecionado do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 329- 2080, 6312-8741, 8856-10079, ou um fragmento ou variante de qual- quer uma destas sequências. Informações adicionais estão apresenta- das no identificador <223> da respectiva SEQ ID NO na listagem de sequências.

[00315] Nas modalidades particularmente preferidas, o RNA codifi- cante compreende ou consiste em uma sequência de RNA que é idên- tica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica a uma se- quência de ácidos nucleicos selecionado do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 329-2080, 6312-8741, 8856-10079, ou um fragmento ou variante de qualquer uma destas sequências. Informações adicionais estão apresentadas no identificador <223> da respectiva SEQ ID NO na listagem de sequências.

[00316] Em modalidades preferidas, o RNA codificante compreende ou consiste em uma sequência de RNA que é idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica a uma sequência de ácidos nu- cleicos selecionado do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 329, 333, 369, 405, 441, 477, 513, 549, 585, 332, 363, 399, 435, 471, 507, 543, 579, 615, 621, 625, 661, 697, 733, 769, 805, 841, 877, 624, 655, 691, 727, 763, 799, 835, 871, 907, 913, 917, 953, 989, 1025, 1061, 1097, 1133, 1169, 916, 947, 983, 1019, 1055, 1091, 1127, 1163, 1199, 1205, 1209, 1245, 1281, 1317, 1353, 1389, 1425, 1461, 1208, 1239, 1275, 1311, 1347, 1383, 1419, 1455, 1491, 1497, 1501, 1537, 1573, 1609, 1645, 1681, 1717, 1753, 1500, 1531, 1567, 1603, 1639, 1675, 1711, etição 870210044043, de 14/05/2021, pág. 12451/12614

1747, 1783, 1789, 1793, 1829, 1865, 1901, 1937, 1973, 2009, 2045, 1792, 1823, 1859, 1895, 1931, 1967, 2003, 2039, 2075, 6312, 6315, 6345, 6375, 6405, 6435, 6465, 6495, 6525, 6555, 6558, 6588, 6618, 6648, 6678, 6708, 6738, 6768, 6798, 6801, 6831, 6861, 6891, 6921, 6951, 6981, 7011, 7041, 7044, 7074, 7104, 7134, 7164, 7194, 7224, 7254, 7284, 7287, 7317, 7347, 7377, 7407, 7437, T467, 7497, 7527, 7530, 7560, 7590, 7620, 7650, 7680, 7710, 7740, 7770, 7773, 7803, 7833, 7863, 7893, 7923, 7953, 7983, 8013, 8016, 8046, 8076, 8106, 8136, 8166, 8196, 8226, 8256, 8259, 8289, 8319, 8349, 8379, 8409, 8439, 8469, 8499, 8502, 8532, 8562, 8592, 8622, 8652, 8682, 8712, ou um fragmento ou variante de qualquer uma destas sequências. Infor- mações adicionais estão apresentadas no identificador <223> da res- pectiva SEQ ID NO na listagem de sequências.

[00317] Em modalidades preferidas, o RNA codificante compreende ou consiste em uma sequência de RNA que é idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica a uma sequência de ácidos nu- cleicos selecionado do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 336, 372, 408, 444, 480, 516, 552, 588, 628, 664, 700, 736, 772, 808, 844, 880, 8857, 6561, 6591, 6621, 6651, 6681, 6711, 6741, 6771, 9163, 7290, 7320, 7350, 7380, 7410, 7440, 7470, 7500, 9469, 8019, 8049, 8079, 8109, 8139, 8169, 8199, 8229, 9775, 920, 956, 992, 1028, 1064, 1100, 1136, 1172, 1212, 1248, 1284, 1320, 1356, 1392, 1428, 1464, 1504, 1540, 1576, 1612, 1648, 1684, 1720, 1756, 1796, 1832, 1868, 1904, 1940, 1976, 2012, 2048, 9061, 7047, 7077, 7107, 7137, 7167, 7197, 7227, 7257, 9367, 7776, 7806, 7836, 7866, 7896, 7926, 7956, 7986, 9673, 8505, 8535, 8565, 8595, 8625, 8655, 8685, 8715, 9979, 6318, 6348, 6378, 6408, 6438, 6468, 6498, 6528, 8959, 6804, 6834, 6864, 6894, 6924, 6954, 6984, 7014, 9265, 7533, 7563, 7593, 7623, 7653, 'etição 870210044043, de 14/05/2021, pág. 12452/12614

7683, 7713, 7743, 9571, 8262, 8292, 8322, 8352, 8382, 8412, 8442, 8472, 9877 (codificando HSALB Pf-CSP(19-397)), ou um fragmento ou variante de qualquer uma destas sequências. Informações adicionais estão apresentadas no identificador <223> da respectiva SEQ ID NO na listagem de sequências.

[00318] “Como descrito em todo o relatório descritivo, informações adicionais sobre sequências de aminoácidos ou sequências de ácidos nucleicos (sequências codificadoras ou sequências de mRNA) ade- quadas também podem ser obtidas a partir da listagem de sequências, em particular dos detalhes apresentados neste pedido no identificador <223> como explicado a seguir.

[00319] “Deve-se observar que em toda a listagem de sequências, as informações apresentadas no identificador numérico <223> seguem a mesma estrutura: "<SEQUÊNCIA DESCRITOR> de <CONSTRUTO IDENTIFICADOR>". O <SEQUÊNCIA DESCRITOR> refere-se ao tipo de sequência (por exemplo, "sequência de proteína derivada e/ou modificada", "CDS derivada e/ou modificada", "desenho a-1 do produto de mRNA compreendendo sequência derivada e/ou modificada", ou "desenho i-2 do produto de MRNA compreendendo sequência derivada e/ou modificada", ou "desenho i-3 do produto de MRNA compreenden- do sequência derivada e/ou modificada", etc.) e se a sequência com- preende ou consiste em uma sequência do tipo selvagem ("wt") ou se a sequência compreende ou consiste em uma sequência sequência- otimizada (por exemplo, "opt1", "opt2", "opt3", "opt4", "opt5", "opt6", "opt11"; as otimizações de sequências estão descritas mais detalha- damente abaixo. O <CONSTRUTO IDENTIFICADOR> apresentado no identificador numérico <223> tem as seguintes estruturas: ("orga- nismo nome construto", ou "organismo número acesso nome construto") e tem a intenção de auxiliar o especialista na técnica a de- rivar explicitamente sequências de ácidos nucleicos adequadas (por 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12453/12614 exemplo, RNA, mRNA) codificando a mesma proteína CSP de acordo com a invenção. Parei pag 94 Métodos para a produção de RNA:

[00320] O RNA codificante, de preferência o MRNA da invenção pode ser preparado por qualquer método conhecido na literatura, inclu- indo síntese química tal como, por exemplo, síntese de RNA em fase sólida, assim como métodos in vitro, tal como reações de transcrição in vitro de RNA.

[00321] Em uma modalidade preferida, o RNA codificante, de prefe- rência o MRNA é obtido por transcrição in vitro de RNA.

[00322] — Por conseguinte, o RNA codificante da invenção é de prefe- rência um RNA transcrito in vitro.

[00323] Os termos "transcrição in vitro de RNA" ou "transcrição in vitro" referem-se a um processo no qual RNA é sintetizado em um sis- tema livre de células (in vitro). O RNA pode ser obtido por transcrição in vitro DNA-dependente de um molde de DNA apropriado que, de acordo com a presente invenção, é um molde DNA plasmídico lineari- zado ou um molde de DNA amplificado por PCR. O promotor para con- trole da transcrição in vitro do RNA pode ser qualquer promotor para qualquer RNA polimerase DNA-dependente. Exemplos particulares de RNA polimerases DNA-dependentes são as RNA polimerases T7, T3, SP6, ou Syn5 RNA. Em uma modalidade preferida da presente inven- ção o molde DNA é linearizado com uma enzima de restrição adequa- da, antes de ser submtido à transcrição de RNA in vitro.

[00324] Os reagentes usados na transcrição de RNA in vitro incluem tipicamente: um molde de DNA (DNA plasmídico linearizado ou produ- to de PCR) com uma sequência promotora que tem uma alta afinidade de ligação para sua respectiva RNA polimerase tal como RNA polime- rases codificadas por bacteriofagos (T7, T3, SP6, or Syn5); ribonucleo- tídeo trifosfatos (NTPs) para as quatro bases (adenina, citosina, guani- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12454/12614 na e uracil); opcionalmente, um análogo tipo cap definido neste pedido (por exemplo, m7G(5')ppp(5')G (m7G)); opcionalmente, outros nucleo- tídeos modificados definidos neste pedido; uma RNA polimerase DNA- dependente capaz de se ligar à sequência promotora no molde de DNA (por exemplo, RNA polimerase T7, T3, SP6, ou Syn5); opcional- mente, um inibidor de ribonuclease (RNase) para inativa toda RNase potencialmente contaminate; opcionalmente, uma pirofosfatase para degradar o pirofosfato, que pode inibir a transcrição de RNA in vitro; MgCl2, que fornece íons de Mg2+ como um cofator para a polimerase; um tampão (TRIS ou HEPES) para manter um valor de pH adequado, que também pode conter antioxidantes (por exemplo, DTT), e/ou poli- aminas tal como espermidina em concentrações órimas, por exemplo um sistema tampão compreendendo TRIS-citrato como revelado no documento WO2017/109161.

[00325] Em modalidades preferidas, a estrutura cap1 do RNA codi- ficante da invenção é formado por capeamento co-transcricional usan- do os análogos tipo cap trinucleotídicos m7G(5')ppp(5')(2º/ OMeA)pG ou m7G(5')ppp(5')(2'/ OMeG)pG. Um análogo tipo cap1 preferido que pode ser adequadamente usado na produção do RNA codificante da inven- ção é m7G(5')ppp(5')(2' OMeA)pG.

[00326] Nas modalidades, a mistura de nucleotídeos usada na transcrição in vitro de RNA pode conter adicionalmente nucleotídeos modificados como definido neste pedido. Neste contexto, nucleotídeos modificados preferidos compreendem pseudouridina (ww), N1- metil- pseudouridina (m1iy), 5-metilcitosina, e 5-metoxiuridina. Em modalida- des particulares, os nucleotídeos uracil na mistura de nucleotídeos são substituídos (parcial ou completamente) por pseudouridina (ww) e/ou N1-metilpseudouridina (m1iyw) para obter uma RNA codificante modifi- cado.

[00327] Em modalidades preferidas, a mistura de nucleotídeos (i.e., a 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12455/12614 fração de cada nucleotídeo na mistura) usada para reações de transcrição in vitro de RNA pode ser otimizada para a sequência de RNA dada, de preferência da maneira descrita no nodcumento WO2015/188933.

[00328] “Na modalidade em que é preciso produzir mais de um RNA codificante diferente definido neste pedido, por exemplo, onde 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 ou ainda mais RNAs codificantes diferentes precisam ser produzidos (por exemplo, codificando diferentes antígenos de CSP, ou, por exemplo, uma combinação de diferentes antígenos; vide se- gundo aspecto) os procedimentos descritos no documento WO?2017/109134 pode ser usados de forma adequada.

[00329] “No contexto de produção de vacinas de RNA, pode ser ne- cessário apresentar RNA de grau GMP. RNA de grau GMP pode ser produzido por um processo produção aprovado por órgãs reguladores. Por conseguinte, em uma modalidade particularmente preferida, a pro- dução de RNA é realizada segundo a boa prática de produção (GMP) vigente, implementando várias etapas de controle de qualidade no ní- vel de DNA e RNA, de preferência de acordo com o documento WO2016/180430. Em modalidades preferidas, o RNA da invenção é um RNA de grau GMP, particularmente um mRNA de grau GMP. Por conseguinte, um RNA codificante para uma vacina é um RNA de grau GMP.

[00330] Os produtos de RNA obtidos são de preferência purificados por PureMessenger& (CureVac, Túbingen, Alemanha; RP-HPLC de acordo com o documento WO2008/077592) e/ou filtração de fluxo tan- gencial (descrita no documento WO2016/193206).

[00331] Em uma outra modalidade preferida, o RNA codificante, particularmente o RNA codificante purificado, é liofilizado de acordo com o documento WOZ2016/165831 ou WO2011/069586 para produzir um RNA codificante seco estável à temperatura (em pó), como definido neste pedido. O RNA da invenção, particularmente o RNA purificado 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12456/12614 também pode ser secado por secagem por aspersão ou secagem por aspersão-congelamento de acordo com o documento WO2016/184575 ou WO2016/184576 para dar um RNA estável à temperatura (em pó) como definido neste pedido. Por conseguinte, no contexto de produção e purificação de RNA, as descrições do documento WO2017/109161, WOZ2015/188933, WO2016/180430, WO2008/077592, WO2016/193206, WOZ2016/165831, WOZ2011/069586, WOZ2016/184575, e WOZ2016/ 184576 estão aqui incorporadas a título de referência.

[00332] Por conseguinte, em modalidades preferidas, o RNA codifi- cante é um RNA seco, particularmente um mRNA seco.

[00333] O termo "RNA seco" conforme usado neste pedido deve ser entendido como um RNA que fora liofilizado, secado por aspersão, ou secado por aspersão-congelamento como definido acima para obter um RNA seco estável à temperatura (em pó).

[00334] Em modalidades preferidas, o RNA codificante da invenção é um RNA purificado, particularmente mRNA purificado.

[00335] O termo "RNA purificado" ou "MRNA puificado" conforme usado neste pedido deve ser entendido como um RNA que tem uma pureza depois de determinadas etapas de purificação (por exemplo, purificação por HPLC, TFF, Oligo d(T), etapas de precipitação) mais alta que o material de partida (por exemplo, RNA transcrito in vitro). Impurezas típicas que não estão essencialmente presentes no RNA purificado compreendem peptídios ou proteínas (por exemplo, enzimas derivadas da transcrição in vitro de RNA DNA-dependente, por exem- plo, RNA polimerases, RNases, pirofosfatase, endonuclease de restri- ção, DNase), espermidina, BSA, sequências abortivas de RNA, frag- mentos de RNA (fragmentos curtos de RNA de cordão duplo, sequên- cias abortivas etc.), nucleotídeos livres (nucleotídeos modificados, NTPs convencionais, análogos tipo cap), fragmentos de DNA molde, componentes tamponantes (HEPES, TRIS, MgCl2) etc. Outras poten- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12457/12614 ciais impurezas que podem ser derivados, por exemplo, de procedi- mentos de fermentação compreendem impurezas bacterianas (biocar- ga, DNA bacteriano) ou impurezas derivados de procedimentos de pu- rificação (solventes orgânicos etc.). Por conseguinte, é desejável, nes- te contexto, que o "grau de pureza do RNA" seja o mais próximo possí- vel de 100%. Também é desejável que o grau de pureza do RNA que a quantidade de transcritos de RNA de comprimento integral seja o mais próximo possível de 100%. Por conseguinte "RNA purificado" conforme usado neste pedido tem um grau de pureza superior a 75%, 80%, 85%, muito particularmente 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% e mais favoravelmente 99% ou mais. O grau de pureza pode, por exemplo, ser determinado por HPLC analítica, onde as percentagens apresentadas acima correspondem à razão entre a área do pico para o RNA alvo e a área total de todos os picos que representam os subpro- dutos. Alternativamente, o grau de pureza pode, por exemplo, ser de- terminado por eletroforese analítica em gel de agarose ou eletroforese capilar em gel.

[00336] Deve ficar entendido que "RNA seco" como definido neste pedido e "RNA purificado" como definido neste pedido ou "MRNA de grau GMP" como definido neste pedido podem ter características de estabilidade (in vitro, in vivo) superiores e eficiência aumentada (por exemplo, melhor translatabilidade do mMRNA in vivo) e são, portanto, particularmente adequados para uma finalidade médica, por exemplo, uma vacina. Além disso, "RNA seco" como definido neste pedido e "RNA purificado" como definido neste pedido ou "MRNA de grau GMP" podem ser particularmente adequados para o uso médico definido nes- te pedido.

[00337] Por conseguinte, em modalidades preferidas, o RNA codifi- cante para uma vacina do primeiro aspecto pode compreender um RNA codificante de grau GMP, um RNA codificante purificado, e/ou um 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12458/12614

RNA codificante seco.

[00338] — Subsequente ao capeamento co-transcricional definido nes- te pedido, e subsequente à purificação definida neste pedido, o grau de capeamento do RNA codificante obtido pode ser determinado por meio de ensaios de capeamento descritos no pedido PCT publicado WOZ2015/101416, em particular, aqueles descritos nas reivindicações 27 a 46 do pedido PCT publicado WO2015/101416 podem ser usados. Alternativamente, pode ser usado um ensaio de capeamento descrito no documento PCT/EP2018/08667. Composição, composição farmacêutica:

[00339] “Um segundo aspecto refere-se a uma composição compre- endendo pelo menos um RNA codificante do primeiro aspecto.

[00340] —Notavelmente, as modalidades referentes à composição do segundo aspecto também podem ser lidas e entendidas como modali- dades adequadas da vacina do terceiro aspecto. Ainda, as modalida- des referentes à vacina do terceiro aspecto também podem ser lidas e entendidas como modalidades adequadas da composição do segundo aspecto (compreendendo o RNA do primeiro aspecto).

[00341] Em modalidades preferidas do segundo aspecto, a referida composição compreende pelo menos um RNA codificante a CSP de um parasita da malária de acordo com o primeiro aspecto, ou um fra- gmento imunogênico ou variante imunogênica do mesmo, onde a refe- rida composição será, de preferência, administrada por via intramuscu- lar ou intradérmica.

[00342] De preferência, a administração intramuscular ou intradér- mica da referida composição resulta na expressão do antígeno da CSP codificada em um indivíduo. De preferência, a composição do segundo aspecto é adequada para uma vacina, em particular, adequada para uma vacina contra malária.

[00343] A composição pode compreender uma quantidade segura e 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12459/12614 eficaz do RNA especificado neste pedido. Conforme usado neste pedi- do, "quantidade segura e eficaz" significa uma quantidade do RNA que é suficiente para resultar na expressão e/ou atividade da poteína anti- gênica da CSP codificada. Ao mesmo tempo, uma "quantidade segura e eficaz" é suficientemente pequena para evitar efeitos colaterais gra- ves.

[00344] Uma "quantidade segura e eficaz" do RNA da composição definida acima vai variar ainda dependendo da condição particular a ser tratada e também com a idade e a condição física do paciente a ser tratado, a gravidade da condição, a duração do tratamento, a natu- reza da terapia concomitante, o carreador farmaceuticamente aceitável particular usado, e fatores similares, dentro do conhecimento e experi- ência do médico assistente. Além disso, a "quantidade segura e eficaz" do RNA ou da composição descritos neste pedido pode depender da via de aplicação (por exemplo, intramuscular, intradérmica), do disposi- tivo de aplicação (injeção com agulha, dispositivo de injeção), e/ou da complexação/formulação (por exemplo, RNA associado a um carreador polimérico ou LNP). Além disso, a "quantidade segura e eficaz" do RNA ou da composição pode depender da condição do indivíduo trata- do (criança, indivíduo humano imunocomprometido etc.). Por conse- guinte, a "quantidade segura e eficaz" adequada precisa ser adaptada e será escolhida e definida pelo especialista na técnica.

[00345] No contexto da invenção, uma "composição" refere-se a qualquer tipo de composição na qual os ingredientes especificados (por exemplo, RNA codificando CSP, por exemplo, associado a um carreador polimérico ou LNP) podem ser incorporados, opcionalmente junto com quaisquer outros constituintes, usualmente com pelo menos um carreador ou excipiente farmaceuticamente aceitável. A composi- ção pode ser uma composição seca tal como um pó ou grânulos, ou uma unidade sólida tal como uma forma liofilizada. Alternativamente, a 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12460/12614 composição pode estar na forma líquida, e cada constituinte pode ser independentemente incorporado na forma dissolvida ou dispersada (por exemplo, suspenddido ou emulsificado).

[00346] Em uma modalidade preferida do segundo aspecto, a com- posição compreende pelo menos um RNA codificante do primeiro as- pecto e, opcionalmente, pelo menos um carreador ou excipiente far- maceuticamente aceitável.

[00347] Nas modalidades particularmente preferidas do segundo aspecto, a composição compreende pelo menos um RNA codificante, onde o RNA codificante compreende ou consiste em uma sequência de RNA que é idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idên- tica a uma sequência de ácidos nucleicos selecionado do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 37-328, 329-2080, 2121-2480, 2887-6134, 6312-8741, 8754-8855, 8856-10079, 10086-10139, e, opcionalmente, pelo menos um carreador ou excipiente farmaceuticamente aceitável.

[00348] O termo "carreador farmaceuticamente aceitável" ou "exci- piente farmaceuticamente aceitável" conforme usado neste pedido in- clui de preferência a base líquida ou não líquida da composição para administração. Se a composição for apresentada na forma líquida, o carreador pode ser água, por exemplo, água livre de pirogênio; solução salina isotônica ou soluções (aquosas) tamponadas, por exemplo, so- luções tamponadas com fosfato, citrato etc. Pode-se usar água ou de preferência um tampão, mais preferivelmente um tampão aquoso con- tendo um sal sódico, de preferência pelo menos 50 mM de um sal só- dico, um sal cálcico, de preferência pelo menos 0,01 mM de um sal cálcico, e opcionalmente um sal potássico, de preferência pelo menos 3 mM de um sal potássico. De acordo com modalidades preferidas, o sal sódico, cálcico e, opcionalmente, potássico podem ocorrer na for- ma de seus halogenetos, por exemplo, cloretos, iodetos ou brometos, 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12461/12614 na forma de seus hidróxidos, carbonatos, hidrogenocarbonatos, ou sul- fatos, etc. Exemplos de sais sódicos incluem NaCl, Nal, NaBr, Na2COs;, NaHCO;3, Na2SO,, exemplos dos sais potássicos opcionais incluem KCl, KI, KBr, KCO3, KHCO3, K2SO2., e exemplos de sais cálcicos in- cluem CaCl2, Cala, CaBr2, CaCO3, CaSO,4, Ca(OH)>2.

[00349] Além disso, ânions orgânicos dos cátions mencionados acima também podem estar no tampão. Por conseguinte, nas modali- dades, a composição de RNA da invenção pode compreender carrea- dores ou excipientes farmaceuticamente aceitáveis usando um ou mais carreadores ou excipientes farmaceuticamente aceitáveis para, por exemplo, aumentar a estabilidade, aumentar a transfecção de células, permitir o aumento sisemático ou retardado da translação da proteína CSP codificada in vivo, e/ou alterar o perfil de liberação da proteína CSP codificada in vivo. Além de excipientes tradicionais tal como todo e qualquer solvente, meio de dispersão, diluente, ou outros veículos líquidos, auxiliares de dispersão ou suspensão, agentes tensoativos, agentes isotônicos, agentes espessantes ou emulsificantes, conservan- tes, os excipientes da presente invenção podem incluir, porém sem |i- mitação, lipidoides, lipossomas, nanopartículas lipídicas, polímeros, lipoplexos, nanopartículas do tipo núcleo-envoltório, peptídios, proteí- nas, células transfectadas com polinucleotídeos, hialuronidase, mimé- ticos de nanopartícula e combinações dos mesmos. Nas modalidades, também podem ser usados uma ou mais cargas sólidas ou líquidas ou diluentes ou compostos encapsulantes compatíveis, que sejam ade- quados para administração a um indivíduo. O termo "compatível" con- forme usado neste pedido significa que os constituintes da composição são capazes de ser misturados com pelo menos um RNA e, opcional- mente, uma pluralidade de RNAs da composição, de tal maneira que não ocorre qualquer interação, o que poderia reduzir substancialmente a atividade biológica ou a eficácia farmacêutica da composição em 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12462/12614 condições de uso típicas (por exemplo, administração intramuscular ou intradérmica). Os carreadores ou excipientes farmaceuticamente acei- táveis devem ter pureza suficientemente alta e toxicidade suficiente baixa para que sejam adequados para administração a um indivíduo a ser tratado. Compostos que podem ser usados como carreadores ou excipientes farmaceuticamente aceitáveis podem ser açúcares, tal co- mo, por exemplo, lactose, glucose, trealose, manose, e sacarose; ami- dos, tal como, por exemplo, amido de milho ou amido de batata; dex- trose; celulose e seus derivados, tal como, por exemplo, carboximetil- celulose sódica, etilcelulose, acetato de celulose; tragacanto em pó; malte; gelatina; sebo; deslizantes sólidos, tal como, por exemplo, ácido esteárico, estearato de magnésio; sulfato de cálcio; óleos vegetais, tal como, por exemplo, óleo de amendoim, óleo de algodão, óleo de ger- gelim, óleo de oliva, óleo milho e óleo de teobroma; polióis, tal como, por exemplo, polipropileno glicol, glicerol, sorbitol, manitol e polietileno glicol; ácido algínico.

[00350] O pelo menos um carreador ou excipiente farmaceutica- mente aceitável da composição pode ser de preferência selecionado para ser adequado para distribuição intramuscular ou intradérmica da referida composição. Por conseguinte, a composição é de preferência uma composição farmacêutica, adequada para administração intra- muscular ou intradérmica.

[00351] — Indivíduos para os quais se contempla a administração dos compostos, de preferência da composição farmacêutica, incluem, po- rém sem limitação, seres humanos e/ou outros primatas; mamíferos, incluindo mamíferos comercialmente relevantes tal como gado bovino, porcos, cavalos, ovelhas, gatos, cachorros, camundongos e/ou ratos; e/ou aves, incluindo aves comercialmente relevantes tal como aves domésticas, galinhas, patos, gansos e/ou perus.

[00352] As composições farmacêuticas da presente invenção de- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12463/12614 vem ser adequadamente estéreis e/ou livres de pirogênio.

[00353] Além disso, também podem ser usados uma ou mais car- gas sólidas ou líquidas ou diluentes ou compostos encapsulantes com- patíveis, que sejam adequados para administração a um indivíduo. O termo "compatível" conforme usado neste pedido significa que os cons- tituintes da composição são capazes de ser misturados com pelo me- nos um RNA e, opcionalmente, o outro RNA da composição, de tal maneira que não ocorre qualquer interação, o que poderia reduzir substancialmente a atividade biológica ou a eficácia farmacêutica da composição em condições de uso típicas. Os carreadores, cargas e diluentes farmaceuticamente aceitáveis devem ter pureza suficiente- mente alta e toxicidade suficiente baixa para que sejam adequados para administração a um indivíduo a ser tratado. Compostos que po- dem ser usados como carreadores, cargas e diluentes farmaceutica- mente aceitáveis podem ser açúcares, tal como, por exemplo, lactose, glucose, trealose, manose, e sacarose; amidos, tal como, por exemplo, amido de milho ou amido de batata; dextrose; celulose e seus deriva- dos, tal como, por exemplo, carboximetilcelulose sódica, etilcelulose, acetato de celulose; tragacanto em pó; malte; gelatina; sebo; deslizan- tes sólidos, tal como, por exemplo, ácido esteárico, estearato de mag- nésio; sulfato de cálcio; óleos vegetais, tal como, por exemplo, óleo de amendoim, óleo de algodão, óleo de gergelim, óleo de oliva, óleo mi- lho e óleo de teobroma; polióis, tal como, por exemplo, polipropileno glicol, glicerol, sorbitol, manitol e polietileno glicol; ácido algínico.

[00354] — Outros aditivos que podem ser incluídos na composição são emulsificantes, tal como, por exemplo, Tween; agentes umectantes, tal como, por exemplo, lauril sulfato de sódio; agentes colorants; agentes flavorizantes, carreadores farmacêuticos; agentes formadores de com- primidos; estabilizantes; antioxidantes; conservantes.

[00355] “Nas modalidades, a composição definida neste pedido pode 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12464/12614 compreender uma pluralidade ou pelo menos mais de uma espécie do RNA codificante definido no contexto do primeiro aspecto da invenção.

[00356] Nas modalidades, pelo menos um RNA compreendido na composição é um ácido nucleico bi- ou multicistrônico, particularmente um ácido nucleico bi- ou multicistrônico definido neste pedido, que co- difica os pelo menos dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, dez, onze ou doze peptídios ou proteínas antigênicos distintos deriva- dos do mesmo parasita da malária e/ou de um parasita da malária.

[00357] “Nas modalidades, a composição definida neste pedido pode compreender uma pluralidade ou pelo menos mais de uma espécie do RNA codificante definido no contexto do primeiro aspecto da invenção. De preferência, a composição definida neste pedido pode compreen- der 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10 RNAs codificantes diferentes definidos no contexto do primeiro aspecto.

[00358] “Na modalidade, a composição pode compreender pelo me- nos 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 ou ainda mais espécies diferentes do RNA codificante definido no contexto do primeiro aspecto, cada uma delas codificando pelo menos um peptídio ou proteína antigênica derivado do geneticamente mesmo parasita da malária, ou um fragmento ou varian- te das mesmas. Particularmente, o referido (geneticamente) mesmo parasita da malária expressa (essencialmente) o mesmo repertório de proteínas ou peptídios, onde todas as proteínas ou peptídios possuem (essencialmente) a mesma sequência de aminoácidos. Particularmen- te, o referido (geneticamente) mesmo parasita da malária expressa es- sencialmente as mesmas proteínas, peptídios ou poliproteínas, onde estas proteínas, peptídios ou poliproteínas não diferem em sua(s) se- quência(s) de aminoácidos. Uma lista não limitativa de parasitas da malária exemplificativos está apresentada na Lista 1.

[00359] Em modalidades preferidas, a composição compreende pe- lo menos 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 ou ainda mais espécies do construto 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12465/12614 de RNA codificante, cada uma delas codificando um antígeno diferente da malária na CSP (construtos) definido no primeiro aspecto, de prefe- rência onde cada um dos construtos de RNA codificante é selecionado dentre as SEQ ID NOs: 329-2080, 6312-8741, 8856-10079.

[00360] Em modalidades preferidas, a composição do segundo as- pecto compreende (i) pelo menos um RNA codificante codificando pelo me- nos uma CSP de comprimento mais integral, e (ii) pelo menos um RNA codificante codificando pelo me- nos um fragmento de CSP encurtado com HBsAg.

[00361] Em modalidades preferidas, a composição do segundo as- pecto compreende (i) pelo menos um RNA codificante codificando pelo me- nos uma variante de CSP induzindo uma fortes respostas imunológicas humoral, e (ii) pelo menos um RNA codificante codificando pelo me- nos um fragmento de CSP induzindo uma fortes respostas imunológi- cas celular.

[00362] Em outras modalidades preferidas, a composição do se- gundo aspecto compreende (i) pelo menos um RNA codificante codificando pelo menos uma variante de CSP induzindo uma forte resposta imunológica de cé- lulas B, (ii) pelo menos um RNA codificante codificando pelo menos um fragmento de CSP induzindo uma forte resposta imunológica de células T CD4+; e (ii) pelo menos um RNA codificante codificando pelo menos um fragmento de CSP uma forte resposta imunológica de células T CD8+.

[00363] Nas modalidades, a composição compreende pelo menos 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12466/12614

2,3,4,5,6,7,8,9,10 ou ainda mais espécies diferentes do RNA codi- ficante definido no contexto do primeiro aspecto, cada uma delas codi- ficando pelo menos um peptídio ou proteína derivada de um parasita da malária geneticamente diferente, ou um fragmento ou variante das mesmas. Os termos "diferente" ou "parasita da malária diferente" con- forme usados em todo o presente relatório descritivo devem ser enten- didos como a diferença entre pelo menos dois parasitas da malária respectivos, onde a diferença é manifestada no genoma dos respeciti- vos parasitas da malária diferentes. Particularmente, os referidos para- sitas da malária (geneticamente) diferentes podem expressar pelo me- nos uma proteína, peptídio ou poliproteína diferente, onde pelo menos uma proteína, peptídio ou poliproteína difere de preferência em pelo menos um aminoácido.

[00364] Em outras modalidades, a composição compreende pelo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 ou ainda mais espécies diferentes de construto de RNA codificante, cada uma delas codificando um antígeno da malária diferente selecionado dentre CSP, LSA1, MSP1, AMA1, TRAP, VAR2CSA, Pfs230, Pfs28, pfs25, Pfs45/48, RH5, Ripr, EMP1, SSP2, ou combinações, ou fragmentos imunogênicos, ou variantes imunogênicas de qualquer uma destas.

[00365] Nas modalidades, a composição compreende pelo menos um RNA codificante codificando a CSP definida no contexto do primei- ro aspecto e, adicionalmente, uma espécie de RNA codificante codifi- cando um antígeno selecionado dentre LSA1, MSP1, AMA1, TRAP, VARZ2ZCSA, Pfs230, Pfs28, pfs25, Pfs45/48, RH5, Ripr, EMP1, SSP2.

[00366] Nas modalidades, a composição compreende pelo menos um RNA codificante codificando a CSP definida no contexto do primei- ro aspecto e, adicionalmente, duas espécies de RNA codificante, cada uma delas codificando um antígeno diferente selecionado dentre LSA1, MSP1, AMA1, TRAP, VARZ2CSA, Pfs230, Pfs28, pfs25, Pís45/48, RH5, 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12467/12614

Ripr, EMP1, SSP2.

[00367] Nas modalidades, a composição compreende pelo menos um RNA codificante codificando a CSP definida no contexto do primei- ro aspecto e, adicionalmente, três espécies de RNA codificante, cada uma delas codificando um antígeno diferente selecionado dentre LSA1, MSP1, AMA1, TRAP, VARZ2CSA, Pfs230, Pfs28, pfs25, Pís45/48, RH5, Ripr, EMP1, SSP2.

[00368] “Nas modalidades, a composição compreende pelo menos um RNA codificante codificando a CSP definida no contexto do primei- ro aspecto e, adicionalmente, pelo menos um RNA codificante codifi- cando VAR2CSA.

[00369] “Nas modalidades, a composição compreende pelo menos um RNA codificante codificando a CSP definida no contexto do primei- ro aspecto e, adicionalmente, pelo menos um RNA codificante codifi- cando VARZ2CSA, e pelo menos um RNA codificante codificando Pfs25 e/ou Pfs230.

