JPS631973A - 反応性重合体粒子及びその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 金満穴す濃度のエポキシ基全有することｔ″特徴する反
応性重合体粒子。

（２）　グリシジル（メタ）アクリレート単量体単位を
有する重合体粒子と１分子中にアミノ基及び／又はイミ
ノ基を有し、且つ該アミノ基及び／又はづミノ基の窒素
原子に結合する水素原子の数が２個であるも１１化合物
とを反応させ、次いで、得られ几重合体粒子と分子中に
エポキシ基を３個以上有するエポキシ化合物と全反応さ
せることを特徴とする反応性重合体粒子の製造方法。

（３）　グリシジル（メタ）アクリレート単り体単位全
有する重合体ね子と、分子中にアミノ基及び／又μイミ
ノ基を有し、且つ該アミ７基及び／又はイミノ基の窒素
原子に結合する水素原子の数が３個以上である含窒素化
合物とを反応させ、次いで、侮られた重合体粒子と分子
中にエポキシ基金２個以上有するエポキシ化合物とを反
応させることｔ％徴とする反応性重合体粒子の製造方法
。

（４）　　グリシジル（メタ）アクリレート単量体単位
を有する重合体粒子にアミノ基及び／又はイミノ基とさ
らにエポキシ基とが導入されてなる反応性重合体粒子で
あって、該反応性重合体粒子の表面に於ける窒素原子の
＠腿をＣＮ（μｍｏｔ・７ｇ−反応性重合体粒子）、エ
ポキシ基のｍ　ＰＩＬ’ｔ　Ｃｙｔｐｘ　（μｍｏＬ＊
／９−反応性重合体枚反応性重合体枚子 ０式％ を満たす濃度のエポキシ基含有する反応性重合体粒子ニ
ジなること’を特徴とする免疫診断用試薬の担体。

３、発明の詳細な説明 （産業上の利用分野） 本発明は、水媒体中で分散安定性のよい反応性重合体粒
子を提供するものである。特に酵素、細菌、ウィルス、
毒素、薬物、及び免役活性物質などを固定化して診断用
試薬として好適に使用しうる反応性重合体粒子及びその
製造方法を提供するものである。

（従来の技術及び発明が解決しようとする問題点）抗原
・抗体反応’ｉ＋ｔｔ用する免役学的検査において、凝
集反応は沈降反応、袖体結合反応と共に、あるいはこれ
らに比して著しく簡便かつ鋭敏な反応として利用されて
いる。そして、凝集反応は。

遊離細胞や細菌膜表面に局在する抗原を検出する反応と
共に、抗原精製技術の進歩にニジ％異性の冒い抗血清が
得られることに１って、特異性の尚い抗体を血球粒子、
ベントナイト粒子、カオリン粒子、ラテックス粒子かど
の粒子担体に固定させておき、対応する抗原を凝集反応
［工って検査するなど、臨床検査における応用範囲が著
しく拡大している。

免疫学的に集反応用としての担体はｉ々のものが公知で
、該相体を使用した種々の診断用試薬が知られている。

これらを大別すると免疫活性物質を物理的に吸着し友診
断用試薬と免疫活性物’ｊｔｋ共有結合で結合させた診
断用試薬になる。これらの試薬にはそれぞれ一長一知が
あシ現在なお完全に満足出来る診断用試薬は存在しない
。

診断用試薬の担体としては、−般に重合体粒子が用いら
れており１診断用試薬に適した重合体粒子の開発が望ま
れている。

かくして、免疫活性物質を固定化した担体の非特異的縦
集反応を抑制することと、保存安定性を高めるために数
多くの方法が開発されている。これらの方法に、免役活
性物ＩｊＭを固定化した担体に保睦コロイドを添加する
方法と、担体を親水性重合体粒子にする方法に大別され
る。前者の方法については、例えば、免疫活性物質を担
体に固定化し几後に、牛血清アルブミン、ゼラチンなど
の親水性蛋白質ｔ−添加する方法が一般的Ｉ／ｃよ〈採
用されているが、検定混合物中で非特異的な蛋白質−蛋
白質相互作用に起因する妨害作用が指摘されている（特
開昭５６−１５８９４７号公報）。また後者の方法につ
いて１例えは、特開昭５６−３０４０５号公報、４ｉＦ
開昭５６−１４１５５９号公報には繰返し単位が２．３
−ジオキシプロピルメタクリレート単位から成る親水性
架橋共重合体粒子を用いる方法が、また％開昭５７−１
３５８０１号公報にはスチレン−グリシジルメタクリレ
ート共重合体粒子を合成し、エポキシ基を加水分解して
ジヒドロキジル基に変換して製氷性重合体粒子を得る方
法が提案されている。これらの方法は極めて秀れた方法
である。しかし、親水性基であるジヒドロキジル基濃度
１に増加させると重合体粒子の安定性を向上させること
が可能であるが、免疫活性物質を共有結合させる活性点
濃度が減少するために免疫活性物質の固定化量が減少す
るとか、あるいは免疫活性物質を吸着固定化するに有効
な疎水性表面が減少するために、免疫学的凝集反応の鋭
敏性が著しく低下する欠点がある。このように免役活性
物質の固定化担体の免疫学的凝集反応性と物理的安定性
を同時に満足させることは従来極めて１難であった。

（間眩点を解決するための手段） 本発８Ａ＠等は、免疫学的凝集反応の鋭敏性に優れると
共に、非％異的襞集反応が低く、かつ保存安定性の優れ
た免疫活性物質の固定化担体となる重合体粒子について
鋭意研究を重ねて来た結果、グリシジル（メタ〕アクリ
レ−）Ａｍ体単位を有する重合体粒子にアミノ基及び／
又はイミノ基とエポキシ基とがさらに導入され、アミノ
基及び／又はイミノ基に由来するＳ１累原子洟度に対し
て特定量のエポキシ基含有する反応性重合体粒子を用い
ることにより、前記４１ｉｌＬ望を満す優れた効果をも
几らすことを見い出した。

即ち、本発明はグリシジ／Ｉ／（メタ）アクリレート単
１体重位を有する重合体粒子にアミノ基及び／又はイミ
ノ基とさらにエポキシ基とが導入されてなる反応性重合
体粒子であって、該反応性重合体粒子の表面に於ける窒
素原子の濃度をＣＮ（μｍ赫Ｖｙ−反応性重合体粒子）
、エポキシ基の濃度全ＣＫＰＸ　（μｍｏｔｅ／ｊｉ−
反応性］ｋ合体粒子〕とするとき、次式 ％式％ を満几す濃度のエポキシ基を有することを％微とする反
応性重合体粒子である。

本発明に於ける重合体粒子は、次式 （但し、Ｒは水素原子又はメチル基である。）で示され
るグリシジル（メタ）アクリレートＪ４ＬｊｌＬ体重位
會有する。本発明の重合体粒子は、上記したグリシジル
（メタ）アクリレートＩＪＩｉ、ｔｈＬ体単位のみ含有
するものであっても工＜、該グリシジル（メタ）アクリ
レート単量体単位と他０ＪＩＬ蓋体単位と會有するもの
であっても良い。上記した他の単１体重位としては、グ
リシジル（メタ）アクリレートと共１合可能なモノマー
で示される単量体却位であれはどのよつなものでもよい
。就中１本発明に於いて好ましい他の単ｌ−体単位は、
次式（但し、Ｒ１は水素原子又はアルキル基であｐ、Ｒ
２はハロダン原子、置換若しくは非置換のフェニル基、
アルコキシカルボニル基又はアシルオキシ基である。） で示される疎水性ビニル糸車ｊ体単位である。ここで、
フェニル基の置換基としては特に限定されないが、ハロ
ダン原子、ハロアルキル基、アルキル基等を挙けること
ができる。このような疎水性ビニル糸ＨＬｂ体単位の中
でもＲ２がｆ挟着しくは非置換のフェニル基、又は塩素
原子である疎水性ビニル系単量体単位が好ましい。また
、他の単量体単位としてμ次式 （但し、Ｒ３は水素原子又はカルボキシル基であり、Ｒ
４は水素原子又はアルキル基であり、Ｒ６はカルボキシ
ル基、スルホニルフェニル基、ヒドロキで示される基（
但し、Ｒ′はアルキレン基、ｎは１〜２０の整数である
。）である。） で示される親水性ビニル糸車蓋体単位を採用することが
できる。

