KR20060054252A - 약물의 캐리어로서 유용한 IgG Fc 단편 및 그의제조방법 - Google Patents
약물의 캐리어로서 유용한 IgG Fc 단편 및 그의제조방법 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 약물의 캐리어로 유용한 IgG Fc 단편, 이를 발현하기 위한 재조합 벡터, 상기 재조합 벡터에 의해 형질전환된 형질전환체 및 상기 형질전환체를 배양하여 IgG Fc 단편을 제조하는 방법에 관한 것이다. 본 발명에 의한 Fc 단편을 임의의 약물과 결합할 경우 결합되는 약물의 생체내 지속성을 향상시킬 뿐 아니라 생체내 활성 감소를 최소화할 수 있다.
IgG Fc 단편, 약물의 캐리어
Description
도 1은 면역글로불린 Fc를 대장균에서 발현 후 비-환원조건에서 웨스턴 블랏팅으로 분석한 결과이고,
도 2 및 3은 면역글로불린 Fc를 15% 크라이테리온 겔(criterion gel, Bio-Rad사)을 사용하여 비-환원조건의 SDS-PAGE 겔과 환원조건의 SDS-PAGE 겔에 전개시킨 결과이고,
도 4은 면역글로불린을 파파인으로 절단하여 얻은 면역글로불린 Fc 단편을 크로마토그래피로 정제한 결과이고,
도 5는 정제된 면역글로불린 Fc 단편을 SDS-PAGE로 분석한 결과이고,
레인 M: 분자량 크기 마커, 레인 1: IgG, 레인 2: Fc
도 6은 커플링 반응 후 생성된 IFNα-PEG-Fc(A), 17Ser-G-CSF-PEG-Fc(B) 및 EPO-PEG-Fc(C) 결합체를 SDS-PAGE로 분석한 결과이고,
레인 M: 분자량 크기 마커, 레인 1: Fc, 레인 2: 생리활성 단백질, 레인 3: 생리활성 단백질-PEG-Fc 결합체
도 7는 커플링 반응 후 정제된 IFNα-PEG-Fc 결합체를 크기 배제 크로마토그래피로 분석한 결과이고,
도 8는 EPO-PEG-Fc 결합체를 MALDI-TOF 질량 분석기로 분석한 결과이고,
도 9a 및 도 9b는 각각 천연형 면역글로불린 Fc와 탈당쇄화 면역글로불린 Fc(deglycosylated Fc; DG Fc)의 MALDI-TOF 질량 분석기 및 SDS-PAGE로 분석한 결과이고,
도 10은 IFNα-PEG-Fc 결합체 및 IFNα-PEG-DG Fc 결합체를 MALDI-TOF 질량 분석기로 분석한 결과이고,
도 11a 내지 도 11c는 각각 IFNα-PEG-Fc 결합체, IFNα-PEG-DG Fc 및 IFNα-PEG-재조합 AG Fc 유도체 결합체를 역상 HPLC로 분석한 결과이고,
도 12는 천연형 IFNα, IFNα-40K PEG, IFNα-PEG-알부민 결합체 및 IFNα-PEG-Fc 결합체의 약물동력학 그래프이고,
도 13은 천연형 EPO, 고 당쇄화 EPO, EPO-PEG-Fc 및 EPO-PEG-AGFc 결합체의 약물동력학을 분석한 그래프이고,
도 14은 IFNα-PEG-Fc 결합체, IFNα-PEG-DG Fc 및 IFNα-PEG-재조합 AG Fc 유도체 결합체의 약물동력학을 분석한 그래프이고,
도 15는 Fab’, Fab’-S-40K PEG 연결체, Fab’-N-PEG-N-Fc 결합체 및 Fab’-S-PEG-N-Fc 결합체의 약물동력학을 분석한 그래프이고,
도 16은 Fab’, Fab’-S-40K PEG 연결체, Fab’-N-PEG-N-Fc 결합체 및 Fab’-S-PEG-N-Fc 결합체의 세포내 활성을 분석한 그래프이다.
도 17은 인간 IgG subclass에서 보체 C1q의 결합활성을 비교분석한 그래프이고,
도 18은 당쇄화된 Fc, 효소를 이용하여 당을 제거한 DG Fc 및 대장균에서 생산한 AGFc를 캐리어로 이용한 인터페론-PEG-캐리어 결합체에서의 보체 C1q의 결합활성을 비교분석한 그래프이다.
본 발명은 약물의 캐리어로서 유용한 IgG Fc 단편에 관한 것이며, 보다 구체적으로는 IgG2 Fc 및 IgG4 Fc 단편, 이의 조합(combination) 및 이의 하이브리드(hybrid)에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 상기 IgG Fc 단편을 발현시키기 위한 발현벡터, 상기 발현벡터에 의해 형질전환된 형질전환체 및 상기 형질전환체를 배양하여 면역글로불린 Fc 단편을 제조하는 방법에 관한 것이다.
과거 수많은 약학자 및 화학자들은 천연적으로 존재하는 생리활성 분자의 생체 활성을 화학적으로 변화 및/또는 변형시키고자 노력하였다. 이러한 노력의 대부분은 생리활성 물질의 특정 생체 활성을 증가시키거나, 생체 활성을 지속시키거나, 독성을 감소시키거나, 부작용을 제거 또는 감소시키거나, 특정 생리활성을 변형시키는 것이었다. 생리활성 물질을 화학적으로 변형시킬 경우 대부분은 생리활성이 제거되거나 상당히 감소되나, 경우에 따라서는 생리활성이 증가되거나 변형되기도 한다. 그러므로, 목적하는 바에 따라 생리활성을 변화시킬 수 있는 화학적 변형에 대한 연구가 많이 이루어지고 있으며, 대부분의 연구는 생리활성 물질(약물)을 생리학적으로 허용가능한 캐리어와 공유결합시키는 것이었다.
국제공개공보 제WO01/93911호에서는 다수의 산 잔기를 가지는 중합체가 약물의 캐리어로 사용된 예가 개시되어 있고, 국제특허공개 제WO03/00778호에서는 음이온 그룹을 함유하는 양쪽성 블록 공중합체를 캐리어로 사용하여 양이온성 약물의 안정성을 증가시킨 예가 개시되어 있으며, 유럽특허 제0 681 481호에서는 사이클로덱스트린과 산을 캐리어로 하여 염기성 약물의 특성을 개선시킨 기술이 개시되어 있다. 한편, 소수성 약물의 경우 생체내 안정성의 저하는 주로 소수성 약물의 낮은 수용해 특성 때문인 것으로 이러한 소수성 약물의 낮은 수용해 특성을 개선시키기 위해 지질(Lipid)를 캐리어로 사용한 기술이 국제특허공개 제WO04/064731호에 개시되어 있다. 그러나, 지금까지 면역글로불린 Fc 단편을 약물의 캐리어로 결합시킨 예는 공지되어 있지 않다.
한편, 일반적으로, 폴리펩타이드는 안정성이 낮아 쉽게 변성되고 혈액내 단백질 가수분해효소에 의해 분해되어 신장이나 간을 통해 쉽게 제거되기 때문에, 약리성분으로 폴리펩타이드를 포함하는 단백질 의약품의 혈중 농도 및 역가를 유지하기 위해서는 단백질 약물을 환자에게 자주 투여할 필요가 있다. 그러나, 대부분 주사제 형태로 환자에게 투여되는 단백질 의약품의 경우, 활성 폴리펩타이드의 혈중 농도를 유지하기 위해 자주 주사를 놓는 것은 환자에게 엄청난 고통을 야기하게 된다. 이러한 문제점을 해결하기 위해, 단백질 약물의 혈중 안정성을 증가시키고 혈중 약물 농도를 오랫동안 높게 지속시켜 약효를 극대화하려는 노력이 계속되어 왔다. 이러한 단백질 약물의 지속성 제제는 단백질 약물의 안정성을 높이는 동시에 약물 자체의 역가가 충분히 높게 유지되어야 하고 환자에게 면역반응을 유발하지 않아야 한다.
단백질을 안정화시키고 단백질 가수분해효소와의 접촉 및 신장 소실을 억제하기 위한 방법으로, 종래에는 폴리에틸렌 글리콜(polyethylene glycol: 이하 "PEG"라 약칭함)과 같이 용해도가 높은 고분자를 단백질 약물 표면에 화학적으로 부가시키는 방법이 사용되어 왔다. PEG는 목적단백질의 특정 부위 또는 다양한 부위에 비특이적으로 결합하여 용해도를 높임으로써 단백질을 안정화시키고, 단백질의 가수분해를 방지하는데 효과가 있으며 특별한 부작용도 일으키지 않는 것으로 알려져 있다(Sada et al., J. Fermentation Bioengineering 71: 137-139, 1991). 그러나, PEG의 결합에 의해 단백질의 안정성은 증가할 수 있지만 생리활성 단백질의 역가가 현저히 낮아지고, PEG의 분자량이 증가할수록 단백질과의 반응성이 낮아져 수율이 감소하는 문제가 있다.
최근에는, PEG의 양쪽 말단에 동일한 단백질 약물을 결합시킨 이중체를 만들어 활성 증가를 꾀하거나(미국특허 제5,738,846호), 서로 다른 종류의 단백질 약물을 PEG의 양쪽 말단에 결합시켜 동시에 2가지 활성을 나타내는 단백질(국제출원공개 제WO 92/16221호)도 개발되었지만, 이들은 단백질 약물의 활성을 지속시키는 면에서는 뚜렷한 효과를 보이지 못하였다.
한편, 킨스틀러 등은 과립구 콜로니 자극인자(G-CSF)와 인간 알부민을 PEG에 결합시킨 융합단백질이 증가된 안정성을 보인다고 보고하였다(Kinstler et al., Pharmaceutical Research 12(12): 1883-1888, 1995). 그러나, G-CSF-PEG-알부민 구조를 갖는 상기 문헌의 변형된 약물은 체내 잔류시간이 천연형 약물을 단독 투여한 경우에 비해 약 4배 증가하는데 불과하고, 혈중반감기 증가가 미미하여 단백질 약물의 효과적인 지속성 제제로서 실용화되지 못하고 있다.
생리활성 단백질의 생체내 안정성을 높이는 또 다른 방법으로서, 유전자 재조합에 의해 혈중 안정성이 높은 단백질 유전자와 생리활성 단백질 유전자를 연결한 후, 상기 재조합 유전자로 형질전환된 동물세포 등을 배양하여 융합단백질을 생산하는 방법이 개발되어 있다. 예를 들면, 현재까지 단백질의 안정성 증가에 가장 효과가 높은 것으로 알려져 있는 알부민 또는 그 단편을 유전자 재조합에 의해 목적하는 생리활성 단백질에 결합시켜 생산한 융합단백질이 보고되어 있다(국제출원공개 제WO 93/15199호 및 제WO 93/15200호, 유럽특허공개 제EP 413,622호). 또한, 휴먼 게놈 사이언스(Human Genome Science)사가 효모에서 생산한 인터페론 알파와 알부민의 융합단백질(제품명: Albuferon™)은 원숭이에서 인터페론의 반감기를 5시간에서 93시간으로 증가시켰지만, 변형되지 않은 인터페론에 비해 생체 활성도가 5% 미만으로 현저히 감소하는 문제가 있다(Osborn et al., J. Phar . Exp . Ther. 303(2): 540-548, 2002). 즉, 지금까지 단백질 약물의 생체 내 지속성과 안정성을 증가시키면서 생체내 활성을 동시에 유지할 수 있는 기술은 개시된 바 없다.
한편, 면역글로불린 및 이의 단편을 이용하여 단백질 약물의 안정성을 높이고자 하는 시도도 많이 이루어졌는 바, 미국특허 제5045,312호에서는 교차결합체를 이용하여 인간 성장호르몬에 혈청알부민 또는 쥐의 면역글로불린을 결합시킴으로써 변형되지 않은 성장호르몬에 비해 성장호르몬의 활성을 증가시킬 수 있음을 개시하고 있다. 또한, 단백질 약물과 면역글로불린 Fc를 융합시켜 보고자 하는 시도도 이루어졌는 데, 인터페론(대한민국 특허공개 제2003-9464호), 및 인터루킨-4 수용체, 인터루킨-7 수용체 또는 적혈구 생성인자 수용체(대한민국 특허등록 제249572호)를 면역글로불린의 Fc 단편과 융합된 형태로 포유동물에서 발현시키기도 하고, 국제특허공개 제WO 01/03737호에는 사이토카인 또는 성장인자를 펩타이드 결합을 통해 면역글로불린의 Fc 단편에 결합시킨 융합단백질을 제조하기도 하였다. 또한, 미국특허 제5116964호에서는 면역글로불린 Fc 단편의 아미노 말단 또는 카르복시 말단에 유전자 재조합 방법에 의해 융합시킨 단백질을 개시하고 있고, 미국특허 제5349053호에서는 IL-2를 면역그로불린 Fc 단편에 펩타이드 결합을 통해 융합시킨 융합단백질을 개시하고 있다.
그 외에도, 유전자 재조합에 의해 제조된 Fc 융합 단백질의 예로서 인터페론-베타 또는 그의 유도체와 면역를로불린 Fc 단편의 융합단백질(국제특허공개 제WO 0/23472호), IL-5 수용체와 면역글로불린 Fc 단편의 융합 단백질(미국특허 제5712121호)이 개시되어 있다. 그러나, 면역글로불린 Fc 단편을 이용하여 생리활성 폴리펩타이드 약물의 지속성을 개선시키고자 하는 기술은 대부분 면역글로불린 Fc 단편을 융합파트너로 사용한 기술에 초점이 맞추어져 있었을 뿐 면역글로불린 Fc 단편을 캐리어로 사용하는 기술은 지금까지 공지된 바 없다.
한편, 면역글로불린 Fc 단편의 아미노산을 변형시킨 기술도 공지되어 있는 데 미국특허 제5605690호에서는 면역글로불린 Fc 단편에서 특히 보체결합부위나 수 용체 결합부위의 아미노산을 변형시킨 Fc를 이용하여 유전자 재조합 방법에 의해 제조된 TNFR-IgG1 Fc 융합단백질을 개시하고 있다
그러나, 이러한 유전자 재조합 방법에 의해 생산된 Fc 융합 단백질은 면역글로불린 Fc 영역의 특정 부위, 즉 아미노 말단 또는 카르복시 말단에서만 단백질 융합이 가능하고 동종 이량체의 형태로만 발현되어 단량체의 형태로는 생산이 불가능하며, 당쇄화 단백질 간의 또는 비당쇄화 단백질 간의 융합만이 가능하여 당쇄화 단백질과 비당쇄화 단백질의 융합은 불가능한 단점이 있다. 또한, 융합에 의해 새로 생긴 아미노산 서열로 인하여 면역반응이 유발될 수 있을 뿐만 아니라 링커 부위에 대한 단백질 가수분해효소의 민감성이 증가될 수 있다는 문제점을 가지고 있다.
이러한 배경 하에, 본 발명자들은 상기 융합 기술의 단점을 극복하면서 약물의 생체내 지속성을 향상시키고 동시에 생체내 활성감소를 최소화하기 위한 방법을 연구중, IgG Fc 단편, 보다 구체적으로 IgG2 및 IgG4 Fc 단편이 약물과 결합될 경우 약물의 생체내 지속성을 향상시키고 생체내 활성 감소를 최소화할 수 있음을 발견하여 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 하나의 목적은 약물의 캐리어로서 유용한 면역글로불린 G 단편을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 면역글로불린 G 단편을 제조하기 위한 재조합벡터를 제공하는 것이다.
본 발명의 또다른 목적은 면역글로불린 G 단편을 제조하기 위한 재조합 벡터로 형질전환된 형질전환체를 제공하는 것이다.
본 발명의 또다른 목적은 면역글로불린 G 단편을 제조하기 위한 재조합 벡터로 형질전환된 형질전환체를 배양하여 면역글로불린 G 단편을 제조하는 방법을 제공하는 것이다.
하나의 양태로서, 본 발명은 약물의 캐리어로서 유용한 면역글로불린 G Fc 단편에 관한 것이며, 보다 바람직하게는 본 발명은 IgG2 Fc 및 IgG4 Fc 단편에 관한 것이다.
본 발명에서, “캐리어”란 약물과 함께 결합되는 물질을 의미하며 일반적으로 약물에 결합되어 약물의 생리활성을 증감시키거나 제거하게 된다. 그러나, 본 발명에서의 캐리어는 본 발명의 목적상 결합되는 약물의 생리활성의 감소를 최소화하면서 동시에 약물의 생체내 안정성은 증가시키기 위한 것이다.
이러한 약물의 캐리어로 기존에 지질(Lipid), 중합체(polymer) 등 많은 물질들이 연구되어 있었으나, 면역글로불린 Fc 단편을 이용한 기술은 공지되어 있지 않다. 즉, 본 발명은 결합되는 약물의 생체내 지속성 증진과 생체내 활성 감소의 최소화를 위한 캐리어로 여러 가능한 물질 중 특히 IgG Fc 단편을 제공함을 특징으로 하며, 보다 바람직하게는 IgG2 Fc 및 IgG4 Fc 단편을 제공함을 특징으로 한다.
본 발명에서 “면역글로불린 G(이하, ”IgG"로 혼용함)란 항원에 선택적으로 작용하여 생체 면역에 관여하는 단백질의 총칭으로 인간 및 동물로부터 기원할 수 있다. 이러한 면역글로불린의 일반구조를 살펴보면, 면역글로불린은 중쇄와 경쇄로 이루어져 있고, 중쇄 불변영역은 감마(γ), 뮤(μ), 알파(α), 델타(δ). 엡실론(ε) 타입을 가지고 서브클래스로 감마1(γ1), 감마2(γ2), 감마3(γ3), 감마4(γ4), 알파1(α1) 및 알파2(α2)를 가진다. 경쇄의 불변영역은 카파(κ) 및 람다(λ) 타입을 가진다(Coleman et al., Fundamental Immunology, 2nd Ed., 1989, 55-73). 이들에 의해 면역글로불린은 IgG, IgA, IgD, IgE 및 IgM의 아형(isotype)으로 나뉠 수 있다. IgG는 다시 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4로 나뉜다.
또한, 면역글로불린은 구조적으로 여러 단편들이 알려져 있는 데, 예로 Fab, F(ab'), F(ab')2, Fv, scFv, Fd, Fc 등이다. 면역글로불린의 단편 중 Fab는 경쇄 및 중쇄의 가변영역과 경쇄의 불변영역 및 중쇄의 첫 번째 불변영역(CH1)을 가지는 구조로 1개의 항원 결합 부위를 가진다. 면역글로불린 단편 중 Fab'는 중쇄 CH1 도메인의 C 말단에 하나 이상의 시스테인 잔기를 포함하는 힌지 영역(hinge region)을 가진다는 점에서 Fab와 차이가 있다. 단편 F(ab‘)2는 Fab'의 힌지 영역의 시스테인 잔기가 디설파이드 결합을 이루면서 생성된다. Fv는 중쇄 가변부위 및 경쇄 가변부위만을 가지고 있는 최소의 항체조각이며, scFv는 중쇄 가변부위 및 경쇄 가변부위만이 펩타이드 링커로 연결된 단일 폴리펩타이드 쇄이다. 또한, Fd 단편은 중쇄 가변영역 및 CH1 도메인으로만 구성된 단편을 의미한다.
즉, 상기와 같은 공지된 다양한 면역글로불린의 타입 및 그의 기능적, 구조 적 단편들 중 본 발명은 약물의 캐리어로서 유용한 IgG Fc 단편을 제공하고자 하며 특히 IgG2 Fc, 및 IgG4 Fc 단편을 제공함을 특징으로 한다.
본 발명의 “면역글로불린 G Fc 단편(이하, “IgG Fc 단편” 또는 “본 발명의 Fc 단편”으로 혼용함)은 면역글로불린 G의 중쇄와 경쇄 가변영역, 중쇄 불변영역 1(CH1)과 경쇄 불변영역 1(CL1)을 제외한, 중쇄 불변영역 2(CH2) 및 중쇄 불변영역 3(CH3)부분을 의미하며, 중쇄 불변영역에 힌지(hinge) 부분을 포함하기도 한다. 또한 본 발명의 IgG Fc 영역은 천연형과 실질적으로 동등하거나 향상된 효과를 갖는 한, IgG의 중쇄와 경쇄 가변영역만을 제외하고, 일부 또는 전체 중쇄 불변영역 1(CH1) 및/또는 경쇄 불변영역 1(CL1)을 포함한 확장된 Fc 단편일 수 있다. 또한, CH2 및/또는 CH3에 해당하는 상당히 긴 일부 아미노산 서열이 제거된 단편일 수도 있다.
이러한 본 발명의 Fc 단편은 천연형 아미노산 서열뿐만 아니라 이의 서열유도체(mutant)도 포함한다. 아미노산 서열 유도체란 천연 아미노산 서열중의 하나 이상의 아미노산 잔기가 결실, 삽입, 비보전적 또는 보전적 치환 또는 이들의 조합에 의하여 상이한 서열을 가지는 것을 의미한다. 예를 들면, IgG Fc의 경우 결합에 중요하다고 알려진 214 내지 238, 297 내지 299, 318 내지 322 또는 327 내지 331번 아미노산 잔기들이 변형을 위해 적당한 부위로서 이용될 수 있다. 또한, 이황화 결합을 형성할 수 있는 부위가 제거되거나, 천연형 Fc에서 N-말단의 몇몇 아미노산이 제거되거나 또는 천연형 Fc의 N-말단에 메티오닌 잔기가 부가될 수도 있는 등 다양한 종류의 유도체가 가능하다. 또한, 이펙터 기능을 없애기 위해 보체 결합부위, 예로 C1q 결합부위가 제거될 수도 있고, ADCC 부위가 제거될 수도 있다. 이러한 면역글로불린 Fc 영역의 서열 유도체를 제조하는 기술은 국제특허공개 제WO97/34631호, 국제특허공개 제96/32478호 등에 개시되어 있다.
분자의 활성을 전체적으로 변경시키지 않는 단백질 및 펩티드에서의 아미노산 교환은 당해 분야에 공지되어 있다(H.Neurath, R.L.Hill, The Proteins, Academic Press, New York, 1979). 가장 통상적으로 일어나는 교환은 아미노산 잔기 Ala/Ser, Val/Ile, Asp/Glu, Thr/Ser, Ala/Gly, Ala/Thr, Ser/Asn, Ala/Val, Ser/Gly, Thy/Phe, Ala/Pro, Lys/Arg, Asp/Asn, Leu/Ile, Leu/Val, Ala/Glu, Asp/Gly 간의 교환이다.
경우에 따라서는 인산화(phosphorylation), 황화(sulfation), 아크릴화(acrylation), 당화(glycosylation), 메틸화(methylation), 파네실화(farnesylation), 아세틸화(acetylation), 아밀화(amidation) 등으로 수식(modification)될 수도 있다.
상기 기술한 Fc 유도체는 본 발명의 Fc 단편과 동일한 생물학적 활성을 나타내나 Fc 단편의 열, pH 등에 대한 구조적 안정성을 증대시킨 유도체다.
또한, 이러한 Fc 단편은 인간 및 소, 염소, 돼지, 마우스, 래빗, 햄스터, 랫트, 기니아 픽 등의 동물의 생체내에서 분리한 천연형으로부터 얻어질 수도 있고, 형질전환된 동물세포 또는 미생물로부터 얻어진 재조합형 또는 이의 유도체 일 수 있다. 여기서, 천연형으로부터 획득하는 방법은 전체 면역글로불린을 인간 또는 동물의 생체로부터 분리한 후, 단백질 분해효소를 처리하여 얻을 수 있다. 파파인 을 처리할 경우에는 Fab 및 Fc로 절단되고, 펩신을 처리할 경우에는 pF'c 및 F(ab’)2로 절단된다. 이를 크기 배제 크로마토그래피(size-exclusion chromatography) 등을 이용하여 Fc 또는 pF'c를 분리할 수 있다. 바람직하게는 인간 유래의 Fc 단편을 미생물로부터 수득한 재조합형 IgG Fc 단편이다. 즉, 본 발명은 인간 유래의 미생물로부터 수득한 재조합형 IgG2 Fc및 IgG4 Fc 단편이 바람직하다.
또한, 본 발명의 Fc 단편은 천연형 당쇄, 천연형에 비해 증가된 당쇄, 천연형에 비해 감소한 당쇄 또는 당쇄가 제거된 형태일 수 있다. 이러한 Fc 단편의 당쇄의 증감 또는 제거에는 화학적 방법, 효소학적 방법 및 미생물을 이용한 유전공학적 방법과 같은 통상적인 방법이 이용될 수 있다. 여기서, Fc에서 당쇄가 제거된 Fc 단편은 보체(c1q)의 결합력이 현저히 저하되고, 항체-의존성 세포독성 또는 보체-의존성 세포독성이 감소 또는 제거되므로, 생체내에서 불필요한 면역반응을 유발하지 않는다. 이런 점에서 약물의 캐리어로서의 본래의 목적에 보다 부합하는 형태는 당쇄가 제거되거나 비당쇄화된 면역글로불린 Fc 단편이라 할 것이다.
이는 도 18을 통해서도 확인될 수 있는 바, 당쇄화 Fc가 비당쇄화 Fc 보다 CDC 활성이 높아 면역유발 위험이 높다고 할 수 있으므로 본 발명의 목적상 비당쇄화되거나 당쇄가 제거된 Fc 단편이 바람직하며, 보다 바람직하게는 비당쇄화된 IgG2 Fc 및 IgG4 Fc 단편, 이의 조합 및 이의 하이브리드라 할 것이다.
본 발명에서 “당쇄의 제거(Deglycosylation)”는 효소로 당을 제거한 Fc 단편을 말하며, “비당쇄화(Aglycosylation)"는 원핵동물, 바람직하게는 대장균에서 생산하여 당쇄화가 되지 않은 Fc 단편을 의미한다.
한편, 본 발명에서 “조합(combination)”이란 이량체 또는 다량체를 형성할 때, 동일 기원 단쇄 면역글로불린 Fc 단편을 암호화하는 폴리펩타이드가 상이한 기원의 단쇄 폴리펩타이드와 결합을 형성하는 것을 의미한다. 즉, IgG1 Fc, IgG2 Fc, IgG3 Fc 및 IgG4 Fc 단편으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 2개 이상의 단편으로부터 이량체 또는 다량체의 제조가 가능하다.
본 발명에서 "하이브리드(hybrid)"란 단쇄의 면역글로불린 Fc 단편내에 2개 이상의 상이한 기원의 면역글로불린 Fc 단편에 해당하는 서열이 존재함을 의미하는 용어이다. 본 발명의 경우 여러 형태의 하이브리드가 가능하다. 즉, IgG1 Fc, IgG2 Fc, IgG3 Fc 및 IgG4 Fc의 CH1, CH2, CH3 및 CH4로 이루어진 그룹으로부터 1개 내지 4개 도메인으로 이루어진 도메인의 하이브리드가 가능하며, 힌지를 포함할 수 있다.
한편, 본 발명의 도 17 및 도 18을 통해 알 수 있는 바와 같이, IgG의 여러 서브클래스 중 특히 IgG4가 보체(C1q)에 대한 결합력이 가장 낮다. 이렇게 보체에 대한 결합력이 저하되면 항체-의존성 세포독성(ADCC, Antibody-dependent cell cytotoxicity) 및 보체-의존성 세포독성(CDC, Complement-dependet cytotoxicity)이 감소 또는 제거되므로 생체내에서 불필요한 면역반응을 유발하지 않게 된다. 이러한 C1q 결합력은 IgG2 및 IgG4 Fc 단편이 IgG1 보다 낮고 이 중 IgG4 Fc 단편이 가장 낮음을 확인할 수 있다. 그러므로, 약물의 캐리어로 사용하기 위해서는 결합되는 Fc 단편의 항체-의존성 세포독성 및 보체-의존성 세포독성과 같은 이펙터 (effector) 기능이 보다 낮은 것을 사용하는 것이 바람직하므로, 본 발명의 목적상 IgG2 Fc 및 IgG4 Fc 단편이 바람직하고, 보다 바람직하게는 IgG4 Fc 단편이며, 가장 바람직하게는 서열번호 8, 10 및 23의 아미노산 서열을 가지는 Fc 단편이다.