[00370] Nas modalidades, a composição compreende pelo menos um RNA codificante codificando a CSP definida no contexto do primei- ro aspecto e, adicionalmente, pelo menos um RNA codificante codifi- cando VAR2Z2CSA, e pelo menos um RNA codificante codificando Pfs230 e/ou Pfs28, e adicionalmente, pelo menos um RNA codificante codificando LSA1, MSP1, AMA1, TRAP, VARZCSA, pís25, Pís45/48, RH5, Ripr, EMP1, SSP2

[00371] Nas modalidades, a composição compreende pelo menos um RNA codificante codificando a CSP definida no contexto do primei- ro aspecto e, adicionalmente, pelo menos um RNA codificante codifi- cando AMA, e pelo menos um RNA codificante codificando TRAP, e pelo menos um RNA codificante codificando MSP1, e/ou pelo menos um RNA codificante codificando LSA.

[00372] Nas modalidades, a composição compreende pelo menos 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12468/12614 um RNA codificante codificando a CSP definida no contexto do primei- ro aspecto e, adicionalmente, pelo menos um RNA codificante codifi- cando Vagr2CSA.

[00373] Nas modalidades, a composição compreende pelo menos um RNA codificante codificando a CSP definida no contexto do primei- ro aspecto e, adicionalmente, pelo menos um RNA codificante codifi- cando Pfs230, PFS28, Pfs25, Pfís48/50CyRPA, RH5 e/ou RIPR.

[00374] Nas modalidades, a composição compreende pelo menos um RNA codificante codificando a CSP definida no contexto do primei- ro aspecto e, adicionalmente, pelo menos um RNA codificante codifi- cando AMA1, TRAP, MSP1, LSA, Vagr2CSA, Pfs230, PFS28, Pfs25, Pfs48/50CyRPA, RH5 e/ou RIPR. Complexação:

[00375] Em uma modalidade preferida do segundo aspecto, pelo menos um RNA codificante, ou a pluralidade de RNAs codificantes (espécies de RNA), é complexado ou associado para obtenção de uma composição formulada. Uma formulação neste contexto pode ter a fun- ção de agente de transfecção. Uma formulação neste contexto também pode ter a função de proteger o RNA codificante contra degradação.

[00376] Em uma modalidade preferida do segundo aspecto, pelo menos um RNA codificante é complexado ou associado ou pelo menos parcialmente complexado ou parcialmene associado a um ou mais compostos catiônicos ou policatiônicos, de preferência um polímero catiônico ou policatiônico, um polissacarídeo catiônico ou policatiônico, um lipídio catiônico ou policatiônico, uma proteína catiônica ou polica- tiônica, um peptídio catiônico ou policatiônico, ou quaisquer combina- ções dos mesmos.

[00377] —Notavelmente, as modalidades referentes a "pelo menos um RNA codificante" também podem ser lidas e entendidas como modali- dades adequadas de mais de um ou de uma pluralidade, por exemplo, 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12469/12614

2,3,4,5,6,7, 8,9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 dos RNAs especificados no contexto do primeiro aspecto.

[00378] O termo "composto catiônico ou policatiônico" conforme usado neste pedido será reconhecido e entendido pelo especialista na técnica, e destina a indicar, por exemplo, uma molécula carregada, que é positivamente carregada em um valor de pH variando de cerca de 1 a 9, em um valor de pH variando de cerca de 3 a 8, em um valor de pH variando de cerca de 4 a 8, em um valor de pH variando de cerca de 5 a 8, mais preferivelmente em um valor de pH variando de cerca de 6 a 8, ainda mais preferivelmente em um valor de pH variando de cerca de 7 a 8, mais preferivelmente ainda em um pH fisiolígico, por exemplo, variando de cerca de 7,2 a cerca de 7,5. Por conseguinte, um compo- nente catiônico, por exemplo, um peptídio catiônico, uma proteína ca- tiônica, um polímero catiônico, um polissacarídeo catiônico, um lipídio catiônico, pode ser qualquer composto positivamente carregado ou po- límero que é positivamente carretado em condições fisiológicas. Um "peptídio ou proteína catiônico ou policatiônico" pode conter pelo me- nos um aminoácido positivamente carregado, ou mais de um aminoá- cido positivamente carregado, por exemplo, selecionado dentre Arg, His, Lys ou Orn. Por conseguinte, também estão dentro do escopo "componentes "policatiônicos" apresentando mais de uma carga positi- va nas condições dadas.

[00379] Os compostos catiônicos ou policatiônicos particularmente preferidos neste contexto podem ser selecionados dentre os seguintes peptídios ou proteínas catiônicos ou policatiônicos ou fragmentos dos mesmos: protamina, nucleolina, espermina ou espermidina, ou outros peptídios ou proteínas catiônicos, tal como poli-L-lisina (PLL), poli- arginina, polipeptídios básicos, peptídios que penetram nas células (CPPs), incluindo peptídios de ligação de HIV, HIV-1 Tat (HIV), peptí- dios derivados de Tat, Penetratina, peptídios derivados de VP22 ou 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12470/12614 análogos, HSV VP22 (Herpes simples), MAP, KALA ou domínios de transdução de proteínas (PTDs), PpT620, peptídios ricos em prolina, peptídios ricos em arginina, peptídios ricos em lisina, peptídios de MPG, Pep-1, L-oligômeros, peptídios de calcitonina, peptídios deriva- dos de Antennapedia, pAntp, plsl, FGF, lactoferrina, transportana, bufo- rina-2, Bac715-24, SynB, SynB(1), pVEC, peptídios derivados de hCT, SAP, ou histonas. Mais preferivelmente, o ácido nucleico definido nes- te pedido, de preferência o MRNA definido neste pedido, é complexado com um ou mais policátions, de preferência com protamina ou oligofec- tamina, mais preferivelmente com protamina.

[00380] Em uma modalidade preferida do segundo aspecto, pelo menos um RNA codificante é complexado com protamina

[00381] Outros compostos catiônicos ou policatiônicos preferidos, que podem ser usados como um agente de transfecção ou de comple- xação, podem incluir polissacarídeos catiônicos, por exemplo, quitosa- no, polibreno etc.; lipídios catiônicos, por exemplo, DOTMA, DMRIE, di-C14-amidina, DOTIM, SAINT, DC-Chol, BGTC, CTAP, DOPC, DODAP, DOPE: Dioleil fosfatidiletanol-amina, DOSPA, DODAB, DOIC, DMEPC, DOGS, DIMRI, DOTAP, DC-6-14, CLIP1, CLIP6, CLIP9, oli- gofectamina; ou polímeros catiônicos ou policatiônicos, por exemplo, poliaminoácidos modificados, tal como polímeros de beta-aminoácidos ou poliamidas invertidas, etc., polietilenos modificados, tal como PVP etc., acrilatos modificados, tal como pDMAEMA etc., amidoaminas modificadas tal como pAMAM etc., polibeta-aminoéster modificado (PBAE), tal como polímeros de 1,4 butanodiol diacrilato-co-5-amino-1- pentanol de extremidade modificada com diamina, etc., dendrímeros, tal como dendrímeros de polipropilamina ou dendrímeros à base de PAMAM, etc., poli-iminas, tal como PEI, poli(propilenoimina), etc., poli- alilamina, polímeros à base de esqueletos de açúcares, tal como polí- meros à base de ciclodextrina, polímeros à base de dextrana, etc., e 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12471/12614 polímeros à base de equeletos de silanas, tal como copolímeros de PMOXA-PDMS, etc., polímeros em blocos consistindo em uma combi- nação de um ou mais blocos catiônicos (por exemplo, selecionados de um polímero catiônico mencionado acima) e um ou mais blocos hidrofí- licos ou hidrófobos (por exemplo, polietilenoglicol); etc.

[00382] Neste contexto é particularmente preferido que pelo menos um RNA codificante esteja complexado ou pelo menos parcialmente complexado com um composto catiônico ou policatiônico e/ou um car- reador polimérico, de preferência proteínas ou peptídios catiônicos. Neste contexto, a descrição dos documentos WO2010/037539 e WO?2012/113513 está aqui incorporada a título de referência. Parcial- mente significa que somente uma parte do RNA codificante é comple- xada com um composto catiônico e que o resto do RNA está (compre- endido na composição (farmacêutica) inventiva) na forma não comple- xada ("livre").

[00383] Em uma modalidade preferida do segundo aspecto, a com- posição compreende pelo menos um RNA codificante complexado com um ou mais compostos catiônicos ou policatiônicoss, de preferência protamina, e pelo menos um RNA codificante livre.

[00384] Neste contexto é particularmente preferido que pelo menos um RNA codificante esteja complexado, ou pelo menos parcialmente complexado com protamina. De preferência, a razão molar do ácido nucleico, particularmente do RNA do RNA complexado com protamina para o RNA livre é selecionada dentre uma razão molar de cerca de 0,001:1 a cerca de 1:0,001, incluindo uma razão de cerca de 1:1. Ade- quadamente, o RNA complexado é complexado com protamina por adição de uma solução de protamina-trealose à amostra de RNA em razão em peso de RNA:protamina (p/p) de 2:1.

[00385] Outras proteínas ou peptídios catiônicos ou policatiônicos preferidos que podem ser usados para complexação podem ser deri- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12472/12614 vados da fórmula (Arg)!;(Lys)m;(His)n;(Orn)o;(Xaa)x do pedido de pa- tente WO2009/030481 ou WO2011/026641, a descrição do documento WO2009/030481 ou WOZ2011/026641 referente aos mesmos estando aqui incorporada a título de referência.

[00386] Em uma modalidade preferida do segundo aspecto, pelo menos um RNA codificante é complexado, ou pelo menos parcialmente complexado, com pelo menos uma proteína ou peptídio catiônico ou policatiônico de preferência selecionado dentre as SEQ ID NOs: 6201- 6204 ou quaisquer combinações dos mesmos.

[00387] “De acordo com as modalidades, a composição da presente invenção compreende o RNA codificante definido no contexto do pri- meiro aspecto, e um carreador polimérico.

[00388] O termo "carreador polimérico" conforme usado neste pedi- do será reconhecido e entendido pelo especialista na técnica, e desti- na-se a indicar, por exemplo, um composto que facilita o transporte e/ou a complexação de um outro composto (por exemplo, RNA de car- ga). Um carreador polimérico é tipicamente um carreador que é forma- do de um polímero. Um carreador polimérico pode ser associado a sua carga (por exemplo, RNA codificante) por ligação covalente ou não co- valente. Um polímero pode ser à base de diferentes subunidades, tal como um copolímero.

[00389] Carreadores poliméricos adequados neste contexto podem incluir, por exemplo, poliacrilatos, polialquicianoacrilatos, polilactídeo, copolímeros de polilactídeo-poliglicolídeo, policaprolactonas, dextrana, albumina, gelatina, alginato, colágeno, quitosano, ciclodextrinas, pro- tamina, protamina peguilada, PLL peguilada e polietilenimina (PEI), ditiobis(succinimidilpropionato) (DSP), Dimetil-3,3'-ditiobispropionimi- dato (DTBP), poli(etileno imina) bicarbamato (PEIC), poli(L-lisina) (PLL), PLL modificada com histidina, poli(N-vinilpirrolidona) (PVP), po- lifpropilonimina (PPI), poliltamidoamina) (PAMAM), poli(amido etileni- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12473/12614 mina) (SS-PAEI), trietilenotetramina (TETA), poli(B-aminoéster), poli(4- hidroxi-L-prolina éster) (PHP), poli(alilamina), ácido poli(a-[4-amino- butil]-L-glicólico (PAGA), poli(fácido D,L-láctico-co-ácido glicólico (PLGA), poli(brometo de N-etil-4-vinilpiridínio), poli(fosfazeno)s (PPZ), poli(fosfoéster)es (PPE), poli(fosforamidato)s (PPA), poli(N-2-hidroxi- propilmetacrilamida) (DHPMA), poli(2-(dimetilamino)etil metacrilato) (PDMAEMA), poli(2-aminoetil propileno fosfato) PPE EA), quitosano galactosilado, quitosano N-dodecilado, histona, colágeno e dextrana- espermina. Em uma modalidade, o polímero pode ser um polímero inerte tal como, porém sem limitação, PEG. Em uma modalidade, o polímero pode ser um polímero catiônico tal como, porém sem limita- ção, PEI, PLL, TETA, poli(alilamina), polilbrometo de N-etil-4-vinilpi- ridínio), DHPMA e pDMAEMA. Em uma modalidade, o polímero pode ser um PEI biodegradável tal como, porém sem limitação, DSP, DTBP e PEIC. Em uma modalidade, o polímero pode ser biodegradável tal como, porém sem limitação, PLL modificada com histina, SS-PAEI, poli(B-aminoéster), PHP, PAGA, PLGA, PPZ, PPE, PPA e PPE-EA.

[00390] “Quando PEI está presente, ele pode ser PEI ramificado de peso molecular variando de 10 a 40 KkDA, por exemplo, PEI ramificado de 25 kDa (Sigma ft408727).

[00391] Em algumas modalidades, a nanopartícula à base de polí- mero compreende PEI. Em algumas modalidades, o PEI é PEI ramifi- cado. O PEI pode ser PEI ramificado de peso molecular variando de 10 a 40 kDA, por exemplo, 25 kDa. Em algumas modalidades, o PEI é PEI linear. Em algumas modalidades, a nanopartícula tem um tamanho igual ou menor que cerca de 60 nm (por exemplo, igual ou menor que cerca de 55 nm, igual ou menor que cerca de 50 nm, igual ou menor que cerca de 45 nm, igual ou menor que cerca de 40 nm, igual ou me- nor que cerca de 35 nm, igual ou menor que cerca de 30 nm, or igual ou menor que cerca de 25 nm). Nanopartículas adequadas podem va- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12474/12614 riar na faixa de 25 nm a 60 nm, por exemplo, 30 nm a 50 nm.

[00392] “Um carreador polimérico adequado pode ser um carreador polimérico formado por compostos catiônicos reticulados com dissulfe- to. Os compostos catiônicos reticulados com dissulfeto podem ser os mesmos ou diferentes um do outro. O carreador polimérico também pode conter outros componentes. O carreador polimérico usado de acordo com a presente invenção pode compreender misturas de peptí- dios, proteínas ou polímeros catiônicos e opcionalmente outros com- ponentes definidos neste pedido, que são reticulados por ligações dis- sulfeto (via grupos -SH).

[00393] Neste contexto, carreadores poliméricos de acordo com a fórmula ((Arg)!;(Lys)m;(His)n;(Orn)o;(Xaa')x(Cys)y) e com a fórmula Cys ((Arg)I;(Lys)Mm;(His)n;(Orn)o;(Xaa)x)Cys2 do pedido de patente WO2012/013326 são preferidos, a descrição do documento WO2012/ 013326 referente aos mesmos estando aqui incorporada a título de re- ferência.

[00394] Nas modalidades, o carreador polimérico usado para com- plexar o RNA codificante pode ser derivado de uma molécula de carre- ador polimérico de acordo com a fórmula (L-P!-S-[S-P2?-S]"-S-P%-L) do pedido de patente WOZ2011/026641, a descrição do documento WO?2011/026641 referente aos mesmos estando aqui incorporada a título de referência.

[00395] Nas modalidades, o composto carreador polimérico é for- mado por, ou compreende ou consiste nos elementos peptídicos CysArg12Cys (SEQ ID NO: 6201) ou CysArg12 (SEQ ID NO: 6202) ou TrpArg12Cys (SEQ ID NO: 6203). Nas modalidades particularmente preferidas, o composto carreador polimérico consiste em um dímero de (R12C)-(R12C), um dímero de (WR12C)-(WR12C), ou um trímero de (CR12)-(CR12C)-(CR12), onde os elementos peptídicos individuais no dímero (por exemplo, (WR12C)), ou no trímero (por exemplo, (CR12)), 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12475/12614 são conectados via grupos -SH.

[00396] Em uma modalidade preferida do segundo aspecto, pelo menos um RNA codificante do primeiro aspecto é complexado ou as- sociado a um polímero de polietileno glicol/peptídio compreendendo HO-PEG5000-S-(S-CHHHHHHRRRRHHHHHHOC-S-)7-S-PEG5000-0H (SEQ ID NO: 6204 como peptídio monomérico), HO-PEG5000-S-(S- CHHHHHHRRRRHHHHHHC-S-)4-S-PEG5000-OH (SEQ ID NO: 6204 como peptídio monomérico), HO-PEG5000-S-(S- CGHHHHHRRRRHHHHHGC-S-)7-S-PEG5000-0H (SEQ ID NO: 10172 como peptídio monomérico) e/ou um polímero de polietileno gli- col/peptídio compreendendo HO-PEG5000-S-(S- CGHHHHHRRRRHHHHHGC-S-)4-S-PEG5000-0H (SEQ ID NO: 10172 do peptídio monomérico).

[00397] Em outras modalidades, a composição compreende pelo menos um RNA codificante, onde pelo menos um RNA codificante é complexado ou associado a carreadores poliméricos e, opcionalmente, com pelo menos um componente lipídio descrito nos documentos WO2017/212008A1, WO2017/212006A1, WOZ2017/212007A1I, e WO2017/212009A1. Neste contexto, as descrições dos documentos WO2017/212008A1, WO2017/212006A1, WOZ2017/212007A1I, e WO2017/212009A1 encontram-se aqui incorporadas em sua íntegra a título de referência.

[00398] Em uma modalidade particularmente preferida, o carreador polimérico é um polímero de peptídio, de preferência um polímero de polietileno glicol/peptídio definido acima, e um componente lipídio, de preferência um componente lipidoide.

[00399] “Na modalidade preferida do segundo aspecto, pelo menos um RNA codificante do primeiro aspecto é complexado ou associado a um carreador polimérico, de preferência com um polímero de polietile- no glicol/peptídio definido acima, e um componente lipidoide, onde o 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12476/12614 componente lipidoide é um composto de acordo com a fórmula A R1

N Inf N | x L, Ru Ra (fórmula A) onde - Ra é independentemente selecionado, para cada ocorrên- cia dentre um grupo C1-20 alifático cíclico ou acíclico, ramificado ou li- near, não substituído; um grupo C1-20 heteroalifático cíclico ou acíclico, ramificado ou linear, substituído ou não substituído; um aril substituído ou não substituído; um heteroaril substituído ou não substituído; Rs CY DP. OH; ou OH; onde pelo menos um Ra é Rs OH ou OH; - R5 é independentemente selecionado, para cada ocorrên- cia dentre um grupo Cg-16 alifático cíclico ou acíclico, ramificado ou li- near, não substituído; um aril substituído ou não substituído; ou um he- teroaril substituído ou não substituído; - cada ocorrência de x é um número inteiro de 1 a 10; - cada ocorrência de y é um número inteiro de 1 a 10; 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12477/12614 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00400] Em uma modalidade preferida, o componente lipidoide pode ser um selecionado dentre os lipidoides da Tabela 7. Tabela 7: Lipidoides adequados para a invenção: 3-C12-O0H e O

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R E É . A nos 3-C12-amida iss monometil HO o A a A. DANRADRADNAA y > fe o & 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12478/12614

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[00401] De acordo com modalidades preferidas, o polímero de pep- tídio compreende um lipidoide da Tabela 7, de preferência o lipidoide 3-C12-OH já especificado acima, é usado para complexar pelo menos um RNA codificante do primeiro aspecto para formar complexos tendo uma razão N/P ratio de cerca de 0,1 a cerca de 20, ou de cerca de 0,2 a cerca de 15, ou de cerca de 2 a cerca de 15, ou de cerca de 2 a cer- ca de 12, onde a razão de N/P é definida como a razão molar dos áto- mos de nitrogênio dos grupos básicos do peptídio ou polímero catiôni- co para os grupos fosfato do ácido nucleico. Neste contexto, a descri- ção do documento WO2017/212009A1, em particular as reivindicações 1 a 10 do documento WO2017/212009A1, e a descrição específica re- ferfente às mesmas estando aqui incorporada a título de referência. Encapsulação/Complexação em LNP's:

[00402] Em modalidades preferidas do segundo aspecto, pelo me- nos um RNA codificante é complexado, encapsulado, parcialmente en- capsulado, ou associado a um ou mais lipídios (por exemplo, lipídios catiônicos e/ou lipídios neutros), formando assim lipossomas, nanopar- tículas lipídicas (LNP's), lipoplexos, e/ou nanolipossomas.

[00403] Os lipossomas, nanopartículas lipídicas (LNP's), lipoplexos, e/ou nanolipossomas - o RNA incorporado pode estar completamente ou parcialmente localizado no espaço internos dos lipossomas, nano- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12482/12614 partículas lipídicas (LNP's), lipoplexos, e/ou nanolipossomas, dentro da membrana, ou associado à superfície externa da membrana. A incor- poração de um ácido nucleico em lipossomas neste pedido também é denominada "encapsulamento" onde o RNA fica totalmente contido no espaço interno dos lipossomas, nanopartículas lipídicas (LNPs), lipo- plexos, e/ou nanolipossomas. A finalidade da incorporação de um RNA em lipossomas, nanopartículas lipídicas (LNPs), lipoplexos, e/ou na- nolipossomas é proteger o RNA contra um ambiente que possa com- preender enzimas ou químicos que degradam o RNA e/ou contra sis- temas ou receptores que causam a excreção rápida do RNA. e RNA. Além disso, a incorporação de um RNA em lipossomas, nanopartículas lipídicas (LNPs), lipoplexos, e/ou nanolipossomas pode promover a absorção do RNA e, assim, pode aumentar o efeito terapêutico do RNA codificando CSP antigênica. Por conseguinte, a incorporação de um RNA em lipossomas, nanopartículas lipídicas (LNP's), lipoplexos, e/ou nanolipossomas pode ser particularmente adequada para uma vacina, por exemplo, para administração intramuscular ou intradérmica.

[00404] Neste contexto, os termos "complexado" ou "associado" re- ferem-se à combinação essencialmente estável do RNA codificante do primeiro aspecto e com um ou mais lipídios em complexos ou conjun- tos maiores sem ligação covalente.

[00405] O termo "nanopartícula lipídica", também denominada "LNP", não está restrito a qualquer morofologia particular, e inclui qualquer morfologia gerada quando um lipídio catiônico e opcionalmente um ou mais outros lipídios são combinados, por exemplo, em um ambiente aquoso e/ou na pesença de RNA. Por exemplo, um lipossoma, um complexo lipídico, um lipoplexo entre outros estão dentro do escopo de uma nanopartícula lipídica (LNP).

[00406] Os lipossomas, nanopartículas lipídicas (LNP's), lipoplexos, e/ou nanolipossomas podem ter diferentes tamanhos tal como, porém 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12483/12614 sem limitação, uma vesícula multilamelar (MLV) que ter centenas de nanômetros diferentes e pode conter uma série de bicamadas concên- tricas separadas por compartimentos aquosos estreitos, uma vesícula unicelular pequena (SUV) que pode ter menos de 50 nm de diâmetro, e uma vesícula unilamelar grande (LUV) que pode ter entre 50 e 500 nm de diâmetro.

[00407] As LNPs da invenção são adequadamente caracterizadas como vesículas microscópicas tendo um espaço aquoso interno se- questrado de um meio externo por uma membrana de uma ou mais bicamadas. As membranas bicamadas das LNPs são tipicamente for- madas por moléculas anfifílicas, tais como lipídios de origem sintética ou natural que compreendem domínios hidrofílicos e hidrófobos espa- cialmente separados. As membranas bicamadas dos lipossomas tam- bém podem ser formadas por polímeros e tensoativos anfofílicos (por exemplo, polomerossomas, niossomas, etc.). No contexto da presente invenção, uma LNP serve tipicamente para transportar o RNA do pri- meiro aspecto para um tecido alvo.

[00408] Por conseguinte, em modalidades preferidas do segundo aspecto, pelo menos um RNA é complexado com um ou mais lipídios formando assim nanopartículas lipídicas (LNP), onde a referida LNP é particularmente adequada para administração intramuscular e/ou intra- dérmica.

[00409] As LNPs compreendem tipicamente um lipídio catiônico e um ou mais excipientes selecionados dentre lipídios neutros, lipídios carregados, esteroides e lipídios conjugados com um polímero (por exemplo, lipídio peguilado). O RNA codificante pode ser encapsulado na porção lipídio de uma LNP ou em um espaço aquoso envelopado por um pouco da porção lipídio ou por toda a porção lipídio da LNP. O RNA codificante ou uma porção do mesmo também pode ser associa- da e complexada com a LNP. Uma LNP pode compreender qualquer 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12484/12614 lipídio capaz de formar uma partícula à qual os ácidos nucleicos são presos, ou na qual o um ou mais ácidos nucleicos são encapsulados. De preferência, a LNP compreendendo ácidos nucleicos compreende um ou mais lipídios catiônicos, e um ou mais lipídios estabilizantes. Lipídios estabilizantes incluem lipídios neutros e lipídios peguilados.

[00410] O lipídio catiônico de uma LNP pode ser cationizável, i.e., ele fica protonado quando o pH diminui para um valor abaixo da pK do grupo ionizável do lipídio, mas fica progressivamente mais neutro em valores de pH mais altos. Em valores de pH abaixo da pK, o lipídio passa então a ser capaz de se associar a ácidos nucleicos negativa- mente carregados. Em certas modalidades, o lipídio catiônico compre- ende um lipídio zwiteriônico que assume uma carga positiva quando o pH diminui.

[00411] A LNP pode compreender qualquer outro lipídio catiônico ou cationizável, i.e., qualquer um dentre inúmeras espécies de lipídio que podem carregar uma carga líquida positiva em um pH seletivo, tal co- mo o pH fisiológico.

[00412] Tais lipídios incluem, porém sem limitação, DSDMA, cloreto de N N-dioleil-N, N-dimetilamônio (DODAC), brometo de N N-diestearil- N N-dimetilamônio (DDAB), cloreto de 1,2-dioleoiltrimetil amônio pro- pano (DOTAP) (também conhecido como cloreto de N-(2,3-dioleoiloxi) propil)-N,N N-trimetilamônio e sal de cloreto de 1,2-Dioleiloxi-3-trime- tilaminopropano), cloreto de N-(1-(2,3-dioleiloxi)propil)-N,N N-trimetila- mônio (DOTMA), N N-dimetil-2,3-dioleiloxi)propilamina (DODMA), ckk- E12, ckk, 1,2-DiLinoleiloxi-N N-dimetilaminopropano (DLinDMA), 1,2- Dilinoleniloxi-N, N-dimetilaminopropano (DLenDMA), 1,2-di-linoleniloxi- N N-dimetilaminopropano (y-DLenDMA), 98N12-5, 1,2-Dilinoleilcarba- moiloxi-3-dimetilaminopropano (DLin-C-DAP), 1,2-Dilinoleiloxi-3-(dime- tilamino)acetoxipropano (DLin-DAC), 1,2-Dilinoleiloxi-3-morfolinopro- pano (DLin-MA), 1,2-Dilinoleoil-3-dimetilaminopropano (DLinDAP), 1,2- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12485/12614

Dilinoleiltio-3-dimetilaminopropano (DLin-S-DMA), 1-Linoleoil-2-linolei- loxi-3-dimetilaminopropano (DLin-2-DMAP), sal de cloreto de 1,2-Dili- noleiloxi-3-trimetilaminopropano (DLin-TMA.CI), ICE (à base de imi- dazol), HGT5000, HGT5001, DMDMA, CLinDMA, CpLinDMA, DMOBA, DOcarbDAP, DLincarbDAP, DLinCDAP, KLin-K-DMA, DLin-K-XTC2- DMA, XTC (2,2-Dilinoleil-4-dimetilaminoetil-[1,3]-dioxolano) HGT4003, sal de cloreto de 1,2-Dilinoleoil-3-trimetilaminopropano (DLin-TAP.CI), 1,2-Dilinoleiloxi-3-(N-metilpiperazino)propano (DLin-MPZ), ou 3-(N,N- Dilinoleilamino)-1,2-propanodiol (DLinAP), 3-(N,N-Dioleilamino)-1,2- propanodiol (DOAP), 1,2-Dilinoleiloxo-3-(2-N N-dimetilamino) etoxipro- pano (DLin-EG-DM A), 2,2-Dilinoleil-4-dimetilaminometil-[1,3]-dioxo- lano (DLin-K-DMA) ou análogos dos mesmos, (3aR,5s,6aS)-N, N-aimetir- 2,2-di((97,12Z)-octadeca-9,12-dienil)tetra-hidro-3aH-ciclopenta[d][1,3] dioxol-5-amina, (62,97Z,28Z,31Z)-heptatriaconta-6,9,28,31-tetraen-19-il- 4-(dimetilamino)butanoato (MC3), ALNY-100 ((3aR,5s,6aS)-N,N-dime- til-2,2-di((972,12Z)-octadeca-9,12-dienil)tetra-hidro-3aH-ciclopenta[d] [1,3]dioxol-5-amina)), 1,1 -(2-(4-(2-((2-(bis(2-hidroxidodecil)amino)etil) (2-hidroxidodecil)amino)etil )piperazin-1-il)etilazanedi-il jdidodecan-2-ol (C12-200), 2,2-dilinoleil-4-(2-dimetilaminoetil)-[1,3]-dioxolano (DLin-K- C2-DMA), 2,2-dilinoleil-4-dimetilaminometil-[1,3]-dioxolano — (DLin-K- DMA), NC98-5 (4,7, 13-tris(3-0x0-3-(undecilamino)propil)-NI N 16- diundecil-4,7, 10,13-tetra-aza-hexadecano-l, 16-diamida), (62,927,287, 31Z)-heptatriaconta-6,9,28,31-tetraen-19-il 4-(dimetilamino) butanoato (DLin-M-C3-DMA), 3-((62,9Z,28Z,31Z)-heptatriaconta-6,9,28,31-tetraen -19-iloxi)-N, N-dimetilpropan-1-amina (éter de MC3), 4-((62,97,28Z, 31Z)- heptatriaconta-6,9,28,31-tetraen-19-iloxi)-N,N-dimetilbutan-1-amina/ (MC4 Ether), LIPOFECTINO (lipossomas catiônicos comercialmente disponí- veis compreendendo DOTMA e 1,2-dioleoil-sn-3fosfoetanolamina (DOPE), da GIBCO/BRL, Grand Island, N.Y.); LIPOFECTAMINAPGO (li- possomas catiônicos comercialmente disponíveis compreendendo N-

'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12486/12614

(1-(2,3dioleiloxi)propil)-N-(2-(esperminacarboxamido)etil)-N N-dimetila- mônio trifluoroacetato (DOSPA) e (DOPE), da GIBCO/BRL); e TRANS- FECTAMO (lipídios catiônicos comercialmente disponíveis compreen- dendo dioctadecilamidoglicil carboxiespermina (DOGS) em etanol da Promega Corp., Madison, Wis.) ou qualquer combinação de quaisquer destes. Outros lipídios catiônicos adequados para uso nas composi- ções e nos métodos da invenção incluem aqueles descritos nas publica- ções de patentes internacionais WO2010/053572 (e particularmente, CI 2-200 descrito no parágrafo [00225]) e WO2012/170930, ambas aqui incorporadas a título de referência, HGT4003, HGT5000, HGTSO001, HGT5001, HGT5002 (vide US20150140070A1).

[00413] Em algumas modalidades, o lipídio é selecionado do grupo que consiste em 98N12-5, C12-200, e ckk-E12.

[00414] Em uma modalidade, o outro lipídio catiônico é um amino lipídio.

[00415] —Amino lipídios representativos incluem, porém sem limita- ção, 1,2-dilinoleiloxi-3-(dimetilamino)acetoxipropano (DLin-DAC), 1,2- dilinoleiloxi-3morfolinopropano — (DLIN-MA), 1,2-dilinoleoil-3-dimetila- minopropano (DLinDAP), 1,2-dilinoleiltio-3-dimetilaminopropano (DLin- S-DMA), 1-linoleoil-2-linoleiloxi-3dimetilaminopropano (DLin-2-DMAP), sal de cloreto de 1,2-dilinoleiloxi-3-trimetilaminopropano (DLin-TMA. CI), sal de cloreto de 1,2-dilinoleoil-3-trimetilaminopropano (DLin-TAP. CI), 1,2-dilinoleiloxi-3-(N-metilpiperazino)propano — (DLin-MPZ), 3- (N,Ndilinoleilamino)-1,2-propanodiol (DLInAP), 3-(N,N-dioleilamino)- 1,2-propanodiol (DOAP), 1,2-dilinoleiloxo-3-(2-N N-dimetilamino) etoxi- propano (DLin-EG-DMA), and 2,2-dilinoleil-4-dimetilaminometil-[1,3]- dioxolano (DLin-K-DMA), 2,2-dilinoleil-4-(2-dimetilaminoetil)-[1,3]-dio- xolano (DLin-KC2-DMA); dilinoleil-metil-4-dimetilaminobutirato (DLin - MC3-DMA); MC3 (US20100324120).

[00416] Em uma modalidade, o RNA codificante do primeiro aspec- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12487/12614 to pode ser formulado como um aminoálcoo! lipidoide.

[00417] Os aminoálcool lipidoides que podem ser usados na pre- sente invenção podem ser preparados pelos métodos descritos na Pa- tente US Nº 8,450,298, cuja íntegra encontra-se aqui incorporada a título de referência. Os lipídios (ionizáveis) adequados também podem ser os compostos apresentados nas Tabelas 1, 2 e 3 e definidos nas reivindicações 1-24 do documento WO2017/075531A1, aqui incorpo- rado a título de referência.

[00418] Em uma outra modalidade, os lipídios ionizáveis também podem ser compostos revelados no documento WOZ2015/074085A1 (i.e., ATX-001 a ATX-032 ou os compostos especificados nas reivindi- cações 1-26), Patente US Nº 61/905,724 e 15/614,499 ou Patentes US Nº 9,593,077 e 9,567,296 cujas íntegras encontram-se aqui incorpora- das a título de referência.

[00419] Neste contexto, qualquer lipídio derivado da fórmula genéri- ca (X1) RO o Ra

DERA ú Ro onde, Ri e R2 são iguais ou diferentes, cada alquil linear ou ramificado consistindo em 1 a 9 carbonos, um alquenila ou alquinil consistindo em 2 a 11 carbonos, Li e L2 são iguais ou diferentes, cada alquileno ou alquenileno linear consistindo em 5 a 18 carbonos, ou formando um heterociclo com N, Xi é uma ligação, ou é -CO-O- formando assim -L2- CO-O-R2, X2 é S ou O, L3 é uma ligação ou um alquileno linear ou ramificado consistindo em 1 a 6 carbonos, ou formando um heterociclo com N, R3 é um um alquileno linear ou ramificado consistindo em 1a 6 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12488/12614 carbonos, e R4 e R 5 são iguais ou diferentes, cada hidrogênio ou al- quil linear ou ramificado consistindo em 1 a 6 carbonos; ou um sal far- maceuticamente aceitável do mesmo pode ser adequadamente usado.

