KR0159071B1 - 감염증 진단용 프로브 - Google Patents

감염증 진단용 프로브

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KR0159071B1
KR0159071B1 KR1019950700098A KR19950700098A KR0159071B1 KR 0159071 B1 KR0159071 B1 KR 0159071B1 KR 1019950700098 A KR1019950700098 A KR 1019950700098A KR 19950700098 A KR19950700098 A KR 19950700098A KR 0159071 B1 KR0159071 B1 KR 0159071B1
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Abstract

주요한 감염증 질환 원인균으로부터 추출한 DNA를 Hind III 로 완전 소화하고, 적당한 벡터에 클로닝하여 각기의 균에 특유한 DNA를 함유하는 프로브를 선발함으로써, 감염증 질환의 원인균의 신속한 검출 및 동정에 유용한 프로브를 제공함과 동시에, 선발한 염기배열을 해명하고 임상검체에 함유되는 게놈 DNA와의 비교 참조용에 알맞은 표준배열까지로 제공하는 것을 목적으로 한다.

Description

[발명의 명칭]
감염증 진단용 프로브
[기술분야]
본 발명은 감염증(感染症)질환의 원인균의 검출 및 동정(同定)에 유용한 감염증 원인균 프로브(prove)에 관한 것이다.
[배경기술]
병리학적으로, 감염이란 병원성 미생물(이하, 균이라 한다)이 생체내에 칩입하여, 증식의 발판을 확립하는 것을 지칭하는 것이며, 생체내에서의 균의 증식에 기인하는 발증(發症)은 수죽의 저항력과 균의 독성과의 상호관계에 의존하는 것이다.
감염증 중에서도, 균혈증(菌血症)의 치료방법을 개선하는 것은 시급한 과제이다. 적, 균혈증은 특정의 균에 의한 것이 아니고, 여러가지 균들이 혈액중에 출현하여, 서식하는데 발단되는 것이며, 임상적으로는 약 40℃의 고열이 2일 이상 동안 지속하면 그의 발병을 의심할 수 있고, 소아환자의 경우에는 수일간, 또 생체의 저항력이 약화된 암의 말기 환자의 경우에는 1~2일 방치하면 죽음에 이르는 중증이고, 위급한 병이기 때문에 균혈증의 치료방법에 있어서의 개선은 시급한 것으로 되어 있다.
감염증에서, 생체조직내에서의 우선적으로 호중구(好中球), 단구(單球) 및 대식구(macrophage)계의 식세포가 그 방어를 맡고 있다. 균혈증에서 혈액중에서의 균의 출현이란, 우선한 균이 식세포 조직에서 혈액중으로 침출(浸出)하는 것으로 생각된다.
균혈증은 균이 혈액중에 침출한 상태로서, 이를 치료하는 방법으로 원인균 감수성이 있는 항생물질을 대량으로 투여하는 방법이 있다. 그러나, 항생물질을 일반적으로 간장등 장기의 기능을 저하시키기 때문에 유효하지 않은 항생물질을 위첨한 상태에 있는 환자에 투여하는 것은 극력 피하지 않으면 안된다.
일반적으로, 세포의 식균력(食菌力)이 균의 독력에 미치지 못하고, 균이 전신의 혈류중에 퍼져 있는 경우를 균혈증(菌血症; Bacteremia)라 정의한다면, 균이 생산하는 독소의 작용으로, 중증상을 나타내는 균혈증을 패혈증(敗血症; Sepsis)라 한다. 그리고, 패혈증의 증명, 즉 진단의 확립에는, (1) 임상증상(臨床症狀), (2)검체의 배양, (3) 검체에 함유된 균의 그람염색 및 (4) 쇼크상태의 확인이 필수적이며, 이들 항목이 확인되고서야 치료방침이 결정된다. 따라서, 임상현장에 있어서는, 신속하고도 확실한 균의 동정이 바람직하다.
일반적으로는, 균혈증을 의심받은 검체의 균을 검사실에서 검출, 동정하는 방법으로서 컬쳐-보틀법(Culture-bottle)에서 양성인 검체에 한해서만, 선택배지를 사용하여 동정이 행해진다. 그러나, 실제로, 이들 혈액 검체로부터의 균을 배양하는 성공율이 매우 낮고, 더구나 균혈증을 의심받은 시점에서, 대량의 항생물질이 투여되고 있는 경우에 있어서는, 비록 혈액중에 균이 들어 있어도, 증균, 증식이 안되는 경우가 많아서 컬쳐-보틀법으로 양성이 되는 비율은 매우 적다.
