JP5331817B2 - 新規な非選択的ソマトスタチン類似体 - Google Patents

Description

本発明は、ソマトスタチンの新規な非選択的機能性類似体シクロペプチド、それらの結合体および錯体、製造方法、それらを含む製剤ならびに医薬分野におけるそれらの使用に関する。

ソマトスタチンの環状ペプチドアゴニストは以前から知られており（例えば、非特許文献１参照）、特に、これらのうちの２つであるオクトレオチドおよびランレオチドは、先端巨大症のケアにおよび癌腫の対症療法に臨床的に使用されている。

ソマトスタチンは、５つの受容体サブタイプ（ＳＳＴＲ１、２、３、４および５）との相互作用によって作用するが、それにもかかわらず、これまで治療に用いられてきた類似体は、単一の受容体ＳＳＴＲ２に対して本質的に選択的である。

既に知られているアゴニストの大部分は、ペプチド構造中に−ＤＴｒｐ−Ｌｙｓ−断片が存在することを特徴とし、それ故この断片は、類似体の活性に不可欠であるように思われており、実際にオクトレオチドおよびランレオチドにも存在している。

近年、選択性がより低い類似体、すなわち、他の受容体サブタイプとも相互作用することが可能な類似体は、治療上の使用の観点からすると利点を提供することができるという仮説が提示されている（例えば、非特許文献２参照）。

受容体ＳＳＴＲ５に対する強い親和力、ＳＳＴＲ２およびＳＳＴＲ３に対するより低い親和力ならびにＳＳＴＲ４に対する０に近い親和力を有するシクロペプチドが開示されている（例えば、特許文献１参照）。ＳＳＴＲ１に対する親和力は、ＳＳＴＲ５に対する親和力に比べて約６０倍低いことが記載されている。

上記発明の同じ発明者らは、これに続く出版物（非特許文献２参照）の中で、ソマトスタチンの抗分泌活性に対する受容体ＳＳＴＲ１、２および５の重要性を支持しているが、上記特許文献に記載されている同シクロペプチドについては、ＳＳＴＲ１に対する親和力は、ＳＳＴＲ５に対する親和力よりも約３００低いことを報告している。

この場合には、受容体ＳＳＴＲ１との相互作用によって媒介される可能な治療活性は、ＳＳＴＲ５との相互作用によって媒介される作用に対し、かなりの過量投与の存在下でのみ達成されうることが明らかである。

それ故、受容体ＳＳＴＲ４に対するアゴニストの可能な治療上の役割は明らかではないが、他の４つの受容体のすべてに同等の親和力レベルを有する新規なソマトスタチン類似体の必要性および可能性のある使用法があることは明らかである。

特に、ＳＳＴＲ１と相互作用することが可能なアゴニストの治療上の潜在的な利点が、文献に報告されている。Ｍ．Ｃ．Ｚａｔｅｌｌｉおよび同僚らは、インビトロにおいて、分泌性のヒト下垂体腺腫（例えば、非特許文献３参照）および臨床的に非機能性のヒト下垂体腺腫（例えば、非特許文献４参照）の両方を対象に、アゴニストがＳＳＴＲ１に及ぼす影響を研究しており、両方の場合で、ＳＳＴＲ１受容体の刺激が、分泌活性および細胞活力の低下をもたらしている。他方では、（受容体ＳＳＴＲ１、２、３および５と相互作用することが可能な）ソマトスタチンの多能性類似体の使用から得ることができる治療上の潜在的な利点も、Ｊ．ｖａｎ ｄｅｒ Ｈｏｅｋおよび同僚によって最近の概説に示された（例えば、非特許文献５参照）。実際、異なる腫瘍、すなわち下垂体腫瘍および胃腸膵管（ＧＥＰ）腫瘍の両方がいかにして、４つのすべての受容体を可変であるが有意なパーセントで細胞表面に発現するかが示されていたが、受容体ＳＳＴＲ４の存在ははるかに少ないことが示されていた。

ソマトスタチンの環状類似体の調製およびそれらの調製に使用される中間体も開示されている（例えば、特許文献２参照）。これらのヘキサ環状類似体は、３位にトリプトファン残基を有する。

ソマトスタチン類似体のいくつかの塩の非経口投与用の医薬組成物も開示されており（例えば、特許文献３参照）、この医薬組成物は、注入後、体液と接触して沈殿ゲルを形成する。ソマトスタチン類似体とは、ソマトスタチンから誘導され、トリプトファンを含むアミノ酸の配列を含む、直鎖状ペプチドまたは環状ペプチドを意味する。

ソマトスタチン活性におけるインドールＮＨ基の重要性が支持されており（例えば、非特許文献６参照）、実際、Ｔｒｐ⁸をナフチルアラニンで置換することによって活性の低下が生じる。

結合データは論文に報告されていないが、インビボ胃液分泌の阻害活性が評価されている。結果が示すところによると、胃の活性については、Ｔｒｐ⁸のハロゲンによる置換、メチル化類似体またはメトキシル化類似体（表ＩＩ）は、生物学的効能にほとんど影響を及ぼさず、それどころかその効能は、トリプトファンよりもむしろ、ペンタメチル−フェニルアラニン（Ｐｍｐ）またはナフチルアラニン（表ＩＩＩ）を含む類似体においてほとんど相殺されている。むしろ、Ｄ−Ｔｒｐから得られるハロゲン化合物は、ＧＨ分泌の阻害活性をかなり向上させるように思われる（表Ｖ）。Ｍｅｒｃｋ Ｓ＆Ｄの研究者らは（例えば、非特許文献７、非特許文献８参照）、環状ヘキサペプチドにおいて、トリプトファンを他の芳香族アミノ酸で置換すると、ＧＨ分泌の阻害におけるインビトロ活性をかなり損失させることを報告している。

ＳＳＴＲ１に対して選択的な類似体も、アゴニストの可能な治療上の役割とともに記載されている（例えば、非特許文献９参照）。ここで解析された構造もトリプトファンを有する。

上記文献は、一方はＤ−Ｔｒｐを含み、他方はＤ−Ｎａｌを含む２つのシクロペプチドから誘導される２シリーズの類似体を記載しており、すべての類似体は、親と同じように、ＳＳＴＲ１に対する親和力を有するだけであり、Ｄ−Ｎａｌを有するシリーズはＤ−Ｔｒｐを有するシリーズに比べて能力が約１０倍低い。これらのペプチドは他のすべての受容体サブタイプに不活性であり、これらのペプチドの１つの独特の詳細は、リジンがｐ−アミン−フェニルアラニンで置換されていることである。

国際公開第２００２／０１０１９２号パンフレット 国際公開第２００５／０１４６２４号パンフレット 国際公開第２００６／０６６８６８号パンフレット 英国特許出願公開第２２２５５７９号明細書 国際公開第９７／０１５７９号パンフレット 米国特許出願公開第２００１／０２１５１９号明細書

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上記に説明されたことから、活性因子としての機能がより少数のソマトスタチンサブ受容体に限定されているアゴニストに比較して、ソマトスタチンの多能性アゴニスト、すなわちＳＳＴ１、ＳＳＴＲ２、ＳＳＴＲ３およびＳＳＴＲ５を刺激することが可能なアゴニストは、神経内分泌腫瘍に侵されている患者において陽性応答の可能性を増大させることがそれ故に明白である。

本出願者は、驚いたことに、既知の多くの類似体中に存在するトリプトファン残基を、他の適した芳香族残基で有用に置換し、ソマトスタチン受容体の多くに対する親和力を維持することができることを見出した。

特に、トリプトファン残基の置換において、芳香族基が十分に電子豊富である（例えば、電子供与基で置換されている）アミノ酸を使用することによって、ＳＳＴＲ２、ＳＳＴＲ３およびＳＳＴＲ５受容体への結合に必要な濃度と同様の濃度値で、ＳＳＴＲ１受容体に対して満足のいく親和力を示すペプチドが得られることが見出された。

それ故、本発明の目的を形成しているのは、式（Ｉ）を有するソマトスタチン類似体シクロヘキサペプチドである。ソマトスタチン類似体シクロヘキサペプチドとは、６つのα−アミノ酸残基を有するペプチドであって、６番目の残基のα−カルボキシル基と１番目の残基のα−アミン基との間に直接的なペプチド結合が存在し、既知のソマトスタチン受容体のうちの少なくとも１つに対してナノモル濃度で結合親和力を有するペプチドを意味する。

式中、
ｍは０、１または２であり、ｎは１、２または３であり、好ましくは、ｍは１に等しく、ｎは１または２に等しく、さらに一層好ましくは、ｎは１に等しい。

Ｒ１は、インドールを除く芳香族基を表し、好ましくは、フェニル、ナフチル、ベンズヒドリル、フルオレニル、スチレニル、アントラニルまたはビフェニルであり、任意選択的に１つまたは複数の位置で置換されていてもよい。好ましい置換基は、アルキル、アルキルオキシル、ヒドロキシル、アルキルアミン、アシルアミン、スルフィドまたはアルキルスルフィドなどの電子供与基である。

