CN108349979B

CN108349979B - [1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-7-基化合物

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Publication number: CN108349979B
Application number: CN201680063119.0A
Authority: CN
Inventors: P.J.J.A.布伊恩斯特斯; H.J.M.吉森; W.H.I.M.德林肯伯格; A.阿瑙尤
Original assignee: Janssen Pharmaceutica NV
Current assignee: Janssen Pharmaceutica NV
Priority date: 2015-11-02
Filing date: 2016-11-02
Publication date: 2021-04-09
Anticipated expiration: 2036-11-02
Also published as: UA122423C2; EP3371188B1; BR112018008431A2; ZA201802842B; MX2018005342A; PH12018500944A1; EA201891067A1; KR20180075630A; AU2016348549B2; EA036851B1; IL259004B; CO2018005163A2; SG11201803605YA; JP6872541B2; IL259004A; CA3001768A1; US20180327408A1; WO2017076900A1; EP3371188A1; AU2016348549A1

Abstract

本发明涉及作为磷酸二酯酶2(PDE2)的抑制剂的具有化学式(1)的新颖的[1,2,4]三唑并[1,5‑a]嘧啶‑基衍生物。本发明还涉及包含该化合物的药物组合物，涉及用于制备此类化合物和组合物的方法，并且涉及此类化合物和组合物用于预防或治疗其中涉及PDE2的障碍(如神经和精神障碍)的用途。

Description

[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-7-基化合物

技术领域

本发明涉及作为磷酸二酯酶2(PDE2)的抑制剂的新颖的[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-基衍生物。本发明还涉及包含该化合物的药物组合物，涉及用于制备此类化合物和组合物的方法，并且涉及此类化合物和组合物用于预防或治疗其中涉及PDE2的障碍(如神经和精神障碍)的用途。

背景技术

磷酸二酯酶(PDE)是由21个基因编码的酶家族并且根据结构和功能特性细分为11个不同的家族。这些酶经代谢使广泛出现的细胞内第二信使3′,5′-环腺苷酸(cAMP)和3′,5′-环鸟苷酸(cGMP)失活。这两种信使调节多种多样的生物过程，包括促炎症介质产生和作用、离子通道功能、肌肉收缩、学习、分化、细胞凋亡、脂肪生成、糖原分解、和葡糖异生。它们通过活化蛋白激酶A(PKA)和蛋白激酶G(PKG)来完成这一工作，这进而使多种多样的物质磷酸化，这些物质包括调节无数生理反应的转录因子和离子通道。在神经元中，这包括cAMP和cGMP-依赖性激酶的活化以及随后参与急性突触传递调节以及神经元分化和存活的蛋白质的磷酸化。cAMP和cGMP的细胞内浓度受到环化酶生物合成速率和PDE降解速率的严格调节。PDE是通过3′-酯键的催化水解使cAMP和cGMP失活的水解酶，形成了失活的5′-单磷酸(方案A)。

方案A

在底物特异性的基础上，PDE家族可以被分为三组：i)cAMP-特异性PDE，该cAMP-特异性PDE包括PDE4、7和8；ii)cGMP-选择性酶PDE5、6和9；和iii)双底物PDE，PDE1、2和3，以及PDE10和11。

此外，在整个生物体(包括中枢神经系统)中，PDE是差异表达的。因此不同的PDE同工酶可以具有不同的生理学功能。选择性地抑制PDE家族或同工酶的化合物可以显示具体的治疗活性，更小的副作用，或者两者兼有。

磷酸二酯酶2A(PDE2A)通过降解cAMP和cGMP(通过将生物相关的第二信使cAMP和cGMP分别水解成不发出信号的AMP和GMP)使赖于其介导的环核苷酸信号转导的细胞内信号传导机制失活。已知这种信号传导途径在参与诱导突触可塑性的基因的调节中发挥作用。

因此，PDE2的药理学抑制引起突触可塑性水平的增加(学习和记忆的基本相关)，表明PDE2A调节可以是用于减轻遭受以下障碍的人类中可见的认知缺陷的靶标，像例如：精神分裂症、阿尔茨海默病、帕金森病和其他与认知功能障碍相关的CNS障碍。

相对于外周组织，磷酸二酯酶2A(PDE2A)在脑中更丰富地表达。在边缘系统中(同形皮质、海马体、扁桃体、松果体缰、基底核)PDE2的高表达表明PDE2可以调节情绪、感知、专注、学习和记忆中涉及的神经元信号传导。此外，PDE2在伏隔核、嗅球、嗅结节和扁桃体中表达，支持了PDE2也可能参与焦虑和抑郁症的说法。(参见例如，Lakics,V.等人，(2010)，Quantitative comparison of phosphodiesterase mRNA distribution in human brainand peripheral tissues.[人脑和外周组织中磷酸二酯酶mRNA分布的定量比较]，Neuropharmacol.[神经药理学]，59,367-374)。

此外，已经显示出PDE2抑制剂在减少氧化应激诱导的焦虑方面是有益的，支持了它们在涉及氧化应激的神经精神障碍和神经退行性障碍的焦虑治疗中的用途，如阿尔茨海默病、帕金森病和多发性硬化症。

已经显示出PDE2抑制剂在大鼠的目标识别和社会认可测试中增强了突触传递的长时程增强并且改进了记忆获得和巩固。此外，已经显示出PDE2抑制剂逆转了MK-801诱导的小鼠的T迷宫中的工作记忆缺陷。

还显示出PDE2抑制剂在强迫游泳测试中和光/暗盒子模型中显示活性；以及在高架十字迷宫实验、洞板实验和空场测试中显示抗焦虑样作用并且预防在细胞凋亡和行为中的应激诱导的变化。

因此，PDE2抑制剂可用于治疗记忆缺陷、认知障碍、焦虑、双相性障碍和抑郁症。

WO 2015/164508(达特神经科学有限责任公司(Dart Neuroscience,LLC))披露了作为PDE2抑制剂的取代的[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-基化合物。

仍需要PDE2抑制剂化合物，这些化合物具有多种特性的有利平衡，例如像对PDE2的选择性、良好的化学稳定性以及通过占据PDE2并且增加相关脑区域中环核苷酸水平的靶标结合。

发明内容

本发明的目的是提供新颖的PDE2的抑制剂，该新颖的PDE2的抑制剂可能在与PDE2酶活性有关的疾病的治疗中是潜在有用的。

因此，本发明涉及化合物1

或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

在具体实施例中，该药学上可接受的盐是盐酸盐，更特别地是.2HCl盐。

本发明的例证是包含药学上可接受的载体和以上化合物1、或其药学上可接受的盐或溶剂化物的药物组合物。本发明的例证是通过将以上化合物1或其药学上可接受的盐或溶剂化物和药学上可接受的载体混合来制备的药物组合物。本发明例证了用于制备药物组合物的方法，该方法包括将以上化合物1或其药学上可接受的盐或溶剂化物和药学上可接受的载体混合。

本发明另外的例证是增强神经元可塑性的方法，该方法包括向对其有需要的受试者给予治疗有效量的以上所述的化合物1或其药学上可接受的盐或溶剂化物、或药物组合物。

本发明例示了治疗由PDE2酶介导的障碍的方法，该方法包括向对其有需要的受试者给予治疗有效量的以上所述的化合物1或其药学上可接受的盐或溶剂化物、或药物组合物。

本发明进一步例示了抑制PDE2酶的方法，该方法包括向对其有需要的受试者给予治疗有效量的以上所述的化合物1或其药学上可接受的盐或溶剂化物、或药物组合物。

本发明的一个实例是治疗选自下组的障碍的方法，该组由以下各项组成：神经和精神障碍，该方法包括向对其有需要的受试者给予治疗有效量的以上所述的化合物1或其药学上可接受的盐或溶剂化物、或药物组合物。

本发明的一个实例是治疗选自下组的障碍的方法：选自以下各项的神经和精神障碍：精神性障碍和病症；焦虑障碍；运动障碍；药物滥用；心境障碍；神经退行性障碍；包含注意力和/或认知缺陷症状的障碍或病症；中风；和自闭性障碍，该方法包括向对其有需要的受试者给予治疗有效量的以上所述的化合物1或其药学上可接受的盐或溶剂化物、或药物组合物。

本发明的一个实例是治疗选自下组的障碍的方法：选自以下各项的神经和精神障碍：精神性障碍和病症；焦虑障碍；运动障碍；药物滥用；心境障碍；神经退行性障碍；包含注意力和/或认知缺陷症状的障碍或病症；中风；和自闭性障碍，该方法包括向对其有需要的受试者给予治疗有效量的以上所述的化合物1或其盐或溶剂化物、或药物组合物。

本发明还例示了用作药剂的以上所述的化合物1或其盐或溶剂化物、或药物组合物。

本发明进一步示例了根据本发明的化合物1或其盐或溶剂化物，或药物组合物，用于治疗、预防、改善、控制或减轻不同神经病学和精神病学障碍风险，这些障碍与哺乳动物(包括人类)中的磷酸二酯酶2功能紊乱相关，其治疗或预防受磷酸二酯酶2的抑制的影响或促进。

本发明的一个实例是根据本发明的化合物1或其药学上可接受的盐或溶剂化物，或根据本发明的药物组合物，用于治疗、预防、缓解、控制或降低选自以下各项的各种障碍的风险：精神性障碍和病症；焦虑障碍；运动障碍；药物滥用；心境障碍；神经退行性障碍；包含注意力和/或认知缺陷症状的障碍或病症；中风；和自闭性障碍。

本发明的一个实例是治疗选自下组的障碍的方法，该组由以下各项组成：阿尔茨海默病、轻度认知损害、衰老、痴呆、路易体痴呆、唐氏综合征、与中风相关的痴呆、与帕金森病相关的痴呆以及与β-淀粉样蛋白相关的痴呆，优选地是阿尔茨海默病，该方法包括向对其有需要的受试者给予治疗有效量的以上所述的化合物1或其药学上可接受的盐或溶剂化物、或药物组合物。

本发明的另一个实例是以上所述的化合物1或其药学上可接受的盐或溶剂化物在对其有需要的受试者中用于治疗以下疾病：(a)阿尔茨海默病、(b)轻度认知损害、(c)衰老、(d)痴呆、(e)路易体痴呆、(f)唐氏综合征、(g)与中风相关的痴呆、(h)与帕金森病相关的痴呆、(i)与β-淀粉样蛋白相关的痴呆、(j)抑郁障碍和(k)焦虑障碍。

