KR0177839B1 - 신규 티오마리놀 유도체 및 그의 제조방법 - Google Patents

Abstract

항균성 및 아스테로콕쿠스성을 갖는 2종류의 티오마리놀 유도체은 알테로모나스 속의 미생물로부터 수득가능하며 티오마리놀 B 및 티오마리놀 C로 명명된다. 티오마리놀 B는 또한 티오마리놀의 산화에 의해 제조될 수 있다.

Description

신규 티오마리놀 유도체 및 그의 제조방법

본 발명은 특정 신규 티오마리놀 유도체에 관한 것이며, 그의 제조방법, 및 그를 항균제로 이용한 방법 및 조성물을 제공한다.

티오마리놀은, 예를 들어 본 발명의 출원일 이전 및 우선권 주장일 이후에 공고된 유럽 특허공고 제 512824호에 기재되어 있다. 이는 하기식 (A) 로 나타낼 수 있다 :

이는 알테로모나스(Alteromonas) 속, 특허 알테로모나스 라바(Alteromonas rava) 균주 SANK 73390 의 미생물을 발효시킴으로써 제조된다. 이제는 원래의 티오마리놀과 유사한 항생 활성을 갖는 2종류의 티오마리놀 유도체를 발견하였다.

알테로모나스 속의 유기체는 해수로 부터 분리될 수 있으며, 그중 일부는 잠재적 치료 용도의 화합물을 생성하는 것으로 나타났다.

예를 들어 비수카베린(bisucaberin) 으로 공지된 화합물은 1 종의 알테로모나스로 부터 수득되었으며, 항종양 활성을 나타내는 것으로 밝혀졌다 (일본국 특허 공개 제63-27484 호).

티오마리놀의 구조에 관해서는, 유사한 구조를 갖는 여러가지 항생물질이 공지되어 있은며 이들은 4군으로 나눌 수 있다.

제 1 군은 슈도모나스 종 (Pseudomonas spp.)으로 부터 제일 먼저 분리된 슈도몬산을 포함한다. 상기에는 슈도몬산 A [슈도모나스 플루오레센스 (Pseudo-monas fluorescens) 에 의해 제조되며 문헌 J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1- 294 (1977) 에 개시됨], 슈도몬산 B [ibid, 318 (1977)], 슈도몬산 C [ibid, 2827 (1982)] 및 슈도몬산 D (ibid, 2655 (1983)] 가 포함된다. 슈도몬산 A 는 항균용도의 2 % 피부연고의 형태로 상표명 박트로 반 (Bactroban) (Beecham, 등록상표) 하에 시판된다. 하지만, 상기 선행기술 화합물 모두는 본 발명의 티오마리놀 유도체 보다 더 약한 항균활성을 갖는다.

본 발명의 화합물과 구조적 유사성을 공유하는 물질의 제 2군은 예를 들어, 항생물질 홀로마이신 [Helv. Chim. Acta, 42, 563 (1959)], 피로틴 [J. Am. Chem. Soc.,77, 2861 (1955)], 티오루틴 [Angew, Chem.,66, 745 (1954)], 아우레오트리신 [J. Am. Chem. Soc.,74, 6304 (1952)] 및 기타를 포함하는 군을 포함한다. 상기 항생물질은 전형적으로 방선균류에 의해 제조되며, 황-함유 발색단에 의해 특징적이다. 키세노랍딘 (Xenorhabens) I-V 는 홀로마이신과 관련된 물질이며 또한 박테리아로 부터 분리되었다 (WO 84/01775에 개시됨).

상기 두 군의 유도체에 관해 각종 연구를 수행하였지만, 티오마리놀과 분자구조가 유사하거나 유사한 특성에 의해 특징적인 물질은 개시되어 있지 않다.

화합물들의 제 3 군은, 말단 카르복실산이 아미드기로 대체된 슈도몬산 유도체가 개시된 일본국 특허 공개 제 52-102279, 54-12375, 54-90179, 54- 103871 및 54-125672 호와 같은 문헌에 개시되어 있다. 상기 화합물들은 필적하는 항균활성을 나타내지 않으며 광범위한 항균활성 스펙트럼을, 나타내지 않는다. 사실상, 상기 화합물들은 원래의 슈도몬산 보다 더 약한 항생 활성을 갖는 경향을 입증한다.

제 4군은 해양 박테리아 근원의 생리학적 물질이라는 점에서 티오마리놀과 유사한 화합물을 함유한다 [Abstracts of Papers from the 200 Year Conference ef the Am. Chem. Soc. (August 26-31, 1990), Part 2, ORGN.No. 139]. 하지만 이 화합물의 말단 카르보닐기에 결합된 혜테로시클릭기는 2 - 옥소 - 3 - 피페리딜기이다. 이는 최근에 살균제 활성을 갖는 것으로 나타났다 [ExBerimentia, Vol. 48, pages 1165 - 1169 (1992)].

하지만, 가장 적절한 선행기술은 슈도몬산 A인 것으로 생각되며, 모든 티오마리놀, 즉 원 티오마리놀, 티오마리놀 B 및 티오마리놀 C 는 슈도몬산 A 보다 상당히 더 잠재적인 항균활성을 갖는다.

본 발명의 목적은 티오마리놀의 특정 신규 유도체를 제공하는 것이다.

본 발명의 좀 더 구체적인 추가의 목적은 우수한 항균 활성 및 항아스테로콕쿠스 활성을 갖는 화합물들을 제공하는 것이다.

그 외의 목적 및 잇점은 이후의 기재에 의해 명백해질 것이다.

개략적으로, 본 발명은 2 종의 신규 티오마리놀 유도체를 제공하는데, 이중 1 종은 S,S - 디옥소 유도체이며 본 발명에서는 티오마리놀 B로 칭하고,다른 1종은 데옥시 유도체이며 본 발명에서는 티오마리놀 C 로 칭한다.

티오마리놀 B 는 하기와 같은 물리화학적 특성에 의해 특징적이다.

본 발명은 또한 알테로모나스 속의 티오마리놀 - 생성 미생물을 배양하고 배양물로부터 티오마리놀 B 또는 C 를 분리함을 특징으로 하는, 티오마리놀 B 또는 C 의 제조방법을 제공한다.

본 발명은 또한 티오마리놀을 산화시킴으로써 티오마리놀 B 를 제조하는 방법을 제공반다.

본 발명은 또한 티오마리놀 B 및 C 로 구성된 군으로 부터 선택된 항균제 또는 항 아스테로콕쿠스제를 약학적으로 허용되는 담체 또는 희석제와 함께 혼합하여 함유하는 약학적조성물을 제공한다.

본 발명은 또한 유효량의 항균제 또는 항 아스테로콕쿠스제를 박테리아 또는 아스테로콕쿠스에 감염되었거나 감염되기 쉬운, 인간일 수 있는 포유동물에 투여함을 특징으로 하는, 박테리아 또는 아스테로콕쿠스 감염의 치료 또는 예방 방법을 추가로 제공한다.

