KR20150006060A - 섬유모세포 성장 인자 21 단백질 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 약리학적으로 효능있고 안정한 인간 섬유모세포 성장 인자 21 (FGF21) 단백질, FGF21 단백질을 포함하는 제약 조성물, 및 그러한 단백질을 사용하여 제2형 당뇨병, 비만, 이상지혈증 및/또는 대사 증후군을 치료하는 방법에 관한 것이다.
Description
본 발명은 섬유모세포 성장 인자 21 (FGF21) 단백질, FGF21 단백질을 포함하는 제약 조성물, 및 제2형 당뇨병, 비만, 이상지혈증 및/또는 대사 증후군을 치료하는 방법에 관한 것이다.
FGF21은 글루코스 및 지질 항상성의 중요한 대사 조절제로서 기능하는 호르몬이다. FGF21은 인슐린의 것과는 뚜렷이 다른 메카니즘인 GLUT1 발현을 상향조절함으로써 지방세포에서의 글루코스 흡수를 촉진한다. 당뇨병 설치류와 원숭이에서, 인간 FGF21은 글루코스의 공복시 혈청 농도를 저하시켰고, 트리글리세리드, 인슐린 및 글루카곤의 공복시 혈청 농도를 감소시켰다. 또한, 식이 유발 비만의 설치류 모델에서, FGF21 투여는 용량 의존적 방식으로 누적 체중 감소를 가져왔다. 따라서, FGF21은 당뇨병, 비만, 이상지혈증 및 대사 증후군의 치료에 잠재적 유용성이 있다.
FGF21 단백질은 WO2010/042747, WO2010/285131 및 WO2009/149171에 기재되었다.
인간 야생형 FGF21 및 공지 FGF21 단백질과 관련된 문제점은 분자의 생체내 짧은 반감기, 낮은 효능 및/또는 제약 불안정성이다. 따라서, 장시간 작용하고, 효능있고/있거나 안정한 대안적인 FGF21 단백질에 대한 필요성이 여전히 존재한다.
본 발명은 대안적인 FGF21 단백질을 제공한다. 본 발명의 특정 FGF21 단백질은 인간 야생형 FGF21과 당업계에 개시된 공지 FGF21 단백질을 능가하는 이점이 있다. 이들 이점은 연장된 반감기, 향상된 효능 및/또는 향상된 제약 안정성을 보유하는 것을 포함한다. 향상된 효능 외에도, 본 발명의 특정 FGF21 단백질은 생체내에서의 감소된 단백질분해, 산화에 대한 감소된 감수성, 고농도에서의 저하된 응집 성향, 포유동물 세포계에서의 생산중 번역후 변형 및 단백질분해의 저하된 수준, 및/또는 향상된 화학적 안정성을 포함하여, 치료용 단백질로서의 효율적인 제조 및/또는 제제화에 유용한 하나 이상의 유리한 안정성 특징을 갖는다. 추가적으로, 본 발명의 FGF21 단백질은 제2형 당뇨병, 비만, 이상지혈증 및/또는 대사 증후군의 치료에 잠재적으로 유용하다.
본 발명은 아미노산 서열이 제2 폴리펩티드에 융합된 제1 폴리펩티드로 이루어지고, 여기서 제1 폴리펩티드는 IgG4 Fc 부분을 포함하고, Fc 부분은 항체의 힌지 영역, CH2 및 CH3 불변 영역 도메인으로 이루어지고, 제2 폴리펩티드는 서열 1의 아미노산 서열을 갖는 FGF21 단백질을 포함하고, 제1 폴리펩티드의 C-말단은 링커를 통해서 제2 폴리펩티드의 N-말단에 융합되는 것인 FGF21 단백질을 제공한다.
또한, 본 발명은 아미노산 서열이 제2 폴리펩티드에 융합된 제1 폴리펩티드로 이루어지고, 여기서 제1 폴리펩티드는 서열 14의 아미노산 서열을 갖는 IgG4 Fc 부분을 포함하고, 제2 폴리펩티드는 서열 1의 아미노산 서열을 갖는 FGF21 단백질을 포함하고, 제1 폴리펩티드의 C-말단은 링커를 통해서 제2 폴리펩티드의 N-말단에 융합되는 것인 FGF21 단백질을 제공한다.
본 발명은 또한 아미노산 서열이 제2 폴리펩티드에 융합된 제1 폴리펩티드로 이루어지고, 여기서 제1 폴리펩티드는 서열 14의 아미노산 서열을 갖는 IgG4 Fc 부분을 포함하고, 제2 폴리펩티드는 서열 1의 아미노산 서열을 갖는 FGF21 단백질을 포함하고, 제1 폴리펩티드의 C-말단은 서열 11의 아미노산 서열을 갖는 링커를 통해서 제2 폴리펩티드의 N-말단에 융합되는 것인 FGF21 단백질을 제공한다.
본 발명은 아미노산 서열이 하기 서열 5인 FGF21 단백질을 제공한다:
전술한 서열 5의 FGF21 단백질은 서열 14의 IgG4 Fc 부분 서열, 볼드체로 확인되는 서열 11의 링커 서열, 및 밑줄쳐 있는 서열 1의 FGF21 단백질을 포함한다.
또한, 본 발명은 아미노산 서열이 하기 서열 15인 FGF21 단백질을 제공한다:
상기 서열에서 X1은 L 또는 D이고, X2는 L 또는 K이고, X3은 R 또는 L이고, X4는 L 또는 E이고, X5는 G 또는 부재한다. 본 발명은 또한 X1은 D이고, X2는 L 또는 K이고, X3은 L이고, X4는 L이고, X5는 G인 서열 15의 FGF21 단백질을 제공한다. 또한, 본 발명은 X1은 L 또는 D이고, X2는 L 또는 K이고, X3은 R이고, X4는 E이고, X5는 부재하는 서열 15의 FGF21 단백질을 제공한다.
본 발명은 FGF21 단백질이 서열 5, 서열 6, 서열 7, 서열 8 및 서열 9로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열 15의 FGF21 단백질을 제공한다. 본 발명은 또한 FGF21 단백질이 서열 8 및 서열 9로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열 15의 FGF21 단백질을 제공한다. 또한, 본 발명은 FGF21 단백질이 서열 5, 서열 6 및 서열 7로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열 15의 FGF21 단백질을 제공한다. 가장 바람직한 FGF21 단백질은 서열 5이다.
본 발명은 또한 본 발명의 FGF21 단백질 및 1종 이상의 제약상 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한 본 발명의 FGF21 단백질을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 환자에서 제2형 당뇨병, 비만, 이상지혈증 및/또는 대사 증후군을 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명은 또한 본 발명의 제약 조성물을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 환자에서 제2형 당뇨병, 비만, 이상지혈증 및/또는 대사 증후군을 치료하는 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 요법에 사용하기 위한 본 발명의 FGF21 단백질을 제공한다. 바람직하게는, 본 발명은 제2형 당뇨병, 비만, 이상지혈증 및/또는 대사 증후군의 치료에 사용하기 위한 본 발명의 FGF21 단백질을 제공한다.
또한, 본 발명은 제2형 당뇨병, 비만, 이상지혈증 및/또는 대사 증후군 치료용 의약의 제조에 있어서 본 발명의 FGF21 단백질의 용도를 제공한다.
본 발명은 또한 본 발명의 상기 FGF21 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 FGF21 단백질의 아미노산 서열이 제2 폴리펩티드에 융합된 제1 폴리펩티드로 이루어지고, 여기서 제1 폴리펩티드는 IgG4 Fc 부분을 포함하고, Fc 부분은 항체의 힌지 영역, CH2 및 CH3 불변 영역 도메인으로 이루어지고, 제2 폴리펩티드는 서열 1의 아미노산 서열을 갖는 FGF21 단백질을 포함하고, 제1 폴리펩티드의 C-말단은 링커를 통해서 제2 폴리펩티드의 N-말단에 융합되는 것인 본 발명의 FGF21 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 FGF21 단백질의 아미노산 서열이 제2 폴리펩티드에 융합된 제1 폴리펩티드로 이루어지고, 여기서 제1 폴리펩티드는 서열 14의 아미노산 서열을 갖는 IgG4 Fc 부분을 포함하고, 제2 폴리펩티드는 서열 1의 아미노산 서열을 갖는 FGF21 단백질을 포함하고, 제1 폴리펩티드의 C-말단은 링커를 통해서 제2 폴리펩티드의 N-말단에 융합되는 것인 본 발명의 FGF21 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
또한, 본 발명은 FGF21 단백질의 아미노산 서열이 제2 폴리펩티드에 융합된 제1 폴리펩티드로 이루어지고, 여기서 제1 폴리펩티드는 서열 14의 아미노산 서열을 갖는 IgG4 Fc 부분을 포함하고, 제2 폴리펩티드는 서열 1의 아미노산 서열을 갖는 FGF21 단백질을 포함하고, 제1 폴리펩티드의 C-말단은 서열 11의 아미노산 서열을 갖는 링커를 통해서 제2 폴리펩티드의 N-말단에 융합되는 것인 본 발명의 FGF21 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
또한, 본 발명은 FGF21 단백질의 아미노산 서열이 하기 서열 5인 본 발명의 FGF21 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다:
본 발명은 또한 뉴클레오티드 서열이 서열 13인 본 발명의 FGF21 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
상기 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 RNA 형태로 또는 DNA 형태로 존재할 수 있으며, DNA는 cDNA 및 합성 DNA를 포함한다. DNA는 이중가닥 또는 단일가닥일 수 있다. 본 발명의 단백질을 코딩하는 코딩 서열은 유전 코드의 중복성 또는 축퇴성의 결과로서 다양할 수 있다.
본 발명의 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 다음을 포함할 수 있다: 오직 단백질에 대한 코딩 서열만, 단백질에 대한 코딩 서열과 추가적인 코딩 서열, 예컨대 리더 또는 분비 서열 또는 전구단백질 서열; 단백질에 대한 코딩 서열과 비-코딩 서열, 예컨대 단백질에 대한 코딩 서열의 인트론 또는 비-코딩 서열 5' 및/또는 3'. 따라서 용어 "단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드"는 단백질에 대한 코딩 서열뿐만 아니라 추가적인 코딩 및/또는 비-코딩 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드도 포함할 수 있는 폴리뉴클레오티드, 예컨대 서열 13을 포함한다.
본 발명의 폴리뉴클레오티드는 그 서열을 발현 제어 서열에 작동가능하게 연결시킨 후 숙주 세포에서 발현될 것이다. 발현 벡터는 전형적으로 숙주 유기체에서 에피솜으로서 또는 숙주 염색체 DNA의 일체 부분으로서 복제가능하다. 통상적으로, 발현 벡터는 목적 DNA 서열로 형질전환된 그들 세포의 검출을 허용하도록 선별마커, 예를 들어 테트라시클린, 네오마이신, 및 디히드로폴레이트 리덕타제를 함유할 것이다.
