KR20110014192A

KR20110014192A - 4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-7-메톡시-6-([1-(ｎ-메틸카르바모일메틸)피페리딘-4-일]옥시)퀴나졸린의 푸마레이트 염

Info

Publication number: KR20110014192A
Application number: KR1020107027716A
Authority: KR
Inventors: 카이 앨리슨 보드먼; 수잔 엘리자베스 번스; 앤드류 혼비 돕슨; 브라이언 휘트록
Original assignee: 아스트라제네카 아베
Priority date: 2008-05-13
Filing date: 2009-05-11
Publication date: 2011-02-10
Also published as: US20090286982A1; WO2009138781A1; CA2723989A1; EA019183B1; US8404839B2; MY183041A; UY31820A; EP2303276A1; SV2010003734A; CR11791A; EA201001773A1; TWI443095B; NZ589883A; EP2303276B1; US8088782B2; CN102088979B; CU23927B1; ZA201008283B; JP5739802B2; DOP2010000346A

Abstract

본 발명은 4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-7-메톡시-6-{[1-(N-메틸카르바모일메틸)피페리딘-4-일]옥시}퀴나졸린 디푸마레이트, 디푸마레이트 함유 약학 조성물, 과증식성 질환, 예컨대 암의 치료에서의 디푸마레이트의 용도 및 디푸마레이트의 제조 방법에 관한 것이다.

Description

4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-7-메톡시-6-([1-(Ｎ-메틸카르바모일메틸)피페리딘-4-일]옥시)퀴나졸린의 푸마레이트 염{FUMARATE SALT OF 4-(3-CHLORO-2-FLUOROANILINO)-7-METHOXY-6-([1-(N-METHYLCARBAMOYLMETHYL)PIPERIDIN-4-YL]OXY)QUINAZOLINE}

본 발명은 4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-7-메톡시-6-{[1-(N-메틸카르바모일메틸)피페리딘-4-일]옥시}퀴나졸린, 이하 "화합물 I"의 염, 더욱 구체적으로는 화합물 I의 디푸마레이트 염에 관한 것이다. 이 염은 erbB 수용체 신호전달에 의해 단독으로 또는 부분적으로 매개되는 병태, 특히 암과 같은 증식성 질병의 치료 또는 예방에 유용한 것으로 기대되고 있다. 본 발명은 또한 염을 포함하는 약학 조성물, 및 유방암과 같은 암의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 약제의 제조에서의 이의 용도에 관한 것이다.

EGFR, erbB2, erbB3 및 erbB4를 포함하는 수용체 티로신 키나아제의 erbB 패밀리는 종종 종양 세포의 증식 및 생존을 야기하는 것과 연관되며 따라서 erbB 패밀리 수용체는, 예컨대 유방암(문헌[Sainsbury et al ., Brit . J. Cancer, 1988, 58, 458]; [Guerin et al ., Oncogene Res ., 1988, 3, 21]; [Slamon et al ., Science, 1989, 244, 707]; [Klijn et al ., Breast Cancer Res . Treat ., 1994, 29, 73] 및 [Salomon et al ., Crit. Rev . Oncol . Hematol ., 1995, 19, 183]에서 검토됨)을 비롯한 다수의 상피암(문헌[Olayioye et al ., EMBO J., 2000, 19, 3159]에서 검토됨), 선암을 비롯한 비소세포폐암(NSCLC)([Cerny et al ., Brit . J. Cancer, 1986, 54, 265]; [Reubi et al ., Int . J. Cancer, 1990, 45, 269]; [Rusch et al ., Cancer Research, 1993, 53, 2379]; [Brabender et al , Clin . Cancer Res ., 2001, 7, 1850]) 뿐만 아니라 폐의 다른 암([Hendler et al ., Cancer Cells, 1989, 7, 347]; [Ohsaki et al ., Oncol . Rep ., 2000, 7, 603]), 방광암([Neal et al ., Lancet, 1985, 366]; [Chow et al ., Clin . Cancer Res ., 2001, 7, 1957, Zhau et al ., Mol Carcinog ., 3, 254]), 식도암(Mukaida et al ., Cancer, 1991, 68, 142), 위장암, 예컨대 결장암, 직장암 또는 위암([Bolen et al., Oncogene Res ., 1987, 1, 149]; [Kapitanovic et al ., Gastroenterology, 2000, 112, 1103]; [Ross et al ., Cancer Invest ., 2001, 19, 554]), 전립선암([Visakorpi et al., Histochem . J., 1992, 24, 481]; [Kumar et al ., 2000, 32, 73]; [Scher et al ., J. Natl . Cancer Inst ., 2000, 92, 1866]), 백혈병암(Konaka et al ., Cell, 1984, 37, 1035, Martin Subero et al ., Cancer Genet Cytogenet ., 2001, 127, 174), 난소암(Hellstrom et al ., Cancer Res ., 2001, 61, 2420), 두경부암(Shiga et al ., Head Neck, 2000, 22, 599) 또는 췌장암(Ovotny et al ., Neoplasma, 2001, 48, 188)과 연관된다.

따라서, 당업자들은 erbB 수용체 티로신 키나아제의 억제제가 특정 암종 성장의 선택적 억제제로서 가치를 가져야 한다는 것을 인식하고 있었다. 다수의 erbB 티로신 키나아제 억제제는 임상적 이점이 입증되어 있고 다수의 erbB 티로신 키나아제 억제제는 암 치료에 사용하는 것이 승인된 바 있다. 예를 들면, EGFR 티로신 키나아제 억제제 게피티닙 및 얼로티닙은 진행성 비소세포폐암의 치료를 위한 것이고, erbB2 티로신 키나아제 억제 활성을 갖는 라파티닙은 전이성 유방암에 사용하기 위한 것이다. 몇몇의 다른 EGFR 및 erbB2 티로신 키나아제 억제제는 현재 개발 중에 있다.

화합물 I은 국제 특허 출원 공개 번호 WO2005/028469에서 실시예 1로서 개시되어 있고 하기 구조를 갖는다:

화합물 I은 erbB 수용체 티로신 키나아제 억제제이고, 특히 화합물 I은 EGFR 및 erbB2 수용체 티로신 키나아제의 강력한 억제제이다.

EGFR 및 erbB2 동종이량체를 통한 신호전달 이외에도, EGFR, erbB2 및 erbB3 이종이량체에 의해 매개된 세포 신호전달은 중요한 종양원성 신호전달 경로가 될 수 있다는 것을 시사하는 전임상적 증거 및 임상적 증거가 증가하고 있는 추세이다([Sergina et al., Nature, 2007, 445, 437]; [Ritter et al., Clin Cancer Res. 2007, 13, 4909]; [Johnston et al., JCO, 2008, 26, 1066]). erbB3이 내인성 티로신 키나아제 활성을 갖고 있지 않기 때문에, erbB3 수용체의 활성화는 특히 EGFR 및 erbB2를 포함하는 다른 키나아제-활성 수용체와의 이종이량체 수용체 복합체의 형성을 통해서만 실현된다. erbB3과 형성된 EGFR 및 erbB2 이종이량체는 그러한 수용체가 발현된 종양에서 종양 성장을 야기하는 것으로 간주된다.

본 발명자들은 전임상적 실험에서 화합물 I은 또한 erbB3의 인산화 억제 후 리간드 자극된 EGFR/erbB3 및/또는 erbB2/erbB3 이종이량체화를 통해 erbB3 매개된 신호전달을 억제한다는 것을 밝혀냈다. 따라서, 화합물 I은 주로 EGFR 티로신 키나아제 억제제로서 작용하는 다른 erbB 티로신 키나아제 억제제, 예컨대 게피티닙 또는 얼로티닙과 비교하여 독특한 erbB 티로신 키나아제 억제 효과를 나타낸다. 본 발명자들은 화합물 I이 EGFR 티로신 키나아제 억제제, 예컨대 게피티닙 및 얼로티닙과 비교하여 향상된 항종양 효과를 나타낸다는 것을 시사하는 전임상적 연구를 수행한 바 있다. 이론에 결부시키고자 하는 것은 아니지만, 본 발명자들은 그 향상된 특성이 화합물 I에 의해 erbB3 매개된 신호전달을 억제할 수 있다고 간주하고 있다.

WO2005/028469에는 여기에 개시된 화합물이 약학적으로 허용가능한 염, 예컨대 화학식 I의 화합물의 산 부가 염의 형태로, 무기산 또는 유기산, 예컨대 염산, 브롬화수소산, 황산, 트리플루오로아세트산, 시트르산 또는 말레산에 의해 제조될 수 있다는 것이 제시되어 있다. WO2005/028469에는 어디에도 푸마르산을 갖는 염에 대하여 제안하고 있지 않다. WO2005/028469의 실시예 1에는 화합물 I이 개시되어 있고 이 화합물 I은 유리 염기로서 단리된다. WO2005/028469에는 화합물 I의 어떠한 임의의 특정 염도 개시되어 있지 않다.

본 발명자들은 화합물 I이 도 1의 XRPD에 도시된 바와 같은 일부 비정질 특징을 갖는 결정질인 것을 발견하였다. 화합물 I 상에서 시차주사열량측정(도 2A)은 용매 손실, 아마도 물로 인한 것일 수 있는 76.2℃의 개시에 의한 광범위한 흡열(endotherm)을 나타내고 이후 126.2℃의 개시에 의한 용융 흡열을 나타낸다. 화합물 I 상에서 열중량 분석(도 2B)은 25℃∼95℃에서 1.2%의 중량 손실을 나타낸다.

동적 증기 수착(도 3)은 80% 상대 습도에서 대략 1.9% w/w의 수분 흡수를 나타내고, 이에 따라 화합물 I은 적당한 흡습성을 갖는다.

본 발명자들은 화합물 I이 특히 6.0 이하의 pH에서 비교적 낮은 고유 용해율을 갖고 높은 세포 투과성을 갖는다는 것을 발견하였다. 저 용해도 및 고 투과성은 화합물 I에 대해 클래스 II의 BCS 분류를 시사한다. 따라서, 화합물의 용해 특성은 특히 보다 높은 용량에서 약물 흡수 및 환자간 가변성을 조절하는데 중요할 수 있다. 이러한 발견은, 화합물 I이 부분적으로 비정질이고 흡습성을 갖는다는 사실과 함께, 향상된 특성을 갖는 화합물 I의 대안 형태를 찾을 필요성을 갖는다.

본 발명자들은 놀랍게도 화합물 I의 디푸마레이트 염이 화합물 I과 비교하여 유리한 성질을 갖는다는 사실을 발견하였다. 화합물 I 디푸마레이트는 유리한 용해 프로파일을 제시하고, 높은 수용해도와 우수한 고유 용해율을 갖는다. 더하여, 화합물 I 디푸마레이트는 유리한 고상 특성, 예컨대 높은 결정화, 낮은 흡습성 및/또는 유리한 열적 특성, 예컨대 높은 융점을 나타낸다.

본 발명의 제1 측면에 따르면, 본 발명은 화합물 I 디푸마레이트를 제공한다.

적절하게도, 화합물 I 디푸마레이트은 결정질이다. 따라서, 본 발명의 추가 측면에 따르면, 본 발명은 결정질 화합물 I 디푸마레이트를 제공한다.

화합물 I 디푸마레이트는 용매화된 형태 뿐만 아니라 비용매화된 형태, 예컨대 수화된 형태 등으로 존재할 수 있다. 당업자라면 본 발명이 화합물 I 디푸마레이트의 모든 용매화된 형태 및 비용매화된 형태를 포함한다는 것을 알고 이해할 것이다.

본 발명자들은 화합물 I 디푸마레이트의 특정한 결정질 형태, 이하 "A형"이 도 4에 도시된 바와 같이 실질적으로 X-선 분말 회절 패턴을 제공한다는 점을 특징으로 한다는 것을 발견하였다. A형의 가장 우세한 피크는 하기 표 1에 나타낸다.

표 1에서는 다음과 같은 약자를 사용한다: VS = 매우 강함; S = 강함; M = 중간임 및 W = 약함.

본 발명의 추가 측면에 따르면, 본 발명은 A형을 제공하고, 상기 A형은 약 2θ = 26.4°에서 하나 이상의 특정 피크를 갖는 X-선 분말 회절 패턴을 갖는다.

본 발명의 추가 측면에 따르면, 본 발명은 A형을 제공하고, 상기 A형은 약 2θ = 26.4°, 14.9° 또는 7.1°에서 하나 이상의 특정 피크를 갖는 X-선 분말 회절 패턴을 갖는다.

본 발명의 추가 측면에 따르면, 본 발명은 A형을 제공하고, 상기 A형은 약 2θ = 26.4°, 14.9° 및 7.1°에서 특정 피크를 갖는 X-선 분말 회절 패턴을 갖는다.

본 발명의 추가 측면에 따르면, 본 발명은 A형을 제공하고, 상기 A형은 약 2θ = 26.4°, 24.0°, 14.9°, 12.4° 또는 7.1°에서 하나 이상의 특정 피크를 갖는 X-선 분말 회절 패턴을 갖는다.

본 발명의 추가 측면에 따르면, 본 발명은 A형을 제공하고, 상기 A형은 약 2θ = 26.4°, 24.0°, 14.9°, 12.4° 및 7.1°에서 특정 피크를 갖는 X-선 분말 회절 패턴을 갖는다.

본 발명의 추가 측면에 따르면, 본 발명은 A형을 제공하고, 상기 A형은 약 2θ = 26.4°, 24.0°, 23.0°, 21.2°, 17.3°, 15.4°, 14.9°, 13.0°, 12.4° 또는 7.1°에서 하나 이상의 특정 피크를 갖는 X-선 분말 회절 패턴을 갖는다.

본 발명의 추가 측면에 따르면, 본 발명은 A형을 제공하고, 상기 A형은 약 2θ = 26.4°, 24.0°, 23.0°, 21.2°, 17.3°, 15.4°, 14.9°, 13.0°, 12.4° 및 7.1°에서 특정 피크를 갖는 X-선 분말 회절 패턴을 갖는다.

본 발명의 또다른 측면에 따르면, 본 발명은 A형을 제공하고, 상기 A형은 도 4에 도시된 X-선 분말 회절 패턴과 실질적으로 동일한 X-선 분말 회절 패턴을 갖는다.

적절하게도, A형은 다른 형태의 화합물 I 디푸마레이트를 실질적으로 포함하지 않는다. 예를 들면, 80% 이상의 화합물 I 디푸마레이트는 A형의 형태로 존재하고, 구체적으로는 90% 이상, 더욱 구체적으로는 95% 이상, 더욱 더 구체적으로는 99% 이상의 화합물 I 디푸마레이트는 A형의 형태로 존재한다. 특정 구체예에서, 98% 이상의 화합물 I 디푸마레이트는 A형의 형태로 존재한다. 여기서, 예를 들어 80%의 화합물 I 디푸마레이트가 A형의 형태로 존재한다고 언급되는 것은 중량%의 화합물 I 디푸마레이트를 지칭한다.

이하, 도 5에는 A형에 대한 DSC 열분석도가 도시되어 있다. A형은, 실시예에 기술되는 Mettler DSC820e 장치를 사용하여 시차주사열량측정(DSC) 분석에 의해 측정된 바에 따르면, 약 210.4℃의 개시 온도에 의한 뚜렷한 용융 흡열을 나타내고 있다. 따라서, A형은 약 210℃의 융점을 갖는다.

본 발명자들은 화합물 I 디푸마레이트가 본원의 실시예에 기술되는 다른 결정질 형태, 예컨대 B형 내지 Q형으로 존재할 수 있다는 것을 발견하였다. 본 발명의 추가 측면에 따르면, 본 발명은 본원에 기술된 B형 내지 Q형 중 어느 하나의 형태로부터 선택된 결정질 화합물 I 디푸마레이트를 제공한다. 적절하게도, 기술된 결정질 화합물 I 디푸마레이트 형태 각각은 화합물 I 디푸마레이트의 다른 형태를 실질적으로 포함하지 않는다. 예를 들면, 80% 이상의 화합물 I 디푸마레이트는 소정의 형태로 존재하고, 구체적으로는 90% 이상, 더욱 구체적으로는 95% 이상, 더욱 더 구체적으로는 99% 이상의 화합물 I 디푸마레이트는 디푸마레이트의 소정의 결정질 형태로 존재한다.

본원에 기술된 화합물 I 디푸마레이트의 결정질 형태는 결정질이다. 적절하게도, X-선 분말 회절 데이타에 의해 측정된 결정화도는, 예를 들어 약 60% 이상, 예컨대 약 80% 이상, 구체적으로는 약 90% 이상, 더욱 구체적으로는 약 95% 이상이다. 본 발명의 구체예에서, X-선 분말 회절 데이타에 의해 측정된 결정화도는 약 98% 이상이고, 여기서 % 결정화는 결정질인 총 샘플 질량의 중량%를 지칭한다.

화합물 I의 결정질 형태에 대한 X-선 분말 회절 피크를 한정하는 이전 단락에서, 용어 "약 ∼에서"는 용어 "…약 2θ =…에서"로 사용되고, 이는, 당업자가 알 수 있는 바와 같이, 피크의 정확한 위치가 한 측정 장치와 다른 측정 장치 사이에서, 한 샘플과 다른 샘플마다, 또는 이용되는 측정 조건의 약간의 변형의 결과로서 피크의 정확한 위치(즉, 인용된 2-θ 각의 값)에 약간의 차이가 생길 수 있기 때문에 절대값으로서 이해해서는 안된다는 것을 나타내고 있다. 또한 이전 단락에서는 화합물 I 디푸마레이트 A형이 도 4에 도시된 X-선 분말 회절 패턴과 '실질적으로' 동일한 X-선 분말 회절 패턴을 제공하고, 표 1에 제시된 실질적으로 가장 우세한 피크(2-θ 각의 값)를 갖는다는 것이 언급되고 있다. 당업자라면 그러한 문맥에서 용어 '실질적으로'의 이용은 또한 X-선 분말 회절 패턴의 2-θ 각의 값이 한 장치에서 다른 장치마다, 한 샘플에서 다른 샘플마다, 또는 이용되는 측정 조건의 약간의 변형의 결과로서 약간의 차이가 생길 수 있으므로, 따라서 도면에 도시되거나 표에 제시된 피크의 위치는 마찬가지로 절대값으로 이해해서는 안된다는 것을 나타내고 있다는 것을 이해하고 알 것이다.

이러한 관점에서, 당업계에는 측정 조건(예, 사용되는 장비 또는 기계)에 따라 하나 이상의 측정 오류를 갖는 X-선 분말 회절 패턴이 얻어질 수 있다는 것이 공지되어 있다. 특히, 일반적으로 X-선 분말 회절 패턴에서 강도는 측정 조건 및 샘플 제법에 따라 계속 변화할 수 있다는 것이 공지되어 있다. 예를 들면, X-선 분말 회절 업계의 당업자는 피크의 상대 강도가, 예를 들어 샘플의 분석에 영향을 미칠 수 있는 30 미크론 이상의 크기를 갖는 입자 및 비-단일 종횡비에 의해 영향을 받을 수 있다는 것을 이해할 것이다. 당업자는 또한 반사 위치가 샘플이 회절분석기에 놓이는 정확한 높이 및 회절분석기의 0 보정에 의해 영향받을 수 있다는 것을 이해할 것이다. 샘플의 표면 평면성도 또한 적은 효과를 가질 수 있다. 따라서, 당업자라면 본원에 제시된 회절 패턴 데이타가 절대적인 것으로서 이해해서는 안된다는 것을 알 것이다(추가 정보에 관해서는, 문헌[Jenkins, R & Snyder, R.L. 'Introduction to X-Ray Powder Diffractometry' John Wiley & Sons, 1996] 참조). 따라서, 당업자라면 본원에 기술된 화합물 I 디푸마레이트 결정질 형태가 도 4에 도시된 X-선 분말 회절 패턴과 동일한 X-선 분말 회절 패턴을 제공하는 결정에 한정되는 것이 아니고, 도 4에 도시된 패턴과 실질적으로 동일한 X-선 분말 회절 패턴을 제공하는 임의의 결정도 본 발명의 범위에 속하는 것으로 이해할 것이다. X-선 분말 회절 업계의 당업자는 X-선 분말 회절 패턴의 실질적인 동일성을 판단할 수 있다.

일반적으로, X-선 분말 회절도에서 회절 각의 측정 오류는 약 2θ = 0.5° 이하이고, 그러한 측정 오류의 정도는 도 1 및 4에서 X-선 분말 회절 패턴을 고려하는 경우에, 그리고 상기 내용 및 표 1에 제시된 피크 위치를 해석하는 경우에 고려되어야 한다.

