BRPI0818978B1

BRPI0818978B1 - novos análogos não-seletivos da somatostatina

Info

Publication number: BRPI0818978B1
Application number: BRPI0818978A
Authority: BR
Inventors: Vitali Andrea; Pinori Massimo; Mascagni Paolo
Original assignee: Italfarmaco Spa
Priority date: 2007-12-03
Filing date: 2008-11-24
Publication date: 2019-09-10
Also published as: CA2702940C; EP2225271A2; CY1114490T1; BRPI0818978B8; PT2225271E; KR20100103464A; US20100323964A1; CA2702940A1; EP2225271B1; KR101500528B1; DK2225271T3; US8937152B2; BRPI0818978A2; JP5331817B2; PL2225271T3; SI2225271T1; JP2011505345A; ES2431573T3; HRP20130948T1; WO2009071460A3

Abstract

novos análogos não-seletivos da somatostatina novos análogos não-seletivos da sornatostatina a presente invenção refere-se a urna nova classe de ciclopeptídios da fórmula (i), relatados abaixo, que são análogos funcionais não-seletivos da somatostatina.

Description

A presente invenção refere-se a novos ciclopeptidios análogos funcionais não-seletivos da somatostatina, a seus conjugados e complexos, a processos de produção, às formulações gue os contêm e a seus usos no campo farmacêutico.

TÉCNICA ANTERIOR

Os agonistas peptidicos cíclicos da somatostatina são conhecidos há algum tempo [J Pept Res 58 (2) , 91 (2001) ] : em 10 particular, dois deles, a octreotida e a lanreotida, são clinicamente utilizados nos cuidados da acromegalia e para o tratamento sintomático de carcinomas.

A somatostatina atua por meio da interação com 5 subtipos de receptor (SSTR1, 2, 3, 4 e 5); porém, os análogos até o momento empregados na terapia são, entretanto, essencialmente seletivos do receptor simples SSTR2.

A grande maioria dos agonistas já conhecidos é caracterizada pela presença, na estrutura do peptídio, do fragmento -DTrp-Lys-; esse fragmento, portanto, parece ser 20 essencial para a atividade dos análogos e, de fato, também está presente na octreotida e na lanreotida.

Recentemente, foi proposta uma hipótese de que análogos menos seletivos, ou seja, capazes de interagir também com os outros subtipos de receptor, podem oferecer uma vantagem do ponto de 25 vista do uso terapêutico [Nature Rev. Drug Discovery 2, 999 (2003)].

No pedido de	patente WQ2002010192, é	descrito um
ciclopeptídio que tem	forte	afinidade pelo	receptor	SSTR5, uma
menor afinidade pelos	SSTR2	θ SSTR3 e uma	afinidade	quase nula

pelo SSTR4. Para o SSTR1, é descrita uma afinidade aproximadamente vezes menor que a afinidade pelo SSTR5.

Os mesmos inventores da W02002010192, em uma publicação sustentam atividade subsequente [Nature Rev. Drug Discovery 2, 999 a importância dos receptores SSTR1, antisecretora da somatostatina, porém mesmo ciclopeptídio descrito no pedido de (2003)] relatam, patente para para acima mencionado, menor que a terapêutica uma afinidade pelo afinidade pelo SSTR5.

Fica claro que,

SSTR1 nesse mediada pela interação com aproximadamente 300 vezes caso, uma possível atividade o receptor

SSTR1 pode ser somente alcançada na presença de uma superdosagem relação às ações mediadas pela interação com o SSTR5.

Portanto, embora o possível papel considerável terapêutico em dos agonistas do necessidade, somatostatina outros quatro potencial relatados in vitro, humanos, receptor SSTR4 não seja claro, existe bem como o possível uso, de novos com um nivel de afinidade comparável receptores.

Em particular, as dos agonistas capazes de claramente análogos a todos vantagens terapêuticas interagir com o SSTR1 da os em são na literatura: M.C. Zatelli e colaboradores estudaram, o efeito de agonistas do ambos secretando [J

Clin

SSTR1 em adenomas hipofisários

End&Met

88,

2797 clinically non-functional [J

Clin

End&Met

89,

5181 ambos os casos, o estímulo dos receptores SSTR1 leva a uma redução da atividade secretora e da vitalidade celular.

Por outro lado, a vantagem terapêutica em potencial que pode derivar do uso de análogos pluripotentes da somatostatina (capazes de interagir com os receptores SSTR 1, 2, 3 e 5) também foi demonstrada por J. van der Hoek e colaboradores em uma recente revisão [Curr. Pharm. Design 11, 1573 (2005)]; foi, de fato, demonstrado como diferentes tumores, ambos hipofisários e gastroenteropancreáticos (GEP), expressam, na superfície celular, percentuais variáveis, porém significativos dos quatro receptores, ao passo que o receptor SSTR4 é muito menos presente.

O pedido W02005014624 descreve a preparação de análogos cíclicos da somatostatina e os intermediários utilizados 10 em sua preparação. Esses análogos hexacíclicos possuem o resíduo de triptofano na posição 3.

O pedido W02006066868 descreve composições farmacêuticas para a administração parenteral de diversos sais de análogos da somatostatina, que formam um gel de depósito após a 15 injeção em contato com os fluidos corpóreos. O termo 'análogos da somatostatina' significa os peptídios lineares ou cíclicos derivados da somatostatina, que compreendem uma sequência de aminoácidos compreendendo triptofano.

Em Regulatory Peptides, 1 (1980) 97-113, a importância do grupo indol NH é sustentada para a atividade da somatostatina: a substituição de Trp⁸ por naf tilalanina de fato leva à perda de atividade.

Os dados de ligação não são relatados no artigo, embora a atividade de inibição da secreção gástrica in vivo seja 25 avaliada. Os resultados indicam que, para a atividade gástrica, a substituição de Trp⁸ por halogênio, análogos metilados ou metoxilados (tabela II) exerce pouca influência sobre a potência biológica, potência essa que é, na verdade, quase anulada nos análogos contendo pentametil-fenilalanina (Pmp) ou naftilalanina (tabela III), em vez de triptofano. Os compostos de halogênio derivantes de D-Trp na verdade parecem melhorar consideravelmente a atividade de inibição da secreção de HC [hormônio do 5 crescimento] (tabela V) . Os pesquisadores da Merck S&D (vide Veber

D.F. em Proceedings of the 12th Am. Pep. Symp.; Smith, J.A. & Rivier J.E. editors, ESCOM 1992, pp 3-14) relatam que, nos hexapeptídios cíclicos, a substituição do triptofano por outros - aminoácidos aromáticos leva a uma considerável perda da atividade in vitro na inibição da secreção de HC.

Em J Med Chem (2005) 48, 507, análogos seletivos de SSTR1 são descritos com seu possível papel terapêutico de agonistas. As estruturas analisadas aqui também possuem triptofano.

O artigo descreve duas séries de análogos 15 derivados de dois ciclopeptídios: um contendo D-Trp e o outro contendo D-Nal; todos os análogos, assim como os precursores, somente possuem afinidade pelo SSTR1; a série com D-Nal é aproximadamente 10 vezes menos potente que a série com D-Trp. Um detalhe particular desses peptídios, que são inativos em todos os 20 outros subtipos de receptor, é a substituição da lisina por pamina-fenilalanina.

A partir do que foi estabelecido acima, é, portanto, evidente que um agonista pluripotente da somatostatina, por exemplo, que seja capaz de estimular o SST1, SSTR2, SSTR3 e 25 SSTR5, aumentará a possibilidade de respostas positivas em pacientes com tumores neuroendócrinos em relação aos agonistas cuja função ativadora é restringida a um menor número de subreceptores da somatostatina.

DESCRIÇÃO DA INVENÇÃO

O requerente surpreendentemente descobriu que o resíduo de triptofano, presente em muitos análogos conhecidos, podem ser substituídos de forma útil por outros resíduos aromáticos adequados, mantendo a afinidade pela maioria dos receptores de somatostatina.