본 발명의 FGF21 단백질은 포유동물 세포, 예컨대 CHO, NS0, HEK293 또는 COS 세포에서; 박테리아 세포, 예컨대 이. 콜라이(E. coli), 바실루스 서브틸리스(Bacillus subtilis) 또는 슈도모나스 플루오레슨스(Pseudomonas fluorescence)에서; 또는 진균 또는 효모 세포에서 쉽사리 생산될 수 있다. 숙주 세포는 당업계 주지의 기술을 이용하여 배양된다. 바람직한 포유동물 숙주 세포는 글루타민 신테타제 (GS) 발현 시스템을 함유하는 CHOK1SV 세포주이다 (US 5,122,464 참조).
관심 폴리뉴클레오티드 서열 (예를 들어, FGF21의 단백질 및 발현 제어 서열)을 함유하는 벡터는 세포 숙주의 타입에 따라 변하게 되는 주지의 방법에 의하여 숙주 세포 중으로 전달될 수 있다. 예를 들어, 염화칼슘 형질전환은 원핵 세포에 대하여 통상적으로 이용되며, 반면에 인산칼슘 처리 또는 전기천공법은 기타 세포 숙주에 대하여 사용될 수 있다.
다양한 단백질 정제 방법이 이용될 수 있고 그러한 방법은 당업계에 알려져 있으며 예를 들어 문헌 [Deutscher, Methods in Enzymology 182: 83-89 (1990)] 및 문헌 [Scopes, Protein Purification : Principles and Practice, 3rd Edition, Springer, NY (1994)]에 기재되어 있다.
본 발명은 또한
i) 서열 5의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 포유동물 숙주 세포를 상기 폴리펩티드 서열이 발현되도록 하는 조건하에서 배양하는 단계; 및
ii) 상기 숙주 세포로부터 각각의 폴리펩티드의 아미노산 서열이 서열 5인 동종이량체를 회수하는 단계
를 포함하는, 각각의 폴리펩티드의 아미노산 서열이 서열 5인 동종이량체를 생산하는 방법을 제공한다.
본 발명의 FGF21 단백질은 포유동물 세포에서 발현시 동종이량체이다. 본원에서 사용되는 "동종이량체"는 Fc 부분에서 비-공유 상호작용 및 분자간 디술피드 결합을 통해 회합하는 동일한 아미노산 서열 (예를 들어, 서열 5)을 갖는 본 발명의 두 FGF21 단백질을 언급한다.
본 발명은 아미노산 서열이 제2 폴리펩티드에 융합된 제1 폴리펩티드로 이루어지고, 여기서 제1 폴리펩티드는 IgG4 Fc 부분을 포함하고, Fc 부분은 항체의 힌지 영역, CH2 및 CH3 불변 영역 도메인으로 이루어지고, 제2 폴리펩티드는 서열 1의 아미노산 서열을 갖는 FGF21 단백질을 포함하고, 제1 폴리펩티드의 C-말단은 링커를 통해서 제2 폴리펩티드의 N-말단에 융합되는 것인 FGF21 단백질의 동종이량체를 제공한다.
또한, 본 발명은 아미노산 서열이 제2 폴리펩티드에 융합된 제1 폴리펩티드로 이루어지고, 여기서 제1 폴리펩티드는 서열 14의 아미노산 서열을 갖는 IgG4 Fc 부분을 포함하고, 제2 폴리펩티드는 서열 1의 아미노산 서열을 갖는 FGF21 단백질을 포함하고, 제1 폴리펩티드의 C-말단은 링커를 통해서 제2 폴리펩티드의 N-말단에 융합되는 것인 FGF21 단백질의 동종이량체를 제공한다.
본 발명은 또한 아미노산 서열이 제2 폴리펩티드에 융합된 제1 폴리펩티드로 이루어지고, 여기서 제1 폴리펩티드는 서열 14의 아미노산 서열을 갖는 IgG4 Fc 부분을 포함하고, 제2 폴리펩티드는 서열 1의 아미노산 서열을 갖는 FGF21 단백질을 포함하고, 제1 폴리펩티드의 C-말단은 서열 11의 아미노산 서열을 갖는 링커를 통해서 제2 폴리펩티드의 N-말단에 융합되는 것인 FGF21 단백질의 동종이량체를 제공한다.
본 발명은 아미노산 서열이 하기 서열 5인 FGF21 단백질의 동종이량체를 제공한다:
전술한 서열 5의 FGF21 단백질은 서열 14의 IgG4 Fc 부분 서열, 볼드체로 확인되는 서열 11의 링커 서열, 및 밑줄쳐 있는 서열 1의 FGF21 단백질을 포함한다.
또한, 본 발명은 아미노산 서열이 하기 서열 15인 FGF21 단백질의 동종이량체를 제공한다:
상기 서열에서 X1은 L 또는 D이고, X2는 L 또는 K이고, X3은 R 또는 L이고, X4는 L 또는 E이고, X5는 G 또는 부재한다. 본 발명은 또한 X1은 D이고, X2는 L 또는 K이고, X3은 L이고, X4는 L이고, X5는 G인 서열 15의 FGF21 단백질의 동종이량체를 제공한다. 또한, 본 발명은 X1은 L 또는 D이고, X2는 L 또는 K이고, X3은 R이고, X4는 E이고, X5는 부재하는 서열 15의 FGF21 단백질의 동종이량체를 제공한다.
본 발명은 FGF21 단백질이 서열 5, 서열 6, 서열 7, 서열 8 및 서열 9로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열 15의 FGF21 단백질의 동종이량체를 제공한다. 본 발명은 또한 FGF21 단백질이 서열 8 및 서열 9로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열 15의 FGF21 단백질의 동종이량체를 제공한다. 또한, 본 발명은 FGF21 단백질이 서열 5, 서열 6 및 서열 7로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열 15의 FGF21 단백질의 동종이량체를 제공한다. 가장 바람직한 FGF21 단백질은 서열 5이다.
본 발명은 또한 본 발명의 FGF21 단백질의 상기 동종이량체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드에 관한 것이다.
본 발명은 또한 본 발명의 FGF21 단백질의 동종이량체 및 1종 이상의 제약상 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한 본 발명의 FGF21 단백질의 동종이량체를 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 환자에서 제2형 당뇨병, 비만, 이상지혈증 및/또는 대사 증후군을 치료하는 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 요법에 사용하기 위한 본 발명의 FGF21 단백질의 동종이량체를 제공한다. 바람직하게는, 본 발명은 제2형 당뇨병, 비만, 이상지혈증 및/또는 대사 증후군의 치료에 사용하기 위한 본 발명의 FGF21 단백질의 동종이량체를 제공한다.
또한, 본 발명은 제2형 당뇨병, 비만, 이상지혈증 및/또는 대사 증후군 치료용 의약의 제조에 있어서 본 발명의 FGF21 단백질의 동종이량체의 용도를 제공한다.
본 발명의 FGF21 단백질은 Fc 부분에서 고도로 보존된 N-글리코실화 부위에서 글리코실화될 수 있다. 또한, 본 발명의 FGF21 단백질은 포유동물 세포에서 발현시 동종이량체이다. 본원에서 사용되는 "동종이량체"는 Fc 부분에서 비-공유 상호작용 및 분자간 디술피드 결합을 통해 회합하는, 동일한 아미노산 서열, 예를 들어 서열 5를 갖는 본 발명의 두 FGF21 단백질을 언급한다.
전장 인간 야생형 FGF21은 27 아미노산 신호 펩티드를 함유하는 208 아미노산 폴리펩티드이다. 성숙 인간 야생형 FGF21은 27 아미노산 신호 펩티드가 없고, 그에 따라 181 아미노산 폴리펩티드 (서열 2)로 귀결되는 전장 폴리펩티드를 포함한다.
본 발명의 FGF21 단백질의 아미노산 위치에서의 변화는 IgG4 Fc 부분과 링커가 없는 성숙 인간 야생형 FGF21의 폴리펩티드 (서열 2)에서의 아미노산 위치로부터 측정된다. 예를 들어, 서열 5의 FGF21 단백질의 IgG4 Fc 부분은 아미노산 1 내지 228번을 포함하고, 서열 5의 FGF21 단백질의 링커는 아미노산 229 내지 244번을 포함하며, 서열 5의 FGF21 단백질의 FGF21 단백질은 아미노산 245 내지 424번을 포함한다. 따라서, "A31C"로서 본원에 기재되는 치환은 성숙 인간 야생형 FGF21의 위치 31에서 야생형 아미노산 Ala → 아미노산 Cys로의 치환을 언급한다.
특정 단백질에서의 1개 아미노산 잔기의 치환은 전체로서 단백질의 특징에 영향을 미칠 수 있다는 점과, 전체적인 효과는 약리학적 효능 및/또는 제약 안정성에 유익하거나 또는 유해할 수 있다는 점에 유념하는 것이 중요하다. 예를 들어, 1개 아미노산 치환인 P115W는 FGF21 단백질의 효능을 증가시키나, P115W는 또한 응집을 초래하는 자기회합의 원인이 되는 것으로 생각된다. 따라서, 전체적인 효과는 단백질에 유해하고, 그에 따라 치환 P115W는 본 발명의 FGF21 단백질에 포함시키지 않는다. 또 다른 예는 아미노산 치환 R175L에 관한 것으로, 이는 FGF21 단백질의 효능을 증가시킨다. 그러나, R175L 치환을 갖는 FGF21 단백질은 단백질분해에 취약한 것으로 밝혀졌으며, 따라서 전체적인 효과는 유해하였다. 본 발명의 FGF21 단백질로 관찰된 C-말단 단백질분해에 대처하기 위하여, 위치 180 및 181에서의 아미노산 (위치 180에서 L 및 위치 181에서 G)을 위치 180에서 아미노산 E로 치환하고 181에서의 아미노산은 결실시킨다. 이들 변형은 실질적으로 C-말단 단백질분해를 감소시키지만, 아울러 인간 293 세포-βKlotho-SRE luc 검정에서 측정하여 FGF21 단백질의 약리학적 효능도 25배 감소시킨다. 놀랍게도, 효능은 위치 175에서의 아미노산 잔기 (R175L)를 야생형 R로 복귀시킴으로써 회복된다. 그러므로, 당해 치환 (R175L)의 전체적인 효과는 단백질에 유해하고, 따라서 치환 R175L은 본 발명의 바람직한 FGF21 단백질에 포함시키지 않는다.
