KR20060129360A

KR20060129360A - 바이러스 질환 치료용 포스포네이트,모노포스폰아미데이트, 비스포스폰아미데이트

Info

Publication number: KR20060129360A
Application number: KR1020067015535A
Authority: KR
Inventors: 찌아퀸 쳉; 개리 피. 쿡; 마노지 씨. 데사이; 에드워드 되플러; 공-씬 헤; 정 유. 김; 윌리암 에이. 리; 존 씨. 롤로프; 지아닝 왕; 젱-유 양
Original assignee: 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드
Priority date: 2003-12-30
Filing date: 2004-12-29
Publication date: 2006-12-15
Also published as: EP2204374B1; NO20150615L; PT2204374E; US8268802B2; US20060030545A1; EA200601263A1; HRP20100626T1; PL212403B1; IS8516A; ES2350983T3; PT1716162E; DK2204374T3; CN1950383A; EP2204374A1; HK1146061A1; EA011304B1; EP1716162B1; SG149075A1; NZ548771A; CN101816664B

Abstract

항증식제 및 특히 항 HPV 약제로서 유용한 화학식 1의 화합물과 약학적으로 허용되는 이들의 염, 및 조성물이 기술된다.

[화학식 1]

Description

바이러스 질환 치료용 포스포네이트, 모노포스폰아미데이트, 비스포스폰아미데이트{PHOSPHONATES, MONOPHOSPHONAMIDATES, BISPHOSPHONAMIDATES FOR THE TREATMENT OF VIRAL DISEASES}

본 발명은 바이러스 감염, 특히 인간 파필로마 바이러스 감염 치료에 유용한 화합물과 조성물 및 이들의 제조 방법에 관한 것이다.

인간 파필로마 바이러스 (human papillomavirus, HPV)는 전세계에서 성 접촉으로 전염되는 가장 유행하는 감염 중의 한 가지이다. 100개가 넘은 서로 다른 유형의 HPV가 존재하는데, 대부분은 유해하지 않다. 그러나, 성 접촉에 의하여 전파되는 것으로는 약 30 가지 유형이 있다. 몇 가지 유형의 HPV는 생식기 혹(genital warts)을 야기하는데, 이는 질, 자궁 경부(cervix), 외음부(질의 외부 영역), 남근 및 직장을 비롯 한 여성 및 남성의 생식기 영역에 하나 또는 다수의 혹으로 나타난다. 많은 사람들이 HPV에 감염되어 있으나, 증상은 없다.

대부분의 HPV 아형(sub-types)은 심하지 않은 손상을 일으키지만, 특정 아형은 보다 심각한 손상을 수반할 수 있다. HPV-6 및 HPV-11 보다는 덜 일반적이지만, HPV-16 및 HPV-18에 의하여 발생하는 항문 생식기 감염(anogenital infections)은 형성 이상(dysplasias)이라고 불리워지는 자궁 경부 및 조적에서의 전암 증상과 가 장 흔하게 연관된다. 형성 이상이 있는 환자들은 종종 자각 증상이 없으며, 스크리닝 후에만 손상이 발견될 수 있다. 치료 없이 방치하는 경우에 고도 형성 이상은 암 조직으로 전환될 수 있다. 낮은 정도의 손상은 자발적으로 퇴화될 수도 있지만, 고도의 손상으로 진행될 수도 있다. 수종의 다른 변형 HPV 아형 역시 형성 이상과 관련이 있지만, HPV-16 및 HPV-18는 가장 흔하게 형성 이상과 연관된다. 최근의 연구는 HIV 양성 동성애 남성의 최대 89%가 위험성이 높은 이들 HPV 아형에 감염되어 있을 수 있다는 것을 보여준다. HIV 양성 환자들은 여러 가지 HPV 아형에 동시에 감염될 가능성 역시 있으며, 이는 높은 형성 이상 진행성과 연관이 있다.

생식기 혹은 전세계에서 가장 흔하게 성 접촉에 의하여 전염되는, 17-33살 연령의 사람들에게서 가장 유행하는 질환이다. 90%에 근접한 모든 생식기 혹이 HPV-6 및 HPV-11 때문이지만, 종양 성장과는 관련이 거의 없다. 미국 사회 건강 협회(American Social Health Association)에 따르면, 2000만 이상의 미국인이 현재 HPV에 감염되어 있고, 해마다 새로 발생하는 성 접촉으로 전염되는 HPV 감염은 550만건에 달한다. 생식기 혹은 대개 생식기관 또는 그 부근에 위치하는 통증이 없는 가려운 혹을 만들어내지만, 치료를 하지 않는 경우에는 크고 더욱 뚜렷한 양배추꽃과 유사한 성장(growths)으로 진행될 수 있다. 생식기 혹에 감염된 사람과 성 접촉을 갖는 사람의 대략 2/3가 접촉 후 3개월 이내에 혹이 생길 것이다. 생식기 혹 발생 건의 10-20%는 생식기 혹이 자발적으로 퇴화된다. 그러나, 손상이 회복되더라도 생식기 혹의 재발생은 1년 후에 50% 정도로 흔하다. 손상이 보기 흉하기 때문에 생식기 혹의 치료는 일반적이다.

지난 20년간의 증거에 의하면 HPV 감염은 필연적으로, 충분하지는 않지만, 자궁경부암으로 발전한다고 널리 받아들여지고 있다. 자궁경부암에서 HPV가 존재하는 경우가 99.7%인 것으로 추산된다. 항문 암(anal cancer)은 자궁경부암의 경우와 마찬가지로, HPV 감염과 손상의 발달 사이에 유사한 관련성이 있는 것으로 여겨진다. 항문 암을 가진 HIV 음성 환자들에 대한 연구에 의하면, 88%의 항문 암에서 HPV 감염이 발견되었다. 2003년에 미국에서는 12,200건의 신규 자궁경부암과 4,100건의 자궁경부암 사망, 및 4,000건의 신규 항문 암과 500건의 항문 암 사망이 예상된다. 광범위한 스크리닝에 기인하여 지난 40년간 자궁경부암 발생은 감소하였으나, 항문 암 발생은 증가하고 있다. HIV 양성 환자들이 일반 인구에 비하여 높은 항문 암 발생률을 나타내므로, 항문 암 발생의 증가는 일부분 HIV 감염 탓이라고 할 수 있다. 항문 암은 일반 인구 100,000명당 0.9건이 발생하는 데에 비하여, 동성애 남성 인구에 있어서는 100,000명당 35건, HIV 양성 동성애 남성 인구에 있어서는 100,000명당 70-100건이 발생한다. 사실, 항문 손상은 HIV-감염 환자들에게서 가장 유행하는 것이고, 항문 암이 증가 추세에 있기 때문에, HIV 양성 환자들의 기회 감염 치료을 위한 2003년 USPHA/IDSA 가이드라인(2003 Guidelines for the Treatment of Opportunistic Infections in HIV Positive Patients)은 항문 손상으로 진단된 환자들에 대한 치료 가이드라인을 포함할 것이다.

HPV에 대한 알려진 치료법은 없다. 치료 없이도 종종 사라지지만, 생식기 혹의 치료법은 있다. 치료 방법은 생식기 혹의 크기 및 위치와 같은 인자에 의존한다. 사용되는 치료법 중에는 이미퀴모드 크림(Imiquimod cream), 20% 포도필린 세 포 분열 저지액(podophyllin antimitotic solution), 0.5% 포도필록스(podophylox)액, 5% 5-플루오로우라실 크림, 및 트리클로로아세트산이 있다. 임신한 여성에게는 포도필린 또는 포도필록스를 사용하는 것이 권고되지 않는데, 이는 피부를 통하여 흡수되어 출생 기형을 유발할 수 있기 때문이다. 임신한 여성에게는 5-플루오로우라실 크림을 사용하는 것 역시 권고되지 않는다. 작은 생식기 혹은 냉동 (냉동 수술), 지짐(전기 지짐) 또는 레이저 치료에 의하여 물리적으로 제거될 수 있다. 다른 치료법에 반응하지 않는 커다란 혹은 수술로 제거하여야 할 수 있다. 생식기 혹은 물리적 제거 이후에 재발생하는 것으로 알려져 있는데, 이 경우에는 이들 혹에 직접 주사하는 방법으로 이 α-인터페론이 이용되어 왔다. 그러나, α-인터페론은 값이 비싸고, 생식기 혹의 재발률을 감소시키지 못한다.

이와 같이, 효과적인 HPV 치료를 위한 충족되지 않은 요구가 존재한다. 놀랍게도, 이러한 요구를 충족시키며, 다른 유일한 점 역시 제공하는 화합물이 발견되었다.

발명의 요약

화학식 1 화합물 및 약학적으로 허용되는 이들의 염.

식 중에서,

Y^1A와 Y^1B는 독립적으로 Y¹이고,

R^X1와 R^X2는 독립적으로 R^X이며,

Y¹는 =O, -O(R^X), =S, -N(R^X), -N(O)(R^X), -N(OR^X), -N(O)(OR^X) 또는 -N(N(R^X)(R^X))이고,

R^X은 독립적으로 R¹, R², R⁴, W³ 또는 보호기이고,

R¹은 독립적으로 -H 또는 탄소 원자 1 내지 18개의 알킬이고,

R²은 독립적으로 R³ 또는 R⁴인데, 여기서 각각의 R⁴는 독립적으로 0 내지 3개의 R³ 기로 치환되거나, 또는 1개의 탄소 원자에서 서로 결합하여 2개의 R² 기 3 내지 8개의 탄소로 이루어진 고리를 형성하며, 상기 고리는 0 내지 3개의 R³ 기로 치환될 수도 있는 것이며,

R³은 R^3a, R^3b, R^3c 또는 R^3d인데, 단 R³ 이 헤테로 원자에 결합된 경우, R³은 R^3c 또는 R^3d이며,

R^3a는 -H, -F, -Cl, -Br, -I, -CF₃, -CN, N_3,-NO_2, 또는 -OR⁴이고,

R^3b는 =O, -O(R⁴), =S, -N(R⁴), -N(O)(R⁴), -N(OR⁴), -N(O)(OR⁴) 또는 -N(N(R⁴)(R⁴))이고,

R^3c는 -R⁴, -N(R⁴)(R⁴), -SR⁴, -S(O)R⁴, -S(O)₂R⁴, -S(O)(OR⁴), -S(O)₂(OR⁴), -OC (R^3b)R⁴, -OC(R^3b)OR⁴, -OC(R^3b)(N(R⁴)(R⁴)), -SC(R^3b)R⁴, -SC(R^3b)OR⁴, -SC(R^3b)(N(R⁴)(R⁴)), -N(R⁴)C(R^3b)R⁴, -N(R⁴)C(R^3b)OR⁴, -N(R⁴)C(R^3b)(N(R⁴)(R⁴)), W³ 또는 -R⁵W³이고,

R^3d는 -C(R^3b)R⁴, -C(R^3b)OR⁴, -C(R^3b)W³, -C(R^3b)OW³ 또는 -C(R^3b)(N(R⁴)(R⁴))이고,

R⁴는 -H, 또는 탄소 원자 1 내지 18개의 알킬, 탄소 원자 2 내지 18개의 알케닐, 또는 탄소 원자 2 내지 18개의 알키닐이고,

R⁵는 탄소 원자 1 내지 18개의 알킬렌, 탄소 원자 2 내지 18개의 알케닐렌, 또는 탄소 원자 2 내지 18개의 알키닐렌이고,

W³은 W⁴ 또는 W⁵이며,

W⁴는 R⁶, -C(R^3b)R⁶, -C(R^3b)W⁵, -SO_M2R⁶, 또는 -SO_M2W⁵이고, 여기서 R⁶은 R⁴이고, 여기서 각각의 R⁴는 0 내지 3개의 R³ 기로 치환되는 것이며;

W⁵는 카보사이클 또는 헤테로사이클이고, 여기서 W⁵는 독립적으로 0 내지 3개의 R² 기로 치환되는 것이며,

M2는 0, 1 또는 2이다.

발명의 상세한 설명

본 발명은 다음 화학식의 화합물 및 약학적으로 허용되는 이들의 염을 제공한다.

식 중에서,

A는

또는

이고,

Y^1A와 Y^1B는 독립적으로 Y¹이고,

R^X1와 R^X2는 독립적으로 R^X이고,

Y¹는 =O, -O(R^X), =S, -N(R^X), -N(O)(R^X), -N(OR^X), -N(O)(OR^X), 또는 -N(N(R^X)(R^X))이고,

R^X는 독립적으로 R¹, R², R⁴, W³ 또는 보호기이고,

R¹은 독립적으로 -H 또는 탄소 원자 1 내지 18개의 알킬이고,

R²는 독립적으로 R³ 또는 R⁴이고, 여기서 각각의 R⁴는 독립적으로 0 내지 3개의 R³ 기로 치환되거나, 또는 1개의 탄소 원자에서 서로 결합하여 2개의 R² 기가 3 내지 8개의 탄소로 이루어진 고리를 형성하며, 상기 고리는 0 내지 3개의 R³ 기로 치환될 수도 있는 것이며,

R³은 R^3a, R^3b, R^3c 또는 R^3d인데, 단 R³이 헤테로 원자에 결합된 경우, R³은 R^3c 또는 R^3d이고,

R^3a는 -H, -F, -Cl, -Br, -I, -CF₃, -CN, N_3,-NO_2, 또는 -OR⁴이고,

W³은 W⁴ 또는 W⁵이고,

W⁴는 R⁶, -C(R^3b)R⁶, -C(R^3b)W⁵, -SO_M2R⁶, 또는 -SO_M2W⁵이고, 여기서 R⁶은 R⁴이고, 여기서 각각의 R⁴는 0 내지 3개의 R³ 기로 치환되는 것이며,

W⁵는 카보사이클 또는 헤테로사이클이고, 여기서 W⁵는 독립적으로 0 내지 3개의 R로 치환되는 것이며,

M2는 0, 1 또는 2이다.

본 발명의 구체예는 화학식 1 화합물 및 약학적으로 허용되는 이들의 염을 제공한다.

[화학식 1]

식 중에서,

Y^1A와 Y^1B는 독립적으로 Y¹이고,

R^X1과 R^X2는 독립적으로 R^X이고,

R^X는 독립적으로 R¹, R², R⁴, W³ 또는 보호기이고,

R¹은 독립적으로 -H 또는 탄소 원자 1 내지 18개의 알킬이고,

R²는 독립적으로 R³ 또는 R⁴ 이고, 여기서 각각의 R⁴는 독립적으로 0 내지 3 개의 R³ 기로 치환되거나, 또는 1개의 탄소 원자에서 서로 결합하여 2개의 R²기가 3 내지 8개의 탄소로 이루어진 고리를 형성하며, 상기 고리는 0 내지 3개의 R³ 기로 치환될 수도 있는 것이며,

R³은 R^3a, R^3b, R^3c 또는 R^3d, 단 R³이 헤테로 원자에 결합된 경우, R³은 R^3c 또는 R^3d이고,

R^3a는 -H, -F, -Cl, -Br, -I, -CF₃, -CN, N_3,-NO_2, 또는 -OR⁴이고,

R^3b는 =O, -O(R⁴), =S, -N(R⁴), -N(O)(R⁴), -N(OR⁴), -N(O)(OR⁴), 또는 -N(N(R⁴)(R⁴))이고,

R^3d는 -C(R^3b)R⁴, -C(R^3b)OR⁴, -C(R^3b)W³, -C(R^3b)OW³ or -C(R^3b)(N(R⁴)(R⁴))이고,

R⁴는 -H, 또는 탄소 원자 1 내지 18개의 알킬, 탄소 원자 2 내지 18개의 알 케닐, 또는 탄소 원자 2 내지 18개의 알키닐이고,

W³은 W⁴ 또는 W⁵이고,

M2는 0, 1 또는 2이다.

본 발명의 구체예는 화학식의 화합물 IA를 제공한다.

[화학식 1A]

여기서, Y^1A 와 Y^1B는 앞에서 정의한 것과 같다.

본 발명의 구체예는 다음 화학식의 화합물을 제공한다.

본 발명의 구체예는 다음 화학식의 화합물을 제공한다.

본 발명의 구체예는 다음 화학식의 화합물을 제공한다.

본 발명의 구체예는 다음 화학식의 화합물을 제공한다.

본 발명의 구체예는 다음 화학식의 화합물을 제공한다.

본 발명의 구체예는 다음 화학식의 화합물을 제공한다.

본 발명의 구체예는 다음 화학식의 화합물을 제공한다.

본 발명의 구체예는 다음 화학식의 화합물을 제공한다.

본 발명의 구체예는 다음 화학식의 화합물을 제공한다.

본 발명의 구체예는 다음 화학식의 화합물을 제공한다.

본 발명의 구체예는 다음 화학식의 화합물을 제공한다.

본 발명의 구체예는 항증식제로서 유용한 화합물을 제공한다.

본 발명의 구체예는 세포자멸제(an apoptotic agent)로서 유용한 화합물을 제공한다.

본 발명의 구체예는 항 HPV 약제로서 유용한 화합물을 제공한다 .

본 발명의 구체예의 한 가지 관점은 제공한다 국소 항 HPV 약제로서 유용한 화합물을 제공한다.

본 발명의 구체예는 유효량의 화학식 1 화합물 또는 약학적으로 허용되는 이 들의 염 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명의 구체예의 한 가지 관점은 상기 조성물이 젤 조성물인 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명의 구체예의 다른 한 가지 관점은 상기 조성물이 연고 조성물인 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명의 구체예는 유효량의 화학식 1 화합물 또는 약학적으로 허용되는 이들의 염, 및 유효량의 1종 이상의 항바이러스제, 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.

정의

"PMEG"라는 용어는 화합물 9-(2-포스포닐메톡시에틸)구아닌을 지칭한다.

"PMEDAP"이라는 용어는 화합물 9-(2-포스포닐메톡시에틸)-2,6-디아미노퓨린을 지칭한다.

"cprPMEDAP"이라는 용어는 화합물 9-(2-포스포닐메톡시에틸)-2-아미노-6-(사이클로프로필)퓨린을 지칭한다.

"생체이용률"은 약제를 체내에 도입한 이후에 약학적 활성제가 표적 조적에서 이용되는 정도이다. 약학적 활성제의 생체이용률을 향상시킴으로써 주어진 투여량에서 더욱 많은 약학적 활성제가 표적 조직 영역에서 이용될 것이므로, 더욱 유효하고 효과적인 환자 치료법을 제공할 수 있다.

"포스포네이트" 및 "포스포네이트기"라는 용어는 1) 탄소에 단일 결합 되어 있는, 2) 헤테로 원자에 이중 결합되어 있는, 3) 헤테로 원자에 단일 결합되어 있는, 및 4) 다른 헤테로 원자에 단일 결합되어 있는 인을 포함하는 분자 내의 작용기 또는 부분을 포함하는 것으로서, 이때 각각의 헤테로 원자는 서로 동일하거나 또는 상이할 수 있다. "포스포네이트" 및 "포스포네이트기"라는 용어는 또한 화합물로부터 분리될 수 있는 전구 약물 부분을 포함하는 작용기 또는 부분은 물론, 전 술한 것과 동일한 산화 상태의 인을 포함하는 작용기 또는 부분을 포함하여, 상기 화합물은 전술한 것과 같은 특성을 갖는 인을 보유한다. 예를 들면, "포스포네이트" 및 "포스포네이트기"라는 용어는 포스폰산, 포스폰산 모노에스테르, 포스폰산 디에스테르, 포스포노아미데이트, 및 포스폰티오에이트 작용기를 포함한다. 본 발명의 한 가지 특정 구체예에 있어서, "포스포네이트" 및 "포스포네이트기"라는 용어는 화합물로부터 분리될 수 있는 전구 약물 부분을 포함하는 작용기 또는 부분은 물론, 1) 탄소에 단일 결합 되어 있는, 2) 산소에 이중 결합되어 있는, 3) 산소에 단일 결합되어 있는, 및 4) 다른 산소에 단일 결합되어 있는, 인을 포함하는 분자 내의 작용기 또는 부분을 포함하여, 상기 화합물은 전술한 특성을 갖는 인을 보유한다. 본 발명의 다른 한 가지 특정 구체예에 있어서, "포스포네이트" 및 "포스포네이트기"라는 용어는 화합물로부터 분리될 수 있는 전구 약물 부분을 포함하는 작용기 또는 부분은 물론, 1) 탄소에 단일 결합 되어 있는, 2) 산소에 이중 결합되어 있는, 3) 산소 또는 질소에 단일 결합되어 있는, 및 4) 다른 산소 또는 질소에 단일 결합되어 있는 인을 포함하는 분자 내의 작용기 또는 부분을 포함하여, 상기 화합물은 전술한 특성을 갖는 인을 보유한다.

대용 위장관 분비액 내에서 화합물의 안정성을 측정하는 비방(recipes) 및 방법은 알려져 있다. 37℃에서 대용 장액 또는 위장액 내에서 1시간 동안 배양한 경우에 약 50 몰% 미만의 보호기가 탈보호되는 정도로, 본원에서 정의된 화합물은 안정하다. 이러한 화합물들은 이 구체예에서 사용하기에 적합하다. 화합물이 위장관에 대하여 안정하다고 하여 이것이 생체 내(in vivo)에서 가수분해될 수 없다는 의미는 아니라는 점에 주의하여야 한다. 전구 약물은 통상적으로 소화계 내에서 안정할 것이지만, 모약물은 소화관 내강(lumen), 간 또는 다른 대사 기관에서, 또는 일반적으로 세포 내에서 실질적으로 가수분해된다.

본 발명의 화합물은 특정의 경우에 호변성 이성질체로서 존재할 수도 있다. 예를 들면, 이미다졸, 구아니딘, 아미딘 및 테트라졸 시스템의 경우 엔아민 호변체가 존재할 수 있으며, 이들의 가능한 모든 호변성 형태는 본 발명의 범위 내이다.

본원에서 사용되는 "전구 약물"이라는 용어는 생물학적 시스템 내에 투여되었을 때 자발적인 화학 반응(들), 효소 촉매 화학 반응(들), 광분해, 및/또는 대사 화학 반응(들)의 결과로서 약물, 즉 활성제를 생성하는 모든 화합물을 지칭한다. 따라서, 전구 약물은 치료학적 활성 화합물의 공유적으로 변형된 유사체 또는 잠재형이다.

"전구 약물 부분"은, 대사 작용 중에 전신적으로 세포 내에서 가수 분해, 효소 분해에 의하여, 또는 다른 몇 가지 과정 (Bundgaard, Hans, "Design and Application of Prodrugs" in A Textbook of Drug Design and Development (1991), P. Krogsgaard-Larsen and H. Bundgaard, Eds. Harwood Academic Publishers, pp. 113-191)에 의하여 활성 억제 화합물로부터 분리되는, 화학적으로 변화되기 쉬운(labile) 작용기를 지칭한다. 본 발명의 포스포네이트 전구 약물 화합물과 효소 활성화 기작이 가능한 효소는 아미다아제, 에스테라아제, 미생물 효소, 포스포리파아제, 콜리에스테라아제 및 포스파아제를 포함하지만, 이에 한정되는 것은 아니다. 전구 약물 부분은 약물 전달을 최적화하기 위한 안정성, 흡수성 및 친지 성(lipophilicity), 생체이용률 및 효율을 향상시킬 수 있다. 전구 약물 부분은 활성 대사 생성물 또는 약물 그 자체를 포함할 수도 있다.

대표적인 전구 약물 부분은 가수 분해에 민감하거나 또는 화학적으로 변화를 일으키기 쉬운 아실옥시메틸 에스테르 -CH₂OC(=O)R 및 아실옥시메틸 카보네이트 -CH₂OC(=O)OR을 포함하며, 이 경우에 R은 C₁-C₆ 알킬, C₁-C₆ 치환 알킬, C₆-C₂₀ 아릴 또는 C₆-C₂₀ 치환 아릴이다. 아실옥시알킬 에스테르는 카르복실산을 위한 전구 약물로서 처음 이용되었고, 이어서 Farquhar 등 (1983) J. Pharm. Sci. 72: 324; US 특허 제4816570호, 제4968788호, 제5663159호 및 제5792756호에 의하여 포스페이트 및 포스포네이트에 응용되었다. 이어서, 아실옥시알킬 에스테르는 세포막을 통과하여 포스폰산을 전달하기 위하여 및 경구 생체이용률을 향상시키기 위하여 이용되었다. 아실옥시알킬 에스테르의 근접한 변형인 알콕시카보닐옥시알킬 에스테르 (카보네이트) 역시 본 발명의 화합물의 조합에 있어서 전구 약물 부분으로서 경구 생체이용률을 향상시킬 수 있다. 대표적인 아실옥시메틸 에스테르는 이소프로필카보닐옥시메톡시, -OCH₂OC(=O)C(CH₃)₂이다. 대표적인 아실옥시메틸 카보네이트 전구 약물 부분은 이소프로필카보닐옥시메틸 카보네이트, HOC(=O)OCH₂OC(=O)C(CH₃)₂이다.

포스포네이트기는 포스포네이트 전구 약물 부분일 수 있다. 상기 전구 약물 부분은 예컨대, 이소프로필카보닐-옥시메톡시 또는 이소프로필카보닐옥시메틸 카보네이트기와 같은, 그러나 이에 한정되지는 않는, 가수 분해에 민감한 기일 수 있 다. 대안으로서, 전구 약물 부분은 락테이트 에스테르 또는 포스포노아미데이트-에스테르기와 같이 효소능(enzymatic potentiated) 분해에 민감할 수 있다.

인 기의 아릴 에스테르, 특히 페닐 에스테르는 경구 생체이용률을 향상시키는 것으로 보고된다 (De Lombaert 등 (1994) J. Med. Chem. 37:498). 포스페이트에 대하여 오르토 카르복실산 에스테르를 갖는 페닐 에스테르 역시 설명되어 있다 (Khamnei 및 Torrence, (1996) J. Med. Chem. 39:4109-4115). 벤질 에스테르는 포스폰산 모체(parent phosphonic acid)를 생성하는 것으로 보고된다. 몇가지 경우에, 오르토 또는 파라 위치의 치환기는 가수 분해를 촉진한다. 아실화 페놀 또는 알킬화 페놀을 갖는 벤질 유사체는 효소, 예를 들면, 에스테라아제, 옥시다아제 등의 작용에 의하여 페놀 화합물을 생성할 수 있는데, 이들은 다시 벤질성 C-O 결합이 분해되어 인산과 퀴논 메타이드(quinone methide) 중간체를 새엉한다. 이 부류의 전구 약물의 예는 Mitchell 등 (1992) J. Chem. Soc. Perkin Trans. II 2345; Glazier WO 91/19721에 설명되어 있다. 또 다른 벤질성 전구 약물은 벤질성 메틸렌기에 부착된 카르복실산 에스테르 함유 기를 갖는 것으로 설명되어 있다 (Glazier WO 91/19721). 티오 함유 전구 약물이 포스포네이트 약물의 세포내 전달에 유용한 것으로 보고된다. 이들 프로(pro) 에스테르는 티올기가 아실기로 에스테르화되거나 또는 다른 티올기와 결합하여 디설파이드를 형성하고 있는 에틸티오기를 함유한다. 에스테르 제거 반응 또는 디설파이드의 환원 반응은 유리 티오 중간체를 생성하고, 이어서 인산과 에피설파이드로 분해된다 (Puech 등 (1993) Antiviral Res., 22: 155-174; Benzaria 등 (1996) J. Med. Chem. 39: 4958). 고리형 포스포네이트 에스 테르 역시 인 함유 화합물의 전구 약물인 것으로 설명되어 있다 (Erion 등, US 특허 No. 6312662).

"보호기"는 작용기의 특성을 차단 또는 개조하거나, 또는 화합물의 특성을 전체적으로 차단 또는 개조하는 화합물의 부분을 지칭한다. 보호/탈보호를 위한 화학적 보호기 및 전략은 본 발명 분야에 잘 알려져 있다. 예컨대, Protective Groups in Organic Chemistry, Theodora W. Greene, John Wiley & Sons, Inc., New York, 1991을 참조하라. 보호기는 종종 특정 작용기의 반응성을 차단하여, 예를 들면, 순차적이고 계획된 양상으로 화학 결합을 생성시키거나 또는 절단하는, 목적하는 화학 반응의 효율성을 돕는 데에 이용된다. 화합물의 작용기의 보호는 보호된 작용기의 반응성 이외에도, 극성, 친지성 (소수성) 및 통상의 분석 수단을 측정할 수 있는 다른 특성과 같은 다른 물리적 특성을 변화시킨다. 화학적으로 보호된 중간체는 그 자체로서 생물학적으로 활성이거나 또는 불활성이다.

보호된 화합물은, 세포막을 통한 통과 및 효소 분해 또는 제거에 대한 내성과 같은, 변화된, 어떤 경우에는 최적화된 생체외 및 생체내 특성을 나타낼 수도 있다. 이 역할에 있어서, 의도하는 치료 효과를 갖는 보호된 화합물은 전구 약물로 지칭될 수도 있다.

보호기의 또 다른 기능은 모 약물을 전구 약물로 전환시킴으로써, 생체내에서 전구 약물이 전환되어 모 약물이 방출된다. 활성 전구 약물은 모 약물에 비하여 더 효과적으로 흡수될 수 있으므로, 전구 약물은 모 약물에 비하여 생체내에서 더 큰 효력을 가질 수도 있다. 보호기는 화학적 중간체 경우에는 생체외에서, 전구 약 물의 경우에는 생체내에서 제거된다. 일반적으로는 생성물이 약리학적으로 무해하다면 더욱 바람직하기는 하지만, 화학적 중간체에 있어서는 탈보호 후에 얻어지는 생성물, 예를 들면, 알코올은 생리학적으로 허용 가능하다.

