전술한 화학식 I의 화합물은 하기 3종의 화합물을 포함한다:
"약학적으로 허용가능한 프로드러그"라는 용어는, 생리적인 조건하에서 또는 가용해분해에 의해 임의의 화학식 I의 화합물 또는 상기 화합물의 약학적으로 허용가능한 염으로 전환될 수 있는 화합물을 의미한다.
화학식 I의 화합물 뿐만 아니라 상기 화합물의 약학적으로 허용가능한 염은 하기 반응기 1 내지 3에 제시한 반응으로 제조된다. 각각의 이러한 화합물의 합성은 하기 실시예 1 내지 실시예 3에 기술되어 있다.
화학식 I-1의 화합물은, 일반식 3의 (1-메틸-6-니트로-1H-인돌-3-일)-옥소-아세틸 클로라이드를 일반식 7의 [1-(2,2-디메틸-프로피오닐)-1H-인돌-3-일]-3-에탄이미드 산 1-메틸 에틸에스테르 염산염과 반응시키고, 반응 생성물을 염기로 처리함으로써 제조할 수 있다.
화학식 I-2의 화합물은, 일반식 17의 (1-메틸-1H-인돌-3-일)-옥소-아세틸 클로라이드를 일반식 19의 [1-(2,2-디메틸-프로피오닐)-6-니트로-1H-인돌-3-일]-3-에탄이미드산 1-메틸 에틸에스테르 염산염과 반응시키고, 반응 생성물을 염기로 처리함으로써 제조할 수 있다.
화학식 I-3의 화합물은 일반식 10의 (1-메톡시메틸-1H-인돌-3-일)-옥소-아세틸 클로라이드를 일반식 15인 (1-메틸-6-니트로-1H-인돌-3-일)-3-에탄이미드 산 1-메틸에틸에스테르 염산염과 반응시키고, 반응 생성물을 산으로 처리함으로써 제조할 수 있다.
본 발명의 화합물의 증식 억제 활성은 하기에서 설명된다. 이러한 효과는, 상기 화합물이 암 치료, 특히 고형 종양의 치료에 유용함을 나타낸다.
에스트로겐 수용체 음성 상피성 유방암 주(MDA-MB-435)는 아메리칸 타입 셀 컬쳐 콜렉션(American Type Cell Culture Collection; ATCC; 미국 매릴랜드주 락빌)에서 시판중이고, ATCC에서 추천하는 배지에서 배양하였다. 이러한 세포의 성장에 대한 시험 화합물의 효과를 분석하기 위해서, 세포를 96-웰 조직 배양 플레이트("시험 플레이트")에 1개의 웰당 2000개의 세포를 플레이팅하고, 37℃에서 5% CO2로 밤새 배양하였다. 다음날, 시험 화합물을 100% 디메틸 설폭사이드(DMSO)에 용해시켜 10 mM 원액을 수득하였다. 각각의 화합물을 살균 희석수로 1mM까지 희석한 후, 최종 농도 40μM를 수득하기에 충분한 양으로 배지를 함유하는 96-웰 "마스터 플레이트"의 3중 웰에 첨가하였다. 화합물을 "마스터 플레이트"에서 배지로 연속적으로 희석하였다. 희석된 화합물의 최종 체적의 ¼를 "시험 플레이트"를 복제하기 위해서 이동시켰다. 각각의 웰의 DMSO의 최종 농도가 0.1%가 되도록 DMSO를 일련의 "대조용 세포"에 첨가하였다. "시험 플레이트"를 배양기로 다시 옮기고 시험 화합물을 첨가한 후 3일 경과 시점에서, 하나의 "시험 플레이트"를 하기와 같이 분석하였다. 유사하게, 시험 화합물을 첨가한 후 5일째, 두번째 "시험 플레이트"를 하기에서 기술하는 바와 같이 분석하였다.
3-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-2,5-디페닐-2H-테트라졸륨 브로마이드(티아졸릴 블루; MTT)를 각각의 웰에 첨가하여, 최종 농도가 1㎎/㎖가 되도록 하였다. 그다음, 플레이트를 3시간 동안 37℃에서 배양시켰다. 그다음, MTT 함유 배지를 제거하고, 50㎕ 100% 에탄올을 각각의 웰에 첨가하여 생성된 포르마잔 대사 산물을 용해하였다. 완전히 용해시키기 위해서, 플레이트를 15분 동안 실온에서 흔들었다. 650㎚ 참조로, 570㎚의 파장에서 미세적정 플레이트 판독기(몰레큘러 다이나믹스(Molecular Dynamics))에서 흡광도를 측정하였다. 모든 웰에서 블랭크 값을 뺀 후, 대조군의 평균치로 각각의 3개의 시험 물질의 평균 흡광도를 나눈값을 1.00으로부터 빼서 억제율(%)을 계산하였다. 억제 농도(IC50및 IC90)는 농도의 로그값과 억제율(%)의 플롯의 선형 회귀법으로부터 측정하였다.