본 발명의 또다른 양태로 본 발명은 IgG Fc 단편, 바람직하게는 IgG2 Fc 및 IgG4 Fc 단편을 암호화하는 유전자에 관한 것이고, 보다 바람직하게는 서열번호 8, 10 및 23의 아미노산을 암호화하는 유전자에 관한 것이다. 이러한 본 발명의 Fc를 암호화하는 유전자는 천연형 핵산서열뿐만 아니라 이의 서열유도체도 포함한다. 핵산서열 유도체란 천연 핵산서열중의 하나 이상의 핵산 잔기가 결실, 삽입, 비보전적 또는 보전적 치환 또는 이들의 조합에 의하여 상이한 서열을 가지는 것을 의미한다.
본 발명의 서열번호 8의 아미노산 서열을 가지는 Fc 단편을 암호화하는 유전자는 바람직하게는 서열번호 4의 핵산서열을 가지는 유전자이고, 서열번호 10의 아미노산 서열을 가지는 Fc 단편을 암호화하는 유전자는 바람직하게는 서열번호 9의 핵산서열을 가지는 유전자이며, 서열번호 23의 아미노산 서열을 가지는 Fc 단편을 암호화하는 유전자는 바람직하게는 서열번호 22의 핵산서열을 가지는 유전자이다. 본 발명의 Fc 단편을 암호화하는 핵산 서열은 하나 이상의 염기가 치환, 결실, 삽입 또는 이들의 조합에 의해 변이될 수 있다. 상기 핵산 서열은 천연에서 분리되거나 인위적으로 합성 또는 유전적 재조합 방법을 통하여 제조할 수 있다.
본 발명의 Fc 단편을 암호화하는 핵산 서열은 이를 발현하는 벡터에 의해 제 공된다.
또 다른 양태로서, 본 발명은 IgG Fc 단편을 포함하는 재조합 벡터를 제공한다.
본 발명에서 “벡터”는 숙주세포에 DNA를 도입하여 항체 또는 항체 단편을 발현시키기 위한 수단으로 플라스미드 벡터, 코즈미드 벡터, 박테리오파아지 벡터 및 아데노바이러스 벡터, 레트로바이러스 벡터, 아데노-연관 바이러스 벡터 같은 바이러스 벡터 등이 있으며, 플라스미드 벡터가 바람직하다. 본 발명의 목적상 발현벡터는 프로모터, 개시코돈, 종결코돈, 폴리아데닐화 시그널 및 인핸서 같은 발현 조절 엘리먼트 외에도 막 표적화 또는 분비를 위한 시그널서열을 포함할 수 있다.
본 발명에서, “시그널서열(signal sequence)”은 단백질의 세포질 밖으로의 수송 및 분비를 가능하게 하는 특정 아미노산 서열을 의미한다. 이러한 신호서열에는 다양한 형태가 공지되어 있으나 본 발명에서는 바람직하게는 대장균을 숙주세포로 사용하기 때문에 본 발명의 신호서열은 대장균에서 분비되는 단백질이 가지는 대장균 유래의 신호 서열인 것이 바람직하다. 한편, 대장균 유래 신호 서열에는 알카라인 포스파테이즈, 페니실리네이즈, Ipp, 열안정성 엔테로톡신 II, LamB, PhoE, PelB, OmpA 또는 말토스 결합 단백질등이 있으나, 가장 바람직하게는 열안정성 엔테로톡신 II이다.
한편, 개시 코돈 및 종결 코돈은 일반적으로 면역원성 표적 단백질을 코딩하 는 뉴클레오타이드 서열의 일부로 간주되며, 유전자 작제물이 투여되었을 때 개체에서 반드시 작용을 나타내야 하며 코딩 서열과 인프레임(in frame)에 있어야 한다. 일반 프로모터는 구성적 또는 유도성일 수 있다. 원핵 세포에는 lac, tac, T3 및 T7 프로모터가 있으나, 이로 제한되지는 않는다. 진핵세포에는 원숭이 바이러스 40(SV40), 마우스 유방 종양 바이러스(MMTV) 프로모터, 사람 면역 결핍 바이러스(HIV), 예를 들면 HIV의 긴 말단 반복부(LTR) 프로모터, 몰로니 바이러스, 시토메갈로바이러스(CMV), 엡스타인 바 바이러스(EBV), 로우스 사코마 바이러스(RSV)프로모터 뿐만 아니라, β-액틴 프로모터, 사람 헤모글로빈, 사람 근육 크레아틴, 사람 메탈로티오네인 유래의 프로모터가 있으나 이것으로 제한되지는 않는다. 또한 발현벡터는 벡터를 함유하는 숙주세포를 선택하기 위한 선택성 마커를 포함하고, 복제가능한 발현벡터인 경우 복제 기원을 포함한다. 항생제 또는 약물 내성을 부여해주는 생성물을 코드화하는 유전자가 보편적인 선택성 마커로 사용되는데 원핵세포의 경우 β-락타마아제 유전자(암피실린 내성) 및 Tet 유전자(테트라사이클린 내성) 및 진핵세포의 경우 네오마이신(G418 또는 제네티신), gpt (미코페놀산), 암피실린, 및 히그로마이신 내성 유전자에서 사용될 수 있다. 디히드로폴레이트 환원효소 마커 유전자는 다양한 숙주에서 메토트렉세이트에 의해 선택될 수 있다. 숙주의 영양요구성 마커의 유전자 생성물을 코드화하는 유전자, 예를 들어, LEU2, URA3및HIS3는 효모에서 선택성 마커로서 종종 사용된다. 그리고 바이러스(예를 들어, 바쿨로바이러스) 또는 파지 벡터, 및 레트로바이러스 벡터와 같은 숙주 세포의 게놈내로 삽입될 수 있는 벡터도 사용 가능하다.
본 발명의 목적에 부합되는 IgG Fc 단편을 제작하기 위하여 서열번호 8, 10 및 23의 아미노산을 코딩하는 유전자가 삽입된 벡터를 이용한다. 본 발명에서는 pT14S1SH-4T20V22Q(대한민국 특허 제38061호)를 출발벡터로 사용하여 서열번호 23의 아미노산을 코딩하는 서열번호 22의 유전자가 삽입된 pSTIIdCG2Fc를 제작하였고, 서열번호 8의 아미노산을 코딩하는 서열번호 4의 유전자가 삽입된 pSTIIdCG4Fc를 제작하였으며, 상기 pSTIIdCG4Fc 플라스미드를 주형으로 하여 PCR을 수행하여 상기 PCR에 의해 증폭된 유전자 중 이량체 형성에 필요한 힌지영역이 제거된 서열번호 10의 아미노산 서열을 코딩하는 서열번호 9의 유전자가 삽입된 pSTIIG4Mo를 제작하였다.
또 다른 양태로서 본 발명은 상기 재조합 벡터로 형질전환된 형질전환체에 관한 것이다.
숙주세포에 따라서 단백질의 발현량과 수식 등이 다르게 나타나므로, 목적에 가장 적합한 숙주세포를 선택하여 사용하면 된다. 숙주세포로는 대장균(Escherichia coli), 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis), 스트렙토마이세스(Streptomyces), 슈도모나스(Pseudomonas), 프로테우스 미라빌리스(Proteus mirabilis) 또는 스타필로코쿠스(Staphylococcus)와 같은 원핵 숙주 세포가 있으나 이로 제한되는 것은 아니다. 또한, 진균(예를 들어, 아스페르길러스(Aspergillus)), 효모(예를 들어, 피치아 파스토리스(Pichia pastoris), 사카로마이세스 세르비시애(Saccharomyces cerevisiae), 쉬조사카로마이세 스(Schizosaccharomyces), 뉴로스포라 크라사(Neurospora crassa)등과 같은 하등 진핵 세포, 곤충 세포, 식물 세포, 포유동물 등을 포함하는 고등 진핵생물 유래의 세포를 숙주세포로 사용할 수 있 수 있다. 그러나, 본 발명의 목적상 면역글로불린 Fc 단편이 당쇄화되지 않는 것이 유리하므로 원핵세포를 사용하는 것이 바람직하며, 특히 대장균을 사용하는 것이 가장 바람직하다.
본 발명에서 숙주세포로의 “형질 전환” 또는/및 “형질감염”은 핵산을 유기체, 세포, 조직 또는 기관에 도입하는 어떤 방법도 포함되며 당 분야에서 공지된 바와 같이 숙주 세포에 따라 적합한 표준 기술을 선택하여 수행할 수 있다. 이런 방법에는 전기충격유전자전달법(electroporation), 원형질 융합, 인산 칼슘(CaPO4)) 침전, 염화 칼슘(CaCl2) 침전, 실리콘 카바이드 섬유 이용한 교반, 아그로 박테리아 매개된 형질전환, PEG, 덱스트란 설페이트, 리포펙타민 및 건조/억제 매개된 형질전환 방법 등이 포함되나 이로 제한되지 않는다. 예를 들어 염화칼슘법을 이용하는 칼슘 처리 또는 일렉트로포레이션은 일반적으로 원핵세포에 대해 사용된다( (Sambrook et al., 1989, Molecular Cloning: A Laboratory Manual (New York: Cold Spring Haror Laboratory Press) 아그로박테리움 투메파시엔스(Agrobacterium tumefaciens)을 사용한 형질감염은 특정 식물 세포의 형질전환에 사용된다(Shaw et al.,1983, Gene,23:315) 국제 공개특허 WO 89/05859). 세포벽이 없는 포유동물 세포의 경우, 인산칼슘 침전법을 사용할 수 있다(Graham et al, 1978, Virology, 52:456-457). 포유동물 숙주세포로의 형질전환의 일반적인 방법 및 특징은 미국 특허 제4,399,216호에 기재되어 있다. 효모 내로의 형질전환은 일 반적으로 반 솔링겐(Van Solingen) 등의 문헌(J. Bact. ,1977, 130:946) 및 히시아오(Hsiao) 등의 문헌(Proc. Natl. Acad. Sci.(USA), 1979, 76:3829)의 방법에 따라 수행된다.
상기 본 발명에 따른 발현벡터가 숙주세포로 형질전환된 본 발명의 형질전환체는 HM10932(pSTIIdCG4Fc 도입 형질전환체), HM10933(pSTIIG4Mo 도입 형질전환체) 및 HM10936(pSTIIdCG2Fc 도입 형질전환체)이다.
또 다른 양태로서, 본 발명은 IgG Fc 단편, 바람직하게는 IgG2 Fc, IgG4 Fc 단편, 이의 조합 및 이의 하이브리드를 발현할 수 있는 벡터로 형질전환된 형질전환체를 적절한 조건에서 배양하여 본 발명의 면역글로불린 단편을 제조하는 방법을 제공한다.
상기 면역글로불린 단편 제조에서 형질전환체의 배양은 당업계에 알려진 적당한 배지와 배양조건에 따라 이루어질 수 있다. 이러한 배양과정은 당업자라면 선택되는 균주에 따라 용이하게 조정하여 사용할 수 있다.
형질전환체를 배양하여 수득한 본 발명의 면역글로불린 단편은 정제하지 않은 상태로 사용될 수 있으며 추가로 다양한 통상의 방법, 예를 들면 투석, 염 침전 및 크로마토그래피 등을 이용하여 고순도로 정제하여 사용될 수 있다. 그 중에서 크로마토그래피를 이용하는 방법이 가장 많이 사용되며, 칼럼의 종류와 순서의 선택에는 어느 경우에나 적용될 수 있는 법칙은 없고 항체의 목적 단백질의 특성, 배양방법 등에 따라 이온교환 크로마토그래피, 크기배제크로마토그래피, 친화성 크로 마토그래피, 단백질-A 친화 칼럼 등에서 선택할 수 있다. 본 발명에서는 단백질-A 친화 칼럼(protein-A affinity column), SP 세파로즈 FF 컬럼 등을 사용하여 정제하였다.
이와 같이 하여 얻어지는 Fc 단편이 유리체로 얻어진 경우에는 자체 공지된 방법 또는 이에 준하는 방법에 의해 염으로 변환할 수 있고, 반대로 염으로 얻어진 경우에는 자체 공지된 방법 또는 이에 준하는 방법에 의해 유리체 또는 다른 염으로 변환할 수 있다. 그리고, 재조합체가 생산하는 Fc 단편을, 정제전 또는 정제후에 적당한 단백질 수식 효소를 작용시킴으로써 임의로 수식을 가하거나, 폴리펩티드를 부분적으로 제거할 수도 있다. 단백질 수식 효소로서는, 예컨대 트립신, 키모트립신, 아르기닐 엔드펩티다아제, 프로테인키나아제, 글리코시다아제 등이 사용된다.
이렇게 제조된 본 발명의 Fc 단편은 약물의 캐리어로 작용하여 약물과 결합체를 형성한다.
본 발명에서 “약물 결합체” 또는 “결합체”는 하나 이상의 약물이 하나 이상의 면역글로불린 Fc와 상호 연결되어 있는 것을 의미한다.
본 발명에서 “약물”이란 인간이나 동물에게 투여될 경우 치료적 활성을 나타내는 물질을 의미하며, 폴리펩타이드, 화합물, 추출물, 핵산 등을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 약물은 바람직하게는, 폴리펩타이드 약물이다.
본 발명에서, “생리활성 폴리펩타이드 약물”, “폴리펩타이드 약물” 및 “단백질 약물”은 동일한 의미로 사용되고 있으며 생체내에서 다양한 생리적 현상에 길항작용을 나타내는 생리활성형인 것을 특징으로 한다.
이러한 폴리펩타이드 약물은 쉽게 변성되거나 생체내에 존재하는 단백질 분해효소에 의해 잘 분해되는 등의 이유로 장시간에 걸쳐 생리학적 활성을 지속할 수 없는 단점이 있다. 그러나, 본 발명의 면역글로불린 Fc 단편과 폴리펩타이드를 결합시킨 결합체의 경우, 약물의 구조적 안정성이 증가하고 분해 반감기가 증가하게 된다. 그러나, Fc 영역의 결합에 의한 폴리펩타이드의 생리학적 활성의 감소는 기타 공지된 다른 폴리펩타이드 약물 제제에 비해 아주 경미하다 할 것이다. 그러므로, 기존의 폴리펩타이드 약물의 생체내 이용률에 비해 본 발명의 폴리펩타이드 및 본 발명 Fc 단편의 결합체는 생체내 이용률이 현저히 증가하였음을 특징으로 한다. 이는 하기 본 발명의 실시예를 통해서도 명백히 개시되고 있는 바, 본 발명의 Fc 단편이 결합된 IFNα, G-CSF, hGH 등이 PEG만 결합되거나 PEG와 알부민이 결합된 기존의 제제에 비해 약 2배 내지 약 6배 정도 증가하였음을 확인할 수 있다(표8, 표9 및 표10)
한편, 본 발명의 Fc 단편과 단백질의 결합은 종래의 재조합적인 방법에 의한 융합이 아닌 것을 특징으로 한다. 면역글로불린 Fc 영역과 약물로 사용되는 활성 폴리펩타이드가 재조합적인 방법에 의해 융합된 형태는, Fc 영역의 N 말단 또는 C 말단에 폴리펩타이드가 펩타이드 결합으로 연결된 형태로, 이를 코딩하는 핵산 서열에서 하나의 폴리펩타이드로 발현되어 폴딩된다.
단백질의 생리학적 기능체로서의 활성이 구조에 의해 결정된다는 점에 기초 할 때, 이는 융합 단백질 활성의 급격한 감소를 초래한다. 따라서 폴리펩타이드 약물이 Fc와 재조합적인 방법에 의한 융합될 경우, 구조적 안정성이 증가하였다 하더라도 생체내 이용률 면에서 효과가 없다. 또한, 이런 융합 단백질은 미스폴딩(misfolding) 되어 응집체의 형태로 발현되는 경향이 있으므로, 단백질 제조, 분리의 수율 면에서 경제적이지 않다. 또한, 활성형 폴리펩타이드가 당쇄화된 형태일 경우, 진핵세포에서 발현시켜야 되고, 이럴 경우 Fc 또한 당쇄화되므로 생체내에서 부적절한 면역반응을 야기할 수도 있다.
즉, 본 발명에 의해서만이 비로소 당쇄화된 활성형 폴리펩타이드를 비당쇄화된 면역글로불린 Fc 영역과 연결시킨 결합체가 가능하게 되었고, 최상의 시스템에서 각각이 제조, 분리되므로 단백질 획득의 수율을 높일 수 있는 등 상기 문제점을 모두 극복할 수 있다.
본 발명의 면역글로불린 Fc 단편과 연결 가능한 단백질 약물의 예로는, 간 성장호르몬, 성장호르몬 방출 호르몬, 성장호르몬 방출 펩타이드, 인터페론류와 인터페론 수용체류(예: 인터페론-알파, -베타 및 -감마, 수용성 타입 I 인터페론 수용체 등), 과립구 콜로니 자극인자(G-CSF), 과립구-마크로파지 콜로니 자극인자(GM-CSF), 글루카콘-유사 펩타이드류 (GLP-1등), 지프로테인 관련수용체 (G-protein-coupled receptor), 인터루킨류(예: IL-1 수용체, IL-4 수용체 등), 효소류(예: 글루코세레브로시다제(glucocerebrosidase), 이두로네이트-2-설파타제(iduronate-2-sulfatase), 알파-갈락토시다제-A, 아갈시다제 알파(agalsidase alpha), 베타, 알파-L-이두로니다제(alpha-L-iduronidase), 뷰티릴콜린에스터라 제(butyrylcholinesterase), 키티나제(chitinase), 글루타메이트 디카르복실라제(glutamate decarboxylase), 이미글루세라제(imiglucerase), 리파제(lipase), 유리케이즈(uricase), 혈소판-활성인자 아세틸하이드롤라제(platelet-activating factor acetylhydrolase), 중성 엔도펩티다제(neutral endopeptidase), 마이엘로퍼옥시다제(myeloperoxidase) 등), 인터루킨 및 사이토카인 결합 단백질류(예: IL-18bp, TNF-결합 단백질 등), 마크로파지 활성인자, 마크로파지 펩타이드, B 세포인자, T 세포인자, 단백질 A, 알러지 억제인자, 세포 괴사 당단백질, 면역독소, 림포독소, 종양 괴사인자, 종양 억제인자, 전이 성장인자, 알파-1 안티트립신, 알부민, 알파-락트알부민(alpha-lactalbumin), 아포리포단백질-E, 적혈구 생성인자, 고 당쇄화 적혈구 생성인자, 안지오포이에틴류(angiopoietin), 헤모글로빈, 트롬빈(thrombin), 트롬빈 수용체 활성 펩타이드, 트롬보모듈린(thrombomodulin), 혈액인자 Ⅶ, 혈액인자 Ⅶa, 혈액인자 Ⅷ, 혈액인자 Ⅸ, 혈액인자 XIII, 플라즈미노겐 활성인자, 피브린-결합 펩타이드, 유로키나제, 스트렙토키나제, 히루딘(hirudin), 단백질 C, C-반응성 단백질, 레닌 억제제, 콜라게나제 억제제, 수퍼옥사이드 디스뮤타제, 렙틴, 혈소판 유래 성장인자, 상피세포 성장인자, 표피세포 성장인자, 안지오스타틴(angiostatin), 안지오텐신(angiotensin), 골 형성 성장인자, 골 형성 촉진 단백질, 칼시토닌, 인슐린, 아트리오펩틴, 연골 유도인자, 엘카토닌(elcatonin), 결합조직 활성인자, 조직인자 경로 억제제(tissue factor pathway inhibitor), 여포 자극 호르몬, 황체 형성 호르몬, 황체 형성 호르몬 방출 호르몬, 신경 성장인자류(예: 신경 성장인자, 모양체 신경영양인자(cilliary neurotrophic factor), 악소제네시스 인자-1(axogenesis factor-1), 뇌-나트륨 이뇨 펩타이드(brain-natriuretic peptide), 신경교 유래 신경영양인자(glial derived neurotrophic factor), 네트린(netrin), 중성구 억제인자(neurophil inhibitor factor), 신경영양인자, 뉴트린(neuturin) 등), 부갑상선 호르몬, 릴랙신, 시크레틴, 소마토메딘, 인슐린 유사 성장인자, 부신피질 호르몬, 글루카곤, 콜레시스토키닌, 췌장 폴리펩타이드, 가스트린 방출 펩타이드, 코티코트로핀 방출인자, 갑상선 자극호르몬, 오토탁신(autotaxin), 락토페린(lactoferrin), 미오스타틴(myostatin), 수용체류(예: TNFR(P75), TNFR(P55), IL-1 수용체, VEGF 수용체, B 세포 활성인자 수용체 등), 수용체 길항물질(예: IL1-Ra 등), 세포표면항원(예: CD 2, 3, 4, 5, 7, 11a, 11b, 18, 19, 20, 23, 25, 33, 38, 40, 45, 69 등), 단일클론 항체, 다중클론 항체, 항체 단편류(예: scFv, Fab, Fab', F(ab')2 및 Fd), 바이러스 유래 백신 항원 등 다양한 종류를 포함하며, 상기 예시된 종류로 한정되지 않는다. 항체 단편은 특정 항원에 결합할 수 있는 능력을 지닌 Fab, Fab’, F(ab’)2, Fd 또는 scFv일 수 있으며, 바람직하게는 Fab’이다.
특히 바람직한 생리활성 폴리펩타이드는, 질병의 치료 또는 예방의 목적으로 인체에 투여될 때 투여 빈도가 높은 인간 성장 호르몬, 인터페론류(인터페론-α, -β, -γ 등), 과립구 콜로니 자극인자, 적혈구 생성인자 및 항체 단편류 등이다. 또한, 상기 생리활성 폴리펩타이드의 천연형과 실질적으로 동등하거나 증가된 기능, 구조, 활성 또는 안정성을 갖는 한, 임의의 유도체 또는 유도체도 본 발명의 생리활성 폴리펩타이드의 범위에 포함된다. 본 발명의 가장 바람직한 폴리펩타이 드 약물은 인터페론-알파이다.
본 발명에서는 폴리펩타이드 약물 외에 다른 약물도 사용가능하며, 테트라사이클린, 미노사이클린, 독시사이클린, 오플록사신, 레보플록사신, 시프로플록사신, 클라리스로마이신, 에리쓰로마이신, 세파클러, 세포탁심, 이미페넴, 페니실린, 겐타마이신, 스트렙토마이신, 반코마이신 등의 유도체 및 혼합물에서 선택되는 항생제;메토트렉세이트, 카보플라틴, 탁솔, 시스플라틴, 5-플루오로우라실, 독소루비신, 에트포사이드,파클리탁셀, 캄토테신, 사이토신 아라비노스 등의 유도체 및 혼합물에서 선택되는 항암제; 인도메타신, 이부프로펜, 케토프로펜, 피록시캄, 플루비프로펜, 디클로페낙 등의 유도체 및 혼합물에서 선택되는 소염제; 아시콜로버, 로바빈 등의 유도체 및 혼합물에서 선택되는 항바이러스제; 및 케토코나졸, 이트라코나졸, 플루코나졸, 암포테리신-B, 그리세오풀빈 등의 유도체 및 혼합물에서 선택되는 항균제를 예시할 수 있으나 이로 한정되는 것은 아니다.
한편, 본 발명의 Fc 단편은 링커를 매개로 하여 약물과 연결된 결합체를 형성할 수 있다.
이러한 링커는 펩타이드성 링커 또는 비펩타이드성 링커 모두를 포함하나, 바람직하게는 비펩타이드성 링커이며, 보다 바람직하게는 비펩타이드성 중합체이다. 여기서, 펩타이드성 링커란 아미노산, 바람직하게는 펩티드 결합으로 연결된 1 내지 20개의 아미노산을 의미하며, 당쇄화된 형태일 수도 있다. 이러한 펩타이드성 링커는 Gly, Ser 반복 단위를 갖는 펩타이드로 T cell에 대해 면역학적으로 불활성인 펩타이드를 사용하는 것이 바람직하다. 비펩타이드성 중합체의 예로는, 폴리(에틸렌 글리콜), 폴리(프로필렌 글리콜), 에틸렌 글리콜과 프로필렌 글리콜의 공중합체, 폴리옥시 에틸화 폴리올, 폴리비닐 알콜, 폴리사카라이드, 덱스트란, 폴리비닐 에테르, PLA(poly(lactic acid)) 및 PLGA(poly(lactic-glycolic acid))와 같은 생분해성 고분자, 지질 중합체, 키틴류, 히아루론산 등을 들 수 있으며, 가장 바람직하게는 폴리(에틸렌글리콜)(PEG)등이 있다.
본 발명의 Fc 단편-약물 또는 본 발명의 Fc 단편-링커-약물은 다양한 몰비의 결합이 가능하다. 즉, 하나의 폴리펩타이드 약물에 결합하는 Fc 단편 및/또는 링커의 수는 제한되지 않는다. 그러나, 바람직하게는 본 발명의 약물 결합체에 있어 약물과 Fc 단편은 1:1 내지 10:1, 바람직하게는 1:1 내지 2:1의 몰비로 결합될 수 있다.
또한, 본 발명의 Fc 단편, 임의의 링커 및 약물의 결합은, 유전자 재조합 방법에 의해 Fc 단편과 폴리펩타이드 약물이 융합단백질 형태로 발현되는 경우의 펩타이드 결합(peptide bond)을 제외한 모든 공유 결합과 수소결합, 이온결합, 반데르발스 친화력, 소수성 상호작용 같은 종류의 모든 종류의 비공유 결합을 포함한다. 그러나, 약물의 생리활성 측면에서 공유결합인 것이 바람직하다.
또한, 본 발명의 Fc 단편, 임의의 링커 및 약물은 약물의 임의의 부위(site)와 결합이 가능하다. 한편, 본 발명의 Fc 단편 및 폴리펩타이드 약물의 경우는 N-말단, C-말단의 결합도 가능하나, 보다 바람직하게는 유리기와 결합되는 것이며, 특히 이들의 아미노 말단, 라이신의 아미노 잔기, 히스티딘의 아미노 잔기 또는 유리 시스테인 잔기에서 공유결합이 잘 형성된다.
한편, 본 발명의 Fc 단편, 임의의 링커 및 약물의 결합은 임의 방향으로 결합될 수 있다. 즉, 링커와 면역글로불린 Fc 영역의 N-말단, C-말단 및 유리기의 결합이 가능하고, 링커와 단백질 약물의 N-말단, C-말단 및 유리기의 결합이 가능하다. 링커가 펩타이드 링커일 경우 임의의 결합부위에서의 결합이 가능하다.
*또한, 본 발명의 결합체는 여러 가교제(coupling agent)로 결합이 가능하다. 이러한 가교제의 종류는 당업계에 공지되어 있으며, 예로 1,1-비스(디아조아세틸)-2-페닐에탄, 글루타르알데하이드, N-히드록시숙신이미드 에스테르, 예로, 4-아지도살리실산과의 에스테르, 이미도에스테르, 예로 디숙신이미딜 에스테르, 예로 3,3‘-디티오비스(숙신이미딜프로피오네이트) 및 이관능성(bifunctional) 말레이미드, 예로 비스-N-말레이미도-1,8-옥탄을 포함하나 이로써 제한되는 것은 아니다.
한편, 본 발명에 의한 신규 Fc 단편 및 약물의 결합체는 다양한 약제학적 조성물을 제조할 수 있다.
본 발명에서 “투여”는 어떠한 적절한 방법으로 환자에게 소정의 물질을 도입하는 것을 의미하며 상기 결합체의 투여 경로는 약물이 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여 투여될 수 있다. 복강내 투여, 정맥내 투여, 근육내 투여, 피하 투여, 피내 투여, 경구 투여, 국소 투여, 비내 투여, 폐내 투여, 직장내 투여 될 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 그러나 경구 투여시, 펩타이드는 소화가 되기 때문에 경구용 조성물은 활성 약제를 코팅하거나 위에서의 분해로부터 보호되도록 제형화하는 것이 바람직하다. 바람직하게는 주사제 형태로 투여될 수 있다. 또한, 제약 조성물은 활성 물질이 표적 세포로 이동할 수 있는 임의의 장치에 의해 투여될 수 있다.