上記したグリシジル（メタ）アクリレートａ量体単位の
重合体粒子に占める割合は待に限定されないが、得られ
る反応性重合体粒子に免役活性物質を吸着させて診断用
試薬として使用する場合は、グリシゾル（メタ）アクリ
レートｊｌｉｉ体単位が０．０５〜２０５〜２０モル価
Ｃｏ、　１〜１５モル価であることが好゛ましい。′ｆ
、友、免役活性物質を共有結合させることによって診断
用試薬として使用する場合は２０〜１００モル饅、さら
に３０〜９９モル−であることが好ましい。

上記したグリシジル（メタ）アクリレート単量体単位以
外の他のＪｎＬｉ体としては、前記した疎水性ビニル糸
車１〔体重位及び親水性ビニル糸車蓋体１１位を用いる
ことが好′ましいが、親水性ビニル糸単−体単位の割合
が多くなり過ぎると反応性重合体粒子の分散安定性に不
都合を生じることがある。

従って、本発明の反応性重合体粒子金秋看による診断用
試薬として用いる場合は、親水性ビニル糸車−体はグリ
シジル（メタ）アクリレート単量体に対して０〜２０モ
ル価の範囲で、また、共有結合による診断用試薬として
用いる場合は、グリシツル（メタ）アクリレート単量体
に対して０〜５０モル★の範囲で用いることが好ましい
。

以上のような組成とすることにＬって、−般に、吹出１
のエポキシ基が０．０５〜４　（Ｊ　Ｏμｍｏｔ＊／ｇ
　−Ｎ合体粉子、エリ好ましく　Ｂ　０．１〜２　Ｕ　
ＯｌｔｍｏＬｅ／ｉ−重合体粒子の重合体粒子を得る仁
とができる。

以上に述べｆｃ重合体粒子の製造方法は、公知の方法が
イロ」ら制限なく使用し祷る。即ち、グリシジル（メタ
）アクリレートを単独で重合するととに工って、或いは
、グリシジル（メタ）アクリレートと共１合可能なビニ
ル糸車倉体とを共１合させることによって、上記の重合
体粒子ヲ得ることができる。グリシジル（メタ）アクリ
レートと共重合させるビニル糸単量体の代表的なもの？
Ｉｌ−挙げれば、スチレン、ビニルトルエン、クロルメ
チルスチレン、クロルスチレン、塩化ビニル、臭化ビニ
ル、メチ／Ｌ／（メタ）アクリレート、エチル（メタ）
アクリレート、デルビル（メタ）アクリレート、酪酸ビ
ニル等の疎水性ビニル糸車鍾体、ま友、アクリル酸、メ
タクリル酸、マレイン酸、スチレンスルホン酸、２−ヒ
ドロキシエチルメタアクリレート、グリセロールモノメ
タクリレ〜ト、ホリエチレングリコールモノメタクリレ
ート尋の親水性ビニル糸単量体などが例示される。これ
らのビニル糸Ｓ菫体は２ね以上全混合して用いることも
できる。さらにまた、修景に応じて、ジビニルベンゼン
、エチレンダリコールジメタクリレート、ジｘｆレンゲ
リコールジメタクリレート、ビスフェノ−／ｌ／Ａｌ／
サジノルエーテル等の架橋性単量体も好適に使用できる
。

これらの単量体を用いて重合体粒子を得るための１合方
法は特に限定されず、公知の方法が好適に採用される。

例えは、アニオン性界面活性剤、非イオン糸界面活性剤
の存在下に水媒体中で水湿性ラジカル翔始剤全用いて乳
化重合する方法、界拘活性剤を使わずに水媒体中で水溶
性ラジカル開始剤を用いて不均一１合する方法、部分鹸
化ポリビニルアルコール。ポリビニルピロリドン等の保
護コロイド存在下に懸濁重合する方法、ビニル糸車９体
は溶解するが重合体は溶解しない有機溶媒中で沈絃１合
する方法等が採用される。

本発明で使用する反応性重合体粒子の平均粒子径は特に
限定されなりが、凝集反応による診断用ｗＡ、栗に用い
る場合には、その鋭敏性や保存安定性を良好にするため
に一般には０．０５乃至１０ミクロンの範囲内にあるこ
とが好ましい。さらにま几、該反応性重合体粒子は１粒
子径の分散値の小さい方が、再現性が良いために望まし
い。従って、このような粒子径となるような重合体粒子
を得ることが好ましい。

本発明の反応性重合体粒子は、上記の重合体粒子にアば
ノ基及び／又はイミノ基が導入され、さらにエポキシ基
が導入されたものであり、反応性重合体粒子の表面に於
ける窒素原子の良度をＣＭ（μｒｎｏＬ・７ｇ−反応性
重合体粒子）、エポキシ基の鎖度をＣＩＩＰ！　（μｍ
ｏＡ・／Ｉ−反応性重合体粒子）とするとき、下記式〔
Ａ〕 ＣＩＰ！≧０．６　Ｘ　Ｃｙ　　　　　　　　［Ａ）好
ましくは、下記式［Ｂ］ ＣＥＰ）Ｃａ２．８　Ｘ　ＣＮ　　　　　　　　［Ｂ］
さらに好ましくは、下記式ＥＣ） Ｃｗｐｘ≧１．　ＯＸ　ＣＭ　　　　　　　　［：Ｃ］
＋ｔｓたす濃度のエポキシ基を有する。アミノ基及び／
又はイミノ基の導入は、後述するように分子中にアミノ
基及び／又はイミノ基を有し、且り肢アミノ基及び／又
はイミノ基の蟹累原子に結合する水素原子の数が２個以
上である富窒素化合物とグリシジル（メタ）アクリレー
ト単量体単位を有する重合体粒子とを反応させることに
よって行なう。即ち、含Ｉｍ素化合物のアミノ基及び／
又はイミノ基とグリシジル（メタ）アクリレート単量体
単位のエポキシ基との反応を利用する。この反応は、下
記［１］又はＣＩ）のように進行しているものと推測で
きる。

このようにして導入されたアミノ基及び／又はイミノ基
は、複数個のエポキシ基を有するエポキシ化合物のエポ
キシ基との反応ｔ／ｃ利用されて、ニーキシ基の導入が
行なわれる。この場合、先にアミノ基及び／又はイミノ
基−の導入を行なう究めに用いられた含窒素化合物のア
ミノ基及び／又はイミノ基の窒素原子に結合する水素原
子の数が２個である場合には、エポキシ基を分子中に３
個以上有するエポキシ化合物金層いる。また、アミノ基
及び／又にイミノ基の窒素原子に結合する水素原子の数
が３個以上である言霊素化合物を用い友場合には１分子
中にエポキシ基を２個以上有するエポキシ化合物が用い
られる。この反応は次の［１１１３又扛［ＩＶ）のよう
に進行しているものと推測される。

ＣＨ２−ＣＨ−Ｒ，−ＣＨ−ＣＨ２［ＩＶ、１晶　　ゝ
０′ このようにアミノ基及び／又はイミノ基とエポキシ基と
を導入することにより、当初の重合体粒子のグリシジル
（メタ）アクリレート単量体単位に基つくエポキシ基の
濃度ニジも高い濃度のエポキシ基を反応性重合体粒子に
導入することができる。即ち１反応性京合体粒子の表面
に於けるエポキシ基の濃度′ｔ−前述のとお’）　ＣＥ
ＰＸ（ｉｔｍｏＬｅ／９−反応性重合体粒子）とし、ア
ミン基、イミノ基、エポキシ基の導入前の重合体粒子の
グリシジル（メタ）アクリレート単−体単位に基つくエ
ポキシ基の′＃展をＧ（μｍ　ｏｌｅ／’Ｊ’−反応性
重合体粒子〕とすると、重合体粒子中のグリシツル（メ
タ）アクリレート単量体単位が２０〜１００モル係の重
合体粒子を用い九場合には ｃ’ｘｐｘ≧１．１ＸＧ 好ましくは ＣＭＰＫ≧１．５ＸＧ を満たすエポキシ基の濃度を有する反応性重合体粒子と
することができ、重合体粒子中のグリシジル（メタ）ア
クリレート単量体単位が０４０５〜２０モル嗟の重合体
粒子を用込九場合には、次式０式％ ｔＳたす反応性重合体粒子とすることも可能である。

