KR20150038663A

KR20150038663A - 신규한 밀크씨슬 추출물, 제조방법 및 용도

Info

Publication number: KR20150038663A
Application number: KR20157006607A
Authority: KR
Inventors: 아스트리드 나겔; 제이미 자이올 아귀레; 산티아고 룰 프로우스
Original assignee: 유로메드 에스.에이.
Priority date: 2007-12-23
Filing date: 2008-12-23
Publication date: 2015-04-08
Also published as: CN104189043A; ES2438003T3; EP2222320A2; JP2014074051A; EP2567703A2; BRPI0822069B8; JP2011507812A; BRPI0822069A2; CA2709947C; KR20100126272A; PT2222320E; HRP20131165T1; KR101541938B1; SI2222320T1; CN101925360A; AU2008340922A1; RU2489161C2; RU2010130855A; BRPI0822069B1; US20110027396A1

Abstract

본 발명은 밀크씨슬 열매 추출물, 특히 방출률이 증가되고 흡수성이 개선된 플라바노리그난 제제 제조방법 및 용도, 특히 간질환 치료 및 예방에 관한 것이다.

Description

신규한 밀크씨슬 추출물, 제조방법 및 용도{NOVEL MILK THISTLE EXTRACT, METHOD FOR THE PRODUCTION, AND USE}

밀크씨슬 (실리붐 마리아눔((Silybum marianum)) 또는 카르두우스 마리아누수)는 특히 유럽 남서부 또는 중부 (오스트리아, 헝가리) 에서 재배되는 식물이며, 유라시아, 북아메리카, 남아메리카 및 호주에서 천연적으로 자생된다. 중국 역시 생산 지역이다.

다양한 간 및 담낭 기능장애들 치료 및 예방에 대한 밀크씨슬 (종자 및 열매)의 생약 효능은 알려져 있다. 생약은 과육이 제거된 성숙 열매로 제조되며, 최소한의 실리마린 함량 1.5% (유럽약전(Ph. Eur.), 2007)을 가진다. 밀크씨슬로 제조되는 팅크제(통상 생약의 알코올 추출물)는 예로부터 알려져 있다. 특히 분리된 실리마린이 적합하다 (예를들면, DE 1 923 982, DE　1 767 666 (Madaus)).

실리마린은 플라바노리그난 복합체, 즉, 폴리히드록시페닐크로마논이며, 1960년대에 식물에서 처음 분리되었다 (논문, Janiak Bernhard, 1960년6월, 베를린 대학 응용과학과 (DE 2020407), Pelter A., Haensel R., Tetrahedron Letters, 25, (1968)).

실리마린은 하기의 플라바노리그난 복합체들 I-IV의 혼합물로 이루어지며; 특히, 일차 성분들은 4가지 유형의 플라바노리그난들인 실리빈 (실리비닌) (실리마린 I), 실리디아닌 (실리마린 II), 및 실리크리스틴 (실리마린 III)

및 이소실리빈 (실리마린 IV)로 구성된다. 이들 플라바노리그난들에서는 탁시폴린이 코니페닐 알코올에 연결된다.

또한 공지된 2차 성분들은 디히드로실리빈, 3-데속시실리크리스틴, 데속시실리디아닌 (실리모닌), 실리아드린, 실리비놈, 실리에르민, 및 네오실리메린이다.

밀크씨슬 열매는 추출물 제조에 사용된다. 이러한 밀크씨슬 추출물 및 제조방법은 선행기술, 예를들면 DE 1 923 982, DE 29 14 330 (Madaus)에 기재되어 있다.

또한 밀크씨슬 열매 건조 추출물 (Extr. cardui mariae fruct. siccum)이 공지되어 있으며, 이는 무엇보다도 추출제 초산에틸을 이용하여 생약식물에서 얻어지고 적용 가능한 Ph. Eur.을 따라 표준화되었다.

