JPS631973A - 反応性重合体粒子及びその製造方法 - Google Patents
反応性重合体粒子及びその製造方法Info
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Landscapes
- Epoxy Resins (AREA)
- Addition Polymer Or Copolymer, Post-Treatments, Or Chemical Modifications (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
金満穴す濃度のエポキシ基全有することt″特徴する反
応性重合体粒子。
応性重合体粒子。
(2) グリシジル(メタ)アクリレート単量体単位を
有する重合体粒子と1分子中にアミノ基及び/又はイミ
ノ基を有し、且つ該アミノ基及び/又はづミノ基の窒素
原子に結合する水素原子の数が2個であるも11化合物
とを反応させ、次いで、得られ几重合体粒子と分子中に
エポキシ基を3個以上有するエポキシ化合物と全反応さ
せることを特徴とする反応性重合体粒子の製造方法。
有する重合体粒子と1分子中にアミノ基及び/又はイミ
ノ基を有し、且つ該アミノ基及び/又はづミノ基の窒素
原子に結合する水素原子の数が2個であるも11化合物
とを反応させ、次いで、得られ几重合体粒子と分子中に
エポキシ基を3個以上有するエポキシ化合物と全反応さ
せることを特徴とする反応性重合体粒子の製造方法。
(3) グリシジル(メタ)アクリレート単り体単位全
有する重合体ね子と、分子中にアミノ基及び/又μイミ
ノ基を有し、且つ該アミ7基及び/又はイミノ基の窒素
原子に結合する水素原子の数が3個以上である含窒素化
合物とを反応させ、次いで、侮られた重合体粒子と分子
中にエポキシ基金2個以上有するエポキシ化合物とを反
応させることt%徴とする反応性重合体粒子の製造方法
。
有する重合体ね子と、分子中にアミノ基及び/又μイミ
ノ基を有し、且つ該アミ7基及び/又はイミノ基の窒素
原子に結合する水素原子の数が3個以上である含窒素化
合物とを反応させ、次いで、侮られた重合体粒子と分子
中にエポキシ基金2個以上有するエポキシ化合物とを反
応させることt%徴とする反応性重合体粒子の製造方法
。
(4) グリシジル(メタ)アクリレート単量体単位
を有する重合体粒子にアミノ基及び/又はイミノ基とさ
らにエポキシ基とが導入されてなる反応性重合体粒子で
あって、該反応性重合体粒子の表面に於ける窒素原子の
@腿をCN(μmot・7g−反応性重合体粒子)、エ
ポキシ基のm PIL’t Cytpx (μmoL*
/9−反応性重合体枚反応性重合体枚子 0式% を満たす濃度のエポキシ基含有する反応性重合体粒子ニ
ジなること’を特徴とする免疫診断用試薬の担体。
を有する重合体粒子にアミノ基及び/又はイミノ基とさ
らにエポキシ基とが導入されてなる反応性重合体粒子で
あって、該反応性重合体粒子の表面に於ける窒素原子の
@腿をCN(μmot・7g−反応性重合体粒子)、エ
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/9−反応性重合体枚反応性重合体枚子 0式% を満たす濃度のエポキシ基含有する反応性重合体粒子ニ
ジなること’を特徴とする免疫診断用試薬の担体。
3、発明の詳細な説明
(産業上の利用分野)
本発明は、水媒体中で分散安定性のよい反応性重合体粒
子を提供するものである。特に酵素、細菌、ウィルス、
毒素、薬物、及び免役活性物質などを固定化して診断用
試薬として好適に使用しうる反応性重合体粒子及びその
製造方法を提供するものである。
子を提供するものである。特に酵素、細菌、ウィルス、
毒素、薬物、及び免役活性物質などを固定化して診断用
試薬として好適に使用しうる反応性重合体粒子及びその
製造方法を提供するものである。
(従来の技術及び発明が解決しようとする問題点)抗原
・抗体反応’i+tt用する免役学的検査において、凝
集反応は沈降反応、袖体結合反応と共に、あるいはこれ
らに比して著しく簡便かつ鋭敏な反応として利用されて
いる。そして、凝集反応は。
・抗体反応’i+tt用する免役学的検査において、凝
集反応は沈降反応、袖体結合反応と共に、あるいはこれ
らに比して著しく簡便かつ鋭敏な反応として利用されて
いる。そして、凝集反応は。
遊離細胞や細菌膜表面に局在する抗原を検出する反応と
共に、抗原精製技術の進歩にニジ%異性の冒い抗血清が
得られることに1って、特異性の尚い抗体を血球粒子、
ベントナイト粒子、カオリン粒子、ラテックス粒子かど
の粒子担体に固定させておき、対応する抗原を凝集反応
[工って検査するなど、臨床検査における応用範囲が著
しく拡大している。
共に、抗原精製技術の進歩にニジ%異性の冒い抗血清が
得られることに1って、特異性の尚い抗体を血球粒子、
ベントナイト粒子、カオリン粒子、ラテックス粒子かど
の粒子担体に固定させておき、対応する抗原を凝集反応
[工って検査するなど、臨床検査における応用範囲が著
しく拡大している。
免疫学的に集反応用としての担体はi々のものが公知で
、該相体を使用した種々の診断用試薬が知られている。
、該相体を使用した種々の診断用試薬が知られている。
これらを大別すると免疫活性物質を物理的に吸着し友診
断用試薬と免疫活性物’jtk共有結合で結合させた診
断用試薬になる。これらの試薬にはそれぞれ一長一知が
あシ現在なお完全に満足出来る診断用試薬は存在しない
。
断用試薬と免疫活性物’jtk共有結合で結合させた診
断用試薬になる。これらの試薬にはそれぞれ一長一知が
あシ現在なお完全に満足出来る診断用試薬は存在しない
。
診断用試薬の担体としては、−般に重合体粒子が用いら
れており1診断用試薬に適した重合体粒子の開発が望ま
れている。
れており1診断用試薬に適した重合体粒子の開発が望ま
れている。
かくして、免疫活性物質を固定化した担体の非特異的縦
集反応を抑制することと、保存安定性を高めるために数
多くの方法が開発されている。これらの方法に、免役活
性物IjMを固定化した担体に保睦コロイドを添加する
方法と、担体を親水性重合体粒子にする方法に大別され
る。前者の方法については、例えば、免疫活性物質を担
体に固定化し几後に、牛血清アルブミン、ゼラチンなど
の親水性蛋白質t−添加する方法が一般的I/cよ〈採
用されているが、検定混合物中で非特異的な蛋白質−蛋
白質相互作用に起因する妨害作用が指摘されている(特
開昭56−158947号公報)。また後者の方法につ
いて1例えは、特開昭56−30405号公報、4iF
開昭56−141559号公報には繰返し単位が2.3
−ジオキシプロピルメタクリレート単位から成る親水性
架橋共重合体粒子を用いる方法が、また%開昭57−1
35801号公報にはスチレン−グリシジルメタクリレ
ート共重合体粒子を合成し、エポキシ基を加水分解して
ジヒドロキジル基に変換して製氷性重合体粒子を得る方
法が提案されている。これらの方法は極めて秀れた方法
である。しかし、親水性基であるジヒドロキジル基濃度
1に増加させると重合体粒子の安定性を向上させること
が可能であるが、免疫活性物質を共有結合させる活性点
濃度が減少するために免疫活性物質の固定化量が減少す
るとか、あるいは免疫活性物質を吸着固定化するに有効
な疎水性表面が減少するために、免疫学的凝集反応の鋭
敏性が著しく低下する欠点がある。このように免役活性
物質の固定化担体の免疫学的凝集反応性と物理的安定性
を同時に満足させることは従来極めて1難であった。
集反応を抑制することと、保存安定性を高めるために数
多くの方法が開発されている。これらの方法に、免役活
性物IjMを固定化した担体に保睦コロイドを添加する
方法と、担体を親水性重合体粒子にする方法に大別され
る。前者の方法については、例えば、免疫活性物質を担
体に固定化し几後に、牛血清アルブミン、ゼラチンなど
の親水性蛋白質t−添加する方法が一般的I/cよ〈採
用されているが、検定混合物中で非特異的な蛋白質−蛋
白質相互作用に起因する妨害作用が指摘されている(特
開昭56−158947号公報)。また後者の方法につ
いて1例えは、特開昭56−30405号公報、4iF
開昭56−141559号公報には繰返し単位が2.3
−ジオキシプロピルメタクリレート単位から成る親水性
架橋共重合体粒子を用いる方法が、また%開昭57−1
35801号公報にはスチレン−グリシジルメタクリレ
ート共重合体粒子を合成し、エポキシ基を加水分解して
ジヒドロキジル基に変換して製氷性重合体粒子を得る方
法が提案されている。これらの方法は極めて秀れた方法
