KR102620279B1 - 술폭시민 글리코시다제 억제제 - Google Patents

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산토쉬 에스. 쿨카르니
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Abstract

하기 화학식 (I)의 화합물은 특히 타우병증 및 알츠하이머 병의 치료에 사용될 수 있다:

상기에서 A, R, W, Q, n 및 m은 청구항에 따른 의미를 갖는다.

Description

술폭시민 글리코시다제 억제제{Sulfoximine glycosidase inhibitors}
본 발명은 화학식 (I)의 화합물 및/또는 이의 생리학적으로 허용가능한 염, 토토머(tautomers), 용매화물(solvates), 입체이성질체(stereoisomers) 및 유도체를 포함하는 약제에 관한 것으로서,
상기에서 A, R, W, Q, n 및 m은 청구범위에 따른 의미를 갖는다. 상기 화학식 (I)의 화합물은 글리코시다제 억제제로서 사용될 수 있다. 본 발명의 목적은 또한 화학식 (I)의 화합물을 포함하는 약학적 조성물, 및 하나 이상의 타우병증(tauopathies) 및 알츠하이머 병(Alzheimer's disease)의 치료를 위한 화학식 (I)의 화합물의 용도이다.
핵 및 세포질 둘 모두의, 광범위한 세포 단백질은, O-글리코시드 연결(O-glycosidic linkage)을 통해 부착된 단당류 2-아세트아미도-2-데옥시-β-D-글루코피라노시드(β-N-아세틸글루코사민)의 첨가에 의해 번역-후 변형된다. 상기 변형은 일반적으로 O-연결된 N-아세틸글루코사민 또는 O-GlcNAc로 지칭된다. β-N-아세틸글루코사민(GlcNAc)을 수많은 핵세포질 단백질의 특정 세린 및 트레오닌 잔기에 번역-후 연결하는 역할을 하는 효소는 O-GlcNAc 트란스퍼라제(OGTase)이다. O-GlcNAcase로 알려진, 두 번째 효소는 상기 번역 후 변형을 제거하여 단백질을 방출하여 O-GlcNAc 변형을 단백질 수명 동안 여러 번 발생하는 동적 사이클(dynamic cycle)로 만든다.
O-GlcNAc-변형된 단백질은, 예를 들어, 전사, 프로테아좀 분해 및 세포 신호전달을 포함하는 광범위한 필수적 세포 기능을 조절한다. O-GlcNAc는 또한 많은 구조 단백질에서 발견된다. 예를 들어, 이는 신경필라멘트(neurofilament) 단백질, 시냅신(synapsins), 시냅신-특이적 클라트린 어셈블리 단백질 AP-3 및 안키린-G(Ankyrin-G)를 포함하는, 다수의 세포골격 단백질(cytoskeletal proteins)에서 발견되었다. O-GlcNAc 변형은 뇌에서 풍부한 것으로 밝혀졌다. 또한 타우병증, 알츠하이머 병(AD), 시뉴클레인병증(synucleinopathies), 파킨슨 병(Parkinson's disease), 근위축성 측색 경화증(amyotrophic lateral sclerosis) 및 암을 포함하는 여러 질병의 병인학(etiology)에 명백하게 연루된 단백질에서 발견되었다.
예를 들어, 다운 증후군(Down's Syndrome), 진행성 핵상 마비(progressive supranuclear palsy: PSP), 픽병(Pick's disease), 피질기저핵 변성(corticobasal degeneration: CBD), 호은성 입자 질병(argyrophilic grain disease: AGD), 구형 아교 타우병증(globular glial tauopathy: GGT), 전측두엽 치매(frontotemporal dementia) 및 파킨슨증(parkinsonism)을 포함하는 다수의 관련 타우병증 및 AD가 염색체-17(FTLD-17)과 연관되어 있음이 잘 확립되어 있다. 니만-픽 타입 C 질환(Niemann-Pick Type C disease)은, 부분적으로, 신경원섬유 엉킴(neurofibrillary tangles: NFTs)을 특징으로 한다. NFT는 또한 외상성 뇌 손상(traumatic brain injury)의 결과인 만성 외상성 뇌병증(chronic traumatic encephalopathy)의 조직병리학적 특징(hallmark)이다. 이러한 NFT는 쌍 나선 필라멘트(paired helical filament: PHF)의 응집체(aggregates)이며 비정상적인 형태의 세포골격 단백질 "타우(tau)"로 구성된다. 일반적으로, 타우는 뉴런 내에서 단백질 및 영양분을 분배하기 위해 필수적인 미세소관(microtubules)의 주요 세포 네트워크를 안정화시킨다. 그러나, AD 환자의 경우, 타우는 과인산화되어, 이의 정상적인 기능을 방해하고, PHF를 형성하며 궁극적으로 응집하여 NTF를 형성한다. 타우의 6 가지 아형(isoforms)이 인간의 뇌에서 발견된다. AD 환자에서, 타우의 6 가지 아형 모두가 NFT에서 발견되고, 모두 현저하게 과인산화된다. 건강한 뇌 조직에서 타우는 단지 2 개 또는 3 개의 인산기를 지니는 반면, AD 환자의 뇌에서 발견되는 것은, 평균적으로, 8 개의 인산기를 지닌다. AD 환자의 뇌에서 NFT 수준과 치매의 중증도 사이의 명확한 평행(parallel)은 AD에서 타우 기능장애에 대한 주요 역할을 강력하게 지지한다. 이러한 타우의 과인산화의 정확한 원인은 찾기 힘들다. 따라서, a)타우 과인산화의 분자 생리학적 기초를 밝히는 것; 및 b)타우병증 및 알츠하이머 병의 진행을 중단시키거나, 심지어 역전시킬 수 있다는, 희망에서 타우 과인산화를 제한할 수 있는 전략을 확인하는 것을 향한 상당한 노력이 헌신되어 왔다. 여러 측면의 증거에 따르면, 매우 최근에 상기 과인산화에 대한 대안적인 기초가 발전되었지만, 다수의 키나제의 상향-조절(up-regulation)이 타우의 과인산화에 관여할 수 있음을 시사한다.
특히, 최근 타우의 인산 수준은 타우의 O-GlcNAc 수준에 의해 조절되는 것으로 나타났다. 타우에서 O-GlcNAc의 존재는 타우 인산화 수준과 O-GlcNAc 수준을 상관관계화하는 연구를 자극하였다. 당 분야의 최근의 관심은 또한 인산화되는 것으로 알려진 아미노산 잔기에서 많은 단백질에 대해 O-GlcNAc 변형이 발생한다는 관찰로부터 유래한다. 이러한 관찰과 일관되게, 인산화 수준의 증가는 O-GlcNAc 수준을 감소시키고, 반대로 O-GlcNAc 수준의 증가는 인산화 수준 감소와 상관관계가 있는 것으로 밝혀졌다. O-GlcNAc와 인산화 사이의 이러한 상호 관계를 "Yin-Yang 가설"이라고 하며, 효소 OGTase가 단백질로부터 인산기를 제거하는 작용을 하는 포스파타제와 기능적 복합체를 형성한다는 최근의 발견에 의해 강력한 생화학적 지지를 얻었다. 인산화와 마찬가지로, O-GlcNAc는 단백질 수명 동안 여러 번 제거되고 재접착될 수 있는 동적인 변형이다. 시사적으로, O-GlcNAcase를 코딩하는 유전자는 AD에 관련된 염색체 좌에 매핑되었다. 인간 AD 뇌에서 과인산화된 타우는 건강한 인간 뇌에서 발견되는 것보다 현저하게 낮은 O-GlcNAc 수준을 갖는다. 매우 최근에, AD에 영향을 받은 인간 뇌로부터 용해성 타우 단백질의 O-GlcNAc 수준이 건강한 뇌로부터의 그것보다 현저히 낮다는 것이 밝혀졌다. 또한, 질환을 가진 뇌로부터의 PHF는 O-GlcNAc 변형이 전혀 없는 것으로 제안되었다. 타우의 이러한 하이포글리코실화(hypoglycosylation)의 분자적 기초는 알려지지 않았지만, O-GlcNAc 처리에 관여하는 키나제의 증가된 활성 및/또는 효소 중 하나의 기능장애로부터 유래할 수 있다. 상기 후자의 관점을 뒷받침하는 것으로, PC-12 뉴런 세포 및 마우스의 뇌 조직 섹션 둘 모두에서, 비선택적 N-아세틸글루코사미니다제 억제제가 타우 O-GlcNAc 수준을 증가시키기 위해 사용되었으며, 그 결과 인산화 수준이 감소하는 것으로 관찰되었다. 게다가, 타우의 O-GlcNAc 변형은 타우 단량체(monomers)의 형태적(conformational) 특성을 교란시키지 않고 이의 응집을 직접적으로 억제하는 것으로 설명되었다. 이러한 집합적 결과는 O-GlcNAcase(OGA)의 작용을 억제하는 것과 같은, AD 환자에서 건강한 O-GlcNAc 수준을 유지함으로써, 타우의 과인산화 및 NFT의 형성을 포함하는 타우 과인산화의 연관된 모든 효과 및 하류 효과를 차단할 수 있음을 암시한다. 그러나, 리소좀 β-헥소사미니다제(lysosomal β-hexosaminidase)의 적절한 기능이 중요하기 때문에, O-GlcNAcase의 작용을 차단하는 AD의 치료를 위한 임의의 잠재적 치료 중재는 리소좀 헥소사미니다제 A 및 B 둘 모두의 수반되는 억제를 피해야 할 것이다.
헥소사민 생합성 경로의 알려진 특성인, O-GlcNAc 트란스퍼라제(OGTase)의 효소적 특성, 및 O-GlcNAc 및 인산화 사이의 상호 관계와 일관되게, 뇌에서 감소된 글루코스 이용가능성이 타우 과인산화를 유도한다는 것이 밝혀졌다. 글루코스 수송 및 대사의 점진적인 손상은 감소된 O-GlcNAc 및 타우(및 다른 단백질)의 과인산화를 유도한다. 따라서, O-GlcNAcase의 억제는 AD 또는 관련 신경퇴행성(neurodegenerative) 질환으로 고통 받는 환자뿐만 아니라 건강한 개체의 뇌 내에서 글루코스 대사의 연령-관련 손상을 보상해야 한다.
이러한 결과는 tau O-GlcNAc 수준을 조절하는 기전의 오작동이 NFT 및 연관된 신경퇴행의 형성에 매우 중요할 수 있다는 것을 시사한다. 치료적으로 유용한 중재로서 타우 과인산화를 차단하는 것에 대한 좋은 뒷받침은 인간 타우를 보유한(harboring) 형질 전환 마우스가 키나제 억제제로 치료될 때, 전형적인 운동 결함이 촉진되지 않으며, 다른 경우에는, 불용성 타우의 수준이 감소함을 보여주는 연구로부터 나온다. 이러한 연구는 타우 인산화 수준을 낮추는 것과 상기 질환의 쥐 모델(murine model)에서 AD-유사 행동 증상을 완화시키는 것 사이의 명확한 연관성을 제공한다.
O-GlcNAc로의 변형이 유해한 단백질 응집을 예방하는데 일반적인 기능을 가질 수 있다는 증거가 있다. 이는 파킨슨 병을 포함하는, 시뉴클레인병증(synucleinopathies)과 연관된 독성 응집 단백질인 타우 단백질 및 또한 단백질 알파-시뉴클레인에 대하여 직접적으로 입증되었다. 근위축성 측색 경화증(Tar DNA 결합 단백질-43(TDP-43) 및 수퍼옥시드-디스뮤타제Ⅰ(superoxide-dismutaseⅠ)(SOD-I)) 및 전측두엽 변성(frontotemporal lobar degeneration)(TDP-43)과 연관된 2 개의 다른 응집 단백질은 O-GlcNAc 변형을 운반하는 것으로 알려져있다. 이러한 결과는 OGA 억제제로 O-GlcNAcyl화를 증가시키는 것이 단백질 응집과 연관된 질병에 일반적으로 유익할 수 있음을 나타낸다.
또한 증가된 수준의 O-GlcNAc 단백질 변형이 허혈, 출혈(hemorrhage), 고혈량성 쇼크(hypervolemic shock) 및 칼슘 역설(calcium paradox)에 의해 유발된 스트레스를 포함한, 심장 조직에서 스트레스의 병원성 효과에 대항하는 보호를 제공한다는 것을 나타내는 많은 증거가 있다. 예를 들어, 글루코사민의 투여에 의한, 헥소사민 생합성 경로(hexosamine biosynthetic pathway: HBP)의 활성화는 허혈/재관류, 외상 출혈, 고혈량성 쇼크 및 칼슘 역설의 동물 모델에서 보호 효과를 나타내는 것으로 입증되었다. 또한, 강력한 증거는 이러한 심장 보호 효과가 상승된 수준의 단백질 O-GlcNAc 변형에 의해 매개된다는 것을 나타낸다. 또한 O-GlcNAc 변형이 파킨슨 병 및 관련 시뉴클레인병증, 및 헌팅턴 병(Huntington's disease)을 포함하는, 다양한 신경퇴행성 질환에서 역할을 한다는 증거가 있다.
인간은 글리코콘쥬게이트(glycoconjugates)로부터 말단 β-N-아세틸-글루코사민 잔기를 절단하는 효소를 코딩하는 3 개의 유전자를 갖는다. 이들 중 첫 번째는 효소 O-글리코단백질-2-아세트아미도-2-데옥시-β-D-글루코피라노시다제(O-GlcNAcase)를 코딩한다. O-GlcNAcase는 글리코시드 히드롤라제(glycoside hydrolases)의 패밀리 84의 구성원이다. O-GlcNAcase는 번역-후 변형된 단백질의 세린 및 트레오닌 잔기로부터 O-GlcNAc를 가수분해시켜 제거하는 작용을 한다. 많은 세포내 단백질 상에 O-GlcNAc의 존재와 일관되게, 효소 O-GlcNAcase는 II 형 당뇨병, AD 및 암을 포함하는 여러 질환의 병인에서 역할을 가지는 것으로 보인다. 비록 O-GlcNAcase가 이전에 단리되었지만, 약 20년이 경과한 후 단백질의 세린 및 트레오닌 잔기로부터 O-GlcNAc를 절단하는 작용에서 이의 생화학적 역할이 이해되었다. 보다 최근에는 O-GlcNAcase가 클로닝되고, 부분적으로 특성이 규명되었으며, 히스톤 아세틸트란스퍼라제(histone acetyltransferase)로서 추가의 활성을 갖는 것으로 제안되었다.
그러나, O-GlcNAcase를 포함한, 포유동물 글리코시다제의 기능을 차단하기 위한 억제제를 개발하는데 있어서 주요 난제는 고등 진핵생물의 조직에는 많은 기능적으로 관련된 효소들이 존재한다는 것이다. 따라서, 하나의 특정 효소의 세포 및 유기 생리학적 역할을 연구하는데 있어서 비-선택적 억제제의 사용은 복잡한 표현형이 이러한 기능적으로 관련된 효소의 수반되는 억제로부터 발생하기 때문에 복잡하다. β-N-아세틸글루코사미니다제의 경우, O-GlcNAcase 기능을 차단하는 작용을 하는 기존의 화합물은 비-특이적이며 리소좀 β-헥소사미니다제를 강력하게 억제하도록 작용한다.
저분자량 OGA 억제제는 예를 들어 국제 출원 WO 2008/025170 및 WO 2014/032187에 개시되어 있으며, 이는 본 발명의 화합물과 구조적으로 상이하다. 일부 구조적으로 유사한 요소를 갖는 추가의 화합물은 WO 2016/030443, US 3489757, US 3299067, WO 99/21850, WO 2005/110982 및 WO 2009/053373에 개시되어 있다. 그러나, 이들 화합물은 하기에 보다 상세하게 기재된 개선된 약리학적 특성을 나타내지 않았다.
현재, OGA 억제제는 시장에 출시되지 않았다. 따라서, OGA를 선택적으로 억제하고 약물 개발에서 높은 관련성이 있는 개선된 약리학적 특성을 제공하는 저분자량 분자가 필요하다.
본 발명은 유용한 특성을 가지는, 특히 약제의 제조에 사용될 수 있는 신규한 화합물을 제공한다는 목적을 가진다.
이와 관련하여, 혈장 단백질 결합(plasma protein binding: PPB)은 약리학적 표적 부위에서 적어도 부분적으로 비결합된, 따라서, 유효할 수 있는 약물 농도를 결정하기 때문에 약물 개발에서 중요한 차별화(differentiating) 요인이다. 에너지-의존적 과정(예: 운반자-매개 활성인 장기 흡수 또는 유출)이 없는 경우, 일단 정상 상태 평형(steady state equilibrium)에 도달하면, 혈장내 비결합된 약물 농도는 표적 조직(들)에서 비결합된 약물 농도와 동일한 것으로 고려될 수 있으며, 즉 상기 조직에서 비결합된 약물만이 표적 수용체와 결합하는데 이용가능하고 따라서 바람직한 약리학적 활성을 유도할 수 있다는 것은 잘-알려진 패러다임이다(Free drug theory (FDT) (Bohnert, T. et al. J. Pharmaceutical Sciences 2013, 102, 2953-2994). 결과적으로, 약리학적 작용을 담당하는 것이 약물의 유리 분획(free fraction)이기 때문에 높은 혈장 단백질 결합은 또한 효능에 부정적인 영향을 미칠 수 있다.
혈장 단백질 결합 정보를 사용하여 동물 및 인간에서 약동학적/약력학적(PKPD) 관계를 확립하기 위해 비결합이므로 효과적인 약물의 농도를 추정할 수 있다. 종에 걸친 혈장 단백질 결합의 정도는 PKPD 모델링에 중요한 정보를 제공하고 동물 모델 및 인간 사이의 번역 측면(translational aspects) 및/또는 효능 차이를 더 잘 이해하는데 도움이 된다.
본 발명에서, 술폭시민(sulfoximine) 기(group)의 도입은 화학식 (I)의 화합물에 대한 증가된 비결합 분율(감소된 PPB)을 초래한다. 또한, 본 발명의 바람직한 화합물은 인간을 포함한 여러 동물 종에 걸쳐 비결합된 분율의 낮은 변동성(variability)을 제공한다. 결과적으로, 조직 내 유리 약물 농도가 증가하여, 상이한 종에 걸쳐 측정가능한 유사한 효과를 갖는 높은 비결합된 뇌 농도(대용으로 뇌척수액 농도로 측정됨)를 직접 수득하며 이는 종에 걸쳐 비결합된 분획의 동일한 정도의 증가로 인해 종종 인간 PK의 예측성을 크게 향상시키고 유효 인간 투여량을 낮추는 결과를 초래한다(Liu et al. J. Med. Chem. 2014, 57, 8238).
놀랍게도 본 발명에 따른 화합물 및 이의 염은 매우 유용한 약리학적 특성을 갖는 것으로 밝혀졌다. 특히, 이들은 혈장에서 증가된 비결합, 즉 유리 분획물을 제공하는, 글리코시다제 억제제로서 작용한다. 또한, 본 발명에 따른 화합물 및 이의 염은 인간을 포함한 종에 걸쳐 혈장에서 증가된 유리 분획물을 일관되게 제공하며(낮은 종-간 변동성), 이는 약학적 개발 및 약물로서 이들의 적용에 이를 이상적이도록 만든다.
또한, 본 발명의 매우 바람직한 화합물은 실시예에 따른 측정에서 바람직한 마이크로솜 안정성 데이터를 나타낸다.
본 발명은 하기 화학식 (I)의 화합물, 및 이의 약학적으로 사용가능한 유도체, 용매화물, 염, 프로드러그, 토토머, 거울상이성질체, 라세미체 및 입체이성질체, 및 하나 이상의 H 원자가 D(deuterium, 중수소)로 대체된 화학식 (I)의 화합물 및 이의 모든 비율의 혼합물에 관한 것으로서,
상기에서
R은 1 내지 6 개의 탄소 원자를 갖는 직쇄(straight chain) 또는 분지형(branched) 알킬이고, 여기서 1 내지 5 개의 수소 원자는 Hal 또는 OH로 대체될 수 있고;
W는 CH 또는 N이며;
A는 하기 기 중 하나를 나타내고:
X는 N 또는 CR'''이며;
Y는 O, S, SO 또는 SO2이고;
R', R''는 각각 독립적으로 H, Hal 또는 1 내지 12 개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지형 알킬을 나타내며;
R''', R''''는 독립적으로 H, Hal, NR3R4, CHR3R4, OR3, CN 또는 1 내지 12 개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지형 알킬을 나타내고, 여기서 1 내지 3 개의 CH2-기는 O, NR3, S, SO, SO2, S(O)(NR3'), N(SO)R3', CO, COO, OCO, CONR3, NR3CO,
로부터 선택된 기로 대체될 수 있으며, 여기서 1 내지 5 개의 수소 원자는 Hal, NR3R4 또는 NO2로 또는 하기 기 중 하나로 대체될 수 있고:
또는 R''', R''''는 독립적으로 하기 기 중 하나를 나타내고:
R3, R4는 각각 독립적으로 H 또는 1 내지 12 개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지형 알킬기를 나타내며;
Q는 하기 기 중 하나를 나타내고:
Z1은 S, O, NR3이고;
Z2, Z3은 독립적으로 CR5 또는 N을 나타내며;
Z4는 N, CH, CON, COCH이고;
Z5는 NR8, CHR5, S(O)(NR3'), N(SO)R3', 이며
Z6은 CH2, CO, S(O)(NR3'), N(SO)R3', 이고;
Z7은 C(R3')2, S, O, NR3'이며;
s는 0 또는 1을 나타내고;
T는 N, CH 또는 CR7이며;
R3'은 H 또는 1 내지 12 개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지형 알킬기를 나타내고, 여기서 1 내지 3 개의 CH2-기는 SO2, CO, O로부터 선택된 기로 대체될 수 있고, 여기서 1 내지 5 개의 수소 원자는 Hal로 대체될 수 있으며;
R5, R6, R7은 독립적으로 H, Hal, NR3R4, NO2 또는 1 내지 12 개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지형 알킬을 나타내고, 여기서 1 내지 3 개의 CH2-기는 O, NR3, S, SO, SO2, S(O)(NR3'), N(SO)R3', CO, COO, OCO, CONR3, NR3CO
로부터 선택된 기로 대체될 수 있으며 여기서 1 내지 5 개의 수소 원자는 Hal, NR3R4, NO2, OR3, Het, Ar, Cyc로 또는 하기 기 중 하나로 대체될 수 있고:
또는 R5, R6, R7은 Ar, Het 또는 Cyc 또는 하기 기 중 하나를 나타낸다:
R8은 H 또는 1 내지 12의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지형 알킬을 나타내며, 여기서 1 내지 3 개의 CH2-기는 SO, SO2, S(O)(NR3'), N(SO)R3', CO, COO, OCO, CONR3, NR3CO, 및
로부터 선택된 기로 대체될 수 있고,
추가로 여기서 1 내지 5 개의 수소 원자는 CN, OR3, SR3, Hal, NR3R4, NO2로 또는 하기 기 중 하나로 대체될 수 있으며:
, 또는 R8은 하기 기 중 하나를 나타내고:
Hal은 F, Cl, Br 또는 I을 나타내며;
Het는 포화, 불포화 또는 방향족 고리를 나타내며, 모노시클릭 또는 비시클릭 또는 융합된(fused)-비시클릭이고 3- 내지 8-원을 가지며 N, O 및 S로부터 선택된 1 내지 4 개의 헤테로 원자를 포함하고, 이는 R5, Hal 및 OR3로부터 선택된 1 내지 3 개의 치환기로 치환될 수 있으며;
Ar은 6-원 카보시클릭 방향족 고리 또는 융합된 또는 비-융합된 비시클릭 방향족 고리 시스템을 나타내고, 이는 R5, OR3 및 Hal로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3 개의 치환기로 선택적으로 치환되며;
Cyc는 3 내지 8 개의 탄소 원자를 갖는 포화 또는 불포화 카보시클릭 고리를 나타내고, 이는 R5 또는 Hal 또는 OH로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3 개의 치환기로 선택적으로 치환되고;
m 및 n은 독립적으로 서로 0, 1, 2 또는 3을 나타내며,
t 및 q는 독립적으로 서로 0, 1, 2 또는 3을 나타내고, t + q ≥ 1이며
Z5 및 Z6 중 적어도 하나는 기 S(O)(NR3') 또는 N(SO)R3' 또는
이거나
또는
R''', R'''', R5, R6, R7 및 R8 중 적어도 하나는 하기로부터 선택된 술폭시민 기이거나 또는 이를 포함하며:
또는
R''', R'''', R5, R6, R7 및 R8 중 적어도 하나는 1 내지 12 개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지형 알킬기로부터 선택되고, 여기서 하나 이상의 CH2-기는 기 S(O)(NR3') 또는 N(SO)R3'또는 로 대체되며
추가의 CH2-기 및 H 원자는 R''', R'''', R5, R6, R7 및 R8의 정의에 따라 다른 기로 대체될 수 있고;
상기 하나 이상의 H 원자는 D(deuterium, 중수소)로 대체된다.
PCT/EP2017/054280 및 PCT/EP2017/054268에 개시된 하기 화합물은 덜 바람직하다:
구체적으로, 화학식 (I)은 하기 화학식 Ia 및 Ib의 2 개의 거울상이성질체를 포함한다:
상기에서 A, R, W, Q, n 및 m은 상기 주어진 의미를 갖는다.
본 발명은 또한 동일 또는 동일하지 않은 양으로, 같은(identical) 기 A, R, W, Q, n 및 m을 갖는, 상기 기재된 바와 같은 화합물 Ia 및 Ib를 포함하는 혼합물, 즉, 조성물에 관한 것이다.
명세서 전체에 걸쳐, 화학식 I, Ia 및 Ib에서 R은 바람직하게는 메틸이다. 화학식 I, Ia 및 Ib에서 지수(indices) m 및 n은 바람직하게는 동시에 1이다.
가장 바람직하게는, 화학식 I의 화합물은 화학식 A 및 B의 화합물이다:
T 및 m과 같은, 개별 기 및 지수가 화학식 I의 화합물에서 두 번 이상 나타나는 경우, 이들은 그 기의 각각의 정의에 따라 동일하거나 상이한 의미를 가질 수 있다.
본 발명의 바람직한 화합물은 바람직하게는 이들의 비-라세미 형태의, 단일 이성질체, 즉 부분입체이성질적으로(diasteromerically) 및 거울상이성질적으로(enantiomerically) 순수한 화합물 또는 각각의 부분입체이성질체 및 거울상이성질체의 부분입체이성질적으로 및 거울상이성질적으로 풍부한 혼합물이다. R이 메틸, 에틸, n-프로필 또는 이소-부틸과 같은, 1 내지 6 개의 탄소 원자를 갖는 비치환된 직쇄 또는 분지형 알킬인 경우, 기 R을 지니는 입체 중심(stereogenic center)에서 S-배열(configuration)이 바람직하다. 화학식 Ib 및 B가 매우 바람직하다.
추가의 바람직한 화학식 I의 화합물은 단일의 순수거울상(enantiopure) 또는 거울상이성질적으로 풍부한 부분입체이성질체, 즉 R기를 지니는 입체 중심이 S-배열을 갖고 화합물 내의 임의의 다른 입체 중심이 S- 또는 R-배열을 갖는 화합물이다.
일반적으로, R'과 같은 하나 이상의 바람직한 기 및 m 또는 n과 같은 지수를 포함하는 화학식 I의 화합물이 바람직하다. 화학식 I의 화합물은 이들이 함유한 기 또는 지수가 더 바람직할수록 더 바람직하다.
기 R8과 같은, 치환기가 헤테로원자(heteroatom)를 통해 분자의 나머지에 연결되는 경우, 각 기의 연결 원자는 바람직하게는 탄소 원자이거나 또는 각 기는 H이다.
본 발명은 또한 약제로서 화학식 (I)의 화합물의 용도에 관한 것이다.
본 발명의 의미에서, 화합물은 이의 모든 비율의 혼합물을 포함하는, 이의 약학적으로 사용가능한 유도체, 용매화물, 프로드러그, 토토머, 거울상이성질체, 라세미체 및 입체이성질체를 포함하는 것으로 정의된다.
상기 용어 "약학적으로 사용가능한 유도체(pharmaceutically usable derivatives)"는, 예를 들어, 본 발명에 따른 화합물의 염 및 또한 소위 프로드러그 화합물을 의미하는 것으로 여겨진다. 상기 화합물의 "용매화물(solvates)"이라는 용어는 상기 화합물 상에 불활성 용매 분자의 부가를 의미하는 것으로 여겨지며, 이는 그의 상호 인력(mutual attractive force)에 의해 형성된다. 용매화물은, 예를 들어, 일- 또는 이수화물 또는 알콕시드(alkoxides)이다. 본 발명은 또한 본 발명에 따른 화합물의 염의 용매화물을 포함한다. 상기 용어 "프로드러그(prodrug)"는, 예를 들어, 알킬 또는 아실기, 당 또는 올리고펩티드에 의해 변형되고 유기체 내에서 빠르게 절단되어 본 발명에 따른 효과적인 화합물을 형성하는 본 발명에 따른 화합물을 의미하는 것으로 여겨진다. 이들은 또한 본 발명에 따른 화합물의 생분해성(biodegradable) 중합체 유도체를 포함한다. 마찬가지로, 본 발명의 화합물은 예를 들어 에스테르, 카보네이트, 카바메이트, 우레아, 아미드 또는 포스페이트와 같은 임의의 바람직한 프로드러그의 형태일 수 있으며, 이 경우 실제로 생물학적으로 활성인 형태는 대사를 통해서만 방출된다. 인-비보에서 전환되어 생물 활성제(bioactive agent)(즉, 본 발명의 화합물)를 제공할 수 있는 임의의 화합물은 본 발명의 범위 및 사상 내에서 프로드러그이다. 다양한 형태의 프로드러그가 당해 기술분야에 잘 알려져 있다. 화학 물질이 체내에서 적절한 경우 바람직한 생물학적 효과를 이끌어 낼 수 있는 경우가 있다는 것-일부 상황에서는 훨씬 더 현저한 형태의 대사산물(metabolites)로 전환되는 것이 추가로 알려져 있다. 본 발명의 임의의 화합물로부터 대사에 의해 인-비보에서 전환된 임의의 생물학적으로 활성인 화합물은 본 발명의 범위 및 사상 내의 대사산물이다.
본 발명의 화합물은 순수한 E 또는 Z 이성질체로서 이들의 이중 결합 이성질체 형태로, 또는 이들 이중 결합 이성질체의 혼합물의 형태로 존재할 수 있다. 가능한 경우, 본 발명의 화합물은 토토머, 예를 들어 케토-엔올 토토머의 형태일 수 있다. 본 발명의 화합물의 모든 입체이성질체는, 혼합물 또는 순수한 또는 실질적으로 순수한 형태로 고려된다. 본 발명의 화합물은 임의의 탄소 원자에서 비대칭 중심(asymmetric centers)을 가질 수 있다. 결과적으로, 이는 이들의 라세미체 형태, 순수한 거울상이성질체 및/또는 부분입체이성질체의 형태 또는 이들 거울상이성질체 및/또는 부분입체이성질체의 혼합물 형태로 존재할 수 있다. 상기 혼합물은 입체이성질체를 임의의 바람직한 혼합 비율을 가질 수 있다. 따라서, 예를 들어, 하나 이상의 키랄 중심을 갖고 라세미체 또는 부분입체이성질체 혼합물로서 발생하는 본 발명의 화합물은 그 자체로 이들의 광학적으로 순수한 이성질체, 즉 거울상이성질체 또는 부분입체이성질체로 알려진 방법에 의해 분별될 수 있다. 본 발명의 화합물의 분리는 키랄 또는 비-키랄 상에서 컬럼 분리에 의해 또는 선택적으로 광학적으로 활성인 용매로부터의 재-결정화(re-crystallization)에 의해 또는 광학적으로 활성인 산 또는 염기를 사용하여 또는 광학적으로 활성인 시약(reagent), 예를 들어, 광학적으로 활성인 알코올에 의한 유도체화, 및 후속하여 라디칼의 제거에 의해 수행될 수 있다.
본 발명은 또한 예를 들어 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:10, 1:100 또는 1:1000의 비율의, 예를 들어, 두 부분입체이성질체의 혼합물인, 본 발명에 따른 화합물의 혼합물의 용도에 관한 것이다. 이들은 특히 바람직하게는 입체이성질체 화합물의 혼합물이다.
거울상이성질적으로 풍부한 혼합물은, 당업자에게 잘 알려진 방법에 의해 측정될 때, 10% 이상, 바람직하게는 50% 이상, 및 보다 바람직하게는 95% 초과의, 거울상이성질체 과잉(enantiomeric excess: EE)을 갖는 화학식 (I) 및 관련 화학식의 화합물을 나타낸다. 가장 바람직하게는 거울상이성질적으로 풍부한 혼합물은 98% 초과의 거울상이성질체 과잉을 갖는 화학식 (I) 또는 관련 화학식의 화합물을 나타낸다.
화합물, 특히 본 발명에 따른 화합물을 정의하기 위해 본원에 사용된 명명법(nomenclature)은, 일반적으로 화학 화합물 및 특히 유기 화합물에 대한 IUPAC-조직의 규칙에 기초한다. 본 발명의 화합물은 프로그램 AutoNom 2000 또는 ACD Lab 버전 12.01 또는 Instant JChem 버전: 15.12.7.0에 사용된 표준에 따라 명명되었다. 입체화학 (S) 또는 (R)의 결정은 당업자에게 잘 알려진 명명법의 표준 규칙을 사용하여 수행된다. 발명의 설명 또는 청구범위에 달리 지시되지 않는 한, 본 발명의 상기 화합물의 설명을 위해 지시된 용어는, 항상 하기 의미를 갖는다:
상기 용어 "비치환된(unsubstituted)"은 상응하는 라디칼, 기 또는 모이어티가 치환기를 갖지 않음을 의미한다. 상기 용어 "치환된(substituted)"은 상응하는 라디칼, 기 또는 모이어티가 하나 이상의 치환기를 갖는 것을 의미한다. 라디칼이 복수의 치환기를 갖고 다양한 치환기의 선택이 특정되는 경우, 상기 치환기는 서로 독립적으로 선택되며 동일할 필요는 없다. 라디칼이 복수의 특정-지정된 치환기를 갖더라도 이러한 치환기의 표현은 서로 상이할 수 있다(예를 들어, 메틸 및 에틸). 따라서 본 발명의 임의의 라디칼에 의한 다중 치환은 동일하거나 상이한 라디칼을 포함할 수 있음을 이해해야 한다. 그러므로, 개별 라디칼이 화합물 내에서 여러 번 발생하는 경우, 상기 라디칼은 서로 독립적으로, 지시된 임의의 의미를 채택할 수 있다.
용어 "알킬(alkyl)"또는 "알킬기(alkyl group)"는 분지형 또는 직쇄일 수 있고 바람직하게는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10 개의 탄소 원자를 갖는 시클릭이 아닌(acyclic) 포화 또는 불포화 탄화수소 라디칼, 즉 C1-C10-알카닐(alkanyls)을 의미한다. 적절한 알킬 라디칼의 예는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, 1,1-, 1,2- 또는 2,2-디메틸프로필, 1-에틸프로필, 1-에틸-1-메틸프로필, 1-에틸-2-메틸프로필, 1,1,2- 또는 1,2,2-트리메틸프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, 1-, 2- 또는 3-메틸부틸, 1,1-, 1,2-, 1,3-, 2,2-, 2,3- 또는 3,3-디메틸부틸, 1- 또는 2-에틸부틸, n-펜틸, 이소-펜틸, 네오-펜틸, tert-펜틸, 1-, 2-, 3- 또는 -메틸-펜틸, n-헥실, 2-헥실, 이소헥실, n-헵틸, n-옥틸, n-노닐, n-데실, n-운데실, n-도데실, n-테트라데실, n-헥사데실, n-옥타데실, n-이코사닐, n-도코사닐이다. 본 발명의 특정 구체예에서, 1 개 이상, 바람직하게는 1 내지 3 개의 CH2 기는 상기 및 하기 제공된 정의에 따라 다른 2가 기(divalent groups)로 대체될 수 있다. 특정 구체예에서, 알킬의 H 원자는 Cyc로 대체될 수 있다.
본 발명의 일 구체예에서, 알킬은 1 내지 10 개의 C 원자를 갖는 비분지형 또는 분지형 알킬을 나타내며, 여기서 1 내지 7 개의 H 원자는 서로 독립적으로 Hal로 대체될 수 있다. 알킬의 바람직한 구체예는 1-6 개의 C 원자를 갖는 비분지형 또는 분지형 알킬을 나타내며, 여기서 1 내지 4 개의 원자는 서로 독립적으로 Hal로 대체될 수 있다. 본 발명의 보다 바람직한 구체예에서, 알킬은 1 내지 4 개의 C 원자를 갖는 비분지형 또는 분지형 알킬을 나타내며, 여기서 1 내지 3 개의 H 원자는 서로 독립적으로 Hal, 특히 F 및/또는 Cl로 대체될 수 있다. 알킬은 1 내지 6 개의 C 원자를 갖는 비분지형 또는 분지형 알킬을 나타내는 것이 가장 바람직하다. 매우 바람직하게는 C1-4-알킬이다. C1-4-알킬 라디칼은 예를 들어 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, 이소부틸, tert-부틸, sec-부틸, tert-부틸, 플루오로메틸, 디플루오로메틸, 트리플루오로메틸, 펜타플루오로에틸, 1,1,1-트리플루오로에틸 또는 브로모메틸, 특히 메틸, 에틸, 프로필 또는 트리플루오로메틸이다. 알킬의 각각의 표기(denotation)는 본 발명의 임의의 라디칼에서 서로 독립적인 것으로 이해해야 한다.
본 발명의 목적을 위한 상기 용어 "시클로알킬(cycloalkyl)" 또는 " Cyc"는 3 내지 20 개, 바람직하게는 3 내지 12 개, 보다 바람직하게는 3 내지 9 개의 탄소 원자를 포함하는, 1 내지 3 개의 고리를 갖는, 포화 및 부분 불포화 비-방향족 시클릭 탄화수소 기/라디칼을 의미한다. 상기 시클로알킬 라디칼은 또한 비-(bi-) 또는 폴리시클릭(polycyclic) 시스템의 일부일 수 있으며, 예를 들어, 상기 시클로알킬 라디칼은 임의의 가능하고 바람직한 고리 구성원(members)(들)에 의해 본원에서 정의된 바와 같은 아릴, 헤테로아릴 또는 헤테로시클릴 라디칼에 융합된다. 일반식(general formula) (I)의 화합물에 대한 결합은 시클로알킬 라디칼의 임의의 가능한 고리 구성원을 통해 일어날 수 있다. 적절한 시클로알킬 라디칼의 예는 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로헵틸, 시클로옥틸, 시클로데실, 시클로헥세닐, 시클로펜테닐 및 시클로옥타디에닐(cyclooctadienyl)이다.
본 발명의 일 구체예에서, Cyc는 3 내지 7 개의 C 원자를 갖는 시클로알킬을 나타내며, 여기서 1 내지 4 개의 H 원자는 서로 독립적으로 Hal로 대체될 수 있다. 바람직하게는 C3-C7-시클로알킬이다. 보다 바람직하게는 C4-C7-시클로알킬이다. 가장 바람직하게는 C5-C7-시클로알킬, 즉 시클로펜틸, 시클로헥실 또는 시클로헵틸, 매우 바람직하게는 시클로헥실이다. Cyc의 각각의 표기는 본 발명의 임의의 라디칼에서 서로 독립적인 것으로 이해해야 한다.
본 발명의 목적을 위한 상기 용어 "Ar", "아릴(aryl)" 또는 "카보아릴(carboaryl)"은 3 내지 14 개, 바람직하게는 3 내지 12 개, 보다 바람직하게는 4 내지 12 개, 가장 바람직하게는 5 내지 10 개, 매우 바람직하게는 6 내지 8 개의 탄소 원자를 갖는 모노- 또는 폴리시클릭 방향족 탄화수소 시스템을 의미하며, 이는 선택적으로 치환될 수 있다. 상기 용어 "Ar" 또는 "아릴"은 또한 방향족 고리가 비-(bi-) 또는 폴리시클릭의 포화된, 부분 불포화 및/또는 방향족 시스템의 일부, 예를 들어 임의의 바람직하고 가능한 아릴 라디칼의 고리 구성원을 통하여 본원에 정의된 바와 같은 방향족 고리가 아릴, 시클로알킬, 헤테로아릴 또는 헤테로시클릴기에 융합된 시스템을 포함한다. 일반식 (I)의 화합물에 대한 결합은 상기 아릴 라디칼의 임의의 가능한 고리 구성원을 통해 일어날 수 있다. 적절한 아릴 라디칼의 예는 페닐, 비페닐(biphenyl), 나프틸, 1-나프틸, 2-나프틸 및 안트라세닐이지만, 또한 인다닐, 인데닐 또는 1,2,3,4-테트라히드로나프틸이다. 본 발명의 바람직한 카보아릴은 선택적으로 치환된 페닐, 나프틸 및 비페닐, 보다 바람직하게는 6 내지 8 개의 C 원자를 갖는 선택적으로 치환된 모노시클릭 카보아릴, 가장 바람직하게는 선택적으로 치환된 페닐이다.
Ar 및 아릴은 바람직하게는 하기 기로부터 선택된다:페닐, o-, m- 또는 p-톨릴(tolyl), o-, m- 또는 p-에틸페닐, o-, m- 또는 p-프로필페닐, o-, m- 또는 p-이소프로필페닐, o-, m- 또는 p-tert.-부틸페닐, o-, m- 또는 p-히드록시페닐, o-, m- 또는 p-메톡시페닐, o-, m- 또는 p-에톡시페닐, o-, m- 또는 p-플루오로-페닐, o-, m- 또는 p-브로모페닐, o-, m- 또는 p-클로로페닐, o-, m- 또는 p-술폰아미도페닐, o-, m- 또는 p-(N-메틸-술폰아미도)페닐, o-, m- 또는 p-(N,N-디메틸-술폰아미도)-페닐, o-, m- 또는 p-(N-에틸-N-메틸-술폰아미도)페닐, o-, m- 또는 p-(N,N-디에틸-술폰아미도)-페닐, 특히 2,3-, 2,4-, 2,5-, 2,6-, 3,4- 또는 3,5-디플루오로페닐, 2,3-, 2,4-, 2,5-, 2,6-, 3,4- 또는 3,5-디클로로페닐, 2,3-, 2,4-, 2,5-, 2,6-, 3,4- 또는 3,5-디브로모페닐, 2,3,4-, 2,3,5-, 2,3,6-, 2,4,6- 또는 3,4,5-트리클로로페닐, 2,4,6-트리메톡시페닐, 2-히드록시-3,5-디클로로페닐, p-요오도페닐, 4-플루오로-3-클로로페닐, 2-플루오로-4-브로모페닐, 2,5-디플루오로-4-브로모페닐, 3-브로모-6-메톡시페닐, 3-클로로-6-메톡시페닐 또는 2,5-디메틸-4-클로로페닐.
추가의 치환에 관계없이, Het은 바람직하게는 2- 또는 3-퓨릴, 2- 또는 3-티에닐, 1-, 2- 또는 3-피롤릴, 1-, 2, 4- 또는 5-이미다졸릴, 1-, 3-, 4- 또는 5-피라졸릴, 2-, 4- 또는 5-옥사졸릴, 3-, 4- 또는 5-이속사졸릴, 2-, 4- 또는 5-티아졸릴, 3-, 4- 또는 5-이소티아졸릴, 2-, 3- 또는 4-피리딜, 2-, 4-, 5- 또는 6-피리미디닐, 더욱 바람직하게는 1,2,3-트리아조M(triazoM)-, -4- 또는 -5-일, 1,2,4-트리아조-, -3- 또는 5-일, 1- 또는 5-테트라졸일, 1,2,3-옥사디아졸-4- 또는 -5-일, 1,2,4-옥사디아졸-3- 또는-5-일, 1,3,4-티아디아졸-2- 또는 -5-일, 1,2,4-티아디아졸-3- 또는 -5-일, 1,2,3-티아디아졸-4- 또는 -5-일, 3- 또는 4-피리다지닐, 피라지닐, 1-, 2-, 3-, 4-, 5-, 6- 또는 7-인돌릴, 4- 또는 5-이소-5인돌릴(5i-ndolyl), 인다졸릴, 1-, 2-, 4- 또는 5-벤즈이미다졸릴, 1-, 3-, 4-, 5-, 6- 또는 7-벤조-피라졸릴, 2-, 4-, 5-, 6- 또는 7-벤즈옥사졸릴, 3-, 4-, 5-, 6- 또는 7-벤즈이속사졸릴, 2-, 4-, 5-, 6- 또는 7-벤조티아졸릴, 2-, 4-, 5-, 6- 또는 7-벤즈이소티아졸릴, 4-, 5-, 6- 또는 7-벤즈-2,1,3-옥사디아졸릴, 2-, 3-, 4-, 5-, 6-, 7- 또는 8-퀴놀릴, 1-, 3-, 4-, 5-, 6-, 7- 또는 8-이소퀴놀릴, 3-, 4-, 5-, 6-, 7- 또는 8-신놀리닐(cinnolinyl), 2-, 4-, 5-, 6-, 7- 또는 8-퀴나졸리닐, 5- 또는 6-퀴녹살리닐, 2-, 3-, 5-, 6-, 7- 또는 8-2H-벤조-1,4-옥사지닐, 더욱 바람직하게는 1,3-벤조디옥솔-5-일, 1,4-벤조디옥산-6-일, 2,1, 3-벤조티아디아졸-4-, -5-일 또는 2,1,3-벤즈옥사디아졸-5-일, 아자비시클로-[3.2.1]옥틸 또는 디벤조푸라닐을 나타낸다.
상기 헤테로시클릭 라디칼은 또한 부분적으로 또는 완전히 수소화될(hydrogenated) 수 있다.
추가 치환과 관계없이, Het은 또한 바람직하게는, 2,3-디히드로-2-, -3-, -4- 또는 -5-퓨릴, 2,5-디히드로-2-, -3-, -4- 또는 5-퓨릴, 테트라-히드로-2- 또는 -3-퓨릴, 1,3-디옥솔란-4-일, 테트라히드로-2- 또는 -3-티에닐, 2,3-디-히드로-1-, -2-, -3-, -4- 또는 -5-피롤릴, 2,5-디히드로-1-, -2-, -3-, -4- 또는 -5-피롤릴, 1-, 2- 또는 3-피롤리디닐, 테트라히드로-1-, -2- 또는 -4-이미다졸릴, 2,3-디히드로-1-, -2-, -3-, -4- 또는 -5-피라졸릴, 테트라히드로-1-, -3- 또는 -4-피라졸릴, 1,4-디히드로-1-, -2-, -3- 또는 -4-피리딜, 1,2,3,4-테트라히드로-1-, -2-, -3-, -4-, -5- 또는 -6-피리딜, 1-, 2-, 3- 또는 4-피페리디닐, 2-, 3- 또는 4-모르폴리닐, 테트라히드로-2-, -3- 또는 -4-피라닐, 1,4-디옥사닐, 1,3-디옥산-2-, -4- 또는 -5-일, 헥사히드로-1-, -3- 또는 -4-피리다지닐, 헥사히드로-1-, -2-, -4- 또는 -5-피리미디닐, 1-, 2- 또는 3-피페라지닐, 1,2,3,4-테트라히드로-1-(-2-,-3-,-4-,-5-,-6-,-7- 또는 -8-퀴놀릴, 1,2,3,4-테트라-히드로-1-, -2-, -3-, -4-, -5-, -6-, -7- 또는 -8-이소퀴놀릴, 2-, 3-, 5-, 6-, 7- 또는 8-3,4-디히드로-2H-벤조-1,4-옥사지닐, 더욱 바람직하게는 2,3-메틸렌-디옥시페닐, 3,4-메틸렌디옥시페닐, 2,3-에틸렌디옥시페닐, 3,4-에틸렌디옥시페닐, 3,4-(디플루오로메틸렌디옥시)페닐, 2,3-디히드로-벤조퓨란-5- 또는 6-일, 2,3-(2-옥소메틸렌디옥시)페닐 또는 또한 3,4-디-히드로-2H-1,5-벤조디옥세핀-6- 또는 -7-일, 더욱 바람직하게는 2,3-디히드로벤조퓨라닐, 2,3-디히드로-2-옥소푸라닐, 3,4-디히드로-2-옥소-1H-퀴나졸리닐, 2,3-디히드로벤즈옥사졸릴, 2-옥소-2,3-디히드로벤즈옥사졸릴, 2,3-디히드로벤즈이미다졸릴, 1,3-디히드로인돌, 2-옥소-1,3-디히드로인돌 또는 2-옥소-2,3-디히드로벤즈이미다졸릴을 나타낼 수 있다.
Het은 바람직하게는 피페리디닐, 4-히드록시피페리디닐, 피페라지닐, 4-메틸피페라지닐, 피롤리디닐, 모르폴리닐, 디히드로-피라졸릴, 디히드로-피리딜, 디히드로피라닐, 퓨릴, 티에닐, 피롤릴, 이미다졸릴, 피라졸릴, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 티아졸릴, 이소티아졸릴, 피리딜, 피리미디닐, 트리아졸릴, 테트라졸릴, 옥사디아졸릴, 티아디아졸릴, 피리다지닐, 피라지닐, 퀴놀릴, 이소퀴놀릴, 벤즈이미다졸릴, 벤조트리아졸릴, 인돌릴, 벤조-1,3-디옥솔릴, 2,3-디히드로-벤조[1,4]디옥시닐, 인다졸릴 또는 벤조티아디아졸릴을 나타내며, 이들 각각은 비치환 또는 일-, 이- 또는 삼치환(trisubstituted)된다.
본 발명의 목적을 위한 상기 용어 "할로겐(halogen)", "할로겐 원자(halogen atom)", "할로겐 치환기(halogen substituent)" 또는 "Hal"은 하나 또는, 적절한 경우, 복수의 불소(F, 플루오로), 브롬(Br, 브로모), 염소(Cl, 클로로) 또는 요오드(I, 요오도) 원자를 의미한다. "디할로겐(dihalogen)", "트리할로겐(trihalogen)" 및 "퍼할로겐(perhalogen)"이라는 명칭은 각각 2, 3 및 4 개의 치환기를 의미하며, 여기서 각각의 치환기는 불소, 염소, 브롬 및 요오드로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택될 수 있다. 할로겐은 바람직하게는 불소, 염소 또는 브롬 원자를 의미한다. 특히 할로겐이 알킬(할로알킬) 또는 알콕시기(예를 들어 CF3 및 CF3O)로 치환될 때, 불소 및 염소이 더 바람직하다. Hal의 각각의 표기는 본 발명의 임의의 라디칼에서 서로 독립적인 것으로 이해해야 한다.
R은 바람직하게는 1 내지 4 개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 알킬이고, 여기서 1 내지 5 개의 수소 원자는 Hal 또는 OH로 대체될 수 있다. 보다 바람직하게는 R은 메틸 또는 에틸이고, 가장 바람직하게는 메틸이다.
W는 바람직하게는 N이다.
R3'은 바람직하게는 H, 메틸, 에틸, 2-히드록시에틸 또는 2-메톡시에틸을 나타낸다.
바람직하게는, 기 S(O)(NR3')는 하기로부터 선택된다:
*.
바람직하게는, 기 N(SO)R3'는 하기로부터 선택된다:
.
바람직하게는 하기 기 중 하나를 나타낸다:
상기에서 R' 및 R''는 상기 주어진 의미를 갖는다.
A가 R''' 및 X가 상기 주어진 의미를 갖는 를 나타내면, 이는 바람직하게는
또는 이다.
A가 R', R'' 및 X가 상기 주어진 의미를 갖는 를 나타내면, 이는 바람직하게는
또는 또는 이다.
A가 R', X 및 Y가 상기 주어진 의미를 갖는 를 나타내면, 이는 바람직하게는
또는 이다.
A는 특히 바람직하게는 하기 기 중 하나이다:
Q는 바람직하게는 하기 기 중 하나이다:
상기에서 T, Z5, Z6, R5, R6 및 R7은 상기 주어진 의미를 가진다.
Q는 특히 바람직하게는 하기 기 중 하나이다:
상기 R3'는 상기 주어진 의미를 가지며, 바람직하게는 메틸, 에틸, 2-히드록시에틸 또는 2-메톡시에틸이다.
상기 R5, R6 및 R7은 바람직하게는 독립적으로 H, SO2CH3, SO2CH2CH3, SO2CH2CH2OH, SO2CH2CH2OCH3, S(O)(NR3')CH3, S(O)(NR3')CH2CH3, S(O)(NR3')CH2CH2OH, S(O)(NR3')CH2CH2OCH3, N(SO)R3'CH3, N(SO)R3'CH2CH3, N(SO)R3'CH2CH2OH, N(SO)R3'CH2CH2OCH3,
Hal, NR3R4, NO2, 페닐, 2-, 3- 또는 4-히드록시 또는 메톡시페닐, 알킬, 바람직하게는 메틸, 에틸, 이소프로필, 이소부틸, tert-부틸, CF3, 알콕시 (O알킬), 바람직하게는 메톡시 또는 에톡시, 히드록시알킬렌, 바람직하게는 CH2OH, CH2CH2OH, 알콕시알킬렌 바람직하게는 CH2CH2OCH3, COOH, COO알킬, 바람직하게는 COOCH3, COOCH2CH3, CONH알킬, 바람직하게는 CONHCH3, CONHCH2CH3, CONH이소프로필, CONH시클로헥실, CONH2, CON(CH3)2, NHCO알킬, 바람직하게는 NHCOCH3, NHCOCH2CH3, NHCO프로필, NHCO이소프로필, NHCO시클로프로필, NHCO-4-클로로-페닐, NHCH2CH3, NHCH2CH2CH3, NHCOCH2CH2OH, CO-N-모르폴리닐, CON(CH3)CH2CH2N(CH3)2, CO-1-피페리디닐, CO-4-히드록시-1-피페리디닐, CO-1-피페라지닐, CO-4-메틸-1-피페라지닐, CH2-N-모르폴리닐, CH2N(H)COCH3, CH2N(CH3)COCH3, CH2NH2, NH2, CH(OH)CH3, CH(OR3)CH3 또는
으로부터 선택된 기이며,
상기에서 t + q는 2 또는 3이고, 바람직하게는
*
으로부터 선택된 기이다.
바람직하게는, 상기 기 R''', R'''', R5, R6 및 R7 중 하나는 하기로부터 선택된 기이다:
.
바람직하게는 기 R''', R'''', R5, R6 및 R7 중 하나만이 기 S(O)(NR3'), N(SO)R3', 를 포함하는 화학식 I의 화합물이다.
더욱 바람직하게는 기 R5, R6, 및 R7 중 하나가 기 S(O)(NH), S(O)(NR3') 또는 N(SO)R3',
를 포함하는 한편, 이들 기 중 나머지는 H 또는 메틸을 나타내는 화학식 I의 화합물이다.
R8은 바람직하게는 CON(SO)R3'CH3, CON(SO)R3'CH2CH3, CON(SO)R3'CH2CH2OH, CON(SO)R3'CH2CH2OCH3, S(O)(NH)CH3, S(O)(NR3')CH3, S(O)(NR3')CH2CH3, S(O)(NR3')CH2CH2OH, S(O)(NR3')CH2CH2OCH3,
으로부터 선택된 기이며, 더욱 바람직하게는 상기 R3'은 H 또는 메틸이다.
X는 바람직하게는 N 또는 CH를 나타낸다.
Y는 바람직하게는 O 또는 S이다.
R', R''은 각각 독립적으로 바람직하게는 H, 메틸 또는 에틸을 나타낸다. 보다 바람직하게는 R', R'' 둘 모두 동시에 H이거나 또는 상기 기 중 하나가 H이고 다른 기는 1 내지 12 개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지형 알킬, 보다 바람직하게는 메틸 또는 에틸인 화학식 I의 화합물이다.
T는 바람직하게는 N 또는 CH, 가장 바람직하게는 N이다.
Z1은 바람직하게는 S 또는 NH이다.
Z2, Z3는 바람직하게는 독립적으로 CH 또는 N을 나타낸다.
Z4는 바람직하게는 N 또는 CH이다.
Z5는 바람직하게는 S(O)(NR3'), N(SO)R3', 더욱 바람직하게는
이다.
Z6는 바람직하게는 CH2, CO 또는 이다.
Z7은 바람직하게는 CH2, S, O, NH이다. Z7가 S, O, NR3'라면, t 및 q는 각각 1이거나 또는 t 및 q 중 하나는 1이고 다른 하나는 2를 나타낸다.
가장 바람직하게는, t 및 q는 동시에 1을 나타낸다.
Z5 및 Z6 중 하나 이상은 기 로부터 선택되거나
또는
R''', R'''', R5, R6, R7 및 R8 중 하나 이상은 하기로부터 선택되는 술폭시민 기이거나 이를 포함하며:
또는
R''', R'''', R5, R6, R7 및 R8 중 하나 이상은 1 내지 12 개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지형 알킬기로부터 선택되고, 상기 하나 이상의 CH2-기는 기 로 대체될 수 있으며
R3', Z7, t, q는 상기 정의된 바와 같은,
화학식 (I)의 화합물, 및 이의 약학적으로 사용가능한 유도체, 용매화물, 염, 프로드러그, 토토머, 거울상이성질체, 라세미체 및 입체이성질체, 및 하나 이상의 H 원자가 D (중수소)로 대체되는, 화학식 (I)의 화합물 및 이의 모든 비율의 혼합물이 바람직하다.
A는 바람직하게는 하기 기 중 하나로부터 선택되며:
상기 Q는 바람직하게는 하기 기 중 하나로부터 선택되고:
Z5 및 Z6 중 하나 이상은 하기 기로부터 선택되거나
또는
R''', R'''', R5, R6, R7 및 R8 중 하나 이상은 하기로부터 선택된 술폭시민 기이거나 이를 포함하거나:
또는
R''', R'''', R5, R6, R7 및 R8 중 하나 이상은 1 개 내지 12 개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지형 알킬기로부터 선택되며, 여기서 하나 이상의 CH2-기는 기 로 대체될 수 있고
X, Y, R', R'', R''', R3', R7, Z5, Z6, Z7, T, t, q는 상기 정의된 바와 같은,
화학식 (I)의 화합물, 및 이의 약학적으로 사용가능한 유도체, 용매화물, 염, 프로드러그, 토토머, 거울상이성질체, 라세미체 및 입체이성질체, 및 하나 이상의 H 원자가 D (중수소)로 대체되는, 화학식 (I)의 화합물 및 이의 모든 비율의 혼합물이 더욱 바람직하다.
특히 바람직한 일 구체예에서, 화학식 (C)의 화합물, 및 이의 약학적으로 사용가능한 유도체, 용매화물, 염, 프로드러그, 토토머, 거울상이성질체, 라세미체 및 입체이성질체, 및 하나 이상의 H 원자가 D (중수소)로 대체되는, 화학식 (I)의 화합물 및 이의 모든 비율의 혼합물은 하기 주어진 바와 같이 정의되며:
상기에서
A'는 하기 기 중 하나를 나타내고:
T'는 N, CH이며;
R7'은 1 개 내지 12 개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지형 알킬을 나타내고, 여기서 1 내지 3 개의 CH2-기는 하기로부터 선택된 기로 대체될 수 있으며
여기서 1 내지 5 개의 수소 원자는 Hal, NR3R4, NO2, OR3, Het, Ar, Cyc로 대체될 수 있거나, 또는 R7'은 다음을 나타내고:
R', R3', R3, R4, Hal, Het, Ar 및 Cyc는 상기 정의된 바와 같다.
추가적으로 특히 바람직한 일 구체예에서, 화학식 (D)의 화합물, 및 이의 약학적으로 사용가능한 유도체, 용매화물, 염, 프로드러그, 토토머, 거울상이성질체, 라세미체 및 입체이성질체, 및 하나 이상의 H 원자가 D (중수소)로 대체되는, 화학식 (I)의 화합물 및 이의 모든 비율의 혼합물은 하기 주어진 바와 같이 정의되며:
상기에서
R', R7' 및 T'은 상기 정의된 바와 같다.
추가적으로 특히 바람직한 일 구체예에서, 화학식 (E)의 화합물, 및 이의 약학적으로 사용가능한 유도체, 용매화물, 염, 프로드러그, 토토머, 거울상이성질체, 라세미체 및 입체이성질체, 및 하나 이상의 H 원자가 D (중수소)로 대체되는, 화학식 (I)의 화합물 및 이의 모든 비율의 혼합물은 하기 주어진 바와 같이 정의되며:
상기에서
R7'은 상기 정의된 바와 같다.
추가적으로 특히 바람직한 일 구체예에서, 화학식 (F)의 화합물, 및 이의 약학적으로 사용가능한 유도체, 용매화물, 염, 프로드러그, 토토머, 거울상이성질체, 라세미체 및 입체이성질체, 및 하나 이상의 H 원자가 D (중수소)로 대체되는, 화학식 (I)의 화합물 및 이의 모든 비율의 혼합물은 하기 주어진 바와 같이 정의되며:
상기에서
R7' 및 T'는 상기 정의된 바와 같다.
바람직하게, R7'은 하기 기로부터 선택된다:
가장 바람직하게, R7'는 하기 기로부터 선택된다:
명세서 및 청구범위 전체에 걸쳐, COO, CONR3, 와 같은 개별적인 기는 화학식 I의 화합물의 나머지에 임의의 연결 원자를 통해 부착될 수 있으며, 즉 본 명세서에 제시된 바와 같이 화학식 I의 화합물의 각각의 부분은 개별 그룹의 상부의 우측 또는 좌측 또는 하부에 부착될 수 있다.
따라서, 본 발명의 요지는 상술한 라디칼 중 하나 이상이 상기 기재한 바와 같이, 임의의 의미를 가지며, 임의의 바람직한 구체예를 특별히 실현하는 약제로서 화학식 (I)의 화합물에 관한 것이다. 화학식 (I), 이의 하위-화학식 또는 다른 라디칼의 임의의 구체예와 관련하여 명시적으로 특정되지 않은, 라디칼은 본 발명의 문제점을 해결하기 위해 하기에 개시된 바와 같이 화학식 (I)에 따른 임의의 각각의 표기를 나타내는 것으로 해석되어야 한다. 이는 상술한 라디칼이, 발견된 문맥과 관계없이, 임의의 바람직한 구체예를 포함하나, 이에 제한되지 않는, 본 명세서의 이전 또는 이후 과정에서 각각 기재된 바와 같은 모든 지정된 의미를 채택할 수 있음을 의미한다. 특정 라디칼의 임의의 구체예는 하나 이상의 다른 라디칼의 임의의 구체예와 조합될 수 있음을 특히 이해해야 한다.
본 발명의 하기 구체예 A 및 B가 특히 바람직하다:
구체예 A:
하기 단계에 의해 수득가능한 화합물:
a) 라세미 5-(1-(피페라진-1-일)에틸)벤조[d]티아졸의 키랄 분해(chiral resolution), 여기서 5-(1-(피페라진-1-일)에틸)벤조[d]티아졸은 에탄올 중의 D-디-p-아니소일타르타르산으로 처리되며, 형성된 고체 D-디-p-아니소일타르타르산 염이 단리된 후, 염기를 갖는 상기 염을 유리 거울상이성질적으로 풍부 또는 순수한 피페라진 염기로 변환시키는 단계,
b) 실시예에 기재된 방법 E에 따라 Phenomenex Lux 아밀로오스-1 컬럼 상에서 키랄 SFC 크로마토그래피에 의한 라세미 2-클로로-5-(메틸술피닐)피리미딘의 키랄 분해, 이에 의해 2-클로로-5-(메틸술피닐)피리미딘의 두 용리(eluting) 거울상이성질체 중 첫 번째는 거울상이성질적으로 풍부 또는 순수한 물질로서 얻어지며, 이 물질은 이 후 MgO, 로듐(II)아세테이트 이량체(Rh2(OAc)4) 및 (디아세톡시요오도)벤젠(PhI(OAc)2)의 존재 하에 트리플루오로아세트아미드와 반응하여 N-((2-클로로피리미딘-5-일)(메틸)(옥소)-λ6-술파닐리덴)-2,2,2-트리플루오로아세트아미드의 상응하는 거울상이성질적으로 풍부 또는 순수한 거울상이성질체를 생산하는 단계,
c) 염기의 존재 하에 단계 a)에서 얻어진 거울상이성질적으로 풍부 또는 순수한 피페라진 염기와 단계 b)에서 얻어진 N-((2-클로로피리미딘-5-일)(메틸)(옥소)-λ6-술파닐리덴)-2,2,2-트리플루오로아세트아미드의 거울상이성질적으로 풍부 또는 순수한 거울상이성질체와의 반응, 이렇게 얻어진 생성물의 단리에 이어진 이의 탈보호(deprotection)에 의해, (2-(4-(1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(이미노)(메틸)-λ6-술파논의 거울상이성질적으로 풍부 또는 순수한 단일의 부분입체이성질체를 얻는 단계.
구체예 B:
하기 단계에 의해 수득가능한 화합물:
a) 라세미 5-(1-(피페라진-1-일)에틸)벤조[d]티아졸의 키랄 분해, 여기서 5-(1-(피페라진-1-일)에틸)벤조[d]티아졸은 에탄올 중의 D-디-p-아니소일타르타르산으로 처리되고 여기서 형성된 고체 D-디-p-아니소일타르타르산 염은 단리된 후 염기를 갖는 상기 염을 유리 거울상이성질적으로 풍부 또는 순수한 피페라진 염기로 변환시키는 단계,
b) 실시예에 기재된 방법 E에 따라 Phenomenex Lux 아밀로오스-1 컬럼 상에서 키랄 SFC 크로마토그래피에 의한 라세미 2-클로로-5-(메틸술피닐)피리미딘의 키랄 분해, 이에 의해 2-클로로-5-(메틸술피닐)피리미딘의 두 용리 거울상이성질체 중 두 번째는 거울상이성질적으로 풍부 또는 순수한 물질로서 얻어지며, 이 물질은 이 후 MgO, 로듐(II) 아세테이트 이량체(Rh2(OAc)4) 및 (디아세톡시요오도)벤젠(PhI(OAc)2)의 존재 하에 트리플루오로아세트아미드와 반응하여 N-((2-클로로피리미딘-5-일)(메틸)(옥소)-λ6-술파닐리덴)-2,2,2-트리플루오로아세트아미드의 상응하는 거울상이성질적으로 풍부 또는 순수한 거울상이성질체를 생산하는 단계.
c) 염기의 존재 하에 단계 a)에서 얻어진 거울상이성질적으로 풍부 또는 순수한 피페라진 염기와 단계 b)에서 얻어진 N-((2-클로로피리미딘-5-일)(메틸)(옥소)-λ6-술파닐리덴)-2,2,2-트리플루오로아세트아미드의 거울상이성질적으로 풍부 또는 순수한 거울상이성질체와의 반응, 이렇게 얻어진 생성물의 단리에 이어진 이의 탈보호(deprotection)에 의해, (2-(4-(1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(이미노)(메틸)-λ6-술파논의 거울상이성질적으로 풍부 또는 순수한 단일의 부분입체이성질체를 얻는 단계.
추가의 바람직한 구체예에서 상기 구체예 A 및 B의 단계 a)에서 사용된 키랄 분해제 D-디-p-아니소일타르타르산은 D-디-p-톨루일타르타르산(toluyltartaric acid) 또는 (R)-(+)-클로키포스(chlocyphos)로 교체되어 동일한 생성물을 얻을 수 있다.
특히 매우 바람직한 구체예는 표 1에 열거된 화학식 (I)의 화합물 및/또는 이의 생리학적으로 허용가능한 염이다.
화학식 (I)의 화합물의 활성 범위는 하기이다:
*+ 1 내지 10 μM
++ 0.2 내지 1 μM
+++ 0.2 내지 0.05 μM
++++ 0.05 μM 이하
본 발명의 바람직한 화합물은 약물로서 사용하기에 적합한 특성을 나타내었다. 특히, 이러한 바람직한 화합물은 높은 고체 상태 안정성, 간 마이크로솜의 존재 하에서의 높은 안정성, 높은 산화 안정성 및 적절한 투과성을 나타낸다. 본 발명의 추가의 바람직한 화합물은 뇌 추출물에서 측정된 총 단백질의 O-GlcNAcyl화 수준과 같은, 강력한 생물학적 활성에 의해 약물로서의 이들의 적절성을 입증한다. 이러한 파라미터를 결정하기 위한 관련 시험은 예를 들어, 고체 상태 안정성(Waterman K.C. (2007) Pharm Res 24(4); 780-790), 간 마이크로솜 존재 하에 안정성(Obach R. S. (1999) Drug Metab Dispos 27(11); 1350-135) 및 투과성(예를 들어 Caco-2 permeability assay, Calcagno A. M. (2006) Mol Pharm 3(1); 87-93)과 같이 당업자에게 알려져 있다; 대안적으로, 이들은 뇌 추출물에서 측정된 총 단백질의 GlcNAcyl 수준 결정을 기재하는 실시예 B02와 같은, 하기 실시예에 기재되어 있다. OGA 억제 분석에서 높은 효력(potency) 및 상기 특성 중 하나 이상을 나타내는 본 발명의 화합물이 본 명세서에 언급된 적응증에 대한 약물로서 특히 적절하다.
화학식 (I)에 따른 화합물 및 이의 제조를 위한 출발 물질은, 각각, 문헌에 기재된 바와 같은, 즉 상기 반응에 대해 알려지고 적절한 반응 조건 하에 그 자체로 알려진 방법에 의해 생성된다.
그 자체로 알려진 변형을 사용할 수 있지만, 본원에서는 더 상세히 언급되지 않는다. 바람직하다면, 상기 출발 물질은 또한 이들을 조(crude) 반응 혼합물에서 단리되지 않은 상태로 놔둘 수 있지만, 이들을 본 발명에 따른 화합물로 추가로 즉시 전환시켜 in-situ에서 형성될 수 있다. 한편, 반응을 단계적으로 수행하는 것이 가능하다.
다음 약어는 각각 하기의 정의를 의미한다:
Ac(아세틸), aq(수성, aqueous), h(시간), g(그램), L(리터), mg(밀리그램), MHz(메가 헤르츠), μM(마이크로몰), min(분), mm(밀리미터), mmol(밀리몰), mM(밀리몰), m.p.(용융점), equiv(당량, equivalent), mL(밀리리터), μL(마이크로리터), ACN(아세토니트릴), AcOH(아세트산), BINAP(2,2'-비스(디스페닐포스피노)-1,1'-비나프탈렌, BOC(tert-부톡시-카보닐), CBZ(카보벤즈옥시), CDCl3(중수소화 클로로포름), CD3OD(중수소화 메탄올), CH3CN(아세토니트릴), c-hex(시클로헥산), DCC(디시클로헥실 카보디이미드), DCM(디클로로메탄), DHP(O-(2,4-디니트로페닐)-히드록실아민), dppf(1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센), DIC(디이소프로필 카보디이미드), DIEA(디이소프로필에틸-아민), DMF(디메틸포름아미드), DMSO(디메틸술폭시드), DMSO-d6(중수소화 디메틸술폭시드), EDC(1-(3-디메틸-아미노-프로필)-3-에틸카보디이미드), ESI(전자-분무 이온화), EtOAc(에틸 아세테이트), Et2O(디에틸 에테르), EtOH(에탄올), FMOC(플루오레닐메틸옥시카보닐), HATU(디메틸아미노-([1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피리딘-3-일옥시)-메틸렌]-디메틸-암모늄 헥사플루오로포스페이트), HPLC(고 성능 액체 크로마토그래피), i-PrOH(2-프로판올), K2CO3(포타슘 카보네이트), LC(액체 크로마토그래피), MD Autoprep(Mass directed Autoprep), MeOH(메탄올), MgSO4(마그네슘 술페이트), MS(질량 분석법), MTBE(메틸 tert-부틸 에테르), Mtr.(4-메톡시-2,3,6-트리메틸벤젠술포닐), MW(마이크로파), NBS(N-브로모 숙신이미드), NaHCO3(소듐 비카보네이트), NaBH4(소듐 보로하이드리드), NMM(N-메틸 모르폴린), NMR(핵 자기 공명), m-CPBA(3-클로로퍼벤조산), MSH(O-메시틸렌술포닐히드록실아민), POA(페녹시아세테이트), Py(피리딘), PyBOP®(벤조트리아졸-1-일-옥시-트리스-피롤리디노-포스포늄 헥사플루오로포스페이트), RT(실온), Rt(유지 시간), SFC(초임계 유체 크로마토그래피), SPE(고상 추출), T3P(프로필포스폰산 무수물), TBAF(테트라-n-부틸암모늄 플루오리드), TBTU(2-(1-H-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로뮴 테트라플루오로 보레이트), TEA(트리에틸아민), TFA(트리플루오로아세트산), THF(테트라히드로푸란), TLC(박막 크로마토그래피), UV(자외선).
일반적으로, 본 발명의 화학식 (I) 및 관련 화학식에 따른 화합물은 쉽게 입수가능한 출발 물질로부터 제조될 수 있다. 이러한 출발 물질이 상업적으로 입수가능하지 않은 경우, 이들은 표준 합성 기술에 의해 제조될 수 있다. 일반적으로, 임의의 개별 화학식 (I) 및 관련 화학식의 화합물에 대한 합성 경로는 각 분자의 특정 치환기에 의존할 것이며, 이러한 요인은 당해 기술분야의 통상의 기술자에 의해 잘 이해될 것이다. 하기 실시예에 기재된 일반적인 방법 및 과정를 이용하여 화학식 (I) 및 관련 화학식의 화합물을 제조할 수 있다. 온도, 용매, 또는 보조-시약과 같은, 하기 반응식에 도시된 반응 조건은, 단지 예로서 제시되며 제한되지 않는다. 전형적인 또는 바람직한 실험 조건(즉, 반응 온도, 시간, 시약의 몰, 용매 등)이 제공되는 경우, 달리 언급되지 않는 한 다른 실험 조건도 사용될 수 있음을 이해할 것이다. 최적의 반응 조건은 사용된 특정 반응물 또는 용매에 따라 다양할 수 있지만, 이러한 조건은 일상적인 최적화 과정을 사용하여, 당업자에 의해 결정될 수 있다. 모든 보호 및 탈보호 방법에 대해서는, Philip J. Kocienski, in "Protecting Groups", Georg Thieme Verlag Stuttgart, New York, 1994 및, Theodora W. Greene and Peter G. M. Wuts in "Protective Groups in Organic Synthesis", Wiley Interscience, 3rd Edition 1999를 참조할 수 있다.
"이탈기(leaving group)" LG는 다른 화학기로 제거되거나 대체될 수 있는 화학 모이어티를 나타낸다. 명세서 전체에 걸쳐, 상기 용어 이탈기는 바람직하게는 Cl, Br, I 또는 반응성으로 변형된 OH 기, 예를 들어, 활성화된 에스테르, 이미다졸리드 또는 1 내지 6 개의 탄소 원자를 갖는 알킬술포닐옥시(바람직하게는 메틸술포닐옥시 또는 트리플루오로메틸술포닐옥시) 또는 6 개 내지 10 개의 탄소 원자를 갖는 아릴술포닐옥시(바람직하게는 페닐- 또는 p-톨릴술포닐옥시)를 나타낸다. 이탈기 LG가 방향족 또는 헤테로방향족 고리에 부착될 때, LG는 SO2-알킬 또는 F를 추가로 나타낼 수 있다. 전형적인 아실화 반응에서 카복실기의 활성화를 위한 이러한 유형의 라디칼은 문헌(예를 들어 Houben-Weyl, Methoden der organischen Chemie [Methods of Organic Chemistry], Georg-Thieme-Verlag, Stuttgart와 같은, 표준 연구)에 기재되어 있다. 활성화된 에스테르는 유리하게는, 예를 들어 HOBt, N-히드록시숙신이미드 또는 HATU의 첨가를 통해 in situ로 형성된다.
A, R, W, Q, m 및 n의 성질에 따라, 화학식 (I)의 화합물의 합성을 위해 상이한 합성 전략이 선택될 수 있다. 하기 반응식에 예시된 과정에서, A, R, W, Q, m 및 n은 달리 언급되지 않는 한 발명의 설명에서 상기-정의된 바와 같다.
A, R, W, Q, m 및 n이 상기와 같이 정의된, 화학식 (I)의 화합물은, 하기 실시예에 기재된 것과 같은 적절한 상호전환 절차, 또는 당해 기술분야의 통상의 기술자에 의해 잘 알려진 통상적인 상호전환 절차를 사용하여, 화학식 (I)의 대안적인 화합물로부터 제조될 수 있다.
화학식 (I)의 화합물은 당해 기술분야의 통상의 기술자에 의해 알려진 방법 및 실시예(반응식 1)에 하기 기재된 바와 같은 방법을 사용하여, 키랄 크로마토그래피 또는 키랄 분해, 광학적으로 활성인 산을 사용한 재-결정화로 화학식 (Ia) 및 (Ib)의 화합물로 분리될 수 있다.
A, R, Q, m 및 n이 상기와 같이 정의되고 W = N 인, 화학식 (Ic)의 화합물은 화학식 (II)의 아민을 화학식 (III)의 헤테로고리에 첨가하여 제조될 수 있고, 여기서 LG는 상기 정의된 바와 같은 이탈기이다. 이러한 첨가는 예를 들어 DMF, DMA 또는 NMP의 극성 용매에서, 이에 제한되지 않지만 TEA, DIEA, K2CO3 또는 Cs2CO3와 같은, 염기의 존재 하에, 일정한 가열 또는 마이크로파 조사를 사용하여, 50℃ 내지 200℃의 온도에서 두 화합물을 가열하는, 열적 조건 하에서 수행될 수 있다. 대안적으로, 이러한 첨가는 예를 들어, 디옥산, 톨루엔/메탄올과 같은 적절한 용매 또는 용매 혼합물에서, 예를 들어 BINAP, o-Tol3P, X-Phos와 같은 리간드, 및 예를 들어 NaOtBu, Cs2CO3 또는 K2CO3와 같은 염기의 존재 하에 실온 내지 150℃, 바람직하게는 실온의 온도로, 예를 들어 1 시간 내지 24 시간의 몇 시간 동안, 이에 제한되지 않지만 PdCl2, Pd(OAc)2, Pd2(dba)3와 같은, 금속 착물(complex)에 의해 촉매될 수 있다(반응식 2). 화학식 (II)의 아민은 화합물 (IVa)의 탈보호 후 얻어진다. PG는 적절한 보호기이며, 이는 이에 제한되지는 않지만 BOC와 같은, 하기 기재된 화학과 양립할 수 있다. 이는 이에 제한되지 않지만 MeOH 중의 HCl 또는 DCM 중의 디옥산 또는 TFA와 같은, 산성 조건 하에서 제거되어, 아민(II)의 단리를 수득할 수 있다.
A, R, Q, m 및 n이 상기와 같이 정의되고 W = CH 인, 화학식 (Id)의 화합물은, 당해 기술분야의 통상의 기술자에 의해 알려진 방법 및 하기 실시예에 기재된 바와 같은 방법을 사용하여 에스테르(IVb)로부터 제조될 수 있다. 상이한 헤테로고리 Q는 이에 제한되지는 않지만 옥사디아졸, 티아디아졸 및 티아졸과 같은, 에스테르 관능기로부터 제조될 수 있다(Jakopin, Z. et al. Curr. Org. Chem. 2008, 12, 850-898. Hemming, K. Science of Synthesis, 2004, 13, 127-184. Augustine, J. K. et al. Tetrahedron, 2009, 65, 9989-9996. 37. Kempson, J. Name Reactions in Heterocyclic Chemistry II (2011), 299-308). Q의 성질에 따라, 화학식 (Id)의 화합물은, 예를 들어 DMF, DMSO 또는 NMP과 같은 극성 용매에서, 이에 제한되지 않지만 Cs2CO3와 같은 염기의 존재 하에, 상기 정의된 바와 같이, 이탈기 LG의 재배치(displacement)에 의해 화합물(IVc)로부터 얻어질 수 있다(반응식 3).
대안적으로 화학식 (Id)의 화합물은 이에 제한되지 않지만 실온 내지 180℃ 범위의 온도에서 용매로서 디옥산, 염기로서 K2CO3, 촉매로서 Pd(PPh3)4와 같은, 당해 기술분야의 통상의 기술자에 의해 알려진 조건을 사용하여, 적절한 보론산(Va) 또는 에스테르(Vb) 및 화학식 (III)의 헤테로고리와 금속 촉매화된 크로스 커플링 반응에 의해 제조될 수 있다(반응식 3). Pd(OH)2와 같은 촉매의 존재 하에서 생성된 커플링 생산물의 수소화는 화학식 (Id)의 화합물을 수득할 것이다(예를 들어 Andres, J.-I. et al. J. Med. Chem. 2012, 55, 8685-8699)(반응식 3).
