KR20130036209A - 재조합 ｃｄｖ 조성물 및 이의 용도 - Google Patents

재조합 ｃｄｖ 조성물 및 이의 용도 Download PDF

Info

Publication number
KR20130036209A
KR20130036209A KR1020127025110A KR20127025110A KR20130036209A KR 20130036209 A KR20130036209 A KR 20130036209A KR 1020127025110 A KR1020127025110 A KR 1020127025110A KR 20127025110 A KR20127025110 A KR 20127025110A KR 20130036209 A KR20130036209 A KR 20130036209A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
leu
ser
ile
val
thr
Prior art date
Application number
KR1020127025110A
Other languages
English (en)
Inventor
쟝-크리스토쁘 오도네
줄스 민케
Original Assignee
메리얼 리미티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 메리얼 리미티드 filed Critical 메리얼 리미티드
Publication of KR20130036209A publication Critical patent/KR20130036209A/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/005—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'active' part of the composition delivered, i.e. the nucleic acid delivered
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/155—Paramyxoviridae, e.g. parainfluenza virus
    • A61K39/175—Canine distemper virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/205—Rhabdoviridae, e.g. rabies virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61N—ELECTROTHERAPY; MAGNETOTHERAPY; RADIATION THERAPY; ULTRASOUND THERAPY
    • A61N5/00—Radiation therapy
    • A61N5/06—Radiation therapy using light
    • A61N5/0613—Apparatus adapted for a specific treatment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/10—Antimycotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/53—Colony-stimulating factor [CSF]
    • C07K14/535—Granulocyte CSF; Granulocyte-macrophage CSF
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
    • A61K2039/552—Veterinary vaccine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55522—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/24011—Poxviridae
    • C12N2710/24041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2710/24043—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14311—Parvovirus, e.g. minute virus of mice
    • C12N2750/14334—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/18011—Paramyxoviridae
    • C12N2760/18411—Morbillivirus, e.g. Measles virus, canine distemper
    • C12N2760/18422—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/18011—Paramyxoviridae
    • C12N2760/18411—Morbillivirus, e.g. Measles virus, canine distemper
    • C12N2760/18434—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/18011—Paramyxoviridae
    • C12N2760/18411—Morbillivirus, e.g. Measles virus, canine distemper
    • C12N2760/18471—Demonstrated in vivo effect
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2800/00—Nucleic acids vectors
    • C12N2800/22—Vectors comprising a coding region that has been codon optimised for expression in a respective host

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Radiology & Medical Imaging (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

본 발명은 CDV 에 대해 동물에서 면역 반응을 이끌어내는 CDV 폴리펩티드 또는 항원을 함유하며 생체내 또는 시험관내 발현하는 벡터, 상기 벡터 및/또는 CDV 폴리펩티드를 포함하는 조성물, 및 CDV 에 대한 백신 접종 방법을 제공한다. 본 발명은 또한 CDV 및 기타 개 바이러스에 대한 면역 또는 보호 반응을 유도하는 방법 뿐 아니라 CDV 및 기타 개 바이러스 또는 CDV 및 기타 개 바이러스에 의해 유발된 질환 상태(들) 를 예방하고 치료하는 방법을 제공한다.