티오마리놀 B 는 하기 식의 화합물이다

상기 식으로부터 티오마리놀 B 및 C 가 다수의 비대칭 탄소원자 및 수개의 이중결합을 포함하는 것이 명백하다. 특히 티오마리놀의 α,β -불포화 카르보닐 부분에서 이성질화가 가능하다. 따라서 티오마리놀은 각종 입체 이성질체 및 기하 이성질체를 형성할 수 있다. 본 발명에서는 모두 단일 분자식으로 나타내지만, 본 발명에는 라세미체를 포함하여 각각의 분리된 이성질체 및 그의 혼합물 모두가 포함된다. 입체 특이적 합성기술을 도입하거나, 출발물질로서 광학활성 화합물을 도입할 경우, 각각의 이성질체는 직접적으로 제조될 수 있으며 ; 한편 이성질체의 혼합물이 제조될 경우, 각 이성질체는 통상적인 분리방법에 의해 수득될 수 있다.

하지만, 티오마리놀은 통상절으로 발효 또는 발표 생성물의 화학적 조작에 의해 제조되므로, 이들은 표준 광학 배위를 채택하게 될 것이다. 따라서, 다른 배위가 제공되지 않는다면, 자연 배위가 바람직하다.

티오마리놀 C 는 하기 물리 화학적 특성에 의해 특징적일 수 있다 :

티오마리놀 B 및 C 는 알테로모나스 속의 티오마리놀 - 생성 미생물을 배양한 다음, 배양 배지로 부터 목적하는 티오마리놀 B 및/또는 C를 수거함으로써 제조될 수 있다. 요구되는 항균활성을 갖는 티오마리놀 B 및/또는 C 의 변종은 유사한 방법으로,요구되는 화합물을 생성하는 알테로모나스의 그 외의 균주 또는 종으로 부터 수득되거나, 상술한 발효에 의해 수득쇤 화합물을 적절히 변형시켜 수득되거나, 직접적으로 화학적으로 합성될 수 있다.

특히, 미생물로서, 알테로모나스 라바(Alteromonas) 종 및 특히 균주 SANK 73390 이라 명명한 최근에 분리된 알테로모나스의 균주를 사용하는 것이 특히 바람직하다. 균주SANK 73390은, 일본국 시즈오까 프리팩쳐 미나미 - 이즈 마찌 고이나의 해변에서 수거한 해수로 부터 분리된 해양 미생물이고, 이 균주는 부다페스트조약에 의거하여 수탁번호 제 FERM BP-3381 호 1991년 4월 30일에 일본 국제 무역산업성 산업과학기술청 발효연구소 기탁기관에 기탁되어 있다.

알테로모나스 라바 균주 SANK 73390의 계통적 특징은 하기 나타낸 바와 같다.

1. 형태학적 특징

알테로모나스 라바 균주 SANK 73390 을 마린 아가 (Marine Agar)(Difco) 상에서 24 시간 동안 23℃ 에서 배양한다.

이후의 현미경 관찰에 의해 세포는 막대형 모양이며 각각 직경이 0.8 - 1.0㎛ 길이가 2.0 - 3.6 ㎛임이 밝혀졌다. 이 균주는 그람 - 음성이며 극성 일편모균 편모에 의해 이동한다.

2. 마린 아가상에서의 증식

SANK 73390 을 마린 아가 (Difco) 상에서 23℃ 에서 24 시간 동안 배양한다. 생성된 콜로니는 색깔이 담황회색이고, 불투명하며 원형이고, 편평하고 톱니꼴이 없음이 관찰되었다. 수용성 색소는 생성되지 않았다.

3. 생리학적 특성

4. 화학계통의 특성

(1) DNA 의 구아닌 및 시토신 몰 % (G + C 함량) : 43.4 % (HPLC 법)

(2) 퀴논 시스템 : 우비퀴논 Q-8

상기 나타낸 계통적 특성을 고려하여, 알테로모나스 라바 균주 SANK 73390 을, 문헌 [Bergey's Manual of Systematic Bacteriology, Vol. 1(1984)] 에 기재된 균주 뿐만 아니라 문헌 [International Journal of Systematic Bacteriology] 의 최근호에 기재된 균주와 비교한다. 알테로모나스 라바 균주 SANK 73390은 또 다른 해양 미생물인 알테로모나스 시트레아와 특정 유사성을 공유하는 것으로 밝혀졌다. SANK 73390 및 알테로모나스 시트레아 ATCC 29719 (표준 균주) 를 비교배양하여 비교한다.

SANK 73390의 색이 담황회색인 것에 비하여, ATCC 29719의 콜로니의 색은 녹황색이다. SANK 73390 은 또한 4℃ 에서 증식되고 탄소공급원으로서 트레할로스 및 프로피은산 나트륨을 이용하는 능력 면에서 알테로모나스 시트레아와 다르다. 따라서, 알테로모나스 라바 균주 SANK 73390은 신종 알테로모나스 라바의 신규 균주이고, 수탁번호 ATCC 29719 로 ,기탁된 가장 근접한 공지의 종과는 본질적 특성이 다르다.

상술한 특성들은 SANK 73390 의 대표적 특성이다. 하지만, 알테로모나스 라바 종의 특성은 자연적 및 인공적으로 변화 가능하다는 것이 잘 공지되어 있다. 상기 정의된 특성은 기탁된 것과 같은 알테로모나스 라바의 균주를 규정하지만, 티오마리놀 또는 그의 자연발생적 변종을 생성할 수 있는 그외의 알테로모나스 종, 또는 알테로모나스 라바의 균주를 반드시 대표하지는 않는다. 그러한 그외의 균주는 본 발명의 범위에 포함된다.

SANK 73390, 또는 티오마리놀 또는 그의 변종의 1 종을 생성할 수 있는 그외의 균주는 준 배양 (sub-cultured) 되거나 생물공학적으로 변질 또는 변형되어 다른 특성을 갖는 유기체를 생성할 수 있음이 이해될 것이다. 유일한 필요조건은 생성된 유기체가 필요한 화합물을 생성할 수 있어야 한다는 것이다.

그러한 변질 및 변형은 모든 목적하는 형태를 취할 수 있거나, 예를들어 배양조건과 같은 조건의 결과로서 일어날수 있다. 균주는 배양에 의해 변형될 수 있으며, 강화된 증식, 또는 저은/고온에서의 증식과 같은 특성을 나타내도록 선택될 수 있다.

생물공학적 변형은 일반적으로 의도적이며, 때때로 내제균성 또는 감수성과 같은 선택가능한 특성, 또는 그의 조합을 도입하여, 순도를 유지하거나 배양물, 특히 종자 배양물을 정제할 수 있다.