基Ｒ１は、１つまたは複数のメチルオキシ基で、好ましくは２つのメチルオキシ基で置換されているナフタレン基であることが好ましく、本発明のさらに一層好ましい態様では、Ｒ１は、３，８−ジメトキシ−ナフタレン−２−イルである。

Ｒ４は、任意選択的に置換されていてもよい芳香族基を表す。Ｒ４基は、好ましくはフェニル基であり、ヒドロキシル基、Ｃ₁〜Ｃ₄アルコキシル、Ｃ₁〜Ｃ₄アルキル、ハロゲンまたはニトロで置換することが可能である。

Ｒ２およびＲ３は、独立に、ＨもしくはＣ₁〜Ｃ₄アルキル基であるか、または、Ｒ２およびＲ３は、一緒になって、窒素原子に結合し環状構造を形成するＣ₄〜Ｃ₅アルキレン鎖を表す。

あるいはまた、Ｒ３は、カチオンまたは金属キレート基であってよく、アミン基に直接的に結合しているか、またはスペーサーを介して結合している。

可能なスペーサーは、当技術分野において既に知られているもの、たとえば文献（例えば、参照によって本明細書に組み込まれている、特許文献４または特許文献５）に記載されているもののうちの１つであってよく、それらは、例えば式−Ｚ−Ｒ５−ＣＯ−の基であってよく、式中、Ｒ５は、Ｃ₁〜Ｃ₁₁アルキレン、Ｃ₁〜Ｃ₁₁アルケニレンまたは−ＣＨ（Ｒ６）−であり、Ｒ６は、αアミノ酸の側鎖であり、Ｚは、キレート基と共有結合を形成することが可能な官能基であり、Ｚは、例えばキレート基の別の官能基（例えばヒドロキシル、カルボニルまたはアミン）とエーテル結合、エステル結合またはアミド結合を形成することが可能な官能基であってよい。Ｚは、好ましくは、酸素原子、硫黄原子、カルボニル基（すなわちＣＯ）またはアミノ基（すなわちＮＨ）である。

基Ｚは、さらに一層好ましくは、アミノ基であり、式−Ｚ−Ｒ５−ＣＯ−の基が、例えば、β−アラニン（すなわち−ＮＨ−（ＣＨ₂）₂−ＣＯ−）、６−アミノヘキサン酸（すなわち−ＮＨ−（ＣＨ₂）₅−ＣＯ−）または他のものなど、カルボキシル−アミノ酸から誘導される二価残基である。

キレート基は、生理的に許容される基であり、イオンまたは他の検出可能な元素もしくは抗腫瘍放射線治療に有用な元素を錯化することができ、好ましくは親水性を有する。

キレート基ならびにイオンおよび他の錯化元素は、既に知られており、例えば、文献（例えば、参照によって本明細書に組み込まれている、非特許文献１０、非特許文献１１または特許文献１）に記載されているものの中から有用に選択することができる。

キレート基は、遊離形にあっても、イオンまたは他の元素と塩または錯体を形成していてもよく、かかる他の元素とは、放射能（放射性核種）によってもしくは他の手段で検出可能な元素または放射線治療目的に使用可能な元素である。

好ましくは、キレート基は、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’’−四酢酸（ＤＯＴＡ）またはジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）から誘導され、上記イオンは、常磁性イオン（Ｇｄ³⁺、Ｆｅ³⁺もしくは他のもの）、蛍光性イオン（Ｅｕ³⁺）またはα、βもしくはγ放射線を放出する放射性核種（¹¹¹Ｉｎ、^99mＴｃ、¹⁶⁹Ｙｂ、¹⁷⁷Ｌｕ、⁹⁰Ｙ、²¹³Ｂｉもしくは他のもの）である。

Ｘ１は、式（ａ）、（ｂ）または（ｃ）を有するアミノアシル残基である。

Ｘ１は、式（ｃ）のアミノアシル残基であることが好ましい。

式（Ｉ）のシクロヘキサペプチド中に存在するアミノアシル残基は、配置Ｌまたは配置Ｄを有することができ、好ましくは、残基１、残基２および残基４〜６はＬであり、好ましくは、残基３はＤである。

式（Ｉ）のシクロヘキサペプチドは、遊離塩基の形でまたは塩として存在することができる。塩には、有機酸との付加塩（例えば酢酸塩、乳酸塩、安息香酸塩、アスパラギン酸塩、パモ酸塩など）、ポリマー酸との付加塩（例えばポリメタクリル酸塩、ポリスチレンスルホン酸塩など）または無機酸との付加塩（例えば塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩など）が含まれる。

本発明の化合物は、ソマトスタチンの類似体シクロジスルフィド（オクトレオチド、ランレオチドなど）と比較して、インビボにおいて分解機構にさらに一層抵抗性であり、その結果として、より長い作用期間を有する。ある場合には、安定なソマトスタチンアゴニストであると既に知られているものを含む他のシクロペプチドに対し、安定性および作用期間も向上する。

また、本発明は、式（Ｉ）の化合物（以後、本発明の化合物と称する）の製造方法を含む。

本発明の化合物は、他のペプチドについて既に知られている方法に類似した、種々の合成方法を使用することによって製造することができる。

ａ）部分的に保護されている、相当する直鎖状ヘキサペプチドは、Ｎ−末端α−アミノ基およびＣ−末端α−カルボキシル基の両方が遊離のまま残るように、固相合成を用いて製造することができ、これら２つの遊離基を、適切な縮合剤を用いて溶液中で反応させ、側鎖の保護を最終的に除去することにより、所望のシクロヘキサペプチドを得られるであろう。

ｂ）代替として、リジン側鎖を用いて樹脂にペプチドを固定することによって固相合成を行うことができる。この場合には、Ｎ−末端基およびＣ−末端基から保護を選択的に除去した後、さらに環化を固相で行うことができ、本発明の化合物は、脱保護および樹脂からの分離をたった１回の処理で得ることができる。

ｃ）別の代替法では、保護されている直鎖状ペプチドを、溶液中での合成を用いて調製することができ、次いで、保護をＮ−末端基およびＣ−末端基から選択的に除去した後、ａ）に記載されているように進めることができる。

環化される直鎖状ペプチドは、本発明の化合物中に存在する６つのペプチド結合のいずれか１つを開くことによって仮定的に得ることができる６つのペプチドの中から選択することができる。その選択は、ペプチド合成の専門家に知られている合成の適切性を考慮することによって導かれるが、最終生成物の性質に最小限に影響を及ぼすとは限らない。その選択は、直鎖状ペプチドの選択された配列がどんなものであっても、いずれの場合でも同一であり、好ましくは、Ｃ−末端アミノ酸がリジンであるペプチドが選択される。

ペプチドの合成に必要なアミノ酸誘導体の多くは、知られており市販されている。

ヒドロキシプロリン誘導体は、文献（例えば、参照によって本明細書に組み込まれている特許文献５）に記載されているように、または他の同様の手法を用いて調製することができる。代替として、部分的に保護されている直鎖状ペプチドは、修飾されていないヒドロキシプロリン残基を含むことができ、側鎖の導入は、脱保護前または環化後の最終脱保護前に、直鎖状ペプチド上で直接的に実施することができる。

本発明の化合物のキレート化誘導体については、ヒドロキシプロリンに結合している鎖の保護基は、それを選択的に除去してリジン側鎖の保護を不変のままにしておくことができるように適切に選択されうる。このようにして、最終脱保護前に、直接的にまたはスペーサーを用いて、キレート基を遊離アミノ基に結合することができる。

一般式（Ｉ）の３位に使用されるアミノ酸のいくつかは、それらの誘導体と同じように新規であり、本発明のさらなる態様を形成している。特に、本発明者らは、式（ｅ）、（ｆ）および（ｇ）に相当する、アミノ酸：
３−（３，８−ジメトキシ−ナフタレン−２−イル）−アラニン、
３−（１，４−ジメトキシ−ナフタレン−２−イル）−アラニンおよび
２，５−ジメトキシ−ホモフェニルアラニン
ならびに完全にまたは部分的に保護されているそれらの誘導体について言及する。

式（ｅ）、（ｇ）および（ｆ）において、Ｇは、水素原子、またはフルオレン−９−イル−メチルオキシ−カルボニル、ｔｅｒｔ−ブチルオキシ−カルボニルもしくはベンジルオキシ−カルボニルなどの当業者に知られている保護基の中から選択される保護基であってよく、Ｗは、ヒドロキシル基、または当業者に知られている保護基、例えばメチルオキシ、ｔｅｒｔ−ブチルオキシもしくはベンジルオキシの中から選択される保護基であってよい。部分的に保護されている誘導体とは、ＧおよびＷの中から１つだけが保護基を表す場合の、それらの誘導体を意味する。