[00420] Em outras modalidades, lipídios catiônicos adequados tam- bém podem ser os compostos revelados no documento WOZ2017/ 117530A1 (i.e., os lipídios 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, ou os compos- tos especificados nas reivindicações), cuja íntegra encontra-se aqui incorporada a título de referência.

[00421] Neste contexto, qualquer lipídio derivado da fórmula genéri- ca (X2) O, p neo Ca À a x N Ú ”R o. x, n onde X é um alquileno ou alquenileno linear ou ramificado, um areno ou heteroareno monocíclico, bicíclico ou tricíclico; Y é uma ligação, um eteno, ou um anel aromático ou hete- roaromático não-substituído ou substituído; Z é S ou O; L é um alquileno linear ou ramificado de 1 a 6 carbonos; R-3 e R4 são independentemente um alquil linear ou ramifi- cado de 1 a 6 carbonos; Ri e R2 são independentemente um alquila ou alquenil line- ar ou ramíificado alquil de 1 a 20 carbonos; ré 0a6;e m, n, p, e q são independentemente 1 a 18; onde quando n=q, m=p, e Ri=R2, então X e Y são diferen- tes; onde quando X=Y, n=q9, m=p, então Ri e R2 são diferentes; onde quando X=Y, n=q, e Ri=R2, então m e p são diferen- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12489/12614 tes; e onde quando X=Y, m=p, e Ri=R2, então n e q são diferen- tes; ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00422] Em modalidades preferidas, pode-se usar um lipídio deriva- do da fórmula (X2), onde, X é uma ligação, alquileno linear ou ramifi- cado, alquenileno, ou areno ou heteroareno monocíclico, bicíclico ou tricíclico; Y é um areno ou heteroareno monocíclico, bicíclico ou tricícli- co; Zé S ou O; L é um alquileno linear ou ramificado de 1 a 6 carbo- nos; R3 e R4 são independentemente um alquil linear ou ramificado de 1 a 6 carbonos; Ri e R2 são independentemente um alquila ou alquenil linear ou ramificado de 1 a 20 carbonos; ré 0 a6; e m,n,p,eqgsão independentemente 1 a 18; ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo pode ser adequadamente usado.

[00423] Em modalidades preferidas, os lipídios ionizáveis podem ser selecionados dentre os lipídios revelados no documento WO2018/ 078053A1 (i.e., lipídios derivados da fórmula |, Il, e Ill do documento WO?2018/078053A1, ou os lipídios especificados nas reivindicações 1 a 12 do documento WOZ2018/078053A1), a descrição do documento WO?2018/078053A1 estando aqui incorporada a título de referência. Neste contexto, os lipídios apresentados na Tabela 7 do documento WO?2018/078053A1 (por exemplo, lipídios derivados da fórmula 1-1 a |- 41) e os lipídios apresentados na Tabela 8 do documento WO2018/ 078053A1 (por exemplo, lipídios derivados da fórmula 11-1 a 11-36) po- dem ser adequadamente usados no contexto da invenção. Por conse- guinte, fórmula |-1 até fórmula 1-41 e fórmula 11-1 até fórmula 11-36 do documento WOZ2018/078053A1, e a descrição específica referente às mesmas estando aqui incorporada a título de referência.

[00424] Nas modalidades particularmente preferidas do segundo aspecto, um lipídio adequado pode ser um lipídio catiônico de acordo 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12490/12614 com a fórmula (Ill) Ro

ARA ou um sal, tautômero, pró-fármaco ou estereoisômero farmaceutica- mente aceitáveis do mesmos, onde, R1, R2,R3,L1,L2, G1, G2, e G3 são como definidos abaixo.

[00425] A fórmula (Ill) é ainda definida por: um de L' ou L? é -O(C=O)-, -(C=0)O-, -C(=O)-, -O-, -S(O)x-, -S-S-, -C(=O)S-, SC(=O)-, -NRºC(=O)-, -C(=O)NRº-, -NRºC(=O)NRº-, -OC (=O)NRº- ou -NRºC(=0)O-, e o outro de L' ou L? é -O(C=O)-, -(C=0) O-, - C(=O)-, -O-, -S(O)x, -S-S-, -C(=O)S-, SC(=O)-, -NRºC(=O)-, -C(=O)NRº-, - NRºC(=O)NRº?-, -OC(=O)NRº?- ou -NRºC(=0)O- ou uma ligação direta; G' e G? são, cada um independentemente, C1-C+12 alquileno ou C1-C12 alquenileno não substituídos; G*? é C1-C2a alquileno, C1-C24 alquenileno, C3-Cg cicloalqui- leno, C3-Cs cicloalquenileno; Rº? é H ou C1-C12 alquila; R' e R? são, cada um independentemente, Ce-C24 alquila ou C6-C>24 alquenila; R? é H, ORó, CN, -C(=0) OR, -OC(=O)Rº ou -NRºC(=O)Rº; Rº é C1-C12 alquila; Rº é H ou C1-Cs alquila; e xéO,1ou2.

[00426] Em algumas das modalidades precedentes da fórmula (Ill), o lipídio tem uma das seguintes estruturas (IIIA) ou (IIIB): R Rº a TT Rare re (IA) ou Ser "ser e (IIIB) onde: 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12491/12614

A é um anel cicloalquila ou cicloalquileno de 3 a 8 membros; R$ é, em cada ocorrência, independentemente H, OH ou C1-C2a alquila; n é um número inteiro variando de 1 a 15.

[00427] Em algumas das modalidades precedentes da fórmula (Ill), o lipídio tem a estrutura (IIIA), e em outras modalidades, o lipídio tem a estrutura (IIIB).

[00428] Em outras modalidades de fórmula (III), o lipídio tem uma das seguintes estruturas (I1IC) ou (IIID): R& Rº R& Rô Edo ROCBLOUL Rr (MC) ou ROO UE OR (IND) onde y e z são, cada um independentemente, números inteiros varian- do de 1 a 12.

[00429] Em qualquer uma das modalidades precedentes de fórmula (111), um de L' ou L? é -O(C=O)-. Por exemplo, em algumas modalida- des cada um de L' e Lº? são -O(C=O)-. Em algumas modalidades dife- rentes de qualquer um dos acima, L' e L? são, cada um independente- mente, -(C=O)O- ou -O(C=O)-. Por exemplo, em algumas modalidades cada um de L' e Lº é -(C=0)O-.

[00430] Em modalidades preferidas do segundo aspecto, o lipídio catiônico da LNP é um composto de fórmula Ill, onde: L' e L? são, cada um independentemente, -O(C=0O)- ou (C=0)-O-; G*? é C1-C2a alquileno ou C1-C24 alquenileno; e R? é H ou OR.

[00431] Em algumas modalidades diferentes de fórmula (III), o lipí- dio tem uma das seguintes estruturas (IIIE) ou (IIIF): 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12492/12614

Ros Ri o No R o e o Y Y (INE) ou AA (INF)

[00432] Em algumas das modalidades precedentes da fórmula (Ill), o lipídio tem uma das seguintes estruturas (I1IG), (IIIH), (III), ou (IIlJ): Re Rô A Re Rô R1 JU R? 9 Di 9 À y z Y Re Ago —R o o qe, y ME o au) Rº O. N O. R? q S 7 AT FE . Agro O O (MM) ou y z (111)

[00433] Em algumas das modalidades precedentes da fórmula (Ill), n é um número inteiro variando de 2 a 12, por exemplo, de 2 a 8 ou de 2 a4. Em algumas modalidades, n é 3, 4, 5 ou 6. Em algumas modali- dades, n é 3. Em algumas modalidades, n é 4. Em algumas modalida- des, n é 5. Em algumas modalidades, n é 6. Em algumas outras das modalidades precedentes de fórmula (Ill), y e z são, cada um indepen- dentemente, um número inteiro variando de 2 a 10. Por exemplo, em algumas modalidades, y e z são, cada um independentemente, um número inteiro variando de 4 a 9 ou de 4 a 6. Em algumas das modali- dades precedentes da fórmula (III), Rô é H. outras das modalidades precedentes, R$ é C1-C24 alquila. Em outras modalidades, Rº é OH. Em algumas modalidades de fórmula (III), Gº é não substituído. Em outras modalidades, G3 é substituído. Em várias modalidades diferentes, Gº é C1-C24 alquileno linear ou C1-C24 alquenileno linear. Em algumas das modalidades precedentes da fórmula (Ill), R' ou R?, ou ambos, é Ce- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12493/12614

C24 alquenila. Por exemplo, em algumas modalidades, R' e R?º têm, independentemente, a seguinte estrutura: Ra H — +

RP onde: R”º e R”?º são, em cada ocorrência, independentemente H ou C1-C12 alquila; e a é um número inteiro de 2 a 12, onde cada um de R”º, R'º e a são selecionados de forma que R* e R? compreendam in- dependentemente de 6 a 20 átomos de carbono. Por exemplo, em al- gumas modalidades a é um número inteiro variando de 5a 9 oude8a

12. Em algumas das modalidades precedentes da fórmula (III), pelo menos uma ocorrência de R”º é H. Por exemplo, em algumas modali- dades, R”º é H em cada ocorrência. Em outras modalidades diferentes da precedente, pelo menos uma ocorrência de R?” é C1-Cs alquila. Por exemplo, em algumas modalidades, C1-Cg alquila é metila, etila, n- propila, iso-propila, n-butila, iso-butila, ter-butila, n-hexila ou n-octila.

[00434] Em modalidades diferentes de fórmula (Ill), R' ou R?, ou ambos, tem uma das seguintes estruturas: KT, CO, UC Do, DOOU, TUTO,

[00435] Em modalidades preferidas do segundo aspecto, o lipídio catiônico da LNP é um composto de fórmula Ill, onde: L' e L? são, cada um independentemente, -O(C=O)- ou (C=0)-O-; e R' e R?, cada um independentemente, têm uma das seguin- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12494/12614 tes estruturas: ROO RU, TOO,

IOOONOOOONOOOOONOO TOTO, ATO

[00436] Em algumas das modalidades precedentes da fórmula (Ill), R? é OH, CN, -C(=0)ORº, -OC(=O)Rº ou -NHC(=O)Rº. Em algumas modalidades, Rº é metila ou etila.

[00437] Em modalidades preferidas do segundo aspecto, o lipídio catiônico da LNP é um composto de fórmula Ill, onde R? é OH.

[00438] Em uma modalidade particularmente preferida do segundo aspecto, o RNA codificante do primeiro aspecto e é complexado com um ou mais lipídios formando assim nanopartículas lipídicas (LNP), onde a LNP é selecionada dentre as estuturas I1l-1 a 111-36 (vide Tabe- la 8). Tabela 8: Compostos lipídicos representativos derivados da fórmula () tome o ea LD o o Nac o 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12495/12614

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ANA 11-22 No 2000 POSCOOO00UOOOS o 11-24 ud 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12498/12614

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[00439] Em algumas modalidades, as LNPs compreendem um lipí- dio de fórmula (Ill), um RNA codificantedo primeiro aspecto, e um ou mais excipientes selecionados dentre lipídios neutros, esteroides e li- pídios peguilados. Em algumas modalidades o lipídio de fórmula (III) é o composto I1Il-3. Em algumas modalidades o lipídio de fórmula (Il) é o composto |ll-7.

[00440] Em modalidades preferidas, a LNP compreende um lipídio catiônico selecionado dentre: 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12500/12614 ou a LT N o o , | o

PACO AOOOS No À “COS | RDI o

POCO OS

FOCO e | DIA o LCOL

POCOS ALTO

[00441] Em uma modalidade particularmente preferida do segundo aspecto, o RNA codificante do primeiro aspecto é complexado com um ou mais lipídios formando assim nanopartículas lipídicas (LNP), onde a LNP compreende o seguinte lipídio catiônico (lipídio de acordo com a fórmula 111-3 da Tabela 8): N o Oo

[00442] Em certas modalidades, o lipídio catiônico definido neste pedido, de preferência apresentado na Tabela 8, mais preferivelmente 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12501/12614

O lipídio catiônico composto 11|-3, está presente na LNP em uma quan- tidade de cerca de 30 a cerca de 95 por cento em mol, em relação ao teor total de lipídio da LNP. Se mais de um lipídio catiônico for incorpo- rado na LNP, tais percentagens também valem para os lipídios catiôni- cos combinados.

[00443] Em uma modalidade, o lipídio catiônico está presente na LNP em uma quantidade de cerca de 30 a cerca de 70 por cento em mol. Em uma modalidade, o lipídio catiônico está presente na LNP em uma quantidade de cerca de 40 a cerca de 60 por cento em mol, tal como cerca de 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59 ou 60 por cento em mol, respectivamente. Nas mo- dalidades, o lipídio catiônico está presente na LNP em uma quantidade de cerca de 47 a cerca de 48 por cento em mol, tal como cerca de 47,0, 47,1, 47,2, 47,3, 47,4, 47,5, 47,6, 47,7, 47,8, 47,9, 50,0 por cento em mol, respectivamente, onde 47,7 por cento em mol é particularmen- te preferido.

[00444] Em algumas modalidades, o lipídio catiônico está presente em uma razão de de cerca de 20% em mol a cerca de 70 ou 75% em mol ou de cerca de 45 a cerca de 65% em mol ou cerca de 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, ou cerca de 70% em mol do lipídio total pre- sente na LNP. Em outras modalidades, as LNPs compreendem de cer- ca de 25% a cerca de 75% em uma base molar de lipídio catiônico, por exemplo, de cerca de 20 a cerca de 70%, de cerca de 35 a cerca de 65%, de cerca de 45 a cerca de 65%, cerca de 60%, cerca de 57,5%, cerca de 57,1%, cerca de 50% ou cerca de 40% em uma base molar (com base em 100% dos moles totais de lipídio na nanopartícula lipídi- ca). Em algumas modalidades, a razão de lipídios catiônico para o RNA codificante do primeiro aspecto é de cerca de 3 a cerca de 15, tal como de cerca de 5 a cerca de 13 ou de cerca de 7 a cerca de 11.

[00445] Em algumas modalidades da invenção a LNP compreende 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12502/12614 uma combinação ou uma mistura de quaisquer dos lipídios descritos acima.

[00446] Outros lipídios (catiônicos ou ionizáveis) adequados estão revelados nos documentos WOZ2Z009/086558, WO2009/127060, WOZ2010/048536, WO2010/054406, WO2010/088537, WO2010/129709, WOZ2011/153493, WO 2013/063468, US2011/0256175, US2012/ 0128760, US2012/0027803, US8158601, WOZ2016/118724, WO2016/ 118725, WO2017/070613, WO2017/070620, WO2017/099823, WO2012/ 040184, WO2011/153120, WO2011/149733, WO2011/090965, WO2011/ 043913, WO2011/022460, WOZ2012/061259, WOZ2012/054365, WO2012/044638, WO2010/080724, WOZ2010/21865, WOZ2008/ 103276, WO2013/086373, WOZ2013/086354, Patentes US Nº 7,893,302, 7,404,969, 8,283,333, 8,466,122 e 8,569,256 e Publicação de Patente US Nº US2010/0036115, US2012/0202871, US2013/ 0064894, US2013/0129785, US2013/0150625, US2013/0178541, US2013/0225836, US2014/0039032 e WO2017/112865. Neste contex- to, as descrições dos documentos WO2009/086558, WO2009/12706860, WO2010/048536, WO2010/054406, WOZ2010/088537, WOZ2010/ 129709, WO2011/153493, WOZ2013/063468, US2011/0256175, US2012/0128760, US2012/0027803, US8158601, WO2016/11872A4, WO?2016/118725, WO?2017/070613, WO?2017/070620, WO2017/099823, WO2012/040184, WO?2011/153120, WO2011/149733, WO?2011/090965, WO?2011/043913, WO2011/022460, WO2012/061259, WO?2012/054365, WO2012/044638, WO?2010/080724, WO?2010/21865, WO2008/103276, WO2013/086373, WO2013/086354, US Patent Nos. 7,893,302, 7,404,969, 8,283,333, 8,466,122 e 8,569,256 e da Publica- ção de Patente US Nº US2010/0036115, US2012/0202871, US2013/0064894, US2013/0129785, US2013/0150625, US2013/0178541, —US2013/0225836 e US2014/0039032 e 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12503/12614

WO?2017/112865 que se referem especificamente a lipídios (catiôni- cos) adequados para LNPs estando aqui incorporadas a título de refe- rência.

[00447] Em algumas modalidades, o lipído é selecionado do grupo que consiste em 98N12-5, C12-200, e ckk-E12.

[00448] Em algumas modalidades, os aminos lipídios e lipídios ca- tiônicos definidos neste pedido possuem pelo menos um grupo proto- nável ou desprotonável, de modo que o lipídio é positivamente carre- gado em um pH ou abaixo do pH fisiológico (por exemplo, pH 7,4), e neutro em um segundo pH, de preferência no pH fisiológico ou acima dele. Ficará, naturalmente entendido que a adição ou remoção de pró- tons em função do pH é um processo de equilíbrio, e que uma menção a um lipídio carregado ou neutro refere-se à natureza da espécie pre- dominante e não requer que todos os lipídios estejam presentes na forma carregada ou neutra. Os lipídios com mais de um grupo protoná- vel ou desprotonável, ou que são zwiteriônicos, não estão excluídos e também podem ser adequados no contexto da presente invenção.

[00449] Em algumas modalidades, os lipídios protonáveis tem um pKa do grupo protonável na faixa de cerca de 4 a cerca de 11, por exemplo, um pKa de cerca de 5 a cerca de 7.

[00450] As LNPs podem compreender dois ou mais lipídios catiôni- cos (diferentes). Os lipídios catiônicos podem ser selecionados para contribuir com diferentes propriedades vantajosas. Por exemplo, lipí- dios catiônicos que diferem em propriedades tais como pKa da amina, estabilidade química, meia-vida na circulação, meia-vida no tecido, acúmulo líquido no tecido, ou toxicidae, podem ser usados na LNP. Em particular, os lipídios catiônicos podem ser escolhidos de forma que as propriedades da LNP mista sejam mais desejáveis que as proprieda- des de uma única LNP de lipídios individuais.

[00451] A quantidade do lipídio permanentemente catiônico ou lipi- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12504/12614 doide deve ser selecionada levando em consideração a quantidade da carga de RNA. Em uma modalidade, essas quantidades são selecio- nadas de forma a resultar em uma razão N/P das nanopartículas ou da composição na faixa de cerca de 0,1 a cerca de 20. Neste contexto, a razão N/P é definida como a razão molar dos átomos de nitrogênio ("N") dos grupos contendo nitrogênio básico do lipídio ou lipidoide para os grupos fosfato ("P") do RNA que é usado como carga. A razão N/P pode ser calculada baseada no fato de que, por exemplo, 1 ug de RNA contém tipicamente cerca de 3 nmoles de resíduos fosfato, desde que o RNA apresente uma distribuição estatística de bases. O valor "N" do lipídio ou lipidoide pode ser calculado com base em seu peso molecu- lar e no teor relativo de grupos permanentemente catiônicos e - se pre- sentes, cationizáveis.

[00452] As características e o comportamento in vivo da LNP po- dem ser modificados por adição de um revestimento polimérico hidrofí- lico, por exemplo, polietileno glicol (PEG), à superfície da LNP para conferir estabilização estérica. Além disso, LNPs podem ser usadas para direcionamento específico fixando ligantes (por exemplo, anticor- pos, peptídios, e carboidratos) a sua superfície ou à extremidade ter- minal das cadeias de PEG fixadas (por exemplo, via lipídios peguila- dos).

[00453] Em algumas modalidades, as LNPs compreendem um lipí- dio conjugado com um polímero. O termo "lipídio conjugado com um polímero" refere-se a uma molécula compreendendo tanto uma porção lipídio quanto uma porção polímero. Um exemplo de um lipídio conju- gado com um polímero é um lipídio peguilado. O termo "lipídio pegui- lado" refere-se a uma molécula compreendendo tanto uma porção lipí- dio quanto uma porção polietileno glicol. Lipídios peguilados são co- nhecidos na literatura e incluem 1-(monometoxi-polietilenoglico!)-2,3- dimiristoilglicerol (PEG-s-DMG) entre outros.

'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12505/12614

[00454] Em certas modalidades, a LNP compreende um lipídio es- tabiliznte adicional que é um polietileno glicol-lipídio (lipídio peguilado). Polietileno glicol-lipídios adequados incluem fosfatidiletanolamina PEG-modificada, ácido fosfatídico PEG-modificado, ceramidas PEG- modificadas (por exemplo, PEG-CerC14 ou PEG-CerC20), dialquilami- nas PEG-modificados, diacilgliceróis PEG-modificados, dialquilglice- róis PEG-modificados. Polietileno glicol-lipídios representativos inclu- em PEG-c-DOMG, PEG-c-DMA, e PEG-s-DMG. Em uma modalidade, o polietileno glicol-lipídio é N-[(metoxi poli(etileno glicol)2000) car- bamil]-1,2-dimiristiloxIpropil-3-amina (PEG-c-DMA). Em uma modali- dade preferida, o polietileno glicol-lipídio é PEG-2000-DMG. Em uma modalidade, o polietileno glicol-lipídio é PEG-c-DOMG). Em outras modalidades, as LNPs compreendem um diacilglicerol peguilado (PEG-DAG) tal como 1-(monometoxi-polietilenoglico!)-2,3-dimiristoil- glicerol (PEG-DMG), uma fosfatidiletanoloamina peguilada (PEG-PE), um PEG succinato diacilglicerol (PEG-S-DAG) tal como 4-O0-(2',3"- di(tetradecanoiloxi)propil-1-O-(w-metoxi(polietoxi)etil)butanodioato (PEG-S-DMG), uma ceramida peguilada (PEG-cer), ou um PEG dial- coxipropilcarbamato tal como w-metoxi(polyetoxi)etil-N-(2,3di(tetra- decanoxi)propil)|carbamato ou 2,3-di(tetradecanoxi)propil-N-(w-metoxi (polyetoxi)etil)carbamato.

[00455] Em modalidades preferidas do segundo aspecto, o RNA codificante do primeiro aspecto é complexado com um ou mais lipídios formando assim nanopartículas lipídicas (LNP), onde a LNP compre- ende adicionalmente a lipídio peguilado with the formula (IV): o “. AL SM) ou um sal, tautômero ou estereoisômero farmaceuticamente aceitável 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12506/12614 do mesmof, onde Rº e Rº são, cada um independentemente, uma ca- deia alquil linear ou ramificada, saturada ou insaturada, contendo de 10 a 30 átomos de carbono, onde a cadeia alquila é opcionalmente inter- rompida por uma ou mais ligações éster; e w tem um valor médio vari- ando de 30 a 60.

[00456] Em algumas das modalidades precedentes do lipídio pegui- lado de acordo com a fórmula (IV), Rê e Rº não são ambos n-octadecil quando w é 42. Em algumas outras modalidades, R$ e Rº são, cada um independentemente, uma cadeia alquil linear ou ramificada, saturada ou insaturada, contendo de 10 a 18 átomos de carbono. Em algumas modalidades, Rô e Rº são, cada um independentemente, uma cadeia alquil linear ou ramificada, saturada ou insaturada, contendo de 12 a 16 átomos de carbono. Em algumas modalidades, Rº e Rº são, cada um independentemente, uma cadeia alquil linear ou ramificada, satura- da ou insaturada, contendo 12 átomos de carbono. Em algumas moda- lidades, Rº e Rº são, cada um independentemente, uma cadeia alquil linear ou ramificada, saturada ou insaturada, contendo 14 átomos de carbono. Em outras modalidades, Rº e Rº são, cada um independen- temente, uma cadeia alquil linear ou ramificada, saturada ou insatura- da, contendo 16 átomos de carbono. Em ainda outras modalidades, Rô e Rº são, cada um independentemente, uma cadeia alquil linear ou ra- mificada, saturada ou insaturada, contendo 18 átomos de carbono. Em ainda outras modalidades, Rº é uma cadeia alquil linear ou ramificada, saturada ou insaturada, contendo 12 átomos de carbono e Rº é uma cadeia alquil linear ou ramificada, saturada ou insaturada, contendo 14 átomos de carbono.

[00457] Em várias modalidades, w cobre um intervalo que é seleci- onado de modo que a porção PEG do lipídio peguilado de acordo com a fórmula (IV) tenha um peso molecular médio de cerca de 400 a cerca de 6000 g/mol. Em algumas modalidades, o w médio é cerca de 50. 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12507/12614

[00458] “Em modalidades preferidas do segundo aspecto, Rº e Rº do lipídio peguilado de acordo com a fórmula (IV) são cadeias alquila sa- turadas.

[00459] Em uma modalidade particularmente preferida do segundo aspecto, o RNA codificante do primeiro aspecto é complexado com um ou mais lipídios formando assim nanopartículas lipídicas (LNP), onde a LNP compreende adicionalmente um lipídio peguilado, onde o PEG- lipídio tem a fórmula (IVa) o

DADA NADA NON

ANA onde n tem um valor médio variando de 30 a 60, tal como cerca de 28 a cerca de 32, cerca de 30 a cerca de 34, 32 a cerca de 36, cerca de 34 a cerca de 38, 36 a cerca de 40, cerca de 38 a cerca de 42, 40 a cerca de 44, cerca de 42 a cerca de 46, 44 a cerca de 48, cerca de 46 a cerca de 50, 48 a cerca de 52, cerca de 50 a cerca de 54, 52 a cerca de 56, cerca de 54 a cerca de 58, 56 a cerca de 60, cerca de 58 a cer- ca de 62. Em modalidades preferidas, n é cerca de 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54. Em uma modalidade mais preferida n tem um valor médio de 49.

[00460] Em outras modalidades, o lipídio peguilado tem uma das seguintes estruturas: o o A O O Fe o >o” Dx o o À N kd PD E. o 1 5 o o TA L O A N À * vP o ko — x À >N À * P & à, 'etição 870210044043, de 14/05/2021, pág. 12508/12614 onde n é um número inteiro selecionado de modo que o peso molecu- lar médio do lipídio peguilado seja cerca de 2500g/mol, mais preferi- velmente n é cerca de 49.

[00461] — Outros exemplos de PEG-lipídios adequados neste contexto estão apresentados nos documentos US2015/0376115A1 e WO2015/ 199952, a íntegra de cada um deles encontrando-se aqui incorporada a título de referência.

[00462] Em algumas modalidades, as LNPs incluem menos de cer- ca de 3, 2, ou 1 por cento em mol de PEG ou lipídio PEG-modificado, com base nos moles totais de lipídio na LNP. Em outras modalidades, as LNPs compreendem de cerca de 0,1% a cerca de 20% do lipídio PEG-modificado em uma base molar, por exemplo, cerca de 0,5 a cer- ca de 10%, cerca de 0,5 a cerca de 5%, cerca de 10%, cerca de 5%, cerca de 3,5%, cerca de 3%, cerca de 2,5%, cerca de 2%, cerca de 1,5%, cerca de 1%, cerca de 0,5%, ou cerca de 0,3% em uma base molar (based on 100% total moles of lipids in the LNP). Em modalida- des preferidas, LNPs compreendem de cerca de 1,0% a cerca de 2,0% do lipídio PEG-modificado em uma base molar, por exemplo, cerca de 1,2 a cerca de 1,9%, cerca de 1,2 a cerca de 1,8%, cerca de 1,3 a cer- ca de 1,8%, cerca de 1,4 a cerca de 1,8%, cerca de 1,5 a cerca de 1,8%, cerca de 1,6 a cerca de 1,8%, em particular cerca de 1,4%, cer- ca de 1,5%, cerca de 1,6%, cerca de 1,7%, cerca de 1,8%, cerca de 1,9%, mais preferivelmente 1,7% (based on 100% total moles of lipids in the LNP). Em várias modalidades, a razão molar do lipídio catiônico para o lipídio peguilado varia de cerca de 100:1 a cerca de 25:1.

[00463] Em modalidades preferidas, a LNP compreende adicional- mente um ou mais lipídios adicionais que estabiliza a formação de par- tículas durante sua formação (por exemplo, lipídio neutro e/ou um ou mais esteroides ou análogos de esteroides).

[00464] Em modalidades preferidas do segundo aspecto, o RNA 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12509/12614 codificante do primeiro aspecto é complexado com um ou mais lipídios formando assim nanopartículas lipídicas (LNP), onde a LNP compre- ende adicionalmente um ou mais lipídios neutros e/ou um ou mais es- teroides ou análogos de esteroides.

[00465] —Lipídios estabilizantes adequados incluem lipídios neutros e lipídios aniônicos. O termo "lipídio neutro" refere-se a qualquer um de inúmeras espécies de lipídio que existem seja em uma forma não car- regada ou em uma forma zwiteriônica neutra no pH fisiológico. Lipídios neutros representativos incluem diacilfosfatidilcolinas, diacilfosfatidile- tanolaminas, ceramidas, esfingomielinas, di-hidro esfingomielinas, ce- falina, ed cerebrosides.

[00466] Nas modalidades do segundo aspecto, a LNP compreende adicionalmente um ou mais lipídios neutros, onde o lipídio neutro é se- lecionado do grupo que compreende diestearoilfosfatidilcolina (DSPC), dioleoilfosfatidilcolina (DOPC), dipalmitoilfosfatidilcolina (DPPC), dio- leoilfosfatidilglicerol (DOPG), dipalmitoilfosfatidilglicerol (DPPG), dio- leoil-fosfatidiletanolamina (DOPE), palmitoiloleoilfosfatidilcolina (POPC), palmitoiloleoil-fosfatidiletanolamina (POPE) e dioleoil-fos- fatidiletanolamina 4-(N-maleimidometil)-ciclo-hexano-1carboxilato (DOPE-mal), dipalmitoil fosfatidil etanolamina (DPPE), dimiristoilfosfo- etanolamina (DMPE), diestearoil-fosfatidiletanolamina (DSPE), 16-O- monometil PE, 16-O-dimetil PE, 18-1-trans PE, 1-estearioil-2-oleoilfos- fatidietanol amina (SOPE), e 1,2-dielaidoil-sn-glicero-3-fosfoetanola- mina (transDOPE), ou misturas dos mesmos.

[00467] Em algumas modalidades, as LNPs compreendem um lipí- dio neutro selecionado dentre DSPC, DPPC, DMPC, DOPC, POPC, DOPE e SM. Em várias modalidades, a razão molar do lipídio catiônico para o lipídio neutro varia de cerca de 2:1 a cerca de 8:1.

[00468] Em modalidades preferidas do segundo aspecto, o lipídio neutro é 1,2-diestearoil-sn-glicero-3-fosfocolina (DSPC). A razão molar 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12510/12614 do lipídio catiônico para DSPC pode variar na faixa de cerca de 2:1 a 8:1.

[00469] Em modalidades preferidas do segundo aspecto, o esteroi- de é colesterol. A razão molar do lipídio catiônico para colesterol pode variar na faixa de cerca de 2:1 a 1:1.

[00470] Em algumas modalidades, o colesterol pode ser peguilado.

[00471] O esterol pode ser cerca de 10% em mol a cerca de 60% em mol ou cerca de 25% em mol a cerca de 40% em mol da partícula lipídica. Em uma modalidade, o esterol é cerca de 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, ou cerca de 60% em mol do lipídio total presente na partícula líquida. Em uma outra modalidade, as LNPs incluem de cerca de 5% a cerca de 50% em uma base molar do esterol, por exemplo, cerca de 15% a cerca de 45%, cerca de 20% a cerca de 40%, cerca de 48%, cerca de 40%, cerca de 38,5%, cerca de 35%, cerca de 34,4%, cerca de 31,5% ou cerca de 31% em uma base molar (com base em 100% dos moles totais de lipídio na nanopartícula lipídica).

[00472] De preferência, nanopartículas lipídicas (LNPs) compreen- dem: (a) pelo menos um RNA codificante do primeiro aspecto, (b) um lipídio catiônico, (c) um agente redutor de agregação (tal como polieti- leno glicol (PEG)-lipídio ou lipídio PEG-modificado), (d) opcionalmente um lipídio não catiônico (tal como um lipídio neutro), e (e) opcional- mente, um esterol.

[00473] Em algumas modalidades, os lipídios catiônicos (definidos acima), os lipídios não catiônicos (definidos acima), colesterol (definido acima), e/ou lipídios PEG-modificados (definidos acima) podem ser combinados em vários razões molares relativas. Por exemplo, a razão de lipídio catiônico para lipídio não catiônico para lipídio à base de co- lesterol para lipídio peguilado pode variar entre cerca de 30-60:20- 35:20-30:1-15, ou em uma razão de cerca de 40:30:25:5, 50:25:20:5, 50:27:20:3, 40:30:20:10, 40:32:20:8, 40:32:25:3 ou 40:33:25:2, ou em 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12511/12614 uma razão de cerca de 50:25:20:5, 50:20:25:5, 50:27:20:3 40:30:20: 10,40:30:25:5 ou 40:32:20:8, 40:32:25:3 ou 40:33:25:2, respectivamen- te.

[00474] Em algumas modalidades, as LNPs compreendem um lipí- dio de fórmula (Ill), pelo menos um RNA codificante definido neste pe- dido, um lipídio neutro, um esteroide e um lipídio peguilado. Em moda- lidades preferidas, o lipídio de fórmula (III) é o composto lipídico I111-3, o lipídio neutro é DSPC, o esteroide is colesterol, e o lipídio peguilado é o composto de fórmula (IVa).

[00475] Em uma modalidade preferida do segundo aspecto, a LNP consiste essencialmente em (i) pelo menos um lipídio catiônico; (ii) um lipídio neutro; (iii) um esterol, por exemplo, colesterol; e (iv) um PEG- lipídio, por exemplo, PEG-DMG ou PEG-cDMA, em uma razão molar de cerca de 20-60% de lipídio catiônico: 5-25% de lipídio neutro: 25- 55% de esterol; 0,5-15% de PEG-lipídio.

[00476] Nas modalidades particularmente preferidas do segundo aspecto, o RNA codificante do primeiro aspecto é complexado com um ou mais lipídios formando assim nanopartículas lipídicas (LNP), onde a LNP consiste essencialmente em (i) pelo menos um lipídio catiônico as defined herein, de preferência um lipídio de fórmula (III), mais preferivelmente o lipídio Ill- 3 (ii) um lipídio neutro definido neste pedido, de preferência 1,2-diestearoil-sn-glicero-3-fosfocolina (DSPC); (iii) um esteroide ou análogo de esteroide definido neste pedido, de preferência colesterol; e (iv) um PEG-lipídio definido neste pedido, por exemplo, PEG-DMG or PEG-cDMA, de preferência um lipídio peguilado de fór- mula (IVa), onde (i) a (iv) estão em uma razão molar de cerca de 20- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12512/12614

60% de lipídio catiônico: 5-25% de lipídio neutro: 25-55% de esterol; 0,5-15% de PEG-lipídio.