본 발명의 특정 FGF21 단백질은 실시예 2 및 3에서 서열 5에 대하여 증명하여 보여주는 바와 같이 효능있고 생물학적으로 활성인 단백질이다. 본 발명의 바람직한 FGF21 단백질은 효능을 향상시킬뿐만 아니라, 다른 아미노산 변화와도 상용성이고 그에 따라 그들은 향상된 안정성 특징 및 증가된 생체내 안정성을 제공할 수 있는 아미노산 치환을 함유한다. 효능을 향상시키는 본 발명의 바람직한 FGF21 단백질에서의 아미노산 치환은 D127K, S167R 및 G174L을 포함한다 (실시예 2 및 3 참조).
인간 야생형 FGF21의 농축 단백질 용액을 m-크레졸과 같은 제약 보존제에 노출시키는 것은 단백질의 응집체 형성 성향을 증가시킨다. 추가적인 디술피드 결합의 도입을 통한 구조적 안정화는 인간 야생형 FGF21의 열 안정성뿐만 아니라 보존제 상용성도 향상시킨다. 본 발명의 FGF21 단백질은 생물학적 활성의 훼손없이 열 안정성과 보존제 상용성을 대폭 향상시키는 아미노산 치환 A31C 및 G43C를 혼입한다. A31C/G43C 치환을 또한 포함하는 고효능 FGF21 단백질은 이전에 기재된 바 있다. 그들 보고된 단백질은 야생형 FGF21과 비교하여 현저히 향상된 보존제 상용성을 보이지만, 그들은 보존제의 존재하에서 여전히 응집하려는 경향이 있다. 이러한 단백질 응집은 면역원성의 위험을 증가시키고, 그에 따라 치료용 단백질로서의 단백질의 수용성(acceptability)을 감소시키게 된다.
FGF21 단백질의 Fc 부분에의 융합 역시 자기회합을 더욱 두드러지게 한다. 이러한 거동은 결합력(avidity)으로 인도할 수 있고 그에 따라 자기 상호작용과 응집을 안정화하는 Fc 융합체의 동종이량체 구조에 기인할 수 있다.
본 발명의 바람직한 단백질은 아미노산 치환 L98D 및 L100K를 포함하고, 이들은 놀랍게도 고농도에서 현저히 더 낮은 고분자량 응집체 형성을 가져온다. 유리하게는, 아미노산 치환 L98D 및 L100K는 단백질의 효능을 감소시키지 않으며, 그러나 그들은 유해한 응집 문제를 최소화한다.
본 발명의 FGF21 단백질의 제조를 위한 바람직한 시판 발현 시스템은 포유동물 CHO-K1 세포주이다. 그러나, 포유동물 세포주 CHO-K1 및 HEK293은 성숙 인간 야생형 FGF21에 위치 179에서 티로신 측쇄의 황산화를 통해 번역후 변형을 초래할 수 있다. 위치 179 및 180 (존재할 경우)에서의 티로신 잔기의 황산화는 효능을 감소시키며 생성물 불균질성의 바람직하지 않은 원천이다. 따라서, 위치 179 및/또는 180에 Tyr을 갖는 FGF21 단백질이 CHO-K1 또는 HEK293 세포주로부터 발현될 경우, 발현된 단백질의 어느 일부는 위치 179에서 황산화될 수 있고 다른 일부는 위치 180에서 황산화될 수 있으며, 한편으로는 다른 일부가 양쪽 위치 모두에서 황산화될 수 있고 어느 일부는 어느 위치에서도 황산화되지 않을 수 있다. 이는 감소된 효능을 갖는 불균질하고 예측할 수 없는 단백질 집단을 초래한다.
본 발명의 바람직한 FGF21 단백질은 이러한 유해한 황산화를 해소한 아미노산 치환을 포함한다. 따라서, 아미노산 치환 Y179F가 단백질중으로 혼입되었다. Y179F는 CHO-K1 및 HEK293 세포에서의 생산으로부터 생기는 황산화를 제거한다. 더욱이, 아미노산 치환 Y179F는 본 발명의 다른 호적한 아미노산 치환과 상용성이고, 효능에 관해서는 중성 변화인 것으로 측정된다.
인간 야생형 FGF21은 생체내에서의 단백질분해에 취약하다. 야생형 FGF21로 마우스 또는 시노몰구스 원숭이의 정맥내 또는 피하 주사 후 혈청으로부터 회수한 주요 단백질분해 단편은 위치 171에서 종결되는 단편이다. 잔기 1 내지 171번을 스패닝하는 FGF21 단편은 시험관내 효능 검정에서 약 100배 효능이 덜한 것으로 측정되었다. 따라서, 당해 단백질분해 절단부위의 제거는 활성 약물에의 노출을 증가시킴으로써 약효를 향상시킬 수 있다. 아미노산 치환 G170E는 마우스에서 절단을 현저히 둔화시키고 시노몰구스 원숭이에서 24시간 후 측정시 171 위치에서의 단백질분해를 실질적으로 제거시키는 것으로 나타났다. G170E 치환은 효능에 영향을 미치지 않으며 목적하는 물리화학적 안정성 프로파일과 상용성이다. 따라서, 아미노산 치환 G170E는 본 발명의 FGF21 단백질중으로 혼입된다.
인간 야생형 FGF21은 CHO-K1 제조에서 생산된 카르복시펩티다제에 또한 취약하고, 아미노산 치환 A180E 및 위치 181에서의 아미노산 결실은 이러한 프로세싱을 감속시키고, 그에 따라 발현된 단백질의 길이의 불균질성 (즉, 세포주에 의해 발현된 성숙 단백질에서 아미노산 잔기의 수에 있어서 불균질성)을 감소시키게 된다. 비록 아미노산 치환 A180E 및 위치 181에서의 아미노산 결실이 포유동물 세포 발현에서 C-말단 단백질분해를 제거하지는 않지만, 본 발명의 FGF21 단백질에서 발견된 다른 목적하는 아미노산 치환에 관련해서 효능을 유지하면서 단백질분해의 감속에 상당히 효과적이다. 이 유리한 특징의 견지에서, 아미노산 치환 A180E 및 위치 181에서의 아미노산 결실은 본 발명의 바람직한 FGF21 단백질중으로 혼입된다.
본 발명의 FGF21 단백질은 링커를 통해서 이뮤노글로불린의 Fc 부분에 융합된다. 본 발명의 FGF21 단백질용으로 사용된 Fc 부분은 IgG4 Fc 부분으로부터 유래한다. 본 발명의 FGF21 단백질은 인간 IgG4로부터 유래하는 Fc 부분을 함유하되, 야생형 인간 서열과 비교하여 하나 이상의 치환을 포함하는 것이 한층 더 바람직하다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 이뮤노글로불린의 Fc 부분은 면역학 분야에서의 용어에 통상적으로 부여되는 의미를 갖는다. 구체적으로, 당해 용어는 항체로부터의 두 항원 결합 영역 (Fab 단편)을 함유하지 않는 항체 단편을 언급한다. Fc 부분은 항체의 힌지 영역, CH2 및 CH3 불변 영역 도메인으로 이루어진다.
항체의 포유동물 발현은 글리코실화로 귀결됨은 당업계에서 주지이다. 전형적으로, 글리코실화는 항체의 Fc 부분에서 고도로 보존된 N-글리코실화 부위에서 일어난다. N-글리칸은 전형적으로 아스파라긴에 부착한다.
따라서, 본 발명의 FGF21 단백질은 본 발명의 FGF21 단백질에 융합된 이뮤노글로불린의 인간 IgG4 Fc 영역으로부터 유래한다. 바람직하게는, FGF21 단백질의 Fc 부분은 서열 14의 서열을 포함한다:
본 발명의 FGF21 단백질의 N-말단 아미노산은 "L"로 지칭되는 글리신-풍부 링커 (G-풍부)를 통해 Fc 부분의 각각의 중쇄의 C-말단에 융합되며, "L" 바로 앞에 오는 숫자는 FGF21 단백질을 Fc 부분과 분리하고 있는 반복되는 링커 단위의 개수를 언급한다. 링커 단위는 Gly-Gly-Gly-Gly-Ser 서열 (서열 10)로서 정의된다. 다중 링커 반복물이 사용되는 경우 링커는 임의로는 최종 Ser에 연결된 Ala를 함유한다.
본 발명의 FGF21 단백질의 Fc 부분은 바람직하게는 "1L"로 지칭되는 G-풍부 펩티드 링커 -Gly-Gly-Gly-Gly-Ser- (서열 10)의 1, 2 또는 3개 반복물을 통해 함께 융합된다. 본 발명의 추가적인 G-풍부 링커는 "2L"로 지칭되는 서열 -Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Ala (서열 12) 및 "3L"로 지칭되는 -Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Ala (서열 11)을 포함한다. 본 발명의 가장 바람직한 글리신-풍부 링커는 링커 "3L" -Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Ala (서열 11)이다.
IgG4 Fc는 IgG4 항체의 양쪽 중쇄로부터의 불변 영역을 포함하여 이루어지는 것으로 이해된다. 따라서, 본 발명의 FGF21 단백질은 각각의 IgG4 Fc 부분 폴리펩티드의 각각의 C-말단에 G-풍부 링커를 통하여 동일한 아미노산 서열을 갖는 두 FGF21 단백질과 융합된 IgG4 Fc 부분을 포함하여 이루어진다.
본 발명의 FGF21 단백질의 제약 조성물은 제2형 당뇨병, 비만, 이상지혈증 및/또는 대사 증후군을 치료하기 위한 일반적으로 의도되는 목적을 달성하는 당업계에 알려져 있는 임의의 수단에 의하여 투여될 수 있다. 투여의 바람직한 경로는 비-경구이다. 투여되는 투여량은 수용자의 연령, 건강과 체중, 병행 치료의 종류 (존재할 경우), 치료 빈도, 및 목적하는 효과의 본질에 좌우될 것이다. 전형적인 투여량 수준은 표준 임상 기술을 이용하여 최적화될 수 있고 투여 방식과 환자의 상태에 좌우될 것이며 당업자에 의하여 결정될 수 있다.
본 발명의 FGF21 단백질은 제약상 유용한 조성물 제조를 위하여 공지의 방법에 따라 제제화된다. 목적 제제는 적당한 희석제로 또는 임의적인 제약상 허용되는 담체, 보존제, 부형제 또는 안정화제를 함유하는 고순도의 수용액으로 재구성되는 안정한 동결건조 제품이다 (문헌 [Remington, The Science and Practice of Pharmacy, 19th edition, Gennaro, ed., Mack Publishing Co., Easton, PA 1995]).
본 발명의 FGF21 단백질은 제약상 허용되는 완충제, 및 허용가능한 안정성 및 투여에 허용가능한 pH를 제공하도록 조정된 pH로 제제화될 수 있다. 더욱이, 본 발명의 FGF21 조성물은 바이알, 카트리지, 펜 전달 장치, 주사기, 정맥내 투여관 또는 정맥내 투여백과 같은 용기 중으로 넣어질 수 있다.