これらは、文献中（例えば、非特許文献１２、非特許文献１３および非特許文献１４参照）で既に知られている方法を適応させることによって調製することができ、例えば、所望の側鎖に相当するアルデヒドから出発し、図式１に記載されている方法を使用することができる。

上記誘導体は、ラセミエナンチオマー混合物（Ｄ／Ｌ）として調製することができるか、または立体選択的合成法もしくはキラル分割法を用いて、上記誘導体は単一エナンチオマーＤもしくはＬとして得ることができる。

キラル分割法の中で、酵素的脱ラセミ化法を使用してよく（例えば、参照によって本明細書に組み込まれている特許文献６に記載されているものなど）、この方法では、酵素（例えばＬアミノ酸−オキシダーゼまたはＤアミノ酸−オキシダーゼ）の立体選択性によって、２つのエナンチオマーのうちの１つだけのラセミ化を誘起させることができ、その後、処理サイクルを反復することによって、エナンチオマーの高い純度を獲得することができる。

本発明の目的はまた、本発明の化合物を含む医薬製剤である。

本発明の化合物は、遊離形で、または薬学的に許容される塩の形でもしくは錯体として投与することができる。そのような塩および錯体は、慣用の方法で調製することができ、遊離化合物と同一オーダーの活性を示す。本発明はまた、遊離塩基の形でまたは薬学的に許容される塩の形の式（Ｉ）の化合物を、１種または複数種の薬学的に許容される賦形剤または希釈剤と一緒に含む医薬化合物を提供する。そのような組成物は、慣用の方法で製剤されうる。本発明の化合物はまた、改変された放出剤形で、例えばインプラント、マイクロカプセル、リポソーム製剤の形態において、たとえば生体分解性のポリマーもしくはコポリマーを含むマイクロスフェアもしくはナノスフェアとして、またはオートゲルの形態（例えば患者の体液との相互作用後にゲルを形成することが可能な固体組成物もしくは半固体組成物）で投与することができる。

本発明の化合物またはそれらの薬学的に許容される塩もしくは錯体は、任意の慣用の経路を用いて投与することができ、例えば非経口で、注入可能な溶液もしくは懸濁液の形で（上記の改変された放出剤形も含む）、経口で、従来の吸収促進剤を使用して、経鼻でまたは坐薬としてまたは局所に、例えば眼科用液剤、ゲル、軟膏もしくは懸濁液である調製物として、例えばリポソーム懸濁液としての調合剤の形で、例えば結膜下または眼内もしくは眼周囲の点眼もしくは注入用のマイクロスフェア製剤もしくはナノスフェア製剤として投与することができる。

本発明のさらなる態様によると、本発明の化合物の結合体または錯体を、薬学的に許容される賦形剤または希釈剤と一緒に含む医薬組成物も提供される。そのような組成物は、例えば画像診断用に、用量を２つに分け、一方には放射性核種を、他方には本発明の化合物の結合体を含み、それらを混合するための使用説明書が添付されたキットとして、慣用の方法で製造され、提示されうる。放射線治療については、錯化されている形の本発明の化合物の結合体は、高温液体剤形であることが好ましい可能性がある。

以下の実施例は、本発明の目的を説明することを意図し、いずれのやり方でも、本発明を限定していると見なされてはならない。

実施例では、以下の略語が使用される。
１，４ＭＮａｌ ３−（１，４−ジメトキシ−ナフタレン−２−イル）−アラニン
２，５ＭｈＰｈｅ ２，５−ジメトキシ−ホモフェニルアラニン
３，８ＭＮａｌ ３−（３，８−ジメトキシ−ナフタレン−２−イル）−アラニン
ＡＣＮ アセトニトリル
Ｂｎ ベンジル
Ｂｏｃ ｔｅｒｔ−ブチルオキシ−カルボニル
ＤＩＰＥＡ ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＰＰＡ ジフェニルホスホリルアジド
ＤＳＣ Ｎ，Ｎ−ジスクシンイミジルカーボネート
Ｆｍｏｃ フルオレン−９−イル−メチルオキシ−カルボニル
Ｆｍｏｃ−ＯＳｕ フルオレン−９−イル−メチル、Ｎ−スクシンイミジルカーボネート
ＨＡＴＵ Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ｈＰｈｅ ホモフェニルアラニン、２−アミノ−４−フェニル−酪酸
Ｈｙｐ ４，ヒドロキシ−プロリン
Ｎａｌ ３−（ナフタレン−２−イル）−アラニン、２−アミノ−３−ナフタレン−２−イル−プロピオン酸
ＮＭＭ Ｎ−メチルモルホリン
Ｐｄ／Ｃ 金属パラジウム・オン・カーボン
Ｐｈｇ フェニルグリシン、２−アミノ−２−フェニル−酢酸
ＰＶＤＦ ポリビニリデンフルオリド
Ｓｔｙ スチリル−アラニン、２−アミノ−５−フェニル−ペント−４−エン酸
Ｔｆａ トリフルオロアセチル
ＴＨＦ テトラヒドロフラン
−Ｔｒｔ（Ｃｌ）−ＤＶＢ 樹脂、（２−クロロ）トリチル−ジビニルベンゼン
Ｚ ベンジルオキシ−カルボニル

別に指示されている場合を除いて、アミノ酸はＬ配置であり、（Ｄ／Ｌ）はラセミアミノ酸を指し、一方（Ｄ，Ｌ）は、不明確なキラリティーの単一エナンチオマーを指す。

一般的な精製方法
他に指示のない限り、最終的な精製はすべて、Ｗａｔｅｒｓ Ｓｙｍｍｅｔｒｙ Ｃ１８ ５ｍｍ １９×５０ｍｍカラムを用い、Ｗａｔｅｒｓ ＺＱ質量分析計を備えたＷａｔｅｒｓＨＰＬＣ／ＭＳ分取システムを用いて実施した。

操作条件：
ＥＳ⁺セントロイドイオン化、走査時間１５分、走査１２０〜１０００ｍ／ｚ、コーン電圧１５Ｖ、ソース温度１２０℃、溶媒和温度２５０℃。

ＨＰＬＣ溶離液：
Ａ＝Ｈ₂Ｏ、Ｂ＝ＡＣＮ、Ｃ＝Ｈ₂Ｏ中１％ＣＦ₃ＣＯＯＨ

精製される粗生成物のアリコートを、ＭｅＯＨに溶解し、ＡＣＮ／Ｈ₂Ｏ（１：１、ｖ／ｖ）混合物で希釈した。この溶液を、０．４５ｍｍＰＶＤＦ膜上でろ過し、前述の分取システムに注入した。各実行について、予期される分子イオン（［Ｍ＋Ｈ］⁺）に関連するピークに相当する画分を採取し、これを合わせて、濃縮乾燥した。同一の分子イオン（異性体）に関連する追加のピークが出現した場合には、これらを別々に採取した。

中間体の調製：
（実施例１）
Ｆｍｏｃ−（Ｄ／Ｌ）３−（３，８−ジメトキシ−ナフタレン−２−イル）−アラニン
ａ）３，８−ジメトキシ−２−ナフトアルデヒド（１当量）、２，２−ジメチル−１，３−ジオキサン−４，６−ジオン（１．３５当量）およびピペリジン（０．１２当量）をＣＨＣｌ₃に溶解し、この溶液を加熱して２．５時間還流させる。水で洗浄後、溶媒を蒸発させることによって生成物を回収し、ＴＨＦとメタノールとの混合物に再溶解し、この溶液にＮａＢＨ₄（５．４当量）を加える。約１０分後、水を加え、混合物をｐＨ＝３に酸性化する。一部蒸発させることによって、固体を分離し、その固体を回収し、エタノールに再溶解し、ピリジンを加え、この混合物を、最初の生成物が完全に消失するまで（ＴＬＣ管理）加熱還流する。

ｂ）エタノールを蒸発させた後、生成物（２−（３，８−ジメトキシ−ナフタレン−２−イル−メチル）−マロン酸のモノ−エチルエステル）をクロロホルムに溶解し、酸性水で洗浄する。乾燥させた溶液に、塩化チオニル（１．３当量）を加え、混合物を約１時間加熱還流する。クロロホルムを繰り返し蒸発させた後、残渣をジクロロメタンに溶解し、この溶液を氷浴中で冷却する。テトラブチルアンモニウムブロミド（触媒）を加え、水に溶解させたＮａＮ₃（１．２当量）を加え、０℃で２時間後、有機相を回収し、これを水で洗浄し、無水Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥する。この溶液を、無水Ｎａ₂ＳＯ₄の存在下で、室温にて丸一晩放置する。ろ過した溶液に、トリフルオロ酢酸（１．５当量）を加え、混合物を約６時間加熱還流する。５％ＮａＨＣＯ₃で洗浄した後、溶媒を蒸発させ、得られた油状物をシリカゲルカラム上で精製する。

