JP2002020398A - リン酸化糖とその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 カルシウム、マグネシウム、あるいは鉄など
のミネラルと反応してミネラルとの化合物または錯体を
形成することにより、これらのミネラルを不溶化させな
い能力のあるリン酸化糖を提供すること、および、この
リン酸化糖を肥料、飼料、食品、飲料、口腔用組成物、
洗浄剤組成物、またはそれらの添加用組成物として広く
提供すること。 【解決手段】 グルコース２個以上からなるグルカンに
１個以上のリン酸基が結合しているリン酸化糖が提供さ
れる。リン酸化糖にタンパク質あるいはペプチドを結合
させたリン酸化糖誘導体、およびリン酸化糖あるいはそ
れらの誘導体とアルカリ土類金属または鉄とを結合させ
た物質、およびそれらの製造方法もまた提供される。本
発明により、上記リン酸化糖またはそれらの誘導体を含
む肥料、飼料、食品、飲料、口腔用組成物、洗浄剤用組
成物、またはそれらの添加用組成物が提供される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、リン酸化された糖
（以下、リン酸化糖と称する）に関する。さらに本発明
は、リン酸化糖とタンパク質またはペプチドとの複合体
であるリン酸化糖誘導体、もしくはリン酸化糖あるいは
リン酸化糖誘導体とアルカリ土類金属あるいは鉄との結
合体であるリン酸化糖誘導体に関する。これらのリン酸
化糖あるいはリン酸化糖誘導体は、カルシウムなどのア
ルカリ土類金属または鉄の沈殿阻害効果（以下、可溶化
という）、あるいはカルシウムの吸収促進作用を有して
いる。従って、本発明は、食品、飲料、飼料、あるいは
肥料に含まれるまたは含有させたカルシウムなどのアル
カリ土類金属、または鉄の生体への吸収を促進させるこ
とによって、ヒトや動物の健康を増進して各種の疾患を
予防する原料、飲食用組成物、食品添加用組成物、ある
いは飼料の原料または組成物として有用である。本発明
はまた、植物へのカルシウムの吸収を促進して、植物あ
るいは果実の日持ちを向上させる肥料の原料や組成物に
関する。さらに、本発明は、虫歯の予防効果を有してお
り、詳細には食品、飲料、飼料はもとより、練り歯磨
き、マウスウオッシュ、トローチなどの口腔用組成物に
も添加され得る。本発明は、種々のスケール、特にカル
シウム系およびマグネシウム系スケールの発生を防止ま
たは抑制し得るスケール防止剤として使用され得る。

【０００２】

【従来の技術】食品から摂取すべき栄養素の中で、ミネ
ラルは、骨、神経、および筋肉の機能を維持するために
欠くことができない。しかし、このミネラルは現在の食
生活においては不足しがちで、このため健康上への影響
が問題となっている。

【０００３】例えば、カルシウムの平均摂取量は栄養所
要量に達していない。所要量が６００ｍｇと高く設定さ
れているのは、以下に示すような理由で体内でのカルシ
ウム吸収率が極めて低いからである。このため、吸収率
を高めることが重要である。カルシウムはアルカリ性領
域において無機リン酸と結合して不溶性の沈澱（リン酸
カルシウム）を形成することが知られている。腸内の環
境は微アルカリ性であり、かつ最近の加工食品には無機
リン酸が多く含まれている。従って、摂取されたカルシ
ウムは、リン酸カルシウムとなり沈殿を生じる。このた
め腸管からのカルシウムの吸収が妨げられる。

【０００４】カルシウムを腸内環境下において腸管から
効率よく吸収させることは、重要な課題である。特に、
成長期の子供や妊婦は、より多くのカルシウムを摂取す
る必要がある。また、高齢になるに従って腸管の機能が
低下し、カルシウムの吸収力が低下する結果発症する骨
粗鬆症も深刻な問題である。カルシウムを多く含む食品
には、牛乳、ヨーグルト、チーズなどの乳製品、および
いわし、えびなどの魚介類の干物、佃煮があるが、嗜好
の問題や咀嚼力の低下から摂取されにくい場合も多い。

【０００５】鉄分の摂取については、２価鉄は酸化され
て３価鉄に変化しやすい。酸化型の鉄は、中性からアル
カリ性域で凝集して沈澱を形成するため生体で吸収され
難くなる。また、鉄はそれが含まれる食品によってその
吸収性が大きく異なるために、偏食しがちな現代人の摂
取量は十分とは言えない。特に、女性は鉄の需要が高い
ので、摂取量が少ないことは問題である。

【０００６】マグネシウムについても、マグネシウム塩
はカルシウム塩と同様、不溶性であるため、その生体内
への吸収率は比較的低く、特に成長期の子供や妊婦にお
いて、摂取量が不足することは問題である。さらに、マ
グネシウムも、鉄と同様に食事内容の影響を受けやす
い。

【０００７】これらのミネラルは、特に成長期の子供や
妊婦において不足することが多く、これらをより多く摂
取する必要がある。さらに今日、ダイエットや偏食の問
題が大きく、嗜好食品においても、カルシウムと同様に
鉄やマグネシウムの有効な生体への吸収を考慮した食品
が期待され、これらの吸収を促進する摂取方法を開発す
ることは重要である。

【０００８】以上のような目的でカルシウム、マグネシ
ウム、鉄などを飲料類に添加した場合に、保存中に沈澱
が発生して有効な成分が損失することが問題となってい
る。また、カルシウムの過剰投与は、タンパク質の利用
性低下（五島ら、栄養と食糧、32巻、１〜11頁、1979
年）あるいはミネラルの利用性低下（内藤ら、日本栄養
食糧学会誌、39巻、433〜439頁、1986年）を引き起こす
ことが知られている。

【０００９】畜産業界では、生産性向上のため、ブロイ
ラー、豚などは急激な成長が求められるため、骨の発育
が追いつかずに脚弱、奇形などの問題が起こっている。
カルシウムは特に、骨、卵殻質改善、牛乳のカルシウム
強化、鰻の骨曲がり防止などの目的で補給されている
が、カルシウムの利用率が悪いことが大きな問題となっ
ている。

【００１０】植物にとってもカルシウムは重要な要素で
あり、ＥＤＴＡ−カルシウムなどのキレートカルシウム
の投与によって、細胞壁の強化あるいはエチレンガスの
発生抑制などの作用による老化抑制効果および日持ち性
の向上が知られている（K.Tanakaら、J.Japan.Soc.Hor
t.Sci.，61巻、183〜190頁、1992年）。しかし、ＥＤＴ
Ａ−カルシウムは毒性を有するため、毒性のない安全で
有効なキレート剤の開発が望まれている。

【００１１】カルシウムが腸内環境下において不溶化し
ないようにすることにより、腸管から効率よく吸収させ
ることを目的として、カルシウムと化合物を形成する能
力のある物質が開発され利用されている。例えば、カゼ
インホスホペプチド（ＣＰＰ）を飲料または食品に添加
する技術（特開平３−２４０４７０号公報、特開平５−
２８４９３９号公報）、クエン酸カルシウム・リンゴ酸
カルシウム複合体のカルシウム可溶化効果（特開昭５６
−９７２４８号公報）、ペクチン酸カルシウムの骨強度
増強作用（特開平６−７１１６号公報）などが知られて
いる。これらの化合物は、一部食品にも既に利用されて
いる。しかし、用途によっては使用に制限があり、必ず
しも満足のいくものではない。

【００１２】例えば、カゼインホスホペプチドはカルシ
ウムの吸収効果が大きく、比較的よく食品に利用されて
いる。このペプチドは、乳汁に含まれる乳タンパク質を
構成する。しかし、乳汁中に占めるその含量が少なく、
分画が容易でないために、大変高価である。さらに、精
製が不十分な製品では、苦味のあるペプチドの混入が多
いため、味覚上好ましくない。

【００１３】酸性多糖または酸性蛋白質もまたカルシウ
ムと化合物を形成する能力を有することが知られてい
る。これらの多糖またはタンパク質は高分子であり、食
品に添加した際に粘度上昇を引き起こすため、その用途
は制限される。さらに、リンゴ酸、酒石酸などの有機酸
は、安価ではあるが、食品にこれらを添加した際に官能
的に好ましくない味質を示す。これらはまた酸であるこ
とから、歯のエナメル質の脱灰を引き起こすことがあ
り、歯を健康に保つ上で問題がある。

【００１４】歯石および歯垢は、歯肉炎、歯周炎、ある
いはう蝕の原因になることが知られている。歯石形成の
詳細については必ずしも明らかにされていないが、プラ
ークを構成する細菌、唾液糖タンパク質などの有機基質
に、唾液および浸出液から供給されるカルシウムまたは
リンが沈着し、結晶化する石灰化現象と考えられる。既
存の歯石防止剤としては、ピロリン酸ナトリウムあるい
はトリポリリン酸ナトリウムに関する、三宅ら（日歯周
誌、第30巻、３号、860〜867頁）の提案がある。う蝕
は、ミュータンス菌（6715株）が砂糖を栄養源として、
酵素グルコシルトランスフェラーゼ（以下ＧＴａｓｅと
略する）の作用により、非水溶性のグルカンをつくるこ
とから始まる。このグルカンが歯の表面を覆うために、
歯垢が生じる。この歯垢の内部でミュータンス菌が酸発
酵を起こすと、歯が溶け出して虫歯となる。非う蝕の糖
としては、ミュ一タンス菌の栄養源にならないいくつか
のオリゴ糖（S.Hamadaら、J.Jpn.Soc.Starch Sci.、31
巻、83-91頁、1984年）が既に提案されている。さら
に、抗う蝕剤として茶の成分であるポリフェノールが報
告され利用されている（S.Sakanakaら、Fragnance Jour
nal、11巻、42-49頁、1990年）。しかし、ポリフェノー
ルの利用もまた味覚の問題があり、用途は制限されてい
る。歯石と歯垢との両方に効果を持つ物質はいまだ開発
されていない。

【００１５】一般的に、オリゴ糖の性質として低カロリ
ーおよび整腸作用が多く報告されているが、リン酸化糖
に関する報告はない。

【００１６】糊化した澱粉は、高い粘性を有する。これ
は、澱粉中のアミロペクチンが、房状構造が多数連なっ
た非常に長い分子であることに起因する。糊化した澱粉
は、高い粘性を有するため、澱粉を原料としてマルトー
スあるいはシクロデキストリンなどを製造する場合に、
取り扱いが困難であるという問題がある。例えば、一定
濃度以上の糊化した澱粉をパイプを用いて輸送する場合
には、パイプが詰まることがある。

【００１７】このように、既存の澱粉が有する性質（溶
解性の低さ、老化性、および高粘度）は、食品およびそ
の他の産業において、澱粉の利用を制限した。そこで、
酵素処理、化学処理、または物理的処理を行って澱粉を
低分子化させることにより、溶解性および耐老化性を向
上させる研究が行われ、ある程度は、老化を抑制できる
ようになった。しかし、過剰な分子量低下を抑えること
は困難であり、本来高分子である澱粉の持つ固有の性質
を失うという問題が生じている。

【００１８】各種工業用水系でのスケール生成は、高温
水系、非高温水系を問わず深刻な問題である。例えば、
水系が加熱されると、溶存しているカルシウム、マグネ
シウムのような金属イオンが不溶性の化合物に変化しや
すく、水系と接触している伝熱面上などにスケールとし
て析出する。この傾向は、ボイラー、海水淡水化装置
系、地熱熱水の利用装置系などの高温水系の場合顕著で
あり、熱効率の低下、水路の閉塞などの障害を引き起こ
す。

【００１９】植物が貯蔵する澱粉の多くには、澱粉を構
成するグルコースに一部リン酸基が工ステル結合してい
る。澱粉中のリン酸含有量としては微量であるが、芋類
の澱粉には比較的多く、中でも馬鈴薯澱粉はリン酸基を
多く含んでおり、リン酸含有量の非常に高い品種も存在
している（矢木敏博ら、澱粉化学、20巻、51頁、1973
年）。馬鈴薯澱粉中では、これを構成するグルコース残
基の３位および６位にリン酸基が比較的多くエステル結
合していることが知られている（Y.Takedaら、Carbohyd
rate Research、102巻、321-327頁、1982年）。このよ
うな澱粉をアミラーゼなどの澱粉分解酵素を用いて分解
する場合、澱粉構造中のリン酸基がエステル結合したグ
ルコース残基の近傍には酵素が作用できない。従って、
糖化終了時点で、リン酸化糖は未分解で残ることが知ら
れる。このため、リン酸化糖は、オリゴ糖、麦芽糖、グ
ルコースなどを生産する澱粉糖化産業において、リン酸
化糖の組成を知らないままに廃棄物として処分されてい
ることもまた知られていた。

【００２０】澱粉糖化産業においては、糖化した液から
糖化に用いた酵素および残存するリン酸化糖を除去する
ことを目的として、糖液をイオン交換樹脂に通す工程が
用いられている。

