CZ292832B6

CZ292832B6 - Způsob přípravy silymarinu se zvýšenou rozpustností

Info

Publication number: CZ292832B6
Application number: CZ20013153A
Authority: CZ
Inventors: Ladislav Cvak; Milan Stuchlík; Květoslava Benešová
Original assignee: Ivax Pharmaceuticals S.R.O.
Priority date: 2001-08-30
Filing date: 2001-08-30
Publication date: 2003-12-17
Also published as: KR20040074052A; US7384919B2; ATE381340T1; AU2002323517B2; NZ531429A; JP2005519863A; EP1420802B1; CZ20013153A3; MXPA04001700A; NO20041300L; TWI238065B; CA2458963A1; DE60224202T2; DE60224202D1; EP1420802A1; US20050101546A1; CN1582159A; EP1420802A4; WO2003020291A1

Abstract

Práškové extrakty z ostropestřce mariánského vykazující vyšší rozpustnost v disolučních médiích ve srovnání s čistými flavanolignany se připraví tak, že se 10 hmotnostních dílů substance obsahující flavanolignany ostropestřce mariánského rozpustí ve 30 až 120 objemových dílech rozpouštědla ze skupiny nerozvětvených či rozvětvených alkanolů či ketonů obsahujících 1 až 4 atomy uhlíku a získaný roztok se smísí s vodným roztokem obsahujícím 0,5 až 10 hmotnostních dílů alespoň jedné pomocné látky ze skupiny tetritolů, pentitolů, hexitolů a/nebo vinylpyrrolidonových či ethylenoxidových homopolymerů, načež se rozpouštědla odstraní a získá se amorfní produkt.ŕ

Description

Způsob přípravy silymarinu se zvýšenou rozpustností

Oblast techniky

Vynález se týká způsobu přípravy substance obsahující flavanolignany izolované zostropestře mariánského, která vykazuje lepší rozpustnost ve vodě oproti čistým flavanolignanům. Taková substance je zejména využitelná pro přípravu pevných léčivých a dietetických přípravků (zrněné prášky, tablety, tobolky) se zlepšenou disoluční charakteristikou.

Dosavadní stav techniky

Plody ostropestřce mariánského [Silybum marianum (L.) Gaertn.] obsahují řadu isomemích látek flavanol-lignanového typu - silybinin A, silybinin B, isosilybinin A, isosilybinin B, silydianin a silychristin, souhrnně označovaných jako flavanolignany ostropestře mariánského nebo silymarin. Všechny uvedené látky vykazují řadu farmakologických aktivit: antioxidační účinek, stabilizace buněčných membrán, stimulace biosyntézy proteinů. Tyto účinky jsou základem použití silymarinu a jeho složek, zejména silybinu (směs silybininu A a silybininu B) jako hepatoprotektiva. Silymarin působí proti akutní i chronické intoxikaci jater řadou toxinů: chlorid uhličitý, galaktosamin, paracetamol, ethanol, phalloidin a α-amanitin. Proto je silymarin aktivní složkou mnoha přípravků používaných k léčbě a prevenci jatemích onemocnění (Legalon, Flavobion, Silygal aj.). Více informací o silymarinu a jeho použití lze najít v následujících přehledných článcích a v publikacích v těchto článcích citovaných: Fitoterapie, LXVI, 3-42 (1995); Chemické listy 90, 859(1996).

Suchý extrakt ostropestřce mariánského, obvykle označovaný jako silymarin, používaný pro přípravu hepatoprotektivních léčivých přípravků či potravinových doplňků, tak představuje rafinovaný extrakt, standardizovaný na obsah flavanolignanů. Podle návrhu USP monografie (Pharm. Fórum 26, 630-632 (2000)) musí obsahovat 40 až 80 % sumy flavanolignanů z níž musí být 40 až 65 % sumy silybininu A a B, 20 až 45 % sumy silychristinu a silydianinu a 10 až 20 % sumy isosilybininu A a B, vše hodnoceno HPLC metodou na standard silybinu (směs silybininu AaB).