である。しかし、親水性基であるジヒドロキジル基濃度
1に増加させると重合体粒子の安定性を向上させること
が可能であるが、免疫活性物質を共有結合させる活性点
濃度が減少するために免疫活性物質の固定化量が減少す
るとか、あるいは免疫活性物質を吸着固定化するに有効
な疎水性表面が減少するために、免疫学的凝集反応の鋭
敏性が著しく低下する欠点がある。このように免役活性
物質の固定化担体の免疫学的凝集反応性と物理的安定性
を同時に満足させることは従来極めて1難であった。
(間眩点を解決するための手段)
本発8A@等は、免疫学的凝集反応の鋭敏性に優れると
共に、非%異的襞集反応が低く、かつ保存安定性の優れ
た免疫活性物質の固定化担体となる重合体粒子について
鋭意研究を重ねて来た結果、グリシジル(メタ〕アクリ
レ−)Am体単位を有する重合体粒子にアミノ基及び/
又はイミノ基とエポキシ基とがさらに導入され、アミノ
基及び/又はイミノ基に由来するS1累原子洟度に対し
て特定量のエポキシ基含有する反応性重合体粒子を用い
ることにより、前記41ilL望を満す優れた効果をも
几らすことを見い出した。
共に、非%異的襞集反応が低く、かつ保存安定性の優れ
た免疫活性物質の固定化担体となる重合体粒子について
鋭意研究を重ねて来た結果、グリシジル(メタ〕アクリ
レ−)Am体単位を有する重合体粒子にアミノ基及び/
又はイミノ基とエポキシ基とがさらに導入され、アミノ
基及び/又はイミノ基に由来するS1累原子洟度に対し
て特定量のエポキシ基含有する反応性重合体粒子を用い
ることにより、前記41ilL望を満す優れた効果をも
几らすことを見い出した。
即ち、本発明はグリシジ/I/(メタ)アクリレート単
1体重位を有する重合体粒子にアミノ基及び/又はイミ
ノ基とさらにエポキシ基とが導入されてなる反応性重合
体粒子であって、該反応性重合体粒子の表面に於ける窒
素原子の濃度をCN(μm赫Vy−反応性重合体粒子)
、エポキシ基の濃度全CKPX (μmote/ji−
反応性]k合体粒子〕とするとき、次式 %式% を満几す濃度のエポキシ基を有することを%微とする反
応性重合体粒子である。
1体重位を有する重合体粒子にアミノ基及び/又はイミ
ノ基とさらにエポキシ基とが導入されてなる反応性重合
体粒子であって、該反応性重合体粒子の表面に於ける窒
素原子の濃度をCN(μm赫Vy−反応性重合体粒子)
、エポキシ基の濃度全CKPX (μmote/ji−
反応性]k合体粒子〕とするとき、次式 %式% を満几す濃度のエポキシ基を有することを%微とする反
応性重合体粒子である。
本発明に於ける重合体粒子は、次式
(但し、Rは水素原子又はメチル基である。)で示され
るグリシジル(メタ)アクリレートJ4LjlL体重位
會有する。本発明の重合体粒子は、上記したグリシジル
(メタ)アクリレートIJIi、thL体単位のみ含有
するものであっても工<、該グリシジル(メタ)アクリ
レート単量体単位と他0JIL蓋体単位と會有するもの
であっても良い。上記した他の単1体重位としては、グ
リシジル(メタ)アクリレートと共1合可能なモノマー
で示される単量体却位であれはどのよつなものでもよい
。就中1本発明に於いて好ましい他の単l−体単位は、
次式(但し、R1は水素原子又はアルキル基であp、R
2はハロダン原子、置換若しくは非置換のフェニル基、
アルコキシカルボニル基又はアシルオキシ基である。) で示される疎水性ビニル糸車j体単位である。ここで、
フェニル基の置換基としては特に限定されないが、ハロ
ダン原子、ハロアルキル基、アルキル基等を挙けること
ができる。このような疎水性ビニル糸HLb体単位の中
でもR2がf挟着しくは非置換のフェニル基、又は塩素
原子である疎水性ビニル系単量体単位が好ましい。また
、他の単量体単位としてμ次式 (但し、R3は水素原子又はカルボキシル基であり、R
4は水素原子又はアルキル基であり、R6はカルボキシ
ル基、スルホニルフェニル基、ヒドロキで示される基(
但し、R′はアルキレン基、nは1〜20の整数である
。)である。) で示される親水性ビニル糸車蓋体単位を採用することが
できる。
るグリシジル(メタ)アクリレートJ4LjlL体重位
會有する。本発明の重合体粒子は、上記したグリシジル
(メタ)アクリレートIJIi、thL体単位のみ含有
するものであっても工<、該グリシジル(メタ)アクリ
レート単量体単位と他0JIL蓋体単位と會有するもの
であっても良い。上記した他の単1体重位としては、グ
リシジル(メタ)アクリレートと共1合可能なモノマー
で示される単量体却位であれはどのよつなものでもよい
。就中1本発明に於いて好ましい他の単l−体単位は、
次式(但し、R1は水素原子又はアルキル基であp、R
2はハロダン原子、置換若しくは非置換のフェニル基、
アルコキシカルボニル基又はアシルオキシ基である。) で示される疎水性ビニル糸車j体単位である。ここで、
フェニル基の置換基としては特に限定されないが、ハロ
ダン原子、ハロアルキル基、アルキル基等を挙けること
ができる。このような疎水性ビニル糸HLb体単位の中
でもR2がf挟着しくは非置換のフェニル基、又は塩素
原子である疎水性ビニル系単量体単位が好ましい。また
、他の単量体単位としてμ次式 (但し、R3は水素原子又はカルボキシル基であり、R
4は水素原子又はアルキル基であり、R6はカルボキシ
ル基、スルホニルフェニル基、ヒドロキで示される基(
但し、R′はアルキレン基、nは1〜20の整数である
。)である。) で示される親水性ビニル糸車蓋体単位を採用することが
できる。
上記したグリシジル(メタ)アクリレートa量体単位の
重合体粒子に占める割合は待に限定されないが、得られ
る反応性重合体粒子に免役活性物質を吸着させて診断用
試薬として使用する場合は、グリシゾル(メタ)アクリ
レートjlii体単位が0.05〜205〜20モル価
Co、 1〜15モル価であることが好゛ましい。′f
、友、免役活性物質を共有結合させることによって診断
用試薬として使用する場合は20〜100モル饅、さら
に30〜99モル−であることが好ましい。
重合体粒子に占める割合は待に限定されないが、得られ
る反応性重合体粒子に免役活性物質を吸着させて診断用
試薬として使用する場合は、グリシゾル(メタ)アクリ
レートjlii体単位が0.05〜205〜20モル価
Co、 1〜15モル価であることが好゛ましい。′f
、友、免役活性物質を共有結合させることによって診断
用試薬として使用する場合は20〜100モル饅、さら
に30〜99モル−であることが好ましい。
上記したグリシジル(メタ)アクリレート単量体単位以
外の他のJnLi体としては、前記した疎水性ビニル糸
車1〔体重位及び親水性ビニル糸車蓋体11位を用いる
ことが好′ましいが、親水性ビニル糸単−体単位の割合
が多くなり過ぎると反応性重合体粒子の分散安定性に不
都合を生じることがある。
外の他のJnLi体としては、前記した疎水性ビニル糸
車1〔体重位及び親水性ビニル糸車蓋体11位を用いる
ことが好′ましいが、親水性ビニル糸単−体単位の割合
が多くなり過ぎると反応性重合体粒子の分散安定性に不
都合を生じることがある。
従って、本発明の反応性重合体粒子金秋看による診断用
試薬として用いる場合は、親水性ビニル糸車−体はグリ
シジル(メタ)アクリレート単量体に対して0〜20モ
ル価の範囲で、また、共有結合による診断用試薬として
用いる場合は、グリシツル(メタ)アクリレート単量体
に対して0〜50モル★の範囲で用いることが好ましい
。
試薬として用いる場合は、親水性ビニル糸車−体はグリ
シジル(メタ)アクリレート単量体に対して0〜20モ
ル価の範囲で、また、共有結合による診断用試薬として
用いる場合は、グリシツル(メタ)アクリレート単量体
に対して0〜50モル★の範囲で用いることが好ましい
。
以上のような組成とすることにLって、−般に、吹出1
のエポキシ基が0.05〜4 (J Oμmot*/g
−N合体粉子、エリ好ましく B 0.1〜2 U
OltmoLe/i−重合体粒子の重合体粒子を得る仁
とができる。
のエポキシ基が0.05〜4 (J Oμmot*/g
−N合体粉子、エリ好ましく B 0.1〜2 U
OltmoLe/i−重合体粒子の重合体粒子を得る仁
とができる。
以上に述べfc重合体粒子の製造方法は、公知の方法が
イロ」ら制限なく使用し祷る。即ち、グリシジル(メタ
)アクリレートを単独で重合するととに工って、或いは
、グリシジル(メタ)アクリレートと共1合可能なビニ
ル糸車倉体とを共1合させることによって、上記の重合
体粒子ヲ得ることができる。グリシジル(メタ)アクリ
レートと共重合させるビニル糸単量体の代表的なもの?