Description

재조합 ＣＤＶ 조성물 및 이의 용도 {RECOMBINANT CDV COMPOSITIONS AND USES THEREOF}
관련 출원에 대한 교차 참조
본 명세서는 2010 년 2 월 26 일에 출원한 미국 가출원 일련 번호 61/308,620 호에 대해 우선권을 주장한다.
발명의 분야
본 발명은 동물에서의 개 홍역 바이러스 및 기타 개 바이러스 감염을 퇴치하기 위한 제형에 관한 것이다. 구체적으로, 본 발명은 개 홍역 바이러스에 대해 동물에서 면역 반응을 이끌어내는 CDV HA 를 함유하며 생체내 또는 시험관내 발현하는 벡터, 상기 벡터를 포함하는 조성물, 개 홍역 바이러스에 대한 백신 접종 방법, 및 이러한 방법 및 조성물과 함께 사용하기 위한 키트를 제공한다. 본 발명은 또한 개 홍역 바이러스 및 기타 개 바이러스에 대해 동물에서 면역 반응을 이끌어내는 CDV HA 및 GM-CSF 를 함유하며 생체내 또는 시험관내 발현하는 벡터, 및 상기 벡터를 포함하는 조성물을 제공한다.
개 홍역 (CD) 은 개 및 기타 육식 동물의 매우 감염성인, 유열성 질환이다 (Fenner, et al., 1987, Veterinary Virology, Academic Press, Inc., pp. 485-503). 사망률은 30 내지 80% 범위로 높다. 생존한 개는 종종 영구적인 중추 신경계 손상을 입는다 (Fenner, et al., 1987). CD 의 확립된 병인은 파라믹소바이러스 (Paramyxovirus) 패밀리의 일원, CD 바이러스 (CDV) 로서 알려져 있는 모르빌리바이러스 (morbillivirus) 속에 의한 감염이다. 일반적으로, 파라믹소바이러스는 음극성의 18-20 kb 단일 가닥 RNA 게놈을 함유하는 외피 바이러스이다. 상기 게놈은 융합물 (F) 및 헤마글루티닌-뉴라미니다아제 (HN) 또는 헤마글루티닌 (HA) 당단백질을 포함하는 5 내지 7 개의 구조 단백질을 인코딩한다. 멤브레인 당단백질 헤마글루티닌 (HA) 은 적혈구 응집반응 및 바이러스의 숙주 세포에 대한 부착에 있어서 역할하며, 융합 당단백질 (F) 은 바이러스와 감염 세포 사이, 또는 감염 세포와 인접한 비감염 세포 사이의 멤브레인 융합을 야기한다 (Graves et al., 1978, Virology 86:254-263). CDV 에 대해서, F 및 HA 당단백질 모두는 바이러스 외피 및 감염 세포의 표면 상에서 존재하는 것으로 발견된다. 기타 모르빌리바이러스 일원으로의 분석에서 추론컨대, CDV F 및 HA 당단백질은 CDV 감염 및 이의 면역생물학에 중요한 것으로 나타난다 (Diallo A., 1990, Vet. Micro. 23: 155-163). 폭스바이러스 기재 재조합 CDV 백신이 개를 보호하고 치료하기 위해 개발되었다 (US 5,756,102). US 특허 출원 USSN 09/587,964 는 CDV 항원을 발현하는 DNA 플라스미드 기재 백신을 개시하였다.
과립구-대식세포 콜로니-자극 인자 (GM-CSF) 는 1977 년에 최초로 발견되었다 (Burgess et al., 1977, J. Biol. Chem.252:1998-2003). GM-CSF 는 많은 생리학적 역할을 갖는다. 특히, GM-CSF 는 과립구, 대식세포, 호산구 및 거핵세포의 콜로니의 생성, 발달 및 형성을 자극한다 (Dy M., in "les Cytokines" Cavailon 1995 ed. Masson, Paris, France, 43-56). GM-CSF 는 특히 대식세포 세포독성을 유도하고, 항체-의존적 세포독성 활성 (ADCC) 및 염증 부위 수준에서의 백혈구의 보충을 자극한다.
다양한 종으로부터의 알려져 있는 GM-CSF 를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열의 크기는 381 내지 432 뉴클레오티드로 가변적이다. 인간 및 쥐과 뉴클레오티드 서열은 69% 의 상동성을 갖는다. 상동성 정도는 아미노산 서열의 수준에서 54% 이다 (Cantrell et al., 1985, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:6250-6254). 말 GM-CSF 가 144 개 아미노산 크기를 갖는 것이 확인되었다 (US 7,250,161). 2 개의 개 GM-CSF 가 US 5,702,919 및 US 5,606,024 에서 확인되었는데, 이는 각각 127 개 아미노산 및 174 개 아미노산을 갖는다.
이종 GM-CSF 의 투여로는 최적의 보조제 효과, 특히 조혈 세포 활성의 자극 및 면역 반응에서의 실제적 증가가 수득될 수 없다.
따라서, CDV 백신의 효능 및 안전성에 있어서의 향상 및 해당 분야 조건에서의 보다 유효한 보호가 일반적으로 필요하다.
본 발명은 caGM-CSF 의 면역학적 효과를 최적화하면서 백신 접종한 개에 대해 높은 안전성을 보유하는 해결책을 제공한다.
발명의 개요
본 발명의 목적은 재조합 벡터 또는 바이러스 뿐 아니라 상기 바이러스 제조 방법을 제공하는 것, 그리고 CDV 및 기타 개 바이러스에 의한 감염의 치료 및 예방을 위한 방법 뿐 아니라 조성물 및/또는 백신을 제공하는 것 중 임의의 하나 또는 모두일 수 있다.
본 발명은 재조합 벡터, 예컨대 재조합 바이러스를 제공하는데, 이는 하나 이상의 외인성 핵산 분자를 함유하고 발현하며, 상기 하나 이상의 외인성 핵산 분자는 CDV 로부터의 관심 면역원 또는 에피토프를 인코딩하는 핵산 분자, 예컨대 CDV HA 를 포함할 수 있다.
본 발명은 재조합 벡터, 예컨대 재조합 폭스바이러스를 제공하는데, 이는 CDV HA 폴리펩티드 및/또는 이의 변이체 또는 단편을 인코딩하는 제 1 폴리뉴클레오티드 및 개 GM-CSF 폴리펩티드 및/또는 이의 변이체 또는 단편을 인코딩하는 제 2 폴리뉴클레오티드를 함유한다.
본 발명은 또한, 이러한 발현 벡터 또는 상기 발현 벡터의 발현 산물(들) 을 포함하는 조성물 또는 백신을 제공한다.
본 발명은 또한, CDV 및 기타 개 바이러스에 대한 면역학적 (또는 면역성) 또는 보호 반응을 유도하는 방법 뿐 아니라 CDV 및 기타 개 바이러스 또는 CDV 및 기타 개 바이러스에 의해 유발된 질환 상태(들) 를 예방 또는 치료하는 방법 (발현 벡터 또는 발현 벡터의 발현 산물을 투여하는 것을 포함함), 또는 발현 벡터를 포함하는 조성물, 또는 발현 벡터의 발현 산물을 포함하는 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한, 바이러스로부터의 발현 산물 뿐 아니라 발현 산물로부터 생성된 항체 또는 이의 생체내 발현물 및 예를 들어 진단 적용물에서의 이러한 산물 및 항체에 대한 용도에 관한 것이다.
하기 상세한 설명에서, 이들 구현예 및 다른 구현예가 기재되거나 이로부터 명백하고 이에 의해 포함된다.
하기의 상세한 설명이 예시로서 제공되지만, 기재된 특정 구현예에만 제한되는 것으로 의도되지 않으며, 하기와 같은 동반 도면과 함께 이해되는 것이 최선일 수 있다.
도 1 은 폴리뉴클레오티드 및 단백질 서열에 부여된 SEQ ID NO 를 확인하는 표를 제공한다.
도 2 는 SEQ ID NO:2 와 SEQ ID NO:5 사이의 서열 정렬을 제공한다.
도 3 은 pCXL1557.1 및 pJSY2218.1 의 플라스미드 맵을 나타낸다.
도 4 는 vCP2263 의 서던 블롯을 나타낸다.
도 5 는 vCP2263 의 웨스턴 블롯을 나타낸다.
도 6 은 vCP2263 의 면역플라크 검정을 나타낸다.
도 7 은 vCP2391 의 웨스턴 블롯을 나타낸다.
도 8 은 vCP2392 의 웨스턴 블롯을 나타낸다.
도 9 는 GM-CSF 에 대한 vCP2391 및 vCP2392 의 웨스턴 블롯을 나타낸다.
도 10 은 CDV HA 단백질에 대한 vCP2392 의 웨스턴 블롯을 나타낸다.
도 11 은 이종 SN 시험을 사용하는 vCP2392 및 vCP2263 의 혈청학 검사 결과를 제공한다.
도 12 는 상동 SN 시험을 사용하는 vCP2392 및 vCP2263 의 혈청학 검사 결과를 제공한다.
도 13a 및 13b 는 CDV HA 단백질의 서열 정렬 및 아미노산 수준에서의 서열 동일성 % 를 제공한다.
도 14 는 코돈-최적화 CDV HA DNA 및 야생형 CDV HA DNA 의 서열 정렬을 제공한다.
도 15a 및 15b 는 CDV HA DNA 의 서열 정렬 및 DNA 수준에서의 서열 동일성 % 를 제공한다.
도 16 은 세포 면역 반응의 결과를 제공한다.
도 17 은 CPV2 ELISA 결과를 제공한다.
도 18 은 CDV SN 항체의 상동 SN 시험 결과를 나타낸다.
도 19 는 CDV SN 항체의 이종 SN 시험 결과를 나타낸다.
상세한 설명
동물에서 면역성 반응을 이끌어내는 CDV 폴리펩티드 및 이의 단편 및 변이체를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터를 포함하는 조성물이 제공된다. CDV 폴리펩티드 또는 단편 또는 변이체를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터는 백신 또는 약학 조성물로 제형화될 수 있으며 동물에서 보호 반응을 이끌어내거나 자극하는데 사용될 수 있다. 한 구현예에서 CDV 폴리펩티드는 CDV 헤마글루티닌 (HA) 폴리펩티드 또는 이의 활성 단편 또는 변이체이다.
CDV HA 폴리펩티드 또는 이의 활성 단편 또는 변이체를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 GM-CSF 폴리펩티드 또는 이의 활성 단편 또는 변이체를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터를 포함하는 조성물이 제공된다.
본 발명의 폴리펩티드가 전체 길이 폴리펩티드 또는 이의 활성 단편 또는 변이체일 수 있다는 것이 인지된다. "활성 단편" 또는 "활성 변이체" 는 단편 또는 변이체가 폴리펩티드의 항원 성질을 보유하는 것으로 의도된다. 따라서, 본 발명은 동물에서 면역성 반응을 이끌어내는 임의의 CDV 폴리펩티드, 항원, 에피토프 또는 면역원을 포함한다. CDV 폴리펩티드, 항원, 에피토프 또는 면역원은 동물에서 반응을 이끌어내고, 유도하거나 자극하는 임의의 CDV 폴리펩티드, 항원, 에피토프 또는 면역원, 예컨대 단백질, 펩티드 또는 이의 단편 또는 변이체일 수 있으나 이에 제한되지는 않는다.
특정한 관심 CDV 폴리펩티드는 CDV 헤마글루티닌 (HA) 이다. CDV HA 는 CDV 의 표면에서 발견된 헤마글루티닌 유형을 지칭한다. 이는 항원 당단백질이며 감염되는 세포에 대한 바이러스의 결합에 있어서 역할한다. 해당 분야에서 알려져 있는 상이한 CDV 종과 연관되는 상이한 HA 항원이 존재하며, 이들 중 임의의 것이 본 발명의 실행에서 사용될 수 있다. 그러나 융합 (F) 당단백질 및 핵단백질 (NP) 과 같은 상이한 항원이 존재하며, 이들 중 임의의 것이 본 발명의 실행에서 사용될 수 있다. 이들 임의의 항원의 전구체가 사용될 수 있다는 것이 또한 인지된다. 즉, 이들은 동물에서 면역 반응을 자극할 수 있다.
용어 "항원" 또는 "면역원" 은 숙주 동물에서 특이적 면역 반응을 유도하는 물질을 의미한다. 항원은 사멸되고, 약화되거나 생존한 전체 유기체; 유기체의 서브유닛 또는 일부; 면역 특성을 갖는 삽입물을 함유하는 재조합 벡터; 숙주 동물에 존재시 면역 반응을 유도할 수 있는 DNA 의 조각 또는 단편; 폴리펩티드, 에피토프, 합텐, 또는 이의 임의의 조합을 포함할 수 있다. 대안적으로, 면역원 또는 항원은 독소 또는 항독소를 포함할 수 있다.
용어 "단백질", "펩티드", "폴리펩티드" 및 "폴리펩티드 단편" 은 임의 길이의 아미노산 잔기의 중합체를 지칭하는 것으로 본원에서 상호교환가능하게 사용된다. 중합체는 선형 또는 분지형일 수 있으며, 개질된 아미노산 또는 아미노산 유사체를 포함할 수 있고, 아미노산 외의 화학적 부분에 의해 방해될 수 있다. 상기 용어는 또한 자연적으로 또는 개입에 의해; 예를 들어 이황화물 결합 형성, 글리코실화, 지질화, 아세틸화, 인산화, 또는 임의의 기타 조작 또는 개질, 예컨대 표지화 또는 생물활성 성분과의 컨쥬게이션에 의해 개질된 아미노산 중합체를 포함한다.
용어 "CDV HA 폴리펩티드 또는 폴리뉴클레오티드" 는 임의의 자연 또는 최적화 CDV HA 폴리펩티드 또는 폴리뉴클레오티드, 및 이의 유도체 및 변이체를 지칭한다.
용어 "GM-CSF 폴리펩티드 또는 폴리뉴클레오티드" 는 임의의 자연 또는 최적화 GM-CSF 폴리펩티드 또는 폴리뉴클레오티드, 및 이의 유도체 및 변이체를 지칭한다.
본원에서 사용되는 바와 같은 용어 "면역성 또는 항원 폴리펩티드" 는 숙주에 투여되고 나면 단백질에 대해 유도된 체액 및/또는 세포 유형의 면역 반응을 일으킬 수 있다는 점에 있어서 면역학적으로 활성인 폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 상기 단백질 단편은 총 단백질과 실제적으로 동일한 면역학적 활성을 갖는 것이다. 따라서, 본 발명에 따른 단백질 단편은 하나 이상의 에피토프 또는 항원 결정기를 포함하거나 이로 본질적으로 이루어지거나 이로 이루어진다. 본원에서 사용되는 바와 같은 "면역성" 단백질 또는 폴리펩티드는 전체 길이 서열의 단백질, 이의 유사체, 또는 이의 면역성 단편을 포함한다. "면역성 단편" 은 하나 이상의 에피토프를 포함하며 그에 따라 상기 기재된 면역 반응을 이끌어내는 단백질의 단편을 의미한다. 이러한 단편은 당업계에 잘 알려져 있는 임의의 수의 에피토프 맵핑 기술을 사용하여 확인될 수 있다. 예를 들어, Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology, Vol. 66 (Glenn E. Morris, Ed., 1996) 을 참조한다. 예를 들어, 선형 에피토프는 예로서 고체 지지체 상의 펩티드 다수를 동시 합성하고 (상기 펩티드는 단백질 분자 일부에 상응함), 펩티드를 항체와 반응시키면서 펩티드를 지지체에 여전히 부착시켜 측정될 수 있다. 이러한 기술은 당업계에 알려져 있으며 예를 들어 미국 특허 제 4,708,871 호; Geysen et al., 1984; Geysen et al., 1986 에 기재되어 있다. 유사하게는, 입체형태 에피토프는 아미노산의 공간적 형태를 측정하여, 예를 들어 x-선 결정학 및 2 차원 핵 자기 공명에 의해 쉽게 확인된다. 예를 들어, 상기 Epitope Mapping Protocols 을 참조한다.
본원에서 토의한 바와 같이, 본 발명은 활성 단편 및 항원 폴리펩티드의 변이체를 포함한다. 따라서, 용어 "면역성 또는 항원 폴리펩티드" 는 폴리펩티드가 본원에 정의된 바와 같은 면역 반응을 생성시키는 기능을 하는 한, 서열에 대한 결실, 추가 및 치환을 추가로 고려한다.
용어 "보존적 변이" 는 아미노산 잔기가 또다른 생물학적으로 유사한 잔기에 의해 대체되거나, 핵산 서열 내 뉴클레오티드가 대체되어, 인코딩된 아미노산 잔기가 변화하지 않거나 다른 생물학적으로 유사한 잔기인 것을 나타낸다. 이와 관련하여, 특히 바람직한 치환은 일반적으로 사실상 보존적일 것이다 (즉, 이들 치환이 아미노산 패밀리 내에서 발생함). 예를 들어, 아미노산은 일반적으로 다음의 네 가지 패밀리로 나누어진다: (1) 산성--아스파르테이트 및 글루타메이트; (2) 염기성--리신, 아르기닌, 히스티딘; (3) 비극성--알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌, 트립토판; 및 (4) 비전하 극성--글리신, 아스파라긴, 글루타민, 시스틴, 세린, 트레오닌, 티로신. 페닐알라닌, 트립토판 및 티로신은 때때로 방향족 아미노산으로서 분류된다. 보존적 변이의 예시는 하나의 소수성 잔기 예컨대 이소류신, 발린, 류신 또는 메티오닌의 또다른 소수성 잔기에 대한 치환, 또는 하나의 극성 잔기의 또다른 극성 잔기에 대한 치환, 예컨대 아르기닌의 리신에 대한 치환, 글루탐산의 아스파르트산에 대한 치환, 또는 글루타민의 아스파라긴에 대한 치환 등; 또는 생물학적 활성에 대한 주요 영향을 갖지 않을 구조적으로 관련된 아미노산으로의 아미노산의 유사한 보존적 대체를 포함한다. 그러므로, 참조 분자와 실제적으로 동일한 아미노산 서열을 갖지만 단백질의 면역원성에 실제적으로 영향을 주지 않는 사소한 아미노산 치환을 갖는 단백질은 참조 폴리펩티드의 정의 내에 있다. 이러한 개질에 의해 생성된 모든 폴리펩티드가 본원에 포함된다. 용어 "보존적 변이" 는 또한 미치환된 모체 아미노산 대신 치환된 아미노산의 사용을 포함한다 (단, 치환된 폴리펩티드에 대해 야기된 항체는 또한 미치환된 폴리펩티드와 면역반응함).
용어 "에피토프" 는 특정 B 세포 및/또는 T 세포가 반응하는 항원 또는 합텐 상의 부위를 지칭한다. 상기 용어는 또한 "항원 결정기" 또는 "항원 결정기 부위" 와 상호교환가능하게 사용된다. 동일한 에피토프를 인지하는 항체는 표적 항원에 대한 또다른 항체의 결합을 차단하는 한 항체의 능력을 보여주는 간단한 면역검정에서 확인될 수 있다.
조성물 또는 백신에 대한 "면역 반응" 은 관심 조성물 또는 백신에 대한 세포 및/또는 항체-매개 면역 반응의 숙주 내에서의 발전이다. 통상, "면역 반응" 은 하기의 효과 중 하나 이상을 포함하나 이에 제한되지는 않는다: 관심 조성물 또는 백신에 포함된 항원(들) 에 특이적으로 유도된 항체, B 세포, 헬퍼 T 세포 및/또는 세포독성 T 세포의 생성. 바람직하게는 숙주 세포가 치료적 또는 보 호성 면역 반응을 나타내어, 새로운 감염에 대한 저항성이 증강되고/되거나 질환의 임상적 중증도가 감소될 것이다. 이러한 보호는 감염된 숙주에 의해 보통 나타나는 증상의 감소 또는 결여, 감염된 숙주에서의 빠른 회복 시간 및/또는 감소된 바이러스 역가에 의해 입증될 것이다.
"동물" 은 포유동물, 조류 등을 의미한다. 본원에서 사용되는 바와 같은 동물 또는 숙주는 포유동물 및 인간을 포함한다. 상기 동물은 말과 (equine) (예를 들어, 말 (horse)), 개과 (canine) (예를 들어, 개 (dog), 늑대, 여우, 코요테, 자칼), 고양이과 (feline) (예를 들어, 사자, 호랑이, 애완용 고양이, 야생 고양이, 기타 대형 고양이과 동물, 및 치타 및 스라소니를 포함하는 기타 고양이과 동물), 양과 (ovine) (예를 들어, 양 (sheep)), 소과 (bovine) (예를 들어, 소 (cattle)), 돼지과 (porcine) (예를 들어, 돼지 (pig)), 조류 (예를 들어, 닭, 오리, 거위, 칠면조, 메추라기, 꿩, 앵무새, 핀치, 매, 까마귀, 오스트리치, 에뮤 및 화식조), 영장류 (예를 들어, 원원류, 안경원숭이, 원숭이, 긴팔원숭이, 유인원), 흰담비, 바다표범 및 어류로 이루어지는 군에서 선택될 수 있다. 용어 "동물" 은 또한 배아 및 태아 단계를 포함하는 모든 발생 단계의 개별적 동물을 포함한다.
다르게 설명하지 않는 한, 본원에서 사용되는 모든 기술적 및 과학적 용어는 이 개시물이 속하는 당업자에 의해 통상 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. 문맥에서 달리 명백히 나타내지 않는 한, 단수형은 복수형을 포함한다. 유사하게, 문맥에서 달리 명백히 나타내지 않는 한, 단어 "또는" 은 "및" 을 포함하는 것으로 의도된다.
이 개시물 및 특히 청구항 및/또는 단락에서, "포함하다", "포함된", "포함하는" 등과 같은 용어가 미국 특허법에서 부여된 의미를 가질 수 있고; 예를 들어, 이들은 "함유하다", "함유된", "함유하는" 등을 의미할 수 있고; "~로 본질적으로 이루어지는" 및 "~로 본질적으로 이루어진다" 와 같은 용어가 미국 특허법에서 부여된 의미를 갖고, 예를 들어 이들이 명백히 인용되지 않은 요소들을 허용하지만 선행 기술에서 발견되거나 본 발명의 기본적 또는 신규한 특징에 영향을 주는 요소들은 제외한다는 것에 유의한다.
조성물
본 발명은 CDV 폴리펩티드, 항원, 에피토프 또는 면역원을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 재조합 또는 발현 벡터 및 약학적으로 또는 수의학적으로 허용가능한 담체, 부형제, 보조제 또는 비히클을 포함할 수 있는 CDV 백신 또는 조성물에 관한 것이다. CDV 폴리펩티드, 항원, 에피토프 또는 면역원은 동물에서 반응을 이끌어내고, 유도하거나 자극하는 임의의 CDV 폴리펩티드, 항원, 에피토프 또는 면역원, 예컨대 단백질, 펩티드 또는 이의 단편일 수 있으나 이에 제한되지는 않는다.
본 발명은 CDV HA 폴리펩티드를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 재조합 또는 발현 벡터 및 약학적으로 또는 수의학적으로 허용가능한 담체, 부형제, 보조제 또는 비히클을 포함할 수 있는 CDV 백신 또는 조성물에 관한 것이다. 한 구현예에서, 발현 벡터는 GM-CSF 폴리펩티드를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 추가로 포함할 수 있다.
또다른 구현예에서, 약학적으로 또는 수의학적으로 허용가능한 담체, 부형제, 보조제 또는 비히클은 유중수 유액일 수 있다. 또다른 구현예에서, 유중수 유액은 수/유/수 (water/oil/water (W/O/W)) 삼중체 유액일 수 있다. 또다른 구현예에서, 약학적으로 또는 수의학적으로 허용가능한 담체, 부형제, 보조제 또는 비히클은 수중유 유액일 수 있다.
한 구현예에서, CDV 폴리펩티드, 항원 또는 이의 단편 또는 변이체는 CDV HA 폴리펩티드 또는 이의 단편 또는 변이체일 수 있다. 이러한 구현예의 한 양상에서, CDV HA 폴리펩티드 또는 이의 단편 또는 변이체는 CDV HA 유전자에 의해 생성된 재조합 폴리펩티드이다. 이러한 구현예의 또다른 양상에서, CDV HA 유전자는 SEQ ID NO: 1, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48 또는 49 에서 나타낸 바와 같은 서열에 대해 70% 이상 동일성을 갖는다. 이러한 구현예의 또다른 양상에서, CDV HA 폴리펩티드 또는 이의 단편 또는 변이체는 SEQ ID NO: 2, 5, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33 또는 34 에서 나타낸 바와 같은 서열에 대해 80% 동일성을 갖는다.
또다른 구현예에서, GM-CSF 폴리펩티드, 항원 또는 단편 또는 변이체는 GM-CSF 유전자에 의해 생성된 재조합 폴리펩티드이다. 이러한 구현예의 또다른 양상에서, GM-CSF 유전자는 SEQ ID NO: 3 에서 나타낸 바와 같은 서열에 대해 70% 이상 동일성을 갖는다. 이러한 구현예의 또다른 양상에서, GM-CSF 폴리펩티드 또는 이의 단편 또는 변이체는 SEQ ID NO: 4 에서 나타낸 바와 같은 서열에 대해 80% 이상 동일성을 갖는다.
합성 항원이 또한 정의 내에 포함된다 (예를 들어, 폴리에피토프, 측면 (flanking) 에피토프 및 기타 재조합 또는 합성적으로 유래한 항원). 예를 들어, Bergmann et al., 1993; Bergmann et al., 1996; Suhrbier, 1997; Gardner et al., 1998 을 참조한다. 본 발명의 목적을 위한 면역성 단편은 통상, 분자의 약 3 개 이상의 아미노산, 약 5 개 이상의 아미노산, 약 10-15 개 이상의 아미노산 또는 약 15-25 개의 아미노산 또는 그 이상의 아미노산을 포함할 것이다. 단편의 길이에 대해 중대한 상한치는 없으며, 이는 거의 전체 길이의 단백질 서열, 또는 심지어 단백질의 하나 이상의 에피토프를 포함하는 융합 단백질을 포함할 수 있다.
따라서, 에피토프를 발현하는 폴리뉴클레오티드의 최소 구조는 CDV 폴리펩티드의 에피토프 또는 항원 결정기를 인코딩하는 뉴클레오티드를 포함하거나 이로 본질적으로 이루어지거나 이로 이루어지는 것이다. CDV 폴리펩티드 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드는 폴리펩티드를 인코딩하는 서열의 최소 15 개 뉴클레오티드, 약 30-45 개 뉴클레오티드, 약 45-75 개, 또는 적어도 75, 87 또는 150 개의 연속 또는 인접 뉴클레오티드를 포함하거나 이로 본질적으로 이루어지거나 이로 이루어질 수 있다. 에피토프 측정 절차, 예컨대 겹치는 펩티드 라이브러리 생성 (Hemmer et al., 1998), Pepscan (Geysen et al., 1984; Geysen et al., 1985; Van der Zee R. et al., 1989; Geysen, 1990; Multipin.RTM. Peptide Synthesis Kits de Chiron) 및 알고리즘 (De Groot et al., 1999; PCT/US2004/022605) 이 본 발명의 실행에서 사용될 수 있다.
용어 "핵산" 및 "폴리뉴클레오티드" 는 선형 또는 분지형, 단일 가닥 또는 이중 가닥인 RNA 또는 DNA, 또는 이의 하이브리드를 지칭한다. 상기 용어는 또한 RNA/DNA 하이브리드를 포함한다. 하기의 것은 폴리뉴클레오티드의 비제한적 예시이다: 유전자 또는 유전자 단편, 엑손, 인트론, mRNA, tRNA, rRNA, 리보자임, cDNA, 재조합 폴리뉴클레오티드, 분지형 폴리뉴클레오티드, 플라스미드, 벡터, 임의 서열의 단리된 DNA, 임의 서열의 단리된 RNA, 핵산 프로브 및 프라이머. 폴리뉴클레오티드는 개질된 뉴클레오티드, 예컨대 메틸화 뉴클레오티드 및 뉴클레오티드 유사체, 우라실, 기타 당류 및 연결기 예컨대 플루오로리보오스 및 티올레이트, 및 뉴클레오티드 분지를 포함할 수 있다. 뉴클레오티드의 서열은 중합 후, 예컨대 표지 성분과의 컨쥬게이션에 의해 추가로 개질될 수 있다. 이러한 정의에 포함되는 다른 유형의 개질은 캡 (cap), 하나 이상의 자연 발생적 뉴클레오티드의 유사체로의 치환, 및 폴리뉴클레오티드를 단백질, 금속 이온, 표지 성분, 다른 폴리뉴클레오티드 또는 고체 지지체에 부착시키기 위한 수단물의 도입이다. 폴리뉴클레오티드는 화학적 합성에 의해 수득될 수 있거나 미생물로부터 유래될 수 있다.
용어 "유전자" 는 생물학적 기능과 관련되는 폴리뉴클레오티드의 임의의 분절을 지칭하는 것으로 광범위하게 사용된다. 따라서, 유전자는 게놈 서열에서와 같이 인트론 및 엑손을 포함하거나, 그의 발현에 필요한 조절 서열 및/또는 cDNA 에서와 같이 코딩 서열만을 포함한다. 예를 들어, 유전자는 또한 mRNA 또는 기능적 RNA 를 발현하거나, 특정 단백질을 인코딩하며, 조절 서열을 포함하는 핵산 단편을 지칭한다.
본 발명은 CDV 항원, 에피토프 또는 면역원을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드, 또는 GM-CSF 항원, 에피토프 또는 면역원을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드에 대한 상보적 가닥을 추가로 포함한다. 상기 상보적 가닥은 중합체성일 수 있으며 임의의 길이일 수 있고, 데옥시리보뉴클레오티드, 리보뉴클레오티드 및 유사체를 임의 조합으로 함유할 수 있다.
"단리된" 생물학적 성분 (예컨대 핵산 또는 단백질 또는 세포 소기관) 은 상기 성분이 자연적으로 발생하는 유기체 세포 내 다른 생물학적 성분, 예를 들어, 기타 염색체 및 염색체외 DNA 및 RNA, 단백질 및 세포 소기관으로부터 실제적으로 분리되거나 정제된 성분을 지칭한다. "단리된" 핵산 및 단백질은 표준 정제 방법에 의해 정제된 핵산 및 단백질을 포함한다. 상기 용어는 또한 재조합 기술 뿐 아니라 화학적 합성에 의해 제조된 핵산 및 단백질을 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같은 용어 "정제된" 은 절대 순도를 필요로 하지 않으며; 그것보다는, 상대적인 용어로서 의도된다. 따라서 예를 들어, 부분적으로 정제된 폴리펩티드 제조물은 자연 환경에서의 폴리펩티드보다 폴리펩티드가 더 풍부한 것이다. 즉, 폴리펩티드는 세포 성분으로부터 분리된다. "실제적으로 정제된" 은 60% 이상, 70% 이상, 80% 이상, 90% 이상, 95% 이상 또는 98% 이상의 세포 성분 또는 물질이 제거된 것을 의미한다. 마찬가지로, 폴리펩티드는 부분적으로 정제될 수 있다. "부분적으로 정제된" 은 60% 미만의 세포 성분 또는 물질이 제거된 것을 의미한다. 폴리뉴클레오티드에 대해서도 이는 동일하게 적용된다. 본원에 개시된 폴리펩티드는 당업계에 알려져 있는 임의의 수단에 의해 정제될 수 있다.
또한, CDV HA 폴리펩티드의 상동체 및 GM-CSF 폴리펩티드의 상동체가 본 발명의 범주 내에 있는 것으로 의도된다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "상동체" 는 오르토로그 (ortholog), 유사체 및 파라로그 (paralog) 를 포함한다. 용어 "유사체" 는 동일하거나 유사한 기능을 갖지만, 관련되지 않은 유기체에서 별개로 진화한 2 개의 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드를 지칭한다. 용어 "오르토로그" 는 상이한 종으로부터의 것이지만 종 분화에 의해 공통 선조 유전자로부터 진화한 2 개의 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드를 지칭한다. 보통, 오르토로그는 동일하거나 유사한 기능을 갖는 폴리펩티드를 인코딩한다. 용어 "파라로그" 는 게놈 내에서 중복 (duplication) 에 의해 관련되는 2 개의 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드를 지칭한다. 파라로그는 통상 상이한 기능을 갖지만, 이들 기능은 관련될 수 있다. 예를 들어, 야생형 CDV 폴리펩티드의 유사체, 오르토로그 및 파라로그는 번역-후 개질, 아미노산 서열 차이, 또는 이 둘 모두에 의해 야생형 CDV 폴리펩티드와 상이할 수 있다. 특히, 본 발명의 상동체는 일반적으로 야생형 CDV 폴리펩티드 또는 폴리뉴클레오티드 서열 모두 또는 일부와 적어도 80-85%, 85-90%, 90-95%, 또는 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 서열 동일성을 나타내며, 유사한 기능을 나타낼 것이다.
한 구현예에서, 본 발명은 SEQ ID NO: 2, 4, 5, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33 또는 34 에서 나타낸 바와 같은 서열을 갖는 폴리펩티드에 대해 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 적어도 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 하나 이상의 폴리펩티드를 인코딩하는 하나 이상의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터를 제공한다. 또다른 구현예에서, 본 발명은 상기 확인된 CDV 폴리펩티드 또는 GM-CSF (SEQ ID NO: 2, 4, 5, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33 또는 34) 의 단편 및 변이체를 제공하는데, 이는 잘 알려져 있는 분자생물학 기술을 사용하여 당업자에 의해 쉽게 제조될 수 있다. 변이체는 SEQ ID NO: 2, 4, 5, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33 또는 34 에서 나타낸 바와 같은 아미노산 서열에 대해 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일성의 아미노산 서열을 갖는 상동 폴리펩티드이다.
변이체는 대립형질 변이체를 포함한다. 용어 "대립형질 변이체" 는 단백질의 아미노산 서열에 있어서 변화를 일으키며 자연 집단 (예를 들어, 바이러스 종 또는 종류) 내에 존재하는 다형성을 포함하는 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드를 지칭한다. 이러한 자연 대립형질 변이는 통상 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드 내에서 1-5% 변이를 야기할 수 있다. 대립형질 변이체는 수많은 상이한 종에서의 관심 핵산 서열을 서열분석하여 확인될 수 있는데, 이는 이들 종에서의 동일 유전자의 유전자자리 (locus) 를 확인하기 위해 하이브리드화 프로브를 사용함으로써 쉽게 실행될 수 있다. 임의의 및 모든 이러한 핵산 변이 및 생성된 아미노산 다형성 및 변이 (자연적 대립형질 변이의 결과이며 관심 유전자의 기능적 활성을 변경시키지 않음) 가 본 발명의 범주 내에 있는 것으로 의도된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "유도체" 또는 "변이체" 는, 하나 이상의 보존적 아미노산 변이 또는 기타 사소한 개질을 갖는 폴리펩티드, 또는 폴리펩티드를 인코딩하는 핵산을 지칭하는데, (1) 상응하는 폴리펩티드는 야생형 폴리펩티드와 비교시 실제적으로 동등한 기능을 갖거나, (2) 상기 폴리펩티드에 대해 야기된 항체가 야생형 폴리펩티드와 면역반응성이다. 이들 변이체 또는 유도체는 비개질된 대응 폴리펩티드와 비교하여 실제적으로 동등한 활성을 갖는 펩티드를 야기할 수 있는 CDV 폴리펩티드 또는 GM-CSF 주요 아미노산 서열의 사소한 개질을 갖는 폴리펩티드를 포함한다. 이러한 개질은 위치-지정 돌연변이유발에 의한 바와 같이 의도적일 수 있거나, 자연발생적일 수 있다. 용어 "변이체" 는, 폴리펩티드가 본원에 정의된 바와 같은 면역 반응을 생성시키는 기능을 하는 한, 서열에 대한 결실, 추가 및 치환을 추가로 고려한다.
CDV 폴리펩티드 또는 GM-CSF 폴리펩티드의 면역성 단편은 SEQ ID NO: 2, 5, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33 또는 34 에서 나타낸 바와 같은 서열을 갖는 CDV HA 폴리펩티드 또는 이의 변이체, 또는 SEQ ID NO:4 에서 나타낸 바와 같은 서열을 갖는 GM-CSF 폴리펩티드 또는 이의 변이체의 적어도 8, 10, 13, 14, 15 또는 20 개 연속 아미노산, 21 개 이상의 아미노산, 23 개 이상의 아미노산, 25 개 이상의 아미노산 또는 30 개 이상의 아미노산을 포함한다.
또다른 양상에서, 본 발명은 CDV HA 폴리펩티드를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드, 예컨대 SEQ ID NO: 2, 5, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33 또는 34 에서 나타낸 바와 같은 서열을 갖는 폴리펩티드를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터를 제공한다. 또다른 양상에서, 본 발명은 SEQ ID NO: 2, 5, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33 또는 34 에서 나타낸 바와 같은 서열을 갖는 폴리펩티드에 대해 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 적어도 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드, 또는 보존적 변이체, 대립형질 변이체, 상동체 또는 면역성 단편 (이들 폴리펩티드 중 하나의 8 개 이상 또는 10 개 이상의 연속 아미노산을 포함) 또는 이들 폴리펩티드의 조합을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터를 제공한다.
또다른 양상에서, 본 발명은 GM-CSF 폴리펩티드를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드, 예컨대 SEQ ID NO: 4 에서 나타낸 바와 같은 서열을 갖는 폴리펩티드를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터를 제공한다. 또다른 양상에서, 본 발명은 SEQ ID NO: 4 에서 나타낸 바와 같은 서열을 갖는 폴리펩티드에 대해 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 적어도 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드, 또는 보존적 변이체, 대립형질 변이체, 상동체 또는 면역성 단편 (이들 폴리펩티드 중 하나의 8 개 이상 또는 10 개 이상의 연속 아미노산을 포함) 또는 이들 폴리펩티드의 조합을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터를 제공한다.
한 구현예에서 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 SEQ ID NO: 1, 3, 6, 7, 8, 9, 14, 19, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48 또는 49 에서 나타낸 바와 같은 뉴클레오티드 서열, 또는 이의 변이체를 갖는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 또다른 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 SEQ ID NO: 1, 3, 6, 7, 8, 9, 14, 19, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48 또는 49 에서 나타낸 바와 같은 서열, 또는 이의 변이체를 갖는 폴리뉴클레오티드 중 하나에 대해 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 적어도 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
본 개시물의 폴리뉴클레오티드는 유전적 코드의 결과로서 퇴화되는 서열을 포함한다 (예를 들어, 특정 숙주에 대한 최적화된 코든 이용도). 본원에서 사용되는 바와 같이, "최적화" 는 주어진 종에서의 이의 발현이 증가하도록 유전자 조작되는 폴리뉴클레오티드를 지칭한다. CDV HA 폴리펩티드 또는 GM-CSF 폴리펩티드를 코딩하는 최적화된 폴리뉴클레오티드를 제공하기 위해서, CDV HA 유전자 또는 GM-CSF 유전자의 DNA 서열은 1) 특정 종에서 고도로 발현되는 유전자에 의해 선호되는 코돈을 포함하고; 2) 상기 종에서 실제적으로 발견된 정도로 뉴클레오티드 염기 조성물에서 A+T 또는 G+C 내용물을 포함하고; 3) 상기 종의 개시 서열을 형성하거나; 4) 불안정화, 부적절한 폴리아데닐화, RNA 의 분해 및 종료를 일으키거나 2 차 구조 헤어핀 또는 RNA 슬라이스 부위를 형성하는 서열이 제거되도록 개질될 수 있다. 상기 종에서의 CDV HA 단백질 또는 GM-CSF 단백질의 증가된 발현은 진핵 세포 및 원핵 세포에서의, 또는 특정 종에서의 코돈 이용도의 분포 빈도를 이용하여 달성될 수 있다. 용어 "바람직한 코돈 이용도 빈도" 는 주어진 아미노산을 명시하기 위해 뉴클레오티드 코돈의 이용도에 있어서 특정 숙주 세포에 의해 나타나는 선호도를 지칭한다. 20 개의 자연 아미노산이 존재하며, 이들 대부분은 1 개 초과의 코돈에 의해 명시된다. 그러므로 모든 퇴화 뉴클레오티드 서열은, 상기 뉴클레오티드 서열에 의해 인코딩된 CDV HA 폴리펩티드 또는 GM-CSF 폴리펩티드의 아미노산 서열이 기능적으로 변화하지 않는 한, 본 개시물에 포함된다.
2 개 아미노산 서열 사이의 서열 동일성은 표준 매개변수를 사용하여, NCBI (미국 국립 생물정보 센터 (National Center for Biotechnology Information)) 쌍별 (pairwise) blast 및 blosum62 매트릭스에 의해 확립될 수 있다 (예를 들어, "미국 국립 생물정보 센터" (NCBI, Bethesda, Md., USA) 서버 뿐 아니라 Altschul et al . 에서 이용가능한 BLAST 또는 BLASTX 알고리즘 참조).
서열에 관한 "동일성" 은 2 개 서열 중 더 짧은 서열에서의 뉴클레오티드 또는 아미노산 수로 나눈, 동일한 뉴클레오티드 또는 아미노산을 갖는 위치의 수를 지칭할 수 있는데, 상기 2 개 서열의 정렬은 예를 들어 20 개 뉴클레오티드의 윈도우 크기, 4 개 뉴클레오티드의 단어 길이 및 갭 패널티 4 를 사용하여 Wilbur and Lipman 알고리즘 (Wilbur and Lipman), 및 컴퓨터 이용 분석에 따라 측정될 수 있으며, 정렬을 포함하는 서열 데이터의 해석은 시판 프로그램 (예를 들어, IntelligeneticsTM Suite, Intelligenetics Inc. CA) 을 사용하여 편리하게 수행될 수 있다. RNA 서열이 유사하거나 DNA 서열과 서열 동일성 또는 상동성 정도를 갖는 것으로 여겨지는 경우, DNA 서열에서의 티미딘 (T) 은 RNA 서열에서의 우라실 (U) 과 동일한 것으로 간주된다. 따라서, RNA 서열은 본 발명의 범주 내에 있으며 RNA 서열에서의 우라실 (U) 과 동일한 것으로 간주되는 DNA 서열에서의 티미딘 (T) 에 의해, DNA 서열에서 유래할 수 있다.
2 개 아미노산 서열의 서열 동일성 또는 서열 유사성, 또는 2 개 뉴클레오티드 서열 간의 서열 동일성은 Vector NTI 소프트웨어 패키지 (Invitrogen, 1600 Faraday Ave., Carlsbad, CA) 를 사용하여 측정될 수 있다.
하기의 문헌들은 서열의 상대적 동일성 또는 상동성을 비교하기 위한 알고리즘을 제공하며, 전술한 것에 추가적으로 또는 대안적으로, 이들 참고문헌에서의 교시는 상동성 또는 동일성 % 를 측정하는데 사용될 수 있다: Needleman SB and Wunsch CD; Smith TF and Waterman MS; Smith TF, Waterman MS and Sadler JR; Feng DF and Dolittle RF; Higgins DG and Sharp PM; Thompson JD, Higgins DG and Gibson TJ; 및 Devereux J, Haeberlie P and Smithies O. 그리고, 과도한 실험 없이, 숙련자는 상동성 % 를 측정하기 위해 많은 다른 프로그램 또는 참고문헌을 참고할 수 있다.
하이브리드화 반응은 상이한 "엄격도" 의 조건 하에 수행될 수 있다. 하이브리드화 반응의 엄격도를 증가시키는 조건은 잘 알려져 있다. 예를 들어, "Molecular Cloning: A Laboratory Manual", 제 2 판 (Sambrook et al., 1989) 을 참조한다.
본 발명은 벡터 분자 또는 발현 벡터에 포함되며 프로모터 요소 및 임의로는 인핸서에 작동가능하게 연결된 CDV 폴리뉴클레오티드 또는 GM-CSF 폴리뉴클레오티드 또는 둘 모두를 포함한다.
본 발명은 또한, CDV HA 폴리펩티드 또는 항원을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 GM-CSF 폴리펩티드 또는 항원을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 상술한 재조합 벡터, 약학적으로 또는 수의학적으로 허용가능한 담체, 부형제, 보조제, 또는 비히클, 및 추가로 개로부터의 하나 이상의 항원을 포함할 수 있는 개 백신 또는 조성물을 포함한다. 본 발명은 또한, GM-CSF 폴리펩티드를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 상술한 재조합 또는 발현 벡터, 약학적으로 또는 수의학적으로 허용가능한 담체, 부형제, 보조제, 또는 비히클, 및 추가로 개로부터의 하나 이상의 항원을 포함할 수 있는 개 백신 또는 조성물에 관한 것이다. 상기 항원은 광견병, 개 파르보바이러스 (parvovirus), 개 코로나바이러스 (coronavirus), 개 인플루엔자, 개 홍역, 감염성 개 간염, 개 헤르페스바이러스 (herpesvirus), 가성광견병 (pseudorabies), 개 미세 바이러스 (minute virus), 렙토스피라 (Leptospira), 네오스포라 카니눔 (Neospora caninum), 보렐리아 부르그도르페리 (Borrelia burgdorferi), 에를리키아 카니스 (Ehrlichia canis), 리케트치아 리케트치 (Rickettsia rickettsii), 보르데텔라 브론치셉티카 (Bordetella bronchiseptica), 블라스토마이세스 데르마티티디스 (Blastomyces dermatitidis), 히스토플라스마 캅술라툼 (Histoplasma capsulatum), 코키디오이데스 이미티스 (Coccidioides immitis), 크립토코쿠스 네오포르만스 (Cryptococcus neoformans), 마이크로스포룸 카니스 (Microsporum canis), 스포로트릭스 스첸키 (Sporothrix schenckii), 아스페르질루스 푸미가투스 (Aspergillus fumigatus) 및 P. 인시디오숨 (P. insidiosum) 으로 이루어지는 군에서 선택되는 개 항원일 수 있다. 상기 항원은 사멸되고, 약화되거나 생존한 전체 유기체; 유기체의 서브유닛 또는 일부; 면역 특성을 갖는 삽입물을 함유하는 재조합 벡터; 숙주 동물에 존재시 면역 반응을 유도할 수 있는 DNA 의 조각 또는 단편; 폴리펩티드, 에피토프, 합텐, 또는 이의 임의의 조합을 포함할 수 있다.
"벡터" 는 시험관내 또는 생체내로 표적 세포에 전달되는 이종 폴리뉴클레오티드를 포함하는 재조합 DNA 또는 RNA 플라스미드 또는 바이러스를 지칭한다. 이종 폴리뉴클레오티드는 본 발명 또는 치료요법의 목적을 위해 관심 서열을 포함할 수 있으며, 임의로는 발현 카세트의 형태일 수 있다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 벡터는 궁극적인 표적 세포 또는 대상에서 복제가능하지 않아도 된다. 상기 용어는 클로닝 벡터 및 바이러스 벡터를 포함한다.
용어 "재조합" 은 자연에서 발생하지 않거나, 자연에서 발견되지 않는 배열로 또다른 폴리뉴클레오티드에 연결되는, 반합성 또는 합성 기원을 갖는 폴리뉴클레오티드를 의미한다.
"이종" 은 비교하는 나머지 부분으로부터 유전적으로 구별되는 부분에서 유래한 것을 의미한다. 예를 들어, 폴리뉴클레오티드는 상이한 근원에서 유래한 플라스미드 또는 벡터 내에 유전자 조작 기술에 의해 위치할 수 있으며, 이종 폴리뉴클레오티드이다. 이의 자연 코딩 서열로부터 제거되며 자연 서열 외의 코딩 서열에 작동가능하게 연결된 프로모터는 이종 프로모터이다.
본 발명의 폴리뉴클레오티드는 추가적인 서열, 예컨대 동일한 전사 단위체 내의 추가적인 인코딩 서열, 제어 요소 예컨대 프로모터, 리보솜 결합 부위, 5'UTR, 3'UTR, 전사 터미네이터, 폴리아데닐화 부위, 동일 또는 상이한 프로모터 제어 하의 추가적인 전사 단위체, 숙주 세포의 클로닝, 발현, 상동 재조합 및 형질전환을 가능하게 하는 서열, 및 본 발명의 구현예를 제공하기 위해 필요할 수 있는 임의의 이러한 구성물을 포함할 수 있다.
CDV HA 폴리펩티드, 항원, 에피토프 또는 면역원 또는 GM-CSF 폴리펩티드의 발현을 위한 요소는 발명의 벡터 내에 존재한다. 최소의 방법으로, 이는 개시 코돈 (ATG), 정지 코돈 및 프로모터, 및 임의로는 또한 특정 벡터 예컨대 플라스미드 및 특정 바이러스 벡터, 예를 들어 폭스바이러스 외의 바이러스 벡터에 대한 폴리아데닐화 서열을 포함한다. 폴리뉴클레오티드가 폴리펩티드 단편, 예를 들어 CDV HA 폴리펩티드를 벡터 내에서 인코딩하는 경우, ATG 는 판독 프레임의 5' 에 위치하며 정지 코돈은 3' 에 위치한다. 발현 제어를 위한 다른 요소, 예컨대 인핸서 서열, 안정화 서열, 예컨대 인트론 및 단백질 분비를 가능하게 하는 신호 서열이 존재할 수 있다.
본 발명은 또한 벡터를 포함하는 조성물 또는 백신에 관한 것이다. 조성물 또는 백신은 하나 이상의 CDV HA 또는 GM-CSF 폴리펩티드, 항원, 에피토프 또는 면역원을 포함하고 발현하는 하나 이상의 벡터, 예를 들어 발현 벡터, 예컨대 생체내 발현 벡터를 포함할 수 있다. 한 구현예에서, 상기 벡터는 폴리뉴클레오티드를 함유하고 발현하는데, 이는 CDV HA 항원, 에피토프 또는 면역원을 코딩하고/하거나 발현하는 폴리뉴클레오티드를 약학적으로 또는 수의학적으로 허용가능한 담체, 부형제, 보조제 또는 비히클 내에 포함한다. 따라서, 본 발명의 구현예에 따르면, 제조물 내의 다른 벡터(들) 는 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하고, 이로 본질적으로 이루어지거나 이로 이루어지며, 적절한 환경 하에 상기 벡터는 CDV HA 폴리펩티드, 항원, 에피토프 또는 면역원 (예를 들어, 헤마글루티닌, 뉴라미니다아제, 핵단백질) 또는 이의 단편의 하나 이상의 다른 단백질을 발현한다.
또다른 구현예에 따라서, 조성물 또는 백신 내의 벡터(들) 는 CDV HA 폴리펩티드, 항원, 에피토프 또는 면역원, 또는 GM-CSF 폴리펩티드, 항원, 에피토프 또는 면역원, 또는 이의 조합의 하나 이상의 단백질 또는 단편(들) 을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드(들) 을 포함하거나, 이로 본질적으로 이루어지거나, 이로 이루어진다. 또다른 구현예에서, 상기 조성물 또는 백신은 CDV HA 폴리펩티드, 항원, 융합 단백질 또는 이의 에피토프를 유리하게는 생체내 인코딩하고 발현하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 하나 또는 둘 이상의 벡터를 포함한다. 본 발명은 또한 상이한 CDV HA 폴리펩티드, 항원, 에피토프, 융합 단백질 또는 면역원, 예를 들어, 인간, 돼지, 암소 또는 소, 개, 고양이 및 조류와 같으나 이에 제한되지 않는 상이한 종으로부터의 CDV HA 폴리펩티드, 항원, 에피토프 또는 면역원을 인코딩하고 발현하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터의 혼합물에 관한 것이다.
본 발명에서 재조합 바이러스 벡터는 CDV 폴리펩티드 또는 이의 단편 또는 변이체를 인코딩하는 CDV 코딩 서열 또는 이의 단편을 발현시키는데 사용된다. 구체적으로, 바이러스 벡터는 CDV 서열, 보다 구체적으로는 항원 폴리펩티드를 인코딩하는 CDV HA 유전자 또는 이의 단편을 발현할 수 있다. 본원에서 고려된 바이러스 벡터는 폭스바이러스 (poxvirus) [예를 들어, 백시니아 바이러스 (vaccinia virus) 또는 약화된 백시니아 바이러스, 아비폭스 바이러스 (avipox virus) 또는 약화된 아비폭스 바이러스 (예를 들어, 카나리아폭스 (canarypox), 계두 (fowlpox), 비둘기폭스 (dovepox), 구두 (pigeonpox), 메추라기폭스 (quailpox), ALVAC, TROVAC; 예를 들어, US 5,505,941, US 5,494,8070 참조), 라쿤폭스 바이러스 (raccoonpox virus), 돈두 바이러스 (swinepox virus) 등], 아데노바이러스 (예를 들어, 인간 아데노바이러스, 개 아데노바이러스), 헤르페스바이러스 (예를 들어, 개 헤르페스바이러스, 고양이 헤르페스바이러스, 소 헤르페스바이러스, 돼지 헤르페스바이러스), 바큘로바이러스, 레트로바이러스 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 또다른 구현예에서, 상기 아비폭스 발현 벡터는 카나리아폭스 벡터, 예컨대 ALVAC 일 수 있다. 또다른 구현예에서, 상기 아비폭스 발현 벡터는 계두 벡터, 예컨대 TROVAC 일 수 있다. CDV 폴리펩티드, 항원, 에피토프 또는 면역원은 CDV HA 일 수 있다. 예를 들어, CDV HA 를 포함하는 상기 폭스바이러스 벡터는 US 5,756,102 에 기재된 바와 같은 벡터일 수 있다. 발현되는 본 발명의 CDV HA 폴리펩티드 또는 항원은 특정 폭스바이러스 프로모터, 예를 들어 그 중에서도 백시니아 프로모터 7.5 kDa (Cochran et al., 1985), 백시니아 프로모터 I3L (Riviere et al., 1992), 백시니아 프로모터 HA (Shida, 1986), 우두 (cowpox) 프로모터 ATI (Funahashi et al., 1988), 백시니아 프로모터 H6 (Taylor et al., 1988b; Guo et al., 1989; Perkus et al., 1989) 의 제어 하에 삽입된다.
본 발명의 추가적인 구현예에 따라서, 발현 벡터는 플라스미드 벡터, 특히 생체내 발현 벡터이다. 구체적인, 비제한적인 예에서, pVR1020 또는 1012 플라스미드 (VICAL Inc.; Luke et al., 1997; Hartikka et al., 1996, 예를 들어, 미국 특허 제 5,846,946 호 및 제 6,451,769 호 참조) 는 폴리뉴클레오티드 서열의 삽입용 벡터로서 이용될 수 있다. pVR1020 플라스미드는 pVR1012 에서 유래하며 인간 tPA 신호 서열을 포함한다. 한 구현예에서 인간 tPA 신호는 GenBank 등록 번호 HUMTPA14 의 아미노산 M(1) 내지 아미노산 S(23) 를 포함한다. 또다른 구체적인, 비제한적 예에서, 폴리뉴클레오티드 서열 삽입용 벡터로서 이용한 플라스미드는 GenBank 등록 번호 U28070 의 아미노산 M(24) 내지 아미노산 A(48) 로부터의 말 IGF1 의 신호 펩티드 서열을 포함할 수 있다. 실행시 참고되거나 이용될 수 있는 DNA 플라스미드에 대한 추가적인 정보는, 예를 들어 미국 특허 제 6,852,705 호; 제 6,818,628 호; 제 6,586,412 호; 제 6,576,243 호; 제 6,558,674 호; 제 6,464,984 호; 제 6,451,770 호; 제 6,376,473 호 및 제 6,221,362 호에서 발견된다. CDV 항원을 발현하는 DNA 플라스미드 기재 백신은 미국 특허 출원 USSN 09/587,964 에서 발견될 수 있다.
용어 플라스미드는 본 발명에 따른 폴리뉴클레오티드 및 세포 또는 원하는 숙주 또는 표적의 세포 내 이의 생체내 발현에 필요한 요소를 포함하는 임의의 DNA 전사 단위체를 포함하며; 이와 관련하여, 초나선 또는 비-초나선, 원형 플라스미드 뿐 아니라 선형 형태가 본 발명의 범주 내에 있는 것으로 의도된다는 것에 주의한다.
각각의 플라스미드는 CDV HA 폴리펩티드, 항원, 에피토프 또는 면역원을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드에 추가로, 임의로는 이종 펩티드 서열, 변이체, 유사체 또는 단편에 융합되고, 프로모터에 작동가능하게 연결되거나 프로모터의 제어 하에 있거나 프로모터에 의존적인 것들을 포함하거나 함유하거나 이로 본질적으로 이루어진다. 일반적으로, 진핵 세포에서의 강력한 기능적 프로모터를 이용하는 것이 유리하다. 강력한 프로모터는 인간 또는 쥐과 기원의, 또는 임의로는 랫트 또는 기니아 피그와 같은 또다른 기원의 즉시 초기 거대세포 바이러스 (cytomegalovirus) 프로모터 (CMV-IE) 일 수 있으나 이에 제한되지는 않는다.
보다 일반적인 용어로, 프로모터는 바이러스 또는 세포 기원의 것이다. 본 발명의 실행에서 유용하게 이용할 수 있는 CMV-IE 외의 강력한 바이러스 프로모터는 라우스 육종 바이러스의 LTR 프로모터 또는 SV40 바이러스의 초기/후기 프로모터이다. 본 발명의 실행에서 유용하게 이용할 수 있는 강력한 세포 프로모터는 세포골격 유전자의 프로모터, 예컨대 데스민 프로모터 (Kwissa et al., 2000), 또는 액틴 프로모터 (Miyazaki et al., 1989) 이다.
폭스바이러스 외의 플라스미드 및 바이러스 벡터에 대한 폴리아데닐화 신호 (폴리A) 에 관해서, 소 성장 호르몬 (bGH) 유전자의 폴리(A) 신호 (U.S. 5,122,458 참조), 또는 토끼 β-글로빈 유전자의 폴리(A) 신호 또는 SV40 바이러스의 폴리(A) 신호가 사용될 수 있다.
"숙주 세포" 는 유전적으로 변경되거나, 외인성 폴리뉴클레오티드, 예컨대 재조합 플라스미드 또는 벡터의 투여에 의해 유전적으로 변경될 수 있는 원핵 세포 또는 진핵 세포를 나타낸다. 유전적으로 변경된 세포를 지칭하는 경우, 상기 용어는 본래 변경된 세포 및 이의 자손 모두를 지칭한다.
사용 방법 및 생산품
본 발명은 하기의 방법 구현예를 포함한다. 한 구현예에서, CDV HA 폴리펩티드 또는 이의 단편 또는 변이체를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터 및 약학적으로 또는 수의학적으로 허용가능한 담체, 부형제, 비히클 또는 보조제를 포함하는 조성물을 동물에게 투여하는 것을 포함하는, 동물 백신 접종 방법이 개시된다. 이러한 구현예의 한 양상에서, 상기 동물은 조류, 말, 개, 고양이, 흰담비, 바다표범 또는 돼지이다.
또다른 구현예에서, CDV HA 폴리펩티드를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 GM-CSF 폴리펩티드를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터 및 약학적으로 또는 수의학적으로 허용가능한 담체, 부형제, 비히클 또는 보조제를 포함하는 조성물 및 개 항원을 포함하는 하나 이상의 조성물을 포함하는 동물 백신 접종 방법이 개시된다.
또다른 구현예에서, GM-CSF 폴리펩티드를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터 및 약학적으로 또는 수의학적으로 허용가능한 담체, 부형제, 비히클 또는 보조제를 포함하는 조성물 및 개 항원을 포함하는 하나 이상의 조성물을 포함하는 동물 백신 접종 방법이 개시된다.
본 발명의 한 구현예에서, 프라임-부스트 (prime-boost) 요법이 이용될 수 있는데, 이는 하나 이상의 제 1 투여 및 하나 이상의 부스터 투여 (하나 이상의 통상의 폴리펩티드, 항원, 에피토프 또는 면역원 사용) 로 이루어진다. 상기 투여는 동일하거나 상이한 항원을 포함하는 하나, 둘, 또는 그 이상의 백신 또는 조성물을 포함할 수 있다. 통상, 제 1 투여에서 사용한 면역 조성물(들) 또는 백신(들) 은 부스터로서 사용한 것들과 그 성질에 있어서 상이하다. 그러나, 동일한 조성물(들) 이 제 1 투여 및 부스터 투여로서 사용될 수 있다는 것에 주목한다. 이러한 투여 프로토콜을 "프라임-부스트" 로 지칭한다.
프라임-부스트 요법은 하나 이상의 프라임-투여 및 하나 이상의 부스터 투여 (하나 이상의 통상의 폴리펩티드 및/또는 이의 변이체 또는 단편 사용) 를 포함한다. 상기 프라임-투여는 1 회 이상의 투여를 포함할 수 있다. 유사하게, 상기 부스트 투여는 1 회 이상의 투여를 포함할 수 있다. 프라임-투여는 하나 이상의 항원을 포함할 수 있으며 부스트 투여는 하나 이상의 항원을 포함할 수 있다.
본 발명의 프라임-부스트 프로토콜 또는 요법의 한 양상에서, 프라임-부스트 프로토콜은 CDV HA 폴리펩티드, 항원 및/또는 이의 변이체 또는 단편을 함유하며 생체내 발현하는 재조합 바이러스 벡터를 포함하는 조성물을 투여한 후 재조합 CDV HA 폴리펩티드 또는 항원, 또는 CDV HA 폴리펩티드 또는 항원을 포함하는 불활성화 바이러스 조성물 또는 백신, 또는 CDV HA 폴리펩티드 또는 항원을 발현하는 DNA 플라스미드 기재 조성물 또는 백신을 투여하는 것을 포함할 수 있다. 마찬가지로, 프라임-부스트 프로토콜은 재조합 CDV HA 항원을 포함하는 조성물, 또는 CDV HA 폴리펩티드 또는 항원을 포함하는 불활성화 바이러스 조성물 또는 백신, 또는 CDV HA 폴리펩티드 또는 항원을 발현하는 DNA 플라스미드 기재 조성물 또는 백신을 투여한 후 CDV HA 폴리펩티드 또는 항원 및/또는 이의 변이체 또는 단편을 함유하며 생체내 발현하는 재조합 바이러스 벡터를 투여하는 것을 포함할 수 있다. 또한, 제 1 투여 및 제 2 투여 모두가 본 발명의 CDV HA 폴리펩티드를 함유하고 발현하는 재조합 바이러스 벡터를 포함할 수 있다는 것에 주목한다. 따라서, 본 발명의 재조합 CDV 바이러스 벡터는 재조합 CDV 항원, CDV 항원을 포함하는 불활성화 바이러스 조성물 또는 백신, 또는 CDV 항원을 발현하는 DNA 플라스미드 기재 조성물 또는 백신과 함께 임의의 순서로 투여될 수 있거나, 대안적으로는 제 1 조성물 및 제 2 조성물 모두로서 단독으로 사용될 수 있다.
포유동물인 표적 종에 대한 조성물의 용량 부피, 예를 들어, 바이러스 벡터 기재의 개 조성물, 예를 들어 비-폭스바이러스-바이러스-벡터 기재 조성물의 용량 부피는 일반적으로 약 0.1 내지 약 2.0 ㎖, 약 0.1 내지 약 1.0 ㎖, 약 0.5 ㎖ 내지 약 1.0 ㎖ 이다.
백신의 효능은 개와 같은 동물에 CDV 의 독성 균주를 챌린지하여 마지막 면역화 약 2 내지 4 주 후 시험할 수 있다. 상동 균주 및 이종 균주 모두, 백신의 효능을 시험하기 위해 챌린지하는데 사용된다. 상기 동물은 경구, IV 주사 또는 IC 접종으로 챌린지될 수 있다. 각각의 상이한 챌린지 균주 및 사용한 각 투여 경로에 대해서, 바이러스는 백신 접종하지 않은 동물에서의 임상적 증상을 유도하기에 충분히 높은 역가의 것이다. 챌린지 바이러스의 부피는 약 0.5 내지 2.0 ㎖ 이다. 동물은 임상적 징후 예컨대 결막염, 비염, 설사, 구토, 우울증, 탈수증, 고체온증, 폐렴, 운동 실조증, 근육간대경련, 감각 과민증, 마비, 부전마비, 발작, 안구 증상 (예컨대 각결막염, 맥락망막염) 및 시신경염에 대해 챌린지 후 21 내지 42 일 동안 관찰될 수 있다. 챌린지 동안 동물은 완전 혈구 측정 및 혈청학 검사 연구 (CDV 특이적 항체의 존재) 를 위해 채혈될 수 있다. 또한 PCR 을 소변, 눈물, 타액, 대변 및 혈액 샘플에 대해 실행할 수 있다.
프라임-부스트 프로토콜에서 사용한 본 발명의 재조합 항원 폴리펩티드를 포함하는 조성물은 약학적으로 또는 수의학적으로 허용가능한 비히클, 보조제, 희석제 또는 부형제 내에 함유된다. 본 발명의 프로토콜은 CDV 로부터 동물을 보호하고/하거나 감염된 동물에서의 질환 진행을 방지한다.
다양한 투여는 바람직하게는 1 내지 6 주 간격으로 실행된다. 바람직한 시간 간격은 3 내지 5 주, 임의로는 4 주이다. 한 구현예에 따라서, 연례 부스터 (annual booster) 가 또한 고려된다. 동물, 예를 들어 개는 최초 투여시 8 주령 이상일 수 있다.
본원의 개시물이 예로서 제공되며 본 발명이 이에 제한되지 않는다는 것이 당업자에 의해 이해될 것이다. 본원의 개시 및 당업계의 지식으로부터, 숙련자는 투여 수, 투여 경로, 및 각각의 주사 프로토콜에 사용할 용량을, 임의의 과도한 실험 없이 결정할 수 있다.
본 발명은 본 발명에 따라 제조된 유효량의 치료 조성물을 동물에게 1 회 이상 투여하는 것을 고려한다. 상기 동물은 수컷, 암컷, 임신한 암컷 및 신생아일 수 있다. 이러한 투여는 근육내 (IM), 피내 (ID) 또는 피하 (SC)주사 또는 비강내 또는 경구 투여를 포함하나 이에 제한되지 않는 다양한 경로를 통한 것일 수 있다. 본 발명에 따른 치료 조성물은 또한 주사 바늘 없는 장치 (예를 들어, Pigjet, Dermojet, Biojector, Avijet (Merial, GA, USA), Vetjet 또는 Vitajet 장치 (Bioject, Oregon, USA)) 에 의해 투여될 수 있다. 플라스미드 조성물을 투여하는 또다른 접근방식은 전기천공법을 사용하는 것이다 (예를 들어, Tollefsen et al., 2002; Tollefsen et al., 2003; Babiuk et al., 2002; PCT 출원 번호 WO99/01158 참조). 또다른 구현예에서, 치료 조성물은 유전자 총 (gene gun) 또는 금 입자 충격법 (gold particle bombardment) 에 의해 동물에게 전달된다. 유리한 구현예에서, 상기 동물은 개, 흰담비 또는 바다표범이다.
한 구현예에서, 본 발명은 표적 세포 내 CDV 항원 또는 에피토프의 전달 및 발현을 위한 치료적 유효량의 제형의 투여를 제공한다. 치료적 유효량의 결정은 당업자에 의한 일상적 실험이다. 한 구현예에서, 상기 제형은 CDV 항원 또는 에피토프를 발현하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터 및 약학적으로 또는 수의학적으로 허용가능한 담체, 비히클, 보조제 또는 부형제를 포함한다. 또다른 구현예에서, 약학적으로 또는 수의학적으로 허용가능한 담체, 비히클, 보조제 또는 부형제는 숙주 내 벡터 또는 단백질의 보존을 향상시키고/시키거나 트랜스펙션 또는 감염을 촉진시킨다.
한 구현예에서, 본 발명은 표적 세포 내 CDV HA 폴리펩티드 또는 항원 또는 에피토프의 전달 및 발현을 위한 치료적 유효량의 조성물의 투여를 제공한다. 치료적 유효량의 결정은 당업자에 의한 일상적 실험이다. 한 구현예에서, 상기 조성물은 CDV HA 폴리펩티드 또는 항원 또는 에피토프를 발현하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터 및 약학적으로 또는 수의학적으로 허용가능한 담체, 보조제, 비히클 또는 부형제를 포함한다. 또다른 구현예에서, 약학적으로 또는 수의학적으로 허용가능한 담체, 비히클, 보조제 또는 부형제는 벡터 또는 단백질의 보존을 향상시키고/시키거나 트랜스펙션 또는 감염을 촉진시킨다.
약학적으로 또는 수의학적으로 허용가능한 담체 또는 비히클 또는 부형제 또는 보조제는 당업자에게 잘 알려져 있다. 예를 들어, 약학적으로 또는 수의학적으로 허용가능한 담체 또는 비히클 또는 부형제 또는 보조제는 0.9% NaCl (예를 들어, 식염수) 용액 또는 인산염 완충액일 수 있다. 본 발명의 방법에 사용할 수 있는 다른 약학적으로 또는 수의학적으로 허용가능한 담체 또는 비히클 또는 부형제 또는 보조제는 폴리-(L-글루타메이트) 또는 폴리비닐피롤리돈을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 약학적으로 또는 수의학적으로 허용가능한 담체 또는 비히클 또는 부형제 또는 보조제는 벡터 (또는 본 발명의 벡터로부터 시험관내 발현된 단백질) 의 투여를 촉진하는 임의의 화합물 또는 화합물의 조합일 수 있고; 유리하게는, 담체, 비히클 또는 부형제 또는 보조제는 벡터 (또는 단백질) 의 보존을 향상시키고/시키거나 트랜스펙션을 촉진할 수 있다. 본원에서 용량 및 용량 부피는 일반적 설명에서 토의되며, 임의의 과다한 실험 없이 당업계에서의 지식과 함께 판독되는 본 개시물로부터 숙련자에 의해 또한 결정될 수 있다.
플라스미드에 유리하지만 독점적으로 적합한 것은 아닌, 제 4 급 암모늄 염을 함유하는 양이온성 지질은 하기 화학식을 갖는 것들이다:
Figure pct00001
[식 중,
R1 은 탄소수 12 내지 18 의 포화 또는 불포화 직쇄 지방족 라디칼이고,
R2 는 탄소수 2 또는 3 의 또다른 지방족 라디칼이고,
X 는 아민 또는 히드록실기, 예를 들어 DMRIE 임].
또다른 구현예에서 양이온성 지질은 중성 지질, 예를 들어 DOPE 와 결합할 수 있다.
이들 양이온성 지질 중에서, 유리하게는 중성 지질, 유리하게는 DOPE (디올레오일-포스파티딜-에탄올 아민; Behr, 1994) 와 결합하여 DMRIE-DOPE 를 형성하는 DMRIE (N-(2-히드록시에틸)-N,N-디메틸-2,3-비스(테트라데실옥시)-1-프로판 암모늄; WO96/34109) 가 바람직하다.
DOPE 가 존재하는 경우, DMRIE:DOPE 몰비는 유리하게는 약 95: 약 5 내지 약 5: 약 95, 보다 유리하게는 약 1: 약 1, 예를 들어, 1:1 이다.
또다른 구현예에서, 약학적으로 또는 수의학적으로 허용가능한 담체, 부형제, 비히클 또는 보조제는 유중수 유액일 수 있다. 적합한 유중수 유액의 예시는 하기를 함유하는, 4℃ 에서 안정하며 유체인 오일 기재 유중수 백신 유액을 포함한다: 6 내지 50 v/v % 의 항원-함유 수성상, 바람직하게는, 비-대사 오일 (예를 들어, 미네랄 오일 예컨대 파라핀 오일) 및/또는 대사 오일 (예를 들어, 식물성 오일, 또는 지방산, 폴리올 또는 알코올 에스테르) 을 총 합으로 또는 부분적으로 함유하는 12 내지 25 v/v %, 50 내지 94 v/v % 의 오일상, 0.2 내지 20 p/v % 의 계면활성제, 바람직하게는 3 내지 8 p/v %, 상기 계면활성제의 양은 총 합 또는 부분적이거나, 폴리글리세롤 에스테르와의 혼합물이며, 상기 폴리글리세롤 에스테르는 바람직하게는 폴리글리세롤 (폴리)리시놀레에이트, 또는 폴리옥시에틸렌 리신 오일 또는 수소화 폴리옥시에틸렌 리신 오일임. 유중수 유액에서 사용할 수 있는 계면활성제의 예시는 에톡실화 소르비탄 에스테르 (예를 들어, 폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노올레에이트 (Tween 80
Figure pct00002
), AppliChem, Inc., Cheshire, CT 에서 시판) 및 소르비탄 에스테르 (예를 들어, 소르비탄 모노올레에이트 (Span 80
Figure pct00003
), Sigma Aldrich, St. Louis, MO 에서 시판) 를 포함한다. 또한, 유중수 유액에 관해서는 US 6,919,084 를 참조한다. 일부 구현예에서, 항원-함유 수성상은 하나 이상의 완충제를 포함하는 식염수를 포함한다. 적합한 완충액의 예시는 인산완충식염수이다. 한 구현예에서, 유중수 유액은 수/유/수 (W/O/W) 삼중체 유액일 수 있다 (U.S. 6,358,500). 다른 적합한 유액의 예시는 U.S. 7,371,395 에 기재되어 있다.
본 발명에 따른 면역 조성물 및 백신은 하나 이상의 약학적으로 또는 수의학적으로 허용가능한 담체, 부형제, 비히클 또는 보조제를 포함하거나 이로 본질적으로 이루어질 수 있다. 본 발명의 실행에서 사용하기에 적합한 보조제는 (1) 아크릴산 또는 메타크릴산의 중합체, 말레산 무수물 및 알케닐 유도체 중합체, (2) 면역자극 서열 (ISS), 예컨대 하나 이상의 비-메틸화 CpG 단위체를 갖는 올리고데옥시리보뉴클레오티드 서열 (Klinman et al., 1996; WO98/16247), (3) 수중유 유액, 예컨대 ["Vaccine Design, The Subunit and Adjuvant Approach" published by M. Powell, M. Newman, Plenum Press 1995] 의 147 페이지에 기재된 SPT 유액, 및 동일 문헌의 183 페이지에 기재된 유액 MF59, (4) DDA 와 같은 제 4 급 암모늄염을 함유하는 양이온 지질, (5) 사이토카인, (6) 수산화알루미늄 또는 인산알루미늄, (7) 사포닌 또는 (8) 본 출원에 참조로 포함되며 인용된 임의 문헌에서 토의한 기타 보조제, 또는 (9) 이의 임의의 조합 또는 혼합물이다.
바이러스 벡터에 특히 적절한 수중유 유액 (3) 은 하기를 기재로 할 수 있다: 경질 액체 파라핀 오일 (유럽 약전 유형), 이소프레노이드 오일 예컨대 스쿠알란, 스쿠알렌, 알켄의 올리고머화로 인한 오일, 예를 들어 이소부텐 또는 데센, 직쇄 알킬기를 갖는 알코올 또는 산의 에스테르, 예컨대 식물성 오일, 에틸 올레에이트, 프로필렌 글리콜, 디(카프릴레이트/카프레이트), 글리세롤 트리(카프릴레이트/카프레이트) 및 프로필렌 글리콜 디올레에이트, 또는 분지형, 지방 알코올 또는 산의 에스테르, 특히 이소스테아르산 에스테르.
오일은 유화제와 조합으로 사용되어 유액을 형성한다. 상기 유화제는 비이온성 계면활성제, 예컨대: 한편으로는 소르비탄, 만니드 (예를 들어, 무수만니톨 올레에이트), 글리세롤, 폴리글리세롤 또는 프로필렌 글리콜 및 다른 한편으로는 올레산, 이소스테아르산, 리시놀레산 또는 히드록시스테아르산의 에스테르일 수 있으며, 상기 에스테르들은 임의로는 에톡실화되거나, 폴리옥시프로필렌-폴리옥시에틸렌 공중합체 블록, 예컨대 Pluronic, 예를 들어, L121 이다.
유형 (1) 보조제 중합체 중에서, 가교된 아크릴산 또는 메타크릴산의 중합체, 특히 폴리알코올 또는 당의 폴리알케닐 에테르에 의해 가교된 아크릴산 또는 메타크릴산의 중합체가 바람직하다. 이들 화합물은 카르보머라는 명칭으로 알려져 있다 (Pharmeuropa, vol. 8, no. 2, 1996 년 6 월). 당업자는 또한 3 개 이상의 히드록실기, 바람직하게는 8 개 이하의 히드록실기를 갖는 폴리히드록실 화합물에 의해 가교된 아크릴 중합체 (3 개 이상의 히드록실기의 수소 원자는 2 개 이상의 탄소 원자를 갖는 불포화, 지방족 라디칼에 의해 대체됨) 를 제공하는 U.S. 2,909,462 를 참조할 수 있다. 바람직한 라디칼은 탄소수 2 내지 4 의 것들, 예를 들어 비닐, 알릴 및 다른 에틸렌성 불포화기이다. 불포화 라디칼은 또한 다른 치환기, 예컨대 메틸을 함유할 수 있다. Carbopol (BF Goodrich, Ohio, USA) 의 이름으로 시판되는 제품이 특히 적합하다. 이들은 알릴 사카로오스 또는 알릴 펜타에리트리톨에 의해 가교된다. 이들 중에서, Carbopol 974P, 934P 및 971P 를 참조한다.
말레산 무수물-알케닐 유도체 공중합체에 관해, 직쇄 또는 가교된 에틸렌-말레산 무수물 공중합체이며 예를 들어 디비닐 에테르에 의해 가교된, EMA (Monsanto) 가 바람직하다.
구조에 관해서, 아크릴산 또는 메타크릴산 중합체 및 EMA 는 바람직하게는 하기 화학식을 갖는 기본적 단위체에 의해 형성된다:
Figure pct00004
[식 중:
동일하거나 상이할 수 있는 R1 및 R2 는 H 또는 CH3 을 나타내고,
