KR20060035809A

KR20060035809A - 소마토스타틴 유사체

Info

Publication number: KR20060035809A
Application number: KR1020067005526A
Authority: KR
Inventors: 레이너 알버트; 빌프리트 바우어; 다비드 보드머; 크리스티안 브룬스; 이포 펠너; 헤리베르트 헬스테른; 이안 루이스; 마르크 마이젠바흐; 기스베르트 베크베커; 베른하르트 비트펠트
Original assignee: 노파르티스 아게
Priority date: 2000-08-01
Filing date: 2001-07-30
Publication date: 2006-04-26
Also published as: PE20020176A1; US8822637B2; CY2012018I2; JP3829118B2; FR12C0041I2; RU2287533C2; SI1307486T1; EP1307486A2; SK287798B6; IL153920A; BRPI0112859B8; AR034132A1; CZ302461B6; LU92024I2; ZA200300406B; BRPI0112859B1; NO331093B1; NZ523836A; KR20030033008A; CY2012018I1

Abstract

본 발명은 흥미로운 제약학적 성질을 갖는 임의로 보호된 형태인 시클로[{4-(NH₂-C₂H₄-NH-CO-O-)Pro}-Phg-DTrp-Lys-Tyr(4-벤질)-Phe], 또는 그의 제약학적으로 허용 가능한 염 또는 착물을 제공한다.

소마토스타틴, 성장 호르몬.

Description

소마토스타틴 유사체{SOMATOSTATIN ANALOGUES}

본 발명은 소마토스타틴 펩티드 유사체, 그의 제조방법 및 그를 포함하는 제약학적 제제에 관한 것이다.

본 발명의 목적은 과도한 GH-분비 및(또는) 과도한 IGF-1을 포함하거나 이와 관련된 병인의 질병, 인슐린 또는 글루카곤 방출과 관련된 기타 대사 질병, 장피누공 및 췌장루, 과민성 대장 증상, 염증성 질병, 건선 또는 류머티스성 관절염, 다낭성 신장 질병, 급속이동 증상, 설사 증상, AIDS 관련 설사, 화학요법 유발 설사, 급성 또는 만성 췌장염 및 위장 호르몬 분비 종양, 임파구 악성종양, 간세포 카르시노마와 위장 출혈, 예를 들면 정맥류 유발의 식도 출혈의 예방 또는 치료에 유용한, 소마토스타틴 펩티드 유사체를 제공하는 것이다.

보다 구체적으로 본 발명은 시클로[{4-(NH₂-C₂H₄-NH-CO-O-)Pro}-Phg-DTrp-Lys-Tyr(4-Bzl)-Phe]로도 불리며 본 명세서에서 화합물 A로 지칭되는 하기 화학식 의 화합물과 그의 부분입체이성질체 및 혼합물을, 유리 형태로, 염 또는 착물 형태 또는 보호된 형태로 제공한다. Phg는 -HN-CH(C₆H₅)-CO-를 의미하며 Bzl은 벤질을 의미한다.

보호된 형태의 화합물 A는 아미노기 중 한개 이상이 보호된 형태의 상기 분자에 해당되며, 탈보호에 의해, 바람직하게는 생리적으로 제거되어 화합물 A로 유도된다. 적합한 아미노 보호기는, 예를 들면 문헌["Protective Groups in Organic Synthesis", 티. 더블유. 그린(T. W. Greene), J. Wiley & Sons NY(1981), 219-287]에 개시되어 있으며, 이 문헌은 참고문헌으로 인용된다. 상기 아미노 보호기의 예를 들면 아세틸이다.

화합물 A가 착물 형태로 존재할 때, 이것은 용이하게는 프롤린 (Pro)의 측쇄 아미노기에 킬레이트기를 포함하며 검출성 또는 방사선치료 원소와 착물화된 화합물 A일 수 있다. 킬레이트기를 포함하는 화합물 A는 본 명세서에서 공액 화합물 A로 지칭된다.

킬레이트기의 예는 폴리-아미노폴리카르복실산 또는 무수물로부터 유도된 것 들, 예를 들면 비환형 리간드로부터 유도된 것들, 예를 들면 디에틸렌 트리아민 펜타아세트산(DTPA), 에틸렌 글리콜-O,O'-비스(2-아미노에틸)-N,N,N',N'-테트라아세트산(EGTA), N,N'-비스(히드록시벤질)에틸렌디아민-N,N'-디아세트산(HBED) 및 트리에틸렌테트라민 헥사아세트산(TTHA), 치환 DTPA로부터 유도된 것들, 예를 들면 p-이소티오시아네이토-벤질-DTPA, 마크로시클릭 리간드로부터 유도된 것들, 예를 들면 1,4,7,10-테트라-아자시클로도데칸-N,N',N",N'"-테트라아세트산(DOTA) 및 1,4,8,11-테트라아자시클로테트라데칸-N,N',N",N'"-테트라아세트산(TETA) 또는 1,4,7,10-테트라아자시클로트리데칸-N,N',N",N'"-테트라아세트산(TITRA)을 포함한다.

킬레이트기는 Pro의 측쇄 아미노기에 직접 또는 스페이서(spacer)를 통하여 부착될 수 있다. 적합한 스페이서는, 예를 들면 제 GB-A-2,225,579 호에 개시된 바와 같은 당업계에 공지되어 있는 것들, 예를 들면 아미노-카르복실산의 2가 잔기, 예컨대 β-Ala 또는 6-아미노-카프로산으로부터 유도된 2가 잔기를 포함한다.

바람직한 킬레이트기는 DTPA, DOTA 또는 TETA로부터 유도된 것들이다. DTPA 또는 DOTA로부터 유도된 킬레이트기가 가장 바람직하다.

검출성 원소는 생체내 진단 기술에 의해 검출될 수 있는 성질을 나타내는 임의의 원소, 바람직하게는 금속 이온, 예를 들면 검출할 수 있는 방사선을 방사하는 금속 이온 또는 NMR 이완 성질에 영향을 줄 수 있는 금속 이온을 의미한다. 방사선치료 원소는 치료할 증상에 이로운 효과를 갖는 방사선을 방사하는 임의의 원소를 의미한다.

적합한 원소는, 예를 들면 중원소 또는 희토류 이온, 예컨대 CAT 스캐닝(전산화 단층 조영술)에 사용되는 것들, 상자성 이온, 예컨대 Gd³⁺, Fe³⁺, Mn²⁺ 및 Cr²⁺, 형광 금속 이온, 예컨대 Eu³⁺, 및 방사성핵종, 예를 들면 라디오란타나이드, 특히 γ-방사 방사성핵종, β-방사 방사성핵종, α-방사 방사성핵종, Auger-e^--방사 방사성핵종 또는 양전자-방사 방사성핵종, 예컨대 ⁶⁸Ga, ¹⁸F 또는 ⁸⁶Y를 포함한다.

적합한 γ-방사 방사성핵종은 진단 기술에 유용한 것들을 포함한다. γ-방사 방사성핵종은 1시간 내지 40일, 바람직하게는 5시간 내지 4일, 보다 바람직하게는 12시간 내지 3일의 반감기를 이롭게 갖는다. 예를 들면 갈륨, 인듐, 테크네튬, 이테르븀, 레늄, 테르븀, 루테튬, 탈륨 및 사마륨으로부터의 방사성 동위원소, 예컨대 ⁶⁷Ga, ¹¹¹In, ^99mTc, ¹⁶¹Tb, ¹⁶⁹Yb, ¹⁸⁶Re 또는 ¹⁷⁷Lu이다.

적합한 β-방사 방사성핵종은 방사선치료 분야에 유용한 것들, 예를 들면 ⁹⁰Y, ⁶⁷Cu, ¹⁸⁶Re, ¹⁸⁸Re, ¹⁶⁹Er, ¹²¹Sn, ¹²⁷Te, ¹⁷⁷Lu, ¹⁴³Pr, ¹⁹⁸Au, ¹⁰⁹Pd, ¹⁶⁵Dy, ¹⁴²Pr또는 ¹⁵³Sm을 포함한다.

적합한 α-방사 방사성핵종은 치료에 사용되는 것들, 예를 들면 ²¹¹At, ²¹²Bi 또는 ²⁰¹Ti이다.

화합물 A는 예를 들면 유리 또는 염 형태로 존재할 수 있다. 염은, 예를 들 면 무기산, 중합체산 또는 유기산과의, 예컨대 염산, 아세트산, 락트산, 아스파르트산, 벤조산, 숙신산 또는 팜산과의 산부가염을 포함한다. 산부가염은, 예를 들면 유리 염기 형태의 화합물 A에 1 또는 2산 당량의 첨가 여부에 따라서 1가 또는 2가 염으로 존재할 수 있다. 바람직한 염은 1염 또는 2염을 포함하는 락테이트, 아스파르테이트, 벤조에이트, 숙시네이트 및 파모에이트, 보다 바람직하게는 아스파르테이트 2염 및 파모에이트 1염이다.