결장 선암 주 SW 480 및 결장 암 주 HCT-116도 ATCC로부터 구하고, 하기와 같은 변형 부분과 함께 앞서 제공된 바와 동일한 프로토콜을 따라 시험하였다. 세포주 SW 480을 웰당 1000개 세포로 플레이팅하고, 시험 화합물을 첨가한 후 6일 경과시 분석하였다. 세포주 HCT-116을 웰당 750개 세포로 플레이팅하고, 시험 화합물을 첨가한 후 4일 경과시 분석하였다. MTT 분석를 위해, MTT-함유 배지를 흡출하기 전에 5분 동안 1000 rpm으로 플레이트를 원심분리하고, 포르마잔을 용해시키기 위해서 100㎕ 100%의 에탄올을 사용하였다.
전술한 시험관내 시험 결과를 하기 표 I 내지 III에 제시하였다.
세포주 MDA-MB-435내 증식 억제 활성 |
화합물 |
IC50(μM) |
화학식 I-1의 화합물 |
0.03* |
화학식 I-3의 화합물 |
0.05* |
화학식 I-2의 화합물 |
0.6* |
*3개 이상의 개별적인 실험의 평균치 |
세포주 HCT-116의 증식 억제 활성 |
화합물 |
IC50(μM) |
화학식 I-1의 화합물 |
0.17* |
화학식 I-3의 화합물 |
0.23* |
화학식 I-2의 화합물 |
1.66* |
*3개 이상의 개별적인 실험의 평균치 |
세포주 SW480의 증식 억제 활성 |
화합물 |
IC50(μM) |
화학식 I-1의 화합물 |
0.20* |
화학식 I-3의 화합물 |
0.22* |
화학식 I-2의 화합물 |
1.86* |
*3개 이상의 개별적인 실험의 평균치 |
세포 사이클 진행에 대한 화합물의 영향을 분석하기 위해, MDA-MB-435 세포(ATCC; 미국 매릴랜드주 락빌 소재)를, RPMI 1640+10% 열-불활성화 소의 태아 혈청, 2mM L-글루타민 및 50 U/㎖ 펜-연쇄상 구균(모두 미국 매릴랜드주 개덜스버그 소재의 GIBCO/BRL로부터 구입)에서 10㎝의 디쉬 당 1×106세포/10㎖로 플레이팅하였다. 세포를 5% CO2와 함께 37℃에서 밤새 배양하였다. 다음날, 100% DMSO 용액중의 시험할 각각의 화합물 10㎕를 개별적인 디쉬에 첨가하여 1/1000×최종 농도의 원액을 수득하였다. 추가로, 10㎕의 100% DMSO를 대조용 다쉬에 첨가하였다. 대조군을 포함한 모든 플레이트내 DMSO의 최종 농도는 0.1%였다. 플레이트를 배양기에 다시 놓았다.
그다음, 다양한 시간 후에, 각각의 플레이트의 배지를 50㎖ 원심분리용 튜브에서 제거하였다. 그다음, 디쉬에 잔류하는 세포 층을 5㎖의 포스페이트 완충 염수(PBS; GIBCO/BRL)로 세척하였다. PBS를 제거하고, 적당한 튜브에서 배지와 혼합하였다. 세포를 37℃에서 5분 동안 트립신 처리하고, 용액을 수집하고, 적당한 튜브에 배지 및 PBS와 함께 수집하였다. 그다음, 튜브를 1200 rpm에서 5분 동안 원심분리하였다. 상청액을 제거하고, 펠레트를 분산시키기 위해 튜브를 막고, 그다음 약하게 와동시키면서 찬 70% 에탄올 5㎖를 첨가하여 세포를 고정시켰다. 그다음, 세포를 24시간 이상 동안 -20℃에서 저장하였다.