본원에 기술된 융점 및 DSC 데이타는 Mettler DSC820e 장치를 사용하여 측정되었고, 이의 용도는 이하 더욱 상세하게 기술된다. 당업자라면 샘플 순도, 샘플 제법 및 측정 조건(예, 가열 속도)에서 변형의 결과로서 DSC에 의해 측정된 융점에서 약간의 변형이 일어날 수 있음을 알고 이해할 것이다. 당업자라면 융점의 대안적인 판독이 다른 유형의 장비에 의해 또는 이하 설명되는 것과 상이한 조건의 이용에 의해 제공될 수 있다는 것을 알고 이해할 것이다. 따라서, 본원에 제시된 융점 및 흡열 특징은 절대값으로서 취해지는 것이 아니고 DSC 데이타를 해석하는 경우 그러한 측정 오류가 고려될 것이다. 통상, 융점은 ± 0.5℃ 이하로 다양할 수 있다.

본 발명에 따른 화합물 I 디푸마레이트의 결정질 형태, 예컨대 A형은 또한 다른 적당한 분석 기법, 예를 들어 NIR 분광기 또는 고상 핵 자기 공명 분광기를 사용하여 다른 물리적 형태를 특성화시킬 수 있고/있거나 다른 물리적 형태로부터 구별될 수 있다.

본 발명의 화합물 I 디푸마레이트의 화학 구조는 일상적인 방법, 예컨대 양성자 핵 자기 공명(NMR) 분석에 의해 확인될 수 있다.

화합물 I의 합성

화합물 I은 WO2005/028469에 기술된 방법을 이용하여 또는 본원에서 실시예에 예시된 바와 같이 합성될 수 있다.

WO2005/028469의 실시예 1에는 화합물 I의 제법이 다음과 같이 개시되어 있다:

2-클로로-N-메틸아세트아미드(32 mg, 0.3 mmol)를 아세토니트릴(5 ㎖) 중의 4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-7-메톡시-6-[(피페리딘-4-일)옥시]퀴나졸린(120 mg, 0.3 mmol), 요오드화칼륨(16 mg, 0.1 mmol) 및 탄산칼륨(50 mg, 0.36 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 이 혼합물을 1시간 동안 환류에서 가열하였다. 진공 하에서 용매를 증발시킨 후, 디클로로메탄에서 잔류물을 꺼냈다. 유기 용액을 물 및 염수로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시켰다. 진공 하에서 용매를 증발시킨 후, 잔류물을 실리카겔 상에서 크로마토그래피(용리제: 디클로로메탄 중의 1% 내지 2% 7 N 메탄올성 암모니아)로 정제하여 화합물 I을 형성하였다.

본 발명자들은 2-클로로-N-메틸아세트아미드를 4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-7-메톡시-6-[(피페리딘-4-일)옥시]퀴나졸린과 바로 반응시키는 것은 요오드화칼륨의 사용을 방지한다는 것을 발견하였다. 게다가, 특정 용매로부터 화합물 I의 결정화는 고 순도의 화합물 I을 제공한다. 따라서, 신규한 공정은 화합물 I의 대규모 제조에 적당할 것으로 예상된다.

따라서, 본 발명의 추가 측면으로서, 본 발명은

(i) 적당한 염기의 존재 하에서 2-클로로-N-메틸아세트아미드와 4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-7-메톡시-6-[(피페리딘-4-일)옥시]퀴나졸린 디히드로클로라이드를 반응시키는 단계;

(ii) 단계 (i)로부터의 반응 혼합물에 에탄올, 물 및 메탄올, 또는 이들의 혼합물 중에서 선택된 용매를 첨가하여 화합물 I의 결정화를 실시하는 단계; 및

(iii) 화합물 I을 단리시키는 단계

를 포함하는 화합물 I의 제조 방법(또는 제조 공정)을 제공한다.

단계 (i)에서 반응은 적당한 불활성 용매, 예컨대 WO2005/028469의 30면에서 공정 (c)에 기술된 용매로 편리하게 수행된다. 예를 들면, 이 반응은 용매로서 아세토니트릴을 사용하여 수행될 수 있다. 이 반응은 적당한 염기, 예컨대 WO2005/028469의 30면에서 공정 (c)에 기술된 염기 중 하나, 예컨대 트리에틸아민의 존재 하에서 수행된다. 적절하게는, 이 반응은 고온, 예컨대 약 75℃에서 수행된다.

일 구체예에서, 공정의 단계 (ii)에서 용매는 물이다. 적절하게는, 이러한 구체예에서 단계 (i)이 아세토니트릴로 수행되는 경우, 물:아세토니트릴의 부피비는 대략 1:3이다.

본 발명의 또다른 구체예에서, 공정의 단계 (ii)에서 용매는 에탄올이다. 적절하게는, 이러한 구체예에서 단계 (i)이 아세토니트릴로 수행되는 경우, 에탄올:아세토니트릴의 부피비는 대략 3.5:7이다.

본 발명의 추가 구체예에서, 공정의 단계 (ii)에서 용매는 에탄올과 물의 혼합물이다. 적절하게는, 이러한 구체예에서 에탄올 대 물의 부피비는 약 20:1 내지 약 30:1, 예컨대 약 21.9:1 내지 25:1이다. 단계 (i)이 아세토니트릴에서 수행되는 경우, 적절하게는, 대략 3.5 부피의 에탄올 및 0.15 부피의 물을 7 부피의 아세토니트릴에 첨가하여 결정화를 실시한다.

이해되는 바와 같이, 예를 들어 물:아세토니트릴의 부피비가 1:3인 것으로 언급되는 것은 공정의 단계 (i)을 완료한 후 반응 용기 내에 존재하는 3 부피의 아세토니트릴에 1 부피의 물을 첨가한다는 것을 의미한다.

일 구체예에서, 공정의 단계 (ii)에서 단계 (i)로부터의 반응 혼합물을 약 70℃로 냉각시키고 에탄올을 첨가하였다. 그리고나서 반응 혼합물을 약 45℃로 냉각시키고 물을 첨가하여 화합물 I의 결정화를 실시한다. 필요한 경우, 반응 혼합물은 화합물 I로 시딩되어 결정화를 개시하는데 도움을 줄 수 있다. 그리고나서 반응 혼합물은 약 20℃로 냉각시켜 결정화가 완료된다.

단계 (iii)에서 화합물 I의 단리는 통상적인 방법, 예컨대 화합물 I의 여과 및 건조를 이용하여 수행될 수 있다.

출발 물질로서 사용된 4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-7-메톡시-6-[(피페리딘-4-일)옥시]퀴나졸린 디히드로클로라이드는 본원의 실시예에 기술된 바와 같이, 예를 들면 염산을 6-{[(1-tert-부톡시카르보닐)피페리딘-4-일]옥시}-4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-7-메톡시퀴나졸린에 첨가함으로써 제조될 수 있다. 편리하게도, 반응은 적당한 용매, 예컨대 에탄올, 아세토니트릴, 테트라히드로푸란, 2-메틸테트라히드로푸란, n-프로판올, 메탄올, 1-부탄올, 에틸 아세테이트, tert-부틸 아세테이트, 이소프로판올 또는 공업용 메틸화된 알콜에서 수행된다. 특정 용매는 에탄올 이상, 특히 공업용 메틸화된 알콜이다.

6-{[(1-tert-부톡시카르보닐)피페리딘-4-일]옥시}-4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-7-메톡시퀴나졸린은 4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-6-히드록시-7-메톡시퀴나졸린과 tert-부틸(4-메탄설포닐옥시)피페리딘-1-카르복실레이트를 반응시킴으로써 WO2005/028469의 실시예 1에 기술된 방법을 이용하여 제조될 수 있고, 그 반응은 용매로서 DMA를 사용하여 플루오르화세슘의 존재 하에서 그리고 85℃의 온도에서 수행된다.

이 반응은 또한 적당한 염기, 예컨대 탄산칼륨의 존재 하에서 N-메틸피롤리돈(NMP)의 존재 하에 수행될 수도 있다. 이 반응은 적절하게는 본원의 실시예에서 기술된 바와 같이 고온에서 수행된다.

하지만, 본 발명자들은 특정 용매의 존재 하에서 반응을 수행하는 것은 우수한 형태의 생성물을 제공한다는 것을 발견하였다. 추가적으로, 그러한 용매들 중 일부는 생성물의 대규모 제조에 적당한 것으로 예상된다.

따라서, 본 발명의 추가 측면으로서, 본 발명은

(i) 적당한 염기의 존재 하에서 4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-6-히드록시-7-메톡시퀴나졸린과 tert-부틸-(4-메탄설포닐옥시)피페리딘-1-카르복실레이트를 반응시키는 단계로서, 여기서 반응은 N-메틸피롤리돈, 또는 메탄올, 에탄올, 이소프로필 알콜, n-프로판올 및 공업용 메틸화된 알콜 중에서 선택된 알콜 중에서 선택된 용매에서 수행하는 것인 단계; 및

(ii) 6-{[(1-tert-부톡시카르보닐)피페리딘-4-일]옥시}-4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-7-메톡시퀴나졸린을 결정화시키는 단계

를 포함하는, 6-{[(1-tert-부톡시카르보닐)피페리딘-4-일]옥시}-4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-7-메톡시퀴나졸린의 제조 방법을 제공한다.

이 공정의 단계 (i)는 적당한 염기, 예컨대 WO2005/028469에 기술된 것, 예컨대 탄산칼륨의 존재 하에서 수행된다. 이 반응은 적절하게는, 고온에서, 편리하게도 환류 온도에서 수행된다.

필요한 경우, 물은 단계 (i)에서 사용된 용매에 첨가하여 반응 혼합물의 이동성을 증가시키는 것과 같은 처리를 도울 수 있다. 일 구체예에서, 반응의 단계 (i)은 경우에 따라 물의 존재 하에서 메탄올, 에탄올, 이소프로필 알콜, n-프로판올 및 공업용 메틸화된 알콜 중에서 선택된 알콜에서 수행된다. 추가 구체예에서, 반응 단계 (i)은 에탄올과 물의 혼합물에서 수행된다. 에탄올과 물의 혼합물이 사용되는 경우, 단계 (i)에서 에탄올 대 물의 부피비는 중요하지 않고, 예를 들면 에탄올 대 물의 부피비는 최대 약 10:2, 예컨대 약 10:1인 것이 적당하다.

공정의 단계 (ii)에서 결정화는 편리하게도 단계 (i)로부터의 반응 혼합물을 냉각시키고(예컨대, 약 70℃로 냉각시키고) 혼합물에 물을 첨가하여 결정화를 실시함으로써 수행된다. 그리고나서 실시예에 기술된 것과 같은 통상적인 방법으로 생성물을 단리시킬 수 있다.

화합물 I은 또한 하기 반응식 1에 예시된 공정에 따라 제조될 수도 있다:

[반응식 1]

반응식 1에 대한 노트:

단계 (i): Lg¹은 적당한 이탈기, 예컨대 할로게노, 알칸설포닐옥시 또는 아릴설포닐옥시 기, 예컨대 클로로, 브로모, 메탄설포닐옥시, 4-니트로벤젠설포닐옥시 또는 톨루엔-4-설포닐옥시 기(적절하게는, 메탄설포닐옥시, 4-니트로벤젠설포닐옥시 또는 톨루엔-4-설포닐옥시 기, 예컨대 Lg¹은 메탄설포닐옥시임)이다.

Pg¹은 적당한 아민 보호기이다. 이러한 기는, 예를 들어 대상에 대한 수많은 일반적인 문헌 중 하나, 예컨대 문헌['Protective Groups in Organic Synthesis' by Theodora Green (publisher: John Wiley & Sons)]에 기술된 바와 같이 잘 공지되어 있다. 아미노 보호기의 예로는 아실 기, 예컨대 알카노일 기, 예컨대 아세틸, 알콕시카르보닐 기, 예컨대 메톡시카르보닐, 에톡시카르보닐 또는 tert-부톡시카르보닐 기, 아릴메톡시카르보닐 기, 예컨대 벤질옥시카르보닐, 또는 아로일 기, 예컨대 벤조일이 포함된다. Pg¹의 특정 예는 tert-부톡시카르보닐이다.

반응은 적절하게는 염기, 예컨대 탄산염, 예컨대 탄산칼륨의 존재 하에서 수행된다. 반응은 편리하게도 적당한 불활성 용매, 예컨대 알콜, 예컨대 이소프로판올의 존재 하에서 수행된다. 반응은 적절하게는 고온, 편리하게도 용매의 환류 온도에서 수행된다.

단계 ( ii ): 보호기 Pg¹은 통상적인 방법을 사용하여 제거된다. 예를 들면, Pg¹이 tert-부톡시카르보닐인 경우, 이는 적당한 산, 예컨대 염산, 황산 또는 인산 또는 트리플루오로아세트산을 처리함으로써 제거될 수 있다.

단계 ( iii ): Lg²는 적당한 이탈기, 예컨대 할로게노, 예컨대 클로로이다. 반응은 적절하게는 적당한 염기, 예컨대 탄산염, 유기 아민 또는 알콕시드의 존재 하에서 수행된다. 적당한 염기로는 탄산칼륨 또는 트리에탄올아민이 포함된다. 반응은 편리하게도 불활성 용매, 예컨대 아세토니트릴 또는 알콜, 예컨대 에탄올의 존재 하에서 수행된다. 반응은 적절하게는 고온, 편리하게도 용매의 환류 온도에서 수행된다.

단계 ( iv ): 질화는, 예를 들어 상기 반응에 대해 잘 공지된 조건 및 실시예에 예시된 조건을 이용하여 황산의 존재 하에서 2-[4-(5-시아노-2-메톡시페녹시)피페리딘-1-일]-N-메틸아세트아미드(4)를 질산으로 처리함으로써 방향족 고리의 질화를 위한 잘 공지된 방법을 사용하여 실시될 수 있다.

단계 (v): 니트로 기를 아민으로 환원시키기에 적당한 환원 반응은, 예컨대 적당한 환원제, 예컨대 나트륨 디티오나이트의 존재 하에서 환원에 의해 잘 공지되어 있다. 이러한 반응은 적절하게도, 수성 용매, 예컨대 수성 메탄올의 존재 하에서 수행된다. 이 반응은 편리하게도 고온, 예컨대 40∼60℃에서 수행된다. 대안으로서, 환원은 적당한 촉매, 예컨대 탄소 상 팔라듐 촉매, 예컨대 10% 탄소상 팔라듐 촉매를 사용하여 수소화, 예컨대 접촉 수소화에 의해 실시될 수 있다. 수소화는 편리하게도 적당한 용매, 예컨대 메탄올에서 수행된다.

단계 ( vi ): 2-[4-(4-아미노-5-시아노-2-메톡시페녹시)피페리딘-1-일]-N-메틸아세트아미드(6)를 N,N-디메틸포름아미드 디메틸 아세탈과 반응시킨다. 그 반응은 편리하게도 적당한 용매, 예컨대 에테르, 예컨대 2-메틸테트라히드로푸란 또는 방향족 탄화수소, 예컨대 톨루엔의 존재 하에서 수행된다. 그 반응은 적절하게는 고온, 예컨대 약 70∼105℃, 적절하게도, 약 76℃에서 수행된다.

단계 ( vii )

반응은 적절하게는 적당한 산, 예컨대 아세트산, 프로판산, 숙신산, 푸마르산 및 시트르산 중에서 선택된 하나 이상의 산의 존재 하에서 수행된다. 일례로, 산은 아세트산이다. 반응은 적절하게는 불활성 용매, 예컨대 방향족 탄화수소 용매, 예컨대 메톡시벤젠의 존재 하에서 수행된다. 반응은 적절하게는 고온, 예컨대 약 90∼약 120℃, 적절하게도, 약 90℃에서 수행된다.

반응식 1에 기술된 공정은 본 발명의 추가 측면을 형성한다. 따라서, 본 발명은 적당한 산의 존재 하에서 2-[4-(5-시아노-4-{[(디메틸아미노)메틸렌]아미노}-2-메톡시페녹시)피페리딘-1-일]-N-메틸아세트아미드(7)와 3-클로로-2-플루오로아닐린을 반응시키는 단계를 포함하는, 화합물 I의 제조 방법을 제공한다.

적당한 반응 조건은 반응식 1의 단계 (vii)과 관련하여 상기 기술된 바와 같다.

반응식 1에 제시된 특정 중간체는 신규한 것이고 본 발명의 추가 측면을 형성한다. 따라서, 본 발명의 또다른 측면은 반응식 1에서 화합물 2, 3, 4, 5, 6 및 7 중 어느 하나에서 선택된 화합물, 또는 이의 염을 제공하고; 여기서 Pg1은 상기 정의된 바와 같다(예, tert-부톡시카르보닐). 반응식 1에서 중간체 중 일부, 예컨대 화합물(7)은 기하 이성질체의 중심(E- 및 Z- 이성질체)을 가질 수 있다. 당업자라면 본 발명이 그러한 모든 기하 이성질체 및 이들의 혼합물을 포함한다는 것을 이해할 것이다.

화합물 I 디푸마레이트 A형의 합성

본 발명의 추가 측면에 따르면, 본 발명은

(i) 화합물 I과 충분량의 푸마르산을 반응시켜 디푸마레이트 염을 형성시키는 단계;

(ii) A형을 결정화시키는 단계; 및

(iii) A형을 단리시키는 단계

를 포함하는, 화합물 I 디푸마레이트(A형)의 제조 방법을 제공한다.

단계 (i)에 대한 노트

편리하게도, 푸마르산과의 반응은 적당한 용매, 예컨대 메탄올, 에탄올, 1-부탄올, 2-부탄올 및 디아세톤 알콜 중에서 선택된 용매에서 수행된다. 이 반응은 또한 적당한 용매의 혼합물, 예컨대 메틸 에틸 케톤 및 디메틸포름아미드; 메틸 에틸 케톤 및 테트라히드로푸란; 메틸 에틸 케톤 및 메탄올; 메틸 에틸 케톤 및 이소프로판올; 에탄올 및 디메틸 설폭시드; 에탄올 및 테트라히드로푸란; 에탄올 및 이소프로판올; 1-부탄올 및 디메틸포름아미드; 1-부탄올 및 디메틸 설폭시드; 1-부탄올 및 테트라히드로푸란; 1-부탄올 및 메탄올; 1-부탄올 및 이소프로판올; 에틸아세테이트 및 디메틸포름아미드; 에틸 아세테이트 및 메탄올; 에틸 아세테이트 및 이소프로판올; 및 메탄올 및 이소프로판올 중에서 선택된 혼합물에서 수행될 수도 있다.

일 구체예에서, 단계 (i)에서 반응은 물에서 수행된다.

일 구체예에서, 단계 (i)에서 반응은 메틸 에틸 케톤을 포함하는 용매와 디메틸포름아미드, 테트라히드로푸란, 메탄올 및 이소프로판올 중에서 선택된 용매의 혼합물에서 수행된다.

또다른 구체예에서, 단계 (i)에서 반응은 에탄올을 포함하는 용매와 디메틸 설폭시드, 테트라히드로푸란 및 이소프로판올 중에서 선택된 용매의 혼합물에서 수행된다.

또다른 구체예에서, 단계 (i)에서 반응은 1-부탄올을 포함하는 용매와 디메틸포름아미드, 디메틸 설폭시드, 테트라히드로푸란, 메탄올 및 이소프로판올 중에서 선택된 용매의 혼합물에서 수행된다.

또다른 구체예에서, 단계 (i)에서 반응은 에틸 아세테이트를 포함하는 용매 및 디메틸 포름아미드, 메탄올 및 이소프로판올 중에서 선택된 용매의 혼합물에서 수행된다.

또다른 구체예에서, 단계 (i)에서 반응은 에틸 아세테이트 및 이소프로판올을 포함하는 용매의 혼합물에서 수행된다.

또다른 구체예에서, 단계 (i)에서 반응은 메탄올 및 이소프로판올을 포함하는 용매의 혼합물에서 수행된다.

반응의 단계 (i)이 메탄올 및 이소프로판올을 포함하는 용매의 혼합물에서 수행되는 구체예에서, 이소프로판올 대 메탄올의 부피비는 적절하게도 약 3.4:1 내지 약 1.0:1, 예컨대 약 1.5:1 내지 약 1.0:1의 범위 내에 있다. 이러한 반응은 적절하게는 고온, 예컨대 60℃를 초과하는 온도, 적절하게는 65℃ 내지 용매의 환류 온도에서 수행된다. 편리하게도, 화합물 I은 이소프로판올 중에 용해되거나 분산되고 이러한 혼합물은 메탄올에서 푸마르산의 용액 또는 분산액과 반응한다.

