DE69334080T2 - Sonde zur Diagnose einer ansteckenden Krankheit verursacht durch Enterococcus Faecalis - Google Patents

Sonde zur Diagnose einer ansteckenden Krankheit verursacht durch Enterococcus Faecalis Download PDF

Info

Publication number
DE69334080T2
DE69334080T2 DE69334080T DE69334080T DE69334080T2 DE 69334080 T2 DE69334080 T2 DE 69334080T2 DE 69334080 T DE69334080 T DE 69334080T DE 69334080 T DE69334080 T DE 69334080T DE 69334080 T2 DE69334080 T2 DE 69334080T2
Authority
DE
Germany
Prior art keywords
bacteria
probe
dna
enterococcus faecalis
infectious disease
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
DE69334080T
Other languages
English (en)
Other versions
DE69334080D1 (de
Inventor
Tsuneya Ohno
Dr. Akio Osaka-shi Matsuhisa
Hirotsugu Takarazuka-shi Uehara
Soji Higashi-Osaka-shi Eda
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Fuso Pharmaceutical Industries Ltd
Original Assignee
Fuso Pharmaceutical Industries Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Fuso Pharmaceutical Industries Ltd filed Critical Fuso Pharmaceutical Industries Ltd
Publication of DE69334080D1 publication Critical patent/DE69334080D1/de
Application granted granted Critical
Publication of DE69334080T2 publication Critical patent/DE69334080T2/de
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
    • C12Q1/689—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for bacteria
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Measuring And Recording Apparatus For Diagnosis (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Ultra Sonic Daignosis Equipment (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Description