유전자 조작에 의해 도입될 수 있는 그외의 특성은 알테로모나스 종에서 허용가능한 것이다. 예를 들어, 내성을 코드하는 플라스미드를 혼입하거나, 모든 자연 발생 플라스미드를 제거할 수 있다. 모든 자연 발생 플라스미드를 제거할 수 있다. 유리한 플라스미드에는 생장인자를 필요로하는 변이체 (auxotrophy) 를 제공하는 플라스미드가 포함된다. 플라스미드는 모든 적절한 공급원으로 부터 수득될 수 있거나, 자연발생적 알테로모나스 플라스미드를 분리하고 목적하는 유전자 또는 다른 공급원으로부터의 유전파를 삽입함으로써 가공할 수 있다. 천연 플라스미드는 또한 바람직하게 고려될 수 있는 그외의 방법으로 변형시킬 수 있다.

적절한 미생물의 배양액으로 부터 티오마리놀 B 및/또는 C 를 수득하기 위해서, 미생물을 적절한 배지내에서 발효시켜야 한다.

그러한 배지는 기술분야에서 일반적으로 잘 공지되어 있으며, 다른 발효 생성물의 제조시에 자주 사용될 것이다. 전형적으로, 배지는 탄소 공급원,질소공급원 및 적절한 미생물에 의해 동화 가능한 1종 이상의 무기염의 배합물을 함유할 필요가 있다.

배지의 최소 필요조건은 미생물의 증식에 필수적인 성분들을 함유하는 것이다.

적절한 탄소 공급원에는 글루코스, 프룩토스, 말토스, 수브로스, 만니톨, 글리세를, 텍스트린, 오트밀, 호밀, 옥수수전분, 감자, 옥수수분말, 대두분 말, 면실유, 시럽, 시트르산 및 타르타르산이 포함되며, 이들은 단독으로 또는 1 종 이상을 배합하여 사용될 수 있다. 양은 목적하는 바 및 목적하는 결과에 따라 변화할 수 있지만, 전형적인 양은 배지량의 약 1 ∼ 10% w/v 의 범위일 것이다.

적절한 질소 공급원에는 예를 들어 단백질을 함유하는 모든 물질이 포함된다. 질소 공급원의 대표적 예는 동물성 및 식물성 유래의 유기 질소 공급원이며, 대두 가루, 겨, 땅콩 가루, 면실가루, 카제인 히드로리세이트, 페르마민 (fermamine), 생선 분말, 옥수수주, 펩톤, 육추출물, 이스트, 이스트 추출물, 맥아 추출물과 같은 자연 공급원 : 및 질산 나트륨, 질산 암모늄 및 황산 암모늄과 같은 무기 질소 공급원으로 부터의 추출물일 수 있다.

탄소 공급원과 함께, 상기 질소 공급원은 단독으로 또는 조합하여 사용될 수 있다. 적절한 양은 전형적으로 배지 양의 약 0.1 - 6 % w/v의 범위이내이다.

적절한 영양분 무기염은 미량의 원소 뿐만 아니라 염의 주요 구성성분을 제공하는 것이다. 바람직하게는, 염은 나트륨, 칼륨, 암모늄, 칼슘, 마그네슘, 철, 인산염, 황산염, 염소 및 탄산염과 같은 이은을 제공해야 한다. 코발트, 망간 및 스트론튬과 같은 미량 금속, 또는 브름, 불소, 붕산 염 또는 규산염 이온과 같은 이온을 제공할 수 있는 염이 또한 존재할 수 있다.

알테로모나스 라바는 해수에서 자연적으로 발생하므로, 반대의 지시 조건 없을 경우 배양 조건은 해양 환경에 이상적으로 일치하는 것으로 이해되어야 한다. 따라서, 해양에서 발견되는 미량의 이온은 알테로모나스의 배양용으로 사용되는 모든 배지에 포함되는 것이 유리하다. 특히,미생물은 해수, 인공해수 또는 해수 조성에 일치하는 성분의 존재하에 배양되어야 하는 것이 바람직하다.

미생물이 액체 배양물로서 발효될 경우, 실리콘오일 또는 식물성유와 같은 소포제 또는 그외의 적절한 계면활성제를 사용하는 것이 바람직하다.

비록 유일한 필요조건은 pH 가 미생물의 증식을 억제하거나 최종 생성물의 질에 비가역적으로 역영향을 미치지 않아야 한다는 것이지만, 티오마리놀 B 및/또는 C의 제조에 사용될 경우 알테로모나스 라바 균주 SANK 73390 용 배양 배지의 pH는 pH 5.0 - pH 8.0 의 범위이내로 유지되는 것이 바람직하다. 과량의 산 또는 알칼리를 첨가하여 발효를 정지시키는 것이 바람직할 수 있다.

알테로모나스 라바 균주 SANK 73390은 일반적으로ℓ ~ 32℃ 의 온도에서 증식하며 17 - 26℃ 에서 잘 증식한다. 상기 범위 이외의 온도는 보다 저온 또는 고온에서 증식할 수 있는 균주가 발육되었을 경우 적용할수 있다. 티오마리놀 B 및/또는 C의 제조를위해 바람직한 온도는 20℃ ∼ 26℃ 이다.

티오마리놀 B 및/또는 C 는 호기성 배양에 의해 이상적으로 수득되며, 예를 들어 고체 배양, 진탕 배양 또는 통기 - 교반 배양과 같은 적절한 호기성 배양기술을 사용할 수 있다.

배양이 소규모로 수행될 경우, 20 - 26℃에서 수일간 발효된 진탕 배양이 일반적으로 바람직하다.

발표 배양을 시작하기 위해서, 바람직한 기술은, 예를 들어 에롤렌 마이어 플라스크 내에서 1 또는 2 단계로 제조된 초기 접종물 (inoculum)을 사용하는 것이다. 탄소 공급원 및 질소 공급원은 배양 배지용으로 조합하여 사용할 수 있다. 종자 플라스크를 23℃의 항온 인큐베이터 내에서 1 - 3일간 또는 충분한증식이 관찰될때까지 진탕한다. 다음, 생성된 종자 배양물을 사용하여 2차 종자 배양물을 접종하거나 배양물을 제조할 수 있다. 2차 접종을 수행할 경우, 이는 유사한 방법으로 수행될 수 있으며 생성 배지에 접종하기 위해 부분적으로 사용될 수 있다. 종자가 접종된 플라스크를 적절한 기간동안,예를 들어 1 ∼ 3일간,또는 최대 생성이 수득될때까지 예를 들어 상술한 바와 같은 적절한 온도에서 진탕한다. 배양이 완료되었을때, 원심분리 또는 여과에 의해 플라스크의 내용물을 수거할 수 있다.

배양이 대규모로 수행될 경우, 적절한 통기 - 교반 발효기 내에서의 배양이 바람직할 수 있다. 이 방법에서, 영양분 배지는 발효기 내에서 제조될 수 있다. 125℃ 에서 멸균한 후, 배지를 냉각하고 멸균 배지상에서 예비 증식된 접종물로 접종한다. 20 - 26℃ 에서 교반 및 통기하면서 배양을 수행한다. 이 방법은 대량의 화합물을 수득하는데 적절하다.

시간의 흐름에 따른 배양에 의해 생성된 티오마리놀 B 및/또는 C 의 양은 예를 들어 고성능 액체 크로마토그래피에 의해 관찰될 수 있다.