통상적인 방법으로, 균체성분이나 균의 대사산물의 기기분석법(辨野義己 기체크로마토그래피에 의한 세균 동정의 신속화, 임상검사, Vol. 29, No. 12, 1985년 11월, 의학서원 참조); 특이항체를 이용한 방법(일본 공개특허 소 60-224068호 참조); 또는 DNA의 특이성을 이용한 하이브리드화(Hybridization)에 의한 방법(일본특허 공표 소 61-502376호) 등이 있으나, 이들 중 어떤 방법도 균의 분리 및 중균배양을 필수로 삼고 있다. 한편, 감염증에 있어서의 식세포의 기능에 착안한 것으로서, 혈액시료 중의 백혈구 성분이 집중해 있는 연막(軟膜 ; Buffy coat)의 도말염색 표본을 검경(檢鏡)하는 방법이 있다. 일반적으로, 연막 표본에 의해 균이 검출되는 빈도는, 성인 균혈증에서는 귓불에서 채취하는 피의 빈도와 마찬가지로 30% 정도에 머물지만, 신생아의 경우 10례중 7례(70%)의 비율로 균이 검출되는 것으로 보고되고 있고, 도말 표본의 검겸에 의하여 말초혈중 균의 유무에 관한 정보는 치료에 있어서 큰 지침이 되고 있다.
상기한 종래기술에 있어서는, 그의 처리 전(前)조작으로서, 적어도 검체에서 균을 선택적으로 분리하는데에 1~2일, 균을 증식(증균; 增菌)하는데에 1일, 고정조작에 1일 이상 소요되어, 전체(합계)적으로 3~4일은 족히 소요되며, 실제로 이 배양을 균이 발육할 때까지 계속하게 되므로, 컬쳐-보틀법에서 양성이 된 경우에도, 처리 전조작에 1주간 이상 소요되는 경우가 많고, 바로 이것이 컬쳐-보틀법에서 양성을 나타낸 환자의 사망율을 상승시키는 요인이 되고 있다. 예를들어 감염증학 잡지 [Vol. 58, No. 2, pp. 122, 1984년]에는, 혈액 배양 양성율이 28.6% (163/569건)인데도, 그중 사망율은 84.6% (138/163건)에 이르고 있다는 내용이 보고되고 있다.
더욱이, 균의 배양시에 질환의 원인균 이외의 균이 혼입되어도, 이를 구별하지 못하는 경우도 있다. 예를 들어, 균혈증의 원인균의 일종인 표피포도상구균(Staphylococcus epidermidis)은 정상인의 피부에도 존재하는 균이며, 이 때문에 주사침을 피부에 꽂는 경우에 함께 검체내에 혼입될 가능성도 있다.
그리고 중요한 것은 전술한 사정으로 말미암아, 배양할 검체중의 많은 균들이 식세포에 의해 유입되어, 항생물질의 투여에 의해 죽거나 활동이 정지해 있는 상태가 되어, 배양조건하에서 증식되는 균의 수는 적게 되기 때문에, 임상검체를 사용한 배양에 의한 실제의 균의 검출율은 10% 전후로서 매우 낮다. 실제, 임상적으로 균혈증이 의심된 환자의 피를 1일 이상 배양해서 검사하여도 90%는 균의 존재조차도 판명해내지 못하고 있는 실정이다.
이와 같은 상황에서, 현재서는 임상적으로 패혈증을 의심한 단계에서 검출결과를 기다리지 않고 치료를 시작하며, 이때 항생물질로는 가장 광범위한 종류의 균에 유효한 항생물질을 투여하게 되며, 1~2일간 상태를 보고 효과가 나타나지 않으면 다른 항생물질로 바꾸는 시행착오적 방법에 의존하고 있다.
또, 검체중의 균을 염색에 의하여 검출하는 방법에서는, 생체성분도 균과 마찬가지로 염색되기 때문에, 오직 검경하여 인식되는 형태에 의해서만 신속하게 균을 판별하는 것은 숙련이 필요하며 판정이 곤란한 경우도 있다.