Em particular, descobriu-se que, pelo uso de aminoácidos cujo grupo aromático é suficientemente rico em » elétrons (sendo, por exemplo, substituídos por grupos doadores de elétrons) em substituição do resíduo de triptofano, são obtidos peptídios que demonstram uma boa afinidade pelo receptor SSTR1, em valores de concentração similares àqueles necessários para a ligação aos receptores

São, os ciclohexapeptídios

SSTR2, SSTR3 portanto, um análogos da e SSTR5.

objetivo da presente somatostatina, tendo a invenção fórmula (I), onde o termo ciclohexapeptídios análogos da somatostatina significa peptídios com seis resíduos de alfa-aminoácido, onde uma ligação peptídica direta está presente entre o grupo alfa-carboxil do sexto resíduo e o grupo alfa-amina do primeiro resíduo, com uma 20 afinidade de ligação em concentrações nanomolares, por pelo menos um dos receptores conhecidos da somatostatina:

R3

Fórmula (I)

m = 0, 1 ou 2 e η = 1, 2 ou 3; preferencialmente m é igual a 1 e n é igual a 1 ou 2; ainda mais preferencialmente, n é igual a 1.

RI representa um grupo aromático, exceto indol, que é preferencialmente fenila, naftila, benzidrila, fluorenila, estirenila, antranila ou bifenila, opcionalmente substituído em uma ou mais posições. Os grupos de substituição preferidos são aqueles doadores de elétrons, tais como alquila, alquiloxila, hidroxila, alquilamina, acilamina, sulfeto ou alquilsulfeto.

O grupo RI é preferencialmente um grupo naftaleno, substituído por ou mais grupos metiloxi, preferencialmente por dois grupos metiloxi; em um aspecto ainda mais preferido da invenção, RI é 3,8-dimetoxi-naftaleno-2-il.

R4 representa um grupo aromático opcionalmente substituído. O grupo R4 é preferencialmente um grupo fenila, possivelmente substituído por um grupo hidroxila, alcoxila Ci~C₄, alquila C]-C₄, halogênio ou nitro.

R2 e R3 são, independentemente, H ou um grupo alquila Ci~C₄, ou, juntos, representam uma cadeia de alquileno C₄-C₅, ligada ao átomo de nitrogênio para formar uma estrutura cíclica.

Alternativamente, R3 pode ser um cátion ou grupo quelante metálico, diretamente ligado ao grupo amina ou ligado por meio de um espaçador.

O possível espaçador pode ser um daqueles já conhecidos na técnica, por exemplo, aqueles descritos na GB-A2.225.579 ou na WO9701579, aqui incorporadas por referência; eles podem ser, por exemplo, um grupo da fórmula -Z-R5-CO-, onde R5 é

V alquileno Ci_n, alquenileno Ci_n ou -CH(R6)-, onde R6 é a cadeia lateral de um alfa aminoácido, e Z é uma função capaz de formar uma ligação covalente com o grupo quelante; Z pode ser, por exemplo, um grupo funcional capaz de formar uma ligação de éter, éster ou amidica com outro grupo funcional do grupo quelante (por

exemplo,	hidroxila,	carboxila ou amina).	Z	é preferencialmente	um
átomo de	oxigênio,	um átomo de	enxofre,	um	radical carbonila	(ou
CO) ou um	radical amino (ou NH).
	0	grupo Z é,	ainda mais	preferencialmente,	um

radical amino e o grupo da fórmula -Z-R5-CO- será um resíduo bivalente derivado de um aminoácido carboxílico, por exemplo, beta-Alanina (ou -NH-(CH₂) ₂-CO-) , ácido 6-amino hexanóico (ou -NH(CH₂)₅-CO-) ou outros.

O grupo quelante é um grupo fisiologicamente aceitável, capaz de complexar íons ou outros elementos detectáveis ou úteis para radioterapia antitumoral e preferencialmente tem um caráter hidrofilico.

Os grupos quelantes e os íons e outros elementos complexantes podem ser escolhidos de forma útil dentre aqueles já conhecidos e descritos, por exemplo, por Okarvi S.M. em Med. Res. Rev.

(3), 357 (2004), por Weiner R.E. e Thakur M.L. BioDrugs 19(3), 145 (2005) ou na WO2002010192, aqui incorporadas por referência.

O grupo quelante pode estar na forma livre, em forma de sal ou complexado com íons ou outros elementos, detectáveis pela radioatividade (radionuclídios) ou por outros meios, ou úteis para propósitos radioterapêuticos.

Preferencialmente, o grupo quelante será derivado do ácido 1,4,7,10-tetraazaciclododecano-N,Ν' ,N,N'-tetracético

(DOTA) ou do ácido dietilenotriaminopentacético (DTPA) e o ion será um ion paramagnético (Gd3+, Fe3+, ou outros), fluorescente (Eu3 + ) ou um radionuclidio gue emite radiações α, β ou γ (lllln, 99mTc, 169Yb, 177Lu, 90Y, 213BÍ ou outros).

XI é um resíduo de aminoacila das fórmulas (a), (b) ou (c) (a) —CO—CH—NHI

CH—CH.

I ³ o-CH₂Ph (b) —CO—CH—NH—

I

CH,

I ² o-CH₂Ph

XI é preferencialmente um resíduo de aminoacila da fórmula (c).

Os resíduos de aminoacila, presentes nos ciclohexapeptídios da fórmula (I), podem ter configuração L ou D;

preferencialmente os resíduos 1, 2 e 4-6 são L, e o resíduo 3 é preferencialmente D.

Os ciclohexapeptídios da fórmula (I) podem existir na forma de base livre ou como sais. Os sais incluem sais de adição com ácidos orgânicos (por exemplo, acetatos, lactatos, benzoatos, 15 aspartatos, pamoatos etc.), ácidos poliméricos (por exemplo, ácido polimetacrílico, ácido poliestirenossulfônico etc.) ou ácidos inorgânicos (por exemplo, cloridratos, sulfatos, nitratos etc.).

Os compostos da invenção são, ín vivo, muito mais resistentes aos mecanismos de degradação se comparados aos ciclobissulfetos análogos da somatostatina (octreotida, lanreotida etc.) e, consequentemente, possuem uma ação de maior duração. Em alguns casos, a estabilidade e a duração da ação também são aperfeiçoadas em relação a outros ciclopeptidios, incluindo agueles 5 já conhecidos por serem agonistas estáveis da somatostatina.

A presente invenção também inclui os processos de produção dos compostos da fórmula (I), a partir daqui denominados compostos da invenção.

Os compostos da invenção podem ser produzidos 10 utilizando-se diferentes métodos sintéticos, análogos aos métodos já conhecidos para outros peptidios.

a) Um hexapeptidio linear correspondente, parcialmente protegido, pode ser produzido por meio de síntese em fase sólida, de modo a deixar tanto o grupo alfa-amino N-terminal com o grupo alfa-carboxílico C-terminal livres; os dois grupos livres reagirão, em solução, por meio de agentes de condensação adequados e as proteções das cadeias laterais serão finalmente removidas, obtendo-se o ciclohexapeptídio desejado.

b) Alternativamente, a síntese em fase sólida 20 pode ser realizada pela ancoragem do peptídio à resina por meio da cadeia lateral de lisina; nesse caso, depois de ter removido seletivamente as proteções dos grupos N-terminal e C-terminal, a ciclização pode ser ainda realizada em fase sólida e os compostos da invenção podem ser obtidos com um único tratamento de 25 desproteção e separação da resina.

c) Em outra alternativa, o peptídio linear protegido pode ser preparado pela síntese em solução e então, depois de ter removido seletivamente as proteções dos grupos N-terminal e C k

terminal, é possível proceder conforme descrito no item a) .

O peptídio linear a ser ciclizado pode ser selecionado dentre seis peptídios hipoteticamente obteníveis por meio da abertura de qualquer uma das seis ligações peptídicas presentes 5 nos compostos da invenção. A escolha será orientada por considerações de adequação sintética, conhecida dos especialistas em síntese peptídica, porém não influenciam minimamente a natureza do produto final, o que será, em qualquer caso, idêntica independente da * sequência selecionada do peptídio linear; preferencialmente, são selecionados os peptídios nos quais o aminoácido C-terminal é lisina.

Muitos dos derivados de aminoácido, necessários para a síntese dos peptídios, são conhecidos e comercialmente disponíveis.

Os derivados de hidroxiprolina podem ser preparados 15 conforme descrito em WO9701579, aqui incorporados por referência, ou por outros procedimentos similares; alternativamente, os peptídios lineares parcialmente protegidos podem conter um resíduo de hidroxiprolina não-modificado, e a introdução da cadeia lateral pode - ser realizada diretamente nos peptídios lineares, antes da desproteção, ou após a ciclização, antes da desproteção final.

