KR100911382B1 - 항-충치 기능을 지닌 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 항-충치 기능을 지닌 식이 조성물 및 구강 조성물에 관한 것이다. 본 발명은 구강 내 pH 완충 작용을 지닌 완충제를 포함한 항-충치 기능을 지닌 식이 조성물 및 구강 조성물을 제공한다.
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항-충치, 식이, 구강, 조성물, 재광화, 인산화, 올리고사카라이드, 글루칸

Description

항-충치 기능을 지닌 조성물{Compositions having anti-dental caries function}
본 발명은 항-충치 기능을 지닌 식이 조성물 및 구강 조성물에 관한 것이다. 더욱 특별하게는 본 발명은 충치의 발달을 감소시키기 위해 치아의 재광화(remineralization)와 같은 항-충치 기능을 지닌 식이 조성물 및 구강 조성물에 관한 것이다.
충치는 그 위에 존재하는 구강 박테리아에 의해 유발된 치아 표면의 탈광화(demineralization)이다. 특히, 구강 박테리아에 의해 생성된 유기산이 일부 차단에 의해 확산되는 것이 방지되고 치아가 유기산의 높은 농도에 노출되어 치아 표면이 탈광화된다. 이러한 정의에서 대사작용에 의해 유기산을 생성하는 당을 발효시키는 능력을 지닌 구강 박테리아가 충치를 유발할 수 있다. 유기산 생성에 적당한 기질은 모노사카라이드 및 올리고사카라이드(즉, 글루코스 및 슈크로 스) 및 모노사카라이드의 중합체인 폴리사카라이드(즉, 전분)를 포함한 사카라이드이다.
유기산의 분산은 주로 (1) 치아의 목 및 뿌리에서의 음식물로부터 획득된 전분의 보유 및 (2) 기질로서 슈크로스와 같은 용이하게 분해가능한 당(즉, 발효성 당)을 이용하여 박테리아에 의해 생성된 불용성 글루칸(glucan)의 치아로의 부착에 의해 방해된다.
요인 (1)에 있어서, 락토바실러스(lactobacillus)와 같이 당을 발효시키는 능력을 지닌 구강 박테리아가 충치의 원인으로 여겨진다. 이러한 경우 충치의 진행은 일반적으로 느린 것으로 알려져 있다. 유기산의 높은 농도가 생성되는 환경의 발달은 수동적 요인에 따라 다르다.
요인 (2)는 최근 슈크로스-함유 음식이 널리 이용될 때 충치의 중요한 요인이다. 이러한 경우 스트렙토코커스 뮤탄스(Streptococcus mutans) 및 스트렙토코커스 소비리누스(Streptococcus sobrinus)가 원인인 것으로 믿고 있다. 이 두 박테리아는 체인으로 나타나고 각 세포는 둥근 형태로 약 0.6 ㎛의 지름을 지닌 스트렙토코커스의 형태이다. 이 두 박테리아는 슈크로스의 존재시 물-불용성 α-글루칸을 활발하게 생성한다. 이러한 글루칸은 치아 표면에 아주 잘 부착되는 성질을 지닌다. 박테리아는 슈크로스를 빠르게 대사하여 산을 생성하는 능력을 나타낸 다. 박테리아 자체는 산 저항성을 지니고 다른 박테리아가 생장할 수 없는 산 환경에서 생존할 수 있다. 물-불용성 글루칸의 부착성은 박테리아가 치아 표면에 견고하게 부착되는 것을 가능하게 한다. 치아 표면에 부착된 물-불용성 글루칸은 박테리아에 의해 생성된 유기산의 분산을 방해하여 치아 표면이 높은 농도의 유기산에 노출되는 환경을 초래한다. 요인 (1)과 비교하여 높은 농도의 유기산이 생성되는 환경의 생성은 박테리아의 활성적 요인에 따라 달라지는 것으로 여겨진다. 이러한 경우 충치의 진행은 요인 (1)에 의해 유발된 것 보다 더 빠르다.
현미경적 수준 에서의 치아의 건강 즉, 상아질(dentin)의 탈광화(demineralization) 및 재광화(remineralization)를 고려함으로서 충치를 방지하는 새로운 접근이 있다(Yoichi Iijima, Takashi Kumagaya; Kariesu Kontororu Dakkai-to Saisekkaika-no-Mekanizumu [Caris Control - Mechanism of Demineralization and Remineralization], Ishiyaku Shupan K.K.; 21-15, 1999). 치아의 표면은 인산의 결정인 에나멜(enamel)로 불리는 칼슘과 수산화인회석(hydroxyapatite)로 이루어진다[Ca10(PO4)6(OH)2]. 에나멜은 치아의 가장 강한 부분이고, 치아 플라크 내의 박테리아에 의해 생성된 유기산, 음식에 함유된 산 등에 의해 칼슘 또는 인산이 에나멜 아래로부터 용해되는 것(탈광화)을 방지한다.
유기산은 물로 채워진 에나멜 로드(rod) 사이의 갭을 통해 에나멜로 스며들고, 탈광화로 불리는 과정에 의해 수산화인회석을 용해한다. 에나멜 조직으로부터의 칼슘과 인산염의 유실은 에나멜의 표면층 아래에서 초기 충치의 발달을 유발한다. 하기에 기술된 바와 같이 본 발명에 따라 상기-기술된 단계의 충치가 치료될 수 있다. 칼슘과 인산 이온은 에나멜 표면 아래의 충치 부분으로 스며들고 분실된 인회석(apatite)이 재광화로 불리는 과정에 의해 회복될 수 있다.
발효성 탄수화물이 취해질 때마다 플라크의 pH는 산성이 되고 탈광화가 시작되는 위험한 pH를 초과한다. 이는 플라크 내의 산-생성 박테리아의 활동으로부터 초래된다. 플라크가 타액에 의해 완충되면 플라크의 pH는 중성으로 돌아가고 타액 내의 칼슘과 인산 이온은 플라크를 통해 상아질 내로 재통합된다(이러한 과정이 재광화로 불린다).
따라서 치아 부식을 예방하고 치료하는 방법은 박테리아가 유기산을 생성하도록 하는 충치를 유발하는 구강 박테리아에게 영양분이 되어서는 안되고; 박테리아가 유기산을 생성하도록 하는 충치를 유발하는 뮤탄스(mutans) 박테리아에게 영양분이 되어서는 안되고; 유기산에 의한 pH 감소가 탈광화가 시작되는 pH 아래로 감소되는 것을 방지해야하고(즉, pH 감소를 방지하도록 완충능력을 지녀야 함); 재광화를 증가시켜야한다.
지금까지 다양한 항-충치제가 알려져 있다.
충치는 뮤탄스 박테리아가 영양분으로 슈크로스를, 효소로서 글리코실트랜스퍼라제(glycosyltransferase)를 이용하여 물-불용성 글루칸을 생성할 때 시작된다. 이러한 글루칸은 치아 표면을 덮어 치아 플라크를 초래한다. 뮤탄스 박테리아가 치아 플라크 내에서 산 발효를 착수하면 치아는 용해되고 치아 부식이 형성된다.
항-충치 사카라이드로서 뮤탄스 박테리아의 영양분이 아닌 일부 올리고사카라이드가 이미 제안되었다(S. Hamada et al., J. Jpn. Soc. Starch Sci., Vol. 31, pp. 83-91, 1984). 이들 항-충치 사카라이드의 하나의 예는 팔라티니트(palatinit)이다(일본 특허 공개공보 제2000-281550호). 팔라티니트가 불소 또는 아연에 결합되면 치아의 재광화가 진행된다(일본 특허 공개공보 제2000-247852호). 그러나 팔라티니트는 약한 단맛을 지니고 음식에 바람직하지 않다. 또한 약 1∼20 중량% 만큼의 농도가 팔라티니트의 재광화 효과에 필요하다.
또한 당 알코올(특히, 자일리톨)이 항-충치제로서 알려져 있다(즉, 일본 특허 공개공보 제2000-128752호 및 일본 특허 공개공보 제2000-53549호). 일본 특허 공개공보 제11-12143호는 자일리톨, 만니톨, 갈락티톨 및 이노실톨로부터 선택된 하나 이상의 당 알코올로 구성된 구강 조성물을 개시한다. 일본 특허 공개공보 제11-12143호는 이들 당 알코올이 치아의 재광화를 증가시킬 수 있음을 기술하 고 있으나 박테리아의 생장을 억제시키지 않는다. 당 알코올이 높은 농도에서만 효과적이더라도 많은 양의 당 알코올의 유입은 묽은 변(loose stool)을 유발하는 것으로 알려져 있다. 하기 실시예에서 기술된 바와 같이 자일리톨의 효과는 실질적으로 확증되지 않았다.
또한 차 성분인 폴리페놀이 항-충치제로 보고되고 사용되고 있다(S. Sakanaka et al., Fragrance Journal, Vol. 11, pp. 42-49, 1990). 그러나 폴리페놀의 이용 또한 맛에 문제점이 있고 따라서 제한적이다.
현재 불소는 재광화 효과에 가장 효과적인 것으로 여겨진다. 불소는 약 2 ppm에서 충분한 효능을 나타낼 수 있다. 불소의 효능에 관해서 하기 2가지 포인트가 뚜렷하다 : (1) 재광화의 증가 ; 및 (2) 불소는 탈광화에 저항하는 단단한 결정 구조로 전환하는 수산화인회석 결정 내로 통합된다(불소는 (1) 보다는 (2)의 효과를 기대하고 사용된다). 이러한 성질을 지닌 불소는 최근 다양한 구강 조성물에 첨가되었다. 예를 들어 일본 특허 공개공보 제11-130643호는 탄산칼슘과 용해성 불소 화합물을 함유한 구강 조성물을 개시한다. 불소 이온과 당 알코올의 결합은 치아를 재광화하는 불소의 능력을 강화한다(예를 들어 일본 특허 공개공보 제11-21217호, 일본 특허 공개공보 제2000-72638호 및 일본 특허 공개공보 제2000-154127호). 일본 특허 공개공보 제8-12541호는 충치를 효과적으로 예방하기 위해 상아질을 강화하고 재광화를 증가시킨 뮤타나제(mutanase) 및 불소 화합물을 함유 한 조성물을 개시한다.
인산칼슘의 공급이 치아의 재광화를 증진시킨다는 것이 당분야에 알려져 있다(즉, 일본 특허 공개공보 제11-22839호 및 일본 특허 공개공보 제10-310513호).
일본 특허 공개공보 제11-29454호는 탄산칼슘 및 알기네이트(alginate)를 함유한 구강 조성물을 개시한다. 이러한 조성물은 pH의 만족스러운 중성화 및 재광화의 증가가 수득되도록 탄산칼슘의 치아 상에 부착하고 잔존하는 능력을 강화하여 우수한 충치-예방 효과를 초래한다.
일본 특허 공개공보 제8-104696호는 여기 개시된 인산화된 올리고사카라이드는 칼슘과 인이 침전되고 결정화되는 것(즉, 석회화)을 억제하고, 인산화된 올리고사카라이드는 충치를 유발하는 뮤탄스 박테리아의 영양분이 아니어서 물-불용성 글루칸이 생성되지 않고, 인산화된 올리고사카라이드는 완충 능력을 지니고 pH 감소 방지 효과를 지니는 것을 기술한다. 상기-기술된 성질은 치아 결석 및 치아 플라크의 발달 및 뮤탄스 박테리아에 의한 산 발효를 방지한다. 또한 식이 조성물 또는 구강 조성물에 함유된 인산화된 올리고사카라이드는 풍미 상에 어떤 영향이 없이 치아 플라크 내에서 발효의 생성물인 유산에 의한 pH 감소 방지 효과를 지님이 개시된다. 그러나 일본 특허 공개공보 제8-104696호는 상기-기술된 인산화된 올리고사카라이드가 여기 기술된 바와 같이 낮은 농도에서 재광화 효과를 지닐 수 있 는지는 제안하지 않았다.
발명의 요약
따라서 본 발명은 항-충치 기능을 지닌 물질에 관한 것이다. 특히, 본 발명의 목적은 치아의 재광화에 의해 충치의 발달을 감소시키는 식이 조성물 및 구강 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명자들은 다양한 물질을 이용함으로서 충치를 예방하는 기술을 연구하였다. 그 결과로서 발명자들은 치아에 재광화 효과를 지닌 완충제를 발견하였고 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 하나의 관점에 따라 식이 조성물은 항-충치 기능을 지닌다. 본 조성물은 구강 내에서 pH 완충 작용을 지닌 완충제로 구성된다.
본 발명의 하나의 실시태양에서 완충제는 인산화된 올리고사카라이드가 하나의 인산 그룹이 글루칸에 연결된 α-1,4 결합으로 3∼5개의 글루코스로 구성된 글루칸 또는 두개의 인산 그룹이 글루칸에 연결된 α-1,4 결합으로 2∼8개의 글루코스로 구성된 글루칸인 인산화된 올리고사카라이드 또는 그의 당 알코올 ; 황산콘드로이틴(chondroitin sulfate) ; 황산콘드로이틴 올리고사카라이드 ; 글루코스-6-인 산 ; 올리고갈락투론산 ; 및 주석산으로 구성된 군으로부터 선택된다.
본 발명의 하나의 실시태양에서 완충제는 인산화된 올리코사카라이드 또는 그의 당 알코올이다. 인산화된 올리고사카라이드는 하나의 인산 그룹이 글루칸에 연결된 α-1,4 결합으로 3∼5개의 글루코스로 구성된 글루칸 또는 두개의 인산 그룹이 글루칸에 연결된 α-1,4 결합으로 2∼8개의 글루코스로 구성된 글루칸이다.
본 발명의 실시태양에서 완충제는 알칼리성 금속염, 알칼리성 지구금속염 또는 철염의 형태이다.
본 발명의 실시태양에서 완충제는 나트륨염 또는 칼슘염의 형태이다.
본 발명의 실시태양에서 식이 조성물은 효과적인 양의 불소 또는 항-충치의 물질을 포함한 불소로 구성된다.
본 발명의 또다른 관점에 따라 식이 조성물은 항-충치 기능을 지닌다. 본 조성물은 구강 내 pH 완충 작용을 지닌 완충제, 인-칼슘 보정제, 인 조제물 및/또는 칼슘 조제물로 구성된다.
본 발명의 하나의 실시태양에서 완충제는 인산화된 올리고사카라이드 또는 그의 당 알코올이다.
본 발명의 하나의 실시태양에서 완충제는 인산화된 올리고사카라이드가 하나의 인산 그룹이 글루칸에 연결된 α-1,4 결합으로 3∼5개의 글루코스로 구성된 글루칸 또는 두개의 인산 그룹이 글루칸에 연결된 α-1,4 결합으로 2∼8개의 글루코스로 구성된 글루칸인 인산화된 올리고사카라이드 또는 그의 당 알코올 ; 황산콘드로이틴 ; 황산콘드로이틴 올리고사카라이드 ; 글루코스-6-인산 ; 올리고갈락투론산 ; 및 주석산으로 구성된 군으로부터 선택된다.
본 발명의 하나의 실시태양에서 완충제는 인산화된 올리고사카라이드 또는 그의 당 알코올이다. 인산화된 올리고사카라이드는 하나의 인산 그룹이 글루칸에 연결된 α-1,4 결합으로 3∼5개의 글루코스로 구성된 글루칸 또는 두개의 인산 그룹이 글루칸에 연결된 α-1,4 결합으로 2∼8개의 글루코스로 구성된 글루칸이다.
본 발명의 실시태양에서 완충제는 알칼리성 금속염, 알칼리성 지구금속염 또는 철염의 형태이다.
본 발명의 실시태양에서 완충제는 나트륨염 또는 칼슘염의 형태이다.
본 발명의 실시태양에서 식이 조성물은 효과적인 양의 불소 또는 항-충치의 물질을 포함한 불소로 구성된다.
본 발명의 또다른 관점에 따라 식이 조성물은 항-충치 기능을 지닌다. 본 조성물은 구강 내 pH 완충 작용을 지닌 완충제로 구성된다.
본 발명의 하나의 실시태양에서 완충제는 인산화된 올리고사카라이드 또는 그의 당 알코올이다.
본 발명의 하나의 실시태양에서 완충제는 인산화된 올리고사카라이드가 하나의 인산 그룹이 글루칸에 연결된 α-1,4 결합으로 3∼5개의 글루코스로 구성된 글루칸 또는 두개의 인산 그룹이 글루칸에 연결된 α-1,4 결합으로 2∼8개의 글루코스로 구성된 글루칸인 인산화된 올리고사카라이드 또는 그의 당 알코올 ; 황산콘드로이틴(chondroitin sulfate) ; 황산콘드로이틴 올리고사카라이드 ; 글루코스-6-인산 ; 올리고갈락투론산 ; 및 주석산으로 구성된 군으로부터 선택된다.
본 발명의 하나의 실시태양에서 완충제는 인산화된 올리코사카라이드 또는 그의 당 알코올이다. 인산화된 올리고사카라이드는 하나의 인산 그룹이 글루칸에 연결된 α-1,4 결합으로 3∼5개의 글루코스로 구성된 글루칸 또는 두개의 인산 그룹이 글루칸에 연결된 α-1,4 결합으로 2∼8개의 글루코스로 구성된 글루칸이다.
본 발명의 실시태양에서 완충제는 알칼리성 금속염, 알칼리성 지구금속염, 아연염 또는 철염의 형태이다.
본 발명의 실시태양에서 완충제는 나트륨염, 칼슘염 또는 아연염의 형태이다.
본 발명의 실시태양에서 구강 조성물은 항-충치를 위한 효과적인 양의 불소 또는 불소 함유 물질로 구성된다.
본 발명의 또다른 관점에 따라 구강 조성물은 항-충치 기능을 지닌다. 본 조성물은 구강 내 pH 완충 작용을 지닌 완충제, 인-칼슘 보정제, 인 조제물 및/또는 칼슘 조제물로 구성된다.
본 발명의 하나의 실시태양에서 완충제는 인산화된 올리고사카라이드 또는 그의 당 알코올이다.
본 발명의 하나의 실시태양에서 완충제는 인산화된 올리고사카라이드가 하나의 인산 그룹이 글루칸에 연결된 α-1,4 결합으로 3∼5개의 글루코스로 구성된 글루칸 또는 두개의 인산 그룹이 글루칸에 연결된 α-1,4 결합으로 2∼8개의 글루코스로 구성된 글루칸인 인산화된 올리고사카라이드 또는 그의 당 알코올 ; 황산콘드 로이틴(chondroitin sulfate) ; 황산콘드로이틴 올리고사카라이드 ; 글루코스-6-인산 ; 올리고갈락투론산 ; 및 주석산으로 구성된 군으로부터 선택된다.
본 발명의 하나의 실시태양에서 완충제는 인산화된 올리코사카라이드 또는 그의 당 알코올이다. 인산화된 올리고사카라이드는 하나의 인산 그룹이 글루칸에 연결된 α-1,4 결합으로 3∼5개의 글루코스로 구성된 글루칸 또는 두개의 인산 그룹이 글루칸에 연결된 α-1,4 결합으로 2∼8개의 글루코스로 구성된 글루칸이다.
본 발명의 실시태양에서 완충제는 알칼리성 금속염, 알칼리성 지구금속염, 아연염 또는 철염의 형태이다.
본 발명의 실시태양에서 완충제는 나트륨염, 칼슘염 또는 아연염의 형태이다.
본 발명의 실시태양에서 구강 조성물은 항-충치를 위한 효과적인 양의 불소 또는 불소 함유 물질로 구성된다.
본 발명의 또다른 관점에 따라 치아 상에 항-충치 작용을 지니는 것으로 기대되는 표본의 재광화 효과를 조사하기 위한 방법은 : (A) 인, 칼슘 및 표본 내 존재하는 치아 성분이 칼슘 침전 반응을 하게 하고 ; (B) 침전 반응 후 용액 내 칼슘 의 농도 또는 침전된 칼슘의 양을 측정하고 ; (C) 표본 부재의 용액을 칼슘 침전 반응을 하게 하고 ; (D) 침전 반응 후 용액 내 칼슘의 농도 또는 침전된 칼슘의 양을 측정하고 ; 및 (E) (B)와 (D) 단계의 용액 내 칼슘 농도 또는 침전된 칼슘 양을 비교하는 것으로 구성된다.
본 발명의 실시태양에서 용액은 수산화인회석, 완충액, KH2PO4 및 CaCl2로 구성된다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
여기서 사용된 "항-충치 기능"이라는 용어는 충치 예방 기능과 충치 치료 기능 모두를 나타낸다. 충치 치료 기능은 충치에 의해 한번 손상된 치아 부분의 치료 기능을 의미한다. 여기서 사용된 "항-충치 기능"이라는 용어는 하나 이상의 하기 성질을 나타낸다 : (1) 구강 박테리아에 의해 생성된 산에 의한 pH 감소를 방지하는 pH 완충 능력 ; (2) 구강 박테리아가 불용성 글루칸을 생성하는 것을 방지는 능력 ; (3) 초기 충치의 치아 재광화를 증가시키는 능력. 바람직하게는 항-충치 기능은 두 가지의 상기-기술된 성질을 지니고 가장 바람직하게는 상기-기술된 성질의 모두를 지닌다.
본 발명의 조성물은 부식된 치아에 인산염과 칼슘을 안정하게 제공할 수 있다. 인산염과 칼슘이 제공된 치아는 재광화되고 충치에 의해 손상된 치아 부분이 치료될 수 있다.
본 발명에 따라 완충제가 구강에 첨가되어 구강 내 타액에 존재하는 인산염과 칼슘이 치아 재광화에 안정하게 사용되게 된다. 따라서 통상적으로 어렵거나 불가능한 것으로 여겨진 치아의 치료가 실현될 수 있다.
적당한 조건하에서 칼슘 또는 인산염이 탈광화된 에나멜 부분에 공급되면(재광화) 탈광화된 손상이 완전한 상태로 치료될 수 있다. 치아의 완전한 상태를 유지하기 위해 탈광화와 재광화가 현미경적 수준에서 균형 잡히도록 타액에 의해 탈광화된 손상에 광물이 공급될 필요가 있다. 일반적으로 치아 플라크 내의 pH는 음식물 섭취 또는 음용 후 낮아지는 경향이 있고 탈광화와 재광화 사이의 균형이 변화된다. 탈광화 > 재광화인 경우 손상이 진행된다. 반대로 재광화 > 탈광화인 경우 탈광화된 손상이 치아의 재광화에 의해 회복된다. 탈광화와 재광화 사이의 균형은 구강 환경에 따라 크게 달라진다(특히, 타액과 치아 플라크 내의 pH 및 칼슘과 인산염의 농도). 본 발명은 재광화가 발생하기 쉬운 구강 환경을 제공할 수 있어서 건강하고 튼튼한 치아를 수득하기 위해 충치를 예방하고 탈광화된 손상( 충치의 초기 단계)을 치료할 수 있다.
여기서 사용된 "완충제"라는 용어는 구강 내 pH 완충 작용을 나타내는 약제를 나타낸다. 특히, 완충제는 예를 들어 완충제의 음이온 또는 양이온으로부터 수득된 물-불용성 염이다. 구강 내 완충제의 존재는 구강 내 pH를 안정화시킬 수 있다. 완충제는 타액 내의 인산 이온 및 칼슘 이온을 안정화시킬 수 있다. 따라서 특히, 인산 이온 및 칼슘 이온의 존재시 좋은 pH 완충 작용을 지닌 약제가 바람직하다. 더욱 바람직하게는 완충제가 인산 이온 및 칼슘 이온을 함유한 수용액 내에 첨가될 때 인산 이온 및 칼슘 이온의 안정성이 완충제에 의해 억제되지 않는다. 즉, 인산 이온 및 칼슘 이온과 반응하기 쉽고 침전물을 형성하는 완충제는 바람직하지 않다.
또한 본 발명에서 pH 완충 효과는 바람직하게는 치아 플라크에서 수득된다. pH 완충 작용이 타액 내에 나타나면 pH 완충 작용은 일반적으로 치아 플라크 내에 나타난다. 따라서 pH 완충 작용을 나타내는 완충제는 치아 플라크 내에서 pH 완충 작용을 나타내는데 사용될 수 있다. 수소 이온 민감성 필드 효과 트랜지스터 전극(PH-6010 : Nihon Kohden Corporation 제조)이 에나멜 섹션 상에 놓이고 아래 턱에 대해 부분적 의치의 치아 갭 내로 통합된다. 이후 Yoshizumi Tamasawa et al.(Journal of the Japan Prosthodontic Society, Vol. 40 special issue, P147, 1996), Takahashi-Abbe, S et al.(Oral Microbiol. Immunol., 16, P94-99, 2001)에 기술된 방법에 따라 전극의 민감성 부분 상에 형성된 치아 플라크 내의 pH가 측정된다. 치아 플라크 내의 pH는 바람직하게는 6 이상이고, 더욱 바람직하게는 7 이상이다. 플라크의 pH가 중성을 돌아가려는 완충 작용에 의해 유발될 때 구강의 타액 내에 존재하는 인산 이온 및 칼슘 이온이 치아 표면에 공급되고 상아질의 재광화를 초래한다. 플라크 pH의 상한선은 특히 한정적이지 않으나 높은 알칼리성 조건은 활성적인 생물체에 적합하지 않다. 플라크의 pH는 바람직하게는 10 이하이고, 더욱 바람직하게는 8 이하이다.
완충제는 일반적으로 염의 형태로 사용되고, 선택적으로는 자유 산의 형태로 사용된다. 완충제가 자유 산의 형태로 구강에 제공되더라도 자유 산과 함께 염을 형성할 수 있는 알칼리성 금속 등이 구강 내에 존재하기 때문에 실질적으로 자유 산의 염이 구강에 제공된다고 여겨진다.
본 발명에 사용될 수 있는 바람직한 완충제는 간단한 실험에 의해 용이하게 선택될 수 있다. 특히, 다양한 알려진 pH 완충제는 인산 이온 및 칼슘 이온 함유 중성 수용액(즉, pH 6∼8의 수용액)에 첨가된다. 침전의 유무가 관찰된다. 이러한 실험에서 침전물을 형성하지 않는 pH 완충제가 본 발명의 항-충치 조성물에 첨가되는 완충제로서 만족스럽게 사용될 수 있다.
완충제가 존재하지 않는다면 구강은 구강 박테리아에 의해 생성된 유기산의 효과에 의해 산성화된다(즉, 타액 또는 치아 플라크가 산성화됨). 타액 또는 치아 플라크가 산성화되면 치아의 칼슘 및 인광체(phosphor)는 Ca 및 P 이온으로 용출되어 충치의 발달을 초래한다. 이러한 경우 완충제가 존재하면 구강 내 타액 및 치아 플라크의 pH가 중성 pH 상태로 안정하게 되어 충치 형성이 쉽게 진행되지 않는다.
타액의 pH는 일반적으로 중성 상태이다. 따라서 중성 pH에서 좋은 완충 작용을 지닌 완충제가 바람직하다.
바람직하게는 완충제는 타액 내에서 인산염과 반응하여 침전물을 형성하지 않는 약제이다.
바람직하게는 완충제는 타액 내에서 칼슘과 반응하여 침전물을 형성하지 않는 약제이다.
바람직하게는 완충제는 산성 기능성 그룹(들)을 지닌다.
바람직하게는 완충제는 어떠한 인산 그룹, 카르복시 그룹 및 황산 그룹도 지닌다.
바람직하게는 완충제는 그의 분자 내에 3개 이하, 더욱 바람직하게는 2개 이하의 산성 기능성 그룹을 지닌다. 과도한 수의 산성 기능성 그룹이 분자 내 존재하면 인광체 및 칼슘을 수산화인회석에 제공하는 이의 능력이 감소하기 쉽다. 예를 들어 그의 분자 내에 1 또는 2개의 인산 그룹을 지닌 인산화된 올리고사카라이드는 그의 분자 내에 6개의 인산 그룹을 지닌 파이틱산(phytic acid) 보다 증가된 충치 치료 기능을 지닌다. 따라서 파이틱산과 같은 물질 이외의 완충제가 바람직하게 사용된다.
인광체 및 칼슘를 수산화인회석에 제공하는 우수한 능력을 지닌 완충제가 바람직하다. 인광체 및 칼슘을 수산화인회석에 제공하는 완충제의 능력은 하기 기술된 바와 같이 간단한 재광화 테스트 시스템에 의해 용이하게 테스트된다.
완충제의 예는 인산화된 올리고사카라이드 및 그의 당 알코올을 포함한다. 여기서 사용된 "인산화된 올리고사카라이드"라는 용어는 그의 분자 내에 적어도 하나 이상의 인산 그룹, 바람직하게는 3 이하의 인산 그룹, 더욱 바람직하게는 2 이하의 인산 그룹을 지닌 올리고사카라이드를 나타낸다. 여기서 사용된 "중성 올리고사카라이드"라는 용어는 결합된 인산 그룹이 없는 올리고사카라이드를 나타낸다. 예를 들어 인산화된 올리고사카라이드는 하나의 인산 그룹이 글루칸에 연결된 α-1,4 결합으로 3∼5개의 글루코스로 구성된 글루칸이다. 대안으로, 인산화된 올리고사카라이드는 2개의 인산 그룹이 글루칸에 연결된 α-1,4 결합으로 2∼8개의 글 루코스로 구성된 글루칸이다. 완충제의 예는 산성 사카라이드 및 그의 당 알코올(즉, 올리고갈락투론산, 황산콘드로이틴, 황산콘드로이틴 올리고사카라이드, 글루코스-6-인산), 유기산(즉, 주석산, 구연산, 사과산, 유산, 퓨마르산 및 말레산), 핵산(즉, 다양한 뉴클레오사이드 또는 뉴클레이타이드의 인산 에스테르), 아미노산 및 상기-기술된 인산화된 올리고사카라이드의 당 알코올을 포함하나 이에 한정적인 것은 아니다.
상기-기술된 완충제는 완충제가 효과적이도록 금속염과 같은 염의 형태이다. 이러한 금속염 형성에 사용되는 금속의 예는 알칼리성 금속, 알칼리성 지구금속, 아연, 철, 크롬 및 납을 포함한다. 예를 들어 칼륨, 나트륨, 칼슘 및 마그네슘이 포함된다. 본 발명의 식이 조성물에 함유된 완충제의 금속염으로서 칼슘염과 나트륨염이 바람직하다. 본 발명의 구강 조성물에 함유된 완충제의 금속염으로서 칼슘염, 나트륨염 및 아연염이 바람직하다. 아연염은 음식이나 음료에 사용되지 않으나 아연염이 구취를 예방하고 치주 질환을 치료하는 효과를 지니는 것으로 알려져 있다. 따라서 아연염은 구강 조성물에 함유된 금속염으로서 바람직하다. 또한 완충제는 암모늄염 또는 제4기 아민염의 형태이다.
황산콘드로이틴은 일반적으로 2개의 당마다 하나의 황산을 포함한다. 황산 그룹은 황산콘드로이틴 A에서 N-아세틸-D-갈락토사민의 4-위치, 황산콘드로이틴 C에서 N-아세틸-D-갈락토사민의 6-위치에 연결된다. 황산콘드로이틴 B(일반적으로 황산더마탄(dermatan sulfate)으로 불림)는 N-아세틸-D-갈락토사민-4-황산과 L-이두론산(iduronic acid)의 이당 단위의 반복 구조를 지닌다. 황산콘드로이틴은 콘드로이티나제에 의해 비환원 말단에서 불포화된 헥수론산(hexuronic acid)을 지닌 올리고사카라이드의 이당까지 분해될 수 있다. 예를 들어 황산콘드로이틴은 콘드로이티나제 ABC(프로테우스 불가리스(Proteus vulgaris)로부터 유도됨), 콘드로이티나제 ACI(플라보박테리움 헤파리눔(Flavobacterium heparinum)으로부터 유도됨) 또는 콘드로이틴 ACII(아르트로박테르 아우레센스(Arthrobacter aurescens)로부터 유도됨)에 의해(후자 2개의 효소는 황산더마탄에 작용하지 않음) 그들의 환원 말단에서 헥소사민(hexosamine)을 지닌 불포화 이당까지 분해될 수 있다. 황산콘드로이틴 및 이러한 효소로 황산콘드로이틴을 분해함으로서 수득된 불포화 올리고사카라이드(바람직하게는, 이당 및 사당(tetrasaccharide))는 재광화 효과를 지닌다.
올리고갈락투론산은 펙틴의 구성 사카라이드로 알려진 중합된 갈락투론산의 올리고사카라이드이다. 올리고갈락투론산은 바람직하게는 2 이상, 다욱 바람직하게는 3 이상, 훨씬 더 바람직하게는 4 이상 바람직하게는 10 이하, 더욱 바람직하게는 8 이하, 훨씬 더 바람직하게는 6 이하의 사카라이드로 구성된다.
여기서 사용된 "당 알코올"이라는 용어는 환원 말단이 환원된 당을 나타낸다. 예를 들어 인산화된 올리고사카라이드의 당 알코올은 인산화된 올리고사카라이드의 환원 말단에 수소를 첨가함으로서 생성된다. 수소의 첨가는 당업자에게 알려진 어떠한 방법으로도 수행될 수 있다. 예를 들어 올리고사카라이드는 pH 8의 1N 수산화나트륨 수용액의 약알칼리성 수용액을 제조하고 약알칼리성 용액 100ml에 3%의 수산화붕소나트륨 30ml를 첨가하고 1시간 동안 40℃에서 혼합물을 정치시킴으로서 환원될 수 있다. 당 알코올은 당업자에게 알려진 니켈 촉매를 이용한 일반적인 방법에 의해 산업적으로 생성된다.
본 발명의 식이 조성물 및 구강 조성물에 포함된 완충제로서 하나의 인산 그룹이 글루칸에 연결되고 α-1,4 결합으로 3∼5개의 글루코스로 구성된 글루칸인 인산화된 올리고사카라이드 또는 두 개의 인산 그룹이 글루칸에 연결되고 α-1,4 결합으로 2∼8개의 글루코스로 구성된 글루칸인 인산화된 올리고사카라이드가 바람직하다.
이러한 인산화된 올리고사카라이드는 일반적인 비가공 식물 전분, 바람직하게는 많은 인산 그룹을 지닌 전분으로부터 제조될 수 있다. 인산화된 올리고사카라이드를 생성하는데 사용되는 전분의 시작 식물의 예는 토마토, 고구마, 카사바, 옥수수, 밀, 쌀, 밀납성(waxy) 쌀, 밀납성 옥수수, 밀납성 밀, 밀납성 감자, 칡, 참마, 백합 및 밤을 포함한다. 이들 중 지하 줄기, 쌀, 밀 등이 많은 결합된 인산 그룹을 포함하고 인산화된 올리고사카라이드의 재료로 적당하다. 예를 들어 감자 전분에서 인산 그룹은 전분의 성분으로서 글루코스의 3-위치 또는 6-위치에 에스테르 결합에 의해 상당히 자주 결합된다. 인산 그룹은 주로 아밀로펙틴 내에 존재한다. 인산화된 올리고사카라이드를 생성하는데 사용되는 전분으로서 화학적으로 변형된 전분도 바람직하게 사용된다. 화학적으로 변형된 전분은 상기 기술된 바와 같이 고유 전분에 인을 결합시킴으로서 수득된다. 예를 들어 옥수수, 밀랍성 옥수수로부터의 전분은 인산화된 올리고사카라이드를 제조하기 위해 인으로 화학적으로 결합된다.
상기-기술된 본 발명의 식이 조성물 및 구강 조성물에 포함된 인산화된 올리고사카라이드는 하기에 의해 생성된다.
효소적으로 전분을 분해하기 위해 α-아밀라제(EC 3.2.1.1), β-아밀라제(EC 3.2.1.2), 글루코아밀라제(EC 3.2.1.3), 이소아밀라제(EC 3.2.1.68), 풀룰라나제(EC 3.2.1.41) 및 네오풀룰라나제(Kuriki et al., Journal of Bacteriology, Vol. 170, pp. 1554-1559, 1988)와 같은 전분분해성(amylolytic) 효소; 및 시클로덱스트린 글루카노트랜스퍼라제(cyclodextrin glucanotransferase)(EC 2.4.1.19; 이후 CGTase로 표기)와 같은 글리코실트랜스퍼라제(glycosyltransferase)로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 하나 이상이 전분에 작용하게 된다. 대안으로, 이들 효소의 적어도 하나 이상이 α-글루코시다제(EC 3.2.1.20)와 결합하여 사용된다.
어떤 분지 구조도 지니지 않은 인산화된 사카라이드는 전분 내 α-1,6 분지 구조를 분열시키기 위해 이소아밀라제 또는 풀룰라나제로 전분을 분해함으로서 수득될 수 있다. 이소아밀라제 또는 풀룰라제가 사용되지 않으면 α-1,6 분지 구조를 지닌 인산화된 사카라이드가 수득될 수 있다. 글루코아밀라제로 인산화된 사카라이드를 분해함으로서 인산화된 사카라이드의 비환원 말단에 결합된 비-인산화된 글루코스가 성공적으로 유리될 수 있다. 이러한 효소 처리로 정제된 인산화된 사카라이드의 분자량 당 인산 그룹의 수가 증가하거나 감소할 수 있다.
다수의 종류의 효소에 의한 분해는 효소를 전분에 동시에 반응하게 함으로서 동시발생적으로 수행될 수 있다. 간단히, 비가공의 물질로서의 전분이 효소가 전분 상에 작용할 수 있도록 적정된 pH의 물 또는 완충액 내에 용해된다. 액화 α-아밀라제, 풀룰라나제, 글루코아밀라제 등이 반응 용액 내로 동시에 첨가되고 결과적인 용액은 가열 동안 반응되게 된다. 이러한 방법으로 전분이 젤라틴화되는 동안 중성 사카라이드는 유리될 수 있고, 인산화된 사카라이드의 비환원 말단에 결합된 비-인산화된 글루코스가 유리될 수 있거나 또는 인산화된 사카라이드 구조 내의 물질로부터 유도된 α-1,6 분지 구조가 분열될 수 있다. 이러한 방법은 2-단계 반응 보다는 1-단계 반응에 의해 증가된 인산 함량을 지닌 인산화된 사카라이드를 수득하는 것을 가능하게 한다.
2 이상의 단계를 포함한 효소 반응이 다수의 종류의 효소가 각 단계에서 전분 상에 개별적으로 작용하게 함으로서 수행되는 경우 적용 효소의 순서는 특별한 순서에 한정적이지 않다. 그러나 전분의 농도가 높으면 전분이 먼저 액화 아밀라제를 포함한 효소에 의해 처리되는 것이 바람직하다. 이소아밀라제 또는 풀룰라나제가 전분에 작용하게 되면 아밀로스 함량이 증가한다. 아밀로스는 아밀로펙틴과 비교하여 쉽게 노화되고 침전되고, 따라서 전분이 노화하고 침전된다. 그 결과로서 다른 효소가 전분에 더 이상 작용하지 않는다.
사용되는 전분 분해 효소, 글루코실트랜스퍼라제 및 α-글루코시다제의 기원에 특별한 한정은 없다. 예를 들어 α-아밀라제는 바람직하게는 바실러스속 또는 아스퍼질러스속의 박테리아로부터 유도된 전분 분해 효소 조제물이다. 효소의 반응 조건은 효소가 기능할 수 있는 어떠한 온도 및 pH도 된다. 예를 들어 25∼70℃ 범위의 온도 및 4∼8 범위의 pH가 바람직하게 사용된다.
먼저, 비가공 물질로서 전분이 효소가 전분 상에 작용할 수 있도록 적정된 pH의 물 또는 완충액 내에서 용해된다. 액화 α-아밀라제가 결과적인 용액 내에 첨가되고 가열동안 반응하게 되어 젤라틴화되는 동안 전분이 액화된다. 이후, 액화된 전분은 적당한 기간 동안 20∼80℃의 온도에 유지된다. 전분을 액화시킬 수 있는 한 액화 α-아밀라제의 어떠한 양도 사용될 수 있다. 액화 α-아밀라제의 바람직한 양은 20∼50,000 U이다. 이러한 유지 시간은 전분이 다음 단계 동안 노화하지 않을 정도로 액화되는 한 한정적이지 않다. 바람직하게는 유지 시간은 20∼80℃의 온도에서 30분이다.
액화의 완성후, 효소의 불활성화는 특별히 요구되지 않으나 효소는 통상적으로 사용되는 방법에 의해 즉, 100℃에서 10분간 유지시킴으로서 불활성화된다. 또한 불용성 물질은 원심분리 또는 필름 여과와 같은 통상적으로 사용되는 방법에 의해 분리되고 제거된다. 이후, 인산화된 사카라이드는 프랙션화될 수 있다. 증가된 인산 함량을 지닌 인산화된 사카라이드가 바람직할 때는 하기에 기술된 부가적인 단계가 수행된다.