본 발명의 결합체를 포함한 약제학적 조성물은 약제적으로 허용가능한 담체를 포함할 수 있다. 약제학적으로 허용되는 담체는 경구투여시에는 결합제, 활탁제, 붕해제, 부형제, 가용화제, 분산제, 안정화제, 현탁화제, 색소, 향료 등을 사용할 수 있으며, 주사제의 경우에는 완충제, 보존제, 무통화제, 가용화제, 등장제, 안정화제 등을 혼합하여 사용할 수 있으며, 국소 투여용의 경우에는 기제, 부형제, 윤활제, 보존제 등을 사용할 수 있다. 본 발명의 약제학적 조성물의 제형은 상술한 바와 같은 약제학적으로 허용되는 담체와 혼합하여 다양하게 제조될 수 있다. 예를 들어, 경구 투여시에는 정제, 트로키, 캡슐, 엘릭서(elixir), 서스펜션, 시럽, 웨이퍼 등의 형태로 제조할 수 있으며, 주사제의 경우에는 단위 투약 앰플 또는 다수회 투약 형태로 제조할 수 있다. 기타, 용액, 현탁액, 정제, hgksdir, 캡슐, 서방형 제제 등으로 제형할 수 있다.
한편, 제제화에 적합한 담체, 부형제 및 희석제의 예로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말디톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로즈, 폴리비닐피롤리돈, 물, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필 하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 또는 광물유 등이 사용될 수 있다. 또한, 충진제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제, 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명에 있어 Fc 단편이 캐리어로 사용된 약물의 실제 투여량은 치료할 질환, 투여 경로, 환자의 연령, 성별 및 체중, 및 질환의 중증도 등의 여러 관련 인자와 함께, 활성성분인 약물의 종류에 따라 결정된다. 본 발명의 약제학적 조성물은 생체내 지속성이 매우 우수하므로, 본 발명의 약제학적 제제의 투여 횟수 및 빈도를 현저하게 감소시킬 수 있다.
이하, 하기 실시예에 의하여 본 발명을 보다 상세하게 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐 본 발명의 범위가 이들만으로 한정되는 것은 아니다.
면역글로불린
Fc
단편의
제조실시예
<실시예 1> 인간 면역글로불린 IgG4 Fc 발현벡터의 제작
<1-1> 이량체 IgG4 Fc 발현벡터의 제작
인간 면역글로불린 IgG4의 Fc 유전자를 클로닝하기 위해, 인간의 혈액에서 수득한 혈구 세포의 RNA를 주형으로 하여 다음과 같이 RT-PCR을 수행하였다. 먼저, Qiamp RNA 혈액 키트(Qiagen사)를 사용하여 약 6 ㎖의 혈액에서 전체 RNA를 분 리한 후, 이 RNA를 주형으로 하고 One-Step RT-PCR 키트(Qiagen사)를 사용하여 유전자를 증폭하였다. 이때 상기 유전자 서열을 수득하기 위해 서열번호 1과 서열번호 2로 기재되는 프라이머 쌍을 사용하였다. 서열번호: 1은 IgG4 힌지영역의 12개(Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro, 서열번호:3) 아미노산 서열중 10번째 아미노산 서열인 세린으로부터 시작되는 서열이고, 서열번호: 2는 종결코돈을 포함하는 BamHI 제한효소 인식부위를 삽입한 것이다. 상기 프라이머 쌍으로 증폭된 유전자는 서열번호: 4로 기재되는 염기서열을 가짐을 확인하였으며 전체 IgG4 Fc 중 힌지 영역에서 세린-시스테인-프롤린으로 시작되는 아미노 말단과 CH2 및 CH3 도메인으로 구성된다. 상기에서 증폭된 IgG4 Fc 유전자 서열을 대장균 시그널서열을 이용한 발현벡터에 클로닝하기 위해, 본 발명자들에 의해 개발된 발현벡터인 pT14S1SH-4T20V22Q(대한민국 특허 제38061호)를 출발벡터로 사용하였다. 상기 발현벡터는 서열번호: 5로 기재되는 염기서열을 갖는 대장균 열안정성 엔테로톡신 시그널서열 유도체를 포함한다. 클로닝을 용이하게 하기 위해, pT14S1SH-4T20V22Q 플라스미드의 대장균 열안정성 엔테로톡신 시그널서열 유도체에 서열번호: 6 및 7의 프라이머 쌍을 사용한 특정 부위 치환 돌연변이법(site-directed mutagenesis)을 수행하여 시그널서열 마지막 아미노산을 coding하는 유전자 서열을 mutagenesis하여 StuI 제한효소 인식부위를 삽입하였으며, 염기서열 분석법을 통해 정확히 StuI 제한효소 인식부위가 생성되었음을 확인하였다. pT14S1SH-4T20V22Q 플라스미드에 StuI 제한효소 인식부위가 생성된 플라스미드를 pmSTⅡ로 명명하였다. 상기와 같이 제작된 플라스미드 pmSTⅡ를 StuI/BamHI 제한효소로 처리한 후 아가로즈 겔에 전기영동을 수행하여 대장균 열안정성 엔테로톡신 시그널서열 유도체를 포함하는 큰 단편(4.7 kb)을 회수하였다. 상기에서 증폭된 IgG4 Fc 유전자 단편을 BamHI 제한효소로 처리한 후 상기에서 회수된 발현벡터 단편에 삽입하여 플라스미드 pSTIIdCG4Fc를 제작하였다. 이 벡터에 의해 발현되는 단백질은 서열번호: 8 의 아미노산 서열을 가지며 힌지영역의 시스테인 잔기에 의한 이황화 결합에 의해 이량체로 존재하게 된다. 상기에서 제작된 발현벡터 각각을 대장균 BL21(DE3)에 형질전환시켜 대장균 형질전환체 BL21/pSTIIdCG4Fc (HM10932), 이들을 한국미생물보존센타(KCCM)에 2004년 9 월 15 일자로 기탁하였다(기탁번호: KCCM-10597).
<1-2> 단량체 IgG4 Fc 발현벡터의 제작
단량체로 발현되는 IgG4 Fc 단편을 클로닝하기 위해, 서열번호: 9 및 2을 사용하여 상기 <1-1>에서 제작한 pSTIIdCG4Fc 플라스미드를 주형으로 하여 PCR을 수행하였다. 상기의 PCR에 의해 증폭된 유전자는 IgG4 Fc 서열에서 이량체 형성에 필요한 힌지영역은 제거된 채 IgG4 CH2-3 유전자만이 증폭되어 단량체로써 존재한게 된다. 상기 <1-1>과 동일한 발현벡터 pmSTII에 동일한 과정으로 클로닝하여 플라스미드 pSTIIG4Mo를 제작하였다. 상기 발현벡터를 대장균 BL21(DE3)에 형질전환시켜 대장균 형질전환체 BL21/pSTIIG4Mo(HM10933)를 제조하였고, 이를 한국미생물보존센타(KCCM)에 2004년 9 월 15 일자로 기탁하였다(기탁번호: KCCM-10598). 상기 발현벡터에 의해 발현되는 단백질은 서열번호: 10 의 아미노산 서열을 가지며 힌지영역이 없기 때문에 CH2 도메인부터 발현되어 단량체로 존재하게 된다.
<실시예 2> 인간 면역글로불린 IgG1 Fc 발현벡터의 제작
<2-1> 이량체 IgG1 Fc 발현벡터의 제작
IgG1의 Fc 유전자를 클로닝하기 위해 상기 실시예<1-1>에서 수행한 방법과 동일하게 인간의 혈액에서 수득한 혈구 세포의 RNA를 주형으로 하여 One-Step RT-PCR 키트(Qiagen사)를 사용하여 RT-PCR을 수행하였다. 이때 상기 유전자 서열을 수득하기 위해 서열번호 11과 서열번호 12로 기재되는 프라이머 쌍을 사용하였다.
서열번호: 11은 15개 아미노산 서열(Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro; 서열번호: 13)로 구성된 힌지영역 단백질 서열중 13번째 아미노산 서열인 프롤린으로부터 시작되는 서열로서, 서열번호: 11 및 12의 프라이머 쌍으로 증폭된 유전자는 전체 IgG1 Fc 유전자 서열 중 힌지영역의 프롤린-시스테인-프롤린으로 시작되는 아미노 말단과 CH2, CH3 도메인으로 구성되며 서열번호 14의 유전자 서열을 갖는다.
상기에서 증폭된 IgG1 Fc 유전자 서열을 대장균 시그널서열을 이용한 발현벡터에 클로닝하기 위해, 앞서 기술한 pmSTII 벡터를 사용하였다. 상기 실시예 <1-1>에서 수행한 클로닝 과정과 유사한 방법으로, 플라스미드 pmSTⅡ를 StuI/BamHI 제한효소로 처리한 후 아가로즈 겔에 전기영동을 수행하여 대장균 열안정성 엔테로톡신 시그널서열 유도체를 포함하는 큰 단편(4.7 kb)을 회수하였다. 상기에서 증폭된 IgG1 Fc 유전자를 BamHI 제한효소로 처리한 후 상기에서 회수된 발현벡터 단편에 삽입하여 pSTIIdCG1Fc를 제작하였다. 이렇게 제작된 발현벡터를 통해 발현되는 산물은 숙주세포에서 발현시 서열번호 15의 아미노산 서열을 갖으며, 힌지영역의 시스테인 잔기에 의해 이황화 결합에 의한 이량체를 형성할 수 있다. 각기 제작된 발현벡터를 대장균 BL21(DE3)에 형질전환시켜 대장균 형질전환체 BL21/pSTIIdCG1Fc(HM10927)을 제조하였고, 이들을 한국미생물보존센타(KCCM)에 2004년 9월 15일자로 기탁하였다(기탁번호: KCCM-10588).
<2-2> 단량체 IgG1 Fc 발현벡터의 제작
단량체 형태로 발현되는 IgG1 Fc를 제조하기 위해 서열번호: 16 및 12의 프라이머 쌍을 사용하여 실시예 <2-1>에서 제작한 프라스미드인 pSTIIdCG1Fc를 주형으로 유전자를 증폭하였다. 증폭된 유전자 조각을 실시예 <2-1>과 동일한 방법으로 발현벡터 pmSTII에 삽입하여 서열번호 17로 기재된 염기서열을 함유하는 pSTIIG1Mo를 제작하였으며, 대장균 BL21(DE3)에 형질전환시켜 대장균 형질전환체 BL21/pSTIIG1Mo(HM10930)을 제조하였고, 이를 한국미생물보존센타(KCCM)에 2004년 9월 15일자로 기탁하였다(기탁번호: KCCM-10595). 상기 발현벡터에 의해 발현되는 단백질은 이량체 형성을 가능케 하는 시스테인 잔기를 함유하는 힌지영역이 제거되었기 때문에 CH2 도메인부터 발현되어 단량체로 존재하게 되고, 서열번호: 18 으로 기재되는 아미노산 서열을 갖는다.
<실시예 3> 인간 면역글로불린 IgG2 Fc 발현벡터의 제작
IgG2의 Fc 유전자를 클로닝하기 위해 상기 실시예<1-1>에서 수행한 방법과 동일하게 인간의 혈액에서 수득한 혈구 세포의 RNA를 주형으로 하여 One-Step RT-PCR 키트(Qiagen사)를 사용하여 RT-PCR을 수행하였다. 이때 상기 유전자 서열을 수득하기 위해 서열번호 19과 서열번호 20으로 기재되는 프라이머 쌍을 사용하였다. 서열번호: 19은 12개 아미노산 서열(Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro; 서열번호: 21)로 구성된 힌지영역 단백질 서열중 10번째 아미노산 서열인 프롤린으로부터 시작되는 서열로서, 서열번호: 19 및 20의 프라이머 쌍으로 증폭된 유전자는 전체 IgG2 Fc 유전자 서열 중 힌지영역의 프롤린-시스테인-프롤린으로 시작되는 아미노 말단과 CH2, CH3 도메인으로 구성되며 서열번호 22의 유전자 서열을 갖는다. 상기에서 증폭된 IgG2 Fc 유전자 서열을 대장균 시그널서열을 이용한 발현벡터에 클로닝하기 위해, 앞서 기술한 pmSTII 벡터를 사용하였다. 상기 실시예 <1-1>에서 수행한 클로닝 과정과 유사한 방법으로, 플라스미드 pmSTⅡ를 StuI/BamHI 제한효소로 처리한 후 아가로즈 겔에 전기영동을 수행하여 대장균 열안정성 엔테로톡신 시그널서열 유도체를 포함하는 큰 단편(4.7 kb)을 회수하였다. 상기에서 증폭된 IgG2 Fc 유전자를 BamHI 제한효소로 처리한 후 상기에서 회수된 발현벡터 단편에 삽입하여 pSTIIdCG2Fc를 제작하였다. 이렇게 제작된 발현벡터를 통해 발현되는 산물은 숙주세포에서 발현시 서열번호 23의 아미노산 서열을 갖으며, 힌지영역의 시스테인 잔기에 의해 이황화 결합에 의한 이량체를 형성할 수 있다. 각기 제작된 발현벡터를 대장균 BL21(DE3)에 형질전환시켜 대장균 형질전환체 BL21/pSTIIdCG2Fc(HM10936)을 제조하였다.
<실시예4> 면역글로불린 Fc의 발현 및 정제
<4-1> 면역글로불린 Fc의 발현 및 발현의 확인
상기 실시예 1, 2 및 3에서 수득한 미생물 형질전환체들을 발효기(Marubishi사)에 접종하여 발효시킨 후 면역글로불린 Fc 단편의 발현유무를 확인하였다.
먼저, LB 배지 100 ㎖에 상기 형질전환체들을 각각 밤새 진탕 배양한 후 발효기에 접종하여 본 배양을 진행하였다. 발효기의 온도는 35℃ 혹은 30℃를 유지하였으며, 혐기성 상태로 가는 것을 방지하기 위해 공기를 20 vvm으로 투입하면서 500 rpm으로 교반하였다. 발효가 진행됨에 따라 미생물의 성장을 위해 부족한 에너지원은 포도당(glucose)과 효모 추출액(yeast extract)을 미생물의 발효 상태에 따라 투여하였고, 흡광도 600 ㎚에서 OD값이 80-100이 되는 시기에 유도물질(inducer)인 IPTG를 20μM에서 4mM이 되게 투여하여 발현을 유도하였다. 이를 40 내지 45시간 동안 배양하여 흡광도 600 ㎚에서 OD값이 100 내지 120이 되도록 고농도로 배양하였다.
상기에서 대장균 형질전환체로부터 면역글로불린 Fc의 발현 유무, 발현 장소, 수용성 여부 및 이량체 형성 유무를 확인하기 위하여 아래와 같은 시험을 실시하였다. 발현 산물이 상기 발현벡터에 융합되어 있는 시그널서열에 의해 발효액이나 페리플라스믹 공간으로 발현되는 지를 확인키 위해 발효액을 원심분리하여 세포를 제거한 발효액 용액과 원심분리하여 회수된 세포를 삼투압 충격법(osmotic shock)에 의해 얻어진 페리플라스믹 공간 용액을 웨스턴 블라팅을 통해 발현 여부를 확인하였으나 그 양은 아주 적었다. 상기 발효액을 울트라-소니케이션 (Misonix 사)을 사용하여 파쇄하여 세포 용해액(cell lysate)를 얻고, 그 세포 용해액을 원심분리하여 수용성 물질과 불용성 물질을 분리한 후 수용성 물질을 다음과 같은 방법으로 웨스턴 블라팅을 수행하였다. 상기 수용성 물질을 DTT나 베타-머캅토에탄올과 같은 환원제를 제거산 단백질 점적 버페와 섞은 후 15% SDS-PAGE ( Criterion Gel, Bio-Rad)에 전기 영동하였다. 전기 영동이 끝난 젤을 nitro-cellulose 막에 이동시킨 후 HRP가 융합된 항-사람 Fc 항체(sigma)를 이용하여 detect를 수행하였다. 도1에서 보다시피 세포내에서 수용성 상태로 과량이 발현됨을 알 수 있으며, 또한 힌지 영역의 일부가 삽입된 형질전환체로부터 발현된 산물은 이량체를 형성함을 알 수 있다. 도1의 레인 1, 2, 3는 각각 형질전환체 HM10927, HM10932, HM10936에서 발현된 산물이며 레인 4는 동물세포에서 생산된 면역글로불린을 파파인 처리하여 생성된 Fc로써 당이 존재하여 대장균에서 생성된 것보다 크기가 약간 크게 전개되는 것을 알 수 있다.
<4-2> N-말단 서열 확인
상기 실시예에서 세포질 내에서 수용성 이량체 형태로 발현되는 Fc는 시그널서열이 융합되어 있기 때문에 분비되지 않고 세포질 내에 존재시 시그널서열의 프라세싱 없이 융합된 채 존재하는 지를 확인키 위해 N-말단 아미노산 서열을 기초과학 지원연구소 서울 분소에 상기 단백질의 N-말단 서열 분석을 의뢰하였으며, 분석할 시료는 하기와 같이 준비하였다.
먼저, PVDF 막 (Bio Rad사)을 메탄올에 약 2-3초간 담구어 활성화시킨 후 차 단 완충용액 (170 mM 글리신, 25 mM Tris?HCl (pH 8), 20% 메탄올)에 충분히 적셔주었다. 실시예 <4-1>에서 전개된 비-환원조건의 SDS-PAGE 겔을 상기와 같이 준비된 PVDF 막에 블럿팅 키트 ( Hoefer Semi-Dry Transfer unit, Amersham)를 이용하여 1시간 가량 블럿팅을 수행하였다. PVDF 막으로 이동된 단백질을 단백질 염색약인 쿠마시블루 R-250 (Amnesco사)으로 잠깐 (3-4 초간) 염색한 후 탈색용액 (물 : 아세트 산: 메탄올이 5 : 1 : 4)으로 세척하였다. 세척이 끝난 막에서 단백질이 포함되어 있는 부위를 가위로 절단하여 N-말단 서열 분석을 의뢰하였다.
IgG1 Fc 단백질의 서열은 Pro-Cys-Pro-Ala-Pro-Glu-Leu-Leu-Gly-Gly 이며 IgG4 Fc 단백질 서열은 Ser-Cysl-Pro-Ala-Pro-Glu-Phe-Leu-Gly-Gly이다. 또한 IgG2 Fc 단백질 서열은 Pro-Cys-Pro-Ala-Pro-Pro-Val-Ala-Gly-Pro으로 확인되었다. 이상과 같은 아미노산 서열 분석 결과, 본 발명의 대장균 형질전환체로부터 발현되는 Fc 단편들은 정확한 N-말단 서열을 갖는 것으로 확인되었으며, 시그널서열을 융합시켜 발현시 세포외막이나 페리플라스믹으로 분비되지 않고 세포질내에 과발현되어도 시그널서열이 정확히 프라세싱되어 수용성 형태로 존재한다는 새로운 사실을 확인시켜 주었다.
<4-3> 면역글로불린 Fc의 정제
면역글로불린에 강한 친화성이 있다고 알려진 단백질-A 컬럼(protein-A affinity column)을 사용하여 하기와 같은 방법으로 정제하였다.
원심분리에 의해 발효액으로부터 회수된 대장균 세포를 Microfluizer(Microfludics사)을 사용하여 파쇄하여 세포 용해액(cell lysate)를 얻고, 세포질내에 존재하는 재조합 면역글로불린 Fc 단편을 2단계 컬럼 크로마토그래피를 실시하여 정제하였다. 단백질-A 친화 컬럼(Pharmacia사) 5 ㎖을 PBS로 평형화시킨 후, 세포 용해액을 5 ㎖/분의 유속으로 부하하였다. 결합하지 않은 분획은 PBS로 세척한 후, 100 mM 시트레이트 용액(pH 3.0)으로 용출하였다. 용출된 분획을 탈염 컬럼(desalting column HiPrep 26/10, Pharmacia사)을 사용하여 10 mM Tris 완충액(pH 8.0)으로 교환하였다. Q HP 26/10 컬럼(Pharmacia사) 50 ㎖을 사용하여 2차 음이온 교환 컬럼 크로마토그래피를 실시하였는데, 1차 정제된 재조합 면역글로불린 Fc 분획을 결합시킨 후 10 mM Tris 완충액(pH 8.0) 조건에서 직선 농도구배(염화나트륨 농도 0 M→0.2 M) 방법으로 흘려 고순도의 분획을 얻을 수 있었다. 각 산물을 단백질-A 컬럼을 통해 부분 정제한 후의 발현양을 하기에 나타내었다.
플라스미드 | 형질전환체 | 단백질-A 정제 후의 발현율(㎎/ℓ) |
pSTIIdCG1Fc | HM10927 | 400 |
pSTIIG1Mo | HM10930 | 500 |
pSTIIdCG4Fc | HM10932 | 400 |
pSTIIG4Mo | HM10933 | 600 |
pSTIIdCG2Fc | HM10936 | 100 |
상기와 같이 수득된 면역글로불린 Fc는 중쇄의 이량체 혹은 단량체 형태이기 때문에 환원조건의 SDS-PAGE와 비-환원조건의 SDS-PAGE에서 단백질의 이동양상이 다르게 나타난다. 발현된 산물을 정제한 후 순도를 확인하기 위해 실시한 SDS- PAGE 결과를 도 2및 3 나타내었다.
도 2및 3은 이와 같이 정제된 이량체 형태와 단량체 형태의 면역글로불린 Fc 단백질들을 15% 크라이테리온 겔(criterion gel, Bio-Rad사)을 사용하여 비-환원조건의 SDS-PAGE 겔과 환원조건의 SDS-PAGE 겔에 전개시켜 그 이동양상을 비교한 것이다. 도 2의 A는 비-환원조건에서 SDS-PAGE 겔에 전개한 것이고, B는 환원조건에서 SDS-PAGE 겔에 전개한 것이다. 레인 M은 미리 염색된 저-범위 표준 단백질 마커(prestained low-range standard marker, Bio-Rad사)이고, 레인 1 내지 4는 각각 형질전환체 HM10927, HM10928(한국미생물보존센타에 2004년 9월 15일자로 기탁하였다. 기탁번호: KCCM-10589), HM10929(한국미생물보존센타에 2004년 9월 15일자로 기탁하였다. 기탁번호: KCCM-10594) 및 HM10932로부터 생산된 면역글로불린 Fc 시료이다. 도 2에 나타난 바와 같이, 환원조건의 SDS-PAGE에서는 힌지영역의 시스테인 잔기에 의한 이황화 결합이 환원되어 이들이 각각 단량체로 존재하기 때문에 단량체의 크기만큼 이동한 반면, 비-환원조건의 SDS-PAGE에서는 각각의 단량체가 이황화 결합으로 연결된 이량체 형태로 존재하여 약 42 kDa의 이동거리를 가짐을 확인하였다.
도 3의 A는 비-환원조건에서 SDS-PAGE 겔에 전개한 것이고, B는 환원조건에서 SDS-PAGE 겔에 전개한 것이다. 레인 M은 상기의 표준 단백질 마커이며, 레인 1 및 2는 형질전환체 HM10930 및 HM10933로부터 생산된 면역글로불린 Fc 시료이다. 도 3에 나타난 바와 같이, 환원과 비-환원조건에서 이동거리는 크게 차이가 없으며 내부 이황화 결합의 환원 유무에 따라 이동거리에 약간의 차이가 있음을 확인하였 다.
면역글로불린
Fc
및 약물의 결합체 제조
<실시예 5> 인터페론 알파(IFNα)-PEG-면역글로불린 Fc 영역(Fc) 결합체의 제조 I
*<단계 1> 면역글로불린을 이용한 면역글로불린 Fc 영역의 제조
면역글로불린 Fc 영역을 제조하기 위하여, 10 mM 인산염 완충액에 용해된 분자량 150 kDa의 면역글로불린 G(Immunoglobulin G; IgG, 녹십자) 200 ㎎에 단백질 가수분해효소 파파인(Papain, Sigma사)을 2 ㎎ 처리하여 37℃에서 2시간 동안 천천히 교반하면서 반응시켰다. 효소반응 후, 생성된 면역글로불린 Fc 영역을 정제하기 위하여 슈퍼덱스 컬럼, 단백질 A 컬럼 및 양이온 교환수지 컬럼 크로마토그래피를 순차적으로 수행하였다. 구체적으로, 반응액을 10 mM 인산나트륨 완충액(PBS, pH 7.3)으로 평형화시킨 슈퍼덱스 200 컬럼(Superdex 200, Pharmacia사)에 점적하였으며, 동일한 완충액을 이용하여 유속 1 ㎖/분으로 용출시켰다. 면역글로불린 Fc 영역보다 분자량이 상대적으로 큰 미반응 면역글로불린(IgG)과 F(ab’)2 등은 앞쪽에서 용출되므로 이를 먼저 제거하였다. 면역글로불린 Fc 영역과 분자량이 유사한 Fab는 다음과 같이 단백질 A 컬럼 크로마토그래피를 실시하여 제거하였다(도 4). 20 mM 인산염 완충액(pH 7.0)으로 평형화시킨 단백질 A 컬럼(Pharmacia사)에 슈퍼덱스 200 컬럼에서 용출된 면역글로불린 Fc 영역 함유 분획을 5 ㎖/분의 유속 으로 부하한 후 컬럼에 결합하지 않은 단백질을 제거하기 위해 동일 완충액으로 충분히 세척하였다. 여기에 100 mM 시트르산 나트륨(Na citrate, pH 3.0) 완충액을 흘려주어 순도가 높은 면역글로불린 Fc 영역을 용출시켰다. 단백질 A 컬럼으로 정제된 Fc 분획을 마지막으로 양이온 교환수지 컬럼(polyCAT, PolyLC사)을 사용하여 최종 정제하였는데, 10 mM 아세테이트 완충액(pH 4.5)을 직선 농도구배(염화나트륨 농도 0.15 M → 0.4 M) 방법으로 흘려 고순도의 Fc 분획을 얻고, 이를 12% SDS-PAGE 상에서 확인하였다(도 5의 레인 2).
<단계 2> IFNα-PEG 연결체의 제조
양쪽 말단에 알데히드 반응기를 가진 분자량 3.4 kDa의 폴리에틸렌 글리콜인 ALD-PEG-ALD(Shearwater사)를 인간 인터페론 알파-2b(hIFNα-2b, 분자량 20 kDa)가 5 ㎎/㎖ 농도로 용해된 100 mM 인산염 완충액에 IFNα:PEG의 몰비가 1:1, 1:2.5, 1:5, 1:10 및 1:20이 되도록 첨가하였다. 여기에 환원제인 나트륨 시아노 보로하이드라이드(NaCNBH3, Sigma사)를 최종 농도 20 mM이 되도록 첨가하고, 4℃에서 천천히 교반하면서 3시간 동안 반응시켰다. 인터페론 알파의 아미노 말단 부위에 선택적으로 PEG가 연결되고, PEG와 인터페론 알파가 1:1로 결합된 연결체를 얻기 위하여, 상기 반응 혼합물을 가지고 슈퍼덱스(SuperdexR, Pharmacia사) 크기 배제(size exclusion) 크로마토그래피를 실시하였다. 용출액으로 10 mM 칼륨-포스페이트 완충액(pH 6.0)을 사용하여 IFNα-PEG 연결체를 정제하였고, PEG와 결합하지 않은 인터페론 알파, 미반응 PEG 및 2개의 인터페론 알파가 PEG와 연결된 이량체 부산물을 제거하였다. 정제된 IFNα-PEG 연결체를 5 ㎎/㎖ 농도로 농축하였다. 이로부터 반응성이 가장 좋고 이량체 등과 같은 부산물이 적은 IFNα:PEG의 최적 반응 몰비는 1:2.5 내지 1:5임을 확인하였다.
<단계 3> IFNα-PEG-Fc 결합체 형성
상기 단계 2에서 정제된 IFNα-PEG 연결체에 면역글로불린 Fc 영역 N 말단에 결합시키기 위하여, 단계 1에서 준비된 면역글로불린 Fc 영역(약 53 kDa)을 10 mM 인산염 완충액에 용해시킨 후, IFNα-PEG 연결체:Fc의 몰비가 각각 1:1, 1:2, 1:4 및 1:8이 되도록 IFNα-PEG 연결체와 혼합하여 반응시켰다. 반응액을 100 mM 인산염 완충액 상태로 만들었고, 환원제로서 NaCNBH3를 최종 농도가 20 mM이 되도록 첨가한 후 4℃에서 20시간 동안 천천히 교반하면서 반응시켰다. 이로부터 반응성이 가장 좋고 이량체 등과 같은 부산물이 적은 IFNα-PEG 연결체:Fc의 최적 반응 몰비는 1:2임을 확인하였다.