Para os derivados quelantes dos compostos da invenção, o grupo protetor da cadeia ligada à hidroxiprolina pode ser devidamente selecionado de modo que seja possível removê-lo seletivamente, deixando a proteção da cadeia lateral de lisina 25 inalterada; dessa forma, será possível ligar o grupo quelante ao grupo amino livre, diretamente ou por meio de um espaçador, antes da desproteção final.

Alguns aminoácidos utilizados na posição 3 da fórmula geral (I), assim como seus derivados, são novos e formam um outro aspecto da presente invenção. Em particular, nos referimos aos aminoácidos:

3- (3,8-dimetoxi-naftaleno-2-il) -alanina,..

3- (1,4-dimetoxi-naftaleno-2-il)-alanina e

2,5-dimetoxi-?iomofenilalanina e aos seus derivados totalmente ou parcialmente protegidos, correspondentes às fórmulas (e), (f) e (g) :

3-(3,8-dimetoxi-naftaleno-2-il)-alanina e seus derivados

3-(l,4-dimetoxi-naftaleno-2-il)-alanina e seus derivados

2,5-dimetoxi-homofenilalanina e seus derivados

Nas fórmulas (e) , (g) e (f), G pode ser um átomo •z de hidrogênio ou um grupo protetor selecionado dentre agueles conhecidos pelos técnicos no assunto, tais como fluoreno-9-ilmetiloxi-carbonila, terc-butiloxi-carbonila ou benziloxi5 carbonila; W pode ser um grupo hidroxila ou um grupo protetor selecionado dentre agueles conhecidos pelos técnicos no assunto, por exemplo, metiloxi, terc-butiloxi ou benziloxi. O termo 'derivados parcialmente protegidos' significa os derivados em gue somente um dentre G e W representa um grupo protetor.

v/ 10 Estes podem ser preparados por métodos de adaptação

I * ' já conhecidos na literatura (vide, por exemplo, [J Org Chem 55, 2913 (1990)], [Org. Lett. 2, 1089 (2000) e [Synthesis (1983), 38]); por exemplo, começando pelo aldeido correspondente à cadeia lateral desejada, pode ser utilizado o método descrito no diagrama 1.

O

DIAGRAMA 1

Os derivados acima mencionados podem ser preparados como misturas racêmicas de enantiômeros (D/L) ou, por meio de síntese estereosseletiva ou métodos de resolução quiral, podem ser obtidos como enantiômeros simples D ou L.

Dentre os métodos de resolução quiral, os métodos de desracemização enzimática pode ser utilizado (por exemplo, aquele descrito na US2001021519, aqui incorporado por referência), no qual a estereosseletividade da enzima (por exemplo, aminoácidooxidase L ou D) permite a indução da racemização de somente um dos 10 dois enantiômeros, sendo que posteriormente os ciclos de tratamento repetidos permitem atingir alta pureza enantiomérica.

São também objetivos da presente invenção as formulações farmacêuticas que contêm os compostos da invenção.

Os compostos da invenção podem ser administrados na forma livre ou na forma de sais farmaceuticamente aceitáveis ou como complexos. Esses sais e complexos podem ser preparados de uma forma convencional e demonstram a mesma ordem de atividade que os compostos livres. A presente invenção também provê compostos farmacêuticos compreendendo os compostos da fórmula (I) na forma 20 de base livre ou na forma de sal farmaceuticamente aceitável, com um ou mais excipientes ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis. Essas composições podem ser formuladas de maneira convencional. Os compostos da invenção também podem ser administrados na forma de liberação modificada, por exemplo, como implantes, microcápsulas, 25 microesferas ou nanoesferas compreendendo, por exemplo, polímeros ou copolímeros biodegradáveis, na forma de formulação de lipossoma ou na forma de autogel, por exemplo, composições sólidas ou semisólidas capazes de formar um gel após a interação com os fluidos do corpo do paciente.

Os compostos da invenção ou seus sais ou complexos farmaceuticamente aceitáveis podem ser administrados por qualquer via convencional, por exemplo, por via parenteral, na forma de uma solução ou suspensão injetável (também incluindo as formas de liberação modificada acima mencionadas), por via oral, utilizando um promotor convencional de absorção, por via nasal ou como supositórios ou por via tópica, por exemplo, na forma de um liquido oftálmico, gel, preparação como pomada ou como suspensão, por exemplo, suspensão de lipossoma, como formulação de microesfera ou nanoesfera, por exemplo, para instilação ou injeção subconjuntival ou intra ou periocular.

De acordo com outro aspecto da invenção, é também provida uma composição farmacêutica compreendendo um conjugado ou 15 um complexo de compostos da invenção com excipientes ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis. Essas composições podem ser produzidas de forma convencional e podem ser apresentadas, por exemplo, para a geração kit compreendendo duas e a outra o conjugado instruções para compostos da preferencialmente de imagens para doses separadas, dos compostos mistura.

invenção na forma fins diagnósticos, como um sendo uma o da invenção,

Para a radioterapia, o radionuclidio incluindo conjugado na forma complexada pode de formulação liquida quente.

as dos ser

Os exemplos a seguir servirão para ilustrar os objetivos da presente invenção e não devem ser considerados, de forma alguma, como limitativos da presente invenção.

Nos exemplos, as seguintes abreviações serão utilizadas:

1,4MNal

2,5MhPhe

3,8MNal

ACN

Bn

Boc

DIPEA

DMF

DPPA

DSC

Fmoc

Fmoc-OSu

HATU hPhe

Hyp

Nal

NMM

Pd/C

Phg

3-(1,4-dimetoxi-Naftaleno-2-il)Alanina

2,5-dimetoxi-homoFenilalanina

3- (3,8-dimetoxi-Naftaleno-2-il)Alanina

Acetonitrila

Benzila terc-Butiloxi-carbonila

Diisopropiletilamina

N,N-dimetilformamida

Difenilfosforilazida

N,N-Disuccinimidilcarbonato

Fluoreno-9-il-metiloxi-carbonila

Fluoreno-9-il-metil, Nsuccinimidil carbonato

0-(7-Azabenzotriazol-l-il)N,N,N',N'-tetrametiluronio hexafluorfosfato homoFenilalanina; ácido 2-amino-4fenil-butírico

4,Hidroxi-prolina

3-(Naftaleno-2-il)-Alanina; ácido

2-amino-3-naftaleno-2-ilpropiônico

N-metil Morfolina

Paládio metálico em carbono

Fenilglicina; ácido 2-amino-2fenil-acético

PVDF Polivinilidenofluoreto

Sty Stiril-Alanina; ácido 2-amino-5fenil-pent-4-enóico

Tfa Trifluoracetila

THF Tetrahidrofurano

-Trt(Cl)-DVB Resina, (2-cloro) TritilDivinilbenzeno

Z Benziloxi-carbonila

Salvo se indicado em contrário, os aminoácidos estão na configuração L; onde os aminoácidos racêmicos são indicados por (D/L), ao passo que os enantiômeros simples de quiralidade indefinida são indicados por (D,L).

MÉTODO DE

PURIFICAÇÃO

GERAL

Se não indicado em contrário, todas as purificações finais foram realizadas por meio de um sistema de

HPLC/MS de preparação Waters com colunas Waters Symmetry C18 5 mm

19x50 mm, equipadas com espectrômetro de massa Waters ZQ.

CONDIÇÕES OPERACIONAIS:

Ionização centróide ES⁺, tempo de varredura de minutos, varredura de 120-1000 m/z, tensão de cone de 15V, temperatura de origem de 120°C, temperatura de solvatação de

250°C.

ELUENTES PARA

HPLC:

A=H₂O, B=ACN,

C=CF₃COOH 1% em H₂O

Uma alíquota do produto bruto a ser purificado foi dissolvida em MeOH e diluída com uma mistura de ACN/H₂O (1:1;

v/v) . A solução, filtrada em membrana de PVDF de 0,45 mm, foi injetada no sistema de preparação anteriormente descrito. Para cada ciclo, as frações correspondentes ao pico associado ao ion molecular esperado ( [M+H]⁺) foram coletadas, combinadas e concentradas até secar. Se picos adicionais fossem apresentados associados ao mesmo ion molecular (isômeros), estes seriam coletados separadamente.