일반적으로, 생성된 티오마리놀 B 의 양은 19 - 200 시간 후에 최대에 달하고, 생성된 티오마리놀 C 의 양은 19 - 200 시간 후에 최대에 달하며 ; 대조적으로, 생성된 티오마리놀의 양은 19 - 96시간 후에 최대에 달한다.

적절한 배양기간 후, 티오마리놀 B 및/또는 C 는 공지의 방법에 의해 분리 및 정제될 수 있다. 예를 들어, 배양 부용 (culture bmth) 내에 잔류하는 티오마리놀 B 및/또는 C 는 예를 들어 여'과 보조제로서 규조토를 이용하여 고체를 여거하거나, 원심분리한 다음 티오마리놀 B 또는 C 의 물리 화학적 특성에 따른 정제에 의해 상청액으로 부터 추출함로써 수득될 수 있다. 예를 들어, 여액 또는 상청액 중에 존재하는 티오마리놀 B 및/또는 C 는 중성 또는 산성 조건하에서 에틸 아세테이트, 클로로포름, 염화메털렌, 염화메틸렌 또는 그의 혼합물과 같은 수혼화성 유기 용매를 이용하여 추출하고 정제할 수 있다.

그렇지 않을 경우, 흡착제로서 활성탄소나 또는 암벨라이트 (상표명) XAD- 2, XAD-4 (Rohm 보arts) 또는 다이아이온 (상표명) HP-10, HP-20, CIP-20, HP-50 (Mitsubishi Kasei Corproation) 과 같은 흡착 수지를 사용할 수 있다. 불순물은, 티오마리놀 B 및/또는 C 를 함유하는 액체를 흡착제층에 통과시킴으로써 흡작후에 제거될 수 있거나 : 티오마리놀 B및/또는 C 는 수성 메탄올, 수성 아세톤 또는 부탄올 /물과 같은 적절한 용리액을 이용하여 용리함으로써 흡착후에 정제될 수 있다.

세포내 티오마리놀 B 및/또는 C 는, 바람직하게는 농도가 50 ∼ 90 부피 % 인 수성 아세톤 또는 수성 메탄올과 같은 적절한 용매를 이용하여 추출한 다음, 유기용매를 제거하고 여액 또는 상청액에 대해 상술한 바와같은 추출을 함으로써 정제될 수 있다.

생성된 티오마리놀 B 및/또는 C 는 잘 공지된 기술, 예를 들어 : 상표명 플로리실 (Florisil) 로 시판되는 실리카겔 또는 마그네슘 - 실리카겔과 같은 담체를 이용한 흡착 컬럼 크로마토그래피 ; 세파덱스 LH-20(Pharmacia 제품의 상표명) 과 같은 흡착제를 이용한 분배 컬럼 크로마토그래피 ; 또는 정상 또는 역상 컬럼을 이용한 고성능 액체 크로마토그래피에 의해 추가로 정제될 수 있다. 기술분야에 잘 공지된 바와 같이, 상기 분리 및 정제 방법은 단독으로 또는 적절히 조합하여 수행할 수 있으며, 목적할 경우, 목적 최종 생성물을 반복적으로 분리 및 정제한다.

그렇지 않을 경우, 티오마리놀 B 는 티오마리놀의 산화에 의해 제조될 수 있으며, 이 방법은 티오마리놀 B 가 발효에 의해 상대적으로 소량만 수득될 경우 유리하게 고려된다.

산화는 산화제를 용매의 존재하 및 염기의 존재 또는 부재하에서 티오마리놀 상에서 작용하도록 함으로써 바람직하게 수행된다.

사용된 산화제의 종류는 본 발명의 방법에 중요하지 않으며 산화반응에 통상적으로 사용되는 모든 산화제를 여기서도 동등하게 사용할 수 있다. 그러한 산화제의 예에는 과망간산 칼륨, 포타슘 디크로메이트 (포타슘 비크로메이트), 소듐 디크로메이트 (소듐 비크로메이트), 산화 크롬 (Vl), 염화 크로밀 및 t - 부틸 크로메이트와 같은 크롬산염 ; 부테늄 테트록시드 : 염소, 브롬 및 요오드와 같은 할로겐 ;오존 ; 산소 ; 과산화수소 ; 비스 (트리메틸실릴) 퍼옥시드, 쿠밀 히드로퍼옥시드 및 t - 부틸 히드로퍼옥시드와 같은 유기 퍼옥시드 ; 디옥시란, 메틸 디옥시란, 디메틸 디옥시란, 디에틸 디옥시란, 에틸 메틸 디옥시란, 메틸 프로필 디옥시란, 부틸 메틸 디옥시란, 플루오로 디옥시란, 메틸 플루오로 디옥시란, 디플루오로 디옥시란, 비스 (트리플루오로메틸)디옥시란, 메틸 트리플루오로메틸 디옥시란 및 트리플루오로메틸 클로로디플루오로메틸 디옥시란과 같은 디옥시란 ; 퍼아세트산, 퍼포름산 및 m - 클로로퍼벤조산과 같은 유기 과산 및 그의 염 ; 및 퍼옥시모노황산, 포타슘 퍼옥시 디술페이트 및 포타슘 퍼옥시모노술페이트와 같은 퍼옥시황산 및 그의 염 (특히 상표명 Oxone 하에 시판됨, eldrich Chemical Co., 제품) 이 포함된다. 산화제의 바람직한 예에는 과산화 수소, 유기 과산 및 그의 염,유기 과산화물,디옥시란,및 퍼옥시황산 및 그의 염이 포함되며, 특히 바람직한 예에는 과산화수소, 디메틸 디옥시란, 및 퍼옥시황산 및 그의 염이 포함된다.

반응은 용매의 존재하에 통상적으로 및 바람직하게 수행되며, 용매의 종류는, 반응시 역영향이 없고 일부 이상의 정도로 시료를 용해시킬 수만 있으면 중요하지 않다. 적절한 용매의 예에는 : 물 ;메탄올,에탄올 또는 프로판올과 같은 알콜 ; 아세톤 또는 메틸에틸케톤과 같은 케톤 ; 아세트산 또는 포름산과 같은 유기산 ; 에틸 아세테이트와 같은 에스테르 ; 디에틸에테르 또는 테트라히드로푸란과 같은 '에테르 ; 디메틸포름아미드 또는 디메틸아세트아미드와 같은 아미드 ; 및 상기 용매의 2 종 이상의 혼합물이 포함된다. 바람직한 예에는 알콜,및 물 및 케톤의 혼합물이 포함되며, 특히 바람직한 예에는 물 및 아세톤의 혼합물이 포함된다.

비록 반응은 하기 촉매 없이 수행되지만 목적할 경우, 반응을 촉진하기 위해 산화 플라티늄 또는 산화 바나듐과 같은 무기 촉매의 존재하에 반응을 수행할 수 있다.