이와 같이, 신속, 정확한 진단이 요구되는 질환임에도 불구하고, 종래의 진단방법에서는 충분히 대응하지 못하고 있는 실정이다.
[발명의 개시]
본 발명은 상기한 당해 기술분야에 안고 있는 과제를 감안한 것이며, 발명 요지로 하는 바는, 주요한 감염증 원인균이 보유하는 DNA 또는 DNA와 특이한 반응성을 갖은 프로브(probe)를 제공하는 것이며, 또 이 프로브가 보유하고 있는 DNA의 염기배열을 해명하여 유전자 정보를 제공하는데 있다.
즉, 본 발명의 프로브에 의하면, 예를 들어, 식세포에 의해 혼입되어(식세포에 묻혀서 유입됨)파괴되고 있는 균에 있어서, 여전히 유지되고 있는 감염증 원인균의 DNA를 검출함으로써, 균을 배양, 증식하지 않고서도 감염증 질환의 원인균이 신속하고 확실하게 검출된다. 또, 이들 프로브의 염기배열 정보를 참조하여 프라이머(Primer)를 디자인 하면 하이브리드화를 행하지 않아서도, PCR법에 의한 DNA의 증폭으로, 감염증 원인균을 동정할 수 있다.
또, 하이브리드화에 이용하는 프로브를 비방사성 문제, 예를 들어, 비오틴화시켜 이용하면, 방사성 동위원소의 사용 시설이 없는 검사실에서도 광학현미경을 사용하여 검출할 수 있고, 검출작업을 신속, 간편하게 할 수 있다.
[도면의 간단한 설명]
제1도는 황색포도상구균검출용 프로브의 Hind III 단편의 제한효소 지도이다.
제2도는 표피포도상구균검출용 프로브의 Hind III 단편의 제한효소 지도이다.
제3도는 장내구균(엔데로코커스 패켈리스) 검출용 프로브의 Hind III 단편의 제한효소 지도이다.
제4도는 녹농균검출용 프로브의 Hind III 단편의 제한효소 지도이다.
제5도는 대장균검출용 프로브의 Hind III 단편의 제한효소 지도이다.
제6도는 엔테로박터 클로아케검출용 프로브 및 폐염간균의 Hind III 단편의 제한효소 지도이다.
[발명을 실시하기 위한 최량의 형태]
이하, 비교적 발증빈도가 높은 감염증 질환 원인균, 특히 패혈증 원인균으로서 들 수 있는, 황색포도상구균(Staphylococcus aureus), 표피포도상구균(Staphylococcus epidermidis), 장내구균(Enterocooccus fiecalis), 녹농균(Pseudomonas aeruginosa), 대장균(Escherichia coli), 폐염간균(Klebsiella pneumonia) 및 엔테로박터 클로아케(Enterobacter cloacae)[J. Infection, Vol. 26, pp. 159-170(1993); J. Clin. Microbiol., Vol. 31, pp. 552-557(1993)]등의 각 원인균에 유래하는 프로브의 실시예를 기재한다.
[실시예 1]
감염즘 질환 원인균 유래의 DNA 프로브의 조재
(1) 감염증 질환 원인의 분리
우선, 목적으로 하는 질병에 걸린 감염 환자로부터 채취한 혈액을, 혈액배양법(BBC 시스템 : 혈액배양 시스템·키트 ; Roche 社 제품) 및 시판되는 동정용 키트(아피 20, 아피스타프, 아피스트레프 20 ; 모두 바이오 메류社 제품)에 적응시켜, 각 키트의 사용 설명서에 따라서 각 감염증 질환 원인균을 분리하고 동정하였다.
(2) 분리 균주가 보유한 게놈 DNA(Genomic DNA)의 추출과 정제
상기한 (1)에서 분리된 균주를 BHI(Brain Heart Infusion) 배지에서 하루밤 배양하고, 배양균체를 집균하여, 리소짐 대신에 아크로모펩티다제를 첨가한 다음, 그 위에 사이또-미우라
에 따라, 게놈 DNA를 추출하고, 얻게된 DNA를 제한효소 Hind III 로 완전 절단하여, 벡터 pBR322에 무작위로 클로닝하였다.
