DE2914330A1 - Verfahren zur gewinnung von silymarin aus pflanzen - Google Patents

Verfahren zur gewinnung von silymarin aus pflanzen

Info

Publication number
DE2914330A1
DE2914330A1 DE19792914330 DE2914330A DE2914330A1 DE 2914330 A1 DE2914330 A1 DE 2914330A1 DE 19792914330 DE19792914330 DE 19792914330 DE 2914330 A DE2914330 A DE 2914330A DE 2914330 A1 DE2914330 A1 DE 2914330A1
Authority
DE
Germany
Prior art keywords
silymarin
residue
methanol
water
ethyl acetate
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
DE19792914330
Other languages
English (en)
Other versions
DE2914330C2 (de
Inventor
Klaus Dipl Chem Dr Rer Goerler
Rolf Dr Med Madaus
Werner Dipl Chem Dr Rer Molls
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Madaus Holding GmbH
Original Assignee
Dr Madaus GmbH and Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Dr Madaus GmbH and Co filed Critical Dr Madaus GmbH and Co
Priority to DE19792914330 priority Critical patent/DE2914330A1/de
Priority to SU802993956A priority patent/SU1433391A3/ru
Publication of DE2914330A1 publication Critical patent/DE2914330A1/de
Priority to US06/267,232 priority patent/US4368195A/en
Application granted granted Critical
Publication of DE2914330C2 publication Critical patent/DE2914330C2/de
Granted legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D407/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D405/00
    • C07D407/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D405/00 containing two hetero rings
    • C07D407/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D405/00 containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Description