A, R, W, Q, m 및 n이 상기와 같이 정의되고 Y1이 W = N인 경우 보호기 PG 또는 W = CH 인 경우 에스테르인, 화학식 (IV)의 화합물은, 이에 제한되지 않지만 DCE 중 AcOH의 1 당량의 존재 하에, 환원제로서 NaBH(OAc)3을 사용하고, 당해 기술분야의 통상의 기술자에게 알려진 조건을 사용하여, 아민(VI)으로 환원성 아민화(reductive amination)에 의해 상응하는 케톤(IX)으로부터 제조될 수 있다. 대안적으로, 환원성 아민화는 Ti(OiPr)4에 의해 촉매될 수 있는 제1 이민 형성에 이어서, 이에 제한되지 않지만 MeOH 중 NaBH4와 같은, 적절한 환원제로 환원하는, 두 단계로 수행될 수 있다(Abdel-Magid, A. F. at al. J. Org. Chem. 1996, 61, 3849-3862). 대안적으로, 케톤(IX)은 MeOH와 같은, 알콜성 용매 중 NaBH4와 같은 일반적인 환원제를 사용하여 상응하는 알콜(VIII)로 환원될 수 있다. 그 후 알코올 관능기는 당해 기술 분야의 통상의 기술자에게 알려진 조건을 사용하여, 이에 제한 되지 않지만 Cl 또는 OMs과 같은, 적절한 이탈기로 변환될 수 있다. 중간체(VII)에 아민(VI)을 첨가하면 화합물(IV)이 형성될 수 있다.
대안적으로, W, Q, m 및 n이 상기와 같이 정의되고 PG가 이에 제한되지 않지만 BOC과 같은, 적절한 보호기인, 화학식 (X)의 화합물은 아민(XI), m, n 및 PG가 상기와 같이 정의되고 Y2는 에스테르 또는 이탈기인 화합물(XII), 또는 화합물 (XIIIa) 또는 (XIIIb)로부터 제조될 수 있다(반응식 5).
W가 N 인 경우, 화학식 (X)의 화합물은 화학식 (III)의 헤테로고리에 화학식 (XI)의 아민을 첨가하여 제조될 수 있고, 여기서 LG는 상기 정의된 바와 같은 이탈기이다. 이러한 첨가는 당해 기술분야의 통상의 기술자에 의해 알려진 조건 및 실시예에서 하기 기재된 바와 같은 조건을 사용하여, 열적 조건하에 수행되거나 금속 착물에 의해 촉매될 수 있다.
W = CH 인 경우, 화학식 (X)의 화합물은 당해 기술분야의 통상의 기술자에 의해 알려진 방법 및 하기 실시예에 기재된 바와 같은 방법을 사용하여, 에스테르(XII)로부터 제조될 수 있고, 여기서 Y2 = COOR 및 W = CH이다. 상이한 헤테로고리 Q는 이에 제한되지 않지만 옥사디아졸, 티아디아졸 및 티아졸과 같은, 에스테르 관능기로부터 제조될 수 있다, (Jakopin, Z. et al. Curr. Org. Chem. 2008, 12, 850-898. Hemming, K. Science of Synthesis, 2004, 13, 127-184. Augustine, J. K. et al. Tetrahedron, 2009, 65, 9989-9996. 37. Kempson, J. Name Reactions in Heterocyclic Chemistry II (2011), 299-308). Q의 성질에 따라, 화학식 (X)의 화합물은 이에 제한되지 않지만, 예를 들어 DMF, DMSO 또는 NMP와 같은 극성 용매에서 Cs2CO3과 같은 염기의 존재 하에서 이탈기 LG의 재배치에 의해, 상기 정의된 바와 같이 Y는 CH이고 Y2 = LG인, 화합물(XII)로부터 수득될 수 있다. Q는 티아졸인, 화학식 (X)의 화합물은, 당해 기술분야의 통상의 기술자에 의해 알려진 조건을 사용하여, Y2가 아미노메탄카보티오일기이고, 적절한 알파-브로모 케톤인, 화합물(XII)로부터 수득될 수 있다.
대안적으로, 화학식 (X)의 화합물은 이에 제한되지 않지만 실온 내지 180℃ 범위의 온도에서 촉매로서 Pd(PPh3)4, 염기로서 K2CO3, 용매로서 디옥산과 같은, 당해 기술분야에서 통상의 기술자에 의해 알려진 조건을 사용하여, 적절한 보론산(XIIIa) 또는 에스테르(XIIIb), 및 화학식 (III)의 헤테로고리와 금속 촉매된 크로스 커플링 반응에 의해 제조될 수 있다(반응식 5). Pd(OH)2와 같은 촉매의 존재 하에서 생성된 커플링 생성물의 수소화는 화학식 (X)의 화합물을 수득할 것이다(예를 들어 Andres, J.-I. et al. J. Med. Chem. 2012, 55, 8685-8699)(반응식 5).
PG는 적절한 보호기이며, 이는 이에 제한되지는 않지만 BOC와 같은, 상기 기재된 화학과 양립할 수 있다. 이는 이에 제한되지는 않지만 MeOH 중 HCl 또는 DCM 중 디옥산 또는 TFA와 같은, 산성 조건 하에서 제거되어 아민(XIV)의 단리를 생성할 수 있다. 실시예에 기재된 바와 같이, 당해 기술분야의 통상의 기술자에 의해 잘 알려진 조건에 따라, 화학식 (IX)의 케톤과의 환원성 알킬화에 의해 화학식 (I)의 화합물로 추가로 변환될 수 있다(Abdel-Magid, AF at al. J). Org. Chem. 1996, 61, 3849-3862). 대안적으로, 상기 및 실시예에 기재된 바와 같이 제조된, 화합물(VII)에 아민(XIV)을 첨가하면 화학식 (I)의 화합물이 형성될 수 있다.
화학식 (II)의 아민은 당해 기술 분야의 통상의 기술자에게 알려진 방법 및 하기 실시예에 기재된 바와 같은 방법을 사용하여, 광학적으로 활성인 산으로 재-결정화에 의한 키랄 크로마토 그래피 또는 키랄 분해로 화학식 (IIa) 및 (IIb)의 아민으로 분리될 수 있다(반응식 6).
대안적으로, 화학식 (IIa) 및 (IIb)의 아민은 각각 키랄 아민(XVIa) 및 (XVIb)로부터 합성될 수 있다. PG는 보호기, 예를 들어 BOC 또는 SO2Tol이며 LG는 예를 들어 Cl과 같은 이탈기인, 시약(XV)에 아민(XVIa) 및 (XVIb)의 첨가는 각각 보호된 아민(IVe) 및 (IVf)의 형성할 수 있다(Thiel, O. R. et al. J. Org. Chem. 2008, 73, 3508-3515). 탈보호 조건은 BOC 보호기에 대해 디옥산 중 HCl 또는 DCM 중 MeOH 또는 TFA와 같이, PG의 성질에 기초하여 선택되는 것이 필요하다. 대안적으로 RT 내지 100℃ 범위의 온도에서 HBr, AcOH 및 4-히드록시벤조산의 혼합물 또는 H2SO4 및 트리플루오로아세트산의 혼합물을 사용하여 파라-톨루엔 술폰아미드와 같은, 술폰아미드 보호기를 절단할 수 있다.
화학식 (XVIa) 및 (XVIb)의 아민의 제조를 위해, 화학식 (IX)의 케톤은 티타늄 에톡시드의 존재하에 이에 제한되지는 않지만 tert-부탄술핀아미드기와 같은 키랄 보조제(auxiliary)와 반응하여 키랄 이민(XVIII)으로 변환될 수 있다(Ellman J. A. et al. Acc. Chem. Res. 2002, 35, 984-995). Ellman J. A. et al. J. Org. Chem. 2007, 72, 626-629로부터의 참조에 기재된 바와 같이, 환원 단계에 사용된 조건에 따라, 술핀아미드(XVIIa) 또는 (XVIIb)로 추가로 변환될 수 있다.
대안적으로, 화학식 (XIX)의 알데히드는 이에 제한되지는 않지만 그리그나드 시약(Grignard reagent)과 같은, 적절한 친핵체를 첨가하여 화학식 (VIII)의 알코올로 변환될 수 있다(반응식 9).
다른 과정에서, 화학식 (IXa)의 케톤은 이에 제한되지는 않지만 실온 내지 110℃ 범위의 온도에서 톨루엔 중 Pd(PPh3)2Cl2와 같은, 촉매의 존재 하에 아릴 할라이드(XX) 및 트리부틸(1-에톡시비닐)주석 사이의 Stille 크로스 커플링 반응(Stille cross coupling reaction)에 의해 수득될 수 있다(반응식 10).
Z5, Z6, R''', R'''', R5, R6, R7 및 R8의 정의에서 지시된 바와 같은 술폭시민 기는 하기 실시예에 기재된 바와 같이, 화학식 (I)의 화합물의 합성의 임의의 단계에서 도입되거나 생성될 수 있다.
술폭시민의 제조를 위한 일반적인 합성 경로는 반응식 10에 기재되어 있으며, 여기서 G1 및 G2는 함께 화학식 I의 화합물의 나머지를 나타낸다:
술폭시민의 전형적인 합성은 술피드(XXI)의 산화에 이어서 생성된 술폭시드(XXII)의 이민화로 시작한다. 로듐-촉매된 이민화는 일반적으로 N-보호된 술폭시민(XXV)(R3'= 보호기)을 생성하여 이어서 탈보호될 수 있으며, 유리 NH-술폭시민(XXIV)(R3'= H)을 생성한다. 술폭시드(XXII) 또는 술피드(XXI)의 금속-촉매된 이민화는 또한 이에 제한되지는 않지만 구리(copper), 철(iron), 망간(manganese) 또는 루테늄(ruthenium) 착물(complexes)과 같은, 대안적인 금속으로도 달성될 수 있다. 디아세톡시요오도벤젠 [PhI(OAc)2]의 존재 하에 in situ로 생성된 히드라조산(hydrazoic acid), O-메시틸렌술포닐히드록실아민(MSH) 또는 O-(2,4-디니트로페닐)-히드록실아민(DPH) 또는 암모늄 카바메이트와 같은 활성화 시약을 사용한 술폭시드(XXII)의 이민화는 직접적으로 유리 술폭시민(XXIV) (R3'= H)을 유도한다. N-기능화된 술폭시민 XXV(R3'≠ H)는 Cu-촉매된 아릴화(arylations), 친핵성 치환(nucleophilic substitutions) 또는 환원성 알킬화와 같은 방법에 의해 유리 NH-술폭시민(XXIV)(R3' = H)으로부터 제조될 수 있다. 대안적으로, 술폭시민(XXV)(R3'≠ H)은 또한 술필이민(sulfilimines)(XXIII)의 산화로 수득될 수 있으며, 이는 술피드(XXI)의 이민화 또는 술폭시드(XXII)의 변환에 의해 접근가능하다(Frings, M. et al. Eur. J. Med. Chem. 2017, 126, 225-245 및 인용된 문헌).
술폭시민(XXIV) 또는 (XXV)은 당해 기술분야의 통상의 기술자에게 알려진 방법 및 하기 실시예에 기재된 바와 같은 방법을 사용하여, 키랄 크로마토그래피 또는 키랄 분해, 광학적으로 활성인 산을 사용한 재-결정화에 의해 화학식 (XXIVa) 및 (XXIVb) 또는 (XXVa) 및 (XXVb)의 화합물로 분리될 수 있다(반응식 11).
대안적으로, 술폭시드(XXII)는 당해 기술분야의 통상의 기술자에게 알려진 방법 및 하기 실시예에 기재된 바와 같은 방법을 사용하여, 키랄 크로마토그래피 또는 키랄 분해에 의해 화학식 (XXIIa) 및 (XXIIb)의 화합물로 분리될 수 있다(반응식 11).
화학식 (XXIIa) 및 (XXIIb)의 키랄 술폭시드는 각각 화학식 (XXIVa) 및 (XXIVb) 또는 각각 (XXVa) 및 (XXVb)의 키랄 술폭시민으로 변환될 수 있다. 배열(configuration)의 유지(retention)와 함께 입체특이적 변환(Stereospecific transformation)은 로듐-촉매된 이민화 및 후속적인 탈보호(H. Okamura et al. Organic Letters 2004, 6, 1305-1307) 또는 메탄올 중 암모늄 카바메이트 및 PhI(OAc)2로 이민화에 의해 달성될 수 있으며, 직접적으로 (XXIVa) 및 (XXIVb)를 수득한다(M. Zenzola et al. Angew. Chem. Int. Ed. 2016, 55, 7203 -7207).
키랄 술폭시드로의 주요 경로는 반응식 12에 도시된다. 라세미 혼합물(경로 i)의 분해는 화학적 접근법 또는 효소 반응에 의해, 키랄 술폭시드를 생산하는데 사용되는 하나의 가능한 방법이다. 부분입체이성질적으로 순수한 술피네이트의 변환은 높은 거울상이성질체 과잉(ee) 값을 갖는 술폭시드를 수득하는 대안적인 경로이다(경로 ii). 효소적 또는 비-효소적 방법에 의한 프로키랄 술피드(XXI)의 거울상선택적(enantioselective) 산화는 거울상이성질체가 풍부한 술폭시드를 제조하는 비교적 직접적인 방법(경로 iii)을 나타낸다. 또 다른 제조 방법(경로 iv)은 황 원자에서 입체화학의 손실없이 일부 키랄 술폭시드의 구조를 변형시키는 것이다(Organosulfur chemistry in asymmetric synthesis, Takeshi Toru ; 2008).
화학식 (XXIIa) 또는 (XXIIb)의 키랄 술폭시드로의 프로키랄 술피드(XXI)의 거울상 선택적 산화에 대한 한 가지 접근법은 산화제(경로 ii)와 조합한 키랄 전이 금속 착물(chiral transition metal complexes)을 사용하는 것이다. 전형적으로, 이는 이에 제한되지 않지만 화학량론적(stoechiometric) 또는 촉매량으로, Ti(i-PrO)4와 같은 금속, 디에틸 타르트레이트(tartrate), 만델산(madelic acid), 비나프톨(binaphthol), 디브로모-비나프톨, 히드로벤조인(hydrobenzoin), 또는 당해 기술분야의 통상의 기술자에 의해 알려진 임의의 다른 리간드로부터 선택된 키랄 리간드, 이에 제한되지는 않지만 물의 선택적인 첨가와 함께 큐멘 히드로퍼옥시드(cumene hydroperoxide), tert-부틸 히드로퍼옥시드, H2O2와 같은 산화제, 또는 i-Pr2NEt, N-메틸모르폴린 또는 1,4-디메틸-피페라진과 같은 삼차 아민을 포함한다(G. E. O'Mahony et al. Arkivoc 2011 (i) 1-110; J. Legros et al. Adv. Synth. Catal. 2005, 347, 19-31). 이에 제한되지는 않지만 키랄 리간드의 존재 하에 Mn, V, Fe 또는 W와 같은, 대안적인 금속이 또한 사용될 수 있다(G. E. O'Mahony et al. Arkivoc 2011 (i) 1-110; J. Legros et al. Adv. Synth. Catal. 2005, 347, 19-31).
대안적으로, 화학식 (XXII)의 술폭시드의 술폰(XXVI)으로의 동역학적 분해(kinetic resolution)는 유사한 조건하에서 잘-알려진 방법에 따라 달성될 수 있으며, 하나의 거울상이성질체가 풍부한 술폭시드는 변화되지 않은 채로 남는다(G. E. O'Mahony et al. Arkivoc 2011 (i) 1-110).
반응이 염기성 조건 하에서 바람직하게 수행되는 경우, 적절한 염기는 금속 산화물(metal oxides), 예를 들어 알루미늄 옥시드, 알칼리 금속 수산화물(특히 포타슘 히드록시드, 소듐 히드록시드 및 리튬 히드록시드), 알칼리 토금속 수산화물(특히 바륨 히드록시드 및 칼슘 히드록시드), 알칼리 금속 알콜레이트(특히 포타슘 에탄올레이트 및 소듐 프로판올레이트), 알칼리 금속 카보네이트(예를 들어, 소듐 비카보네이트) 및 여러 유기 염기(예를 들어, 특히 N,N-디이소프로필에틸아민, 피페리딘 또는 디에탄올아민)로부터 선택될 수 있다.
반응은 일반적으로 불활성(inert) 용매에서 수행된다. 적절한 불활성 용매는, 예를 들어, 헥산(hexane), 석유 에테르, 벤젠, 톨루엔 또는 자일렌(xylene)과 같은 탄화수소; 트리클로로에틸렌, 1,2-디클로로에탄, 카본 테트라클로리드, 클로로포름 또는 디클로로메탄과 같은 염소화된 탄화수소; 메탄올, 에탄올, 이소프로판올, n-프로판올, n-부탄올 또는 tert-부탄올과 같은 알코올; 디에틸 에테르, 디이소프로필 에테르, 테트라히드로퓨란(THF) 또는 디옥산과 같은 에테르; 에틸렌 글리콜 모노메틸 또는 모노에틸 에테르, 에틸렌 글리콜 디메틸 에테르(디글림(diglyme))와 같은 글리콜 에테르; 아세톤 또는 부탄온과 같은 케톤; 아세트아미드, 디메틸아세트아미드 또는 디메틸포름아미드(DMF)와 같은 아미드; 아세토니트릴과 같은 니트릴; 디메틸 술폭시드(DMSO)와 같은 술폭시드; 카본 디술피드; 포름산, 아세트산 또는 트리플루오로아세트산(TFA)과 같은 카복실산; 니트로메탄 또는 니트로벤젠과 같은 니트로 화합물; 에틸 아세테이트와 같은 에스테르, 또는 상기 용매의 혼합물이다. 특히 바람직한 것은 TFA, DMF, 디클로로메탄, THF, H2O, 메탄올, tert. 부탄올, tert. 아밀알코올, 트리에틸아민 또는 디옥산이다.
사용된 조건에 따라, 반응 시간은 몇 분 내지 14 일이고, 반응 온도는 약 -80℃ 내지 140℃, 일반적으로 -50℃ 내지 120℃, 바람직하게는 -20℃ 내지 100℃이다.
화학식 (I) 및 이의 하위-화학식의 화합물은 상기 경로를 통해 접근가능하다. 출발 물질은, 일반적으로 통상의 기술자에게 알려져 있거나, 또는 이들은 알려진 방법에 의해 용이하게 제조될 수 있다.
화학식 (I)의 화합물은 수소화 또는 금속-환원과 같이 변형되어, 염소를 제거하거나, 치환 반응을 시키거나, 및/또는 산 또는 염기로, 바람직하게는 강산에 의해 염으로 변환될 수 있다. 유기 화학, 화학 전략 및 전술, 합성 경로, 중간체의 보호, 절단 및 정제 절차, 분리 및 특성 규명과 관련하여 다수의 문헌 및 방법이 당해 기술분야의 통상의 기술자를 위해 이용가능하고 유용하다. 일반적인 화학적 변형은 통상의 기술자에게 알려져 있다. 산, 알콜, 페놀 및 그의 토토머 구조의 아릴의 할로겐화(Halogenation) 또는 할로겐에 의한 히드록시 치환은 바람직하게는 POCl3 또는 SOCl2, PCl5, SO2Cl2를 사용하여 수행될 수 있다. 일부 경우에는 옥살릴 클로리드도 유용하다. 온도는 0℃에서 피리돈 구조 또는 카복실산 또는 술폰산을 할로겐화하는 작업에 따라 환류하는 온도까지 다양할 수 있다. 시간은 몇 분에서 몇 시간 또는 심지어 밤샘으로 조절될 것이다. 유사하게, 알킬화, 에테르 형성, 에스테르 형성, 아미드 형성은 당해 기술분야의 통상의 기술자에게 알려져 있다. 아릴 보론산을 사용한 아릴화는 Pd 촉매, 적합한 리간드 및 염기, 바람직하게는 소듐, 포타슘 또는 세슘의 카보네이트, 포스페이트, 보레이트 염의 존재 하에 수행될 수 있다. Et3N, DIPEA 또는 보다 염기성인 DBU와 같은 유기 염기도 사용될 수 있다. 용매는 톨루엔, 디옥산, THF, 디글림, 모노글림(monoglyme), 알코올, DMF, DMA, NMP, 아세토니트릴, 경우에 따라 심지어 물, 이외의 것으로 다양할 수 있다. PdO 촉매의 PdCl2 유형 전구체인 Pd(PPh3)4 또는 Pd(OAc)2와 같이 일반적으로 사용되는 촉매는 보다 효율적인 리간드를 갖는 보다 복잡한 것으로 발전하였다. C-C 아릴화에서, 보론산 및 에스테르 대신, 아릴-트리플루오로보레이트 포타슘 염(Suzuki-Miyaura coupling), 유기 실란(Hiyama coupling), 그리그나드 시약(Kumada), 유기아연 화합물(Negishi coupling) 및 알킬주석(stannanes)(Stille coupling)이 유용할 수 있따. 이러한 경험은 N- 및 O-아릴화로 전달될 수 있다. Cu 촉매 및 Pd 촉매를 사용함으로써, O-아릴화뿐만 아니라 아릴 클로리드 및 아닐린에 의한 N-아릴화 및 심지어 전자 결핍 아닐린에 관해 당해 기술분야의 통상의 기술자에게 수많은 논문 및 방법이 이용가능하고 유용하다.
상기 과정의 최종 단계에서, 화합물, 바람직하게는 화학식 (I)의 화합물의 염이 선택적으로 제공된다. 본 발명에 따른 상기 화합물은 이들의 최종 비-염 형태로 사용될 수 있다. 한편, 본 발명은 또한 당해 기술분야에 알려진 절차에 의해 다양한 유기 및 무기 산 및 염기로부터 유래될 수 있는, 이의 약학적으로 허용가능한 염 형태로 이들 화합물의 용도를 포함한다. 본 발명에 따른 화합물의 약학적으로 허용가능한 염 형태는 대부분 통상적인 방법에 의해 제조된다. 본 발명에 따른 화합물이 카복실기를 포함하는 경우, 이의 적절한 염 중 하나는 화합물과 적절한 염기의 반응에 의해 형성되어 상응하는 염기-부가 염을 제공할 수 있다. 이러한 염기는, 예를 들어, 포타슘 히드록시드, 소듐 히드록시드 및 리튬 히드록시드를 포함하는 알칼리 금속 수산화물; 마그네슘 히드록시드, 칼슘 히드록시드 및 바륨 히드록시드와 같은 알칼리 토금속 수산화물; 예를 들어 포타슘 에톡시드 및 소듐 프로폭시드와 같은 알칼리 금속 알콕시드; 및 피페리딘, 디에탄올아민 및 N-메틸-글루카민(메글루민), 벤자틴(benzathine), 콜린, 디에탄올아민, 에틸렌디아민, 베네타민(benethamine), 디에틸아민, 피페라진, 리신, L-아르기닌, 암모니아, 트리에탄올아민, 베타인(betaine), 에탄올아민, 모르폴린 및 트로메타민(tromethamine)과 같은 다양한 유기 염기이다. 본 발명에 따른 화합물의 알루미늄 염도 마찬가지로 포함된다. 염기성 중심을 포함하는, 화학식 I의 특정 화합물의 경우, 이들 화합물을 약학적으로 허용가능한 유기 및 무기 산, 예를 들어, 수소 클로리드, 수소 브로미드 또는 수소 요오디드(iodide)와 같은 수소 할라이드, 술페이트, 니트레이트(nitrate) 또는 포스페이트 등과 같은 다른 미네랄 산 및, 이의 상응하는 염, 및 메탄술포네이트, 에탄술포네이트, 톨루엔술포네이트 및 벤젠술포네이트와 같은 알킬- 및 모노아릴술포네이트, 및 카보네이트, 아세테이트, 트리플루오로아세테이트, 타르트레이트, 말레이트(maleate), 숙시네이트, 시트레이트, 벤조에이트, 살리실레이트, 아스코르베이트 등과 같은 다른 유기산, 및 이의 상응하는 염으로 처리하여 산-부가 염이 형성될 수 있다. 따라서, 본 발명에 따른 화합물의 약학적으로 허용가능한 산-부가 염은 하기를 포함한다: 아세테이트, 아디페이트(adipate), 알기네이트(arginate), 아르기네이트(arginate), 아스파테이트(aspartate), 벤조에이트, 벤젠술포네이트(베실레이트), 비술페이트(bisulfate), 비술파이트(bisulfite), 브로미드, 부티레이트, 캄포레이트, 캄포술포네이트, 카프레이트(caprate), 카프릴레이트(caprylate), 클로리드, 클로로벤조에이트, 시트레이트, 시클라메이트(cyclamate), 신나메이트(cinnamate), 시클로펜탄프로피오네이트, 디글루코네이트, 디히드로겐포스페이트, 디니트로벤조에이트, 도데실술페이트, 에탄술포네이트, 포르메이트, 글리콜레이트, 푸마레이트, 갈락테레이트(뮤식(mucic)산으로부터), 갈락투로네이트, 글루코헵타노에이트, 글루코네이트, 글루타메이트, 글리세로포스페이트, 헤미숙시네이트, 헤미술페이트, 헵타노에이트, 헥사노에이트, 힙푸레이트, 히드로클로리드, 히드로브로미드, 히드로요오디드, 2-히드록시에탄술포네이트, 요오디드, 이세티오네이트(isethionate), 이소부티레이트, 락테이트, 락토비오네이트, 말레이트(malate), 말레에이트(maleate), 말로네이트, 만델레이트, 메타포스페이트, 메탄술포네이트, 메틸벤조에이트, 모노히드로겐포스페이트, 2-나프탈렌술포네이트, 니코티네이트, 니트레이트, 옥살레이트(oxalate), 올레에이트(oleate), 팔모에이트(palmoate), 펙티네이트, 퍼술페이트, 페닐아세테이트, 3-페닐프로피오네이트, 포스페이트, 포스포네이트, 프탈레이트, 그러나 이는 제한을 나타내는 것이 아니다.
염의 모든 유형은 바람직하게는 이온-교환 수지 기술을 사용하여 형성되거나 상호전환될 수 있다.
상기 언급된 것과 관련하여, 본원에 존재하는 연결로, 상호교환가능하게 사용되는, "약학적으로 허용가능한 염(pharmaceutically acceptable salt)" 및 "생리학적으로 허용가능한 염(physiologically acceptable salt)"이라는 표현은 본 발명의 화합물이 이의 염 중 하나의 형태로, 특히 이러한 염 형태가 활성 성분의 유리 형태 또는 이전에 사용된 임의의 다른 염 형태의 활성 성분과 비교하여 활성 성분에 개선된 약동학적 특성을 부여하는 경우를 포함하는 활성 성분을 의미하는 것으로 여겨질 수 있다. 활성 성분의 약학적으로 허용가능한 염 형태는 또한 초기에 가지지 못하는 바람직한 약동학적 특성을 초회에 이러한 활성 성분에 제공할 수 있으며 심지어 인체에서 이의 치료 효능(efficacy)과 관련하여 이러한 활성 성분의 약력학(pharmacodynamics)에 대해 긍정적인 영향을 미칠 수 있다.
상기-언급된 바람직한 약학적 염은 아세테이트, 트리플루오로아세테이트, 베실레이트, 시트레이트, 푸마레이트, 글루코네이트, 헤미숙시네이트, 힙푸레이트, 히드로클로리드, 히드로브로미드, 이세티오네이트, 만델레이트, 메-글루민(me­glumine), 니트레이트, 올레에이트, 포스포네이트, 피발레이트(pivalate), 소듐 포스페이트, 스테아레이트, 술페이트, 술포살리실레이트, 타르트레이트, 티오말레이트(thiomalate), 토실레이트 및 트로-메타-민이지만, 이는 제한을 나타내는 것은 아니다.
화학식 (I)의 염기성 화합물의 산-부가 염은 유리 염기 형태를 충분한 양의 바람직한 산과 접촉시켜, 통상적인 방식으로 염을 형성시킴으로써 제조된다. 상기 유리 염기는 상기 염 형태를 염기와 접촉시키고 유리 염기를 통상적인 방식으로 단리시킴으로써 재생될 수 있다. 상기 유리 염기 형태는 극성 용매에서의 용해도와 같은, 특정 물리적 특성에 관하여 이의 상응하는 염 형태와 특정 측면에서 상이하다; 그러나, 본 발명의 목적 상, 상기 염은 다른-방식으로 이의 각각의 유리 염기 형태에 상응한다.
언급한 바와 같이, 화학식 I의 화합물의 약학적으로 허용가능한 염기-부가 염은 금속 또는 아민, 예를 들어 알칼리 금속 및 알칼리 토금속 또는 유기 아민으로 형성된다. 바람직한 금속은 소듐, 포타슘, 마그네슘 및 칼슘이다. 바람직한 유기 아민은 N,N'-디벤질에틸렌디아민, 클로로프로카인, 콜린, 디에탄올-아민, 에틸렌디아민, N-메틸-D-글루카민 및 프로카인이다. 이는 제한을 나타내는 것은 아니다.
화학식 I의 산성 화합물의 염기-부가 염은 유리 산 형태를 충분한 양의 바람직한 염기와 접촉시켜, 통상적인 방식으로 염을 형성시킴으로써 제조된다. 상기 유리 산은 염 형태를 산과 접촉시키고 유리 산을 통상적인 방식으로 단리시킴으로써 재생될 수 있다. 상기 유리 산 형태는 극성 용매에서의 용해도와 같은, 특정 물리적 특성에 관하여 이의 상응하는 염 형태와 특정 측면에서 상이하다; 그러나, 본 발명의 목적 상, 상기 염은 다른-방식으로 이의 각각의 유리 산 형태에 상응한다.
화학식 (I)의 화합물이 이러한 유형의 약학적으로 허용가능한 염을 형성할 수 있는 하나 이상의 기를 포함하는 경우, 화학식 I은 또한 다중 염을 포함한다. 전형적인 다중 염 형태는, 예를 들어, 비타르트레이트(bitartrate), 디아세테이트, 디푸마레이트, 디메글루민, 디-포스페이트, 디소듐 및 트리히드로클로리드를 포함하지만, 이는 제한을 나타내는 것이 아니다.
상기 언급된 것과 관련하여, 본원에 존재하는 연결로, 상호교환가능하게 사용되는, "약학적으로 허용가능한 염" 및 "생리학적으로 허용가능한 염"이라는 표현은 본 발명의 화합물이 이의 염 중 하나의 형태로, 특히 이러한 염 형태가 활성 성분의 유리 형태 또는 이전에 사용된 임의의 다른 염 형태의 활성 성분과 비교하여 활성 성분에 개선된 약동학적 특성을 부여하는 경우를 포함하는 활성 성분을 의미하는 것으로 여겨질 수 있다. 활성 성분의 약학적으로 허용가능한 염 형태는 또한 초기에 가지지 못하는 바람직한 약동학적 특성을 초회에 이러한 활성 성분에 제공할 수 있으며 심지어 인체에서 이의 치료 효능과 관련하여 이러한 활성 성분의 약력학에 대해 긍정적인 영향을 미칠 수 있다.
이들의 분자 구조로 인해, 화학식 (I)의 화합물은 키랄일 수 있고 따라서 다양한 거울상이성질체 형태로 발생할 수 있다. 그러므로 이들은 라세미 또는 광학적으로 활성인 형태로 존재할 수 있다.
본 발명에 따른 화합물의 라세미체 또는 입체이성질체의 약학적 활성은 상이할 수 있으므로, 거울상이성질체를 사용하는 것이 바람직할 수 있다. 이들의 경우에, 최종 생성물 또는 심지어 중간체는 당해 기술 분야에서 통상의 기술자에게 알려진 화학적 또는 물리적 조치에 의해 거울상이성질체 화합물로 분리될 수 있고 심지어 합성에서 그대로 이용될 수 있다.
라세미 아민의 경우, 부분입체이성질체는 광학적으로 활성인 분해제(resolving agent)와의 반응에 의해 혼합물로부터 형성된다. 적절한 분해제의 예는 광학적으로 활성인 산, 예를 들어 타르타르산(tartaric acid), 디아세틸타르타르산, 디벤조일타르타르산, 디-O-p-톨루오일-타르타르산, 만델산, 말산(malic acid), 락트산(lactic acid), 적절한 N-보호된 아미노산(예를 들어 N-벤조일프롤린 또는 N-벤젠술포닐프롤린), 또는 다양한 광학적으로 활성인 캄포술폰산(camphorsulfonic acids)의 (R) 및 (S)형태이다. 광학적으로 활성인 산으로 적절하게 형성된 염은 이에 제한되지는 않지만 메탄올, 에탄올, 이소프로판올, THF, 물, 디에틸 에테르, 아세톤, 메틸 tert-부틸 에테르 및 당해 기술분야의 통상의 기술자에게 알려진 다른 용매와 같은, 용매의 다양한 조합을 사용하여 결정화된다. 광학적으로 활성인 분해제(예를 들어 디니트로벤조일페닐글리신, 셀룰로오스 트리아세테이트 또는 탄수화물의 다른 유도체 또는 실리카 겔에 고정된 키랄로 유도체화된 메타크릴레이트 중합체)의 도움으로 크로마토그래피 거울상이성질체 분리가 또한 유익하다. 이러한 목적에 적절한 용리제(eluents)는 수성(aqueous) 또는 알콜성 용매 혼합물, 예를 들어, 82:15:3의 비율인, 예를 들어 헥산/이소프로판올/아세토니트릴과 같은 것이다.
치료제를 발견하고 개발할 때, 당해 기술분야의 통상의 기술자는 바람직한 인-비트로(in-vitro) 특성을 유지하면서 약동학적 파라미터를 최적화하려고 시도한다. 약동학적 프로파일이 불량한 많은 화합물이 산화 대사작용에 영향을 받기 쉽다고 추정하는 것이 타당하다. 현재 이용가능한 인-비트로 간 마이크로솜 분석은 이러한 유형의 산화 대사작용 과정에 대한 가치있는 정보를 제공하며, 이는 차례로 이러한 산화 대사작용에 대한 내성을 통해 안정성이 개선된 화학식 (I)의 중수소화 화합물의 합리적인 설계를 허용한다. 이에 의해 화학식 (I)의 화합물의 약동학적 프로파일에서 유의한 개선이 얻어지고, 인 비보(in vivo) 반감기(t/2), 최대 치료 효과에서의 농도(Cmax), 투여량 반응 곡선하 면적(AUC), 및 F의 증가의 관점에서; 및 클리어런스, 투여량 및 재료 비용의 감소의 관점에서 정량적으로 표현될 수 있다.
본 발명의 추가적인 양상은 글리코시다제를 억제하기 위한 화학식 (I)에 따른 화합물 및/또는 이의 생리학적으로 허용가능한 염의 용도에 관한 것이다. 그러한 용도는 특성상 치료적이거나 비-치료적일 수 있다. 상기 용어 "억제(inhibition)"는 글리코시다제 활성에서 임의의 감소를 나타내며, 이는 인식(recognition), 결합 및 차단을 가능하게 만드는 방식으로 표적 글리코시다제와 상호작용할 수 있는 특정한 본 발명의 화합물의 작용에 기초한다. 본 발명의 화합물은 최종적으로 표적과 상호작용하여 효과를 전개시키는 것으로 이해될 것이다. 상기 화합물은 신뢰할 수 있는 결합 및 바람직하게는 글리코시다제 활성의 완전한 차단을 보장하는 하나 이상의 글리코시드 히드롤라제(glycoside hydrolase)에 대한 상당한 친화성을 특징으로한다. 보다 바람직하게는, 상기 물질은 선택된 단일 글리코시다제 표적에 대한 배타적이고 직접적인 인식을 보장하기 위해 단일-특이적이다. 본 발명의 문맥에서, 상기 용어 "인식(recognition)"은 -이에 제한되지 않지만- 특정 화합물과 표적 사이의 임의의 유형의 상호작용, 특히 공유 또는 비-공유 결합 또는 회합(association), 예를 들어 공유 결합, 소수성/친수성 상호작용, 반데르발스 힘, 이온 쌍, 수소 결합, 리간드-수용체 상호작용 등에 관한 것이다. 상기 회합은 또한 펩티드, 단백질 또는 뉴클레오티드 서열과 같은 다른 분자의 존재를 포함할 수 있다. 본 발명의 수용체/리간드-상호작용은 바람직하게는 치료 개체에 대한 건강에 해롭고 유해한 영향을 배제하기 위해 다른 표적 분자에 대한 높은 친화성, 높은 선택성 및 최소 또는 심지어 교차-반응성이 부족한 것을 특징으로 한다.
본 발명의 바람직한 구체예에서, 상기 글리코시다제는 글리코시드 히드롤라제, 보다 바람직하게는 패밀리 84 글리코시드 히드롤라제, 가장 바람직하게는 O-글리코단백질-2-아세트아미도-2데옥시-β-D-글루코피라노시다제(OGA), 매우 바람직하게는 포유류 O-GlcNAcase를 포함한다. 본 발명에 따른 화학식 (I)의 화합물은 O-GlcNAcase에 선택적으로 결합하는 것, 예를 들어 이에 의해 2-아세트아미도-2-데옥시-β-D-글루코피라노시드(O-GlcNAc)의 절단을 선택적으로 억제하면서 리소좀 β-헥소사미니다제를 실질적으로 억제하지는 않는 것이 특히 바람직하다.
본 발명에 따른 화합물은 바람직하게는 유익한 생물학적 활성을 나타내며, 이는 본원에 기재되거나 선행 기술로부터 알려진 효소 활성 분석에서 쉽게 입증된다. 이러한 인-비트로 분석에서, 상기 화합물은 바람직하게는 억제 효과를 나타내며 유발한다. IC50은 그 화합물에 대한 최대 억제의 50%를 발휘하는 화합물의 농도이다. 상기 글리코시다제 표적은 상기 화합물의 농도가 100 μM 미만, 바람직하게는 10 μM 미만, 보다 바람직하게는 1 μM 미만, 가장 바람직하게는 0.2 μM 미만의 양인 경우, 본원에 기재된 화합물에 의해 특히 절반이 억제된다. 가장 바람직하게는, 화학식 (I)의 화합물은 0.02 μM 미만의 IC50을 나타낸다.
본 발명의 추가적인 양상은 글리코시다제를 억제하는 방법에 관한 것으로, 여기서 글리코시다제를 발현할 수 있는 시스템, 특히 상기 글리코시다제를 발현할 수 있는 시스템은 상기 글리코시다제가 억제되는 조건 하에서, 본 발명에 따른 하나 이상의 화학식 (I)의 화합물 및/또는 이의 생리학적으로 허용가능한 염과 접촉된다. 상기 방법의 바람직한 구체예에서, 상기 글리코시다제는 O-GlcNAcase를 선택적으로 억제하고 보다 바람직하게는 0.2 μM 미만의 IC50을 갖는 화합물과 접촉된다. 상기 방법은 또한 인-비트로에서 수행되고 및/또는 상기 방법이 인체에서 실시되지 않는 것도 바람직하다. 상기 방법의 범위에서 세포 시스템(cellular system)이 바람직하다. 상기 세포 시스템은 개체가 세포를 포함하는 한 임의의 개체로 정의된다. 상기 세포는 이들이 글리코시다제를 발현할 수 있다면, 조직, 기관 또는 온전한 실험적 포유동물로 집합된 것이든, 단리된 상태이든, 배양에서든, 세포주로서든, 임의의 유형의 주요 세포 또는 유전적으로 조작된 세포를 의미한다. 세포가 억제 방법을 실시하기 위해 글리코시다제를 고유의 전-조건(pre-condition)으로서 발현하는 것이 또한 이해될 것이다. 세포가 글리코시다제를 발현하거나 발현할 수 있는 것이 특히 바람직하지만, 글리코시다제-결핍 세포가 사용될 수 있고 상기 글리코시다제가 인위적으로 세포 시스템에 첨가되는 것도 배제되지 않아야 한다. 세포가 결여(waived)되지만 글리코시다제가 본 발명에 따른 하나 이상의 화학식 (I)의 화합물 및/또는 이의 생리학적으로 허용가능한 염과 접촉되도록 본 발명의 분석은 인-비트로에서 완전히 수행될 수 있다. 따라서, 이러한 목적을 위해 일정량의 단리된 글리코시다제가 조(crude) 또는 정제된 형태로 제공된다.
본원에 논의된 바와 같이, 글리코시다제-시그널링(signaling) 경로는 다양한 질환, 바람직하게는 신경퇴행성 질환, 당뇨병, 암, 심혈관 질환 및 뇌졸중과 관련이 있다. 따라서, 본 발명에 따른 화합물은 하나 이상의 이들과의 상호작용에 의해 상기 시그널링 경로에 의존하는 질환의 예방 및/또는 치료에 유용하다. 그러므로 본 발명은 본원에 기재된 시그널링 경로의 억제제, 바람직하게는 OGA-매개 시그널링의 억제제로서 본 발명에 따른 화합물의 치료적 및 비-치료적 용도에 관한 것이다.
본 발명의 방법은 인-비트로 또는 인-비보에서 수행될 수 있다. 본 발명에 따른 화합물로의 치료에 대한 특정 세포의 감수성(susceptibility)은 연구의 과정이든 또는 임상 적용 중이든, 특히 인-비트로 시험에 의해 결정될 수 있다. 전형적으로, 세포의 배양물은 활성제가 글리코시다제 활성을 조정하도록 하는 충분한 시간의 기간, 일반적으로 약 1 시간 내지 1 주일 동안 다양한 농도로 본 발명에 따른 화합물과 조합된다. 인-비트로 처리는 임의의 샘플 또는 세포주로부터 배양된 세포를 사용하여 수행될 수 있다.
숙주 또는 환자는 임의의 포유동물 종, 예를 들어 영장류 종, 특히 인간; 마우스, 랫트 및 햄스터를 포함한 설치류; 토끼; 말, 소, 개, 고양이 등이 속할 수 있다. 동물 모델은 실험적 조사에 대해 관심이 있으며, 인간 질병의 치료를 위한 모델을 제공한다.
신호 전달(signal transduction) 경로의 식별 및 다양한 신호 전달 경로 사이의 상호 작용의 검출을 위해, 많은 과학자들은 적절한 모델 또는 모델 시스템, 예를 들어 세포 배양 모델 및 유전자변형(transgenic) 동물 모델을 개발하였다. 신호 전달 캐스케이드에서 특정 단계의 결정을 위해, 상호작용하는 화합물은 신호를 조정하기 위해 활용될 수 있다. 본 발명에 따른 화합물은 또한 동물 및/또는 세포 배양 모델 또는 본 출원에서 언급된 임상 질환에서 OGA-의존적 신호 전달 경로를 시험하기 위한 시약으로서 사용될 수 있다.
본 명세서의 이전 단락에 따른 용도는 인-비트로 또는 인-비보 모델로 수행될 수 있다. 상기 억제는 본 명세서의 과정에 기재된 기술에 의해 모니터링될 수 있다. 인-비트로 용도는 바람직하게는 신경퇴행성 질환, 당뇨병, 암, 심혈관 질환 및 뇌졸중으로 고통받는 인간의 샘플에 적용된다. 여러 특정 화합물 및/또는 이의 유도체의 시험은 인간 개체의 치료를 위해 가장 적절한 활성 성분의 선택을 가능하게 한다. 선택된 유도체의 인-비보 투여율(dose rate)은 인-비트로 데이터와 관련하여 각각의 개체의 글리코시다제 감수성 및/또는 질환의 중증도에 유익하게 사전-조절된다. 그러므로, 치료 효능이 현저하게 향상된다. 또한, 예방적 또는 치료적 치료 및/또는 모니터링을 위한 약제의 제조를 위한 화학식 (I)의 화합물 및 이의 유도체의 용도에 관한 본 명세서의 후속적인 교시(subsequent teaching)는 편리하게는, 글리코시다제 활성, 바람직하게는 OGA 활성의 억제에 대한 화합물의 사용에 제한 없이 유효하고 적용가능한 것으로 간주된다.
본 발명의 추가적인 양상은 이의 모든 비율의 혼합물을 포함하는, 본 발명에 따른 하나 이상의 화합물 및/또는 이의 약학적으로 사용가능한 유도체, 염, 용매화물 및 입체이성질체를 포함하는 약제에 관한 것이다. 본 발명의 의미에서 "약제(medicament)"는 의약 분야에서 임의의 제제이며, 이는 하나 이상의 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 제제(예를 들어, 약학적 조성물 또는 약학적 제제)를 포함하고 이들의 전체 병태 또는 유기체의 특정 영역의 병태의 병원성 변형이 적어도 일시적으로 확립될 수 있는, OGA 활성과 연관된, 질환으로 고통받는 환자의 예방, 치료, 팔로-업 또는 사후관리(aftercare)에 사용될 수 있다.
결과적으로, 본 발명은 또한 활성 성분으로서 유효한 양의 본 발명에 따른 하나 이상의 화학식 (I)의 화합물 및/또는 이의 생리학적으로 허용가능한 염을 약학적으로 내약성이 있는(tolerable) 아쥬반트 및/또는 부형제(excipients)와 함께 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 의미에서, "아쥬반트(adjuvant)"는 동시에(simultaneously), 일시에(contemporarily) 또는 순차적으로(sequentially) 투여되는 경우 본 발명의 활성 성분에 대한 특정 반응을 가능하게 하거나, 강화시키거나 변형시키는 모든 물질을 나타낸다. 주사 용액에 대한 알려진 아쥬반트는 예를 들어, 알루미늄 히드록시드 또는 알루미늄 포스페이트와 같은 알루미늄 조성물, QS21과 같은 사포닌, 무라밀디펩티드(muramyldipeptide) 또는 무라밀트리펩티드(muramyltripeptide), 감마-인터페론 또는 TNF와 같은 단백질, M59, 스쿠알렌 또는 폴리올이다.
또한, 상기 활성 성분은 단독으로 또는 다른 치료와 조합으로 투여될 수 있다. 약학적 조성물에서 하나 초과의 화합물을 사용함으로써, 즉 화학식 (I)의 화합물은 활성성분으로서 또 다른 화학식 (I)의 화합물 또는 다른 구조적 스캐폴드(scaffold)의 화합물인, 적어도 다른 제제와 조합하여 시너지 효과가 달성될 수 있다. 상기 활성 성분은 동시에 또는 순차적으로 사용될 수 있다. 본 화합물은 당해 기술 분야의 통상의 기술자에게 알려진 제제와 조합하기에 적절하며(예를 들어, WO 2008/025170) 본 발명의 화합물에 유용하다.
일부 구체예에서, 본 발명에 따른, 또는 본 발명에 따른 용도를 위한 화합물은 예를 들어 신경퇴행성, 염증성, 심혈관, 또는 면역조절 질환 또는 본원에 기재된 임의의 병태를 치료하기 위해, O-GlcNAcase 활성을 조정하기에 유용할 수 있는 병용 요법(combined therapy)으로 임의의 다른 활성 제제 또는 약학적 조성물과 조합하여 제공될 수 있다. 일부 구체예에서, 본 발명에 따른, 또는 본 발명에 따른 용도를 위한 화합물은, 타우병증 및 알츠하이머 병의 예방 또는 치료에 유용한 하나 이상의 제제와 조합하여 제공될 수 있다. 이러한 제제의 예는, 제한없이, 하기를 포함할 수 있다:
- 아세틸콜린 에스테라제 억제제(acetylcholine esterase inhibitors: AChEIs) 예컨대 Aricept® (도네페질), Exelon® (리바스티그민), Razadyne® (Razadyne ER®, Reminyl®, Nivalin®, 갈란타민), Cognex® (타크린(Tacrine)), NMDA 길항제 예컨대 메만틴(Axura®, Ebixa®), 휴페르진 A, 펜세린, Debio-9902 SR (ZT-1 SR), 자나페질(Zanapezil)(TAK0147), 간스티그민(ganstigmine), NP7557, α7 니코틴 아세틸콜린 수용체 효능제, 5-HT6 수용체 길항제, M1 무스카린 아세틸콜린 수용체 효능제 및 양성 알로스테릭 조절제(positive allosteric modulators) 등
- 메틸렌 블루 등과 같은 타우 응집 억제제
- 타우 항체 및 타우 백신 등과 같은 타우 응집 시딩(seeding) 및 전파(propagation)를 차단하는 제제
- AL-108, AL-208, 파클리탁셀 등과 같은 미세소관(Microtubule) 안정화제
- β-세크레타제(BACE-1) 억제제와 같은 아밀로이드-β(Aβ) 펩티드 저하제, Aβ 항체 및 Aβ 백신과 같은 노인 플라크-제거 생물제제(senile plaque-clearing biologics)
본 발명은 또한 이의 모든 비율의 혼합물을 포함하는, 본 발명에 따른 유효한 양의 화합물 및/또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 유도체, 용매화물 및 입체이성질체, 및 유효한 양의 추가적인 약제 활성 성분의 분리된 팩으로 이루어진 세트(키트)에 관한 것이다. 상기 세트는 박스, 개별 병, 백(bags) 또는 앰풀(ampoules)과 같은, 적절한 용기를 포함한다. 상기 세트는 예를 들어, 이의 모든 비율의 혼합물을 포함하는, 본 발명에 따른 유효한 양의 화합물 및/또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 유도체, 용매화물 및 입체이성질체, 및 용해된 또는 동결건조된 형태로 유효한 양의 추가적인 약제 활성 성분을 각각 함유하는, 분리된 앰풀을 포함할 수 있다.
약학적 제제는 임의의 바람직한 적절한 방법, 예를 들어 경구(협측(buccal) 또는 설하를 포함), 직장, 비강, 국소(협측, 설하 또는 경피를 포함), 질 또는 비경구(피하, 근육내, 정맥내 또는 피내(intra-dermal)를 포함) 방법에 의한 투여에 응용할 수 있다. 이러한 제제는 예를 들어 활성 성분을 부형제(들) 또는 아쥬반트(들)와 조합함으로써 약학 분야에 알려진 과정을 사용하여 제조될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 일반적인 고체 또는 액체 담체, 희석제 및/또는 첨가제 및 약학 공학을 위한 통상적인 아쥬반트를 사용하여 적합한 투여량으로 알려진 방식으로 생산된다. 단일 투여 형태를 생산하기 위해 활성 성분과 조합된 부형제 물질의 양은 치료되는 숙주 및 특정 투여 방식(mode)에 따라 다양하다. 적절한 부형제는 장내(예를 들어, 경구), 비경구 또는 국소 적용과 같은, 상이한 투여 경로에 적절하고 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 염과 반응하지 않는 유기 또는 무기 물질을 포함한다. 적절한 부형제의 예는 물, 식물성 오일, 벤질 알코올, 알킬렌 글리콜(alkylene glycols), 폴리에틸렌 글리콜, 글리세롤 트리아세테이트, 젤라틴, 탄수화물, 예를 들어 락토오스 또는 전분, 마그네슘 스테아레이트, 탈크 및 석유 젤리(petroleum jelly)이다.
경구 투여에 응용되는 약학적 제제는, 예를 들어, 캡슐 또는 정제; 산제 또는 과립; 수성 또는 비-수성 액체의 용액 또는 현탁액; 식용 거품(foams) 또는 거품 음식; 또는 수-중-유 액체 에멀젼 또는 유-중-수 액체 에멀젼와 같이 분리된 단위로서 투여될 수 있다.
비경구 투여에 응용되는 약학적 제제는 항산화제, 완충제, 정균제 및 용질을 포함하는 수성 및 비-수성 멸균 주사 용액을 포함하며, 이를 수단으로 치료될 수용자(recipient)의 혈액; 및 현탁 매질 및 증점제(thickeners)를 포함할 수 있는, 수성 및 비-수성 멸균 현탁액과 함께 상기 제제가 등장성으로 된다. 상기 제제는 단일-투여량 또는 다중-투여량 용기, 예를 들어 밀봉된 앰풀 및 바이알로 투여될 수 있고, 동결-건조된(동결건조된)상태로 저장되어, 사용 직전에 멸균 액체 담체, 예를 들어 주사 목적을 위해 물만의 추가가 필요하다. 처방(recipe)에 따라 제조된 주사 용액 및 현탁액은 멸균 산제, 과립 및 정제로부터 제조될 수 있다.
말할 것도 없이, 상기 특히 언급된 성분 이외에, 상기 제제는 또한 특정 유형의 제제과 관련하여 당해 기술분야에 통상적인 다른 작용제를 포함할 수 있으며; 따라서, 예를 들어, 경구 투여에 적절한 제제는 향미제(flavors)를 포함할 수 있다.
본 발명의 바람직한 일 구체예에서, 상기 약학적 조성물은 경구 투여에 응용된다. 상기 제제는 멸균될 수 있고 및/또는 보조제, 예컨대 담체 단백질(예: 혈청 알부민), 윤활제, 보존제, 안정화제, 충전제(fillers), 킬레이트제, 항산화제, 용매, 결합제, 현탁제, 습윤제, 유화제, 염(삼투압에 영향을 주기 위함), 완충 물질, 착색제(colorants), 향미제 및 하나 이상의 추가적인 활성 물질, 예를 들어 하나 이상의 비타민을 포함할 수 있다. 첨가제는 당해 기술분야에 잘 알려져 있으며 다양한 제제로 사용된다.
따라서, 본 발명은 또한 유효한 양의 본 발명에 따른 하나 이상의 화학식 (I)의 화합물 및/또는 이의 생리학적으로 허용가능한 염을 경구 투여용으로 약학적으로 내약성이 있는 아쥬반트와 함께, 선택적으로 하나 이상의 다른 활성 약학적 성분의 조합을 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다. 투여 경로 및 조합 제품에 관한 본 명세서의 선행 교시(The prior teaching)는, 각각, 편리하게는 두 특징의 조합에 제한없이 유효하고 적용가능하다.
상기 용어 "유효한 양(effective amount)" 또는 "유효한 투여량(effective dose)" 또는 "투여량(dose)"은 본원에서 상호교환적으로 사용되며 질환 또는 병리학적 병태에 대한 예방적으로 또는 치료학적으로 관련된 효과, 즉 조직, 시스템에서, 예를 들어, 연구자 또는 의사에 의해, 추구되는 또는 바람직한 생물학적 또는 의학적 반응을 유발하는 효과를 갖는 약학적 조성물의 양을 나타낸다. "예방 효과(prophylactic effect)"는 질병의 발달 가능성을 감소시키거나 심지어 질병의 발병을 예방한다. "치료학적으로 관련된 효과(therapeutically relevant effect)"는 질환의 하나 이상의 증상을 어느 정도 완화시키거나 질환 또는 병리학적 상태와 연관되거나 원인이 되는 하나 이상의 생리학적 또는 생화학적 파라미터를 부분적으로 또는 완전히 정상으로 되돌린다. 또한, 상기 표현 "치료학적으로 유효한 양(therapeutically effective amount)"은, 이러한 양이 투여되지 않은 상응하는 개체와 비교하여, 하기 결과를 갖는 양을 나타낸다: 질환, 증후군(syndrome), 병태, 호소증상(complaint), 장애 또는 부-작용의 개선된 치료, 치유, 예방 또는 제거 또는 또한 질환, 호소증상 또는 장애의 진행(advance) 감소. 상기 표현 "치료학적으로 유효한 양"은 또한 정상적인 생리학적 기능을 증가시키는데 효과적인 양을 포함한다.
본 발명에 따른 약학적 조성물을 투여하기 위한 각각의 투여량 또는 투여 범위는 상술한 질환의 증상을 감소시키는 바람직한 예방 또는 치료 효과를 달성하기에 충분히 높다. 임의의 특정 인간에 대한 투여의 특정 투여량 수준, 빈도 및 기간은 이용된 특정 화합물의 활성, 연령, 체중, 일반적인 건강 상태, 성별, 식이, 투여 시간 및 경로, 배설 속도, 약물 조합 및 특정 치료법이 적용되는 특정 질환의 중증도를 포함하는 다양한 요인에 달려 있다는 것을 이해해야 한다. 잘-알려진 수단 및 방법을 사용하여, 정확한 투여량은 일상적인 실험의 문제로서 당해 기술분야의 기술자에 의해 결정될 수 있다. 본 명세서의 선행 교시는 편리하게는 화학식 (I)의 화합물을 포함하는 약학적 조성물에 제한없이 유효하고 적용가능하다.
약학적 제제는 투여 단위 당 미리 결정된 양의 활성 성분을 포함하는 투여 단위의 형태로 투여될 수 있다. 상기 제제 중 예방적으로 또는 치료적으로 활성인 성분의 농도는 약 0.1 내지 100 중량%로 다양할 수 있다. 바람직하게는, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 투여 단위 당 대략 0.5 내지 1000 mg, 보다 바람직하게는 1 내지 700 mg, 가장 바람직하게는 5 내지 100 mg의 용량으로 투여된다. 일반적으로, 이러한 투여량 범위는 총 하루 혼입(incorporation)에 적합하다. 다시 말해서, 하루 투여량은 바람직하게는 대략 0.02 내지 100 mg/kg 체중이다. 그러나, 각각의 환자에 대한 특정 투여량은 본 명세서에 이미 기재된 바와 같은 매우 다양한 요인(예를 들어, 치료된 병태, 투여 방법 및 환자의 연령, 체중 및 병태에 따라 다름)에 의존한다. 바람직한 투여 단위 제제는, 상기 지시된 바와 같이, 하루 투여량 또는 부분-투여량, 또는 이의 상응하는 분획물(fraction)의 활성 성분을 포함하는 것이다. 또한, 이러한 유형의 약학적 제제는 약학 기술분야에 일반적으로 알려진 과정을 사용하여 제조될 수 있다.
본 발명에 따른 치료학적으로 유효한 양의 화합물은 다수의 요인(예를 들어 동물의 연령 및 체중, 치료를 필요로 하는 정확한 병태, 병태의 중증도 제제의 특성 및 투여 방법)를 고려하여 치료하는 의사 또는 수의사에 의해 궁극적으로 결정되어야 하지만, 신경퇴행성 질환, 예를 들어 타우병증 및 알츠하이머 병의 치료를 위한 본 발명에 따른 화합물의 유효한 양은 일반적으로 매일 수용자(포유동물)의 0.1 내지 100 mg/kg 체중의 범위이며 특히 전형적으로 매일 1 내지 10 mg/kg의 범위이다. 따라서, 체중이 70 kg인 성체(adult) 포유동물의 매일 실제적인 양은 일반적으로 70 내지 700 mg이며, 상기 양은 매일 단일 투여량으로 또는 일반적으로 매일 일련의 부분-투여량(예를 들어, 2, 3, 4, 5 또는 6회)으로 투여될 수 있고, 그러므로 총 일일 투여량은 동일하다. 유효한 양의 염 또는 용매화물 또는 이의 생리학적 기능적 유도체는 본 발명에 따른 화합물 자체의 유효한 양의 분율로 결정될 수 있다. 유사한 투여량이 상기 언급된 다른 병태의 치료에 적절하다고 가정될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 인간 및 수의학에서 약제로서 이용될 수 있다. 본 발명에 따르면, 화학식 (I)의 화합물 및/또는 이의 생리학적 염은 OGA 활성에 의해 유발, 매개 및/또는 전파되는 질환의 예방적 또는 치료적 치료 및/또는 모니터링에 적절하다. 상기 질환이 신경퇴행성 질환, 당뇨병, 암, 심혈관 질환 및 뇌졸중, 보다 바람직하게는 신경퇴행성 질환, 가장 바람직하게는 하나 이상의 타우병증, 매우 바람직하게는 알츠하이머 병 및 치매인 것이 특히 바람직하다. 화합물의 숙주는 본 발명에 따른 본 보호 범위에 포함되는 것으로 이해해야 한다.
본 발명의 다른 양상은 OGA 활성에 의해 유발, 매개 및/또는 전파하는 질환의 예방적 또는 치료적 치료 및/또는 모니터링에 사용하기 위한 본 발명에 따른 화학식 (I)의 화합물 및/또는 이의 생리학적으로 허용가능한 염에 관한 것이다. 본 발명의 다른 양상은 신경퇴행성 질환, 당뇨병, 암, 심혈관 질환 및 뇌졸중의 예방적 또는 치료적 치료 및/또는 모니터링에 사용하기 위한 본 발명에 따른 화학식 (I)의 화합물 및/또는 이의 생리학적으로 허용가능한 염에 관한 것이다. 이의 임의의 바람직한 구체예를 포함하는, 화학식 (I)의 화합물에 관한 본 명세서의 선행 교시는, 신경퇴행성 질환, 당뇨병, 암, 심혈관 질환 및 뇌졸중의 예방적 또는 치료적 치료 및/또는 모니터링에 사용하기 위한 화학식 (I)에 따른 화합물 및 이의 염에 제한없이 유효하고 적용가능하다.
본 발명의 다른 양상은 OGA 활성에 의해 유발, 매개 및/또는 전파하는 질환을 치료하는 방법에 관한 것으로, 여기서 유효한 양의 본 발명에 따른 하나 이상의 화학식 (I)의 화합물 및/또는 이의 생리학적으로 허용가능한 염은 상기 치료를 필요로 하는 포유동물에 투여된다. 본 발명의 다른 양상은 신경퇴행성 질환, 당뇨병, 암, 심혈관 질환 및 뇌졸중, 바람직하게는 타우병증을 치료하는 방법에 관한 것으로, 여기서 유효한 양의 본 발명에 따른 하나 이상의 화학식 (I)의 화합물 및/또는 이의 생리학적으로 허용가능한 염은 상기 치료를 필요로 하는 포유동물에 투여된다. 바람직한 치료는 경구 투여이다. 본 발명 및 이의 구체예의 선행 교시는 편리하게는 상기 치료 방법에 제한없이 유효하고 적용가능하다.
상기 신경 퇴행성 질환 또는 병태는 보다 바람직하게는 하나 이상의 타우병증 및 알츠하이머 병, 근위축성 측색 경화증(ALS), 인지 장애를 갖는 근위축성 측색 경화증(Amyotrophic lateral sclerosis with cognitive impairment: ALSci), 호은성 입자 질병(Argyrophilic grain disease), 행동 변이 전측두엽 치매(Behavior variant frontotemporal dementia: bvFTD), 블룻 질환(Bluit disease), 피질기저 퇴화(Corticobasal degeneration: CBP), 권투 선수 치매(Dementia pugilistica), 루이체를 갖는 치매(Dementia with Lewy Bodies), 석회화를 갖는 확산 신경원섬유 엉킴(Diffuse neurofibrillary tangles with calcification), 다운 증후군(Down's syndrome), 가족성 영국 치매(Familial British dementia), 가족성 덴마크 치매(Familial Danish dementia), 염색체 17에 연결된 파킨슨증을 가진 전측두엽 치매(Frontotemporal dementia with parkinsonism linked to chromosome 17: FTDP-17), 전측두엽 퇴행(Frontotemporal Lobar Degeneratio: FTLD), 신경절교세포종(Ganglioglioma), 신경절세포종(Gangliocytoma), 게르스트만-슈트라우슬러-샤인커병(Gerstmann-Straussler-Scheinker disease), 구형 아교 타우병증(Globular glial tauopathy), 과들루프 파킨슨증(Guadeloupean parkinsonism), 할러보르덴-스파츠 병(Hallevorden-Spatz disease)(뇌의 철 축적 유형 1을 갖는 신경퇴행), 납중독 뇌병증(Lead encephalopathy), 리포푸신증(Lipofuscinosis), 수막혈관종증(Meningioangiomatosis), 다발 시스템 위축(Multiple system atrophy), 근긴장 디스트로피(Myotonic dystrophy), 니만-픽 병(Niemann-Pick disease)(유형 C), 팔리도-폰토-니그랄 퇴행(Pallido-ponto-nigral degeneration), 파킨슨 병, 파킨슨 병 치매(Parkinson's disease dementia: PDD), 괌의 파킨슨증-치매 복합(Parkinsonism-dementia complex of Guam), 픽 병(Pick's disease: PiD), 뇌염후 파킨슨증(Postencephalitic parkinsonism: PEP), 일차성 진행성 언어상실증(Primary progressive aphasia), 프리온 질환(크로이츠펠트-야콥 병(Creutzfeldt-Jakob Disease: CJD), 변종 크로이츠펠트-야콥 병(Variant Creutzfeldt-Jakob Disease: vCJD), 치명적 가족성 불면증(Fatal Familial Insomnia), 쿠루병(Kuru), 진행성 피질상 교증(Progressive supercortical gliosis), 진행성 핵상 마비(Progressive supranuclear palsy: PSP), 순수 자율신경계 부전(Pure Autonomic Failure), 리차드슨 증후군(Richardson's syndrome), 아급성 경화성 범뇌염(Subacute sclerosing panencephalitis), 엉킴-유일 치매(Tangle-only dementia), 결절성 경화증(Tuberous Sclerosis), 헌팅턴 병(Huntington's disease)의 군으로부터 선택된다. 가장 바람직하게는 하나 이상의 타우병증 및 알츠하이머병이다.
본 발명은 또한 OGA 활성에 의해 유발, 매개 및/또는 전파하는 질환의 예방적 또는 치료적 치료 및/또는 모니터링을 위한 화학식 (I)의 화합물 및/또는 이의 생리학적으로 허용가능한 염의 용도에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 OGA 활성에 의해 유발, 매개 및/또는 전파하는 질환의 예방적 또는 치료적 치료 및/또는 모니터링을 위한 약제의 생산을 위한 화학식 (I)의 화합물 및/또는 이의 생리학적으로 허용가능한 염의 용도에 관한 것이다. 화학식 (I)의 화합물 및/또는 이의 생리학적으로 허용가능한 염은 추가적인 약제 활성 성분의 제조를 위한 중간체로서 추가로 이용될 수 있다. 상기 약제는 바람직하게는 비-화학적인 방식으로, 예를 들어 활성 성분을 하나 이상의 고체, 유체(fluid) 및/또는 반-유체 담체 또는 부형제와 조합하고, 및 선택적으로 적합한 투여 형태의 단일 또는 그 이상의 다른 활성 물질과 함께 제조된다.
본 발명에 따른 화학식 (I)의 화합물은 치료법으로서 작용하는 질환의 발병 전 또는 후에 한 번 또는 여러 번 투여될 수 있다. 본 발명 용도의 상술한 화합물 및 의학적 생산물은 특히 치료적 치료에 사용된다. 치료적으로 관련된 효과는 장애의 하나 이상의 증상을 어느 정도 완화시키거나, 질환 또는 병리학적 병태와 연관되거나 원인이 되는 하나 이상의 생리학적 또는 생화학적 파라미터를, 부분적으로 또는 완전히, 정상으로 되돌린다. 예를 들어 반응을 촉진시키고 질환의 병원체(pathogens) 및/또는 증상을 근절하기 위해, 상기 화합물이 뚜렷한 간격으로 투여되는 경우 모니터링은 일종의 치료로 간주된다. 동일한 화합물 또는 다른 화합물이 적용될 수 있다. 상기 약제는 또한 장애의 발달 가능성을 감소시키거나 또는 심지어 OGA 활동과 연관된 장애의 개시를 미리 예방하거나 상승하는 및 지속하는 증상을 치료하는데 사용될 수 있다. 본 발명에 관련된 상기 장애는 바람직하게는 신경퇴행성 질환, 당뇨병, 암, 심혈관 질환 및 뇌졸중이다.
본 발명의 의미에서, 개체가 상술한 생리학적 또는 병리학적 병태, 예를 들어 가족성 소인(familial disposition), 유전적 결함 또는 이전에 지나간 질환에 대한 임의의 전제조건(preconditions)을 갖는 경우 예방적 치료가 권장된다.
본 발명의 범위에서, 화학식 (I)의 화합물이 처음으로 제공된다. 본 발명의 저분자량 화합물은 개선된 수동 투과성을 갖는 강력하고 선택적인 글리코시다제 억제제이다. 화학식 (I)의 화합물은 기질 포켓(substrate pocket)에 결합하는 알려진 OGA 억제제인, PUGNAc와 경쟁하는 것으로 나타났다. 내인성 기질은 O-GlcNAcyl화된 단백질이다. 핵 및 세포질 단백질의 O-GlcNAcyl화(O-GlcNAcylation)는 동물과 식물에서 가장 일반적인 번역-후 변형 중 하나이다. O-GlcNAc 사이클링(cycling)은 다수의 세포 과정을 조정하며, O-GlcNAcyl화의 조절장애(dysregulation)가 타우병증 및 알츠하이머 병을 포함한, 여러 질환의 병인에 중요한 역할을 한다는 증거가 증가하고 있다. O-GlcNAc 트란스퍼라제(OGT) 및 O-GlcNAcase(OGA)는 O-GlcNAc 사이클링을 조절하는 두 효소이다. 새로운 데이터는 OGA를 차단하는 억제제가 타우병증 및 알츠하이머 병 환자에서 건강한 O-GlcNAc 수준을 유지시키는데 도움을 줄 수 있고 이에 의해 신경원섬유 엉킴(neurofibrillary tangle)의 형성을 억제할 수 있음을 시사한다. 따라서, 본 발명은 글리코시다제 신호 캐스케이드의 조절, 개조 및/또는 억제에서 화학식 (I)의 화합물의 용도를 포함하며, 이는 OGA 시그널링 및 억제에 반응하는 임의의 장애의 진단을 위해 및/또는 치료에서, 연구 도구로서 유익하게 적용될 수 있다.
저분자량 억제제는 자체적으로 및/또는 치료 효과의 진단을 위한 물리적 측정과 조합하여 적용될 수 있다. 상기 화합물을 함유하는 약제 및 약학적 조성물 및 글리코시다제-매개 병태를 치료하기 위한 상기 화합물의 용도는 인간 및 동물에서, 건강 상태의 직접적 및 즉각적 개선을 유발하는 광범위한 치료법에 대한 유망하고, 신규한 접근법이다. 이는 단독으로 또는 다른 신경퇴행성 치료와 조합하여, 타우병증 및 알츠하이머 병을 효과적으로 퇴치하는데 특히 효과적이다.
수동적 투과성과 더불어, OGA에 대한 놀라운 주목할만한 억제 활성으로 인해, 본 발명의 화합물은 선행 기술의 다른 덜 강력하거나 선택적인 억제제와 비교하여 동등하거나 훨씬 더 바람직한 생물학적 효과를 여전히 달성하면서 더 적은 양으로 유익하게 투여될 수 있다. 또한, 이러한 투여량 감소는 유익하게는 의학적 유해 효과를 줄이거나 심지어 없앨 수 있다.
화학식 (I)의 화합물, 이의 염, 이성질체, 토토머, 거울상이성질체 형태, 부분입체이성질체, 라세미체, 유도체, 프로드러그 및/또는 대사체는 높은 특이성 및 안정성, 낮은 제조 비용 및 편리한 취급(handling)을 특징으로 한다. 이러한 특징은 교차 반응의 결여가 포함된, 재현가능한 작용 및 표적 구조와의 신뢰할 수 있고 안전한 상호작용에 대한 기초를 형성한다.
본원에 인용된 모든 참조는 본 발명의 개시에서 참조로 통합된다.
본 발명에 따라 필수적인 기술은 본 명세서에서 상세하게 기재된다. 상세하게 기재되지 않은 다른 기술은 당해 기술분야의 통상의 기술자에게 잘 알려진 공지의 표준 방법에 부합하며, 또는 상기 기술은 인용된 문헌, 특허 출원 또는 표준 인쇄물에서 더 상세히 기재된다. 본원에 기재된 것과 유사하거나 동등한 방법 및 물질이 본 발명의 실시 또는 시험에 사용될 수 있지만, 적절한 예가 하기에 기재된다. 하기 실시예는 제한이 아니라 예시로서 제공된다. 실시예 내에서, 오염시키는 활성이 없는 표준 시약 및 완충제가 사용된다(실시할 때마다). 실시예는 특히 명시적으로 증명된 특징의 조합으로 제한되지 않도록 해석되어야하지만, 예시된 특징은 본 발명의 기술적 문제가 해결된다면 제한없이 다시 조합될 수 있다. 유사하게, 임의의 청구항의 특징은 하나 이상의 다른 청구항의 특징과 조합될 수 있다.
실험 파트
화학식 (I)에 따른 화합물은 용액-상 및 고체-상 화학 프로토콜 또는 혼합 용액 및 고체상 프로토콜을 사용하여, 여러 가지 합성 접근법에 의해 용이하게 입수가능한 출발 물질로부터 제조될 수 있다. 합성 경로의 예는 하기 실시예에 기재되어 있다. 보고된 모든 수율은 최적화되지 않은 수율이다. 달리 언급되지 않는 한, 라세미 혼합물로서 얻어진 화학식 (I) 및 관련 화학식의 화합물을 분리하여 거울상이성질체가 풍부한 혼합물 또는 순수한 거울상이성질체를 제공할 수 있다.
하기 실험 설명에 사용된 상업적으로 이용가능한 출발 물질은 달리 보고되지 않는 한 Aldrich, Sigma, ACROS, ABCR, Combi-Blocks, Matrix, Apollo Scientific, Alfa Aesar 등으로부터 구매되었다.
하기 기재된 실시예에서 제공된 HPLC, MS 및 NMR 데이터는 다음과 같이 얻어진다:
1 H NMR 분석 은 BRUKER NMR, 모델 AV-II 및 AV-III 400 MHz FT-NMR을 사용하여 수행되었다. 중수소화 용매의 잔류 신호를 내부 기준으로 사용하였다. 화학적 이동(Chemical shifts, δ)은 잔류 용매 신호(DMSO-d6 중에서 1H NMR에 대해 δ=2.50, CDCl3 중에서 7.26)에 대해 ppm으로 보고된다. s(싱글렛(singlet)), d(더블렛(doublet)), t(트리플렛(triplet)), q(쿼드러플렛(quadruplet)), br(브로드(broad)), quint(퀸투플렛(quintuplet)).
LCMS 분석 조건:
기기명: Agilent Technologies 1290 infinity 11
방법 A: 방법: A-H2O 중 0.1% TFA, B-ACN 중 0.1% TFA; 유속: 2.0 mL/분; 컬럼: XBridge C8(50 x 4.6 mm, 3.5 μm), + ve 모드
방법 B: 방법: A-H2O 중 10 mM NH4HCO3, B-ACN; 유속: 1.0 mL/분; 컬럼: XBridge C8(50 x 4.6 mm, 3.5 μm), + ve 모드
방법 C: 방법: A-H2O 중 0.1% HCOOH, B-ACN; 유속: 1.5 ml/분; 컬럼: ZORBAX Eclipse XDB-C18(50 x 4.6 mm, 3.5 μm), + ve 모드
HPLC 분석 조건:
기기명: 하기와 같이 UV 감지(maxplot)와 함께 %를 사용하는 Agilent 1200 Series 기기
방법 A: 방법: A-H2O 중 0.1% TFA, B-ACN 중 0.1% TFA; 유속: 2.0 mL/분; 컬럼: XBridge C8(50 x 4.6 mm, 3.5 μm).
방법 B: 방법: A-H2O 중 10 mM NH4HCO3, B-ACN; 유속: 1.0 mL/분; 컬럼: XBridge C8(50 x 4.6 mm, 3.5 μm).
키랄 HPLC 분석 조건:
기기명: Agilent 1260 Infiinity II
방법 A: 이동상: n-헥산 중 0.1% DEA: EtOH: 60:40; 유속: 1.0 mL/분; 컬럼: Chiralcell OD-H(250 x 4.6 mm, 5 μm).
키랄 SFC 분석 조건:
기기명: THAR-SFC 80 및 THAR-SFC 200(analytical)
CO2 및 공-용매의 비율은 50:50 내지 90:10의 범위이다.
방법 A: 이동상: IPA 중 20 mM 암모니아, 유속: 4 mL/분; 컬럼: 키랄팩 ADH(250 x 4.6 mm, 5 μm).
방법 B: 이동상: 메탄올 중 20 mM 암모니아, 유속: 10 mL/분; 컬럼: YMC Cellulose C(250 x 4.6 mm, 5 μm).
방법 C: 이동상: IPA 중 20 mM 암모니아, 유속: 4 mL/분; 컬럼: Lux A1(250 x 4.6 mm, 5 μm).
방법 D: 이동상: MeOH 중 20 mM 암모니아, 유속: 4 mL/분; 컬럼: 키랄팩 ADH(250 x 4.6 mm, 5μm).
방법 E: 이동상: IPA, 유속: 3 mL/분; 컬럼: Lux A1(250 x 4.6 mm, 5 μm).
Prep-HPLC 분석 조건:
방법 A: A-H2O 중 0.1% TFA, B-MeOH 또는 CAN; 컬럼: Sunfire C8(19 x 250 mm, 5 μm) 또는 Sunfire C18(30 x 250 mm, 10 μm).
방법 B: A-H2O 중 10 mM NH4HCO3, B-MeOH 또는 ACN, 컬럼: Sunfire C8(19 x 250 mm, 5 μm) 또는 Sunfire C18(30 x 250 mm, 10 μm).
키랄 예비 SFC 분석 조건:
기기명: THAR-SFC 80, THAR-SFC 200 및 PIC SFC 10-150
CO2와 공-용매의 비율은 50:50 내지 90:10의 범위이다.
방법 A: 이동상: IPA 중 20 mM 암모니아; 유속: 3 mL/분; 컬럼: 키랄팩 ADH(250 x 30 mm, 5 μm).
방법 B: 이동상: 메탄올 중 20 mM 암모니아; 유속: 5 mL/분; 컬럼: YMC Cellulose C(250 x 30 mm, 5 μm).
방법 C: 이동상: IPA 중 20 mM 암모니아; 유속: 5 mL/분; 컬럼: Lux A1(250 x 30 mm, 5 μm).
방법 D: 이동상: MeOH 중 20 mM 암모니아; 유속: 4 mL/분; 컬럼: 키랄팩 ADH(250 x 30 mm, 5 μm).
방법 E: 이동상: IPA, 유속: 100 mL/분; 컬럼: Phenomenex Lux Amylose-1(250 x 30 mm, 5 μm).
마이크로파 화학 은 Biotage의 단일 모드 마이크로파 반응기 InitiatorTM Sixty로 수행되었다.
중간체 또는 화학식 I의 화합물의 정제를 위해 사용되는 일반적인 플래쉬 크로마토그래피(General flash chromatography) 조건 : 실리카 겔 230-400 메쉬 (mesh); 용리액(elutent)으로 사용되는 구배: 석유 에테르(petroleum ether) 중 10 내지 80% EtOAc 또는 DCM 중 1 내지 15% MeOH
중간체 1: (1-(1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진)
단계 1: 2-(2,5-디브로모페녹시)에탄-1-올
에틸렌 글리콜(5100 mL) 중 1,4-디브로모-2-플루오로벤젠(Combi-Blocks, 1000 g, 3.94 mol)의 교반된 용액에 NMP(500 mL)를 질소 대기 하의 실온(room temperature: RT)에서 첨가하였다. 이어서, KOtBu(1547 g, 1.38 mol)를 5℃에서 45 분에 걸쳐 나누어 첨가하고, 생성된 혼합물을 90℃에서 16 시간 동안 가열하였다. 반응의 완료는 HPLC(방법 A)로 모니터링하고, 이어서 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물(2000 mL)로 희석하고 15 분 동안 교반하였다. 생성된 고체를 여과하고 에틸렌 글리콜(2 x 300 mL)로 세척하였다. 여과물에 물(16000 mL)을 첨가하고, 10℃로 냉각하고 동일한 온도에서 1 시간 동안 교반하여 전체 고체를 침전시켰다. 얻어진 고체를 여과하고 물(2 x 1000 mL), 석유 에테르(pet ether)(3 x 1000 mL)로 세척하고 진공 하에서 건조시켰다. 이 고체를 톨루엔(3 x 500 mL)과 공-증류하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 78% (910 g, 흰색 고체). 1 H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.41 (d, J = 8.0 Hz, 1H ), 7.06-7.00 (m, 2H), 4.14 (t, J = 4.0 Hz, 2H), 4.01 (q, J = 3.6 Hz, 2H). LCMS: (방법 A) 296.0 (M+H), Rt. 3.9 min, 98.2% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 3.7 min, 99.5% (최대).