PREPARAÇÃO DOS INTERMEDIÁRIOS:

EXEMPLO 1

Fmoc-(D/L) 3- (3,8-dimetoxi-Naftaleno-2-il)-Alanina

a) 3,8-dimetoxi-2-naftaldeido (1 eq), 2,210 dimetil-1,3-dioxano-4,6-diona (1,35 eq) e piperidina (0,12 eq) são dissolvidos em CHC1₃ e a solução é aquecida e submetida a refluxo por 2,5 horas. Após lavagens aquosas, o produto é recuperado por evaporação do solvente e novamente dissolvido em uma mistura de THF e metanol, e NaBH₄ (5,4 eq) é adicionado à solução. Após 15 aproximadamente 10 minutos, adiciona-se água e a mistura é acidifiçada até pH=3. Por meio de evaporação parcial, é separado um sólido que é recuperado e novamente dissolvido em etanol, adiciona-se piridina e a mistura é aquecida sob refluxo até o produto inicial desaparecer completamente (controle TLC) .

b) Após a evaporação do etanol, o produto (éster monoetilico do ácido 2-(3,8-Dimetoxi-naftaleno-2-il-metil)-malônico) é dissolvido em clorofórmio e lavado com água acidulada. Adiciona-se cloreto de tionila (1,3 eq) à solução seca e a mistura é aquecida sob refluxo por aproximadamente uma hora. Após evaporações repetidas do 25 clorofórmio, o resíduo é dissolvido em diclorometano e a solução é resfriada em um banho de gelo. Adiciona-se brometo de tetrabutilamônio (catalítico) e NaN₃ (1,2 eq) dissolvido em água e, após duas horas a 0°C, a fase orgânica é recuperada, lavada com água e seca com Na₂SO₄ anidro; a solução é deixada em temperatura ambiente, na presença de Na₂SO₄ anidro durante toda a noite. Adiciona-se ácido trifluoracético (1,5 eq) à solução filtrada, e a mistura é aquecida sob refluxo por aproximadamente 6 horas. Depois de lavado com NaHCO₃

5%, o solvente é evaporado e o óleo obtido é purificado em uma coluna de sílica gel.

c) O produto obtido (Tfa-(D/L)3,8MNal-0Et) é dissolvido em uma mistura de THF, metanol e água, contendo K₂CO₃ (2 eq) e aquecida sob refluxo por uma noite. A solução é parcialmente evaporada e adiciona-se Fmoc-OSu (1 eq) dissolvido em THF. Quando a reação está concluída (controle TLC), o THF é evaporado e o produto é recuperado pela extração da solução aquosa com acetato de etila. Com a adição de n-hexano, obtém-se a precipitação do produto (Fmoc-(D/L)3,8MNal-0H) que é filtrado e seco (pureza HPLC:

98,5%; m/z= 498 amu ([M+H]+)).

EXEMPLO 2

Fmoc-[4-(2-aminoetil)carbamoil]Prolina

a) Z-Hyp-OBn e DSC (1 equivalente) são dissolvidos em acetonitrila e tratados com trietilamina (1,2 eq) .

Após uma noite em temperatura ambiente, adiciona-se N-Bocdiaminoetano (1,2 eq) e a mistura é deixada reagir por 3,5 horas. Após a evaporação do solvente, o resíduo recuperado com acetato de etila é lavado, em ordem, com KHSO₄ 2,5%, NaHCO₃ e NaCl. A solução orgânica, seca com Na₂SO₄ anidro, é evaporada até secar, recuperando o produto.

b) O produto é dissolvido em metanol e os grupos protetores (Z e éster benzílico) são removidos por hidrogenação catalítica na presença de Pd/C 10%. Após a filtração do catalisador, o aminoácido é recuperado por evaporação do solvente e dissolvido em uma mistura de água e THF contendo K₂CO₃ (1 eq) ; uma vez resfriado a 0°C, adiciona-se Fmoc-OSu (2 eq) dissolvido em THF. Quando a reação está concluída (controle TLC), o THF é evaporado e o produto recuperado por extração da solução aquosa com acetato de etila. Com a adição de n-hexano, obtém-se a precipitação do produto, que é filtrado e seco (pureza HPLC: 99,9%; m/z = 540 amu ([M+H]⁺))

EXEMPLO 3

Fmoc-(D/L) 2,5-dimetoxi-homofenilalanina

a) A uma suspensão de 2,2-dimetil-l,3-díoxano-

4,6-diona (1,3 eq) em DMF (50 mL) , resfriada em um banho de gelo, adiciona-se NaCNBH₃ (1,8 eq) e 2,5-dimetoxifenilacetaldeído (1,1 eq) . A mistura de reação é agitada em temperatura ambiente por 5 horas. Adicionando-se H₂O, é separado um sólido que é filtrado, purificado por cristalização a partir do isopropanol e finalmente dissolvido em EtOH e tratado sob refluxo com piridina por seis horas.

b) Procedendo conforme descrito no ponto b) do exemplo 1, o aminoácido parcialmente protegido Fmoc-(D/L)2,5MhPheOH é preparado a partir do produto obtido (éster monoetílico do ácido 2-(2,5-Dímetoxi-fenil-etí1)-malônico) (pureza HPLC: 96%;

m/z= 462 amu ([M+H]⁺) ) .

EXEMPLO 4

Fmoc-(D/L) 3-(1,4-dimetoxi-Naftaleno-2-il)Alanina

Começando com 1,4-dimetoxi-2-naftaldeído e procedendo conforme descrito no exemplo 1, obtém-se o aminoácido protegido Fmoc-(D/L)1,4MNal-OH. (pureza HPLC: 96,9%; m/z([M+H]+)=

498 amu).

PREPARAÇÃO DOS CICLOPEPTÍDIOS:

A pureza dos peptidios descritos nos exemplos foi analisada por cromatografia HPLC de fase reversa (cromatógrafo

Agilent 1100) v/v) minutos utilizando o seguinte método:

Eluentes: A) TFA 0,1% em acetonitrila/água (5:95;

B) TFA 0,1% em acetonitrila

Gradiente do eluente B: de 20% a 80% em 30

Fluxo: 1,0 ml/minutos

Coluna: Júpiter 4 μ (4 x 250 mm)

EXEMPLO 5

Ciclo [Tyr (Bn) -Phe-Pro (4-OCONH (CH₂) ₂NH₂) -Phe(D,L)3,8MNal-Lys) isômero B

a) H-Tyr (Bn) -Phe-Pro (4-OCONH (CH₂) ₂NHBoc) -Phe(D/L)3,8MNal-Lys(Boc) -OH

Começando com a resina Fmoc-Lys(Boc)-Trt(Cl)-DVB, diversos ciclos de síntese peptídica em fase sólida são realizadas para obter o hexapeptídio desejado; no primeiro ciclo, utiliza-se Fmoc-(D/L)3,8Mnal-0H (vide exemplo 1) e no terceiro ciclo utilizase Fmoc-Pro(4-OCONH(CH₂) ₂NHBoc)-OH (vide exemplo 2); para cada ciclo, o grupo Fmoc é removido com Piperidina 20% em DMF e o aminoácido subseqüente, protegido como o Fmoc, é ativado com HATU e reagido com o grupos amino presentes na resina.

Ao final, o grupo Fmoc é removido com Piperidina

20% em DMF e o peptídio parcialmente protegido é removido da resina pelo tratamento com uma mistura de ácido acético, trifluoretanol e diclorometano (na proporção de 1:2:7) por 30 minutos em temperatura ambiente. Após a evaporação do solvente, o resíduo é dividido entre acetato de etila e NaHCO₃ 5%, a fase orgânica é recuperada e evaporada, obtendo-se um resíduo sólido.

b) ciclo [Tyr (Bn) -Phe-Pro (4-OCONH (CH₂) ₂NH) -Phe(D,L)3,8-MNal-Lys]

O peptídio obtido em c) é dissolvido em DMF (1,6 mM) e resfriado até -10°C; adiciona-se DIPEA (2 eq) e DPPA (1,3 eq) e a mistura é deixada a +4°C por 60 horas. Após a remoção da DMF, o resíduo é recuperado com acetato de etila e lavado com NAHCO₃ 5%. Pela evaporação da fase orgânica, obtém-se um resíduo sólido que é tratado com TFA (95% em H2O) a 0°C por 1 hora e então evaporado; diferentes espécies de isômeros estão presentes no resíduo, as quais são separadas por cromatografia de fase reversa (coluna C18) . O segundo isômero, na ordem de eluição da coluna de HPLC, (isômero B), é coletado puro.