Il−挙げれば、スチレン、ビニルトルエン、クロルメ
チルスチレン、クロルスチレン、塩化ビニル、臭化ビニ
ル、メチ/L/(メタ)アクリレート、エチル(メタ)
アクリレート、デルビル(メタ)アクリレート、酪酸ビ
ニル等の疎水性ビニル糸車鍾体、ま友、アクリル酸、メ
タクリル酸、マレイン酸、スチレンスルホン酸、2−ヒ
ドロキシエチルメタアクリレート、グリセロールモノメ
タクリレ〜ト、ホリエチレングリコールモノメタクリレ
ート尋の親水性ビニル糸単量体などが例示される。これ
らのビニル糸S菫体は2ね以上全混合して用いることも
できる。さらにまた、修景に応じて、ジビニルベンゼン
、エチレンダリコールジメタクリレート、ジxfレンゲ
リコールジメタクリレート、ビスフェノ−/l/Al/
サジノルエーテル等の架橋性単量体も好適に使用できる
。
イロ」ら制限なく使用し祷る。即ち、グリシジル(メタ
)アクリレートを単独で重合するととに工って、或いは
、グリシジル(メタ)アクリレートと共1合可能なビニ
ル糸車倉体とを共1合させることによって、上記の重合
体粒子ヲ得ることができる。グリシジル(メタ)アクリ
レートと共重合させるビニル糸単量体の代表的なもの?
Il−挙げれば、スチレン、ビニルトルエン、クロルメ
チルスチレン、クロルスチレン、塩化ビニル、臭化ビニ
ル、メチ/L/(メタ)アクリレート、エチル(メタ)
アクリレート、デルビル(メタ)アクリレート、酪酸ビ
ニル等の疎水性ビニル糸車鍾体、ま友、アクリル酸、メ
タクリル酸、マレイン酸、スチレンスルホン酸、2−ヒ
ドロキシエチルメタアクリレート、グリセロールモノメ
タクリレ〜ト、ホリエチレングリコールモノメタクリレ
ート尋の親水性ビニル糸単量体などが例示される。これ
らのビニル糸S菫体は2ね以上全混合して用いることも
できる。さらにまた、修景に応じて、ジビニルベンゼン
、エチレンダリコールジメタクリレート、ジxfレンゲ
リコールジメタクリレート、ビスフェノ−/l/Al/
サジノルエーテル等の架橋性単量体も好適に使用できる
。
これらの単量体を用いて重合体粒子を得るための1合方
法は特に限定されず、公知の方法が好適に採用される。
法は特に限定されず、公知の方法が好適に採用される。
例えは、アニオン性界面活性剤、非イオン糸界面活性剤
の存在下に水媒体中で水湿性ラジカル翔始剤全用いて乳
化重合する方法、界拘活性剤を使わずに水媒体中で水溶
性ラジカル開始剤を用いて不均一1合する方法、部分鹸
化ポリビニルアルコール。ポリビニルピロリドン等の保
護コロイド存在下に懸濁重合する方法、ビニル糸車9体
は溶解するが重合体は溶解しない有機溶媒中で沈絃1合
する方法等が採用される。
の存在下に水媒体中で水湿性ラジカル翔始剤全用いて乳
化重合する方法、界拘活性剤を使わずに水媒体中で水溶
性ラジカル開始剤を用いて不均一1合する方法、部分鹸
化ポリビニルアルコール。ポリビニルピロリドン等の保
護コロイド存在下に懸濁重合する方法、ビニル糸車9体
は溶解するが重合体は溶解しない有機溶媒中で沈絃1合
する方法等が採用される。
本発明で使用する反応性重合体粒子の平均粒子径は特に
限定されなりが、凝集反応による診断用wA、栗に用い
る場合には、その鋭敏性や保存安定性を良好にするため
に一般には0.05乃至10ミクロンの範囲内にあるこ
とが好ましい。さらにま几、該反応性重合体粒子は1粒
子径の分散値の小さい方が、再現性が良いために望まし
い。従って、このような粒子径となるような重合体粒子
を得ることが好ましい。
限定されなりが、凝集反応による診断用wA、栗に用い
る場合には、その鋭敏性や保存安定性を良好にするため
に一般には0.05乃至10ミクロンの範囲内にあるこ
とが好ましい。さらにま几、該反応性重合体粒子は1粒
子径の分散値の小さい方が、再現性が良いために望まし
い。従って、このような粒子径となるような重合体粒子
を得ることが好ましい。
本発明の反応性重合体粒子は、上記の重合体粒子にアば
ノ基及び/又はイミノ基が導入され、さらにエポキシ基
が導入されたものであり、反応性重合体粒子の表面に於
ける窒素原子の良度をCM(μrnoL・7g−反応性
重合体粒子)、エポキシ基の鎖度をCIIP! (μm
oA・/I−反応性重合体粒子)とするとき、下記式〔
A〕 CIP!≧0.6 X Cy [A)好
ましくは、下記式[B] CEP)Ca2.8 X CN [B]
さらに好ましくは、下記式EC) Cwpx≧1. OX CM [:C]
+tsたす濃度のエポキシ基を有する。アミノ基及び/
又はイミノ基の導入は、後述するように分子中にアミノ
基及び/又はイミノ基を有し、且り肢アミノ基及び/又
はイミノ基の蟹累原子に結合する水素原子の数が2個以
上である富窒素化合物とグリシジル(メタ)アクリレー
ト単量体単位を有する重合体粒子とを反応させることに
よって行なう。即ち、含Im素化合物のアミノ基及び/
又はイミノ基とグリシジル(メタ)アクリレート単量体
単位のエポキシ基との反応を利用する。この反応は、下
記[1]又はCI)のように進行しているものと推測で
きる。
ノ基及び/又はイミノ基が導入され、さらにエポキシ基
が導入されたものであり、反応性重合体粒子の表面に於
ける窒素原子の良度をCM(μrnoL・7g−反応性
重合体粒子)、エポキシ基の鎖度をCIIP! (μm
oA・/I−反応性重合体粒子)とするとき、下記式〔
A〕 CIP!≧0.6 X Cy [A)好
ましくは、下記式[B] CEP)Ca2.8 X CN [B]
さらに好ましくは、下記式EC) Cwpx≧1. OX CM [:C]
+tsたす濃度のエポキシ基を有する。アミノ基及び/
又はイミノ基の導入は、後述するように分子中にアミノ
基及び/又はイミノ基を有し、且り肢アミノ基及び/又
はイミノ基の蟹累原子に結合する水素原子の数が2個以
上である富窒素化合物とグリシジル(メタ)アクリレー
ト単量体単位を有する重合体粒子とを反応させることに
よって行なう。即ち、含Im素化合物のアミノ基及び/
又はイミノ基とグリシジル(メタ)アクリレート単量体
単位のエポキシ基との反応を利用する。この反応は、下
記[1]又はCI)のように進行しているものと推測で
きる。
このようにして導入されたアミノ基及び/又はイミノ基
は、複数個のエポキシ基を有するエポキシ化合物のエポ
キシ基との反応t/c利用されて、ニーキシ基の導入が
行なわれる。この場合、先にアミノ基及び/又はイミノ
基−の導入を行なう究めに用いられた含窒素化合物のア
ミノ基及び/又はイミノ基の窒素原子に結合する水素原
子の数が2個である場合には、エポキシ基を分子中に3
個以上有するエポキシ化合物金層いる。また、アミノ基
及び/又にイミノ基の窒素原子に結合する水素原子の数
が3個以上である言霊素化合物を用い友場合には1分子
中にエポキシ基を2個以上有するエポキシ化合物が用い
られる。この反応は次の[1113又扛[IV)のよう
に進行しているものと推測される。
は、複数個のエポキシ基を有するエポキシ化合物のエポ
キシ基との反応t/c利用されて、ニーキシ基の導入が
行なわれる。この場合、先にアミノ基及び/又はイミノ
基−の導入を行なう究めに用いられた含窒素化合物のア
ミノ基及び/又はイミノ基の窒素原子に結合する水素原
子の数が2個である場合には、エポキシ基を分子中に3
個以上有するエポキシ化合物金層いる。また、アミノ基
及び/又にイミノ基の窒素原子に結合する水素原子の数
が3個以上である言霊素化合物を用い友場合には1分子
中にエポキシ基を2個以上有するエポキシ化合物が用い
られる。この反応は次の[1113又扛[IV)のよう
に進行しているものと推測される。
