KR20090078841A - 피리딜 비방향족 질소 함유 헤테로환-1-카르복실산에스테르 유도체 - Google Patents

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겐따로 사또
다쯔히사 다까하시
다까또시 가나야마
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Abstract

지방산 아미드 가수 분해 효소(FAAH)가 관여하는 질환, 특히 빈뇨ㆍ뇨실금, 과활동 방광 및/또는 동통의 치료에 사용할 수 있는 화합물의 제공.
신규 피리딜 비방향족 질소 함유 헤테로환-1-카르복실산에스테르 유도체 및 그의 제제학적으로 허용되는 염이 강력한 FAAH 저해 활성을 갖는 것을 발견하였다. 또한, 본 발명의 피리딜 비방향족 질소 함유 헤테로환-1-카르복실산에스테르 유도체는 우수한 유효 방광 용량의 증가 작용, 빈뇨 상태의 개선 작용, 항알로디니아 작용을 나타내었기 때문에, 빈뇨ㆍ뇨실금, 과활동 방광 및/또는 동통의 치료에 사용할 수 있다.
FAAH 저해활성, 피리딜 비방향족 질소 함유 헤테로환-1-카르복실산에스테르 유도체, 요실금

Description

피리딜 비방향족 질소 함유 헤테로환-1-카르복실산에스테르 유도체 {PYRIDYL NON-AROMATIC NITROGENATED HETEROCYCLIC-1-CARBOXYLATE ESTER DERIVATIVE}
본 발명은 의약, 특히 지방산 아미드 가수 분해 효소(이하 FAAH) 저해 활성을 갖는 빈뇨ㆍ뇨실금 치료제, 과활동 방광 치료제 및/또는 동통(疼痛) 치료제인 피리딜 비방향족 질소 함유 헤테로환-1-카르복실산에스테르 유도체 또는 그의 제약학적으로 허용되는 염에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 FAAH의 활성을 저해하는 물질인 빈뇨ㆍ뇨실금 치료제, 과활동 방광 치료제 및/또는 동통 치료제를 스크리닝하는 방법, 및 본 발명의 스크리닝 방법에 의해 얻어진 물질 또는 지방산 아미드 가수 분해 효소의 활성을 저해하는 물질을 함유하는 빈뇨ㆍ뇨실금 치료용, 과활동 방광 치료용 및/또는 동통 치료용 의약 조성물에 관한 것이다.
지방산 아미드 가수 분해 효소(Fatty acid amide hydrolase; FAAH)는 엔도칸나비노이드를 가수 분해함으로써, 그의 활성을 소실시키는 것으로 알려져 있다(비특허 문헌 1 내지 4 참조). 엔도칸나비노이드(endocannabinoid)란, 칸나비노이드 수용체에 작용하여 생리 작용을 발휘하는 생체내 물질의 총칭이다. 대표적인 엔도칸나비노이드로서 아난다미드, 팔미토일에탄올아미드, 올레아미드, 2-아라퀴돈산글 리세롤이 있고, FAAH에 의해 가수 분해를 받아 활성이 소실되는 것으로 알려져 있다. 또한, 대마(마리화나)의 활성 성분이라고 생각되는 Δ9-테트라히드로칸나비놀은 칸나비노이드 수용체를 활성화하는 것으로 알려져 있다(비특허 문헌 5 참조).
포유 동물에는 지금까지 2종의 칸나비노이드 수용체 CB1, CB2가 알려져 있다. CB1은 중추 및 말초 신경계에 발현되어, 그의 활성화에 의해 정신 작용 및 진통 작용 등이 야기된다. CB2는 면역계 조직에 발현되어, 그의 활성화에 의해 항염증 작용 및 진통(염증성) 작용 등이 야기된다.
한편, 래트 방광염 모델에 있어서 칸나비노이드 수용체 작동약은 방광 용량 및 배뇨 임계값을 증대시키는 것(비특허 문헌 6 및 비특허 문헌 7), 또한 칸나비노이드 수용체 작동약을 동물에게 투여한 경우에 관찰되는 환각, 망상, 빈맥, 기립성 저혈압 등의 부작용이, FAAH 저해제를 투여한 경우에는 관찰되지 않는 것(비특허 문헌 8)으로부터, FAAH 저해제는 빈뇨ㆍ뇨실금 치료약, 과활동 방광 치료약 및/또는 동통 치료약으로서 기대된다.
FAAH 저해 활성을 갖는 화합물로서는, 진통제, 항불안약, 항간질약, 항우울제, 제토제, 순환기 질환 치료제 또는 녹내장 치료제가 될 수 있는 화합물이 알려져 있다[방향환 또는 페닐 치환 지방족 탄화수소 카르밤산 C1-4 알킬 또는 다환식 방향환 에스테르 유도체(특허 문헌 1) 및 시클로헥실 카르밤산페닐에스테르(특허 문헌 2)]. 또한, FAAH 저해 활성을 갖는 화합물인 디옥산-2-알킬카르바메이트 유도체가 다수개 나열(羅列)된 질환의 한 양태로서 뇨실금의 치료약이 기재되어 있다(특허 문헌 3). 그러나, 특허 문헌 3에는 빈뇨ㆍ뇨실금 치료약 및/또는 과활동 방광 치료 효과를 뒷받침하는 실험 성적은 없으며 시사도 없었다. 또한, 피리딜 비방향족 질소 함유 헤테로환-1-카르복실산에스테르로서는, 4-아미노피리딜피페리딘-1-카르복실레이트가 아세틸콜린에스테라제 저해제로서 기재되어 있지만(비특허 문헌 9), 상기 화합물이 FAAH 저해제 및 빈뇨ㆍ뇨실금 치료약 및/또는 과활동 방광 치료약인 것에 대해서는 기재되어 있지 않았다.
특허 문헌 1: 국제 공개 공보 WO2003/065989호
특허 문헌 2: 국제 공개 공보 WO2004/033422호
특허 문헌 3: 일본 특허 공개 제2003-192659호
비특허 문헌 1: 「프로스타글란딘즈ㆍ로이코트리언즈ㆍ앤드ㆍ에센셜ㆍ패티ㆍ애시드(Prostaglandins Leukotrienes and essential Fatty Acids)」, (영국), 2002년, 제66권, p.143-160
비특허 문헌 2: 「브리티쉬ㆍ저널ㆍ오브ㆍ파마콜로지(British Journal of Pharmacology)」, (영국), 2004년, 제141권, p.253-262
비특허 문헌 3:「네이쳐(Nature)」, (영국), 1996년, 제384권, p.83-87
비특허 문헌 4: 「바이오케미컬ㆍ파마콜로지(Biochemical Pharmacology)」, (미국), 2001년, 제62권, p.517-526
비특허 문헌 5: 「커런트ㆍ메디스널ㆍ케미스트리(Current Medicinal Chemistry)」, (미국), 1999년, 제6권, p.635-664
비특허 문헌 6: 「더ㆍ저널ㆍ오브ㆍ뉴로사이언스(The Journal of Neuroscience)」, 2002년, 제22권, p.7147-7153
비특허 문헌 7: 「페인(Pain)」, 1998년, 제76권, p.189-199
비특허 문헌 8: 「네이쳐ㆍ메디슨(Nature Medicine)」, (영국), 2003년, 제9권, p.76-81
비특허 문헌 9: 「저널ㆍ오브ㆍ파마슈티칼ㆍ사이언스(Journal of Pharmaceutical Science)」, 1992년, 제81권, p380-385
본 발명의 과제는 대마 양태의 부작용이나 상용성에 대한 우려가 없거나 또는 경감된 빈뇨ㆍ뇨실금 치료제, 과활동 방광 치료제 및/또는 동통 치료제를 제공하는 것에 있다. 또한, FAAH의 활성을 저해하는 물질인 빈뇨ㆍ뇨실금 치료제, 과활동 방광 치료제 및/또는 동통 치료제를 스크리닝하는 방법, 및 본 발명의 스크리닝 방법에 의해 얻어진 물질 또는 지방산 아미드 가수 분해 효소의 활성을 저해하는 물질을 함유하는 빈뇨ㆍ뇨실금 치료용, 과활동 방광 치료용 및/또는 동통 치료용 의약 조성물을 제공하는 것에 있다.
본 발명자들은 FAAH 저해 활성을 갖는 화합물을 창제하기 위해 예의 검토한 결과, 신규 피리딜 질소 함유 헤테로환-1-카르복실산에스테르 유도체를 발견하였다.
또한, 본 발명자들은 시클로포스파미드(Cyclophosphamide)에 의해 유발된 빈뇨 래트에 대하여, FAAH 저해 활성을 갖는 화합물을 투여하면, 유효 방광 용량이 증가하는 것을 처음으로 발견하고, 또한 FAAH 저해 활성을 갖는 화합물이 동통 모델 래트에 있어서 우수한 개선 작용을 나타내는 것도 발견하였기 때문에, FAAH 저해제를 선택하는 것에 의한 빈뇨ㆍ뇨실금 치료제, 과활동 방광 치료제 및/또는 동통 치료제의 스크리닝 방법을 제공하여, 본 발명을 완성시켰다.
즉, 본 발명은
[1] 화학식 I에 나타내어지는 피리딜 비방향족 질소 함유 헤테로환-1-카르복실산에스테르 유도체 및 그의 제약학적으로 허용되는 염.
<화학식 I>
Figure 112009033955637-PAT00001
[식 I 중의 기호는 이하의 의미를 나타낸다.
HET1: 5 내지 7원 비방향족 질소 함유 헤테로환,
R1, R2 및 R3: 동일하거나 또는 다르고,
(1) H,
(2) OH,
(3) 에스테르화될 수도 있는 카르복실,
(4) 시아노,
(5) 저급 알킬-CO-,
(6) 옥소(=O),
(7) 식[R101-(O)m1]m2-[HO로 치환될 수도 있는 ALK1]-(O)n1-,
(m1 및 n1; 동일하거나 또는 다르고, 0 또는 1, m2; 1 내지 5,
ALK1: 저급 알킬렌, 저급 알케닐렌 또는 저급 알키닐렌,
R101: (i) H,
(ii) (a) H2N-, (b) 할로, (c) 시아노, (d) 에스테르화될 수도 있는 카르복실, (e) 기 R1011aR1012aN-CO-, (f) HET2, (g) 할로, 시아노, OH, 저급 알킬-O- 또는 저급 알킬로 치환될 수도 있는 Ar1a,
Ar1a: 아릴,
(h) 저급 알킬, (j) OH, (k) Ar1a 또는 할로-Ar1a로 치환될 수도 있는 저급 알킬-O-, (l) 할로, Ar1a 또는 HETAr1a로 치환될 수도 있는 HET2-CO-,
HET2: 질소 함유 헤테로환,
HETAr1a: 질소 함유 헤테로아릴,
(s) HET2-CONR1011a-, (t) H2NCONH- 및 (u) 에스테르화될 수도 있는 카르복실-ALK2a로 이루어지는 군에서 선택된 1 이상의 치환기로 치환될 수도 있는 Ar1a,
ALK2a: 저급 알킬 또는 저급 알케닐,
(iii) 기 R1011aR1012aN 또는 Ar1a로 치환될 수도 있는 ALK2a,
R1011a 및 R1012a: 동일하거나 또는 다르고,
(a) H, (b) cALK,
cALK: 시클로알킬,
(c) 할로, cALK, OH, 저급 알킬-O- 또는 Ar1a로 치환될 수도 있는 ALK2a, 또는 (d) 할로로 치환될 수도 있는 Ar1a-SO2-,
(iv) (a) Ar1a 또는 할로-Ar1a로 치환될 수도 있는 ALK2a, (b) Ar1a, (c) 저급 알킬로 치환될 수도 있는 HETAr1a, (d) Ar1a-CO- 또는 할로-Ar1a-CO-로 이루어지는 군에서 선택된 1 이상의 치환기로 치환될 수도 있는 HET2,
(v) ALK2a로 치환될 수도 있는 cALK,
또는
(vi) 에스테르화될 수도 있는 카르복실,
(여기서, m2가 2 내지 5인 경우에는, [R101-(O)m1]은 동일하거나 상이할 수 있다.),
(8) 기 R102-ALK1-N(R103)-CO-,
(R102: (i) H,
(ii) cALK,
(iii) HETAr1a 또는
(iv) (a) HO, (b) ALK2a-O-, (c) cALK-ALK1-O-, (d) cALK-Ar1a-ALK1-O- 및 (e) Ar1a-ALK1-O-로 이루어지는 군에서 선택된 1 이상의 치환기로 치환될 수도 있는 Ar1a,
R103: (i) H,
(ii) cALK,
(iii) (a) HET2, (b) Ar1a 및 (c) 할로-Ar1a로 이루어지는 군에서 선택된 1 이상의 치환기로 치환될 수도 있는 ALK2a,
(iv) HETAr1a 또는
(v) (a) cALK, (b) H2N, (c) 기 R1011aR1012aN-CO- 또는 (d) ALK2a로 이루어지는 군에서 선택된 1 이상의 치환기로 치환될 수도 있는 Ar1a-[CO]m1),
(9) 기 R104aR105aN-[CO]m1-ALK1-,
(R104a 및 R105a: 동일하거나 또는 다르고, 기 R103)
(1O) 기 R106-ALK3-L1-,
(R106: (i) 기 R101-(O)m1-,
(ii) 기 R104aR105aN-,
(iii) 기 ALK2a-CONH- 또는
(iv) 기 Ar1a-CONH-,
ALK3: 저급 알킬렌, 저급 알케닐렌 또는 시클로알킬렌,
L1: -C(=O)- 또는 -SO2-)
(11) Ar1a로 치환될 수도 있는 ALK2a-CONH-,
(12) 할로로 치환된 Ar1a,
(13) 기[R107-(O)m1]m2-Ar2-(O)n1-,
(Ar2: 아릴렌,
R107: (i) H,
(ii) 할로,
(iii) (a) HO, (b) cALK, (c) HET2, (d) 할로, 저급 알킬, 저급 알킬-O-, 기 R1011aR1012aN-[CO]p-, 시아노 또는 에스테르화될 수도 있는 카르복실로 치환될 수도 있는 Ar1a, (e) 에스테르화될 수도 있는 카르복실, (f) 기 R1011aR1012aN-[CO]p-로 치환될 수도 있는 HET2-[CO]p- 및 (g) 기 R1011aR1012aN-[CO]p-로 이루어지는 군에서 선택된 1 이상의 치환기로 치환될 수도 있는 ALK2a,
p: 0 또는 1,
(iv) 기 R1011aR1012aN-[CO]p- 또는
(v) 기 R1011aR1012aN-[CO]p-Ar1a
또한, 여기서 m2가 2 내지 5인 경우에는, [R107-(O)m1]은 동일하거나 상이할 수도 있고, 또한 기[R107-(O)m1]m2가 메틸렌디옥시를 의미하며 환을 형성할 수도 있다.),
(14) 기[R107-(O)m1]m2-Ar2-N(R103)-CO-,
(여기서, m2가 2 내지 5인 경우에는, [R107-(O)m1]은 동일하거나 상이할 수 있다.),
(15) 기[R1011aR1012aN-[CO]m1]m2-Ar2-(O)n1-,
(여기서, m2가 2 내지 5인 경우에는, [R1011aR1012aN-[CO]m1]은 동일하거나 상이할 수 있다.),
(16) 기[R108]m2-Ar2-L2-,
[R108: (i) H,
(ii) 할로,
(iii) HO,
* (iv) cALK-O-,
(v) 기 R109-ALK1-(O)m1-
(R109: (a) H, (b) cALK, (c) (1') 할로, (2') 시아노, (3') NO2, (4') 할로로 치환될 수도 있는 ALK2a, (5') HO, (6') 할로로 치환될 수도 있는 ALK2a-O-, (7') 에스테르화될 수도 있는 카르복실, 또는 (8') 기 R104aR105aN으로 이루어지는 군에서 선택된 1 이상의 치환기로 치환될 수도 있는 Ar1a, (d) HETAr1a 또는 (e) 기 R104aR105aN-[CO]m1-,),
(vi) 기 R1013R1014N- 또는,
R1013, R1014: 동일하거나 또는 다르고, (i) H, (ii) ALK2a, (iii) cALK-ALK1- 또는 (iv) (1') 할로, (2') 시아노, (3') 할로로 치환될 수도 있는 ALK2a, (4') 할로로 치환될 수도 있는 ALK2a-O-로 이루어지는 군에서 선택된 1 이상의 치환기로 치환될 수도 있는 Ar1a-ALK1-,
(vii) 저급 알킬로 치환될 수도 있는 HET2-(O)m1-,
L2: -CO- 또는 -S(O)q-,
q: 0, 1 또는 2,
또한, 여기서 m2가 2 내지 5인 경우에는, [R108]은 동일하거나 상이할 수 있다.]
(17) 기[R101]m2-Ar2-CONH-,
(여기서, m2가 2 내지 5인 경우에는, [R101]은 동일하거나 상이할 수 있다.),
(18) 기[R111]m2-HETAr2-(O)m1-,
(R111: (i) H, (ii) 할로, (m) 옥소(=O) 또는 (iv) 기 R103A-(O)n1-,
R103A: (i) H,
(ii) cALK,
(iii) (a) HET2 또는 (b) Ar1a, (c) cALK 및 (d) 할로-Ar1a로 이루어지는 군에서 선택된 1 이상의 치환기로 치환될 수도 있는 ALK2a,
(iv) HETAr1a, 또는
(v) (a) cALK, (b) H2N 및 (c) 기 R1011aR1012aN-CO-로 이루어지는 군에서 선택된 1 이상의 치환기로 치환될 수도 있는 Ar1a,
HETAr2: 질소 함유 헤테로아릴렌,
또한, 여기서 m2가 2 내지 5인 경우에는, [R111]은 동일하거나 상이할 수 있다.),
(19) 식[R112]m2-HETAr2-N(R103)-CO-,
(R112: (i) H,
(ii) cALK,
(m) ALK2a 또는
(iv) (a) 할로, (b) HO, (c) ALK2a-O- 및 (d) Ar1a-ALK1-O-로 이루어지는 군에서 선택된 1 이상의 치환기로 치환될 수도 있는 Ar1a,
또한, 여기서 m2가 2 내지 5인 경우에는, [R112]는 동일하거나 다를 수도 있다.),
(20) 식[R108]m2-HETAr2-L2-,
(여기서, m2가 2 내지 5인 경우에는, [R108]은 동일하거나 상이할 수 있다.),
단, R1, R2 및 R3 중 어느 하나의 기가 기[R111]m2-HETAr2-(O)m1- 중의 m1이 O인 경우, 나머지 R1, R2 및 R3의 기는 H,
R4, R5, R6 및 R7: 동일하거나 또는 다르고,
(1) H,
(2) 할로,
(3) 에스테르화될 수도 있는 카르복실,
(4) HO,
(5) 기 R113-ALK4-(O)m3-,
(ALK4: 저급 알킬렌, 저급 알케닐렌 또는 저급 알키닐렌,
m3: 0 또는 1,
R113: ((i) H,
(ii) HO,
(iii) 에스테르화될 수도 있는 카르복실로 치환될 수도 있는 저급 알킬-O-,
(iv) 에스테르화될 수도 있는 카르복실,
(v) 저급 알킬-CO-O- 또는
(vi) 기 R104bR105bN-[CO]m3-(R104b 및 R105b: 동일하거나 또는 다르고, 기 R103)),
(6) R114R115N(R114 및 R115: 동일하거나 또는 다르고, (i) H, 또는 (ii) 기 R104bR105bN로 치환될 수도 있는 ALK2b,
ALK2b: 저급 알킬 또는 저급 알케닐),
(7) 기 R116-(ALK4)n2-N(R117)-CO-,
(n2: 0 또는 1,
R116: (i) H,
(ii) HO,
(iii) 저급 알킬-O-,
(iv) 에스테르화될 수도 있는 카르복실,
(v) 기 R104bR105bN-[CO]m3-,
(vi) (a) HO 또는 (b) ALK2b-O-로 치환될 수도 있는 Ar1b,
Ar1b: 아릴,
(vii) 기 R104bR105bN-[CO]m3- 또는 에스테르화될 수도 있는 카르복실로 치환될 수도 있는 HET3,
HET3: 질소 함유 헤테로환,
(viii) 기 R104bR105bN-[CO]m3-으로 치환될 수도 있는 Ar1b, 또는
(x) SO3H),
R117: (i) H, 또는 (ii) Ar1b로 치환될 수도 있는 ALK2b),
(8) 에스테르화될 수도 있는 카르복실 및 기 R1011bR1012bN-[(CO)]m3-으로 이루어지는 군에서 선택된 1 이상의 치환기로 치환될 수도 있는 Ar1b,
R1011b 및 R1012b: 동일하거나 또는 다르고,
(i) H,
(ii) cALK,
(iii) 할로, cALK, OH, 저급 알킬-O- 또는 Ar1b로 치환될 수도 있는 ALK2b, 또는
(iv) 할로로 치환될 수도 있는 Ar1b-SO2-,
(9) 에스테르화될 수도 있는 카르복실로 치환될 수도 있는 HET3,
(10) ALK2b 및 기 R104bR105bN-[CO]m3-으로 이루어지는 군에서 선택된 1 이상의 치환기로 치환될 수도 있는 HET3-CO-, 또는
(11) 시아노. 단, 4-아미노피리딘-3-일피페리딘-1-카르복실레이트를 제외한다.]
[2] [1]에 있어서, 화학식 II로 표시되는 화합물.
<화학식 II>
Figure 112009033955637-PAT00002
[식 II 중, R1 내지 R7은 [1]과 동일한 의미를 나타내고, T는 CH2, NH, NHCH2 또는 O를 나타낸다. 여기서, R1 내지 R3에서 T의 수소가 치환되어 있는 경우도 포함한다. 이하 동일]
[3] [2]에 있어서, R1 내지 R3이 동일하거나 또는 다르고, 기[R101-(O)m1]m2-[HO로 치환될 수도 있는 ALK1]-(O)n1-, 기 R102-ALK1-N(R103)-CO-, 기 R106-ALK3-L1-, 기[R107-(O)m1]m2-Ar2-(O)n1-, 기[R107-(O)m1]m2-Ar2-N(R103)-CO- 또는 기[R108]m2-Ar2-L2-인 화합물.
[4] 화학식 III으로 표시되는 피리딜 비방향족 질소 함유 헤테로환-1-카르복실산에스테르 유도체 및 그의 제약학적으로 허용되는 염.
<화학식 III>
Figure 112009033955637-PAT00003
[식 III 중의 기호는 이하의 의미를 나타낸다.
A환: 벤젠환, 시클로펜탄환, 시클로헥산환, 시클로헵탄환, 또는 5 내지 7원 질소 함유 헤테로환,
L: 단결합, 저급 알킬렌, 저급 알케닐렌, -N(R15)-C(=O)-, -C(=O)-N(R15)-, -(저급 알케닐렌)-C(=O)-, -O- 또는 -C(=0)-,
R15: H 또는 저급 알킬,
X: CH 또는 N,
R8 내지 R10: 동일하거나 또는 다르고,
하기 G군에서 선택되는 기,
하기 G군에서 선택되는 동일하거나 또는 다른 기로 치환될 수도 있는 아릴,
하기 G군에서 선택되는 동일하거나 또는 다른 기로 치환될 수도 있는 질소 함유 헤테로아릴,
R16-(저급 알킬렌)-O-, R16-(저급 알킬렌)-N(R15)-
또는 R17R18N-C(=O)-,
R16: 하기 G군에서 선택되는 동일하거나 또는 다른 기로 치환될 수도 있는 아릴, 하기 G군에서 선택되는 동일하거나 또는 다른 기로 치환될 수도 있는 질소 함유 헤테로아릴, 또는 3 내지 8원 시클로알킬,
R17 및 R18: 동일하거나 또는 다르고, H, 저급 알킬, 또는 3 내지 8원 시클로알킬, (또한, R17 및 R18은 결합된 N 원자와 일체가 되어 3 내지 8원 질소 함유 헤테로환을 형성할 수도 있다.),
G군: H, 할로, -CN, -CF3, 저급 알킬 또는 -O-저급 알킬,
R11: H, 저급 알킬 또는 옥소(=O),
R12 내지 R14: 동일하거나 또는 다르고, H, 저급 알킬, -C(=O)-O-(저급 알킬), -CO2H,
또는 -CONH2]
[5] [4]에 있어서, A환이 벤젠환, 시클로헥산환, 피페리딘환, 피페라진환인 화합물.
[6] [5]에 있어서, R9, R10, R11, R12, R13이 H인 화합물.
[7] 화학식 IV로 표시되는 피리딜 비방향족 질소 함유 헤테로환-1-카르복실산에스테르 유도체 및 그의 제약학적으로 허용되는 염.
<화학식 IV>
Figure 112009033955637-PAT00004
[식 IV 중의 기호는 이하의 의미를 나타낸다.
A1환: 벤젠환, 피페리딘환 또는 피페라진환,
L1: 저급 알킬렌, 저급 알케닐렌, -N(R15-C(=O)- 또는 -O-,
R15: H 또는 저급 알킬,
R19: 하기 G군에서 선택되는 기,
하기 G군에서 선택되는 동일하거나 또는 다른 기로 치환될 수도 있는 질소 함유 헤테로아릴,
R16-(저급 알킬렌)-O- 또는 R17R18N-C(=O)-,
R16: 하기 G군에서 선택되는 동일하거나 또는 다른 기로 치환될 수도 있는 아릴, 하기 G군에서 선택되는 동일하거나 또는 다른 기로 치환될 수도 있는 질소 함유 헤테로아릴, 또는 3 내지 8원 시클로알킬,
R17 및 R18: 동일하거나 또는 다르고, H, 또는 저급 알킬,
(또한, R17, R18은 결합된 N 원자와 일체가 되어 5 또는 6원 질소 함유 헤테 로환을 형성할 수도 있다.),
G군: H, 할로, -CN, -CF3, 저급 알킬 또는 -O-저급 알킬,
R20: H, -C(=O)-O-(저급 알킬), -CO2H 또는 -CONH2]
[8] 화학식 V로 표시되는 피리딜 비방향족 질소 함유 헤테로환-1-카르복실산에스테르 유도체 및 그의 제약학적으로 허용되는 염.
<화학식 V>
Figure 112009033955637-PAT00005
[식 V 중의 기호는 이하의 의미를 나타낸다.
L2: 저급 알킬렌, 저급 알케닐렌 또는 -(저급 알케닐렌)-C(=O)-,
R21: H, 할로, -CN, -CF3, 저급 알킬 또는 -O-저급 알킬,
R22: H, -C(=O)-O-(저급 알킬), -CO2H 또는 -CONH2]
[9] [1]에 있어서, 피리딘-3-일 4-{4-[(3-플루오로벤질)옥시]페녹시}피페리딘-1-카르복실레이트,
5{[(4-{4-[(3-플루오로벤질)옥시]페녹시}피페리딘-1-일)카르보닐]옥시}니코틴산,
5-({[4-(2-페닐에틸)피페리딘-1-일]카르보닐}옥시)니코틴산,
5-[({4-[4-(2-시클로헥실에톡시)페녹시]피페리딘-1-일}카르보닐)옥시]니코틴산,
5-[({4-[(E)-2-페닐비닐]피페리딘-1-일}카르보닐)옥시]니코틴산,
5-{[(4-{3-[1-(6-메틸피리딘-2-일)피페리딘-4-일]프로필}피페리딘-1-일)카르보닐]옥시}니코틴산,
5-(아미노카르보닐)피리딘-3-일 4-{2-[3-(아미노카르보닐)페닐]에틸}피페리딘-1-카르복실레이트,
5-(아미노카르보닐)피리딘-3-일 4-(2-{3-[(디메틸아미노)카르보닐]페닐}에틸)피페리딘-1-카르복실레이트,
5-(아미노카르보닐)피리딘-3-일 4-{2-[3-(피페리딘-1-일카르보닐)페닐]에틸}피페리딘-1-카르복실레이트,
5-(아미노카르보닐)피리딘-3-일 4-{2-[3-(피롤리딘-1-일카르보닐)페닐]에틸}피페리딘-1-카르복실레이트,
피리딘-3-일 4-[(2E)-3-페닐프로파-2-에노일]피페라진-1-카르복실레이트,
피리딘-3-일 4-(아닐리노카르보닐)피페리딘-1-카르복실레이트,
5-(아미노카르보닐)피리딘-3-일 4-(2-페닐에틸)피페리딘-1-카르복실레이트,
피리딘-3-일 4-(2-페닐에틸)피페라진-1-카르복실레이트,
5-(메톡시카르보닐)피리딘-3-일 4-(2-페닐에틸)피페라진-1-카르복실레이트,
5-(아미노카르보닐)피리딘-3-일 4-[2-(3-플루오로페닐)에틸]피페리딘-1-카르 복실레이트,
5-(아미노카르보닐)피리딘-3-일 4-[2-(3-시아노페닐)에틸]피페리딘-1-카르복실레이트
로 이루어지는 군에서 선택되는 화합물.
[10] [1]에 기재된 화합물을 유효 성분으로 하는 의약 조성물.
[11] [10]에 있어서, FAAH 저해제인 의약 조성물.
[12] [10]에 있어서, 빈뇨ㆍ뇨실금 및/또는 과활동 방광의 치료약인 의약 조성물.
[13] [10]에 있어서, 동통(疼痛)의 치료약인 의약 조성물.
[14] FAAH 저해제, 빈뇨ㆍ뇨실금 및/또는 과활동 방광 치료약의 제조를 위한, [1]에 기재된 화합물의 용도.
[15] FAAH 저해제, 동통 치료약의 제조를 위한, [1]에 기재된 화합물의 용도.
[16] [1]에 기재된 화합물의 치료 유효량을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 빈뇨ㆍ뇨실금 및/또는 과활동 방광의 치료 방법.
[17] [1]에 기재된 화합물의 치료 유효량을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 동통의 치료 방법.
[18] (1) (a) 서열 2, 서열 4, 서열 6 또는 서열 8로 표시되는 아미노산 서열, (b) 서열 2, 서열 4, 서열 6 또는 서열 8로 표시되는 아미노산 서열에 있어서 1 내지 10개의 아미노산이 결실, 치환 및/또는 삽입된 아미노산 서열, (c) 서열 2, 서열 4, 서열 6 또는 서열 8로 표시되는 아미노산 서열과의 상동성이 70 ％ 이상인 아미노산 서열, 또는 (d) 서열 1, 서열 3, 서열 5 또는 서열 7로 표시되는 폴리뉴클레오티드 또는 그의 상보 서열에 엄격한 조건에서 혼성화하는 폴리뉴클레오티드로 코딩되는 아미노산 서열에 있어서의 전부 또는 적어도 막 관통 영역을 포함하는 아미노 말단 영역을 제외한 아미노산 서열을 포함하고, 또한 기질을 가수 분해할 수 있는 폴리펩티드에 시험 물질을 접촉시키는 공정, (2) 상기 폴리펩티드의 활성 변화를 분석하는 공정, 및 (3) 상기 폴리펩티드의 활성을 저해하는 물질을 선택하는 공정을 포함하는, 빈뇨ㆍ뇨실금 치료제, 과활동 방광 치료제 및/또는 동통 치료제를 스크리닝하는 방법,
(여기서 FAAH 또는 기능적 FAAH에 접촉시키는 「기질」이란, FAAH 또는 기능적 FAAH에 의해 가수 분해되는 엔도칸나비노이드이면, 어느 것도 이용하는 것이 가능하다. 구체적으로는 아난다미드, 팔미토일에탄올아미드, 2-아라퀴돈산글리세롤, 올레아미드 등을 기질로서 사용할 수 있다. 또한, 이들 기질을 3H나 14C 등으로 표지한 것, 또는 표지한 것과 미표지한 것의 혼합물을 사용할 수 있다. 이하 동일),
[19] (1) (a) 서열 2, 서열 4, 서열 6 또는 서열 8로 표시되는 아미노산 서열, (b) 서열 2, 서열 4, 서열 6 또는 서열 8로 표시되는 아미노산 서열에 있어서 1 내지 10개의 아미노산이 결실, 치환 및/또는 삽입된 아미노산 서열, (c) 서열 2, 서열 4, 서열 6 또는 서열 8로 표시되는 아미노산 서열과의 상동성이 70 ％ 이상인 아미노산 서열, 또는 (d) 서열 1, 서열 3, 서열 5 또는 서열 7로 표시되는 폴리뉴 클레오티드 또는 그의 상보 서열에 엄격한 조건에서 혼성화하는 폴리뉴클레오티드로 코딩되는 아미노산 서열에 있어서의 전부 또는 적어도 막 관통 영역을 포함하는 아미노 말단 영역을 제외한 아미노산 서열을 포함하고, 또한 기질을 가수 분해할 수 있는 폴리펩티드와, 시험 물질을, 상기 폴리펩티드의 기질 존재하에서 접촉시키는 공정, (2) 상기 기질로부터 가수 분해산물로의 변환량을 측정하는 공정, 및 (3) 상기 기질의 가수 분해를 저해하는 물질을 선택하는 공정을 포함하는, 빈뇨ㆍ뇨실금 치료제, 과활동 방광 치료제 및/또는 동통 치료제를 스크리닝하는 방법,
[20] (1) (a) 서열 2, 서열 4, 서열 6 또는 서열 8로 표시되는 아미노산 서열, (b) 서열 2, 서열 4, 서열 6 또는 서열 8로 표시되는 아미노산 서열에 있어서 1 내지 10개의 아미노산이 결실, 치환 및/또는 삽입된 아미노산 서열, (c) 서열 2, 서열 4, 서열 6 또는 서열 8로 표시되는 아미노산 서열과의 상동성이 70 ％ 이상인 아미노산 서열, 또는 (d) 서열 1, 서열 3, 서열 5 또는 서열 7로 표시되는 폴리뉴클레오티드 또는 그의 상보 서열에 엄격한 조건에서 혼성화하는 폴리뉴클레오티드로 코딩되는 아미노산 서열에 있어서의 전부 또는 적어도 막 관통 영역을 포함하는 아미노 말단 영역을 제외한 아미노산 서열을 포함하고, 또한 기질을 가수 분해할 수 있는 폴리펩티드를 발현하는 세포 또는 조직, 또는 상기 세포 또는 상기 조직의 용해액 또는 파쇄액과, 시험 물질을, 상기 폴리펩티드의 기질 존재하에서 접촉시키는 공정, (2) 상기 기질로부터 가수 분해산물에의 변환량을 측정하는 공정, 및 (3) 상기 기질의 가수 분해를 저해하는 물질을 선택하는 공정을 포함하는, 빈뇨ㆍ뇨실금 치료제, 과활동 방광 치료제 및/또는 동통 치료제를 스크리닝하는 방법,
[21] (1) 지방산 아미드 가수 분해 효소에 시험 물질을 접촉시키는 공정, (2) 상기 효소의 활성 변화를 분석하는 공정, 및 (3) 상기 효소의 활성을 저해하는 물질을 선택하는 공정을 포함하는, 빈뇨ㆍ뇨실금 치료제, 과활동 방광 치료제 및/또는 동통 치료제를 스크리닝하는 방법
에 관한 것이다.
<발명의 효과>
본 발명 화합물은 실시예 438 내지 실시예 442의 약리 시험에 있어서, 예를 들면 표 64에 나타내어진 대표적인 화합물에서 우수한 FAAH 저해 작용을 갖는 것, 실시예 441에 나타내어진 대표적인 화합물은 빈뇨ㆍ뇨실금 치료제, 과활동 방광 치료약로서 유용한 것, 및 실시예 442에 나타내어진 대표적인 화합물은 동통 치료약으로서 유용한 것이 확인되었다. 또한, 본 발명 화합물은 수용액 중에서의 안정성이 높고, 의약품으로서 우수한 성질을 가지고 있다.