세포 함유 튜브를 냉각기에서 꺼내서 실온에서 20 내지 30분 동안 방치하였다. 5분 동안 튜브를 3000 rpm으로 원심분리시켰다. 상청액을 제거하고, 펠레트를 5㎖의 PBS로 세척하고, 튜브를 전술한 바와 같이 원심분리시켰다. 그다음, 상청액을 제거하고, 펠레트를 0.5㎖의 PBS에 재현탁시켰다. 그다음, 0.5㎖의 RNAase A(1㎎/PBS의 ㎖)를 각각의 튜브에 첨가하고, 튜브를 15분 동안 37℃에서 배양하였다. 100㎕의 프로피디움 요오다이드(미국 미조리주 세인트 루이스 소재의 시그마(Sigma))(1㎎/PBS의 ㎖)를 각각의 튜브에 첨가하고, 그다음 튜브를 실온에서 2 내지 3분 동안 배양하였다. 각각의 생성 용액을 필터 캡 튜브를 통해 통과시켰다(미국 캘리포니아주 산호세 소재의 베톤 디킨슨(Becton Dickinson), #2235).
제조업체의 셀퀘스트(CellQUEST) 프로그램을 사용하여 FACSort 기기(베톤 디킨슨)에서 샘플을 판독하고, 제조업자의 ModFIT 소프트웨어로 분석하였다. 이러한 측정치는, 각각의 G0/G1, DNA 분석(S) 및 G2/M 단계에서의 세포의 함량(%)을 나타낸다.
시험 화합물인 화학식 I-1의 화합물, 화학식 I-2의 화합물 및 화학식 I-3의 화합물을 첨가한 후 1일 경과 시점에서 분석한 세포 사이클 진행 시험의 결과를 하기 표 IV에서 요약하였다.
전술한 표 I 내지 IV에서 요약한 결과는 화학식 I-1, 화학식 I-2 및 화학식 I-3의 화합물이 증식 억제 활성을 가지고, 구체적으로 이들은 세포 사이클의 G2/m 단계에서의 세포의 축적을 야기함을 나타낸다.
전술한 화학식 I의 피롤 및 이들의 전술한 염은 약제, 예를 들어 경구 투여 방식으로 투여될 수 있는 약학 제제의 형태, 예를 들어 정제, 피복된 정제, 당의정, 경질 젤라틴 캡슐 또는 연질 젤라틴 캡슐, 용액, 유화액 또는 현탁액의 형태로 사용될 수 있다. 이들은 또한 직장 투여 형태, 예를 들어 좌제로 투여되거나, 비경구 투여 형태, 예를 들어 주사 용액 형태로 투여될 수 있다.
약학 제제를 제조하기 위해서, 이러한 화합물은 치료적으로 불활성인 무기 또는 유기 담체로 제형화될 수 있다. 락토즈, 옥수수 전분 또는 이들의 유도체, 활석, 스테아르산 또는 이들의 염이 정제, 피복된 정제, 당의정 및 경질 젤라틴 캡슐을 위한 담체로서 사용될 수 있다. 연질 젤라틴 캡슐을 위한 적당한 담체로는, 식물유, 왁스, 지방, 반고형 또는 액체 폴리올을 들 수 있다. 그러나, 활성 물질의 특성에 따라, 일반적으로 연질 젤라틴 캡슐의 경우에는 어떠한 담체도 필요로 하지 않는다. 용액 및 시럽의 제조를 위한 적당한 담체로는 물, 폴리올, 사카로즈, 전화당 및 글루코즈를 들 수 있다. 주사용으로 적당한 담체로는, 물, 알콜, 폴리올, 글리세린, 식물유, 당지질 및 계면활성제를 들 수 있고, 좌제를 위한 적당한 담체로는 천연 또는 경질유, 왁스, 지방 및 반고체형 폴리올을 들 수 있다.
약학 제제는 또한 방부제, 가용화제, 안정화제, 습윤제, 유화제, 감미제, 착색제, 풍미제, 삼투압을 변화시키기 위한 염, 완충제, 피복제 또는 산화방지제를 포함할 수 있다. 이들은 또한 다른 치료적으로 유용한 물질을 함유할 수 있다.
전술한 바와 같이, 화학식 I의 피롤 및 이들의 전술한 염은 종양 질환의 치료 또는 억제에서 사용될 수 있다. 투여량은 폭넓게 변할 수 있지만, 예를 들어 각각의 특정한 경우에서 개별적인 요구사항에 따라 조절될 것이다. 일반적으로 체중이 약 70㎏인 성인 남자에게 경구 또는 비경구 투여하는 경우, 1일 투여량은 약 10㎎ 내지 약 10,000㎎, 바람직하게는 약 200㎎ 내지 약 5,000㎎이고, 보다 바람직하게는 약 1000㎎ 이하가 적당하지만, 처방이 있는 경우 상한치는 초과될 수 있다. 1일 투여량은 1회 또는 여러회로 나누어 투여될 수 있거나, 비경구 투여인 경우에는 연속 주입으로 투여될 수도 있다.