CH2−CH−R,−CH−CH2[IV、1晶 ゝ
0′ このようにアミノ基及び/又はイミノ基とエポキシ基と
を導入することにより、当初の重合体粒子のグリシジル
(メタ)アクリレート単量体単位に基つくエポキシ基の
濃度ニジも高い濃度のエポキシ基を反応性重合体粒子に
導入することができる。即ち1反応性京合体粒子の表面
に於けるエポキシ基の濃度′t−前述のとお’) CE
PX(itmoLe/9−反応性重合体粒子)とし、ア
ミン基、イミノ基、エポキシ基の導入前の重合体粒子の
グリシジル(メタ)アクリレート単−体単位に基つくエ
ポキシ基の′#展をG(μm ole/’J’−反応性
重合体粒子〕とすると、重合体粒子中のグリシツル(メ
タ)アクリレート単量体単位が20〜100モル係の重
合体粒子を用い九場合には c’xpx≧1.1XG 好ましくは CMPK≧1.5XG を満たすエポキシ基の濃度を有する反応性重合体粒子と
することができ、重合体粒子中のグリシジル(メタ)ア
クリレート単量体単位が0405〜20モル嗟の重合体
粒子を用込九場合には、次式0式% tSたす反応性重合体粒子とすることも可能である。
0′ このようにアミノ基及び/又はイミノ基とエポキシ基と
を導入することにより、当初の重合体粒子のグリシジル
(メタ)アクリレート単量体単位に基つくエポキシ基の
濃度ニジも高い濃度のエポキシ基を反応性重合体粒子に
導入することができる。即ち1反応性京合体粒子の表面
に於けるエポキシ基の濃度′t−前述のとお’) CE
PX(itmoLe/9−反応性重合体粒子)とし、ア
ミン基、イミノ基、エポキシ基の導入前の重合体粒子の
グリシジル(メタ)アクリレート単−体単位に基つくエ
ポキシ基の′#展をG(μm ole/’J’−反応性
重合体粒子〕とすると、重合体粒子中のグリシツル(メ
タ)アクリレート単量体単位が20〜100モル係の重
合体粒子を用い九場合には c’xpx≧1.1XG 好ましくは CMPK≧1.5XG を満たすエポキシ基の濃度を有する反応性重合体粒子と
することができ、重合体粒子中のグリシジル(メタ)ア
クリレート単量体単位が0405〜20モル嗟の重合体
粒子を用込九場合には、次式0式% tSたす反応性重合体粒子とすることも可能である。
しかも、アばノ基及び/又はイミノ基とニーキシ基の導
入により親水性である水酸基が生成し、このために分散
安定性の優れた反応性重合体粒子が得られる。
入により親水性である水酸基が生成し、このために分散
安定性の優れた反応性重合体粒子が得られる。
本発明の反応性重合体粒子のエポキシ基の濃度が、前記
式[A]で示される値未満の場合には、アミノ基及び/
又はイばノ基の導入蓋に応じてエポキシ基の導入量が増
加してbなりことを示す。即(]7) ち、アミノ基及び/又はイばノ基とエポキシ基の導入前
の重合体粒子のグリシジル(メタ)アクリレート単量体
単位に基づくエポキシ基の濃度Gに比べて、ア〈ノ基及
び/又はイミノ基とエポキシ基とを導入後の反応性重合
体粒子のエポキシ基の濃度czpxの方が小さめことに
なる。このような、反応性重合体粒子に免疫活性物質を
吸着させて診断用試薬としても、エポキシ基濃度が当初
の重合体粒子のそれよりも減少し、その開環によって生
成する水酸基濃度が減少する念めに、診断用試薬の安定
性が低下する。また、上記のような反応性重合体粒子に
免疫活性物質を共有結合させて診断用試薬としても、免
疫活性物質の共有結合に用贋るエポ午シ基濃度が当初の
重合体粒子のそれよりも減少することによって、共有結
合で固定される免疫活性物質の量が減少し、このtめ診
断用試薬の鋭敏性が低下する。
式[A]で示される値未満の場合には、アミノ基及び/
又はイばノ基の導入蓋に応じてエポキシ基の導入量が増
加してbなりことを示す。即(]7) ち、アミノ基及び/又はイばノ基とエポキシ基の導入前
の重合体粒子のグリシジル(メタ)アクリレート単量体
単位に基づくエポキシ基の濃度Gに比べて、ア〈ノ基及
び/又はイミノ基とエポキシ基とを導入後の反応性重合
体粒子のエポキシ基の濃度czpxの方が小さめことに
なる。このような、反応性重合体粒子に免疫活性物質を
吸着させて診断用試薬としても、エポキシ基濃度が当初
の重合体粒子のそれよりも減少し、その開環によって生
成する水酸基濃度が減少する念めに、診断用試薬の安定
性が低下する。また、上記のような反応性重合体粒子に
免疫活性物質を共有結合させて診断用試薬としても、免
疫活性物質の共有結合に用贋るエポ午シ基濃度が当初の
重合体粒子のそれよりも減少することによって、共有結
合で固定される免疫活性物質の量が減少し、このtめ診
断用試薬の鋭敏性が低下する。
前記した特定普のエポキシ基の濃度を有する反応性重合
体粒子の製造方法としては、次の(イ)及び(ロ)の方
法が採用される。
体粒子の製造方法としては、次の(イ)及び(ロ)の方
法が採用される。
(イ) グリシ、ゾル(メタ)アクリレート単量体重位
を有する重合体粒子と1分子中にアミノ基及び/又はイ
ミノ基を有し、且つ該アミノ基及び/又はイミノ基の窒
素原子に結合する水素原子の数が2個である含窒素化合
物とを反応させ、次いで、得られた重合体粒子と分子中
にエポキシ基を3個以上有する工がキシ化合物とを反応
させることを特徴とする反応性重合体粒子の製造方法。
を有する重合体粒子と1分子中にアミノ基及び/又はイ
ミノ基を有し、且つ該アミノ基及び/又はイミノ基の窒
素原子に結合する水素原子の数が2個である含窒素化合
物とを反応させ、次いで、得られた重合体粒子と分子中
にエポキシ基を3個以上有する工がキシ化合物とを反応
させることを特徴とする反応性重合体粒子の製造方法。
(ロ) グリシジル(メタ)アクリレート単量体単位を
有する重合体粒子と、分子中にアミノ基及び/又仁イミ
ノ基を有し、且つ核アミノ基及び/又はイミノ基の窒x
i子に結合する水素原子の数が3個以上である含窒素化
合物とを反応させ1次いで、得られた重合体粒子と分子
中にエポキシ基を2個以上存するエポキシ化合物とを反
応させること全特徴とする反応性重合体粒子の製造方法
。
有する重合体粒子と、分子中にアミノ基及び/又仁イミ
ノ基を有し、且つ核アミノ基及び/又はイミノ基の窒x
i子に結合する水素原子の数が3個以上である含窒素化
合物とを反応させ1次いで、得られた重合体粒子と分子
中にエポキシ基を2個以上存するエポキシ化合物とを反
応させること全特徴とする反応性重合体粒子の製造方法
。
本発明に於いてアミノ基及び/又はイミノ基を有し、該
アミノ基及び/又はイミノ基の菫素原子に結合する水素
原子の数が2個である含窒素化合物としては公知のもの
が特に制限されず採用される。例えば、 N、N’−ジ
メチルエチレンジアミン、N、N’−エチルエチレンシ
アばン、1.3−ビス〔トリス(ヒドロキシメチル)メ
チルアiノ〕ゾロノダン、N 、N’−ツメチル−1,
6−ジアばノヘキサン、N、N’−ジエチル−1,6−
ジアイノヘキサン、N 、N′−シアセチルエチレンシ
アばン、等のイばノ基を有するイずノ化合物を挙げるこ
とができる。
アミノ基及び/又はイミノ基の菫素原子に結合する水素
原子の数が2個である含窒素化合物としては公知のもの
が特に制限されず採用される。例えば、 N、N’−ジ
メチルエチレンジアミン、N、N’−エチルエチレンシ
アばン、1.3−ビス〔トリス(ヒドロキシメチル)メ
チルアiノ〕ゾロノダン、N 、N’−ツメチル−1,
6−ジアばノヘキサン、N、N’−ジエチル−1,6−
ジアイノヘキサン、N 、N′−シアセチルエチレンシ
アばン、等のイばノ基を有するイずノ化合物を挙げるこ
とができる。
さらにま九、次式に示す如く1当量のゾアンノ化合物と