【００２１】この工程において、イオン交換樹脂に吸着
したリン酸化糖は、樹脂の再生を目的とした水酸化ナト
リウム溶液によるイオン交換樹脂の洗浄の際に樹脂から
溶出される。このリン酸化糖を含む洗浄後の液は、廃液
として処分されてきた。この廃液は、強アルカリ性であ
るため、その中に含まれるリン酸化糖が分解されてリン
酸と中性糖になる、あるいは糖の還元末端が酸化される
などの反応が起こるため、廃液中のリン酸化糖の残存率
は低かった。

【００２２】他方、リン酸を化学的に結合させた澱粉
（以下、化工澱粉という）もまた知られている。リン酸
化澱粉を食品に用いる場合、食品添加物の規格に従う
と、食品添加物として認可されるためには、結合リンと
して０．２〜３％であって、しかも澱粉と結合していな
い遊離の無機リン含量が全リンの２０％以下であること
が要求される。

【００２３】他方、リン酸化糖または化工澱粉とカルシ
ウムなどのアルカリ土類金属または鉄との化合物または
錯体の形成に関する研究、リン酸化糖によるカルシウム
などのアルカリ土類金属や鉄の生体における吸収促進に
関する研究、およびリン酸化糖による洗浄剤および歯石
防止剤としての研究は、これまでに全くなされていな
い。

【００２４】

【発明が解決しようとする課題】カルシウム、マグネシ
ウム、あるいは鉄などのミネラルと反応してミネラルと
の化合物または錯体を形成することにより、これらのミ
ネラルを不溶化させない能力のあるリン酸化糖を提供す
ること、および、このリン酸化糖を肥料、飼料、食品、
飲料、口腔用組成物、洗浄剤組成物、またはそれらの添
加用組成物として広く提供することである。

【００２５】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、リン酸化
糖に着目し、かかる状況下において鋭意研究を重ねた結
果、本発明を完成した。

【００２６】本発明のリン酸化糖は、分子内に少なくと
も１個のリン酸基を有する。上記糖は、グルカン、マン
ナン、デキストラン、寒天、シクロデキストリン、フコ
イダン、ジェランガム、ローカストビーンガム、グアー
ガム、タマリンドガム、およびキサンタンガムからなる
群から選択される。

【００２７】好ましい実施態様では、本発明のリン酸化
糖は、上記糖がグルカンであり、このグルカン１分子あ
たり少なくとも１個のリン酸を有する。

【００２８】さらに別の好ましい実施態様では、本発明
のリン酸化糖は、上記糖がグルカンであり、このグルカ
ンが、α−１，４結合した３〜５個のグルコースからな
り、そしてこのグルカンに１個のリン酸基が結合してい
る。

【００２９】さらに別の好ましい実施態様では、本発明
のリン酸化糖は、上記糖がグルカンであり、このグルカ
ンが、α−１，４結合した２〜８個のグルコースからな
り、そしてこのグルカンに２個のリン酸基が結合してい
る。

【００３０】さらに別の好ましい実施態様では、本発明
のリン酸化糖は、上記糖がグルカンであり、このグルカ
ンが、α−１，４結合したグルコースを主鎖とし、α−
１，６結合および／またはα−１，４結合したグルコー
スを側鎖とする。

【００３１】さらに本発明は、タンパク質あるいはペプ
チドとを結合したリン酸化糖に関する。

【００３２】また、本発明は、リン酸化糖またはリン酸
化糖誘導体に、アルカリ土類金属または鉄と結合したリ
ン酸化誘導体に関する。

【００３３】本発明のリン酸化糖の製造方法は、公知の
糖類をリン酸化する方法が用いられ得る。

【００３４】好ましい実施態様では、糖がグルカンの場
合には、リン酸基を有する澱粉または化工澱粉を分解し
て得られ得る。

【００３５】好適な実施態様では、リン酸基を有する澱
粉または化工澱粉に、澱粉分解酵素、糖転移酵素、また
はα−グルコシダーゼ、あるいはそれらの１種以上の組
み合わせ（但し、α−グルコシダーゼ１種のみを除く）
を作用させる。

【００３６】好ましい実施態様では、上記澱粉分解酵素
は、α−アミラーゼ、β−アミラーゼ、グルコアミラー
ゼ、イソアミラーゼ、プルラナーゼ、またはネオプルラ
ナーゼの１種以上の組み合わせからなるものである。好
ましい実施態様では、上記糖転移酵素は、シクロデキス
トリングルカノトランスフェラーゼである。

【００３７】好ましい実施態様では、上記製造方法は、
本発明のリン酸化糖に糖転移酵素を作用させる。上記糖
転移酵素がシクロデキストリングルカノトランスフェラ
ーゼである。

【００３８】本発明のリン酸化糖の誘導体は、リン酸化
糖またはリン酸化糖誘導体にアルカリ土類金属の塩また
は鉄の塩を作用させて製造される。

【００３９】本発明によれば、上記リン酸化糖またはそ
れらの誘導体を含む、肥料、飼料、食品、飲料、口腔用
組成物、洗浄剤用組成物、またはそれらの添加用組成物
が提供される。

【００４０】本発明によれば、上記リン酸化糖またはそ
れらの誘導体と、リン酸化糖とが結合している物質を含
む、肥料、飼料、食品、飲料、口腔用組成物、洗浄剤用
組成物、またはそれらの添加用組成物もまた提供され
る。

【００４１】本発明によれば、リン酸化糖体またはその
誘導体を含む、肥料、飼料、食品、飲料、口腔用組成
物、洗浄剤用組成物、またはそれらの添加用組成物もま
た提供される。

【００４２】

【発明の実施の形態】以下に、本発明について詳細に記
述する。

【００４３】本発明においてリン酸化糖とは、分子内に
少なくとも１個のリン酸基を有するリン酸化された糖を
いう。また本願において中性糖とは、リン酸基が結合し
ていない糖をいう。

【００４４】本発明のリン酸化糖の製造原料である糖と
しては、グルカン、マンナン、デキストラン、寒天、シ
クロデキストリン、フコイダン、ジェランガム、ローカ
ストビーンガム、グアーガム、タマリンドガム、および
キサンタンガムが挙げられる。以下、グルカンの場合に
ついて説明する。一般の粗製植物澱粉、好ましくは馬鈴
薯の粗製澱粉などのリン酸基が多く結合した澱粉が適し
ているが、精製品でもよい。化工澱粉もまた、好適に用
いられ得る。さらに、リン酸基を化学的に結合させた各
種糖質を用いることもまた可能である。馬鈴薯澱粉中で
は、これを構成するグルコースの３位および６位にリン
酸基が比較的多くエステル結合している。リン酸基は主
にアミロペクチンに存在する。

【００４５】澱粉などの酵素的分解には、澱粉分解酵素
であるα−アミラーゼ（ＥＣ3.2.1.1）、β−アミラー
ゼ（ＥＣ3.2.1.2）、グルコアミラーゼ（ＥＣ3.2.1.
3）、イソアミラーゼ（ＥＣ3.2.1.68）、プルラナーゼ
（ＥＣ3.2.1.41）、およびネオプルラナーゼ（Kuriki
ら、Journal of Bacteriology、170巻、1554頁-1559
頁、1988年）、ならびに糖転移酵素であるシクロデキス
トリングルカノトランスフェラーゼ（ＥＣ2.4.1.19；以
下ＣＧＴａｓｅと略する）をそれらのうち１種以上作用
させ、または、それら１種以上とα−グルコシダーゼ
（ＥＣ3.2.1.20）を併用する。

【００４６】イソアミラーゼあるいはプルラナーゼで分
解することにより、澱粉中のα−１，６分枝構造を切る
ことによって、分枝構造を有しないリン酸化糖を得るこ
とができるし、これらの酵素を用いなければ、α−１，
６分枝構造を有するリン酸化糖を得ることもできる。ま
た、グルコアミラーゼで分解することにより、非還元末
端に結合したリン酸化されていないグルコースを順次遊
離させることができる。このような酵素処理を行うこと
で、精製後のリン酸化糖の分子量あたりのリン酸基数を
増減させることが可能となる。

【００４７】すなわち、高いリン酸含量のリン酸化糖が
必要であれば、多い酵素量で長時間反応させればよく、
それほど高いリン酸含量のリン酸化糖が必要でなけれ
ば、少ない酵素量で短時間で反応させればよい。

【００４８】酵素による分解は複数種の酵素を同時に反
応させることにより、同時に進行させ得る。簡単に言え
ば、原料となる澱粉を、水、または酵素が作用できるｐ
Ｈに調整した緩衝液に溶解する。この反応液に、液化型
α−アミラーゼ、プルラナーゼ、グルコアミラーゼなど
を同時に加えて、加熱を行うことにより反応させる。こ
の方法を用いると、澱粉を糊化させながら、中性糖を遊
離すること、リン酸化糖の非還元末端に結合したリン酸
化されていないグルコースを遊離させること、あるいは
リン酸化糖構造中の原料に由来するα−１，６分枝構造
を切断することができる。この方法により、２段階の反
応ではなく、１段階の反応でリン酸含量を高めたリン酸
化糖が得られる。

【００４９】複数種の酵素を個別の工程で作用させるこ
とにより２段階以上の酵素反応をさせる場合において
は、作用させる酵素の順序は特定されない。しかし、澱
粉の濃度が高い場合、最初に液化型アミラーゼを含めた
酵素を作用させるのが好ましい。最初にイソアミラーゼ
あるいはプルラナーゼを作用させるとアミロース含量が
増える。アミロースはアミロペクチンに比べて老化およ
び沈澱しやすいため、原料が老化、沈澱してしまう。そ
して他の酵素による作用を受けなくなる。

【００５０】使用する澱粉分解酵素、糖転移酵素、およ
びα−グルコシダーゼの由来は特に問わない。例えば、
α−アミラーゼの由来としては、バチルス（Bacillus）
属菌やアスペルギルス（Aspergillus）属菌由来の澱粉
分解酵素製剤が好適に使用され得る。また、酵素の反応
条件は、酵素が作用し得る温度およびｐＨであればよ
い。例えば、温度２５℃〜７０℃、ｐＨ４〜８が好適に
用いられる。

【００５１】まず原料となる澱粉を、水、または酵素の
作用できるｐＨに調整した緩衝液に溶解する。この溶液
に、液化型α−アミラーゼを加え、加熱して反応させる
ことにより、澱粉を糊化させつつ液化する。その後、温
度２０〜８０℃にて適当な時間保持する。作用させる液
化型α−アミラーゼ量は、澱粉を液化できる量であれ
ば、少量でも過剰でも良い。好適な量としては、２０〜
５０，０００Ｕである。また、この時の保持時間は、澱
粉がその後の工程中において老化を起こさない程度まで
液化されるならば、その長さは問わない。好ましくは、
２０〜８０℃で３０分間保持される。

【００５２】液化終了後、特に酵素を失活させる必要は
ないが、１００℃で１０分保持するなど常法により酵素
を失活させてもよい。さらに、遠心分離あるいは膜濾過
などの常法により不溶物を分離除去してもよい。その
後、リン酸化糖を分画してもよいが、リン酸含量を高め
たリン酸化糖を得るには、さらに以下の操作を行う。

【００５３】簡単に言えば、原料を液化させた後、これ
に、グルコアミラーゼ、イソアミラーゼ、プルラナー
ゼ、およびα−グルコシダーゼをそれぞれ同時にあるい
は適当な順序で添加して糖化させ、例えば温度４０〜６
０℃で３０分〜４０時間作用させて、原料から、中性糖
およびリン酸化糖の非還元末端に結合したリン酸化され
ていないグルコースを遊離させ得、そしてリン酸化糖構
造中の原料に由来するα−１，６分枝構造を切断し得
る。このグルコアミラーゼ、イソアミラーゼ、プルラナ
ーゼを組み合わせて使用する場合、その組み合わせおよ
び添加順序は問わない。また、酵素の添加量および保持
時間は、リン酸化糖に求められるリン酸含量などに応じ
て決定され得る。好ましくは、グルコアミラーゼは５０
〜７００Ｕ、イソアミラーゼおよびプルラナーゼはそれ
ぞれ２〜１００Ｕ、α−グルコシダーゼは５０〜７００
Ｕ添加され得る。酵素は固定化しても好適に用いられ得
る。

【００５４】各酵素の反応終了後においては、特に酵素
を失活させる必要はないが、１００℃で１０分保持する
など常法により酵素を失活させてもよい。さらに、遠心
分離あるいは膜濾過などの常法により不溶物を分離除去
してもよい。

【００５５】リン酸化糖を含有する糖混合物からリン酸
化糖を精製するために、リン酸化糖が中性糖とは異なり
イオン性の物質であることから、陰イオン交換樹脂が用
いられ得る。樹脂の種類は、特に限定するものではない
が、キトパールＢＣＷ２５００タイプ（富士紡績製）、
アンバーライトｌＲＡタイプ（オルガノ製）、ＤＥＡＥ
−セルロース（ワットマン製）、ＤＥＡＥ−セファデッ
クス、ＱＡＥ‐セファデックス（ファルマシア製）、Ｑ
ＡＥ−セルロース（バイオラッド製）などが好適に用い
られ得る。適当なｐＨに調整した緩衝液を用いて、樹脂
を平衡化する。例えば１０〜５０ｍＭ程度の酢酸緩衝液
（ｐＨ４〜５）などの条件が好適に用いられ得る。平衡
化した樹脂をカラムに詰め、リン酸化糖を含有する糖混
合物をチャージする。中性糖を洗浄除去した後、吸着し
たリン酸化糖をアルカリ性の溶液または塩溶液を用いて
溶出する。