용어 "이상지혈증"은 지단백질 과생산 또는 결핍을 비롯하여 지단백질 대사의 장애를 의미한다. 이상지혈증은 총 콜레스테롤, 저밀도 지단백질 (LDL) 콜레스테롤 및 트리글리세리드 농도의 상승, 및/또는 혈중 고밀도 지단백질 (HDL) 콜레스테롤 농도의 감소에 의하여 징후가 나타날 수 있다.
용어 "대사 증후군"은 1인에서의 대사 위험 인자의 군을 특징으로 한다. 그들은 다음의 것들을 포함한다: 복부 지방 - 대부분의 남성에서 허리 40인치 이상; 고혈당 - 절식후 적어도 110 밀리그램/데시리터(mg/dl); 고 트리글리세리드 - 혈류중 적어도 150 mg/dl; 저 HDL - 40 mg/dl 미만; 및/또는 130/85 또는 그보다 높은 혈압.
용어 "비만"은 야윈 체중에 비례하여 과량의 피하 지방이 존재하는 상태로서 정의된다 (문헌 [Stedman's Medical Dictionary 28th edition, 2006, Lippincott Williams & Wilkins]).
"환자"는 포유동물, 바람직하게는 인간이다.
용어 "치료하는" (또는 "치료하다" 또는 "치료")는 기존 증상, 장애, 상태 또는 질환의 진행 또는 중증도를 둔화, 감소 또는 역전시키는 것을 의미한다.
용어 "치료 유효량"은 환자에로의 단일 또는 다중 용량 투여시 목적하는 치료를 제공하는 본 발명 단백질의 양 또는 용량을 언급한다.
용어 "제2형 당뇨병"은 인슐린의 이용가능성에도 불구하고 과잉 글루코스 생산을 특징으로 하며, 순환 글루코스 수준은 불충분한 글루코스 클리어런스의 결과로서 과도하게 높은 상태로 잔류한다.
본 발명은 하기 실시예를 참조함으로써 실시될 수 있다. 그러나, 이는 본 발명의 범위를 제한하는 것으로서 해석되지 않아야 한다. 또한, 실시예에 기재되고 예시된 본 발명의 FGF21 단백질은 포유동물 세포에서 발현되고, 그러므로 동종이량체이다.
실시예
1
CHOK1SV
세포에서의
FGF21
단백질 발현
본 발명의 FGF21 단백질을 CHOK1SV 세포를 사용하여 포유동물 세포 발현 시스템에서 생산하였다. 본 발명의 FGF21 단백질을 코딩하는 유전자를 글루타민 신테타제 (GS)-함유 발현 플라스미드 백본 (pEE12.4-기재 플라스미드) 중으로 서브클로닝하였다. 본 발명의 FGF21 단백질을 코딩하는 cDNA 서열을 바람직한 신호 펩티드 서열의 코딩 서열과 프레임을 맞추어(in frame) 융합시켜 조직 배양 배지 중으로의 목적 생성물 분비를 증진시켰다. 바람직한 신호 펩티드 서열은 아미노산 서열 서열 3 및 서열 4로 나타낸 바와 같은 폴리펩티드이었다.
발현은 바이러스 시토메갈로바이러스 (CMV) 프로모터에 의하여 구동되었다. CHOK1SV 세포를 전기천공법과 적당량의 재조합 발현 플라스미드를 사용하여 안정하게 형질감염시키고, 형질감염된 세포를 현탁 배양으로 적당한 세포 밀도로 유지시켰다. 형질감염된 세포의 선별은 메티오닌 술폭시민 (MSX)-함유 무혈청 배지에서의 성장에 의하여 달성하였고 35 내지 37℃와 5 내지 7% CO2에서 인큐베이션하였다.
클론-유래 세포주를 유동 세포 측정기의 사용에 의하여 계측 또는 측정하였다. 포유동물 세포에서의 FGF21 단백질 발현은 일반적으로, 서열 5의 아미노산 서열로 나타낸 FGF21 단백질과 같은, 즉 N-말단에 메티오닌 잔기가 없는 천연 N-말단 서열 ESKY를 산출한다.
CHO 세포로부터 배지 중으로 분비된 FGF21 단백질은 표준 크로마토그래피 기술에 따라 단백질 A 친화성 크로마토그래피에 이은 정제용 크기 배제 크로마토그래피에 의하여 정제될 수 있다. 간단히 말하면, 수확한 배지로부터의 FGF21 단백질을 맵 실렉트 프로틴 에이(Mab Select Protein A: GE, 미국 뉴저지주 피스캣어웨이) 상에 PBS pH 7.4 러닝 버퍼(running buffer)로 포획하고; 러닝 버퍼로 잠시 세척하여 비-특이적 결합 물질을 제거한 다음; 10 mM 시트레이트 pH 3.0으로 용리하였다. FGF21 단백질을 함유하는 분획을 풀링하고(pooled) 1/10 부피의 1M 트리스 pH 8.0을 첨가하여 pH를 중화시켰다. 중화된 풀을 농축시켜 PBS pH 7.4 이동상을 갖는 슈퍼덱스(Superdex) 200 크기 배제 크로마토그래피 칼럼 (GE, 미국 뉴저지주 피스캣어웨이) 상에 로딩하였다. 단량체 FGF21 단백질 (공유결합 동종이량체)을 함유하는 분획을 풀링, 농축 및 저장하였다.
이와 달리, FGF21 단백질을 함유하는 무세포 배지를 2시간까지 동안 50 내지 60℃로 가열, 냉각, 바이러스 불활성화를 위해 세제 (트리톤 X-100)로 처리, 맵 실렉트 프로틴 에이 (지이 헬스케어, GE Healthcare) 칼럼에 적용, 및 염화나트륨-함유 및 -비함유 pH 7 트리스-완충 용액으로 연속적으로 세척하여 비-특이적 결합 물질을 제거할 수 있다. FGF21 단백질을 20 mM 시트레이트 pH 3을 사용하여 칼럼으로부터 용리시킨 다음 바이러스 불활성화를 위하여 pH 3.4 내지 3.7에서 2시간까지 동안 유지시켰다. 용액을 트리스 완충제와 염화나트륨을 첨가하여 pH 4.8 내지 5.2로 조정하고 적어도 15분 동안 혼합하였다. 형성되는 침전물을 심층 여과 (밀리포어, Millipore)에 의하여 제거하였다. FGF21 단백질을 포로스 에이치에스 50(Poros HS 50; 라이프 테크놀로지스, Life Technologies) 또는 에스피 세파로스 에이치피(SP Sepharose HP, 지이 헬스케어)와 같은 수지를 사용하여 양이온 교환 크로마토그래피에 의하여 추가 정제하였다. 양이온 교환 칼럼을 pH 5 소듐 아세테이트-완충 용액중 염화나트륨으로 용리하였다. FGF 단백질은 트리스 완충제를 사용하여 pH를 7에서 8로 조정, 황산나트륨의 첨가 및 칼럼에의 적용에 이어 황산나트륨의 역전된 농도 구배로의 용출에 의하여 페닐 세파로스 에이치피(Phenyl Sepharose HP, 지이 헬스케어) 상에서 소수성 상호작용 크로마토그래피로 추가 정제될 수 있다. 정제된 FGF21 단백질은 플라노바 20N(Planova 20N; 아사히 카세이 메디컬, Asahi Kasei Medical)과 같은 바이러스 체류 필터(retention filter)에 통과시킬 수 있으며 뒤이어 재생 셀룰로스막 (밀리포어) 상에서 접선 유동 한외여과를 이용하여 10 mM 시트레이트, 150 mM NaCl pH 7 중으로의 농축/투석 여과가 행해진다.
실시예
2
3
T3
-
L1
-β
Klotho
섬유모세포
글루코스
흡수 검정
야생형 마우스 βKlotho의 코딩 서열 및 블라스티시딘 내성 마커를 함유하는 CMV-구동 포유동물 발현 벡터의 레트로바이러스 형질도입에 의하여 3T3-L1 섬유모세포로부터 3T3-L1-βKlotho 섬유모세포를 생성하였다. 블라스티시딘-내성 세포를 15 μM 블라스티시딘의 존재하에서 14일 동안 성장 후 선별하였고, βKlotho 단백질 발현은 항-βKlotho 항체로의 이뮤노블롯에 의하여 검증하였다. 3T3-L1-βKlotho 섬유모세포를 실험 용도로 플레이팅시까지 10% 송아지 혈청 및 15 μM 블라스티시딘을 함유한 둘베코 변형 이글 배지 (DMEM)에서 유지시켰다.
글루코스 흡수를 위하여, 3T3-L1-βKlotho 섬유모세포를 96-웰 플레이트에 20,000 세포/웰로 플레이팅하고 10% 송아지 혈청을 함유한 DMEM에서 48시간 동안 인큐베이션하였다. 세포를 0.1% 소 혈청 알부민 (BSA)을 함유하고 관심 FGF21 단백질이 들어있거나 들어있지 않은 DMEM에서 3시간 동안 인큐베이션하고, 뒤이어 100 μM 2-데옥시-D-(14C) 글루코스를 함유하고 FGF21 단백질이 들어있거나 들어있지 않은 크렙스-링거 포스페이트 (KRP) 완충제 (15 mM Hepes, pH 7.4, 118 mM NaCl, 4.8 mM KCl, 1.2 mM MgSO4, 1.3 mM CaCl2, 1.2 mM KH2PO4, 0.1% BSA)에서 1시간 인큐베이션을 행하였다. 비-특이적 결합은 1 mM 2-데옥시-D-(14C) 글루코스를 함유하는 크렙스-링거 비카르보네이트/Hepes (KRBH) 완충제에서 선별 웰의 인큐베이션에 의하여 측정되었다. 반응은 세포에 20 μM 시토칼라신 B를 첨가하여 종료하였고 글루코스 흡수는 액체 섬광 계수기를 사용하여 측정하였다.
본질적으로 전술한 바와 같은 프로토콜에 따라, 3T3-L1-βKlotho 섬유모세포 글루코스 흡수 검정에서 서열 5의 FGF21 단백질의 동종이량체의 시험관내 효능 (EC50)은 0.070 nM인 것으로 측정되었다.