附图说明

图1示出了化合物1对斯泼累格·多雷(Sprague Dawley)大鼠的海马体的pGlu1水平的作用(10mg/kg和40mg/kg化合物1)。示出了来自个体大鼠的蛋白质印迹(n＝5/治疗)(图1a)。在图1b中示出了定量(针对总Glu1水平归一化的pGlu1)。

图2示出了PDE2被化合物1的占用。

图3示出了化合物1对在苔藓纤维突触处的基础突触传递的作用。

图4示出了化合物1对在苔藓纤维突触处的基础突触传递的剂量反应作用。

图5a和5b示出了化合物1对在苔藓纤维突触处的长时程增强(LTP)的弱HFS诱导的作用。

图6示出了[CAS 1394033-54-5]1对在苔藓纤维突触处的基础突触传递的作用。

图7示出了玛斯比格(Marshall Beagle)犬中的CSF中的cGMP水平的测量。

图8a示出了记录在齿状回中的场兴奋性突触后电位(fEPSP)的斜率的输入-输出曲线；样品记录示出了以30min间隔的平均群峰电位斜率(PSA)反应；图8b示出了与运载体条件相比，化合物1在穿质通路突触处增强了由高频刺激(HFS)诱导的LTP；将在HFS之前和之后的平均归一化的PSA斜率作为时间的函数绘制；插图条形图示出了在强直电刺激程序之前和之后在30min间隔内的平均数据；图8c示出了fEPSP斜率的持续增加。*p<0.05，在每30min时间间隔，化合物1与运载体。

具体实施方式

定义

如在此使用的术语“受试者”是指动物，优选地是哺乳动物，最优选地是人类，该受试者是或已经成为治疗、观察或实验的对象。

如在此使用的术语“治疗有效量”意指由研究员、兽医、医师或其他临床医生寻找的，在组织系统、动物或人类中引起生物学或医学反应的活性化合物或药物试剂的量，该反应包括正在被治疗的疾病或障碍的症状的减轻。

如在此使用的，术语“组合物”旨在涵盖包含处于特定量的特定成分的产品，连同直接或间接地源于处于特定量的特定成分的组合物的任何产品。

术语“宿主”是指哺乳动物，特别地指人类、小鼠、狗和大鼠。

术语“细胞”是指表达或包含PDE2酶的细胞。

如在此使用的术语“本发明的化合物”意指包括化合物1及其盐和溶剂化物。

如在此所用，任何具有仅仅显示为实线并且不显示为实楔形键或虚楔形键的键的化学式，或者另外表示为围绕一个或多个原子具有特殊构型(例如R，S)的化学式，考虑每种可能的立体异构体，或者两种或更多种立体异构体的混合物。

绝对构型根据坎-殷高-普利洛(Cahn-Ingold-Prelog)系统来规定。不对称原子处的构型由R或S规定。

当鉴别特定立体异构体时，这意指所述立体异构体基本上不含其他立体异构体，即与少于50％、优选地少于20％、更优选地少于10％、甚至更优选地少于5％、特别是少于2％并且最优选地少于1％的其他立体异构体相关。

另外，本发明的化合物可以与水(即，水合物)或常用有机溶剂形成溶剂化物，并且此类溶剂化物也旨在被涵盖在本发明的范围之内。

为了用于医学，化合物1的盐是指无毒性“药学上可接受的盐”。然而，其他盐可以适用于制备化合物1或其药学上可接受的盐。化合物1的适合的药学上可接受的盐包括可以例如通过将化合物的溶液与药学上可接受的酸的溶液混合而形成的酸加成盐，该药学上可接受的酸是如盐酸、硫酸、富马酸、马来酸、琥珀酸、乙酸、苯甲酸、柠檬酸、酒石酸、碳酸或磷酸。可以在药学上可接受的盐的制备中使用的代表性酸包括但不限于以下各项：乙酸、2,2-二氯乙酸、酰化氨基酸、己二酸、海藻酸、抗坏血酸、L-天冬氨酸、苯磺酸、苯甲酸、4-乙酰氨基苯甲酸、(+)-樟脑酸、樟脑磺酸、癸酸、己酸、辛酸、肉桂酸、柠檬酸、环拉酸、乙烷-1,2-二磺酸、乙磺酸、2-羟基-乙磺酸、甲酸、富马酸、半乳糖二酸、龙胆酸、葡庚糖酸、D-葡糖酸、D-葡萄糖醛酸、L-谷氨酸、β-氧代-戊二酸、乙醇酸、马尿酸、氢溴酸、盐酸、(+)-L-乳酸、(±)-DL-乳酸、乳糖酸、马来酸、(-)-L-苹果酸、丙二酸、(±)-DL-扁桃酸、甲磺酸、萘-2-磺酸、萘-1,5-二磺酸、1-羟基-2-萘甲酸、烟酸、硝酸、油酸、乳清酸、草酸、棕榈酸、双羟萘酸、磷酸、L-焦谷氨酸、水杨酸、4-氨基-水杨酸、癸二酸、硬脂酸、琥珀酸、硫酸、单宁酸、(+)-L-酒石酸、硫氰酸、对-甲苯磺酸、三氟甲磺酸、以及十一碳烯酸。

药理学

根据本发明的化合物抑制PDE2酶活性，特别是PDE2A，并且因此提高表达PDE2的细胞内的cAMP或cGMP水平。相应地，PDE2酶活性的抑制可用于治疗由细胞中cAMP或cGMP的量缺乏所引起的疾病。PDE2抑制剂也可以有益于如下情况，其中提高超过正常水平的cAMP或cGMP的量导致治疗效果。PDE2抑制剂可用于治疗神经和精神障碍。

因此，本发明涉及根据本发明的化合物1或其药学上可接受的盐或溶剂化物用作药物，连同涉及根据本发明的化合物1或其药学上可接受的盐或溶剂化物或根据本发明的药物组合物用于制造药剂的用途。本发明还涉及根据本发明的化合物1或其药学上可接受的盐或溶剂化物、或根据本发明的药物组合物，用于治疗或预防，特别地是治疗哺乳动物(包括人类)中的病症，该病症的治疗或预防是受磷酸二酯酶2的抑制的影响或促进。本发明还涉及根据本发明的化合物1或其药学上可接受的盐或溶剂化物、或根据本发明的药物组合物用于制造用于治疗或预防，特别地治疗哺乳动物(包括人类)中的病症的药剂的用途，该病症的治疗或预防是受磷酸二酯酶2的抑制的影响或促进。

本发明还涉及根据本发明的化合物1或其药学上可接受的盐或溶剂化物、或根据本发明的药物组合物，用于治疗、预防、改善、控制或减轻不同神经病学和精神病学障碍风险，这些障碍与哺乳动物(包括人类)中的磷酸二酯酶2功能紊乱相关，其治疗或预防受磷酸二酯酶2的抑制的影响或促进。

同样，本发明涉及根据本发明的化合物1或其药学上可接受的盐或溶剂化物、或根据本发明的药物组合物用于制造用于治疗、预防、改善、控制或减轻不同神经病学和精神病学障碍风险的药剂的用途，这些障碍与哺乳动物(包括人类)中的磷酸二酯酶2功能紊乱相关，其治疗或预防受磷酸二酯酶2的抑制的影响或促进。

在据说本发明涉及根据本发明的化合物1或其药学上可接受的盐或溶剂化物或组合物用于制造用于例如治疗受试者(例如哺乳动物)的药剂的用途的情况下，应当理解的是此类用途在某些司法管辖权内被解释为例如治疗受试者的方法，该方法包括向对此类(例如治疗)有需要的受试者给予有效量的根据本发明的化合物1或其药学上可接受的盐或溶剂化物或组合物。

特别地，这些适应症可以单独地或与其他药物组合地用PDE2抑制剂进行治疗，这些适应症包括但不限于：那些被认为部分由基底核、前额皮质和海马体介导的疾病。

这些适应症包括选自精神性障碍和病症的神经和精神障碍；焦虑障碍；运动障碍；药物滥用；心境障碍；神经退行性障碍；包含注意力和/或认知缺陷症状的障碍或病症；中风；和自闭性障碍或孤独症。

特别地，与PDE2功能紊乱相关的精神性障碍和病症包括一种或多种以下的病症或疾病：精神分裂症，例如妄想型、紊乱型、紧张性型、未分化型或残余类型的精神分裂症；精神分裂症样障碍；情感性分裂障碍，如妄想型或抑郁型；妄想性障碍；物质-诱导的精神性障碍如由酒精、安非他明、大麻、可卡因、致幻剂、吸入剂、阿片样物质、或苯环己哌啶诱导的精神病；妄想型人格障碍；以及分裂型人格障碍。

特别地，焦虑障碍包括：惊恐性障碍；广场恐怖症；特殊恐惧症；社交恐惧症；强迫性障碍；创伤后应激障碍；急性应激障碍；以及广泛性焦虑障碍。

特别地，运动障碍包括：亨廷顿病和异动症；帕金森病；下肢不宁综合征和特发性震颤。另外地，可以包括妥瑞氏综合征(Tourette’s syndrome)和其他抽动障碍。

特别地，中枢神经系统障碍是选自下组的物质相关障碍：酒精滥用；酒精依赖；酒精戒断；酒精戒断性谵妄；酒精-诱导的精神性障碍；安非他明依赖；安非他明戒断；可卡因依赖；可卡因戒断；尼古丁依赖；尼古丁戒断；阿片样物质依赖和阿片样物质戒断。

特别地，心境障碍和心境发作包括抑郁症、躁狂症和双相性障碍。优选地，心境障碍选自下组：双相性障碍(I型和II型)；循环情感性精神障碍；抑郁症；精神抑郁症；重度抑郁障碍；难治性抑郁症；和物质-诱导的心境障碍。

特别地，神经退行性障碍包括：帕金森病；亨廷顿病；痴呆例如像阿尔茨海默病；多发梗塞性痴呆；艾滋病痴呆或额颞痴呆。该神经退行性障碍或病症包含纹状体中棘神经元反应的机能障碍。