[00477] Em uma modalidade preferida, a nanopartícula lipídica compreende: um lipídio catiônico de fórmula (III) e/ou PEG lipídio de fórmula (IV), opcionalmente um lipídio neutro, de preferência 1,2- diestearoil-sn-glicero-3-fosfocolina (DSPC) e opcionalmente um este- roide, de preferência colesterol, onde a razão molar do lipídio catiônico para DSPC is opcionalmente na faixa de cerca de 2:1 a 8:1, onde a razão molar do lipídio catiônico para colesterol varia opcionalmente na faixa de cerca de 2:1 a 1:1.

[00478] Em uma modalidade preferida particular, a composição do segundo aspecto compreendendo o RNA codificante do primeiro as- pecto compreende nanopartículas lipídicas (LNPs, LNP-III-3), que apresentam uma razão molar de aproximadamente 50:10:38,5:1,5, de preferência 47,5:10:40,8:1,7 ou mais preferivelmente 47,4:10:40,9:1,7 (i.e., proporção (% em mol) de lipídio catiônico (de preferência lipídio I111-3), DSPC, colesterol e PEG-lipid ((de preferência PEG-lipídio de fórmula (IVa) com n = 49); solubilizado em etanol).

[00479] A quantidade total de RNA nas nanopartículas lipídicas po- de variar e é definida dependendo, por exemplo, da razão p/p de RNA para lipídios totais. Em uma modalidade da invenção a razão de RNA codificante para lipídios totais é menor que 0,06 p/p, de preferência entre 0,03 p/p e 0,04 p/p.

[00480] Em algumas modalidades, a composição do segundo as- pecto compreendendo o RNA do primeiro aspecto compreende nano- partículas lipídicas (LNPs), que são compostas de apenas três compo- nentes lipídicos, a saber, imidazol colesterol éster (ICE), 1,2-dioleoil- sn-glicero-3-fosfoetanolamina (DOPE), e 1,2-dimiristoil-sn-glicerol, me- toxipolietileno glicol (DMG-PEG-2K)

[00481] Em várias modalidades, uma LNP definida neste pedido 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12513/12614 tem um diâmetro médio de cerca de 50 nm a cerca de 200 nm, de cer- ca de 60 nm a cerca de 200 nm, de cerca de 70 nm a cerca de 200 nm, de cerca de 80 nm a cerca de 200 nm, de cerca de 90 nm a cerca de 200 nm, de cerca de 90 nm a cerca de 190 nm, de cerca de 90 nm a cerca de 180 nm, de cerca de 90 nm a cerca de 170 nm, de cerca de 90 nm a cerca de 160 nm, de cerca de 90 nm a cerca de 150 nm, de cerca de 90 nm a cerca de 140 nm, de cerca de 90 nm a cerca de 130 nm, de cerca de 90 nm a cerca de 120 nm, de cerca de 90 nm a cerca de 100 nm, de cerca de 70 nm a cerca de 90 nm, de cerca de 80 nm a cerca de 90 nm, de cerca de 70 nm a cerca de 80 nm, ou cerca de 30 nm, 35 nm, 40 nm, 45 nm, 50 nm, 55 nm, 60 nm, 65 nm, 70 nm, 75 nm, 80 nm, 85 nm, 90 nm, 95 nm, 100 nm, 105 nm, 110 nm, 115 nm, 120 nm, 125 nm, 130 nm, 135 nm, 140 nm, 145 nm, 150 nm, 160 nm, 170 nm, 180 nm, 190 nm, ou 200 nm e é substancialmente atóxica. Con- forme usado neste pedido, o diâmetro médio pode ser representado pela média z segundo determinada por espalhamento de luz dinâmico comumente conhecido na literatura.

[00482] O índice de polidispersidade (PDI) das nanopartículas varia tipicamente na faixa de 0,1 a 0,5. Em uma modalidade particular, o PDI é menor que 0,2. Tipicamente, o PDI é determinado por espalhamento de luz dinâmico.

[00483] Em uma outra modalidade preferida da invenção as nano- partículas lipídicas têm um diâmetro hidrodinâmico na faixa de cerca de 50 nm a cerca de 300 nm, ou de cerca de 60 nm a cerca de 250 nm, de cerca de 60 nm a cerca de 150 nm, ou de cerca de 60 nm a cerca de 120 nm, respectivamente.

[00484] Em uma outra modalidade preferida da invenção as nano- partículas lipídicas têm um diâmetro hidrodinâmico na faixa de cerca de 50 nm a cerca de 300 nm, ou de cerca de 60 nm a cerca de 250 nm, de cerca de 60 nm a cerca de 150 nm, ou de cerca de 60 nm a cerca 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12514/12614 de 120 nm, respectivamente.

[00485] Nas modalidades em que mais de um ou uma pluralidade, por exemplo, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 dos RNAs do primeiro aspecto estão compreendidos na composição, o referido mais de um ou a referida plufalidade, por exemplo, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 dos RNAs podem ser complexados dentro de um ou mais lipídios formando assim LNPs compreendendo mais de um ou uma pluralidade, por exemplo, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, de RNAs diferentes.

[00486] Nas modalidades, as LNPs descritas neste pedido podem ser liofilizadas para melhorar a estabilidade da formulação e/ou do RNA ao armazenamento. Nas modalidades, as LNPs descritas neste pedido podem ser secadas por aspersão para melhorar a estabilidade da formulação e/ou do RNA ao armazenamento. Lioprotetores para liofilização e ou para secagem por aspersão podem ser selecionados dentre trealose, sacarose, manose, dextrana e inulina.

[00487] Em uma modalidade, uma nanopartícula lipídica usada na invenção compreende um lipídio catiônico, um esteroide; um lipídio neutro; e um lipídio conjugado com um polímero, de preferência a lipí- dio peguilado. De preferência, o lipídio conjugado com um polímero é um lipídio peguilado ou PEG-lipídio. Em uma modalidade específica, nanopartículas lipídicas compreendem um lipídio catiônico parecido com o lipídio catiônico COATSOMEO SS-EC (nome anterior: SS- 33/4PE-15; NOF Corporation, Tóquio, Japão), de acordo com a seguin- te fórmula NAODAOSOÔSAOS POCO o ”

Í WA Õ AI

LUA LDA ASOÔSAODÔADASDÓDAOSS Pos PR. o 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12515/12614

[00488] “Como descrito mais adiante, essas nanopartículas lipídicas são denominadas "GNO1".

[00489] Além disso, em uma modalidade específica, as nanopartícu- las lipídicas GNO01 compreendem um lipídio neutro parecido com a es- trutura 1,2-difitanoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina (DPhyPE): CH3 CHs CHs CH; OQ o AAA AAA -P- e EO

NOOÇÓODOÇYOAOAXA CH; CH; CH;3 CH; O

[00490] Além disso, em uma modalidade específica, as nanopartícu- las lipídicas GNO01 compreendem um lipídio conjugado com um políme- ro, de preferência um lipídio peguilado, sendo 1,2-dimiristoil-rac- glicero-3-metoxipolietileno glicol 2000 (DMG-PEG 2000) tendo a se- guinte estrutura: o IODO eo” DOODODOIODOI,

[00491] “Conforme usado na literatura, "DMG-PEG 2000" é conside- rado uma mistura de 1,2-DMG PEG2000 e 1,3-DMG PEG2000 na ra- zão de —97:3.

[00492] “Por conseguinte, as nanopartículas lipídicas GNO01 (GN01- LNP's) de acordo com uma das modalidades preferidas compreendem um lipídio catiônico SS-EC, um lipídio neutro DPhyPE, colesterol, e o lipídio conjugado com um polímero (lipídio peguilado) 1,2-dimiristoil- rac-glicero-3-metoxipolietileno glicol (PEG-DMG).

[00493] Em uma modalidade preferida, as LNPs GNO1 compreen- dem: (a) o lipídio catiônico SS-EC (nome anterior: SS-33/4PE-15; NOF Corporation, Tóquio, Japão) em uma quantidade de 45-65% em 'etição 870210044043, de 14/05/2021, pág. 12516/12614 mol; (b) colesterol em uma quantidade de 25-45% em mol; (c) DPhyPE em uma quantidade de 8-12% em mol; e (d) PEG-DMG 2000 em uma quantidade de 1-3% em mol; cada quantidade sendo em relação à quantidade molar total de todos os excipientes lipídicos das nanopartículas lipídicas GN01.

[00494] Em uma outra modalidade preferida, as nanopartículas lipí- dicas GN01 descritas neste pedido compreendem 59% em mol de lipí- dio catiônico, 10% em mol de lipídio neutro, 29,3% em mol de esteroi- de e 1,7% em mol de lipídio conjugado a um polímero, de preferência lipídio peguilado. Em uma modalidade mais preferida, as nanopartícu- las lipídicas GN01 descritas neste pedido compreendem 59% em mol de lipídio catiônico SS-EC, 10% em mol de DPhyPE, 29,3% em mol de colesterol e 1,7% em mol de DMG-PEG 2000.

[00495] A quantidade do lipídio catiônico em relação àquela do composto de mRNA na nanopartícula lipídica GNO1 também pode ser expressa como uma razão em peso (abreviada f.e. "m/m"). Por exem- plo, as nanopartículas lipídicas GNO01 compreendem o composto de MRNA em uma quantidade tal para atingir uma razão em peso de lipí- dio para mRNA na faixa de cerca de 20 a cerca de 60, ou cerca de 10 a cerca de 50. Em outras modalidades, a razão de lipídio catiônico pa- ra ácido nucleico ou mRNA varia de cerca de 3 a cerca de 15, tal como de cerca de 5 a cerca de 13, de cerca de 4 a cerca de 8 ou de cerca de 7 a cerca de 11. Em uma modalidade muito preferida da presente in- venção, a razão em massa de lipídios totais/MRNA é de cerca de 40 ou 40, i.e., cerca de 40 ou 40 vezes o excesso de massa para garantir o encapsulamento do mMRNA. Uma outra razão preferida de RNA/lipídio varia entre cerca de 1 and cerca de 10, cerca de 2 e cerca de 5, cerca de 2 e cerca de 4, ou é de preferência cerca de 3.

[00496] Ainda, a quantidade do lipídio catiônico pode ser seleciona- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12517/12614 da levando em conta a quantidade da carga de ácidos nucleicos tal como o composto de mRNA. Em uma modalidade, a razão N/P pode variar na faixa de cerca de 1 a cerca de 50. Em uma outra modalidade, a faixa varia de cerca de 1 a cerca de 20, cerca de 1 a cerca de 10, cerca de 1 a cerca de 5. Em uma modalidade preferida, estas quanti- dades são selecionadas de forma a resultar em uma razão N/P das nanopartículas lipídicas GNO01 ou da composição na faixa de cerca de a cerca de 20. Em uma outra modalidade muito preferida, a N/P é 14 (i.e., 14 vezes o excesso molar de carga positiva para garantir o en- capsulamento do MRNA).

[00497] Uma modalidade particularmente preferida para uma nano- partícula lipídica GNO01 da presente invenção se dá quando 59% em mol de lipídio catiôênico COATSOMEO SS-EC (nome anterior: SS- 33/4PE-15 como evidente a partir da seção exemplos; NOF Corpora- tion, Tóquio, Japão), 29,3% em mol de colesterol como esteroide, 10% em mol de DPhyPE como lipídio neutro / fosfolipídio e 1,7% em mol de DMG-PEG 2000 como lipídio conjugado com um polímero. A referida composição de LNP é, neste pedido e nos exemplos práticos, chama- da de "GNO1". SS-EC tem uma carga positiva em pH 4 e uma carga neutra em pH 7, o que é vantajoso para as LNPs e formulações / com- posições da presente invenção. Uma outra vantagem da invenção rela- cionada ao uso de DPhyPE é a grande capacidade de fusogenicidade por causa de suas caudas volumosas, por meio das quais ele é capas de se fundir em um alto nível com lipídios endossômicos. Para "GNO1", a N/P (razão molar de lipídio para MRNA) é de preferência 14 e razão em massa de lipídios totais/MRNA é de preferência 40 (m/m). Adjuvantes:

[00498] “De acordo com outras modalidades, a composição do se- gundo aspecto pode compreender pelo menos adjuvante. Adequada- mente, o adjuvante é de preferência acrescentado para melhorar as 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12518/12614 propriedades imumoestimulatodoras da composição.

[00499] O termo "adjuvante" conforme usado neste pedido será re- conhecido e entendido pelo especialista na técnica, e destina-se a in- dicar, por exemplo, a um agente farmacológico e/ou imunológico que pode modificar, por exemplo, melhorar, o efeito de outros agentes (aqui: o efeito do RNA codificante) ou que pode ser adequado para dar suporte à administração e distribuição da composição. O termo "adju- vante" refere-se a um amplo espectro de substâncias. Tipicamente, essas substâncias são capazes de aumentr a imunogenicidade de an- tígenos. Por exemplo, os adjuvantes podem ser reconhecidos pelos sistemas imunológicos inatos e, por exemplo, podem provocar uma resposta imunológica inata (isto é, uma resposta imunológica inespecií- fica). Os "adjuvantes" tipicamente não provocam uma resposta imuno- lógica adaptativa. No contexto da invenção, os adjuvantes podem me- lhorar o efeito do peptídio ou proteína antigênica apresentada pelo RNA codificante. Neste contexto, pelo menos um adjuvante pode ser selecionado dentre qualquer adjuvante conhecido pelo especialista na técnica e adequado para o presente caso, i.e., dar suporte à indução de uma resposta imunológica em um indivíduo, por exemplo, em um indivíduo humano.

[00500] — Por conseguinte, a composição do segundo aspecto pode compreender pelo menos um adjuvante, onde pelo menos um adjuvan- te pode ser adequadamente selecionado dentre qualquer adjuvante apresentado no documento WO2016/203025. Os adjuvantes revelados em qualquer uma das reivindicações 2 a 17 do documento WO2016/ 203025, de preferência os adjuvantes revelados na reivindicação 17 do documento WO2016/203025 são particularmente adequados, o teor específico referente às mesmas estando aqui incorporado a título de referência.

[00501] A composição do segundo aspecto pode compreender, 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12519/12614 além dos componentes especificados neste pedido, pelo menos um outro componente que pode ser selecionado do grupo que consiste em outros antígenos (por exemplo, na forma de um peptídio ou proteína) ou outros ácidos nucleicos codificantes de antígenos; um outro agente imunoterapêutico; uma ou mais substâncias auxiliares (citocinas, tais como monocinas, linfocinas, interleucinas ou quimiocinas); ou qualquer outro composto, que seja sabidamente imunoestimulante devido a sua afinidade de ligação (como ligandos) para receptores Toll-like huma- nos; e/ou um ácido nucleico adjuvante, de preferência um RNA imu- noestimulador RNA (isRNA), por exemplo, CpG-RNA etc. Vacina:

[00502] Em um terceiro aspecto, a presente invenção apresenta uma vacina contra malária onde a vacina compreende o RNA codifi- cante do primeiro aspecto, e, opcionalmente, a composição do segun- do aspecto.

[00503] —Extraordinariamente, as modalidades referentes à composi- ção do segundo aspecto também podem ser lidas e entendidas como modaliades adequadas da vacina do terceiro aspecto. Ainda, as moda- lidades referentes à vacina do terceiro aspecto também podem ser li- das e entendidas como modaliades adequadas da composição do se- gundo aspecto (compreendendo o RNA do primeiro aspecto).

[00504] O termo "vacina" será reconhecido e entendido pelo espe- cialista na técnica, e destina-se a ser, por exemplo, um material profilá- tico ou terapêutico apresentando pelo menos um epítopo ou antígeno, de preferência um imunógeno. No contexto da invenção o antígeno ou a função antigênica é fornecido pela RNA codificante inventivo do pri- meiro aspecto (o referido RNA compreendendo uma sequência codifi- cadora codificando um peptídio ou proteína antigênica derivada da CSP) ou a composição do segundo aspecto (compreendendo o RNA do primeirot aspecto.

'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12520/12614

[00505] Em modalidades preferidas do terceiro aspecto, a vacina compreendendo o RNA do primeiro aspecto ou a composição do se- gundo aspecto, provoca uma resposta imunológica adaptativa, de pre- ferência uma resposta imunológica adaptativa contra um parasita da malária.

[00506] Em modalidades preferidas do terceiro aspecto, a vacina compreendendo o RNA do primeiro aspecto ou a composição do se- gundo aspecto induz respostas imunológicas humoral e celular fortes, de preferência respostas de células T CD4+ e CD8+ fortes.

[00507] De acordo com uma modalidade preferida do terceiro as- pecto, a vacina definida neste peido pode compreender ainda um car- reador farmaceuticamente aceitável e opcionalmente om um adjuvante como especificado no contexto do segundo aspecto.

[00508] —Adjuvantes adequados neste contexto podem ser selecio- nados dentre os adjuvantes revelados na reivindicação 17 do docu- mento WO2016/203025.

[00509] Em uma modalidade preferida, a vacina é uma vacina mo- novalente.

[00510] Nas modalidades a vacina é uma vacina polivalente com- preendendo uma pluralidade ou pelo menos mais de uma espécie do RNA codificante definido no contexto do primeiro aspecto. As modali- dades referentes a uma composição polivalente revelada no contexto do segundo aspecto também podem ser lidas e etendidas como moda- lidades adequadas da vacina polivalente do terceiro aspecto.

[00511] A vacina do terceiro aspecto compreende tipicamente uma quantidade segura e eficaz do RNA codificante do primeiro aspecto. Conforme usado neste pedido, "quantidade segura e eficaz" significa ma quantidade do RNA codificante que é suficiente para induzir signifi- cativamente uma modificação positiva de uma doença ou distúrbio re- lacionado com uma infecção pelo parasita da malária. Ao mesmo tem- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12521/12614 po, uma "quantidade segura e eficaz" é pequena o bastante para evitar efeitos colaterais graves. Em relação à vacina or composição da pre- sente invenção, a expressão "quantidade segura e eficaz" significa de preferência uma quantidade do RNA codificante que é adequada para estimular o sistema imunológico adaptativo de maneira que não ocor- ram reações imunes excessivas ou prejudiciais, porém, de preferência, nenhuma dessas reações imunes abaixo de um nível mensurável.

[00512] Uma "quantidade segura e eficaz" do RNA codificante d composição ou vacina definida acima vai ainda variar de acordo com a condição particular a ser tratada e também com a idade e a condição física do paciente a ser tratado, da gravidade da condição, da duração do tratamento, da natureza da terapia concomitante, do carreador far- maceuticamente aceitável particular usado, e fatores similares, dentro do conhecimento e da experiência do médico assistente. Além disso, a "quantidade segura e eficaz" do RNA codificante, da composição, da vacina pode depender da via de aplicação (intradérmica, intramuscu- lar), do dispositivo de aplicação (injeção de jato, injeção com agulha, patch com microagulhas) e/ou da complexação (complexação com pro- tamina ou encapsulamento em LNP). Além disso, a "quantidade segura e eficaz" do RNA codificante, da composição, da vacina pode depen- der da condição do indivíduo tratado (criança, mulher grávida, indivíduo humano imunocomprometido etc.). Por conseguinte, a "quantidade se- gura e eficaz" adequada precisa ser adaptada de acordo com e será escolhida e definida pelo especialista.

[00513] Em algumas modalidades, a "quantidade segura e eficaz" é uma dose equivalente a uma redução de pelo menos 2 vezes, pelo menos 4 vezes, pelo menos 10 vezes, pelo menos 100 vezes, pelo menos 1000 vezes a dose padrão de cuidado de uma vacina de proteí- na recombinante contra malária, onde o título de anticorpos polipeptí- dicos anti-antigênicos produzidos no indivíduo é equivalente ao título 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12522/12614 de anticorpos polipeptídicos anti-antigênicos produzidos em um indiví- duo de controle que recebera a dose padrão de cuidado de uma vacina de proteína recombinante contra malária, uma vacina de proteína puri- ficada contra malária, uma vacina viva atenuada contra malária, uma vacina inativada contra malária ou uma vacina de VLP contra malária. Em algumas modalidades, o controle é o título de anticorpos polipeptí- dicos anti-antigênicos produzidos em um indivíduo que recebera uma vacina de partículas semelhantes ao vírus (VLP) compreendendo pro- teínas estruturas da malária.

[00514] A vacina pode ser usada de acordo com a invenção para finalidades médicas em humanos e também para finalidades médicas veterinários (em mamíferos, vertebrados, espécies aviárias), como uma composição farmacêutica, ou como uma vacina.

[00515] Por conseguinte, o carreador farmaceuticamente aceitável conforme usado neste pedido de preferência inclui a base líquida ou não líquida da vacina da invenção. Se a vacina da invenção for apre- sentada na forma líquida, o carreador será água; água tipicamente livre de pirogênio; solução salina isotônica ou soluções (aquosas) tampona- das, por exemplo, soluções tamponadas com fosfato, citrato etc.. De preferência, a solução de Ringer com lactato é usada como uma base líquina para a vacina ou a composição de acordo com a invenção co- mo descrito no documento WOZ2006/122828, a descrição referente a soluções tamponadas adequadas estando aqui incorporadas a título de referência.

[00516] A escolha de um carreador farmaceuticamente aceitável definido neste pedido é determinada, em princípio, pela maneira com que a composição farmacêutica ou vacina de acordo com a invenção é administrada. A vacina é de preferência administrada localmente. Vias para administração local em geral incluem, por exemplo, vias para ad- ministração tópica, mas também injeção intradérmica, transdérmica, 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12523/12614 subcutânea ou intramuscular, ou injeção intralesional, intracraniana, intrapulmonar, intracardíaca, intra-articular e sublingual. Mais preferi- velmente, a composição ou vacina de acordo com a presente invenção pode ser administrada por uma via intradérmica, subcutânea, ou intra- muscular, de preferência por injeção, que pode ser injeção sem agulha e/ou com agulha. As composições/vacinas são, portanto, de preferên- cia formuladas em uma forma líquida ou sólida. A quantidade adequa- da da vacina ou composição de acordo com a invenção a ser adminis- trada pode ser determinada por experimentos de rotina, por exemplo, usando modelos animais. Tais modelos incluem, porém sem limitação, modelos de coelho, ovelha, camundongo, rato, cachorro e primatas não humanos. As formas de dosagem unitária preferidas para injeção incluem soluções aquosas estéreis, solução salina fisiológica ou mistu- ras das mesmas. O pH destas soluções deve ser ajustado em cerca de 7,4. Carreadores adequados para injeção incluem hidrogéis, dispositi- vos para liberação controlada ou retardada, matrizes de ácido polilácti- co e colágeno.

[00517] A vacina ou composição inventiva definida neste pedido po- de compreender adicionalmente uma ou mais substâncias auxiliares definidas acima a fim de aumentar ainda mais a imunogenicidade. Uma ação sinergística do RNA codificante contido na composi- ção/vacina inventiva e de uma substância auxiliar, que pode ser opcio- nalmente co-formulada (ou formulada separadamente) com a vacina ou composição inventiva descrita acima, é de preferência obtida dessa maneira. Tais agentes ou compostos aumentadores de imunogenicida- de podem ser apresentados separadamente (não co-formulados com a vacina ou composição inventiva) e administrados individualmente.

[00518] Outros aditivos que podem ser incluídos na vacina ou com- posição inventiva são emulsificantes tal como, por exemplo, Tween; agentes umectantes tal como, por exemplo, lauril sulfato de sódio; 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12524/12614 agentes colorantes; agentes flavorizantes; carreadores farmacêuticos; agentes formadores de comprimidos; estabilizantes; antioxidantes; conservantes. Kit ou kit de partes, aplicação, usos médicos, método de tratamen- to:

[00519] Em um quarto aspecto, a presente invenção apresenta um kit ou kit de partes, onde o Kit ou kit de partes compreende o RNA codi- ficante do primeiro aspecto, a composição do segundo aspecto (com- preendendo o referido RNA), e/ou a vacina do terceiro aspecto. Além disso, o kit ou kit de partes do quarto aspecto pode compreender um veículo líquido para solubilização, e/ou instruções técnicas fornecendo informações sobre a administração e a dosagem dos componentes.

[00520] O kit pode compreender ainda componentes adicionais descritos no contexto da composição do segundo aspecto, e/ou da va- cina do terceiro aspecto.

[00521] As instruções técnicas do referido kit podem conter informa- ções sobre a administração e a dosagem e os grupos de pacientes. Tais kits, de preferência kits de partes, podem ser aplicados, por exemplo, para qualquer uma das aplicações ou usos mencionados neste pedido, de preferência para uso do RNA codificante do primeiro aspecto, da composição do segundo aspecto, ou da vacina do terceiro aspecto, para o tratamento ou a profilaxia de uma infecção ou doença causada por um parasita da malária ou distúrbios relacionados à mes- ma. De preferência, o RNA codificante do primeiro aspecto, a compo- sição do segundo aspecto, ou a vacina do terceiro aspecto é apresen- tada em uma parte separada do kit, onde o RNA codificante do primei- ro aspecto, a composição do segundo aspecto, ou a vacina do terceiro aspecto é de preferência liofilizada. O kit pode conter ainda como uma parte um veículo (por exemplo, solução tampão) para solubilizar o RNA codificante do primeiro aspecto, a composição do segundo aspecto, ou 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12525/12614 a vacina do quinto aspecto.

[00522] Em modalidades preferidas, o kit ou kit de partes definido neste pedido compreende solução de Ringer com lactato.

[00523] “Qualquer um dos kits acima pode ser usado em um trata- mento ou profilaxia descrita neste pedido. Mais preferivelmente, qual- quer um dos kits acima pode ser usado como uma vacina, de preferên- cia uma vacina contra infecções causadas por um parasita da malária definido neste pedido. Uso médico:

[00524] Em um outro aspecto, a presente invenção refere-se ao primeiro uso médico do RNA codificante do primeiro aspecto, da com- posição do segundo aspecto, da vacina do terceiro aspecto, ou do kit ou kit de partes do quarto aspecto.

[00525] — Por conseguinte, o RNA do primeiro aspecto, a composição do segundo aspecto, a vacina do terceiro aspecto, ou o kit ou kit de partes do quarto aspecto é para uso como um medicamento.

[00526] A presente invenção apresenta ainda diversas aplicações e usos do RNA codificante do primeiro aspecto, da composição do se- gundo aspecto, da vacina do terceiro aspecto, ou do kit ou kit de partes do quarto aspecto.

[00527] Em particular, o referido RNA, composição, vacina, ou o kit ou kit de partes pode ser usado para finalidades médicas em humanos e também para finalidades médicas veterinárias, de preferência paa finalidades médicas em humanos.

[00528] Em particular, o referido RNA, composição, vacina, ou o kit ou kit de partes é para uso como um medicamento para finalidades médicas em humanos, onde o referido RNA, composição, vacina, ou o kit ou kit de partes pode ser particularmente adequado para crianças, recém-nascidos, receptores imunocomprometidos, assim como mulhe- res grávidas e lactantes e idosos.

'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12526/12614

[00529] Em ainda um outro aspecto, the present invention refere-se ao segundo uso médico do RNA codificante do primeiro aspecto, à composição do segundo aspecto, à vacina do terceiro aspecto, ou ao kit ou kit de partes do quarto aspecto.

[00530] Nas modalidades, o RNA do primeiro aspecto, a composi- ção do segundo aspecto, a vacina do terceiro aspecto, ou o kit ou kit de partes do quarto aspecto é para uso no tratamento ou na profilaxia de uma infecção por um patógeno (por exemplo, a protozoan parasite), em particular por um parasita da malária, ou um distúrbio relacionado com tal infecção.

[00531] Nas modalidades, o RNA do primeiro aspecto, a composi- ção do segundo aspecto, a vacina do terceiro aspecto, ou o kit ou kit de partes do quarto aspecto é para uso no tratamento ou na profilaxia de uma infecção por um parasita da malária, em particular por Plas- modium falciparum (Pf), Plasmodium knowlesi (Pk), Plasmodium ovale (Po), Plasmodium simiovale (Ps), e Plasmodium vivax (Pv), Plasmodi- um malariae (Pm), Plasmodium ovale curtisi (Poc), Plasmodium ovale wallikeri (Pow), ou Plasmodium berghei (Pb).

[00532] Em modalidades preferidas, o RNA do primeiro aspecto, a composição do segundo aspecto, a vacina do terceiro aspecto, ou o kit ou kit de partes do quarto aspecto é para uso no tratamento ou na pro- filaxia de uma infecção por Plasmodium falciparum (Pf).

[00533] Em particular, o RNA do primeiro aspecto, a composição do segundo aspecto, a vacina do terceiro aspecto, ou o kit ou kit de partes do quarto aspecto pode ser usado no tratamento ou na profilaxia de uma infecção por um parasita da malária, em particular por Plasmodi- um falciparum (Pf), Plasmodium knowlesi (Pk), Plasmodium ovale (Po), Plasmodium simiovale (Ps), e Plasmodium vivax (Pv), Plasmodium malariae (Pm), Plasmodium ovale curtisi (Poc), Plasmodium ovale wal- likeri (Pow), ou Plasmodium berghei (Pb), ou um distúrbio relacionado 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12527/12614 com tal infecção, para finalidades médicas em humanos e também pa- ra finalidades médicas veterinárias, de preferência para finalidades médicas em humanos.

[00534] Conforme usado neste pedido, "um distúrbio relacionado com uma infecção por malária" pode de preferência compreender um sintoma típico ou uma complicação de uma infecção por malária.

[00535] — Particularmente, o RNA codificante do primeiro aspecto, a composição do segundo aspecto, a vacina do terceiro aspecto, ou o kit ou kit de partes do quarto aspecto pode ser usado em um método pro- filático (profilaxia antes de exposição ou profilaxia após exposição) e/ou no tratamento terapêutico de infecções cauadas por um parasita da malária.

[00536] A composição ou a vacina definida neste pedido pode ser de preferência administrada localmente. Em particular, a composição ou vacina pode ser administrada por uma via intradérmica, subcutânea, intranasal, ou intramuscular. As composições ou vacinas inventivas da invenção são, portanto, formuladas de preferência em uma forma líqui- da (ou às vezes sólida). Nas modalidades, a vacina inventiva pode ser administrada por injeção com agulha convencional ou por injeção de jato sem agulha. É preferível neste contexto que o RNA, a composition, a vacina seja administrada por injeção intramuscular com agulha.

[00537] O termo "injeção de jato", conforme usado neste pedido, refere-se a um método de injeção sem agulha, onde o líquido (vacina, composição da invenção) contendo, por exemplo, pelo menos um RNA do primeiro aspecto é forçado através de um orifício, gerando assim uma corrente ultra-fina de líquido de alta pressão que é capaz de pene- trar a pele de um mamífero, dependendo da configuração da injeção, do tecido subcutâneo ou tecido muscular. Em princípio, a corrente de líquido perfura a pele, através da qual a corrente de líquido é forçada para dentro do tecido alvo. De preferência, a injeção de jato é usada 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12528/12614 para injeção intradérmica, subcutânea ou intramuscular do RNA, das comps, das vacinas reveladas neste pedido.

[00538] “Nas modalidades, o RNA compreendido em uma composi- ção ou vacina definida neste pedido é apresentado em uma quantidade de cerca de 100 ng a cerca de 500 ug, em uma quantidade de cerca de 1 ug a cerca de 200 ug, em uma quantidade de cerca de 1 ug a cerca de 100 ug, em uma quantidade de cerca de 5 ug a cerca de 100 ug, de preferência em uma quantidade de cerca de 10 ug a cerca de 50 ug, specifically, em uma quantidade de cerca de 5 ug, 10 ug, 15 ug, 20 ug, ug, 30 ug, 35 ug, 40 ug, 45 ug, 50 ug, 55 ug, 60 ug, 65 ug, 70 ug, 75 ug, 80 ug, 85 ug, 90 ug, 95 ug or 100 ug.

[00539] Em algumas modalidades, a vacina compreendendo o RNA codificante é formulada em uma quantidade eficaz para produzir uma resposta imunológica antígeno-específica em um indivíduo. Em algu- mas modalidades, a quantidade eficaz é uma dose total de 1 ug a 200 ug, 1 ug a 100 ug, ou 5 ug a 100 ug.

[00540] Em algumas modalidades, o indivíduo tem cerca de 5 anos de idade ou menos. Por exemplo, o indivíduo pode ter entre cerca de 1 ano e cerca de 5 anos (por exemplo, cerca de 1, 2, 3, 4 ou 5 anos), ou entre cerca de 6 meses e cerca de 1 ano (por exemplo, cerca de 6, 7, 8, 9, 10, 11 ou 12 meses). Em algumas modalidades, o indivíduo tem cerca de 12 meses ou menos (por exemplo, 12, 11, 10, 9,8,7,6,5,4, 3, 2 meses ou 1 mês). Em algumas modalidades, o indivíduo tem cer- ca de 6 meses ou menos.

[00541] Em algumas modalidades, o indivíduo é um adulto entre as idades de cerca de 20 anos e cerca de 50 anos (por exemplo, cerca de 20, 25, 30, 35, 40, 45 ou 50 anos). Em algumas modalidades, o indiví- duo é um idoso de cerca de 60 anos, cerca de 70 anos, ou mais (por exemplo, cerca de 60, 65, 70, 75, 80, 85 ou 90 anos).

[00542] Em algumas modalidades, o indivíduo fora exposto à malá- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12529/12614 ria

[00543] “Dependendo da via de aplicação (intradérmica, intramuscu- lar, intranasal), dispositivo de aplicação (injeção de jato, injeção com agulha, patch com microagulhas) e/ou complexação (de preferência encapsulamento em LNP) e o grupo de pacientes, a quantidade ade- quada precisa ser adaptada de acordo e será escolhida e definida pelo especialista.

[00544] Em uma modalidade, o protocolo de imunização para o tra- tamento ou a profilaxia de um indivíduo contra malária compreende uma única dose da composição ou da vacina.