DR. MADAUS & CO. · - - 5~
Verfahren zur Gewinnung von Silymarin aus Pflanzen
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Gewinnung von reinem Silymarin durch Extraktion von Früchten der Mariendistel (Silybum marianum Gaertn.).
Unter der Bezeichnung Silymarin versteht man nach dem Stand der Technik die Silymaringruppe, d. h. die Polyhydroxyphenylchromanone (Silymarin I bis Silymarin IV), die bereits aus den Früchten der Mariendistel in 70 bis 80 #-iger Reinheit - je nach Droge - isoliert werden konnten (Dt-AS 1 923 082).
Silymarin I bis Silymarin III sind Isomere der Summenformel ^2^29^10 un<* *n ^er Literatur a^s Silybin, Silydianin und Silychristin struktur-chemisch charakterisiert worden. (Dt-AS 1 923 082; PELTER A und HANSEL, R., Tetrahedron Letters, London 25>, 2911, 1968; WAGNER, H., HÖRHAMMER, L., SELIGMANN, 0. und FARNSWORTH, N.R., Tetrahedron Letters No. 31, Seiten 2675 - 2678, 1970; WAGNER, H., SELIGMANN, 0., HÖRHAMMER, L. und SEITZ, M., Tetrahedron Letters No. 22, Seiten 1895 - 1899, 1971). Silymarin IV ist Taxifolin (Dt-AS 1 923 082).
Silymarin ist ein wertvolles Lebertherapeutikum, und das Silymaringemiscli ist aufgrund eines Synergismus wirksamer als die Summe der Wirkungen der einzelnen Isomeren (Dt-AS 1 923 082).
03 0 0 A A/005 0
-6- 29U330
Aus der Dt-AS 1 923 082 ist ein Verfahren zur Gewinnung -von Silymarin (Silymarin I-IV) bekannt, bei dem die getrockneten Früchte von Silybum marianum Gaertn. mechanisch ausgepresst werden, um sie von der Hauptmenge des fetten Öles zu befreien. Durch erschöpfende Extraktion des Preßrückstandes mit Äthylacetat, Eindampfen der Äthylacetatlösung, Aufnahme des Trockenrückstandes in wasserhaltigem Methanol, Entfettung durch multiplikate gleichförmige Verteilung im Gegenstrom, und Eindampfen der fettfreien methanolischen Lösung im Vakuum zur Trockne erhält man ein 70 - 80 jt-iges Polyhydroxyphenylchromanongemisch (Silymarin I-IV). Das Verhältnis Silymarin I-III liegt etwa bei 3:1:1; der Gehalt an Silymarin IV, Taxifolin, beträgt etwa 2 - 3 % des Gesamtanteils Silymarin.
Als weiterer Stand der Technik ist die Dt-OS 2 020 407 zu nennen. Das Verfahren dieser OLS beschäftigt sich mit der Isolierung von Silymarin ohne Vorentfettung, durch direkte Gesamtextraktion mittels eines "Losungsmittelgemiscb.es Alkohol-Wasser-niedere Fettsäureester oder Kohlenwasserstoff" und Abtrennung der Fettanteile "durch anschließendes Abdestillieren von 10-40 ^ des Volumens der erhaltenen Extraktlösung, anschließendes Stehenlassen und Entfernen der oben auf der Lösung abgesetzten Fette". Dieses Verfahren führt laut Anmeldung nur zu einem 40 j£-igen Silymarinextrakt; weiter empfiehlt die Patentanmeldung eine ümkristallisation mit Methanol, ohne weitere Angaben über etwaige Verfahrensmaßnahmen zu machen. Bei einer Nacharbeitung war dieses Verfahren nicht reproduzierbar, und im Endprodukt verblieben ca. 13 % ursprüngliches Fett.
Ein weiteres Verfahren ist aus der Dt-OS 2 017 789 bekannt. Die Endprodukte dieses Verfahrens sollen 40 bis 70 |έ Silymarin enthalten, und die Ausbeute an Endprodukt beträgt 0,8 bis maximal 2,4 $ (bei 40 $-igem Silymarin). Eine Nacharbeitung zeigte, daß dieses Verfahren ebenfalls nicht reproduzierbar war.
Q3QQ44/Q050
""■7" 29H330
Weiterhin existiert zum Stand der Technik das französische Patent Nr. 72.14042, das sich mit der Herstellung eines Extraktes aus Silybum mariamim beschäftigt, ohne eine Vorentfettung vorzunehmen. Es wird angegeben, daß das Endprodukt ca. 82 j£ an Polyhydroxyphenylchromonen hat; von 82 % sollen 50 % Silymarine darstellen. Es sei dazu angemerkt, daß das Silymarin einer anderen Verbindungsklasse zugeordnet ist, und zwar den Polyhydroxyphenylchromanonen, nicht aber den Polyhydroxyphenylchromonen. Auch dieses Verfahren ist nicht reproduzierbar.
Es ist bisher nicht gelungen, das Verfahren der Dt-AS 1 923 082 wesentlich zu verbessern. Einesteils liegen die Schwierigkeiten in der Abtrennung der Wirkstoffe aus der Droge unter Bewahrung des vorhandenen Silymaringemisches und andernteils in der Abtrennung desselben von ca. 30 $> fetten Ölen und schwer zu entfernenden Begleitstoffen. Diese Schwierigkeiten wurden durch die Dt-AS 1 923 082 nur teilweise überwunden.
Da Silymarin ein wertvolles Lebertherapeutikum ist, besteht ein Bedarf an einem möglichst hochkonzentrierten Silymarin, das über der aus dem Stand der Technik bisher bekannten Konzentration liegt.
Der vorliegenden Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, ein neues Verfahren zur Gewinnung von reinem Silymarin (Silymarin I-IV), das weitgehend frei von Begleitstoffen ist und das alle natürlichen Isomeren enthält, zu schaffen. Dieses neue Verfahren soll auf einfachem Weg zu einem besonders reinen Produkt und höherer Ausbeute führen.
030044/0050
29U330
Es wurde überraschenderveise ein Verfahren gefunden, das die Nachteile der bekannten Methoden vermeidet und das auf wirtschaftlichem Weg zu reinem Silymarin (Silymarin 1-IV) (Reinheit 90 - 96 ^) führt.
Das erfindungsgemäße Verfahren zur Gewinnung von Silymarin (Silymarin I-IV), wobei man die Früchte von Silybum marianum von einem großen Teil fetten Öles durch kaltes Abpressen befreit, die abgepresste Masse zerkleinert, den Preßrückstand mit Athylacetat extrahiert, den Äthylacetatextrakt eindampft und aufarbeitet, ist dadurch gekennzeichnet, daß man
a) den Preßrückstand mehrmals mit wasserfreiem Athylacetat extrahiert und die Extrakte vom Rückstand abtrennt,
b) entweder den Eindampfungsrückstand a) der vereinigten Athylacetatextrakte mit Petroläther mehrmals durch festflüssig-Extraktion entfettet, oder
b1) den Eindampfungsrückstand a) in Methanol auflöst und die Lösung mit Petrolaether mehrmals in flüssig-flüssig-Extraktion entfettet,
c) entweder den entfetteten Rückstand b) in Methanol weitgehend auflöst und die Lösung von den ungelösten Anteilen abtrennt, oder