特别地，包含注意力和/或认知缺陷症状的障碍或病症包括痴呆，如阿尔茨海默病；多发梗塞性痴呆；由路易体疾病引起的痴呆；酒精性痴呆或物质-诱导的持续性痴呆；与颅内肿瘤或颅脑创伤相关的痴呆；与亨廷顿病相关的痴呆；与帕金森病相关的痴呆；AIDS相关的痴呆；由皮克病引起的痴呆；由克罗伊茨费尔特-雅各布病(Creutzfeldt-Jakobdisease)引起的痴呆；其他疾病包括谵妄；遗忘障碍；创伤后应激障碍；中风；进行性核上性麻痹；智力障碍；学习障碍；注意力-缺陷/过动症(ADHD)；轻度认知障碍；阿斯伯格综合征(Asperger’s syndrome)；年龄相关的认知损害；以及与感知、专注、学习和记忆相关的认知损害。

具体地，与记忆获得和巩固相关的障碍包括：记忆障碍，如与年龄相关的记忆丧失、记忆缺陷。

优选地，精神性障碍选自下组：精神分裂症、妄想性障碍、情感性分裂障碍、精神分裂症样障碍和物质-诱导的精神性障碍。

优选地，中枢神经系统障碍是选自下组的人格障碍：强-迫型人格障碍和精神分裂障碍、分裂型障碍。

优选地，中枢神经系统障碍是选自下组的心境障碍：双相性障碍(I型&II型)、循环情感性精神障碍、抑郁症、精神抑郁症、重度抑郁障碍、难治性抑郁症、和物质-诱导的心境障碍。

优选地，该中枢神经系统障碍是注意力-缺陷/过动症。

优选地，中枢神经系统障碍是选自下组的认知障碍：谵妄、物质-诱导的持续性谵妄、痴呆、由HIV疾病引起的痴呆、由亨廷顿病引起的痴呆、由帕金森病引起的痴呆、阿尔茨默型痴呆、物质-诱导的持续性痴呆和轻度认知损害。

优选地，由本发明的具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物治疗的障碍选自：精神分裂症；强迫性障碍；广泛性焦虑障碍；亨廷顿病；异动症；帕金森病；抑郁症；双相性障碍；痴呆如阿尔茨海默病；注意力-缺陷/过动症；药物滥用；中风；和孤独症。

优选地，由本发明的具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物治疗的障碍是精神分裂症，包括其阳性和阴性症状，和认知缺陷，如注意力或记忆力受损。

以上提到的障碍中，焦虑、强迫性障碍、创伤后应激障碍、广泛性焦虑障碍、精神分裂症、抑郁症、注意力-缺陷/过动症、阿尔茨海默病、由亨廷顿病引起的痴呆、由帕金森病引起的痴呆、阿尔茨海默型痴呆、物质-诱导的持续性痴呆以及轻度认知损害的治疗是尤其重要的。

以上提到的障碍中，焦虑、强迫性障碍、精神分裂症、抑郁症、注意力-缺陷/过动症以及阿尔茨海默病的治疗是尤其重要的。

其他的中枢神经系统障碍包括精神分裂焦虑障碍，以及抑郁症和焦虑共病，特别地重度抑郁障碍与广泛性焦虑障碍、社交焦虑障碍、或惊恐性障碍共病；应当理解的是抑郁症和焦虑共病也可以是指术语焦虑抑郁症、混合焦虑抑郁症、混合焦虑抑郁障碍、或重度抑郁障碍与焦虑症，它们在此无区别使用。

目前，第四版的美国精神病学协会的精神障碍的诊断与统计学手册(Diagnostic&Statistical Manual of Mental Disorders)(DSM-IV)为在此所述的障碍的鉴别提供了诊断工具。本领域技术人员将意识到对于在此所述的神经障碍和精神障碍的可替代的术语表、疾病分类学、以及分类系统是存在的，并且这些随着医学和科学的进步而发展。例如，“American Psychiatric Association:Diagnostic and Statistical Manual of MentalDisorders[美国精神病学协会：精神障碍的诊断与统计学手册]，第五版，阿灵顿，弗吉尼亚州，美国精神病学协会(American Psychiatric Association)，2013”(DSM-5^TM)利用以下术语，如抑郁障碍，特别是重度抑郁障碍、持续性抑郁障碍(心境恶劣)、物质-药物-诱导的抑郁障碍；神经认知障碍(NCD)(重度和中度两者)，特别是由阿尔茨海默病引起的神经认知障碍、血管性NCD(如表现为多发性梗死的血管性NCD)、由HIV感染引起的NCD、由创伤性脑损伤(TBI)引起的NCD、由帕金森病引起的NCD、由亨廷顿病引起的NCD、额颞性NCD、由朊病毒病引起的NCD、以及物质/药物-诱导的NCD；神经发育障碍，特别是智力残疾、特定的学习障碍、神经发育性运动障碍、沟通障碍、以及注意力-缺陷/过动症(ADHD)；物质相关性障碍和成瘾性障碍，特别是酒精使用障碍、安非他明使用障碍、大麻使用障碍、可卡因使用障碍、其他致幻剂使用障碍、烟草使用障碍、阿片样物质使用障碍、以及苯环利定使用障碍；精神分裂症谱系以及其他精神障碍，特别是精神分裂症、精神分裂症样障碍、情感性分裂障碍、妄想性障碍、短时精神障碍、物质/药物-诱导的精神性障碍、以及循环情感性精神障碍(该障碍在DSM-5^TM下归类在双极和相关障碍分类下)。技术人员可以使用此类术语作为用于一些在此提及的疾病或病症的替代性命名。另外的神经发育障碍包括自闭症谱系障碍(ASD)，根据DSM-5^TM这种障碍涵盖先前通过术语早期幼儿自闭症、儿童期自闭症、卡纳自闭症(Kanner’sautism)、高功能自闭症、非典型自闭症、未以另外的方式指明的广泛性发育障碍、儿童期崩解性障碍(childhood disintegrative disorder)、以及亚斯伯格障碍(Asperger’sdisorder)而已知的障碍。

因此，本发明还涉及根据本发明的化合物1或其药学上可接受的盐或溶剂化物用于治疗任何一种上文提及的疾病。

本发明还涉及根据本发明的化合物1或其药学上可接受的盐或溶剂化物用于治疗任何一种上文提及的疾病。

本发明还涉及根据本发明的化合物1或其药学上可接受的盐或溶剂化物用于治疗或预防，特别地治疗任何一种上文提及的疾病。

本发明还涉及根据本发明的化合物1或其药学上可接受的盐或溶剂化物，用于制造用于治疗或预防上文提及的任何一种疾病状况的药剂的用途。

本发明还涉及根据本发明的化合物1，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，用于制造用于治疗上文提及的任何一种疾病状况的药剂的用途。

可以将本发明的化合物1或其药学上可接受的盐或溶剂化物给予至哺乳动物，优选地人类，用于治疗或预防上文提及的任何一种疾病。

鉴于根据本发明的化合物1或其药学上可接受的盐或溶剂化物的效用，提供了一种治疗上文中提及的障碍或疾病的方法，包括向对其有需要的受试者给予治疗有效量的在此所述的化合物1或其药学上可接受的盐或溶剂化物或药物组合物。

所述方法包括向温血动物(包括人类)给予，即，全身给予或局部给予，优选口服给予治疗有效量的根据本发明的化合物1或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

因此，本发明还涉及用于预防和/或治疗任何一种上文提及的疾病的方法，该方法包括向对其有需要的患者给予治疗有效量的根据本发明的化合物1或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

在此所述的PDE2抑制剂可以单独使用，组合使用或与其他药物试剂组合使用，这些其他药物试剂如在治疗精神病中使用的其他试剂，该精神病如精神分裂症和双相性障碍、强迫性障碍、帕金森病、认知损害和/或记忆丧失，这些试剂例如，烟碱α-7激动剂、PDE4抑制剂(咯利普兰、GEBR-7b、GSK356278、GSK256066、阿普斯特、MK-0952、罗氟司特、AN2898、AN2728、西洛司特(Ariflo Cilomilast)、屈他维林、Ronomilast Elbimilast、Revamilast、替托司特、E6005、GDP-1116、HT0712、MK-0873)、PDE5抑制剂(西地那非、伐地那非、他达拉非、乌地那非、阿伐那非、米罗那非、罗地那非、达生他非、PF-00489791)、PDE9(PF-04447943)、其他PDE2抑制剂(Bay 60-7550、PF-999、ND-7001)、PDE10抑制剂(PF-02545920、AMG579)、PDE2和PDE10抑制剂、钙通道阻断剂、毒蕈碱m1和m2调节剂、腺苷酸受体调节剂、安帕金、NMDA-R调节剂、mGluR调节剂、多巴胺调节剂、血清素调节剂、大麻素调节剂、HDAC抑制剂(伏立诺他SAHA、帕比司他、奎辛司他、丙戊酸)、和胆碱酯酶抑制剂(例如多奈哌齐、卡巴拉汀、和加兰他敏)。在此类组合中，本发明的化合物1或其药学上可接受的盐或溶剂化物可以与一种或多种其他药物组合用于治疗、预防、控制、改善或减轻疾病或病症，对于这些疾病或病症化合物1或其他药物可以具有效用，其中药物组合在一起比任何一种单独的药物更安全或更有效。

本领域普通技术人员将认识到，本发明的PDE2抑制剂的治疗有效量是足以抑制PDE2酶的量，并且这个量取决于疾病类型、治疗性配制品中化合物的浓度以及患者的病状而特别不同。通常，有待作为用于治疗在其中PDE2酶的抑制是有益的疾病(如在此所述的这些障碍)的治疗剂而给予的PDE2抑制剂的量将就事论事地由主治医师决定。

通常，适合的剂量是导致在治疗部位处的PDE2抑制剂的浓度处于0.5nM至200μM并且更常见在5nM至50μM的范围内的剂量。为了获得这些治疗浓度，需要治疗的患者可能将被给予在0.001mg/kg至15mg/kg体重之间，特别地从0.01mg/kg至2.50mg/kg体重，特别地，从0.01至1.5mg/kg体重，特别地从0.1mg/kg至0.50mg/kg体重。实现治疗作用所需要的根据本发明的化合物(在此还被称为活性成分)的量将(当然在-就事论事-的基础上变化)随着具体化合物、给予途径、接受者的年龄和病症、以及正被治疗的具体障碍或疾病而变化。治疗方法还包括以每天一到四次摄入之间的方案给予活性成分。在这些治疗方法中，优选在入院之前配制根据本发明的化合物。如在此下文所述的，适合的药物配制品通过已知程序使用熟知并且容易可得的成分来制备。