ｃ）得られた生成物（Ｔｆａ−（Ｄ／Ｌ）３，８ＭＮａｌ−ＯＥｔ）を、Ｋ₂ＣＯ₃（２当量）を含むＴＨＦ、メタノールおよび水の混合物に溶解し、一晩加熱還流する。溶液を一部蒸発させ、ＴＨＦに溶解させたＦｍｏｃ−ＯＳｕ（１当量）を加える。反応終了時（ＴＬＣ管理）、ＴＨＦを蒸発させ、水溶液を酢酸エチルで抽出することによって、生成物を回収する。ｎ−ヘキサンを加えて、生成物（Ｆｍｏｃ−（Ｄ／Ｌ）３，８ＭＮａｌ−ＯＨ）の沈殿を得て、この沈殿をろ過して乾燥する（ＨＰＬＣ純度：９８．５％、ｍ／ｚ＝４９８ａｍｕ（［Ｍ＋Ｈ］⁺））。

（実施例２）
Ｆｍｏｃ−［４−（２−アミノエチル）カルバモイル］プロリン
ａ）Ｚ−Ｈｙｐ−ＯＢｎおよびＤＳＣ（１当量）をアセトニトリルに溶解し、トリエチルアミン（１．２当量）で処理する。室温で一晩経過した後、Ｎ−Ｂｏｃ−ジアミンエタン（１．２当量）を加え、混合物を３．５時間反応させたままにしておく。溶媒を蒸発させた後、残渣を酢酸エチルで回収し、順に、２．５％ＫＨＳＯ₄、ＮａＨＣＯ₃およびＮａＣｌで洗浄する。有機溶液を無水Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥し、蒸発乾燥して、生成物を回収する。

ｂ）生成物をメタノールに溶解し、１０％Ｐｄ／Ｃの存在下での接触水素化を用いて保護基（Ｚおよびベンジルエステル）を除去する。触媒をろ過した後、溶媒を蒸発させることによってアミノ酸を回収し、これをＫ₂ＣＯ₃（１当量）を含む水とＴＨＦとの混合物に溶解し、０℃に冷却した後、ＴＨＦに溶解させたＦｍｏｃ−ＯＳｕ（２当量）を加える。反応終了時（ＴＬＣ管理）、ＴＨＦを蒸発させ、水溶液を酢酸エチルで抽出することによって、生成物を回収する。ｎ−ヘキサンを加えて、生成物の沈殿を得、この沈殿をろ過して乾燥する（ＨＰＬＣ純度：９９．９％、ｍ／ｚ＝５４０ａｍｕ（［Ｍ＋Ｈ］⁺））。

（実施例３）
Ｆｍｏｃ−（Ｄ／Ｌ）２，５−ジメトキシ−ホモフェニルアラニン
ａ）２，２−ジメチル−１，３−ジオキサン−４，６−ジオン（１．３当量）のＤＭＦ（５０ｍＬ）懸濁液を氷浴中で冷却し、この懸濁液に、ＮａＣＮＢＨ₃（１．８当量）および２．５−ジメトキシフェニルアセトアルデヒド（１．１当量）を加える。反応混合物を室温で５時間撹拌する。Ｈ₂Ｏを加えることによって、固体を分離し、この固体をろ過し、イソプロパノールから結晶化することによって精製し、最終的にＥｔＯＨに溶解し、ピリジンで６時間還流処理する。

ｂ）得られた生成物（２−（２，５−ジメトキシ−フェニル−エチル）−マロン酸のモノ−エチルエステル）から、実施例１のポイントｂ）に記載されているように操作し、部分的に保護されたアミノ酸Ｆｍｏｃ−（Ｄ／Ｌ）２，５ＭｈＰｈｅ−ＯＨを調製する（ＨＰＬＣ純度：９６％、ｍ／ｚ＝４６２ａｍｕ（［Ｍ＋Ｈ］⁺））。

（実施例４）
Ｆｍｏｃ−（Ｄ／Ｌ）３−（１，４−ジメトキシ−ナフタレン−２−イル）−アラニン
１，４−ジメトキシ−２−ナフトアルデヒドから出発し、実施例１に記載されているように操作し、保護されたアミノ酸Ｆｍｏｃ−（Ｄ／Ｌ）１，４ＭＮａｌ−ＯＨを得る。（ＨＰＬＣ純度：９６．９％、ｍ／ｚ（［Ｍ＋Ｈ］⁺）＝４９８ａｍｕ）。

シクロペプチドの調製：
実施例に記載されているペプチドの純度は、ＨＰＬＣ逆相クロマトグラフィー（Ａｇｉｌｅｎｔ １１００クロマトグラフ）を用い、以下の方法を使用して分析した。
溶離液：Ａ）０．１％ＴＦＡアセトニトリル／水（５：９５、ｖ／ｖ）溶液
Ｂ）０．１％ＴＦＡアセトニトリル溶液
溶離液Ｂ勾配：３０分で２０％から８０％まで
流速： １．０ｍｌ／分
カラム：Ｊｕｐｉｔｅｒ ４μ（４×２５０ｍｍ）

（実施例５）
シクロ［Ｔｙｒ（Ｂｎ）−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ（４−ＯＣＯＮＨ（ＣＨ₂）₂ＮＨ₂）−Ｐｈｅ−（Ｄ，Ｌ）３，８ＭＮａｌ−Ｌｙｓ］異性体Ｂ
ａ）Ｈ−Ｔｙｒ（Ｂｎ）−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ（４−ＯＣＯＮＨ（ＣＨ₂）₂ＮＨＢｏｃ）−Ｐｈｅ−（Ｄ／Ｌ）３，８ＭＮａｌ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ
樹脂Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｔｒｔ（Ｃｌ）−ＤＶＢから出発し、固相ペプチド合成の多様なサイクルを実行し、所望のヘキサペプチドを得る。第１のサイクルに、Ｆｍｏｃ−（Ｄ／Ｌ）３，８Ｍｎａｌ−ＯＨ（実施例１参照）を使用し、第３のサイクルに、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ（４−ＯＣＯＮＨ（ＣＨ₂）₂ＮＨＢｏｃ）−ＯＨ（実施例２参照）を使用する。各サイクルについては、Ｆｍｏｃ基をＤＭＦ中２０％ピペリジンで除去し、Ｆｍｏｃと同じように保護された次のアミノ酸をＨＡＴＵで活性化し、樹脂上に存在するアミノ基と反応させる。

最後に、Ｆｍｏｃ基をＤＭＦ中２０％ピペリジンで除去し、部分的に保護されているペプチドを、酢酸、トリフルオロエタノールおよびジクロロメタン（１：２：７の割合）の混合物で、室温にて３０分間処理することによって樹脂から除去する。溶媒を蒸発させた後、残渣を酢酸エチルと５％ＮａＨＣＯ₃との間に分配し、有機相を回収し、蒸発させて固体残渣を得る。

ｂ）シクロ［Ｔｙｒ（Ｂｎ）−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ（４−ＯＣＯＮＨ（ＣＨ₂）₂ＮＨ）−Ｐｈｅ−（Ｄ，Ｌ）３，８−ＭＮａｌ−Ｌｙｓ］
ｃ）で得られたペプチドを（１．６ｍＭ）ＤＭＦに溶解し、−１０℃に冷却する。ＤＩＰＥＡ（２当量）およびＤＰＰＡ（１．３当量）を加え、この混合物を＋４℃で６０時間放置する。ＤＭＦを除去した後、残渣を酢酸エチルで回収し、５％ＮａＨＣＯ₃で洗浄する。有機相を蒸発させることによって、固体残渣を得、これをＴＦＡ（Ｈ２Ｏ中９５％）で０℃にて１時間処理し、次いで蒸発させる。種々の異性体種が樹脂中に存在し、これらを逆相クロマトグラフィー（カラムＣ１８）を用いて分離する。ＨＰＬＣカラムからの溶離順で、２番目の異性体（異性体Ｂ）を純粋な状態で回収する。
ＨＰＬＣ：ＲＴ１４．７４分、純度９９．１％
ＭＳ：ｍ／ｚ＝１１３３ａｍｕ（［Ｍ＋Ｈ］⁺）および５６７ａｍｕ（［Ｍ＋２Ｈ］²⁺）