반응은 광범위한 온도범위에 걸쳐 일어나며, 선택된 정확한 반응 온도는 반응에 중요하지 않다. 일반적으로, 반응은 -78℃ - l00℃, 더욱 바람직하게는 -10℃ ~ 실온의 범위의 온도에서 수행하는 것이 편리함이 발견되었다. 반응에 필요한 시간은 많은 인자, 특히 반응 은도 및 시료, 특히 사용한 산화제 및 염기의 종류에 따라 광범위하게 변화할 수 있다. 하지만 대부분의 경우 15분 ~ 30 시간, 특히 바람직하게는 15분 ∼ 2 시간이면 통상적으로 충분할 것이다.

반응 완료후, 반응 혼합물로 부터 통상적인 방법으로 목적 화합물을 회수할 수 있다. 예를 들어, 하나의 적절한 회수 기술은 : 반응 혼합물을 물에 붓고 ; 이를 방향족 탄화수소 (예 : 벤젠), 에테르 (예 : 디에틸 에테르), 유기산의 에스테르 (예 : 에틸 아세테이트) 또는 할로겐화 탄화수소 (예 : 염화메틸렌) 와 같은 : 수혼화성 용매로 추출한 다음; 추출액으로 부터 용매를 증류제거하는 것을 포함한다. 꼭 방법으로 수득된 목적 화합물은 목적할 경우, 통상적인 방법, 예를 들어 각종 크로마토그래피법, 주로 컬럼 크로마토그래피 또는 분취 박층 크로마토그래피를 이용하여 추가로 정제될 수 있다.

상기 산화 반응의 출발 물질인 티오마리놀은 알테로모나스 속의 미생물, 특히 티오마리놀 B 및 C 의 제조에 관련하여 상기한 바와 같은 알테로모나스 라바 균주 SANK 73390을 이용하여 발효시킴으로써 제조될 수 있다.

티오마리놀 B 및 C 는 동물 (예 : 인간, 개, 고양이 및 토끼) 내에서 그람 - 양성 및 그람 - 음성 박테리아 및 사스테로콕쿠스에 대한 항균 효과를 나타내기 때문에, 감염 종류에 따라, 각종 경로에 의한 박테리아 또는 아스테로콕쿠스 감염의 치료 또는 예방을 위해 사용될 수 있다.

본 발명의 화합물을 치료 용도로 사용하고자 할 경우, 이들은 단독으로, 또는 활성 화합물 이외에 통상적인 1 종 이상의 희석제, 담체, 부형제 또는 보조체를 함유하는 적절한 약학적 제제로 투여될 수 있다. 제형의 종류는 물론 목적하는 투여경로에 따라 달라진다. 하지만, 경구 투여를 위해서는 화합물은 바람직하게는 분제, 입제, 정제, 캡슬 또는 시럽으로 제형화된다. 비경구 투여를 위해서는, 주사액 (정맥내, 근육내 또는 피하주사액일 수 있음), 점적액, 좌제, 연고 또는 도포약으로 제형화되는 것이 바람직하다.

상기 제제들은 활성 화합물에 부형제, 결합제, 붕해제, 윤활제, 안정화제, 교정제, 용해제, 향료, 향수, 지지제 또는 도포제와 같은 첨가제를 첨가함으로써 공지 방법에 의해 제조될 수 있다. 복용량은 환자의 증상 및 연료,감염의 종류 및 정도 및 투여 경로 및 방법에 따라 변화할 수 있지만, 성인 환자에 경구 투여할 경우, 본 발명의 화합물은 통상적으로 20 mg ~ 2000 mg의 1일 복용량으로 투여될 수 있다. 화합물은 단일 복용,또는 분할 복용, 예를 들어 하루에 2 회 이상의 분할 복용에 의해 투여될 수 있다.

본 발명의 화합물의 제조는 하기 비제한적 실시예에 의해 추가로 예시되며, 상기 화합물의 생물학적 활성은 이후의 실시예에 의해 예시된다.

실시예6은 티오마리놀B의 산화적제조용 출발물질로서 사용되는 티오마리놀의 제조를 예시한다.

[실시예 1]

[탱크내 배양에 의해 티오마리놀 B의 제조]

A) 배양

알테로모나스 라바 균주 SANK 73390 을 '마린 아가 (Difco 제품) 의 구배상에서 22℃ 로 3 일간 배양한다. 생성된 배양물을 3 ml 멸균 인공해수에 현탁한다. 생정된 현탁액 0.1 ml 를, 하기 조성을 갖는 멸균 배지 100 ml 를 1각각 함유하는 2개의 500 ml 에를렌마이어 플라스크에 접종한다 :

다음, 배양물을, 회전 진탕기를 이용하여 210 rpm 으로 진탕하면서 23℃ 에서 24 시간 동안 배양한다. 생성된 배양물 전체를, 별도로 멸균되었으며 상술한 것과 같은 조성을 갖는 배지 200ℓ 를 함유하는 600ℓ 통기 교반 - 배양 탱크에 접종한다.

다음, 배양물을 0.5 wm (즉, 1분당 1 부피당·부피 : 1 wm 은 1 분 동안 공급된 공기의 양이 탱크 내 공기의 양과 동일함을 의미한다)의 공기 흐름 속도로 통기하고, 회전속도를 82.5 ∼ 170 rpm 의 범위 이내로 조정하여 용존 산소 농도를 5.0 ppm 으로 유지하면서, 23℃ 에서 26 시간 동안 배양한다.

B) 분리

생성된 배양액 230ℓ 에 충분한 수성 염산을 첨가하여 pH 를 2.5로 조정한다. 다음, 아세톤 200ℓ 를 생성된 혼합물에 첨가하고, 혼합물을 0.5 시간 동안 교반하면서 추출한다. 다음, 혼합물에 4.0kg 의 셀라이트 545 여과기 보조제 (Jones Manvill Project Corporation, U.S.A. 제품의 상표명) 를 첨가하고, 혼합물을 여과한다. 여액 (430ℓ) 을 200ℓ 의 에틸 아세테이트로 1 회 추출한 다음, I00ℓ 의 에털아세테이트로 2 회 추출한다. 합한 에틸아세테이트 추출물을 5 % w/v 탄산수소나트륨 수용액 200ℓ 로 세척한 다음, 염화나트륨 포화수용액 100ℓ 로 세척한 후, 이를 무수황산나트륨으로 건조시키고 감압하에 증발건조시켜 약80 g의 오일을 수득한다.

상기와 같이 수득된 오일 전부를 염화메틸렌에 용해시키고, 생성된 웅액을, 염화메틸렌으로 포화된 1.1 kg 의 실리카겔로 충진된 컬럼상에 흡착시킨다. 다음, 용액을 염화메틸렌 및 에틸 아세테이트의 부피비 1:1 혼합물, 에틸 아세테이트 단독 및 에틸아세테이트 -메탄올의 부피비 9:1혼합물 (용리액의 극성도는 이 순서대로 증가한다) 를 이용하여 이 순서대로 용리한다. 용출액을 각각 500 ml 의 부분표본으로 분별한 다음, 에틸 아세테이트 및 메탄올의 혼합물로 용리되었으며 티오마리놀 B를 함유하는 분획을 수거하고 감압하에 증발건조시켜 60 g 의 오일을 수득한다.