x = 0 또는 1, 바람직하게는 x = 1 이고,
y = 1 또는 2 이며, x + y = 2 임].
EMA 에 대해서, x = 0 이고 y = 2 이고, 카르보머에 대해서 x = y = 1 이다.
이들 중합체는 물 또는 생리적 식염수 (20 g/ℓ NaCl) 에 가용성이며, 예를 들어 소다 (NaOH) 에 의해 pH 를 7.3 내지 7.4 로 조정하여, 발현 벡터(들) 가 혼입될 수 있는 보조제 용액이 제공될 수 있게 한다. 최종 면역 또는 백신 조성물 중의 중합체 농도는 약 0.01 내지 약 1.5% w/v, 약 0.05 내지 약 1% w/v, 및 약 0.1 내지 약 0.4% w/v 의 범위일 수 있다.
사이토카인(들) (5) 는 면역 또는 백신 조성물에서 단백질 형태로 존재할 수 있거나, 이의 면역원(들) 또는 에피토프(들) 와 함께 숙주에서 동시 발현될 수 있다. 이의 면역원(들) 또는 에피토프(들) 를 발현하는 것과 동일한 벡터에 의한, 또는 이의 별개의 벡터에 의한 사이토카인(들) 의 동시 발현이 바람직하다.
본 발명은 예를 들어 활성 성분을 유리하게는 함께, 및 보조제, 담체, 사이토카인 및/또는 희석제와 함께 혼합함으로써 이러한 조합 조성물을 제조하는 것을 이해한다.
본 발명에서 사용할 수 있는 사이토카인은 과립구 콜로니 자극 인자 (G-CSF), 과립구/대식세포 콜로니 자극 인자 (GM-CSF), 인터페론 α (IFNα), 인터페론 β (IFNβ), 인터페론 γ (IFNγ), 인터류킨-1α (IL-1α), 인터류킨-1β (IL-1β), 인터류킨-2 (IL-2), 인터류킨-3 (IL-3), 인터류킨-4 (IL-4), 인터류킨-5 (IL-5), 인터류킨-6 (IL-6), 인터류킨-7 (IL-7), 인터류킨-8 (IL-8), 인터류킨-9 (IL-9), 인터류킨-10 (IL-10), 인터류킨-11 (IL-11), 인터류킨-12 (IL-12), 종양 괴사 인자 α (TNFα), 종양 괴사 인자 β (TNFβ) 및 형질전환 성장 인자 β (TGFβ) 를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 사이토카인이 본 발명의 면역 또는 백신 조성물과 동시 투여되고/되거나 순차적으로 투여될 수 있다는 것이 이해된다. 따라서 예를 들어, 본 발명의 백신은 또한 적합한 사이토카인, 예를 들어 백신 접종할 숙주에 매치되거나, 여기서 면역 반응이 야기되는 사이토카인 (예를 들어, 개에게 투여되는 제제에 대한 개 사이토카인) 을 생체내 발현하는 외인성 핵산 분자를 함유할 수 있다.
이제 본 발명을, 하기 비제한적인 실시예를 통해 보다 더 설명할 것이다.
실시예
추가의 상술 없이, 당업계의 숙련자가, 전술하는 설명을 사용하여 최대한으로 본 발명을 실행할 수 있다고 여겨진다. 하기의 상세한 실시예는 단지 설명적인 것으로서 간주되며, 어떤 식으로도 전술한 개시물을 제한하지 않는다. 당업자는 반응물과 반응 조건 및 기술 모두에 관해 상기 절차로부터 적절한 변형을 즉시 인지할 것이다.
DNA 삽입물, 플라스미드 및 재조합 바이러스 또는 식물 벡터의 구축을, J. Sambrook et al . (Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 제 2 판, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York, 1989) 에 의해 기재된 표준 분자 생물학 기술을 사용하여 실행하였다.
실시예 1. CDV HA - pC5 H6 CDV HA 를 함유하는 플라스미드, pCXL1557.1 의 구축
코돈-최적화 CDV HA 유전자 (SEQ ID NO:1) (덴마크 CDV 균주로부터의) 를 함유하는 플라스미드를 EcoRV 및 XhoI 으로 소화시켰다. 전체 길이 코돈-최적화 CDV HA 유전자 및 백시니아 H6 프로모터의 3' 서열을 함유하는 1849 bp 단편을 겔 정제하였다. 플라스미드 pCXL148.2 (pC5 공여체 플라스미드, Merial 등록 상표 물질) 를 EcoRV 및 XhoI 으로 소화시켜, H6 프로모터의 5' 서열을 함유하는 49851 bp 벡터를 생성시켰다. 1849 bp 삽입물을 49851 bp 벡터에 라이게이션하여 pC5 H6 CDV HA (pCXL1557.1) 를 생성시켰다. 구축물을 서열분석하여 올바른 서열을 확인하였다. 도 3 에 플라스미드 pCXL1557.1 맵을 나타낸다.
실시예 2. 개 GM-CSF - pC3 H6p 개 GM-CSF 를 함유하는 플라스미드, pJSY2218.1 의 구축
코돈-최적화 개 GM-CSF 유전자를 함유하는 플라스미드를 NruI/XhoI 으로 소화시켰다. 생성된 개 GM-CSF DNA 단편을 단리하고 NruI/XhoI 소화된 pJY19131.1 (Merial 등록 상표 물질) 에 라이게이션하여, C3 암 (arm) 에 대한 반대 방향으로 발현 카세트 H6p (백시니아 H6 프로모터)-개 GM-CSF 를 함유하는 C3 공여체 플라스미드 pJSY2218.1 을 제작하였다. 플라스미드 pJSY2218.1 을 서열분석하고 올바른 서열을 갖는지를 확인하였다. 도 3 에 플라스미드 pJSY2218.1 맵을 나타낸다.
실시예 3. ALVAC 의 C5 유전자자리에 CDV 합성 HA 유전자를 함유하는 ALVAC 재조합체 (vCP2263) 의 생성 및 분석
A. vCP2263 의 생성
공여체 플라스미드 pCXL1557.1 은 코돈-최적화 개 CDV HA 유전자 (SEQ ID NO:1) 를 함유한다. 제 1 닭 배아 섬유아세포 (1°CEF) 를 시험관내 재조합에 사용하였다. 1°CEF 세포를, 1x 항생제/항진균제 (P/S/A/A, BRL/Gibco#15240-062) 의 존재 하에 4 mM 글루타민 (BRL/Gibco#25030-081) 및 1 mM 나트륨 피루베이트 (BRL/Gibco#11360-070) 가 보충된 10% FBS (JRH: γ-조사 # 12107-500M), DMEM (BRL/Gibco#11960-051 또는 11960-044) 에서 성장시켰다. 서양고추냉이 퍼옥시다아제 (HRP)-표지 CDV 합성 HA 특이적 프로브와의 플라크 하이브리드화를 재조합체 선별에 사용하였다.
FuGENE-6
Figure pct00005
시약 (Roche) 을 사용하여 12 ㎍ 의 NotI-선형화 공여체 플라스미드 pCXL1557.1 로 1°CEF 세포를 트랜스펙션하여, IVR (시험관내 재조합) 을 수행하였다. 트랜스펙션된 세포를 이후, 10 의 MOI (감염 다중도) (ALVAC 저장물, 6.3 x109 pfu/㎖) 에서 구제 바이러스 (rescue virus) 로서 ALVAC 로 감염시켰다. 24 시간 후, 트랜스펙션-감염된 세포를 수확하고, 초음파 처리하고 재조합 바이러스 스크리닝에 사용하였다. 재조합 플라크를, 제조사의 프로토콜에 따라 (Amersham Cat# RPN3001) 서양고추냉이 퍼옥시다아제 (HRP) 로 표지된 1232 bp 합성 HA 특이적 프로브를 사용하여 플라크 리프트 하이브리드화 방법 (plaque lift hybridization method) 을 기반으로 하여 스크리닝하였다. 4 회의 순차적인 플라크 정제 라운드 후에, vCP2263.1.2.1.1 및 vCP2263.6.1.1.1 로 지정한 재조합체를 생성시키고, HA 삽입물에 대해 100% 양성이며 빈 C5 부위에 대해 100% 음성인 것으로서 하이브리드화에 의해 확인하였다. 단일 플라크를 플라크 정제의 4 번째 라운드로부터 선별하고, 확장시켜 P1 (시스터 당 1 x T25 플라스크), P2 (시스터 당 1 x T75 플라스크) 및 P3 (vCP2263.1.2.1.1 에 대한 4 x 롤러 바틀) 저장물을 수득하여, vCP2263 을 증폭하였다. 롤러 바틀로부터의 감염 세포 배양 유체를 수확하고 농축하여 바이러스 저장물을 생성시켰다.
B. 게놈 분석
vCP2263.1.2.1.1 및 vCP2263.6.1.1.1 로부터의 게놈 DNA 를 추출하고, BamHI, HindIII 또는 PstI 으로 소화시키고, 0.8% 아가로오스 겔에서 시험하였다. 결과는 CDV 합성 HA 서열의 올바른 삽입을 밝혀내었다.
서던 블롯: BamHI, HindIII 또는 PstI 소화된 게놈 DNA 를 갖는 겔을 나일론 멤브레인에 옮기고, 합성 CDV HA 특이적 프로브로 프로브처리하여 서던 블롯 분석을 수행하였다. 모든 3 개의 소화물로부터의 단일 또는 이중 밴드가 예측된 크기에서 관찰되었는데: 1984 bp BamHI, 12294 bp HindIII 및 6465 및 12119 bp PstI (도 4 참조), 이는 CDV 합성 HA 가 C5 유전자자리에 올바르게 삽입된 것을 나타낸다.
합성 CDV HA 프로브 증폭용 프라이머:
Figure pct00006
C. 발현 분석
웨스턴 블롯: 1°CEF 세포를 MOI 10 에서 P2 저장물로 감염시키고, 37℃ 에서 25 시간 동안 인큐베이션하였다. 세포 및 배양 상청액을 이후 수확하였다. 샘플 단백질을 10% SDS-PAGE 겔에서 분리하고, Immobilon 나일론 멤브레인에 옮기고, 토끼 항-CDV 다중클론 항체 (토끼 A151 및 152 로부터의 풀 (pool) 혈청, 1/100 희석물) 로 프로브처리하였다. 퍼옥시다아제-컨쥬게이션된 당나귀 항-토끼 항혈청을 2 차 항체로서 사용하고, 루미놀 시약을 사용하여 밴드를 가시화하였다. vCP2263.1211 은 세포 상청액 분획물에서 73 kDa 에서 매우 약한 단일 밴드를 나타내었으나, CDV 특이적 밴드는 세포 펠렛 분획물에서 검출되지 않았다 (도 5 참조).
면역 플라크: 토끼 항-CDV 항체를 사용하여 면역플라크 검정에서 증명된 바와 같이, 집단의 동질성은 vCP2263.1.2.1.1 에 대해 100% 였다 (도 6 참조).
D. 서열 분석
P3 저장물 게놈 DNA 의 보다 상세한 분석을, CDV 합성 HA 삽입물 및 C5 유전자자리의 측면 암의 PCR 증폭 및 서열 분석에 의해 수행하였다. ALVAC 게놈 내 C5 유전자자리의 암 너머에 위치한 프라이머 7931DC 및 7932DC 를 사용하여 전체 C5L-CDV 합성 HA-C5R 단편을 증폭하였다. 결과는 ALVAC 의 C5L 및 C5R 및 CDV 합성 HA 의 서열이 올바르다는 것을 나타내었다.
PCR 증폭용 프라이머:
Figure pct00007
C5 암, H6 프로모터 및 CDV 합성 HA 를 함유하는 프라이머 7931DC 및 7932DC 에 측면 위치한 DNA 서열을 SEQ ID NO:14 로 지정하였다.
실시예 4. ALVAC 의 C3 유전자자리에 삽입된 H6p 합성 코돈 최적화 개 GM-CSF 유전자를 함유하는 ALVAC 재조합체의 생성 및 분석 - vCP2391
A. vCP2391 의 생성
공여체 플라스미드 pJSY2218.1 은 코돈-최적화 개 GM-CSF 유전자 (SEQ ID NO:3) 를 함유한다. 제 1 닭 배아 섬유아세포 (1°CEF) 를 시험관내 재조합에 사용하였다. 서양고추냉이 퍼옥시다아제 (HRP)-표지 개 GM-CSF 특이적 프로브와의 플라크 하이브리드화를 재조합체 선별에 사용하였다.
FuGENE-6
Figure pct00008
시약 (Roche) 을 사용하여 1°CEF 세포를 10 ㎍ 의 NotI-선형화 공여체 플라스미드 pJSY2218.1 로 트랜스펙션하여 IVR 을 수행하였다. 트랜스펙션된 세포를 이후, MOI 10 에서 구제 바이러스로서 ALVAC 로 감염시켰다. 24 시간 후, 트랜스펙션된 감염 세포를 수확하고, 초음파 처리하고 재조합 바이러스 스크리닝에 사용하였다. 재조합 플라크를, 제조사의 프로토콜에 따라 (Amersham Cat# RPN3001) 서양고추냉이 퍼옥시다아제 (HRP) 로 표지된 382 염기 개 GM-CSF 특이적 프로브를 사용하여 플라크 리프트 하이브리드화 방법을 기반으로 하여 스크리닝하였다. 2 회의 순차적인 플라크 정제 라운드 후에, vCP2391.4.4 로 지정한 재조합체를 생성시키고, 개 GM-CSF 삽입물에 대해 100% 양성이며 C3 ORF 에 대해 100% 음성인 것으로서 하이브리드화에 의해 확인하였다. 단일 플라크를 플라크 정제의 2 번째 라운드로부터 선별하고, 확장시켜 P1 (1 x T25 플라스크), P2 (1 x T75 플라스크) 및 P3 (6 x 롤러 바틀) 을 수득하였다.
B. 게놈 분석 - 서던 블롯
vCP2391 로부터 게놈 DNA 를 추출하고, BamHI, HindIII 또는 PstI 으로 소화시키고, 0.8% 아가로오스 겔에서 시험하였다. BamHI, HindIII 또는 PstI 소화된 게놈 DNA 를 갖는 겔을 나일론 멤브레인에 옮기고, 382 염기 caGM-CSF 프로브로 프로브처리하여 서던 블롯 분석을 수행하였다. 여러 밴드가 예측된 크기에서 관찰되었는데, 이는 caGM-CSF 유전자가 C3 유전자자리에 올바르게 삽입된 것을 나타낸다.
Figure pct00009
개 GM-CSF 프로브 증폭용 프라이머:
Figure pct00010
C. 발현 분석
웨스턴 블롯: 제 1 CEF 세포를 MOI 10 에서 vCP2391.4.4 의 P3 저장물로 감염시키고, 37℃ 에서 24 시간 동안 인큐베이션하였다. 모든 배양 상청액 및 세포를 이후 수확하였다. 세포 펠렛을 Roche 사제 리포터 유전자 검정 용해 완충액 (Reporter Gene Assay Lysis Buffer) (Cat. 1 897 675) 으로 용해하였다. 상청액 및 세포 용해물 모두, 항산화제를 첨가하여 NuPage
Figure pct00011
시스템으로 준비하였다. 단백질을 NuPage
Figure pct00012
10% 비스-트리스 프리-캐스트 겔에서 분리한 후, PVDF 멤브레인에 옮겼다. 정제된 염소 항-개 GM-CSF IgG (R&D Systems, Cat AF1546) 를 1 차 항체로서 사용하였다. 웨스턴 블롯으로, vCP2391.4.4 의 상청액으로부터 분비된 ~20kDa 의 주 단백질 및 ~17kDa 의 소수 단백질이 검출되었다 (도 7 및 9 참조). 도 9 는 미정제물 및 상청액에서의 GM-CSF 의 양호한 발현을 나타내었다.
D. 서열 분석
vCP2391.4.4 의 P3 저장물 게놈 DNA 의 보다 상세한 분석을, 개 GM-CSF 삽입물 및 C3 유전자자리의 측면 암의 PCR 증폭 및 서열 분석에 의해 수행하였다. ALVAC 게놈 내 C3 유전자자리의 암 너머에 위치한 프라이머 8103JY 및 8104JY 를 사용하여 전체 C3L-caGM-CSF-C3R 단편을 증폭하였다. 결과는 ALVAC 의 C3L 및 C3R 및 개 GM-CSF 삽입물의 서열이 올바르다는 것을 나타내었다 (SEQ ID NO: 19).
C3L-개 GM-CSF-C3R 카세트의 PCR 증폭용 프라이머:
Figure pct00013
실시예 5. vCP2263 의 C3 유전자자리에 삽입된 H6p 합성 코돈 최적화 개 GM-CSF 유전자를 함유하는 ALVAC 재조합체의 생성 및 분석 - vCP2392
ALVAC C5 H6p CDV (vCP2263.1.2.1.1) 를 모체 바이러스로서 사용하였다. 코돈-최적화 개 GM-CSF 유전자를 함유하는 pJSY2218.1 을 공여체 플라스미드로서 사용하였다. 제 1 닭 배아 섬유아세포 (1°CEF) 를 시험관내 재조합에 사용하였다. 서양고추냉이 퍼옥시다아제 (HRP)-표지 개 GM-CSF 특이적 프로브와의 플라크 하이브리드화를 재조합체 선별에 사용하였다.
FuGENE-6
Figure pct00014
시약 (Roche) 을 사용하여 1°CEF 세포를 10 ㎍ 의 NotI-선형화 공여체 플라스미드 pJSY2218.1 로 트랜스펙션하여 IVR 을 수행하였다. 트랜스펙션된 세포를 이후, MOI 10 에서 구제 바이러스로서 vCP2263.1.2.1.1 로 감염시켰다. 24 시간 후, 트랜스펙션된 감염 세포를 수확하고, 초음파 처리하고 재조합 바이러스 스크리닝에 사용하였다. 재조합 플라크를, 제조사의 프로토콜에 따라 (Amersham Cat# RPN3001) 서양고추냉이 퍼옥시다아제 (HRP) 로 표지된 382 염기 개 GM-CSF 특이적 프로브를 사용하여 플라크 리프트 하이브리드화 방법을 기반으로 하여 스크리닝하였다 (실시예 4). 4 회의 순차적인 플라크 정제 라운드 후에, vCP2392.5.3.1.1 로 지정한 재조합체를 생성시키고, 개 GM-CSF 삽입물에 대해 100% 양성이며 C3 ORF 에 대해 100% 음성인 것으로서 하이브리드화에 의해 확인하였다. 단일 플라크를 플라크 정제의 4 번째 라운드로부터 선별하고, 확장시켜 P1 (1 x T25 플라스크), P2 (1 x T75 플라스크) 및 P3 (6 x 롤러 바틀) 을 수득하였다.
A. 게놈 분석 - 서던 블롯
vCP2392 로부터 게놈 DNA 를 추출하고, BamHI, HindIII 또는 PstI 으로 소화시키고, 0.8% 아가로오스 겔에서 시험하였다. BamHI, HindIII 또는 PstI 소화된 게놈 DNA 를 갖는 겔을 나일론 멤브레인에 옮기고, 382 염기 개 GM-CSF 프로브로 프로브처리하여 서던 블롯 분석을 수행하였다 (실시예 4). 여러 밴드가 예측된 크기에서 관찰되었는데, 이는 개 GM-CSF 유전자가 C3 유전자자리에 올바르게 삽입된 것을 나타낸다.
Figure pct00015
B. 발현 분석
웨스턴 블롯: 제 1 CEF 세포를 MOI 10 에서 vCP2392.5.3.1.1 의 P3 저장물로 감염시키고, 37℃ 에서 24 시간 동안 인큐베이션하였다. 모든 배양 상청액 및 세포를 이후 수확하였다. 세포 펠렛을 Roche 사제 리포터 유전자 검정 용해 완충액 (Cat. 1 897 675) 으로 용해하였다. 상청액 및 세포 용해물 모두, 항산화제를 첨가하여 NuPage
Figure pct00016
시스템으로 준비하였다. 단백질을 NuPage
Figure pct00017
10% 비스-트리스 프리-캐스트 겔에서 분리한 후, PVDF 멤브레인에 옮겼다. 정제된 염소 항-개 GM-CSF IgG (R&D Systems, Cat AF1546) 를 1 차 항체로서 사용하였다. 웨스턴 블롯으로, vCP2392.5.3.1.1 의 상청액으로부터 분비된 ~20kDa 의 주 단백질 및 ~17kDa 의 소수 단백질이 검출되었다 (도 8 및 9 참조). CDV HA 발현 결과를 도 10 에 나타내었다. 결과는 vCP2392 를 갖는 CDV HA 단백질의 양호한 발현을 나타내었다.
C. 서열 분석
vCP2392.5.3.1.1 의 P3 저장물 게놈 DNA 의 보다 상세한 분석을, 개 GM-CSF 삽입물 및 C3 유전자자리의 측면 암의 PCR 증폭 및 서열 분석에 의해 수행하였다. ALVAC 게놈 내 C3 유전자자리의 암 너머에 위치한 프라이머 8103JY 및 8104JY (실시예 4 참조) 를 사용하여 전체 C3L-caGM-CSF-C3R 단편을 증폭하였다. 결과는 ALVAC 의 C3L 및 C3R 및 개 GM-CSF 삽입물의 서열이 올바르다는 것을 나타내었다.
실시예 6. 개에서의 챌린지에 의한, 재조합 카나리아폭스-개 CDV HA 및 개 GM-CSF (vCP2392) 와 재조합 카나리아폭스-개 CDV HA (vCP2263) 의 효능 비교
18 마리의 CDV 특이적 병원균-미포함 개를 사용하였다. 4 개월령의 수컷 및 암컷 개를 3 개 군으로 그룹화하고, 하기 표 1 에서 나타낸 바와 같이 백신 접종하고 샘플링하였다.
[표 1]
Figure pct00018
- SN: 혈청중화 (seroneutralization) 시험
- SLAM: 신호전달 림프구-활성화 분자
- CMI: 세포 매개 면역력
임상 검사를 다음의 일수에 수행하였다: (V1) 0, 0+4/5h, 1, 2, (V2) 28, 28+4/5h, 29, 30, 또는 모든 증상이 사라질 때까지. 임상적 모니터링은 개의 일반적 상태, 예컨대 직장 온도, 주사 부위 촉진시 통증, 국부적 종창, 국부적 열, 소양증 및 국부적 탈모를 모니터링하는 것을 포함하였다.
혈청학 검사용 플레인 (plain) 튜브에서의 샘플링을 다음의 일수에 수행하였다: 0, 13, 27, 35, 42, 56 및 70. 2 개 유형의 SN 을 수행하였다. vCP2392 및 vCP2263 에서 CDV HA 삽입물에 대해 이종인 CDV 균주 (BA5) 를 사용하였다. 결과를 도 11 에 나타내었다. 상기 결과는, A 군에서의 역가가 B 군에서의 역가보다 더 높다 (1 log 10) 는 것을 나타내었다 (D35, D42 및 D70 에서 각각 p=0.009, p=0.019 및 p=0.03). D42 에서의 B 군에서, 3 마리의 개가 0.8log10PD50 미만의 역가를 가졌다. vero SLAM 세포 및 CDV 균주 5804-GFP (vCP2392 및 vCP2263 에서의 CDV HA 삽입물에 대해 상동) 를 사용하는 2 번째 유형의 SN 을 수행하였다. 결과를 도 12 에 나타내었다. 상기 결과는 A 군 역가가 B 군 역가보다 높다는 것을 나타내었다. 상기 결과는 또한, B 군에서 2 마리의 개가 D70 에 0.48 의 역가를 가졌던 한편, A 군에서 모든 개가 0.72 이상의 혈청학적 역가를 가졌다는 것을 나타내었다.
CMI 모니터링용 헤파린화 튜브 (heparinated tube) 에서의 샘플링을 다음의 일수에 수행하였다: 13, 42 및 70. 핵감염된 (nucleofected) PBMC (말초 혈액 단핵 세포) 로의 PBMC 재-자극시 ELIspot 검정을 사용하여 IFNγ 의 생성을 모니터링하였다. 항원 특이적 IFNγ 생성 세포의 빈도를 계산하였다. 데이터를 도 16 에 나타내었다.
요약: vCP2392 (CDV HA + 개 GM-CSF) 는 vCP2263 (CDV HA) 에 비해 유의하게 높은 혈청학 검사 반응을 유도한다.
실시예 7. 다른 백신 항원의 면역원성에 대한 vCP2392 의 효과
상기 연구를, vCP2392 (CDV HA 및 개 GM-CSF 를 동시 발현함) 가 다른 백신 항원의 면역원성에 대해 긍정적 영향을 갖는지 여부를 조사하기 위해 설계하였다.
개질된 생 (live) 개 파르보바이러스 백신을 보통의 상업적 용량 미만인 용량 (2.6 log10 TCID50) 으로 사용하였다. 12 마리의 SPF (특이적 항원-미포함) 수컷 및 암컷 비글 강아지 (2-3 개월령) 를 2 개 군으로 무작위하게 배정하고, 하기 표 2 에서 나타낸 바와 같이 백신 접종하였다.
[표 2]
Figure pct00019
* 우측 어깨 (D0), 이후 좌측 어깨 (D28) 에 SC 경로에 의해, 2㎖ (vCP + MLV-CPV2 (PBS 중))
** 개질된 생 바이러스 - 개 파르보바이러스 유형 2 (MLV-CPV2)
임상적 모니터링은 개의 일반적 상태, 직장 온도, 주사 부위 촉진시 통증, 국부적 종창, 국부적 열 및 소양증을 모니터링하는 것을 포함하였다. 투여한 백신은 A 군 및 B 군 모두에서 개에 의해 잘 용인되었다. MLV-CPV2 와 조합된 vCP2392 (CDV HA + GM-CSF) 및 vCP2263 (CDV HA) 는 임상 연구 결과를 기반으로 안전한 것으로 고려되었다.
CPV2 및 CDV 에 대한 항체에 대해 혈청을 적정하였다 (혈청중화 시험에서의 상동 및 이종 CDV 사용).
도 17 은 CVP2 ELISA 결과를 나타낸다. A 군 및 B 군에서의 어떠한 동물도 연구 시작시 CPV2 에 대한 항체를 갖지 않았다. B 군에서, 오직 1 마리의 개에서만 백신 접종 후 항체 반응이 증가하였다. 이러한 반응은 D28 이후 검출되었다. A 군에서, 6 마리 중 4 마리의 개가 높은 항체 반응을 나타내었으며, 반응은 일부 개에서 빠르면 D7 에 검출되었다. 어떠한 개도 D28 에 2 차 주사 후 부스터 반응을 나타내지 않았다. 반응 동물의 발생률에 대한 통계적 분석은, 상기 군이 유의하게 상이하다는 것을 나타내었다 (p = 0.046). 상기 결과는, vCP2392 에 포함된 GM-CSF 삽입물이 CPV2 혈청학 검사에 대해 긍정적 효과를 갖는다는 것을 나타내었다.
도 18 은 CDV 상동 SN (혈청중화) 시험의 결과를 나타낸다. 백신 접종 전에, 어떠한 동물도 CDV 에 대한 항체를 갖지 않았다. A 군 및 B 군 역가는 D35 및 D56 에 유사하였다. 그러나 A 군에서의 5/6 개가 D28 에 항체를 가진 한편, B 군에서는 어떠한 개도 D28 에 항체를 갖지 않았다. D42 에 혈청학적 역가는 A 군에서 유의하게 높았다 (스튜던트 t-시험, p=0.01).
도 19 는 CDV 이종 SN 시험의 결과를 나타낸다. 백신 접종 전에, 어떠한 동물도 CDV 에 대한 항체를 갖지 않았다. A 군에서의 항체 역가는 제 35, 42 및 56 일에 B 군보다 더 높은 경향이 있었다. D56 에, A 군에서의 항체 역가는 B 군보다 유의하게 높았다 (윌콕슨, p=0.016).
상기 연구 결과는 B 군의 결과에서 나타낸 바와 같이, 1 마리의 개 당 MLV-CPV2 의 2.6 log10 TCID50 의 용량이 혈청변환을 부여할 수 있는 최소 용량 하에 있다는 것을 나타내었다. 흥미롭고 놀랍게도, A 군의 결과에서 나타낸 바와 같이, 카나리아폭스 벡터 (vCP2392) 내 GM-CSF 의 포함은 상이한 항체 반응을 유도하였다. 상기 결과는, 카나리아폭스 벡터 내 caGM-CSF 의 존재가 동일 부위에 주사한 또다른 백신 성분의 면역원성에 대해 효과를 가질 수 있다는 것을 입증하였다.
*****
본 발명의 상세한 바람직한 구현예에 기재된 바와 같이, 본 발명의 취지 또는 범주에서 벗어나지 않고 이의 많은 명백한 변형이 가능하기 때문에, 상기 단락에 의해 정의된 본 발명이 상기 상세한 설명에서 나타낸 특정 세부사항에 제한되지 않는다는 것이 이해된다.
본 출원 인용 문헌에서의 모든 인용 또는 참조 문헌, 및 본원의 모든 인용 또는 참조 문헌 ("본원에 인용된 문헌"), 및 본원의 인용 문헌에서의 모든 인용 또는 참조 문헌, 이와 함께 본원에서 또는 본원에 참조로 포함된 임의의 문헌에서 언급된 임의의 제품에 대한 제조사의 지시사항, 설명서, 제품 사양 및 제품 시트는 본원에 참조로 포함되며, 본 발명의 실행에서 이용될 수 있다.
SEQUENCE LISTING <110> Merial Limited AUDONNET, Jean-Christophe MINKE, Jules <120> RECOMBINANT CDV COMPOSITIONS AND USES THEREOF <130> MER 09-137 <150> 61/308,620 <151> 2010-02-26 <160> 51 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 1821 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> codon-optimized CDV HA gene <400> 1 atgctgagct accaggacaa agtgggcgcc ttctacaagg acaacgccag ggccaatagc 60 agcaagctga gcctggtgac cgaggagcag ggcggcagga gaccccccta cctgctgttc 120 gtgctgctga tccttcttgt gggcatcatg accctgctgg ccatcaccgg agtgagattc 180 caccaggtgt ccacctccaa catggagttc agccggctgc tgaaagagga catggagaag 240 agcgaggccg tgcaccacca ggtgatcgat gtgctgaccc ccctgttcaa gatcatcggc 300 gacgaagtgg gcctgagact gccccagaag ctgaacgaga tcaagcagtt catcctgcag 360 aaaaccaact tcttcaaccc caaccgggag ttcgacttca gagacctgca ctggtgcatc 420 aaccccccca gcaagatcaa agtgaacttc accaactact gcgacaccat cggcatcagg 480 aagagcatcg ccagcgccgt gaatcccatc ctgctgagcg ccctgagcgg cggcagaggc 540 gacatcttcc ccccctacag atgcagcggc gccaccacct ctgtgggcag agtgttccct 600 ctgagcgtgt ccctgagcat gagcctgatc agcaagacca gcgagatcac caacatgctg 660 accgccatca gcgacggcgt gtacggcaag acctatctgc tggtgcccga ctacatcgag 720 ggcgagttcg acacccagaa gatccgcgtg ttcgagatcg gcttcatcaa gcggtggctg 780 aacaacatgc ccctgctgca gaccaccaac tacatggtgc tgcccgagaa cagcaaggcc 840 aaagtgtgca ccatcgctgt gggcgagctg accctggcca gcctgtgcgt ggacgagagc 900 accgtgctgc tgtaccacga cagcaacggc agccaggacg gcatcctggt ggtgaccctg 960 ggcatcttcg gcgccacccc tatggaccag gtggaggaag tgatccccgt ggcccacccc 1020 agcgtggaga agatccacat caccaaccac cggggcttta tcaaggacag catcgccacc 1080 tggatggtgc ccgccctggt gtctgagaag caggaggagc agaagaactg cctggagagc 1140 gcctgccaga gaaagaccta ccccatgtgc aaccagacca gctgggagcc ctttggcggc 1200 ggacagctgc ccagctacgg cagactgacc ctgagcctgg accctagcat cgacctgcag 1260 ctgaacatca gcttcaccta cggccccgtg atcctgaacg gcgacggcat ggattactac 1320 ggcagcagcc tgagcgacag cggctggctg accatccctc ccaagaacgg cacagtgctg 1380 ggcctgatca acaaggcctc caggggcgac cagttcaccg tgatccctca cgtgctgacc 1440 ttcgccccca gagagagcag cggcaactgc tacctgccta tccagacctc ccagatcatg 1500 gacaaggacg tgctgacaga gagcaacctg gtggtgctgc ctacccagaa cttccggtac 1560 gtgatcgcca cctacgacat cagcagaggc gatcacgcca tcgtgtacta cgtgtacgac 1620 cccatccgga ccatcagcta cacatacccc ttccggctga ccaccaaggg cagacccgac 1680 ttcctgcgga tcgagtgctt tgtgtgggac gacgacctgt ggtgccacca gttctacaga 1740 ttcgaggccg acatcaccaa tagcaccacc tccgtggaga accttgtgag gatccggttc 1800 agctgcgaca gaagcaagcc c 1821 <210> 2 <211> 607 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> CDV HA protein encoded by codon-optimized gene (SEQ ID NO:1) <400> 2 Met Leu Ser Tyr Gln Asp Lys Val Gly Ala Phe Tyr Lys Asp Asn Ala 1 5 10 15 Arg Ala Asn Ser Ser Lys Leu Ser Leu Val Thr Glu Glu Gln Gly Gly 20 25 30 Arg Arg Pro Pro Tyr Leu Leu Phe Val Leu Leu Ile Leu Leu Val Gly 35 40 45 Ile Met Thr Leu Leu Ala Ile Thr Gly Val Arg Phe His Gln Val Ser 50 55 60 Thr Ser Asn Met Glu Phe Ser Arg Leu Leu Lys Glu Asp Met Glu Lys 65 70 75 80 Ser Glu Ala Val His His Gln Val Ile Asp Val Leu Thr Pro Leu Phe 85 90 95 Lys Ile Ile Gly Asp Glu Val Gly Leu Arg Leu Pro Gln Lys Leu Asn 100 105 110 Glu Ile Lys Gln Phe Ile Leu Gln Lys Thr Asn Phe Phe Asn Pro Asn 115 120 125 Arg Glu Phe Asp Phe Arg Asp Leu His Trp Cys Ile Asn Pro Pro Ser 130 135 140 Lys Ile Lys Val Asn Phe Thr Asn Tyr Cys Asp Thr Ile Gly Ile Arg 145 150 155 160 Lys Ser Ile Ala Ser Ala Val Asn Pro Ile Leu Leu Ser Ala Leu Ser 165 170 175 Gly Gly Arg Gly Asp Ile Phe Pro Pro Tyr Arg Cys Ser Gly Ala Thr 180 185 190 Thr Ser Val Gly Arg Val Phe Pro Leu Ser Val Ser Leu Ser Met Ser 195 200 205 Leu Ile Ser Lys Thr Ser Glu Ile Thr Asn Met Leu Thr Ala Ile Ser 210 215 220 Asp Gly Val Tyr Gly Lys Thr Tyr Leu Leu Val Pro Asp Tyr Ile Glu 225 230 235 240 Gly Glu Phe Asp Thr Gln Lys Ile Arg Val Phe Glu Ile Gly Phe Ile 245 250 255 Lys Arg Trp Leu Asn Asn Met Pro Leu Leu Gln Thr Thr Asn Tyr Met 260 265 270 Val Leu Pro Glu Asn Ser Lys Ala Lys Val Cys Thr Ile Ala Val Gly 275 280 285 Glu Leu Thr Leu Ala Ser Leu Cys Val Asp Glu Ser Thr Val Leu Leu 290 295 300 Tyr His Asp Ser Asn Gly Ser Gln Asp Gly Ile Leu Val Val Thr Leu 305 310 315 320 Gly Ile Phe Gly Ala Thr Pro Met Asp Gln Val Glu Glu Val Ile Pro 325 330 335 Val Ala His Pro Ser Val Glu Lys Ile His Ile Thr Asn His Arg Gly 340 345 350 Phe Ile Lys Asp Ser Ile Ala Thr Trp Met Val Pro Ala Leu Val Ser 355 360 365 Glu Lys Gln Glu Glu Gln Lys Asn Cys Leu Glu Ser Ala Cys Gln Arg 370 375 380 Lys Thr Tyr Pro Met Cys Asn Gln Thr Ser Trp Glu Pro Phe Gly Gly 385 390 395 400 Gly Gln Leu Pro Ser Tyr Gly Arg Leu Thr Leu Ser Leu Asp Pro Ser 405 410 415 Ile Asp Leu Gln Leu Asn Ile Ser Phe Thr Tyr Gly Pro Val Ile Leu 420 425 430 Asn Gly Asp Gly Met Asp Tyr Tyr Gly Ser Ser Leu Ser Asp Ser Gly 435 440 445 Trp Leu Thr Ile Pro Pro Lys Asn Gly Thr Val Leu Gly Leu Ile Asn 450 455 460 Lys Ala Ser Arg Gly Asp Gln Phe Thr Val Ile Pro His Val Leu Thr 465 470 475 480 Phe Ala Pro Arg Glu Ser Ser Gly Asn Cys Tyr Leu Pro Ile Gln Thr 485 490 495 Ser Gln Ile Met Asp Lys Asp Val Leu Thr Glu Ser Asn Leu Val Val 500 505 510 Leu Pro Thr Gln Asn Phe Arg Tyr Val Ile Ala Thr Tyr Asp Ile Ser 515 520 525 Arg Gly Asp His Ala Ile Val Tyr Tyr Val Tyr Asp Pro Ile Arg Thr 530 535 540 Ile Ser Tyr Thr Tyr Pro Phe Arg Leu Thr Thr Lys Gly Arg Pro Asp 545 550 555 560 Phe Leu Arg Ile Glu Cys Phe Val Trp Asp Asp Asp Leu Trp Cys His 565 570 575 Gln Phe Tyr Arg Phe Glu Ala Asp Ile Thr Asn Ser Thr Thr Ser Val 580 585 590 Glu Asn Leu Val Arg Ile Arg Phe Ser Cys Asp Arg Ser Lys Pro 595 600 605 <210> 3 <211> 435 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> codon-optimized canine GM-CSF gene <400> 3 atgtggctgc agaacctgct gttcctgggc accgtggtgt gcagcatcag cgcccccacc 60 agatccccca ccctggtgac ccggcccagc cagcacgtgg acgccatcca ggaagccctg 120 agcctgctga acaacagcaa cgacgtgacc gccgtgatga acaaggccgt gaaggtggtg 180 tccgaggtgt tcgaccccga gggccccacc tgcctggaaa cccggctgca gctgtacaaa 240 gagggcctgc agggcagcct gaccagcctg aagaaccccc tgaccatgat ggccaaccac 300 tacaagcagc actgcccccc cacccccgag agcccttgcg ccacccagaa catcaacttc 360 aagagcttca aagagaacct gaaggacttc ctgttcaaca tccccttcga ctgctggaag 420 cccgtgaaga agtga 435 <210> 4 <211> 144 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> canine GM-CSF protein encoded by codon-optimized gene (SEQ ID NO:3) <400> 4 Met Trp Leu Gln Asn Leu Leu Phe Leu Gly Thr Val Val Cys Ser Ile 1 5 10 15 Ser Ala Pro Thr Arg Ser Pro Thr Leu Val Thr Arg Pro Ser Gln His 20 25 30 Val Asp Ala Ile Gln Glu Ala Leu Ser Leu Leu Asn Asn Ser Asn Asp 35 40 45 Val Thr Ala Val Met Asn Lys Ala Val Lys Val Val Ser Glu Val Phe 50 55 60 Asp Pro Glu Gly Pro Thr Cys Leu Glu Thr Arg Leu Gln Leu Tyr Lys 65 70 75 80 Glu Gly Leu Gln Gly Ser Leu Thr Ser Leu Lys Asn Pro Leu Thr Met 85 90 95 Met Ala Asn His Tyr Lys Gln His Cys Pro Pro Thr Pro Glu Ser Pro 100 105 110 Cys Ala Thr Gln Asn Ile Asn Phe Lys Ser Phe Lys Glu Asn Leu Lys 115 120 125 Asp Phe Leu Phe Asn Ile Pro Phe Asp Cys Trp Lys Pro Val Lys Lys 130 135 140 <210> 5 <211> 604 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> CDV HA protein from vCP258 <400> 5 Met Leu Pro Tyr Gln Asp Lys Val Gly Ala Phe Tyr Lys Asp Asn Ala 1 5 10 15 Arg Ala Asn Ser Thr Lys Leu Ser Leu Val Thr Glu Gly His Gly Gly 20 25 30 Arg Arg Pro Pro Tyr Leu Leu Phe Val Leu Leu Ile Leu Leu Val Gly 35 40 45 Ile Leu Ala Leu Leu Ala Ile Thr Gly Val Arg Phe His Gln Val Ser 50 55 60 Thr Ser Asn Met Glu Phe Ser Arg Leu Leu Lys Glu Asp Met Glu Lys 65 70 75 80 Ser Glu Ala Val His His Gln Val Ile Asp Val Leu Thr Pro Leu Phe 85 90 95 Lys Ile Ile Gly Asp Glu Ile Gly Leu Arg Leu Pro Gln Lys Leu Asn 100 105 110 Glu Ile Lys Gln Phe Ile Leu Gln Lys Thr Asn Phe Phe Asn Pro Asn 115 120 125 Arg Glu Phe Asp Phe Arg Asp Leu His Trp Cys Ile Asn Pro Pro Ser 130 135 140 Thr Val Lys Val Asn Phe Thr Asn Tyr Cys Glu Ser Ile Gly Ile Arg 145 150 155 160 Lys Ala Ile Ala Ser Ala Ala Asn Pro Ile Leu Leu Ser Ala Leu Ser 165 170 175 Gly Gly Arg Gly Asp Ile Phe Pro Pro His Arg Cys Ser Gly Ala Thr 180 185 190 Thr Ser Val Gly Lys Val Phe Pro Leu Ser Val Ser Leu Ser Met Ser 195 200 205 Leu Ile Ser Arg Thr Ser Glu Val Ile Asn Met Leu Thr Ala Ile Ser 210 215 220 Asp Gly Val Tyr Gly Lys Thr Tyr Leu Leu Val Pro Asp Asp Ile Glu 225 230 235 240 Arg Glu Phe Asp Thr Arg Glu Ile Arg Val Phe Glu Ile Gly Phe Ile 245 250 255 Lys Arg Trp Leu Asn Asp Met Pro Leu Leu Gln Thr Thr Asn Tyr Met 260 265 270 Val Leu Pro Lys Asn Ser Lys Ala Lys Val Cys Thr Ile Ala Val Gly 275 280 285 Glu Leu Thr Leu Ala Ser Leu Cys Val Glu Glu Ser Thr Val Leu Leu 290 295 300 Tyr His Asp Ser Ser Gly Ser Gln Asp Gly Ile Leu Val Val Thr Leu 305 310 315 320 Gly Ile Phe Trp Ala Thr Pro Met Asp His Ile Glu Glu Val Ile Pro 325 330 335 Val Ala His Pro Ser Met Lys Lys Ile His Ile Thr Asn His Arg Gly 340 345 350 Phe Ile Lys Asp Ser Ile Ala Thr Trp Met Val Pro Ala Leu Ala Ser 355 360 365 Glu Lys Gln Glu Glu Gln Lys Gly Cys Leu Glu Ser Ala Cys Gln Arg 370 375 380 Lys Thr Tyr Pro Met Cys Asn Gln Ala Ser Trp Glu Pro Phe Gly Gly 385 390 395 400 Arg Gln Leu Pro Ser Tyr Gly Arg Leu Thr Leu Pro Leu Asp Ala Ser 405 410 415 Val Asp Leu Gln Leu Asn Ile Ser Phe Thr Tyr Gly Pro Val Ile Leu 420 425 430 Asn Gly Asp Gly Met Asp Tyr Tyr Glu Ser Pro Leu Leu Asn Ser Gly 435 440 445 Trp Leu Thr Ile Pro Pro Lys Asp Gly Thr Ile Ser Gly Leu Ile Asn 450 455 460 Lys Ala Gly Arg Gly Asp Gln Phe Thr Val Leu Pro His Val Leu Thr 465 470 475 480 Phe Ala Pro Arg Glu Ser Ser Gly Asn Cys Tyr Leu Pro Ile Gln Thr 485 490 495 Ser Gln Ile Arg Asp Arg Asp Val Leu Ile Glu Ser Asn Ile Val Val 500 505 510 Leu Pro Thr Gln Ser Ile Arg Tyr Val Ile Ala Thr Tyr Asp Ile Ser 515 520 525 Arg Ser Asp His Ala Ile Val Tyr Tyr Val Tyr Asp Pro Ile Arg Thr 530 535 540 Ile Ser Tyr Thr His Pro Phe Arg Leu Thr Thr Lys Gly Arg Pro Asp 545 550 555 560 Phe Leu Arg Ile Glu Cys Phe Val Trp Asp Asp Asn Leu Trp Cys His 565 570 575 Gln Phe Tyr Arg Phe Glu Ala Asp Ile Ala Asn Ser Thr Thr Ser Val 580 585 590 Glu Asn Leu Val Arg Ile Arg Phe Ser Cys Asn Arg 595 600 <210> 6 <211> 4140 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> part of pCXL1557.1 containing arms and insert <220> <221> misc_feature <222> (43)..(1578) <223> this is the C5L region <220> <221> promoter <222> (1676)..(1799) <223> this is the H6 promoter region <220> <221> CDS <222> (1800)..(3620) <223> this is the CDV-HA coding region <220> <221> misc_feature <222> (3677)..(4081) <223> this is the C5R region <400> 6 ggaaacagct atgaccatga ttacgaattg cggccgcaat tctgaatgtt aaatgttata 60 ctttggatga agctataaat atgcattgga aaaataatcc atttaaagaa aggattcaaa 120 tactacaaaa cctaagcgat aatatgttaa ctaagcttat tcttaacgac gctttaaata 180 tacacaaata aacataattt ttgtataacc taacaaataa ctaaaacata aaaataataa 240 aaggaaatgt aatatcgtaa ttattttact caggaatggg gttaaatatt tatatcacgt 300 gtatatctat actgttatcg tatactcttt acaattacta ttacgaatat gcaagagata 360 ataagattac gtatttaaga gaatcttgtc atgataattg ggtacgacat agtgataaat 420 gctatttcgc atcgttacat aaagtcagtt ggaaagatgg atttgacaga tgtaacttaa 480 taggtgcaaa aatgttaaat aacagcattc tatcggaaga taggatacca gttatattat 540 acaaaaatca ctggttggat aaaacagatt ctgcaatatt cgtaaaagat gaagattact 600 gcgaatttgt aaactatgac aataaaaagc catttatctc aacgacatcg tgtaattctt 660 ccatgtttta tgtatgtgtt tcagatatta tgagattact ataaactttt tgtatactta 720 tattccgtaa actatattaa tcatgaagaa aatgaaaaag tatagaagct gttcacgagc 780 ggttgttgaa aacaacaaaa ttatacattc aagatggctt acatatacgt ctgtgaggct 840 atcatggata atgacaatgc atctctaaat aggtttttgg acaatggatt cgaccctaac 900 acggaatatg gtactctaca atctcctctt gaaatggctg taatgttcaa gaataccgag 960 gctataaaaa tcttgatgag gtatggagct aaacctgtag ttactgaatg cacaacttct 1020 tgtctgcatg atgcggtgtt gagagacgac tacaaaatag tgaaagatct gttgaagaat 1080 aactatgtaa acaatgttct ttacagcgga ggctttactc ctttgtgttt ggcagcttac 1140 cttaacaaag ttaatttggt taaacttcta ttggctcatt cggcggatgt agatatttca 1200 aacacggatc ggttaactcc tctacatata gccgtatcaa ataaaaattt aacaatggtt 1260 aaacttctat tgaacaaagg tgctgatact gacttgctgg ataacatggg acgtactcct 1320 ttaatgatcg ctgtacaatc tggaaatatt gaaatatgta gcacactact taaaaaaaat 1380 aaaatgtcca gaactgggaa aaattgatct tgccagctgt aattcatggt agaaaagaag 1440 tgctcaggct acttttcaac aaaggagcag atgtaaacta catctttgaa agaaatggaa 1500 aatcatatac tgttttggaa ttgattaaag aaagttactc tgagacacaa aagaggtagc 1560 tgaagtggta ctctcaaagg tacgtgacta attagctata aaaaggatcc gggttaatta 1620 attagtcatc aggcagggcg agaacgagac tatctgctcg ttaattaatt agagcttctt 1680 tattctatac ttaaaaagtg aaaataaata caaaggttct tgagggttgt gttaaattga 1740 aagcgagaaa taatcataaa ttatttcatt atcgcgatat ccgttaagtt tgtatcgtaa 1800 tgctgagcta ccaggacaaa gtgggcgcct tctacaagga caacgccagg gccaatagca 1860 gcaagctgag cctggtgacc gaggagcagg gcggcaggag acccccctac ctgctgttcg 1920 tgctgctgat ccttcttgtg ggcatcatga ccctgctggc catcaccgga gtgagattcc 1980 accaggtgtc cacctccaac atggagttca gccggctgct gaaagaggac atggagaaga 2040 gcgaggccgt gcaccaccag gtgatcgatg tgctgacccc cctgttcaag atcatcggcg 2100 acgaagtggg cctgagactg ccccagaagc tgaacgagat caagcagttc atcctgcaga 2160 aaaccaactt cttcaacccc aaccgggagt tcgacttcag agacctgcac tggtgcatca 2220 acccccccag caagatcaaa gtgaacttca ccaactactg cgacaccatc ggcatcagga 2280 agagcatcgc cagcgccgtg aatcccatcc tgctgagcgc cctgagcggc ggcagaggcg 2340 acatcttccc cccctacaga tgcagcggcg ccaccacctc tgtgggcaga gtgttccctc 2400 tgagcgtgtc cctgagcatg agcctgatca gcaagaccag cgagatcacc aacatgctga 2460 ccgccatcag cgacggcgtg tacggcaaga cctatctgct ggtgcccgac tacatcgagg 2520 gcgagttcga cacccagaag atccgcgtgt tcgagatcgg cttcatcaag cggtggctga 2580 acaacatgcc cctgctgcag accaccaact acatggtgct gcccgagaac agcaaggcca 2640 aagtgtgcac catcgctgtg ggcgagctga ccctggccag cctgtgcgtg gacgagagca 2700 ccgtgctgct gtaccacgac agcaacggca gccaggacgg catcctggtg gtgaccctgg 2760 gcatcttcgg cgccacccct atggaccagg tggaggaagt gatccccgtg gcccacccca 2820 gcgtggagaa gatccacatc accaaccacc ggggctttat caaggacagc atcgccacct 2880 ggatggtgcc cgccctggtg tctgagaagc aggaggagca gaagaactgc ctggagagcg 2940 cctgccagag aaagacctac cccatgtgca accagaccag ctgggagccc tttggcggcg 3000 gacagctgcc cagctacggc agactgaccc tgagcctgga ccctagcatc gacctgcagc 3060 tgaacatcag cttcacctac ggccccgtga tcctgaacgg cgacggcatg gattactacg 3120 gcagcagcct gagcgacagc ggctggctga ccatccctcc caagaacggc acagtgctgg 3180 gcctgatcaa caaggcctcc aggggcgacc agttcaccgt gatccctcac gtgctgacct 3240 tcgcccccag agagagcagc ggcaactgct acctgcctat ccagacctcc cagatcatgg 3300 acaaggacgt gctgacagag agcaacctgg tggtgctgcc tacccagaac ttccggtacg 3360 tgatcgccac ctacgacatc agcagaggcg atcacgccat cgtgtactac gtgtacgacc 3420 ccatccggac catcagctac acatacccct tccggctgac caccaagggc agacccgact 3480 tcctgcggat cgagtgcttt gtgtgggacg acgacctgtg gtgccaccag ttctacagat 3540 tcgaggccga catcaccaat agcaccacct ccgtggagaa ccttgtgagg atccggttca 3600 gctgcgacag aagcaagccc tgatagctcg agtctagaat cgatcccggg tttttatgac 3660 tagttaatca cggccgctta taaagatcta aaatgcataa tttctaaata atgaaaaaaa 3720 gtacatcatg agcaacgcgt tagtatattt tacaatggag attaacgctc tataccgttc 3780 tatgtttatt gattcagatg atgttttaga aaagaaagtt attgaatatg aaaactttaa 3840 tgaagatgaa gatgacgacg atgattattg ttgtaaatct gttttagatg aagaagatga 3900 cgcgctaaag tatactatgg ttacaaagta taagtctata ctactaatgg cgacttgtgc 3960 aagaaggtat agtatagtga aaatgttgtt agattatgat tatgaaaaac caaataaatc 4020 agatccatat ctaaaggtat ctcctttgca cataatttca tctattccta gtttagaata 4080 cctgcagcca agcttggcac tggccgtcgt tttacaacgt cgtgactggg aaaaccctgg 4140 <210> 7 <211> 6700 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> pCXL1557.1 plasmid entire sequence <400> 7 acatatagcc gtatcaaata aaaatttaac aatggttaaa cttctattga acaaaggtgc 60 tgatactgac ttgctggata acatgggacg tactccttta atgatcgctg tacaatctgg 120 aaatattgaa atatgtagca cactacttaa aaaaaataaa atgtccagaa ctgggaaaaa 180 ttgatcttgc cagctgtaat tcatggtaga aaagaagtgc tcaggctact tttcaacaaa 240 ggagcagatg taaactacat ctttgaaaga aatggaaaat catatactgt tttggaattg 300 attaaagaaa gttactctga gacacaaaag aggtagctga agtggtactc tcaaaggtac 360 gtgactaatt agctataaaa aggatccggg ttaattaatt agtcatcagg cagggcgaga 420 acgagactat ctgctcgtta attaattaga gcttctttat tctatactta aaaagtgaaa 480 ataaatacaa aggttcttga gggttgtgtt aaattgaaag cgagaaataa tcataaatta 540 tttcattatc gcgatatccg ttaagtttgt atcgtaatgc tgagctacca ggacaaagtg 600 ggcgccttct acaaggacaa cgccagggcc aatagcagca agctgagcct ggtgaccgag 660 gagcagggcg gcaggagacc cccctacctg ctgttcgtgc tgctgatcct tcttgtgggc 720 atcatgaccc tgctggccat caccggagtg agattccacc aggtgtccac ctccaacatg 780 gagttcagcc ggctgctgaa agaggacatg gagaagagcg aggccgtgca ccaccaggtg 840 atcgatgtgc tgacccccct gttcaagatc atcggcgacg aagtgggcct gagactgccc 900 cagaagctga acgagatcaa gcagttcatc ctgcagaaaa ccaacttctt caaccccaac 960 cgggagttcg acttcagaga cctgcactgg tgcatcaacc cccccagcaa gatcaaagtg 1020 aacttcacca actactgcga caccatcggc atcaggaaga gcatcgccag cgccgtgaat 1080 cccatcctgc tgagcgccct gagcggcggc agaggcgaca tcttcccccc ctacagatgc 1140 agcggcgcca ccacctctgt gggcagagtg ttccctctga gcgtgtccct gagcatgagc 1200 ctgatcagca agaccagcga gatcaccaac atgctgaccg ccatcagcga cggcgtgtac 1260 ggcaagacct atctgctggt gcccgactac atcgagggcg agttcgacac ccagaagatc 1320 cgcgtgttcg agatcggctt catcaagcgg tggctgaaca acatgcccct gctgcagacc 1380 accaactaca tggtgctgcc cgagaacagc aaggccaaag tgtgcaccat cgctgtgggc 1440 gagctgaccc tggccagcct gtgcgtggac gagagcaccg tgctgctgta ccacgacagc 1500 aacggcagcc aggacggcat cctggtggtg accctgggca tcttcggcgc cacccctatg 1560 gaccaggtgg aggaagtgat ccccgtggcc caccccagcg tggagaagat ccacatcacc 1620 aaccaccggg gctttatcaa ggacagcatc gccacctgga tggtgcccgc cctggtgtct 1680 gagaagcagg aggagcagaa gaactgcctg gagagcgcct gccagagaaa gacctacccc 1740 atgtgcaacc agaccagctg ggagcccttt ggcggcggac agctgcccag ctacggcaga 1800 ctgaccctga gcctggaccc tagcatcgac ctgcagctga acatcagctt cacctacggc 1860 cccgtgatcc tgaacggcga cggcatggat tactacggca gcagcctgag cgacagcggc 1920 tggctgacca tccctcccaa gaacggcaca gtgctgggcc tgatcaacaa ggcctccagg 1980 ggcgaccagt tcaccgtgat ccctcacgtg ctgaccttcg cccccagaga gagcagcggc 2040 aactgctacc tgcctatcca gacctcccag atcatggaca aggacgtgct gacagagagc 2100 aacctggtgg tgctgcctac ccagaacttc cggtacgtga tcgccaccta cgacatcagc 2160 agaggcgatc acgccatcgt gtactacgtg tacgacccca tccggaccat cagctacaca 2220 taccccttcc ggctgaccac caagggcaga cccgacttcc tgcggatcga gtgctttgtg 2280 tgggacgacg acctgtggtg ccaccagttc tacagattcg aggccgacat caccaatagc 2340 accacctccg tggagaacct tgtgaggatc cggttcagct gcgacagaag caagccctga 2400 tagctcgagt ctagaatcga tcccgggttt ttatgactag ttaatcacgg ccgcttataa 2460 agatctaaaa tgcataattt ctaaataatg aaaaaaagta catcatgagc aacgcgttag 2520 tatattttac aatggagatt aacgctctat accgttctat gtttattgat tcagatgatg 2580 ttttagaaaa gaaagttatt gaatatgaaa actttaatga agatgaagat gacgacgatg 2640 attattgttg taaatctgtt ttagatgaag aagatgacgc gctaaagtat actatggtta 2700 caaagtataa gtctatacta ctaatggcga cttgtgcaag aaggtatagt atagtgaaaa 2760 tgttgttaga ttatgattat gaaaaaccaa ataaatcaga tccatatcta aaggtatctc 2820 ctttgcacat aatttcatct attcctagtt tagaatacct gcagccaagc ttggcactgg 2880 ccgtcgtttt acaacgtcgt gactgggaaa accctggcgt tacccaactt aatcgccttg 2940 cagcacatcc ccctttcgcc agctggcgta atagcgaaga ggcccgcacc gatcgccctt 3000 cccaacagtt gcgcagcctg aatggcgaat ggcgcctgat gcggtatttt ctccttacgc 3060 atctgtgcgg tatttcacac cgcatatggt gcactctcag tacaatctgc tctgatgccg 3120 catagttaag ccagccccga cacccgccaa cacccgctga cgcgccctga cgggcttgtc 3180 tgctcccggc atccgcttac agacaagctg tgaccgtctc cgggagctgc atgtgtcaga 3240 ggttttcacc gtcatcaccg aaacgcgcga gacgaaaggg cctcgtgata cgcctatttt 3300 tataggttaa tgtcatgata ataatggttt cttagacgtc aggtggcact tttcggggaa 3360 atgtgcgcgg aacccctatt tgtttatttt tctaaataca ttcaaatatg tatccgctca 3420 tgagacaata accctgataa atgcttcaat aatattgaaa aaggaagagt atgagtattc 3480 aacatttccg tgtcgccctt attccctttt ttgcggcatt ttgccttcct gtttttgctc 3540 acccagaaac gctggtgaaa gtaaaagatg ctgaagatca gttgggtgca cgagtgggtt 3600 acatcgaact ggatctcaac agcggtaaga tccttgagag ttttcgcccc gaagaacgtt 3660 ttccaatgat gagcactttt aaagttctgc tatgtggcgc ggtattatcc cgtattgacg 3720 ccgggcaaga gcaactcggt cgccgcatac actattctca gaatgacttg gttgagtact 3780 caccagtcac agaaaagcat cttacggatg gcatgacagt aagagaatta tgcagtgctg 3840 ccataaccat gagtgataac actgcggcca acttacttct gacaacgatc ggaggaccga 3900 aggagctaac cgcttttttg cacaacatgg gggatcatgt aactcgcctt gatcgttggg 3960 aaccggagct gaatgaagcc ataccaaacg acgagcgtga caccacgatg cctgtagcaa 4020 tggcaacaac gttgcgcaaa ctattaactg gcgaactact tactctagct tcccggcaac 4080 aattaataga ctggatggag gcggataaag ttgcaggacc acttctgcgc tcggcccttc 4140 cggctggctg gtttattgct gataaatctg gagccggtga gcgtgggtct cgcggtatca 4200 ttgcagcact ggggccagat ggtaagccct cccgtatcgt agttatctac acgacgggga 4260 gtcaggcaac tatggatgaa cgaaatagac agatcgctga gataggtgcc tcactgatta 4320 agcattggta actgtcagac caagtttact catatatact ttagattgat ttaaaacttc 4380 atttttaatt taaaaggatc taggtgaaga tcctttttga taatctcatg accaaaatcc 4440 cttaacgtga gttttcgttc cactgagcgt cagaccccgt agaaaagatc aaaggatctt 4500 cttgagatcc tttttttctg cgcgtaatct gctgcttgca aacaaaaaaa ccaccgctac 4560 cagcggtggt ttgtttgccg gatcaagagc taccaactct ttttccgaag gtaactggct 4620 tcagcagagc gcagatacca aatactgtcc ttctagtgta gccgtagtta ggccaccact 4680 tcaagaactc tgtagcaccg cctacatacc tcgctctgct aatcctgtta ccagtggctg 4740 ctgccagtgg cgataagtcg tgtcttaccg ggttggactc aagacgatag ttaccggata 4800 aggcgcagcg gtcgggctga acggggggtt cgtgcacaca gcccagcttg gagcgaacga 4860 cctacaccga actgagatac ctacagcgtg agctatgaga aagcgccacg cttcccgaag 4920 ggagaaaggc ggacaggtat ccggtaagcg gcagggtcgg aacaggagag cgcacgaggg 4980 agcttccagg gggaaacgcc tggtatcttt atagtcctgt cgggtttcgc cacctctgac 5040 ttgagcgtcg atttttgtga tgctcgtcag gggggcggag cctatggaaa aacgccagca 5100 acgcggcctt tttacggttc ctggcctttt gctggccttt tgctcacatg ttctttcctg 5160 cgttatcccc tgattctgtg gataaccgta ttaccgcctt tgagtgagct gataccgctc 5220 gccgcagccg aacgaccgag cgcagcgagt cagtgagcga ggaagcggaa gagcgcccaa 5280 tacgcaaacc gcctctcccc gcgcgttggc cgattcatta atgcagctgg cacgacaggt 5340 ttcccgactg gaaagcgggc agtgagcgca acgcaattaa tgtgagttag ctcactcatt 5400 aggcacccca ggctttacac tttatgcttc cggctcgtat gttgtgtgga attgtgagcg 5460 gataacaatt tcacacagga aacagctatg accatgatta cgaattgcgg ccgcaattct 5520 gaatgttaaa tgttatactt tggatgaagc tataaatatg cattggaaaa ataatccatt 5580 taaagaaagg attcaaatac tacaaaacct aagcgataat atgttaacta agcttattct 5640 taacgacgct ttaaatatac acaaataaac ataatttttg tataacctaa caaataacta 5700 aaacataaaa ataataaaag gaaatgtaat atcgtaatta ttttactcag gaatggggtt 5760 aaatatttat atcacgtgta tatctatact gttatcgtat actctttaca attactatta 5820 cgaatatgca agagataata agattacgta tttaagagaa tcttgtcatg ataattgggt 5880 acgacatagt gataaatgct atttcgcatc gttacataaa gtcagttgga aagatggatt 5940 tgacagatgt aacttaatag gtgcaaaaat gttaaataac agcattctat cggaagatag 6000 gataccagtt atattataca aaaatcactg gttggataaa acagattctg caatattcgt 6060 aaaagatgaa gattactgcg aatttgtaaa ctatgacaat aaaaagccat ttatctcaac 6120 gacatcgtgt aattcttcca tgttttatgt atgtgtttca gatattatga gattactata 6180 aactttttgt atacttatat tccgtaaact atattaatca tgaagaaaat gaaaaagtat 6240 agaagctgtt cacgagcggt tgttgaaaac aacaaaatta tacattcaag atggcttaca 6300 tatacgtctg tgaggctatc atggataatg acaatgcatc tctaaatagg tttttggaca 6360 atggattcga ccctaacacg gaatatggta ctctacaatc tcctcttgaa atggctgtaa 6420 tgttcaagaa taccgaggct ataaaaatct tgatgaggta tggagctaaa cctgtagtta 6480 ctgaatgcac aacttcttgt ctgcatgatg cggtgttgag agacgactac aaaatagtga 6540 aagatctgtt gaagaataac tatgtaaaca atgttcttta cagcggaggc tttactcctt 6600 tgtgtttggc agcttacctt aacaaagtta atttggttaa acttctattg gctcattcgg 6660 cggatgtaga tatttcaaac acggatcggt taactcctct 6700 <210> 8 <211> 4193 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> pJSY2218.1 seq containing arms and insert <400> 8 ctttatacta ctgggttaca acagctggtg ataacagaat gtaaatcatt attacttaat 60 agttccatta ttatatgttt gatatctata ggtaacctac ctattattcc tagattctta 120 ctctctttta cagctttaac tattagctga tgtctatgaa aagctaatga tttatttttc 180 cgtattaatt ccctatatat acgtatacat gcaggtatct tattaactct aggattagtt 240 acgaacttta ccataagatc tatgttattg tcaagaaaga tattaaaaga atatatagaa 300 tttaacttta tatgtgttat aacatctagt tctttttcgc atgattcttt tatagatagt 360 agtcttttat tactgtttat atgttccatg tttactataa aaccttctga attagctatt 420 