간단히, 물질이 액화된 후 글루코아밀라제, 이소아밀라제, 풀룰라나제 및 α-글루코시다제가 액화된 물질에 동시 또는 적당한 순서로 첨가되어 물질을 당화시킨다. 탕화된 물질은 예를 들어 30∼40 시간 동안 40∼60℃의 온도에서 반응하게 되어 중성 사카라이드 및 인산화된 사카라이드의 비환원 말단에 결합된 비-인산화된 글루코스가 상기 물질로부터 유리될 수 있고, 상기 물질로부터 유도된 인산화된 사카라이드 구조 내의 α-1,6 분지 구조가 분열될 수 있다. 글루코아밀라제, 이소아밀라제 및 풀룰라나제가 조합하여 사용될 때 그의 첨가의 조합 및 순서는 한정적이지 않다. 부가적인 효소의 양 및 유지 시간은 인산화된 사카라이드의 요구된 인산 함량에 따라 다르게 결정될 수 있다. 바람직하게는 50∼70,000 U의 글루코아밀라제, 2∼100 U의 이소아밀라제, 2∼100 U의 풀룰라나제 및 50∼700 U의 α-글루코시다제가 첨가될 수 있다. 고정화 효소가 바람직하게 사용될 수 있다.
각 효소와의 반응의 완료 후 효소의 불활성화는 특별히 요구되지 않으나 일반적으로 사용되는 방법에 의해 즉, 100℃에서 10분간 유지시킴으로서 불활성화된다. 또한 불용성 물질은 원심분리 또는 멤브레인 여과와 같은 일반적으로 사용되는 방법에 의해 분리되고 제거된다.
인산화된 사카라이드가 중성 사카라이드와 달리 이온성 물질이기 때문에 인산화된 올리고사카라이드를 포함한 사카라이트로부터 인산화된 올리고사카라이드를 정제하기 위해 음이온 교환 수지가 사용될 수 있다. 수지 타입에 특별한 한정은 없다. 수지의 바람직한 예는 Chitopearl BCW 2500 타입(Fuji Spinning Co., Ltd. 제조), Anberlite IRA 타입(Whatman 제조), DEAE-Sephadex 및 QAE-Sephadex(Pharmacia 제조) 및 QAE-CELLULOSE(Bio Rad 제조)를 포함한다. 수지는 pH가 적당히 적정된 완충액을 이용함으로서 평형화된다. 예를 들어 약 10∼50 mM의 아세테이트 완충액(pH 4-5)이 바람직하게 사용된다. 평형화된 수지는 컬럼 내로 팩(pack)되고 인산화된 올리고사카라이드를 포함한 사카라이드 혼합물이 이에 로드된다. 중성 사카라이드는 세척에 의해 제고되고 이후 컬럼에 흡착된 인산화된 올리고사카라이드는 알칼리성 용액 또는 염 용액으로 용출된다.
용출액의 이온 강도를 증가시킴으로서 인산화된 올리고사카라이드가 용출되는 경우 사용되는 염 종류에 특별한 한정은 없다. 염의 바람직한 예는 염화나트륨, 중탄산암모늄, 염화칼륨, 황산나트륨 및 황산암모늄을 포함한다.
용출액의 pH를 알칼리성으로 변화시킴으로서 인산화된 올리고사카라이드가 용출되는 경우 사용되는 알칼리성 시약의 종류에 특별한 한정은 없다. 예를 들어 암모니아, 탄산나트륨 또는 수산화나트륨이 사용된다. 그러나 강한 알칼리성 조건 하에서 인산 그룹은 사카라이드부터 유리되거나 또는 사카라이드의 환원 말단이 산화된다. 따라서 인산화된 올리고사카라이드는 바람직하게는 약산성에서 약알칼리성의 범위의 pH, 더욱 바람직하게는 3∼8의 범위의 pH 내에서 용출된다.
상기의 경우 용출액의 염 농도 또는 pH를 점진적으로 또는 단계적 방식으로 증가시켜 인산화된 사카라이드를 용출시킴으로서 인산화된 사카라이드는 하나의 인산화된 사카라이드 분자에 결합된 인산 그룹의 수에 따라 다르게 프랙션화될 수 있다.
또한 인산화된 올리고사카라이드를 포함한 사카라이드 혼합물로부터 인산화된 올리고사카라이드를 정제하기 위해 활성화된 목탄이 음이온 수지 대신 사용될 수 있다. 사용되는 활성화된 목탄의 종류에 특별한 한정은 없으나 컬럼 내로 팩되는 것이 가능한 과립성 활성화 목탄이 바람직하게 사용된다. 활성화된 목탄은 글루코스를 배제한 중성 사카라이드를 흡착할 수 있는 능력이 수득되도록 완충액, 산성 용액, 알칼리성 용액, 염 용액 및 증류수를 이용하여 제조된다. 예를 들어 컬럼 내로 팩되고 증류수로 세척된 균일한 그레인(grain) 크기를 지닌 가스 제거된 불활성화 목탄이 바람직하게 사용된다. 인산화된 올리고사카라이드는 표몬을 컬럼에 적용하고 중성 사카라이드가 컬럼 내로 흡착되게 함으로서 통과된 프랙션으로서 수득될 수 있다.
대안으로, 인산화된 올리고사카라이드를 포함한 사카라이드 혼합물로부터 인산화된 올리고사카라이드를 정제하기 위해 인산화된 올리고사카라이드는 1∼3개의 탄소 원자를 지닌 알코올의 첨가에 의해 침전된다. 간단히, 알코올은 단지 인산화된 올리고사카라이드만 침전되도록 표본 용액에 첨가된다. 표본 용액이 10% 이상의 사카라이드 농도를 지니면 3 체적부(parts by volume) 이상의 알코올이 표본 용액의 1 체적부에 첨가된다.
인산화된 올리고사카라이드는 알코올에 더하여 금속염, 바람직하게는 칼슘염 또는 철염의 존재시 인산화된 사카라이드 금속염을 형성하고 쉽게 침전된다. 이러한 이유로 알코올 단독으로 사용하는 경우와 비교하여 금속염의 존재시 인산화된 올리고사카라이드가 적은 양의 알코올을 이용하여 더욱 용이하게 회수된다. 바람직하게는 인산화된 사카라이드는 알칼리성 조건 하에서 침전된다. 사용되는 염의 종류에 특별한 한정은 없다. 예를 들어 염화칼슘, 염화마그네슘 또는 염화제1철이 그들의 만족스러운 용해성 때문에 바람직하게 사용될 수 있다. 알코올의 첨가에 의해 생성된 침전물의 수집은 데칸테이션(decantation), 여과 및 원심분리와 같은 일반적으로 사용되는 방법에 의해 수행된다.
인산화된 올리고사카라이드는 금속염의 첨가에 의해 침전된 인산화된 올리고사카라이드 금속염으로부터 금속염을 제거함으로서 생성된다. 금속염의 제거(탈염)는 일반적으로 사용되는 방법에 의해 수행될 수 있다. 탈염은 예를 들어 탁상용 탈염 마이크로아실라이저(microacilyzer) G3(Asahi Chemical Industry Co., Ltd. 제조)를 이용하여 용이하게 수행될 수 있다.
결과적인 인산화된 사카라이드 용액, 인산화된 사카라이드 또는 인산화된 사카라이드 유도체가 열기 건조, 유체화된-베드 건조 및 진공 건조와 같은 통상적으로 사용하는 건조 방법을 이용하여 농축되거나 분말화된다. 필요한 경우 알코을 제거함으로서 식이 또는 구강 적용용으로 사용될 수 있는 인산화된 사카라이드가 수득될 수 있다.
감자 전분에서 인산 그룹은 전분의 성분으로서 글루코스의 3-위치 또는 6-위치에 에스테르 결합에 의해 상당히 자주 결합된다. 따라서 다양한 아밀라제를 이용하여 감자 전분으로부터 제조된 인산화된 올리고사카라이드는 인산 그룹이 주로 글루코스의 3-위치 또는 6-위치에 결합된 올리고사카라이드이다. 예를 들어 글루코아밀라제를 감자 전분에 작용하게 함으로서 수득된 인산화된 올리고사카라이드 내의 글루코스의 6-위치에 인산 그룹이 결합되면 전분은 그의 6-위치에서 인산 그룹을 지닌 글루코스의 바로 전(비-환원 발단 사이드)에서 분열될 수 있다. 따라 서 인산화된 올리고사카라이드는 비환원 말단에서 인산 그룹과의 6-위치 본드를 지닌 글루코스를 지닌 올리고사카라이드이거나 또는 비환원 말단으로부터 적어도 두 번째의 글루코스가 인산 그룹과의 6-위치 본드를 지닌 구조를 지닌다. 인산 그룹이 인산화된 올리고사카라이드 내의 글루코스의 3-위치에 결합되면 비환원 말단으로부터의 두 번째 글루코스는 인산 그룹에 결합된 3-위치를 지닌다. 다양한 아밀라제를 이용하여 감자 전분을 가수분해함으로서 수득된 인산화된 올리고사카라이드의 대표적인 예가 도 26에 나타나 있다. 물론 상기-기술된 구조를 지닌 인산화된 올리고사카라이드는 다양한 아밀라제에 의해 감자 전분을 가수분해함으로서 생성된다는 것에 한정적이지 않다. 유사한 구조를 지닌 인산화된 올리고사카라이드는 유사한 항-충치 기능을 지닌다.
여기서 사용된 "인산화된 올리고사카라이드의 당 알코올"이라는 용어는 인산화된 올리고사카라이드의 환원 말단을 환원시킴으로서 수득된 화합물을 나타낸다. 상기-기술된 인산화된 올리고사카라이드의 당 알코올은 인산화된 올리고사카라이드의 환원 말단에 수소를 첨가함으로서 생성된다. 수소 첨가는 당업자에게 알려진 어떠한 방법에 의해서도 수행된다. 예를 들어 올리고사카라이드는 pH 8의 1N 수산화나트륨 수용액의 약알칼리성 수용액을 제조하고 3%의 수산화붕소나트륨 30ml를 첨가하고 1시간 동안 40℃에서 혼합물을 정치시킴으로서 환원될 수 있다. 당 알코올은 당업자에게 알려진 니켈 촉매를 이용한 일반적인 방법에 의해 산업적으로 생성된다.
상기-기술된 인산화된 올리고사카라이드 또는 그의 당 알코올은 금속염과 같은 염의 형태이다. 이러한 금속염 형성에 사용되는 금속의 예는 알칼리성 금속, 알칼리성 지구금속, 아연, 철, 크롬 및 납을 포함한다. 예를 들어 칼륨, 나트륨, 칼슘 및 마그네슘이 포함된다. 본 발명의 식이 조성물에 함유된 인산화된 올리고사카라이드의 금속염으로서 칼슘염과 나트륨염이 바람직하다. 본 발명의 구강 조성물에 함유된 인산화된 올리고사카라이드의 금속염으로서 칼슘염, 나트륨염 및 아연염이 바람직하다. 아연염은 음식이나 음료에 사용되지 않으나 아연염이 구취를 예방하고 치주 질환을 치료하는 효과를 지니는 것으로 알려져 있다. 따라서 아연염은 구강 조성물에 함유된 금속염으로서 바람직하다. 또한 인산화된 올리고사카라이드는 암모늄염 또는 제4기 아민염의 형태이다.
이러한 금속염은 하기와 같이 생성될 수 있다. 인산화된 올리고사카라이드 및 금속염의 화합물인 인산화된 올리고사카라이드 염은 상기 기술된 바와 같이 알코올 침전에 의해 침전될 수 있다. 필요한 경우 회수된 침전은 물 또는 적당한 용액에 재용해되고 알코올이 첨가된다. 이러한 작용이 반복된다. 이러한 작용으로 중성 당 및 과도한 염과 같은 불순물이 제고될 수 있다. 한외여과막(ultrafiltration film)이 염과 같은 불순물을 제거하는데 사용된다.
상기-기술된 인산화된 올리고사카라이드는 하기의 성질을 지니는 것으로 알 려져 있다 : (1) 충치 병원성 박테리아(즉, 뮤탄스 스트렙토코시(mutans streptococci) 및 소브리너스 스트렙토코시(sobrinus streptococci) 의해 사용되지 않음 ; (2) 농도-의존적 방식으로 이들 박테리아에 의해 슈크로스 사용에 의한 pH의 감소를 억제함 ; (3) 이들 억제는 인산화된 올리고사카라이드의 완충 능력에 달려 있음(일본 특허 공개공보 제8-104696호 참조). 본 발명에 따라 염-형태 인산화된 올리고사카라이드 및 그의 당 알코올이 매우 낮은 농도에서 치아의 재광화를 증진시키는 효과를 지니는 것으로 더욱 알려졌다. 이러한 인산화된 올리고사카라이드의 성질을 이용함으로서 항-충치 기능을 지닌 식이 조성물 및 구강 조성물이 수득될 수 있다. 특히, 재광화 효과가 낮은 농도에서 충분히 수득된다는 사실은 음식 첨가에 매우 바람직하다.
본 발명의 식이 조성물 및 구강 조성물은 완충제가 구강 내에서 항-충치 기능을 효과적으로 나타내는 양의 완충제를 포함한다. 예를 들어 인산화된 올리고사카라이드 나트륨염의 경우 양은 구강 내에서 염 농도가 0.01∼20%, 바람직하게는 0.03∼1%가 되는 양이다. 예를 들어 인산화된 올리고사카라이드 칼슘염의 경우 양은 구강내 염 농도가 0.01∼20%, 바람직하게는 0.03∼1%가 되는 양이다. 예를 들어 인산화된 올리고사카라이드 아연염의 경우 양은 구강 내 염 농도가 0.01∼20%, 바람직하게는 0.03∼1%가 되는 양이다. 모든 인산화된 올리고사카라이드 나트륨염, 인산화된 올리고사카라이드 칼슘염, 인산화된 올리고사카라이드 아연염에 있어서 가장 바람직하게는 구강 내 그들의 농도는 구강 내 무기 칼슘 및 인 농도가 약 1.5 mM 및 0.9 mM인 약 0.2%이다.
이들 첨가물의 양은 본 발명의 식이 조성물 및 구강 조성물의 구강 내 유지 시간을 고려함으로서 결정된다. 저작 작용을 필요로 하는 식이 조성물의 경우 An이 제공될 것이다. 예를 들어 약 20%의 인산화된 올리고사카라이드를 함유한 츄임 검의 경우 인산화된 올리고사카라이드는 식이 조성물로부터 용출되어 상대적으로 높은 농도(약 1∼5%)의 인산화된 올리고사카라이드가 저작 후 약 10분간 존재할 수 있다. 약 20∼30분 후 약 0.25 이하의 인산화된 올리고사카라이드만이 구강 내에 존재한다. 따라서 구강 내의 인산화된 올리고사카라이드의 농도는 음식물 내의 농도의 4배 이하로 희석된다. 따라서 이러한 음식의 경우 완충제는 구강 내 의도된 농도의 4배 이하인 농도(즉, 1∼4배)로 음식에 첨가된다. 반대로 저작 작용을 필요로 하지 않는 경우(즉, 음용) 구강 내 유지 시간이 1분 이내이다. 이러한 조성물은 구강 내에서 실질적으로 희석되지 않는다. 따라서 인산화된 올리고사카라이드는 구강 내에서 의도된 농도와 실질적으로 동일한 농도(즉, 0.1∼0.5%)로 조성물에 통합된다. 본 발명의 식이 조성물 및 구강 조성물은 상기-기술된 완충제 단독 또는 구강 내에서 약제의 상기-기술된 양이 유지될 수 있도록 조합되어 함유할 수 있다.
또다른 관점에서 본 발명의 식이 조성물 및 구강 조성물은 상기-기술된 완충제 이외에 인-칼슘 보정제, 인 조제물 및 칼슘 조제물 또는 대안적으로 그들의 하 나 이상의 조합을 더욱 포함한다. 특히, 조성물이 칼슘염을 포함하는 경우 여분의 칼슘이 칼슘염으로부터 해리되어 조성물 내 인에 대한 칼슘의 비율이 변화된다. 또한 첨가된 완충제는 치아로부터의 칼슘 용출에 영향을 미친다. 이러한 경우 완충제에 의해 변화된 구강 내 타액의 칼슘 농도에 대한 인의 비율이 보정되면 치아의 재광화가 더욱 효과적이 될 수 있다. 정상의 사람의 경우 타액의 칼슘에 대한 인의 몰 비율(이후 "Ca/P"로 표기)은 일반적으로 0.25∼0.67(P/Ca = 1.45∼3.9)이고 따라서 인은 칼슘 보다 더 많이 존재한다(즉, 약 2 몰의 칼슘에 대해 3 몰의 인 내지 1 몰의 칼슘에 대해 3.9 몰의 인). 치아의 성분인 수산화인회석( Ca10(PO4)6(OH)2로 표기)는 1.67의 Ca/P(P/Ca = 0.6)를 지닌다. 치아 에나멜을 구성하는 조성물은 1.0∼1.67의 Ca/P(P/Ca = 0.6∼1.0)를 지닌다. 따라서 Ca/P를 1.0∼1.67에 가깝도록 하기 위해 완충제에 인 및/또는 칼슘을 공급함으로서 수산화인회석으로의 이들 물질의 결정화를 증가시키는 것이 가능하다.
Ca/P를 보정할 수 있는 약제는 여기서 "인-칼슘 보정제"로 명명된다. 이러한 인-칼슘 보정제의 예는 1염기성 인산칼슘{칼슘 비스(bis)(디하이드로겐포스페이트) 모노하이드레이트}, 2염기성 인산칼슘(칼슘 하이드로겐포스페이트 디하이드레이트), 3염기성 인산칼슘, 피로인산칼슘, 수산화인회석 분말, 비결정성 인산칼슘, 소뼈 칼슘, 달걀껍질 칼슘, 산호 칼슘, 진주 칼슘, 어류 및 패류 칼슘 및 α-3염기성 인산칼슘을 포함한다. 여기서 Ca/P를 보정한다는 것은 Ca/P를 실질적으로 1.0 ∼1.67(P/Ca = 0.6∼1.0)에 근접할 수 있는 범위 내에 유지시키는 것을 의미한다. 이러한 경우 Ca/P는 정확히 1.0∼1.67(P/Ca = 0.6∼1.0)일 필요는 없다. Ca/P가 약 1.0∼1.67(P/Ca = 0.6∼1.0)에 실질적으로 근접할 수 있는 한 Ca/P는 1.0∼1.67(P/Ca = 0.6∼1.0)의 범위 밖으로 떨어진다. 보정에 필요한 보정제의 양은 완충제 및 보정제의 종류에 따라 달라지나 이러한 양의 범위는 필요한 경우 간단한 실험을 수행하여 당업자에 의해 결정될 수 있다. 인-칼슘 보정제의 경우 그의 적당한 양은 첨가된 완충제의 1 몰부(part by mole)에 대해 1/20∼20 몰부, 바람직하게는 1/2∼2 몰부이다.
인이 타액 내에서 과잉이면 칼슘 조제물이 Ca/P를 1.0∼1.67(P/Ca = 0.6∼1.0)로 조정하는데 사용된다. 사람의 타액 내에서 인 농도는 3∼3.5 mM이고 칼슘 농도는 0.9∼2 mM이다. 따라서 바람직하게는 칼슘 농도를 증가시키기 위해 칼슘이 약 4∼5 mM로 첨가된다. 따라서 칼슘염(완충제)은 인-칼슘 보정제로서 사용될 수 있다. 3%의 칼슘을 함유한 인산화된 올리고사카라이드의 경우 약 0.7%의 인산화된 올리고사카라이드 칼슘의 첨가가 적당하다. 칼슘 조제물의 바람직한 예는 탄산칼슘, 염화칼슘, 유산칼슘, 글루콘산칼슘, 유장 칼슘, 유기산 칼슘, 콜로이드성 탄산칼슘, 카세인 포스포펩타이드 칼슘 및 불화칼슘을 포함하나 이에 한정적인 것은 아니다.
본 발명의 식이 조성물 및 구강 조성물은 인 조제물을 더욱 포함한다. 여 기서 사용된 "인 조제물"이라는 용어는 인산 화합물을 나타낸다. 인산 화합물의 예는 인산나트륨, 수소인산나트륨, 인산칼륨 및 수소인산칼륨을 포함한다.
상기-기술된 인-칼슘 보정제, 인 조제물 또는 칼슘 조제물은 Ca/P가 1.0∼1.67(P/Ca = 0.6∼1.0) 및 바람직하게는 1.67(P/Ca = 0.6)에 가깝게 되도록 단독으로 또는 본 발명의 식이 조성물 및 구강 조성물에 조합하여 첨가된다.
여기서 사용된 "식이 조성물"이라는 용어는 인간 음식, 동물 또는 어류 사육 사료 및 애완동물 사료의 총칭적인 명칭이다. 특히, 본 발명의 식이 조성물은 액체 및 커피, 차, 녹차, 오룡차, 쥬스, 가공된 우유, 와 같은 분말화된 음료 및 스포츠 음료 ; 식빵, 피자 및 파이와 같은 구워진 음식 ; 쿠키, 크래커, 비스킷 및 케이크와 같은 구워진 과자류 ; 스파게티 및 마카로니와 같은 파스타 ; 밀국수, 메밀국수 및 중국 국수와 같은 국수 ; 사탕, 연질 사탕, 츄잉 검 및 쵸콜렛과 같은 단것(sweet) ; 쌀 크래커 및 감자 칩과 같은 스낵 ; 아이스크림 및 샤벳과 같은 빙과류 ; 크림, 치즈, 분말 우유, 농축 우유, 우유 음료와 같은 유제품 ; 젤리, 푸딩, 우스 및 요거트와 같은 서양 굽지 않은 과자류 ; 스위트 번(sweet bun), 우이로우(uirou)(분말에 사카라이드를 첨가하고 찐 4각-떡), 떡 및 오하기(ohagi)(콩 잼과 같은 것을 덮인 쌀 덤플링)와 같은 일본 과자류 ; 간장, 디핑 소스, 국수 소스, 우스터소스, 육즙 원액, 스튜 원액, 스프 원액, 혼합 조미료, 카레 분말, 마요네즈 및 케찹과 같은 조미료 ; 카레, 스튜, 스프 및 죽과 같은 통조림 또는 레토르 트 음식 ; 햄, 햄버거, 미트볼, 크로켓, 중국식 덤플링, 튀긴쌀 및 쌀 볼과 같은 냉동 및 냉장 음식 ; 티쿠와(tikuwa)(관모양 어류 반죽) 및 카마보코(kamaboko)(어류 반죽 케이크)와 같은 가공된 해산물 ; 및 피크닉 점심 및 초밥용 쌀과 같은 쌀 생성물을 포함한다. 더욱이 본 발명의 식이 조성물은 칼슘이 용이하게 흡수되게 하는 능력 때문에 유아용 유동식, 위닝 푸드(weaning food), 이유식, 애완동물용 사료, 동물 사료, 스포츠 음료, 영양 보조 식품 및 건강 식품을 포함한다.
바람직한 실시태양에서 음식 또는 음료는 검과 같은 섭취시 많이 저작되는 것이다. 많이 저작되는 음식 및 음료의 경우 완충제는 구강 내 용이하게 확산되어 항-충치의 만족스러운 효과를 초래한다. 많이 저작되는 음식 및 음료의 경우 완충제는 음식물에 바람직하게는 0.1∼50 중량%, 더욱 바람직하게는 0.5∼20 중량%, 훨씬 더 바람직하게는 0.5∼10 중량%, 특히 바람직하게는 0.5∼5 중량%의 비율로 첨가될 수 있다. 특히, 예를 들어 이러한 음식은 0.1∼50 중량%의 완충제를 함유한 검 또는 0.1∼50 중량%의 완충제를 포함한 정제 과자류, 사탕, 점착성 사탕 등이다.
또다른 바람직한 실시태양에서 음식 및 음료는 음료수(즉, 쥬스 또는 신선한 물)와 같이 섭취시 저작이 필요하지 않은 것들이다. 섭취시 저작이 필요하지 않은 음식 및 음료의 경우 완충제는 음식물에 바람직하게는 0.1∼70 중량%, 더욱 바람직하게는 0.1∼50 중량%, 훨씬 더 바람직하게는 0.2∼5 중량%의 비율로 혼합될 수 있다. 특히, 예를 들어 음식물은 1∼30 중량%의 완충제를 포함한 쥬스이다. 바람직하게는 음식물은 0.1∼10 중량%의 완충제를 포함한 야채 쥬스, 천연 쥬스, 우유 음료수, 우유, 두유, 스포츠 음료수, 니어 워터 음료수, 영양 음료수, 커피 음료수 또는 코코아이다.
또다른 바람직한 실시태양에서 음식 및 음료는 섭취시 일반적인 기본 식품만큼 저작되는 것들이다. 음식 및 음료는 바람직하게는 기본 음식 및 음료이다. 예를 들어 이러한 음식물은 쌀이다. 기본 식품의 경우 음식물이 많은 양으로 섭취되기 때문에 첨가된 완충제의 작은 농도도 유의적이고 장기적인 충치 예방 효과를 유리하게 제공한다. 기본 식품만큼 저작되는 음식물의 경우 완충제는 음식물에 바람직하게는 0.01∼20 중량%, 더욱 바람직하게는 0.02∼10 중량%, 훨씬 더 바람직하게는 0.03∼5 중량%, 특히 바람직하게는 0.05∼3 중량%의 비율로 혼합될 수 있다. 특히, 예를 들어 음식물은 0.02∼10 중량%의 완충제를 포함한 쌀, 0.01∼20 중량%의 완충제를 포함한 식빵이다.
물론 본 발명은 상기-기술된 바람직한 실시태양 이외의 음식 및 음료에 적용된다. 특히, 본 발명은 예를 들어 0.1∼20 중량%의 완충제를 포함한 중국 국수, 0.1∼20 중량%의 완충제를 포함한 밀국수, 0.1∼20 중량%의 완충제를 포함한 떡, 0.1∼20 중량%의 완충제를 포함한 프레츨(pretzel), 0.1∼20 중량%의 완충제를 포함한 한천, 0.1∼20 중량%의 완충제를 포함한 젤리, 0.1∼20 중량%의 완충제를 포 함한 요거트, 0.1∼20 중량%의 완충제를 포함한 쿠키, 0.1∼20 중량%의 완충제를 포함한 정제 과자류, 0.1∼20 중량%의 완충제를 포함한 토푸(tofu), 0.1∼20 중량%의 완충제를 포함한 쵸콜렛, 0.1∼20 중량%의 완충제를 포함한 쌀 과자류, 0.1∼20 중량%의 완충제를 포함한 중국 덤플링, 0.1∼20 중량%의 완충제를 포함한 햄에 적용된다.
여기서 사용된 "구강 조성물"이라는 용어는 음식 및 음료 이외에 구강 내에 도입될 수 있고, 치아에 접촉할 수 있는 조성물을 나타낸다. 구강 조성물은 약품 또는 준-약품 또는 다른 조성물이다. 예를 들어, "구강 조성물"은 화장품(더욱 특별하게는 치아 부식을 예방하고, 치아를 미백하고, 치아 플라크를 제거하고, 구강을 세척하고, 구취를 예방하고, 타르를 제거하고, 치아 결석을 예방하는 등의 효과를 지닌 치약(Japanese Pharmaceutical Affairs Law(2001년 개정됨)에 따른 화장품))을 포함한다. 특히, 본 발명의 구강 조성물은 예를 들어 치약, 마우스워시(mouthwash), 트로쉬(troche), 가글(gargle), 검 마사지 크림, 로잔지(lozenge), 인공 타액 등을 포함한다.
하나의 바람직한 실시태양에서 본 발명의 구강 조성물은 바람직하게는 0.01∼20 중량%, 더욱 바람직하게는 0.02∼10 중량%, 훨씬 더 바람직하게는 0.03∼5 중량%, 특히 바람직하게는 0.05∼3 중량%의 완충제를 포함한 치약이다.
하나의 바람직한 실시태양에서 본 발명의 구강 조성물은 바람직하게는 0.01∼20 중량%, 더욱 바람직하게는 0.02∼10 중량%, 훨씬 더 바람직하게는 0.03∼5 중량%, 특히 바람직하게는 0.05∼3 중량%의 완충제를 포함한 마우스워시이다.
하나의 바람직한 실시태양에서 본 발명의 구강 조성물은 바람직하게는 0.01∼20 중량%, 더욱 바람직하게는 0.02∼10 중량%, 훨씬 더 바람직하게는 0.03∼5 중량%, 특히 바람직하게는 0.05∼3 중량%의 완충제를 포함한 구강 연고이다.
바람직하게는 본 발명의 구강 조성물은 0.1∼20 중량%의 완충제를 포함한 치약, 마우스워시, 트로쉬, 가글, 인공 타액이다.
인공 타액은 구강건조증을 개선시키는데 사용되었다. 인공 타액은 사람의 타액과 같이 광물과 같은 실질적으로 동일한 성분을 포함한다. 상기-기술된 완충제를 포함한 인공 타액은 혀와 후두 점막을 적셔서 혀와 후두 점막이 부드럽게 이동할 수 있게 할 뿐만 아니라 충치를 예방하고 치료할 수 있다.
또한 본 발명의 식이 조성물 및 구강 조성물은 선택적으로 불소를 포함한다. 본 발명의 식이 조성물 및 구강 조성물은 1000 ppm 이하, 바람직하게는 0.1∼500 ppm, 더욱 바람직하게는 0.1∼300 ppm의 범위로 함유한다. 100 ppm 이상의 불소의 유효성을 증가시키기 위해 완충제는 약품, 준-약품 및 화장품에 적당하다. 본 발명의 식이 조성물 및 구강 조성물은 불소를 더욱 포함함으로서 치아에 높은 수준의 재광화 효과를 지닐 수 있다. 여기서 "불소"는 불소 이온을 포함한다. "불소 함유 물질"이라는 용어는 불소 이온, 바람직하게는 불소 이온 함유 화합물(즉, 모노플루오로인산나트륨, 불화나트륨, 불화칼륨, 불화암모늄, 불화아민염 및 불화제1주석)을 제공하는 어떤 물질도 나타낸다. 모노플루오로인산나트륨 및 불화나트륨의 사용이 바람직하다.
불소만 또는 불소 함유 물질의 사용은 낮은 수준의 치아의 재광화를 초래한다. 특히, 불소 및 불소 함유 물질은 100 pm 이상의 높은 농도에서 불용성이 되기 쉬워 유효성의 유의적인 감소를 초래한다. 그러나 본 발명에서 불소 또는 불소 함유 물질과 함께 완충제의 사용은 유효성의 증가를 유도한다. 음식에 있어서 많은 양의 불소(200∼300 ppm)를 함유한 차가 바람직하다. 불소 또는 불소 함유 물질은 치아의 결정으로 통합되어 산에 저항성인 강한 결정을 생성한다. 따라서 본 발명의 식이 조성물 및 구강 조성물은 치아의 재광화 뿐만 아니라 치아의 강한 결정 생성에 관련되어 충치의 발달을 감소시킨다.
본 발명의 식이 조성물 및 구강 조성물은 항-충치 기능을 지닌 것으로 당업자에 알려진 다른 물질을 더욱 포함한다. 이러한 물질의 예는 다양한 올리고사카라이드(판노스(62-글루코실-말토스), 이소말토올리고사카라이드, 팔라티노스(6-O-α-D-글로코피라노실-D-프럭토푸라노스), 트레할로스(O-α-글루코피라노실(1-1)-α-D-글루코시라노시드), 말토올리고사카라이드, 락토슈크로스TM(4G-β-D-갈락토실슈크로스), 프럭토올리고사카라이드, 결합당, 자일로실프럭토시드, 시클로덱스트린 등) ; 당 알코올(자일리톨, 에리쓰리톨, 팔라티니트, 솔비톨, 말티톨, 만니톨 등) ; 차 추출물(불소, 폴리페놀, 카테킨 등) ; 허브(즉, 민트, 페퍼민트 오일, 카모마일, 샐비어, 생강, 로즈마리 등, Shibuya et al., FRAGRANCE JOURNAL SPECIAL ISSUE, 12, P150-155, 1992 참조) ; 효소(즉, 덱스트라나제, 뮤타제 등) ; 및 백신(즉, 뮤탄스 스트렙토코커스에 대해 분비된 면역글로블린 A)을 포함한다. 당 알코올이 바람직하다. 자일리톨이 더욱 바람직하다. 본 발명의 식이 조성물 및 구강 조성물은 상기-기술된 물질을 포함함으로서 충치를 예방하는 효과를 증가시킬 수 있다.
완충네의 재광화 효과는 Inaba. D et al., Eur. J. Sci. 105:74-80, 1997; Inaba. D et al., J. Dent. Health. 47:67-74, 1997 ; 및 Iijima. Y et al., Dental Caries Research. 33:206-213, 1999에 기술된 소 치아 섹션을 이용한 재광화 테스트 시스템과 같은 알려진 방법에 의해 조사될 수 있다.
본 발명의 식이 조성물 및 구강 조성물에 포함된 완충제의 재광화 효과를 조사하기 위해 본 발명자들은 상기-기술된 재광화 테스트 시스템과 비교하여 더 간단 한 테스트 시스템을 개발하였다. 재광화가 용이하게 발생하는 조건은 예를 들어 하기와 같다 : 치아 표면(수산화인회석)에 접촉하는 칼슘과 인의 빠른 공급 및 이들의 치아 성분(수산화인회석) 내로의 통합 ; 치아 표면을 포함한 시스템 내의 더 높은 칼슘과 인 농도의 유지 ; 및 치아 표면 이외의 곳에서 어떤 칼슘과 인도 침전되거나 손실되지 않음. 용이한 재광화를 위한 이들 조건은 하기와 같이 단순화된다 : 수산화인회석을 포함한 시스템 내에서 칼슘과 인이 결정화를 위해 공급되고 용해성 칼슘이 감소된다 ; 수산화인회석을 포함하지 않는 시스템 내에서 인과 칼슘은 침전되지 않고 그의 높은 용해도가 유지된다. 따라서 2가지 시스템 내의 칼슘의 용해도의 규모는 재광화 효과를 조사하기 위해 비교된다. 이들 간단한 테스트 시스템은 하기에 기술될 것이다. TMR(Transversal microradiography) 방법이 정량의 방식으로 치아 광물 농도의 분포를 측정하기 위해 탈광화 및 재광화의 표준 방법으로 많은 연구자들에게 사용되었다. 이러한 방법에서 하기 강제성이 있다 : 조사에 장시간이 요구됨 ; 높은-수준의 실험 기술이 요구됨 등. 따라서 치아 광물 농도의 변화를 빠르게 감지할 수 있는 간단한 평가 시스템의 요구가 있다. 치아의 에나멜 내에서의 초기 충치 부식의 재광화가 하기 2가지의 과정을 통해 발달되는 것으로 여겨진다 :
(ⅰ) 에나멜의 성분인 칼슘 (Ca) 이온 및 인(P) 이온이 탈광화 부분에 공급된다 ; 및
(ⅱ) 공급된 Ca 이온 및 P 이온이 탈광화된 부분 내 에나멜의 결정 성장에 사용된다.
상기-기술된 2가지 과정을 고려할 때 재광화를 증가시키는 효과를 지닌 물질이 Ca 및 P의 불용성 및 침전을 억제하나 중성 pH에서 수산화인회석의 결정 성장을 억제하지 않는 것으로 여겨진다.
이들 테스트 시스템은 소 치아를 이용한 상기-기술된 통상의 시스템과 관련이 있고 단순하고 우수한 방법을 구성한다.
본 발명의 하나의 관점에서 본 발명은 항-충치 기능을 지닌 것으로 기대되는 치아 표본 상의 재광화 효과를 조사하는 방법에 관한 것이다. 이러한 방법은 : (A) 표본의 존재시 인, 칼슘 및 치아 성분을 포함한 용액 내에 칼슘을 침전시키고 ; (B) 침전 후 용액 내의 칼슘 농도 또는 침전된 칼슘의 양을 측정하고 ; (C) 표본의 부재시 용액 내에 칼슘을 침전시키고 ; (D) 침전 후 용액 내의 칼슘 농도 또는 침전된 칼슘의 양을 측정하고 ; 및 (E) 단계 (B)와 (D)의 칼슘 농도 또는 침전된 칼슘 양을 비교하는 단계로 구성된다. 바람직한 실시태양에서 상기-기술된 용액은 수산화인회석, 완충액, KH2PO4, 및 CaCl2를 포함한다. 상기-기술된 용액 내에 포함된 "치아 성분"은 인과 칼슘을 침전시켜 재광화에 의해 수산화인회석을 생성하는 어떤 물질도 된다. 수산화인회석의 사용이 바람직하다. 대안으로, 소와 같은 포유류의 치아 및 그의 섹션 또는 단편이 사용된다. 칼슘 침전을 위한 용액이 제 조될 때 상기-기술된 인, 칼슘 및 다른 치아 성분의 첨가 순서는 한정적이지 않다. 바람직하게는 먼저 표본, 다음으로 인, 염화칼슘 용액 및 치아 성분 현탁액 또는 탈이온수 순서로 첨가되어 용액을 제조한다. 용액의 pH는 바람직하게는 KH2PO4의 첨가후 적정된다. 일반적으로 칼슘 침전은 10시간 내지 며칠 동안(바람직하게는 10시간 내지 7일, 더욱 바람직하게는 18시간 내지 42시간) 상온에서의 인큐베이션에 의해 발생한다. 용액의 칼슘 용해도는 당업자에게 알려진 어떠한 절차에 의해서도 측정될 수 있다. 용액의 칼슘 용해도는 OCPC 방법(Wako Pure Chemicals사 제조의 칼슘 C 테스트 Wako를 이용)에 의해 측정된다. 대안으로, 용액 내 침전된 칼슘의 양이 측정될 수 있다. 용액 내 침전된 칼슘의 양은 당업자에게 알려진 어떠한 절차에 의해서도 측정된다. 용액의 칼슘 용해도는 당업자에게 알려진 어떠한 절차에 의해서도 측정된다. 이러한 방법의 예는 ICP 방법(Inductive Coupled Plasma method), 원자흡광 분석 및 이온 전극 방법을포함한다.
항-충치 기능을 조사하기 위해 인공 구강 장치가 가능한한 실재하는 탈광화된 에나멜을 수득하는데 사용된다(예를 들어 Jpn. J. Oral Biol. 20:288-291, 1984). 예를 들어 이러한 장치는 전극, 전극에 부착된 에나멜 섹션 및 뮤탄스 스트렙토코커스 세포 현탁액, 배양액 및 당 용액의 드로핑(dropping)을 위한 수단으로 구성된다. 이러한 장치로 물-불용성 글루칸을 합성하는 뮤탄스 스트렙토코커스 박테리아가 전극 표면에 부착되어 인공 플라크를 형성하여 낮은 pH를 생성한다. 더욱이 인공 플라크는 에나멜 조각 상에 유사하게 형성되어 에나멜 경도의 유의적인 감소를 초래한다.
도 1은 소 치아 섹션을 이용한 재광화 테스트 시스템 내의 충치에 의한 광물 손실 수치를 나타낸 그래프이다.
도 2는 소 치아 섹션을 이용한 재광화 테스트 시스템 내의 손상 깊이를 나타낸 그래프이다.
도 3은 인산화된 올리고사카라이드 나트륨염을 이용한 실시예 4의 단순 테스트 시스템 내의 재광화 결과를 나타낸 그래프이다.
도 4는 인산화된 올리고사카라이드 칼슘염을 이용한 실시예 4의 단순 테스트 시스템 내의 재광화 결과를 나타낸 그래프이다.
도 5는 P/Ca가 0.6인 재광화시 인산화된 올리고사카라이드의 효과를 나타낸 그래프이다.
도 6a는 인산화된 올리고사카라이드 부재의 재광화시 P/Ca 농도 비율 변화의 효과를 나타낸 그래프이다. 도 6b는 인산화된 올리고사카라이드 나트륨염 존재의 재광화시 P/Ca 농도 비율 변화의 영향을 나타낸 그래프이다. 도 6c는 인산화된 올리고사카라이드 칼슘염 존재의 재광화시 P/Ca 농도 비율 변화의 영향을 나타낸 그래프이다.
도 7a는 실시예 5에서 인산화된 올리고사카라이드 칼슘염과 인산화된 올리고사카라이드 나트륨염의 재광화 효과를 나타낸 그래프이다. 도 7b는 자일리톨과 자일로스의 재광화 효과를 나타낸 그래프이다. 도 7c는 팔라티니트와 팔라티노스의 재광화 효과를 나타낸 그래프이다.
도 8은 실시예 7에서 TLC 분석 결과를 나타낸 사진이다.
도 9는 실시예 7에서 재광화시 인산화된 올리고사카라이드 및 불소의 상승작용을 나타낸 그래프이다.
도 10은 실시예 8에서 표분 용액 농도를 지닌 인산화된 올리고사카라이드의 TLC 분석을 나타낸 사진이다.
도 11은 실시예 8에서 검(gum) 함유 인산화된 올리고사카라이드를 섭취시 시 간에 따른 용출량을 나타내는 TLC 분석 결과를 나타낸 사진이다.
도 12는 실시예 12에서 다양한 물질의 재광화 효과를 나타낸 그래프이다.
도 13은 실시예 13에서 다양한 물질의 재광화 효과를 나타낸 그래프이다.
도 14는 실시예 14에서 인공 구강 장치에서의 pH 변화를 나타낸 그래프이다.
도 15는 실시예 16에서 POs Ca 함유 검 또는 POs Ca-없는 검을 씹을 때 타액의 양을 나타낸 그래프이다.
도 16은 실시예 16에서 POs Ca 함유 검 또는 POs Ca-없는 검을 씹을 때 타액의 pH를 나타낸 그래프이다.
도 17은 실시예 16에서 POs Ca 함유 검 또는 POs Ca-없는 검을 씹을 때 타액의 P 함량을 나타낸 그래프이다.
도 18은 실시예 16에서 POs Ca 함유 검 또는 POs Ca-없는 검을 씹을 때 타액의 Ca 함량을 나타낸 그래프이다.
도 19는 실시예 16에서 POs Ca 함유 검 또는 POs Ca-없는 검을 씹을 때 Ca/P 비율의 변화를 나타낸 그래프이다.
도 20A는 실시예 16에서 각각 처리된 치아의 손상 깊이를 나타낸 그래프이다. 도 20B는 실시예 16에서 각각 처리된 치아의 광물 손실 수치를 나타낸 그래프이다.
도 21은 실시예 17에서 재광화 속도를 나타낸 그래프이다.
도 22는 실시예 18에서 POs Ca 함유 사탕을 섭취시 분비된 타액의 pH를 나타낸 그래프이다.
도 23은 실시예 18에서 POs Ca 함유 사탕을 섭취시 분비된 타액의 양을 나타낸 그래프이다.
도 24는 실시예 18에서 POs Ca 함유 사탕을 섭취시 분비된 타액의 Ca 및 P 함량을 나타낸 그래프이다.
도 25는 POs Ca 함유 사탕 및 POs Ca 함유 연질 사탕(soft candy)을 이용한 재광화 테스트 결과를 나타낸 그래프이다.
도 26은 대표적인 인산화된 올리고사카라이드의 화학구조식을 나타낸 도면이다.