본 발명의 화합물 중 어떤 것에 대한 언급은 생리학적으로 허용 가능한 염을 포함한다. 본 발명의 화합물의 생리학적으로 허용 가능한 염의 예는 알칼리 금속 (예를 들면, 나트륨), 알칼리 토금속 (예를 들면, 마그네슘), 암모늄 및 NX₄ ⁺ (여기서 X는 C₁-C₄ 알킬)과 같은 적당한 염기로부터 유래하는 염을 포함한다. 수소 원자 또는 아미노기의 생리학적으로 허용 가능한 염은 아세트산, 벤조산, 락트산, 푸마르산, 타르타르산, 말레산, 말론산, 말산, 이세티온산(isethionic acid), 락토비온산(lactobionic) 및 숙신산과 같은 유기 카르복실산, 메탄설폰산, 에탄설폰산, 벤젠설폰산 및 p-톨루엔설폰산과 같은 유기 설폰산, 및 염산, 황산, 인산 및 설파민산(sulfamic acid)과 같은 무기산의 염을 포함한다. 하이드록시기 화합물의 생리학적으로 허용 가능한 염은 Na⁺ 및 NX₄ ⁺ (여기서, X는 독립적으로 H 또는 C₁-C₄ 알킬기로부터 선택된다)와 같은 적합한 양이온과 조합된 상기 화합물의 음이온을 포함한다.

본원에서 사용되는, "젤"이라는 용어는 액체에 의하여 둘러싸인 및 상호침투된 작은 무기 입자 또는 큰 유기 분자로 만들어진 현탁액으로 이루어진 반고체(semisolid) 시스템을 지칭한다. 젤 매스가 작은 입자로 이루어진 솜 모양의 침 전물(floccules)로 이루어진 경우에 상기 젤은 2상(two-phase) 시스템으로 분류되며, 때로는 마그마(magma)로 불리워진다. 알루미늄 하이드록사이드 젤과 벤토나이트 마그마가 2상 시스템의 예이다. 단일상 젤은 외관상 분산된 거대 분자와 액체 사이의 경계가 존재하지 않는 양상으로 액체 내에 균일하게 분산된 유기 거대 분자로 구성된다. 이와 같은 젤의 예는 카르복시메틸셀룰로오스 나트륨 및 트라가칸스(tragacanth)이다. 젤은 통상적으로 수성이지만, 연속상(continuous phase)으로서 알코올 및 오일이 사용될 수도 있다.

본원에서 사용되는 "연고"라는 용어는 문질러 바르는 것에 의하여 피부에 용이하게 도포될 수 있는 농도의 외용 반고체 제제를 지칭한다. 신체에 도포될 때 이들은 연화되지만 용융될 필요는 없는 조성물이어야 한다. 이들은 의약 물질의 국소 응용을 위한 운송 수단으로 작용하고, 또한 피부를 위한 보호제(protectives) 및 연화제로 작용한다.

치료적 사용에 있어서, 본 발명의 화합물의 활성 성분의 염은 생리학적으로 허용 가능할 것이다. 다시 말하면, 이들은 생리학적으로 허용 가능한 산 또는 염기로부터 유래하는 염일 것이다. 그러나, 생리학적으로 허용 가능하지 않은 산 또는 염기의 염 역시 용도를 찾을 수 있는데, 예를 들면, 생리학적으로 허용 가능한 화합물의 제조 또는 화합물의 정제에 사용할 수 있다. 생리학적으로 허용 가능한 산 또는 염기로부터 유래하는 것인가 아닌가에 무관하게 모든 염은 본 발명의 범위 내이다.

"알킬"은 노르말, 2차, 3차 또는 고리형 탄소 원자를 함유하는 C₁-C₁₈ 탄화수소이다. 예는 메틸 (Me, -CH₃), 에틸 (Et, -CH₂CH₃), 1-프로필 (n-Pr, n-프로필, -CH₂CH₂CH₃), 2-프로필 (i-Pr, i-프로필, -CH(CH₃)₂), 1-부틸 (n-Bu, n-부틸, -CH₂CH₂CH₂CH₃), 2-메틸-1-프로필 (i-Bu, i-부틸, -CH₂CH(CH₃)₂), 2-부틸 (s-Bu, s-부틸, -CH(CH₃)CH₂CH₃), 2-메틸-2-프로필 (t-Bu, t-부틸, -C(CH₃)₃), 1-펜틸 (n-펜틸, -CH₂CH₂CH₂CH₂CH₃), 2-펜틸 (-CH(CH₃)CH₂CH₂CH₃), 3-펜틸 (-CH(CH₂CH₃)₂), 2-메틸-2-부틸 (-C(CH₃)₂CH₂CH₃), 3-메틸-2-부틸 (-CH(CH₃)CH(CH₃)₂), 3-메틸-1-부틸 (-CH₂CH₂CH(CH₃)₂), 2-메틸-1-부틸 (-CH₂CH(CH₃)CH₂CH₃), 1-헥실 (-CH₂CH₂CH₂CH₂CH₂CH₃), 2-헥실 (-CH(CH₃)CH₂CH₂CH₂CH₃), 3-헥실 (-CH(CH₂CH₃)(CH₂CH₂CH₃)), 2-메틸-2-펜틸 (-C(CH₃)₂CH₂CH₂CH₃), 3-메틸-2-펜틸 (-CH(CH₃)CH(CH₃)CH₂CH₃), 4-메틸-2-펜틸 (-CH(CH₃)CH₂CH(CH₃)₂), 3-메틸-3-펜틸 (-C(CH₃)(CH₂CH₃)₂), 2-메틸-3-펜틸 (-CH(CH₂CH₃)CH(CH₃)₂), 2,3-디메틸-2-부틸 (-C(CH₃)₂CH(CH₃)₂), 3,3-디메틸-2-부틸 (-CH(CH₃)C(CH₃)₃이다.

"알케닐"은 1개 이상의 불포화 부위, 즉, 탄소-탄소, sp ² 이중 결합을 갖는 노르말, 2차, 3차 또는 고리형 탄소 원자를 함유하는 C₂-C₁₈ 탄화수소이다. 예는 에 틸렌 또는 비닐 (-CH=CH₂), 알릴 (-CH₂CH=CH₂), 사이클로펜테닐 (-C₅H₇), 및 5-헥세닐 (-CH₂ CH₂CH₂CH₂CH=CH₂)을 포함하지만, 이에 한정되지는 않는다.

"알키닐"은 1개 이상의 불포화 부위, 즉, 탄소-탄소, sp 삼중 결합을 갖는 노르말, 2차, 3차 또는 고리형 탄소 원자를 함유하는 C₂-C₁₈ 탄화수소이다. 예는 아세틸레닐 (-C≡H) 및 프로파질 (-CH₂C≡H)를 포함하지만, 이에 한정되지는 않는다,

"알킬렌"은 1-18개의 탄소 원자로 이루어진 포화, 분지형 또는 직선형 쇄 또는 고리형 탄화수소 라디칼을 지칭하는 것으로서, 모 알칸의 서로 동일하거나 상이한 탄소 원자로부터 2개의 수소 원자가 제거되어 유도된 2개의 1가(monovalent) 라디칼 중심을 갖는 것이다. 전형적인 알킬렌 라디칼은 메틸렌 (-CH₂-) 1,2-에틸 (-CH₂CH₂-), 1,3-프로필 (-CH₂CH₂CH₂-), 1,4-부틸 (-CH₂CH₂CH₂CH₂-) 등을 포함하지만, 이에 한정되는 되는 것은 아니다.

"알케닐렌"은 2-18개의 탄소 원자로 이루어진 불포화, 분지형 또는 직선형 쇄 또는 고리형 탄화수소 라디칼을 지칭하는 것으로서, 모 알켄의 서로 동일하거나 상이한 탄소 원자로부터 2개의 수소 원자가 제거되어 유도된 2개의 1가 라디칼 중심을 갖는 것이다. 전형적인 알케닐렌 라디칼은 1,2-에틸렌 (-CH=CH-)을 포함하지만, 이에 한정되는 되는 것은 아니다.

"알키닐렌"은 2-18개의 탄소 원자로 이루어진 불포화, 분지형 또는 직선형 쇄 또는 고리형 탄화수소 라디칼을 지칭하는 것으로서, 모 알킨의 서로 동일하거나 상이한 탄소 원자로부터 2개의 수소 원자가 제거되어 유도된 2개의 1가 라디칼 중심을 갖는 것이다. 전형적인 알키닐렌 라디칼은 아세틸렌 (-C≡-), 프로파질 (-CH₂C≡-), 및 4-펜티닐 (-CH₂CH₂CH₂C≡H-)을 포함하지만, 이에 한정되는 되는 것은 아니다.

"아릴"은 모 방향족 고리 시스템의 탄소 원자 1개로부터 1개의 수소 원자가 제거되어 유도된, 6-20개의 탄소 원자로 이루어진 1가 방향족 탄화수소 라디칼을 의미한다. 전형적인 아릴기는 벤젠, 치환 벤젠, 나프탈렌, 안트라센, 바이페닐 등으로부터 유도되는 라디칼을 포함하지만, 이에 한정되는 되는 것은 아니다.

"아릴알킬"은 탄소 원자, 통상적으로 말단 또는 sp³ 탄소 원자에 결합된 수소 원자 중 1개가 아릴 라디칼로 교체된 고리형 알킬 라디칼을 지칭한다. 전형적인 아릴알킬기는 벤질, 2-페닐에탄-1-일, 나프틸메틸, 2-나프틸에탄-1-일, 나프토벤질, 2-나프토페닐에탄-1-일 등을 포함하지만, 이에 한정되는 되는 것은 아니다. 상기 아릴알킬기는 6 내지 20개의 탄소 원자를 포함하는데, 예를 들면, 알킬, 알케닐 또는 알키닐기를 비롯한 상기 아릴알킬기의 알킬 부분은 1 내지 6개의 탄소 원자이고, 아릴 부분은 5 내지 14개의 탄소 원자이다.

"치환 알킬", "치환 아릴" 및 "치환 아릴알킬"은 각각 1개 이상의 수소 원자가 독립적으로 비수소 치환기로 교체된 알킬, 아릴, 및 아릴알킬을 의미한다. 전형적인 치환기는 -X, -R, -O^-, -OR, -SR, -S^-, -NR₂, -NR₃, =NR, -CX₃, -CN, -OCN, -SCN, -N=C=O, -NCS, -NO, -NO₂, =N₂, -N₃, NC(=O)R, -C(=O)R, -C(=O)NRR -S(=O)₂O^-, -S(=O)₂OH, -S(=O)₂R, -OS(=O)₂OR, -S(=O)₂NHR, -S(=O)R, -OP(=O)O₂RR_,-P(=O)O₂RR -P(=O)(O^-)₂, -P(=O)(OH)₂, -C(=O)R, -C(=O)X, -C(S)R, -C(O)OR, -C(O)O^-, -C(S)OR, -C(O)SR, -C(S)SR, -C(O)NRR, -C(S)NRR, -C(NR)NRR을 포함하지만, 이에 한정되는 되는 것은 아니며, 여기서, 각각의 X는 독립적으로 할로겐 (F, Cl, Br 또는 I)이고, 각각의 R은 독립적으로 -H, 알킬, 아릴, 헤테로사이클, 보호기 또는 전구 약물 부분이다.

알킬렌, 알케닐렌 및 알키닐렌기 역시 유사하게 치환될 수 있다.

본원에서 사용되는 "헤테로사이클"의 예는 Paquette, Leo A.; Principles of Modern Heterocyclic Chemistry (W.A. Benjamin, New York, 1968), 특히 1, 3, 4, 6, 7 및 9장; The Chemistry of Heterocyclic Compounds, A Series of Monographs" (John Wiley & Sons, New York, 1950부터 현재까지), 특히 13, 14, 16, 19 및 28권; 및 J. Am. Chem. Soc. (1960) 82:5566에 기술되어 있는 헤테로사이클을 포함하지만, 이에 한정되는 것은 아니다. 한 가지 특정 구체예에 있어서 본 발명의 "헤테로사이클"은 1개 이상의 (예를 들면 1, 2, 3 또는 4개) 탄소 원자가 헤테로 원자 (예를 들면 O, N 또는 S)로 교체된 본원에서 정의한 것과 같은 "카보사이클"을 포함한다.

헤테로사이클의 예는 피리딜, 디하이드로이피리딜, 테트라하이드로피리딜 (피페리딜), 티아졸릴, 테트라하이드로티오페닐, 황 산화 테트라하이드로티오페닐, 피리미디닐, 퓨라닐, 티에닐, 피롤릴, 피라졸릴, 이미다졸릴, 테트라졸릴, 벤조퓨라닐, 티아나프탈레닐, 인돌릴, 인돌레닐, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 벤즈이미다졸릴, 피페리디닐, 4-피페리도닐, 피롤리디닐, 2-피롤리도닐, 피롤리닐, 테트라하이드로퓨라닐, 테트라하이드로퀴놀리닐, 테트라하이드로이소퀴놀리닐, 데카하이드로퀴놀리닐, 옥타하이드로이소퀴놀리닐, 아조시닐, 트리아지닐, 6H-1,2,5-티아디아지닐, 2H,6H-1,5,2-디티아지닐, 티에닐, 티안트레닐, 피라닐, 이소벤조퓨라닐, 크로메닐, 크산테닐, 페녹사티닐, 2H-피롤릴, 이소티아졸릴, 이속사졸릴, 피라지닐, 피리다지닐, 인돌리지닐, 이소인돌릴, 3H-인돌릴, 1H-인다졸릴, 퓨리닐, 4H-퀴놀리지닐, 프탈라지닐, 나프티리디닐, 퀴녹살리닐, 퀴나졸리닐, 시놀리닐, 프테리디닐, 4aH-카바졸릴, 카바졸릴, β-카볼리닐, 페난트리디닐, 아크리디닐, 피리미디닐, 페난트롤리닐, 페나지닐, 페노티아지닐, 퓨라자닐, 페녹사지닐, 아소크로마닐, 크로마닐, 이미다졸리디닐, 이미다졸리닐, 피라졸리디닐, 피라졸리닐, 피페라지닐, 인돌리닐, 이소인돌리닐, 퀴누클리디닐, 모폴리닐, 옥사졸리디닐, 벤조트리아졸릴, 벤즈이속사졸릴, 옥신돌릴, 벤족사졸리닐, 이사티노일 및 비스-테트라하이드로퓨라닐을 포함하지만, 이에 한정되는 것은 아니다.

탄소 결합 헤테로사이클의 예는 피리딘의 2, 3, 4, 5, 또는 6번 위치, 피리다진의 3, 4, 5, 또는 6번 위치, 피리미딘의 2, 4, 5, 또는 6번 위치, 피라진의 2, 3, 5, 또는 6번 위치, 퓨란, 테트라하이드로퓨란, 티오퓨란, 티오펜, 피롤 또는 테트라하이드로피롤의 2, 3, 4, 또는 5번 위치, 옥사졸, 이미다졸 또는 티아졸의 2, 4, 또는 5번 위치, 이속사졸, 피라졸, 또는 이소티아졸의 3, 4, 또는 5번 위치, 아지리딘의 2 또는 3번 위치, 아제티딘의 2, 3, 또는 4번 위치, 퀴놀린의 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8번 위치, 또는 이소퀴놀린의 1, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8번 위치에 결합된 것을 포함하지만, 이에 한정되는 것은 아니다. 더욱 통상적으로는, 탄소 결합 헤테로사이클은 2-피리딜, 3-피리딜, 4-피리딜, 5-피리딜, 6-피리딜, 3-피리다지닐, 4-피리다지닐, 5-피리다지닐, 6-피리다지닐, 2-피리미디닐, 4-피리미디닐, 5-피리미디닐, 6-피리미디닐, 2-피라지닐, 3-피라지닐, 5-피라지닐, 6-피라지닐, 2-티아졸릴, 4-티아졸릴, 또는 5-티아졸릴을 포함한다.

질소 결합 헤테로사이클의 예는 아지리딘, 아제티딘, 피롤, 피롤리딘, 2-피롤린, 3-피롤린, 이미다졸, 이미다졸리딘, 2-이미다졸린, 3-이미다졸린, 피라졸, 피라졸린, 2-피라졸린, 3-피라졸린, 피페리딘, 피페라진, 인돌, 인돌린, 1H-인다졸의 1번 위치, 이소인돌, 또는 이소인돌린의 2번 위치, 모폴린의 4번 위치, 및 카바졸, 또는 β-카볼린의 9번 위치에 결합된 것을 포함하지만, 이에 한정되는 것은 아니다. 더욱 통상적으로는, 질소 결합 헤테로사이클은 1-아지리딜, 1-아제티딜, 1-피롤릴, 1-이미다졸릴, 1-피라졸릴 및 1-피페리디닐을 포함한다.

"카보사이클"은 단일 고리로서 3 내지 7개의 탄소 원자, 두 고리로서 7 내지 12개의 탄소 원자, 다중 고리로서 최대 약 20개의 탄소 원자를 갖는 포화, 불포화 또는 방향족 고리를 지칭한다. 단일 고리형 카보사이클은 3 내지 6개의 고리 원자, 더욱 통상적으로는 5 또는 6개의 고리 원자를 갖는다. 두 고리형 카보사이클은 예를 들면, 바이사이클로 [4,5], [5,5], [5,6] 또는 [6,6] 시스템으로 배열된 7 내지 12개의 고리 원자, 또는 바이사이클로 [5,6] 또는 [6,6] 시스템으로 배열된 9 또는 10개의 고리 원자를 갖는다. 단일 고리형 카보사이클의 예는 사이클로프로필 (cPropyl), 사이클로부틸 (cButyl), 사이클로펜틸 (cPentyl), 1-사이클로펜트-1-에닐, 1-사이클로펜트-2-에닐, 1-사이클로펜트-3-에닐, 사이클로헥실, 1-사이클로헥스-1-에닐, 1-사이클로헥스-2-에닐, 1-사이클로헥스-3-에닐, 페닐, 스피릴(spiryl) 및 나프틸을 포함한다.

"링커" 또는 "링크"는 공유 결합 또는 포스포네이트기를 약물에 공유적으로 부착시키는 원자의 쇄 또는 기를 포함하는 화학적 부분을 지칭한다. 링커는 알킬옥시 (예를 들면, 폴리에틸렌옥시, PEG, 폴리메틸렌옥시) 및 알킬아미노 (예를 들면, 폴리에틸렌아미노, Jeff아민^TM; 및 숙시네이트, 숙신아미드, 디글리콜레이트, 말로네이트 및 카프로아미드를 포함하는, 이산(diacids) 에스테르 및 아미드의 반복 단위와 같은 부분들을 포함한다.

본원에서 사용되는 "Aba"라는 용어는 2-아미노부타노산의 2가(divalent) 부분을 지칭한다.

여기서, 부착 지점은 "*"로 표시된다.

본원에서 사용되는 "Ala"라는 용어는 알라닌의 2가 부분을 지칭한다.

여기서, 부착 지점은 "*"로 표시된다.

본원에서 사용되는 "Phe"이라는 용어는 알라닌의 2가 부분을 지칭한다.

여기서, 부착 지점은 "*"로 표시된다.

본원에서 사용되는"Ala"라는 용어는 알라닌의 2가 부분을 지칭한다.

여기서, 부착 지점은 "*"로 표시된다.

본원에서 사용되는 "POC"라는 용어는 하이드록시메틸 이소프로필 카보네이트의 2가 부분을 지칭한다.

여기서, 부착 지점은 "*"로 표시된다.

치환기 Y^1A and Y^1B는 표 80-3에서와 같이, 전술한 2가 아미노산 부분 및 알킬 부분을 병합한 명명법을 이용하여 기술될 수 있다.

예를 들면, 다음 화학식의 화합물은

화학식 1의 명명법을 이용하여 기술될 수 있는데, 여기서, Y^1A와 Y^1B는 -N(R^X)이고, 이때 R^X는 R²이며, 여기서, R²는 R^3d로 치환된 R⁴이고, 이때 R⁴는 R^3d로 치환된 에틸이고, 추가로 R^3d는 -C(R^3b)OW³이며, 이때 R^3b는 =O이고, 여기서 W 은 W⁵이며, W⁵는 카보사이클이고, R⁴는 R^3d로 치환된 프로필이며, 여기서 R^3d는 -C(R^3b)OR⁴이고, R^3b는 =O이며, 이때, R⁴는 에틸이다. 대안으로서, 상기 화합물은, 표 80-3에서와 같이, 화학식 1로서 기술될 수 있는데, 여기서, Y^1A와 Y^1B는 "Aba-Et"이고, 이는 다음과 같은 부분 (여기서, "*"는 부착 지점을 나타낸다)을 기술하는 것으로서,

이것은 "Et" (에틸)에 연결된 "Aba"이다.

예를 들면, 다음 화학식의 화합물은

화학식 1의 명명법을 이용하여 기술될 수 있는데, 여기서, Y^1A와 Y^1B는 -N(R^X)이고, R^X는 R²이고, R²는 R^3d로 치환된 R⁴이고, R⁴는 R^3d로 치환된 에틸이며, 여기서 R^3d는 -C(R^3b)OR⁴이고, R^3b는 =O이고, 이때 R⁴는 n-프로필이다. 대안으로서, 상기 화합물은, 표 80-3에서와 같이, 화학식 1로서 기술될 수 있는데, 여기서, Y^1A와 Y^1B는 "Ala-nPr"이고, 이는 다음과 같은 부분 (여기서, "*"는 부착 지점을 나타낸다)을 기술하는 것으로서,

이는 "nPr" (n-프로필)에 연결된 "Ala"이다.

"키랄"이라는 용어는 비중첩(superimposability) 특성을 갖는 거울상 파트너(mirror image partner) 분자를 지칭하는 것이고, "비키랄(achiral)"이라는 용어는 거울상 파트너가 중첩성인 분자를 지칭한다.

"입체 이성질체"라는 용어는 화학적 구성이 동일하지만, 원자 또는 기(groups)의 공간적인 배열이 서로 상이한 화합물을 지칭한다.

"부분 입체 이성질체(diastereomer)"는 2개 이상의 키랄 중심을 가지며, 분자들이 서로 거울상이 아닌 입체 이성질체를 지칭한다. 부분 입체 이성질체는 서로 상이한 물리적 특성, 예를 들면, 녹는점, 끓는점, 스펙트럼 특성 및 반응성을 갖는다. 부분 입체 이성질체의 혼합물은 전기영동 및 크로마토그래피와 같은 고분해능(high resolution) 분석 절차에 의하여 분리될 수 있다.

"거울상 이성질체"는 서로 비중첩성 거울상인 화합물의 2개의 입체 이성질체를 지칭한다.

질환 또는 상태(condition)와 관련이 있는 범위 내에서, "치료" 또는 "처치"라는 용어는 질환 또는 상태의 발생 방지, 질환 또는 상태의 억제, 질환 또는 상태 의 제거, 및/또는 질환 또는 상태의 증상 한 가지 이상을 완화하는 것을 포함한다.

"항증식성"이라는 용어는 종양 세포에 대한 항증식성 효과, 또는 바이러스에 감염된 세포에 대한 항증식성 효과와 같이, 세포 성장을 억제하는 데에 사용되는 활성 또는 억제하는 경향이 있는 활성을 지칭한다.

"세포 자멸사"라는 용어는 프로그램된 세포 치사의 주요 유형 중 한 가지이다. 이것은 다세포 유기체(organism)에 있어서 바람직하지 않은 세포의 계획적인 자살 과정이다. 급성 조직 손상에 기인하는 괴사(necrosis)와는 달리, 세포 자멸사는 일반적으로 유기체의 생명 주기 중에 이점을 제공하는 질서 정연한 과정으로 수행된다. 세포 자멸사는 세포가 세포 그 자체를 치사시키는 전문적인 세포 기계를 이용하는 세포 치사 유형으로서, 후생동물(metazoans)이 세포수를 제어하고, 동물의 생존에 위협이 되는 세포를 제거할 수 있는 세포 자살 메카니즘이다. 세포 자멸사는, 예컨대, 회복 불능 상태로 손상되거나, 또는 바이러스에 감염되었을 때 일어날 수 있다. 세포 자멸사에 대한 자극은 세포 그 자체로부터, 주변 조직으로부터 또는 면역 체계의 부분인 세포로부터 유래할 수 있으며, 이는 화학적, 생물학적 또는 물리적인 것일 수 있다. 관련 용어 "세포 자멸(apoptitic)"은 세포 자멸사의 과정을 지칭한다.

본원에서 사용되는 입체 화학적 정의 및 전환은 일반적으로 S. P. Parker 편집 McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (1984) McGraw-Hill Book Company, New York; 및 Eliel, E.와 Wilen, S.의 Stereochemistry of Organic Compounds (1994) John Wiley & Sons, Inc., New York에 따른다. 다수의 유기 화합물은 광학 활성 형태로 존재한다. 즉, 이들은 평면 편광면을 회전시키는 능력이 있다. 광학 활성 화합물을 기술함에 있어서, 그 키랄 중심(들)에 대하여 분자의 절대적인 배열을 나타내기 위하여 접두사 D와 L 또는 R과 S를 사용한다. 화합물에 의한 평면 편광의 회전 부호를 나타내기 위하여 접두사 d와 l 또는 (+)와 (-)을 사용하는데, (-) 또는 l은 화합물이 좌선성(levorotatory)이라는 의미이다. 접두사 (+) 또는 d로 표시되는 화합물은 우선성(dextrorotatory)이다. 주어진 화학 구조에 있어서, 디을 입체 이성질체는 서로 거울상 이미지라는 것을 제외하고는 서로 동일하다. 특정 입체 이성질체는 거울상 이성질체로 지칭될 수도 있으며, 이러한 이성질체의 혼합물은 종종 거울상 이성질체 혼합물로 지칭된다. 거울상 이성질체의 50:50 혼합물은 라세미 혼합물 또는 라세메이트로 지칭되는데, 이것은 화학 반응 또는 공정에 입체 선택성 또는 입체 특이성이 없는 경우에 발생할 수 있다. "라세미 혼합물" 및 "라세메이트"라는 용어는 동일한 몰수의 거울상 이성질체 2개의 혼합물을 지칭하는 것으로서, 이들은 광학 활성이 없다.

보호기

본 발명의 범주에 있어서, 보호기는 전구 약물 부분 및 화학적 보호기를 포함한다.

보호기는 이용 가능하고, 통상적으로 알려져 있으며, 이용되는데, 임의로 합성 절차, 즉, 본 발명의 화합물을 제조하는 경로 또는 방법의 도중에 보호기와 관련된 부반응을 방지하기 위하여 이용된다. 대부분의 경우에, 어떤 기를 보호할 것인지, 언제 보호할 것인지, 및 화학적 보호기 "PG"의 성질에 관한 결정은 보호하고 자 하는 반응의 화학 (예를 들면, 산성, 염기성, 산화, 환원 또는 기타의 조건) 및 의도하는 합성 방향에 의존할 것이다. 화합물이 여러 개의 PG로 치환되는 경우에, PG 기는 서로 동일할 필요가 없으며, 통상적으로 동일하지 않다. 통상적으로 PG는 카르복실, 하이드록실, 티오, 또는 아미노기와 같은 작용기를 보호하여, 부반응을 방지하거나 또는 합성 효율을 높이는 데에 이용될 것이다. 유리된 탈보호된 기를 얻기 위한 탈보호 순서는 의도하는 합성 방향 및 만나게 되는 반응 조건에 의존하며, 기술자에 의하여 결정된 어떤 순서라도 일어날 수 있다.

본 발명의 화합물은 다양한 작용기로 보호될 수 있다. 예를 들면, (하이드록실, 카르복실 산, 포스폰산, 또는 기타의 작용기일 수 있는) -OH기를 위한 보호기는 "에테르 또는 에스테르 형성 기"를 포함한다. 에테르 또는 에스테르 형성 기는 본원에 개시된 합성 계획에 있어서 화학적 보호기로 작용할 수 있다. 그러나, 몇 가지 하이드록실 및 티오 보호기는, 본 발명 분야의 숙련자가 이해하는 바와 같이, 에테르 형성 기도, 에스테르 형성 기도 아니며, 이들은 이하에서 논의하는 바와 같이 아미드를 포함할 것이다. 매우 많은 수의 하이드록실 보호기 및 아미드 형성 기와, 이에 대응하는 화학적 절단 반응이 Protective Groups in Organic 합성, Theodora W. Greene (John Wiley & Sons, Inc., New York, 1991, ISBN 0-471-62301-6) ("Greene")에 기술되어 있다. 본원에 참고 문헌으로서 그 전체가 병합되는 Kocienski, Philip J.; Protecting Groups (Georg Thieme Verlag Stuttgart, New York, 1994) 역시 참조하라. 특히 1장, 보호기: 개괄, 1-20쪽, 2장, 하이드록실 보호기, 21-94쪽, 3장, 디올 보호기, 95-117쪽, 4장, 카르복실 보호기, 118-154 쪽, 5장, 카보닐 보호기, 155-184쪽. 카르복실 산, 포스폰산, 포스포네이트, 설폰산을 위한 보호기와, 산을 위한 기타의 보호기는 이하에 기술하는 바에 따라 Greene을 참조하라. 이러한 기의 예는 에스테르, 아미드, 하이드라자이드 등을 포함하지만, 이에 한정되지는 않는다.

에테르 및 에스테르 형성 보호기

에스테르 형성 기는 (1) 포스포노아미데이트 에스테르, 포스포로티오에이트 에스테르, 포스포네이트 에스테르 및 포스폰-비스-아미데이트와 같은 포스포네이트 에스테르 형성 기, (2) 카르복실 에스테르 형성 기 및 (3) 설포네이트, 설페이트 및 설피네이트와 같은 설퍼(sulphur) 에스테르 형성 기를 포함한다.

본 발명의 화합물의 포스포네이트 부분은 전구 약물 부분을 포함할 수도, 포함하지 않을 수도 있다. 즉, 이들은 가수 분해 또는 효소 분해 또는 변형(modification)에 민감할 수도 있다. 특정 포스포네이트 부분은 대부분 또는 거의 모든 대사 조건에서 안정하다. 예를 들면, 알킬기가 2개 이상의 탄소 원자인 디알킬포스포네이트는 가수 분해 속도가 느리기 때문에 생체내에서 상당히 안정성을 가질 수 있다.

염 및 수화물

본 발명의 조성물은 임의로 본원 화합물의 염, 특히 약학적으로 허용 가능한, 예를 들면, Na⁺, Li⁺, K^+, Ca⁺⁺ 및 Mg⁺⁺를 함유하는 무독성 염을 포함할 수 있다. 이와 같은 염은 알칼리 및 알칼리 토금속 이온 또는 암모늄 및 4차 아미노 이온과 같은 적당한 양이온과 산 음이온 부분의 조합에 의하여 유도되는 것들을 포함할 수 있다. 수용성 염이 필요한 경우 1가 염이 바람직하다.