2当量のモノエポキシ化合物の付加反応生成物が好適に
採用される。
2当量のモノエポキシ化合物の付加反応生成物が好適に
採用される。
例えば、シアイノエタン、シアはノデロノfン、シアず
ノブクン% 3#3′−シアずノー2−デロノ母ノール
、ゾエチレングリコールピス(3−アミノプロピル)エ
ーテル、等のシアばノ化合物1当量とエチレンオキシド
、プロピレンオキシド% 1.2−エポキシブタン、グ
リシドール、メチルグリシゾルエーテル、グリセロール
グリシジルエーテル、等のモノエポキシ化合物2当量の
付加反応生成物が好適に採用される。
ノブクン% 3#3′−シアずノー2−デロノ母ノール
、ゾエチレングリコールピス(3−アミノプロピル)エ
ーテル、等のシアばノ化合物1当量とエチレンオキシド
、プロピレンオキシド% 1.2−エポキシブタン、グ
リシドール、メチルグリシゾルエーテル、グリセロール
グリシジルエーテル、等のモノエポキシ化合物2当量の
付加反応生成物が好適に採用される。
本発明に於いてアミノ基及び/又はイミノ基を有し、該
アミノ基及び/又はイミノ基の窒素原子に結合する水素
原子の数が3以上である含窒素化合物としては、公知の
ものが特に制限されず採用される。例えば、ジアミノエ
タン、シア2ノプロノ臂ン、ジアミノブタン、3.3’
−ジアミノジデpピルアミンs 3 e 3’* 3#
−)リアミノトリプロピルアミン、N−(β−ヒドロキ
シプロピル)エチレンジアミン、ジエチレントリアミン
、トリエチレンテトラミン、テトラエチレンペンタミン
、ペンタエチレンへキサミン、ヘキサエチレンペンタミ
ン。
アミノ基及び/又はイミノ基の窒素原子に結合する水素
原子の数が3以上である含窒素化合物としては、公知の
ものが特に制限されず採用される。例えば、ジアミノエ
タン、シア2ノプロノ臂ン、ジアミノブタン、3.3’
−ジアミノジデpピルアミンs 3 e 3’* 3#
−)リアミノトリプロピルアミン、N−(β−ヒドロキ
シプロピル)エチレンジアミン、ジエチレントリアミン
、トリエチレンテトラミン、テトラエチレンペンタミン
、ペンタエチレンへキサミン、ヘキサエチレンペンタミ
ン。
ポリオキシエチレンジアミン、等の多価アミノ化合物を
挙げることができる。
挙げることができる。
本発明に於いてエポキシ基を2個以上有するエポキシ化
合物としては、公知のエポキシ化合物が採用される1例
えは1.3−ブタジエンジエボキシド、1.4−7”タ
ンジグリシジルエーテル、エチレングリコールジグリシ
ジルエーテル、セカンダリ−ブチルフェノールソゲリシ
ジルエーテル、ゾロビレングリコールゾグリシジルエー
テル、グリセロールジグリシジルエーテル、1.6−ヘ
キサンシオールジダリシジルエーテル、ポリエチレング
リコールジグリシノルエーテル、グルコ−ストリグリシ
ジルエーテル、トリメテロ−〃プロノ臂ントリグリシジ
ルエーテル、ペンタエリスリトールトリグリシジルエー
テル、ペンタエリスリトールテトラグリシジルエーテル
、グルコーストリグリシジルエーテル、グルコーストリ
グリシジルエーテル、グルコシドトリグリシジルエーテ
ル、グリシツル(メタ)アクリレート勢の多価アミノ化
合物を挙けることができる。
合物としては、公知のエポキシ化合物が採用される1例
えは1.3−ブタジエンジエボキシド、1.4−7”タ
ンジグリシジルエーテル、エチレングリコールジグリシ
ジルエーテル、セカンダリ−ブチルフェノールソゲリシ
ジルエーテル、ゾロビレングリコールゾグリシジルエー
テル、グリセロールジグリシジルエーテル、1.6−ヘ
キサンシオールジダリシジルエーテル、ポリエチレング
リコールジグリシノルエーテル、グルコ−ストリグリシ
ジルエーテル、トリメテロ−〃プロノ臂ントリグリシジ
ルエーテル、ペンタエリスリトールトリグリシジルエー
テル、ペンタエリスリトールテトラグリシジルエーテル
、グルコーストリグリシジルエーテル、グルコーストリ
グリシジルエーテル、グルコシドトリグリシジルエーテ
ル、グリシツル(メタ)アクリレート勢の多価アミノ化
合物を挙けることができる。
本発明に於いて、グリシジル(メタ)アクリレート単量
体単位を有する重合体粒子と、アミノ基及び/又はイミ
ノ基を有するf窒素化合物との反応は、重合体粒子と重
合体粒子が有する特定量のエポキシ基と反応させるべき
含窒素化合物とを水媒体中、エポキシ基に不活性な緩衝
液中、あるいはエポキシ基とル応件の極めて久しくかつ
1@体粒子を浴解させないメタノール、エタノール、イ
ンゾロパノール、アセトン、酢酸メチル、酢酸エチル、
等の水と親和性の大きい有機溶媒中、あるいはこれらの
混合縁体中で混合して反応すれFiよい。特に水媒体中
での反応が好ましく採用される。
体単位を有する重合体粒子と、アミノ基及び/又はイミ
ノ基を有するf窒素化合物との反応は、重合体粒子と重
合体粒子が有する特定量のエポキシ基と反応させるべき
含窒素化合物とを水媒体中、エポキシ基に不活性な緩衝
液中、あるいはエポキシ基とル応件の極めて久しくかつ
1@体粒子を浴解させないメタノール、エタノール、イ
ンゾロパノール、アセトン、酢酸メチル、酢酸エチル、
等の水と親和性の大きい有機溶媒中、あるいはこれらの
混合縁体中で混合して反応すれFiよい。特に水媒体中
での反応が好ましく採用される。
また、反応温度は1、合体粒子の分子構造やエポキシ基
濃度、含窒素化合物の分子構造、及び反応媒体に工って
異なるが、−般的には4℃乃至100℃、好1しくに4
℃乃至60℃の範囲が好適に採用される。反応媒体に有
機電媒を用いる場合には重合体粒子全溶解させない反応
温度′lk選ぶことが重要である。さらにまた含窒素化
合物のm度は重合体粒子の分子構造、エポキシ基濃度、
含窒素化合物の分子構造、及び反応条件によって異なる
が、重合体粒子のエポキシ基濃度に対して2乃至500
モル倍となるべく違べは良い。さらにまた、1に合体粒
子と含窒素化合物の混合方法は特に限定的でない。−般
的には、重合体粒子の懸濁媒体中へ含窒素化合物の溶液
を一括して添加する方法もしくCま飯々添力11する方
法、あるいは含窒素化合物の浴液中へ重合体粒子の懸濁
液全−括もしくは滴々添)J++する方法が女Jましく
採用される。
濃度、含窒素化合物の分子構造、及び反応媒体に工って
異なるが、−般的には4℃乃至100℃、好1しくに4
℃乃至60℃の範囲が好適に採用される。反応媒体に有
機電媒を用いる場合には重合体粒子全溶解させない反応
温度′lk選ぶことが重要である。さらにまた含窒素化
合物のm度は重合体粒子の分子構造、エポキシ基濃度、
含窒素化合物の分子構造、及び反応条件によって異なる
が、重合体粒子のエポキシ基濃度に対して2乃至500
モル倍となるべく違べは良い。さらにまた、1に合体粒
子と含窒素化合物の混合方法は特に限定的でない。−般
的には、重合体粒子の懸濁媒体中へ含窒素化合物の溶液
を一括して添加する方法もしくCま飯々添力11する方
法、あるいは含窒素化合物の浴液中へ重合体粒子の懸濁
液全−括もしくは滴々添)J++する方法が女Jましく
採用される。
以上の方法によってアミノ基及び/又はイミノ基が導入
され7cJ合体粒子とエポキシ基を複数個有するエポキ
シ化合物の反応は、重合体粒子のアミノ基及び/又はイ
ミノ基と反応させるべきエポキシ化合物全水媒体中、エ
ポキシ基に不活性な緩勾准中、あるいはエポキシ基と反
応性の極めて欠し7くかつ重合体粒子を浴解させないメ
タノール。
され7cJ合体粒子とエポキシ基を複数個有するエポキ
シ化合物の反応は、重合体粒子のアミノ基及び/又はイ
ミノ基と反応させるべきエポキシ化合物全水媒体中、エ
ポキシ基に不活性な緩勾准中、あるいはエポキシ基と反