HPLC: RT 14,74 minutos; pureza de 99,1%

MS: m/z = 1133 amu ([M+H]⁺) e 567 amu ([M+2H]²⁺)

EXEMPLO 6 ciclo [Tyr (Bn) -Phe-Pro (4-OCONH (CH₂) ₂NH₂) -Phe(D,L)2,5MhPhe-Lys] isômero B

a) Η-Tyr (Bn) -Phe-Pro (4-OCONH (CH₂) ₂NHBoc) -Phe(D/L)2,5-MhPhe-Lys(Boc)-OH

	Procede-se	conforme descrito	no ponto	a)	do
exemplo	5,	utilizando Fmoc-(D/L)2,5MhPhe-OH	(exemplo	3)	no
primeiro	ciclo e Fmoc-Hyp-OH	no terceiro ciclo	. Antes da	remoção
do grupo	Fmoc terminal,	a resina é	tratada	com	p-

» j nitrofenilcloroformiato (5 eq) na presença de NMM (5 eq) ; após três horas, a resina é lavada com DCM e tratada com N-Bocdiaminoetano (5 eq) por mais três horas, e então filtrada e lavada. Procede-se então conforme descrito no ponto a) do exemplo

5.

b) ciclo[Tyr(Bn)-Phe-Pro(4-OCONH(CH₂) ₂NH)-Phe(D,L)2,5-MhPhe-Lys]

O peptidio obtido em a) é tratado conforme descrito no ponto b) do exemplo 5. Também nesse caso, obtém-se 10 diferentes isômeros, que são separados por cromatografia de fase reversa (coluna C18) . O segundo isômero, na ordem de eluição da coluna de HPLC, (isômero B) , é coletado puro.

HPLC: temperatura ambiente, 13,82 minutos; pureza de 99,0%

MS: m/z= 549 amu ([M+2H]²⁺)

EXEMPLO 7 ciclo [Tyr (Bn) -Phe-Pro (4-OCONH (CH₂) ₂NHCH₃) -Phe(D,L)3,8MNal-Lys] isômero B

Procede-se conforme descrito no exemplo 6, utilizando Fmoc-(D/L)3,8MNal-OH (exemplo 1) no primeiro ciclo e

Boc-N (CH₃) - (CH₂) 2-NH₂) para modificar a cadeia lateral da hidroxiprolina. Diferentes isômeros são obtidos, que são separados por cromatografia de fase reversa (coluna C18) . O segundo isômero, na ordem de eluição da coluna de HPLC, (isômero B) , é coletado puro.

HPLC: temperatura ambiente, 15,07 minutos; pureza de 94,5%

MS: m/z= 1147 amu ([M+H]⁺) e 574 amu ([M+2H]²⁺

EXEMPLO 8 ciclo [Tyr (Bn) -Phe-Pro (4-OCONH (CH₂) ₂NH₂) -Phe(D,L)1,4-MNal-Lys] isômero A

Procede-se conforme descrito no exemplo 6, utilizando Fmoc-(D/L)1,4MNal-0H (exemplo 4) no primeiro ciclo.

Diferentes isômeros são obtidos, os quais são separados por cromatografia de fase reversa (coluna C18) . O isômero com menor tempo de retenção (isômero A) corresponde ao produto do título.

HPLC: temperatura ambiente, 13,71 minutos; pureza 10 de 80,6%

MS: m/z= 1133 amu ([M+H]⁺) e 567 amu ([M+2H]²⁺))

EXEMPLO 9 ciclo[Tyr(Bn)-Phe-Pro(4-OCONH(CH₂) ₂NH₂)-Phe(D,L)1,4-MNal-Lys] isômero B

A partir da preparação descrita no exemplo anterior, o isômero B também é coletado puro, o segundo na ordem de eluição da coluna de HPLC.

HPLC: temperatura ambiente, 14,71 minutos; pureza de 97,7%

MS: m/z= 1133 amu ([M+H]⁺) e 567 amu ([M+2H]²⁺)

EXEMPLO 10 ciclo[Tyr(Bn)-Phe-Pro(4-OCONH(CH₂) ₂NH₂)-Phe(D)Nal-Lys]

O composto é sintetizado seguindo-se o procedimento descrito no exemplo 6, utilizando Fmoc-(D)Nal-OH no ciclo.

HPLC: temperatura ambiente, 14,14 minutos; pureza de 99,5%

MS: m/z= 1073 amu ([M+H]⁺) e 537 amu ([M+2H]²⁺)

EXEMPLO 11 ciclo [Tyr (Bn) -Phe-Pro (4-OCONH (CH₂) ₂NH₂) -Phe(D)hPhe-Lys]

O composto é sintetizado seguindo-se o procedimento descrito no exemplo 6, utilizando Fmoc-(D)hPhe-OH no primeiro ciclo.

HPLC: temperatura ambiente, 13,81 minutos; pureza de 94,5%

MS: m/z= 1037 amu ([M+H]⁺) e 519 amu ([M+2H]²⁺)

EXEMPLO 12 ciclo [Tyr (Bn) -Phe-Pro (4-OCONH (CH₂) ₂NHCH₃) -Phg(D)Sty-Lys]

O composto é sintetizado seguindo-se o procedimento descrito no exemplo 7, utilizando Fmoc-(D)Sty-OH no primeiro ciclo e Fmoc-Phg-OH no segundo ciclo.

HPLC: temperatura ambiente, 13,62 minutos; pureza de 97,8% (D)hPhe-Lys] procedimento

MS: m/z= 1049 amu ([M+H]⁺) e 525 amu ([M+2H]²⁺)

EXEMPLO 13 ciclo [Tyr (Bn) -Phe-Pro (4-OCONH (CH₂) ₂NH₂) -PhgO composto é sintetizado seguindo-se o descrito no exemplo 6, utilizando Fmoc-(D)hPhe-OH no primeiro ciclo e Fmoc-Phg-OH no segundo ciclo.

HPLC: temperatura ambiente, 12,78 minutos; pureza de 98,8%

MS: m/z=512 amu ([M+2H]²⁺)

EXEMPLO 14 ciclo[Tyr(Bn)-Phe-Pro(4-OCONH(CH₂) ₂NH₂)-Tyr(D,L)3,8MNal-Lys] isômero B

Procede-se conforme descrito no exemplo 5, utilizando Fmoc-Tyr(tBu)-OH no segundo ciclo.

HPLC: temperatura ambiente, 13,13 minutos; pureza de 95,4%

MS: m/z - 1149 amu ([M+H]⁺) e 575 amu ([M+2H]²⁺)

EXEMPLO 15 ciclo[Ser(Bn)-Phe-Pro(4-OCONH(CH₂) ₂NH₂)-Phe(D,L)3,8MNal-Lys] isômero B

Procede-se conforme descrito no exemplo 5, utilizando Fmoc-Ser(Bn)-OH no quinto ciclo.

HPLC: temperatura ambiente, 12,26 minutos; pureza 15 de 98,2%

MS: m/z = 1057 amu ([M+H]⁺) e 529 amu ([M+2H]²⁺)·

PARTE EXPERIMENTAL

Os compostos da invenção demonstram importantes propriedades farmacológicas, conforme indicado em vários teste in 20 vitro e in vivo.

Em particular, os compostos da invenção se ligam, com boa afinidade, a pelo menos um dos subtipos dos receptores da somatostatina.

ENSAIOS DE LIGAÇÃO

Os ensaios de ligação foram realizados, conforme explicado abaixo, utilizando-se preparações de receptores humanos recombinantes, hSSTRl, hSSTR2, hSSTR3 e hSSTR5, obtidos de membranas celulares (por exemplo, CHO) transfectadas de acordo com métodos padrão.