반응의 단계 (i)이 에틸 아세테이트 및 이소프로판올을 포함하는 용매의 혼합물에서 수행되는 구체예에서, 에틸 아세테이트 대 이소프로판올의 부피비는 적절하게도 약 5.1:1 내지 1.9:1의 범위, 예컨대 약 3.9:1 내지 1.9:1의 범위, 예컨대 약 2.1:1이다. 이러한 반응은 적절하게는 약 20∼약 73℃, 예컨대 약 40℃의 온도에서 수행된다. 편리하게도, 화합물 I은 에틸 아세테이트 중에 용해되거나 분산되고 이러한 혼합물은 이소프로판올 중의 푸마르산의 용액 또는 분산액과 반응한다. 대안적으로, 화합물 I은 에틸 아세테이트와 이소프로판올의 혼합물 중에 사전 용해될 수 있다. 필요한 경우, 이소프로판올은 통상적인 방법, 예컨대 증류를 사용하여 화합물 I의 용해 후 제거될 수 있다.

알콜, 예컨대 메탄올 또는 이소프로필 알콜 중에 푸마르산의 용액 또는 분산액을 제조하는 경우, 혼합물을 가열하여 푸마르산을 용해시키는 것이 필요할 수 있다. 하지만, 에스테르 형성을 최소화하기 위해서는 긴 시간 동안 고온에서 혼합물의 과도한 가열 및/또는 유지를 방지하여야 한다.

일반적으로, 공정의 단계 (i)에서 화합물 I은 2 몰 당량 이상의 푸마르산, 예컨대 약 2∼약 3, 구체적으로는 약 2∼약 2.7 몰 당량의 푸마르산과 반응시킨다. 하지만, 특정 용매계에는 보다 적은 양의 푸마르산이 사용될 수 있다. 예를 들면, 반응이 에틸 아세테이트와 이소프로판올의 혼합물에서 수행되는 경우, 본 발명자들은 푸마르산 대 화합물 I의 몰비가 1.725 이상이거나 이와 동일할 때 화합물 I 디푸마레이트가 제조될 수 있다는 것을 발견하였다.

단계 ( ii )에 대한 노트

A형의 결정화는 염을 함유하는 용액의 과포화를 유도하는 것과 같은 공지된 방법을 사용하여 용액으로부터 화합물의 결정화를 실시할 수 있다. 과포화는, 예를 들어 용액의 냉각, 용액으로부터 용매의 증발 또는 이 용액에 적당한 반용매의 첨가에 의해 실현될 수 있다.

일 구체예에서, 결정화는 용액을 냉각시킴으로써 실시된다. 예를 들면, 반응의 단계 (i)이 메탄올과 이소프로필 알콜의 혼합물에서 수행되는 경우, 반응 혼합물은 약 90분 동안 약 30℃로 냉각되고 약 30분 동안 30℃에서 유지된다. 그리고나서 이 반응 혼합물을 약 2시간 동안 약 0℃로 추가 냉각시킬 수 있고 결정화가 완료되기에 충분한 시간, 예컨대 약 1시간 동안 그 온도에서 유지시킨다.

대안적으로는, 반응의 단계 (i)이 에틸 아세테이트와 이소프로필 알콜의 혼합물에서 수행되는 경우, 반응 혼합물은 약 20℃(예, 약 1시간 동안 약 40℃∼약 20℃)로 냉각시킨다. 그리고나서 반응 혼합물은 충분한 시간 동안 20℃에서 유지하여 결정화를 실시한다. 적절하게는, 반응 혼합물은 10시간 이상, 예컨대 약 13.5시간 동안 약 20℃에서 유지된다.

또다른 구체예에서, 반응의 단계 (i)이 메탄올과 이소프로필 알콜의 혼합물에서 수행되는 경우, 결정화는 용매의 비율을 제거하여 잔여 반응 혼합물의 과포화를 유도함으로써 실시될 수 있다. 용매는 증발 또는 증류에 의해 제거될 수 있다. 적절하게는, 약 55∼65 중량%의 용매, 예컨대 약 62%의 용매를 제거한다. 필요한 경우, 추가의 이소프로판올은 혼합물에 첨가된 후 대략 동일 중량의 용매를 증류시킬 수 있다. 예를 들면, 대략 50∼60%의 추가 이소프로판올을 혼합물에 첨가할 수 있고, 여기서 %는 제1 증류 이후 반응 용기에 잔류하는 용매의 중량%이다. 이소프로판올의 첨가 후, 증류에 의해 유사한 중량의 용매를 제거한다. 결정화는 추가 이소프로판올을 첨가하고 혼합물을 약 8시간 동안 약 0℃로 냉각시킴으로써 완료될 수 있다.

일반적으로, A형은 공정의 단계 (ii)에서 자가 결정화되지만, 당업자가 알 수 있는 바와 같이, 결정화를 촉진하기 위해서는 A형에 의한 시딩이 이용될 수 있다. 필요한 경우, 시드 결정은 상기 기술된 방법을 사용하여 제조될 수 있고 화합물 I 디푸마레이트 A형의 제조에 대해서는 실시예에 예시되어 있다.

단계 ( iii )에 대한 노트

공정의 단계 (iii)에는 용액으로부터 결정질 물질을 단리시키기 위한 당업계에 공지된 임의의 적당한 방법이 사용될 수 있다. 적절하게는, A형은 여과에 의해 수집된다. A형의 단리 후, 염은 적당한 용매, 예컨대 냉각 이소프로판올로 세척될 수 있다. 단리 후, A형은 통상적인 방법, 예컨대 진공 건조를 사용하여 건조될 수 있다.

따라서, 본 발명의 일 구체예에서 본 발명은

(i) 이소프로판올 중의 화합물 I의 용액 또는 현탁액과 메탄올 중의 2 몰 당량 이상의 푸마르산을 반응시키는 단계로서,

여기서 이소프로판올 대 메탄올의 부피비는 3.4:1 내지 약 1.0:1, 예컨대 약 1.5:1 내지 약 1.0:1이고,

반응은 60℃ 이상의 온도에서 수행하는 것인 단계;

(ii) A형을 결정화시키는 단계; 및

(iii) A형을 단리시키는 단계

A형의 결정화 및 단리시키기에 적당한 조건은 상기 정의된 바와 같다.

따라서, 본 발명의 또다른 구체예에서 본 발명은

(i) 에틸 아세테이트 중의 화합물 I의 용액 또는 현탁액과 이소프로판올 중의 1.725 몰 당량 이상의 푸마르산(적절하게는, 2 몰 당량 이상의 푸마르산)을 반응시키는 단계로서, 여기서 에틸 아세테이트 대 이소프로판올의 부피비는 적절하게는 약 5:1 내지 1:1, 예컨대 약 5.1:1 내지 1.9:1, 예컨대 약 2.1:1이고, 반응은 약 20∼약 73℃(예, 약 40℃)의 온도에서 수행하는 것인 단계;

(ii) 단계 (i)로부터의 반응 혼합물을 약 20℃로 냉각시키고 이 온도에서 혼합물을 유지시켜 A형의 결정화를 실시하는 단계; 및

(iii) 화합물 I 디푸마레이트 A형을 단리시키는 단계

A형을 단리시키기에 적당한 조건은 상기 정의된 바와 같다.

따라서, 본 발명의 또다른 구체예에서 본 발명은

(i) 수중의 화합물 I과 2 몰 당량 이상의 푸마르산(예, 2.05 이상, 예컨대 약 2.1 몰 당량의 푸마르산)을 반응시키고, 여기서 반응은 약 85℃에서 수행하는 것인 단계;

(ii) 단계 (i)로부터의 반응 혼합물을 약 60℃로 냉각시키는 단계; 및

(iii) 화합물 I 디푸마레이트 A형을 단리시키는 단계

적절하게도, 단계 (ii)에서 반응 혼합물은 약 60℃로 서서히, 예를 들어 약 1℃/분의 냉각 속도로 냉각시킨다. 필요한 경우, A형의 결정화는 혼합물의 냉각 동안 A형의 시드 결정을 첨가함으로써 유도될 수 있다. 적절하게는, A형 시드 결정은 반응 혼합물이 약 77℃로 냉각되는 경우 첨가된다. 단계 (iii)에서 A형을 단리시키기에 적당한 조건은 상기 기술된 바와 같다.

결정질 화합물 I 디푸마레이트 B형 내지 P형은, 예를 들어 실시예에서 본원에 기술된 방법에 의해 제조될 수 있다.

약학 조성물

본 발명의 추가 측면에 따르면, 본 발명은 화합물 I 디푸마레이트를 약학적으로 허용가능한 희석제 또는 담체와 회합된 상태로 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 화합물 I 디푸마레이트는 본원에 기술된 형태 중 임의의 형태, 예컨대 A형으로 조성물에 사용될 수 있다.

본 발명의 조성물은 경구용(예, 정제, 로젠지제, 경질 또는 연질 캅셀제, 수성 또는 유성 현탁제, 에멀션제, 분산성 산제 또는 과립제, 시럽제 또는 엘릭시르제), 국소용(예, 크림제, 연고제, 겔제 또는 수성 또는 유성 액제 또는 현탁제), 흡입 투여용(예, 미분 산제 또는 액상 에어로졸), 통기 투여용(예, 미분 산제) 또는 비경구 투여용(예, 정맥내, 피하, 근육내 투여를 위한 멸균 수성 또는 유성 액제 또는 장내 투여를 위한 좌제)에 적당한 형태일 수 있다.

본 발명의 조성물은 당업계에 잘 공지된 통상의 약학 부형제를 사용하여 용이한 절차에 의해 얻을 수 있다. 따라서, 경구용 조성물은, 예를 들면 하나 이상의 착색제, 감미제, 향미제 및/또는 보존제를 함유할 수 있다.

예를 들면, 화합물 I 디푸마레이트는 적절하게는 다음과 같은 부형제를 사용하여 정제로서 조제된다:

정제 코어:

화합물 I 디푸마레이트(예, A형);

락토즈;

마이크로결정질 셀룰로즈;

크로스포비돈;

폴리비돈(PVP); 및

스테아르산마그네슘

정제 코어는 필름-코팅, 예컨대 HPMC계 필름 코팅으로 코팅될 수 있고, 이 코팅은 경우에 따라 하나 이상의 착색제 및/또는 광 보호제를 함유한다.

정제는 통상적인 방법을 사용하여 그리고 실시예에 예시된 바와 같이 제조될 수 있다. 필요한 경우, 화합물 I 디푸마레이트는 정제로 제형하기 전에 분쇄시켜 정제 내에 균일한 입도 분포의 화합물 I 디푸마레이트를 제공할 수 있다. 예를 들면, 화합물 I 디푸마레이트는 분쇄되어 약 5 ㎛의 평균 입도를 제공할 수 있다. 적당한 분쇄 방법은 잘 공지되어 있다.

단일 제형을 제조하기 위한 하나 이상의 부형제와 조합되는 활성 성분의 양은 필연적으로 치료된 호스트 및 특정 투여 경로에 따라 달라질 것이다. 예를 들면, 인간에게 경구 투여하기 위한 제형은 일반적으로 예를 들어 총 조성물의 약 5∼약 98 중량%로 다양할 수 있는 적절하고 편리한 양의 부형제와 배합되는 0.5 mg∼0.5 g의 활성제(더욱 적절하게는, 0.5∼200 mg, 예컨대 1∼30 mg)를 함유할 것이다.

화합물 I 디푸마레이트의 치료적 또는 예방적 목적을 위한 용량의 크기는 병태의 성질 및 중증도, 동물 또는 환자의 연령 및 성별, 및 투여 경로에 따라, 의학의 잘 공지된 원리에 따라 자연적으로 달라질 것이다.

치료적 또는 예방적 목적을 위해 화합물 I 디푸마레이트의 사용시, 일반적으로는 예를 들어 0.1 mg/kg∼75 mg/kg 체중 범위에서 1일 용량은 필요한 경우 분할 용량으로 제공받도록 투여될 것이다. 일반적으로, 보다 낮은 용량은 비경구 경로를 이용하였을 때 투여될 것이다. 따라서, 예를 들면, 정맥내 투여의 경우, 예컨대 0.1 mg/kg∼30 mg/kg 체중 범위에서 용량이 일반적으로 사용될 것이다. 유사하게, 흡입 투여의 경우에는, 예컨대 0.05 mg/kg∼25 mg/kg 체중 범위에서 용량이 사용될 것이다. 하지만, 경구 투여가 바람직하고, 특히 정제 형태가 바람직하다. 예를 들면, 화합물 I 디푸마레이트는 온혈 동물에게 1일 1 g 미만이나 1 mg 초과인 단위 용량에서 경구적으로 투여될 수 있다. 특히, 화합물 I 디푸마레이트는 온혈 동물에게 1일 250 mg 미만의 단위 용량에서 투여될 수 있다. 본 발명의 또다른 측면에서, 화합물 I 디푸마레이트는 온혈 동물에게 1일 160 mg 미만의 단위 용량에서 투여될 수 있다. 본 발명의 추가 측면에서, 화합물 I 디푸마레이트는 온혈 동물에게 1일 50 mg 미만의 단위 용량에서 투여될 수 있다. 화합물 I 디푸마레이트의 용량은 1일 1회 용량으로서 또는 전체 1일 용량의 다중 부분으로서 투여될 수 있다. 예를 들면, 화합물 I 디푸마레이트는 전체 1일 용량은 동일하거나 상이할 수 있는 2개의 용량으로서 투여될 수 있다. 하지만, 적절하게는, 전체 1일 용량의 각 부분은 대략 동일할 것이다. 예로서, 화합물 I 디푸마레이트는 1.5, 3.7, 14.9, 59.6 또는 149 mg의 화합물 I 디푸마레이트(1, 2.5, 10, 40 또는 100 mg의 화합물 I 유리형의 당량임)를 함유하는 정제 또는 캅셀제와 같은 하나 이상의 제형으로서 투여될 수 있다. 추가 구체예에서, 40, 80, 100, 160, 200 또는 240 mg의 화합물 I의 당량인 화합물 I 디푸마레이트의 용량은 1일 2회 투여된다. 특정 구체예에서, 160 mg의 화합물 I의 당량인 화합물 I 디푸마레이트의 용량은 1일 2회 투여된다. 특정 구체예에서, 200 mg의 화합물 I의 당량인 화합물 I 디푸마레이트의 용량은 1일 2회 투여된다. 또다른 특정 구체예에서, 240 mg의 화합물 I의 당량인 화합물 I 디푸마레이트의 용량은 1일 2회 투여된다.

생물학적 검정

화합물 I 및 화합물 I 디푸마레이트의 억제 활성은 WO2005/028469에 기술된 검정으로 또는 본원의 실시예에 기술된 바와 같이 측정될 수 있다.

본 발명의 화합물은 erbB 패밀리 수용체 티로신 키나아제 억제 활성, 및 특히 혼합된 erbB2/EGF 및/또는 erbB3/EGF 프로파일에서 기인하는 것으로 생각되는 항암 특성과 같은 항증식성 특징을 보유한다.

따라서, 본 발명의 화합물은 erbB 수용체 티로신 키나아제에 의해 단독으로 또는 부분적으로 매개되는 질병 또는 의학적 병태의 치료에 유용할 것으로 예상되는데, 즉 본 발명의 화합물은 그러한 치료가 필요한 온혈 동물에서 erbB 수용체 티로신 키나아제 억제 효과를 생성하는데 사용될 수 있다. 따라서, 본 발명의 화합물은 erbB 패밀리의 수용체 티로신 키나아제 중 하나 이상의 억제를 특징으로 하는 악성 세포의 치료 방법을 제공한다. 특히, 본 발명의 화합물은 erbB 수용체 티로신 키나아제의 억제에 의해 단독으로 또는 부분적으로 매개되는 항증식성 및/또는 세포사멸촉진성 및/또는 항침윤성 효과를 생성하는데 사용될 수 있다. 특히, 본 발명의 화합물은 erbB 수용체 티로신 키나아제 중 하나 이상의 억제에 감수성이고, 그러한 종양 세포의 증식 및 생존을 야기하는 신호 전달 단계에 수반되는 종양의 예방 또는 치료에 유용할 것으로 예상된다. 따라서, 본 발명의 화합물은 항증식성 효과를 제공함으로써 건선, 양성 전립선 과형성(BPH), 죽상동맥경화증 및 재협착증 및/또는 암의 치료에, 특히 erbB 수용체 티로신 키나아제 감수성 암의 치료에 유용할 것으로 예상된다. 그러한 양성 또는 음성 종양은 임의의 조직에 영향을 미칠 수 있고 비고형 종양, 예컨대 백혈병, 다발성 골수종 또는 림프종, 및 또한 고형 종양, 예컨대 담관암, 골암, 방광암, 뇌/CNS암, 유방암, 결장직장암, 자궁내막암, 위암, 두경부암, 간암, 폐암, 뉴런암, 식도암, 난소암, 췌장암, 전립선암, 신장암, 피부암, 고환암, 갑상선암, 자궁암 및 외음부암을 포함한다.

암이 지칭되는 경우, 구체적으로는 식도암, 골수종, 간세포암, 췌장암, 자궁경부암, 유잉 종양, 신경아세포종, 카포시 육종, 난소암, 유방암, 결장직장암, 전립선암, 방광암, 흑색종, 폐암 - 비소세포폐암(NSCLC), 및 소세포 폐암(SCLC), 위암, 두경부암, 뇌암, 신장암, 림프종 및 백혈병을 지칭한다. 일 구체예에서, 암은 유방암, 예컨대 호르몬 수용체-양성 유방암을 지칭한다. 또다른 구체예에서, 암은 SCLC, NSCLC, 결장직장암, 난소암 및/또는 유방암을 지칭한다. 또다른 구체예에서, 암은 SCLC를 지칭한다. 또다른 구체예에서, 암은 위암을 지칭한다. 또한, 암은 NSCLC를 지칭한다. 또한, 암은 결장직장암을 지칭한다. 또한, 암은 난소암을 지칭한다. 또한, 더욱 구체적으로는 암은 유방암을 지칭한다. 또한, 더욱 구체적으로는 암은 호르몬 수용체 양성 유방암, 특히 폐경기후 여성에서 호르몬 수용체 양성 유방암을 지칭한다. 일 구체예에서, 암은 초기 단계 비전이성 호르몬 수용체 양성 유방암, 예컨대 폐경기후 여성에서 초기 단계 비전이성 호르몬 수용체 양성 유방암을 지칭한다. 또한 추가적으로, 암은 초기 단계 비전이성 에스트로겐 및/또는 프로게스테론 수용체 양성 유방암, 특히 폐경기후 여성에서 초기 단계 비전이성 에스트로겐 및/또는 프로게스테론 수용체 양성 유방암을 지칭한다. 또한, 더욱 구체적으로는 암은 전이성 호르몬 수용체 양성 유방암, 특히 폐경기후 여성에서 전이성 호르몬 수용체 양성 유방암을 지칭한다. 또한 추가적으로, 암은 전이성 에스트로겐 및/또는 프로게스테론 수용체 양성 유방암, 특히 폐경기후 여성에서 전이성 에스트로겐 및/또는 프로게스테론 수용체 양성 유방암을 지칭한다. 추가적으로, 암은 방광암, 식도암, 위암, 흑색종, 자궁경부암 및/또는 신장암을 지칭한다. 또한, 암은 자궁내막암, 간암, 위장암, 갑상선, 직장암 및/또는 뇌암을 지칭한다. 본 발명의 또다른 구체예에서, 구체적으로는 암은 비전이성 상태로 존재한다. 본 발명의 또다른 구체예에서, 구체적으로는 암은 전이성 상태로 존재한다. 본 발명의 추가 구체예에서, 구체적으로는 암은 전이성 상태로 존재하고, 더욱 구체적으로는 암은 피부 전이를 유발한다. 본 발명의 추가 구체예에서, 구체적으로는 암은 전이성 상태로 존재하고, 더욱 구체적으로는 암은 림프 전이를 유발한다. 본 발명의 추가 구체예에서, 구체적으로는 암은 전이성 상태로 존재하고, 더욱 구체적으로는 암은 뇌 전이를 유발한다.

암 치료가 지칭되는 경우, 구체적으로는 erbB 패밀리 수용체, 예컨대 EFGR, erbB2 및/또는 erbB3 수용체 중 하나 이상을 발현하는 암성 종양의 치료를 지칭한다. 본 발명에 따른 화합물 I 디푸마레이트의 항암 효과는 항종양 효과, 반응 정도(예, 감소된 종양 체적 또는 감소된 종양 부담), 반응 속도, 임상적 이점 비율(완전형 반응, 부분형 반응 및 안정형 질병의 합계), 질병 진행 시간, 진행-불포함 생존 및 전체 생존 비율 중 하나 이상의 측면에서 측정될 수 있다. 그러한 임상 시험의 최종목적은 잘 공지되어 있고 예를 들어 FDA 문헌["Guidance for Industry Clinical Trial Endpoints for the Approval of Cancer Drugs and Biologics" May 2007 (www.fda.gov/CbER/gdlns/clintrialend.htm)]에 기술되어 있다. 본 발명에 따른 화합물 I 디푸마레이트의 항종양 효과는, 예를 들어 종양 성장 억제, 종양 성장 지연, 종양 퇴화, 종양 수축, 치료 중단시 종양의 재성장 시간의 증가 또는 질병 진행의 서행 중 하나 이상일 수 있다.