통상적으로 본 발명의 화합물을 금속 하이드록시드와 반응시켜 금속 염을 제조한다. 이 방법으로 제조되는 금속 염의 예는 Li⁺, Na⁺ 및 K⁺를 함유하는 염이다. 적합한 금속 화합물을 첨가함으로써 용해성이 낮은 금속염을 용해성이 큰 염의 용액으로부터 침전시킬 수 있다.

그 외에도, 염은 특정 유기산 및 무기산, 예를 들면, HCl, HBr, H₂SO₄ 또는 유기 설폰산을 염기성 중심(basic centers) 또는 산기에 첨가하는 것에 의하여 형성될 수도 있다. 마지막으로, 본원의 조성물은 양성 이온(zwitterion) 형태는 물론, 이온화되지 않은 형태 및 화학양론적인 양의 물과 수화물 형태로 조합된 본 발명의 화합물을 포함하는 것으로 이해된다.

본 발명의 범위에는 1개 이상의 아미노산과 모 화합물로 이루어진 염 역시 포함된다. 아미노산은 통상적으로 염기 기 또는 산 기를 갖는 측쇄를 갖는 것, 예를 들면, 리신, 알기닌 또는 글루탐산, 또는 글리신, 세린, 트레오닌, 알라닌, 이소류신 또는 류신과 같은 중성기를 갖는 것이지만, 앞에서 설명한 아미노산 중의 어떤 것, 특히 단백질 화합물로서 발견되는 천연 아미노산이 바람직하다.

HPV 억제 방법

본 발명의 다른 한 가지 관점은 HPV를 함유하는 것으로 의심되는 시료(sample)을 본 발명의 화합물로 치료하는 단계를 포함하는, HPV의 활성 억제 방 법에 관한 것이다.

본 발명의 조성물은 HPV 억제제로서, 이와 같은 억제제를 위한 중간체로서 작용하거나, 또는 이하에서 설명하는 기타의 유용성을 갖는다.

본 발명의 치료 단계는 시료에 본 발명의 조성물을 가하는 것을 포함하거나, 또는 시료에 조성물의 전구체를 가하는 것을 포함한다. 상기 첨가 단게는 전술한 것과 같은 투여 방법 중의 어떤 것을 포함한다.

필요한 경우, 상기 조성물을 도포한 후에 HPV의 활성을 HPV 활성을 검출하는 직접 또는 간접적인 방법을 포함하는 방법 중의 어떤 것에 의하여 관찰할 수 있다. HPV 활성을 결정하는 모든 정량, 정성 및 반정량(semi quantitative)법이 고려된다. 통상적으로, 전술한 선별법 중의 한가지를 이용하지만, 살아있는 유기체의 생리적 특성 관찰과 같은 다른 어떤 방법 역시 이용 가능하다.

HPV 억제제의 선별

본 발명의 화합물 및 조성물은 EC₅₀, 즉, 50%의 세포 성장 억제를 달성하는 화합물의 농도를 측정하여 치료 유용성을 선별한다. HPV-비감염 및 감염 세포에서의 EC₅₀의 비율은 바이러스 감염 세포에 대한 화합물의 선택성 측정값을 제공한다. 이와 같은 측정값을 얻는 데에 이용되는 프로토콜은 실시예에서 교시된다.

약학적 배합물 및 투여 경로

본 발명의 화합물은 통상의 실시에 따라 선택되는 통상의 담체 및 부형제와 배합된다. 정제는 부형제, 윤활제(glidants), 충전제, 결합제 등을 함유할 것이다. 수성(aqueous) 배합물은 멸균형으로 제조되며, 경구 투여 이외의 경로로 투여하고자 하는 경우에는 일반적으로 등장성(isotonic)일 것이다. 모든 배합물은 임의로 "Handbook of Pharmaceutical Excipents" (1986)에 개시되어 있는 것과 같은 부형제를 함유할 것이다. 부형제는 아스코르브산 및 기타의 항산화제, EDTA와 같은 킬레이트화제, 덱스트린, 하이드록시알킬셀룰로오스, 하이드록시알킬메틸셀룰로오스, 스테아르산 등과 같은 탄수화물을 포함한다. 배합물의 pH 범위는 약 3 내지 11의 범위이지만, 통상적으로는 약 7 내지 10이다.

1종 이상의 (본원에서 활성 성분으로 지칭되는) 본 발명의 화합물은 치료하고자 하는 상태에 적합한 경로 중의 어떤 것에 의하여 투여된다. 적합한 경로는 경구, 직장, 코, 국소 (구강 및 설하 포함), 질 및 비경구 (피하, 근육내, 정맥, 피내, 경막내(intrathecal) 및 경막외 포함) 등을 포함한다. 바람직한 경로는 수용자(recipient)의 상태에 따라 변할 수 있는 것으로 이해될 것이다. 본 발명의 화합물의 장점은 이들이 경구적으로 생체 이용 가능하고, 경구 투여될 수 있다는 점이다.

활성 성분은 단독으로 투여될 수도 있지만, 이들은 약학적 배합물로 존재하는 것이 바람직할 수 있다. 동물 및 인간에 대한 사용 양쪽 모두에 있어서, 본 발명의 배합물은 앞에서 정의한 것과 같은 활성 성분 1종 이상을, 이들을 위한 허용 가능한 담체 1종 이상 및 임의로 치료 성분과 함께 포함한다. 상기 담체는 배합물의 다른 성분과 양립성(compatible)이어야 하며, 생리학적으로 수용자에게 해롭지 않아야 한다. 상기 배합물은 전술한 투여 경로에 적합한 것들을 포함한다. 상기 배 합물은 편리하게 단위 투여 제형으로 제공될 수 있으며, 제약 분야에 잘 알려져 있는 방법 중의 한 가지에 의하여 제조될 수 있다. 기술 및 배합은 일반적으로 Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Co., Easton, PA)에서 찾을 수 있다. 이와 같은 방법들은 활성 성분을, 1개 이상의 보조 성분을 구성하는 담체와 회합(association)되도록 하는 단계를 포함한다. 통상적으로, 상기 배합물은 활성 성분을 액체 담체 또는 미분화(finely divided)된 고체 담체 또는 이들 양쪽 모두와 균일하고 친밀하게 회합되도록 제조한 다음, 필요한 경우 제품을 형상화(shaping)한다.

경구 투여에 적합한 본 발명의 배합물은 각각 사전에 결정된 양의 활성 성분을 함유하는 캡슐, 교갑(cachets) 또는 정제와 같은 불연속(discrete) 단위 형태로, 분말 또는 과립 형태로, 수계 액체 또는 비수계 액체 내의 용액 또는 현탁액 형태로, 또는 수중유 액체 에멀젼 또는 유중수 액체 에멀젼 형태로 제조된다. 활성 성분은 큰 환약(bolus), 연약(electuary) 또는 페이스트 형태로 제공될 수도 있다.

정제는 임의로 1개 이상의 보조 성분과 함께 압착 또는 성형법으로 만들어진다. 분말 또는 과립과 같이 자유롭게 흐르는(free-flowing) 형태의 활성 성분을, 임의로 결합제, 윤활제, 불활성 희석제, 보존제, 표면 활성제 또는 분산제와 혼합하여, 적당한 기계 내에서 압착하여 압착 정제를 제조할 수 있다. 불활성 액체 희석제로 적신(moistened) 분말화한 활성 성분의 혼합물을 적당한 기계 내에서 성형하여 성형 정제를 만들 수 있다. 상기 정제는 필요에 따라 코팅되거나 또는 표시(scored)될 수 있고, 필요에 따라 배합되어, 활성 성분의 느린 또는 제어된 방출 을 제공하도록 할 수도 있다.

눈(eye) 또는 다른 외부 조직, 예를 들면 구강 및 피부 감염에 있어서, 상기 배합물은 활성 성분을, 예를 들면, 0.075 내지 20% w/w (0.6% w/w, 0.7% w/w, 등과 같이, 0.1% w/w 만큼씩 증가하는, 0.1% 내지 20% 범위의 활성 성분 포함), 바람직하게는 0.2 내지 15% w/w and 가장 바람직하게는 0.5 내지 10% w/w의 양으로 함유하는 국소 연고 또는 크림 형태로 적용하는 것이 바람직하다. 연고로 배합하는 경우, 활성 성분은 파라핀 또는 수혼화성(water-miscible) 연고 기재 중의 어느 한 가지와 함께 적용될 수 있다. 대안으로서, 활성 성분 수중유 크림 기재와 함께 크림 형태로 배합될 수도 있다.

필요한 경우, 크림 기재의 수성상은, 예를 들면, 여러개의 수산기를 가진 알코올, 즉, 프로필렌 글리콜, 부탄 1,3-디올, 마니톨, 소르비톨, 글리세롤 및 폴리에틸렌 글리콜 (PEG 400 포함)과 같이, 2개 이상의 하이드록실기를 갖는 알코올 및 이들의 혼합물을 30% w/w 이상 포함할 수도 있다. 국소 배합물은 피부 또는 다른 영향을 받은(affected) 영역을 통한 활성 성분의 흡수력 또는 침투력을 개선하는 화합물을 포함하는 것이 바람직할 수 있다. 피부 침투 개선제의 예는 디메틸 설폭시드 및 관련 유사체를 포함한다.

본 발명의 에멀젼의 오일상은 알려진 방법에 따라 알려진 성분으로부터 구성될 수 있다. 오일상은 단순히 (에멀전트라고도 알려져 있는) 유화제를 포함할 수도 있지만, 1종 이상의 유화제와 지방 또는 오일의 혼합물, 또는 1종 이상의 유화제와 지방 및 오일 양쪽 모두와의 혼합물을 포함하는 것이 바람직하다. 바람직하게는, 친수성 유화제를 안정제로 작용하는 친지성 유화제와 함께 포함시킨다. 오일과 지방 양쪽 모두를 포함시키는 것 역시 바람직하다. 그와 함께, 안정제와 함께 또는 안정제 없이 유화제는 소위 유화 왁스(emulsifying wax)를 구성하며, 왁스는 오일 및 지방과 함께, 크림 배합물의 오일 분산상을 형성하는, 소위 유화 연고 기재를 구성한다.

본 발명의 배합물에 사용되기에 적합한 에멀전트 및 에멀젼 안정제는 Tween

60, Span

80, 세토스테아릴 알코올, 벤질 알코올, 미리스틸 알코올, 글리세릴 모노-스테아레이트 및 소듐 라우릴 설페이트를 포함한다.

배합물에 적합한 오일 또는 지방의 선택은 필요한 미용 특성 달성에 기초한다. 크림은 바람직하게는 기름기가 없고(non-greasy), 얼룩이 없으며, 튜브 또는 기타의 용기로부터의 누출(leakage)을 피하는 데에 적합한 밀도(consistency)를 갖는 가용성(washable) 제품이어야 한다. 디-이소아디페이트, 이소세틸 스테아레이트, 코코넛 지방산의 프로필렌 글리콜 디에스테르, 이소프로필 미리스테이트, 데실 올리에이트, 이소프로필 팔미테이트, 부틸 스테아레이트, 2-에틸헥실 팔미테이트 또는 Crodamol CAP라고 알려져 있는 분지형 사슬 에스테르의 블렌드와 같은, 직선형 또는 분지형 사슬 모노- 또는 2염기성(dibasic) 알킬 에스테르를 사용할 수 있는데, 가장 나중의 3종이 바람직한 에스테르이다. 이들은 단독으로 또는 필요한 특성에 따라 조합으로 사용될 수 있다. 대안으로서, 백색 연질 파라핀 및/또는 액체 파라핀 또는 기타의 미네랄 오일과 같이, 녹는점이 높은 지질이 사용된다.

눈에 대한 국소 투여에 적합한 배합물은 점안약 역시 포함하는데, 이 경우, 활성 성분을 적당한 담체, 특히 활성 성분을 위한 수성 용매 내에 용해 또는 현탁시킨다. 활성 성분은 바람직하게는 이러한 배합물 내에 0.5 내지 20%, 유리하게는 0.5 내지 10%, 특히 약 1.5% w/w의 농도로 존재한다.

구강 내 국소 투여에 적합한 배합물은 맛을 낸(flavored) 기재, 일반적으로 수크로오스 및 아카시아 또는 트라가칸스 내에 활성 성분을 포함하는 마름모꼴 정제, 젤라틴과 글리세린, 또는 수크로오스와 아카시아와 같은 불활성 기재 내에 활성 성분을 포함하는 향정(pastilles), 및 적당한 액체 담체 내에 활성 성분을 포함하는 양치액(mouthwashes)을 포함한다.

직장 투여용 배합물은 예를 들면 코코아 버터 또는 살리실레이트를 포함하는 적당한 base와 함께 좌약 형태로 제공될 수 있다.

폐내(intrapulmonary) 또는 코 투여에 적합한 배합물은, 예를 들면 0.1 내지 500 마이크론 (마이크론 수가, 0.5, 1, 30 마이크론, 35 마이크론 등과 같이 증가하는, 0.1 내지 500 마이크론 사이의 범위의 입자 크기 포함) 범위의 입자 크기를 갖는데, 이들은 코 통로를 통한 신속한 흡입 또는 구강을 통한 흡입에 의하여 투여되어 폐포 액낭(alveolar sacs)에 도달한다. 적합한 배합물은 활성 성분의 수용액 또는 오일 용액을 포함한다. 에어로졸 또는 건조 분말 투여에 적합한 배합물은 통상의 방법에 따라 제조될 수 있으며, 이하에 기술된 것과 같은 A 또는 B형 인플루엔자 감염의 치료 및 예방에 사용되는 화합물과 같은 다른 치료제와 함께 전달될 수 있다.

질 투여에 적합한 배합물은 활성 성분과, 적합하다고 본 발명 분야에 알려져 있는 담체를 함유하는, 질 좌약(pessaries), 탐폰(tampons), 크림, 젤, 페이스트, 발포체 또는 스프레이 배합물 형태로 제공될 수 있다.

비경구 투여에 적합한 배합물은 항산화제, 완충제, 세균 발육 저지제 및 배합물을 의도되는 수용자의 혈액과 등장성이 되도록 하는 용질(solutes)를 함유할 수 있는 수계 및 비수계 멸균 주사액, 현탁제 및 농후제(thickening agents)를 함유할 수도 있는 수계 및 비수계 멸균 현탁액을 포함한다.

배합물은 단위 투여 또는 다중 투여 용기, 예를 들면, 밀봉 앰플 및 약병(virals) 형태로 제공되며, 사용 직전에 단지 멸균 액체 담체, 예를 들면, 주사용 멸균수를 첨가하는 것만이 필요한 동결 건조 상태로 보관될 수 있다. 즉석(extemporaneous) 주사액 및 현탁액은 전술한 바와 같은 종류의 멸균 분말, 과립 및 정제로부터 제조된다. 바람직한 단위 투여 배합물은 앞에 기술한 것과 같은 일일 투여량 또는 단위 일일 하위 투여량(sub-dose), 또는 이들의 적당한 분획(fraction)의 활성 성분을 함유하는 것이다.

특별히 언급된 성분 이외에도, 본 발명의 배합물은 본 발명의 배합물의 유형에 관한 기술 분야에서 통상적인 다른 작용제(agents)를 포함할 수 있는 것으로 이해되어야 하는데, 예를 들면, 경구 투여에 적합한 것은 풍미제(flavoring agents)를 포함할 수 있다.

추가로, 본 발명은 전술한 1종 이상의 활성 성분을 이들을 위한 수의학적(veterinary) 담체와 함께 포함하는 수의학적 조성물을 제공한다.

수의학적 담체는 조성물을 조성물의 투여 목적에 유용한 물질로서, 불활성이 거나 또는 수의학 분야에서 허용 가능하고, 활성 성분과 양립성인, 고체, 액체 또는 기체 물질일 수 있다. 수의학적 조성물은 경구, 비경구 또는 다른 바람직한 경로 중의 어떤 것에 의하여 투여될 수 있다.

본 발명의 화합물은, 활성 성분의 방출을 제어 및 조절함으로써 주어진 활성 성분의 투여 빈도를 낮추거나 또는 약물 동력학 프로파일이나 독성 프로파일을 개선하는 것을 가능하게 하는, 활성 성분으로서 본 발명의 화합물 1종 이상을 함유하는 제어 방출 약학적 배합물 ("제어 방출 배합물")을 제공하는 데에 사용된다.

활성 성분의 유효 투여량은 적어도 치료되는 상태, 독성, 화합물이 활성 인플루엔자의 감염 또는 예방 (낮은 투여량)에 사용되는 것인가 여부, 전달 방법 및 약학적 배합물의 성질에 의존하는데, 통상의 투여량 단계적 확대 연구를 이용하는 임상의에 의하여 결정될 것이다. 하루(per day) 약 0.0001 내지 약 100 mg/kg 체중, 통상적으로는, 하루 약 0.01 내지 약 10 mg/kg 체중, 더욱 통상적으로는, 하루 약 0.01 내지 약 5 mg/kg 체중, 가장 통상적으로는, 하루 약 0.05 내지 약 0.5 mg/kg 체중이 될 것으로 예상될 수 있다. 예를 들면, 흡입의 경우, 대략 70 kg 체중의 성인에 대한 일일 후보 투여량은 1 mg 내지 1000 mg, 바람직하게는 5 mg에서 500 mg 사이의 범위가 될 것이며, 1회 투여 또는 다중 투여의 형태가 될 수 있다.

본 발명의 활성 성분은 다른 활성 성분과의 조합으로 사용되기도 한다. 그러한 조합은 치료되는 상태, 성분의 교차 반응성 및 조합의 약물 특성(pharmaco-properties)에 기초하여 선택된다. 예를 들면, 호흡기계의 바이러스 감염, 특히 인플루엔자 감염을 치료하는 경우, 본 발명의 조성물은 (아다만틴, 리만타딘 및 리바 비린과 같은) 항바이러스제, 점액 용해제(mucolytics), 거담제(expectorants), 기관지 확장제(bronchialdilators), 항생제, 해열제(antipyretics), 또는 진통제와 조합된다. 보통, 항생제, 해열제 및 진통제가 본 발명의 화합물과 함께 투여된다.

본 발명 화합물의 대사 생성물

또한, 본 발명은 본원에 기술된 화합물의 생체내 대사 생성물이 신규하고 종래 기술로부터 자명하지 않은 범위 내에서 이들 생체내 대사 생성물을 제공한다. 이러한 대사 생성물은 예를 들면 투여되는 화합물의 산화, 환원, 가수 분해, 아미드화, 에스테르화 등으로부터, 주로 효소 공정에 기인하여 유도될 수 있다. 따라서, 본 발명은 본 발명의 화합물이 이들의 대사 생성물이 얻어지기에 충분한 시간 동안 포유 동물과 접촉하는 것을 포함하는 공정에 의하여 생성되는 신규하고 비자명한 화합물을 포함한다. 이러한 대사 생성물은 통상적으로 방사성 원소로 표지한 (예를 들면 C¹⁴ 또는 H³) 본 발명의 화합물을 제조하여, 쥐(rat), 생쥐(mouse), 돼지쥐(guinea pig), 원숭이(monkey)와 같은 동물에게, 또는 인간에게 검출 가능한 투여량 (예를 들면, 약 0.5 mg/kg 초과)으로 비경구 투여하고, 대사 작용이 일어나기에 충분한 시간 (통상적으로 약 30초 내지 30시간) 동안 방치한 다음, 뇨(urine), 혈액 또는 기타의 생물학적 시료로부터 전환 생성물을 분리함으로써 확인된다. 표지되어 있으므로 이들 대사 생성물은 용이하게 분리된다 (다른 것들은 대사 과정에서 생존한 에피토프(epitophs)를 결합시킬 수 있는 항체를 사용하여 분리된다).

대사 생성물 구조는 통상의 방법, 예를 들면 MS 또는 NMR 분석법으로 결정된다. 통상적으로, 대사 생성물의 분석은 본 발명 분야의 숙련자에게 잘 알려져 있는 통상의 약물 대사 작용 연구에서와 동일한 방법으로 수행된다. 생체내에서 다르게 밝혀지지 않은한, 전환 생성물이 본 발명 화합물 그 자체의 뉴라미니다제 억제 활성을 갖지 않을지라도, 전환 생성물은 본 발명의 화합물의 치료적 투여에 대한 진단 분석에 유용하다.

본 발명의 화합물의 추가 용도.

본 발명의 화합물, 또는 가수 분해 또는 생체내 대사 작용에 의하여 이들 화합물로부터 생성되는 생물학적 활성 물질은 면역원으로서 또는 단백질과의 접합(conjugation)에 사용되는데, 이에 의하여 이들은 면역학적으로 인지되는 에피토프 (항체 결합 부위)를 보유하는 단백질, 화합물 또는 이들의 대사 생성물에 특이적으로 결합할 수 있는 항체를 제조하기 위한 면역원성 조성물의 성분으로 작용한다. 따라서, 면역원성 조성물은 진단, 품질 관리 등에 이용되는 항체의 제조, 화합물 또는 이들의 신규 대사 생성물에 대한 분석 및 방법에 있어서 중간체로 유용하다. 화합물은 비변형 접합 단백질과 교차 반응하는 면역 반응을 자극하는 합텐 부위로 작용하므로, 화합물은 다른 방법으로(otherwise) 비면역원성 폴리펩티드에 대한 항체를 기르는 데에 유용하다.

흥미로운 가수 분해 생성물은 앞에서 논의한 것과 같은 보호된 산기 또는 염기 기의 가수 분해 생성물을 포함한다. 위에 언급된 바와 같이, 알부민 또는 열쇠 구멍 림펫(keyhole limpet) 헤모시아닌과 같은 면역원성 폴리펩티드를 포함하는 산 성 또는 염기성 아미드는 통상적으로 면역원으로서 유용하다. 전술한 대사 생성물은 본 발명의 화합물과 상당한 정도의 면역학적 교차 반응성을 보유할 수 있다. 따라서, 본 발명의 항체는 보호된 화합물에 결합함이 없이 보호되지 않은 본 발명의 화합물과 결합할 수 있으며, 대안으로서, 대사 생성물이 보호된 화합물에 및/또는 보호된 본 발명의 화합물에 결합함이 없이 대사 생성물에 결합할 수 있거나, 또는 이들 중 어떤 것에 또는 이들 세가지 모두에 특이적으로 결합할 수 있을 것이다. 항체는 바람직하게는 천연 물질과는 실질적으로 교차 반응하지 않을 것이다. 실질적인 교차 반응성은 특정 분석 조건 하에서 특정 분석물에 대한 분석 결과를 간섭하기에 충분한 반응성이다.

본 발명의 면역원은 면역원성 물질과의 회합으로 원하는 에피토프를 제공하는 본 발명의 화합물을 함유한다. 본 발명의 범주 내에서 이와 같은 회합은 면역원성 접합체 (적용 가능한 경우)를 형성하는 공유 결합 또는 비공유적으로 결합된 물질의 혼합물, 또는 이들의 조합을 의미한다. 면역원성 물질은 Freund's 보조제와 같은 보조제(adjuvants), 바이러스, 박테리아, 이스트, 식물 및 동물 폴리펩티드와 같은 면역원성 단백질, 특히 열쇠 구멍 림펫 헤모시아닌, 혈청 알부민, 소 티로글로불린(thyroglobulin) 또는 대두 트립신 억제제 및 면역원성 다당류를 포함한다. 통상적으로, 필요한 에피토프 구조를 갖는 화합물을 다관능성 (통상적으로 이관능성) 가교제를 이용함으로써 면역원성 폴리펩티드 또는 다당류에 공유적으로 접합시킨다. 합텐 면역원을 제조하는 방법은 본래 통상적인 것이며, 현재까지 면역원성 폴리펩티드 등을 합텐에 접합시키는 데에 이용되고 있는 방법 중 어떤 것이라도, 가교에 이용될 수 있고, 면역원성 물질에 대항하여 관심의 대상인 에피토프에 특이적인 항체를 생성할 가능성이 있는 가수 분해 생성물 또는 전구체 상의 작용기를 고려하여, 본 발명에서도 적절하게 이용된다. 통상적으로 인지되는 에피토프로부터 멀리 떨어져 있는 본 발명의 화합물의 부위에 폴리펩티드를 접합시킨다. 접합체는 통상의 방법으로 제조된다. 예를 들면, 가교제 N-하이드록시 숙신이미드, 숙신산 무수물 또는 alkN=C=Nalk가 본 발명의 접합체 제조에 유용하다. 접합체는 하나의 결합(a bond) 또는 1-100개, 통상적으로, 1-25개, 더욱 통상적으로 1-10개의 탄소 원자로 이루어진 연결기를 통하여 면역원성 물질에 부착된 본 발명의 화합물을 포함한다. 크로마토그래피 등을 이용하여 출발 물질 및 부산물로부터 접합체를 분리한 다음, 멸균 여과하여 보관용 약병에 담는다.

동물은 통상적으로 통상적인 방법으로 제조한 면역 혈청(antisera) 또는 단일 클론 항체 및 면역원성 접합체 또는 유도체에 대하여 면역성이 부여된다.

본 발명의 화합물은 친화성 흡수 매체(affinity absorption matrices), 공정 제어용 고정화 효소 또는 면역 분석 시약을 제조함에 있어서 링커 또는 스페이서로서 유용하다. 본원의 화합물은 필요한 물질을 가교시키기 위한 부위로서 적합한 다수의 작용기를 함유한다. 예를 들면, 호르몬, 펩티드, 항체, 약물 등과 같은 친화성 시약(affinity agent)을 불용성 기질(insoluble substrates)에 연결시키는 것은 일반적이다. 생산된 제조물(preparations), 진단 시료 및 기타의 불순한 혼합물로부터 친화성 시약에 결합 파트너를 흡수시키기 위하여 이들 불용화 시약(insolublized agent)을 알려진 방법으로 이용한다. 유사하게, 효소의 용이한 회 수와 함께 촉매 전환을 수행하기 위하여 고정화 효소를 사용한다. 진단 시약의 제조 시에는 분석물을 검출 가능한 기에 연결시키기 위하여 보통 이관능성 화합물을 사용한다.

선별(screening) 분석법은 바람직하게는 HPV 감염에 취약한 특정 조직으로부터의 세포를 이용한다. 본 발명 분야에서 알려진 분석법은 장 루멘(intestinal lumen) 안정성, 세포 침투, 간 균질물(liver homogenate) 안정성 및 혈장 안정성 분석을 비롯하여 생체내 생체이용률 결정에 적합하다. 그러나, 에스테르, 아미드 또는 기타의 보호된 유도체가 생체내에서 유리 카르복실, 아미노 또는 하이드록실기로 전환되지 않더라도 이들은 화학적 중간체로서 유용하게 잔류한다.

본 발명의 유용성은 항증식 분석법(antiproliferation assays)을 이용하여 교시되었다. 항증식 분석법은 배양된 세포의 증식에 대한 화합물의 효과를 측정한다. 세포를 7일 동안 다양한 농도의 화합물 존재하에서 배양하였다. 7일이 되는 날에 세포를 염료로 염색하고, 분광 광도계로 염색 강도 (세포수에 비례)를 측정하였다. 데이터를 화합물 농도에 대하여 도시하고, S자형 만곡부(sigmoid) 투여량 응답 곡선에 대하여 맞추고(fitted), 이로부터 세포 증식률을 50%까지 감소시키는 화합물 농도 (50% 유효 농도 또는 EC₅₀)를 결정하였다. 항증식 분석법에 있어서 활성 화합물은 세포 증식 억제성 (세포 분열 억제) 및/또는 세포 치사성 (세포 치사)일 수 있다. HPV 양성 암세포와 정상 세포에서 항증식 분석법을 수행함으로써 우리는 인간의 정상 조직으로부터의 세포에 비하여 더욱 유효하게 HPV 양성 암세포의 증식을 억제하는 화합물을 확인한다.

본 발명의 화합물을 제조하는 대표적인 방법

또한, 본 발명은 본 발명의 조성물을 제조하는 방법에 관한 것이다. 상기 조성물은 적용 가능한 유기 합성법 중의 어떤 것에 의하여 제조될 수 있다. 이러한 다수의 기술이 본 발명 분야에 잘 알려져 있다. 그러나, 다수의 공지 기술이 "Compendium of Organic Synthetic 방법" (John Wiley & Sons, New York), Vol. 1, Ian T. Harrison 및 Shuyen Harrison, 1971; Vol. 2, Ian T. Harrison 및 Shuyen Harrison, 1974; Vol. 3, Louis S. Hegedus 및 Leroy Wade, 1977; Vol. 4, Leroy G. Wade, jr., 1980; Vol. 5, Leroy G. Wade, Jr., 1984; 및 Vol. 6, Michael B. Smith; March, J.의 "Advanced Organic Chemistry" 제3판 (John Wiley & Sons, New York, 1985), "Comprehensive Organic Synthesis. 선택성, Strategy & Efficiency in Modern Organic Chemistry. In 9 Volumes", Barry M. Trost, Editor-in-Chief (Pergamon Press, New York, 1993년 인쇄)에 설명되어 있다.

본 발명의 조성물을 제조하는 다수의 대표적인 방법이 이하에 제공된다. 이들 방법은 이러한 제조 방법의 본질을 예시하기 위한 것일 뿐, 이용 가능한 방법의 범위를 한정하기 위한 것이 아니다.

일반적으로, 온도, 반응 시간, 용매, 반응 후처리(workup) 절차 등과 같은 반응 조건들은 수행되는 특정 반응에 있어서 본 발명 분야에서 통상적인 것들일 것이다. 인용되는 참고 자료는 이들 자료에서 이용하는 자료와 함께 이와 같은 조건들에 대한 상세한 설명을 포함한다. 통상적으로 온도는 -100℃ 내지 200℃일 것이 고, 용매는 비양성자성 또는 양성자성일 것이며, 반응 시간은 10 초 내지 10일일 것이다. 반응 후처리는 통상적으로 미반응 시약의 중지(quenching)와, 이에 이어지는 수/유기 층 시스템 사이의 분배 (추출) 및 생성물을 함유하는 층의 분리로 구성된다.

산화 및 환원 반응은 통상적으로 실온 부근의 온도 (약 20℃)에서 수행되지만, 금속 수소화물 환원의 경우에는 온도를 자주 0℃ 내지 -100℃까지 내리며, 용매는 환원 반응에서는 통상적으로 비양성자성이고, 산화 반응에서는 양성자성 또는 비양성자성 중의 어떤 것일 수 있다. 반응 시간은 원하는 전환을 달성하도록 조정된다.