c1) die entfettete methanolische Lösung b1) vom Petrolaether abtrennt,
d) der methanolischen Lösung c) oder c') jeweils ein chlorsubstituiertes niederes Alkan als Lösungsmittel und Wasser zusetzt, ausschüttelt, die wäßrig-methanolische Lösung abtrennt und aufbewahrt,
e) die Phase des chlorierten Lösungsmittels mehrmals mit Methanol und Wasser unter Rühren durchmischt und abdekantiert,
030044/0050
f) die vereinigten wäßrig-methanolisehen Phasen eindampft,
g) den Eindampfungsrückstand in wenig Methanol suspendiert, anschließend die Suspension in Wasser einrührt und nach Zentrifugieren den Niederschlag mehrmals mit Wasser nachwäscht, und
h) den Niederschlag im Vakuum trocknet, mahlt und erneut im Vakuum trocknet.
Eine bevorzugte Ausführungsform des erfindungsgemäßen Verfahrens ist dadurch gekennzeichnet, daß man
a) den Preßrückstand 2 bis 4-mal, vorzugsweise 3-mal, je l/2 bis 1 t/2, vorzugsweise 1 Stunde lang mit wasserfreiem Äthylacetat bei 65 bis 76 C, vorzugsweise 75 C, im Verhältnis 1:8 bis 1:12, vorzugsweise 1:10 unter kräftigem Rühren extrahiert und die extrahierte Droge abtrennt,
b) entweder die vereinigten Äthylacetatextrakte bei 40 55 C, vorzugsweise 50 C, im Vakuum bei 15 mbar eindampft, den Eindampfungsrückstand a) durch dreimalige 10- bis 20-minütige, vorzugsweise 15-minütige fest-flüssig-Extraktion mit Petroläther 6o/7O° im Verhältnis 1:15 bis 1:25, vorzugsweise 1:20, entfettet, oder
b1) den Eindampfungsrückstand a) in der 6- bis 10-fachen, vorzugsweise 8-fachen Gewichtemenge Methanol auflöst, die ungelöst verbleibenden Bestandteile abtrennt, durch dreimalige 10- bis 20-minütige, vorzugsweise 15-minütige flüssig-flüssig-Extraktion mit Petrolaether (Siedebereich 60/70 0C) im Verhältnis 1:1,5 bis 1:2,5, vorzugsweise 1:2, entfettet,
3 0 0 4 4/0050
29H330
c) entweder den entfetteten Rückstand b) in der 6- bis 10-fachen, -vorzugsweise 8-fachen Gewichtsmenge Methanol auflöst und die ungelöst verbleibenden Bestandteile abtrennt, oder
c1) die entfettete methanolische Lösung b1) vom Petrolaether abtrennt,
d) der methanolischen Lösung c) oder c') Chloroform und Wasser in jeweils der gleichen Volumenmenge zusetzt und das Gemisch ca. 15 Minuten kräftig rührt und abdekantiert,
e) die Chloroformphase fünfmal mit Methanol und Wasser im
Volumenverhältnis 1:1:1 je ca, 15 Minuten unter kräftigem Rühren mischt und anschließend die Chloroformphase abtrennt,
f) die vereinigten wäßrig-methanolischen Phasen bei 30 - 50 °C, vorzugsweise 40 C, im Vakuum bei 15 mbar eindampft,
g) den eingedampften Rückstand mit Methanol im Verhältnis 1:4 bis 1:6, vorzugsweise 1:5, suspendiert, und die Suspension in die 8- bis 12-fache, vorzugsweise 10-fache Volumenmenge Wasser einrührt, sowie nach Zentrifugieren den Niederschlag mehrfach mit Wasser nachwäscht,
h) den Niederschlag 20 bis 30, vorzugsweise 24 Stunden, bei 30 bis 50 C, vorzugsweise 40 C, im Vakuum bei 10 mbar trocknet, anschließend vermahlt und das vermahlene Produkt ebenfalls bei 30 bis 50 C, vorzugsweise 40 0C, im Vakuum bei 10 mbar nachtrocknet.
030044/0050
29H330
Die auf diesem Wege isolierten Produkte verfügen über einen Silymarin-(Silymarin I-IV)-Gehalt von 90 - 96 ^, bezogen auf wasserfreie Substanz.
Verfahrenstechnisch sind die einzelnen Schritte und die spezifischen Maßnahmen so gewählt, daß das in der Droge vorliegende Wirkstoff-Gemisch praktisch vollständig isoliert wird. Weicht man von diesen Verfahrensschritten ab, so würde die eine oder andere Verbindung ganz oder teilweise verlorengehen. Diese Schwierigkeit wächst mit dem Anreicherungsgrad dieses Wirkstoffgemisches, insbesondere bei den fortgeschrittenen Verfahrensstufen, da die gewünschten Wirkstoffe teilweise als Einzelverbindungen oder als Gesamtgemisch mit den abzutrennenden Begleitstoffen sich der Gewinnung entziehen wurden.
Das erfindungsgemäße Verfahren berücksichtigt diese Punkte, so daß es zu einem reinen Produkt in optimaler Ausbeute unter weitgehender Erhaltung des Isomerenverhältnisses, das in der Droge vorliegt, führt.
Überraschenderweise kommt man nur durch die ausgesuchte Kombination der Verfahrensmaßnahmen, der Lösungsmittel bzw. Lösungsmittelsysteme und der physikalischen bzw. chemischen Bedingungen zu dem vorteilhaften Produkt.
030044/0050
Durch das kalte Pressen der Früchte des Silybum marianum verhindert man einen chemischen Abbau oder Polymerisation des Silymarins, und man vermeidet inniges Emulgieren des Silymarins und der Begleitstoffe in dem fettigen Öl, was sich für die nachfolgende Trennung nachteilig auswirken würde. Durch das Pressen wird die Droge teilweise entfettet. Etwa 25 - 30 /δ des Öls werden ausgepresst. -
Die Feinvermahlungsmaßnahme ermöglicht eine raschere nachfolgende Extraktion, weil das Extraktionsmittel leichter in die Drogenpartikel eindringen kann.
Es ist in diesem Verfahren entscheidend, daß die Äthylacetatextraktion mit wasserfreiem Äthylacetat durchgeführt wird. Der Gehalt an Wasser kann maximal 0,5 /^ betragen. Ist der Gehalt an Wasser über 0,5 ^j dann lassen sich bei den nachfolgenden Verfahrensschritten die Begleitsubstanzen nicht mehr trennen. Dieser überraschende Effekt ist in Kombination mit den anderen Verfahrensmaßnahmen maßgebend für den Erfolg des Verfahrens, nämlich die Gewinnung von reinem Silymarin.
Das Verhältnis Droge/Lösungsmittel bei der Äthylacetatextraktion von 1:8 bis 1:12, vorzugsweise 1:10, iat so gewählt, daß es ohne unnötige Überschüsse die Auflösung des Silymarins spezifisch und schonend gewährleistet. Die zwei- bis viermalige, vorzugsweise dreimalige, Extraktion erlaubt die vollständige Gewinnung des Silymarins aus der Droge. Die Temperatur von 60 - 80 C, vorzugsweise 75 C, ist günstig für eine gute Lösung der Wirkstoffe und führt gleichzeitig nicht zu Zersetzungserscheinungen der hier vorhandenen chemischen Verbindungen.
030044/0050
29U330