tcaggatttt tagatatttc taacatcatt ttagatatta tcataatagc tatcttgtca 480 tctaaaaagc taacacaagt tagaggcgta ttaccgtgat tatttagaga attatagtcg 540 gcgttataag ataaaagtaa ttttatatta ttaaaactat tagataacat agctttatgt 600 aaaggagtat ttccagataa cttagcttta gcatttacgt aagcaccgtg gtcaagtaag 660 agtttaacaa attctgtttt catagaacta actgccatgt atagaggagt gaaaccttta 720 tgattataga cgtttacata gcaaccatat aataagatcg cattcagtat attaatatct 780 ttcatttcta tagctatgtg aataacatgt ttatctaatc ctaccaactt tgtatcagta 840 ccgtacttca gtaataagtt tactatagtt ttgtttttag atgcaacagc tatatttaga 900 acggtatcta tatgattatt aaccacatta acattagatc ctctttctaa aagtgtcttt 960 gttgtttcga tatcgttacg tgaaacagcg taatgtaagg gactgcccat acagtcatct 1020 attacgttta tatcagctcc tagatttaac agaagtgctg ttacatcttt tcttctatta 1080 attaccgaat gatgtaatgg ggttttacct aaatcatctt gttcgtttat aggcactccg 1140 tgatttataa gtaacgctat tatatcgtaa ctacaattat ttttaagtgc ctttatgaga 1200 tactgtttat gcaaaaataa acttttatct attttaatac tattatctaa caatatccta 1260 attaaatcta tattcttata ctttatagcg taatgtaacg gagtttcaaa atttctagtt 1320 tgtatattaa gatcaatatt aaaatctata aatattttat acatatcatc agatatctta 1380 tcatacagta catcgtaata atttagaaag aatctattac aattaacacc tttttttaat 1440 aaatatctag ttaatgactt attgtttcta tatacagaaa tatataacgg actatttcca 1500 gaatgtatct gttctatgtc agcgccagaa tctattagta gtttagcaat ttctgtatta 1560 tctaaactag cagctttatg aagaggagga tttttacatt ttaaaatatc ggcaccgtgt 1620 tctagtaata attttaccat ttctatatca gaaatactta cggctaaata caaagacgtt 1680 gatagtatat ttacgttatt gtatttgcat tttttaagta tataccttac taaatttata 1740 tctctatacc ttatagcttt atgcagttca tttataagtc ttccattact catttctggt 1800 aatgaagtat tatatatcat tatgatatta tctctatttt attctaataa aaaccgttat 1860 catgttattt attatttgtt ataattatac tatttaataa attataccaa atacttagat 1920 acttattaat accatcctag aacttgtatt tcttgccccc taaacttgga catgcactcc 1980 attaggcgtt tcttgttttc gacatcgtcc tccttaacat atcctactgt tatgtgagga 2040 ttccacggat tatctactgt gatatcacca aacacgtcct tcgaacaggg taccgcattc 2100 agcagaacat ttcttagggc tctaagttca tcagatacct ccagtttcat aactacagcg 2160 catcctttcg ctcccaactg tttagaggcg ttactctgag gaaaacacat ctcttcttta 2220 cagactatag aaatagtctg taaatcttga tcagttattt gctttttgaa attttcaaat 2280 ctatcacatt gatccatatt tgctattcca agagttatat gaggaaaaat atcacatcct 2340 gtcatgtatt ttattgtaac attattataa tctgtaacat cagtatctaa cctaacgtcg 2400 taaaagttaa cagatgccca gttactataa tcccaaggaa ccttaacatc taatcccatt 2460 aaaatagtat cctttctact atttttttca ttggcaagta tgtggcttag tttacacaaa 2520 attcctgcca ttttgtaacg atagcgaagc aatagcttgt atgcttttta tttgattaac 2580 taggggttaa ttaattagtc atcaggcagg gcgagaacga gactatctgc tcgttaatta 2640 attagagctt ctttattcta tacttaaaaa gtgaaaataa atacaaaggt tcttgagggt 2700 tgtgttaaat tgaaagcgag aaataatcat aaattatttc attatcgcga tatccgttaa 2760 gtttgtatcg taatgtggct gcagaacctg ctgttcctgg gcaccgtggt gtgcagcatc 2820 agcgccccca ccagatcccc caccctggtg acccggccca gccagcacgt ggacgccatc 2880 caggaagccc tgagcctgct gaacaacagc aacgacgtga ccgccgtgat gaacaaggcc 2940 gtgaaggtgg tgtccgaggt gttcgacccc gagggcccca cctgcctgga aacccggctg 3000 cagctgtaca aagagggcct gcagggcagc ctgaccagcc tgaagaaccc cctgaccatg 3060 atggccaacc actacaagca gcactgcccc cccacccccg agagcccttg cgccacccag 3120 aacatcaact tcaagagctt caaagagaac ctgaaggact tcctgttcaa catccccttc 3180 gactgctgga agcccgtgaa gaagtgatga ctcgagtttt tattgactag gggtttttat 3240 agctaattag tcaaatgtga gttaatatta gtatactaca ttactaattt attacatatt 3300 catttatatc aatctagtag catttagctt ttataaaaca atataactga atagtacata 3360 ctttactaat aagttataaa taagagatac atatttatag tattttactt tctacactga 3420 atataataat ataattatac aaatataatt tttaatacta tatagtatat aactgaaata 3480 aaataccagt gtaatatagt tattatacat ttataccaca tcaaagatga gttataacat 3540 cagtgtcact gttagcaaca gtagttatac gatgagtagt tactctcgta tggcgttagt 3600 atgtatgtat cttctagttt tcttagtagg cattatagga aacgtcaagc ttataaggtt 3660 attaatggta tctagaaata tatctattat accgtttctc aacttgggaa tagccgattt 3720 gctgtttgtg atattcatac ctttatacat tatatacata ctaagtaatt tccattggca 3780 ttttggtaaa gcactttgta aaattagttc tttctttttt acttctaaca tgtttgcaag 3840 tatattttta ataactgtaa taagcgtata tagatatgta aaaattaccc ttcctggatt 3900 tacctataaa tatgttaaca ttagaaatat gtacattact atatttttca tatggattat 3960 ttctattata ctagggattc ctgctcttta ctttagaaat actatcgtaa caaaaaataa 4020 cgacacgctg tgtattaatc attatcatga taatagagaa attgctgaat tgatttacaa 4080 agttattatc tgtatcagat ttattttagg atacctacta cctacgataa ttatactcgt 4140 atgctatacg ttactgatct acagaactaa caatgcatgt cgacgcggcc gca 4193 <210> 9 <211> 6842 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> pJSY2218.1 entire plasmid sequence <400> 9 tgcggccgcg tcgacatgca ttgttagttc tgtagatcag taacgtatag catacgagta 60 taattatcgt aggtagtagg tatcctaaaa taaatctgat acagataata actttgtaaa 120 tcaattcagc aatttctcta ttatcatgat aatgattaat acacagcgtg tcgttatttt 180 ttgttacgat agtatttcta aagtaaagag caggaatccc tagtataata gaaataatcc 240 atatgaaaaa tatagtaatg tacatatttc taatgttaac atatttatag gtaaatccag 300 gaagggtaat ttttacatat ctatatacgc ttattacagt tattaaaaat atacttgcaa 360 acatgttaga agtaaaaaag aaagaactaa ttttacaaag tgctttacca aaatgccaat 420 ggaaattact tagtatgtat ataatgtata aaggtatgaa tatcacaaac agcaaatcgg 480 ctattcccaa gttgagaaac ggtataatag atatatttct agataccatt aataacctta 540 taagcttgac gtttcctata atgcctacta agaaaactag aagatacata catactaacg 600 ccatacgaga gtaactactc atcgtataac tactgttgct aacagtgaca ctgatgttat 660 aactcatctt tgatgtggta taaatgtata ataactatat tacactggta ttttatttca 720 gttatatact atatagtatt aaaaattata tttgtataat tatattatta tattcagtgt 780 agaaagtaaa atactataaa tatgtatctc ttatttataa cttattagta aagtatgtac 840 tattcagtta tattgtttta taaaagctaa atgctactag attgatataa atgaatatgt 900 aataaattag taatgtagta tactaatatt aactcacatt tgactaatta gctataaaaa 960 cccctagtca ataaaaactc gagtcatcac ttcttcacgg gcttccagca gtcgaagggg 1020 atgttgaaca ggaagtcctt caggttctct ttgaagctct tgaagttgat gttctgggtg 1080 gcgcaagggc tctcgggggt gggggggcag tgctgcttgt agtggttggc catcatggtc 1140 agggggttct tcaggctggt caggctgccc tgcaggccct ctttgtacag ctgcagccgg 1200 gtttccaggc aggtggggcc ctcggggtcg aacacctcgg acaccacctt cacggccttg 1260 ttcatcacgg cggtcacgtc gttgctgttg ttcagcaggc tcagggcttc ctggatggcg 1320 tccacgtgct ggctgggccg ggtcaccagg gtgggggatc tggtgggggc gctgatgctg 1380 cacaccacgg tgcccaggaa cagcaggttc tgcagccaca ttacgataca aacttaacgg 1440 atatcgcgat aatgaaataa tttatgatta tttctcgctt tcaatttaac acaaccctca 1500 agaacctttg tatttatttt cactttttaa gtatagaata aagaagctct aattaattaa 1560 cgagcagata gtctcgttct cgccctgcct gatgactaat taattaaccc ctagttaatc 1620 aaataaaaag catacaagct attgcttcgc tatcgttaca aaatggcagg aattttgtgt 1680 aaactaagcc acatacttgc caatgaaaaa aatagtagaa aggatactat tttaatggga 1740 ttagatgtta aggttccttg ggattatagt aactgggcat ctgttaactt ttacgacgtt 1800 aggttagata ctgatgttac agattataat aatgttacaa taaaatacat gacaggatgt 1860 gatatttttc ctcatataac tcttggaata gcaaatatgg atcaatgtga tagatttgaa 1920 aatttcaaaa agcaaataac tgatcaagat ttacagacta tttctatagt ctgtaaagaa 1980 gagatgtgtt ttcctcagag taacgcctct aaacagttgg gagcgaaagg atgcgctgta 2040 gttatgaaac tggaggtatc tgatgaactt agagccctaa gaaatgttct gctgaatgcg 2100 gtaccctgtt cgaaggacgt gtttggtgat atcacagtag ataatccgtg gaatcctcac 2160 ataacagtag gatatgttaa ggaggacgat gtcgaaaaca agaaacgcct aatggagtgc 2220 atgtccaagt ttagggggca agaaatacaa gttctaggat ggtattaata agtatctaag 2280 tatttggtat aatttattaa atagtataat tataacaaat aataaataac atgataacgg 2340 tttttattag aataaaatag agataatatc ataatgatat ataatacttc attaccagaa 2400 atgagtaatg gaagacttat aaatgaactg cataaagcta taaggtatag agatataaat 2460 ttagtaaggt atatacttaa aaaatgcaaa tacaataacg taaatatact atcaacgtct 2520 ttgtatttag ccgtaagtat ttctgatata gaaatggtaa aattattact agaacacggt 2580 gccgatattt taaaatgtaa aaatcctcct cttcataaag ctgctagttt agataataca 2640 gaaattgcta aactactaat agattctggc gctgacatag aacagataca ttctggaaat 2700 agtccgttat atatttctgt atatagaaac aataagtcat taactagata tttattaaaa 2760 aaaggtgtta attgtaatag attctttcta aattattacg atgtactgta tgataagata 2820 tctgatgata tgtataaaat atttatagat tttaatattg atcttaatat acaaactaga 2880 aattttgaaa ctccgttaca ttacgctata aagtataaga atatagattt aattaggata 2940 ttgttagata atagtattaa aatagataaa agtttatttt tgcataaaca gtatctcata 3000 aaggcactta aaaataattg tagttacgat ataatagcgt tacttataaa tcacggagtg 3060 cctataaacg aacaagatga tttaggtaaa accccattac atcattcggt aattaataga 3120 agaaaagatg taacagcact tctgttaaat ctaggagctg atataaacgt aatagatgac 3180 tgtatgggca gtcccttaca ttacgctgtt tcacgtaacg atatcgaaac aacaaagaca 3240 cttttagaaa gaggatctaa tgttaatgtg gttaataatc atatagatac cgttctaaat 3300 atagctgttg catctaaaaa caaaactata gtaaacttat tactgaagta cggtactgat 3360 acaaagttgg taggattaga taaacatgtt attcacatag ctatagaaat gaaagatatt 3420 aatatactga atgcgatctt attatatggt tgctatgtaa acgtctataa tcataaaggt 3480 ttcactcctc tatacatggc agttagttct atgaaaacag aatttgttaa actcttactt 3540 gaccacggtg cttacgtaaa tgctaaagct aagttatctg gaaatactcc tttacataaa 3600 gctatgttat ctaatagttt taataatata aaattacttt tatcttataa cgccgactat 3660 aattctctaa ataatcacgg taatacgcct ctaacttgtg ttagcttttt agatgacaag 3720 atagctatta tgataatatc taaaatgatg ttagaaatat ctaaaaatcc tgaaatagct 3780 aattcagaag gttttatagt aaacatggaa catataaaca gtaataaaag actactatct 3840 ataaaagaat catgcgaaaa agaactagat gttataacac atataaagtt aaattctata 3900 tattctttta atatctttct tgacaataac atagatctta tggtaaagtt cgtaactaat 3960 cctagagtta ataagatacc tgcatgtata cgtatatata gggaattaat acggaaaaat 4020 aaatcattag cttttcatag acatcagcta atagttaaag ctgtaaaaga gagtaagaat 4080 ctaggaataa taggtaggtt acctatagat atcaaacata taataatgga actattaagt 4140 aataatgatt tacattctgt tatcaccagc tgttgtaacc cagtagtata aagagctcga 4200 attaattcac tggccgtcgt tttacaacgt cgtgactggg aaaaccctgg cgttacccaa 4260 cttaatcgcc ttgcagcaca tccccctttc gccagctggc gtaatagcga agaggcccgc 4320 accgatcgcc cttcccaaca gttgcgcagc ctgaatggcg aatggcgcct gatgcggtat 4380 tttctcctta cgcatctgtg cggtatttca caccgcatat ggtgcactct cagtacaatc 4440 tgctctgatg ccgcatagtt aagccagccc cgacacccgc caacacccgc tgacgcgccc 4500 tgacgggctt gtctgctccc ggcatccgct tacagacaag ctgtgaccgt ctccgggagc 4560 tgcatgtgtc agaggttttc accgtcatca ccgaaacgcg cgagacgaaa gggcctcgtg 4620 atacgcctat ttttataggt taatgtcatg ataataatgg tttcttagac gtcaggtggc 4680 acttttcggg gaaatgtgcg cggaacccct atttgtttat ttttctaaat acattcaaat 4740 atgtatccgc tcatgagaca ataaccctga taaatgcttc aataatattg aaaaaggaag 4800 agtatgagta ttcaacattt ccgtgtcgcc cttattccct tttttgcggc attttgcctt 4860 cctgtttttg ctcacccaga aacgctggtg aaagtaaaag atgctgaaga tcagttgggt 4920 gcacgagtgg gttacatcga actggatctc aacagcggta agatccttga gagttttcgc 4980 cccgaagaac gttttccaat gatgagcact tttaaagttc tgctatgtgg cgcggtatta 5040 tcccgtattg acgccgggca agagcaactc ggtcgccgca tacactattc tcagaatgac 5100 ttggttgagt actcaccagt cacagaaaag catcttacgg atggcatgac agtaagagaa 5160 ttatgcagtg ctgccataac catgagtgat aacactgcgg ccaacttact tctgacaacg 5220 atcggaggac cgaaggagct aaccgctttt ttgcacaaca tgggggatca tgtaactcgc 5280 cttgatcgtt gggaaccgga gctgaatgaa gccataccaa acgacgagcg tgacaccacg 5340 atgcctgtag caatggcaac aacgttgcgc aaactattaa ctggcgaact acttactcta 5400 gcttcccggc aacaattaat agactggatg gaggcggata aagttgcagg accacttctg 5460 cgctcggccc ttccggctgg ctggtttatt gctgataaat ctggagccgg tgagcgtggg 5520 tctcgcggta tcattgcagc actggggcca gatggtaagc cctcccgtat cgtagttatc 5580 tacacgacgg ggagtcaggc aactatggat gaacgaaata gacagatcgc tgagataggt 5640 gcctcactga ttaagcattg gtaactgtca gaccaagttt actcatatat actttagatt 5700 gatttaaaac ttcattttta atttaaaagg atctaggtga agatcctttt tgataatctc 5760 atgaccaaaa tcccttaacg tgagttttcg ttccactgag cgtcagaccc cgtagaaaag 5820 atcaaaggat cttcttgaga tccttttttt ctgcgcgtaa tctgctgctt gcaaacaaaa 5880 aaaccaccgc taccagcggt ggtttgtttg ccggatcaag agctaccaac tctttttccg 5940 aaggtaactg gcttcagcag agcgcagata ccaaatactg tccttctagt gtagccgtag 6000 ttaggccacc acttcaagaa ctctgtagca ccgcctacat acctcgctct gctaatcctg 6060 ttaccagtgg ctgctgccag tggcgataag tcgtgtctta ccgggttgga ctcaagacga 6120 tagttaccgg ataaggcgca gcggtcgggc tgaacggggg gttcgtgcac acagcccagc 6180 ttggagcgaa cgacctacac cgaactgaga tacctacagc gtgagctatg agaaagcgcc 6240 acgcttcccg aagggagaaa ggcggacagg tatccggtaa gcggcagggt cggaacagga 6300 gagcgcacga gggagcttcc agggggaaac gcctggtatc tttatagtcc tgtcgggttt 6360 cgccacctct gacttgagcg tcgatttttg tgatgctcgt caggggggcg gagcctatgg 6420 aaaaacgcca gcaacgcggc ctttttacgg ttcctggcct tttgctggcc ttttgctcac 6480 atgttctttc ctgcgttatc ccctgattct gtggataacc gtattaccgc ctttgagtga 6540 gctgataccg ctcgccgcag ccgaacgacc gagcgcagcg agtcagtgag cgaggaagcg 6600 gaagagcgcc caatacgcaa accgcctctc cccgcgcgtt ggccgattca ttaatgcagc 6660 tggcacgaca ggtttcccga ctggaaagcg ggcagtgagc gcaacgcaat taatgtgagt 6720 tagctcactc attaggcacc ccaggcttta cactttatgc ttccggctcg tatgttgtgt 6780 ggaattgtga gcggataaca atttcacaca ggaaacagct atgaccatga ttacgccaag 6840 ct 6842 <210> 10 <211> 24 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> 13220CXL primer <400> 10 aggtgtccac ctccaacatg gagt 24 <210> 11 <211> 24 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> 13225CXL primer <400> 11 gaactggtcg cccctggagg cctt 24 <210> 12 <211> 25 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> 7931DC primer <400> 12 gaatctgtta gttagttact tggat 25 <210> 13 <211> 25 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> 7932DC primer <400> 13 tgattatagc tattatcaca gactc 25 <210> 14 <211> 4279 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> vCP2263 containing arms and insert <220> <221> misc_feature <222> (126)..(1661) <223> this is the C5 arm region <220> <221> promoter <222> (1759)..(1882) <220> <221> CDS <222> (1883)..(3703) <223> this is the HA protein encoding region <220> <221> misc_feature <222> (3760)..(4164) <223> this is the C5 arm region <400> 14 gaatctgtta gttagttact tggataaatt aatcgagacg cgtgataaaa tgactatgta 60 ccgttattgc atgaacgata ttataaatat aggttctcgt aggagagaac tattgactat 120 ggcaatgaat gttaaatgtt atactttgga tgaagctata aatatgcatt ggaaaaataa 180 tccatttaaa gaaaggattc aaatactaca aaacctaagc gataatatgt taactaagct 240 tattcttaac gacgctttaa atatacacaa ataaacataa tttttgtata acctaacaaa 300 taactaaaac ataaaaataa taaaaggaaa tgtaatatcg taattatttt actcaggaat 360 ggggttaaat atttatatca cgtgtatatc tatactgtta tcgtatactc tttacaatta 420 ctattacgaa tatgcaagag ataataagat tacgtattta agagaatctt gtcatgataa 480 ttgggtacga catagtgata aatgctattt cgcatcgtta cataaagtca gttggaaaga 540 tggatttgac agatgtaact taataggtgc aaaaatgtta aataacagca ttctatcgga 600 agataggata ccagttatat tatacaaaaa tcactggttg gataaaacag attctgcaat 660 attcgtaaaa gatgaagatt actgcgaatt tgtaaactat gacaataaaa agccatttat 720 ctcaacgaca tcgtgtaatt cttccatgtt ttatgtatgt gtttcagata ttatgagatt 780 actataaact ttttgtatac ttatattccg taaactatat taatcatgaa gaaaatgaaa 840 aagtatagaa gctgttcacg agcggttgtt gaaaacaaca aaattataca ttcaagatgg 900 cttacatata cgtctgtgag gctatcatgg ataatgacaa tgcatctcta aataggtttt 960 tggacaatgg attcgaccct aacacggaat atggtactct acaatctcct cttgaaatgg 1020 ctgtaatgtt caagaatacc gaggctataa aaatcttgat gaggtatgga gctaaacctg 1080 tagttactga atgcacaact tcttgtctgc atgatgcggt gttgagagac gactacaaaa 1140 tagtgaaaga tctgttgaag aataactatg taaacaatgt tctttacagc ggaggcttta 1200 ctcctttgtg tttggcagct taccttaaca aagttaattt ggttaaactt ctattggctc 1260 attcggcgga tgtagatatt tcaaacacgg atcggttaac tcctctacat atagccgtat 1320 caaataaaaa tttaacaatg gttaaacttc tattgaacaa aggtgctgat actgacttgc 1380 tggataacat gggacgtact cctttaatga tcgctgtaca atctggaaat attgaaatat 1440 gtagcacact acttaaaaaa aataaaatgt ccagaactgg gaaaaattga tcttgccagc 1500 tgtaattcat ggtagaaaag aagtgctcag gctacttttc aacaaaggag cagatgtaaa 1560 ctacatcttt gaaagaaatg gaaaatcata tactgttttg gaattgatta aagaaagtta 1620 ctctgagaca caaaagaggt agctgaagtg gtactctcaa aggtacgtga ctaattagct 1680 ataaaaagga tccgggttaa ttaattagtc atcaggcagg gcgagaacga gactatctgc 1740 tcgttaatta attagagctt ctttattcta tacttaaaaa gtgaaaataa atacaaaggt 1800 tcttgagggt tgtgttaaat tgaaagcgag aaataatcat aaattatttc attatcgcga 1860 tatccgttaa gtttgtatcg taatgctgag ctaccaggac aaagtgggcg ccttctacaa 1920 ggacaacgcc agggccaata gcagcaagct gagcctggtg accgaggagc agggcggcag 1980 gagacccccc tacctgctgt tcgtgctgct gatccttctt gtgggcatca tgaccctgct 2040 ggccatcacc ggagtgagat tccaccaggt gtccacctcc aacatggagt tcagccggct 2100 gctgaaagag gacatggaga agagcgaggc cgtgcaccac caggtgatcg atgtgctgac 2160 ccccctgttc aagatcatcg gcgacgaagt gggcctgaga ctgccccaga agctgaacga 2220 gatcaagcag ttcatcctgc agaaaaccaa cttcttcaac cccaaccggg agttcgactt 2280 cagagacctg cactggtgca tcaacccccc cagcaagatc aaagtgaact tcaccaacta 2340 ctgcgacacc atcggcatca ggaagagcat cgccagcgcc gtgaatccca tcctgctgag 2400 cgccctgagc ggcggcagag gcgacatctt ccccccctac agatgcagcg gcgccaccac 2460 ctctgtgggc agagtgttcc ctctgagcgt gtccctgagc atgagcctga tcagcaagac 2520 cagcgagatc accaacatgc tgaccgccat cagcgacggc gtgtacggca agacctatct 2580 gctggtgccc gactacatcg agggcgagtt cgacacccag aagatccgcg tgttcgagat 2640 cggcttcatc aagcggtggc tgaacaacat gcccctgctg cagaccacca actacatggt 2700 gctgcccgag aacagcaagg ccaaagtgtg caccatcgct gtgggcgagc tgaccctggc 2760 cagcctgtgc gtggacgaga gcaccgtgct gctgtaccac gacagcaacg gcagccagga 2820 cggcatcctg gtggtgaccc tgggcatctt cggcgccacc cctatggacc aggtggagga 2880 agtgatcccc gtggcccacc ccagcgtgga gaagatccac atcaccaacc accggggctt 2940 tatcaaggac agcatcgcca cctggatggt gcccgccctg gtgtctgaga agcaggagga 3000 gcagaagaac tgcctggaga gcgcctgcca gagaaagacc taccccatgt gcaaccagac 3060 cagctgggag ccctttggcg gcggacagct gcccagctac ggcagactga ccctgagcct 3120 ggaccctagc atcgacctgc agctgaacat cagcttcacc tacggccccg tgatcctgaa 3180 cggcgacggc atggattact acggcagcag cctgagcgac agcggctggc tgaccatccc 3240 tcccaagaac ggcacagtgc tgggcctgat caacaaggcc tccaggggcg accagttcac 3300 cgtgatccct cacgtgctga ccttcgcccc cagagagagc agcggcaact gctacctgcc 3360 tatccagacc tcccagatca tggacaagga cgtgctgaca gagagcaacc tggtggtgct 3420 gcctacccag aacttccggt acgtgatcgc cacctacgac atcagcagag gcgatcacgc 3480 catcgtgtac tacgtgtacg accccatccg gaccatcagc tacacatacc ccttccggct 3540 gaccaccaag ggcagacccg acttcctgcg gatcgagtgc tttgtgtggg acgacgacct 3600 gtggtgccac cagttctaca gattcgaggc cgacatcacc aatagcacca cctccgtgga 3660 gaaccttgtg aggatccggt tcagctgcga cagaagcaag ccctgatagc tcgagtctag 3720 aatcgatccc gggtttttat gactagttaa tcacggccgc ttataaagat ctaaaatgca 3780 taatttctaa ataatgaaaa aaagtacatc atgagcaacg cgttagtata ttttacaatg 3840 gagattaacg ctctataccg ttctatgttt attgattcag atgatgtttt agaaaagaaa 3900 gttattgaat atgaaaactt taatgaagat gaagatgacg acgatgatta ttgttgtaaa 3960 tctgttttag atgaagaaga tgacgcgcta aagtatacta tggttacaaa gtataagtct 4020 atactactaa tggcgacttg tgcaagaagg tatagtatag tgaaaatgtt gttagattat 4080 gattatgaaa aaccaaataa atcagatcca tatctaaagg tatctccttt gcacataatt 4140 tcatctattc ctagtttaga atacttttca ttatatttgt ttacagctga agacgaaaaa 4200 aatatatcga taatagaaga ttatgttaac tctgctaata agatgaaatt gaatgagtct 4260 gtgataatag ctataatca 4279 <210> 15 <211> 26 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> 18071BK primer <400> 15 gatgttgaac aggaagtcct tcaggt 26 <210> 16 <211> 26 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> 18073BK primer <400> 16 gttcctgggc accgtggtgt gcagca 26 <210> 17 <211> 30 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> 8103JY primer <400> 17 gaggcatcca acatataaag aagactaaag 30 <210> 18 <211> 27 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> 8104JY primer <400> 18 tagttaaata ctcataactc atatctg 27 <210> 19 <211> 4350 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> part of vCP2391 containing C3L-canine GM-CSF-C3R <220> <221> misc_feature <222> (72)..(2643) <223> this is the C3 arm region <220> <221> promoter <222> (2658)..(2843) <220> <221> CDS <222> (2844)..(3281) <223> this is the GM_CSF coding region <220> <221> misc_feature <222> (3323)..(4249) <223> this is the C3 arm region <400> 19 ctttagttaa atactcataa ctcatatctg ttaacaaatt taatgtttat cttcgtaatt 60 gaataaaatc actttatact actgggttac aacagctggt gataacagaa tgtaaatcat 120 tattacttaa tagttccatt attatatgtt tgatatctat aggtaaccta cctattattc 180 ctagattctt actctctttt acagctttaa ctattagctg atgtctatga aaagctaatg 240 atttattttt ccgtattaat tccctatata tacgtataca tgcaggtatc ttattaactc 300 taggattagt tacgaacttt accataagat ctatgttatt gtcaagaaag atattaaaag 360 aatatataga atttaacttt atatgtgtta taacatctag ttctttttcg catgattctt 420 ttatagatag tagtctttta ttactgttta tatgttccat gtttactata aaaccttctg 480 aattagctat ttcaggattt ttagatattt ctaacatcat tttagatatt atcataatag 540 ctatcttgtc atctaaaaag ctaacacaag ttagaggcgt attaccgtga ttatttagag 600 aattatagtc ggcgttataa gataaaagta attttatatt attaaaacta ttagataaca 660 tagctttatg taaaggagta tttccagata acttagcttt agcatttacg taagcaccgt 720 ggtcaagtaa gagtttaaca aattctgttt tcatagaact aactgccatg tatagaggag 780 tgaaaccttt atgattatag acgtttacat agcaaccata taataagatc gcattcagta 840 tattaatatc tttcatttct atagctatgt gaataacatg tttatctaat cctaccaact 900 ttgtatcagt accgtacttc agtaataagt ttactatagt tttgttttta gatgcaacag 960 ctatatttag aacggtatct atatgattat taaccacatt aacattagat cctctttcta 1020 aaagtgtctt tgttgtttcg atatcgttac gtgaaacagc gtaatgtaag ggactgccca 1080 tacagtcatc tattacgttt atatcagctc ctagatttaa cagaagtgct gttacatctt 1140 ttcttctatt aattaccgaa tgatgtaatg gggttttacc taaatcatct tgttcgttta 1200 taggcactcc gtgatttata agtaacgcta ttatatcgta actacaatta tttttaagtg 1260 cctttatgag atactgttta tgcaaaaata aacttttatc tattttaata ctattatcta 1320 acaatatcct aattaaatct atattcttat actttatagc gtaatgtaac ggagtttcaa 1380 aatttctagt ttgtatatta agatcaatat taaaatctat aaatatttta tacatatcat 1440 cagatatctt atcatacagt acatcgtaat aatttagaaa gaatctatta caattaacac 1500 ctttttttaa taaatatcta gttaatgact tattgtttct atatacagaa atatataacg 1560 gactatttcc agaatgtatc tgttctatgt cagcgccaga atctattagt agtttagcaa 1620 tttctgtatt atctaaacta gcagctttat gaagaggagg atttttacat tttaaaatat 1680 cggcaccgtg ttctagtaat aattttacca tttctatatc agaaatactt acggctaaat 1740 acaaagacgt tgatagtata tttacgttat tgtatttgca ttttttaagt atatacctta 1800 ctaaatttat atctctatac cttatagctt tatgcagttc atttataagt cttccattac 1860 tcatttctgg taatgaagta ttatatatca ttatgatatt atctctattt tattctaata 1920 aaaaccgtta tcatgttatt tattatttgt tataattata ctatttaata aattatacca 1980 aatacttaga tacttattaa taccatccta gaacttgtat ttcttgcccc ctaaacttgg 2040 acatgcactc cattaggcgt ttcttgtttt cgacatcgtc ctccttaaca tatcctactg 2100 ttatgtgagg attccacgga ttatctactg tgatatcacc aaacacgtcc ttcgaacagg 2160 gtaccgcatt cagcagaaca tttcttaggg ctctaagttc atcagatacc tccagtttca 2220 taactacagc gcatcctttc gctcccaact gtttagaggc gttactctga ggaaaacaca 2280 tctcttcttt acagactata gaaatagtct gtaaatcttg atcagttatt tgctttttga 2340 aattttcaaa tctatcacat tgatccatat ttgctattcc aagagttata tgaggaaaaa 2400 tatcacatcc tgtcatgtat tttattgtaa cattattata atctgtaaca tcagtatcta 2460 acctaacgtc gtaaaagtta acagatgccc agttactata atcccaagga accttaacat 2520 ctaatcccat taaaatagta tcctttctac tatttttttc attggcaagt atgtggctta 2580 gtttacacaa aattcctgcc attttgtaac gatagcgaag caatagcttg tatgcttttt 2640 atttgattaa ctaggggtta attaattagt catcaggcag ggcgagaacg agactatctg 2700 ctcgttaatt aattagagct tctttattct atacttaaaa agtgaaaata aatacaaagg 2760 ttcttgaggg ttgtgttaaa ttgaaagcga gaaataatca taaattattt cattatcgcg 2820 atatccgtta agtttgtatc gtaatgtggc tgcagaacct gctgttcctg ggcaccgtgg 2880 tgtgcagcat cagcgccccc accagatccc ccaccctggt gacccggccc agccagcacg 2940 tggacgccat ccaggaagcc ctgagcctgc tgaacaacag caacgacgtg accgccgtga 3000 tgaacaaggc cgtgaaggtg gtgtccgagg tgttcgaccc cgagggcccc acctgcctgg 3060 aaacccggct gcagctgtac aaagagggcc tgcagggcag cctgaccagc ctgaagaacc 3120 ccctgaccat gatggccaac cactacaagc agcactgccc ccccaccccc gagagccctt 3180 gcgccaccca gaacatcaac ttcaagagct tcaaagagaa cctgaaggac ttcctgttca 3240 acatcccctt cgactgctgg aagcccgtga agaagtgatg actcgagttt ttattgacta 3300 ggggttttta tagctaatta gtcaaatgtg agttaatatt agtatactac attactaatt 3360 tattacatat tcatttatat caatctagta gcatttagct tttataaaac aatataactg 3420 aatagtacat actttactaa taagttataa ataagagata catatttata gtattttact 3480 ttctacactg aatataataa tataattata caaatataat ttttaatact atatagtata 3540 taactgaaat aaaataccag tgtaatatag ttattataca tttataccac atcaaagatg 3600 agttataaca tcagtgtcac tgttagcaac agtagttata cgatgagtag ttactctcgt 3660 atggcgttag tatgtatgta tcttctagtt ttcttagtag gcattatagg aaacgtcaag 3720 cttataaggt tattaatggt atctagaaat atatctatta taccgtttct caacttggga 3780 atagccgatt tgctgtttgt gatattcata cctttataca ttatatacat actaagtaat 3840 ttccattggc attttggtaa agcactttgt aaaattagtt ctttcttttt tacttctaac 3900 atgtttgcaa gtatattttt aataactgta ataagcgtat atagatatgt aaaaattacc 3960 cttcctggat ttacctataa atatgttaac attagaaata tgtacattac tatatttttc 4020 atatggatta tttctattat actagggatt cctgctcttt actttagaaa tactatcgta 4080 acaaaaaata acgacacgct gtgtattaat cattatcatg ataatagaga aattgctgaa 4140 ttgatttaca aagttattat ctgtatcaga tttattttag gatacctact acctacgata 4200 attatactcg tatgctatac gttactgatc tacagaacta acaatgcatc taatatatct 4260 gataagatat tcttcataac agcttctaca gctttagtct tctttatatg ttggatgcct 4320 catcacataa ttaatgtaat atctcttttg 4350 <210> 20 <211> 607 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> AAQ05828 <400> 20 Met Leu Ser Tyr Gln Asp Lys Val Gly Ala Phe Tyr Lys Asp Asn Ala 1 5 10 15 Arg Ala Asn Ser Ser Lys Leu Ser Leu Val Thr Glu Glu Gln Gly Gly 20 25 30 Arg Arg Pro Pro Tyr Leu Leu Phe Val Leu Leu Ile Leu Leu Val Gly 35 40 45 Ile Met Thr Leu Leu Ala Ile Thr Gly Val Arg Phe His Gln Val Ser 50 55 60 Thr Ser Asn Met Glu Phe Ser Arg Leu Leu Lys Glu Asp Met Glu Lys 65 70 75 80 Ser Glu Ala Val His His Gln Val Ile Asp Val Leu Thr Pro Leu Phe 85 90 95 Lys Ile Ile Gly Asp Glu Val Gly Leu Arg Leu Pro Gln Lys Leu Asn 100 105 110 Glu Ile Lys Gln Phe Ile Leu Gln Lys Thr Asn Phe Phe Asn Pro Asn 115 120 125 Arg Glu Phe Asp Phe Arg Asp Leu His Trp Cys Ile Asn Pro Pro Ser 130 135 140 Lys Ile Lys Val Asn Phe Thr Asn Tyr Cys Asp Thr Ile Gly Ile Arg 145 150 155 160 Lys Ser Ile Ala Ser Ala Val Asn Pro Ile Leu Leu Ser Ala Leu Ser 165 170 175 Gly Gly Arg Gly Asp Ile Phe Pro Pro Tyr Arg Cys Ser Gly Ala Thr 180 185 190 Thr Ser Val Gly Arg Val Phe Pro Leu Ser Val Ser Leu Ser Met Ser 195 200 205 Leu Ile Ser Lys Thr Ser Glu Ile Thr Asn Met Leu Thr Ala Ile Ser 210 215 220 Asp Gly Val Tyr Gly Lys Thr Tyr Leu Leu Val Pro Asp Tyr Ile Glu 225 230 235 240 Gly Glu Phe Asp Thr Gln Lys Ile Arg Val Phe Glu Ile Gly Phe Ile 245 250 255 Lys Arg Trp Leu Asn Asn Met Pro Leu Leu Gln Thr Thr Asn Tyr Met 260 265 270 Val Leu Pro Glu Asn Ser Lys Ala Lys Val Cys Thr Ile Ala Val Gly 275 280 285 Glu Leu Thr Leu Ala Ser Leu Cys Val Asp Glu Ser Thr Val Leu Leu 290 295 300 Tyr His Asp Ser Asn Gly Ser Gln Asp Gly Ile Leu Val Val Thr Leu 305 310 315 320 Gly Ile Phe Gly Ala Thr Pro Met Asp Gln Val Glu Glu Val Ile Pro 325 330 335 Val Ala His Pro Ser Val Glu Lys Ile His Ile Thr Asn His Arg Gly 340 345 350 Phe Ile Lys Asp Ser Ile Ala Thr Trp Met Val Pro Ala Leu Val Ser 355 360 365 Glu Lys Gln Glu Glu Gln Lys Asn Cys Leu Glu Ser Ala Cys Gln Arg 370 375 380 Lys Thr Tyr Pro Met Cys Asn Gln Thr Ser Trp Glu Pro Phe Gly Gly 385 390 395 400 Gly Gln Leu Pro Ser Tyr Gly Arg Leu Thr Leu Ser Leu Asp Pro Ser 405 410 415 Ile Asp Leu Gln Leu Asn Ile Ser Phe Thr Tyr Gly Pro Val Ile Leu 420 425 430 Asn Gly Asp Gly Met Asp Tyr Tyr Gly Ser Ser Leu Ser Asp Ser Gly 435 440 445 Trp Leu Thr Ile Pro Pro Lys Asn Gly Thr Val Leu Gly Leu Ile Asn 450 455 460 Lys Ala Ser Arg Gly Asp Gln Phe Thr Val Ile Pro His Val Leu Thr 465 470 475 480 Phe Ala Pro Arg Glu Ser Ser Gly Asn Cys Tyr Leu Pro Ile Gln Thr 485 490 495 Ser Gln Ile Met Asp Lys Asp Val Leu Thr Glu Ser Asn Leu Val Val 500 505 510 Leu Pro Thr Gln Asn Phe Arg Tyr Val Ile Ala Thr Tyr Asp Ile Ser 515 520 525 Arg Gly Asp His Ala Ile Val Tyr Asp Val Tyr Asp Pro Ile Arg Thr 530 535 540 Ile Ser Tyr Thr His Pro Phe Arg Leu Thr Thr Lys Gly Arg Pro Asp 545 550 555 560 Phe Leu Arg Ile Glu Cys Phe Val Trp Asp Asp Asp Leu Trp Cys His 565 570 575 Gln Phe Tyr Arg Phe Glu Ala Asp Ile Thr Asn Ser Thr Thr Ser Val 580 585 590 Glu Asn Leu Val Arg Ile Arg Phe Ser Cys Asp Arg Ser Lys Pro 595 600 605 <210> 21 <211> 607 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> ABF55673 <400> 21 Met Leu Ser Tyr Gln Asp Lys Val Gly Ala Phe Tyr Lys Asp Asn Ala 1 5 10 15 Arg Ala Asn Ser Ser Lys Leu Ser Leu Val Thr Glu Glu Gln Gly Gly 20 25 30 Arg Arg Pro Pro Tyr Leu Leu Phe Val Leu Leu Ile Leu Leu Val Gly 35 40 45 Ile Met Thr Leu Leu Ala Ile Thr Gly Val Arg Phe His Gln Val Ser 50 55 60 Thr Ser Asn Met Glu Phe Ser Arg Leu Leu Lys Glu Asp Met Glu Lys 65 70 75 80 Ser Glu Ala Val His His Gln Val Ile Asp Val Leu Thr Pro Leu Phe 85 90 95 Lys Ile Ile Gly Asp Glu Val Gly Leu Arg Leu Pro Gln Lys Leu Asn 100 105 110 Glu Ile Lys Gln Phe Ile Leu Gln Lys Thr Asn Phe Phe Asn Pro Asn 115 120 125 Arg Glu Phe Asp Phe Arg Asp Leu His Trp Cys Ile Asn Pro Pro Ser 130 135 140 Lys Ile Lys Val Asn Phe Thr Asn Tyr Cys Asp Thr Ile Gly Ile Arg 145 150 155 160 Lys Ser Ile Ala Ser Ala Ala Asn Pro Ile Leu Leu Ser Ala Leu Ser 165 170 175 Gly Gly Arg Gly Asp Ile Phe Pro Pro Tyr Arg Cys Ser Gly Ala Thr 180 185 190 Thr Ser Val Gly Arg Val Phe Pro Leu Ser Val Ser Leu Ser Met Ser 195 200 205 Leu Ile Ser Lys Thr Ser Glu Ile Thr Asn Met Leu Thr Ala Ile Ser 210 215 220 Asp Gly Val Tyr Gly Lys Thr Tyr Leu Leu Val Pro Asp Tyr Ile Glu 225 230 235 240 Gly Glu Phe Asp Thr Gln Lys Ile Arg Val Phe Glu Ile Gly Phe Ile 245 250 255 Lys Arg Trp Leu Asn Asn Met Pro Leu Leu Gln Thr Thr Asn Tyr Met 260 265 270 Val Leu Pro Glu Asn Ser Lys Ala Lys Val Cys Thr Ile Ala Val Gly 275 280 285 Glu Leu Thr Leu Ala Ser Leu Cys Val Asp Glu Ser Thr Val Leu Leu 290 295 300 Tyr His Asp Ser Asn Gly Ser Gln Asp Gly Ile Leu Val Val Thr Leu 305 310 315 320 Gly Ile Phe Gly Ala Thr Pro Met Asp Gln Val Gly Glu Val Ile Pro 325 330 335 Val Ala His Pro Ser Val Glu Lys Ile His Ile Thr Asn His Arg Gly 340 345 350 Phe Ile Lys Asp Ser Ile Ala Thr Trp Met Val Pro Ala Leu Val Ser 355 360 365 Glu Lys Gln Glu Glu Gln Lys Asn Cys Leu Glu Ser Ala Cys Gln Arg 370 375 380 Lys Thr Tyr Pro Met Cys Asn Gln Thr Ser Trp Glu Pro Phe Gly Gly 385 390 395 400 Gly Gln Leu Pro Ser Tyr Gly Arg Leu Thr Leu Pro Leu Asp Pro Ser 405 410 415 Ile Asp Pro Gln Leu Asn Ile Ser Phe Thr Tyr Gly Pro Val Ile Leu 420 425 430 Asn Gly Asp Gly Met Asp Tyr Tyr Glu Ser Ser Leu Ser Asp Ser Gly 435 440 445 Trp Leu Thr Ile Pro Pro Lys Asn Gly Thr Val Leu Gly Leu Ile Asn 450 455 460 Lys Ala Ser Arg Gly Asp Gln Phe Thr Val Ile Pro His Val Leu Thr 465 470 475 480 Phe Ala Pro Arg Glu Ser Ser Gly Asn Cys Tyr Leu Pro Ile Gln Thr 485 490 495 Ser Gln Ile Met Asp Lys Asp Val Leu Thr Glu Ser Asn Leu Val Val 500 505 510 Leu Pro Thr Gln Asn Phe Arg Tyr Val Ile Ala Thr Tyr Asp Ile Ser 515 520 525 Arg Gly Asp His Ala Ile Val Tyr Tyr Val Tyr Asp Pro Ile Arg Thr 530 535 540 Ile Ser Tyr Thr Tyr Pro Phe Arg Leu Thr Thr Lys Gly Arg Pro Asp 545 550 555 560 Phe Leu Arg Ile Glu Cys Phe Val Trp Asp Asp Asp Leu Trp Cys His 565 570 575 Gln Phe Tyr Arg Phe Glu Ala Asp Ile Thr Asn Ser Thr Thr Ser Val 580 585 590 Glu Asn Leu Val Arg Ile Arg Phe Ser Cys Asn Arg Ser Lys Pro 595 600 605 <210> 22 <211> 607 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> CAA55672 <400> 22 Met Leu Ser Tyr Gln Asp Lys Val Gly Ala Phe Tyr Lys Asp Asn Ala 1 5 10 15 Arg Ala Asn Ser Ser Lys Leu Ser Leu Val Thr Glu Glu Gln Gly Gly 20 25 30 Arg Arg Pro Pro Tyr Leu Leu Phe Val Leu Leu Ile Leu Leu Val Gly 35 40 45 Ile Met Thr Leu Leu Ala Ile Thr Gly Val Arg Phe His Gln Val Ser 50 55 60 Thr Ser Asn Met Glu Phe Ser Arg Leu Leu Lys Glu Asp Met Glu Lys 65 70 75 80 Ser Glu Ala Val His His Gln Val Ile Asp Val Leu Thr Pro Leu Phe 85 90 95 Lys Ile Ile Gly Asp Glu Val Gly Leu Arg Leu Pro Gln Lys Leu Asn 100 105 110 Glu Ile Lys Gln Phe Ile Leu Gln Lys Thr Asn Phe Phe Asn Pro Asn 115 120 125 Arg Glu Phe Asp Phe Arg Asp Leu His Trp Cys Ile Asn Pro Pro Ser 130 135 140 Lys Ile Lys Val Asn Phe Thr Asn Tyr Cys Asp Thr Ile Gly Ile Arg 145 150 155 160 Lys Ser Ile Ala Ser Ala Ala Asn Pro Ile Leu Leu Ser Ala Leu Ser 165 170 175 Gly Gly Arg Gly Asp Ile Phe Pro Pro Tyr Arg Cys Ser Gly Ala Thr 180 185 190 Thr Ser Val Gly Arg Val Phe Pro Leu Ser Val Ser Leu Ser Met Ser 195 200 205 Leu Ile Ser Lys Thr Ser Glu Ile Thr Asn Met Leu Thr Ala Ile Ser 210 215 220 Asp Gly Val Tyr Gly Lys Thr Tyr Leu Leu Val Pro Asp Tyr Ile Glu 225 230 235 240 Gly Glu Phe Asp Thr Gln Met Ile Arg Val Phe Glu Ile Gly Phe Ile 245 250 255 Lys Arg Trp Leu Asn Asn Met Pro Leu Leu Gln Thr Thr Asn Tyr Met 260 265 270 Val Leu Pro Glu Asn Ser Lys Ala Lys Val Cys Thr Ile Ala Val Gly 275 280 285 Glu Leu Thr Leu Ala Ser Leu Cys Val Asp Glu Ser Thr Val Leu Leu 290 295 300 Tyr His Asp Ser Asn Gly Ser Gln Asp Gly Ile Leu Val Val Thr Leu 305 310 315 320 Gly Ile Phe Gly Ala Thr Pro Met Asp Gln Val Gly Glu Val Ile Pro 325 330 335 Val Ala His Pro Ser Val Glu Lys Ile His Ile Thr Asn His Arg Gly 340 345 350 Phe Ile Lys Asp Ser Ile Ala Thr Trp Met Val Pro Ala Leu Val Ser 355 360 365 Glu Lys Gln Glu Glu Gln Lys Asn Cys Leu Glu Ser Ala Cys Gln Arg 370 375 380 Lys Thr Tyr Pro Met Cys Asn Gln Thr Ser Trp Glu Pro Phe Gly Gly 385 390 395 400 Gly Gln Leu Pro Ser Tyr Gly Arg Leu Thr Leu Pro Leu Asp Pro Ser 405 410 415 Ile Asp Pro Gln Leu Asn Ile Ser Phe Thr Tyr Gly Pro Val Ile Leu 420 425 430 Asn Gly Asp Gly Met Asp Tyr Tyr Glu Ser Ser Leu Ser Asp Ser Gly 435 440 445 Trp Leu Thr Ile Pro Pro Lys Asn Gly Thr Val Leu Gly Leu Ile Asn 450 455 460 Lys Ala Ser Arg Gly Asp Gln Phe Thr Val Ile Pro His Val Leu Thr 465 470 475 480 Phe Ala Pro Arg Glu Ser Ser Gly Asn Cys Tyr Leu Pro Ile Gln Thr 485 490 495 Ser Gln Ile Met Asp Lys Asp Val Leu Thr Glu Ser Asn Leu Val Val 500 505 510 Leu Pro Thr Gln Asn Phe Arg Tyr Val Ile Ala Thr Tyr Asp Ile Ser 515 520 525 Arg Gly Asp His Ala Ile Val Tyr Tyr Val Tyr Asp Pro Ile Arg Thr 530 535 540 Ile Ser Tyr Thr Tyr Pro Phe Arg Leu Thr Thr Lys Gly Arg Pro Asp 545 550 555 560 Phe Leu Arg Ile Glu Cys Phe Val Trp Asp Asp Asp Leu Trp Cys His 565 570 575 Gln Phe Tyr Arg Phe Glu Ala Asp Ile Thr Asn Ser Thr Thr Ser Val 580 585 590 Glu Asn Leu Val Arg Ile Arg Phe Ser Cys Asn Arg Ser Lys Pro 595 600 605 <210> 23 <211> 607 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> AAQ96308 <400> 23 Met Leu Ser Tyr Gln Asp Lys Val Gly Ala Phe Tyr Lys Asp Asn Ala 1 5 10 15 Arg Ala Asn Ser Ser Lys Leu Ser Leu Val Thr Glu Glu Gln Gly Gly 20 25 30 Arg Arg Pro Pro Tyr Leu Leu Phe Val Leu Leu Ile Leu Leu Val Gly 35 40 45 Ile Met Thr Leu Leu Ala Ile Thr Gly Val Arg Phe His Gln Val Ser 50 55 60 Thr Ser Asn Met Glu Phe Ser Arg Leu Leu Lys Glu Asp Met Glu Lys 65 70 75 80 Ser Glu Ala Val His His Gln Val Ile Asp Val Leu Thr Pro Leu Phe 85 90 95 Lys Ile Ile Gly Asp Glu Val Gly Leu Gln Leu Pro Gln Lys Leu Asn 100 105 110 Glu Ile Lys Gln Phe Ile Leu Gln Lys Thr Asn Phe Phe Asn Pro Asn 115 120 125 Arg Glu Phe Asp Phe Arg Asp Leu His Trp Cys Ile Asn Pro Pro Ser 130 135 140 Lys Ile Lys Val Asn Phe Thr Asn Tyr Cys Asp Thr Ile Gly Ile Lys 145 150 155 160 Lys Ser Ile Ala Ser Ala Ala Asn Pro Ile Leu Leu Ser Ala Leu Ser 165 170 175 Gly Gly Arg Gly Asp Ile Phe Pro Pro Tyr Arg Cys Ser Gly Ala Thr 180 185 190 Thr Ser Val Gly Arg Val Phe Pro Leu Ser Val Ser Leu Ser Met Ser 195 200 205 Leu Ile Ser Lys Thr Ser Glu Ile Thr Ser Met Leu Thr Ala Ile Ser 210 215 220 Asp Gly Val Tyr Gly Lys Thr Tyr Leu Leu Val Pro Asp Tyr Ile Glu 225 230 235 240 Gly Glu Phe Asp Thr Gln Lys Ile Arg Val Phe Glu Ile Gly Phe Ile 245 250 255 Lys Arg Trp Leu Asn Asn Met Pro Leu Leu Gln Thr Thr Asn Tyr Met 260 265 270 Val Leu Pro Glu Asn Ser Lys Ala Lys Val Cys Thr Ile Ala Val Gly 275 280 285 Glu Leu Thr Leu Ala Ser Leu Cys Val Asp Glu Ser Thr Val Leu Leu 290 295 300 Tyr His Asp Ser Asn Gly Ser Gln Asp Gly Ile Leu Val Val Thr Leu 305 310 315 320 Gly Ile Phe Gly Ala Thr Pro Met Asp Gln Val Glu Glu Val Ile Pro 325 330 335 Val Ala His Pro Ser Val Glu Lys Ile His Ile Thr Asn His Arg Gly 340 345 350 Phe Ile Lys Asp Ser Ile Ala Thr Trp Met Val Pro Ala Leu Val Ser 355 360 365 Glu Lys Gln Glu Glu Gln Lys Asn Cys Leu Glu Ser Ala Cys Gln Arg 370 375 380 Lys Thr Tyr Pro Met Cys Asn Gln Thr Ser Trp Glu Pro Phe Gly Gly 385 390 395 400 Gly Gln Leu Pro Ser Tyr Gly Arg Leu Thr Leu Pro Leu Asp Pro Ser 405 410 415 Ile Asp Leu Gln Leu Asn Ile Ser Phe Thr Tyr Gly Pro Val Ile Leu 420 425 430 Asn Gly Asp Gly Met Asp Tyr Tyr Glu Ser Pro Leu Ser Asp Ser Gly 435 440 445 Trp Leu Thr Ile Pro Pro Arg Asn Gly Thr Val Leu Gly Leu Ile Asn 450 455 460 Lys Ala Ser Arg Gly Asp Gln Phe Thr Val Ile Pro His Val Leu Thr 465 470 475 480 Phe Ala Pro Arg Glu Ser Ser Gly Asn Cys Tyr Leu Pro Ile Gln Thr 485 490 495 Ser Gln Ile Met Asp Lys Asp Val Leu Thr Glu Ser Asn Leu Val Val 500 505 510 Leu Pro Thr Gln Asn Phe Arg Tyr Val Ile Ala Thr Tyr Asp Ile Ser 515 520 525 Arg Gly Asp His Ala Ile Val Tyr Tyr Val Tyr Asp Pro Ile Arg Thr 530 535 540 Ile Ser Tyr Thr His Pro Phe Arg Leu Thr Thr Lys Gly Arg Pro Asp 545 550 555 560 Phe Leu Arg Ile Glu Cys Phe Val Trp Asp Asp Asp Leu Trp Cys His 565 570 575 Gln Phe Tyr Arg Phe Glu Ala Asp Ile Thr Asn Ser Thr Thr Ser Val 580 585 590 Glu Asn Leu Val Arg Ile Arg Phe Ser Cys Asn Arg Ser Lys Pro 595 600 605 <210> 24 <211> 607 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> ABF55671 <220> <221> misc_feature <222> (53)..