【００５６】リン酸化糖の溶出を溶出液のイオン強度を
上昇させることによって行う場合、用いる塩の種類は特
に問わない。例えば、塩化ナトリウム、重炭酸アンモニ
ウム、塩化カリウム、硫酸ナトリウム、硫酸アンモニウ
ムのような塩が好適に用いられ得る。

【００５７】リン酸化糖の溶出を溶出液のｐＨをアルカ
リに変化させることによって行う場合、用いるアルカリ
試薬の種類は特に問わない。例えば、アンモニア、炭酸
ナトリウム、または水酸化ナトリウムが用いられ得る。
しかし、強アルカリ条件下では、リン酸基が糖から離脱
し、あるいは糖の還元末端が酸化される。従って、好ま
しくは、リン酸化糖の溶出は、弱酸性から弱アルカリ性
の範囲のｐＨで行い、さらに好ましくはｐＨ３〜ｐＨ８
の範囲で行う。

【００５８】この場合、徐々に溶出液の塩濃度またはｐ
Ｈを高くしたり、あるいは段階的に塩濃度またはｐＨを
上昇させてリン酸化糖を溶出することにより、リン酸化
糖１分子当たりに結合しているリン酸基の個数に応じて
リン酸化糖の成分を分画することが可能となる。

【００５９】リン酸化糖を含有する糖混合物からリン酸
化糖を精製するには、陰イオン交換樹脂の代わりに活性
炭もまた用いられ得る。用いる活性炭の種類は特に問わ
ないが、好ましくは、カラムに充填可能な粒状活性炭が
用いられる。グルコースを除く中性糖の吸着能が生じる
条件となるように、緩衝液、酸、アルカリ、塩溶液、お
よび蒸留水を用いて、活性炭を調製する。例えば粒径が
均一で、脱気を施した活性炭を、カラムに充填し、蒸留
水で洗浄したものなどが好適に用いられ得る。カラムに
試料を供して中性糖を吸着させることにより、リン酸化
糖を素通り画分に得ることができる。

【００６０】リン酸化糖を含有する糖混合物からリン酸
化糖を精製するには、炭素数１〜３のアルコールを添加
してリン酸化糖を沈澱させる方法もまた、用いられ得
る。簡単に言えば、試料溶液にアルコールを添加するこ
とにより、リン酸化糖のみが沈澱として得られ得る。１
０％以上の糖濃度であれば容積比で３倍量以上のアルコ
ールを添加することが望ましい。

【００６１】アルコールに加えて、金属塩、好ましくは
カルシウム塩または鉄塩の存在下で、本発明のリン酸化
糖はリン酸化糖誘導体を形成し、沈澱が生じやすくな
る。このため、金属塩の存在下では、先に示したアルコ
ールのみによる沈澱化に比べ、少量のアルコールでもリ
ン酸化糖の回収が容易となる。好ましくはアルカリ条件
下で実施する。用いる塩の種類は特に限定するものでは
ないが、例えば、塩化カルシウム、塩化マグネシウム、
または塩化第一鉄が、溶解性もよく、好適に用いられ得
る。アルコールを添加することで生じた沈澱の採取は、
一般に使用される方法、例えば、デカンテーション、濾
過、遠心分離などにより行われる。リン酸化糖と金属塩
との化合物であるリン酸化糖誘導体の沈澱は、上述のよ
うなアルコール沈澱で得られる。必要ならば、回収した
沈澱を水あるいは適当な溶液に再溶解し、アルコールを
再度添加する操作を繰返し行ってもよい。この操作によ
り、中性糖および過剰の塩などの不純物が除去され得
る。塩など不純物の除去には限外濾過膜もまた用いられ
得る。

【００６２】金属塩を添加し、沈殿物として得られたリ
ン酸化糖誘導体から、金属塩を除去してリン酸化糖を製
造し得る。金属体の除去は（脱塩）は定法により行われ
得る。脱塩は、例えば卓上脱塩装置マイクロアシライザ
ーＧ３（旭化成（株）製）を用いると容易に行われ得
る。

【００６３】このようにして得られたリン酸化糖の溶
液、リン酸化糖、またはリン酸化糖誘導体は、通常実施
される乾燥方法、例えば熱風乾燥、流動層乾燥、真空乾
燥などの方法を用いて、濃縮あるいは粉末にされ得る。
必要に応じてアルコールを除去することにより、飲食に
供し得るリン酸化糖あるいはリン酸化糖誘導体、または
施肥、洗浄に供し得るリン酸化糖またはリン酸化糖誘導
体が得られ得る。

【００６４】化工澱粉を用いる場合、モノエステル型は
一般に乾式法で製造され、ジエステル型は湿式法で製造
され得る。結合させるリン酸基数は条件によって変動し
得る。食品添加物規格に基づくと、結合リン酸基が重量
比で３％以下程度であることが食品としては好ましい。
しかし、飼料、肥料、または洗浄剤に用いる場合にはこ
の限りではない。天然に存在する澱粉に比べて化工澱粉
ではリン酸基が多く結合しており、酵素作用産物として
得られるリン酸化糖の重合度は大きく、そしてその結合
リン酸含有量は高い。従って、化工澱粉では、先に示し
たアミラーゼなどの酵素処理によって、結合リン酸基数
がリン酸化糖１分子当たりに１個のものから複数個のも
のまでが生成される。それゆえ化工澱粉より生産された
リン酸化糖のカルシウム、鉄、マグネシウムとの化合物
形成能は、結合リン酸基数の上昇につれて高くなる。

【００６５】得られたリン酸化糖の構造は以下のように
分析できる。

【００６６】まず、リン酸化糖からリン酸基を除去す
る。例えばリン酸化糖溶液と１０ｍＭ塩化マグネシウ
ム、０．３ｍＭ塩化亜鉛、および０．０５％アジ化ナト
リウムを含む６０ｍＭ炭酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ９．
４）とを混合し、これにアルカリホスファターゼ（Ｅ
Ｃ．3.1.3.1；E.coli由来；シグマ社製）を添加して、
適当な温度で適当な時間（例えば４０℃で１８時間）反
応させる。限外濾過膜を用いてアルカリホスファターゼ
を除去することにより反応を停止し、リン酸基が除去さ
れた糖（以下、脱リン酸化糖と言う）を成分とする反応
液（以下反応液Ａという）を得る。

【００６７】得られた反応液Ａに対し、例えば２００ｍ
Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ４．８）に溶解したβ−アミラーゼ
（さつまいも由来；シグマ社製）を添加して、適当な温
度で適当な時間（例えば３７℃で２時間）反応させる
（以下、この液を反応液Ｂという）。同様に、反応液Ａ
に６０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４．５）に溶解したグルコ
アミラーゼ（Rhizopus由来；東洋紡績製）を添加して、
適当な温度で適当な時間（例えば３５℃で１８時間）反
応させる（以下、この液を反応液Ｃという）。

【００６８】反応液Ａ〜Ｃを分析して生成物を確認す
る。これらの反応液内の生成物は、陰イオン交換樹脂カ
ラムCarboPac PA-100（φ４×２５０ｍｍ、ダイオネッ
クス社製）による高速液体クロマトグラフィーまたはシ
リカゲルを用いた薄層クロマトグラフィーを用いて分析
し、各種重合度の標準マルトオリゴ糖と比較することに
より確認され得る。高速液体クロマトグラフィーを用い
た脱リン酸化糖の溶出は、１００ｍＭの水酸化ナトリウ
ムを基本溶液として１Ｍ酢酸ナトリウム濃度を上昇させ
ることによって行なわれ得る。検出はパルスドアンペロ
メトリー（ダイオネックス社製）を用いて行われ得る。
薄層クロマトグラフィーによる脱リン酸化糖の分析は、
脱リン酸化糖をアセトニトリル／水＝８０／２０で多重
展開した後、硫酸／メタノール＝１／１の溶液を噴霧
し、１３０℃で３分間保持することにより行なわれ得
る。

【００６９】反応液Ａを分析すれば、リン酸化糖の鎖長
が確認できる。反応液Ｂを分析したときにマルトースの
み、あるいはマルトースとマルトトリオース（およびわ
ずかにグルコース）が検出されれば、この脱リン酸化糖
はグルコースがα−１，４結合したグルカンであること
が確認できる。さらに反応液Ｃを分析したときにグルコ
ースのみが検出されれば、この脱リン酸化糖はα−結合
したグルコースからなることが確認できる。

【００７０】糖の平均鎖長（以下グルコースを１単位と
してＤＰで表す。）は、脱リン酸化糖を構成する各重合
度の糖含量から求められ得る。全リン酸化糖中の全糖量
はフェノール硫酸法により定量し、結合リン酸基数は湿
式灰化後、無機リン酸として定量され得る（澱粉関連糖
質実験法、生物化学実験法19、中村道徳ら、31頁、1986
年、学会出版センター）。１分子当たりの結合リン酸基
数は、湿式灰化後定量された無機リン酸量と、ＤＰより
下式を用いて算出される。

【００７１】

【数１】

【００７２】例えば、馬鈴薯澱粉にα−アミラーゼにつ
づいてグルコアミラーゼ、イソアミラーゼあるいはプル
ラナーゼを作用させることにより、グルコースがα−
１，４結合したリン酸化糖（重合度２以上８以下）が得
られる。得られるリン酸化糖は、前述の陰イオン交換樹
脂を用いる精製法によって、グルコースがα−１，４結
合したグルカンに１分子あたり１個のリン酸基が結合し
たものと、グルコースがα−１，４結合したグルカンに
１分子あたり２個以上のリン酸基が結合したものとの２
種のリン酸化糖のグループに区別され得る。

【００７３】上記のようにグルコアミラーゼを作用させ
て得られるリン酸化糖は、リン酸基がグルコースの６位
に結合していれば、その直前まで非還元末端側から切断
され得る。従って、このリン酸化糖は、６位に結合した
グルコースを非還元末端に有するオリゴ糖あるいは少な
くとも非還元末端側から２個目のグルコースの６位に結
合している構造になる。リン酸基がグルコースの３位に
結合していれば、非還元末端側から２個目のグルコース
の３位に結合している構造になる。これは、桧作ら（Bi
ochmica et Biophysica Acta、749巻、302〜311頁、198
3年）のグルコアミラーゼの特性から明らかとなってい
る。

【００７４】このようなグルコースがα−１，４結合し
たグルカンに１分子あたり１個のリン酸基が結合したリ
ン酸化糖にＣＧＴａｓｅを作用させると、さらにカルシ
ウム可溶化効果の高いリン酸化糖が得られ得る。

【００７５】これらのリン酸化糖は、これまでに製造さ
れたことがなく、本発明によって初めて分画され、その
構造が明らかとなったものである。また、グルコースが
α−１，４結合したグルカンに、１分子あたり２個以上
のリン酸基が結合したものはこれまでその存在も知られ
ていなかった。

【００７６】このようにして分画したリン酸化糖の構造
を分析した結果、馬鈴薯澱粉から各種糖液を生産する時
に処分されてきた廃液に存在することもまた判明した。
澱粉糖化産業においては、このようなリン酸化糖は陰イ
オン交換樹脂によって吸着されるが、このリン酸化糖
は、目的産物ではなく、陰イオン交換樹脂の再生時に強
アルカリ性の液にて溶出されるために分解してしまって
いる。

【００７７】以上のように調製されたリン酸化糖は、以
下のような性質を有する。

【００７８】（１）糖質に結合しているリン酸基が、カ
ルシウムなどのアルカリ土類金属および鉄との親和性が
高く、それら金属類の沈澱を防ぐことができる。

【００７９】（２）カルシウムなどのアルカリ土類金属
および鉄の生体への吸収を促進する効果を有する。

【００８０】（３）虫歯の原因であるミュータンス菌に
資化されない非う蝕性の糖であり、グルカンの生成を行
わない。

【００８１】（４）ｐＨの緩衝能があり、炭酸カルシウ
ムの存在下で相乗作用が生じて、緩衝能力が高まる。

【００８２】（５）生体内酵素では消化され難く、そし
てカロリーに成りにくい難消化性糖である。

【００８３】（６）澱粉の老化を防ぐ効果を有する。

【００８４】（７）無味無臭である。

【００８５】これらの効果は、馬鈴薯由来の澱粉から得
たリン酸化糖に限らず、例えば、酵母由来のリン酸化さ
れたマンナンによっても提供される。デキストラン、寒
天、シクロデキストリン、フコイダン、ジェランガム、
ローカストビーンガム、グアーガム、タマリンドガム、
あるいはキサンタンガムのリン酸化糖もまた同様の効果
を有する。さらに、糖質の種類によらずリン酸化されて
いれば、以上の性質を有する糖質を提供できる。ただ
し、リン酸基を化学的に結合させた糖質は、先に述べた
ように食品添加物規格の使用制限を受けるが、食用以外
はその限りではない。