공액 화합물 A는 킬레이트기에 존재하는 카르복실산기에 의해 얻을 수 있는 염 형태, 예를 들면 알칼리금속염, 예컨대 나트륨 또는 칼륨, 또는 치환 또는 비치환 암모늄 염의 형태로도 존재할 수 있다.

본 발명은 또한 화합물 A의 제조방법도 포함한다. 이것은 공지된 방법과 유사하게, 예를 들면 다음과 같이 제조될 수 있다:

a) 보호된 형태, 중합체 결합된 형태 또는 비보호된 형태의 선형 펩티드를 화합물 A가 수득되는 방식으로 고리화시킨 후, 임의로 보호기(들)를 제거하고,

b) 킬레이트기와 함께 연결된 공액 화합물 A 또는 보호된 형태 또는 비보호된 형태의 화합물 A를 얻은 다음, 임의로 보호기를 제거하며,

이렇게 얻은 화합물 A 또는 공액 화합물 A를 유리 형태, 염 형태 또는 검출성 또는 방사선치료 원소와 임의로 착물화된 형태로 회수한다.

선형 펩티드의 아미노산 서열이 화합물 A의 서열에 상응하는 경우에만 그 선형 펩티드가 고리화될 것이므로, 화합물 A에 상응하는 선형 펩티드에서 펩티드 사슬을 시작하는 C-말단 위치에 어떤 아미노산이 선택되는 지의 여부는 일반적으로 중요하지 않다. 그러나, 하나의 출발 아미노산이 다른 것에 비하여 더 선호될 수 있는 다른 요인이 존재할 수 있다. 화합물 A가 고체상 합성 기술에 의해 제조된다면, 제 1 아미노산은 바람직하게는 수지에, 예를 들면 상업적으로 구입할 수 있는 폴리스티렌 기재 수지에, 적합한 연결기, 예를 들면 온화한 조건에서 분해되어 측쇄 보호기를 본래대로 유지할 수 있는 연결기, 예컨대 SASRIN 또는 임의로 치환된 트리틸 기재 연결기, 예컨대 하나의 페닐기가 예를 들면 Cl에 의해 임의로 치환될 수 있는 4-(히드록시-디페닐-메틸)-벤조산을 통해 부착될 수 있다. 원하는 펩티드 사슬의 형성은 통상적인 방법으로, 예를 들면 말단 아미노기가 Fmoc-보호되고, 존재한다면 측쇄 아미노기는 상이한 아미노 보호기, 예를 들면 Boc 또는 CBO로 보호된 아미노산 단위를 사용하여 실행될 수 있다. 바람직하게는 선형 펩티드는 Tyr(4-Bzl)-OH 및 Phe 사이의 결합이 형성되도록, 예를 들면 Phe-{4-(NHR₁-C₂H₄-NH-CO-O-)Pro}-Phg-DTrp(R₂)-Lys(ε-NHR₃)-Tyr(4-Bzl)-OH 또는 그의 작용기 유도체(여기에서, R₁, R₂ 및 R₃ 각각은 아미노 보호기이다)가 형성되도록 고리화된다. 고리화 단계 a)는 공지된 방법에 따라서, 예를 들면 아지드, 활성 에스테르, 혼합 무수물 또는 카르보디이미드를 통해서 편리하게 수행될 수 있다. 그 후에, 예를 들면 트리플루오로아세트산에 의한 분해 또는 수소화에 의해 보호기를 제거한다.

펩티드의 고리화는 또한 고체 지지체 상에서 직접 수행될 수도 있는데, 제 1 아미노산은 Nα- 및 C-말단 보호 형태이고, 측쇄, 예를 들면 Lys의 ε-아미노 작용기를 통해 또는 주쇄 고정에 의해 부착된다. 선형 배열은 표준 고체상 합성(SPPS) 방법에 따라서 합성된다. C-말단 보호기의 분해 후에 펩티드는, 예를 들면 상기한 바와 같이 고리화된다. 그 후에 환형 펩티드가 수지로부터 분해되고 탈보호된다.

바람직하다면, Pro 상에 존재하는 측쇄는 펩티드 고리화 단계 a)의 전 또는 후에 아미노산에 도입될 수 있다. 그러므로, 각 경우에 Pro가 OH에 의해 환-치환된 출발 아미노산 또는 출발 선형 또는 환형 펩티드로서의 Pro는 화합물 A 또는 원하는 Pro 단위 또는 상응하는 선형 펩티드 각각이 제공되도록 전환될 수 있다(여기에서, Pro는 NHR₁-C₂H₄-NH-CO-O-에 의해 치환된다).

공액 화합물 A의 착물화는 공액 화합물 A를 상응하는 검출성 또는 방사선치료 원소와 반응시켜서 화합물, 예를 들면 금속염, 바람직하게는 수용성 염을 형성함으로써 수행될 수 있다. 이 반응은 공지된 방법과 유사한 방법에 의해, 예를 들면 문헌[Perrin, Organic Ligand, Chemical Data Series 22. NY Pergamon Press(1982)]; [Krejcarit and Tucker, Biophys. Biochem. Res. Com. 77: 581(1977)] 및 [Wagner and Welch, J. Nucl. Med. 20: 428(1979)]에 개시된 바와 같이 수행될 수 있다.

하기 실시예는 본 발명을 설명한다. 모든 온도는 ℃이다.

약어:

AcOH=아세트산

Boc=t-부톡시-카르보닐

Bzl=벤질

CBO=카르보벤족시

DIPCI=N,N'-디이소프로필카르보디이미드

DIPEA=디이소프로필에틸아민

DMF=디메틸포름아미드

DPPA=디페닐포스포릴아지드

Fmoc=플루오레닐메톡시카르보닐

HOBT=1-히드록시벤조트리아졸

Osu=N-히드록시숙신이미드

TFA=트리플루오로아세트산

THF=테트라히드로푸란

실시예 1 : 시클로[{4-(NH ₂ -C ₂ H ₄ -NH-CO-O-)Pro}-Phg-DTrp-Lys-Tyr(4-Bzl)-Phe]

a) Fmoc-Pro(4-OCO-NH-CH ₂ -CH ₂ -NH-Boc)-OH의 합성

L-히드록시프롤린 메틸에스테르 히드로클로라이드를 Fmoc-OSu와 수성 1.0N 나트륨 카르보네이트/THF 중 실온에서 반응시켰다. 반응을 완결한 후에, Fmoc-Pro(4-OH)-OMe를 침전에 의해 분리했다. Fmoc-Pro(4-OH)-Ome를 THF 중의 트리포스겐(0.6eq.)의 용액에 적가하여 클로로카르보네이트 중간체를 수득했다. 1시간 후에 디메틸아미노피리딘(1.0eq.) 및 N-Boc-디아미노에탄(6.0eq.)를 첨가하고 반응물을 실온에서 교반했다. 반응을 완결한 후에, 용매를 진공 제거하고 생성된 Fmoc-Pro(4-OCO-NH-CH₂-CH₂-NH-Boc)-OMe를 에틸 아세테이트/0.1M HCl의 2상계로부터 추 출하여 조 생성물(MH⁺=554)을 수득하고, 이것을 에틸 아세테이트로부터의 결정화에 의해 정제했다. 디옥산/물 중의 1N NaOH로의 처리에 의해 메틸 에스테르를 유리산으로 분해하고 생성물 Fmoc-Pro(4-OCO-NH-CH₂-CH₂-NH-Boc)-OH를 실리카 겔 상에서 정제했다, [(M+Na)]⁺=562.

b) H-Phe-Pro(4-OCO-NH-CH ₂ -CH ₂ -NH-Boc)-Phg-DTrp(Boc)-Lys(Boc)-Tyr(Bzl)-OH

상업적으로 구입할 수 있는 Fmoc-Tyr(Bzl)-O-CH₂-Ph(3-OCH₃)-O-CH₂-폴리스티렌 수지(SASRIN-수지, 2.4mM)를 출발 물질로 사용하여 Nα-탈보호(피페리딘/DMF, 2:8)의 반복 사이클, DMF로의 반복 세척 및 커플링(DIPCI: 4.8mM/HOBT: 6mM, DMF)으로 구성된 표준 프로토콜을 실행했다. 하기 아미노산 유도체를 차례로 커플링했다: Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Dtrp(Boc)-OH, Fmoc-Phg-OH, Fmoc-Pro(4-OCO-NH-CH₂-CH₂-NH-Boc)-OH, Fmoc-Phe-OH. 커플링(2eq. 아미노산)을 완결시까지, 즉 음성 'Kaiser' 닌히드린 시험에 의해 모니터할 때 잔류 아미노산이 완전이 없어질 때가지 계속 또는 반복했다. 완전하게 형성된 보호 선형 펩티드를 그의 수지 지지체로부터 분해하기 전에 최종 잔기로부터 Nα-Fmoc 보호를 제거했다.

c) H-Phe-Pro(4-OCO-NH-CH ₂ -CH ₂ -NH-Boc)-Phg-DTrp(Boc)-Lys(Boc)-Tyr(Bzl)-OH

CH₂Cl₂로 세척한 후에, 펩티드-수지를 컬럼 또는 교반 흡입 여과기로 옮기고 펩티드 단편을 분해하고 CH₂Cl₂ 중의 2% TFA로의 1시간 이내의 단시간 처리로 용출 했다. 용출물을 즉시 포화 NaHCO₃ 용액으로 중화했다. 유기 용액을 분리 및 증발시키고 측쇄 보호 전구체(MH⁺=1366)를 더이상 정제하지 않고 고리화했다.

d) 시클로[-Pro(4-OCO-NH-CH ₂ -CH ₂ -NH ₂ )-Phg-DTrp-Lys-Tyr(Bzl)-Phe-], 트리플루오로아세테이트

상기 선형 단편을 DMF(4mM)에 용해하고, -5℃로 냉각하고 2eq. DIPEA로 처리한 다음, 1.5eq.의 DPPA로 처리하고 완결될 때까지(약, 20시간) 0-4℃에서 교반했다. 용매를 거의 완전하게 진공제거하고; 농축물을 에틸 아세테이트로 희석하고, NaHCO₃, 물로 세척하고 건조하고 진공증발시켰다.