이후, 본 발명은 실시예를 통해 더욱 상세히 설명된다. 이들 실시예는 본 발명을 한정하지 않는다. 실시예에 사용된 재료, 시약 등은 언급되지 않는한 상업적으로 사용가능한 것이다.
(실시예 1)
실시예 1은 본 발명의 조성물에 사용된 인산화된 올리고사카라이드를 생성하는 방법을 나타낸다.
먼저, 1%의 감자 전분 용액이 젤라틴화되기 위해 6mM의 염화나트륨 및 2mM의 염화칼슘을 함유한 5ml의 용액 내에 용해되는 동안 100℃에서 빠르게 가열되었다. 이후 35 U의 α-아밀라제(Fukutamirase, Hankyu Bioindustry Ltd.사 제조)가 젤라틴화된 혼합물에 작용하게 되고 30분간 50℃에 유지되었다. 반응 용액의 적은 양이 0.2%의 사카라이드 용액을 제조하기 위해 취해졌다. 0.01M의 요오드화 요오드-칼륨 용액의 1/10 부분이 사카라이드 용액의 한 부분에 첨가되었다. 결과적인 혼합물은 요오드적정에서 음성인 것으로 확인되었다. 이후 2 U의 풀룰라나제(Hayashibara Biochemical Lab. 제조) 및 6 U의 글루코아밀라제(Toyobo Co., Ltd. 제조)가 동시에 20시간 동안 40℃에서 혼합물에 작용하게 되었다. 반응이 종결되고 원심분리되었다. 상청액은 20mM의 아세테이트 완충액(pH 4.5)으로 평형화된 음이온 교환 수지 컬럼(Chitopearl BCW 2501; Fuji Spinning Co., Ltd. 제조)으로 투입되었다. 컬럼은 중성 사카라이드를 제거하기 위해 아세테이트 완충액으로 완전하게 세척되었고 0.5M의 염화나트륨을 포함한 아세테이트 완충액으로 용출되었다. 각각의 용출된 프랙션은 증발기를 이용하여 농축되고 탈염되고 동결건조되어 인산화된 올리고사카라이드를 수득하였다.
이렇게 수득된 인산화된 올리고사카라이드는 다시 20mM의 아세테이트 완충액(pH 4.5)으로 평형화된 음이온 교환 수지 컬럼(Chitopearl BCW 2501)으로 투입되었다. 컬럼은 중성 사카라이드를 제거하기 위해 아세테이트 완충액으로 완전하게 세척되었다. 컬럼은 0.15M의 염화나트륨을 포함한 아세테이트 완충액으로 용출되고 이후 0.5M의 염화나트륨을 포함한 아세테이트 완충액으로 용출되었다. 수집된 프랙션은 탈염되고 동결건조되었다. 구조물을 측정하기 위한 상기-논의된 방법에 따른 이들 프랙션의 분석은 0.15M의 염화나트륨-용출된 프랙션(PO-1 프랙션)으로부터 수득된 인산화된 올리고사카라이드에서 하나의 인산 그룹이 α-1,4 결합으로 3∼5개의 글루코스를 지닌 글루칸에 결합되었고 ; 0.5M의 염화나트륨-용출 된 프랙션(PO-2 프랙션)으로부터 수득된 인산화된 올리고사카라이드에서 2 이상의 인산 그룹이 α-1,4 결합으로 2∼8개의 글루크로스를 지닌 글루칸에 결합되었음을 나타내었다.
인산화된 올리고사카라이드의 상기-기술된 구조적 분석은 하기와 같이 수행되었다.
먼저, 인산 그룹이 인산화된 올리고사카라이드로부터 제거되었다. 100㎕의 3% 인산화된 올리고사카라이드 용액이 10mM 염화마그네슘, 0.3mM 염화아연 및 0.05%의 아지드화나트륨을 포함한 100㎕의 60mM 탄산나트륨 완충액(pH 9.4)과 혼합되었다. 100㎕의 30 U/ml 알칼리성 인산효소(EC 3.1.3.1. ; E. coli로부터 유도 ; SIGMA 제조)가 혼합물에 첨가되어 18시간 동안 40℃에서 반응되게 되었다. 반응은 한외여과막을 이용하여 알칼리성 인산효소를 제거함으로서 종결되어 인산 그룹이 제거된 사카라이드(이후 탈인산화된 사카라이드라고 표기)를 포함한 반응 액체(이후 반응 액체 A로 표기)를 수득하였다.
10㎕의 결과적인 반응 액체 A에 10㎕의 200mM 아세테이트 완충액(pH 4.8)에 용해된 5000 U/ml의 β-아밀라제(고구마로부터 유도 ; SIGMA 제조)가 첨가되었고, 결과적인 혼합물은 2시간 동안 37℃에 유지되었다(결과적인 액체는 반응 액체 B로 표기). 유사하게는 10㎕의 60mM 아세테이트 완충액(pH 4.5)에 용해된 300 U/ml의 글루코아밀라제(Rhizopus로부터 유도됨 ; Toyobo Co., Ltd. 제조)가 10㎕의 반응 액체 A에 첨가되었고, 결과적인 혼합물은 18시간 동안 35℃에서 유지되었다(이후 결과적인 액체는 반응 액체 C로 표기).
반응 액체 A 내지 C는 그의 생성물을 확인하기 위해 분석되었다. 이들 반응 액체의 생성물은 음이온 교환 수지 컬럼, CarboPac PA-100(φ4 ×250mm, Dionex Corp. 제조)을 이용한 고성능 액체 크로마토그래피 또는 실리카겔을 이용한 박층크로마토그래피에 의해 이들 액체를 분석하고, 다양한 정도의 중합을 지닌 표준 말토올리고사카라이드의 분석된 결과와 비교함으로서 확인되었다. 고성능 액체 크로마토그래피를 이용한 탈인산화된 사카라이드의 용출은 기본 용액으로 100mM의 수산화나트륨을 이용하여 1M의 아세트산나트륨의 농도를 증가시킴으로서 수행되었다. 탈인산화된 사카라이드의 검출은 펄스드 전류적정 검출기(Dionex Corp. 제조)에 의해 수행되었다. 박층크로마토그래피에 의한 탈인산화된 사카라이드의 분석은 아세토니트릴/물(80/20)로 탈인산화된 사카라이드를 다수-발달시키고, 황산/물(=1/1)의 용액을 스프레이하고, 3분간 130℃에서 유지시킴으로서 수행될 수 있다.
반응 액체 A가 분석되어 인산화된 올리고사카라이드의 체인 길이가 확인되었다. 반응 액체 B가 분석될 때 말토스만 또는 말토스 및 말토트리오스(및 적은양의 글루코스)가 검출되었다. 따라서 탈인산화된 사카라이드는 글루코스가 α-1,4 결합에 의해 서로 결합된 글루칸임이 확인되었다. 또한 반응 액체 C가 분석될 때 단지 글루코스만이 검출되었다. 따라서 탈인산화된 사카라이드는 α-결합된 글루코스로 이루어짐이 확인되었다.
사카라이드의 평균 체인 길이(이후 하나의 유니트로서 글루코스를 이용한 DP로 표현)가 다양한 정도의 중합을 지닌 탈인산화된 사카라이드의 사카라이드 함량으로부터 수득되었다. 전체 인산화된 사카라이드의 총 사카라이드 함량은 페놀-황산 방법에 의해 측정되었다. 결합된 인산 그룹의 수는 탈인산화된 사카라이드를 습윤 소각시킴으로서 수득된 무기 인산으로 측정되었다(Starch-related saccharide experimetal method, Biochemistry experimental method 19, M. Nakamura et al., p. 31, 1986, JSSP Tokyo). 분자 당 결합된 인산 그룹의 수는 하기의 식에 따라 습윤 소각 후 측정된 무기 인산의 양 및 DP를 이용하여 산정되었다.
분자 당 결합된 인산 그룹의 평균수 =
Figure 112003031937639-pct00001