하기 실시예는 본 발명을 설명한다.
실시예 1
3-(1H-인돌-3-일)-4-(1-메틸-6-니트로-1H-인돌-3-일)-피롤-2,5-디온(화학식 I-1)의 제조
A. 일반식 2의 1-메틸-6-니트로-1H-인돌
무수 디메틸포름아미드(DMF) 30㎖내 0.33g(8.3 mmol)의 NaH(오일내 60% 분산액)의 슬러리에, 0.973g(6.00 mmol)의 시판중인 일반식 1의 6-니트로-1H-인돌을 10분 동안 0 내지 5℃에서 첨가하였다. 1시간 동안, 동일한 온도에서 교반한 후, 0.75㎖(12.01 mmol)의 메틸 요오다이드를 첨가하고, 혼합물을 동일한 온도에서 30분 동안 교반한 후, 실온에서 1시간 동안 교반하고, 얼음 및 물에 붓고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기상은 염수로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 농축시켜 0.814g(77.5%)의 일반식 2의 1-메틸-6-니트로-1H-인돌을 황색 고체로 수득하였다. 이러한 물질은 정제하지 않고 사용하였다.
B. 일반식 3의 (1-메틸-6-니트로-1H-인돌-3-일)-옥소-아세틸 클로라이드
40㎖의 에테르내 1-메틸-6-니트로-1H-인돌(일반식 2) 1.33g(7.55 mmol) 용액에 옥살릴 클로라이드 1.5㎖(17.2 mmol)을 아르곤 대기하에서 0 내지 5℃에서 첨가하였다. 침전물이 형성되었다. 3시간 동안 교반한 후, 생성물 고체를 여과하고, 소량의 에테르로 세척하고, 건조시켜, 황색 고체로서 1.9g(95%)의 일반식 3의 (1-메틸-6-니트로-1H-인돌-3-일)-옥소-아세틸 클로라이드를 수득하였다. 이러한 물질은 정제하지 않고 사용되었다.
C. 일반식 6의 [1-(2,2-디메틸-프로피오닐)-1H-인돌-3-일]-아세토니트릴
전술한 A 부분의 방법을 사용하여, 115㎖ DMF에서 염기로서 3.4g(85 mmol)의 NaH(오일내 60% 분산액) 및 8.7㎖(71 mmol)의 트리메틸아세틸 클로라이드와, 10.2g(65 mmol)의 시판중인 일반식 5의 (1H-인돌-3-일)-아세토니트릴을 N-알킬화 반응시키고, 크로마토그래피 정제한 후, 황색 오일로서 6.6g(38.7%)의 일반식 6의 [1-(2,2-디메틸-프로피오닐)-1H-인돌-3-일]-아세토니트릴을 수득하였다.
D. 일반식 7의 [1-(2,2-디메틸-프로피오닐)-1H-인돌-3-일]-3-에탄이미드산 1-메틸에틸에스테르 염산염
105㎖의 2-프로판올내 전술한 C 단계의 일반식 6의 [1-(2,2-디메틸-프로피오닐)-1H-인돌-3-일]-아세토니트릴 6.6g(27.5 mmol)의 슬러리에, 40㎖(0.563 mol)의 아세틸 클로라이드를 20분 동안 0 내지 5℃에서 적가하였다. 반응 혼합물을 밤새 실온에서 교반하고, 농축하고, 잔류물을 약 75㎖의 에틸 아세테이트로 희석하고, 15분 동안 스팀 배쓰에서 가열하고, 냉각시키고, 냉각기에 방치하였다. 침전물을 여과하고, 건조시켜, 6.0g(65.0%)의 일반식 7의 [1-(2,2-디메틸-프로피오닐)-1H-인돌-3-일]-2-에탄이미드산 1-메틸에틸에스테르 염산염을 백색 고체로서 수득하였다.