药物组合物

本发明还提供了用于预防或治疗在其中PDE2的抑制是有益的疾病(如神经和精神障碍)的组合物。所述组合物包含治疗有效量的化合物1以及药学上可接受的载体或稀释剂。

虽然可以单独给予活性成分，但可优选的是以药物组合物形式呈递。因此，本发明进一步提供了药物组合物，该药物组合物包含根据本发明的化合物连同药学上可接受的载体或稀释剂。该载体或稀释剂在与该组合物的其他成分相容的意义上必须是“可接受的”并且对于其接受者是无害的。

可以通过制药领域所熟知的任何方法来制备本发明的药物组合物。治疗有效量的呈碱形式或加成盐形式的作为活性成分的具体化合物与药学上可接受的载体组合成紧密混合物，该载体可以取决于给予所希望的制剂形式而采用多种多样的形式。这些药物组合物期望为适用于系统给予如口服、经皮或肠胃外给予；或局部给予如通过吸入、鼻喷雾、滴眼剂或通过霜剂、凝胶剂、洗发剂等给予。例如，在制备呈口服剂型的组合物时，可以采用任何常见药物介质，像例如在口服液体制剂(如悬浮液、糖浆、酏剂以及溶液)的情况下，是水、二醇、油、醇等；或在散剂、丸剂、胶囊以及片剂的情况下，是固体载体，如淀粉、糖、高岭土、润滑剂、粘合剂、崩解剂等。片剂和胶囊由于其给予简易性而代表了最有利的口服单位剂型，在该情况下，显然采用固体药物载体。对于肠胃外组合物来说，载体通常将包含至少呈大部分的无菌水，但也可以包括其他成分例如以辅助溶解性。可以制备例如可注射溶液，其中载体包含生理盐水溶液、葡萄糖溶液或生理盐水与葡萄糖溶液的混合物。还可以制备可注射悬浮液，在该情况下，可以使用适当液体载体、悬浮剂等。在适合于经皮给予的组合物中，载体任选地包含渗透增强剂和/或适合的可湿润剂，任选地与小比例的具有任何性质的适合添加剂组合，这些添加剂不会对皮肤造成任何显著有害作用。所述添加剂可促进向皮肤给予和/或可有助于制备期望的组合物。这些组合物能够以不同方式，例如作为透皮贴剂、作为滴-剂或作为软膏给予。

尤其有利的是将以上提及的药物组合物配制成单位剂型以实现给予简易性和剂量均一性。如本说明书和权利要求书中所用的单位剂型在此是指适合作为单位剂量的物理离散单位，每一单位含有经计算以与所需的药物载体结合而产生所希望的治疗作用的预定量的活性成分。此类单位剂型的实例是片剂(包括刻痕或包衣片剂)、胶囊、丸剂、散剂包、糯米纸囊剂、可注射溶液或悬浮液、茶匙剂、汤匙剂等，及其分开的多个。

取决于给予模式，该药物组合物将包含按重量计从0.05％至99％，优选地按重量计从0.1％至70％，更优选地按重量计从0.1％至50％的活性成分，以及按重量计从1％至99.95％，优选地按重量计从30％至99.9％，更优选地按重量计从50％至99.9％的一种药学上可接受的载体，所有的百分数都基于该组合物的总重量。

本发明化合物可以用于全身性给予，如口服、经皮或肠胃外给予；或局部给予如通过吸入、鼻喷雾、滴眼剂或通过霜剂、凝胶剂、洗发剂等给予。该化合物优选地口服给予。

如本领域的普通技术人员所熟知的，给予的精确剂量以及频率取决于化合物、进行治疗的具体病症、进行治疗的病症的严重性、具体患者的年龄、体重、性别、障碍程度以及总体身体健康状况，连同个体可以服用的其他药物。此外，显而易见的是，所述有效日用量可以降低或提高，这取决于所治疗的受试者的反应和/或取决于给出本发明化合物处方的医生的评估。

可以与载体材料组合以产生单一剂型的化合物1的量将取决于治疗的疾病、哺乳动物种类以及具体给予模式而变化。然而，作为一般指导，本发明的这些化合物的适合单位剂量可以例如优选地含有0.1mg至约1000mg之间的活性化合物。优选的单位剂量是在1mg至大约500mg之间。更优选的单位剂量是在1mg至大约300mg之间。甚至更优选的单位剂量是在1mg至大约100mg之间。这样的单位剂量可以每天超过一次地被给予，例如一天2、3、4、5或6次，但是优选每天1次或2次，这样使得对于一个70kg的成人每次给予的总剂量是每kg受试者重量在0.001至大约15mg的范围中。优选的剂量是每次给予每kg受试者重量0.01至约1.5mg，并且此类疗法可以持续多个星期或月，并且在一些情况中，持续多年。然而，应当理解，任何特定患者的具体剂量水平取决于各种因素，包括采用的特定化合物的活性；个体的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；给予时间和途径；排泄速率；先前给予的其他药物；及进行医疗的特定疾病的严重性，如本领域技术人员所理解的。

典型剂量可以是一天服用一次或一天多次的一片1mg至约100mg片剂或1mg至约300mg，或者一天服用一次的、并且含有在比例上含量较高的活性成分的一粒延时释放(time-release)的胶囊或片剂。延时释放效应可以通过在不同的pH值下溶解的胶囊材料、通过经渗透压造成的缓慢释放的胶囊、或者通过控制释放的任何其他已知手段来获得。

如本领域技术人员将理解的，在一些情况下有必要使用这些范围外的剂量。此外，应当注意临床医生或治疗医师结合个体患者反应将知道如何以及何时开始、中断、调节或终止治疗。

对于以上提供的组合物、方法以及试剂盒，本领域技术人员将理解，用于各个的优选化合物是在此注明的化合物

实验部分

如在此所使用，术语“ACN”意指乙腈，“AcOH”意指乙酸，“DMAP”意指4-二甲基氨基吡啶，“DSC”意指差示扫描量热法，“LCMS”意指液相色谱法/质谱法，“HPLC”意指高效液相色谱法，“RP HPLC”意指反相高效液相色谱法，“aq.”意指水性的，“DCM”意指二氯甲烷，“DIPE”意指二异丙醚，“DIPEA”意指二异丙基乙胺，“DMF”意指N,N-二甲基甲酰胺，“EtOH”意指乙醇，“Et₂O”意指二乙醚，“EtOAc”意指乙酸乙酯，“Et₃N”意指三乙胺，“HBTU”意指O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N'N,'-四甲基脲六氟磷酸酯，“THF”意指四氢呋喃，“min”意指分钟，“h”意指小时，“MeOH”意指甲醇，“iPrOH”意指2-丙醇，“RM”意指反应混合物，“RT”意指室温，“OL”意指有机层，“R_t”意指保留时间(以分钟计)，“quant.”意指定量的，“sat.”意指饱和的，“sol.”意指溶液，“m.p.”意指熔点，“q.s.”意指足量。

使用试剂级溶剂，在硅胶60F254板(默克公司(Merck))上进行薄层色谱(TLC)。在标准技术下，在硅胶(网目230-400粒度以及

孔径大小，(默克公司))上进行开口柱色谱。使用来自默克公司的易连接柱，在来自阿尔钦仪器公司(Armen Instrument)的SPOT或LAFLASH系统上，在不规则凝胶上进行自动快速柱色谱法，粒度15-40μm(正向一次性使用的快速柱)。

使用振动圆二色光谱(VCD)确定这些化合物中的一些的绝对立体化学的构型。在配备有PMA 37的Bruker Equinox 55上，在KBr液体池中使用CD₂Cl₂作为溶剂(PEM：1350cm-1，LIA：1mV，分辨率：4cm^-1)，对它们进行测量。关于VCD用于绝对构型测定用法的说明可以发现于Dyatkin A.B.等人，Chirality[手征]，14:215-219(2002)中。

从头计算：使用宏模型在分子力学水平上进行彻底的构象检索，从而以OPLS-2005力场进行混合扭转/低模取样。用模拟二氯甲烷溶剂的泊松-波尔兹曼(Poisson-Boltzmann)连续溶剂化模型使用捷豹(Jaguar)在B3LYP/6-31G**水平上优化定位的最小值。使用10kJ/mol区间内的所有构象模拟VCD和IR光谱。使用捷豹在相同的B3LYP/6-31G**水平下计算偶极和旋转强度。在以0.97的因子缩放频率，转换为洛伦兹谱带形，并将每个构象异构体的贡献相加(假设波尔兹曼系综(Boltzmann ensemble))后生成的计算的VCD光谱与实验光谱进行视觉比较以用于分配正确的立体化学。

以下实例旨在说明但并非限制本发明的范围。除非另外指出，否则所有起始材料都从商业供应商获得并且不经进一步纯化即使用。

A.中间体的合成

中间体1

程序a：将4-甲基-3-吡啶甲酸盐酸盐(1:1)(40g，230.4mmol)添加到硫酸(20mL)和MeOH(400mL)的回流混合物中。

将该混合物回流过夜，然后将其蒸发，并将所得浆液添加到冷却的NaHCO₃(64g)在水中的溶液(360mL)中。将产物用DCM萃取，并将有机层经MgSO₄干燥，过滤并蒸发，产生中间体1(28.70g，83％)。

程序b：将金属反应器用3-溴-4-甲基-吡啶(200g，0.116mol)和DMF/MeOH(1L/1L)的混合物填充。向其中添加Et₃N(400g，0.395mol)、乙酸钯(II)(8g，0.036mol)和1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁(16g，0.029mol)。将反应器关闭并用CO气体加压(3MPa)，并且搅拌反应混合物并在140℃下加热过夜。将该RM冷却，过滤并且在真空中浓缩。将残余物通过快速柱色谱法在硅胶上(梯度洗脱：EtOAc/石油醚，从1/1至1/0)进行纯化。收集产物级分并将溶剂蒸发以提供所希望的中间体1(90g，51％)。

中间体2

程序a：将氢化烧瓶用AcOH(500mL)填充，并且然后添加PtO₂(15.02g，66.2mmol)。添加中间体1(50g，330.8mmol)，并将混合物在50℃下氢化7天。将该RM经

过滤，并将滤液蒸发以产生中间体2(52g)，将其不进一步纯化而用于下一步骤中。

程序b：向中间体1(90g，0.595mol)和AcOH(1L)的溶液中添加氧化铂(5g，0.022mol)。将r.m.搅拌，并在50℃下在3.5kPa的压力下氢化5天。将冷却的RM在真空中浓缩，以给出呈乙酸盐的中间体2(140g，97％，90％纯度，通过¹H-NMR确定)。