<단계 4> IFNα-PEG-Fc 결합체의 분리 및 정제
상기 단계 3의 결합반응 후 미반응 물질 및 부산물을 제거하고 생성된 IFNα-PEG-Fc 단백질 결합체를 정제하기 위하여 슈퍼덱스 크기 배제 크로마토그래피를 수행하였다. 반응 혼합물을 농축한 후 10 mM 인산염 완충액(pH 7.3)을 이용하여 유속 2.5 ㎖/분으로 컬럼에 통과시켜 결합되지 않은 Fc 및 미반응 물질을 제거하고 IFNα-PEG-Fc 단백질 결합체 분획을 얻었다. 얻어진 IFNα-PEG-Fc 단백질 결합 체 분획에는 불순물로서 소량의 미반응 Fc 및 인터페론 알파 이량체가 혼재되어 있기 때문에 이를 제거하기 위해 추가로 양이온 교환수지 크로마토그래피를 수행하였다. IFNα-PEG-Fc 단백질 결합체 분획을 10 mM 아세트산 나트륨(pH 4.5)으로 평형화시킨 PolyCAT LP 컬럼(PolyLC사)에 넣고 1 M 염화나트륨(NaCl)을 포함하는 10 mM 아세트산 나트륨(pH 4.5) 완충액을 직선 농도구배(염화나트륨 농도 0 M → 0.5 M) 방법으로 흘려 추가로 정제하였다. 마지막으로 음이온 교환컬럼을 사용하여 IFNα-PEG-Fc 단백질 결합체를 순수하게 획득하였다. PolyWAX LP 컬럼(PolyLC사)을 10 mM Tris-HCl(pH 7.5) 완충액으로 평형화시킨 후 정제된 IFNα-PEG-Fc 단백질 결합체 분획을 부하하고 1 M 염화나트륨을 포함하는 10 mM Tris-HCl(pH 7.5) 완충액을 직선 농도구배(염화나트륨 농도 0 M → 0.3 M) 방법으로 흘려 순수한 IFNα-PEG-Fc 단백질 결합체를 정제하였다.
<실시예 6> IFNα-PEG-Fc 결합체의 제조 Ⅱ
<단계 1> Fc-PEG 연결체의 제조
양쪽 말단에 알데히드 반응기를 가진, 분자량 3.4 kDa의 폴리에틸렌 글리콜인 ALD-PEG-ALD(Shearwater사)를 상기 실시예 5의 단계 1에서 준비된 면역글로불린 Fc 영역이 15 ㎎/㎖ 농도로 용해된 100 mM 인산염 완충액에 면역글로불린 Fc:PEG의 몰비가 각각 1:1, 1:2.5, 1:5, 1:10 및 1:20이 되도록 첨가하였다. 환원제인 NaCNBH3를 최종 농도 20 mM로 첨가한 후, 4℃에서 천천히 교반하면서 3시간 동안 반응시켰다. 면역글로불린 Fc 영역의 아미노 말단부위에 선택적으로 PEG:Fc가 1:1 로 결합된 연결체를 얻기 위하여 상기 반응 혼합물을 가지고 슈퍼덱스(SuperdexR, Pharmacia사) 크기 배제 크로마토그래피를 수행하였다. 용출액으로 10 mM 칼륨-포스페이트 완충액(pH 6.0)을 사용하여 Fc-PEG 연결체를 정제하였고, PEG와 결합하지 않은 면역글로불린 Fc 영역, 미반응 PEG 및 2개의 면역글로불린 Fc 영역이 PEG와 연결된 이량체 부산물을 제거하였다. 정제된 Fc-PEG 연결체를 약 15 ㎎/㎖로 농축하였다. 이로부터 반응성이 가장 좋고 이량체 등과 같은 부산물이 적은 Fc:PEG의 최적 반응 몰비는 1:3 내지 1:10임을 확인하였다.
<단계 2> Fc-PEG 연결체와 인터페론 알파의 결합체 형성 및 정제
상기 단계 1에서 정제된 Fc-PEG 연결체에 IFNα N 말단에 결합시키기 위하여, 10 mM 인산염 완충액에 용해된 인터페론 알파를 사용하고, Fc-PEG 연결체:IFNα의 몰비를 각각 1:1, 1:1.5, 1:3 및 1:6이 되도록 첨가하여 반응시켰다. 반응액을 100 mM 인산염 완충액 상태로 만들었고, 환원제로서 NaCNBH3를 최종 농도가 20 mM이 되도록 첨가한 후 4℃에서 20시간 동안 천천히 교반하면서 반응을 진행시켰다. 반응 후 실시예 5의 단계 4와 동일한 방법으로 정제하여 미반응 물질 및 부산물을 제거하고, 이로부터 생성된 Fc-PEG-IFNα 단백질 결합체를 순수하게 분리하였다.
<실시예 7> 인간 성장 호르몬(hGH)-PEG-Fc 결합체의 제조
인터페론 알파 대신에 인간 성장 호르몬(hGH, 분자량 22 kDa)을 사용하고, hGH:PEG의 몰비를 1:5로 하는 것을 제외하고는 실시예 5와 동일한 방법으로 hGH-PEG-Fc 단백질 결합체를 제조 및 정제하였다.
<실시예 8> 인간 과립구 콜로니 자극인자(G-CSF)-PEG-Fc 결합체의 제조
인터페론 알파 대신에 인간 과립구 콜로니 자극인자(G-CSF)를 사용하고, G-CSF:PEG의 몰비를 1:5로 하는 것을 제외하고는 실시예 5와 동일한 방법으로 G-CSF-PEG-Fc 단백질 결합체를 제조 및 정제하였다.
한편, 천연형 G-CSF의 17번째 아미노산이 세린으로 치환된 유도체(17S-G-CSF)를 이용하여 상기와 동일한 방법으로 17S-G-CSF-PEG-Fc 단백질 결합체를 제조 및 정제하였다.
<실시예 9> 인간 적혈구 생성인자(EPO)-PEG-Fc 결합체의 제조
인터페론 알파 대신 인간 적혈구 생성인자(Erythropoietin; EPO)를 사용하고, EPO:PEG의 몰비를 1:5로 하는 것을 제외하고는 실시예 5와 동일한 방법으로 EPO-PEG-Fc 단백질 결합체를 제조 및 정제하였다.
<실시예 10> 반응기의 종류를 달리하는 PEG를 이용한 단백질 결합체의 제조
양쪽 말단의 반응 그룹이 모두 석시니미딜 프로피오네이트(succinimidyl propionate; SPA)인 PEG를 사용하여 IFNα-PEG-Fc 단백질 결합체를 다음과 같이 제조하였다. 인터페론 알파 10 ㎎이 용해된 100 mM 인산염 완충액에 양쪽 말단에 SPA 반응기를 갖는, 분자량 3.4 kDa의 폴리에틸렌 글리콜인 SPA-PEG-SPA(Shearwater사)를 IFNα:PEG의 몰비가 각각 1:1, 1:2.5, 1:5, 1:10 및 1:20이 되도록 정량하여 첨가하고, 상온에서 천천히 교반하면서 2시간 동안 반응시켰다. 인터페론 알파의 라이신 잔기의 아미노 그룹 부위에 선택적으로 PEG가 1:1로 결합된 PEG-IFNα 연결체를 얻기 위하여 반응 혼합물을 가지고 슈퍼덱스 크기 배제 크로마토그래피를 실시하였다. 용출액으로 10 mM 칼륨-포스페이트 완충액(pH 6.0)을 사용하여 IFNα-PEG 연결체를 정제하였고, PEG와 결합하지 않은 인터페론 알파, 미반응 PEG, 및 PEG의 양쪽 말단에 2개의 인터페론 알파가 연결된 이량체 부산물을 제거하였다. IFNα-PEG 연결체를 면역글로블린 Fc 라이신 잔기의 아미노 그룹 부위에 결합하기 위하여 정제된 IFNα-PEG 연결체를 약 5 ㎎/㎖로 농축한 후, 실시5의 단계 3 및 4와 동일한 방법으로 IFNα-PEG-Fc 결합체를 제조 및 정제하였다. 이로부터 반응성이 가장 좋고 이량체 등과 같은 부산물이 적은 인터페론 알파:PEG의 최적 반응 몰비는 1:2.5 내지 1:5임이 확인되었다.
한편, 상기와 동일한 방법을 수행하되 양쪽 말단의 반응 그룹이 모두 N-하이드록시석시니미딜(N-hydroxysuccinimidyl; NHS)인 PEG(NHS-PEG-NHS; Shearwater사) 또는 부틸알데히드(buthyl aldehyde)인 PEG(BUA-PEG-BUA; Shearwater사)를 사용하여 IFNα-PEG-Fc 결합체의 생성을 확인하였다.
<실시예 11> 분자량이 다른 PEG를 이용한 단백질 결합체의 제조
분자량이 10 kDa이고, 양쪽 말단에 알데히드 반응기를 가진 폴리에틸렌 글리 콜인 ALD-PEG-ALD(Shearwater사)를 사용하여 실시예 5의 단계 2와 동일한 방법으로 IFNα-10K PEG 연결체를 제조 및 정제하였다. 이때, 반응성이 가장 좋고 이량체 등과 같은 부산물이 적은 인터페론 알파:10K PEG의 최적 몰비는 1:2.5 내지 1:5임이 확인되었다. 정제된 IFNα-PEG 연결체를 약 5 ㎎/㎖이 되도록 농축한 후, 이를 이용하여 실시예 5의 단계 3 및 4와 동일한 방법으로 IFNα-10K PEG-Fc 단백질 결합체를 제조 및 정제하였다.
<실시예 12> Fab’-S-PEG-N-Fc 결합체의 제조(-SH기)
<단계 1> Fab’의 발현 및 정제
항-종양 괴사인자-알파 Fab’를 발현하는 대장균 형질전환체 BL21/poDLHF(기탁번호: KCCM-10511)를 LB 배지 100 ㎖에 접종하여 밤새 진탕 배양한 후 5 ℓ의 발효기(Marubishi)에 접종하여 온도 30℃, 공기 투입량 20 vvm, 교반 속도 500 rpm의 조건하에서 배양하였다. 발효가 진행됨에 따라 미생물의 성장을 위해 부족한 에너지원은 포도당(glucose)과 효모 추출액(yeast extract)을 미생물의 발효 상태에 따라 투여하였고, 흡광도 600 ㎚에서 OD값이 80이 되는 시기에 IPTG를 투여하여 단백질 발현을 유도하였다. 이를 40 내지 45시간 동안 배양하여 흡광도 600 ㎚에서 OD값이 120 내지 140이 되도록 고농도로 배양하였다. 얻어진 발효액을 원심분리(20,000 g, 30분)하여 침전물은 버리고 상층액만을 취하였다.
얻어진 상층액으로부터 다음과 같은 3 단계의 컬럼 크로마토그래피를 거쳐 항-종양괴사인자-알파 Fab’를 순수하게 정제하였다. 20 mM 인산염 완충액(pH 7.0)으로 평형화시킨 HiTrap 단백질 G 컬럼(5 ㎖, Pharmacia사)에 상기 상층액을 점적한 후, 100 mM 글리신(Glycine, pH 3.0) 완충액으로 용출하였다. 용출된 Fab’분획을 10 mM 인산나트륨 완충액(pH 7.3)으로 평형화시킨 슈퍼덱스 200 컬럼(Superdex 200, Pharmacia사)에 점적하였으며, 동일한 완충액으로 용출하였다. 용출된 Fab’ 분획을 polyCAT 21×250 컬럼(PolyLC사)을 사용하여 최종 정제하였는데, 10 mM 아세테이트 완충액(pH 4.5)을 직선 농도구배(염화나트륨 농도 0.15 M → 0.4 M) 방법으로 흘려 순수한 항-종양괴사인자-알파 Fab’분획을 었었다.
<단계 2> Fc-PEG 연결체의 제조 및 정제
면역글로블린 Fc N 말단의 아미노 그룹에 링커 PEG를 결합시키기 위하여 상기 실시예 5의 단계 1과 동일한 방법으로 제조된 면역글로불린 Fc를 100 mM 인산나트륨 완충액(pH 6.0)에 5 ㎎/㎖ 농도로 용해시키고, 여기에 NHS-PEG-MAL(3.4 kDa, Shearwater사)을 Fc:PEG의 몰비가 1:10이 되도록 첨가한 후, 4℃에서 천천히 교반하면서 12시간 동안 반응시켰다.
반응 종료 후, 반응 완충액을 20 mM 인산나트륨 완충액(pH 6.0)으로 교환하면서 반응하지 않은 NHS-PEG-MAL을 제거하였다. 완충액 교환 후 반응물을 polyCAT 컬럼(PolyLC사)에 부하하고, 20 mM 인산나트륨 완충액(pH 6.0)을 직선 농도구배(염화나트륨 농도 0.15 M → 0.5 M) 방법으로 흘려 면역글로불린 Fc-PEG 연결체를 먼저 용출하여 얻고, 이후에 반응하지 않은 면역글로불린 Fc를 용출시켜 제거하였다.
<단계 3> Fab’-S-PEG-N-Fc 결합체(-SH기)의 제조 및 정제
Fab' 의 유리 시스테인 그룹에 면역글로블린 Fc-PEG 연결체를 결합시키기 위하여 단계 1에서 정제된 Fab’를 100 mM 인산나트륨 완충액(pH 7.3)에 2 ㎎/㎖로 용해시킨 후, 동일한 완충액에 단계 2에서 준비된 면역글로불린 Fc-PEG 연결체를 Fab’:연결체의 몰비가 1:5가 되도록 넣어주었다. 최종 단백질 농도가 50 ㎎/㎖이 되도록 농축하였고, 4℃에서 천천히 교반하면서 24시간 동안 반응시켰다.
커플링 반응 종료 후, 반응액을 10 mM 인산나트륨 완충액(pH 7.3)으로 평형화시킨 슈퍼덱스 200 컬럼(Superdex 200, Pharmacia사)에 점적하였으며, 동일한 완충액을 1 ㎖/분의 유속으로 흘려 용출시켰다. 커플링된 Fab’-S-PEG-N-Fc 결합체는 분자량이 커서 먼저 용출되고, 반응하지 않은 면역글로불린 Fc-PEG 연결체 및 Fab’는 이후에 용출되어 제거할 수 있었다. 잔존하는 미반응 면역글로불린 Fc를 완전히 제거하기 위해, 용출된 Fab’-S-PEG-N-Fc 결합체 분획을 다시 polyCAT 21×250 컬럼(PolyLC사)에 점적하고, 20 mM 인산나트륨 완충액(pH 6.0)을 직선 농도구배(염화나트륨 농도 0.15 M → 0.5 M) 방법으로 흘려 Fc-PEG 연결체가 Fab’의 C-말단 부근 -SH기에 연결된 Fab’-S-PEG-N-Fc 결합체를 순수하게 얻었다.
<실시예 13> Fab’-N-PEG-N-Fc 결합체의 제조(N-말단)
<단계 1> Fab’-PEG 연결체(N-말단)의 제조 및 정제
상기 실시예 12의 단계 1에서 얻은 정제된 Fab’ 40 ㎎을 100 mM 인산나트륨 완충액(pH 6.0)에 5 ㎎/㎖로 용해시킨 후, 부틸ALD-PEG-부틸ALD(3.4 kDa, Nektar 사)을 Fab’:PEG의 몰비가 1:5가 되도록 첨가하였다. 환원제로서 NaCNBH3를 최종 농도가 20 mM이 되도록 첨가한 후, 4℃에서 천천히 교반하면서 2시간 동안 반응시켰다.
반응 종료 후, 반응 완충액을 20 mM 인산나트륨 완충액(pH 6.0)으로 교환하였다. 완충액 교환 후 반응물을 polyCAT 컬럼(PolyLC사)에 부하하고, 20 mM 아세테이트 완충액(pH 4.5)을 직선 농도구배(염화나트륨 농도 0.15 M → 0.4 M) 방법으로 흘려 Fab' N 말단에 링커 PEG 결합된 Fab’-PEG 연결체 분획을 먼저 용출하여 얻고, 이후에 반응하지 않은 Fab’를 용출시켜 제거하였다.
<단계 2> Fab’-N-PEG-N-Fc 결합체의 제조 및 정제
단계 1에서 정제된 Fab’-PEG 연결체를 면역글로블린 Fc N 말단에 결합시키기 위하여 100 mM 인산나트륨 완충액(pH 6.0)에 10 ㎎/㎖로 용해시킨 후, 동일한 완충액에 용해된 면역글로불린 Fc를 Fab’-PEG 연결체:Fc의 몰비가 1:5가 되도록 넣어주었다. 최종 단백질 농도가 50 ㎎/㎖이 되도록 농축하였고, 환원제로서 NaCNBH3를 최종 농도가 20 mM이 되도록 첨가한 후, 4℃에서 천천히 교반하면서 24시간 동안 반응시켰다.
커플링 반응 종료 후, 반응액을 10 mM 인산나트륨 완충액(pH 7.3)으로 평형화시킨 슈퍼덱스 200 컬럼(Superdex 200, Pharmacia사)에 점적하였으며, 동일한 완충액을 1 ㎖/분의 유속으로 흘려 용출시켰다. 커플링된 Fab’-N-PEG-N-Fc 결합체는 분자량이 커서 먼저 용출되고, 반응하지 않은 면역글로불린 Fc 및 Fab’-PEG 연 결체는 이후에 용출되어 제거할 수 있었다. 잔존하는 미반응 면역글로불린 Fc를 완전히 제거하기 위해, 용출된 Fab’-N-PEG-N-Fc 결합체 분획을 다시 polyCAT 21×250 컬럼(PolyLC사)에 부하하고, 20 mM 인산나트륨 완충액(pH 6.0)을 직선 농도구배(염화나트륨 농도 0.15 M → 0.5 M) 방법으로 흘려 면역글로불린 Fc-PEG 연결체가 Fab’의 N-말단에 연결된 Fab’-N-PEG-N-Fc 결합체를 순수하게 얻었다.
<실시예 14> 당쇄가 제거된 면역글로불린 Fc의 제조 및 정제
상기 실시예 5와 동일한 방법으로 제조한 면역글로불린 Fc 200 ㎎을 100 mM 인산염 완충액(pH 7.5)에 2 ㎎/㎖이 되도록 준비한 후, 탈당쇄화 효소인 PNGase F(NEB사)를 300 U/㎎이 되도록 첨가하였다. 반응 혼합물을 37℃에서 24시간 동안 천천히 교반하면서 반응시켰다. 반응 종료 후, 당쇄가 제거된 면역글로불린 Fc를 정제하기 위하여 반응물을 SP 세파로즈 FF 컬럼(Pharmacia사)에 부하하고, 10 mM 아세테이트 완충액(pH 4.5) 조건에서 1 M NaCl을 사용한 직선 농도구배(0.1 M → 0.6 M) 방법으로 용출하여, 천연형 면역글로불린 Fc 분획을 먼저 용출한 후, 당쇄가 제거된 면역글로불린 Fc (deglycosylated Fc: DG Fc)를 용출하여 얻었다.
<실시예 15> IFNα-PEG-DG Fc 결합체의 제조
상기 실시예 5의 단계 2에서 정제된 IFNα-PEG 연결체에 상기 실시예 14에서 제조된 당쇄가 제거된 면역글로불린 Fc를 결합시키기 위하여, IFNα-PEG 연결체를 10 mM 인산염 완충액에 용해된 DG Fc에 IFNα-PEG 연결체:DG Fc의 몰비가 각각 1:1, 1:2, 1:4 및 1:8이 되도록 첨가하여 반응시켰다. 반응액을 100 mM 인산염 완충액 상태로 만들었고, 환원제로서 NaCNBH3를 최종 농도가 20 mM이 되도록 첨가한 후 4℃에서 20시간 동안 천천히 교반하면서 반응시켰다. 이로부터 반응성이 가장 좋고 이량체 등과 같은 부산물이 적은 IFNα-PEG 연결체:DG Fc의 최적 반응 몰비는 1:2임을 확인하였다.
결합반응 후 미반응 물질 및 부산물을 제거하고 생성된 IFNα-PEG-DG Fc 결합체를 정제하기 위하여 반응 혼합물을 이용하여 슈퍼덱스(SuperdexR, Pharmacia사) 크기 배제 크로마토그래피를 수행하였다. 인산염 완충액(pH 7.3)을 이용하여 유속 2.5 ㎖/분으로 컬럼에 통과시켜 결합되지 않은 DG Fc 및 미반응 물질을 제거하고 IFNα-PEG-DG Fc 단백질 결합체 분획을 정제하였다. 이로부터 얻어진 IFNα-PEG-DG Fc 단백질 결합체 분획에는 불순물로서 소량의 미반응 DG Fc 및 인터페론 알파-PEG 연결체가 혼재되어 있기 때문에 이를 제거하기 위해 추가로 양이온 교환수지 크로마토그래피를 수행하였다. IFNα-PEG-DG Fc 단백질 결합체 분획을 10 mM 아세트산 나트륨(pH 4.5)으로 평형화시킨 PolyCAT LP 컬럼(PolyLC사)에 넣고 1 M NaCl을 포함한 10 mM 아세트산 나트륨 완충액(pH 4.5)을 직선 농도구배(염화나트륨 농도 0 M → 0.6 M) 방법으로 흘려 추가로 정제하였고, 마지막으로 음이온 교환컬럼을 사용하여 IFN α-PEG-DG Fc 단백질 결합체를 순수하게 획득하였다. PolyWAX LP 컬럼(PolyLC사)을 10 mM Tris-HCl 완충액(pH 7.5)으로 평형화시킨 후 정제된 IFNα-PEG-DG Fc 단백질 결합체 분획을 부하하고, 1 M 염화나트륨을 포함한 10 mM Tris-HCl 완충액(pH 7.5)을 직선 농도구배(염화나트륨 농도 0 M → 0.3 M) 방법으 로 흘려 순수한 IFNα-PEG-DG Fc 단백질 결합체를 정제하였다.
<실시예 16> 인터페론 알파-PEG 연결체와 재조합 AG Fc 유도체의 결합체 제조
상기 실시예 5 및 15와 동일한 방법으로, 실시예 1에서 제조된 AG Fc 유도체인 IgG4 delta-Cys N 말단에 IFNα-PEG 연결체를 결합시켰다. 실시예 1에서 제조된 AG Fc 유도체인 IgG4 delta-Cys를 IFNα-PEG 연결체와 결합시켰다. 결합반응 후 미반응 물질 및 부산물을 제거하고 생성된 IFNα-PEG-AG Fc 단백질 결합체(I)를 정제하기 위하여 Q HP 26/10 컬럼(Pharmacia사) 50 ㎖을 사용하여 1차 정제한 후 고압컬럼인 polyCAT 21.5×250 컬럼(polyLC사)으로 고순도의 결합체를 정제하였다. 커플링 반응액을 탈염컬럼 HiPrep 26/10 (Pharmacia사)을 사용하여 10 mM Tris 완충액(pH 8.0)으로 교환한 후 Q HP 26/10 50 ㎖ 컬럼에 8 ㎖/분의 유속으로 부하하여 결합시킨 후, 직선 농도구배(염화나트륨 농도 0 M → 0.2 M) 방법으로 원하는 분획을 얻었다. 용출된 분획을 10 mM 아세트산 완충액(pH 5.2)으로 평형화된 polyCAT 21.5×250 컬럼에 15 ㎖/분 유속으로 다시 결합시킨 후 직선 농도구배(염화나트륨 농도 0.1 M → 0.3 M) 방법으로 용출하여 고순도의 분획을 얻을 수 있었다. 동일한 방법으로, 실시예 12에서 제조된 또 다른 AG Fc 유도체인 IgG4 단량체를 사용하여 IFNα-PEG-AG Fc 단백질 결합체(Ⅱ)를 제조하였다.
<실시예 17> 인간 적혈구 생성인자(EPO)-PEG-재조합 AG Fc 유도체의 결합체 제조
상기 실시예 16과 동일한 방법으로, EPO-PEG 연결체와 AG Fc 유도체인 IgG4 delta-Cys가 연결된 결합체를 제조하였다.
<비교예 1> IFNα-40K PEG 연결체의 제조
100 mM 인산칼륨 완충액(pH 6.0)에 인터페론 알파 5 ㎎을 넣어 최종 부피 5 ㎖가 되도록 준비한 후, PEG의 분자량이 40 kDa인 활성화된 메톡시-PEG-알데히드(Shearwater사)를 인터페론 알파:40K PEG의 몰비가 1:4가 되도록 상기 용액에 첨가하였다. 상기 반응용액에 환원제인 NaCNBH3를 최종 농도 20 mM이 되도록 첨가한 후, 4℃에서 18시간 동안 서서히 교반시키면서 반응시켰다. 인터페론 알파에 반응하지 않은 PEG를 불활성화시키기 위해 에탄올아민을 최종 농도가 50 mM이 되도록 첨가하였다.
미반응 PEG의 분리 및 완충액 교체를 위해 세파덱스 G-25 컬럼(Pharmacia사)을 이용하였다. 먼저, 2 칼럼 부피(column volume; CV)의 10 mM Tris-HCl 완충액(pH 7.5)으로 컬럼을 평형화시킨 후 반응 혼합물을 점적하였고, 파장 260 ㎚에서 자외부 흡광계로 흡광도를 검출하였다. 상기 컬럼을 동일한 완충액으로 용출하면 크기가 더 큰 PEG로 (N 말단에:삽입KYM) 수식된 인터페론 알파가 먼저 용출되고 미반응 PEG는 시차를 두고 나중에 용출되기 때문에 IFNα-40K PEG만을 분리할 수 있다.
상기에서 얻은 용출액으로부터 IFNα-40K PEG 연결체를 더욱 순수하게 분리, 정제하기 위해 다음과 같이 크로마토그래피를 수행하였다. 3 ㎖의 PolyWAX LP 컬럼(Polywax사)을 10 mM Tris-HCl 완충액(pH 7.5)으로 평형화시켰다. PEG-IFNα 연 결체를 함유하는 용출액을 1 ㎖/분의 유속으로 컬럼에 부가한 후, 15 ㎖의 평형 완충액으로 세척하였다. 30 ㎖의 1 M NaCl 완충액으로 30분 동안 0에서 100%까지의 염 농도구배 방법을 이용하여 트리-, 디- 및 모노-PEG가 결합된 인터페론 알파를 순서대로 용출시켰다.
더욱 순수한 모노-PEG 결합 인터페론 알파를 분리하기 위해 상기에서 수득한 모노-PEG와 인터페론 알파의 연결체 용출분획을 가지고 크기 배제 크로마토그래피를 수행하였다. 10 mM 인산나트륨 완충액(pH 7.0)으로 평형화시킨 슈퍼덱스 200(Superdex 200, Pharmacia사)에 상기 용출액을 농축하여 점적한 후 동일한 완충액으로 용출하였다. 이때, 1 ㎖/분의 유속으로 완충액을 흘려주었다. 트리- 및 디-PEG가 결합된 인터페론 알파는 모노-PEG가 결합된 인터페론 알파보다 용출시간이 상대적으로 빠르므로 이를 제거하여 모노-PEG가 결합된 인터페론 알파만을 순수하게 분리하였다.
동일한 방법으로 인간 성장 호르몬, 과립구 콜로니 자극인자 및 그의 유도체의 아미노 말단에 40K PEG가 결합된 hGH-40K PEG, G-CSF-40K PEG 및 40K PEG-17S-G-CSF 유도체의 연결체들을 제조하였다.
<비교예 2> IFNα-PEG-알부민 결합체의 제조
실시예 1의 단계 2에서 정제된 IFNα-PEG 연결체에 알부민을 아미노 말단에 결합시키기 위하여 10 mM 인산염 완충액에 용해된 인간 알부민(human serum albumin, HSA, 약 67 kDa, 녹십자)을 IFNα-PEG 연결체:알부민의 몰비가 각각 1:1, 1:2, 1:4 및 1:8이 되도록 첨가한 후 반응시켰다. 반응액을 100 mM 인산염 완충액 상태로 만들었고, 환원제로서 NaCNBH3를 최종 농도가 20 mM이 되도록 첨가한 후 4℃에서 20시간 동안 천천히 교반하면서 반응시켰다. 이로부터 반응성이 가장 좋고 이량체 등과 같은 부산물이 적은 IFNα-PEG 연결체:알부민의 최적 반응 몰비는 1:2임을 확인하였다.