특허 문헌 2에 기재된 발명은 진통제, 항불안약, 항간질약, 항우울제, 제토제, 순환기 질환 치료제 또는 녹내장 치료제에 유용한 것에 비해, 본 발명은 특허 문헌 2와는 다른 빈뇨ㆍ뇨실금 치료제 및/또는 과활동 방광 치료제에 유용한 것을 발견하였다. 또한, 본 발명 화합물은 우수한 FAAH 저해 작용을 갖기 때문에, (1) 정신 신경 질환(불안ㆍ우울ㆍ전간 등), (2) 뇌 상해, 신경 변성 질환(두부 외상ㆍ뇌허혈ㆍ인지증(치매) 등), (3) 면역, 염증성 질환, (4) 구토, (5) 섭식 장해, (6) 과민 성장 증후군ㆍ궤양성 대장염, (7) 고혈압, (8) 녹내장 또는 (9) 수면 장해의 치료약으로서 유용하다. 또한, 대마 양태의 부작용이나 상용성에 대한 우려가 없 거나 경감된 화합물이다.
또한, 본 발명의 스크리닝 방법에 의해, 대마 양태의 부작용이나 상용성에 대한 우려가 없거나 경감된 빈뇨ㆍ뇨실금 치료제, 과활동 방광 치료제 및/또는 동통 치료제를 FAAH 활성의 제어에 기초하여 스크리닝할 수 있다. 상기 스크리닝 방법에 의해 얻어진 물질이나 FAAH의 활성을 저해하는 물질은 유용한 빈뇨ㆍ뇨실금 치료용, 과활동 방광 치료용 및/또는 동통 치료용 의약 조성물로 할 수 있다.
<발명을 실시하기 위한 최선의 형태>
이하에 본 발명을 상세하게 설명한다.
이하, 본 발명 화합물에 관하여 상세하게 설명한다.
[정의 등]
본 명세서의 구조 화학식에 대한 정의에 있어서 특별히 언급하지 않는 한, 「저급」이라는 용어는 탄소수가 1 내지 6개인 직쇄 또는 분지상 탄소쇄를 의미한다.
「저급 알킬」이란, 예를 들면 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, 펜틸, 이소펜틸, 네오펜틸, tert-펜틸, 헥실, 이소헥실 등이고, 바람직하게는 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, tert-부틸이다.
「저급 알케닐」이란, 하나 이상의 이중 결합을 갖는 지방족 탄화수소기를 의미하고, 예를 들면 비닐, 프로페닐, 알릴, 이소프로페닐, 1,3-부타디에닐, 헥세닐 등이다.
「시클로알킬」이란, 탄소수가 3 내지 14개인 1 내지 3환계 지방족 포화 탄 화수소환기를 의미하고, 예를 들면 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로헵틸, 시클로옥틸, 비시클로헵틸, 비시클로옥틸, 트리시클로도데카닐, 비시클로[2.2.1]헵틸, 비시클로[2.2.2]옥틸 등을 들 수 있고, 바람직하게는 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로헵틸, 시클로옥틸이다.
「아릴」이란, 탄소수가 6 내지 14개인 1 내지 3환계 방향족 탄화수소환기를 의미하고, 또한 페닐에 시클로알킬이 축합될 수도 있다. 예를 들면, 페닐, 인데닐, 나프틸, 안트릴, 페난트릴, 인다닐, 테트라히드로나프틸 등을 들 수 있고, 바람직하게는 페닐, 나프틸이다.
「헤테로환」이란, N, S 및 O에서 선택되는 헤테로 원자를 1 내지 4개 함유하는 4 내지 16원의, 단환식, 2환식 또는 3환식의 포화 또는 불포화환이다. 이러한 헤테로환기는 가교 또는 스피로를 가질 수도 있다. 불포화환에는 방향족의 환(헤테로아릴)이나 비방향족의 환을 포함한다. 단환식으로서는, 아제티디닐, 옥세타닐, 피롤리디닐, 1,3-디옥솔라닐, 피라졸리디닐, 피페라지닐, 피페리딜, 피페라지닐, 모르폴리닐, 티오모르폴리닐, 푸릴, 티에닐, 피롤릴, 이미다졸릴, 피라졸릴, 티아졸릴, 옥사졸릴, 피리딜, 피라지닐, 피리미디닐, 트리아졸릴, 티아디아졸릴, 피리다지닐, 옥사디아졸릴, 테트라졸릴을, 이환식으로서는 인돌릴, 이소인돌릴, 3,4-메틸렌디옥시페닐, 3,4-에틸렌디옥시페닐, 벤조푸라닐, 벤조티에닐, 벤조티아디아졸릴, 벤조티아졸릴, 벤조이미다졸릴, 인돌릴, 이소인돌릴, 퀴놀릴, 이소퀴놀릴, 1,2,3,4-테트라히드로퀴놀릴, 1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀릴, 데카히드로이소퀴놀릴, 퀴녹살리닐 등을, 3환식으로서는 카르바졸릴, 아크리디닐, 페노티아지닐 등을 들 수 있다. 가교 헤테로환기로서는, 퀴누클리디닐, 2,5-디아자비시클로[2.2.1]헵틸, 8-아자비시클로[3.2.1]옥틸, 7-아자비시클로[2.2.1]헵틸 등을 들 수 있다. 스피로식 헤테로환기로서는, 1,4-디옥사-8-아자스피로[4.5]데카닐 등을 들 수 있다.
「질소 함유 헤테로아릴」이란, 상기 헤테로환기 중 질소 원자를 1 내지 4개 갖는, 4원 내지 10원 방향족의 1 내지 2환계 질소 함유 헤테로아릴을 의미하고, 예를 들면 피롤릴, 이미다졸릴, 티아졸릴, 피라졸릴, 트리아졸릴, 테트라졸릴, 피리딜, 피리다지닐, 피리미디닐, 피라지닐, 인돌릴, 이소인돌릴, 벤즈이미다졸릴, 벤조피라졸릴, 퀴놀릴, 이소퀴놀릴, 퀴녹살리닐 등을 들 수 있고, 바람직하게는 이미다졸릴, 티아졸릴, 피리딜, 벤즈이미다졸릴, 퀴놀릴이다.
「질소 함유 포화 헤테로환기」란, 상기 헤테로환기 중 질소 원자를 1 내지 3개 갖는, 3원 내지 10원의 1 또는 2환계 질소 함유 헤테로 시클로알킬을 의미하고, 예를 들면 아지리디닐, 아제티디닐, 피롤리디닐, 피페리딜, 피페라지닐, 모르폴리닐, 헥사히드로아제피닐, 1,4-디아제피닐, 1,4-옥사제피닐, 퀴누클리디닐, 2,5-디아자비시클로[2.2.1]헵틸, 아자비시클로옥틸(예를 들면 아자비시클로[3.2.1]옥틸), 디아자비시클로옥틸, 아자비시클로노닐, 아자비시클로데카닐, 1,4-디옥사-8-아자스피로[4.5]데카닐 등을 들 수 있고, 바람직하게는 피롤리디닐, 피페리딜, 피페라지닐, 모르폴리닐, 헥사히드로아제피닐, 1,4-디아제피닐, 1,4-옥사제피닐, 퀴누클리디닐, 2,5-디아자비시클로[2.2.1]헵틸, 아자비시클로[3.2.1]옥틸이다.
「질소 함유 헤테로환」이란, 상기 질소 함유 헤테로아릴, 상기 질소 함유 포화 헤테로환기, 또는 질소 함유 헤테로아릴과 질소 함유 헤테로 시클로알킬이 축합된 기를 의미하고, 바람직하게는 피롤리디닐, 피페리딜, 피페라지닐, 모르폴리닐, 헥사히드로아제피닐, 아자비시클로[3.2.1]옥틸, 1,4-디옥사-8-아자스피로[4.5]데카닐, 이미다졸릴, 피리딜, 퀴놀릴이다.
「비방향족 질소 함유 헤테로환」이란, 상기 질소 함유 헤테로환기 중 질소 함유 헤테로아릴을 제외한 질소 함유 포화 헤테로환기 및 불포화 질소 함유 헤테로환기를 의미한다. 바람직하게는 5 내지 7원의 비방향족 질소 함유 헤테로환기가 바람직하다.
「저급 알킬렌」, 「저급 알케닐렌」, 「시클로알킬렌」, 「아릴렌」 및 「질소 함유 헤테로아릴렌」이란, 상기 저급 알킬, 저급 알케닐, 시클로알킬, 아릴 및 질소 함유 헤테로아릴의 임의의 수소 원자를 1개 제거한 2가기이다. 「에스테르화된 카르복실」이란, 저급 알킬-O-CO-, 아릴-저급 알킬-O-CO- 또는 H2N-CO-아릴-저급 알킬-O-CO-이다.
「할로」란, 할로겐기를 의미하고, 구체적으로는 플루오로, 클로로, 브로모, 요오드를 들 수 있고, 바람직하게는 플루오로, 클로로이다.
또한, 「치환될 수도 있는」이란, 「치환되지 않은」 또는 「동일하거나 또는 다른 1 내지 5개의 치환기로 치환된」 것을 의미한다.
본 발명 화합물(I)은 치환기의 종류에 의해서는 광학 이성체(광학 활성체, 디아스테레오머 등) 또는 기하 이성체가 존재한다. 따라서, 본 발명 화합물(I)에 는 이들 광학 이성체 또는 기하 이성체의 혼합물이나 단리된 것도 포함된다.
또한, 본 발명 화합물(I)은 산 부가염 또는 염기와의 염과 같은 제약학적으로 허용되는 염을 형성할 수 있다. 예를 들면, 염산, 브롬화수소산, 요오드화수소산, 황산, 질산, 인산 등의 무기산이나, 포름산, 아세트산, 프로피온산, 옥살산, 말론산, 숙신산, 푸말산, 말레산, 락트산, 말산, 시트르산, 타르타르산, 탄산, 피크르산, 메탄술폰산, 에탄술폰산, 글루탐산 등의 유기산과의 산 부가염; 나트륨, 칼륨, 마그네슘, 칼슘, 알루미늄 등의 무기 염기나, 메틸아민, 에틸아민, 모노에탄올아민, 디에탄올아민, 트리에탄올아민, 시클로헥실아민, 리신, 오르니틴 등의 유기 염기와의 염을 들 수 있다. 또한, 본 발명 화합물(I) 또는 그의 제약학적으로 허용되는 그의 염은 수화물, 에탄올 등의 용매화물이나 결정 다형을 형성할 수 있다.
또한, 본 발명 화합물(I)에는, 생체내에서 대사되어 본 발명 화합물(I) 또는 그의 제약학적으로 허용되는 염으로 변환되는 화합물, 소위 프로드러그도 전부 포함된다. 본 발명 화합물(I)의 프로드러그를 형성하는 기로서는, [Prog. Med. 5: 2157-2161(1985)]에 기재되어 있는 기나, [히로카와 쇼뗀 1990년간 「의약품의 개발」 제7권 분자 설계 163 내지 198 페이지]에 기재되어 있는 기를 들 수 있다. 구체적으로는 가수 분해, 가용매 분해에 의해, 또는 생리학적 조건하에서 본 발명에 있어서의 1급 아민 또는 2급 아민, HO-, HO-CO- 등으로 변환될 수 있는 기이고, HO-의 프로드러그로서는, 예를 들면 치환될 수도 있는 저급 알킬-CO-O-, 치환될 수도 있는 아릴-CO-O-, 치환될 수도 있는 헤테로아릴-CO-O-, RO-CO-치환될 수도 있는 저급 알킬렌-CO-O-(R은 H- 또는 저급 알킬을 나타낸다. 이하 동일), RO-CO-치환될 수도 있는 저급 알케닐렌-CO-O-, RO-CO-저급 알킬렌-O-저급 알킬렌-CO-O-, RO-CO-CO-O-, ROS(=O)2-치환될 수도 있는 저급 알케닐렌-CO-O-, 프탈리딜-O-, 5-메틸-1,3-디옥솔렌-2-온-4-일-메틸옥시 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서의 「빈뇨」란, 배뇨 횟수가 정상 범위를 넘어 증가한 상태를 말한다. 또한, 상기 「뇨실금」이란, 사회적, 위생적으로 문제가 되는 불수의적인 뇨 누출 상태를 말한다.
본 명세서에 있어서의 「과활동 방광」이란, 빈뇨 및 뇨의 절박감이라는 자각 증상에 의해 진단되는 증후군을 말한다([「뉴로우롤로지ㆍ앤드ㆍ우로다이나믹스(Neurourology and Urodynamics)」, (미국), 2002년, 제21권, p.167-178]). 그의 발증 원인으로서 신경 장해(예를 들면 신경 인성 방광, 뇌경색에서 기인하는 것), 하부 뇨로 폐색(예를 들면 전립선 비대), 노화 등이 있고, 이들에 공통되는 발증 메카니즘으로서 캅사이신 감수성 구심성 신경의 활동 항진이 생각되었다.
빈뇨ㆍ뇨실금, 뇨의 절박감 등의 증상을 개선함으로써 과활동 방광을 치료할 수 있다. 그것은, 예를 들면 항콜린약인 염산 옥시부티닌(일본 표준 상품 분류 번호 87259; 아벤티스 파마 가부시끼가이샤)이 과활동 방광의 환자에게 1일 3회, 일회 2 내지 3 mg 투여하여 빈뇨, 뇨실금, 뇨의 절박감 등의 증상을 개선함으로써 과활동 방광을 치료할 수 있는 것으로부터도 분명하다.
빈뇨ㆍ뇨실금 치료 효과 및/또는 과활동 방광 치료 효과가 있는 지에 대한 확인은 당업자에 공지된 방법 또는 그것을 개량한 방법을 이용함으로써 실시할 수 있다. 예를 들면, 래트, 몰모트, 개 등에 시클로포스파미드(CPA)를 50 내지 200 mg 투여함으로써 유발되는 병태 모델이 상기 분야에 있어서는 매우 자주 이용된다([Ozawa 등, The Journal of Uro1ogy, 제162권, 제2211-2216 페이지, 1999년]; [Boucher 등, The Journal of Urology, 제164권, 제203-208 페이지, 2000년]). 이 모델은 출혈성 방광염에 따른 병태 모델이지만, 이러한 빈뇨 발증 기서에 캅사이신 감수성 구심성 신경이 관여하기 때문에, 본 모델은 신경 인성 방광을 포함하는 각종 과활동 방광에 의거한 병태 모델이라고 생각되었다([Carlo Alberto Maggi 등, Journal of the Autonomic Nervous System, 제38권, 제201-208 페이지, 1992년]). 빈뇨 상태는 유효 방광 용량의 감소에 의해 확인할 수 있다. 이 병태 모델 동물에 대하여, 유효 용량의 의약 조성물을 경구, 복강내 또는 정맥내 투여로 단회 또는 반복 투여함으로써 유효 방광 용량을 증가시켜, 빈뇨ㆍ뇨실금 치료 효과 및/또는 과활동 방광 치료 효과를 확인할 수 있다.
또한, 본 명세서에 있어서의 「동통」이란, 신경 인성 동통, 침해 수용성 동통, 염증성 동통 등의 총칭이고, 이 중 「신경 인성 동통 」이란 말초 또는 중추 신경 기능 이상에 의한 동통을 의미하며, 당뇨병성 신경 장해의 동통, 암성 동통, 삼차 신경통, 환지통(幻肢痛), 대상포진 후 동통 또는 시상통(視床痛) 등을 들 수 있다. 신경 인성 동통의 임상에 있어서의 주요한 증상은 조이는 듯한 아픔, 타들어가는 듯한 아픔, 통각 과민 및 이통증(알로디니아) 등이다.
일반적인 진통제인 비스테로이드 항염증약 및 모르핀 등의 마약성 진통약은, 신경 인성 동통에 대하여 효과가 약한 것이 알려져 있다. 의료 현장에서는 가바펜틴 등의 항전간약이나 멕실레틴 등의 항부정맥약이 동통 완화에 이용되지만, 그의 진통 효과도 충분하지는 않다.
신경 인성 동통 치료 효과가 있는 것에 대한 확인은 당업자에 공지된 방법, 또는 그것을 개량한 방법을 이용함으로써 실시할 수 있다. 예를 들면, Kim and Chung의 방법([Pain, 제50권, 제355-363 페이지, 1992년])을 일부 개변하여 제조한 L5/L6 척수 신경 결찰(結紮) 래트에 있어서, 촉자극에 대한 현저한 반응 임계값 저하(알로디니아)의 화합물에 의한 개선 작용을 평가함으로써 신경 인성 동통 치료 효과를 확인할 수 있다.
또한, 본 발명 화합물에는 빈뇨ㆍ뇨실금, 과활동 방광에 효과적인 화합물, 동통, 특히 신경 인성 동통에 효과적인 화합물, 및 그의 양자(兩者)에 효과적인 화합물이 포함된다.
[제조법]
본 발명 화합물 및 그의 제약학적으로 허용되는 염은 그의 기본 골격 또는 치환기의 종류에 기초하는 특징을 이용하여, 여러 가지 공지된 합성법을 적용하여 제조할 수 있다.
그 때, 관능기의 종류에 따라서는, 상기 관능기를 원료 내지 중간체의 단계에서 적당한 보호기(용이하게 상기 관능기로 전환 가능한 기)로 치환해 둔 것이 제조 기술상 효과적인 경우가 있다. 이러한 관능기로서는, 예를 들면 아미노기, 수산기 또는 카르복실기 등이고, 이들 보호기로서는, 예를 들면 그린(Greene) 및 웃 츠(Wuts) 저서 「Protective Groups in Organics Synthesis(제2판)」에 기재된 보호기를 들 수 있고, 이들을 반응 조건에 따라서 적절하게 선택하여 이용할 수 있다.
이러한 방법에서는, 상기 보호기를 도입하여 반응을 행한 후, 필요에 따라서 보호기를 제거함으로써 원하는 화합물을 얻을 수 있다.
이하, 본 발명 화합물 또는 그 중간체의 대표적인 제조법을 설명한다.
(이하의 문장 중의 기호는 다음과 같다.
DMF: N,N-디메틸포름아미드; DMSO: 디메틸술폭시드; THF: 테트라히드로푸란; TFA: 트리플루오로아세트산; Tol: 톨루엔; EtOAc: 아세트산에틸; DCE: 1,2-디클로로에탄; TEA: 트리에틸아민)
이하에 본 발명 화합물의 대표적인 제조법에 대하여 설명하지만, 이들 제조법으로 한정되는 것은 아니다.
또한, 본 발명 화합물 중에 동일한 치환기가 상기 제조법의 반응식 중 이외의 위치에 존재하는 경우에는, 치환기 수식 반응에 의해 용이하게 본 발명에 포함되는 화합물을 제조할 수 있다.
제1 제조법(카르바메이트화 반응)
Figure 112009033955637-PAT00006
(식 중, X는 본 반응에 있어서 유리한 이탈기를 의미한다. 이하 동일)
본 반응은 화학식(VI)으로 표시되는 케톤 유도체와 그의 반응 대응량의 화학식(VII)로 표시되는 히드록시피리딘 유도체를 반응에 불활성인 용매 중, 냉각하 또는 실온하 내지 가온하에 교반하여 에스테르화함으로써 행해진다. 이탈기 X로서는, 예를 들면 할로겐 원자, 저급 알콕시기, 페녹시기, 이미다졸릴기 등을 포함한다. 불활성 용매로서는, 예를 들면 DMF, 디메틸아세트아미드, THF, 디옥산, 디메톡시에탄, 디에톡시에탄, 벤젠, Tol 또는 크실렌 등이나 이들의 혼합 용매를 들 수 있다. 본 반응을 촉진시키기 위해서 염기(예를 들면 나트륨, 수소화나트륨, 나트륨메톡시드, 나트륨에톡시드 등)을 첨가하는 것이 바람직하다.
제2 제조법(카르바메이트화 반응)
Figure 112009033955637-PAT00007
본 반응은 화학식(VIII)로 표시되는 질소 함유 헤테로환 화합물과 그의 반응 대응량의 화학식(IX)로 표시되는 피리딘 유도체를 상기 반응에 불활성인 용매 중, 냉각하 또는 실온 내지 가온하에 교반함으로써 행해진다. 본 반응을 촉진시키기 위해서 염기(예를 들면 나트륨, 수소화나트륨, 나트륨메톡시드, 나트륨에톡시드, TEA, 피리딘 등)을 첨가하는 것이 바람직하다.
제3 제조법(가수 분해 반응)
카르복실기를 갖는 본 발명 화합물(I-3)은 에스테르화된 카르복시기를 갖는 화합물을 가수 분해 반응에 의해, 예를 들면 그린(Greene) 및 웃츠(Wuts) 저서「 Protective Groups in Organic Synthesis(제2판)」에 기재된 탈보호 반응에 준하여 행할 수 있다.
Figure 112009033955637-PAT00008
(식 중, 기 ROCO-는 에스테르화된 카르복실기를 의미한다. 이하 동일)
제4 제조법(아미드화 반응)
Figure 112009033955637-PAT00009
화합물 I-3 또는 R1이 카르복실산인 경우에는 아민과, R1이 아민인 경우에는 카르복실산과 다양한 아미드 화합물을 제조할 수 있다. 질소 함유 헤테로환이 피페리딘인 경우, 카르복실산 또는 술폰산 화합물 또는 이들의 반응성 유도체를 사용함으로써 다양한 아미드 화합물을 제조할 수 있다. 반응은 축합제(예를 들면 디시클로헥실카르보디이미드(DCC), 디이소프로필카르보디이미드(DIPC), 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드(WSC), 1,1'-카르보닐비스-1H-이미다졸(CDI) 등), 경우에 따라서는 또한 첨가제(예를 들면 N-히드록시숙신이미드(HONSu), 1-히드록시벤조트리아졸(HOBt), 디메틸아미노피리딘(DMAP) 등)의 존재하에 행할 수 있다. 카르복실산 또는 술폰산 화합물의 반응성 유도체로서는, 산 할라이드, 산 무수물, 활성 에스테르 등을 사용할 수 있다. 반응은, 예를 들면 일본 화학회편 「실험 화학 강좌(제4판)」 22권(1992년) (마루젠) 등에 기재된 방법에 의해 행할 수도 있다.
제5 제조법(커플링 반응)
Figure 112009033955637-PAT00010
(식 중의 기호는 이하의 의미를 나타낸다. X는 할로겐 또는 -O-SO2CF3을 의미하고, Y는 -B(OH)2, 디알킬붕소, 디알콕시붕소 또는 트리알킬주석을 의미한다. 또한, X가 -B(OH2), 디알킬붕소, 디알콕시붕소 또는 트리알킬주석을 의미하고, Y가 할로겐 또는 -O-SO2CF3을 의미할 수도 있다.)
화합물(I-6)과 화합물(I-7)의 조합으로 이루어지는 2개의 방향환을, 바람직하게는 전이 금속 촉매 및 적당한 첨가제의 존재하에 반응시켜 비아릴 화합물(I-8)을 합성하는 반응이다. 대표적인 방법으로서는, 마루젠 1991년간 「실험 과학 강좌」 제25권 유기 합성 VII 353 내지 366항, 396 내지 427항에 기재되어 있는 방법을 들 수 있다. 전이 금속 촉매로서는, 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐 등 다양한 팔라듐 착체나, 디브로모비스(트리페닐포스핀)니켈 등의 다양한 니켈 착체 등을 바람직하게 사용할 수 있다. 첨가제로서는 트리페닐포스핀, 탄산나트륨, 아연 등을 바람직하게 사용할 수 있지만, 적용하는 방법에 따라서 적절하게 선택하는 것이 바람직하다. 통상, 상기 반응은 용매 중에 실온 내지 가열하에 행해진다. 또한, 여기에 기재된 반응 이외에도, 비아릴 구조를 형성하는 반응, 예를 들면 적당 한 전이 금속 촉매 존재하에서의 할로겐화아릴 화합물과 아릴 그리나드 시약과의 반응 등을 바람직하게 이용하는 것이 가능하다.
(원료 화합물의 제조법)
본 발명 화합물을 제조하기 위한 원료 화합물은 기지의 화합물을 목적에 따라서, 상기 제조법에 기재된 반응 또는 당업자에게 자명한 반응(J. March 저서, ADVANCED ORGANIC CHEMISTRY(John WILEY & SONS(1992))(예를 들면 아실화, 알킬화, 우레아화, 산화, 환원(바람직하게는 COMPREHENSIVE ORGANIC SYNTHESIS 8 REDUCTION(Pergamon Press) (1991)), 할로겐화 반응 등)을 수행함으로써 제조할 수 있다.
제조 방법(i)
광연 반응
원료 화합물(X)은 화학식(XI) 및 (XII)로 표시되는 알코올을 광연 반응시킴으로써 합성할 수 있다. 본 반응은 화합물(XI)과 (XII)를 등량부터 과잉량의 트리페닐포스핀 및 아조디카르복실산디에틸 존재하에, 제1 제조법에 기재된 불활성인 용매 중에서 냉각하 내지 가열하에 교반하면서 행해진다.
Figure 112009033955637-PAT00011
(식 중의 기호는 이하와 같다.
U: 아미노기의 보호기,
ALK3: HO로 치환될 수도 있는 ALK1, 이하 동일)
제조 방법(ii)
치환 반응
본 반응은 알킬화 반응이다. 1급 아민, 2급 아민, 알코올, 티올, 1급 아미드 및 2급 아미드 등과 그의 반응 대응량의 이탈기를 갖는 화합물을, 반응에 불활성인 용매 중에서 등량 또는 한쪽을 과잉량 이용하여 냉각하 내지 가열하에 교반하면서 행해진다. 염기(예를 들면 탄산칼륨, 탄산나트륨 및 탄산세슘 등의 무기 염기, 또는 TEA 및 디이소프로필에틸아민 등의 유기 염기, 칼륨 tert-부톡시드 및 나트륨 tert-부톡시드 등의 금속 알콕시드, 또는 수소화나트륨 및 수소화리튬 등), 첨가제(요오드화테트라-n-부틸암모늄, 요오드화칼륨 또는 요오드화나트륨 등)의 존재하에 반응시키는 것이, 반응을 원활하게 진행시키는 데에 있어서 유리한 경우가 있다. 상술한 반응에 불활성인 용매로서는, 예를 들면 디클로로메탄, DCE, 클로로포름, 벤젠, Tol, 크실렌, 에테르, THF, 디옥산, EtOAc, 에탄올, 메탄올, 2-프로판올, 아세토니트릴, DMF, N,N-디메틸아세트아미드, N-메틸피롤리돈, 디메틸이미다졸리디논, DMSO, 아세톤, 메틸에틸케톤 또는 물 등이나 이들의 균일계 및 불균일계 혼합 용매를 들 수 있지만, 다양한 반응 조건에 따라서 적절하게 선택된다.
Figure 112009033955637-PAT00012
[상기 화학식 중의 기호는 이하와 같다.
Q: O, S 또는 NH
Z: 이탈기(예를 들면 Cl, Br, I 또는 OMs 등)]
제조 방법(iii)
본 제조법은 화학식(XVI)으로 표시되는 알데히드 또는 케톤 및 화학식(XVII)로 표시되는 Wittig 시약 또는 Horner-Emmons 시약을 반응시킴으로써 화합물(XVIII)을 제조하는 방법이다.
본 반응은 등량부터 과잉량의 염기(예를 들면 TEA 및 디이소프로필에틸아민 등의 유기 염기, 또는 탄산칼륨, 탄산나트륨 및 탄산세슘 등의 무기 염기) 존재하에, 화합물(XVI) 및 화합물(XVII)을 상기 불활성인 용매 중에서 등량 또는 어느 하나를 과잉량 이용하여 냉각하 내지 가열하에 교반하면서 행해진다. 첨가제(요오드화테트라-n-부틸암모늄 또는 요오드화칼륨 등)의 존재하에 반응시키는 것이, 반응을 원활하게 진행시키는 데에 있어서 유리한 경우가 있다.
Figure 112009033955637-PAT00013
Z1: Wittig 시약 또는 Horner-Emmons 시약에 이용되는 기(포스포늄염 또는 아인산디에스테르 등
n: 0 또는 1)
[1] 본 발명의 스크리닝 방법
지방산 아미드 가수 분해 효소(fatty acid amide hydrolase; 이하 FAAH라 함)에는, 아난다미드, 팔미토일에탄올아미드, 올레아미드 및/또는 2-아라퀴돈산글리세롤을 가수 분해하는 활성을 갖는 효소가 포함되고, 동일 분자종으로서 동정되는 것인 한, 어떤 종류에서 유래한 것이라도 좋고, 예를 들면 인간(GenBank 등록(accession) 번호 NM_001441), 마우스(GenBank 등록 번호 NM_010173), 래트(GenBank 등록 번호 NM_024132), 돼지(GenBank 등록 번호 AB027132), 토끼, 양, 닭, 개, 고양이, 햄스터, 다람쥐, 곰, 사슴, 원숭이 등 포유 동물 유래의 것이 포함된다. 또한, 천연 폴리펩티드로 한정되지 않고, 인공적으로 제조한 변이체도 포함된다.
(a) 서열 2, 서열 4, 서열 6 또는 서열 8로 표시되는 아미노산 서열에 있어서의 전부 또는 적어도 막 관통 영역을 포함하는 아미노 말단 영역을 제외한 아미노산 서열을 포함하고, 또한 아난다미드, 팔미토일에탄올아미드, 올레아미드 및/또는 2-아라퀴돈산글리세롤을 가수 분해할 수 있는 폴리펩티드;
(b) 서열 2, 서열 4, 서열 6 또는 서열 8로 표시되는 아미노산 서열에 있어서, 1 내지 10개, 바람직하게는 1 내지 7개, 더욱 바람직하게는 1 내지 5개의 아미노산이 결실, 치환 및/또는 삽입된 아미노산 서열에 있어서의 전부 또는 적어도 막 관통 영역을 포함하는 아미노 말단 영역을 제외한 아미노산 서열을 포함하고, 또한 아난다미드, 팔미토일에탄올아미드, 올레아미드 및/또는 2-아라퀴돈산글리세롤을 가수 분해할 수 있는 폴리펩티드;
(c) 서열 2, 서열 4, 서열 6 또는 서열 8로 표시되는 아미노산 서열과의 상동성이 70 ％ 이상, 바람직하게는 80 ％ 이상, 더욱 바람직하게는 90 ％ 이상, 가 장 바람직하게는 95 ％ 이상의 상동성을 갖는 아미노산 서열에 있어서의 전부 또는 막 관통 영역을 포함하는 아미노 말단 영역을 제외한 아미노산 서열을 포함하고, 또한 아난다미드, 팔미토일에탄올아미드, 올레아미드 및/또는 2-아라퀴돈산글리세롤을 가수 분해할 수 있는 폴리펩티드;
(d) 서열 1, 서열 3, 서열 5 또는 서열 7로 표시되는 폴리뉴클레오티드 또는 그의 상보 서열에, 엄격한 조건에서 혼성화하는 폴리뉴클레오티드로 코딩되는 아미노산 서열에 있어서의 전부 또는 적어도 막 관통 영역을 포함하는 아미노 말단 영역을 제외한 아미노산 서열을 포함하고, 또한 아난다미드, 팔미토일에탄올아미드, 올레아미드 및/또는 2-아라퀴돈산글리세롤을 가수 분해할 수 있는 폴리펩티드;
에 대하여, (a) 내지 (d)를 총칭하여 이하에서는 「기능적 FAAH」라 한다.
또한, 본 명세서에 있어서의 상기 「막 관통 영역을 포함하는 아미노 말단 영역」이란, 아미노 말단에 있는 세포외 영역과, 세포외 영역과 세포내 영역 사이에 끼워진 세포막에 매립되어 있는 막 관통 영역을 포함하는 아미노 말단 영역을 말한다. 막 관통 영역이 어디에 존재하는 가는 막 단백 구조 예측 프로그램 TMpred, PSORT, SOSUI 등을 이용하여 아미노산 서열로부터 예측할 수 있다. 「막 관통 영역을 포함하는 아미노 말단 영역」은, 구체적으로는 예를 들면 서열 2의 제1번째로부터 제30번째, 서열 6의 제1번째로부터 제29번째로 표시되는 영역이다. 서열 6의 제1번째로부터 제29번째로 표시되는 영역을 제외한 서열 6의 제30번째로부터 579번째의 아미노산으로 표시되는 폴리펩티드도 상기 영역을 제거하지 않은 폴리펩티드와 동등한 효소 활성을 갖는 것이 알려져 있다([Matthew 등, Biochemistry, 제37권, 제15177-15187 페이지, 1998년]).
본 명세서에 있어서의 상기 「상동성」이란, Clustal V program(Higgins와 Sharp, [Gene, 제73권, 제237-244 페이지, 1998년]; Thompson 등, [Nucleic Acid Res., 제22권, 제4673-7680 페이지, 1994년]) 검색에 의해 디폴트로 준비되어 있는 매개변수를 이용하여 얻어진 값 Identities를 의미한다. 상기 매개변수는 이하와 같다.
Pairwise Alignment Parameters로서
K tuple 1
Gap Penalty 3
Window 5
Diagonals Saved 5
본 명세서에 있어서의 상기 「엄격한 조건」에서의 혼성화란, 비특이적인 결합이 발생하지 않는 조건을 의미하고, 구체적으로는 예를 들면 혼성화를 50 ％ 포름아미드, 5×SSC(0.75 M NaCl, 0.075 M 시트르산나트륨, pH 7), 5×덴하르트 용액(0.1 ％ 피콜 400, 0.1 ％ 폴리비닐피롤리돈, 0.1 ％ BSA), 변형 연어 정자 DNA(50 g/ml), 0.1 ％ SDS 및 10 ％ 황산덱스트란으로 이루어지는 용액 중에서, 37 내지 42 ℃의 온도 조건하에 약 12 내지 18 시간 행하고, 세정 용액(0.2×SSC, 0.1 ％ SDS)으로 필요에 따라서 예비 세정을 행한 후, 50 내지 60 ℃의 온도 조건하에서 세정하는 혼성화를 말한다.
본 명세서에 있어서의 상기 「아난다미드, 팔미토일에탄올아미드, 올레아미 드 및/또는 2-아라퀴돈산글리세롤을 가수 분해한다」란, 구체적으로는 실시예 1 내지 4에 기재된 방법에 의해 pH 7 내지 9의 완충액 중에서 4 ℃ 내지 37 ℃에서 30 분간 내지 90 분간의 가수 분해 반응에 의해 아난다미드(N-arachidonoyl ethanolamine)를 아라퀴돈산(arachidonic acid)와 에탄올아민(ethanolamine)으로, 팔미토일에탄올아미드(N-palmitoyl ethanolamine)를 팔미트산(palmitic acid)과 에탄올아민으로, 올레아미드(Cis-9,10-octadecenoamide)를 올레산(oleic acid)과 암모니아로, 2-아라퀴돈산글리세롤(2-arachidonoyl glycerol)을 아라퀴돈산과 글리세롤(glycerol)로 분해하는 반응을 말한다.
본 발명의 스크리닝 방법에는, (1) FAAH 또는 기능적 FAAH에 시험 물질을 접촉시키는 공정, (2) FAAH 또는 기능적 FAAH의 활성 변화를 분석하는 공정, (3) FAAH 또는 기능적 FAAH의 활성을 저해하는 물질을 선택하는 공정에 의해, 빈뇨ㆍ뇨실금 치료제, 과활동 방광 치료제 및/또는 동통 치료제를 스크리닝하는 방법이 포함된다.