단계 2: 1,4-디브로모-2-(2-브로모에톡시)벤젠
톨루엔(6370 mL) 중 2-(2,5-디브로모페녹시)에탄-1-올(910.0 g, 3.07 mol)의 교반된 용액에, PBr3(Aldrich, 145 mL, 1.54 mol)을 0℃에서 질소 대기 하에 15분에 걸쳐 첨가하였다. 생성된 혼합물을 90℃에서 4 시간 동안 가열한 다음 0℃로 냉각시켰다. PBr3(13.57 mL, 142.92 mmol) 첨가에 이어서 물(20 mL)을 서서히 첨가하고 90℃에서 3 시간 동안 가열을 계속하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링하고, 이어서 반응 혼합물을 10℃로 냉각시키고 1N NaOH 용액(2200 mL)으로 ??칭하였다. ??칭 직후에 형성된, 유백색(milky) 고체 층을 셀라이트(celite) 패드를 통해 여과하였다. 유기층을 분리하고, 물(1820 mL), 염수 용액(brine solution)(1820 mL)으로 세척하고 무수 Na2SO4상에서 건조시켰다. 이어서, 진공 하에서 45℃에서 증발시켰다. 생성된 조 물질(crude material)을 EtOAc(3185 mL)에 용해시키고, 유기층을 물(1820 mL), 염수 용액(1820 mL)으로 세척하고 무수 Na2SO4로 건조시켰다. 유기층을 감압 하에 40℃에서 증발시켜 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 86% (946 g, 흰색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 7.54 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.36 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.13-7.10 (m, 1H), 4.45 (t, J = 1.2 Hz, 2H), 3.82 (t, J = 1.6 Hz, 2H). HPLC: (방법 A) Rt. 4.7 min, 93.0% (최대).
단계 3: 2,3-디히드로벤조퓨란-6-카브알데히드
질소 대기 하에서 건조 THF(9.5 L) 중 1,4-디브로모-2-(2-브로모에톡시)벤젠(946 g, 2.64 mol)의 교반된 용액에, n-부틸 리튬(1812 mL, 2.89 mol, 헥산 중 1.6 M)을 -78℃에서 30 분에 걸쳐 서서히 첨가하고 동일한 온도에서 1 시간 동안 교반을 계속하였다. n-부틸 리튬의 제 2 배치(batch)(1812 mL, 2.89 mol, 헥산 중 1.6 M)를 -78℃에서 30 분에 걸쳐 서서히 첨가하고 1 시간 더 교반을 계속하였다. 이어서 DMF(408 mL, 5.27 mol)를 동일한 온도에서 서서히 첨가하고 혼합물을 45 분 동안 교반하였다. 반응의 완료 후(TLC로 모니터링), 반응 혼합물을 10℃로 가온하고 sat. NH4Cl 용액(3784 mL)의 첨가로 ??칭시키고 수성층(aqueous layer)을 EtOAc(2 x 2800 mL)로 추출하였다. 합한(combined) 유기층을 물(2838 mL), 염수 용액(2838 mL)으로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 감압 하에 40℃에서 증발시켜 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 96% 조질(crude) (404 g, 옅은 갈색 구미 고체(pale brown gummy solid)). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 9.90 (s, 1H), 7.45 (dd, J = 5.2, 1.2 Hz, 2H), 7.19 (s, 1H), 4.60 (t, J = 8.7 Hz, 2H), 3.27 (t, J = 8.7 Hz, 2H). HPLC: (방법 A) Rt. 2.9 min, 84.3% (최대).
단계 4: 1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에탄-1-올
질소 대기 하에서 건조 THF(4040 mL) 중 2,3-디히드로벤조퓨란-6-카브알데히드(404 g, 2.73 mol)의 교반된 용액에, 메틸 마그네슘 클로리드 용액(1820 mL, 5.45 mol, THF 중 3 M)을 0℃에서 30 분에 걸쳐 서서히 첨가하고 실온에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음, 반응 혼합물을 sat. NH4Cl 용액(1616 mL)을 사용하여 ??칭하고 EtOAc(2 x 2828 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 물(1616 mL), 염수 용액(1616 mL)으로 세척하고, Na2SO4상에서 건조시키고, 45℃에서 감압 하에 증발시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔: 60-120 메쉬, 용리액: 석유 에테르 중 18% EtOAc)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 46% (210 g, 옅은 갈색 구미 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 7.12 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.77 (dd, J = 7.6, 0.8 Hz, 1H), 6.72 (s, 1H), 5.05 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 4.66-4.60 (m, 1H), 4.48 (t, J = 8.4 Hz, 2H), 3.12 (t, J = 8.4 Hz, 2H), 1.28 (t, J = 6.8 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 147.0 (M-H2O+H), Rt. 2.7 min, 90.7% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 2.6 min, 91.7% (최대).
단계 5: 6-(1-클로로에틸)-2,3-디히드로벤조퓨란
0℃에서 DCM(1600 mL) 중 1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에탄-1-올(200 g, 1.22 mmol)의 교반된 용액에, 옥살릴 클로리드(155 mL, 3.66 mmol) 및 촉매량의 DMF(2 mL)를 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 16 시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 건조 DCM(3 x 500 mL)으로 공-증류시켜 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 97% (조질) (220 g, 옅은 갈색 구미 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 7.32 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.92 (d, J = 9.6 Hz, 2H), 5.28 (q, J = 13.2 Hz, 1H), 4.52 (t, J = 8.4 Hz, 2H), 3.15 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 1.75 (d, J = 8.4 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 147.2 (M+H-chloro), Rt. 4.2 min, 77.2% (최대).
단계 6: tert-부틸 4-(1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-카복실레이트
DMF(2000 mL) 중 tert-부틸 피페라진-1-카복실레이트(562 g, 3.02 mol)의 교반된 용액에, DMF(400 mL) 중 6-(1-클로로에틸)-2,3-디히드로벤조퓨란(220 g, 1.21 mol)을 첨가하고 생성된 혼합물을 50℃에서 20 시간 동안 교반하였다. 반응의 완료 후(TLC로 모니터링), 반응 혼합물을 물(500 mL)로 희석하고 EtOAc(2 x 1000 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수(500 mL)로 세척하고, Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에서 증발시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔: 60-120 메쉬, 용리액: 석유 에테르 중 22% EtOAc)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 35% (210 g, 옅은 갈색 구미 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 7.13 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.73-6.68 (m, 2H), 4.49 (q, J = 8.8 Hz, 2H), 3.33-3.26 (m, 3H), 3.12 (t, J = 8.4 Hz, 2H), 2.33-2.22 (m, 4H), 1.45 (s, 9H), 1.25 (d, J = 6.4 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 333.0 (M+H), Rt. 3.2 min, 71.8% (최대).
단계 7: 1-(1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진
1,4 디옥산(300 mL) 중 tert-부틸 4-(1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-카복실레이트(202 g, 608.4 mmol)의 교반된 용액에, 디옥산 중 HCl(4M, 1000mL)을 0℃에서 첨가하였다. 이어서 반응을 실온으로 가온하고 밤새 교반하였다. 반응의 완료는 HPLC(방법 A)로 모니터링 하였다. 이어서 반응 혼합물을 여과하고 1,4 디옥산(200 ml), EtOAc(200 mL), 아세토니트릴(200 mL) 및 디에틸에테르(200 mL)로 세척하였다. 얻어진 고체를 물(350 mL)에 용해시키고 EtOAc(3 x 300 mL)로 세척하였다. 수성층을 pH = 13이 될 때까지 5 N NaOH 용액(300 mL)으로 염기성화하고 EtOAc(2 x 300 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔: 60-120 메쉬, 용리액: DCM 중 10% 메탄올)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 73% (103 g, 옅은 갈색 구미 고체). 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ): δ 7.12 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 6.73-6.67 (m, 2H), 4.48 (t, J = 8.7 Hz, 2H), 3.26 (q, J = 6.6 Hz, 1H), 3.12-3.09 (m, 2H), 2.64-2.61 (m, 4H), 2.26-2.20 (m, 4H), 1.21 (d, J = 6.6 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 233.0 (M+H), Rt. 1.7 min, 92.1% (최대).
중간체 2: (S)-1-(1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진 또는 (R)-1-(1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진
또는
메탄올(1236 mL, 12V) 중 5% 물 중 1-(1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진(102 g, 439.7 mmol)의 교반된 용액에, D-디-p-아니소일타르타르산(92.86 g, 219.8 mmol)을 실온에서 첨가하고 30 분 동안 환류시켰다. 먼저 모든 물질을 용해시킨 후 염을 백색 고체로서 침전시켰다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반한 후, 고체를 여과로 수집하고 메탄올 중 5% 물로 2 회 세척하였다(2 x 1.0 L). 고체의 광학 순도(optical purities)는 87% ee였다. 고체를 5%의 물을 함유하는 메탄올 12 V(1.2 L)에서 환류시켰다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 밤새 교반한 후 고체를 여과로 수집하고 메탄올 중 5% 물로 2 회 세척하였다(2 x 1.0 L). 고체의 광학 순도는 94% ee였다. 고체를 다시 5% 물을 함유하는 환류 메탄올(1.2 L)에 용해시켰다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 밤새 교반한 후 고체를 여과로 수집하고 메탄올 중 5% 물(1.2L)로 세척하였다. 고체의 광학 순도는 97.94% ee(거울상이성질체 순도(enantiomeric purity): 98.9%)였다. 후자를 진공에서 건조시켜 표제 화합물을 D-디-p-아니소일타르타르산 염 (1-(1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진 헤미((2R,3R)-2,3-비스((4-메톡시벤조일)옥시)숙시네이트))로서 제공하였다. 수율: 33% (65 g, 회-백색 고체). 상기 고체를 물(100 mL)에 용해시키고 생성된 용액을 5 N NaOH 용액(200 mL)을 사용하여 염기성화하였다(pH = 14). 화합물을 EtOAc(2 x 500 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수 용액(500 mL)으로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시켰다. 진공 하에서 증발시켜 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 59% (30.5 g, 옅은 갈색 구미 고체). 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ): δ 7.12 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.72 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 6.66 (s, 1H), 4.49 (t, J = 8.7 Hz, 2H), 3.30 (q, J = 6.6 Hz, 1H), 3.12 (t, J = 8.6 Hz, 2H), 2.65-2.62 (m, 4H), 2.20-2.17 (m, 4H), 1.20 (d, J = 6.6 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 233.0 (M+H), Rt. 1.6 min, 84.2% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 1.6 min, 85.8% (최대). Chiral SFC: (방법 D) Rt. 3.0 min, 97.8% (최대).
중간체 3: 1-(1-(2,2-디메틸-2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진 디히드로클로리드
단계 1: 1-브로모-3-((2-메틸알릴)옥시)벤젠
건조 아세톤(60 mL) 중 3-브로모페놀(오크우드 제품, 10.0 g, 28.90 mmol)의 교반된 용액에, K2CO3(8 g, 86.7 mmol)을 실온에서 첨가하고 10 분 동안 교반하였다. 이어서 2-메틸-3-브로모프로펜(3.2 mL, 31.7 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 6 시간 동안 환류시켰다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링하고, 이어서 반응 혼합물을 여과하고 여과물 부분을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 추가 정제없이 다음 단계에서 사용하였다. 수율: 84% (11.0 g, 갈색 액체). 1 H NMR (400 MHz, CDCl3):7.28 (s, 1H), 7.17-7.01 (m, 2H), 6.89-6.86 (m, 1H), 5.10 (s, 1H), 5.02 (s, 1H), 4.44 (s, 2H), 1.85 (s, 3H).
단계 2: 5-브로모-2-(2-메틸알릴)페놀 및 3-브로모-2-(2-메틸알릴)페놀
실온에서 1-브로모-3-((2-메틸알릴)옥시)벤젠(11.0 g, 48.4 mmol)을 폴리에틸렌 글리콜(50 mL)에 첨가하고 반응 혼합물을 마이크로웨이브 조사 하에 250℃에서 1 시간 동안 교반하였다. 반응의 완료 후(TLC로 모니터링), 물(100 mL)을 생성된 혼합물에 첨가하고 수성층을 EtOAc(2 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 석유 에테르 중 30-50% EtOAc)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 위치이성질체(regioisomers)의 혼합물(1.4:1)을 다음 단계에 그대로 사용하였다. 수율: 91% (10 g, 갈색 액체). 1 H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.28 (s, 1H), 7.21-6.90 (m, 2H), 6.96-6.80 (m, 2H), 3.34 (s, 2H), 1.82 (s, 3H). LCMS: (방법 B) 225.0 (M-H), Rt1: 6.4 min, 52.3%, Rt 2: 6.6 min, 36.3% (최대).
단계 3: 6-브로모-2,2-디메틸-2,3-디히드로벤조퓨란
포름산(30 mL) 중 5-브로모-2-(2-메틸알릴)페놀 및 3-브로모-2-(2-메틸알릴)페놀 위치이성질체 혼합물(10 g, 44.0 mmol)의 교반된 용액을 10 시간 동안 환류시켰다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링하고 반응 혼합물을 진공 하에서 완전히 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 석유 에테르 중 15% EtOAc)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 위치이성질체의 혼합물을 그대로 다음 단계로 진행시켰다. 수율: 80% (8 g, 어두운 갈색 액체). 1 H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 6.98 (t, J = 2.0 Hz, 1H), 6.96 (s, 1H), 6.66 (dd, J = 6.8, 2.4 Hz, 1H), 3.03 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 2.96 (s, 1H), 1.51 (d, J = 2.0 Hz, 3H), 1.48 (d, J = 2.0 Hz, 3H).
단계 4: 1-(2,2-디메틸-2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에탄-1-온
건조 톨루엔(100 mL) 중 6-브로모-2,2-디메틸-2,3-디히드로벤조퓨란 및 3-브로모-2,2-디메틸-2,3-디히드로벤조퓨란 위치이성질체 혼합물(7.6 g, 33.5 mmol)의 탈기(degassed) 용액에, 1-에톡시 비닐 트리부틸 주석(1-ethoxy vinyl tributyl tin)(14 ml, 40.15 mmol) 및 Pd(PPh3)2Cl2(940 mg, 1.2 mmol)를 첨가하고 생성된 혼합물을 밤새 90℃에서 가열하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 후, HCl 수용액(6N, 50 mL)을 첨가하고 혼합물을 40℃에서 1 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 고체 NaHCO3를 사용하여 염기성화(pH~8)하고, 셀라이트를 통해 여과하고 EtOAc(100 mL)로 세척하였다. 유기층을 분리하고, 염수 용액(100 mL)으로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에서 증발시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 석유 에테르 중 55% EtOAc)로 정제하여 이성질체(isomer) A 및 이성질체 B를 수득하였다.
이성질체 A 분석: 수율: 30% (2.2 g, 옅은 노란색 액체). 1 H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.45 (dd, J = 7.6, 1.2 Hz, 1H), 7.29 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.21 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 3.05 (s, 2H), 2.56 (s, 3H), 1.50 (s, 6H). LCMS: (방법 A) 191.0 (M+H), Rt 4.0 min, 98.4%, (최대).
이성질체 B 분석: 수율: 15% (500 mg, 옅은 노란색 액체). 1 H NMR (400 MHz, CDCl3): 　δ 7.37 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.23 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 6.93 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 3.36 (s, 2H), 2.59 (s, 3H), 1.48 (s, 6H). LCMS: (방법 A) 191.0 (M+H), Rt. 4.2 min, 99.2% (최대).
단계 5: 1-(2,2-디메틸-2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에탄-1-올
0℃에서 메탄올(11 mL) 중 1-(2,2-디메틸-2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에탄-1-온(2.1 g, 11.0 mmol)의 교반된 용액에, NaBH4(838 mg, 22.0 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 60 분 동안 교반하였다. 반응의 완료 후(TLC로 모니터링), 반응 혼합물을 빙-냉수(ice-cold water)(5 mL)로 ??칭하고 DCM(2 x 30 mL)으로 추출하였다. 합한 유기층을 염수(20 mL)로 세척하고, Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켜 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 76% (조질) (1.6 g, 갈색 액체). 1 H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.28 (s, 1H), 7.12 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.85 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 4.88-4.83 (m, 1H), 3.01 (s 2H), 1.50-1.48 (m, 9H). LCMS: (방법 A) 175.0 (M+H), Rt. 3.5 min, 96.9% (최대).
단계 6: 6-(1-클로로에틸)-2,2-디메틸-2,3-디히드로벤조퓨란
DCM(10 mL) 중 1-(2,2-디메틸-2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에탄-1-올(1.6 g, 8.32 mmol)의 교반된 용액에, SOCl2(2.0 mL, 24.9 mmol)를 0℃에서 첨가하고 혼합물을 실온에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응의 완료 후(TLC로 모니터링), 이어서 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켜 표제 화합물을 수득하고 이를 추가 정제없이 다음 단계에 사용하였다. 수율: 91% (1.75 g, 옅은 갈색 구미 고체).
단계 7: tert-부틸 4-(1-(2,2-디메틸-2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-카복실레이트
DMF(3 mL) 중 1-boc-피페라진(960 mg, 22.19 mmol)의 교반된 용액에, 6-(1-클로로에틸)-2,2-디메틸-2,3-디히드로벤조퓨란(900 mg, 4.21 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 70℃에서 밤새 가열하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음 반응 혼합물을 진공 하에 증발시켰다. 생성된 혼합물에, 물(5 mL)을 첨가하고 수성층을 EtOAc(2 x 15 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 석유 에테르 중 35% EtOAc)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 46% (700 mg, 옅은 갈색 구미 고체). 1 H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.06 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.75 (q, J = 8.0 Hz, 1H), 6.70 (s, 1H), 3.47-3.32 (m, 4H), 2.99 (s, 2H), 2.86-2.85 (m, 2H), 2.45-2.44 (m, 2H), 1.47-1.35 (m, 15H). 1.36 (d, J = 6.4 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 361.0 (M+H), Rt. 3.7 min, 63.4% (최대).
단계 8: 1-(1-(2,2-디메틸-2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진 디히드로클로리드
건조 1,4 디옥산(5 mL) 중 tert-부틸 4-(1-(2,2-디메틸-2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-카복실레이트(700 mg, 1.94 mmol)의 교반된 용액에, 디옥산 중의 HCl 용액(4 M, 10 mL)을 0℃에서 첨가하고 실온에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음, 반응 혼합물을 감압 하에 농축하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 93% (600 mg, 회백색 고체). 1 H NMR (400 MHz, CDCl3): 12.3 (s, 1H), 9.64 (s, 2H), 7.26 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.05-7.04 (m, 2H), 4.50 (bs, 1H), 3.80-3.10 (m, 1H), 3.40-3.10 (m, 9H), 1.67 (s, 3H), 1.42-1.41 (m, 6H). LCMS: (방법 A) 261.2 (M+H), Rt. 1.8 min, 82.2% (최대).
중간체 4: 1-(1-(2-메틸-2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진 디히드로클로리드
단계 1: 1-(3-(알릴옥시)페닐)에탄-1-온
건조 아세톤(60 mL) 중 1-(3-히드록시페닐)에탄-1-온(25 g, 18.36 mol)의 교반된 용액에, K2CO3(81.2 g, 58.75 mol)을 실온에서 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 10 분 동안 교반하였다. 이어서 알릴 브로미드(24 ml, 27.54 mol)를 첨가하고 생성된 혼합물을 6 시간 동안 환류시켰다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 하였다; 이어서 반응 혼합물을 여과하였다. 생성된 여과물을 진공 하에 농축시켜 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 93% (30 g, 갈색 액체). 1 H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.56 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.52 (t, J = 2.0 Hz, 1H) 7.39 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.15 (dd, J = 8.2, 2.8 Hz, 1H), 6.12-6.11 (m, 1H), 5.46 (dd, J = 14.2, 1.2 Hz, 1H), 5.33 (dd, J = 10.6, 1.2 Hz, 1H), 4.63-4.61 (m, 2H), 2.62 (s, 3H).
단계 2: 1-(4-알릴-3-히드록시페닐)에탄-1-온 및 1-(2-알릴-3-히드록시페닐)에탄-1-온의 혼합물
폴리에틸렌 글리콜(10 mL) 중 1-(3-(알릴옥시)페닐)에탄-1-온(5.0 g, 36.7 mmol)의 용액을 마이크로웨이브 조사 하에 250℃에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응의 완료 후(TLC로 모니터링), 물(10 mL)을 생성된 혼합물에 첨가하고 수성층을 EtOAc(2 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 헥산 중 30-50% EtOAc)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. LCMS 분석에 기초하여, 두 위치-이성질체 사이의 비는 1.5:1이었다. 위치이성질체의 혼합물을 그대로 다음 단계로 진행시켰다. 수율: 57% (17 g, 옅은 갈색 액체). 1 H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.50-7.49 (m, 1H), 7.24-7.20 (m, 2H), 7.01-6.99 (m, 1H), 6.08-6.02 (m, 1H), 5.19-5.08 (m, 1H), 4.15 (s, H), 3.49 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 2.08 (s, 3H). LCMS: (방법 B) 175.2 (M-H), Rt 1: 4.9 min, 53.8%; Rt 2: 2.5 min, 34.3% (최대).
단계 3: 1-(2-메틸-2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에탄-1-온 (이성질체 A) 및 1-(2-메틸-2,3-디히드로벤조퓨란-4-일)에탄-1-온 (이성질체 B)
건조 DCM(60 mL) 중 1-(4-알릴-3-히드록시페닐)에탄-1-온 및 1-(2-알릴-3-히드록시페닐)에탄-1-온(17 g, 96.4 mmol)의 교반된 용액에, 지르코늄 클로리드(44 g, 0.1929 mol)을 실온에서 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 12 시간 동안 교반하였다. 이어서 반응 혼합물을 여과하고 여과물을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 런타임: 1.5 시간(장기 구동(long run)), 용리액: 헥산 중 4% EtOAc)로 정제하여 이성질체 A 및 이성질체 B를 수득하였다.
이성질체 A의 분석: 수율: 6.0 % (1.5 g, 갈색 액체). 1 H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.49 (t, J = 9.2 Hz, 1H), 7.33 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.24 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 5.03-5.01 (m, 1H), 3.41-3.35 (m, 1H), 2.90-2.84 (m, 1H), 2.57 (t, J = 1.2 Hz, 3H), 1.50 (d, J = 6.4 Hz, 3H). HPLC: (방법 A) Rt. 3.5 min, 99.4% (최대).
이성질체 B의 분석: 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 7.37 (d, J = 7.60 Hz, 1H), 7.24-7.18 (m, 1H), 6.95 (d, J = 7.60 Hz, 1H), 5.00-4.94 (m, 1H), 3.72-3.65 (m, 1H), 3.18-3.11 (m, 1H), 2.60 (s, 3H), 1.49-1.47 (m, 3H). LCMS: (방법 A) 177.3 (M+H), Rt. 3.7 min, 74.5% (최대).
단계 4: 1-(2-메틸-2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에탄-1-올
0℃에서 메탄올(7.4 mL, 20 V) 중 1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에탄-1-온(0.32 g, 1.82 mmol)의 교반된 용액에, NaBH4(0.14 mL, 3.60 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 60 분 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후(TLC로 모니터링), 반응 혼합물을 빙-냉수(5 mL)로 ??칭하고 수성층을 DCM(2 x 10 mL)으로 추출하였다. 합한 유기층을 염수(5 mL)로 세척하고, Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켜 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 82.5% (조질, 0.25 g, 갈색 액체). 1 H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.12 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 6.85 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 6.80 (s, 1H), 4.97-4.95 (m, 1H), 4.87-4.86 (m, 1H), 3.33-3.31 (m, 1H), 2.83-2.78 (m, 1H), 1.48-1.47 (m, 6H). LCMS: (방법 A) 161.2 (M-H2O+H), Rt. 3.1 min, 99.7% (최대).
단계 5: 6-(1-클로로에틸)-2-메틸-2,3-디히드로벤조퓨란
DCM(10 mL) 중 1-(2-메틸-2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에탄-1-올(0.25 mg, 1.90 mmol)의 교반된 용액에 SOCl2(0.5 mL, 5.8 mmol)를 0℃에서 첨가하고 생성된 혼합물을 실온에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후(TLC로 모니터링), 반응 혼합물을 진공 하에 농축하고 생성된 조물질을 DCM(2 x 10 mL)으로 공-증류하여 표제 화합물을 수득하였다. 생성된 고체를 추가 정제없이 다음 단계에 사용하였다. 수율: 80% (275 mg, 옅은 갈색 구미 고체). 1 H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 7.13 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 6.85 (m, 2H), 5.09-4.90 (m, 2H), 3.35-3.27 (m, 1H), 2.85-2.77 (m, 1H), 1.83 (d, J = 8.00 Hz, 3H), 1.46 (d, J = 6.3 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 161.2 (M-HCl+H), Rt. 4.3 min 65.2% (최대).
단계 6: tert-부틸 4-(1-(2-메틸-2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-카복실레이트
DMF(3 mL) 중 1-Boc-피페라진(658 mg, 11.7 mmol)의 교반된 용액에, 6-(1-클로로에틸)-2-메틸-2,3-디히드로벤조퓨란(580 mg, 2.9 mmol) 및 TEA(1.6 mL, 11.7 mmol)을 첨가하고 70℃에서 밤새 가열하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음, 반응 혼합물을 진공 하에 증발시켰다. 생성된 혼합물에, 물(5 mL)을 첨가하고 수성층을 EtOAc(2 x 15 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 석유 에테르 중 35% EtOAc)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 31% (250 mg, 옅은 갈색 검(pale brown gum)). 1 H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.06 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.75 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.70 (s, 1H), 3.47-3.32 (m, 1H), 3.13-3.11 (m, 1H), 2.86-2.82 (m, 2H), 2.45-2.42 (m, 2H), 2.44-2.34 (m, 4H), 1.47-1.42 (m, 12H), 1.36 (d, J = 6.4 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 347.3 (M+H), Rt. 3.7 min, 63.4 % (최대).
단계 7: 1-(1-(2-메틸-2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진 디히드로클로리드
무수 1,4 디옥산(5 mL) 중 tert-부틸 4-(1-(2-메틸-2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-카복실레이트(250 mg, 0.08 mmol)의 교반된 용액에, 디옥산 중의 HCl 용액(4 M, 10 mL)을 0℃에서 첨가하고 실온에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후(TLC로 모니터링), 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 93% (600 mg, 회백색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): 9.79-9.61 (m, 2H), 7.26 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.09-7.03 (m, 2H), 4.97-4.51 (m, 1H), 3.51 (q, J =6.6 Hz, 1H), 3.83-3.31 (m, 8H), 3.16-3.13 (m, 2H), 1.67 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 1.52 (d, J = 6.4 Hz, 3H).
중간체 5: 1-(1-(크로만-7-일)에틸)피페라진 디히드로클로리드
단계 1: 3-(2,5-디브로모페녹시)프로판-1-올
프로판-1,3-디올(90 mL) 중 1,4-디브로모-2-플루오로벤젠(15 g, 59.28 mmol)의 교반된 용액에, NMP(7 mL)를 질소 대기 하에서 실온에서 첨가하였다. 이어서 KOtBu(27.88 g, 207.5 mmol)를 10℃에서 20 분에 걸쳐 서서히 첨가하고 생성된 반응 혼합물을 100℃에서 12 시간 동안 가열하였다. 반응이 완료된 후(TLC로 모니터링), 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물(200 mL)로 희석하고 15 분 동안 교반하였다. 생성된 고체를 여과하고 에틸렌 글리콜(2 x 50 mL)로 세척하였다. 여과물에, 물(400 mL)을 첨가하고, 반응 혼합물을 10℃로 냉각시키고 동일한 온도에서 1 시간 동안 교반하였다. 생성된 고체를 여과하고 물(2 x 50 mL), 석유 에테르(3 x 50 mL)로 세척하고 진공 하에서 건조시켰다. 이 고체를 톨루엔(3 x 50 mL)과 공-증류하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 88% (16 g, 회백색 고체). 1 H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.41 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.28 (s, 1H), 7.06 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.01 (dd, J = 8.4, 2.4 Hz, 1H), 4.17 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.69 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.42-2.41 (m, 2H).
단계 2: 1,4-디브로모-2-(3-브로모프로폭시)벤젠
톨루엔(1351 mL) 중 3-(2,5-디브로모페녹시)프로판-1-올(16 g, 51.96 mmol)의 교반된 용액에, PBr3(5.06 g, 18.70 mmol)을 질소 대기 하에서 0℃에서 15 분에 걸쳐 서서히 첨가하고 90℃에서 2 시간 동안 가열하였다. 이어서 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 물(2 mL)을 서서히 첨가하고 90℃에서 8 시간 동안 가열을 계속하였다. 반응이 완료된 후(TLC로 모니터링), 반응 혼합물을 10℃로 냉각시키고 2 N NaOH 용액(100 mL)으로 ??칭하였다. 유기층을 물(200 mL), 염수 용액(200 mL)으로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에서 45℃에서 증발시켰다. 생성된 조 물질을 EtOAc(250 mL)로 희석하고, 유기층을 물(250 mL), 염수 용액(250 mL)으로 세척하고 Na2SO4상에서 건조시켰다. 생성된 유기층을 감압 하에 40℃에서 증발시켜 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 88% (17 g, 회백색 고체).
단계 3: 크로만-7-카브알데히드
질소 대기 하에서 건조 THF(100 mL) 중 1,4-디브로모-2-(3-브로모프로폭시)벤젠(5 g, 13.5 mmol)의 교반된 용액에, n-부틸 리튬(9.3 mL 중, 14.87 mmol, 헥산 중 1.6 M)를 -78℃에서 30 분에 걸쳐 서서히 첨가하고 동일한 온도에서 1 시간 동안 계속하였다. n-부틸 리튬의 제 2 배치(9.3 mL, 14.87 mmol, 헥산 중 1.6 M)를 -78℃에서 30 분에 걸쳐 서서히 첨가하고 1 시간 더 교반을 계속하였다. 이어서 DMF(1.73 g, 27.04 mmol)를 동일한 온도에서 서서히 첨가하고 -78℃에서 추가 5 분 동안 유지시켰다. 반응 완료 후(TLC로 모니터링), 반응 혼합물을 10℃로 가온하고 sat.NH4Cl 용액(100 mL)을 첨가하여 ??칭하였다. 수성층을 EtOAc(2 x 200 mL)로 추출하고 합한 유기층을 물(200 mL), 염수 용액(200 mL)으로 세척하였다. 유기층을 Na2SO4상에서 건조시키고 40℃에서 감압 하에 증발시켜 표제 화합물을 수득하였으며 이를 추가 정제없이 다음 단계에 사용하였다. 수율: 82% (1.8 g, 옅은 갈색 구미 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 10.16 (s, 1H), 7.48-7.41 (m, 3H), 4.62 (t, J = 4.0 Hz, 2H), 2.90-2.87 (m, 2H), 2.08-1.99 (m, 2H).
단계 4: 1-(크로만-7-일)에탄-1-올
질소 대기 하에서 건조 THF(18 mL) 중 크로만-7-카브알데히드(1.8 g, 12.33 mmol)의 교반된 용액에, 메틸 마그네슘 클로리드 용액(7.5 mL, 22.47 mmol, THF 중 3 M)을 0℃에서 30 분에 걸쳐 서서히 첨가하고 2 시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음, 반응 혼합물을 sat.NH4Cl 용액(30 mL)을 사용하여 ??칭하고 EtOAc(2 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 물(20 mL), 염수 용액(30 mL)으로 세척하고, Na2SO4상에서 건조시키고 45℃에서 감압 하에 증발시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔: 230-400 메쉬, 용리액: 석유 에테르 중 15% EtOAc)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 30% (600 mg, 옅은 노란색 구미 액체). 1 H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.04 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.86 (dd, J = 7.6, 1.6 Hz, 1H), 6.82 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 4.85 (q, J = 6.4 Hz, 1H), 4.21 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 2.81 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.06-2.00 (m, 2H), 1.52 (d, J = 6.4 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 161.1 (M+H-H2O), Rt. 2.2 min, 59.2% (최대).
단계 5: 7-(1-클로로에틸)크로만:
0℃로 냉각된 DCM(60 mL) 중 1-(크로만-7-일)에탄-1-올(600 mg, 3.37 mmol)의 교반된 용액에, 티오닐 클로리드(0.75 mL, 10.11 mmol) 및 촉매량 DMF(0.01 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3 시간 동안 교반하고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 건조 DCM(3 x 500 mL)으로 공-증류하여 표제 화합물을 수득하고 다음 단계를 위해 그대로 사용되었다. 수율: 97% (조질) (630 mg, 옅은 갈색 구미 고체).
단계 6: tert-부틸 4-(1-(크로만-7-일)에틸)피페라진-1-카복실레이트:
DMF(6.0 mL) 중 tert-부틸 피페라진-1-카복실레이트(684 mg, 3.67 mmol)의 교반된 용액에, 7-(1-클로로에틸)크로만(600 mg, 3.06 mmol) 및 TEA(2.1 mL)를 첨가하고 50℃에서 20 시간 동안 가열하였다. 반응 완료 후(TLC로 모니터링), 이어서 반응 혼합물을 물(500 mL)로 희석하고 수성층을 EtOAc(2 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수(50 mL)로 세척하고, 여과하고 무수 Na2SO4상에서 건조시켰다. 생성된 조 혼합물을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 석유 에테르 중 22% EtOAc)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 41% (700 mg, 옅은 노란색 구미 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 7.00 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.82 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.74 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 4.20 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.43-3.42 (m, 5H), 2.80 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.45-2.42 (m, 4H), 2.01-1.98 (m, 2H), 1.49-1.26 (m, 12H). LCMS: (방법 A) 347 (M+H), Rt. 2.3 min, 69% (최대).
단계 7: 1-(1-(크로만-7-일)에틸)피페라진 디히드로클로리드:
1,4 디옥산(300 mL) 중 tert-부틸 4-(1-(크로만-7-일)에틸)피페라진-1-카복실레이트(700 mg, 608.4 mmol)의 교반된 용액에, 디옥산 중 HCl(4 M, 1000 mL)를 0℃에서 첨가하고 실온에서 19 시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후(TLC로 모니터링), 반응 혼합물을 진공 하에서 농축하고 건조 DCM(3 x 100 mL)으로 공-증류하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 87% (570 mg, 옅은 노란색 구미 액체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 12.14 (s, 1H), 9.50 (s, 1H), 9.13 (s, 1H), 7.16-7.04 (m, 3H), 4.61-4.60 (m, 1H), 4.16-3.13 (m, 4H), 3.64-3.41 (m, 4H), 3.93-3.33 (m, 2H), 2.94-1.89 (m, 2H), 1.93-1.91 (m, 2H), 1.73-1.65 (m, 3H). LCMS: (방법 A) 247.3 (M+H), Rt. 1.6 min, 49.8% (최대).
중간체 6: 5-(1-(피페라진-1-일)에틸)벤조[d]티아졸
　단계 1: 1-(벤조[d]티아졸-5-일)에탄-1-온:
무수 톨루엔(6 L) 중 5-브로모 벤조티아졸(Combi-Blocks, 750 g, 3.51 mol)의 탈기된 용액에, 1-에톡시비닐 트리부틸주석(1.42 L, 4.21 mol)에 이어서 Pd(PPh3)2Cl2(105.6 g, 150.7 mmol)을 실온에서 첨가하고 생성된 혼합물을 90℃에서 16 시간 동안 가열하였다. 반응이 완료된 후(TLC로 모니터링), 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고, 셀라이트를 통해 여과하고 EtOAc(1 L)로 세척하였다. 여과물을 진공 하에 증발시키고 5 N HCl 용액(2.5 L)을 조 혼합물에 첨가하였다. 생성된 담갈색 용액을 실온에서 1.5 시간 동안 교반하고, 포화 NaHCO3(12 L) 용액을 1 시간에 걸쳐 0℃에서 서서히 첨가하여 중화시키고 EtOAc(2 x 5 L)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수 용액(2.5 L)으로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에서 증발시켰다. 생성된 조 물질을 DCM(750 mL)에 용해시키고, 헥산(3 L)을 첨가하고 생성된 고체를 여과하고 상기 고체를 MTBE(4 L)로 세척하였다. 합한 여과물을 진공 하에 농축시키고 잔류물(residue)을 EtOAc(2.5 L)에 용해시켰다. 숯(charcoal)(35 g)을 생성된 용액에 첨가하였다. 유기층을 실온에서 6 시간 동안 교반하고 여과하고 고체를 EtOAc(1 L)로 세척하였다. 유기층을 농축시켜 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 79% (475 g, 밝은 갈색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 9.53 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.32 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.04 (dd, J = 8.4, 1.3 Hz, 1H), 2.71 (s, 3H). LCMS: (방법 C) 178.0 (M+H), Rt. 1.4 min, 98.5% (최대). HPLC: (방법 A) Rt 2.6 min, 97.2% (최대).
단계 2: 1-(벤조[d]티아졸-5-일)에탄-1-올:
메탄올(4.75 L) 중 1-(벤조[d]티아졸-5-일)에탄-1-온(475 g, 2.68 mol)의 교반된 용액에, NaBH4(152.28 g, 4.03 mol)를 조금씩 0℃에서 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 하였다. 이어서 반응 혼합물을 0℃에서 빙수(400 mL)로 ??칭하고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 혼합물에, 물(2.5 L)을 첨가하고 수성층을 EtOAc(2 x 2.5 L)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수(2 L)로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 고체(crude solid)를 헥산:디에틸 에테르(8:2)로 연화처리하고(triturated) 기울여 따라내어(decanted) 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 93% 조질 (440 g, 옅은 갈색 구미 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 9.37 (s, 1H), 8.09 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.50 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 5.32 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 4.93-4.89 (m, 1H), 1.40 (d, J = 6.4 Hz, 3H). LCMS: (방법 C) 180.1 (M+H), Rt. 1.2 min, 98.7% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 2.2 min, 99.5% (최대).
단계 3: 5-(1-클로로에틸)벤조[d]티아졸:
DCM(4.4 L) 중 1-(벤조[d]티아졸-5-일)에탄-1-올(440 g, 2.46 mol)의 교반된 용액에, 티오닐 클로리드(534 mL, 7.37 mol)를 0℃에서 30 분에 걸쳐 적가하고 반응 혼합물을 1 시간 동안 0-10℃에서 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 하였다. 이어서 반응 혼합물을 진공 하에서 증발시켰다. 생성된 조 물질을 건조 DCM(3 x 400 mL)으로 공-증류하고, 진공 하에서 건조시켜 표제 화합물을 수득하였으며 이를 추가 정제없이 다음 단계에 사용하였다. 수율: 100% 조질 (488 g, 노란색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 10.79 (s, 1H), 8.52 (s, 1H), 8.16 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.86 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.30-5.24 (m, 1H), 1.91 (d, J = 6.8 Hz, 3H). LCMS: (방법 C) 198.1 (M+H), Rt. 2.0 min, 50.1% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 3.9 min, 66.8% (최대).
단계 4: tert-부틸 4-(1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-카복실레이트:
DMF(2 L) 중 tert-부틸 피페라진-1-카복실레이트(522 g, 2.97 mol) 및 TEA(2.5 L, 17.34 mol)의 교반된 용액에, DMF(3 L) 중 (5-(1-클로로에틸)벤조[d]티아졸)(488 g, 2.48 mol)을 질소 대기 하에서 실온에서 적가하고 반응 혼합물을 24 시간 동안 60℃로 가열하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 하였다; 이어서 반응 혼합물을 실온으로 냉각시켰다. 생성된 혼합물에, 물(10 L)을 첨가하고 수성층을 EtOAc(6 x 2 L)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수(2.5 L)로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔: 60-120 메쉬, 용리액: 석유 에테르 중 40% EtOAc)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 81% (700 g, 옅은 갈색 구미 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 9.39 (s, 1H), 8.11 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.47 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.45 (q, J = 6.8 Hz, 1H), 3.34-3.29 (m, 4H), 2.37-2.27 (m, 4H), 1.41-1.18 (m, 12H). LCMS: (방법 A) 348.1 (M+H), Rt. 1.6 min, 85.6% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 2.89 min, 81.5% (최대).
단계 5: 5-(1-(피페라진-1-일)에틸)벤조[d]티아졸
1,4-디옥산(3 L) 중 tert-부틸 4-(1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-카복실레이트(700 g, 2.02 mol)의 교반된 용액에, 디옥산 중의 HCl 용액(3.50 L, 4M)을 0℃에서 적가하고 생성된 용액을 실온에서 6 시간 동안 교반하였다. 반응의 완료 후(TLC로 모니터링 됨), 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고 생성된 조 물질을 EtOAc(2 x 1 L)로 연화처리 하였다. 히드로클로리드 염을 물(2.5 L)에 용해시키고 수성층을 EtOAc(3 x 2 L) 및 DCM(3 x 2 L)으로 세척하였다. 생성된 수성층을 6 N NaOH(pH~12)로 염기성화하고 EtOAc(3 x 2 L)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수(500 mL), 물(500 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켜 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 70% (350 g, 옅은 갈색 구미 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 9.38 (s, 1H), 8.10 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.46 (dd, J = 8.4, 1.2 Hz, 1H), 3.33 (m, 1H), 3.58 (q, J = 6.8 Hz, 1H), 2.71-2.68 (m, 4H), 2.37-2.27 (m, 4H), 1.19 (d, J = 6.8 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 248.1 (M+H), Rt. 0.88 min, 97.3% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 1.6 min, 99.1% (최대).
중간체 7: (S)-5-(1-(피페라진-1-일)에틸)벤조[d]티아졸 또는 (R)-5-(1-(피페라진-1-일)에틸)벤조[d]티아졸
또는
EtOH(2 L, 20 V) 중 중간체 6(100 g, 405.0 mmol)의 교반된 혼합물에, D-디-p-아니소일타르타르산(42.31 g, 101.2 mmol)을 실온에서 첨가하고 90℃에서 20 분 동안 가열하였다(참고: D-디-p-아니소일타르타르산을 첨가하고 3 내지 5 분 후에 염 형성이 서서히 관찰되었다). 이어서 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 생성된 혼합물을 여과하고 여과 케이크(filtration cake)를 EtOH(2 x 250 mL, 5 V), 디에틸 에테르(250 mL)로 세척하고 고진공 하에 건조시켰다. ee를 증가시키기 위해, 염(66 g, 79% ee)을 EtOH(1 L, 10 V)에서 24 시간 동안 추가로 환류시키고 실온에서 밤새 교반하였다. 얻어진 염을 여과하고, EtOH(200 mL, 2 V), 디에틸 에테르(200 mL)로 세척하고 고진공 하에 건조시켰다. 96.1%(21.2 g)의 ee를 달성하기 위해 동일한 과정을 반복하였다. 이 단계를 300 g 규모로 반복하여 염(113.2 g)을 얻었다.
　상기 얻어진 염(134.4 g)을 물(300 mL)에 용해시키고, 6 N NaOH 용액(350 mL)으로 pH ~14로 염기성화하고 수성층을 EtOAc(2 x 1 L)로 추출하였다. 합한 EtOAc 층을 염수 용액(2 x 1 L), 물(300 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켜 표제 화합물을 얻었다(거울상이성질체 비율 97.41: 2.58%). 수율: 85% (63.0 g, 옅은 갈색 구미 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 9.38 (s, 1H), 8.09 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.45 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 3.55 (q, J = 6.8 Hz, 1H), 2.67-2.66 (m, 4H), 2.34-2.25 (m, 4H), 1.34 (d, J = 6.8 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 248.2 (M+H), Rt. 1.5 min, 98.5% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 1.6 min, 98.7% (최대). Chiral HPLC: (방법 A) Rt. 11.1 min, 97.4% (최대).
중간체 8: 2-메틸-5-(1-(피페라진-1-일)에틸)벤조[d]티아졸
단계 1: 1-(2-메틸벤조[d]티아졸-5-일)에탄-1-온
건조 톨루엔(40 mL) 중 5-브로모-2-메틸벤조[d]티아졸(10 g, 43.85 mmol, Combi block)의 탈기 용액에, Pd(PPh3)2Cl2(3.07 g, 4.3 mmol)에 이어서 1-에톡시비닐 트리부틸주석(16.2 mL, 48.2 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 90℃에서 16 시간 동안 가열하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음, 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고 셀라이트를 통해 여과하였다. 생성된 여과물을 진공 하에 증발시킨 후, 6 N HCl 용액(80 mL)을 조 물질에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반한 후, NaHCO3를 사용하여 중화시키고 수성층을 EtOAc(2 x 80 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에서 증발시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 컬럼 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 헥산 중 60-80% EtOAc)로 정제하였다. 수율: 72% (6 g, 노란색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.48 (s, 1H), 8.18 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 7.95 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 2.85 (s, 3H), 2.67 (s, 3H). LCMS: (방법 A) 192.3 (M+H), Rt. 2.9 min, 96.8% (최대).
단계 2: 1-(2-메틸벤조[d]티아졸-5-일)에탄-1-올
메탄올(30 mL) 중 1-(2-메틸벤조[d]티아졸-5-일)에탄-1-온(6 g, 31.31 mmol)의 교반된 용액에, NaBH4(2.37 g, 62.74 mmol)를 0℃에서 나누어 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링하고, 이어서 반응 혼합물을 얼음으로 ??칭하고 진공 하에서 증발시켰다. 생성된 반응 혼합물에, 물(10 mL)을 첨가하고 EtOAc(2 x 60 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에서 증발시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 헥산 중 70-90% EtOAc)로 정제하였다. 수율: 87% (5.3 g, 갈색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 7.94 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.38 (dd, J = 8.2, 1.2 Hz, 1H), 5.28 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 4.90-4.80 (m, 1H), 2.79 (s, 3H), 1.38 (d, J = 6.4 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 194.2 (M+H), Rt. 2.5 min, 98.9% (최대).
단계 3: 5-(1-클로로에틸)-2-메틸벤조[d]티아졸
건조 DCM(50 mL) 중 1-(2-메틸벤조[d]티아졸-5-일)에탄-1-올(5.3 g, 27.4 mmol)의 교반된 용액에, 티오닐 클로리드(4 mL, 54.8 mmol)를 0℃에서 적가하고 25℃에서 1 시간 동안 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음, 반응 혼합물을 진공 하에 농축하고 톨루엔(10 mL)과 공-증류시켰다. 생성된 조 물질을 고진공 하에 건조시켜 표제 화합물을 수득하고 이를 추가 정제없이 다음 단계에 사용하였다. 수율: 5.5 g (조질), 갈색 고체. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.05-8.01 (m, 2H), 7.53 (dd, J = 8.4, 2.0 Hz, 1H), 5.51 (q, J = 6.8 Hz, 1H), 2.81 (s, 3H), 1.86 (d, J = 6.8 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 212.2 (M+H), Rt. 4.2 min, 36.1% (최대).
단계 4: 2-메틸-5-(1-(피페라진-1-일)에틸)벤조[d]티아졸
건조 DCM(80 mL) 중 피페라진(13.6 g, 15.9 mmol)의 교반된 용액에, 5-(1-클로로에틸)-2-메틸벤조[d]티아졸(4.2 g, 19.8 mmol)을 20 분의 기간에 걸쳐 적가하고 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응이 완료된 후(TLC로 모니터링), 물(50 mL)을 생성된 혼합물에 첨가하고 10 분 동안 교반하였다. 유기층을 분리하고, 염수(50 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: DCM 중 18-20% 메탄올)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 16% (870 mg, 옅은 갈색 구미 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.32 (s, 1H), 7.95 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.34 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 3.52-3.48 (m, 1H), 2.78 (s, 3H), 2.70 (t, J = 6.0 Hz, 4H), 2.44-2.24 (m, 4H), 1.33 (d, J = 8.8 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 262.2 (M+H), Rt. 1.8 min, 97.3% (최대).
중간체 9: 2-클로로-5-(메틸술피닐)피리미딘
단계 1: 2-클로로-5-(메틸티오)피리미딘
THF(15 mL) 중 5-브로모-2-클로로피리미딘(5 g, 25.8 mmol) 및 1,2-디메틸디술판(2.92 g, 31.02 mmol)의 교반된 용액에, n-BuLi(16.0 mL, 25.8 mmol, 헥산 중 1.6 M)을 -78℃에서 첨가하고 동일한 온도에서 1 시간 동안 교반하였다. 반응 완료 후(TLC로 모니터링), sat.NH4Cl(15 mL)을 첨가하여 반응을 ??칭하고 수성층을 EtOAc(50 mL)로 추출하였다. 유기층을 물(10 mL), 염수(10 mL)로 세척하고 무수 Na2SO4상에서 건조시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔: 60-120 메쉬, 용리액: 석유 에테르 중 15% EtOAc)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 13% (0.6 g, 흰색 고체). 1 H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.50 (s, 2H), 2.56 (s, 3H). LCMS: (방법 A) 161.1 (M+H), Rt. 2.1 min, 95.2% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 2.4 min, 98.5% (최대).
단계 2: 2-클로로-5-(메틸술피닐)피리미딘
DCM(2 mL, 10 V) 중 2-클로로-5-(메틸티오)피리미딘(0.6 g, 2.49 mmol)의 교반된 용액에, m-CPBA(0.644 g, 3.23 mmol)를 0℃에서 30 분 동안 나누어 첨가하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음, 반응 혼합물을 10% NaHCO3 용액으로 ??칭하고 DCM(2 x 100 mL)으로 추출하였다. 합한 유기층을 염수(30 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 석유 에테르 중 10-12% EtOAc)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 33% (330 mg, 회백색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.88 (s, 2H), 2.92 (s, 3H). LCMS: (방법 A) 177.1 (M+H), Rt. 0.8 min, 99.1% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 1.9 min, 99.6% (최대).