(실시예 2)
분자 당 하나의 인산 그룹을 지닌 인산화된 올리고사카라이드를 포함한 PO-1 프랙션 및 2개의 인산 그룹을 지닌 인산화된 올리고사카라이드를 포함한 PO-2의 각 10g이 100ml의 증류수에 용해되었다. 이들 수용액은 전기투석기(Micro acilyzer, G3, AC210-400 멤브레인 ; Asahi Kasei Co., Ltd. 제조)를 이용하여 탈염되고, 강한 양이온 교환 수지(Dowex 50w 20-50 MESH, H-Form ; Nisshin Kasei 제조)를 이용하여 이온 교환되어 pH 2.7의 사카라이드 용액을 수득하였다. 결과적인 용액은 1N의 수산화나트륨 용액 또는 수산화칼슘 용액으로 중성화되었고 동결건조되어 인산화된 올리고사카라이드 나트륨 또는 칼슘 염을 제조하였다.
하기 실시예에 사용된 인산화된 사카라이드(나트륨 염 또는 칼슘 염의 형태)는 80% 이상의 상기-기술된 PO-1 프랙션 인산화된 사카라이드 및 나머지 PO-2 프랙션 인산화된 사카라이드를 포함한 인산화된 사카라이드 혼합물이었다.
(실시예 3)
실시예 3에서 소 치아 조각을 이용한 시스템은 초기 충치의 재광화상의 인산화된 올리고사카라이드의 효과를 명확히 하는데 사용되었다.
이러한 실험은 Inaba. D et al., Eur. J. Sci. 105:74-80, 1997; Inaba. D et al., J. Dent. Helth. 47:67-74, 1997; 및 Iijima. Y et al., Caries Research. 33:206-213, 1999를 기본적으로 따라 수행되었다.
상기 실험에 사용된 치아 조각은 하기와 같이 제조되었다 : 면당 3mm의 입방 소 치아 조각이 에나멜 표면이 위로 오게 놓였다. 조각은 에나멜 표면을 제외하고 수지 혼합물로 뒤덮였다. 에나멜은 습윤 연마 사포로 처리되었다. 탈광화는 하기와 같이 수행되었다 : 치아 조각은 6%의 카르복시에틸셀룰로스 겔을 함유한 1%의 유산염 겔(pH 5.0)에 3주간 37℃에서 담겼다. 재광화는 하기와 같이 수행되었다 : 탈광화된 치아 조각은 1.5mM CaCl2 및 0.9mM KH2PO4를 함유한 20mM의 2-[4-(2-하이드록시에틸)]-1-피퍼리디닐에탄 설포네이트(HEPES) 완충액(pH 7.0)에 1주간 37℃에서 담겼다.
하기 8개 테스트 그룹이 제조되었다 : (1) 탈광화만(블랭크 ; 도 1 및 2의 "블랭크") ; (2) 재광화만(음성 대조군 ; 도 1 및 2의 "대조군") ; (3) 재광화 용액 + 2 ppm의 불소(F)(양성 대조군 ; 도 1 및 2의 "2 ppm F") ; (4) 재광화 용액 + 4.0%의 인산화된 올리고사카라이드 나트륨염(도 1 및 2의 "POs Na 4%") ; (5) 재광화 용액 + 1.0%의 인산화된 올리고사카라이드 나트륨염(도 1 및 2의 "POs Na 1%") ; (6) 재광화 용액 + 0.2%의 인산화된 올리고사카라이드 나트륨염(도 1 및 2의 "POs Na 0.2%") ; (7) 재광화 용액 + 0.2%의 인산화된 올리고사카라이드 칼슘염(도 1 및 2의 "POs Ca 0.2%") ; (8) 재광화 용액 + 0.07%의 인산화된 올리고사카라이드 칼슘염(도 1 및 2의 "POs Ca 0.07%").
각 처리 후 200㎛-두께 섹션이 처리된 치아 조각으로부터 제조되었고, 그의 광물 농도 분포가 미세방사능사진 이미지(나타내지 않음)로부터 분석되었다. 치아 조각이 탈광화되면 광물은 공동(cavity)이 뒤이어 생기는 치아 조각으로부터 용출되고 손실되었다(충치의 징후). 도 1은 이러한 광물 농도 분석에 따른 광물 손실 수치 그래프를 나타낸다(세포축은 광물 손실 수치를 나타냄). 도 2는 탈광화의 깊이를 나타낸다(세로축은 손상 깊이(㎛)를 나타냄). 도 1에 따라 인산화된 올리고사카라이드 나트륨 및 인산화된 올리고사카라이드 칼슘 모두의 경우 광물 손실은 시험된 농도의 최저 농도에서 최소였다. 이러한 광물 손실은 (2) 양성 대조군보다 더 낮았다. 인산화된 올리고사카라이드 나트륨 및 인산화된 올리고사카라이드 칼슘의 경우 적은 손상 깊이가 수득되었다(도 2). 이는 공동이 재광화에 의해 채워졌음을 나타낸다. 흥미롭게 (2) 불소를 지닌 양성 대조군의 경우 손상 깊이가 변화하지 않았다.
각 처리후 후-재광화 용액의 칼슘 및 인 농도도 분석되었다. 용액은 2분간 10,000 g에서 원심분리되었고, 상청액이 분석되었다. 인 농도는 몰리부덴산 방법("Shin-ban Bunseki Kagaku Jikken [New Edition Analytical Chemistry Experiment](1st ed.), pp. 313-314, published by Kagaku Dojin K.K.)에 의해 측정되었고, 칼슘 농도는 OCPC 방법(Wako Pure Chemicals 제조 : "칼슘 C 테스트 Wako" 키트에 의해 측정됨)에 의해 측정되었다. 결과는 표 1에 나타나 있다.
Pi(mM) Ca(mM)
대조군 0.34 0.68
2 ppm F 0.41 0.73
POs Na 4% 1.4 3.86
1% 1.2 1.86
0.2% 1.1 1.63
POs Ca 0.2% 1.2 2.66
0.07% 1.2 1.80