  • [technisches Gebiet]
  • Die vorliegende Erfindung betrifft Sonden, die hergestellt werden, indem von ansteckende Krankheiten verursachenden Bakterien Gebrauch gemacht wird, welche zum Nachweisen und Identifizieren der verursachenden Bakterien nützlich sind.
  • [Stand der Technik]
  • In der Pathologie wird eine Infektion als Invasion und Errichtung einer Basis zum Wachstum in einem Organismus durch einen pathogenen Organismus (nachstehend als „Bakterien" bezeichnet) definiert, dann hängt der Ausbruch der Krankheit von der Wechselbeziehung zwischen der Resistenz des Wirtes und der Virulenz der Bakterien ab.
  • Bei den ansteckenden Krankheiten ist die Verbesserung der Behandlungsmethoden von Bakteriämie als wichtige Kernfrage erhoben worden. Das heißt, Bakteriämie ist keine Krankheit, die durch ein bestimmtes Bakterium verursacht wird, sondern durch Auftreten und Innewohnen der verschiedenen Bakterien im Blut verursacht wird, dann wird der Beginn davon klinisch vermutet, wenn Fieber von etwa 40°C zwei oder mehr Tage lang anhält. Wenn ein Patient ein Baby ist oder an Krebs im Endstadium mit geschwächter Abwehr leidet, kann der Patient innerhalb von ein oder zwei Tagen sterben, weshalb die Bakteriämie eine schwerwiegende und dringende Krankheit ist, und die Verbesserung der Behandlungsmethoden davon erwartet worden ist.
  • Bei einer ansteckenden Krankheit arbeiten Phagozyten, einschließlich Neutrophile, Monozyten und Makrophagen, hauptsächlich an der Immunabwehr des Körpers. Das Auftreten von Bakterien im Blut wird als Invasion von überwiegenden Bakterien, welche aus dem Gewebe des Phagozyten hervorgegangen sind, angesehen.
  • Bakteriämie ist ein Zustand, in welchem die Bakterien im Blut aufgetreten sind, und eine große Menge an Antibiotikum verabreicht wird, um sie zu behandeln, wobei die verursachenden Bakterien gegen das Antibiotikum empfindlich sind. Weil Antibiotika allgemein die Funktionen der inneren Organe, wie der Leber, senken, ist es erforderlich, der Verringerung einer Verabreichung eines unwirksamen Antibiotikums an den Patienten in einem schwerwiegenden Zustand Beachtung zu schenken.
  • Wenn die Bakteriämie als ein Fall definiert ist, in welchem die Phagozytose von Zellen die Virulenz von Bakterien nicht überwinden kann, dann breiten sich die Bakterien durch das Blut im Körper aus, Bakteriämie mit schwerwiegenden Symptomen, die Toxinen zuzuschreiben sind, die durch die Bakterien produziert werden, wird als Sepsis bezeichnet. Der Nachweis von Sepsis, mit anderen Worten die Festsetzung der Diagnose erfordert ein Überprüfen der folgenden Punkte:1) klinische Symptome, 2) Kultivieren einer Probe, 3) Gram-Färbung der Bakterien, die in den Proben enthalten sind, und 4) Schockzustand, dann wird bei Vervollständigen der Überprüfung dieser Punkte das Behandlungsverfahren bestimmt. Dementsprechend ist die schnelle und zuverlässige Identifizierung der Bakterien in der Klinik erwartet worden.
  • Im vorliegenden Verfahren zum Nachweisen und Identifizieren der Bakterien in einer Bakteriämieprobe ist es ein gewöhnliches Verfahren, eine Probe in selektivem Medium zu identifizieren, welches ein positives Signal in einem routinemäßigen Verfahren in einer Kulturflasche hat. Jedoch ist es ziemlich schwierig, Bakterien aus dieser Blutprobe erfolgreich zu züchten, dann werden, wenn eine hohe Dosis von Antibiotika verabreicht wird, wenn Verdacht auf Bakteriämie besteht, die Bakterien im Blut in vielen Fällen nicht gezüchtet und wachsen nicht, weshalb die Rate positiver Fälle in der Kulturflasche extrem niedrig wird.
  • Obwohl verfügbare Subroutineverfahren die instrumentelle Analyse von Bestandteilen und metabolischen Produkten von Bakterien (Yoshimi Benno, „Quick identification of bacteria with gas chromatography", Rinsho Kensa, Bd. 29, Nr. 12, November 1985, Igaku Shoin Hrsg.) einschließen, sind ein Verfahren, das einen spezifischen Antikörper verwendet (vorläufige Japanische Patentschrift Nr. 60-224068), und ein Hybridisierungsverfahren, das die Spezifität von DNA verwendet (vorläufige Japanische Patentschrift Nr. 61-502376), von denen jedes erfordert, die Bakterien zu trennen und sie zu züchten, entwickelt worden. Auf der anderen Seite gibt es, weil ein Verfahren eingeführt wurde, das auf der Funktion der Phagozyten bei ansteckenden Krankheiten beruht, ein Verfahren zum Untersuchen eines gefärbten Abstrichs von Buffy coat unter einem optischen Mikroskop, worin Leukozyten der Blutprobe konzentriert sind. Allgemein gesagt, wurde, obwohl die Rate des Nachweises von Bakterien in Buffy coat-Proben von erwachsenen Bakteriämiepatienten höchstens 30% beträgt, welches dem in Ohrläppchenproben ähnlich ist, berichtet, dass Bakterien in sieben Fällen von zehn Fällen (70%) bei neugeborenen Patienten nachgewiesen wurden, weshalb eine Information hinsichtlich des Vorhandenseins von Bakterien im peripheren Blut, die durch Mikroskopuntersuchung eines Abstrichs zu erhalten ist, wichtig für die Behandlung ist.
  • Weil die herkömmlichen Verfahren die Vorbehandlung notwendig machen, welche insgesamt mindestens drei bis vier Tage erfordert, wobei ein oder zwei Tage zur selektiven Isolierung von Bakterien aus einer Probe, einen Tag zur Kultivierung und einen oder mehrere Tage zur Fixierung enthalten sind, und das Züchten davon bei der Ausübung fortgesetzt wird, bis die Bakterien wachsen, erfordert das Züchten eine Woche oder mehr sogar für C.B.-positive Fälle, weshalb dieses ein Faktor bei der hohen Sterblichkeit von C.B.-positiven Patienten war, die mit den herkömmlichen Verfahren behandelt wurden. Zum Beispiel betrug gemäß eines Berichts, der in „The Journal of the Japanese Association for Infectious Diseases", Bd. 58, Nr. 2, S. 122, 1984, veröffentlicht wurde, obwohl die Rate positiver Blutkulturen 28,6% (163 Fälle/569 Fällen) betrug, die Sterblichkeit mindestens 84,6% (138 Fälle/163 Fällen).
  • Ferner kann es unmöglich sein, bei der Züchtung eine Kontamination durch indigene Bakterien zu erkennen. Zum Beispiel hält sich Staphylococcus epidermidis, welches eines der Staphylokokken ist und das verursachende Bakterium von Bakteriämie ist, auf der Haut normaler Personen auf, dann gibt es ein Kontaminationsrisiko einer Probe mit diesem Bakterium, wenn eine Nadel in die Haut eingeführt wird.
  • Als wichtige Tatsache unter solchen vorstehenden Umständen ist, weil viele Bakterien in einer zu züchtenden Probe in die Phagozyten eingebracht worden sind und tot oder stationär immobilisiert sind, die Anzahl an züchtbaren Bakterien selbst unter geeigneten Züchtungsbedingungen klein, wodurch die tatsächliche Nachweisrate von Bakterien durch Züchten einer Probe höchstens etwa 10% beträgt. Mit anderen Worten, zu diesem Zeitpunkt können 90% des überprüften Bluts, welches weitere ein oder mehrere Tage gezüchtet worden ist, des Patienten, bei dem klinisch der Verdacht besteht, dass er an einer Bakteriämie leidet, das Vorhandensein von Bakterien nicht erklären.