しかも、アばノ基及び／又はイミノ基とニーキシ基の導
入により親水性である水酸基が生成し、このために分散
安定性の優れた反応性重合体粒子が得られる。

本発明の反応性重合体粒子のエポキシ基の濃度が、前記
式［Ａ］で示される値未満の場合には、アミノ基及び／
又はイばノ基の導入蓋に応じてエポキシ基の導入量が増
加してｂなりことを示す。即（］７） ち、アミノ基及び／又はイばノ基とエポキシ基の導入前
の重合体粒子のグリシジル（メタ）アクリレート単量体
単位に基づくエポキシ基の濃度Ｇに比べて、ア〈ノ基及
び／又はイミノ基とエポキシ基とを導入後の反応性重合
体粒子のエポキシ基の濃度ｃｚｐｘの方が小さめことに
なる。このような、反応性重合体粒子に免疫活性物質を
吸着させて診断用試薬としても、エポキシ基濃度が当初
の重合体粒子のそれよりも減少し、その開環によって生
成する水酸基濃度が減少する念めに、診断用試薬の安定
性が低下する。また、上記のような反応性重合体粒子に
免疫活性物質を共有結合させて診断用試薬としても、免
疫活性物質の共有結合に用贋るエポ午シ基濃度が当初の
重合体粒子のそれよりも減少することによって、共有結
合で固定される免疫活性物質の量が減少し、このｔめ診
断用試薬の鋭敏性が低下する。

前記した特定普のエポキシ基の濃度を有する反応性重合
体粒子の製造方法としては、次の（イ）及び（ロ）の方
法が採用される。

（イ）　グリシ、ゾル（メタ）アクリレート単量体重位
を有する重合体粒子と１分子中にアミノ基及び／又はイ
ミノ基を有し、且つ該アミノ基及び／又はイミノ基の窒
素原子に結合する水素原子の数が２個である含窒素化合
物とを反応させ、次いで、得られた重合体粒子と分子中
にエポキシ基を３個以上有する工がキシ化合物とを反応
させることを特徴とする反応性重合体粒子の製造方法。

（ロ）　グリシジル（メタ）アクリレート単量体単位を
有する重合体粒子と、分子中にアミノ基及び／又仁イミ
ノ基を有し、且つ核アミノ基及び／又はイミノ基の窒ｘ
ｉ子に結合する水素原子の数が３個以上である含窒素化
合物とを反応させ１次いで、得られた重合体粒子と分子
中にエポキシ基を２個以上存するエポキシ化合物とを反
応させること全特徴とする反応性重合体粒子の製造方法
。

本発明に於いてアミノ基及び／又はイミノ基を有し、該
アミノ基及び／又はイミノ基の菫素原子に結合する水素
原子の数が２個である含窒素化合物としては公知のもの
が特に制限されず採用される。例えば、　Ｎ、Ｎ’−ジ
メチルエチレンジアミン、Ｎ、Ｎ’−エチルエチレンシ
アばン、１．３−ビス〔トリス（ヒドロキシメチル）メ
チルアｉノ〕ゾロノダン、Ｎ　、Ｎ’−ツメチル−１，
６−ジアばノヘキサン、Ｎ、Ｎ’−ジエチル−１，６−
ジアイノヘキサン、Ｎ　、Ｎ′−シアセチルエチレンシ
アばン、等のイばノ基を有するイずノ化合物を挙げるこ
とができる。

さらにま九、次式に示す如く１当量のゾアンノ化合物と
２当量のモノエポキシ化合物の付加反応生成物が好適に
採用される。

例えば、シアイノエタン、シアはノデロノｆン、シアず
ノブクン％　３＃３′−シアずノー２−デロノ母ノール
、ゾエチレングリコールピス（３−アミノプロピル）エ
ーテル、等のシアばノ化合物１当量とエチレンオキシド
、プロピレンオキシド％　１．２−エポキシブタン、グ
リシドール、メチルグリシゾルエーテル、グリセロール
グリシジルエーテル、等のモノエポキシ化合物２当量の
付加反応生成物が好適に採用される。

本発明に於いてアミノ基及び／又はイミノ基を有し、該
アミノ基及び／又はイミノ基の窒素原子に結合する水素
原子の数が３以上である含窒素化合物としては、公知の
ものが特に制限されず採用される。例えば、ジアミノエ
タン、シア２ノプロノ臂ン、ジアミノブタン、３．３’
−ジアミノジデｐピルアミンｓ　３　ｅ　３’＊　３＃
−）リアミノトリプロピルアミン、Ｎ−（β−ヒドロキ
シプロピル）エチレンジアミン、ジエチレントリアミン
、トリエチレンテトラミン、テトラエチレンペンタミン
、ペンタエチレンへキサミン、ヘキサエチレンペンタミ
ン。

ポリオキシエチレンジアミン、等の多価アミノ化合物を
挙げることができる。

本発明に於いてエポキシ基を２個以上有するエポキシ化
合物としては、公知のエポキシ化合物が採用される１例
えは１．３−ブタジエンジエボキシド、１．４−７”タ
ンジグリシジルエーテル、エチレングリコールジグリシ
ジルエーテル、セカンダリ−ブチルフェノールソゲリシ
ジルエーテル、ゾロビレングリコールゾグリシジルエー
テル、グリセロールジグリシジルエーテル、１．６−ヘ
キサンシオールジダリシジルエーテル、ポリエチレング
リコールジグリシノルエーテル、グルコ−ストリグリシ
ジルエーテル、トリメテロ−〃プロノ臂ントリグリシジ
ルエーテル、ペンタエリスリトールトリグリシジルエー
テル、ペンタエリスリトールテトラグリシジルエーテル
、グルコーストリグリシジルエーテル、グルコーストリ
グリシジルエーテル、グルコシドトリグリシジルエーテ
ル、グリシツル（メタ）アクリレート勢の多価アミノ化
合物を挙けることができる。

本発明に於いて、グリシジル（メタ）アクリレート単量
体単位を有する重合体粒子と、アミノ基及び／又はイミ
ノ基を有するｆ窒素化合物との反応は、重合体粒子と重
合体粒子が有する特定量のエポキシ基と反応させるべき
含窒素化合物とを水媒体中、エポキシ基に不活性な緩衝
液中、あるいはエポキシ基とル応件の極めて久しくかつ
１＠体粒子を浴解させないメタノール、エタノール、イ
ンゾロパノール、アセトン、酢酸メチル、酢酸エチル、
等の水と親和性の大きい有機溶媒中、あるいはこれらの
混合縁体中で混合して反応すれＦｉよい。特に水媒体中
での反応が好ましく採用される。

また、反応温度は１、合体粒子の分子構造やエポキシ基
濃度、含窒素化合物の分子構造、及び反応媒体に工って
異なるが、−般的には４℃乃至１００℃、好１しくに４
℃乃至６０℃の範囲が好適に採用される。反応媒体に有
機電媒を用いる場合には重合体粒子全溶解させない反応
温度′ｌｋ選ぶことが重要である。さらにまた含窒素化
合物のｍ度は重合体粒子の分子構造、エポキシ基濃度、
含窒素化合物の分子構造、及び反応条件によって異なる
が、重合体粒子のエポキシ基濃度に対して２乃至５００
モル倍となるべく違べは良い。さらにまた、１に合体粒
子と含窒素化合物の混合方法は特に限定的でない。−般
的には、重合体粒子の懸濁媒体中へ含窒素化合物の溶液
を一括して添加する方法もしくＣま飯々添力１１する方
法、あるいは含窒素化合物の浴液中へ重合体粒子の懸濁
液全−括もしくは滴々添）Ｊ＋＋する方法が女Ｊましく
採用される。

以上の方法によってアミノ基及び／又はイミノ基が導入
され７ｃＪ合体粒子とエポキシ基を複数個有するエポキ
シ化合物の反応は、重合体粒子のアミノ基及び／又はイ
ミノ基と反応させるべきエポキシ化合物全水媒体中、エ
ポキシ基に不活性な緩勾准中、あるいはエポキシ基と反
応性の極めて欠し７くかつ重合体粒子を浴解させないメ
タノール。