Das Ausrühren mit einem Intensivrührer bringt eine mechanische Auflockerung der Droge mit sich, was die Extraktion begünstigt. Die gewählte kurze Zeit bei jeder der mehreren Extraktionen von 1/2 bis 1 l/2 Stunden, vorzugsweise 1 Stunde, erlaubt es trotzdem, erschöpfend zu extrahieren.
Auf schonende Weise werden die vereinigten Äthylacetatextrakte bei niedriger Temperatur im Vakuum eingedampft.
Die nachfolgende mehrmalige fest-flüssig-Entfettung des Rückstandes mit Petroläther bei einem relativ hohen Verhältnis von Rückstand zu Petroläther, von z. B. ca. 1:20 hat den Vorteil, daß einerseits in kurzer Zeit und ohne großen apparativen Aufwand erschöpfend das fettige Öl abgetrennt wird. Wahlweise kann man die Eindampfungsrückstände in der ca. 8-fachen Gewichtsmenge Methanol auflösen, die ungelösten Bestandteile abtrennen und anschließend eine mehrmalige flüssig-flüssig-Extraktion mit Petroläther im Verhältnis von ca. 1:2 vornehmen. Die Ergebnisse sind praktisch gleich.
Methanol, als verhältnismäßig billiges Lösungsmittel, eignet sich zum Auflösen des entfetteten Rückstandes besonders gut .wegen seines großen Solvatationsvermogens. Das Silymarin (Silymarin I-IV) löst sich relativ gut darin. Das hohe Verhältnis Rückstand/Lösungsmittel ist vorteilhaft, um das Silymarin (Silymarin I-IV) vollständig aufzunehmen. Im Rückstand bleibt kein Silymarin zurück.
Neu und besonders erfinderisch ist der Einsatz von chlorhaltigen organischen Lösungsmitteln, insbesondere von chlorsubstituierten niederen Alkanen, wie Chloroform, Methylenchlorid, 1,2-Dichloräthan, vorzugsweise Chlorofrom, für die Abtrennung von noch verbleibenden Begleitstoffen vom Silymarin
0 3004A/005 0
(Silymarin I-IV), ohne daß das Silymarin insgesamt einen Verlust erleidet und wobei auch keine Isomeren verlorengehen. Dabei erfolgt die Abtrennung von weiteren lipophilen Begleitstoffen, die bei der Entfettungsstufe mit dem Öl und Petroläther nicht ausgeschieden wurden, sowie weiterer weniger polarer Begleitstoffe, die zwar zunächst in Methanol aufgelöst wurden, aber sich in einem Verteilungsphasensystem entsprechend verhalten. Das Lösungsgleichgewicht - Zustandsdiagramm - des gewählten Lösungsmittelsystems - sowohl in der Art wie in der Menge -, in diesem Fall Methanol-Wasser-Chloroform 1:1:1, ist in Gegenwart von Silymarin (Silymarin I-IV) und etwaigen noch vorhandenen Begleitstoffen besonders geeignet, da gute Trennungen in zwei Phasen mit diesem Lösungsmittelsystem erreicht werden. Das Entmischungsgebiet des Zustandsdiagrammes erfaßt die angegebenen Lösungsmittelverhältnisse.
Der Verteilungskoeffizient des Silymarins (Silymarin I bis Silymarin IV) zwischen beiden Phasen ist sehr hoch. Nach ausgeführten sechs Ausschüttelungen im System Methanol/Chloroform/Wasser l/l/l (v/v/v) ergibt sich ein Verhältnis von SiIymarin in den vereinigten wäßrig-methanolischen Phasen zu dem in der Chloroformphase verbleibenden Silymarin wie 13sl.
Dadurch ist das Silymarin (Silymarin I-IV) aus der methanolischen Phase praktisch vollständig zu gewinnen.
Erfindungsgemäß konnte überraschenderweise erreicht werden, daß die SilymariueI bis IV auch als Einzelverbindungen anteilmäßig in der wäßrig-methanolisehen Phase verbleiben, so daß das Isomerenverhältnis aufrechterhalten bleibt.
03QQU/0Q50
_ 15 - -; ■ ■
29U330
Die wäßrig-methanolische Phase wird schonend bei niedriger Temperatur und unter Vakuum zur Trockne eingedampft und der Rückstand in Wasser zwecks Auswaschens mehrere Male suspendiert. Dieser Auswaschvorgang hat sich als vorteilhaft erwiesen, um die bei normaler Filtration auftretenden Okkludierungen von Unreinheiten im Produkt zu beseitigen.
Gegenüber den Verfahren des Standes der Technik hat das erfindungsgemäße den Vorteil, daß es auf einfachem Wege zu einem 90 - 96 ^-igen, reinen Silymarin (Silymarin I-IV) bei einer Ausbeute von «1,7 ji führt. Nur die erfindungsgemäße Kombination der gewählten Verfahrensmaßnahmen mit Einsatz von wasserfreiem Äthylacetat und einem mit Chlor substituierten Alkan, wie Chloroform, führt überraschenderweise zu der Gewinnung von weitgehend reinem Silymarin aus den Früchten von Silybum marianum.
Der Effekt der wasserfreien Äthylacetat-Extraktion der Droge ist gegenüber dem Stand der Technik als besonders erfinderisch hervorzuheben. Hiermit bleiben hydrophile Substanzen der Droge im Rückstand. Bei den nachfolgenden Verfahrensstufen, wie Verteilung in Lösungsmitteln, sind normalerweise diese hydrophilen Begleitstoffe weitgehend vom Silymarin nicht mehr zu trennen.
Weiterhin ist besonders überraschend, die Verteilungswirkung von Lösungsmitteln eines chlorsubstituierten niederen Alkan, insbesondere Chloroform, in der zweiten Phase des Verfahrens wegen der spezifischen Selektivität, wobei praktisch alle noch bei dieser Verfahrensstufe vorhandenen Begleitstoffe entfernt werden, so daß Silymarin in der methanolischen Lösung weitgehend rein bleibt.
03Q04A/0050
Die Bestimmung der Wirksamkeit von per os appliziertem reinen Silymarin aus einer Charge mit 91»3 % Gehalt wurde bei der letalen Phalloidin-Intoxikation von Mäusen durchgeführt, und zwar I.) durch Dosis-Wirkungsbeziehung und II.) durch Zeit-Wirkungsbeziehung. Die verwendete Methodik war von W. Forth, D. Henachler und W. Rummel "Allgemeine und spezielle Pharmakologie und Toxikologie", Wissenschaftsverlag, Bibliographisches Institut, Mannheim, Wien, Zürich, Jahr 1977» 2. Auflage, Seiten 3 - 17.
Material und Methode:
a) Tiere: oo NMRI Mäuse, je Gruppe η = 10,
mittleres Gewicht zu i) 22,5 bzw. 26,3 g
zu II) 22,5 bzw. 17,5 g
b) Putter: ssniff-Mischfutter
c) Wasser: ad libitum
d) Haltung: konventionell in klimatisierten Räumen mit Tag-
Nacht-Rhythmus
e) Auswahl der Tiere pro Gruppe: nach Zufallsschlüssel
f) Toxin: Phalloidin: Stammlösung 1 mg/l ml Methanol Dosis: 2,7 mg/20 ml 0,9 #ige NaCl/kg KG
Applikation i.p.
g) Prüfsubstanz: Silymarin, Charge 53002
Dosen: 200, 400, 600, 800 mg und 1, 3, 5, 7, 9, g/50 ml