(53) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 24 Met Leu Ser Tyr Gln Asp Lys Val Gly Ala Phe Tyr Lys Asp Asn Ala 1 5 10 15 Arg Ala Asn Ser Ser Lys Leu Ser Leu Val Thr Glu Glu Gln Gly Gly 20 25 30 Arg Arg Pro Pro Tyr Leu Leu Phe Val Leu Leu Ile Leu Leu Val Gly 35 40 45 Val Met Thr Leu Xaa Ala Ile Thr Gly Val Arg Ile His Gln Val Ser 50 55 60 Thr Ser Asn Met Glu Phe Ser Arg Leu Leu Lys Glu Asp Met Glu Lys 65 70 75 80 Ser Glu Ala Val His His Gln Val Ile Asp Val Leu Thr Pro Leu Phe 85 90 95 Lys Ile Ile Gly Asp Glu Val Gly Leu Arg Leu Pro Gln Lys Leu Asn 100 105 110 Glu Ile Lys Gln Phe Ile Leu Gln Lys Thr Asn Phe Phe Asn Pro Asn 115 120 125 Arg Glu Phe Asp Phe Arg Asp Leu His Trp Cys Ile Asn Pro Pro Ser 130 135 140 Lys Ile Lys Val Asn Phe Thr Asn Tyr Cys Asp Thr Val Gly Ile Arg 145 150 155 160 Lys Ser Ile Ala Ser Ala Ala Asn Pro Ile Leu Leu Ser Ala Leu Ser 165 170 175 Gly Gly Arg Gly Asp Ile Phe Pro Pro Tyr Arg Cys Ser Gly Ala Thr 180 185 190 Thr Ser Val Gly Arg Val Phe Pro Leu Ser Val Ser Leu Ser Met Ser 195 200 205 Leu Ile Ser Lys Thr Ser Glu Ile Thr Asn Met Leu Thr Ala Ile Ser 210 215 220 Asp Gly Val Tyr Gly Lys Thr Tyr Leu Leu Val Pro Asp Tyr Ile Glu 225 230 235 240 Gly Glu Phe Asp Thr Gln Lys Ile Arg Val Phe Glu Ile Gly Phe Ile 245 250 255 Arg Arg Trp Leu Asn Asn Met Pro Leu Leu Gln Thr Thr Asn Tyr Met 260 265 270 Val Leu Pro Glu Asn Ser Lys Ala Lys Val Cys Thr Ile Ala Val Gly 275 280 285 Glu Leu Thr Leu Ala Ser Leu Cys Val Asp Glu Ser Thr Val Leu Leu 290 295 300 Tyr His Asp Ser Asn Gly Ser Gln Asp Gly Ile Leu Val Val Thr Leu 305 310 315 320 Gly Ile Phe Gly Ala Thr Pro Met Asp Gln Val Glu Glu Val Ile Pro 325 330 335 Val Ala His Pro Ser Val Glu Lys Ile His Ile Thr Asn His Arg Gly 340 345 350 Phe Ile Lys Asp Ala Ile Ala Thr Trp Met Val Pro Ala Leu Val Ser 355 360 365 Glu Lys Gln Glu Glu Gln Lys Asn Cys Leu Glu Ser Ala Cys Gln Arg 370 375 380 Lys Thr Tyr Pro Met Cys Asn Gln Thr Ser Trp Glu Pro Phe Gly Gly 385 390 395 400 Gly Gln Leu Pro Ser Tyr Gly Arg Leu Thr Leu Pro Leu Asp Pro Ser 405 410 415 Ile Asp Leu Gln Leu Asn Ile Ser Phe Thr Tyr Gly Pro Val Ile Leu 420 425 430 Asn Gly Asp Gly Met Asp Tyr Tyr Glu Ser Ser Leu Ser Asp Ser Gly 435 440 445 Trp Leu Thr Ile Pro Pro Lys Asn Gly Thr Val Leu Gly Leu Ile Asn 450 455 460 Lys Ala Ser Arg Gly Asp Gln Phe Thr Val Thr Pro His Val Leu Thr 465 470 475 480 Ser Ala Pro Arg Glu Ser Ser Gly Asn Cys Tyr Leu Pro Ile Gln Thr 485 490 495 Ser Gln Ile Met Asp Lys Asp Val Leu Thr Glu Ser Asn Leu Val Val 500 505 510 Leu Pro Thr Gln Asn Phe Arg Tyr Val Ile Ala Thr Tyr Asp Ile Ser 515 520 525 Arg Gly Asp His Ala Ile Val Tyr Tyr Val Tyr Asp Pro Ile Arg Thr 530 535 540 Ile Ser Tyr Thr Tyr Pro Phe Arg Leu Thr Thr Lys Gly Arg Pro Asp 545 550 555 560 Phe Leu Arg Ile Glu Cys Phe Val Trp Asp Asp Asp Met Trp Cys His 565 570 575 Gln Phe Tyr Arg Phe Glu Ala Asp Ile Thr Asn Ser Thr Thr Ser Val 580 585 590 Glu Asn Leu Val Arg Ile Arg Phe Ser Cys Asn Arg Ser Lys Pro 595 600 605 <210> 25 <211> 607 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> ACS88240 <400> 25 Met Leu Ser Tyr Gln Asp Lys Val Gly Ala Phe Tyr Lys Asp Asn Ala 1 5 10 15 Arg Ala Asn Ser Ser Lys Leu Ser Leu Val Thr Glu Glu Gln Gly Gly 20 25 30 Arg Arg Pro Pro Tyr Leu Leu Phe Val Leu Leu Ile Leu Leu Val Gly 35 40 45 Ile Met Thr Leu Leu Ala Ile Thr Gly Val Arg Phe His Gln Val Ser 50 55 60 Thr Ser Asn Met Glu Phe Ser Arg Leu Leu Lys Glu Asp Met Glu Lys 65 70 75 80 Ser Glu Ala Val His His Gln Val Ile Asp Val Leu Thr Pro Leu Phe 85 90 95 Lys Ile Ile Gly Asp Glu Val Gly Leu Arg Leu Pro Gln Lys Leu Asn 100 105 110 Glu Ile Lys Gln Phe Ile Leu Gln Lys Thr Asn Phe Phe Asn Pro Asn 115 120 125 Arg Glu Phe Asp Phe Arg Asp Leu His Trp Cys Ile Asn Pro Pro Ser 130 135 140 Lys Ile Lys Val Asn Phe Thr Asn Tyr Cys Asp Thr Ile Gly Ile Arg 145 150 155 160 Gln Ser Ile Ala Ser Ala Ala Asn Pro Ile Leu Leu Ser Ala Leu Ser 165 170 175 Gly Gly Arg Gly Asp Ile Phe Pro Pro Tyr Arg Cys Ser Gly Ala Thr 180 185 190 Thr Ser Val Gly Arg Val Phe Pro Leu Ser Val Ser Leu Ser Met Ser 195 200 205 Val Ile Ser Lys Thr Ser Glu Ile Thr Asn Met Leu Thr Ala Ile Ser 210 215 220 Asp Gly Val Tyr Gly Lys Thr Tyr Leu Leu Val Pro Asp Tyr Ile Glu 225 230 235 240 Gly Glu Phe Asp Thr Gln Lys Ile Arg Val Phe Glu Ile Gly Phe Ile 245 250 255 Lys Arg Trp Leu Asn Asn Met Pro Leu Leu Gln Thr Thr Asn Tyr Met 260 265 270 Val Leu Pro Glu Asn Ser Lys Ala Lys Val Cys Thr Ile Ala Val Gly 275 280 285 Glu Leu Thr Leu Ala Ser Leu Cys Val Asp Glu Asn Thr Val Leu Leu 290 295 300 Tyr His Asp Ser Asn Gly Ser Gln Asp Gly Ile Leu Val Val Thr Leu 305 310 315 320 Gly Ile Phe Gly Ala Thr Pro Met Asp Gln Val Glu Glu Val Ile Pro 325 330 335 Val Ala His Pro Ser Ile Glu Lys Ile His Ile Thr Asn His Arg Gly 340 345 350 Phe Ile Lys Asp Ser Ile Ala Thr Trp Met Val Pro Ala Leu Val Ser 355 360 365 Glu Lys Gln Glu Glu Gln Lys Asn Cys Leu Glu Ser Ala Cys Gln Arg 370 375 380 Lys Thr Tyr Pro Met Cys Asn Gln Thr Ser Trp Glu Pro Phe Gly Gly 385 390 395 400 Arg Gln Leu Pro Ser Tyr Gly Arg Leu Thr Leu Pro Leu Asp Pro Ser 405 410 415 Met Asp Leu Gln Leu Asn Ile Ser Phe Thr Tyr Gly Pro Val Ile Leu 420 425 430 Asn Gly Asp Gly Met Asp Tyr Tyr Glu Ser Pro Leu Pro Asp Ser Gly 435 440 445 Trp Leu Thr Ile Pro Pro Lys Asn Gly Thr Val Leu Gly Leu Ile Asn 450 455 460 Lys Ala Ser Arg Gly Asp Gln Phe Thr Val Ile Pro His Val Leu Thr 465 470 475 480 Phe Ala Pro Arg Glu Ser Ser Gly Asn Cys Tyr Leu Pro Ile Gln Thr 485 490 495 Ser Gln Ile Met Asp Lys Asp Val Leu Thr Glu Ser Asn Leu Val Val 500 505 510 Leu Pro Thr Gln Asn Phe Arg Tyr Val Ile Ala Thr Tyr Asp Ile Ser 515 520 525 Arg Gly Asp His Ala Ile Val Tyr Tyr Val Tyr Asp Pro Ile Arg Thr 530 535 540 Ile Ser Tyr Thr Tyr Pro Phe Arg Leu Thr Thr Lys Gly Arg Pro Asp 545 550 555 560 Phe Leu Arg Ile Glu Cys Phe Val Trp Asp Asp Asp Leu Trp Cys His 565 570 575 Gln Phe Tyr Arg Phe Glu Ala Asp Ile Thr Asn Ser Thr Thr Ser Val 580 585 590 Glu Asn Leu Val Cys Ile Arg Phe Ser Cys Asn Arg Ser Lys Pro 595 600 605 <210> 26 <211> 607 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> ABK35770 <400> 26 Met Leu Ser Tyr Gln Asp Lys Val Gly Ala Phe Tyr Lys Asp Asn Ala 1 5 10 15 Arg Ala Asn Ser Ser Lys Leu Ser Leu Val Thr Glu Glu Gln Gly Gly 20 25 30 Arg Arg Pro Pro Tyr Leu Leu Phe Val Leu Leu Ile Leu Leu Val Gly 35 40 45 Ile Met Thr Leu Leu Ala Ile Thr Gly Val Arg Phe His Gln Val Ser 50 55 60 Thr Ser Asn Met Glu Phe Ser Arg Leu Leu Lys Glu Asp Met Glu Lys 65 70 75 80 Ser Glu Ala Val His His Gln Val Ile Asp Val Leu Thr Pro Leu Phe 85 90 95 Lys Ile Ile Gly Asp Glu Val Gly Leu Arg Leu Pro Gln Lys Leu Asn 100 105 110 Glu Ile Lys Gln Phe Ile Leu Gln Lys Thr Asn Phe Phe Asn Pro Asn 115 120 125 Arg Glu Phe Asp Phe Arg Asp Leu His Trp Cys Ile Asn Pro Pro Ser 130 135 140 Lys Ile Lys Val Asn Phe Thr Asn Tyr Cys Asp Thr Ile Gly Ile Arg 145 150 155 160 Lys Ser Ile Ala Ser Ala Ala Asn Pro Ile Leu Leu Ser Ala Leu Ser 165 170 175 Gly Gly Arg Gly Asp Ile Phe Pro Pro Tyr Arg Cys Ser Gly Ala Thr 180 185 190 Thr Ser Val Gly Arg Val Phe Pro Leu Ser Val Ser Leu Ser Met Ser 195 200 205 Leu Ile Ser Lys Thr Ser Gly Ile Thr Asn Met Leu Thr Ala Ile Ser 210 215 220 Asp Gly Val Tyr Gly Lys Thr Tyr Leu Leu Val Pro Asp Tyr Ile Glu 225 230 235 240 Gly Glu Phe Asp Thr Gln Lys Ile Arg Val Phe Glu Ile Gly Phe Ile 245 250 255 Lys Arg Trp Leu Asn Asn Met Pro Leu Phe Gln Thr Thr Asn Tyr Met 260 265 270 Val Leu Pro Glu Asn Ser Lys Ala Lys Val Cys Thr Ile Ala Val Gly 275 280 285 Glu Leu Thr Leu Ala Ser Leu Cys Val Asp Glu Ser Thr Val Leu Leu 290 295 300 Tyr His Asp Ser Asn Gly Ser Gln Gly Gly Val Leu Val Val Thr Leu 305 310 315 320 Gly Ile Phe Gly Ala Thr Pro Met Asp Gln Val Glu Glu Met Ile Pro 325 330 335 Val Ala His Pro Ser Val Glu Lys Ile His Ile Thr Asn His Arg Gly 340 345 350 Phe Ile Lys Asp Ser Ile Ala Thr Trp Met Val Pro Val Leu Val Ser 355 360 365 Glu Lys Gln Glu Glu Gln Lys Asn Cys Leu Glu Ser Ala Cys Gln Arg 370 375 380 Lys Thr Tyr Pro Met Cys Asn Gln Thr Ser Trp Glu Pro Phe Gly Gly 385 390 395 400 Gly Gln Leu Pro Ser Tyr Gly Arg Leu Thr Leu Pro Leu Asp Pro Ser 405 410 415 Ile Asp Leu Gln Leu Asn Ile Ser Phe Thr Tyr Gly Pro Val Ile Leu 420 425 430 Asn Gly Asp Gly Met Asp Tyr Tyr Glu Ser Pro Leu Leu Asp Ser Gly 435 440 445 Trp Leu Thr Ile Pro Pro Lys Asn Gly Thr Val Leu Gly Leu Ile Asn 450 455 460 Lys Ala Ser Arg Gly Asp Gln Phe Thr Val Ile Pro His Val Leu Thr 465 470 475 480 Phe Ala Pro Arg Glu Ser Ser Gly Asn Cys Tyr Leu Pro Ile Gln Thr 485 490 495 Ser Gln Ile Met Asp Lys Asp Val Leu Thr Glu Ser Asn Leu Val Val 500 505 510 Leu Pro Thr Gln Asn Phe Arg Tyr Val Ile Ala Thr Tyr Asp Ile Ser 515 520 525 Arg Gly Asp His Ala Ile Val Tyr Tyr Val Tyr Asp Pro Ile Arg Thr 530 535 540 Ile Ser Tyr Thr Tyr Pro Phe Arg Leu Thr Thr Lys Gly Arg Pro Glu 545 550 555 560 Phe Leu Arg Ile Glu Cys Phe Val Trp Asp Asp Asp Leu Trp Cys His 565 570 575 Gln Phe Tyr Arg Phe Glu Ala Asp Ile Thr Asn Ser Thr Ile Ser Val 580 585 590 Glu Asn Leu Val His Ile Arg Phe Ser Cys Asn Arg Ser Lys Pro 595 600 605 <210> 27 <211> 607 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> ACD92997 <400> 27 Met Leu Ser Tyr Gln Asp Lys Val Gly Ala Phe Tyr Lys Asp Asn Ala 1 5 10 15 Arg Ala Asn Ser Ser Lys Leu Ser Ser Val Thr Glu Glu Gln Gly Gly 20 25 30 Arg Arg Pro Pro Tyr Leu Leu Phe Val Leu Leu Ile Leu Leu Val Gly 35 40 45 Ile Met Ala Leu Leu Ala Ile Thr Gly Val Arg Phe His Gln Val Ser 50 55 60 Thr Asn Asn Met Glu Phe Ser Arg Leu Leu Lys Glu Asp Met Glu Lys 65 70 75 80 Ser Glu Ala Val His His Gln Val Ile Asp Val Leu Thr Pro Leu Phe 85 90 95 Lys Ile Ile Gly Asp Glu Val Gly Leu Arg Leu Pro Gln Lys Leu Asn 100 105 110 Glu Ile Lys Gln Phe Ile Leu Gln Lys Thr Asn Phe Phe Asn Pro Asn 115 120 125 Arg Glu Phe Asp Phe Arg Asp Leu His Trp Cys Ile Asn Pro Pro Ser 130 135 140 Lys Ile Lys Val Asn Phe Thr Asn Tyr Cys Asp Thr Ile Glu Ile Arg 145 150 155 160 Lys Ser Ile Ala Leu Ala Ala Asn Pro Ile Leu Leu Ser Ala Leu Ser 165 170 175 Gly Gly Arg Gly Asp Ile Phe Pro Pro Tyr Ser Cys Ser Gly Ala Thr 180 185 190 Thr Ser Val Gly Arg Val Phe Pro Leu Ser Val Ser Leu Ser Met Ser 195 200 205 Leu Ile Ser Lys Thr Ser Glu Ile Ile Asn Met Leu Thr Ala Ile Ser 210 215 220 Asp Gly Val Tyr Gly Lys Thr Tyr Leu Leu Val Pro Asp Tyr Ile Glu 225 230 235 240 Gly Gly Phe Asp Thr Gln Lys Ile Arg Val Phe Glu Ile Gly Phe Ile 245 250 255 Lys Arg Trp Leu Asn Asp Met Pro Leu Leu Gln Thr Thr Asn Tyr Met 260 265 270 Val Leu Pro Glu Asn Ser Lys Ala Lys Val Cys Thr Ile Ala Val Gly 275 280 285 Glu Leu Thr Leu Ala Ser Leu Cys Val Asp Glu Ser Thr Val Leu Leu 290 295 300 Tyr His Asp Ser Asp Gly Ser Gln Asp Gly Ile Leu Val Val Thr Leu 305 310 315 320 Gly Ile Phe Gly Ala Thr Pro Met Asp Gln Val Glu Glu Val Ile Pro 325 330 335 Val Ala His Pro Ser Val Glu Lys Ile His Ile Thr Asn His Arg Gly 340 345 350 Phe Ile Lys Asp Ser Ile Ala Thr Trp Met Val Pro Ala Leu Val Ser 355 360 365 Glu Lys Gln Glu Glu Gln Lys Asn Cys Leu Glu Ser Ala Cys Gln Arg 370 375 380 Lys Ser Tyr Pro Met Cys Asn Gln Thr Ser Trp Glu Pro Phe Gly Gly 385 390 395 400 Gly Gln Leu Pro Ser Tyr Gly Arg Leu Thr Leu Pro Leu Asp Pro Ser 405 410 415 Ile Asp Leu Gln Leu Asn Ile Ser Phe Thr Tyr Gly Pro Val Ile Leu 420 425 430 Asn Gly Asp Gly Met Asp Tyr Tyr Glu Ser Pro Leu Leu Asp Ser Gly 435 440 445 Trp Leu Thr Ile Pro Pro Lys Asn Gly Thr Val Leu Gly Leu Ile Asn 450 455 460 Lys Ala Ser Arg Gly Asp Gln Phe Thr Val Ile Pro His Val Leu Thr 465 470 475 480 Phe Ala Pro Arg Glu Ser Ser Gly Asn Cys Tyr Leu Pro Ile Gln Thr 485 490 495 Ser Gln Ile Met Asp Lys Asp Val Leu Thr Glu Ser Asn Leu Val Val 500 505 510 Leu Pro Thr Gln Asn Phe Arg Tyr Val Ile Ala Thr Tyr Asp Ile Ser 515 520 525 Arg Gly Asp His Ala Ile Val Tyr Tyr Val Tyr Asp Pro Ile Arg Ala 530 535 540 Ile Ser Tyr Thr Tyr Pro Phe Arg Leu Thr Thr Lys Gly Arg Pro Asp 545 550 555 560 Phe Leu Arg Ile Glu Cys Phe Val Trp Asp Asp Asp Leu Trp Cys His 565 570 575 Gln Phe Tyr Arg Phe Glu Ala Asp Ser Thr Asn Ser Thr Thr Ser Val 580 585 590 Glu Asn Leu Val Arg Ile Arg Phe Ser Cys Asn Arg Ser Lys Pro 595 600 605 <210> 28 <211> 607 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> ACI28389 <400> 28 Met Leu Ser Tyr Gln Asp Lys Val Gly Ala Phe Tyr Lys Asp Asn Ala 1 5 10 15 Arg Ala Asn Ser Ser Lys Leu Ser Leu Val Thr Glu Glu Gln Gly Gly 20 25 30 Arg Arg Pro Pro Tyr Leu Leu Phe Val Leu Leu Ile Leu Leu Val Gly 35 40 45 Ile Met Thr Leu Leu Ala Ile Thr Gly Val Arg Phe His Gln Val Ser 50 55 60 Thr Ser Asn Met Glu Phe Ser Arg Leu Leu Lys Glu Asp Met Glu Lys 65 70 75 80 Ser Glu Ala Val His His Gln Val Ile Asp Val Leu Thr Pro Leu Phe 85 90 95 Lys Ile Ile Gly Asp Glu Val Gly Leu Arg Leu Pro Gln Lys Leu Asn 100 105 110 Glu Ile Lys Gln Phe Ile Leu Gln Lys Thr Asn Phe Phe Asn Pro Asn 115 120 125 Arg Glu Phe Asp Phe Arg Asp Leu His Trp Cys Ile Asn Pro Pro Ser 130 135 140 Lys Ile Lys Val Asn Phe Thr Asn Tyr Cys Asp Thr Ile Glu Ile Arg 145 150 155 160 Lys Ser Ile Ala Ser Ala Ala Asn Pro Ile Leu Leu Ser Ala Leu Ser 165 170 175 Gly Gly Arg Gly Asp Ile Phe Pro Pro Tyr Arg Cys Ser Gly Ala Thr 180 185 190 Thr Ser Val Gly Arg Val Phe Pro Leu Ser Val Ser Leu Ser Met Ser 195 200 205 Leu Ile Ser Arg Thr Ser Glu Ile Thr Asn Met Leu Thr Ala Ile Ser 210 215 220 Asp Gly Val Tyr Gly Lys Thr Tyr Leu Leu Val Pro Asp Tyr Phe Glu 225 230 235 240 Gly Glu Phe Asp Thr Gln Lys Ile Arg Val Phe Glu Ile Gly Phe Ile 245 250 255 Lys Arg Trp Leu Asn Asp Met Pro Leu Leu Gln Thr Thr Asn Tyr Met 260 265 270 Phe Leu Pro Glu Asn Ser Lys Ala Lys Val Cys Thr Ile Ala Val Gly 275 280 285 Glu Leu Thr Leu Ala Ser Leu Cys Val Asp Glu Ser Thr Val Ser Leu 290 295 300 Tyr His Asp Gly Ser Gly Ser Gln Asp Gly Ile Leu Val Val Thr Leu 305 310 315 320 Gly Ile Phe Gly Ala Thr Pro Met Asp Gln Val Glu Glu Val Ile Pro 325 330 335 Val Ala His Pro Ser Val Glu Lys Ile His Ile Thr Asn His Arg Gly 340 345 350 Phe Ile Lys Asp Ser Ile Ala Thr Trp Met Val Pro Ala Leu Val Ser 355 360 365 Glu Lys Gln Glu Glu Gln Lys Asn Cys Leu Glu Ser Ala Cys Gln Arg 370 375 380 Lys Thr Tyr Pro Met Cys Asn Gln Thr Ser Trp Glu Pro Phe Gly Gly 385 390 395 400 Gly Gln Leu Pro Ser Tyr Gly Arg Trp Thr Leu Pro Leu Asp Pro Ser 405 410 415 Ile Asp Leu Gln Leu Asn Ile Ser Val Thr Tyr Gly Pro Val Ile Leu 420 425 430 Asn Gly Asp Gly Met Asp Tyr Tyr Glu Ser Pro Leu Ser Asp Ser Gly 435 440 445 Trp Leu Thr Ile Pro Pro Lys Asn Gly Thr Ile Leu Gly Leu Ile Asn 450 455 460 Lys Ala Ser Arg Gly Asp Gln Phe Thr Val Ile Pro His Val Leu Thr 465 470 475 480 Phe Ala Pro Arg Glu Ser Ser Gly Asn Cys Tyr Leu Pro Ile Gln Thr 485 490 495 Ser Gln Ile Met Asp Lys Asp Val Leu Thr Glu Ser Asn Leu Val Val 500 505 510 Leu Pro Thr Gln Asn Phe Arg Tyr Val Ile Ala Thr Tyr Asp Ile Ser 515 520 525 Arg Gly Asp His Ala Ile Val Tyr Tyr Val Tyr Asp Pro Ile Arg Thr 530 535 540 Ile Ser Tyr Thr Tyr Pro Phe Arg Leu Thr Thr Lys Gly Arg Pro Val 545 550 555 560 Ser Leu Arg Ile Glu Cys Phe Val Trp Asp Asp Asp Leu Trp Cys His 565 570 575 Gln Phe Tyr Gln Phe Glu Ala Asp Ile Thr Asn Ser Thr Thr Ser Val 580 585 590 Glu Asn Leu Val Arg Ile Arg Phe Ser Cys Asn Arg Ser Lys Pro 595 600 605 <210> 29 <211> 607 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> ACI28390 <400> 29 Met Leu Ser Tyr Gln Asp Lys Val Gly Ala Phe Tyr Lys Asp Asn Ala 1 5 10 15 Arg Ala Asn Ser Ser Lys Leu Ser Leu Val Thr Glu Glu Gln Gly Gly 20 25 30 Arg Arg Pro Pro Tyr Leu Leu Phe Val Leu Leu Ile Leu Leu Val Gly 35 40 45 Ile Met Thr Leu Leu Ala Ile Thr Gly Val Arg Phe His Gln Val Ser 50 55 60 Thr Ser Asn Met Glu Phe Ser Arg Leu Leu Lys Glu Asp Met Glu Lys 65 70 75 80 Ser Glu Ala Val His His Gln Val Met Asp Val Leu Thr Pro Leu Phe 85 90 95 Lys Ile Ile Gly Asp Glu Val Gly Leu Arg Leu Pro Gln Lys Leu Asn 100 105 110 Glu Ile Lys Gln Phe Ile Leu Gln Lys Thr Asn Phe Phe Asn Pro Asn 115 120 125 Arg Glu Phe Asp Phe Arg Asp Leu His Trp Cys Ile Asn Pro Pro Ser 130 135 140 Lys Ile Lys Val Asn Phe Ser Asn Tyr Cys Asp Thr Ile Gly Ile Arg 145 150 155 160 Lys Ser Ile Ala Ser Ala Ala Asn Pro Ile Leu Leu Ser Ala Leu Ser 165 170 175 Gly Gly Arg Gly Asp Ile Phe Pro Pro Tyr Arg Cys Asn Gly Ala Ala 180 185 190 Thr Ser Ile Gly Arg Val Phe Pro Leu Ser Val Ser Leu Ser Met Ser 195 200 205 Leu Ile Ser Arg Thr Ala Glu Ile Ile Asn Met Leu Thr Ala Ile Ser 210 215 220 Asp Gly Val Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Leu Val Pro Asp Tyr Ile Glu 225 230 235 240 Gly Glu Phe Glu Thr Gln Lys Ile Arg Val Phe Glu Ile Gly Phe Ile 245 250 255 Lys Arg Trp Leu Asn Asp Met Ser Leu Leu Gln Thr Thr Asn Tyr Met 260 265 270 Val Leu Pro Glu Asn Ser Lys Ala Lys Val Cys Thr Ile Ala Val Gly 275 280 285 Glu Leu Thr Leu Ala Ser Leu Cys Val Asp Glu Ser Thr Val Leu Leu 290 295 300 Tyr His Asp Ser Asn Gly Ser Gln Asp Gly Ile Leu Val Val Thr Leu 305 310 315 320 Gly Ile Phe Trp Gly Thr Pro Met Asp Gln Val Glu Glu Val Ile Pro 325 330 335 Val Ala His Pro Ser Val Glu Lys Ile His Ile Thr Asn His Arg Gly 340 345 350 Phe Ile Lys Asp Ser Lys Ala Ile Trp Met Val Pro Ala Leu Val Ser 355 360 365 Glu Lys Gln Glu Glu Gln Lys Asn Cys Leu Glu Ser Ala Cys Gln Arg 370 375 380 Lys Thr Tyr Pro Met Cys Asn Gln Thr Ser Trp Glu Pro Phe Gly Gly 385 390 395 400 Gly Gln Leu Pro Ser Tyr Gly Arg Leu Thr Leu Pro Leu Asp Pro Ser 405 410 415 Ile Asp Leu Gln Leu Asn Ile Ser Phe Thr Tyr Gly Pro Val Ile Leu 420 425 430 Asn Gly Asp Gly Met Asp Tyr Tyr Glu Ser Pro Leu Leu Asp Ser Gly 435 440 445 Trp Leu Thr Ile Pro Pro Lys Asn Gly Thr Val Leu Gly Leu Met Asn 450 455 460 Lys Ala Ser Arg Gly Asp Gln Phe Thr Val Ile Pro His Val Leu Thr 465 470 475 480 Phe Ala Pro Arg Glu Ser Gly Gly Asn Cys Tyr Leu Pro Ile Gln Thr 485 490 495 Ser Gln Ile Met Asp Lys Asp Val Leu Ala Glu Ser Asn Leu Val Val 500 505 510 Leu Pro Thr Gln Asn Phe Arg Tyr Val Ile Ala Thr Tyr Asp Ile Ser 515 520 525 Arg Asp Asp His Ala Ile Val Tyr Tyr Val Tyr Asp Pro Ile Arg Thr 530 535 540 Ile Ser Tyr Thr Tyr Pro Phe Arg Leu Thr Thr Lys Gly Arg Pro Asp 545 550 555 560 Phe Leu Arg Ile Glu Cys Phe Val Trp Asp Asp Asp Leu Trp Cys His 565 570 575 Gln Phe Tyr Arg Phe Glu Ala Asp Ile Thr Asn Ser Thr Thr Ser Val 580 585 590 Glu Asn Leu Val Arg Ile Arg Phe Ser Cys Asn Arg Ser Lys Pro 595 600 605 <210> 30 <211> 607 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> ACN58242 <400> 30 Met Leu Ser Tyr Gln Asp Lys Val Gly Ala Phe Tyr Lys Asp Asn Ala 1 5 10 15 Arg Ala Asn Ser Ser Lys Leu Ser Leu Val Thr Glu Glu Gln Gly Gly 20 25 30 Arg Arg Pro Pro Tyr Leu Leu Phe Val Leu Leu Ile Leu Leu Thr Gly 35 40 45 Ile Leu Ala Leu Leu Ala Ile Thr Arg Val Arg Phe His Gln Val Ser 50 55 60 Thr Ser Asn Met Glu Phe Ser Arg Leu Leu Lys Glu Asp Met Glu Lys 65 70 75 80 Ser Glu Ala Val His His Gln Val Ile Asp Val Leu Thr Pro Leu Phe 85 90 95 Lys Ile Ile Gly Asp Glu Ile Gly Leu Arg Leu Pro Gln Lys Leu Asn 100 105 110 Glu Ile Lys Gln Phe Ile Leu Gln Lys Thr Asn Phe Phe Asn Pro Asn 115 120 125 Arg Glu Phe Asp Phe Arg Asp Leu His Trp Cys Ile Asn Pro Pro Ser 130 135 140 Lys Ile Lys Val Asn Phe Thr Asn Tyr Cys Asp Thr Val Gly Val Lys 145 150 155 160 Lys Ser Ile Ala Ser Ala Ala Asn Pro Ile Ile Leu Ser Ala Leu Ser 165 170 175 Gly Ala Arg Gly Asp Ile Phe Pro Pro Cys Arg Cys Ser Gly Ala Thr 180 185 190 Thr Ser Val Gly Arg Val Phe Pro Leu Ser Val Ser Leu Ser Met Ser 195 200 205 Leu Ile Ser Arg Thr Ser Glu Ile Ile Asn Met Leu Thr Ala Ile Ser 210 215 220 Asp Gly Met Tyr Gly Lys Thr Tyr Leu Leu Val Pro Asp Tyr Ile Glu 225 230 235 240 Gly Glu Phe Asp Ser Gln Lys Ile Arg Val Phe Glu Ile Gly Phe Ile 245 250 255 Arg Arg Trp Leu Asn Asp Met Pro Leu Leu Gln Thr Thr Asn Tyr Met 260 265 270 Val Leu Pro Glu Thr Ser Lys Ala Lys Val Cys Thr Ile Ala Val Gly 275 280 285 Glu Leu Thr Leu Ala Ser Leu Cys Val Asp Glu Ser Thr Val Leu Leu 290 295 300 Tyr His Asp Ser Asn Gly Ser Gln Asn Gly Ile Leu Val Val Thr Leu 305 310 315 320 Gly Ile Phe Gly Ala Thr Pro Met Asp Gln Val Glu Glu Val Ile Pro 325 330 335 Ile Ala His Pro Ser Val Glu Arg Ile His Ile Thr Asn His Arg Gly 340 345 350 Phe Ile Lys Asp Ser Ile Val Thr Trp Met Val Pro Val Leu Val Ser 355 360 365 Glu Lys Gln Glu Glu Gln Lys Asn Cys Leu Glu Ser Ala Cys Gln Arg 370 375 380 Lys Thr Tyr Pro Met Cys Asn Gln Thr Ser Trp Glu Pro Phe Gly Gly 385 390 395 400 Gly Gln Leu Pro Ser Tyr Gly Arg Leu Thr Leu Pro Leu Asp Pro Ser 405 410 415 Ile Asp Leu Gln Leu Asn Ile Ser Phe Thr Tyr Gly Pro Val Ile Leu 420 425 430 Asn Gly Asp Gly Met Asp Tyr Tyr Glu Ser Pro Leu Leu Asp Ser Gly 435 440 445 Trp Leu Thr Ile Pro Pro Lys Asn Gly Thr Val Leu Gly Leu Ile Asn 450 455 460 Lys Ala Ser Arg Gly Asp Gln Phe Thr Val Thr Pro His Val Leu Thr 465 470 475 480 Phe Ala Pro Arg Glu Ser Ser Gly Asn Cys Tyr Leu Pro Ile Gln Thr 485 490 495 Ser Gln Ile Met Asp Lys Asp Val Leu Thr Glu Ser Asn Leu Val Val 500 505 510 Leu Pro Thr Gln Asn Phe Arg Tyr Val Ile Ala Thr Tyr Asp Ile Ser 515 520 525 Arg Gly Asp His Ala Ile Val Tyr Tyr Val Tyr Asp Pro Ile Arg Thr 530 535 540 Ile Ser Tyr Thr Tyr Pro Phe Arg Leu Thr Thr Lys Gly Arg Pro Asp 545 550 555 560 Phe Leu Arg Ile Glu Cys Phe Val Trp Asp Asp Asp Leu Trp Cys His 565 570 575 Gln Phe Tyr Arg Phe Glu Ala Asn Ile Thr Asn Ser Thr Thr Ser Val 580 585 590 Glu Asn Leu Val Arg Ile Arg Phe Ser Cys Asn Arg Ser Lys Pro 595 600 605 <210> 31 <211> 607 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> ABB51156 <220> <221> misc_feature <222> (343)..(343) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 31 Met Leu Ser Tyr Gln Asp Lys Val Gly Ala Phe Tyr Lys Asp Asn Ala 1 5 10 15 Arg Ala Asn Ser Ser Lys Leu Ser Leu Val Thr Glu Glu Gln Gly Gly 20 25 30 Arg Arg Pro Pro Phe Leu Leu Phe Val Leu Leu Val Leu Leu Val Gly 35 40 45 Ile Met Ala Leu Leu Ala Ile Thr Gly Val Arg Phe His Gln Val Ser 50 55 60 Thr Ser Asn Met Glu Phe Ser Arg Leu Leu Lys Glu Asp Met Glu Lys 65 70 75 80 Ser Glu Ala Val His His Gln Val Ile Asp Val Leu Thr Pro Leu Phe 85 90 95 Lys Ile Ile Gly Asp Glu Ile Gly Leu Arg Leu Pro Gln Lys Leu Asn 100 105 110 Glu Ile Lys Gln Phe Ile Leu Gln Lys Thr Asn Phe Phe Asn Pro Asn 115 120 125 Arg Glu Phe Asp Phe Arg Asp Leu His Trp Cys Ile Asn Pro Pro Ser 130 135 140 Lys Ile Lys Val Asn Phe Thr Asn Tyr Cys Asp Thr Ile Gly Ile Arg 145 150 155 160 Lys Ser Ile Ala Ser Ala Ala Asn Pro Ile Leu Leu Ser Ala Leu Ser 165 170 175 Gly Gly Arg Gly Asp Ile Phe Pro Pro Tyr Lys Cys Asn Gly Ala Ala 180 185 190 Thr Ser Val Gly Arg Val Phe Pro Leu Ser Val Ser Leu Ser Met Ser 195 200 205 Leu Ile Ser Lys Thr Ser Gly Ile Ile Asn Met Leu Thr Ala Ile Ser 210 215 220 Asp Gly Val Tyr Gly Lys Thr Tyr Leu Leu Met Pro Asp Tyr Ile Glu 225 230 235 240 Gly Glu Phe Asp Thr Gln Lys Ile Arg Val Phe Glu Ile Gly Phe Ile 245 250 255 Lys Arg Trp Leu Asn Asp Met Pro Leu Leu Gln Thr Thr Asn Tyr Ile 260 265 270 Val Leu Pro Glu Asn Ser Lys Ala Lys Val Cys Thr Ile Ala Val Gly 275 280 285 Glu Leu Thr Leu Ala Ser Leu Cys Val Asp Glu Ser Thr Val Leu Leu 290 295 300 Tyr His Asp Ser Asn Gly Ser Gln Asp Gly Ile Leu Val Val Thr Leu 305 310 315 320 Gly Ile Phe Gly Ala Thr Pro Met Asp Gln Val Glu Glu Val Ile Pro 325 330 335 Val Ala His Pro Ser Val Xaa Lys Ile His Ile Thr Asn His Arg Gly 340 345 350 Phe Ile Lys Asp Ser Ile Ala Thr Trp Met Val Pro Ala Leu Ile Ser 355 360 365 Gly Glu Gln Glu Glu Gln Lys Asn Cys Leu Glu Ser Ala Cys Gln Arg 370 375 380 Lys Ser Tyr Pro Met Cys Asn Gln Thr Ser Trp Lys Pro Phe Gly Gly 385 390 395 400 Gly Gln Leu Pro Ser Tyr Gly Arg Leu Thr Leu Pro Leu Asp Pro Gly 405 410 415 Ile Asp Leu Gln Leu Asn Ile Ser Phe Thr Tyr Gly Pro Val Ile Leu 420 425 430 Asn Gly Asp Gly Met Asp Tyr Tyr Glu Ser Pro Leu Leu Asp Ser Gly 435 440 445 Trp Leu Thr Ile Pro Pro Lys Asn Gly Thr Ile Leu Gly Leu Ile Asn 450 455 460 Lys Ala Ser Arg Gly Asp Gln Phe Thr Val Ile Pro His Val Leu Thr 465 470 475 480 Phe Ala Pro Arg Glu Ser Ser Gly Asn Cys Tyr Leu Pro Ile Gln Thr 485 490 495 Ser Gln Ile Met Asp Lys Asp Val Leu Thr Glu Ser Asn Leu Val Val 500 505 510 Leu Pro Thr Gln Asn Phe Arg Tyr Val Ile Ala Thr Tyr Asp Ile Ser 515 520 525 Arg Asn Asp His Ala Ile Val Tyr Tyr Val Tyr Asp Pro Ile Arg Thr 530 535 540 Ile Ser Tyr Thr His Pro Phe Arg Leu Thr Thr Lys Gly Arg Pro Asp 545 550 555 560 Phe Leu Arg Ile Glu Cys Phe Val Trp Asp Asp Asp Leu Trp Cys His 565 570 575 Gln Phe Tyr Arg Phe Glu Ala Asp Ile Thr Asn Ser Ala Thr Ser Val 580 585 590 Glu Asn Leu Val Arg Ile Arg Phe Ser Cys Asn Arg Ser Lys Pro 595 600 605 <210> 32 <211> 607 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> ABK35780 <400> 32 Met Leu Ser Tyr Gln Asp Lys Val Ser Ala Phe Tyr Lys Asp Asn Ala 1 5 10 15 Arg Ala Asn Ser Ser Lys Leu Ser Leu Val Thr Glu Glu His Gly Ser 20 25 30 Arg Arg Pro Pro Tyr Leu Leu Phe Ile Leu Leu Ile Leu Leu Val Gly 35 40 45 Ile Met Ala Leu Leu Ala Ile Thr Gly Ala Arg Phe His Gln Val Ser 50 55 60 Thr Ser Asn Met Glu Phe Ser Arg Leu Leu Lys Glu Asp Met Glu Lys 65 70 75 80 Ser Glu Ala Val His His Gln Val Ile Asp Val Leu Thr Pro Leu Phe 85 90 95 Lys Ile Ile Gly Asp Glu Ile Gly Leu Arg Leu Pro Gln Lys Leu Asn 100 105 110 Glu Ile Lys Gln Phe Ile Leu Gln Lys Thr Asn Phe Phe Asn Pro Lys 115 120 125 Arg Glu Phe Asp Phe Arg Asp Leu His Trp Cys Ile Asn Pro Pro Ser 130 135 140 Lys Ile Lys Val Asn Phe Thr Asn Tyr Cys Asp Thr Ile Gly Ile Arg 145 150 155 160 Lys Ser Ile Ala Leu Ala Ala Asn Pro Ile Leu Leu Ser Ala Leu Ser 165 170 175 Arg Gly Arg Gly Asp Ile Phe Pro Pro Tyr Arg Cys Ser Gly Ala Ala 180 185 190 Thr Ser Val Gly Arg Val Phe Pro Leu Ser Val Ser Leu Ser Met Ser 195 200 205 Leu Ile Ser Arg Thr Ser Glu Ile Ile Asn Met Leu Thr Ala Ile Ser 210 215 220 Asp Gly Val Tyr Gly Lys Thr Tyr Leu Leu Val Pro Asp Tyr Ile Glu 225 230 235 240 Gly Glu Phe Asp Thr Gln Lys Ile Arg Val Phe Glu Ile Gly Phe Ile 245 250 255 Lys Arg Trp Leu Asn Asp Met Pro Leu Leu Gln Thr Thr Asn Tyr Met 260 265 270 Val Leu Pro Glu Asn Ser Lys Ala Lys Val Cys Thr Ile Ala Val Gly 275 280 285 Glu Leu Thr Leu Ala Ser Leu Cys Val Asp Glu Ser Thr Val Leu Leu 290 295 300 Tyr His Asp Ser Asn Gly Ser Gln Asp Gly Ile Leu Val Val Thr Leu 305 310 315 320 Gly Ile Phe Gly Ala Thr Pro Met Asp Gln Val Glu Glu Val Ile Pro 325 330 335 Val Ala His Pro Ser Val Glu Lys Ile His Ile Thr Asn His Arg Gly 340 345 350 Phe Ile Lys Asp Ser Ile Ala Thr Trp Met Val Pro Val Leu Val Ser 355 360 365 Glu Asn Gln Glu Glu Gln Lys Asn Cys Leu Glu Ser Ala Cys Gln Arg 370 375 380 Lys Ser Tyr Pro Met Cys Asn Gln Thr Ser Trp Glu Pro Phe Gly Gly 385 390 395 400 Gly Gln Leu Pro Ser Tyr Gly Arg Leu Thr Leu Pro Leu Asp Pro Gly 405 410 415 Ile Asp Leu Gln Leu Asn Leu Ser Phe Thr Tyr Gly Pro Ile Ile Leu 420 425 430 Asn Gly Asp Gly Met Asp Tyr Tyr Glu Ser Pro Leu Leu Asn Ser Gly 435 440 445 Trp Leu Thr Ile Pro Pro Lys Asn Gly Thr Ile Leu Gly Leu Ile Asn 450 455 460 Lys Ala Ser Arg Gly Asp Gln Phe Thr Val Thr Pro His Val Leu Thr 465 470 475 480 Phe Ala Pro Arg Glu Ser Ser Gly Asn Cys Tyr Leu Pro Ile Gln Thr 485 490 495 Ser Gln Ile Met Asp Lys Asp Val Leu Thr Glu Ser Asn Leu Val Val 500 505 510 Leu Pro Thr Gln Asn Phe Arg Tyr Val Ile Ala Thr Tyr Asp Ile Ser 515 520 525 Arg Asp Asp His Ala Ile Val Tyr Tyr Val Tyr Asp Pro Ile Arg Thr 530 535 540 Ile Ser Tyr Thr Tyr Pro Phe Arg Leu Thr Thr Lys Gly Arg Pro Asp 545 550 555 560 Phe Leu Arg Ile Glu Cys Phe Val Trp Asp Tyr Asp Leu Trp Cys His 565 570 575 Gln Phe Tyr Arg Phe Glu Ala Asp Ile Thr Asn Ser Thr Thr Ser Val 580 585 590 Glu Asn Leu Val Arg Ile Arg Phe Ser Cys Asn Arg Ser Lys Pro 595 600 605 <210> 33 <211> 607 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> ACJ46470 <400> 33 Met Leu Ser Tyr Gln Asp Lys Val Gly Ala Phe Tyr Lys Asp Asn Ala 1 5 10 15 Arg Ala Asn Ser Ser Lys Leu Ser Leu Val Thr Glu Glu Gln Gly Gly 20 25 30 Arg Arg Pro Pro Tyr Leu Phe Phe Val Leu Leu Thr Leu Leu Ile Gly 35 40 45 Ile Leu Ala Leu Leu Ala Ile Thr Gly Val Arg Phe His Gln Val Ser 50 55 60 Thr Ser Asn Met Glu Phe Ser Arg Leu Leu Lys Glu Asp Met Glu Lys 65 70 75 80 Ser Glu Ala Val His His Gln Val Ile Asp Val Leu Thr Pro Leu Phe 85 90 95 Lys Ile Ile Gly Asp Glu Ile Gly Leu Arg Leu Pro Gln Lys Leu Asn 100 105 110 Glu Ile Lys Gln Phe Ile Leu Gln Lys Thr Asn Phe Phe Asn Pro Asn 115 120 125 Arg Glu Phe Asp Phe Arg Asp Leu His Trp Cys Ile Asn Pro Pro Ser 130 135 140 Lys Ile Lys Val Asn Phe Thr Asn Tyr Cys Asp Thr Val Gly Val Lys 145 150 155 160 Lys Ser Ile Thr Ser Ala Ala Asn Pro Ile Ile Leu Ser Ala Leu Ser 165 170 175 Gly Ala Arg Gly Asp Ile Phe Pro Pro Tyr Arg Cys Ser Gly Ala Thr 180 185 190 Thr Ser Val Gly Arg Val Phe Pro Leu Ser Val Ser Leu Ser Met Ser 195 200 205 Leu Ile Ser Arg Thr Ser Glu Ile Ile Asn Met Leu Thr Ala Ile Ser 210 215 220 Asp Gly Val Tyr Gly Lys Thr Tyr Leu Leu Val Pro Asp Tyr Ile Glu 225 230 235 240 Gly Glu Phe Asp Ser Gln Lys Ile Arg Val Phe Glu Ile Gly Phe Ile 245 250 255 Lys Arg Trp Leu Asn Asp Met Pro Leu Leu Gln Thr Thr Asn Tyr Met 260 265 270 Val Leu Pro Glu Thr Ser Lys Ala Lys Val Cys Thr Ile Ala Val Gly 275 280 285 Glu Leu Thr Leu Ala Ser Leu Cys Val Asp Glu Ser Thr Val Leu Leu 290 295 300 Tyr His Asp Ser Asn Gly Ser Gln Asn Gly Ile Leu Val Val Thr Leu 305 310 315 320 Gly Ile Phe Gly Ala Thr Ser Met Asp Gln Val Glu Glu Val Ile Pro 325 330 335 Ile Ala His Pro Ser Val Glu Arg Ile His Ile Thr Asn His Arg Gly 340 345 350 Phe Ile Lys Asp Ser Ile Val Thr Trp Met Val Pro Val Leu Val Ser 355 360 365 Glu Lys Gln Glu Glu Gln Lys Asn Cys Leu Glu Ser Ala Cys Gln Arg 370 375 380 Lys Ser Tyr Pro Met Cys Asn Gln Thr Ser Trp Glu Pro Phe Gly Gly 385 390 395 400 Gly Gln Leu Pro Ser Tyr Gly Arg Leu Thr Leu Pro Leu Asp Pro Ser 405 410 415 Ile Asp Leu Gln Leu Asn Ile Ser Phe Thr Tyr Gly Pro Val Ile Leu 420 425 430 Asn Gly Asp Gly Met Asp Tyr Tyr Glu Ser Pro Leu Leu Glu Ser Gly 435 440 445 Trp Leu Thr Ile Pro Pro Lys Asn Gly Thr Val Leu Gly Leu Ile Asn 450 455 460 Lys Ala Ser Arg Gly Asp Gln Phe Thr Ala Thr Pro His Val Leu Thr 465 470 475 480 Phe Ala Pro Arg Glu Ser Ser Gly Asn Cys Tyr Leu Pro Ile Gln Thr 485 490 495 Ser Gln Ile Met Asp Lys Asp Val Leu Thr Glu Ser Asn Leu Val Val 500 505 510 Leu Pro Thr Gln Asn Phe Arg Tyr Val Ile Ala Thr Tyr Asp Ile Ser 515 520 525 Arg Gly Asp His Ala Ile Val Tyr Tyr Val Tyr Asp Pro Ile Arg Thr 530 535 540 Ile Ser Tyr Thr Tyr Pro Phe Arg Leu Thr Thr Lys Gly Arg Pro Asp 545 550 555 560 Phe Leu Arg Ile Glu Cys Phe Val Trp Asp Asp Asp Leu Trp Cys His 565 570 575 Gln Phe Tyr Arg Phe Glu Ala Asn Ile Thr Asn Ser Thr Thr Ser Val 580 585 590 Glu Asn Leu Val Arg Ile Arg Phe Ser Cys Asn Arg Ser Lys Pro 595 600 605 <210> 34 <211> 607 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> ABX84040 <400> 34 Met Leu Ser Tyr Gln Asp Lys Val Gly Ala Phe Tyr Lys Asp Asn Ala 1 5 10 15 Arg Ala Asn Ser Ser Lys Leu Ser Leu Val Thr Glu Glu Gln Gly Gly 20 25 30 Arg Arg Pro Pro Tyr Leu Leu Phe Val Leu Leu Ile Leu Leu Ile Gly 35 40 45 Ile Leu Ala Leu Leu Ala Ile Thr Gly Val Arg Phe His Gln Val Ser 50 55 60 Thr Ser Asn Met Glu Phe Ser Arg Leu Leu Lys Glu Asp Met Glu Lys 65 70 75 80 Ser Glu Ala Val His His Gln Val Ile Asp Val Leu Thr Pro Leu Phe 85 90 95 Lys Ile Ile Gly Asp Glu Ile Gly Leu Arg Leu Pro Gln Lys Leu Asn 100 105 110 Glu Ile Lys Gln Phe Ile Leu Gln Lys Thr Asn Phe Phe Asn Pro Asn 115 120 125 Arg Glu Phe Asp Phe Arg Asp Leu His Trp Cys Ile Asn Pro Pro Ser 130 135 140 Lys Ile Lys Val Asn Phe Thr Asn Tyr Cys Asp Thr Val Gly Val Lys 145 150 155 160 Lys Ser Ile Ala Ser Ala Ala Asn Pro Ile Ile Leu Ser Ala Leu Ser 165 170 175 Gly Ala Arg Gly Asp Ile Phe Pro Pro Tyr Arg Cys Ser Gly Ala Thr 180 185 190 Thr Ser Val Gly Arg Val Phe Pro Leu Ser Val Ser Leu Ser Met Ser 195 200 205 Leu Ile Ser Arg Thr Ser Glu Ile Ile Asn Met Leu Thr Ala Ile Ser 210 215 220 Asp Gly Val Tyr Gly Lys Thr Tyr Met Leu Val Pro Asp Tyr Ile Glu 225 230 235 240 Gly Glu Phe Asp Ser Gln Lys Ile Arg Val Phe Glu Ile Gly Phe Ile 245 250 255 Lys Arg Trp Leu Asn Asn Met Pro Leu Leu Gln Thr Thr Asn Tyr Met 260 265 270 Val Leu Pro Glu Thr Ser Lys Ala Lys Val Cys Thr Ile Ala Val Gly 275 280 285 Glu Leu Thr Leu Ala Ser Leu Cys Val Asp Glu Ser Thr Val Leu Leu 290 295 300 Tyr His Asp Ser Asn Gly Ser Gln Asn Gly Ile Leu Val Val Thr Leu 305 310 315 320 Gly Ile Phe Gly Ala Thr Pro Met Asp Gln Val Glu Glu Val Ile Pro 325 330 335 Ile Ala His Pro Ser Val Glu Arg Ile His Ile Thr Asn His Arg Gly 340 345 350 Phe Ile Lys Asp Ser Val Val Thr Trp Met Val Pro Val Leu Val Ser 355 360 365 Glu Lys Gln Glu Glu Gln Lys Asn Cys Leu Glu Ser Ala Cys Gln Arg 370 375 380 Lys Ser Tyr Pro Met Cys Asn Gln Thr Ser Trp Glu Pro Phe Gly Gly 385 390 395 400 Gly Gln Leu Pro Ser Tyr Gly Arg Leu Thr Leu Pro Leu Asp Pro Ser 405 410 415 Val Asp Leu Gln Leu Asn Ile Ser Phe Thr Tyr Gly Pro Val Ile Leu 420 425 430 Asn Gly Asp Gly Met Asp Tyr Tyr Glu Ser Pro Leu Leu Glu Ser Gly 435 440 445 Trp Leu Ala Ile Pro Pro Lys Asn Gly Thr Val Leu Gly Leu Ile Asn 450 455 460 Lys Ala Ser Arg Gly Asp Gln Phe Thr Val Thr Pro His Val Leu Thr 465 470 475 480 Phe Ala Pro Arg Glu Ser Ser Gly Asn Cys Tyr Leu Pro Ile Gln Thr 485 490 495 Ser Gln Ile Met Asp Lys Asp Val Leu Thr Glu Ser Asn Leu Val Val 500 505 510 Leu Pro Thr Gln Asn Phe Arg Tyr Val Ile Ala Thr Tyr Asp Ile Ser 515 520 525 Arg Gly Asp His Ala Ile Val Tyr Tyr Val Tyr Asp Pro Ile Arg Thr 530 535 540 Ile Ser Tyr Thr Tyr Pro Phe Arg Leu Thr Thr Lys Gly Arg Pro Asp 545 550 555 560 Phe Leu Arg Ile Glu Cys Phe Val Trp Asp Asp Asp Leu Trp Cys His 565 570 575 Gln Phe Tyr Arg Phe Glu Ala Asn Ile Thr Asn Ser Thr Thr Ser Val 580 585 590 Glu Asn Leu Val Arg Ile Arg Phe Ser Cys Asn Arg Ser Lys Pro 595 600 605 <210> 35 <211> 1824 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> wildtype DNA encoding CDV HA (AAQ05830) <400> 35 atgctctcct accaagacaa ggtgggtgcc ttctataagg ataatgcaag agctaattca 60 tccaagctgt ccttagtgac agaagagcaa gggggcagga gaccacccta tttgctgttt 120 gtccttctca tccttctggt tggaatcatg accttgcttg ctatcactgg agttcgattt 180 caccaagtat caactagcaa tatggaattt agcagattgc tgaaagagga tatggagaaa 240 tcagaggccg tacatcacca agtcatagat gtcttgacac cgctcttcaa aattattgga 300 gatgaggttg ggttacggtt gccacaaaaa ctaaacgaga tcaaacaatt tatccttcaa 360 aagacaaact tcttcaatcc gaacagggaa ttcgacttcc gcgatctcca ctggtgcatt 420 aatccaccta gtaagatcaa ggtgaatttt actaattact gcgatacaat tgggatcaga 480 aaatctattg catcggcagt aaatcccatc cttttatcag cactctccgg aggcagaggt 540 gacatattcc caccatacag atgcagtgga gctactactt cagtgggcag agttttcccc 600 ctatcagtat cattgtccat gtctttgatc tcaaaaacat cagagataac caatatgcta 660 actgctatct cagacggagt gtatggtaaa acctatttgc tagtgcctga ttacattgaa 720 ggggagttcg acacgcaaaa gattcgagtc tttgagatag ggttcatcaa acggtggctg 780 aataacatgc cattactcca gacaaccaac tacatggtcc tcccggagaa ttccaaagcc 840 aaggtatgta ctatagcagt gggcgagttg acactggctt ccttgtgtgt agatgagagc 900 accgtattgt tatatcatga cagcaatggt tcacaagatg gtattctagt agtgacgctg 960 gggatatttg gggcaacacc tatggatcaa gttgaagaag tgatacctgt cgctcaccca 1020 tcagtagaaa aaatacatat aacaaatcac cgtgggttca taaaagattc aatagcaacc 1080 tggatggtgc ctgcattggt ctctgagaaa caagaggaac aaaaaaattg tctggagtcg 1140 gcttgtcaaa gaaaaaccta ccctatgtgc aaccaaacgt catgggaacc ctttggaggg 1200 ggacagttgc catcttatgg gcggttgaca ttatctctag atccaagcat tgaccttcaa 1260 cttaacatat catttacata cggtccagtt atactgaatg gagacggtat ggattattat 1320 ggaagctcac tttcggactc cggatggctt accattcctc ccaagaatgg aacagtcctt 1380 ggattgataa acaaagcaag tagaggagac cagttcactg taatccccca tgtgttgaca 1440 tttgcgccca gggaatcaag tggaaattgt tatttaccta ttcaaacatc ccagattatg 1500 gataaagatg tcctgactga gtccaattta gtggtgttgc ctacacagaa ttttagatat 1560 gtcatagcaa catatgatat atctcggggc gatcatgcaa ttgtttatta tgtttatgac 1620 ccaatccgga cgatttctta tacgtaccca tttagactaa ctaccaaggg tagacctgat 1680 ttcctaagaa ttgaatgttt tgtgtgggat gacgatttgt ggtgtcacca attttaccga 1740 tttgaggctg acatcaccaa ctctacaacc agtgttgaga atttagtccg tataagattc 1800 tcatgtgacc gttcaaaacc ttga 1824 <210> 36 <211> 1824 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> AF478543 encoding CDV HA AAQ05828 <400> 36 atgctctcct accaagacaa ggtgggtgcc ttctataagg ataatgcaag agctaattca 60 tccaagctgt ccttagtgac agaagagcaa gggggcagga gaccacccta tttgctgttt 120 gtccttctca tccttctggt tggaatcatg accttgcttg ctatcactgg agttcgattt 180 caccaagtat caactagcaa tatggaattt agcagattgc tgaaagagga tatggagaaa 240 tcagaggccg tacatcacca agtcatagat gtcttgacac cgctcttcaa aattattgga 300 gatgaggttg ggttacggtt gccacaaaaa ctaaacgaga tcaaacaatt tatccttcaa 360 aagacaaact tcttcaatcc gaacagggaa ttcgacttcc gcgatctcca ctggtgcatt 420 aatccaccta gtaagatcaa ggtgaatttt actaattact gcgatacaat tgggatcaga 480 aaatctattg catcggcagt aaatcccatc cttttatcag cactctccgg aggcagaggt 540 gacatattcc caccatacag atgcagtgga gctactactt cagtgggcag agttttcccc 600 ctatcagtat cattgtccat gtctttgatc tcaaaaacat cagagataac caatatgcta 660 actgctatct cagacggagt gtatggtaaa acctatttgc tagtgcctga ttacattgaa 720 ggggagttcg acacgcaaaa gattcgagtc tttgagatag ggttcatcaa acggtggctg 780 aataacatgc cattactcca gacaaccaac tacatggtcc tcccggagaa ttccaaagcc 840 aaggtatgta ctatagcagt gggcgagttg acactggctt ccttgtgtgt agatgagagc 900 accgtattgt tatatcatga cagcaatggt tcacaagatg gtattctagt agtgacgctg 960 gggatatttg gggcaacacc tatggatcaa gttgaagaag tgatacctgt cgctcaccca 1020 tcagtagaaa aaatacatat aacaaatcac cgtgggttca taaaagattc aatagcaacc 1080 tggatggtgc ctgcattggt ctctgagaaa caagaggaac aaaaaaattg tctggagtcg 1140 gcttgtcaaa gaaaaaccta ccctatgtgc aaccaaacgt catgggaacc ctttggaggg 1200 ggacagttgc catcttatgg gcggttgaca ttatctctag atccaagcat tgaccttcaa 1260 cttaacatat catttacata cggtccagtt atactgaatg gagacggtat ggattattat 1320 ggaagctcac tttcggactc cggatggctt accattcctc ccaagaatgg aacagtcctt 1380 ggattgataa acaaagcaag tagaggagac cagttcactg taatccccca tgtgttgaca 1440 tttgcgccca gggaatcaag tggaaattgt tatttaccta ttcaaacatc ccagattatg 1500 gataaagatg tcctgactga gtccaattta gtggtgttgc ctacacagaa ttttagatat 1560 gtcatagcaa catatgatat atctcggggc gatcatgcaa ttgtttatga tgtttatgac 1620 ccaatccgga cgatttctta tacgcaccca tttagactaa ctaccaaggg tagacctgat 1680 ttcctaagaa ttgaatgttt tgtgtgggat gacgatttgt ggtgtcacca attttaccga 1740 tttgaggctg acatcaccaa ctctacaacc agtgttgaga atttagtccg tataagattc 1800 tcatgtgacc gttcaaaacc ttga 1824 <210> 37 <211> 1824 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> DQ494318 encoding CDV HA ABF55672 <400> 37 atgctctcct accaagacaa ggtgggtgcc ttctataagg ataatgcaag agctaattca 60 tccaagctgt ccttagtgac agaagagcaa gggggcagga gaccacccta tttgctgttt 120 gtccttctca tccttctggt cggaatcatg accttgcttg ctatcactgg agttcgattt 180 caccaagtat caactagcaa tatggaattt agcagattgt tgaaagagga tatggagaaa 240 tcagaggccg tacatcacca agtcatagat gtcttgacac cgctcttcaa aattattgga 300 gatgaggttg ggttacggtt gccacaaaaa ctaaacgaga tcaaacaatt tatccttcaa 360 aagacaaact tcttcaatcc gaacagggaa ttcgacttcc gcgatctcca ctggtgcatt 420 aatccaccta gtaagatcaa ggtgaatttt actaattact gcgatacaat tgggatcaga 480 aaatctattg catcggcagc aaatcccatc cttttatcag cactctccgg aggcagaggt 540 gacatattcc caccatacag atgcagtgga gctactactt cagtgggcag agttttcccc 600 ctatcagtat cattgtccat gtctttgatc tcaaaaacat cagagataac caatatgcta 660 actgctatct cagacggagt gtatggtaaa acctatttgc tagtgcctga ttacattgaa 720 ggggagttcg acacgcaaat gattcgagtc tttgagatag ggttcatcaa acggtggctg 780 aataacatgc cattactcca gacaaccaac tacatggtcc tcccggagaa ttccaaagcc 840 aaggtatgta ctatagcagt gggcgagttg acactagctt ccttgtgtgt agatgagagc 900 accgtattgt tatatcatga cagcaatggt tcacaagatg gtattctagt agtgacgctg 960 gggatatttg gggcaacacc tatggatcaa gttggagaag tgatacctgt cgctcacccc 1020 tcagtagaaa aaatacatat aacaaatcac cgtgggttca taaaagattc aatagcaacc 1080 tggatggtgc ctgcattggt ctctgagaaa caagaggaac aaaaaaattg tctggagtcg 1140 gcttgtcaaa gaaaaaccta cccaatgtgc aaccaaacgt catgggaacc ctttggaggg 1200 ggacagttac catcttatgg gcggttgaca ttacctctag atccaagcat tgaccctcaa 1260 cttaacatat catttacata cggtccagtt atactgaatg gagacggtat ggattattat 1320 gaaagctcac tttcggactc tggatggctt accattcctc ccaagaacgg aacagtcctt 1380 ggattgataa acaaagcaag tagaggagac cagttcactg taatccccca tgtgttgaca 1440 tttgcgccca gggaatcaag tggaaattgt tatttaccta ttcaaacatc ccagattatg 1500 gataaagatg tcctgactga gtccaattta gtggtgttgc ctacacagaa ttttagatat 1560 gtcatagcaa catatgatat atctcggggc gatcatgcca ttgtttatta tgtttatgac 1620 ccaatccgga cgatttctta tacgtaccca tttagactga ctaccaaggg tagacctgat 1680 ttcctaagaa ttgaatgttt tgtgtgggat gacgatttgt ggtgtcacca attttaccga 1740 tttgaggctg acatcaccaa ctctacaacc agtgttgaga atttagtccg tataagattc 1800 tcatgtaatc gttcaaaacc ttga 1824 <210> 38 <211> 1824 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> AY386316 <400> 38 atgctctcct accaagacaa ggtgggtgcc ttctataagg ataatgcaag agctaattca 60 tccaagctgt ccttagtgac agaagagcaa gggggcagga gaccacccta tttgctgttt 120 gtccttctca tccttctggt tggaatcatg accttgcttg ctatcactgg agttcgattt 180 caccaagtat caactagcaa tatggaattt agcagattgc tgaaagagga tatggagaaa 240 tcagaggccg tacatcacca agtcatagat gtcttgacac cgctcttcaa aattattgga 300 gatgaggttg ggttacagtt gccacaaaaa ctaaacgaga tcaaacaatt tatccttcaa 360 aagacaaact tcttcaatcc gaacagggaa ttcgacttcc gcgatctcca ctggtgcatt 420 aatccaccta gtaagatcaa ggtgaatttt actaattact gcgatacaat tgggatcaaa 480 aagtctattg catcggcagc aaatcccatc cttttatcag cactctccgg aggcagaggt 540 gacatattcc caccatacag atgcagtgga gctactactt cagtgggcag agttttcccc 600 ctatcagtat cattgtccat gtctttgatc tcaaaaacat cagagataac cagtatgcta 660 actgctatct cagacggagt gtatggtaaa acctatttgc tagtgcctga ttacattgaa 720 ggggagttcg acacgcaaaa gattcgagtc tttgagatag ggttcatcaa acggtggctg 780 aataacatgc cattactcca gacaaccaac tacatggtcc tcccggagaa ttccaaagcc 840 aaggtatgta ctatagcagt gggcgagttg acactggctt ccttgtgtgt agatgagagc 900 accgtattgt tatatcatga cagcaatggt tcacaagatg gtattctagt agtgacgctg 960 gggatatttg gagcaacacc tatggatcaa gttgaagaag tgatacctgt cgctcaccca 1020 tcagtagaaa aaatacatat aacaaatcac cgtgggttca taaaagattc aatagcaacc 1080 tggatggtgc ctgcattggt ctctgagaaa caagaggaac aaaaaaattg tctggagtcg 1140 gcttgtcaaa gaaaaactta ccctatgtgc aaccaaacgt catgggaacc ctttggaggg 1200 ggacagttgc catcttatgg gcggttgaca ttacctctag atccaagcat tgaccttcaa 1260 cttaacatat catttacata cggtccggtt atactgaatg gagacggtat ggattattat 1320 gaaagcccac tttcggactc cggatggctt accattcctc ccaggaacgg aacagtcctt 1380 ggattgataa acaaagcaag tagaggagac cagttcactg taatccccca tgtgttgaca 1440 tttgcgccca gggaatcaag tggaaattgt tatttaccta ttcaaacatc ccagattatg 1500 gataaagatg tccttactga gtccaattta gtggtgttgc ctacacagaa ttttagatat 1560 gtcatagcaa catatgatat atcccggggc gatcatgcaa ttgtttatta tgtttatgac 1620 ccaatccgga cgatttctta tacgcaccca tttagactaa ccaccaaggg tagacctgat 1680 ttcctaagga ttgaatgttt tgtgtgggat gacgatttgt ggtgtcacca attttaccga 1740 tttgaggctg acatcaccaa ctctacaacc agtgttgaga atttagtccg tataagattc 1800 tcatgtaacc gttcaaaacc ttga 1824 <210> 39 <211> 1824 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> DQ494317 encoding CDV HA ABF55671 <220> <221> misc_feature <222> (158)..