축합 반응은 통상적으로 실온 부근의 온도에서 수행되지만, 비평형(non-equilibrating)의 동력학적 제어 축합 반응에서는 낮은 온도 (0℃ 내지 -100℃) 역시 통상적이다. 용매는 양성자성 (평형 반응에서 일반적)이거나 또는 비양성자성 (동력학적 제어 반응에서 일반적)일 수 있다.

반응 부산물의 공비 제거 및 무수 반응 조건의 이용 (예를 들면 불활성 기체 환경)과 같은 표준 합성 기술은 본 발명 분야에 있어서 일반적이며, 적용 가능한 경우 적용될 것이다.

본 발명의 화합물을 제조하는 대표적인 방법이 이하의 반응식에 제시된다. 방법에 대한 상세한 설명은 이하의 실험 부분에 제시되며, 특정 반응식이 참조된다.

반응식

이하의 공정의 각 생성물은 다음 공정에 사용하기에 앞서 임의로 분리 및/또는 정제된다.

화학적 공정, 프로토콜 또는 제조 방법과 관련하여 사용되는 경우에 "처리되는", "처리하는", "처리" 등의 용어는 접촉, 혼합, 반응, 반응하도록 방치, 접촉되도록 하는 것과, 1개 이상의 화학적 실체를 1개 이상의 다른 화학적 실체로 전환시키는 것과 같은 방법으로 1개 이상의 화학적 실체를 처리하는 것을 나타내는 데에 있어서 본 발명 분야에 있어서 통상적인 기타의 용어를 의미한다. 이는 "화합물 1을 화합물 2로 처리하는"이라는 것이 "화합물 1이 화합물 2와 반응하도록 하는", "화합물 1을 화합물 2와 접촉시키는", "화합물 1을 화합물 2와 반응시키는, 및 화합물 1을 화합물 2로 "처리하는", 화합물 2와 "반응시키는", 화합물 2로 "반응하도록 하는" 등을 적절하게 나타내는 유기 합성 발명 분야에서 일반적인 기타의 표현들과 동일한 것임을 의미한다. 화학적 공정, 프로토콜 또는 제조 방법의 범주에 있어서, "처리하는"이라는 용어는 유기 화학 물질이 반응하도록 하는 합리적이고 통상적인 방식을 나타낸다. 달리 표시하지 않는 한, 정상의 농도 (0.01M 내지 10M, 통상적으로 0.1M 내지 1M), 온도 (-100℃ 내지 250℃, 통상적으로는 -78℃ 내지 150℃, 더욱 통상적으로는 -78℃ 내지 100℃, 더욱 더 통상적으로는 0℃ 내지 100℃), 반응 용기 (통상적으로 유리, 플라스틱, 금속), 용매, 압력, 대기 (통상적으로, 산소 및 물에 대하여 민감하지 않은 반응에 있어서는 공기, 산소 또는 물에 민감한 반응에 있어서는 질소 또는 아르곤) 등이 의도된다. 주어진 공정에서의 "처리"를 위한 조건 및 장치를 선택함에 있어서는 유기 합성 발명 분야에 알려져 있는 유사한 반응에 관한 지식이 이용된다. 특히, 유기 합성 발명 분야의 통상의 숙련자는 본 발명 분야에 공지된 지식에 기초하여 기술된 공정의 화학 반응이 성공적으로 수행될 것으로 합리적으로 예측되는 조건 및 장치를 선택한다.

상기 반응식(들) 각각의 변형은 위에서 제조되는 특정 대표 물질의 다양한 유사체를 이끌어낸다. 적당한 유기 합성 방법을 설명하는 상기 인용 문헌들이 그러한 변형에 적용 가능하다.

상기 대표적인 반응식 각각에 있어서는 반응 생성물을 상호 분리 및/또는 출발 물질로부터 분리하는 데에 유리할 수 있다. 각 단계 또는 일련의 단계의 목적 생성물은 본 발명 분야에서 일반적인 기술에 의하여 원하는 정도의 동질성(homogeneity)을 갖도록 분리 및/또는 정제 (이하에서 분리라 함)된다. 통상적으로 이러한 분리는 다중 추출, 용매 또는 용매 혼합물로부터의 결정화, 증류, 승화, 또는 크로마토그래피를 포함한다. 크로마토그래피는 예를 들면, 입도 배제 또는 이 온 교환 크로마토그래피, 고, 중 또는 저 압력 액체 크로마토그래피, 소규모 박층 및 플래쉬 크로마토그래피는 물론, 소규모 및 프렙(preparative) 얇은 층 또는 두꺼운 층 층 크로마토그래피를 비롯하여, 어떤 수의 방법이라도 포함할 수 있다.

다른 종류의 분리법은 혼합물을 결합시키거나 또는 목적 생성물, 미반응 출발 물질, 반응 부산물 등에 다른 방법에 의한 분리 가능성을 부여하도록 선택되는 시약으로 처리하는 것을 포함한다. 이러한 시약은 활성탄, 분자체, 이온 교환 매질 등과 같은 흡착제 또는 흡수제를 포함한다. 대안으로서, 상기 시약은 염기성 물질의 경우에는 산, 산성 물질의 경우에는 염기, 항체, 결합 단백질과 같은 결합 시약, 크라운 에테르와 같은 선택적 킬레이트화제, 또는 액체/액체 이온 추출 시약 (LIX) 등일 수 있다.

적당한 분리 방법의 선택은 관련 물질의 특성, 예를 들면, 증류 및 승화에 있어서는 끓는점과 분자량, 크로마토그래피에 있어서는 극성 작용기의 존부, 다중 추출에 있어서는 산성 및 염기성 매질 내에서의 물질의 안정성 등에 의존한다. 본 발명 분야의 숙련자는 필요한 분리를 달성하는 데에 가장 적합한 기술을 적용할 것이다.

모든 문헌 및 인용 특허는 이들의 인용 위치에서 언급한 것에 의하여 본원에 명시적으로 병합된다. 구체적으로 인용한 부분과 페이지는 특별한 참조로서 병합된다. 본 발명은 본 발명 분야의 통상의 숙련자가 이어지는 청구범위의 요지를 이용하고 실시하는 데에 충분하도록 상세히 설명되었다. 청구범위의 방법 및 조성물의 어떤 변형이라도 본 발명의 정신 및 범위 안에서 이루어질 수 있다. 이하의 실시예 는 본 발명을 예시하기 위하여 제시된 것으로서, 어떠한 경우에도 본 발명은 이에 한정되지 않는다.

일반 사항

몇 가지 실시예는 여러 차례 실시되었다. 반복 실시예에 있어서는, 시간, 온도, 농도와 같은 반응 조건 및 수율이 정상의 실험 범위 내이었다. 중대한 변형이 가해진 반복 실시예에 있어서는 결과가 기술된 것과는 상당히 달라진 것이 주목된다. 상이한 출발 물질을 사용한 실시예에 있어서 이러한 것들이 관찰된다. 반복 실시예가, "대응하는 에틸 에스테르"와 같이, 화합물의 "대응하는" 유사체를 지칭하는 경우, 이는 다른 존재하는 기, 이 경우에는 통상적으로 메틸 에스테르를 표시된 것과 같이 변형시킨 동일한 기를 취한다는 의미이다.

실시예 1 내지 35는 상기 반응식 1 내지 9를 참조한다.

실시예 1

아세톡시에틸옥시메틸클로라이드 1: 5 L 3구 플라스크에 기계적 교반기, 온도계, 500 mL 첨가 깔때기를 장치하고, 아르곤으로 정화시켰다(purged). 1,3-디옥솔란 (140 mL, 2.00 mol)의 무수 Et₂O (800 mL) 용액과 1.0 M ZnCl₂/Et₂O (7.5 mL, 0.007 mol)를 첨가하였다. 아세틸 클로라이드 (157 mL, 2.20 mol)의 Et₂O (200 mL) 용액을 첨가 깔때기를 통하여 20분에 걸쳐 적가하였다. 냉수 중탕(cold water bath)을 이용하여 온도를 19 - 27℃ 사이로 유지하였다. 외부 냉각 없이 4시간 동 안, 자가 가열로 20 - 25℃에서 약 1시간 동안 계속 교반하였다. 투명한 무색 용액을 아르곤 하에서 밤새도록 유지하였다. 3일 동안 방치하여 오렌지색 용액을 형성시켰다. 35℃ 중탕에서 더 이상 증류되지 않을 때까지 회전 증발기 (물 흡입기)로 Et₂O를 제거하였다. 정량적 수율의 생성물 318 g (이론 수율 306 g)을 얻었다.

실시예 2

디이소프로필 포스포네이트 2: 500 mL 3구 플라스크에 조질 클로로메틸에테르 1 (317 g, 2.00 mol)를 넣었다. 트리이소프로필포스파이트 (494 mL)를 125℃ 오일 중탕 내에서 가열 및 격렬하게 교반하면서 첨가 깔때기를 통하여 적가하였다. 건조 얼음 냉각 수납 용기(receiver), 아르곤 덮개(blanket) 내의 짧은 경로 정상부(short-path head)를 통하여 2-클로로프로판 증류액을 수집하여, 140 g (이론값 157 g)의 증류액을 수집하였다. 포스파이트는 반응물을 황색으로 만들었고, 125℃ 오일 중탕 내에서 추가로 2시간 동안 가열을 계속한 다음, 진공 펌프를 이용하여 진공 증류 장치를 하였다. 황색 전면 컷(cut) (140 g, 135℃까지 정상부, 190℃까지 하부) 이후에 깨끗한 수납 용기로 바꾸었다. 222 - 228℃의 중탕 온도에서 모르는 진공 상태로 178 - 187℃의 정상부 온도 (대부분 185 - 187℃)에서 주요 분획을 수집하였다. 258 g의 생성물 2를 (1,3-디옥솔란으로부터 47% 수율).

실시예 3

알코올 3: 2 (125 g, 0.443 mol)의 무수 MeOH (440 mL) 용액을 진한 HCl (11.2 mL, 0.112 mol)으로 처리하고, 아르곤 하에서 6시간 동안 가열 환류하였다. 55℃까지에서 회전 증발기(수 흡입기)로 MeOH를 제거하여, 115 g의 투명한 오일을 남기고, 이를 톨루엔 (2 x 200 mL)과 함께 증발시켰다. 조질 생성물(crude product)을 진공 건조시켜 오일을 얻었다 (102 g, 96%).

실시예 4

디이소프로필 포스포네이트 4: 트리페닐포스핀 (25.57 g, 97.5 mmol) 및 알코올 3 (18 g, 75 mmol)의 DMF (120 mL) 용액을 6-클로로퓨린 (12.72 g, 75 mmoL)으로 처리하고, -15℃까지 냉각시켰다. 디이소프로필 아조디카르복실레이트 (16.68 g, 82.5 mmol)의 DMF (50 mL) 용액을 80분에 걸쳐 첨가 깔때기를 통하여 적가하였다. 반응 혼합물을 -15℃에서 2시간 동안 유지한 다음, 실온까지 데워지도록 하고, 추가로 2시간 동안 교반하였다. 흐릿한(cloudy) 반응 혼합물이 밝은 황색 용액으로 바뀌었다. 반응 용매를 감압하에서 증발시키고, 톨루엔 (3 x)과 함께 증발시키고, 정제에 앞서 밤새도록 진공 건조하였다. 조질 생성물을 실리카젤 상에서 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 (5% MeOH/CH₂Cl₂) 디이소프로필 포스포네이트 (18.52 g, 63%)를 백색 고체 상태로 얻었다. ¹H NMR (CDCl₃) δ 7.95 (s, 1H), 4.70 (m, 2H), 4.31 (m, 2H), 3.93 (m, 2H), 3.73 (m, 2H), 1.29 (m, 12H)이고, ³¹P NMR (CDCl₃) δ 18.42.

실시예 5

디이소프로필 포스포네이트 5: 4 (11.00 g, 28.08 mmol)와 사이클로프로필아 민 (4.86 g, 85.16 mmol)의 혼합물의 CH₃CN (80 mL) 용액을 반응 용기(bomb)에 넣고, 4시간 동안 100℃까지 가열하였다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 감압하에서 농축시켰다. 생성물을 15% MeOH/CH₂Cl₂ (3 x)와 포화 소금물 사이에 분배시키고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과하여 농축시켰다. 조질 생성물을 실리카젤 상에서 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 (5% MeOH/CH₂Cl₂), 연한 황색 폼(foam) 상태의 5 (10.42 g, 90%)를. ¹H NMR (CDCl₃) δ 7.59 (s, 1H), 5.83 (broad, s, 1H), 4.88 (broad, s, 2H), 4.70 (m, 2H), 4.21 (m, 2H), 3.88 (m, 2H), 3.72 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 3.03 (broad, s, 1H), 1.28 (m, 12H), 0.84 (m, 2H), 0.60 (m, 2H)이고, ³¹P NMR (CDCl₃) δ 18.63.

실시예 6

cPrPMEDAP 6: 5 (11.00 g, 26.67 mmol)의 무수 CH₃CN (120 mL) 용액을 브로모트리메틸실란 (21.1 mL, 160.02 mmol)으로 처리하였다. 플라스크를 알루미늄 호일로 싸서 빛으로부터 반응물을 보호하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새도록 교반하였다. 휘발 성분을 감압하에서 증발시켰다. 잔류물을 H₂O (250 mL)에 용해시키고, pH를 암모늄 하이드록시드로 9까지 조절하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 황색 고체를. 고체를 H₂O (30 mL)에 용해시키고, pH를 10% HCl로 2까지 조절하였다. 미세 고체를 수집하고, 진공 건조시켜 6 (7.88 g, 90%)을 백색 고체 상태로 얻었다.

실시예 7

모노포스폰산 하이드로클로라이드 7: 산 6 (3.00 g, 9.15 mmol)과 DMF (0.1 mL)의 혼합물의 설폴란 (9.2 mL) 용액을 70℃까지 가열하였다. 티오닐클로라이드 (1.66 mL, 22.76 mmol)를 1시간 동안에 걸쳐 적가하였다. 온도를 90℃까지 상승시키고, TMSOPh (1.74 mL, 9.61 mmol)를 가한 다음, 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 밤새도록 실온까지 냉각시켰다. 반응 혼합물을 잘 교반된 얼음 냉각 아세톤 (100 mL)에 적가하였다. 생성물이 침전되었다. 고체를 Ar 하에서 여과하고, 냉각시킨 아세톤 (100 mL)으로 세정한 다음, 진공 건조시켜 모노포스폰산 하이드로클로라이드 (3.70 g, 92%)를 고체 상태로 얻었다.

실시예 8

모노포스포노아미데이트 8: 모노포스폰산 7 (0.22 g, 0.50 mmol), L-알라닌 메틸 에스테르 하이드로클로라이드 (0.14 g, 1.00 mmol) 및 트리에틸아민 (0.21 mL, 1.50 mmol)의 혼합물의 피리딘 (3 mL) 용액을 5분 동안 60℃까지 가열하였다. 갓 제조한, 알드리티올 (0.39 g, 1.75 mmol)과 트리페닐포스핀 (0.46 g, 1.75 mmol)의 밝은 황색 피리딘 (2 mL) 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 밤새도록 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃ 사이에 분배시켰다. 유기상을 포화 소금물로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 실리카젤 상에서 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 (7% MeOH/CH₂Cl₂), 모노포스포노아미데이트 (97 mg, 39%, 1:1 부분 입체 이성질체 혼합물)를 회백색(off-white) 폼 상태로 얻었다.

실시예 9

모노포스포노아미데이트 9: 모노포스폰산 7 (0.88 g, 2.00 mmol), D-알라닌 메틸 에스테르 하이드로클로라이드 (0.84 g, 6.00 mmol) 및 트리에틸아민 (0.84 mL, 6.00 mmol)의 혼합물의 피리딘 (8 mL) 용액을 5분 동안 60℃까지 가열하였다. 갓 제조한, 알드리티올 (1.56 g, 7.00 mmol)과 트리페닐포스핀 (1.84 g, 7.00 mmol)의 밝은 황색 피리딘 (8 mL) 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 밤새도록 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃사이에 분배시켰다. 유기상을 포화 소금물로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 실리카젤 상에서 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 (7% MeOH/CH₂Cl₂), 모노포스포노아미데이트 (0.40 g, 41%, 1:1 부분 입체 이성질체 혼합물)를 회백색 폼 상태로 얻었다.

실시예 10

모노포스포노아미데이트 10: 모노포스폰산 7 (0.88 g, 2.00 mmol), L-알라닌 tert-부틸 에스테르 하이드로클로라이드 (1.31 g, 6.00 mmol) 및 트리에틸아민 (0.84 mL, 6.00 mmol)의 혼합물의 피리딘 (8 mL) 용액을 5분 동안 60℃까지 가열하였다. 갓 제조한, 알드리티올 (1.54 g, 7.00 mmol)과 트리페닐포스핀 (1.84 g, 7.00 mmol)의 밝은 황색 피리딘 (8 mL) 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반 응물을 60℃에서 밤새도록 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃사이에 분배시켰다. 유기상을 포화 소금물로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 실리카젤 상에서 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 (7% MeOH/CH₂Cl₂), 모노포스포노아미데이트 (0.38 g, 36%, 1:1 부분 입체 이성질체 혼합물)를 밝은 오렌지색 폼 상태로 얻었다.

실시예 11

모노포스포노아미데이트 11: 포스폰산 6 (0.10 g, 0.30 mmol), L-알라닌 에틸 에스테르 하이드로클로라이드 (94 mg, 0.60 mmol), 페놀 (0.14 g, 1.52 mmol) 및 트리에틸아민 (0.51 mL, 3.60 mmol)의 혼합물의 피리딘 (1.0 mL) 용액을 5분 동안 60℃까지 가열하였다. 갓 제조한, 알드리티올 (0.47 g, 2.13 mmol)과 트리페닐포스핀 (0.56 g, 2.13 mmol)의 밝은 황색 피리딘 (1.0 mL) 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 밤새도록 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃ 사이에 분배시켰다. 유기상을 포화 소금물로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 실리카젤 상에서 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 (7% MeOH/CH₂Cl₂), 모노포스포노아미데이트 (74 mg, 48%, 1:1 부분 입체 이성질체 혼합물)를 연한 황색 폼 상태로 얻었다: ¹H NMR (CDCl₃) δ 7.61 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 7.26-7.08 (m, 5H), 4.23 (m, 2H), 4.13 (m, 2H), 4.09 (m, 1H), 3.92-3.85 (m, 4H), 3.03 (broad, s, 1H), 1.30-1.26 (m, 3H), 1.24 (m, 3H), 0.88 (m, 2H), 0.63 (m, 2H)이고, ³¹P NMR (CDCl₃) δ 21.94, 20.68.

실시예 12

모노포스포노아미데이트 12: 포스폰산 6 (1.50 g, 4.56 mmol), L-알라닌 n-프로필 에스테르 하이드로클로라이드 (1.59 g, 9.49 mmol), 페놀 (2.25 g, 22.80 mmol) 및 트리에틸아민 (10.50 mL, 54.72 mmol)의 혼합물의 피리딘 (8.0 mL) 용액을 5분 동안 60℃까지 가열하였다. 갓 제조한, 알드리티올 (6.54 g, 31.92 mmol)과 트리페닐포스핀 (7.32 g, 31.92 mmol)의 밝은 황색 피리딘 (8.0 mL) 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 밤새도록 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃사이에 분배시켰다. 유기상을 포화 소금물로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 실리카젤 상에서 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 (7% MeOH/CH₂Cl₂), 모노포스포노아미데이트 (0.43 g, 18%, 화합물 E, 1:1 부분 입체 이성질체 혼합물)을 연한 황색 폼 상태로 얻었다: ¹H NMR (CDCl₃) δ 7.61 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 7.27-7.09 (m, 5H), 4.27-4.20 (m, 2H), 4.16-4.00 (m, 3H), 3.93- 3.82 (m, 4H), 3.04 (broad, s, 1H), 1.63 (m, 2H), 1.30 (dd, 3H), 0.92 (m, 3H), 0.89 (m, 2H), 0.63 (m, 2H)이고, ³¹P NMR (CDCl₃) δ 21.89, 20.66.

실시예 13

모노포스포노아미데이트 13: 포스폰산 6 (0.10 g, 0.30 mmol), L-알라닌 이소프로필 에스테르 하이드로클로라이드 (0.10 g, 0.60 mmol), 페놀 (0.14 g, 1.52 mmol) 및 트리에틸아민 (0.51 mL, 3.60 mmol)의 혼합물의 피리딘 (1.0 mL) 용액을 5분 동안 60℃까지 가열하였다. 갓 제조한, 알드리티올 (0.47 g, 2.13 mmol)과 트리페닐포스핀 (0.56 g, 2.13 mmol)의 밝은 황색 피리딘 (1.0 mL) 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 밤새도록 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃ 사이에 분배시켰다. 유기상을 포화 소금물로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 실리카젤 상에서 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 (7% MeOH/CH₂Cl₂), 모노포스포노아미데이트 (87 mg, 55%, 1:1 부분 입체 이성질체 혼합물)을 황색 폼 상태로 얻었다: ¹H NMR (CDCl₃) δ 7.60 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.26-7.09 (m, 5H), 4.98 (m, 1H), 4.23 (m, 2H), 4.06 (m, 1H), 3.91-3.83 (m, 4H), 3.04 (broad, s, 1H), 1.29-1.21 (m, 9H), 0.89 (m, 2H), 0.63 (m, 2H)이고, ³¹P NMR (CDCl₃) δ 21.85, 20.68.

실시예 14

모노포스포노아미데이트 14: 포스폰산 6 (0.10 g, 0.30 mmol), L-알라닌 n-부틸 에스테르 하이드로클로라이드 (0.11 g, 0.60 mmol), 페놀 (0.14 g, 1.52 mmol) 및 트리에틸아민 (0.51 mL, 3.60 mmol)의 혼합물의 피리딘 (1.0 mL) 용액을 5분 동안 60℃까지 가열하였다. 갓 제조한, 알드리티올 (0.47 g, 2.13 mmol)과 트리페닐포스핀 (0.56 g, 2.13 mmol)의 밝은 황색 피리딘 (1.0 mL) 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 밤새도록 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃ 사이에 분배시켰다. 유기상을 포화 소금물로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 실리카젤 상에서 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 (7% MeOH/CH₂Cl₂), 모노포스포노아미데이트 (80 mg, 50%, 1:1 부분 입체 이성질체 혼합물)를 연한 황색 폼 상태로 얻었다: ¹H NMR (CDCl₃) δ 7.61 (d, J = 4.20 Hz, 1H), 7.27-7.08 (m, 5H)이고, 5.93 (broad, s, 1H), 4.97 (broad, s, 2H), 4.23 (m, 2H), 4.10-4.08 (m, 3H), 3.91-3.84 (m, 4H), 3.03 (broad, s, 1H), 1.58 (m, 2H), 1.34-1.27 (m, 5H), 0.92-0.89 (m, 5H), 0.63 (m, 2H)이고, ³¹P NMR (CDCl₃) δ 21.94, 20.68.

실시예 15

모노포스포노아미데이트 15: 포스폰산 6 (0.10 g, 0.30 mmol), L-알라닌 n-헥실 에스테르 하이드로클로라이드 (0.13 g, 0.60 mmol), 페놀 (0.14 g, 1.52 mmol) 및 트리에틸아민 (0.51 mL, 3.60 mmol)의 혼합물의 피리딘 (1.0 mL) 용액을 5분 동안 60℃까지 가열하였다. 갓 제조한, 알드리티올 (0.47 g, 2.13 mmol)과 트리페닐포스핀 (0.56 g, 2.13 mmol)의 밝은 황색 피리딘 (1.0 mL) 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 밤새도록 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃ 사이에 분배시켰다. 유기상을 포화 소금물로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 ISCO 상에서 크로마토그래피로 정제하여 (2-프로판올/CH₂Cl₂), 모노포스포노아미데이트 (0.10 g, 59%, 1:1 부분 입체 이성질체 혼합물)를 연한 황색 폼 상태로 얻었다: ¹H NMR (CDCl₃) δ 7.59 (d, J = 4.20 Hz, 1H), 7.26-7.08 (m, 5H), 4.22 (m, 2H), 4.11 (m, 1H), 4.06 (m, 2H), 3.91-3.84 (m, 4H), 3.01 (broad, s, 1H), 1.59 (m, 2H), 1.31-1.27 (m, 9H), 0.89 (m, 3H), 0.86 (m, 2H), 0.62 (m, 2H)이고, ³¹P NMR (CDCl₃) δ 21.94, 20.68.

실시예 16

모노포스포노아미데이트 16: 포스폰산 6 (0.10 g, 0.30 mmol), L-알라닌 n-옥타닐 에스테르 하이드로클로라이드 (0.15 g, 0.60 mmol), 페놀 (0.14 g, 1.52 mmol) 및 트리에틸아민 (0.51 mL, 3.60 mmol)의 혼합물의 피리딘 (1.0 mL) 용액을 5분 동안 60℃까지 가열하였다. 갓 제조한, 알드리티올 (0.47 g, 2.13 mmol)과 트리페닐포스핀 (0.56 g, 2.13 mmol)의 밝은 황색 피리딘 (1.0 mL) 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 밤새도록 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃ 사이에 분배시켰다. 유기상을 포화 소금물로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 ISCO 상에서 크로마토그래피로 정제하여 (2-프로판올/CH₂Cl₂), 모노포스포노아미데이트 (0.13 g, 73%, 1:1 부분 입체 이성질체 혼합물)를 연한 황색 폼 상태로 얻었다: ¹H NMR (CDCl₃) δ 7.59 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 7.25-7.07 (m, 5H), 4.22 (m, 2H), 4.10 (m, 1H), 4.07 (m, 2H), 3.90-3.84 (m, 4H), 3.02 (broad, s, 1H), 1.59 (m, 2H), 1.29-1.26 (m, 13H), 0.88 (m, 3H), 0.85 (m, 2H), 0.60 (m, 2H)이고, ³¹P NMR (CDCl₃) δ 21.96, 20.69.

실시예 17

모노포스포노아미데이트 17: 포스폰산 6 (70 mg, 0.21 mmol), L-2-아미노부티르산 에틸 에스테르 하이드로클로라이드 (72 mg, 0.42 mmol), 페놀 (0.10 g, 1.05 mmol) 및 트리에틸아민 (0.36 mL, 2.52 mmol)의 혼합물의 피리딘 (1.0 mL) 용액을 5분 동안 60℃까지 가열하였다. 갓 제조한, 알드리티올 (0.33 g, 1.47 mmol)과 트리페닐포스핀 (0.39 g, 1.47 mmol)의 밝은 황색 피리딘 (1.0 mL) 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 밤새도록 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃ 사이에 분배시켰다. 유기상 을 포화 소금물로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 실리카젤 상에서 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 (7% MeOH/CH₂Cl₂), 모노포스포노아미데이트 (66 mg, 60%, 1:1 부분 입체 이성질체 혼합물)를 연한 황색 폼 상태로 얻었다: ¹H NMR (CDCl₃) δ 7.61 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.26-7.08 (m, 5H), 5.91 (broad, s, 1H), 4.97 (broad, s, 2H), 4.22-4.12 (m, 4H), 4.01-3.81 (m, 5H), 3.03 (broad, s, 1H), 1.71-1.60 (m, 2H), 1.24 (m, 3H), 0.89 (m, 2H), 0.84-0.76 (m, 3H), 0.63 (m, 2H)이고, ³¹P NMR (CDCl₃) δ 22.15, 20.93.

실시예 18

모노포스포노아미데이트 18: 포스폰산 6 (1.00 g, 3.05 mmol), L-2-아미노부티르산 n-부틸 에스테르 하이드로클로라이드 (1.19 g, 6.09 mmol), 페놀 (1.43 g, 15.23 mmol) 및 트리에틸아민 (5.10 mL, 36.60 mmol)의 혼합물의 피리딘 (5.0 mL) 용액을 5분 동안 60℃까지 가열하였다. 갓 제조한, 알드리티올 (4.70 g, 21.32 mmol)과 트리페닐포스핀 (5.59 g, 21.32 mmol)의 밝은 황색 피리딘 (5.0 mL) 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 밤새도록 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃ 사이에 분배시켰다. 유기상을 포화 소금물로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 실리카젤 상에서 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 (5% MeOH/CH₂Cl₂), 모노포스포노아미데이트 (0.7 g, 42%, 화합물　G, 1:1 부분 입체 이성질체 혼합물)를 회백색 폼 상태로 얻었다: ¹H NMR (CDCl₃) δ 7.60 (d, J = 6.60 Hz, 1H), 7.27-7.04 (m, 5H), 5.89 (broad, s, 1H), 4.94 (broad, s, 2H), 4.22 (m, 2H), 4.07-3.99 (m, 3H), 3.91-3.84 (m, 4H), 3.03 (broad, s, 1H), 1.70-1.57 (m, 4H), 1.35 (m, 2H), 0.92-0.75 (m, 8H), 0.63 (m, 2H)이고, ³¹P NMR (CDCl₃) δ 22.21, 20.95.

실시예 19

모노포스포노아미데이트 19: 포스폰산 6 (0.10 g, 0.30 mmol), L-2-아미노부티르산 n-옥타닐 에스테르 하이드로클로라이드 (0.15 g, 0.60 mmol), 페놀 (0.14 g, 1.52 mmol) 및 트리에틸아민 (0.51 mL, 3.60 mmol)의 혼합물의 피리딘 (1.0 mL) 용액을 5분 동안 60℃까지 가열하였다. 갓 제조한, 알드리티올 (0.47 g, 2.13 mmol)과 트리페닐포스핀 (0.56 g, 2.13 mmol)의 밝은 황색 피리딘 (1.0 mL) 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 밤새도록 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃ 사이에 분배시켰다. 유기상을 포화 소금물로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 ISCO 상에서 크로마토그래피로 정제하여 (2-프로판올 /CH₂Cl₂), 모노포스포노아미데이트 (0.12 g, 64%, 1:1 부분 입체 이성질체 혼합물)를 연한 황색 폼 상태로 얻었다: ¹H NMR (CDCl₃) δ 7.62 (d, J = 6.60 Hz, 1H), 7.25-7.08 (m, 5H), 4.24-4.21 (m 2H), 4.09-4.04 (m, 2H), 4.00 (m, 1H), 3.91-3.83 (m, 4H), 3.01 (broad, s, 1H), 1.70-1.58 (m, 4H), 1.27 (m, 10H), 0.89-0.76 (m, 8H), 0.62 (m, 2H)이고, ³¹P NMR (CDCl₃) δ 22.22, 20.92.