中间体3

程序a：向中间体2(52g，330.8mmol)在DCM(869mL)中的溶液中添加DIPEA(85.5g，661.5mmol)和DMAP(4.04g，33.08mmol)。然后将二碳酸二叔丁酯(72.19g，330.8mmol)以小部分添加到该溶液中，并将反应物在RT下搅拌1h。将该RM用水和盐水洗涤，并将该有机层经MgSO₄干燥，过滤并蒸发。将产物通过柱色谱(硅胶，洗脱液：DCM，在DCM中的1％MeOH，2％，4％)进行纯化。将所希望的级分蒸发，产生中间体3(64.1mg，75％)。

程序b：向中间体2(140g，0.595mol)在DCM(1.5L)中的搅拌和冷却(0℃)溶液顺序添加二碳酸二叔丁酯(130g，0.596mol)、Et₃N(225g，1.74mol)和DMAP(10g，0.082mol)，并在RT下继续搅拌2h。将该反应混合物倒入H₂O(500mL)中，并用DCM(2x 100mL)萃取。将该有机层分离，干燥(Na₂SO₄)，并蒸发溶剂以给出粗中间体3(150g，90％，90％纯度，通过¹H-NMR确定)，将其照原样用于下一步骤。

中间体4

程序a：将中间体3(64.1g，249.1mmol)在MeOH(500mL)中在RT下搅拌。添加NaOH(2M，747.3mL)，并将混合物在RT下搅拌2h。将该RM用1N HCl酸化，并将产物用Et₂O萃取。将OL用盐水洗涤并经MgSO₄干燥，过滤并蒸发，产生呈白色固体的中间体4(59.70g)。

程序b：向中间体3(150g，90％纯，0.524mol)在MeOH(0.9L)中的搅拌溶液中添加2MNaOH(1.8mol)溶液。在RT下14h后，用MTBE(2x 0.8L)萃取RM。将水层用10％柠檬酸酸化，并且然后用EtOAc(4x 1L)萃取。将合并的有机层经Na₂SO₄干燥，过滤并在真空中浓缩，以给出粗中间体4(142g，90％纯度，通过¹H-NMR确定，100％)，将其照原样用于下一步骤。

中间体5

程序a：向中间体4(59.7g，0.25mol)在THF(800mL)中的溶液中添加二-1H-咪唑-1-基-甲酮(54g，0.33mol)，并将混合物在RT下搅拌1h。在另一烧瓶中，向N-甲氧基-甲胺盐酸盐(1:1)(32.93g，0.34mol)在ACN(500mL)中的悬浮液中添加三甲胺(35.75g，0.35mol)。将两种混合物合并并且在50℃下搅拌，同时进行监测。将中间产物从RM中结晶，并且不与N-甲氧基-甲胺反应以形成所希望的产物。添加DCM直到中间体溶解。将该反应在80℃下搅拌1周。蒸发溶剂。将残余物溶解于DCM中，并且用水、20％AcOH溶液洗涤，并且最后用饱和NaHCO₃溶液洗涤。将有机层经MgSO₄干燥，过滤并进行蒸发。将产物通过柱色谱法(硅胶，洗脱液：在DCM中的2％MeOH，4％)进行纯化。蒸发纯级分，产生中间体5(70g，定量的)。

程序b：向中间体4(140g，0.518mol)在DCM(2L)中的搅拌和冰冷溶液中添加N,O-二甲基羟胺(113g，1.16mol)和Et₃N(113g，1.79mol)。然后添加HATU(235g，0.618mol)，并且继续搅拌14h。蒸发溶剂，并且添加NaHCO₃溶液(0.5L)，并且然后用DCM(3x 1L)萃取。将合并的有机层分离、经Na₂SO₄干燥，过滤并且在真空中进行浓缩。将残余物通过用在石油醚中的1％-10％EtOAc洗脱的硅胶快速色谱纯化，以提供中间体5(152g，100％)。

中间体6

程序a：将在THF(250mL)中的中间体5(70g，244.4mmol)在N₂下充入烧瓶中并冷却至-15℃。滴加溴化甲镁(1.4M在甲苯/THF 75/25中，206mL)，同时温度不超过0℃。添加后，将RM在RT下搅拌1h。然后将该RM与20mL AcOH一起倒在冰上。将产物用Et₂O萃取，并将有机层用5％NaHCO₃溶液洗涤。将有机层经MgSO₄干燥，过滤并且蒸发以给出中间体6(53.35g，90％)。

程序b：向中间体5(150g，0.524mol)在THF(2L)中的搅拌和冷却溶液(0℃)中滴加在THF(0.75L，2.25mol)中的3M溴化甲镁溶液，并在RT下持续搅拌2h。将该反应混合物倒入水性NH₄Cl溶液中，并且用DCM萃取。将合并的有机层经Na₂SO₄干燥，过滤并且在真空中进行浓缩。将残余物通过用在石油醚中的1％-5％EtOAc洗脱的硅胶色谱纯化，以提供中间体6(120g，95％)。

中间体7

在0℃，在N₂气下，将中间体6(53.35g，0.22mol)在甲苯(1500mL)中搅拌。在0-5℃下添加叔丁醇钾(34.14g)，在0-5℃下滴加2,2-二氟-乙酸乙酯(33.01g，0.27mol)。将该RM在RT下搅拌2h，然后用在水中的10％H₂SO₄洗涤，并且将有机层经MgSO₄干燥，过滤并蒸发，产生中间体7(70.50g，定量的)。

中间体8

将中间体7(70.5g，220.8mmol)、1H-1,2,4-三唑-5-胺盐酸盐(1:1)(53.22g，441.52mmol)和DMF(1500mL)在80℃下搅拌24h。添加Et₃N(20g)和二碳酸二叔丁酯(20g)。将该混合物搅拌30min，蒸发并且然后溶解于EtOAc中，用水和盐水洗涤。将有机层经MgSO₄干燥，过滤并进行蒸发。观察到四种异构体。将第一级分从Et₂O中结晶。将晶体过滤出并干燥，产生中间体8(24.60g，30％)。该母液产生化合物的第二级分。将晶体过滤出并干燥，产生中间体8(2.53g，3％)。

N.B.“RS”意指中间体是反式相对构型的两种对映异构体的外消旋混合物。

中间体9、9a和9b

向中间体8(24.6g，67mmol)在MeOH(350mL)中的溶液中添加HCl-iPrOH(350mL)，并将RM在RT下搅拌2h。蒸发RM，并将产物从EtOH中结晶。将晶体过滤出并干燥，产生20.33g粗品，向其中添加水、Na₂CO₃和DCM。将有机层经MgSO₄干燥，过滤并蒸发，产生12.80g的中间体9。通过经制备型SFC(固定相：Chiralpak Diacel AD 30x 250mm；流动相：CO₂，(MeOH-iPrOH50/50)与0.4％iPrNH₂)的纯化将该游离碱分离成对映异构体9a和9b，产生中间体9a(5g，19％，R_t＝7.57min)和中间体9b(5.13g，19％，R_t＝9.36min)。

将中间体9a和9b分离为游离碱，或可替代地，将它们溶解于MeOH中，随后添加HCl/i-PrOH并将混合物蒸发。将盐酸盐(在每种情况下，HCl)从ACN中结晶，过滤出并干燥。

最终化合物的B-合成

化合物1

将2,6-二甲基吡啶-4-羧酸(1.84g，12.2mmol)在DCM(100mL)中搅拌，添加DIPEA(6.31g，48.8mmol)和HBTU(4.63g，12.2mmol)，在RT下继续搅拌0.5h。向该溶液中添加中间体9b(3.26g，12.2mmol)，并在RT下继续搅拌5h。添加NaOH 1N溶液并且搅拌5min。将有机层分离，经MgSO₄干燥，过滤并蒸发。将产物通过柱色谱法(硅胶，洗脱液：在DCM中的1％MeOH，2％，4％)进行纯化。将纯级分蒸发并将产物从DIPE中结晶，过滤出并干燥，产生化合物1(3.85g，79％)。

将分离批的化合物作为HCl盐从Et₂O中结晶以产生作为盐酸盐(.2HCl)的化合物1(产率：175mg，70％，从175mg中间体9b.HCl开始)。

通过振动圆二色光谱(VCD)确认化合物1的立体构型。

分析部分

熔点

值是峰值亦或熔融范围，并且所获得的值具有通常与这种分析方法相关的实验不确定性。

DSC823e(指示为DSC)

用DSC823e(Mettler-Toledo)确定熔点。用10℃/min的温度梯度来测量熔点。最高温度是300℃。

表1

化合物编号	MP
		1	149.31

旋光度

在铂金埃尔默(Perkin-Elmer)341旋光计上用钠灯测量旋光度并且报告如下：[α]°(λ，c g/100ml，溶剂，T℃)。

[α]_λ ^T＝(100α)/(l×c)：其中l是以dm计的路径长度并且c是针对在温度T(℃)和波长λ(以nm计)下的样品的以g/100ml计的浓度。如果所使用的光波长是589nm(钠D线)，那么可以改为使用符号D。始终应给出旋转符号(+或-)。当使用这一等式时，常常在旋转后的括号中提供浓度和溶剂。使用度报道旋转并且浓度不带单位的给出(将其假定为g/100ml)。

表2

化合物编号	OR
		1	+28.91°(589nm，c 0.2975w/v％，DMF，20℃)

SFC-MS方法

使用分析型超临界流体色谱法(SFC)系统来进行SFC测量，该系统由以下构成：用于递送二氧化碳(CO₂)和改性剂的二元泵、自动进样器、柱温箱、配备有经得起400巴的高压流动池的二极管阵列检测器。如果配置有质谱仪(MS)，来自该柱的流被引至该(MS)。设置调谐参数(例如扫描范围、停留时间等)以便获得允许鉴定化合物的标称单一同位素分子量(MW)的离子在技术人员的知识内。利用适宜软件进行数据采集。

表3a.分析性SFC-MS方法(以mL/min表示流量；以℃表示柱温度(T)；以分钟表示运行时间，以巴表示背压(BPR)。

表3b.分析的SFC数据-R_t意指保留时间(以分钟计)，[M+H]⁺意指该化合物的质子化质量，方法是指用于对映异构体纯的化合物的(SFC)MS分析的方法。

LC/MS方法

使用LC泵、二极管阵列(DAD)或UV检测器以及如在对应的方法中所指定的柱进行高效液相色谱法(HPLC)测量。如果必要的话，包括其他检测器(参见下文的方法表格)。