실시예
3
인간 293 세포-β
Klotho
-
SRE
luc
검정
293-βKlotho-SRE luc 리포터 세포의 구축:
HEK-293 세포 (인간 태아 신장 세포)를 둘베코 변형 이글 배지에 10% 우태 혈청 (FBS)을 함유하는 성장 배지 (GM) 중 37℃, 5% CO2에서 배양하였다. 세포를 CMV 프로모터-구동 인간 βKlotho 발현 카세트를 함유하는 플라스미드 및 혈청 반응 요소 (SRE)-구동 루시페라제 발현 카세트를 함유하는 플라스미드로 공-형질감염시켰다. βKlotho 발현 플라스미드는 아미노글리코시드 항생제 G418에 대한 내성을 부여하기 위하여 SV40 프로모터-구동 네오마이신 포스포트랜스페라제 발현 카세트를 또한 함유하였다. 형질감염된 HEK-293 세포를 600 ㎍/mL의 G418로 선별하여 형질감염된 플라스미드가 게놈중으로 통합된 세포를 선별하였다. 선별된 세포를 희석에 의하여 클로닝한 다음 FGF21의 첨가후 24시간째에서 루시페라제 생산의 증가에 대하여 시험하였다. 루시페라제에 있어서 최대 FGF21-의존적 증가를 증명해 보여주는 클론이 상대적인 FGF21 단백질 활성의 측정에 사용된 세포주로서 선택되었다.
293-βKlotho-SRE luc FGF21 활성 검정:
293-βKlotho-SRE luc 세포를 세정하여 CD 293 현탁 배양 배지 (인비트로젠, Invitrogen)에 넣었다. 세포를 37℃, 6% CO2, 125 rpm에서 밤새 현탁 성장시켰다. 세포를 계수하고 원심분리에 의하여 펠릿화한 다음, 0.1% BSA를 함유하는 CD 293 배지에 재현탁시켰다. 세포를 백색 96-웰 플레이트에 25,000 세포/웰로 넣었다. CD 293/0.1% BSA중의 4배 연속 희석액을 각각의 FGF21 단백질에 대하여 제조하여 100 nM 내지 0.006 nM의 최종 농도를 갖는 8개 희석액을 생성하였다. 희석액을 세포에 3개1조로 첨가하고 16 내지 20시간 동안 37℃, 5% CO2에서 인큐베이션하였다. 루시페라제 수준은 동등 부피의 원글로(OneGlo)TM 루시페라제 기질 (프로메가, Promega)을 첨가하고 상대적인 발광을 계측함으로써 측정되었다. 데이터를 4 파라미터 로지스틱 모델 (XLfit version 5.1)을 이용하여 분석하여 곡선을 맞추고(fit) EC50을 측정하였다.
본질적으로 전술한 바와 같은 프로토콜에 따라, 인간 293 세포-βKlotho-SRE luc 검정에서 서열 5의 FGF21 단백질의 동종이량체의 평균 시험관내 효능 (EC50)은 0.51 nM인 것으로 측정되었다.
실시예
4
물리적 안정성
R175
및
E180
발현
불균질성
일관되고 잘 특징규명된 생성물을 보다 잘 보장해주므로 균질 단백질 생성물의 생산이 바람직하다. 생성물 불균질성을 평가하기 위하여, 샘플의 10 ㎕ 분취량을 90 ㎕의 DPBS와 혼합하였다. 샘플을 하기 조건을 이용하여 액체 크로마토그래피-질량 분광측정 (LC-MS)에 의하여 분석하였다: 이동상 A는 0.05% TFA이고, 이동상 B는 아세토니트릴중 0.04% TFA이고, 칼럼은 PLRPS 2.1 X 50 mm 칼럼이며, 주입량은 15 ㎕이다.
워터스 마이크로매스 엘시티 프레미어(Waters Micromass LCT Premier)TM 질량 분광계를 400 내지 1990 amu의 질량 범위, 극성 ES+, 캐필러리 3000, 샘플 콘 40V로 셋업하였고, 개구부(aperture) 1은 25V, 공급원 온도는 105℃, 콘 가스 유량은 50 L/시간, 탈용매화 온도는 150℃, 및 탈용매화 가스 유량은 600 L/시간이었다.
표 2는 LC/MS 방법으로 측정한 각각의 FGF21 단백질에서의 생성되는 불균질성을 보고한다. 생성물 1-425는 서열 8의 FGF21 단백질 및 서열 9의 FGF21 단백질에 대한 IgG4 Fc 부분, 링커 및 FGF21 단백질을 함유하는 전장 FGF21 단백질을 나타낸다. 서열 8의 FGF21 단백질과 서열 9의 FGF21 단백질은 위치 100에서만 상이한데 서열 8의 FGF21 단백질은 야생형 잔기 루이신을 함유하고 서열 9의 FGF21 단백질은 아미노산 잔기 리신을 함유하며(L100K), 양쪽 단백질은 동일한 C-말단을 갖는다. 이들 단백질 양쪽 모두는 C-말단 절단, 특히 위치 181에서의 아미노산 잔기 글리신의 제거에 취약하다. 표 2에 나타낸 바와 같이, 서열 8의 FGF21 단백질의 동종이량체 및 서열 9의 FGF21 단백질의 동종이량체에 대한 정제 생성물의 50% 미만이 의도되는 전장 1-425이었고; 1-424 단편은 정제 생성물의 가장 많은 부분을 차지하였다. 추가로, 소량의 생성물 1-422, 1-411 및 1-379가 또한 검출되었다.
서열 5의 FGF21 단백질은 유전자 구축물에서 181에서의 아미노산 잔기를 결실시키고 아미노산 잔기 180은 글루탐산 (E)으로 치환시켰다. 이들 변화는 CHO 발현 동안 C-말단을 분해로부터 보호하고, 그에 따라 100% 균질하고 정제된 1-424 생성물이 생성된다.
실시예
5
물리적 안정성
고농도에서의 자기회합
잠재적으로는 면역반응 촉발과 같은 불필요한 효과를 악화시킬 수 있으므로 단백질 응집과 자기회합은 바람직하지 않다. 따라서, 단백질을 단량체 상태 (공유결합 동종이량체)로 유지시키는 것이 바람직하다. FGF21 단백질의 자기회합 성향에 대하여 시험하기 위하여, 단백질을 표 3에 수록된 완충제 중으로 투석하고 크기 배제 크로마토그래피 (SEC)로 분석하여 1.0 mg/mL 용액의 %고분자량 (%HMW)을 측정하였다. %HMW는 단백질 응집 및 자기회합의 지표이다.
SEC 분리법은 30 cm x 0.78 cm 치수를 갖는 5 마이크로미터 칼럼인 토소 바이오사이언스(Tosoh Bioscience) 3000SWXL상에서 수행하였다. 이동상은 0.5 mL/분의 유량으로 0.05 M 인산나트륨, 175 mM NaCl, pH 7이었다. 1.0 mg/mL 샘플은 10 mcL 주입으로서 적용하고 214 nm의 흡수 파장에서 모니터링한 반면에, 75 mg/mL 샘플은 1 mcL 주입으로서 적용하고 280 nm에서 모니터링하였다.
표 3은 모든 완충제 조성에 대하여 1.0 mg/mL에서 서열 8의 FGF21 단백질의 동종이량체에 대한 4 내지 5% HMW 및 서열 9의 FGF21 단백질의 동종이량체와 서열 5의 FGF21 단백질의 동종이량체에 대한 <1% HMW를 실례를 들어 설명한다. 샘플을 이어서 75 mg/mL로 농축하여 고농도 제제를 시뮬레이션하고 SEC로 재차 분석하여 %HMW를 측정하였다. 서열 8 변이체의 FGF21 단백질의 동종이량체는 75 mg/mL에서 13.7 내지 21.9% HMW를 함유한 반면에, 서열 9의 FGF21 단백질의 동종이량체는 불과 2.2 내지 3.5%를 함유하였다. 서열 8의 FGF21 단백질과 서열 9의 FGF21 단백질간의 유일한 차이는 위치 100에서의 치환이므로(L100L vs. L100K), 이러한 데이터는 L100K가 HMW 형성을 감소시킴을 증명해 보여준다.
서열 5의 FGF21 단백질은 다른 변화 외에도 L100K를 또한 함유하였고, 보다 낮은 %HMW가 당해 동종이량체 단백질에서 또한 관찰되었다.
실시예
6
물리적 안정성
L100K
치환 및 %
고분자량
FGF21 단백질의 물리적 안정성을 다음과 같이 측정하였다. 단백질을 1 내지 2 mg/mL로 10 mM 시트레이트 pH 7, 150 mM NaCl에서 투석 및 제조하고 SEC로 분석하여 %HMW를 측정하였다 (표 3: "초기").
SEC 분리법은 30 cm x 0.78 cm 치수를 갖는 5 마이크로미터 칼럼인 토소 바이오사이언스 3000SWXL상에서 수행하였다. 이동상은 0.5 mL/분의 유량으로 0.05 M 인산나트륨, 175 mM NaCl, pH 7이었다. 초기 저농도 샘플은 10 mcL 주입으로서 적용하고 214 nm의 흡수 파장에서 모니터링한 반면에, 50 mg/mL 샘플은 1 mcL 주입으로서 적용하고 280 nm에서 모니터링하였다.
다음으로, 단백질을 50 mg/mL로 농축하고 재차 분석하였다 (t=0). 서열 8의 FGF21 단백질의 동종이량체에 대한 %HMW는 농축시에 4.5%에서 9.3%로 증가하였다. 서열 9의 FGF21 단백질의 동종이량체에 대한 %HMW는 농축시에 0.9%에서 1.4%로 증가하였다. 서열 5의 FGF21 단백질의 동종이량체에 대한 %HMW는 농축시에 0.4%에서 1.4%로 증가하였다. 따라서, 서열 9의 FGF21 단백질의 동종이량체와 서열 5의 FGF21 단백질의 동종이량체 양쪽 모두는 단백질을 50 mg/mL로 제제화하였을 때 서열 8의 FGF21 단백질의 동종이량체에 비해 보다 낮은 초기 %HMW 및 보다 낮은 %HMW를 가졌다. 이들 데이터는 서열 9의 FGF21 단백질과 서열 5의 FGF21 단백질에는 존재하지만 서열 8의 FGF21 단백질에는 존재하지 않는 L100K 돌연변이의 중요성을 증명해 보여준다.
50 mg/mL 제제를 4주 동안 4℃, 25℃ 및 40℃에서 인큐베이션하여 스트레스 조건하에서의 장기 안정성을 평가하였다. 표 4에 나타낸 바와 같이, %HMW는 4주차 (t=4주)에서 재차 측정하였다. 서열 8의 FGF21 단백질의 동종이량체에 대한 %HMW는 40℃에서 9.3%에서 16.0%로 증가하였다. 서열 9의 FGF21 단백질의 동종이량체에 대한 %HMW는 40℃에서 1.4%에서 5.5%로 증가하였다. 서열 5의 FGF21 단백질의 동종이량체에 대한 %HMW는 40℃에서 0.4%에서 5.4%로 증가하였다. 25℃에서의 4주 후, %HMW의 수준은 서열 9의 FGF21 단백질의 동종이량체 및 서열 5의 FGF21 단백질의 동종이량체에 대하여 불과 3.3%이었고, 반면에 그들은 서열 8의 FGF21 단백질의 동종이량체에 대하여는 13.8%이었다. 이들 데이터는 서열 9의 FGF21 단백질 및 서열 5의 FGF21 단백질에 존재하는 L100K 돌연변이를 포함하는 유익한 영향을 증명해 보여준다.