エタノール、インゾロパノール、アセトン、酢酸メチル
、酢酸エチル、等の水と親和性の大きい有機溶媒中、あ
るいはこれらの混合媒体中で混合して反応すれはよい。

特に水媒体中での反応が好ましく採用される。また、反
応温度は重合体粒子の分子構造やアミノ基及び／又はイ
ミノ基Ｉ＃度、含窒素化合物の分子構造、及び反Ｙし媒
体に裏って異なるが、−般的には４℃乃至１００℃、好
ましくは４℃乃至（ｉ　０℃の範、囲が好適に採用され
る。反応媒体Ｖこ有機電媒を用いる場合には重合体粒子
全溶解させない反応温度を選ぶことがＩｉ景である。

さらにまたエポキシ化合物の濃度は重合体粒子の分子構
造、アミノ基及び／又はイミノ基濃度、工Ｉキシ化合物
の分子構造、及び反応条件によって異なるが、重合体粒
子の粒子表面のアミノ基及び／又はイミノ基濃度に対し
て１０乃至５００モル倍の範囲が好適に採用される。さ
らにまた反応時間は一概に限定できないが、−般には１
０分乃至１００時間が好ましく、更には３０分乃至５０
時間がニジ好ましく採用される。

本発明に於ける反応性重合体粒子の有するエポキシ基は
、反応性重合体粒子に免疫活性物質を吸着して診断用試
薬とする場合にはその大部分を、また、免疫活性物質を
共有結合に工り結合して診断用試薬とする場合には免疫
活性物質の共有結合に使用し友残りの大部分を以下の方
法によって親水基に変換することができる。

以下の方法により反応性重合体粒子のエポキシ基金取水
基に変換することに工す１診断用試薬の免疫学的凝集反
応の鋭敏性が優れると共に、非特）°ｒ的凝集反応が低
く、かつ保存安定性に優れる特徴がある。

（１）反応性ｌ−合体粒子を加熱加水分解するが、もし
くは酸性水浴液中で加水分解することに工りエポキシ基
金ソヒドロキシル基に変換する。

（２）　　２−メルカプトエタノール、２−メルカデト
デロノ卆ノール、３−メルトカプト−１，２−プロパン
ジオール、メルカプトペンタエリスリトール等のメルカ
プトアルカノール類と反応することにより、エポキシ基
をヒドロキシル基に変換する。

（３）　　エタノールアミン、プロパツールアミン、ジ
ェタノールアミン、２−アミノ−２−エチル−１，３−
プロパンジオール、トリス（ヒドロキシエチル）アミノ
メタン等のヒドロキシアミン類と反応することに工ｐ、
エポキシ基をヒドロキシル基に変換する。

（４）　　チメグリコール酸、チオプロピオン酸、等の
メルカプトカルボン酸類と反応することにニジ、エポキ
シ基をカルブキシル基に変換する。

（５）クリシン、Ｎ−１リス（ヒドロキシメチル）メチ
ルグリシン、等のカルボキシル化アミン類と反応するこ
とにより、エポキシ？＆ヲカル？キシル基に変換する。

（１）〜（５）の反応条件は本発明で用いる重合体粒子
に含蟹木化合物全反応させる条件に準じて行なえばよい
。さらにまた、本発明で得られた反応性重合体粒子に上
述の（１１〜（５）の親水化反応を行なう前に、前記（
イ）及びく口）に示した方法によりｔａ累化合物を反応
させ次いでエポキシ化合物を反応させる方法を複数回繰
返し行なうことも可能である。

このようにして得られた反応性重合体粒子のエポキシ基
の娘度は、前記した［Ａ］式を満足することが必要であ
るが、さらに、０．１〜１０００μｍａｌｅ／１７−反
応性重合体粒子、よシ好ましくは０．２〜５　Ｕ　Ｏμ
ｍｏ！Ａ／９−反応性重合体粒子であることが好ましい
。

本発明によ勺得られた反応性重合体粒子は、水媒体中で
の疎水性有機化合物の吸層剤、生体内での各種細胞、組
紙による貧食作用の観察用粒子、及び酵素、蛋白質ある
いは免役活性物質の固定化用粒子等に応用でき、特に免
疫活性物質をＩＪＢ？、着法吃しくに共有結合法で固定
化した診断用試薬は免役学的凝集反応性が太きいだけで
なく、分散安定性と保存安定性に優れる特徴がある。

以下に、本発明で得られた反応性重合体粒子を診断用試
薬として用いた壜１合について説明する。

本発明で得られた反応性重合体粒子に成層法もしくは共
有結合法によって固定化する免疫活性物質としては１％
に限定的でなく公知のものが使用出来る。代表的なもの
を例示すれは、例えば、変性ガンマグロブリン、抗核因
子、ヒトアルブミン、抗ヒトアルブミン抗体、イムノグ
ロブリンＧ　（ＩｇＧ）、抗ヒトＩｇＧ抗体、イムノグ
ロブリンＡ　（ＩｇＡ　）　。

抗ヒトＩｇＡ抗体、イムノグロブリンＭ　（ＩｇＭ　）
、抗ヒトＩｇＭ抗体、ストレプトリジンＯ、ストレプト
キナーゼ、ヒアルロンダーゼ、抗ストレプトリジン０抗
体、Ｃ−反応性蛋白知、抗Ｃ−反応性蛋白抗体、アルフ
ァーフエトプロティン（ＡＦＰ　）　。

抗ＡＦＰ抗体、楠胎児性抗原（ＣＥＡ　）　、抗ＣＥＡ
抗体、ヒト繊毛性ゴナドトロピン（ＨＣＧ　）　、抗Ｈ
ＣＧ抗体、抗ニストロｒン抗体、抗インシュリン抗体、
Ｂ型肝炎表向抗原（ＨＢｓ　）　、抗１１Ｂｍ抗体、梅
参トレポネマ抗！、Ｘ疹抗原、インフルエンザ抗Ｊｈ、
、袖体成分Ｃ１９、抗Ｃ１９抗体、抗Ｃ３，抗体、等の
公知の免疫活性愉＊’ｔあげることができる。

本発明で得られた反応性重合体粒子に固定化される該免
疫活性物質の量は、各検査項目＆Ｃ適している割合で反
応性重合体粒子に固定化させれは工〈、−概に限定され
ない。−般には、該免疫活性物質の量が多い程１診断用
試薬の鋭敏性が上がるため、鋭敏性ｔｙ求する場合には
、前記の反応性重合体粒子に飽和する迄、免疫活性物質
を吸着又は共有結合させることが好まし−。

本発明に工り得られた反応性重合体粒子は免疫活性物質
の固定化能力と親水性のバランスが極めて良く調節され
ているので、抗原又は抗体と反応性重合体粒子を緩衝液
又は生理食塩水などの水媒体中で混合し、抗原又は抗体
が化学的に変化しないように、そしてそれらの免役学的
性質を保持させるように、非常に温和な条件下に抗原又
は抗体を反応性重合体粒子表面に固定化させることがで
きるだけでなく、該媒体中で極めて安定性が高い特徴が
ある。反応性１合粒子表面に固定化され几免疫活性物質
の童は、重合体粒子の蛋白結合部位を飽和又はブロック
されるように辿ぶことか好ましいが、残存する蛋白結合
部位を免疫学的に不活性な適当な物餉でブロック又は不
活性化させることができる。

（効果及び作用） 本発明の反応性重合体粒子音用い几診断用試業は、免疫
学的に県反応の鋭敏性が大きめだけでなく、分散安定性
や保存安定性がすぐれるという特徴がある。その理由は
必ずしも明らかではないが、本発明者等は次のように推
測している。本発明の反応性重合体粒子は免疫活性物質
を共有結合法で固定化する千ポキシ基尋の１能基の数或
いは免疫活性物質を吸着する表面のエリアの広さと１分
散安定性と保存安定性に寄与する水酸基等の親水基の数
とが独立函数となっており、そのどちらも大きくするこ
とができるという特徴を有する。この事実は鹸断用試条
の合成上極めてｉｌｌな因子である。免役活性物ηを固
定化する官能基湿度或いは表面のエリアの広さが多けれ
ば多い程、診断用試薬の鋭敏性は向上するが、重合体粒
子の分散安定性と保存安定性が低下する欠点がある。−
万、重合体粒子の親水基嬢度が多ければ多い程診断用試
系の分散安定性と保存安定性が増加するが、鋭敏性が著
しく低下する欠点が生じる。しかしながら。