(158) <223> n is a, c, g, or t <400> 39 atgctctcct accaagacaa ggtgggtgcc ttctataagg ataatgcaag agctaattca 60 tccaagctgt ccttagtgac agaagagcaa gggggcagga gaccacccta tttgctgttt 120 gtccttctca tccttctggt tggagtcatg accttgcntg ctatcactgg agttcgaatt 180 caccaagtat caactagcaa tatggaattt agcagattgc tgaaagagga tatggagaaa 240 tcagaggccg tacatcacca agtcatagat gtcttgacac cgctcttcaa aattattgga 300 gatgaggttg ggttacggtt gccacaaaaa ctaaacgaga tcaaacaatt tatccttcaa 360 aagacaaact tcttcaatcc gaacagggaa ttcgacttcc gcgatctcca ctggtgcatt 420 aatccaccta gtaagatcaa ggtgaatttt actaattact gcgatacagt tgggatcaga 480 aaatctattg catcggcagc aaatcccatc cttttatcag cactctccgg aggcagaggt 540 gacatattcc caccatacag atgcagtgga gctactactt cagtgggcag agttttcccc 600 ctatcagtat cattgtccat gtctttgatc tcaaaaacat cagagataac caatatgcta 660 actgctatct cagacggagt gtatggtaaa acctatttgc tagtgcctga ttacattgaa 720 ggggagttcg acacgcaaaa gattcgagtc tttgagattg ggttcatcag acggtggctg 780 aataacatgc cattactcca gacaaccaac tacatggtcc tcccggagaa ttccaaagcc 840 aaggtatgta ctatagcagt gggcgagttg acactggctt ccttgtgtgt agatgagagc 900 accgtattgt tatatcatga cagcaatggt tcacaagatg gtattctagt agtgacgctg 960 gggatatttg gggcaacacc tatggatcaa gttgaagaag tgatacctgt cgctcaccca 1020 tcagtagaaa aaatacatat aacaaatcac cgtgggttca taaaagatgc aatagcaacc 1080 tggatggtgc ctgcattggt ctctgagaaa caagaggaac aaaaaaattg tctggagtcg 1140 gcttgtcaaa gaaaaaccta tcctatgtgc aaccaaacgt catgggaacc ctttggagga 1200 ggacagttgc catcttatgg gcggttgaca ttacctctag atccaagcat tgaccttcaa 1260 cttaacatat catttacata cggtccagtt atactgaatg gagacggtat ggattattat 1320 gaaagctcac tttcggactc cggatggctt accattcctc ccaagaacgg aacagtcctt 1380 ggattgataa acaaagcaag tagaggagac cagttcactg taacccccca tgtgttgaca 1440 tctgcgccca gggaatcaag tggaaattgt tatttaccta ttcaaacatc ccagattatg 1500 gataaagatg tcctgactga gtccaattta gtggtgttgc ctacacagaa ttttagatat 1560 gtcatagcaa catatgatat atctcggggc gatcatgcaa ttgtttatta tgtttatgac 1620 ccaatccgga cgatttctta tacgtaccca tttagactaa ctaccaaggg tagacctgat 1680 ttcctaagaa ttgaatgttt tgtgtgggat gacgatatgt ggtgtcacca attttaccga 1740 tttgaggctg acatcaccaa ctctacaacc agtgttgaga atttagtccg tataagattc 1800 tcatgtaacc gttcaaaacc ttga 1824 <210> 40 <211> 1824 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> GQ214376 encoding CDV HA ACS88240 <400> 40 atgctctcct accaagacaa ggtgggtgcc ttctataagg ataatgcaag agctaattca 60 tccaagctgt ccttagtgac agaagagcaa gggggcagga gaccacccta tttgctgttt 120 gtccttctca tccttctggt tggaatcatg accttgcttg ctatcactgg agttcgattt 180 caccaagtat caactagcaa tatggaattt agcagattgc tgaaagagga tatggagaaa 240 tcagaggccg tacatcacca agtcatagat gtcttgacac cgctcttcaa aattattgga 300 gatgaggttg ggttacggtt gccacaaaaa ctaaacgaga tcaaacaatt tatccttcaa 360 aagacaaact tcttcaatcc gaacagggaa ttcgacttcc gcgatctcca ctggtgcatt 420 aatccaccta gtaagatcaa ggtgaatttt actaattact gcgatacaat tgggatcaga 480 caatctattg catcggcagc aaatcccatc cttttatcag cactctccgg aggcagaggt 540 gacatattcc caccatacag atgcagtgga gctactactt cagtgggcag agttttcccc 600 ctgtcagtat cattgtccat gtctgtgatc tcaaaaacat cagagataac caatatgcta 660 actgctatct cagacggagt gtatggtaaa acctatttgc tagtgcctga ttacattgaa 720 ggggagttcg acacgcaaaa gattcgagtc tttgagatag ggttcatcaa acggtggctg 780 aataacatgc cattactcca gacaaccaac tatatggtcc tcccggagaa ttccaaagcc 840 aaggtatgta ctatagcagt gggcgagttg acactggctt ccttgtgtgt agatgagaac 900 accgtattgt tatatcatga cagcaatggt tcacaagatg gtattctagt agtgacgctg 960 gggatatttg gggcaacacc tatggatcaa gttgaagaag tgatacctgt cgcccaccca 1020 tcaatagaaa aaatacatat aacaaatcac cgtgggttca taaaagattc aatagcaacc 1080 tggatggtgc ctgcattggt ctctgagaaa caagaggaac aaaaaaattg tctggagtcg 1140 gcttgtcaaa gaaaaaccta ccctatgtgc aaccaaacgt catgggaacc ctttggaggg 1200 agacagttgc catcttatgg gcggttgaca ttacctctag atccaagtat ggaccttcaa 1260 cttaacatat catttacata cggtccagtt atactgaatg gagacggtat ggattattat 1320 gaaagcccac ttccggactc cggatggctt accattccac ccaagaacgg aacagtcctt 1380 ggactgataa acaaagcaag tagaggagac cagttcactg taatccccca tgtgttgaca 1440 tttgcgccca gggaatcaag tggaaattgt tatttaccta ttcaaacatc ccagattatg 1500 gataaagatg tccttactga gtccaattta gtggtgttgc ctacacagaa ttttagatat 1560 gtcatagcaa catatgatat atcccggggt gatcatgcaa ttgtttatta tgtttatgac 1620 ccaatccgga cgatttctta tacgtaccca tttagactaa ctaccaaggg tagacctgat 1680 ttcctaagga ttgaatgttt tgtgtgggat gacgatttgt ggtgtcacca attttatcga 1740 tttgaggctg acatcaccaa ctctacaacc agtgttgaga atttagtctg tataagattc 1800 tcatgtaacc gttcaaaacc ttga 1824 <210> 41 <211> 1824 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> DQ889177 encoding CDV HA ABK35770 <400> 41 atgctctcct accaagacaa ggtgggtgcc ttctataagg ataatgcaag agctaattca 60 tccaagctgt ccttagtgac agaagagcaa gggggcagga gaccacccta tttgctgttt 120 gtccttctca tccttctggt tggaatcatg accttgcttg ctatcactgg agttcgattt 180 caccaagtat caactagcaa tatggaattt agcagattac tgaaagagga tatggagaaa 240 tcagaggccg tacatcacca agtcatagat gtcttgacac cgctcttcaa aattattgga 300 gatgaggttg ggttacggtt gccacaaaaa ctaaacgaga tcaaacaatt tatccttcaa 360 aagacaaact tcttcaatcc gaacagggaa ttcgacttcc gcgatctcca ctggtgcatt 420 aatccaccta gtaagatcaa ggtgaatttt actaattact gcgatacaat tgggatcaga 480 aaatctattg catcggcagc aaatcccatc cttttatcag cactctcggg aggcagaggt 540 gacatattcc caccatacag atgcagtgga gctactactt cagtgggcag agttttcccc 600 ctatcagtat cattgtccat gtctttgatt tcaaaaacat cagggataac caatatgcta 660 actgccatct cagacggagt gtatggtaaa acctatttgc tagtgcctga ttacattgaa 720 ggggagttcg acacgcaaaa gattcgagtc tttgagatag ggttcattaa acggtggctg 780 aataacatgc cattattcca gacaaccaac tacatggtcc tcccggagaa ttccaaagcc 840 aaggtatgta ctatagcagt gggcgaattg acactagctt ccttgtgtgt agatgagagc 900 accgtattgt tatatcatga tagcaatggt tcacaaggtg gtgttctagt agtgacgctg 960 gggatatttg gggcaacacc tatggatcaa gttgaagaaa tgatacctgt cgctcaccca 1020 tcagtagaaa aaatacatat aacaaatcac cgtgggttca taaaagattc aatagcaacc 1080 tggatggtgc ctgtattggt ctctgagaaa caagaggaac aaaaaaattg tctggagtcg 1140 gcttgtcaaa gaaaaaccta ccctatgtgc aaccaaacgt catgggaacc ctttggaggg 1200 ggacagttgc catcttatgg gcggttgaca ttacctctag atccgagcat tgaccttcaa 1260 cttaacatat catttacata cggtccagtt atactgaatg gagacggtat ggattactat 1320 gaaagcccac ttttggactc tgggtggctt accattcctc ccaagaacgg aacagtcctt 1380 ggattgataa acaaagcaag tagaggagac cagttcactg taatccccca tgtgttaaca 1440 tttgcgccca gggaatcaag tggaaattgt tatttaccta ttcaaacatc ccagattatg 1500 gataaagatg tccttactga gtccaattta gtggtgttgc ctacacagaa ttttagatat 1560 gtcatagcaa catatgatat atcccggggc gatcatgcaa ttgtttatta tgtttatgac 1620 ccaatccgga cgatatccta tacgtaccca tttagactaa ctaccaaggg tagacctgaa 1680 ttcctaagga ttgaatgttt tgtgtgggat gacgatttgt ggtgtcacca attttaccga 1740 tttgaggctg acatcaccaa ctctacaatc agtgttgaga atttagtcca tataagattc 1800 tcatgtaacc gttcaaaacc ttga 1824 <210> 42 <211> 1824 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> EU716337 encoding CDV HA ACD92997 <400> 42 atgctctcct accaagacaa ggtgggtgcc ttctataagg ataatgcaag agctaattca 60 tccaagctgt cctcagtgac agaagagcaa gggggcagga gaccacccta tttgctgttt 120 gtccttctca tcctactggt tggaatcatg gccttgcttg ctatcactgg agttcgattt 180 caccaagtat caactaacaa tatggaattt agcagattgc tgaaagagga tatggagaag 240 tcagaggccg tacatcacca agtcatagat gtcttgacac cgctcttcaa gattattgga 300 gatgaggttg ggttacggtt gccacaaaaa ctaaacgaga tcaaacaatt tatccttcaa 360 aagacaaact tcttcaatcc gaacagggag ttcgatttcc gcgatctcca ctggtgcatt 420 aacccaccta gtaagatcaa agtgaatttt actaattact gcgatacaat tgagatcaga 480 aaatctattg cattggcagc aaatcccatc cttttatcag cactctccgg tggcagaggt 540 gacatattcc caccatacag ttgcagtgga gctactactt cagtaggcag agttttccct 600 ctatcagtat cattgtccat gtctttgatc tcaaaaacat cagagataat caatatgcta 660 accgctatct cagacggggt gtatggtaaa acttatttgc tagttcctga ttatattgaa 720 ggggggttcg acacgcaaaa gattcgagtc tttgagatag ggttcatcaa acggtggctg 780 aatgacatgc cattactcca gacaaccaac tatatggtcc tcccggagaa ttccaaagcc 840 aaggtatgta ctatagcggt gggcgagttg acactggctt ccttgtgtgt agatgagagc 900 accgtattgt tatatcatga cagcgatggt tcacaagatg gtattctagt ggtgacgctg 960 ggaatatttg gggcaacacc tatggatcaa gttgaagagg tgatacctgt tgctcaccca 1020 tcagtagaaa aaatacatat aacaaatcac cgtgggttca taaaagattc aatagcaacc 1080 tggatggtgc ctgcattggt atctgagaaa caagaggaac aaaaaaattg tctggagtcg 1140 gcttgtcaaa gaaaatccta ccctatgtgc aaccaaacgt catgggaacc ctttggagga 1200 ggacagttgc catcttatgg gcggttgaca ttacctctag atccaagcat tgaccttcaa 1260 cttaacatct cgtttacata cggtccggtt atactgaatg gagacggtat ggattattat 1320 gaaagcccac ttttggactc cggatggctt accattcccc ccaagaacgg aacagtcctt 1380 ggattgataa acaaagcaag tagaggagac caattcactg taatccccca tgtgttgaca 1440 tttgcgccca gggaatcaag tggaaattgt tatttaccta ttcaaacatc ccagattatg 1500 gataaagatg tccttactga gtccaattta gtggtgttgc ctacacagaa ttttagatat 1560 gtcatagcaa catatgatat atcccggggc gatcatgcga ttgtttatta tgtttatgac 1620 ccaatccggg cgatttctta tacgtaccca tttagactaa ctaccaaggg tagacctgat 1680 ttcctaagga ttgaatgttt tgtgtgggat gacgatttgt ggtgtcacca attttaccga 1740 ttcgaggctg acagcaccaa ctctacaacc agtgttgaga atttagtccg tataagattc 1800 tcatgtaatc gttcaaaacc ttga 1824 <210> 43 <211> 1821 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> FJ011004 encoding CDV HA ACI28389 <400> 43 atgctctcct accaagacaa ggtgggtgcc ttctataagg ataatgcaag agctaattca 60 tccaagctgt ccttagtgac agaagagcaa gggggccgga gaccacccta tttgctgttt 120 gtccttctca tccttctggt tggaatcatg accttgcttg ctatcactgg agttcgattt 180 caccaagtat caactagcaa tatggaattt agcagattgc tgaaagagga tatggagaaa 240 tcagaggccg tacatcacca agtcatagat gtcttgacac cgctcttcaa aattattgga 300 gatgaggttg ggttacggtt gccacagaaa ctaaacgaga tcaagcaatt tatccttcaa 360 aagacaaact tcttcaatcc gaacagggaa ttcgacttcc gcgatctcca ctggtgcatt 420 aatccaccta gtaagatcaa ggtgaatttt actaattact gtgatacaat tgagatcaga 480 aaatctattg catcggcagc aaatcccatc cttttatcag cactctccgg aggcagaggt 540 gacatattcc caccatacag atgcagtgga gctactactt cagtgggcag agttttcccc 600 ctatcagtat cattgtccat gtctttgatc tcaagaacat cagagataac caatatgcta 660 actgctatct cagacggagt gtatggtaaa acctatttgc tagtgcctga ttactttgaa 720 ggggagttcg acacgcaaaa gattcgggtc tttgagatag ggttcatcaa acggtggctg 780 aatgacatgc cattactcca gacaaccaac tacatgttcc tcccggagaa ttccaaagcc 840 aaggtatgta ctatagcagt gggcgagttg acactggctt ccttgtgtgt agatgagagc 900 accgtatcgt tatatcatga cggcagtggt tcacaagatg gtattctagt agtgacgctg 960 gggatatttg gggcaacacc tatggatcaa gttgaagagg tgatacctgt cgctcaccca 1020 tcagtagaga aaatacatat aaccaatcac cgtggattca taaaagattc aatcgcaacc 1080 tggatggtgc ctgcattggt ctctgagaaa caagaggaac aaaaaaattg tctggagtcg 1140 gcttgtcaaa gaaaaaccta ccctatgtgc aaccaaacgt catgggaacc ctttggagga 1200 ggacagttgc catcttatgg gcggtggaca ttacctctag atccaagcat tgaccttcaa 1260 cttaacatat cagttacata cggtccagtt atactgaatg gagacggtat ggattattat 1320 gaaagcccac tttcagactc cggatggctt accattcctc ccaagaacgg aacaatcctt 1380 ggattgataa acaaagcaag tagaggagac cagttcactg taatccccca tgtgttgaca 1440 tttgcgccca gggaatcaag tggaaattgt tatttaccta ttcaaacatc ccagattatg 1500 gataaagatg tccttactga gtccaattta gtggtgttgc ctacacagaa ttttagatat 1560 gtcatagcaa catatgatat atcccggggc gatcatgcaa ttgtttatta tgtttatgac 1620 ccaatccgga cgatttctta tacttaccca tttagactaa ctaccaaggg tagacctgtt 1680 tccctaagga ttgaatgttt tgtgtgggat gacgatttgt ggtgtcacca attttaccaa 1740 tttgaggcag acatcaccaa ctctaccacc agtgttgaga atttagtccg tataagattc 1800 tcatgtaacc gttcaaaacc t 1821 <210> 44 <211> 1821 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> FJ011005 encoding CDV HA ACI28390 <400> 44 atgctctcct accaagacaa ggtgggtgcc ttttataagg ataatgcaag agccaattca 60 tccaagctgt ctctagtgac agaagagcaa gggggtagga gaccacccta tctgctgttt 120 gtccttctca tcctactggt tggaatcatg accttgcttg ctatcaccgg agttcgattt 180 caccaggtat caactagcaa tatggaattc agcagattgc tgaaagagga tatggagaaa 240 tcagaggccg tacaccacca agtcatggat gtcttgacac cgctcttcaa aattattgga 300 gatgaggttg ggttacggtt gccacaaaaa ctgaacgaga tcaaacaatt tatccttcaa 360 aagacaaact tcttcaatcc gaacagggaa ttcgacttcc gcgatctcca ctggtgcatt 420 aacccaccta gtaagatcaa ggtgaatttt tctaattact gtgatacaat tgggatcaga 480 aaatctattg catcagcagc aaatcctatc cttttatcag cactctccgg aggcagaggt 540 gacatattcc ctccatacag atgcaatgga gctgctactt caataggcag agttttccct 600 ctatctgtgt cattgtccat gtccttgatc tccagaacag cagagataat caatatgcta 660 accgctatct cagacggagt tgatggtaaa acttacttgc tagtgcctga ttatattgaa 720 ggggagttcg aaacgcagaa gattcgagtc tttgagatcg ggttcatcaa acggtggctg 780 aatgacatgt cattactcca gacaaccaac tatatggtcc tcccggagaa ttccaaagcc 840 aaggtatgta ctatagcagt gggcgagttg acactggctt ccttgtgtgt agatgagagc 900 actgtattgt tatatcatga cagcaatggt tcacaagatg gtattctagt agtgacgctg 960 ggaatatttt ggggcacacc tatggatcaa gttgaagagg tgatacctgt cgctcaccca 1020 tcagtagaaa aaatacatat aacaaatcac cgtgggttca taaaagattc aaaagcaatc 1080 tggatggtgc ctgcattggt ctctgagaaa caagaggaac aaaaaaattg tctggagtcg 1140 gcttgtcaaa gaaaaaccta ccctatgtgc aaccaaacgt catgggaacc ctttggggga 1200 ggacaattgc catcctatgg gcggctgaca ttacctctag atccaagtat tgaccttcaa 1260 cttaacatat cgtttacata cggtccggtt atactgaatg gagacggtat ggattattat 1320 gaaagcccac ttttggactc cggatggctt accattcctc ccaaaaacgg aacagttctt 1380 ggattgatga acaaagcaag tagaggagac cagttcactg taatccccca tgtgttgaca 1440 tttgcgccta gggaatcagg tggaaattgt tatttaccta ttcaaacctc ccagattatg 1500 gataaagatg tccttgctga gtccaattta gtggtgttgc ctacacagaa ttttagatat 1560 gtcatagcaa catatgatat atcccgggac gatcatgcga ttgtttatta tgtttatgat 1620 ccaatccgga cgatttctta tacgtaccca tttagactaa ctaccaaggg tagacctgat 1680 ttcctaagaa ttgaatgttt tgtatgggat gacgatttgt ggtgtcatca attttaccga 1740 ttcgaggctg acatcactaa ctctacaacc agtgttgaga atttagtccg tataagattc 1800 tcatgtaacc gttcaaaacc t 1821 <210> 45 <211> 1824 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> FJ705233 encoding CDV HA ACN58242 <400> 45 atgctctcct accaagacaa ggtgggtgcc ttctataagg ataatgcaag agctaattca 60 tccaagctgt ccttagtgac agaagagcaa gggggaagga gaccacccta tttgctgttt 120 gtccttctca tcctactgac tggaatcctg gccttgcttg ccatcactag agttcgattt 180 caccaagtat caactagcaa tatggaattt agcagattgc tgaaagagga tatggagaaa 240 tcagaggccg tacatcacca agtcatagat gtcttgacgc cgctcttcaa aattattgga 300 gatgagattg ggttacggtt gccacaaaaa ctaaacgaga tcaaacaatt tatccttcaa 360 aagacaaact tcttcaatcc gaacagggaa ttcgacttcc gcgatctcca ctggtgcatt 420 aacccaccta gcaagatcaa ggtgaatttt actaattact gtgatacagt tggggtcaaa 480 aaatctattg catcggcagc aaatcccatc attttatcag cactctccgg agccagaggt 540 gacatattcc cgccgtgcag atgcagtgga gctactactt cagtaggcag agtattcccc 600 ctatccgtat cattatccat gtctttgata tcaagaacat cagagataat caatatgcta 660 accgctatct cagacggaat gtatggtaaa acttatttgc tagtgcctga ttatattgaa 720 ggggagttcg actcgcaaaa gattcgagtc tttgagatag ggtttatcag acggtggctg 780 aatgacatgc ctttactcca gacaaccaac tatatggtcc ttccggaaac ttccaaagcc 840 aaggtatgta ctatagcagt gggcgagctg acactagctt ccttgtgtgt agatgagagc 900 accgtattgt tatatcatga cagcaatggt tcacaaaatg gtattctagt agtgacattg 960 ggaatatttg gggcaacacc tatggatcaa gttgaagagg tgatacctat cgctcaccca 1020 tcagtggaga gaatacatat aacaaatcac cgtgggttca taaaagattc aatagtaacc 1080 tggatggtgc ctgtattggt ctcagagaaa caagaggagc aaaaaaactg tctggagtct 1140 gcttgtcaaa gaaaaaccta tcctatgtgc aaccaaacgt catgggaacc ctttggagga 1200 ggacagttgc cctcttatgg gcggttgaca ttacctctag atccaagcat tgaccttcag 1260 cttaacatat catttacata tggtccggtt atactgaacg gagacggtat ggattattat 1320 gaaagcccgc ttttggactc cggatggctt accatacctc ctaagaacgg aacagtcctt 1380 ggattgataa acaaagcaag tagaggagac cagttcactg tgacccccca tgtgttgaca 1440 tttgcgccca gggaatcaag tggaaattgt tatttgccta ttcaaacatc ccagattatg 1500 gataaagatg tccttactga gtccaattta gtagtgttac ctacacagaa ttttaggtat 1560 gtcatagcaa catatgatat atcccggggc gatcatgcaa ttgtttatta tgtttatgac 1620 ccaatccgga cgatttctta tacataccca tttagactaa ctaccaaggg tagacctgat 1680 ttcctaagga ttgaatgttt tgtgtgggat gacgatttgt ggtgtcatca attttaccga 1740 ttcgaggcta acattactaa ctctacaacc agtgttgaga atttagtccg tataagattc 1800 tcatgtaacc gttcaaaacc ttga 1824 <210> 46 <211> 1824 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> DQ228166 encoding CDV HA ABB51156 <220> <221> misc_feature <222> (1027)..(1027) <223> n is a, c, g, or t <400> 46 atgctctcct accaagacaa ggtgggtgcc ttctataaag ataatgcaag agccaattca 60 tccaagctgt ccttagtgac agaagagcaa gggggtagaa gaccaccctt tttgctgttt 120 gtccttctcg tcctactggt tggaatcatg gccttgcttg ctatcactgg agttcgattt 180 catcaagtat caaccagcaa tatggaattt agtagattgc tgaaagagga tatggagaaa 240 tctgaggccg tacatcatca agtcatagat gttttgacac cgctcttcaa aatcatcgga 300 gatgagattg ggttacggtt gccacaaaaa ctaaacgaga ttaaacaatt tatccttcaa 360 aagacaaact tcttcaatcc gaacagggaa ttcgacttcc gcgatctcca ctggtgcatt 420 aacccaccta gtaagatcaa ggtgaatttt actaattact gcgatacaat tgggatcaga 480 aaatctattg catcggcagc aaatcctatc cttttatcag cactttctgg aggcagaggt 540 gacatattcc caccatacaa gtgcaatgga gctgctactt cagtaggcag agttttcccc 600 ctttcagtat cattgtccat gtctttgatc tcaaaaacat cagggataat caatatgcta 660 accgctatct cagacggagt gtatggtaaa acttacttgc taatgcctga ttatattgaa 720 ggggagttcg acacgcaaaa gattcgagtc tttgagatag ggttcatcaa acggtggctg 780 aatgacatgc cattactcca gacaaccaac tatattgtcc tcccggagaa ttccaaagcc 840 aaggtatgta ctatagcagt gggtgagttg acactggctt ccttgtgtgt agatgagagc 900 accgtattgt tatatcatga cagcaatggt tcacaagatg gtattctagt agtgacactg 960 ggaatattcg gggcaacacc tatggatcaa gttgaagagg tgatacctgt cgctcaccca 1020 tcagtanaaa aaatacatat aacaaatcac cgtgggttca taaaagattc aatagcaacc 1080 tggatggtgc ctgcattgat ctctggggaa caagaggaac aaaaaaattg tctggagtcg 1140 gcttgtcaaa gaaaatccta ccctatgtgc aaccaaacgt catggaaacc ctttggagga 1200 ggacagttgc catcttatgg gcggttgaca ttacctctag atccaggcat tgaccttcaa 1260 cttaacatat catttacata cggtccggtt atactgaatg gagacggtat ggattattat 1320 gaaagcccac ttttggactc cggatggctt accattcctc ccaagaacgg aacaattctt 1380 ggattgataa acaaggcaag tagaggagac cagttcactg taatccccca tgtgttgaca 1440 tttgcgccca gggaatcaag tgggaattgt tatttaccta ttcaaacatc tcagattatg 1500 gataaagatg tccttactga gtccaattta gtggtattgc ctacacagaa ttttagatat 1560 gtcatagcaa catatgatat atcccggaac gatcatgcga ttgtttatta tgtttatgac 1620 ccaatccgga ctatttctta tacgcaccca tttagactaa ctactaaggg tagacctgat 1680 ttcctaagga ttgaatgttt tgtgtgggat gatgatttgt ggtgtcacca attttaccgg 1740 ttcgaggctg acatcaccaa ctctgcaacc agtgttgaga atttggtccg tataagattc 1800 tcatgtaacc gttcaaaacc ttga 1824 <210> 47 <211> 1824 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> DQ889187 encoding CDV HA ABK35780 <400> 47 atgctctcct accaagacaa ggtgagtgcc ttctataagg ataatgcaag agccaattca 60 tccaaactgt ccttagtgac agaagaacat gggagcagga gaccacccta tttgctgttt 120 atccttctca tcctactggt tggaatcatg gccttgcttg ctatcactgg agctcgattt 180 caccaagtat caactagcaa tatggaattt agcagattgc tgaaagagga tatggagaaa 240 tcagaggccg tacatcacca agtcatagat gtcttgacac cgctctttaa aattattggt 300 gatgagattg ggttacggtt gccacaaaaa ctaaacgaga tcaaacagtt tatccttcaa 360 aagacaaact tcttcaatcc gaaaagggaa ttcgacttcc gcgacctcca ctggtgcatt 420 aacccaccta gtaagatcaa ggtgaatttt actaattact gcgatacaat tgggatcaga 480 aaatctattg cattggcagc aaatcccatc cttttgtcgg cactctccag aggcaggggt 540 gacatattcc caccatacag atgtagtgga gctgctactt cagtaggcag agttttcccc 600 ctctcagtat cattgtccat gtctttgatc tcaagaacat cagagataat caatatgcta 660 accgctatct cagatggagt gtatggtaaa acttacttgc tagtgcctga ttatattgaa 720 ggggaattcg acacacaaaa gattcgagtc tttgagatag ggttcatcaa acggtggctg 780 aatgacatgc cattactcca gacaaccaac tatatggtcc tcccggagaa ttccaaagcc 840 aaggtatgta ctatagcagt gggcgagttg acactggctt ccttgtgtgt agatgagagc 900 actgtattac tatatcatga cagcaatggt tcacaagatg gtattctagt agtgacgctg 960 ggaatatttg gggcaacacc tatggatcaa gttgaagagg tgatacctgt cgctcatcca 1020 tcagtagaaa aaatacatat aacaaatcac cgtgggttca taaaagattc aatagcaacc 1080 tggatggtgc ctgtattggt ctctgagaac caagaggaac aaaaaaattg tctggagtcg 1140 gcttgtcaaa gaaaatccta ccctatgtgc aaccaaacgt catgggaacc ctttggagga 1200 ggacagctgc catcttatgg gcggttgaca ttacctctag atccaggcat tgaccttcaa 1260 cttaatctat cgtttacata cggtccgatt atactgaatg gagacggtat ggattattat 1320 gaaagcccac ttttgaactc cggatggctt accattcctc ccaagaacgg gacaattctt 1380 ggattgataa acaaagcaag tagaggagac cagttcactg taacccccca tgtgttgaca 1440 tttgcgccta gggaatcaag tgggaattgt tatttaccta ttcaaacatc tcagattatg 1500 gataaagatg tccttactga gtccaatttg gtggtgttgc ctacacagaa ttttagatat 1560 gtcatagcaa catatgatat atcccgggat gatcatgcga ttgtttatta tgtttatgac 1620 ccaatccgga cgatttctta tacgtaccca tttagactaa ctaccaaggg tagacctgat 1680 ttcctaagga ttgaatgttt tgtgtgggat tacgatttgt ggtgtcacca attttaccga 1740 ttcgaggctg acatcaccaa ctctacaacc agtgttgaga atttagtccg tataagattc 1800 tcatgtaacc gttcaaaacc ttga 1824 <210> 48 <211> 1824 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> FJ423608 encoding CDV HA ACJ46470 <400> 48 atgctctctt accaagacaa ggtgggtgcc ttctataagg ataatgcaag agctaattca 60 tccaagctgt ccttagtgac agaagagcaa gggggaagga gaccacccta cttgtttttt 120 gtccttctca ccctactgat tggaatcctg gccttgcttg ccatcactgg agttcgattt 180 caccaagtat caactagcaa tatggaattt agcagattgc tgaaagagga tatggagaaa 240 tcagaggccg tacatcacca agtcatagat gtcttgacac cgctcttcaa aattattgga 300 gatgagattg ggttacggtt gccacaaaaa ctaaacgaga tcaaacaatt tatccttcaa 360 aagacaaact tcttcaatcc gaacagggaa ttcgacttcc gcgatctcca ctggtgcatt 420 aacccaccta gcaagatcaa ggtgaatttt actaattact gtgatacagt tggggtcaaa 480 aaatctatta catcggcagc aaatcccatc attttatcag cactctccgg agccagaggt 540 gacatattcc cgccgtacag atgcagtgga gctactactt cagtaggcag agtattcccc 600 ctatctgtat cattatccat gtctttgata tcaagaacat cagagataat caatatgcta 660 accgctatct cagacggagt gtatggtaaa acttatttgc tagtgcctga ttatattgaa 720 ggggagttcg actcgcaaaa gattcgagtc tttgagatag ggtttatcaa acggtggctg 780 aatgacatgc ctttactcca gacaaccaac tatatggttc tcccggaaac ttccaaagcc 840 aaggtatgta ctatagcagt gggcgagctg acactagctt ccttgtgtgt agatgagagc 900 actgtattat tatatcatga cagcaatggt tcacaaaatg gtattctagt agtgacattg 960 ggaatatttg gggcaacatc tatggatcaa gttgaagagg tgatacctat cgctcaccca 1020 tcagtggaga gaatacatat aacaaatcac cgtgggttca taaaagattc aatagtaacc 1080 tggatggtgc ctgtattggt ctctgagaaa caagaggagc aaaaaaactg tctggagtct 1140 gcttgtcaaa gaaaatccta ccctatgtgc aaccaaacgt catgggaacc ctttggagga 1200 ggacagttgc cttcttatgg gcggttgaca ttacctctag atccaagcat tgaccttcaa 1260 cttaacatat catttacata tggtccggtt atactgaacg gggacggtat ggattattat 1320 gaaagcccac ttttggaatc cggatggctt accatacccc ctaagaacgg aacagtcctt 1380 ggattgataa acaaagcaag tagaggagac cagttcactg cgacccccca tgtgttgaca 1440 tttgcgccca gggaatcaag tggaaattgt tatttgccta ttcaaacatc ccagattatg 1500 gataaagatg tccttactga gtccaattta gtggtgttac ctacacagaa ttttagatat 1560 gtcatagcaa catatgatat atcccggggc gatcatgcaa ttgtttatta tgtttatgac 1620 cctatccgga cgatttctta tacataccca tttagactaa ctaccaaagg tagacctgat 1680 ttcctaagga ttgaatgttt tgtgtgggat gacgatttgt ggtgtcatca attttaccga 1740 ttcgaggcta acatcactaa ctctacaacc agtgttgaga atttagtccg tataagattc 1800 tcatgtaacc gttcaaaacc ttga 1824 <210> 49 <211> 1824 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> EU325730 encoding CDV HA ABX84040 <400> 49 atgctctctt accaagacaa ggtgggtgcc ttctataagg acaatgcaag agctaattca 60 tccaagctgt ccttagtgac agaagagcaa gggggaagga gaccacccta tttgctgttt 120 gtccttctca tcctactgat tggaatcctg gccttgcttg ccatcactgg agttcgattt 180 caccaagtat caactagcaa tatggaattt agcagattgc tgaaagagga tatggagaaa 240 tcagaggccg tacatcacca agtcatagat gtcttgacac cgctcttcaa aattattgga 300 gatgagattg ggttgcggtt gccacaaaaa ctaaacgaga tcaaacaatt tatccttcaa 360 aagacaaact tcttcaatcc gaacagggaa ttcgacttcc gcgatctcca ctggtgcatt 420 aacccaccta gcaagatcaa ggtgaatttt actaattact gtgatacagt tggggtcaaa 480 aaatctattg catcggcagc aaatcccatc attttatcag cactctccgg agccagaggc 540 gacatattcc cgccgtacag atgcagtgga gctactactt cagtaggcag agtattcccc 600 ctatccgtat cattatccat gtctttgata tcaagaacat cagagataat caatatgcta 660 accgctatct cagacggagt gtatggtaaa acttatatgc tagtgcctga ttatattgaa 720 ggggagttcg actcgcaaaa gattcgagtc tttgagatag ggtttatcaa acggtggctg 780 aataacatgc ctttactcca gacaaccaac tatatggtcc tcccggaaac ttccaaagcc 840 aaggtatgta ctatagcagt gggcgagctg acactagctt ccttgtgtgt agatgagagc 900 accgtattgt tatatcatga cagcaatggt tcacaaaatg gtattctagt agtgacattg 960 ggaatatttg gggcaacacc tatggatcaa gttgaagagg tgatacctat cgctcaccca 1020 tcagtggaga gaatacatat aacaaatcac cgtgggttca taaaagattc agtagtaacc 1080 tggatggtgc ctgtattggt ctctgagaaa caagaggagc aaaaaaactg tctggagtct 1140 gcttgtcaaa gaaaatccta cccgatgtgc aaccaaacgt catgggaacc ctttggagga 1200 ggacagttgc cttcttatgg gcggttgaca ttacctctag atccaagcgt tgaccttcaa 1260 cttaacatat catttacata tggtccggtt atactgaacg gagacggtat ggattattat 1320 gaaagcccac ttttggaatc cggatggctt gccatacccc ctaagaacgg aacagtcctt 1380 ggattgataa acaaagcaag tagaggagac cagttcactg tgacccccca tgtgttgaca 1440 tttgcgccca gggaatcaag tgggaattgt tatttgccta ttcaaacatc ccagattatg 1500 gataaagatg tccttactga gtccaattta gtggtgttac ctacacagaa ttttagatat 1560 gtcatagcaa catatgatat atcccggggc gatcatgcaa ttgtttatta tgtttatgac 1620 cctatccgga cgatttctta tacataccca tttagactaa ctaccaaggg tagacctgat 1680 ttcctaagga ttgaatgttt tgtgtgggat gacgatttgt ggtgtcatca attttaccga 1740 ttcgaggcta acatcactaa ctctacaacc agtgttgaga atttagtccg tataagattc 1800 tcatgtaacc gttcaaaacc ttga 1824 <210> 50 <211> 4178 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> vCP2392 part containing C3 arms, H6 promoter and GM-CSF <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2586) <223> this is the C3 arm region <220> <221> promoter <222> (2587)..(2772) <223> this is the H6 promoter region <220> <221> CDS <222> (2773)..(3207) <223> this is the caGM-CSF coding region <220> <221> misc_feature <222> (3208)..(4178) <223> this is the C3 arm region <400> 50 ctttatacta ctgggttaca acagctggtg ataacagaat gtaaatcatt attacttaat 60 agttccatta ttatatgttt gatatctata ggtaacctac ctattattcc tagattctta 120 ctctctttta cagctttaac tattagctga tgtctatgaa aagctaatga tttatttttc 180 cgtattaatt ccctatatat acgtatacat gcaggtatct tattaactct aggattagtt 240 acgaacttta ccataagatc tatgttattg tcaagaaaga tattaaaaga atatatagaa 300 tttaacttta tatgtgttat aacatctagt tctttttcgc atgattcttt tatagatagt 360 agtcttttat tactgtttat atgttccatg tttactataa aaccttctga attagctatt 420 tcaggatttt tagatatttc taacatcatt ttagatatta tcataatagc tatcttgtca 480 tctaaaaagc taacacaagt tagaggcgta ttaccgtgat tatttagaga attatagtcg 540 gcgttataag ataaaagtaa ttttatatta ttaaaactat tagataacat agctttatgt 600 aaaggagtat ttccagataa cttagcttta gcatttacgt aagcaccgtg gtcaagtaag 660 agtttaacaa attctgtttt catagaacta actgccatgt atagaggagt gaaaccttta 720 tgattataga cgtttacata gcaaccatat aataagatcg cattcagtat attaatatct 780 ttcatttcta tagctatgtg aataacatgt ttatctaatc ctaccaactt tgtatcagta 840 ccgtacttca gtaataagtt tactatagtt ttgtttttag atgcaacagc tatatttaga 900 acggtatcta tatgattatt aaccacatta acattagatc ctctttctaa aagtgtcttt 960 gttgtttcga tatcgttacg tgaaacagcg taatgtaagg gactgcccat acagtcatct 1020 attacgttta tatcagctcc tagatttaac agaagtgctg ttacatcttt tcttctatta 1080 attaccgaat gatgtaatgg ggttttacct aaatcatctt gttcgtttat aggcactccg 1140 tgatttataa gtaacgctat tatatcgtaa ctacaattat ttttaagtgc ctttatgaga 1200 tactgtttat gcaaaaataa acttttatct attttaatac tattatctaa caatatccta 1260 attaaatcta tattcttata ctttatagcg taatgtaacg gagtttcaaa atttctagtt 1320 tgtatattaa gatcaatatt aaaatctata aatattttat acatatcatc agatatctta 1380 tcatacagta catcgtaata atttagaaag aatctattac aattaacacc tttttttaat 1440 aaatatctag ttaatgactt attgtttcta tatacagaaa tatataacgg actatttcca 1500 gaatgtatct gttctatgtc agcgccagaa tctattagta gtttagcaat ttctgtatta 1560 tctaaactag cagctttatg aagaggagga tttttacatt ttaaaatatc ggcaccgtgt 1620 tctagtaata attttaccat ttctatatca gaaatactta cggctaaata caaagacgtt 1680 gatagtatat ttacgttatt gtatttgcat tttttaagta tataccttac taaatttata 1740 tctctatacc ttatagcttt atgcagttca tttataagtc ttccattact catttctggt 1800 aatgaagtat tatatatcat tatgatatta tctctatttt attctaataa aaaccgttat 1860 catgttattt attatttgtt ataattatac tatttaataa attataccaa atacttagat 1920 acttattaat accatcctag aacttgtatt tcttgccccc taaacttgga catgcactcc 1980 attaggcgtt tcttgttttc gacatcgtcc tccttaacat atcctactgt tatgtgagga 2040 ttccacggat tatctactgt gatatcacca aacacgtcct tcgaacaggg taccgcattc 2100 agcagaacat ttcttagggc tctaagttca tcagatacct ccagtttcat aactacagcg 2160 catcctttcg ctcccaactg tttagaggcg ttactctgag gaaaacacat ctcttcttta 2220 cagactatag aaatagtctg taaatcttga tcagttattt gctttttgaa attttcaaat 2280 ctatcacatt gatccatatt tgctattcca agagttatat gaggaaaaat atcacatcct 2340 gtcatgtatt ttattgtaac attattataa tctgtaacat cagtatctaa cctaacgtcg 2400 taaaagttaa cagatgccca gttactataa tcccaaggaa ccttaacatc taatcccatt 2460 aaaatagtat cctttctact atttttttca ttggcaagta tgtggcttag tttacacaaa 2520 attcctgcca ttttgtaacg atagcgaagc aatagcttgt atgcttttta tttgattaac 2580 taggggttaa ttaattagtc atcaggcagg gcgagaacga gactatctgc tcgttaatta 2640 attagagctt ctttattcta tacttaaaaa gtgaaaataa atacaaaggt tcttgagggt 2700 tgtgttaaat tgaaagcgag aaataatcat aaattatttc attatcgcga tatccgttaa 2760 gtttgtatcg taatgtggct gcagaacctg ctgttcctgg gcaccgtggt gtgcagcatc 2820 agcgccccca ccagatcccc caccctggtg acccggccca gccagcacgt ggacgccatc 2880 caggaagccc tgagcctgct gaacaacagc aacgacgtga ccgccgtgat gaacaaggcc 2940 gtgaaggtgg tgtccgaggt gttcgacccc gagggcccca cctgcctgga aacccggctg 3000 cagctgtaca aagagggcct gcagggcagc ctgaccagcc tgaagaaccc cctgaccatg 3060 atggccaacc actacaagca gcactgcccc cccacccccg agagcccttg cgccacccag 3120 aacatcaact tcaagagctt caaagagaac ctgaaggact tcctgttcaa catccccttc 3180 gactgctgga agcccgtgaa gaagtgatga ctcgagtttt tattgactag gggtttttat 3240 agctaattag tcaaatgtga gttaatatta gtatactaca ttactaattt attacatatt 3300 catttatatc aatctagtag catttagctt ttataaaaca atataactga atagtacata 3360 ctttactaat aagttataaa taagagatac atatttatag tattttactt tctacactga 3420 atataataat ataattatac aaatataatt tttaatacta tatagtatat aactgaaata 3480 aaataccagt gtaatatagt tattatacat ttataccaca tcaaagatga gttataacat 3540 cagtgtcact gttagcaaca gtagttatac gatgagtagt tactctcgta tggcgttagt 3600 atgtatgtat cttctagttt tcttagtagg cattatagga aacgtcaagc ttataaggtt 3660 attaatggta tctagaaata tatctattat accgtttctc aacttgggaa tagccgattt 3720 gctgtttgtg atattcatac ctttatacat tatatacata ctaagtaatt tccattggca 3780 ttttggtaaa gcactttgta aaattagttc tttctttttt acttctaaca tgtttgcaag 3840 tatattttta ataactgtaa taagcgtata tagatatgta aaaattaccc ttcctggatt 3900 tacctataaa tatgttaaca ttagaaatat gtacattact atatttttca tatggattat 3960 ttctattata ctagggattc ctgctcttta ctttagaaat actatcgtaa caaaaaataa 4020 cgacacgctg tgtattaatc attatcatga taatagagaa attgctgaat tgatttacaa 4080 agttattatc tgtatcagat ttattttagg atacctacta cctacgataa ttatactcgt 4140 atgctatacg ttactgatct acagaactaa caatgcat 4178 <210> 51 <211> 621 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> vCP2392 part seq containing H6 promoter + caGM-CSF <220> <221> promoter <222> (1)..(186) <223> this is the H6 promoter region <220> <221> CDS <222> (187)..(621) <223> this is the caGM-CSF coding region <400> 51 ttaattaatt agtcatcagg cagggcgaga acgagactat ctgctcgtta attaattaga 60 gcttctttat tctatactta aaaagtgaaa ataaatacaa aggttcttga gggttgtgtt 120 aaattgaaag cgagaaataa tcataaatta tttcattatc gcgatatccg ttaagtttgt 180 atcgtaatgt ggctgcagaa cctgctgttc ctgggcaccg tggtgtgcag catcagcgcc 240 cccaccagat cccccaccct ggtgacccgg cccagccagc acgtggacgc catccaggaa 300 gccctgagcc tgctgaacaa cagcaacgac gtgaccgccg tgatgaacaa ggccgtgaag 360 gtggtgtccg aggtgttcga ccccgagggc cccacctgcc tggaaacccg gctgcagctg 420 tacaaagagg gcctgcaggg cagcctgacc agcctgaaga accccctgac catgatggcc 480 aaccactaca agcagcactg cccccccacc cccgagagcc cttgcgccac ccagaacatc 540 aacttcaaga gcttcaaaga gaacctgaag gacttcctgt tcaacatccc cttcgactgc 600 tggaagcccg tgaagaagtg a 621