결합반응 후 미반응 물질 및 부산물을 제거하고 생성된 IFNα-PEG-알부민 단백질 결합체를 정제하기 위하여 슈퍼덱스 크기 배제 크로마토그래피를 수행하였다. 각 반응 혼합물을 농축한 후 10 mM 아세트산 나트륨 완충액을 유속 2.5 ㎖/분으로 컬럼에 통과시켜 결합되지 않은 알부민 및 미반응 물질을 제거하고 IFNα-PEG-알부민 단백질 결합체만을 정제하였다. 얻어진 IFNα-PEG-알부민 단백질 결합체 분획에는 불순물로서 소량의 미반응 알부민 및 인터페론 알파 이량체가 섞여 있으므로 이를 제거하기 위해 추가로 양이온 교환수지 크로마토그래피를 수행하였다. IFNα-PEG-알부민 단백질 결합체 분획을 10 mM 아세트산 나트륨 용액(pH 4.5)으로 평형화시킨 컬럼(SP5PW, Waters사)에 넣고 1 M 염화나트륨(NaCl)을 포함한 10 mM 아세트산 나트륨 완충액(pH 4.5)을 직선 농도구배(염화나트륨 농도 0 M → 0.5 M) 방법으로 흘려 추가로 정제하였고, IFNα-PEG-알부민 단백질 결합체를 순수하게 획득하였다.
동일한 방법으로 인간 성장 호르몬, G-CSF 및 그의 유도체에 각각 알부민이 결합된 hGH-PEG-알부민, G-CSF-PEG-알부민 및 17S-G-CSF-PEG-알부민 결합체를 제조하였다.
<비교예 3> Fab’-S-40K PEG 연결체의 제조
실시예 8의 단계 1에서 정제된 Fab’에 존재하는 유리 시스테인기를 활성화시키기 위해, 활성화 완충액(20 mM 아세트산 나트륨(pH 4.0), 0.2 mM DTT)에 1시간 동안 방치하였다. PEG 수식 완충액인 50 mM 인산 칼륨(pH 6.5)으로 완충액을 교환한 후, 말레이미드-PEG(분자량 40 kDa, Shearwater사)를 Fab’:40K PEG의 몰비가 1:10이 되도록 첨가한 다음, 4℃에서 천천히 교반하면서 24시간 동안 반응시켰다.
반응 종료 후, 반응액을 10 mM 인산나트륨 완충액(pH 7.3)으로 평형화시킨 슈퍼덱스 200 컬럼(Superdex 200, Pharmacia사)에 점적하였으며, 동일한 완충액을 1 ㎖/분의 유속으로 흘려 용출시켰다. 40K PEG가 수식된 Fab’-40K PEG 연결체는 분자량이 커서 반응하지 않은 Fab’보다 앞쪽에서 용출되고 Fab’는 이후에 용출되어 제거할 수 있었다. 완전히 제거되지 않은 Fab’를 제거하기 위해, 용출된 Fab’-40K PEG 연결체 분획을 polyCAT 21×250 컬럼(PolyLC사)을 사용하여 최종 정제하였는데, 20 mM 인산나트륨 완충액(pH 4.5)을 직선 농도구배(염화나트륨 농도 0.15 M → 0.5 M) 방법으로 흘려 Fab’의 -SH기에 40K PEG가 연결된 Fab’-S-40K PEG 연결체를 순수하게 얻었다.
<실험예 1> 단백질 결합체의 확인 및 정량
<1-1> 단백질 결합체의 확인
상기 실시예들에서 제조한 단백질 결합체는 4 내지 20% 농도구배 겔 및 12% 겔을 사용한 비환원성 SDS-PAGE 및 ELISA(R&D system사) 방법으로 확인하였다.
SDS-PAGE 결과, 도 6에 나타난 바와 같이, 생리활성 폴리펩타이드, 비펩타이드성 중합체인 PEG 및 면역글로불린 Fc 영역의 커플링 반응에 의해 IFNα-PEG-Fc 결합체(A), 17Ser-G-CSF-PEG-Fc 결합체(B) 및 EPO-PEG-Fc 결합체(C)가 생성되었음을 확인하였다.
또한, 상기 실시예 10에서 제조한 DG Fc를 확인하기 위해 비환원성 12% SDS-PAGE를 수행한 결과, 도 9b에 나타난 바와 같이, 천연형 Fc에 비해 제거된 당쇄 분자량만큼 감소한 위치에서 DG Fc 밴드가 검출되었다.
<1-2> 단백질 결합체의 정량
상기 실시예에서 제조한 각각의 단백질 결합체의 양은 슈퍼덱스 컬럼(Superdex 75 26/60, Pharmacia사)과 10 mM 칼륨-포스페이트 완충액(pH 6.0)을 용출액으로 사용하는 크기 배제 크로마토그래피 상에서 피크면적을 대조구와 비교하여 환산하는 방법으로 계산하였다. 이미 정량되어 있는 IFNα, hGH, G-CSF, 17S-G-CSF, EPO 및 Fc로 각각 크기 배제 크로마토그래피를 실시한 후 농도와 피크면적 간의 환산계수를 측정하였다. 각 단백질 결합체의 일정량을 사용하여 동일한 크기 배제 크로마토그래피를 실시하고, 여기서 얻어진 피크면적에서 면역글로불린 Fc 영역에 해당하는 피크면적을 뺀 값을 각 단백질 결합체에 존재하는 생리활성 단백질의 정량 값으로 결정하였다. 도 7은 정제된 IFNα-PEG-Fc 결합체의 크기 배제 크로마토그래피 컬럼 분석 결과를 나타낸 것으로, 이량체 이상의 다량체 불순물이 없는 단일피크를 확인하였다.
Fc가 생리활성 폴리펩타이드에 결합되면 생리활성 폴리펩타이드의 항체로 그 양을 정량할 때 항체와 상기 폴리펩타이드와의 결합이 저해되어 크로마토그래피에 의해 계산되는 실제 값보다 적게 정량된다. ELISA 분석 결과, IFNα-PEG-Fc의 경우에는 ELISA에 의해 측정된 값이 대략 실제 값의 약 30% 정도인 것으로 확인되었다.
<1-3> 단백질 결합체의 순도 및 질량 확인
각각의 실시예에서 얻은 단백질 결합체에 대해 크기 배제 크로마토그래피를 실시한 후 280 ㎚에서 흡광했을 때, IFNα-PEG-Fc, hGH-PEG-Fc, G-CSF-PEG-Fc 및17Ser-G-CSF-PEG-Fc는 분자량 70 내지 80 kDa인 물질의 체류시간대에서 단일 피크를 나타내었다.
한편, 실시예 5, 15 및 16에서 획득한 단백질 결합체 IFNα-PEG-Fc, IFNα-PEG-DG Fc 및 IFNα-PEG-재조합 AG Fc 유도체 시료의 순도를 분석하기 위해 역상 HPLC를 수행하였다. 역상 컬럼(Vydac사, 259 VHP54 칼럼)을 이용하여 분석하였고, 0.5% TFA 존재하에 아세토니트릴 용매를 이용하여 100%까지 농도구배(40 내지 100%) 방법을 이용하여 280 ㎚의 파장에서 순도를 분석하였다. 그 결과, 도 11에서 알 수 있듯이, 결합하지 않은 인터페론이나 면역글로불린 Fc는 존재하지 않았으며 IFNα-PEG-Fc 결합체(A), IFNα-PEG-DG Fc 결합체(B) 및 IFNα-PEG-재조합 AG Fc 유도체 결합체(C) 모두 96% 이상의 순도로 순수하게 정제되었음을 알 수 있었 다.
각 정제된 시료의 정확한 분자량을 확인하기 위하여, 각 시료의 질량을 MALDI-TOF(Voyager DE-STR, Applied Biosystems사) 초고속 질량분석기를 이용하여 분석하였다. 매트릭스로는 시나핀 산(sinapinic acid)을 사용하였으며, 각각의 시험용 시료 0.5 ㎕를 시료 슬라이드에 도포하여 자연 건조한 후, 동량의 매트릭스 용액을 첨가한 다음 다시 자연 건조시켜 이온원(ion source)에 도입하였다. 검출은 포지티브 방식으로 리니어 모드 TOF 방식 장치를 사용하여 수행하였으며, 이온은 지연된 이온 추출(DE)을 사용하는 분할 추출 공급원에서, 지연된 추출 시간은 750 nsec/1500 nsec로, 약 2.5 kV의 전체 전위차를 통해 가속화하였다.
하기 표 1은 상기 실시예에서 얻은 각각의 Fc 단백질 결합체의 MALDI-TOF 질량분석 결과를 수치화하여 나타낸 것이고, 도 8는 EPO-PEG-Fc 결합체, 도 10은 IFNα-PEG-Fc 및 IFNα-PEG-DG Fc 결합체의 MALDI-TOF 질량분석 결과를 나타낸 것이다. 그 결과, 수득된 EPO-PEG-Fc 단백질 결합체의 순도는 95% 이상이었고, 이론치와 매우 가까운 분자량을 나타내었다. 또한, 면역글로불린 Fc 영역에 적혈구 생성인자(EPO)가 1:1로 결합된 형태인 것으로 나타났다.
또한, MALDI-TOF 질량 분석법에 의해 실시예 14에서 제조된 Fc 및 DG Fc의 분자량을 측정한 결과, DG Fc의 분자량은 천연형 Fc보다 3 kDa 정도 작은 50 kDa으로 확인되었다(도 9a). 감소한 3 kDa은 이론적 당쇄 크기에 해당하는 분자량으로 당쇄가 완전히 제거되었을 확인할 수 있었다.
하기 표 2는 상기 실시예 11에서 제조된 IFNα-PEG-DG Fc 결합체와, 실시예 16에서 제조된 IFNα-PEG-재조합 AG Fc 유도체 결합체(Ⅰ 및 Ⅱ)의 MALDI-TOF 질량분석 결과를 나타낸 것이다. IFNα-PEG-Fc 결합체의 분자량(75.9 kDa)과 비교했을 때, IFNα-PEG-DG Fc 결합체는 약 3 kDa 정도 작은 분자량을 나타내었고, IFNα-PEG-재조합 AG Fc 유도체 결합체(Ⅰ)는 약 3~4 kDa 정도 작은 분자량을 나타내었다. Fc 단량체와 연결된 IFNα-PEG-재조합 AG Fc 유도체 결합체(Ⅱ)의 분자량은 Fc 단량체 분자량에 해당하는 24.5 kDa이 감소한 분자량을 나타내었다.
<실험예 2> 약물동력학 조사 Ⅰ
각 군당 5 마리의 SD 랫트(Rat)에 천연형 생리활성 단백질(대조군)과 상기 실시예 및 비교예에서 제조한 -40K PEG 연결체, -PEG-알부민 결합체, -PEG-Fc 결합체, -PEG-DG Fc 결합체, 및 -PEG-재조합 AG Fc 유도체 결합체의 혈액내 안정성 및 약물동력학 계수를 비교하였다. 대조군 및 -40K PEG 연결체, -PEG-알부민 결합체, -PEG-Fc 결합체, -PEG-DG Fc 결합체, 및 -PEG-재조합 AG Fc 유도체 결합체(시험군)를 각 100 ㎍/㎏씩 피하주사한 후, 대조군은 주사 후 0.5, 1, 2, 4, 6, 12, 24, 30, 48, 72 및 96시간 후에 채혈하였고, 시험군은 주사 후 1, 6, 12, 24, 30, 48, 72, 96, 120, 240 및 288시간 후에 채혈하였다. 헤파린을 함유하는 튜브에 혈액시료를 모아 응고를 방지하였고, 에펜도르프 고속 마이크로 원심분리기에서 5분간 원심분리하여 세포를 제거하였다. 혈장내 단백질 양은 각 생리활성 단백질에 대한 항체를 이용하여 ELISA 방법으로 측정하였다.
IFNα, hGH, G-CSF 또는 EPO의 천연형 단백질, 이들의 -40K PEG 연결체, -PEG-알부민 결합체, -PEG-Fc 결합체, 및 -PEG-DG Fc 결합체의 약물동력학 분석 결과를 하기 표 3 내지 표 7에 나타내었다. 하기 표에서 Tmax는 최고 약물 농도에 도달하는 시간을, T1/2는 약물의 혈중반감기를, MRT(mean residence time)는 약물분자의 평균적인 체내 체류시간을 의미한다.
상기 표 3 및 도 12의 약물 동력학 그래프에서 알 수 있듯이, IFNα-PEG-Fc 단백질 결합체의 경우 혈중반감기는 90.4시간으로 천연형에 비해 약 50배 증가하였으며, 이는 비교예 1에서 제조한 IFNα-40K PEG의 반감기인 35.8시간보다 약 2.5배 증가한 것이다. 또한, IFNα-PEG-알부민의 반감기인 17.1시간에 비해서도 본 발명의 IFNα-PEG-Fc 단백질 결합체가 월등히 우수한 혈중반감기를 나타냄을 확인하였다.
한편, 표 3 및 도 14에 나타난 바와 같이, IFNα-PEG-DG Fc 결합체의 경우에는 혈중반감기가 71.0시간으로 IFNα-PEG-Fc 결합체와 거의 동등하여 당쇄가 없더라도 생체내 안정성에는 큰 영향이 없으며, 재조합 방법으로 생산된 재조합 AG Fc 유도체를 이용한 결합체도 천연형 유래 DG Fc와 동일한 효과를 나타냄을 확인하였다. 그러나, Fc 단량체를 사용한 결합체의 경우에는 정상적인 Fc 이량체의 결합체와 비교했을 때 약 2배 감소한 혈중반감기를 나타내었다.
인간 성장 호르몬의 경우도 표 4에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 단백질 결합체가 나타내는 혈중반감기의 증가효과를 확인할 수 있다. 즉, 천연형(1.1시간)에 비해서 hGH-40K PEG 연결체 및 hGH-PEG-알부민 결합체의 반감기가 7.7시간 및 5.9시간으로 다소 증가한 반면, 본 발명의 hGH-PEG-Fc 단백질 결합체의 경우에는 혈중반감기가 11.8시간으로 획기적으로 증가하였다.
표 5 및 표 6에서의 과립구 콜로니 자극인자와 그의 유도체에 대한 약물동력학 분석 결과에서도, 천연형, -40K PEG 연결체 및 -PEG-알부민 결합체에 비해 본 발명의 G-CSF-PEG-Fc 및 17S-G-CSF-PEG-Fc 결합체가 훨씬 긴 혈중반감기를 나타내었다. 단백질의 혈중 지속성을 증가시키는 면역글로불린 Fc 영역의 효과는 천연형 생리활성 단백질 뿐만 아니라 일부 아미노산을 변형시킨 유도체에서도 천연형과 비슷한 정도임을 확인할 수 있었고, 이러한 결과로부터 본 발명의 방법이 다른 단백질의 유도체에서도 유사한 효과를 나타낼 것임을 쉽게 예상할 수 있다.
표 7 및 도 13에서 보듯이, 당쇄화가 되어 있는 천연형 단백질인 적혈구 생성인자에 대해서도 본 발명의 단백질 결합체의 혈중반감기 증가효과가 확인되었다. 즉, 천연형 적혈구 생성인자의 혈중반감기가 9.4시간이고, EPO를 고 당쇄화시켜 혈중 안정성을 높인 다베포에틴-α(Darbepoetin-α, Aranesp, Amgen사)의 경우는 반감기가 18.4시간으로 증가하는 것으로 나타났다. 적혈구 생성인자에 면역글로불린 Fc 영역을 결합시킨 본 발명의 EPO-PEG-Fc 결합체의 경우에는 혈중반감기가 무려 61.5시간으로 획기적으로 증가하였으며, 당쇄가 제거된 대장균 유래 재조합 AG Fc 유도체를 사용한 결합체의 경우는 87.9시간까지 반감기 증가를 보여 당쇄가 제거되어도 혈중 안정성에는 영향을 미치지 않으면서 항체 기능이 없는 결합체를 제조할 수 있음을 확인하였다.
상기 결과에서 볼 수 있는 바와 같이, 본 발명에 따라 면역글로불린 Fc 영역 및 비펩타이드성 중합체와 공유결합된 단백질 결합체들은 천연형 단백질들에 비해 수배에서 수십배 이상 증가된 혈중반감기를 나타내었다. 또한, 면역글로불린 Fc를 유전자 재조합 방법으로 대장균에서 생산하거나, 효소 처리에 의해 당쇄를 제거하여도 이를 이용하여 제조된 단백질 결합체에서의 혈중반감기 증가효과는 비슷하게 유지되었다.
특히, 기존의 단백질 혈중 지속성을 증가시키기 위한 PEG 제형 중 지속성이 가장 높은 40 kDa PEG를 수식한 단백질과의 비교에서도 면역글로불린 Fc 단백질 결합체가 월등하게 높은 혈중 안정성을 나타내었다. 또한, 면역글로불린 Fc 대신 알부민을 결합시킨 단백질 결합체와의 비교시험에서도 본 발명의 단백질 결합체가 탁월한 혈중 안정성을 보여줌으로써 본 발명의 단백질 결합체가 지속형 단백질 약물 제제 개발에 효과적임을 확인할 수 있었다. 점 돌연변이(point mutation)에 의한 콜로니 자극인자 유도체까지 광범위한 범위의 단백질에서 종래의 PEG 결합 단백질 또는 알부민 단백질 결합체보다 탁월한 혈중 안정성과 평균 체류시간(MRT)을 나타내는 결과를 볼 때, 본 발명의 단백질 결합체에 의한 안정성 및 지속성 증가효과는 다른 생리활성 폴리펩티드에도 적용 가능함을 알 수 있다.
한편, 비펩타이드성 중합체로서 10 kDa PEG를 사용한 IFNα-10K PEG-Fc 단백질 결합체(실시예 11)를 사용하여 상기와 동일한 방법으로 혈중반감기를 측정했을 때, 혈중반감기는 48.8시간으로 나타나 분자량 3.4 kD인 PEG를 사용한 단백질 결합체의 혈중반감기인 79.7시간보다 다소 감소하였다.
또한, 비펩타이드성 중합체인 PEG의 분자량 증가에 따라 혈중반감기는 오히려 다소 감소하였는데, 이러한 결과로부터 단백질 결합체의 혈중 안정성 및 지속성 증가의 주된 요인이 비펩타이드성 중합체의 분자량보다는 결합된 면역글로불린 Fc 영역에 의한 효과임을 확인할 수 있다.
PEG의 반응기를 알데히드 반응기 외의 반응기로 변화시킨 경우에도 겉보기 분자량과 혈중반감기가 알데히드 반응기를 갖는 PEG를 사용한 경우와 유사한 양상을 보였다.
<실험예 3> 약물동력학 조사 Ⅱ
실시예 12 및 13에서 제조된 Fab’-S-PEG-N-Fc, Fab’-N-PEG-N-Fc 결합체 및 비교예 3에서 제조된 Fab’-S-40K PEG 연결체의 혈중반감기를 측정하기 위하여, Fab’를 대조군으로 하고 상기 결합체 또는 연결체를 이용하여 실험예 2와 동일한 방법으로 약물 동력학 조사를 실시하였고, 그 결과를 도 15에 나타내었다.
도 15에 나타난 바와 같이, Fab’-S-PEG-N-Fc 및 Fab’-N-PEG-N-Fc 결합체들이 Fab’ 또는 Fab’-S-40K PEG 연결체에 비해 2 내지 3배 연장된 혈중반감기를 나타내었다.
<실험예 4> 세포내 활성 측정
<4-1> 인터페론 알파 단백질 결합체의 세포내 활성비교
인터페론 알파 단백질 결합체의 세포내 활성비교를 위하여, IFNα-PEG-Fc(실시예 5), IFNα-PEG-DG Fc(실시예 15), IFNα-PEG-재조합 AG Fc 유도체(실시예 16), IFNα-40K PEG(비교예 1) 및 IFNα-PEG-알부민(비교예 2)의 항바이러스 활성을 수포성 구내염 바이러스로 포화시킨 마딘-다비 소 신장세포(MDBK, Madin Darby Bovine Kidney, ATCC CCL-22)를 사용하는 세포배양 생검으로 측정하였다. 이때, PEG가 결합되지 않은 인터페론 알파-2b(NIBSC 국제표준품)를 표준물질로 사용하였다.
MDBK 세포를 MEM(minimum essential medium: JBI사)에 10% FBS 및 1% 페니실린/스트렙토마이신이 첨가된 배지에서 37℃, 5% CO2의 조건으로 배양하였다. 측정하고자 하는 시료 및 표준물질을 일정 농도로 세포 배양배지에 희석하여 96웰 플레이트의 각 웰에 100 ㎕씩 분주하였다. 상기에서 배양된 세포를 플라스크에서 떼어내어 시료가 분주되어 있는 플레이트에 100 ㎕씩 가한 후, 37℃, 5% CO2 조건에서 약 1시간 가량 배양하였다. 1시간 후 바이러스 농도가 5 내지 7×103 PFU가 되도록 조절된 VSV(Vesilculer stomatitis virus)를 50 ㎕씩 플레이트에 첨가하고, 37℃, 5% CO2의 조건에서 약 16 내지 20시간 추가로 배양하였다. 시료 및 표준물질을 넣지 않고 세포와 바이러스만을 넣은 웰을 음성 대조군으로, 바이러스 희석용액을 넣지 않고 세포만 넣은 웰을 양성 대조군으로 각각 사용하였다.
배양액을 제거하고 살아있는 세포를 염색하기 위하여 뉴트랄 레드(neutral red) 용액 100 ㎕씩을 첨가한 후 37℃, 5% CO2 조건에서 2시간 동안 배양하였다. 상등액을 제거한 후 100% 에탄올과 1% 아세트산을 1:1로 섞어서 100 ㎕씩 넣어주었다. 염색된 세포를 잘 흔들어서 녹인 후 540 ㎚에서 흡광도를 측정하였다. 음성 대조군을 블랭크(blank)로 하고, 양성 대조군을 세포 성장 100%로 간주하여 50% 세포 성장시의 농도(ED50)를 계산하였다.
그 결과, 표 8에서 보는 바와 같이, IFNα-40K PEG는 그 활성도가 천연형의 4.8% 수준으로 떨어짐을 확인할 수 있다. 특히, 수식된 PEG의 크기가 클수록 혈중 안정성은 증가하지만 상대적으로 활성도가 점차 감소하였는데, 인터페론 알파의 경우, 12 kDa PEG가 수식된 경우에는 25%, 40 kDa PEG가 수식된 경우에는 약 7% 정도의 시험관내 활성을 갖는다고 보고된 바 있다(P. Bailon et al., Bioconjugate Chem. 12: 195~202, 2001). 즉, PEG의 분자량이 증가하면 혈중반감기는 길어지게 되나 상대적으로 활성이 급격하게 감소되므로, 혈중반감기가 길면서 활성도 뛰어난 단백질 결합체의 개발이 요구되고 있다. 또한, IFNα-PEG-알부민 결합체도 천연형에 비하여 약 5.2% 정도로 낮은 활성을 나타내었으나, 본 발명의 IFNα-PEG-Fc 결합체 및 IFNα-PEG-DG Fc 결합체는 천연형에 비하여 상대적 활성도가 28.1% 및 25.7%로 획기적으로 높아짐을 확인할 수 있었고, 재조합 AG Fc 유도체를 사용한 결합체에서도 유사한 활성 증가효과를 보였다. 이와 같은 결과로부터 혈중반감기의 획기적 증가와 더불어 인터페론 알파와 면역글로불린 Fc 영역의 결합체의 생체내 약효가 매우 뛰어날 것을 기대할 수 있다.
<4-2> 인간 성장 호르몬 단백질 결합체의 세포내 활성비교
인간 성장 호르몬 단백질 결합체의 세포내 활성을 비교하기 위하여 hGH-PEG-Fc, hGH-40K PEG 및 hGH-PEG-알부민의 세포내 활성을 비교 시험하였다.
인간 성장 호르몬 의존성 유사분열을 하는 세포인 랫트 결절 림포종(rat node lymphoma) 세포주인 Nb2 세포(European Collection of Cell Cultures(ECACC) #97041101)를 이용하여 세포내 활성도를 시험관내 분석을 통해 측정하였다.
Nb2 세포를 배양액(Fisher’s medium)에 10% 소 태아 혈청(FBS, fetal bovine serum), 0.075% NaCO3, 0.05 mM 2-메르캅토에탄올 및 2 mM 글루타민을 첨가한 배지에서 배양한 후, 10% 소 태아 혈청을 제외한 동일한 배지에서 24시간 동안 더 배양하였다. 배양액에서 배양된 세포의 수를 세어 약 2×104개의 세포를 96웰 플레이트의 각 웰에 넣은 후, hGH-PEG-Fc, hGH-40K PEG, hGH-PEG-알부민, 대조군인 국제표준품(National Institute for Biological Standards and Control, NIBSC) 및 천연형 인간 성장 호르몬(HM-hGH)을 각각 희석하여 농도별로 첨가한 후 37℃, CO2 배양기에서 48시간 동안 배양하였다. 이후 세포의 성장 정도(각 웰의 세포 수)를 측정하기 위해 세포 염색약(cell titer 96 Aqueous One Solution, Promega사)을 각 웰에 25 ㎕씩 넣은 후, 4시간 동안 배양하였다. 이후 490 ㎚에서 흡광도를 측정하여 각 시료의 역가를 계산하였고, 그 결과를 하기 표 9에 나타내었다.
표 9에서 볼 수 있듯이, 인간 성장 호르몬의 경우도 hGH-40K PEG의 활성도는 천연형의 약 7.6%로 저하되었고, hGH-PEG-알부민 결합체의 시험관내 활성은 천연형 대비 약 5.2% 정도로 낮은 활성을 나타내었다. 그러나, 본 발명의 hGH-PEG-Fc 결합체는 상대적 활성도가 천연형 대비 28% 이상 획기적으로 증가하였다. 이와 같은 결과로부터, 혈중반감기의 획기적 증가와 더불어 인간 성장 호르몬과 면역글로불린 Fc 영역의 단백질 결합체의 생체내 약효가 매우 뛰어날 것으로 기대할 수 있다. 또한, 본 발명의 면역글로불린 Fc 단백질 결합체의 활성 증가는 면역글로불린 Fc로 인한 혈중 안정성 증가 및 수용체와의 결합력 보존, 또는 비펩타이드성 중합체로 인해 형성된 공간적 여유에 의한 것으로 파악되며, 이러한 작용은 다른 생리활성 단백질들의 면역글로불린 Fc 단백질 결합체에서도 유사할 것으로 기대된다.
<4-3> 과립구 콜로니 자극인자 단백질 결합체의 세포내 활성비교
과립구 콜로니 자극인자 유도체의 단백질 결합체의 세포내 활성비교를 위하여, 천연형 G-CSF(Filgrastim, 제일약품(주)), 17Ser-G-CSF 유도체, 20K PEG-G-CSF(Neulasta사), 40K PEG-17S-G-CSF, 17Ser-G-CSF-PEG-알부민 및 17S-G-CSF-PEG-Fc의 세포내 활성을 측정하였다.
우선, 인간 골수 기원의 세포주인 HL-60(ATCC CCL-240, Promyelocytic leukemia patient/36 yr old Caucasian female)을 10%의 소 태아 혈청을 포함하는 RPMI 1640 배지에서 배양하다가, 세포의 숫자를 약 2.2×105 세포/㎖이 되도록 조정한 후, DMSO(dimethylsulfoxide, culture grade, Sigma사)를 최종 1.25%(v/v)가 되도록 첨가하였다. 위의 세포주를 96웰 플레이트(Corning/low evaporation 96 well plate)에 90 ㎕씩 넣어서 웰당 세포가 약 2×104개가 되도록 한 후, 5% CO2가 공급되는 37℃ 배양기에서 약 72시간 동안 배양하였다.
G-CSF ELISA 키트(R&D systems사)를 이용하여 농도가 결정되어진 각 시료들을 동일한 농도가 되도록 RPMI 1640으로 희석하여 최종 농도가 10 ㎍/㎖이 되도록 하였고, 이를 다시 RPMI 1640으로 1/2로 희석하는 것을 19회 반복하였다. 이렇게 만들어진 시료를 배양 중인 HL-60 세포주의 각 웰에 10 ㎕씩 가하여, 최종 농도가 1 ㎍/㎖로부터 연속적으로 반감되도록 하였다. 위에서 제조한 단백질 시료들을 처리한 세포주는 37℃ 배양기에서 72시간을 다시 배양하였다.
배양 후 세포주의 증가 정도를 알아보기 위하여, CellTiter96TM(Cat. No. G4100, Promega사)을 이용하여 증가한 세포주의 숫자를 670 ㎚ 파장에서의 흡광도로 결정하여 분석하였다.