（実施例６）
シクロ［Ｔｙｒ（Ｂｎ）−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ（４−ＯＣＯＮＨ（ＣＨ₂）₂ＮＨ₂）−Ｐｈｅ−（Ｄ，Ｌ）２，５ＭｈＰｈｅ−Ｌｙｓ］異性体Ｂ
ａ）Ｈ−Ｔｙｒ（Ｂｎ）−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ（４−ＯＣＯＮＨ（ＣＨ₂）₂ＮＨＢｏｃ）−Ｐｈｅ−（Ｄ／Ｌ）２，５−ＭｈＰｈｅ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ
実施例５のポイントａ）に記載されているように操作し、第１のサイクルにＦｍｏｃ−（Ｄ／Ｌ）２，５ＭｈＰｈｅ−ＯＨ（実施例３）を使用し、第３のサイクルにＦｍｏｃ−Ｈｙｐ−ＯＨを使用する。末端Ｆｍｏｃ基を除去する前に、樹脂をＮＭＭ（５当量）の存在下で、ｐ−ニトロフェニルクロロホルミエート（５当量）で処理する。３時間後、この樹脂をＤＣＭで洗浄し、Ｎ−Ｂｏｃ−ジアミンエタン（５当量）でさらに３時間処理し、次いで、ろ過して洗浄する。次いで、実施例５のポイントａ）に記載されているように進める。

ｂ）シクロ［Ｔｙｒ（Ｂｎ）−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ（４−ＯＣＯＮＨ（ＣＨ₂）₂ＮＨ）−Ｐｈｅ−（Ｄ，Ｌ）２，５−ＭｈＰｈｅ−Ｌｙｓ］
ａ）で得られたペプチドを、実施例５のポイントｂ）に記載されているように処理する。また、この場合には、種々の異性体を得て、これらを逆相クロマトグラフィー（カラムＣ１８）を用いて分離する。ＨＰＬＣカラムからの溶離順で、２番目の異性体（異性体Ｂ）を純粋な状態で回収する。
ＨＰＬＣ：ＲＴ１３．８２分、純度９９．０％
ＭＳ：ｍ／ｚ＝５４９ａｍｕ（［Ｍ＋２Ｈ］²⁺）

（実施例７）
シクロ［Ｔｙｒ（Ｂｎ）−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ（４−ＯＣＯＮＨ（ＣＨ₂）₂ＮＨＣＨ₃）−Ｐｈｅ−（Ｄ，Ｌ）３，８ＭＮａｌ−Ｌｙｓ］異性体Ｂ
実施例６に記載されているように操作し、第１のサイクルにＦｍｏｃ−（Ｄ／Ｌ）３，８ＭＮａｌ−ＯＨ（実施例１）を使用し、Ｂｏｃ−Ｎ（ＣＨ₃）−（ＣＨ₂）₂−ＮＨ₂）を使用して、ヒドロキシプロリンの側鎖を修飾する。種々の異性体が得られ、これらを逆相クロマトグラフィー（カラムＣ１８）を用いて分離する。ＨＰＬＣカラムからの溶離順で、２番目の異性体（異性体Ｂ）を純粋な状態で回収する。
ＨＰＬＣ：ＲＴ１５．０７分、純度９４．５％
ＭＳ：ｍ／ｚ＝１１４７ａｍｕ（［Ｍ＋Ｈ］⁺）および５７４ａｍｕ（［Ｍ＋２Ｈ］²⁺）

（実施例８）
シクロ［Ｔｙｒ（Ｂｎ）−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ（４−ＯＣＯＮＨ（ＣＨ₂）₂ＮＨ₂）−Ｐｈｅ−（Ｄ，Ｌ）１，４−ＭＮａｌ−Ｌｙｓ］異性体Ａ
実施例６に記載されているように操作し、第１のサイクルにＦｍｏｃ−（Ｄ／Ｌ）１，４ＭＮａｌ−ＯＨ（実施例４）を使用する。種々の異性体が得られ、これらを逆相クロマトグラフィー（カラムＣ１８）を用いて分離する。より低い保持時間を有する異性体（異性体Ａ）が、表題の生成物に相当する。
ＨＰＬＣ：ＲＴ１３．７１分、純度８０．６％
ＭＳ：ｍ／ｚ＝１１３３ａｍｕ（［Ｍ＋Ｈ］⁺）および５６７ａｍｕ（［Ｍ＋２Ｈ］²⁺）

（実施例９）
シクロ［Ｔｙｒ（Ｂｎ）−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ（４−ＯＣＯＮＨ（ＣＨ₂）₂ＮＨ₂）−Ｐｈｅ−（Ｄ，Ｌ）１，４−ＭＮａｌ−Ｌｙｓ］異性体Ｂ
前の実施例に記載されている調製から、ＨＰＬＣカラムからの溶離順で２番目である異性体Ｂも、純粋な状態で回収される。
ＨＰＬＣ：ＲＴ１４．７１分、純度９７．７％
ＭＳ：ｍ／ｚ＝１１３３ａｍｕ（［Ｍ＋Ｈ］⁺）および５６７ａｍｕ（［Ｍ＋２Ｈ］²⁺）

（実施例１０）
シクロ［Ｔｙｒ（Ｂｎ）−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ（４−ＯＣＯＮＨ（ＣＨ₂）₂ＮＨ₂）−Ｐｈｅ−（Ｄ）Ｎａｌ−Ｌｙｓ］
化合物の合成は、実施例６に記載されている手法に従って、サイクルにＦｍｏｃ−（Ｄ）Ｎａｌ−ＯＨを使用して行う。
ＨＰＬＣ：ＲＴ１４．１４分、純度９９．５％
ＭＳ：ｍ／ｚ＝１０７３ａｍｕ（［Ｍ＋Ｈ］⁺）および５３７ａｍｕ（［Ｍ＋２Ｈ］²⁺）

（実施例１１）
シクロ［Ｔｙｒ（Ｂｎ）−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ（４−ＯＣＯＮＨ（ＣＨ₂）₂ＮＨ₂）−Ｐｈｅ−（Ｄ）ｈＰｈｅ−Ｌｙｓ］
化合物の合成は、実施例６に記載されている手法に従うことによって、第１のサイクルにＦｍｏｃ−（Ｄ）ｈＰｈｅ−ＯＨを使用して行う。
ＨＰＬＣ：ＲＴ１３．８１分、純度９４．５％
ＭＳ：ｍ／ｚ＝１０３７ａｍｕ（［Ｍ＋Ｈ］⁺）および５１９ａｍｕ（［Ｍ＋２Ｈ］²⁺）

（実施例１２）
シクロ［Ｔｙｒ（Ｂｎ）−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ（４−ＯＣＯＮＨ（ＣＨ₂）₂ＮＨＣＨ₃）−Ｐｈｇ−（Ｄ）Ｓｔｙ−Ｌｙｓ］
化合物の合成は、実施例７に記載されている手法に従って、第１のサイクルにＦｍｏｃ−（Ｄ）Ｓｔｙ−ＯＨを使用し、第２のサイクルにＦｍｏｃ−Ｐｈｇ−ＯＨを使用して行う。
ＨＰＬＣ：ＲＴ１３．６２分、純度９７．８％
ＭＳ：ｍ／ｚ＝１０４９ａｍｕ（［Ｍ＋Ｈ］⁺）および５２５ａｍｕ（［Ｍ＋２Ｈ］²⁺）

（実施例１３）
シクロ［Ｔｙｒ（Ｂｎ）−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ（４−ＯＣＯＮＨ（ＣＨ₂）₂ＮＨ₂）−Ｐｈｇ−（Ｄ）ｈＰｈｅ−Ｌｙｓ］
化合物の合成は、実施例６に記載されている手法に従って、第１のサイクルにＦｍｏｃ−（Ｄ）ｈＰｈｅ−ＯＨを使用し、第２のサイクルにＦｍｏｃ−Ｐｈｇ−ＯＨを使用して行う。
ＨＰＬＣ：ＲＴ１２．７８分、純度９８．８％
ＭＳ：ｍ／ｚ＝５１２ａｍｕ（［Ｍ＋２Ｈ］²⁺）

（実施例１４）
シクロ［Ｔｙｒ（Ｂｎ）−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ（４−ＯＣＯＮＨ（ＣＨ₂）₂ＮＨ₂）−Ｔｙｒ−（Ｄ，Ｌ）３，８ＭＮａｌ−Ｌｙｓ］異性体Ｂ
実施例５に記載されているように操作し、第２のサイクルにＦｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨを使用する。
ＨＰＬＣ：ＲＴ１３．１３分、純度９５．４％
ＭＳ：ｍ／ｚ＝１１４９ａｍｕ（［Ｍ＋Ｈ］⁺）および５７５ａｍｕ（［Ｍ＋２Ｈ］²⁺）

（実施例１５）
シクロ［Ｓｅｒ（Ｂｎ）−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ（４−ＯＣＯＮＨ（ＣＨ₂）₂ＮＨ₂）−Ｐｈｅ−（Ｄ，Ｌ）３，８ＭＮａｌ−Ｌｙｓ］異性体Ｂ
実施例５に記載されているように操作し、第５のサイクルにＦｍｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｎ）−ＯＨを使用する。
ＨＰＬＣ：ＲＴ１２．２６分、純度９８．２％
ＭＳ：ｍ／ｚ＝１０５７ａｍｕ（［Ｍ＋Ｈ］⁺）および５２９ａｍｕ（［Ｍ＋２Ｈ］²⁺）