Použití flavanolignanů ostropestře mariánského (silymarinu a jeho složek, zejména silybinu) v léčivých přípravcích omezuje jejich nízká rozpustnost jak v hydrofilních, tak lipofilních rozpouštědlech. Tento nedostatek se pokoušela řešit řada níže uvedených patentových postupů:

Příprava esterů silybinu (směsi silybininu AaB, případně i isosilybininu A a B) s dikarboxylovými kyselinami. Typickým patentovým příkladem (patenty US 4 895 839 a 5 196 448) je dvojsodná sůl bis-hemisukcinátu silybinu, která je součástí Léku Legalon inj.

Příprava glykosidů silybinu je předmětem patentu CZ 287 657. Popsané glykosidy silymarinu jsou rozpustnější ve vodě než silybin a vykazují podobné účinky jako silymarin.

Komplexní sloučeniny silymarinu nebo silybinu sfosfolipidy popisují patenty CS 257 289 a 261 637. Tyto komplexy se připravují rozpuštěním složek (1 mol silymarinu či silybinu a 0,3 až 2,0 molů fosfatidyl cholinu, fosfatidyl šeřinu či fosfatidyl ethanolaminu) v aprotickém rozpouštědle (dioxan či aceton) a vysrážením komplexu přídavkem alifatického uhlovodíku či lyofilizací nebo rozprašovacím sušením. Popsané komplexní sloučeniny jsou podstatou substance nazývané Silipid, které je v současné době v klinickém zkoušení.

Inkluzní komplexy silybininu s cyklodextriny jsou popsány v patentu US 5 198 430. Popsány jsou komplexy silybininu s α-, β- i γ-cyklodextrinem a jejich deriváty v molámím poměru 1 mol silybininu s 1 až 4 moly příslušného cyklodextrinu. Komplexy se připravují rozpouštěním obou

-1 CZ 292832 B6 ><

i komponent ve vodném amoniaku a odstraněním amoniaku buď opatřením, nebo neutralizací kyselinou chlorovodíkovou a následným sušením nebo lyofílizací.

Poslední nám známý patentový postup zvýšení biodostupnosti silymarinu spočívá v přípravě 5 komprecipitátů flavanol-lignanů s nosiči a detergenty (patent US 5 906 991). Jako vhodné nosiče jsou popsány novorozpustné sacharidy, deriváty celulosy a polyvinylpyrolidon, jako detergent jsou používány polysorbáty mastných kyselin. Tyto koprecipitáty vykazují v disolučním testu vyšší rozpustnost než neupravený silymarin a tudíž lze předpokládat i jejich vyšší biodostupnost.

Podstata vynálezu

Při testování rozpustnosti silymarinu připraveného různými postupy disolučním testem bylo překvapivě zjištěno, že některé vzorky silymarinu připraveného sprejovým sušením ethanolového 15 nebo vodně-ethanolového roztoku silymarinu vykazovaly podstatně lepší rozpustnost, než jiné vzorky z podobných pokusů nebo než standardně vyráběný silymarin. Rentgenovou práškovou analýzou bylo zjištěno, že zatímco dobře rozpustné vzorky jsou zcela amorfní, vzorky špatně rozpustné vykazují znatelnou krystalinitu přítomného silybininu. Amorfní produkt lze připravit sprejovým sušením ethanolového, acetonového, methanolového, isopropylalkoholového nebo 20 etylacetátového roztoku samotného silymarinu. Získaný produkt má však velmi nízkou sypnou hmotnost a je roto obtížně prakticky využitelný. Produkt s vyšší sypnou hmotností lze získat sušením vodně-ethanolového, vodně-acetonového, vodně-methanolového či vodně-isopropylalkoholového roztoku silymarinu, ale právě u těchto, vodu obsahujících roztoků se enormně zvyšuje nebezpečí krystalizace silybininu během sušení. Bylo zjištěno, že krystalizací silybininu 25 z vodně-ethanolového, vodně-acetonového, vodně-methanolového či vodně-isopropylalkoholového roztoku silymarinu lze s úspěchem zabránit přídavkem některých látek, jako alkoholických cukrů, tetritolů, peptitolů či hexitolů, například manitolu, treitolu, erytritolu, arabinitolu, xylitolu, talitolu, maltitolu či sorbitolu, nebo polyvinylpyrrolidonu a nebo plyethylenoxidu. Vedle zabránění krystalizace silybininu z vodně-alkoholické či vodně-acetonového roztoku během sušení 30 má přídavek těchto vodorozpustných pomocných látek ještě příznivý účinek na rozpustnost konečného produktu, kde tyto látky vytvářejí vodorozpustnou matrici a tak ještě usnadňují přístup vody k vlastnímu amorfnímu silymarinu.