E. 일반식 4의 3-[1-(2,2-디메틸-프로피오닐)-1H-인돌-3-일]-4-(1-메틸-6-니트로-1H-인돌-3일)-피롤-2,5-디온
80㎖의 메틸렌 클로라이드내 전술한 B 단계에서 제조된 일반식 3의 (1-메틸-6-니트로-1H-인돌-3-일)-옥소-아세틸 클로라이드 1.25g(4.69 mmol) 및 전술한 단계 D에서 제조된 일반식 7의 [1-(2,2-디메틸-프로피오닐)-1H-인돌-3-일]-3-에탄이미드 산 1-메틸 에틸에스테르 염산염 1.6g(4.75 mmol)의 용액에, 2.6㎖(18.65 mmol)의 트리에틸아민을 아르곤하에서 0℃에서 첨가하였다. 동일한 온도에서 30분 동안 교반한 후, 그다음 반응 혼합물을 실온에서 3 1/2 동안 교반하고, 추가의 메틸렌 클로라이드로 세척하였다. 유기상을 물, 0.5N HCl 용액, 염수로 세척하고, MgSO4로 건조하고, 농축시켜 3.01g의 발포체를 형성하였다. 이러한 물질을 50㎖의 톨루엔에 용해시키고, 987.9 ㎎(5.19 mmol)의 p-톨루엔설폰산으로 0℃에서 처리하였다. 3시간의 실온에서의 교반 후, 반응 혼합물을 메틸렌 클로라이드로 추출하였다. 유기상은 포화 NaHCO3용액, 염수로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 농축시켜 3.9g의 조질의 물질을 수득하였다. 실리카 겔 컬럼으로 크로마토그래피 정제하여, 1.7g(77%)의 일반식 4의 3-[1-(2,2-디메틸-프로피오닐)-1H-인돌-3-일]-4-(1-메틸-6-니트로-1H-인돌-3-일)-피롤-2,5-디온을 오렌지색 고체로 수득하였다. 융점: 146℃ 이상에서 분해, MS: (M+), m/z 470.
F. 화학식 I-1의 3-(1H-인돌-3-일)-4-(1-메틸-6-니트로-1H-인돌-3-일)-피롤-2,5-디온
60㎖의 메탄올내 전술한 단계 E로부터의 일반식 4의 3-[1-(2,2-디메틸-프로피오닐)-1H-인돌-3-일]-4-(1-메틸-6-니트로-1H-인돌-3-일)-피롤-2,5-디온 1.7g(3.61 mmol)을, 메탄올내 NaOCH31.6 몰 용액 5.6㎖(8.96 mmol)로 처리하였다. 반응물을 1시간 동안 실온에서 교반하고, 2N-HCl/얼음에 붓고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 추출액을 무수 MgSO4에서 건조시키고, 농축시키고, 크로마토그래피 정제하여, 394.7㎎(28%)의 화학식 I-1의 3-(1H-인돌-3-일)-4-(1-메틸-6-니트로-1H-인돌-3-일)-피롤-2,5-디온을 적색 고체로서 수득하였다. 융점: 280℃이상, MS: (M+), m/z 386.
실시예 2
화학식 I-3의 3-(1-하이드록시메틸-1H-인돌-3-일)-4-(1-메틸-6-니트로-1H-인돌-3-일)-피롤-2,5-디온의 제조
A. 일반식 9의 1-메톡시메틸-1H-인돌
실시예 1, 단계 A의 방법을 사용하여, DMF 22㎖내 염기로서 NaH(오일내 60% 분산액) 0.48g(12 mmol) 및 클로로메틸 메틸 에테르 1㎖(13.1 mmol)와, 시판중인 일반식 8의 인돌 1.17g(10 mmol)을 N-알킬화 반응시키고, 크로마토그래피 정제하여 무색 오일로서 일반식 9의 1-메톡시메틸-1H-인돌 1.4g(86.9%)를 수득하였다.
B. 일반식 10의 (1-메톡시메틸-1H-인돌-3-일)-옥소-아세틸 클로라이드
실시예 1, 단계 B의 방법을 사용하여, 3.5㎖의 에테르내 옥살릴 클로라이드 0.25㎖(2.86 mmol)로 전술한 A 단계의 일반식 9의 1-메톡시메틸-1H-인돌 0.23g(1.43 mmol)을 반응시킴으로써, 0.174g(48.5%)의 일반식 10의 (1-메톡시메틸-1H-인돌-3-일)-옥소-아세틸 클로라이드를 황색 고체로서 수득하였다. 이러한 물질은 정제없이 사용하였다.