0,5 % Traganth/kg KG
Applikation: p.o.; Applikationszeit 0, 5» 10, 15 und
20 min. nach Intox.
Kontrolle: 50 ml 0,5 % Traganth/kg KG
Applikation: p.o.; Applikationszeit 0, 5, 10,
und 20 min. nach Intox.
h) Prüfparameter: Überlebensrate
03QQ44/0050
29U330
Ergebnisse zur Dosis-Wirkung:
1.) Bei 1 g Silymarin überlebten 70 bzw. 50 % der Tiere. 2.) Bei 3 g und höheren Dosen überlebten 100 $.
3.) Auch bei 9 g Silymarin/kg KG waren keine toxischen Nebeneffekte festzustellen.
Ergebnisse zur Zeit-Wirkungsbeziehung:
Hier wurden 5 g Silymarin/kg KG getestet:
i.) Bei gleichzeitiger Gabe von Phalloidin und Silymarin überlebten 100 % der Tiere.
2.) Lagen zwischen Intoxikation und Behandlung 5 min, so war die Überlebensrate 70 ^.
Es liegt eine therapeutische Antagonisierung der Phalloidin-Vergiftung vor.
Die akute Toxizität wurde an Mäusen geprüft. Die DL^n beträgt 590 mg/kg.
Das erfindungsgemäße Produkt erfüllt die gestellten Forderungen der Aufgabenstellung.
030Ό44/0050
29U330
Beispiele für die Gewinnung von Silymarin (Silymarin I-IV) Beisgiel 1:
kg feinvermahlene, kalt abgepresste Mariendistelfrüchte werden mit
1 wasserfreiem Äthylacetat versetzt und auf 75 C erhitzt. Bei dieser Temperatur wird die Mischung mit einem Intensivrührer eine Stunde kräftig
durchgerührt. Danach wird filtriert und der Drogenrückstand noch zweimal, wie beschrieben, mit Äthylacetat extrahiert.
Die vereinigten, geklärten Äthylacetat-Lösungen werden bei 50 C im Vakuum bei 15 mbar zur Trockne eingedampft. Zur Entfettung wird der Bückstand bei Raumtemperatur dreimal mit je 300 1 Petroläther 60/70 15 min. ausgerührt und danach im Vakuum vom Lösungsmittel befreit. Das auf diese Weise erhaltene Rohprodukt wird in der vierfachen Menge Methanol aufgenommen, wobei der dabei nicht in Lösung gehende Feststoff abzentrifugiert, zweimal mit je der Hälfte der erwähnten Menge Methanol nachgewaschen und schließlich - da er praktisch kein Silymarin enthält - abgetrennt wird.
Die vereinigten methanolischen Lösungen werden zunächst mit Chloroform, danach mit Wasser im Volumenverhältnis 1:1:1 versetzt und in Dekantationsbehälter überführt.
Nachdem die Mischung 15 min. kräftig durchgerührt
worden und die Phasentrennung erreicht ist, wird die untere Phase (Chloroformphase) abgetrennt und
030044/0050
29U330
noch fünfmal ebenfalls im Volumenverhältnis 1:1:1 mit Methanol-Wasser je 15 min. extrahiert. Danach wird die Chloroformphase abgetrennt.
Die vereinigten wäßrig-methanolischen Pasen werden bei 50 0C im Vakuum bei 15 mbar eingedampft und der
Rückstand wird in der 5-fachen Menge Methanol suspendiert. Die Suspension wird in dünnem Strahl zu der 10-fachen Volumenmenge Wasser unter Rühren zugegeben und danach 15 min. lang kräftig nachgerührt.
Danach wird zentrifugiert und das Zentrifugat mehr
fach mit Wasser unter Suspendierung nachgewaschen. Das Produkt wird 24 Stunden bei 40 °C im Vakuumtrockenschrank getrocknet, vermählen und weitere 48 Stunden bei 40 °G nachgetrocknet.
Es resultiert ein hellbeige-farbenes Pulver, das
über einen Silymaringehalt von 90 - 96 % verfügt (bestimmt nach der Dinitrophenylhydrazin-Methode (DNPH-Methöde) analog zur Bestimmung von Silymarin in Mariendistelfrüchte, DAB VII Ausgabe 1968,
2. Nachtrag 1975» Seite 198, sowie nach quantitativer
Auswertung der Remissionsortskurven.) Der Identitätsnachweis erfolgte über Dünnschichtchromatografie.
Das Verhältnis der einzelnen Isomeren zueinander wurde durch die quantitative Auswertung der Remis
sionsortskurven bestimmt (siehe Figur l).
Die Ausbeute beträgt 4,9 kg *** 1,7 % - bezogen auf trockene Droge.
0300 A A/0050
kg feinvermahlene, kalt abgespresste Mariendistelfrüchte werden mit
1 wasserfreiem Äthylacetat versetzt und auf 75 C erhitzt. Bei dieser Temperatur wird die Mischung mit einem Intensivriihrer eine Stunde
kräftig durchgerührt. Danach wird filtriert und der Drogenrückstand noch zweimal, wie beschrieben, mit Äthylacetat extrahiert.
Die vereinigten, geklärten Äthylacetat-Lösungen werden bei 50 C im Vakuum bei 15 mbar zur Trockne
eingedampft.
Der Eindampfungsrückstand wird mit 120 1 Methanol aufgelöst und die dabei nicht in Lösung gehenden Feststoffe abzentrifugiert. Die methanolische Lösung wird dreimal während 15 Minuten einer
flüssig-flüssig-Extraktion mit je 135 1 Petrolaether unterzogen.
Die methanolische Lösung wird zunächst mit Chloroform, danach mit Wasser im Volumenverhältnis 1:1:1 versetzt und in Dekantationsbehälter überführt.
Nachdem die Mischung 15 min. kräftig durchgerührt worden und die Phasentrenmmg erreicht ist, wird die untere Phase (Chloroformphase) abgetrennt und noch fünfmal ebenfalls im Volumenverhältnis 1:1:1 mit Methanol-Wasser je 15 min. extrahiert. Danach wird
die Chloroformphase abgetrennt.
Die vereinigten wäßrig-methanolischen Phasen werden bei 50 C im Vakuum bei 15 mbar eingedampft und der Rückstand wird in der 5-fachen Menge Methanol suspendiert. Dia Suspension wird in dünnem Strahl
Q3QQ44/0050
zu der 10-fachen VoLumeninenge Wasser unter Rühren zugegeben und danach 15 min. lang kräftig nachgorührt. Danach wird zentrifugiert und das Zentrifugat mehrfach mit Wasser unter Suspendierung nachgewaschen. Das Produkt wird 24 Stunden bei
40 C im Vakuumtrockenschrank getrocknet, vermählen und weitere 48 Stunden bei 40 C nachge— trocknet.
Das Verfahren führt zu einem 90 - 96 /έ-igen Silymarin der gleichen Beschaffenheit wie im
Beispiel 1.
Beispiel 3* ■
Die gleichen Verfahrensmaßnahiaen mit dem Einsatz von Methylenchlorid anstelle von Chloroform führen zu einem 90 - 9k #-igen Silymarin.
Die Ausbeute beträgt 1,7 %·
Beispiel 4:
Die gleichen Verfahrensmaßnahmen mit dem Einsatz von 1,2-Dichioräthan anstelle von Chloroform führen zu einem 90 - 93 #-igen Silymarin.
Die Ausbeute beträgt 1,8 $.
Für alle Beispiele gilt üblicherweise:
Reinheitsoereiche und kleine Schwankungen in der Ausbeute in Abhängigkeit der Droge.
030 0-A A/0050
Leerseite