【００８６】本発明のリン酸化糖は、タンパク質あるい
はペプチドと複合体を形成し得、リン酸化糖の誘導体と
し得る。糖質のタンパク質とのメイラード反応を利用し
た複合体の作製は古くから行われてきた。このメイラー
ド反応は、通常の食品調理中にも起こる反応であり、反
応産物は生体に安全である。その反応は、糖質の還元性
末端がタンパク質のアミノ基に脱水縮合することによっ
て起こる。多糖の場合はタンパク質１分子に糖１〜２分
子が結合し、単糖の場合はほとんどのタンパク質のアミ
ノ基に糖が結合することが可能である（A. Katoら、Ame
rican ChemicalSociety.、16章、213〜229頁。1991
年）。また、その機能として、タンパク質の熱安定性お
よびｐＨ安定性の向上、乳化特性の付与、あるいは水に
不溶性のタンパク質の可溶化などが報告されている（A.
Katoら、J. Agric. Food Chem.、39巻、1053〜1056
頁。1991年）。最近、グルコース−６−リン酸をタンパ
ク質に結合させることにより、カルシウム可溶化効果が
得られることもまた判った（T.Aokiら、Bioskci. Biote
ch. Biochem.、58巻、９号、1727〜1728頁、1994年）。
しかし、単糖は反応性が高く、タンパク質の変性もまた
起こるので、その効果および安定性は満足のいくもので
はない。また、本発明のリン酸化糖を用いたタンパク質
との誘導体に関する報告も全く行われていない。

【００８７】本発明のリン酸化糖のタンパク質との誘導
体を用いた場合、タンパク質の変性がグルコース−６−
リン酸を用いた場合よりも極めて少なく、安定的に長時
間、カルシウムを可溶化することが明らかとなった。こ
れは、特に、オリゴ糖の場合、単糖に比べて反応が緩や
かに進み、タンパク質へのダメージが少ないためと思わ
れる。タンパク質に容易に有機リガンドを結合させ得る
方法として優れた方法である。用いるタンパク質は特に
問わないが、安価に入手でき、食品として安全なものが
好ましい。このようなタンパク質としては、例えば、卵
白アルブミン、カゼイン、小麦タンパク質、大豆タンパ
ク質などが挙げられる。それらを加水分解したペプチド
もまた好適に用いられ得る。

【００８８】本発明のリン酸化糖により、肥料、飼料ま
たは食品の摂取におけるカルシウムの吸収を促進し得
る。またリン酸化糖がカルシウムその他のアルカリ土類
金属や鉄とも化合物または錯体を形成し、それらの生体
への吸収を促進することが可能となる。アルカリ土類金
属としては、カルシウムの他に、マグネシウム、亜鉛、
セレンが挙げられる。従って、骨粗鬆症などのカルシウ
ム不足からくる疾患の予防も期待できる。さらに今日、
ダイエットや偏食の問題が大きく、嗜好食品においても
カルシウムと同様に鉄およびマグネシウムの有効な生体
への吸収を考慮した食品が期待され、これらの吸収を促
進する摂取方法を開発することは重要である。本発明の
リン酸化糖またはリン酸化糖誘導体は、安全であり、難
消化性であり、かつ低カロリーである。このリン酸化糖
はまた、多くのオリゴ糖に報告されているようにビフィ
ズス薗増殖効果および整腸作用も期待できる。

【００８９】さらに、金属を可溶化させる効果が生体に
安全な領域において行われるため、金属が沈着したこと
が原因とされる汚れに対して効果的かつ安全な洗浄剤、
もしくはカルシウムが歯に沈着することによって発生す
る歯石の発生防止剤として、本発明のリン酸化糖を用い
ることが可能である。また、本発明のリン酸化糖のカル
シウムおよびリンが沈着し結晶化する石灰化現象を抑制
する性質は、歯石の発生を防止する。さらに、上記リン
酸化糖はまた、う蝕の原因であるミュータンス菌の栄養
源にならず、非水溶性のグルカンを生成しない糖質であ
る。従って、歯垢が生じず、ミュータンス菌の酸発酵も
起こさない。さらに、本発明のリン酸化糖は緩衝作用を
有し、ｐＨの低下を防ぐ効果をも有する。従って、リン
酸化糖は、食品または口腔組成物において、風味に影響
を与えることなく、歯垢内の発酵産物である乳酸による
ｐＨの低下を防ぐ効果を有する。リン酸化糖は、練り歯
磨き、マウスウオッシュ、トローチなどの口腔用組成物
などに添加され得る。また本発明により、リン酸化糖が
カルシウムその他のアルカリ土類金属、あるいは鉄と複
合体を形成し、生体への吸収を促進することが可能とな
ると同様に、アルカリ土壌およびアルカリ条件下におけ
る植物へのカルシウムなどの微量金属の吸収を促すこと
もまた可能となる。例えば、本発明により、切り花、果
樹、果実の老化抑制および日持ち向上に効果のある、安
全なカルシウム吸収促進剤を提供できる。金属を吸着す
る性質は、金属類の沈着を防止するスケール防止剤や洗
浄剤としても有効である。

【００９０】以上により、本発明のリン酸化糖あるいは
それらの誘導体は、以下のような用途に好適に用いられ
得る。

【００９１】本発明のリン酸化糖は、ほとんど全ての飲
食用組成物または食品添加物用組成物に使用することが
可能である。この飲食用組成物とは、ヒトの食品、動物
あるいは養魚用の飼料、ペットフードを総称する。すな
わち、コーヒー、紅茶、日本茶、ウーロン茶、ジュー
ス、加工乳、スポーツドリンクなどの液体および粉末の
飲料類、パン、クッキー、クラッカー、ビスケット、ケ
ーキ、ピザ、パイなどのベーカリー類、スパゲティー、
マカロニなどのパスタ類、うどん、そば、ラーメンなど
の麺類、キャラメル、ガム、チョコレートなどの菓子
類、おかき、ポテトチップス、スナックなどのスナック
菓子類、アイスクリーム、シャーベットなどの冷菓類、
クリーム、チーズ、粉乳、練乳、乳飲料などの乳製品、
ゼリー、プリン、ムース、ヨーグルトなどの洋菓子類、
饅頭、ういろ、もち、おはぎなどの和菓子類、醤油、た
れ、麺類のつゆ、ソース、だしの素、シチューの素、ス
ープの素、複合調味料、カレーの素、マヨネーズ、ケチ
ャップなどの調味料類、カレー、シチュー、スープ、ど
んぶりなどのレトルトもしくは缶詰食品、ハム、ハンバ
ーグ、ミートボール、コロッケ、餃子、ピラフ、おにぎ
りなどの冷凍食品および冷蔵食品、ちくわ、蒲鉾などの
水産加工食品、弁当のご飯、寿司などの米飯類にも効果
的に利用できる。さらに、カルシウムの吸収のよさを利
用して、乳児用ミルク、離乳食、ベビーフード、ペット
フード、動物用飼料、スポーツ食品、栄養補助食品、健
康食品などに使用され得る。

【００９２】本発明のリン酸化糖は、カルシウムの沈澱
を防ぎ、植物体に速やかに吸収されることから、液体あ
るいは粉末の肥料、果実、切り花などの植物の日持ち向
上剤として使用され得る。

【００９３】本発明のリン酸化糖は、高温水系、非高温
水系を問わず種々のスケール、ことにカルシウム系やマ
グネシウム系スケールの発生を防止または抑制し得るス
ケール防止剤として使用され得る。さらに必要により、
他の公知の薬剤を併用してもよい。

【００９４】本発明のリン酸化糖は、歯磨き剤、マウス
ウオッシュ、トローチ、うがい薬などに使用され得る。

【００９５】本発明のリン酸化糖は、カルシウム、鉄、
マグネシウムなどが含まれる飲み薬、入浴剤などの薬剤
にも使用され得る。

【００９６】

【作用】本発明は、これまで生理機能の全く知られてい
なかったリン酸化糖を製造し、その構造や作用について
明らかにしたものである。このリン酸化糖の生理機能と
は、生体に摂取される必要なミネラル（カルシウムおよ
びマグネシウムなどのアルカリ土類金属または鉄）を、
リン酸化糖が、それらミネラルを不溶化させることなく
腸まで運搬し、これらのミネラルの吸収を促進させる効
果を意味する。リン酸化糖の構造を分析した結果、馬鈴
薯澱粉からグルコースを工業生産する時の廃液に存在す
るリン酸化糖の構造に等しいものが含まれることもまた
判明した。本発明は、工業上の廃棄物に新たな機能を見
いだしたものである。そして、資源の有効利用を考慮
し、リン酸化糖の原料としての再利用をも可能とした。

【００９７】

【実施例】本実施例のリン酸化糖の構造は以下のように
分析した。

【００９８】まず、リン酸化糖よりリン酸基を除去し
た。１００μｌの３％リン酸化糖溶液に１００μｌの１
０ｍＭ塩化マグネシウムと０．３ｍＭ塩化亜鉛、０．０
５％アジ化ナトリウムを含む６０ｍＭ炭酸ナトリウム緩
衝液（ｐＨ９．４）を混合し、これに１００μｌの３０
Ｕ／ｍｌのアルカリホスファターゼ（ＥＣ．3.1.3.1；
E.coli由来；シグマ社製）を添加して、４０℃で１８時
間反応させた。限外濾過膜を用いてアルカリホスファタ
ーゼを除去することにより反応を停止し、リン酸基除去
済の糖（以下、脱リン酸化糖と言う）を成分とする反応
液（以下反応液Ａという）を得た。

【００９９】得られた反応液Ａ１０μｌに対し、１０μ
ｌの２００ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４．８）に溶解した
５，０００Ｕ／ｍｌのβ−アミラーゼ（さつまいも由
来；シグマ社製）を添加して、３７℃で２時間保持した
（以下、この液を反応液Ｂという）。同様に、反応液Ａ
１０μｌに１０μｌの６０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４．
５）に溶解した３００Ｕ／ｍｌのグルコアミラーゼ（Rh
izopus由来；東洋紡績製）を添加して、３５℃で１８時
間保持した（以下、この液を反応液Ｃという）。

【０１００】反応液Ａ〜Ｃを分析して生成物を確認し
た。これらの反応液の分析は、陰イオン交換樹脂カラム
CarboPac PA-100（φ４×２５０ｍｍ、ダイオネックス
社製）による高速液体クロマトグラフィーまたはシリカ
ゲルを用いた薄層クロマトグラフィーによって、各種重
合度の標準マルトオリゴ糖と比較することにより確認し
た。高速液体クロマトグラフィーを用いた脱リン酸化糖
の溶出は、１００ｍＭの水酸化ナトリウムを基本溶液と
して１Ｍ酢酸ナトリウム濃度を上昇させることによって
行なわれる。検出はパルスドアンペロメトリー（ダイオ
ネックス社製）によった。薄層クロマトグラフィーによ
る脱リン酸化糖の分析は、脱リン酸化糖をアセトニトリ
ル／水＝８０／２０で多重展開した後、硫酸／メタノー
ル＝１／１の溶液を噴霧し、１３０℃で３分間保持する
ことにより行なった。

【０１０１】反応液Ａを分析することによりリン酸化糖
の鎖長を確認した。反応液Ｂを分析したとき、マルトー
スのみ、あるいはマルトースとマルトトリオース（およ
びわずかにグルコース）が検出された。従って、この脱
リン酸化糖はグルコースがα−１，４結合したグルカン
であることを確認した。さらに反応液Ｃを分析したと
き、グルコースのみが検出された。従って、この脱リン
酸化糖はα−結合したグルコースからなることを確認し
た。

【０１０２】糖の平均鎖長（以下グルコースを１単位と
してＤＰで表す。）は、脱リン酸化糖を構成する各重合
度の糖含量から求めた。全リン酸化糖中の全糖量はフェ
ノール硫酸法により定量し、結合リン酸基数は湿式灰化
後、無機リン酸として定量される（澱粉関連糖質実験
法、生物化学実験法19、中村道徳ら、31頁、1986年、学
会出版センター）。１分子当たりの結合リン酸基数は、
湿式灰化後定量された無機リン酸量と、ＤＰより下式を
用いて算出した。

【０１０３】

【数２】

【０１０４】（実施例１）馬鈴薯澱粉の１％溶液を、５
ｍｌの６ｍＭ塩化ナトリウムおよび２ｍＭ塩化カルシウ
ムを含む溶液に溶解しつつ１００℃まで迅速に温度上昇
させて糊化した後、α−アミラーゼ（フクタミラーゼ；
上田化学製）を３５Ｕ作用させて、５０℃で３０分間保
持した。この反応液を少量分取して０．２％糖溶液と
し、０．０１Ｍのヨウ素−ヨウ化カリウム溶液を１／１
０量添加しヨード呈色が陰性であることを確認後、プル
ラナーゼ（林原生物化学研究所製）２Ｕとグルコアミラ
ーゼ（東洋紡績製）６Ｕとを同時に４０℃で２０時間作
用させた。反応を停止し、この溶液を、遠心分離後、上
清を２０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４．５）で平衡化した陰
イオン交換樹脂（キトパールＢＣＷ２５０１；富士紡績
製）に供した。十分に同緩衝液で洗浄して中性糖を除去
し、続いて、０．５Ｍ塩化ナトリウムを含む同緩衝液で
溶出した。各溶出画分をエバポレーターを用いて濃縮し
てから脱塩後、凍結乾燥することにより、リン酸化糖を
得た。