C. 일반식 13의 (6-니트로-1H-인돌-3-일)-아세토니트릴
아세토니트릴 450㎖내 일반식 12의 6-니트로그라민(잭슨(Jackson B. Hester)의 문헌[J. Org. Chem., 29: 1158(1964)] 참고) 44.27g(0.204mol)의 교반 용액에, 1시간 동안 0 내지 5℃에서 메틸 요오다이드 44.59g(0.31 mol)의 메틸 요오아디으를 첨가하였다. 3시간 동안 반응 혼합물을 실온에서 교반하고, 그다음 225㎖의 물내에 나트륨 시아나이드 26.6g(0.543 mol)을 한번에 첨가하였다. 반응 혼합물을 32℃에서 밤새 가열하고, 실온으로 냉각시키고, 생성물을 총 800㎖ 들이의 에틸 아세테이트 및 300㎖의 물로 3회 추출하였다. 추출액을 모아, 물, 1H HCl 용액, 포화 중탄산 나트륨 용액으로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 진공하에서 용매를 증발시켰다. 주황색-갈색 잔류물(41.3g)을 200㎖의 승온된 에틸 아세테이트에 용해시키고, 실리카 겔의 작은 패드를 통과시키고, 용매를 증발시킨 후 28.9g(70.4%)의 일반식 13의 (6-니트로-1H-인돌릴-3-일)-아세토니트릴 28.9g(70.4%)을 제조하였다.
D. 일반식 14의 (1-메틸-6-니트로-1H-인돌-3-일)-아세토니트릴
분말화 탄산칼슘 65.5g(0.474mol)을, 실온에서 230㎖의 디메틸 포름아미드내 전술한 C 단계에서 제조된 일반식 13의 (6-니트로-1H-인돌-3-일)-아세토니트릴 28.9g(0.143 mol)의 용액에 첨가하였다. 현탁액을 40분 동안 교반한 후, 그다음 25.48g(0.179 mol)의 메틸 요오다이드를 65분 동안 적가하였다. 실온에서 밤새 교반한 후, 반응 혼합물을 냉각시키고, 총 600㎖의 물에 부었다. 침전물을 여과하고, 소량의 물로 세척하고, 일정 중량에 도달할 때까지 인 무수물에서 건조시켰다. 이러한 방법으로 30.4g(95.4%)의 일반식 14의 (1-메틸-6-니트로-1H0-인돌-3-일)-아세토니트릴을 수득하고, 이것을 추가의 정제없이 사용하였다.
E. 일반식 15의 (1-메틸-6-니트로-1H-인돌-3-일)-3-에탄이미드산 1-메틸에틸에스테르 염산염
HCl 기체 스트림을, 0 내지 10℃에서 1000㎖의 2-프로판올내 전술한 D 단계에서 제조된 일반식 14의 (1-메틸-6-니트로-1H-인돌-3-일)-아세토니트릴 82g(0.382 mol)의 교반된 현탁액에서 버블링하였다. 약 350g HCl를 첨가한 후, 침전물이 형성될 때까지 에테르를 반응 혼합물에 첨가하였다. 고형물을 수집한 후, 에테르로 세척하고, 진공하여 건조시켜, 102g(85.7%)의 일반식 15의 (1-메틸-6-니트로-1H-인돌-3-일)-3-에탄이미드 산 1-메틸에텔에스테르 염산염을 수득하였다.
F. 일반식 11의 3-(1-메톡시메틸-1H-인돌-3-일)-4-(1-메틸-6-니트로-1H-인돌-3- 일)-피롤-2,5-디온
실시예 1, 단계 E의 방법을 사용하여, 95㎖의 메틸렌 클로라이드내 전술한 단계 E에서 제조된 일반식 15의 (1-메틸-6-니트로-1H-인돌)-3-에탄이미드 산 1-메틸 에틸에스테르 염산염 1.7g(5.45 mmol)과, 전술한 단계 B에서 제조된 일반식 10의 옥소아세틸 클로라이드 1.3g(5.17 mmol)을 응축 반응시켜, 주황색 고체로서 1.08g(48.5%)의 3-(1-메톡시메틸-1H-인돌-3-일)-4-(1-메틸-6-니트로-1H-인돌-3- 일)-피롤-2,5-디온을 수득하였다. 융점: 250℃ 이상에서 분해; MS:(M+), m/z 430.
G. 화학식 I-3의 3-(1-하이드록시메틸-1H-인돌-3-일)-4-(1-메틸-6-니트로-1H-인돌-3-일)-피롤-2,5-디온
65㎖의 THF내 전술한 단계 F에서 제조된 일반식 11의 3-[1-(메톡시메틸)-1H-인돌-3-일)-4-(1-메틸-6-니트로-1H-인돌-3-일)-피롤-2,5-디온 727.5㎎의 용액을 약 40㎖의 2N HCl로 처리하였다. 반응 혼합물을 5시간 동안 환류하고, 냉각시키고, 생성물을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기상을 MgSO4에서 건조시키고, 용매를 증발시켜 주황색 고체를 수득하였다. 이러한 물질을 크로마토그래피 정제하여 123.3㎎의 화학식 I-3의 3-(1-하이드록시메틸-1H-인돌-3-일)-4-(1-메틸-6-니트로-1H-인돌-3-일)-피롤-2,5-디온을 적색 고체로서 수득하였다. 융점: 210-213℃. MS: (M+), m/z 416.