표 1에 따라 인산화된 올리고사카라이드의 첨가에 의해 용액 내에 용해된 칼슘 및 인산의 농도가 높게 유지되었음이 발견되었다.
따라서 이러한 실험은 인산화된 올리고사카라이드의 첨가에 의해 용액 내에 용해된 칼슘 및 이산의 농도가 높게 유지되고, 그 결과로서 이들 용해된 인 및 칼슘이 충치 부분에 공급되어 재광화에 사용됨을 나타낸다. 이러한 현상은 인간 구강에서 발생하는 것으로 여겨진다.
(실시예 4)
실시예 4에서 재광화 표본 테스트 시스템은 초기 충치에 있어서 재광화 상의 인산화된 올리고사카라이드의 효과를 명백히 하는데 사용되었다.
재광화 테스트 시스템의 절차
더욱 간단한 방식으로 재광화 현상을 조사하기 위해 재광화가 더욱 용이하게 발생하는 조건이 단순화되었다. 수산화인회석을 포함한 시스템에서 칼슘 및 인이 결정화를 위해 공급되고 용해성 칼슘이 감소된다. 반대로 수산화인회석을 포함하지 않는 시스템에서는 칼슘 및 인이 침전되지 않아서 그들의 용해도가 높은 수준에 유지된다. 이러한 사실에 기초하여 하기 테스트 시스템이 고안되었다.
500㎕의 용액이 하기의 순서로 하기 물질을 혼합함으로서 제조된다 : (1) 50㎕의 200mM HEPES 완충액(pH 7.0) ; (2) 200㎕의 탈이온수 또는 표본 ; (3) 50㎕의 18mM KH2PO4 용액 ; (4) 50㎕의 30mM 염화칼슘 용액 ; 및 (5) 수산화인회석 현탁액(5mg/ml) 또는 탈이온수. (3)의 첨가 후 0.1N의 수산화칼륨 용액이 용액의 pH를 적정하는데 사용된다. 결과적인 용액은 교반되고 1∼7일간 37℃에서 인큐베이트된다. 이후 용액은 3분간 12,000 rpm에서 원심분리된다. 결과적인 상청액 내의 칼슘 농도는 OCPC 방법에 의해 측정되었다. 마지막으로 흡광도가 칼슘 C 테스트 Wako(코드 ; 272-21801)를 이용하여 570nm에서 측정되었다. 용행성 칼슘의 백분율은 첨가된 칼슘 농도로 상청액 내의 칼슘 농도를 나누어 100을 곱함으로서 얻어졌다. 재광화의 백분율은 (5)에서 탈이온수에 의해 수득된 수치와 수산화인회석의 첨가시 수득된 수치 사이의 차이를 산정함으로서 얻어졌다.
다양한 농도를 지닌 인산화된 올리고사카라이드의 재광화상의 효과
상기-기술된 표본 테스트 시스템은 다양한 농도를 지닌 인산화된 올리고사카라이드 나트륨염 및 인산화된 올리고사카라이드 칼슘염을 42시간 동안 37℃에서 인큐베이트하는데 사용되었다. 인산화된 올리고사카라이드 나트륨염 및 인산화된 올리고사카라이드 칼슘염의 경우 재광화의 결과는 각각 도 3 및 도 4에 나타나 있다(도 3 및 4에서 세로축은 재광화율(%)을 가로축은 표본(%)을 대조군은 어떠한 표본의 첨가도 없음을 나타내고; 각 표본의 농도에 있어서 좌측 막대는 18시간 처리를 나타내고 우측 막대는 42시간 처리를 나타냄). 낮은 농도에서의 인산화된 올리고사카라이드 나트륨염도 첨가된 칼슘을 용해시키는 능력을 증가시켰다(도 3). 인산화된 올리고사카라이드 칼슘염은 외생적으로 첨가된 칼슘염을 용해시키는 낮은 능력을 지녔고, 오히려 여분의 칼슘을 방출하여 용액 내의 인에 대한 칼슘의 비율을 변화시켜 칼슘이 더 용이하게 침전되었고 따라서 높은 농도의 칼슘 농도가 유지될 수 없었다(도 4).
따라서 인산화된 올리고사카라이드 나트륨염은 시스템 내의 인 농도에 대한 칼슘의 비율을 변화시키지 않고 용해 작용을 나타낼 수 있었다. 인산화된 올리고사카라이드 칼슘염의 경우 인(인산염, 인 화합물 등)은 Ca/P 비율을 1.67로 유지시키도록 동시에 공급될 필요가 있음을 나타내었다. 대안으로, 첨가된 인산화된 올리고사카라이드 칼슘염의 농도는 비율에 대해 영향을 미칠 필요가 거의 없다.
Ca/P 농도 비율 = 1.67(P/Ca 농도 비율 = 0.6)의 인산화된 올리고사카라이드의 재광화 효과 상의 효과
인산화된 올리고사카라이드 칼슘염이 사용되었을 때 인 농도에 대한 칼슘의 비율은 1.67(P/Ca 농도 비율 = 0.6)로 맞춰졌고, 농도는 칼슘이 인산화된 올리고사카라이드로부터 유도되도록 맞춰졌다. 나트륨염은 인산화된 올리고사카라이드 농도에 매치되로고 맞춰졌다. 농도 세팅은 하기 표 2에 나타나 있다.
대조군 POs Na
번호 P(mM) Ca(mM) 번호 P(mM) Ca(mM) 시료(%)
-HAp -HAp
1 0.9 1.5 11 0.9 1.5 0.25
2 1.8 3.0 12 1.8 3.0 0.50
3 2.7 4.5 13 2.7 4.5 0.75
4 3.6 6.0 14 3.6 6.0 1.00
5 4.5 7.5 15 4.5 7.5 1.25
+HAp +HAp
6 0.9 1.5 16 0.9 1.5 0.25
7 1.8 3.0 17 1.8 3.0 0.50
8 2.7 4.5 18 2.7 4.5 0.75
9 3.6 6.0 19 3.6 6.0 1.00
10 4.5 7.5 20 4.5 7.5 1.25
POs Ca
번호 P(mM) Ca(mM) 시료(%)
-HAp
21 0.9 1.5 0.25
22 1.8 3.0 0.50
23 2.7 4.5 0.75
24 3.6 6.0 1.00
25 4.5 7.5 1.25
+HAp
26 0.9 1.5 0.25
27 1.8 3.0 0.50
28 2.7 4.5 0.75
29 3.6 6.0 1.00
30 4.5 7.5 1.25

15시간 동안 37℃에서의 인큐베이션은 상기-기술된 간단한 테스트 시스템에서 수행되었다. 결과는 도 5에 나타나 있다(세로축은 재광화율(%)를 나타내고, 가로축은 Ca 농도(mM)를 나타내고, 사각형은 인산화된 올리고사카라이드 염이 없는 대조군을 나타내고, 다이아몬드형은 인산화된 올리고사카라이드 나트륨염(POs Na)를 나타내고, 원형은 인산화된 올리고사카라이드 칼슘염(POs Ca)을 나타냄). 도 5에 나타난 바와 같이 Ca/P 농도 비율 = 1.67(P/Ca 농도 비율 = 0.6)이 일정하고 첨가된 칼슘의 농도가 증가하면 인산화된 올리고사카라이드 나트륨염과 인산화된 올리고사카라이드 칼슘염 사이에 유사한 결과가 얻어졌다. 첨가된 칼슘염이 6mM 이상이면 인산화된 올리고사카라이드의 첨가 효과가 감소되었다.
다양한 Ca/P의 인산화된 올리고사카라이드의 재광화 효과 상의 효과
상기-기술된 간단한 테스트 시스템은 17.5시간 내지 1주 동안 37℃에서 인큐베이트되는 동안 인 농도에 대한 칼슘의 비율이 표 3에 나타난 바와 같이 변화하였다(표 3은 P/Ca 사용).
번호 X(P) Y(Ca) *1 *2
1 9 15 CaCl2 D.W
2 18 15 CaCl2 D.W
3 27 15 CaCl2 D.W
4 36 15 CaCl2 D.W
5 45 15 CaCl2 D.W
6 9 15 CaCl2 2.4% POs-Na
7 18 15 CaCl2 2.4% POs-Na
8 27 15 CaCl2 2.4% POs-Na
9 36 15 CaCl2 2.4% POs-Na
10 45 15 CaCl2 2.4% POs-Na
11 9 15 2.4% POs-Ca D.W
12 18 15 2.4% POs-Ca D.W
13 27 15 2.4% POs-Ca D.W
14 36 15 2.4% POs-Ca D.W
15 45 15 2.4% POs-Ca D.W

결과는 도 6a 내지 6c에 나타나 있다(세로축은 재광화율(%)을 나타내고, 가로축은 P/Ca를 나타냄). 도 6a는 인산화된 올리고사카라이드가 없는 대조군의 결과를 나타낸다. 사각형은 17.5 시간 처리를 나타내고, 다이아몬드형은 1주 처리를 나타낸다. 도 6b는 인산화된 올리고사카라이드 나트륨염의 결과를 나타낸 것이다. 삼각형은 17.5시간 처리를 나타내고, 색칠된 삼각형은 1주 처리를 나타낸다. 도 6c는 인산화된 올리고사카라이드 칼슘염의 결과를 나타낸 것이다. 원형은 17.5시간 처리를 나타내고, 색칠된 원형은 1주 처리를 나타낸다. 도 6a 내지 6C에 나타난 바와 같이 Ca이 1.5mM에 고정되고 인 농도가 P/Ca 비율을 변화시키도록 바뀌면 인산화된 올리고사카라이드 나트륨염과 인산화된 올리고사카라이드 칼슘염 모두 상당히 효과적인 재광화를 유발하는 것으로 여겨졌다. 그 결과에 따라 칼슘염은 낮은 농도의 인에서도 더욱 안정한 것을 여겨졌다.
(실시예 5)
실시예 5는 재광화 효과에 있어서 다른 항-충치 약제와 인산화된 올리고사카라이드의 비료를 나타낸 것이다. 항-충치 약제로서 자일로스, 자일리톨, 팔라티노스 및 팔라티니트가 사용되었다. 실시예 3의 간단한 시스템은 재광화 효과를 조사하는데 사용되었다. 8일간 37℃에서의 인큐베이션이 간단한 시스템 내에서 수행되었다. 결과는 도 7a 내지 7c에 나타나 있다(세로축은 재광화율(%)을 나타내고, 가로축은 표본 농도(%)를 나타냄). 도 7a는 인산화된 올리고사카라이드 염의 결과를 나타낸 것으로, 색칠된 삼각형은 칼슘염을 나타내고, 삼각형은 나트륨염을 나타낸다. 도 7b는 자일리톨의 결과를 나타낸 것으로, 색칠된 원형은 자일리톨을 나타내고 원형은 자일로스를 나타낸다. 도 7c는 팔라티니트의 결과를 나타낸 것으로, 색칠된 사각형은 팔라티니트를 나타내고, 사각형은 팔라티노스를 나타낸다. 도 7a 내지 7c에 따라 약 0.1%의 낮은 농도의 인산화된 올리고사카라이드는 높은 재광화 효과를 나타낸 반면 다른 항-충치 약제(자일리톨, 팔라티노스 및 팔라티니트)는 이전에 보고된 바와 같은 20%의 농도에서 재광화 효과를 나타내었다(일본 특허 공개공보 제2000-128752호 등). 자일로스의 경우 재광화 백분율은 어떤 농도에서도 낮았다.
(실시예 6)
실시예 6에서 탈광화를 억제하는 인산화된 올리고사카라이드의 효과가 조사되었다.
하기 조성물을 지닌 탈광화 용액이 제조되었다 : 6.0mM의 염화칼슘 용액 ; 3.6mM 포타슘 디하이드로겐포스페이트 ; 2%의 유산 용액 ; 및 5mg/ml의 수산화인회석 용액, pH 5.0. 125㎕의 탈광화 용액 및 0.2% 및 2%의 최종 농도를 지닌 125㎕의 인산화된 올리고사카라이드 나트륨염 용액들이 혼합되어 교반되었고 2일간 37℃에서 인큐베이트되었다. 이후, 혼합물은 3분간 12,000 rpm으로 원심분리되었다. 결과적인 상청액의 칼슘 농도는 OCPC 방법에 의해 측정되었다. 첨가된 칼슘 농도와 처리 후 칼슘 농도가 서로 비교되었다. 테스트 표본의 존재시 첨가된 칼슘 농도와 처리 후 칼슘 농도 사이의 차이가 비교된 대조군(테스트 표본 없는) 만큼 작으면 테스트 표본은 탈광화를 억제하는 효과를 지닌 것으로 인식되었다. 인산화된 올리고사카라이드없이 대조군(5mM)을 비교하면 0.2% 및 2%의 인산화된 올리고사카라이드 나트륨염 용액 모두 작은 차이를 지녔다(3mM 및 2mM). 따라서 인산화된 올리고사카라이드 나트륨염은 탈광화를 억제하는 효과를 지닌 것으로 여겨졌다.
(실시예 7)
실시예 7은 재광화 효과에 있어서 인산화된 올리고사카라이드의 불소와의 상승효과를 나타낸 것이다.
하기 표 4에 기술된 조성물은 인산화된 올리고사카라이드의 존재 또는 부재시 재광화 효과를 조사하는데 사용되었다.
번호 POs Na Ca(mM) P(mM) F(ppm)
1 0.20% 3.0 1.8 0
2 0.20% 3.0 1.8 3.91
3 0.20% 3.0 1.8 7.81
4 0.20% 3.0 1.8 15.63
5 0.20% 3.0 1.8 31.25
6 0.20% 3.0 1.8 62.50
7 0.20% 3.0 1.8 125.00
8 0.20% 3.0 1.8 250.00
9 0.20% 3.0 1.8 500.00
10 0.20% 3.0 1.8 1000.00

실시예 4의 간단한 시스템이 재광화 효과를 조사하는데 사용되었다. 5일간 37℃에서의 인큐베이션이 간단한 시스템에서 수행되었다. 이후 용해성 칼슘의 양이 OCPC 방법에 의해 측정되었다. 박층크로마토그래프(TLC)에 의해 인산화된 올리고사카라이드가 질적으로 확인되었다. TLC 분석의 조건은 하기와 같다 : 실리카겔 플레이트(Merck 제조) ; 에탄올/탈이온수/아세트산(=70/30/2) ; 상온에서 한번 발달 ; 5㎕의 첨가된 표본 ; 1㎕의 인산화된 올리고사카라이드 및 마커로서 1㎕의 1% 말토트리오스.
TLC 분석의 결과는 표 8에 나타나 있다. 도 8에서 각 레인은 다양한 농도(ppm)를 지닌 불소를 나타내고, 상위 점은 말토트리오스를 나타내고, 하위 점 은 인산화된 올리고사카라이드를 나타낸다. 도 9는 재광화에 있어서 인산화된 올리고사카라이드의 불소와의 상승작용을 나타낸 것이다(세로축은 재광화율(%)을 나타내고, 가로축은 불소 농도(ppm)를 나타낸다 ; 각 수치에서 좌측 막대는 인산화된 올리고사카라이드가 없는 대조군을 나타내고 우측 막대는 0.2%의 인산화된 올리고사카라이드 군에 속함). 불소는 매우 반응적인 할로겐 원소이다. 인산화된 올리고사카라이드 상의 불소의 효과 및 칼슘의 정량이 조사되었다. 본 실험의 조건하에서 불소 첨가의 영향은 미약한 것으로 보였다(도 8). 불소의 첨가는 P에 대한 Ca의 농도 비율의 평형을 변화시켜 불용성이 감소되었다. 따라서 재광화율은 불소 농도의 증가에 의해 감소되었다. 그러나 0.2%의 인산화된 올리고사카라이드 나트륨염이 첨가되면 재광화 효과가 증가되는 경향이 있어서 유의적인 상승효과가 확인될 수 있었다(도 9).
(실시예 8)
실시예 8은 인산화된 올리고사카라이드과 츄잉 검과의 혼합물 및 인간 구강 내로의 인산화된 올리고사카라이드의 용출을 나타낸다.
표 5에 나타난 인산화된 올리고사카라이드 칼슘염을 포함한 시트 검(플레이트-유사 검)(칼슘 함량은 3.2%)이 제조되었다(시트 검은 약 3.2g의 중량을 지님).
첨가(%)
검 베이스 25.2
POs Ca 22.7
자일리톨 50.4
글리세롤 0.7
민트 오일 1.0
총계 100.0
3.2g/슬랩 검

검이 저작될 때 시간이 지나 구강 내로 용출된 칼슘염의 양이 박층크로마토그래피(TLC)에 의해 분석되었다. TLC의 조건은 하기와 같다 : 발달 플레이트는 실리카 겔이었다 ; 발달 용출액은 에탄올/탈이온수/아세트산 = 70/30/2이었다 ; 발달 온도는 상온이었고 발달은 한번 수행되었다 ; 점 표본의 양은 3㎕이었다 ; 검출은 검출 용액(황산염/에탄올 = 1 : 1)을 플레이트로 스프레이하고 3분간 130℃에서 처리하여 점이 발색함으로서 수행되었다.
도 10은 표준 용액 농도를 지닌 인산화된 올리고사카라이드의 TLC 분석의 결과를 나타낸 것이다. 각 레인은 다양한 농도를 지닌 인산화된 올리고사카라이드의 용출은 나타낸다(좌측의 대조군으로서 1%의 자일리톨 및 우측의 1% 말토트리오스(G3)를 나타냄). 하위 점은 인산화된 올리고사카라이드을 나타내고, 상위 점은 자일리톨과 말토트리오스를 나타낸다. 도 11은 인산화된 올리고사카라이드를 포함한 검이 저작될 때 시간에 따른 용출 양을 나타낸 것이다(좌측의 대조군으로서 1%의 인산화된 올리고사카라이드 및 우측의 1% 자일리톨 및 말토트리오스(G3)를 나타냄). 하위 점은 인산화된 올리고사카라이드를 나타내고 상위 점은 자일리톨과 말토트리오스를 나타낸다. 인산화된 올리고사카라이드는 타액 아밀라제로 가수분해되지 않는다. 이들 도면에 따라 저작 시작 후 10분후 상대적으로 높은 농도의 인산화된 올리고사카라이드가 구강 내에 존재하고, 20분후 인산화된 올리고사카라이드는 약 0.25%의 농도로 잔존하였음이 이해될 것이다.
(실시예 9)
실시예 9는 슈크로스 발효 상의 인산화된 올리고사카라이드의 효과를 나타낸다.
S. mutans 균주 8148은 14시간 동안 37℃에서 1,000ml의 브레인 하트 인퓨전(brain heart infusion) 배지(DIFCO Corporation 제조) 내에서 인큐베이트되었다. 이후, 박테리아는 20분간 6,000 rpm에서의 원심분리에 의해 수집되었다. 박테리아는 인산 완충된 식염수(PBS, pH 7.2)로 세척되었고, 동일한 PBS에 40%(v/v)로 현탁되었다. pH를 측정하기 위해 반응 혼합물(250㎕)이 125㎕의 40% 박테리아 세포 현탁액, 62.5㎕의 80mM 슈크로스 및 다양한 올리고사카라이드(5% 인산화된 올리고사카라이드 나트륨염 및 인산화된 올리고사카라이드 칼슘염)를 포함한 6.25㎕의 수용액으로 이루어졌다. 반응 혼합물의 pH는 37℃에서 인큐베이트되는 동안 pH 측정기(Toa Denpa 제조)로 연속적으로 측정되었다.
0.684%의 슈크로스 또는 0.684%의 글루코스가 S. mutans 8158 균주를 포함한 20%의 박테리아 세포 현탁액에 첨가되면 반응 액체의 pH는 5분 이내에 5.0 이하가 되었고, 10분후 4.0으로 감소하였다. 5%의 인산화된 올리고사카라이드(PO-1 및 PO-2)가 동시에 존재하면 pH 감소는 두 가지 경우에서 명백히 억제되었다(데이터는 나타내지 않음). 5%의 인산화된 올리고사카라이드 나트륨염 또는 인산화된 올리고사카라이드 칼슘염이 첨가되면 0.648%의 슈크로스의 발현에 의한 pH 감소는 효과적으로 억제되었다(데이터는 나타내지 않음).
(실시예 10)
실시예 10에서 인산화된 올리고사카라이드의 당 알코올이 제조되었다.
분자 당 하나의 인산 그룹을 지닌 인산화된 올리고사카라이드를 포함한 PO-1 및 2개의 인산 그룹을 지닌 인산화된 올리고사카라이드를 포함한 PO-2의 각 10g이 증류수 100ml에 용해되었다. 용액은 1N의 수산화나트륨 용액으로 약 알칼리성 용액으로 적정되었다(약 pH 8). 결과적인 용액 100ml에 30m의 3% 수산화붕소나트륨가 첨가되었다. 혼합물은 1시간 동안 40℃에서 정치되고 인산화된 올리고사카라이드가 감소되었다. 따라서 수소는 인산화된 올리고사카라이드의 환원 말단에 첨가되었다. 수소-첨가된 용액은 1N의 염산 용액으로 pH 7.5로 적정되었다. 반응이 종결된 후 용액은 0.22㎛ 멤브레인을 이용하여 투석되었다. 결과적인 용액은 전기투석기(Micro acilyser G3, AC210-400 멤브레인 : Asahi Kasei Corporaton 제조)를 이용하여 탈염되었고, 강한 양이온 교환 수지(Dowex 50w 20-50 MESH, H-Form : Nisshin Kasei 제조)를 이용하여 이온 교환되어 pH 2.7의 사카라이드 용액을 수득하였다. 결과적인 용액은 1N의 수산화나트륨 또는 수산화칼슘 용액으로 중성화되고 동결건조되어 인산화된 올리고사카라이드 나트륨염 또는 칼슘염을 제조하였다.
(실시예 11)
실시예 11에서 황산콘드로이틴 올리고사카라이드(불포화된 디사카라이드(다이머))가 제조되었다.
4.8g의 황산콘드로이틴나트륨(C 타입 ; Katayama Kagaku 제조)이 500ml의 증류수(pH 6.0)에 용해되었다. 15 U의 콘드로이티나제 ACII(Arthrobacter aurescens로부터 유도됨, Seikagaku Kogyo 제조)가 결과적인 용액 내로 첨가되었고 23시간 동안 37℃에서 반응되었다. 반응은 배쓰(bath) 내에서 끓이고, 실시예 10에서 기술된 바와 같이 탈염시킴으로서 종결되었다. 따라서 황산콘드로이틴 올리고사카라이드 나트륨염 또는 칼슘염이 제조되었다.
(실시예 12)
실시예 12에서 다양한 물질의 재광화 효과가 조사되었다.
실시예 4의 간단한 재광화 테스트 시스템이 사용되었다. 표본으로서 하기 표 6에 나타난 물질이 사용되었다. 물질 모두는 0.1%의 최종 농도로 제조되었다.
번호 표본
1 POs Na
2 PO-2 Na
3 POsH Na
4 G3
5 PO-2H Na
6 Glc-6-P
7 Ser-P
8 황산콘드로이틴 C
9 올리고갈락투론산
10 다이머 Na
11 D.W.