실시예
7
물리적 안정성
자기회합
서열 7의 정제된 FGF21 단백질 (이는 D98L을 갖는 서열 5의 FGF21 단백질이다) 및 서열 6의 정제된 FGF21 단백질 (이는 K100L을 갖는 서열 5의 FGF21 단백질이다)을 10 mM 시트레이트, 50 mM NaCl, pH 6 완충제 중으로 투석하였고 농도는 각각 12.9 mg/mL, 1.0 mg/mL 및 0.6 mg/mL인 것으로 측정되었다. 투석으로부터의 각각의 회수된 샘플을 SEC로 분석하여 %HMW를 측정하였다 (표 5). %HMW는 모든 회수된 투석물에 대하여 <1%이었다. 이어서, 샘플을 10,000 분자량 컷오프, 4mL 밀리포어 스핀 농축기를 사용하여 65 내지 87 mg/mL로 농축하였다. 각각의 샘플에 대한 농도를 표 5에 나타내었다. 농축 후, %HMW는 농축된 단백질을 사용하여 SEC로 재차 측정하였다.
표 5에 나타낸 바와 같이, 서열 5의 FGF21 단백질의 동종이량체에 대한 %HMW는 2.3%로 증가하였고 이는 보다 높은 농도에서 발생한 자기회합의 낮은 수준을 시사한다. 반대로, 서열 7의 FGF21 단백질 (이는 D98L을 갖는 서열 5의 FGF21 단백질이다)의 동종이량체 및 서열 6의 FGF21 단백질 (이는 K100L을 갖는 서열 5의 FGF21 단백질이다)의 동종이량체에 대한 %HMW는 각각 8.0% 및 14.2%의 수준으로 증가하였다. 이들 데이터는 야생형 L98 또는 L100을 서열에 포함시킬 때 바람직하지 않은 자기회합에 대한 보다 높은 성향을 증명해 보여준다. 따라서, L98D 및 L100K 치환 양쪽 모두는 서열 5의 FGF21 단백질의 자기회합 감소에 기여한다. 또한, L98D의 부재하에 L100K의 존재 (즉, 서열 7의 FGF21 단백질)는 자기회합을 완전히 최소화하기에는 불충분한 것으로 결론내려진다. 반대로, L100K의 부재하에 L98D의 존재 (즉, 서열 6의 FGF21 단백질)는 자기회합을 완전히 최소화하기에는 불충분한 것으로 결론내려진다. 따라서, 자기회합 감소에 대한 최대 효과는 L98D와 L100K 양쪽 모두를 함께 요구한다.
농축 단백질을 1 mg/mL로 희석시, %HMW는 감소하였고 이는 자기회합이 가역적임을 증명해 보여준다. 서열 6의 FGF21 단백질 (이는 K100L을 갖는 서열 5의 FGF21 단백질이다)의 동종이량체를 1 mg/mL로 희석하면 14.2%에서 2.0%로 %HMW의 감소를 가져온다. 서열 7의 FGF21 단백질 (이는 D98L을 갖는 서열 5의 FGF21 단백질이다)의 동종이량체를 1 mg/mL로 희석하면 8.0%에서 1.3%로 %HMW의 감소를 가져온다. L98D와 L100K가 서열 5의 FGF21 단백질의 동종이량체에 함께 존재하는 경우, 1 mg/mL로 희석시 %HMW는 0.88%로 감소하였고, 이는 L98D와 L100K가 조합되는 경우에 보다 유익한 거동을 재차 증명해 보여준다.
실시예
8
ob
/
ob
마우스 모델에서의
글루코스
저하
수컷 ob/ob 마우스와 생후주령-매칭(age-matched) ob/m (야윈) 대조군은 도착시 7주령이었고 처리 개시시에는 8 내지 9주령이었다. 도착시, 모든 마우스는 단독으로 수용하여 처리의 개시전에 1 내지 2주 동안 순응하도록 하였다. 마우스에게는 퓨리나 로던트 차우(Purina Rodent Chow) 5015를 급식하였고 자동 급수장치로부터 가정용수를 무제한으로 제공하였다. 마우스를 12시간 명/암 사이클하에 75℉로 세팅한 주위 온도로 수용하였다. 처리의 개시 1 내지 2일 전에, 혈액 샘플을 꼬리 출혈을 통해 수집하였다. 애쿠-체크 애비비아(Accu-Check Avivia) 혈당계 (로슈, Roche)를 사용하여 혈당 수준을 측정하고 메소 스케일(Meso Scale) 마우스/래트 인슐린 검정 키트를 사용하는 인슐린의 검정을 위하여 혈청 샘플을 수집하였다. 처리 개시 당일 (0일차)에, 마우스를 처리전 체중, 혈당, 및 혈청 인슐린에 기초하여 군별로 분류하였다 (BRAT 분류 소프트웨어). 0일차 및 3일차에, 마우스에 10 mL/kg의 부피로 서열 5의 FGF21 단백질의 동종이량체를 0.1 내지 30 nmol/kg으로 SQ 투여하였다. 투여 비히클은 0.03% 마우스 혈청 알부민 (MSA; 시그마 A3139)을 함유하는 멸균 PBS (하이클론(HyClone) DPBS/변형 칼슘-마그네슘)이었다. 혈당은 7일 동안 매일 측정하였고 AUC가 측정되었다. 글루코스 저하에 대한 ED50 계산은 AUC에 기초하였다. 간 균질화물을 참수시에 수집하고 간 트리글리세리드를 히타치 모듈라(Hitachi Modular) P 임상 분석기상에서 측정하였다.
7일차에, 비히클-처리 마우스는 387±63.0 mg/dl (평균±SEM)로 측정된 평균 혈당 수준으로 고혈당성이었고, 반면에 ob/m 야윈 대조군 마우스는 162±9.0 mg/dl (평균±SEM)의 혈당 수준을 가졌다. 서열 5의 FGF21 단백질의 동종이량체는 혈당을 ob/m 야윈 대조군에 필적하는 수준으로 저하시켰다. 서열 5의 FGF21 단백질의 동종이량체의 ED50은 2.796 nmol/kg이었다 (95% 신뢰구간 = 1.1 - 7.0).
서열
서열 1 -
FGF21
단백질
서열 2 - 야생형
FGF21
(호모 사피엔스)
서열 3 - 인간
트랜스페린
(
hTrf
) 신호 펩티드
서열 4 - 인간
섬유모세포
성장 인자 결합 단백질-1 (
hFGFP
-1) 신호 펩티드
서열 5 -
FGF21
단백질
서열 6 -
FGF21
단백질
서열 7 -
FGF21
단백질
서열 8 -
FGF21
단백질
서열 9 -
FGF21
단백질
서열 10 - 링커 (L)
서열 11 - 링커 (3L)
서열 12 - 링커 (2L)
서열 13 -
FGF21
단백질의 (
DNA
)
서열 14 -
Fc
부분
서열 15 -
컨센서스
FGF21
단백질
SEQUENCE LISTING
<110> Eli Lilly and Company
<120> FIBROBLAST GROWTH FACTOR 21 PROTEINS
<130> X19535
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<151> 2012-06-11
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<151> 2013-03-12
<150> PCT/US2013/044190
<151> 2013-06-05
<160> 15
<170> PatentIn version 3.5
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<211> 180
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic construct
<400> 1
His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly Gly Gln Val
1 5 10 15
Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr Glu Cys His
20 25 30
Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Cys Ala Ala Asp Gln Ser
35 40 45
Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Lys Ala Leu Lys Pro Gly Val Ile Gln
50 55 60
Ile Leu Gly Val Lys Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg Pro Asp Gly
65 70 75 80
Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys Ser Phe Arg
85 90 95
Glu Asp Leu Lys Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser Glu Ala His
100 105 110
Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Asp Lys Ser Pro His Arg Lys Pro
115 120 125
Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly Leu Pro Pro
130 135 140
Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro Pro Asp Val
145 150 155 160
Gly Ser Ser Asp Pro Leu Arg Leu Val Glu Pro Ser Gln Leu Arg Ser
165 170 175
Pro Ser Phe Glu
180
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<212> PRT
<213> Homo sapiens
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His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly Gly Gln Val
1 5 10 15
Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr Glu Ala His
20 25 30
Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala Asp Gln Ser
35 40 45
Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Lys Ala Leu Lys Pro Gly Val Ile Gln
50 55 60
Ile Leu Gly Val Lys Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg Pro Asp Gly
65 70 75 80
Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys Ser Phe Arg
85 90 95
Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser Glu Ala His
100 105 110
Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Asn Lys Ser Pro His Arg Asp Pro
115 120 125
Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly Leu Pro Pro
130 135 140
Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro Pro Asp Val
145 150 155 160
Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Met Val Gly Pro Ser Gln Gly Arg Ser
165 170 175
Pro Ser Tyr Ala Ser
180
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic construct
<400> 3
Met Arg Leu Ala Val Gly Ala Leu Leu Val Cys Ala Val Leu Gly Leu
1 5 10 15
Cys Leu Ala
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic construct
<400> 4
Met Lys Ile Cys Ser Leu Thr Leu Leu Ser Phe Leu Leu Leu Ala Ala
1 5 10 15
Gln Val Leu Leu Val Glu Gly
20
<210> 5
<211> 424
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic construct
<400> 5
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala
1 5 10 15
Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
20 25 30
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
35 40 45
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
50 55 60
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
65 70 75 80
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
85 90 95
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
100 105 110
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
115 120 125
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
130 135 140
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
145 150 155 160
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
165 170 175
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
180 185 190
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
195 200 205
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
225 230 235 240
Gly Gly Ser Ala His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe
245 250 255
Gly Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln
260 265 270
Thr Glu Cys His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Cys Ala
275 280 285
Ala Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Lys Ala Leu Lys Pro
290 295 300
Gly Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Lys Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln
305 310 315 320
Arg Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala
325 330 335
Cys Ser Phe Arg Glu Asp Leu Lys Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln
340 345 350
Ser Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Asp Lys Ser Pro
355 360 365
His Arg Lys Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro
370 375 380
Gly Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln
385 390 395 400
Pro Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Arg Leu Val Glu Pro Ser
405 410 415
Gln Leu Arg Ser Pro Ser Phe Glu
420
<210> 6
<211> 424
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic construct
<400> 6
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala
1 5 10 15
Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
20 25 30
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
35 40 45
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
50 55 60
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
65 70 75 80
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
85 90 95
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
100 105 110
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
115 120 125
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
130 135 140
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
145 150 155 160
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
165 170 175
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
180 185 190
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
195 200 205
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
225 230 235 240
Gly Gly Ser Ala His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe
245 250 255
Gly Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln
260 265 270
Thr Glu Cys His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Cys Ala
275 280 285
Ala Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Lys Ala Leu Lys Pro
290 295 300
Gly Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Lys Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln
305 310 315 320
Arg Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala
325 330 335
Cys Ser Phe Arg Glu Asp Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln
340 345 350
Ser Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Asp Lys Ser Pro
355 360 365
His Arg Lys Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro
370 375 380
Gly Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln
385 390 395 400
Pro Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Arg Leu Val Glu Pro Ser
405 410 415
Gln Leu Arg Ser Pro Ser Phe Glu
420
<210> 7
<211> 424
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic construct
<400> 7
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala
1 5 10 15
Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
20 25 30
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
35 40 45
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
50 55 60
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
65 70 75 80
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
85 90 95
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
100 105 110
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
115 120 125
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
130 135 140
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
145 150 155 160
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
165 170 175
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
180 185 190
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
195 200 205
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
225 230 235 240
Gly Gly Ser Ala His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe
245 250 255
Gly Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln
260 265 270
Thr Glu Cys His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Cys Ala
275 280 285
Ala Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Lys Ala Leu Lys Pro
290 295 300
Gly Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Lys Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln
305 310 315 320
Arg Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala
325 330 335
Cys Ser Phe Arg Glu Leu Leu Lys Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln
340 345 350