将来自柱的流带至配置有大气压离子源的质谱仪(MS)。设置调谐参数(例如扫描范围、停留时间等)以便获得允许鉴定化合物的标称单一同位素分子量(MW)的离子在技术人员的知识内。利用适宜软件进行数据采集。通过其实验保留时间(R_t)和离子描述化合物。如果未在数据表中不同地指定，那么报道的分子离子对应于[M+H]⁺(质子化的分子)和/或[M-H]^-(去质子的分子)。在该化合物不是直接可电离的情况下，指定加合物类型(即[M+NH₄]⁺、[M+HCOO]^-等)。对于具有多种同位素模式的分子(Br、Cl)来说，报道的值是针对最低同位素质量获得的值。获得的所有结果具有通常与所使用的方法相关的实验不确定性。

下文中，“SQD”意指单四极检测器，“MSD”质量选择性检测器，“RT”室温，“BEH”桥连乙基硅氧烷/二氧化硅杂化体，“DAD”二极管阵列检测器，“HSS”高强度二氧化硅。

表4a.LCMS方法代码(以mL/min表示流量；以℃表示柱温度(T)；以分钟表示运行时间)

表4b.分析性LCMS数据-R_t意指保留时间(以分钟计)，[M+H]⁺意指化合物的质子化质量，方法是指用于(LC)MS分析的方法。

化合物编号	R<sub>t</sub>	[M+H]<sup>+</sup>	[M+H]	方法
					1	0.76	401.2	399.2	方法A

核磁共振(NMR)

或者在Bruker DPX-400光谱仪上用标准脉冲序列(在400MHz下操作)记录¹H NMR光谱。化学位移(δ)以百万分率报告。

化合物编号1：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆,120℃)δppm 0.81(d,J＝6.6Hz,3H)1.43(qd,J＝12.4,4.4Hz,1H)1.89(br dq,J＝13.4,3.1Hz,1H)2.44(s,6H)2.49-2.53

(m,1H)3.11(t,J＝12.7Hz,1H)3.35(dd,J＝12.9,11.1Hz,1H)3.57(td,J＝10.8,4.1Hz,1H)4.00-4.27(m,2H)6.98(t,J＝54.2Hz,1H)7.00(s,2H)7.53(s,1H)8.68(s,1H)

药理学实例

本发明提供的化合物是PDE2的抑制剂，特别是PDE2A的抑制剂。在若干种药理学测定中测试化合物1的结果如下所示。

体外测定PDE2A

人类重组PDE2A(hPDE2A)在Sf9细胞中使用重组rPDE10A杆状病毒构建体表达。感染48h后收集细胞并通过在Ni-琼脂糖6FF上的金属螯合色谱纯化hPDE2A蛋白。将检测化合物溶解并在100％DMSO中稀释至测定中终浓度的100倍的浓度。在384孔板中向20μl的孵育缓冲液(50mM Tris pH 7.8，8.3mM MgCl₂，1.7mM EGTA)中添加化合物稀释液(0.4μl)。在孵育缓冲液中添加10μl的hPDE2A酶并且通过添加10μl底物至终浓度为10μM cGMP和0.01μCi³H-cGMP来起始该反应。将该反应在室温下孵育45分钟。孵育后，用20μl的终止液终止该反应，该终止液由17.8mg/ml PDE SPA(闪烁迫近测定法)微珠组成，该终止液补充有200mMZnCl₂。在30分钟期间这些微珠沉淀后，在铂金埃尔默公司(Perkin Elmer)Topcount闪烁计数器中测量放射活性并且结果表示为cpm。对于空白值，将该酶从该反应省略掉并且由孵育缓冲液取代。对照值通过通过添加终浓度为1％的DMSO而不是化合物获得。通过对减去空白值的对照值的％与化合物浓度的曲线的最小平方和法拟合获得最佳拟合曲线并且半最大抑制浓度值(IC₅₀)衍生自此曲线。

体外测定PDE3A

人类重组PDE3A(hPDE3A)作为部分纯化的昆虫细胞裂解物由苏格兰生物医学(Scottish Biomedical)提供，其克隆自人脑并在Sf9细胞中表达。将检测化合物溶解并在100％DMSO中稀释至测定中终浓度的100倍的浓度。在384孔板中向20μl的孵育缓冲液(50mMTris pH 7.8，8.3mM MgCl₂，1.7mM EGTA)中添加化合物稀释液(0.4μl)。在孵育缓冲液中添加10μl的hPDE3A酶并且通过添加10μl底物至终浓度为0.4μM cAMP和2.4μCi/ml[³H]-cAMP来起始该反应。将该反应在室温下孵育60min。孵育后，用20μl的终止液终止该反应，该终止液由17.8mg/ml PDE SPA(闪烁亲近测定法)微珠组成，该终止液补充有200mM ZnCl₂。在30min期间这些微珠沉淀后，在铂金埃尔默公司(Perkin Elmer)Topcount闪烁计数器中测量放射活性并且结果表示为cpm。对于空白值，将该酶从该反应省略掉并且由孵育缓冲液取代。对照值通过通过添加终浓度为1％的DMSO而不是化合物获得。通过对减去空白值的对照值的％与化合物浓度的曲线的最小平方和法拟合获得最佳拟合曲线并且半最大抑制浓度值(IC₅₀)衍生自此曲线。

体外测定PDE10A

大鼠重组PDE10A(rPDE10A2)在Sf9细胞中使用重组rPDE10A杆状病毒构建体表达。感染48h后收集细胞并通过在Ni-琼脂糖6FF上的金属螯合色谱纯化rPDE10A蛋白。将检测化合物溶解并在100％DMSO中稀释至测定中终浓度的100倍的浓度。在384孔板中向20μl的孵育缓冲液(50mM Tris pH 7.8，8.3mM MgCl₂，1.7mM EGTA)中添加化合物稀释液(0.4μl)。添加10μl在培养缓冲液中的rPDE10A酶，并且通过添加10μl底物至终浓度为60nM的cAMP和0.008μCi ³H-cAMP来起始反应。将该反应在室温下孵育60分钟。孵育后，用20μl的终止液终止该反应，该终止液由17.8mg/ml PDE SPA(闪烁亲近测定法)微珠组成。在30分钟期间这些微珠沉淀后，在铂金埃尔默公司(Perkin Elmer)Topcount闪烁计数器中测量放射活性并且结果表示为cpm。对于空白值，将该酶从该反应省略掉并且由孵育缓冲液取代。对照值通过通过添加终浓度为1％的DMSO而不是化合物获得。通过对减去空白值的对照值的％与化合物浓度的曲线的最小平方和法拟合获得最佳拟合曲线并且半最大抑制浓度值(IC₅₀)衍生自此曲线。

表5a.

化合物	IC<sub>50</sub>PDE2A(nM)
		1	0.95
1.2HCl	0.7

表5b.pIC₅₀相应于以mol/L表示的–log IC50。

化合物	pIC<sub>50</sub>(PDE2A)	pIC<sub>50</sub>PDE3B	pIC<sub>50</sub>PDE10A2
				1	9.07	5.21	7.06
1.2HCl	9.11	5.15	6.93

GluR1磷酸化的蛋白质印迹检测

PDE2主要在海马体、皮质和纹状体中表达，并且可以使cAMP和cGMP水解。AMPA-R运输可以通过活化PKA(通过cAMP)或cGKII(通过cGMP)来调节。已经示出AMPA-R的Glu1亚基的磷酸化对于LTD(减少)和LTP(增加)表达以及记忆保留是关键的。

方法

将化合物1(溶解于10％CD+1HCl中)p.o.(口服)给予至斯泼累格·多雷大鼠(180-200g；10和40mg/kg)，并且稍后2小时，将动物通过斩首处死。解剖海马体并将组织在-80℃下速冻并储存。

解冻后，在补充有5mM EDTA和蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物的组织提取试剂中进行组织裂解。将蛋白样品通过LDS样品缓冲液和还原剂(生命技术公司(LifeTechnologies)，英杰公司(Invitrogen)，卡尔斯巴德，加利福尼亚州，美国)变性，并且最终，将50μg蛋白装载并使用10％Bis-Tris聚丙烯酰胺凝胶(伯乐公司(Bio-Rad)，赫拉克勒斯，加利福尼亚州，美国)在90-160V下电泳。然后通过使用Trans-blot Turbo转移系统(伯乐公司)将凝胶上的蛋白电印迹到Trans blot turbo的0.2μm硝酸纤维素膜(伯乐公司)上。将膜在含有5％脱脂奶粉(圣克鲁斯生物技术公司(Santa Cruz Biotechnology)，达拉斯，得克萨斯州，美国)的Tween-20Trisbuffered盐水(TBS-T：10mM Tris-HCl pH 8.0，150mMNaCl，0.05％Tween-20)中在RT下阻断1h，并与第一抗体一起在4℃下孵育过夜，允许温和摇动(总Glu1Abcam 31232，Ser845pGlu1Abcam 76321，两者稀释度1/1000)。将印迹用TBS-T缓冲液洗涤五次，并在RT下与第二抗体一起孵育1小时(第二驴抗兔HRP缀合的，稀释度1/1000)。在用TBST缓冲液洗涤后通过SuperSignal West Femto最大灵敏度底物(赛默飞世尔科技公司(Thermo scientific)，克拉姆灵顿，英国)显示免疫染色。信号通过化学发光捕获并定量(G-box Syngene，Syngene公司，剑桥，英国)。

这个测试的结果显示在图1中。

被化合物1的PDE2占用

方法

使用[³H]B-17a(描述于WO 2013/000924)作为放射性配体(化合物12，于Buijnsters等人，(2014)，Structure-Based Design of a Potent,Selective,and BrainPenetrating PDE2Inhibitor with Demonstrated Target Engagement[以结构为基础设计有效，选择性和脑部穿透性PDE2抑制剂，具有明确的靶向作用]，ACS Med Chem Lett[美国化学学会药物化学快报]5(9):1049-53.)，通过离体放射自显影评估PDE2A的占用。通过口服给予运载体或递增[³H]B-17a的剂量处理雄性韦斯特(Wistar)大鼠(200-250g)，并在1h后处死。将脑迅速从颅骨中取出并在干冰冷却的2-甲基丁烷(-40℃)中快速冷冻。使用Leica CM 3050恒冷箱切片机(van Hopplynus公司，比利时)切割二十μm厚的纹状体切片，将其解冻安装在显微镜载玻片(SuperFrost PlusSlides，拉博诺德(LaboNord)，法国)上，并在-20℃下储存直到使用。