생성된 오일 전부를 6ℓ의 50 % v/v수성 메탄올에 용해시키고, 생성된 용액을 물로 포화된 다이아이온 HP-20(상표명) 으로 충진된 2.3ℓ 컬럼상에 흡착시킨 후, 오일 용액을 수성 메탄올을 이용하여, 메탄올의 농도를 30 부피 % 에서 90 부피 % 로 점차 증가시키면서 단계적으로 구배용리를 수행한다. 더 구체적으로, 컬럼에 30 % 수성메탄올, 50 % 수성 메탄올, 60 % 수성메탄올, 70 % 수성메탄올 및 80 % 수성메탄올 각각 4ℓ씩을 첨가한 후, 컬럼을 90 % 수성 메탄올로 용리한다. 고성능 액체 크로마토그래피로 관찰했을 때 화합물의 용리가 더이상 관찰되지 않고 용리에 사용된 90 % 수성 메탄올의 양이 약 10ℓ 가될때 까지 용리를 계속한다. 90 % 수성 메탄올로 용리된 분획을 수거하고 감압하에 증발건조시켜 3.8 g 의 황색 분말을 수득한다. 황색 분말을, 염화메털렌, 에틸아세테이트 및 메탄올의 부피비 19:19:2 의 혼합물로 포화된 세파덱스 LH-20 320 g으로 충진된 컬럼을 이용하여 크로마토그래피한 후, 이를 동일한 용매 혼합물로 용리하여 정제를 수행한다.

역상 컬럼 [센슈 - 팩 ODS H-5251 (컬럼 크기 : 20 mm 직경, 250 mm 길이), Senshu Scientific Co., Ltd. 제품의 상표명] 및 용리액으로서 40 % v/v수성 아세토니트릴을 이용하여 15 ml/분의 흐름속도로 수득된 생성물을 고성능 액체 크로마토그래피하여, 220 nm 에서 흡광도를 관찰함으로써 정제를 관찰하면서 추가로 정제한다. 티오마리놀 B는 체류시간이 13 ∼ 14분인 피크로서 수득되므로 이분획을 수거하고 감압하에 증발건조시켜 물리 화학적 특성이 상기 제시한 바와 같은 표제 화합물 130 mg 을 분리한다.

[실시예 2]

[티오마리놀 산화에 의한 티오마리놀 B의 제조]

100.9 mg 의 티오마리놀 (실시예 6 에 기재된 대로 제조) 을 아세톤 5 ml및 물 5 ml의 혼합물에 용해시킨 다음, 생성된 용액을 빙냉한다. 생성된 용액에 112.2 mg 의 OXONE (Aldrich Chemical Co., Ltd. 제품의 상표명) 을 첨가한 다음, 혼합물을 빙냉하면서 40분간 교반한다. 교반 종료시, 이 혼합물엔 1.2 ml의 탄산수소나트륨 포화수용액을 첨가하고, 혼합물을 빙냉하면서 30분간 재교반한다. 다음,반응 혼합물에 5 ml의 물을 첨가하고 이를 염화메틸렌 및 테트라히드로푸란의 부피비 10 : 1 의 혼합물로 추출한다. 추출액을 무수 황산나트륨으로 건조지킨 다음, 감압 증류에 의해 용매를 제거한다. 다음, 생성된 잔류물을 역상 고성능 액체 크로마토그래피 (센슈 -팩 ODS-5251-N컬럼, 및 용리액으로서 40 % v/v수성 아세토니트릴을 이용함)에 의해 분리 및 정제하여, 물리 화학적 특성이 상기 제시한 바와 같은 담황색 티오마리놀 B 79.5 mg (수율 75 %) 를 수득한다.

[실시예 3]

[티오마리놀 산화에 의한 티오마리놀 B의 제조]

100 mg의 티오마리놀 (실시예 6에 기재한 대로 제조)을 아세톤 15 ml 및 물 7.5 ml의 혼합물에 용해시킨 다음, 혼합물에 35 % 수성과산화수소 0.074 ml및 탄산수소나트륨 희석 수용액 2방울을 첨가한다. 반응 혼합물을 5 분간 교반한 후, 감압증류에 의해 아세톤을 제거한다. 다음,잔류물에 아세토니트릴을 첨가하고, 역상 고성능 액체 크로마토그래피 (센슈 팩 ODS-H-2151 컬럼, 및 용리액으로서 40% v/v 수성 아세토니트릴을 사용) 에 의해 티오마리놀 B 의 생성을 확인한다. 감압증류에 의해 반응 혼합물로 부터 용매를 제거하고, 생성된 잔류물을 40 % v/v 수성 아세토니트릴에 용해시킨다. 이를 역상 고성능 액체 크로마토그래피 (센슈 팩 ODS-4251-N 컬럼, 및 용리액으로서 40 % v/v 수성 아세토니트릴을 사용)에 의해 분리 및 정제하여, 물리 화학적 특성이 상기 제시한 바와 같은 담황색 티오마리놀 B 43.2 mg (수율 41 %) 을 수득한다.

[실시예 4]

[티오마리놀 산화에 의한 티오마리놀 B의 제조]

100 mg의 티오마리놀(실시예 6에 기재한대로 제조)을 40 ml의 아세톤에 용해시킨 다음, 생성된 용액에 빙냉 및 교반하면서 134 mg의 m - 클로로퍼벤조산을 첨가한다. 다음, 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반한다. 교반 종료시, 반응 혼합물을 염화 메틸렌으로 추출하고, 추출액을 물로 3 회 세척한 다음 탄산수소나트륨 포화수용액으로 1 회 세척한다.

추출액을 무수 황산나트륨으로 건조시진 다음, 감압 증류에 의해 용매를 제거한다. .다음, 생성된 잔류물을 역상 고성능 액체 크로마토그래피 (센슈 - 팩 ODS-4251-N 컬럼, 및 용리액으로서 40 % v/v 수성 아세토니트릴을 사용) 에 의해 분리 및 정제하여, 물리 화학적 특성이 상기 제시한 바와 같은 담황색 티오마리놀 B 8.5 mg (수율 8 %) 을 수득한다.

[실시예 5]

[탱크내 배양에 의한 티오마리놀 C의 제조]

A) 배양

알테로모나스 라바 균주 SANfC 73390가 가해지고 증식된 마린 아가(Difco)의 1부배를 10 ml의 멸균 마린 브로스 (Difco)에 첨가하여 박테리아 현탁액을 제조한다.

15ℓ 의 동일한 마린 브로스 배지를 함유하는 30ℓ 쟈 (Jar) 발효기를 가열에 의해 멸균한 다음, 박테리아 현탁액 전부를 발효기에 접종하고 23℃ 의 온도 및 7.5 4/분의 공기 흐름 속도로 24 시간 동안 배양한다.

초기 교반 속도를 100 ram으로 한 다음, 교반 속도를 적절히 조정하여 용존 산소농도를 5.0 rpm 으로 유지시킨다.