Claims (4)

  1. DS. MADAUS & CO.
    5 KÖLN-MERHEIM
    Patentansprüche
    l.J Verfahren zur Gewinnung von Silymarin (Silymarin I-IV), wobei man die Früchte von Silybum marianum von einem großen Teil fetten Öles durch kaltes Abpressen befreit, die abgepresste Masse zerkleinert, den Preßrückstand mit Äthylacetat extrahiert, den Äthylacetatextrakt eindampft und aufarbeitet, dadurch gekennzeichnet, daß man:
    a) den Preßrückstand mehrmals mit wasserfreiem Äthylacetat extrahiert und die Extrakte vom Rückstand abtrennt,
    b) entweder den Eindampfungsrück3tand a) der vereinigten Äthylacetatextrakte mit Petroläther mehrmals durch festflüssig-Extraktion entfettet, oder
    b1) den Eindampfungsrückstand a) in Methanol auflöst und die Lösung mit Petrolaether mehrmals in flüssig-flüssig-Extraktion entfettet,
    c) entweder den entfetteten Rückstand b) in Methanol weitgehend auflöst und die Lösung von den ungelösten Anteilen abtrennt, oder
    c1) die entfettete methanolische Lösung b1) vom Petrolaether abtrennt,
    d) der methanolischen Lösung c) oder c') jeweils ein chlorsubstituiertes niederes Alkan als Lösungsmittel und Wasser zusetzt, ausschüttelt, die wäßrig-methanolische Lösung abtrennt und aufbewahrt,
    030044/00 50 ORIGINAL INSPECTED
    29H330
    e) die Phase des chlorierten Lösungsmittels mehrmals mit Methanol und Wasser unter Rühren durchmischt und abdekantiert,
    f) die -wreinigten wäßrig-methanolischen Phasen eindampft,
    g) den Eindampfungsrückstand in wenig Methanol suspendiert, anschließend die Suspension in Wasser einrührt und nach Zentrifugieren den Niederschlag mehrmals mit Wasser nachwäscht, und
    h) den Niederschlag im Vakuum trocknet, mahlt und erneut im Vakuum trocknet.
  2. 2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man:
    a) den Preßrückstand 2 his 4-mal, vorzugsweise 3-mal, je l/2 his 1 1/2, vorzugsweise 1 Stunde lang mit wasserfreiem Äthylacetat hei 65 his 76 C, vorzugsweise 75 C, im Verhältnis 1:8 bis 1:12, vorzugsweise 1:10 unter kräftigem Rühren extrahiert und die extrahierte Droge abtrennt,
    b) entweder die vereinigten Äthylacetatextrakte bei 40 -
    55 °C, vorzugsweise 50 C, im Vakuum bei 15 mbar eindampft, den Eindampfungsrückstand a) durch dreimalige 10- bis 20-minütige, vorzugsweise 15-minütige fest-flüssig-Extraktion mit Petroläther 60/700 im Verhältnis 1:15 bis 1:25, vorzugsweise 1:20, entfettet, oder
    b') den Eindampfungsrückstand a) in der 6- bis 10-fachen, vorzugsweise 8-fachen Gewichtsmenge Methanol auflöst, die ungelöst verbleibenden Bestandteile abtrennt, durch dreimalige 10- bis 20-minütige, vorzugsweise 15-minütige flüssig-flüssig-Extraktion mit Petrolaether (Siedebereich 60/70 0C) im Verhältnis 1:1,5 bis 1:2,5, vorzugsweise 1:2, entfettet,
    030044/OOEO
    29U330
    c) entweder den entfetteten Bückstand b) in der 6- bis 10-fachen, vorzugsweise 8-fachen Gewichtsmenge Methanol auflöst und die ungelöst verbleibenden Bestandteile abtrennt, oder
    c1) die entfettete methanolische Lösung b1) vom Petrolaether abtrennt,
    d) der methanolischen Lösung c) oder c1) Chloroform und Wasser in jeweils der gleichen Volumenmenge zusetzt und das Gemisch ca. 15 Minuten kräftig rührt und abdekantiert,
    e) die Chloroformphase fünfmal mit Methanol und Wasser im Volumenverhältnis 1:1:1 je ca. 15 Minuten unter kräftigem Rühren mischt und anschließend die Chloroformphase abtrennt,
    f) die vereinigten wäßrig-methanolischen Phasen bei 30-50 C, vorzugsweise 40 C, im Vakuum bei 15 mbar eindampft,
    g) den eingedampften Rückstand mit Methanol im Verhältnis 1:4 bis 1:6, vorzugsweise 1:5, suspendiert, und die Suspension in die 8- bis 12-fache, vorzugsweise 10-fache Volumenmenge Wasser einrührt, sowie nach Zentrifugieren den Niederschlag mehrfach mit Wasser nachwäscht,
    h) den Niederschlag 20 bis 30, vorzugsweise 24 Stunden, bei 30 bis 50 C, vorzugsweise 40 C, im Vakuum bei 10 mbar trocknet, anschließend vermahlt und das vermahlene Produkt ebenfalls bei 50 bis 50 C, vorzugsweise 40 0C, im Vakuum bei 10 mbar nachtrocknet.
  3. 3. Silvmarin (Silymarin I-IV) mit mindestens 90 jS-iger Reinheit, erhältlich gemäß Anspruch 1 oder.2.
    Q30QU/0050
  4. 4. Verwendung des Silymarins nach Anspruch 3 in einem Lebertherapeutikum mit einem üblichen pharmazeutischen Träger und/oder Verdünnungsmittel.
    030044/0050
DE19792914330 1979-04-09 1979-04-09 Verfahren zur gewinnung von silymarin aus pflanzen Granted DE2914330A1 (de)