  • In Anbetracht der vorstehend beschriebenen Sachlage hängt die gegenwärtige Praxis von einer zu beginnenden Behandlung ab, wenn klinisch der Verdacht auf Bakteriämie besteht, ohne die Nachweisergebnisse abzuwarten, das heißt ein empirischer Versuch (Trial and Error-Verfahren), bei welchem zuerst ein Breitband-Antibiotikum verabreicht wird, und wenn das Antibiotikum nach einem oder zwei Tagen nicht wirksam ist, ein anderes Antibiotikum versucht wird.
  • Gemäß dem Verfahren zum Färben von Bakterien in der Probe werden auch die Bestandteile des lebenden Körpers zusammen mit den Bakterien gefärbt, weshalb Erfahrung erforderlich ist, um die Bakterien gemäß ihres Bildes durch das Mikroskop schnell zu identifizieren, dann kann es Fälle geben, die als Bakteriämie kaum diagnostiziert werden können.
  • Obwohl die Bakteriämie eine Krankheit ist, bei welcher eine schnelle und genaue Diagnose erforderlich ist, kann das herkömmliche Diagnoseverfahren nicht auf derartige Erfordernisse reagieren.
  • [Offenbarung der Erfindung]
  • Die vorliegende Erfindung wurde hinsichtlich der Probleme auf dem Fachgebiet eingeführt und betrifft eine Sonde mit einer spezifischen Reaktivität mit DNA oder RNA, die aus primären ansteckende Krankheiten verursachenden Bakterien erhalten wurde, dann stellen sie eine genetische Information durch Analysieren der Basensequenz von DNA in der Sonde bereit.
  • Durch die erfindungsgemäße Sonde werden zum Beispiel ansteckende Krankheiten verursachende Bakterien ohne Züchtung/Vermehrung der Bakterien schnell und genau durch Nachweis von DNA, die in den verursachenden Bakterien enthalten ist, die gespalten und mit dem Phagozyten nach und nach eingebracht wird, nachgewiesen. Dann können, wenn Primer entworfen werden, die sich auf die Information über die Basensequenz dieser Sonden beziehen, die verursachenden Bakterien ohne Hybridisierung durch Amplifikation der DNA mit PCR-Technik identifiziert werden.
  • Wenn eine nicht-radioaktive Sonde, zum Beispiel eine biotinylierte Sonde, zur Hybridisierung verwendet wird, weil eine derartige Sonde mit einem optischen Mikroskop in einem herkömmlichen Labor ohne Einrichtungen zum Umgang mit Radioisotopen nachgewiesen werden kann, wäre das Nachweisverfahren schnell und einfach.
  • [Kurze Beschreibung der Zeichnungen]
  • 1 ist eine Restriktionsenzymkarte eines HindIII-Fragments einer Sonde zum Nachweisen von Staphylococcus aureus.
  • 2 ist eine Restriktionsenzymkarte eines HindIII-Fragments einer Sonde zum Nachweisen von Staphylococcus epidermidis.
  • 3 ist eine Restriktionsenzymkarte eines HindIII-Fragments einer Sonde zum Nachweisen von Enterococcus faecalis.
  • 4 ist eine Restriktionsenzymkarte eines HindIII-Fragments einer Sonde zum Nachweisen von Pseudomonas aeruginosa.
  • 5 ist eine Restriktionsenzymkarte eines HindIII-Fragments einer Sonde zum Nachweisen von Escherichia coli.
  • 6 ist eine Restriktionsenzymkarte eines HindIII-Fragments einer Sonde zum Nachweisen von Enterobacter cloacae und Klebsiella pneumonia.
  • [Beste Art und Weise zum Durchführen der Erfindung]
  • Beispiele von Sonden, die aus Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Enterococcus faecalis, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae beziehungsweise Enterobacter cloacae (J. Infection, Bd. 26, S. 159–170 (1993), J. Clin. Microbiol., Bd. 31, S. 552–557 (1993)) hergestellt werden, die als verhältnismäßig weitverbreitete ansteckende Krankheiten verursachende Bakterien, insbesondere von Bakteriämie, aufgeführt werden, wurden wie folgt beschrieben.
  • Beispiel 1: Herstellung einer DNA-Sonde aus ansteckende Krankheiten verursachenden Bakterien
  • (1) Isolierung von ansteckende Krankheiten verursachenden Bakterien
  • Das Blut, das vom Patienten gesammelt wurde, der an zielgerichteten Krankheiten leidet, wurde für das Blutkulturverfahren (BBC-System: Blutkultursystem (Blood Culture System); Roche) und für einen herkömmlichen Identifizierungskit (Api 20, Apistaf, Apistlep 20: Bio-Meryu) verwendet, und das jeweilige verursachende Bakterium wurde gemäß dem Handbuch des Kits isoliert und identifiziert.
  • (2) Extraktion und Reinigung von genomischer DNA aus einem isolierten Stamm
  • Stämme, die im vorstehenden (1) isoliert wurden, wurden über Nacht in BHI-(Brain Heart Infusion-) Medium gezüchtet, die gezüchteten Bakterien gesammelt, dazu wurde Achromopeptidase anstelle von Lysozym zugegeben, dann wurde genomische DNA gemäß dem Saito-Miura-Verfahren („Preparation of Transforming Deoxyribonucleic Acid by Phenol Treatment", Biochem. Biophys. Acta. Bd. 72, S. 619–629) extrahiert, und die extrahierte DNA wurde mit dem Restriktionsenzym HindIII gespalten, und wurde zufällig in den Vektor pBR322 kloniert.
  • (3) Auswahl der Sonde mit Spezifität zu Arten von ursprünglichen Bakterien
  • Escherichia coli, das jeden Klon enthielt, der gemäß dem Handbuch von Maniatis (T. Maniatis, et al., „Molecular Cloning (A Laboratory Manual)", Cold Spring Harbour Laboratory (1982)) hergestellt wurde, wurde mit Kulturen im kleinen Maßstab gezüchtet, und es wurden Plasmide erhalten, die jeden Klon enthielten.
  • Diese Plasmide wurden mit dem Restriktionsenzym HindIII gespalten, wodurch mit 1% Agarose-Gel-Elektrophorese (Myupid: Cosmo-Bio) Insertionen vollständig von den Plasmiden getrennt wurden, dann mit Southern-Transferverfahren (Paul Biodine A: Paul) auf Nylonmembran übertragen wurden und mit einer Sonde kreuzhybridisiert wurden, die durch 32P-dCTP-Makierung (Amersham) durch Nick-Translation von Chromosomen-DNA von jedem der vorstehend aufgeführten Bakterienarten hergestellt wurde.
  • Bei dieser Hybridisierung wurde eine Sonde, welche mit keiner Insertion kreuzreagierte, außer mit einer Sonde, die aus der ursprünglichen Spezies davon hergestellt wurde, als Sonde ausgewählt, die ein DNA-Fragment enthielt, welches zu ansteckende Krankheiten verursachenden Bakterien spezifisch ist.
  • Hinsichtlich der Sonden, die aus Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter cloacae, weil diese Bakterien zur selben Gruppe gehören (Darmbakterien; Gram-negativer aerober Bacillus), als verursachende Bakterien der Bakteriämie (siehe J. Infection, Bd. 26, S. 159–170 (1993), J. Clin. Microbiol., Bd. 31., S. 552–557 (1993), vorstehend) hergestellt wurden und die Kreuzreaktion unter den drei Bakterien in den vorhergehenden Reihenexperimenten auf Spezifität bestätigt worden war, wurde jede Sonde, die aus einer der drei Bakterien hergestellt wurde, als Sonde zum Nachweisen aller dieser Bakterien als relevante Bakterien bezeichnet.
  • Die Sonden (Bezeichnung), die durch die vorhergehenden Verfahren aus jeder Spezies ausgewählt wurden, sind in der folgenden Tabelle 1 aufgeführt.
  • TABELLE 1
    Figure 00060001
  • Restriktionsenzymkarten jeder Sonde wurden jeweils in den 1–6 auch veranschaulicht.
  • Beispiel 2: Bewertung auf Speziesspezifität jeder DNA-Sonde