화합물 I 디푸마레이트의 용도는 또한 온혈 동물, 예컨대 인간에서 암의 개시를 예방하는데 유리한 효과를 가질 수도 있다.

본 발명의 이러한 측면에 따르면, 본 발명은 약제로서 사용하기 위한 화합물 I 디푸마레이트를 제공한다.

본 발명의 추가 측면에 따르면, 본 발명은 온혈 동물, 예컨대 인간에서 항증식성 효과의 유도하는데 사용하기 위한 화합물 I 디푸마레이트를 제공한다.

따라서, 본 발명의 이러한 측면에 따르면, 본 발명은 온혈 동물, 예컨대 인간에서 항증식성 효과의 유도하는데 사용하기 위한 약제의 제조에서의 화합물 I 디푸마레이트의 용도를 제공한다.

본 발명의 이러한 측면의 추가 특징에 따르면, 본 발명은 항증식성 효과를 유도하는 치료를 필요로 하는 온혈 동물, 예컨대 인간에서 항증식성 효과를 유도하는 방법으로서, 상기 동물에게 화합물 I 디푸마레이트의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다.

본 발명의 추가 측면에 따르면, 본 발명은 종양 세포의 증식을 유발하는 신호 전달 단계에 수반되는 erbB 수용체 티로신 키나아제, 예컨대 EGFR 및 erbB2 및/또는 EGFR 및 erbB3의 조합의 억제에 감수성인 종양의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 화합물 I 디푸마레이트를 제공한다.

본 발명의 추가 측면에 따르면, 본 발명은 종양 세포의 증식을 유발하는 신호 전달 단계에 수반되는 erbB 수용체 티로신 키나아제, 예컨대 EGFR 및 erbB2 및/또는 EGFR 및 erbB3의 조합의 억제에 감수성인 종양의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 약제의 제조에서의 화합물 I 디푸마레이트의 용도를 제공한다.

본 발명의 이러한 측면의 추가 특징에 따르면, 본 발명은 종양 세포의 증식을 유발하는 신호 전달 단계에 수반되는 erbB 수용체 티로신 키나아제, 예컨대 EGFR 및 erbB2 및/또는 EGFR 및 erbB3의 조합의 억제에 감수성인 종양의 예방 또는 치료 방법으로서, 상기 동물에게 화합물 I 디푸마레이트의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다.

본 발명의 추가 측면에 따르면, 본 발명은 조합된 EGFR 및 erbB2 티로신 키나아제의 억제 효과를 제공하는데 사용하기 위한 약제의 제조에서의 화합물 I 디푸마레이트의 용도를 제공한다.

본 발명의 이러한 측면의 추가 특징에 따르면, 본 발명은 조합된 EGFR 및 erbB2 티로신 키나아제의 억제 효과를 제공하는 방법으로서, 상기 동물에게 화합물 I 디푸마레이트의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다.

본 발명의 이러한 측면의 추가 특징에 따르면, 본 발명은 조합된 EGFR 및 erbB2 티로신 키나아제의 억제 효과를 제공하는데 사용하기 위한 화합물 I 디푸마레이트를 제공한다.

본 발명의 추가 측면에 따르면, 본 발명은 EGFR, erbB2 및 erbB3 중에서 선택된 하나 이상의 수용체 상에 티로신 키나아제 억제 효과를 제공하는데 사용하기 위한 약제의 제조에서의 화합물 I 디푸마레이트의 용도를 제공한다.

본 발명의 이러한 측면의 추가 특징에 따르면, 본 발명은 EGFR, erbB2 및 erbB3 중에서 선택된 2 이상의 수용체 상에 티로신 키나아제 억제 효과를 제공하는 방법으로서, 상기 동물에게 화합물 I 디푸마레이트의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다.

본 발명의 이러한 측면의 추가 특징에 따르면, 본 발명은 EGFR, erbB2 및 erbB3 중에서 선택된 2 이상의 수용체 상에 티로신 키나아제 억제 효과를 제공하는데 사용하기 위한 화합물 I 디푸마레이트를 제공한다.

본 발명의 추가 측면에 따르면, 본 발명은 erbB2/erbB3 이종이량체의 인산화에 의해 전체적으로 또는 부분적으로 매개된 병태(예, 종양)의 치료에 사용하기 위한 약제의 제조에서의 화합물 I 디푸마레이트의 용도를 제공한다.

본 발명의 이러한 측면의 추가 특징에 따르면, 본 발명은 erbB2/erbB3 이종이량체의 인산화에 의해 전체적으로 또는 부분적으로 매개된 병태(예, 종양)의 치료 방법으로서, 상기 동물에게 화합물 I 디푸마레이트의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다.

본 발명의 이러한 측면의 추가 특징에 따르면, 본 발명은 erbB2/erbB3 이종이량체의 인산화에 의해 전체적으로 또는 부분적으로 매개된 병태(예, 종양)의 치료에 사용하기 위한 화합물 I 디푸마레이트를 제공한다.

본 발명의 추가 측면에 따르면, 본 발명은 암(예, 백혈병암, 다발성 골수종, 림프종, 담관암, 골암, 방광암, 뇌/CNS암, 유방암, 결장직장암, 자궁내막암, 위암, 두경부암, 간암, 폐암(구체적으로는, 비소세포폐암), 뉴런암, 식도암, 난소암, 췌장암, 전립선암, 신장암, 피부암, 고환암, 갑상선암, 자궁암 및 외음부암 중에서 선택된 암, 구체적으로는 유방암, 위암, 결장직장암, 두경부암, 난소암 및 폐암 중에서 선택된 암, 더욱 구체적으로는 유방암)의 치료에 사용하기 위한 약제의 제조에서의 화합물 I 디푸마레이트의 용도를 제공한다.

본 발명의 이러한 측면의 추가 특징에 따르면, 본 발명은 암(예, 백혈병암, 다발성 골수종, 림프종, 담관암, 골암, 방광암, 뇌/CNS암, 유방암, 결장직장암, 자궁내막암, 위암, 두경부암, 간암, 폐암(구체적으로는, 비소세포폐암), 뉴런암, 식도암, 난소암, 췌장암, 전립선암, 신장암, 피부암, 고환암, 갑상선암, 자궁암 및 외음부암 중에서 선택된 암, 구체적으로는 유방암, 위암, 결장직장암, 두경부암, 난소암 및 폐암 중에서 선택된 암, 더욱 구체적으로는 유방암)의 치료를 필요로 하는 온혈 동물, 예컨대 인간에서 암을 치료하는 방법으로서, 상기 동물에게 화합물 I 디푸마레이트의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다.

본 발명의 추가 측면에 따르면, 본 발명은 암(예, 백혈병암, 다발성 골수종, 림프종, 담관암, 골암, 방광암, 뇌/CNS암, 유방암, 결장직장암, 자궁내막암, 위암, 두경부암, 간암, 폐암(구체적으로는, 비소세포폐암), 뉴런암, 식도암, 난소암, 췌장암, 전립선암, 신장암, 피부암, 고환암, 갑상선암, 자궁암 및 외음부암 중에서 선택된 암, 구체적으로는 유방암, 위암, 결장직장암, 두경부암, 난소암 및 폐암 중에서 선택된 암, 더욱 구체적으로는 유방암)의 치료에 사용하기 위한 화합물 I 디푸마레이트를 제공한다.

상기 언급된 바와 같이, 특정 질병의 치료적 또는 예방적 치료에 필요한 용량의 크기는, 다른 것들 중에서, 치료된 호스트, 투여 경로 및 치료하는 질병의 중증도에 따라 필연적으로 달라질 것이다.

본 발명의 추가 측면에 따르면, 본 발명은 암 치료에 이용하기 위해 화합물 I 디푸마레이트를, 약학적으로 허용가능한 희석제 또는 담체와 회합된 상태로 포함하는 약학 조성물을 제공한다.

의심을 피하기 위해, 암의 치료가 제시되는 경우, 이는 또한 전이, 즉 암 전개의 예방 및 치료를 지칭하는 것으로 이해된다. 따라서, 본 발명의 화합물 I 및 화합물 I 디푸마레이트는 전이가 없어서 발생이 중지되거나, 발생되기 전에 시간을 연장시키는 환자를 치료하는데 사용하고, 이미 전이를 가져서 전이 자체를 치료하는 환자에게 사용될 수 있다. 추가적으로, 암의 치료는 또한 확립된 원발성 종양 또는 종양, 및 발달 중인 원발성 종양 또는 종양의 치료를 지칭한다. 본 발명의 일 측면에서, 암의 치료는 전이의 예방에 관한 것이다. 본 발명의 또다른 측면에서, 암의 치료는 전이의 치료에 관한 것이다. 본 발명의 또다른 측면에서, 암의 치료는 확립된 원발성 종양 또는 종양, 또는 발달 중인 원발성 종양 또는 종양의 치료에 관한 것이다. 일 구체예에서, 암의 치료는 보조 치료에 관한 것이다. 또다른 구체예에서, 암의 치료는 암의 선행-보조 치료에 관한 것이다. 따라서, 본 발명의 구체예에서, 호르몬 감수성 유방암의 보조 치료로서, 구체적으로는 폐경기후 여성에서 에스트로겐 수용체 양성 유방암의 보조 치료로서 본 발명에 따른 화합물 I 디푸마레이트가 사용된다. 본 발명의 또다른 구체예에서, 호르몬 감수성 유방암의 선행-보조 치료로서, 구체적으로는 폐경기후 여성에서 에스트로겐 및/또는 프로게스테론 수용체 유방암의 선행-보조 치료로서 본 발명에 따른 화합물 I 디푸마레이트가 사용된다. 또다른 구체예에서, 화합물 I 디푸마레이트는 진행성 (전이성) 호르몬 감수성 (에스트로겐 및/또는 프로게스테론 수용체 양성) 유방암, 구체적으로는 폐경기후 여성에서 진행성 에스트로겐 수용체 양성 암을 치료하는데 사용된다.

추가 구체예에서, 본 발명에 따른 화합물 I 디푸마레이트는 환자에서 호르몬 감수성 유방암 치료에서 선행-보조 요법으로서 사용될 수 있다. 또다른 구체예에서, 선행-보조 치료로서 본 발명에 따른 화합물 I 디푸마레이트가 사용되지 않는다.

용어 "보조 요법"은 원발성 종양의 제거 이후에 제공되는 치료를 지칭한다. 암이 유방암인 경우, 원발성 종양의 제거는, 예를 들어 외과수술(예, 유방종양절제수술 또는 유방절제수술) 및/또는 방사선요법에 의해 실시될 수 있다.

용어 "선행-보조 요법"은 외과수술 또는 방사선요법에 의한 원발성 종양의 제거 이전에 제공되는 치료를 지칭한다.

본원에서, 암의 치료는 또한 암의 예방 자체를 지칭한다.

본 발명의 일 구체예에서, 화합물 I 디푸마레이트는 유방암의 치료에 사용하기에 적당한 내분비성 물질과 조합되어 사용된다. 예를 들면, 화합물 I 디푸마레이트 및 내분비성 물질의 조합은 아로마타제 억제제, 선택적 에스트로겐 수용체 조절물질, LHRH 작용제 및 에스트로겐 수용체 하향조절제 중에서 선택된다. 예를 들면, 화합물 I 디푸마레이트 및 아로마타제 억제제의 조합이다. 예를 들면, 화합물 I 디푸마레이트 및 타목시펜의 조합이다. 예를 들면, 화합물 I 디푸마레이트 및 아나스트로졸의 조합이다. 예를 들면, 화합물 I 디푸마레이트 및 레트로졸의 조합이다. 예를 들면, 화합물 I 디푸마레이트 및 엑세메스탄의 조합이다. 화합물 I 디푸마레이트 및 내분비물 요법의 조합은 본원에 기술된 유방암 치료에 사용하기에 특히 적당할 수 있다. 예를 들면, 이 조합은 전이성 에스트로겐 및/또는 프로게스테론 양성 유방암의 치료에 유용할 수 있다. 대안적으로, 이 조합은 유방암의 보조 치료로서, 특히 에스트로겐 및/또는 프로게스테론 양성 유방암의 보조 치료로서 유용할 수 있다. 이 조합은 또한 내분비물 요법(예, 선택적 에스트로겐 수용체 조절물질, 예컨대 타목시펜, 아로마타제 억제제, 예를 들어 아나스트로졸 또는 에스트로겐 수용체 하향조절제) 이전에 수용되지 않은 환자에서 에스트로겐 및/또는 프로게스테론 양성 유방암의 치료에 유용할 수도 있다.

따라서, 본 발명의 일 구체예에서, 본 발명은 진행성 (전이성) 에스트로겐 및/또는 프로게스테론 양성 유방암의 치료를 필요로 하는 온혈 동물, 예컨대 인간에서 진행성 (전이성) 에스트로겐 및/또는 프로게스테론 양성 유방암을 치료하는 방법으로서, 상기 동물에게 아로마타제 억제제, 예컨대 아나스트로졸의 유효량과 조합되어 화합물 I 디푸마레이트의 유효량을 투여하는 단계를 포함하고, 상기 동물은 이전에 내분비물 요법, 예를 들어 선택적 에스트로겐 수용체 조절물질 등, 예컨대 타목시펜, 아로마타제 억제제, 예컨대 아나스트로졸 또는 에스트로겐 수용체 하향조절제로 처리되지 않는 방법을 제공한다.

본 발명의 또다른 구체예에서, 본 발명은 비전이성 에스트로겐 및/또는 프로게스테론 양성 유방암의 치료를 필요로 하는 온혈 동물, 예컨대 인간에서 비전이성 에스트로겐 및/또는 프로게스테론 양성 유방암을 치료하는 방법으로서, 상기 동물에게 아로마타제 억제제, 예컨대 아나스트로졸의 유효량과 조합되어 화합물 I 디푸마레이트의 유효량을 투여하는 단계를 포함하고, 상기 동물은 이전에 내분비물 요법, 예를 들어 선택적 에스트로겐 수용체 조절물질 등, 예컨대 타목시펜, 아로마타제 억제제, 예컨대 아나스트로졸 또는 에스트로겐 수용체 하향조절제로 처리되지 않는 방법을 제공한다. 이러한 구체예에서, 이 조합은 적절하게는 보조 치료로서 투여된다.

유방암 치료를 위한 상기 2개의 구체예에서, 온혈 동물은 적절하게는 폐경기후 여성이다. 용어 "폐경기후"는 자연적인 폐경기후의 여성 및 폐경기가, 예를 들어 LHRH 작용제, 예컨대 고세렐린에 의한 치료에 의해 유도된 여성을 포함한다. 당업자라면 본원에서 "이전에 내분비물 요법으로 치료되지 않은" 환자를 언급하는 경우, 이는 환자에서 초기 폐경기가 유도되는 LHRH 작용제에 의한 환자의 치료는 "이전에 내분비물 요법으로 치료된" 환자는 고려하지 않는다는 것을 의도한다는 것을 이해할 것이다. 따라서, 초기 폐경기가 유도되는 LHRH 작용제에 의해 치료된 환자는 "내분비물 요법으로 치료된" 환자가 아니므로 본원에 기술된 구체예로부터 배제되지 않는다.

또다른 구체예에서, 화합물 I 디푸마레이트는 탁산, 예컨대 파클리탁셀 또는 도세탁셀과 조합되어 사용된다. 이러한 조합은 유방암의 치료에 유용할 수 있다. 예를 들면, erbB2의 낮은 과발현을 갖는 유방암(구체적으로는, 진행성/전이성 유방암)의 치료에 유용할 수 있다. 용어 "erbB2의 낮은 과발현"은 Her2 형광 계내 혼성화(FISH) 음성인 종양을 지칭한다. 구체적으로는, "erbB2의 낮은 과발현"인 종양은 다음과 같다:

(i) 면역조직화학(IHC)에 의한 Her2+; 및/또는

(ii) IHC 및 Her2 형광 계내 혼성화(FISH) 음성에 의한 Her2++.

따라서, 본 발명의 특정 구체예에서, 화합물 I 디푸마레이트는

(a) Her2 FISH 음성인 유방암;

(b) IHC에 의한 Her2+인 유방암; 및

(c) IHC 및 Her2 FISH 음성에 의한 Her2++인 유방암

중 하나 이상에서 선택된 erbB2의 낮은 과발현을 갖는 암의 치료에서 탁산, 예컨대 파클리탁셀 또는 도세탁셀과 조합되어 사용된다.

본 발명의 추가 측면에 따르면, 본 발명은 erbB2의 낮은 과발현을 갖는 유방암의 치료를 필요로 하는 온혈 동물, 예컨대 인간에서 erbB2의 낮은 과발현을 갖는 유방암을 치료하는 방법으로서, 상기 동물에게 탁산, 예컨대 파클리탁셀 또는 도세탁셀의 유효량과 조합된 화합물 I 디푸마레이트의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다.

본원에서, 용어 "조합"이 사용되는 경우, 당업자라면 이것이 동시적으로, 독립적으로 또는 순차적으로 투여하는 것을 지칭한다는 것을 이해할 것이다. 본 발명의 일 측면에서, "조합"은 동시 투여를 지칭한다. 본 발명의 또다른 측면에서, "조합"은 독립 투여를 지칭한다. 본 발명의 추가 측면에서, "조합"은 순차 투여를 지칭한다. 투여가 순차적 또는 독립적인 경우, 제2 성분의 투여 지연은 조합의 유리한 효과를 손실하게 되는 것이 아니어야 한다.

이해될 수 있는 바와 같이, 본원에 기술되는 방법, 용도 및 약학 조성물에 기술되는 화합물 I 디푸마레이트의 용도에 대한 언급은 본원에 기술된 디푸마레이트 중 어느 하나, 예컨대 A형을 지칭하는 것이다.

도면의 간단한 설명

도 1에는 화합물 I 유리형에 대한 X-선 분말 회절 패턴(XRPD)이 도시된다. x-축은 2-θ 값, y-축은 계수를 나타낸다.

도 2a에는 화합물 I 유리형 상에서 시차주사열량측정 결과가 도시된다. x-축은 온도 및 시간을 나타내고, y-축은 전력(mW)을 나타낸다. 도면 상의 설명은 흡열의 개시 온도 및 곡선의 적분(mJ)을 나타낸다.

도 2b는 화합물 I 유리형에 대한 열중량 결과이다. x-축은 온도 및 시간을 나타내고, y-축은 중량(mg)을 나타낸다. 이 그래프 내 설명은 약 30∼80℃에서의 샘플로부터 % 중량 손실 및 절대 중량 손실을 나타낸다.

도 3에는 화합물 I 유리형에 대한 동적 증기 수착 등온선 플롯이 도시된다. x-축은 % 상대 습도를 나타내고, y-축은 샘플 중량에서의 % 변화를 나타낸다. "sorp"는 흡착 사이클을 지칭하고 "desorp"는 탈착 사이클을 지칭한다.

도 4에는 화합물 I 디푸마레이트 A형에 대한 X-선 분말 회절 패턴(XRPD)이 도시된다. x-축은 2-θ 값, y-축은 계수를 나타낸다.

도 5에는 화합물 I 디푸마레이트 A형 상의 시차주사열량측정 결과가 도시된다. x-축은 온도 및 시간을 나타내고, y-축은 전력(mW)을 나타낸다. 도면 상의 설명은 용융 흡열의 개시 온도 및 곡선의 적분(mJ)을 나타낸다.

도 6에는 화합물 I 디푸마레이트 A형에 대한 열중량 결과가 도시된다. x-축은 온도 및 시간을 나타내고, y-축은 중량(mg)을 나타낸다. 이 그래프 내 설명은 약 30∼80℃에서의 샘플로부터 % 중량 손실 및 절대 중량 손실을 나타낸다.

도 7에는 화합물 I 디푸마레이트 A형에 대한 동적 증기 수착 등온선 플롯이 도시된다. x-축은 % 상대 습도를 나타내고, y-축은 샘플 중량에서의 % 변화를 나타낸다. "sorp"는 흡착 사이클을 지칭하고 "desorp"는 탈착 사이클을 지칭한다.

도 8에는 화합물 I 디푸마레이트 B형에 대한 X-선 분말 회절 패턴이 도시된다. x-축은 2-θ 값, y-축은 계수를 나타낸다.

도 9에는 화합물 I 디푸마레이트 C형에 대한 X-선 분말 회절 패턴이 도시된다. x-축은 2-θ 값, y-축은 계수를 나타낸다.