상기-기술된 표 1에서 1번 POs Na는 인산화된 올리고사카라이드(PO-1 프랙션) 나트륨염을 나타내고, 2번 PO-2 Na는 인산화된 올리고사카라이드(PO-2 프랙션) 나트륨염을 나타내고, 3번 POsH Na는 인산화된 올리고사카라이드(PO-1 프랙션) 당 알코올 나트륨염을 나타내고, 4번 PO-2H Na는 인산화된 올리고사카라이드(PO-2 프랙션) 당 알코올 나트륨염을 나타내고, 5번 G3는 말토트리오스(3개의 글루코스 사카라이드)를 나타내고, 6번 Glc-6-P는 글루코스-6-인산을 나타내고, 7번 Ser-P는 포스포세린을 나타내고, 8번은 황산콘드로이틴 C를 나타내고, 9번은 올리고갈락투 론산을 나타내고, 10번은 황산콘드로이티의 불포화된 디사카라이드를 나타내고(표 6 및 도 12에서 다이머 Na), 11번 D.W.는 탈이온수를 나타낸다.
결과는 도 12에 나타나 있다(세로축은 재광화율(%)을 나타내고, 가로축은 표본 물질을 나타냄). 도면에서 탈이온수보다 더 높은 재광화 비율을 지닌 물질은 재과와 효과를 지니는 것으로 판단되었다. 인산화된 올리고사카라이드 알코올 나트륨 염, 글루코스-6-인산, 황산콘드로이틴 C 나트륨염 및 황산콘드로이틴 불포화된 디사카라이드 나트륨염은 인산화된 올리고사카라이드 나트륨염과 비슷하거나 더 높은 재광화 효과를 나타내었다.
(실시예 13)
실시예 13에서 다양한 물질의 재광화 효과가 조사되었다.
실시예 4의 간단한 재광화 테스트 시스템이 사용되었다. 표본으로서 표 7에 나타난 물질이 사용되었다.
번호 표본 최종 (%)
1 POs Na 0.2
2 2.0
3 팔라티노스 2.0
4 20
5 자일리톨 2.0
6 20
7 트레할로스 2.0
8 20
9 솔비톨 2.0
10 20
11 G3 2.0
12 D.W
13 유기산 0.2
14 1.4
15 황산덱스트란 0.2

표 7에서 1번 POs Na는 인산화된 올리고사카라이드(PO-1 프랙션) 나트륨염(최종농도 0.2%)을 나타내고, 2번 POs Na는 인산화된 올리고사카라이드(PO-1 프랙션) 나트륨염(최종농도 2.0%)을 나타내고, 3번은 팔라티노스(최종농도 0.2%)를 나타내고, 4번은 팔라티노스(최종농도 20%)를 나타내고, 5번은 자일리톨(Wako 244-0052)(최종농도 2.0%)을 나타내고, 6번은 5번은 자일리톨(Wako 244-0052)(최종농도 20%)을 나타내고, 7번은 트레할로스(Wako 022552)(최종농도 2.0%)를 나타내고, 8번은 트레할로스(Wako 022552)(최종농도 20%)를 나타내고, 9번은 솔비톨(Katayama 2804770)(최종농도 2.0%)을 나타내고, 10번은 솔비톨(Katayama 2804770)(최종농도 20%)을 나타내고, 11번 G3은 말토트리오스(최종농도 2%)를 나타내고, 12번 D.W.는 탈이온수(대조군)을 나타내고, 13번은 유기산(주석산)(최종농도 0.2%)을 나타내고, 14번은 유기산(주석산)(최종농도 1.4%)를 나타내고, 15번은 황산덱스트란(최종농도 0.2%)을 나타낸다.
결과는 도 13에 나타나 있다(세로축은 재광화율(%)을 나타내고 가로축은 표본 물질을 나타냄). 자일리톨, 팔라티노스 및 솔비톨을 포함한 20%의 첨가 그룹에서 이전에 보고된 바와 같은 재광화 효과가 확인되었다. 또한 황산콘드로이틴에 유사하게 황산덱스트란이 재광화 효과를 지닌 것으로 확인되었다. 유기산도 인산화된 올리고사카라이드에 유사하게 효과적이었다.
(실시예 14)
실시예 14에서 충치 예방 효과는 인공 구강 장치 내에서 조사되었다.
S. sobrinus 균주 6715 배양액(DIFCO Corporation 제조), 하트 인퓨전 액체 배지(DIFCO Corporation 제조) 및 표본 용액(각 용액은 테스트되는 동안 냉각됨)이 소 치아(약 5 ×5mm)에 공급되어 6ml/시간/관의 속도로 인정 온도 배쓰(37℃)에서 유지되었다. 치아 표면의 pH가 시간에 따라 측정되었다. 결과는 도 14에 나타나 있다(세로축은 pH의 변화를 나타내고 가로축은 시간 경과를 나타냄 ; 원형은 1%의 당(GF)만의 첨가를 나타내고 색칠된 삼각형은 1%의 GF 및 5%의 인산화된 올리고사카라이드 칼슘염(POs Ca)의 첨가를 나타냄). 16시간 후 치아 플라크가 치아로부터 긁혀서 탁도가 500nm에서 측정되었다. 또한 형성된 물 불용성 글루칸(WIG)의 양이 페놀-황산 방법에 의해 측정되었다. 이러한 경도와 처리되지 않은 치아의 경도 사이의 차이가 얻어졌다(ΔH). 결과는 표 8에 나타나 있다.
WIG (㎍/mm2) 탁도 (OD500/mm2) ΔH
1% GF 전극 7.2 0.057 -
에나멜 10.8 ±2.0 0.070 ±0.012 240 ±16.4
1% GF + 5% POs Ca 전극 0.3 0.004 -
에나멜 0.4 ±0.3 0.016 ±0.007 19 ±10.4

1%의 GF(당)의 경우 유기산이 생성되었고 10시간 후 pH가 5.6 이하가 되었고, 유기산이 플라크 내에 유지됨이 분명하였다. 플라크는 충분히 형성되었고, 치아는 탈광화를 겪게 되고 부서지기 쉽게 되었다. 반대로 1%의 GF 및 5%의 인산화된 올리고사카라이드를 포함한 용액의 경우 어떠한 플라크도 형성되지 않았고 pH는 감소되지 않았다. 즉, 충치 박테리아가 치아에 콜로니를 형성하는 것이 방지되어 플라크 형성이 차단되고 치아의 탈광화가 억제되었다. 따라서 치아의 경도는 변하지 않았다. 이러한 결과에 따라 인산화된 올리고사카라이드가 충치를 예방하는 효과를 지님이 명백히 발견되었다. 이러한 현상은 인간 구강 내에서 유사하게 발생하는 것으로 여겨진다.
(실시예 15)
실시예 15에서 인산화된 올리고사카라이드가 다양한 전분으로부터 제조되었다.
이러한 실시예에서 사용된 전분은 쌀 전분(브랜드 명 Better FriendTM : Shimada Kagaku 제조) 및 타피오카(tapioca) 전분(Sanwa Cornstarch Co., Ltd.)의 것이었다.
100g의 전분 분말이 800∼1000ml의 물에 첨가되었다. 결과적이 용액에 B. lichenformis 박테리아(Fukutamirase로부터 이용가능, Hankyu Industries, 1%)로부터 유도된 5000 U/ml의 전분 액화 α-아밀라제(BLA) 50㎕이 첨가되었다. 용액은 물 배쓰 내에서 48시간 동안 50℃로 젤라틴화되었다. 또한 50㎕의 5000 U/ml BLA(Fukutamirase, Hankyu Industries, 1%), 50㎕의 200 U/ml 풀룰라나제(Promozyme : Novo Nordisk) 및 50㎕의 글루코아밀라제(416 U/ml)(Toyobo로부터 이용가능)가 젤라틴화된 전분에 첨가되고 48시간 동안 50℃에서 인큐베이션되었다. 결과적인 혼합물은 20분간 8,000 rpm에서 원심분리되었다. 상청액은 10mM의 아세테이트 완충액(pH 4.5)으로 평형화된 음이온 교환 수지(Chitopearl BCW 2501 ; Fuji Spinning Co., Ltd. 제조)에 투입되었다. 컬럼은 중성 사카라이드를 제거하기 위해 동일한 완충액으로 완전하게 세척되었고 0.5M의 염화나트륨을 함유한 동일 완충액으로 용출되었다. 각각의 용출되 프랙션은 증발기를 이용하고 탈염 및 동결건조에 의해 농축되었다. 따라서 인산화된 올리고사카라이드가 수득되었다.
이렇게-수득된 인산화된 올리고사카라이드는 다시 20mM의 아세테이트 완충액(pH 4.5)으로 평형화된 음이온 교환 수지(Chitopearl BCW 2501)에 투입되었다. 컬럼은 중성 사카라이드를 제거하기 위해 동일한 완충액으로 완전하게 세척되었고 먼저 0.15M의 염화나트륨을 함유한 동일 완충액으로, 다음으로는 0.5M의 염화나트륨을 함유한 동일 완충액으로 용출되어 프랙션을 수집하였다. 수집된 프랙션은 탈염되고 동결건조되었다. 구조물을 측정하기 위해 상기-논의된 방법에 따른 이들 프랙션의 분석은 0.15M 염화나트륨-용출된 프랙션(PO-1 프랙션)으로부터 수득된 인산화된 올리고사카라이드에서 하나의 인산 그룹이 α-1,4 결합으로 3∼5개의 글루코스를 지닌 글루칸에 연결되었고 ; 0.5M 염화나트륨-용출된 프랙션(PO-2 프랙션)으로부터 수득된 인산화된 올리고사카라이드에서 2개 이상의 인산 그룹이 α-1,4 결합으로 3∼5개의 글루코스를 지닌 글루칸에 연결되었다. 인산화된 올리고사카라이드의 구조적 분석인 실시예 1에서 기술된 바와 같이 수행되었다.
(실시예 16)
실시예 16은 인산화된 올리고사카라이드를 함유한 츄잉 검이 초기 충치에 에나멜 재광화를 증가시키는 효과를 지님을 나타낸다.
2개의 정제형 검(약 1.5g/정제) : 감자 전분으로부터 유도된 2.5%(평균 함 량)의 POs Ca를 포함한 무설탕 검(45%의 자일리톨을 포함) 및 어떤 POs Ca도 포함하지 않은 무설탕 검(47.5%의 자일리톨을 포함)이 통상적으로 사용되는 방법에 의해 생성되었다. 모든 실험 시약은 보증된 시약이었다. 각 물질의 함량은 검의 총 중량에 대한 비율이다.
치아 물질로서 소 치아의 크라운(crown) 에나멜이 사용되었다. 다이아몬드 톱(LUXO 제조)이 표준화된-크기 면을 지닌 블록(7 ×7 ×3mm)으로 에나멜을 절단하는데 사용되었다. 이들 에나멜 블록(6개 표본)은 오토폴리머 수지(UNFAST Trad, GC 제조) 내에 고정되었고, 15 ×50mm의 크기 및 7mm의 두께를 지닌 플레이트 내로 형체화되었다. 이후 플레이트의 표면은 평평하고 신선한 에나멜을 노출시키기 위해 습윤식 연마 사포(그리트 800)로 연마되었다. 반대로 치아의 상아질면은 미리 임프레션 화합물(GC 제조)에 고정되었다. 이렇게-준비된 플레이트에 고정된 각각의 에나멜 블록은 4주간 37℃에서 0.1M 유산 겔 100ml(6 wt% 카르복시메틸셀룰로스, pH 5.0)에 담겨져서 충치가 인공적으로 발생하였다.
17명의 건강한 피험자가 20분간 POs Ca 함유 검 또는 POs Ca-없는 검(3.0g)의 2개 그레인을 저작하는 테스트에 참여하였다. 본 테스트에서 피험자는 검의 형태에 대한 정보를 알려주지 않았다. 타액은 검 저작 시작 1분후, 1∼3분후, 3∼6분후, 6∼10분후 및 10∼20분후의 기간동안 피험자로부터 플라스틱 깔때기를 이용하여 10ml의 플라스틱 시험관에 수집되었다. 타액의 양과 pH가 수집 후 즉시 측정되었다. 이후 타액 상청액이 증류수로 10배까지 희석되었고 0.45㎛의 필터(Millipore 제조)로 여과되었다. 여과액은 OCPC 방법(칼슘 C 테스트 Wako; Wake Pure Chemicals 제조) 및 몰르브덴산 방법을 이용하여 Ca 및 무기 P 함량에 대해 정량화되었다.
12명의 건강한 피험자가 20분간 POs Ca 함유 검 또는 POs Ca-없는 검(3.0g)의 2개 그레인을 저작하는 테스트에 참여하였다. 본 테스트에서 피험자는 검의 형태에 대한 정보를 알려주지 않았다. 타액은 20분-저작의 첫 번째 반 10분(타액 A) 및 두 번째 반 10분(타액 B) 동안 피험자로부터 플라스틱 깔때기를 이용하여 50ml의 플라스틱 시험관에 수집되었다. 타액의 양과 pH가 수집 후 즉시 측정되었다. 측정후 바로 7ml의 타액은 인공 충치를 지니고 플레이트에 고정된 하나의 에나멜 블록이 미리 놓여진 플라스틱 베셀(10 ×30 ×60mm) 내로 부어졌다. 이러한 양은 플레이트에 고정된 에나멜 블록이 타액 내에 충분히 적셔지는 양이다. 플레이트가 10분간 타액 A에 담긴후 플레이트는 10분간 타액 B에 담겼다. 이후 플레이트가 제거되었고 플레이트 표면은 증류수로 완전하게 세척되었다. 이러한 침수 작업은 37℃에서 수행되었고 하루에 4회 연속적으로 반복되었다. 플레이트에 고정된 에나멜 블록은 작업 후 100%의 습도에서 매일 차갑게 보관되었다. 테스트는 인간 타액이 매일 수집되는 동안 4일 연속으로 수행되었다. 테스트에 사용된 타액에서 상청액 부분이 사용되었고 증류수로 10까지 희석되었고 0.45㎛ 필터(Millipore 제조)로 여과되었다. 여과액의 Ca 및 무기 인 함량이 상기-기술 된 방법에 의해 매일 측정되었다.
인간 타액 내로의 참수 후 각 치아 에나멜은 경조직 절단기(Isomet, Buhler, USA)를 이용하여 약 500㎛의 두께를 지닌 섹션으로 절단되었다. 각 섹션은 습윤식 연마 사포(그리트 800)로 약 200㎛ 두께로 연마되었다. 각 섹션은 미세방사능사진 촬영되었다(PW-1830, Philips, The Netherlands). 미세방사능사진촬영을 위한 조건은 튜브 전압이 25 kV ; 튜브 전류는 25mA ; 및 튜브와 피험체 사이의 거리가 370mm인 것이었다. 이후 손상 깊이(Ld, ㎛) 및 광물 손실 수치 ΔZ(vol%·㎛)가 Inaba et al.의 이미지 정량화 방법에 의해 측정되었다(Eur. J. Oral. Sci. 105:74-84, 1997).
17명의 건강한 피험자는 POs Ca 함유 검 또는 POs Ca-없는 검을 함유한 2개의 그레인(3.0g)을 20분간 저작하였다. 이러한 경우 타액의 양(도 15; 가로축은 검 저작 시간을 나타내고 세로축은 타액 양(ml)을 나타냄), 타액의 pH(도 16; 가로축은 검 저작 시간을 나타내고 세로축은 pH를 나타냄), 타액의 Ca 함량(도 18; 가로축은 검 저작 시간을 나타내고 세로축은 칼슘 함량(mg)을 나타냄) 및 타액의 P 함량(도 17; 가로축은 검 저작 시간을 나타내고 세로축은 인 함량(mg)을 나타냄)이 시간에 따라 측정되었고 수치는 시작부터 통합된 수치에 의해 표현된다. 더욱이 타액의 Ca/P 비율의 변화(도 19; 가로축은 검 저작 시간을 나타내고 세로축은 Ca/P 비유을 나타냄)가 계산되었다. 각 도면에서 POs Ca 함유 검(+POs Ca 검) 및 POs Ca-없는 검(-POs Ca 검)은 각각 사각형 및 다이아몬드형으로 표현된다.
그 결과로서 분비된 타액이 양(도 15), pH 변화(도 16) 및 P 함량 내 변화(도 17)는 통계학적으로 유의적인 수준에서 검 타입 간에 변하지 않았다. 20분 검 저작시 약 30ml의 타액이 분비되었고 타액의 pH가 검 저작 시작에서의 7.0에서 5분 후 7.5로 증가되었다. 검 저작에 의해 분비된 타액의 P 함량은 약 5mg이었고 이는 Ca 함량과 비교하여 재광화에 충분하다. 반대로 POs Ca 함유 검의 경우 저작 시작 후 20분에 타액에 용해된 Ca의 양은 POs Ca-없는 검(도 18)의 경우보다 약 4배였다. P의 특정한 양은 타액에서 고유하게 존재하기 때문에(도 16) Ca/P 비율은 POs Ca 함유 검의 경우 유의적으로 높았다(p<0.001)(도 19). 상기-기술된 분석 결과 남성과 여성 피험자 사이의 유의적인 차이는 없었다.
표 9는 20분간 POs Ca 함유 검 또는 POs Ca-없는 검의 2개의 그레인(3.0g)을 저작하는 12명의 건강한 피험자로부터 수집된 타액 A 및 타액 B의 분석 결과를 나타낸 것이다.
타액의 부피, pH 및 광물 함량의 비교
검 스페이시 A 타액 B 타액
타액(ml) +POs-Ca 20.34 ±4.13 9.35 ±3.24
-POs-Ca 20.74 ±4.43 9.65 ±3.35
Ca(mM) +POs-Ca 6.29 ±2.44** 1.72 ±0.53*
-POs-Ca 1.69 ±0.41 1.51 ±0.42
P(mM) +POs-Ca 5.62 ±1.41 6.22 ±1.31
-POs-Ca 6.15 ±1.35 6.49 ±1.15
Ca/P +POs-Ca 1.12 ±0.31** 0.28 ±0.08
-POs-Ca 0.28 ±0.08 0.23 ±0.06
평균 ±SD, *p<0.05, **p<0.001, n = 12
두 검에서 타액 A의 양은 타액 B의 약 2배였다. 타액 A에서 POs Ca-없는 검과 POs Ca 함유 검 사이의 Ca 함량의 유의적인 차이가 있었다. 그러나 타액 B에서 이러한 차이는 작았다. P 함량에 있어서 검들 사이 및 타액 A와 B 사이에는 어떤 차이도 인식되지 않았다. 따라서 타액 A에서 POs Ca 함유 검을 저작시 Ca/P 비율은 POs Ca-없는 검 저작시보다 약 4배 더 높았다.
다음으로, 12명의 피험자의 처리된 치아 상의 재광화 증가 효과를 평가하는 결과는 도 20A(세로축은 손상 깊이(Ld, ㎛)를 나타냄) 및 도 20B(세로축은 광물 손실 수치 ΔZ(vol%·㎛)를 나타냄)에서 손상 깊이 및 광물 손실 수치로서 나타나 있다. 두 도면에서 가로축은 순서대로 블랭크, POs Ca 함유 검 및 POs Ca-없는 검을 나타낸다. 탈광화된 치아 에나멜의 회복은 POs Ca-없는 검의 경우 보다 유의적으로 더 많은 POs Ca 함유 검의 경우에서 손상 깊이(Ld)와 광물 손실 수치(ΔZ)의 표현으로 관찰되었다. 즉, POs Ca 함유 검 저작 그룹에서 재광화의 증가가 수득되었다(p<0.001).
(실시예 17)
실시예 17은 인간 구강 내의 에나멜 상의 인산화된 올리고사카라이드을 포함한 츄잉 검의 재광화 증가 효과를 나타낸다.
실시예 13과 유사하게 2개의 정제형 검(약 1.5g/정제) 즉, POs Ca 함유 검 및 비-POs Ca 함유 무설탕 검이 제조되었다. 사용된 모든 실험 시약은 보증된 시약이었다.
에나멜 디스크(지름 5mm; 두께 1.5mm)가 소 앞니의 크라운 부분의 에나멜 부분으로부터 제조되었다. 구강 표면의 헤드 표면은 에나멜의 신선하고 평평한 면을 노출시키기 위해 습윤식 연마 사포(그리트 800)로 연마되었다. 이렇게-준비된 에나멜 디스크는 인공 충치를 생성하기 위해 3일간 37℃에서 0.1M의 유산 100ml에 담겼다. 본 테스트에서 각 피험자들은 하루에 4회 검들 중 하나를 씹었다. 피험자뿐만 아니라 본 테스트의 책임자도 피험자가 씹는 검의 타입에 대한 정보도 통보되지 않았다. 각각의 검에 대해 테스트는 2주 연속 동안 수행되었다. 각 테스트 사이에는 1-주일의 간격이 있었다. 구개 플레이트가 검 저작 동안과 그 후 20분 동안 부착되었다. 테스트 기간 동안 피험자는 불소 약제를 사용하지 않았고 탈착된 구개 플레이트는 건조를 피하여 100%의 습도로 보관되었다.
부착된 테스트 치아는 1, 2 및 4주 후 피험자의 구개 플레이트로부터 제거되었다. 약 200㎛의 두께를 지닌 섹션이 각 에나멜로부터 절단되었다. 각 섹션은 미세방사능사진촬영되었다(PW-1803, Philips, The Netherlands). 미세방사능사진촬영을 위한 조건은 하기와 같다 : 튜브 전압은 25 kV ; 튜브 전류는 25mA ; 및 튜브와 피험체 사이의 거리가 370mm인 것이었다. 이후 손상 깊이(ld, ㎛)가 Inaba et al.의 이미지 정량화 방법에 의해 측정되었다(Eur. J. Oral. Sci. 105:74-84, 1997). ld 수치는 치아의 헤드 표면에서 광물 함량이 정상 조직의 광물 함량의 95% 수준에 이르는 손상 위치까지의 거리로서 광물 분포 프로파일 상에 정의되었다. 탈광화가가 재광화율로서 계산된 후 재광화율은 초기 ld 수치에 대한 ld 수치의 감소율로서 계산되었다. 재광화의 결과는 도 21에 나타나 있다. 도 21에서 가로축은 1주, 2주 및 4주의 순서대로 슈크로스 검 그룹(Suc), POs Ca-없는 검 그룹(Xyl) 및 POs Ca 함유 검 그룹(POs)을 나타낸다. 세로축은 재광화율(%)을 나타낸다.
POs Ca 함유 검 그룹(POs)의 재광화율은 1주, 2주 및 4주의 순서대로 67%, 54% 및 76%이었다. POs Ca-없는 검 그룹(Xyl)의 재광화율은 12∼23%로 POs Ca 함유 검 그룹보다 더 낮았다. 슈크로스 검 그룹(Suc)은 2주까지 양성인 재광화율을 나타내었으나 결국 4주에 음성 수치에 도달하여 탈광화를 나타내었다.
인강 구강내 평가는 POs Ca-없는 검과 슈크로스 검 보다 POs Ca 함유 검의 경우 더 높은 재광화 증가 효과를 나타내었다. 특히, 12명의 피험자 모두 2주 동안 각 종류의 검을 섭취하였고 POs Ca 함유 검의 경우 유의적인 결과가 수득되었다. 따라서 인간 구강 내 평가에 의해 POs Ca의 검의로의 첨가가 높은 수준의 재광화 증가 효과를 유도함이 확인되었다. 동시에 구강내에서 실질적으로 매일 POs Ca 함유 검 생성물을 취함으로서 초기 충치의 재광화가 증가되어 충치를 매우 효과적으로 예방함이 확인되었다.
(실시예 18)
실시예 18에서 인산화된 올리고사카라이드를 포함한 사탕을 취할 때 타액의 성분이 분석되었다.
표 10의 하기 성분을 함유한 사탕이 제조되었다.
사탕 (중량%)
팔라티니트 95
POs-Ca 2.94
향미료 2.06