[00545] Em algumas modalidades, a quantidade eficaz é uma dose de 5 ug administrada ao indivíduo em uma vacinação. Em algumas modalidades, a quantidade eficaz é uma dose de 10 ug administrada ao indivíduo em uma vacinação. Em algumas modalidades, a quanti- dade eficaz é uma dose de 20 ug administrada ao indivíduo em uma vacinação. Em algumas modalidades, a quantidade eficaz é uma dose de 30 ug administrada ao indivíduo em uma vacinação. Em algumas modalidades, a quantidade eficaz é uma dose de 40 ug administrada ao indivíduo em uma vacinação. Em algumas modalidades, a quanti- dade eficaz é uma dose de 50 ug administrada ao indivíduo em uma vacinação. Em algumas modalidades, a quantidade eficaz é uma dose de 100 ug administrada ao indivíduo em uma vacinação. Em algumas modalidades, a quantidade eficaz é uma dose de 200ug administrada ao indivíduo em uma vacinação.

[00546] Em modalidades preferidas, o protocolo de imunização para o tratamento ou a profilaxia de uma infecção definida neste pedido, i.e., a imunização de um indivíduo contra malária, compreende tipicamente uma série de doses ou dosagens únicas da composição ou da vacina. Uma dosagem única, conforme usado neste pedido, refere-se à dose inicial/primeira dose, uma segunda dose ou quaisquer doses adicio- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12530/12614 nais, respectivamente, que são de preferência administradas com a finalidade de "reforçar" a reação imunológica.

[00547] Em modalidades preferidas, o protocolo de imunização para o tratamento ou a profilaxia de uma infecção definida neste pedido, i.e., a imunização de um indivíduo contra malária, compreende um intervalo de injeção prolongado entre a primeira imunização (imunização inicial) e a segunda imunização (imunização de reforço).

[00548] Os inventores conseguiram mostrar que um intervalo pro- longado entre a vacinação inicial e de reforço pode resultar em respos- tas imunológicas humorais aumetadas (vide, por exemplo, Exemplo 12).

[00549] Em outras modalidades preferidas, o protocolo de imuniza- ção para o tratamento ou a profilaxia de uma infecção definida neste pedido, compreende um intervalo de injeção prolongado entre a primei- ra imunização (imunização inicial) no dia O e a segunda imunização (imunização de reforço no dia 56.

[00550] — Em algumas modalidades, a quantidade eficaz é uma dose de 5 ug administrada ao indivíduo um total de duas vezes. Em algumas modalidades, a quantidade eficaz é uma dose de 10 ug administrada ao indivíduo um total de duas vezes. Em algumas modalidades, a quantidade eficaz é uma dose de 20 ug administrada ao indivíduo um total de duas vezes. Em algumas modalidades, a quantidade eficaz é uma dose de 30 ug administrada ao indivíduo um total de duas vezes. Em algumas modalidades, a quantidade eficaz é uma dose de 40 ug administrada ao indivíduo um total de duas vezes. Em algumas moda- lidades, a quantidade eficaz é uma dose de 50 ug administrada ao in- divíduo um total de duas vezes. Em algumas modalidades, a quantida- de eficaz é uma dose de 100 ug administrada ao indivíduo um total de duas vezes. Em algumas modalidades, a quantidade eficaz é uma do- se de 200 ug administrada ao indivíduo um total de duas vezes.

'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12531/12614

[00551] Em modalidades preferidas, a vacina/composição imuniza o indivíduo contra malária (por exemplo, P. falciparum, P. vivax, P. mala- riae e/ou P. ovale) por mais de 2 anos, mais de 3 anos, mais de 4 anos, ou por 5-10 anos. Método de tratamento e uso, método de diagnóstico e uso:

[00552] Em um outro aspecto, a presente invenção refere-se a um método de tratamento ou prevenção de um distúrbio. Em modalidades preferidas, a presente invenção refere-se a um méto- do de tratamento ou prevenção de um distúrbio, onde o método com- preende aplicar ou administrar a um indivíduo com necessidade do mesmo o RNA do primeiro aspecto, a composição do segundo aspec- to, a vacina do terceiro aspecto, ou o kit ou kit de partes do quarto as- pecto.

[00553] Em modalidades preferidas, o distúrbio é uma infecção por um parasita da malária, em particular por Plasmodium falciparum (Pf), Plasmodium knowlesi (Pk), Plasmodium ovale (Po), Plasmodium simi- ovale (Ps), e Plasmodium vivax (Pv), Plasmodium malariae (Pm), Plasmodium ovale curtisi (Poc), Plasmodium ovale wallikeri (Pow), ou Plasmodium berghei (Pb), ou um distúrbio relacionado com tal infec- ção.

[00554] Em modalidades preferidas, a presente invenção refere-se a um método de tratamento ou prevenção de um distúrbio definido acima, onde o método compreende aplicar ou administrar a um indiví- duo com necessidade do mesmo o RNA codificante do primeiro aspec- to, a composição do segundo aspecto, a vacina do terceiro aspecto, ou O kit ou kit de partes do quarto aspecto, onde o indivíduo com necessi- dade é de preferência um indivíduo mamífero. Nas modalidades parti- cularmente preferidas, o indivíduo mamífero é um indivíduo humano, particularmente uma criança, um recém-nascido, uma mulher grávida, uma mulher lactante, um idoso, ou um indivíduo humano imunocom- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12532/12614 prometido.

[00555] Em particular, tal como método pode de preferência com- preender as etapas de: a) apresentar o RNA codificante do primeiro aspecto, a composição do segundo aspecto, a vacina do terceiro aspecto, ou o kit ou kit de partes do quarto aspecto; b) aplicar ou administrar o referido RNA do primeiro aspec- to, a composição do segundo aspecto, a vacina do terceiro aspecto, ou O kit ou kit de partes do quarto aspecto a um tecido ou a um organis- mo; c) opcionalmente, administrar imunoglobulina (IgGs) contra um parasita da malária; d) opcionalmente, administrar uma outra substância (adju- vante, substância auxiliar, outro antígeno, vacina).

[00556] — De acordo com um outro aspecto, a presente invenção tam- bém apresenta um método para expressão de um pelo menos um poli- peptídio compreendendo pelo menos um peptídio ou proteína derivada de um parasita da malária, ou um fragmento ou variante das mesmas, onde o método de preferência compreende as seguintes etapas: a) apresentar o RNA codificante do primeiro aspecto ou a composição do segundo aspecto; e b) aplicar ou administrar o referido RNA codificante ou a composição a uma sistema de expressão (células), um tecido, um or- ganismo.

[00557] O método pode ser aplicado em laboratório, para pesquisa, para diagnóstico, para produção comercial de peptídios ou proteínas e/ou para fins terapêuticos. O método pode ser ainda realizado no con- texto do tratamento de uma doença específica, particularmente no tra- tamento de doenças infecciosas, particularmente infecções por malá- ria.

'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12533/12614

[00558] — Ainda, de acordo com um outro aspecto, a presente inven- ção também apresenta o uso do RNA codificante do primeiro aspecto, da composição do segundo aspecto, da vacina do terceiro aspecto, ou do kit ou kit de partes do quarto aspecto de preferência para fins diag- nósticos ou terapêuticos, por exemplo, para expressão de um peptídio ou proteína antigênica codificada de malária, por exemplo, por aplica- ção ou administração do referido RNA codificante, da composição compreendendo o referido RNA codificante, da vacina compreendendo o referido RNA codificante, por exemplo, a um sistema de expressão sem células, uma célula (por exemplo, uma célula hospedeira de ex- pressão ou uma célula somática), um tecido ou um organismo. Em modalidades específicas, a aplicação ou administração do referido RNA codificante, da composição compreendendo o referido RNA codi- ficante, da vacina compreendendo o referido RNA codificante a um te- cido ou a um organismo é seguida, por exemplo, por uma etapa de ob- tenção de anticorpos induzidos contra malária, por exemplo, anticorpos (monoclonais) específicos para malária.

[00559] O uso pode ser em um laboratório (diagnóstico), em pes- quisa, em diagnóstico, na produção comercial de peptídios, proteínas, ou anticorpos contra malária e/ou para fins terapêuticos. O uso pode ser feito in vitro, in vivo or ex vivo. O uso pode ser ainda no contexto do tratamento de uma doença específica, particularmente no tratamento de uma infecção por malária ou de um distúrbio relacionado. Lista de modalidades / itens preferidos

[00560] A seguir, apresentamos modalidades particularmente prefe- ridas (itens 1-58) da invenção. Itens

1. Um RNA codificante para uma vacina compreendendo a) pelo menos uma região não transladada 5' heteróloga (5-UTR) e/ou pelo menos uma região não transladada 3' heteróloga 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12534/12614

(3-UTR); e b) pelo menos uma sequência codificadora operacionalmen- te ligada à referida 3-UTR e/ou 5-UTR codificando pelo menos uma proteína antigênica derivada da proteína circunsporozoíta (CSP) de um parasita da malária, ou um fragmento imunogênico ou variante imuno- gênica do mesmo:

2. RNA codificante do item 1, onde o parasita da malária é selecionado dentre Plasmodium falciparum (Pf), Plasmodium knowlesi (Pk), Plasmodium ovale (Po), Plasmodium simiovale (Ps), ou Plasmo- dium vivax (Pv).

3. RNA codificante dos itens 1 ou 2, onde o parasita da ma- lária é Plasmodium falciparum (Pf), de preferência Plasmodium falci- parum 3D7.

4. RNA codificante de qualquer um dos itens 1 a 3, onde a sequência codificadora codifica pelo menos uma proteína antigênica da CSP de um parasita da malária sendo idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica a qualquer uma das SEQ ID NOs: 1- 36, 2081-2120, 2481-2886, 8742-8753, 10080-10085, ou de um frag- mento imunogênico ou variante imunogênica do mesmo.

5. RNA codificante de qualquer um dos itens 1 a 4, onde a sequência codificadora codifica pelo menos uma CSP de comprimento mais integral ou um fragmento imunogênico ou variante imunogênica do mesmo.

6. RNA codificante de qualquer um dos itens 1 a 5, onde a sequência codificadora adicionalmente codificada pelo menos um ele- mento peptídicos ou proteicos heterólogo selecionado dentre um pep- tídio sinal heterólogo, um ligante, um epítopo auxiliar, um domínio de conglomeração de antígenos, ou um domínio transmembrana.

7. RNA codificante do item 6, onde o peptídio sinal heteró- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12535/12614 logo é derivado dentre SPARC de acordo com a SEQ ID NO: 6208, Hslns-iso1 de acordo com a SEQ ID NO: 6207, HsSALB de acordo com a SEQ ID NO: 6205, ou IgE de acordo com a SEQ ID NO: 6206, ou fragmento ou variante de qualquer um destes, onde HsALB é particu- larmente preferido.

8. RNA codificante do item 6, onde o elemento ligante é o elemento de (L) selecionado dnetre as SEQ ID NOs: 6241-6244, 10141, 10147.

9. RNA codificante do item 8, onde pelo menos um elemen- to ligante combina pelo menos um epítopo de célula T derivado de CSP de preferência selecionado dentre sequências de acordo com as SEQ ID NOs: 2100, 2101, 2102, 2113, 10083, 10084 com um fragmen- to de CSP e/ou onde o fragmento de CSP é de preferência combinado com um terminal C de acordo com Ligante(AAY) Pf-CSP(310-327) Ligante(AAY) Pf-CSP(346-375), —Ligante(AAY) Pf-CSP(346-365) Ligante(AAY) PADRE, —Ligante(AAY) Pf-CSP(310-327) Ligante (AAY) Pf-CSP(346-375) — Ligante(G4S) Pf-CSP(310-327) Pf-CSP (346-375), —Ligante(G4S) Pf-CSP(310-327) Ligante(G4S) Pf-CSP (346-375).

10. RNA codificante do item 6, onde o epítopo auxiliar é de- rivado dentre o peptídio auxiliar P2 de acordo com a SEQ ID NO: 6272, o peptídio auxiliar PADRE de acordo com a SEQ ID NO: 6273, HBsAg de acordo com a SEQ ID NO: 6274, ou fragmento ou variante de qualquer um destes.

11. RNA codificante do item 6, onde o domínio de conglo- meração de antígenos é derivado dentre ferritina de acordo com a SEQ ID NO: 10162, Lumazina-sintase (LS) de acordo com a SEQ ID NO: 10153, antígeno de superfície do vírus da hepatite B (HBsAg) de acor- do com a SEQ ID NO: 6274, ou fragmento ou variante de qualquer um destes.

'etição 870210044043, de 14/05/2021, pág. 12536/12614

12. RNA codificante do item 6, onde o domínio transmem- brana é derivado dentre um domínio transmembrana de HA de acordo com a SEQ ID NOs: 6302, ou fragmento ou variante do mesmo.

13. RNA codificante de qualquer um dos itens precedentes, onde pelo menos uma proteína antigênica compreende, de preferência da direção N-terminal para a direção C-terminal: a) opcionalmente, uma sequência sinal secretora heteróloga selecionada dentre as SEQ ID NOs: 6205-6208; b) pelo menos uma proteína derivada de CSP de um parasi- ta da malária, ou fragmentos ou variantes do mesmo; c) opcionalmente, pelo menos um epítopo auxiliar heterólo- go selecionado dentre as SEQ ID NOs: 6272, 6273, or 62740u frag- mentos ou variantes do mesmo; d) opcionalmente, pelo menos um domínio de conglomera- ção de antígenos heterólogo selecionado dentre as SEQ ID NOs: 6274, 10153, 10162, ou fragmentos ou variantes do mesmo, and e) opcionalmente, pelo menos um domínio transmembrana heterólogo selecionado dentre as SEQ ID NOs: 6302 ou fragmentos ou variantes do mesmo, onde a), b), c), d) e/ou e) podem ser conectados de prefe- rência via pelo menos um elemento ligante peptídico selecionado den- tre as SEQ ID NOs: 6241-6244, 10141, 10147.

14. RNA codificante de qualquer um dos itens precedentes, onde pelo menos uma proteína antigênica derivada da proteína cir- cunspozoroíta (CSP) de um parasita da malária, ou um fragmento imu- nogênico ou variante imunogênica do mesmo, é mutado para deletar pelo menos um sítio de glicosilação previsto ou em potencial.

15. RNA codificante de qualquer um dos itens precedentes, onde pelo menos uma sequência codificadora codifica pelo menos uma sequências de aminoácidos sendo idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12537/12614

85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica a qualquer uma das SEQ ID NOs: 1-36, 2081-2120, 2481-2886, 8742-8753, 10080, ou um fragmento imunogê- nico ou uma variante imunogênica de qualquer uma destas.

16. RNA codificante de qualquer um dos itens precedentes, onde pelo menos uma sequência codificadora compreende pelo menos uma sequência de ácidos nucleicos sendo idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica a qualquer uma das SEQ ID NOs: 37-328, 2121-2480, 2887-6134, 8754-8855, 10086-10139 ou um fragmento ou variante de qualquer uma destas sequências.

17. RNA codificante de qualquer um dos itens precedentes, onde pelo menos uma sequência codificadora compreende pelo menos uma modificação química ou pelo menos um nucleotídio modificado, de preferência selecionado dentre pseudouridina (w), Ni-metilpseu- douridina (m1y), 5-metilcitosina, and 5-metoxiuridina.

18. RNA codificante de qualquer um dos itens precedentes, onde pelo menos uma sequência codificadora é uma sequência codifi- cadora códon-modificada, onde a sequência de aminoácidos codifica- da pela pelo menos uma sequência codificadora códon-modificada de preferência não é modificada em relação à sequência de aminoácidos codificada pela sequência codificadora do tipo selvagem correspon- dente.

19. RNA codificante de acordo com o item 18, onde pelo menos uma sequência codificadora códon-modificada é selecionada dentre sequência codificadora C-maximizada, sequência codificadora CAl-maximizada, sequência codificadora adaptada ao uso de códons humanos, sequência codificadora teor de G/C-modificada, e sequência codificadora G/C-otimizada, ou qualquer combinação das mesmas.

20. RNA codificante dos itens 18 ou 19, onde pelo menos 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12538/12614 uma sequência codificadora compreende uma sequência codificadora códon-modificada compreendendo uma sequência de ácidos nucleicos sendo idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica a qualquer uma das SEQ ID NOs: : 41-328, 2161-2480, 3293-6134, 8754-8855, 10092-10139 ou um fragmento ou variante de qualquer uma destas sequências.

21. RNA codificante de qualquer um dos itens 18 a 20, onde pelo menos uma sequência codificadora compreende uma sequência codificadora códon-modificada compreendendo uma sequência de áci- dos nucleicos sendo idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica a qualquer uma das SEQ ID NOs: 41-328, 8754-8855 ou um fragmento ou variante de qualquer uma destas sequências.

22. RNA codificante de qualquer um dos itens 18 to 121, onde pelo menos uma sequência codificadora compreende uma se- quência codificadora G/C-otimizada compreendendo uma sequência de ácidos nucleicos sendo idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica a qualquer uma das SEQ ID NOs: 41-112, 2161- 2240, 3293-3698, 8754-8783, 10092-10103 ou um fragmento ou vari- ante de qualquer uma destas sequências.

23. RNA codificante de qualquer um dos itens precedentes, onde o RNA codificante é um mMRNA, um RNA auto-replicante, um RNA circular, ou um RNA replicon.

24. RNA codificante de qualquer um dos itens precedentes, onde o RNA codificante é um mRNA.

25. RNA codificante de qualquer um dos itens precedentes, onde o RNA codificante compreende uma estrutura 5'-cap, de prefe- rência m7G, capo, cap1, cap2, uma estrutura capo modificada ou uma 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12539/12614 estrutura cap1 modificada, onde cap1 é preferida.

26. RNA codificante de qualquer um dos itens precedentes, onde o RNA compreende pelo menos uma sequência de poli(A), de preferência compreendendo 30 a 150 nucleotídeos adenosina e/ou pe- lo menos uma sequência de poli(C), de preferência compreendendo 10 a 40 nucleotídeos citosina, onde sequências de poli(A) com cerca de 64 nucleotídeos adenosina (A64) ou cerca de 100 nucleotídeos adeno- sina (A100) são preferidas.

27. RNA codificante de qualquer um dos itens precedentes, onde o RNA compreende pelo menos uma sequência de poli(A) locali- zada (exatamente no terminal 3' do RNA codificante.

28. RNA codificante de qualquer um dos itens precedentes, onde o RNA compreende pelo menos uma alça-tronco de histona, on- de a alça-tronco histona de preferência compreende uma sequência de ácidos nucleicos de acordo com as SEQ ID NOs: 6173 ou 6174 ou um fragmento ou variante das mesmas.

29. RNA codificante de qualquer um dos itens precedentes, onde pelo menos uma 3'-UTR heteróloga compreende uma sequência de ácidos nucleicos derivada de uma 3'-UTR de um gene selecionado dentre PSMB3, ALB7, alfa-globina, CASP1, COX6B1, GNAS, NDUFA1 e RPS9, ou de um homólogo, um fragmento ou uma variante de qual- quer um destes genes.

30. RNA codificante de qualquer um dos itens precedentes, onde pelo menos uma 5'-UTR heteróloga compreende uma sequência de ácidos nucleicos derivada de uma 5'-UTR de um gene selecionado dentre HSD17B4, RPL32, ASAH1, ATPSA1, MP68, NDUFAA4, NOSIP, RPL31, SLC7A3, TUBB4B e UBQLN?2, ou de um homólogo, um frag- mento ou uma variante de qualquer um destes genes.

31. RNA codificante de qualquer um dos itens precedentes, compreendendo 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12540/12614 a-1. pelo menos uma 5"-UTR derivada de uma 5-UTR de um gene HSD17BA4, ou de uma sequência de RNA correspondente, homólogo, fragmento ou variante do mesmo e pelo menos uma 3-UTR derivada de uma 3-UTR de um gene PSMB3, ou de uma sequência de RNA correspondente, homólogo, fragmento ou variante do mesmo; ou a-3. pelo menos uma 5"-UTR derivada de uma 5-UTR de um gene SLC7A3, ou de uma sequência de RNA correspondente, ho- mólogo, fragmento ou variante do mesmo e pelo menos uma 3-UTR derivada de uma 3-UTR de um gene PSMB3, ou de uma sequência de RNA correspondente, homólogo, fragmento ou variante do mesmo; ou i-2. pelo menos uma 5'-UTR derivada de uma 5"-UTR de um gene RPL32, ou de uma sequência de RNA correspondente, homólo- go, fragmento ou variante do mesmo e pelo menos uma 3'-UTR deri- vada de uma 3-UTR de um gene ALB7, ou de uma sequência de RNA correspondente, homólogo, fragmento ou variante do mesmo; ou i-3. pelo menos uma 3'-UTR derivada de uma 3-UTR de a alfa-globina gene gene, ou de uma sequência de RNA correspondente, homólogo, fragmento ou variante do mesmo.

32. RNA codificante de qualquer um dos itens precedentes, onde o RNA codificante compreende os seguintes elementos de prefe- rência na direção de 5' para 3': A) uma estrutura 5'-cap selecionada dentre m7G(5'), m7G(5')ppp(5')(2!/OMeA), ou m7G(5')ppp(5')(2'OMeG); B) um elemento de início 5'-terminal selecionado dentre as SEQ ID NOs: 6177 ou 6178 ou fragmentos ou variantes do mesmo; C) opcionalmente, um sítio de clivagem para uma molécula de ácido nucleico catalítica, de preferência como especificado neste pedido; D) opcionalmente, uma 5-UTR selecionada dentre as SEQ ID NOs: 6135-6156 ou fragmentos ou variantes do mesmo; 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12541/12614

F) um sítio de ligação de ribossomas selecionado dentre as SEQ ID NOs: 6175, 6176 ou fragmentos ou variantes do mesmo; E) pelo menos uma sequência codificadora selecionada dentre as SEQ ID NOs: 37-328, 2121-2480, 2887-6134, 8754-8855, 10086-10139 ou fragmentos ou variantes do mesmo; F) uma 3-UTR selecionada dentre as SEQ ID NOs: 6157 a 6172; G) opcionalmente, uma sequência de poli(A) compreen- dendo cerca de 50 a cerca de 500 adenosinas; H) opcionalmente, uma sequência de poli(A) compreen- dendo cerca de 10 a cerca de 100 citosinas; |) opcionalmente, uma alça-tronco de histona selecionada dentre as SEQ ID NOs: 6173 ou 6174; J) opcionalmente, um elemento de sequência 3 -terminal de SEQ ID NOs: 6179-6200, 10173-10196.

33. RNA codificante de qualquer um dos itens precedentes, onde o RNA codificante compreende os seguintes elementos de prefe- rência na direção de 5' para 3': A) uma estrutura 5'-cap selecionada dentre m7G(5'), m7G(5')ppp(5')(2!/OMeA), ou m7G(5')ppp(5')(2'OMeG); B) um elemento de início 5'-terminal selecionado dentre as SEQ ID NOs: 6177 ou 6178 ou fragmentos ou variantes do mesmo; C) um elemento de 3'-UTR e/ou 5-UTR de acordo com a-1, a-2, a-3, a-4, a-5, b-1, b-2, b-3, b-4, b-5, c-1, c-2, c-3, c-4, c-5, d-1, d-2, d-3, d-4, d-5, e-1, e-2, e-3, e-4, e-5, e-6, f-1, f-2, f-3, f-4, f-5, g-1, g-2, g- 3, g-4, g-5, h-1, h-2, h-3, h-4, h-5, i-1, i-2, ou i-3, como especificado neste pedido, onde a-1, a-3, i-2, i-3 são preferidos; D) um sítio de ligação de ribossomas selecionado dentre as SEQ ID NOs: 6175, 6176 ou fragmentos ou variantes do mesmo; E) pelo menos uma sequência codificadora selecionada 'etição 870210044043, de 14/05/2021, pág. 12542/12614 dentre as SEQ ID NOs: 37-328, 8754-8855 ou fragmentos ou variantes do mesmo; G) uma sequência de poli(A) compreendendo cerca de 50 a cerca de 500 adenosinas, de preferência cerca de 64 or 100 adenosi- nas; H) opcionalmente, uma sequência de poli(A) compreen- dendo cerca de 10 a cerca de 100 citosinas, de preferência cerca de citosinas; |) opcionalmente, uma alça-tronco de histona selecionada dentre as SEQ ID NOs: 6173 or 6174.

34. RNA codificante de qualquer um dos itens precedentes, onde o RNA codificante compreende os seguintes elementos de prefe- rência na direção de 5' para 3': A) uma estrutura 5'-cap selecionada dentre m7G(5'), m7G(5')ppp(5')(2!OMeA), or m7 G(5')ppp(5')(2!/OMeG); B) um elemento de início 5'-terminal selecionado dentre as SEQ ID NOs: 6177 ou 6178 ou fragmentos ou variantes do mesmo; C) um elemento de 3'-UTR e/ou 5-UTR de acordo com a-1, a-3, i-2, 1-3; D) um sítio de ligação de ribossomas selecionado dentre as SEQ ID NOs: 6175, 6176 ou fragmentos ou variantes do mesmo; E) pelo menos uma sequência codificadora selecionada dentre as SEQ ID NOs: 44, 80, 116, 152, 188, 224, 260, 296, 8755 (HsSALB Pf-CSP(19-397)) ou fragmentos ou variantes do mesmo; G) uma sequência de poli(A) compreendendo cerca de 50 a cerca de 500 adenosinas, de preferência cerca de 64 or 100 adenosi- nas; H) opcionalmente, uma sequência de poli(A) compreen- dendo cerca de 10 a cerca de 100 citosinas, de preferência cerca de 30 citosinas; 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12543/12614

|) opcionalmente, uma alça-trnco de histona selecionada dentre as SEQ ID NOs: 6173 ou 6174.

35. RNA codificante de qualquer um dos itens precedentes, onde o RNA codificante compreende ou consiste em uma sequência de RNA que é idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idên- tica a uma sequência de ácidos nucleicos selecionado do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 329-2080, 6312-8741, 8856-10079, ou um fragmento ou variante de qualquer uma destas sequências.

36. Uma composição compreendendo pelo menos um RNA codificante como definido em qualquer um dos itens 1 a 25, onde a composição opcionalmente compreende pelo menos um carreador farmaceuticamente aceitável.

37. Composição do item 36, onde pelo menos um RNA co- dificante é complexado ou associado ou pelo menos parcialmente complexado ou parcialmene associado a um ou mais compostos catiô- nicos ou policatiônicos, de preferência um polímero catiônico ou polica- tiônico, um polissacarídeo catiônico ou policatiônico, um lipídio catiôni- co ou policatiônico, uma proteína catiônica ou policatiônica, um peptí- dio catiônico ou policatiônico, ou quaisquer combinações dos mesmos.

38. Composição do item 37, onde pelo menos um RNA co- dificante é complexado ou associado a um ou mais lipídios, formando assim lipossomas, nanopartículas lipídicas, lipoplexos, e/ou nanolipos- somas.

39. Composição do item 38, onde pelo menos um RNA co- dificante é complexado com um ou mais lipídios formando assim nano- partículas lipídicas (LNP).

40. Composição do item 39, onde a LNP consiste essenci- almente em (i) pelo menos um lipídio catiônico; 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12544/12614

(ii) pelo menos um lipídio neutro; (iii) pelo menos um esteroide ou análogo de esteroide; e (iv) pelo menos um PEG-lipídio, onde (i) a (iv) estão em uma razão molar de cerca de 20-60% de lipídio catiônico, 5-25% de lipídio neutro, 25-55% de este- rol, e 0,5-15% de PEG-lipídio.

41. Composição do item 40, onde a LNP compreende um |li- pídio catiônico de acordo com a fórmula I11-3: ou a LT o

NC o (111-3)

42. Composição de qualquer um dos itens 40 a 41, onde a LNP compreende um PEG-lipídio, onde o PEG-lipídio é de fórmula (IVa): o

DADA NADA NON

PAO (IVa) onde n tem um valor médio variando de 30 a 60, de pre- ferência onde n tem um valor médio de cerca de 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, mais preferivelmente onde n tem um valor médio de 49.

44. Composição de qualquer um dos itens 40 a 43, onde a LNP compreende um ou mais lipídios neutros e/ou um ou mais esteroi- des ou análogos de esteroides.

45. Composição do item 44, onde o lipídio neutro é 1,2- diestearoil-sn-glicero-3-fosfocolina (DSPC), de preferência onde a ra- zão molar do lipídio catiônico para DSPC varia na faixa de cerca de 2:1 a cerca de 8:1.

'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12545/12614

46. Composição do item 44, onde o esteroide é colesterol, de preferência onde a razão molar do lipídio catiônico para colesterol varia na faixa de cerca de 2:1 a cerca de 1:1

47. Composição do item 40, onde a LNP compreende COATSOMEO SS-EC.

48. Composição de qualquer um dos itens 40 e 47, onde a LNP compreende um PEG-lipídio, onde o PEG-lipídio é DMG-PEG

2000.

49. Composição de qualquer um dos itens 40 e 47 a 48, on- de a LNP compreende ainda 1,2-difitanoil-sn-glicero-3-fosfoetano- lamina (DPhyPE) e colesterol.

50. Composição dos itens 40 a 49, onde as LNPs são de preferência selecionadas dentre LNP-GNO1 ou LNP-I11-3.

51. Uma vacina compreendendo o RNA codificante definido em qualquer um dos itens 1 a 35, ou a composição definida em qual- quer dos itens 36 a 50.

52. Vacina do item 51, onde a vacina provoca uma resposta imunológica adaptativa.

53. Um kit ou kit de partes, compreendendo o RNA codifi- cante as definido em qualquer um dos itens 1 a 35, a composição defi- nida em qualquer um dos itens 36 a 50, e/ou a vacina definida em qualquer um dos itens 51 a 52, opcionalmente compreendendo um veí- culo líquido para solubilização, e, opcionalmente, instruções técnicas fonecendo informações sobre a administração e a dosagem dos com- ponentes.

54. RNA codificante definido em qualquer um dos itens 1 a 35, a composição definida em qualquer um dos itens 36 a 50, a vacina definida em qualquer um dos itens 51 a 52, ou o kit ou kit de partes de- finido no item 53, para uso como um medicamento.

55. RNA codificante definido em qualquer um dos itens 1 a 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12546/12614

35, a composição definida em qualquer um dos itens 36 a 50, a vacina definida em qualquer um dos itens 51 a 52, ou o kit ou kit de partes de- finido no item 53, para uso no tratamento ou na profilaxia de malária, ou de um distúrbio relacionado com tal infecção.

56. Método para o tratamento ou a prevenção de um distúr- bio, onde o método compreende aplicar ou administrar a um indivíduo com necessidade do mesmo o RNA codificante definido em qualquer um dos itens 1 a 35, a composição definida em qualquer um dos itens 36 a 50, a vacina definida em qualquer um dos itens 51 a 52, ou o kit ou kit de partes definido no item 53.

57. Método do item 56, onde o distúrbio é uma infecção por malária, ou um distúrbio relacionado com tal infecção.

58. Método dos itens 56 a 57, onde o indivíduo com neces- sidade é um indivíduo mamífero, de preferência um indivíduo humano.

Breve descrição das listas e tabelas Lista 1: Parasitas da malária/espécie e sub-espécie de Plasmodium com os respectivos IDs no NCBI Taxonomy Lista 2: Números NCBI de acesso de proteína de antígenos de malária adequados Tabela 1: Desenhos preferidos de antígenos de CSP Tabela 2: Tabela de uso de códons humanos com as fre- quências indicadas para cada aminoácido Tabela A: Antígenos de CSP e respectivas sequências co- dificadoras Tabela 3: Fragmentos de CSP e respectivas sequências codificadoras Tabela 4: Elementos heterólogos e respectivas sequências codificadoras Tabela 5: Sequências codificadoras preferidas da invenção Tabela 6A: Construtos de mRNA preferidos codificando a 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12547/12614 csP

Tabela 6B: Construtos de mRNA preferidos codificando a csP

Tabela 7: Lipidoides adequados para a invenção

Tabela 8: Compostos lipídicos representativos derivados da fórmula (II)

Tabela 9: Construtos de mRNA codificando a CPS usada nos presentes exemplos (vide seção Exemplos)

Tabela B: Panorama da composição de nanopartículas lipí- dicas da formulação de GNO01-LNPs

Tabela 10: Esquema de vacinação do Exemplo 2 (vide se- ção Exemplos)

Tabela C: Mix de peptídios CSP para ICS

Tabela 11: Esquema de vacinação do Exemplo 3 (vide se- ção Exemplos)

Tabela 12: Construtos de RNA usados para análise da mancha ocidental do Exemplo 4 (vide seção Exemplos)

Tabela 13A: Esquema de vacinação do Exemplo 6

Tabela 13B: Esquema de vacinação do Exemplo 7

Tabela 14: Esquema de vacinação do Exemplo 8

Tabela 15: Esquema de vacinação do Exemplo 9

Tabela 16: Esquema de vacinação do Exemplo 10

Tabela 17: Esquema de vacinação do Exemplo 11

Tabela 18: Esquema de vacinação do Exemplo 12

Tabela 19: Esquema de vacinação do Exemplo 13

Tabela 20: Construtos de RNA usados para análise da mancha ocidental

Tabela 21: Panorama dos construtos de MRNA usados no Exemplo 15

'etição 870210044043, de 14/05/2021, pág. 12548/12614

Tabela 22: Panorama da análise de transferência passiva de acordo com o Exemplo 16,1.

Tabela 23: Esquema de vacinação do Exemplo 16,2.

Tabela 24: Exemplo de grupos de animais e esquema de vacinação do Exemplo 17 Breve Descrição dos Desenhos

[00561] A Figura 1 mostra que MRNA formulado codificando CSP induz resposta imunológica humoral em camundongos, usando um ensaio ELISA. Figura 1A: títulos finais de IgG1 e IgG2a no dia 21 após vacinação; Figura 1B: títulos finais de I9G1 e IgG2a no dia 42 após vacinação; Figura 1C: títulos finais de I9gG1 e IgG2a em 56 dias após vacinação. Grupos 1 e 2: vacina formulada em LNP; Grupo 3: NaCl 0,9%; Grupo 4: vacina formulada em protamina. Esquema de va- cinação vide Tabela 10. Mais detalhes apresentados no Exemplo 2.

[00562] A Figura 2 mostra que MRNA formulado codificando CSP induz respostas de anticorpos específicos para CSP de ligação em camundongos, usando um ensaio de detecção de anticorpos baseado em FACS. Figura 2A: Células positivas no dia 21 após vacinação; Fi- gura 2B: Células positivas no dia 42 após vacinação; Figura 2C: Célu- las positivas no dia 56 após vacinação. Grupos 1 e 2: vacina formulada em LNP; Grupo 3: NaCl 0,9%; Grupo 4: vacina formulada em protami- na. Esquema de vacinação vide Tabela 10. Mais detalhes apresenta- dos no Exemplo 2.