탈보호를 위해 잔류물을 0℃에서 TFA/H₂O 95:5(약 50mM)에 용해하고 차갑게 30분간 교반했다. 생성물을 약 10eq. HCl을 함유하는 에테르로 침전시키고, 에테르로 세척하고 건조시켰다. 나머지 인돌-N-카르바민산을 완전하게 분해하기 위해 생성물을 5% AcOH에 용해하고 15시간 후에 약 5℃에서 동결건조했다. 제조용 RP-HPLC를 C-18 10㎛ STAGROMA 컬럼(5-25cm) 상에서 0.5% THA 내지 70% 아세토니트릴 중의 0.5% TFA의 구배를 사용하여 수행했다. 순수한 표제 화합물을 포함하는 분획을 합하고, 물로 희석하고, 동결건조했다. 동결 건조물을 물에 용해시킨 후에, 물 중의 10% Na₂CO₃로 침전시켰다. 고체 유리 염기를 여과하고, 물로 세척하고, 실온에서 진공 건조했다. 생성된 백색 분말을 여러 염에 대하여 직접 사용했다.

실시예 2 : 염 형태의 시클로[{4-(NH ₂ -C ₂ H ₄ -NH-CO-O-)Pro}-Phg-DTrp-Lys-Tyr(4-Bzl)- Phe]

a. 아세테이트

아세트 염 형태로의 전환은 이온-교환 수지(예를 들면, AG 3x4)를 사용하여 수행했다. MS(ESI): m/z 524.5[M+2H]²⁺ [α]_D ²⁰=-42°; c=0.26, AcOH 95% 중.

b. 아스파르테이트

실시예 1의 1 당량의 화합물을 1 또는 2 당량의 아스파르트산과 아세토니트릴/물 1:3의 혼합물 중에서 반응시킴으로써 모노- 또는 디-아스파르테이트로의 전환을 수행했다. 제조된 혼합물을 동결하고 동결건조했다. 실시예 1의 화합물을 물/아세토니트릴 4:1에 용해하고, 여과하고, 이온 교환 수지, 예를 들면 BioRad AG 4x4 컬럼 상에 걸고, 물/아세토니트릴 4:1로 용출하여 디-아스파르테이트도 얻을 수 있었다. 용출물을 농축하고, 동결하고, 동견건조시켰다. [α]_D ²⁰=-47.5°, c=2.5mg/ml 메탄올 중.

c. 벤조에이트

실시예 1의 화합물을 2 당량의 벤조산과 아세토니트릴/물 1:2의 혼합물 중에 용해시켜서 벤조에이트로의 전환을 수행할 수 있었다. 형성된 혼합물을 동결하고 동결건조했다.

d. 파모에이트

1당량의 실시예 1의 화합물을 1당량의 엠본산과 함께 아세토니트릴/THF/물 2:2:1의 혼합물에 용해시켰다. 형성된 혼합물을 동결하고, 동결건조했다.

실시예 3 : 시클로[{4-(DOTA-NH-C ₂ H ₄ -NH-CO-O-)Pro}-Phg-DTrp-Lys-Tyr(4-Bzl)-Phe

a) 시클로[-Pro(4-OCO-NH-CH ₂ -CH ₂ -NH ₂ )-Phg-DTrp-Lys(Cbo)-Tyr(Bzl)-Phe-], 트리플루오로아세테이트

화합물을 시클로[-Pro(4-OCO-NH-CH₂-CH₂-NH₂)-Phg-DTrp-Lys(Cbo)-Tyr(Bzl)-Phe-], 트리플루오로아세테이트와 동일한 방법으로, Fmoc-Lys(Boc)-OH 대신에 Fmoc-Lys(Cbo)-OH를 사용하여 합성했다.

b) 400mg의 상업적으로 구입할 수 있는 DOTAx2H₂O(SYMAFEX-프랑스)를 20ml의 물에 용해시켰다. 20ml의 DMF를 첨가한 후에, 170mg의 시클로[-Pro(4-OCO-NH-CH₂-CH₂-NH₂)-Phg-DTrp-Lys(CBO)-Tyr(Bzl)-Phe-]를 190mg의 DCCI 및 60mg의 N-히드록시숙신이미드와 함께 첨가했다. 형성된 현탁액을 실온에서 72시간 동안 유지했다. 여과 후에, 용매를 감압 제거하고 조 잔류물을 실리카 겔상에서 정제했다(DCM/MeOH/HOAc_50% 8/2/0.25-->7/3/1 이동상)

c) 상기 DOTA-공액물을 탈보호하기 위해 5ml의 트리플루오로아세트산/티오아니솔(9/1)로 2시간 동안 실온에서 처리했다. 용액을 100ml 디에틸에테르+5ml 3N HCl/디에틸에테르의 혼합물에 부은 후에 생성 침전물을 여과에 의해 분리했다. 정제를 실리카겔에서 이동상으로서 DCM/MeOH/HOAc_50%7/4/2-->7/5/4를 사용하여 수행했다. RP₁₈-HPLC 컬럼(Spherisorb 250x4.6mm) 상에서의 0.1% TFA 내지 90% CH₃CN 중의 0.1% TFA 구배를 사용하는 탈염 단계 후에 분석학적으로 순수한 최종 생성물을 수득했다. MH⁺=1434.7

유리 형태 또는 제약학적으로 허용 가능한 염 형태의 화합물 A 및 착물은 시험관내 및 생체내 시험에서 알 수 있는 바와 같이 값어치 있는 약리학적 성질을 나타내었으므로 치료에 유용한 것도 알 수 있다.

보다 구체적으로, 화합물 A는 인간 소마토스타틴 수용체(hsst), 특히 hsst1, hsst2, hsst3 및 hsst5에 대한 흥미로운 결합 특성을 나타낸다. 5종의 소마토스타닌 수용체 아형, sst1, sst2, sst3, sst4 및 sst5가 클로닝되었으며 특성화되었다. hsst1, hsst2 및 hsst3과 그의 서열은 와이. 야마다(Y. Yamada) 등에 의해 문헌[Proc. Nat. Acad. Sci., 89, 251-255(1992)]에 개시되었다. hsst4 및 그의 서열은 엘. 로러(L. Rohrer) 등에 의해 문헌[Proc. Acad. Sci., 90, 4196-4200(1993)]에 개시되었다. hsst5 및 그의 서열은 알. 파네타(R. Panetta) 등에 의해 문헌[Mol. Pharmacol. 45, 417-427, 1993]에 기술되었다.

결합 분석은 hsst1, hsst2, hsst3, hsst4 또는 hsst5를 선택적으로 그리고 안정적으로 발현하는 세포주, 예를 들면 CHO 또는 COS 세포로부터의 막을 사용하여 하기에 개시된 바와 같이 수행할 수 있었다.

공지된 방법, 예를 들면 씨. 브룬스(C. Bruns) 등에 의해 문헌[Biochem. J., 1990, 65, page 39-44]에 개시된 방법에 따라서 막을 준비했다. hsst1 또는 hsst2 또는 hsst3 또는 hsst4 또는 hsst5를 안정적으로 발현하는 hsst 선택성 세포주, 예를 들면 CHO 또는 COS 세포로부터 준비된 막을 0.5% BSA를 포함하는 10mmol/l Hepes 완충액(pH 7.6) 중에서 [¹²⁵I-Tyr¹¹]-SRIF-14의 농도를 증가시키면서 30분간 22℃에서 300㎕의 총부피로 3중으로 배양했다. 신속하게 여과하여 배양을 종결하고 필터를 계수기에서 계수했다. 특이 결합은 총 결합 빼기 1㎛ol/l 소마토스타틴-14의 존재하의 비특이 결합이다. 실험을 3중으로 수행했다. 친화성 상수(K_D) 및 결합 부위의 수를 적합한 통계학 및 그래프 프로그램을 사용하여 계산했다.

hsst1, hsst2, hsst3 및(또는) hsst5에 대한 상기 결합 분석에서 화합물 A는 nM 범위의 IC₅₀, 바람직하게는 0.1 내지 10nM의 IC₅₀을 갖는다(IC₅₀=hsst1-5 특이 방사성리간드로서 [¹²⁵I-Tyr¹¹]-SRIF-14를 사용하는 경쟁 결합 분석에 있어서 최대 저해의 절반을 저해하는 농도).