도 10에는 화합물 I 디푸마레이트 D형에 대한X-선 분말 회절 패턴이 도시된다. x-축은 2-θ 값, y-축은 계수를 나타낸다.

도 11에는 화합물 I 디푸마레이트 E형에 대한 X-선 분말 회절 패턴이 도시된다. x-축은 2-θ 값, y-축은 계수를 나타낸다.

도 12에는 화합물 I 디푸마레이트 F형에 대한 X-선 분말 회절 패턴이 도시된다. x-축은 2-θ 값, y-축은 계수를 나타낸다.

도 13에는 화합물 I 디푸마레이트 G형에 대한 X-선 분말 회절 패턴이 도시된다. x-축은 2-θ 값, y-축은 계수를 나타낸다.

도 14에는 화합물 I 디푸마레이트 H형에 대한 X-선 분말 회절 패턴이 도시된다. x-축은 2-θ 값, y-축은 계수를 나타낸다.

도 15에는 화합물 I 디푸마레이트 I형에 대한 X-선 분말 회절 패턴이 도시된다. x-축은 2-θ 값, y-축은 계수를 나타낸다.

도 16에는 화합물 I 디푸마레이트 J형에 대한 X-선 분말 회절 패턴이 도시된다. x-축은 2-θ 값, y-축은 계수를 나타낸다.

도 17에는 화합물 I 디푸마레이트 K형에 대한 X-선 분말 회절 패턴이 도시된다. x-축은 2-θ 값, y-축은 계수를 나타낸다.

도 18에는 화합물 I 디푸마레이트 L형에 대한 X-선 분말 회절 패턴이 도시된다. x-축은 2-θ 값, y-축은 계수를 나타낸다.

도 19에는 화합물 I 디푸마레이트 M형에 대한 X-선 분말 회절 패턴이 도시된다. x-축은 2-θ 값, y-축은 계수를 나타낸다.

도 20에는 화합물 I 디푸마레이트 N형에 대한 X-선 분말 회절 패턴이 도시된다. x-축은 2-θ 값, y-축은 계수를 나타낸다.

도 21에는 화합물 I 디푸마레이트 O형에 대한 X-선 분말 회절 패턴이 도시된다. x-축은 2-θ 값, y-축은 계수를 나타낸다.

도 22에는 화합물 I 디푸마레이트 P형에 대한 X-선 분말 회절 패턴이 도시된다. x-축은 2-θ 값, y-축은 계수를 나타낸다.

도 23에는 화합물 I 디푸마레이트 Q형에 대한 X-선 분말 회절 패턴이 도시된다. x-축은 2-θ 값, y-축은 계수를 나타낸다.

본 발명은 본 발명의 정교한 몇몇 구체예인 하기 실시예에 의해 추가로 예시된다. 이러한 실시예는 본 발명의 범위를 한정하려는 것도 아니며 한정하는 것으로 이해해서도 안된다. 당업자라면 본 발명은 본원에 특정하게 기술된 것과 달리 실시될 수 있다는 것을 분명하게 알 것이다. 본 발명의 다수의 변형예 및 변경예는 본원의 교시의 측면에서 가능하고, 이에 따라 본 발명의 범위 내에 속한다.

실시예에서, 달리 제시되지 않는 한 다음과 같다:

(i) 수율은 단지 예시로서만 제공되고 반드시 그런 것은 아니지만 도달할 수 있는 최대치이다.

(ii) 융점은 Mettler DSC820e 장치를 사용하여 DSC 분석에 의해 측정되었고; 1∼2 mg의 샘플이 정확하게 칭량되어 배출 샘플 팬에서 분석되었고; 가열은 25℃∼325℃에서 10℃/분으로 수행되었고; 달리 제시하지 않는 한 본원에서 융점은 DSC를 사용하여 측정된 용융 흡열의 개시 온도를 지칭한다.

(iii) 질량 스펙트럼은 직접 노출 프로브를 사용하여 화학 이온화(CI) 중에서 70 전자 볼트의 전자 에너지로 수행하였으며; 이것이 표시된 경우, 이온화는 전자 충격(EI), 고속 원자 충돌(FAB) 또는 전자 분무(ESP)에 의해 실시되었고; m/z에 대한 값을 제공하며; 일반적으로 모체 질량을 가리키는 이온만을 보고하고; 달리 제시되지 않는 한, 인용된 질량 이온은 양성자화 질량 이온을 지칭하는 (MH)⁺이고; M⁺에 대한 언급은 전자 소실에 의해 발생된 질량 이온에 관한 것이고; M-H⁺에 대한 언급은 양성자 소설에 의해 발생된 질량 이온에 관한 것이다.

(iv) NMR 데이터가 제공되는 경우, 이는 달리 설명하지 않는 한 용매로서 과중수소화 디메틸 술폭시드(DMSO-d₆)를 사용하여 500 MHz에서 측정한, 내부 표준으로서 테트라메틸실란(TMS)에 대하여 백만분율(ppm)로 제공되는, 주요 진단 양성자에 대한 델타 값 형태이며; 하기 약자는 다음과 같이 사용된다: s, 일중항; d, 이중항; t, 삼중항; q, 사중항; m, 다중항; br, 브로드.

(v) 화학 기호는 통상의 의미를 갖고; SI 단위 및 기호가 사용된다.

(vi) 용매 비율은 부피:부피(v/v) 방식으로 제공된다.

(vii) 열중량 분석은 Mettler TG851 장비를 사용하여 수행되고, 1∼5 mg 샘플은 정확하게 칭량되어 개방 팬에서 분석되고; 가열은 25℃∼325℃에서 10℃/분으로 수행되었다.

(viii) X-선 분말 회절 분석은 섬광 검출기에 장착된 Siemens D5000 분말 X-선 회절분석기를 사용하여 수행하였고; X-선 공급원은 1.54 Å 파장을 제공하는 CuKα이었고; 데이타는 2-θ 2∼40°범위 하에서, 2-θ 0.02°의 증가로, 증가 당 1초에서 수집되었고 하기 표 2에서 확인되는 카테고리로 분류된다:

[미리 언급된 바와 같이, X-선 분말 회절 분야의 당업자는 피크의 상대 강도가, 예를 들어 샘플의 분석에 영향을 미칠 수 있는 30 미크론 이상의 크기를 갖는 입자 및 비-단일 종횡비에 의해 영향을 받을 수 있다는 것을 이해할 것이다. 당업자는 또한 반사 위치가 샘플이 회절분석기에 놓이는 정확한 높이 및 회절분석기의 0 보정에 의해 영향받을 수 있다는 것을 이해할 것이다. 샘플의 표면 평면성도 또한 적은 효과를 가질 수 있다. 따라서, 본원에 제시된 회절 패턴 데이타가 절대적인 것으로서 이해해서는 안된다(추가 정보에 관해서는, 문헌[Jenkins, R & Snyder, R.L. 'Introduction to X-Ray Powder Diffractometry' John Wiley & Sons, 1996] 참조)]

(ix) 동적 증기 수착은 SMS DVS(Surface Measurement Systems Limited, 영국 소재)를 사용하여 측정되었다. 샘플은 200 cm³/분의 기체 유동을 이용하여 25℃에서 분석하였다. 상대 습도(RH)는 10% RH∼80% RH의 단계에서 0% RH로부터 95% RH의 최종 단계로 증간된다. 그리고나서 샘플은 수착으로서 동일한 RH 단계 패턴을 이용하여 탈착되었고; 그리고나서 이러한 절차는 제2 수착/탈착 사이클로 반복된다. 각 습도 단계에서 평형은 시간(분)에 따른 중량 변화율이 0.002%이도록 설정된다.

(x) 고유 용해율은 광섬유 UV 검출기와 커플링된 용해 수조에서 측정되었다.

(xi) 수중에서 용해도는 HPLC UV를 이용하여 측정되었다.

(xii) 하기 제시되는 실시예에서 언급된 몰수 및 수율은 100% w/w에서 원료 및 시약을 지칭하고, 이에 따라 사용되는 물질의 순도를 고려한다.

실시예 A

4-(3- 클로로 -2- 플루오로아닐리노 )-7- 메톡시 -6-{[1-(N- 메틸카르바모일메 틸)피페리딘-4-일] 옥시 } 퀴나졸린 (화합물 I)의 제조

2-클로로-N-메틸아세트아미드(3.720 kg, 34.60 몰) 및 4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-7-메톡시-6-[(피페리딘-4-일)옥시]퀴나졸린 디히드로클로라이드(13.70 kg, 27.25 몰)를 아세토니트릴(79.2 kg) 중에 용해시켰다. 상온에서 교반된 현탁액에 트리에틸아민(17.40 kg, 172.11 몰)을 첨가하였다. 생성된 투영 용액을 환류로 가열하고 3시간 동안 유지시켰다. 이 용액을 20℃로 냉각시켰다(50℃에서 결정화되는 생성물). 물(54.2 kg)을 반응기에 첨가하고 현탁액을 20℃에서 추가 2시간 동안 교반하였다. 생성물을 여과하고 물(34 kg)로 세척한 후 저온(0℃) 아세토니트릴(13.0 kg)로 세척하였다. 생성물을 아세토니트릴(94.6 kg)로부터 재결정화시키고, 여과 단리시키고 저온(0℃) 아세토니트릴(13.2 kg)로 세척하였다. 그리고나서 상기와 같이 아세토니트릴(75.2 kg)로부터 이 생성물의 추가 재결정화를 수행하였다. 그리고나서 고체를 진공 건조시켜 백색 고체로서 표제 생성물(6.50 kg, 50%)을 형성하였다; ¹H NMR 스펙트럼: (CDCl₃) 1.98 (m, 2H), 2.08 (m, 2H), 2.46 (-m, 2H), 2.85 (m, 2H), 2.87 (d, 3H), 3.07 (s, 2H), 4.02 (s, 3H), 4.49 (m, 1H), 7.16 (m, 4H), 7.31 (m, 2H), 8.49 (m, 1H), 8.71 (s, 1H); 질량 스펙트럼: MH⁺ 474.

출발 물질로서 사용된 4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-7-메톡시-6-[(피페리딘-4-일)옥시]퀴나졸린은 다음과 같이 제조되었다:

단계 1: 6- 아세톡시 -4-(3- 클로로 -2- 플루오로아닐리노 )-7- 메톡시퀴나졸린 히드로클로라이드

6-아세톡시-7-메톡시퀴나졸린-4-온(국제 특허 출원 WO 96/15118, 이의 실시예 39; 21.4 kg, 89.3 몰)을 톨루엔(150 kg) 중에 현탁시켰다. 여기에 N-에틸디이소프로필아민(13.3 kg, 103 몰)을 첨가하였다. 갈색 현탁액을 70℃로 가열한 후 산염화인(36.0 kg, 228 몰)을 투입하였다. 반응 혼합물을 5시간 동안 70℃에서 교반하였다. 추가 톨루엔(84.0 kg)을 첨가한 후 3-클로로-2-플루오로아닐린(14.88 kg, 102 몰)을 첨가하였다. 고체가 침전되는 시간 동안 반응 혼합물을 2시간 동안 70℃에서 교반하였다. 현탁액을 25℃로 냉각시키고 93시간 동안 이 온도에서 유지시켰다. 반응 혼합물을 여과하고 필터 케이크상을 톨루엔(2 x 55.5 kg)으로 세척하였다. 이 케이크상을 에탄올(24.5 kg)과 물(32.0 kg)의 혼합물로 2회, 그리고나서 에탄올(50.5 kg)로 2회 추가 세척하고 그후 고체를 진공 건조시켜 베이지색 고체로서 표제 생성물(33.4 kg, 78%)을 형성하였다; ¹H NMR: 2.37 (s, 3H), 4.00 (s, 3H), 7.34 (ddd, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.52 (ddd, 1H), 7.61 (ddd, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.86 (s, 1H); 질량 스펙트럼: 362.4, 364.4.

단계 2: 4-(3- 클로로 -2- 플루오로아닐리노 )-6-히드록시-7- 메톡시퀴나졸린

단계 1로부터 6-아세톡시-4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-7-메톡시퀴나졸린 히드로클로라이드(33.5 kg, 69.6 몰)를 메탄올(198 kg) 중에 현탁시켰다. 25℃에서 교반된 현탁액에 물(86 kg) 및 수산화나트륨(31.5 kg, 32%)을 첨가하였다. 생성된 용액을 4.5시간 동안 60℃에서 교반한 후 25℃로 냉각시켰다. 용액으로부터 생성물이 침전되는 시점인 pH 5.5∼6.0이 실현될 때까지 아세트산(대략 16.0 kg)을 첨가하였다. 추가 메탄올(5.5 kg)을 첨가한 후 현탁액을 90분 동안 교반하였다. 이 생성물을 여과하고 그리고나서 25% 수성 메탄올(39.0 kg MeOH + 17.0 kg 물)로 세척한 후 메탄올(55.5 kg)로 세척하였다. 미정제 고체를 40℃에서 진공 건조시켰다. 미정제 고체를 물(145 kg)로 슬러리화시키고 65℃에서 2시간 동안 교반하였다. 이 슬러리를 20℃로 냉각시키고 여과하였다. 필터 케이크상을 메탄올(2 x 21.5 kg)로 세척하고, 그리고나서 40℃에서 진공 건조시켜 담갈색 고체로서 표제 생성물(21.85 kg, 98%)을 형성하였다; ¹H NMR: 3.95 (s, 3H), 7.19 (s, 1H), 7.23 (dd, 1H), 7.42 (dd, 1H), 7.50 (dd, 1H), 7.64 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 9.43 (s, 1H), 9.67 (br.s, 1H); 질량 스펙트럼: 320.4, 322.4.

단계 3: 6-{[(1- tert - 부톡시카르보닐 )피페리딘-4-일] 옥시 }-4-(3- 클로로 -2-플 루오로아닐리 노)-7- 메톡시 퀴나졸린

단계 2로부터 4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-6-히드록시-7-메톡시퀴나졸린(15.591 kg, 48.44mol), tert-부틸(4-메탄설포닐옥시)피페리딘-1-카르복실레이트(문헌[Chemical & Pharmaceutical Bulletin 2001, 49(7), 822-829]에서와 같이 제조됨; 16.20 kg, 57.99 몰) 및 탄산칼륨(7.978 kg, 57.73 몰)을 N-메틸피롤리디논(114.2 kg) 중에 용해시키고, 이 혼합물을 교반하면서 100℃로 가열하였다. 5시간 동안 100℃(95℃∼105℃)에서 가열을 계속하였다. 그리고나서 혼합물을 80℃로 냉각시키고 물(216.6 kg) 첨가에 의해 켄칭하였다.

뱃치를 추가 60분 동안 80℃에서 교반한 후, 생성물이 결정화되는 시간인 2시간 동안 20℃로 냉각시켰다. 생성물을 여과 단리시켰다. 생성물을 고온(환류) 메탄올(200 L) 중에 용해시켰다. 이 혼합물에 물(20 L)을 첨가하여, 결정화를 유도하였다. 현탁액을 0℃로 냉각시키고 여과하였다. 50℃에서 진공 건조시켜 표제 생성물을 얻었다, 18.80 kg (77%); ¹H NMR: 1.40 (s, 9H), 1.60-1.65 (m, 2H), 1.95-2.00 (m, 2H), 3.20-3.25 (m, 2H), 3.65-3.70 (m, 2H), 3.92 (s, 3H), 4.68 (m, 1H), 7.21 (s, 1H), 7.27 (dd, 1H), 7.47 (ddd, 1H), 7.51 (dd, 1H), 7.85 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 9.53 (s, 1H); 질량 스펙트럼: 503.5, 505.5.

단계 4: 4-(3- 클로로 -2- 플루오로아닐리노 )-7- 메톡시 -6-[(피페리딘-4-일)옥시] 퀴나졸린 디히드로클로라이드

단계 3으로부터 6-{[(1-tert-부톡시카르보닐)피페리딘-4-일]옥시}-4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-7-메톡시퀴나졸린(18.80 kg, 37.38 몰)을 이소프로판올(139.8 kg) 중에 현탁시키고, 교반하면서 40℃로 가열하였다. 용기에 염산(15.40 kg, ∼156.3 몰)을 50분에 걸쳐 투입하여 대략 9℃의 발열선(exotherm)이 발생하도록 하였다. 산을 투입하는 동안, 현탁액을 용해시켜 투명 용액을 형성시켰다. 이 용액을 대략 90분에 걸쳐 환류로 서서히 가열하고, 그리고나서 추가 3시간 동안 환류에서 유지시켰다. 이 환류 기간 동안 생성물을 결정화하였다. 진한 현탁액을 0℃로 냉각하고 여과하였다. 필터 케이크상을 저온(0℃) 이소프로판올(2 x 20.6 kg)로 2회 세척하였다. 이 생성물을 50℃에서 진공 건조시켜 표제 생성물을 형성하였다, 13.60 kg (73%); ¹H NMR: 1.53-1.64 (m, 2H), 2.00-2.05 (m, 2H), 2.64-2.72 (m, 2H), 3.00-3.07 (m, 2H), 3.92 (s, 3H), 4.60 (m, 1H), 7.20 (s, 1H), 7.26 (ddd, 1H), 7.47 (dd, 1H), 7.50 (dd, 1H), 7.82 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 9.56 (s, 1H); 질량 스펙트럼: 403.2, 405.2.

실시예 B

4-(3- 클로로 -2- 플루오로아닐리노 )-7- 메톡시 -6-{[1-(N- 메틸카르바모일메틸 )피페리딘-4-일] 옥시 } 퀴나졸린 (화합물 I)의 제조

2-클로로-N-메틸아세트아미드(24.22 g, 223.1 mmol) 및 4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-7-메톡시-6-[(피페리딘-4-일)옥시]퀴나졸린 디히드로클로라이드(86.00 g, 160.9 mmol)를 아세토니트릴(537 ㎖) 중에 슬러리화시켰다. 상온에서 교반된 현탁액에 트리에틸아민(101 ㎖, 723.9 mmol)을 첨가하였다. 이 반응물을 75℃로 가열하고 5시간 동안 유지시켰다. 용액을 70℃로 냉각시키고 에탄올(268 ㎖)을 첨가하였다. 반응물을 45℃로 냉각시키고 물(9.6 ㎖)을 첨가하였다. 화합물 I(0.42 g)을 첨가하여 결정화를 달성하고 그리고나서 슬러리를 2시간에 걸쳐 20℃로 냉각시켰다. 추가 12시간 동안 교반한 후, 생성물을 여과 단리시켰다. 필터 케이크상을 아세토니트릴(102 ㎖): 에탄올(51 ㎖): 물(1.8 ㎖)로 2회 세척한 후 물(153 ㎖)로 세척하였다. 이 생성물을 60℃에서 진공 건조시켜 백색 고체로서 표제 화합물(45.9g, 60%)을 형성하였다; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ ppm 1.76 - 1.87 (m, 2 H) 2.01 - 2.11 (m, 2 H) 2.35 - 2.44 (m, 2 H) 2.64 (d, J=4.74 Hz, 3 H) 2.72 - 2.80 (m, 2 H) 2.95 (s, 2 H) 3.95 (s, 3 H) 4.51 - 4.63 (m, 1 H) 7.23 (s, 1 H) 7.29 (td, J=8.08, 1.29 Hz, 1 H) 7.46 - 7.58 (m, 2 H) 7.75 (q, J=4.60 Hz, 1 H) 7.83 (s, 1 H) 8.38 (s, 1 H) 9.59 (s, 1 H); 질량 스펙트럼: MH⁺ 474.

출발 물질로서 사용된 4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-7-메톡시-6-[(피페리딘-4-일)옥시]퀴나졸린 디히드로클로라이드를 다음과 같이 제조하였다:

단계 1: 6-{[(1- tert - 부톡시카르보닐 )피페리딘-4- 일]옥시 }-4-(3- 클로로 -2-플 루오로아닐리 노)-7- 메톡시 퀴나졸린

4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-6-히드록시-7-메톡시퀴나졸린(실시예 A의 단계 2에 기술된 바와 같이 제조됨; 60.00 g, 0.1828 몰), tert-부틸(4-메탄설포닐옥시)피페리딘-1-카르복실레이트(88.04 g, 0.3107 몰) 및 탄산칼륨(30.31 g, 0.2193 몰)을 에탄올(584 ㎖) 및 물(58 ㎖) 중에 현탁시키고, 이 혼합물을 교반하면서 환류로 가열하였다. 16.5시간 동안 환류에서 가열을 계속하였다. 그리고나서 혼합물을 70℃로 냉각시키고 물(234 ㎖)을 60분에 걸쳐 첨가하였다.