  • Die Reaktivität zwischen jeder Sonde und DNA von ansteckende Krankheiten verursachenden Bakterien wurde gemäß dem folgenden Verfahren untersucht. Zuallererst wurden als Stämme des Gegenstands der Untersuchung klinische Isolate von Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Enterococcus faecalis, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae und Enterobacter cloacae gemäß dem Verfahren von vorstehendem Beispiel 1 (1) isoliert.
  • Dann wurde DNA von jedem klinischen Isolat gemäß dem Verfahren von Beispiel 1 (2) extrahiert, und Proben für Dot-Blot-Hybridisierung wurden erhalten, indem eine bestimmte Menge (z.B. 5 μl) DNA auf Nylonfilter getüpfelt wurde und die im Alkalischen denaturierten Isolate ausgewählt wurden. Die Hybridisierung an DNA-Sonden, die aus jedem unterzogenen Bakterium hergestellt und mit Biotin (Bio-dUTP; BRL) markiert wurden, wurde über Nacht gemäß dem Handbuch von Maniatis, vorstehend, unter der Bedingung von 45% Formamid, 5 × SSC, 42°C durchgeführt.
  • Die Proben, die durch Hybridisierung über Nacht erhalten wurden, wurden 20 Minuten lang bei 55°C zweimal mit 0,1 × SSC, 0,1% SDS gewaschen, dann wurde die Farbreaktion mit Streptavidin-ALP-Konjugaten (BRL) nachgewiesen und die Hybridisierung bewertet.
  • Die experimentellen Ergebnisse an Reaktivität zwischen jeder Sonde und DNA von jedem klinischen Isolat werden in der folgenden Tabelle 2 (i)–(vi) veranschaulicht. Hinsichtlich einer Bezeichnung in den Tabellen, bezieht sich die Bezeichnung von „+" auf das Vorhandensein eines Signals an Hybridisierung, während sich das von „–" auf das Fehlen eines Signals an Hybridisierung bezieht.
  • Tabelle 2 (i)
    Figure 00070001
  • Tabelle 2 (ii)
    Figure 00080001
  • Tabelle 2 (iii)
    Figure 00080002
  • Tabelle 2 (iv)
    Figure 00080003
  • Tabelle 2 (v)
    Figure 00080004
  • Tabelle 2 (vi)
    Figure 00080005
  • Wie aus der vorstehenden Tabelle 2 ersichtlich ist, hat jede Sonde nur mit der DNA reagiert, die aus dem Herkunftsstamm (oder verwandten Stamm davon) erhalten wurde, und mit keiner DNA reagiert (hybridisiert), die aus anderen Stämmen als den Stämmen aus dem Herkunftsstamm erhalten wurde, deshalb ist ihre Spezifität bestätigt worden.
  • Beispiel 3: Analyse der Basensequenz
  • Die Basensequenz der DNA-Sonden (insgesamt 23 Sonden), deren Spezifität zur Herkunftsspezies in den Beispielen 1 und 2 bestätigt worden ist, wurde gemäß dem folgenden Verfahren sequenziert.
  • (1) Präparation von Plasmid-DNA
  • Escherichia coli K-12, JM109 Transformanten, wobei die subklonierten Insertionsfragmente (die sequenziert werden sollen) in pGem-3Z (Promega) enthalten sind, wurden in 5 ml Luria-Bactani-Medium (Bactotrypton, 10 g/l; Bactohefeextrakt, 5 g/l; NaCl, 10 g/l; pH-Wert mit 5 N NaOH auf 7,0 eingestellt) geimpft und über Nacht gezüchtet.
  • Die Kulturflüssigkeit wurde zentrifugiert (5.000 U/min, 5 min) und die Bakterien gesammelt. 100 μl Lösung aus 50 mM Glukose/50 mM Tris-HCl (pH 8,0)/10 mM EDTA, die 2,5 mg/ml Lysozym (Sigma) enthielt, wurde zum Ausfällen zugegeben und fünf Minuten lang bei Raumtemperatur stehengelassen. 0,2 M NaOH-Lösung, die 1 % Natriumdodecylsulfat (Sigma) enthielt, wurde zu der so erhaltenen Suspension zugegeben und damit gemischt. 150 μl 5 M Kaliumacetatlösung (pH 4,8) wurde ferner dazugegeben und damit gemischt, dann 15 Minuten lang auf Eis gestellt.
  • Der durch Zentrifugation (15.000 U/min, 15 min) erhaltene Überstand wurde mit Phenol/CHCl3 behandelt, und dazu wurde das zweifache Volumen Ethanol gegeben, dann wurde ein Niederschlag durch Zentrifugation (12.000 U/min, 5 min) erhalten. Dieser Niederschlag wurde in 100 μl Lösung aus 10 mM Tris-HCl (pH 7,5)/0,1 mM EDTA gelöst, und 10 mg/ml RNase A-Lösung (Sigma) wurde dazugegeben, dann wurde es 15 Minuten lang bei Raumtemperatur stehengelassen.
  • 300 μl 0,1 M Natriumacetatlösung (pH-Wert 4,8) wurde zu dieser Präparation zugegeben und mit Phenol/CHCl3 behandelt, dann wurde ein Niederschlag durch Zugeben von Ethanol zum Überstand erhalten. Die DNA-Proben wurden erzeugt, indem dieser Niederschlag getrocknet und in 10 μl destilliertem Wasser gelöst wurde.
  • (2) Vorbehandlung zum Sequenzieren
  • Die Vorbehandlung zum Sequenzieren wurde mit einem AutoReadTM Sequencing Kit (Pharmacia) durchgeführt.
  • Die Konzentration der DNA, um eine Matrize zu werden, wurde auf 5–10 μg in 32 μl eingestellt. 32 μl Matrizen-DNA wurde in ein 1,5-ml-Miniröhrchen (Eppendorf) überführt und dazu 8 μl 2 M NaOH-Lösung gegeben, dann leicht damit gemischt. Nach sofortiger Zentrifugation wurde es 10 Minuten lang bei Raumtemperatur stehengelassen.
  • 7 μl 3M Natriumacetat (pH 4,8) und 4 μl destilliertes Wasser, dann 120 μl Ethanol wurden dazugegeben, dann damit gemischt, und 15 Minuten lang auf Trockeneis stehengelassen. DNA, welche durch 15 Minuten lange Zentrifugation gefällt worden ist, wurde gesammelt, und der Überstand wurde vorsichtig entfernt. Der so erhaltene Niederschlag wurde mit 70% Ethanol gewaschen und 10 Minuten lang zentrifugiert. Dann wurde der Überstand wieder vorsichtig entfernt und der Niederschlag unter vermindertem Druck getrocknet.
  • Der Niederschlag wurde in 10 μl destilliertem Wasser gelöst, dann wurden 2 μl Fluoreszenzprimer (0,42 A260 Unit/10 ml, 4–6 pmol) {M13 Universalprimer; 5'-Fluorescein-d[CGACGTTGTAAAACGACGGCCAGT]-3' (1,6 pmol/μl; 0,42 A260 Unit/ml); M13-Gegenstrangprimer, 5'-Fluorescein-d[CAGGAAACAG CTATGAC]-3' (2,1 pmol/μl; 0,42 A260 Unit/ml)} und 2 μl Kochsalzlösung zum Anlagern dazugegeben und leicht gemischt.
  • Nach sofortiger Zentrifugation wurden sie bei 65°C 5 Minuten lang wärmebehandelt und schnell in eine 37°C warme Umgebung überführt, und die Temperatur wurde 10 Minuten lang gehalten. Nach dem Halten der Temperatur wurde sie 10 Minuten lang oder länger bei Raumtemperatur stehengelassen und sofort zentrifugiert. Dann wurden Proben hergestellt, indem dazu 1 μl einer Verlängerungskochsalzlösung und 3 μl Dimethylsulfoxid gegeben wurden.
  • Vier Miniröhrchen sind mit einer der Markierungen „A", „C", „G" und „T" identifiziert worden, und gemäß der Markierung wurden 2,5 μl A-Mischung (gelöstes ddATP mit dATP, dCTP, c7dGTP und dTTP), C-Mischung (gelöstes ddCTP mit dATP, dCTP, c7dGTP und dTTP), G-Mischung (gelöstes ddGTP mit dATP, dCTP, c7dGTP und dTTP) oder T-Mischung (gelöstes ddTTP mit dATP, dCTP, c7dGTP und dTTP) wurden in jeweils ein identifiziertes Röhrchen gegossen. Jede Lösung wurde in gefrorenem Zustand aufbewahrt, und die Lösung wurde zur Verwendung eine Minute lang oder länger auf 37°C erwärmt.
  • 2 μl verdünnte T7DNA-Polymerase (Pharmacia; 6–8 Units/2 μl) wurde zur DNA-Probe zugegeben und durch leichtes Pipettieren oder Mischen vollständig gemischt. Sofort nach dem Beenden des Mischens wurde diese gemischte Lösung in jeweils 4,5 μl Vierarten-Lösung gegossen, welche bei der bestimmten Temperatur gehalten wurde. Frische Spitzen wurden zum Zeitpunkt des Gießens verwendet.