실시예 3
화학식 I-2의 3-(1-메틸-1H-인돌-3-일)-4-(6-니트로-1H-인돌-3-일)-피롤-2,5-디온의 제조
A. 일반식 17의 (1-메틸-1H-인돌-3-일)-옥소-아세틸 클로라이드
실시예 1, 단계 B의 방법을 사용하여, 120㎖의 에테르내 옥살릴 클로라이드 8㎖(92 mmol)와 시판중인 일반식 16의 1-메틸-1H-인돌 6㎖(47 mmol)을 반응시켜 황색 고체로서 일반식 17의 (1-메틸-1H-인돌-3-일)-옥소-아세틸 클로라이드 7.6g(73.2%)를 수득하였다. 이러한 물질은 정제하지 않고 사용하였다.
B. 일반식 18의 [1-(2,2-디메틸-프로피오닐)-6-니트로-1H-인돌-3-일]-아세토니트릴
실시예 1, 단계 A의 방법을 사용하여, 8㎖의 DMF내 염기로서 NaH(오일내 60% 분산액) 70.8㎎(1.77 mmol) 및 트리메틸아세틸 클로라이드 0.3㎖(2.44 mmol)와, 실시예 2, 단계 C에서 제조된 일반식 13의 6-니트로-1H-인돌릴-3-아세토니트릴 346.6㎎(1.72 mmol)을 N-알킬화 반응시켜, 크로마토그래피 정제한 후, 287.7㎎(43.2%)의 [1-(2,2-디메틸-프로피오닐)-6-니트로-1H-인돌-3-일]-아세토니트릴(일반식 18)을 황색 오일로서 수득하였다.
C. [1-(2,2-디메틸-프로피오닐)-6-니트로-1H-인돌-3-일]-3-에탄이미드산 1-메틸에틸 에스테르 염산염(일반식 19)
0 내지 5℃에서, HCl의 스트림을, 3분 동안 2-프로판올 90㎖내 전술한 단계 B에서 제조된 1[(2,2-디메틸-프로피오닐)-6-니트로-1H-인돌릴]-3-아세토니트릴(일반식 18) 1.45g(5.08 mmol)의 일정하게 교반한 현탁액에 버블링하였다. 반응 혼합물을 21시간 동안 실온에서 교반하였다. 용매를 진공하에서 증발시켜, 1.95g(100%)의 황색 고체(일반식 19)를 수득하였다. 이러한 물질은 추가의 정제 과정 없이 사용되었다.
D. 3-[1-(2,2-디메틸-프로피오닐)-6-니트로-1H-인돌-3-일]-4-(1-메틸-1H-인돌-3-일)피롤-2,5-디온(일반식 20)
실시예 1, 단계 E의 방법을 사용하여, 전술한 단계 A로부터의 옥소아세틸 클로라이드 1.1g(4.96 mmol)을 전술한 단계 C에서 제조된 [1-(2,2-디메틸-프로피오닐)-6-니트로-1H-인돌-3-일]-3-에탄이미드산 1-메틸에틸에스테르 염산염(일반식 19) 1.95g(5.08 mmol) 및 메틸렌 클로라이드 120㎖내 트리에틸아민 2.1㎖(17.94 mmol)과 반응시키고, 생성된 생성물을 톨루엔 80㎖내 p-톨루엔설폰산 일수화물 1.1g(5.78 mmol)로 처리하여, 1.3g(62.1%)의 3-[1-(2,2-디메틸-프로피오닐)-6-니트로-1H-인돌-3-일]-4-(1-메틸-1H-인돌-3-일)-피롤-2,5-디온(일반식 20)을 주황색 고체로서 수득하였다. 융점: 245℃ 이상에서 분해됨, MS: (M+), m/z 470.
E. 3-(1-메틸-1H-인돌-3-일)-4-(6-니트로-1H-인돌-3-일)-피롤-2,5-디온(화학식 I-2)
실시예 1, 단계 F의 방법을 사용하여, 65㎖ 메탄올내 NaOCH3의 1.6 몰 용액 4.3㎖(6.88 mmol)과 전술한 단계 D에서 제조된 3-[1-(2,2-디메틸-프로피오닐)-6-니트로-1H-인돌-3-일]-4-(1-메틸-1H-인돌-3-일)-피롤-2,5-디온(일반식 20) 1.3g(2.76 mmol)을 N-탈양성자화 반응시키고, 에틸 아세테이트 및 헥산으로 결정화시킴으로써, 300.6㎎(28.1%)의 3-(1-메틸-1H-인돌-3-일)-4-(6-니트로-1H-인돌-3-일)-피롤-2,5-디온(화학식 I-2)를 적색 고체로서 수득하였다. 융점: 260℃ 이상; MS: (M+), m/z 386.