뱃치를 추가 2시간 동안 65℃에서 교반하여 결정화를 달성하였다. 이 슬러리를 6시간에 걸쳐 20℃로 냉각시켰다. 생성물을 여과 단리시켰다. 필터 케이크상을 수성 에탄올(에탄올 117 ㎖, 물 58 ㎖)에 의해 슬러리화시킨 후 치환체를 수성 에탄올(에탄올 117 ㎖, 물 58 ㎖)로 세척하였다. 그리고나서 필터 케이크상을 물(175 ㎖)로 슬러리화시킨 후 치환체를 물(175 ㎖)로 세척하였다. 생성물을 40℃에서 진공 건조시켜 표제 화합물(81.5 g, 84%)을 형성하였다; ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ ppm 1.42 (s, 9 H) 1.60 - 1.70 (m, 2 H) 1.96 - 2.04 (m, 2 H) 3.23 - 3.30 (m, 2 H) 3.65 - 3.75 (m, 2 H) 3.95 (s, 3 H) 4.68 - 4.75 (m, 1 H) 7.24 (s, 1 H) 7.29 (t, J=8.06 Hz, 1 H) 7.49 (t, J=7.50 Hz, 1 H) 7.54 (t, J=7.19 Hz, 1 H) 7.88 (s, 1 H) 8.39 (s, 1 H) 9.57 (s, 1 H); 질량 스펙트럼: 503.5, 505.5.

단계 2: 4-(3- 클로로 -2-플루오로아닐리노)-7-메톡시-6-[(피페리딘-4-일)옥시] 퀴나졸린 디히드로클로라이드

6-{[(1-tert-부톡시카르보닐)피페리딘-4-일]옥시}-4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-7-메톡시퀴나졸린(10.00 g, 0.1879 몰)을 공업용 메틸화된 알콜(95 ㎖) 중에 현탁시키고, 교반하면서 35℃로 가열하였다. 용기에 염산(6.59 ㎖, 대략 0.7891 몰)을 투입하여 대략 5.5℃의 발열선이 발생하도록 한다. 산을 투입하는 동안, 현탁액을 용해시켜 투명 용액을 형성시켰다. 이 용액을 대략 90분에 걸쳐 70℃로 서서히 가열한 후, 추가 1시간 동안 70℃에서 유지시켰다. 그리고나서 생성물이 결정화되는 시간인 4시간 동안 반응물을 0℃로 냉각시켰다. 생성물을 여과 단리시킨 후 필터 케이크상을 공업용 메틸화된 알콜(2 x 14 ㎖)로 2회 세척하였다. 생성물을 50℃에서 진공 건조시켜 표제 생성물(9.04 g, 88%)을 형성하였다; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ ppm 1.91 - 2.01 (m, 2 H) 2.27 - 2.35 (m, 2 H) 3.15 - 3.26 (m, 2 H) 3.26 - 3.35 (m, 2 H) 4.02 (s, 3 H) 5.07 - 5.15 (m, 1 H) 7.35 (td, J=8.08, 1.29 Hz, 1 H) 7.46 (s, 1 H) 7.52 (ddd, J=8.03, 5.23 Hz, 1 H) 7.63 (ddd, J=8.22, 6.76, 1.62 Hz, 1 H) 8.83 (s, 1 H) 8.91 (s, 1 H) 9.02 - 9.13 (m, 1 H) 9.20 - 9.31 (m, 1 H) 12.51 (br. s., 1 H)); 질량 스펙트럼: 403.2, 405.2.

실시예 C

화합물 I을 하기 제시된 반응에 따라 제조하였다:

2-[4-(5-시아노-4-{[(디메틸아미노)메틸렌]아미노}-2-메톡시페녹시)피페리딘-1-일]-N-메틸아세트아미드(7, 7.00 g, 17.71 mmole)를 메톡시벤젠(35.8 g) 중에 현탁시켰다. 아세트산(16.6 g)을 투입하고 이 생성된 용액에 3-클로로-2-플루오로아닐린(2.71 g, 18.07 mmole)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 20시간 동안 90℃에서 가열한 후 20℃로 냉각하였다. 물(37.04 g)을 반응 혼합물에 투입하고, 유기 층을 버렸다. 생성된 수성 혼합물에 이소프로판올(39.00 g)을 투입한 후, 수성 암모니아(20.79 g, 25%)를 투입하였다. 반응 혼합물을 30℃로 가열하고 화합물 I을 시딩하여 결정화를 유도하였다. 그리고나서 반응물을 0℃로 냉각시키고 생성물을 여과 단리시켰다. 필터 케이크상을 물(7.28 g)과 이소프로판올(4.68 g)의 혼합물로 2회 세척하고, 건조시켜 화합물 I(5.65 g, 55% 수율)을 얻었다; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ ppm 1.79 (m, 2 H) 2.04 (m, 2 H) 2.38 (m, 2 H) 2.62 (d, J=4.5 Hz, 3 H) 2.74 (m, 2 H) 2.94 (s, 2 H) 3.93 (s, 3 H) 4.56 (tt, J=8.1, 3.8 Hz, 1 H) 7.21 (s, 1 H) 7.28 (m, 1 H) 7.50 (m, 2 H) 7.73 (q, J=4.5 Hz, 1 H) 7.81 (s, 1 H) 8.36 (s, 1 H) 9.56 (br.s, 1 H); 질량 스펙트럼: m/z (M + H)⁺ 474.2, 476.2.

출발 물질로서 사용된 2-[4-(5-시아노-4-{[(디메틸아미노)메틸렌]아미노}-2-메톡시페녹시)피페리딘-1-일]-N-메틸아세트아미드(7)는 다음과 같이 제조하였다:

단계 1: tert -부틸 4-(5- 시아노 -2- 메톡시페녹시 )피페리딘-1- 카르복실레이트(2)의 제조

3-히드록시-4-메톡시벤조니트릴(1, 6.00 g, 39.62 mmole), tert-부틸(4-메탄설포닐옥시)피페리딘-1-카르복실레이트(16.6 g, 59.44 mmole)(Chemical & Pharmaceutical Bulletin 2001, 49(7), 822-829) 및 탄산칼륨(6.71 g, 47.55 mmole)을 이소프로판올(78.98 g) 중에 현탁시키고 이 혼합물을 교반하면서 환류에서 가열하였다. 추가의 tert-부틸(4-메탄설포닐옥시)피페리딘-1-카르복실레이트(2.08 g, 7.43 mmole)를 첨가하여 반응이 완료되도록 촉진하였다. 그리고나서 혼합물을 냉각시키고 물(100.47 g)을 첨가하여 켄칭하였다. tert-부틸 4-(5-시아노-2-메톡시페녹시)피페리딘-1-카르복실레이트(2)에 의한 시딩 후 0℃로 냉각시키는 것으로 결정질 생성물을 유도하고, 이를 여과 단리시켰다. 필터 케이크상을 물(8.86 g)과 이소프로판올(6.97 g)의 혼합물로 세척한 후, 물(23.64 g)로 세척하고, 그리고나서 건조시켜 표제 화합물(10.75 g, 80% 수율)을 형성하였다; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ ppm 1.39 (s, 9 H) 1.48 (m, 2 H) 1.88 (m, 2 H) 3.13 (m, 2 H) 3.67 (m, 2 H) 3.83 (s, 3 H) 4.56 (tt, J=8.1, 3.8 Hz, 1 H) 7.13 (d, J=8.4 Hz, 1 H) 7.42 (dd, J=8.4, 1.9 Hz, 1 H) 7.51 (d, J=1.9 Hz, 1 H); 질량 스펙트럼: m/z (M + H)⁺ 333.1.

단계 2: 4- 메톡시 -3-(피페리딘-4- 일옥시 ) 벤조니트릴 (3)의 제조

Tert-부틸 4-(5-시아노-2-메톡시페녹시)피페리딘-1-카르복실레이트(2, 39.31 g, 118.26 mmole)을 에탄올(155.53 g) 중에 현탁시키고 40℃로 가열하였다. 이 슬러리에 HCl(46.61 g, 573.04 mmole)을 서서히 첨가하였다. 이 혼합물을 60℃로 가열하고 3시간 동안 유지시켰다. 반응 혼합물을 20℃로 냉각시키고 시드를 투입하여 결정화를 개시하였다. 생성된 고체를 0℃에서 여과 단리시키고, 에탄올(62.21 g)로 2회 세척한 후 건조시켜 염산염으로서 표제 화합물(29.84 g, 77% 수율)을 형성하였다; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ ppm 1.84 (m, 2 H) 2.09 (m, 2 H) 3.02 (ddd, J=12.7, 8.9, 3.4 Hz, 2 H) 3.20 (m, 2 H) 3.84 (s, 3 H) 4.63 (tt, J=7.7, 3.6 Hz, 1 H) 7.15 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 7.45 (dd, J=8.5, 1.9 Hz, 1 H) 7.56 (d, J=1.9 Hz, 1 H) 9.16 (br. s, 2 H); 질량 스펙트럼: m/z (M + H)⁺ 233.2.

단계 3: 2-[4-(5- 시아노 -2- 메톡시페녹시 )피페리딘-1-일]-N- 메틸아세트아미드(4)의 제조

4-메톡시-3-(피페리딘-4-일옥시)벤조니트릴 염산염(3, 28.36 g, 95.82 mmole), 2-클로로-N-메틸아세트아미드(12.37 g, 114.98 mmole) 및 탄산칼륨(33.11 g, 239.55 mmole)을 아세토니트릴(161.36 g) 중에 현탁시켰다. 반응 혼합물을 3시간 동안 환류에서 가열하였다. 반응 혼합물을 20℃로 냉각시키고 물(386.26 g)을 투입하였다. 반응물을 75℃로 가열하고 증류에 의해 부피를 감소시켰다. 냉각시 결정화가 발생하였다. 생성된 고체를 여과 단리시키고, 물(77.25 g 및 128.75 g)로 2회 세척한 후 건조시켜 표제 화합물(27.95 g, 94% 수율)을 형성하였다; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ ppm 1.68 (m, 2 H) 1.91 (m, 2 H) 2.29 (m, 2 H) 2.61 (d, J=4.7 Hz, 3 H) 2.67 (m, 2 H) 2.88 (s, 2 H) 3.83 (s, 3 H) 4.41 (tt, J=8.3, 4.0 Hz, 1 H) 7.11 (d, J=8.4 Hz, 1 H) 7.40 (dd, J=8.4, 1.9 Hz, 1 H) 7.47 (d, J=1.9 Hz, 1 H) 7.68 (q, J=4.7 Hz, 1 H); 질량 스펙트럼: m/z (M + H)⁺ 304.2.

단계 4: 2-[4-(5- 시아노 -2- 메톡시 -4- 니트로페녹시 )피페리딘-1-일]-N- 메틸아세트아미드(5)의 제조

2-[4-(5-시아노-2-메톡시페녹시)피페리딘-1-일]-N-메틸아세트아미드(4, 8.78 g, 26.11 mmole)를 아세트산(22.82 g, 364.87 mmole) 중에 현탁시키고 생성된 반응 혼합물을 5℃로 냉각시켰다. 여기에 황산(23.64 g, 234.95 mmole)을 첨가하고 반응물의 온도를 30℃ 이하로 유지시켰다. 생성된 용액에 질산(2.40 g, 26.63 mmole)을 첨가하였다. 그리고나서 반응 혼합물을 35℃로 가열하고 3시간 동안 유지시켰다. 추가의 질산(117 mg, 1.31 mmole) 및 황산(1.31 g, 13.1 mmole)을 투입하고 반응 혼합물을 30분 동안 35℃에서 가열하였다. 이 용액을 20℃로 냉각시키고 수성 암모니아(92.45 g 1.36 몰)로 켄칭하고, 50℃로 온도를 증가시켰다. 생성된 슬러리에 프로피오니트릴(61.58 g 1.12 몰) 및 물(19 g)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃로 가열하여 투명 용액을 생성하고, 가라앉혀서 2개의 층을 형성하였다. 하부 층을 제거하였다. 반응 혼합물을 20℃로 냉각시켜 진한 슬러리를 생성하였다. 고체를 여과 단리시키고, 프로피오니트릴(6.16 g, 112.0 mmole)로 세척하고 건조시켜 표제 화합물(7.44 g, 82% 수율)을 얻었다; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ ppm 1.72 (m, 2 H) 1.97 (m, 2 H) 2.35 (m, 2 H) 2.61 (d, J=4.7 Hz, 3 H) 2.66 (m, 2 H) 2.90 (s, 2 H) 3.96 (s, 3 H) 4.73 (tt, J=8.4, 4.0 Hz, 1 H) 7.71 (q, J=4.7 Hz, 1 H) 7.82 (s, 1 H) 7.86 (s, 1 H); 질량 스펙트럼: m/z (M + H)⁺ 349.2

단계 5: 2-[4-(4-아미노-5- 시아노 -2- 메톡시페녹시 )피페리딘-1-일]-N- 메틸아세트 아미드(6)의 제조

2-[4-(5-시아노-2-메톡시-4-니트로페녹시)피페리딘-1-일]-N-메틸아세트아미드(5, 7.42 g, 19.38 mmole)를 물(44.52 g) 및 메탄올(5.35 g) 중에 현탁시켰다. 여기에 나트륨 디티오나이트(11.91 g, 58.15 mmole)를 첨가하고 생성된 반응 혼합물을 60℃로 가열하였다. 반응 혼합물에 염산(46.98 g, 463.89 mmole)을 첨가하여 용액을 생성시키고 이를 3시간 동안 60℃에서 유지시켰다. 그리고나서 반응 혼합물을 20℃로 냉각시켰다. 수성 수산화나트륨(15.51 g, 182.2 mmole)을 투입한 후 2-메틸테트라히드로푸란(58.0 g)을 투입하였다. 반응 혼합물을 60℃로 가열하고, 가라앉혀서 2개의 층을 형성시키고 하부 수성 층을 버렸다. 반응 혼합물의 부피를 진공 증류에 의해 감소시키고 메틸 tert-부틸 에테르(18.54 g)를 첨가하여 슬러리를 형성하고 이를 10℃로 냉각시킨 후 그 고체를 여과 수집하였다. 고체를 2-메틸테트라히드로푸란(5.8 g)으로 세척하고 건조시켜 표제 화합물(5.4 g, 78% 수율)을 형성하였다; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ ppm 1.62 (m, 2 H) 1.82 (m, 2 H) 2.20 (m, 2 H) 2.60 (d, J=4.7 Hz, 3 H) 2.65 (m, 2 H) 2.86 (s, 2 H) 3.72 (s, 3 H) 4.00 (tt, J=8.3, 4.0 Hz, 1 H) 5.66 (br. s, 2 H) 6.39 (s, 1 H) 6.94 (s, 1 H) 7.65 (q, J=4.7 Hz, 1 H); 질량 스펙트럼: m/z (M + H)⁺ 319.2.

단계 6: 2-[4-(5- 시아노 -4-{[(디메틸아미노)메틸렌]아미노}-2- 메톡시페녹시 )피페리딘-1-일]-N- 메틸아세트아미드(7)의 제조

2-[4-(4-아미노-5-시아노-2-메톡시페녹시)피페리딘-1-일]-N-메틸아세트아미드(6, 18.21 g, 52.05 mmole)를 2-메틸테트라히드로푸란(99.62 g) 중에 현탁시켰다. 여기에 아세트산(162.79 mg) 및 N,N-디메틸포름아미드 디메틸 아세탈(DMF-DMA)(8.63 g, 70.27 mmole)을 첨가하고 생성된 반응 혼합물을 16시간 동안 76℃에서 가열하였다. 추가의 N,N-디메틸포름아미드 디메틸 아세탈(639.41 mg, 5.20 mmole)을 반응 혼합물에 첨가하여 반응을 완료시켰다. 반응 혼합물을 결정화가 발생하는 시간 동안 30℃로 냉각시켰다. 생성된 고체를 여과 단리시키고, 2-메틸테트라히드로푸란(14.23 g)으로 세척하고 건조시켜 표제 화합물(19.53 g, 97% 수율)을 얻었다; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ ppm 1.65 (m, 2 H) 1.86 (m, 2 H) 2.24 (m, 2 H) 2.60 (d, J=4.7 Hz, 3 H) 2.66 (m, 2 H) 2.87 (s, 2 H) 2.95 (s, 3 H) 3.04 (s, 3 H) 3.81 (s, 3 H) 4.19 (tt, J=8.2, 3.8 Hz, 1 H) 6.72 (s, 1 H) 7.15 (s, 1 H) 7.67 (q, J=4.7 Hz, 1 H) 7.90 (s, 1 H); 질량 스펙트럼: m/z (M + H)⁺ 374.2.

생물학적 활성

화합물 I의 활성은

a) 리간드-자극 세포에서 EGFR, ErbB2 및 ErbB3의 활성화(인산화)를 억제시키는 능력; 및

b) MCF-7 세포의 기본 증식 및 리간드-자극 증식을 억제시키는 능력

을 테스트하기 위해 평가한 것이다.

(a) 리간드 유도 검정에서 화합물 I

방법:

미국모식균배양수집소(ATCC)로부터 KB 세포 및 MCF-7 세포를 얻고 RPMI 1640(페놀 레드 무함유) + 10% 우태혈청 + 2 mM L-글루타민 중에서 일상적으로 배양하였다.

세포의 처리 및 분해:

10% FBS 함유 RPMI 1640 배지 중의 96웰 플레이트 내에서, 5000 세포/웰에서 KB 세포 그리고 4000 세포/웰에서 MCF-7 세포를 시딩하였다. 세포를 72시간 동안 항온처리한 후 이 배지를 혈청 무함유 RPMI 1640 배지로 24시간 동안 대체하였다. 그리고나서 세포를 0∼10 μM 범위의 농도에서 90분 동안 화합물 I로 처리하였다. 세포 분해 직후, MCF-7 및 KB 세포를 검정간 비교를 위해 최대 90%(ED₉₀)로 수용체 인산화의 증가가 요구되는 농도에서 리간드(MCF-7 세포의 경우 헤레굴린("HRG") 및 KB 세포의 경우 표피 성장 인자("EGF"))와 5분간 항온처리하였다.

p- EGFR , p- ErbB2 및 p- ErbB3 의 측정:

Human 포스포-EGFR Duoset ELISA 키트(R&D 시스템즈, 전체 EGFR #DYC1854, pEGFR #DYC1095)를 사용하여 KB 세포의 p-EGFR 상태를 측정하였다. MCF-7 세포 중 p-ErbB2 및 p-ErbB3의 함량은 Human 포스포-ErbB2 Duoset ELISA 키트(R&D 시스템즈, DYC1768) 및 Human 포스포-ErbB3 Duoset ELISA 키트(R&D 시스템즈, DYC1769)를 각각 사용하여 측정하였다. 키트는 EGFR, ErbB2 또는 ErbB3의 전체 세포의 티로신 인산화를 측정하였다. 제조자의 지시에 따라 웰마다 50 ㎕의 분해물을 첨가하여 검정을 수행하였다.

결과:

그 결과를 하기 표 3에 요약한다.

표 3은 화합물 I이 상기 세포에서 포스포-EGFR, 포스포-ErbB2 및 포스포-ErbB3의 강력한 억제제임을 나타내고 있다.

b) 기본 또는 HRG -자극 MCF -7 세포 증식 검정에서 화합물 I

방법:

DMEM(페놀 레드 무함유) + 10% 우태혈청 + 2 mM L-글루타민 중에서 MCF-7 세포를 일상적으로 배양하였다.

96 웰 플레이트 내 1% 활성탄/덱스트란-처리된 FBS 및 2 mM 글루타민 함유 DMEM 배지 중에서 웰 당 4000개 세포에서 세포를 시딩하고 4시간 동안 가라앉힌 이후 각각 0∼3 μM 및 0∼10 ㎍/㎖ 범위의 농도에서 화합물 I로 처리하였다. 처리하고 2시간 후, 세포를 최대 90%(ED₉₀)로 MCF-7 세포 증식의 증가가 요구되는 농도에서 10 ng/㎖ HRG와 항온처리하였다. 기본 웰은 리간드에 의해 자극되지 않았다. 4일 동안 항온처리 후, 3-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-5-(3-카르복시메톡시페닐)-2-(4-설포페닐)-2H-테트라졸륨(MTS) 검정을 이용하여 세포 생존력을 평가하였다.

HRG-자극 화합물-처리된 세포의 IC₅₀ 측정에 앞서, 96시간에서 평균 기본 성장은 HRG-신호전달을 통해 유도된 증식을 평가하도록 판독 정보(readout) 각각으로부터 제하였다. 기본 IC₅₀ 값은 GI₅₀으로 표시되고, 즉 일수 0의 플레이트 세포 수(기선 판독)는 96시간 후에 판독 정보로부터 제하였다.

결과:

그 결과는 하기 표 4 및 표 5에 요약한다.