(1) FAAH 또는 기능적 FAAH에 시험 물질을 접촉시키는 공정
FAAH 또는 기능적 FAAH에 시험 물질을 접촉시키기 위해서는,
a) FAAH 또는 기능적 FAAH를 발현하는 세포 또는 조직
b) FAAH 또는 기능적 FAAH를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터에 의해 형질 전환된 형질 전환체
c) a) 또는 b)의 용해액 또는 파쇄액
d) c)로부터 정제한 FAAH 또는 기능적 FAAH의 정제물
중 어느 것에 시험 물질을 첨가하여 일정 시간 배양할 수도 있고, 또는
e) 시험 물질을 투여한 실험 동물의 조직 파쇄액 또는 혈액을 이용할 수도 있다.
a) FAAH 또는 기능적 FAAH를 발현하는 세포 또는 조직
FAAH 또는 기능적 FAAH를 발현하는 세포로서는, 구체적으로는 신경 세포, 글리아 세포, 상피 세포, 내피 세포, 림프구, 매크로파지, 혈소판, 마스트 세포, 단구, 수상 세포, 간 세포, 신장 세포, 장 세포, 췌 세포, 자궁 세포, 태반 세포, 방광 세포, 전립선 세포, 각화 세포 및 근 세포를 들 수 있다. 이들 세포는 FAAH 또는 기능적 FAAH를 발현하는 한, 어떤 종류에서 유래한 것이어도 좋고, 예를 들면 인간, 마우스, 래트, 돼지, 토끼, 양, 닭, 개, 고양이, 햄스터, 다람쥐, 곰, 사슴, 원숭이 유래의 것 등 포유 동물 유래의 세포를 사용할 수 있다.
세포에는 수립된 세포주를 이용할 수도 있고, 동물 조직으로부터 박리하거나 또는 단리한 세포를 이용할 수도 있다. 수립된 세포주로서는, 인간 방광 상피암 유래 세포주 5637 세포, 인간 전립선암 유래 세포주 PC-3 세포, 래트 호염기구성 백혈병 세포주 RBL-2H3 세포, 래트 신경 아세포종주 N18TG2 세포, 래트 신경 교종 세포주 C6 세포, 래트 매크로파지 세포주 J774 세포, 래트 부신수질 유래 친크롬성 세포종주 PC-12 세포, 인간 단구형 세포주 U937 세포, 인간 유암 세포주 MCF-7 세포, 인간 유암 세포주 EFM-19 세포, 인간 대장암 유래 세포주 CaCo-2 세포(이상의 세포주는 모두 American Type Culture Collection(ATCC)로부터 입수 가능), 인간 표피 각화 세포주 HaCaT 세포, 및 인간 신경 아세포종주 CHP100 세포를 사용할 수 있다. 바람직하게는 인간 방광 상피암 유래 세포주 5637 세포나 래트 호염기구성 백혈병 세포주 RBL-2H3 세포를 사용할 수 있다.
FAAH 또는 기능적 FAAH를 발현하는 조직으로서는, 구체적으로는 뇌, 방광, 전립선, 신장, 간장, 정소, 근육, 혈관, 췌장, 소화관, 폐, 자궁, 태반, 피부, 림프구, 혈소판, 매크로파지, 단구, 마스트 세포 및 전립선을 들 수 있다. 바람직하게는 뇌, 간장, 단구를 사용할 수 있다. 이들 조직은 FAAH 또는 기능적 FAAH를 발현하는 한, 어떤 종류에서 유래한 것이어도 좋고, 예를 들면 인간, 마우스, 래트, 돼지, 토끼, 양, 닭, 개, 고양이, 햄스터, 다람쥐, 곰, 사슴, 원숭이 유래의 것 등 포유 동물 유래의 조직을 사용할 수 있다.
세포 및 조직에 FAAH 또는 기능적 FAAH가 발현하는가 아닌가를 조사하기 위해서는, 세포 또는 조직의 추출액을 이용하여 검토 대상의 폴리펩티드를 검출할 수 있는 항체를 사용한 웨스턴 블로팅, 또는 검토 대상의 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 특이적으로 검출하는 프라이머를 사용한 PCR(Polymerase Chain Reaction) 등에 의해 확인할 수 있다. 또는, 세포 또는 조직의 용해액 또는 파쇄액을 아난다미드, 팔미토일에탄올아미드, 올레아미드 및/또는 2-아라퀴돈산글리세롤 등의 기질과, pH 7 내지 9의 완충액 중에서 4 ℃ 내지 37 ℃에서 30 분간 내지 90 분간 반응시켜, 이들 기질이 가수 분해되는가 아닌가를 조사함으로써 확인할 수 있다.
b) FAAH 또는 기능적 FAAH를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터에 의해 형질 전환된 형질 전환체
FAAH 또는 기능적 FAAH를 코딩하는 폴리뉴클레오티드는, 기지의 아미노산 서열이나 염기 서열의 정보 등을 바탕으로 설계하여 합성한 프라이머나 프로브를 이용하여, PCR법이나 혼성화에 의한 스크리닝에 의해 cDNA 라이브러리로부터 단리할 수 있다.
단리된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 단편은 적당한 발현 벡터에 조립함으로써, 진핵 생물 및 원핵 생물의 숙주 세포에 형질 이입할 수 있게 되고, 숙주 세포에 있어서 형질 이입된 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩되는 폴리펩티드를 발현시키는 것이 가능하다. 발현 벡터에는, 숙주 세포에 따라서 적절하게 선택한 공지된 발현 벡터를 사용할 수 있을 뿐 아니라, 숙주 세포에 따라서 적절하게 선택한 벡터 플라스미드에 적당한 프로모터 및 형질 발현에 관련되는 서열을 도입한 것을 사용할 수 있다. 또한, 조립한 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩되는 폴리펩티드가 발현될 때에 글루타티온-S-트랜스퍼라제(GST)나 Flag, His 등의 태그가 융합된 상태로 발현하도록 특정 서열을 도입한 발현 벡터를 이용할 수도 있다. 수종류의 폴리뉴클레오티드로 동시에 하나의 세포를 형질 전환하는 경우에는, 수종류의 폴리뉴클레오티드가 하나의 발현 벡터에 포함되도록 구성할 수도 있고, 또는 각각 개개의 발현 벡터에 포함되도록 구성할 수도 있다. 또는, 이러한 구성이 염색체 DNA에 조립된 세포를 취득하여 이것을 이용할 수도 있다.
목적하는 폴리뉴클레오티드를 도입한 발현 벡터는 DEAE-덱스트란법(Luthman 등, Nucleic Acids Res., 제11권, 제1295-1308 페이지, 1983년]), 인산칼슘-DNA 공침전법(Graham 등, [Virology, 제52권, 제456-457 페이지, 1973년]), 시판용 트랜 스펙션 시약인 Lipofectamine 2000(Invitrogen사)나 FuGENE 6(Roche Molecular Biochemicals사)를 이용한 방법 및 전기 펄스 천공법(Neumann 등, [EMBO J., 제1권, 제841-845 페이지, 1982년]) 등에 의해 숙주 세포에 포함시켜 형질 전환시킬 수 있다. 숙주 세포로서 대장균을 이용하는 경우에는, 대장균을 Hanahan의 방법(Hanahan 등, [Mol. Biol, 제166권, 제557-580 페이지, 1983년])에 따라서 CaCl2, MgCl2 또는 RbCl을 공존시켜 컴피턴트 세포로 제조하고, 원하는 폴리뉴클레오티드를 도입한 발현 벡터를 부가함으로써 형질 전환시킬 수 있다.
c) 상기 a), b)의 용해액 또는 파쇄액
세포의 파쇄액은 세포를 완충액으로 수회 세정한 후, 완충액 중에서 마쇄형 균질기 등을 이용하여 균일하게 될 때까지 파쇄함으로써 제조할 수 있다. 조직 파쇄액은 조직 중량의 5 내지 10 배 용량의 빙냉시킨 완충액을 첨가하고, 얼음 중에서 마쇄형 균질기에 의해 균일한 용액이 될 때까지 마쇄하고, 또한 수초간, 초음파 파쇄함으로써 제조할 수 있다. 상기 완충액으로서는, Tris 완충액(50 mM Tris-HCl(pH 8.0), 1 mM EDTA)이나 Hepes 완충액(1 mM EDTA, 100 mM NaCl, 12.5 mM Hepes, pH 8.0) 등을 사용할 수 있다. 예를 들면, 실시예 438 및 실시예 439의 시험법을 들 수 있다. FAAH 또는 기능적 FAAH를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터에 의해 형질 전환된 대장균 용해액은, 대장균을 원심 분리에 의해 회수하고, 용균 완충액(예를 들면 20 mM Tris-HCl(pH 8.0), 500 mM NaCl, 10 ％ Glycerol, 0.2 mM EDTA, 0.5 mM DTT, 10 mM Imidazole, 1 ％ n-Octyl-β-D- glucopyranoside)로써 용해시킴으로써 제조할 수 있다.
d) 상기 c)로부터 정제한 FAAH 또는 기능적 FAAH의 정제물
FAAH 또는 기능적 FAAH의 정제물은, a) FAAH 또는 기능적 FAAH를 발현하는 세포 또는 조직, 또는 b) FAAH 또는 기능적 FAAH를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터에 의해 형질 전환된 형질 전환체의 용해액 또는 파쇄액으로부터 친화성 크로마토그래피, 전기 크로마토그래피, 겔 투과 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피 및 분배 크로마토그래피 등을 이용한 일반적인 방법에 의해 정제할 수 있다.
구체적으로는, FAAH 또는 기능적 FAAH를 발현하는 세포 또는 조직을 수크로오스를 포함하는 용매 중에서 균질화한 후, 원심 분리, 초고속 원심 분리함으로써 미크로솜 분획을 취득하고, Triton-X를 포함하는 용매로 용해시킨 후, 또한 원심 분리시킴으로써 침전물을 제거한 단백질 용해액을 고속 단백 액체 크로마토그래피(FPLC) 시스템(Pharmacia사)로 처리함으로써 정제할 수 있다(Ueda 등, [J. Biol. Chem., 제270권, 제23823-23827 페이지, 1995년]).
또는, His 태그를 융합시킨 FAAH 또는 기능적 FAAH를 발현하도록 형질 전환된 대장균을 용균 완충액으로 용해시키고, 초음파 처리를 행한 후, 원심 분리(예를 들면 10000×g으로 20 분간)하여 얻어진 상청을 용균 완충액으로 미리 평형화시킨 His 태그에 높은 결합력을 갖는 레진과 저온에서 12 시간 이상 혼합하고, 레진을 세정한 후, 레진으로부터 His 태그를 융합시킨 FAAH 또는 기능적 FAAH를 용출시킴으로써 정제할 수 있다.
상기 세포 또는 조직, 상기한 바와 같이 제조한 세포 또는 조직의 용해액 또는 파쇄액, 또는 FAAH 또는 기능적 FAAH의 정제물에 시험 물질을 접촉시키기 위해서는, 이들에 시험 물질을 첨가 또는 비첨가하여 일정 시간 인큐베이팅하는 방법이 있다. 구체적으로는 시험 물질을 그 시험 물질의 용해성에 따라서 적절하게 선택한 증류수, 디메틸술폭시드(DMSO) 등의 용해액을 이용하여 용해시키고, 상기 세포 또는 조직, 이들의 용해액 또는 파쇄액, 또는 FAAH 또는 기능적 FAAH의 정제물에 0.003 nM 내지 10 μM이 되도록 첨가하고, 세포 또는 조직의 경우에는 CO2 인큐베이터내에서 37 ℃에서 30 내지 60 분간, 그 이외의 경우에는 4 ℃ 내지 37 ℃에서 30 내지 90 분간 인큐베이팅함으로써 시험 물질과 접촉시킬 수 있다.
e) 시험 물질을 투여한 실험 동물의 조직 파쇄액 또는 혈액
실험 동물에게 시험 물질을 투여함으로써도, 상기 실험 동물의 조직 또는 혈액에 있는 FAAH 또는 기능적 FAAH에 시험 물질을 접촉시킬 수 있다. 실험 동물로는, 예를 들면 마우스, 래트, 개 등의 포유 동물을 사용할 수 있다. 이들 실험 동물에게 시험 물질을 투여하기 위해서는, 시험 물질을 그 시험 물질의 성질에 따라서 통상 사용되는 담체인 생리 식염수나 디메틸포름아미드 용액, 10 ％ 메틸셀룰로오스 용액 등에 현탁, 용해시키고, 예를 들면 경구 투여, 피하 투여, 복강내 투여, 정맥내 투여할 수 있다. 투여 후 조직을 적출하고, 이들 조직을 상기 c)에 기재된 방법에 의해 파쇄하여 조직 파쇄액을 제조할 수 있다. 구체적으로는, 예를 들면 9 주령의 래트에 시험 물질을 1 내지 3 mg/kg으로 경구 투여하여 30 분 후에 적출한 뇌, 간장, 단구 등의 조직으로부터 조직 파쇄액을 제조할 수 있다. 또는, 13 내지 18개월령의 개에게 시험 물질을 0.3 내지 3 mg/kg으로 정맥내 투여하고, 30 분 후에 적출한 뇌, 간장, 단구 등의 조직으로부터 조직 파쇄액을 제조할 수 있다. 보다 구체적으로는, 예를 들면 실시예 440에 기재된 방법에 의해 조직 파쇄액을 제조할 수 있다. 또한, 혈액은 상기 시험 물질을 투여한 실험 동물의 심장이나 하대 동맥 등으로부터 채취할 수 있다.
(2) FAAH 또는 기능적 FAAH의 활성 변화를 분석하는 공정
FAAH 또는 기능적 FAAH의 활성 변화를 분석하기 위해서는, 시험 물질의 접촉의 유무에 의한 FAAH 또는 기능적 FAAH의 효소 활성 변화를 측정하는 방법이 있다. FAAH 또는 기능적 FAAH의 효소 활성은 FAAH 또는 기능적 FAAH에 기질을 일정 시간 접촉시키고, 그 기질의 분해산물량을 측정함으로써 측정할 수 있다. 또는, 실험 동물의 조직이나 혈액 중에 포함되는 FAAH의 생체내 기질인 엔도칸나비노이드량을 측정함으로써 측정할 수 있다.
시험 물질 의존적인 효소 활성의 변화를 분석하기 위해서는, 시험 물질 존재하에 또는 비존재하에 FAAH 또는 기능적 FAAH와 기질을 일정 시간 접촉시키고, 시험 물질 비존재하에서의 기질의 분해산물량에 대한 시험 물질 존재하에서의 기질의 분해산물량의 비를 구함으로써 분석할 수 있다.
또는, 미리 시험 물질과 접촉시킨 FAAH 또는 기능적 FAAH 및 시험 물질과 접촉시키지 않은 FAAH 또는 기능적 FAAH에 기질을 일정 시간 접촉시키고, 시험 물질과 접촉시키지 않은 FAAH 또는 기능적 FAAH에 의한 기질의 분해산물량에 대한, 미 리 시험 물질과 접촉시킨 FAAH 또는 기능적 FAAH에 의한 기질의 분해산물량의 비를 구함으로써도 시험 물질 의존적인 효소 활성의 변화를 측정할 수 있다.
또한, 실험 동물에게 시험 물질을 투여하기 전후의 조직 또는 혈액 중의 엔도칸나비노이드량을 측정하고, 시험 물질 투여 전의 엔도칸나비노이드량에 대한 시험 물질 투여 후의 엔도칸나비노이드량의 비를 구함으로써, 또는 시험 물질을 투여, 비투여의 실험 동물의 조직 또는 혈액 중의 엔도칸나비노이드량을 측정하여, 시험 물질 비투여의 실험 동물의 조직 또는 혈액 중의 엔도칸나비노이드량에 대한 시험 물질을 투여한 실험 동물의 조직 또는 혈액 중의 엔도칸나비노이드량의 비를 구함으로써도 시험 물질 의존적인 효소 활성의 변화를 측정할 수 있다.
FAAH 또는 기능적 FAAH와 기질은 FAAH 또는 기능적 FAAH의 상태에 따라서 이하의 조건하에서 접촉시킬 수 있다.
상기 (1) a), b)의 세포, 조직에 발현하는 FAAH 또는 기능적 FAAH를 기질과 접촉시키기 위해서는, pH 7 내지 9의 완충액 중의 배양 세포 또는 조직에, 상기 기질을 첨가하여 CO2 인큐베이터내에서 37 ℃ 또는 실온에서 바람직하게는 30 내지 60 분간 반응시키는 방법이 있다. 반응의 정지는 상기 세포 또는 상기 조직을 빙상에 옮겨 급냉시킴으로써, FAAH 저해제를 충분한 농도로 접촉시킴으로써 또는 클로로포름과 메탄올의 1:1(용량비) 용액을 첨가함으로써 행할 수 있다. 이들 세포, 조직을 상기 (1) c)에 기재된 방법에 의해 용해, 파쇄하여 용해액 또는 파쇄액을 제조할 수 있다.
상기 (1) c), e)의 세포, 조직의 용해액 또는 파쇄액 중의 FAAH 또는 기능적 FAAH와 기질을 접촉시키기 위해서는, pH 7 내지 9의 완충액으로, 바람직하게는 단백질 농도를 10 내지 100 μg/ml로 희석시킨 용해액, 파쇄액에 상기 기질을 첨가하여 4 ℃ 내지 37 ℃의 온도 조건하에 반응시키는 방법이 있다. 반응 시간은 첨가한 효소량, 기질량 및 반응 온도 등의 조건에 따라서 적절하게 설정할 수 있다. 예를 들면, 실온에서 반응시키는 경우에는 반응 시간을 30 내지 90 분간으로 행할 수 있다.
상기 (1) d)의 FAAH 또는 기능적 FAAH의 정제물을 기질과 접촉시키기 위해서는, pH 7 내지 9의 완충액을 이용하여 희석시킨 용해액 또는 파쇄액에 상기 기질을 첨가하고, 4 ℃ 내지 37 ℃의 온도 조건하에 반응시키는 방법이 있다. 반응 시간은 첨가한 효소량, 기질량 및 반응 온도 등의 조건에 따라서 적절하게 설정할 수 있다. 예를 들면, 실온에서 반응시키는 경우에는, 반응 시간을 30 내지 90 분간으로 행할 수 있다.
기질의 분해산물량을 측정하기 위해서는, 상기 효소 반응액 중의 미반응의 기질과 분해산물을 분리하여 분해산물량을 측정할 수 있다. 미반응 기질과 분해산물을 분리하기 위해서는, 분해산물인 에탄올아민 등이 수용성인 것을 이용하고, 예를 들면 효소 반응액에 2배량의 클로로포름과 메탄올의 1:1(용량비) 용액을 첨가하여 교반한 후, 원심 분리함으로써, 상층인 물/에탄올층에 포함되는 분해산물과 하층인 클로로포름층에 포함되는 미반응 기질과 분리할 수 있다. 또는 흡수성이 없는 액체 섬광 칵테일제와 혼합함으로써, 지용성의 미반응 방사성 기질을 칵테일제 에 포함시켜 분해산물과 미반응 기질을 분리할 수 있다. 또는, 박층 크로마토그래피이나 고속 액체 크로마토그래피 등에 의해 미반응 기질과 분해산물을 분리할 수 있다.
기질에 3H나 14C 등으로 표지한 것, 또는 표지한 것과 미표지한 것의 혼합물을 이용하는 경우에는, 분해산물량 또는 미반응 기질량을 액체 섬광 계수기를 이용하여 측정하거나, 또는 이미징 플레이트에 X선 잠상으로서 기록시켜 이미징 플레이트 판독 장치에 의해 측정할 수 있다.
기질에 미표지한 것을 이용하는 경우에는, 고속 액체 크로마토그래피로 205 nm의 흡광도를 모니터링함으로써 분해산물량 또는 미반응 기질량을 측정할 수 있다(Lang 등, [Anal. Biochem., 제238권, 제40-45 페이지, 1996년]).
미반응 기질량을 측정한 경우, 반응 전에 첨가한 기질량으로부터 미반응 기질량을 감함으로써 분해산물량을 구할 수 있다. 또한, FAAH 또는 기능적 FAAH의 기질의 분해산물량으로부터, FAAH 또는 기능적 FAAH를 포함하지 않는 완충액만을 첨가하여 측정한 기질의 분해산물량을 컨트롤로서 감함으로써, FAAH 또는 기능적 FAAH에 의한 정미(正味)한 기질의 분해산물량을 구할 수 있다.
조직 파쇄액 중의 엔도칸나비노이드량은, 예를 들면 채취한 조직을 클로로포름과 메탄올과 50 mM Tris(pH 8.0)의 2:1:1(용량비) 용액 중에서 파쇄하여, 유기층(클로로포름층)에 포함되는 엔도칸나비노이드를 액체 크로마토그래피-동위체 희석 질량 분석(isotope dilution mass spectrometry)에 의해 측정할 수 있 다(Cravatt등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 제98권, 제9371-9376 페이지, 2001년).
혈액 중의 엔도칸나비노이드량은, 예를 들면 이하와 같이 측정할 수 있다. 채취한 혈액으로부터 혈장을 분리하고, 혈장에 포함되는 단백질을 등량의 아세톤(-20 ℃)을 첨가하여 원심함으로써 제거한다. 질소 가스를 분무함으로써 아세톤을 증발시킨 후, 메탄올과 클로로포름의 1:2(용량비) 용액을 첨가하고, 유기층(클로로포름층)에 포함되는 엔도칸나비노이드를 액체 크로마토그래피-동위체 희석 질량 분석에 의해 측정할 수 있다(Giuffrida 등, [Eur. J. Pharmacol., 제408권, 제161-168 페이지, 2000년]).
(3) FAAH 또는 기능적 FAAH의 활성을 저해하는 물질을 선택하는 공정
FAAH 또는 기능적 FAAH의 활성을 저해하는 물질을 선택하기 위해서는, FAAH 또는 기능적 FAAH에 시험 물질을 접촉시킴으로써, 시험 물질을 접촉시키지 않은 경우와 비교하여 기질의 분해산물량을 감소시키는 물질을 선택할 수 있다.
구체적으로는, FAAH 또는 기능적 FAAH에 시험 물질을 접촉시킨 경우, 시험 물질을 접촉시키지 않은 경우와 비교하여 기질의 분해산물량이 바람직하게는 1/2배 이하로 감소되는 물질, 즉, 빈뇨ㆍ뇨실금 치료제, 과활동 방광 치료제 및/또는 동통 치료제를 스크리닝할 수 있다.
또한, FAAH 또는 기능적 FAAH에 각종 농도의 시험 물질을 접촉시키고, 시험 물질을 접촉시키지 않은 경우의 기질의 분해산물량을 100 ％라 하였을 때의, 각 농도의 시험 물질을 접촉시킨 경우의 기질의 분해산물량의 상대값(％)을 구하고, 또 는 시험 물질을 접촉시키지 않은 경우의 기질의 분해산물량을 100 ％라 하고, 기존의 FAAH 저해 물질을 충분한 농도, 시간에 FAAH 또는 기능적 FAAH에 접촉시킨 경우의 기질의 분해산물량을 0 ％라고 하였을 때의, 각 농도의 시험 물질을 접촉시킨 경우의 기질의 분해산물량의 상대값(％)을 구하여, 기질의 분해산물량의 상대값(％)을 종축으로, 시험 물질의 농도를 횡축으로 나타낸 저해 곡선으로, 분해산물량의 상대값이 50 ％가 되는 시험 물질의 농도(IC50값)를 산출하고, IC50이 바람직하게는 1 μM 이하, 보다 바람직하게는 100 nM 이하인 물질, 즉, 빈뇨ㆍ뇨실금 치료제, 과활동 방광 치료제 및/또는 동통 치료제를 스크리닝할 수 있다. 예를 들면 실시예 438로부터 실시예 440의 시험을 들 수 있다.
또는, 실험 동물에게 투여함으로써 조직 또는 혈액 중의 엔도칸나비노이드량을 투여 전과 비교하여 또는 비투여 실험 동물과 비교하여, 바람직하게는 1.5배로 증가시키는 시험 물질을 선택함으로써도 FAAH 또는 기능적 FAAH의 활성을 저해하는 물질, 즉, 빈뇨ㆍ뇨실금 치료제, 과활동 방광 치료제 및/또는 동통 치료제를 스크리닝할 수 있다.
[2] 시험 물질
본 발명의 스크리닝법에서 사용되는 시험 물질로서는, 특별히 한정되지 않지만, 예를 들면 시판용 화합물(펩티드를 포함함), 케미컬 파일에 등록되어 있는 다양한 공지 화합물(펩티드를 포함함), 콤비나트리얼ㆍ케미스트리 기술(Terrett 등, [J. Steele. Tetrahedron, 제51권, 제8135-8173 페이지, 1995년])에 의해 얻어진 화합물군, 미생물의 배양 상청, 식물이나 해양 생물 유래의 천연 성분, 동물 조직 추출물, 또는 본 발명의 스크리닝법에 의해 선택된 화합물(펩티드를 포함함)을 화학적 또는 생물학적으로 수식한 화합물(펩티드를 포함함)을 들 수 있다.
[3] 빈뇨ㆍ뇨실금 치료용, 과활동 방광 치료용 및/또는 동통 치료용 의약 조성물
본 발명의 의약 조성물에 있어서의 유효 성분으로서는, FAAH 또는 기능적 FAAH를 활성을 저해하는 물질을 사용할 수 있고, 상기 저해 물질은, 예를 들면 본 발명의 스크리닝 방법에 의해 선택할 수 있다.
본 발명의 의약 조성물은 본 발명의 스크리닝 방법으로 얻어진 물질을 유효 성분으로 하는 의약 조성물로 한정되지 않고, FAAH 또는 기능적 FAAH의 활성을 저해하는 물질을 유효 성분으로 하는 빈뇨ㆍ뇨실금 치료용, 과활동 방광 치료용 및/또는 동통 치료용 의약 조성물이면 전부 포함되고, 바람직하게는 빈뇨ㆍ뇨실금 치료용, 과활동 방광 치료용 및/또는 동통 치료용 의약 조성물이다.
또한, 빈뇨ㆍ뇨실금 치료 효과, 과활동 방광 치료 효과 및/또는 신경 인성 동통 치료 효과가 있는 것에 대한 확인은 상기와 같다.
FAAH 또는 기능적 FAAH의 활성을 저해하는 물질인, 예를 들면 DNA, 단백질(항체 또는 항체 단편을 포함함), 펩티드, 또는 그 이외의 화합물을 유효 성분으로 하는 제제는, 상기 유효 성분의 타입에 따라서 이들의 제제화에 통상 이용되는 약리학상 허용되는 담체, 부형제 및/또는 그 밖의 첨가제를 이용하여 의약 조성물로서 제조할 수 있다.
투여로서는, 예를 들면 정제, 환제, 캡슐제, 과립제, 세립제, 산제 또는 경구용 액제 등에 의한 경구 투여, 또는 정맥 주사, 근육 주사, 또는 관절 주사 등의 주사제, 좌제, 경피 투여제, 또는 경점막 투여제 등에 의한 비경구 투여를 들 수 있다. 특히 위에서 소화되는 펩티드에 있어서는, 정맥 주사 등의 비경구 투여가 바람직하다.
경구 투여를 위한 고체 조성물에 있어서는, 1 또는 그 이상의 활성 물질과 하나 이상의 불활성인 희석제, 예를 들면 젖당, 만니톨, 포도당, 미결정 셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 전분, 폴리비닐피롤리돈 또는 메타규산 알루민산 마그네슘 등으로 혼합할 수 있다. 상기 조성물은 통상법에 따라서 불활성인 희석제 이외의 첨가제, 예를 들면 활택제, 붕괴제, 안정화제, 또는 용해 또는 용해 보조제 등을 함유할 수 있다. 정제 또는 환제는 필요에 따라서 당의 또는 위용성 또는 장용성 물질 등의 필름으로 피복할 수 있다.
경구 투여를 위한 액체 조성물은, 예를 들면 유탁제, 용액제, 현탁제, 시럽제 또는 엘릭시르제를 포함할 수 있고, 일반적으로 사용되는 불활성인 희석제, 예를 들면 정제물 또는 에탄올을 포함할 수 있다. 상기 조성물은 불활성인 희석제 이외의 첨가물, 예를 들면 습윤제, 현탁제, 감미제, 방향제 또는 방부제를 함유할 수 있다.
비경구를 위한 주사제로서는, 무균 수성 또는 비수성 용액제, 현탁제 또는 유탁제를 포함할 수 있다. 수성 용액제 또는 현탁제에는, 희석제로서, 예를 들면 주사용 증류수 또는 생리용 식염수 등을 포함할 수 있다. 비수성 용액제 또는 현 탁제의 희석제로서는, 예를 들면 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 식물유(예를 들면 올리브유), 알코올류(예를 들면 에탄올) 또는 폴리소르베이트 80 등을 포함할 수 있다. 상기 조성물은 습윤제, 유화제, 분산제, 안정화제, 용해제 또는 용해 보조제, 또는 방부제 등을 더 포함할 수 있다. 상기 조성물은, 예를 들면 박테리아 보류 필터를 통과시키는 여과, 살균제의 배합, 또는 조사에 의해 무균화할 수 있다. 또한, 무균 고체 조성물을 제조하고, 사용시에 무균물 또는 그 밖의 무균용 주사용 매체에 용해시켜 사용할 수도 있다.
투여량은 유효 성분, 즉, 본 발명의 스크리닝 방법에 의해 얻어지는 물질 활성의 강도, 증상, 투여 대상의 연령, 또는 성별 등을 고려하여 적절하게 결정할 수 있다.
예를 들면, 경구 투여의 경우, 그 투여량은 통상적으로 성인(체중 60 kg으로서)에 있어서 1일당 약 0.1 내지 100 mg, 바람직하게는 0.1 내지 50 mg이다. 비경구 투여의 경우, 주사제 형태에서는 1일당 0.01 내지 50 mg, 바람직하게는 0.01 내지 10 mg이다.
본 발명의 화합물은 우수한 FAAH 저해 작용을 갖기 때문에, FAAH가 관여하는 질환, 특히 빈뇨ㆍ뇨실금, 과활동 방광 및/또는 동통, 특히 신경 인성 동통의 치료에 유용하다.
이하, 실시예에 기초하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명한다. 본 발명 화합 물은 하기 실시예에 기재된 화합물로 한정되지 않는다. 또한, 원료 화합물의 제조 방법을 참고예에 나타낸다. 본 발명 화합물의 일부는 원료 화합물인 경우도 있고, 편의상 참고예로서 제조 방법을 나타낸 경우도 있다. 또한, 참고예에서 얻어진 화합물의 화학 구조식 및 물리 화학적 성상을 표 1 내지 15에 나타낸다. 실시예에서 얻어진 화합물의 화학 구조식을 표 16 내지 표 34에, 그의 물리 화학적 성상을 표 35 내지 63에 나타낸다. 또한, 표 65 내지 73에 본 발명의 다른 화합물의 구조를 나타낸다. 이들은 상기 제조법이나 하기 참고예ㆍ실시예에 기재된 방법 또는 당업자에게 자명한 방법, 또는 이들의 변법을 이용함으로써 용이하게 제조할 수 있다.
또한, 시판용 키트를 이용하는 경우에는 시판품 지시서에 따라서 실시할 수도 있다. 또한, 명세서내의 약호는 이하와 같다.
Rex: 참고예; Ex: 실시예; Str: 구조식; DAT: 물리 화학적 성상; 1H-NMR δ(ppm), 용매: 핵자기 공명 스펙트럼; 실시예 화합물의 물리 화학 데이터 중의 DMSO: DMSO-d6; MS m/z: 질량 분석값: Com: 화합물; NC: 시아노; Ph: 페닐; Me: 메틸; diMe: 디메틸; Et: 에틸; Pr: 프로필; iPr: 이소프로필; Bu: 부틸; tBu: tert-부틸; iBu: 이소부틸; Pen: 펜틸; Hex: 헥실; Hep: 헵틸; Oct: 옥틸; cPr: 시클로프로필; cPen: 시클로펜틸; cHex: 시클로헥실; cHep: 시클로헵틸; cOct: 시클로옥틸; Ac: 아세틸; Cl: 클로로; diCl: 디클로로; CN: 시아노; F: 플루오로; diF: 디플루오로; FPh: 플루오로페닐; NCPh: 시아노페닐; diFPh: 디플루오로페닐; O2N: 니트로; MeO:메톡시; diMeO: 디메톡시; Br: 브로모; diBr: 디브로모; BrPh: 브로모페 닐; F3C: 트리플루오로메틸; AcO: 아세톡시; MeOCO 또는 COOMe: 메톡시카르보닐; tBuOCO 또는 COOtBu: tert-부톡시카르보닐; HO: 히드록시; HOPh: 히드록시페닐; H2N: 아미노; PhCONH: 벤조일아미노; EtCONH: 에틸카르보닐아미노; Me2N: 디메틸아미노; Et2N: 디에틸아미노; BIP2: 2-비페닐; BIP3: 3-비페닐; BIP4: 4-비페닐; BIP5: 5-비페닐; BIP6: 6-비페닐; Thiop2: 티오펜-2-일; Thiop3: 티오펜-3-일; Thiop4: 티오펜-4-일; Thiop5: 티오펜-5-일; PYRR1: 피롤리딘-1-일; PYRR2: 피롤리딘-2-일; PYRR3: 피롤리딘-3-일; PYRR4: 피롤리딘-4-일; PYRR5: 피롤리딘-5-일; Py2: 피리딘-2-일; Py3: 피리딘-3-일; Py4: 피리딘-4-일; Py5: 피리딘-5-일; IM1: 이미다졸-1-일; IM2: 이미다졸-2-일; IM3: 이미다졸-3-일; IM4: 이미다졸-4-일; BenzIM1: 벤즈이미다졸-1-일; BenzIM2: 벤즈이미다졸-2-일; BenzIM3: 벤즈이미다졸-3-일; BenzIM4: 벤즈이미다졸-4-일; BenzIM5: 벤즈이미다졸-5-일; BenzIM6: 벤즈이미다졸-6-일; Pyrazi1: 피라진-1-일; Pyrazi2: 피라진-2-일; Pyrazi3: 피라진-3-일; Pyrazi4: 피라진-4-일; Pyrazi5: 피라진-5-일; Pyrazi6: 피라진-6-일; PIPE1: 피페리딘-1-일; PIPE2: 피페리딘-2-일; PIPE3: 피페리딘-3-일; PIPE4: 피페리딘-4-일; PIPE5: 피페리딘-5-일; PIPE6: 피페리딘-6-일; PIPERA: 피페라진; PIPERA1: 피페라진-1-일; PIPERA2: 피페라진-2-일; PIPERA3: 피페라진-3-일; PIPERA4: 피페라진-4-일; PIPERA5: 피페라진-5-일; Pyrazo1: 피라졸-1-일; Pyrazo2: 피라졸-2-일; Pyrazo3: 피라졸-3-일; Pyrazo4: 피라졸-4-일; Pyrazo5: 피라졸-5-일; Mo: 모르폴린; Mo2: 모르폴린-2-일; Mo3: 모르폴린-3-일; Mo4: 모르폴린-4-일; Mo5: 모르폴린 -5-일; Azep: 헥사히드로아제핀; Azep1: 헥사히드로아제핀-1-일; Azep2: 헥사히드로아제핀-2-일; Azep3: 헥사히드로아제핀-3-일; Azep4: 헥사히드로아제핀-4-일; Thiaz2: 티아졸-2-일; Thiaz3: 티아졸-3-일; Thiaz4: 티아졸-4-일; Thiaz5: 티아졸-5-일; QUI1: 퀴놀린-1-일; QUI2: 퀴놀린-2-일; QUI3: 퀴놀린-3-일; QUI4: 퀴놀린-4-일; QUI5: 퀴놀린-5-일; QUI6: 퀴놀린-6-일; QUI7: 퀴놀린-7-일; QUI8: 퀴놀린-8-일; ISOQUI2: 이소퀴놀린-2-일; ISOQUI3: 이소퀴놀린-3-일; ISOQUI4: 이소퀴놀린-4-일; ISOQUI5: 이소퀴놀린-5-일; ISOQUI6: 이소퀴놀린-6-일; ISOQUI7: 이소퀴놀린-7-일; ISOQUI8: 이소퀴놀린-8-일; NAPH1: 나프탈렌-1-일; NAPH2: 나프탈렌-2-일; NAPH3: 나프탈렌-3-일; NAPH4: 나프탈렌-4-일; NAPH5: 나프탈렌-5-일; TEA: 트리에틸아민; Sal: 부가염; HCl: 염산염; oxal: 옥살산염; fum: 푸마르산염; p-to1: p-톨루엔술폰산염
참고예 1
tert-부틸-4-(히드록시디메틸)피페리딘-1-카르복실레이트(1.57 g)와 트리페닐포스핀(1.70 g)을 포함하는 THF(15 ml) 용액 중에, 페놀(471 mg)과 디에틸아조디카르복실레이트(2.83 g, 40 ％ Tol 용액)을 포함하는 THF(10 ml) 용액을 0 ℃에서 적하하여 실온에서 24 시간 교반하였다. 반응 용액에 물(40 ml)을 첨가하고, EtOAc로 추출하여 유기층을 1 M 수산화나트륨 수용액, 포화 식염수로 차례로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 용매를 감압 증류 제거하고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 헥산:EtOAc=4:1(V/V))로 정제하여 무색 유상물(1.14 g)을 얻었다. 얻어진 화합물을 EtOAc에 용해시키고, 4 M 염화수소-EtOAc 용액(9.6 ml)을 첨가하여 실온에서 5 시간 교반하여 무색 분말의 4-(페녹시메틸)피페리딘 염산염(680 mg)을 얻었다.