As membranas são incubadas em duplicata por 60 minutos a 25°C com 3-[1251]iodotirosilllSomatostatina-14 (Amersham, IM161, 2000 Ci/mmol) como radioligante e com concentrações crescentes do composto em análise, em tampão Hepes mM (pH 7,4), contendo MgCl₂ 5 mM, CaCl₂ 1 mM, 10 gg/ml de Saponin, BSA 0,5%. A incubação é concluída por filtração com um Coletor Filtermate (Perkin Elmer) através de filtros GF/B, gue são então lavados 6 vezes com tampão (Hepes 25 mM pH 7,4, MgCl₂ 5 mM,

CaCl₂ 1 mM) . A radioatividade dos filtros é medida em um leitor

TopCountTM ou MicroBetaTM por 1 minuto/poço após a adição da cintilação líguida Microscint 20 (Packard) e incubada por 15 minutos em um agitador orbital. Os resultados são expressos como percentual de ligação específica do ligante marcado radioativamente, na presença de concentrações crescentes do composto em análise. Os valores de IC50 foram calculados utilizando-se o software GraphPad Prism (IC50 = concentração do composto necessária para obter metade da inibição máxima, no teste de ligação competitiva descrito acima).

Os valores de IC50 dos compostos da invenção estão situados no campo de concentração nMolar, preferencialmente compreendidos entre 0,1 e 50 nM.

	IC50 (nM)
\|Composto	hSSTRl	hSSTR2	hSSTR3	hSSTR5
Exemplo 5	10,8	9,3	0, 31	0,42
Exemplo 6	10,0	25, 8	0, 52	0,64
Exemplo 7	5, 8	9,2	1,33	0,97

Exemplo 8	19, 1	26, 6	2,92	9,78
Exemplo 9	32,4	9,9	2,34	1,90
Exemplo 10	113,8	1,7	1,22	0,52
Exemplo 11	26, 9	21,3	1,34	1,18
Exemplo 12	39,3	3, 3	4,03	4,86
Exemplo 13	84,7	31,9	3,02	0,54
Exemplo 14	21,7	1,8	0,35	0,36
Exemplo 15	1,0	7,0	1,80	1,62

ENSAIO DA INIBIÇÃO DA LIBERAÇÃO DO HORMÔNIO DO

CRESCIMENTO EM CÉLULAS HIPOFISÁRIAS DE RATO

Os compostos da invenção também demonstram atividade de inibição da liberação do hormônio do crescimento (HC), conforme demonstrado em testes realizados in vitro em células hipofisárias de rato. As glândulas hipofisárias retiradas de ratos adultos machos (CD1-SD, 175-200 g) são cortadas em pequenos pedaços e incubadas com colagenase (1 mg/ml) em tampão de Hank contendo BSA 1%, Hepes 20 mM, antibióticos, por 20 minutos a

37°C. As células dispersas, depois de terem sido lavadas várias vezes com tampão, são distribuídas, sendo 20000 células/poço, em placas de 48 poços e mantidas em cultura por 6-7 dias (DMEM contendo soro bovino fetal a 5%, soro de cavalo a 5%, aminoácidos não-essenciais a 1%) . No dia do experimento, as células são lavadas com tampão de Hank e são então incubadas a 37 °C por 1 hora na presença de tampão de Hank adicionado com BSA 0,1% e HEPES 20 mM. O tampão é então substituído por tampão fresco, ainda na presença de BSA 0,1% e HEPES 20 mM. As células são então incubadas por 3 horas a 37 °C em uma incubadora de CO₂ com várias concentrações dos produtos em análise e com GHRH 3x10-9 Μ. O HC liberado no meio é medido utilizando-se o Kit ELISA de Ensaio Imunoenzimático Biotrack de Hormônio de Crescimento de Rato (Amersham RPN2561) ou o Kit ELISA de HC de Camundongo/Rato (DSL10-72100) de acordo com as indicações do fornecedor. Os compostos da invenção inibem a liberação do HC em concentrações na faixa de

10-11 a 10-6

M;

o composto do exemplo tem um valor de IC50 de

1,3 nM.

ENSAIO DE

INIBIÇÃO

DA

LIBERAÇÃO DO HORMÔNIO

DO

CRESCIMENTO

EM

HUMANOS,

CÉLULAS

DE

ADENOMA HIPOFISÁRIO QUE

SECRETAM HC

Os compostos da invenção também demonstram atividade de inibição da liberação de HC de humanos, células de adenoma hipofisário que secretam HC, conforme indicado a partir dos testes in vitro em relatos clínicos de tumores. O teste é 15 realizado utilizando-se biópsias de tumor humano; o HC produzido a partir das células não estimuladas, na presença de quantidades variáveis do composto em análise, é medido utilizando-se o kit ELISA hGH - EASIA (biosource KAP1081) de acordo com as indicações do fornecedor. Nos tumores sensíveis à ação da somatostatina e 20 análogos, os compostos da invenção dividem a produção de HC em concentrações na faixa de 10-10 a 10-6 M; preferencialmente na concentração de 10 nM.

ENSAIO DA INIBIÇÃO IN VIVO DA PRODUÇÃO DE HC,

ESTIMULADA POR BARBITURATOS..

Os compostos da invenção inibem, in vivo, a liberação de HC estimulada pela administração de Nembutal. Os compostos são administrados por via subcutânea, em diferentes doses, em ratos machos (CD, Harlan Italy). Amostras de sangue são *

coletadas, em diferentes tempos, uma hora depois que os animais foram anestesiados pela administração intraperitoneal de Nembutal (60 mg/kg); os níveis hormonais são medidos pelo teste ELISA. Nos animais tratados com os compostos da invenção, em doses de 5 a 250 5 pg/kg, há uma redução dos níveis de HC produzido. O composto do exemplo 1, na dose de 5 pg/kg, reduz em 55% a liberação de HC medida seis horas após a administração; na dose de 125 pg/kg, a redução de HC ainda é mensurável 24 horas após a administração.

. ENSAIO DO PERFIL FARMACOCINÉTICO

Os compostos da invenção também demonstram um perfil farmacocinético muito favorável em ratos. O perfil farmacocinético foi medido pela administração dos compostos a ratos machos, por via subcutânea, na dose de mg/kg (CD, Sprague •J

Dawley; 200-250

g) · diferentes horários, concentrações do plasma separadas valores foram

Amostras de sangue até 72 horas após composto em utilizando processados compartimental utilizando seguir, são apresentados os obtidos com o composto do com PASIREOTIDA, outro análise foram um método de de acordo software principais exemplo 1, foram coletadas, a administração.

medidas nas amostras análise com um

Kinetíca.

parâmetros comparados análogo estável da em

As de

LC-MS/MS e os modelo nãoNa tabela a farmacocinéticos àqueles obtidos somatostatina, atualmente em fase de desenvolvimento clínico (o

PASIREOTIDA foi preparado seguindo-se o processo descrito em W02002010192) .

	Exemplo 5	PASIREOTIDA
Dose	(mg/kg)	1	1
Cmax	(ng/mL)	224,02	667,88

tmax	(h)	4	2
tl/2	(h)	31,3	24,4
AUCO-t	(ng/mL*h)	2728,50	2781,40
AUCtot	(ng/mL*h)	2883,06	2795,85
MRT	(h)	18,96	4,87

0	composto	do exemplo 5 é	melhor	que a
PASIREOTIDA tanto em	termos de	meia-vida e como em	termos	de tempo
médio de permanência	(MRT); no	caso da OCTREOTIDA,	o valor	de tl/2
é de aproximadamente	2 horas.
Os	compostos	da invenção são	consequentemente

úteis na prevenção ou tratamento de distúrbios com uma origem que compreende ou está associada a um excesso de secreção de HC e/ou um excesso de IGF-1, como ocorre no tratamento da acromegalia, no tratamento do diabetes mellitus tipo I ou tipo II, especialmente 10 em suas complicações, por exemplo, angiopatia, retinopatia diabética proliferativa, edema macular diabético, nefropatia e fenômeno hiperglicêmico ao acordar e outros distúrbios metabólicos relacionados à liberação de insulina ou glucagon, por exemplo, obesidade mórbida ou obesidade hipotalâmica ou obesidade hiperinsulenimica. Os compostos da invenção também são úteis no tratamento de fistulas enterocutâneas e pancreáticas cutâneas, sindrome do intestino irritável, doenças inflamatórias, por exemplo, sindrome de Grave, sindrome do intestino irritável, psoríase ou artrite reumatóide, doença renal policistica, doença 20 do rápido esvaziamento gástrico, sindrome da diarréia aquosa, diarréia relacionada à AIDS, diarréia induzida por quimioterapia, pancreatite aguda ou crônica, tumores gastrointestinais que secretam hormônio (por exemplo, tumores GEO, tais como vipomas,

c.