IC₅₀
	hsst1	hsst2	hsst3	hsst4	hsst5
화합물 A	9.3nM+0.1	1.0nM+0.1	1.5nM+0.3	>100nM	0.16nM+0.1

화합물 A는 성장 호르몬 분비촉진제 수용체에도 결합한다. 상기 수용체는 지. 무키올리(G. Muccioli) 등에 의해 문헌[J. Endocrinol. 1998, 157, 99-106]에, 에이치. 옹(H. Ong) 등에 의해 문헌[Endocrinology, 1998, 139, 432-435]에 그리고 알. 지. 스미쓰(R. G. Smith) 등에 의해 문헌[Horm. Res., 1999, 3), 1-8]에 개시되어 있다. 이들 수용체로의 결합 분석은 문헌[J. Endocrinol. Invest. 24: RC1- RC3, 2001]에 개시된 바와 같이 수행될 수 있다. 이 분석에서 화합물 A가 ¹²⁵I-Tyr-Ala-헥사렐린을 대신한다. 따라서 화합물 A는 성장 호르몬 분비촉진제 수용체의 활성을 조절하는데 유용하므로, 예를 들면 체중 증가 또는 대사 조절에서 역할을 할 수 있다는 것을 알 수 있었다.

게다가, 화합물 A는 배양된 뇌하수체 세포로부터의 시험관내 성장 호르몬 (GH) 방출 저해로 알 수 있는 바와 같은 GH-방출 저해 활성을 나타내었다. 예를 들면, 성인 수컷 쥐의 뇌하수체선 전엽을 작은 조각으로 절단하고 20mM HEPES 완충액 중의 0.1% 트립신을 사용하여 분산했다. 분산된 세포를 5% 소태아 혈청, 5% 말 혈청, 1mM NaHCO₃, 2.5nM 덱사메타손, 2.5mg/ml 인슐린 및 20U/ml Pen/Strep으로 보충된 MEM(Gibco) 중에서 4일간 배양했다. 실험일에, 부착된 세포를 20mM HEPES로 완충되고 5mM 글루코스 및 0.2% BSA로 보충된 Krebs-Ringer 배지로 2회 세척했다. 이어서 세포를 화합물 A와 함께 3시간 동안 3x10^-10M 성장 호르몬 방출 인자 존재하에 배양했다. 배지로 방출된 성장 호르몬의 양을 RIA에 의해 측정했다. 화합물 A는 이 분석에서 0.4nM의 IC₅₀을 가졌다.

화합물 A는 쥐에서 성장 호르몬(GH)의 방출을 저해했다. 화합물 A를 마취된 쥐에게 피하 (s.c.) 투여했다. 화합물 투여 1시간 후에 단두한 다음 혈액을 수집했다. 작용의 지속 시간은 약물 처리 후 6시간 동안의 기초 GH 분비의 저해를 기초로 하여 평가했다. 호르몬 수치를 처리한지 1시간 및 6시간 후에 RIA에 의해 측 정했다. 호르몬 분비 저해에 대한 ID₅₀-값을 각 실험에 대하여 그래프(로그-프로빗)로 측정했으며 결과 수치를 대수적으로 평균내었다. 이러한 생체내 모델에 있어서 화합물 A는 성장호르몬 방출을 장시간의 작용 지속시간으로 현저하게 저해했다(평균 기초 ID₅₀=5.5㎍/kg, 피하, 6시간). 인슐린에 대한 효과를 측정하는 유사한 분석에서, 화합물 A는 인슐린 분비를 저해했다.

GH의 강력하고 효과적인 저해는 또한 원숭이 연구에서도 확인되었다. 또한, 당뇨병 원숭이에서의 대사 연구로 화합물 A의 강력한 항당뇨병/인슐린 감작 효과를 증명했다.

게다가, 화합물 A는 수컷 쥐를 사용하는 표준 시험에서 알 수 있는 바와 같이 생체내 인슐린 유사 성장 인자 (IGF)-1 혈장 수치를 저해했다. 간단하게 Lewis 종의 수컷 쥐에 피하 이식된 삼투압 펌프에 의해 화합물 A를 투여했다. 예를 들면, 이소플루란을 사용하는 단시간 마취에 의해 혈액 샘플을 심구후부 신경총으로부터 수집했다. 이 분석에서, 화합물 A는 효과가 오래 지속되면서 IGF-1 혈장 수치를 현저하게 저하시켰는데: 예를 들면 10㎍/kg/h의 화합물 A로의 처리 14일 후에 60% 이상의 저해가 관찰되었다. 보다 구체적으로 IGF-1 혈장 수치를 상당하게 그리고 계속적으로 낮추는, 화합물 A를 126일까지 10㎍/kg/h로 연속적으로 주입하는 연속 처리 후에, 대동맥 또는 신장 동종이식편의 쥐 수용자에 있어서 일탈자를 관찰할 수 없었다.

따라서 화합물 A는 과도한 GH-분비 및(또는) 과도한 IGF-1을 포함하거나 이 와 관련된 병인의 질병을 예방 또는 치료하는데, 예를 들면 말단비대증의 치료와 I형 또는 II형 당뇨병, 특히 그의 합병증, 예를 들면 혈관병증, 당뇨성 증식성 망막병증, 당뇨성 황반부종, 신장병증, 신경병증 및 새벽 현상의 치료에, 그리고 인슐린 또는 글루카곤 방출과 관련된 기타 대사 질병, 예를 들면 비만, 예컨대 병적 비만 또는 시상하부성 또는 과인슐린성 비만을 예방 또는 치료하는데 유용하다. 화합물 A는 또한 장피누공 및 췌장루, 과민성 대장 증상, 염증성 질병, 예를 들면 그레이브스병, 염증성 대장 질병, 건선 또는 류머티스성 관절염, 다낭성 신장 질병, 급속이동 증상, 설사 증상, AIDS 관련 설사, 화학요법 유발 설사, 급성 또는 만성 췌장염 및 위장 호르몬 분비 종양(예를 들면, GEP 종양, 예컨대 VIP 생산 종양, 글루카곤 생산 종양, 인슐린 분비 종양, 카르시노이드 등), 임파구 악성종양, 예를 들면 임파종 또는 백혈병, 간세포 카르시노마와 위장 출혈, 예를 들면 정맥류 유발의 식도 출혈 치료에 유용하다.

화합물 A는 또한 소마토스타틴 수용체 양성인 종양, 예를 들면 hsst1, hsst2, hsst3 및(또는) hsst5를 포함하는 종양의 치료에, 상기 소마토스타틴 수용체를 포함하는 여러 암세포로의 증식 시험에서 알 수 있는 바와 같이 유용하다.

AR42J 쥐 췌장 종양 세포주는 아자세린 유도 외분비 췌장 종양으로부터 유도되었다(제솝 앤드 헤이(Jessop and Hay), 1980). 미코플라스마 세포가 없는 배양물을 10% 소태아 혈청(FCS)으로 보충된 DMEM 중에서 5% CO₂ 에서 번식시켰다. 세포를 항생제 또는 항진균제 부재하에 성장시켰다. 서브컨플루언트(subconfluent) AR42J 세포를 트립신 처리하고, DMEM+2.5% FCS에 희석하고 비코팅 96-웰 플레이트에 접종했다. 48시간의 배양 기간 후(0일)에, 별개의 대조용 플레이트의 세포 수를 쿨터 계수기에서 그리고 SRB 비색 분석 모두에 의해 측정했다. 세포를 화합물 A에 2 내지 5일간 여러 농도에서 노출시킨 다음 계수했다. 이들 조건하에서 화합물 A는 10^-12 내지 10^-6M 범위의 농도에서 종양 세포의 증식을 저해했다.

생체내 종양 성장 연구

체중 19-22g의 암컷 누드 마우스를 5마리의 군으로 사육했으며 물과 무병원체 설치류 사료를 자유급식했다. 피하 종양을 배양된 AR42J 세포로 유발했다. 종양 세포의 접종 2-4일 후에 처리를 시작했는데, 화합물 A를 예를 들면, 10 내지 50㎍/kg/hr의 속도로 연속 주입으로 투여했다. 종양의 크기를 캘리퍼로 측정했다. 통계학적 계산을 위하여, 스튜던트의 t-검정을 적용했다. 이 분석에서 화합물 A는 11일에 종양성장을 생리식염수 대조용에 비하여 51% 저해했다.

그러므로 화합물 A는 악성종양 세포 증식 질병, 예를 들면 암 종양, 특히 화합물 A가, 예를 들면 착물 공액 화합물 A에 대해 하기에 개시하는 바와 같이, 결합 친화성을 갖는 소마토스타틴 수용체 유형을 포함하는 종양의 치료에 유용하다.