상기 건조 추출물 요건은 바람직하게는 30-65 중량% 실리마린 함량(다른 함량 범위도 가능)이며, 실리마린은 다음 분획물들을 함유한다:

40-65 중량%: 실리빈(실리비닌) A 및 B (부분입체이성질체 혼합물, C₂₅H₂₂OH₁₀, MW 482.4) 및

10-20 중량%: 이소실리비닌 A 및 B (부분입체이성질체 혼합물, C₂₅H₂₂OH_10,MW 482.4) 및

20-45 중량%: 실리다닌 및 실리크리스틴 (C₂₅H₂₂OH₁₀, MW 482.4).

추출물을 제조하기 위하여, 원재료 (본 경우, 생약식물)는 통상 탈지, 추출, 여과, 농축, 및 정제된다.

상기 연속적인 추출을 위하여, 초산에틸 / 에탄올 / 아세톤 / 메탄올 (선택적으로는 수성 형태) 또는 상기 언급 용매들과의 수성 혼합물을 이용하고, 통상 여과가 수행되며, 이어 농축이 진행된다. 이후 에탄올 및 헥산 (추가적 탈지)을 이용하여 정제되어, 상기 함량의 실리마린이 수득된다.

이러한 조성물에서 실리마린 방출률은 30 내지 약 40% 이다(Ph. Eur. 5.7; 2.9.3 (01/2006:20903 개정)에 따라 측정, 예를들면 바스켓 방법, 패들 모델 적용).

그러나, 천연 추출물에서 실리마린 방출률이 더욱 증가될 필요성이 존재한다.

상기 플라바노리그난들은 물에서 거의 또는 전혀 용해되지 않는다는 것은 알려져 있다 (순수한 실리마린 용해도는 pH 6.9에서 약 0.08 mg/mL). 이러한 용해 특성으로 인하여 이들 화합물 방출률, 및 이에 따라 인간 또는 포유동물 체내에서 이들 생체이용률 및 흡수성은 적절하지 않다.

방출률 증가를 위하여, 예를들면 폴리알코올, 아미노당, 또는 에스테르를 이용한 플라바노리그난 유도체화, 시클로덱스트린과 같은 포접 화합물을 이용한 (EP 0 422 497 B1 (Madaus)) 또는 예를들면 포스파티딜콜린과 같은 착화 화합물을 이용한 착화 등의 시도가 있었다.

그러나, 생리적 외래 물질은 유해 부작용을 유발시키는 단점이 있다.

또한 선행기술에서는 방출률을 높이기 위하여 예를들면 1-비닐-2-피롤리돈, 만니톨, 및 기타 (EP 0 722 918 B1, US 5,906,991 (Madaus))와 같은 운반체 물질을 사용하는 것이 알려져 있다. 또한, 습윤제 예를들면 폴리솔베이트 (덴시드)가 필요하다. EP　1　021　198　B1 (Madaus)에서는 PEG를 이용한 실리마린 공침을 개시하고 있다. 그러나, 이들 상기 방법은 모두 투여를 더욱 어렵게 하며, 외래 물질은 불명확한 부작용을 유발시키는 단점들이 있다.

대한민국 공개특허공보 제10-2004-0074052호 (2004.08.21)

따라서, 본 발명의 목적은 개선된 밀크씨슬 열매 추출물, 특히 유리하게 개선된 실리마린 방출률을 가지면서도 천연 특성을 유지하는 추출물을 제공하는 것이다. 본 목적은 실질적으로 첨가제, 보충제, 운반체 물질 또는 습윤제를 포함하지 않는 추출물을 제조하는 것이다.

본 목적은 다음과 같은 단계들을 포함하여 구성되는 밀크씨슬 열매 추출물 제조방법을 제공하여 달성된다:

a.) 바람직하게는 40-80℃, 더욱 바람직하게는 50-70℃에서 중간 (moderate) 극성의 용매 (예를들면, 초산에틸, 에탄올, 아세톤, 메탄올, 선택적으로 수성 분획물 포함)를 이용한 생약식물 추출 단계,

b.) 바람직하게는 여과에 의한 분리 단계,

c.) 바람직하게는 진공 중 교반하며 60℃ 이하 바람직하게는 40℃ 이하에서의 농축 단계, 및 c') 선택적으로는 열수로 세척 단계,

d.) 에탄올, 바람직하게는 96% 이상의 에탄올, 또는 이와 유사한 극성의 용매와 혼합, 및 이후 헥산 또는 이와 유사한 극성의 용매와 혼합, 및 바람직하게는 1-100 mbar 압력에서 농축, 및 생성된 에탄올 및 물을 포함한 모든 용매의 제거 단계,

e.) 건조 및 선택적으로는 분쇄 단계,

f.) 무수 알코올, 바람직하게는 에탄올 중에 용해(taken up)시키는 단계,

g.) 선택적으로는 여과 및 농축 단계, 및

h.) 건조 및 선택적으로는 분쇄 단계.