【０１０５】（実施例２）実施例１により得たリン酸化
糖を２０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４．５）で平衡化した陰
イオン交換樹脂カラム（キトパールＢＣＷ２５０１）に
再び供した。十分にカラムを同緩衝液で洗浄して中性糖
を除去した。まず０．１５Ｍ塩化ナトリウムを含む同緩
衝液で、次に０．５Ｍ塩化ナトリウムを含む同緩衝液で
溶出する画分を集めた。上記の構造決定法に基づいて分
析した結果、これらの画分を脱塩し凍結乾燥すること
で、０．１５Ｍ塩化ナトリウム溶出画分からはグルコー
スが３個以上５個以下α−１，４結合したグルカンにリ
ン酸基が１個結合しているリン酸化糖（ＰＯ−１画分）
が、０．５Ｍ塩化ナトリウム溶出画分からはグルコース
が２個以上８個以下α−１，４結合したグルカンにリン
酸基が２個以上結合しているリン酸化糖（ＰＯ−２画
分）が得られた。

【０１０６】このリン酸化糖のリン酸基のグルコースへ
の結合位置の決定は、桧作ら（Staerke, ２２巻、338〜
343頁、1970年）の方法で６位の位置にあるか否かが決
定できる。簡単に言えば、リン酸化糖は加水分解後に生
じたグルコース−６−リン酸を酵素を用いて定量した。
グルコース−６−リン酸は酸に安定であり、生成した量
をグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼで定量し
た。この方法でＰＯ−１画分およびＰＯ−２画分を分析
した結果、ＰＯ−１画分では、約７５％のリン酸基が６
位に結合し、残りが３位または２位に結合していると考
えられる。ＰＯ−２画分では、リン酸基は６位にはほと
んど結合していないと考えられる。

【０１０７】（実施例３）馬鈴薯澱粉１％溶液を、５ｍ
ｌの６ｍＭ塩化ナトリウムおよび２ｍＭ塩化カルシウム
を含む溶液に溶解し１００℃まで迅速に温度上昇させて
糊化した後、α−アミラーゼ（フクタミラーゼ）を３５
Ｕ作用させて、５０℃で３０分間保持した。沸騰浴中で
５分間保持して反応を停止し、この溶液を、遠心分離
後、上清を実施例１と同様に陰イオン交換樹脂カラムで
リン酸化糖を回収して、脱塩し、凍結乾燥することで、
リン酸化糖を得た。

【０１０８】（実施例４）１０％化工澱粉（結合リン酸
含量４％；日澱化学製）５００ｍｌを分子量１万の限外
濾過膜処理（ミリポア製；ペリコンラボカセット使用）
し脱塩した後、α−アミラーゼ（フクタミラーゼ）２５
００Ｕおよびグルコアミラーゼ（グルクザイムＮＬ４．
２；天野製薬製）１００Ｕを添加し５０℃で１８０分反
応させた後、沸騰浴中で５分間保持して反応を停止し
た。これをすぐに冷却し、３倍量エタノールを添加する
ことによって生じた沈澱を遠心分離で回収した。つづい
て、１００ｇの活性炭を添加して中性糖を吸着除去し、
膜濾過後、凍結乾燥することでリン酸化糖を得た。

【０１０９】（実施例５）５ｇの化工澱粉（結合リン酸
含量４％）を１００ｍｌの１Ｎ塩酸溶液に溶解し、１０
０℃で１５分間加熱処理した。これをすぐに冷却し、１
Ｎ水酸化ナトリウム溶液で中性にｐＨを調節した後脱塩
した。続いて、５０ｇの活性炭を添加して中性糖を吸着
除去し、膜濾過した後凍結乾燥することでリン酸化糖を
得た。

【０１１０】（実施例６）リン酸化糖のカルシウム、
鉄、またはマグネシウムとの化合物形成能を、ゲル濾過
法によっても確認した。実施例１のリン酸化糖１０％溶
液１００μｌに、１００ｍＭ塩化カルシウム溶液１００
μｌを添加し、２０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．
４）を用いて平衡化したゲル濾過（セファデックスＧ−
１０；ファルマシア社製、φ１．２×１０ｃｍカラム）
に供した。その結果、リン酸化糖とカルシウムのピーク
が一致し、同時に溶出したので，そのリン酸化糖とカル
シウムとの化合物を分取した。また、１００ｍＭ塩化カ
ルシウム溶液１００μｌも同カラムに供した。これらの
溶出パターンを、図１に示した。塩化第一鉄や、塩化マ
グネシウムについても同様にカラムに供し、リン酸化糖
の影響を調べた。これらを、図２、図３に示した。

【０１１１】ここで、図１は、以下の３種類の溶液によ
るゲル濾過溶出パターンを示す：実施例１の１０％リン
酸化糖１００μｌのみの溶液（溶出液をリン酸化糖濃度
で測定；図中□で表す）；１０％濃度リン酸化糖１００
μｌと共に供した場合の１００ｍＭ塩化カルシウム１０
０μｌの溶液（溶出液をカルシウム濃度で測定；図中●
で表す）；および１００ｍＭ塩化カルシウム１００μｌ
のみの溶液（溶出液をカルシウム濃度で測定；図中○で
表す）。横軸に溶出時間、左の縦軸にリン酸化糖濃度を
示し、そして右の縦軸に溶出したカルシウム濃度を示
す。

【０１１２】図２は、以下の３種類の溶液によるゲル濾
過溶出パターンを示す：実施例１の１０％リン酸化糖１
００μｌのみの溶液（溶出液をリン酸化糖濃度で測定；
図中□で表す）；１０％濃度リン酸化糖１００μｌと共
に供した場合の１００ｍＭ塩化第一鉄１００μｌの溶液
（溶出液を鉄濃度で測定；図中●で表す）；および１０
０ｍＭ塩化第一鉄１００μｌのみの溶液（溶出液を鉄濃
度で測定；図中○で表す）。横軸に溶出時間、左の縦軸
にリン酸化糖濃度を示し、そして右の縦軸に溶出した鉄
濃度を示す。

【０１１３】図３は、以下の３種類の溶液によるゲル濾
過溶出パターンを示す：実施例１の１０％リン酸化糖１
００μｌのみの溶液（溶出液をリン酸化糖濃度で測定；
図中□で表す）；１０％リン酸化糖１００μｌと共に供
した場合の１００ｍＭ塩化マグネシウム１００μｌの溶
液（溶出液をマグネシウム濃度で測定；図中●で表
す）；および１００ｍＭ塩化マグネシウム１００μｌの
みの溶液（溶出液をマグネシウム濃度で測定；図中○で
表す）。横軸に溶出時間、左の縦軸にリン酸化糖濃度を
示し、そして右の縦軸に溶出したマグネシウム塩濃度を
示す。

【０１１４】これらより、リン酸化糖と金属塩とを同時
に供した場合、金属塩はリン酸化糖と同じ溶出時間で溶
出することが判った。金属塩とリン酸化糖とを同時に供
した場合の溶出時間は、塩のみを供した場合の溶出時間
とは明らかに異なっていた。従って、本実施例により、
リン酸化糖のカルシウム、鉄、およびマグネシウムとの
化合物形成について確認できた。

【０１１５】（実施例７）５ｍｌの１０ｍＭ酢酸緩衝液
（ｐＨ５．５）中に溶解した１％馬鈴薯澱粉に、ＣＧＴ
ａｓｅ（コンチザイム；天野製薬製）２０Ｕおよびイソ
アミラーゼ（林原生物化学研究所製）３０Ｕを添加し、
４０℃で１４時間反応させた後、沸騰浴中で５分間保持
して反応を停止した。この溶液を遠心分離して得られた
上清に１００ｍＭ酢酸緩衝液を添加して、ｐＨ４．５に
調整後、同緩衝液で平衡化した陰イオン交換樹脂（キト
パールＢＣＷ２５０１）カラムに供した。これを同緩衝
液で十分に洗浄して中性糖を除去し、０．５Ｍ塩化ナト
リウムを含む同緩衝液で溶出した。脱塩し、凍結乾燥す
ることにより、リン酸化糖を得た。

【０１１６】（実施例８）実施例２のＰＯ−１画分を用
いてリン酸化糖のタンパク質との誘導体を作製した。タ
ンパク質として鶏卵由来オボアルブミン（シグマ社製）
１ｍｇと、実施例２のＰＯ−１画分１ｍｇとを混合し、
７０％の湿度下で５０℃で一定期間保存した。この時の
ｐＨは８に調整した。０、２、４、８、１２、１６、２
０、および３０日目にサンプリングした。グルコースお
よびグルコース−６−リン酸もまた、同様にして実施し
た。サンプリング後、これらを１ｍｌの蒸留水に溶解
し、遠心分離して沈澱を除去した後、メイラード反応の
進行度として４２０ｎｍでの着色度を測定した。その結
果を図４に示した。

【０１１７】図４は、４２０ｎｍでの着色度を測定する
ことによる、以下の糖のタンパク質とのメイラード反応
の結果を示す；実施例２のＰＯ−１画分（４２０ｎｍの
吸光度で測定；図中◇で表す）；グルコース−６−リン
酸（図中○で表す）；グルコース（図中△で表す）；お
よびコントロールとしてのタンパク質のみ（図中■で表
す）。横軸に反応時間、そして縦軸に４２０ｎｍでの吸
光度を示す。

【０１１８】グルコース−６−リン酸を用いた場合は、
反応は急速に進み、４日程度でピークに達し、次第に沈
澱してしまうため溶液の着色度は一挙に低下した。それ
に比べて、ＰＯ−１画分を用いた場合は緩やかに進み、
さらに、グルコースはさらにゆるやかに進んだ。

【０１１９】また、メイラード反応の進行度としてアミ
ノ基の減少をＴＮＢＳ法（京都大学農学部食品工学教室
編食品工学実験書、養賢堂、620〜621頁、1982年）を用
いて測定した。この結果を図５に示す。

【０１２０】図５は、アミノ基の減少をＴＮＢＳ法を用
いて測定することによる、以下の糖のタンパク質とのメ
イラード反応の進行度を示す：実施例２のＰＯ−１画分
（アミノ基の減少をＴＮＢＳ法で測定；図中◇で表
す）；グルコース−６−リン酸（図中○で表す）；グル
コース（図中△で表す）；およびコントロールとしての
タンパク質のみ（図中■で表す）。横軸に反応時間、そ
して縦軸に残存アミノ基率を示す。

【０１２１】図５によっても、図４と同様の結果が得ら
れた。

【０１２２】（実施例９）さらに、オボアルブミンとＰ
Ｏ−１とのメイラード反応について、ＰＯ−１の濃度を
変えて実施した。簡単に言えば、オボアルブミン１ｍｇ
に対してＰＯ−１を４、２、１、０．５、０．２５、
０．１２５、０．０６２５、０．０３１２５、０ｍｇを
それぞれ実施例８の方法で７日間保存した。保存後、カ
ルシウム可溶化効果を検証した。この結果を図６に示
し、横軸に反応時に添加したＰＯ−１量を採り、左の縦
軸に可溶性カルシウムの百分率（図中では溶性カルシウ
ム率と表示。以下の図もまた同様である）を示した。こ
こで、図中、□は１時間後の、◇は２時間後の、そして
○は４時間後のＰＯ−１の溶性カルシウム率を示した。
ただし、図６では０ｍｇのＰＯ−１添加量０ｍｇの値は
示されていない。上記と同様にオボアルブミンの反応に
よって減少したアミノ基の量について、右の縦軸に残存
量を百分率で示した（図中▲はＴＮＢＳ％を示す）。ア
ミノ基の量が減少し、反応が進むにつれて、カルシウム
可溶化効果が現れた。また、反応が進むにつれてタンパ
ク質の分子量は上昇しているのが、図７のＳＤＳ−電気
泳動写真からよく判る。ＳＤＳ−電気泳動はLaemmliら
（Nature、227巻、3831〜3839頁、1970年）の方法で実
施した。図中、両端のレーンは分子量マーカーを示す。
それぞれのレーンについて、添加ＰＯ−１量は以下の通
りである：レーン１、０ｍｇ；レーン２、０．０６２５
ｍｇ；レーン３、０．１２５ｍｇ；レーン４、０．２５
ｍｇ；レーン５、０．５ｍｇ；レーン６、１ｍｇ；レー
ン７、２ｍｇ；およびレーン８、４ｍｇ。図６および図
７からオボアルブミン１ｍｇに対して、ＰＯ−１を１ｍ
ｇ反応させるのが最も効果的であり、結合ＰＯ−１量も
これ以上増加しないことが判った。