화합물 A는 또한, 예를 들면 누드 마우스의 표준 시험에서 관찰되는 바와 같이, 혈관형성에 대한 저해 효과를 갖는다. 간단하게 종양 세포(0.1ml 중 0.1 내지 10x10⁶)(문헌[Angiogenesis, 알. 스타이너(R. Steiner), 피. 비. 와이즈(P.B. Weisz) 및 알. 랑거(R. Langer) 편집, 1992, 스위스]에 개시된 바와 같이 제조된 SiHa 세포 및 MDA MB-231 세포)를 피내 접종했다. 주요 복측 피부 혈관으로부터 멀리 위치한 보통 2개의 배중간 부위/생쥐에 주사해서 배후 혈관 수를 낮추었다. 대조용 군에는 PBS 중 0.02% 트립탄 블루 0.1ml를 투여했다. 주사 10일 후에, 마취된 생쥐에게 CO₂를 흡입시켜서 죽였다. 12.5- 및 25-배 확대로 도립 현미경(Zeiss IM)에 의해 평가하기 위해 피부를 플라스틱 링(40mm 직경) 상에 놓았다. 혈관형성의 척도로서, 혈관의 사진을 찍고 종양에 직접 연결된 것들의 수를 세었다. 대조용 동물에서는 주사 부위 주변의 정해진 면적에 연결된 것들을 세었다. 이 면적은 피부 종양의 평균 면적에 해당된다. 피부 종양의 평균 면적은 3.14xr²의 식에 따라서 캘리퍼를 사용하여 측정했다. 화합물 A를 종양 접종일 또는 3일 후에 피하 투여했다. 대조용 동물은 부형제 처리했다. 이 분석에서, 화합물 A는 예를 들면 0.01 내지 1000㎍/kg의 투여량으로 피하 투여했을 때 혈관 형성을 저해했다.

그러므로 화합물 A는 혈관형성, 상기한 바와 같은 염증성 질병, 예컨대 염증성 눈 질병, 황반부종, 예컨대 낭종 모양의 황반부종, 자연발생 낭종 모양의 황반부종, 삼출성 연령 관련 황반 변성, 맥락막 혈관신행 관련 질병 및 증식성 망막증의 예방 또는 치료에 유용하다.

화합물 A는 또한 하기 실험에서 알 수 있는 바와 같이 평활근 세포의 증식 및 이동에 대한 저해 효과도 갖는다.

만성 동종이식편 거부

수컷 DA(RT1^a) 쥐의 신장을 수컷 Lewis(RT1¹) 수용자에게 정위 이식했다. 총 24마리의 동물에게 이식했다. 동물 모두를 이식일로부터 시작하여 14일 동안 시클로스포린 A 7.5mg/kg/일로 경구적으로 처리하여 급성 세포 거부를 방지했다. 대측 신절제술은 실행하지 않았다. 화합물 A의 별개 투여량 또는 위약으로 처리한 각각의 실험군은 6마리의 동물을 포함했다. 이식후 14일부터 112일까지 화합물 A를 수용자 동물에게 주입하거나 위약을 투여했다. 이식후 14일에 장기 관류를 MRI에 의해 측정했다. 이것을 이식후 53-64일에 그리고 실험 마지막에 반복했다. 동물을 해부했다. 이러한 쥐 신장 동종이식편 모델에 10㎍/kg/h의 투여량으로 화합물 A를 투여한 결과 장기 관류가 개선되었으며 혈관 재형성 및 이식편 침윤소(세포거부)와 관련된 만성거부가 완화되었다. IGF-1의 수치의 현저하고 계속적인 저하도 또한 측정되었다. 이러한 결과는 이소 생쥐 심장 타가이식술 모델을 사용하는 제 2 실험에서도 확인되었으며, 혈관 재형성과 이식편 침윤소에 대한 이로운 효과도 나타내었다.

공여자로서 B10.A(2R)(H-2h²) 생쥐를 그리고 수용자로서 B10.BR(H-2^k) 생쥐를 사용하는 경동맥 루프 이식 모델에서도 화합물 A를 시험했다. 말하자면 공여자 경동맥을 수용자 경동맥내로 루프로서 엔드-투-사이드(end-to-side) 문합술에 의해 파라톱 이식했다. 화합물 A를 50㎍/kg/h의 속도로 전달하는 미니-펌프를 이식후 즉시 피하로 위치시켰다. 경동맥 이식편을 이식후 30에 수거하고, 예를 들면 컴퓨터 보조 시스템을 사용하는 Verhoeff 엘라스틴 염색 파라핀 섹션의 형태측정 분석에 의해 혈관 개조를 분석했다. 이 모델에서 대량의 네오인티마가 형성된 비처리 동물에 비교하여 화합물 A는 네오인티마 형성을 저해했다.

혈관형성술

벌룬 카테테르 손상의 쥐 모델에서 혈관형성술에 대한 연구를 수행했다. 벌룬 카테테르 삽입은 0일에, 실질적으로 파웰(Powell) 등에 의해 기술된 방법(1989)에 따라서 수행했다. 이소플루오란 마취하에, Fogarty 2F 카테테르를 좌 총경동맥 내로 도입하여 균일한 탈-내피를 달성했다. 그 다음에 카테테르를 제거하고, 외부 경동맥 주변에 결찰을 놓아서 출혈을 방지하고 동물을 회복시켰다. 12마리의 RoRo 쥐(400g, 대략 24주령)의 2개군을 연구에 사용했다: 하나의 대조용 군과 화합물 A를 투여한 군을 연구에 사용했으며 쥐들은 완전히 임의추출했다. 화합물 A는 벌룬손상 2일 전(-3일)부터 연구의 마지막, 벌룬 손상 14일 후까지 미니펌프를 사용하여 10㎍/kg/h의 속도로 연속 주입에 의해 투여했다. 쥐를 이소플루오란으로 마취하고 0.1M 인산염 완충 생리식염수 용액(PBS, pH 7.4)으로, 그 다음에는 인산염 완충액(pH7.4) 중의 2.5% 글루타르알데히드로 15분 동안 관류했다. 경동맥을 절제하고, 주변 조직으로부터 분리하고, 7% 사카로스를 포함하는 0.1M 카코딜레이트 완충액(pH7.4)에 침지하고, 4℃에서 하룻밤 동안 배양했다. 다음날 경동맥을 Technovit7100에 제조자 권장방법에 따라서 끼워넣었다. 상분석 시스템(MCID, 캐나다 토론토)에 의해 중막, 네오인티마 및 관강의 단면적을 형태측정학적으로 평가했다. 이 분석에서, 화합물 A는 네오인티마가 두꺼워지는 것을 현저하게 저해했다.

화합물 A는 이식편 혈관 질병, 예를 들면 타가 또는 이종 이식조직 혈관 장 애, 예를 들면 이식편 혈관 아테롬성 동맥경화증을, 예를 들면 장기 이식조적, 예컨대 심장, 폐, 결합 심장-폐, 간, 신장 또는 췌장 이식조직 내에서 예방 또는 퇴치하는데 유용하고 또는, 예를 들면 카테테르 삽입 절차 또는 혈관 소파 절차, 예컨대 경피 경구 혈관형성술, 레이저 처리 또는 혈관 동맥내막 또는 내피의 일체성을 파괴하는 기타 조직파괴 절차에 의해 야기되는 혈관 손상 후의 정맥 이식편 협착증, 재발협착증 및(또는) 혈관 폐색을 예방 또는 치료하는데 유용하다.

화합물 A는 이로운 혈장 반감기를 갖는다. 이것은 15 내지 30시간의 제거 반감기를 갖는다.

상기한 모든 내용에 있어서, 필요투여량은 물론, 예를 들면 대상체, 투여 방법 및 치료되는 증상의 정도에 따라서 변화될 것이다. 그러나 일반적으로는 약 1㎍ 내지 0.7mg/kg/일의 화합물 A를 투여함으로써 만족스러운 결과를 얻을 수 있었다. 환자에 대하여 지시된 일일 투여량은, 예를 들면 약 0.5㎍ 내지 약 25mg, 예를 들면 약 2㎍ 내지 20mg, 예를 들면 2㎍ 내지 1.5mg의 화합물 A를 포함하는 단위 투여 형태로 매일 3회까지의 분할 투여로 편리하게 투여되는 화합물 약 2㎍ 내지 약 50mg, 바람직하게는 약 0.01 내지 약 40mg, 예를 들면 약 0.01 내지 약 3mg (피하)의 범위이다.

화합물 A는 유리 형태 또는 제약학적으로 허용 가능한 염 형태 또는 착물로 투여될 수 있다. 상기 염 및 착물은 통상적인 방법으로 제조될 수 있으며 유리 화합물의 활성과 거의 동일한 활성을 나타낸다. 본 발명은 또한 유리 염기 형태 또는 제약학적으로 허용 가능한 염 형태 또는 착물 형태의 화합물 A를 1종 이상의 제 약학적으로 허용 가능한 희석제 또는 담체와 함께 포함하는 제약학적 조성물을 제공한다. 상기 조성물은 통상적인 방법으로 제형될 수 있다. 화합물 A는 또한 서방형 형태로, 예를 들면 생분해성 중합체 또는 공중합체를 포함하는 이식물, 미소캡슐, 미소구 또는 나노구의 형태로, 리포좀 제제의 형태로, 또는 오토겔의 형태로, 예를 들면 환자 체액과의 상호작용 후에 겔을 형성할 수 있는 고체 또는 반-고체 조성물의 형태로 투여될 수 있다.