참고예 1과 동일하게 하여 참고예 2 내지 27의 화합물을 얻었다.
참고예 28
3-브로모벤즈아미드(3.0 g)와 (3-히드록시페닐)붕소산(2.27 g)을 포함하는 디메톡시에탄(50 ml) 용액 중에, 물(10 ml), 탄산나트륨(4.76 g), 테트라키스트리페닐포스핀팔라듐(866 mg)을 차례로 첨가한 후, 60 ℃에서 24 시간 가열하였다. 반응 용액을 냉각 후, EtOAc로 희석하여 유기층을 수세 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 용매를 감압 증류 제거하고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; EtOAc)로 정제하여 담황색 분말(2.74 g)을 얻었다. 얻어진 화합물을 이용하여, 참고예 1과 동일하게 하여 참고예 28의 화합물을 얻었다.
참고예 29
tert-부틸-4-히드록시피페리딘-1-카르복실레이트(12 g)와 트리페닐포스핀(16 g)을 포함하는 THF(80 ml) 용액 중에, 4-(벤질옥시)페놀(8.0 g)과 디에틸아조디카르복실레이트(26 ml, 40 ％ Tol 용액)를 포함하는 THF(80 ml) 용액을 0 ℃에서 적하하여 실온에서 24 시간 교반하였다. 반응 용액에 물(40 ml)을 첨가하고, EtOAc로 추출하여 유기층을 1 M 수산화나트륨 수용액, 포화 식염수로 차례로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 용매를 감압 증류 제거하고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 헥산:EtOAc=8:1(V/V))로 정제하여 무색 유상물(12.4 g)을 얻었다.
얻어진 화합물(5.18 g)을 포함하는 에탄올(100 ml) 용액에 10 ％ 팔라듐-카본(촉매량)을 첨가하여 수소 가스 분위기하에 상온 상압에서 16 시간 교반하였다. 촉매를 여과 제거하고, 얻어진 여과액을 감압 농축하여 담갈색 고체(4.0 g)를 얻었다.
얻어진 화합물(4.0 g)을 포함하는 아세토니트릴(100 ml) 용액에 1-(브로모메틸)-3-플루오로벤젠(2.5 ml)과 탄산칼륨(2.8 g)을 첨가하여 80 ℃에서 22 시간 가열하였다. 고형물을 여과 제거 후, 얻어진 여과액을 감압 농축하고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 헥산:EtOAc=8:1(V/V))로 정제하여 무색 고체(5.15 g)를 얻었다.
얻어진 화합물(5.15 g)을 EtOAc(20 ml)에 용해시키고, 4 M 염화수소-EtOAc 용액(20 ml)을 첨가하여 실온에서 5 시간 교반한 후, 용매를 감압 증류 제거하였다. 잔류물을 물에 용해시키고, 1 M 수산화나트륨 수용액으써 중화하며, 얻어진 고체를 건조시켜 4-{4-[(3-플루오로벤질)옥시]페녹시}피페리딘(3.70 g)을 얻었다.
참고예 29와 동일하게 하여 참고예 30 내지 36의 화합물을 얻었다.
참고예 37
tert-부틸-4-히드록시피페리딘-1-카르복실레이트(4.6 g), 트리페닐포스핀(6.1 g), 6-클로로-2-피리딘올(2.0 g)을 포함하는 THF(30 ml) 용액 중에, 디에틸아조디카르복실레이트(11 ml, 40 ％ Tol 용액)을 0 ℃에서 적하하여 실온에서 24 시간 교반하였다. 반응 용액에 물을 첨가하고, EtOAc로 추출하여 유기층을 1 M 수산화나트륨 수용액으로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 용매를 감압 증류 제거하고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 헥산:EtOAc=10:1(V/V))로 정제하여 tert-부틸 4-[(6-클로로-2-피리디닐)옥시]-1-피페리딘카르복실레이트(3.8 g)를 얻었다.
tert-부틸 4-[(6-클로로-2-피리디닐)옥시]-1-피페리딘카르복실레이트(500 mg)를 포함하는 DMF(5 ml) 용액에 (3-플루오로페닐)메탄올(220 mg)과 칼륨-tert-부톡시드(200 mg)를 첨가하여 100 ℃에서 30 분 가열 후, 또한 (3-플루오로페닐)메탄올(220 mg)과 칼륨-tert-부톡시드를(200 mg)을 첨가하여 110 ℃에서 30 분 가열하였다. 반응 용액에 물을 첨가하고, EtOAc로 추출하여 유기층을 포화 탄산수소나트륨 수용액으로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 용매를 감압 증류 제거하고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 헥산:EtOAc=10:1(V/V))로 정제하여 백색 고체(420 mg)를 얻었다.
얻어진 화합물(400 mg)을 EtOAc(5 ml)에 용해시키고, 4 M 염화수소-EtOAc 용액(3 ml)을 첨가하여 실온에서 밤새 교반하였다. 석출된 고체를 여과 분리하여 EtOAc로 세정 후, 감압하에 건조시켜 2-[(3-플루오로벤질)옥시]-6-(4-피페리딘옥시)피리딘 염산염(310 mg)을 얻었다.
참고예 37과 동일하게 하여 참고예 38의 화합물을 얻었다.
참고예 39
4-[(6-클로로-2-피리디닐)옥시]-1-피페리딘카르복실산 tert-부틸(500 mg)과 [3-(아미노카르보닐)페닐]붕소산(320 mg)을 포함하는 Tol(10 ml) 용액 중에, 물(4 ml), 탄산나트륨(610 mg), 테트라키스트리페닐포스핀팔라듐(110 mg)을 차례로 첨가 한 후, 100 ℃에서 밤새 가열하였다. 반응 용액을 냉각 후, EtOAc로 희석하여 유기층을 무수 탄산수소나트륨 수용액으로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 용매를 감압 증류 제거하고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 헥산:EtOAc=1:2(V/V))로 정제하여 담황색 분말(590 mg)을 얻었다.
얻어진 화합물(590 mg)을 EtOAc(5 ml)에 용해시키고, 4 M 염화수소-EtOAc 용액(5 ml)을 첨가하여 실온에서 밤새 교반하였다. 석출된 고체를 여과 분리하고, EtOAc로 세정 후, 감압하에 건조시켜 3-[6-(4-피페리디닐옥시)-2-피리디닐]벤즈아미드 염산염(440 mg)을 얻었다.
참고예 40
tert-부틸-4-(2-히드록시에틸)피페리딘-1-카르복실레이트(5.0 g)를 포함하는 염화메틸렌(80 ml) 용액 중에, TEA(4.6 ml)와 메탄술포닐클로라이드(2.0 ml)를 0 ℃에서 적하하여 실온에서 3 시간 교반하였다. 반응 용액에 탄산수소나트륨 수용액과 메탄올을 첨가하여 실온에서 30 분간 교반하였다. 클로로포름으로 추출하여 유기층을 포화 식염수로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 용매를 감압 증류 제거하고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 클로로포름:메탄올=10:1(V/V))로 정제하여 무색 고체(6.lg)를 얻었다.
얻어진 화합물(2.0 g)과 페닐프로판올(1.3 g)을 포함하는 DMF(80 ml) 용액 중에 수소화나트륨(541 mg, 오일 중 60 ％)을 0 ℃에서 첨가하여 100 ℃에서 20 시간 가열하였다. 반응 용액을 냉각 후, 물을 첨가하고, EtOAc로 추출하였다. 1 M 염산 수용액, 포화 탄산수소나트륨 수용액, 포화 식염수로 차례로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 용매를 감압 증류 제거하고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 클로로포름:메탄올=20:1(V/V))로 정제하여 황색 유상물(1.96 g)을 얻었다.
얻어진 화합물(1.96 g)을 EtOAc(5 ml)에 용해시키고, 4 M 염화수소-EtOAc 용액(10 ml)을 첨가하여 실온에서 2 시간 교반하였다. 얻어져 오는 고체를 여과 분리하고, 건조시켜 4-[2-(3-페닐 프로폭시)에틸]피페리딘 염산염(1.55 g)을 얻었다.
참고예 41
tert-부틸-4-히드록시피페리딘-1-카르복실레이트(3.02 g)를 포함하는 THF(40 ml) 용액 중에 TEA(2.30 ml)와 메탄술포닐클로라이드(1.22 ml)를 0 ℃에서 적하하여 실온에서 1 시간 교반하였다. 반응 용액에 EtOAc(50 ml)와 물(50 ml)을 첨가하고, 유기층을 5 ％ 시트르산 수용액, 포화 탄산수소나트륨 수용액, 포화 식염수로 차례로 세정 후, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 용매를 감압 증류 제거하여 담등색 유상물을 얻었다. 얻어진 유상물을 DMA(25 ml)에 용해시키고, 탄산세슘(5.38 g)과 4-술파닐페놀(1.89 g)을 첨가하여 50 ℃에서 2 시간 가열하였다. 반응 용액을 냉각 후, 물을 첨가하고, EtOAc로 추출하였다. 유기층을 1 M 염산 수용액, 포화 식염수로 차례로 세정 후, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 용매를 감압 증류 제거하고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 헥산:EtOAc=4:1(V/V))로 정제하여 무색 분말의 tert-부틸-4-[(4-히드록시페닐)술파닐]피페리딘-1-카르복실레이트(3.40 g)를 얻었다.
tert-부틸-4-[(4-히드록시페닐)술파닐]피페리딘-1-카르복실레이트(1.00 g)를 포함하는 아세토니트릴(15 ml) 용액에 1-(브로모메틸)-3-플루오로벤젠(0.436 ml)과 탄산칼륨(670 mg)을 첨가하여 80 ℃에서 2 시간 가열하였다. 반응 용액을 냉각 후, 포화 식염수를 첨가하여 클로로포름으로 추출하였다. 유기층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 용매를 감압 증류 제거하며 얻어진 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 헥산:EtOAc=8:1(V/V))로 정제하여 무색 분말의 tert-부틸-4-({4-[(3-플루오로벤질)옥시]페닐}술파닐)피페리딘-1-카르복실레이트(1.50 g)를 얻었다.
tert-부틸-4-({4-[(3-플루오로벤질)옥시]페닐}술파닐)피페리딘-1-카르복실레이트(501 mg)을 EtOAc(5 ml)에 용해시키고, 4 M 염화수소-EtOAc 용액(3 ml)을 첨가하여 실온에서 3 시간 교반한 후, 용매를 감압 증류 제거하였다. 잔류물을 물에 용해시키고, 1 M 수산화나트륨 수용액으로 중화시켜 클로로포름으로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정 후, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 용매를 감압 증류 제거하여 4-({4-[(3-플루오로벤질)옥시]페닐}술파닐)피페리딘(328 mg)을 얻었다.
참고예 41과 동일하게 하여 참고예 42를 얻었다.
참고예 43
참고예 41의 방법으로 얻어진 tert-부틸-4-({4-[(3-플루오로벤질)옥시]페닐}술파닐)피페리딘-1-카르복실레이트(1.50 g)를 포함하는 클로로포름(20 ml) 용액에 mCPBA(1.64 g)를 0 ℃에서 첨가하여 실온에서 17 시간 교반하였다. 고형물을 여과 후, 여과액에 10 ％ 황산나트륨 수용액을 첨가하여 클로로포름으로 추출하였다. 유기층을 포화 탄산수소나트륨 수용액으로 세정 후, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 용매를 감압 증류 제거하고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 헥산:EtOAc=2:1(V/V))로 정제하여 무색 분말(1.58 g)을 얻었다. 얻어진 분말(1.56 g)을 EtOAc(10 ml)에 용해시키고, 4 M 염화수소-EtOAc 용액(8 ml)을 첨가하여 실온에서 2 시간 교반한 후, 고형물을 여과 분리하여 EtOAc로 세정하고, 무색 분말의 4-({4-[(3-플루오로벤질)옥시]페닐}술포닐)피페리딘 염산염(1.13 g)을 얻었다.
참고예 43과 동일하게 하여 참고예 44 내지 46을 얻었다.
참고예 47
시클로헥실메탄올과 트리페닐포스핀(629 mg)을 포함하는 THF(5 ml) 용액 중에 참고예 41의 방법으로 얻어진 tert-부틸-4-[(4-히드록시페닐)술파닐]피페리딘-1-카르복실레이트(495 mg)와 디에틸아조디카르복실레이트(1.04 g, 40 ％ Tol 용액)를 포함하는 THF(5 ml) 용액을 0 ℃에서 적하하여 실온에서 24 시간 교반하였다. 반응 용액에 물(40 ml)을 첨가하고, EtOAc로 추출하여 유기층을 1 M 수산화나트륨 수용액, 포화 식염수로 차례로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 용매를 감압 증류 제거하고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 헥산:EtOAc=9:1(V/V))로 정제하여 담황색 유상물의 tert-부틸-4-{[4-(시클로헥실메톡시)페닐]술포닐}피페리딘-1-카르복실레이트(744 mg)를 얻었다.
얻어진 tert-부틸-4-{[4-(시클로헥실메톡시)페닐]술포닐}피페리딘-1-카르복실레이트(635 mg)를 EtOAc(7 ml)에 용해시키고, 4 M 염화수소-EtOAc 용액(3.6 ml) 을 첨가하여 실온에서 6 시간 교반한 후, 고형물을 여과 분리하고, EtOAc로 세정하여 무색 분말의 4-{[4-(시클로헥실메톡시)페닐]술포닐}피페리딘 염산염(485 mg)을 얻었다.
참고예 47과 동일하게 하여 참고예 48을 얻었다.
참고예 49
tert-부틸-4-히드록시피페리딘-1-카르복실레이트(1.5 g)를 포함하는 THF(40 ml) 용액 중에, 수소화나트륨(355 mg, 오일 중 60 ％)과 벤질브로마이드(1.0 ml)를 첨가하여 60 ℃에서 13 시간 가열하였다. 반응 용액을 냉각 후, 물을 첨가하고, EtOAc로 추출하였다. 1 M 염산 수용액, 포화 탄산수소나트륨 수용액, 포화 식염수로 차례로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 용매를 감압 증류 제거하고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 헥산:EtOAc=10:1(V/V))로 정제하여 무색 유상물(1.91 g)을 얻었다.
얻어진 화합물(1.8 g)을 EtOAc(5 ml)에 용해시키고, 4 M 염화수소-EtOAc 용액(15 ml)을 첨가하여 실온에서 3 시간 교반하였다. 반응 용액을 이소프로필에테르로써 희석하고, 얻어진 고체를 여과 분리, 건조시켜 4-(벤질옥시)피페리딘 염산염(1.32 g)을 얻었다.
참고예 49와 동일하게 하여 참고예 50 내지 53의 화합물을 얻었다.
참고예 54
(3-플루오로페닐)메탄올(730 mg), 트리페닐포스핀(1.5 g), 6-클로로-3-피리딘올(500 mg)을 포함하는 THF(10 ml) 용액 중에 디에틸아조디카르복실레이트(2.6 ml, 40 ％ Tol 용액)을 0 ℃에서 적하하여 실온에서 24 시간 교반하였다. 반응 용액을 EtOAc로 희석하고, 유기층을 포화 탄산수소나트륨 수용액으로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 용매를 감압 증류 제거하고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 헥산:EtOAc=8:1(V/V))로 정제하여 백색 고체(810 mg)를 얻었다.
얻어진 백색 개체(800 mg)를 포함하는 DMF(10 ml) 용액에 tert-부틸-4-히드록시피페리딘-1-카르복실레이트(1.0 g)와 칼륨-tert-부톡시드를(570 mg)을 첨가하여 130 ℃에서 1 시간 가열한 후, 칼륨-tert-부톡시드를(400 mg)을 첨가하여 130 ℃에서 1 시간 더 가열하였다. 반응 용액을 실온까지 냉각시킨 후, EtOAc로 희석하고, 포화 탄산수소나트륨 수용액으로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 용매를 감압 증류 제거하고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 헥산:EtOAc=7:1(V/V))로 정제하여 백색 고체(350 mg)를 얻었다.
얻어진 화합물(345 mg)을 EtOAc(3 ml)에 용해시키고, 4 M 염화수소-EtOAc 용액(2 ml)을 첨가하여 실온에서 밤새 교반하였다. 석출된 고체를 여과 분리하여 EtOAc로 세정 후, 감압하에 건조시켜 6-[(3-플루오로벤질)옥시]-2-(4-피페리딘옥시)피리딘 염산염(260 mg)을 얻었다.
참고예 55
[1-(tert-부톡시카르보닐)피페리딘-4-일]아세트산(0.60 g)을 디메틸포름아미드(12 ml)에 용해시키고, 1-[3-(디메틸아미노)프로필]-3-에틸카르보디이미드 염산염(0.89 g), 1-히드록시벤조트리아졸(0.50 g) 및 벤질아민(0.40 g)을 첨가하여 실 온에서 15 시간 혼합하였다. 반응 용액에 물을 첨가하고 1 시간 더 혼합한 후, EtOAc와 탄산수소나트륨 용액을 첨가하여 분액하고, 유기층을 0.5 M 염산, 포화 식염수로 차례로 세정하였다. 유기층을 무수 황산마그네슘으로 건조시키고, 용매를 감압 증류 제거하며, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 헥산:EtOAc=1:2(V/V))로 정제하여 무색 분말(0.69 g)을 얻었다.
얻어진 화합물(0.69 g)을 EtOAc(10 ml)에 용해시키고, 4 M 염화수소-EtOAc 용액(2.2 ml)을 첨가하여 실온에서 20 시간 교반하였다. 반응 용액을 농축 건고시켜 N-벤질-2-피페리딘-4-일아세트아미드 염산염(0.62 g)을 얻었다.
참고예 56
인산(7 ml)과 오산화이인산(14 g)을 150 ℃에서 30 분간 가열한 중에, N-메틸벤젠-1,2-디아민(1.3 g)과 4-피페리딘-4-일부탄산염산염(1.5 g)을 첨가하여 120 ℃에서 3 시간 가열하였다. 반응 용액을 물 중에 부어 수산화나트륨 수용액으로 중화 후, 클로로포름으로 추출하였다. 유기층을 무수 황산마그네슘으로 건조시킨 후, 용매를 감압 증류 제거하고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 클로로포름:메탄올:암모니아수=10:1:0.1(V/V))로 정제하여 1-메틸-2-(3-피페리딘-일프로필)-1H-벤즈이미다졸(1.61 g)을 얻었다.
참고예 57 및 참고예 58
[4-(메톡시시카르보닐)벤질](트리페닐)포스포늄프로미드(7.51 g)를 포함하는 THF(30 ml) 용액 중에 칼륨 tert-부톡시드(1.72 g)를 0 ℃에서 첨가하여 1 시간 교반하였다. 반응 용액 중에, 4-포르밀피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸에스테 르(Beilstein Registry No.7704210, 2.96 g)를 포함하는 THF(20 ml) 용액을 0 ℃에서 적하하여 14 시간 교반하였다. 반응 용액에 물을 첨가하고, EtOAc로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정 후, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 용매를 감압 증류 제거하고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 헥산:EtOAc=9:1(V/V))으로 정제하여 황색 유상물(3.77 g)을 얻었다.
얻어진 화합물(3.75 g)을 메탄올(20 ml)과 THF(10 ml)에 용해시키고, 1 M 수산화나트륨 수용액(16.3 ml)을 첨가하여 50 ℃에서 4 시간 가열하였다. 반응 용액을 냉각 후, 용매를 감압 증류 제거하였다. 1 M 염산염을 첨가하여 산성으로 하여 석출된 고형물을 여과 분리하고, 물로 세정하여 담갈색 분말(2.82 g)을 얻었다.
얻어진 화합물(2.80 g)을 포함하는 DMF(30 ml) 용액 중에, 염화암모늄(2.26 g), 1-에틸-3-(디메틸아미노프로필)카르보디이미드 염산염(3.24 g), 1-히드록시벤조트리아졸(1.14 g), TEA(5.88 ml)를 첨가하여 실온에서 32 시간 교반하였다. 반응 용액에 물을 첨가하고, 석출된 고형물을 여과 분리하며 물로 세정하고, 담갈색 분말(2.61 g)을 얻었다.
얻어진 화합물(2.58 g)을 EtOAc(15 ml)에 용해시키고, 4 M 염화수소-EtOAc 용액(15 ml)을 첨가하여 실온에서 8 시간 교반하였다. 얻어진 고체를 여과 분리하여 EtOAc로 세정 후, 건조시켜 4-[(E)-2-피페리딘-4-일비닐]벤즈아미드 염산염(1.92 g)을 얻었다(참고예 57).
4-[(E)-2-피페리딘-4-일비닐]벤즈아미드 염산염(800 mg)을 포함하는 메탄올(15 ml)-물(5 ml) 용액에 10 ％ 팔라듐-카본(촉매량)을 첨가하고, 수소 가스 분 위기하에 상온 상압에서 4 시간 교반하였다. 촉매를 여과 제거하고, 얻어진 여과액을 감압 농축하였다. 얻어진 고체물을 에탄올-아세토니트릴에 의해 재결정하여 4-(2-피페리딘-4-일에틸)벤즈아미드 염산염(451 mg)을 얻었다(참고예 58).
참고예 59
tert-부틸 4-(4-아미노페녹시)-1-피페리딘카르복실레이트(2.0 g: Beilstein Registry No.9262581), 시클로헥산카르보알데히드(770 mg), 아세트산 1.25 g을 포함하는 디클로로메탄(30 ml) 용액 중에 수소화트리아세톡시붕소나트륨(2.2 g)을 0 ℃에서 첨가하여 실온에서 2 시간 교반하였다. 반응 용액에 포화 탄산수소나트륨 수용액을 첨가하고, 클로로포름으로 추출하여 유기층을 포화 탄산수소나트륨 수용액으로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 용매를 감압 증류 제거하고, 얻어진 고형물을 EtOAc 헥산으로 재결정하여 담갈색 결정(2.0 g)을 얻었다.
얻어진 결정(970 mg), 37 ％ 포름알데히드 수용액(0.94 ml), 아세트산 0.75 g을 포함하는 디클로로메탄(20 ml) 용액에 수소화트리아세톡시붕소나트륨(1.1 g)을 0 ℃에서 첨가하여 실온에서 2 시간 교반하였다. 반응 용액에 포화 탄산수소나트륨 수용액을 첨가하고, 클로로포름으로 추출하여 유기층을 포화 탄산수소나트륨 수용액으로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 용매를 감압 증류 제거하고, 얻어진 유상물을 EtOAc(15 ml)에 용해시키고, 4 M 염화수소-EtOAc 용액(5 ml)을 첨가하여 실온에서 밤새 교반하였다. 석출된 고체를 여과 분리하여 EtOAc로 세정 후, 감압하에 건조시켜 N-(시클로헥실메틸)-N-메틸-4-(4-피페리디닐옥시)아닐린 2염산염(820 mg)을 얻었다.
참고예 60
*벤질 3-요오도페닐에테르(1.1 g), tert-부틸 1-피페라진카르복실레이트(640 mg), 나트륨 tert-부톡시드(500 mg), 2-비페닐릴(디시클로헥실)포스핀(70 mg)을 포함하는 Tol(10 ml) 용액 중에, 아르곤 기류하에 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(95 mg)을 첨가하여 80 ℃에서 1 시간 가열하였다. 반응 용액을 냉각 후, EtOAc로 희석하여 유기층을 포화 식염수로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 용매를 감압 증류 제거하고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 헥산 EtOAc=5:1(V/V))로 정제하여 갈색 고체(950 mg)를 얻었다.
얻어진 고체(940 mg)를 EtOAc(5 ml)에 용해시키고, 4 M 염화수소-EtOAc 용액(5 ml)을 첨가하여 실온에서 밤새 교반하였다. 석출된 고체를 여과 분리하여 EtOAc로 세정 후, 감압하에 건조시켜 1-[3-(벤질옥시)페닐]피페라진 2염산염(840 mg)을 얻었다.
참고예 61
4-(벤질옥시)-2-클로로페놀(1.7 g: Beilstein Registry No.6582932), 트리페닐포스핀(2.8 g), tert-부틸-4-히드록시피페리딘-1-카르복실레이트(2.1 g)를 포함하는 THF(60 ml) 용액 중에 디에틸아조디카르복실레이트(4.8 ml, 40 ％ Tol 용액)을 0 ℃에서 적하하여 실온에서 24 시간 교반하였다. 반응 용액을 EtOAc로 희석하여 유기층을 포화 탄산수소나트륨 수용액으로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 용매를 감압 증류 제거하고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (용출액; 헥산:EtOAc=5:1(V/V))로 정제하여 백색 고체(2.3 g)를 얻었다.
얻어진 화합물(1.0 g)을 EtOAc(10 ml)로 용해시키고, 4 M 염화수소-EtOAc 용액(10 ml)을 첨가하여 실온에서 밤새 교반하였다. 석출된 고체를 여과 분리하여 EtOAc로 세정 후, 감압하에 건조시켜 4-[4-(벤질옥시)-2-클로로페녹시]피페리딘 염산염(690 mg)을 얻었다.
참고예 62
4-히드록시벤젠술폰산나트륨염(1.00 g)의 DMF(5 ml) 용액 중에 티오닐클로라이드(10 ml)를 적하한 후, 65 ℃에서 3 시간 가열하였다. 반응 용액을 냉각 후, Tol(10 ml)을 첨거하고, 용매를 감압 증류 제거한 후, 물을 첨가하고, 클로로포름으로 추출하여 유기층을 포화 식염수로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 용매를 감압 증류 제거함으로써 무색 고체(587 mg)를 얻었다.
1-tert-부톡시카르보닐피페라진(672 mg)과 피리딘(0.58 ml)을 포함하는 아세토니트릴(10 ml) 용액에, 0 ℃에서 조금 전에 얻어진 화합물(579 mg)의 아세토니트릴(10 ml) 용액을 첨가하여 실온에서 2 시간 교반하였다. 용매를 감압 증류 제거 후, Tol(10 ml)을 첨가하여 공비한 후, 물을 첨가하고, EtOAc로 추출하여 유기층을 포화 식염수로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 용매를 감압 증류 제거함으로써 무색 고체(0.41 g)를 얻었다.
얻어진 화합물(0.41 g) 및 1-(브로모메틸)-3-플루오로벤젠(340 mg)을 포함하는 아세토니트릴(20 ml) 용액에 탄산칼륨(248 mg)을 첨가하여 80 ℃에서 3 시간 가열하였다. 고형물을 여과 제거 후, 얻어진 여과액을 감압 농축하고, 잔류물을 실 리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 헥산:EtOAc=5:1(V/V))로 정제하여 무색 고체(469 mg)를 얻었다.
얻어진 화합물(460 mg)을 EtOAc(5 ml)와 THF(5 ml)의 혼합 용액에 용해시키고, 4 M 염화수소-EtOAc 용액(20 ml)을 첨가하여 70 ℃에서 3 시간 교반한 후, 용매를 감압 증류 제거하였다. 잔류물을 물에 용해시키고, 1 M 수산화나트륨 수용액으로 중화시키고, 얻어진 고체를 건조시켜 4-{4-[(3-플루오로벤질)옥시]벤젠술포닐}피페라진(304 mg)을 얻었다.
참고예 63
4-(벤질옥시)-3-클로로페놀(1.2 g: Beilstein Registry No.5527577), 트리페닐포스핀(1.9 g), tert-부틸-4-히드록시피페리딘-1-카르복실레이트(1.5 g)를 포함하는 THF(30 ml) 용액 중에, 디에틸아조디카르복실레이트(3.3 ml, 40 ％ Tol 용액)를 0 ℃에서 적하하여 실온에서 24 시간 교반하였다. 반응 용액을 EtOAc로 희석하고, 유기층을 포화 탄산수소나트륨 수용액으로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 용매를 감압 증류 제거하고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 헥산:EtOAc=5:1(V/V))로 정제하여 백색 고체(1.7 g)를 얻었다.
얻어진 화합물(1.6 g)을 EtOAc(20 ml)에 용해시키고, 4 M 염화수소-EtOAc 용액(15 ml)을 첨가하여 실온에서 밤새 교반하였다. 석출된 고체를 여과 분리하여 EtOAc로 세정 후, 감압하에 건조시켜 4-[4-(벤질옥시)-3-클로로페녹시]피페리딘 염산염(1.3 g)을 얻었다.
참고예 64
tert-부틸 4-(4-아미노페녹시)-1-피페리딘카르복실레이트(4.0 g: Beilstein Registry No.9262581)를 포함하는 피리딘(30 ml) 용액 중에 3-플루오로벤젠술포닐클로라이드(3.2 g)를 0 ℃에서 첨가하여 실온에서 밤새 교반하였다. 용매를 감압 증류 제거 후, 클로로포름으로 희석하여 유기층을 10 ％ 시트르산 수용액, 물, 포화 식염수로 차례로 세정 후, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 용매를 감압 증류 제거하고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 클로로포름:메탄올=60:1(V/V))로 정제하여 백색 고형물(5.3 g)을 얻었다.
얻어진 화합물(700 mg)을 포함하는 아세토니트릴(10 ml) 용액에 탄산칼륨(280 mg), 요오드화메틸(0.28 ml)을 첨가하여 50 ℃에서 3 시간 교반하였다. 반응 용액을 EtOAc로 희석하고, 유기층을 물, 포화 식염수로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 용매를 감압 증류 제거하고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 헥산:EtOAc=3:1(V/V))로 정제하여 무색 유상물(700 mg)을 얻었다.
얻어진 유상물(700 mg)을 EtOAc(10 ml)에 용해시키고, 4 M 염화수소-EtOAc 용액(5 ml)을 첨가하여 실온에서 밤새 교반하였다. 석출된 고체를 여과 분리하여 EtOAc로 세정 후, 감압하에 건조시켜 3-플루오로-N-메틸-N-[4-(4-피페리디닐옥시)페닐]벤젠술폰아미드 염산염(480 mg)을 얻었다.
참고예 65
1-[(벤질옥시)카르보닐]-4-(tert-부톡시카르보닐)-2-피페리딘카르복실산(1.0 g)을 포함하는 DMF(10 ml) 용액에 1-에틸-3-(디메틸아미노프로필)카르보디이미드 염산염(630 mg), 1-히드록시벤조트리아졸(440 mg)을 첨가하여 실온에서 1 시간 교반 후, 진한 암모니아수(2 ml)를 첨가하여 실온에서 3 시간 교반하였다. 반응 용액에 물을 첨가하고, 석출된 고체를 여과 분리하며 물로 세정 후, 감압하에 건조시켜 무색 고형물(870 mg)을 얻었다.
얻어진 고형물(860 mg)을 EtOAc(10 ml)에 용해시키고, 4 M 염화수소-EtOAc 용액(5 ml)을 첨가하여 실온에서 밤새 교반하였다. 석출된 고체를 여과 분리하여 EtOAc로 세정 후, 감압하에 건조시켜 벤질 2-(아미노카르보닐)-1-피페라진카르복실레이트 염산염(700 mg)을 얻었다.
참고예 66
메틸 4-(히드록시디메틸)벤조에이트를 포함하는 아세토니트릴(20 ml) 용액 중에 피리딘(1.62 ml)과 4-니트로페닐클로로카르보네이트(2.22 g)를 0 ℃에서 첨가하여 실온에서 2 시간 교반하였다. 반응 용액에 5 ％ 시트르산 수용액을 첨가하고, EtOAc로 추출하여 유기층을 포화 탄산수소나트륨 수용액, 포화 식염수로 차례로 세정 후, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 용매를 감압 증류 제거하고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 헥산:EtOAc=4:1(V/V))로 정제하여 담갈색 분말(2.39 g)을 얻었다.
얻어진 화합물(2.37 g)을 포함하는 아세토니트릴(30 ml) 용액 중에 tert-부틸-피페라진-1-카르복실레이트(1.47 g)를 첨가하여 실온에서 8 시간 교반하였다. 반응 용액을 EtOAc로 희석하고, 0.5 M 수산화나트륨 수용액으로 세정하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정 후, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 용매를 감압 증류 제거하였다. 얻어진 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 헥산:EtOAc=2:1(V/V))로 정제하여 무색 고체(3.32 g)를 얻었다.
얻어진 화합물(3.30 g)을 포함하는 THF(30 ml) 용액 중에 메탄올(0.34 ml)과 1 M 수산화나트륨 수용액(8.52 ml)을 첨가하여 실온에서 26 시간 교반하였다. 용매를 감압 증류 제거한 후, 잔류물에 1 M 염산 수용액을 첨가하고, 클로로포름으로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정 후, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 용매를 감압 증류 제거하였다. 얻어진 잔류물을 헥산-EtOAc에 의해 재결정하여 무색 분말(2.37 g)을 얻었다.
얻어진 화합물(729 mg)을 포함하는 DMF(10 ml) 용액 중에 염화암모늄(321 mg), 1-에틸-3-(디메틸아미노프로필)카르보디이미드 염산염 (767 mg), 1-히드록시벤조트리아졸(270 mg), TEA(0.83 ml)을 첨가하여 실온에서 3 시간 교반하였다. 반응 용액에 물을 첨가하고, 석출된 고형물을 여과 분리하며 물로 세정하여 담갈색 분말(722 mg)을 얻었다.