KB 세포에서, EGFR에 특이적으로 결합하는 EGF에 의한 자극은 인산화를 유도하고 이에 따라 이 수용체의 활성화를 유도한다. 유사하게, ErbB3에 특이적으로 결합하는 MCF-7 세포에서 HRG는 이를 유도하여 ErbB2와 이종이량체를 형성하고 수용체들은 둘다 인산화되고 활성화된다. 표 4에는 화합물 I이 HRG-자극 MCF-7 증식의 강력한 억제제임을 나타내고 있다. 증식에 대한 효과는 ErbB2/ErbB3 이종이량체 상에서 화합물의 활성으로 인한 것으로 생각되고, 화합물 I은 상기 이종이량체의 더욱 더 강력한 억제제이다.

MCF-7 기본 검정은 erbB2/erbB3 이종이량체화의 증가된 자극 또는 활성화가 있는 상황을 나타낸다. 표 5는 심지어 그러한 상태에서도 화합물 I이 MCF-7을 억제하는 것을 나타내고 있다.

실시예 1

화합물 I 디푸마레이트 A형: 2-[4-({4-[(3- 클로로 -2- 플루오로페닐 )아미노]-7- 메톡시퀴나졸린 -6-일} 옥시 )피페리딘-1-일]-N- 메틸아세트아미드 디-[(2E)-부트-2- 엔디오에이트 ] A형의 제조

메탄올(95 ㎖) 중의 푸마르산(2.7 g, 23.22 mmol) 용액을 이소프로판올(100 ㎖) 중의 2-[4-({4-[(3-클로로-2-플루오로페닐)아미노]-7-메톡시퀴나졸린-6-일}옥시)피페리딘-1-일]-N-메틸아세트아미드(화합물 I)(89% w/w에서 5.62 g, 10.55 mmol) 혼합물에 첨가하고 > 65℃ 온도를 유지하였다. 이 혼합물을 1시간 동안 환류에서 가열한 후 정화시켰다. 반응 혼합물을 90분에 걸쳐 30℃로 냉각시키고 30분 동안 유지시켜 결정화를 달성하였다. 반응물을 2시간에 걸쳐 0℃로 냉각시키고 1시간 동안 유지시킨 후 여과 단리시켰다. 필터 케이크상을 저온 이소프로판올(2 x 10 ㎖)로 2회 세척하고 50℃에서 진공 건조하여 백색 고체로서 표제 화합물(5.84 g, 78%)을 형성하였다; ¹H NMR 스펙트럼: (DMSO) 1.85 (m, 1H), 2.08 (m, 1H), 2.50 (m, 1H), 2.66 (d, 3H), 2.83 (m, 1H), 3.05 (s, 2H), 3.96 (s, 3H), 4.58 (m, 1H), 6.64 (s, 4H), 7.23 (s, 1H), 7.28 (m, 1H), 7.46 (ddd, 1H), 7.55 (m, 1H), 7.70 (브로드 q, 1H), 7.85 (s, 1H), 8.38 (s, 1H).

실시예 2

메탄올(26.6 kg) 중의 푸마르산(1.4 kg, 12.1 몰) 용액을 이소프로판올(39 kg) 중의 2-[4-({4-[(3-클로로-2-플루오로페닐)아미노]-7-메톡시퀴나졸린-6-일}옥시)피페리딘-1-일]-N-메틸아세트아미드(2.93 kg, 84.8% w/w, 5.24 몰) 혼합물에 첨가하고 > 65℃ 온도를 유지시켰다. 메탄올(3.6 kg)의 라인 세척물(line wash)을 투입하였다. 정제하기 전에 혼합물을 1시간 동안 환류에서 가열한 후, 메탄올(7 kg)의 라인 세척물을 가열하였다. 반응 혼합물을 대기압에서 증류시켜 47 kg의 증류물을 제거하였다. 이소프로판올(15.8 kg)을 첨가하고 반응 혼합물을 증류시켜 15.6 kg의 증류물을 제거하였다. 증류 동안 결정화가 발생하였다. 이소프로판올(21 kg)을 첨가하고 반응물을 8시간에 걸쳐 0℃로 냉각시키고 여과 단리시키기 전에 1시간 동안 유지시켰다. 필터 케이크상을 저온 50:50 이소프로판올:MeOH(4kg)로 세척한 후 저온 이소프로판올(4 kg)로 세척하고 50℃에서 진공 건조하여 백색 고체로서 표제 화합물(3.64 kg, 98%)을 형성하였다; ¹H NMR 스펙트럼: (DMSO) 1.85 (m, 1H), 2.08 (m, 1H), 2.50 (m, 1H), 2.66 (d, 3H), 2.83 (m, 1H), 3.05 (s, 2H), 3.96 (s, 3H), 4.58 (m, 1H), 6.64 (s, 4H), 7.23 (s, 1H), 7.28 (m, 1H), 7.46 (ddd, 1H), 7.55 (m, 1H), 7.70 (브로드 q, 1H), 7.85 (s, 1H), 8.38 (s, 1H).

실시예 3

화합물 I 디푸마레이트 A형: 2-[4-({4-[(3- 클로로 -2- 플루오로페닐 )아미노]-7- 메톡시퀴나졸린 -6-일} 옥시 )피페리딘-1-일]-N- 메틸아세트아미드 디-[(2E)- 부트 -2- 엔디오에 이트] A형의 제조

2-[4-({4-[(3-클로로-2-플루오로페닐)아미노]-7-메톡시퀴나졸린-6-일}옥시)피페리딘-1-일]-N-메틸아세트아미드(화합물 I)(88% w/w에서 60.19 g, 111.8 mmol)를 에틸 아세테이트(1550 ㎖) 중에 용해시켰다. 이 용액을 여과 정제하고 필터를 에틸 아세테이트(53 ㎖)로 세척하였다. 용액을 40℃로 냉각하였다. 그리고나서 이소프로판올(408 ㎖) 중의 푸마르산(26.60 g, 257.0 mmol)의 정제된 용액을 1시간에 걸쳐 첨가하였다. 그리고나서 푸마르산 용액을 정제하는데 사용된 필터를 이소프로판올(37 ㎖)로 세척하였다. 40℃에서 1시간 동안 유지시킨 후, 반응물을 1시간에 걸쳐 20℃로 냉각시켰다. 생성물을 여과 단리시키기 전에 반응 혼합물을 13.5시간 동안 유지시켰다. 필터 케이크상을 에틸 아세테이트(82 ㎖):이소프로판올(24 ㎖)로 2회 세척한 후 40℃에서 진공 건조시켜 백색 고체로서 표제 화합물(72.32 g, 90%)을 형성하였다; ¹H NMR 스펙트럼: (DMSO) 1.85 (m, 1H), 2.08 (m, 1H), 2.50 (m, 1H), 2.66 (d, 3H), 2.83 (m, 1H), 3.05 (s, 2H), 3.96 (s, 3H), 4.58 (m, 1H), 6.64 (s, 4H), 7.23 (s, 1H), 7.28 (m, 1H), 7.46 (ddd, 1H), 7.55 (m, 1H), 7.70 (브로드 q, 1H), 7.85 (s, 1H), 8.38 (s, 1H).

실시예 4

2-[4-({4-[(3-클로로-2-플루오로페닐)아미노]-7-메톡시퀴나졸린-6-일}옥시)피페리딘-1-일]-N-메틸아세트아미드(화합물 I)(추정된 100% w/w에서 2.75 g, 5.80 mmol)를 에틸 아세테이트(94 ㎖) 및 이소프로판올(14 ㎖) 중에 용해시켰다. 용액을, 25.2 ㎖의 증류물이 수집되도록 증류시켰다. 용액을 40℃로 냉각시켰다. 그리고나서 이소프로판올(21 ㎖) 중의 푸마르산(1.38 g, 11.90 mmol)의 정제된 용액을 1시간에 걸쳐 첨가하였다. 화합물 I 디푸마레이트 A형 시드를 첨가하였다(3.7 mg, 5.3 μM). 그리고나서 푸마르산 용액을 정제하는데 사용된 필터를 이소프로판올(2 ㎖)로 세척하였다. 40℃에서 1시간 동안 유지시킨 후 생성물을 2시간에 걸쳐 20℃로 냉각시켰다. 생성물을 여과 단리시키기 전에 반응 혼합물을 15시간 동안 유지시켰다. 필터 케이크상을 에틸 아세테이트(4.3 ㎖):이소프로판올(1.2 ㎖)로 2회 세척한 후 40℃에서 진공 건조하여 백색 고체로서 표제 화합물(72.32 g, 90%)을 형성하였다; ¹H NMR 스펙트럼: (DMSO) 1.85 (m, 1H), 2.08 (m, 1H), 2.50 (m, 1H), 2.66 (d, 3H), 2.83 (m, 1H), 3.05 (s, 2H), 3.96 (s, 3H), 4.58 (m, 1H), 6.64 (s, 4H), 7.23 (s, 1H), 7.28 (m, 1H), 7.46 (ddd, 1H), 7.55 (m, 1H), 7.70 (브로드 q, 1H), 7.85 (s, 1H), 8.38 (s, 1H).

실시예 5

2-[4-({4-[(3-클로로-2-플루오로페닐)아미노]-7-메톡시퀴나졸린-6-일}옥시)피페리딘-1-일]-N-메틸아세트아미드(화합물 I)(1 g, 1.86 mmole) 및 푸마르산(0.44 g, 3.81 mmole)을 수중(4.4 g)에 현탁시키고 85℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 1℃/분에서 60℃로 냉각시키고 온도가 77℃일 때 화합물 I A형 시드를 첨가하였다. 생성된 고체를 여과 단리시키고, 아세톤(세척 당 0.70 g)으로 2회 세척하고 40℃에서 진공 오븐 하에 건조시켜 표제 화합물(0.89 g, 68% 수율)을 얻었다, ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) d ppm 1.84 (m, 2 H) 2.08 (m, 2 H) 2.55 (m, 2 H) 2.63 (d, J=4.7 Hz, 3 H) 2.86 (m, 2 H) 3.12 (s, 2 H) 3.93 (s, 3 H) 4.59 (tt, J=7.8, 3.7 Hz, 1 H) 6.62 (s, 4 H) 7.21 (s, 1 H) 7.27 (td, J=8.1, 1.3 Hz, 1 H) 7.49 (m, 2 H) 7.86 (m, 2 H) 8.36 (s, 1 H) 9.63 (br. s., 1 H).

화합물 I 디푸마레이트 A형의 특성

화합물 I 디푸마레이트 A형은 자유 유동성 분말이다. 화합물 I 디푸마레이트의 X-선 분말 회절(도 4)은 물질이 결정질인 것을 가리킨다. A형의 XRPD 패턴으로부터 가장 우세한 피크는 상기 기술되고 표 1에 나열되어 있다. 시차주사열량측정은 210.4℃에서 개시점을 갖는 단일 용융 흡열을 나타낸다(도 5). 열중량 분석에 의해 관찰되는 상당한 중량 손실은 없다(도 6). 동적 증기 수착은 화합물이 < 0.5% 수분에서 자기이력의 증거가 없는 95% 상대 습도까지 흡수하는 비-흡습성이 된다는 것을 입증하고 있다(도 7).

화합물 I 및 화합물 I 디푸마레이트 A형의 수성 용해도 비교

수성 완충제의 범위에서 화합물 I의 용해도(48시간, 25℃)는 표 4에 상세하게 설명된다. 화합물 I은 낮은 pH에서 높은 용해도(27.2 mg/㎖, pH 2.7) 그리고 높은 pH에서 낮은 용해도(1 ㎍/㎖, pH 7.9)를 갖는 수성 완충제에서 pH 의존 용해도를 나타낸다. pH 6 이하에서 화합물 I의 용해도에서 유의적 증가가 발생한다. 따라서, 낮은 pH 값에서 화합물 I의 용해 속도는 신속한 것으로 예상되는 반면 6 이상의 pH에서 용해 속도는 느린 것으로 예상된다.

수중에서 화합물 I의 용해도(48시간, 25℃)는 1 ㎍/㎖(pH 7.0)이다. 비교시, 수중에서 화합물 I 디푸마레이트 A형의 용해도(48시간)는 22.5 mg/㎖(pH 3.5)이다. 화합물 I 디푸마레이트 A형 및 화합물 I의 고유 용해 속도는 또한 수성 완충제의 범위 내에서 측정된다. 화합물 I 디푸마레이트 A형은 표 6에 제시된 바와 같이 pH 6.5 포스페이트 완충제에서 유의적으로 높은 고유 용해 속도를 갖는다.

화합물 I 및 화합물 I 디푸마레이트 A형을 비교하기 위한 개에서의 약동학적 연구

화합물 둘다는 하기 조성을 갖는 100 mg 화합물 I 유리 염기 또는 이의 당량을 함유하는 직접 압축된 정제(디-푸마레이트 염을 함유하는 정제)로서 개에게 투여되었다:

25%w/w 화합물 I(또는 이의 당량의 디푸마레이트 염);

10 %w/w 마이크로결정질 셀룰로즈 (아비셀 102);

4 %w/w 크로스카메롤루스 나트륨 (AcDiSol);

1 %w/w 나트륨 라우릴 설페이트;

99 %w/w로 락토즈

100 %w/w에 대하여 스테아르산마그네슘.

표마다 이것이 동일하다:

151 mg의 화합물 I;

60.4 mg의 아비셀;

24.16 mg AcDiSol;

6.04 mg 나트륨 라우릴 설페이트;

356.36 mg 락토즈; 및

6.04 mg 스테아르산마그네슘.

전체 정제 중량은 604 mg였다.

고체 제형의 성능은 생체내 개 연구가 개시되기 전에 시험관내에서 평가되었다. 100 mg(유리 염기 당량)의 화합물 I 로딩에서 pH 4.5 배지(싱크 조건에 가까움) 중에 고체 제형을 용해시키는 것은 45분 후 > 90% 방출을 나타내었고(표 7) 이는 개 PK 연구에 사용하기 위한 제형의 적합성을 나타낸다.

개에게 경구 투여되는 정제 조성물의 성능은 1 M HCl을 사용하여 4로 조정되는 주입 pH를 위해 수중에서 25% w/v 히드록시프로필-베타-시클로덱스트린(HP-베타-CD)을 갖는 부피까지 용해되어 제조되는 4 mg·mL^-1을 포함하는 화합물 I 20 mg 용량의 정맥내 주입과 비교되었다.

개 연구의 결과는 하기 표 8에 나타낸다.

표 8은 화합물 I 디푸마레이트 A형의 생체이용효율 및 최대 혈장 농도(C_max)가 95% 신뢰 수준에서 한쌍의 t-테스트(n=4)로 측정된 바와 같이 화합물 I(64% 생체이용효율과 비교하여 113%)에서 얻은 것보다 상당히 우수하다는 것을 나타낸다.

실시예 6 내지 21 : 결정질 화합물 I 디푸마레이트 B형 내 지 Q 형

XRPD 분석

Bruker D-8 Discover 회절분석기 및 Bruker's General Detector System(GADDS, v. 4.1.20)을 사용하여 XRPD 패턴을 수집하였다. Cu Kα 방사선의 입사 마이크로빔을, 미세-초점 튜브(40 kV, 40 mA), Gobel 미러, 및 0.5 mm 이중-핀홀 콜리메이터(collimator)를 사용하여 생성하였다. 분석에 앞서, 규소 표준물(NIST SRM 640c)을 분석하여 Si 111 피크 위치를 입증하였다. 샘플을 3 ㎛의 진한 필름 사이에 충전하여 휴대용 디스크형 견본을 형성하였다. 제조된 견본을 번역 스테이지에 부착되어 있는 홀더에 적재하였다. 전송 기하구조에서 입사빔을 교차하도록 해당 부분에 위치시키는데 비디오 카메라 및 레이저를 사용하였다. 입사빔을 주사하고 래스터하여(rastered) 배향 통계를 최적화시켰다. 빔-스탑(beam-stop)은 입사빔으로부터 공기 산란을 최소화하는데 사용되었다. 회절 패턴은 샘플로부터 15 cm에 위치하는 Hi-Star 부분 검출기를 사용하여 수집하고 GADDS를 사용하여 처리하였다. 회절 패턴의 GADDS 이미지 강도는 0.04°2θ의 단계 크기를 이용하여 통합하였다. 통합된 패턴은 2θ의 함수로서 회절 강도를 나타낸다.

가변 온도 - XRPD

가변-온도 XRPD 패턴(VT-XRPD)은 Anton Paar HTK 1200 고온 스테이지가 구비된 Shimadzu XRD-6000 X-선 분말 회절분석기를 사용하여 수집되었다. 분석에 앞서, 규소 표준물(NIST SRM 640c)을 분석하여 Si 111 피크 위치를 입증하고, 바닐린 및 설파피리딘 표준물을 분석하여 스테이지 온도를 입증하였다. 이 샘플을 세라믹 홀더에 충전하고 3 °/분(0.4 초/0.02°단계)에서 2.5∼40°2θ를 분석하였다.

XRPD - 마이크로플레이트 분석

XRPD 패턴은 Bruker D-8 Discover 회절분석기 및 Bruker's General Area Diffraction Detection System(GADDS, v. 4.1.20)에 의해 수집하였다. Cu Kα 방사선의 입사빔은 미세-초점 튜브 (40 kV, 40 mA), Gobel 미러, 및 0.5 mm 이중-핀홀 콜리메이터를 사용하여 생성되었다. 웰 플레이트를 번역 스테이지에 부척시키고 각 샘플을 이동시켜 입사빔을 교차시킴으로써 분석을 위해 샘플을 배치하였다. 이 샘플은 전송 기하구조를 이용하여 분석되었다. 입사빔을 주사하고 분석 동안 샘플에 걸쳐 래스터하여 배향 통계를 최적화시켰다. 빔-스탑은 작은 각도에서 입사빔으로부터 공기 산란을 최소화하는데 사용되었다. 회절 패턴은 샘플로부터 15 cm에 위치하는 Hi-Star 부분 검출기를 사용하여 수집하고 GADDS를 사용하여 처리하였다. 회절 패턴의 GADDS 이미지 강도는 0.04°2θ의 단계 크기를 이용하여 통합하였다. 통합된 패턴은 2θ의 함수로서 회절 강도를 나타낸다. 분석에 앞서, 규소 표준물을 분석하여 Si 111 피크 위치를 입증하였다.

실시예 6 : 화합물 I 디푸마레이트 B형의 제조

충분한 화합물 I 디푸마레이트 A형을 물에 첨가하여 과량의 고체를 존재시킴으로써 슬러리를 제조하였다. 그리고나서 7일 동안 4℃에서 밀봉된 바이알 내에서 혼합물을 교반하였다. 고체를 진공 건조시킴으로써 단리하고 분석하였다. 생성된 B형의 XRPD 패턴은 하기 도 8에 도시되어 있다. B형의 가장 우세한 X-선 분말 회절 피크는 하기 표 9에 나타낸다:

B형은 수화물, 가능하게는 4수화물 또는 5수화물이 될 것으로 생각된다.

실시예 7 : 화합물 I 디푸마레이트 C형의 제조

충분한 화합물 I 디푸마레이트 A형을 IPA/물(90/10, v/v)에 첨가하고 과량의 고체를 존재시킴으로써 슬러리를 제조하였다. 그리고나서 6일 동안 15℃에서 밀봉된 바이알 내에서 혼합물을 교반하였다. 고체를 진공 여과에 의해 단리시키고 분석하였다. 생성된 C형의 XRPD 패턴은 하기 도 9에 도시되어 있다. C형의 가장 우세한 X-선 분말 회절 피크는 하기 표 10에 나타낸다:

C형은 혼합 수화물/용매화물 형태가 될 것으로 생각된다.