그 결과, 표 10에서 보는 바와 같이, G-CSF의 아미노산을 치환시킨 17Ser-G-CSF 유도체의 면역글로불린 Fc 단백질 결합체도 천연형 단백질의 단백질 결합체와 유사한 효과를 나타내었다. 17Ser-G-CSF-PEG의 경우에는 PEG로 수식되지 않은 것에 비하여 혈중반감기는 증가하지만 활성도는 떨어짐이 이미 보고된 바 있다(대한민국 특허공개 제2004-83268호). 특히, 수식된 PEG의 크기가 클수록 혈중 안정성은 증가하지만 상대적으로 활성도가 점차 떨어짐을 알 수 있고, 17Ser-G-CSF-40K PEG는 천연형에 비하여 약 10% 이하의 매우 낮은 활성도를 나타내었다. 즉, PEG의 분자량이 증가하면 혈중반감기는 길어지게 되나 상대적으로 활성이 급격하게 감소되므로, 혈중반감기가 길면서 활성도 뛰어난 단백질 결합체의 개발이 요구되고 있다. 17Ser-G-CSF-PEG-알부민도 천연형에 비하여 약 23% 정도로 낮은 활성을 나타내었으나, 17Ser-G-CSF-PEG-Fc는 천연형에 비하여 상대적 활성도가 51% 이상으로 높아짐을 확인할 수 있었다. 이로부터 혈중반감기의 획기적 증가와 더불어 면역글로불린 Fc 영역과 17Ser-G-CSF 유도체의 결합체의 생체내 약효가 매우 뛰어날 것으로 기대할 수 있다.
<4-4> Fab’ 결합체의 세포 독성 중화 시험
실시예 8 및 9에서 제조된 Fab’-S-PEG-N-Fc, Fab’-N-PEG-N-Fc 결합체, 및 비교예 3에서 제조된 Fab’-S-40K PEG 연결체의 시험관내 활성 실험을 진행하였다. 마우스 섬유아세포주 L929(ATCC CRL-2148)를 이용하여 TNFα의 세포 독성을 측정하는 실험을 기본 골격으로 하여 Fab’가 TNFα의 세포 괴사 활성을 얼마나 중화시키는가를 측정하였다.
Fab’-S-PEG-N-Fc, Fab’-N-PEG-N-Fc 결합체 및 Fab’-S-40K PEG 연결체를 각각 2배씩 순차적으로 희석하여 96웰 플레이트의 각 웰에 100 ㎕씩 분주한 후, rhTNF-α(R&D systems사) 및 RNA 합성의 저해제로 이용되는 악티노마이신-디(actinomycin D, Sigma사)를 각각 최종농도가 10 ng/㎖ 및 1 ㎍/㎖이 되도록 첨가하여 37℃, 5% CO2에서 30 분간 반응시킨 뒤 분석용 마이크로플레이트로 옮겼다. 플레이트의 각 웰에 L929 세포주를 5×104 개/50 ㎕ 배지로 첨가하여 37℃, 5% CO2 배양기에서 24시간 동안 배양하였다. 마이크로플레이트 내의 배양액을 제거한 뒤 PBS에 5 ㎎/㎖ 농도로 녹아 있는 MTT(Sigma사)를 50 ㎕씩 넣었다. 약 4시간 동안 37℃, 5% CO2 배양기에서 배양하였다. 150 ㎕의 DMSO를 첨가하여 녹인 후, 540 ㎚에서 흡광도를 측정하여 세포 독성 중화 정도를 확인하였다. 대조군으로는 실시예 8의 단계 1에서 정제한 Fab’을 사용하였다.
그 결과, 도 16에 나타난 바와 같이, 실험에 사용한 모든 단백질 결합체들은 Fab’과 비슷한 역가를 나타내었으며, 이러한 결과로부터 Fab’의 N-말단 또는 C-말단 근처의 유리 시스테인 잔기에 PEG를 통해 면역글로불린 Fc를 결합시킨 단백질 결합체들은 Fab’의 혈중반감기를 획기적으로 증가시킴은 물론 생체내 활성도도 높게 유지시킴을 알 수 있다.
<4-5> CDC 활성 측정
상기 실시예에서 제조한 유도체들과 대장균 형질전환체로부터 발현되어 정제된 면역글로불린 불변영역 단백질들이 인간 C1q와 결합하는지 여부를 확인하기 위해, 하기와 같이 활성효소 면역측정 분석법(ELISA)을 수행하였다. 실험군으로서 형질전환체 HM10932 및 HM10927 으로부터 생산된 면역글로불린 불변영역 시료와 상기 실시예들에서 제조한 유도체들을 사용하였으며 비교군으로 당이 결합되어 있는 면역글로불린(IVIG-글로불린 에스, 녹십자 PBM)을 비롯하여 상업화되어 치료용 항체로 쓰이고 있는 여러 항체들을 사용하였다. 상기 실험군과 비교군 시료들을 10 mM 카보네이트 완충액(pH 9.6)에 1 ㎍/㎖의 농도로 준비하였다. 준비된 시료를 96-웰 플레이트(Nunc)에 웰당 200 ng의 양으로 분주한 후 4℃에서 밤새 코팅한 다음, 웰 플레이트를 PBS-T 용액(137 mM NaCl, 2 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4, 0.05% 트윈 20)으로 3번 세척하였다. 소 혈청 알부민을 1%의 농도로 PBS-T 용액에 용해시켜 준비한 차단(blocking) 완충액 250 ㎕를 각 웰에 첨가한 후, 상온에서 1시간 동안 방치하고 동일한 PBS-T 용액으로 3번 세척하였다. 표준액과 시료를 적당한 농도로 PBS-T 용액으로 희석한 후 항체가 코팅된 웰에 점적하여 상온에서 1시간 동안 방치시켜 반응시킨 후 다시 PBS-T 용액으로 3번 세척하였다. 차단반응이 완료된 플레이트에 2 ㎍/㎖ C1q(R&D systems사, 미국)를 첨가한 후 2시간 동안 상온에서 반응시켰으며, 반응이 완료된 플레이트를 상기 PBS-T 용액으로 6번 세척하였다. 인간의 항-인간 C1q 항체-퍼옥시다제 컨쥬게이트(Biogenesis사, 미국)를 차단 완충용액에 1000:1로 희석하여 각 웰에 200 ㎕씩 점적한 후 1시간 동안 상온에서 반응시켰다. 반응이 끝난 뒤 각 웰을 PBS-T 용액으로 3번 세척한 후 발색용액 A와 B(칼라-A-안정화 퍼옥시다제 [Color A-Stabilized peroxide] 용액 및 칼라 B-안정화 크로모젠 [Color B-stabilized chromogen] 용액, DY 999, R&D Systems사)를 동량으로 혼합하여 각 웰에 200 ㎕씩 첨가하고 30분간 방치하였다. 그 후에 반응 정지용액인 2 M 황산을 50 ㎕씩 첨가하여 반응을 정지시켰다. 반응이 완료된 웰 플레이트는 마이크로플레이트 판독기(Molecular Device사)를 이용하여 450 ㎚ 파장에서 표준액과 검액의 흡광도를 측정하였으며, 그 결과를 도 17, 18에 각각 나타내었다.
면역글로불린의 Fc 영역에서의 보체 활성을 subclass에 따라 비교해본 결과 인간 면역글로불린 IgG1(Fitzgerald), IgG2(Fitzgerald), IgG4(Fitzgerald)의 순서대로 C1q에 대한 높은 결합력을 가지고 있음을 확인 할 수 있었고 이에 따라 보체 활성도 subclass 간에 차이가 있음을 알 수 있었다. 상기 실험에 사용한 IVIG의 경우 IgG subclass들의 집합체이지만 IgG1이 거의 대부분을 차지 하고 있으므로 분리 정제된 IgG1 과 거의 유사한 친화도를 보였다. 이러한 대조군과 비교하여 볼 때 비당쇄화에 의한 C1q의 친화도 변이는 보체 활성이 가장 강한 IgG1 Fc에서 현저하게 감소하는 것을 볼 수가 있으며, 이미 보체 반응이 없는 것으로 알려진 IgG4 Fc에서는 C1q에 대한 결합력이 거의 없는 것으로 나타나 보체 활성이 없는 뛰어난 재조합 캐리어임을 알 수 있었다. (도 17)
C1q 친화도가 제거된 캐리어의 특성이 생리활성 펩타이드와 결합체를 만든 후 에도 여전히 유지되는지를 보기 위하여, IFN alpha를 모델로하여 당쇄화된 Fc, 효소를 이용한 탈당쇄화된 Fc 및 당쇄화가 제거된 재조합 Fc를 캐리어로 사용하여 각 결합체를 만든 후 C1q에 대한 결합력을 조사하였다. 당쇄화된 Fc와 IFNa 결합체(IFNα-PEG-Fc: Glycosylated IgG1Fc)는 C1q에 대한 여전히 높은 친화도를 유지하지만, 여기에 PNGaseF등을 이용하여 탈당쇄화를 시킨 인터페론 결합체(IFNα-PEG-DGFc: Deglycosylated IgG1Fc)는 결합력이 현격하게 낮아짐을 확인하였고, 그 정도는 비당쇄화 된 대장균 유래의 Fc 결합체와 유사한 수준의 C1q에 대한 결합력을 나타내었다. 뿐만 아니라 IgG1의 비당쇄화된 Fc를 이용한 인터페론 결합체(IFNα-PEG-AGFcG1: Aglycosylated IgG1Fc)를 IgG1에서 IgG4로 바꾼 인터페론 결합체(IFNα-PEG-FcG4 유도체1: Aglycosylated IgG4Fc) 경우 C1q에 대한 친화도가 완전히 제거되는 것을 볼 수 있었고, 결합체를 비당쇄화된 IgG4 Fc 단량체로 바꾼 결합체 (IFNα-PEG-FcG4 유도체2: Aglycosylated IgG4Fc) 경우에도 역시 C1q에 대한 결합능력은 완전히 제거되는 것으로 보아 항체단편의 effector 기능이 없는 좋은 캐리어임을 확인 할 수 있었다. (도 18)
본 발명의 IgG Fc 단편은 캐리어로 사용되어 약물의 혈중반감기를 증가시키고 약물의 생체내 활성을 유지시켜주며, 특히 폴리펩타이드 약물의 경우 폴리펩타이드 약물의 혈중반감기 증가가 기존에 보고된 어떠한 변형 단백질보다도 높고, 기존 지속형 제형의 가장 큰 단점인 역가의 감소를 극복하여, 종래 가장 효과가 좋은 것으로 알려진 알부민을 이용한 경우보다 월등한 혈중 지속성과 생체내 활성을 가질 뿐만 아니라, 면역반응 유발의 위험도 거의 없어 단백질 약물의 지속형 제재 개발에 유용하게 이용될 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 단백질 약물의 지속형 제제는 잦은 주사로 인한 환자의 고통을 감소시킬 수 있고, 활성 폴리펩타이드의 혈중 농도를 지속적으로 유지하여 약효를 안정적으로 나타낼 수 있다.
<110> HANMI PHARM. IND. CO., LTD.
<120> IgG Fc FRAGMENT FOR A DRUG CARRIER AND METHOD FOR THE PREPARATION
THEREOF
<150> KR 10-2003-0080299
<151> 2003-11-13
<160> 23
<170> KopatentIn 1.71
<210> 1
<211> 35
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> primer
<400> 1
cgtcatgccc agcacctgag ttcctggggg gacca 35
<210> 2
<211> 42
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> primer
<400> 2
gggggatcct catttaccca gagacaggga gaggctcttc tg 42
<210> 3
<211> 12
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 3
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro
1 5 10
<210> 4
<211> 663
<212> DNA
<213> homo sapiens
<400> 4
tcatgcccag cacctgagtt cctgggggga ccatcagtct tcctgttccc cccaaaaccc 60
aaggacactc tcatgatctc ccggacccct gaggtcacgt gcgtggtggt ggacgtgagc 120
caggaagacc ccgaggtcca gttcaactgg tacgtggatg gcgtggaggt gcataatgcc 180
aagacaaagc cgcgggagga gcagttcaac agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc 240
gtcctgcacc aggactggct gaacggcaag gagtacaagt gcaaggtctc caacaaaggc 300
ctcccgtcct ccatcgagaa aaccatctcc aaagccaaag ggcagccccg agagccacag 360
gtgtacaccc tgcccccatc ccaggaggag atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc 420
ctggtcaaag gcttctaccc cagcgacatc gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg 480
gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg ctggactccg acggctcctt cttcctctac 540
agcaggctaa ccgtggacaa gagcaggtgg caggagggga atgtcttctc atgctccgtg 600
atgcatgagg ctctgcacaa ccactacaca cagaagagcc tctccctgtc tctgggtaaa 660
tga 663
<210> 5
<211> 69
<212> DNA
<213> homo sapiens
<400> 5
atgaaaaaga caatcgcatt tcttcttgca tctatgttcg ttttttctat tgctacaaat 60
gcccaggcg 69
<210> 6
<211> 45
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> primer
<400> 6
tctattgcta caaatgccca ggccttccca accattccct tatcc 45
<210> 7
<211> 45
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> primer
<400> 7
agataacgat gtttacgggt ccggaagggt tggtaaggga atagg 45
<210> 8
<211> 220
<212> PRT
<213> homo sapiens
<400> 8
Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
1 5 10 15
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
20 25 30
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe
35 40 45
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
50 55 60
Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
65 70 75 80
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
85 90 95
Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
100 105 110
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln
115 120 125
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
130 135 140
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
145 150 155 160
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
165 170 175
Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu
180 185 190
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
195 200 205
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
210 215 220
<210> 9
<211> 654
<212> DNA
<213> homo sapiens
<400> 9
gcacctgagt tcctgggggg accatcagtc ttcctgttcc ccccaaaacc caaggacact 60
ctcatgatct cccggacccc tgaggtcacg tgcgtggtgg tggacgtgag ccaggaagac 120
cccgaggtcc agttcaactg gtacgtggat ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag 180
ccgcgggagg agcagttcaa cagcacgtac cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac 240
caggactggc tgaacggcaa ggagtacaag tgcaaggtct ccaacaaagg cctcccgtcc 300
tccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa gggcagcccc gagagccaca ggtgtacacc 360
ctgcccccat cccaggagga gatgaccaag aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa 420
ggcttctacc ccagcgacat cgccgtggag tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac 480
tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc gacggctcct tcttcctcta cagcaggcta 540
accgtggaca agagcaggtg gcaggagggg aatgtcttct catgctccgt gatgcatgag 600
gctctgcaca accactacac acagaagagc ctctccctgt ctctgggtaa atga 654
<210> 10
<211> 217
<212> PRT
<213> homo sapiens
<400> 10
Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
210 215
<210> 11
<211> 33
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> primer
<400> 11
cgccgtgccc agcacctgaa ctcctggggg gac 33
<210> 12
<211> 33
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> primer
<400> 12
gggggatcct catttacccg gagacaggga gag 33
<210> 13
<211> 15
<212> PRT
<213> homo sapiens
<400> 13
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10 15
<210> 14
<211> 660
<212> DNA
<213> homo sapiens
<400> 14
ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc 60
aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc 120
cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc 180
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gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc 300
ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc aaagccaaag ggcagccccg agagccacag 360
gtgtacaccc tgcccccatc ccgggatgag ctgaccaaga accaggtcag cctgacctgc 420
ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg 480
gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg ctggactccg acggctcctt cttcctctac 540
agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg 600
atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 660
660
<210> 15
<211> 220
<212> PRT
<213> homo sapiens
<400> 15
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
1 5 10 15
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
20 25 30
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
35 40 45
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
50 55 60
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
65 70 75 80
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
85 90 95
Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
100 105 110
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
115 120 125
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
130 135 140
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
145 150 155 160
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
165 170 175
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
180 185 190
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
195 200 205
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 16
<211> 26
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> primer
<400> 16
cggcacctga actcctgggg ggaccg 26
<210> 17
<211> 651
<212> DNA
<213> homo sapiens
<400> 17
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ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac 480
tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc 540
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<210> 18
<211> 217
<212> PRT
<213> homo sapiens
<400> 18
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
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20 25 30
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Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
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195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
210 215
<210> 19
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> primer
<400> 19
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> primer
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<211> 12
<212> PRT
<213> homo sapiens
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<211> 657
<212> PRT
<213> homo sapiens
<400> 22
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1 5 10 15
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Cys Cys Ala Ala Ala Ala Cys Cys Cys Ala Ala Gly Gly Ala Cys Ala
50 55 60
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65 70 75 80
Gly Ala Cys Cys Cys Cys Thr Gly Ala Gly Gly Thr Cys Ala Cys Ala
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Thr Gly Ala Gly Gly Thr Cys Cys Ala Gly Thr Thr Cys Ala Ala Cys
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Thr Thr Cys Cys Thr Cys Thr Ala Cys Ala Gly Cys Ala Ala Gly Cys
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Thr Cys Ala Cys Cys Gly Thr Gly Gly Ala Cys Ala Ala Gly Ala Gly
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Ala
<210> 23
<211> 219
<212> PRT
<213> homo sapiens
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Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
210 215
Claims (12)
- IgG Fc, 이의 조합(combination) 또는 이의 하이브리드(hybrid)인, 약물 캐리어 Fc 단편.
- 제1항에 있어서, IgG가 IgG2 또는 IgG4인 Fc 단편.
- 제2항에 있어서, IgG가 IgG4인 Fc 단편,
- 제1항에 있어서, 비당쇄화된 Fc 단편.
- 제4항에 있어서, 비당쇄화된 IgG4 Fc 단편.
- 제5항에 있어서, 인간 유래의 비당쇄화된 IgG4 Fc 단편.
- 제1항에 있어서, 서열번호 8, 10 또는 23의 아미노산 서열을 가지는 Fc 단편 .
- 제1항의 Fc 단편을 암호화하는 유전자.
- 제8항에 있어서, 서열번호 4, 9 또는 22인 유전자.
- 제9항의 유전자 중 선택되는 서열을 갖는 재조합 벡터.
- 제10항의 재조합 벡터로 형질전환된 형질전환체.
- 제11항의 형질전환된 재조합 미생물을 배양하여 Fc 단백질을 수득하는 방법.
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Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR20180071241A (ko) * | 2013-07-12 | 2018-06-27 | 한미약품 주식회사 | FcRn 결합력이 유지되는 면역글로불린 Fc 결합체 |
Families Citing this family (255)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7157555B1 (en) * | 1997-08-08 | 2007-01-02 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Exendin agonist compounds |
US7829084B2 (en) * | 2001-01-17 | 2010-11-09 | Trubion Pharmaceuticals, Inc. | Binding constructs and methods for use thereof |
US7754208B2 (en) | 2001-01-17 | 2010-07-13 | Trubion Pharmaceuticals, Inc. | Binding domain-immunoglobulin fusion proteins |
ES2359562T3 (es) | 2002-12-20 | 2011-05-24 | Amgen, Inc. | Agentes de unión que inhiben miostatina. |
EP3552627A1 (en) | 2003-05-06 | 2019-10-16 | Bioverativ Therapeutics Inc. | Clotting factor-fc chimeric proteins to treat hemophilia |
TWI353991B (en) | 2003-05-06 | 2011-12-11 | Syntonix Pharmaceuticals Inc | Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids |
EP3192872A1 (en) | 2003-08-26 | 2017-07-19 | The Regents of the University of Colorado, a body corporate | Inhibitors of serine protease activity and their use in methods and compositions for treatment of bacterial infections |
US8263084B2 (en) * | 2003-11-13 | 2012-09-11 | Hanmi Science Co., Ltd | Pharmaceutical composition for treating obesity-related disease comprising insulinotropic peptide conjugate |
KR101135244B1 (ko) * | 2007-11-29 | 2012-04-24 | 한미사이언스 주식회사 | 인슐린 분비 펩타이드 결합체를 포함하는 비만 관련질환 치료용 조성물 |
US8110665B2 (en) * | 2003-11-13 | 2012-02-07 | Hanmi Holdings Co., Ltd. | Pharmaceutical composition comprising an immunoglobulin FC region as a carrier |
KR100775343B1 (ko) | 2003-11-13 | 2007-11-08 | 한미약품 주식회사 | 면역글로불린 Fc 영역을 캐리어로 포함하는 약제학적조성물 |
JP4874954B2 (ja) * | 2004-04-21 | 2012-02-15 | エノビア ファーマ インコーポレイティド | 骨送達複合体ならびにタンパク質に骨を標的化させるためのその使用方法 |
US20070081984A1 (en) | 2005-10-11 | 2007-04-12 | Shunji Tomatsu | Compositions and methods for treating hypophosphatasia |
MX2007000216A (es) * | 2004-07-08 | 2007-03-15 | Amgen Inc | Peptidos terapeuticos. |
KR100594607B1 (ko) * | 2004-11-03 | 2006-06-30 | 재단법인서울대학교산학협력재단 | 신규한 경구투여용 재조합 인간 성장호르몬 분비미생물제제 및 그 제조방법 |
US20090087478A1 (en) * | 2004-12-27 | 2009-04-02 | Progenics Pharmaceuticals (Nevada), Inc. | Orally Deliverable and Anti-Toxin Antibodies and Methods for Making and Using Them |
CA2597346A1 (en) * | 2005-02-14 | 2006-08-17 | Apollo Life Sciences Limited | A molecule and chimeric molecules thereof |
KR100754667B1 (ko) * | 2005-04-08 | 2007-09-03 | 한미약품 주식회사 | 비펩타이드성 중합체로 개질된 면역글로불린 Fc 단편 및이를 포함하는 약제학적 조성물 |
US7833979B2 (en) | 2005-04-22 | 2010-11-16 | Amgen Inc. | Toxin peptide therapeutic agents |
CN105012953B (zh) | 2005-07-25 | 2018-06-22 | 阿普泰沃研发有限责任公司 | 用cd37-特异性和cd20-特异性结合分子减少b-细胞 |
US8008453B2 (en) | 2005-08-12 | 2011-08-30 | Amgen Inc. | Modified Fc molecules |
JP5846712B2 (ja) | 2005-08-16 | 2016-01-20 | ハンミ サイエンス カンパニー リミテッドHanmi Scienceco.,Ltd. | 開始メチオニン残基が除去された免疫グロブリンFc領域の大量生産方法 |
KR100824505B1 (ko) * | 2005-08-16 | 2008-04-22 | 한미약품 주식회사 | 개시 메티오닌 잔기가 제거된 면역글로불린 Fc 영역의대량 생산방법 |
CN101534865A (zh) * | 2005-10-19 | 2009-09-16 | Ibc药品公司 | 生物活性装配体的制备方法及其用途 |
US20070122408A1 (en) * | 2005-10-20 | 2007-05-31 | The Scripps Research Institute | Fc Labeling for Immunostaining and Immunotargeting |
TW200732350A (en) * | 2005-10-21 | 2007-09-01 | Amgen Inc | Methods for generating monovalent IgG |
US8067562B2 (en) | 2005-11-01 | 2011-11-29 | Amgen Inc. | Isolated nucleic acid molecule comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:1 |
SG10201600950TA (en) | 2005-11-28 | 2016-03-30 | Genmab As | Recombinant monovalent antibodies and methods for production thereof |
AU2006321906C1 (en) * | 2005-12-06 | 2014-01-16 | Amgen Inc. | Uses of myostatin antagonists |
CN101002945B (zh) | 2006-01-20 | 2012-09-05 | 清华大学 | 一种用于肿瘤治疗的新型复合物 |
CN100475270C (zh) | 2006-01-20 | 2009-04-08 | 清华大学 | 一种治疗肿瘤的药物及其应用 |
RU2487888C2 (ru) * | 2006-06-12 | 2013-07-20 | ЭМЕРДЖЕНТ ПРОДАКТ ДИВЕЛОПМЕНТ СИЭТЛ, ЭлЭлСи | Одноцепочечные мультивалентные связывающие белки с эффекторной функцией |
PL2061803T5 (pl) | 2006-08-28 | 2023-03-27 | Ares Trading S.A. | Proces oczyszczania białek zawierających fc |
US20140147441A1 (en) * | 2006-09-12 | 2014-05-29 | The General Hospital Corporation | Compositions containing alpha-1-antitrypsin and methods for use |
US7803769B2 (en) | 2006-10-25 | 2010-09-28 | Amgen Inc. | OSK1 peptide analogs and pharmaceutical compositions |
US20080181903A1 (en) * | 2006-12-21 | 2008-07-31 | Pdl Biopharma, Inc. | Conjugate of natriuretic peptide and antibody constant region |
JP2008169195A (ja) * | 2007-01-05 | 2008-07-24 | Hanmi Pharmaceutical Co Ltd | キャリア物質を用いたインスリン分泌ペプチド薬物結合体 |
CN101219219B (zh) | 2007-01-10 | 2013-02-13 | 北京普罗吉生物科技发展有限公司 | 包含血管抑素或其片段的复合物、其制备方法及应用 |
WO2008127780A2 (en) * | 2007-02-21 | 2008-10-23 | Nantero, Inc. | Symmetric touch screen system with carbon nanotube-based transparent conductive electrode pairs |
US8501678B2 (en) | 2007-03-06 | 2013-08-06 | Atara Biotherapeutics, Inc. | Variant activin receptor polypeptides and uses thereof |
US7947646B2 (en) | 2007-03-06 | 2011-05-24 | Amgen Inc. | Variant activin receptor polypeptides |
US8420779B2 (en) | 2007-05-22 | 2013-04-16 | Amgen Inc. | Compositions and methods for producing bioactive fusion proteins |
DK2662449T3 (en) * | 2007-05-30 | 2017-05-15 | Postech Academy-Industry- Found | immunoglobulin fusion proteins |
EP2167669A2 (en) | 2007-05-31 | 2010-03-31 | Genmab A/S | Transgenic animals producing monovalent human antibodies and antibodies obtainable from these animals |
KR101580938B1 (ko) | 2007-06-01 | 2015-12-30 | 유니버시티 오브 매릴랜드, 발티모어 | 면역글로불린 불변영역 Fc 수용체 결합제 |
US20100310561A1 (en) * | 2007-06-06 | 2010-12-09 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Natriuretic fusion proteins |
WO2008156713A2 (en) * | 2007-06-12 | 2008-12-24 | Wyeth | Anti-cd20 therapeutic compositions and methods |
CN101990439A (zh) * | 2007-07-06 | 2011-03-23 | 特鲁比昂药品公司 | 具有置于c末端的特异性结合结构域的结合肽 |
US8492347B2 (en) * | 2007-10-17 | 2013-07-23 | The Regents Of The University Of California | Peptide for induction of immune tolerance as treatment for systemic lupus erythematosus |
JP2011503000A (ja) * | 2007-11-02 | 2011-01-27 | セントコア・オーソ・バイオテツク・インコーポレーテツド | 半合成GLP−1ペプチド−Fc融合コンストラクト、その方法及び使用 |
ATE513856T1 (de) * | 2008-04-11 | 2011-07-15 | Emergent Product Dev Seattle | Cd37-immuntherapeutikum und kombination mit bifunktionellem chemotherapeutikum davon |
MY151184A (en) * | 2008-07-23 | 2014-04-30 | Hanmi Science Co Ltd | A polypeptide complex comprising non-peptidyl polymer having three functional ends |
RU2457856C2 (ru) * | 2008-08-05 | 2012-08-10 | Виктор Владимирович Чалов | Композиция, обладающая противовирусным и антимикробным действием, для перорального применения |
BRPI0916890A2 (pt) * | 2008-08-07 | 2019-09-24 | Ipsen Pharma Sas | composto, composição farmacêutica, métodos para elicitar um efeito agonista, e um efeito antagonista de um receptor de gip, para tratar condições ou doeças, para tratar distúrbios, para tratar ou prevenir causas secundárias de diabete, e para estimular secreção de insulina em um indivíduo, e, uso de um composto |
CN102170895A (zh) | 2008-08-07 | 2011-08-31 | 益普生制药股份有限公司 | 葡萄糖依赖性促胰岛素多肽类似物 |
KR20130133103A (ko) * | 2008-08-07 | 2013-12-05 | 입센 파마 에스.에이.에스 | N-말단이 변형된 포도당 의존적인 인슐린 분비 자극성 폴리펩타이드(gip)의 유사체 |
WO2010033207A1 (en) * | 2008-09-19 | 2010-03-25 | Nektar Therapeutics | Polymer conjugates of therapeutic peptides |
WO2010033216A1 (en) * | 2008-09-19 | 2010-03-25 | Nektar Therapeutics | Polymer conjugates of nesiritide peptides |