【０１２３】（実施例１０）１０％の実施例１のリン酸
化糖２５μｌに、１０Ｕ／ｍｌのＣＧＴａｓｅ（コンチ
ザイム）５μｌを添加し、３７℃で１５時間反応させ
た。その結果、実施例２のＰＯ−１画分からＰＯ−２に
似た位置の画分（以下、ＰＯ−２様画分という）が生成
することが判った。このＰＯ−２様画分は、馬鈴薯澱粉
から得た実施例２のＰＯ−２画分とは異なる。これを以
下に説明する。

【０１２４】実施例２のＰＯ−２は、グルコースの６位
に結合したリン酸基はほとんどなく、２〜８の重合度の
オリゴ糖にリン酸基が２個結合した構造である。しか
し、実施例１０におけるＣＧＴａｓｅによるＰＯ−１の
転移反応で生じた物質は、ＰＯ−１のうち重合度が４ま
たは５のオリゴ糖が転移反応のために（重合度３のリン
酸化糖は転移しない）消失あるいは減少し、さらに重合
度の高い、２個以上のリン酸基を有するリン酸化糖に変
化している。これは上記の構造決定法に基づいて分析し
た結果、判明した。ただし、新たに生じたこの物質（Ｐ
Ｏ−２に似た位置に検出される液体クロマトグラフィー
でのピーク）は、ホスファターゼによる脱リン酸化が同
様の条件では生じ難く、ホスファターゼに抵抗性のある
物質に変化している。それでも、重合度が１０程度まで
の中性糖が検出され、実施例２で得たＰＯ−２とは異な
る物質であることが確認された。

【０１２５】（実施例１１）酵母よりリン酸基の結合し
たマンナンをJeanesらの方法（Arch. Biochem. Biophy
s.、92巻、343頁−350頁、1961年）で調製した。５ｇの
リン酸化マンナン（結合リン酸含量４％）を得た。

【０１２６】（実施例１２）得られたリン酸化糖のカル
シウムとの化合物形成によるカルシウム可溶化効果につ
いて調べた。

【０１２７】カルシウム可溶化効果は、山本らの方法を
改変して無機リン酸との沈澱形成阻害効果を調べること
により確認した（Biosci.Biotech.Biochem.、56巻、90
〜93頁、1992年）。

【０１２８】簡単に言えば、６ｍＭアジ化ナトリウムお
よび８０ｍＭ塩化カリウムを含む２０ｍＭリン酸緩衝液
（ｐＨ７．４）５００μｌと試験溶液または蒸留水１０
０μｌを充分に混合し、次に１０ｍＭ塩化カルシウム溶
液４００μｌを添加して、３０℃で０．５、１、２、お
よび４時間振盪後、遠心分離（１０，０００ｒｐｍ、１
分間）して上澄液のカルシウム濃度を原子吸光分析法で
測定した。

【０１２９】試験溶液として実施例１によって得られた
リン酸化糖を用いたものを図８に、実施例２によって得
られた重合度３〜５のグルカンにリン酸基が１個結合し
ているリン酸化糖、および重合度２〜８のグルカンにリ
ン酸基が２個以上結合しているリン酸化糖を用いたもの
を図９に、実施例４において得られたリン酸化糖を用い
たものを図１０に、カゼインホスホペプチド（ＣＰＰII
I；明治製菓製）、ペクチンおよびアルギン酸ナトリウ
ムを用いたものを図１１に、グルコース−１，６−二リ
ン酸、グルコース−６−リン酸、フラクトース−１，６
−二リン酸、およびフラクトース−６−リン酸を用いた
ものを図１２に示す。全図とも横軸に振盪時間、縦軸に
可溶カルシウム率を示す。

【０１３０】図８では、実施例１において得られた１％
リン酸化糖（図中●で表す）および５％リン酸化糖（図
中○で表す）をそれぞれ１００μｌと、６ｍＭアジ化ナ
トリウムおよび８０ｍＭ塩化カリウムを含む２０ｍＭリ
ン酸緩衝液（ｐＨ７．４）５００μｌとを充分に混合
し、次に塩化カルシウム１０ｍＭ溶液を４００μｌを添
加して、３０℃にて０．５、１、２、および４時間振盪
した後、遠心分離（１０，０００ｒｐｍ、１分間）して
上澄液のカルシウム濃度を原子吸光分析法で測定した。

【０１３１】図９では、実施例２において得られたグル
コースが３個以上５個以下α−１，４結合したグルカン
にリン酸基が１個結合しているリン酸化糖（図中●で表
す）およびグルコースが２個以上８個以下α−１，４結
合したグルカンにリン酸基が２個以上結合しているリン
酸化糖（図中○で表す）各々５％の濃度に調整したもの
を１００μｌと、６ｍＭアジ化ナトリウムおよび８０ｍ
Ｍ塩化カリウムを含む２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．
４）５００μｌとを充分に混合し、次に１０ｍＭ塩化カ
ルシウム溶液４００μｌを添加して、３０℃にて０．
５、１、２、および４時間振盪後、遠心分離（１０，０
００ｒｐｍ、１分間）して上澄液のカルシウム濃度を原
子吸光分析法で測定した。

【０１３２】図１０では、実施例４において得られたリ
ン酸化糖を５％の濃度に調整したもの１００μｌと、６
ｍＭアジ化ナトリウムおよび８０ｍＭ塩化カリウムを含
む２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）５００μｌとを
充分に混合し、次に１０ｍＭ塩化カルシウム溶液４００
μｌを添加して、３０℃にて０．５、１、２、および４
時間振盪語、遠心分離（１０，０００ｒｐｍ、１分間）
して上澄液のカルシウム濃度を原子吸光分析法で測定し
た。

【０１３３】図１１では、アルギン酸ナトリウム（図中
□で表す）、ペクチン（図中●で表す）、ＣＰＰIII
（明治製菓製）（図中○で表す）をそれぞれ５％濃度に
調整したもの１００μｌと、６ｍＭアジ化ナトリウムお
よび８０ｍＭ塩化カリウムを含む２０ｍＭリン酸緩衝液
（ｐＨ７．４）５００μｌとを充分に混合し、次に１０
ｍＭ塩化カルシウム溶液４００μｌを添加して、３０℃
にて０．５、１、２、および４時間振盪後、遠心分離
（１０，０００ｒｐｍ、１分間）して上澄液のカルシウ
ム濃度を原子吸光分析法で測定した。

【０１３４】図１２では、フラクトース−１，６−二リ
ン酸（図中△で表す）、グルコース−６−リン酸（図中
□で表す）、フラクトース−６−リン酸（図中○で表
す）、グルコース−１，６−二リン酸（図中●で表す）
それぞれを５％濃度に調整したもの１００μｌ、および
６ｍＭアジ化ナトリウム、８０ｍＭ塩化カリウムを含む
２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）５００μｌを充分
に混合し、次に１０ｍＭ塩化カルシウム溶液４００μｌ
を添加して、３０℃にて０．５、１、２、および４時間
振盪後、遠心分離（１０，０００ｒｐｍ、１分間）して
上澄液のカルシウム濃度を原子吸光分析法で測定した。

【０１３５】これらの結果、リン酸化糖は、カルシウム
と化合物もしくは錯体を形成し、腸内環境と同じ微アル
カリ性においてもリン酸カルシウムとなってカルシウム
が不溶化するのを阻害する効果を有することが明らかと
なった。さらに、この効果は、リン酸化糖１分子当たり
２個以上のリン酸基を有しているリン酸化糖および実施
例４において調製したリン酸化糖において、特に優れて
いることが明らかとなった。

【０１３６】（実施例１３）さらに、種々の物質のカル
シウム可溶化効果がどの程度の濃度において現れるかに
ついての試験を行った。試験溶液を０．１％、０．０７
５％、０．０５％、０．０２５％、０．０１％、０．０
０５％の各濃度に調整したものを１００μｌ、および６
ｍＭアジ化ナトリウム、８０ｍＭ塩化カリウムを含む２
０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）５００μｌとを充分
に混合し、次に１０ｍＭ塩化カルシウム溶液４００μｌ
を添加して、３０℃にて２時間振盪後、遠心分離（１
０，０００ｒｐｍ、１分間）して上澄液のカルシウム濃
度を原子吸光分析法で測定した。試験溶液として，実施
例２によって得られた重合度２〜８のグルカンにリン酸
基が２個以上結合しているリン酸化糖を用いたものを図
１３に、実施例４において得られたリン酸化糖を用いた
ものを図１４に、カゼインホスホペプチド（ＣＰＰII
I；明治製菓製）（図中□で表す）またはアルギン酸ナ
トリウム（図中○で表す）を用いたものを図１５に示す
（アルギン酸ナトリウム、カゼインホスホペプチド（Ｃ
ＰＰIII〔明治製菓製〕）。横軸はそれぞれの濃度につ
いて、１０を底とする対数を採っている。縦軸に溶性カ
ルシウム率を示す。

【０１３７】（実施例１４）上記に加えて、グルコース
−１，６−二リン酸、フラクトース−１，６−二リン
酸、グルコース−６−リン酸におけるカルシウムの可溶
化効果がどの程度の濃度において現れるかについての試
験を行った。試験溶液をそれぞれ１０ｍＭ、７．５ｍ
Ｍ、５ｍＭ、２．５ｍＭ、１ｍＭ、０．５ｍＭの各濃度
に調整したもの１００μｌ、および６ｍＭアジ化ナトリ
ウム、８０ｍＭ塩化カリウムを含む２０ｍＭリン酸緩衝
液（ｐＨ７．４）５００μｌを充分に混合し、次に１０
ｍＭ塩化カルシウム溶液を４００μｌを添加して、３０
℃にて２時間振盪後、遠心分離（１０，０００ｒｐｍ、
１分間）して上澄液のカルシウム濃度を原子吸光分析法
で測定した結果を図１６に示す。

【０１３８】図１６では、フラクトース−１，６−二リ
ン酸（図中□で表す）、グルコース−６−リン酸（図中
△で表す）、グルコース−１，６−二リン酸（図中○で
表す）それぞれを１０、７．５、５、２．５、１、０．
５ｍＭの各濃度に調整したもの１００μｌと、６ｍＭア
ジ化ナトリウムおよび８０ｍＭ塩化カリウムを含む２０
ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）５００μｌとを充分に
混合し、次に１０ｍＭ塩化カルシウム溶液４００μｌを
添加して、３０℃にて０．５、１、２、４時間振盪後、
遠心分離（１０，０００ｒｐｍ、１分間）して上澄液の
カルシウム濃度を原子吸光分析法で測定した。横軸はそ
れぞれの濃度について、１０を底とする対数を採ってい
る。縦軸に溶性カルシウム率を示す。

【０１３９】実施例１２、１３および１４により、本発
明のリン酸化糖のカルシウム可溶化効果は、カゼインホ
スホペプチドやアルギン酸などのカルシウム可溶化効果
と同程度であることが判った。

【０１４０】（実施例１５）実施例８のリン酸化糖のタ
ンパク質との誘導体のカルシウム可溶化効果もまた検証
した。その結果を図１７、１８、および１９に示した。
全図とも横軸に反応時間、縦軸に溶性カルシウム率を示
す。

【０１４１】図１７では、図４に示した実施例２のＰＯ
−１画分のタンパク質とのメイラード反応産物の１％の
濃度に調整したもの１００μｌと、６ｍＭアジ化ナトリ
ウム、８０ｍＭ塩化カリウムを含む２０ｍＭリン酸緩衝
液（ｐＨ７．４）５００μｌを充分に混合し、次に１０
ｍＭ塩化カルシウム溶液４００μｌを添加して、３０℃
にて０．５（図中△で表す）、１（図中□で表す）、お
よび４（図中●で表す）時間振盪後、遠心分離（１０，
０００ｒｐｍ、１分間）して上澄液のカルシウム濃度を
原子吸光分析法で測定した。

【０１４２】図１８では、図４に示したグルコース−６
−リン酸のタンパク質とのメイラード反応産物の１％の
濃度に調整したもの１００μｌ、および６ｍＭアジ化ナ
トリウム、８０ｍＭ塩化カリウムを含む２０ｍＭリン酸
緩衝液（ｐＨ７．４）５００μｌを充分に混合し、次に
１０ｍＭ塩化カルシウム溶液４００μｌを添加して、３
０℃にて０．５（図中△で表す）、１（図中□で表
す）、および４（図中●で表す）時間振盪後、遠心分離
（１０，０００ｒｐｍ、１分間）して上澄液のカルシウ
ム濃度を原子吸光分析法で測定した。

【０１４３】図１９では、図４に示したグルコースのタ
ンパク質とのメイラード反応産物の１％の濃度に調整し
たもの１００μｌ、および６ｍＭアジ化ナトリウム、８
０ｍＭ塩化カリウムを含む２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ
７．４）５００μｌを充分に混合し、次に１０ｍＭ塩化
カルシウム溶液４００μｌを添加して、３０℃にて０．
５（図中△で表す）、１（図中□で表す）、および４
（図中●で表す）時間振盪後、遠心分離（１０，０００
ｒｐｍ、１分間）して上澄液のカルシウム濃度を原子吸
光分析法で測定した。