[00563] A Figura3 mostra que mMRNA formulado codificando CSP induz respostas imunológicas celulares em camundongos (res- postas de células T CD8+ e/ou CD4+), usando um ensaio de coloração de citocina intracelular (dia 56 após vacinação). Grupos 1 e 2: vacina formulada em LNP; Grupo 3: NaCl 0,9%; Grupo 4: vacina formulada em protamina. Esquema de vacinação vide Tabela 10. Mais detalhes 'etição 870210044043, de 14/05/2021, pág. 12549/12614 apresentados no Exemplo 2.

[00564] A Figura 4 mostra que MRNA formulado em LNP codifican- do CSP induz resposta imunológica humoral em camundongos, usando um ensaio ELISA. Os títulos finais de I9gG1 e IgG2 no dia 21 após vaci- nação estão mostrados. Grupos A-C: CSP mRNA formulado em LNP; Grupo D: RTS,S mRNA formulado em LNP; Grupo E: controle negati- vo. Esquema de vacinação vide Tabela 11. Mais detalhes apresenta- dos no Exemplo 3.

[00565] A Figura 5 mostra que MRNA formulado em LNP codifican- do CSP induz resposta imunológica humoral em camundongos, usando um ensaio ELISA. Os títulos finais de I9G1 e IgG2 no dia 35 após a vacinação estão mostrados. Grupos A-C: CSP mRNA formulado em LNP; Grupo D: RTS,S mRNA formulado em LNP, o grupo E: controle negativo. Esquema de vacinação vide Tabela 11. Mais detalhes apre- sentados no Exemplo 3.

[00566] A Figura 6 mostra que MRNA formulado em LNP codifican- do CSP induz respostas imunológicas celulares em camundongos (respostas de células T CD8+ e/ou CD4+), usando um ensaio de colo- ração de citocina intracelular (dia 35 após a vacinação). Grupos A-C: CSP mRNA formulado em LNP; Grupo D: RTS,S mRNA formulado em LNP, o grupo E: controle negativo. Esquema de vacinação vide Tabela

11. Mais detalhes apresentados no Exemplo 3.

[00567] A Figura 7 mostra que construtos de mMRNA codificando diferentes desenhos de construtos de CSP são expressos e secretados em células de mamíferos usando análise da mancha ocidental. A: R7111, B: R7641, C: R7642, D: R7643, E: R7647, F: R/649 e G: R7650; M = size ladder (vide Tabela 12). Mais detalhes apresentados no Exemplo 4.

[00568] A Figura8 mostra que MRNA formulado codificando varian- 'etição 870210044043, de 14/05/2021, pág. 12550/12614 tes de CSP induz resposta imunológica humoral em camundongos, usando um ensaio ELISA. Figura 8A: revestimento: peptídio [NANP];; títulos finais de I9gG1 e IgG2a no dia 21 após vacinação; Figura 8B: revestimento: peptídio [NANP];; títulos finais de IgG1 e IgG2a no dia 35 após a vacinação; grupos 1 e 2: Vacina de CSP formulada em LNP; grupo 3: Tampão NaCl. Esquema de vacinação vide Tabela 13A. Mais detalhes apresentados no Exemplo 6.

[00569] A Figura 9 mostra que MRNA formulado codificando dife- rentes variantes de CSP induz respostas imunológicas celulares em camundongos (respostas de células T CD8+ e/ou CD4+), usando um ensaio de coloração de citocina intracelulare. Grupos 1 e 2: Vacina de CSP formulada em LNP; Grupo 3: Tampão NaCl. Esquema de vacina- ção vide Tabela 13A. Mais detalhes apresentados no Exemplo 6.

[00570] A Figura 10 mostra que MRNA formulado codificando dife- rentes variantes de CSP induz resposta imunológica humoral em ca- mundongos, usando um ensaio ELISA. Figura 10A: revestimento: [NANP]; peptide; títulos finais de I9gG1 e IgG2a no dia 21 após vacina- ção; Figura 10B: revestimento: peptídio [NANP];; títulos finais de I9G1 e IgG2a no dia 35 após a vacinação; Figura 10C: revestimento: peptí- dio C-terminal; títulos finais de IIG1 e IgG2a em 21 dias após vacina- ção; Figura 10D: revestimento peptídio C-terminal; títulos finais de IgG1 e IgG2a em 35 dias após vacinação; Figura 10E: revestimento: peptídio N-terminal; títulos finais de I9gG1 e IgG2a em 21 dias após va- cinação; Figura 10F: revestimento peptídio N-terminal; títulos finais de I9gG1 e IgG2a em 35 dias após vacinação. Grupos 1 a 3: Vacina de CSP formulada em LNP; Grupo 4: LNP com Poli: C RNA irrelevante. Esquema de vacinação vide Tabela 13B. Mais detalhes apresentados no Exemplo 7.

[00571] A Figura 11 mostra que MRNA formulado codificando dife- 'etição 870210044043, de 14/05/2021, pág. 12551/12614 rentes variantes de CSP induz respostas imunológicas celulares em camundongos (respostas de células T CD8+ e/ou CD4+), usando um ensaio de coloração de citocina intracelular (dia 35 após a vacinação). Grupos 1 a 3: Vacina de CSP formulada em LNP; Grupo 4: LNP com Poli: C RNA irrelevante. Esquema de vacinação vide Tabela 13B. Mais detalhes apresentados no Exemplo 7.

[00572] A Figura 12 mostra que MRNA formulado codificando CSP com terminal C encurtado induz resposta imunológica humoral em ca- mundongos, usando um ensaio ELISA. Figura 12A: revestimento: pep- tídio [NANP];; títulos finais de I9G1 e IgG2a no dia 21 após vacinação; Figura 12B: revestimento: peptídio [NANP];; títulos finais de I9G1 e IgG2a no dia 35 após a vacinação; Figura 12C: revestimento: peptídio C-terminal; títulos finais de I9G1 e IgG2a em 21 dias após vacinação; Figura 12D: revestimento: peptídio C-terminal; títulos finais de I9G1 e IgG2a em 35 dias após vacinação. Grupos 1 a 6: Vacina de CSP for- mulada em LNP (encurtado no terminal C); Grupo 7: LNP com Poli: C RNA. Esquema de vacinação vide Tabela 14. Mais detalhes apresen- tados no Exemplo 8.

[00573] A Figura 13 mostra que MRNA formulado codificando CSP com terminal C encurtado induz respostas imunológicas celulares em camundongos (respostas de células T CD8+ e/ou CD4+), usando um ensaio de coloração de citocina intracelular (dia 35 após a vacinação). Figura 13A: todos os grupos. Figura 13B: apenas os grupos 5-7 para mostrar uma comparação entre os grupos 5 e 6. Grupos 1 a 6: Vacina de CSP formulada em LNP (encurtado no terminal C); Grupo 7: LNP com Poli: C RNA. Esquema de vacinação vide Tabela 14. Mais deta- lhes apresentados no Exemplo 8.

[00574] A Figura 14 mostra que MRNA formulado em LNP codifi- cando CSP com terminal C diferente induz resposta imunológica humo- 'etição 870210044043, de 14/05/2021, pág. 12552/12614 ral em camundongos, usando um ensaio ELISA. Figura 14A: revesti- mento: peptídio [NANP];; títulos finais de IIG1 e IgG2a no dia 21 após vacinação; Figura 14B: revestimento: peptídio [NANP];; títulos finais de IgG1 e IgG2a no dia 35 após a vacinação; Figura 14C: revestimen- to: peptídio C-terminal; títulos finais de IgG1 e IgG2a em 35 dias após vacinação; Figura 14D: revestimento: peptídio N-terminal; títulos finais de IgG1 e IgG2a em 35 dias após vacinação. Grupos 1 a 8 Vacina de CSP formulada em LNP (terminal C diferente); Grupo 9: RNA irrelevan- te formulado com LNP. Esquema de vacinação vide Tabela 15. Mais detalhes apresentados no Exemplo 9.

[00575] A Figura 15 mostra que MRNA formulado com LNO codifi- cando CSP com terminal C diferente induz respostas imunológicas ce- lulares em camundongos (respostas de células T CD8+ e/ou CD4+), usando um ensaio de coloração de citocina intracelular (dia 35 após a vacinação). Grupos 1 a 8: Vacina de CSP formulada em LNP (terminal C diferente); Grupo 9: RNA irrelevante formulado com LNP. Esquema de vacinação vide Tabela 15. Mais detalhes apresentados no Exemplo

9.

[00576] A Figura 16 mostra que vacina de MRNA formulado em LNP codificando CSP (encurtado no terminal N ou na região de repeti- ção de NANP no terminal C) induz resposta imunológica humoral em camundongos, usando um ensaio ELISA. Figura 16A: revestimento: peptídio [NANP];; títulos finais de IgG1 e IgG2a no dia 21 após vacina- ção; Figura 16B: revestimento: peptídio [NANP];; títulos finais de I9G1 e IgG2a no dia 35 após a vacinação; Figura 16C: revestimento: peptí- dio C-terminal; títulos finais de IIG1 e IgG2a em 35 dias após vacina- ção; Figura 16D: revestimento: peptídio N-terminal; títulos finais de I9gG1 e IgG2a em 35 dias após vacinação. Grupos 1 a 8: Vacina de CSP formulada em LNP (encurtado no terminal N ou na região de repe- 'etição 870210044043, de 14/05/2021, pág. 12553/12614 tição de NANP no terminal C); Grupo 9: RNA irrelevante formulado com LNP. Esquema de vacinação vide Tabela 16. Mais detalhes apre- sentados no Exemplo 10.

[00577] A Figura 17 mostra que vacina de mMRNA formulado em LNP codificando CSP (encurtado no terminal N ou na região de repeti- ção de NANP no terminal C) induz respostas imunológicas celulares em camundongos (respostas de células T CD8+ e/ou CD4+), usando um ensaio de coloração de citocina intracelular (dia 35 após a vacina- ção). Grupos 1 a 8: Vacina de CSP formulada em LNP (encurtado no terminal N ou na região de repetição de NANP no terminal C); Grupo 9: RNA irrelevante formulado com LNP. Esquema de vacinação vide Ta- bela 16. Mais detalhes apresentados no Exemplo 10.

[00578] A Figura 18 mostra que vacina de MRNA formulado em LNP codificando CSP diferentemente capeada induz resposta imuno- lógica humoral em camundongos, usando um ensaio ELISA. Figura 18A: revestimento: [NANP]; peptide; títulos finais de IgG1 e IgG2a no dia 21 após vacinação; Figura 18B: revestimento: peptídio [NANP]; ou peptídio C terminal ou ou peptídio N terminal; IgG1 títulos finais no dia após a vacinação; Figura 18C: revestimento: peptídio [NANP]; ou peptídio C terminal ou peptídio N terminal; IgG2a títulos finais no dia 35 após a vacinação. Grupos 1 e 2: Vacina de mMRNA CSP diferente- mente capeado formulado em LNP; Grupo 3: RNA irrelevante formula- do com LNP. Esquema de vacinação vide Tabela 17. Mais detalhes apresentados no Exemplo 11.

[00579] A Figura 19 mostra que vacina de mMRNA formulado em LNP codificando CSP diferentemente capeada induz respostas imuno- lógicas celulares em camundongos (respostas de células T CD8+ e/ou CD4+), usando um ensaio de coloração de citocina intracelular (dia 35 após a vacinação). Grupos 1 e 2: Vacina de MRNA CSP diferentemen- te capeado formulado em LNP; Grupo 3: LNP com RNA irrelevante. 'etição 870210044043, de 14/05/2021, pág. 12554/12614

Esquema de vacinação vide Tabela 17. Mais detalhes apresentados no Exemplo 11.

[00580] A Figura 20 mostra que vacina de MRNA formulado em LNP codificando CSP (diferentemente capeada) induz resposta imuno- lógica humoral em camundongos, usando um ensaio ELISA. Um inter- valo de injeção prolongado entre a dose inicial e a dose de reforço me- lhora a resposta imunológica humoral. Figura 20: revestimento: peptí- dio [NANP];; títulos finais de I9gG1 e IgG2a em different dias como indi- cado; Grupos 1, 2, 4 e 5: LNP vacina de CSP diferentemente capeada; Grupo 3 e 6: Tampão NaCl. Esquema de vacinação vide Tabela 18. Mais detalhes apresentados no Exemplo 12.

[00581] A Figura 21 mostra que vacina de MRNA formulado codifi- cando CSP diferentemente capeada induz respostas imunológicas ce- lulares em camundongos (respostas de células T CD8+ e/ou CD4+), usando um ensaio de coloração de citocina intracelulare. Grupos 1, 2, 4 e 5: LNP com vacina de CSP diferentemente capeada; Grupo 3 e 6: Tampão NaCl. Esquema de vacinação vide Tabela 18. Mais detalhes apresentados no Exemplo 12.

[00582] A Figura 22 mostra que independentemente qual extremi- dade 3' é usada na vacina de mRNA codificando CSP induz resposta imunológica humoral em camundongos, usando um ensaio ELISA. Fi- gura 22A: revestimento: peptídio [NANP];; títulos finais de I9G1 e IgG2a no dia 21 após a primeira vacinação; Figura 22B: revestimento: peptídio [NANP];; títulos finais de I9gG1 e IgG2a no dia 35 após a vaci- nação; Grupos 1-6: MRNA com extremidade 3' diferente e vacina de CSP codificando uracil não modificado ou modificado; Grupo 7: Tam- pão NaCl. Esquema de vacinação vide Tabela 19. Mais detalhes apre- sentados no Exemplo 13.

[00583] A Figura 23 mostra que independentemente qual extremi- 'etição 870210044043, de 14/05/2021, pág. 12555/12614 dade 3' é usada na vacina de mMRNA codificando CSP induz respostas imunológicas celulares em camundongos (respostas de células T CD8+ e/ou CD4+), usando um ensaio de coloração de citocina intrace- lulare. Grupos 1-6: MRNA com extremidade 3' diferente e vacina de CSP codificando uracil não modificado ou modificado; Grupo 7: Tam- pão NaCl. Esquema de vacinação vide Tabela 19. Mais detalhes apre- sentados no Exemplo 13.

[00584] A Figura 24 mostra que a expressão é independentemente comparável à qual extremidade 3' é usada. Os construtos de CSP com terminal N encurtado (grupo G e H) apresentaram expressão levemen- te mais alta. O experimento foi realizado da maneira descrita no Exemplo 14. Para maiores detalhes vide Tabela 20.

[00585] A Figura 25 mostra que todos os construtos de MRNA codi- ficando antígenos de CSP da malária levaram a uma expressão detec- tável da proteína usando um sistema de lisado de reticulócitos de coe- lho. Mais detalhes apresentados no Exemplo 15 e Tabela 21.

[00586] A Figura 26 mostra desenhos esquemáticos de desenhos de construtos/proteína de CSP preferidos; CSP: proteína circunspozo- roíta de Plasmodium (os fragmentos estão indicados pelas posições dos aminoácidos); SP: peptídio sinal heterolólogo; L: Ligante; HA-TM: domínio transmembrana de Influenza HA; HBsAg: antígeno de superfí- cie da hepatite B; Tétano: epítopo auxiliar de células T P2 da toxina tetânica; PADRE: epítopo de ligação de pan HLA DR; Ferritina: proteí- na de armazenamento de ferro ferritina; Lumazina.: Lumazina sintase. Maiores informações podem ser encontradas na Tabela 1. Exemplos

[00587] A seguir, são apresentados exemplos particulares ilustrando várias modalidades e aspectos da invenção. No entanto, a presente invenção não deve ter seu escopo limitado pelas modalidades especí- ficas descritas neste pedido. As preparações e exemplos a seguir são 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12556/12614 dados para permitir que os especialistas na técnica entendam de forma mais a invenção e executem a mesma. A presente invenção, no entan- to, não tem seu escopo limitado pelas modalidades exemplificadas, que se destinam apenas a ilustrar aspectos simples da invenção, e mé- todos que são funcionalmente equivalentes estão dentro do escopo da invenção. Na verdade, várias modificações da invenção além daquelas descritas neste pedido estarão prontamente aparentes para os especi- alistas na técnica a partir da descrição precedente, das figuras que acompanham e dos exemplos abaixo. Todas estas modificações se enquadram no escopo das reivindicações anexas. Exemplo 1: Preparação de construtos de RNA, composições, e va- cinas

[00588] O presente Exemplo apresenta métodos de obtenção do RNA codificante da invenção, assim como métodos de produção de uma composição ou de uma vacina da invenção. 1,1. Preparação de construtos de DNA e mRNA:

[00589] —Sequências de DNA sequences codificando diferentes pro- teínas CSP foram preparadas e usadas para subsequentes reações de transcrição in vitro de RNA. As referidas sequências de DNA foram preparadas por modificação das sequências de DNA codificante do tipo selvagem por introdução de uma sequência codificadora G/C- otimizada (por exemplo, "cds opt1") para estabilização e otimização da expressão. As sequências foram introduzidas em um vetor de DNA de- rivado de pUC para compreender sequências de 3-UTR e sequências de 5-UTR estabilizantes, compreendendo adicionalmente um trecho de adenosinas (por exemplo, 64A ou A100), e opcionalmente uma es- trutura de alça-tronco de histona (hSL), e um trecho de 30 citosinas (por exemplo, C30) (vide Tabela 9, a (para um panorama esquemático de desenhos de construtos de CSP vide Figura 26).

[00590] Os construtos de DNA plasmídico obtidos foram transfor- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12557/12614 mados e propagadas em bactérias usando protocolos comuns conhe- cidos na literatura. Por fim, os construtos de DNA plasmídico foram ex- traídos, purificados, e usados para subsequente transcrição in vitro de RNA (vide seção 1.2.).

[00591] — Alternativamente, os DNA plasmídicos são usados como molde para amplificação por PCR (vide seção 1.3.).

1.2. Transcrição in vitro de RNA a partir de moldes de DNA plasmídico:

[00592] — Plasmídios de DNA preparados de acordo com o parágrafo

1.1 foram linearizados usando uma enzima de restrição e usados para transcrição in vitro de RNA DNA-dependente usando T7 RNA polime- rase na presença de uma mistura de nucleotídeos (ATP/GTP/CTP/ UTP) e um análogo tipo cap (por exemplo, m7GpppG) em condições tampão adequadas. O análogo tipo cap m7G(5')ppp(5')(2' OMeA)pG foi usado para preparação de alguns construtos de RNA para gerar uma estrutura cap1 (por exemplo, R8143, R8229, R8233, R8232, R8230, R8231, R8238). Os construtos de RNA obtidos foram purificados usan- do RP-HPLC (PureMessengerO, CureVac AG, Túbingen, Alemanha; WO2008/077592) e usados para experimentos in vitro e in vivo. As se- quências/construtos e RNA gerados estão apresentados na Tabela 9, com os construtos de CSP codificados e os respectivos elementos UTR indicados na mesma (desenho de mRNA a-1 (HSD17B4/PSMB3), desenho de mRNA a-3 (SLC7A3/PSMB3), desenho de mRNA i-3 (- /muag) edesenho de mMRNA i-2 (RPL32/ALB7)). As proteínas e frag- mentos de CSP foram derivados de Plasmodium falciparum 3D7 (XP 001351122.1, XM 001351086.1; aqui abreviado "Pf(3D7)"), ou Plasmodium berghei ANKA (XP 022712148.1, XM 022858407.1; aqui abreviado "PD(ANKA'")).

[00593] Além das informações apresentadas na Tabela 9, maiores informações sobre as SEQ-ID NOs dos construtos de mMRNA especiífi- cos podem ser deduzidas a partir das informações apresentadas no 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12558/12614 identificador <223> na listagem de sequências ST.25.

[00594] Para obtenção de MRNA modificado, transcrição in vitro de RNA foi realizada na presença de uma mistura de nucleotídeos modifi- cados (ATP, GTP, CTP, pseudouridina (W) ou N(1)-metilpseudouridina (M1YW)) e um análogo tipo cap (m7GpppG ou m7G(5')ppp(5') (2OMeA)PG) em condições tampão adequadas. Os mRNAs 'W- modificados obtidos foram purificados por RP-HPLC (PureMessen- gerO, CureVac AG, Túbingen, Alemanha; WO2008/077592) e usasdos para experimentos adicionais.

[00595] — Alguns construtos de RNA são transcritos in vitro na ausên- cia de um análogo tipo cap. A estrutura cap (cap1) é adicionada enzi- maticamente usando enzimas de capeamento comumente conhecidas na literatura. Resumidamente, o mRNA transcrito in vitro é capeado usando-se um kit de capeamento m7G com 2'-O-metiltransferase para obtenção de RNA capeado com cap1.

[00596] "RNA para desenvolvimento clínico é produzido segundo as boas práticas de produção em vigor, por exemplo, de acordo com com o documento WOZ2016/180430, implementando várias etapas de con- trole de qualidade no nível de DNA e RNA.

1.3. Transcrição in vitro de RNA a partir de moldes de DNA amplifica- dos por PCR:

[00597] Moldes de DNA amplificados por PCR purificados prepara- dos de acordo com o parágrafo 1,1 são transcritos in vitro usando T7 RNA polimerase DNA-dependente na presença de uma mistura de nu- cleotídeos (ATP/GTP/CTP/UTP) e um análogo tipo cap (m7GpppG or m7G(5')ppp(5')(2' OMeA)pG) em condições tampão adequadas. Alter- nativamente, DNA amplificado por PCR é transcrito in vitro usando T7 RNA polimerase DNA-dependente na presença de uma mistura de nu- cleotídeos modificados (ATP, GTP, CTP, N(1)-metilpseudouridina (M1YW) ou pseudouridina (VW) e um análogo tipo cap (m7GpppG ou 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12559/12614 m7G(5')ppp(5')(2 OMeA)pG) em condições tampão adequadas.

Alguns construtos de mRNA são transcritos in vitro na ausência de um análogo tipo cap e a estrutura cap (cap1) é adicionada enzimaticamente usando enzimas de capeamento comumente conhecidas na literatura, por exem- plo, usando um kit de capeamento m7G com 2'-O-metiltransferase.

Os MRNAs obtidos são purificados, por exemplo, por RP-HPLC (Pure- MessengerO, CureVac AG, Túbingen, Alemanha; WO2008/077592) e usados para experimentos in vitro e in vivo. 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12560/12614

Tabela 9: Construtos de mRNA codificando CPS usados nos presentes exemplos Proteína Desenho | Extremidade 3' Estrutura | SEQIDNO: |SEQIDNO: |SEQIDNO: pe ope E te om mt [5 PROSPERAR iz asse far ar e a [E prt ErEATIRTAS a asr5cRREAS far ar e a STS IEP a asse fat er a

Ô 8 ? [5 er er asrscRREAS far ar e a [E REAR a asrscRreS far a e a 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12561/12614

Proteína Desenho | Extremidade 3º Estrutura |/SEQIDNO: |SEQIDNO: |SEQIDNO: so e e pre pane es E:

S

S R8104 HsALB Pr-CSP(19-272) Ligante(G4S) PR-CSP(310- [a AGI-N5-C30-NSL-N5 [capo 350 78 58 e mB cu R8103 HsALB Pr-CSP(19-272) Ligante(G4S) PR-CSP(310- [a AGI-N5-C30-NSL-N5 [capo 349 7 57 o as Nr etição 870210044043, de 14/05/2021, pág. 12562/12614

Proteína Desenho | Extremidade 3º Estrutura |/SEQIDNO: |SEQIDNO: |SEQIDNO: ea e pre pane es] o ERR R8101 HsALB Pr-CSP(19-272) Ligante(AAY) PI-CSP(346- [al AGI-N5-C30-NSL-N5 [capo 348 16 56 a uu R8102 HsALB Pr-CSP(19-272) Ligante(AAY) PI-CSP(346- [al AGI-N5-C30-NSL-N5 [capo 347 15 55 a uv R8571 HsALB Pr-CSP(19-272) Ligante(AAY) PI-CSP(346- [al AGI-N5-C30-NSL-N5 [capi 8859 BT44 B757 ap En e ne Toa a O R8572 HsALB Pr-CSP(19-272) Ligante(AAY) PI-CSP(346- [al hSL-A100 cap1 9778 BT44 8758

CCO AA x 6 resete ar asneiras fa e a FR rsREePReSPRRR ar assess far a a o R etição 870210044043, de 14/05/2021, pág. 12563/12614

Proteína Desenho | Extremidade 3º Estrutura |/SEQIDNO: |SEQIDNO: |SEQIDNO: o e E re pane es ge reseeresaaea ar assess fa o ls a Boo rsseeresaaar ar assess fa o a a [76 RRREBPRESPRRD a asenscsneeas ao er :

S

S etição 870210044043, de 14/05/2021, pág. 12564/12614

1.4.1: Preparação de uma composição de mRNA formulada em LNP (LNP-II1-3):

[00598] —LNPs (LNP-lIIl-3) foram preparadas usando lipídios catiôni- cos, lipídios estruturais, um PEG-lipídios, e colesterol. Uma solução de lipídios (em etanol) foi misturada com uma solução de RNA (tampão aquoso) usando um dispositivo de misturação microfluídica. As LNPs obtidas foram novamente tamponadas em um tampão carboidrato via diálise, e concentrada até uma concentração alvo usando tubos de ul- tracentrifugação. O mRNA formulado em LNP'ss foi armazenado a -80ºC antes de ser usado em experimentos in vitro ou in vivo.

[00599] — Nanopartículas lipídicas (LNP), lipídios catiônicos, e lipídios conjugados com polímero (PEG-lipídio) foram preparados e testados essencialmente de acordo com os procedimentos gerais descritos nos documentos WO2015/199952, WO2017/004143 e WO2017/075531, cujas íntegras encontram-se aqui incorporada a título de referência. RNA formulado em LNP'ss foi preparado usando um aminolipídio ionizá- vel (lipídio catiônico), fosfolipídio, colesterol e um lipídio peguilado. Resumidamente, o composto de lipídio catiônico de fórmula 1II-3, DSPC, colesterol, e PEG-lipídio de fórmula IVa foram solubilizados em etanol a uma razão molar (%) de aproximadamente 50:10:38,5:1,5 ou 47,4:10:40,9:1,7. LNPs compreendendo o composto de lipídio catiônico de fórmula 111-3 e o composto de PEG-lipídio de fórmula IVa foram pre- paradas a uma razão de RNA para lipídio total de 0,03-0.,4 p/p. O RNA foi diluído até 0,05mg/mL a 0,2mg/mL em tampão citrato 10 mM a 50 MM, pH 4. Bombas de seringa foram usadas para misturar a solução etanólica de lipídios com a solução aquosa de RNA a uma razão de cerca de 1:5 a 1:3 (vol/vol) com taxas de fluxo total acima de 15 ml/min. O etanol foi então removido e o tampão externo foi substituído por um tampão PBS compreendendo sacarose por diálise. Por fim, as nanopartículas lipídicas foram filtradas por um filtro estéril com poros 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12565/12614 de 0,2 um e a composição de RNA formulada em LNP foi ajustada em cerca de 1 mg/ml de RNA total. O tamanho do diâmetro de partícula das nanopartícula foi de 60-90 nm segundo determinado por espalha- mento de luz quasi-elático usando um Malvern Zetasizer Nano (Mal- vern, UK). Para outros compostos de lipídio catiônico mencionados no presente relatório descritivo, o processo de formulação é essencial- mente semelhante. A composição de RNA formulado em LNP (1 mg/ml de RNA total) foi diluída até a concentração desejada usando solução salina antes da aplicação in vivo.

[00600] “Composições de nanopartículas lipídicas para a composi- ção de LNP LNP-l1I-3 estão deetalhadas na Tabela B abaixo. Exemplo 1.4.2: Preparação de LNPs (GNO01-LNPs) usando o sistema microfluídico NanoAssemblrTM:

[00601] — GNO1-LNPs foram preparadas usando o sistema microfluí- dico NanoAssembIrTM (Precision NanoSystems Inc., Vancouver, BC) de acordo com protocolos padrão. GNO01-LNPs compreendendo o lipí- dio catiônico COATSOMEG SS-EC (nome anterior: SS-33/4PE-15; NOF Corporation, Tóquio, Japão).

[00602] Nos presentes exemplos, COATSOMEG SS-EC (NOF Cor- poration, Tóquio, Japão) foi usado para a preparação de composições de nanopartículas lipídicas. Além disso, foram usados colesterol (Avan- ti Polar Lipids; Alabaster, AL), lipídio neutro / fosfolipídio DPhyPE (Avanti Polar Lipids; Alabaster, AL) e DMG-PEG 2000 (NOF Corpora- tion, Tóquio, Japão).

[00603] Os lipídios foram solubilizados em solução alcoólica (eta- nol) de acordo com procedimentos tradicionais. As composições de nanopartículas lipídicas correspondentes estão detalhadas na Tabela B abaixo.

[00604] *“Detalhadamente, LNPs foram preparadas por misturação de volumes apropriados de soluções de estoque de lipídios em tampão 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12566/12614 etanol com uma fase aquosa (acetato de sódio 25 mM, pH 4,0) conten- do quantidades apropriadas de mMRNA conforme indicado neste pedido; colesterol, fosfolipídio e lipídio conjugado com polímero: 20 mg/ml em EtOH, lipídios catiônicos, exceto para GNO01: 20 mg/ml em EtOH, GNO1-lipídio: 30 mg/ml em ter-butanol.

[00605] Resumidamente, o mMRNA foi diluído até 0,05 a 0,2 mg/ml em tampão acetato 10 a 50 MM, pH 4. Bombas de seringa foram insta- ladas nas entradas do NanoAssemblr'"Y (Precision NanoSystems Inc., Vancouver, BC) e usadas para mistura a solução etanólica de lipídios com a solução aquosa de mMRNA a uma razão de cerca de 1:5 a 1:3 (vol/vol) com taxas de fluxo total de cerca de 14 ml/min a cerca de 18 ml/min.

[00606] O etanol foientão removido e o tampão externo foi substitu- ído por PBS por diálise (Slide-A-Lyzer'"" Dialysis Cassettes, Thermo- Fisher). Por fim, as nanopartículas lipídicas foram filtradas por um filtro estéril com poros de 0,2 um. O tamanho do diâmetro de partícula das nanopartículas foi de cerca de 90 nm a cerca de 140 nm segundo de- terminado por espalhamento de luz quasi-elático usando um Malvern Zetasizer Nano (Malvern Instruments Ltd.; Malvern, UK). Tabela B: Panorama da composição de nanopartículas lipídicas da formulação de GNO1-LNP's e LNP I1I-3 em LNP para excipientes [mol%] TM pente polímero] DMG-PEG 2000 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12567/12614

1.5. Preparação de uma composição de mRNA complexada com pro-

[00607] —Construtos de RNA foram complexados com protamina an- tes do uso em experimentos de imunização in vivo. A formulação de RNA consistia em uma mistura de 50% de RNA livre e 50% de RNA complexado com protamina a uma razão em peso de 2:1. Primeiro, MRNA foi complexado com protamina por adição de protamina-solução de Ringer com lactato ao MRNA. Depois de incubação por 10 minutos, quando os complexos foram gerados de forma estável, mRNA livre foi adicionado, e a concentração final foi ajustada com solução de Ringer com lactato.

1.6. Análise da expressão dos construtos de MRNA desenhados:

[00608] Os construtos de MRNA mostrados na Tabela 9 foram tes- tados quanto a sua expressão em cultura de células usando análise da mancha ocidental ou FACS como comumente conhecido na literatura. Um exemplo está descrito no Exemplo 4. Exemplo 2: Vacinação de camundongos com mRNA codificando CSP, formulado em protamina e formulado em LNP

[00609] O presente exemplos mostra que vacinas de mRNA contra malária codificando CSP induzem respostas imunológicas humorais e celulares em camundongos Balb/c.

[00610] Construtos de mRNA contra malária codificando CSP de comprimento integral foram preparados de acordo com o Exemplo 1. O mRNA foi formulado em nanopartículas lipídicas (vide Exemplo

1.4.2.) ou com protamina (vide Exemplo 1.5). Os diferentes candidatos a vacinas de mMRNA foram aplicados nos dias 0, 21, e 42 e administra- dos nas doses de RNA, formulações, e vias de administração mostra- das na Tabela 10. Um grupo controle negativo 3) recebeu tampão NaCl. Amostras de soro foram coletadas no dia 21, dia 42, e dia 56 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12568/12614 para determinação das respostas imunológicas humorais. Tabela 10: Esquema de vacinação do Exemplo 2 Nº de ca- Tratamento Via Volume mundongos 1 Formulação 1 de MRNA R7111 |10ug im. 1x25uL codificando CSP em LNP (GNO1) 2 Formulação 2 de MRNA R7111 |10ug im. 1x25uL codificando CSP em LNP (composição similar à GNO1) E nas | 4 Formulação de MRNA R7112 |80ug 2x50uL codificando CSP em protamina

2.1. Determinação de respostas imunológicas humorais específicas por ELISA:

[00611] ELISA foi realizado usando o peptídio [NANP]; da malária (de acordo com a SEQ ID NO: 10209) para revestimento. As placas revestidas foram incubadas com as respectivas diluições em soro, e a ligação de anticorpos específicos ao respectivo peptídio [NANP]; da malária foi detectada usando anticorpos anti-camundongo biotinilados isótipo-específicos seguido por estreptavidina-HRP (peroxidase de ra- iz-forte) com Amplex como substrato. Os títulos finais de anticorpos (I9G1, IgG2a) direcionados contra o peptídio [NANP]; da malária foram medidos por ELISA no dia 21, dia 42, e 56 após vacinação. Os resulta- dos estão mostrados nas Figuras 1 A-C (A: dia 21; B: dia 42; C: dia 56).

2.2. Detecção de respostas imunológicas específicas de CSP de liga- ção:

[00612] Células Hela foram transfectadas com 2 ug de mRNA codi- ficando CSP (R7111) usando lipofectamina. As células foram recolhi- das 20 horas após a transfecção, e semeadas a 1x10º por poço em 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12569/12614 uma placa de 96 poços. As células foram incubadas com amostras de soro de camundongos vacinados (diluídas 1:50) seguidas pelo anticor- po IgG anti-camundongo conjugado com aFITC. As células foram ad- quiridas no BD FACS Canto Il usando o software DIVA e analisadas por FlowJo. Os resultados estão mostrados nas Figuras 2 A-C (A: dia 21; B: dia 42; C: dia 56).