놀랍게도, 추가적인 단계 f.)로 인하여 실리마린 방출률이 80% (비교예들 참조)까지 상당히 증가되었다. 본 발명에 의한 밀크씨슬 열매 추출물 용량이 더욱 낮아질 수 있으므로 특히 바람직하다. 또한 선행기술에서 첨가제, 보충제, 운반체 물질 및 습윤제를 이용하여야만 달성될 수 있었던 품질이 달성되므로 바람직하다.

단계 f.)에서의 용어 "무수 알코올"은 바람직하게는 C1-C4 알코올, 특히 바람직하게는 에탄올 예를들면 99% 또는 99.5% 정도로 순수한 에탄올을 포함한다.

따라서, 또한 본 발명은 80% 또는 이상의 실리마린 방출률을 가지는 밀크씨슬 열매 추출물 제조방법에 관한 것이며, 이때 실리마린 함량이 15-85 중량%, 특히 30-65 중량%인 추출물은 무수 알코올로 처리되고(taken up), 선택적으로 여과 및 농축, 이후 건조 및 선택적으로 분쇄된다.

본 발명의 범위 내에서, "실리마린"은 (최소한) 4가지 유형의 물질인 실리빈, 실리디아닌, 실리크리스틴, 및 이소실리빈이 여러 농도로 함유된 혼합물을 말한다. 이들 물질의 상호 비율 및 혼합물에서의 추가 물질의 존재는 중요하지 않다. 그러나, 이들 물질이 개정 Ph. Eur. 또는 DAB 요건을 충족시키는 것이 바람직하다. 본 발명의 경우는 이를 충족시킨다.

"80% 또는 이상의 실리마린 방출률"이란 수용액 중 활성물질이 최소한 80% 용해되는 것을 의미한다 (Ph. Eur.에 따른 표준; 실시예 참조).

이에 따라 유리하게 흡수성이 개선된다.

단계 f.) 결과로 수득된 밀크씨슬 열매 추출물은 생성 추출물 중 결정 분획물이 상당히 감소되고, 실질적으로 비정질의 결정 변성물(crystal modification)을 가지는 밀크씨슬 열매 추출물이 얻어진다.

따라서 본 발명은 실질적으로 비정질의 결정 변성물을 가지는 신규한 밀크씨슬 열매 추출물 또는 플라바노리그난 제제에 관한 것이다 (도 1에서의 X-선 구조분석 비교 시험 참조).

특히 바람직한 일 예에서, 본 발명은 비정질의 결정 변성물을 포함한 신규한 밀크씨슬 열매 추출물 또는 플라바노리그난 제제에 관한 것이며, 이때 결정 분획물은 20% 이하, 바람직하게는 10% 이하, 더욱 바람직하게는 7% 이하, 심지어 5% 이하이다.

따라서 또한 본 발명은 본 발명에 의한 밀크씨슬 열매 추출물로 구성된 약제, 또는 간 및 담낭 기능장애, 특히 독성 간 손상 (지방간, 알코올에 의한 간 손상), 간증(hepatose) 예를 들면 버섯 중독, 급성 간부전, 간괴사, 간 이상증(liver dystrophy), 간경화, 간 섬유증, 간 비대 및 지방간 변성, 간 기능저하 및 간염 특히 C형 간염 치료 및 예방 용도에 관한 것이다.

또한 본 발명은, 본 발명에 의한 밀크씨슬 열매 추출물로 구성된 본 발명에 의한 약제를 포함하는 약제학적 제형에 관한 것이다.