Claims (18)

  1. 하기를 포함하는 조성물:
    a) CDV HA 폴리펩티드, GM-CSF 폴리펩티드 및 이의 혼합물로 이루어지는 군에서 선택되는 하나 이상의 폴리펩티드를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터; 및
    b) 약학적으로 또는 수의학적으로 허용가능한 비히클, 보조제, 희석제 또는 부형제.
  2. 제 1 항에 있어서, 벡터가 CDV HA 폴리펩티드를 인코딩하는 제 1 폴리뉴클레오티드 및 GM-CSF 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 폴리뉴클레오티드를 포함하는 조성물.
  3. 제 2 항에 있어서, 하나 이상의 추가적인 항원을 추가로 포함하는 조성물.
  4. 제 3 항에 있어서, 추가적인 항원이 광견병, 개 파르보바이러스 (parvovirus), 개 코로나바이러스 (coronavirus), 개 인플루엔자, 감염성 개 간염, 개 헤르페스바이러스 (herpesvirus), 가성광견병 (pseudorabies), 개 미세 바이러스 (minute virus), 렙토스피라 (Leptospira) 및 네오스포라 카니눔 (Neospora caninum) 으로 이루어지는 군에서 선택되는 개 항원인 조성물.
  5. 제 2 항에 있어서, 제 1 폴리뉴클레오티드가 SEQ ID NO: 2 에서 나타낸 바와 같은 서열에 대해 80% 이상 서열 동일성을 갖는 CDV HA 폴리펩티드를 인코딩하고, 제 2 폴리뉴클레오티드가 SEQ ID NO: 4 에서 나타낸 바와 같은 서열에 대해 80% 이상 동일성을 갖는 GM-CSF 폴리펩티드를 인코딩하는 조성물.
  6. 제 1 항에 있어서, 폴리뉴클레오티드가 SEQ ID NO:2 에서 나타낸 바와 같은 서열에 대해 80% 이상 서열 동일성을 갖는 CDV HA 폴리펩티드를 인코딩하는 조성물.
  7. 제 1 항에 있어서, 폴리뉴클레오티드가 SEQ ID NO:4 에서 나타낸 바와 같은 서열에 대해 80% 이상 서열 동일성을 갖는 GM-CSF 폴리펩티드를 인코딩하는 조성물.
  8. 제 1 항에 있어서, 폴리뉴클레오티드가 SEQ ID NO:1, 35 또는 3 에서 나타낸 바와 같은 서열에 대해 70% 이상 서열 동일성을 갖는 조성물.
  9. 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서, 벡터가 바이러스 벡터인 조성물.
  10. 제 1 항에 있어서, 발현 벡터가 GM-CSF 폴리펩티드를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하며, 조성물이 하나 이상의 항원을 추가로 포함하는 조성물.
  11. 제 10 항에 있어서, 항원이 광견병, 개 파르보바이러스, 개 코로나바이러스, 개 인플루엔자, 감염성 개 간염, 개 헤르페스바이러스, 가성광견병, 개 미세 바이러스, 렙토스피라 및 네오스포라 카니눔으로 이루어지는 군에서 선택되는 개 항원인 조성물.
  12. CDV HA 폴리펩티드, GM-CSF 폴리펩티드 및 이의 혼합물로 이루어지는 군에서 선택되는 하나 이상의 폴리펩티드를 인코딩하는 하나 이상의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터.
  13. 제 12 항에 있어서, CDV HA 폴리펩티드를 인코딩하는 제 1 폴리뉴클레오티드 및 GM-CSF 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터.
  14. 제 12 항에 있어서, CDV HA 폴리펩티드를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터.
  15. 제 12 항에 있어서, GM-CSF 폴리펩티드를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터.
  16. 제 12 항 내지 제 15 항 중 어느 한 항에 있어서, 바이러스 벡터인 벡터.
  17. 제 1 항 내지 제 16 항 중 어느 한 항에 따른 조성물 또는 벡터의 1 회 이상의 투여를 포함하는 동물 백신 접종 방법.
  18. 제 17 항에 있어서, 프라임-부스트 (prime-boost) 투여 요법을 포함하는 방법.
KR1020127025110A 2010-02-26 2011-02-25 재조합 ｃｄｖ 조성물 및 이의 용도 KR20130036209A (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US30862010P 2010-02-26 2010-02-26
US61/308,620 2010-02-26
PCT/US2011/026378 WO2011106743A1 (en) 2010-02-26 2011-02-25 Recombinant cdv compositions and uses thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20130036209A true KR20130036209A (ko) 2013-04-11