(3) 기원세균종의 특이적 프로브의 선별
다음에 마니아티스(Maniatis) 매뉴얼
에 의거하여, 얻게된 각 클로닝을 보유한 대장균을 소규모 배양기(Small Scale Culture)에서 배양하여, 각각의 클로닝을 보유한 플라스미드를 얻었다.
이들 플마스리드를 제한효소 Hind III 로 절단하고, 1% 아가로스겔 전기영동(뮤피트 : 코스모바이오社 제품)으로 삽입체와 플라스미드를 완전히 분리한 후, 사잔트랜스퍼법에 따라, 나일론 멘브랑(폴 바이오 다인 A : 폴社 제품)에 전사하고, 전술한 각 균종의 염색체 DNA를32P-dCTR(社 제품)로 니크트랜스레에션 라벨화한 프로브와의 교차성 하이브리드화를 실시하였다.
이 하이브리드화에서, 각 삽입체와는 교차하지 않고, 기원종 세균 유래의 프로브만 과 교차한 것을 각 감염증 원인균에 특이한 DNA 단편을 보유한 프로브로서 선택하였다.
더욱이, 대장균, 폐염간균 및 엔테로박터 클로아케로부터 조제한 프로브에 관해서는, 이들 균이 패혈증의 원인균으로서 같은 그룹(장내구균, 그람음성 통기성 간균)에 속하기 때문에을 참조], 상기한 일련의 특이성 검정(檢定)에 있어서도, 상기 3개의 균종 상호간에 교차반응이 인정되며, 상기한 3종의 균의 한 균에서 조제한 각 프로브를, 이들 균의 유연균(類緣菌)으로서 일괄 검출하기 위한 프로브로 정하였다.
그리고 하기한 표 1에 이상의 방법에 의하여 선별된 각 균종별 프로브(프로브 기호)를 열거하였다.
동시에 상기한 각 프로브의 제한효소 지도를, 제1도 내지 제6도에 각기 나타내었다.
[실시예 2]
각각의 DNA 프로브의 종특이성의 검정
각 프로브와 각종 감염증 원인균주의 DNA와의 반응성을 다음 방법에 의하여 검토하였다. 먼저 검토 대장균주로서, 황색포도상구균표피포도상구균장내구균녹농균
, 대장균폐염간균 및 엔테로박터 클로아케의 임상 균주를 실시예 1(1)에 기재한 방법으로 분리하였다.
그런 다음, 각 임상 균주를 실시예1 (2)에 기재한 방법에 의거하여, 각 균주의 DNA를 추출하고, 이 추출한 DNA의 일정량(예를 들어, 5㎕)을 나일론 필터에 스포트하고 알칼리 변성시킨 것을 도트 블록 하이브리드화의 시료로 삼았다. 그리고 비오틴으로 라벨화한 각 대상균 주 유래의 DNA 프로브를, 전기한 마니아티스 메뉴얼에 따라, 45%의 포름아미드, 5×SSC, 42℃의 조건하에, 밤새도록 하이브리드화를 실시하였다.
철야 하이브리드화를 마친 시료를 55℃에서 0.1×SSC, 0.1%의 SDS에 의해 20분간의 세정을 2회 실시한 후, 스트렙타비딘-ALP 컨쥬네이트
으로 검출, 발색시켜 교잡(하이브리드화)의 상태를 확인하였다.
각 프로브와 각 임상균주의 DNA와의 반응성에 관한 실험결과를 하기 표2 (a)~(f)에 나타내었다. 표에서, +부호는 교잡의 신호가 검출된 것을, 또 -부호는 그 교잡의 신호가 검출되지 않는 것을 나타낸다.
상기한 표 2에서 명백하듯이, 각 프로브는 그 어느 것도 기원으로 하는 균주(또는 그의 유연균)가 보유하는 DNA에 대해서만 반응성을 보이고, 기원균 이외의 균주로부터 얻은 DNA에 대해서는 전혀 반응을 나타내지 않으며, 그 종특이성이 확인되었다.
[실시예 3]
실시예 1 및 2에서 종특이성이 확인된 본 발명의 DNA 프로브(계 23개)의 염기 배열을 하기와 같은 방법에 의해서 결정하였다.