4명의 건강한 성인 피험자가 사탕(4.7g)을 섭취하였고 분비된 타액이 수집되 었다. 사탕은 입으로 취해진 후 약 10분 동안 구강 내에 존재하였다. 타액은 하기 4가지 기간에 수집되었다 : (ⅰ) 0∼1분 ; (ⅱ) 1∼3분 ; (ⅲ) 3∼6분 ; (ⅳ) 6∼10분. 분비된 타액은 15ml의 시험관으로 깔때기를 통해 수집되었다. 수집 후 즉시 분비된 타액이 교반되었고 타액의 pH 및 양이 측정되었다. 결과는 도 22 및 23에 나타나 있다. 도 22에서 가로축은 섭취 시간(분)을 나타내고 세로축은 pH를 나타낸다. 구강 내 타액의 pH는 7로 일정하였다. 도 23에서 가로축은 섭취 시간(분)을 나타내고 세로축은 타액의 양(ml/분)을 나타낸다. 분비된 타액의 양은 섭취 시간에 걸쳐 실질적으로 일정하다.
이후, 1800㎕의 타액이 4개의 원심분리관에 옮겨졌다. 1N의 HCL 용액 200㎕이 각 관에 첨가되었다. 혼합물은 완전히 혼합되었고 3분간 10,000 ×g에서 원심분리되었고 0.5㎛ 멤브레인으로 여과되었다. 칼슘 함량을 측정하기 위해 10㎕의 결과적인 상청액이 OCPC 방법에 의해 측정되었다. 인 함량을 측정하기 위해 50㎕의 상청액이 몰리브덴 방법에 의해 측정되었다. 칼슘 및 인 함량은 도 24에 나타나 있다. 도 24에서 가로축은 섭취 시간(분)을 나타내고 좌측 세로축은 칼슘 또는 인 함량(mM)을 나타내고 우측 세로축은 Ca/P 비율을 나타낸다. 칼슘 및 인 함량 모두 섭취 시간에 걸쳐 실질적으로 일정하였다(약 0.6 유지).
(실시예 19)
실시예 19에서 인산화된 올리고사카라이드를 포함한 사탕 및 연질 사탕이 재광화 증가 효과를 조사하기 위해 제조되었다.
표 11에 나타난 성분을 함유한 사탕(4.7g/각각) 및 연질 사탕(4.0g/각각)이 통상으로 사용되는 방법에 따라 제조되었다.
사탕 (중량%)
팔라티니트 95
POs-Ca 2.94
향미료 2.06
연질 사탕 (중량%)
팔라티니트 47.5
자일리톨 47.5
POs-Ca 2.94
향미료 2.06

10ml의 증류수가 상기-기술된 사탕 및 연질 사탕에 첨가되었고 끓는 배쓰에서 용해되었다. 결과적인 추출 용액의 pH가 마이크로 pH 측정기에 의해 측정되었다. 이후 추출 용액은 3분간 10,000 ×g에서 원심분리되었고 0.5㎛ 멤브레인으로 여과되었다. 칼슘 농도를 측정하기 위해 10㎕의 결과적인 상청액이 OCPC 방법에 의해 측정되었다. 무기 인 농도를 측정하기 위해 50㎕의 결과적인 상청액이 몰리브덴산 방법에 의해 측정되었다. 결과는 표 12에 나타나 있다.
연질 사탕 및 사탕의 추출물 내의 Ca 및 P 광물 함량
생성물 Ca(mM) P(mM) Ca/P
연질 사탕 3.88 1.82 2.13
사탕 5.18 2.14 2.42

또한 표 12의 분석 결과에 기초하여 2- 및 10-배 희석된 추출 용액이 표 13에 나타난 칼슘 및 인 함량을 지니도록 조정되었다. 이후 수산화인회석 상의 재광화 증가 효과가 평가되었다.
증가된 재광화의 평가 시스템
3.0mM CaCl2 용액
1.8mM KH2PO4 용액
20mM HEPES 완충액(pH 7.0)
(0.5mg/ml 수산화인회석)

결과는 도 24에 나타나 있다. 도 25에서 가로축은 섭취 시간(분)을 나타내고 좌측 세로축은 칼슘 또는 인 함량(mM)을 나타내고 우측 세로축은 Ca/P 비율을 나타낸다.
사탕 또는 연질 사탕에서 10-배 희석된 용액은 높은 수준의 재광화 증가 효과를 나타내었다.
(실시예 20)
표 14에 나타난 조성물을 지닌 치약이 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
실리카 15.00
카르복시메틸셀룰로스 1.50
폴리에틸렌글리콜 3.00
솔비톨 10.00
라우릴황산나트륨 1.50
방부제 0.10
향미료 1.00
사카린 미량
불화나트륨 0.15
POs Ca 4.00
디소듐 하이드로겐포스페이트 3.75
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 21)
표 15에 나타난 조성물을 지닌 치약이 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
실리카 15.00
카르복시메틸셀룰로스 1.50
폴리에틸렌글리콜 3.00
솔비톨 20.00
글리세린 5.00
라우릴황산나트륨 1.50
방부제 0.10
향미료 1.00
사카린 0.10
불화나트륨 0.20
POs Ca 4.00
염화세틸피리디늄 0.25
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 22)
표 16에 나타난 조성물을 지닌 치약이 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
실리카 15.00
카르복시메틸셀룰로스 1.50
폴리에틸렌글리콜 3.00
자일리톨 20.00
글리세린 5.00
라우릴황산나트륨 1.50
방부제 0.10
향미료 1.00
피로인산나트륨 0.50
불화나트륨 0.20
POs Ca 4.00
덱스트라나제 0.20
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 23)
표 17에 나타난 조성물을 지닌 치약이 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
실리카 15.00
카르복시메틸셀룰로스 1.50
폴리에틸렌글리콜 3.00
자일리톨 20.00
라우릴황산나트륨 1.50
방부제 0.10
향미료 1.00
α-칼슘 터리어리(tertiary) 포스페이트 4.00
불화나트륨 0.20
POs Na 4.00
슈크라노스TM 0.20
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 24)
표 18에 나타난 조성물을 지닌 치약이 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조 되었다.
성분 중량%
실리카 16.00
카르복시메틸셀룰로스 1.50
폴리아크릴산나트륨 2.00
플루로닉(Pluronic) 1.00
자일리톨 20.00
라우릴황산나트륨 1.50
이산화티타늄 0.50
향미료 1.00
트리클로산(Triclosan) 0.50
파라-옥시벤조에이트에스테르 5.00
POs Ca 5.00
모노플루오로인산나트륨 0.80
스테비아 추출물 1.50
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 25)
표 19에 나타난 조성물을 지닌 치약이 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
실리카 15.00
카르복시메틸셀룰로스 1.50
폴리에틸렌글리세롤 3.00
자일리톨 20.00
라우릴황산나트륨 1.50
방부제 0.10
향미료 1.00
α-칼슘 터리어리(tertiary) 포스페이트 4.00
불화나트륨 0.20
POs Na 4.00
스테비아 0.20
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 26)
표 20에 나타난 조성물을 지닌 치약이 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
실리카 15.00
카르복시메틸셀룰로스 1.50
폴리에틸렌글리세롤 3.00
자일리톨 20.00
라우릴황산나트륨 1.50
방부제 0.10
향미료 1.00
α-칼슘 터리어리(tertiary) 포스페이트 4.00
불화아연 0.20
POs Na 4.00
효소-처리된 스테비아 0.20
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 27)
표 21에 나타난 조성물을 지닌 치약이 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다. POs Zn은 1N의 수산화아연 용액이 중성화에 사용된 것을 제외하고는 실시예 2에서와 동일한 방식으로 제조되었다.
성분 중량%
실리카 15.00
카르복시메틸셀룰로스 1.50
폴리에틸렌글리세롤 3.00
자일리톨 20.00
라우릴황산나트륨 1.50
방부제 0.10
향미료 1.00
α-칼슘 터리어리(tertiary) 포스페이트 4.00
불화나트륨 0.20
POs Zn 1.00
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 28)
표 22에 나타난 조성물을 지닌 치약이 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조 되었다.
성분 중량%
실리카 15.00
카르복시메틸셀룰로스 1.50
폴리에틸렌글리세롤 3.00
자일리톨 20.00
라우릴황산나트륨 1.50
방부제 0.10
향미료 1.00
트리폴리인산나트륨 2.00
POs Ca 4.00
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 29)
표 23에 나타난 조성물을 지닌 마우스워시가 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
에틸알코올 10.00
라우릴황산나트륨 1.50
글리세린 10.00
멘톨 1.00
자일리톨 17.00
POs Ca 5.00
염화세틸피리디늄 0.25
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 30)
표 24에 나타난 조성물을 지닌 마우스워시가 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
에틸알코올 10.00
라우릴황산나트륨 1.50
글리세린 10.00
멘톨 1.00
자일리톨 17.00
POs Ca 5.00
수소인산이나트륨 3.75
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 31)
표 25에 나타난 조성물을 지닌 마우스워시가 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
에틸알코올 10.00
라우릴황산나트륨 1.50
글리세린 10.00
멘톨 1.00
자일리톨 17.00
POs Ca 5.00
불화나트륨 0.20
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 32)
표 26에 나타난 조성물을 지닌 마우스워시가 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
에틸알코올 10.00
라우릴황산나트륨 1.50
글리세린 10.00
멘톨 1.00
자일리톨 17.00
POs Na 5.00
α-칼슘 터리어리(tertiary) 포스페이트 4.00
수소인산이나트륨 3.75
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 33)
표 27에 나타난 조성물을 지닌 마우스워시가 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다. POs Zn은 1N의 수산화아연 용액이 중성화에 사용된 것을 제외하고는 실시예 2에서와 동일한 방식으로 제조되었다.
성분 중량%
에틸알코올 10.00
라우릴황산나트륨 1.50
글리세린 10.00
멘톨 1.00
자일리톨 17.00
POs Zn 5.00
염화세틸피리디늄 0.25
α-칼슘 터리어리(tertiary) 포스페이트 4.00
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 34)
표 28에 나타난 조성물을 지닌 구강 연고가 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
액체 파라핀 25.00
프레그데신나트륨(sodium fragdecin) 1.00
백색 바셀린 25.00
실리콘 오일 4.00
카르복시메틸셀룰로스 25.00
펙틴 10.00
향미료 1.05
불화나트륨 0.20
POs Ca 5.00
수소인산이나트륨 3.75
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 35)
표 29에 나타난 조성물을 지닌 구강 연고가 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
액체 파라핀 25.00
프레그데신나트륨(sodium fragdecin) 1.00
백색 바셀린 25.00
실리콘 오일 4.00
카르복시메틸셀룰로스 25.00
자일리톨 10.00
향미료 1.05
불화나트륨 0.20
POs Ca 5.00
수소인산이나트륨 3.75
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 36)
표 30에 나타난 조성물을 지닌 치약이 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
실리카 15.00
카르복시메틸셀룰로스 1.50
폴리에틸렌글리세롤 3.00
솔비톨 10.00
자일리톨 10.00
라우릴황산나트륨 1.50
방부제 0.10
향미료 1.00
사카린 미량
불화나트륨 0.15
황산콘드로이틴 4.00
수소인산이나트륨 3.75
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 37)
표 31에 나타난 조성물을 지닌 치약이 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
실리카 15.00
카르복시메틸셀룰로스 1.50
폴리에틸렌글리세롤 3.00
자일리톨 20.00
글리세린 5.00
라우릴황산나트륨 1.50
방부제 0.10
향미료 1.00
사카린 0.10
불화나트륨 0.20
황산콘드로이틴 4.00
염화세틸피리디늄 0.25
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 38)
표 32에 나타난 조성물을 지닌 치약이 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
실리카 15.00
카르복시메틸셀룰로스 1.50
폴리에틸렌글리세롤 3.00
자일리톨 20.00
글리세린 5.00
라우릴황산나트륨 1.50
방부제 0.10
향미료 1.00
피로인산나트륨 0.50
불화나트륨 0.20
황산콘드로이틴 4.00
덱스트라나제 0.20
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 39)
표 33에 나타난 조성물을 지닌 치약이 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
실리카 15.00
카르복시메틸셀룰로스 1.50
폴리에틸렌글리세롤 3.00
자일리톨 20.00
라우릴황산나트륨 1.50
방부제 0.10
향미료 1.00
α-칼슘 터리어리(tertiary) 포스페이트 4.00
불화나트륨 0.20
황산콘드로이틴 4.00
슈크라노스TM 0.20
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 40)
표 34에 나타난 조성물을 지닌 치약이 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
실리카 16.00
카르복시메틸셀룰로스 1.50
폴리아크릴산나트륨 2.00
플루로닉(Pluronic) 1.00
자일리톨 20.00
라우릴황산나트륨 1.50
이산화티타늄 0.50
향미료 1.00
트리클로산(Triclosan) 0.50
파라-옥시벤조에이트에스테르 0.10
황산콘드로이틴 5.00
모노플루오로인산나트륨 0.80
스테비아 추출물 1.50
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 41)
표 35에 나타난 조성물을 지닌 치약이 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
실리카 15.00
카르복시메틸셀룰로스 1.50
폴리에틸렌글리세롤 3.00
자일리톨 20.00
라우릴황산나트륨 1.50
방부제 0.10
향미료 1.00
α-칼슘 터리어리(tertiary) 포스페이트 4.00
불화나트륨 0.20
황산콘드로이틴 4.00
스테비아 0.20
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 42)
표 36에 나타난 조성물을 지닌 치약이 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
실리카 15.00
카르복시메틸셀룰로스 1.50
폴리에틸렌글리세롤 3.00
자일리톨 20.00
라우릴황산나트륨 1.50
방부제 0.10
향미료 1.00
α-칼슘 터리어리(tertiary) 포스페이트 4.00
염화아연 0.20
황산콘드로이틴 4.00
효소-처리된 스테비아 0.20
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 43)
표 37에 나타난 조성물을 지닌 치약이 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
실리카 15.00
카르복시메틸셀룰로스 1.50
폴리에틸렌글리세롤 3.00
자일리톨 20.00
라우릴황산나트륨 1.50
방부제 0.10
향미료 1.00
α-칼슘 터리어리(tertiary) 포스페이트 4.00
불화나트륨 0.20
황산콘드로이틴 1.00
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 44)
표 38에 나타난 조성물을 지닌 치약이 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
실리카 15.00
카르복시메틸셀룰로스 1.50
폴리에틸렌글리세롤 3.00
자일리톨 20.00
라우릴황산나트륨 1.50
방부제 0.10
향미료 1.00
트리폴리인산나트륨 2.00
황산콘드로이틴 4.00
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 45)
표 39에 나타난 조성물을 지닌 마우스워시가 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
에틸알코올 10.00
라우릴황산나트륨 1.50
글리세린 10.00
멘톨 1.00
자일리톨 17.00
황산콘드로이틴 5.00
염화세틸피리디늄 0.25
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 46)
표 40에 나타난 조성물을 지닌 마우스워시가 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
에틸알코올 10.00
라우릴황산나트륨 1.50
글리세린 10.00
멘톨 1.00
자일리톨 17.00
황산콘드로이틴 5.00
수소인산이나트륨 3.75
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 47)
표 41에 나타난 조성물을 지닌 마우스워시가 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
에틸알코올 10.00
라우릴황산나트륨 1.50
글리세린 10.00
멘톨 1.00
자일리톨 17.00
황산콘드로이틴 5.00
불화나트륨 0.20
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 48)
표 42에 나타난 조성물을 지닌 마우스워시가 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
에틸알코올 10.00
라우릴황산나트륨 1.50
글리세린 10.00
멘톨 1.00
자일리톨 17.00
황산콘드로이틴 5.00
α-칼슘 터리어리(tertiary) 포스페이트 4.00
수소인산이나트륨 3.75
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 49)
표 43에 나타난 조성물을 지닌 마우스워시가 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
에틸알코올 10.00
라우릴황산나트륨 1.50
글리세린 10.00
멘톨 1.00
자일리톨 17.00
황산콘드로이틴 5.00
염화세틸피리디늄 0.25
α-칼슘 터리어리(tertiary) 포스페이트 4.00
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 50)
표 44에 나타난 조성물을 지닌 구강 연고가 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
액체 파라핀 25.00
프레그데신나트륨(sodium fragdecin) 1.00
백색 바셀린 25.00
실리콘 오일 4.00
카르복시메틸셀룰로스 25.00
펙틴 10.00
향미료 1.05
불화나트륨 0.20
황산콘드로이틴 5.00
수소인산이나트륨 3.75
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 51)
표 45에 나타난 조성물을 지닌 구강 연고가 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
액체 파라핀 25.00
프레그데신나트륨(sodium fragdecin) 1.00
백색 바셀린 25.00
실리콘 오일 4.00
카르복시메틸셀룰로스 25.00
자일리톨 10.00
향미료 1.05
불화나트륨 0.20
황산콘드로이틴 5.00
수소인산이나트륨 3.75
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 52)
표 46에 나타난 조성물을 지닌 치약이 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
실리카 15.00
카르복시메틸셀룰로스 1.50
폴리에틸렌글리세롤 3.00
솔비톨 10.00
자일리톨 10.00
라우릴황산나트륨 1.50
방부제 0.10
향미료 1.00
사카린 미량
불화나트륨 0.15
황산콘드로이틴 다이머 4.00
수소인산이나트륨 3.75
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 53)
표 47에 나타난 조성물을 지닌 치약이 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
실리카 15.00
카르복시메틸셀룰로스 1.50
폴리에틸렌글리세롤 3.00
자일리톨 20.00
글리세린 5.00
라우릴황산나트륨 1.50
방부제 0.10
향미료 1.00
사카린 0.10
불화나트륨 0.20
황산콘드로이틴 다이머 4.00
염화세틸피리디늄 0.25
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 54)
표 48에 나타난 조성물을 지닌 치약이 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
실리카 15.00
카르복시메틸셀룰로스 1.50
폴리에틸렌글리세롤 3.00
자일리톨 20.00
글리세린 5.00
라우릴황산나트륨 1.50
방부제 0.10
향미료 1.00
피로인산나트륨 0.50
불화나트륨 0.20
황산콘드로이틴 다이머 4.00
덱스트라나제 0.20
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 55)
표 49에 나타난 조성물을 지닌 치약이 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
실리카 15.00
카르복시메틸셀룰로스 1.50
폴리에틸렌글리콜 3.00
자일리톨 20.00
라우릴황산나트륨 1.50
방부제 0.10
향미료 1.00
α-칼슘 터리어리(tertiary) 포스페이트 4.00
불화나트륨 0.20
황산콘드로이틴 다이머 4.00
슈크라노스TM 0.20
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 56)
표 50에 나타난 조성물을 지닌 치약이 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
실리카 16.00
카르복시메틸셀룰로스 1.50
폴리아크릴산나트륨 2.00
플루로닉(Pluronic) 1.00
자일리톨 20.00
라우릴황산나트륨 1.50
이산화티타늄 0.50
향미료 1.00
트리클로산(Triclosan) 0.50
파라-옥시벤조에이트에스테르 0.10
황산콘드로이틴 다이머 5.00
모노플루오로인산나트륨 0.80
스테비아 추출물 1.50
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 57)
표 51에 나타난 조성물을 지닌 치약이 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
실리카 15.00
카르복시메틸셀룰로스 1.50
폴리에틸렌글리세롤 3.00
자일리톨 20.00
라우릴황산나트륨 1.50
방부제 0.10
향미료 1.00
α-칼슘 터리어리(tertiary) 포스페이트 4.00
불화나트륨 0.20
황산콘드로이틴 다이머 4.00
스테비아 0.20
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 58)
표 52에 나타난 조성물을 지닌 치약이 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조 되었다.
성분 중량%
실리카 15.00
카르복시메틸셀룰로스 1.50
폴리에틸렌글리세롤 3.00
자일리톨 20.00
라우릴황산나트륨 1.50
방부제 0.10
향미료 1.00
α-칼슘 터리어리(tertiary) 포스페이트 4.00
염화아연 0.20
황산콘드로이틴 다이머 4.00
효소-처리된 스테비아 0.20
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 59)
표 53에 나타난 조성물을 지닌 치약이 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
실리카 15.00
카르복시메틸셀룰로스 1.50
폴리에틸렌글리세롤 3.00
자일리톨 20.00
라우릴황산나트륨 1.50
방부제 0.10
향미료 1.00
α-칼슘 터리어리(tertiary) 포스페이트 4.00
불화나트륨 0.20
황산콘드로이틴 다이머 1.00
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 60)
표 54에 나타난 조성물을 지닌 치약이 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
실리카 15.00
카르복시메틸셀룰로스 1.50
폴리에틸렌글리세롤 3.00
자일리톨 20.00
라우릴황산나트륨 1.50
방부제 0.10
향미료 1.00
트리폴리인산나트륨 2.00
황산콘드로이틴 다이머 4.00
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 61)
표 55에 나타난 조성물을 지닌 마우스워시가 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
에틸알코올 10.00
라우릴황산나트륨 1.50
글리세린 10.00
멘톨 1.00
자일리톨 17.00
황산콘드로이틴 다이머 5.00
염화세틸피리디늄 0.25
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 62)
표 56에 나타난 조성물을 지닌 마우스워시가 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
에틸알코올 10.00
라우릴황산나트륨 1.50
글리세린 10.00
멘톨 1.00
자일리톨 17.00
황산콘드로이틴 다이머 5.00
수소인산이나트륨 3.75
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 63)
표 57에 나타난 조성물을 지닌 마우스워시가 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
에틸알코올 10.00
라우릴황산나트륨 1.50
글리세린 10.00
멘톨 1.00
자일리톨 17.00
황산콘드로이틴 다이머 5.00
불화나트륨 0.20
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 64)
표 58에 나타난 조성물을 지닌 마우스워시가 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
에틸알코올 10.00
라우릴황산나트륨 1.50
글리세린 10.00
멘톨 1.00
자일리톨 17.00
황산콘드로이틴 다이머 5.00
α-칼슘 터리어리(tertiary) 포스페이트 4.00
수소인산이나트륨 3.75
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 65)
표 59에 나타난 조성물을 지닌 마우스워시가 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
에틸알코올 10.00
라우릴황산나트륨 1.50
글리세린 10.00
멘톨 1.00
자일리톨 17.00
황산콘드로이틴 다이머 5.00
염화세틸피리디늄 0.25
α-칼슘 터리어리(tertiary) 포스페이트 4.00
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 66)
표 60에 나타난 조성물을 지닌 구강 연고가 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
액체 파라핀 25.00
프레그데신나트륨(sodium fragdecin) 1.00
백색 바셀린 25.00
실리콘 오일 4.00
카르복시메틸셀룰로스 25.00
펙틴 10.00
향미료 1.05
불화나트륨 0.20
황산콘드로이틴 다이머 5.00
수소인산이나트륨 3.75
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 67)
표 61에 나타난 조성물을 지닌 구강 연고가 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
액체 파라핀 25.00
프레그데신나트륨(sodium fragdecin) 1.00
백색 바셀린 25.00
실리콘 오일 4.00
카르복시메틸셀룰로스 25.00
자일리톨 10.00
향미료 1.05
불화나트륨 0.20
황산콘드로이틴 다이머 5.00
수소인산이나트륨 3.75
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 68)
표 62에 나타난 조성물을 지닌 치약이 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
실리카 15.00
카르복시메틸셀룰로스 1.50
폴리에틸렌글리세롤 3.00
솔비톨 10.00
자일리톨 10.00
라우릴황산나트륨 1.50
방부제 0.10
향미료 1.00
사카린 미량
불화나트륨 0.15
글루코스-6-인산 4.00
수소인산이나트륨 3.75
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 69)
표 63에 나타난 조성물을 지닌 치약이 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
실리카 15.00
카르복시메틸셀룰로스 1.50
폴리에틸렌글리세롤 3.00
자일리톨 20.00
글리세린 5.00
라우릴황산나트륨 1.50
방부제 0.10
향미료 1.00
사카린 0.10
불화나트륨 0.20
글루코스-6-인산 4.00
염화세틸피리디늄 0.25
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 70)
표 64에 나타난 조성물을 지닌 치약이 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
실리카 15.00
카르복시메틸셀룰로스 1.50
폴리에틸렌글리세롤 3.00
자일리톨 20.00
글리세린 5.00
라우릴황산나트륨 1.50
방부제 0.10
향미료 1.00
피로인산나트륨 0.50
불화나트륨 0.20
글루코스-6-인산 4.00
덱스트라나제 0.20
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 71)
표 65에 나타난 조성물을 지닌 치약이 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
실리카 15.00
카르복시메틸셀룰로스 1.50
폴리에틸렌글리콜 3.00
자일리톨 20.00
라우릴황산나트륨 1.50
방부제 0.10
향미료 1.00
α-칼슘 터리어리(tertiary) 포스페이트 4.00
불화나트륨 0.20
글루코스-6-인산 4.00
슈크라노스TM 0.20
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 72)
표 66에 나타난 조성물을 지닌 치약이 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조 되었다.
성분 중량%
실리카 16.00
카르복시메틸셀룰로스 1.50
폴리아크릴산나트륨 2.00
플루로닉(Pluronic) 1.00
자일리톨 20.00
라우릴황산나트륨 1.50
이산화티타늄 0.50
향미료 1.00
트리클로산(Triclosan) 0.50
파라-옥시벤조에이트에스테르 0.10
글루코스-6-인산 5.00
모노플루오로인산나트륨 0.80
스테비아 추출물 1.50
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 73)
표 67에 나타난 조성물을 지닌 치약이 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
실리카 15.00
카르복시메틸셀룰로스 1.50
폴리에틸렌글리세롤 3.00
자일리톨 20.00
라우릴황산나트륨 1.50
방부제 0.10
향미료 1.00
α-칼슘 터리어리(tertiary) 포스페이트 4.00
불화나트륨 0.20
글루코스-6-인산 4.00
스테비아 0.20
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 74)
표 68에 나타난 조성물을 지닌 치약이 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
실리카 15.00
카르복시메틸셀룰로스 1.50
폴리에틸렌글리세롤 3.00
자일리톨 20.00
라우릴황산나트륨 1.50
방부제 0.10
향미료 1.00
α-칼슘 터리어리(tertiary) 포스페이트 4.00
염화아연 0.20
글루코스-6-인산 4.00
효소-처리된 스테비아 0.20
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 75)
표 69에 나타난 조성물을 지닌 치약이 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
실리카 15.00
카르복시메틸셀룰로스 1.50
폴리에틸렌글리세롤 3.00
자일리톨 20.00
라우릴황산나트륨 1.50
방부제 0.10
향미료 1.00
α-칼슘 터리어리(tertiary) 포스페이트 4.00
불화나트륨 0.20
글루코스-6-인산 1.00
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 76)
표 70에 나타난 조성물을 지닌 치약이 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
실리카 15.00
카르복시메틸셀룰로스 1.50
폴리에틸렌글리세롤 3.00
자일리톨 20.00
라우릴황산나트륨 1.50
방부제 0.10
향미료 1.00
트리폴리인산나트륨 2.00
글루코스-6-인산 4.00
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 77)
표 71에 나타난 조성물을 지닌 마우스워시가 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
에틸알코올 10.00
라우릴황산나트륨 1.50
글리세린 10.00
멘톨 1.00
자일리톨 17.00
글루코스-6-인산 5.00
염화세틸피리디늄 0.25
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 78)
표 72에 나타난 조성물을 지닌 마우스워시가 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
에틸알코올 10.00
라우릴황산나트륨 1.50
글리세린 10.00
멘톨 1.00
자일리톨 17.00
글루코스-6-인산 5.00
수소인산이나트륨 3.75
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 79)
표 73에 나타난 조성물을 지닌 마우스워시가 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
에틸알코올 10.00
라우릴황산나트륨 1.50
글리세린 10.00
멘톨 1.00
자일리톨 17.00
글루코스-6-인산 5.00
불화나트륨 0.20
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 80)
표 74에 나타난 조성물을 지닌 마우스워시가 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
에틸알코올 10.00
라우릴황산나트륨 1.50
글리세린 10.00
멘톨 1.00
자일리톨 17.00
글루코스-6-인산 5.00
α-칼슘 터리어리(tertiary) 포스페이트 4.00
수소인산이나트륨 3.75
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 81)
표 75에 나타난 조성물을 지닌 마우스워시가 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
에틸알코올 10.00
라우릴황산나트륨 1.50
글리세린 10.00
멘톨 1.00
자일리톨 17.00
글루코스-6-인산 5.00
염화세틸피리디늄 0.25
α-칼슘 터리어리(tertiary) 포스페이트 4.00
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 82)
표 76에 나타난 조성물을 지닌 구강 연고가 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
액체 파라핀 25.00
프레그데신나트륨(sodium fragdecin) 1.00
백색 바셀린 25.00
실리콘 오일 4.00
카르복시메틸셀룰로스 25.00
펙틴 10.00
향미료 1.05
불화나트륨 0.20
글루코스-6-인산 5.00
수소인산이나트륨 3.75
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 83)
표 77에 나타난 조성물을 지닌 구강 연고가 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
액체 파라핀 25.00
프레그데신나트륨(sodium fragdecin) 1.00
백색 바셀린 25.00
실리콘 오일 4.00
카르복시메틸셀룰로스 25.00
자일리톨 10.00
향미료 1.05
불화나트륨 0.20
글루코스-6-인산 5.00
수소인산이나트륨 3.75
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 84)
표 78에 나타난 조성물을 지닌 치약이 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
실리카 15.00
카르복시메틸셀룰로스 1.50
폴리에틸렌글리세롤 3.00
솔비톨 10.00
자일리톨 10.00
라우릴황산나트륨 1.50
방부제 0.10
향미료 1.00
사카린 미량
불화나트륨 0.15
올리고갈락투론산 4.00
수소인산이나트륨 3.75
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 85)
표 79에 나타난 조성물을 지닌 치약이 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
실리카 15.00
카르복시메틸셀룰로스 1.50
폴리에틸렌글리세롤 3.00
자일리톨 20.00
글리세린 5.00
라우릴황산나트륨 1.50
방부제 0.10
향미료 1.00
사카린 0.10
불화나트륨 0.20
올리고갈락투론산 4.00
염화세틸피리디늄 0.25
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 86)
표 80에 나타난 조성물을 지닌 치약이 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
실리카 15.00
카르복시메틸셀룰로스 1.50
폴리에틸렌글리세롤 3.00
자일리톨 20.00
글리세린 5.00
라우릴황산나트륨 1.50
방부제 0.10
향미료 1.00
피로인산나트륨 0.50
불화나트륨 0.20
올리고갈락투론산 4.00
덱스트라나제 0.20
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 87)
표 81에 나타난 조성물을 지닌 치약이 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
실리카 15.00
카르복시메틸셀룰로스 1.50
폴리에틸렌글리콜 3.00
자일리톨 20.00
라우릴황산나트륨 1.50
방부제 0.10
향미료 1.00
α-칼슘 터리어리(tertiary) 포스페이트 4.00
불화나트륨 0.20
올리고갈락투론산 4.00
슈크라노스TM 0.20
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 88)
표 82에 나타난 조성물을 지닌 치약이 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
실리카 16.00
카르복시메틸셀룰로스 1.50
폴리아크릴산나트륨 2.00
플루로닉(Pluronic) 1.00
자일리톨 20.00
라우릴황산나트륨 1.50
이산화티타늄 0.50
향미료 1.00
트리클로산(Triclosan) 0.50
파라-옥시벤조에이트에스테르 0.10
올리고갈락투론산 5.00
모노플루오로인산나트륨 0.80
스테비아 추출물 1.50
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 89)
표 83에 나타난 조성물을 지닌 치약이 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
실리카 15.00
카르복시메틸셀룰로스 1.50
폴리에틸렌글리세롤 3.00
자일리톨 20.00
라우릴황산나트륨 1.50
방부제 0.10
향미료 1.00
α-칼슘 터리어리(tertiary) 포스페이트 4.00
불화나트륨 0.20
올리고갈락투론산 4.00
스테비아 0.20
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 90)
표 84에 나타난 조성물을 지닌 치약이 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
실리카 15.00
카르복시메틸셀룰로스 1.50
폴리에틸렌글리세롤 3.00
자일리톨 20.00
라우릴황산나트륨 1.50
방부제 0.10
향미료 1.00
α-칼슘 터리어리(tertiary) 포스페이트 4.00
염화아연 0.20
올리고갈락투론산 4.00
효소-처리된 스테비아 0.20
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 91)
표 85에 나타난 조성물을 지닌 치약이 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
실리카 15.00
카르복시메틸셀룰로스 1.50
폴리에틸렌글리세롤 3.00
자일리톨 20.00
라우릴황산나트륨 1.50
방부제 0.10
향미료 1.00
α-칼슘 터리어리(tertiary) 포스페이트 4.00
불화나트륨 0.20
올리고갈락투론산 1.00
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 92)
표 86에 나타난 조성물을 지닌 치약이 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
실리카 15.00
카르복시메틸셀룰로스 1.50
폴리에틸렌글리세롤 3.00
자일리톨 20.00
라우릴황산나트륨 1.50
방부제 0.10
향미료 1.00
트리폴리인산나트륨 2.00
올리고갈락투론산 4.00
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 93)
표 87에 나타난 조성물을 지닌 마우스워시가 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
에틸알코올 10.00
라우릴황산나트륨 1.50
글리세린 10.00
멘톨 1.00
자일리톨 17.00
올리고갈락투론산 5.00
염화세틸피리디늄 0.25
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 94)
표 88에 나타난 조성물을 지닌 마우스워시가 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
에틸알코올 10.00
라우릴황산나트륨 1.50
글리세린 10.00
멘톨 1.00
자일리톨 17.00
올리고갈락투론산 5.00
수소인산이나트륨 3.75
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 95)
표 89에 나타난 조성물을 지닌 마우스워시가 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
에틸알코올 10.00
라우릴황산나트륨 1.50
글리세린 10.00
멘톨 1.00
자일리톨 17.00
올리고갈락투론산 5.00
불화나트륨 0.20
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 96)
표 90에 나타난 조성물을 지닌 마우스워시가 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
에틸알코올 10.00
라우릴황산나트륨 1.50
글리세린 10.00
멘톨 1.00
자일리톨 17.00
올리고갈락투론산 5.00
α-칼슘 터리어리(tertiary) 포스페이트 4.00
수소인산이나트륨 3.75
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 97)
표 91에 나타난 조성물을 지닌 마우스워시가 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
에틸알코올 10.00
라우릴황산나트륨 1.50
글리세린 10.00
멘톨 1.00
자일리톨 17.00
올리고갈락투론산 5.00
염화세틸피리디늄 0.25
α-칼슘 터리어리(tertiary) 포스페이트 4.00
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 98)
표 92에 나타난 조성물을 지닌 구강 연고가 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
액체 파라핀 25.00
프레그데신나트륨(sodium fragdecin) 1.00
백색 바셀린 25.00
실리콘 오일 4.00
카르복시메틸셀룰로스 25.00
펙틴 10.00
향미료 1.05
불화나트륨 0.20
올리고갈락투론산 5.00
수소인산이나트륨 3.75
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 99)
표 93에 나타난 조성물을 지닌 구강 연고가 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
액체 파라핀 25.00
프레그데신나트륨(sodium fragdecin) 1.00
백색 바셀린 25.00
실리콘 오일 4.00
카르복시메틸셀룰로스 25.00
자일리톨 10.00
향미료 1.05
불화나트륨 0.20
올리고갈락투론산 5.00
수소인산이나트륨 3.75
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 100)
표 94에 나타난 조성물을 지닌 치약이 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
실리카 15.00
카르복시메틸셀룰로스 1.50
폴리에틸렌글리세롤 3.00
솔비톨 10.00
자일리톨 10.00
라우릴황산나트륨 1.50
방부제 0.10
향미료 1.00
사카린 미량
불화나트륨 0.15
주석산 4.00
수소인산이나트륨 3.75
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 101)
표 95에 나타난 조성물을 지닌 치약이 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
실리카 15.00
카르복시메틸셀룰로스 1.50
폴리에틸렌글리세롤 3.00
자일리톨 20.00
글리세린 5.00
라우릴황산나트륨 1.50
방부제 0.10
향미료 1.00
사카린 0.10
불화나트륨 0.20
주석산 4.00
염화세틸피리디늄 0.25
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 102)
표 96에 나타난 조성물을 지닌 치약이 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
실리카 15.00
카르복시메틸셀룰로스 1.50
폴리에틸렌글리세롤 3.00
자일리톨 20.00
글리세린 5.00
라우릴황산나트륨 1.50
방부제 0.10
향미료 1.00
피로인산나트륨 0.50
불화나트륨 0.20
주석산 4.00
덱스트라나제 0.20
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 103)
표 97에 나타난 조성물을 지닌 치약이 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
실리카 15.00
카르복시메틸셀룰로스 1.50
폴리에틸렌글리콜 3.00
자일리톨 20.00
라우릴황산나트륨 1.50
방부제 0.10
향미료 1.00
α-칼슘 터리어리(tertiary) 포스페이트 4.00
불화나트륨 0.20
주석산 4.00
슈크라노스TM 0.20
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 104)
표 98에 나타난 조성물을 지닌 치약이 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
실리카 16.00
카르복시메틸셀룰로스 1.50
폴리아크릴산나트륨 2.00
플루로닉(Pluronic) 1.00
자일리톨 20.00
라우릴황산나트륨 1.50
이산화티타늄 0.50
향미료 1.00
트리클로산(Triclosan) 0.50
파라-옥시벤조에이트에스테르 0.10
주석산 5.00
모노플루오로인산나트륨 0.80
스테비아 추출물 1.50
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 105)
표 99에 나타난 조성물을 지닌 치약이 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
실리카 15.00
카르복시메틸셀룰로스 1.50
폴리에틸렌글리세롤 3.00
자일리톨 20.00
라우릴황산나트륨 1.50
방부제 0.10
향미료 1.00
α-칼슘 터리어리(tertiary) 포스페이트 4.00
불화나트륨 0.20
주석산 4.00
스테비아 0.20
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 106)
표 100에 나타난 조성물을 지닌 치약이 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조 되었다.
성분 중량%
실리카 15.00
카르복시메틸셀룰로스 1.50
폴리에틸렌글리세롤 3.00
자일리톨 20.00
라우릴황산나트륨 1.50
방부제 0.10
향미료 1.00
α-칼슘 터리어리(tertiary) 포스페이트 4.00
염화아연 0.20
주석산 4.00
효소-처리된 스테비아 0.20
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 107)
표 101에 나타난 조성물을 지닌 치약이 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
실리카 15.00
카르복시메틸셀룰로스 1.50
폴리에틸렌글리세롤 3.00
자일리톨 20.00
라우릴황산나트륨 1.50
방부제 0.10
향미료 1.00
α-칼슘 터리어리(tertiary) 포스페이트 4.00
불화나트륨 0.20
주석산 1.00
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 108)
표 102에 나타난 조성물을 지닌 치약이 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
실리카 15.00
카르복시메틸셀룰로스 1.50
폴리에틸렌글리세롤 3.00
자일리톨 20.00
라우릴황산나트륨 1.50
방부제 0.10
향미료 1.00
트리폴리인산나트륨 2.00
주석산 4.00
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 109)
표 103에 나타난 조성물을 지닌 마우스워시가 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
에틸알코올 10.00
라우릴황산나트륨 1.50
글리세린 10.00
멘톨 1.00
자일리톨 17.00
주석산 5.00
염화세틸피리디늄 0.25
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 110)
표 104에 나타난 조성물을 지닌 마우스워시가 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
에틸알코올 10.00
라우릴황산나트륨 1.50
글리세린 10.00
멘톨 1.00
자일리톨 17.00
주석산 5.00
수소인산이나트륨 3.75
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 111)
표 105에 나타난 조성물을 지닌 마우스워시가 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
에틸알코올 10.00
라우릴황산나트륨 1.50
글리세린 10.00
멘톨 1.00
자일리톨 17.00
주석산 5.00
불화나트륨 0.20
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 112)
표 106에 나타난 조성물을 지닌 마우스워시가 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
에틸알코올 10.00
라우릴황산나트륨 1.50
글리세린 10.00
멘톨 1.00
자일리톨 17.00
주석산 5.00
α-칼슘 터리어리(tertiary) 포스페이트 4.00
수소인산이나트륨 3.75
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 113)
표 107에 나타난 조성물을 지닌 마우스워시가 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
에틸알코올 10.00
라우릴황산나트륨 1.50
글리세린 10.00
멘톨 1.00
자일리톨 17.00
주석산 5.00
염화세틸피리디늄 0.25
α-칼슘 터리어리(tertiary) 포스페이트 4.00
물 나머지
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 114)
표 108에 나타난 조성물을 지닌 구강 연고가 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
액체 파라핀 25.00
프레그데신나트륨(sodium fragdecin) 1.00
백색 바셀린 25.00
실리콘 오일 4.00
카르복시메틸셀룰로스 25.00
펙틴 10.00
향미료 1.05
불화나트륨 0.20
주석산 5.00
수소인산이나트륨 3.75
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 115)
표 109에 나타난 조성물을 지닌 구강 연고가 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
성분 중량%
액체 파라핀 25.00
프레그데신나트륨(sodium fragdecin) 1.00
백색 바셀린 25.00
실리콘 오일 4.00
카르복시메틸셀룰로스 25.00
자일리톨 10.00
향미료 1.05
불화나트륨 0.20
주석산 5.00
수소인산이나트륨 3.75
100.00