실시예 4
정제 제제
품목 |
성분 |
㎎/정제 |
1 |
화합물 A* |
5 |
25 |
100 |
250 |
500 |
750 |
2 |
무수 락토즈 |
103 |
83 |
35 |
19 |
38 |
57 |
3 |
크로스카멜로즈 나트륨 |
6 |
6 |
8 |
16 |
32 |
48 |
4 |
포비돈 K30 |
5 |
5 |
6 |
12 |
24 |
36 |
5 |
마그네슘 스테아레이트 |
1 |
1 |
1 |
3 |
6 |
9 |
|
총 중량 |
120 |
120 |
150 |
300 |
600 |
900 |
*화합물 A는 본 발명의 화합물을 대표한다. |
제조 방법
1. 적당한 혼합기에서 15분 동안 품목 1, 2 및 3를 혼합한다.
2. 20%의 포비돈 K30 용액(품목 4)과 단계 1로부터의 분말 혼합물을 과립화한다.
3. 50℃에서 단계 2로부터의 과립화물을 건조시킨다.
4. 적당한 밀 기기를 통해 단계 3의 과립화물을 통과시킨다.
5. 단계 4의 분쇄된 과립화물에 품목 5를 첨가하고 3분 동안 혼합한다.
6. 적당한 프레스에서 단계 5의 과립화물을 압축시킨다.
실시예 5
캡슐 제제
품목 |
성분 |
㎎/정제 |
1 |
화합물 A* |
5 |
25 |
100 |
250 |
500 |
2 |
수화 락토즈 |
159 |
123 |
148 |
-- |
-- |
3 |
옥수수 전분 |
25 |
35 |
40 |
35 |
70 |
4 |
활석 |
10 |
15 |
10 |
12 |
24 |
5 |
마그네슘 스테아레이트 |
1 |
2 |
2 |
3 |
6 |
|
총 중량 |
200 |
200 |
300 |
300 |
600 |
*화합물 A는 본 발명의 화합물을 대표한다. |
제조 방법
1. 품목 1, 2 및 3을 적당한 혼합기에서 15분 동안 혼합한다.
2. 품목 4 및 5를 첨가하고 3분 동안 혼합한다.
3. 적당한 캡슐에 채운다.
실시예 6
주사 용액/유화액 제제
품목 |
성분 |
㎎/㎖ |
1 |
화합물 A* |
1㎎ |
2 |
PEG 400 |
10-50㎎ |
3 |
레시틴 |
20-50㎎ |
4 |
대두유 |
1-5㎎ |
5 |
글리세롤 |
8-12㎎ |
6 |
물 적당량 |
1㎖ |
* 화합물 A는 본 발명의 화합물을 나타낸다. |
제조 방법
1. 품목 2에 품목 1을 용해시킨다.
2. 품목 6에 품목 3, 4 및 5를 첨가하고, 분산될 때까지 혼합한 후, 균일화시킨다.
3. 단계 2의 혼합물에 단계 1의 용액을 첨가하고, 분산액이 투명해질 때까지 균일화시킨다.
4. 0.2㎛의 필터를 통해 살균 여과한 후 바이알에 채운다.
실시예 7
주사 용액/유화액 제제
품목 |
성분 |
㎎/㎖ |
1 |
화합물 A* |
1㎎ |
2 |
글리코푸롤 |
10-50㎎ |
3 |
레시틴 |
20-50㎎ |
4 |
대두유 |
1-5㎎ |
5 |
글리세롤 |
8-12㎎ |
6 |
물 |
적당량 1㎖ |
* 화합물 A는 본 발명의 화합물을 나타낸다. |
제조 방법
1. 품목 2에 품목 1을 용해시킨다.
2. 품목 6에 품목 3, 4 및 5를 첨가하고, 분산될 때까지 혼합한 후, 균일화시킨다.
3. 단계 2의 혼합물에 단계 1의 용액을 첨가하고, 분산액이 투명해질 때까지 균일화시킨다.
4. 0.2㎛의 필터를 통해 살균 여과한 후 바이알에 채운다.