(1)플라스미트 DNA의 조제
서브클로링된 (염기배열을 결정할) 삽입 단편을 pGem-3Z(Promega)에 의해 보유시킨 대장균 K-12, JM109 형질전환체를 5㎕의 루리아-벡타니(Luria-Bactani) 배지[백트로-트립톤(bacto-tryplone) 10g/1ℓ ; 벡트로-이스트 추출물 5g/1ℓ; NaCl 10g/1ℓ; 5N 의 NaOH에서 pHi 7.0에 조정]에 식균하고 하룻밤 배양했다.
배양액을 원심분리(5,000rpm, 5분)하여 질균하였다. 침전물에 2.5mg/ml의 농도로 리조짐(시그마社)을 함유하는 50mM의 글루코스/50mM의 트리스 -HCl(pH8.0)/10mM의 EDTA용액을 100㎕ 첨가하고 실온에서 5분간 방치하였다. 얻게된 현탁액에 1% 농도로 도데실황산나트륨(시그마社)를 함유한 0.2M의 수산화나트륨 수용액을 첨가하여 혼합하였다. 5M의 초산칼륨수용액(pH4.8) 150㎕을 다시 첨가하여 혼합하고 15분간 빙냉시켰다.
그리고, 원심분리(15,000rpm, 15분)하여 얻은 상청액을 페놀/CHCl3혼합액으로 처리하고, 상청액 2배량 이상의 에탄올을 첨가하고, 다시 원심분리(12,000rpm, 5분)하여 침전물을 얻었다. 침전물에 10mM의 트리스 -HCl(pH7.5)/0.1mM 의 EDTA용액을 100㎕에 용해하고, 10mg/ml의 RNaseA(시그마社)용액을 첨가하여, 실온에서 15분간 방지하였다.
이 조제물에, 0.1M의 초산나트륨 수용액(pH4.8)을 300㎕ 첨가하고, 페놀/CHCl3처리하고, 상청액에 에탄올을 첨가하여 침전을 얻었다. 이 침전물을 건조시켜 10㎕의 증류수에 용해시킨 것을 DNA 시료로 삼았다.
(2) 염기배열 결정의 전처리
염기배열 결정의 전처리를 AutoRead(등록상표) 시퀸싱 키트(Sequencing Kit; 파르마시아社)를 사용하여 실시하였다.
즉, 주형이 되는 DNA를 32㎕ 용액중에 5~10㎍의 농도로 되도록 조정하였다. 1.5ml의 미니튜브(에펜돌프)에 주형 DNA 32㎕을 옮겨 2M의 수산화나트륨 수용액을 8㎕ 첨가하여 서서히 혼합하였다. 그리고, 가볍게 원심분리한 후, 실온에서 10분간 방치하였다.
3M의 초산나트륨(pH4.8) 7㎕와 증류수 4㎕을 첨가하고, 다시 에탄올을 120㎕ 첨가하여 혼합하고 드라이아이스 위에서 15분간 방치하였다. 그런 다음, 15분간 원심분리하여 침전시켜서 DNA를 모으고, 조심하면서 상청을 제거하였다. 얻은 침전물을 70%의 에탄올로 세정하고, 10분간 원심분리하였다. 그리고 다시 조심하여 상청을 걷어내고, 감압조건하에서 침전물을 건조시켰다.
침전물을 증류수에 10㎕에 용해하고, 형광성 프라이머[Fluorescent Primer, M13 Universal Primer ; 5'-플루오레스세인-d[CGACGTTGTAAAACGACGGCCAGT]-3'(1.6pmol/㎕; 0.42 A260unit/㎖); M13 역프라이머(Reverse Primer), 5'-플루오레스세인-d[CAGGAAACAGCTATGAC]-3'(2.1pmol/㎕; 0.42 A260unit/㎖)] 2㎕(0.42A260unit/㎖, 4~6pmol)과 아닐링용 완충액 2㎕를 첨가하여 서서히 혼합하였다.
그리고, 가볍게 원심분리시킨 후, 65℃로 5분간 열처리를 하고, 재빨리 37℃조건하에 두고, 그대로 10분간 보온하였다. 보온후 10분간 이상 실온에서 방치하고 가볍게 원심하였다. 그리고, 연장용(延長用)완충액 1㎕과 디메틸셀폭시드 3㎕을 첨가하여 시료로 삼았다.