화합물 A 또는 그의 제약학적으로 허용 가능한 염 또는 착물은 임의의 통상적인 경로로, 예를 들면 비경구로, 예컨대 주사 용액 또는 현탁액(예를 들면 상기한 바와 같은 서방형 형태 포함)의 형태로, 통상적인 흡수 증진제를 사용하여 경구로, 비내 또는 좌약 형태로, 국소적으로, 예를 들면 안액, 겔, 연고 또는 현탁액 제제, 예를 들면 리포좀, 미소구 또는 나노구 제제의 형태로, 예를 들면 점적 주입 또는 결막하 또는 안내 또는 눈주변 주사로 투여될 수 있다.

전술한 내용에 따르면 본 발명은 또한 하기를 제공한다.

1. 약품으로 사용하기 위한 화합물 A 또는 그의 제약학적으로 허용 가능한 염 또는 착물;

2. 상기한 바와 같은 질병 또는 질환의 예방 또는 치료를 필요로 하는 대상체에 유효량의 화합물 A 또는 그의 제약학적으로 허용 가능한 염 또는 착물을 투여하는 것을 포함하는, 상기 질병 또는 질환의 예방 또는 치료 방법.

3. 상기 2에 정의된 바와 같은 방법에 사용하기 위한 제약학적 조성물의 제조에 사용하기 위한 화합물 A 또는 그의 제약학적으로 허용 가능한 염 또는 착물.

공액 화합물 A 또는 그의 제약학적으로 허용 가능한 염은 검출성 원소, 예를 들면 γ- 또는 양전자-방사 방사성핵종, 형광 금속 이온 또는 상자성 이온, 예를 들면 ¹¹¹In, ¹⁶¹Tb, ¹⁷⁷Lu, ⁸⁶Y, ⁶⁸Ga, Eu³⁺ _,Gd³⁺, Fe³⁺, Mn²⁺ 또는 Cr²⁺와 착물화되었을 때는, 소마토스타틴 수용체 양성 조직 및 세포, 예를 들어 소마토스타틴 수용체 양성 종양 및 전이, 소마토스타틴 수용체를 나타내는 염증성 또는 자가면역 질병, 결핵종 또는 이식 후 장기 거부의 가시화를 위한 영상화제로서, 또는 α- 또는 β-방사 방사성핵종 또는 Auger-e^--케스케이드의 방사성핵종, 예를 들면 ⁹⁰Y, ¹⁶¹Tb, ¹⁷⁷Lu, ²¹¹At, ²¹³Bi 또는 ²⁰¹Ti와 착물화될 때는, 표준 시험에서 지시된 바와 같이 소마토스타틴 수용체 양성 종양 및 전이, 류머티스성 관절염 및 심한 염증 증상의 생체내 치료를 위한 방사성약품으로서 유용하다.

특히, 공액 화합물 A는 소마토스타틴 수용체에 약 8 내지 10의 pKi 값으로 결합하는 것으로 관찰되었다. 예를 들면, ¹¹¹In, ⁸⁸Y, ⁹⁰Y 또는 ¹⁷⁷Lu와 착물화된 실시예 3의 화합물은 화합물 A의 결합 프로파일에 따라서 각각의 sst 아형에 nM 범위로 결합했다.

공액 화합물 A 및 그의 착물의 소마토스타틴 수용체에 대한 친화성은 또한 제 GB-A-2,225,579 호에 개시된 표준 시험 방법에 따른 생체내 시험에 의해 증명될 수 있었다. 예를 들면 ¹¹¹In, ⁸⁸Y, ⁹⁰Y 또는 ¹⁷⁷Lu와 착물화된 실시예 3의 화합물은 hsst2 수용체를 발현하는 외분비 췌장 종양을 포함하는 생쥐 또는 쥐에 주사한지 4 시간 후에 상당하게 종양에 축적되었다.

착물 형태의 공액 화합물 A, 예를 들면 ¹¹¹In, ¹⁷⁷Lu, ⁸⁶Y 또는 ¹⁶¹Tb 착물 화합물 A를, 0.1 내지 5mCi 방사성핵종으로, 바람직하게는 0.1 내지 2mCi로 표지된 1 내지 5㎍/kg의 투여량으로 투여 후에, 종양부위가 검출할 수 있게 되었다.

α- 또는 β-방사 방사성핵종 또는 Auger-e^--케스케이드의 방사성핵종으로 방사성표지될 때 공액 화합물 A는, 예를 들면 누드 마우스 시험에서 알 수 있는 바와 같이 소마토스타틴 수용체를 갖는 종양 세포에 대하여 항증식 및(또는) 세포 독성 효과를 나타내었다.

누드 마우스에 상기한 바와 같이 AR42J 쥐 췌장 종양 세포 또는 NCI-H69 인간 소세포 폐암 세포를 접종했다. 종양이 1 내지 2cm³의 체적으로 되면 동물을 대조용 및 처리군으로 무작위 추출했다. 착물 형태의 공액 화합물 A를 i.p. 또는 i.v. 주사에 의해 투여했다. 40mCi/kg까지의 투여량을 생쥐마다 투여했다. 종양의 크기를 상기한 바와 같이 캘리퍼에 의해 측정했다. 통계학적 계산을 위해 스튜던트의 t-검정을 적용했다. 이 시험에서 처음의 50% 까지의 일시적인 종양 수축이 1주 후에 관찰되었으며 종양 성장은 ⁹⁰Y와 착물화된 실시예 3의 화합물을 1회 적용시 2주간 지연되었다. 대조적으로 대조용 군은 약 7일의 체적 2배화 시간으로 계속적인 종양 성장을 나타내었다.

따라서 일련의 특정 또는 대안의 실시태양에서, 본 발명은 또한 하기를 제공 한다:

4. 검출성 원소와 착물화된 공액 화합물 A의, 대상체의 소마토스타틴 수용체 양성 세포 및 조직, 예를 들면 소마토스타틴 수용체 양성 종양 및 전이를 생체내 검출하고 상기 착물에 의해 표적화된 수용체의 위치를 기록하기 위한 용도.

5. 검출성 원소와 착물화된 공액 화합물 A 또는 그의 제약학적으로 허용 가능한 염 형태를 대상체에 투여하고 상기 착물에 의해 표적화된 소마토스타틴 수용체의 위치를 기록하는 것을 포함하는, 소마토스타틴 수용체 양성 조직 및 세포, 예를 들면 소마토스타틴 수용체 양성 종양 및 전이의 생체내 검출 방법.

영상화제로서 사용하기 위한 착물 형태의 공액 화합물 A는, 예를 들면 주사 용액 또는 현탁액의 형태로, 바람직하게는 1회 주사 형태로, 예를 들면 정맥내로 투여될 수 있다. 방사성표지는 바람직하게는 대상체로의 투여 직전에 수행될 수 있다.

동물에 있어서 지시된 투여량 범위는 0.02 내지 0.5mCi γ-방사 방사성핵종과 착물화된 공액 화합물 A 0.01 내지 1㎍/kg일 수 있다. 보다 대형의 포유동물, 예를 들면 인간에 있어서, 지시된 투여량 범위는, 예를 들면 1 내지 100mCi/m²의 검출성 원소, 예컨대 ¹¹¹In, ⁸⁶Y 또는 ¹⁷⁷Lu와 착물화된 공액 화합물 A 1 내지 100㎍/m²일 수 있다.

6. α- 또는 β-방사 방사성핵종, 또는 Auger-e^--케스케이드의 방사성핵종과 착물화된 공액 화합물 A의, 소마토스타틴 수용체 양성 종양 및 전이의 생체내 치료 를 위한 용도.

7. 소마토스타틴 양성 종양 및 전이의 생체내 치료, 예를 들면 상기 종양 또는 상기 종양 성장과 관련된 증상 침입의 치료를 필요로 하는 대상체에 α- 또는 β-방사 방사성핵종 또는 Auger-e^--케스케이드의 방사성핵종과 착물화된 치료학적 유효량의 공액 화합물 A를 투여하는 것을 포함하는, 상기 질환의 치료 방법.

8. 화합물 A 또는 그의 제약학적으로 허용 가능한 염의 영상화제 또는 방사성약품 조성물의 제조를 위한 용도.

본 발명의 방사선치료를 수행하는데 사용되는 투여량은 물론, 예를 들면 치료될 특정 증상, 예를 들면 소마토스타틴 수용체 발현 정상 장기에 대한 공지된 방사선 독성, 종양의 체적 및 원하는 요법에 따라서 변화될 것이다. 일반적으로, 투여량은 건강한 장기에서 얻어지고 관찰된 표적 흡수를 기초로 한 약물동력학 및 방사능 분포데이타를 기초로 하여 계산된다. 공액 화합물 A의 β-방사 착물은 1 내지 3개월간 반복적으로 투여될 수 있다.