Priority Applications (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE19792914330 DE2914330A1 (de) 1979-04-09 1979-04-09 Verfahren zur gewinnung von silymarin aus pflanzen
SU802993956A SU1433391A3 (ru) 1979-04-09 1980-10-08 Способ получени силимариновой смеси
US06/267,232 US4368195A (en) 1979-04-09 1981-05-26 Method for the extraction of silymarin from plants

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE19792914330 DE2914330A1 (de) 1979-04-09 1979-04-09 Verfahren zur gewinnung von silymarin aus pflanzen

Publications (2)

Publication Number Publication Date
DE2914330A1 true DE2914330A1 (de) 1980-10-30
DE2914330C2 DE2914330C2 (de) 1987-10-29

Family

ID=6067883

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE19792914330 Granted DE2914330A1 (de) 1979-04-09 1979-04-09 Verfahren zur gewinnung von silymarin aus pflanzen

Country Status (2)

Country Link
US (1) US4368195A (de)
DE (1) DE2914330A1 (de)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE102008039271A1 (de) 2007-12-23 2009-06-25 Euromed Sa Neuer Mariendistelextrakt, Verfahren zur Herstellung und Verwendung
US8614341B2 (en) 2009-05-14 2013-12-24 Euromed S.A. Amorphous silibinin for the treatment of viral hepatitis
WO2019058179A1 (en) * 2017-09-22 2019-03-28 Euromed Sa ENHANCED SOLUBILITY OF CHARDON-MARY EXTRACT