  • Die Lösung ist fünf Minuten lang bei 37°C gehalten worden, dann wurden 5 μl Stopplösung in jede Reaktionslösung gegossen. Frische Spitzen wurden zum Gießen verwendet. Sofort nach 2–3 Minuten langem Halten der Lösung bei 90°C wurde sie auf Eis gekühlt. 4–6 μl/Spur der Lösung wurden auf die Elektrophorese aufgetragen.
  • (3) Sequenzierung der Basensequenz
  • Sequenzieren jeder Basensequenz der Sonden, die in den Beispielen 1 und 2 offenbart sind, mit der Spezifität gegen Staphylococcus aureus oder Staphylococcus epidermidis wurden mit dem A.L.F.-DNA-Sequenziersystem (Pharmacia) unter einer Elektrophoresebedingung von 45°C 6 Stunden lang durchgeführt.
  • Dann wurden die Basensequenzen der Sonden (SEQ ID NR.), die aus jedem ansteckende Krankheiten verursachenden Bakterium hergestellt wurden und in der nachfolgenden Tabelle 3 aufgeführt sind, in der hier angefügten Sequenzliste offenbart.
  • Tabelle 3
    Figure 00110001
  • Dadurch ist genetische Information hinsichtlich der spezifischen Stelle von jedem ansteckende Krankheiten verursachenden Bakterium (oder verwandten Bakterien davon) geklärt worden.
  • Gewerbliche Anwendungsmöglichkeit
  • Gemäß der Sonden der vorliegenden Erfindung können zum Beispiel ansteckende Krankheiten verursachende Bakterien, welche in den Phagozyten eingebracht worden sind, ohne Vermehrung der Bakterien direkt nachgewiesen werden und schnell und genau identifiziert werden. Das heißt, entsprechend der Diagnose kann die Identifizierung der Bakterien unter Verwendung der erfindungsgemäßen Sonde mit einer einzelnen Probe verwirklicht werden, dann kann die für die Diagnose erforderliche Zeit auf etwa einen bis zwei Tag(e) verringert werden, während das herkömmliche Verfahren (mit niedriger Nachweisrate) 3–4 Tage erforderte, und die Nachweisrate bemerkenswert verbessert werden. Deshalb kann diese Erfindung objektive Faktoren zur Behandlung der Bakteriämie bereitstellen, dann die wirksame Behandlung im frühen Stadium der ansteckenden Krankheiten verwirklichen und es wird erwartet, dass sie die Sterblichkeit verringern kann.
  • Dann können diese Sonden künstlich hergestellt werden, indem die Basensequenzen der Sonden geklärt werden, welche spezifisch mit primären Bakterien von ansteckenden Krankheiten reagieren. Ferner kann ein Teil der Information über die analysierten Basensequenzen zum schnellen Diagnostizieren der verursachenden Bakterien verwendet werden, indem DNA von ansteckende Krankheiten verursachenden Bakterien in der klinischen Probe mit PCR-Verfahren und Primern, die durch Gebrauchmachen von der Information hergestellt werden, amplifiziert wird.
  • Ferner kann durch Vergleichen der Basensequenzen der genomischen DNA in der klinischen Probe mit der der vorliegenden Erfindung eine schnelle Identifizierung der Spezies der ansteckende Krankheiten verursachenden Bakterien verwirklicht werden.
  • Wie vorstehend angegeben, stellt die vorliegende Erfindung wünschenswerte Sonden zur Diagnose ansteckender Krankheiten bereit, erwartet dann Nützlichkeiten als Faktor, um Primer für die PCR und eine Standardsequenz für einen Vergleich mit genomischer DNA in der klinischen Probe herzustellen, und erwartet ferner eine Wirkung, um wertvolle Hinweise zum Herstellen und Entwickeln der anderen Sonden bereitzustellen, welche spezifisch mit ansteckende Krankheiten verursachenden Bakterien reagieren.
  • Dann sollten, weil die Basensequenzen, die in der vorliegenden Anmeldung offenbart sind, durch zufälliges Klonieren der genomischen DNA von klinischen Isolaten erhalten wurden, Nützlichkeiten der Basensequenzen der vorliegenden Erfindung auf die Komplementärstränge davon erweitert werden.
  • Ferner würde, obwohl angenommen wird, dass die DNA, die aus Wildtypstämmen erhalten wird, den mutierten Teil enthält, aus der vorstehenden Offenbarung der Beispiele ersichtlich, dass der mutierte DNA-Teil die Nützlichkeiten, die aus der vorliegenden Erfindung abzuleiten sind, die die Spezifität der erfindungsgemäßen Sonden bei der Hybridisierung zur Diagnose von ansteckenden Krankheiten umfassen, und einen Gebrauch von der Information über die Basensequenzen, die in der vorliegenden Anmeldung offenbart sind, um die Primer für das PCR-Verfahren zu entwerfen, um eine schnelle Diagnose der ansteckenden Krankheiten zu verwirklichen, nicht beeinflusst.
  • Sequenzverzeichnis
    Figure 00140001
  • Figure 00150001
  • Figure 00160001
  • Figure 00170001
  • Figure 00180001
  • Figure 00190001
  • Figure 00200001
  • Figure 00210001
  • Figure 00220001
  • Figure 00230001
  • Figure 00240001
  • Figure 00250001
  • Figure 00260001
  • Figure 00270001
  • Figure 00280001
  • Figure 00290001
  • Figure 00300001
  • Figure 00310001
  • Figure 00320001
  • Figure 00330001
  • Figure 00340001
  • Figure 00350001
  • Figure 00360001
  • Figure 00370001
  • Figure 00380001
  • Figure 00390001
  • Figure 00400001
  • Figure 00410001
  • Figure 00420001
  • Figure 00430001
  • Figure 00440001
  • Figure 00450001
  • Figure 00460001
  • Figure 00470001
  • Figure 00480001
  • Figure 00490001
  • Figure 00500001
  • Figure 00510001
  • Figure 00520001
  • Figure 00530001
  • Figure 00540001
  • Figure 00550001
  • Figure 00560001
  • Figure 00570001
  • Figure 00580001
  • Figure 00590001
  • Figure 00600001
  • Figure 00610001
  • Figure 00620001
  • Figure 00630001
  • Figure 00640001
  • Figure 00650001
  • Figure 00660001
  • Figure 00670001
  • Figure 00680001
  • Figure 00690001
  • Figure 00700001
  • Figure 00710001
  • Figure 00720001
  • Figure 00730001
  • Figure 00740001
  • Figure 00750001
  • Figure 00760001
  • Figure 00770001
  • Figure 00780001
  • Figure 00790001
  • Figure 00800001
  • Figure 00810001
  • Figure 00820001
  • Figure 00830001
  • Figure 00840001
  • Figure 00850001
  • Figure 00860001
  • Figure 00870001
  • SEQUENZVERZEICHNIS
    Figure 00880001
  • Figure 00890001
  • Figure 00900001
  • Figure 00910001
  • Figure 00920001
  • Figure 00930001
  • Figure 00940001
  • Figure 00950001
  • Figure 00960001
  • Figure 00970001
  • Figure 00980001
  • Figure 00990001
  • Figure 01000001
  • Figure 01010001
  • Figure 01020001
  • Figure 01030001
  • Figure 01040001
  • Figure 01050001
  • Figure 01060001
  • Figure 01070001
  • Figure 01080001
  • Figure 01090001
  • Figure 01100001
  • Figure 01110001
  • Figure 01120001
  • Figure 01130001
  • Figure 01140001
  • Figure 01150001
  • Figure 01160001
  • Figure 01170001
  • Figure 01180001
  • Figure 01190001
  • Figure 01200001
  • Figure 01210001
  • Figure 01220001
  • Figure 01230001
  • Figure 01240001
  • Figure 01250001
  • Figure 01260001
  • Figure 01270001
  • Figure 01280001
  • Figure 01290001
  • Figure 01300001
  • Figure 01310001
  • Figure 01320001
  • Figure 01330001
  • Figure 01340001
  • Figure 01350001
  • Figure 01360001
  • Figure 01370001
  • Figure 01380001
  • Figure 01390001
  • Figure 01400001
  • Figure 01410001
  • Figure 01420001
  • Figure 01430001
  • Figure 01440001