중간체 10: N-((2-클로로피리미딘-5-일)(메틸)(옥소)-λ 6 -술파닐리덴)-2,2,2-트리플루오로아세트아미드
DCM(18.0 mL, 20 V) 중 중간체 9(0.9 g, 5.09 mmol)의 교반된 용액에, 트리플루오로아세트아미드(1.15 g, 10.19 mmol), MgO(0.8 g, 20.38 mmol), Rh2(OAc)4(0.12 g, 0.25 mmol) 및 PhI(OAC)2(2.46 g, 7.64 mmol)를 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링하고, 이어서 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 여과물을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 석유 에테르 중 16-18% EtOAc)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 74% (1.1 g, 흰색 고체). LCMS: (방법 A) 288.0 (M+H), Rt. 3.8 min, 71.1% (최대).
중간체 11 및 중간체 12: N-((2-클로로피리미딘-5-일)-(R)-(메틸)(옥소)-λ 6 -술파닐리덴)-2,2,2-트리플루오로아세트아미드 및 N-((2-클로로피리미딘-5-일)-(S)-(메틸)(옥소)-λ 6 -술파닐리덴)-2,2,2-트리플루오로아세트아미드
및
단계 1:(R)-2-클로로-5-(메틸술피닐)피리미딘 및 (S)-2-클로로-5-(메틸술피닐)피리미딘:
및
상기 중간체 9(502 g, 2.84 mol)를 SFC 크로마토그래피(Pic SFC 10-150; CO2: IPA(70:30); 컬럼: Lux A1(250 x 30); 유속: 100 mL/분; 파장: 210nm; 사이클 시간: 5 분; 배압(back pressure): 100 bar, 방법 E)로 분리하였다. 제 1 용리 피크(250.0 L의 IPA)를 40℃에서 농축시켰다. 수율: 40% (201.0 g, 흰색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 9.05 (s, 2H), 2.98 (s, 3H). LCMS: (방법 A) 177.0 (M+H), Rt. 0.7 min, 99.9% (최대). HPLC: (방법 B) Rt. 2.04 min, 99.8% (최대). Chiral SFC: (방법 E) Rt 2.1 min,100% (최대).
제 2 용리 피크(250.0 L의 IPA)를 40℃에서 농축시켰다. 수율: 36% (180.0 g, 흰색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 9.04 (s, 2H), 2.98 (s, 3H).LCMS: (방법 A) 177.0 (M+H), Rt. 0.8 min, 99.8% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 1.02 min, 98.8% (최대). Chiral SFC: (방법 E) Rt 4.6 min, 99.7%.
단계 2: N-((2-클로로피리미딘-5-일)-(S)-(메틸)(옥소)-λ 6 -술파닐리덴)-2,2,2-트리플루오로아세트아미드 및 N-((2-클로로피리미딘-5-일)-(R)-(메틸)(옥소)-λ 6 -술파닐리덴)-2,2,2-트리플루오로아세트아미드
DCM(5 mL) 중 단계 1에서 단리된 상기 제 1 용리 화합물(0.5 g, 2.8 mmol)의 교반된 용액에, 트리플루오로아세트아미드(0.64 g, 5.66 mmol), MgO(0.45 g, 11.3 mmol), Rh2(OAc)4(0.062 g, 0.14 mmol) 및 PhI(OAc)2(1.36 g, 4.20 mmol)를 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 하였다. 이어서 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, DCM으로 세척하였다. 유기층을 진공 하에 농축시키고, 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 석유 에테르 중 25-28% EtOAc)로 정제하여 중간체 11을 수득하였다. 수율: 86 % (0.69 g, 흰색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 9.39 (s, 2H), 3.98 (s, 3H). LCMS: (방법 A) 191.9 (M-COCF3+H), Rt. 3.8 min, 73.8%.
DCM(20 mL, 10 V) 중 단계 1에서 단리된 제 2 용리 화합물(2.0 g, 0.01 mmol)의 교반된 용액에, 트리플루오로아세트아미드(2.56 g, 0.226 mol), MgO(1.83 g, 0.05 mol), Rh2(OAC)4(250 mg, 0.56 mol) 및 PhI(OAC)2(5.49 g, 0.016 mol)를 첨가하고 밤새 실온에서 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음, 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하였다. 여과물을 진공 하에 농축시키고, 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 석유 에테르 중 15-25% EtOAc)로 정제하여 중간체 12를 수득하였다. 수율: 62% (2.0 g, 흰색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 9.39 (s, 2H), 4.04 (s, 3H). LCMS: (방법 A) 288.0 (M+H), Rt. 1.9 min, 92.8% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 3.8 min, 96.1% (최대).
중간체 13: N-((2-클로로피리미딘-5-일)(에틸)(옥소)-λ 6 -술파닐리덴)-2,2,2-트리플루오로아세트아미드
단계 1: 2-클로로-5-(에틸티오)피리미딘
DCM(200 mL) 중 t-부틸 니트라이트(nitrite)(5.99 g, 58.13 mmol) 및 1,2-디에틸디술판(9.4 g, 77.51 mmol)의 교반된 용액에, 2-클로로피리미딘-5-아민(5 g, 38.75 mmol)을 30 분 동안 실온에서 나누어 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응이 완료된 후(TLC로 모니터링), 반응 혼합물을 농축하여 조 물질을 얻고 이를 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔: 60-120 메쉬, 용리액: 석유 에테르 중 5% EtOAc)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 24% (1.6 g, 흰색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.74 (s, 2H), 3.12-3.08 (m, 2H), 1.26-1.22 (m, 3H).
단계 2: 2-클로로-5-(에틸술피닐)피리미딘
0℃로 냉각된 DCM(32.0 mL, 20 V) 중 2-클로로-5-(에틸티오)피리미딘(1.6g, 9.16 mmol)의 교반된 용액에, m-CPBA(2.05 g, 11.90 mmol)를 나누어 첨가하고 생성된 혼합물을 0℃에서 30 분 동안 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음, 반응 혼합물을 10% NaHCO3 용액으로 ??칭하고 DCM(2 x 100 mL)으로 추출하였다. 합한 유기층을 염수(30 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 석유 에테르 중 10-12% EtOAc)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 58% (1.0 g, 회백색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.99 (s, 2H), 3.31 (q, J = 8.6 Hz, 2H), 1.11 (t, J = 8.6 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 191.2 (M+H), Rt. 1.3 min, 98.7% (최대).
단계 3: N-((2-클로로피리미딘-5-일)(에틸)(옥소)-λ 6 -술파닐리덴)-2,2,2-트리플루오로아세트아미드
DCM(18.0 mL, 20 V) 중 2-클로로-5-(에틸술피닐)피리미딘(0.95 g, 5.00 mmol)의 교반된 용액에, 트리플루오로아세트아미드(1.13 g, 10.0 mmol), MgO(0.8 g, 20.0 mmol), Rh2(OAc)4(0.11 g, 0.25 mmol) 및 PhI(OAc)2(2.41 g, 7.5 mmol)를 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링하고, 이어서 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 여과물을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 석유 에테르 중 16-18% EtOAc)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 63% (1.1 g, 흰색 고체).
중간체 14: N-((2-클로로피리미딘-5-일)(옥소)(프로필)-λ 6 -술파닐리덴)-2,2,2-트리플루오로아세트아미드
단계 1: 2-클로로-5-(프로필티오)피리미딘
　DCE(200 mL) 중 t-부틸 니트라이트(6.9 ml, 57.91 mmol) 및 1,2-디프로필 디술판(12 mL, 77.2 mmol)의 교반된 용액에, 2-클로로피리미딘-5-아민(5.0 g, 38.61 mmol, Angene)을 실온에서 30 분 동안 나누어 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 석유-에테르 중의 20% EtOAc)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 25% (2.0 g, 옅은 노란색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.72 (s, 2H), 2.68 (t, J = 9.2 Hz, 2H), 1.81-1.54 (m, 2H), 1.14-0.90 (m, 3H). LCMS: (방법 A) 189 (M+H), Rt. 3.7 min, 94.5 (최대).
단계-2: 2-클로로-5-(프로필술피닐)피리미딘
DCM(23 mL, 10 V) 중 2-클로로-5-(프로필티오)피리미딘(2.3 g, 12.7 mmol)의 교반된 용액에, m-CPBA(Spectrochem, 1.89 g, 10.97 mmol)를 0℃에서 나누어 첨가하고 0℃에서 60 분 동안 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음, 반응 혼합물을 10% NaHCO3 용액으로 ??칭하고 DCM(2 x 50 mL)으로 추출하였다. 합한 DCM 층을 염수(20 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 석유 에테르 중 60-70% EtOAc)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 43% (0.9 g, 옅은 노란색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 9.01 (s, 2H), 3.19-3.00 (m, 2H), 1.75-1.53 (m, 2H), 0.97 (t, J = 6.0 Hz, 3H).
단계-3: N-((2-클로로피리미딘-5-일)(옥소)(프로필)-λ 6 -술파닐리덴)-2,2,2-트리플루오로아세트아미드
DCM(20 mL, 10 V) 중 2-클로로-5-(프로필술피닐)피리미딘(0.9 g, 4.07 mmol)의 교반된 용액에, 트리플루오로아세트아미드(0.92 g, 8.10 mmol), MgO(1.56 g, 16.30 mmol), Rh2(OAc)4(90.11 mg, 0.20 mmol) 및 PhI(OAc)2(1.97 g, 6.11 mmol)를 실온에서 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음, 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 석유 에테르 중 16-18% EtOAc)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 78% (1.0 g, 회백색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 9.36 (s, 2H), 3.19-3.00 (m, 2H), 1.75-1.53 (m, 2H), 0.97 (t, J = 6.0 Hz, 3H).
중간체 15: N-((6-클로로피리딘-3-일)(메틸)(옥소)-λ 6 -술파닐리덴)-2,2,2-트리플루오로아세트아미드
단계 1: 2-클로로-5-(메틸티오)피리딘
DCE(50 mL) 중 t-부틸 니트라이트(6.01 g, 58.33 mmol) 및 디메틸 디술판(7.32 mL, 77.78 mmol)의 교반된 용액에, 6-클로로피리딘-3-아민(5.0 g, 38.89 mmol)을 실온에서 30 분 동안 나누어 첨가하고 실온에서 밤새 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 후, 반응 혼합물을 물에 붓고 수성층을 EtOAc(2 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 석유-에테르에서 50% EtOAc)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 73% (4.5 g, 무색(colourless) 액체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.30 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.79-7.76 (m, 1H), 7.46-7.44 (m, 1H), 2.54 (s, 3H). LCMS: (방법 A) 160.2 (M+H), Rt. 2.3 min, 95.4% (최대).
단계 2: 2-클로로-5-(메틸술피닐)피리딘
0℃로 냉각된 DCM(45 mL, 10 V) 중 2-클로로-5-(메틸티오)피리딘(4.5 g, 28.19 mmol)의 교반된 용액에, m-CPBA(6.32 g, 36.64 mmol)를 나누어 첨가하고 0℃에서 60 분 동안 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음, 반응 혼합물을 10% NaHCO3 용액으로 ??칭하고 DCM(2 x 100 mL)으로 추출하였다. 합한 유기층을 염수(30 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 석유 에테르 중 60-70% EtOAc)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 72% (3.5 g, 옅은 노란색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.69 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 8.20-8.16 (m, 1H), 7.76 (s, 1H), 2.89 (s, 3H). LCMS: (방법 A) 176.2 (M+H), Rt. 1.4 min, 96.3% (최대).
단계 3: N-((6-클로로피리딘-3-일)(메틸)(옥소)-λ 6 -술파닐리덴)-2,2,2-트리플루오로아세트아미드
DCM(20 mL, 10 V) 중 2-클로로-5-(메틸술피닐)피리딘(2.0 g, 11.42 mmol)의 교반된 용액에, 트리플루오로아세트아미드(2.58 g, 22.85 mmol), MgO(1.84 g, 45.68 mmol), Rh2(OAc)4(252 mg, 0.57 mmol) 및 PhI(OAC)2(5.52 g, 17.13 mmol)를 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응이 완료된 후(TLC로 모니터링), 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 여과물을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 석유 에테르 중 16-18% EtOAc)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 86% (2.8 g, 회백색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 9.03 (s, 1H), 8.48-8.46 (m, 1H), 7.96-7.93 (m, 1H), 3.91 (s, 3H). LCMS: (방법 B) 190.9 (M-CF3CO), Rt. 2.6 min, 96.4% (최대).
* 중간체 16: N-((6-클로로피리딘-3-일)(에틸)(옥소)-λ 6 -술파닐리덴)-2,2,2-트리플루오로아세트아미드
단계 1: 2-클로로-5-(에틸티오)피리딘
DCM(75 mL, 15 V) 중 t-부틸 니트라이트(6.01 g, 58.0 mmol) 및 1,2-디에틸디술판(9.6 mL, 78.0 mmol)의 교반된 용액에, 6-클로로피리딘-3-아민(5 g, 38.9 mmol)을 실온에서 30 분 동안 나누어 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 완료 후(TLC로 모니터링), 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 DCM(2 x 15 mL)으로 세척하였다. 합한 유기층을 진공 하에 농축시키고 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 석유 에테르 중 6-10% EtOAc)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 78% (5.3 g, 옅은 노란색 구미 액체). 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.35 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.84 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.47 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.07 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 1.22 (t, J = 7.2 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 174.0 (M+H), Rt. 3.9 min, 97.1% (최대).
단계 2: 2-클로로-5-(에틸술피닐)피리딘
-30℃로 냉각시킨 DCM(53 mL) 중 2-클로로-5-(에틸티오)피리딘(5.3 g, 30.5 mmol)의 교반된 용액에, m-CPBA(Spectrochem, 6.85 g, 39.7 mmol)를 나누어 첨가하고 생성된 혼합물을 1 시간 동안 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음, 반응 혼합물을 10% aq NaHCO3(20 mL)로 ??칭하고 20 분 동안 교반하였다. 수성층을 DCM(50 mL)으로 추출하고, DCM 층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 석유 에테르 중 60-65% EtOAc)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 66% (3.8 g, 회백색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.65 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.12 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.76 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.19-3.12 (m, 1H), 2.95-2.86 (m, 1H), 1.05 (t, J = 7.2 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 190.2 (M+H), Rt. 1.9 min, 98.4% (최대).
단계 3: N-((6-클로로피리딘-3-일)(에틸)(옥소)-λ 6 -술파닐리덴)-2,2,2-트리플루오로아세트아미드
DCM(100 mL) 중 2-클로로-5-(에틸술피닐)피리딘(3.8 g, 20.0 mmol)의 교반된 용액에, 트리플루오로아세트아미드(4.5 g, 40.0 mmol), MgO(3.2 g, 80.1 mmol), Rh2(OAc)4(0.44 g, 1.0 mmol) 및 PhI(OAc)2(9.68 g, 30.0 mmol)를 실온에서 첨가하고 밤새 교반하였다. 반응의 완료 후(TLC로 모니터링), 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, DCM(2 x 20 mL)으로 세척하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 석유 에테르 중 30-35% EtOAc)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 85% (5.1 g, 옅은 갈색 검). 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.97 (s, 1H), 8.44 (d, J = 6.3 Hz, 1H), 7.96 (d, J = 6.6 Hz, 1H), 4.09-4.07 (m, 2H), 1.25 (t, J = 5.1 Hz, 3H).
중간체 17: 메틸 2-(피페라진-1-일)피리미딘-5-카복실레이트
단계 1: 메틸 2-(4-(tert-부톡시카보닐)피페라진-1-일)피리미딘-5-카복실레이트
건조 DMF(60 mL) 중 메틸 2-클로로피리미딘-5-카복실레이트(5 g, 28.97 mmol)의 교반된 용액에, TEA(12.09 mL, 86.92 mmol) 및 tert-부틸 피페라진-1-카복실레이트(5.93 g, 31.87 mmol)을 0℃에서 첨가하고 반응 혼합물을 100℃에서 밤새 가열하였다. 반응의 완료 후(TLC로 모니터링), 반응 혼합물을 농축시켜 DMF(~30 mL)를 감소시키고 얻어진 고체를 여과하고 DCM(35 mL)에 용해시켰다. 유기층을 물(20 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켜 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 70% (7 g, 회백색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.81 (s, 2H), 3.84-3.81 (m, 4H), 3.80 (s, 3H), 3.48-3.38 (m, 4H), 1.42 (s, 9H). LCMS: (방법 A) 323.3 (M+H), Rt. 4.3 min, 99.9% (최대).
단계 2: 메틸 2-(4-(λ 2 -클로라닐)-4λ 4 -피페라진-1-일)피리미딘-5-카복실레이트
건조 1,4 디옥산(30 mL) 중 메틸 2-(4-(tert-부톡시카보닐)피페라진-1-일)피리미딘-5-카복실레이트(6.9 g, 21.42 mmol)의 교반된 용액에, 디옥산 중 HCl 용액(50 mL, 4 N)을 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 3 시간 동안 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음, 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 디에틸 에테르(50 mL)로 연화처리하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 98% (4.7 g, 회백색 고체). LCMS: (방법 A) 223.3 (M-Boc), Rt. 1.6 min, 99.8% (최대).
중간체 18: 1-(4-(메틸티오)페닐)피페라진 히드로클로리드
단계 1: tert-부틸 4-(4-(메틸티오)페닐)피페라진-1-카복실레이트
1,4 디옥산(10 mL) 중 (4-브로모페닐)(메틸)술판(5.0 g, 24.6 mmol), 1-Boc 피페라진(4.6 g, 24.6 mmol), 데이브포스(Davephos)(2.63 g, 6.66 mmol, Combi-blocks) 및 KO t Bu(4.7 g, 49.0 mmol)의 탈기된 교반 용액에, Pd(dba)3(0.45 g, 0.4 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 마이크로웨이브 조사 하에 120℃에서 15 분 동안 가열하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음, 반응 혼합물을 감압 하에 50℃에서 증발시켰다. 생성된 조 혼합물에, 물(10 mL)을 첨가하고 수성층을 EtOAc(2 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 석유-에테르에서 50% EtOAc)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 88% (6.0 g, 회백색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 7.25-7.23 (m, 2H), 6.96-6.93 (m, 2H), 3.58-3.57 (m, 4H), 3.12-3.09 (m, 4H), 2.42 (s, 3H), 1.50 (s, 9H). LCMS: (방법 A) 309.2 (M+H), Rt. 4.3 min, 98.7% (최대).
단계-2: 1-(4-(메틸티오)페닐)피페라진 히드로클로리드
1,4 디옥산(20 mL) 중 tert-부틸 4-(4-(메틸티오)페닐)피페라진-1-카복실레이트(6.0 g, 19.41 mmol)의 교반된 용액에, 디옥산 중 HCl 용액(4 M, 20 mL)을 0℃에서 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 4 시간 동안 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음, 반응 혼합물을 감압 하에서 증발시켜 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 89% (4.8 g, 회백색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 7.5 (m, 2H), 7.22-7.16 (m, 2H), 7.06-6.93 (m, 2H), 3.02-2.99 (m, 4H), 2.51-2.38 (m, 4H), 2.38 (s, 3H).
* 중간체 19: 7-(1-(피페라진-1-일)에틸)퀴놀린
단계 1: 퀴놀린-7-일메탄올
0℃에서 메탄올(50 mL) 중 메틸 퀴놀린-7-카복실레이트(5 g, 26.73 mmol)의 교반된 용액에, NaBH4(1.50 g, 40.10 mmol)를 나누어 첨가하고 실온에서 3 시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후(TLC로 모니터링), 반응 혼합물을 빙-냉수(5 mL)로 ??칭하고 EtOAc(2 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 헥산 중 30% EtOAc)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 98% (4.1 g, 노란색 구미 오일). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.86 (t, J = 2.0 Hz, 1H), 8.35 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 7.98 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.71 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 7.53-7.49 (m, 1H), 5.43 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 4.71 (d, J = 7.2 Hz, 2H). LCMS: (방법 A) 160.0 (M+H), Rt. 0.7 min, 93.5% (최대).
단계 2: 퀴놀린-7-카브알데히드
DCM(50 mL) 중 퀴놀린-7-일메탄올(4 g, 25.15 mmol)의 교반된 용액에, 데스-마틴 페리오디오난(Dess-Martin periodionane)(16 g, 37.72 mmol)을 첨가하고 6 시간 동안 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음, 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하였다. 물(5 mL)을 여과물에 첨가하고, 수성층을 EtOAc(2 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 헥산 중 13% EtOAc)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 98% (3.4 g, 회백색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 10.23 (s, 1H), 9.08-9.07 (m, 1H), 8.68-8.62 (m, 2H), 8.16 (s, 2H), 7.71-7.68 (m, 1H). LCMS: (방법 A) 158.1 (M +H), Rt. 1.2 min, 99.3% (최대).
단계 3: 1-(퀴놀린-7-일)에탄-1-올
THF(20 mL) 중 퀴놀린-7-카브알데히드(3.2 g, 20.25 mmol)의 교반된 용액에, 메틸 마그네슘 클로리드(5.4 g, 16.20 mmol)을 0℃에서 첨가하고 실온에서 6 시간 동안 교반하였다. 반응의 완료 후(TLC로 모니터링), 반응 혼합물을 포화 NH4Cl(15 mL)로 ??칭하고 DCM(2 x 50 mL)으로 추출하였다. 합한 유기층을 물(5 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 헥산 중 25% EtOAc)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 49% (1.5 g, 노란색 구미 액체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.87-8.85 (m, 1H), 8.35 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.98 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.90 (s, 1H), 7.78-7.75 (m, 1H), 7.53-7.50 (m, 1H), 5.39 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 4.94-4.92 (m, 1H), 1.42 (d, J = 6.4 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 174.2 (M+H), Rt. 1.1 min, 91.6% (최대).
단계 4: 7-(1-클로로에틸)퀴놀린
　
DCM(20 mL, 50 V) 중 1-(퀴놀린-7-일)에탄-1-올(400 mg, 2.30 mmol)의 교반된 용액에, SOCl2(0.82 mL, 6.92 mmol)를 0℃에서 첨가하고 실온에서 1 시간 동안 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음, 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 건조 DCM(3 x 500 mL)으로 공-증류하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 87% (380 mg, 조질, 갈색 구미 고체). LCMS: (방법 A) 192.3 (M+H), Rt. 1.8 min, 86.2% (최대).
단계 5: tert-부틸 4-(1-(퀴놀린-7-일)에틸)피페라진-1-카복실레이트
DMF(20 mL) 중 tert-부틸 피페라진-1-카복실레이트(5.7 g, 36.5 mmol)의 교반된 용액에, 7-(1-클로로에틸)퀴놀론(700 mg, 3.65 mmol)을 0℃에서 첨가하고 실온에서 밤새 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 후, 반응 혼합물을 진공 하에서 증발시켰다. 생성된 혼합물에, 물(25 mL)을 첨가하고 EtOAc(2 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 헥산 중 16% EtOAc)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 65% (800 mg, 갈색 구미 액체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.87 (t, J = 4.2 Hz, 1H), 8.35 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.99 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.85 (s, 1H), 7.77 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.54 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 3.67-3.34 (m, 1H), 2.90-2.74 (m, 2H), 2.68-2.61 (m, 2H), 2.41-2.28 (m, 7H), 1.42 (s, 9H). LCMS: (방법 A) 342.2 (M+H), Rt. 1.8 min, 95.7% (최대).
단계 6: 7-(1-(피페라진-1-일)에틸)퀴놀린
1,4 디옥산(20 mL) 중 tert-부틸 4-(1-(퀴놀린-7-일)에틸)피페라진-1-카복실레이트(800 mg, 2.34 mmol)의 교반된 용액에, 디옥산 중 HCl(4 M, 2.34 mL, 9.36 mmol)을 0℃에서 첨가하고 실온에서 4 시간 동안 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 후, 반응 혼합물을 진공 하에서 증발시켰다. 생성된 조 물질을 EtOAc로 연화처리하고 진공 하에서 증발시켜 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 71% (800 mg, 회백색 고체). LCMS: (방법 A) 242.0 (M+H), Rt. 0.6 min, 89.9% (최대).
중간체 20: 6-이미노-2-(피페라진-1-일)-5,6,7,8-테트라히드로-6l4-티오피라노[4,3-d]피리미딘 6-옥시드 히드로클로리드
단계 1: tert-부틸 4-카바미미도일피페라진-1-카복실레이트
건조 DMF(15 mL) 중 1-Boc-피페라진(3.0 g, 16.13 mmol)의 교반된 용액에, 1H-피라졸-1-카복사미드 히드로클로리드(2.364 g, 16.13 mmol)에 이어서 DIPEA(2.4 mL, 17.741 mmol)을 20℃에서 적가하고 60℃에서 밤새 교반하였다. 생성된 반응 혼합물을 15-20℃로 냉각시키고, MTBE(10 mL)를 첨가하고 1 시간 동안 교반하였다. 침전된 고체를 여과하고, 추가의 MTBE(10 mL)로 세척하여 표제 화합물을 수득하였으며 이를 추가 정제없이 다음 단계로 가져갔다. 수율: 95% (3.5 g, 회백색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 7.71 (s, 3H), 3.43-3.37 (m, 8H), 1.41 (s, 9H). LCMS: (방법 A) 229.3 (M+H), Rt. 1.8 min, 97.9% (최대).
단계 2: (E)-3-((디메틸아미노)메틸렌)테트라히드로-4H-티오피란-4-온
DMF(15 mL) 중 테트라히드로-4H-티오피란-4-온 1,1-디옥시드(2.5 g, 21.52 mmol)의 교반된 용액에, DMF-DMA(8.65 mL, 64.554 mmol)를 실온에서 첨가하고 100℃에서 6 시간 동안 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 95% (3.5 g, 갈색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 7.29 (s, 1H), 3.75 (s, 2H), 3.10 (s, 6H), 2.79-2.74 (m, 2H), 2.49-2.47 (m, 2H).
*단계 3: tert-부틸 4-(7,8-디히드로-5H-티오피라노[4,3-d]피리미딘-2-일)피페라진-1-카복실레이트
에탄올(30 mL) 중 tert-부틸 4-카바미미도일피페라진-1-카복실레이트(3.5 g, 15.35 mmol) 및 (E)-3-((디메틸 아미노)메틸렌)테트라히드로-4H-티오피란-4-온 1,1-디옥시드(3.5 g, 20.47 mmol)의 교반된 용액에, K2CO3(4.24 g, 30.7 mmol)을 실온에서 첨가하고 밤새 환류시켰다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 후, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 혼합물에, 물(10 mL)을 첨가하고 수성층을 EtOAc(2 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 석유-에테르에서 30-40% EtOAc)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 44% (3.0 g, 회백색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.15 (s, 1H), 3.69-3.68 (m, 4H), 3.39-3.38 (m, 2H), 2.92-2.89 (m, 4H), 2.55-2.51 (m, 4H), 1.42 (s, 9H). LCMS: (방법 A) 337.2 (M+H), Rt 2.6 min, 99.6% (최대).
단계 4: tert-부틸 4-(6-옥시도-7,8-디히드로-5H-티오피라노[4,3-d]피리미딘-2-일)피페라진-1-카복실레이트
0℃에서 DCM(30 mL, 10 V) 중 tert-부틸 4-(7,8-디히드로-5H-티오피라노[4,3-d]피리미딘-2-일)피페라진-1-카복실레이트(3.0 g, 8.92 mmol)의 교반된 용액에, m-CPBA(1.53 g, 8.916 mmol)를 나누어 첨가하고 0℃에서 60 분 동안 교반하였다. 반응의 완료 후(TLC로 모니터링), 반응 혼합물을 10% NaHCO3 용액으로 ??칭하고 수성층을 DCM(2 x 100 mL)으로 추출하였다. 합한 유기층을 염수(30 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 석유 에테르 중 60-70% EtOAc)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 92% (2.9 g, 옅은 노란색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.17 (s, 1H), 3.92-3.90 (m, 2H), 3.71-3.70 (m, 4H), 3.34-3.16 (m, 4H), 3.13-2.89 (m, 4H), 1.43 (s, 9H). LCMS: (방법 A) 253.1 (M-Boc), Rt. 2.2 min, 97.9% (최대).
단계 5: tert-부틸 4-(6-이미노-6-옥시도-5,6,7,8-테트라히드로-6l4-티오피라노[4,3-d]피리미딘-2-일)피페라진-1-카복실레이트
DCM(60 mL, 20 V) 중 tert-부틸 4-(6-옥시도-7,8-디히드로-5H-티오피라노[4,3-d]피리미딘-2-일)피페라진-1-카복실레이트(2.9 g, 8.24 mmol)의 교반된 용액에, 트리플루오로아세트아미드(1.86 g, 16.477 mmol), MgO(1.33 g, 32.952 mmol), Rh2(OAC)4(182 mg, 0.412 mmol) 및 PhI(OAc)2(3.98 g, 12.357 mmol)을 첨가하고 실온에서 밤새 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음, 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 석유 에테르 중 55-60% EtOAc)로 정제하여 중간체 tert-부틸 4-(6-옥시도-6-((2,2,2-트리플루오로아세틸)이미노)-5,6,7,8-테트라히드로-6λ4-티오피라노[4,3-d]피리미딘-2-일)피페라진-1-카복실레이트를 얻었다. 수율: 55% (2.1 g, 옅은 갈색 오일).
이 중간체에 메탄올(10 mL, 20 V) 및 K2CO3(1.13 g, 8.24 mmol)를 첨가하고 생성된 혼합물을 20 분 동안 교반하였다. 20 분 후, 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 진공 하에 농축시켰다. 이 생성된 잔류물에 물(50 mL)을 첨가하고, DCM(2 x 100 mL)으로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 구배(gradient): DCM 중 1-2% 메탄올)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 66% (800 mg, 회백색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.13 (s, 1H), 4.26-4.22 (m, 2H), 3.93 (s, 1H), 3.71-3.70 (m, 4H), 3.38-3.37 (m, 4H), 3.34-3.30 (m, 2H), 3.12-3.11 (m, 2H), 1.42 (s, 9H). LCMS: (방법 A) 268.1 (M-Boc), Rt. 2.2 min, 95.7% (최대).
단계 6: 6-이미노-2-(피페라진-1-일)-5,6,7,8-테트라히드로-6l4-티오피라노[4,3-d]피리미딘 6-옥시드 히드로클로리드
　
1,4 디옥산(10 mL) 중 tert-부틸 4-(6-이미노-6-옥시도-5,6,7,8-테트라히드로-6λ4-티오피라노[4,3-d]피리미딘-2-일)피페라진-1-카복실레이트(2.0 g, 5.45 mmol)의 교반된 용액에, 디옥산 중 HCl(4 M, 10 mL)을 0℃에서 첨가하고 실온에서 4 시간 동안 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 후, 반응 혼합물을 감압 하에서 증발시켜 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 82% (0.95 g, 회백색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 9.96 (bs, 2H) 8.13 (s, 1H), 4.26-4.22 (m, 2H), 3.93 (s, 1H), 3.71-3.70 (m, 4H), 3.38-3.37 (m, 4H), 3.34-3.30 (m, 2H), 3.12-3.11 (m, 2H). LCMS: (방법 B) 268.1 (M+H), Rt. 0.6 min, 99.2% (최대).
중간체 21: 6-(1-(피페라진-1-일)에틸)퀴녹살린
단계 1: 1-(퀴녹살린-6-일)에탄-1-온
톨루엔(20 mL) 중 6-브로모 퀴녹살린(2.0 g, 9.50 mmol)의 탈기된 교반 용액에, 1-에톡시 비닐 트리부틸주석(3.8 g, 10.5 mmol)에 이어서 Pd(PPh3)2Cl2(0.67 g, 0.95 mmol)를 실온에서 첨가하고 90℃에서 16 시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후(TLC로 모니터링), 반응 혼합물을 실온에서 냉각하고, 셀라이트를 통해 여과하고, 여과물을 진공 하에서 증발시켰다. 생성된 조 혼합물에, 6 N HCl 용액(20 mL)을 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하였다. 용액을 sat. NaHCO3로 중화시키고 수성층을 DCM(2 x 100 mL)으로 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 헥산 중 30% EtOAc)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 45% (800 mg, 갈색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 9.06-9.04 (m, 2H), 8.70 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.28 (t, J = 2.8 Hz, 1H), 8.16 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 2.97 (s, 3H). LCMS: (방법 A) 173 (M+H), Rt. 2.2 min, 99.1% (최대).
단계 2: 1-(퀴녹살린-6-일)에탄-1-올
0℃에서 건조 메탄올(20 mL) 중 1-(퀴녹살린-6-일)에탄-1-온(0.8 g, 4.65 mmol)의 교반된 용액에, NaBH4(0.36 g, 9.30 mmol)를 나누어 첨가하고 생성된 혼합물을 1 시간 동안 교반하였다. 반응 완료 후(TLC로 모니터링), 반응 혼합물을 빙 냉수로 ??칭하고 수성층을 DCM(2 x 40 mL)으로 추출하였다. 합한 유기층을 물(20 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 추가 정제없이 다음 단계로 진행시켰다. 수율: 75% (600 mg, 어두운 갈색 액체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.91-8.89 (m, 2H), 8.03 (t, J = 11.6 Hz, 2H), 7.87-7.86 (m, 1H), 5.49 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 4.98-4.97 (m, 1H), 1.42 (d, J = 8.6 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 175.0 (M+H), Rt. 1.8 min, 95.0% (최대).
단계 3: 6-(1-클로로에틸)퀴녹살린
건조 DCM(10 mL) 중 1-(퀴녹살린-6-일)에탄-1-올(0.6 g, 3.46 mmol)의 교반된 용액에, 티오닐 클로리드(0.5 mL, 6.93 mmol)를 0℃에서 적가하고 실온에서 1 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에서 증발 건조하고, 생성된 조 물질을 추가 정제없이 그대로 다음 단계로 진행시켰다. 수율: 97% (650 mg, 회백색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.74 (s, 2H), 7.93 (s, 1H), 7.70-7.68 (m, 2H), 4.46-4.23 (m, 1H), 1.87 (s, 3H). LCMS: (방법 A) 193 (M+H), Rt. 3.41 min, 71.4% (최대).
단계 4: tert-부틸 4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-카복실레이트
건조 DMF(40 mL) 중 1-Boc 피페라진(3.8 g, 20.83 mmol)의 교반된 용액에, TEA(8.7 mL, 62.4 mmol) 및 6-(1-클로로에틸)퀴녹살린(4 g, 20.83 mmol)을 실온에서 첨가하고 밤새 90℃에서 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 혼합물에, 물(50 mL)을 첨가하고 수성층을 DCM(150 mL)으로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 헥산 중 45-50% EtOAc)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 46% (3.5 g, 갈색 고체). LCMS: (방법 A) 343.2 (M+H), Rt. 2.5 min, 75.3% (최대).
단계 5: 6-(1-(피페라진-1-일)에틸)퀴녹살린 히드로클로리드
메탄올(5 mL) 중 tert-부틸 4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-카복실레이트(3.5 g, 10.23 mmol)의 교반된 용액에, 디옥산 중 HCl(4 M, 35 mL, 10 V)을 0℃에서 첨가하고 실온에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 후, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 조 물질을 디에틸에테르(15 mL)로 연화처리하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 87% (2.1 g, 갈색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): 8.94 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 8.09 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.88 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 3.85 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 3.54 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.16 (d, J = 3.6 Hz, 2H), 3.06-2.96 (m, 1H),2.92-3.02 (m, 1H), 2.67 (s, 2H), 2.55-2.58 (m, 2H), 1.42 (d, J = 6.8 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 243.3 (M+H), Rt. 1.3 min, 95.0% (최대).
중간체 22: 2-메틸-5-(1-(피페라진-1-일)에틸)벤조[d]옥사졸 히드로클로리드
*
단계 1: 5-브로모-2-메틸벤조[d]옥사졸
트리에틸오르토아세테이트(triethylorthoacetate)(100 mL) 중 2-아미노-4-브로모페놀(10.0 g, 53.18 mmol)의 교반된 용액을 105℃에서 밤새 가열하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음, 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 석유 에테르 중 8-12% EtOAc)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 85% (9.5 g, 옅은 핑크색 결정(crystal)). 1 H-NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 7.90 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.66 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.53-7.50 (m, 1H), 2.62 (s, 3H). LCMS: (방법 A) 211.9 (M+H), Rt. 3.7 min, 97.7% (최대).
단계 2: 1-(2-메틸벤조[d]옥사졸-5-일)에탄-1-온
무수 톨루엔(95 mL) 중 5-브로모-2-메틸벤조[d]옥사졸(9.5 g, 45.03 mmol)의 교반된 용액에, 1-에톡시이닐트리부틸주석(1-ethoxyinyltributyltin)(16.7 mL, 49.53 mmol)에 이어서 Pd(PPh3)2Cl2(1.6 g, 2.25 mmol)을 첨가하고 90℃에서 밤새 가열하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음, 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 혼합물에, aq. HCl(6 N, 50 mL) 용액을 첨가하고, 30 분 동안 교반하고 수성층을 EtOAc(100 mL)로 추출하였다. 유기층을 물(2 x 100 mL), 염수(100 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 석유 에테르 중 25-30% EtOAc)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 65% (5.2 g, 회백색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.27 (s, 1H), 7.99 (dd, J = 8.8, 1.6 Hz, 1H), 7.78 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 2.66 (s, 6H). LCMS: (방법 A) 176.0 (M+H), Rt. 2.6 min, 98.2% (최대).
단계 3: 1-(2-메틸벤조[d]옥사졸-5-일)에탄-1-올
0℃에서 메탄올(50 mL) 중 1-(2-메틸벤조[d]옥사졸-5-일)에탄-1-온(5 g, 28.5 mmol)의 교반된 용액에, NaBH4(1.62 g, 42.84 mmol)을 첨가하고 실온에서 30 분 동안 교반하였다. 반응 완료 후(TLC로 모니터링), 반응 혼합물을 빙 냉수로 ??칭하고 수성층을 EtOAc(60 mL)로 추출하였다. 유기층을 물(2 x 60 mL), 염수(60 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고 진공 하에서 농축하였다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 석유 에테르 중 40-45% EtOAc)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 84% (4.2 g, 어두운 갈색 오일). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 7.59-7.55 (m, 2H), 7.32 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 5.23 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 4.83 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 2.59 (s, 3H), 1.35 (d, J = 8.4 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 178.0 (M+H), Rt. 2.4 min, 92.3% (최대).
단계 4: 5-(1-클로로에틸)-2-메틸벤조[d]옥사졸
0℃에서 건조 DCM(20 mL) 중 1-(2-메틸벤조[d]옥사졸-5-일)에탄-1-올(2 g, 11.3 mmol)의 교반된 용액에, 티오닐 클로리드(1.23 mL, 16.94 mmol)를 첨가하고 실온에서 30 분 동안 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음, 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 톨루엔과 함께 공-증류하고 추가 정제없이 그대로 다음 단계로 진행시켰다. 수율: 84% (1.89 g, 갈색 구미 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 7.78 (s, 1H), 7.66 (dd, J = 8.4, 3.6 Hz, 1H), 7.48 (dd, J = 8.4, 1.6 Hz, 1H), 5.52-5.47 (m, 1H), 2.61 (s, 3H), 1.76 (d, J = 6.6 Hz, 3H).
단계 5: tert-부틸 4-(1-(2-메틸벤조[d]옥사졸-5-일)에틸)피페라진-1-카복실레이트
건조 DMF(10 mL) 중 (5-(1-클로로에틸)-2-메틸벤조[d]옥사졸(1 g, 5.12 mmol)의 교반된 용액에, TEA(2 mL, 15.36 mmol) 및 N-Boc-피페라진(1.14 g, 6.15 mmol)을 첨가하고 90℃에서 밤새 가열하였다. 반응이 완료된 후(TLC로 모니터링), 반응 혼합물을 진공 하에 농축하고 생성된 혼합물을 DCM(10 mL)에 용해시켰다. 유기층을 염수(10 mL)로 세척하고, Na2SO4상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 석유-에테르에서 40-50% EtOAc)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 68% (1.2 g, 갈색 검). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 7.57 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 7.28 (dd, J = 8.4, 1.6 Hz, 1H), 3.57-3.55 (m, 1H), 3.31-3.25 (m, 4H), 2.60 (s, 3H), 2.35-2.23 (m, 4H), 1.41-1.34 (m, 12H). LCMS: (방법 B) 346.0 (M+H), Rt. 6.1 min, 99.3% (최대).
단계 6: 2-메틸-5-(1-(피페라진-1-일)에틸)벤조[d]옥사졸 히드로클로리드
건조 1,4-디옥산(10 mL) 중 tert-부틸 4-(1-(2-메틸벤조[d]옥사졸-5-일)에틸)피페라진-1-카복실레이트(0.9 g, 2.60 mmol)의 교반된 용액에, 디옥산 중 HCl(4 M, 9 mL)을 0℃에서 첨가하고 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 완료 후(TLC로 모니터링), 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하고 디에틸에테르(10 mL)로 연화처리하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 30% (192 mg, 갈색 고체). LCMS: (방법 A) 246.0 (M+H), Rt. 1.5 min, 90.4% (최대).
중간체 23: 1-(1-((R)-2-메틸-2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진 디히드로클로리드
단계 1:(R)-1-(트리틸옥시)프로판-2-올
0℃에서 DCM(300 mL) 중 (R)-프로판-1,2-디올(15.0 g, 0.19 mol)의 교반된 용액에, DCM(100 mL) 중 TEA(44.37 mL, 0.31 mol) 및 트리틸클로리드(56 g, 0.20 mol)를 질소 대기 하에 서서히 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응이 완료된 후(TLC로 모니터링), 반응 혼합물을 sat. NH4Cl(150 mL)로 ??칭시키고 수성층을 DCM(2 x 100 mL)으로 추출하였다. 합한 유기층을 물(100 mL), 염수(100 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에서 증발시켜 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 84% (52.09 g, 옅은 노란색 구미 액체). 1 H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.49-7.42 (m, 6H), 7.35-7.29 (m, 6H), 7.28-7.25 (m, 3H), 4.03-3.98 (m, 1H), 3.16 (dd, J = 9.2, 3.2 Hz, 1H), 3.02 (dd, J = 9.2, 8.0 Hz, 1H), 2.39 (s, 1H), 1.09 (d, J = 6.4 Hz, 3H).
단계 2: (R)-((2-(2,5-디브로모페녹시)프로폭시)메탄트리일)트리벤젠
THF(300 mL) 중 1,4-디브로모-2-플루오로벤젠(32 g, 0.13 mmol) 및 (R)-1-(트리틸옥시)프로판-2-올(44.24 g, 0.14 mmol)의 교반된 용액에, KOtBu(56.8 g, 0.5 mmol)를 5℃에서 25 분에 걸쳐 회분식으로 첨가하고 반응 혼합물을 밤새 70℃에서 가열하였다. 완료 후(TLC로 모니터링), 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물(150 mL)로 희석하고 수성층을 EtOAc(2 x 150 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 물(100 mL), 염수(100 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 헥산 중 6% EtOAc)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 65% (45.3 g, 회백색 고체). 1 H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.48-7.41 (m, 7H), 7.36-7.12 (m, 11H), 4.60-4.57 (m, 1H), 3.46 (dd, J = 10.0, 6.4 Hz, 1H), 3.17 (dd, J = 10.0, 6.2 Hz, 1H), 1.33 (d, J = 6.4, Hz, 3H).
단계 3:(R)-2-(2,5-디브로모페녹시)프로판-1-올
건조 DCM(250 mL) 중 (R)-((2-(2,5-디브로모페녹시)프로폭시)메탄트리일)트리벤젠(25 g, 32.54 mmol)의 교반된 용액에, DCM 중 10% TFA(50 mL)를 0℃에서 적가하고 반응 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하였다. 완료 후(TLC로 모니터링), 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고 sat. NaHCO3로 ??칭시키고 수성층을 DCM(2 x 150 mL)으로 추출하였다. 합한 유기층을 염수(30 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 헥산 중 18% EtOAc)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 32% (7.5 g, 옅은 갈색 구미 오일). 1 H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.41 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.12 (s, 1H), 7.02 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 4.52-4.48 (m, 1H), 3.79 (m, 2H), 1.36 (d, J = 6.4 Hz, 3H). HPLC: (방법 A), Rt. 4.2 min, 99.7% (최대). Chiral SFC: (방법 D), Rt 2.7 min, 96.6%.
단계 4: (R)-1,4-디브로모-2-((1-브로모프로판-2-일)옥시)벤젠
DCM(70 mL) 중 (R)-2-(2,5-디브로모페녹시)프로판-1-올(7.0 g, 22.5 mmol)의 교반된 용액에, TPP(7.09 g, 27.09 mmol) 및 CBr4(8.98 g, 27.09 mmol)을 0℃에서 질소 대기 하에 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 2 시간 동안 교반하였다. 완료 후(TLC로 모니터링), 반응 혼합물을 진공 하에 증발시키고 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 헥산 중 10% EtOAc)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 62% (5.1 g, 옅은 갈색 구미 고체). 1 H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.43 (dd, J = 8.4, 1.6 Hz, 1H), 7.09 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.09-7.03 (m, 1H), 4.58 (m, 1H), 3.61 (dd, J = 10.6, 5.2 Hz, 1H), 3.50 (dd, J = 8.4, 1.2 Hz, 1H), 1.53 (d, J = 6.0 Hz, 3H).
단계 5: (R)-2-메틸-2,3-디히드로벤조퓨란-6-카브알데히드
질소 대기 하에서 건조 THF(40 mL) 중 (R)-1,4-디브로모-2-((1-브로모프로판-2-일)옥시)벤젠(4.8 g, 0.013 mol)의 교반된 용액에, n-부틸 리튬(8.8 mL, 0.014 mol, 헥산 중 1.6 M)을 -78℃에서 10 분에 걸쳐 서서히 첨가하고 1 시간 동안 교반하였다. n-부틸 리튬의 제 2 로트(8.8 mL, 0.014 mol, 헥산 중 1.6 M)를 -78℃에서 10 분에 걸쳐 서서히 첨가하고 1 시간 더 교반을 계속하였다. 이어서 DMF(1.0 mL, 12.8 mmol)를 서서히 첨가하고, -78℃에서 45 분 동안 유지시키고 반응의 완료는 TLC로 모니터링 하였다. 이어서 반응 혼합물을 10℃로 가온하고, sat.NH4Cl 용액(20 mL)으로 ??칭하고 수성층을 EtOAc(2 x 25 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 물(10 mL), 염수 용액(5 mL)으로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에서 증발시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 헥산 중 15-20% EtOAc)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 78% (1.7 g, 갈색 구미 오일). 1 H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 9.92 (s, 1H), 7.39 (dd, J = 7.4, 1.2 Hz, 1H), 7.31 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.24 (s, 1H), 5.04-4.99 (m, 1H), 3.40 (dd, J = 16.4, 8.8 Hz, 1H), 2.89 (dd, J = 14.0, 2.8 Hz, 1H), 1.51 (d, J = 6.4 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 163.1 (M+H), Rt. 3.4 min, 64.6% (최대).
단계 6: 1-((R)-2-메틸-2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에탄-1-올
질소 대기 하에서 건조 THF(10 mL) 중 (R)-2-메틸-2,3-디히드로벤조퓨란-6-카브알데히드(1.6 g, 9.80 mmol)의 교반된 용액에, 메틸 마그네슘 클로리드 용액(4.9 mL, 0.02 mol, THF 중 3 M)을 0℃에서 10 분에 걸쳐 서서히 첨가하고 2 시간 동안 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음, 반응 혼합물을 sat.NH4Cl 용액(10 mL)으로 ??칭하고 수성층을 EtOAc(2 X 15 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 물(5 mL), 염수 용액(2 mL)으로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에서 증발시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 석유 에테르 중 18% EtOAc)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 91% (1.0 g, 옅은 노란색 액체). 1 H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.14 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.86 (dd, J = 7.4, 1.6 Hz, 1H), 6.81 (s, 1H), 4.98-4.92 (m, 1H), 4.86 (q, J = 6.4 Hz, 1H), 3.31 (dd, J = 15.2, 8.8 Hz 1H), 2.81 (dd, J = 15.6, 7.6 Hz, 1H), 1.52 (s, 3H), 1.51 (d, J = 6.8 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 161.0 (M-H2O+H), Rt 2.2 min, 81.1% (최대).
단계 7: (2R)-6-(1-클로로에틸)-2-메틸-2,3-디히드로벤조퓨란
DCM(20 mL) 중 1-((R)-2-메틸-2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에탄-1-올(0.5 g, 2.80 mmol)의 교반된 용액에, SOCl2(0.48 mL, 4.79 mmol)을 0℃에서 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하였다. 완료 후(TLC로 모니터링), 반응 혼합물을 진공 하에 농축하고 생성된 조 물질을 건조 DCM(2 x 500 mL)과 공-증류시켜 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 98% (조질, 500 mg, 갈색 구미 오일). LCMS: (방법 A) 161.0 (M-HCl+H), Rt. 4.9 min, 35.9% (최대).
단계 8: tert-부틸 4-(1-((R)-2-메틸-2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-카복실레이트
DMF(5.6 mL) 중 1-Boc-피페라진(3.18 g, 17.08 mmol)의 교반된 용액에, (2R)-6-(1-클로로에틸)-2-메틸-2,3-디히드로벤조퓨란(2.8 g, 14.23 mmol)에 이어서 TEA(8.00 mL, 56.94 mmol)를 실온에서 서서히 첨가하고 반응 혼합물을 밤새 80℃에서 가열하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 후, 반응 혼합물을 진공 하에서 증발시켰다. 생성된 혼합물에, 물(20 mL)을 첨가하고 수성층을 EtOAc(2 x 25 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수 용액(10 mL)으로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 석유 에테르 중 12% EtOAc)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 71% (3.45 g, 옅은 갈색 구미 액체). 1 H NMR (400 MHz, CDCl3):δ 7.08 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.75 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 4.96-4.92 (m, 1H), 3.40-3.25 (m, 6H), 2.80 (dd, J = 15.4, 8.4 Hz, 1H), 2.41-2.37 (m, 4H), 1.49-1.44 (m, 12H), 1.35 (d, J = 6.4 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 347.2 (M+H), Rt 2.37 min, 81.0% (최대).
단계 9: 1-(1-((R)-2-메틸-2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진 디히드로클로리드
건조 1,4-디옥산(10 mL) 중 tert-부틸 4-(1-((R)-2-메틸-2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-카복실레이트(3.4 g, 9.82 mmol)의 교반된 용액에, 디옥산 중 HCl 용액(17 mL, 4 M)을 0℃에서 적가하고 반응 혼합물을 실온에서 2 시간 동안 교반하였다. 완료 후(TLC로 모니터링 됨), 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 생성된 조 물질을 EtOAc로 연화처리하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 94% (2.9 g, 옅은 갈색 고체). 1 H NMR (400 MHz,DMSO-d 6 ): δ 7.27 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.08 (q, J = 4.4 Hz, 2H), 4.97-4.91 (m, 1H), 4.52 (s, 1H), 3.86-3.84 (m, 1H), 3.65-3.60 (m, 4H), 3.57 (m, 1H), 3.49-3.30 (m, 4H),2.81-2.77 (m, 1H) 1.70 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.40 (d, J = 6.4 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 247.2 (M+H), Rt 1.7 min, 81.7% (최대).