얻어진 화합물(700 mg)을 EtOAc(6 ml)에 용해시키고, 4 M 염화수소-EtOAc 용액(4.8 ml)을 첨가하여 실온에서 3 시간 교반하였다. 얻어져 오는 고체를 여과 분리하여 EtOAc로 세정 후, 건조시켜 4-(아미노카르보닐)벤질피페라진-1-카르복실레이트 염산염(541 mg)을 얻었다.
참고예 67
시클로헥실메탄올(510 mg)과 트리페닐포스핀(1.18 g)을 포함하는 THF(5 ml) 용액 중에, 4-히드록시벤조산메틸(460 mg)과 디에틸아조디카르복실레이트(0.71 ml) 를 포함하는 THF(5 ml) 용액을 0 ℃에서 적하하여 실온에서 24 시간 교반하였다. 반응 용액에 1 M 수산화나트륨 수용액(40 ml)을 첨가하여 EtOAc로 추출하고, 유기층을 포화 식염수로 세정 후, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 용매를 감압 증류 제거하고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 헥산:EtOAc=4:1(V/V))로 정제하여 무색 고형물(930 mg)을 얻었다.
얻어진 화합물(920 mg)을 포함하는 메탄올(5 ml)-THF(3 ml) 용액에 1 M 수산화나트륨 수용액(4.4 ml)을 첨가하고, 50 ℃에서 6 시간 교반하였다. 실온까지 냉각 후, EtOAc(40 ml), 물(30 ml)을 첨가하여 교반 후, 유기층을 1 M 수산화나트륨 수용액으로 추출하였다. 수층을 합하고, 진한 염산을 이용하여 pH를 1로 한 후, 수층을 클로로포름을 이용하여 추출 후, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 용매를 감압 증류 제거하고, 잔류물을 헥산-EtOAc로 재결정하여 4-(시클로헥실메톡시)벤조산(600 mg)을 얻었다.
얻어진 화합물(370 ml), tert-부틸 1-피페라진카르복실레이트(350 mg)를 포함하는 DMF(10 ml) 용액에 1-에틸-3-(디메틸아미노프로필)카르보디이미드 염산염(359 mg), 1-히드록시벤조트리아졸(254 mg)을 첨가하여 실온에서 12 시간 교반하였다. 반응 용액에 물을 첨가하고, 석출된 고체를 여과 분리하며 물로 세정 후, 감압하에 건조시켜 무색 고형물(610 mg)을 얻었다.
얻어진 화합물(600 mg)을 EtOAc(6 ml)에 용해시키고, 4 M 염화수소-EtOAc 용액(4 ml)을 첨가하여 실온에서 밤새 교반하였다. 석출된 고체를 여과 분리하여 EtOAc로 세정 후, 감압하에 건조시켜 1-[4-(시클로헥실메톡시)벤조일]피페라진 염 산염(580 mg)을 얻었다.
참고예 67과 동일하게 하여 참고예 68 내지 72의 화합물을 얻었다.
참고예 73
2 M 디메틸아민-THF 용액(11.6 ml)에 -70 ℃에서 1.59 M 노르말 부틸리튬-THF 용액(14.6 ml)을 첨가하여 10 분간 교반하였다. 0 ℃까지 승온하고, 3-클로로-5-히드록시피리딘(1.00 g)을 첨가하여 실온에서 밤새 교반하였다. 에탄올(15 ml)을 첨가한 후, 용매를 감압 증류 제거하였다. 잔류물에 물을 첨가하고, 클로로포름으로 추출하여 유기층을 포화 식염수로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 용매를 감압 증류 제거하고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 클로로포름:메탄올=10:1(V/V))로 정제하여 3-디메틸아미노-5-히드록시피리딘(176 mg)을 얻었다.
참고예 74
3-벤질옥시-5-브로모피리딘(400 mg)과 모르폴린(158 mg)을 포함하는 Tol(10 ml) 용액에 트리스디벤질리덴아세톤디팔라듐(21 mg), 2,2'-비스(디페닐포스피노)-1,1'-비나프틸(124 mg), 나트륨 tert-부톡시드(160 mg)를 차례로 첨가한 후, 85 ℃에서 4 시간 가열하였다. 용매를 감압 증류 제거하고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 클로로포름:메탄올=20:1(V/V))로 정제하여 무색 유상물(372 mg)을 얻었다.
얻어진 화합물(370 mg)을 포함하는 에탄올(20 ml) 용액에 10 ％ 팔라듐-카본(촉매량)을 첨가하고, 수소 가스 분위기하에 상온 상압에서 1.5 시간 교반하였 다. 촉매를 여과 제거하고, 얻어진 여과액을 감압 농축하여 5-히드록시-3-모르폴리닐피리진(248 mg)을 얻었다.
참고예 74와 동일하게 하여 참고예 75 내지 76의 화합물을 얻었다.
참고예 77
5-(벤젠술포닐옥시)-2-(브로모메틸)피리딘(Beilstein Registry No.7430370, 800 mg)을 포함하는 메탄올(20 ml) 용액 중에 나트륨메톡시드(393 mg)를 첨가하여 실온에서 4 시간 교반하였다. 반응 용액에 물을 첨가하고, EtOAc로 추출하여 유기층을 포화 식염수로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 용매를 감압 증류 제거하고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; EtOAc)로 정제하여 6-(메톡시메틸)피리딘-3-올(200 mg)을 얻었다.
참고예 78
3-벤질옥시-5-아미노피리딘(250 mg)의 THF(10 ml) 용액에 TEA(0.21 ml), 디-tert-부틸디카르보네이트(463 mg)를 차례로 첨가한 후, 60 ℃에서 3 시간 가열하였다. 용매를 감압 증류 제거 후, 물을 첨가하고, EtOAc로 추출하여 유기층을 포화 탄산수소나트륨 수용액, 포화 식염수로 차례로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 용매를 감압 증류 제거하고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 헥산:EtOAc=1:1(V/V))로 정제하여 무색 고체(153 mg)를 얻었다.
얻어진 화합물(240 mg)을 포함하는 에탄올(20 ml) 용액에 10 ％ 팔라듐-카본(촉매량)을 첨가하고, 수소 가스 분위기하에 상온 상압에서 1.5 시간 교반하였다. 촉매를 여과 제거하고, 얻어진 여과액을 감압 농축하여 tert-부틸(5-히드록시 피리딘-3-일)카르바메이트(167 mg)를 얻었다.
참고예 79
메틸디에틸포스포노아세테이트(732 mg)의 THF(10 ml) 용액에 0 ℃에서 수소화나트륨(60 ％ 오일 혼합물, 139 mg)의 THF(10 ml) 현탁액을 첨가하고, 15 분간 교반한 후, 5-(벤질옥시)니코틴알데히드(495 mg)를 첨가하여 상온에서 4 시간 교반하였다. 반응 용액에 물을 첨가하고, EtOAc로 추출하여 유기층을 포화 식염수로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 용매를 감압 증류 제거하여 무색 고체(680 mg)를 얻었다.
얻어진 화합물(330 mg)을 포함하는 에탄올(20 ml) 용액에 10 ％ 팔라듐-카본(촉매량)을 첨가하여 수소 가스 분위기하에 상온 상압에서 2 시간 교반하였다. 촉매를 여과 제거하고, 얻어진 여과액을 감압 농축하여 메틸 3-(5-히드록시피리딘-3-일)프로파노에이트(150 mg)를 얻었다.
참고예 80
리튬 알루미늄 하이드라이드(1.49 g)의 THF(100 ml)현탁액에 -78 ℃에서 메틸 5-(벤질옥시)니코티노에이트(3.52 g)의 THF(30 ml) 용액을 첨가하여 15 분간 교반한 후, 상온에서 2 시간 교반하였다. 반응 용액을 0 ℃로 냉각 후에 물(1.49 ml), 15 ％ 수산화나트륨 수용액(1.49 ml), 물(4.47 ml)을 차례로 첨가하였다. 고형물을 여과 제거 후, 얻어진 여과액을 감압 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 클로로포름:메탄올=10:1(V/V))로 정제하여 무색 고체(1.41 g)를 얻었다.
얻어진 화합물(450 mg)을 포함하는 벤젠(20 ml) 용액에, tert-부틸브로모아세테이트(609 mg), 테트라부틸암모늄히드로겐술페이트(35 mg), 50 ％ 수산화나트륨 수용액(2 ml)을 차례로 첨가하여 실온에서 밤새 교반하였다. 1 M 염산 수용액으로 중화시키고, EtOAc로 추출하여 유기층을 포화 식염수로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 용매를 감압 증류 제거하고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 헥산:EtOAc=6:4(V/V))로 정제하여 무색 유상물(576 mg)을 얻었다.
얻어진 화합물(570 mg)을 포함하는 에탄올(20 ml) 용액에 10 ％ 팔라듐-카본(촉매량)을 첨가하고, 수소 가스 분위기하에 상온 상압에서 1 시간 교반하였다. 촉매를 여과 제거하고, 얻어진 여과액을 감압 농축하며 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 클로로포름:메탄올=15:1(V/V))로 정제하여 tert-부틸[(5-히드록시피리딘-3-일)메톡시]아세테이트(400 mg)를 얻었다.
참고예 81
메틸(2E)-3-[5-(벤질옥시)피리딘-3-일]아크릴레이트(300 mg)를 포함하는 TFA(10 ml) 용액에 펜타메틸벤젠(826 mg)을 첨가하여 60 ℃에서 밤새 교반하였다. 용매를 감압 증류 제거하고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 클로로포름:메탄올=10:1(V/V))로 정제하여 tert-부틸(5-히드록시피리딘-3-일)아세테이트(180 mg)를 얻었다.
참고예 82
메틸 3-히드록시니코티노에이트(1.50 g)의 THF(60 ml) 용액 중에 디이소프로 필에틸아민(2.05 ml), 메톡시메틸클로라이드(0.89 ml)를 차례로 첨가한 후, 실온에서 밤새 교반하였다. 용매를 감압 증류 제거 후, 물을 첨가하고, 클로로포름으로 추출하여 유기층을 포화 식염수로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 용매를 감압 증류 제거하여 무색 유상물(2.01 g)을 얻었다.
리튬 알루미늄 수소화(838 mg)의 THF(50 ml)현탁액에 -78 ℃에서 얻어진 화합물(1.98 g)의 THF(20 ml) 용액을 첨가하여 30 분간 교반한 후, 상온에서 2 시간 교반하였다. 반응 용액을 0 ℃로 냉각 후에 물(0.84 ml), 15 ％ 수산화나트륨 수용액(0.84 ml), 물(2.52 ml)을 차례로 첨가하였다. 고형물을 여과 제거 후, 얻어진 여과액을 감압 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; EtOAc)로 정제하여 무색 유상물(838 mg)을 얻었다.
얻어진 화합물(828 ml)을 포함하는 피리딘(10 ml) 용액에 무수 아세트산(1.39 ml)을 첨가하고, 실온에서 1.5 시간 교반하였다. 용매를 감압 증류 제거 후, Tol(10 ml)을 첨가하고, 공비하여 무색 유상물(1.01 g)을 얻었다.
얻어진 화합물(1.01 g)을 포함하는 디옥산(10 ml) 용액에 4 M 염화수소-디옥산 용액(3.58 ml)을 첨가하여 실온에서 1 시간 교반하였다. 용매를 감압 증류 제거하여 (5-히드록시피리딘-3-일)메틸아세테이트 염산염(973 mg)을 얻었다.
참고예 95
3-시아노벤질브로마이드(2.0 g)의 Tol(50 ml) 용액에 트리페닐포스핀(2.8 g)을 첨가하여 80 ℃에서 5 시간 교반하였다. 실온으로 냉각 후, 석출된 결정을 여과하고, Tol로 세정하였다. 감압하에 건조시켜 (3-시아노벤질)(트리페닐)포스포늄 브로마이드(3.4 g)를 얻었다.
(3-시아노벤질)(트리페닐)포스포늄브로마이드(1.6 g), tert-부틸 4-포르밀-1-피페리딘카르복실레이트(0.75 g)의 DMF(20 ml) 용액에 빙냉하에 수소화나트륨(60 ％ 유상물, 141 mg)을 첨가하여 실온에서 밤새 교반하였다. 반응액을 EtOAc로 희석하고, 물로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 용매를 증류 제거하고, 얻어진 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 헥산:EtOAc=6:1(V/V)로 정제하여 유상물을 얻었다. 얻어진 유상물의 EtOAc(30 ml) 용액에 10 ％ 팔라듐-탄소(100 mg)를 첨가하여 수소 기류하에 2 시간 교반하였다. 촉매를 셀라이트를 이용하여 제거하고, 용매를 농축하여 유상물을 얻었다. 얻어진 유상물을 EtOAc(10 ml)에 용해시키고, 4 M 염산-EtOAc 용액(5 ml)을 첨가하여 실온에서 6 시간 교반 후 농축하였다. 얻어진 고체를 에테로로 세정 후, 감압하에 건조시켜 3-[2-(4-피페리디닐)에틸]벤조니트릴 염산염(506 mg)을 얻었다.
참고예 95와 동일하게 하여 참고예 96 내지 101의 화합물을 얻었다.
참고예 102
3-브로모메틸벤조산메틸(50.0 g)의 Tol(400 ml) 용액에 트리페닐포스핀(85.8 g)을 첨가하여 80 ℃에서 10 시간 교반하였다. 실온에 냉각 후, 석출된 결정을 여과하여 Tol로 세정하였다. 감압하에 건조시켜 (3-메톡시카르보닐벤질)(트리페닐)포스포늄브로마이드(107.6 g)를 얻었다.
(3-메톡시카르보닐벤질)(트리페닐)포스포늄브로마이드(84.6 g)의 DMF(250 ml) 용액에, 빙냉하에 칼륨 tert-부톡시드(22.5 g)를 첨가하여 실온에서 30 분 교 반 후, tert-부틸 4-포르밀-1-피페리딘카르복실레이트(30.6 g)의 DMF(50 ml) 용액을 빙냉하에서 첨가하여 실온에서 밤새 교반하였다. 반응액에 아세트산(11.5 ml)을 첨가하여 실온에서 1 시간 교반 후, EtOAc로 희석하여 물, 포화 식염수로 세정 후, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 용매를 증류 제거하고, 얻어진 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 헥산:EtOAc=7:1(V/V)로 정제하였다. 잔사를 EtOAc에 용해시키고, 활성탄을 첨가하여 실온에서 2 시간 교반하였다. 셀라이트를 이용하여 활성탄을 제거하고, 용매를 감압 증류 제거하여 무색 유상물을 얻었다.
얻어진 유상물의 EtOAc(400 ml) 용액에 10 ％ 팔라듐-탄소(4.58 g)를 첨가하여 수소 기류하에 2 시간 교반하였다. 촉매를 셀라이트를 이용하여 제거하고, 용매를 농축시켜 tert-부틸 4-{2-[3-(메톡시카르보닐)페닐]에틸}-1-피페리딘카르복실레이트(45.4 g)을 얻었다.
참고예 102와 동일하게 하여 참고예 103의 화합물을 얻었다.
참고예 104
tert-부틸 4-{2-[3-(메톡시카르보닐)페닐]에틸}-1-피페리딘카르복실레이트(45.4 g)의 THF(200 ml), 메탄올(50 ml) 혼합 용액에 1 M 수산화나트륨 수용액(196 ml)을 첨가하여 60 ℃에서 2 시간 교반하였다. 유기용매를 감압 증류 제거하고, 빙냉하에 잔사에 0.5 M 염산(400 ml)을 첨가하였다. 반응액을 EtOAc로 희석하고, 물, 포화 식염수로 세정 후, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 용매를 증류 제거하여 3-{2-[1-(tert-부톡시카르보닐)-4-피페리디닐]에틸} 벤조산(43.5 g)을 얻었다.
참고예 104와 동일하게 하여 참고예 105의 화합물을 얻었다.
참고예 106
3-{2-[1-(tert-부톡시카르보닐)-4-피페리디닐]에틸}벤조산(17.8 g)을 DMF(200 ml)에 용해시키고, 1-[3-(디메틸아미노)프로필]-3-에틸카르보디이미드 염산염(15.4 g), 1-히드록시벤조트리아졸(10.8 g)을 첨가하여 실온에서 2 시간 교반하였다. 반응액에 염화암모늄(8.57 g), TEA(22.3 ml)를 첨가하여 실온에서 밤새 교반하였다. 반응액에 포화 탄산수소나트륨 수용액을 첨가하고, 석출된 결정을 여과하고, 건조시켜 tert-부틸 4-{2-[3-(아미노카르보닐)페닐]에틸}-1-피페리딘카르복실레이트(10.8 g)을 얻었다.
참고예 106과 동일하게 하여 참고예 107 내지 118의 화합물을 얻었다.
참고예 119
4-[2-(4-{[(2-히드록시에틸)아미노]카르보닐}페닐)에틸]피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸에스테르(280 mg), 사브롬화탄소(247 mg), 2,6-루티딘(103 ㎕)을 디클로로메탄(5.6 ml)에 용해시키고, 빙냉하에 트리페닐포스핀(195 mg)을 첨가하여 실온에서 3 시간 교반하였다. 용매를 감압 증류 제거하고, 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 헥산:EtOAc=3:7(V/V)로 정제하여 4-{2-[4-(1-아지리디닐카르보닐)페닐]에틸}-1-피페리딘카르복실산 tert-부틸에스테르(136 mg)를 무색 유상물로서 얻었다.
참고예 120
tert-부틸 4-{2-[3-(아미노카르보닐)페닐]에틸}-1-피페리딘카르복실레이 트(13.8 g)을 EtOAc(200 ml)에 용해시키고, 4 M 염산-EtOAc 용액(130ml)을 첨가하여 실온에서 4 시간 교반 후, 농축하였다. 얻어진 잔사에 아세토니트릴을 첨가하여 가열하고, 석출된 결정을 여과 분리하여 EtOAc로 세정 후, 감압하에 건조시켜 3-[2-(4-피페리디닐)에틸]벤즈아미드 염산염(11.2 g)을 얻었다.
참고예 120과 동일하게 하여 참고예 121 내지 139의 화합물을 얻었다.
참고예 140
아르곤 기류하에 tert-부틸 4-[2-(3-브로모페닐)에틸]-1-피페리딘카르복실레이트(0.50 g)와 페닐붕소산(0.20 g)의 Tol(6 ml)-물(2 ml) 용액에 탄산나트륨(0.43 g), 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(80 mg)을 첨가하여 100 ℃에서 7 시간 가열 교반하였다. 실온으로 복귀시키고, EtOAc로 희석하여 포화 탄산수소나트륨 수용액으로 세정하였다. 무수 황산마그네슘으로 건조 후, 용매를 증류 제거하고, 얻어진 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 헥산:EtOAc=10:1(V/V)로 정제하여 tert-부틸 4-[2-(3-비페닐)에틸]-1-피페리딘카르복실레이트(0.41 g)를 얻었다.
tert-부틸 4-[2-(3-비페닐)에틸]-1-피페리딘카르복실레이트(0.41 g)의 EtOAc(4 ml) 용액에 4 M 염산/EtOAc(1.5 ml)을 첨가하여 실온에서 밤새 교반하였다. 석출된 결정을 여과 분리하고, EtOAc 헥산으로 세정 후 감압하에 건조시켜 4-[2-(3-비페닐)에틸]피페리딘 염산염(0.31 g)을 얻었다.
참고예 140과 동일하게 하여 참고예 141 내지 142의 화합물을 얻었다.
참고예 143
4,4'-(1,3-프로판디일)디피페리딘(5.0 g)의 디클로로메탄(50 ml) 용액에 빙 냉하에 디-tert-부틸디카르보네이트(2.6 g)를 첨가하여 실온에서 밤새 교반하였다. 반응액을 클로로포름으로 희석하고, 포화 식염수로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 용매를 증류 제거하고, 얻어진 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 클로로포름:메탄올:진한 암모니아수=4:1:0.1(V/V))로 정제하여 tert-부틸 4-[3-(4-피페리디닐)프로필]-1-피페리딘카르복실레이트(2.2 g)를 얻었다.
아르곤 분위기하에 2-클로로-6-메틸피리딘(0.56 g)과 tert-부틸 4-[3-(4-피페리디닐)프로필]-1-피페리딘카르복실레이트(1.1 g)의 Tol(22 ml) 용액에 나트륨 tert-부톡시드(0.52 g), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(100 ml), 2-(디시클로헥실포스피노)비페닐(76 mg)을 첨가하여 100 ℃에서 1 시간 가열 교반하였다. 실온으로 복귀시키고, EtOAc로 희석하여 포화 탄산수소나트륨 수용액으로 세정하였다. 무수 황산마그네슘으로 건조 후, 용매를 증류 제거하고, 얻어진 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 헥산:EtOAc=10:1(V/V))로 정제하여 tert-부틸 4-{3-[1-(6-메틸-2-피리디닐)-4-피페리딜]프로필}-1-피페리딘카르복실레이트(1.3 g)를 얻었다.
tert-부틸 4-{3-[1-(6-메틸-2-피리디닐)-4-피페리디닐]프로필}-1-피페리딘카르복실레이트(1.3 g)의 EtOAc(25 ml) 용액에 4 M 염산-EtOAc(10 ml)을 첨가하여 실온에서 밤새 교반하였다. 반응액을 농축시키고, 2-프로판올-디에틸에테르를 첨가하여 교반하였다. 석출된 고체를 여과 분리한 후, 감압하에 건조시켜 2-메틸-6-{4-[3-(4-피페리디닐)프로필]-1-피페리딜}피리딘 2염산염(1.1 g)을 얻었다.
참고예 143과 동일하게 하여 참고예 144 내지 145의 화합물을 얻었다.
참고예 146
tert-부틸-4-(3-히드록시프로필)피페리딘-1-카르복실레이트(8.00 g) 및 TEA(4.8 mL)의 염화메틸렌(200 mL) 용액에 메탄술포닐클로라이드(2.7 mL)를 0 ℃에서 적하하여 실온에서 밤새 교반하였다. 반응액을 포화 중조수 및 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산마그네슘으로 건조시킨 후, 용매를 증류 제거하였다. 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; EtOAc:헥산=1:3(V/V))에 의해 정제하여 tert-부틸 4-{3-[(메틸술포닐)옥시]프로필}피페리딘-1-카르복실레이트(10.1 g)를 얻었다.
tert-부틸 4-{3-[(메틸술포닐)옥시]프로필}피페리딘-1-카르복실레이트(1.00 g), 1-피페라진-1-일이소퀴놀린 2염산염(980 mg), 탄산세슘(1.02 g) 및 요오드화나트륨(467 mg)의 DMI(20 mL) 현탁액을 140 ℃에서 1 시간 교반하였다. 반응액에 EtOAc를 첨가하여 물, 포화 탄산수소나트륨 수용액으로 차례로 세정한 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시켜 용매를 증류 제거하였다. 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 헥산:EtOAc=1:1(V/V))에 의해 정제하여 tert-부틸 4-[3-(4-이소퀴놀린-1-일피페라진-1-일)프로필]피레리딘-1-카르복실레이트(1.07 g)를 담황색 유상 물질로서 얻었다.
tert-부틸 4-[3-(4-이소퀴놀린-1-일피페라진-1-일)프로필]피페리딘-1-카르복실레이트(1.44 g)의 EtOAc(15 mL) 용액에 4 M 염산-EtOAc 용액(5.0 mL)을 적하하여 밤새 교반하였다. 용매를 증류 제거한 후, 고체를 EtOAc로 세정하고, 여과 분리 하여 1-[4-(3-피페리딘-4-일프로필)피페라진-1-일]이소퀴놀린 2염산염(1.32 g)을 백색 고체로서 얻었다.
참고예 146과 동일하게 하여 참고예 154의 화합물을 얻었다.
참고예 147
5-히드록시니코틴산메틸(5.3 g), 디이소프로필에틸아민(6.1 ml)의 디클로로메탄(100 ml) 용액에 클로로포름산 4-니트로페닐(7.0 g)을 첨가하여 실온에서 1 시간 교반하였다. 반응액을 물로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 용매를 증류 제거하고, 얻어진 고체를 EtOAc 헥산으로 세정 후, 감압하에 건조시키고 메틸 5{[(4-니트로페녹시)카르보닐]옥시}니코티네이트(8.4 g)를 얻었다.
참고예 147과 동일하게 하여 참고예 148의 화합물을 얻었다.
참고예 151
3-{2-[1-(tert-부톡시카르보닐)-4-피페리디닐]에틸}벤조산(1.25 g), 1-[3-(디메틸아미노)프로필]-3-에틸카르보디이미드 염산염(863 mg), 1-히드록시벤조트리아졸(608 mg)의 DMF(15 mL) 용액을 실온에서 1 시간 교반한 후, 2-브로모에틸아민브롬화수소산염(2.30 g)의 TEA(1.6 mL) 용액을 첨가하여 밤새 더 교반하였다. 반응액에 EtOAc 및 포화 중조수를 첨가하여 추출하고, 포화 식염수 세정, 무수 황산마그네슘 건조시킨 후, 용매를 증류 제거하여 tert-부틸 4-[2-(3-{[(2-브로모에틸)아미노]카르보닐}페닐)에틸]피페리딘-1-카르복실레이트의 조제물을 얻었다.
tert-부틸 4-[2-(3-{[(2-브로모에틸)아미노]카르보닐}페닐)에틸]피페리딘-1-카르복실레이트 조제물의 EtOAc(15 mL) 용액에 4 M 염산-EtOAc 용액(5 mL)을 실온에서 첨가하여 밤새 교반하였다. 용매를 감압하에 증류 제거함으로써 N-(2-브로모 에틸)-3-(2-피페리딘-4-일에틸)벤즈아미드 염산염(1.27 g)을 백색 고체로서 얻었다.
N-(2-브로모에틸)-3-(2-피페리딘-4-일에틸)벤즈아미드 염산염(1.20 g), 메틸 5-{[(4-니트로페녹시)카르보닐]옥시}니코티네이트의 (1.02 g)의 아세토니트릴(30 mL) 현탁액에 TEA(0.90 mL)를 적하하여 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 용매를 감압 증류 제거한 후, 포화 중조수를 첨가하여 EtOAc로 추출하고, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 이것을 여과하여 용매를 증류 제거하고, 잔사를 2회의 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(염기성 실리카; 용출액; 헥산:EtOAc=1:2(V/V), 이어서 중성 실리카; 용출액; 클로로포름:메탄올=19:1(V/V))에 의해 정제하여 메틸 5-[({4-[2-(3-{[(2-브로모에틸)아미노]카르보닐}페닐)에틸]피페리딘-1-일}카르보닐)옥시]니코티이트(762 mg)를 백색 분말로서 얻었다.
메틸 5-[({4-[2-(3-{[(2-브로모에틸)아미노]카르보닐}페닐)에틸]피페리딘-1-일}카르보닐)옥시]니코티네이트(750 mg), 탄산칼륨(300 mg), 요오드화칼륨(361 mg)의 DMF(10 mL) 현탁액을 80 ℃에서 1 시간 교반하였다. 반응액을 방냉 후, EtOAc를 첨가하여 포화 중조수, 포화 식염수로 차례로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시켜 용매를 감압 증류 제거하였다. 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 클로로포름:메탄올=20:1(V/V))로 정제하여 메틸 5{[(4-{2-[3-(아지리딘-1-일카르보닐)페닐]에틸}피페리딘-1-일)카르보닐]옥시}니코티네이트(630 mg)를 무색 유상 물질로서 얻었다.
참고예 152
3-{2-[1-(tert-부톡시카르보닐)-4-피페리딜]에틸}벤조산(600 mg), TEA(0.3 ml)의 Tol 용액(10 ml)에 빙냉하에 디페닐포스포릴아지드(540 mg)를 첨가하여 실온에서 2 시간 교반하였다. 반응 용액에 EtOAc를 첨가하여 포화 중조수, 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 용매를 감압 증류 제거하여 무색 유상물(630 mg)을 얻었다. 이 유상물(400 mg)의 Tol 용액(10 ml)을 110 ℃에서 1 시간 교반하였다. 실온으로 복귀시키고, 30 ％ 암모니아수 용액(0.2 ml)을 첨가하여 실온에서 15 시간 교반하였다. 반응 용액에 EtOAc를 첨가하여 1 규정 염산 수용액, 포화 식염수로 차례로 세정하고, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 용매를 감압 증류 제거하고, 얻어진 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 클로로포름:메탄올=95:5(V/V))로 정제하여 tert-부틸 4-(2-{3-[(아미노카르보닐)아미노]페닐}에틸)-1-피페리딘카르복실레이트(227 mg)를 얻었다.
tert-부틸 4-(2-{3-[(아미노카르보닐)아미노]페닐}에틸)-1-피페리딘카르복실레이트(227 mg)의 EtOAc(9 ml) 용액에 4 M 염산-EtOAc(4 ml)을 첨가하여 실온에서 3 시간 교반하였다. 용매를 감압 증류 제거하여 1-{3-[2-(4-피페리딜)에틸]페닐}우레아 염산염(185 mg)을 얻었다.
1-{3-[2-(4-피페리디닐)에틸]페닐}우레아 염산염(185 mg), TEA(0.2 ml)의 아세토니트릴(5 ml) 용액에 메틸 5-{[(4-니트로페녹시)카르보닐]옥시}니코티네이트(228 mg)를 첨가하여 실온에서 밤새 교반하였다. 반응액을 EtOAc로 희석하고, 포화 탄산수소나트륨 수용액, 포화 식염수로 차례로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 용매를 증류 제거하고, 얻어진 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그 래피(용출액; 클로로포름:메탄올=10:1(V/V))로 정제하여 메틸 5-({[4-(2-{3-[(아미노카르보닐)아미노]페닐}에틸)-1-피페리딜]카르보닐}옥시)니코티네이트(183 mg)를 얻었다. 참고예 152와 동일하게 하여 참고예 153의 화합물을 얻었다.
참고예 155
4-에티닐피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸에스테르(12.5 g, 요오도벤젠(12.8 g)을 THF:TEA=1:1(V/V)의 혼합 용매(125 ml)에 용해시키고, 실온에서 요오드화 구리(455 mg), 팔라듐테트라키스트리페닐포스핀 착체(1.38 g)를 차례로 첨가하여 밤새 실온에서 교반하였다. 용매를 증류 제거하고, EtOAc를 첨가하여 1 M 염산 수용액, 물, 포화 식염수로 차례로 세정하였다. 황산마그네슘으로 건조 후, 용매를 증류 제거하여 다갈색 유상물을 얻었다. 이것을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(추출액; 헥산:EtOAc=19:1(V/V))로 정제하여 4-(페닐에티닐)피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸에스테르(15.5 g)를 담갈색 유상물로서 얻었다.
4-(페닐에티닐)피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸에스테르(7.0 g)에 4 M 염화수소-EtOAc 용액(70 ml)을 첨가하여 실온에서 30 분간 교반하였다. 용매를 증류 제거하여 4-(페닐에티닐)피페리딘 염산염(5.4 g)을 백색 분말로서 얻었다.
실시예 1
피페리딘-1-카르보닐클로라이드(745 mg)를 포함하는 THF(10 ml) 용액 중에 3-히드록시피리딘(400 mg), TEA(1.17 ml), DMAP(촉매량)을 차례로 첨가한 후, 60 ℃에서 5 시간 가열하였다. 반응 용액을 냉각 후, 물(3 ml)을 첨가하고, EtOAc로 추출하였다. 추출액을 수세 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 용매를 감압 증류 제거하고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 헥산:EtOAc=1:1(V/V))로 정제하여 무색 유상물을 얻었다. 얻어진 유상 물질을 에탄올에 용해시키고, 옥살산(378 mg)의 에탄올 용액을 첨가하며 처리하여 무색 분말을 얻었다. 이것을 헥산-에탄올에 의해 재결정하여 (피리딘-3-일)피페리딘-1-카르복실레이트 옥살산염(761 mg)을 얻었다.
실시예 2
트리포스겐(590 mg)을 포함하는 염화메틸렌(25 ml) 용액 중에 3-히드록시피리딘(568 mg), 피리딘(724 μl)을 포함하는 염화메틸렌(20 ml) 용액을 적하하여 실온에서 1 시간 교반하였다. 용매를 감압 증류 제거하여 잔류물을 피리딘(30 ml)에 용해시키고, 참고예 22에서 얻어진 화합물(1.2 g)을 첨가하고, 70 ℃에서 4 시간 가열하였다. 반응 용액을 감압하에 농축하여 클로로포름 및 탄산수소나트륨 수용액을 첨가하고, 유기층을 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 용매를 감압 증류 제거하고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 헥산:EtOAc=1:2(V/V))로 정제하여 무색 분말을 얻었다. 이것을 헥산-EtOAc로 재결정하여 (피리딘-3-일)-4-{4-[(3-플루오로벤질)옥시]페녹시}피페리딘-1-카르복실레이트(861 mg)를 얻었다.
실시예 2와 동일하게 하여 실시예 3 내지 118, 389 내지 391, 416, 417과 참고예 83 내지 93의 화합물을 얻었다.
실시예 119
트리포스겐(1.48 g)을 포함하는 염화메틸렌(30 ml) 용액 중에, 3-히드록시피 리딘(1.43 g), 피리딘(1.46 ml)을 포함하는 염화메틸렌(20 ml) 용액을 적하하여 실온에서 1 시간 교반하였다. 반응 용액에 tert-부틸 1-피페라진카르복실레이트(2.0 g), 피리딘(0.97 ml)을 포함하는 염화메틸렌(5 ml) 용액을 적하 후, 피리딘(20 ml)을 첨가하여 70 ℃에서 4 시간 가열하였다. 반응 용액을 감압하에 농축 후, EtOAc로 희석하여 유기층을 포화 탄산수소나트륨 수용액으로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 용매를 감압 증류 제거하고, 잔류물을 염기성 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 헥산:EtOAc=4:1(V/V))로 정제하여 무색 고체(3.0 g)를 얻었다.
얻어진 화합물(3.0 g)을 EtOAc(20 ml)-2-프로판올(10 ml)에 용해시키고, 4 M 염화수소-EtOAc 용액(10 ml)을 첨가하여 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 용액을 감압하에 농축하고, 얻어진 고체를 EtOAc로 세정 후, 감압하에 건조시켜 3-피리딜 1-피페라진카르복실레이트 2염산염(2.66 g)을 얻었다.
얻어진 화합물(190 mg), 및 참고예 70을 참고로 시클로옥틸메탄올로부터 합성한 4-(시클로옥틸메톡시)벤조산(176 mg)을 포함하는 DMF(5 ml) 용액에 1-에틸-3-(디메틸아미노프로필)카르보디이미드 염산염(150 mg), 1-히드록시벤조트리아졸(110 mg), 디이소프로필에틸아민(0.23 ml)을 첨가하여 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 용액을 EtOAc로 희석하고, 유기층을 포화 탄산수소나트륨 수용액으로 세정 후, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 용매를 감압 증류 제거하고, 잔류물을 EtOAc 헥산으로 재결정하여 3-피리딜 4-[4-(시클로옥틸메톡시)벤조일]-1-피페라진카르복실레이트(240 mg)를 얻었다.
실시예 119와 동일하게 하여 실시예 120 내지 136의 화합물을 얻었다.
실시예 137
6-클로로니코티노니트릴(1.0 g), 3-클로로벤질알코올(1.0 g)을 포함하는 DMF(10 ml) 용액에 칼륨 tert-부톡시드(810 mg)를 첨가하여 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 용액에 물을 첨가하고, 석출된 고체를 여과 분리하여 물, 헥산으로 차례로 세정 후, 감압하에 건조시켜 갈색 고체(1.3 g)를 얻었다.