Claims (4)

  1. Sonde zur Diagnose von ansteckenden Krankheiten, umfassend DNA-Fragmente, erzeugt durch Spaltung von DNA von Enterococcus faecalis, das zu den verursachenden Bakterien der ansteckenden Krankheiten gehört, mit dem Restriktionsenzym HindIII, wobei die Sonde mindestens eine Sequenz der Basensequenzen enthält, die in den SEQ ID NR. 9 bis 12 aufgezeigt sind, und mit der DNA von Enterococcus faecalis spezifisch reagiert.
  2. Sonde gemäß Anspruch 1, wobei die Sonde nichtradioaktiv ist.
  3. Sonde gemäß Anspruch 2, wobei die Sonde biotinyliert ist.
  4. Verwendung der Sonde gemäß Anspruch 1 zur Herstellung eines Primers.
DE69334080T 1992-07-07 1993-07-07 Sonde zur Diagnose einer ansteckenden Krankheit verursacht durch Enterococcus Faecalis Expired - Lifetime DE69334080T2 (de)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP17971992 1992-07-07
JP17971992 1992-07-07

Publications (2)

Publication Number Publication Date
DE69334080D1 DE69334080D1 (de) 2006-12-14
DE69334080T2 true DE69334080T2 (de) 2007-05-24

Family

ID=16070679

Family Applications (10)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE69333887T Expired - Lifetime DE69333887T2 (de) 1992-07-07 1993-07-07 Sonde zur Diagnose einer ansteckenden Krankheit verursacht durch Staphylococcus Epidermidis
DE69334080T Expired - Lifetime DE69334080T2 (de) 1992-07-07 1993-07-07 Sonde zur Diagnose einer ansteckenden Krankheit verursacht durch Enterococcus Faecalis
DE69333958T Expired - Lifetime DE69333958T2 (de) 1992-07-07 1993-07-07 Sonde zur Diagnose einer ansteckenden Krankheit verursacht durch Staphylococcus aureus
DE69333872T Expired - Lifetime DE69333872T2 (de) 1992-07-07 1993-07-07 Sonde zur Diagnose einer ansteckenden Krankheit verursacht durch Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae oder Enterobacter cloacae
DE69333008T Expired - Lifetime DE69333008T2 (de) 1992-07-07 1993-07-07 Sonde zur diagnose einer ansteckenden krankheit
DE69334028T Expired - Lifetime DE69334028T2 (de) 1992-07-07 1993-07-07 DNS-Sonde spezifisch für Staphylococcus epidermidis
DE69334018T Expired - Lifetime DE69334018T2 (de) 1992-07-07 1993-07-07 DNS-Sonde spezifisch für Staphylococcus epidermidis
DE69334094T Expired - Lifetime DE69334094T2 (de) 1992-07-07 1993-07-07 Sonde zur Diagnose einer ansteckenden Krankheit verursacht durch Staphylococcus aureus
DE69334060T Expired - Lifetime DE69334060T2 (de) 1992-07-07 1993-07-07 Sonde zur Diagnose einer ansteckenden Krankheit verursacht durch Pseudomonas Aeruginosa
DE69334090T Expired - Lifetime DE69334090T2 (de) 1992-07-07 1993-07-07 Sonde zur Diagnose einer ansteckenden Krankheit verursacht durch Staphylococcus aureus

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE69333887T Expired - Lifetime DE69333887T2 (de) 1992-07-07 1993-07-07 Sonde zur Diagnose einer ansteckenden Krankheit verursacht durch Staphylococcus Epidermidis

Family Applications After (8)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE69333958T Expired - Lifetime DE69333958T2 (de) 1992-07-07 1993-07-07 Sonde zur Diagnose einer ansteckenden Krankheit verursacht durch Staphylococcus aureus
DE69333872T Expired - Lifetime DE69333872T2 (de) 1992-07-07 1993-07-07 Sonde zur Diagnose einer ansteckenden Krankheit verursacht durch Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae oder Enterobacter cloacae
DE69333008T Expired - Lifetime DE69333008T2 (de) 1992-07-07 1993-07-07 Sonde zur diagnose einer ansteckenden krankheit
DE69334028T Expired - Lifetime DE69334028T2 (de) 1992-07-07 1993-07-07 DNS-Sonde spezifisch für Staphylococcus epidermidis
DE69334018T Expired - Lifetime DE69334018T2 (de) 1992-07-07 1993-07-07 DNS-Sonde spezifisch für Staphylococcus epidermidis
DE69334094T Expired - Lifetime DE69334094T2 (de) 1992-07-07 1993-07-07 Sonde zur Diagnose einer ansteckenden Krankheit verursacht durch Staphylococcus aureus
DE69334060T Expired - Lifetime DE69334060T2 (de) 1992-07-07 1993-07-07 Sonde zur Diagnose einer ansteckenden Krankheit verursacht durch Pseudomonas Aeruginosa
DE69334090T Expired - Lifetime DE69334090T2 (de) 1992-07-07 1993-07-07 Sonde zur Diagnose einer ansteckenden Krankheit verursacht durch Staphylococcus aureus