실시예 1: (2-(4-(1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(이미노)(메틸)-λ 6 -술파논
단계 1: 2-(4-(1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)-5-(메틸술피닐)피리미딘
　DMF(2 mL, 10 V) 중 중간체 1(0.24 g, 1.04 mmol)의 교반된 용액에 TEA(0.43 mL, 3.13 mmol) 및 중간체 9(0.2 g, 1.04 mmol)를 첨가하고 반응 혼합물을 80℃에서 밤새 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 혼합물에, 물(30 mL)을 첨가하고 수성층을 DCM(2 x 100 mL)으로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 석유 에테르 중 30-32% EtOAc)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 42% (160 mg, 회백색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.61 (s, 2H), 7.15 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 6.76 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 6.72 (s, 1H), 4.50 (t, J = 8.4 Hz, 2H), 3.78-3.75 (m, 4H), 3.16-3.13 (m, 2H), 2.88 (s, 3H), 2.51-2.50 (m, 4H), 1.28 (d, J = 8.4 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 373.3 (M+H), Rt. 2.1 min, 97.2% (최대).
단계 2: (2-(4-(1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(이미노)(메틸)-λ 6 -술파논
　DCM(2 mL, 10 V) 중 2-(4-(1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)-5-(메틸술피닐)피리미딘(180 mg, 0.48 mmol)의 교반된 용액에, 트리플루오로아세트아미드(100 mg, 0.96 mmol), MgO(78 mg, 1.93 mmol), Rh2(OAc)4(42 mg, 0.01 mmol) 및 PhI(OAc)2(230 mg, 0.72 mmol)를 첨가하고 실온에서 밤새 교반하였다. 반응이 완료된 후(TLC로 모니터링), 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 진공 하에서 농축시켜 중간체 N-((2-(4-(1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(메틸)(옥소)-λ6-술파닐리덴)-2,2,2-트리플루오로아세트아미드를 얻었다. 수율: 45% (105 mg, 회백색 고체).
　이 중간체에, 메탄올(2 mL) 및 K2CO3(100 mg, 0.79 mmol)를 실온에서 첨가하고 30 분 동안 교반하였다. 30 분 후, 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 혼합물에, 물(4 mL)을 첨가하고, DCM(2 x 100 mL)으로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 구배: EtOAc 중 2-3% 메탄올)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 13% (20 mg, 회백색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.66-8.65 (m, 2H), 7.15 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.75 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.72 (s, 1H), 4.51 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 4.24 (s, 1H), 3.83-3.81 (m, 4H), 3.38 (q, J = 6.4 Hz, 1H), 3.15 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 3.07 (s, 3H), 2.38-2.33 (m, 4H), 1.29 (d, J = 6.8 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 388.3 (M+H), Rt. 2.1 min, 94.9% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 2.1 min, 95.2% (최대).
실시예 2: 이미노(메틸)(2-(4-(1-(2-메틸-2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)-λ 6 -술파논
DMF(2.5 mL) 중 중간체 4(300 mg, 0.90 mmol)의 교반된 용액에, TEA(0.7 mL, 4.80 mmol) 및 중간체 10(300 mg, 1.2 mmol)을 실온에서 첨가하고 밤새 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 후, 반응 혼합물을 감압 하에 50℃에서 증발시켰다. 생성된 혼합물에, 물(5 mL)을 첨가하고 수성층을 EtOAc(2 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔: 230-400 메쉬, 용리액: 석유-에테르 중 50% EtOAc)로 정제하여 2,2,2-트리플루오로-N-(메틸(2-(4-(1-(2-메틸-2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(옥소)-λ6-술파닐리덴)아세트아미드를 얻었다. 수율: 30% (150 mg, 회백색 고체).
이 중간체에, 메탄올(7 mL, 20 V) 및 K2CO3(414 mg, 4.53 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 20 분 동안 교반하였다. 20 분 후, 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 혼합물에, 물(20 mL)을 첨가하고 수성층을 DCM(2 x 100 mL)으로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 구배: DCM 중 1-2% 메탄올)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 20% (75 mg, 회백색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) : δ 8.66 (s, 2H), 7.11 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.75 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.68 (s, 1H), 4.89-4.87 (m, 1H), 4.24 (s, 1H), 3.82-3.81 (m, 4H), 3.37-3.20 (m, 2H), 3.08 (s, 3H), 2.76-2.71 (m, 1H), 2.47-2.33 (m, 4H), 1.38 (q, J = 2.4 Hz, 3H), 1.28 (d, J = 6.4 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 402.0 (M+H), Rt 2.4 min, 99.0% (최대). HPLC: (방법 A) Rt 2.4 min, 98.3% (최대).
실시예 3:(2-(4-(1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(에틸)(이미노)-λ 6 -술파논
　
*DMF(2.50 mL, 10 V) 중 중간체 1(0.25 g, 1.07 mmol)의 교반된 용액에, TEA(0.4 mL, 3.23 mmol) 및 중간체 13(0.32 g, 1.07 mmol)을 첨가하고 실온에서 밤새 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음, 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 석유 에테르 중 40% EtOAc)로 정제하여 N-((2-(4-(1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(에틸)(옥소)-λ6-술파닐리덴)-2,2,2-트리플루오로아세트아미드를 얻었다. 수율: 92% (0.48 g, 흰색 고체).
이 중간체에 메탄올(2.5 mL, 20 V) 및 K2CO3(0.40 g, 3.23 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 20 분 동안 교반하였다. 20 분 후, 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 혼합물에, 물(50 mL)을 첨가하고 수성층을 DCM(2 x 100 mL)으로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 구배: EtOAc 중 1-2% 메탄올)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 25% (110 mg, 흰색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.58 (s, 2H), 7.15 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.75 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.72 (s, 1H), 4.50 (t, J = 8.4 Hz, 2H), 4.22 (s, 1H), 3.82-3.80 (m, 4H), 3.37 (q, J = 6.8 Hz, 1H), 3.17-3.11 (m, 4H), 2.50-2.33 (m, 4H), 1.28 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.08 (t, J = 7.6 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 402.2 (M+H), Rt. 2.3 min, 98.8% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 2.2 min, 99.8% (최대).
실시예 4: (2-(4-(1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(이미노)(프로필)-λ 6 -술파논
DMF(2.5 mL) 중 중간체 1(286 mg, 9.50 mmol)의 교반된 용액에, TEA(0.5 mL, 3.8 mmol) 및 중간체 14(300 mg, 9.50 mmol)를 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음, 반응 혼합물을 진공 하에 50℃에서 농축시켰다. 생성된 혼합물에, 물(5 mL)을 첨가하고 수성층을 EtOAc(2 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔: 230-400 메쉬, 용리액: 석유-에테르 중 50% EtOAc)로 정제하여 중간체 N-((2-(4-(1-(2,3-디히드로벤조퓨란)-6-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(옥소)(프로필)-λ6-술파닐리덴)-2,2,2-트리플루오로아세트아미드를 얻었다. 수율: 33% (160 mg, 회백색 고체).
이 중간체에, 메탄올(7 mL, 20 V) 및 K2CO3(414 mg, 4.53 mmol)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 20 분 동안 교반하였다. 20 분 후, 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 혼합물에 물(20 mL)을 첨가하고 DCM(2 x 100 mL)으로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 구배: DCM 중 1-2% 메탄올)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 25% (48.3 mg, 회백색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) : δ 8.59 (s, 2H), 7.15 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 6.74 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.72 (s, 1H), 4.51 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 4.22 (s, 1H), 3.82-3.81 (m, 4H), 3.38 (q, J = 6.4 Hz, 1H), 3.33-3.08 (m, 4H), 2.52-2.33 (m, 4H), 1.56-1.52 (m, 2H), 1.29 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.90 (t, J = 7.6 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 416.2 (M+H), Rt. 2.7 min, 98.3% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 2.4 min, 99.8% (최대).
실시예 5: (2-(4-(1-(2,2-디메틸-2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(이미노)(메틸)-λ 6 -술파논
DMF(2.5 mL) 중 중간체 3(400 mg, 1.20 mmol)의 교반된 용액에, TEA(0.7 mL, 4.80 mmol) 및 중간체 10(344 mg, 1.20 mmol)을 실온에서 첨가하고 반응 혼합물을 밤새 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 후, 반응 혼합물을 감압 하에 50℃에서 증발시켰다. 생성된 혼합물에, 물(2 mL)을 첨가하고 수성층을 EtOAc(2 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔: 230-400 메쉬, 용리액: 석유 에테르 중 50% EtOAc)로 정제하여 N-((2-(4-(1-(2,2-디메틸-2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(메틸)(옥소)-λ6-술파닐리덴)-2,2,2-트리플루오로아세트아미드를 얻었다. 수율: 23% (180 mg, 회백색 고체).
이 중간체에, 메탄올(7 mL, 20 V) 및 K2CO3(414 mg, 4.53 mmol)을 첨가하고 20 분 동안 교반하였다. 20 분 후, 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 혼합물에, 물(20 mL)을 첨가하고 수성층을 DCM(2 x 100 mL)으로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 구배: DCM 중 1-2% 메탄올)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 18% (83.6 mg, 회백색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) : δ 8.66 (s, 2H), 7.10 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.74 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.65 (s, 1H), 4.24 (s, 1H), 3.82 (s, 4H), 3.38 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 3.08 (s, 3H), 2.96 (s, 2H), 2.39-2.33 (m, 4H), 1.41-1.39 (m, 6H), 1.29 (d, J = 6.8 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 416.0 (M+H), Rt. 2.6 min, 99.6% (최대). HPLC: (방법 A) Rt 2.5 min, 99.8% (최대).
실시예 6:(6-(4-(1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)피리딘-3-일)(에틸)(이미노)-λ 6 -술파논
DMF(3 mL, 10 V) 중 중간체 1(0.3 g, 1.3 mmol)의 교반된 용액에, TEA(0.54 mL, 3.9 mmol) 및 중간체 16(0.43 g, 1.42 mmol)을 첨가하고 실온에서 1 시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후(TLC로 모니터링), 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 혼합물을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 석유 에테르 중 85-90% EtOAc)로 정제하여 순수한 중간체 N-((6-(4-(1-(2,3-디히드로벤조퓨란-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리딘-3-일)(에틸)(옥소)-λ6-술파닐리덴)-2,2,2-트리플루오로아세트아미드를 얻었다. 수율: 95% (610 mg, 노란색 구미 고체).
이 중간체에 메탄올(3 mL, 5 V) 및 K2CO3(300 mg, 2.40 mmol)을 첨가하고 15 분 동안 교반하였다. 15 분 후, 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 구배: DCM 중 4-5% 메탄올)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 41% (200.3 mg, 옅은 노란색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.42 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.80 (dd, J = 8.8, 2.4 Hz, 1H), 7.15 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.88 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 6.76 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.72 (s, 1H), 4.50 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 4.03-3.99 (m, 1H), 3.62-3.61 (m, 4H), 3.18-3.16 (m, 2H), 3.08-3.03 (m, 2H), 2.47-2.36 (m, 4H), 1.28 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.05 (t, J = 7.6 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 401.0 (M+H), Rt. 2.1 min, 99.4% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 2.2 min, 99.1% (최대).
실시예 7: (6-(4-(1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)피리딘-3-일)(이미노)(메틸)-λ 6 -술파논
DMF(3.5 mL) 중 중간체 1(350 mg, 1.51 mmol)의 교반된 용액에, TEA(0.6 mL, 4.52 mmol) 및 중간체 15(475 mg, 1.66 mmol)를 실온에서 첨가하고 밤새 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 하였다; 이어서, 반응 혼합물을 감압 하에 50℃에서 증발시켰다. 생성된 혼합물에, 물(10 mL)을 첨가하고 수성층을 EtOAc(2 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔: 230-400 메쉬, 용리액: 석유 에테르 중 50% EtOAc)로 정제하여 순수한 중간체 N-((6-(4-(1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)피리딘-3-일)(메틸)(옥소)-λ6-술파닐리덴)-2,2,2-트리플루오로아세트아미드를 얻었다. 수율: 63% (395 mg, 회백색 고체).
이 중간체에 메탄올(7 mL, 20 V) 및 K2CO3(414 mg, 4.53 mmol)을 첨가하고 20 분 동안 교반하였다. 20 분 후, 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 혼합물에, 물(50 mL)을 첨가하고 수성층을 DCM(2 x 100 mL)으로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: DCM 중 1-2% 메탄올)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 47% (271.43 mg, 회백색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.48 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.87-7.84 (m, 1H), 7.14 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.87 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 6.77-6.72 (m, 2H), 4.52 (t, J = 8.4 Hz, 2H), 4.03 (s, 1H), 3.60 (t, J = 4.8 Hz, 4H), 3.38-3.33 (m, 1H), 3.13 (t, J = 8.4 Hz, 2H), 3.00 (s, 3H), 2.49-2.35 (m, 4H), 1.28 (d, J = 6.8 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 387.0 (M+H), Rt. 2.0 min, 98.7% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 1.4 min, 98.2% (최대).
실시예 8: (2-(4-(1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(메틸)(메틸이미노)-λ 6 -술파논
THF(1.0 mL, 10 V) 중 실시예 1(0.1 g, 0.25 mmol)의 교반된 용액에, NaH(60%)(16 mg, 0.63 mmol)을 0℃에서 첨가하고 생성된 혼합물을 15 분 동안 이 온도에서 교반하였다. MeI(0.048 mL, 0.75 mmol)를 첨가하고 반응 혼합물을 밀봉된 튜브 내에서 실온에서 밤새 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음, 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: DCM 중 1-3% 메탄올)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 19% (29 mg, 회백색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.56 (s, 2H), 7.15 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 6.78 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 6.73 (s, 1H), 4.51 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 3.83 (t, J = 4.8 Hz, 4H), 3.37 (q, J = 6.8 Hz, 1H), 3.16-3.12 (m, 5H), 2.51-2.37 (m, 7H), 1.29 (d, J = 6.8 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 402 (M+H), Rt. 2.1 min, 99.0% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 2.1 min, 99.2% (최대).
실시예 9: ((2-(4-(1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)이미노)디메틸-λ 6 -술파논
단계 1: 5-브로모-2-(4-(1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘:
건조 DMF(20 ml) 중 중간체 1(500 mg, 1.86 mmol)의 교반된 용액에, TEA(0.7 ml, 5.59 mmol)에 이어서 5-브로모-2-클로로피리미딘(431 mg, 2.23 mmol)을 0℃에서 첨가하고 0℃에서 3 시간 동안 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음, 반응 혼합물을 빙 냉수로 희석하였다. 얻어진 침전물을 여과하고 진공 하에서 잘 건조시켜 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 63% (460 mg, 흰색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.42 (s, 2H), 7.14 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.75 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.71 (s, 1H), 4.52-4.48 (m, 2H), 3.67-3.65 (m, 4H), 3.33 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 3.15-3.11 (m, 2H), 2.41-2.32 (m, 4H), 1.27 (d, J = 8.0 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 390.8 (M+2H), Rt. 2.4 min, 92.9% (최대).
단계 2: ((2-(4-(1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)이미노)디메틸-λ 6 -술파논:
5-브로모-2-(4-(1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘(800 mg, 5.01 mmol)의 교반된 용액에, 이미노디메틸-λ6-술파논(132 mg, 1.42 mmol), Cs2CO3(1.15 g, 3.55 mmol) 및 2-디시클로헥실포스피노-2',6'-디이소프로폭시비페닐(RuPhos, 44 mg, 0.09 mmol)을 건조 톨루엔(20 mL) 중에 첨가하였다. 반응 혼합물을 아르곤 가스로 10 분 동안 탈기한 후, Pd(OAc)2(10 mg, 0.05 mmol)를 첨가하고 혼합물을 밤새 110℃에서 가열하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 하였다. 이어서 반응 혼합물을 증류 제거(distilled off)하였다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: DCM 중 2-3% 메탄올)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 39% (18.75 mg, 옅은 갈색 구미 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.01 (s, 2H), 7.14 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.76 (d, J = 7.2, 0.8 Hz, 1H), 6.72 (s, 1H), 4.50 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 3.58 (t, J = 5.2 Hz, 4H), 3.17-3.11 (m, 8H), 2.43 (d, J = 4.0 Hz, 2H), 2.35-2.33 (m, 2H), 1.27 (d, J = 6.8 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 402.2 (M+H), Rt. 2.3 min, 95.2% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 2.3 min, 97.3% (최대).
실시예 10: 2-(4-(1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)-N-(디메틸(옥소)-λ 6 -술파닐리덴)피리미딘-5-카복사미드
단계 1: 메틸 2-(4-(1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-카복실레이트
건조 DMF(10 mL) 중 중간체 17(1 g, 3.87 mmol)의 교반된 용액에, TEA(1.94 mL, 13.95 mmol) 및 6-(1-클로로에틸)-2,3-디히드로벤조퓨란(중간체 1의 단계 1 내지 5에 기재된 합성)(0.24 g, 1.04 mmol)를 0℃에서 첨가하고 100℃에서 12 시간 동안 가열하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음, 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔: 230-400 메쉬, 구배: DCM 중 2-3% 메탄올)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 18% (250 mg, 회백색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.76 (s, 2H), 7.15 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.76 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.72 (s, 1H), 4.50 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 3.82 (t, J = 4.8 Hz, 4H), 3.79 (s, 3H), 3.50-3.42 (m, 1H), 3.13 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 2.49-2.44 (m, 2H), 2.42-2.33 (m, 2H), 1.28 (d, J = 6.8 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 369.2 (M+H), Rt. 2.9 min, 98.9% (최대). HPLC: (방법 A) Rt 2.9 min, 98.8% (최대).
단계 2: 2-(4-(1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)-N-(디메틸(옥소)-λ 6 -술파닐리덴)피리미딘-5-카복사미드
건조 톨루엔(10 mL) 중 메틸 2-(4-(1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-카복실레이트(120 mg, 0.32 mmol)의 교반된 용액에, DABAL-Me3(125 mg, 0.48 mmol) 및 이미노디메틸-λ6-술파논(36 mg, 0.39 mmol, Sibian)을 첨가하고 110℃에서 12 시간 동안 가열하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 후, 반응 혼합물을 증류 제거하여 톨루엔을 완전히 제거하였다. 생성된 조 물질을 플래쉬 컬럼 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: DCM 중 3-4% 메탄올)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 23% (32.10 mg, 회백색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.76 (s, 2H), 7.14 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.76 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 6.72 (s, 1H), 4.50-4.48 (m, 2H), 3.81-3.78 (m, 4H), 3.43 (s, 6H), 3.36-3.32 (m, 1H), 3.15-3.11 (m, 2H), 4.45-4.23 (m, 4H), 1.28 (d, J = 8.0 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 430.0 (M+H), Rt. 2.4 min, 96.3% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 2.4 min, 95.9 (최대).
실시예 11: (4-(4-(1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)페닐)(이미노)(메틸)-λ 6 -술파논
단계 1: 1-(1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)-4-(4-(메틸티오)페닐)피페라진
DMF(10 mL) 중 중간체 18(1.6 g, 6.56 mmol)의 교반된 용액에, TEA(2.76 mL, 19.67 mmol) 및 6-(1-클로로에틸)-2,3-디히드로벤조퓨란(중간체 1의 단계 1 내지 5에 기재된 합성)(1.197 g, 6.557 mmol)를 실온에서 첨가하고 70℃에서 밤새 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 후, 반응 혼합물을 감압 하에 50℃에서 증발시켰다. 생성된 혼합물에, 물(10 mL)을 첨가하고 수성층을 EtOAc(2 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: DCM 중 1-2% 메탄올)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 39% (900 mg, 회백색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 7.17-7.15 (m, 3H), 7.16 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 6.78 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 6.73 (s, 1H), 4.51 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 3.33-3.16 (m, 5H), 2.38 (s, 3H), 2.51-2.33 (m, 4H), 1.29 (d, J = 6.8 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 355.2 (M+H), Rt. 3.6 min, 93.1% (최대).
단계 2: 1-(1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)-4-(4-(메틸술피닐)페닐)피페라진
DCM(9 mL, 10 V) 중 화합물 1-(1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)-4-(4-(메틸티오)페닐)피페라진(900 mg, 2.54 mmol)의 교반된 용액에, m-CPBA(965 mg, 2.79 mmol)를 0℃에서 나누어 첨가하고 동일한 온도에서 60 분 동안 교반하였다. 반응의 완료 후(TLC로 모니터링), 반응 혼합물을 10% NaHCO3 용액으로 ??칭하고 수성층을 DCM(2 x 100 mL)으로 추출하였다. 합한 유기층을 염수(30 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 석유 에테르 중 60-70% EtOAc)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 53% (500 mg, 옅은 노란색 구미 고체).
단계 3: (4-(4-(1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)페닐)(이미노)(메틸)-λ 6 -술파논
DCM(10 mL, 20 V) 중 1-(1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)-4-(4-(메틸술피닐)페닐)피페라진(500 mg, 1.41 mmol)의 교반된 용액에, 트리플루오로아세트아미드(319 mg, 2.83 mmol), MgO(45.68 mg, 5.65 mmol), Rh2(OAc)4(31.2 mg, 0.07 mmol) 및 PhI(OAc)2(362.8 mg, 2.12 mmol)를 첨가하고 실온에서 밤새 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음, 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 석유 에테르 중 55-60% EtOAc)로 정제하여 순수한 중간체 N-((4-(4-(1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)페닐)(메틸)(옥소)-λ6-술파닐리덴)-2,2,2-트리플루오로아세트아미드를 얻었다. 수율: 80% (25 mg, 회백색).
이 중간체에 메탄올(10 mL, 10 V) 및 K2CO3(194 mg, 1.41 mmol)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 20 분 동안 교반하였다. 20 분 후, 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 혼합물에, 물(50 mL)을 첨가하고 수성층을 DCM(2 x 100 mL)으로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 구배: DCM 중 1-2% 메탄올)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 3% (15.7 mg, 옅은 노란색 고체, 두 단계 후 전체적인 수율). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 7.68 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.16 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.01 (d, J = 9.2 Hz, 2H), 6.78 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 6.73 (s, 1H), 4.51 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 3.85 (s, 1H), 3.38-3.33 (m, 1H), 3.28-3.26 (m, 4H), 3.18-3.12 (m, 2H), 2.97 (s, 3H), 2.51-2.33 (m, 4H), 1.29 (d, J = 6.8 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 386.2 (M+H), Rt. 2.1 min, 96.7% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 2.1 min, 97.3% (최대).
실시예 12, 13, 14 및 15: (S)-(2-(4-((S)-1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(이미노)(메틸)-λ 6 -술파논, (S)-(2-(4-((R)-1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(이미노)(메틸)-λ 6 -술파논, (R)-(2-(4-((S)-1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(이미노)(메틸)-λ 6 -술파논 및 (R)-(2-(4-((R)-1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(이미노)(메틸)-λ 6 -술파논
ACN(7 mL) 중 중간체 1(0.56 g, 2.40 mmol)의 교반된 용액에, TEA(1.0 mL, 7.2 mmol) 및 중간체 10(0.69 g, 2.4 mmol)을 첨가하고 생성된 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음, 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 석유 에테르 중 62-65% EtOAc)로 정제하여 순수한 중간체 N-((2-(4-((S)-1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(메틸)(옥소)-λ6-술파닐리덴)-2,2,2-트리플루오로아세트아미드를 얻었다. 수율: 63% (0.7 g, 회-백색 고체).
이 중간체에 메탄올(5 mL) 및 K2CO3(0.5 g, 3.6 mmol)를 첨가하고 생성된 혼합물을 20 분 동안 교반하였다. 20 분 후, 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: EtOAc 중 7-8% 메탄올)로 정제하여 실시예 12, 13, 14 및 15의 혼합물을 수득하였다. 이 혼합물의 부분입체이성질체(diastereomers)를 SFC로 분리하였다; 이동상: IPA 중 20 mM 암모니아, 컬럼: 키랄팩 ADH(방법 A).
첫 번째 용리 분획물의 분석(실시예 12); 수율: 35% (170 mg, 흰색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.66 (s, 2H), 7.15 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.76 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.72 (s, 1H), 4.51 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 4.24 (s, 1H), 3.83-3.82 (m, 4H), 3.39-3.37 (m, 1H), 3.18-3.16 (m, 2H), 3.08 (s, 3H), 2.40-2.38 (m, 4H), 1.29 (d, J = 6.40 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 388.0 (M+H), Rt. 2.1 min, 99.8% (최대). HPLC: (방법 A) Rt 2.0 min, 99.6% (최대). Chiral SFC: (방법 A) Rt. 3.9 min, 100% (최대).
　두 번째 용리 분획물의 분석(실시예 13); 수율: 17% (22 mg, 흰색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.66 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 7.15 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.75 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 4.51 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 4.24 (s, 1H), 3.83-3.81 (m, 4H), 3.38 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 3.16-3.76 (m, 5H), 2.38-2.33 (m, 4H), 1.29 (d, J = 6.8 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 388.3 (M+H), Rt. 2.0 min, 99.7% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 2.1 min, 99.1% (최대). Chiral SFC: (방법 A) Rt. 4.5 min, 98.6% (최대).
세 번째 용리 분획물의 분석(실시예 14); 수율: 18% (26 mg, 흰색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.66 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 7.15 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.75 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 4.51 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 4.24 (s, 1H), 3.83-3.81 (m, 3H), 3.38 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 3.16-3.76(m, 6H), 2.38-2.33 (m, 4H), 1.29 (d, J = 6.8 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 388.3 (M+H), Rt. 2.0 min, 99.7% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 2.1 min, 99.1% (최대). Chiral SFC: (방법 A) Rt. 5.4 min, 96.6% (최대)
네 번째 용리 분획물의 분석(실시예 15); 수율: 18% (25 mg, 흰색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.66 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 7.15 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.75 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 4.51 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 4.24 (s, 1H), 3.83-3.81 (m, 3H), 3.38 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 3.16-3.76 (m, 6H), 2.38-2.33 (m, 4H), 1.29 (d, J = 6.8 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 388.3 (M+H), Rt. 2.0 min, 99.7% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 2.1 min, 99.1% (최대). Chiral SFC: (방법 A) Rt. 7.4 min, 96.6% (최대)
실시예 12의 대안적인 합성:
DMF(75.0 mL, 10 V) 중 중간체 2(7.5 g, 32.3 mmol)의 교반된 용액에, TEA(13.5 mL, 96.98 mmol) 및 중간체 10(10.2 g, 35.56 mmol)을 실온에서 첨가하고 동일한 온도에서 밤새 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음, 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 석유 에테르 중 40% EtOAc)로 정제하여 중간체 N-((2-(4-((S)-1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6)-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(메틸)(옥소)-λ6-술파닐리덴)-2,2,2-트리플루오로아세트아미드 또는 N-((2-(4-((R)-1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(메틸)(옥소)-λ6-술파닐리덴)-2,2,2-트리플루오로아세트아미드를 얻었다. 수율: 60% (9.0 g, 회-백색 고체).
이 중간체에 메탄올(75 mL) 및 K2CO3(13.09 g, 96.98 mmol)을 첨가하고 실온에서 20 분 동안 교반하였다. 20 분 후, 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조물질에 물(150 mL)을 첨가하고, 수성층을 DCM(2 x 300 mL)으로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: EtOAc 중 1-2% 메탄올)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 48% (6.5 g, 흰색 고체). 이 라세미 화합물의 거울상이성질체를 SFC에 의해 분리하였다; 이동상: IPA 중 20 mM 암모니아, 컬럼: 키랄팩 ADH(방법 A). 첫 번째 피크를 농축하여 실시예 12를 수득하였다. 수율: 39% (2.2 g, 흰색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.66 (s, 2H), 7.15 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.76 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.72 (s, 1H), 4.51 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 4.24 (s, 1H), 3.83-3.82 (m, 4H), 3.39-3.37 (m, 1H), 3.18-3.16 (m, 2H), 3.08 (s, 3H), 2.40-2.38 (m, 4H), 1.29 (d, J = 6.4 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 388.3 (M+H), Rt. 2.1 min, 99.7% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 2.1 min, 99.2% (최대). Chiral SFC: (방법 A) Rt. 3.9 min, 99.8% (최대).
실시예 16:(2-(4-((S)-1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(이미노)(메틸)-λ 6 -술파논 또는 (2-(4-((R)-1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(이미노)(메틸)-λ 6 -술파논
또는
DMF(11.0 mL, 10 V) 중 중간체 2(0.88 g, 3.80 mmol)의 교반된 용액에, TEA(1.6 mL, 11.41 mmol) 및 중간체 10(1.1 g, 3.80 mmol)을 첨가하고 실온에서 밤새 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음, 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 석유 에테르 중 40% EtOAc)로 정제하여 순수한 중간체 N-((2-(4-((S)-1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6)-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(메틸)(옥소)-λ6-술파닐리덴)-2,2,2-트리플루오로아세트아미드를 수득하였다. 수율: 93% (1.5 g, 흰색 고체).
이 중간체에 메탄올(22.0 mL, 20 V) 및 K2CO3(1.46 g, 11.41 mmol)을 첨가하고 생성된 혼합물을 20 분 동안 교반하였다. 20 분 후, 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 혼합물에, 물(50 mL)을 첨가하고 수성층을 DCM(2 x 100 mL)으로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 구배: EtOAc 중 1-2% 메탄올)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 49% (720 mg, 흰색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.66 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 7.15 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.75 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 4.51 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 4.24 (s, 1H), 3.83-3.81 (m, 4H), 3.38 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 3.76-3.16 (m, 5H), 2.38-2.33 (m, 4H), 1.29 (d, J = 6.8 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 388.3 (M+H), Rt. 2.1 min, 99.8% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 2.1 min, 99.2% (최대).
실시예 17: (S)-(2-(4-((S)-1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)((2-메톡시에틸)이미노)(메틸)-λ 6 -술파논 또는 (R)-(2-(4-((S)-1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)((2-메톡시에틸)이미노)(메틸)-λ 6 -술파논 또는 (S)-(2-(4-((R)-1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)((2-메톡시에틸)이미노)(메틸)-λ 6 -술파논 또는 (R)-(2-(4-((R)-1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)((2-메톡시에틸)이미노)(메틸)-λ 6 -술파논
THF(1.0 mL) 중 실시예 12(0.1 g, 0.26 mmol)의 교반된 용액에, NaH(60%)(1584 mg, 0.41 mmol)를 0℃에서 첨가하고 혼합물을 15 분 동안 교반하였다. 이어서 1-브로모-2-메톡시에탄(0.07 g, 0.52 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 밀봉된 튜브 내에서 밤새 60℃에서 가열하였다. 반응 완료 후(TLC로 모니터링), 빙-냉수(2 mL)를 첨가하여 반응 혼합물을 ??칭하고 수성층을 EtOAc(10 mL)로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: DCM 중 1-2% 메탄올)로 정제하고 Prep.HPLC(방법 B)로 추가 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 15% (16 mg, 옅은 갈색 구미 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.57 (s, 2H), 7.15 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.76 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.73 (s, 1H), 4.50 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 3.84-3.82 (m, 4H), 3.38-3.37 (m, 2H), 3.33-3.32 (m, 1H), 3.19 (s, 3H), 3.18-3.16 (m, 5H), 2.93-2.91 (m, 2H), 2.48-2.46 (m, 2H), 2.39-2.37 (m, 2H), 1.28 (d, J = 6.80 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 446.0 (M+H), Rt. 2.3 min, 98.8% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 2.4 min, 99.1% (최대).
실시예 18: (S)-(2-(4-((S)-1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(에틸이미노)(메틸)-λ 6 -술파논 또는 (R)-(2-(4-((S)-1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(에틸이미노)(메틸)-λ 6 -술파논 또는 (S)-(2-(4-((R)-1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(에틸이미노)(메틸)-λ 6 -술파논 또는 (R)-(2-(4-((R)-1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(에틸이미노)(메틸)-λ 6 -술파논
DMF(4 mL) 중 실시예 12(0.147 g, 0.379 mmol)의 교반된 용액에, NaH(60%)(0.03 g, 0.76 mmol)를 0℃에서 첨가하고 15 분 동안 교반하였다. 이어서 에틸 브로미드(0.056 mL, 0.76 mmol)를 첨가하고 실온에서 24 시간 동안 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 후, 빙 냉수를 첨가하여 반응을 ??칭하고 증발 건조하였다. 잔류물을 DCM(10 mL)으로 용해시키고, 유기층을 물(5 mL), 염수 용액(5 mL)으로 세척하고 무수 Na2SO4로 건조시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 구배: DCM 중 1-3% 메탄올)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 10% (16 mg, 회백색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.57 (s, 2H), 7.16 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.77 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.73 (s, 1H), 4.51 (t, J = 8.4 Hz, 2H), 3.87-3.64 (m, 5H), 3.83-3.39 (m, 1H), 3.20-3.10 (m, 4H), 2.87-2.82 (m, 1H), 2.76-2.71 (m, 1H), 2.50-2.30 (m, 4H), 1.29 (d, J = 6.40 Hz, 3H), 1.04 (t, J = 7.20 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 416.2 (M +H), Rt. 2.3 min, 97.9% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 2.3 min, 97.6% (최대).
실시예 19: (S)-(2-(4-((S)-1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(이소프로필이미노)(메틸)-λ 6 -술파논 또는 (R)-(2-(4-((S)-1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(이소프로필이미노)(메틸)-λ 6 -술파논 또는 (S)-(2-(4-((R)-1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(이소프로필이미노)(메틸)-λ 6 -술파논 또는 (R)-(2-(4-((R)-1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(이소프로필이미노)(메틸)-λ 6 -술파논
DMF(4 mL) 중 실시예 12(0.15 g, 0.38 mmol)의 교반된 용액에, NaH(60%)(0.03 g, 0.76 mmol)을 0℃에서 첨가하고 15 분 동안 교반하였다. 이어서 2-브로모프로판(100 mg, 0.76 mmol)을 반응 혼합물에 첨가하고 실온에서 48 시간 동안 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음, 반응 혼합물을 빙 냉수의 첨가로 ??칭하고 증발 건조하였다. 생성된 혼합물을 DCM(10 mL)에 용해시키고, 유기층을 물(5 mL), 염수 용액(5 mL)으로 세척하고 무수 Na2SO4상에서 건조시켰다. 생성된 조 혼합물을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 구배: DCM 중 5% 메탄올)로 정제하였다. 얻어진 물질을 preparative HPLC(방법 B)로 추가로 정제하였다. 생성된 TFA 염을 DCM(10 mL)에 용해시키고 NaHCO3(100 mg)을 첨가하였다. DCM 층을 30 분 동안 교반하고, 셀라이트를 통해 여과하였다. 여과물을 45℃에서 감압 하에 증발시켜 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 36% (58 mg, 흰색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) : δ 8.58 (s, 2H), 7.15 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.76 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.73 (s, 1H), 4.51 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 3.88-3.80 (m, 4H), 3.40-3.30 (m, 1H), 3.27-3.20 (m, 6H), 2.50-2.35 (m, 4H), 1.29 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.06 (d, J = 6.0 Hz, 3H), 0.98 (d, J = 6.0 Hz, 3H). LCMS: (방법 B) 430.0 (M+H), Rt. 6.1 min, 99.1% (최대). HPLC: (방법 B) Rt. 5.6 min, 99.9% (최대).
실시예 20: (6-(4-((S)-1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)피리딘-3-일)(메틸)(메틸이미노)-λ 6 -술파논 또는 (6-(4-((R)-1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)피리딘-3-일)(메틸)(메틸이미노)-λ 6 -술파논
단계 1: N-((6-(4-((S)-1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)피리딘-3-일)(메틸)(옥소)-λ 6 -술파닐리덴)-2,2,2-트리플루오로아세트아미드 또는 N-((6-(4-((R)-1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)피리딘-3-일)(메틸)(옥소)-λ 6 -술파닐리덴)-2,2,2-트리플루오로아세트아미드
ACN(10 mL) 중 중간체 2(500 mg, 2.15 mmol)의 교반된 용액에, TEA(0.6 mL, 4.29 mmol) 및 중간체 15(611 mg, 2.01 mmol)를 첨가하고 반응 혼합물을 45℃에서 밤새 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 후, 반응 혼합물을 진공 하에서 증발시켰다. 생성된 혼합물에, 물(10 mL)을 첨가하고 수성층을 EtOAc(2 x 25 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켜 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 53% (550 mg, 회백색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.48 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 7.93-7.89 (m, 1H), 7.15 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 6.88 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 6.77-6.72 (m, 2H), 4.50 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 3.62-3.59 (m, 4H), 3.18-3.11 (m, 2H), 3.45-3.37 (m, 1H), 2.50-2.28 (m, 4H), 1.30 (d, J = 6.4 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 482.9 (M+H), Rt. 2.4 min, 99.7% (최대).
단계 2:(6-(4-((S)-1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)피리딘-3-일)(이미노)(메틸)-λ 6 -술파논 또는 (6-(4-((R)-1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)피리딘-3-일)(이미노)(메틸)-λ 6 -술파논
EtOH(10 mL) 중 단계 1에서 수득된 생성물(550 mg, 1.14 mmol)의 교반된 용액에, K2CO3(354 mg, 2.28 mmol)을 첨가하고 실온에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 후, 반응 혼합물을 진공 하에서 증발시켰다. 생성된 혼합물에, 물(10 mL)을 첨가하고 수성층을 EtOAc(2 x 10 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 물(10 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 감압 하에서 농축시켜 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 90% (400 mg, 회백색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.49 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.88-7.85 (m, 1H), 7.15 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.88 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 6.76 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.72 (s, 1H), 4.51 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 4.04 (s, 1H), 3.6-3.51 (m, 4H), 3.14 (t, J = 8.4 Hz, 2H), 3.02 (s, 3H), 2.48-2.45 (m, 2H), 2.39-2.33 (m, 2H), 1.30 (d, J = 8.4 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 387.2 (M+H), Rt. 1.7 min, 99.7% (최대).
단계 3: (6-(4-((S)-1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)피리딘-3-일)(메틸)(메틸이미노)-λ 6 -술파논 또는 (6-(4-((R)-1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)피리딘-3-일)(메틸)(메틸이미노)-λ 6 -술파논
DMF(5 mL) 중 단계 2에서 얻어진 생성물(200 mg, 0.52 mmol)의 교반된 용액에, NaH(60%)(24 mg, 1.04 mmol)을 0℃에서 첨가하고 혼합물을 10 분 동안 교반하였다. 이어서 MeI(0.004 mL, 0.78 mmol)를 첨가하고 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 후, 반응 혼합물을 감압 하에서 증발시켰다. 생성된 혼합물에, 물(5 mL)을 첨가하고 수성층을 EtOAc(2 x 25 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 Prep HPLC(방법 B)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 20% (40 mg, 회백색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.38 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.76 (t, J = 2.4 Hz, 1H), 7.16 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.91 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 6.77 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 6.73 (s, 1H), 4.51 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 3.62 (s, 4H), 3.37 (s, 1H), 3.14 (t, J = 8.4 Hz, 2H), 3.05 (s, 3H), 2.39 (s, 5H), 2.34 (s, 2H), 1.30 (s, 3H). LCMS: (방법 A) 401.2 (M+H), Rt. 2.2 min, 98.9% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 2.2 min, 99.1% (최대).
실시예 21: (2-(4-(1-(크로만-7-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(이미노)(메틸)-λ 6 -술파논
DMF(2.0 mL) 중 중간체 5(120 mg, 0.24 mmol)의 교반된 용액에, TEA(0.1 mL, 0.74 mmol) 및 중간체 10(8 mg, 0.82 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음, 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 석유 에테르 중 30% EtOAc)로 정제하여 순수한 중간체 N-((2-(4-(1-(크로만-7-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(메틸)(옥소)-λ6-술파닐리덴)-2,2,2-트리플루오로아세트아미드를 얻었다. 수율: 56 % (87 mg, 회백색 고체)
이 중간체에, 메탄올(4.0 mL) 및 K2CO3(15 mg, 0.11 mmol)을 첨가하고 생성된 혼합물을 20 분 동안 교반하였다. 20 분 후, 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, DCM 중 2-5% 메탄올)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 16% (15 mg, 회백색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.65 (s, 2H), 6.98 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.75 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.66 (s, 1H), 4.24 (s, 1H), 4.10 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 3.82-3.37 (m, 4H), 3.07 (s, 3H), 2.71-2.67 (m, 3H), 2.55-2.38 (m, 5H), 1.90-1.88 (m, 2H), 1.35 (d, J = 6.4 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 402.0 (M+H), Rt. 2.3 min, 98.4% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 2.4 min, 98.6% (최대).