본 발명에 의한 밀크씨슬 열매 추출물은 단위용량(dosage unit)의 약제학적 제형 형태로 제공될 수 있다. 이것은 제제가 개별 분량 형태, 예를들면 정제, 당제, 캡슐, 환제, 좌제, 앰플 형태로 존재할 수 있고, 이의 활성물질 함량은 단일함량(single dose) 일부 또는 복수배일 수 있다는 것을 의미한다. 단위용량은 예를 들면, 단일함량의 1, 2, 3, 또는 4배, 또는 단일함량의 1/2, 1/3, 또는 1/4배를 함유할 수 있다. 단일함량은 바람직하게는 일회 투여에 제공되는 활성물질 함량을 포함하며, 통상 일일 함량 또는 일일 함량의 1/2, 1/3 또는 1/4에 해당된다.

비독성, 비활성, 약제학적으로 적합한 운반체 물질들은 고체상, 반고상 또는 액상 희석제, 부형제, 및 모든 유형의 제형 보강제를 의미하는 것으로 이해되어야 한다.

정제, 당제, 캡슐, 환제, 과립제, 좌제, 용액, 시럽, 현탁액, 및 에멀젼들은 바람직한 약제학적 제형들로 언급될 수 있다. 정제, 당제, 캡슐, 환제 및 과립제는 활성물질과 함께 통상적인 운반체 물질, 예를들면 a) 부형제 및 증량제 예를들면 전분, 유당, 자당, 포도당, 만니톨, 및 규산, b) 결합제, 예를들면 카르복시메틸셀룰로스, 알기네이트, 젤라틴, 및 폴리비닐피롤리돈, c) 보습제, 예를들면 글리세린, d) 붕해제, 예를들면 한천, 탄산칼슘 및 탄산나트륨, e) 용해지연제, 예를들면 파라핀, f) 흡수촉진제, 예를들면 4가 암모늄 화합물, g) 습윤제, 예를들면 세틸 알코올 및 모노스테아르산글리세린, h) 흡착제, 예를들면 카올린 및 벤토나이트, 및 i) 윤활제, 예를들면 활석, 스테아르산칼슘, 스테아르산마그네슘, 및 고상의 폴리에틸렌 글리콜, 또는 상기 a) 내지 i) 언급된 물질들의 혼합물을 포함한다.

정제, 당제, 캡슐, 환제 및 과립제는 선택적으로 불투명화제를 함유한 통상의 코팅 및 쉘과 함께 제공될 수 있고, 또한 활성물질 또는 활성물질들을 위장관으로만 또는 바람직하게는 이의 특정 부위들로, 선택적으로는 지연 방식으로 전달하는 조성물을 포함할 수 있고, 예를 들면 고분자성 물질 및 왁스가 캡슐화 화합물로 사용될 수 있다.

또한 활성물질 또는 활성물질들은 선택적으로 하나 이상의 상기 운반체 물질과 함께 캡슐 형태로 존재할 수 있다.

좌제는 활성물질 또는 활성물질들과 함께, 통상의 수용성 또는 수불용성 운반체 물질, 예를 들면 폴리에틸렌 글리콜, 지방 예를들면 코코아 버터, 및 고급 에스테르 (예를들면, C14 알코올과 C16 지방산의 에스테르), 또는 이들 물질의 혼합물을 포함할 수 있다.

용액 및 에멀젼은 활성물질 또는 활성물질들과 함께, 통상의 운반체 물질 예를들면 용매, 용해화제, 및 유화제, 예를들면 물, 에틸알코올, 이소프로필 알코올, 탄산에틸, 초산에틸, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸렌 글리콜, 디메틸포르마이드, 오일, 특히 면실유, 낙화생유(peanut oil), 옥수수배아유, 올리브유, 피마자유, 참기름, 글리세린, 글리세린 포르말, 테트라히드로푸르푸릴 알코올, 폴리에틸렌 글리콜 및 솔비탄의 지방산 에스테르, 또는 이들 물질들의 혼합물을 함유할 수 있다.

현탁액은 활성물질 또는 활성물질들과 함께, 통상의 운반체 물질, 예를 들면 액상 희석제, 예를 들면 물, 에틸알코올, 및 프로필렌 글리콜, 현탁제, 예를 들면 에톡시화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 솔바이트, 및 솔비탄 에스테르, 미소결정성 셀룰로스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 한천, 및 트래거캔스 검(tragacanth gum), 또는 이들 물질의 혼합물을 함유할 수 있다. 상기 제형은 또한 색소, 보존제, 및 향- 및 맛-개선제, 예를들면 페퍼민트 오일 및 유칼리유, 및 감미제 예를들면 사카린을 포함할 수 있다.