Postup lze aplikovat dokonce i na čisté složky silymarinu - silybin (směs silybininu A a silybi35 ninu B) nebo silydianin, u nichž je nebezpečí krystalizace během sušení podstatné vyšší než je tomu v případě směsi ftavanolignanů - silymarinu a jejichž rozpustnost ve vodě a tím i biodostupnost je, vzhledem k jejich krystalické struktuře, nepatrné a nelze je tudíž používat pro přípravu pevných léčivých přípravků jako takové.

Postupem podle vynálezu se připraví amorfní substance, obsahující flavanolignany ostropestřce mariánského. Substance se připraví sprejovým sušením nebo lyofílizací vodně-ethanolového, vodně-acetonového, vodně-methanolového, vodně-isopropylalkoholového či vodně-terc.butanolového roztoku, který obsahuje vedle flavanolignanů vodorozpustné pomocné látky, které brání krystalizací některé ze složek flavanolignanů během sušení a dále zvyšují rozpustnost 45 připravené substance. Jako vodorozpustné pomocné látky lze použít přírodní látky, tzv. alkoholické cukry - tetritoly, pentitoly či hexitoly, například treitol, erythritol, arabinitol, xylitol, talitol, manitol, maltitol či sorbitol. Dále lze použít některé syntetické polymemí látky jako polyvinylpyrrolidon nebo polyethylenoxid. Experimentálně bylo zjištěno, že ke zvýšení rozpustnosti směsi flavanolignanů postačuje přídavek 5 hmotnostních % těchto pomocných látek, vztaženo na 50 hmotnost výsledné suché substance. Naproti tomu pro zvýšení rozpustnosti čistých flavanolignanů silybinu a silydianinu je nutno použít podstatně větší množství pomocných látek, obvykle minimálně 30 hmotnostních %. Z hlediska přípravy substance se zvýšenou rozpustností není horní hranice obsahu pomocných látek nijak omezena. Ovšem z hlediska praktické využitelnosti substance pro přípravu léčivých přípravků je substance obsahující méně než 50 hmotnostních 55 procent vlastních flavanolignanů obtížně použitelná.

-2CZ 292832 B6

Terapeutického potenciálu obsahových látek ostropestře mariánského lze využít k preventivnímu ovlivňování zdravotního stavu osob ohrožených diabetem a rakovinou tlustého střeva. Stále rostoucí počty diabetiků v populaci (celosvětově asi 50 milionů) a značný výskyt karcinomů tlustého střeva představují daleko větší skupiny nemocných než jsou lidé s onemocněním jater a náhodně intoxikovaní lidé, z kterých se dosud rekrutuje většina konzumentů silymarinových přípravků. Jsou známy experimentální práce o hypoglykemických účincích ostropestře mariánského [např. Marles R.J., Famsworth N.R.: Antidiabetic plants and their active constituents. Phytomedicine 2, 137-189, (,1995)] a pozitivním vlivu flavanolignanů při diabetů [Soto C.P. et all.: Clin. Pharmacology, Toxicology & Endocrinology, 119, 125-129, (1989)]. V novější době je rovněž patentováno použití flavanolignanů z ostropestře mariánského jako adjuvans při chemoterapii tumorů (Patent US 5 714 473) i jako samotných antiproliferativních léčiv (Patent US 5 912 265). K takovým indikacím je možno použít zejména silymarin podle vynálezu, u něhož lze předpokládat lepší biologickou dostupnost ve srovnání se standardní kvalitou silymarinu, a to ve formě potravních doplňků. Účinná látka je kombinována se synergický působícími nerozpustnými vlákninami z rostliny rodu Amaranthus a s živočišným chitosinem i s rozpustnou vlákninou ze semen Cyamopsis tetragonoglobulus (galaktomanan guar).

Příklady provedení vynálezu

Postup podle vynálezu blíže vysvětlí následující příklady, které však jeho rozsah nijak neomezují.