AU2009308909A1 (en) * | 2008-10-31 | 2010-05-06 | Amgen Inc. | Materials and methods relating to stem cell mobilization by multi-PEGylated granulocyte colony stimulating factor |
LT2370463T (lt) | 2008-11-26 | 2016-12-12 | Amgen Inc. | Stabilizuotas aktivino iib receptoriaus variantas |
US20100143353A1 (en) * | 2008-12-04 | 2010-06-10 | Mosser David M | POLYPEPTIDES COMPRISING Fc FRAGMENTS OF IMMUNOGLOBULIN G (lgG) AND METHODS OF USING THE SAME |
US20100158893A1 (en) * | 2008-12-19 | 2010-06-24 | Baxter International Inc. | Systems and methods for obtaining immunoglobulin from blood |
TW201031752A (en) * | 2009-01-19 | 2010-09-01 | Hanmi Pharm Ind Co Ltd | Method for producing physiologically active protein or peptide using immunoglobulin fragment |
US9238878B2 (en) | 2009-02-17 | 2016-01-19 | Redwood Bioscience, Inc. | Aldehyde-tagged protein-based drug carriers and methods of use |
EP2401378B1 (en) | 2009-02-25 | 2013-08-14 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Metabolic engineering of a galactose assimilation pathway in the glycoengineered yeast pichia pastoris |
JP5739865B2 (ja) * | 2009-03-24 | 2015-06-24 | バイエル・ヘルスケア・エルエルシー | 第viii因子変異体および使用の方法 |
KR101183262B1 (ko) * | 2009-04-22 | 2012-09-14 | (주)알테오젠 | 체내 지속성을 유지함으로 체내 반감기가 증가된 단백질 또는 펩티드 융합체, 및 이를 이용하여 체내 반감기를 증가시키는 방법 |
US20120219538A1 (en) * | 2009-11-02 | 2012-08-30 | Therapeomic Ag | Stabilized protein formulations and use thereof |
US8765432B2 (en) | 2009-12-18 | 2014-07-01 | Oligasis, Llc | Targeted drug phosphorylcholine polymer conjugates |
CN102802617B (zh) * | 2009-12-18 | 2016-05-11 | 埃克索多斯生命科学有限合伙公司 | 用于稳定的液体药物制剂的方法和组合物 |
BR112012017982A2 (pt) * | 2010-01-19 | 2016-05-03 | Hanmi Science Co Ltd | formulações líquidas para conjugado de eritropoietina de longa ação |
EP2525787B1 (en) | 2010-01-19 | 2017-03-15 | Hanmi Science Co., Ltd. | Liquid formulations for long-acting g-csf conjugate |
WO2011093470A1 (ja) * | 2010-01-28 | 2011-08-04 | 協和発酵キリン株式会社 | Bone morphogenetic protein receptor 1B(BMPR1B)細胞外ドメイン又はその変異体を含む蛋白質を含有する骨疾患治療用医薬組成物 |
BR112012020882A2 (pt) | 2010-02-24 | 2015-11-03 | Merck Sharp & Dohme | métodos para produzir uma glicoproteína heteróloga e para produzir uma composição de glicoproteína, célula hospedeira, composição de glicoproteína, e, uso da pichia pastoris recombinante. |
US9175067B2 (en) * | 2010-03-08 | 2015-11-03 | Ge Healthcare Bio-Sciences Ab | Immunoglobulin G Fc region binding polypeptide |
AR080993A1 (es) * | 2010-04-02 | 2012-05-30 | Hanmi Holdings Co Ltd | Formulacion de accion prolongada de interferon beta donde se usa un fragmento de inmunoglobulina |
AR081755A1 (es) * | 2010-04-02 | 2012-10-17 | Hanmi Holdings Co Ltd | Formulacion de accion prolongada de la hormona estimuladora de los foliculos donde se usa un fragmento de inmunoglobulina, metodo de preparacion y metodo para tratar a un sujeto que sufre un trastorno reproductivo |
US9981017B2 (en) | 2010-04-02 | 2018-05-29 | Hanmi Science Co., Ltd. | Insulin conjugate using an immunoglobulin fragment |
AR081066A1 (es) * | 2010-04-02 | 2012-06-06 | Hanmi Holdings Co Ltd | Conjugado de insulina donde se usa un fragmento de inmunoglobulina |
MX2012012643A (es) | 2010-04-30 | 2013-01-22 | Alexion Pharma Internat Sarl | Metodos, composiciones, y kits para el tratamiento de trastornos de mineralizacion de matriz. |
CN103124788B (zh) | 2010-05-21 | 2016-01-13 | 梅里麦克制药股份有限公司 | 双特异性融合蛋白 |
KR101330868B1 (ko) * | 2010-06-08 | 2013-11-18 | 한미사이언스 주식회사 | 면역글로불린 단편을 이용한 인슐린 유도체 약물 결합체 |
KR20120002129A (ko) * | 2010-06-30 | 2012-01-05 | 한미홀딩스 주식회사 | 면역글로불린 단편을 이용한 제7인자(Factor Ⅶa)약물 결합체 |
KR101337797B1 (ko) * | 2010-07-14 | 2013-12-06 | 한미사이언스 주식회사 | 지속형 인간 성장 호르몬 결합체 액상 제제 |
KR101382593B1 (ko) * | 2010-07-21 | 2014-04-10 | 한미사이언스 주식회사 | 신규한 지속형 글루카곤 결합체 및 이를 포함하는 비만 예방 및 치료용 약학적 조성물 |
SI2598533T1 (sl) | 2010-07-28 | 2019-05-31 | Gliknik Inc. | Fuzijski proteini naravnih humanih proteinskih fragmentov za kreiranje urejeno multimeriziranih imunoglobulinskih Fc sestavkov |
WO2012053828A2 (ko) * | 2010-10-20 | 2012-04-26 | 주식회사 한독약품 | 인간 인터루킨-1 수용체 길항제-하이브리드 Fc 융합단백질 |
US8883134B2 (en) | 2010-10-20 | 2014-11-11 | Handok Pharmaceuticals, Inc. | Human interleukin-1 receptor antagonist—hybrid Fc fusion protein |
KR101303388B1 (ko) * | 2010-10-26 | 2013-09-03 | 한미사이언스 주식회사 | 지속형 인터페론 알파 결합체의 액상 제제 |
EP2465536A1 (en) * | 2010-12-14 | 2012-06-20 | CSL Behring AG | CD89 activation in therapy |
EP2655413B1 (en) | 2010-12-23 | 2019-01-16 | F.Hoffmann-La Roche Ag | Polypeptide-polynucleotide-complex and its use in targeted effector moiety delivery |
US9266939B2 (en) | 2010-12-27 | 2016-02-23 | Alexion Pharmaceuticals, Inc. | Compositions comprising natriuretic peptides and methods of use thereof |
CN103415621A (zh) | 2011-01-14 | 2013-11-27 | 雷德伍德生物科技股份有限公司 | 醛标记免疫球蛋白多肽及其使用方法 |
CN102309765B (zh) * | 2011-02-28 | 2013-10-16 | 北京韩美药品有限公司 | 包含免疫球蛋白Fc片段作为载体的长效抗凝多肽及其制备方法 |
MX343729B (es) | 2011-04-08 | 2016-11-18 | Amgen Inc | Factor de diferenciación de crecimiento 15 (gdf-15) y composiciones del mismo para usarse en el tratamiento o mejoramiento de trastornos metabólicos. |
UA113626C2 (xx) * | 2011-06-02 | 2017-02-27 | Композиція для лікування діабету, що містить кон'югат інсуліну тривалої дії та кон'югат інсулінотропного пептиду тривалої дії | |
CN102807619B (zh) * | 2011-06-03 | 2016-08-03 | 北京韩美药品有限公司 | 含有免疫球蛋白Fc片段和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的复合物及其药物组合物 |
AU2012267398B2 (en) | 2011-06-10 | 2016-10-13 | Hanmi Science Co., Ltd. | Novel oxyntomodulin derivatives and pharmaceutical composition for treating obesity comprising the same |
RU2733544C2 (ru) * | 2011-06-17 | 2020-10-05 | Ханми Сайенс Ко., Лтд. | Конъюгат, содержащий оксинтомодулин и фрагмент иммуноглобулина, и его применение |
EP2723370A4 (en) * | 2011-06-24 | 2015-06-03 | Univ Colorado Regents | COMPOSITIONS, PROCESS AND USE OF ALPHA-1-ANTITRYPHIN FUSION MOLECULES |
US10400029B2 (en) | 2011-06-28 | 2019-09-03 | Inhibrx, Lp | Serpin fusion polypeptides and methods of use thereof |
EP2726093A4 (en) * | 2011-06-28 | 2015-08-19 | Inhibrx Llc | WAP DOMAIN FUSION POLYPEPTIDES AND METHOD FOR THEIR USE |
KR20210032558A (ko) * | 2011-06-28 | 2021-03-24 | 인히브릭스, 인크. | 세르핀 융합 폴리펩타이드 및 이의 이용 방법 |
BR112014005091A2 (pt) | 2011-09-05 | 2017-06-13 | Beijing Hanmi Pharmaceutical Co Ltd | composição farmacêutica para o tratamento do câncer compreendendo conjugado de interferon alfa |
US9458214B2 (en) * | 2011-09-26 | 2016-10-04 | Novartis Ag | Dual function fibroblast growth factor 21 proteins |
MY168754A (en) * | 2011-10-06 | 2018-11-30 | Hanmi Science Co Ltd | Blood coagulation factor vii and viia derivatives, conjugates and complexes comprising the same, and use thereof |
WO2013065343A1 (ja) * | 2011-10-31 | 2013-05-10 | 株式会社 島津製作所 | 非ペプチドヒンジ部含有フレキシブル抗体様分子 |
KR20130049671A (ko) * | 2011-11-04 | 2013-05-14 | 한미사이언스 주식회사 | 생리활성 폴리펩타이드 결합체 제조 방법 |
SG10201605027XA (en) | 2011-12-19 | 2016-08-30 | Amgen Inc | Variant activin receptor polypeptides, alone or in combination with chemotherapy, and uses thereof |
CN103172745A (zh) * | 2011-12-21 | 2013-06-26 | 北京韩美药品有限公司 | 包含免疫球蛋白Fc片段的长效人内皮抑素 |
KR102041412B1 (ko) * | 2011-12-30 | 2019-11-11 | 한미사이언스 주식회사 | 면역글로불린 Fc 단편 유도체 |
KR101895047B1 (ko) * | 2011-12-30 | 2018-09-06 | 한미사이언스 주식회사 | 면역글로불린 단편을 이용한 위치 특이적 글루카곤 유사 펩타이드-2 약물 결합체 |
US20140050720A1 (en) | 2012-01-09 | 2014-02-20 | The Scripps Research Institute | Ultralong complementarity determining regions and uses thereof |
WO2013106489A1 (en) | 2012-01-09 | 2013-07-18 | The Scripps Research Institute | Humanized antibodies with ultralong cdr3s |
EP2802653A4 (en) | 2012-01-10 | 2015-09-02 | Univ Colorado Regents | ALPHA-1 ANTITRYPSIN FUSION MOLECULE COMPOSITIONS, METHODS AND USES THEREOF |
EP3683228A3 (en) | 2012-01-26 | 2020-07-29 | Amgen Inc. | Growth differentiation factor 15 (gdf-15) polypeptides |
AR090281A1 (es) | 2012-03-08 | 2014-10-29 | Hanmi Science Co Ltd | Proceso mejorado para la preparacion de un complejo polipeptidico fisiologicamente activo |
ES2751976T3 (es) | 2012-03-09 | 2020-04-02 | Csl Behring Ag | Composiciones que comprenden inmunoglobulinas de tipo secretor |
EP2636684A1 (en) | 2012-03-09 | 2013-09-11 | CSL Behring AG | Prevention of infection |
EP2636681A1 (en) | 2012-03-09 | 2013-09-11 | CSL Behring AG | Process for enriching IgA |
US10064951B2 (en) * | 2012-03-30 | 2018-09-04 | Hanmi Science Co., Ltd. | Liquid formulation of highly concentrated long-acting human growth hormone conjugate |
CA2871468C (en) * | 2012-04-23 | 2021-09-21 | Nrl Pharma, Inc. | Lactoferrin fusion protein and method for preparation thereof |
US10052366B2 (en) | 2012-05-21 | 2018-08-21 | Alexion Pharmaceuticsl, Inc. | Compositions comprising alkaline phosphatase and/or natriuretic peptide and methods of use thereof |
SI2859017T1 (sl) | 2012-06-08 | 2019-05-31 | Sutro Biopharma, Inc. | Protitelesa, ki vsebujejo specifične nenaravne aminokislinske ostanke, postopki njihove priprave in postopki njihove uporabe |
US9732161B2 (en) | 2012-06-26 | 2017-08-15 | Sutro Biopharma, Inc. | Modified Fc proteins comprising site-specific non-natural amino acid residues, conjugates of the same, methods of their preparation and methods of their use |
BR112014032193A2 (pt) | 2012-06-27 | 2017-06-27 | Hoffmann La Roche | métodos de produção de anticorpos biespecíficos e de determinação de combinação, anticorpo biespecífico, formulação e uso de anticorpo biespecífico |
CN104411718B (zh) | 2012-06-27 | 2018-04-24 | 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 | 用于制备包含特异性结合靶的至少一种结合实体的抗体Fc区缀合物的方法及其用途 |
KR101968344B1 (ko) | 2012-07-25 | 2019-04-12 | 한미약품 주식회사 | 옥신토모듈린 유도체를 포함하는 고지혈증 치료용 조성물 |
AR094821A1 (es) | 2012-07-25 | 2015-09-02 | Hanmi Pharm Ind Co Ltd | Formulación líquida de un conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada |
AR091902A1 (es) | 2012-07-25 | 2015-03-11 | Hanmi Pharm Ind Co Ltd | Formulacion liquida de un conjugado de insulina de accion prolongada |
AR092862A1 (es) | 2012-07-25 | 2015-05-06 | Hanmi Pharm Ind Co Ltd | Formulacion liquida de insulina de accion prolongada y un peptido insulinotropico y metodo de preparacion |
US10441665B2 (en) | 2012-07-25 | 2019-10-15 | Hanmi Pharm. Co., Ltd. | Liquid formulation of long acting insulinotropic peptide conjugate |
EP2885320A4 (en) | 2012-08-20 | 2016-04-06 | Gliknik Inc | MOLECULES WITH ANTIGEN-BINDING AND POLYVALENT FC GAMMA RECEPTOR BINDING ACTIVITY |
ES2907763T3 (es) | 2012-08-31 | 2022-04-26 | Sutro Biopharma Inc | Aminoácidos modificados que comprenden un grupo azido |
MX2015002407A (es) | 2012-09-14 | 2015-06-22 | Hoffmann La Roche | Metodo para produccion y seleccion de moleculas que comprenden al menos dos entidades diferentes y usos del mismo. |
US9561275B2 (en) | 2012-09-14 | 2017-02-07 | The Johns Hopkins University | Compositions and methods for rendering tumor cells susceptible to CD8+ T cell-mediated killing |
KR101993393B1 (ko) * | 2012-11-06 | 2019-10-01 | 한미약품 주식회사 | 옥신토모듈린 유도체를 포함하는 당뇨병 또는 비만성 당뇨병 치료용 조성물 |
EA039082B1 (ru) | 2012-11-06 | 2021-12-01 | Ханми Фарм. Ко., Лтд. | Жидкая композиция белкового конъюгата, содержащего оксинтомодулин и фрагмент иммуноглобулина |
EP2943512A4 (en) | 2013-01-11 | 2016-06-01 | California Inst Biomedical Res | FUSION BOVINE ANTIBODIES |
CN103217489B (zh) * | 2013-01-15 | 2016-03-09 | 珠海市丽珠单抗生物技术有限公司 | 一种测定蛋白纯化工艺过程中样品的糖基化和末端修饰情况的方法 |
KR102073748B1 (ko) * | 2013-01-31 | 2020-02-05 | 한미약품 주식회사 | 재조합 효모 형질전환체 및 이를 이용하여 면역글로불린 단편을 생산하는 방법 |
MX2015009901A (es) | 2013-02-01 | 2016-04-06 | Santa Maria Biotherapeutics Inc | Administración de un compuesto de antiactivina a a un sujeto. |
CA2900814A1 (en) | 2013-02-22 | 2014-08-28 | Zoetis Services Llc | In ovo administration of growth factors for improving poultry performance |
ES2743612T3 (es) * | 2013-03-05 | 2020-02-20 | Hanmi Pharm Ind Co Ltd | Procedimiento de preparación mejorado para producción de alto rendimiento de un conjugado de polipéptido fisiológicamente activo |
EP2970506A1 (en) | 2013-03-11 | 2016-01-20 | Novo Nordisk Health Care AG | Growth hormone compounds |
US20140271641A1 (en) * | 2013-03-14 | 2014-09-18 | University Of Guelph | Thrombospondin-1 polypeptides and methods of using same |
SG11201505926VA (en) | 2013-03-15 | 2015-09-29 | Biogen Ma Inc | Factor ix polypeptide formulations |
CN114717206A (zh) | 2013-03-15 | 2022-07-08 | Atyr 医药公司 | 组氨酰-trna合成酶-fc缀合物 |
KR101895634B1 (ko) * | 2013-05-31 | 2018-09-05 | 한미약품 주식회사 | 변이된 힌지 영역을 포함하는 IgG4 Fc 단편 |
US9764039B2 (en) | 2013-07-10 | 2017-09-19 | Sutro Biopharma, Inc. | Antibodies comprising multiple site-specific non-natural amino acid residues, methods of their preparation and methods of their use |
AR096891A1 (es) * | 2013-07-12 | 2016-02-03 | Hanmi Pharm Ind Co Ltd | Conjugado de monómero polipéptido biológicamente activo y conjugado de fragmento fc de inmunoglobulina, que muestra aclaramiento mediado por receptor reducido, y el método para la preparación del mismo |
WO2015010100A2 (en) | 2013-07-18 | 2015-01-22 | Fabrus, Inc. | Humanized antibodies with ultralong complementarity determining regions |
MA38873B1 (fr) | 2013-07-31 | 2018-11-30 | Amgen Inc | Constructions contenant le facteur 15 de différentiation de croissance (gdf-15) |
WO2015031673A2 (en) | 2013-08-28 | 2015-03-05 | Bioasis Technologies Inc. | Cns-targeted conjugates having modified fc regions and methods of use thereof |
HUE052447T2 (hu) | 2013-09-08 | 2021-04-28 | Kodiak Sciences Inc | A VIII. tényezõs zwitterionos polimer konjugációk |
EP3656391A1 (en) | 2013-09-09 | 2020-05-27 | CanImGuide Therapeutics AB | Immune system modulators |
KR102276304B1 (ko) | 2013-09-27 | 2021-07-14 | 한미약품 주식회사 | 지속형 인간 성장 호르몬 제제 |
KR20160058952A (ko) * | 2013-09-30 | 2016-05-25 | 쓰리엠 이노베이티브 프로퍼티즈 컴파니 | 에폭시화 지방 에스테르가 그 상에 배치된 섬유 및 와이프, 및 방법 |
WO2015070210A1 (en) | 2013-11-11 | 2015-05-14 | Wake Forest University Health Sciences | Epha3 and multi-valent targeting of tumors |
KR102406654B1 (ko) | 2014-01-20 | 2022-06-10 | 한미약품 주식회사 | 지속형 인슐린 및 그 용도 |
WO2015112597A1 (en) * | 2014-01-21 | 2015-07-30 | Belmont Biosciences, Inc. | Variants of igg fc with limited amine groups that retain functional properties |
CN106488933A (zh) * | 2014-03-31 | 2017-03-08 | 韩美药品株式会社 | 通过使用免疫球蛋白Fc片段连接改善蛋白质和肽的溶解度的方法 |
CN106459205B (zh) * | 2014-04-11 | 2021-04-09 | 免疫医疗有限责任公司 | 包含半胱氨酸工程化抗体的轭合化合物 |
AU2015254818A1 (en) * | 2014-04-28 | 2016-11-17 | The National Institute for Biotechnology in the Negev Ltd. | Variants of DR3 and use thereof |
KR20150133576A (ko) * | 2014-05-20 | 2015-11-30 | 삼성전자주식회사 | 화학적 개질된 표적화 단백질 및 그의 이용 |
AR100639A1 (es) | 2014-05-29 | 2016-10-19 | Hanmi Pharm Ind Co Ltd | Composición para tratar diabetes que comprende conjugados de análogos de insulina de acción prolongada y conjugados de péptidos insulinotrópicos de acción prolongada |
TWI684458B (zh) | 2014-05-30 | 2020-02-11 | 南韓商韓美藥品股份有限公司 | 包含胰島素及glp-1/昇糖素雙重促效劑之治療糖尿病之組成物 |
WO2015197593A1 (en) | 2014-06-27 | 2015-12-30 | Innate Pharma | MULTISPECIFIC NKp46 BINDING PROTEINS |
EP3160994A2 (en) * | 2014-06-27 | 2017-05-03 | Innate Pharma | Multispecific antigen binding proteins |
US9840553B2 (en) | 2014-06-28 | 2017-12-12 | Kodiak Sciences Inc. | Dual PDGF/VEGF antagonists |
WO2016007873A1 (en) | 2014-07-11 | 2016-01-14 | The Regents Of The University Of Michigan | Compositions and methods for treating craniosynostosis |
SG10202102467RA (en) | 2014-07-24 | 2021-04-29 | Genentech Inc | Methods of conjugating an agent to a thiol moiety in a protein that contains at least one trisulfide bond |
TWI802396B (zh) | 2014-09-16 | 2023-05-11 | 南韓商韓美藥品股份有限公司 | 長效glp-1/高血糖素受體雙促效劑治療非酒精性脂肝疾病之用途 |
US9616114B1 (en) | 2014-09-18 | 2017-04-11 | David Gordon Bermudes | Modified bacteria having improved pharmacokinetics and tumor colonization enhancing antitumor activity |
CN107208076A (zh) * | 2014-10-17 | 2017-09-26 | 科达制药 | 丁酰胆碱酯酶两性离子聚合物缀合物 |
RU2708068C2 (ru) | 2014-12-05 | 2019-12-04 | Алексион Фармасьютикалз, Инк. | Лечение судорог с использованием рекомбинантной щелочной фосфатазы |
KR102418477B1 (ko) | 2014-12-30 | 2022-07-08 | 한미약품 주식회사 | 글루카곤 유도체 |
MA40709B1 (fr) | 2014-12-30 | 2019-07-31 | Hanmi Pharmaceutical Co Ltd | Dérivé du glucagon à stabilité améliorée |
JP6868561B2 (ja) | 2015-01-28 | 2021-05-12 | アレクシオン ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッド | アルカリホスファターゼ欠損を有する被験者を治療する方法 |
US10881709B2 (en) | 2015-03-06 | 2021-01-05 | Canimguide Therapeutics Ab | Immune system modulators and compositions |
WO2016164501A1 (en) * | 2015-04-06 | 2016-10-13 | Acceleron Pharma Inc. | Single-arm type i and type ii receptor fusion proteins and uses thereof |
AU2016251640B2 (en) | 2015-04-22 | 2020-07-16 | Alivegen Inc. | Novel hybrid ActRIIB ligand trap proteins for treating muscle wasting diseases |
CN107531771A (zh) * | 2015-04-29 | 2018-01-02 | 意大利梅迪奥兰制药公司 | 可溶性嵌合白细胞介素‑10受体和其治疗用途 |
WO2016193380A1 (en) | 2015-06-02 | 2016-12-08 | Novo Nordisk A/S | Insulins with polar recombinant extensions |
KR20180032551A (ko) * | 2015-06-12 | 2018-03-30 | 유비아이 파마 인크. | 이뮤노글로불린 융합 단백질 및 그의 용도 |
US11820807B2 (en) * | 2015-06-12 | 2023-11-21 | Ubi Pharma Inc | Immunoglobulin fusion proteins and uses thereof |
WO2016207278A1 (en) | 2015-06-23 | 2016-12-29 | Innate Pharma | Multispecific nk engager proteins |
KR102005456B1 (ko) * | 2015-06-30 | 2019-07-30 | 한미약품 주식회사 | 신규 글루카곤 유도체 및 이의 지속형 결합체를 포함하는 조성물 |
JP6987741B2 (ja) | 2015-07-24 | 2022-01-05 | ハンミ ファーマシューティカル カンパニー リミテッド | 生理活性ポリペプチド結合体の製造方法 |
RU2745528C2 (ru) | 2015-08-17 | 2021-03-26 | Алексион Фармасьютикалз, Инк. | Производство щелочных фосфатаз |
UY36870A (es) | 2015-08-28 | 2017-03-31 | Hanmi Pharm Ind Co Ltd | Análogos de insulina novedosos |
CA2999138C (en) | 2015-09-21 | 2024-05-21 | Aptevo Research And Development Llc | Cd3 binding polypeptides |
KR102231217B1 (ko) | 2015-09-24 | 2021-03-24 | 한미약품 주식회사 | 면역글로불린 단편의 특정 위치를 연결 부위로 이용한 단백질 결합체 |
TW201718629A (zh) * | 2015-09-25 | 2017-06-01 | 韓美藥品股份有限公司 | 包含多個生理多肽及免疫球蛋白Fc區之蛋白質接合物 |
EP3355904A4 (en) | 2015-09-28 | 2019-06-12 | Alexion Pharmaceuticals, Inc. | IDENTIFICATION OF EFFECTIVE DOSE SHEETS FOR TISSUE-SPECIFIC ALKALINE PHOSPHATASE ENZYMERSAT THERAPY OF HYPOPHOSPHATASIA |
MA43348A (fr) | 2015-10-01 | 2018-08-08 | Novo Nordisk As | Conjugués de protéines |
CN116063566A (zh) | 2015-10-01 | 2023-05-05 | 热生物制品有限公司 | 作为异源嵌合蛋白邻接i型和ii型胞外结构域的组合物和方法 |
US10040840B2 (en) | 2015-10-02 | 2018-08-07 | Silver Creek Pharmaceuticals, Inc. | Bi-specific annexin A5/IGF-1 proteins and methods of use thereof to promote regeneration and survival of tissue |
US20170095577A1 (en) * | 2015-10-06 | 2017-04-06 | Washington University | Noninvasive imaging of focal atherosclerotic lesions using fluorescence molecular tomography |
US11400140B2 (en) | 2015-10-30 | 2022-08-02 | Alexion Pharmaceuticals, Inc. | Methods for treating craniosynostosis in a patient |
EP3395366B1 (en) * | 2015-12-21 | 2023-11-22 | Hefei Lifeon Pharmaceutical Co., Ltd. | Drug design method, obtained drug and application thereof |
KR20170079409A (ko) * | 2015-12-30 | 2017-07-10 | 한미약품 주식회사 | 지속형 인간 성장 호르몬 결합체의 신규 액상 제제 |
RU2744860C2 (ru) | 2015-12-30 | 2021-03-16 | Кодиак Сайенсиз Инк. | Антитела и их конъюгаты |
PE20181494A1 (es) | 2015-12-31 | 2018-09-18 | Hanmi Pharm Ind Co Ltd | Conjugado persistente de triple activador que activa el receptor de glucagon, glp-1 u gip |
EP3407917A1 (en) | 2016-01-27 | 2018-12-05 | Sutro Biopharma, Inc. | Anti-cd74 antibody conjugates, compositions comprising anti-cd74 antibody conjugates and methods of using anti-cd74 antibody conjugates |
AR107483A1 (es) * | 2016-01-29 | 2018-05-02 | Hanmi Pharm Ind Co Ltd | Conjugado de enzimas terapéuticas |
WO2017155569A1 (en) | 2016-03-08 | 2017-09-14 | Alexion Pharmaceuticals, Inc. | Methods for treating hypophosphatasia in children |
MX2018011833A (es) | 2016-04-01 | 2019-02-13 | Alexion Pharma Inc | Tratamiento para la debilidad muscular con fosfatasas alcalinas. |
EP3436020A4 (en) | 2016-04-01 | 2019-12-25 | Alexion Pharmaceuticals, Inc. | METHOD FOR TREATING HYPOPHOSPHATASIE IN TEENS AND ADULTS |
WO2017189432A1 (en) | 2016-04-26 | 2017-11-02 | R.P. Scherer Technologies, Llc | Antibody conjugates and methods of making and using the same |
EP3453758A4 (en) | 2016-05-02 | 2019-12-04 | Ajinomoto Co., Inc. | FC PROTEIN WITH AZID GROUP |
CN106008722B (zh) * | 2016-05-13 | 2019-10-15 | 未名生物医药有限公司 | 一种重组β-hNGF-Fc融合蛋白、制备方法及用途 |
EP3464573A4 (en) | 2016-06-06 | 2020-02-19 | Alexion Pharmaceuticals, Inc. | IMPACT OF METAL ON THE PRODUCTION OF ALKALINE PHOSPHATASES |
AU2017279538A1 (en) | 2016-06-07 | 2019-01-03 | Gliknik Inc. | Cysteine-optimized stradomers |
CA3029518A1 (en) | 2016-06-29 | 2018-01-04 | Hanmi Pharm. Co., Ltd. | Glucagon derivative, conjugate thereof, composition comprising same, and therapeutic use thereof |