解冻后，将切片在冷空气流下干燥，并用在含有0.3％BSA的Tris-HCl(50mM，pH7.4)中的30nM[³H]B-17a孵育1分钟。将来自药物处理和运载体处理的动物的脑切片进行平行地孵育。在小脑切片(不含PDE2A酶的脑区域)上测量非特异性结合。孵育后，将过量的[³H]B-17a在冰冷的缓冲液中洗涤2次10分钟，随后快速浸入蒸馏水中。然后将这些切片在冷空气流下干燥。

将脑切片装载在β成像仪(拜斯倍斯(Biospace)，巴黎)中持续4h，并使用β视觉程序(拜斯倍斯，巴黎)定量出现自描绘的脑区域的放射活性。按照纹状体中的总结合与小脑中的非特异性结合之间的差异确定特异性结合。给予动物的药物的受体占用百分比对应于100％减去经处理的动物中标记的受体百分比。对于ED₅₀值的确定，将受体占用的百分比针对剂量作图，并且使用GraphPad Prism程序通过非线性回归分析计算最佳拟合的S形对数剂量-效应曲线。从剂量-反应曲线计算具有95％置信区间的ED₅₀(产生50％受体占用的药物剂量)。

这个测试的结果显示在图2中。

化合物1对突触传递的作用

关键性试剂

蔗糖解剖缓冲液含有以下各项(以mM计)：蔗糖(150)、NaCl(40)、KCl(4)、NaH₂PO₄.H₂O(0.3)、MgCl.6H₂O(7)、NaHCO₃(26)、CaCl₂.2H₂O(0.5)、D-葡萄糖(10)，用95％O₂和5％CO₂气体混合物平衡。在平衡和记录期间使用的人造脑脊液(ACSF)含有以下各项(以mM计)：NaCl(124)、KCl(2.7)、NaH₂PO₄.H₂O(1.25)、MgSO₄.7H₂O(1.3)、NaHCO₃(26)、CaCl₂.2H₂O(2)，D-葡萄糖(10)、抗坏血酸(2)，用95％O₂和5％CO₂气体混合物平衡。

在ACSF中分别以50μM和1mM浓度制备CNQX和犬尿酸。从ACSF中的储备溶液(具有DMSO)新鲜制备化合物1，并且最终DMSO浓度不超过0.1％。除非另有说明，否则所有试剂均来自西格玛-奥德里奇(Sigma-Aldrich)。

动物(物种、体重和性别)

使用的动物是由查尔斯河德国(Charles River Germany)提供的重量范围在145和200g之间的雄性斯泼累格·多雷大鼠。

海马切片的制备

根据标准方案，从用异氟烷麻醉的雄性斯普拉格道利大鼠的腹中-腹侧海马体获得的水平脑切片(300μm)。在冷(4℃)蔗糖解剖缓冲液中以0.1mm/s的速度使用振动的组织切片机(Leica VT1200S)切割切片。切割后，将切片置于35℃下平衡20min，并且然后允许在RT下在人造脑脊液(ACSF)中回收至少一小时。从一个脑制备三到四个切片。

测试系统

用商购自多通道系统MCS股份有限公司(MultiChannel Systems MCS GmbH)(罗伊特林根(Reutlingen)，德国)的MEA装置(由4通道刺激发生器和连接到60通道A/D卡的60通道放大器探头(head-stage)组成)记录所有数据。用于刺激、记录和分析的软件是分别商购自多通道系统公司(Multi Channel Systems)：MC Stim(II 2.0.0发布)和MC Rack(3.8.1.0发布)的软件。用由100μm间隔的60个尖端形状(tip-shaped)和60μm高的电极组成的三维MEA(阿扬达生物科技公司(Ayanda Biosystems，S.A.)，CH-1015洛桑市(Lausanne)，瑞士(Switzerland))进行所有的实验。这些MEA电极由600kΩ<阻抗<900kΩ的铂制成。

实验设计

通过记录海马切片中的细胞外场电位来研究化合物1对突触传递的作用。已经确定的是，突触传递可以产生细胞外场电位的偏转，这反映了在记录电极周围的神经元群体中的同步突触活性。

细胞外场电位记录。恢复后，将脑切片安装在显微镜下的MEA芯片上，并将60个记录电极定位在海马体的苔藓纤维突触(齿状回-CA3)区域上。ACSF溶液以2mL/min的速率连续灌注。将MEA腔的温度保持在32±0.1℃，并且Peltier元件位于MEA放大器探头。用商购自多通道系统MCS股份有限公司(罗伊特林根，德国)的MEA装置记录所有数据。选择芯片的两个相邻电极以刺激齿状回的门区中的苔藓纤维，并且将fEPSP记录在海马体CA3区域的末端区域。通过用以30ms间隔并且每60s重复一次的两个连续的电脉冲(脉冲宽度100μs，并且电流刺激强度(μA)40％相对最大振幅)刺激苔藓纤维输入诱发场细胞外突触后电位(fEPSP)。同时用随机分配用运载体(DMSO)处理的切片进行对照实验。N代表切片数，并且每只动物通常使用3-4个切片。如果满足某些质量标准(包括：正确的位置，稳定的基线(连续10分钟内波动在+/-10％内，振幅>100μV)，则记录突触后神经元水平(fEPSP)的诱发反应。将来自所选电极的fEPSP以5kHz采样并记录在PC的硬盘上用于离线分析。平行地，将所选电极的fEPSP振幅在线编译(用MC Rack程序)以监测和跟踪实验的质量。将数据绘制在电子表格文件中以进行离线分析。

通过单次高频刺激(HFS)诱发弱的长时程增强(LTP)，以产生小于fEPSP的最大增强。

该测试的结果显示在以下图中：图3和图4为化合物1对基础突触传递的作用，并且图5为化合物1的作用，这些作用促进用弱的长时程增强方案诱导LTP。有趣的是，用其他PDE2抑制剂如4-(1-氮杂环丁烷基)-7-甲基-5-[1-甲基-5-[5-(三氟甲基)-2-吡啶基]-1H-吡唑-4-基]-咪唑并[5,1-f][1,2,4]三嗪[CAS 1394033-54-5](WO 2012114222，辉瑞公司(Pfizer))获得了类似的结果(参见图6)。

单剂量PK/PD PDE2i的犬研究

对于这些研究，使用雄性和雌性玛斯比格犬(1-6岁)：2只雄性和2只雌性/治疗组。在仪表化的(instrumented)有意识的动物中经由针导管从侧脑室采样脑脊液(CSF)。

给药前2至5天取基线CSF和血液样品。将这些犬禁食过夜，并且第二天早上在空腹时给药(口服灌胃)。在给药后的预定时间点收集血液和/或CSF用于测量化合物水平和cGMP。通过LC-MS/MS分析cGMP：将25μl的CSF用125μl人造CSF(STIL(20ng/ml))稀释，离心，并注射25μl。使用的系统是：岛津(Shimadzu)SIL-30UPLC系统(Hypercarb(50mm x 1mm(3μm))柱，碱性(10mM碳酸铵)水性-乙腈梯度(5.5分钟后5％至98％)，以250μl/min的速率)和API Sciex 5500系统(配备ESI源(选择性MRM转换(m/z 346.1->152.1(75msec停留时间))。本研究的结果总结在图7中。在单次剂量化合物1后，做出以下观察：在0.5mg/kg下3/8的动物中轻微至中度震颤；在1mg/kg下7只动物中的6只中镇静和/或震颤(由于化合物的有限的储备液，一只动物未被给药)。血浆药代动力学显示非剂量线性。在CSF中存在剂量相关的cGMP的增加。由于分析误差，在PDE2H-2的运载体组中有限的个体数据(n＝2，在1、4和8h处)。

PDE2抑制增强了被麻醉的大鼠中的突触可塑性：化合物1的案例初步研究

介绍

突触可塑性是许多神经生物功能的基础机制。长时程增强(LTP)(一种持续高度局部化的增加海马体以及皮质中的突触强度的形式)是用于记忆和学习的突触底物(Cooke和Bliss，Curr Opin Investig Drugs.[调查药物当前意见]2005；6(1):25-34)。突触强度的增加和减少取决于突触前和突触后神经元的活性，取决于脑中的网络如何操作来建立记忆中多项目的感觉表征并产生适当的运动反应。在完整脑中的这些突触修饰的不同特征对于不同类型网络的操作和若干种不同脑回路系统的操作至关重要。因此，预期LTP会在衰老的精神障碍和神经退行性障碍如阿尔茨海默病中受损(Bergado和Almaguer，Neural Plast.[神经可塑性]2002；9(4):217-32；Rowan等人，Biochem SocTrans.[生化学会会刊]2005；33:563-7)。在动物中，在完整的高度互连的脑区域中在麻醉下进行的程序提供了一种强大的工具，该工具用于研究以单个脉冲或成对脉冲递送的低频和高频的强直电刺激后，在海马-皮质回路中的有效连接性和可塑性的持久变化(Albensi等人，Exp Neurol.[实验神经病学]2007；204:1-13)。这些研究有助于扩展对受损的突触强度的潜在发展的神经回路的理解，即确定直接回路路径以及特异性区域间网络连接所具有的特异性生物靶标在介导突触弱化中的作用。该程序允许测试旨在恢复病理性形式神经可塑性的药理学试剂，例如通过增加突触功效来逆转LTP和网络连接的缺陷，预期该方法对相关的认知和学习能力有有益的影响(Cooke和Bliss，2005；Albensi等人，2007)。

磷酸二酯酶(PDE)是负责第二信使3’,5’-环腺苷单磷酸(cAMP)和3’,5’-环鸟苷酸(cGMP)的代谢失活的一类酶(Francis等人，Physiol Rev.[生理学评论]2011,9:651-90)。根据其结构、酶和分布，对多达11个PDE家族进行分类(Omori和Kotera，Circ Res.[循环研究]2007；100:309-27)。PDE在增加环核苷酸信号传导中的作用使得这些酶成为调节兴奋性和增强神经元传导作用的有吸引力的靶标。在脑中，PDE2主要在皮质、海马体和纹状体中表达，其中PDE2控制cAMP的水解。在过去几年中，研究小组集中开发PDE2抑制剂作为修饰细胞内第二信使cGMP和cAMP以对可塑性和认知过程发挥作用的方式(Duinen等人，Curr PharmDes.[当今制药设计]2015；21:3813-28；Gomez和Breitenbucher，Bioorg Med Chem Lett.[生物有机与药物化学快报]2013；23:6522-7；Xu等人，Neurobiol Aging.[衰老神经生物学]2015；36:955-70；Barco等人，Expert Opin Ther Targets[治疗目标的专家意见]2003；7:101–114)。