다음, 하기 조성을 갖는 배양 배지 300ℓ 를 2 개의 600ℓ 탱크에 각각 주입한다 :

다음, 탱크를 가열함으로써 멸균한 후, 종자 배양물 3ℓ 를 각 탱크에 접종하고, 23℃의 온도 및 150 ℓ/분의 공기 흐름속도로 29시간 동안 배양한다. 초기 교반속도를 82 rpm으로 한 다음, 교반복도를 적절히 조정하여 용존산소 농도를 5.0 ppm으로 유지시킨다.

B) 분리

생성된 배양액 700ℓ 에 층분한 수성 염산을 첨가하여 pH 를 3으로 조정한 다음, 생성된 혼합물에 700ℓ 의 아세톤을 첨가하고, 1 시간 동안 교반하면서 추출을 수행한다. 다음,생성된 추출물 자체를 700ℓ 의 에틸아세테이트로 1회 추출한다음, 300 ℓ의 에틸아세테이트로 1회 추출한다. 다음, 합한 에틸 아세테이트 추출물을 5 % w/v 탄산수소나트륨 수용액 300ℓ 및 염화나트륨포화수용액 300ℓ 의 순서로 세척한후, 이를 무수 황산나트륨으로 건조시킨다. 다음, 용매를 감압 중발에 의해 제거한다. 증발과정에서, 540 g 의 실리카겔을 첨가한 다음, 증발건조를 계속한다.

상기와 같이 수득된 잔류물을 염화메틸렌에 현탁하고, 생성된 용액을 염화메틸렌으로 포화된 실리카겔 4kg 으로 충진된 컬럼상에 주입한다.

다음,이를 염화메틸렌, 염화메틸렌 및 에틸 아세테이트의 부피비 1:1혼합물, 에틸 아세테이트 단독 및 에틸 아세테이트 및 메탄올의 부피비 9:1 혼합물 (용리액의 극성도는 이 순서대로 증가한다) 을 이용하여 이 순서대로 용리한다. 용출액을 각각 2ℓ의 부분표본으로 분별한 다음, 에틸 아세테이트 및 메탄올의 혼합물로 용리되었으며 티오마리놀C를 함유하는 분획을 수거하고 감압하에 증발 건조시킨다. 증발과정에서, 50 g및 실리카겔을 첨가한 다음, 증발건조를 계속한다.

생성된 잔류물을 헥산 및 아세톤의 혼합물에 현탁한 다음, 생성된 현탁액을 헥산으도 포화된 실리카겔 200 g 으로 충진된 컬럼상에 주입하고 이를 헥산 및 아세톤의 부피비 1:1의 혼합물로 용리한다. 용출액을 500 ml의 부분표본 각각에 분별하여 티오마리놀C를 함유하는 분획1 및 2 를 수득한다. 감압증발에 의해 분획 1 을 농축한다. 농축과정중에 25 g 의 실리카겔을 첨가한 다음, 증발 건조를 계속한다.

생성된 잔류물을 헥산, 가세톤 및 에틸 아세테이트의 부피비 1:1:2 의 혼합물에 현탁하고, 생성된 현탁액을 헥산으로 포화된 실리카겔 200 g 으로 충진된 컬럼상에 주입한다. 이를 헥산, 아세톤 및 에틸 아세테이트의 부피비 1:1:2 의 혼합물로 용리한다. 용출액을 500 ml의 부분 표본각각에 분별하고, 티오마리놀 C를 함유하는 분획을 모은다. 이 분획을 상기 수득된 분획 2 와 합하고, 합한 분획을 감압 중발에 의해 농축한다. 농축과정 중에 20 g 의 실리카겔을 첨가한 다음 증발 건조를 계속한다.

생성된 잔류물을 헥산, 아세톤 및 에틸 아세테이트의 부피비 1:1:1 의 혼합물에 현탁하고, 생성된 현탁액을 헥산으로 포화된 실리카겔 200 g 으로 충진된 컬럼상에 주입한다. 이를 핵산, 아세톤 및 에틸 아세테이트의 부피비 1:1:1 의 혼합물로 용리한다. 용출액을 500 ml 의 부분표본 각각에 분별하고, 티오마리놀C를 함유하는 분획을 수거하고 감압증발에 의해 농축하여 유상물을 수득한다.

상기 유상물 전부를 염화메틸렌, 에틸 아세테이트 및 메탄올의 부피비 19:19:2 의 혼합물로 포화된 세파덱스 LH-20으로 충진된 200 ml 컬럼을 이용하여 추가로 크로마토그래피한 다음, 동일한 용매 혼합물로 용리함으로써 정제한다. 티오마리놀 C 를 함유하는 분획을 수거하고 감압 증발에 의해 농축한다. 농축과정 중에 25 g 의 실리카겔을 첨가한 다음, 증발건조를 계속한다.

생성된 잔류물을 염화메틸렌에 현탁하고, 현탁액을 염화메틸렌으로 포화된 실리카겔 250 g 으로 충진된 컬럼상에 주입한다. 다음, 이를 용리액의 극성도가 점차 증가되도록 부피가 9:1 - 1:9의 비율로 변화하는 염화메틸렌 및 아세톤의 혼합물로 용리한다. 용출액을 1ℓ 의 부분표본 각각에 분별하고 티오마리놀 C 를 함유하는 분획을 수거하고 감압하에 증발건조하여, 물리 화학적 특성이 상기 제시한 바와 같은 티오마리놀 C 150 mg 을 분리한다.

[실시예 6]

[티오마리놀의 쟈 발효]

A) 배양

알테로모나스 라바 균주 SANK 73390 을 마린 아가 (Difco 제품)의 구배상에서 22℃로 3일간배양한다. 생성된 배양물을3 ml의 인공해수에 현탁한다. 0.1 ml 의 현탁액을 무균 채취하고 100 ml 의 멸균 배지 [탈이온수 1ℓ 중 마린 브로스 (Difco 제품) 37.4 g, pH는 비조정] 를 함유하는 500 ml 에를렌마이어 플라스크에 접종한다.

플라스크를 회전 진탕기를 이용하여 200 rpm (회전 반경 : 70 mm)으로 진탕하면서 23℃ 에서 24 시간 동안 배양한다. 배양후, 각각 상술한 멸균 배지 15ℓ를 함유하는 4개의 30ℓ 쟈 발효기 각각을, 에를렌마이어 플라스크로 부터 무균 채취된 배양물 15 ml로 접종한다. 쟈 발효기를 교반 (100 rpm) 하면서 통기속도 7.5 ℓ/분으로 23℃ 에서 23시간 동안 배양한다.