실시예 20

모노포스포노아미데이트 20: 포스폰산 6 (1.5 g, 4.57 mmol), L-페닐알라닌 에틸 에스테르 하이드로클로라이드 (2.10 g, 9.14 mmol), 페놀 (2.15 g, 22.85 mmol) 및 트리에틸아민 (7.64 mL, 54.84 mmol)의 혼합물의 피리딘 (8.0 mL) 용액을 5분 동안 60℃까지 가열하였다. 갓 제조한, 알드리티올 (7.05 g, 31.99 mmol)과 트리페닐포스핀 (8.39 g, 31.99 mmol)의 밝은 황색 피리딘 (7.0 mL) 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 밤새도록 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃ 사이에 분배시켰다. 유기상을 포화 소금물로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 실리카젤 상에서 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 (5% MeOH/CH₂Cl₂), 불순물을 약 10% 함유하는 연한 황색 고체 1.32 g을 얻었다. 황색 고체 (1.32 g, 2.28 mmol)를 iPrOH (10 mL)에 용해시키고, 푸마르산 산 (0.27 g, 2.28 mmol)의 뜨거운 iPrOH (30 mL) 용액으로 옮긴 다음, 80℃에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 서서히 실온까지 냉각시키고, 0℃에서 푸마르산염을 수집하였다. 얻어진 푸마르산염을 NaHCO₃ (2 x)과 EtOAc 사이에 분배시켜 중화하였다. 유기상을 포화 소금물과 H₂O로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키킨 다음, 여과하여 농축시켰다. 생성물을 진공 건조시켜 모노포스포노아미데이트 (0.70 g, 26%, 화합물 A, 1:1 부분 입체 이성질체 혼합물)를 백색 폼 상태로 얻었다: ¹H NMR (CDCl₃) δ 7.54 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.27-6.98 (m, 10H), 4.35 (m, 1H), 4.16 (m, 2H), 4.08 (m, 2H), 3.84-3.61 (m, 3H), 3.33 (m, 1H), 3.02 (broad, s, 1H), 2.95-2.87 (m, 2H), 1.17 (m, 3H), 0.87 (m, 2H), 0.61 (m, 2H)이고, ³¹P NMR (CDCl₃) δ 21.88, 21.07.

실시예 21

모노포스포노아미데이트 21: 포스폰산 6 (70 mg, 0.21 mmol), L-페닐알라닌 n-부틸 에스테르 하이드로클로라이드 (0.11 g, 0.42 mmol), 페놀 (0.10 g, 1.05 mmol) 및 트리에틸아민 (0.36 mL, 2.52 mmol)의 혼합물의 피리딘 (1.0 mL) 용액을 5분 동안 60℃까지 가열하였다. 갓 제조한, 알드리티올 (0.33 g, 1.47 mmol)과 트리페닐포스핀 (0.39 g, 1.47 mmol)의 밝은 황색 피리딘 (1.0 mL) 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 밤새도록 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃사이에 분배시켰다. 유기상을 포 화 소금물로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 실리카젤 상에서 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 (7% MeOH/CH₂Cl₂), 모노포스포노아미데이트 (30 mg, 23%, 1:1 부분 입체 이성질체 혼합물)를 연한 황색 폼 상태로 얻었다: ¹H NMR (CDCl₃) δ 7.55 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 7.25-6.98 (m, 10H), 4.36 (m, 1H), 4.17 (m, 2H), 4.02 (m, 2H), 3.83-3.35 (m, 4H), 3.02 (broad, s, 1H), 2.94-2.86 (m, 2H), 1.52 (m, 2H), 1.29 (m, 2H), 0.90 (m, 3H), 0.88 (m, 2H), 0.62 (m, 2H)이고, ³¹P NMR (CDCl₃) δ 21.85, 21.05.

실시예 22

모노포스포노아미데이트 22: 포스폰산 6 (70 mg, 0.21 mmol), L-페닐알라닌 iso부틸 에스테르 하이드로클로라이드 (0.11 g, 0.42 mmol), 페놀 (0.10 g, 1.05 mmol) 및 트리에틸아민 (0.36 mL, 2.52 mmol)의 혼합물의 피리딘 (1.0 mL) 용액을 5분 동안 60℃까지 가열하였다. 갓 제조한, 알드리티올 (0.33 g, 1.47 mmol)과 트리페닐포스핀 (0.39 g, 1.47 mmol)의 밝은 황색 피리딘 (1.0 mL) 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 밤새도록 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃ 사이에 분배시켰다. 유기상을 포화 소금물로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 실리카젤 상에서 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 (7% MeOH/CH₂Cl₂), 모노포스포노아미데이트 (65 mg, 50%, 1:1 부분 입체 이성질체 혼합물)를 연한 황색 폼 상태로 얻었다:¹H NMR (CDCl₃) δ 7.56 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.26-6.98 (m, 10H), 4.40 (m, 1H), 4.17 (m, 2H), 3.82 (m, 2H), 3.75-3.62 (m, 3H), 3.35 (m, 1H), 3.04 (broad, s, 1H), 2.96-2.87 (m, 2H), 1.83 (m, 1H), 0.90 (m, 2H), 0.86 (m, 6H), 0.63 (m, 2H)이고, ³¹P NMR (CDCl₃) δ 21.82, 21.03.

실시예 23

비스포스포노아미데이트 23: 포스폰산 6 (0.10 g, 0.30 mmol), L-알라닌 에틸 에스테르 하이드로클로라이드 (0.28 g, 1.80 mmol) 및 트리에틸아민 (0.51 mL, 3.60 mmol)의 혼합물을 피리딘 (1.0 mL) 용액을 5분 동안 60℃까지 가열하였다. 갓 제조한, 알드리티올 (0.47 g, 2.10 mmol)과 트리페닐포스핀 (0.56 g, 2.10 mmol)의 밝은 황색 피리딘 (1.0 mL) 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 밤새도록 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃ 사이에 분배시켰다. 유기상을 포화 소금물로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 실리카젤 상에서 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 (10% MeOH/CH₂Cl₂), 비스포스포노아미데이트 (80 mg, 50%,)를 연한 황색 폼 상태로 얻었다: ¹H NMR (CDCl₃) δ 7.63 (s, 1H), 5.88 (broad, s, 1H), 4.96 (broad, s, 2H), 4.24-4.16 (m, 6H), 4.00 (m, 2H), 3.86 (m, 2H), 3.72 (m, 2H), 3.01 (broad, s, 1H), 1.36 (m, 6H), 1.26 (m, 6H), 0.86 (m, 2H), 0.61 (m, 2H)이고, ³¹P NMR (CDCl₃) δ 20.63.

실시예 24

비스포스포노아미데이트 24: 포스폰산 6 (1.00 g, 3.05 mmol), L-알라닌 n-프로필 에스테르 하이드로클로라이드 (3.06 g, 18.30 mmol) 및 트리에틸아민 (5.10 mL, 36.50 mmol)의 혼합물의 피리딘 (5.0 mL) 용액을 5분 동안 60℃까지 가열하였다. 갓 제조한, 알드리티올 (4.70 g, 21.32 mmol)과 트리페닐포스핀 (5.59 g, 21.32 mmol)의 밝은 황색 피리딘 (5.0 mL) 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 밤새도록 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃ 사이에 분배시켰다. 유기상을 포화 소금물로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 실리카젤 상에서 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 (10% MeOH/CH₂Cl₂), 비스포스포노아미데이트 (1.13 g, 71%, 화합물 F)를 연한 황색 폼 상태로 얻었다: ¹H NMR (CDCl₃) δ 7.65 (s, 1H), 5.92 (broad, s, 1H), 5.03 (broad, s, 2H), 4.24 (m, 2H), 4.10-4.02 (m, 6H), 3.87 (m, 2H), 3.73 (m, 2H), 3.03 (broad, s, 1H), 1.65 (m, 4H), 1.37 (m, 6H), 0.93 (m, 6H), 0.88 (m, 2H), 0.63 (m, 2H)이고, ³¹P NMR (CDCl₃) δ 20.61.

실시예 25

비스포스포노아미데이트 25: 포스폰산 6 (0.60 g, 1.83 mmol), L-알라닌 이소프로필 에스테르 하이드로클로라이드 (1.84 g, 10.98 mmol) 및 트리에틸아민 (3.06 mL, 21.96 mmol)의 혼합물의 피리딘 (3.0 mL) 용액을 5분 동안 60℃까지 가열하였다. 갓 제조한, 알드리티올 (2.82 g, 12.80 mmol)과 트리페닐포스핀 (3.36 g, 12.80 mmol)의 밝은 황색 피리딘 (3.0 mL) 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 밤새도록 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃ 사이에 분배시켰다. 유기상을 포화 소금물로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 실리카젤 상에서 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 (10% MeOH/CH₂Cl₂), 비스포스포노아미데이트 (0.53 g, 52%, 화합물 B)를 연한 황색 폼 상태로 얻었다: ¹H NMR (CDCl₃) δ 7.65 (s, 1H), 5.00 (m, 2H), 4.24 (m, 2H), 3.97 (m, 2H), 3.87 (m, 2H), 3.71 (m, 2H), 3.01 (broad, s, 1H), 1.34 (m, 6H), 1.23 (m, 12H), 0.86 (m, 2H), 0.62 (m, 2H)이고, ³¹P NMR (CDCl₃) δ 20.59.

실시예 26

비스포스포노아미데이트 26: 포스폰산 6 (0.10 g, 0.30 mmol), L-알라닌 n-부틸 에스테르 하이드로클로라이드 (0.33 g, 1.82 mmol) 및 트리에틸아민 (0.51 mL, 3.60 mmol)의 혼합물을 피리딘 (1.0 mL) 용액을 5분 동안 60℃까지 가열하였 다. 갓 제조한, 알드리티올 (0.47 g, 2.10 mmol)과 트리페닐포스핀 (0.56 g, 2.10 mmol)의 밝은 황색 피리딘 (1.0 mL) 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 밤새도록 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃ 사이에 분배시켰다. 유기상을 포화 소금물로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 실리카젤 상에서 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 (10% MeOH/CH₂Cl₂), 비스포스포노아미데이트 (97 mg, 55%)를 연한 황색 폼 상태로 얻었다: ¹H NMR (CDCl₃) δ 7.63 (s, 1H), 4.24 (m, 2H), 4.09 (m, 4H), 4.01 (m, 2H), 3.86 (m, 2H), 3.72 (m, 2H), 3.01 (broad, s, 1H), 1.61 (m, 4H), 1.37 (m, 10H), 0.93 (m, 6H), 0.88 (m, 2H), 0.61 (m, 2H)이고, ³¹P NMR (CDCl₃) δ 20.59.

실시예 27

비스포스포노아미데이트 27: 포스폰산 6 (0.10 g, 0.30 mmol), L-알라닌 n-헥실 에스테르 하이드로클로라이드 (0.38 g, 1.80 mmol) 및 트리에틸아민 (0.51 mL, 3.60 mmol)의 혼합물을 피리딘 (1.0 mL) 용액을 5분 동안 60℃까지 가열하였다. 갓 제조한, 알드리티올 (0.47 g, 2.10 mmol)과 트리페닐포스핀 (0.56 g, 2.10 mmol)의 밝은 황색 피리딘 (1.0 mL) 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 밤새도록 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃ 사이에 분배시켰다. 유기상을 포화 소금물로 세정하고, Na₂SO₄ 로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 ISCO 상에서 크로마토그래피로 정제하여 (2-프로판올/CH₂Cl₂), 비스포스포노아미데이트 (0.13 g, 65%)를 연한 황색 폼 상태로 얻었다: ¹H NMR (CDCl₃) δ 7.62 (s, 1H), 4.23 (m, 2H), 4.09 (m, 4H), 4.01 (m, 2H), 3.86 (m, 2H), 3.72 (m, 2H), 2.99 (broad, s, 1H), 1.61 (m, 4H), 1.36-1.29 (m, 18H), 0.88 (m, 6H), 0.84 (m, 2H), 0.60 (m, 2H)이고, ³¹P NMR (CDCl₃) δ 20.61.

실시예 28

비스포스포노아미데이트 28: 포스폰산 6 (0.10 g, 0.30 mmol), L-알라닌 n-옥타닐 에스테르 하이드로클로라이드 (0.43 g, 1.80 mmol) 및 트리에틸아민 (0.51 mL, 3.60 mmol)의 혼합물을 피리딘 (1.0 mL) 용액을 5분 동안 60℃까지 가열하였다. 갓 제조한, 알드리티올 (0.47 g, 2.10 mmol)과 트리페닐포스핀 (0.56 g, 2.10 mmol)의 밝은 황색 피리딘 (1.0 mL) 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 밤새도록 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃ 사이에 분배시켰다. 유기상을 포화 소금물로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 ISCO 상에서 크로마토그래피로 정제하여 (2-프로판올/CH₂Cl₂), 비스포스포노아미데이트 (0.13 g, 61%)를 연한 황색 폼 상태로 얻었다: ¹H NMR (CDCl₃) δ 7.61 (s, 1H), 4.21 (m, 2H), 4.07-4.00 (m, 6H), 3.84-3.70 (m, 4H), 2.98 (broad, s, 1H), 1.60 (m, 4H), 1.34 (m, 6H), 1.27 (m, 20H), 0.87 (m, 6H), 0.83 (m, 2H), 0.58 (m, 2H)이고, ³¹P NMR (CDCl₃) δ 20.63.

실시예 29

비스포스포노아미데이트 29: 포스폰산 6 (0.70 g, 2.13 mmol), L-2-아미노부티르산 에틸 에스테르 하이드로클로라이드 (2.15 g, 12.80 mmol) 및 트리에틸아민 (3.57 mL, 25.56 mmol)의 혼합물의 피리딘 (3.0 mL) 용액을 5분 동안 60℃까지 가열하였다. 갓 제조한, 알드리티올 (3.29 g, 14.91 mmol)과 트리페닐포스핀 (3.92 g, 14.91 mmol)의 밝은 황색 피리딘 (3.0 mL) 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 밤새도록 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃ 사이에 분배시켰다. 유기상을 포화 소금물로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 실리카젤 상에서 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 (10% MeOH/CH₂Cl₂), 비스포스포노아미데이트 (0.71 g, 60%, 화합물 D)를 연한 황색 폼 상태로 얻었다: ¹H NMR (CDCl₃) δ 7.64 (s, 1H), 4.24 (m, 2H), 4.16 (m, 4H), 3.89-3.87 (m, 4H), 3.72 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 3.01 (broad, s, 1H), 1.78-1.64 (m, 4H), 1.26 (m, 6H), 0.91 (m, 6H), 0.87 (m, 2H), 0.61 (m, 2H)이고, ³¹P NMR (CDCl₃) δ 21.23.

실시예 30

비스포스포노아미데이트 30: 포스폰산 6 (0.70 g, 21.32 mmol), L-2-아미노부티르산 n-부틸 에스테르 하이드로클로라이드 (2.50 g, 12.80 mmol) 및 트리에틸아민 (3.57 mL, 25.56 mmol)의 혼합물을 피리딘 (3.0 mL) 용액을 5분 동안 60℃까지 가열하였다. 갓 제조한, 알드리티올 (3.29 g, 14.91 mmol)과 트리페닐포스핀 (3.92 g, 14.91 mmol)의 밝은 황색 피리딘 (3.0 mL) 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 밤새도록 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃ 사이에 분배시켰다. 유기상을 포화 소금물로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 실리카젤 상에서 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 (10% MeOH/CH₂Cl₂), 비스포스포노아미데이트 (0.40 g, 31%, 화합물 C)를 연한 황색 폼 상태로 얻었다: ¹H NMR (CDCl₃) δ 7.64 (s, 1H), 4.24 (m, 2H), 4.11 (m, 4H), 3.91 (m, 2H), 3.87 (m, 2H), 3.71 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 3.03 (broad, s, 1H), 1.79-1.64 (m, 4H), 1.60 (m, 4H), 1.37 (m, 4H), 0.94 (m, 6H), 0.90 (m, 6H), 0.86 (m, 2H), 0.62 (m, 2H)이고, ³¹P NMR (CDCl₃) δ 21.25.

실시예 31

비스포스포노아미데이트 31: 포스폰산 6 (0.10 g, 0.30 mmol), L-2-아미노부티르산 n-옥타닐 에스테르 하이드로클로라이드 (0.33 g, 1.82 mmol) 및 트리에틸아 민 (0.51 mL, 3.60 mmol)의 혼합물을 피리딘 (1.0 mL) 용액을 5분 동안 60℃까지 가열하였다. 갓 제조한, 알드리티올 (0.47 g, 2.10 mmol)과 트리페닐포스핀 (0.56 g, 2.10 mmol)의 밝은 황색 피리딘 (1.0 mL) 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 밤새도록 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃ 사이에 분배시켰다. 유기층을 포화 소금물로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 ISCO 상에서 크로마토그래피로 정제하여 (2-프로판올/CH₂Cl₂), 비스포스포노아미데이트 (0.12 g, 55%)를 연한 황색 폼 상태로 얻었다: ¹H NMR (CDCl₃) δ 7.64 (s, 1H), 4.24 (m, 2H), 4.13-4.05 (m, 4H), 3.91 (m, 2H), 3.87-3.72 (m, 4H), 3.01 (broad, s, 1H), 1.78-1.65 (m, 4H), 1.61-1.29 (m, 24H), 0.91 (m, 6H), 0.89 (m, 6H), 0.86 (m, 2H), 0.62 (m, 2H)이고, ³¹P NMR (CDCl₃) δ 21.20.

실시예 32

비스포스포노아미데이트 32: 포스폰산 6 (0.60 g, 1.82 mmol), L-페닐알라닌 에틸 에스테르 하이드로클로라이드 (2.51 g, 10.96 mmol) 및 트리에틸아민 (3.06 mL, 21.84 mmol)의 혼합물의 피리딘 (3.0 mL) 용액을 5분 동안 60℃까지 가열하였다. 갓 제조한, 알드리티올 (2.82 g, 12.74 mmol)과 트리페닐포스핀 (3.36 g, 12.74 mmol)의 밝은 황색 피리딘 (3.0 mL) 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 밤새도록 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성 물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃ 사이에 분배시켰다. 유기층을 포화 소금물로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 ISCO 상에서 크로마토그래피로 정제하여 (2-프로판올/CH₂Cl₂), 비스포스포노아미데이트 (0.53 g, 43%)를 연한 황색 폼 상태로 얻었다: ¹H NMR (CDCl₃) δ 7.48 (s, 1H), 7.22-7.06 (m, 10H), 4.20 (m, 1H), 4.12 (m, 4H), 4.09 (m, 2H), 4.04 (m, 1H), 3.63 (m, 2H), 3.33-3.21 (m, 2H), 3.04-2.78 (m, 5H), 1.20 (m, 6H), 0.83 (m, 2H), 0.58 (m, 2H)이고, ³¹P NMR (CDCl₃) δ 20.38.

실시예 33

비스포스포노아미데이트 33: 포스폰산 6 (70 mg, 0.21 mmol), L-페닐알라닌 n-부틸 에스테르 하이드로클로라이드 (0.33 g, 1.26 mmol) 및 트리에틸아민 (0.36 mL, 2.52 mmol)의 혼합물의 피리딘 (1.0 mL) 용액을 5분 동안 60℃까지 가열하였다. 갓 제조한, 알드리티올 (0.33 g, 1.47 mmol)과 트리페닐포스핀 (0.39 g, 1.47 mmol)의 밝은 황색 피리딘 (1.0 mL) 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 밤새도록 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃ 사이에 분배시켰다. 유기층을 포화 소금물로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 실리카젤 상에서 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 (10% MeOH/CH₂Cl₂), 비스포스포노아미데이트 (0.11 g, 70%)를 연한 황색 폼 상태로 얻었다: ¹H NMR (CDCl₃) δ 7.51 (s, 1H), 7.23-7.06 (m, 10H), 4.23 (m, 1H), 4.11-4.05 (m, 7H), 3.65 (m, 2H), 3.35-3.23 (m, 2H), 3.01 (m, 1H), 3.04-2.78 (m, 4H), 1.57 (m, 4H), 1.33 (m, 4H), 0.92 (m, 6H), 0.86 (m, 2H), 0.61 (m, 2H)이고, ³¹P NMR (CDCl₃) δ 20.35.

실시예 34

비스포스포노아미데이트 34: 포스폰산 6 (70 mg, 0.21 mmol), L-페닐알라닌 iso부틸 에스테르 하이드로클로라이드 (0.33 g, 1.26 mmol) 및 트리에틸아민 (0.36 mL, 2.52 mmol)의 혼합물의 피리딘 (1.0 mL) 용액을 5분 동안 60℃까지 가열하였다. 갓 제조한, 알드리티올 (0.33 g, 1.47 mmol)과 트리페닐포스핀 (0.39 g, 1.47 mmol)의 밝은 황색 피리딘 (1.0 mL) 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 밤새도록 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃ 사이에 분배시켰다. 유기층을 포화 소금물로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 실리카젤 상에서 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 (10% MeOH/CH₂Cl₂), 비스포스포노아미데이트 (78 mg, 50%)를 연한 황색 폼 상태로 얻었다: ¹H NMR (CDCl₃) δ 7.52 (s, 1H), 7.24-7.07 (m, 10H), 4.26 (m, 1H), 4.11 (m, 2H), 4.01 (m, 1H), 3.85 (m, 4H), 3.66 (m, 2H), 3.35-3.25 (m, 2H), 3.07-2.85 (m, 3H), 2.97-2.79 (m, 2H), 1.89 (m, 2H), 0.90 (m, 12H), 0.89 (m, 2H), 0.62 (m, 2H)이고, ³¹P NMR (CDCl₃) δ 20.31.

실시예 35

cPrPMEDAP의 비스POC 35: 포스폰산 6 (0.20 g, 0.61 mmol) 및 트리에틸아민 (0.42 mL, 3.01 mmol)의 혼합물의 1-메틸-2-피롤리딘온 (2.0 mL) 용액을 30분 동안 60℃까지 가열하였다. POCCl (0.45 g, 2.92 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 교반하였다 60℃에서 3시간 동안, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃ 사이에 분배시켰다. 유기층을 포화 소금물로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 ISCO 상에서 크로마토그래피로 정제하여 (2-프로판올/CH₂Cl₂), cPrPMEDAP의 비스POC (0.13 g, 39%)를 고체 상태로 얻었다: ¹H NMR (CDCl₃) δ 7.58 (s, 1H), 5.66 (m, 4H), 4.92 (m, 2H), 4.22 (m, 2H), 3.90-3.88 (m, 4H), 3.01 (broad, s, 1H), 1.81 (m, 12H), 0.86 (m, 2H), 0.62 (m, 2H)이고, ³¹P NMR (CDCl₃) δ 20.93.

실시예 36 내지 38은 반응식 10을 참조한다.

실시예 36

비스포스포노아미데이트 37: 포스폰산 36 (0.32 g, 1.00 mmol), L-알라닌 부틸 에스테르 하이드로클로라이드 (0.47 g, 2.60 mmol) 및 트리에틸아민 (0.27 g, 2.60 mmol)의 혼합물의 피리딘 (5.0 mL) 용액을 5분 동안 60℃까지 가열하였다. 갓 제조한, 알드리티올 (0.77 g, 3.50 mmol)과 트리페닐포스핀 (0.92 g, 3.50 mmol)의 밝은 황색 피리딘 (2.0 mL) 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 밤새도록 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃사이에 분배시켰다. 유기층을 포화 소금물로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 실리카젤 상에서 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 (10% MeOH/CH₂Cl₂), 비스포스포노아미데이트 (0.43 g, 75%)를 연한 황색 폼 상태로 얻었다.

실시예 37

모노포스폰산 38: 이산(diacid) 36 (1.30 g, 4.10 mmol)과 DMF (0.1 mL)의 혼합물의 설폴란 (35 mL) 용액을 70℃까지 가열하였다. 티오닐클로라이드 (0.54 mL, 7.38 mmol)를 1시간 동안에 걸쳐 적가하였다. 온도를 90℃까지 상승시키고, TMSOPh (0.75 g, 4.51 mmol)를 가한 다음, 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 밤새도록 실온까지 냉각시켰다. 반응 혼합물을 잘 교반된 얼음 냉각 아세톤 (100 mL)에 적가하였다. 생성물이 침전되었다. 고체를 여과하고, MeOH (40 mL)에 용해시킨 다음, 45% KOH로 pH를 3까지 조절하였다. 여과하여 고체를 수집하였다. 생성물을 MeOH에 용해시켜 추가 정제하고, 45% KOH로 pH를 6까지 조정한 다음, 얼음 냉각 아세톤으로부터 결정화하여, 모노포스폰산 (0.20 g, 12%)을 회백색 고체 상태로 얻었다.

실시예 38

모노포스포노아미데이트 39: 모노포스폰산 38 (0.20 g, 0.50 mmol), L-알라닌 이소프로필 에스테르 하이드로클로라이드 (0.17 g, 1.00 mmol) 및 트리에틸아민 (0.10 g, 1.00 mmol)의 혼합물의 피리딘 (2.0 mL) 용액을 5분 동안 60℃까지 가열하였다. 갓 제조한, 알드리티올 (0.39 g, 1.75 mmol)과 트리페닐포스핀 (0.46 g, 1.75 mmol)의 밝은 황색 피리딘 (2.0 mL) 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 밤새도록 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃ 사이에 분배시켰다. 유기층을 포화 소금물로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 실리카젤 상에서 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 (7% MeOH/CH₂Cl₂), 모노포스포노아미데이트 (0.14 g, 54%, 1:1 부분 입체 이성질체 혼합물)를 연한 황색 폼 상태로 얻었다.

실시예 39는 반응식 11을 참조한다.

실시예 39

비스포스포노아미데이트 41: 포스폰산 40 (0.36 g, 1.00 mmol), L-알라닌 n-부틸 에스테르 하이드로클로라이드 (0.47 g, 2.60 mmol) 및 트리에틸아민 (0.27 g, 2.60 mmol)의 혼합물의 피리딘 (5.0 mL) 용액을 5분 동안 60℃까지 가열하였다. 갓 제조한, 알드리티올 (0.77 g, 3.50 mmol)과 트리페닐포스핀 (0.92 g, 3.50 mmol)의 밝은 황색 피리딘 (2.0 mL) 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 60℃ 에서 밤새도록 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃ 사이에 분배시켰다. 유기층을 포화 소금물로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 실리카젤 상에서 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 (10% MeOH/CH₂Cl₂), 비스포스포노아미데이트 (0.32 g, 35%)를 연한 황색 폼 상태로 얻었다.

실시예 40 내지 56은 반응식 12 내지 16을 참조한다.

실시예 40

비스포스포노아미데이트 43: 포스폰산 42 (0.37 g, 1.00 mmol), L-알라닌 n-부틸 에스테르 하이드로클로라이드 (0.47 g, 2.60 mmol) 및 트리에틸아민 (0.27 g, 2.60 mmol)의 혼합물의 피리딘 (5.0 mL) 용액을 5분 동안 60℃까지 가열하였다. 갓 제조한, 알드리티올 (0.77 g, 3.50 mmol)과 트리페닐포스핀 (0.92 g, 3.50 mmol)의 밝은 황색 피리딘 (2.0 mL) 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 밤새도록 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃ 사이에 분배시켰다. 유기층을 포화 소금물로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 실리카젤 상에서 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 (10% MeOH/CH₂Cl₂), 비스포스포노아미데이트 (0.53 g, 85%)를 연한 황색 폼 상태로 얻었다.

실시예 41

비스포스포노아미데이트 45: 포스폰산 44 (0.55 g, 2.00 mmol), L-알라닌 부 틸 에스테르 하이드로클로라이드 (0.94 g, 5.20 mmol) 및 트리에틸아민 (0.54 g, 5.20 mmol)의 혼합물의 피리딘 (5.0 mL) 용액을 5분 동안 60℃까지 가열하였다. 갓 제조한, 알드리티올 (1.54 g, 7.00 mmol)과 트리페닐포스핀 (1.84 g, 7.00 mmol)의 밝은 황색 피리딘 (5.0 mL) 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 밤새도록 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃ 사이에 분배시켰다. 유기층을 포화 소금물로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 실리카젤 상에서 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 (10% MeOH/CH₂Cl₂), 비스포스포노아미데이트 (0.48 g, 45%)를 연한 황색 폼 상태로 얻었다.

실시예 42

모노포스폰산 46: 이산 44 (10.00 g, 36.30 mmol)과 DMF (0.2 mL)의 혼합물의 설폴란 (50 mL) 용액을 70℃까지 가열하였다. 티오닐클로라이드 (4.72 mL, 64.70 mmol)를 1시간 동안에 걸쳐 적가하였다. 온도를 90℃까지 상승시키고, TMSOPh (6.65 g, 40.00 mmol)를 가한 다음, 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 밤새도록 실온까지 냉각시켰다. 반응 혼합물을 잘 교반된 얼음 냉각 아세톤 (100 mL)에 적가하였다. 생성물이 침전되었다. 고체를 여과하고, MeOH (40 mL)에 용해시킨 다음, 45% KOH로 pH를 3까지 조절하였다. 여과하여 고체를 수집하고, 진공 건조시켜 모노포스폰산 (12.40 g, 97%)을 고체 상태로 얻었다.

실시예 43

모노포스포노아미데이트 47: 모노포스폰산 46 (1.00 g, 2.86 mmol), L-알라닌 메틸 에스테르 하이드로클로라이드 (0.80 g, 5.73 mmol) 및 트리에틸아민 (0.58 g, 5.73 mmol)의 혼합물의 피리딘 (5.0 mL) 용액을 5분 동안 60℃까지 가열하였다. 갓 제조한, 알드리티올 (2.21 g, 10.00 mmol)과 트리페닐포스핀 (2.63 g, 10.00 mmol)의 밝은 황색 피리딘 (5.0 mL) 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 밤새도록 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃ 사이에 분배시켰다. 유기층을 포화 소금물로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 실리카젤 상에서 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 (7% MeOH/CH₂Cl₂), 모노포스포노아미데이트 (0.80 g, 64%, 1:1 부분 입체 이성질체 혼합물)를 연한 황색 오일 상태로 얻었다.