동물에 있어서, 상기 투여량 범위는 15 내지 70mCi의 α- 또는 β-방사 방사성핵종, 또는 Auger-e^--케스케이드의 방사성핵종, 예를 들면 ⁹⁰Y, ¹⁷⁷Lu 또는 ¹⁶¹Tb와 착물화된 공액 화합물 A 20 내지 100㎍/kg의 범위일 수 있다. 보다 대형의 포유동물, 예를 들면 인간에 있어서, 상기 투여량 범위는 1 내지 100mCi/m²의 α- 또는 β-방사 방사성핵종, 또는 Auger-e^--케스케이드의 방사성핵종, 예를 들면 ⁹⁰Y, ¹⁷⁷Lu 또 는 ¹⁶¹Tb와 착물화된 공액 화합물 A 1 내지 100㎍/m²의 범위일 수 있다.

방사선치료제로서 사용하기 위한 착물 형태의 공액 화합물 A는 임의의 통상적인 경로로, 예를 들면 정맥내로, 예를 들면 주사 용액의 형태로 투여될 수 있다. 또한 주입에 의해서, 예를 들면 15 내지 60분간의 주입에 의해서 이롭게 투여될 수도 있다. 종양 부위에 따라서, 예를 들면 카테테르에 의해 가능한 한 종양 부위에 가깝게 투여될 수도 있다. 본 발명은 유리 염기 형태 또는 제약학적으로 허용 가능한 염 형태 또는 검출성 방사선치료제와 착물화된 공액 화합물 A를, 1종 이상의 제약학적으로 허용 가능한 희석제 또는 담체와 함께 포함하는 제약학적 조성물을 제공한다.

화합물 A 또는 착물 형태의 공액 화합물 A는 소마토스타틴 수용체 발현 또는 축적 종양, 예컨대 뇌하수체, 위장-장췌장, 카르시노이드, 중추신경계, 유방, 전립선(진행된 호르몬 무반응성 전립선 암 포함), 난소 또는 대장 종양, 소세포 폐암, 악성종양 대장 폐색, 방신경절종, 신장암, 피부암, 신경아세포종, 호크롬성세포종, 수질 갑상선 카르시노마, 골수종, 임파종, 호치킨 및 비호지킨 임파종, 골 종양 및 그의 전이와 자가 면역 또는 염증성 질병, 예를 들면 류머티스성 관절염, 그레이브스병 또는 기타 염증성 안 질병을 영상화 또는 치료하는데 적합할 수 있다.

본 발명의 또 하나의 국면에 따르면, 공액 화합물 A 또는 그의 착물을 1종 이상의 제약학적으로 허용 가능한 담체 또는 희석제와 함께 포함하는 제약학적 조성물을 제공한다. 상기 조성물은 통상적인 방법으로 제조될 수 있으며, 예를 들면 하나는 방사성핵종이고 다른 하나는 기타 공액 화합물 A인 두개의 별개 투여량을, 이것을 혼합하는 방법에 대한 설명서와 함께 포함하는 영상화용 키트 형태로 존재할 수 있다. 방사선치료를 위해서, 착물 형태의 공액 화합물 A는 바람직하게는 핫(hot) 액체 제제의 형태일 수 있다.

화합물 A 또는 착물 형태의 공액 화합물 A는 단독 활성 성분으로서 또는, 예를들면 보조제로서의 기타 약품과 함께 투여될 수 있다. 예를 들면, 화합물 A는 면역억제제, 예를 들면 칼시네우린 저해제, 예를 들면 시클로스포린 A 또는 FK 506; 면역억제 성질을 갖는 마크로시클릭 락톤, 예를 들면 라파마이신 또는 40-O-(2-히드록시에틸)-라파마이신(RAD); 면역억제 성질을 갖는 아스코마이신, 예를 들면 ABT-281, ASM981 등; 코르코스테로이드; 시클로포스파미드; 아자티오프렌; 메토트렉세이트; 레플루노미드; 미조리빈; 미코페놀산 또는 그의 염, 예를 들면 Myfortic(등록상표); 미코페놀레이트 모페틸; 15-데옥시스페르구알린 또는 그의 면역억제성 동족체, 유사체 또는 유도체; 촉진 임파구 호밍제(homing agent), 예를 들면 FTY720; 면역억제성 단클론성 항체, 예를 들면 백혈구 수용체에 대한 단클론성 항체, 예컨대 MHC, CD2, CD3, CD4, CD7, CD8, CD25, CD28, CD40, CD45, CD58, CD80, CD86 또는 그의 리간드; 기타 면역조절 화합물, 예를 들면 CTLA4 또는 그의 변이체의 적어도 일부의 세포외 영역을 갖는 재조합 결합 분자, 예를 들면 비-CTLA 단백질 배열에 연결된 CTLA4 또는 그의 변이체의 적어도 일부의 세포외 영역, 예컨대 CTLA4lg(ATCC 68629로 지정됨) 또는 그의 변이체, 예컨대 LEA29Y; 부착 분자 저해제, 예를 들면 LFA-1 길항제, ICAM-1 또는 -3 길항제, VCAM-4 길항제 또는 VLA-4 길항제와 함께 사용될 수 있다. 화합물 A는 또한 항염증제, GH-분비촉진제 수용체 조절제, 예를 들면 그렐린 또는 헥사렐린, GH 수용체 길항제, 예컨대 페그비소만트, 인슐린 분비촉진제 또는 인슐린 분비 증진제, 예컨대 술포닐 우레아, 예컨대 톨부타미드, 클로르프로파미드, 톨라자미드, 아세토헥사미드, 4-클로로-N-[(1-피롤리디닐아미노)카르보닐]-벤젠술폰아미드(글리코피라미드), 글리벤클라미드(글리부리드), 글리클라지드, 1-부틸-3-메타닐우레아, 카르부타미드, 글리본우리드, 글리피지드, 글리퀴돈, 글리소제피드, 글리부티아졸, 글리부졸, 글리헥사미드, 글리미딘, 글리핀아미드, 펜부타미드 또는 톨릴시클라미드, 단시간 작용 비술포닐 우레아, 경구 인슐리노트로픽제 유도체, 예를 들면 단시간 작용 인슐린 증진제, 예를 들면 메글리티니드, 레파글리니드, 페닐 아세트산 유도체, 예를 들면 나테글리니드, DPP IV 저해제, 예를 들면 1-{2-[(5-시아노피리딘-2-일)아미노]에틸아미노}아세틸-(2S)-시아노-피롤리딘 디히드로클로라이드, LAF237, GLP-1 또는 GLP-1 작동근 유사체, 인슐린 감작제, 예를 들면 퍼옥시솜 증식제 활성화 수용체 γ 작동근(PPARγ), 예를 들면 글리타존, 예컨대 (S)-((3,4-디히드로-2-(페닐메틸)-2H-1-벤조피란-6-일)메틸-티아졸리딘-2,4-디온(엔글리타존), 5-{4-(3-(5-메틸-2-페닐-4-옥사졸일)-1-옥소프로필)-페닐]-메틸}-티아졸리딘-2,4-디온(다르글리타존), 5-{[4-(1-메틸-시클로헥실)메톡시)-페닐]메틸}-티아졸리딘-2,4-디온(시클리타존), 5-{[4-(2-(1-인돌일)에톡시)페닐]메틸}-티아졸리딘-2,4-디온(DRF2189), 5-{4-[2-(5-메틸-2-페닐-4-옥사졸일)-에톡시)]벤질}-티아졸리딘-2,4-디온(BM-13.1246), 5-(2-나프틸술포닐)-티아졸리딘-2,4-디온(AY-31637), 비스{4-{[2,4-디옥소-5-티아졸리디닐)메틸] 페닐}메탄(YM268), 5-{4-(2-(5-메틸-2-페닐-4-옥사졸일)-2-히드록시에톡시]벤질}-티아졸리딘-2,4-디온(AD-5075), 5-[4-(1-페닐-1-시클로프로판카르보닐아미노)-벤질]-티아졸리딘-2,4-디온(DN-108), 5-{[4-(2-(2,3-디히드로인돌-1-일)에톡시)페닐]메틸}-티아졸리딘-2,4-디온, 5-[3-(4-클로로-페닐)-2-프로피닐]-5-페닐술포닐)티아졸리딘-2,4-디온, 5-[3-(4-클로로페닐)-2-프로피닐]-5-(4-플루오로페닐술포닐)티아졸리딘-2,4-디온, 5-{[4-(2-메틸-2-피리딜-아미노)-에톡시)페닐]메틸}-티아졸리딘-2,4-디온(로지글리타존), 5-{[4-(2-(5-에틸-2-피리딜)에톡시)페닐]메틸}티아졸리딘-2,4-디온(피오글리타존), 5-{[4-((3,4-디히드로-6-히드록시-2,5,7,8-테트라메틸-2H-1-벤조피란-2-일)메톡시)-페닐]-메틸}-티아졸리딘-2,4-디온(트로글리타존), 5-[6-(2-플루오로-벤질옥시)나프탈렌-2-일메틸]-티아졸린-2,4-디온(MCC555), 5-{[2-(2-나프틸)-벤족사졸-5-일]-메틸}티아졸리딘-2,4-디온(T-174) 또는 5-(2,4-디옥소티아졸리딘-5-일메틸)-2-메톡시-N-(4-트리플루오로메틸-벤질)벤즈아미드(KRP297), 비-글리타존 유형, 예컨대 N-(2-벤조일페닐)-L-티로신 유사체, 예를 들면 GI-262570, 또는 옥솔리딘디온, 예를 들면 JTT501, 이중 PPARγ/PPARα 작동근, 예를 들면 DRF-554158, NC-2100 또는 NN-622, 레티노이드 X 수용체 작동근 또는 렉시노이드, 예를 들면 2-[1-(3,5,5,8,8-펜타메틸-5,6,7,8-테트라히드로-2-나프틸)-시클로프로필]-피리딘-5-카르복실산, 4-[(3,5,5,8,8-펜타메틸-5,6,7,8-테트라히드로-2-나프틸)-2-카르보닐]-벤조산, 9-시스 레티노산 또는 그의 유사체, 유도체 또는 제약학적으로 허용 가능한 염, 단백질 티로신 포스파타제 키나제 1B, 글루코겐 신타제 키나제-3 저해제, 비-펩티딜 소 분자 인슐린 유사 화합물, 예를 들면 L-783,281 또는 CLX-901, 또는 저 투여량의 인슐린, 글루타민: 프럭토스-6-포스페이트 아미도트랜스퍼라제 저해제, 글루코스-6-포스파타제 저해제, 비구아니드, 예를 들면 Metformin, 프럭토스-1,6-비포스파타제 저해제, 글리코겐 포스포릴라제 저해제, 예를 들면 CP-91149, 글루카곤 수용체 길항제, 예를 들면 CP-99711, NNC 92-1687, L-168,049 또는 BAY27-9955, 포스페노피루베이트 카르복시키나제, 피루베이트 데히드로게나제 키나제 저해제, α-글루코시다제 저해제, 예를 들면 4",6"-디데옥시-4"-[(1S)-(1,4,6/5)-4,5,6-트리히드록시-3-히드록시메틸-2-시클로-헥세닐아미노}말토트리오스 또는 O-4,6-디데옥시-4-{[1S,4R,5S,6S]-4,5,6-트리히드록시-3-(히드록시메틸)-2-시클로헥센-1-일]-아미노}-α-D-글루코피라노실-(1->4)-O-α-D-글루피라노실-(1->4)-D-글루코피라노스(아카르보스), N-(1,3-디히드록시-2-프로필)발리올아민(보그리보스) 또는 미그리톨, 또는 공복 저해제, 예를 들면 GLP-1, CCK-8 및 아밀린(예를 들면 Pramlintide), 항혈관형성 효과를 갖는 약품, 예를 들면 벤조포르피린, 예를 들면 베르테포르핀, 미도스타우린 또는 4-피리딜메틸-프탈아진과 함께 사용될 수 있다.