WO2018035420A1 (en) | 2016-08-18 | 2018-02-22 | Alexion Pharmaceuticals, Inc. | Methods for treating tracheobronchomalacia |
JOP20190019A1 (ar) * | 2016-08-30 | 2019-02-12 | Genexine Inc | تركيبة صيدلانية لعلاج نقص في هرمون نمو يحتوي على بروتين اندماجي لهرمون نمو بشري (hGH) |
JP7158378B2 (ja) | 2016-09-23 | 2022-10-21 | ハンミ ファーマシューティカル カンパニー リミテッド | インスリン受容体との結合力が減少された、インスリンアナログ及びその用途 |
CN110291103A (zh) * | 2016-12-05 | 2019-09-27 | 韩美药品株式会社 | 具有弱化的免疫应答的缀合物 |
US11180535B1 (en) | 2016-12-07 | 2021-11-23 | David Gordon Bermudes | Saccharide binding, tumor penetration, and cytotoxic antitumor chimeric peptides from therapeutic bacteria |
US11129906B1 (en) | 2016-12-07 | 2021-09-28 | David Gordon Bermudes | Chimeric protein toxins for expression by therapeutic bacteria |
WO2018107079A1 (en) | 2016-12-09 | 2018-06-14 | Gliknik Inc. | Manufacturing optimization of gl-2045, a multimerizing stradomer |
US20200230250A1 (en) * | 2017-02-03 | 2020-07-23 | Hanmi Pharm. Co., Ltd. | Long-acting conjugate of a physiologically active material and use thereof |
US11267856B2 (en) | 2017-02-27 | 2022-03-08 | Shattuck Labs, Inc. | CSF1R-CD40L chimeric proteins |
MX2019009812A (es) | 2017-02-27 | 2019-10-14 | Shattuck Labs Inc | Proteinas quimericas basadas en tigit y light. |
AU2018239037B2 (en) | 2017-03-23 | 2022-05-26 | Hanmi Pharm. Co., Ltd. | Insulin analog complex with reduced affinity for insulin receptor and use thereof |
KR20190129058A (ko) | 2017-03-31 | 2019-11-19 | 알렉시온 파마슈티칼스, 인코포레이티드 | 성인 및 청소년에서 저포스파타제증 (hpp)을 치료하는 방법 |
CN110505885A (zh) * | 2017-04-05 | 2019-11-26 | 诺和诺德股份有限公司 | 寡聚体延伸的胰岛素-Fc缀合物 |
EP3612215A4 (en) | 2017-04-20 | 2021-05-26 | aTyr Pharma, Inc. | COMPOSITIONS AND METHODS OF TREATMENT OF Pneumonia |
MA50141A (fr) * | 2017-04-20 | 2020-07-29 | Novo Nordisk As | Procédés de purification de protéines de fusion d'albumine |
CN109206522B (zh) * | 2017-07-07 | 2021-11-09 | 北京三有利和泽生物科技有限公司 | 一种长效抗凝血融合蛋白及其应用 |
JP6566324B2 (ja) * | 2017-09-29 | 2019-08-28 | サイデン化学株式会社 | 粘着シート |
CN111406073A (zh) * | 2017-09-29 | 2020-07-10 | 韩美药品株式会社 | 具有提高功效的持久性蛋白质缀合物 |
CA3076369A1 (en) | 2017-10-02 | 2019-04-11 | Denali Therapeutics Inc. | Fusion proteins comprising enzyme replacement therapy enzymes |
KR102167827B1 (ko) * | 2017-12-20 | 2020-10-20 | 주식회사 알테오젠 | 신규한 성장 호르몬 수용체 길항제 및 이의 융합 단백질 |
CN108218998A (zh) * | 2017-12-31 | 2018-06-29 | 武汉班科生物技术股份有限公司 | 一种突变型人源IgG的Fc片段及其制备方法与应用 |
KR101974305B1 (ko) * | 2018-02-14 | 2019-04-30 | 한미사이언스 주식회사 | 생리활성 폴리펩타이드 결합체 제조 방법 |
MA52177A (fr) * | 2018-03-26 | 2021-02-17 | Regeneron Pharma | Rongeurs humanisés pour tester des agents thérapeutiques |
KR102209108B1 (ko) | 2018-03-27 | 2021-01-28 | 국립암센터 | Oct4 기능 저해용 펩티드를 포함하는 줄기세포성 억제용 조성물 |
US11913039B2 (en) | 2018-03-30 | 2024-02-27 | Alexion Pharmaceuticals, Inc. | Method for producing recombinant alkaline phosphatase |
CA3096097A1 (en) | 2018-04-09 | 2019-10-17 | Amgen Inc. | Growth differentiation factor 15 fusion proteins |
US10780121B2 (en) | 2018-08-29 | 2020-09-22 | Shattuck Labs, Inc. | FLT3L-based chimeric proteins |
WO2020218827A1 (ko) * | 2019-04-23 | 2020-10-29 | 주식회사 엘지화학 | 면역글로불린의 Fc 영역 및 GDF15를 포함하는 융합 폴리펩타이드 |
US11267858B2 (en) * | 2019-05-31 | 2022-03-08 | Spectrum Pharmaceuticals, Inc. | Methods of treatment using G-CSF protein complex |
CN112142850A (zh) * | 2019-06-27 | 2020-12-29 | 深圳市卫光生物制品股份有限公司 | 人神经生长因子-乳铁蛋白重组蛋白及用途 |
EP4041312A4 (en) | 2019-10-10 | 2023-12-20 | Kodiak Sciences Inc. | METHOD FOR TREATING AN EYE DISORDER |
CN110669134A (zh) * | 2019-10-15 | 2020-01-10 | 广东菲鹏生物有限公司 | IgM-FC片段、IgM-FC抗体及制备方法和应用 |
MX2022006634A (es) * | 2019-12-11 | 2022-07-04 | Lg Chemical Ltd | Polipeptido de fusion que comprende gdf15 y region de polipeptido capaz de experimentar o-glicosilacion. |
CN111153996B (zh) * | 2020-01-10 | 2021-12-14 | 苏州睿瀛生物技术有限公司 | G蛋白偶联受体的抗体及其制备方法和g蛋白偶联受体试剂盒 |
CN111505291B (zh) * | 2020-04-14 | 2023-04-25 | 山东省千佛山医院 | 一种排除巨酶分子对血清酶浓度检测带来干扰的方法 |
AU2021276071A1 (en) | 2020-05-22 | 2023-02-02 | Hanmi Pharm. Co., Ltd. | Liquid formulation |
CN112098639B (zh) * | 2020-09-21 | 2024-01-02 | 天津医科大学 | 以氧化石墨烯为载体的二抗的合成及应用 |
WO2023147489A2 (en) * | 2022-01-28 | 2023-08-03 | argenx BV | Anti-musk antibodies for use in treating neuromuscular disorders |
WO2023168403A2 (en) * | 2022-03-03 | 2023-09-07 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Viral vectors encoding parathyroid hormone fusions and uses thereof in treating hypoparathyroidism |
CN114588315A (zh) * | 2022-03-14 | 2022-06-07 | 东莞市人民医院 | 抗炎蛋白涂层的制备方法、生物工程功能材料及其应用 |
Family Cites Families (120)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4399216A (en) | 1980-02-25 | 1983-08-16 | The Trustees Of Columbia University | Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials |
GB8504099D0 (en) * | 1985-02-18 | 1985-03-20 | Wellcome Found | Physiologically active substances |
JPS62153300A (ja) * | 1985-12-26 | 1987-07-08 | Teijin Ltd | ヒト免疫グロブリンGFc領域蛋白質およびその製造方法 |
JPH0728746B2 (ja) | 1986-02-28 | 1995-04-05 | 理化学研究所 | 新規プラスミド、微生物細胞及びヒト免疫グロブリンG Fc領域蛋白質の製造法 |
US5643758A (en) * | 1987-03-10 | 1997-07-01 | New England Biolabs, Inc. | Production and purification of a protein fused to a binding protein |
JPS63245691A (ja) | 1987-03-31 | 1988-10-12 | Teijin Ltd | ヒト免疫グロブリンGFc領域蛋白質およびその製造方法 |
JPS63290899A (ja) | 1987-05-22 | 1988-11-28 | Takeda Chem Ind Ltd | ヒトIgEFc蛋白質のフラグメントおよびその製造法 |
US6710169B2 (en) * | 1987-10-02 | 2004-03-23 | Genentech, Inc. | Adheson variants |
DE3889546T2 (de) | 1987-12-21 | 1994-09-08 | Univ Toledo | Transformation von keimenden pflanzensamen mit hilfe von agrobacterium. |
US6004781A (en) | 1988-01-22 | 1999-12-21 | The General Hospital Corporation | Nucleic acid encoding Ig-CD4 fusion proteins |
US6018026A (en) | 1988-01-22 | 2000-01-25 | Zymogenetics, Inc. | Biologically active dimerized and multimerized polypeptide fusions |
US5567584A (en) | 1988-01-22 | 1996-10-22 | Zymogenetics, Inc. | Methods of using biologically active dimerized polypeptide fusions to detect PDGF |
GB8824869D0 (en) | 1988-10-24 | 1988-11-30 | Stevenson G T | Synthetic antibody |
US5225538A (en) | 1989-02-23 | 1993-07-06 | Genentech, Inc. | Lymphocyte homing receptor/immunoglobulin fusion proteins |
US6406697B1 (en) | 1989-02-23 | 2002-06-18 | Genentech, Inc. | Hybrid immunoglobulins |
US5116964A (en) | 1989-02-23 | 1992-05-26 | Genentech, Inc. | Hybrid immunoglobulins |
US6307025B1 (en) | 1989-04-28 | 2001-10-23 | Biogen, Inc. | VCAM fusion proteins and DNA coding therefor |
FR2650598B1 (fr) | 1989-08-03 | 1994-06-03 | Rhone Poulenc Sante | Derives de l'albumine a fonction therapeutique |
US5605690A (en) * | 1989-09-05 | 1997-02-25 | Immunex Corporation | Methods of lowering active TNF-α levels in mammals using tumor necrosis factor receptor |
US6541610B1 (en) | 1989-09-05 | 2003-04-01 | Immunex Corporation | Fusion proteins comprising tumor necrosis factor receptor |
GB9009106D0 (en) | 1990-04-23 | 1990-06-20 | 3I Res Expl Ltd | Processes and intermediates for synthetic antibody derivatives |
US5349053A (en) | 1990-06-01 | 1994-09-20 | Protein Design Labs, Inc. | Chimeric ligand/immunoglobulin molecules and their uses |
US7253264B1 (en) * | 1990-06-28 | 2007-08-07 | Sanofi-Arentideutschland GmbH | Immunoglobulin fusion proteins, their production and use |
DE59109032D1 (de) | 1990-06-28 | 1998-09-03 | Hoechst Ag | Fusionsproteine mit immunglobulinanteilen, ihre Herstellung und Verwendung |
US5650150A (en) | 1990-11-09 | 1997-07-22 | Gillies; Stephen D. | Recombinant antibody cytokine fusion proteins |
US5191066A (en) | 1990-12-07 | 1993-03-02 | Abbott Laboratories | Site-specific conjugation of immunoglobulins and detectable labels |
WO1992013947A1 (en) | 1991-02-08 | 1992-08-20 | Progenics Pharmaceuticals, Inc. | CD4-GAMMA2 AND CD4-IgG2 CHIMERAS |
GEP20033082B (en) | 1991-03-15 | 2003-10-27 | Amgen Inc | Pegylation of Polypeptides |
DK0537166T3 (da) * | 1991-04-17 | 1999-11-22 | Medisup Int Nv | Vandopløselige polypeptider med stor affinitet for alfa og beta-interferon |
EP0533006A1 (en) | 1991-09-18 | 1993-03-24 | F.Hoffmann-La Roche & Co. Aktiengesellschaft | Chimaeric interleukin 5-receptor/immunoglobulin polypeptides |
US20020037558A1 (en) * | 1991-10-23 | 2002-03-28 | Kin-Ming Lo | E.coli produced immunoglobulin constructs |
FR2686901A1 (fr) | 1992-01-31 | 1993-08-06 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Nouveaux polypeptides antithrombotiques, leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenant. |
FR2686899B1 (fr) | 1992-01-31 | 1995-09-01 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Nouveaux polypeptides biologiquement actifs, leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenant. |
GB9206422D0 (en) * | 1992-03-24 | 1992-05-06 | Bolt Sarah L | Antibody preparation |
US5447851B1 (en) | 1992-04-02 | 1999-07-06 | Univ Texas System Board Of | Dna encoding a chimeric polypeptide comprising the extracellular domain of tnf receptor fused to igg vectors and host cells |
JPH0640945A (ja) * | 1992-07-23 | 1994-02-15 | Kureha Chem Ind Co Ltd | Fcフラグメント結合抗腫瘍剤 |
EP0664710A4 (en) * | 1992-08-07 | 1998-09-30 | Progenics Pharm Inc | CD4-GAMMA2 AND CD4-IgG2 NON-PEPTIDYL CONJUGATE IMMUNOCONJUGATES AND USES THEREOF. |
IT1263831B (it) | 1993-01-29 | 1996-09-04 | Paolo Chiesi | Complessi di inclusione multicomponente ad elevata solubilita' costituiti da un farmaco di tipo basico, un acido ed una ciclodestrina |
US6482919B2 (en) | 1993-02-01 | 2002-11-19 | Bristol-Myers Squibb Company | Expression vectors encoding bispecific fusion proteins and methods of producing biologically active bispecific fusion proteins in a mammalian cell |
US5470952A (en) | 1993-10-20 | 1995-11-28 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | CNTF and IL-6 antagonists |
US5738846A (en) | 1994-11-10 | 1998-04-14 | Enzon, Inc. | Interferon polymer conjugates and process for preparing the same |
US6410008B1 (en) * | 1994-12-12 | 2002-06-25 | Beth Israel Hospital Association | Chimeric IL-10 proteins and uses thereof |
US6030613A (en) * | 1995-01-17 | 2000-02-29 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Receptor specific transepithelial transport of therapeutics |
WO1996028475A1 (fr) * | 1995-03-10 | 1996-09-19 | Nakamura, Toshikazu | Facteur de croissance des hepatocytes modifie a l'aide de polyethylene glycol |
US6096871A (en) | 1995-04-14 | 2000-08-01 | Genentech, Inc. | Polypeptides altered to contain an epitope from the Fc region of an IgG molecule for increased half-life |
GB9511935D0 (en) | 1995-06-13 | 1995-08-09 | Smithkline Beecham Plc | Novel compound |
AU717329B2 (en) * | 1995-09-21 | 2000-03-23 | Quadrant Healthcare (Uk) Limited | Transcytosis vehicles and enhancers for drug delivery |
US6936439B2 (en) | 1995-11-22 | 2005-08-30 | Amgen Inc. | OB fusion protein compositions and methods |
US6620413B1 (en) * | 1995-12-27 | 2003-09-16 | Genentech, Inc. | OB protein-polymer chimeras |
US5723125A (en) | 1995-12-28 | 1998-03-03 | Tanox Biosystems, Inc. | Hybrid with interferon-alpha and an immunoglobulin Fc linked through a non-immunogenic peptide |
US6750334B1 (en) | 1996-02-02 | 2004-06-15 | Repligen Corporation | CTLA4-immunoglobulin fusion proteins having modified effector functions and uses therefor |
AU728657B2 (en) | 1996-03-18 | 2001-01-18 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Immunoglobulin-like domains with increased half-lives |
KR19980038061A (ko) | 1996-11-23 | 1998-08-05 | 유우준 | 음식물 쓰레기 수분분리 처리장치 |
US7122636B1 (en) * | 1997-02-21 | 2006-10-17 | Genentech, Inc. | Antibody fragment-polymer conjugates and uses of same |
US6277375B1 (en) | 1997-03-03 | 2001-08-21 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Immunoglobulin-like domains with increased half-lives |
AR012448A1 (es) * | 1997-04-18 | 2000-10-18 | Ipsen Pharma Biotech | Composicion en forma de microcapsulas o de implantes que comprende un excipiente biodegradable, polimero o co-polimero, o una mezcla de talesexcipientes, y una sustancia activa o una mezcla de sustancias activas, procedimiento para la preparacion de una sustancia soluble en agua de elevada |
US5990237A (en) * | 1997-05-21 | 1999-11-23 | Shearwater Polymers, Inc. | Poly(ethylene glycol) aldehyde hydrates and related polymers and applications in modifying amines |
US6165476A (en) | 1997-07-10 | 2000-12-26 | Beth Israel Deaconess Medical Center | Fusion proteins with an immunoglobulin hinge region linker |
AU8182298A (en) | 1997-07-10 | 1999-02-08 | Beth Israel Deaconess Medical Center | Recombinant erythropoietin / immunoglobulin fusion proteins |
US6451986B1 (en) * | 1998-06-22 | 2002-09-17 | Immunex Corporation | Site specific protein modification |
US6703381B1 (en) * | 1998-08-14 | 2004-03-09 | Nobex Corporation | Methods for delivery therapeutic compounds across the blood-brain barrier |
KR100316347B1 (ko) * | 1998-09-15 | 2002-08-27 | 한미약품(주) | 대장균엔테로톡신ⅱ신호펩티드의변형체와인체성장호르몬의융합단백질을발현하는재조합미생물및그를이용한인체성장호르몬의제조방법 |
BR9915548A (pt) | 1998-10-16 | 2001-08-14 | Biogen Inc | Proteìnas de fusão de interferon-beta e usos |
US6660843B1 (en) | 1998-10-23 | 2003-12-09 | Amgen Inc. | Modified peptides as therapeutic agents |
BR0007414A (pt) | 1999-01-07 | 2001-10-16 | Lexigen Pharm Corp | Expressão e exportação de proteìnas antiobesidade como proteìnas de fusão fc |
US6737056B1 (en) * | 1999-01-15 | 2004-05-18 | Genentech, Inc. | Polypeptide variants with altered effector function |
AU3224700A (en) | 1999-02-08 | 2000-08-25 | Chiron Corporation | Fibroblast growth factor receptor-immunoglobulin fusion |
US20040266673A1 (en) * | 2002-07-31 | 2004-12-30 | Peter Bakis | Long lasting natriuretic peptide derivatives |
JP2003530070A (ja) | 1999-05-19 | 2003-10-14 | レキシジェン ファーマシューティカルズ コーポレイション | Fc融合タンパク質としてのインターフェロン−αタンパク質の発現および搬出 |
US6833349B2 (en) * | 1999-06-08 | 2004-12-21 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods of treating inflammatory skin diseases |
EP1194451A1 (en) * | 1999-07-02 | 2002-04-10 | Genentech, Inc. | Fusion peptides comprising a peptide ligand domain and a multimerization domain |
PE20010288A1 (es) | 1999-07-02 | 2001-03-07 | Hoffmann La Roche | Derivados de eritropoyetina |
JP4944324B2 (ja) * | 1999-07-13 | 2012-05-30 | ボルダー バイオテクノロジー, インコーポレイテッド | 免疫グロブリン融合タンパク質 |
KR100360594B1 (ko) | 2000-01-19 | 2002-11-13 | 한미약품공업 주식회사 | 인간 인터페론 알파의 발현 분비벡터 및 이를 이용한인터페론 알파의 생산 방법 |
ES2260219T3 (es) | 2000-04-21 | 2006-11-01 | Amgen Inc. | Derivados de peptidos apo-ai/aii. |
US6756480B2 (en) | 2000-04-27 | 2004-06-29 | Amgen Inc. | Modulators of receptors for parathyroid hormone and parathyroid hormone-related protein |
US20020168367A1 (en) * | 2000-04-28 | 2002-11-14 | Planet Biotechnology Incorporated | Novel immunoadhesins for treating and preventing viral and bacterial diseases |
US6677136B2 (en) * | 2000-05-03 | 2004-01-13 | Amgen Inc. | Glucagon antagonists |
DE10021731B4 (de) | 2000-05-04 | 2005-12-08 | Aventis Pharma Deutschland Gmbh | Cyclipostine, Verfahren zu ihrer Herstellung und pharmazeutische Zubereitung derselben |
US6417237B1 (en) | 2000-06-08 | 2002-07-09 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Macromolecular drug complexes and compositions containing the same |
PL209550B1 (pl) * | 2000-12-07 | 2011-09-30 | Lilly Co Eli | Heterogenne białko fuzyjne, kompozycja farmaceutyczna do leczenia pacjentów z cukrzycą insulinoniezależną i kompozycja do leczenia pacjentów z otyłością |
US6979556B2 (en) * | 2000-12-14 | 2005-12-27 | Genentech, Inc. | Separate-cistron contructs for secretion of aglycosylated antibodies from prokaryotes |
EP1341899B9 (en) | 2000-12-14 | 2007-03-21 | Genentech, Inc. | Bacterial host strains |
US7754208B2 (en) | 2001-01-17 | 2010-07-13 | Trubion Pharmaceuticals, Inc. | Binding domain-immunoglobulin fusion proteins |
US7829084B2 (en) | 2001-01-17 | 2010-11-09 | Trubion Pharmaceuticals, Inc. | Binding constructs and methods for use thereof |
CA2435037A1 (en) | 2001-01-18 | 2002-07-25 | Silke Schumacher | Bifunctional fusion proteins with glucocerebrosidase activity |
JP2004532620A (ja) * | 2001-02-19 | 2004-10-28 | メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフトング | 免疫原性の低減された人工タンパク質 |
KR100566911B1 (ko) | 2001-06-25 | 2006-04-03 | 주식회사 삼양사 | 약물 전달체용 음이온기-함유 양친성 블록 공중합체 및 그의 양이온성 약물과의 복합체 |
CA2452058A1 (en) * | 2001-06-26 | 2003-01-09 | Imclone Systems Incorporated | Bispecific antibodies that bind to vegf receptors |
US20030026764A1 (en) | 2001-07-31 | 2003-02-06 | Immunomedics, Inc. | Polymeric delivery systems |
US6900292B2 (en) * | 2001-08-17 | 2005-05-31 | Lee-Hwei K. Sun | Fc fusion proteins of human erythropoietin with increased biological activities |
US6797493B2 (en) | 2001-10-01 | 2004-09-28 | Lee-Hwei K. Sun | Fc fusion proteins of human granulocyte colony-stimulating factor with increased biological activities |
US7125843B2 (en) * | 2001-10-19 | 2006-10-24 | Neose Technologies, Inc. | Glycoconjugates including more than one peptide |
US7138370B2 (en) * | 2001-10-11 | 2006-11-21 | Amgen Inc. | Specific binding agents of human angiopoietin-2 |
KR100811138B1 (ko) | 2001-11-13 | 2008-03-07 | 오리온피디피주식회사 | 저온소성세라믹기판을 이용한 다층회로기판의 제조방법과 이에 의해 제조된 다층회로기판 |
US20030211078A1 (en) * | 2001-12-07 | 2003-11-13 | Heavner George A. | Pseudo-antibody constructs |
US20040110226A1 (en) * | 2002-03-01 | 2004-06-10 | Xencor | Antibody optimization |
WO2003076567A2 (en) | 2002-03-05 | 2003-09-18 | Eli Lilly And Company | Heterologous g-csf fusion proteins |
WO2003077834A2 (en) * | 2002-03-15 | 2003-09-25 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Central airway administration for systemic delivery of therapeutics |
US20030191056A1 (en) * | 2002-04-04 | 2003-10-09 | Kenneth Walker | Use of transthyretin peptide/protein fusions to increase the serum half-life of pharmacologically active peptides/proteins |
CA2499075A1 (en) * | 2002-09-16 | 2004-03-25 | Elusys Therapeutics, Inc. | Production of bispecific molecules using polyethylene glycol linkers |
CA2499300A1 (en) * | 2002-10-31 | 2004-05-21 | Genentech, Inc. | Methods and compositions for increasing antibody production |
ES2359562T3 (es) | 2002-12-20 | 2011-05-24 | Amgen, Inc. | Agentes de unión que inhiben miostatina. |
WO2004064731A2 (en) | 2003-01-14 | 2004-08-05 | University Of Washington | Lipid-drug formulations and methods for targeted delivery of lipid-drug complexes to lymlplhoid tissues |
US20050176108A1 (en) * | 2003-03-13 | 2005-08-11 | Young-Min Kim | Physiologically active polypeptide conjugate having prolonged in vivo half-life |
KR20040083268A (ko) | 2003-03-21 | 2004-10-01 | 한미약품 주식회사 | 안정성이 증가된 인간 과립구 콜로니 자극인자 융합체 및이의 제조방법 |
TWI353991B (en) | 2003-05-06 | 2011-12-11 | Syntonix Pharmaceuticals Inc | Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids |
EP3552627A1 (en) | 2003-05-06 | 2019-10-16 | Bioverativ Therapeutics Inc. | Clotting factor-fc chimeric proteins to treat hemophilia |
WO2004108885A2 (en) | 2003-05-06 | 2004-12-16 | Syntonix Pharmaceuticals, Inc. | Fc chimeric proteins with anti-hiv drugs |
WO2005007809A2 (en) * | 2003-05-30 | 2005-01-27 | Alexion Pharmaceuticals, Inc. | Antibodies and fusion proteins that include engineered constant regions |
KR100775343B1 (ko) | 2003-11-13 | 2007-11-08 | 한미약품 주식회사 | 면역글로불린 Fc 영역을 캐리어로 포함하는 약제학적조성물 |
CN1926237A (zh) | 2004-01-28 | 2007-03-07 | 森托尼克斯制药有限公司 | 用于治疗不育症的异二聚体促卵泡激素-Fc(FSH-Fc)融合蛋白 |
JP2008537874A (ja) | 2004-09-27 | 2008-10-02 | セントカー・インコーポレーテツド | sRAGEミメティボディ、組成物、方法および使用 |
KR100594607B1 (ko) * | 2004-11-03 | 2006-06-30 | 재단법인서울대학교산학협력재단 | 신규한 경구투여용 재조합 인간 성장호르몬 분비미생물제제 및 그 제조방법 |
KR100754667B1 (ko) * | 2005-04-08 | 2007-09-03 | 한미약품 주식회사 | 비펩타이드성 중합체로 개질된 면역글로불린 Fc 단편 및이를 포함하는 약제학적 조성물 |
KR20100038061A (ko) | 2008-10-02 | 2010-04-12 | 도쿠리츠다이가쿠호징 가나자와다이가쿠 | 리마프로스트를 함유하는, 암화학 요법에 기인하는 말초신경장애 예방, 치료 및/또는 증상 경감제 |
AR081066A1 (es) * | 2010-04-02 | 2012-06-06 | Hanmi Holdings Co Ltd | Conjugado de insulina donde se usa un fragmento de inmunoglobulina |
AR080993A1 (es) * | 2010-04-02 | 2012-05-30 | Hanmi Holdings Co Ltd | Formulacion de accion prolongada de interferon beta donde se usa un fragmento de inmunoglobulina |
AR081755A1 (es) * | 2010-04-02 | 2012-10-17 | Hanmi Holdings Co Ltd | Formulacion de accion prolongada de la hormona estimuladora de los foliculos donde se usa un fragmento de inmunoglobulina, metodo de preparacion y metodo para tratar a un sujeto que sufre un trastorno reproductivo |
KR20120002129A (ko) * | 2010-06-30 | 2012-01-05 | 한미홀딩스 주식회사 | 면역글로불린 단편을 이용한 제7인자(Factor Ⅶa)약물 결합체 |
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Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR20180071241A (ko) * | 2013-07-12 | 2018-06-27 | 한미약품 주식회사 | FcRn 결합력이 유지되는 면역글로불린 Fc 결합체 |
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KR20040081378A (ko) | 생체내 지속성이 증가된 생리활성 폴리펩타이드 결합체 |
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