本発明の反応性重合体粒子は、これらの矛盾を解決し、
鋭敏性及び分散安定性の共に優れたものである。従って
、本発明の反応性重合体粒子は、新規な診断用試薬の開
発に於すて極めて１袂な位置を占めるものである。

以下に実施例及び比較例をｉけて本発明をさらに詳細に
説明するが、本発明にこれらの実施例に限定されるもの
ではない。

尚、実施例及び比較例に於ける窒Ｘ１Ｑ子及びエポキシ
基の足置は以下の方法により行なった。

（１）窒素原子の定− 反応性基合体粒子全乾燥後、三菱化成（株）製の微ｉ窒
素分析装置（モデルＴＮ−（Ｉ２型）を周込て窒素原子
の濃度（ＣＮ）全測定した。

（２）　　エポキシ基濃度の定量 重合体粒子及び反応性重合体粒子金１重ｉｉ％濃夏で＃
省水に分散した懸濁液１容と６−アミノカプロン酸全０
．５Ｍ−度に溶解した水溶液１容を混合し、）１１１＝
８にｐＡ製した後、６０℃で２４時間攪拌下に反応した
。反応抜蚕温で１過間蒸留水中で透析を繰返した彼、遠
心分離して重合体粒子を回収し、乾燥後、三菱化成（株
）製の微ｆｍ累分析装置（モデル、ＴＮ−０２型）全利
用してエポキシ基と反応したε−アミノカルボン酸ｉ＆
ｌ測定し、ε−アミノカプロン［１−反応しない重合体
粒子のブランク仙全差し引くことにエリ、重合体粒子及
び反応性重合体板子の弐面に於けるエポキシ基の濃度（
Ｃにｐｘ）を分析し几。

実施例１〜３及び比較例１〜２ （１）京盆体粒子の調製 攪拌機付きガラス製フラスコを情累置換した後に、＃留
水２７υ０ＣＣ７Ｊｌえて７０℃に保つ友後に、簀累雰
囲気ｆ、攪拌下に過硫酸カリウムを５．０ミリ七ル／ｌ
＠度になるようＶＣ院加した。次いでソー２−エチルへ
キシルスルホコハク酸１．５　、！ｉ’　ｋ乳化剤とし
て添加した後、７０℃に加温し几グリシジルメタクリレ
ート３０ミリモル、メタクリル酸３ミリモル、及びスチ
レン１００ミリモルの混合物を添加して１時間重合金行
なり几。その後スチレン２．６モルを定量ポンプで摘々
添加してから７０℃で２９時間攪拌下に重合した。１合
後、室温まで冷却してから、得られ定型合体粒子を濾紙
（Ａ２）で濾別して大きな凝集体を除いた。次いで透析
全行なった後に、遠心分離、蒸留水への再分散の操作を
繰返し几後に、イオン交換樹脂で脱イオン操作全行ない
、更に遠心分離と洗浄を行なって重合体粒子′ｌｉ−精
製し念。得られた重合体粒子の粒子径は０．２３２μｍ
であった。ま几、ｖｉ重合体粒子の表面に於けるエポキ
シ基濃度（Ｇ）は１．６１１ｍａム力−重合体粒子であ
った。

（２）反応性重合体粒子の１！１ｉ！製得られた重合体
粒子全２鼠：ｆｉ！％濃度で蒸留水に分散させた懸濁液
２００　ｍｌと第１表に示す官％ｉＹ累化合物を溶かし
た水浴液５０ｍを混合し、室温で７２時間攪拌下に反応
した。反応後、重合体粒子１１−遠心分離、蒸留水への
再分散の操作を繰返した後に、窒叱ｔ１ｔ、換してから
９８℃で２時間加熱することに工す重合体粒子の未反応
のエポキシ基を加水分解した。次いで、該重合体粒子を
２１血饅襄度で＃留水に分散させたに濁液１００−と第
１表に示したエポキシ化合物をＦ＋かした水′＃液１０
１００ａ　ｆ混合し、室温で攪拌下に７２時間反応した
。

反応後、遠心分離、蒸留水への再分散の操作を３回繰返
してＮ製することにより１本発明の反応性重合体粒子を
得た。得られ几反応性重合体粒子の輩累原子＃Ｆ度（Ｃ
Ｉ４）及びエポキシ基の１Ｍ度（ＣＥＰＸ）は第】表に
示す通りであった。さらに、該反応性重合体粒子を９８
℃で２時間加熱することにより反応性重合体粒子のエポ
キシ基金加水分解した。

次いで反ろ性重合体粒子を濾紙（Ａ２）で濾別した後に
、遠心分離、蒸留水への再分散の操作を３回繰返してハ
製した。

（刀　ヒ）ＩｇＧを固定化［７た反応性重合体ね子のル
Ｑ製 （２）で得られた本発明の反応性重合体粒子を固型分濃
度１：１（ｔ％でグリシン緩衝液に分散し友。本発明に
於いてグリシン緩衝液とはグリシン０．０５モル及び食
塩０．０５モルを水１）に溶解し、次いで２規定水酸化
す）　ＩＪウム水溶液でｐｉ−１’ｉ８．２に調製し、
さらにアジ化ナトリウム’ｋｌ、９添加したものである
。

本発明に於いてヒ）　ＩｇＧは、ヒト血清を飽和硫安で
塩析し、さらに透析を行ない精製したものを用いた。

ヒ）ＩｇＧをグリシン緩衝液にニジ希釈し１■／−に調
整する。次いで倍数希釈法に工りヒ）ＩｒＧ１ｒグリシ
ン緩衝液により希釈してヒ）ＩｇＧ希釈液を調製する。

１１量チ濃度の反応性重合体粒子分散液１容にヒ）Ｉｇ
Ｇ希釈液１容を加え攪拌し、室温下２時間放置する。次
いで遠心分離、グリシン緩衝液への再分散の操作を繰り
返えすことに工りヒ）　ＩｇＧを固定化した反応性重合
体粒子を洗浄した後に、グリシン緩衝液に固型分濃度を
０．５重量−になるように再分散させ、４℃で保存し友
。

（４）抗原・抗体反応 ヒ）ＩｇＧｋウサギに免疫して得た抗ヒトＩｇＧウサギ
血清を６０℃、３０分非削化処理を行かった。この血清
を以下抗ヒ）　ＩｇＧウサギ血清と呼ぶ。

抗ヒ）　ＩｇＧウサギ血清をグリシン緩衝液で２０倍に
希釈したものを原液とし、倍数希釈法により抗ヒトＩｇ
Ｇウサギ血清をグリシン緩衝液で希釈して抗と）　Ｉｇ
Ｇウサギ血清希釈液を調製する。抗原・抗体反応を行な
うためにガラス製１０大のホールグラスを用意し、グリ
シン緩衝液で希釈した抗ヒトＩｇＧウサギ血清を各ホー
ルに０．０４−加える。

次いでヒ）ＩｇＧ′ｆｒ固定化した反応性重合体粒子の
グリシン緩衝液分散液を各ホールに０．ｏ４−加える。

この後直ちに平沢製作所製テーバー式攪拌機によりホー
ルグラス′ｆｒ１分間に１２０回転の速度で水平回転し
攪拌を行なう。抗原・抗体反応により反応性及合体粒子
の凝集の有無から、ヒ）　ＩｇＧ舌・６５１足化した反
応性型′合体粒子の特性である鋭敏性を評価した。ホー
ルグラスを用いた実施例１の反応性重合体粒子の凝集試
験の結果ｔ−第１図に示す。第１図は１０分間の攪拌後
の凝集状態を示す。