【０１４４】実施例２のＰＯ−１画分のリン酸化糖は、
それ自体では、カルシウム可溶化効果が弱かったが、タ
ンパク質に複数個結合することで強い可溶化効果が得ら
れた。グルコース−６−リン酸のタンパク質との誘導体
の可溶化効果は２時間以降消失するが、本発明のリン酸
化糖誘導体は安定的に可溶化効果が現れることもまた判
った。グルコースのタンパク質との誘導体ではカルシウ
ム可溶化効果は起こらなかった。従って、カルシウム可
溶化効果にはリン酸基の結合した糖類を用いることが必
要であることが判った。

【０１４５】（実施例１６）１０％の実施例１のリン酸
化糖２５μｌに、６０ｍＭの酢酸緩衝液に溶解した１０
Ｕ／ｍｌのＣＧＴａｓｅ５μｌを添加し、３７℃で１５
時間反応させた結果、実施例２のＰＯ−１画分からＰＯ
−２様画分が生成することが判った。この実施例１０の
リン酸化糖のカルシウム可溶化効果を検証した。その結
果を図２０に示した。横軸に反応時間、縦軸に溶性カル
シウム率を示す。図２０では、以下のＣＧＴａｓｅを用
いている：Bacillus. Thermophilic由来（図中□で表
す）；Bacillus Circulans由来（図中◆で表す）；Baci
llus Megaterium由来（図中○で表す）；市販のBacillu
s Macerans（図中△で表す）；Alkaline CGTase（T. Ko
metaniら、Biosci. Biotech. Biochem.、58巻、517−52
0頁、1994年）（図中■で表す）；およびコントロール
として６０ｍＭ酢酸緩衝液（図中●で表す）。そして、
リン酸化糖を１％の濃度に調製したもの１００μｌと、
６ｍＭアジ化ナトリウムおよび８０ｍＭ塩化カリウムを
含む２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）５００μｌと
を充分に混合し、次に１０ｍＭ塩化カルシウム溶液４０
０μｌを添加して、３０℃にて０．５、１、２、および
４時間振盪後、遠心分離（１０，０００ｒｐｍ、１分
間）して上澄液のカルシウム濃度を原子吸光分析法で測
定した。

【０１４６】このＰＯ−２様画分によってもカルシウム
の可溶化効果は上昇した。このＰＯ−２様画分は、分子
内に２個以上のリン酸基が存在しているためにカルシウ
ムの可溶化効果が上昇したと思われる。

【０１４７】（実施例１７）実施例１１のマンノースか
らなるリン酸化糖のカルシウム可溶化効果もまた検証し
た。その結果を図２１に示した。横軸に反応時間、縦軸
に溶性カルシウム率を示す。それらリン酸化糖を１％の
濃度に調整したもの１００μｌと、６ｍＭアジ化ナトリ
ウムおよび８０ｍＭ塩化カリウムを含む２０ｍＭリン酸
緩衝液（ｐＨ７．４）５００μｌとを充分に混合し、次
に１０ｍＭ塩化カルシウム溶液４００μｌを添加して、
３０℃にて０．５、１、２、４時間振盪後、遠心分離
（１０，０００ｒｐｍ、１分間）して上澄液のカルシウ
ム濃度を原子吸光分析法で測定した。本実施例により、
構成糖に関係なくカルシウム可溶化効果は現れることが
判った。

【０１４８】（実施例１８）０．５、１、５、１０ｍＭ
の各金属塩化物溶液２００μｌに対し、１％の実施例１
のリン酸化糖１００μｌを添加して混合した後に、５０
０μｌエタノールを添加して生成する沈澱の有無を目視
により比較した。その結果を以下の表１に示す。これに
５００μｌエタノールをさらに添加して同様に比較し
た。その結果を以下の表２に示す。

【０１４９】また、塩化カルシウム（図中○で表す）ま
たは塩化第一鉄（図中●で表す）を添加したときのリン
酸化糖の回収率を図２２に示した。横軸に各金属塩濃
度、縦軸に沈殿としてのリン酸化糖回収率を示す。

【０１５０】

【表１】

【０１５１】

【表２】

【０１５２】（実施例１９）鉄のキレート力については
川上ら（Biosci. Biotech. Biochem.、57巻、1376-1377
頁、1993年）の方法で試験した。即ち、１００ｍＭの塩
化第一鉄、塩化第二鉄溶液２５μｌに、実施例１のリン
酸化糖を最終溶液中で０、０．０１２５、０．０２５、
０．１２５、０．２５、０．５、１％のリン酸化糖濃度
となるように加える。その後、２００ｍＭ炭酸ナトリウ
ム溶液でｐＨを７に調整し、さらに蒸留水を加え１ｍｌ
溶液とした。その溶液を２４、４８時間、３７℃で振盪
後、遠心分離して上澄溶液の鉄濃度を原子吸光分析法で
求めた。その結果を図２３、図２４に示した。両図とも
横軸にリン酸化糖濃度、縦軸に初発の添加鉄量に対する
可溶性鉄量の百分率を示す。

【０１５３】図２３では、１００ｍＭ塩化第一鉄２５μ
ｌにリン酸化糖を最終溶液中で０、０．０１２５、０．
０２５、０．１２５、０．２５、０．５、１％となるよ
うに添加し、２００ｍＭ炭酸水素ナトリウム溶液でｐＨ
７に調整後１ｍｌ溶液とした。その溶液を２４時間（図
中○で表す）、４８時間（図中●で表す）、３７℃で振
盪後、遠心分離して上澄液の鉄濃度を原子吸光分析法で
求めた。

【０１５４】図２４では、１００ｍＭの塩化第二鉄２５
μｌにリン酸化糖を最終溶液中で０、０．０１２５、
０．０２５、０．１２５、０．２５、０．５、１％とな
るように添加し、２００ｍＭの炭酸水素ナトリウム溶液
でｐＨ７に調製後１ｍｌ溶液とした。その溶液を２４時
間（図中□で表す）、４８時間（図中■で表す）、３７
℃で振盪後、遠心分離して上澄液の鉄濃度を原子吸光分
析法で求めた。

【０１５５】本実施例により、リン酸化糖は、約０．１
％の濃度で鉄イオンを可溶化する効果があることが判っ
た。 （実施例２０）虫歯の原因であるミュータンス菌による
酸生成の有無を確認した。用いたミュータンス菌は、S.
mutans 6715株を用いた。菌株をBrain Heart Infusion
（DIFCO社製）で、２４時間、３７℃で静置培養後、同
条件で、１リットル本培養した。遠心分離で菌体を集菌
後、１００ｍＭのリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）１０ｍｌ
に懸濁した（菌濃度０．２ｇ／ｍｌ）。この溶液１．５
ｍｌと２０ｍＭの試験糖溶液１．５ｍｌとを混合し、３
７℃で静置して、一定時間ごとに溶液のｐＨを測定し
た。用いた試験糖溶液は、実施例１のリン酸化糖（図中
◇で表す）、シュークロース（図中△で表す）、マルト
トライオース（図中□で示す）、およびグルコース（図
中○で表す）である。その結果を図２５に示した。横軸
に反応時間、縦軸にｐＨの変化を示す。

【０１５６】本実施例により、リン酸化糖を用いた場
合、溶液のｐＨがシュークロースやグルコースのように
低下せず、酸が生成されないことが判った。すなわち、
本発明のリン酸化糖はミュータンス菌に資化されないこ
とが判った。

【０１５７】（実施例２１）リン酸化糖が、虫歯の原因
であるミュータンス菌によって生産される酵素ＧＴａｓ
ｅの基質として用いられて、グルカンを生成し得るかど
うかを確認した。用いたＧＴａｓｅは、Streptococcus
mutans 6715株由来の酵素を用いた。１５０μＭデキス
トランＴ−１０（ファルマシア製）を２００μｌと１０
０ＵのＧＴａｓｅ１００μｌとを混合した後、５００ｍ
Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．５）を２００μｌと５００μ
ｌの試験糖溶液を添加し十分に混合した（全量１ｍ
ｌ）。１５時間、３７℃で反応後遠心分離で沈澱を集
め、蒸留水で沈澱を２〜３回洗浄後、５００μｌの蒸留
水に懸濁して、糖濃度をフェノール硫酸法で測定した。
試験糖溶液は、実施例１のリン酸化糖を用い、反応溶液
の終濃度で１０、５、１、および０％に調製した。一
方、コントロールとして５％シュークロース溶液を用い
て、同様の試験も実施した。その結果を以下の表３に示
した。

【０１５８】

【表３】

【０１５９】本実施例により、リン酸化糖は、それ自体
ＧＴａｓｅの基質にはならず、グルカンを生成しないこ
とが判った。

【０１６０】（実施例２２）完全に加熱糊化した４％可
溶性澱粉水溶液を４℃に保存すると、可溶性澱粉は速や
かに老化し、糊液は白濁する。この系を用いて、澱粉の
老化抑制効果を次のように検証した。可溶性澱粉を終濃
度で４％になるように蒸留水に溶解後、実施例１のリン
酸化糖（図中□で表す）を４％添加した。その溶液を４
℃で保存して経時的に６６０ｎｍでの白濁度を測定し、
老化による沈澱の生成度を検証した。比較に澱粉老化防
止効果があるといわれる日食化工（株）製のフジオリゴ
＃３６０（マルトトライオース６０％以上）（図中△で
表す）を用いた。また、ブランクとして蒸留水（図中●
で表す）を用いた。その結果を図２６に示した。横軸に
反応時間、縦軸に白濁度（６００ｎｍでの吸光度）を示
す。

【０１６１】本実施例により、リン酸化糖は、フジオリ
ゴに比較しても澱粉の老化による濁度の生成が小さく、
老化を抑制する効果が確認できた。

【０１６２】（実施例２３）リン酸化糖の緩衝作用を次
のように調べた。実施例１の１％リン酸化糖溶液３０ｍ
ｌ（図中○で表す）に対して、０．１Ｎ乳酸を１分間に
０．４ｍｌの割合で滴下して行き、ｐＨの低下を経時的
に測定した。コントロールとして蒸留水３０ｍｌ（図中
◆で表す）に対して乳酸を滴下していった。その結果を
図２７に示した。横軸に添加乳酸量、縦軸にｐＨの変化
を示す。

【０１６３】本実施例により、コントロールでは０．４
ｍｌの乳酸添加ですみやかにｐＨが３．５まで低下する
のに対し、リン酸化糖に緩衝作用があり、ｐＨの急激な
変化を防止することが判った。

【０１６４】（実施例２４）ラットを用いたカルシウム
の出納実験は次のように行った。４週齢のSprague-Dawl
ey系ラットを日本クレア（株）より購入し、個別ゲージ
にて、室温２３．１±１．０℃、湿度５５±７％、１２
時間ごとの明暗サイクルの環境で飼育した。初めの１週
間をＡＩＮ−７６精製飼料で予備飼育した後、各群の体
重が同じになるように３群（各６匹）に分けた。各群の
試験食として、実施例１のリン酸化糖食群、実施例４の
リン酸化糖食群、無添加のコントロール群に分けて５週
間飼育した。食餌組成は以下の表４に示す。それぞれの
飼料は、大豆タンパク質（２０％）をタンパク源とした
カルシウム０．３５％、リン０．７０％を含む精製飼料
に、実施例１、実施例４のリン酸化糖を、対カルシウム
重量比にして１０倍量添加した（炭水化物の一部代替）
ものを用いた。

【０１６５】

【表４】

【０１６６】ラットの体重は、１週間に一度、飼料摂取
量は２〜３日に一度測定した。カルシウムの出納の測定
および尿と糞便の回収は、実験終了前３日間に行った。
群間の体重増加に差はなく、約３６０ｇ程度であった。
カルシウムの出納実験結果より得た吸収率を図２８に示
した。横軸にラット群、縦軸にカルシウム吸収率を示
す。また、体内保留率を図２９に示した。横軸にラット
群、縦軸にカルシウム体内保留率を示す。

【０１６７】図２８において、カルシウムの出納実験結
果より得た吸収率は、採取した糞便を乾燥重量を測定し
た後、一定量を灰化して１Ｎ塩酸での抽出溶液を原子吸
光分析でカルシウム量を求め、次式で計算したものであ
る。

【０１６８】

【数３】

【０１６９】図２９において、採取した糞便は乾燥重量
を測定した後、一定量を灰化して１Ｎ塩酸での抽出溶液
と尿のカルシウム量を原子吸光分析で求め、カルシウム
の体内保留率は、次式で計算したものである。

【０１７０】

【数４】

【０１７１】本実施例により、カルシウムの吸収率はリ
ン酸化糖の投与によって上昇する傾向にあり、カルシウ
ムの吸収促進効果が観察された。さらに、体内保留率も
改善される傾向にあった。