실시예 8 : 화합물 I 디푸마레이트 D형의 제조

화합물 I 디푸마레이트 용액을 아세토니트릴/물(50/50)로 제조하고 분취물을 마이크로플레이트 웰에 첨가하였다. 용매를 증발시키고 2-프로판올/물(90/10, v/v)을 웰에 첨가하였다. 플레이트를 초음파 처리한 후 용매를 진공 증발시켰다. 생성된 D형의 XRPD 패턴은 하기 도 10에 도시되어 있다. D형의 가장 우세한 X-선 분말 회절 피크는 하기 표 11에 나타낸다:

실시예 9 : 화합물 I 디푸마레이트 E형의 제조

화합물 I 디푸마레이트 용액을 아세토니트릴/물(50/50, v/v)로 제조하고 분취물을 마이크로플레이트 웰에 첨가하였다. 용매를 증발시키고 테트라히드로푸란을 웰에 첨가하였다. 플레이트를 초음파 처리한 후 용매를 진공 증발시켰다. 생성된 E형의 XRPD 패턴은 하기 도 11에 도시되어 있다. E형의 가장 우세한 X-선 분말 회절 피크는 하기 표 12에 나타낸다:

실시예 10 : 화합물 I 디푸마레이트 F형의 제조

화합물 I 디푸마레이트의 포화 용액을 고온에서 테트라히드로푸란으로 제조하고 여전히 가온되는 동안 예비 가온된 바이알 내로 0.2 ㎛ 나일론 필터를 통해 여과시켰다. 이 바이알을 피복하고 실온으로 서시히 냉각시켰다. 고체의 존재 또는 부재를 유념하였다. 고체가 존재하지 않는 경우, 또는 XRPD 분석에서 고체의 양이 너무 적은 것으로 판단되는 경우, 바이알은 냉장고 내에 배치하였다. 마찬가지로, 고체의 존재 또는 부재를 유념하고 아무것도 없는 경우, 바이알을 냉동고 내에 배치하였다. 형성된 고체를 여과 단리시키고 분석에 앞서 건조시켰다. 생성된 F형의 XRPD 패턴은 하기 도 12에 도시되어 있다. F형의 가장 우세한 X-선 분말 회절 피크는 하기 표 13에 나타낸다.

실시예 11 : 화합물 I 디푸마레이트 G형의 제조

화합물 I 디푸마레이트 용액을 아세토니트릴/물(50/50, v/v)로 제조하고 분취물을 마이크로플레이트 웰에 첨가하였다. 용매를 증발시키고 2-프로판올/물(90/10)을 웰에 첨가하였다. 플레이트를 초음파 처리한 후 용매를 진공 증발시켰다. 생성된 G형의 XRPD 패턴은 하기 도 13에 도시되어 있다. G형의 가장 우세한 X-선 분말 회절 피크는 하기 표 14에 나타낸다:

실시예 12 : 화합물 I 디푸마레이트 H형의 제조

화합물 I 디푸마레이트 용액을 아세톤/물(95/5, v/v)로 제조하고, 분취물 첨가물 간에 초음파 처리하여 용해를 촉진하였다. 일단 혼합물이 시각적 관찰에 의한 판단으로서 완전한 용해에 도달하면, 용액을 0.2 μm 나일론 필터에 여과시켰다. 여과된 용액을 비캡핑된 바이알에서 주위 조건 하에 증발시켰다. 형성된 고체를 단리 및 분석하였다. 생성된 H형의 XRPD 패턴은 하기 도 14에 도시되어 있다. H형의 가장 우세한 X-선 분말 회절 피크는 하기 표 15에 나타낸다:

실시예 13 : 화합물 I 디푸마레이트 I형의 제조

화합물 I 디푸마레이트 용액을 상온에서 메탄올로 제조하였다. 그리고나서 용액을 상온에서 톨루엔에 여과시켰다. 생성된 고체를 여과 단리시키고 분석에 앞서 건조시켰다. 생성된 I형의 XRPD 패턴은 하기 도 15에 도시되어 있다. I형의 가장 우세한 X-선 분말 회절 피크는 하기 표 16에 나타낸다:

실시예 14 : 화합물 I 디푸마레이트 J형의 제조

화합물 I 디푸마레이트 용액을 상온에서 메탄올로 제조하였다. 그리고나서 용액을 상온에서 과량의 헵탄에 여과시켰다. 생성된 고체를 여과 단리시키고 분석에 앞서 건조시켰다. 생성된 J형의 XRPD 패턴은 하기 도 16에 도시되어 있다. J형의 가장 우세한 X-선 분말 회절 피크는 하기 표 17에 나타낸다:

실시예 15 : 화합물 I 디푸마레이트 K형의 제조

화합물 I 디푸마레이트 용액을 아세토니트릴/물(50/50, v/v)로 제조하고 분취물을 마이크로플레이트 웰에 첨가하였다. 용매를 증발시키고 플루오로벤젠을 웰에 첨가하였다. 이 플레이트를 초음파 처리한 후 용매를 주위 조건 하에서 증발시켰다. 생성된 K형의 XRPD 패턴은 하기 도 17에 도시되어 있다. K형의 가장 우세한 X-선 분말 회절 피크는 하기 표 18에 나타낸다:

실시예 16 : 화합물 I 디푸마레이트 L형의 제조

화합물 I 디푸마레이트 용액을 아세토니트릴/물(50/50, v/v)로 제조하고 분취물을 마이크로플레이트 웰에 첨가하였다. 용매를 증발시키고 1,1,1,3,3,3-헥사플루오로-2-프로판올을 웰에 첨가하였다. 이 플레이트를 초음파 처리한 후 용매를 주위 조건 하에서 증발시켰다. 생성된 L형의 XRPD 패턴은 하기 도 18에 도시되어 있다. L형의 가장 우세한 X-선 분말 회절 피크는 하기 표 19에 나타낸다:

실시예 17 : 화합물 I 디푸마레이트 M형의 제조

화합물 I 디푸마레이트 용액을 아세토니트릴/물(50/50, v/v)로 제조하고 분취물을 마이크로플레이트 웰에 첨가하였다. 용매를 증발시키고 2-프로판올/물(90/10, v/v)을 웰에 첨가하였다. 이 플레이트를 초음파 처리한 후 용매를 주위 조건 하에서 증발시켰다. 생성된 M형의 XRPD 패턴은 하기 도 19에 도시되어 있다. M형의 가장 우세한 X-선 분말 회절 피크는 하기 표 20에 나타낸다:

실시예 18 : 화합물 I 디푸마레이트 N형의 제조

화합물 I 디푸마레이트 용액을 아세토니트릴/물(50/50, v/v)로 제조하고 분취물을 마이크로플레이트 웰에 첨가하였다. 용매를 증발시키고 아세톤/물(60/40, v/v)을 웰에 첨가하였다. 이 플레이트를 초음파 처리한 후 용매를 4℃에서 증발시켰다. 생성된 N형의 XRPD 패턴은 하기 도 20에 도시되어 있다. N형의 가장 우세한 X-선 분말 회절 피크는 하기 표 21에 나타낸다:

실시예 19 : 화합물 I 디푸마레이트 O형의 제조

화합물 I 디푸마레이트 용액을 아세토니트릴/물(50/50, v/v)로 제조하고 분취물을 마이크로플레이트 웰에 첨가하였다. 용매를 증발시키고 에탄올/물(30/70, v/v)을 웰에 첨가하였다. 이 플레이트를 초음파 처리한 후 용매를 4℃에서 증발시켰다. 생성된 O형의 XRPD 패턴은 하기 도 21에 도시되어 있다. O형의 가장 우세한 X-선 분말 회절 피크는 하기 표 22에 나타낸다:

실시예 20 : 화합물 I 디푸마레이트 P형의 제조

화합물 I 디푸마레이트 용액을 아세토니트릴/물(50/50, v/v)로 제조하고 분취물을 마이크로플레이트 웰에 첨가하였다. 용매를 증발시키고 2-프로판올/물(90/10, v/v)을 웰에 첨가하였다. 이 플레이트를 초음파 처리한 후 용매를 4℃에서 증발시켰다. 생성된 P형의 XRPD 패턴은 하기 도 22에 도시되어 있다. P형의 가장 우세한 X-선 분말 회절 피크는 하기 표 23에 나타낸다:

실시예 21 : 화합물 I 디푸마레이트 Q형의 제조

Q형은 B형을 가변 온도 XRPD 분석 동안 150℃로 가열하였을 때 관찰되었다. 생성된 Q형의 XRPD 패턴은 하기 도 23에 도시되어 있다. Q형의 가장 우세한 X-선 분말 회절 피크는 하기 표 24에 나타낸다:

실시예 22 : 화합물 I 디푸마레이트의 정제 제형

하기 제시된 분말화된 성분을 믹서에 투입하고 이를 혼합하여 화합물 I 디푸마레이트의 균일한 분포물을 생성하였다. 결합제 용액을 제조하고 이 용액을 적당한 습식 덩어리가 형성될 때까지 추가 혼합을 하면서 분말에 첨가하였다. 습식 덩어리를 스크린에 통과시키고 생성된 과립을 적당한 수분 함량으로 건조시켰다(예, 2 중량% 미만). 건조된 과립을 적당하게 분립된 스크린에 통과시키고 스테아르산마그네슘과 배합한 후 통상적인 타정 장치를 사용하여 정제 코어로 압축시켰다. 그리고나서 압축된 코어를, 통상적인 천공형 드럼 코터를 사용하여 필름 코팅 성분의 수성 현탁액으로 코팅하였다.

상기 기술된 바와 같이 제조된 2.5, 10, 40 및 100 mg의 화합물 I의 당량으로 화합물 I 디푸마레이트 A형을 함유한 필름-코팅된 정제를 하기 표 25에 예시한다.

^1. 정제 농도는 정제 내 존재하는 당량의 화합물 I 유리 염기를 지칭함.

^2. 화합물 I 디푸마레이트는 미분된 후 조제하여 약 5 ㎛ 미만의 평균 입도를 형성하였음.

^3. 히프로멜로즈, 마크로골 300 및 이산화티탄은 Colorcon에 의해 공급되는 오파드리 화이트(03B28460)로서 포함됨.

^4. 필름-코팅 동안 용매/담체 유동액으로서 정제수를 사용하고 이 물은 코팅 과정 동안 제거됨.

적당한 제조 과정을 하기 개설한다:

Claims

4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-7-메톡시-6-{[1-(N-메틸카르바모일메틸)피페리딘-4-일]옥시}퀴나졸린 디푸마레이트.
결정질 4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-7-메톡시-6-{[1-(N-메틸카르바모일메틸)피페리딘-4-일]옥시}퀴나졸린 디푸마레이트.
4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-7-메톡시-6-{[1-(N-메틸카르바모일메틸)피페리딘-4-일]옥시}퀴나졸린 디푸마레이트 A형.
4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-7-메톡시-6-{[1-(N-메틸카르바모일메틸)피페리딘-4-일]옥시}퀴나졸린 디푸마레이트 A형으로서, 상기 A형은 약 2θ = 26.4°에서 하나 이상의 특정 피크를 지닌 X-선 분말 회절 패턴을 갖는 것인 4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-7-메톡시-6-{[1-(N-메틸카르바모일메틸)피페리딘-4-일]옥시}퀴나졸린 디푸마레이트 A형.
4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-7-메톡시-6-{[1-(N-메틸카르바모일메틸)피페리딘-4-일]옥시}퀴나졸린 디푸마레이트 A형으로서, 상기 A형은 약 2θ = 26.4°, 14.9° 또는 7.1°에서 하나 이상의 특정 피크를 지닌 X-선 분말 회절 패턴을 갖는 것인 4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-7-메톡시-6-{[1-(N-메틸카르바모일메틸)피페리딘-4-일]옥시}퀴나졸린 디푸마레이트 A형.
4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-7-메톡시-6-{[1-(N-메틸카르바모일메틸)피페리딘-4-일]옥시}퀴나졸린 디푸마레이트 A형으로서, 상기 A형은 약 2θ = 26.4°, 24.0°, 14.9°, 12.4° 또는 7.1°에서 하나 이상의 특정 피크를 지닌 X-선 분말 회절 패턴을 갖는 것인 4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-7-메톡시-6-{[1-(N-메틸카르바모일메틸)피페리딘-4-일]옥시}퀴나졸린 디푸마레이트 A형.
4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-7-메톡시-6-{[1-(N-메틸카르바모일메틸)피페리딘-4-일]옥시}퀴나졸린 디푸마레이트 A형으로서, 상기 A형은 약 2θ = 26.4°, 14.9° 및 7.1°에서 하나 이상의 특정 피크를 지닌 X-선 분말 회절 패턴을 갖는 것인 4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-7-메톡시-6-{[1-(N-메틸카르바모일메틸)피페리딘-4-일]옥시}퀴나졸린 디푸마레이트 A형.
4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-7-메톡시-6-{[1-(N-메틸카르바모일메틸)피페리딘-4-일]옥시}퀴나졸린 디푸마레이트 A형으로서, 상기 A형은 약 2θ = 26.4°, 24.0°, 14.9°, 12.4° 및 7.1°에서 하나 이상의 특정 피크를 지닌 X-선 분말 회절 패턴을 갖는 것인 4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-7-메톡시-6-{[1-(N-메틸카르바모일메틸)피페리딘-4-일]옥시}퀴나졸린 디푸마레이트 A형.
4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-7-메톡시-6-{[1-(N-메틸카르바모일메틸)피페리딘-4-일]옥시}퀴나졸린 디푸마레이트 A형으로서, 상기 A형은 약 2θ = 26.4°, 24.0°, 23.0°, 21.2°, 17.3°, 15.4°, 14.9°, 13.0°, 12.4° 및 7.1°에서 하나 이상의 특정 피크를 지닌 X-선 분말 회절 패턴을 갖는 것인 4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-7-메톡시-6-{[1-(N-메틸카르바모일메틸)피페리딘-4-일]옥시}퀴나졸린 디푸마레이트 A형.
4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-7-메톡시-6-{[1-(N-메틸카르바모일메틸)피페리딘-4-일]옥시}퀴나졸린 디푸마레이트 A형으로서, 상기 A형은 도 4에 도시된 X-선 분말 회절 패턴과 실질적으로 동일한 X-선 분말 회절 패턴을 갖는 것인 4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-7-메톡시-6-{[1-(N-메틸카르바모일메틸)피페리딘-4-일]옥시}퀴나졸린 디푸마레이트 A형.
4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-7-메톡시-6-{[1-(N-메틸카르바모일메틸)피페리딘-4-일]옥시}퀴나졸린 디푸마레이트 A형으로서, 상기 A형은 약 210℃의 융점을 갖는 것인 4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-7-메톡시-6-{[1-(N-메틸카르바모일메틸)피페리딘-4-일]옥시}퀴나졸린 디푸마레이트 A형.
4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-7-메톡시-6-{[1-(N-메틸카르바모일메틸)피페리딘-4-일]옥시}퀴나졸린 디푸마레이트 A형의 제조 방법으로서,
(i) 4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-7-메톡시-6-{[1-(N-메틸카르바모일메틸)피페리딘-4-일]옥시}퀴나졸린과 충분량의 푸마르산을 반응시켜 디푸마레이트 염을 형성시키는 단계;
(ii) 4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-7-메톡시-6-{[1-(N-메틸카르바모일메틸)피페리딘-4-일]옥시}퀴나졸린 디푸마레이트를 결정화시키는 단계; 및
(iii) 4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-7-메톡시-6-{[1-(N-메틸카르바모일메틸)피페리딘-4-일]옥시}퀴나졸린 디푸마레이트 A형을 단리시키는 단계
를 포함하는 제조 방법.
제12항에 있어서, 방법의 단계 (i)은 메탄올 및 이소프로판올을 포함하는 용매 혼합물에서 수행하는 것인 제조 방법.
제13항에 있어서, 이소프로판올 대 메탄올의 부피비가 약 3.4:1 내지 약 1.0:1인 제조 방법.
제12항에 있어서, 방법의 단계 (i)은 에틸 아세테이트 및 이소프로판올을 포함하는 용매 혼합물에서 수행하는 것인 제조 방법.
제15항에 있어서, 에틸 아세테이트 대 이소프로판올의 부피비가 약 5.1:1 내지 약 1.9:1인 제조 방법.
제12항에 있어서, 방법의 단계 (i)은 수중에서 수행하는 것인 제조 방법.
제12항 내지 제17항 중 어느 하나의 항에 있어서, 4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-7-메톡시-6-{[1-(N-메틸카르바모일메틸)피페리딘-4-일]옥시}퀴나졸린은 2 몰 당량 이상의 푸마르산과 반응시키는 것인 제조 방법.
4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-7-메톡시-6-{[1-(N-메틸카르바모일메틸)피페리딘-4-일]옥시}퀴나졸린 디푸마레이트 A형의 제조 방법으로서,
(i) 에틸 아세테이트 중의 4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-7-메톡시-6-{[1-(N-메틸카르바모일메틸)피페리딘-4-일]옥시}퀴나졸린의 용액 또는 현탁액과 이소프로판올 중의 1.725 몰 당량 이상의 푸마르산을 반응시키는 단계로서, 여기서 에틸 아세테이트 대 이소프로판올의 부피비는 적절하게는 약 5:1 내지 약 1:1, 예컨대 약 5.1:1 내지 1.9:1이고 반응은 약 20∼약 73℃의 온도에서 수행하는 것인 단계;
(ii) 단계 (i)로부터의 반응 혼합물을 약 20℃로 냉각시키고 이 온도에서 혼합물을 유지하여 4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-7-메톡시-6-{[1-(N-메틸카르바모일메틸)피페리딘-4-일]옥시}퀴나졸린 디푸마레이트 A형을 결정화시키는 단계; 및
(iii) 4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-7-메톡시-6-{[1-(N-메틸카르바모일메틸)피페리딘-4-일]옥시}퀴나졸린 디푸마레이트 A형을 단리시키는 단계
를 포함하는 제조 방법.
제19항에 있어서, 4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-7-메톡시-6-{[1-(N-메틸카르바모일메틸)피페리딘-4-일]옥시}퀴나졸린은 2 몰 당량 이상의 푸마르산과 반응시키는 것인 제조 방법.
4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-7-메톡시-6-{[1-(N-메틸카르바모일메틸)피페리딘-4-일]옥시}퀴나졸린 디푸마레이트 A형의 제조 방법으로서,
(i) 수중의 4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-7-메톡시-6-{[1-(N-메틸카르바모일메틸)피페리딘-4-일]옥시}퀴나졸린의 용액 또는 현탁액과 2 몰 당량 이상의 푸마르산을 반응시키는 단계로서, 여기서 반응은 약 85℃에서 수행하는 것인 단계;
(ii) 단계 (i)로부터의 반응 혼합물을 약 60℃로 냉각시키는 단계; 및
(iii) 4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-7-메톡시-6-{[1-(N-메틸카르바모일메틸)피페리딘-4-일]옥시}퀴나졸린 디푸마레이트 A형을 단리시키는 단계
를 포함하는 제조 방법.
제21항에 있어서, 단계 (ii)에서, 반응 혼합물은 약 1℃/분의 속도로 냉각하는 것인 제조 방법.
제1항 내지 제11항 중 어느 하나의 항에 따른 4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-7-메톡시-6-{[1-(N-메틸카르바모일메틸)피페리딘-4-일]옥시}퀴나졸린 디푸마레이트를 약학적으로 허용가능한 희석제 또는 담체와 회합된 상태로 포함하는 약학 조성물.
제1항 내지 제11항 중 어느 하나의 항에 따른 4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-7-메톡시-6-{[1-(N-메틸카르바모일메틸)피페리딘-4-일]옥시}퀴나졸린 디푸마레이트;
락토즈;
마이크로결정질 셀룰로즈;
크로스포비돈;
폴리비돈; 및
스테아르산마그네슘
을 포함하고, 하나 이상의 착색제 및/또는 광 보호제를 경우에 따라 함유하는 코팅으로 임의 코팅되는 정제인 약학 조성물.
제23항 또는 제24항에 있어서, 4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-7-메톡시-6-{[1-(N-메틸카르바모일메틸)피페리딘-4-일]옥시}퀴나졸린 디푸마레이트가 4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-7-메톡시-6-{[1-(N-메틸카르바모일메틸)피페리딘-4-일]옥시}퀴나졸린 디푸마레이트 A형인 약학 조성물.
약제로서 사용하기 위한, 제1항 내지 제11항 중 어느 하나의 항에 따른 4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-7-메톡시-6-{[1-(N-메틸카르바모일메틸)피페리딘-4-일]옥시}퀴나졸린 디푸마레이트.
암 치료에 사용하기 위한 약제의 제조에서의, 제1항 내지 제11항 중 어느 하나의 항에 따른 4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-7-메톡시-6-{[1-(N-메틸카르바모일메틸)피페리딘-4-일]옥시}퀴나졸린 디푸마레이트의 용도.
암 치료에 사용하기 위한, 제1항 내지 제11항 중 어느 하나의 항에 따른 4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-7-메톡시-6-{[1-(N-메틸카르바모일메틸)피페리딘-4-일]옥시}퀴나졸린 디푸마레이트.
암의 치료를 필요로 하는 온혈 동물, 예컨대 인간에서 암을 치료하는 방법으로서, 상기 동물에게 제1항 내지 제11항 중 어느 하나의 항에 따른 4-(3-클로로-2-플루오로아닐리노)-7-메톡시-6-{[1-(N-메틸카르바모일메틸)피페리딘-4-일]옥시}퀴나졸린 디푸마레이트의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는 방법.
제29항에 있어서, 암은 유방암, 위암, 결장직장암, 두경부암, 난소암 및 폐암 중에서 선택하는 것인 방법.
제29항에 있어서, 암이 유방암인 방법.
제29항에 있어서, 암이 위암인 방법.