실시예 44

모노포스포노아미데이트 48: 모노포스폰산 46 (0.35 g, 1.00 mmol), L-알라닌 이소프로필 에스테르 하이드로클로라이드 (0.34 g, 2.00 mmol) 및 트리에틸아민 (0.20 g, 2.00 mmol)의 혼합물의 피리딘 (2.0 mL) 용액을 5분 동안 60℃까지 가열하였다. 갓 제조한, 알드리티올 (0.77 g, 3.50 mmol)과 트리페닐포스핀 (0.92 g, 3.50 mmol)의 밝은 황색 피리딘 (2.0 mL) 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 밤새도록 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃ 사이에 분배시켰다. 유기층을 포화 소금물로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 실리카 젤 상에서 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 (7% MeOH/CH₂Cl₂), 약간의 불순물을 함유하는 모노포스포노아미데이트를. 얻어진 화합물을 뜨거운 CH₃CN (10 mL) 내에서 푸마르산 산 (77 mg)으로 처리하고, 실온까지 냉각시켰다. 생성물을 침전시켜 회수하고, 진공 건조시켜 모노포스포노아미데이트의 푸마르산염(0.13 g, 22%, 1:1 부분 입체 이성질체 혼합물)을 고체 상태로 얻었다.

실시예 45

PMEG의 벤질 에테르 50: 이산 49 (0.62 g, 2.00 mmol)와 벤질 알코올 (10 mL) 의 혼합물을 교반하면서 0℃까지 냉각시켰다. 나트륨 수소화물 (0.24 g, 10.00 mmol)을 조금씩 나누어 첨가하고, 반응 혼합물을 1시간 동안 100℃로 가열하였다. 추가의 벤질 알코올 (20 mL)과 나트륨 수소화물 (0.12 g, 5.00 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 140℃에서 1시간 동안 교반하고, 실온까지 냉각시켰다. 휘발 성분을 감압하에서 증발시키고, 물 (50 mL)를 가한 다음, NaOH로 pH를 11까지 조절하였다. 생성물을 톨루엔 (3 x)과 H₂O 사이에 분배시켰다. 수층을 HCl로 pH = 3까지 산성화하고, 0℃에서 밤새도록 유지하였다. 생성물을 수집하고, 진공 건조시켜 벤질 에테르 (0.18 g, 22%)를 황갈색 고체 상태로 얻었다.

실시예 46

모노포스포노아미데이트 51: 포스폰산 50 (0.13 g , 0.34 mmol), L-알라닌 이소프로필 에스테르 하이드로클로라이드 (0.11 g, 0.68 mmol), 페놀 (0.16 g, 1.69 mmol) 및 트리에틸아민 (0.28 mL, 2.03 mmol)의 혼합물의 피리딘 (2.0 mL) 용 액을 5분 동안 60℃까지 가열하였다. 갓 제조한, 알드리티올 (0.52 g, 2.37 mmol)과 트리페닐포스핀 (0.62 g, 2.37 mmol)의 밝은 황색 피리딘 (2.0 mL) 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 밤새도록 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃ 사이에 분배시켰다. 유기층을 포화 소금물로 세정하고, 로 건조시키고Na₂SO₄, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 실리카젤 상에서 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 (5% MeOH/CH₂Cl₂), 모노포스포노아미데이트 (50 mg, 26%, 1:1 부분 입체 이성질체 혼합물)를 걸죽한 오일 상태로 얻었다.

실시예 47

모노포스포노아미데이트 52: 모노포스포노아미데이트 51 (50 mg, 0.09 mmol)과 Pd(OH)₂/C (50 mg)의 혼합물의 iPrOH (3 mL) 용액을 H₂ (풍선) 1기압 하에서 실온에서 밤새도록 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 충전물(plug)을 통과시켜 여과하고, 용매를 감압하에서 회전 증발기로 제거하였다. 조질 생성물을 실리카젤 상에서 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 (5-15% MeOH/CHCl₃), 모노포스포노아미데이트 (40 mg, 95%, 1:1 부분 입체 이성질체 혼합물)를 회백색 폼 상태로 얻었다.

실시예 48

비스포스포노아미데이트 54: 포스폰산 53 (0.10 g, 0.35 mmol), L-알라닌 부틸 에스테르 하이드로클로라이드 (0.38 g, 2.10 mmol) 및 트리에틸아민 (0.58 mL, 4.20 mmol)의 혼합물의 피리딘 (1.0 mL) 용액을 5분 동안 60℃까지 가열하였다. 갓 제조한, 알드리티올 (0.53 g, 2.45 mmol)과 트리페닐포스핀 (0.64 g, 2.45 mmol)의 밝은 황색 피리딘 (1.0 mL) 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 밤새도록 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃ 사이에 분배시켰다. 유기층을 포화 소금물로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 실리카젤 상에서 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 (15% MeOH/CH₂Cl₂), 비스포스포노아미데이트 (25 mg, 13%)를 연한 황색 폼 상태로 얻었다: ¹H NMR (CD₃OD) δ 7.82 (s, 1H), 4.26 (m, 2H), 4.11 (m, 4H), 3.94 (m, 2H), 3.88 (m, 2H), 3.78 (m, 2H), 1.61 (m, 4H), 1.39 (m, 4H), 1.34 (m, 6H), 0.95 (m, 6H)이고, ³¹P NMR (CDCl₃) δ 23.39.

실시예 49

디이소프로필 포스포네이트 55: 4 (3.00 g, 7.66 mmol)와 10% Pd/C (0.60 g)의 혼합물의 MeOH (30 mL) 용액을 H₂ (풍선) 1기압 하에서 실온에서 밤새도록 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 충전물을 통과시켜 여과하고, 회전 증발기로 용매를 제거하였다. 조질 생성물을 실리카젤 상에서 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 (5% MeOH/CHCl₃), 디이소프로필 포스포네이트 (2.08 g, 76%)를 걸죽한 오일 상태로 얻고, 이를 방치하여 고체화하였다: ¹H NMR (CDCl₃) δ 8.72 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 4.73 (m, 2H), 4.33 (m, 2H), 3.97 (m, 2H), 3.73 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 1.31 (m, 12H)이고, ³¹P NMR (CDCl₃) δ 18.47.

실시예 50

포스폰산 56: 디이소프로필 포스포네이트 55 (0.10 g, 0.28 mmol)를 CH₃CN (1.5 mL)에 용해시키고, 0℃까지 냉각시켰다. 브로모트리메틸실란 (0.18 mL, 1.40 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반하고, 밤새도록 실온까지 데워지게 하였다. DMF (0.5 mL)를 가하여 용액을 생성시키고, 2시간 동안 교반하였다. MeOH를 가한 다음, 2시간 동안 교반하였다. 휘발 성분을 감압하에서 증발시켰다. 잔류 DMF 용액을 얼음 냉각 CH₃CN에 천천히 가하고, 생성물을 침전시켰다. 고체를 수집하고, 진공 건조시켜 포스폰산 (74 mg, 95%)을 백색 고체 상태로 얻었다.

실시예 51

비스포스포노아미데이트 57: 포스폰산 56 (23 mg, 0.08 mmol), L-알라닌 n-부틸 에스테르 하이드로클로라이드 (91 mg, 0.50 mmol) 및 트리에틸아민 (0.14 mL, 0.96 mmol)의 혼합물의 피리딘 (0.5 mL) 용액을 5분 동안 60℃까지 가열하였다. 갓 제조한, 알드리티올 (0.11 g, 0.56 mmol)과 트리페닐포스핀 (0.12 g, 0.56 mmol)의 밝은 황색 피리딘 (0.5 mL) 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 밤새도록 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃ 사이에 분배시켰다. 유기층을 포화 소금물로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 ISCO 상에서 크로마토그래피로 정제하여 (2-프로판올/CH₂Cl₂), 비스포스포노아미데이트 (17 mg, 38%)를 연한 황색 폼 상태로 얻었다: ¹H NMR (CDCl₃) δ 8.65 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 5.20 (s, broad, 2H), 4.35 (m, 2H), 4.20-3.92 (m, 6H), 3.89 (m, 2H), 3.72 (m, 2H), 3.42-3.19 (m, 2H), 1.61 (m, 4H), 1.32 (m, 8H), 0.96 (m, 6H)이고, ³¹P NMR (CDCl₃) δ 20.70.

실시예 52

모노포스포노아미데이트 58: 포스폰산 56 (20 mg, 0.07 mmol), L-페닐알라닌 에틸 에스테르 하이드로클로라이드 (33 mg, 0.14 mmol), 페놀 (33 mg, 0.35 mmol) 및 트리에틸아민 (0.12 mL, 0.84 mmol)의 혼합물의 피리딘 (0.5 mL) 용액을 5분 동안 60℃까지 가열하였다. 갓 제조한, 알드리티올 (0.11 g, 0.56 mmol)과 트리페닐포스핀 (0.12 g, 0.56 mmol)의 밝은 황색 피리딘 (0.5 mL) 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 밤새도록 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃ 사이에 분배시켰다. 유기층을 포화 소금물로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 ISCO 상에서 크로마토그래피로 정제하여 (2-프로판올/CH₂Cl₂), 모노포스포 노아미데이트 (13 mg, 34%, 1:1 부분 입체 이성질체 혼합물)를 회백색 폼 상태로 얻었다: ¹H NMR (CDCl₃) δ 8.69 (d, J = 15.0 Hz, 1H), 7.84 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 7.25-6.97 (m, 10H), 4.35 (m, 1H), 4.23 (m, 2H), 4.08 (m, 2H), 3.85 (m, 1H), 3.72 (m, 1H), 3.73-3.62 (m, 1H), 3.38 (m, 1H), 2.95-2.86 (m, 2H), 1.17 (m, 3H)이고, ³¹P NMR (CDCl₃) δ 21.67, 20.84.

실시예 53

디이소프로필 포스포네이트 59: 화합물 4 (1.00 g, 2.56 mmol) and 알릴아민 (3 mL)의 혼합물의 CH₃CN (3.0 mL) 용액을 섬광(scintillation) 약병에 넣고, 65℃까지 5시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 감압하에서 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 소금물 사이에 분배시키고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과하여 농축시켰다. 생성물을 최소량의 CH₃CN에 용해시키고, H₂O를 가한 다음, 동결 건조시켜 디이소프로필 포스포네이트 (1.00 g, 95%)를.

실시예 54

포스폰산 60: 디이소프로필 포스포네이트 59 (1.00 g, 2.43 mmol)를 CH₃CN (1.5 mL)에 용해시키고, 0℃까지 냉각시켰다. 브로모트리메틸실란 (0.31 mL, 12.15 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반하고, 밤새도록 실온까지 데워지게 하였다. DMF (0.5 mL)를 가하여 용액을 생성시키고, 2시간 동안 교 반하였다. MeOH를 가한 다음, 2시간 동안 교반하였다. 휘발 성분을 감압하에서 증발시켰다. 잔류 DMF 용액을 얼음 냉각 CH₃CN에 천천히 가하고, 생성물을 침전시켰다. 고체를 수집하고, 진공 건조시켜 포스폰산 (0.48 g, 60%)을 백색 고체 상태로 얻었다.

실시예 55

모노포스포노아미데이트 61 및 비스포스포노아미데이트 62: 이산 60 (0.40 g, 1.20 mmol), L-알라닌 이소프로필 에스테르 하이드로클로라이드 (0.49 g, 2.40 mmol), 페놀 (0.68 g, 7.20 mmol) 및 트리에틸아민 (1.0 mL, 7.20 mmol)의 혼합물의 피리딘 (3.0 mL) 용액을 5분 동안 60℃까지 가열하였다. 갓 제조한, 알드리티올 (1.84 g, 8.40 mmol)과 트리페닐포스핀 (2.20 g, 8.40 mmol)의 밝은 황색 피리딘 (3.0 mL) 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 밤새도록 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃ 사이에 분배시켰다. 유기층을 포화 소금물로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 실리카젤 상에서 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 (5-10% MeOH/CH₂Cl₂), 모노포스포노아미데이트 61 (0.52 g, 37%, 1:1 부분 입체 이성질체 혼합물) and 비스포스포노아미데이트 62 (0.13 g, 20%)를.

실시예 56

비스포스포노아미데이트 63: 포스폰산 60 (0.33 g, 1.00 mmol), L-알라닌 부틸 에스테르 하이드로클로라이드 (0.47 g, 2.60 mmol) 및 트리에틸아민 (0.27 g, 2.60 mmol)의 혼합물의 피리딘 (5.0 mL) 용액을 5분 동안 60℃까지 가열하였다. 갓 제조한, 알드리티올 (0.77 g, 3.50 mmol)과 트리페닐포스핀 (0.92 g, 3.50 mmol)의 밝은 황색 피리딘 (2.0 mL) 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 밤새도록 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃사이에 분배시켰다. 유기층을 포화 소금물로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 실리카젤 상에서 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 (10% MeOH/CH₂Cl₂), 비스포스포노아미데이트를 연한 황색 폼 상태로 얻었다.

실시예 57은 반응식 17과 관련된 것이다.

실시예 57

6-알릴PMEDAP의 비스POC 64: 포스폰산 60 (0.20 g, 0.61 mmol) 및 트리에틸아민 (0.42 mL, 3.01 mmol)의 혼합물의 1-메틸-2-피롤리딘온 (2.0 mL) 용액을 30분 동안 60^℃까지 가열하였다. POCCl (0.45 g, 2.92 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 60^℃에서 3시간 동안 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃ 사이에 분배시켰다. 유기층을 포화 소금물로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 ISCO 상에서 크로마토그래피로 정제하여 (2-프로판올/CH₂Cl₂), 6-알릴PMEDAP의 비스POC 64 (0.11 g, 32%, GS 192727)를고체 상태로 얻었다: ¹H NMR (CDCl₃) δ 7.60 (s, 1H), 6.00 (m, 1H), 5.66 (m, 4H), 5.30 (dd, 1H), 5.17 (dd, 1H), 4.92 (m, 2H), 4.80 (s, 2H), 4.22 (m, 4H), 3.95 (m, 4H), 1.35 (m, 12H)이고, ³¹P NMR (CDCl₃) δ 20.94.

실시예 58 내지 61은 반응식 18에 관한 것이다.

실시예 58

비스포스포아미데이트 65: 포스폰산 60 (35 mg, 0.11 mmol), L-알라닌 에틸 에스테르 하이드로클로라이드 (0.1 g, 0.65 mmol) 및 트리에틸아민 (0.2 mL, 1.43 mmol)의 혼합물의 피리딘 (0.5 mL) 용액을 5분 동안 60^℃까지 가열하였다. 갓 제조한, 알드리티올 (0.16 g, 0.74 mmol)과 트리페닐포스핀 (0.20 g, 0.75 mmol)의 밝은 황색 피리딘 (0.5 mL) 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 60^℃에서 밤새도록 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃ 사이에 분배시켰다. 유기층을 포화 소금물로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 ISCO 상에서 크로마토그래피로 정제하여 (2-프로판올/CH₂Cl₂), 비스포스포아미데이트 (23 mg, 41%)를 연한 황색 폼 상태로 얻었다: ¹H NMR (CDCl₃) δ 7.70 (s, 1H), 6.00 (m, 1H), 5.30 (dd, 1H), 5.17 (dd, 1H), 4.30 (m, 4H), 4.20-4.00 (m, 6H), 3.89 (m, 2H), 3.72 (m, 2H), 3.42 (m, 1H), 3.22 (m, 1H), 1.45-1.25 (m, 12H)이고, ³¹P NMR (CDCl₃) δ 20.77.

실시예 59

비스포스포아미데이트 66: 포스폰산 60 (0.10 g, 0.30 mmol), L-알라닌 사이클로부틸 에스테르 하이드로클로라이드 (0.33 g, 0.91 mmol) 및 트리에틸아민 (0.50 mL, 3.59 mmol)의 혼합물의 피리딘 (2.0 mL) 용액을 5분 동안 60℃까지 가열하였다. 갓 제조한, 알드리티올 (0.47 g, 2.12 mmol)과 트리페닐포스핀 (0.56 g, 2.14 mmol)의 밝은 황색 피리딘 (1.0 mL) 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 밤새도록 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃ 사이에 분배시켰다. 유기층을 포화 소금물로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 ISCO 상에서 크로마토그래피로 정제하여 (2-프로판올/CH₂Cl₂), 비스포스포아미데이트 (45 mg, 26%)를 연한 황색 폼 상태로 얻었다: ¹H NMR (CDCl₃) δ 7.60 (s, 1H), 6.00 (m, 1H), 5.30 (dd, 1H), 5.18 (dd, 1H), 5.00 (m, 2H), 4.78 (s, 2H), 4.30 (m, 4H), 4.00 (m, 2H), 3.89 (m, 2H), 3.72 (m, 2H), 3.38 (m, 1H), 3.19 (m, 1H), 2.38 (m, 4H), 2.10 (m, 4H), 1.85-1.60 (m, 4H), 1.45 (m, 6H)이고, ³¹P NMR (CDCl₃) δ 20.61.

실시예 60

비스포스포아미데이트 67: 포스폰산 60 (0.10 g, 0.30 mmol), L-알라닌 n-헥실 에스테르 하이드로클로라이드 (0.25 g, 1.21 mmol) 및 트리에틸아민 (0.7 mL, 5.02 mmol)의 혼합물의 피리딘 (2.0 mL) 용액을 5분 동안 60℃까지 가열하였다. 갓 제조한, 알드리티올 (0.47 g, 2.12 mmol)과 트리페닐포스핀 (0.56 g, 2.14 mmol)의 밝은 황색 피리딘 (1.0 mL) 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 밤새도록 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃ 사이에 분배시켰다. 유기층을 포화 소금물로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 ISCO 상에서 크로마토그래피로 정제하여 (2-프로판올/CH₂Cl₂), 비스포스포아미데이트 (80 mg, 41%)를 연한 황색 폼 상태로 얻었다: ¹H NMR (CDCl₃) δ 7.65 (s, 1H), 6.00 (m, 1H), 5.30 (dd, 1H), 5.17 (dd, 1H), 4.80 (s, 2H), 4.25 (m, 4H), 4.20-4.00 (m, 6H), 3.85 (m, 2H), 3.72 (m, 2H), 3.42 (m, 1H), 3.20 (m, 1H), 1.70 (m, 4H), 1.32 (m, 18H), 0.96 (m, 6H)이고, ³¹P NMR (CDCl₃) δ 20.61.

실시예 61

비스포스포아미데이트 68: 포스폰산 60 (35 mg, 0.11 mmol), L-2-아미노부티르산 n-부틸 에스테르 하이드로클로라이드 (0.13 g, 0.64 mmol) 및 트리에틸아민 (0.2 mL, 1.43 mmol)의 혼합물의 피리딘 (0.5 mL) 용액을 5분 동안 60℃까지 가열 하였다. 갓 제조한, 알드리티올 (0.16 g, 0.74 mmol)과 트리페닐포스핀 (0.20 g, 0.75 mmol)의 밝은 황색 피리딘 (0.5 mL) 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 밤새도록 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃ 사이에 분배시켰다. 유기층을 포화 소금물로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 ISCO 상에서 크로마토그래피로 정제하여 (2-프로판올/CH₂Cl₂), 비스포스포아미데이트 (32 mg, 49%)를 연한 황색 폼 상태로 얻었다: ¹H NMR (CDCl₃) δ 7.68 (s, 1H), 6.00 (m, 1H), 5.70 (s, broad, 1H), 5.30 (dd, 1H), 5.18 (dd, 1H), 4.80 (s, 2H), 4.25 (m, 4H), 4.20-4.05 (m, 6H), 3.89 (m, 2H), 3.72 (m, 2H), 3.35 (m, 1H), 3.15 (m, 1H), 1.86-1.60 (m, 8H), 1.40 (m, 4H), 0.96 (m, 12H)이고, ³¹P NMR (CDCl₃) δ 21.25.

실시예 62 내지 71는 반응식 19에 관한 것이다.

실시예 62

비스포스포아미데이트 69: 포스폰산 60 (35 mg, 0.11 mmol), L-페닐알라닌 에틸 에스테르 하이드로클로라이드 (0.15 g, 0.65 mmol) 및 트리에틸아민 (0.2 mL, 1.43 mmol)의 혼합물의 피리딘 (0.5 mL) 용액을 5분 동안 60℃까지 가열하였다. 갓 제조한, 알드리티올 (0.16 g, 0.74 mmol)과 트리페닐포스핀 (0.20 g, 0.75 mmol)의 밝은 황색 피리딘 (0.5 mL) 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 60 ℃에서 밤새도록 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃ 사이에 분배시켰다. 유기층을 포화 소금물로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 ISCO 상에서 크로마토그래피로 정제하여 (2-프로판올/CH₂Cl₂), 비스포스포아미데이트 (28 mg, 39%)를 연한 황색 폼 상태로 얻었다: ¹H NMR (CDCl₃) δ 7.58 (s, 1H), 7.28-7.03 (m, 10H), 6.00 (m, 1H), 5.30 (dd, 1H), 5.17 (dd, 1H), 4.25-4.00 (m, 8H), 3.65 (m, 2H), 3.42-3.19 (m, 2H), 3.15-2.77 (m, 6H), 1.23 (m, 6H)이고, ³¹P NMR (CDCl₃) δ 20.34.

실시예 63

비스포스포아미데이트 70: 포스폰산 60 (35 mg, 0.11 mmol), L-페닐알라닌 n-부틸 에스테르 하이드로클로라이드 (0.15 g, 0.58 mmol) 및 트리에틸아민 (0.2 mL, 1.43 mmol)의 혼합물의 피리딘 (0.5 mL) 용액을 5분 동안 60℃까지 가열하였다. 갓 제조한, 알드리티올 (0.16 g, 0.74 mmol)과 트리페닐포스핀 (0.20 g, 0.75 mmol)의 밝은 황색 피리딘 (0.5 mL) 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 밤새도록 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃ 사이에 분배시켰다. 유기층을 포화 소금물로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 ISCO 상에서 크로마토그래피로 정제하여 (2-프로판올/CH₂Cl₂), 비스포스포아미데이트 (49 mg, 63%)를 연한 황색 폼 상태로 얻었다: ¹H NMR (CDCl₃) δ 7.58 (s, 1H), 7.28-7.03 (m, 10H), 6.00 (m, 1H), 5.70 (s, broad, 1H), 5.30 (dd, 1H), 5.17 (dd, 1H), 4.78 (s, 2H), 4.25-4.03 (m, 8H), 3.65 (m, 2H), 3.42-3.19 (m, 2H), 3.17-2.78 (m, 6H), 1.61 (m, 4H), 1.32 (m, 4H), 0.96 (m, 6H)이고, ³¹P NMR (CDCl₃) δ 20.35.

실시예 64

비스포스포아미데이트 71: 포스폰산 60 (0.10 g, 0.30 mmol), L-페닐알라닌 iso부틸 에스테르 하이드로클로라이드 (0.31 g, 1.20 mmol) 및 트리에틸아민 (0.7 mL, 5.02 mmol)의 혼합물의 피리딘 (2.0 mL) 용액을 5분 동안 60℃까지 가열하였다. 갓 제조한, 알드리티올 (0.44 g, 2.00 mmol)과 트리페닐포스핀 (0.53 g, 2.00 mmol)의 밝은 황색 피리딘 (1.0 mL) 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 밤새도록 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃ 사이에 분배시켰다. 유기층을 포화 소금물로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 ISCO 상에서 크로마토그래피로 정제하여 (2-프로판올/CH₂Cl₂), 비스포스포아미데이트 (94 mg, 42%)를 연한 황색 폼 상태로 얻었다: ¹H NMR (CDCl₃) δ 7.55 (s, 1H), 7.27-7.03 (m, 10H), 6.00 (m, 1H), 5.70 (s, broad, 1H), 5.25 (dd, 1H), 5.17 (dd, 1H), 4.78 (s, 2H), 4.25-4.08 (m, 4H), 3.87 (m, 4H), 3.65 (m, 2H), 3.42-3.19 (m, 2H), 3.17-2.78 (m, 6H), 1.97 (m, 2H), 0.96 (m, 12H)이고, ³¹P NMR (CDCl₃) δ 20.31.

실시예 65

모노포스포아미데이트 72: 포스폰산 60 (35 mg, 0.11 mmol), L-알라닌 에틸 에스테르 하이드로클로라이드 (32 mg, 0.20 mmol), 페놀 (50 mg, 0.53 mmol) 및 트리에틸아민 (0.2 mL, 1.43 mmol)의 혼합물의 피리딘 (0.5 mL) 용액을 5분 동안 60℃까지 가열하였다. 갓 제조한, 알드리티올 (0.16 g, 0.74 mmol)과 트리페닐포스핀 (0.20 g, 0.75 mmol)의 밝은 황색 피리딘 (0.5 mL) 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 밤새도록 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃ 사이에 분배시켰다. 유기층을 포화 소금물로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 ISCO 상에서 크로마토그래피로 정제하여 (2-프로판올/CH₂Cl₂), 모노포스포아미데이트 (12 mg, 22%, 1:1 부분 입체 이성질체 혼합물)를 회백색 폼 상태로 얻었다: ¹H NMR (CDCl₃) δ 7.62 (d, 1H), 7.30-7.04 (m, 5H), 6.00 (m, 1H), 5.30 (dd, 1H), 5.18 (dd, 1H), 4.30-4.05 (m, 7H), 3.90-3.80 (m, 4H), 1.23 (m, 6H)이고, ³¹P NMR (CDCl₃) δ 21.89, 20.65.

실시예 66

모노포스포아미데이트 73: 포스폰산 60 (35 mg, 0.11 mmol), L-알라닌 n-부틸 에스테르 하이드로클로라이드 (39 mg, 0.21 mmol), 페놀 (50 mg, 0.53 mmol) 및 트리에틸아민 (0.2 mL, 1.43 mmol)의 혼합물의 피리딘 (0.5 mL) 용액을 5분 동안 60℃까지 가열하였다. 갓 제조한, 알드리티올 (0.16 g, 0.74 mmol)과 트리페닐포스핀 (0.20 g, 0.75 mmol)의 밝은 황색 피리딘 (0.5 mL) 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 밤새도록 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃ 사이에 분배시켰다. 유기층을 포화 소금물로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 ISCO 상에서 크로마토그래피로 정제하여 (2-프로판올/CH₂Cl₂), 모노포스포아미데이트 (16 mg, 28%, 1:1 부분 입체 이성질체 혼합물)를 회백색 폼 상태로 얻었다: ¹H NMR (CDCl₃) δ 7.61 (d, 1H), 7.32-7.06 (m, 5H), 6.00 (m, 1H), 5.80 (s, broad, 1H), 5.30 (dd, 1H), 5.20 (dd, 1H), 4.80 (m, 2H), 4.30-4.05 (m, 7H), 3.90-3.80 (m, 4H), 3.90-3.60 (m, 2H), 1.60 (m, 2H), 1.32 (m, 5H), 0.96 (m, 3H)이고, ³¹P NMR (CDCl₃) δ 21.96, 20.70.

실시예 67

모노포스포아미데이트 74: 포스폰산 60 (0.10 g, 0.30 mmol), L-알라닌 사이클로부틸 에스테르 하이드로클로라이드 (0.11 g, 0.61 mmol), 페놀 (0.13 g, 1.39 mmol) 및 트리에틸아민 (0.5 mL, 3.59 mmol)의 혼합물의 피리딘 (2.0 mL) 용액을 5분 동안 60℃까지 가열하였다. 갓 제조한, 알드리티올 (0.47 g, 2.12 mmol)과 트리페닐포스핀 (0.56 g, 2.14 mmol)의 밝은 황색 피리딘 (1.0 mL) 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 밤새도록 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃ 사이에 분배시켰다. 유기층을 포화 소금물로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 ISCO 상에서 크로마토그래피로 정제하여 (2-프로판올/CH₂Cl₂), 모노포스포아미데이트 (28 mg, 17%, 1:1 부분 입체 이성질체 혼합물)를 회백색 폼 상태로 얻었다: ¹H NMR (CDCl₃) δ 7.60 (d, 1H), 7.25-7.03 (m, 5H), 6.00 (m, 1H), 5.30 (dd, 1H), 5.18 (dd, 1H), 5.00 (m, 2H), 4.79 (d, 2H), 4.28-4.05 (m, 4H), 3.90 (m, 4H), 3.70 (m, 1H), 3.57 (m, 1H), 2.30 (m, 2H), 2.00-1.60 (m, 4H), 1.25 (m, 3H)이고, ³¹P NMR (CDCl₃) δ 21.91, 20.64.

실시예 68

모노포스포아미데이트 75: 포스폰산 60 (0.10 g, 0.30 mmol), L-알라닌 n-헥실 에스테르 하이드로클로라이드 (0.13 g, 0.61 mmol), 페놀 (0.14 g, 1.52 mmol) 및 트리에틸아민 (0.7 mL, 5.02 mmol)의 혼합물의 피리딘 (2.0 mL) 용액을 5분 동 안 60℃까지 가열하였다. 갓 제조한, 알드리티올 (0.47 g, 2.12 mmol)과 트리페닐포스핀 (0.56 g, 2.14 mmol)의 밝은 황색 피리딘 (1.0 mL) 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 밤새도록 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃ 사이에 분배시켰다. 유기층을 포화 소금물로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 ISCO 상에서 크로마토그래피로 정제하여 (2-프로판올/CH₂Cl₂), 모노포스포아미데이트 (28 mg, 16%, 1:1 부분 입체 이성질체 혼합물)를 회백색 폼 상태로 얻었다: ¹H NMR (CDCl₃) δ 7.60 (d, 1H), 7.25-7.03 (m, 5H), 6.00 (m, 1H), 5.85 (s, 1H), 5.30 (dd, 1H), 5.17 (dd, 1H), 4.78 (d, 2H), 4.35-4.05 (m, 7H), 3.90 (m, 4H), 3.70 (m, 1H), 1.60 (m, 2H), 1.30 (m, 9H), 0.96 (m, 3H)이고, ³¹P NMR (CDCl₃) δ 21.97, 20.69.

실시예 69 내지 72는 반응식 21에 관한 것이다.