実験の部
本発明の化合物は、重要な薬理学的特性を示し、このことはいくつかのインビトロ試験およびインビボ試験において示されている。

特に、本発明の化合物は、ソマトスタチンの受容体のサブタイプうちの少なくとも１つに、満足のいく親和力で結合する。

結合アッセイ
結合アッセイは、以下に説明されているように、標準方法に従ってトランスフェクションした細胞膜（例えばＣＨＯ）から得られた組換えヒト受容体、ｈＳＳＴＲ１、ｈＳＳＴＲ２、ｈＳＳＴＲ３およびｈＳＳＴＲ５の調製物を使用することによって行った。

５ｍＭ ＭｇＣｌ₂、１ｍＭ ＣａＣｌ₂、１０μｇ／ｍｌのサポニン、０．５％ＢＳＡを含む２５ｍＭ Ｈｅｐｅｓ（ｐＨ７．４）緩衝液中、放射性リガンドとして３−［１２５Ｉ］ヨードチロシル１１ソマトスタチン−１４（Ａｍｅｒｓｈａｍ、ＩＭ１６１、２０００Ｃｉ／ｍｍｏｌ）とともに、試験中の化合物の濃度を増加させながら、２５℃で６０分間、膜を２倍にインキュベートする。インキュベーションを、Ｆｉｌｔｅｒｍａｔｅ Ｈａｒｖｅｓｔｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）で、ＧＦ／Ｂフィルターを通した濾過により終了させ、次いで、緩衝液（２５ｍＭ Ｈｅｐｅｓ ｐＨ７．４、５ｍＭ ＭｇＣ１₂、１ｍＭ ＣａＣ１₂）で６回洗浄する。Ｍｉｃｒｏｓｃｉｎｔ２０液体シンチレーション（Ｐａｃｋａｒｄ）を加え、オービタル撹拌機で１５分間インキュベートした後、フィルターの放射活性を、ＴｏｐＣｏｕｎｔ（商標）またはＭｉｃｒｏＢｅｔａ（商標）リーダーで、１分間／ウェルで測定する。結果は、増加された濃度の試験中の化合物の存在下で、放射標識リガンドの特異的結合の百分率として表される。ＩＣ５０値の計算は、「ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ」ソフトウェアを使用して行った（ＩＣ５０とは、上記の競合結合試験において、最大阻害数の半数を得るために必要な化合物の濃度である）。

本発明の化合物のＩＣ５０値は、ナノモル濃度範囲に位置し、０．１から５０ｎＭまでの間に含まれることが好ましい。

ラット下垂体細胞における成長ホルモン放出の阻害のアッセイ
本発明の化合物はまた、ラット下垂体細胞を対象としてインビトロで実施した試験から示されるように、成長ホルモン放出（ＧＨ）の阻害活性を示す。成熟雄ラット（ＣＤ１−ＳＤ、１７５〜２００ｇ）から取り出した下垂体を小さい断片に切断し、１％ＢＳＡ、２０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ、抗体を含むハンクス緩衝液中、コラゲナーゼ（１ｍｇ／ｍｌ）とともに３７℃で２０分間インキュベートする。分散された細胞を、緩衝液で数回洗浄した後、４８ウェルプレート中に２００００細胞／ウェルで分注し、６〜７日間培養する（５％胎児ウシ血清、５％ウマ血清、１％非必須アミノ酸を含むＤＭＥＭ）。実験当日に、細胞をハンクス緩衝液で洗浄し、次いで、０．１％ＢＳＡおよび２０ｍＭ ＨＥＰＥＳを加えたハンクス緩衝液の存在下で、３７℃にて１時間インキュベートする。次いで、依然として０．１％ＢＳＡおよび２０ｍＭ ＨＥＰＥＳの存在下で、緩衝液を新鮮な緩衝液で置換する。次いで細胞を、多様な濃度の試験中の生成物とともにおよび３×１０^-9Ｍ ＧＨＲＨとともに、ＣＯ₂インキュベーター中で、３７℃にて３時間インキュベートする。供給業者の指示に従ってＥＬＩＳＡ Ｒａｔ Ｇｒｏｗｔｈ Ｈｏｒｍｏｎｅ Ｂｉｏｔｒａｃｋ Ｅｎｚｙｍｅｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙキット（Ａｍｅｒｓｈａｍ ＲＰＮ２５６１）またはＭｏｕｓｅ／Ｒａｔ ＧＨ ＥＬＩＳＡキット（ＤＳＬ−１０−７２１００）を使用することによって、培地に放出されるＧＨを測定する。本発明の化合物は、１０^-11から１０^-6Ｍの範囲の濃度で、ＧＨの放出を阻害し、実施例５の化合物は、１．３ｎＭのＩＣ５０値を有する。

ＧＨ分泌性ヒト下垂体腺腫細胞における成長ホルモン放出の阻害のアッセイ
本発明の化合物はまた、腫瘍に関する臨床報告でインビトロ試験から示される用に、ＧＨ分泌性ヒト下垂体腺腫細胞からのＧＨ放出の阻害活性を示す。試験は、ヒト腫瘍生検を使用することによって実行し、可変量の試験中の化合物の存在下で、刺激を受けていない細胞から産生されるＧＨを、供給業者の指示に従ってＥＬＩＳＡ ｈＧＨ−ＥＡＳＩＡキット（ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ ＫＡＰ１０８１）を使用することによって、測定する。ソマトスタチンおよび類似体の作用に感受性がある腫瘍において、本発明の化合物は、１０^-10から１０^-6Ｍの範囲の濃度で、好ましくは１０ｎＭの濃度で、ＧＨ産生を半減させる。

バルビツール酸系薬剤によって刺激されたＧＨ産生のインビボ阻害のアッセイ
本発明の化合物は、ネンブタールの投与によって刺激されたＧＨの放出を、インビボで阻害する。化合物を、雄ラット（ＣＤ、Ｈａｒｌａｎ Ｉｔａｌｙ）に、種々の用量で皮下投与する。ネンブタール（６０ｍｇ／ｋｇ）の腹腔内投与を用いて動物を麻酔させた後１時間目から、種々の時間に血液サンプルを採取し、ＥＬＩＳＡ試験を用いてホルモンレベルを測定する。本発明の化合物を、５から２５０μｇ／ｋｇまでの用量で投与された動物において、産生されたＧＨレベルの減少が見られた。実施例１の化合物は、５μｇ／ｋｇの用量では、投与後６時間目に測定されたＧＨの放出を５５％減じ、１２５μｇ／ｋｇの用量では、投与後２４時間目でもなおＧＨの減少を測定することができる。

薬物動態プロフィールのアッセイ
本発明の化合物はまた、ラットにおいて、非常に良好な薬物動態プロフィールを示す。薬物動態プロフィールは、化合物を雄ラット（ＣＤ、Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ、２００〜２５０ｇ）に１ｍｇ／ｋｇの用量で皮下投与することによって測定した。投与後７２時間まで、種々の時間に血液サンプルを採取した。試験中の化合物の濃度を、別々の血漿サンプルにおいてＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析法を用いて測定し、その値は、ノンコンパートメントモデルに従って、ソフトウェア「Ｋｉｎｅｔｉｃａ」を使用して処理した。以下の表に、実施例１の化合物を用いて得られた主要な薬物動態パラメータを、ソマトスタチンの別の安定な類似体であり、現在臨床開発段階中のパシレオチドを用いて得られたものと比較して報告する（パシレオチドは、文献（例えば、特許文献１）に記載されている方法に従うことによって調製された）。

実施例５の化合物は、半減期および平均滞留時間（ＭＲＴ）の両方の点から見て、パシレオチドよりも良好である。また、オクトレオチドの場合には、ｔ１／２値は約２時間である。

結果として、本発明の化合物は、ＧＨ分泌過多および／またはＩＧＦ−１過多を含むかまたはこれに関連する原因を有する障害の予防または治療に、例えば先端巨大症の治療に、Ｉ型もしくはＩＩ型糖尿病、特にそれらの合併症、例えば血管障害、増殖性糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、腎症および覚醒時高血糖現象ならびにインスリンもしくはグルカゴンの放出に関係する他の代謝障害、例えば病的肥満または視床下部性肥満症もしくは高インスリン性肥満症などの治療に有用である。本発明の化合物は、腸管皮膚瘻および膵皮膚瘻、過敏性腸症候群、炎症性疾患、例えばグレーブス病、過敏性腸疾患、乾癬または関節リウマチ、多発性嚢胞腎疾患、急速胃内容排出疾患、水様性下痢症候群、ＡＩＤＳに関係する下痢、化学療法によって誘発される下痢、急性膵炎または慢性膵炎、消化管ホルモン分泌腫瘍（例えばビポーマ、グルコノーマ（ｇｌｕｃｏｎｏｍａｓ）、インスリノーマ、カルチノイドなどのＧＥＯ腫瘍）、リンパ腫または白血病などの悪性リンパ球、食道静脈瘤出血などの消化管出血などの肝細胞癌の治療にも有用である。