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6379714B1 (en) 1995-04-14 2002-04-30 Pharmaprint, Inc. Pharmaceutical grade botanical drugs
US6524599B2 (en) * 2001-02-21 2003-02-25 Skinceuticals, Inc. Use of milk thistle extract in skin care compositions
HRP20020858A2 (en) * 2002-10-29 2005-02-28 Leko Vladimir Method for isolation of sylimarin from sylibum marianum seeds
JP3914244B2 (ja) * 2005-10-03 2007-05-16 株式会社ファンケル 異常タンパク質除去用組成物
CZ305673B6 (cs) * 2007-08-02 2016-02-03 Irel, Spol. S R. O. Mechanicky upravený plod ostropestřce mariánského a způsob jeho úpravy
KR20230058156A (ko) 2020-09-29 2023-05-02 무니색하 매다사니 실리범 마리아넘 식물 물질로부터 생리활성 화합물의 추출 및 이의 이용

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3773932A (en) * 1968-06-01 1973-11-20 Madaus & Co Dr Method for recovering silymarin comprising polyhydroxyphenyl chromanones
US3864484A (en) * 1972-05-27 1975-02-04 Madaus & Co Dr Therapeutic compositions and methods using silymarin comprising poly-hydroxyphenyl chromanones

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
NICHTS-ERMITTELT *

Cited By (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE102008039271A1 (de) 2007-12-23 2009-06-25 Euromed Sa Neuer Mariendistelextrakt, Verfahren zur Herstellung und Verwendung
WO2009080006A2 (de) 2007-12-23 2009-07-02 Euromed Sa Neuer mariendistelextrakt, verfahren zur herstellung und verwendung
WO2009080006A3 (de) * 2007-12-23 2009-10-08 Euromed Sa Neuer mariendistelextrakt, verfahren zur herstellung und verwendung
EP2567703A2 (de) 2007-12-23 2013-03-13 Euromed SA Neuer Mariendistelextrakt, Verfahren zur Herstellung und Verwendung
EP2567703A3 (de) * 2007-12-23 2013-03-20 Euromed SA Neuer Mariendistelextrakt, Verfahren zur Herstellung und Verwendung
RU2489161C2 (ru) * 2007-12-23 2013-08-10 Эуромед Са Новый экстракт чертополоха молочного, способ его получения и применение
US8614341B2 (en) 2009-05-14 2013-12-24 Euromed S.A. Amorphous silibinin for the treatment of viral hepatitis
WO2019058179A1 (en) * 2017-09-22 2019-03-28 Euromed Sa ENHANCED SOLUBILITY OF CHARDON-MARY EXTRACT
AU2018336098B2 (en) * 2017-09-22 2023-09-07 Euromed, S.A. Enhanced solubility of milk thistle extract
US11819528B2 (en) 2017-09-22 2023-11-21 Euromed, S.A. Enhanced solubility of milk thistle extract

Also Published As

Publication number Publication date
DE2914330C2 (de) 1987-10-29
US4368195A (en) 1983-01-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP0579624B1 (de) Verfahren zur herstellung eines lagerfähigen azadirachtinreichen insektizids aus samenkernen des neem-baumes
DE69721017T2 (de) Entfernung von antioxidantien
DE3317439C2 (de)
DE60104390T2 (de) Procede d&#39;extraction des insaponifiables des huiles vegetales au moyen de chloro-1-butane
DE2914330C2 (de)
CH650404A5 (de) Zedrachborken-extrakt mit antineoplastischer wirksamkeit und verfahren zu dessen herstellung.
DE69815866T2 (de) Verwendung von shogaolen und gingerolen zur herstellung von deodoranzien
DE3537656A1 (de) Verfahren zur herstellung von isosilybinfreiem silibinin und arzneimittel, enthaltend silibinin
EP0874550B1 (de) Extraktion von inhaltsstoffen aus bestandteilen des neem-baumes
EP0211095B1 (de) Arzneimittel enthaltend Extraktivstoffe aus Pflanzen oder Pflanzenteilen der Art Leptospermum scoparium
DE1191515B (de) Verfahren zur Gewinnung von sedativ und spasmolytisch wirksamen Estern aus Radix valerianae
DE3344161C2 (de) Extraktion von Insektiziden aus Pflanzen
DE2924345C2 (de)
AT371717B (de) Verfahren zur gewinnung von reinem silymarin
CH646695A5 (en) Method of obtaining silymarin from plants
EP0285752B1 (de) Kamillenöle mit hohem Gehalt an natürlichen Polyinen und Verfahren zu deren Herstellung
GB2084569A (en) Extraction of Silymarin
DE3227001C1 (de) Verfahren zur Gewinnung von mit Phosphatidylcholin hochangereicherten ethanolischen Phosphatidfraktionen
DE2943167A1 (de) Extraktionsverfahren zur herstellung von apigenin und aus letzterem hergestellte arzneimittel
DE3112737C2 (de)
DE3225688A1 (de) Verfahren zur gewinnung von silymarin aus silybum marianum
DE2133107B2 (de) Verfahren zur Gewinnung der unverseifbaren Fraktion aus natürlichen Fettstoffen
DE925374C (de) Verfahren zur Gewinnung reiner Lipoide
DE2246205A1 (de) Verfahren zur gewinnung eines extrakts aus arnica montana
EP0049424B1 (de) Bioaktives, pflanzliche Wirkstoffe enthaltendes Mittel

Legal Events

Date Code Title Description
8110 Request for examination paragraph 44
8125 Change of the main classification

Ipc: C07D407/04

D2 Grant after examination
8364 No opposition during term of opposition
8327 Change in the person/name/address of the patent owner

Owner name: MADAUS AG, 5000 KOELN, DE

8339 Ceased/non-payment of the annual fee