본 발명에 따르면, 개선된 밀크씨슬 열매 추출물, 특히 유리하게 개선된 실리마린 방출률을 가지면서도 천연 특성을 유지하는 추출물을 제공할 수 있고, 실질적으로 첨가제, 보충제, 운반체 물질 또는 습윤제를 포함하지 않는 추출물을 제조할 수 있다. 본 발명은 밀크씨슬 열매 추출물, 특히 방출률이 증가되고 흡수성이 개선된 플라바노리그난 제제를 제공할 수 있고, 이를 이용한 간질환 치료 및 예방제를 제공할 수 있다.

도 1은 X-선 구조분석 (실시예 2의 조건)에 의한, 실리비닌 Ch.-B.: 194051 및 실리비닌 Ch.-B.: 7085i에 기초한 결정형 변환을 나타내는 도면이다.
도 2는 단계 f.)에 의해 제조된 생성물 Ref. 7233i에 대해 얻어진 X-선 회절 다이아그램이다.
도 3은 단계 f.)가 없이 제조된 생성물 Ref. 7232i에 대해 얻어진 X-선 회절 다이아그램이다.

하기 실시예들은 단지 본 발명을 예시하기 위한 것이며 이에 본 발명을 제한하지 아니한다.

실시예 1:

실리마린 방출 비교 시험:

상기 설명에 의한 비교 추출물들 (실리비닌 Ch.-B.: 194051, Ch.-B.: 7085i)이 제조되었고, 추가 방법 단계 f.)에 의한 실리비닌 Ch.-B.: 7085i가 제조되었다.

하기 (실리마린) 활성물질 방출은 pH 7.5 및, Ph. Eur.에 언급된 조건에 따른 것이다 (고체 용해 시험; Ph. Eur 5.7; 2.9.3 (01/2006:20903):

시료	시료 취함	용해량 %
실리비닌 Ch.-B.: 194051	30분 후	4.16%
실리비닌 Ch.-B.: 7085i	30분 후	49.13%

본 결과는, 단계 f.)에서 무수 알코올로 처리하면, 비정질 구조 및 결정 구조로 이루어진 이전의 불량한 수용성의 실리비닌 혼합물이 비정질의 결정 변성물로 변환되어(도 1 참조)(즉, 결정 격자 구조가 변경), 용해도 및 활성물질 방출이 개선된다는 것을 보인다.

본 방법은 실리비닌 뿐만 아니라 기타 실리마린 이성질체 용해도 역시 개선시키므로, 이러한 추가 방법 단계로 인하여 3분 후 실리비닌으로써 계산된 (HPLC - Ph. Eur. 01/2007:2071) 최소한 80%의 총 실리마린 활성물질 방출을 가지는 상기 추출물을 제조할 수 있다.

도 1은 X-선 구조분석 (실시예 2의 조건)에 의한, 실리비닌 Ch.-B.: 194051 및 실리비닌 Ch.-B.: 7085i 에 기초한 결정형 변환을 보인다.

방사선 분석은 브래그-브렌타노 기하학(Bragg-Brentano geometry) 및 X'Celerator 검출기를 이용한 PANalytical B.V.사의 X'Pert Pro MPD 회절분석기로, 방사선 투과 사진 분석이 수행되었다.

추가적인 비교 시험들은 아래에 기재된다:

실시예 2:

방법

a. 시료 제조:

두 개의 고상의 분말 시료들은 본 발명에 의한 방법을 이용하여 단계 f.)에 의해 제조된 생성물 Ref. 7233i 및 단계 f.)가 없이 제조된 생성물 Ref. 7232i이다.

b. 분말법에 의한 X-선 회절 분석

분말 재료 일부를 0.5 밀리미터 직경의 린데만 유리 모세관에 채움.

c. 장비 및 시험 조건:

PANalytical X'Pert PRO MPD 회절분석기는 240 밀리미터 반경의 9/9 각도측정기, 하이브리드 단색화 장치를 가지는 평행 렌즈들, 및 회전장치를 가진 유리 모세관용 시료 홀더의 기하 전달장치 (transfer geometry) 가 구비됨.