本発明の化合物はまた、ソマトスタチン受容体に陽性の腫瘍、例えば受容体ＳＳＴＲ１、ＳＳＴＲ２、ＳＳＴＲ３および／またはＳＳＴＲ５を産する腫瘍などの治療に有用であり、このことはソマトスタチンの受容体を発現する多様な癌細胞系を用いた増殖性試験において示されている。

上述の適応症のすべてについて、所要の投与量は、例えば、患者、投与方法および治療されるべき症状の重症度に関して当然変化する。しかし、一般に、１μｇから０．７ｍｇ／ｋｇ／日までの本発明の化合物を投与することで満足な結果を得る。患者に対して推奨される１日投与量は、約２μｇから５０ｍｇまで、好ましくは約０．０１から約４０ｍｇまでのオーダーであり、例えば約０．００１から約３ｍｇまでの化合物を皮下に、１日３回までの分割された用量で、例えば、約０．５μｇから約２５ｍｇまで、例えば約２μｇから約２０ｍｇまで、例えば約２μｇから約１．５ｍｇまでの本発明の化合物を含む単回剤形で、都合良く投与される。

本発明の化合物の結合体またはそれらの薬学的に許容される塩は、検出可能な元素、例えばγ核種もしくは陽電子放出核種、蛍光性金属イオンもしくは常磁性イオン、例えば¹¹¹Ｉｎ、¹⁶¹Ｔｂ、¹⁷⁷Ｌｕ、⁶⁸Ｇａ、Ｅｕ³⁺、Ｇｄ³⁺、Ｆｅ³⁺、Ｍｎ²⁺もしくはＣｒ²⁺などと錯化される場合、例えばソマトスタチン受容体に陽性の組織および細胞、例えばソマトスタチン受容体に陽性の腫瘍および転移などの表示のための、ならびにソマトスタチン受容体を示す炎症性障害もしくは自己免疫性障害、結核もしくは移植後の器官の拒絶反応のための画像診断用薬剤として、または、オージェ電子のカスケードを有するα−放出核種もしくはβ−放出核種、例えば⁹⁰Ｙ、¹⁶¹Ｔｂ、¹⁷⁷Ｌｕ、²¹¹Ａｔ、²¹³Ｂｉもしくは²⁰¹Ｔｌと錯化される場合、ソマトスタチン受容体に陽性の腫瘍および転移の、慢性関節リウマチおよび重度の炎症状態のためのインビボ治療用の放射性薬物としてのどちらにも有用である。

画像診断に使用するための、錯化されている形の本発明の化合物の結合体は、例えば注入可能な溶液または懸濁液の形で、好ましくは単回注入剤形で、静脈内投与することができる。放射性トレーサーは、患者に投与する直前に作成することができることが好ましい。

動物では、推奨される投与量範囲は、０．０２〜０．５ｍＣｉのγ−放出放射性核種と錯化される、本発明の化合物の結合体０．０１から１μｇ／ｋｇまででありうる。ヒトなどのより大きい哺乳動物では、推奨される投与量範囲は、例えば１〜１００ｍＣｉ／ｍ²の検出可能な元素、¹¹¹Ｉｎ、⁸⁶Ｙまたは¹⁷⁷Ｌｕなどと錯化される、本発明の化合物の結合体１から１００μｇ／ｍ²まででありうる。

本発明の放射線治療使用を実施するのに使用される投与量は、言うまでもなく、治療されるべき具体的な状態、例えばソマトスタチン受容体を発現する正常な器官に対して知られている放射能毒性、腫瘤のサイズおよび所望の療法によって決まる。一般に、用量は、正常な器官から得られた放射活性の薬物動態データおよび分布データならびに標的について観測された取り込みに基づいて算出される。本発明の化合物のβ−放出錯体または結合体は、例えば１〜３か月間、繰り返し投与することができる。

動物では、推奨される投与量範囲は、１５〜７０ｍＣｉのα−放出核種もしくはβ−放出核種またはオージェ電子カスケードを有する核種、例えば⁹⁰Ｙ、¹⁷⁷Ｌｕもしくは¹⁶¹Ｔｂなどと錯化される、本発明の化合物の結合体２０から１００μｇ／ｋｇまででありうる。ヒトなどのより大きい哺乳動物では、推奨される投与量範囲は、例えば１〜１００ｍＣｉ／ｍ²までのα−放出核種もしくはβ−放出核種またはオージェ電子カスケードを有する核種、例えば⁹⁰Ｙ、¹⁷⁷Ｌｕもしくは¹⁶¹Ｔｂとの本発明の錯化結合体化合物１〜１００μ／ｍ²まででありうる。

放射線治療薬として使用するための、錯化されている形の本発明の化合物の結合体は、任意の慣用の経路によって、例えば静脈内に、例えば注入可能な溶液の形で投与することができる。それらは、有利なことに、点滴によって、例えば１５〜６０分の点滴で注入することができる。腫瘍部位に応じて、それは腫瘍部位にできるだけ接近して、例えばカテーテルを通じて投与することができる。本発明はまた、本発明の化合物の結合体を、遊離塩基の形でまたは薬学的に許容される塩として、または検出可能な薬剤もしくは放射線治療薬との錯体として、１種または複数種の薬学的に許容される賦形剤または希釈剤と一緒に含む医薬化合物を提供する。

本発明の化合物またはそれらの錯化されている形の結合体は、受容体を発現または蓄積する腫瘍、例えば、下垂体腫瘍、胃腸膵管腫瘍、カルチノイド、中枢神経系の腫瘍、乳房腫瘍、前立腺腫瘍（ホルモン抵抗性進行前立腺癌を含む）、卵巣腫瘍または結腸腫瘍、小細胞肺腫瘍、悪性腸閉塞、パラガングリオーマ、腎癌、皮膚癌、神経芽細胞腫、褐色細胞腫、甲状腺の髄様癌、骨髄腫、リンパ腫、ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫、骨腫瘍およびそれらの転移、ならびに自己免疫性障害または炎症性障害、例えば関節リウマチ、グレーブス病または眼の他の炎症性疾患などをマッピングまたは治療するのに有用である。

本発明の化合物もしくはそれらの錯化されている結合体は、単一の活性成分として投与されうるか、またはそれらは、例えばアジュバントとして、他の活性成分と組み合わせて投与されうる。例えば、それらは、免疫抑制剤（例えばシクロスポリンＡもしくはＦＫ５０６などのカルシネウリンの阻害剤）、ラパマイシンなどの免疫抑制性を有する大環状ラクトン、免疫抑制性を有するモノクロナール抗体または抗炎症剤と組み合わせて使用することができる。

本発明の化合物またはそれらの錯化されている結合体はまた、抗増殖剤、例えばパクリタキセル、ゲムシタビン、シスプラチン、ドキソルビシン、５−フルオロウラシルもしくはタキソールなどの化学療法薬の活性成分、ホルモン剤もしくは拮抗剤（例えば抗アンドロゲンもしくはミトキサントロン（特に前立腺癌の場合に）またはレトロゾール（特に乳癌の場合に）などの抗エストロゲン）、代謝拮抗剤、植物由来のアルカロイド、生物反応修飾物質（好ましくはインターフェロンもしくはリンホカイン）、タンパク質チロシンキナーゼ阻害剤および／またはセリン／トレオニンキナーゼ、ヒストン脱アセチル化酵素の酵素阻害剤または他のもしくは未知の作用機序を有する薬剤（例えばアネポチロンもしくはエポチロン誘導体など）、または大環状ラクトン（例えばラパマイシン、ＲＡＤもしくはＣＣＩ７７９）などと組み合わせて使用することができる。

本発明の化合物またはそれらの錯化されている形の結合体が、別の薬物と組み合わせて投与される場合、同時投与される薬物の用量は、言うまでもなく、治療すべき状態などに応じて変化する。「同時投与」または「併用投与」などの用語は、ただ１人の患者のために選択される治療薬の投与を表すために本明細書に使用され、薬剤が、同一の投与経路によってまたは同時に、必ずしも投与されるわけではない治療計画を含むことを意図する。

本発明の特定の組合せは、疾患または障害が予防または治療されるべきかどうかによって選択される。かかる組合せには、例えば：たとえば慢性移植拒絶の予防または治療のための免疫抑制剤との組合せ；糖尿病およびその合併症の治療における、インスリン分泌促進薬との組合せ、インスリン分泌の促進剤との組合せ、インスリン増感剤との組合せまたは低用量のインスリンとの組合せ；炎症性疾患または炎症性障害の予防および治療のための抗炎症剤との組合せ；例えば黄斑浮腫または変性または癌の予防または治療のための抗血管形成作用を有する薬剤との組合せ；癌に使用するための化学療法薬との組合せが挙げられる。