Příklad 1

Vzorek 1 g silymarinu bylo rozpuštěno v 600 ml absolutního ethanolu za varu. K roztoku byl přijat za míchání horký roztok 20 g manitolu ve 200 ml vody. Získaný roztok byl udržován při teplotě minimálně 75 °C a byl postupně usušen na sprejové sušárně na suchý produkt.

Vzorek 2.

g silymarinu bylo rozpuštěno v 600 ml acetonu za varu. K roztoku byl přilit za míchání horký roztok 5 g sorbitolu ve 100 ml vody. Získaný roztok byl udržován pod refluxem a byl postupně usušen na suchý produkt.

Vzorek 3.

g silymarinu bylo rozpuštěno v 900 ml methanolu za varu. K roztoku byl přilit za míchání horký roztok 10 g maltitolu ve 100 ml vody. Získaný roztok byl udržován pod refluxem a byl postupně sprejově usušen na suchý produkt.

Vzorek 4.

g silymarinu bylo rozpuštěno v 900 mal isopropylalkoholu za varu. K roztoku byl přilit za míchání horký roztok 15 xylitolu ve 100 ml vody. Získaný roztok byl udržován při teplotě minimálně 80 °C a byl postupně sprejově usušen na suchý produkt.

Vzorek 5.

g silymarinu bylo rozpuštěno ve 450 ml ethanolu za varu. K roztoku byl přilit za míchání horký roztok 10 g povidonu 30 ve 100 ml vody. Získaný roztok byl udržován při teplotě minimálně 75 °C a byl postupně sprejově usušen na suchý produkt.

-3CZ 292832 B6

Vzorek 6.

g silymarinu bylo rozpuštěno ve 450 ml ethanolu za varu. K roztoku byl přilit za míchání 5 horký roztok 10 g makrogolu 6000 ve 100 ml vody. Získaný roztok byl udržován při teplotě minimálně 75 °C a byl postupně sprej ově usušen na suchý produkt.

Disoluční testy

Vzorky 1 až 6 a výchozí silymarin byly testovány disolučním testem. 100 ml příslušné substance bylo naplněno do tvrdých želatinových tobolek č. 00. Jednotlivé tobolky byly podrobeny testu na přístroji dle Ph. Eur. Typ 2 ve 2 litrech disolučního média pH 7,5 a při 100 otáčkách za minutu. V tabulce 1 jsou uvedeny průměrné výsledky disoluce ze 6 tobolek po 30 a 60 minutách.

Tabulka 1

Vzorek	30 minut	60 minut
Silymarin	41,3%	45,9 %
Vzorek 1	82,5 %	88,1 %
Vzorek 2	77,8 %	83,0 %
Vzorek 3	79,4 %	81,5%
Vzorek 4	83,4 %	85,8 %
Vzorek 5	80,6 %	89,2 %
Vzorek 6	77,4 %	84,9 %

Příklad 2

Vzorek 1.

g silybinu bylo rozpuštěno ve 450 ml ethanolu za varu. K roztoku byl přilit horký roztok 10 g 25 sorbitolu ve 100 ml vody. Získaný roztok byl udržován při teplotě minimálně 75 °C a byl postupně usušen na sprej ové sušárně na suchý produkt.

Vzorek 2.

30 g silybinu bylo rozpuštěno ve 450 ml ethanolu za varu. K roztoku byl přilit horký roztok 20 g sorbitolu ve 100 ml vody. Získaný roztok byl udržován při teplotě minimálně 75 °C a byl postupně usušen na sprejové sušárně na suchý produkt.

Vzorek 3.

g silybinu bylo rozpuštěno ve 450 ml ethanolu za varu. K roztoku byl přilit horký roztok 30 g sorbitolu ve 100 ml vody. Získaný roztok byl udržován při teplotě minimálně 75 °C a byl postupně usušen na sprejové sušárně na suchý produkt.

Vzorek 4.

g silybinu bylo rozpuštěno ve 450 ml ethanolu za varu. K roztoku byl přilit horký roztok 10 g manitolu ve 100 ml vody. Získaný roztok byl udržován při teplotě minimálně 75 °C a byl postupně usušen na sprejové sušárně na suchý produkt.

-4CZ 292832 B6

Vzorek 5 g silydianinu bylo rozpuštěno ve 300 ml ethanolu za varu. K roztoku byl přilit horký roztok 10 g sorbitolu ve 100 ml vody. Získaný roztok byl udržován při teplotě minimálně 75 °C a byl postupně usušen na sprejové sušárně na suchý produkt.