이러한 조성물로 만족스러운 항-충치 기능이 달성될 수 있었다.
(실시예 116)
표 110에 나타난 조성물을 지닌 인공 타액이 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
(mg)
염화나트륨 42.2
염화칼륨 60
염화칼슘 7.3
염화마그네슘 2.6
제2인산칼륨 17.1
POs Na 20
총계 (ml) 50

인공 타액은 우수한 재광화 증가 효과 및 구강 내 pH를 중성으로 회복시키는 능력을 지닌다.
(실시예 117)
표 111에 나타난 조성물을 지닌 인공 타액이 통상으로 사용되는 방법에 의해 제조되었다.
(mg)
염화나트륨 42.2
염화칼륨 60
POs Ca 10
염화마그네슘 2.6
제2인산칼륨 17.1
총계 (ml) 50

인공 타액은 우수한 재광화 증가 효과 및 구강 내 pH를 중성으로 회복시키는 능력을 지닌다.
인공 타액은 POs Ca 및 POs Na 이외의 완충제를 첨가함으로서 유사하게 제조될 수 있다.
상기 기술된 바와 같이 본 발명은 치아의 재광화에 의해 충치의 발달을 감소시키는 식이 조성물 또는 구강 조성물을 제공한다.





Claims (42)

  1. 삭제
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 삭제
  5. 삭제
  6. 삭제
  7. 삭제
  8. 삭제
  9. ⅰ) 인산화된 올리고사카라이드 또는 그의 당 알코올인 구강 내 pH 완충 작용을 지닌 완충제;
    ⅱ) 상기 (ⅰ)항의 완충제 성분과는 상이한
    칼슘 비스(bis)(디하이드로겐포스페이트) 모노하이드레이트, 칼슘 하이드로겐포스페이트 디하이드레이트, 3염기성 인산칼슘, 피로인산칼슘, 수산화인회석 분말, 비결정성 인산칼슘, 소뼈 칼슘, 달걀껍질 칼슘, 산호 칼슘, 진주 칼슘, 어류 칼슘, 패류 칼슘 또는 α-3염기성 인산칼슘에서 선택된 1종 이상의 인-칼슘 보정제;
    인산나트륨, 수소인산나트륨, 인산칼륨 또는 수소인산칼륨에서 선택된 1종 이상의 인 제제, 또는
    탄산칼슘, 염화칼슘, 유산칼슘, 글루콘산칼슘, 유장 칼슘, 유기산 칼슘, 콜로이드성 탄산칼슘, 카세인 포스포펩타이드 칼슘 또는 불화칼슘에서 선택된 1종 이상의 칼슘제제; 및
    ⅲ) 항-충치를 위한 유효량의 불소 또는 불소 함유 물질을 포함하는 식이 조성물에 있어서,
    상기 식이조성물의 Ca/P 비율은 1.0 내지 1.67 임을 특징으로 하는 식이조성물
  10. 삭제
  11. 제 9항에 있어서, 상기 완충제는 하나의 인산기가 글루칸에 연결된 α-1,4 결합으로 3∼5개의 글루코스로 구성된 글루칸 또는 두개의 인산기가 글루칸에 연결된 α-1,4 결합으로 2∼8개의 글루코스로 구성된 글루칸인 인산화된 올리고사카라이드 또는 그의 당 알코올임을 특징으로 하는 식이 조성물
  12. 제 9항에 있어서, 상기 완충제는 알칼리성 금속염, 알칼리토금속염 또는 철염의 형태임을 특징으로 하는 식이 조성물
  13. 제 12항에 있어서, 상기 완충제는 나트륨염 또는 칼슘염의 형태임을 특징으로 하는 식이 조성물
  14. 삭제
  15. 삭제
  16. 삭제
  17. 삭제
  18. 삭제
  19. 삭제
  20. 삭제
  21. 삭제
  22. 삭제
  23. ⅰ) 인산화된 올리고사카라이드 또는 그의 당 알코올인 구강 내 pH 완충 작용을 지닌 완충제;
    ⅱ) 상기 (ⅰ)항의 완충제 성분과는 상이한
    칼슘 비스(bis)(디하이드로겐포스페이트) 모노하이드레이트, 칼슘 하이드로겐포스페이트 디하이드레이트, 3염기성 인산칼슘, 피로인산칼슘, 수산화인회석 분말, 비결정성 인산칼슘, 소뼈 칼슘, 달걀껍질 칼슘, 산호 칼슘, 진주 칼슘, 어류 칼슘, 패류 칼슘 또는 α-3염기성 인산칼슘에서 선택된 1종 이상의 인-칼슘 보정제;
    인산나트륨, 수소인산나트륨, 인산칼륨 또는 수소인산칼륨에서 선택된 1종 이상의 인 제제, 또는
    탄산칼슘, 염화칼슘, 유산칼슘, 글루콘산칼슘, 유장 칼슘, 유기산 칼슘, 콜로이드성 탄산칼슘, 카세인 포스포펩타이드 칼슘 또는 불화칼슘에서 선택된 1종 이상의 칼슘제제; 및
    ⅲ) 항-충치를 위한 유효량의 불소 또는 불소 함유 물질을 포함하는 구강 조성물에 있어서,
    상기 구강조성물의 Ca/P 비율은 1.0 내지 1.67 임을 특징으로 하는 구강조성물
  24. 삭제
  25. 제 23항에 있어서, 상기 완충제는 하나의 인산기가 글루칸에 연결된 α-1,4 결합으로 3∼5개의 글루코스로 구성된 글루칸 또는 두개의 인산기가 글루칸에 연결된 α-1,4 결합으로 2∼8개의 글루코스로 구성된 글루칸인 인산화된 올리고사카라이드 또는 그의 당 알코올임을 특징으로 하는 구강 조성물
  26. 제 23항에 있어서, 상기 완충제는 알칼리성 금속염, 알칼리토금속염, 아연염 또는 철염의 형태임을 특징으로 하는 구강 조성물
  27. 제 26항에 있어서, 상기 완충제는 나트륨염, 칼슘염 또는 아연염의 형태임을 특징으로 하는 구강 조성물
  28. 삭제
  29. 삭제
  30. 삭제
  31. 삭제
  32. 삭제
  33. 삭제
  34. 삭제
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