실시예 69

모노포스포아미데이트 76: 포스폰산 60 (35 mg, 0.11 mmol), L-2-아미노부티르산 n-부틸 에스테르 하이드로클로라이드 (42 mg, 0.21 mmol), 페놀 (50 mg, 0.53 mmol) 및 트리에틸아민 (0.2 mL, 1.43 mmol)의 혼합물의 피리딘 (0.5 mL) 용액을 5분 동안 60℃까지 가열하였다. 갓 제조한, 알드리티올 (0.16 g, 0.74 mmol)과 트리페닐포스핀 (0.20 g, 0.75 mmol)의 밝은 황색 피리딘 (0.5 mL) 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 밤새도록 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃ 사이에 분배시켰다. 유기층을 포화 소금물로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키고 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 ISCO 상에서 크로마토그래피로 정제하여 (2-프로판올/CH₂Cl₂), 모노포스포아미데이트 (17 mg, 29%, 1:1 부분 입체 이성질체 혼합물)를 회백색 폼 상태로 얻었다: ¹H NMR (CDCl₃) δ 7.60 (d, 1H), 7.25-7.03 (m, 5H), 6.00 (m, 1H), 5.30 (dd, 1H), 5.17 (dd, 1H), 4.78 (d, 2H), 4.30-4.03 (m, 7H), 3.95-3.80 (m, 4H), 3.62 (m, 1H), 3.40 (m, 1H), 1.80-1.60 (m, 4H), 1.38 (m, 2H), 0.98-0.75 (m, 6H)이고, ³¹P NMR (CDCl₃) δ 22.26, 20.95.

실시예 70

모노포스포아미데이트 77: 포스폰산 60 (35 mg, 0.11 mmol), L-페닐알라닌 에틸 에스테르 하이드로클로라이드 (48 mg, 0.21 mmol), 페놀 (50 mg, 0.53 mmol) 및 트리에틸아민 (0.2 mL, 1.43 mmol)의 혼합물의 피리딘 (0.5 mL) 용액을 5분 동안 60℃까지 가열하였다. 갓 제조한, 알드리티올 (0.16 g, 0.74 mmol)과 트리페닐포스핀 (0.20 g, 0.75 mmol)의 밝은 황색 피리딘 (0.5 mL) 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 밤새도록 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃ 사이에 분배시켰다. 유기층을 포화 소금 물로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 ISCO 상에서 크로마토그래피로 정제하여 (2-프로판올/CH₂Cl₂), 모노포스포아미데이트 (14 mg, 23%, 1:1 부분 입체 이성질체 혼합물)를 회백색 폼 상태로 얻었다: ¹H NMR (CDCl₃) δ 7.60 (d, 1H), 7.25-7.03 (m, 10H), 6.00 (m, 1H), 5.30 (dd, 1H), 5.17 (dd, 1H), 4.80 (m, 2H), 4.40-4.08 (m, 7H), 3.85-3.65 (m, 4H), 3.38-3.25 (m, 2H), 2.95-2.86 (m, 2H), 1.20 (m, 3H)이고, ³¹P NMR (CDCl₃) δ 21.86, 21.06.

실시예 71

모노포스포아미데이트 78: 포스폰산 60 (35 mg, 0.11 mmol), L-페닐알라닌 n-부틸 에스테르 하이드로클로라이드 (55 mg, 0.21 mmol), 페놀 (50 mg, 0.53 mmol) 및 트리에틸아민 (0.2 mL, 1.43 mmol)의 혼합물의 피리딘 (0.5 mL) 용액을 5분 동안 60℃까지 가열하였다. 갓 제조한, 알드리티올 (0.16 g, 0.74 mmol)과 트리페닐포스핀 (0.20 g, 0.75 mmol)의 밝은 황색 피리딘 (0.5 mL) 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 밤새도록 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃ 사이에 분배시켰다. 유기층을 포화 소금물로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 ISCO 상에서 크로마토그래피로 정제하여 (2-프로판올/CH₂Cl₂), 모노 포스포아미데이트 (18 mg, 28%, 1:1 부분 입체 이성질체 혼합물)를 회백색 폼 상태로 얻었다: ¹H NMR (CDCl₃) δ 7.60 (d, 1H), 7.25-6.97 (m, 10H), 6.00 (m, 1H), 5.80 (s, broad, 1H), 5.30 (dd, 1H), 5.17 (dd, 1H), 4.78 (d, 2H), 4.40-4.03 (m, 7H), 3.85-3.65 (m, 4H), 3.45-3.25 (m, 2H), 2.95-2.86 (m, 2H), 1.57 (m, 2H), 1.30 (m, 2H), 0.96 (m, 3H)이고, ³¹P NMR (CDCl₃) δ 21.89, 21.09.

실시예 72

모노포스포아미데이트 79: 포스폰산 60 (0.10 g, 0.30 mmol), L-페닐알라닌 iso부틸 에스테르 하이드로클로라이드 (0.16 g, 0.61 mmol), 페놀 (0.14 g, 1.52 mmol) 및 트리에틸아민 (0.7 mL, 5.02 mmol)의 혼합물의 피리딘 (2.0 mL) 용액을 5분 동안 60℃까지 가열하였다. 갓 제조한, 알드리티올 (0.47 g, 2.12 mmol)과 트리페닐포스핀 (0.56 g, 2.14 mmol)의 밝은 황색 피리딘 (1.0 mL) 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 밤새도록 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃ 사이에 분배시켰다. 유기층을 포화 소금물로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 ISCO 상에서 크로마토그래피로 정제하여 (2-프로판올/CH₂Cl₂), 모노포스포아미데이트 (19mg, 10%, 1:1 부분 입체 이성질체 혼합물)를 회백색 폼 상태로 얻었다: ¹H NMR (CDCl₃) δ 7.60 (d, 1H), 7.25-7.03 (m, 10H), 6.00 (m, 1H), 5.30 (dd, 1H), 5.17 (dd, 1H), 4.78 (d, 2H), 4.45 (m, 1H), 4.35-4.18 (m, 4H), 3.95-3.60 (m, 5H), 3.35 (m, 1H), 3.00-2.83 (m, 2H), 1.85 (m, 1H), 0.96 (m, 6H)이고, ³¹P NMR (CDCl₃) δ 21.90, 21.07.

실시예 73 내지 76는 반응식 22에 관한 것이다.

실시예 73

모노포스포아미데이트 80: 모노포스폰산 6 (0.10 g, 0.30 mmol), L-알라닌 사이클로부틸 에스테르 하이드로클로라이드 (0.11 g, 0.61 mmol), 페놀 (0.13 g, 1.4 mmol) 및 트리에틸아민 (0.51 mL, 3.67 mmol)의 혼합물의 피리딘 (2 mL) 용액을 5분 동안 60℃까지 가열하였다. 갓 제조한, 알드리티올 (0.47 g, 2.12 mmol)과 트리페닐포스핀 (0.56 g, 2.14 mmol)의 밝은 황색 피리딘 (1.0 mL) 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 밤새도록 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃ 사이에 분배시켰다. 유기층을 포화 소금물로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 ISCO 상에서 크로마토그래피로 정제하고 (2-프로판올/CH₂Cl₂), 이어서 Gilson HPLC로 정제하여 (CH₃CN/H₂O), 모노포스포아미데이트 (33 mg, 20%, 1:1 부분 입체 이성질체를 회백색 폼 상태로 얻었다: ¹H NMR (CDCl₃) δ 7.60 (s, 1H), 7.30-7.03 (m, 5H), 5.80 (s, broad, 1H), 5.00 (m, 1H), 4.80 (d, 2H), 4.28-4.05 (m, 3H), 3.90 (m, 4H), 3.03 (s, broad, 1H), 2.35 (m, 2H), 2.05 (m, 2H), 1.80 (m, 2H), 1.30 (m, 3H), 0.90 (m, 2H), 0.62 (m, 2H)이고, ³¹P NMR (CDCl₃) δ 21.91, 20.61.

실시예 74

비스포스포아미데이트 81: 포스폰산 6 (60 mg, 0.18 mmol), L-알라닌 사이클로부틸 에스테르 하이드로클로라이드 (0.13 g, 0.72 mmol) 및 트리에틸아민 (0.31 mL, 2.16 mmol)의 혼합물의 피리딘 (1.0 mL) 용액을 5분 동안 60℃까지 가열하였다. 갓 제조한, 알드리티올 (0.28 g, 1.26 mmol)과 트리페닐포스핀 (0.34 g, 1.26 mmol)의 밝은 황색 피리딘 (0.5 mL) 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 밤새도록 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃사이에 분배시켰다. 유기층을 포화 소금물로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 실리카젤 상에서 크로마토그래피로 정제하여 (5% MeOH/CH₂Cl₂), 비스포스포아미데이트 (30 mg, 28%)를 연한 황색 폼 상태로 얻었다: ¹H NMR (CDCl₃) δ 7.60 (s, 1H), 5.70 (s, 1H), 5.00 (m, 2H), 4.90 (s, 2H), 4.25 (m, 2H), 4.00 (m, 2H), 3.90 (m, 2H), 3.78 (m, 2H), 3.40 (m, 1H), 3.21 (m, 1H), 3.03 (s, broad, 1H), 2.35 (m, 4H), 2.05 (m, 4H), 1.90-1.65 (m, 4H), 1.32 (m, 6H), 0.90 (m, 2H), 0.60 (m, 2H)이 고, ³¹P NMR (CDCl₃) δ 20.70.

실시예 75

비스포스포아미데이트 82: 포스폰산 6 (60 mg, 0.18 mmol), L-알라닌 사이클로펜틸 에스테르 하이드로클로라이드 (0.13 g, 0.72 mmol) 및 트리에틸아민 (0.31 mL, 2.16 mmol)의 혼합물의 피리딘 (1.0 mL) 용액을 5분 동안 60℃까지 가열하였다. 갓 제조한, 알드리티올 (0.28 g, 1.26 mmol)과 트리페닐포스핀 (0.34 g, 1.26 mmol)의 밝은 황색 피리딘 (0.5 mL) 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 밤새도록 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃ 사이에 분배시켰다. 유기층을 포화 소금물로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 실리카젤 상에서 크로마토그래피로 정제하여 (5% MeOH/CH₂Cl₂), 비스포스포아미데이트 (30 mg, 27%)를 연한 황색 폼 상태로 얻었다: ¹H NMR (CDCl₃) δ 7.62 (s, 1H), 5.72 (s, 1H), 5.20 (m, 2H), 4.80 (s, 2H), 4.25 (m, 2H), 4.04-3.88 (m, 4H), 3.74 (m, 2H), 3.40 ( m, 1H), 3.23 (m, 1H), 3.03 (s, broad, 1H), 1.95-1.58 (m, 16H), 1.37 (m, 6H), 0.90 (m, 2H), 0.60 (m, 2H)이고, ³¹P NMR (CDCl₃) δ 20.64.

실시예 76

비스포스포아미데이트 83: 포스폰산 6 (40 mg, 0.12 mmol), L-페닐알라닌 사 이클로부틸 에스테르 하이드로클로라이드 (0.13 g, 0.48 mmol) 및 트리에틸아민 (0.20 mL, 1.44 mmol)의 혼합물의 피리딘 (0.5 mL) 용액을 5분 동안 60℃까지 가열하였다. 갓 제조한, 알드리티올 (0.19 g, 0.85 mmol)과 트리페닐포스핀 (0.22 g, 0.85 mmol)의 밝은 황색 피리딘 (0.5 mL) 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 밤새도록 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃ 사이에 분배시켰다. 유기층을 포화 소금물로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 실리카젤 상에서 크로마토그래피로 정제하여 (5% MeOH/CH₂Cl₂), 비스포스포아미데이트 (20 mg, 22%)를 연한 황색 폼 상태로 얻었다: ¹H NMR (CDCl₃) δ 7.50 (s, 1H), 7.28-7.05 (m, 10H), 5.72 (s, 1H), 5.00 (m, 2H), 4.90 (s, 2H), 4.23-4.03 (m, 4H), 3.68 (m, 2H), 3.42-3.19 (m, 2H), 3.15-2.82 ( m, 7H), 2.38 (m, 4H), 2.00 (m, 4H), 1.85-1.55 (m, 4H), 0.90 (m, 2H), 0.60 (m, 2H)이고, ³¹P NMR (CDCl₃) δ 20.31.

실시예 77 및 78는 반응식 23에 관한 것이다.

실시예 77

디이소프로필 포스포네이트 84: 4 (5.0 g, 12.82 mmol) 및 트리플루오로에틸아민 (6.35 g, 64.10 mmol)의 혼합물의 CH₃CN (40 mL) 용액을 반응 용기(bomb)에 넣 고, 4시간 동안 80℃까지 가열하였다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 감압하에서 농축시켰다. 생성물을 15% MeOH/CH₂Cl₂ (3 x)와 포화 소금물 사이에 분배시키고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과하여 농축시켰다. 조질 생성물을 ISCO 상에서 크로마토그래피로 정제하고 (2-프로판올/CH₂Cl₂), 이어서 Gilson HPLC로 정제하여 (CH₃CN/H₂O), 84 (3.26 g, 56%)를 연한 황색 폼 상태로 얻었다.

실시예 78

비스포스포아미데이트 85: 포스폰산 42 (0.11 g, 0.29 mmol), L-알라닌 사이클로부틸 에스테르 하이드로클로라이드 (0.31 g, 1.75 mmol) 및 트리에틸아민 (0.52 mL, 3.67 mmol)의 혼합물의 피리딘 (2.0 mL) 용액을 5분 동안 60℃까지 가열하였다. 갓 제조한, 알드리티올 (0.47 g, 2.12 mmol)과 트리페닐포스핀 (0.56 g, 2.12 mmol)의 밝은 황색 피리딘 (1.0 mL) 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 밤새도록 교반하고, 실온까지 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 생성물을 EtOAc와 포화 NaHCO₃사이에 분배시켰다. 유기층을 포화 소금물로 세정하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 증발시켰다. 조질 생성물을 ISCO 상에서 크로마토그래피로 정제하여 (2-프로판올/CH₂Cl₂), 비스포스포아미데이트 (97 mg, 54%)를 연한 황색 폼 상태로 얻었다: ¹H NMR (CDCl₃) δ 7.65 (s, 1H), 5.90 (s, broad, 1H), 5.00 (m, 2H), 4.80 (s, 2H), 4.35-4.20 (m, 4H), 4.00 (m, 2H), 3.87 (m, 2H), 3.70 (d, 2H), 3.38 (m, 1H), 3.20 (m, 1H), 2.30 (m, 4H), 2.00 (m, 4H), 1.90-1.60 (m, 4H), 1.35 (m, 6H)이고, ³¹P NMR (CDCl₃) δ 20.61.

실시예 79

이 실시예는 항증식 활성을 입증하는 데에 이용되는 분석법을 교시한다.

항증식성 분석에 사용되는 세포 유형

항증식성 분석에 사용되는 인간 암세포주는 3가지 유형의 HPV (HPV-16, HPV-18, HPV-39), 1가지 유형의 HPV 음성 자궁 경부 암종 세포주, 및 혀로부터의 2가지 유형의 각질 세포 유사 암종인 6가지 유형의 자궁 경부 암종 세포주를 포함하였다. 시험되는 정상 인간 세포는 피부 각질 세포, 자궁 경부 각질 세포 및 폐 섬유 모세포를 포함하였다. 피부 각질 세포 및 자궁 경부 각질 세포를 Cambrex (East Rutherford, NJ)를 얻었고, 다른 모든 세포는 American Type 배양 Collection (Manassas, VA)으로부터 얻었다.

표 79-1은 각 세포 유형 및 배양 조건의 특성을 요약한 것이다.

항증식성 분석 절차

1. 세포 배양

트립신을 이용하여 배양 플라스크로부터 분리하고, 수를 센 다음, 96-웰 배양 플레이트 (웰당 세포수 250-1000, 세포 유형에 따름)에서 평판 배양하였다. 다음날 (일수 0으로 정의됨), 세포를 평판의 바닥에 부착시킨 후에, 화합물의 일련의 5배(5-fold) 희석물을 중복적으로 첨가하였다. 화합물이 없는 것과 10 μM 콜히 친 (세포 분열 억제제)을 대조 웰에 첨가하였는데, 이들은 각각 100% 증식과 0% 증식을 각각 나타낼 것이다.

2. 설포로다민 B로 세포 염색

화합물을 첨가한 7일 후에, 배양 플레이트를 4℃에서 1시간 동안 10% 트리클로로아세트산으로 처리한 다음, 물로 세정하였다. 이 절차는 세포-유도 단백질이 플레이트의 바닥에 결합되게 한다. 단백질을 1% 아세트산 내에서 10분 동안 0.4% 설포로다민으로 염색한 다음, 1% 아세트산으로 광범위 세정(extensive washing)을 하였다. 플레이트의 바닥에 결합된 잔류 염료를 10mM 트리즈마 염기에 용해시켰다. 여기서 생성된 보라색을 분광 광도계를 이용하여 510 nm 파장에서 흡광도를 측정함으로써 정량화한다.

3. 데이터 분석

실험 데이터로부터 S자 만곡부(sigmoidal) 투여-응답 곡선을 만들고, 윈도우용 GraphPad Prism 버전 4.01 (GraphPad Software, 샌디애고, 캘리포니아, 미국)을 이용하여 50% 유효 농도 (EC₅₀)를 계산하였다.

표 79-1. 항증식 분석법에 사용된 세포 유형

^*배지

세포를 아래와 같은 배지에서 가습(humidified) 배양기 내에서 37℃에서 5% CO₂와 함께 유지하였다.

A1: 배양 유지용 배지: Earle의 BSS (Cambrex, East Rutherford, NJ)를 함유하고, 10% 태아 소 혈청, 2 mM 글루타민, 100 단위/mL 페니실린 및 100 ㎍/mL 스트렙토마이신으로 보충된 Eagle MEM.

A2: 항증식 분석용 배지: Earle의 BSS를 함유하고, 5% 태아 소 혈청, 2 mM 글루타민, 100 단위/mL 페니실린 및 100 ㎍/mL 스트렙토마이신으로 보충된 Eagle MEM.

B1: 배양 유지용 배지: 0.01 mg/mL 소 뇌하수체 추출물, 0.001 ㎍/mL 재조합 표피 성장 인자, 100 단위/mL 페니실린 및 100 ㎍/mL 스트렙토마이신으로 보충된 각질 세포-SFM (Invitrogen, Carlsbad, CA).

B2: 항증식 분석용 배지: B1과 A2의 4:1 혼합물.

결과

1. 정상 섬유 모세포와 비교한, HPV 양성 SiHa 세포 내에서의 아미데이트 전구 약물의 선택적 항증식 활성

목표는 표피 및 진피 (각질 세포 및 섬유 모세포와 같은) 내의 정상 세포에 대한 영향 없이 HPV-전환(HPV-전환) 손상(lesion)의 성장을 억제하는 화합물을 발견하는 것이었다. 각각 HPV-전환 손상와 정상 섬유 모세포를 모형화한 SiHa 세포와 HEL 세포를 이용하여 생체외 항증식 분석법을 구성하였다. SiHa 세포는 HPV-16 감염에 의하여 유발된 자궁 목내 비늘 세포 암종으로부터의 것이고, HEL 섬유 모세포는 정상 인간 배아 폐로부터의 것이다 (표 79-1). 표 79-2에 제시된 바와 같이, SiHa 세포에서의 7종의 아미데이트 전구 약물의 50% 유효 농도 (EC₅₀)는 0.13~3.2 nM 범위이었고, HEL 세포에서의 EC₅₀은 12~727 nM 범위이었는데, 이는 이들 화합물이 HEL 세포에 비하여 SiHa 세포의 증식을 더욱 유효하게 억제한다는 것을 나타낸다. HEL/SiHa 선택성 지수 (SiHa EC₅₀로 나눈 HEL EC₅₀)는 72~559 범위이었다 (표 79-2).

7종의 아미데이트 전구 약물은 모두 동일한 대사 생성물인 cprPMEDAP를 생성 한다. 추가적인 대사에 의하여 cprPMEDAP는 PMEG로 된다 [Compton 등, 1999; Haste 등, 1999]. 이들 화합물의 SiHa 세포 내에서의 항증식 EC₅₀는 상기 전구 약물의 값에 비하여 더 높은데 (표 79-2), 이것은 아미데이트 부분의 부착이 효력을 향상시켰다는 것을 나타낸다. 나아가, cprPMEDAP와 PMEG의 HEL/SiHa 선택성 지수는 각각 17과 4.1이었는데 (표 79-2), 이것은 전구 약물이 cprPMEDAP에 비하여 선택성이 더 좋고, cprPMEDAP가 PMEG에 비하여 선택성이 더 좋다는 것을 나타낸다.

PMEG는 세포의 DNA 폴리머라제의 사슬 종결 억제제로서 작용하는 PMEGpp로 인산화되는 것으로 알려져 있다 [Compton 등, 1999; Haste 등, 1999]. 4종의 공지 DNA 폴리머라제 억제제 (시도포버, 아라 C, 독시플루리딘 및 아피디콜린)과, DNA 국소 이성화 효소 억제제 (다카바진, 엘립티신), DNA 알킬화제 (독소루비신, 미톡산트론, 블레오마이신, 메클로데타민), 및 튜블린 억제제 (빈크리스틴, 빈블라스틴, 에토포시드 및 인다노신)를 포함하는, 다른 작용 메커니즘을 갖는 기타의 항암 약물을 SiHa 및 HEL 세포 내에서 시험하였다 (표 79-2). SiHa 세포 내에서 이들 화합물의 항증식 EC₅₀은 다양하였으며, 몇 가지는 7종의 아미데이트 전구 약물과 동등하거나 또는 더 우수하였다. 그럼에도 불구하고, 이들 모두는 7종의 아미데이트 전구 약물에 비하여 좋지 않은 HEL/SiHa 선택성 지수 (0.01~3.98)를 나타내었다.

종합하면, HPV-16 양성 SiHa 암종 세포에서 낮은 것 이하(sub-low)의 nM 항증식 EC₅₀과, HEL 섬유 모세포에 비하여 50배 더 큰 선택성을 나타내는 일련의 독창적인 화합물이 교시되었다.

2. 정상 각질 세포와 비교한, HPV 양성 SiHa 세포에서의 아미데이트 전구 약물의 선택적 항증식 활성

표피로부터의 정상 세포에서 화합물의 효과를 시험하기 위하여, 피부 (PHK) 및 자궁 경부 (CK)로부터 분리한 제1기의 인간 각질 세포를 사용하여 항증식성 분석을 실시하였다. PHK 및 CK에서 얻어진 7종의 전구 약물의 항증식 EC₅₀ 값은 HEL에서 얻어진 값에 비하여 낮았는데, 이것은 섬유 모세포에 비하여 각질 세포가 더 취약하다는 것을 나타낸다 (표 79-2 및 79-3). 그럼에도 불구하고, 이들 전구 약물 및 cprPMEDAP의 PHK/SiHa 및 CK/SiHa 선택성 지수는 대조 화합물 PMEG 및 DNA 폴리머라제 억제제 아라 C에 비하여 더 좋았다 (표 79-3). 따라서, 상기 전구 약물은 피부 및 자궁 경부로부터의 정상 각질 세포에 비하여 HPV-16 양성 SiHa 세포의 증식을 우선적으로 억제하였다.

3. 기타의 HPV 양성 세포 내에서의 항증식 활성

그 다음, (표 79-1에 정리된) HPV-유발 자궁 경부 암종으로부터 유도된 5종의 추가 세포주 내에서 항증식 분석법으로 7종의 전구 약물을 시험하였으며, 그 데이터는 SiHa 데이터와 함께 표 4에 제시되어 있다. SiHa, C-4I 및 MS751 세포 내에서 화합물 C를 제외한 모든 화합물이 낮은 것 이하의 nM 항증식 EC₅₀를 보여주었다. 그러나, CaSki, HeLa 및 ME-180 내에서는 모든 화합물이 7.8~410 nM 범위의 EC₅₀로 효력이 상당히 낮았다. 이것은 저항성(resistance)과 HPV 유형 (16, 18 or 39) 사이, 또는 저항성과 전이(metastatis) (CaSki, MS751 및 ME180는 전이 된(metastased) 부위로부터 유도된 것이다) 사이에는 상관 관계가 없는 것으로 보인다. 대조 화합물 아라 C (DNA 폴리머라제 억제제)는 94~257 nM 범위의 EC₅₀ 값으로 모든 세포주를 균일하게 억제하였다.

4. HPV 음성 암종 세포 내에서의 항증식 활성

HPV 음성 암종 세포주에 대한 화합물의 효과를 조사하기 위하여, 3 종의 세포주 (HT-3, SCC4, SCC9, 표 79-1)를 항증식 분석법으로 시험하였다. 표 79-4에 제시된 바와 같이, 7종의 전구 약물은 모두 대조 화합물 아라 C와 동등하거나 또는 더 좋은 효력을 나타내었다.

표 79-2. HEL 섬유 모세포와 비교한, HPV16+ SiHa 세포의 선택적 억제

표 79-3. 제1기 각질 세포와 비교한, HPV16+ SiHa 세포의 선택적 억제

표 79-4. 기타의 HPV 양성 및 음성 암종 세포 내에서의 항증식 활성

실시예 80

항증식 분석

항증식 분석은 배양된 세포의 증식에 대한 화합물의 효과를 측정하는 것이다. 항증식 분석에 있어서 활성 화합물은 세포 증식 억제성 (세포 분열 억제) 및/ 또는 세포 파괴성 (세포 치사)일 수 있다. HPV 양성 암종 세포 및 정상 세포를 사용하여 항증식 분석을 수행함으로써, 정상 인간 조직으로부터의 세포와 비교하여 HPV 양성 암종 세포의 증식을 선택적으로 억제하는 화합물을 확인한다. 표 80-1은 HPV에 의하여 전환된 6종의 자궁 경부 암종 세포주, 정상 인간 피부 각질 세포 (PHK) 및 정상 폐 섬유 모세포 (HEL)를 포함하는, 각 세포 유형의 특성의 특성을 정리한 것이다. 피부 각질 세포를 Cambrex (East Rutherford, NJ)로부터 얻었다. 다른 모든 세포는 American Type Culture Collection (Manassas, VA)으로부터 얻었다.

트립신을 이용하여 세포를 배양 플라스크로부터 떼어내고, 수를 센 다음, 96-웰 배양 플레이트 (세포 유형에 따라 250~100 웰당 세포수)에서 평판 배양하였다. 다음날 (일수 0으로 정의됨), 화합물의 일련의 5배 희석물을 복제물(duplicate)에 가하였다. 화합물 첨가후 7일 째에 배양 플레이트를 4℃에서 1시간 동안 10% 트리클로로아세트산으로 처리하고, 물로 세정하였다. 이 절차는 세포의 단백질은 플레이트의 바닥 표면에 결합시킨다. 단백질을 0.4% 설포로다민 B의 1% 아세트산 용액으로 10분 동안 염색하고, 이어서 1% 아세트산으로 집중(extensive) 세정한다. 플레이트 바닥에 결합된 잔류 염료를 10mM 트리즈마 염기에 용해시키면, 보라색이 된다. (세포 수에 비례하는) 색상의 강도를 분광 광도계를 이용하여 510 nm 파장에서 흡광도를 측정함으로써 정량화한다. 약물 처리 하지 않은 세포 (=100% 증식)와 10 μM 콜히친 (세포 분열 억제제)으로 처리한 세포 (= 0% 증식)를 대조 화합물로 사용하여, 억제 %를 결정하였다. 억제 % 값을 화합물 농 도에 대하여 도시하고, S자 만곡부 투여 응답 곡선에 대하여 맞춘 다음, 이로부터 세포 증식률을 50%까지 감소시키는 화합물 농도 (= EC₅₀)를 구하였다. 곡선 맞춤과 EC₅₀ 계산에는 윈도우용 GraphPad Prism 버전 4.00 (GraphPad Software, San Diego California USA)를 사용하였다.

세포 자멸사 분석 [ 카스파제 ( caspase ) 3 유도법]

카스파제의 유도는 세포 자멸사 또는 프로그램화된 세포 사멸과 관련된 초기 사건(events) 중의 하나이다. 카스파제 활성은 형광 기질을 이용하여 정량적으로 검출될 수 있다. 세포 자멸 경로에 직접 작용하는 화합물은 상대적으로 짧은 배양 시간 (< 24 시간) 내에 카스파제를 유도할 수 있다. 기타의 세포 생리학을 교란시키는, 궁극적으로는 세포 자멸사를 야기하는, 화합물은 카스파제를 유도함에 있어서 보다 긴 배양 시간 (>48 시간)을 필요로 할 수 있다.

10,000개의 세포를 96-웰 배양 플레이트에 평판화하고, 화합물의 일련의 5배 희석물과 함께 24, 48 및 72 시간 동안 배양하였다. 세포를 분리시키고, 세포 분리물 내의 카스파제 활성을 제조자의 지시 (카스파제 분석 키트, Roche, Indianapolis, IN)에 따라 형광 기질을 이용하여 측정하였다.

세포 자멸사 분석 ( 아넥신 V 염색법)

세포막 내부에서 외부까지의 포스파티딜세린의 전위(translocation)은 세포 자멸사 또는 프로그램화된 세포 사멸과 관련된 초기/중간 단계 중 하나이다. 전위되는 포스파티딜세린은 Ca++ 의존성 인지질-결합 단백질인 아넥신 V를 FITC 표지화 하여 세포를 배양함으로써 관찰될 수 있다. 아넥신-FITC와 (죽은 세포를 염색시키는) 요오드화프로피듐으로 세포를 염색하는 경우, 살아있는 세포는 양쪽 염료에 대하여 음성이지만, 죽은 세포는 양쪽 모두에 대하여 양성이고, 세포 자멸 세포는 아넥신-FITC에 대해서만 양성이다.

HPV-16 SiHa 세포를 3가지 상이한 농도의 화합물과 함께 3 또는 7일 동안 배양하고, 아넥신-FITC과 요오드화프로피듐으로 동시에 염색하였다. 각 세포의 염색을 흐름 세포 측정법으로 조사하였다.

결과

선택적 항증식 활성

이 절차의 목적은 표피 및 진피 (각질 세포 및 섬유 모세포와 같은) 내의 정상 세포에 대한 영향 없이 HPV-전환 손상의 성장을 억제하는 화합물을 확인하는 것이다. 따라서, 화합물을 HPV-전환 세포, 정상 각질 세포 및 정상 섬유 모세포를 각각 모형화한 SiHa, PHK 및 HEL 세포 내에서 시험하였다.