gluconomas, insulinomas, carcinóides e similares), linfócitos malignos, tais como linfornas ou leucemias, carcinomas hepatocelulares, tais como sangramento gastrointestinal sangramento varicoso esofágico.

tratamento de somatostatina,

SSTR1, SSTR2, proliferativos

Os compostos da invenção tumores positivos para por exemplo,

SSTR3 e/ou com várias expressam os receptores da também são úteis os receptores no de os tumores que

SSTR5, conforme contém os receptores indicado nos testes linhagens de células somatostatina.

do câncer que

Para todas as indicações acima mencionadas, a dosagem exigida variará naturalmente de acordo com, por exemplo, o paciente, o modo de administração e a gravidade das condições que devem ser tratadas. De modo geral, satisfatórios com administrações no entanto, obtém-se resultados de 1 pg até

0,7 mg/kg/dia dos compostos da invenção. Um dosagem diária recomendada para pacientes é da ordem de aproximadamente pg a 50 mg, preferencialmente de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 40 mg, por exemplo, de aproximadamente 0,001 a aproximadamente 3 mg s.c.

do composto convenientemente administrado em doses dividas, até 3 por vezes ao farmacêuticas simples contendo, dia, em formas

exemplo,	de	aproximadamente	0,5 pg a	aproximadamente	25	mg,
exemplo,	de	aproximadamente	2 pg a	aproximadamente	20	mg,
exemplo,	de	aproximadamente	2 pg a	aproximadamente	1,5	mg
25 compostos	da	invenção.

por por dos dos compostos da invenção ou

Os conjugados seus sais farmaceuticamente aceitáveis são úteis tanto como agentes para a geração de imagens para fins diagnósticos, por exemplo, para a visualização de tecidos e células positivas para os receptores de somatostatina, por exemplo, os tumores e metástases positivas para os receptores de somatostatina, e para os distúrbios inflamatórios ou autoimunes que apresentam receptores de somatostatina, tuberculose ou a rejeição a órgãos após transplante, quando complexado com um elemento detectável, por exemplo, os nuclidios γ ou pósitrons emissores, um ion metálico fluorescente ou um ion paramagnético, por exemplo, ^11:LIn, ¹⁶¹Tb,

i.

¹⁷⁷Lu, ⁶⁸Ga, Eu³⁺, Gd³⁺, Fe³⁺, Mn²⁺ ou Cr ou como radio-medicamentos para o tratamento in vivo de tumores metástases positivas para os receptores de somatostatina, para artrite reumatóide e graves condições de inflamação, quando complexado com um nuclidio a- ou β-emissor com uma cascata de elétrons Auger, por exemplo, ⁹⁰Y, ¹⁶¹Tb, ¹⁷⁷Lu, ²¹¹At, ²¹³Bi ou ^2O1T1.

Os conjugados dos compostos da invenção na forma complexada para uso na geração de imagens para fins diagnósticos podem ser administrados por via intravenosa, por exemplo, na forma de solução ou suspensão injetável, preferencialmente na forma de injeção única. Os radiotraçadores podem ser preferencialmente 20 feitos pouco antes da administração ao paciente.

Em animais, uma faixa posológica recomendada pode variar de 0,01 a 1 pg/kg de conjugado dos compostos da invenção, complexados com 0,02 a 0,5 mCi de radionuclidio γ-emissores. Nos mamíferos maiores, por exemplo, humanos, uma faixa posológica 25 recomendada pode variar de 1 a 100 pg/m² de conjugado dos compostos da invenção complexados, por exemplo, com 1 a 100 mCi/m²de elemento detectável, por exemplo, ^mIn, ⁸⁶Y ou ¹⁷⁷Lu.

As dosagens utilizadas no uso radioterapêutico prático da presente invenção evidentemente dependerão das condições em particular que precisam ser tratadas, por exemplo, a radiotoxicidade conhecida de órgãos saudáveis que expressam os receptores de somatostatina, o tamanho da massa do tumor e a 5 terapia desejada. De modo geral, a dose é calculada com base nos dados farmacocinéticos e nos dados de distribuição da radioatividade obtidos de órgãos saudáveis e com base na captação observada no alvo. Um complexo β-emissor ou um conjugado dos , compostos da invenção podem ser repetidamente administrados, por * 10 exemplo, por um período de 1 a 3 meses.

Em animais, a faixa posológica recomendada pode variar de 20 a 100 pg/kg de conjugado dos compostos da invenção complexados com 15 a 70 mCi de um nuclídio oí- ou β-emissor, ou um nuclídio com a cascata de elétrons Auger, por exemplo, ⁹⁰Y, ¹⁷⁷Lu ou 15 ¹⁵¹Tb. Em mamíferos maiores, por exemplo, humanos, uma faixa posológica recomendada pode variar de 1 a 100 μ/m² de um composto conjugado complexado da invenção, por exemplo, de 1 a 100 mCi/m²de um nuclídio a- ou β-emissor ou de um nuclídio com cascata de _t elétrons Auger, por exemplo, ⁹⁰Y, ¹⁷⁷Lu ou ¹⁶¹Tb.

Os conjugados dos compostos da invenção na forma complexada para uso como agentes radioterápicos podem ser administrados por qualquer via convencional, por exemplo, por via intravenosa, por exemplo, na forma de solução injetável. Estes podem ser vantajosamente injetados por infusão, por exemplo, com uma infusão de 15 a 60 minutos. Dependendo da localização do tumor, podem ser administrados o mais próximo possível do local do tumor, por exemplo, através de um cateter. A presente invenção também provê uma composição farmacêutica compreendendo um

conjugado dos compostos da invenção na forma de base livre ou como sal farmaceuticamente aceitavel ou como complexo com um agente detectável ou radioterápico, com um ou mais excipientes ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis.

Os compostos da invenção ou seus conjugados na forma complexada são úteis no mapeamento ou tratamento de tumores que expressam ou acumulam os receptores, tais como tumores da hipófise, tumores gastro-entero-pancreáticos, carcinóides, tumores do sistema nervoso central, tumores de mama, tumores de próstata (incluindo o câncer de próstata avançado refratário a hormônio), tumores de ovário ou cólon, tumor de pulmão de células pequenas, oclusão intestinal maligna, paragangliomas, câncer de rim, câncer de pele, neuroblastomas, feocromocitomas, carcinoma medular da tireóide, mielomas, linfomas, linfomas de Hodgkins e linfomas nãoHodgkins, tumores ósseos e suas metástases, bem como distúrbios autoimunes ou inflamatórios, por exemplo, artrite reumatóide, sindrome de Grave ou outras doenças oculares inflamatórias.

Os compostos da invenção ou seus conjugados complexados podem ser administrados como princípio ativo simples ou podem ser administrados em associação, por exemplo, como adjuvantes, com outros princípios ativos. Por exemplo, podem ser utilizados em associação com um agente imunossupressor, por exemplo, um inibidor da calcineurina, como a ciclosporina A ou FK506; com uma lactona macrocíclica tendo propriedades imunossupressoras, como a rapamicina; com um anticorpo monoclonal com propriedades imunossupressoras ou com um agente antiinflamatório.

Os compostos da invenção ou seus conjugados complexados também podem ser utilizados em associação com um agente antiproliferativo, por exemplo, um principio ativo quimioterápico, como o paclitaxel, gencitabina, cisplatina, doxorrubicina, 5-fluoruracila ou taxol, com um agente hormonal ou antagonista, por exemplo, um anti-andrógeno ou mitoxantrona (especialmente no caso de câncer de próstata) ou com um antiestrógeno como o letrozol (especialmente nos casos de câncer de mama), com um antimetabólito, com um alcalóide derivado de planta, com um modificador de resposta biológica, preferencialmente um interferon ou uma linfocina, com um inibidor da proteína tirosina quinase e/ou com as serina/treonina quinases, com um inibidor enzimático de histona-deacetilase ou com um agente com outros mecanismos de ação ou com mecanismos de ação desconhecidos, por exemplo, derivados de anepotilona ou epotilona, ou com uma lactona macrocíclica, por exemplo, rapamicina, RAD ou CCI779.