Ser Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Asp Lys Ser Pro
355 360 365
His Arg Lys Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro
370 375 380
Gly Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln
385 390 395 400
Pro Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Arg Leu Val Glu Pro Ser
405 410 415
Gln Leu Arg Ser Pro Ser Phe Glu
420
<210> 8
<211> 425
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic construct
<400> 8
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala
1 5 10 15
Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
20 25 30
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
35 40 45
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
50 55 60
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
65 70 75 80
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
85 90 95
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
100 105 110
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
115 120 125
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
130 135 140
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
145 150 155 160
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
165 170 175
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
180 185 190
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
195 200 205
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
225 230 235 240
Gly Gly Ser Ala His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe
245 250 255
Gly Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln
260 265 270
Thr Glu Cys His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Cys Ala
275 280 285
Ala Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Lys Ala Leu Lys Pro
290 295 300
Gly Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Lys Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln
305 310 315 320
Arg Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala
325 330 335
Cys Ser Phe Arg Glu Asp Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln
340 345 350
Ser Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Asp Lys Ser Pro
355 360 365
His Arg Lys Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro
370 375 380
Gly Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln
385 390 395 400
Pro Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Arg Leu Val Glu Pro Ser
405 410 415
Gln Leu Leu Ser Pro Ser Phe Leu Gly
420 425
<210> 9
<211> 425
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic construct
<400> 9
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala
1 5 10 15
Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
20 25 30
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
35 40 45
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
50 55 60
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
65 70 75 80
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
85 90 95
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
100 105 110
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
115 120 125
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
130 135 140
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
145 150 155 160
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
165 170 175
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
180 185 190
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
195 200 205
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
225 230 235 240
Gly Gly Ser Ala His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe
245 250 255
Gly Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln
260 265 270
Thr Glu Cys His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Cys Ala
275 280 285
Ala Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Lys Ala Leu Lys Pro
290 295 300
Gly Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Lys Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln
305 310 315 320
Arg Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala
325 330 335
Cys Ser Phe Arg Glu Asp Leu Lys Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln
340 345 350
Ser Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Asp Lys Ser Pro
355 360 365
His Arg Lys Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro
370 375 380
Gly Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln
385 390 395 400
Pro Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Arg Leu Val Glu Pro Ser
405 410 415
Gln Leu Leu Ser Pro Ser Phe Leu Gly
420 425
<210> 10
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic construct
<400> 10
Gly Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 11
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic construct
<400> 11
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala
1 5 10 15
<210> 12
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic construct
<400> 12
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala
1 5 10
<210> 13
<211> 1272
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic construct
<400> 13
gagtccaaat atggtccccc atgcccaccc tgcccagcac ctgaggccgc cgggggacca 60
tcagtcttcc tgttcccccc aaaacccaag gacactctca tgatctcccg gacccctgag 120
gtcacgtgcg tggtggtgga cgtgagccag gaagaccccg aggtccagtt caactggtac 180
gtggatggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccgc gggaggagca gttcaacagc 240
acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccagg actggctgaa cggcaaggag 300
tacaagtgca aggtctccaa caaaggcctc ccgtcctcca tcgagaaaac catctccaaa 360
gccaaagggc agccccgaga gccacaggtg tacaccctgc ccccatccca ggaggagatg 420
accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg gtcaaaggct tctaccccag cgacatcgcc 480
gtggagtggg aaagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg 540
gactccgacg gctccttctt cctctacagc aggctaaccg tggacaagag caggtggcag 600
gaggggaatg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacacag 660
aagagcctct ccctgtctct gggtggtggt ggtggctccg gaggcggcgg ctctggtggc 720
ggtggcagcg ctcaccccat ccctgactcc agtcctctcc tgcaattcgg gggccaagtc 780
cggcagcggt acctgtacac cgacgacgcc cagcagaccg agtgccacct ggaaatccgg 840
gaggacggca ccgtgggctg tgccgccgac cagtcccctg agtccctgct gcagctgaag 900
gccctgaagc ctggcgtgat ccagatcctg ggcgtgaaaa cctcccggtt cctgtgccag 960
aggcctgatg gcgccctgta cggctccctg cacttcgacc ctgaggcctg ctccttccgg 1020
gaggacctga aggaagatgg ctacaacgtg taccagtccg aggctcacgg cctgcctctg 1080
catctgcctg gcgacaagtc cccccaccgg aagcctgctc ctaggggccc tgccagattc 1140
ctgccactgc ctggcctgcc tccagctctg cctgagcctc ctggcatcct ggcccctcag 1200
cctccagacg tgggctcctc cgaccctctg cggctggtcg agccttccca gctgcggagc 1260
cctagcttcg ag 1272
<210> 14
<211> 228
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic construct
<400> 14
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala
1 5 10 15
Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
20 25 30
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
35 40 45
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
50 55 60
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
65 70 75 80
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
85 90 95
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
100 105 110
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
115 120 125
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
130 135 140
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
145 150 155 160
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
165 170 175
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
180 185 190
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
195 200 205
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Gly
225
<210> 15
<211> 425
<212> PRT
<213> artificial sequence
<220>
<223> synthetic construct
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (342)..(342)
<223> Xaa at position 342 is Leu or Asp
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (344)..(344)
<223> Xaa at position 344 is Leu or Lys
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (419)..(419)
<223> Xaa at position 419 is Arg or Leu
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (424)..(424)
<223> Xaa at position 424 is Leu or Glu
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (425)..(425)
<223> Xaa at position 425 is Gly or is absent
<400> 15
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala
1 5 10 15
Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
20 25 30
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
35 40 45
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
50 55 60
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
65 70 75 80
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
85 90 95
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
100 105 110
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
115 120 125
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
130 135 140
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
145 150 155 160
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
165 170 175
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
180 185 190
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
195 200 205
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
225 230 235 240
Gly Gly Ser Ala His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe
245 250 255
Gly Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln
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Thr Glu Cys His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Cys Ala
275 280 285
Ala Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Lys Ala Leu Lys Pro
290 295 300
Gly Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Lys Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln
305 310 315 320
Arg Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala
325 330 335
Cys Ser Phe Arg Glu Xaa Leu Xaa Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln
340 345 350
Ser Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Asp Lys Ser Pro
355 360 365
His Arg Lys Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro
370 375 380
Gly Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln
385 390 395 400
Pro Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Arg Leu Val Glu Pro Ser
405 410 415
Gln Leu Xaa Ser Pro Ser Phe Xaa Xaa
420 425
Claims (13)
- 아미노산 서열이 제2 폴리펩티드에 융합된 제1 폴리펩티드로 이루어지고, 여기서 제1 폴리펩티드는 IgG4 Fc 부분을 포함하고, 제2 폴리펩티드는 서열 1의 아미노산 서열을 갖는 FGF21 단백질을 포함하고, 제1 폴리펩티드의 C-말단은 링커를 통해서 제2 폴리펩티드의 N-말단에 융합되는 것인, 섬유모세포 성장 인자 21 (FGF21) 단백질의 동종이량체.
- 제1항에 있어서, IgG4 Fc 부분의 아미노산 서열이 서열 14인 동종이량체.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 링커의 아미노산 서열이 서열 11인 동종이량체.
- 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 아미노산 서열이
인 동종이량체.
- 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 단백질의 IgG4 Fc 부분이 글리코실화된 것인 동종이량체.
- 아미노산 서열이 서열 5인 폴리펩티드를 코딩하는 DNA 분자.
- 각각의 폴리펩티드의 아미노산 서열이 서열 5인 동종이량체를 발현할 수 있는, 제6항의 DNA 분자로 형질전환된 포유동물 숙주 세포.
- i) 서열 5의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 포유동물 숙주 세포를 상기 폴리펩티드 서열이 발현되도록 하는 조건하에서 배양하는 단계; 및
ii) 상기 숙주 세포로부터 각각의 폴리펩티드의 아미노산 서열이 서열 5인 동종이량체를 회수하는 단계
를 포함하는, 각각의 폴리펩티드의 아미노산 서열이 서열 5인 동종이량체를 생산하는 방법. - 제8항의 방법에 의하여 생산된 동종이량체.
- 제1항 내지 제5항 및 제9항 중 어느 한 항의 동종이량체 및 1종 이상의 제약상 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물.
- 제1항 내지 제5항 및 제9항 중 어느 한 항의 동종이량체를 치료가 필요한 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 제2형 당뇨병, 비만, 이상지혈증 및/또는 대사 증후군을 치료하는 방법.
- 제1항 내지 제5항 및 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 요법에 사용하기 위한 동종이량체.
- 제1항 내지 제5항 및 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 제2형 당뇨병, 비만, 이상지혈증 및/또는 대사 증후군의 치료에 사용하기 위한 동종이량체.