2.3. Coloração de citocinas intracelulares (ICS):

[00613] “Esplenócitos de camundongos vacinados foram isolados no dia 56 de acordo com um protocolo padrão conhecido na literatura. Resumidamente, os baços isolados foram triturados em um coador pa- ra células e lavados com PBS/1%FBS seguido por lise das células sanguíneas vermelhas. Depois de uma extensa etapa de lavagem com PBS/1%FBS, os esplenócitos foram semeados em placas de 96 poços (2x108 células por poço). As células foram estimuladas com uma mistu- ra de peptídios de CSP (1ug/ml) (vide Tabela C) na presença de 2,5ug Iml de um anticorpo anti-CD28 (BD Biosciences) e um inibidor do transporte de proteínas por 6 horas a 37ºC. Depois da estimulação, as células foram lavadas e coloridas para citocinas intracelulares usando o reagente Cytofix/Cytoperm (BD Biosciences) de acordo com as ins- truções do fabricante. Os seguintes anticorpos foram usados para colo- ração: Thy1.2-FITC (1:100), CD8-PE-Cy7 (1:200), TNF-PE (1:100), IFNy-APC (1:100) (eBioscience), CD4-BD Horizon V450 (1:200) (BD Biosciences) e incubados com Fcy-block diluído 1:100. Aqua Dye foi usado para distinguir entre células vivas/mortas (Invitrogen). As células foram adquiridas usando um citômetro de fluxo BD FACS Canto |l (Beckton Dickinson). Os dados da citometria de fluxo foram analisados usando o software FlowJo (Tree Star, Inc.). Os resultados estão mos- trados nas Figuras 3.

'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12570/12614

Tabela C: Mix de peptídios da CSP para ICS Peptídio Localização | Posição ami- | Sequência noacídfica da proteína Pf(3D7)-CSP CSP peptide 1 [10197 aa359-368 DYANDIEKKI CSP peptide 2 10198 aa377-385 VFNVVNSSI| CSP peptide 3 /10199 aa25-33 CYGSSSNTR CSP peptide 4 10200 aa26-34 YGSSSNTRV CSP peptide 5 |10201 aa39-47 NYDNAGTNL CSP peptide 6 |10202 AILSVSSFL CSP peptide 7 10203 aa30-38 SNTRVLNEL CSP peptide 8 |10204 aa388-396 IMVLSFLFL CSP peptide 9 |10205 aa387-395 LIMVLSFLF CSP peptide 10 [10206 aa57-65 GKQENWYSL CSP peptide 11 [10207 MMRKLAILSVSSFLF CSP peptide 12 [10208 aa318-337 EYLNKIQNSLSTEWSPCSVT Resultados:

[00614] “Como mostrado na Figura 1 e Figura 2, as vacinas de CSP mMRNA formulado em LNP induziram fortes respostas imunológicas humoral em camundongos. Nas condições testadas, a vacina formula- da em LNP aplicada ao grupo 1 (dose de 1 ug) induziu as respostas imunológicas mais fortes.

[00615] “Como mostrado na Figura 3, as vacinas de CSP mRNA formulado em LNP induziram respostas imunológicas celulares em camundongos (respostas de células T CD8+ e/ou CD4+). Notavelmen- te, nas condições testadas, o grupo 1 (dose de 1 ug) apresenta respos- tas de células T CD8+ e de células de células T CD4+ fortes e o grupo 2 (dose de 1 ug) respostas de células T CD8+ e de células de células T CD4+ moderadas em relação à vacina de MRNA CSP formulada em protamina (dose de 10 ug, grupo 4).

[00616] Como as células T CD8+ podem ser um importante meca- nismo imunológico protetor contra infecções intracelulares causadas por parasitas da malária, uma vacina contra malária eficaz deve induzir respostas de células T CD8+ fortes. Por conseguinte, estes achados 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12571/12614 ressaltam uma das características vantajosas da vacina de mRNA in- ventiva contra malária. Exemplo 3: Vacinação de camundongos com MRNA codificando CSP, formulado em LNP

[00617] O presente exemplo mostra que vacinas de mRNA codifi- cando CSP contra malária induzem respostas imunológicas humorais e celulares fortes em camundongos. Notavelmente, a vacina de MRNA inventiva contra malária induz respostas de células T CD8+ fortes.

[00618] Candidatos à vacina de mMRNA contra malária codificando CSP de comprimento integral foram preparados de acordo com o Exemplo 1, e os construtos de MRNA foram formulados em nanopartí- culas lipídicas (vide Exemplo 1,4,2). As formulações de LNP foam apli- cadas nos dias O e 21 por via intramuscular (i.m.; musculus tibialis, Balb/c mice) nas doses de RNA, formulações, e grupos controle mos- trados na Tabela 11. Um grupo controle (D) foi vacinado com mRNA codificando RTS,S. Um grupo controle negativo (E) foi vacinado com um RNA irrelevante, formulado em LNPs. Amostras de soro foram co- letadas no dia 21 e no dia 35 para análise por ELISA. Tabela 11: Esquema de vacinação do Exemplo 3 Nº de ca- Tratamento Via |Volume mundongos A Formulação 1 de MRNA cod- [R7111 |iug im. | 1x25uUL ificando CSP em LNP (GNO1) CSP de comprimento integral Formulação 2 de mMRNA cod- [R7111 |iug im. | 1x25uUL ificando CSP em LNP (similar à composição GNO1) CSP de comprimento integral Cc Formulação 3 de mMRNA cod- [R7111 |iug im. | 1x25uUL ificando CSP em LNP (similar à composição GNO1) full length CSP 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12572/12614

3.1. Determinação das respostas imunológicas humorais específicas por ELISA:

[00619] ELISA foi realizado usando o peptídio [NANP]; da malária para revestimento essencialmente da maneira descrita no Exemplo

3.1.

[00620] Os resultados estão mostrados na Figura 4 e Figura 5.

3.2. Coloração de citocinas intracelulares:

[00621] “Coloração de citocinas intracelulares foi realizada essenci- almente da maneira descrita no Exemplo 3.2. Os resultados estão mostrados na Figura 6. Resultados:

[00622] — Como mostrado na Figura 4 e Figura 5, as vacinas de CSP MRNA formulado em LNP induziram respostas imunológicas humorais fortes em camundongos. Nas condições testadas, a vacina formulada em LNP aplicada ao grupo A (dose de 1 ug) induziu as respostas imu- nológicas mais fortes que eram equiparáveis às do grupo RTS,S (fra- gmento de CSP com HBsAg) (Grupo D; dose de 10 ug).

[00623] “Como mostrado na Figura 6, as vacinas de CSP mRNA formulado em LNP induziram respostas imunológicas celulares em camundongos (respostas de células T CD8+ e/ou CD4+). Notavelmen- te, nas condições testadas, os grupos A (dose de 1 ug) e B (dose de 1 ug) apresentaram respostas de células T CD8+ e de células T CD4+ fortes, ao passo que grupo RTS,S (fragmento de CSP com HBsAg) 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12573/12614

(Grupo D; dose de 10 ug) apresentou apenas respostas de células T CDA4+.

[00624] Como as células T CD8+ são um importante mecanismo imunológico protetor contra infecções intracelulares causadas por pa- rasitas da malária, uma vacina contra malária eficaz deve induzir res- postas de células T CD8+ fortes. Por conseguinte, estes achados res- saltam uma das características vantajosas da vacina de mMRNA inventi- va contra malária. Exemplo 4: Análise da expressão de diferentes construtos de mMRNA codificando CSP em células 293T

[00625] O presente exemplo mostra que construtos de RNA codifi- cando construtos de CSP modificada são expressos e secretados em células de mamíferos.

[00626] Para determinar a expressão in vitro de proteína de alguns dos construtos de RNA, células 293T foram transitoriamente transfec- tadas com mMRNA codificando o antígeno de CSP. 24 horas antes da transfecção, as células 293T foram semeadas em uma placa de 6 po- ços a uma densidade de 500,000 células/poço em um meio de cultura de células. As células foram transfectadas com 1 ug de RNA usando Lipofectamina 2000 (Invitrogen) como agente de transfecção. Os se- guintes construtos de mMRNA foram usados no experimento: R7111, R7641, R7642, R7643, R7647, R7649 e R7650 (vide Tabela 12). Tabela 12: RNA constructs used for análise da mancha ocidental, Exemplo 4 a am da proteína | asas Prospro ssa TuSomO RA TATA araras — | [9 aereas ar larocasioa | 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12574/12614 o vam da proteína

[00627] Análise da mancha ocidental foi realizada da maneira co- mumente conhecida na literatura, usando anticorpo monoclonal de ca- mundongo anti-2A10 contra a região de repetição da CSP(diluído 1:5000) como anticorpo primário em combinação com o anticorpo anti- camundongo secundário IgG IRDye 800CW (diluído 1:10000) (vide Fi- gura 7A e Figura 7B). Resultados:

[00628] Para cinco dos construtos de RNA testados (R7642; R7643; R7647; R7649 e R7650) a proteína CSP codificada era detectável nos sobrenadantes das céluls 293T transfectadas (vide Figura 7A). À ex- pressão de todos os sete construtos foi demonstrada nos lisados celu- lares correspondentes (vide Figura 7B). Exemplo 5: Avaliação da imunogenicidade funcional das vacinas de mRNA contra malária (profético)

[00629] O objetivo do presente exemplo é avaliar a imunogenicida- de funcional da vacina de mMRNA inventiva contra malária por meio de um ensaio ELISA aprimorado, um modelo de transferência passiva (Exemplo 5.1), e um modelo de desafio (Exemplo 5.2).

5.1. Análise do soro de camundongos vacinados com várias vacinas de MRNA à base de CSP:

[00630] — Amostras de soro de aproximadamente 2 ml de camundon- gos vacinados com vacinas à base de CSP formulada em LNP são analisadas em um modelo consolidado de ELISA com CSP recombi- nante e esporozoítas como controles positivos.

[00631] Além disso, 500 ul dos soros dos camundongos são anali- sados em um modelo de transferência passiva: os anticorpos de CSP 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12575/12614 nas amostras de soro são transferidos de forma passiva para camun- dongos (n=4) que haviam sido infectados 2 horas ou 16 horas após a injeção de esporozoítas quiméricos da CSP de Plasmodium berghei- Plasmodium falciparum ou por 5 picadas de mosquitos infecciosos. Os camundongos foram então avaliados quanto à carga reduzida de para- sitas no fígado.

5.2. Estudo de desafio de camundongos vacinados com várias vacinas de mRNA à base de CSP:

[00632] Vacinas de MRNA formulado em LNP contra malária foram testadas em um modelo de desafio. Os camundongos foram vacinados nos dias O e 21 e então desafiados por 5 picadas de mosquitos infecci- osos com o parasita da malária Plasmodium berghei transgênico (com início no dia 35 após a vacinação). Os camundongos foram então ava- liados quanto à carga reduzida de parasitas no fígado.

[00633] Vacinas de mMRNA formulado em LNP codificando CSP são injetadas por via intramuscular nos dias O e 21. Com início no dia 35 após a vacinação, os camundongos foram desafiados por 5 picadas de mosquitos infecciosos com o parasita P. berghei transgênico. A cepa do parasita P. berghei transgênico expressa a proeína de CSP de comprimento integral do P. Falciparum. Estes parasitas geram esporo- zoítas altamente infecciosos em camundongos mosquitos. Exemplo 6: Vacinação de camundongos com MRNA codificando CSP, formulado em LNP

[00634] O presente exemplo mostra que vacinas de mMRNA contra malária codificando CSP de comprimento integral induzem respostas imunológicas humorais e celulares fortes em camundongos.

[00635] —Construtos de mMRNA contra malária codificando CSP de comprimento integral (Pf-CSP) ou o fragmento CSP(199-377) com HBsAg (Pf-CSP(199-377) Ligante(PVTN) HBsAg) foram preparados de acordo com o Exemplo 1. O mRNA foi formulado em nanopartícu- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12576/12614 las lipídicas GNO1-LNP'ss (vide Exemplo 1.4.2). Os diferentes candida- tos à vacina de mMRNA foram aplicados por via intramuscular (i.m.; musculus tibialis, camundongos Balb/c) nos dias O e 21 e administra- dos nas doses de RNA, formulações, e vias de administração mostra- das na Tabela 13A. Um grupo controle negativo (3) recebeu tampão NaCl. Amostras de soro foram coletadas no dia 21 e no dia 35 para determinação das respostas imunológicas humorais. Os esplenócitos foram coletados no dia 35 para determinação das respostas imunológi- cas celulares. Tabela 13A: Esquema de vacinação do Exemplo 6 [2 manage O mundongos ume e ea se fim [6esa| Dr meme | 1º 7 377) Ligante(PVTN) HBsAg Be era Ti fresa|

6.1. Determinação das respostas imunológicas humorais específicas por ELISA:

[00636] ELISA foirealizado essencialmente da maneira descrita no Exemplo 2.1. Os resultados estão mostrados nas Figuras 8.

6.2. Coloração de citocinas intracelulares:

[00637] —Esplenócitos de camundongos vacinados foram isolados no dia 35 de acordo com um protocolo padrão conhecido na literatura. Resumidamente, os esplenócitos isolados foram triturados em um co- ador para células e lavados com PBS/1%FBS seguido por lise das cé- lulas sanguíneas vermelhas. Depois de uma extensa etapa de lavagem com PBS/1%FBS, os esplenócitos foram semeados em placas de 96 poços (2x106 células por poço). As células foram estimuladas com uma biblioteca de peptídios de CSP (0,5 ug/ml, ThermoFisher) de acordo com as SEQ ID NO: 10212-10276 e um peptídio d CSP (0,5 ug/ml, CSP peptídio 12 de acordo com a SEQ ID NO: 10208, EMC Micro- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12577/12614 collections GmbH, vide Tabela Cm) na presença de 2,5 ug/ml de um anticorpo anti-CD28 (BD Biosciences) e um inibidor do transporte de proteínas por 6 horas a 37ºC. Depois da estimulação, as células foram lavadas e coloridas para citocinas intracelulares usando o reagente Cytofix/Cytoperm (BD Biosciences) de acordo com as instruções do fabricante. Os seguintes anticorpos foram usados para coloração: Thy1.2-FITC (1:100), CD8-PE-Cy7 (1:200), TNF-PE (1:100), IFNy-APC (1:100) (eBioscience), CD4-BD Horizon V450 (1:200) (BD Biosciences) e incubados com Fcy-block diluído 1:100. Aqua Dye foi usado para dis- tinguir entre células vivas/mortas (Invitrogen). As células foram adquiri- das usando um citômetro de fluxo BD FACS Canto Il (Beckton Dickin- son). Os dados de citometria de fluxo foram analisados pelo software FlowJo (Tree Star, Inc.). Os resultados estão mostrados na Figura 9. Resultados:

[00638] “Como mostrado na Figura 8, as vacinas de CSP mRNA formulado em LNP induziram respostas imunológicas humorais fortes em camundongos. Nas condições testadas, a vacina formulada em LNP aplicada ao grupo 1 (CSP de comprimento integral) (dose de 5 ug) induziu respostas imunológicas ligeiramente aumentadas em com- paação com uma vacina de mRNA formulado em LNP compreendendo o fragmento CSP(199-377) com HBsAg (Grupo 2; Tabela 12).

[00639] “Como mostrado na Figura 9, as vacinas de CSP mRNA formulado em LNP induziram respostas imunológicas celulares em camundongos (respostas de células T CD8+ e/ou CD4+). Notavelmen- te, nas condições testadas, o grupo 1 (CSP de comprimento integral) (dose de 5 ug) apresentou respostas de células T CD8+ e células T CD4+ fortes, ao passo que a vacina de MRNA formulado em LNP compreendendo o fragmento CSP(199-377) com HBsAg (Grupo 2; Ta- bela 12) apresentou apenas respostas de células T CD4+.

[00640] Como as células T CD8+ podem ser um importante meca- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12578/12614 nismo imunológico protetor contra infecções intracelulares causadas por parasitas da malária, uma vacina contra malária eficaz deve induzir respostas de células T CD8+ fortes. Por conseguinte, estes achados ressaltam uma das características vantajosas da vacina de mRNA in- ventiva contra malária. A CSP de comprimento mais integral como um antígeno induz respostas humorais e especialmente celulares mais amplas dos anticorpos em relação à vacina de mRNA formulado em LNP truncada compreendendo o fragmento CSP(199-377) com HBsAg. A CSP de comprimento mais integral pode proporcionar epítopos de células T adicionais, levando à maior imunidde celular, o que poderia aumentar potencialmente a proteção contra malária. Exemplo 7: Vacinação de camundongos com MRNA codificando CSP, formulado em LNP

[00641] O presente exemplo mostra que o terminal C da CSP é im- portante para a vacina de mMRNA contra malária para induzir respostas de células T CD4+.

[00642] —Construtos da vacina de MRNA contra malária codificando variantes de CSP (por exemplo, compreendendo um domínio trans- membrana heterólogo (grupo 1), um mutante de deleção da âncora GPI (grupo 2), ou uma variante de CSP de terminal C encurtado/dele- tado (grupo 3)) foram preparados de acordo com o Exemplo 1. O mMRNA foi formulado em nanopartículas lipídicas GNO1-LNPs (vide Exemplo 1.4.2). Os diferentes candidatos à vacina de mRNA foram aplicados por via intramuscular (i.m.; musculus tibialis, camundongos Balb/c) nos dias O e 21 e administrados nas doses de RNA, formula- ções, e vias de administração mostradas na Tabela 13B. Um grupo controle negativo (4) recebeu RNA irrelevante (ácido policitidílico (po- Ili(C) RNA) (Sigma)). Amostras de soro foram coletadas no dia 21, e no dia 35 para determinação das respostas imunológicas humorais. Os esplenócitos foram coletados no dia 35 para determinação das respos- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12579/12614 tas imunológicas celulares. Tabela 13B: Esquema de vacinação do Exemplo 7 o a mundongos Doo semen 11º 1 SS) 384) TM domínio HA 2 HsALB Pf-CSP(19-384) |R7642 Tug Jim. |1x20uL Do ema SE 1 fe eres mer e fim 26 | E e e fi [re |

7.1. Determinação das respostas imunológicas humorais específicas por ELISA:

[00643] ELISA foi realizado usando o peptídio [NANP]; C-terminal ou N-terminal da malária para revestimento (de acordo com as SEQ ID NOs: 10209, 10211, 10210 respectivamente). As placas revestidas fo- ram incubadas usando as respectivas diluições de soro, e a ligação de anticorpos específicos para o peptídio [NANP];, C-terminal ou N- terminal da malária, respectivamente, foi detectada usando anticorpos anti-camundongo biotinilados isótipo-específicos seguido por estrepta- vidina-HRP (peroxidase de raiz-forte) como Amplex como substrato. Os títulos finais de anticorpos (IgG1, IgG2a) direcionados contra o pep- tídio [NANP];, C-terminal ou N-terminal da malária, respectivamente, foram medidos por ELISA no dia 21 e no dia 35 após a vacinação. Os resultados estão mostrados nas Figuras 10 A-F.

7.2. Coloração de citocinas intracelulares:

[00644] —Esplenócitos de camundongos vacinados foram isolados no dia 35 de acordo com um protocolo padrão conhecido na literatura. Co- loração de citocinas intracelulares foi realizada essencialmente da ma- neira descrita no Exemplo 2.3. Os resultados estão mostrados na Fi- gura 11. 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12580/12614

Resultados:

[00645] “Como mostrado na Figura 10, todas as vacinas de CSP mMRNA formulado em LNP induziram fortes respostas imunológicas humoral em camundongos. Nas condições testadas, as vacinas de MRNA de "comprimento mais integral" aplicadas ao grupo 1 e 2 (Tabe- la 13) induziu as respostas imunológicas mais fortes. Por conseguinte, estes achados demonstram que epítopos no terminal C são importan- tes para induzir resposta imunológica humoral em geral, assim como contra epítopos na região NANP imunodominante (vide, por exemplo, Figuras 10 A e 10 B: análise por Elisa com material de revestimento NANP).

[00646] “Como mostrado na Figura 11, todas as vacinas de CSP MRNA formulado em LNP induziram respostas imunológicas celulares em camundongos (respostas de células T CD8+ e/ou CD4+). Notavel- mente, nas condições testadas, a vacina de MRNA sem a âncora GPI (grupo 2, Tabela 13) apresentaram respostas de células T CD8+ e de de células T CD4+ mais fortes que o grupo 1 com o domínio trans- membrana de HA e o grupo 3 com a variante de CSP de terminal C encurtado. Estes achados demonstram mais uma vez que epítopos no terminal C são importantes para induzir respostas de células T CD4+, uma vez que o mMRNA de "comprimento mais integral" (aplicado ao grupo 2) em relação à vacina de mRNA codificando uma variante de CSP encurtada (aplicada ao grupo 3) leva a respostas de células T su- periores (células T CD4+). Exemplo 8: Vacinação de camundongos com MRNA codificando CSP, formulado em LNP

[00647] O presente exemplo mostra que o terminal C é importante a vacina de mMRNA contra malária para induzir respostas de células T CDA4+.

[00648] “Construtos de mMRNA contra malária codificando variantes 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12581/12614 de CSP (compreendendo um domínio transmembrana heterólogo (gru- po 1), ou um peptídio sinal secretor heterólogo (grupo 1, 2, 3, 5), cons- trutos de CSP com uma deleção da âncora GPI (grupo 2), ou CSP de terminal C encurtado (grupo 3), fragmento de CSP com HBsAg heteró- logo (grupo 4)) foram preparados de acordo com o Exemplo 1. O mMRNA foi formulado em nanopartículas lipídicas (LNP-III-3) (vide Exemplo 1.4.1). Os diferentes candidatos à vacina de mMRNA foram aplicados por via intramuscular (i.m.; musculus tibialis, Balb/c mice) nos dias O e 21 e administrados nas doses de RNA, formulações, e vias de administração mostradas na Tabela 14. Um grupo controle ne- gativo (7) recebeu RNA irrelevante (ácido policitidílico (poli(C) RNA) (Sigma). Amostras de soro foram coletadas no dia 21, e no dia 35 para determinação das respostas imunológicas humorais. Os esplenócitos foram coletados no dia 35 para determinação das respostas imunológi- cas celulares. Tabela 14: Esquema de vacinação do Exemplo 8 Nº de camun- |Tratamento Via Vol- dongos ume 1 HsALB Pf-CSP(19-384) TM |[R7641 |1ug im. [1x20uUL domínio HA 2 HsALB Pf-CSP(19-384) (sem |R7642 |1ug |im. [1x20uUL âncora GPI) PE eee 5 rn fm Tre 4 PF-CSP(199- R7271 [lug fim. [1x20uUL 377) Ligante(PVTN) HBsAg E eee 5 rn im Tre Ec es as Tr re FO e e res]

8.1. Determinação das respostas imunológicas humorais específicas por ELISA:

[00649] ELISA foi realizado essencialmente da maneira descrita no Exemplo 7.1. Os resultados estão mostrados nas Figuras 12 A-D. 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12582/12614

8.2. Coloração de citocinas intracelulares:

[00650] — Esplenócitos de camundongos vacinados foram isolados no dia 35 de acordo com um protocolo padrão conhecido na literatura. Co- loração de citocinas intracelulares foi realizada essencialmente da ma- neira descrita no Exemplo 2.3. Os resultados estão mostrados na Fi- gura 13. Resultados:

[00651] — Como mostrado na Figura 12, praticamente todas as vaci- nas de CSP mRNA formulado em LNP induziram fortes respostas imu- nológicas humoral em camundongos. Nas condições testadas, as vaci- nas de mMRNA de "comprimento mais integral" aplicadas aos grupos 1, 2 e 5 com o peptídio sinal secretor heterólogo comparado a uma vari- ante encurtada (aplicada ao grupo 3) ou ao comprimento integral com o peptídio sinal natural (aplicado ao grupo 6) (Tabela 14) induziram respostas imunológicas humorais mais fortes. Por conseguinte, estes achados demonstram que epítopos no terminal C são importantes para induzir respostas imunológicas humorais contra epítopos na região NANP imunodominante (vide, por exemplo, Figuras 12A e 12B: Análi- se por ELISA com revestimento de [NANP];).

[00652] — Como mostrado na Figura 13 A, todas as vacinas de CSP MRNA formulado em LNP induziram respostas imunológicas celulares em camundongos (respostas de células T CD8+ e/ou CD4+). Notavel- mente, nas condições testadas, a vacina de MRNA com uma deleção da âncora GPI (grupo 2, Tabela 14) apresentou respostas de células T CD8+ mais fortes. A vacina de MRNA com o terminal C mais curto (grupo 3, Tabela 14) apresentou resposta de células T CD4+ baixa. Estes achados mais uma vez demonstram que epítopos no terminal C são importantes para induzir especialmente resposta de células T CD4+, uma vez que o mMRNA de "comprimento mais integral" (aplicado aos grupos 1, 2, 5 e 6) em comparação com a vacina de mMRNA codifi- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12583/12614 cando uma variante de CSP encurtada (aplicada ao grupo 3) leva e respostas de células T CD4+ superiores.

[00653] “Como mostrado na Figura 13A, e para melhor visibilidade na Figura 13B, nas condições testadas, a vacina de MRNA contra ma- lária codificando um peptídio sinal secretor heterólogo (peptídio sinal de albumina sérica humano, grupo 5, Tabela 14) apresentou a melhor resposta de células T CD8+ e respostas de células T CD4+ ligeiramen- te melhores em comparação com a vacina de mMRNA contra malária com o peptídio sinal do tipo selvagem (grupo 6, Tabela 14). Parei pag 166 Exemplo 9: Vacinação de camundongos com MRNA codificando CSP, formulado em LNP

[00654] O presente exemplo mostra que vacinas de MRNA compre- endendo diferentes epítopos de células T no terminal C da CSP indu- zem diferentes respostas imunológicas humorais assim como respos- tas imunológicas celulares.

[00655] —Construtos de MRNA contra malária codificando CSP com diferentes variantes C-terminais foram preparados de acordo com o Exemplo 1. O mRNA foi formulado em nanopartículas lipídicas (LNP- I111-3) (vide Exemplo 1,4,1). Os diferentes candidatos à vacina de MRNA foram aplicados por via intramuscular (i.m.; musculus tibialis, camundongos Balb/c) nos dias O e 21 e administrados nas doses de RNA, formulações, e vias de administração mostradas na Tabela 15. Um grupo controle negativo (9) recebeu RNA irrelevante. Amostras de soro foram coletadas no dia 21, e no dia 35 para determinação das respostas imunológicas humorais. Os esplenócitos foram coletados no dia 35 para determinação das respostas imunológicas celulares.

'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12584/12614

Tabela 15: Esquema de vacinação do Exemplo 9

Nº de camun- | Tratamento Via Volume ia O IE REAR e im ren 2 HsALB Pf-CSP(19-272) Ligante(AAY) PF-CSP(310-327) Ligante(AAY) Pf- —[R8100 Tug im.

T1x20uL oo faseaço “SOS mento 1 SS 1x 1 3 HsALB Pf-CSP(19-272) Ligante(AAY) PF-CSP(346- R8101 Tug im.

T1x20uL o sta SE JS EE parar EAR FCEE RE ne im ren HsALB Pf-CSP(19-272) Ligante(G4S) PF-CSP(310-327) Ligante(G4S) Pf- —[R8103 Tug im.

T1x20uL rs O EE arrasar TESE CEEE Rm ne me) EEE ares er me IE EEE im ren LITE LO RRRRRRE OOOO O O OODOODOT Sw qem]

etição 870210044043, de 14/05/2021, pág. 12585/12614

9.1. Determinação das respostas imunológicas humorais específicas por ELISA:

[00656] ELISA foirealizado essencialmente da maneira descrita no Exemplo 7.1. Os resultados estão mostrados nas Figuras 14 A-D.

9.2. Coloração de citocinas intracelulares:

[00657] —Esplenócitos de camundongos vacinados foram isolados no dia 35 de acordo com um protocolo padrão conhecido na literatura. Resumidamente, os esplenócitos isolados foram triturados em um co- ador para células e lavados com PBS/1%FBS seguido por lise das cé- lulas sanguíneas vermelhas. Depois de uma extensa etapa de lavagem com PBS/1%FBS, os esplenócitos foram semeados em placas de 96 poços (2x106 células por poço). As células foram estimuladas com uma mistura de peptídios de CSP (1 ugiml, EMC Microcollections GmbH) (vide Tabela C) para estimular células T CD4+ ou com uma biblioteca de peptídios de CSP (0,5ug/ml, ThermoFisher) de acordo com as SEQ ID NO: 10212-10276 para estimular células T CD8+ na presen;ca de 2,5 ug/ml de um anticorpo anti-CD28 (BD Biosciences) e um inibidor do transporte de proteínas por 6 horas a 37ºC. Depois da estimulação, as células foram lavadas e coloridas para citocinas intracelulares usando o reagente Cytofix/Cytoperm (BD Biosciences) de acordo com as ins- truções do fabricante. Os seguintes anticorpos foram usados para colo- ração: Thy1.2-FITC (1:100), CD8-PE-Cy7 (1:200), TNF-PE (1:100), IFNy-APC (1:100) (eBioscience), CD4-BD Horizon V450 (1:200) (BD Biosciences) e incubados com Fcy-block diluído 1:100. Aqua Dye foi usado para distinguir entre células vivas/mortas (Invitrogen). As células foram adquiridas usando um citômetro de fluxo BD FACS Canto |l (Beckton Dickinson). Os dados de citometria de fluxo foram analisados pelo software FlowJo (Tree Star, Inc.). Os resultados estão mostrados nas Figuras 15.

'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12586/12614

Resultados:

[00658] “Como mostrado na Figura 14 e 15, praticamente todas as vacinas de CSP mRNA formulado em LNP induziram respostas imuno- lógicas humorais e/ou celulares fortes em camundongos.

[00659] Nas condições testadas os construtos com terminal C —Ligante(AAY) PFf-CSP(310-327) Ligante(AAY) PF-CSP(346-375) e —Ligante(AAY) Pf-CSP(346-365) Ligante(AAY) PADRE (R8100 e R8101, grupo 2 e 3, Tabela 15) apresentaram fortes respostas imuno- lógicas humoral. O construto com Ligante(AAY) Pf-CSP(310- 327) Ligante(AAY) Pf-CSP(346-375) (R8100, grupo 2, Tabela 15) apresentou forte resposta de células T CD8+ assim como os construtos com Ligante(G4S) Pf-CSP(310-327) PIf-CSP(346-375) (R8104, gru- po 6, Tabela 15) que também apresentou forte resposta de células T CDB8+. Estes dois construtos (R8100 e R8104, grupo 2 e 6, Tabela 15) também apresentaram a melhor resposta de células T CD4+ dos cons- trutos C-terminais testados.

[00660] A localização relativa entre os epítipos de células T, por exemplo, atingida pela introdução de elementos ligantes heterólogos também influenciou a indução de respostas imunológicas humorais ou celulares. A vacina de MRNA compreendendo, por exemplo, o ligante AAY introduzido, por exemplo, (R8100, grupo 2, Tabela 15) induzium uma resposta imunológica humoral mais forte em comparação com o ligante G4S e, portanto, uma localização alterada dos epítopos de cé- lulas T (R8103, grupo 5).

[00661] Os achados também demonstraram que a ligação direta de epítopos como no construto HSALB Pf-CSP(19-272) Ligante(G4S) Pf- CSP(310-327) PIf-CSP(346-375) (R8104, o grupo 6, Tabela 15) induzir uma resposta de células T CD8+ mais forte que a separação com um ligante adicional HSALB Pf-CSP(19-272) Ligante(G4S) Pf-CSP(310- 327) Ligante(G4S) Pf-CSP(346-375) (R8103, grupo 5, Tabela 15). 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12587/12614

[00662] Por conseguinte, é muito importante testar diferentes com- binações de ligantes e epítopos para induzir a melhor resposta imuno- lógica humoral assim como a melhor resposta imunológica celular. Ca- da uma das combinações testadas mostrou sua capacidade de induzir uma resposta imunológica em diferentes estágios. Uma composição de vacina compreendendo diferentes mRNAs codificando diferentes de- senhos da proteína CSP poderia ser uma ferramenta potente para al- cançar respostas imunológicas humanores e celulares equilibradas e potentes. Exemplo 10: Vacinação de camundongos com MRNA codificando CSP, formulado em LNP

[00663] O presente exemplo mostra que diferentes comprimentos do terminal N assim como das regiões de repetição de NANP no termi- nal C da vacina de MRNA contra malária induz respostas imunológicas humorais e celulares diferentes.

[00664] — Construtos de MRNA contra malária codificando CSP com diferentes variantes da região de repetição de NANP nas variantes C- terminais e N-terminais foram preparados de acordo com o Exemplo

1. O mRNA foi formulado em nanopartículas lipídicas (LNP-II1-3) (vide Exemplo 1,4,1). Os diferentes candidatos à vacina de mRNA foram aplicados por via intramuscular (i.m.; musculus tibialis, camundongos Balb/c) nos dias O e 21 e administrados nas doses de RNA, formula- ções, e vias de administração mostradas na Tabela 16. Um grupo con- trole negativo (9) recebeu RNA irrelevante. Amostras de soro foram coletadas no dia 21, e no dia 35 para determinação das respostas imu- nológicas humorais. Os esplenócitos foram coletados no dia 35 para determinação das respostas imunológicas celulares.

'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12588/12614

10.1. Determinação das respostas imunológicas humorais específicas por ELISA:

[00665] ELISA foi realizado essencialmente da maneira descrita no Exemplo 7.1. Os resultados estão mostrados nas Figuras 16 A-D.

10.2. Coloração de citocinas intracelulares:

[00666] —Esplenócitos de camundongos vacinados foram isolados no dia 35 de acordo com um protocolo padrão conhecido na literatura. Co- loração de citocinas intracelulares foi realizada essencialmente da ma- neira descrita no Exemplo 9.2. Os resultados estão mostrados na Fi- gura 17. Resultados:

[00667] “Como mostrado na Figura 16, praticamente todas as vaci- nas de CSP mRNA formulado em LNP induziram resposta imunológica humoral em camundongos. Nas condições testadas, a vacina de MRNA com repetições de NANP encurtadas no terminal C (grupos 1-3, Tabela 16) apresentou menos resposta de anticorpos em comparação com vacinas de mRNA encurtadas no terminal N (grupos 4-6, Tabela 16). Por conseguinte, estes achados demonstram que epítopos no ter- minal C e na região de repetição de NANP são importantes para indu- zir respostas imunológicas humorais.