Cu-Ka 조사 (k = 1.5406 Å).

파워: 45 kV - 40 mA.

0.19 밀리미터에서 선량(quantity)을 정하는 슬릿

0.02 조사량(radiation)의 입사 선량 및 회절 선량을 가진 솔러 개구(Soller aperture)

d. 유효 길이(active length) 2122을 가지는 X'Celerator 측정 단위.

0.017의 스텝 크기 및 스텝 당 1500 초의 측정 시간을 갖는 3°∼60°29의 플러싱(Flushing) 29.

e.목적

분말법을 이용하여 X-선 회절 다이아그램을 얻음. 결정화율 (rate of crystallization) 판단.

f. 방법

결정화율은 결정 상 및 비정질 상들로 이루어진 시료 혼합물 중 결정 상(phase)의 중량 백분율이며, 결정화 지수 Ci를 이용한다.

Ci = 100[Xc/(Xa+Xc)], 여기서 Xc는 결정 상의 중량 분율이다.

Xc 수치는 연구 대상 각도 범위 내의 (결정 상에서의) 모든 좁은 포인트들 영역의 합계로부터 결정되었다. Xa 값은 (비정질 상에서의) 넓은 포인트들 또는 "회절선상(halo)" 영역을 결정하여 얻어졌다.

g. 결과

도 2 및 3은 모든 각도 측정 범위에서 얻어진 다이아그램이다. 결정 및 비정질 상들로 구성된 시료 혼합물이 이용되었다.

Ci 수치는 시료 Ref. 7233i의 경우 7%이고(도 2 참조), 시료 Ref. 7232i의 경우 24%이었다(도 3 참조).

Claims

(a) 초산에틸, 에탄올, 메탄올 및 아세톤으로 구성된 군으로부터 선택된 중간 극성(moderate polarity) 용매를 이용하여, 40-80℃에서 생약 식물(실리붐 마리아눔(Silybum marianum))을 추출하는 단계,
(b) 상기 (a)단계에서 추출된 생약 식물 추출물을 분리하는 단계,
(c) 60℃ 이하에서 농축하는 단계,
(d) 에탄올과의 혼합, 이후 헥산과의 혼합 및 농축 단계,
(e) 건조 단계,
(f) 무수 알코올 중에 용해(taken up)시키는 단계, 및
(h) 건조 단계를 포함하는 80% 이상의 실리마린 방출률을 가지는 밀크씨슬 열매 추출물 제조방법으로 수득되는, 밀크씨슬 열매 추출물.
결정 분획물이 20% 이하인, 비정질의 결정 변성물(amorphous crystal modification)로 구성되는 밀크씨슬 열매 추출물.
제2항에 있어서,
결정 분획물이 10% 이하인 것을 특징으로 하는 밀크씨슬 열매 추출물.
제2항에 있어서,
결정 분획물이 7% 이하인 것을 특징으로 하는 밀크씨슬 열매 추출물.
제1항 내지 제4항 중 어느 하나의 항에 있어서,
간 및 담낭 기능 장애의 치료 및 예방에 사용되는 것을 특징으로 하는 밀크씨슬 열매 추출물.
제5항에 있어서,
상기 간 및 담낭 기능 장애는 독성 간 손상, 간증(hepatose), 간 기능저하 또는 간염인 것을 특징으로 하는 밀크씨슬 열매 추출물.
제6항에 있어서,
상기 독성 간 손상은 지방간 또는 알코올에 의한 간 손상이고, 상기 간증(hepatose)은 버섯 중독, 급성 간부전, 간괴사, 간 이상증(liver dystrophy), 간경화, 간 섬유증, 간 비대 또는 지방간 변성이며, 상기 간염은 C형 간염인 것을 특징으로 하는 밀크씨슬 열매 추출물.
제5항에 의한 밀크씨슬 열매 추출물을 함유하는, 간 및 담낭 기능 장애의 치료 및 예방을 위한 약제학적 제제.