【０１７２】（実施例２４）リン酸化糖の消化性試験
は、平山らの糖質消化性の簡易評価法（澱粉科学、37
巻、第４号、259-262頁、1990年）に従って行った。簡
単に言えば、ラットの小腸アセトン粉末（シグマ社製）
に、蒸留水を添加して１００ｍｇ／ｍｌの懸濁液とし
た。超音波処理（SONIFIER cell disruptor：１％ dut
ycycle 50，１分×３回）の後、遠心分離した上清を酵
素液とした。その酵素液５０μｌと試験糖溶液５０μｌ
とを混合して３７℃で０、５、１０、３０分、１、２、
４、および２２時間処理した。沸騰浴中で５分間処理し
て反応停止後、グルコースオキシダーゼ法（A. Dahlqvi
st、Anal. Biochem.、７巻、18-25頁、1964年）に従っ
て生じたグルコースを定量し、消化性を検証した。試験
糖液として、０．５％実施例１のリン酸化糖（図中●で
表す）、実施例２のＰＯ−２画分（図中■で表す）、グ
ルコース−６−リン酸（図中△で表す）、パラチノース
（図中◇で表す）、マルトトライオース（図中□で表
す）の溶液を用いた。その結果を図３０に示した。横軸
に処理時間、縦軸に生成グルコース濃度を示す。

【０１７３】本実施例により、パラチノース、マルトト
ライオースに比べて、リン酸化糖は難消化性であること
が判った。

【０１７４】（実施例２５）実施例１で得たリン酸化糖
を用いて、カーネーションの日持ち効果を調べた。カー
ネーション（コーラル種）の切り花各々６本を、２０℃
の室内（１２時間明暗サイクル）で、以下の各水溶液３
００ｍｌにそれぞれ生け、経過日数後の健全花数を調査
した。本実施例で用いた水溶液の組成を以下の表５に示
す。水としては脱イオン水を用いた。

【０１７５】

【表５】

【０１７６】調査は３、６、１３日後に実施し、そのと
きに各水溶液を新しいものに取り替えた。結果を以下の
表６に示す。

【０１７７】

【表６】

【０１７８】リン酸化糖およびカルシウムの共存下で
は、１３日後もほとんどの切り花が健全であり、効果が
確認された。図３１に６日後の切り花の状態を示す。最
も健全なものと最も劣悪なものの２本を除いて撮影し
た。

【０１７９】（実施例２６）実施例１で得たリン酸化糖
を用いて、このリン酸化糖のかいわれ大根の生長への効
果を調べた。かいわれ大根（ウタネ（株）製）の種２０
粒を、２０℃の室内（１２時間明暗サイクル）で、以下
の水溶液３０ｍｌを添加した脱脂綿を敷いたシャーレ上
に蒔き、９日後に脱脂綿上から根部分を切り取ることに
より採取し、生長状態を観察した。リンを含有する肥料
としてハイポネックス（村上物産（株））の１０００倍
希釈溶液を用いた。溶液は乾燥しないようにシャーレご
と透明な密閉容器に置いた。本実施例で用いた水溶液の
組成を以下の表７に示す。水としては脱イオン水を用い
た。

【０１８０】

【表７】

【０１８１】採取したかいわれ大根は、伸長および重量
を測定した。この測定結果を以下の表８に示す。

【０１８２】

【表８】

【０１８３】上記表８に示されるように、ハイポネック
スとカルシウムのみとの組み合わせよりも、これにリン
酸化糖を加えたものにおいて、良好な生長が観察され、
効果が確認された。

【０１８４】（実施例２７）様々な糖質について化学的
にリン酸化を試みた。グルコースまたはグルコース以外
の構成糖からなる多糖であるキサンタンガム、タマリン
ドガム、グアーガム、ローカストビーンガム、ジェラン
ガム、フコイダン、寒天、デキストラン、およびマンナ
ン、あるいは、環状オリゴ糖であるα−シクロデキスト
リンについて、リン酸化澱粉の製造法である澱粉科学ハ
ンドブック（二國二郎監修、朝倉書店、510〜511頁、19
77年）の方法でリン酸化を試みた。反応後、約４０ｍｌ
の脱イオン水に溶解した。各溶液の不溶物を遠心分離
（８０００ｒｐｍ、２０分）で除去後、透析で塩類を完
全除去し、凍結乾燥した。各粉末試料を用いて、実施例
１２の方法でカルシウム可溶化効果を検証した。試料濃
度は終濃度で０．５％とした。この結果を以下の表９に
示す。この表には、振盪２時間後の添加カルシウムに対
する可溶性カルシウムの率を示した。

【０１８５】

【表９】

【０１８６】未処理の糖質にはカルシウム可溶化効果が
認められなかったが、処理後は表９に示したように効果
が確認された。

【０１８７】

【発明の効果】本発明のリン酸化糖は、カルシウム、マ
グネシウムおよび鉄を必要とする成長期の子供、妊婦、
あるいは病中病後の患者の食する食品、同様に動物、植
物の配合飼料および肥料に適する。肥料、飼料、または
食品として希釈せずにそのまま用いても、カルシウムお
よびマグネシウムのようなアルカリ土類金属、および鉄
などの吸収促進効果を発揮する。本発明のリン酸化糖
は、天然物を由来とするために生体に有害となることは
ない。本発明のリン酸化糖は、難消化性であり、かつ低
カロリーである。従って、このリン酸化糖はまた、多く
のオリゴ糖に報告されているようにビフィズス薗増殖効
果および整腸作用も期待できる。本発明のリン酸化糖は
また、生体に対して安全な洗浄剤および歯石防止剤とし
ても好適である。

【図面の簡単な説明】

【図１】実施例１で得られたリン酸化糖溶液および塩化
カルシウム溶液のゲル濾過溶出パターンを示すグラフで
ある。

【図２】実施例１で得られたリン酸化糖溶液および塩化
第一鉄溶液のゲル濾過溶出パターンを示すグラフであ
る。

【図３】実施例１で得られたリン酸化糖溶液および塩化
マグネシウム溶液のゲル濾過溶出パターンを示すグラフ
である。

【図４】４２０ｎｍでの着色度の測定により、実施例２
で得られたリン酸化糖を含む種々の糖のタンパク質との
メイラード反応の進行度を示すグラフである。

【図５】アミノ基の減少をＴＮＢＳ法を用いて測定する
ことにより、実施例２で得られたリン酸化糖を含む種々
の糖のタンパク質とのメイラード反応の進行度を示すグ
ラフである。

【図６】実施例９におけるメイラード反応の結果得られ
るリン酸化糖のタンパク質との誘導体のカルシウム可溶
化効果を示すグラフである。

【図７】実施例９のメイラード反応におけるタンパク質
の分子量の変化を示す電気泳動写真である。

【図８】実施例１において得られたリン酸化糖のカルシ
ウム可溶化効果を示すグラフである。

【図９】実施例２において得られた重合度３〜５のグル
カンにリン酸基が１つ結合しているリン酸化糖および重
合度が２〜８のグルカンにリン酸基が２個以上結合して
いるリン酸化糖のカルシウム可溶化効果を示すグラフで
ある。

【図１０】実施例４において得られたリン酸化糖のカル
シウム可溶化効果を示すグラフである。

【図１１】アルギン酸ナトリウム、ペクチン、およびＣ
ＰＰのカルシウム可溶化効果を示すグラフである。

【図１２】フラクトース−１，６−二リン酸、グルコー
ス−６−リン酸、フラクトース−６−リン酸、およびグ
ルコース−１，６−二リン酸のカルシウム可溶化効果を
示すグラフである。

【図１３】実施例２で得られた重合度２〜８のグルカン
にリン酸基が２個以上結合しているリン酸化糖の種々の
濃度でのカルシウム可溶化効果を示すグラフである。

【図１４】実施例４において得られたリン酸化糖の種々
の濃度でのカルシウム可溶化効果を示すグラフである。

【図１５】アルギン酸ナトリウムおよびカゼインホスホ
ペプチドの種々の濃度でのカルシウム可溶化効果を示す
グラフである。

【図１６】フラクトース−１，６−二リン酸、グルコー
ス−６−リン酸、およびグルコース−１，６−二リン酸
の種々の濃度でのカルシウム可溶化効果を示すグラフで
ある。

【図１７】実施例２で得られたリン酸化糖のタンパク質
との誘導体のカルシウム可溶化効果を示すグラフであ
る。

【図１８】グルコース−６−リン酸のタンパク質との誘
導体のカルシウム可溶化効果を示すグラフである。

【図１９】グルコースのタンパク質との誘導体のカルシ
ウム可溶化効果を示すグラフである。

【図２０】実施例１０のリン酸化糖のカルシウム可溶化
効果を示すグラフである。

【図２１】酵母より調製したマンノースを構成糖とする
リン酸化糖のカルシウム可溶化効果を示すグラフであ
る。

【図２２】実施例１のリン酸化糖の塩化カルシウムまた
は塩化第一鉄の添加による回収率を示すグラフである。

【図２３】実施例１のリン酸化糖の塩化第一鉄による鉄
イオン可溶化効果を示すグラフである。

【図２４】実施例１のリン酸化糖の塩化第二鉄による鉄
イオン可溶化効果を示すグラフである。

【図２５】実施例１のリン酸化糖を含む種々の糖のミュ
ータンス菌による酸生成の結果を示すグラフである。

【図２６】実施例１のリン酸化糖の澱粉の老化抑制効果
を示すグラフである。

【図２７】実施例１のリン酸化糖の緩衝作用を示すグラ
フである。

【図２８】本発明のリン酸化糖のラットのカルシウム吸
収率を示すグラフである。

【図２９】本発明のリン酸化糖のラットのカルシウム体
内保留率を示すグラフである。

【図３０】本発明のリン酸化糖の消化性試験の結果を示
すグラフである。

【図３１】本発明のリン酸化糖を処理した切り花の状態
を示す生物生態写真である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ０５Ｂ 15/00 Ｃ１１Ｄ 3/382 ４Ｈ００３ Ｃ０７Ｈ 1/02 Ｃ１２Ｐ 19/14 ４Ｈ０６１ Ｃ１１Ｄ 3/382 19/16 Ｃ１２Ｐ 19/14 19/18 19/16 19/22 19/18 Ａ２３Ｌ 2/00 Ｆ 19/22 Ｋ (72)発明者 芳川 憲司 大阪府高槻市西五百住町10−５ Ｆターム(参考） 4B017 LC03 LC07 LK01 LK11 LK13 LK15 LK23 LL09 LP06 4B018 LB08 LE05 MD03 MD06 MD20 MD27 MD34 MD90 ME05 MF12 4B064 AF04 CA21 CB07 CD01 CD19 CD20 DA01 DA10 DA16 DA19 4C057 AA20 BB04 GG03 4C083 AC90 AD21 CC41 FF01 4H003 EB41 EB44 FA07 FA29 4H061 AA01 AA02 BB45 HH07

Claims (11)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 リン酸化された糖であって、該糖がグル
   カンであり、該グルカンが、α−１，４結合した３〜５
   個のグルコースからなり、そして該グルカンに１個のリ
   ン酸基が結合しており、該リン酸基は、該グルカンの非
   還元末端のグルコースの６位、または、該グルカンの非
   還元末端側から２個目のグルコースの３位に結合してい
   る、リン酸化糖。
2. 【請求項２】 請求項１に記載のリン酸化糖とタンパク
   質あるいはペプチドとを結合させた、リン酸化糖誘導
   体。
3. 【請求項３】 請求項１に記載のリン酸化糖あるいは請
   求項２に記載のリン酸化誘導体とアルカリ土類金属また
   は鉄とを結合させた、リン酸化糖誘導体。
4. 【請求項４】 リン酸基を有する澱粉または化工澱粉
   に、澱粉分解酵素、あるいは、澱粉分解酵素および糖転
   移酵素の組み合わせを作用させる工程を包含し、ここで
   該澱粉分解酵素が、ｉ）αアミラーゼおよびネオプルラ
   ナーゼからなる群から選択されるエンド型澱粉分解酵
   素、ｉｉ）βアミラーゼおよびグルコアミラーゼからな
   る群から選択されるエキソ型澱粉分解酵素、およびｉｉ
   ｉ）イソアミラーゼおよびプルラナーゼからなる群から
   選択される枝切り酵素の組み合わせを含む、請求項１に
   記載のリン酸化糖の製造方法。
5. 【請求項５】 前記糖転移酵素がシクロデキストリング
   ルカノトランスフェラーゼである、請求項４に記載のリ
   ン酸化糖の製造方法。
6. 【請求項６】 請求項１に記載のリン酸化糖に糖転移酵
   素を作用させる、リン酸化糖の製造方法。
7. 【請求項７】 前記糖転移酵素がシクロデキストリング
   ルカノトランスフェラーゼである、請求項６に記載のリ
   ン酸化糖の製造方法。
8. 【請求項８】 請求項６に記載の方法により得られた、
   リン酸化糖。
9. 【請求項９】 リン酸化糖にアルカリ土類金属の塩また
   は鉄の塩を作用させる、請求項３に記載のリン酸化糖誘
   導体の製造方法。
10. 【請求項１０】 請求項１または８に記載のリン酸化
    糖、あるいは請求項２または３に記載のリン酸化誘導体
    を含む、肥料、飼料、食品、飲料、口腔用組成物、洗浄
    剤用組成物、またはそれらの添加用組成物。
11. 【請求項１１】 請求項１または８に記載のリン酸化
    糖、あるいは請求項２あるいは３に記載のリン酸化誘導
    体と、リン酸化糖とが結合している物質を含む、肥料、
    飼料、食品、飲料、口腔用組成物、洗浄剤用組成物、ま
    たはそれらの添加用組成物。