Country Status (11)

Country Link
US (5) US5807673A (de)
EP (10) EP0652291B1 (de)
JP (4) JP2798499B2 (de)
KR (1) KR0159071B1 (de)
AT (10) ATE328118T1 (de)
AU (1) AU684250B2 (de)
CA (1) CA2139847C (de)
DE (10) DE69333887T2 (de)
DK (8) DK1498495T3 (de)
TW (1) TW256881B (de)
WO (1) WO1994001583A1 (de)

Families Citing this family (34)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20020055101A1 (en) 1995-09-11 2002-05-09 Michel G. Bergeron Specific and universal probes and amplification primers to rapidly detect and identify common bacterial pathogens and antibiotic resistance genes from clinical specimens for routine diagnosis in microbiology laboratories
US6001564A (en) * 1994-09-12 1999-12-14 Infectio Diagnostic, Inc. Species specific and universal DNA probes and amplification primers to rapidly detect and identify common bacterial pathogens and associated antibiotic resistance genes from clinical specimens for routine diagnosis in microbiology laboratories
JP3571378B2 (ja) * 1994-09-30 2004-09-29 扶桑薬品工業株式会社 感染症診断用プローブ
US6905670B2 (en) * 1995-03-28 2005-06-14 The General Hospital Corporation Methods of screening compounds useful for prevention of infection or pathogenicity
AUPN350795A0 (en) * 1995-06-13 1995-07-06 Australian National University, The Nucleic acid molecule and its uses in determining pathogenicity of Staphylococcus
US5994066A (en) * 1995-09-11 1999-11-30 Infectio Diagnostic, Inc. Species-specific and universal DNA probes and amplification primers to rapidly detect and identify common bacterial pathogens and associated antibiotic resistance genes from clinical specimens for routine diagnosis in microbiology laboratories
US6107071A (en) * 1996-09-24 2000-08-22 Smithkline Beecham Corporation Histidinol dehydrogenase
US6255072B1 (en) 1996-09-30 2001-07-03 Smithkline Beecham Corporation spsA polynucleotides
US20030049636A1 (en) 1999-05-03 2003-03-13 Bergeron Michel G. Species-specific, genus-specific and universal DNA probes and amplification primers to rapidly detect and identify common bacterial and fungal pathogens and associated antibiotic resistance genes from clinical specimens for diagnosis in microbiology laboratories
US20100267012A1 (en) 1997-11-04 2010-10-21 Bergeron Michel G Highly conserved genes and their use to generate probes and primers for detection of microorganisms
JP3520172B2 (ja) * 1997-03-25 2004-04-19 扶桑薬品工業株式会社 クレブシェラ・ニューモニエ菌に起因する感染症の診断用プローブ
JP2002516571A (ja) * 1997-05-06 2002-06-04 ヒューマン ジノーム サイエンシーズ，インコーポレイテッド Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓポリヌクレオチドおよびポリペプチド
US7060458B1 (en) * 1997-08-14 2006-06-13 Wyeth Nucleic acid and amino acid sequences relating to Staphylococcus epidermidis for diagnostics and therapeutics
US6914131B1 (en) * 1998-10-09 2005-07-05 Chiron S.R.L. Neisserial antigens
US6610836B1 (en) 1999-01-29 2003-08-26 Genome Therapeutics Corporation Nucleic acid amino acid sequences relating to Klebsiella pneumoniae for diagnostics and therapeutics
GB9911683D0 (en) * 1999-05-19 1999-07-21 Chiron Spa Antigenic peptides
BR0014370A (pt) 1999-09-28 2002-11-05 Infectio Diagnostic Inc Genes altamente conservados e seu uso para gerar sondas de ácido nucléico e preparadores de amplificação especìficos em espécie, especìfico em gênero, especìficos em famìlia, especìficos em grupo e universais para rapidamente detectar e identificar microorganismos algais, amebianos, bacterianos, fúngicos e parasitas de espécimes clìnicos para diagnose
KR100353506B1 (ko) * 1999-10-04 2002-09-19 제일제당주식회사 녹농균 동정 및 감염 진단용 프라이머
US6703492B1 (en) 1999-11-09 2004-03-09 Smithkline Beecham Corporation Staphylococcus epidermidis nucleic acids and proteins
AU1478301A (en) * 1999-11-09 2001-06-06 Glaxo Group Limited Staphylococcus epidermidis nucleic acids and proteins
JP2003523754A (ja) * 2000-02-25 2003-08-12 ザ ジェネラル ホスピタル コーポレーション グラム陽性エンテロコッカスビルレンス因子のスクリーニング法
MXPA02008314A (es) * 2000-02-28 2002-12-09 Chiron Spa Expresion heterologa de proteinas de neisseria.
US7078584B2 (en) * 2000-03-17 2006-07-18 The General Hospital Corporation Salmonella typhimurium-infected Caenorhabditis elegans for identifying inhibitors of infection
WO2001073038A2 (de) * 2000-03-31 2001-10-04 Lonza Ag Verfahren zur biotechnologischen herstellung von l-alaninol
US7112716B2 (en) * 2000-04-06 2006-09-26 The General Hospital Corporation Methods for screening and identifying host pathogen defense genes
WO2002099133A1 (fr) * 2001-05-31 2002-12-12 Fuso Pharmaceutical Industries, Ltd. Procede ameliore de detection et d'identification de micro-organismes causes d'infections
EP1818402A3 (de) * 2001-05-31 2008-04-02 Fuso Pharmaceutical Industries, Ltd. Verfahren zur Beurteilung der Phagozytenfunktion und dessen Anwendung
US20040161741A1 (en) 2001-06-30 2004-08-19 Elazar Rabani Novel compositions and processes for analyte detection, quantification and amplification
US6696254B2 (en) * 2001-11-21 2004-02-24 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Detection and identification of enteric bacteria
JP2004089046A (ja) * 2002-08-30 2004-03-25 Fuso Pharmaceutical Industries Ltd カンジダアルビカンス菌の検出用プローブおよびそれを用いた方法
JP2004313181A (ja) 2003-04-02 2004-11-11 Canon Inc 感染症起炎菌検出用プローブ及びプローブセット、ならびに担体及び遺伝子検査方法
US20090035767A1 (en) * 2006-11-28 2009-02-05 Canon Kabushiki Kaisha Primer for bacterium genome amplification reaction
EP2503008B1 (de) 2007-04-19 2015-04-01 Molecular Detection Inc. Verfahren, Zusammensetzungen und Kits zur Erkennung und Analyse von Antibiotika-resistenten Bakterien
WO2009152298A1 (en) * 2008-06-13 2009-12-17 Zeus Scientific, Inc. Methods, compositions and and diagnostic kits for the detection and treatment for staphylococcal nasal decolonization using achromopeptidase