본 발명의 대표적인 화합물은 SiHa 세포 내에서 25,000 nM 미만의 50% 유효 농도 (EC₅₀)라는 검출 가능한 수준의 항증식 활성을 나타내는, 표 80-2에 정리된 것과 같은 것들이다. 활성 화합물은 HEL 세포에서도 시험되었다. 모든 경우에, HEL 세포에서의 EC₅₀은 SiHa 세포에서의 EC₅₀에 비하여 높았는데, 이는 상기 활성 화합물이 HEL 세포에 비하여 SiHa 세포의 증식을 더 효과적으로 억제한다는 것을 나타낸다. PMEG (2-포스포노메톡시에틸 구아닌), Ara-C (시타라빈, CAS# 147-94-4) 및 젬 시타빈 (CAS# 95058-81-4)와 같은 다른 뉴클레오티드/뉴클레오시드 유사체는 이와 같은 선택성을 보여주지 않았다. 항 피부사마귀(wart) 약물 콘딜록스의 활성 성분인 포도필록스 (CAS# 518-28-5) 역시 선택성이 없었다.

표 80-3에 정리된 것들과 같은 본 발명의 대표적인 전구 약물 화합물은 활성을 나타낸다. 대부분의 경우에 전구 약물은 효력이 더 크고, 몇 가지 경우에는 각각의 모 화합물에 비하여 더 선택적이다. 다수의 포스포아미데이트 전구 약물은 포도필록스에 비하여 활성이 더 크고 선택적이다.

종합하면, 화합물들은 HPV-16 양성 SiHa 세포에서 nM 이하의 항증식 EC₅₀과, PHK 각질 세포 또는 HEL 섬유 모세포와 비교할 때 50배 더 큰 선택성을 가진다.

기타 HPV + 세포주에서의 항증식 활성

또한, 선택된 화합물을 HPV-유발 자궁 경부 암종으로부터 유도된 5종의 추가 세포주에서 시험하였다 (실시예 79 및 표 80-4 참조). 각 화합물은 존재하는 HPV 유형에 무관하게 6종의 HPV+ 세포주에서 서로 상이한 활성 수준을 나타내었다. 통상적으로, 화합물들은 CaSki (HPV-16), HeLa (HPV-18) 및 ME-180 (HPV-39) 세포에서와 비교하여 SiHa (HPV-16), C-4I (HPV-18) 및 MS751 (HPV-18) 세포에서 더 큰 효력을 나타내었다.

세포 자멸사의 유도 (카스파제 3 유도법)

본 발명의 대표적인 화합물을 SiHa 세포에서의 세포 자멸사 유도에 대하여 시험하였다. 세포를 72 시간 동안 배양한 경우 (고체 막대), 유의한 투여 응답 카 스파제 유도가 관찰되었는데, 이는 화합물이 세포 자멸사를 유도하였다는 의미이다 (도 80-1). 카스파제의 유도는 48시간 배양에서는 덜 분명하였으며 (그늘 막대), 24시간 배양에서는 관찰되지 않았다 (데이터 미제시).

세포 자멸사의 유도 (아넥신 V 염색법)

PMEG, N6-사이클로프로필 PMEDAP 및 본 발명의 대표적인 화합물을 3가지 서로 다른 농도에서 아넥신 V-요오드화프로피듐 이중 염색법을 이용하여 SiHa 세포에서의 세포 자멸사 유도를 시험하였다. 3종의 화합물 모두에 있어서, 3일째에 비하여 7일째에 더 높은 퍼센트의 세포 자멸 세포가 관찰되었다. 전술한 본 발명의 대표적인 화합물은 세포 자멸사를 유도함에 있어서 가장 활성이 높았으며, 0.2 ㎍/m의 이 화합물로 처리한 배양액 내의 세포 63.8%가 7일째에 세포 자멸성이었다. 이와는 대조적으로, 0.2 ㎍/mL PMEG과 0.5 ㎍/mL N6-사이클로프로필 PMEDAP만으로 처리한 배양액은 각각 1.2 %와 15.9 %의 세포만이 세포 자멸되었다.

표 80-1. 항증식 분석에 사용된 세포 유형

^* 세포의 DNA에 집적된 HPV DNA의 아형

^**배지

세포를 아래와 같은 배지에서 37℃에서 5% CO₂와 함께 가습 배양기 내에 보관하였다.

B2: 항증식 분석용 배지: B1과 A2의 4:1 혼합물.

표 80-2. HPV16+ SiHa 세포 및 HEL 섬유 모세포에서의 N6-치환 PMEDAP의 항증식 활성

표 80-3. HPV16+ SiHa 세포, PHK 각질 세포 및 HEL 섬유 모세포 내에서의 N6-치환 PMEDAP의 포스포아미데이트 전구 약물의 항증식 활성

표 80-4. 6종의 서로 다른 HPV 양성 세포 내에서의 N6-사이클로프롤릴 PMEDAP 및 이의 포스포아미데이트 전구 약물의 항증식 활성

실시예 81

화합물 A와 B의 토끼(rabbit) 피부 과민성(과민 반응) 연구

수컷 토끼에게 7일 동안 연속하여 피부 도포를 통하여 투여한 경우에 과민 반응이 생길 가능성에 대하여 본 발명의 2종의 화합물을 평가하기 위한 연구를 수행하였다. 전체 6마리의 수컷을 아래의 표에 나타낸 바와 같은 연구에 배당하였다.

운송 수단, 양성 대조 물질 및 시험 물질을 연구가 수행되는 7일 동안 1일 1 회 피부 투여하였다. 시험 물질을 0.01, 0.03 및 0.1% 농도로 투여하였다. 양성 대조 물질을 0.1% (PMEG) 또는 1% (시도포버

) 농도로 투여하였다. 모든 배합물의 투여 부피는 100㎕ 고정 부피이었다.

최초 투여에 앞서 각 동물의 시험 부위의 털을 깎고, 연구 중에도 필요에 따라 털을 깎았다. 두 부위를 좌측 투여 면의 털을 깎았고, 세 부위는 우측 투여 면의 털을 깎았다. 각 투여의 외곽 (각각 약 1 평방 인치)을 지워지지 않는 잉크로 표시하였다. 털을 깎은 총 면적은 각 동물의 총 신체 표면의 10% 이상이 되도록 하였다.

운송 수단과, 적절한 양성 대조 및 시험 물질을 각 동물의 약 1 평방 인치의 투여 부위 내에 투여하였다. 운송 수단을 좌측 주둥이 부위 (투여 부위 1)에 투여하고, 적절한 양성 대조 물질을 좌측 꼬리 부위 (투여 부위 2)에 투여하였다. 적절한 시험 물질을 다음과 같이 투여하였다: 우측 주둥이 부위 (투여 부위 3)에 0.01%, 우측 중간 부위 (투여 부위 4)에 0.03% 및 우측 꼬리 부위 (투여 부위 5)에 0.1%. 칼라(collars)를 투여 후 즉시 1 내지 2 시간 동안 동물에게 배치하였다.

상기 부위의 홍반 및 부종을 1일째 투여 이전 및 하루 후, 그 이후 매일, 투여 후 약 24시간 및 다음 투여 이전에 평가하였다.

각 부위를 피부 과민 반응의 점수화를 위한 Draize 스케일(Draize JH, Woodard G, Calvery HO, 방법 for the 연구 of Irritation and toxicity of substances applied topically to the skin and mucous membranes. J Pharmacol Exp Ther 1944;82:377-90)에 따라 과민 반응 점수를 매겼다

모든 동물에 대하여 1일 2회 치사율(mortality), 사망률(morbidity) 및 식품(food)과 물의 유용성(availability)에 대하여 관찰하였다. 무작위화(randomization) 이전, 1일째 투여 이전 및 그 이후 매일 상세한 임상 조사를 하였다. 도착한 다음날, 무작위화 이전 및 1, 3 및 7일째 투여 이전에 체중을 측정하여 기록하였다.

나트륨 펜토바비탈계 안락사 용액을 정맥 마취제 과다 투여로 안락사시키고, 대퇴부 맥관을 절단하여 방혈시켰다. 동물을 크기(masses)를 포함하여 외적인 비정상성을 주의 깊게 조사하였다. 피부를 복부 정중선 절개로부터 반사시키고(reflected), 모든 비정상성을 확인하고, 죽기 전(ante-mortem)에 발견된 사항과 서로 관련시켰다. 복부, 흉부 및 두개골 공동(cavities)의 비정상성을 조사하고, 기관들을 제거하여 조사하고, 필요한 경우, 중성 완충 포르말린에 넣었다. 각 동물의 투여 부위, 신장 및 모든 전체적 손상을 수집하여 보존하였다.

고정 헤마톡실린 및 에오신-염색 파라핀 단면(sections)에서의 현미경 조사를 모든 동물의 각 투여 부위에 대하여 실시하였다. 수의 병리학자가 슬라이드를 조사하였다. 투여 그룹 사이의 비교를 위하여 등급화할 수 있는 손상을 정의하는 데에 4단계 등급 시스템을 이용하였다.

결론

2종의 시험 물질은 어떤 농도에서도 중요한 임상적 발견, 피부 과민 반응, 체중 변화 또는 현미경 관찰 사항을 만들어내지 않았다. 양성 대조 화합물 중의 1종은 임상적 발견과 약간 및 중간 정도의 육안 및 현미경 관찰 사항과 관련이 있었 다.

실시예 82

화합물 B 및 H의 토끼 피부 과민 반응 연구

수컷 토끼에게 7일 동안 연속하여 피부 도포를 통하여 투여한 경우에 과민 반응이 생길 가능성에 대하여 본 발명의 2종의 화합물을 평가하기 위한 연구를 수행하였다. 전체 24 마리의 수컷을 아래의 표에 나타낸 바와 같은 연구에 배당하였다.

시험 및 대조 물질을 연구가 수행되는 7일 동안 1일 1회 피부 투여하였다. 화합물 B의 투여 수준은 0.03, 0.1 및 0.3%이었다. 화합물 H의 투여 수준은 0.03, 0.1 및 0.3%이었다. PMEG (양성 대조)의 투여 수준은 0.1%이었다. cPrPMEDAP (양성 대조)의 투여 수준은 1.0%이었다. 운송 수단 대조의 투여 수준은 0.0% (이것은 젤 및 연고 배합물 양쪽 모두의 형태로 투여되었다)이었다. 모든 부위에 대한 투여 부피는 100㎕이었다. 1회 투여 24 시간 미만 이전에, 동물의 등으로부터 털을 깎았다. 털을 깎은 총 면적은 각 동물의 총 신체 표면의 10% 이상이 되도록 하였다. 피부가 벗겨지지 않도록 주의하였다.

시험, 양성 대조 및 운송 수단 대조 물질을 약 1" x 1"의 투여 부위 내에 투여하였다. 2개의 투여 부위는 좌측 등 표면을 따라 위치하였다. 운송 수단 또는 양성 대조 물질을 주둥이 부위에 투여하고, 저투여 시험 물질을 꼬리 부위에 투여하였다. 2개의 투여 부위는 우측 등 표면을 따라 위치하였다. 중간 투여 시험 물질을 주둥이 부위에 투여하고, 고투여 시험 물질을 꼬리 부위에 투여하였다. 칼라(collars)를 투여 후 즉시 약 2 시간 동안 동물에게 배치하였다. 칼라를 배치한 기간을 가공하지 않은 데이터로서 기록하였다.

모든 동물에 대하여 1일 2회 치사율(mortality), 사망률(morbidity) 및 식품(food)과 물의 유용성(availability)에 대하여 관찰하였다. 상기 부위의 홍반 및 부종을 최초 투여 이전과, 각 투여 후 약 24시간 (그 다음 계획된 투여 이전) 및 7일의 회복 기간 동안 매일 평가하였다. 연구 중에 피부 관찰과 같은 시간에 임상 신호에 대한 관찰을 매일 실시하였다. 수취한 다음날, 무작위화 이전, 1일, 7일 및 14일의 시험 물질 투여 이전 및 검시 (8일 및 15일)에 체중을 측정하여 기록하였 다. 수취시 및 무작위 이전에 측정한 체중은 보고되지 않지만, 연구에 보관된다. 임상 병리 변수를 평가하기 위하여 혈액 시료 (4-6 mL)를 경부 또는 다른 적당한 혈관으로부터 종결 시에 6 동물/그룹과 회복기의 3 동물/그룹으로부터 채취할 것이다.

7일째에 투여 후 약 2 시간이 되었을 때 시험 물질의 혈장 농도를 결정하기 위하여 경부 또는 다른 적당한 혈관으로부터 추가의 혈액 시료 (대략 1mL)를 채취하였다. 시료를 칼륨 EDTA를 함유하는 튜브에 넣고, 원심 분리할 때까지 얼음 블록 위에 보관하였다. 혈액 채취 전에 동물을 금식시키지 않았다. 시료를 조사할 때까지 -70℃에 보관하였다.

모든 동물에 대하여 수의 병리학에서 승인된 절차에 따라 완전한 검시 조사를 실시하였다. 귀 혈관/동맥 또는 다른 적당한 혈관을 통하여 나트륨 펜토바비탈계 안락사 용액으로 마취제 과다 투여하여 안락사시키고, 대퇴부 맥관을 절단하여 방혈시켰다. 동물을 크기를 포함하여 외적 비정상성을 주의깊게 조사하였다. 복부 정중선 절개로부터 피부를 반사시키고, 모든 비정상성을 확인하고, 죽기 전(ante-mortem)에 발견된 사항과 서로 관련시켰다. 복부, 흉부 및 두개골 공동(cavities)의 비정상성을 조사하고, 기관들을 제거하여 조사하고, 필요한 경우, 중성 완충 포르말린에 넣었다. 투여 부위 (동물당 4), 신장 및 모든 전체적 손상으로부터의 조직 단면에 대한 고정 헤마톡실린 및 에오신-염색 파라핀 단면(sections)에 대한 현미경 조사를 하였다.

주요 연구 동물의 경우 8일 및 회복 동물의 경우 15일의 검시의 시간에, 동 물당 4개의 투여 부위를 확인하였다. 각 투여 부위의 약 반 정도를 절제한 다음, 조직학적 처리에 대하여 앞에서 언급한 바와 같이 수집하여 보관하였다. 각 투여 부위의 대략 나머지 반은 동물에게 아직 그대로 두고, 다음 절차를 수행하였다. 투여 부위를 3개의 에탄올 거즈로 닦아내고, 완전히 건조시켰다. 테입 (3M

패킹 테입 또는 이의 동등물)을 각 투여 부위에 10회 적용하였다. 도달(reach) 적용을 위하여 깨끗한 테입 조각을 사용하였다. 그 다음, 남아 있는 투여 부위를 가위로 절제하였다. 각 투여 부위와 동물 사이에 가위를 아세톤 또는 에탄올로 세정하였다. 투여 부위 제거 순서는 운송 수단 또는 양성 대조 부위, 저투여 부위, 중간 투여 부위 및 고투여 부위이었다. 1 cm² 조직을 각 투여 부위로부터 절제하였다. 조직 시료의 무게를 재고, 기록하였다. 피부 펀치를 가위로 개개의 적절한 크기의 섬광 약병에 잘게 썰어 넣었다. 냉각시킨 포스페이트-완충 식염수 (5mL)를 섬광 약병에 가하였다. 그 다음, 조직을 기계적 균질기를 이용하여 20초 펄스로 균질화하였다. 균질물을 대략 -20℃에서 급속 냉동시켰다.

결론

피부 과민 반응 및 현미경 관찰 사항에 따르면, 시험 물질 중의 한 가지는 운송 수단 젤 내에서 과민 반응이 없었으나, 운송 수단 연고에서는 가벼운 정도에서 적당한 정도까지의 과민 반응이 있었다. 두 번째 시험 물질은 운송 수단 젤에서 아주 조금 과민 반응성이었고, 운송 수단 연고로 배합된 경우에는 가벼운 과민 반응이 있었다.

실시예 83

국소 젤 약학적 조성물의 제조

이 실시예는 화학식 1의 활성 화합물을 함유하는 대표적인 국소 젤 조성물의 제조 방법을 예시한다.

국소 젤 조성물은 다음과 같은 조성을 갖도록 제조된다.

*X = 0.01% 내지 1.0% 범위의 화합물

본 명세서에 따라 제조되는 것들과 같은 기타의 화학식 1의 화합물은 이 실시예의 젤 배합물 제조 방법에 있어서 활성 화합물로서 사용될 수 있다.

또한, 다음 성분들의 적합성이 이 배합물의 개발 중에 평가되었다.

이소프로필 미스리테이트 (mysritate) (용매/공용매/침투력 개선제),

폴리에틸렌 글리콜, 트리아세틴 (용매),

세틸 알코올 및 스테아릴 알코올 [경화제(stiffening agents)],

카보머 (점도 향상제) 및

Tweens, Spans (유화제).

실시예 84

국소 연고 약학적 조성물의 제조

이 실시예는 화학식 1의 활성 화합물을 함유하는 대표적인 국소 연고 조성물의 제조 방법을 예시한다.

국소 연고 조성물은 다음과 같은 조성을 갖도록 제조된다.

*X = 0.01% 내지 1.0% 범위의 화합물

본 명세서에 따라 제조되는 것들과 같은 기타의 화학식 1의 화합물은 이 실시예의 연고 배합물 제조 방법에 있어서 활성 화합물로서 사용될 수 있다.

이소프로필 미스리테이트 (용매/공용매/침투력 개선제),

폴리에틸렌 글리콜, 트리아세틴 (용매),

세틸 알코올 및 스테아릴 알코올 (경화제),

카보머 (점도 향상제) 및

Tweens, Spans (유화제).

Claims

화학식 1 화합물 및 약학적으로 허용되는 이들의 염:

[화학식 1]

식 중에서,

Y^1A와 Y^1B는 독립적으로 Y¹이고,

R^X1과 R^X2는 독립적으로 R^X이고,

Y¹는 =O, -O(R^X), =S, -N(R^X), -N(O)(R^X), -N(OR^X), -N(O)(OR^X) 또는 -N(N(R^X)(R^X))이고,

R^X는 독립적으로 R¹, R², R⁴, W³ 또는 보호기이고,

R¹은 독립적으로 -H 또는 탄소 원자 1 내지 18개의 알킬이고,

R²는 독립적으로 R³ 또는 R⁴이고, 여기서 각각의 R⁴는 독립적으로 0 내지 3개 의 R³기로 치환되거나, 또는 1개의 탄소 원자에서 서로 결합하여 2개의 R²기가 3 내지 8개의 탄소로 이루어진 고리를 형성하며, 상기 고리는 0 내지 3개의 R³기로 치환될 수 있는 것이고,

R³은 R^3a, R^3b, R^3c 또는 R^3d인데, 단 R³이 헤테로 원자에 결합된 경우에 R³은 R^3c 또는 R^3d이고,

R^3a는 -H, -F, -Cl, -Br, -I, -CF₃, -CN, N₃ _,-NO₂ _, 또는 -OR⁴이고,

R^3b는 =O, -O(R⁴), =S, -N(R⁴), -N(O)(R⁴), -N(OR⁴), -N(O)(OR⁴) 또는 -N(N(R⁴)(R⁴))이고,

R^3c는 -R⁴, -N(R⁴)(R⁴), -SR⁴, -S(O)R⁴, -S(O)₂R⁴, -S(O)(OR⁴), -S(O)₂(OR⁴), -OC(R^3b)R⁴, -OC(R^3b)OR⁴, -OC(R^3b)(N(R⁴)(R⁴)), -SC(R^3b)R⁴, -SC(R^3b)OR⁴, -SC(R^3b)(N(R⁴)(R⁴)), -N(R⁴)C(R^3b)R⁴, -N(R⁴)C(R^3b)OR⁴, -N(R⁴)C(R^3b)(N(R⁴)(R⁴)), W³ 또는 -R⁵W³이고,

R^3d는 -C(R^3b)R⁴, -C(R^3b)OR⁴, -C(R^3b)W³, -C(R^3b)OW³ 또는 -C(R^3b)(N(R⁴)(R⁴))이고,

R⁴는 -H, 또는 탄소 원자 1 내지 18개의 알킬, 탄소 원자 2 내지 18개의 알케닐, 또는 탄소 원자 2 내지 18개의 알키닐이고,

R⁵는 탄소 원자 1 내지 18개의 알킬렌, 탄소 원자 2 내지 18개의 알케닐렌 또는 탄소 원자 2 내지 18개의 알키닐렌이고,

W³은 W⁴ 또는 W⁵이고,

W⁴는 R⁶, -C(R^3b)R⁶, -C(R^3b)W⁵, -SO_M2R⁶ 또는 -SO_M2W⁵이고, 여기서 R⁶은 R⁴이고, 여기서 각각의 R⁴는 0 내지 3개의 R³기로 치환되는 것이며,

W⁵는 카보사이클 또는 헤테로사이클이고, 여기서 W⁵는 독립적으로 0 내지 3개의 R²기로 치환되는 것이고,

M2는 0, 1 또는 2이다.
제1항에 있어서, R^X1은 H인 화합물.
제2항에 있어서, R^X2는 W³인 화합물.
제3항에 있어서, W³은 W⁵인 화합물.
제4항에 있어서, W⁵는 사이클로프로필인 화합물.
제5항에 있어서, 다음 화학식 1A인 화합물.

[화학식 1A]
제6항에 있어서, Y^1A와 Y^1B는 -N(R^X)인 화합물.
제7항에 있어서, R^X는 R²인 화합물.
제8항에 있어서, R²는 R^3d로 치환된 R⁴인 화합물.
제9항에 있어서, R⁴는 R^3d로 치환된 에틸인 화합물.
제10항에 있어서, R^3d는 -C(R^3b)OR⁴인 화합물.
제11항에 있어서, R^3b는 =O인 화합물.
제12항에 있어서, R⁴는 프로필인 화합물.
제13항에 있어서, R⁴는 n-프로필인 화합물.
제14항에 있어서, 다음 화학식의 화합물.
제13항에 있어서, R⁴는 i-프로필인 화합물.
제16항에 있어서, 다음 화학식의 화합물.
제10항에 있어서, R^3d는 -C(R^3b)OW³인 화합물.
제18항에 있어서, R^3b는 =O인 화합물.
제19항에 있어서, W³은 W⁵인 화합물.
제20항에 있어서, W⁵는 카보사이클인 화합물.
제9항에 있어서, R⁴는 R^3d로 치환된 프로필인 화합물.
제22항에 있어서, R^3d는 -C(R^3b)OR⁴인 화합물.
제23항에 있어서, R^3b는 =O인 화합물.
제24항에 있어서, R⁴는 에틸인 화합물.
제25항에 있어서, 다음 화학식의 화합물.
제24항에 있어서, R⁴는 부틸인 화합물.
제27항에 있어서, R⁴는 n-부틸인 화합물.
제28항에 있어서, 다음 화학식의 화합물.
제24항에 있어서, R⁴는 프로필인 화합물.
제30항에 있어서, R⁴는 i-프로필인 화합물.
제31항에 있어서, 다음 화학식의 화합물.
제8항에 있어서, R²는 독립적으로 2개의 R³기로 치환된 R⁴인 화합물.
제33항에 있어서, R⁴는 2개의 R³기로 치환된 메틸인 화합물.
제34항에 있어서, 1개의 R³기는 R^3c인 화합물.
제35항에 있어서, R^3d는 -R⁵W³인 화합물.
제36항에 있어서, R⁵는 메틸렌인 화합물.
제37항에 있어서, W³은 W⁵인 화합물.
제38항에 있어서, W⁵는 페닐인 화합물.
제35항에 있어서, 다른 1개의 R³기는 R^3d인 화합물.
제40항에 있어서, R^3d는 -C(R^3b)OR⁴인 화합물.
제41항에 있어서, R^3b는 =O인 화합물.
제42항에 있어서, R⁴는 부틸인 화합물.
제43항에 있어서, R⁴는 i-부틸인 화합물.
제44항에 있어서, 다음 화학식의 화합물.
제6항에 있어서, Y^1A는 -N(R^X)인 화합물.
제46항에 있어서, R^X는 R²인 화합물.
제47항에 있어서, R²는 R^3d로 치환된 R⁴인 화합물.
제48항에 있어서, R⁴는 R^3d로 치환된 에틸인 화합물.
제49항에 있어서, R^3d는 -C(R^3b)OR⁴인 화합물.
제50항에 있어서, R^3b는 =O인 화합물.
제51항에 있어서, R⁴는 프로필인 화합물.
제52항에 있어서, R⁴는 i-프로필인 화합물.
제46항에 있어서, Y^1B는 -N(R^X)인 화합물.
제54항에 있어서, R^X는 R²인 화합물.
제55항에 있어서, R²는 독립적으로 2개의 R³기로 치환된 R⁴인 화합물.
제56항에 있어서, R⁴는 2개의 R³기로 치환된 메틸인 화합물.
제57항에 있어서, 1개의 R³기는 R^3c인 화합물.
제58항에 있어서, R^3c는 -R⁵W³인 화합물.
제59항에 있어서, -R⁵-는 메틸렌인 화합물.
제60항에 있어서, W³은 W⁵인 화합물.
제61항에 있어서, W⁵는 페닐인 화합물.
제58항에 있어서, 다른 1개의 R³기는 R^3d인 화합물.
제63항에 있어서, R^3d는 -C(R^3b)OR⁴인 화합물.
제64항에 있어서, R^3b는 =O인 화합물.
제65항에 있어서, R⁴는 부틸인 화합물.
제66항에 있어서, R⁴는 i-부틸인 화합물.
제67항에 있어서, 다음 화학식의 화합물.
제63항에 있어서, R^3d는 -C(R^3b)OW³인 화합물.
제69항에 있어서, R^3b는 =O인 화합물.
제70항에 있어서, W³은 W⁵인 화합물.
제71항에 있어서, W⁵는 카보사이클인 화합물.
제6항에 있어서, Y^1B는 -O(R^X)인 화합물.
제73항에 있어서, Y^1B는 -O(W³)인 화합물.
제74항에 있어서, W³은 W⁵인 화합물.
제75항에 있어서, W⁵는 카보사이클인 화합물.
제76항에 있어서, 상기 카보사이클은 페닐인 화합물.
제77항에 있어서, 다음 화학식의 화합물.
제78항에 있어서, Y^1A는 -N(R^X)인 화합물.
제79항에 있어서, R^X는 R²인 화합물.
제80항에 있어서, R²는 R^3d로 치환된 R⁴인 화합물.
제81항에 있어서, R⁴는 R^3d로 치환된 에틸인 화합물.
제82항에 있어서, R^3d는 -C(R^3b)OR⁴인 화합물.
제83항에 있어서, R^3b는 =O인 화합물.
제84항에 있어서, R⁴는 프로필인 화합물.
제85항에 있어서, R⁴는 n-프로필인 화합물.
제86항에 있어서, 다음 화학식의 화합물.
제81항에 있어서, R⁴는 R^3d로 치환된 프로필인 화합물.
제88항에 있어서, R⁴는 R^3d로 치환된 n-프로필인 화합물.
제89항에 있어서, R^3d는 -C(R^3b)OR⁴인 화합물.
제90항에 있어서, R^3b는 =O인 화합물.
제91항에 있어서, R⁴는 부틸인 화합물.
제92항에 있어서, R⁴는 n-부틸인 화합물.
제93항에 있어서, 다음 화학식의 화합물.
제79항에 있어서, R^X는 R²인 화합물.
제95항에 있어서, R²는 R^3c와 R^3d로 치환된 R⁴인 화합물.
제96항에 있어서, R⁴는 R^3c와 R^3d로 치환된 에틸인 화합물.
제97항에 있어서, R^3c는 -R⁵W³인 화합물.
제98항에 있어서, -R⁵는 메틸렌인 화합물.
제99항에 있어서, W³은 W⁵인 화합물.
제100항에 있어서, W⁵는 카보사이클인 화합물.
제101항에 있어서, 상기 카보사이클은 페닐인 화합물.
제102항에 있어서, R^3d는 -C(R^3b)OR⁴인 화합물.
제103항에 있어서, R^3b는 =O인 화합물.
제104항에 있어서, R⁴는 에틸인 화합물.
제105항에 있어서, 다음 화학식의 화합물.
제6항에 있어서, Y^1A와 Y^1B는 -O(R^X)인 화합물.
제2항에 있어서, R^X2는 R⁴인 화합물.
제108항에 있어서, R⁴는 알킬인 화합물.
제108항에 있어서, R⁴는 알케닐인 화합물.
제108항에 있어서, R⁴는 알키닐인 화합물.
제110항에 있어서, R⁴는 2-프로페닐인 화합물.
제2항에 있어서, R^X2는 R²인 화합물.
제113항에 있어서, R²는 1개의 R³으로 치환된 R⁴인 화합물.
제114항에 있어서, R⁴는 1개의 R³으로 치환된 메틸인 화합물.
제115항에 있어서, R³은 R^3a인 화합물.
제116항에 있어서, R^3a는 -CF₃인 화합물.
제115항에 있어서, R⁴는 -CH₂-CF₃인 화합물.
제1항에 있어서, 항증식제로 사용되는 것인 화합물.
제1항에 있어서, 세포 자멸제로 사용되는 것인 화합물.
제1항에 있어서, 항 HPV 약제로 사용되는 것인 화합물.
제1항에 있어서, 국소 항 HPV 약제로 사용되는 것인 화합물.
제1항에 있어서, 항증식제로 사용되는 것인 화합물.
제1항에 있어서, 세포 자멸제로 사용되는 것인 화합물.
유효량의 제1항의 화합물 또는 약학적으로 허용되는 이들의 염과, 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약학적 조성물.
제125항에 있어서, 상기 조성물은 젤 조성물인 약학적 조성물.
제125항에 있어서, 상기 조성물은 연고 조성물인 약학적 조성물.
유효량의 제1항의 화합물 또는 약학적으로 허용되는 이들의 염 및 유효량의 1종 이상의 항바이러스제와, 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약학적 조성물.
제128항에 있어서, 상기 조성물은 젤 조성물인 약학적 조성물.
제128항에 있어서, 상기 조성물은 연고 조성물인 약학적 조성물.