凝集が全く認められない場合←）、凝集の有無が判定し
が九い場合（±）、明らかに＃集が認められる場合、凝
集の強い順に千〇　＋４−＃＋と判定した。

図中Ｃは抗原もしく扶抗体を全く含まないことを示す。

凝集試験の結果、明らかに凝集の認められたホールに於
ける抗ヒ）　ＩｇＧウサギ血清希釈液の最高希釈倍数を
もって１反応性重合体粒子の鋭敏性を評価した。

反応性重合体粒子の特性として、さらに反応性重合体粒
子の分散安定性を評価した。すなわち。

反応性重合体粒子にヒ）　ＩｇＧ希釈液を加え室温で１
月放置した後の反応性重合体粒子の分散状態をもりて反
応性重合体粒子のヒ）ＩｇＧ固足固定の分散安定性″に
評価した。又と）　ｘｇａ固定化後３ケ月経過した後の
反応性重合体粒子の分散状態をもってヒ）ＩｇＧｔ−固
定化した反応性重合体粒子の保存中の分散安定性を評価
した。

尚、比較例１として、（１）で得られた重合体粒子に実
施例１と同様の操作で、本発明で特定した範１１Ｊ以下
の粒子表面のエポキシ基濃度（Ｃｗｐｘ　）の反応性重
合体粒子を得た。得られた反応性重合体粒子を実九例１
と同様の操作で性能を調べた。その結果を組１表に示す
。

また、比較例２として、（１）で得られた重合体粒子′
５ｒ：９８℃で２時間加熱することによシエＩキシ基を
加水分解した。次いで重合体粒子を濾紙（Ａ２）で濾別
した後に、遠心分離、蒸留水への再分散の操作を３回繰
返して精製した。得られｔ重合体粒子を実施例１と同様
の操作で性能を調べた。

その結果な泥り表に示す。

第１表の結果から明らかな如く１本発明の反応性重合体
粒子はヒ）ＩｇＧ’に吸着で固定化した後に残存する結
合部位を親水性の蛋白、例えば、ウシ崩清アルブミンな
どでブロックさせることなく、分散安定性がよく、かつ
鋭敏性が高いというＩ＃徴がある。

実施例４ （１）反応性及合体粒子の調製 実施例１で得られた反応性重合体粒子（粒子表面のｍ　
＄　ＩＦＡ子濃度（ＣＮ　）　＝　５．６　ＡｍｏＬＪ
’ｊｊ−反応性重合体粒子、エポキシＭ　１ｌｉｋ　Ｌ
　（Ｃｚ　Ｐ　ｘ　）　＝　６．４　ｔｍｏｂｓＪ−反
応性重合体粒子）を２１′！１に％濃度で蒸留水に分散
させた懸濁液５０ゴと３００μｍｏｔ・のα−チオグリ
セロールの水浴液１〇−を混合し、室温で４８時Ｍ攪拌
下に反応した。反応後、反応性重合体粒子を遠心分離、
′＃ｃ貿水留水再分散の操作を５回繰返して精製した。

子のＦＡ製 （りで得られた反応性重合体粒子全固型分濃反１ム鈑チ
でｐｉ４　＝　８．２に調製したグリシン緩衝液に分散
させた。次いでヤギの産生じた抗ＣＲＰ血清を塩層１と
透析でγ−グロブリンにｗ８輪しｔ後、アフイニティク
ロマトにエリ精製して得た精′＃ＣＲＰ抗体を１０００
４．勺漠度に當有するグリモノ駿伽液全調製し几後に倍
歓布釈法にニジ希釈してＣＲＰ抗体希釈液をｙ４Ｎした
。反応性重合体粒子分散液１容と′！′ＰＩ製ＣＲＰ抗
ＣＲＰ抗体１容とを加え、攪拌し、室温下２時間放置し
た。次いで遠心分離、グリシン緩衝液への再分散の操作
を繰り返して洗浄した後、ＣＲＰ抗体を固定化した反応
性重合体粒子をグリシン緩衝液に固型分濃度全０．５１
電チになるように調製し几。

（３）抗原・抗体反応 検体として既知濃度のヒ）　ＣＲＰ血消を５６℃で３０
分間加熱処理して非動化しｔ後、グリシン緩＠液で希釈
系列全訳節した。実施例１と同様の操作で、ガラス製１
０穴のホールグラスを利用して抗原・抗体反応金銅べた
。その結果、鋭敏性は７日後及び３ケ月後共に５μＩ淘
であっ九。オた、分散安定性は７日後１本、３ケ月後に
１本の非特異的凝集が誌められた。

実施例５及び比較例３ （１）　　］！合体粒子のＶ＠製 攪拌機付きガラス製フラスコを窒素ｔｔ換し次後ニ、＃
留水２７００（Ｌｋ加えて７５℃に保ツ７’Ｃｆｌｊに
、音素雰囲気下、攪拌下に過硫酸カリウム５ミリモル／
７１．チオ硫酸ナトリウム５ミリモル／ｌ。

硫酸＠ｏ、２５ミｌＪモル／ｌを添加した。次いで７５
℃に加温し几グリシジルアクリレート１５ミリモル及び
メチルメタクリレート２５０ミリモルの混合物を添加し
て７５℃で３０分間攪拌下に重合した。その後、メチル
メタクリレート２．６モルヲ定量ポンプで満々添加して
、更に７５℃で２時間攪拌下に重合した。その後の操作
は実施例１と同様の操作を行なった。得られ九重合体粒
子の粒子径は０．２０８μｍであった。この重合体粒子
の表面におけるエポキシ基諷度（Ｇ）は０．８μｍｏｌ
＠／／ｌ−重合体粒子であっ友。

辺−医艮其重合体粒子の調製 得られた重合体粒子ｔ−２重−１ｔチ濃度で蒸留水に分
散させた懸濁液２００−と２００μｍｏｔｅのジエチレ
ントリアミンを溶かした水浴液５０−を混合し、室温で
７２時間攪拌下に反応し友。反応後、重合体粒子を遠心
分離、蒸留水への再分散操作を繰返した後に、２重１に
チ濃度で蒸留水に分散させた懸濁液２００ｔｄと６００
μｍｏｔｅのグリセロールジグリシジルエーテルの水浴
液１００−を混合し、室温で攪拌下に５０時間反応した
。反応後、遠心分離、蒸留水への再分散操作を繰返して
精製した反応性重合体粒子を得た。得られた反応性重合
体粒子に上記反応を全く同様の操作ｆｔ緑返して、分岐
数の多い反応性重合体粒子を合成した。かくして得られ
た反応性重合体粒子のｔＭｉＸ原子濃度（ＣＮ）は２．
１μｍｏｔ−Ａ−反応性重合体粒子、エポキシ基の濃度
（（−ｅｐｘ　）は２．６μｒｎｏＬｅ／ＩＩ−反応性
重合体粒子であった。さらに該反応性重合体粒子を９８
℃で２時間、音素雰囲気下で加熱することにより反応性
重合体粒子のエポキシ基を加水分解した。次いで反応性
重合体粒子を濾紙（ム２）で濾別した後に、遠心分離、
蒸留水への再分散の操作を３回繰返してＮ製した。

（３）熱変性ヒトＩｇＧの固定化 （２）で得た反応性重合体粒子をグリシン緩衝液に０、
５１ｋ　倉チになるように分散させた。次いで６０℃で
１０分１１４Ｊ加熱処理したヒ）　ＩｇＧをグリシン緩
衝液にニジ希釈し１■／−に調整した。０．５重量ｓｙ
ａ度の反応性重合体粒子分散液１答に熱変性し几と）　
ＩｇＧ希釈液１容を加え、攪拌し、室温下２時間放置し
た。その後、遠心分離して洗浄した後、固型分濃度が０
．５］ｋ１ｉｔ％になるように０．０５ｉ−ｉｔチ濃度
の牛血清アルブミンを含むグリシン緩衝液に再分散した
。

検体として非動化慢性関節リウマチ患者プール血？ｉＩ
ｆをグリシン緩衝液で２０倍に希釈したものを原液とし
て、実施例１と同様にしてガラス製１０大のホールグラ
スにグリシン緩衝液で希釈した慢性関節リウマチ患者血
清を各ホールに０．０４ｄ’ｅ加え１次いで熱変性ヒ）
　ＩｇＧ　ｋ固定化した反応性重合体粒子をグリシン緩
衝液で希釈した分散液全容ホールに０．０４−加えて実
施例１と同体の操作で鋭敏性及び分散安定性音調べ比。