Family

ID=44022809

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020127025110A KR20130036209A (ko) 2010-02-26 2011-02-25 재조합 ｃｄｖ 조성물 및 이의 용도

Country Status (23)

Country Link
US (3) US20130197612A1 (ko)
EP (1) EP2538972B1 (ko)
JP (1) JP5898632B2 (ko)
KR (1) KR20130036209A (ko)
CN (1) CN102971010A (ko)
AR (1) AR080313A1 (ko)
AU (1) AU2011220410B9 (ko)
BR (1) BR112012021545B1 (ko)
CA (1) CA2791787C (ko)
CY (1) CY1120430T1 (ko)
DK (1) DK2538972T3 (ko)
ES (1) ES2676542T3 (ko)
HR (1) HRP20181188T1 (ko)
HU (1) HUE039735T2 (ko)
LT (1) LT2538972T (ko)
NZ (1) NZ602077A (ko)
PL (1) PL2538972T3 (ko)
PT (1) PT2538972T (ko)
RS (1) RS57759B1 (ko)
RU (1) RU2567337C2 (ko)
SI (1) SI2538972T1 (ko)
WO (1) WO2011106743A1 (ko)
ZA (1) ZA201206209B (ko)

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103525776A (zh) * 2013-10-23 2014-01-22 华中农业大学 一种重组狂犬病病毒口服疫苗株及其制备方法
CN104164409A (zh) * 2014-07-18 2014-11-26 中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所 含有犬gmcsf基因的重组犬瘟热病毒及其制备方法
US10081796B2 (en) * 2015-01-12 2018-09-25 International Aids Vaccine Initiative Neutralization-resistant CDV mutants and viral vectors
AU2017329672B2 (en) 2016-09-20 2023-07-27 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh New promoters
JP6913747B2 (ja) 2016-09-20 2021-08-04 ベーリンガー インゲルハイム フェトメディカ ゲーエムベーハーＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ Ｖｅｔｍｅｄｉｃａ ＧｍｂＨ イヌアデノウイルスベクター
KR102566066B1 (ko) 2016-09-20 2023-08-16 베링거잉겔하임베트메디카게엠베하 신규한 돼지 인플루엔자 백신
US10619169B2 (en) 2016-09-20 2020-04-14 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh EHV insertion site ORF70
CN109265522B (zh) * 2018-09-29 2022-03-04 东北农业大学 用于检测犬瘟热病毒血凝蛋白h抗体的致敏聚苯乙烯纳米微球及其制备方法和应用
US20210401970A1 (en) * 2018-10-26 2021-12-30 The Wistar Institute Of Anatomy And Biology Canine distemper vaccines and methods of treatment using the same
RU2768749C1 (ru) * 2021-06-07 2022-03-24 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") Средство специфической профилактики covid-19 для плотоядных животных
CN114480441B (zh) * 2021-12-21 2023-03-21 长春维石检测技术服务有限公司 一段核苷酸序列及其表达重组蛋白纳米颗粒在犬瘟热病毒疫苗的应用

Family Cites Families (41)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US702919A (en) * 1902-02-03 1902-06-24 Adam Simpson Boyd Pipe cutter and wrench.
US2909462A (en) 1955-12-08 1959-10-20 Bristol Myers Co Acrylic acid polymer laxative compositions
US5505941A (en) 1981-12-24 1996-04-09 Health Research, Inc. Recombinant avipox virus and method to induce an immune response
US4708871A (en) 1983-03-08 1987-11-24 Commonwealth Serum Laboratories Commission Antigenically active amino acid sequences
EP0173552B1 (en) 1984-08-24 1991-10-09 The Upjohn Company Recombinant dna compounds and the expression of polypeptides such as tpa
EP0447523A4 (en) 1989-10-10 1991-11-27 Amgen Inc. Compositions and methods for treating or preventing infections in canine and feline animals
US5756102A (en) 1990-11-20 1998-05-26 Virogenetics Corporation Poxvirus-canine distemper virus (CDV) recombinants and compositions and methods employing the recombinants
US6309647B1 (en) * 1999-07-15 2001-10-30 Aventis Pasteur Poxvirus—canine dispemper virus (CDV) or measles virus recombinants and compositions and methods employing the recombinants
CA2044468C (en) * 1990-11-21 2006-08-22 Richard A. Nash Canine granulocyte macrophage colony stimulating factor
JP3602530B2 (ja) 1991-03-07 2004-12-15 ヴァイロジェネティクス コーポレイション 遺伝子操作したワクチン菌株
CN1117081A (zh) * 1995-03-16 1996-02-21 高云 犬瘟热狂犬病细小病毒三联活疫苗、毒种及制造方法
EP0826063A1 (en) 1995-04-25 1998-03-04 Vical Incorporated Single-vial formulations of dna/lipid complexes
US20010036928A1 (en) * 1996-04-22 2001-11-01 Chamberlain Ronald S. Heterologous boosting immunizations
US5846946A (en) 1996-06-14 1998-12-08 Pasteur Merieux Serums Et Vaccins Compositions and methods for administering Borrelia DNA
FR2750865B1 (fr) * 1996-06-27 1998-12-04 Rhone Merieux Vaccin vivant recombinant a base d'herpesvirus canin, notamment contre la maladie de carre, la rage ou le virus parainfluenza de type 2
WO1998000166A1 (en) * 1996-07-03 1998-01-08 Merial, Inc. Recombinant canine adenovirus (cav) containing exogenous dna
FR2751225B1 (fr) 1996-07-19 1998-11-27 Rhone Merieux Formule de vaccin polynucleotidique aviaire
FR2751229B1 (fr) 1996-07-19 1998-11-27 Rhone Merieux Formule de vaccin polynucleotidique notamment contre la pathologie respiratoire des bovins
FR2751224B1 (fr) 1996-07-19 1998-11-20 Rhone Merieux Formule de vaccin polynucleotidique contre les pathologies respiratoires et de reproduction des porcs
FR2751226B1 (fr) 1996-07-19 1998-11-27 Rhone Merieux Formule de vaccin polynucleotidique contre les pathologies du cheval
US7294338B2 (en) 1996-07-19 2007-11-13 Merial Polynucleotide vaccine formula against canine pathologies, in particular respiratory and digestive pathologies
FR2751227B1 (fr) 1996-07-19 1998-11-27 Rhone Merieux Formule de vaccin polynucleotidique contre les pathologies canines, notamment les pathologies respiratoires et digestives
FR2751228B1 (fr) 1996-07-19 1998-11-20 Rhone Merieux Vaccin polynucleotidique bovin pour voie intradermique
AU4992197A (en) 1996-10-11 1998-05-11 Regents Of The University Of California, The Immunostimulatory polynucleotide/immunomodulatory molecule conjugates
AU729579B2 (en) * 1996-10-23 2001-02-01 Trustees Of The University Of Pennsylvania, The Immunotherapy and improved vaccines
DE69826124T3 (de) 1997-06-30 2007-10-11 Institut Gustave Roussy Verabreichung der nukleinsäure in den quergestreiften muskel
FR2775601B1 (fr) * 1998-03-03 2001-09-21 Merial Sas Vaccins vivants recombines et adjuves
FR2778858B1 (fr) 1998-05-20 2000-06-16 Oreal Emulsion e/h/e stable et son utilisation comme composition cosmetique et/ou dermatologique
CA2375320C (en) * 1999-06-10 2013-02-19 Merial Dna vaccines for pets or for animals used in sports
US6645740B1 (en) * 1999-06-10 2003-11-11 Merial Limited Nucleic acids encodings equine GM-CSF
FR2794648B1 (fr) * 1999-06-10 2003-03-07 Merial Sas Vaccins adn pour animaux de compagnie et de sport
FR2801607B1 (fr) 1999-11-26 2001-12-28 Merial Sas Pneumovirus du canard et vaccins correspondants
US6852705B2 (en) 2000-01-21 2005-02-08 Merial DNA vaccines for farm animals, in particular bovines and porcines
US7018164B2 (en) 2000-09-06 2006-03-28 The Charles Machine Works, Inc. Auxiliary pipe loading device
US7740863B2 (en) * 2001-04-06 2010-06-22 Merial Recombinant vaccine against West Nile Virus
DE50304603D1 (de) 2002-09-23 2006-09-21 Mologen Ag Impfstoff gegen infektionen mit onkoviren, wie dem felinen leukosevirus der katze
MXPA06000942A (es) 2003-07-24 2006-03-30 Merial Ltd Nuevas formulaciones de vacunas.
EP1732585B1 (en) 2004-03-30 2010-06-30 Institut Gustave Roussy Polypeptide sequence involved in the modulation of the immunosuppresive effect of viral proteins
EP1928560A2 (en) * 2005-04-06 2008-06-11 Verenium Corporation Enzymes and formulations for broad-specificity decontamination of chemical and biological warfare agents
US7682619B2 (en) * 2006-04-06 2010-03-23 Cornell Research Foundation, Inc. Canine influenza virus
CA2720168C (en) * 2008-04-04 2024-04-30 David B. Weiner Vaccines and immunotherapeutics using il-28 and compositions and methods of using the same

Also Published As

Publication number Publication date
CA2791787C (en) 2019-03-26
AR080313A1 (es) 2012-03-28
JP5898632B2 (ja) 2016-04-06
LT2538972T (lt) 2018-07-25
EP2538972A1 (en) 2013-01-02
US9327137B2 (en) 2016-05-03
PT2538972T (pt) 2018-07-30
WO2011106743A1 (en) 2011-09-01
PL2538972T3 (pl) 2018-09-28
US20160199483A1 (en) 2016-07-14
DK2538972T3 (en) 2018-07-30
EP2538972B1 (en) 2018-04-25
AU2011220410B2 (en) 2015-04-02
SI2538972T1 (en) 2018-07-31
CA2791787A1 (en) 2011-09-01
CY1120430T1 (el) 2019-07-10
ZA201206209B (en) 2013-06-26
NZ602077A (en) 2014-08-29
BR112012021545A2 (pt) 2018-09-04
ES2676542T3 (es) 2018-07-20
US20130197612A1 (en) 2013-08-01
BR112012021545B1 (pt) 2020-11-03
HUE039735T2 (hu) 2019-01-28
HRP20181188T1 (hr) 2018-10-05
RU2012140741A (ru) 2014-04-10
US10076566B2 (en) 2018-09-18
AU2011220410A1 (en) 2012-09-20
RS57759B1 (sr) 2018-12-31
JP2013521234A (ja) 2013-06-10
US20110236419A1 (en) 2011-09-29
CN102971010A (zh) 2013-03-13
RU2567337C2 (ru) 2015-11-10
AU2011220410B9 (en) 2015-07-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DK2538972T3 (en) RECOMBINANT CDV COMPOSITIONS AND APPLICATIONS THEREOF
CN109714962A (zh) 用于在体外培养细胞的系统和方法
KR101891195B1 (ko) 공통 항원 구성체 및 이것으로부터 만들어진 백신 및 말라리아를 치료하기 위한 이것의 사용방법
CN112779291B (zh) 构建瘦肉率高、生长快、繁殖力高且抗系列流行病的优质猪核移植供体细胞的方法及其应用
KR20070114263A (ko) 바실러스 안트라시스 유래의 방어 항원 제조 방법
KR20100120140A (ko) 조류에서의 당화
CN112779292A (zh) 构建瘦肉率高、生长快且抗蓝耳病和系列腹泻病的优质猪核移植供体细胞的方法及其应用
TW200826958A (en) Canine leishmania vaccine
CN112877362A (zh) 构建高繁殖力、抗蓝耳病和系列腹泻病的优质猪核移植供体细胞的基因编辑系统及其应用
CN114958762B (zh) 一种构建神经组织特异过表达人源snca的帕金森病模型猪的方法及应用
CN112522313B (zh) 用于构建TPH2基因突变的抑郁症克隆猪核供体细胞的CRISPR/Cas9系统
CN112522264B (zh) 一种导致先天性耳聋的CRISPR/Cas9系统及其在制备模型猪核供体细胞中的应用
ES2270427T3 (es) Herpresvirus transformados para la expresion de la gd in vitro.
CN113046388A (zh) 用于构建双基因联合敲除的动脉粥样硬化猪核移植供体细胞的crispr系统及其应用
CN112575033B (zh) Crispr系统及其在构建scn1a基因突变的癫痫性脑病克隆猪核供体细胞中的应用
CN112813101B (zh) 一种构建瘦肉率高、生长快的优质猪核移植供体细胞的基因编辑系统及其应用
CN112680444B (zh) 用于oca2基因突变的crispr系统及其在构建白化病克隆猪核供体细胞中的应用
CN112795566B (zh) 用于构建骨质疏松症克隆猪核供体细胞系的opg基因编辑系统及其应用
CN112680453B (zh) Crispr系统及其在构建stxbp1突变的癫痫性脑病克隆猪核供体细胞中的应用
CN113584078B (zh) 用于双靶标基因编辑的crispr系统及其在构建抑郁症猪核移植供体细胞中的应用
CN112608941B (zh) 用于构建mc4r基因突变的肥胖症猪核移植供体细胞的crispr系统及其应用
CN112899306B (zh) Crispr系统及其在构建gabrg2基因突变的克隆猪核供体细胞中的应用
CN112522258B (zh) Il2rg基因和ada基因联合敲除的重组细胞及其在制备免疫缺陷猪模型中的应用
CN112522202B (zh) 制备addi四个基因联合敲除的重症免疫缺陷猪源重组细胞的方法及其专用试剂盒
CN112877359A (zh) CRISPR/cas系统及其在构建INHA突变的高繁殖力猪核移植供体细胞中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
AMND Amendment
E902 Notification of reason for refusal
AMND Amendment
E601 Decision to refuse application
AMND Amendment