応性の極めて欠し7くかつ重合体粒子を浴解させないメ
タノール。
エタノール、インゾロパノール、アセトン、酢酸メチル
、酢酸エチル、等の水と親和性の大きい有機溶媒中、あ
るいはこれらの混合媒体中で混合して反応すれはよい。
、酢酸エチル、等の水と親和性の大きい有機溶媒中、あ
るいはこれらの混合媒体中で混合して反応すれはよい。
特に水媒体中での反応が好ましく採用される。また、反
応温度は重合体粒子の分子構造やアミノ基及び/又はイ
ミノ基I#度、含窒素化合物の分子構造、及び反Yし媒
体に裏って異なるが、−般的には4℃乃至100℃、好
ましくは4℃乃至(i 0℃の範、囲が好適に採用され
る。反応媒体Vこ有機電媒を用いる場合には重合体粒子
全溶解させない反応温度を選ぶことがIi景である。
応温度は重合体粒子の分子構造やアミノ基及び/又はイ
ミノ基I#度、含窒素化合物の分子構造、及び反Yし媒
体に裏って異なるが、−般的には4℃乃至100℃、好
ましくは4℃乃至(i 0℃の範、囲が好適に採用され
る。反応媒体Vこ有機電媒を用いる場合には重合体粒子
全溶解させない反応温度を選ぶことがIi景である。
さらにまたエポキシ化合物の濃度は重合体粒子の分子構
造、アミノ基及び/又はイミノ基濃度、工Iキシ化合物
の分子構造、及び反応条件によって異なるが、重合体粒
子の粒子表面のアミノ基及び/又はイミノ基濃度に対し
て10乃至500モル倍の範囲が好適に採用される。さ
らにまた反応時間は一概に限定できないが、−般には1
0分乃至100時間が好ましく、更には30分乃至50
時間がニジ好ましく採用される。
造、アミノ基及び/又はイミノ基濃度、工Iキシ化合物
の分子構造、及び反応条件によって異なるが、重合体粒
子の粒子表面のアミノ基及び/又はイミノ基濃度に対し
て10乃至500モル倍の範囲が好適に採用される。さ
らにまた反応時間は一概に限定できないが、−般には1
0分乃至100時間が好ましく、更には30分乃至50
時間がニジ好ましく採用される。
本発明に於ける反応性重合体粒子の有するエポキシ基は
、反応性重合体粒子に免疫活性物質を吸着して診断用試
薬とする場合にはその大部分を、また、免疫活性物質を
共有結合に工り結合して診断用試薬とする場合には免疫
活性物質の共有結合に使用し友残りの大部分を以下の方
法によって親水基に変換することができる。
、反応性重合体粒子に免疫活性物質を吸着して診断用試
薬とする場合にはその大部分を、また、免疫活性物質を
共有結合に工り結合して診断用試薬とする場合には免疫
活性物質の共有結合に使用し友残りの大部分を以下の方
法によって親水基に変換することができる。
以下の方法により反応性重合体粒子のエポキシ基金取水
基に変換することに工す1診断用試薬の免疫学的凝集反
応の鋭敏性が優れると共に、非特)°r的凝集反応が低
く、かつ保存安定性に優れる特徴がある。
基に変換することに工す1診断用試薬の免疫学的凝集反
応の鋭敏性が優れると共に、非特)°r的凝集反応が低
く、かつ保存安定性に優れる特徴がある。
(1)反応性l−合体粒子を加熱加水分解するが、もし
くは酸性水浴液中で加水分解することに工りエポキシ基
金ソヒドロキシル基に変換する。
くは酸性水浴液中で加水分解することに工りエポキシ基
金ソヒドロキシル基に変換する。
(2) 2−メルカプトエタノール、2−メルカデト
デロノ卆ノール、3−メルトカプト−1,2−プロパン
ジオール、メルカプトペンタエリスリトール等のメルカ
プトアルカノール類と反応することにより、エポキシ基
をヒドロキシル基に変換する。
デロノ卆ノール、3−メルトカプト−1,2−プロパン
ジオール、メルカプトペンタエリスリトール等のメルカ
プトアルカノール類と反応することにより、エポキシ基
をヒドロキシル基に変換する。
(3) エタノールアミン、プロパツールアミン、ジ
ェタノールアミン、2−アミノ−2−エチル−1,3−
プロパンジオール、トリス(ヒドロキシエチル)アミノ
メタン等のヒドロキシアミン類と反応することに工p、
エポキシ基をヒドロキシル基に変換する。
ェタノールアミン、2−アミノ−2−エチル−1,3−
プロパンジオール、トリス(ヒドロキシエチル)アミノ
メタン等のヒドロキシアミン類と反応することに工p、
エポキシ基をヒドロキシル基に変換する。
(4) チメグリコール酸、チオプロピオン酸、等の
メルカプトカルボン酸類と反応することにニジ、エポキ
シ基をカルブキシル基に変換する。
メルカプトカルボン酸類と反応することにニジ、エポキ
シ基をカルブキシル基に変換する。
(5)クリシン、N−1リス(ヒドロキシメチル)メチ
ルグリシン、等のカルボキシル化アミン類と反応するこ
とにより、エポキシ?&ヲカル?キシル基に変換する。
ルグリシン、等のカルボキシル化アミン類と反応するこ
とにより、エポキシ?&ヲカル?キシル基に変換する。
(1)〜(5)の反応条件は本発明で用いる重合体粒子
に含蟹木化合物全反応させる条件に準じて行なえばよい
。さらにまた、本発明で得られた反応性重合体粒子に上
述の(11〜(5)の親水化反応を行なう前に、前記(
イ)及びく口)に示した方法によりta累化合物を反応
させ次いでエポキシ化合物を反応させる方法を複数回繰
返し行なうことも可能である。
に含蟹木化合物全反応させる条件に準じて行なえばよい
。さらにまた、本発明で得られた反応性重合体粒子に上
述の(11〜(5)の親水化反応を行なう前に、前記(
イ)及びく口)に示した方法によりta累化合物を反応
させ次いでエポキシ化合物を反応させる方法を複数回繰
返し行なうことも可能である。
このようにして得られた反応性重合体粒子のエポキシ基
の娘度は、前記した[A]式を満足することが必要であ
るが、さらに、0.1〜1000μmale/17−反
応性重合体粒子、よシ好ましくは0.2〜5 U Oμ
mo!A/9−反応性重合体粒子であることが好ましい
。
の娘度は、前記した[A]式を満足することが必要であ
るが、さらに、0.1〜1000μmale/17−反
応性重合体粒子、よシ好ましくは0.2〜5 U Oμ
mo!A/9−反応性重合体粒子であることが好ましい
。
本発明によ勺得られた反応性重合体粒子は、水媒体中で
の疎水性有機化合物の吸層剤、生体内での各種細胞、組
紙による貧食作用の観察用粒子、及び酵素、蛋白質ある
いは免役活性物質の固定化用粒子等に応用でき、特に免
疫活性物質をIJB?、着法吃しくに共有結合法で固定
化した診断用試薬は免役学的凝集反応性が太きいだけで
なく、分散安定性と保存安定性に優れる特徴がある。
の疎水性有機化合物の吸層剤、生体内での各種細胞、組
紙による貧食作用の観察用粒子、及び酵素、蛋白質ある
いは免役活性物質の固定化用粒子等に応用でき、特に免
疫活性物質をIJB?、着法吃しくに共有結合法で固定
化した診断用試薬は免役学的凝集反応性が太きいだけで
なく、分散安定性と保存安定性に優れる特徴がある。
以下に、本発明で得られた反応性重合体粒子を診断用試
薬として用いた壜1合について説明する。
薬として用いた壜1合について説明する。
本発明で得られた反応性重合体粒子に成層法もしくは共
有結合法によって固定化する免疫活性物質としては1%
に限定的でなく公知のものが使用出来る。代表的なもの
を例示すれは、例えば、変性ガンマグロブリン、抗核因
子、ヒトアルブミン、抗ヒトアルブミン抗体、イムノグ
ロブリンG (IgG)、抗ヒトIgG抗体、イムノグ
ロブリンA (IgA ) 。
有結合法によって固定化する免疫活性物質としては1%
に限定的でなく公知のものが使用出来る。代表的なもの
を例示すれは、例えば、変性ガンマグロブリン、抗核因
子、ヒトアルブミン、抗ヒトアルブミン抗体、イムノグ