Quando os compostos da invenção ou seus conjugados na forma complexada são administrados em associação com outra droga, as doses das drogas co-administradas evidentemente variarão em função das condições a serem tratadas e assim por diante. Os termos co-administração ou administração associada ou similares são aqui utilizados para indicar uma administração dos agentes terapêuticos selecionados para um único paciente, e devem incluir regimes de tratamento nos quais os agentes não são necessariamente administrados pela mesma via de administração ou ao mesmo tempo.

A associação em particular da invenção será escolhida dependendo se o propósito é evitar ou prevenir a doença ou distúrbio; por exemplo, uma associação com agente imunossupressor, por exemplo, para a prevenção ou tratamento de rejeição crônica a transplantes, uma associação com um secretagogo de insulina, com um promotor da secreção de insulina, com um sensibilizador de insulina ou com uma baixa dose de insulina no 5 tratamento do diabetes e suas complicações, uma associação com um agente antiinflamatório para a prevenção e tratamento de doenças ou distúrbios inflamatórios, uma associação com um agente com efeito anti-angiogênico para a prevenção ou tratamento, por exemplo, de edema ou degeneração macular ou câncer, uma associação 10 com um agente guimioterápico para tratamento do câncer.

Claims

1. Compostos da fórmula (I):

R3 /

R2-N

R1

NH₂

Fórmula (I) caracterizados pelo fato de que m varia de 0 a 2;

n varia de 1 a 3; R1 é um grupo aromático, exceto indol, opcionalmente substituído em uma ou mais posições; R4 é um grupo aromático opcionalmente substituído; R2 e R3 são, independentemente, H ou um grupo alquila C₁-C₄, ou, juntos, são uma cadeia de alquileno C₄-C₅, ligada ao átomo de nitrogênio para formar uma estrutura cíclica; ou R3 é um cátion ou grupo quelante metálico;

X1 é um resíduo de aminoacila das fórmulas (a), (b) ou (c) (a) (b)

-CO-CH-NHI ch₂

I ²

O-CH₂Ph

-CO-CH-NHI ch-ch₃

I ³

O-CH₂Ph

Petição 870190058182, de 24/06/2019, pág. 5/11

2/5 (c) -CO-CH-NHI

CH

O-CH₂Ph onde o ciclohexapeptídeo é selecionado do grupo consistindo em:

— ciclo[Tyr(Bn)-Phe-[4-(2-aminoetil)carbamoil] Pro-Phe-(D,L)[3-(3,8-dimetoxi-naftaleno-2-il)]Ala-Lys] isômero B, — ciclo[Tyr(Bn)-Phe-(D,L)[4-(2-aminoetil) carbamoil]Pro-Phe-(2,5-dimetoxi)hPhe-Lys] isômero B, — ciclo[Tyr(Bn)-Phe-[4-(2-metilaminoetil) carbamoil]Pro-Phe-(D,L)[3-(3,8-dimetoxi-naftaleno-2-il)]Ala-Lys] isômero B, — ciclo[Tyr(Bn)-Phe-[4-(2-aminoetil)carbamoil]

Pro-Phe-(D,L) [3-(1,4- dimetoxi-naftaleno-2-il)]Ala-Lys] isômero A, — ciclo[Tyr(Bn)-Phe-[4-(2-aminoetil)carbamoil] Pro-Phe-(D,L)[3-(1,4-dimetoxi-naftaleno-2-il)]Ala-Lys] isômero B, — ciclo[Tyr(Bn)-Phe-[4-(2-aminoetil)carbamoil] Pro-Phe-(D)[3-(naftaleno-2-il)]-Ala -Lys], — ciclo[Tyr(Bn)-Phe-[4-(2-aminoetil)carbamoil] Pro-Phe-(D)hPhe-Lys], — ciclo[Tyr(Bn)-Phe-[4-(2-metilaminoetil) carbamoil]Pro-Phg-(D)StirilAla-Lys], — ciclo[Tyr(Bn)-Phe-[4-(2-aminoetil)carbamoil] Pro-Phg-(D)hPhe-Lys], — ciclo[Tyr(Bn)-Phe-[4-(2-aminoetil)carbamoil]

Pro-Tyr-(D,L)[3-(3,8- dimetoxi-naftaleno-2-il)]Ala-Lys] isômero B, e

Petição 870190058182, de 24/06/2019, pág. 6/11

3/5 — ciclo[Ser(Bn)-Phe-[4-(2-aminoetil)carbamoil]

Pro-Phe-(D,L)[3-(3,8- dimetoxi-naftaleno-2-il)]Ala-Lys] isômero B,

aceitáveis. e seus sais e complexos farmaceuticamente 2. Compostos, de acordo com a reivindicação 1, caracterizados pelo fato de que o íon ou grupo quelante metálico é diretamente ligado ao grupo amino ou é ligado por meio de um espaçador. 3. Compostos, de acordo com a reivindicação 2, caracterizados pelo fato de que o grupo espaçador é um grupo da

fórmula -Z-R5-CO-, onde R5 é alquileno C_1-11, alquenileno C_1-11 ou CH(R6)-, onde R6 é a cadeia lateral de um alfa aminoácido, e Z é um grupo funcional capaz de formar uma ligação de éter, ligação de éster ou ligação amídica com um grupo funcional presente no grupo quelante.

4. Compostos, de acordo com a reivindicação 3, caracterizados pelo fato de que Z é um átomo de oxigênio, um átomo de enxofre, um radical carbonila ou um radical amino.

5. Compostos, de acordo com a reivindicação 1, caracterizados pelo fato de que o grupo quelante R3 é complexado com um íon paramagnético, por exemplo, Gd3+, Fe3+, ou um íon fluorescente, por exemplo, Eu3+ ou um radionuclídio emisor de radiações α, β ou γ, por exemplo, ¹¹¹In, ⁹⁹mTc, ¹⁶⁹Yb, ¹⁷⁷Lu, ⁹⁰Y ou ²¹³Bi.

6. Compostos, de acordo com a reivindicação 1, caracterizados pelo fato de que um dos grupos amino pode opcionalmente estar na forma protegida ou em sua forma de sal ou forma complexada.

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4/5

7. Compostos, de acordo com a reivindicação 1, caracterizados pelo fato de que mono- ou disalinizado.

8. Compostos, de acordo com a reivindicação 1, caracterizados pelo fato de que o sal é um sal de adição com ácidos orgânicos, ácidos poliméricos ou ácidos inorgânicos.

9. Compostos, de acordo com a reivindicação 1, caracterizados pelo fato de que os sais são selecionados dentre acetatos, lactatos, benzoatos, aspartatos, pamoatos, polimetacrilatos, poliestirenossulfonatos, cloridratos, sulfatos ou nitratos.

10. Processo para a preparação dos ciclohexapeptídeos da reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende as seguintes etapas:

a) preparação de um hexapeptídeo linear no qual os grupos funcionais opcionais presentes nas cadeias laterais de aminoácido estão opcionalmente na forma protegida;

b) ciclização do referido hexapeptídeo por meio de um ou mais agentes de condensação;

c) remoção opcional dos grupos protetores opcionais;

d) purificação final do ciclopeptídeo assim obtido.

11. Processo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a preparação do hexapeptídeo linear do ponto a) é realizada por meio da síntese em solução ou em fase sólida.

12. Processo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o aminoácido C-terminal do peptídeo

Petição 870190058182, de 24/06/2019, pág. 8/11

5/5 linear obtido no ponto a) é lisina.

13. Processo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que um dos resíduos de aminoácido do peptídeo linear obtido no ponto a) é 4-(2-amino-etilcarbamoiloxi)-prolina, protegido no grupo amino da cadeia lateral.

14. Processo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que um dos resíduos de aminoácido do hexapeptídeo linear obtido no ponto a) é 4-hidroxi-prolina com o grupo 4-hidroxila desprotegido.

15. Processo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o grupo 2-amino-etilcarbamoil é ligado ao grupo hidroxila da 4-hidroxi-prolina, após o estágio de

ciclização b), porém antes da possível remoção dos grupos protetores opcionais do estágio c) . 16. Processo, de acordo com a reivindicação 1,

caracterizado pelo fato de que a purificação de acordo com o estágio d) é realizada por cromatografia de fase reversa e/ou por cromatografia de troca iônica.

17. Composição farmacêutica compreendendo um composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que um sal farmaceuticamente aceitável deste, em associação com pelo menos um excipiente farmaceuticamente aceitável.

18. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de estar em uma forma para liberação modificada ou liberação tópica.