얻어진 화합물(1.3 g)을 포함하는 에탄올(10 ml) 용액에 5 M 수산화나트륨 수용액(10 ml)을 첨가하고, 100 ℃에서 4 시간 교반하였다. 실온까지 냉각 후, 1 규정 염산(56 ml)을 첨가하고, 석출된 고체를 여과 분리하며 물로 세정 후, 감압하에 건조시켜 무색 고체(0.82 g)를 얻었다.
*얻어진 화합물(176 mg), 3-피리딜 1-피페라진카르복실레이트 2염산염(166 mg)을 포함하는 DMF(5 ml) 용액에 1-에틸-3-(디메틸아미노프로필)카르보디이미드 염산염(150 mg), 1-히드록시벤조트리아졸(110 mg), 디이소프로필에틸아민(0.23 ml)을 첨가하여 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 용액을 EtOAc로 희석하고, 유기층을 포화 탄산수소나트륨 수용액으로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 용매를 감압 증류 제거하고, 잔류물을 염기성 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 헥산:EtOAc=1:2(V/V))로 정제하여 무색 유상물(140 mg)을 얻었다.
얻어진 화합물(140 mg)을 포함하는 2-프로판올 용액에 옥살산(35 mg)을 첨가하여 30 분간 교반하였다. 석출된 고체를 여과 분리하고, 2-프로판올-헥산으로 세 정 후, 감압하에 건조시켜 3-피리딜 4-({6-[(3-클로로벤질)옥시]-3-피리딜}카르보닐)-1-피페라진카르복실레이트 0.5 옥살산염(120 mg)을 얻었다.
실시예 137과 동일하게 하여 실시예 138의 화합물을 얻었다.
실시예 139
4-히드록시벤즈아미드(686 mg)를 포함하는 아세토니트릴(15 ml) 용액에 탄산칼륨(1.04 g), 브로모아세트산에틸(0.610 ml)를 첨가하여 80 ℃에서 2 시간 가열하였다. 반응 용액을 냉각 후, 물(45 ml)을 첨가하고, 석출된 고형물을 여과 분리하고, 물로 세정 후 건조시켜 담갈색 분말의 에틸[4-(아미노카르보닐)페녹시]아세테이트(893 mg)를 얻었다.
얻어진 화합물(870 mg)을 THF(10 ml)에 용해시키고, 에탄올(0.274 ml)과 1 M 수산화나트륨 수용액(4.68 ml)을 첨가하여 실온에서 4 시간 교반하였다. 반응 용액을 감압 농축 후, 1 M 염산 수용액으로써 산성으로 하고, 석출된 고형물을 여과 분리하여 건조시켜 담갈색 분말의 [4-(아미노카르보닐)페녹시]아세트산(714 mg)을 얻었다.
실시예 121의 방법으로 얻어진 3-피리딜 1-피페리딘카르복실레이트 2염산염(252 mg)을 포함하는 DMF(5 ml) 용액 중에 TEA(0.251 ml), 1-[3-(디메틸아미노)프로필]-3-에틸카르보디이미드 염산염(259 mg), 1-히드록시벤조트리아졸(122 mg) 및 상술한 합성 화합물[4-(아미노카르보닐)페녹시]아세트산(184 mg)을 첨가하여 실온에서 5 시간 교반하였다. 반응 용액에 포화 탄산수소나트륨 수용액을 첨가하고, 클로로포름으로 추출하여 유기층을 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 용매를 감 압 증류 제거하고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 클로로포름:메탄올=95:5(V/V))로 정제하며, 얻어진 고체를 EtOAc 아세토니트릴로 재결정하여 피리딘-3-일-4-{[4-(아미노카르보닐)페녹시]아세틸}피페리딘-1-카르복실레이트(274 mg)를 얻었다. 실시예 139와 동일하게 하여 실시예 140 내지 141의 화합물을 얻었다.
실시예 142
3-피리딜 1-피페라진카르복실레이트 2염산염(150 mg)을 포함하는 디클로로메탄(5 ml) 용액에 TEA(0.23 ml), 벤젠술포닐클로라이드(0.075 ml)를 첨가하여 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 용액을 클로로포름으로 희석하고, 유기층을 포화 탄산수소나트륨 수용액으로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 용매를 감압 증류 제거하고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 클로로포름)로 정제하며, 얻어진 고체를 2-프로판올로 재결정하여 3-피리딜 4-(페닐 술포닐)-1-피페라진카르복실레이트(130 mg)를 얻었다.
실시예 142와 동일하게 하여 실시예 143의 화합물을 얻었다.
실시예 144
3-피리딜 1-피페라진카르복실레이트 2염산염(150 mg)을 포함하는 피리딘(3 ml) 용액에 클로로포름산벤질(91 mg)을 첨가하여 실온에서 12 시간 교반하였다. 반응 용액을 감압하에 농축하고, EtOAc로 희석하여 유기층을 포화 탄산수소나트륨 수용액으로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 용매를 감압 증류 제거하고, 2-프로판올(3 ml)로 희석 후, 톨루엔술폰산 수화물(100 mg)을 첨가하여 교반 하였다. 석출된 결정을 여과하고, 2-프로판올로 재결정하여 벤질 3-피리딜 1,4-피페라진디카르복실레이트 토실산염(98 mg)을 얻었다.
실시예 144와 동일하게 하여 실시예 145 내지 146의 화합물을 얻었다.
실시예 147
3-피리딜 4-[(4-벤질옥시)벤조일]-1-피페라진카르복실레이트(1.3g)를 포함하는 THF(20 ml)-2-프로판올(20 ml) 용액에 10 ％ 팔라듐-카본(촉매량)을 첨가하여 수소 가스 분위기하에 상온 상압에서 12 시간 교반하였다. 촉매를 여과 제거하고, 여과액을 감압 농축 후, 얻어진 고형물을 EtOAc 헥산으로 재결정하여 3-피리딜 4-(4-히드록시벤조일)-1-피페라진카르복실레이트(950 mg)를 얻었다.
3-클로로벤질알코올(200 mg)과 트리페닐포스핀(360 mg)을 포함하는 THF(5 ml) 용액 중에, 3-피리딜 4-(4-히드록시벤조일)-1-피페라진카르복실레이트(300 mg)와 디에틸아조디카르복실레이트(0.62 ml, 40 ％ Tol 용액)을 포함하는 THF(5 ml) 용액을 0 ℃에서 적하하여 실온에서 3일간 교반하였다. 반응 용액을 클로로포름으로 희석하고, 포화 탄산수소나트륨 수용액으로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 용매를 감압 증류 제거하고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 클로로포름:메탄올=95:5(V/V))로 정제하며, 얻어진 고형물을 2-프로판올을 이용하여 재결정하여 3-피리딜 4-{4-[(3-클로로벤조일)옥시]벤질}-1-피페라진카르복실레이트(260 mg)를 얻었다.
실시예 147과 동일하게 하여 실시예 148 내지 166의 화합물을 얻었다.
실시예 167
3-피리딜 4-(4-히드록시벤조일)-1-피페라진카르복실레이트(530 mg), 메틸 3-(브로모메틸)벤조에이트(450 mg)를 포함하는 아세토니트릴(10 ml) 용액에 탄산칼륨(270 mg)을 첨가하여 80 ℃에서 1 시간 교반하였다. 반응 용액에 물을 첨가하고, EtOAc로 추출하여 유기층을 물로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 용매를 감압 증류 제거하고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 헥산:EtOAc=1:4(V/V))로 정제하여 무색 고형물(470 mg)을 얻었다.
얻어진 고형물(100 mg)을 EtOAc 헥산으로 재결정하여 3-피리딜 4-(4-{[3-(메톡시카르보닐)벤질]옥시}벤조일)-1-피페라진카르복실레이트(88 mg)를 얻었다.
실시예 168
4-에틸 1-피리딘-3-일피페리딘-1,4-디카르복실레이트(0.732g)를 THF(15 ml),에탄올(8.0 ml)에 용해시키고, 빙냉하에서 1 M 수산화나트륨 수용액(3.9 ml)을 적하하였다. 실온에서 2 시간 혼합한 후, 1 M 염산(0.5 ml)으로 중화하였다. 반응액을 감압 농축하고, 잔류물에 메탄올을 첨가하여 흡인 여과로 석출된 염을 제거하였다. 여과액을 농축시켜 무색 고체 1-[(피리딘-3-일옥시)카르보닐]피페리딘-4-카르복실산(0.727 g)을 얻었다.
얻어진 화합물(0.60 g)을 디메틸포름아미드(10 ml)에 용해시키고, 1-[3-(디메틸아미노)프로필]-3-에틸카르보디이미드 염산염(0.93 g), 1-히드록시벤조트리아졸(0.51 g) 및 시클로헥산메틸아민(0.43 g)을 첨가하여 실온에서 15 시간 혼합하였다. 반응 용액에 물을 첨가하여 1 시간 더 혼합한 후, EtOAc와 탄산수소나트륨 용액을 첨가하여 분액하고, 유기층을 0.5 M 염산, 포화 식염수로 차례로 세정하였다. 유기층을 무수 황산마그네슘으로 건조시키고, 용매를 감압 증류 제거하며, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 헥산:EtOAc=1:4(V/V))로 정제하여 무색 분말(0.69 g)을 얻었다. 이것을 에탄올, 헥산에 의해 재결정하여 (피리딘-3-일)-4-{[(시클로헥실메틸)아미노]카르보닐}피페리딘-1-카르복실레이트(261 mg)를 얻었다. 실시예 168과 동일하게 하여 실시예 169 내지 192, 383 내지 388과 참고예 94의 화합물을 얻었다.
실시예 193
1-벤질 2-메틸 1,2-피페라진디카르복실레이트(660 mg: Benstein Registry No.4236331)를 포함하는 피리딘(10 ml) 용액에 3-피리디닐클로로카르보네이트(330 mg)를 첨가하여 80 ℃에서 7 시간 교반하였다. 반응 용액을 감압하에 농축 후, 클로로포름으로 희석하고, 유기층을 포화 탄산수소나트륨 수용액으로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 용매를 감압 증류 제거하고, 잔류물을 염기성 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 헥산:EtOAc=1:1(V/V))로 정제하여 무색 유상물(700 mg)을 얻었다.
얻어진 화합물(430 mg)을 포함하는 THF(5 ml) 용액에 1 M 수산화나트륨 수용액(1.2 ml)을 첨가하여 50 ℃에서 3 시간 교반하였다. 1 M 수산화나트륨 수용액(0.8 ml)을 첨가하여 50 ℃에서 1 시간 더 가열 후, 실온까지 냉각시키고, 1 규정 염산(2 ml)을 첨가하였다. 반응 용액을 EtOAc로 추출하고, 유기층을 포화 식염수로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 용매를 감압 증류 제거하고, 석출된 고체를 EtOAc 헥산으로 세정 후, 감압하에 건조시켜 1-[(벤질옥시)카르보 닐]-4-[(3-피리딜옥시)카르보닐]-2-피페라진카르복실산(140 mg)을 얻었다.
*실시예 193과 동일하게 하여 실시예 194 내지 195의 화합물을 얻었다.
실시예 196
피리딘-3-일 4-({[2-(메틸아미노)페닐]아미노}카르보닐)피페리딘-1-카르복실레이트(0.41 g)를 아세트산(10 ml)에 용해시키고, 2 시간 가열 환류하였다. 용매를 증류 제거한 후, 메탄올과 디에틸에테르에 의해 재결정하여 (피리딘-3-일)-4-(1-메틸-1H-벤즈이미다졸-2-일)피페리딘-1-카르복실레이트(307 mg)를 얻었다.
실시예 197
피리딘-3-일 4-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]피페리딘-1-카르복실레이트(0.249 g)를 THF(5.0 ml)에 용해시키고, 빙냉하에서 4 M 염화수소-EtOAc 용액(2.10 ml)를 첨가하여 실온에서 24 시간 교반하였다. 반응 용액을 농축 건고하여 피리딘-3-일 4-아미노피페리딘-1-카르복실레이트 2염산염(0.280 g)을 얻었다.
*얻어진 화합물(0.28 g)을 디메틸포름아미드(10 ml)에 용해시키고, 1-[3-(디메틸아미노)프로필]-3-에틸카르보디이미드 염산염(0.28 g), 1-히드록시벤조트리아졸(0.16 g), TEA(0.54 ml) 및 6-페닐헥산산(0.18 g)을 첨가하여 실온에서 15 시간 혼합하였다. 반응 용액에 물을 첨가하여 1 시간 더 혼합한 후, EtOAc와 탄산수소나트륨 용액을 첨가하여 분액하고, 유기층을 포화 식염수로 세정하였다. 유기층을 무수 황산마그네슘으로 건조시키고, 용매를 감압 증류 제거하며 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; EtOAc)로 정제하여 무색 분말을 얻었다. 이것을 메탄올, 디에틸에테르에 의해 재결정하여 (피리딘-3-일)-4-[(6-페닐헥사노일)아미노]피페리딘-1-카르복실레이트(108 mg)를 얻었다.
실시예 198
3-피리딜 4-[3-(벤질옥시)페녹시]-1-피페리딘카르복실레이트(4.0 g)를 포함하는 THF(75 ml)-2-프로판올(75 ml) 용액에 10 ％ 팔라듐-카본(촉매량)을 첨가하여 수소 가스 분위기하에 상온 상압에서 24 시간 교반하였다. 촉매를 여과 제거 후, 여과액을 감압 농축하고, 얻어진 고형물을 EtOAc 헥산으로 세정 후, 감압하에 건조시켜 3-피리딜 4-(3-히드록시페녹시)-1-피페리딘카르복실레이트(2.2 g)를 얻었다.
*실시예 199
3-피리딜 4-[4-(벤질옥시)페녹시]-1-피페리딘카르복실레이트(3.7 g)를 포함하는 THF(75 ml)-2-프로판올(75 ml) 용액에 10 ％ 팔라듐-카본(촉매량)을 첨가하여 수소 가스 분위기하에 상온 상압에서 24 시간 교반하였다. 촉매를 여과 제거 후, 여과액을 감압 농축하고, 얻어진 고형물을 EtOAc 헥산으로 세정 후, 감압하에 건조시켜 3-피리딜 4-(4-히드록시페녹시)-1-피페리딘카르복실레이트(2.4 g)를 얻었다.
실시예 200
3-피리딜 4-(3-히드록시페녹시)-1-피페리딘카르복실레이트(160 mg), 시클로헥실메탄올(87 mg), 트리페닐포스핀(200 mg)을 포함하는 THF(5 ml) 용액 중에 디에틸아조디카르복실레이트(0.35 ml, 40 ％ Tol 용액)을 0 ℃에서 적하하여 실온에서 24 시간 교반하였다. 반응 용액을 클로로포름으로 희석하고, 포화 탄산수소나트륨 수용액으로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 용매를 감압 증류 제거하고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 헥산:EtOAc=1:1(V/V))로 정제하였다. 얻어진 유상물을 EtOAc(5 ml)에 용해시키고, 4 M 염화수소-EtOAc 용액(1 ml)을 첨가하여 실온에서 교반하였다. 용매를 감압하에 증류 제거하고, 석출된 고체를 EtOAc 2-프로판올로 세정 후, 감압하에 건조시켜 3-피리딜 4-[3-(시클로헥실메톡시)페녹시]-1-피페리딘카르복실레이트 염산염(94 mg)을 얻었다.
실시예 200과 동일하게 하여 실시예 201 내지 205의 화합물을 얻었다.
실시예 206
3-피리딜 4-(4-히드록시페녹시)-1-피페리딘카르복실레이트(160 mg), 3-클로로벤질알코올(110 mg), 트리페닐포스핀(200 mg)을 포함하는 THF(5 ml) 용액 중에 디에틸아조디카르복실레이트(0.35 ml, 40 ％ Tol 용액)을 0 ℃에서 적하하여 실온에서 24 시간 교반하였다. 반응 용액을 클로로포름으로 희석하고, 포화 탄산수소나트륨 수용액으로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 용매를 감압 증류 제거하고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 헥산:EtOAc=1:3(V/V))로 정제하였다. 얻어진 유상물을 EtOAc(5 ml)에 용해시키고, 4 M 염화수소-EtOAc 용액(1 ml)을 첨가하여 실온에서 교반하였다. 용매를 감압하에 증류 제거하고, 석출된 고체를 EtOAc2-프로판올로 재결정하여 3-피리딜 4-{4-[(3-클로로벤질)옥시]페녹시}-1-피페리딘카르복실레이트 염산염(45 mg)을 얻었다.
실시예 206과 동일하게 하여 실시예 207 내지 212의 화합물을 얻었다.
실시예 213
메틸 5-[({4-[4-(벤질옥시)페녹시]피페리딘-1-일}카르보닐)옥시]니코티노에이트를 포함하는 에탄올(100 ml) 용액에 10 ％ 팔라듐-카본(촉매량)을 첨가하여 수소 가스 분위기하에 상온 상압에서 밤새 교반하였다. 촉매를 여과 제거하고, 얻어진 여과액을 감압 농축하며, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 클로로포름:메탄올=15:1(V/V))로 정제하여 무색 유상물(1.08 g)을 얻었다.
얻어진 화합물(450 mg) 및 3-시클로헥실-1-프로판올(315 mg)을 포함하는 THF(20 ml) 용액에, 2.2 M 디에틸아조디카르복실레이트(1.01 ml), 트리페닐포스핀(581 mg)을 첨가하여 50 ℃에서 22 시간 가열하였다. 반응 용액에 물을 첨가하고, 클로로포름으로 추출하여 유기층을 포화 식염수로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 용매를 감압 증류 제거하고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 헥산:EtOAc=2:1(V/V))로 정제하여 메틸 5-[({4-[4-(3-시클로헥실 프로폭시)페녹시]피페리딘-1-일}카르보닐)옥시]니코티노에이트(242 mg)를 얻었다.
실시예 213과 동일하게 하여 실시예 214 내지 216의 화합물을 얻었다.
실시예 217
5-[({4-[4-(벤질옥시)페녹시]피페리딘-1-일}카르보닐)옥시]니코틴산(200 mg)을 포함하는 THF(10 ml) 용액에 10 ％ 팔라듐-카본(촉매량)을 첨가하여 수소 가스 분위기하에 상온 상압에서 3 시간 교반하였다. 촉매를 여과 제거하고, 얻어진 여과액을 감압 농축하여 5-[({4-[4-(히드록시)페녹시]피페리딘-1-일}카르보닐)옥시]니코틴산(55 mg)을 얻었다.
실시예 218
실시예 2와 동일한 방법으로 얻어진 실시예 29의 화합물(4.0 g)을 THF(30 ml), 메탄올(15 ml)에 용해시키고, 빙냉하에 1 M 수산화나트륨 수용액(12 ml)을 적하하였다. 실온에서 30 분 혼합한 후, 빙냉하여 1 M 염산(12 ml)으로 중화하였다. 석출된 무색 고체를 여과 분리하여 5-{[(4-{4-[(3-플루오로벤질)옥시]페녹시}피페리딘-1-일)카르보닐]옥시}니코틴산(3.52 g)을 얻었다.
실시예 218과 동일하게 하여 실시예 219 내지 224 및 실시예 226 내지 243의 화합물을 얻었다.
실시예 225
트리포스겐(1.56 g)을 포함하는 염화메틸렌(50 ml) 용액 중에, 5-히드록시 니코틴산메틸(2.20 g)과 피리딘(4 ml)을 포함하는 염화메틸렌(30 ml) 용액을 적하하여 실온에서 1 시간 교반하였다. 용매를 감압 증류 제거하여 잔류물을 피리딘(50 ml)에 용해시키고, 4-(2-페닐에틸)피페리딘 염산염(2.70 g)을 첨가하고, 80 ℃에서 밤새 가열하였다. 반응 용액을 감압하에 농축시키고, EtOAc 및 탄산수소나트륨 수용액을 첨가하여 유기층을 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 용매를 감압 증류 제거하고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 헥산:EtOAc=1:1(V/V))로 정제하여 무색 분말을 얻었다. 이것을 헥산-EtOAc에서 재결정하여 메틸 5-({[4-(2-페닐에틸)피페리딘-1-일]카르보닐}옥시)니코티네이트(3.95 g)를 얻었다.
메틸 5-({[4-(2-페닐에틸)피페리딘-1-일]카르보닐}옥시)니코티네이트(3.95 g)를 THF(32 ml), 메탄올(16 ml)에 용해시키고, 빙냉하에 1 M 수산화나트륨 수용액(16 ml)을 적하하였다. 실온에서 30 분 혼합한 후, 빙냉하여 1 M 염산(16 ml)으로 중화하였다. 석출된 무색 고체를 여과 분리하고, 이것을 메탄올-물에 의해 재결정하여 5-({[4-(2-페닐에틸)피페리딘-1-일]카르보닐}옥시)니코틴산(3.70 g)을 얻었다.
실시예 244
실시예 219의 화합물 5-{[(4-{4-[(3-플루오로벤질)옥시]페녹시}피페리딘-1-일)카르보닐]옥시}니코틴산(0.50 g)을 DMF(8.0 ml)에 용해시키고, 1-[3-(디메틸아미노)프로필]-3-에틸카르보디이미드 염산염(0.38 g), 1-히드록시벤조트리아졸(0.22 g) 및 글리신 tert-부틸에스테르(0.21 g)를 첨가하여 실온에서 15 시간 혼합하였다. 반응 용액에 물을 첨가하여 1 시간 더 혼합한 후, EtOAc와 탄산수소나트륨 용액을 첨가하여 분액하고, 유기층을 포화 식염수로 세정하였다. 유기층을 무수 황산마그네슘으로 건조시키고, 용매를 감압 증류 제거하며, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 헥산:EtOAc=1:1(V/V))로 정제하여 무색 유상물(0.444 g)을 얻었다.
얻어진 화합물(0.444 g)을 염화메틸렌(5.0 ml)에 용해시키고, 빙냉하에 TFA(1.15 ml)를 첨가하였다. 동일한 온도에서 24 시간 혼합한 후, 반응액을 농축하여 황색 고체를 얻었다. 이것을 에탄올과 디에틸에테르에 의해 재결정하여 {[(5-{[(4-{4-[(3-플루오로벤질)옥시]페녹시}피페리딘-1-일)카르보닐]옥시}피리딘-3-일)카르보닐]아미노}아세트산(348 mg)을 얻었다.
실시예 244와 동일한 아미드화 반응을 이용하여 실시예 245 내지 257의 화합물을 얻었다.
실시예 258
실시예 54의 화합물(400 mg)과 [3-(아미노카르보닐)페닐]붕소산(176 mg)을 포함하는 디메톡시에탄(12 ml) 용액 중에 물(4 ml), 탄산나트륨(337 mg), 테트라키스트리페닐포스핀팔라듐(115 mg)을 차례로 첨가한 후, 80 ℃에서 5 시간 가열하였다. 반응 용액을 냉각 후, EtOAc로 희석하여 유기층을 수세 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 용매를 감압 증류 제거하고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 헥산:EtOAc=1:5(V/V))로 정제하여 5-[3-(아미노카르보닐)페닐]피리딘-3-일-4-벤질피페리딘-1-카르복실레이트(205 mg)를 얻었다.
실시예 258과 동일하게 하여 실시예 259, 265, 266, 399의 화합물을 얻었다.
실시예 260
5-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]피리딘-3-일 4-{4-[(3-플루오로벤질)옥시]페녹시}피페리딘-1-카르복실레이트(174 mg)를 포함하는 THF(10 ml) 용액에 4 M 염화수소-디옥산 용액(1.8 ml)을 첨가하여 60 ℃에서 4 시간 교반하였다. 용매를 감압 증류 제거하여 5-아미노피페리딘-3-일 4-{4-[(3-플루오로벤질)옥시]페녹시}피리딘-1-카르복실레이트 염산염(74 mg)을 얻었다.
실시예 261
5-[4-(에톡시카르보닐)피페리딘-1-일]피리딘-3-일 4-{4-[(3-플루오로벤질)옥시]페녹시}피페리딘-1-카르복실레이트 옥살산염(240 mg)을 포함하는 THF(10 ml) 용 액에 1 M 수산화나트륨 수용액(3.24 ml)을 첨가하여 60 ℃에서 5 시간 교반하였다. 반응 용액에 1 M 염산 수용액(3.24 ml)을 첨가한 후, 용매를 감압 증류 제거하고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 클로로포름:메탄올=10:1(V/V))로 정제하였다. 얻어진 유상물을 에탄올수에 용해시키고, 옥살산(24 mg)을 첨가하여 결정화시켜 1-(5-{[(4-{4-[(3-플루오로벤질)옥시]페녹시}피페리딘-1-일)카르보닐]옥시}피리딘-3-일)피페리딘-4-카르복실산 옥살산염(93 mg)을 얻었다.
실시예 262
5-[(2-tert-부톡시-2-옥소에톡시)메틸]피리딘-3-일 4-{4-[(3-(3-플루오로벤질)옥시]페녹시}피페리딘}-카르복실레이트(333 mg)를 포함하는 염화메틸렌(10 ml) 용액에 TFA(1.0 ml)를 첨가하여 실온에서 밤새 교반하였다. 용매를 감압 증류 제거하여 [(5{[(4-{4-[(3-플루오로벤질)옥시]페녹시}피페리딘-1-일)카르보닐]옥시}피리딘-3-일)메톡시]아세트산(232 mg)을 얻었다.
실시예 263
5-[(아세톡시)메틸]피리딘-3-일 4-{4-[(3-플루오로벤질)옥시]페녹시}피페리딘-1-카르복실레이트 옥살산염(1.10 g)을 포함하는 THF(20 ml) 용액에 1 M 수산화나트륨 수용액(7.65 ml)을 첨가하여 65 ℃에서 3 시간 교반하였다. 반응액을 1 M 염산 수용액으로 중화하여 클로로포름으로 추출한 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 용매를 감압 증류 제거하고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 클로로포름:메탄올=12:1(V/V))로 정제하여 5-히드록시메틸)피리딘-3-일 4-{4-[(3-플루오로벤질)옥시]페녹시}피페리딘-1-카르복실레이트(770 mg)를 얻었다.
실시예 264
5-[(1E)-3-메톡시-3-옥소프로페-1-엔-1-일]피리딘-3-일 4-{4-[(3-플루오로벤질)옥시]페녹시}피페리딘-1-카르복실레이트(158 mg)를 포함하는 THF(5 ml) 용액에 1 M 수산화나트륨 수용액(1.11 ml)을 첨가하여 60 ℃에서 3 시간 교반하였다. 용매를 감압 증류 제거하고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 클로로포름:메탄올=10:1(V/V))로 정제하여 (2E)-3-(5-{[(4-{4-[(3-플루오로벤질)옥시]페녹시}피페리딘-1-일)카르보닐]옥시}피리딘-3-일)아크릴산(88 mg)을 얻었다.
실시예 267
(a) 3-[2-(4-피페리딜)에틸]벤조니트릴 염산염(475 mg), TEA(0.58 ml)의 아세토니트릴(10 ml) 용액에 메틸 5-{[(4-니트로페녹시)카르보닐]옥시}니코티네이트(723 mg)를 첨가하여 실온에서 밤새 교반하였다. 반응액을 EtOAc로 희석하여 포화 탄산수소나트륨 수용액으로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 용매를 증류 제거하고, 얻어진 잔사를 염기성 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 헥산:EtOAc=1:1(V/V))로 부생한 니트로페놀을 제거한 후, 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 헥산:EtOAc=3:2(V/V))로 정제하여 메틸 5-[({4-[2-(3-시아노페닐)에틸]-1-피페리딜}카르보닐)옥시]니코티네이트(284 mg)를 얻었다.
(b) 메틸 5-[({4-[2-(3-시아노페닐)에틸]-1-피페리딜}카르보닐)옥시]니코티네이트(272 mg)의 THF(5 ml)-물(4 ml) 용액에 1 M 수산화나트륨 수용액(0.69 ml)을 첨가하여 실온에서 밤새 교반하였다. 반응액에 1 M 염산(0.69 ml)을 첨가하고, 석출된 결정을 여과 분리하였다. 결정을 열 메탄올 수용액으로 세정 후, 건조시켜 5-[({4-[2-(3-시아노페닐)에틸]-1-피페리딜}카르보닐)옥시]니코틴산(240 mg)을 얻었다.
실시예 267의 공정(a)와 동일하게 하여 참고예 149 내지 150및 실시예 268 내지 272, 392, 396, 400, 402, 413, 419, 421, 422의 화합물을 얻었다.
실시예 267의 공정(a)에 이어서 공정(b)를 행하는 방법과 동일하게 하여 실시예 273 내지 317, 393 내지 395, 401, 403, 405, 406, 414, 418의 화합물을 얻었다.
실시예 318
5-[({4-[2-(3-시아노페닐)에틸]-1-피페리딜}카르보닐)옥시]니코틴산(102 mg)의 DMF(3.0 ml) 용액에 1-[3-(디메틸아미노)프로필]-3-에틸카르보디이미드 염산염(62 mg), 1-히드록시벤조트리아졸(43 mg), 염화암모늄(43 mg), TEA(0.038 ml)를 첨가하여 실온에서 밤새 교반하였다. 반응액에 포화 탄산수소나트륨 수용액을 첨가하고, 석출된 결정을 여과하여 건조시켰다. 얻어진 결정을 EtOAc 헥산으로 재결정하여 5-(아미노카르보닐)-3-피리딜 4-[2-(3-시아노페닐)에틸]-1-피페리딘카르복실레이트(81 mg)를 얻었다.
동일한 방법을 이용하여 실시예 319 내지 382, 397, 398, 404, 408 내지 412, 415, 420, 423의 화합물을 얻었다.
실시예 407
트리페닐(피리딘-4-일메틸)포스포늄클로라이드 염산염(4.75 g)과 tert-부틸 4-포르밀피페리딘-1-카르복실레이트(1.91 g)의 DMF(50 ml) 용액에 빙냉하에 칼륨 tert-부톡시드(2.73 g)를 첨가하여 실온에서 밤새 교반하였다. 반응액을 EtOAc로 희석하고, 물, 포화 식염수로 차례로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 용매를 증류 제거하고, 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 헥산:EtOAc=1:2(V/V))로 정제하여 백색 고체(2.05 g)를 얻었다.
얻어진 고체(2.04 g)를 EtOAc(30 ml)에 용해시키고, 10 ％ 팔라듐 탄소(200 mg)를 첨가하여 수소 존재하에 실온에서 3 시간 교반하였다. 촉매를 여과 제거한 후, 용매를 농축시키고, 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 헥산:아세트산에틸=1:1(V/V))로 정제하여 tert-부틸 4-[(E)-2-피리딘-4-일비닐]피페리딘-1-카르복실레이트(1.70 g)를 백색 고체로서 얻었다.
tert-부틸 4-[(E)-2-피리딘-4-일비닐]피페리딘-1-카르복실레이트(1.02 g)의 에탄올(25 ml) 용액에 4 M 염화수소-EtOAc 용액(0.88 ml), 산화백금(100 mg)을 첨가하여 수소 존재하(3.5 atm)에서 24 시간 교반한 아르곤 치환한 후, 메탄올로 희석하고, 셀라이트를 이용하여 여과하며, 감압 농축하였다. 석출된 고체를 EtOAc-헥산으로 세정 후, 감압하에 건조시켜 tert-부틸 4-(2-피페리딘-4-일에틸)피페리딘-1-카르복실레이트 염산염(850 mg)을 백색 고체로서 얻었다.
tert-부틸 4-(2-피페리딘-4-일에틸)피페리딘-1-카르복실레이트 염산염(1.13 g), 2-클로로-6-메틸피리딘(431 mg) 및 나트륨-tert-부톡시드(487 mg)의 톨루엔(10 ml) 현탁액에 2-(디시클로헥실포스피노)비페닐(71 mg) 및 (1E,4E)-1,5-디페닐-1,4-펜타디엔-3-온-팔라듐(93 mg)을 첨가하여 120 ℃에서 1 시간 교반하였다. 반응액을 방냉 후, 포화 탄산나트륨 수용액을 첨가하여 EtOAc로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시키고, 용매를 증류 제거하였다. 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 헥산:EtOAc=10:1(V/V))에 의해 정제하여 tert-부틸 4-{2-[1-(6-메틸피리딘-2-일)피페리딘-4-일]에틸}피페리딘-1-카르복실레이트(660 mg)를 적색 유상 물질로서 얻었다.
tert-부틸 4-{2-[1-(6-메틸피리딘-2-일)피페리딘-4-일]에틸}피페리딘-1-카르복실레이트(650 mg)의 EtOAc(10 ml) 용액에 4 M 염화수소-EtOAc 용액(2 ml)을 첨가하여 실온에서 2일간 교반하였다. 반응액을 농축하여 2-메틸-6-[4-(2-피페리딘-4-일에틸)피페리딘-1-일]피리딘 2염산염(644 mg)을 황색 비정질상 물질로서 얻었다.
2-메틸-6-[4-(2-피페리딘-4-일에틸)피페리딘-1-일]피리딘 2염산염(520 mg), TEA(0.50 ml)의 아세토니트릴(10 ml) 용액에 메틸 5-{[(4-니트로페녹시)카르보닐]옥시}니코티네이트(505 mg)를 첨가하여 실온에서 3 시간 교반하였다. 반응액을 EtOAc로 희석하여 포화 탄산수소나트륨 수용액으로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 용매를 증류 제거하고, 얻어진 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출액; 클로로포름:메탄올=98:2(V/V))로 정제하여 메틸 5-{[(4-{2-[1-(6-메틸피리딘-2-일)피페리딘-4-일]에틸}피페리딘-1-일)카르보닐]옥시}니코티네이트(424 mg)를 얻었다.
메틸 5-{[(4-{2-[1-(6-메틸피리딘-2-일)피페리딘-4-일]에틸}피페리딘-1-일)카르보닐]옥시}니코티네이트(208 mg)의 THF(5 ml) 용액에 1 M 수산화나트륨 수용액(0.45 ml)을 첨가하여 실온에서 밤새 교반하였다. 반응액을 농축하여 5{[(4-[2-[1-(6-메틸피리딘-2-일)피페리딘-4-일]에틸}피페리딘-1-일)카르보닐]옥시}니코틴산 나트륨염(158 mg)을 얻었다.
5-{(4-{2-[1-(6-메틸피리딘-2-일)피페리딘-4-일]에틸}피페리딘-1-일)카르보닐]옥시}니코틴산나트륨염(210 mg)의 DMF(10 ml) 용액 중에 1-[3-(디메틸아미노)프로필]-3-에틸카르보디이미드 염산염(103 mg), 1-히드록시벤조트리아졸(90 mg), 염화암모늄(119 mg)을 첨가하여 실온에서 밤새 교반하였다. 반응액을 EtOAc로 희석하여 포화 탄산수소나트륨 수용액, 포화 식염수로 차례로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 용매를 감압 증류 제거하고, 얻어진 잔사를 EtOAc-헥산에 의해 재결정하여 5-(아미노카르보닐)피리딘-3-일 4-{2-[1-(6-메틸피리딘-2-일)피페리딘-4-일]에틸}피페리딘-1-카르복실레이트(150 mg)를 얻었다.