Claims (23)

1. 式（Ｉ）の化合物であって、
   

   

   式中、ｍは、０から２まで変化し、ｎは、１から３まで変化し、Ｒ１は、インドールを除く芳香族基であり、Ｒ４は、芳香族基であり、Ｒ２およびＲ３は、独立に、ＨもしくはＣ_１〜Ｃ_４アルキル基であるか、または、Ｒ２およびＲ３は、一緒になって、窒素原子に結合し環状構造を形成するＣ_４〜Ｃ_５アルキレン鎖であり、またはＲ３は、カチオンもしくは金属キレート基であり、
   Ｘ１は、式（ａ）、（ｂ）または（ｃ）
   

   

   のアミノアシル残基であることを特徴とする化合物。
2. 前記イオンまたは金属キレート基は、前記アミノ基に直接的に結合しているか、または式−Ｚ−Ｒ５−ＣＯ−の基を介して結合しており、
   Ｒ５は、Ｃ_１〜Ｃ_１１アルキレン、Ｃ_１〜Ｃ_１１アルケニレンまたは−ＣＨ（Ｒ６）−であり、Ｒ６は、αアミノ酸の側鎖であり、Ｚは、前記キレート基上に存在する官能基とエーテル結合、エステル結合またはアミド結合を形成することが可能な官能基であることを特徴とする請求項１に記載の化合物。
3. ｍは、１に等しく、ｎは、１から２まで変化することを特徴とする請求項１に記載の化合物。
4. Ｒ１は、フェニル、ナフチル、ベンズヒドリル、フルオレニル、スチレニル、アントラニルまたはビフェニルであることを特徴とする請求項１に記載の化合物。
5. Ｒ１は、１つまたは複数のメチルオキシ基で置換されているナフタレン基であることを特徴とする請求項１に記載の化合物。
6. Ｒ１は、３，８−ジメトキシ−ナフタレン−２−イルであることを特徴とする請求項１に記載の化合物。
7. Ｒ４は、フェニル、またはヒドロキシル基、Ｃ_１〜Ｃ_４アルコキシル基、Ｃ_１〜Ｃ_４アルキル基、ハロゲン基またはニトロ基によって置換されているフェニルであることを特徴とする請求項１に記載の化合物。
8. Ｒ４は、４−ヒドロキシフェニルであることを特徴とする請求項１に記載の化合物。
9. 前記Ｒ３基は、親水性キレート化剤であることを特徴とする請求項１に記載の化合物。
10. Ｘ１は、式（ｃ）のアミノアシル残基であることを特徴とする請求項１に記載の化合物。
11. 式（Ｉ）におけるシクロヘキサペプチドのアミノアシル残基は配置Ｌまたは配置Ｄを有することを特徴とする請求項１に記載の化合物。
12. 式（Ｉ）におけるシクロヘキサペプチドのアミノアシル残基１、アミノアシル残基２およびアミノアシル残基４〜６は配置Ｌを有することを特徴とする請求項１１に記載の化合物。
13. 式（Ｉ）におけるシクロヘキサペプチドのアミノアシル残基３は配置Ｄを有することを特徴とする請求項１１に記載の化合物。
14. 前記アミノ基のうちの１つは、保護されている形またはその塩化もしくは錯化されている形であってよいことを特徴とする請求項１に記載の化合物。
15. 前記塩は、酢酸塩、乳酸塩、安息香酸塩、アスパラギン酸塩、パモ酸塩、ポリメタクリル酸塩、ポリスチレンスルホン酸塩、塩酸塩、硫酸塩または硝酸塩の中から選択されることを特徴とする請求項１４に記載の化合物。
16. ・シクロ［Ｔｙｒ（Ｂｎ）−Ｐｈｅ−［４−（２−アミノエチル）カルバモイル］Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−（Ｄ，Ｌ）［３−（３，８−ジメトキシ−ナフタレン−２−イル）］Ａｌａ−Ｌｙｓ］異性体Ｂ、
    ・シクロ［Ｔｙｒ（Ｂｎ）−Ｐｈｅ−［４−（２−アミノエチル）カルバモイル］Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−（Ｄ，Ｌ）（２，５−ジメトキシ）ｈＰｈｅ−Ｌｙｓ］異性体Ｂ、
    ・シクロ［Ｔｙｒ（Ｂｎ）−Ｐｈｅ−［４−（２−メチルアミノエチル）カルバモイル］Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−（Ｄ，Ｌ）［３−（３，８−ジメトキシ−ナフタレン−２−イル）］Ａｌａ−Ｌｙｓ］異性体Ｂ、
    ・シクロ［Ｔｙｒ（Ｂｎ）−Ｐｈｅ−［４−（２−アミノエチル）カルバモイル］Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−（Ｄ，Ｌ）［３−（１，４−ジメトキシ−ナフタレン−２−イル）］Ａｌａ−Ｌｙｓ］異性体Ａ、
    ・シクロ［Ｔｙｒ（Ｂｎ）−Ｐｈｅ−［４−（２−アミノエチル）カルバモイル］Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−（Ｄ，Ｌ）［３−（１，４−ジメトキシ−ナフタレン−２−イル）］Ａｌａ−Ｌｙｓ］異性体Ｂ、
    ・シクロ［Ｔｙｒ（Ｂｎ）−Ｐｈｅ−［４−（２−アミノエチル）カルバモイル］Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−（Ｄ）［３−（ナフタレン−２−イル）］Ａｌａ−Ｌｙｓ］、
    ・シクロ［Ｔｙｒ（Ｂｎ）−Ｐｈｅ−［４−（２−アミノエチル）カルバモイル］Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−（Ｄ）ｈＰｈｅ−Ｌｙｓ］、
    ・シクロ［Ｔｙｒ（Ｂｎ）−Ｐｈｅ−［４−（２−メチルアミノエチル）カルバモイル］Ｐｒｏ−Ｐｈｇ−（Ｄ）スチリルＡｌａ−Ｌｙｓ］、
    ・シクロ［Ｔｙｒ（Ｂｎ）−Ｐｈｅ−［４−（２−アミノエチル）カルバモイル］Ｐｒｏ−Ｐｈｇ−（Ｄ）ｈＰｈｅ−Ｌｙｓ］、
    ・シクロ［Ｔｙｒ（Ｂｎ）−Ｐｈｅ−［４−（２−アミノエチル）カルバモイル］Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−（Ｄ，Ｌ）［３−（３，８−ジメトキシ−ナフタレン−２−イル）］Ａｌａ−Ｌｙｓ］異性体Ｂおよび
    ・シクロ［Ｓｅｒ（Ｂｎ）−Ｐｈｅ−［４−（２−アミノエチル）カルバモイル］Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−（Ｄ，Ｌ）［３−（３，８−ジメトキシ−ナフタレン−２−イル）］Ａｌａ−Ｌｙｓ］異性体Ｂ、
    ならびにそれらの塩および薬学的に許容される錯体で構成される群から選択されることを特徴とする請求項１に記載の化合物。
17. 請求項１に記載の化合物の調製方法であって、
    ａ）アミノ酸側鎖に存在する官能基が保護されている形である、直鎖状ヘキサペプチドを調製するステップと、
    ｂ）１種または複数種の縮合剤を用いて、前記ヘキサペプチドを環化するステップと、
    ｃ）保護基を除去するステップと、
    ｄ）得られたシクロペプチドを最終的に精製するステップと
    を含むことを特徴とする方法。
18. ステップａ）で得られた前記直鎖状ペプチドのＣ−末端アミノ酸は、リジンであることを特徴とする、請求項１７に記載の方法。
19. 請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を、少なくとも１種の薬学的に許容される賦形剤と併せて含むことを特徴とする医薬組成物。
20. 改変された放出用または局所放出用の剤形であることを特徴とする、請求項１９に記載の組成物。
21. 血管形成、増殖性網膜症、黄斑浮腫、脈絡膜血管新生疾患に相関する障害、血管損傷後の、血管移植片疾患、静脈移植片狭窄、再狭窄および血管閉塞、腸管皮膚瘻および膵皮膚瘻、過敏性腸症候群、炎症性疾患および炎症性障害、多発性嚢胞腎疾患、急速胃内容排出症候群、水様性下痢症候群、ＡＩＤＳに関係する下痢、化学療法によって誘発される下痢、急性膵炎または慢性膵炎、消化管出血、腫瘍および悪性腫瘍の治療のための、請求項１に記載の化合物。
22. 先端巨大症の治療のための、請求項１に記載の化合物。
23. 消化管ホルモン分泌腫瘍の治療のための、請求項１に記載の化合物。