ロブリンG (IgG)、抗ヒトIgG抗体、イムノグ
ロブリンA (IgA ) 。
抗ヒトIgA抗体、イムノグロブリンM (IgM )
、抗ヒトIgM抗体、ストレプトリジンO、ストレプト
キナーゼ、ヒアルロンダーゼ、抗ストレプトリジン0抗
体、C−反応性蛋白知、抗C−反応性蛋白抗体、アルフ
ァーフエトプロティン(AFP ) 。
、抗ヒトIgM抗体、ストレプトリジンO、ストレプト
キナーゼ、ヒアルロンダーゼ、抗ストレプトリジン0抗
体、C−反応性蛋白知、抗C−反応性蛋白抗体、アルフ
ァーフエトプロティン(AFP ) 。
抗AFP抗体、楠胎児性抗原(CEA ) 、抗CEA
抗体、ヒト繊毛性ゴナドトロピン(HCG ) 、抗H
CG抗体、抗ニストロrン抗体、抗インシュリン抗体、
B型肝炎表向抗原(HBs ) 、抗11Bm抗体、梅
参トレポネマ抗!、X疹抗原、インフルエンザ抗Jh、
、袖体成分C19、抗C19抗体、抗C3,抗体、等の
公知の免疫活性愉*’tあげることができる。
抗体、ヒト繊毛性ゴナドトロピン(HCG ) 、抗H
CG抗体、抗ニストロrン抗体、抗インシュリン抗体、
B型肝炎表向抗原(HBs ) 、抗11Bm抗体、梅
参トレポネマ抗!、X疹抗原、インフルエンザ抗Jh、
、袖体成分C19、抗C19抗体、抗C3,抗体、等の
公知の免疫活性愉*’tあげることができる。
本発明で得られた反応性重合体粒子に固定化される該免
疫活性物質の量は、各検査項目&C適している割合で反
応性重合体粒子に固定化させれは工〈、−概に限定され
ない。−般には、該免疫活性物質の量が多い程1診断用
試薬の鋭敏性が上がるため、鋭敏性ty求する場合には
、前記の反応性重合体粒子に飽和する迄、免疫活性物質
を吸着又は共有結合させることが好まし−。
疫活性物質の量は、各検査項目&C適している割合で反
応性重合体粒子に固定化させれは工〈、−概に限定され
ない。−般には、該免疫活性物質の量が多い程1診断用
試薬の鋭敏性が上がるため、鋭敏性ty求する場合には
、前記の反応性重合体粒子に飽和する迄、免疫活性物質
を吸着又は共有結合させることが好まし−。
本発明に工り得られた反応性重合体粒子は免疫活性物質
の固定化能力と親水性のバランスが極めて良く調節され
ているので、抗原又は抗体と反応性重合体粒子を緩衝液
又は生理食塩水などの水媒体中で混合し、抗原又は抗体
が化学的に変化しないように、そしてそれらの免役学的
性質を保持させるように、非常に温和な条件下に抗原又
は抗体を反応性重合体粒子表面に固定化させることがで
きるだけでなく、該媒体中で極めて安定性が高い特徴が
ある。反応性1合粒子表面に固定化され几免疫活性物質
の童は、重合体粒子の蛋白結合部位を飽和又はブロック
されるように辿ぶことか好ましいが、残存する蛋白結合
部位を免疫学的に不活性な適当な物餉でブロック又は不
活性化させることができる。
の固定化能力と親水性のバランスが極めて良く調節され
ているので、抗原又は抗体と反応性重合体粒子を緩衝液
又は生理食塩水などの水媒体中で混合し、抗原又は抗体
が化学的に変化しないように、そしてそれらの免役学的
性質を保持させるように、非常に温和な条件下に抗原又
は抗体を反応性重合体粒子表面に固定化させることがで
きるだけでなく、該媒体中で極めて安定性が高い特徴が
ある。反応性1合粒子表面に固定化され几免疫活性物質
の童は、重合体粒子の蛋白結合部位を飽和又はブロック
されるように辿ぶことか好ましいが、残存する蛋白結合
部位を免疫学的に不活性な適当な物餉でブロック又は不
活性化させることができる。
(効果及び作用)
本発明の反応性重合体粒子音用い几診断用試業は、免疫
学的に県反応の鋭敏性が大きめだけでなく、分散安定性
や保存安定性がすぐれるという特徴がある。その理由は
必ずしも明らかではないが、本発明者等は次のように推
測している。本発明の反応性重合体粒子は免疫活性物質
を共有結合法で固定化する千ポキシ基尋の1能基の数或
いは免疫活性物質を吸着する表面のエリアの広さと1分
散安定性と保存安定性に寄与する水酸基等の親水基の数
とが独立函数となっており、そのどちらも大きくするこ
とができるという特徴を有する。この事実は鹸断用試条
の合成上極めてillな因子である。免役活性物ηを固
定化する官能基湿度或いは表面のエリアの広さが多けれ
ば多い程、診断用試薬の鋭敏性は向上するが、重合体粒
子の分散安定性と保存安定性が低下する欠点がある。−
万、重合体粒子の親水基嬢度が多ければ多い程診断用試
系の分散安定性と保存安定性が増加するが、鋭敏性が著
しく低下する欠点が生じる。しかしながら。
学的に県反応の鋭敏性が大きめだけでなく、分散安定性
や保存安定性がすぐれるという特徴がある。その理由は
必ずしも明らかではないが、本発明者等は次のように推
測している。本発明の反応性重合体粒子は免疫活性物質
を共有結合法で固定化する千ポキシ基尋の1能基の数或
いは免疫活性物質を吸着する表面のエリアの広さと1分
散安定性と保存安定性に寄与する水酸基等の親水基の数
とが独立函数となっており、そのどちらも大きくするこ
とができるという特徴を有する。この事実は鹸断用試条
の合成上極めてillな因子である。免役活性物ηを固
定化する官能基湿度或いは表面のエリアの広さが多けれ
ば多い程、診断用試薬の鋭敏性は向上するが、重合体粒
子の分散安定性と保存安定性が低下する欠点がある。−
万、重合体粒子の親水基嬢度が多ければ多い程診断用試
系の分散安定性と保存安定性が増加するが、鋭敏性が著
しく低下する欠点が生じる。しかしながら。
本発明の反応性重合体粒子は、これらの矛盾を解決し、
鋭敏性及び分散安定性の共に優れたものである。従って
、本発明の反応性重合体粒子は、新規な診断用試薬の開
発に於すて極めて1袂な位置を占めるものである。
鋭敏性及び分散安定性の共に優れたものである。従って
、本発明の反応性重合体粒子は、新規な診断用試薬の開
発に於すて極めて1袂な位置を占めるものである。
以下に実施例及び比較例をiけて本発明をさらに詳細に
説明するが、本発明にこれらの実施例に限定されるもの
ではない。
説明するが、本発明にこれらの実施例に限定されるもの
ではない。
尚、実施例及び比較例に於ける窒X1Q子及びエポキシ
基の足置は以下の方法により行なった。
基の足置は以下の方法により行なった。
(1)窒素原子の定−
反応性基合体粒子全乾燥後、三菱化成(株)製の微i窒
素分析装置(モデルTN−(I2型)を周込て窒素原子
の濃度(CN)全測定した。
素分析装置(モデルTN−(I2型)を周込て窒素原子
の濃度(CN)全測定した。
(2) エポキシ基濃度の定量
重合体粒子及び反応性重合体粒子金1重ii%濃夏で#
省水に分散した懸濁液1容と6−アミノカプロン酸全0
.5M−度に溶解した水溶液1容を混合し、)111=
8にpA製した後、60℃で24時間攪拌下に反応した
。反応抜蚕温で1過間蒸留水中で透析を繰返した彼、遠
心分離して重合体粒子を回収し、乾燥後、三菱化成(株
)製の微fm累分析装置(モデル、TN−02型)全利
用してエポキシ基と反応したε−アミノカルボン酸i&
l測定し、ε−アミノカプロン[1−反応しない重合体
粒子のブランク仙全差し引くことにエリ、重合体粒子及
び反応性重合体板子の弐面に於けるエポキシ基の濃度(
Cにpx)を分析し几。
省水に分散した懸濁液1容と6−アミノカプロン酸全0
.5M−度に溶解した水溶液1容を混合し、)111=
8にpA製した後、60℃で24時間攪拌下に反応した
。反応抜蚕温で1過間蒸留水中で透析を繰返した彼、遠
心分離して重合体粒子を回収し、乾燥後、三菱化成(株
)製の微fm累分析装置(モデル、TN−02型)全利