その結果、鋭敏性は１目抜×２５６０．３次月後Ｘ２５
６（１゜であり、分散安定性は１日後及び３次月後に共
に非特異凝集反応は認められなかった。

尚、比較例３として比較例１で用いた重合体粒子を用い
て上記と一様の操作でテストすると、鋭敏性は１目抜Ｘ
１２８０．３ケ月後は非特異凝集の几め評価できなかつ
友。

夾り例６ 攪拌機付きガラス製フラスコｒｍｘｕ換し友後に、蒸留
水２７００ＣＩ１．加えて７０℃に保つ几後に、窒素雰
囲気下、攪拌下に過硫酸カリウム１０ミリモル／ｌ濃度
になるように添加した。次いで７０℃に加温したグリシ
ジルメタアクリレート１００ミリモル及びクロルメチル
スチレン４００ミリモルの混合物を添加して７０℃で１
時間攪拌下に重合した。その後スチレン２．５モルを足
置ポンプで満々添加してから、７０℃で２９時間攪拌下
に１合した。その後の操作は実施例１と同様の操作を行
なった。得られた重合体粒子の粒子径は０．３２４μｍ
であっ友。重合体粒子表面におけるエポキシ基濃度（Ｇ
）は３．５μｍｏｌｅ／９−重合体粒子であった、得ら
れた重合体粒子を実施例１と同様の操作でテトラエチレ
ンペンタミン、１．４−ブタンジグリシジルエーテル全
反工しさせ、詔素原子−度（Ｃｓ　）が１２．５μｍｏ
ｌｅカー反応性重合体粒子、エポキシ両度（Ｃｘｐｘ）
が１３．３μｍｏｔｅ／、９−反応性重合体粒子となる
反応性重合体粒子を合成した。かくして得られ几反応性
重合体粒子全実施例１と同様の操作でヒ）ＩｇＧ’ｅ固
定化し、抗ヒ）　ＩｇＧウザギ血清との抗原・抗体反応
を行なった。その結果、鋭敏性は１目抜Ｘ１２８０．３
ケ月彼Ｘ１２８０．ｔた分散安定性は１日後と３ケ月後
共非特異的凝集が認められなかった。

実施例７ （１）ｉ合体粒子のＶ＠製 攪拌機付きガラス製フラスコ金窒素置換しｔ後に、蒸留
水２７００ＣＩ−’に加えて７０℃に保った後に、Ｓ１
素雰囲気下、攪拌下に過仇酸カリウム４ミリモル／１．
チオ硫酸ナトリウム２ミリモル／ノ、及び倣敏銅０．２
　ミ！Ｊモル／ｌを添加した。次いで７０℃に加温した
グリシジルメタクリレート１．５モル及びスチレン０．
５モルの混合物を添加して７０℃で６時間１合した。重
合後、室温まで冷却してから得られ定型合体粒子を濾紙
（屋２）で濾別して大きなＭ集体を除いた。次いで透析
を行なった後に遠心分離、蒸角水への再分散の操作全繰
返した後に、イオン交換樹脂で脱イオン操作を行ない、
更に遠心分離と洗浄を行なって重合体粒子金鞘゛製した
。得られた重合体粒子の粒子径は０．３０４μｍ得らね
、た重合体粒子を２Ｎ蓋チ濃度で蒸留水に分散した懸濁
液２００−と３．４μｍａｔｅのテトラ（アミノメチル
）メタンの水溶液２００ｍｔｋ混合し、室温で４８時間
攪拌下に反応した。反応後、重合体粒子全遠心分離、蒸
留水への再分散の操作を３回繰返した後に、９８℃で２
時間加熱することによシ、重合体粒子の未反応のエポキ
シ基を加水分解した。次いで、得られた重合体粒子を２
Ｍ播％濃度にＰ＋調製した懸濁液１００ゴに過ヨウ素酸
ナトリウム１５　ｍｍｏｌｅと酢酸１５　ｍｍｏｔｅの
混合物５０ｍを添加し、４０℃で一夜攪拌した後・−が
６．５以上になる壕で透析をつづけて私製して、重合体
粒子のジヒドロキジル基をホルミル化した。

得られたホルミル化重合体粒子を１．５重ｆ％旋度に再
調製した懸濁液１００−に３００μｍｏｂ・のジエチレ
ングリコールジグリシジルエーテル水浴液２０−を加え
て、室温で７２時間攪拌下に反応し几後に、濾紙（崖２
）で濾別し、次いで遠心分離、蒸留水への再分散の操作
を３回繰返して１＃ｉ製した。かくして得られた反応性
重合体粒子の窒素原子濃度（ＣＮ）は１１，６μｍｏｔ
ｅ／９−反応性重合体粒子であり、エポキシ基濃度（（
４ｐｘ　）は１８．３μｍｏｚｅ／ｇ〜反応性重合体粒
子であった。

（３）抗原・抗体反応−１ （２）で得られた反応性重合体粒子のエポキシ基を加水
分解してジヒドロキジル基に変換した後に、実施例１で
使用したグリシン緩衝液をホウ酸緩衝液（０，ＩＭ　　
ｐＨ８，２、ＮａＣＡ’　　０．０５Ｍ　）ｋ用いた以
外、全て実施例１と同様の操作でヒ）　ＩｇＧを固定化
し友診断用試薬の性能を評価した。

その結果、鋭敏性は７目抜Ｘ５１２０．３ケ月後Ｘ５１
２０．分散安定性は７日後ＶＣＯ本、３ケ力抜には１木
の非特異凝集が餡められた。

（４）抗原・抗体反応−２ （２）で得られた反応性重合体粒子を１１蓋％濃度に再
１）４Ｊしたｈｉ液５（）−に１００１１ｍｏｌｅのε
−アミノカプロン酸水溶液５０−を加えて、ｐｉ（＝８
．２に調製し童濡で７２時間攪拌下に反応した。次いで
濾紙（Ａ２）で濾別した後、遠心分離、蒸留水へのｐ）
分散の操作４３回繰返して精製することに１す、エポキ
シＭ’にカルボキシル基に変換した反応性重合体粒子會
得た。

ヤギの産生じたアルファーフェトプロティン（４を下Ａ
ＦＰと略す）の抗体をアフィニティクロマトにより鞘製
し−て得た鞘ｉ　ＡＦＰ抗体を１〜／−濃度に官有する
ホウ酸＊衝液全調製し九後に倍数布釈法に工り煽釈して
ＡＦＰ抗体布釈液を調製し友。

ｉ：＆ｍ％濃度の反応性重合体粒子の懸濁液１容にＡＦ
Ｉ）抗体希釈液１容會加え攪拌下に室温で４時間数ｆｌ
ｔｅ　Ｌ几。そして遠ノし分離した後に固型分濃度が０
、５１Ｊ％となるようにグリシン緩衝液に一調製し４℃
に保有した。

検体としてヒト血清中のＡＦｐ　濃度がｉｏｏ。

μ９／、ａｔであるものを原液とし、グリシン緩衝液で
希釈系列金ｖＩ４製した。実施例１と同様にしてガラス
製ｌＯ大のホールグラスにグリシン緩衝液で希釈したＡ
ＦＰ　ｆ：各ホールに０．（１４１１ｔ加え１次いでＡ
ＦＰ抗体を固足化した診断用試薬の分散液を各ホール［
０，０４ｍ加えて実施例１と同様の操作で鋭敏性。