실시예 22: (2-(4-(1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(이미노)(메틸)-λ 6 -술파논
DMF(1.2 mL, 10 V) 중 중간체 6(0.12 g, 0.51 mmol)의 교반된 용액에, TEA(0.23 mL, 1.68 mmol) 및 중간체 10(0.16 g, 5.60 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음, 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 석유 에테르 중 40% EtOAc)로 정제하여 순수한 중간체 N-((2-(4-(1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(메틸)(옥소)-λ6-술파닐리덴)-2,2,2-트리플루오로아세트아미드를 얻었다. 수율: 87% (0.21 g, 회-백색 고체).
이 중간체에 메탄올(2.2 mL, 20 V) 및 K2CO3(0.21 g, 1.68 mmol)을 첨가하고 생성된 혼합물을 20 분 동안 교반하였다. 20 분 후, 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 혼합물에 물(50 mL)을 첨가하고 수성층을 DCM(2 x 100 mL)으로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 구배: EtOAc 중 1-2% 메탄올)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 15% (30 mg, 흰색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 9.38 (s, 1H), 8.65 (s, 2H), 8.11 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.02 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.50 (dd, J = 8.2, 1.2 Hz, 1H), 4.22 (s, 1H), 3.85-3.83 (m, 4H), 3.68 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 3.06 (d, J = 0.8 Hz, 3H), 2.52-2.32 (m, 4H), 1.41 (d, J = 6.8 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 403.3 (M+H), Rt. 1.8 min, 97.5% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 1.9 min, 95.9% (최대).
실시예 23: (2-(4-(1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(에틸)(이미노)-λ 6 -술파논
DMF(2.50 mL, 10 V) 중 중간체 6(0.25 g, 1.01 mmol)의 교반된 용액에, TEA(0.4 mL, 3.03 mmol) 및 중간체 13(0.30 g, 1.01 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음, 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 석유 에테르 중 40% EtOAc)로 정제하여 순수한 중간체 N-((2-(4-(1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(에틸)(옥소)-λ6-술파닐리덴)-2,2,2-트리플루오로아세트아미드를 얻었다. 수율: 88% (0.45 g, 회-백색 고체).
이 중간체에, 메탄올(2.5 mL, 20 V) 및 K2CO3(0.40 g, 3.23 mmol)을 첨가하고 생성된 혼합물을 20 분 동안 교반하였다. 20 분 후, 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 혼합물에, 물(50 mL)을 첨가하고 수성층을 DCM(2 x 100 mL)으로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 구배: EtOAc 중 1-2% 메탄올)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 18% (60 mg, 흰색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 9.38 (s, 1H), 8.58 (s, 2H), 8.12 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.51-7.49 (m, 1H), 4.22 (s, 1H), 3.85-3.83 (m, 4H), 3.67 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 3.12 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.49-2.39 (m, 4H), 1.40 (d, J = 6.40 Hz, 3H), 1.07 (t, J = 7.20 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 417.3 (M+H), Rt. 2.2 min, 99.6% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 2.0 min, 97.1% (최대).
실시예 24: (2-(4-(1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(이미노)(프로필)-λ 6 -술파논
DMF(2.5 mL, 10 V) 중 중간체 6(235 mg, 9.50 mmol)의 교반된 용액에, TEA(0.5 mL, 3.8 mmol) 및 중간체 14(235 mg, 0.95 mmol)를 실온에서 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 후, 반응 혼합물을 진공 하에 50℃에서 증발시켰다. 생성된 혼합물에, 물(2 mL)을 첨가하고 수성층을 EtOAc(2 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔: 230-400 메쉬, 용리액: 석유-에테르 중 50% EtOAc)로 정제하여 순수한 중간체 N-((2-(4-(1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(옥소)(프로필)-λ6-술파닐리덴)-2,2,2-트리플루오로아세트아미드를 얻었다. 수율: 28% (140 mg, 회백색 고체).
이 중간체에 메탄올(7 mL, 20 V) 및 K2CO3(414 mg, 4.53 mmol)를 첨가하고 실온에서 20 분 동안 교반하였다. 20 분 후, 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 혼합물에, 물(20 mL)을 첨가하고 수성층을 DCM(2 x 100 mL)으로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 구배: DCM 중 1-2% 메탄올)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 21% (35 mg, 회백색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) : δ 9.39 (s, 1H), 8.59 (s, 2H), 8.13 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.51 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.22 (s, 1H), 3.85-3.83 (m, 4H), 3.68 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 3.17-3.08 (m, 2H), 2.53-2.44 (m, 4H), 1.57-1.51 (m, 2H), 1.41 (d, J = 6.40 Hz, 3H), 0.88 (t, J = 7.20 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 431.3 (M+H), Rt. 2.4 min, 97.2% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 2.2 min, 97.6% (최대).
실시예 25: (2-(4-(1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(메틸)(메틸이미노)-λ 6 -술파논
THF(1.0 mL, 10 V) 중 실시예 22(0.1 g, 0.25 mmol)의 교반된 용액에, NaH(60%)(18 mg, 0.37 mmol)을 0℃에서 첨가하고 15 분 동안 교반하였다. 이어서 MeI(0.04 mL, 0.62 mmol)를 밀봉된 튜브 내에서 반응 혼합물에 첨가하고 90℃에서 밤새 가열하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음, 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 구배: DCM 중 5-6% 메탄올)로 정제하고 Prep. HPLC(방법 B)로 추가로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 23% (23 mg, 회백색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 9.38 (s, 1H), 8.55 (s, 2H), 8.11 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.02 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.50 (dd, J = 8.2, 1.2 Hz, 1H), 3.86-3.70 (m, 4H), 3.69-3.65 (m, 1H), 3.10 (s, 3H), 2.56-2.51 (m, 2H), 2.50-2.32 (m, 5H), 1.41 (d, J = 6.8 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 416.8 (M+H), Rt. 1.94 min, 98.9% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 1.9 min, 99.7% (최대).
실시예 26: (6-(4-(1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리딘-3-일)(이미노)(메틸)-λ 6 -술파논
DMF(3.5 mL) 중 중간체 6(350 mg, 1.41 mmol)의 교반된 용액에, TEA(0.6 mL, 4.25 mmol) 및 중간체 15(446 mg, 1.56 mmol)를 실온에서 첨가하고 반응 혼합물을 밤새 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 후, 반응 혼합물을 진공 하에 50℃에서 증발시켰다. 생성된 혼합물에, 물(10 mL)을 첨가하고 수성층을 EtOAc(2 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔: 230-400 메쉬, 용리액: 석유-에테르 중 50% EtOAc)로 정제하여 순수한 중간체 N-((6-(4-(1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리딘-3-일)(메틸)(옥소)-λ6-술파닐리덴)-2,2,2-트리플루오로아세트아미드를 얻었다. 수율: 41% (252 mg, 회백색 고체).
이 중간체에, 메탄올(7 mL, 20 V) 및 K2CO3(414 mg, 4.53 mmol)을 첨가하고 생성된 혼합물을 실온에서 20 분 동안 교반하였다. 20 분 후, 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 혼합물에, 물(50 mL)을 첨가하고 수성층을 DCM(2 x 100 mL)으로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 구배: DCM 중 1-2% 메탄올)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 30% (168.89 mg, 회백색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 9.38 (s, 1H), 8.48 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.12 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.02 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.85 (dd, J = 9.2, 2.4 Hz, 1H), 7.49 (dd, J = 6.8, 1.6 Hz, 1H), 6.87 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 4.02 (s, 1H), 3.67-3.62 (m, 5H), 3.00 (s, 3H), 2.67-2.33 (m, 4H), 1.41 (d, J = 6.40 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 402.0 (M+H), Rt. 1.8 min, 97.7% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 1.8 min, 97.6% (최대).
실시예 27: (2-(4-(1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(에틸이미노)(메틸)-λ 6 -술파논
DMF(1.2 mL, 10 V) 중 실시예 22(0.12 g, 0.51 mmol)의 교반된 용액에, NaH(60%)(0.23 mg, 1.68 mmol)를 0℃에서 첨가하고 15 분 동안 교반하였다. 이어서 에틸 브로미드(0.16 g, 5.6 mmol)를 반응 혼합물에 첨가하고 실온에서 밤새 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음, 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 prep HPLC(방법 B)로 정제하였다. 수율: 15% (30 mg, 흰색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 9.38 (s, 1H), 8.65 (s, 2H), 8.11 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.02 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.50 (dd, J = 8.2, 1.2 Hz, 1H), 3.85-3.83 (m, 4H), 3.68 (q, J = 6.4 Hz, 1H), 3.33-3.30 (m, 2H), 3.06 (s, 3H), 2.44-2.33 (m, 4H), 1.41 (d, J = 6.80 Hz, 3H) 1.08 (t, J = 6.4 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 431.3 (M+H), Rt. 2.1 min, 99.7% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 1.9 min, 95.9% (최대).
실시예 28: (2-(4-(1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(이소프로필이미노)(메틸)-λ 6 -술파논
DMF(3.0 mL, 10 V) 중 실시예 22(0.15 g, 0.37 mmol)의 교반된 용액에, NaH(60%)(17 mg, 0.746 mmol)를 0℃에서 첨가하고 15 분 동안 교반하였다. 이어서 이소-프로필 브로미드(91 mg, 0.74 mmol)를 반응 혼합물에 첨가하고 반응 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음, 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 조 물질을 prep HPLC에 의해 정제하였다(조건 방법 B). 수율: 8% (12.5 mg, 흰색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 9.39 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.58 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 8.12 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.50 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 4.11-4.10 (m, 4H), 3.85 (q, J = 6.8 Hz, 1H), 3.18-3.09 (m, 4H), 2.52-2.33 (m, 4H), 1.42 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.02 (d, J = 7.2 Hz, 6H). LCMS: (방법 A) 445.0 (M+H), Rt. 2.2 min, 96.5% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 2.3 min, 97.4% (최대).
실시예 29: (2-(4-(1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)((2-메톡시에틸)이미노)(메틸)-λ 6 -술파논
DMF(3.0 mL, 10 V) 중 실시예 22(0.15 g, 0.51 mmol)의 교반된 용액에, NaH(60%)(0.13 mg, 0.55 mmol)을 0℃에서 첨가하고 15 분 동안 교반하였다. 이어서 메톡시메틸 브로미드(103 mg, 0.74 mmol)를 첨가하고 반응 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음, 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조물질을 prep HPLC(방법 B)로 정제하였다. 수율: 8% (14.3 mg, 흰색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 9.38 (s, 1H), 8.59 (s, 2H), 8.11 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.50 (dd, J = 8.4, 1.2 Hz, 1H), 3.85-3.82 (m, 4H), 3.68 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 3.18 (s, 3H), 3.12 (s, 3H), 2.95-2.82 (m, 2H), 2.50-2.33 (m, 4H), 1.40 (d, J = 6.4 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 460.9 (M+H), Rt. 2.1 min, 99.1% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 2.1 min, 99.1% (최대).
실시예 30: (6-(4-(1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리딘-3-일)(메틸)(메틸이미노)-λ 6 -술파논
THF(2 mL) 중 실시예 26(0.11 g, 0.27 mmol)의 교반된 용액에, NaH(60%)(0.03 g, 0.55 mmol)을 0℃에서 첨가하고 15 분 동안 교반하였다. 이어서 MeI(0.05 mL, 0.87 mmol)를 반응 혼합물에 첨가하고 실온에서 밤새 교반하였다. 반응의 완료 후(TLC로 모니터링), 생성된 반응 혼합물을 빙 냉수(2 mL)로 ??칭하고 수성층을 EtOAc(2 x 15 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에서 증발시켰다. 생성된 조 물질을 Prep HPLC(방법 B)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 23% (27 mg, 회백색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 9.39 (s, 1H), 8.37 (s, 1H), 8.13 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.75 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.51 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.91 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 3.64-3.57 (m, 5H), 3.05 (s, 3H), 2.44-2.41 (m, 7H), 1.42 (d, J = 6.4 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 415.8 (M +H), Rt. 1.9 min, 97.5% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 2.1 min, 97.3% (최대).
실시예 31: ((2-(4-(1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)이미노)디메틸-λ 6 -술파논
단계 1: 5-(1-(4-(5-브로모피리미딘-2-일)피페라진-1-일)에틸)벤조[d]티아졸
DMF(10 mL) 중 중간체 6(0.5 g, 2.02 mmol)의 교반된 용액에, TEA(0.84 mL, 6.06 mmol) 및 5-브로모-2-클로로피리미딘(0.469 g, 2.42 mmol)을 실온에서 첨가하고 90℃에서 밤새 교반하였다. 반응 완료 후(TLC로 모니터링), 반응 혼합물을 45℃에서 진공 하에 증발시키고 생성된 혼합물을 DCM(10 mL)에 용해시켰다. 유기층을 물(5 mL), 염수 용액(5 mL)으로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에서 증발시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 컬럼 크로마토그래피(Biotage Isolera, 석유-에테르에서 60% EtOAC)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 61% (500 mg, 흰색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 9.38 (s, 1H), 8.42 (s, 2H), 8.11 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.49 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 3.69-3.64 (m, 5H), 2.40-2.33 (m, 4H), 1.40 (d, J = 6.4 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 406.2 (M +H), Rt. 3.0 min, 99.9% (최대).
단계 2: ((2-(4-(1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)이미노)디메틸-λ 6 -술파논
　
건조 톨루엔(6 mL) 중 5-(1-(4-(5-브로모피리미딘-2-일)피페라진-1-일)에틸)벤조[d]티아졸(300 mg, 0.74 mmol)의 교반된 용액에, Pd(OAc)2(6.6 mg, 0.03 mmol), Ru-phos(27.7 mg, 0.06 mmol), 세슘 카보네이트(727 mg, 2.23 mmol) 및 S,S-디메틸 술피미드(sulphimide)(83.2 mg, 0.9 mmol)를 첨가하고 110℃에서 밤새 가열하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음, 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: CHCl3 중 8-10% 메탄올)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 4% (10.7 mg, 갈색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 9.39 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.12 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.03-8.01 (m, 3H), 7.51-7.49 (m, 1H), 3.64-3.59 (m, 4H), 3.37-3.36 (m, 1H), 3.18 (s, 6H), 2.42-2.34 (m, 4H), 1.42 (d, J = 8.0 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 417.0 (M+H), Rt. 2.1 min, 98.5% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 2.1 min, 98.8 (최대).
실시예 32: 2-(4-(1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)-N-(디메틸(옥소)-λ 6 -술파닐리덴)피리미딘-5-카복사미드
단계 1: 에틸 2-(4-(1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-카복실레이트
0℃에서 건조 DCM(8 mL) 중 1-(벤조[d]티아졸-5-일)에탄-1-올(중간체 6의 단계 1 및 2에 기재된 합성)(0.5 g, 2.53 mmol)의 교반된 용액에, 티오닐 클로리드(0.5 mL, 4.46 mmol)를 첨가하고 실온에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응의 완료 후(TLC로 모니터링), 반응 혼합물을 완전히 농축시키고 건조 DMF(8 mL) 중 중간체 17(0.9 g, 3.29 mmol) 및 TEA(1.02 mL, 7.61 mmol)의 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 90℃에서 밤새 가열하였다. 반응 완료 후(TLC로 모니터링), 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 혼합물에, 물(8 mL)을 첨가하고 수성층을 DCM(2 x 8 mL)으로 추출하였다. 합한 유기층을 물(8 mL), 염수 용액(8 mL)으로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 석유-에테르에서 30-50% EtOAc)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 30% (0.3 g, 옅은 노란색 구미 고체). LCMS: (방법 A) 398.0 (M+H), Rt. 2.9 min, 92.2% (최대).
단계 2: 2-(4-(1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-카복실산
MeOH:THF:H2O(3:2:1, 8 mL) 중 에틸 2-(4-(1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-카복실레이트(0.3 g, 75.47 mmol)의 교반된 용액에, LiOH.H2O(36 mg, 1.50 mmol)를 첨가하고 실온에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후(TLC로 모니터링), 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고 생성된 반응 혼합물을 aq. HCl(1.5 N, 4 mL)로 산성화하였다. 수성층을 DCM(2 x 6 mL)으로 추출하고 합한 유기층을 염수 용액(1 x 6 mL)으로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시켰다. 유기층을 진공 하에 농축시켜 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 93% (0.26 g, 회백색 고체). LCMS: (방법 A) 370.0 (M+H), Rt. 2.1 min, 97.9% (최대).
단계 3: 2-(4-(1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)-N-(디메틸(옥소)-λ 6 -술파닐리덴)피리미딘-5-카복사미드
건조 DMF(6 mL) 중 2-(4-(1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-카복실산(0.25 g, 0.67 mmol)의 용액에, S,S-디메틸술피미드(0.095 g, 1.01 mmol), DIPEA(0.35 mL, 2.03 mmol) 및 HATU(0.51 g, 1.35 mmol)를 첨가하고 실온에서 밤새 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음, 반응 혼합물을 진공 하에서 완전히 농축시켰다. 생성된 혼합물에, 물(8 mL)을 첨가하고 수성층을 DCM(2 x 8 mL)으로 추출하였다. 합한 유기층을 염수 용액(8 mL)으로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: DCM 중 8-10% 메탄올)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 4% (11.8 mg, 흰색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 9.39 (s, 1H), 8.77 (s, 2H), 8.12 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.51 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.93-3.75 (m, 4H), 3.72-3.65 (m, 1H), 3.43 (s, 6H), 2.49-2.38 (m, 4H), 1.41 (d, J = 8.0 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 445.0 (M+H), Rt. 2.2 min, 98.8% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 2.2 min, 98.2 (최대).
실시예 33: (4-(4-(1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)페닐)(이미노)(메틸)-λ 6 -술파논
단계 1: 5-(1-(4-(4-(메틸티오)페닐)피페라진-1-일)에틸)벤조[d]티아졸
DMF(10 mL) 중 중간체 18(1.6 g, 6.56 mmol) 및 TEA(2.76 mL, 19.67 mmol)의 교반된 용액에, 5-(1-클로로에틸)벤조[d]티아졸(중간체 6의 단계 1 내지 3에 기재된 합성)(1.29 g, 6.56 mmol)을 실온에서 첨가하고 70℃에서 밤새 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 후, 반응 혼합물을 진공 하에 50℃에서 증발시켰다. 생성된 혼합물에, 물(10 mL)을 첨가하고 수성층을 EtOAc(2 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 구배: DCM 중 1-2% 메탄올)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 25% (600 mg, 회백색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 9.94 (s, 1H), 8.13 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.68 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.51 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.01 (d, J = 9.2 Hz, 2H), 3.68-3.66 (m, 1H), 3.34-3.30 (m, 4H), 2.37 (s, 3H), 2.68-2.34 (m, 4H), 1.42 (d, J = 6.8 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 369.9 (M +H), Rt. 2.3 min, 83.3% (최대).
단계 2: 5-(1-(4-(4-(메틸술피닐)페닐)피페라진-1-일)에틸)벤조[d]티아졸
0℃에서 DCM(7 mL, 10 V) 중 5-(1-(4-(4-(메틸티오)페닐)피페라진-1-일)에틸)벤조[d]티아졸(700 mg, 1.90 mmol)의 교반된 용액에, m-CPBA(722 mg, 2.09 mmol)를 나누어 첨가하고 0℃에서 1 시간 동안 교반하였다. 반응의 완료 후(TLC로 모니터링), 반응 혼합물을 10% NaHCO3 용액으로 ??칭하고 수성층을 DCM(2 x 100 mL)으로 추출하였다. 합한 유기층을 염수(30 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 석유 에테르 중 60-70% EtOAc)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 34% (250 mg, 옅은 노란색 구미 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 9.94 (s, 1H), 8.13 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.68 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.51 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.01 (d, J = 9.2 Hz, 2H), 3.68-3.66 (m, 1H), 3.34-3.30 (m, 4H), 2.65 (s, 3H), 2.68-2.34 (m, 4H), 1.42 (d, J = 6.80 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 386.5 (M +H), Rt. 1.7 min, 83.3% (최대).
단계 3: (4-(4-(1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)페닐)(이미노)(메틸)-λ 6 -술파논
DCM(5 mL, 20 V) 중 5-(1-(4-(4-(메틸술피닐)페닐)피페라진-1-일)에틸)벤조[d]티아졸(250 mg, 0.65 mmol)의 교반된 용액에, 트리플루오로아세트아미드(146 mg, 1.30 mmol), MgO(118 mg, 2.59 mmol), Rh2(OAc)4(14.32 mg, 0.03 mmol) 및 PhI(OAc)2(166 mg, 0.97 mmol)를 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음, 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 석유 에테르 중 55-60% EtOAc)로 정제하여 순수한 중간체 N-((4-(4-(1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)페닐)(메틸)(옥소)-λ6-술파닐리덴)-2,2,2-트리플루오로아세트아미드를 얻었다. 수율: 8% (25 mg, 회백색 고체).
이 중간체에, 메탄올(10 mL, 20 V) 및 K2CO3(89 mg, 0.648 mmol)을 첨가하고 20 분 동안 교반하였다. 20 분 후, 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 혼합물에, 물(50 mL)을 첨가하고 수성층을 DCM(2 x 100 mL)으로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 구배: DCM 중 1-2% 메탄올)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 6% (4.86 mg, 회백색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 9.94 (s, 1H), 8.13 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.68 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.51 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.01 (d, J = 9.2 Hz, 2H), 3.89 (s, 1H), 3.68-3.66 (m, 1H), 3.34-3.30 (m, 4H), 2.97 (s, 3H), 2.68-2.34 (m, 4H), 1.42 (d, J = 6.80 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 401.0 (M +H), Rt. 1.9 min, 98.2% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 1.8 min, 96.9% (최대).
실시예 34: (2-(4-((S)-1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(이미노)(메틸)-λ 6 -술파논 또는 (2-(4-((R)-1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(이미노)(메틸)-λ 6 -술파논
ACN(5 mL) 중 중간체 7(400 mg, 1.41 mmol)의 교반된 용액에, TEA(0.6 mL, 4.23 mmol) 및 중간체 10(445 mg, 1.54 mmol)을 실온에서 첨가하고 밤새 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 후, 반응 혼합물을 진공 하에 50℃에서 증발시켰다. 생성된 혼합물에, 물(10 mL)을 첨가하고 수성층을 EtOAc(2 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔: 230-400 메쉬, 용리액: 석유-에테르 중 50% EtOAc)로 정제하여 순수한 중간체 N-((6-(4-(1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리딘-3-일)(메틸)(옥소)-λ6-술파닐리덴)-2,2,2-트리플루오로아세트아미드를 얻었다. 수율: 39% (273 mg, 회백색 고체).
이 중간체에, 메탄올(7 mL, 20 V) 및 K2CO3(414 mg, 4.53 mmol)을 첨가하고 실온에서 20 분 동안 교반하였다. 20 분 후, 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 혼합물에, 물(50 mL)을 첨가하고 수성층을 DCM(2 x 100 mL)으로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 구배: DCM 중 1-2% 메탄올)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 34% (190 mg, 회백색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 9.39 (s, 1H), 8.65 (s, 2H), 8.12 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.51-7.49 (m, 1H), 4.24 (s, 1H), 3.86-3.83 (m, 4H), 3.69-3.67 (m, 1H), 3.07 (s, 3H), 2.54-2.39 (m, 4H), 1.41 (d, J = 6.8 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 402.8 (M+H), Rt. 1.8 min, 99.7% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 1.8 min, 99.8% (최대).
실시예 35: (S)-(2-(4-((S)-1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(이미노)(메틸)-λ 6 -술파논 또는 (R)-(2-(4-((S)-1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(이미노)(메틸)-λ 6 -술파논 또는 (S)-(2-(4-((R)-1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(이미노)(메틸)-λ 6 -술파논 또는 (R)-(2-(4-((R)-1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(이미노)(메틸)-λ 6 -술파논
ACN(620.0 mL) 중 중간체 7(62.0 g, 0.25 mol)의 교반된 용액에, 실온에서 TEA(140.0 mL, 1.04 mmol) 및 중간체 11(75.8 g, 0.26 mol)을 첨가하고 반응 혼합물을 동일한 온도에서 30 분 동안 교반하였다. 반응의 완료는 TLC에 의해 확인되었다. 반응 혼합물을 진공 하에 50℃에서 농축시켰다. 생성된 조 생성물(crude product)을 석유 에테르 중 60-80% 에틸 아세테이트를 사용하는 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔 60-120 메쉬)로 정제하여 순수한 중간체 N-((S)-(2-(4-((S)-1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(메틸)(옥소)-λ6-술파닐리덴)-2,2,2-트리플루오로아세트아미드, 또는 N-((R)-(2-(4-((S)-1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(메틸)(옥소)-λ6-술파닐리덴)-2,2,2-트리플루오로아세트아미드, 또는 N-((S)-(2-(4-((R)-1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(메틸)(옥소)-λ6-술파닐리덴)-2,2,2-트리플루오로아세트아미드, 또는 N-((R)-(2-(4-((R)-1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(메틸)(옥소)-λ6-술파닐리덴)-2,2,2-트리플루오로아세트아미드를 얻었다. 수율: 75% (93.0 g, 회백색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 9.39 (s, 1H), 8.75 (s, 2H), 8.13 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.51 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.90-3.88 (m, 4H), 3.76 (s, 3H), 3.69 (q, J = 6.8 Hz, 2.58-2.43 (m, 4H), 1.41 (d, J = 6.4 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 499.0 (M+H), Rt. 2.33 min, 97.01% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 3.46 min, 96.61% (최대), 96.22% (220 nm)
MeOH(930.0 mL, 10 V) 및 DCM(186.0 mL, 2 V) 중 이 중간체(93.0 g, 0.18 mol)에, K2CO3(25.7 g, 0.18 mol)을 실온에서 첨가하고 혼합물을 동일한 온도에서 1 시간 동안 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 확인하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 생성물을 DCM 중 1-4% MeOH를 사용하는 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔 60-120 메쉬)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 83% (60 g, 흰색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 9.38 (s, 1H), 8.64 (s, 2H), 8.11 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.49 (dd, J = 8.2, 1.2 Hz, 1H), 4.23 (s, 1H), 3.85-3.82 (m, 4H), 3.65 (q, J = 6.4 Hz, 1H), 3.06 (s, 3H), 2.54-2.41 (m, 4H), 1.40 (d, J = 6.4 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 403.1 (M+H), Rt. 1.65 min, 99.89% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 1.90 min, 99.70% (최대), 99.58% (220 nm). Chiral SFC: (방법 B) Rt 9.1 min, 97.68% (최대).
실시예 36: (S)-(2-(4-((S)-1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(이미노)(메틸)-λ 6 -술파논 또는 (R)-(2-(4-((S)-1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(이미노)(메틸)-λ 6 -술파논 또는 (S)-(2-(4-((R)-1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(이미노)(메틸)-λ 6 -술파논 또는 (R)-(2-(4-((R)-1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(이미노)(메틸)-λ 6 -술파논
　
ACN(5 mL) 중 중간체 7(400 mg, 1.41 mmol)의 교반된 용액에, TEA(0.6 mL, 4.23 mmol) 및 중간체 12(445 mg, 1.54 mmol)를 첨가하고 반응 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 후, 반응 혼합물을 진공 하에 50℃에서 증발시켰다. 생성된 혼합물에, 물(10 mL)을 첨가하고 수성층을 EtOAc(2 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔: 230-400 메쉬, 용리액: 석유 에테르 중 50% EtOAc)로 정제하여 순수한 중간체 N-((R)-(2-(4-((S)-1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(메틸)(옥소)-λ6-술파닐리덴)-2,2,2-트리플루오로아세트아미드, 또는 N-((S)-(2-(4-((S)-1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(메틸)(옥소)-λ6-술파닐리덴)-2,2,2-트리플루오로아세트아미드, 또는 N-((S)-(2-(4-((R)-1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(메틸)(옥소)-λ6-술파닐리덴)-2,2,2-트리플루오로아세트아미드, 또는 N-((R)-(2-(4-((R)-1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(메틸)(옥소)-λ6-술파닐리덴)-2,2,2-트리플루오로아세트아미드를 얻었다. 수율: 39% (273 mg, 회백색 고체).
이 중간체에, 메탄올(7 mL, 20 V) 및 K2CO3(414 mg, 4.53 mmol)을 첨가하고 20 분 동안 교반하였다. 20 분 후, 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 혼합물에, 물(50 mL)을 첨가하고 수성층을 DCM(2 x 100 mL)으로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 구배: DCM 중 1-2% 메탄올)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 14% (22 mg, 회백색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 9.39 (t, J = 2.0 Hz, 1H), 8.65 (t, J = 2.0 Hz, 2H), 8.12 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.50 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.24 (s, 1H), 3.84-3.82 (m, 4H), 3.68 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 3.07 (s, 3H), 2.51-2.34 (m, 4H), 1.41 (d, J = 6.4 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 403.3 (M+H), Rt. 1.8 min, 93.9% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 1.9 min, 94.5% (최대). Chiral SFC: (방법 B) Rt 10.2 min, 98.8% (최대).
실시예 37: (S)-(2-(4-((S)-1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(메틸)(메틸이미노)-λ 6 -술파논 또는 (R)-(2-(4-((S)-1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(메틸)(메틸이미노)-λ 6 -술파논 또는 (S)-(2-(4-((R)-1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(메틸)(메틸이미노)-λ 6 -술파논 또는 (R)-(2-(4-((R)-1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(메틸)(메틸이미노)-λ 6 -술파논
　
DMF(5 mL) 중 실시예 35(150 mg, 0.372 mmol)의 교반된 용액에, NaH(60%)(35.79 mg, 0.74 mmol)를 0℃에서 첨가하고 15 분 동안 교반하였다. 이어서 요오도메탄(iodomethane)(0.05 mL, 0.74 mmol)을 반응 혼합물에 첨가하고 실온에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응의 완료 후(TLC로 모니터링), 반응 혼합물을 빙 냉수(10 mL)로 ??칭하고 수성층을 EtOAc(2 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 구배: DCM 중 1-2% 메탄올)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 27 % (41.2 mg, 회백색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 9.39 (s, 1H), 8.55 (s, 2H), 8.12 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.51 (d, J = 1.6, 8.0 Hz, 1H), 3.87-3.84 (m, 4H), 3.71-3.66 (m, 1H), 3.11 (s, 3H), 2.56-2.42 (m, 7H), 1.41 (d, J = 6.8 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 417.0 (M+H), Rt. 1.9 min, 98.1% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 1.9 min, 98.5% (최대).
실시예 38:(R)-(2-(4-(1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(이미노)(메틸)-λ 6 -술파논 또는 (S)-(2-(4-(1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(이미노)(메틸)-λ 6 -술파논
　
단계 1: N-((R)-(2-(4-(1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(메틸)(옥소)-λ 6 -술파닐리덴)-2,2,2-트리플루오로아세트아미드 또는 N-((S)-(2-(4-(1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(메틸)(옥소)-λ 6 -술파닐리덴)-2,2,2-트리플루오로아세트아미드
ACN(2.0 mL) 중 중간체 6(0.47 g, 1.46 mmol)의 교반된 용액에, TEA(0.88 mL, 5.8 mmol) 및 중간체 12(464 mg 1.6 mmol)를 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 30 분 동안 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음, 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 석유 에테르 중 60-80% EtOAc)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 44% (320 mg, 흰색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 9.39 (s, 1H), 8.75 (s, 2H), 8.13 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.51 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.89 (t, J = 4.8 Hz, 4H), 3.76 (s, 3H), 3.70 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 2.58-2.43 (m, 4H), 1.41 (d, J = 6.4 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 268.0 (M+H), Rt. 1.9 min, 92.8% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 3.8 min, 96.1% (최대).
단계 2: (R)-(2-(4-(1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(이미노)(메틸)-λ 6 -술파논 또는 (S)-(2-(4-(1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(이미노)(메틸)-λ 6 -술파논
메탄올(2 mL) 및 DCM(1 mL) 중 단계 1의 생성물(310 mg, 0.62 mmol)의 교반된 용액에, K2CO3(200 mg, 1.0 mmol)을 첨가하고 1 시간 동안 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음, 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 구배: DCM 중 3-4% 메탄올)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 84% (210 g, 흰색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 9.38 (s, 1H), 8.64 (s, 2H), 8.11 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.49 (dd, J = 8.2, 1.2 Hz, 1H), 4.23 (s, 1H), 3.84 (t, J = 4.8 Hz, 4H), 3.06 (s, 3H), 2.54-2.41 (m, 4H), 1.40 (d, J = 6.4 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 403.1 (M+H), Rt. 1.6 min, 99.9% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 1.9 min, 99.7% (최대).
실시예 39: (R)-(2-(4-(1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(이미노)(메틸)-λ 6 -술파논 또는 (S)-(2-(4-(1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(이미노)(메틸)-λ 6 -술파논
　
ACN(2.0 mL) 중 중간체 6(0.47 g, 1.46 mmol)의 교반된 용액에, TEA(0.88 mL, 5.80 mmol) 및 중간체 11(464 mg 1.60 mmol)을 실온에서 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 30 분 동안 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음, 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 석유 에테르 중 60-80% EtOAc)로 정제하여 순수한 중간체 N-((R)-(2-(4-(1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(메틸)(옥소)-λ6-술파닐리덴)-2,2,2-트리플루오로아세트아미드 또는 N-((S)-(2-(4-(1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(메틸)(옥소)-λ6-술파닐리덴)-2,2,2-트리플루오로아세트아미드를 수득하였다. 수율: 44 % (320 mg, 흰색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 9.39 (s, 1H), 8.75 (s, 2H), 8.13 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.51 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.89 (t, J = 4.8 Hz, 4H), 3.76 (s, 3H), 3.70 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 2.58-2.43 (m, 4H), 1.41 (d, J = 6.4 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 403.1.0 (M+H), Rt. 1.9 min, 92.8% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 3.8 min, 96.1% (최대).
메탄올(2 mL) 및 DCM(1 mL) 중 이 중간체(310 mg, 0.62 mol)의 교반된 용액에, K2CO3(200 mg, 1.0 mol)을 첨가하고 실온에서 1 시간 동안 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음, 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 구배: DCM 중 3-4% 메탄올)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 84% (210 g, 흰색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 9.38 (s, 1H), 8.64 (s, 2H), 8.11 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.49 (dd, J = 8.2, 1.2 Hz, 1H), 4.23 (s, 1H), 3.84 (t, J = 4.8 Hz, 4H), 3.06 (s, 3H), 2.54-2.41 (m, 4H), 1.40 (d, J = 6.4 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 403.1 (M+H), Rt. 1.6 min, 99.9% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 1.9 min, 99.7% (최대).
실시예 40: (S)-(2-(4-((R)-1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(이미노)(메틸)-λ 6 -술파논 또는 (R)-(2-(4-((R)-1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(이미노)(메틸)-λ 6 -술파논 또는 (S)-(2-(4-((S)-1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(이미노)(메틸)-λ 6 -술파논 또는 (R)-(2-(4-((S)-1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(이미노)(메틸)-λ 6 -술파논
　
실시예 39로부터 얻어진 2 개의 거울상이성질체의 혼합물을 SFC(방법 H: 메탄올 중 20 mM 암모니아, 컬럼: YMC Cellulose C)로 분리하였다. 첫 번째 용리 피크를 농축시켜 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 21% (35 mg, 회백색 고체). 1 H NMR: (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 9.38 (s, 1H), 8.65 (s, 2H), 8.12 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.49 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.23 (s, 1H), 3.84 (d, J = 4.4 Hz, 4H), 3.67 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 3.06 (s, 3H), 2.44-2.40 (m, 2H), 1.41 (d, J = 6.40 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 403.1 (M+H), Rt 1.6 min, 99.3% (최대). HPLC: (방법 A) Rt 1.8 min, 98.9% (최대). Chiral SFC: (방법 B) Rt. 8.1 min, 100% (최대).
실시예 41: (S)-(2-(4-((R)-1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(이미노)(메틸)-λ 6 -술파논 또는 (R)-(2-(4-((R)-1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(이미노)(메틸)-λ 6 -술파논 또는 (S)-(2-(4-((S)-1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(이미노)(메틸)-λ 6 -술파논 또는 (R)-(2-(4-((S)-1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(이미노)(메틸)-λ 6 -술파논
　
실시예 38의 2 개의 거울상이성질체의 혼합물을 SFC(방법 H: 메탄올 중 20 mM 암모니아, 컬럼: YMC Cellulose C)로 분리하였다. 첫 번째 용리 피크를 농축시켜 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 28% (46 mg, 회백색 고체). 1 H NMR: (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 9.39 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 8.66 (d, J = 1.6 Hz, 2H), 8.13 (q, J = 1.6 Hz, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.51 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.25 (s, 1H), 3.85 (m, 4H), 3.69 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 3.08 (s, 3H), 2.45-2.34 (m, 2H),1.42 (d, J = 6.40 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 403.1 (M+H), Rt 1.6 min, 99.7% (최대). HPLC: (방법 A), Rt 1.9 min, 99.5% (최대). Chiral SFC: (방법 B) Rt. 9.3 min, 100% (최대).
실시예 42: 이미노(메틸)(2-(4-(1-(2-메틸벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)-λ 6 -술파논
DMF(11.0 mL, 10 V) 중 중간체 8(0.88 g, 3.80 mmol)의 교반된 용액에 TEA(1.6 mL, 11.41 mmol) 및 중간체 10(1.1 g, 3.80 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음, 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 석유 에테르 중 60% EtOAc)로 정제하여 순수한 중간체 2,2,2-트리플루오로-N-(메틸(2-(4-(1-(2-메틸벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(옥소)-λ6-술파닐리덴)아세트아미드를 수득하였다. 수율: 22% (246 mg, 흰색 고체).
이 중간체에 메탄올(22.0 mL, 20 V) 및 K2CO3(1.46 g, 11.41 mmol)을 첨가하고 20 분 동안 교반하였다. 20 분 후, 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 혼합물에, 물(50 mL)을 첨가하고 수성층을 DCM(2 x 100 mL)으로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 구배: EtOAc 중 1-2% 메탄올)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 23% (15 mg, 흰색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.65 (s, 2H), 7.97 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.38 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.23 (s, 1H), 3.84 (t, J = 4.8 Hz, 4H), 3.63 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 3.06 (s, 3H), 2.60 (s, 3H), 2.43-2.39 (m, 4H), 1.39 (d, J = 6.8 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 417.3 (M+H), Rt. 2.1 min, 97.3% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 2.2 min, 97.1% (최대).
실시예 43: 에틸(이미노)(2-(4-(1-(2-메틸벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)-λ 6 -술파논
　
DMF(2.50 mL, 10 V) 중 중간체 8(0.25 g, 1.01 mmol)의 교반된 용액에, TEA(0.4 mL, 3.03 mmol) 및 중간체 13을 실온에서 첨가하고(0.30 g, 1.01 mmol) 밤새 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음, 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 석유 에테르 중 40% EtOAc)로 정제하여 중간체 N-(에틸(2-(4-(1-(2-메틸벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(옥소)-λ6-술파닐리덴)-2,2,2-트리플루오로아세트아미드를 수득하였다. 수율: 94% (0.48 g, 옅은 노란색 구미 고체).
이 중간체에 메탄올(2.5 mL, 20 V) 및 K2CO3(0.40 g, 3.23 mmol)을 첨가하고 실온에서 20 분 동안 교반하였다. 20 분 후, 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 혼합물에, 물(50 mL)을 첨가하고 수성층을 DCM(2 x 100 mL)으로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 구배: EtOAc 중 1-2% 메탄올)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 5% (20 mg, 흰색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.58 (s, 2H), 7.97 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.38 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 4.22 (s, 1H), 3.83 (t, J = 4.4 Hz, 4H), 3.65-3.60 (m, 1H), 3.17-3.08 (m, 2H), 2.78 (s, 3H), 2.52-2.32 (m, 4H), 1.38 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.07 (t, J = 7.2 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 431.3 (M+H), Rt. 2.5 min, 98.2% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 2.2 min, 98.3% (최대).
실시예 44: 이미노(2-(4-(1-(2-메틸벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(프로필)-λ 6 -술파논
DMF(2.5 mL) 중 중간체 8(249 mg, 9.50 mmol)의 교반된 용액에, TEA(0.5 mL, 3.80 mmol) 및 중간체 14(300 mg, 9.50 mmol)를 실온에서 첨가하고 밤새 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 후, 반응 혼합물을 진공 하에 50℃에서 증발시켰다. 생성된 혼합물에, 물(2 mL)을 첨가하고 수성층을 EtOAc(2 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔: 230-400 메쉬, 용리액: 석유 에테르 중 50% EtOAc)로 정제하여 순수한 중간체 2,2,2-트리플루오로-N-((2-(4-(1-(2-메틸벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(옥소)(프로필)-λ6-술파닐리덴)아세트아미드를 수득하였다. 수율: 27% (136 mg, 회백색 고체).
이 중간체에 메탄올(7 mL, 20 V) 및 K2CO3(414 mg, 4.53 mmol)을 첨가하고 20 분 동안 교반하였다. 20 분 후, 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 혼합물에, 물(20 mL)을 첨가하고 수성층을 DCM(2 x 100 mL)으로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 구배: DCM 중 1-2% 메탄올)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 18% (26.5 mg, 회백색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) : δ 8.59 (s, 2H), 7.97 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.85 (s, 1H), 7.38 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.22 (s, 1H), 3.85-3.83 (m, 4H), 3.66-3.61 (m, 1H), 3.12-3.08 (m, 2H), 2.79 (s, 3H), 2.49-2.39 (m, 2H), 1.57-1.51 (m, 2H), 1.39 (d, J = 6.40 Hz, 3H), 0.88 (t, J = 7.20 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 445.2 (M+H), Rt. 2.2 min, 99.7% (최대). HPLC: (방법 A) Rt 2.4 min, 99.7% (최대).