在本研究中，研究了使用化合物1的PDE2抑制是否导致在麻醉的成年斯泼累格·多雷的齿状回中兴奋性的改变或表达突触增强的能力的改变。

材料与方法

动物

本实验严格按照国际实验动物护理和评估协会(Association for Assessmentand Accreditation of Laboratory Animal Care International，AAALAC)以及按照1986年11月24日的欧洲共同体理事会指令(86/609/EEC)的指导进行，并经当地伦理委员会批准。在到达保持在受控的环境条件下的实验动物设施后，将手术时体重为170-200g的斯泼累格·多雷大鼠群养于在12-h光/暗循环(在07:00AM开灯)下的通风笼中。

手术和电生理学

用腹膜内注射尿烷1.5g/kg体重来麻醉大鼠。将动物置于用于插入电极的立体定向框架中，并且通过直肠探针不断监测其体温，并用加热垫使体温保持在37℃。必要时补充给予尿烷(0.2-0.5g/kg)以确保完全麻醉。在左侧海马体结构位置的颅骨上钻两个小孔(1mm直径)，用于刺激和记录电极。双极刺激电极；具有尖端水平分隔开0.125μm的一对扭曲的不锈钢聚酰亚胺涂覆的丝(MS303/13-B.PlasticsOne)位于内侧穿通通路(mPP)(AP-7.5，ML-3.8，DV-2.5)处，并且不锈涂覆的记录电极(MS303T-2-AIU，0.008-0.005)位于背海马体的齿状回(DG)区域(AP-2.8，ML-3.8，DV-3.8)处。通过这两个孔刺穿硬脑膜，并且将刺激和记录电极穿过皮质和海马体上层非常缓慢地(0.2mm/min)降低进入背海马的mPP和DG中。在手术过程中，尽一切努力最小化动物的痛苦。

场兴奋性突触后电位(fEPSP)斜率用作兴奋性突触传递的量度。例如，通过恒定电流单元(MC，德国)产生的单个单相方0.1或0.2ms波脉冲被施加于例如mPP，并且在DG中产生诱发的反应。将细胞外场电位放大；在1Hz和2kHz之间进行带通滤波，数字化并使用定制软件进行分析。降低电极直到观察到具有最大反应的负偏转fEPSP。允许最少30min以确保测量前的稳定性兴奋性。接下来，递送具有从50至500μA范围的刺激强度的单相恒流脉冲以产生输入/输出(I/O)曲线并确定最大PSA和fEPSP斜率，并且然后将产生最大反应(即，测试脉冲)的50％的刺激强度用于后续实验。

LTP诱导：在强直刺激前后每5min施加一次测试刺激。通过高频刺激(20方波脉冲的10个刺激训练，200Hz下0.2ms持续时间，5ms的刺激间的间隔，用2秒的训练间的间隔)诱发反应。针对在实验期间测量的每个时间点，基线记录的半小、立即在药物施用或强直刺激(LTP诱导的对照)之前，对五个诱发的反应进行平均。突触增强的幅度被表示为振幅DG群峰电位(PSA)增加的百分比，以及强直刺激后时间间隔处的fEPSP斜率(相对于在药理学周期的稳定30-min内平均的斜率)。

将选择的脉冲强度处的反应收集并平均一直到强直电刺激后130min。群峰电位的振幅被定义为从第一正峰(a)到第一负峰(b)的振幅以及从负峰(b)到第二正峰(c)的振幅的平均值：[(a–b)/(c-b)]/2。为了定量fEPSP的斜率，仅仅测量波形的非常早的组分(ΔV/Δt)以避免群峰电位的污染。

组织学

在电生理学研究结束时，递送500μA的电刺激持续20sec，以在刺激的末端产生损伤，并收集记录电极和脑用于电极放置的组织学验证。使用光学显微镜检查脑切片(20mm)。从研究中排除具有不正确电极放置的动物。

药物

对于皮下(SC)给予，将化合物1溶解于10％环糊精(CD)+1HCl+NaCl中。

统计

对于每只动物，将30min内的稳定基线(强直前(pre-tetanus))反应平均，并且将平均值归一化为100％，并且相对于基线平均值来表示强直后反应数据。使用单向重复测量方差分析(ANOVA)在等级上以30min间隔进行强直后的运载体和化合物1的影响的比较，接着是针对基线(100％值)的Dunnett事后比较。使用双尾学生t测试检查离散时间点处的治疗之间的差异。所有统计程序均使用StatExact软件进行。

结果

基础突触传递不受化合物1的影响，因为在基线强直前期间，在运载体处理的对照之间没有发现显著变化(图8b)。在LTP诱导范例期间，化合物1的皮下给予(40mg/kg)增强了持久的(>2h)突触增强(图8b)。在强直电刺激完成后0-30min时，与运载体水平(124％±5％)相比，PSA斜率为164％±13％，p<0.05。在强直电刺激后90-120min时，PSA振幅依然更高(与运载体水平(116％±17％)相比，179％±20％，p<0.05)。类似地，刺激-反应曲线的分析显示与运载体条件相比fEPSP斜率的显着持续增加(90-120min：与运载体水平(94％±7％)相比，137％±24％，p<0.05)(图8c)。

总的来说，化合物1促进体内LTP，但不影响基础突触传递。

预知的组合物实例

如贯穿这些实例使用的“活性成分”涉及化合物1、其药学上可接受的盐、或其溶剂化物。

用于本发明的配制品的配方的典型实例如下：

1.片剂

2.悬浮液

制备用于口服给予的水性悬浮液，这样使得每1毫升含有1到5mg一种化合物1、50mg羧甲基纤维素钠、1mg苯甲酸钠、500mg山梨糖醇以及水(补足到1ml)。

3.可注射剂

通过搅拌在按体积计在水中的10％丙二醇中的按重量计的1.5％的本发明的化合物1来制备肠胃外组合物。

4.软膏

合理的变化不应被认为偏离本发明的范围。将显而易见的是在此所述的发明可以由本领域普通技术人员以许多方式改变。

Claims

1.一种具有化学式 (1) 的化合物

(1)

或其药学上可接受的盐。

2.根据权利要求1所述的具有化学式 (1) 的化合物的盐酸盐。

3.一种药物组合物，该药物组合物包含治疗有效量的根据权利要求1或2所述的化合物和药学上可接受的载体。

4.根据权利要求1或2所述的化合物或根据权利要求3所述的药物组合物在制备药剂中的用途。

5.根据权利要求1或2所述的化合物或根据权利要求3所述的药物组合物在制备药剂中的用途，所述药剂用于治疗或预防选自下组的中枢神经系统障碍：精神性障碍和病症；焦虑障碍；运动障碍；物质相关障碍；心境障碍；神经退行性障碍；包含注意力和/或认知缺陷症状的障碍或病症；与记忆获得和巩固相关的障碍；中风；和自闭性障碍。

6.根据权利要求5所述的用途，其中

所述精神性障碍选自下组：精神分裂症；精神分裂症样障碍；情感性分裂障碍；妄想性障碍；物质-诱导的精神性障碍；妄想型人格障碍；以及分裂型人格障碍；

所述焦虑障碍选自下组：惊恐性障碍；广场恐怖症；特殊恐惧症；社交恐惧症；强迫性障碍；创伤后应激障碍；急性应激障碍；以及广泛性焦虑障碍；

所述运动障碍选自下组：亨廷顿病和异动症；帕金森病；下肢不宁综合征和特发性震颤；妥瑞氏综合征和其他抽动障碍；

所述物质相关障碍选自下组：酒精滥用；酒精依赖；酒精戒断；酒精戒断性谵妄；酒精-诱导的精神性障碍；安非他明依赖；安非他明戒断；可卡因依赖；可卡因戒断；尼古丁依赖；尼古丁戒断；阿片样物质依赖和阿片样物质戒断；

所述心境障碍选自：抑郁症；躁狂症；双相性I型障碍、双相性II型障碍；循环情感性精神障碍；情绪障碍症；和物质-诱导的心境障碍；

所述包含注意力和/或认知缺陷症状的障碍或病症选自下组：与阿尔茨海默病相关的痴呆；多发梗塞性痴呆；由路易体疾病引起的痴呆；酒精性痴呆或物质-诱导的持续性痴呆；与颅内肿瘤或颅脑创伤相关的痴呆；与亨廷顿病相关的痴呆；与帕金森病相关的痴呆；AIDS相关的痴呆；由皮克病引起的痴呆；由克罗伊茨费尔特-雅各布病引起的痴呆；谵妄；遗忘障碍；创伤后应激障碍；中风；进行性核上性麻痹；智力迟钝；学习障碍；注意力-缺陷/过动症（ADHD）；轻度认知损害；阿斯伯格综合征；年龄相关的认知损害；以及与感知、专注、学习或记忆相关的认知损害；

所述与记忆获得和巩固相关的障碍选自记忆障碍。

7.根据权利要求5所述的用途，其中所述神经退行性障碍选自下组：帕金森病；亨廷顿病；或痴呆。

8.根据权利要求5所述的用途，其中

所述心境障碍选自：躁狂症；双相性I型障碍、双相性II型障碍；循环情感性精神障碍；情绪障碍症；重度抑郁障碍；难治性抑郁症；和物质-诱导的心境障碍；且

所述神经退行性障碍选自下组：帕金森病；亨廷顿病；阿尔茨海默病；多发梗塞性痴呆；AIDS相关的痴呆或额颞痴呆。

9.一种用于制备如权利要求3所定义的药物组合物的方法，其特征在于将药学上可接受的载体与治疗有效量的如权利要求1或2所定义的化合物紧密混合。

10.根据权利要求1或2所述的化合物或根据权利要求3所述的药物组合物在制备药剂中的用途，所述药剂用于治疗选自下组的障碍：精神性障碍和病症；焦虑障碍；运动障碍；药物滥用；心境障碍；神经退行性障碍；包含注意力和/或认知缺陷症状的障碍或病症；与记忆获得和巩固相关的障碍；中风；和自闭性障碍；包括向对其有需要的受试者给予治疗有效量的根据权利要求1或2所述的化合物或治疗量的根据权利要求3所述的药物组合物。