分散安定性音調べ友。その結果、鋭敏性は１日後、３か
力抜共に２５μ９／ｗｔであった。分散安定性は１日後
、３か力抜共に非％異凝集は認められなかった・ 実施例８ 攪拌機付きガラス製フラスコを窒素置換した後に、ｉ＊
水２７０ＵＣＣ１−加えて７０　℃に保った後に、窒素
ｙＩ１．曲気下圧気下酸カリウム５．０ミリモル／１．
チオ硫酸ナトリウム５．０ミリモル／　ｌ　、（ｍｔ酸
銅０．２５ミリモル／〕、及びメルカプトエタノ−）ｖ
　（１５ミＩＪモル／！を添加した。次いで７０℃に加
温し友グリシジルメタクリレート２．０モル及びエチレ
ングリコールジメタクリレー）４０℃リモルの混合物を
添加して７０℃で２時間攪拌下に重合した。その後の操
作は実施例１と同様の操作を行なった。得られた重合体
粒子の粒子径は０．２４５得られた重合体粒子を２重量
係濃度で蒸留水に分散した懸濁液２００−と１０　ｍｍ
ｏムの１−アミノ−２，２−に’Ｘ（アミノメチル）デ
ロノヤンー１−オール水溶液２００−を混合し、室温で
４８時間攪拌下に反応し九１反応後、遠心分離、蒸留水
への再分数の操作を３回繰返して精製した。得られた重
合体粒子を２ｊＩ［量襲濃度で蒸留水２００ｍ！７に分
散させｓ５０ｍｍｅｔ−の１．４−ブタンゾオールゾダ
リシゾルエーテル２００ｄと混合して室温で７２時間攪
拌下に反応した後に、濾紙（Ａ２）で濾別した。

次いで遠心分離、蒸留水への再分散の操作を３回繰返し
て精製した。かくして得られた反応性重合体粒子の犠素
原子濃度（ＣＭ）は３００μｍｏＡ・／１１−反応性重
合体粒子、エポキシ基濃度（Ｃｇｐｘ）は４３０μｍｏ
ｔ＠／、！ｉ’−反応性重合体粒子であった。

（３）抗原・抗体反応 （２）で得られた反応性重合体粒子を固型分濃度１重量
％でホウ酸緩衝液に分散させた。次いでヒト絨毛性ブナ
ドトロピン（ｈＣＧ　）を１００ＯＩＵ／ｍＪ濃度に含
有するホウ酸緩衝液を調製した後に倍数希釈法によシ希
釈したｈＣＧ希釈溶液１容と１重量％の反応性重合体粒
子！容を混合し、攪拌下に室温で２時間放置した後、４
℃にて攪拌下に１週間放置した。次いで遠心分離した後
にグリシン緩衝液に再分散し、固型分濃度を０．５重量
％に調製した。

抗ｈｃＧウサギ抗体をグリシン緩衝液で２０倍に希釈し
たものを原液とし、倍数希釈法により抗ｈＣＧウサギ抗
体をグリシン緩衝液で希釈して抗ｈＣＧ抗体希釈液を調
製する。その後実施例１と同様の操作で鋭敏性、分散安
定性を評価した。その結果、鋭敏性は７口径ｘ３２０，
３ケ月後×３２０であった。また分散安定性は７日後及
び３ケ月後共に保存中に全く非特異的凝集が認められな
かった。

実施例９ （１）反応性重合体粒子の調製 実施例８で得られた重合体粒子を２重量チ濃度で蒸留水
に分散した懸濁液２００−と１０　ｙｍｏＬ＠の１−ア
ミノ−２，２−ビス（アミノメチル）デロノ４？ンー１
−オール水溶液２００−を混合し、室温で４８時間攪拌
下に反応した。反応後、遠心分離、蒸留水への再分散の
操作を３回繰返してｙＩＮ製した後に、９８℃で２時間
加熱することにより１重合体粒子の未反応のエポキシ基
を加水分解した。次いで、得られ定型合体粒子を２重量
％濃度で蒸留水２（）０−に分散させ、５０　ｍｎｏｔ
ｅの１．４−ブタンヅオールジグリシジルエーテル２０
０−と混合して室温で７２時間攪拌下に反応した後に、
濾紙（４２）で濾別した。次いで、遠心分離蒸留水への
再分散の操作を３回繰返して精製した。かくして得られ
た反応性重合体粒子の窒素原子濃度（ＣＮ）は２８５μ
ｍｏｔｅ／９反応性重合体粒子、エポキシ酸［４ｊ　（
Ｃ＊：ｐｘ　）は４００μｍｏｌｅ１９反応性夏合体粒
子であった。

（２）抗原・抗体反応 （１）で得られた反応性重合体粒子を２重蓋％濃度で蒸
留水に分散した慇濁液１００−にε−アミノカブ０７酸
５　ｍｍｏｔｅ　（ｉｌ−加え、　ｄ−１＝　８．２に
Ｒ）ｎシて室温で７２時間攪拌下に反応し友。反応後、
遠心分離、蒸留水への再分散の操作を３回繰返して精製
した。

かくして得られ友カルぎキシル化重合体粒子を固型分濃
度１重ｉｋｉチで声＝６．０のリン酸緩衝液に分散し念
。次いでヒト胎盤ラクトゲン（ｈＰＬ　）　ｆｆ１１０
００　ＩＵ／Ｌｔ嬢度に官有するリン酸緩衝液を調製し
友後に倍数希釈法により希釈したｈＰＬ希釈溶液１容と
１重量％濃度のカルボキシル化重合体粒子１容全混合し
、４℃で２日出）攪拌下に放置した。

次いで遠心分離した後に、リン酸緩衝液に再分散し、固
型分濃度を０．５］１ｆｌｉチに詞製し几。

抗ｈＰＬウサギ抗体をリン酸緩衝液で２０倍に希釈した
もの全原液とし、倍数希釈法に工り抗ｈＰＬウサギ抗体
をリン酸緩衝液で希釈して抗ｈＰＬ抗体希釈液を調製す
る。その後、実施例１と同様の操作で鋭敏性と分散安定
性を評価した。その結果、鋭敏性は７口径×１６０％３
ケ月後×１６０であった。舊た、分散安定性は７日後及
び３ケ月後共に保存中に全く非％異的＃集が認められな
かった。

【図面の簡単な説明】

第１図は、実施例１で得ら７’した反応性重合体粒子ｆ
担体とした診断用試薬の＃集試験の結果を示す。 ％訂出願人　徳山曹達株式会社

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. （１）グリシジル（メタ）アクリレート単量体単位を有
   する重合体粒子にアミノ基及び／又はイミノ基とさらに
   エポキシ基とが導入されてなる反応性重合体粒子であっ
   て、該反応性重合体粒子の表面に於ける窒素原子の濃度
   をＣ＿Ｎ（μｍｏｌｅ／ｇ−反応性重合体粒子）、エポ
   キシ基の濃度をＣ＿Ｅ＿Ｐ＿Ｘ（μｍｏｌｅ／ｇ−反応
   性重合体粒子）とするとき、次式 Ｃ＿Ｅ＿Ｐ＿Ｘ≧０．６×Ｃ＿Ｎ を満たす濃度のエポキシ基を有することを特徴とする反
   応性重合体粒子。
2. （２）グリシジル（メタ）アクリレート単量体単位を有
   する重合体粒子と、分子中にアミノ基及び／又はイミノ
   基を有し、且つ該アミノ基及び／又はイミノ基の窒素原
   子に結合する水素原子の数が２個である含窒素化合物と
   を反応させ、次いで、得られた重合体粒子と分子中にエ
   ポキシ基を３個以上有するエポキシ化合物とを反応させ
   ることを特徴とする反応性重合体粒子の製造方法。
3. （３）グリシジル（メタ）アクリレート単量体単位を有
   する重合体粒子と、分子中にアミノ基及び／又はイミノ
   基を有し、且つ該アミノ基及び／又はイミノ基の窒素原
   子に結合する水素原子の数が３個以上である含窒素化合
   物とを反応させ、次いで、得られた重合体粒子と分子中
   にエポキシ基を２個以上有するエポキシ化合物とを反応
   させることを特徴とする反応性重合体粒子の製造方法。
4. （４）グリシジル（メタ）アクリレート単量体単位を有
   する重合体粒子にアミノ基及び／又はイミノ基とさらに
   エポキシ基とが導入されてなる反応性重合体粒子であっ
   て、該反応性重合体粒子の表面に於ける窒素原子の濃度
   をＣ＿Ｎ（μｍｏｌｅ／ｇ−反応性重合体粒子）、エポ
   キシ基の濃度をＣ＿Ｅ＿Ｐ＿Ｘ（μｍｏｌｅ／ｇ−反応
   性重合体粒子）とするとき、次式 Ｃ＿Ｅ＿Ｐ＿Ｘ≧０．６×Ｃ＿Ｎ を満たす濃度のエポキシ基を有する反応性重合体粒子よ
   りなることを特徴とする免疫診断用試薬の担体。