실시예 438
래트 뇌 파쇄액을 이용한 FAAH 활성을 저해하는 물질의 스크리닝
(1) 래트 뇌 파쇄액의 제조
10주령의 SD계 웅성 래트(닛본 SLC사)를 에테르 마취하에서 단두하고, 대뇌를 적출하여 중량을 측정하였다. 중량의 5배 용량의 빙냉시킨 완충액(50 mM Tris-HCl(pH 7.4), 0.32 M Sucrose)을 첨가하고, 얼음 중에서 균질기에 의해 균일한 현탁액이 될 때까지 마쇄하였다. 원심 분리(1500×g, 4 ℃, 15 분간) 후, 그의 상청을 더 원심 분리(15000×g, 4 ℃, 20 분간)하여 침전을 얻었다. 또한, 초음파 발생기(UR-20P; 도미 세이꼬사)에 의해 5 초간 초음파 파쇄(Power dial 4)하였다. 얻어진 파쇄액의 단백질 농도를 색소 결합법(프로테인 앗세이 CBB 용액; 나카라이테스크사)에 의해 측정하였다. 완충액(50 mM Tris-HCl(pH 8.0), 1 mM EDTA, 0.1 mg/ml BSA, 100 mM NaCl)을 이용하여, 단백질의 농도가 60 μg/ml가 되도록 래트 뇌 파쇄액을 희석하여 효소액을 제조하였다.
(2) FAAH 활성을 저해하는 물질의 스크리닝
2 μCi/ml 방사 표지 아난다미드(Anandamide [ethanolamine 1-3H] (American Radiolabeled Chemical사)), 8 μM 아난다미드(프나코시사), 50 mM Tris-HCl(pH 8.0), 1 mM EDTA, 0.1 mg/ml BSA 및 100 mM NaCl로 이루어지는 기질액을 제조하였다. 1 nM 내지 100 μM이 되도록 DMSO에 용해시킨 시험 물질 용액을 제조하였다. 50 μl의 효소액에 50 μl의 상기 기질액 1 μl의 시험 물질 용액을 첨가하여 1 시간 방치하였다. 또한, 컨트롤로서는 DMSO를 시험 물질 용액 대신에 첨가하였다. 이것에 200 μl의 클로로포름과 메탄올의 1:1(용량비) 용액을 첨가하여 교반하였다. 원심 분리(15000 회전/분, 2 분간)함으로써 상층(물/메탄올층)에 분해산물의 에탄올아민(ethanolamine 1-3H)이, 하층(클로로포름층)에 미반응의 방사 표지 아난다미드(Anandamide [ethanolamine 1-3H])가 분리되었다. 상층의 30 μl를 96웰의 유기 용매 내성 백색 마이크로플레이트(PicoPlate-96; Perkin Elmer사)에 옮기고, 150 μl의 마이클로신티 20(Perkin Elmer사)을 첨가하여 마이크로플레이트 섬광 계수기(TopCounTM; Beckman사)로써 측정하였다. 컨트롤과 비교하여 측정값을 감소시키는 물질을, FAAH 활성을 저해하는 물질로서 선택하였다.
(3) FAAH 활성 저해 물질의 IC50값의 측정
화합물을 1 nM 내지 100 μM이 되도록 DMSO에 용해시켜 시험 물질 용액을 제조하고, 상기에 기재된 방법으로 FAAH 활성에 미치는 영향을 조사하였다. 컨트롤로서 DMSO를 이용하였다. 각 측정값으로부터, 효소액 대신에 완충액(50 mM Tris-HCl(pH 8.0), 1 mM EDTA, 0.1 mg/ml BSA, 100 mM NaCl)를 이용하여 반응시킨 경의 측정값을 감하였다. 컨트롤의 측정값을 100 ％로 하여 IC50값을 구하였다. 예를 들면 실시예 2, 151, 225, 228, 273, 324, 325 및 359의 화합물에서는, 각각 IC50값이 0.14 nM, 27 nM, 0.37 nM, 0.19 nM, 0.65 nM, 0.54 nM, 2.5 nM 및 1.3 nM이었다.
이상의 결과로부터, FAAH 또는 기능적 FAAH를 발현하는 조직 파쇄액에 시험 물질을 접촉시켜, 시험 물질 의존적인 FAAH 활성의 변화를 측정함으로써, FAAH 활성을 저해하는 물질, 즉, 빈뇨ㆍ뇨실금 치료제, 과활동 방광 치료제 및/또는 동통 치료제를 스크리닝할 수 있는 것이 개시되었다.
실시예 439
인간 방광 상피암 유래 세포을 이용한 FAAH 활성을 저해하는 물질의 스크리닝
(1) FAAH 활성을 저해하는 물질의 스크리닝
인간 방광 상피암 유래 세포주 5637 세포(HTB-9; ATCC)를 48웰의 세포 배양 플레이트에 1웰당 1×105개, 10 ％ 소태아 혈청(HyClone사)를 함유하는 RPMI1640 배지(Invitrogen사)를 이용하여 파종하였다. 37 ℃에서 12 시간 이상 배양한 후, 세 포를 1웰당 400 μl의 완충액(Hank's Balanced Salt Solution, 20 mM Hepes-NaOH(pH 7.4))으로 세정하였다. 기질액(3 μCi/ml 방사 표지 아난다미드(Anandamide [ethanolamine 1-3H], 10 μM 아난다미드를 함유하는 상기 완충액)에 DMSO에 용해시킨 시험 물질을 0.003 nM 내지 30 nM이 되도록 첨가하였다. 컨트롤로서 DMSO만을 첨가하였다. 상기 세포에 1웰당 100 μl의 기질액을 첨가하고, CO2 인큐베이터내에서, 37 ℃에서 30 분간 배양하였다. 그 후, 세포 배양 플레이트를 빙상에 옮기고, 기질액을 흡인 제거하여 1웰당 75 μl의 빙냉시킨 세포 용해용 용액(0.5 ％ Triton X-100, 10 μM의 FAAH 저해 활성을 갖는 화합물 cyclohexylcarbamic acid 3'-carbamoylbiphenyl-3-yl ester(URB597; Cayman Chemical사; Kathuria 등, [Nature Med., 제9권, 제76-81 페이지, 2003년])를 포함하는 상기 완충액)를 첨가하여 교반하였다. 얻어진 세포 용해액을 웰마다 1.5 ml 용량의 샘플 튜브에 옮기고, 150 μl의 클로로포름과 메탄올의 1:1(용량비) 용액을 첨가하여 교반하였다. 원심 분리(15000 회전/분, 2 분간)하면, 상층(물/메탄올층)에 분해산물의 에탄올아민(ethanolamine 1-3H)이, 하층(클로로포름층)에 미반응의 방사 표지 아난다미드가 분리된다. 상층의 25 μl를 96웰의 유기 용매 내성 백색 마이크로플레이트(PicoPlate-96; Perkin EImer사)에 옮기고, 150 μl의 마이크로신티 20(Perkin Elmer사)을 첨가하여 마이크로플레이트 섬광 계수기(TopCounTM; Beckman사)로 측정하였다. 컨트롤과 비교하여 측정값을 감소시키는 물질을, FAAH 활성을 저해하는 물질로서 선택하였다.
(2) FAAH 활성 저해 물질의 IC50값의 측정
DMSO에 10 mM이 되도록 용해시킨 화합물을 0.003 nM 내지 30 nM이 되도록, 기질액에 첨가하여 상기에 기재된 방법으로 FAAH 활성에 미치는 영향을 조사하였다. 네가티브 컨트롤로서 DMSO를, 포지티브 컨트롤로서 URB597을 10 μM이 되도록 기질액에 첨가하고, 포지티브 컨트롤의 측정값을 0 ％, 네거티브 컨트롤의 측정값을 100 ％로 하여 IC50값을 구하였다. 시험 결과를 표 64에 나타낸다.
*이상의 결과로부터, 대표적인 본 발명 화합물에 있어서 우수한 FAAH 저해 활성을 갖는 것을 확인할 수 있었다. 또한, FAAH 또는 기능적 FAAH를 발현하는 세포에 시험 물질을 접촉시켜 시험 물질 의존적인 FAAH 활성의 변화를 측정함으로써, FAAH 활성을 저해하는 물질, 즉, 빈뇨ㆍ뇨실금 치료제, 과활동 방광 치료제 및/또는 동통제를 스크리닝할 수 있는 것이 개시되었다.
실시예 440
시험 물질을 투여한 래트의 조직 파쇄액을 이용한 FAAH 활성을 저해하는 물질의 스크리닝
(1) 래트에의 투여, 및 조직 파쇄액의 제조
2 마리의 9 주령의 Wistar계 웅성 래트(닛본 SLC사)에 0.5 ％ 메틸셀룰로오스(MC) 용액에 현탁시킨 시험 물질을 1 내지 3 mg/kg으로 경구 투여하였다. 컨트 롤로서 2 마리의 래트에는 0.5 ％ MC 용액을 경구 투여하였다. 30 분 후에, 에테르 마취하에서 하대동맥으로부터 혈액을 채취하였다. 그 후, 단두하여 대뇌를 채취하였다.
채취한 혈액 3 ml를 등량의 생리 식염수로 희석하고, 원심 튜브내의 3 ml의 혈구 분리제(Nycoplep; AXIS-SHIELD사) 위에 가만히 중층하였다. 원심 분리(400×g, 20 분간)하여 단구층을 채취하였다. 얻어진 단구를 생리 식염수로 2회 세정하고, 측정까지 -20 ℃에서 동결 보존하였다.
채취한 래트 뇌에, 중량의 5배 용량의 빙냉시킨 완충액(50 mM Tris-HCl(pH 8.0), 1 mM EDTA)을 첨가하고, 얼음 중에서 균질기에 의해 균일한 용액이 될 때까지 마쇄하였다. 또한, 초음파 발생기(UR-20P(Power dial 4; 도미 세이꼬사)에 의해 5 초간 초음파 파쇄하였다. 상기 동결 보존한 단구에는, 빙냉시킨 완충액(50 mM Tris-HCl(pH 8.0), 1 mM EDTA)을 100 μl 첨가하고, 초음파 발생기(UR-20P(Power dial 4); 도미 세이꼬사)에 의해 5 초간 초음파 처리하였다. 뇌, 단구의 파쇄액에 대하여 색소 결합법(프로테인 앗세이 CBB 용액; 나카라이테스크사)에 의해 단백질 농도를 측정하였다. 뇌, 단구의 파쇄액을 완충액(50 mM Tris-HCl(pH 8.0), 1 mM EDTA, 0.1 mg/ml BSA, 100 mM NaCl)를 이용하여, 단백질 농도가 각각 80 μg/ml, 400 μg/ml가 되도록 희석하여 효소액으로 하였다.
(2) FAAH 활성의 측정
50 μl의 효소액에 50 μl의 기질액(3 μCi/ml 방사 표지 아난다미 드(Anandamide [ethanolamine 1-3H](American Radiolabeled Chemical사)), 8 μM 아난다미드(프나코시사), 50 mM Tris-HCl(pH 8.0), 1 mM EDTA)를 첨가하여 실온에서 1 시간 반응시켰다. 200 μl의 클로로포름과 메탄올의 1:1(용량비) 용액을 첨가하여 교반하였다. 원심 분리(2000×g, 2 분간)에 의해 상층(물/메탄올층)에 분해산물의 에탄올아민(ethanolamine 1-3H)이, 하층(클로로포름층)에 미반응의 방사 표지 아난다미드(Anandamide[ethanolamine 1-3H])가 분리되었다. 상층의 25 μl를 96웰의 유기 용매 내성 백색 마이크로플레이트(PicoPlate-96; Perkin Elmer사)에 옮기고, 150 μl의 마이크로신티 20(Perkin Elmer사)을 첨가하여 마이크로플레이트 섬광 계수기(TopCounTM; Beckman사)로써 측정하였다.
시험 물질을 투여하지 않은 컨트롤 래트의 뇌, 단구의 파쇄액에 있어서의 FAAH 활성을 100 ％로 하고, 조직 파쇄액을 포함하지 않는 완충액(50 mM Tris-HCl(pH 8.0), 1 mM EDTA, 0.1 mg/ml BSA, 100 mM NaCl)의 FAAH 활성을 0 ％로 하여, 시험 물질을 투여한 래트 조직 파쇄액의 FAAH 활성의 상대값(％)를 구하였다. FAAH 활성의 상대값을 저하시키는 물질을, FAAH 활성을 저해하는 물질로서 선택하였다.
이상의 결과로부터, 시험 물질을 실험 동물에게 투여한 후, 적출한 조직의 파쇄액에 있어서의 시험 물질 의존적인 FAAH 활성의 변화를 측정함으로써, FAAH 활성을 저해하는 물질, 즉, 빈뇨ㆍ뇨실금 치료제, 과활동 방광 치료제 및/또는 동통 치료제를 스크리닝할 수 있는 것이 개시되었다.
실시예 441
시클로포스파미드(CPA) 유발 빈뇨 래트에 대한 화합물의 작용
화합물의 방광 자격 증상 개선 작용을 병태 모델을 이용하여 검토하였다. 시클로포스파미드(CPA)는 전신 투여에 의해 대사물인 아크롤레인으로 변환되어, 뇨 중에서 방광 점막을 상해하는 것이 알려져 있다. 래트에 있어서는, CPA 투여에 의해 출혈성 방광염에 따른 방광통 또는 빈뇨 상태가 유발되기 때문에, 이들 증상에 대한 약효 평가가 가능하였다. 실험에는 9 주령의 위스타계 자성 래트(찰스리버사)를 이용하였다. CPA(100 mg/kg)를 복강내 투여하고, 그의 2일 후에 실험을 행하였다. 화합물을 경구 투여(p.o.)하여 15 분 후에, 증류수(30 ml/kg)를 강제적으로 경구 투여하였다. 래트를 대사 케이지에 넣고, 배뇨 중량을 1 시간 연속적으로 측정하였다. 총 배뇨량을 총 배뇨 횟수로 나눔으로써 유효 방광 용량을 산출하였다. 그 결과, 용매인 0.5 ％ 메틸셀룰로오스(MC) 투여군에 있어서는 유효 방광 용량이 감소하고, 빈뇨 상태가 확인되었다. 유효 경구 투여량은 실시예 2, 218 및 261의 화합물에서는 3 mg/kg, 실시예 225, 228, 273, 313, 324, 325 및 359의 화합물에서는 1 mg/kg이었다. 이들 화합물은 감소된 유효 방광 용량을 증가시키고, 빈뇨 상태를 개선하였다.
실시예 442
L5/L6 척수 신경 결찰 래트(신경 인성 동통 모델)에 있어서의 화합물의 항알로디니아 효과
펜토바르비탈 마취하에서 웅성 5 내지 6주령 SD 래트의 좌측 L5 및 L6 척수 신경을 견사로 결찰하는 수술을 실시하였다. 진통 작용의 평가법은 von Frey hair test를 채용하였다. 즉, 동물의 뒷다리 안쪽을 모발(hair)로 쿡쿡 찔러, 다리 들림 반응을 일으키는 최소의 모발 강도를 기계 자극에 대한 반응 임계값(log gram)으로 하였다. 동물의 수술측 발의 반응 임계값은 수술 후 7일째에서 14일째 사이에서는 현저히 저하된(알로디니아 상태에 있음) 것이 예비 검토에 의해 확인할 수 있기 때문에, 시험 화합물의 항알로디니아 효과는 수술 후 7일째에서 14일째 사이의 어느 날에 평가하였다. 시험 화합물 평가 전일에, 시험 화합물 투여 전 반응 임계값을 측정하였다. 시험 화합물 투여 전 반응 임계값의 군간 평균값의 차 및 군내 변동이 작아지도록 동물군을 나누었다. 시험 화합물 평가 시험에 있어서는 시험 화합물 투여 후 반응 임계값을 측정하였다. 시험 화합물은 반응 임계값 측정의 60 분 전에 경구 투여하였다. 시험 화합물의 항알로디니아 작용의 효력은, 용매 투여군의 수술측 발 및 비수술측 발의 반응 임계값을 각각 0 ％ 및 100 ％라고 정의하여 산출하였다. 그 결과, 실시예 126의 화합물은 10 mg/kg 경구 투여에 있어서 74 ％의 효력을 나타내었다.
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<서열표 프리텍스트>
이하 서열표의 서열 1의 수자 색인 <223>에 발명자를 기록한다.
SEQUENCE LISTING <110> Astellas Pharma Inc. <120> Pyridyl non aromatic hetero ring including nitrogen-1-carboxylic acid ester derivative <130> A05067 <150> JP2005-40197 <151> 2005-02-17 <150> JP2005-303065 <151> 2005-10-18 <160> 8 <170> PatentIn version 3.1 <210> 1 <211> 2063 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (36)..(1772) <223> Inventor;Ishii, Takahiro; Sugane, Takashi; Maeda, Jun; Narazaki, Fumie; Kakefuda, Akio; Sato Kentaro; Takahashi, Tatsuhisa; Kanayama, Takatoshi; Saitoh, Chikashi; Suzuki, Jotaro; Kanai Chisato <400> 1 tgccgggcgg taggcagcag caggctgaag ggatc atg gtg cag tac gag ctg 53 Met Val Gln Tyr Glu Leu 1 5 tgg gcc gcg ctg cct ggc gcc tcc ggg gtc gcc ctg gcc tgc tgc ttc 101 Trp Ala Ala Leu Pro Gly Ala Ser Gly Val Ala Leu Ala Cys Cys Phe 10 15 20 gtg gcg gcg gcc gtg gcc ctg cgc tgg tcc ggg cgc cgg acg gcg cgg 149 Val Ala Ala Ala Val Ala Leu Arg Trp Ser Gly Arg Arg Thr Ala Arg 25 30 35 ggc gcg gtg gtc cgg gcg cga cag aag cag cga gcg ggc ctg gag aac 197 Gly Ala Val Val Arg Ala Arg Gln Lys Gln Arg Ala Gly Leu Glu Asn 40 45 50 atg gac agg gcg gcg cag cgc ttc cgg ctc cag aac cca gac ctg gac 245 Met Asp Arg Ala Ala Gln Arg Phe Arg Leu Gln Asn Pro Asp Leu Asp 55 60 65 70 tca gag gcg ctg cta gcc ctg ccc ctg cct cag ctg gtg cag aag tta 293 Ser Glu Ala Leu Leu Ala Leu Pro Leu Pro Gln Leu Val Gln Lys Leu 75 80 85 cac agt aga gag ctg gcc cct gag gcc gtg ctc ttc acc tat gtg gga 341 His Ser Arg Glu Leu Ala Pro Glu Ala Val Leu Phe Thr Tyr Val Gly 90 95 100 aag gcc tgg gaa gtg aac aaa ggg acc aac tgt gtg acc tcc tat ctg 389 Lys Ala Trp Glu Val Asn Lys Gly Thr Asn Cys Val Thr Ser Tyr Leu 105 110 115 gct gac tgt gag act cag ctg tct cag gcc cca agg cag ggc ctg ctc 437 Ala Asp Cys Glu Thr Gln Leu Ser Gln Ala Pro Arg Gln Gly Leu Leu 120 125 130 tat ggc gtc cct gtg agc ctc aag gag tgc ttc acc tac aag ggc cag 485 Tyr Gly Val Pro Val Ser Leu Lys Glu Cys Phe Thr Tyr Lys Gly Gln 135 140 145 150 gac tcc acg ctg ggc ttg agc ctg aat gaa ggg gtg ccg gcg gag tgc 533 Asp Ser Thr Leu Gly Leu Ser Leu Asn Glu Gly Val Pro Ala Glu Cys 155 160 165 gac agc gta gtg gtg cat gtg ctg aag ctg cag ggt gcc gtg ccc ttc 581 Asp Ser Val Val Val His Val Leu Lys Leu Gln Gly Ala Val Pro Phe 170 175 180 gtg cac acc aat gtt cca cag tcc atg ttc agc tat gac tgc agt aac 629 Val His Thr Asn Val Pro Gln Ser Met Phe Ser Tyr Asp Cys Ser Asn 185 190 195 ccc ctc ttt ggc cag acc gtg aac cca tgg aag tcc tcc aaa agc cca 677 Pro Leu Phe Gly Gln Thr Val Asn Pro Trp Lys Ser Ser Lys Ser Pro 200 205 210 ggg ggc tcc tca ggg ggt gaa ggg gcc ctc atc ggg tct gga ggc tcc 725 Gly Gly Ser Ser Gly Gly Glu Gly Ala Leu Ile Gly Ser Gly Gly Ser 215 220 225 230 ccc ctg ggc tta ggc act gat atc gga ggc agc atc cgc ttc ccc tcc 773 Pro Leu Gly Leu Gly Thr Asp Ile Gly Gly Ser Ile Arg Phe Pro Ser 235 240 245 tcc ttc tgc ggc atc tgc ggc ctc aag ccc aca ggg aac cgc ctc agc 821 Ser Phe Cys Gly Ile Cys Gly Leu Lys Pro Thr Gly Asn Arg Leu Ser 250 255 260 aag agt ggc ctg aag ggc tgt gtc tat gga cag gag gca gtg cgt ctc 869 Lys Ser Gly Leu Lys Gly Cys Val Tyr Gly Gln Glu Ala Val Arg Leu 265 270 275 tcc gtg ggc ccc atg gcc cgg gac gtg gag agc ctg gca ctg tgc ctg 917 Ser Val Gly Pro Met Ala Arg Asp Val Glu Ser Leu Ala Leu Cys Leu 280 285 290 cga gcc ctg ctg tgc gag gac atg ttc cgc ttg gac ccc act gtg cct 965 Arg Ala Leu Leu Cys Glu Asp Met Phe Arg Leu Asp Pro Thr Val Pro 295 300 305 310 ccc ttg ccc ttc aga gaa gag gtc tac acc agc tct cag ccc ctg cgt 1013 Pro Leu Pro Phe Arg Glu Glu Val Tyr Thr Ser Ser Gln Pro Leu Arg 315 320 325 gtg ggg tac tat gag act gac aac tat acc atg ccc tcc ccg gcc atg 1061 Val Gly Tyr Tyr Glu Thr Asp Asn Tyr Thr Met Pro Ser Pro Ala Met 330 335 340 agg cgg gcc gtg ctg gag acc aaa cag agc ctt gag gct gcg ggg cac 1109 Arg Arg Ala Val Leu Glu Thr Lys Gln Ser Leu Glu Ala Ala Gly His 345 350 355 acg ctg gtt ccc ttc ttg cca agc aac ata ccc cat gct ctg gag acc 1157 Thr Leu Val Pro Phe Leu Pro Ser Asn Ile Pro His Ala Leu Glu Thr 360 365 370 ctg tca aca ggt ggg ctc ttc agt gat ggt ggc cac acc ttc cta cag 1205 Leu Ser Thr Gly Gly Leu Phe Ser Asp Gly Gly His Thr Phe Leu Gln 375 380 385 390 aac ttc aaa ggt gat ttc gtg gac ccc tgc ctg ggg gac ctg gtc tca 1253 Asn Phe Lys Gly Asp Phe Val Asp Pro Cys Leu Gly Asp Leu Val Ser 395 400 405 att ctg aag ctt ccc caa tgg ctt aaa gga ctg ctg gcc ttc ctg gtg 1301 Ile Leu Lys Leu Pro Gln Trp Leu Lys Gly Leu Leu Ala Phe Leu Val 410 415 420 aag cct ctg ctg cca agg ctg tca gct ttc ctc agc aac atg aag tct 1349 Lys Pro Leu Leu Pro Arg Leu Ser Ala Phe Leu Ser Asn Met Lys Ser 425 430 435 cgt tcg gct gga aaa ctc tgg gaa ctg cag cac gag atc gag gtg tac 1397 Arg Ser Ala Gly Lys Leu Trp Glu Leu Gln His Glu Ile Glu Val Tyr 440 445 450 cgc aaa acc gtg att gcc cag tgg agg gcg ctg gac ctg gat gtg gtg 1445 Arg Lys Thr Val Ile Ala Gln Trp Arg Ala Leu Asp Leu Asp Val Val 455 460 465 470 ctg acc ccc atg ctg gcc cct gct ctg gac ttg aat gcc cca ggc agg 1493 Leu Thr Pro Met Leu Ala Pro Ala Leu Asp Leu Asn Ala Pro Gly Arg 475 480 485 gcc aca ggg gcc gtc agc tac act atg ctg tac aac tgc ctg gac ttc 1541 Ala Thr Gly Ala Val Ser Tyr Thr Met Leu Tyr Asn Cys Leu Asp Phe 490 495 500 cct gca ggg gtg gtg cct gtc acc acg gtg act gct gag gac gag gcc 1589 Pro Ala Gly Val Val Pro Val Thr Thr Val Thr Ala Glu Asp Glu Ala 505 510 515 cag atg gaa cat tac agg ggc tac ttt ggg gat atc tgg gac aag atg 1637 Gln Met Glu His Tyr Arg Gly Tyr Phe Gly Asp Ile Trp Asp Lys Met 520 525 530 ctg cag aag ggc atg aag aag agt gtg ggg ctg ccg gtg gcc gtg cag 1685 Leu Gln Lys Gly Met Lys Lys Ser Val Gly Leu Pro Val Ala Val Gln 535 540 545 550 tgt gtg gct ctg ccc tgg caa gaa gag ttg tgt ctg cgg ttc atg cgg 1733 Cys Val Ala Leu Pro Trp Gln Glu Glu Leu Cys Leu Arg Phe Met Arg 555 560 565 gag gtg gag cga ctg atg acc cct gaa aag cag tca tcc tgatggctct 1782 Glu Val Glu Arg Leu Met Thr Pro Glu Lys Gln Ser Ser 570 575 ggctccagag gacctgagac tcacactctc tgcagcccag cctagtcagg gcacagctgc 1842 cctgctgcca cagcaaggaa atgtcctgca tggggcagag gcttccgtgt cctctccccc 1902 aaccccctgc aagaagcgcc gactccctga gtctggacct ccatccctgc tctggtcccc 1962 tctcttcgtc ctgatccctc cacccccatg tggcagccca tgggtatgac ataggccaag 2022 gcccaactaa cagtcaagaa acaaaaaaaa aaaaaaaaaa a 2063 <210> 2 <211> 579 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Met Val Gln Tyr Glu Leu Trp Ala Ala Leu Pro Gly Ala Ser Gly Val 1 5 10 15 Ala Leu Ala Cys Cys Phe Val Ala Ala Ala Val Ala Leu Arg Trp Ser 20 25 30 Gly Arg Arg Thr Ala Arg Gly Ala Val Val Arg Ala Arg Gln Lys Gln 35 40 45 Arg Ala Gly Leu Glu Asn Met Asp Arg Ala Ala Gln Arg Phe Arg Leu 50 55 60 Gln Asn Pro Asp Leu Asp Ser Glu Ala Leu Leu Ala Leu Pro Leu Pro 65 70 75 80 Gln Leu Val Gln Lys Leu His Ser Arg Glu Leu Ala Pro Glu Ala Val 85 90 95 Leu Phe Thr Tyr Val Gly Lys Ala Trp Glu Val Asn Lys Gly Thr Asn 100 105 110 Cys Val Thr Ser Tyr Leu Ala Asp Cys Glu Thr Gln Leu Ser Gln Ala 115 120 125 Pro Arg Gln Gly Leu Leu Tyr Gly Val Pro Val Ser Leu Lys Glu Cys 130 135 140 Phe Thr Tyr Lys Gly Gln Asp Ser Thr Leu Gly Leu Ser Leu Asn Glu 145 150 155 160 Gly Val Pro Ala Glu Cys Asp Ser Val Val Val His Val Leu Lys Leu 165 170 175 Gln Gly Ala Val Pro Phe Val His Thr Asn Val Pro Gln Ser Met Phe 180 185 190 Ser Tyr Asp Cys Ser Asn Pro Leu Phe Gly Gln Thr Val Asn Pro Trp 195 200 205 Lys Ser Ser Lys Ser Pro Gly Gly Ser Ser Gly Gly Glu Gly Ala Leu 210 215 220 Ile Gly Ser Gly Gly Ser Pro Leu Gly Leu Gly Thr Asp Ile Gly Gly 225 230 235 240 Ser Ile Arg Phe Pro Ser Ser Phe Cys Gly Ile Cys Gly Leu Lys Pro 245 250 255 Thr Gly Asn Arg Leu Ser Lys Ser Gly Leu Lys Gly Cys Val Tyr Gly 260 265 270 Gln Glu Ala Val Arg Leu Ser Val Gly Pro Met Ala Arg Asp Val Glu 275 280 285 Ser Leu Ala Leu Cys Leu Arg Ala Leu Leu Cys Glu Asp Met Phe Arg 290 295 300 Leu Asp Pro Thr Val Pro Pro Leu Pro Phe Arg Glu Glu Val Tyr Thr 305 310 315 320 Ser Ser Gln Pro Leu Arg Val Gly Tyr Tyr Glu Thr Asp Asn Tyr Thr 325 330 335 Met Pro Ser Pro Ala Met Arg Arg Ala Val Leu Glu Thr Lys Gln Ser 340 345 350 Leu Glu Ala Ala Gly His Thr Leu Val Pro Phe Leu Pro Ser Asn Ile 355 360 365 Pro His Ala Leu Glu Thr Leu 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gct gag gac gat gcc cag atg gaa cac tac aaa ggc tac 1824 Thr Val Thr Ala Glu Asp Asp Ala Gln Met Glu His Tyr Lys Gly Tyr 515 520 525 ttt ggg gat atg tgg gac aac att ctg aag aag ggc atg aaa aag ggt 1872 Phe Gly Asp Met Trp Asp Asn Ile Leu Lys Lys Gly Met Lys Lys Gly 530 535 540 ata ggc ctg cct gtg gct gtg cag tgc gtg gct ctg ccc tgg cag gaa 1920 Ile Gly Leu Pro Val Ala Val Gln Cys Val Ala Leu Pro Trp Gln Glu 545 550 555 gag ctg tgt ctg cgg ttc atg cgg gag gtg gaa cgg ctg atg acc cct 1968 Glu Leu Cys Leu Arg Phe Met Arg Glu Val Glu Arg Leu Met Thr Pro 560 565 570 gaa aag cgg cca tct tgagggtcat tcatctgccc agctctggag gacctaaggc 2023 Glu Lys Arg Pro Ser 575 ccatgcgctc tgcactgcag ccccatctat tcaggatcct gccacccatg aggagatgcc 2083 cagcacggga agaggcaacc acctgccctc ccctggactc ctacagaaac ccaggacatg 2143 ccctccataa ccaagtctgg accttgctcc cctttctggt ctactttcca tcctgacccc 2203 ctactctatg tgacagccca gcaggaacga cacgggccaa ggaccaccaa cagtcaaaaa 2263 aagcaatgtg tttctgtatt tttctgggta tttttctatt aggaccttgg 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ccc tac gcc 1162 Ala Gly His Thr Leu Ile Pro Phe Leu Pro Asn Asn Ile Pro Tyr Ala 360 365 370 ctg gag gtc ctg tct gcg ggc ggc ctg ttc agt gac ggt ggc cgc agt 1210 Leu Glu Val Leu Ser Ala Gly Gly Leu Phe Ser Asp Gly Gly Arg Ser 375 380 385 ttt ctc caa aac ttc aaa ggt gac ttt gtg gat ccc tgc ttg gga gac 1258 Phe Leu Gln Asn Phe Lys Gly Asp Phe Val Asp Pro Cys Leu Gly Asp 390 395 400 ctg atc tta att ctg agg ctg ccc agc tgg ttt aaa aga ctg ctg agc 1306 Leu Ile Leu Ile Leu Arg Leu Pro Ser Trp Phe Lys Arg Leu Leu Ser 405 410 415 ctc ctg ctg aag cct ctg ttt cct cgg ctg gca gcc ttt ctc aac agt 1354 Leu Leu Leu Lys Pro Leu Phe Pro Arg Leu Ala Ala Phe Leu Asn Ser 420 425 430 435 atg cgt cct cgg tca gct gaa aag ctg tgg aaa ctg cag cat gag att 1402 Met Arg Pro Arg Ser Ala Glu Lys Leu Trp Lys Leu Gln His Glu Ile 440 445 450 gag atg tat cgc cag tct gtg att gcc cag tgg aaa gcg atg aac ttg 1450 Glu Met Tyr Arg Gln Ser Val Ile Ala Gln Trp Lys Ala Met Asn Leu 455 460 465 gat gtg ctg ctg acc ccc atg ttg ggc cct gct ctg gat ttg aac aca 1498 Asp Val Leu Leu Thr Pro Met Leu Gly Pro Ala Leu Asp Leu Asn Thr 470 475 480 ccg ggc aga gcc aca ggg gct atc agc tac acc gtt ctc tac aac tgc 1546 Pro Gly Arg Ala Thr Gly Ala Ile Ser Tyr Thr Val Leu Tyr Asn Cys 485 490 495 ctg gac ttc cct gcg ggg gtg gtg cct gtc acc act gtg acc gcc gag 1594 Leu Asp Phe Pro Ala Gly Val Val Pro Val Thr Thr Val Thr Ala Glu 500 505 510 515 gac gat gcc cag atg gaa ctc tac aaa ggc tac ttt ggg gat atc tgg 1642 Asp Asp Ala Gln Met Glu Leu Tyr Lys Gly Tyr Phe Gly Asp Ile Trp 520 525 530 gac atc atc ctg aag aag gcc atg aaa aat agt gtc ggt ctg cct gtg 1690 Asp Ile Ile Leu Lys Lys Ala Met Lys Asn Ser Val Gly Leu Pro Val 535 540 545 gct gtg cag tgc gtg gct ctg ccc tgg cag gaa gag ctg tgt ctg agg 1738 Ala Val Gln Cys Val Ala Leu Pro Trp Gln Glu Glu Leu Cys Leu Arg 550 555 560 ttc atg cgg gag gtg gaa cag ctg atg acc cct caa aag cag cca tcg 1786 Phe Met Arg Glu Val Glu Gln Leu Met Thr Pro Gln Lys Gln Pro Ser 565 570 575 tgagggtcgt tcatccgcca gctctggagg acctaaggcc catgcgctgt gcactgtagc 1846 cccatgtatt caggagccac cacccacgag ggaacgccca gcacagggaa gaggtgtcta 1906 cctgccctcc cctggactcc tgcagccaca accaagtctg gaccttcctc cccgttatgg 1966 tctactttcc atcctgattc cctgcttttt atggcagcca gcaggaatga cgtgggccaa 2026 ggatcaccaa cattcaaaaa caatgcgttt atctattttc tgggtatctc cattagggcc 2086 ctgggaacca gagtgctggg aaggctgtcc agaccctcca gagctggctg taaccacatc 2146 actctcctgc tccaaagcct ccctagttct gtcacccaca agatagacac agggacatgt 2206 ccttggcact tgactcctgt ccttcctttc ttattcagat tgaccccagc cttgatggac 2266 cctgcccctg cacttccttc ctcagtccac ctctctgccg acacgccctt tttatggctc 2326 ctctatttgt tgtggagaca aggtttctct cagtagccct ggctgtccag gacctcactc 2386 tgtagatgag gctggctttc aactcacaag gctgcctgcc tgggtgctgg gattaaaggc 2446 gtatgccacc acaaagaaaa aaaaaa 2472 <210> 6 <211> 579 <212> PRT <213> Rattus norvegicus <400> 6 Met Val Leu Ser Glu Val Trp Thr Thr Leu Ser Gly Val Ser Gly Val 1 5 10 15 Cys Leu Ala Cys Ser Leu Leu Ser Ala Ala Val Val Leu Arg Trp Thr 20 25 30 Gly Arg Gln Lys Ala Arg Gly Ala Ala Thr Arg Ala Arg Gln Lys Gln 35 40 45 Arg Ala Ser Leu Glu Thr Met Asp Lys Ala Val Gln Arg Phe Arg Leu 50 55 60 Gln Asn Pro Asp Leu Asp Ser Glu Ala Leu Leu Thr Leu Pro Leu Leu 65 70 75 80 Gln Leu Val Gln Lys Leu Gln Ser Gly Glu Leu Ser Pro Glu Ala Val 85 90 95 Phe Phe Thr Tyr Leu Gly Lys Ala Trp Glu Val Asn Lys Gly Thr Asn 100 105 110 Cys Val Thr Ser Tyr Leu Thr Asp Cys Glu Thr Gln Leu Ser Gln Ala 115 120 125 Pro Arg Gln Gly Leu Leu Tyr Gly Val Pro Val Ser Leu Lys Glu Cys 130 135 140 Phe Ser Tyr Lys Gly His Asp Ser Thr Leu Gly Leu Ser Leu Asn Glu 145 150 155 160 Gly Met Pro Ser Glu Ser Asp Cys Val Val Val Gln Val Leu Lys Leu 165 170 175 Gln Gly Ala Val Pro Phe Val His Thr Asn Val Pro Gln Ser Met Leu 180 185 190 Ser Phe Asp Cys Ser Asn Pro Leu Phe Gly Gln Thr Met Asn Pro Trp 195 200 205 Lys Ser Ser Lys Ser Pro Gly Gly Ser Ser Gly Gly Glu Gly Ala Leu 210 215 220 Ile Gly Ser Gly Gly Ser Pro Leu Gly Leu Gly Thr Asp Ile Gly Gly 225 230 235 240 Ser Ile Arg Phe Pro Ser Ala Phe Cys Gly Ile Cys Gly Leu Lys Pro 245 250 255 Thr Gly Asn Arg Leu Ser Lys Ser Gly Leu Lys Gly Cys Val Tyr Gly 260 265 270 Gln Thr Ala Val Gln Leu Ser Leu Gly Pro Met Ala Arg Asp Val Glu 275 280 285 Ser Leu Ala Leu Cys Leu Lys Ala Leu Leu Cys Glu His Leu Phe Thr 290 295 300 Leu Asp Pro Thr Val Pro Pro Leu Pro Phe Arg Glu Glu Val Tyr Arg 305 310 315 320 Ser Ser Arg Pro Leu Arg Val Gly Tyr Tyr Glu Thr Asp Asn Tyr Thr 325 330 335 Met Pro Ser Pro Ala Met Arg Arg Ala Leu Ile Glu Thr Lys Gln Arg 340 345 350 Leu Glu Ala Ala Gly His Thr Leu Ile Pro Phe Leu Pro Asn Asn Ile 355 360 365 Pro Tyr Ala Leu Glu Val Leu Ser Ala Gly Gly Leu Phe Ser Asp Gly 370 375 380 Gly Arg Ser Phe Leu Gln Asn Phe Lys Gly Asp Phe Val Asp Pro Cys 385 390 395 400 Leu Gly Asp Leu Ile Leu Ile Leu Arg Leu Pro Ser Trp Phe Lys Arg 405 410 415 Leu Leu Ser Leu Leu Leu Lys Pro Leu Phe Pro Arg Leu Ala Ala Phe 420 425 430 Leu Asn Ser Met Arg Pro Arg Ser Ala Glu Lys Leu Trp Lys Leu Gln 435 440 445 His Glu Ile Glu Met Tyr Arg Gln Ser Val Ile Ala Gln Trp Lys Ala 450 455 460 Met Asn Leu Asp Val Leu Leu Thr Pro Met Leu Gly Pro Ala Leu Asp 465 470 475 480 Leu Asn Thr Pro Gly Arg Ala Thr Gly Ala Ile Ser Tyr Thr Val Leu 485 490 495 Tyr Asn Cys Leu Asp Phe Pro Ala Gly Val Val Pro Val Thr Thr Val 500 505 510 Thr Ala Glu Asp Asp Ala Gln Met Glu Leu Tyr Lys Gly Tyr Phe Gly 515 520 525 Asp Ile Trp Asp Ile Ile Leu Lys Lys Ala Met Lys Asn Ser Val Gly 530 535 540 Leu Pro Val Ala Val Gln Cys Val Ala Leu Pro Trp Gln Glu Glu Leu 545 550 555 560 Cys Leu Arg Phe Met Arg Glu Val Glu Gln Leu Met Thr Pro Gln Lys 565 570 575 Gln Pro Ser <210> 7 <211> 2300 <212> DNA <213> Sus scrofa <220> <221> CDS <222> (20)..