4개의 미니튜브에 A, C, G 및 T라 기입하고, 각각의 튜브에
와 함께 용해시킨 것),
와 함께 용해시킨 것),
dTTP와 함께 용해시킨 것)
께 용해시킨 것)을 2.5㎕씩 분주하였다. 또 각 용액은 사용시까지는 얼음속에 보존하고, 사용이에는 37℃에서 1분간 이상 보온시킨 후 사용하였다.
희석시킨 T7DNA 폴리머아제(파르마시아社 : 6~8 units/2㎕을 DNA시료에 첨가하고, 피페팅 또는 서서히 완전 혼합시켰다.
혼합시킨 후, 곧 이 혼합액을 4.5㎕씩 보온시켜 둔 4종의 용액에 분주하였다. 또 분주때는 새 칩을 사용하였다.
37℃에서 5분간 보온하고, 정지용액을 5㎕씩 각 반응액에 첨가하였다. 이 분주에서도, 새 칩을 사용하였다. 90℃에서 2~3분간 보온시키고, 곧바로, 얼음으로 식혔다. 전기영동에는 1렌당 4~6㎕을 영동하였다.
(3) 염기 배열의 결정
실시예 1 및 2에 개시한, 황색포도상구균(Staphylococcus aureus) 또는 표피포도상구균(Staphylococcus epidermidis)에 대하여 특이성을 갖는 프로브 각각의 염기배열의 결정은 영동온도 45℃, 영동시간 6시간으로 하고, A. L.F DNA 시컨서(Sequencer) 시스템(파르마시아社)를 사용하여 행하였다.
그리고, 각 감염증 질환 원인균에서 조제된 하기의 표 3에 열거한 프로브(배열번호)의 염기배열을, 첨부한 배열표에 나타내었다.
이것으로, 각 감염증 질환 원인균(또는 그 유연균)에 특이한 부위를 함유하는 유전자 정보가 명백하게 된 것이다.
[산업상의 이용가능성]
본 발명의 프로브를 사용하면, 예를 들어, 식세포에 의해 혼입된 감염증 원인균을 증식시키지 않고도 직접 검출할 수 있고, 아울러 균을 신속하게 그리고 정확하게 동정할 수 있다. 즉, 본 발명의 프로브를 사용한 진단에서는, 1회분의 검체로 균의 동정까지 할 수 있고, 진단에 요하는 시간도 종재의 방법의 경우 3~4일 (검출율 또한 낮다) 소요되는 데 비하여, 약 1~2일로 비약적으로 단축시킬 수 있으며, 또 그의 검출율로 훨씬 높다. 그러므로, 균혈증의 치료에 대하여 획기적인 지침을 줄 수 있을 뿐만 아니라, 감염증 환자에게 조기의 유효한 치료에 실시되고, 나아가서는 사망율의 저감도 기대된다.
또, 감염증 질환 원인균의 주요한 균에 특이하게 반응하는 프로브의 염기배열을 명료하게 함으로써, 이들 프로브를 인공적으로 조제할 수 있게 되었다. 또, 해석한 염기배열의 정보의 일부를 이용하여 제작한 프라이머를 이용하여, 임상검체에 함유된 감염증 원인균의 DNA를 PCR법에 의하여 증폭하고, 원인균의 신속한 진단에 도움이 될 수 있다.
또, 임상검체에 함유하는 게놈 DNA의 염기배열과 본 발명에 의하여 해석된 염기배열을 비교, 참조함으로써 감염증 원인균종의 신속한 동정을 실시할 수 있다.
상기한 바와 같이, 본 발명은 소기의 목적인 감염증 진당용 프로브를 제공할 수 있을 뿐만 아니라, PCR용 프라이머 제작의 지침으로써, 또 임상검체에 내포된 게놈 DNA의 비교, 참조용으로 알맞는 표준 배열로서 뛰어난 유용성이 기대되며, 나아가서는 감염증 질환 원인균에 특이한 반응을 하는 프로브의 금후의 탐구와 개발에 대한 귀중한 계기를 줄 수 있는 등 뛰어난 효과를 거둔 것이다.