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20220059660A (ko) * | 2020-11-03 | 2022-05-10 | 주식회사 도어코코리아 | Fgf21의 열탄력성을 이용한 fgf21 생산 방법 |
| WO2022260468A1 (ko) * | 2021-06-10 | 2022-12-15 | 주식회사 도어코코리아 | 신규 fgf21 변이체 개발 및 이의 생산기법과 용도 |
Families Citing this family (44)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| BRPI0809583B1 (pt) | 2007-03-30 | 2022-02-22 | Ambrx, Inc | Polipeptídeo fgf-21 modificado, composição compreendendo o mesmo, método para produzir o referido polipetídeo fgf-21 e célula compreendendo um polinucleotídeo |
| AU2012279237B2 (en) | 2011-07-01 | 2016-09-29 | Ngm Biopharmaceuticals, Inc. | Compositions, uses and methods for treatment of metabolic disorders and diseases |
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| KR20150006059A (ko) * | 2012-06-11 | 2015-01-15 | 일라이 릴리 앤드 캄파니 | 섬유모세포 성장 인자 21 변이체 |
| US9290557B2 (en) | 2012-11-28 | 2016-03-22 | Ngm Biopharmaceuticals, Inc. | Compositions comprising variants and fusions of FGF19 polypeptides |
| WO2014085365A2 (en) | 2012-11-28 | 2014-06-05 | Ngm Biopharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for treatment of metabolic disorders and diseases |
| JP6403685B2 (ja) | 2012-12-27 | 2018-10-17 | エヌジーエム バイオファーマシューティカルス，インコーポレーテッド | 胆汁酸ホメオスタシス調整並びに胆汁酸障害及び疾患の治療の方法 |
| US9273107B2 (en) | 2012-12-27 | 2016-03-01 | Ngm Biopharmaceuticals, Inc. | Uses and methods for modulating bile acid homeostasis and treatment of bile acid disorders and diseases |
| NZ718962A (en) | 2013-10-28 | 2019-12-20 | Ngm Biopharmaceuticals Inc | Cancer models and associated methods |
| US9738716B2 (en) | 2014-01-24 | 2017-08-22 | Ngm Biopharmaceuticals, Inc. | Beta klotho binding proteins and methods of use thereof |
| RU2016137264A (ru) * | 2014-02-21 | 2018-03-26 | МЕДИММЬЮН, ЭлЭлСи | Слияния антитела к pcsk9~glp-1 и способы применения |
| EP3125921B1 (en) | 2014-03-11 | 2020-07-08 | Novartis AG | Fgf21 variants for use in treating hiv-haart induced partial lipodystrophy |
| WO2015148708A1 (en) | 2014-03-25 | 2015-10-01 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Fgf21 receptor agonists and uses thereof |
| US10398758B2 (en) | 2014-05-28 | 2019-09-03 | Ngm Biopharmaceuticals, Inc. | Compositions comprising variants of FGF19 polypeptides and uses thereof for the treatment of hyperglycemic conditions |
| AU2015277438B2 (en) | 2014-06-16 | 2020-02-27 | Ngm Biopharmaceuticals, Inc. | Methods and uses for modulating bile acid homeostasis and treatment of bile acid disorders and diseases |
| WO2016039339A1 (ja) * | 2014-09-08 | 2016-03-17 | 国立大学法人大阪大学 | 脱髄疾患の予防又は治療剤 |
| RU2729161C2 (ru) | 2014-10-23 | 2020-08-04 | ЭнДжиЭм БАЙОФАРМАСЬЮТИКАЛЗ, ИНК. | Фармацевтические композиции, содержащие варианты пептидов, и способы их применения |
| UY36370A (es) | 2014-10-24 | 2016-04-29 | Bristol Myers Squibb Company Una Corporación Del Estado De Delaware | Polipéptidos fgf-21 modificados y sus usos |
| US10434144B2 (en) | 2014-11-07 | 2019-10-08 | Ngm Biopharmaceuticals, Inc. | Methods for treatment of bile acid-related disorders and prediction of clinical sensitivity to treatment of bile acid-related disorders |
| KR20160088656A (ko) | 2015-01-16 | 2016-07-26 | 주식회사유한양행 | 지속형 fgf21 융합 단백질 및 이를 포함하는 약학적 조성물 |
| US11638745B2 (en) | 2015-05-20 | 2023-05-02 | University of Pittsburgh—Of the Commonwealth Cvctom of Hierher Education | Method to improve neurologic outcomes in temperature managed patients |
| US10800843B2 (en) | 2015-07-29 | 2020-10-13 | Ngm Biopharmaceuticals, Inc. | Beta klotho-binding proteins |
| KR102668200B1 (ko) * | 2015-10-28 | 2024-05-23 | 주식회사유한양행 | 지속형 fgf21 융합 단백질 및 이를 포함하는 약학적 조성물 |
| KR102670157B1 (ko) | 2015-10-28 | 2024-05-29 | 주식회사유한양행 | 이중 작용 단백질 및 이를 포함하는 약학적 조성물 |
| US10744185B2 (en) | 2015-11-09 | 2020-08-18 | Ngm Biopharmaceuticals, Inc. | Methods of using variants of FGF19 polypeptides for the treatment of pruritus |
| CN105348380B (zh) * | 2015-12-28 | 2019-03-01 | 江苏康缘瑞翱生物医药科技有限公司 | 犬成纤维细胞生长因子21及其在治疗犬内分泌疾病中的用途 |
| CN107759694B (zh) | 2016-08-19 | 2023-01-13 | 安源医药科技（上海）有限公司 | 双特异性抗体及其制备方法与用途 |
| EP3502143A4 (en) | 2016-08-19 | 2020-07-15 | Ampsource Biopharma Shanghai Inc. | BINDING PEPTIDE FOR THE CONSTRUCTION OF A FUSION PROTEIN |
| CN106279437B (zh) | 2016-08-19 | 2017-10-31 | 安源医药科技（上海）有限公司 | 高糖基化人凝血因子viii融合蛋白及其制备方法与用途 |
| US11370841B2 (en) | 2016-08-26 | 2022-06-28 | Ngm Biopharmaceuticals, Inc. | Methods of treating fibroblast growth factor 19-mediated cancers and tumors |
| KR20180052545A (ko) * | 2016-11-10 | 2018-05-18 | 주식회사유한양행 | 융합 단백질을 포함하는 간염증, 간섬유화 및 간경화 예방 또는 치료용 약학적 조성물 |
| US20220127322A1 (en) | 2017-03-14 | 2022-04-28 | Sunshine Lake Pharma Co., Ltd. | Dual-target fusion proteins comprising the fc portion of an immunoglobulin |
| WO2018194413A1 (en) | 2017-04-21 | 2018-10-25 | Yuhan Corporation | Method for producing dual function proteins and its derivatives |
| CN107385020A (zh) * | 2017-06-23 | 2017-11-24 | 西安医学院 | 瘦素在人重组fgf21蛋白活性检测中的应用 |
| AU2018329850A1 (en) | 2017-09-08 | 2020-04-23 | Bristol-Myers Squibb Company | Modified fibroblast growth factor 21 (FGF-21) for use in methods for treating nonalcoholic steatohepatitis (NASH) |
| EP3749683A4 (en) | 2018-02-08 | 2022-03-16 | Sunshine Lake Pharma Co., Ltd. | FGF21 VARIANT, FUSION PROTEIN AND USE THEREOF |
| WO2020010117A2 (en) | 2018-07-03 | 2020-01-09 | Bristol-Myers Squibb Company | Fgf21 formulations |
| CN111195234B (zh) * | 2018-11-16 | 2022-08-26 | 鲁南制药集团股份有限公司 | 一种重组FGF21-Fc融合蛋白冻干粉制剂 |
| EP3935075A4 (en) * | 2019-03-05 | 2023-01-18 | Sunshine Lake Pharma Co., Ltd. | POLYPEPTIDIC MOLECULE AND ITS APPLICATION |
| AR122359A1 (es) | 2020-01-08 | 2022-09-07 | Bristol Myers Squibb Co | Formulaciones de fgf-21 conjugado |
| US11981718B2 (en) | 2020-05-27 | 2024-05-14 | Ampsource Biopharma Shanghai Inc. | Dual-function protein for lipid and blood glucose regulation |
| EP4192495A1 (en) | 2020-08-07 | 2023-06-14 | Bristol-Myers Squibb Company | Fgf21 combined with ccr2/5 antagonists for the treatment of fibrosis |
| KR20220021207A (ko) | 2020-08-13 | 2022-02-22 | 주식회사 나이벡 | 이소골 형성 부작용 경감으로 치료효과가 증진된 골형성 단백질-9, 10의 변이체 및 이를 포함하는 약학적 조성물 |
| US20240123031A1 (en) | 2020-11-25 | 2024-04-18 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods of treating liver diseases |
Family Cites Families (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB8601597D0 (en) | 1986-01-23 | 1986-02-26 | Wilson R H | Nucleotide sequences |
| US7459540B1 (en) | 1999-09-07 | 2008-12-02 | Amgen Inc. | Fibroblast growth factor-like polypeptides |
| WO2003011213A2 (en) | 2001-07-30 | 2003-02-13 | Eli Lilly And Company | Method for treating diabetes and obesity |
| EA200601121A1 (ru) * | 2003-12-10 | 2006-10-27 | Эли Лилли Энд Компани | Мутеины фактора роста фибробластов 21 |
| US7576190B2 (en) | 2004-05-13 | 2009-08-18 | Eli Lilly And Company | FGF-21 fusion proteins |
| BRPI0809583B1 (pt) | 2007-03-30 | 2022-02-22 | Ambrx, Inc | Polipeptídeo fgf-21 modificado, composição compreendendo o mesmo, método para produzir o referido polipetídeo fgf-21 e célula compreendendo um polinucleotídeo |
| JOP20190083A1 (ar) * | 2008-06-04 | 2017-06-16 | Amgen Inc | بولي ببتيدات اندماجية طافرة لـfgf21 واستخداماتها |
| CH699521A2 (de) | 2008-09-09 | 2010-03-15 | Rotorcraft Ag | Streckwerk für eine Strickmaschine. |
| EA032727B1 (ru) | 2008-10-10 | 2019-07-31 | Амген Инк. | Мутантный резистентный к протеолизу полипептид fgf21 и его применение |
| WO2010065439A1 (en) * | 2008-12-05 | 2010-06-10 | Eli Lilly And Company | Variants of fibroblast growth factor 21 |
| CN102361647B (zh) | 2009-01-23 | 2018-02-16 | 诺沃-诺迪斯克有限公司 | 具有白蛋白结合剂a‑b‑c‑d‑e‑的fgf21衍生物及其应用 |
| US20120052069A1 (en) | 2009-05-05 | 2012-03-01 | Amgen Inc | Fgf21 mutants and uses thereof |
| SG10201402038WA (en) | 2009-05-05 | 2014-07-30 | Amgen Inc | FGF21 Mutants And Uses Thereof |
| WO2011154349A2 (en) * | 2010-06-08 | 2011-12-15 | Novo Nordisk A/S | Fgf21 analogues and derivatives |
| AR087973A1 (es) | 2011-10-04 | 2014-04-30 | Lilly Co Eli | Variantes del factor 21 del crecimiento de fibroblastos |
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2015
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| WO2022260468A1 (ko) * | 2021-06-10 | 2022-12-15 | 주식회사 도어코코리아 | 신규 fgf21 변이체 개발 및 이의 생산기법과 용도 |
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| Publication number | Publication date |
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