화합물 A 또는 착물 형태의 공액 화합물 A는 항증식제, 예를 들면 화학요법 약품, 예컨대 파클리택셀, 젬시타빈, 시스플라티늄, 독소루비신, 5-플루오로우라실 또는 택솔, 호르몬제 또는 길항제, 예를 들면 항안드로겐 또는 미토잔트론(특히 전립선 암의 경우) 또는 항에스트로겐, 예컨대 레트로졸(특히 유방암의 경우), 항대사산물, 식물 알칼로이드, 생물학적 반응 변형제, 바람직하게는 림포카인 또는 인터페론, 단백질 티로신 키나제 및(또는) 세린/트레오닌 키나제의 저해제 또는 기타 또는 비공지 작용 메카니즘의 약품, 예를 들면 임의의 에포틸론 또는 에포틸론 유도체, 또는 마크로시클릭 락톤, 예를 들면 라파마이신, RAD 또는 CC1779와 함께 사용될 수 있다.

화합물 A 또는 착물 형태의 공액 화합물 A가 기타 약품과 함께 투여될 때, 동시 투여되는 약품의 투여량은 물론 사용되는 보조 약품의 유형, 사용되는 특정 약품, 치료되는 증상 등에 따라서 변화될 수 있다. 본 명세서에 사용되는 용어 "동시 투여" 또는 "병행 투여" 등은 선택된 치료제들을 단일 환자에게 투여하는 것을 의미하며 약품들이 동일한 투여 경로 또는 동시에 투여될 필요는 없다는 치료 처방을 포함하는 것이다.

전술한 본 발명에 따르면 다음과 같은 추가의 국면이 제공된다:

9. a) 화합물 A 또는 착물 형태의 공액 화합물 A인 제 1 약품 및 b) 예를 들면 상기한 바와 같은 보조 약품을 포함하는 제약학적 조성물.

10. 치료학적 유효량의 화합물 A 또는 착물 형태의 공액 화합물 A 및 상기한 바와 같은 제 2 약품 물질의 동시 투여, 예를 들면 동시에 또는 차례로 투여하는 것을 포함하는 상기한 바와 같은 방법.

본 발명의 특정 혼합물은 질병의 예방 또는 치료에 따라서 선택될 것이며; 예를 들면 만성 이식편 거부를 예방 또는 처리하기 위한 면역억제제와의 혼합물, 당뇨병 또는 이의 합병증의 치료를 위한 인슐린 분비촉진제, 인슐린 분비 증진제, 인슐린 감작제 또는 저 투여량의 인슐린과의 혼합물, 염증 질병을 예방 또는 치료하기 위한 항염증제와의 혼합물, 예를 들면 황반부종 또는 변성의 예방 또는 치료 를 위한 항혈관형성 효과를 갖는 약품과의 혼합물, 암에 사용하기 위한 화학요법제와의 혼합물이다.

본 발명에 따라, 과도한 GH-분비 및(또는) 과도한 IGF-1을 포함하거나 이와 관련된 병인의 질병, 인슐린 또는 글루카곤 방출과 관련된 기타 대사 질병, 장피누공 및 췌장루, 과민성 대장 증상, 염증성 질병, 건선 또는 류머티스성 관절염, 다낭성 신장 질병, 급속이동 증상, 설사 증상, AIDS 관련 설사, 화학요법 유발 설사, 급성 또는 만성 췌장염 및 위장 호르몬 분비 종양, 임파구 악성종양, 간세포 카르시노마와 위장 출혈, 예를 들면 정맥류 유발의 식도 출혈의 예방 또는 치료에 유용한, 소마토스타틴 펩티드 유사체를 제공할 수 있다.

Claims

아미노기 중 하나가 보호되거나 보호되지 않은 형태인 하기 화학식의 화합물 또는 그의 염.
제1항에 있어서, 보호되지 않은 형태이고, 염 형태인 화합물.
제2항에 있어서, 1염 또는 2염인 화합물.
제3항에 있어서, 아세테이트, 벤조에이트, 아스파르테이트 또는 파모에이트 염의 형태인 화합물.
보호된 형태, 중합체-결합된 형태 또는 보호되지 않은 형태의 선형 펩티드를 고리화시켜 제1항에 따른 화합물을 수득한 후, 보호기(들)를 제거하거나 제거하지 않고, 이와 같이 수득된 제1항에 따른 화합물을 유리 형태 또는 염 형태로 회수함 을 포함하는, 제1항에 따른 화합물의 제조 방법.
제1항에 있어서, 프롤린 (Pro)의 측쇄 아미노기가 킬레이트기에 공액된 화합물.
제1항에 따른 화합물 또는 그의 제약학적으로 허용가능한 염을 1종 이상의 제약학적으로 허용가능한 희석제 또는 담체와 함께 포함하는, 말단비대증, I형 또는 II형 당뇨병, 혈관병증, 당뇨성 증식성 망막병증, 당뇨성 황반부종, 신장병증, 신경병증, 새벽 현상, 및 소마토스타틴 수용체 양성인 종양 및 악성종양의 예방 또는 치료를 위한 제약학적 조성물.
제7항에 있어서, 서방성 형태 또는 국소 형태인 제약학적 조성물.
제7항에 있어서, 면역억제제, 소염제, 성장 호르몬 (GH) 분비촉진제 수용체 조절제, GH 수용체 길항제, 인슐린 분비촉진제, 인슐린 분비 증진제, 인슐린 감작제, 저 투여량의 인슐린, 항혈관형성 효과를 갖는 약제 또는 화학요법제와 배합되어 사용되는 제약학적 조성물.
제6항에 있어서, 중원소, 희토류 이온, 상자성 이온, 형광 금속 이온 또는 방사성핵종으로 착물화된 화합물.
중원소, 희토류 이온, 상자성 이온, 형광 금속 이온 또는 방사성핵종과의 하기 화학식의 화합물의 착물.