또, 본 출원에 의해 개시되는 염기배열은 임상분리주(株)의 게놈 DNA를 무작위로 클로닝하여 얻은 것이기 때문에, 본 발명의 염기배열의 유용성은 상보쇄에까지 미치는 것이다.
또, 양성주가 보유한 DNA에 변이부분이 존재한다는 것은 당연히 짐작가는 것이지만, 상기한 실시예의 개시에서 명백한 바와 같이, 이 DNA 변이부분이 감염증 진단을 위한 하이브리드화에 이용될 경우, 본 발명의 프로브의 특이성, 또는 본 출원에 의해 개시되는 염기배열 정보를, 감염증의 신속한 진단을 목적으로 한 PCR법의 프라이머를 디자인하는데에 이용할 수 있다는 등의 본 발명이 거두는 유용성에는 하등 영향을 끼치지 않는다.
[배열표]

Claims (7)

  1. 감염증 질환 원인균인 황색포도상구균이 보유한 DNA를 제한효소 Hind III로 처리하여 얻게 되는 DNA단편을 보유하는 감염증 진단용 프로브로서; 전기한 감염증 진단용 브로브가 배열번호 1~4에 기재된 적어도 하나의 염기배열을 가지며, 또 황색포도상구균이 보유한 DNA와 특이하게 반응함을 특징으로 하는 감염증 진단용 프로브.
  2. 감염증 질환 원인균인 표피포도상구균이 보유한 DNA를 제한효소 Hind III로 처리하여 얻게 되는 DNA단편을 보유하는 감염증 진단용 프로브로서; 전기한 감염증 진단용 브로브가 배열번호 5~8에 기재된 적어도 하나의 염기배열을 가지며, 또 표피포도상구균이 보유한 DNA와 특이하게 반응함을 특징으로 하는 감염증 진단용 프로브.
  3. 감염증 질환 원인균인 장내구균이 보유한 DNA를 제한효소 Hind III로 처리하여 얻게 되는 DNA단편을 보유하는 감염증 진단용 프로브로서; 전기한 감염증 진단용 브로브가 배열번호 9~12에 기재된 적어도 하나의 염기배열을 가지며, 또 장내구균이 보유한 DNA와 특이하게 반응함을 특징으로 하는 감염증 진단용 프로브.
  4. 감염증 질환 원인균인 녹농균이 보유한 DNA를 제한효소 Hind III로 처리하여 얻게 되는 DNA단편을 보유하는 감염증 진단용 프로브로서; 전기한 감염증 진단용 브로브가 배열번호 13~16에 기재된 적어도 하나의 염기배열을 가지며, 또 녹농균이 보유한 DNA와 특이하게 반응함을 특징으로 하는 감염증 진단용 프로브.
  5. 감염증 질환 원인균인 대장균이 보유한 DNA를 제한효소 Hind III로 처리하여 얻게 되는 DNA단편을 보유하는 감염증 진단용 프로브로서; 전기한 감염증 진단용 브로브가 배열번호 17~20에 기재된 적어도 하나의 염기배열을 가지며, 또 대장균, 엔테로박터 클로아케및 폐염간균이 보유한 DNA와 특이하게 반응함을 특징으로 하는 감염증 진단용 프로브.
  6. 감염증 질환 원인균인 엔테로박터 클로아케이 보유한 DNA를 제한효소 Hind III로 처리하여 얻게 되는 DNA단편을 보유하는 감염증 진단용 프로브로서; 전기한 감염증 진단용 브로브가 배열번호 21, 또는 22에 기재된 적어도 하나의 염기배열을 가지며, 또 대장균, 엔테로박터 클로아케및 폐염간균이 보유한 DNA와 특이하게 반응함을 특징으로 하는 감염증 진단용 프로브.
  7. 감염증 질환 원인균인 폐염간균이 보유한 DNA를 제한효소 Hind III로 처리하여 얻게 되는 DNA단편을 보유하는 감염증 진단용 프로브로서; 전기한 감염증 진단용 브로브가 배열번호 23에 기재된 적어도 하나의 염기배열을 가지며, 또 대장균, 엔테로박터 클로아케
    및 폐염간균이 보유한 DNA와 특이하게 반응함을 특징으로 하는 감염증 진단용 프로브.
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