B) 분리

23 시간 후, 발효기의 내용물을 합하여 60ℓ 의 배양액을 수득한다. 다음, 염산을 첨가함으로써 배양액의 pH 를 3으로 조정한 후, 60ℓ 의 아세톤을 첨가하고, 혼합물을 교반하면서 30분간 추출한다. 1.2kg 의 셀라이트 545 여과기 보조제 (Johns Manville Co. 로 부터 수득 가능한 제품의 상표명) 를 이용하여, 용액을 여과한다. 다음, 생성된 여액 110ℓ 를 60ℓ 의 에틸 아세테이트로 1회 추출하고 30ℓ 씩의 에틸 아세테이트로 각각 2 회 추출한다. 합한 유기 추출물을 5 % w/v 탄산수소나트륨 수용액 30ℓ 로 세척한 다음, 30ℓ 의 염화나트륨 포화 수용액으로 세척한다. 다음, 혼합물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고 감압하에 증발건조시켜 14 g 의 유상물을 수득한다.

수득된 유상물 전부를 염화메틸렌에 용해시키고, 용액을 염화메틸렌으로 포화된 실리카겔 200 g 으로 충진된 컬럼상에 흡착시킨다. 다음, 용액을 염화메틸렌 및 에틸 아세테이트의 부피비 1:1혼합물, 에틸 아세테이트 단독 및 에틸 아세테이트 - 메탄올의 부피비 9:1 혼합물의 순서로 (용리액의 극성도는 이 순서로 증가한다) 용리한다. 용리액을 18 ml 의 분획에 수거하고, 에틸 아세테이트 및 메탄올의 혼합물로 용리되었으며 티오마리놀을 함유하는 분획을 모은다.

모은 분획을 증발건조시켜 7 g의 유상물을 수득하고, 이를 400 ml 의 50 % v/v 수성 메탄올에 용해시키고, 물로 포화된 다이아이온 HP-20(Mitsubishi Chem. 1nd. 로부터 수득가능한 제품의 상표명) 로 충진된 600 ml 컬럼상에 흡착시킨다. 컬럼을 50 % v/v 수성 메탄올로 세척한 다음, 목적 물질을 90 % v/v 수성 메탄올로 용리한다. 생성된 분획으로 부터 감압 중발에 의해 황색 분말 1 g 을 수득한다. 이 황색 분말을 세파덱스LH - 20을이용하여 컬럼크로마토그램상에서 추가로 용리시키고 염화메틸렌, 에틸아세테이트 및 메탄올의 부피비 19:19:2 의 혼합물로 전개시킨다. 활성 분획으로 부터 황색 분말의 티오마리놀 750 mg 을 수득한다.

생성된 티오마리놀은 하기 나타낸 특성을 갖는다.

[생물학적 활성]

하기 시험예에 의해 티오마리놀 B및 C의 생물학적 활성을 검증하며, 시험예에서 이들은 슈도몬산 A 및 티오마리놀과 비교된다.

[시험예 1]

[티오마리놀 B 및 C의 항균 활성]

㎍/ml 로 나타낸 티오마리놀, 티오마리놀 B, 티오마리놀 C 및 슈도몬산 A (각각 A,: B, C 및 P 로 구분함) 의 그람 - 양성 박테리아 및 그람 - 음성 박테리아에 대한 최소 억제 농도 (MIC) 를 영양분 한천 배지 (Eikon Chemical Co., Ltd. 제품) 를 이용하여 한천 배지 회석법에 의해 측정한다.

결과를 하기 표 1 에 나타낸다.

[시험예 2]

[티오마리놀 B 및 C의 항 아스테로콕쿠스 활성]

시험예 1 과 동일한 방법에 따라, 티오마리놀, 티오마리놀 8, 티오마리놀 C 및 슈도몬산 A (각각 A, B, C 및 P 로 구분함) 의 활성을 각종 아스테로콕쿠스 종에 대해 분석한다. 결과를 하기 표 2 에 나타낸다.

분석용 배지 :

티오마리놀 B, 티오마리놀 C 및 슈도몬산 A 모두를 모든 미생물용 챠녹 (Chanock) 배지 [P.N.A.S., :48. 41 -49 (1962)에 기재된 대로 제조되었으며 20 % 말 혈청이 보충됨] 상에서 분석한다 :

티오마리놀은 하기 배지상에서 분석한다 :

엠. 보비스(M. bovis) 및 갈리셉티쿰(M. galisepticum) : 챠녹 배지(상술한 대로 제조)

상기 결과로 부터, 티오마리놀 B및 C는 적어도 티오마리놀 만큼 양호하며 일반적으로 슈도몬산 A 보다 상당히 더 나은, 우수한 항균활성 및 항 아스테로콕쿠스 활성을 나타내는 것이 명백하다.

Claims (15)

1. 하기 식 (B) 를 갖는 티오마리놀 B로 명명된 화합물 :
2. 하기 식(C)를 갖는 티오마리놀 C로 명명된 화합물 :
3. 알테로모나스 속의 티오마리놀 B - 생성 미생물을 배양하고, 배양물로 부터 티오마리놀 B 를 분리함을 특징으로 하는 제 1 항의 화합물의 제조방법.
4. 제3항에 있어서, 상기 미생물이 알테로모나스 라바인 제조 방법 .
5. 제3항에 있어서, 상기 미생물이 수탁번호 제 FERM BP-3381호로 구분되는 알테로모나스 라바 균주 SANK 73390 인 제조방법.
6. 알테로모나스 속의 티오마리놀 C -생성 미생물을 배양하고, 그 배양물로 부터 티오마리놀 C 를 분리함을 특징으로 하는 제 2 항의 화합물의 제조방법.
7. 제6항에 있어서, 상기 미생물이 알테로모나스 라바인 제조방법.
8. 제6항에 있어서, 상기 미생물이 수탁번호 제 FERM BP-3381 호로 구분되는 알테로모나스 라바 균주 SANK 73390 인 제조방법.
9. 티오마리놀을 산화시킴으로써 제 1 항의 화합물을 제조하는 방법.
10. 제9항에 있어서, 산화가 과망간산 칼륨, 크롬산염 ; 루테늄 테트록시드 ; 할로겐 ; 오존 ; 산소 : 과산화수소 ; 유기 과산화물 ; 디옥시란 ; 유기 과산 및 그의 염 ; 및 퍼옥시 황산 및 그의 염으로 구성된 군으로 부터 선택된 산화제를 이용하여 수행되는 제조방법.
11. 제9항에 있어서, 산화가 과산화수소,유기 과산 및 그의 염, 유기 과산화물, 디옥시란, 및 퍼옥시황산 및 그의 염으로 구성된 군으로 부터 선택된 산화제를 이용하여 수행되는 제조방법.
12. 제9항에 있어서, 산화가 과산화수소,디메틸디옥시란, 및 퍼옥시항산 및 그의 염으로 구성된 군으로 부터 선택된 산화제를 이용하여 수행되는 제조방법.
13. 제9항에 있어서,
14. 유효량의 제1항의 화합물을 박테리아 감염이 되었거나 감염되기 쉬운, 인간을 제외한 포유동물에 투여함을 특징으로 하는, 박테리아 감염의 치료 또는 예방 방법.
15. 유효량의 제2항의 화합물을 박테리아 감염이 되었거나 감염되기 쉬운, 인간을 제외한 포유동물에 투여함을 특징으로 하는, 박테리아 감염의 치료 또는 예방 방법.