실시예 45: 메틸(2-(4-(1-(2-메틸벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(메틸이미노)-λ 6 -술파논
THF(1.5 mL, 10 V) 중 실시예 42(0.15 g, 0.36 mmol)의 교반된 용액에, NaH(60%)(26 mg, 0.54 mmol)를 0℃에서 첨가하고 15 분 동안 교반하였다. 이어서 MeI(0.05 mL, 0.9 mmol)를 밀봉된 튜브에서 반응 혼합물에 첨가하고 90℃에서 밤새 가열하였다. 반응의 완료 후(TLC로 모니터링), 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: DCM 중 5-6% 메탄올)로 정제하였다. 얻어진 물질을 Prep. HPLC(방법 B)로 추가 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 9% (13 mg, 회백색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.55 (s, 2H), 7.97 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.39 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.85-3.84 (m, 4H), 3.64-3.62 (m, 1H), 3.10 (s, 3H), 2.78 (s, 3H), 2.54-2.53 (m, 2H), 2.46 (s, 3H), 2.44-2.42 (m, 2H), 1.39 (d, J = 6.8 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 430.8 (M+H), Rt. 2.2 min, 98.7% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 2.1 min, 99.3% (최대).
실시예 46: 이미노(메틸)(6-(4-(1-(2-메틸벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리딘-3-일)-λ 6 -술파논
DMF(3.5 mL) 중 중간체 8(350 mg, 1.34 mmol)의 교반된 용액에, TEA(0.6 mL, 4.02 mmol) 및 중간체 15(422 mg, 1.47 mmol)를 실온에서 첨가하고 밤새 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 후, 반응 혼합물을 진공 하에 50℃에서 증발시켰다. 생성된 혼합물에, 물(10 mL)을 첨가하고 수성층을 EtOAc(2 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔: 230-400 메쉬, 용리액: 석유 에테르 중 50% EtOAc)로 정제하여 순수한 중간체 2,2,2-트리플루오로-N-(메틸(6-(4-(1-(2-메틸벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리딘-3-일)(옥소)-λ6-술파닐리덴)아세트아미드를 수득하였다. 수율: 40% (241 mg, 회백색 고체).
이 중간체에 메탄올(7 mL, 20 V) 및 K2CO3(414 mg, 4.53 mmol)을 첨가하고 20 분 동안 교반하였다. 20 분 후, 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 혼합물에, 물(50 mL)을 첨가하고 수성층을 DCM(2 x 100 mL)으로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 구배: DCM 중 1-2% 메탄올)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 30% (163.7 mg, 회백색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.48 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.96 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.86-7.84 (m, 2H), 7.38 (dd, J = 8.0, 1.2 Hz, 1H), 6.87 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 4.02 (s, 1H), 3.63-3.59 (m, 5H), 3.00 (s, 3H), 2.78 (s, 3H), 2.54-2.49 (m, 2H), 2.43-2.37 (m, 2H), 1.38 (d, J = 6.8 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 415.8 (M +H), Rt. 2.1 min, 99.0% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 2.1 min, 99.2% (최대).
실시예 47: 메틸(6-(4-(1-(2-메틸벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리딘-3-일)(메틸이미노)-λ 6 -술파논
　THF(2 mL) 중 실시예 46(0.11 g, 0.26 mmol)의 교반된 용액에, NaH(60%)(0.03 g, 0.52 mmol)를 0℃에서 첨가하고 15 분 동안 교반하였다. 이어서 MeI(0.05 mL, 0.79 mmol)를 반응 혼합물에 첨가하고 실온에서 밤새 교반하였다. 반응의 완료 후(TLC로 모니터링), 반응 혼합물을 빙 냉수(2 mL)로 ??칭하고 수성층을 EtOAc(2 x 15 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에서 증발시켰다. 생성된 조 물질을 Prep HPLC(방법 B)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 15% (17 mg, 회백색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.37 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.97 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.85 (s, 1H), 7.76-7.73 (m, 1H), 7.39 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.91 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 3.63-3.58 (m, 5H), 3.04 (s, 3H), 2.79 (s, 3H), 2.51-2.48 (m, 2H), 2.44 (s, 3H), 2.44-2.40 (m, 2H), 1.39 (d, J = 6.80 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 429.8 (M+H), Rt. 2.2 min, 96.2% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 2.1 min, 99.6% (최대).
실시예 48:(에틸이미노)(메틸)(2-(4-(1-(2-메틸벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)-λ 6 -술파논
THF(1.5 mL) 중 실시예 42(150 mg, 0.35 mmol)의 교반된 용액에, NaH(60%)(19 mg, 0.39 mmol)를 0℃에서 첨가하고 15 분 동안 교반하였다. 이어서 EtI(0.18 mL, 0.54 mmol, THF 중 3.0 M)를 첨가하고 실온에서 밤새 교반하였다. 반응이 완료된 후(TLC로 모니터링), 생성된 반응 혼합물을 빙 냉수(2 x 50 mL)에 붓고 수성층을 EtOAc(2 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수(50 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 구배: DCM 중 3% 메탄올)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 19% (30 mg, 옅은-노란색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.56 (s, 2H), 7.97 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.85 (s, 1H), 7.39 (dd, J = 8.2, 1.2 Hz, 1H), 3.84 (t, J = 4.8 Hz, 4H), 3.63 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 3.10 (s, 3H), 2.84-2.73 (m, 5H), 2.55-2.39 (m, 4H), 1.39 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.03 (t, J = 7.20 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 445.0 (M+H), Rt. 2.3 min, 91.3% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 2.2 min, 92.0% (최대).
실시예 49: (이소프로필이미노)(메틸)(2-(4-(1-(2-메틸벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)-λ 6 -술파논
DMF(1.5 mL) 중 실시예 42(150 mg, 0.35 mmol)의 교반된 용액에, NaH(60%)(19 mg, 0.39 mmol)를 0℃에서 첨가하고 15 분 동안 교반하였다. 이어서 이소프로필 요오디드(isopropyl iodide)(0.1 mL, 1.05 mmol)를 첨가하고 60℃에서 밤새 교반하였다. 반응의 완료 후(TLC로 모니터링), 반응을 빙 냉수(2 x 50 mL)로 ??칭하고 수성층을 EtOAc(2 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수(50 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 Prep. HPLC(방법 A)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 8% (11 mg, 옅은 노란색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.58 (s, 2H), 7.97 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.85 (s, 1H), 7.39 (dd, J = 8.2, 1.2 Hz, 1H), 3.84 (t, J = 5.2 Hz, 4H), 3.63 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 3.15-3.08 (m, 4H), 2.79 (s, 3H), 2.50-2.33 (m, 4H), 1.39 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.05 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.98 (d, J = 6.4 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 459.0 (M+H), Rt. 2.4 min, 99.3% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 2.5 min, 99.3% (최대).
실시예 50: 이미노(메틸)(4-(4-(1-(2-메틸벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)페닐)-λ 6 -술파논
단계 1: 2-메틸-5-(1-(4-(4-(메틸티오)페닐)피페라진-1-일)에틸)벤조[d]티아졸
DMF(10 mL) 중 중간체 18(1.72 g, 6.12 mmol)의 교반된 용액에, TEA(3.45 mL, 24.4 mmol) 및 5-(1-클로로에틸)-2-메틸벤조[d]티아졸(중간체 8, 단계 1 내지 3)(1.30 g, 6.12 mmol)을 실온에서 첨가하고 70℃에서 밤새 교반하였다. 반응이 완료된 후(TLC로 모니터링), 반응 혼합물을 진공 하에 50℃에서 증발시켰다. 생성된 혼합물에, 물(10 mL)을 첨가하고 수성층을 EtOAc(2 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 구배: DCM 중 1-2% 메탄올)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 39% (900 mg, 회백색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.13 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.68 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.51 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.01 (d, J = 9.2 Hz, 2H), 3.68-3.66 (m, 1H), 3.34-3.30 (m, 4H), 2.96 (s, 3H ) 2.37 (s, 3H), 2.68-2.34 (m, 4H), 1.42 (d, J = 6.8 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 384.3 (M+H), Rt. 2.3 min, 83.3% (최대).
단계 2: 2-메틸-5-(1-(4-(4-(메틸술피닐)페닐)피페라진-1-일)에틸)벤조[d]티아졸
DCM(7 mL, 10 V) 중 2-메틸-5-(1-(4-(4-(메틸티오)페닐)피페라진-1-일)에틸)벤조[d]티아졸(850 mg, 2.21 mmol)의 교반된 용액에, m-CPBA(0.5 g, 2.88 mmol)를 0℃에서 60 분 동안 나누어 첨가하였다. 반응의 완료 후(TLC로 모니터링), 반응 혼합물을 10% NaHCO3 용액으로 ??칭하고 수성층을 DCM(2 x 100 mL)으로 추출하였다. 합한 유기층을 염수(30 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 석유 에테르 중 60-70% EtOAc)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 51% (450 mg, 옅은 노란색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.13 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.68 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.51 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.01 (d, J = 9.2 Hz, 2H), 3.68-3.66 (m, 1H), 3.34-3.30 (m, 4H), 2.97 (s, 3H), 2.65 (s, 3H), 2.68-2.34 (m, 4H), 1.42 (d, J = 6.8 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 400.3 (M+H), Rt. 1.7 min, 83.3% (최대).
단계 3: 이미노(메틸)(4-(4-(1-(2-메틸벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)페닐)-λ 6 -술파논
DCM(8 mL, 20 V) 중 2-메틸-5-(1-(4-(4-(메틸술피닐)페닐)피페라진-1-일)에틸)벤조[d]티아졸(420 mg, 1.05 mmol)의 교반된 용액에, 트리플루오로아세트아미드(240 mg, 2.1 mmol), MgO(404 mg, 4.2 mmol), Rh2(OAC)4(24 mg, 0.05 mmol) 및 PhI(OAc)2(507 mg, 1.5 mmol)를 실온에서 첨가하고 밤새 동일한 온도에서 교반하였다. 반응이 완료된 후(TLC로 모니터링), 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 석유 에테르 중 55-60% EtOAc)로 정제하여 순수한 중간체 2,2,2-트리플루오로-N-(메틸(4-(4-(1-(2-메틸벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)페닐)(옥소)-λ6-술파닐리덴)아세트아미드를 수득하였다. 수율: 40% (210 mg, 회백색 고체).
이 중간체에, 메탄올(10 mL, 20 V) 및 K2CO3(300 mg, 2.30 mmol)을 첨가하고 20 분 동안 교반하였다. 20 분 후, 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 혼합물에, 물(50 mL)을 첨가하고 수성층을 DCM(2 x 100 mL)으로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 구배: DCM 중 1-2% 메탄올)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 4% (16 mg, 회백색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 7.98 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.68 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.40 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.01 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 3.86 (s, 1H), 3.61 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 3.34-3.28 (m, 4H), 2.97 (s, 3H), 2.80 (s, 3H), 2.59-2.46 (m, 4H), 1.40 (d, J = 6.4 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 415.2 (M+H), Rt. 2.2 min, 96.5% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 2.2 min, 96.0% (최대).
실시예 51, 실시예 52, 실시예 53 및 실시예 54: (S)-이미노(메틸)(2-(4-((S)-1-(2-메틸벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)-λ 6 -술파논 및 (R)-이미노(메틸)(2-(4-((S)-1-(2-메틸벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)-λ 6 -술파논 및 (S)-이미노(메틸)(2-(4-((R)-1-(2-메틸벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)-λ 6 -술파논 및 (R)-이미노(메틸)(2-(4-((R)-1-(2-메틸벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)-λ 6 -술파논
　
ACN(11 mL) 중 중간체 8(1.10 g, 4.20 mmol)의 교반된 용액에, TEA(1.6 mL, 11.5 mmol) 및 중간체 10(1.10 g, 4.00 mmol)을 실온에서 첨가하고 생성된 혼합물을 밤새 교반하였다. 반응이 완료된 후(TLC로 모니터링), 생성된 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 석유 에테르 중 90-95% EtOAc)로 정제하여 순수한 중간체 2,2,2-트리플루오로-N-(메틸(2-(4-(1-(2-메틸벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(옥소)-λ6-술파닐리덴)아세트아미드를 수득하였다. 수율: 61% (1.2 g, 회백색 고체).
이 중간체에, 메탄올(2.5 mL) 및 K2CO3(500 mg, 3.1 mmol)을 첨가하고 15 분 동안 교반하였다. 15 분 후, 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: DCM 중 3-4% 메탄올)로 정제하여 표제 화합물을 라세미 형태로 수득하였다. 이 라세미 화합물의 4 개의 거울상이성질체를 SFC(방법 I: 키랄 정제 이동상: IPA 중 40% 20 mM 암모니아, 컬럼: LUX A1, 유속: 4.0 mL)로 분리하였다.
첫 번째 용리 분획물의 분석(실시예 51); 수율: 12% (55 mg, 회백색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.65 (s, 2H), 7.97 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.39 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.23 (s, 1H), 3.85-3.84 (m, 4H), 3.66-3.64 (m, 1H), 3.07 (s, 3H), 2.79 (s, 3H), 2.50-2.43 (m, 4H), 1.39 (d, J = 6.8 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 416.8 (M+H), Rt. 2.1 min, 99.4% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 2.0 min, 99.7% (최대). Chiral SFC: (방법 C) Rt. 3.8 min, 100% (최대).
두 번째 용리 분획물의 분석(실시예 52); 수율: 11% (46 mg, 회백색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.65 (s, 2H), 7.97 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.39 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.23 (s, 1H), 3.85-3.84 (m, 4H), 3.66-3.64 (m, 1H), 3.07 (s, 3H), 2.79 (s, 3H), 2.50-2.43 (m, 4H), 1.39 (d, J = 6.80 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 416.8 (M+H), Rt. 2.1 min, 99.2% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 2.0 min, 99.7% (최대). Chiral SFC: (방법 C) Rt. 4.5 min, 97.6% (최대).
세 번째 용리 분획물의 분석(실시예 53); 수율: 15% (65 mg, 회백색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.65 (s, 2H), 7.97 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.39 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.23 (s, 1H), 3.85-3.84 (m, 4H), 3.66-3.64 (m, 1H), 3.07 (s, 3H), 2.79 (s, 3H), 2.50-2.43 (m, 4H), 1.39 (d, J = 6.80 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 416.8 (M+H), Rt. 2.1 min, 99.4% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 2.0 min, 99.4% (최대). Chiral SFC: (방법 C) Rt. 4.9 min, 97.4% (최대).
네 번째 용리 분획물의 분석(실시예 54); 수율: 17% (75 mg, 회백색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.65 (s, 2H), 7.97 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.39 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.23 (s, 1H), 3.85-3.84 (m, 4H), 3.66-3.64 (m, 1H), 3.07 (s, 3H), 2.79 (s, 3H), 2.50-2.43 (m, 4H), 1.39 (d, J = 6.80 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 416.8 (M+H), Rt. 2.1 min, 98.2% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 2.0 min, 97.9% (최대). Chiral SFC: (방법 C) Rt. 8.5 min, 98.9% (최대).
실시예 55: 이미노(메틸)(2-(4-(1-(2-메틸벤조[d]옥사졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)-λ 6 -술파논
단계 1: 2,2,2-트리플루오로-N-(메틸(2-(4-(1-(2-메틸벤조[d]옥사졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(옥소)-λ 6 -술파닐리덴)아세트아미드
건조 ACN(5 mL) 중 중간체 22(0.19 g, 0.77 mmol)의 교반된 용액에, TEA(0.34 g, 2.32 mmol) 및 중간체 10(0.26 g, 0.92 mmol)을 실온에서 첨가하고 생성된 혼합물을 30 분 동안 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: DCM 중 3% 메탄올)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 24% (90 mg, 옅은 노란색 구미 고체). LCMS: (방법 A) 496.8 (M+H), Rt. 3.4 min, 74.8% (최대).
단계 2: 이미노(메틸)(2-(4-(1-(2-메틸벤조[d]옥사졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)-λ 6 -술파논
건조 메탄올(2 mL) 중 2,2,2-트리플루오로-N-(메틸(2-(4-(1-(2-메틸 벤조 [d]옥사졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(옥소)-λ6-술파닐리덴)아세트아미드(0.09 g, 0.18 mmol)의 교반된 용액에, K2CO3(0.03 g, 0.21 mmol)을 첨가하고 생성된 혼합물을 실온에서 30 분 동안 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음, 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: DCM 중 4% 메탄올)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 18% (14 mg, 옅은 노란색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.65 (s, 2H), 7.60-7.58 (m, 2H), 7.32 (dd, J = 8.4, 1.6 Hz, 1H), 4.24 (s, 1H), 3.84-3.81 (m, 4H), 3.61-3.59 (m, 1H), 3.07 (s, 3H), 2.60 (s, 3H), 2.48-2.34 (m, 4H), 1.37 (d, J = 6.8 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 401.0 (M+H), Rt. 1.9 min, 98.4% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 1.9 min, 98.8% (최대).
실시예 56: 이미노(메틸)(2-(4-(1-(퀴놀린-7-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)-λ 6 -술파논
단계 1: 2,2,2-트리플루오로-N-(메틸(옥소)(2-(4-(1-(퀴놀린-7-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)-λ 6 -술파닐리덴)아세트아미드
DMF(2mL) 중 중간체 19(200 mg, 0.82 mmol)의 교반된 용액에 TEA(0.4 mL, 2.4 mmol) 및 중간체 10(285 mg, 0.97 mmol)을 실온에서 첨가하고 밤새 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 후, 반응 혼합물을 진공 하에 증발시켰다. 생성된 혼합물에, 물(5 mL)을 첨가하고 수성층을 EtOAc(2 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 헥산 중 76% EtOAc)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 25% (100 mg, 노란색 검). LCMS: (방법 B) 492.8 (M+H), Rt. 2.1 min, 94.7% (최대).
단계 2: 이미노(메틸)(2-(4-(1-(퀴놀린-7-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)-λ 6 -술파논
메탄올(10 mL) 중 중간체 2,2,2-트리플루오로-N-(메틸(옥소)(2-(4-(1-(퀴놀린-7-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)-λ6-술파닐리덴)아세트아미드(100 mg, 0.20 mmol)의 교반된 용액에, K2CO3(56 mg, 0.46 mmol)을 첨가하고 생성된 혼합물을 1 시간 동안 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 후, 반응 혼합물을 진공 하에서 증발시켰다. 생성된 혼합물에, 물(5 mL)을 첨가하고 수성층을 EtOAc(2 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 메탄올 중 3% EtOAc)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 40% (64.12 mg, 회백색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.87 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 8.68 (s, 2H), 8.36 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.01 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.81 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.24 (s, 1H), 3.95-3.85 (m, 4H), 3.73-3.68 (m, 1H), 3.07 (s, 3H), 2.68-2.68 (m, 2H), 2.42-2.33 (m, 2H), 1.43 (d, J = 6.8 Hz, 3H). LCMS: (방법 B) 397.0 (M+H), Rt. 4.4 min, 97.8% (최대). HPLC: (방법 B), Rt. 4.1 min, 97.8% (최대).
실시예 57: 이미노(메틸)(2-(4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)-λ 6 -술파논
단계 1: 2,2,2-트리플루오로-N-(메틸(옥소)(2-(4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)-λ 6 -술파닐리덴)아세트아미드
DMF(3 mL) 중 중간체 21(200 mg, 0.83 mmol)의 교반된 용액에, TEA(500 mL, 4.1 mmol) 및 중간체 10(200 mg, 0.69 mmol)을 첨가하고 실온에서 밤새 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 후, 반응 혼합물을 진공 하에서 증발시켰다. 생성된 혼합물에, 물(5 mL)을 첨가하고 수성층을 EtOAc(2 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(100% EtOAc)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 50% (220 mg, 갈색 구미 고체). LCMS: (방법 A) 494.2 (M+H), Rt. 2.1 min, 77.3% (최대).
단계 2: 이미노(메틸)(2-(4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)-λ 6 -술파논
메탄올(5 mL) 중 2,2,2-트리플루오로-N-(메틸(옥소)(2-(4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)-λ6-술파닐리덴)아세트아미드(220 mg, 0.44 mmol)의 교반된 용액에, K2CO3(123 mg, 0.89 mmol)을 첨가하고 30 분 동안 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 후, 반응 혼합물을 진공 하에서 증발시켰다. 생성된 혼합물에, 물(5 mL)을 첨가하고 수성층을 EtOAc(2 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: DCM 중 2-5% 메탄올)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 47% (56.43 mg, 회백색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.94 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 8.66 (s, 2H), 8.10 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.93 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 4.26 (s, 1H), 3.86-3.82 (m, 5H), 3.08 (s, 3H), 2.68-2.56 (m, 2H), 2.52-2.51 (m, 2H), 1.45 (d, J = 6.0 Hz, 3H). LCMS: (방법 B) 398.0 (M+H), Rt. 1.5 min, 99.8% (최대). HPLC: (방법 A), Rt. 1.6 min, 99.4% (최대).
실시예 58: 6-이미노-2-(4-(1-(2-메틸벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)-5,6,7,8-테트라히드로-6λ 4 -티오피라노[4,3-d]피리미딘 6-옥시드
DMF(5 mL) 중 중간체 20(500 mg, 1.64 mmol)의 교반된 용액에, TEA(1.2 mL, 8.22 mmol) 및 5-(1-클로로에틸)-2-메틸벤조[d]티아졸(중간체 8의 단계 1 내지 3에 기재된 합성)(382.7 mg, 1.81 mmol)을 실온에서 첨가하고 70℃에서 밤새 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 후, 반응 혼합물을 진공 하에 50℃에서 증발시켰다. 생성된 혼합물에, 물(10 mL)을 첨가하고 수성층을 EtOAc(2 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 구배: DCM 중 1-2% 메탄올)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 31% (30 mg, 회백색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.07 (s, 1H), 7.96 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.38 (s, 1H), 4.22-4.10 (m, 2H), 3.90 (s, 1H), 3.71-3.69 (m, 4H), 3.60 (q, J = 6.8 Hz, 1H), 3.40-3.25 (m, 2H), 3.06 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.79 (s, 3H), 2.45-2.33 (m, 4H), 1.38 (d, J = 6.8 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 443.2 (M+H), Rt. 2.1 min, 99.4% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 2.2 min, 99.4% (최대).
실시예 59: 2-(4-(1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)피페라진-1-일)-6-이미노-5,6,7,8-테트라히드로-6λ 4 -티오피라노[4,3-d]피리미딘 6-옥시드
DMF(5 mL) 중 중간체 20(500 mg, 1.64 mmol)의 교반된 용액에, TEA(1.2 mL, 8.22 mmol) 및 5-(1-클로로에틸)벤조[d]티아졸(중간체 6, 단계 1 내지 3) (357.4 mg, 1.81 mmol)을 실온에서 첨가하고 70℃에서 밤새 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 후, 반응 혼합물을 진공 하에 50℃에서 증발시켰다. 생성된 혼합물에, 물(10 mL)을 첨가하고 수성층을 EtOAc(2 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 구배: DCM 중 1-2% 메탄올)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 9% (62.94 mg, 회백색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 9.38 (s, 1H), 8.11 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.07 (s, 1H), 8.01 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.49 (dd, J = 8.4, 1.2 Hz, 1H), 4.22-4.11 (m, 2H), 3.90 (s, 1H), 3.72-3.62 (m, 5H), 3.39-3.24 (m, 2H), 3.06 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.52-2.33 (m, 4H), 1.39 (d, J = 6.8 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 429.2 (M+H), Rt. 1.6 min, 96.9% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 1.9 min, 96.9% (최대).
실시예 60: 4-(4-(1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)-6-이미노-6,7-디히드로-5H-6λ 4 -티에노[3,4-d]피리미딘 6-옥시드
단계 1: 2-(에틸티오)-5,7-디히드로티에노[3,4-d]피리미딘-4(3H)-온
물(100.0 mL, 10 V) 중 S-에틸-이소티오우로늄 브로미드(10.0 g, 70.34 mmol)의 용액에, Na2CO3(7.44 g, 70.34 mmol), 이어서 메틸 4-옥소테트라히드로티오펜-3-카복실레이트(13.02 g, 70.34 mmol)를 나누어 첨가하고 실온에서 밤새 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 후, 현탁액을 여과 제거하였다. 얻어진 고체를 물 및 디에틸 에테르로 세척하고 진공 하에 건조하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 67% (10 g, 흰색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 12.82 (s, 1H), 4.09 (s, 2H), 3.90 (s, 2H), 3.11-3.08 (m, 2H), 1.30-1.26 (m, 3H). LCMS: (방법 A) 215.3 (M+H), Rt. 2.8 min, 96.2% (최대).
단계 2: 5,7-디히드로티에노[3,4-d]피리미딘-2,4(1H,3H)-디온
물(75.0 mL, 7.5 V) 중 2-(에틸티오)-5,7-디히드로티에노[3,4-d]피리미딘-4(3H)-온(10.0 g, 46.66 mmol)의 용액에, 농축 HCl(7.5 mL, 0.75 V) 및 빙초산(15 mL, 1.5 V)을 첨가하고 반응 혼합물을 5 시간 동안 100℃로 가열하였다. 생성된 현탁액을 여과 제거하고, 수득된 고체를 물, 디에틸 에테르로 세척하고 잘 건조시켜 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 95% (7.5 g, 흰색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 11.23 (s, 1H), 11.08 (s, 1H), 3.97 (s, 2H), 3.76 (s, 2H). LCMS: (방법 A) 171.2 (M+H), Rt. 0.9 min, 95.3% (최대).
단계 3: 2,4-디클로로-5,7-디히드로티에노[3,4-d]피리미딘
건조 POCl3(75 mL, 10 V) 중 2,4-디클로로-1,2,3,4,5,7-헥사히드로티에노[3,4-d]피리미딘(7.5 g, 44.06 mmol)의 교반된 용액에 90℃에서 밤새 가열하였다. 반응이 완료된 후(TLC로 모니터링), 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 혼합물에, DCM(100 mL)을 첨가하고 포화 K2CO3 용액으로 염기성화시켰다. 유기층을 분리하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 석유 에테르 중 8-10% EtOAc)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 44% (4.0 g, 흰색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 4.37 (t, J = 2.4 Hz, 2H), 4.24 (t, J = 2.8 Hz, 2H). LCMS: (방법 A) 206.0 (M+H), Rt. 5.2 min, 96.5% (최대).
단계 4: 2,4-디클로로-5,7-디히드로티에노[3,4-d]피리미딘 6-옥시드
DCM(60 mL, 15 V) 중 2,4-디클로로-5,7-디히드로티에노[3,4-d]피리미딘(4.0 g, 19.27 mmol)의 교반된 용액에, m-CPBA(4.98 g, 28.91 mmol)를 0℃에서 나누어 첨가하고 실온에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음, 반응 혼합물을 10% NaHCO3 용액으로 ??칭하고 수성층을 DCM(2 x 100 mL)으로 추출하였다. 합한 유기층을 염수(30 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 석유 에테르 중 10-12% EtOAc)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 56% (2.6 g, 흰색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 4.91 (s, 2H), 4.75 (s, 2H).
단계 5: N-(2,4-디클로로-6-옥시도-5,7-디히드로-6λ 4 -티에노[3,4-d]피리미딘-6-일리덴)-2,2,2-트리플루오로아세트아미드
DCM(44.0 mL, 15 V) 중 2,4-디클로로-5,7-디히드로티에노[3,4-d]피리미딘 6-옥시드(2.6 g, 11.65 mmol)의 교반된 용액에, 트리플루오로아세트아미드(2.63 g, 23.31 mmol), MgO(1.87 g, 46.60 mmol), Rh2(OAc)4(0.25 g, 0.58 mmol) 및 PhI(OAc)2(5.6 g, 17.47 mmol)를 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음, 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 추가 정제없이 다음 단계로 전달하였다. 수율: 56% (2.6 g, 흰색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 4.91 (s, 2H), 4.75 (s, 2H).
단계 6: 2-클로로-4-(4-(1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)시클로헥실)-6-이미노-6,7-디히드로-5H-6λ 4 -티에노[3,4-d]피리미딘 6-옥시드
　
DMF(3.0 mL, 10 V) 중 N-(2,4-디클로로-6-옥시도-5,7-디히드로-6λ4 -티에노[3,4-d]피리미딘-6-일리덴)-2,2,2-트리플루오로아세트아미드(475 mg, 1.42 mmol)의 교반된 용액에, TEA(0.54 mL, 3.87 mol) 및 중간체 1(300 mg, 1.29 mmol)을 첨가하고 실온에서 밤새 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음, 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 용리액: 석유 에테르 중 40% EtOAc)로 정제하여 중간체 N-(2-클로로-4-(4-(1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)-6-옥시도-5,7-디히드로-6λ4-티에노[3,4-d]피리미딘-6-일리덴)-2,2,2-트리플루오로아세트아미드를 수득하였다. 수율: 94% (0.51 g, 회-백색 고체).
이 중간체에, 메탄올(22.0 mL, 20 V) 및 K2CO3(1.46 g, 11.41 mmol)을 첨가하고 20 분 동안 교반하였다. 20 분 후, 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 혼합물에, 물(50 mL)을 첨가하고 수성층을 DCM(2 x 100 mL)으로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 추가 정제없이 다음 단계로 전달하였다. 수율: 35% (200 mg, 흰색 고체). LCMS: (방법 A) 435.2 (M+H), Rt. 2.12 min, 40.4% (최대).
단계 7: 4-(4-(1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)시클로헥실)-6-이미노-6,7-디히드로-5H-6l4-티에노[3,4-d]피리미딘 6-옥시드
에탄올(2.0 mL, 20 V) 중 2-클로로-4-(4-(1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)시클로헥실)-6-이미노-6,7-디히드로-5H-6λ4-티에노[3,4-d]피리미딘 6-옥시드(200 mg, 0.52 mmol)의 교반된 용액에, 10% Pd/C(10 mg, 1.6 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음, 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 Prep. HPLC(방법 A)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 5% (15 mg, 옅은 노란색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.45 (s, 1H), 7.16 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.74 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.71 (s, 1H), 4.60 (s, 1H), 4.50 (t, J = 8.6 Hz, 2H), 4.42 (s, 2H), 3.58-3.56 (m, 4H), 3.34-3.33 (m, 2H), 3.13 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 2.40-2.37 (m, 4H), 1.28 (d, J = 6.8 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 401.2 (M+H), Rt. 2.2 min, 99.1% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 2.3 min, 99.2% (최대).
실시예 61: 2-(4-(1-(2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)-6-이미노-5,6,7,8-테트라히드로-6λ 4 -티오피라노[4,3-d]피리미딘 6-옥시드
DMF(5 mL) 중 중간체 20(500 mg, 1.64 mmol)의 교반된 용액에, TEA(1.2 mL, 8.22 mmol) 및 6-(1-클로로에틸)-2,3-디히드로벤조퓨란(중간체 1의 단계 1 내지 5에 기재된 합성)(329 mg, 1.81 mmol)를 실온에서 첨가하고 70℃에서 밤새 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 후, 반응 혼합물을 감압 하에 50℃에서 증발시켰다. 생성된 혼합물에, 물(10 mL)을 첨가하고 수성층을 EtOAc(2 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 구배: DCM 중 1-2% 메탄올)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 2% (10.09 mg, 옅은 갈색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.08 (s, 1H), 7.14 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.75 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.71 (s, 1H), 4.50 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 4.22-4.10 (m, 2H), 3.91 (s, 1H), 3.69-3.67 (m, 4H), 3.40-3.30 (m, 2H), 3.18-3.05 (m, 5H), 2.50-2.31 (m, 4H), 1.27 (d, J = 6.4 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 414.2 (M+H), Rt. 1.8 min, 99.9% (최대). HPLC: (방법 A) Rt. 2.1 min, 99.6% (최대).
실시예 62: 6-이미노-2-(4-(1-(퀴놀린-7-일)에틸)피페라진-1-일)-5,6,7,8-테트라히드로-6-λ 4 -티오피라노[4,3-d]피리미딘 6-옥시드
DMF(2 mL) 중 중간체 20(153 mg, 0.5 mmol)의 교반된 용액에, TEA(0.2 mL, 1.41 mmol) 및 7-(1-클로로에틸)퀴놀론(중간체 19의 단계 1 내지 4에 기재된 합성)(95 mg, 0.47 mmol)을 첨가하고 밤새 환류시켰다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 후, 반응 혼합물을 진공 하에 증발시켰다. 생성된 혼합물에, 물(5 mL)을 첨가하고 수성층을 EtOAc(2 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 구배: EtOAc 중 3% 메탄올)로 정제하고 얻어진 물질을 prep.HPLC(방법 B)로 추가로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 3% (6.59 mg, 갈색 구미 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.87 (s, 1H), 8.36 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 8.08 (s, 1H), 8.01 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.80 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 4.23-4.11 (m, 2H), 3.91 (s, 1H), 3.71-3.49 (m, 5H), 3.32-3.18 (m, 2H), 3.08 (t, J = 6.40 Hz, 2H), 2.45-2.34 (m, 4H), 1.42 (d, J = 6.40 Hz, 3H). LCMS: (방법 B) 423.0 (M+H), Rt. 4.3 min, 98.2% (최대). HPLC: (방법 B), Rt. 4.1 min, 97.5% (최대).
실시예 63: 이미노(메틸)(2-(4-(1-((R)-2-메틸-2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)-λ 6 -술파논
단계 1: 2,2,2-트리플루오로-N-(메틸(2-(4-(1-((R)-2-메틸-2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(옥소)-λ 6 -술파네일리덴)아세트아미드
ACN(3.0 mL) 중 중간체 23(0.3 g, 0.94 mmol)의 교반된 용액에, TEA(0.53 mL, 3.75 mmol) 및 중간체 10(0.3 g, 1.03 mmol)을 실온에서 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 후, 반응 혼합물을 진공 하에 50℃에서 증발시켰다. 생성된 혼합물에, 물(2 mL)을 첨가하고 수성층을 EtOAc(2 x 15 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수 용액(20 mL)으로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔: 230-400 메쉬, 용리액: 석유-에테르 중의 25% EtOAc)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 66% (0.31 g, 옅은 노란색 고체). 1 H NMR (400 MHz,DMSO-d 6 ): δ 8.68 (s, 2H), 7.11 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.80-6.76 (m, 2H), 4.95 (q, J = 7.2 Hz, 1H), 4.92-4.11 (m, 1H), 3.98-3.97 (m, 4H), 3.47 (s, 3H), 3.34-3.28 (m, 1H), 2.85-2.79 (m, 1H), 2.55-2.54 (m, 4H), 1.54 (d, J = 7.20 Hz, 3H), 1.49 (d, J = 6.4 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 402.1 (M+H), Rt 2.5 min, 97.1% (최대).
단계 2: 이미노(메틸)(2-(4-(1-((R)-2-메틸-2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)-λ 6 -술파논
메탄올(6.1 mL, 20 V) 중 2,2,2-트리플루오로-N-(메틸(2-(4-(1-((R)-2-메틸-2,3-디히드로벤조퓨란-6-일)에틸)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)(옥소)-λ6-술파네일리덴)아세트아미드(0.31 g, 0.61 mmol)의 교반된 용액에, K2CO3(170 mg, 1.22 mmol)를 첨가하고 반응 혼합물을 20 분 동안 교반하였다. 반응의 완료는 TLC로 모니터링 한 다음, 20 분 후, 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 여과물을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 혼합물에, 물(2 mL)을 첨가하고 수성층을 EtOAc(2 x 10 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수 용액(10 mL)으로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 생성된 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(Biotage Isolera, 구배: DCM 중 1-4% 메탄올)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 수율: 19% (74 mg, 회백색 고체). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.66 (s, 2H), 7.11 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.75 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.68 (s, 1H), 4.89-4.86 (m, 1H), 4.25 (s, 1H), 3.83-3.81 (m, 4H), 3.39-3.34 (m, 1H), 3.30-3.24 (m, 1H), 3.08 (s, 3H), 2.77-2.68 (m, 1H), 2.44-2.34 (m, 4H), 1.38 (q, J = 6.2 Hz, 3H), 1.28 (d, J = 6.4 Hz, 3H). LCMS: (방법 A) 402.2 (M+H), Rt 1.9 min, 99.0% (최대). HPLC: (방법 A) Rt 2.3 min, 97.9% (최대).
실시예 B01: 인간 O -GlcNAcase 효소 억제 분석
2% DMSO 중 McIlvaine's 완충액(pH 6.5)에 있는 억제제 용액의 적합한 농도의 5 μl(용량 반응 곡선 계산을 위해)를 384-웰 플레이트(Greiner, 781900)의 각 웰에 첨가하였다. 이어서, 20 nM의 His-태그된 hOGA 및 10 μM의 FL-GlcNAc(플루오레세인 모노-베타-D-(2-데옥시-2-N-아세틸)글루코피라노시드; Marker Gene Technologies Inc, M1485)를 384-웰 플레이트에 최종 부피 20 ㎕로 첨가하였다. 실온에서 60 분 동안 인큐베이션한 후, 10 ㎕의 정지(stop) 완충액(200 mM 글리신, pH 10.75)를 첨가하여 반응을 종결시켰다. 형광 수준(λexc 485 nm; (λemm 520 nm)을 PHERAstar 기계에서 판독하였다. 측정된 형광의 양을 억제제 농도에 대해 플로팅하여 S자형(sigmoidal) 용량 반응 곡선을 생산하여 IC50을 계산하였다. 모든 개별 데이터는 배경(background)을 제외(subtraction)하여 수정하였다(Thiamet 3 uM = 100% 억제). 0.5% DMSO가 대조군 값으로 간주되었다(억제 없음).
실시예 B02: 약력학적 모델: 총 단백질 O -GlcNAcyl화 면역분석(RL2 mAb, 메소 스케일 전기화학발광(electrochemiluminescence: ECL)분석)
시험 화합물을 C57BL/6J 마우스에 경구로 투여하였다. 화합물 투여 후 정의된 시간 간격인, 전형적으로 2 내지 48 시간, 바람직하게는 4 내지 24 시간의 시간 범위로, 마우스를 혈액 수집 및 전뇌 해부(dissection)를 위해 단두술(decapitation)로 희생시켰다. 우측 뇌 반구를 2 ml 프리셀리스(Precellys) 튜브에 넣고, 드라이 아이스에서 급속 냉동하고 -80℃에서 보관하였다. 좌측 반구를 2 ml 에펜도르프(Eppendorf) 튜브에 넣고, 드라이 아이스에서 급속 냉동하고 추가 처리까지 -80℃에서 보관하였다. 혈액 샘플을 35 IU의 헤파린을 함유하는 Sarstedt 튜브에 모으고 4℃로 유지하였다. 3800 xg, 4℃에서 10 분 동안 원심분리한 후, 각 샘플로부터 50 μL의 혈장을 1.5 ml 에펜도르프 튜브로 옮기고 -80℃에서 보관하였다.
면역분석을 위한 용해성 뇌 단백질의 제조를 위해, 상기 반구를 프로테아제 억제제 칵테일과 함께 빙-냉 시토버스터(Cytobuster) 시약(71009 -Merck Millipore) 완충액에서 균질화시켰다. 4℃로 17000 xg에서 15 분 동안 원심분리한 후, 상등액을 폴리카보네이트 튜브(1 ml)로 옮겼다. 1 시간 동안 100000 xg, 4℃에서 원심분리하여 상등액을 제거하였고, 단백질 농도를 제조사의 지시에 따라 BCA 키트(23227-Pierce, Rockford, IL)를 사용하여 결정하였다.
총 단백질 O -GlcNAcyl화 면역분석:
샘플을 무작위화하고 120 μg/ml(25 μl/웰)의 용해성 뇌 단백질을 4℃에서 밤새 Multi-array 96-웰 high bind plate(L15XB-3 High bind-Meso Scale Discovery) 상에 직접 코팅하였다. 세척(PBS-T 완충액으로 3회)한 후, 플레이트를 1 시간 동안 교반 하에 실온(RT)에서 MSD 차단제 A 용액(MSD blocker A solution)으로 차단하였다. 세척(PBS-T 완충액으로 3회)한 후, 플레이트를 1 시간 동안 교반 하에 실온에서 O-GlcNAc 모이어티(RL2; MA1-072 - Thermo Scientific)에 대한 0.1 ㎍/ml의 마우스 모노클로날 항체와 함께 인큐베이션하였다. ECL 분석을 위해, 세척(PBS-T 완충액으로 3회)한 후, 1 μg/ml의 SULFO-TAG™ 표지된 항-마우스 이차 항체(Meso Scale Discovery)를 첨가하고 플레이트를 1 시간 동안 교반 하에 실온에서 인큐베이션하였고 빛으로부터 보호하였다. 세척(PBS-T 완충액으로 3회)한 후, 150 μl/웰의 1X Read Buffer T를 플레이트에 첨가하고 섹터 이미저 6000(Sector Imager 6000)(Meso Scale Discovery)에서 판독하였다.
실시예 B03: 약학적 제제
(A) 주사 바이알(Injection vials): 3 L의 이중-증류수(bi-distilled water) 중 본 발명에 따른 활성 성분 100 g 및 디소듐 히드로겐 포스페이트 5 g의 용액을 2N 염산을 사용하여 pH 6.5로 조정하고, 멸균 여과하고, 주사 바이알로 옮기고, 무균 조건 하에 동결건조시키고 무균 조건 하에 밀봉하였다. 각 주사 바이알은 5 mg의 활성 성분을 함유하였다.
(B) 좌제(Suppositories): 본 발명에 따른 20 g의 활성 성분의 혼합물을 100 g의 대두 레시틴 및 1400 g의 코코아 버터로 용융시키고, 주형(moulds)에 붓고 냉각시켰다. 각 좌제는 20 mg의 활성 성분을 함유하였다.
(C) 용액: 이중-증류수 940 ml 중 본 발명에 따른 1 g의 활성 성분, 9.38 g의 NaH2PO4ㆍ2H2O, 28.48 g의 Na2HPO4ㆍ12H2O 및 0.1 g의 벤잘코늄 클로리드로부터 용액을 제조하였다. pH를 6.8로 조정하고, 용액을 1 L까지 만들고 조사(irradiation)로 멸균시켰다. 이 용액은 점안제(eye drops)의 형태로 사용될 수 있다.
(D) 연고(Ointment): 본 발명에 따른 500 mg의 활성 성분을 무균 조건 하에서 99.5 g의 바셀린과 혼합하였다.
(E) 정제: 본 발명에 따른 1 kg의 활성 성분, 4 kg의 락토오스, 1.2 kg의 감자 전분, 0.2 kg의 탈크 및 0.1 kg의 마그네슘 스테아레이트의 혼합물을 가압하여 통상적인 방식으로 정제를 수득하였으며 그러한 방식으로 각 정제는 10 mg의 활성 성분을 함유하였다.
(F) 코팅된 정제: 정제를 실시예 E와 비슷하게 가압한 후 수크로오스, 감자 전분, 활석, 트라가칸트 및 염료의 코팅으로 통상적인 방식으로 코팅하였다.
(G) 캡슐: 본 발명에 따른 활성 성분 2 kg을 통상적인 방식으로 경질 젤라틴 캡슐에 도입하였고 그러한 방식으로 각 캡슐은 20 mg의 활성 성분을 함유하였다.
(H) 앰풀(Ampoules): 60 L의 이중-증류수 중 본 발명에 따른 1 kg의 활성 성분의 용액을 멸균 여과하고, 앰풀로 옮기고, 멸균 조건 하에서 동결건조시키고 멸균 조건하에 밀봉하였다. 각 앰풀은 10 mg의 활성 성분을 함유하였다.
(I) 흡입 스프레이(Inhalation spray): 본 발명에 따른 활성 성분 14 g을 등장성 NaCl 용액 10 L에 용해시키고, 용액을 펌프 기계(pump mechanism)를 사용하여 시판되는 스프레이 용기로 옮겼다. 상기 용액을 입이나 코에 분무할 수 있었다. 1 회의 스프레이 샷(약 0.1 ml)은 약 0.14 mg의 용량에 상응하였다.
실시예 B04: 급속 평형 투석(Rapid Equilibrium Dialysis)을 사용한 마우스 혈장에서의 단백질 결합
재료
ㆍCD1 마우스 혈장: 풀링된(pooled) 수컷, K2-EDTA(MSEPLEDTA2, Bioreclammation, USA)
*ㆍ포스페이트 완충 식염수(1XPBS), pH 7.4, 100 mM(Sigma, Cat No. P4417)
ㆍRED 인서트(inserts)(Pierce, Cat No.9006, 8 kDa MWCO)
ㆍ시료 분석: LC-MS/MS
방법
ㆍ DMSO 스톡 용액(stock solution)의 준비
기준 및 시험 화합물의 20 mM DMSO 스톡 용액으로부터, 1 mM DMSO 중간 작업 용액을 제조하였다. 1 mM 중간 작업 용액으로부터, 100 μM DMSO 작업 용액을 제조하였다.
ㆍ 시료 제조 절차:
선택된 혈장을 이의 사용 전에 수조(water bath)를 사용하여 -20℃ 내지 37℃로 하였다. 기준 또는 시험 화합물의 DMSO 작업 용액(2 μL; 100 μM)을 선택된 혈장(198 μL)에 첨가하여 테스트 용액을 제조하였다. 스파이크된 혈장(Spiked plasma)(200 μl)을 테플론(teflon) 플레이트에 놓인 RED 인서트의 시료 구획으로 옮겼다. RED 인서트의 완충 구획에 350 μl의 1XPBS를 첨가하였다. 테플론 플레이트를 밀봉 매트(sealing mat)로 덮고 Thermomixer에서 500 RPM으로 37℃에서 5 시간 동안 교반하였다. 인큐베이션 시간 후, 시료 구획으로부터 혈장의 알리코트(aliquot)(50 μl)를 블랭크 1XPBS(50 μl)와 혼합하였다. 유사하게, 완충 구획으로부터의 완충액의 알리코트(50 μl)를 블랭크 혈장(50 μl)와 혼합하였다. ??칭(Quenching) 용액(200 μL, 내부 표준 톨부타미드(tolbutamide)을 함유하는 아세토니트릴(0.5 μg/mL))을 첨가하고, 생성된 용액을 볼텍스 믹서(vortex mixer)를 사용하여 혼합하고 원심분리하였다(Eppendorf 5415, 13792 g). 상등액을 질량 분석기(Mass Spectrometer)를 사용하여 분석하였다. 시료(상등액 분획, 5 μL)를 LC-MS/MS 기기에 주입하였다.
ㆍ 크로마토그래피 조건:
LC-MS/MS: API 4000 LC-MS/MS
소프트웨어: Analyst Version 1.6.1
컬럼: Phenomenex Synergy 30*4.6*5μ
컬럼 오븐: 40℃
모드: ESI Positive
주입량: 5 μl
유속: 1000 μL/mL
완충액: 물 중 0.1% 포름산
방법: 등용매 방법/구배
조성: A)물 중 0.1% 포름산
B)메탄올 중 0.1% 포름산
결과 계산
유리 약물 및 총 약물의 농도가 LCMS/MS에 의해 결정된 후, 혈장 단백질 결합 백분율은 하기와 같이 계산될 수 있다:
이 프로토콜에 따라, 다른 종의 혈장 중 비결합된 분획%도 또한 측정될 수 있다.
실시예 B05: 마우스, 래트 및 인간 간 마이크로솜을 이용한 인 비트로 고유 클리어런스(intrinsic clearance)(Cl int - 인 비트로 )의 결정
이 분석에서, 시험 화합물을 마우스, 래트 및 인간유래의 간 마이크로솜과 인큐베이션하고, 약물의 소실 속도를 LC-MS/MS를 사용하여 결정하였다. 분석에 사용된 조건은 하기에 요약된다:
재료
ㆍCD-1 마우스 간 마이크로솜, 풀링된 수컷(Life Technologies, Cat No. MSMC-PL)(20 mg/ml)
ㆍSD 래트 간 마이크로솜, 풀링된 수컷(Life Technologies, Cat No. RTMCL-PL)(20 mg/ml)
ㆍ인간 간 마이크로솜, 풀링된 혼합된 성별(Life Technologies, Cat No. HMMC-PL)(20 mg/ml)
ㆍNADPH(SRL 뭄바이, Cat No.99197)
ㆍ베라파밀(Sigma, Cat No.V4629)
ㆍ아테놀롤(Sigma, Cat No.A7655)
ㆍ톨부타미드(Sigma Cat. No.T0891)
ㆍ분석 완충액: 50 mM 포타슘 포스페이트 완충액, pH 7.4
ㆍ시험 & 기준 화합물: DMSO 스톡 용액(10 mM 농도)을 제조하고 실온에서 보관하였다. 10 μL의 10 mM DMSO 스톡을 90 μL의 DMSO와 혼합하여 시험 또는 기준 화합물의 중간체 1 mM 용액을 제조하였다. 볼텍스 믹서에서 내용물을 격렬하게 혼합하였다.
방법
ㆍ시험 및 기준 화합물의 작업 용액 제조:
시험 또는 기준 화합물의 1 mM DMSO 용액 10 μL를 분석 완충액 90 μL와 혼합하여 작업 용액(100 μM 농도)을 제조하였다. 혼합물을 볼텍스 믹서에서 격렬하게 혼합하였다. 이 결과의 용액은 10%의 DMSO를 함유하였다. 대사 안정성 분석(metabolic stability assay)을 위해, 상기 100 μM 작업 용액 10 μL를 1 mL의 최종 분석 부피로 첨가하여, 1 μM의 최종 시험 농도 및 0.1%의 DMSO 농도를 생성하였다.
ㆍ대사 안정성 분석
대사 안정성 분석을 pH 7.4의, 50 mM 분석 완충액, 포타슘 포스페이트 완충액 중 최종 부피 1 ml로 수행하였다. 분석은 2 회(in duplicates) 수행된다(n = 2). 955 μL의 분석 완충액, 25 μL의 간 마이크로솜 및 10 μL의 100 μM 시험 화합물 용액을 함유하는 혼합물을 37℃로 유지되는 수조에서 10 분 동안 사전-인큐베이션하였다. 사전-인큐베이션 후, 10 μL의 100 mM NADPH 용액을 첨가하여 반응을 시작하였다. 용액을 혼합하고 수조에서 37℃로 인큐베이션하였다. 상기 분석에서 상이한 성분의 최종 농도는 DMSO 0.1%, 시험 화합물 1 μM, 간 마이크로솜 단백질 0.5 mg/ml 및 NADPH 1 mM이다.
알리코트(100 μL)는 다양한 시점(0, 5, 15, 30 및 45 분)에서 취해지고, 내부 표준으로서 톨부타미드(500 ng/mL)를 함유하는 100 μL의 아세토니트릴로 ??칭하였다. 볼텍스 믹서를 사용하여 샘플을 혼합하고 4000 rpm에서 10 분 동안 원심분리한다(Eppendorf 5810R, 3000g). 상등액(5 μL)을 96 웰 플레이트로 옮기고 LC-MS/MS 분석을 위해 제출하였다.
동일한 분석 혼합물이지만, NADPH가 부재한, 별개의 인큐베이션을 화합물 안정성에 대한 대조군으로서 병렬로 수행하였다. 이 대조 분석은 2 회 수행된다(n = 2). 사전-인큐베이션 후, NADPH의 첨가를 생략하고 10 μL의 분석 완충액으로 대체하였다. 최종 분석 부피는 1 mL이고 대사 안정성 분석에 대해 기재된 바와 같이 분석을 위해 알리코트(100 μL)를 추출하고 처리하였다.
ㆍLC-MS/MS 조건(일반적인 방법)
LC-MS/MS: Nexera™ UHPLC가 구비된 API Sciex 4000
소프트웨어: Analyst Version 1.6.1
컬럼: Phenomenex Kinetex C18 50X3.0 mm, 2.6μ
컬럼 오븐: 40℃
모드: ESI Positive
주입량: 5 μl
유속: 1000 μL/mL
완충액: 물 중 0.1% 포름산
방법: 등용매 방법/구배
조성: A)물 중 0.1% 포름산
B)메탄올 중 0.1% 포름산
결과 계산
LC-MS/MS 데이터로부터, 상이한 시점에 남아있는 약물의 양을 결정하였다(%PCR). 기울기 값(slope value)을 얻기 위해 시간에 대해 %PCR의 로그(logarithm)를 플로팅하였다. 기울기 값으로부터, 인 비트로 T1/2를 결정하였다. 인 비트로 고유 클리어런스(Clint)를 하기 공식을 사용하여 계산하였다.
여기서 Kel은 제거 상수(기울기)이다.
본 발명의 하나 이상의 화합물을 이를 필요로 하는 환자에게 투여함으로써, 타우병증과 같은, 본 명세서에서 언급된 질병을 치료하는 방법은 또한 본 발명의 목적이다.
상기 구조에서 화학 결합이 하기와 같이 그려진 경우, 이들이 부착된 원자의 하나 이상에서 이들은 정의된, 즉 R 또는 S 입체화학를 지시한다:
또는 .
이는 하기에 예시되며, 구조
는
하기의 4 가지 가능한 부분입체이성질체 중 오직 하나, 즉 부분입체이성질체 및/또는 거울상이성질체의 혼합물에 대조되는 단일의 개별적인 화학 구조를 나타낸다:

Claims (16)

  1. 하기 화학식 (I)의 술폭시민 기 포함 화합물, 또는 이의 약학적으로 사용가능한 용매화물, 염, 토토머, 거울상이성질체, 라세미체, 또는 입체이성질체, 또는 하나 이상의 H 원자가 D (중수소)로 대체되는, 술폭시민 기 포함 화합물:

    상기에서
    R은 1 내지 6 개의 탄소 원자를 갖는 직쇄(straight chain) 또는 분지형(branched) 알킬이고;
    W는 CH 또는 N이며;
    A는 하기 기 중 하나를 나타내고:

    X는 N 또는 CR'''이며;
    Y는 O, S, SO 또는 SO2이고;
    R', R''는 각각 독립적으로 H 또는 1 내지 12 개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지형 알킬을 나타내며;
    R'''은 H 를 나타내고;
    Q는 하기 기 중 하나를 나타내고:

    Z5는 NR8, CHR5, S(O)(NR3'), N(SO)R3', 이며
    Z6은 CH2, CO, S(O)(NR3'), N(SO)R3', 이고;
    T는 N, CH 또는 CR7이며;
    R3'은 H 또는 1 내지 12 개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지형 알킬기를 나타내고, 여기서 1 내지 3 개의 CH2-기는 SO2, CO, O로부터 선택된 기로 대체될 수 있고;
    R5, R7은 독립적으로 H, Hal, NR3R4, NO2 또는 1 내지 12 개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지형 알킬을 나타내고, 여기서 1 내지 3 개의 CH2-기는 O, NR3, S, SO, SO2, S(O)(NR3'), N(SO)R3', CO, COO, OCO, CONR3, NR3CO
    로부터 선택된 기로 대체될 수 있으며 여기서 1 내지 5 개의 수소 원자는 Hal, NR3R4, NO2, OR3, Het, Ar, Cyc로 또는 하기 기 중 하나로 대체될 수 있고:

    또는 R5, R7은 Ar, Het 또는 Cyc 또는 하기 기 중 하나를 나타내며:

    R3, R4는 각각 독립적으로 H 또는 1 내지 12 개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지형 알킬기를 나타내며;
    Z7은 C(R3')2, S, O, NR3'이며;
    R8은 H 또는 1 내지 12의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지형 알킬을 나타내며, 여기서 1 내지 3 개의 CH2-기는 SO, SO2, S(O)(NR3'), N(SO)R3', CO, COO, OCO, CONR3, NR3CO, 및
    로부터 선택된 기로 대체될 수 있고
    또한 여기서 1 내지 5 개의 수소 원자는 CN, OR3, SR3, Hal, NR3R4, NO2로 또는 하기 기 중 하나로 대체될 수 있으며:
    , ,
    또는 R8은 하기 기 중 하나를 나타내고:
    , ;
    Hal은 F, Cl, Br 또는 I을 나타내며;
    Het는 포화, 불포화 또는 방향족 고리로서, 모노시클릭(monocyclic) 또는 비시클릭(bicyclic) 또는 융합된(fused)-비시클릭이고, 3- 내지 8-원을 가지며 N, O 및 S로부터 선택된 1 내지 4 개의 헤테로 원자를 포함하고, 이는 R5, Hal 및 OR3로부터 선택된 1 내지 3 개의 치환기로 치환될 수 있는 포화, 불포화 또는 방향족 고리를 나타내며;
    Ar은 6-원 카보시클릭 방향족 고리 또는 융합된 또는 비-융합된 비시클릭 방향족 고리 시스템을 나타내고, 이는 R5, OR3 및 Hal로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3 개의 치환기로 선택적으로 치환되며;
    Cyc는 3 내지 8 개의 탄소 원자를 갖는 포화 또는 불포화 카보시클릭 고리를 나타내고, 이는 R5 또는 Hal 또는 OH로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3 개의 치환기로 선택적으로 치환되며;
    m 및 n은 1을 나타내며,
    t 및 q는 독립적으로 서로 0, 1, 2 또는 3을 나타내고, t + q ≥ 1이며,
    Z5 및 Z6 중 적어도 하나는 기 S(O)(NR3') 또는 N(SO)R3' 또는
    이거나:
    또는
    상기 R5, R7 and R8 중 적어도 하나는
    에서 선택된 술폭사민기이거나 이를 포함하거나,
    상기 R5, R7 and R8 중 적어도 하나는 1 내지 12 개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지형 알킬기로부터 선택되고, 여기서 하나 이상의 CH2-기는 기 S(O)(NR3') 또는 N(SO)R3' 또는 로 대체되며;
    단 하기 화합물은 제외한다:
  2. 하기 화학식 Ia 및 Ib로 구성된 군으로부터 선택된 술폭시민 기 포함 화합물:

    상기에서 A, R, W, Q, n 및 m은 청구항 1에서 주어진 의미를 갖는다.
  3. 동일 또는 동일하지 않은 양으로, 같은(identical) 기 A, R, W, Q, n 및 m을 갖는, 청구항 2에 따른 술폭시민 기 포함 화합물 Ia 및 Ib를 포함하는 혼합물.
  4. 청구항 1에 있어서, 상기 R은 메틸이고, W는 N인 것인 화학식 (I)의 술폭시민 기 포함 화합물.
  5. 청구항 1에 있어서, 상기 R5, R7은 독립적으로 H, SO2CH3, SO2CH2CH3, SO2CH2CH2OH, SO2CH2CH2OCH3, S(O)(NR3')CH3, S(O)(NR3')CH2CH3, S(O)(NR3')CH2CH2OH, S(O)(NR3')CH2CH2OCH3, N(SO)R3'CH3, N(SO)R3'CH2CH3, N(SO)R3'CH2CH2OH, N(SO)R3'CH2CH2OCH3,

    Hal, NR3R4, NO2, 페닐, 2-, 3- 또는 4-히드록시 또는 메톡시페닐, 알킬, 알콕시(O알킬), 히드록시알킬렌(hydroxyalkylen), 알콕시알킬렌(alkoxyalkylen), COOH, COO알킬, CONH알킬, CONH2, CON(CH3)2, NHCO알킬, NHCH2CH3, NHCH2CH2CH3, NHCOCH2CH2OH, CO-N-모르폴리닐, CON(CH3)CH2CH2N(CH3)2, CO-1-피페리디닐, CO-4-히드록시-1-피페리디닐, CO-1-피페라지닐, CO-4-메틸-1-피페라지닐, CH2-N-모르폴리닐, CH2N(H)COCH3, CH2N(CH3)COCH3, CH2NH2, NH2, CH(OH)CH3, CH(OR3)CH3, 및 기

    로부터 선택되며
    상기 t + q는 2 또는 3이고,
    R3, R4, Z7 및 R3'는 청구항 1에 주어진 의미를 갖는 것인 화학식 (I)의 술폭시민 기 포함 화합물.
  6. 청구항 1에 있어서, 상기 기 R5, R7 및 R8 중 하나는 하기로부터 선택된 것인 화학식 (I)의 술폭시민 기 포함 화합물:

    상기 R3'는 청구항 1에 주어진 의미를 갖는다.
  7. 청구항 1에 있어서, 상기 Z5 및 Z6 중 하나 이상은 하기 기

    로부터 선택되거나
    또는
    상기 R5, R7 및 R8 중 하나 이상은 하기로부터 선택되는 술폭시민 기이거나 또는 이를 포함하며:

    또는
    상기 R5, R7 및 R8 중 하나 이상은 1 내지 12 개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지형 알킬기로부터 선택되고, 상기 하나 이상의 CH2-기는 기 로 대체되며,
    상기 R3', Z7, t, q는 청구항 1에서 정의되는 바와 같은 것인 화학식 (I)의 술폭시민 기 포함 화합물, 또는 이의 약학적으로 사용가능한 용매화물, 염, 토토머, 거울상이성질체, 라세미체, 또는 입체이성질체, 또는 하나 이상의 H 원자가 D (중수소)로 대체되는, 화학식 (I)의 술폭시민 기 포함 화합물.
  8. 하기 화학식 (C)의 술폭시민 기 포함 화합물, 또는 이의 약학적으로 사용가능한 용매화물, 염, 토토머, 거울상이성질체, 라세미체, 또는 입체이성질체, 또는 하나 이상의 H 원자가 D (중수소)로 대체되는, 화학식 (C)의 술폭시민 기 포함 화합물:

    상기에서
    A'는 하기 기 중 하나를 나타내고:

    T'는 N, CH이며;
    R7'은 1 내지 12 개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지형 알킬을 나타내고, 여기서 1 내지 3 개의 CH2-기는 하기로부터 선택된 기로 대체되며

    여기서 1 내지 5 개의 수소 원자는 Hal, NR3R4, NO2, OR3, Het, Ar, Cyc로 대체될 수 있거나, 또는 R7'은 하기를 나타내고:

    R', R3', R3, R4, Hal, Het, Ar 및 Cyc는 청구항 1에 정의되는 바와 같다.
  9. 하기 군에서 선택된 술폭시민 기 포함 화합물, 또는 이의 약학적으로 사용가능한 용매화물, 염, 토토머, 거울상이성질체, 라세미체, 또는 입체이성질체, 또는 하나 이상의 H 원자가 D (중수소)로 대체되는, 술폭시민 기 포함 화합물:



















  10. 약제로서 사용하기 위한 청구항 1-9 중 어느 한 항에 따른 술폭시민 기 포함 화합물.
  11. 청구항 1-9 중 어느 한 항에 따른 술폭시민 기 포함 화합물, 또는 이의 약학적으로 사용가능한 용매화물, 염, 토토머, 거울상이성질체, 라세미체, 또는 입체이성질체를 포함하는, 신경퇴행성 질환, 당뇨병, 암, 심혈관 질환 및 뇌졸중으로부터 선택된 병태 치료에 사용하기 위한 약학적 조성물.
  12. 청구항 11에 있어서, 상기 병태는 하나 이상의 타우병증 및 알츠하이머 병, 치매, 근위축성 측색 경화증(Amyotrophic lateral sclerosis: ALS), 인지 장애를 갖는 근위축성 측색 경화증(Amyotrophic lateral sclerosis with cognitive impairment: ALSci), 호은성 입자 질병(Argyrophilic grain disease), 행동 변이 전측두엽 치매(Behavior variant frontotemporal dementia: BvFTD), 블룻 질환(Bluit disease), 만성 외상성 뇌병증(Chronic traumatic encephalopathy), 피질기저 퇴화(Corticobasal degeneration: CBP), 권투 선수 치매(Dementia pugilistica), 석회화를 갖는 확산 신경원섬유 엉킴(Diffuse neurofibrillary tangles with calcification), 다운 증후군(Down's syndrome), 가족성 영국 치매(Familial British dementia), 가족성 덴마크 치매(Familial Danish dementia), 염색체 17에 연결된 파킨슨증을 가진 전측두엽 치매(Frontotemporal dementia with parkinsonism linked to chromosome 17: FTDP-17), 전측두엽 퇴행(Frontotemporal Lobar Degeneration: FTLD), 신경절교세포종(Ganglioglioma), 신경절세포종(Gangliocytoma), 게르스트만-슈트라우슬러-샤인커병(Gerstmann-Straussler-Scheinker disease), 구형 아교 타우병증(Globular glial tauopathy), 과들루프 파킨슨증(Guadeloupean parkinsonism), 할러보르덴-스파츠 병(Hallevorden-Spatz disease)(뇌의 철 축적 유형 1을 갖는 신경퇴행), 납중독 뇌병증(Lead encephalopathy), 리포푸신증(Lipofuscinosis), 수막혈관종증(Meningioangiomatosis), 다발 시스템 위축(Multiple system atrophy), 근긴장 디스트로피(Myotonic dystrophy), 니만-픽 병(Niemann-Pick disease)(유형 C), 팔리도-폰토-니그랄 퇴행(Pallido-ponto-nigral degeneration), 괌의 파킨슨증-치매 복합(Parkinsonism-dementia complex of Guam), 픽 병(Pick's disease: PiD), 파킨슨병 치매, 뇌염후 파킨슨증(Postencephalitic parkinsonism: PEP), 일차성 진행성 언어상실증(Primary progressive aphasia), 크로이츠펠트-야콥 병(Creutzfeldt-Jakob Disease: CJD) 포함 프리온 질환, 진행성 비유창성 언어상실증(Progressive nonfluent aphasia), 변종 크로이츠펠트-야콥 병(Variant Creutzfeldt-Jakob Disease: vCJD), 치명적 가족성 불면증(Fatal Familial Insomnia), 쿠루병(Kuru), 진행성 피질상 교증(Progressive supercortical gliosis), 진행성 핵상 마비(Progressive supranuclear palsy: PSP), 문의성 치매(Semantic dementia), 스틸-리처드슨-올스제브스키 증후군(Steele-Richardson-Olszewski syndrome), 아급성 경화성 범뇌염(Subacute sclerosing panencephalitis), 엉킴-유일 치매(Tangle-only dementia), 결절성 경화증(Tuberous Sclerosis), 헌팅턴 병(Huntington's disease) 및 파킨슨 병의 군으로부터 선택되는 것인 약학적 조성물.
  13. 타우병증(tauopathy)을 치료하는 방법으로서, 청구항 1-9 중 어느 한 항에 따른 술폭시민 기 포함 화합물을 이러한 치료를 필요로 하는 인간을 제외한 포유동물에게 투여하는 것인 방법.
  14. 글리코시다제(glycosidase)를 억제하는 방법으로서, 상기 글리코시다제를 발현하는 시스템을 청구항 1-9 중 어느 한 항에 따른 술폭시민 기 포함 화합물과, 상기 글리코시다제가 억제되는 인-비트로 조건하에 접촉하는 것인 방법.
  15. 청구항 11에 있어서, 상기 약학적 조성물은, 선택적으로 하나 이상의 추가적인 활성성분과 함께, 약학적으로 내약성이 있는(tolerable) 아쥬반트(adjuvants) 및/또는 부형제(excipients)를 추가로 포함하는 것인 약학적 조성물.
  16. 청구항 15에 있어서, 상기 병태는 하나 이상의 타우병증 및 알츠하이머 병의 군으로부터 선택되는 것인 약학 조성물.
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