Disoluční testy

Vzorky 1 až 5 a výchozí silybin byly testovány disolučním testem. 100 mg příslušné substance bylo naplněno do tvrdých želatinových tobolek č. 00. Jednotlivé tobolky byly podrobeny testu na přístroji dle Ph. Eur. Typ 2 ve 2 litrech disolučního média pH 7,5 a při 100 otáčkách za minutu. V tabulce 2 jsou uvedeny průměrné výsledky disoluce ze 6 tobolek po 30 a 60 minutách.

Tabulka 2

Vzorek	30 minut	60 minut
Silybin	4,6 %	4,5 %
Vzorek 1	85,5 %	84,1 %
Vzorek 2	79,3 %	83,0 %
Vzorek 3	82,2 %	81,7%
Vzorek 4	87,3 %	85,1 %
Vzorek 5	89,0 %	84,5 %

Příklad 3

Tvrdé želatinové tobolky s obsahem 140 mg silymarinu (HPLC)

Násada pro 1000 ks tobolek:

Ostropestřcový extrakt práškovaný (dle příkladu 1, vzorek 1) Mikrokrystalická celulosa (Avicel PH 302)

Talek

Magnesium stearát

255,00 g

45,00 g

9,00 g

3,00 g

Do 1 tobolky velikosti O _ei se plní 0,312 g homogenní směsi

Příklad 4

Granulát silymarinu s rostlinnou vlákninou

Složení jedné 8 g dávky:

Ostropestřcový extrakt práškovaný Galaktomanan guar Amarantová vlákna Chitosan L-Camitin tartarát Acesulfam draselná sůl Manitol do

0,5000 g 2,0000 g 2,0000 g 2,0000 g 0,7360 g 0,0640 g 8,0000 g

-5CZ 292832 B6 t

o i Směs prášků tvořená ostropestřcovým extraktem, guarovým galaktomananem, amarantovou vlákninou a chitosanem se granuluje vodným roztokem L-camitin tartarátu, draselné soli acesulfamu a manitolu.

Nejvhodnější použití takového dietetika je rozmíchání obsahu sáčku v nízkotučném jogurtu nebo v teplých mléčných nápojích.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Způsob přípravy práškových extraktů z ostropestřce mariánského vykazujících vyšší roz-

15 pustnost vdisolučních médiích ve srovnání sčistými flavanolignany, vyznačující se t í m , že se 10 hmotnostních dílů substance obsahující flavanolignany ostropestřce mariánského rozpustí ve 30 až 120 objemových dílech rozpouštědla ze skupiny nerozvětvených či rozvětvených alkanolů či ketonů obsahujících 1 až 4 atomy uhlíku a získaný roztok se smísí s vodným roztokem obsahujícím 0,5 až 10 hmotnostních dílů alespoň jedné pomocné látky ze skupiny

20 tetritolů, pentitolů, hexitolů a/nebo vinylpyrrolidonových či ethylenoxidových homopolymerů, načež se rozpouštědla odstraní a získá se amorfní produkt.
2. Způsob podle nároku 1,vyznačující se t í m, že se jako substance obsahující flavanolignany ostropestřce mariánského použije silybin, silydianin nebo směs obsahující 50 až 65 %

25 flavanolignanů, z nichž 40 až 65 % tvoří silybinin, 10 až 20 % isosilybinin a 20 až 45 % silydianin se silychristinem, označovaná běžně jako silymarin nebo suchý extrakt ostropestřce mariánského.
3. Způsob podle nároku 1,vyznačující se tím, že jako rozpouštědlo flavanolignanů 30 se použije ethanol, terc.butanol nebo aceton.
4. Způsob podle nároku 1,vyznačující se tím, že jako látka obsažená ve vodném roztoku se použije xylitol, manitol, sorbitol, polyvinylpyrrolidon o střední molekulové hmotnosti 44 000 až 54 000 a/nebo polyethylenglykol o střední molekulové hmotnosti 5000 až 7000.
5. Způsob podle nároků 1 až 4, vyznačující se tím, že odstranění rozpouštědel ze směsi roztoků se provede sprejovým sušením nebo lyofilizací.