[00668] “Como mostrado na Figura 17, todas as vacinas de CSP MRNA formulado em LNP induziram respostas imunológicas celulares em camundongos (respostas de células T CD8+ e/ou CD4+). Notavel- mente, nas condições testadas, a vacina de MRNA com repetições de NANP encurtadas no terminal C (grupos 1-3, Tabela 16) apresentou resposta de células T CD8+ mais forte, porém menos resposta de célu- las T CD4+ e vice-versa as vacinas de MRNA com terminal N encurta- do (grupos 4-6, Tabela 16) apresentaram resposta de células T CD4+ mais forte, porém menos resposta de células T CD8+. Por conseguin- te, estes achados demonstram que epítopos no terminal N são impor- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12590/12614 tantes para induzir uma resposta de células T CD8+ ao passo que epí- topos no terminaal C são importantes para induzir uma resposta de cé- lulas T CD4+. Exemplo 11: Vacinação de camundongos com MRNA codificando CSP, formulado em LNP

[00669] O presente exemplo mostra que vacinas de mMRNA contra malária compreendendo mRNAs capeados de formas diferentes (cap1 or capO) induzem respostas imunológicas humorais diferentes assim como respostas imunológicas celulares diferentes.

[00670] — Construtos de MRNA contra malária codificando CSP foram capeados de formas diferentes e foram preparados de acordo com o Exemplo 1. O mRNA foi formulado em nanopartículas lipídicas (LNP- I111-3) (vide Exemplo 1,4,1). Os diferentes candidatos à vacina de MRNA foram aplicados por via intramuscular (i.m.; musculus tibialis, camundongos Balb/c) nos dias O e 21 e administrados nas doses de RNA, formulações, e vias de administração mostradas na Tabela 17. Um grupo controle negativo (3) recebeu RNA irrelevante. Amostras de soro foram coletadas no dia 21, e no dia 35 para determinação das respostas imunológicas humorais. Os esplenócitos foram coletados no dia 35 para determinação das respostas imunológicas celulares. Tabela 17: Esquema de vacinação do Exemplo 11 TOO agree UTEIS Juno MSI Jets De fee dongos mento o o ea ES PE es im 2 (19-384) po ga em e e 12 (19-384) o A A vante

11.1. Determinação das respostas imunológicas humorais específicas por ELISA:

[00671] ELISA foi realizado essencialmente da maneira descrita no 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12591/12614

Exemplo 7.1. Os resultados estão mostrados nas Figuras 18.

11.2. Coloração de citocinas intracelulares:

[00672] —Esplenócitos de camundongos vacinados foram isolados no dia 35 de acordo com um protocolo padrão conhecido na literatura. Co- loração de citocinas intracelulares foi realizada essencialmente da ma- neira descrita no Exemplo 9.2. Os resultados estão mostrados na Fi- gura 19. Resultados:

[00673] “Como mostrado na Figura 18, independentemente do ca- peamento que foi usado, todas as vacinas de CSP mRNA formulado em LNP induziram fortes respostas imunológicas humoral em camun- dongos.

[00674] “Como mostrado na Figura 19, todas as vacinas de CSP MRNA formulado em LNP induziram respostas imunológicas celulares em camundongos (respostas de células T CD8+ e/ou CD4+). Notavel- mente, nas condições testadas, a vacina de MRNA com cap1 (grupo 2, Tabela 18) apresentou resposta de células T CD8+ muito forte e tam- bém forte resposta de células T CD4+. Exemplo 12: Vacinação de camundongos com MRNA codificando CSP, formulado em LNP

[00675] O presente exemplo mostra que vacinas de mMRNA capea- dos de formas diferentes contra malária induzem respostas imunológi- cas humorais diferentes bem como respostas imunológicas celulares diferentes e que um intervalo mais longo entre a vacinação inicial e a vacinação de reforço pode induzir respostas imunológicas mais fortes.

[00676] — Construtos de MRNA contra malária codificando CSP foram capeados de formas diferentes e preparados de acordo com o Exem- plo 1. O mRNA foi formulado em nanopartículas lipídicas (LNP-l11-3) (vide Exemplo 1.4.1). Os diferentes candidatos à vacina de mRNA fo- ram aplicados por via intramuscular (i.m.; musculus tibialis, camundon- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12592/12614 gos Balb/c) no dia O e 21 ou 56 e administrados nas doses de RNA, formulações, e vias de administração mostradas na Tabela 18. Dois grupos controle negativo (3 and 6) receberam tampão NaCl. Amostras de soro foram coletadas no dia 21, dia 35, dia 49, dia 70, e no dia 84 para determinação das respostas imunológicas humorais. Os esplenó- citos foram coletados no dia 84 para determinação das respostas imu- nológicas celulares. Tabela 18: Esquema de vacinação do Exemplo 12 Nº de Tratamento Capea Via Vol- Vac- camun- mento ume inação no dongos dia 1 HsALB Pf- capo R7267 |5ug lim. |1x25uUL/0e21 CSP(19-397) 2 HsALB Pf- cap1 R8229 |5ug lim. |1x25uL/0e21 CSP(19-397) 4 HsALB Pf- capo R7267 |5ug lim. |1x25uL/0e56 CSP(19-397) HsALB Pf- cap1 R8229 |5ug lim. |1x25uL | 0e56 CSP(19-397)

12.1. Determinação das respostas imunológicas humorais específicas por ELISA:

[00677] ELISA foi realizado essencialmente da maneira descrita no Exemplo 7.1. Os resultados estão mostrados nas Figuras 20.

12.2. Coloração de citocinas intracelulares:

[00678] —“Esplenócitos de camundongos vacinados foram isolados no dia 84 de acordo com um protocolo padrão conhecido na literatura. Co- loração de citocinas intracelulares foi realizada essencialmente da ma- neira descrita no Exemplo 6.2. Os resultados estão mostrados na Fi- gura 21. 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12593/12614

Resultados:

[00679] “Como mostrado na Figura 20, todas as vacinas CSP mRNA formulado em LNP testadas induziram respostas imunológicas humo- rais muito fortes em camundongos em um nível equiparável. A respos- ta imunológica humoral é aumentada com um reforço posterior no dia 56 em vez de no dia 21 da vacina de CSP mRNA formulado em LNP. Um intervalo prolongado entre a vacinação inicial e a vacinação de re- forço leva a respostas imunológicas humorais aumentadas (mostradas para títulos finais de IIG1 e IgG2a (grupo 5 e 6, dias 70 e 84). As vaci- nas de CSP compreendendo cap1i em vez de capO apresentaram em geral respostas imunológicas mais pronunciadas, especialmente para os primeiros instantes.

[00680] “Como mostrado na Figura 21, todas as vacinas de CSP MRNA formulado em LNP induziram respostas imunológicas celulares em camundongos (respostas de células T CD8+ e/ou CD4+). Notavel- mente, nas condições testadas, a vacina de MRNA com cap1 apresen- tou resposta de células T CD8+ muito forte e também resposta de célu- las T CD4+ fortes. Exemplo 13: Vacinação de camundongos com MRNA codificando CSP, formulado em LNP

[00681] O presente exemplo mostra que vacinas de mMRNA contra malária com mMRNA compreendendo formas alternativas da extremida- de 3' (por exemplo, hSL-A64-N5 ou hSL-A100), induzem fortes respos- tas imunológicas humorais assim como celulares em camundongos. Além disso, uma vacina de MRNA compreendendo mRNA com nucleo- tídeos quimicamente modificados (por exemplo, pseudourinina W%) in- duz respostas imunológicas.

[00682] Vacinas de mMRNA contra malária compreendendo constru- tos de MRNA com diferentes extremidades 3' codificando CSP foram preparadas de acordo com o Exemplo 1. O mRNA foi formulado em 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12594/12614 nanopartículas lipídicas (LNP-I11-3) (vide Exemplo 1.4.1). Os diferentes candidatos à vacina de mMRNA foram aplicados por via intramuscular (i.m.; musculus tibialis, camundongos Balb/c) no dia O e no dia 21 e administrados nas doses de RNA, formulações, e vias de administra- ção mostradas na Tabela 18. Um grupo controle negativo (7) recebeu tampão NaCl.

Amostras de soro foram coletadas no dia 21 e no dia 35 para determinação das respostas imunológicas humorais.

Os esplenó- citos foram coletados no dia 84 para determinação das respostas imu- nológicas celulares. 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12595/12614

Tabela 19: Esquema de vacinação do Exemplo 13 Nº de camun- | Tratamento Modificação | Extremidade 3º Via |Volume mae UE QD TS So Ps PS E o ee a an es ie im rasa

EE mare a aero aro ie im frase

IE mare A ae es io im frase

ATE EEE aero ars io im f6e5a

EE ares fim raro ams io im frase

EE iara DEPARA fr raro err ie im frase

E A o a a a 8 = etição 870210044043, de 14/05/2021, pág. 12596/12614

13.1. Determinação das respostas imunológicas humorais específicas por ELISA:

[00683] ELISA foi realizado essencialmente da maneira descrita no Exemplo 5.1. Os resultados estão mostrados nas Figuras 22.

13.2. Coloração de citocinas intracelulares:

[00684] —“Esplenócitos de camundongos vacinados foram isolados no dia 35 de acordo com um protocolo padrão conhecido na literatura. Co- loração de citocinas intracelulares foi realizada essencialmente da ma- neira descrita no Exemplo 6.2. Os resultados estão mostrados na Fi- gura 23. Resultados:

[00685] “Como mostrado na Figura 22, independentemente de qual extremidade 3' é usada, todas as vacinas de CSP mRNA formulado em LNP induziram respostas imunológicas humorais muito fortes em ca- mundongos. Além disso, uma vacina de MRNA compreendendo mMRNA com nucleotídeos quimicamente modificados (por exemplo, pseudouri- nina W) também induz respostas imunológicas humorais.

[00686] “Como mostrado na Figura 23, independentemente de qual extremidade 3' é usada, todas as vacinas de CSP mRNA formulado em LNP induziram fortes respostas imunológicas celulares em camundon- gos (respostas de células T CD8+ e/ou CD4+). Notavelmente, nas condições testadas, a vacina de MRNA compreendendo nucleotídeos modificados com pseudouridina (W) apresentou resposta de células T CD8+ e resposta de células T CD4+ mais baixas que a vacina de mMRNA compreendendo nucleotídeos não modificados. Independente- mente de qual extremidade 3' é usada, são geradas respostas imuno- lógicas humorais assim como respostas imunológicas celulares fortes. Exemplo 14: Análise da expressão de diferentes construtos de mMRNA codificando CSP em células 293T

[00687] O presente exemplo mostra que construtos de MRNA com 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12597/12614 extremidades 3' alternativas codificando diferentes construtos de CSP são expressos em células de mamíferos.

[00688] Para determinar a expressão de proteínas in vitro de alguns dos construtos de RNA, células 293T foram transitoriamente transfec- tadas com mMRNA codificando o antígeno de CSP. 24 horas antes da transfecção, as células 293T foram semeadas em uma placa de 6 po- ços a uma densidade de 500.000 células/poço em um meio de cultura de células. As células foram transfectadas com 1 ug de RNA usando Lipofectamina 2000 (Invitrogen) como agente de transfecção. Os lisa- dos celulares foram submetidos à SDS-PAGE e análise da mancha ocidental foi efetuada da maneira comumente conhecida na literatura, usando soro anti-CSP de falciparum de coelho (Alpha Diagnostics) contra uma parte da região de repetição da CSP e o terminal C (diluído 1:1000) ou anticorpo anti-alfa-tubulina de camundongo (1:1000; Ab- cam) como anticorpos primários em combinação com o anticorpo se- cundário anti-coelho de cabra IgG IRDye 800CW (Li-Cor, diluído 1:10000) ou IgG IRDye& 680RD anti-camundongo de cabra (Li-Cor, diluído 1:100000) (vide Figura 24). A detecção e quantificação foram feitas com a ajuda de um sistema de detecção Li-Cor (sistema de ima- gens Odyssey CLx) em combinação com o software Image Studio Lite. A Tabela 19 contém os construtos de MRNA que foram usados no ex- perimento: Tabela 20: Construtos de RNA usados para análise da mancha ocidental mm o AR |? [ASAS PFOSP(T9-S69) Higante(PVTN HASAg = |nSiATOo = jRrSSS | [PD — |FSALA PROSP(TI ATA Migante(PVTNI HASAg = |nsiatoo => jReS6S | etição 870210044043, de 14/05/2021, pág. 12598/12614

As O (8346-365) Ligante(AAY) PADRE Ligante N5 (PVTN) HBsAg (346-365) Ligante(AAY) PADRE Ligante (PVTN) HBsAg

E usaram Resultados:

[00689] “Como mostrado na Figura 24 todos os construtos de MRNA testados expressaram proteínas CSP detectáveis, o que é um pré- requisito para uma vacina contra malária à base de mMRNA. Exemplo 15: Análise da expressão de diferentes construtos de mMRNA codificando CSP

[00690] Para determinar a expressão de proteínas in vitro dos cons- trutos de MRNA, os construtos com diferentes terminais N heterólogos (grupo A e B, Tabela 20) ou com diferentes peptídios sinal heterólogos (grupo C e D, Tabela 20) foram misturados com componentes do Sis- tema de Lisados de Reticulócitos de Coelho Promega de acordo com o protocolo do fabricante. O lisado contém os componentes celulares necessários para síntese de proteínas (tRNA, ribossomas, aminoáci- dos, fatores de iniciação, elongação e terminação), como controle posi- tivo foi usado o Luciferase RNA do kit Lysate System. O resultado da translação foi analisado por SDS-Page e análise da mancha ocidental (anticorpo de estreptavidina IRDye 800CW (1:2000)). A Tabela 20 re- sume os construtos de RNA testados.

'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12599/12614

Tabela 21: Panorama dos construtos de MRNA usados no Exemplo 15 A HsALB Pf-CSP(19- AGA4-N5-C30-hSL-N5 [R8780 384) Ligante(SGG) Ferritina HsALB Pf-CSP(19- hSL-A100 R8781 384) Ligante(SGG) Ferritina Cc LumSynt Ligante(GGS4-GGG) Pf- AGA4-N5-C30-hSL-N5 [R8782 CSP(19-397) LumSynt Ligante(GGS4-GGG) Pf- hSL-A100 R8783 CSP(19-397) RNA de controle do kit Lysate System Fo Resultados:

[00691] — Como mostrado na Figura 25, os construtos de MRNA usa- dos levaram a uma expressão de proteínas detectável, o que é um pré- requisito para uma vacina contra malária à base de mMRNA. Exemplo 16: Imunogenicidade funcional da vacina de MRNA com malária em um desafio

[00692] O objetivo do presente exemplo é avaliar a imunogenicidade funcional da vacina contra malária à base de mMRNA inventiva por meio de um ensaio ELISA aprimorado, um modelo de desafio de transferência passiva (Exemplo 16.1), e um modelo de desafio ativo (Exemplo 16.2).

16.1. Análise do soro de camundongos vacinados com várias vacinas de mRNA à base de CSP:

[00693] Amostras de soro de camundongos vacinados com vacinas à base de CSP formulada em LNP são analisadas por um modelo de ELISA consolidado com CSP recombinante e esporozoítas como con- troles positivos.

[00694] Além disso, 400 ul de soro de camundongo são analisados em um modelo de transferência passiva: anticorpos de CSP nas amos- tras de soro são transferidos de forma passiva para camundongos (n=4) que foram infectados 2 horas depois da injeção com esporozoí- tas quiméricos de CSP de Plasmodium berghei-Plasmodium falci- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12600/12614 parum (vide Tabela 22). Os camundongos foram então avaliados quan- to à carga reduzida de parasitas no fígado. Tabela 22: Panorama da análise de transferência passiva de acordo com o Exemplo 16.1. Nº de camun- Via infecção dongos com 2000 esporozítas — - com 250 esporozoítas

16.2. Estudo do desafio ativo de camundongos vacinados com várias vacinas de mMRNA à base de CSP:

[00695] Vacinas de mMRNA formulado em LNP contra malária foram testados em um modelo de desafio ativo. Os camundongos foram en- tão avaliados quanto à carga reduzida de parasitas no fígado.

[00696] Vacinas de MRNA formulado em LNP codificando CSP são injetadas por via intramuscular nos dias O e 21. Com início no dia 35 após a vacinação, os camundongos vacinados foram desafiados com esporozoítas quiméricos de CSP de Plasmodium berghei-Plasmodium falciparum (vide Tabela 23). Tabela 23: Esquema de vacinação do Exemplo 16.2. Nº de camun- | Tratamento Via |Volume | Desafio/dose dongos 1 5 Vacina demRNA | 1ilug im. |1x25uL csP 2 5 Vacina de mRNA | 5ug im. |1x25uL csP 3 5 Vacina demRNA |/10ug jim. |1x25uUL No dia 35 com 2000 csP esporozoítas 4 5 MRNA irrelevante |10ug Jim. |1x25uL controle Eee Ee pe 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12601/12614

Exemplo 17: Análise da vacina de mRNA polivalente contra malária

[00697] O presente exemplo mostra uma composição de vacina de MRNA compreendendo diferentes construtos de CSP de acordo com a invenção compreendendo, por exemplo, porém sem limitação: e pelo menos um mRNA codificando uma CSP(I) de com- primento mais integral e pelo menos um segundo mRNA codificando um fragmento de CSP encurtado com HBsAg (II), ou e pelo menos dois construtos de mMRNA diferentes compre- endendo ou diferentes epítopos auxiliares de células T heterólogos ou derivados de CSP (1) e (Il), ou e pelo menos um mRNA codificando uma CSP de compri- mento mais integral com um peptídio sinal heterólogo (1) e pelo menos um segundo mRNA codificando um fragmento de CSP encurtado com HBsAg (Il).

[00698] —RNAs codificando diferentes vacinas de mMRNA contra malá- ria codificando CSP ou um fragmento ou variante da mesma (vide Ta- bela 24) foram gerados de acordo com o Exemplo 1 ae formulados em LNP's de acordo com o Exemplo 1.4.1 ou 1.4.2. Camundongos Balb/c (9 camundongos por grupo) foram vacinados no dia O e no dia 21 por via intramuscular (i.m). O soro foi coletado nos dias 21 e 28 para testar as respostas imunológicas humorais. Os esplenócitos foram coletados no dia 28 para testar as respostas imunológicas celulares via um ICS como descrito acima.

Tabela 24: Exemplo de grupos de animais e programa de vacinação do Exemplo 17 o [TampaonacIosTcontalemegevo) 8 e mRNacadeando ESP [e e mRNAcendo SP [9 8 mRNA codrficando CSP (1) e mRRNA codificado CSP (1) | 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12602/12614

Exemplo 18: Segurança, reatogenicidade e imunogenicidade da vacina de mRNA contra malária em adultos saudáveis.

[00699] “Para demonstrar a segurança, a reatogenicidade e a imu- nogenicidade da vacina de mMRNA contra malária, foi dado início a um ensaio clínico fase |.

[00700] Para desenvolvimento clínico, é usado um RNA que fora produzido em condições GMP (por exemplo, por um procedimento descrito no documento WO2016/180430).

[00701] Neste ensaio fase | da vacina de MRNA contra malária, di- ferentes dosagens da candidata à vacina de MRNA contra malária se- rão administradas a indivíduos adultos saudáveis em um programa de uma ou duas doses. Os indivíduos serão admitidos sequencialmente nos diferentes grupos de ensaio para receber uma ou duas doses da vacina de mMRNA contra malária. Os indivíduos nos grupos de duas do- ses receberão uma segunda dose 28 dias ou de preferência 56 dias depois. Um grupo adicional de indivíduos controle receberá uma única dose de solução salina no dia 1. As informações de segurança para eventos adversos (AEs) solicitados (dias 1-7 após a vacinação) e não solicitados (dias 1-28 após a vacinação serão registradas em fichas diárias. Os AEs graves, AEs que levam à suspensão prematura do en- saio ou do recebimento da segunda dose, AEs de interesse especial e AEs com atendimento médico serão registrados durante todo o ensaio (desde o dia 1 até o dia 365 após a última dose da vacina). Dados de segurança especificados serão revisados por uma equipe interna de revisão da segurança e por um DSMB em um calendário pré-definido. 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12603/12614

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. RNA codificante A para vacina, caracterizado por com- preender a) pelomenos uma região não transladada 5' heteróloga (5-UTR) e/ou pelo menos uma região não transladada 3' heteróloga (3-UTR); e b) pelomenos uma sequência codificadora operacional- mente ligada à referida 3-UTR e/ou 5-UTR codificando pelo menos uma proteína antigênica derivada da proteína circunsporozoíta (CSP) de um parasita da malária, ou um fragmento imunogênico ou variante imunogênica do mesmo:

2. RNA codificante de acordo com a reivindicação 1, carac- terizado pelo fato de que o parasita da malária é selecionado dentre Plasmodium falciparum (Pf), Plasmodium knowlesi (Pk), Plasmodium ovale (Po), Plasmodium simiovale (Ps), ou Plasmodium vivax (Pv).

3. RNA codificante de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que o parasita da malária é Plasmodium fal- ciparum (Pf), de preferência Plasmodium falciparum 3D7.

4. RNA codificante de acordo com qualquer uma das reivin- dicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que a sequência codificado- ra codifica adicionalmente pelo menos um elemento de peptídico ou proteico heterólogo selecionado dentre um peptídio sinal heterólogo, um ligante, um epítopo auxiliar, um domínio de conglomeração de an- tígenos, ou um domínio transmembrana.

5. RNA codificante de acordo com a reivindicação 4, carac- terizado pelo fato de que o peptídio sinal heterólogo é derivado de SPARC de acordo com a SEQ ID NO: 6208, Hslns-iso1 de acordo com a SEQ ID NO: 6207, HsALB de acordo com a SEQ ID NO: 6205, ou IgE de acordo com a SEQ ID NO: 6206, ou fragmento ou variante de qualquer um destes.

'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12604/12614

6. RNA codificante de acordo com a reivindicação 4, carac- terizado pelo fato de que o epítopo auxiliar é derivado dentre o peptídio auxiliar P2 de acordo com a SEQ ID NO: 6272, o epítopo auxiliar PADRE de acordo com a SEQ ID NO: 6273, a matriz carreadora HBsAg de acordo com a SEQ ID NO: 6274, ou fragmento ou variante de qualquer um destes.

7. RNA codificante de acordo com a reivindicação 4, carac- terizado pelo fato de que o domínio de conglomeração de antígenos é derivado dentre ferritina de acordo com a SEQ ID NO: 10162, lumazi- na-sintase (LS) de acordo com a SEQ ID NO: 10153, antígeno de su- perfície do vírus da hepatite B (HBsAg) de acordo com a SEQ ID NO: 6274, ou fragmento ou variante de qualquer um destes.

8. RNA codificante de acordo com a reivindicação 4, carac- terizado pelo fato de que o domínio transmembrana é derivado dentre um domínio transmembrana de HA de acordo com a SEQ ID NOs: 6302, ou fragmento ou variante do mesmo.

9. RNA codificante de acordo com qualquer uma das reivin- dicações precedentes, caracterizado pelo fato de que pelo menos uma proteína antigênica compreende, de preferência da direção N-terminal para a direção C-terminal: a) opcionalmente, uma sequência sinal secretora heteróloga selecionada dentre as SEQ ID NOs: 6205-6208; b) pelo menos uma proteína derivada de CSP de um parasi- ta da malária, ou fragmentos ou variantes do mesmo; c) opcionalmente, pelo menos um epítopo auxiliar heteró- logo selecionado dentre as SEQ ID NOs: 6272, 6273, ou 6274 ou fra- gmentos ou variantes do mesmo; d) opcionalmente, pelo menos um domínio de congolmera- ção de antígenos heterólogo selecionado dentre as SEQ ID NOs: 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12605/12614

6274, 10153, 10162, ou fragmentos ou variantes do mesmo, e e) opcionalmente, pelo menos um domínio transmembrana heterólogo selecionado dentre as SEQ ID NOs: 6302 ou fragmentos ou variantes do mesmo, onde a), b), c), d) e/ou e) podem ser conectados de prefe- rência via pelo menos um elemento ligante peptídico selecionado den- tre as SEQ ID NOs: 6241-6244, 10141, 10147.

10. RNA codificante de acordo com qualquer uma das rei- vindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que pelo menos uma sequência codificadora codifica pelo menos uma das sequências de aminoácidos sendo idênticas ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idênticas a qualquer uma das SEQ ID NOs: 1-36, 2081-2120, 2481-2886, 8742-8753, 10080, ou um fragmento imunogênico ou uma variante imunogênica de qualquer uma destas.

11. RNA codificante de acordo com qualquer uma das rei- vindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que pelo menos uma sequência codificadora compreende pelo menos uma sequência de ácidos nucleicos sendo idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica a qualquer uma das SEQ ID NOs: 37-328, 2121- 2480, 2887-6134, 8754-8855, 10086-10139, ou um fragmento ou vari- ante de qualquer uma destas sequências.

12. RNA codificante de acordo com qualquer uma das rei- vindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que pelo menos uma sequência codificadora é uma sequência codificadora códon- modificada, onde a sequência de aminoácidos codificada pela pelo menos uma sequência codificadora códon-modificada de preferência não é modificada em relação à sequência de aminoácidos codificada pela sequência codificadora do tipo selvagem correspondente.

'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12606/12614

13. RNA codificante de acordo com a reivindicação 12, ca- racterizado pelo fato de que pelo menos uma sequência codificadora códon-modificada é selecionada dentre sequência codificadora C- maximizada, sequência codificadora CAl-maximizada, sequência codi- ficadora adaptada ao uso de códons humanos, sequência codificadora com teor de G/C modificado, e sequência codificadora G/C-otimizada, ou qualquer combinação das mesmas.

14. RNA codificante de acordo com a reivindicação 11 ou 13, caracterizado pelo fato de que pelo me- nos uma sequência codificadora compreende uma sequência codifica- dora códon-modificada compreendendo uma sequência de ácidos nu- cleicos sendo idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica a qualquer uma das SEQ ID NOs: 41-328, 2161-2480, 3293- 6134, 8754-8855, 10092-10139 ou um fragmento ou variante de qual- quer uma destas sequências.

15. RNA codificante de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 11 a 14, caracterizado pelo fato de que pelo menos uma sequência codificadora compreende uma sequência codificadora có- don-modificada compreendendo uma sequência de ácidos nucleicos sendo idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica a qualquer uma das SEQ ID NOs: 41-328, 8754-8855 ou um fragmento ou variante de qualquer uma destas sequências.

16. RNA codificante de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 11 a 15, caracterizado pelo fato de que pelo menos uma sequência codificadora compreende uma sequência codificadora G/C- otimizada compreendendo uma sequência de ácidos nucleicos sendo idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica a qual- quer uma das SEQ ID NOs: 41-112, 2161-2240, 3293-3698, 8754- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12607/12614

8783, 10092-10103 ou um fragmento ou variante de qualquer uma des- tas sequências.

17. RNA codificante de acordo com qualquer uma das rei- vindicações precedentes, caracterizado por ser um mMRNA, um RNA auto-replicante, um RNA circular, ou um RNA replicon.

18. RNA codificante de acordo com qualquer uma das rei- vindicações precedentes, caracterizado por ser um mMRNA.

19. RNA codificante de acordo com qualquer uma das rei- vindicações precedentes, caracterizado por compreender uma estrutu- ra 5'-cap, de preferência m7G, cap0, cap1, cap2, um capo modificado ou uma estrutura cap1 modificada.

20. RNA codificante de acordo com qualquer uma das rei- vindicações precedentes, caracterizado por compreender pelo menos uma sequência de poli(A), de preferência compreendendo 30 a 150 nucleotídeos adenosina e/ou pelo menos uma sequência de poli(C), de preferência compreendendo 10 a 40 nucleotídeos citosina.

21. RNA codificante de acordo com qualquer uma das rei- vindicações precedentes, caracterizado por compreender pelo menos uma alça-tronco de histona, onde a alça-tronco histona de preferência compreende uma sequência de ácidos nucleicos de acordo com as SEQ ID NOs: 6173 ou 6174 ou um fragmento ou variante das mes- mas.

22. RNA codificante de acordo com qualquer uma das rei- vindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que pelo menos uma 3'-UTR heteróloga compreende uma sequência de ácidos nuclei- cos derivada de uma 3-UTR de um gene selecionado dentre PSMB3, ALB7, alfa-globina, CASP1, COX6B1, GNAS, NDUFA1 e RPS9, ou de um homólogo, um fragmento ou uma variante de qualquer um destes genes.

23. RNA codificante de acordo com qualquer uma das rei- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12608/12614 vindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que pelo menos uma 5'-UTR heterólog compreende uma sequência de ácidos nucleicos derivada de uma 5-UTR de um gene selecionado dentre HSD17BA, RPL32, ASAH1, ATPSA1, MP68, NDUFA4, NOSIP, RPL31, SLC7A3, TUBB4B e UBQLN?2, ou de um homólogo, um fragmento ou uma vari- ante de qualquer um destes genes.

24. RNA codificante de acordo com qualquer uma das rei- vindicações precedentes, caracterizado por compreender a-1. pelo menos uma 5"-UTR derivada de uma 5-UTR de um gene HSD17BA4, ou de uma sequência de RNA correspondente, homólogo, fragmento ou variante do mesmo e pelo menos uma 3-UTR derivada de uma 3-UTR de um gene PSMB3, ou de uma sequência de RNA correspondente, homólogo, fragmento ou variante do mesmo; ou a-3. pelo menos uma 5"-UTR derivada de uma 5-UTR de um gene SLC7A3, ou de uma sequência de RNA correspondente, homólogo, fragmento ou variante do mesmo e pelo menos uma 3-UTR derivada de uma 3-UTR de um gene PSMB3, ou de uma sequência de RNA correspondente, homólogo, fragmento ou variante do mesmo; ou i-2. pelo menos uma 5'-UTR derivada de uma 5-UTR de um gene RPL32, ou de uma sequência de RNA correspondente, homólogo, fragmento ou variante do mesmo e pelo menos uma 3-UTR derivada de uma 3-UTR de um gene ALB7, ou de uma sequência de RNA correspondente, homólogo, fragmento ou variante do mesmo; ou i-3. pelo menos uma 3-UTR derivada de uma 3-UTR de um gene de alfa-globina, ou de uma sequência de RNA correspon- dente, homólogo, fragmento ou variante do mesmo.

25. RNA codificante de acordo com qualquer uma das rei- vindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que compreende ou consiste em uma sequência de RNA que é idêntica ou pelo menos 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12609/12614

95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica a uma sequência de ácidos nu- cleicos selecionado do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 329- 2080, 6312-8741, 8856-10079 ou um fragmento ou variante de qual- quer uma destas sequências.

26. Composição caracterizada por compreender pelo me- nos um RNA codificante como definido em qualquer uma das reivindi- cações | a 24, caracterizada por compreender opcionalmente pelo menos um carreador farmaceuticamente aceitável.

27. Composição de acordo com a reivindicação 26, caracte- rizada pelo fato de que pelo menos um RNA codificante é complexado ou associado ou pelo menos parcialmente complexado ou parcialmene associado a um ou mais compostos catiônicos ou policatiônicos, de preferência um polímero catiônico ou policatiônico, um polissacarídeo catiônico ou policatiônico, um lipídio catiônico ou policatiônico, uma proteína catiônica ou policatiônica, um peptídio catiônico ou policatiô- nico, ou quaisquer combinações dos mesmos.

28. Composição de acordo com a reivindicação 27, caracte- rizada pelo fato de que pelo menos um RNA codificante é complexado ou associado a um ou mais lipídios, formando assim lipossomas, na- nopartículas lipídicas, lipoplexos, e/ou nanolipossomas.

29. Composição de acordo com a reivindicação 28, caracte- rizada pelo fato de que o pelo menos RNA codificante é complexado com um ou mais lipídios formando assim nanopartículas lipídicas (LNP).

30. Composição de acordo com a reivindicação 29, caracte- rizada pelo fato de que a LNP consiste essencialmente em (i) pelo menos um lipídio catiônico; (ii) pelo menos um lipídio neutro; (iii) pelo menos um esteroide ou análogo de esteroide; e 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12610/12614

(iv) pelo menos um PEG-lipídio, onde (i) a (iv) estão em uma razão molar de cerca de 20-60% de lipídio catiônico, 5-25% de lipídio neutro, 25-55% de este- rol, e 0,5-15% de PEG-lipídio.

31. Vacina caracterizada por compreender o RNA codifican- te como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 25, ou a composição como definida em qualquer uma das reivindicações 26 a

30.

32. Vacina de acordo com a reivindicação 31, caracterizada por provocar uma resposta imunológica adaptativa.

33. Kit ou kit de partes, caracterizado por compreender o RNA codificante como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 25, a composição como definida em qualquer uma das reivindica- ções 26 a 30, e/ou a vacina como definida na reivindicação 31 ou 32, opcionalmente compreendendo um veículo líquido para solubilização, e, opcionalmente, instruções técnicas apresentando informações sobre a administração e a dosagem dos componentes.

34. RNA codificante de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 1 a 25, composição de acordo com a reivindicação 26 a 30, vacina de acordo com a reivindicação 31 ou 32, ou kit ou kit de par- tes de acordo com a reivindicação 33, caracterizado por ser para uso como um medicamento.

35. RNA codificante de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 1 a 25, composição de acordo com a reivindicação 26 a 30, vacina de acordo com a reivindicação 31 ou 32, ou kit ou kit de par- tes de acordo com a reivindicação 33, caracterizado por ser para uso no tratamento ou na profilaxia de malária, ou de um distúrbio relacio- nado com tal infecção.

36. Método para o tratamento ou a prevenção de um distúr- bio, caracterizado por compreender aplicar ou administrar a um indiví- 'etição 8702 10044043, de 14/05/2021, pág. 12611/12614 duo com necessidade do mesma o RNA codificante como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 25, a composição como definida em qualquer uma das reivindicações 26 a 30, a vacina como definida na reivindicação 31 ou 32, ou o kit ou kit de partes como definido na reivindicação 33.

37. Método de acordo com a reivindicação 36, caracteriza- do pelo fato de que o distúrbio é uma infecção por malária, ou um dis- túrbio relacionado com tal infecção.

38. Método de acordo com a reivindicação 36 ou 37, carac- terizado pelo fato de que o indivíduo com necessidade é um indivíduo mamífero, de preferência um indivíduo humano.

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