(1756) <223> <400> 7 cggtcctcgg tgggagatc atg gtg cag gaa gaa ctg tgg gct gcg ttc tcc 52 Met Val Gln Glu Glu Leu Trp Ala Ala Phe Ser 1 5 10 ggc ccc tcc ggg gtt gcc ctg gcc tgc tgc ttg gtg gca gcg gcc ttg 100 Gly Pro Ser Gly Val Ala Leu Ala Cys Cys Leu Val Ala Ala Ala Leu 15 20 25 gcc ctg cgt tgg tcc agt cgc cgg atg gcg cgg ggc gcg gcg gcc cgg 148 Ala Leu Arg Trp Ser Ser Arg Arg Met Ala Arg Gly Ala Ala Ala Arg 30 35 40 gcg cga cag agg cag caa gcg gcc ctg gag acc atg gac aag gcg gcg 196 Ala Arg Gln Arg Gln Gln Ala Ala Leu Glu Thr Met Asp Lys Ala Ala 45 50 55 cag cgc ttc cgg ctc cag aac ccc gat ctg gac tcg gag atg ctg ctg 244 Gln Arg Phe Arg Leu Gln Asn Pro Asp Leu Asp Ser Glu Met Leu Leu 60 65 70 75 gcc ctg cca ctg cct cag ctg gta cag aag gta cga agt ggg gag ctg 292 Ala Leu Pro Leu Pro Gln Leu Val Gln Lys Val Arg Ser Gly Glu Leu 80 85 90 tct cca gag gct gtg ctc ttt tcc tac ctg caa aag gcc tgg gaa gtg 340 Ser Pro Glu Ala Val Leu Phe Ser Tyr Leu Gln Lys Ala Trp Glu Val 95 100 105 aac aga ggg acc aac tgc gtg acc acc tac ctg gca gac tgt gag gct 388 Asn Arg Gly Thr Asn Cys Val Thr Thr Tyr Leu Ala Asp Cys Glu Ala 110 115 120 cag ctg tgc cag gcg ccc ggg cag ggc ctg ctc tac ggt gtc ccc gtc 436 Gln Leu Cys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Leu Tyr Gly Val Pro Val 125 130 135 agc ctc aag gag tgc ttc agc tgc aag ggc cat gac tcc acg ctg ggc 484 Ser Leu Lys Glu Cys Phe Ser Cys Lys Gly His Asp Ser Thr Leu Gly 140 145 150 155 ttg agc cgg aac cag ggg aca cca gca gaa tgt gac tgc gtg gtg gtg 532 Leu Ser Arg Asn Gln Gly Thr Pro Ala Glu Cys Asp Cys Val Val Val 160 165 170 cag gtg ctg aaa ctg cag ggt gct gtg cct ttc gtg cac acc aac gtc 580 Gln Val Leu Lys Leu Gln Gly Ala Val Pro Phe Val His Thr Asn Val 175 180 185 ccc cag tcc atg ttc agc tat gac tgc agt aac ccc ctc ttt ggc cag 628 Pro Gln Ser Met Phe Ser Tyr Asp Cys Ser Asn Pro Leu Phe Gly Gln 190 195 200 acc acg aac cca tgg atg tcg tcc aag agc ccg ggc ggc tcc tcg gga 676 Thr Thr Asn Pro Trp Met Ser Ser Lys Ser Pro Gly Gly Ser Ser Gly 205 210 215 ggt gag ggg gcc ctc att gct gct gga ggc tcc cca ctg ggc tta ggc 724 Gly Glu Gly Ala Leu Ile Ala Ala Gly Gly Ser Pro Leu Gly Leu Gly 220 225 230 235 acc gac atc ggg ggc agc atc cgc ttt ccc tcc gcc ttc tgt ggc atc 772 Thr Asp Ile Gly Gly Ser Ile Arg Phe Pro Ser Ala Phe Cys Gly Ile 240 245 250 tgc ggc atc aaa ccc acg ggg aac cgc atc agc aag agt ggt ctg aag 820 Cys Gly Ile Lys Pro Thr Gly Asn Arg Ile Ser Lys Ser Gly Leu Lys 255 260 265 ggc tct gtc tat gga cag gta gca gtg cag ctc tca gtg ggc ccc atg 868 Gly Ser Val Tyr Gly Gln Val Ala Val Gln Leu Ser Val Gly Pro Met 270 275 280 gcg cgg gac gtg gag agc ctg gcc ctg tgc ctg cgt gcg ctg ctg tgc 916 Ala Arg Asp Val Glu Ser Leu Ala Leu Cys Leu Arg Ala Leu Leu Cys 285 290 295 gaa gac atg ttc cgc ctg gac ccc acg gtg cct ccc ctg ccc ttc aac 964 Glu Asp Met Phe Arg Leu Asp Pro Thr Val Pro Pro Leu Pro Phe Asn 300 305 310 315 gag gag gtc tac gca agc tct cgg ccc ctg cgt gtc ggg tat tat gag 1012 Glu Glu Val Tyr Ala Ser Ser Arg Pro Leu Arg Val Gly Tyr Tyr Glu 320 325 330 acc gac aac tac acc atg ccc acg ccg gcc atg agg cgg gcc ctg ctg 1060 Thr Asp Asn Tyr Thr Met Pro Thr Pro Ala Met Arg Arg Ala Leu Leu 335 340 345 gag acc aag cgg agc ctt gag gct gcg ggc cac acg ctg att ccc ttc 1108 Glu Thr Lys Arg Ser Leu Glu Ala Ala Gly His Thr Leu Ile Pro Phe 350 355 360 ctg ccg gcc aac ata ccc cac gct ctg gag gcc ctg tca acg ggc ggg 1156 Leu Pro Ala Asn Ile Pro His Ala Leu Glu Ala Leu Ser Thr Gly Gly 365 370 375 ctc ttc agt gat ggt ggg aag agg ttg cta cag aac ttc gaa ggc gat 1204 Leu Phe Ser Asp Gly Gly Lys Arg Leu Leu Gln Asn Phe Glu Gly Asp 380 385 390 395 tac gtg gac tcc tgc tta ggg gac ctg atc tca att ctg agg ctg ccc 1252 Tyr Val Asp Ser Cys Leu Gly Asp Leu Ile Ser Ile Leu Arg Leu Pro 400 405 410 aaa tgg ctt aaa gga ctg ctg gct ttc atg ctg agg cct ctg ctc cca 1300 Lys Trp Leu Lys Gly Leu Leu Ala Phe Met Leu Arg Pro Leu Leu Pro 415 420 425 agg ttg gca ggc ttt ctc agc agc ctg agg cct cgg tcg gct gga aag 1348 Arg Leu Ala Gly Phe Leu Ser Ser Leu Arg Pro Arg Ser Ala Gly Lys 430 435 440 ctc tgg gaa ctg cag cac gag att gag atg tac cgt cac tcc gtg att 1396 Leu Trp Glu Leu Gln His Glu Ile Glu Met Tyr Arg His Ser Val Ile 445 450 455 gcc cag tgg cga gcg ctg gac ctg gat gtg gtg cta acc ccc atg ctg 1444 Ala Gln Trp Arg Ala Leu Asp Leu Asp Val Val Leu Thr Pro Met Leu 460 465 470 475 agc cct gcc cta gac ttg aat gcc cca ggc aag gcc aca ggg gcc gtc 1492 Ser Pro Ala Leu Asp Leu Asn Ala Pro Gly Lys Ala Thr Gly Ala Val 480 485 490 agc tac acg ctg ctc tac aac tgc ctg gac ttc ccc gcg ggg gtg gtg 1540 Ser Tyr Thr Leu Leu Tyr Asn Cys Leu Asp Phe Pro Ala Gly Val Val 495 500 505 cct gtc acc acg gtg act gcc gag gac gag gcc cag atg gag cat tac 1588 Pro Val Thr Thr Val Thr Ala Glu Asp Glu Ala Gln Met Glu His Tyr 510 515 520 aag ggc tac ttt ggg gac att tgg gac aag gtg gtg cag aag gcc atg 1636 Lys Gly Tyr Phe Gly Asp Ile Trp Asp Lys Val Val Gln Lys Ala Met 525 530 535 aag agg agc gtg ggg ctg cct gtg gcc gtg cag tgt gtg gct ctg ccc 1684 Lys Arg Ser Val Gly Leu Pro Val Ala Val Gln Cys Val Ala Leu Pro 540 545 550 555 tgg cag gag gag ctg tgt ttg cgg ttc atg cgg gag gtg gag cga ctg 1732 Trp Gln Glu Glu Leu Cys Leu Arg Phe Met Arg Glu Val Glu Arg Leu 560 565 570 atg gct cct ggg cgg cag ccc tcc tgaccgctgc ccgcccggcc ccccaggacc 1786 Met Ala Pro Gly Arg Gln Pro Ser 575 tgagacccac tggatccgcg cccagcggag tcaggacaca actgccaccg tgcaagaaaa 1846 tgttcaacct caggcagagg cttcccggtc tctccccctc gcccctgcca gaagcccaga 1906 accactgagt ctggaccttg ctcttcccgt ggtccctgct ctgccctgac cccgccaatg 1966 tggcagctag tgggtatgac atggcaaagg ccccccaacc gtcaaaaacc ggttcctggt 2026 ctccatactt tctggcagtc gttgttaggg cagtgggggt tggagacctg accttctgga 2086 acccgactcc agccatgtcc gtctcgtgct gcagaagctt ctctggtcct cgtcactcac 2146 gggcagacac cggcttctcc gagtgggcct tgcagcccag gacttcaccc cgccgccccc 2206 agcctaagcc ctactttgcg aggcattgtc ttctctcctg ccctctgctg agggtgccct 2266 ttctgctcct ctaccattaa atcctttgag gccc 2300 <210> 8 <211> 579 <212> PRT <213> Sus scrofa <400> 8 Met Val Gln Glu Glu Leu Trp Ala Ala Phe Ser Gly Pro Ser Gly Val 1 5 10 15 Ala Leu Ala Cys Cys Leu Val Ala Ala Ala Leu Ala Leu Arg Trp Ser 20 25 30 Ser Arg Arg Met Ala Arg Gly Ala Ala Ala Arg Ala Arg Gln Arg Gln 35 40 45 Gln Ala Ala Leu Glu Thr Met Asp Lys Ala Ala Gln Arg Phe Arg Leu 50 55 60 Gln Asn Pro Asp Leu Asp Ser Glu Met Leu Leu Ala Leu Pro Leu Pro 65 70 75 80 Gln Leu Val Gln Lys Val Arg Ser Gly Glu Leu Ser Pro Glu Ala Val 85 90 95 Leu Phe Ser Tyr Leu Gln Lys Ala Trp Glu Val Asn Arg Gly Thr Asn 100 105 110 Cys Val Thr Thr Tyr Leu Ala Asp Cys Glu Ala Gln Leu Cys Gln Ala 115 120 125 Pro Gly Gln Gly Leu Leu Tyr Gly Val Pro Val Ser Leu Lys Glu Cys 130 135 140 Phe Ser Cys Lys Gly His Asp Ser Thr Leu Gly Leu Ser Arg Asn Gln 145 150 155 160 Gly Thr Pro Ala Glu Cys Asp Cys Val Val Val Gln Val Leu Lys Leu 165 170 175 Gln Gly Ala Val Pro Phe Val His Thr Asn Val Pro Gln Ser Met Phe 180 185 190 Ser Tyr Asp Cys Ser Asn Pro Leu Phe Gly Gln Thr Thr Asn Pro Trp 195 200 205 Met Ser Ser Lys Ser Pro Gly Gly Ser Ser Gly Gly Glu Gly Ala Leu 210 215 220 Ile Ala Ala Gly Gly Ser Pro Leu Gly Leu Gly Thr Asp Ile Gly Gly 225 230 235 240 Ser Ile Arg Phe Pro Ser Ala Phe Cys Gly Ile Cys Gly Ile Lys Pro 245 250 255 Thr Gly Asn Arg Ile Ser Lys Ser Gly Leu Lys Gly Ser Val Tyr Gly 260 265 270 Gln Val Ala Val Gln Leu Ser Val Gly Pro Met Ala Arg Asp Val Glu 275 280 285 Ser Leu Ala Leu Cys Leu Arg Ala Leu Leu Cys Glu Asp Met Phe Arg 290 295 300 Leu Asp Pro Thr Val Pro Pro Leu Pro Phe Asn Glu Glu Val Tyr Ala 305 310 315 320 Ser Ser Arg Pro Leu Arg Val Gly Tyr Tyr Glu Thr Asp Asn Tyr Thr 325 330 335 Met Pro Thr Pro Ala Met Arg Arg Ala Leu Leu Glu Thr Lys Arg Ser 340 345 350 Leu Glu Ala Ala Gly His Thr Leu Ile Pro Phe Leu Pro Ala Asn Ile 355 360 365 Pro His Ala Leu Glu Ala Leu Ser Thr Gly Gly Leu Phe Ser Asp Gly 370 375 380 Gly Lys Arg Leu Leu Gln Asn Phe Glu Gly Asp Tyr Val Asp Ser Cys 385 390 395 400 Leu Gly Asp Leu Ile Ser Ile Leu Arg Leu Pro Lys Trp Leu Lys Gly 405 410 415 Leu Leu Ala Phe Met Leu Arg Pro Leu Leu Pro Arg Leu Ala Gly Phe 420 425 430 Leu Ser Ser Leu Arg Pro Arg Ser Ala Gly Lys Leu Trp Glu Leu Gln 435 440 445 His Glu Ile Glu Met Tyr Arg His Ser Val Ile Ala Gln Trp Arg Ala 450 455 460 Leu Asp Leu Asp Val Val Leu Thr Pro Met Leu Ser Pro Ala Leu Asp 465 470 475 480 Leu Asn Ala Pro Gly Lys Ala Thr Gly Ala Val Ser Tyr Thr Leu Leu 485 490 495 Tyr Asn Cys Leu Asp Phe Pro Ala Gly Val Val Pro Val Thr Thr Val 500 505 510 Thr Ala Glu Asp Glu Ala Gln Met Glu His Tyr Lys Gly Tyr Phe Gly 515 520 525 Asp Ile Trp Asp Lys Val Val Gln Lys Ala Met Lys Arg Ser Val Gly 530 535 540 Leu Pro Val Ala Val Gln Cys Val Ala Leu Pro Trp Gln Glu Glu Leu 545 550 555 560 Cys Leu Arg Phe Met Arg Glu Val Glu Arg Leu Met Ala Pro Gly Arg 565 570 575 Gln Pro Ser

Claims (13)

  1. 화학식 I에 나타내어지는 피리딜 비방향족 질소 함유 헤테로환-1-카르복실산에스테르 유도체 또는 그의 제약학적으로 허용되는 염.
    <화학식 I>
    Figure 112009033955637-PAT00087
    [식 I 중의 기호는 이하의 의미를 나타낸다.
    HET1: 5 내지 7원 비방향족 질소 함유 헤테로환,
    R1, R2 및 R3: 동일하거나 또는 다르고,
    (1) H,
    (2) OH,
    (3) HO-CO-, 저급 알킬-O-CO-, 아릴-저급 알킬-O-CO- 또는 H2N-CO-아릴-저급 알킬-O-CO-,
    (4) 시아노,
    (5) 저급 알킬-CO-,
    (6) 옥소(=O),
    (7) 식[R101-(O)m1]m2-[HO로 치환될 수도 있는 ALK1]-(O)n1-,
    (m1 및 n1; 동일하거나 또는 다르고, 0 또는 1, m2; 1 내지 5,
    ALK1: 저급 알킬렌, 저급 알케닐렌 또는 저급 알키닐렌,
    R101: (i) H,
    (ii) (a) H2N-, (b) 할로, (c) 시아노, (d) 에스테르화될 수도 있는 카르복실, (e) 기 R1011aR1012aN-CO-, (f) HET2, (g) 할로, 시아노, OH, 저급 알킬-O- 또는 저급 알킬로 치환될 수도 있는 Ar1a,
    Ar1a: 아릴,
    (h) 저급 알킬, (j) OH, (k) Ar1a 또는 할로-Ar1a로 치환될 수도 있는 저급 알킬-O-, (l) 할로, Ar1a 또는 HETAr1a로 치환될 수도 있는 HET2-CO-,
    HET2: 질소 함유 헤테로환,
    HETAr1a: 질소 함유 헤테로아릴,
    (s) HET2-CONR1011a-, (t) H2NCONH- 및 (u) 에스테르화될 수도 있는 카르복실-ALK2a로 이루어지는 군에서 선택된 1 이상의 치환기로 치환될 수도 있는 Ar1a,
    ALK2a: 저급 알킬 또는 저급 알케닐,
    (iii) 기 R1011aR1012aN 또는 Ar1a로 치환될 수도 있는 ALK2a,
    R1011a 및 R1012a: 동일하거나 또는 다르고,
    (a) H, (b) cALK,
    cALK: 시클로알킬,
    (c) 할로, cALK, OH, 저급 알킬-O- 또는 Ar1a로 치환될 수도 있는 ALK2a, 또는 (d) 할로로 치환될 수도 있는 Ar1a-SO2-,
    (iv) (a) Ar1a 또는 할로-Ar1a로 치환될 수도 있는 ALK2a, (b) Ar1a, (c) 저급 알킬로 치환될 수도 있는 HETAr1a, 및 (d) Ar1a-CO- 또는 할로-Ar1a-CO-로 이루어지는 군에서 선택된 1 이상의 치환기로 치환될 수도 있는 HET2,
    (v) ALK2a로 치환될 수도 있는 cALK,
    또는
    (vi) 에스테르화될 수도 있는 카르복실,
    (여기서, m2가 2 내지 5인 경우에는, [R101-(O)m1]은 동일하거나 상이할 수 있다.),
    (8) 기 R102-ALK1-N(R103)-CO-,
    (R102: (i) H,
    (ii) cALK,
    (iii) HETAr1a 또는
    (iv) (a) HO, (b) ALK2a-O-, (c) cALK-ALK1-O-, (d) cALK-Ar1a-ALK1-O- 및 (e) Ar1a-ALK1-O-로 이루어지는 군에서 선택된 1 이상의 치환기로 치환될 수도 있는 Ar1a,
    R103: (i) H,
    (ii) cALK,
    (iii) (a) HET2, (b) Ar1a 및 (c) 할로-Ar1a로 이루어지는 군에서 선택된 1 이상의 치환기로 치환될 수도 있는 ALK2a,
    (iv) HETAr1a 또는
    (v) (a) cALK, (b) H2N, (c) 기 R1011aR1012aN-CO- 및 (d) ALK2a로 이루어지는 군에서 선택된 1 이상의 치환기로 치환될 수도 있는 Ar1a-[CO]m1),
    (9) 기 R104aR105aN-[CO]m1-ALK1-,
    (R104a 및 R105a: 동일하거나 또는 다르고, 기 R103)
    (1O) 기 R106-ALK3-L1-,
    (R106: (i) 기 R101-(O)m1-,
    (ii) 기 R104aR105aN-,
    (iii) 기 ALK2a-CONH- 또는
    (iv) 기 Ar1a-CONH-,
    ALK3: 저급 알킬렌, 저급 알케닐렌 또는 시클로알킬렌,
    L1: -C(=O)- 또는 -SO2-)
    (11) Ar1a로 치환될 수도 있는 ALK2a-CONH-,
    (12) 할로로 치환된 Ar1a,
    (13) 기[R107-(O)m1]m2-Ar2-(O)n1-,
    (Ar2: 아릴렌,
    R107: (i) H,
    (ii) 할로,
    (iii) (a) HO, (b) cALK, (c) HET2, (d) 할로, 저급 알킬, 저급 알킬- O-, 기 R1011aR1012aN-[CO]p-, 시아노 또는 에스테르화될 수도 있는 카르복실로 치환될 수도 있는 Ar1a, (e) 에스테르화될 수도 있는 카르복실, (f) 기 R1011aR1012aN-[CO]p-로 치환될 수도 있는 HET2-[CO]p- 및 (g) 기 R1011aR1012aN-[CO]p-로 이루어지는 군에서 선택된 1 이상의 치환기로 치환될 수도 있는 ALK2a,
    p: 0 또는 1,
    (iv) 기 R1011aR1012aN-[CO]p- 또는
    (v) 기 R1011aR1012aN-[CO]p-Ar1a,
    또한, 여기서 m2가 2 내지 5인 경우에는, [R107-(O)m1]은 동일하거나 상이할 수도 있고, 또한 기[R107-(O)m1]m2가 메틸렌디옥시를 의미하며 환을 형성할 수도 있다.),
    (14) 기[R107-(O)m1]m2-Ar2-N(R103)-CO-,
    (여기서, m2가 2 내지 5인 경우에는, [R107-(O)m1]은 동일하거나 상이할 수 있다.),
    (15) 기[R1011aR1012aN-[CO]m1]m2-Ar2-(O)n1-,
    (여기서, m2가 2 내지 5인 경우에는, [R1011aR1012aN-[CO]m1]은 동일하거나 상 이할 수 있다.),
    (16) 기[R108]m2-Ar2-L2-,
    [R108: (i) H,
    (ii) 할로,
    (iii) HO,
    (iv) cALK-O-,
    (v) 기 R109-ALK1-(O)m1-
    (R109: (a) H, (b) cALK, (c) (1') 할로, (2') 시아노, (3') NO2, (4') 할로로 치환될 수도 있는 ALK2a, (5') HO, (6') 할로로 치환될 수도 있는 ALK2a-O-, (7') 에스테르화될 수도 있는 카르복실, 및 (8') 기 R104aR105aN으로 이루어지는 군에서 선택된 1 이상의 치환기로 치환될 수도 있는 Ar1a, (d) HETAr1a 또는 (e) 기 R104aR105aN-[CO]m1-,),
    (vi) 기 R1013R1014N- 또는,
    R1013, R1014: 동일하거나 또는 다르고, (i) H, (ii) ALK2a, (iii) cALK-ALK1- 또는 (iv) (1') 할로, (2') 시아노, (3') 할로로 치환될 수도 있는 ALK2a, 및 (4') 할로로 치환될 수도 있는 ALK2a-O-로 이루어지는 군에서 선택된 1 이상의 치환기로 치환될 수도 있는 Ar1a-ALK1-,
    (vii) 저급 알킬로 치환될 수도 있는 HET2-(O)m1-,
    L2: -CO- 또는 -S(O)q-,
    q: 0, 1 또는 2,
    또한, 여기서 m2가 2 내지 5인 경우에는, [R108]은 동일하거나 상이할 수 있다.]
    (17) 기[R101]m2-Ar2-CONH-,
    (여기서, m2가 2 내지 5인 경우에는, [R101]은 동일하거나 상이할 수 있다.),
    (18) 기[R111]m2-HETAr2-(O)m1-,
    (R111: (i) H, (ii) 할로, (m) 옥소(=O) 또는 (iv) 기 R103a-(O)n1-,
    R103a: (i) H,
    (ii) cALK,
    (iii) (a) HET2 또는 (b) Ar1a, (c) cALK 및 (d) 할로-Ar1a로 이루어지는 군에서 선택된 1 이상의 치환기로 치환될 수도 있는 ALK2a,
    (iv) HETAr1a, 또는
    (v) (a) cALK, (b) H2N 및 (c) 기 R1011aR1012aN-CO-로 이루어지는 군에서 선택된 1 이상의 치환기로 치환될 수도 있는 Ar1a,
    HETAr2: 질소 함유 헤테로아릴렌,
    또한, 여기서 m2가 2 내지 5인 경우에는, [R111]은 동일하거나 상이할 수 있다.),
    (19) 식[R112]m2-HETAr2-N(R103)-CO-,
    (R112: (i) H,
    (ii) cALK,
    (m) ALK2a 또는
    (iv) (a) 할로, (b) HO, (c) ALK2a-O- 및 (d) Ar1a-ALK1-O-로 이루어지는 군에서 선택된 1 이상의 치환기로 치환될 수도 있는 Ar1a,
    또한, 여기서 m2가 2 내지 5인 경우에는, [R112]는 동일하거나 다를 수도 있다.),
    (20) 식[R108]m2-HETAr2-L2-,
    (여기서, m2가 2 내지 5인 경우에는, [R108]은 동일하거나 상이할 수 있다.),
    단, R1, R2 및 R3 중 어느 하나의 기가 기[R111]m2-HETAr2-(O)m1- 중의 m1이 O인 경우, 나머지 R1, R2 및 R3의 기는 H,
    R4, R5, R6 및 R7은 H. 단, 피리딘-3-일 4-메틸피페라진-1-카르복실레이트 및 피리딘-2-일 2-옥소피리딘-1(2H)-카르복실레이트를 제외한다.]
  2. 제1항에 있어서, 화학식 II로 표시되는 피리딜 비방향족 질소 함유 헤테로환-1-카르복실산 에스테르 유도체 또는 그의 제약학적으로 허용되는 염.
    <화학식 II>
    Figure 112009033955637-PAT00088
    [식 II 중, R1 내지 R7은 청구의 범위 제1항의 기재와 동일한 의미를 나타내고, T는 CH2, NH, NHCH2 또는 O을 나타낸다. 여기서, R1 내지 R3에서 T의 수소가 치환되어 있는 경우도 포함한다.]
  3. 제2항에 있어서, R1 내지 R3이 동일하거나 또는 다르고, H, 기[R101-(O)m1]m2- [HO로 치환될 수도 있는 ALK1]-(O)n1-, 기 R102-ALK1-N(R103)-CO-, 기 R106-ALK3-L1-, 기[R107-(O)m1]m2-Ar2-(O)n1-, 기[R107-(O)m1]m2-Ar2-N(R103)-CO- 또는 기[R108]m2-Ar2-L2-인 피리딜 비방향족 질소 함유 헤테로환-1-카르복실산 에스테르 유도체 또는 그의 제약학적으로 허용되는 염.
  4. 화학식 III으로 표시되는 피리딜 비방향족 질소 함유 헤테로환-1-카르복실산에스테르 유도체 또는 그의 제약학적으로 허용되는 염.
    <화학식 III>
    Figure 112009033955637-PAT00089
    [식 III 중의 기호는 이하의 의미를 나타낸다.
    A환: 벤젠환, 시클로펜탄환, 시클로헥산환, 시클로헵탄환, 또는 5 내지 7원 질소 함유 헤테로환,
    L: 단결합, 저급 알킬렌, 저급 알케닐렌, -N(R15)-C(=O)-, -C(=O)-N(R15)-, -(저급 알케닐렌)-C(=O)-, -O- 또는 -C(=0)-,
    R15: H 또는 저급 알킬,
    X: CH 또는 N,
    R8 내지 R10: 동일하거나 또는 다르고,
    하기 G군에서 선택되는 기,
    하기 G군에서 선택되는 동일하거나 또는 다른 기로 치환될 수도 있는 아릴,
    하기 G군에서 선택되는 동일하거나 또는 다른 기로 치환될 수도 있는 질소 함유 헤테로아릴,
    R16-(저급 알킬렌)-O-, R16-(저급 알킬렌)-N(R15)-
    또는 R17R18N-C(=O)-,
    R16: 하기 G군에서 선택되는 동일하거나 또는 다른 기로 치환될 수도 있는 아릴, 하기 G군에서 선택되는 동일하거나 또는 다른 기로 치환될 수도 있는 질소 함유 헤테로아릴, 또는 3 내지 8원 시클로알킬,
    R17 및 R18: 동일하거나 또는 다르고, H, 저급 알킬, 또는 3 내지 8원 시클로알킬, (또한, R17 및 R18은 결합된 N 원자와 일체가 되어 3 내지 8원 질소 함유 헤테로환을 형성할 수도 있다.),
    G군: H, 할로, -CN, -CF3, 저급 알킬 및 -O-저급 알킬,
    R11: H, 저급 알킬 또는 옥소(=O),
    R12 내지 R14: H.]
  5. 제4항에 있어서, A환이 벤젠환, 시클로헥산환, 피페리딘환, 또는 피페라진환인 피리딜 비방향족 질소 함유 헤테로환-1-카르복실산 에스테르 유도체 또는 그의 제약학적으로 허용되는 염.
  6. 제5항에 있어서, R9, R10, R11이 H인 피리딜 비방향족 질소 함유 헤테로환-1-카르복실산 에스테르 유도체 또는 그의 제약학적으로 허용되는 염.
  7. 화학식 IV로 표시되는 피리딜 비방향족 질소 함유 헤테로환-1-카르복실산에스테르 유도체 또는 그의 제약학적으로 허용되는 염.
    <화학식 IV>
    Figure 112009033955637-PAT00090
    [식 IV 중의 기호는 이하의 의미를 나타낸다.
    A1환: 벤젠환, 피페리딘환 또는 피페라진환,
    L1: 저급 알킬렌, 저급 알케닐렌, -N(R15)-C(=O)- 또는 -O-,
    R15: H 또는 저급 알킬,
    R19: 하기 G군에서 선택되는 기,
    하기 G군에서 선택되는 동일하거나 또는 다른 기로 치환될 수도 있는 질소 함유 헤테로아릴,
    R16-(저급 알킬렌)-O- 또는 R17R18N-C(=O)-,
    R16: 하기 G군에서 선택되는 동일하거나 또는 다른 기로 치환될 수도 있는 아릴, 하기 G군에서 선택되는 동일하거나 또는 다른 기로 치환될 수도 있는 질소 함유 헤테로아릴, 또는 3 내지 8원 시클로알킬,
    R17 및 R18: 동일하거나 또는 다르고, H, 또는 저급 알킬,
    (또한, R17, R18은 결합된 N 원자와 일체가 되어 5 또는 6원 질소 함유 헤테로환을 형성할 수도 있다.),
    G군: H, 할로, -CN, -CF3, 저급 알킬 및 -O-저급 알킬,
    R20: H.]
  8. 화학식 V로 표시되는 피리딜 비방향족 질소 함유 헤테로환-1-카르복실산에스테르 유도체 또는 그의 제약학적으로 허용되는 염.
    <화학식 V>
    Figure 112009033955637-PAT00091
    [식 V 중의 기호는 이하의 의미를 나타낸다.
    L2: 저급 알킬렌, 저급 알케닐렌 또는 -(저급 알케닐렌)-C(=O)-,
    R21: H, 할로, -CN, -CF3, 저급 알킬 또는 -O-저급 알킬,
    R22: H]
  9. 제1항에 있어서,
    피리딘-3-일 4-{4-[(3-플루오로벤질)옥시]페녹시}피페리딘-1-카르복실레이트,
    피리딘-3-일 4-[(2E)-3-페닐프로파-2-에노일]피페라진-1-카르복실레이트,
    피리딘-3-일 4-(아닐리노카르보닐)피페리딘-1-카르복실레이트, 및
    피리딘-3-일 4-(2-페닐에틸)피페라진-1-카르복실레이트
    로 이루어지는 군에서 선택되는 피리딜 비방향족 질소 함유 헤테로환-1-카르복실산에스테르 유도체 또는 그의 제약학적으로 허용되는 염.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 기재된 피리딜 비방향족 질소 함유 헤테 로환-1-카르복실산에스테르 유도체 또는 그의 제약학적으로 허용되는 염을 유효 성분으로 하는 의약 조성물.
  11. 제10항에 있어서, FAAH 저해제인 의약 조성물.
  12. 제10항에 있어서, 빈뇨ㆍ뇨실금 및/또는 과활동 방광의 치료약인 의약 조성물.
  13. 제10항에 있어서, 동통(疼痛)의 치료약인 의약 조성물.
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