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4652517A (en) * 1984-06-11 1987-03-24 Diagnostic Research Limited Partnership Methods for the in vitro detection and identification of unknown pathogens or genetic entities
US5047334A (en) * 1987-06-30 1991-09-10 Repligen Corporation Novel prokaryotic expression and secretion system
US5004682A (en) * 1987-11-02 1991-04-02 Olin Corporation Method and kit for detecting live microorganisms in chlorine- or bromine-treated water
AU623889B2 (en) * 1988-04-20 1992-05-28 Fuso Yakuhin Kogyo Kabushiki Kaisha Method for diagnosis of infectious diseases and method of detecting and identifying microorganisms
EP0377711A1 (de) * 1988-06-20 1990-07-18 Luminis Pty. Limited Dns-sonden für serotypierung
NL8900670A (nl) * 1989-03-17 1990-10-16 Stichting Tech Wetenschapp Polynucleotide-probe, werkwijze en kit voor het identificeren en opsporen van gram-negatieve bacterien.
DE69022167T2 (de) * 1989-05-23 1996-02-15 Amoco Corp Nukleinsäuresonden zum nachweis von staphylococcus aureus.
NL9002157A (nl) * 1989-11-27 1991-06-17 U Gene Research Bv Dna fragmenten en daarop gebaseerde dna-probes en primers.
ES2056261T3 (es) * 1990-02-10 1994-10-01 Nestle Sa Un ensayo del dna para el lactobacilius helveticus.
WO1992005281A1 (en) * 1990-09-14 1992-04-02 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method of detecting mesitylene-cephem-resistant staphylococcus aureus

Also Published As

Publication number Publication date
DE69334018T2 (de) 2006-11-09
DE69333872D1 (de) 2005-10-20
DE69334094D1 (de) 2007-01-11
US5770375A (en) 1998-06-23
EP1329518A2 (de) 2003-07-23
EP1498496B1 (de) 2006-05-17
ATE241702T1 (de) 2003-06-15
ATE346956T1 (de) 2006-12-15
US5798211A (en) 1998-08-25
DE69334060T2 (de) 2007-03-01
DE69334060D1 (de) 2006-10-12
JP2965544B2 (ja) 1999-10-18
ATE326551T1 (de) 2006-06-15
EP1167542A2 (de) 2002-01-02
EP0652291A4 (de) 1999-08-18
JPH10304897A (ja) 1998-11-17
JPH10304896A (ja) 1998-11-17
EP1329519A2 (de) 2003-07-23
DE69334080D1 (de) 2006-12-14
EP1167543A3 (de) 2004-01-07
EP1329518B1 (de) 2006-11-22
DE69334090T2 (de) 2007-05-10
DE69333958T2 (de) 2006-08-03
JP2798499B2 (ja) 1998-09-17
EP1329519A3 (de) 2004-01-07
KR0159071B1 (ko) 1998-11-16
DE69334028T2 (de) 2007-05-10
EP1167543A2 (de) 2002-01-02
ATE346167T1 (de) 2006-12-15
EP1160334A3 (de) 2004-01-02
DE69333872T2 (de) 2006-06-14
AU4513593A (en) 1994-01-31
EP1329520A3 (de) 2003-12-17
EP1498495A2 (de) 2005-01-19
JP2965543B2 (ja) 1999-10-18
ATE304609T1 (de) 2005-09-15
DE69333887T2 (de) 2006-06-22
DK1329520T3 (da) 2006-12-27
EP0652291A1 (de) 1995-05-10
EP1498495A3 (de) 2005-03-09
DE69334090D1 (de) 2007-01-04
WO1994001583A1 (en) 1994-01-20
US5763188A (en) 1998-06-09
EP0652291B1 (de) 2003-05-28
DE69333887D1 (de) 2006-03-02
CA2139847A1 (en) 1994-01-20
DE69333958D1 (de) 2006-02-02
DK1329519T3 (da) 2006-05-08
EP1329519B1 (de) 2005-12-28
KR950702640A (ko) 1995-07-29
EP1498495B1 (de) 2006-05-31
ATE328118T1 (de) 2006-06-15
DK1160334T3 (da) 2007-01-08
DK1498495T3 (da) 2006-10-09
EP1329518A3 (de) 2003-12-10
ATE338141T1 (de) 2006-09-15
ATE344333T1 (de) 2006-11-15
EP1498496A2 (de) 2005-01-19
DE69334018D1 (de) 2006-06-22
DE69333008T2 (de) 2004-02-05
EP1167543B1 (de) 2005-10-19
EP1167542A3 (de) 2003-12-17
EP1498496A3 (de) 2005-03-09
EP1167544A3 (de) 2004-03-03
US5807673A (en) 1998-09-15
DK1329518T3 (da) 2006-12-27
DK0652291T3 (da) 2003-06-23
JPH10304895A (ja) 1998-11-17
DE69333008D1 (de) 2003-07-03
TW256881B (de) 1995-09-11
US5853998A (en) 1998-12-29
DK1498496T3 (da) 2006-09-18
EP1167544A2 (de) 2002-01-02
EP1160334B1 (de) 2006-08-30
EP1167544B1 (de) 2005-09-14
EP1329520A2 (de) 2003-07-23
JP3026789B2 (ja) 2000-03-27
ATE307200T1 (de) 2005-11-15
DE69334094T2 (de) 2007-05-16
EP1167542B1 (de) 2006-11-02
AU684250B2 (en) 1997-12-11
CA2139847C (en) 2002-05-21
DE69334028D1 (de) 2006-07-06
EP1160334A2 (de) 2001-12-05
EP1329520B1 (de) 2006-11-29
ATE314467T1 (de) 2006-01-15
DK1167542T3 (da) 2006-12-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DE69334080T2 (de) Sonde zur Diagnose einer ansteckenden Krankheit verursacht durch Enterococcus Faecalis
DE69316801T2 (de) Spezies-Spezifische Oligonukleotide gegen Bifidobakterien und Verfahren zum Nachweis unter Verwendung derselben
DE3650317T2 (de) Test zum nachweis von kampylobakter.
DE69333808T2 (de) Sonde für die diagnose von candida-infektionen
DE69529758T2 (de) Sonde für die diagnose von infektiösen erkrankungen
DE69735562T2 (de) Sonden zur Erkennung und Identifizierung von Helicobacter Pylori
DE69821344T2 (de) Sonden zum nachweis von durch streptococcus pyogenes hervorgerufenen infektionen
DE69821341T2 (de) Sonden zum nachweis von infektion durch klebsiella pneumoniae

Legal Events

Date Code Title Description
8364 No opposition during term of opposition