用してエポキシ基と反応したε−アミノカルボン酸i&
l測定し、ε−アミノカプロン[1−反応しない重合体
粒子のブランク仙全差し引くことにエリ、重合体粒子及
び反応性重合体板子の弐面に於けるエポキシ基の濃度(
Cにpx)を分析し几。
実施例1〜3及び比較例1〜2
(1)京盆体粒子の調製
攪拌機付きガラス製フラスコを情累置換した後に、#留
水27υ0CC7Jlえて70℃に保つ友後に、簀累雰
囲気f、攪拌下に過硫酸カリウムを5.0ミリ七ル/l
@度になるようVC院加した。次いでソー2−エチルへ
キシルスルホコハク酸1.5 、!i’ k乳化剤とし
て添加した後、70℃に加温し几グリシジルメタクリレ
ート30ミリモル、メタクリル酸3ミリモル、及びスチ
レン100ミリモルの混合物を添加して1時間重合金行
なり几。その後スチレン2.6モルを定量ポンプで摘々
添加してから70℃で29時間攪拌下に重合した。1合
後、室温まで冷却してから、得られ定型合体粒子を濾紙
(A2)で濾別して大きな凝集体を除いた。次いで透析
全行なった後に、遠心分離、蒸留水への再分散の操作を
繰返し几後に、イオン交換樹脂で脱イオン操作全行ない
、更に遠心分離と洗浄を行なって重合体粒子′li−精
製し念。得られた重合体粒子の粒子径は0.232μm
であった。ま几、vi重合体粒子の表面に於けるエポキ
シ基濃度(G)は1.611maム力−重合体粒子であ
った。
水27υ0CC7Jlえて70℃に保つ友後に、簀累雰
囲気f、攪拌下に過硫酸カリウムを5.0ミリ七ル/l
@度になるようVC院加した。次いでソー2−エチルへ
キシルスルホコハク酸1.5 、!i’ k乳化剤とし
て添加した後、70℃に加温し几グリシジルメタクリレ
ート30ミリモル、メタクリル酸3ミリモル、及びスチ
レン100ミリモルの混合物を添加して1時間重合金行
なり几。その後スチレン2.6モルを定量ポンプで摘々
添加してから70℃で29時間攪拌下に重合した。1合
後、室温まで冷却してから、得られ定型合体粒子を濾紙
(A2)で濾別して大きな凝集体を除いた。次いで透析
全行なった後に、遠心分離、蒸留水への再分散の操作を
繰返し几後に、イオン交換樹脂で脱イオン操作全行ない
、更に遠心分離と洗浄を行なって重合体粒子′li−精
製し念。得られた重合体粒子の粒子径は0.232μm
であった。ま几、vi重合体粒子の表面に於けるエポキ
シ基濃度(G)は1.611maム力−重合体粒子であ
った。
(2)反応性重合体粒子の1!1i!製得られた重合体
粒子全2鼠:fi!%濃度で蒸留水に分散させた懸濁液
200 mlと第1表に示す官%iY累化合物を溶かし
た水浴液50mを混合し、室温で72時間攪拌下に反応
した。反応後、重合体粒子11−遠心分離、蒸留水への
再分散の操作を繰返した後に、窒叱t1t、換してから
98℃で2時間加熱することに工す重合体粒子の未反応
のエポキシ基を加水分解した。次いで、該重合体粒子を
21血饅襄度で#留水に分散させたに濁液100−と第
1表に示したエポキシ化合物をF+かした水′#液10
100a f混合し、室温で攪拌下に72時間反応した
。
粒子全2鼠:fi!%濃度で蒸留水に分散させた懸濁液
200 mlと第1表に示す官%iY累化合物を溶かし
た水浴液50mを混合し、室温で72時間攪拌下に反応
した。反応後、重合体粒子11−遠心分離、蒸留水への
再分散の操作を繰返した後に、窒叱t1t、換してから
98℃で2時間加熱することに工す重合体粒子の未反応
のエポキシ基を加水分解した。次いで、該重合体粒子を
21血饅襄度で#留水に分散させたに濁液100−と第
1表に示したエポキシ化合物をF+かした水′#液10
100a f混合し、室温で攪拌下に72時間反応した
。
反応後、遠心分離、蒸留水への再分散の操作を3回繰返
してN製することにより1本発明の反応性重合体粒子を
得た。得られ几反応性重合体粒子の輩累原子#F度(C
I4)及びエポキシ基の1M度(CEPX)は第】表に
示す通りであった。さらに、該反応性重合体粒子を98
℃で2時間加熱することにより反応性重合体粒子のエポ
キシ基金加水分解した。
してN製することにより1本発明の反応性重合体粒子を
得た。得られ几反応性重合体粒子の輩累原子#F度(C
I4)及びエポキシ基の1M度(CEPX)は第】表に
示す通りであった。さらに、該反応性重合体粒子を98
℃で2時間加熱することにより反応性重合体粒子のエポ
キシ基金加水分解した。
次いで反ろ性重合体粒子を濾紙(A2)で濾別した後に
、遠心分離、蒸留水への再分散の操作を3回繰返してハ
製した。
、遠心分離、蒸留水への再分散の操作を3回繰返してハ
製した。
(刀 ヒ)IgGを固定化[7た反応性重合体ね子のル
Q製 (2)で得られた本発明の反応性重合体粒子を固型分濃
度1:1(t%でグリシン緩衝液に分散し友。本発明に
於いてグリシン緩衝液とはグリシン0.05モル及び食
塩0.05モルを水1)に溶解し、次いで2規定水酸化
す) IJウム水溶液でpi−1’i8.2に調製し、
さらにアジ化ナトリウム’kl、9添加したものである
。
Q製 (2)で得られた本発明の反応性重合体粒子を固型分濃
度1:1(t%でグリシン緩衝液に分散し友。本発明に
於いてグリシン緩衝液とはグリシン0.05モル及び食
塩0.05モルを水1)に溶解し、次いで2規定水酸化
す) IJウム水溶液でpi−1’i8.2に調製し、
さらにアジ化ナトリウム’kl、9添加したものである
。
本発明に於いてヒ) IgGは、ヒト血清を飽和硫安で
塩析し、さらに透析を行ない精製したものを用いた。
塩析し、さらに透析を行ない精製したものを用いた。
ヒ)IgGをグリシン緩衝液にニジ希釈し1■/−に調
整する。次いで倍数希釈法に工りヒ)IrG1rグリシ
ン緩衝液により希釈してヒ)IgG希釈液を調製する。
整する。次いで倍数希釈法に工りヒ)IrG1rグリシ
ン緩衝液により希釈してヒ)IgG希釈液を調製する。
11量チ濃度の反応性重合体粒子分散液1容にヒ)Ig
G希釈液1容を加え攪拌し、室温下2時間放置する。次
いで遠心分離、グリシン緩衝液への再分散の操作を繰り
返えすことに工りヒ) IgGを固定化した反応性重合
体粒子を洗浄した後に、グリシン緩衝液に固型分濃度を
0.5重量−になるように再分散させ、4℃で保存し友
。
G希釈液1容を加え攪拌し、室温下2時間放置する。次
いで遠心分離、グリシン緩衝液への再分散の操作を繰り
返えすことに工りヒ) IgGを固定化した反応性重合
体粒子を洗浄した後に、グリシン緩衝液に固型分濃度を
0.5重量−になるように再分散させ、4℃で保存し友
。
(4)抗原・抗体反応
ヒ)IgGkウサギに免疫して得た抗ヒトIgGウサギ
血清を60℃、30分非削化処理を行かった。この血清
を以下抗ヒ) IgGウサギ血清と呼ぶ。
血清を60℃、30分非削化処理を行かった。この血清
を以下抗ヒ) IgGウサギ血清と呼ぶ。
抗ヒ) IgGウサギ血清をグリシン緩衝液で20倍に
希釈したものを原液とし、倍数希釈法により抗ヒトIg
Gウサギ血清をグリシン緩衝液で希釈して抗と) Ig
Gウサギ血清希釈液を調製する。抗原・抗体反応を行な
うためにガラス製10大のホールグラスを用意し、グリ
シン緩衝液で希釈した抗ヒトIgGウサギ血清を各ホー
ルに0.04−加える。
希釈したものを原液とし、倍数希釈法により抗ヒトIg
Gウサギ血清をグリシン緩衝液で希釈して抗と) Ig
Gウサギ血清希釈液を調製する。抗原・抗体反応を行な
うためにガラス製10大のホールグラスを用意し、グリ
シン緩衝液で希釈した抗ヒトIgGウサギ血清を各ホー
ルに0.04−加える。
次いでヒ)IgG′fr固定化した反応性重合体粒子の
グリシン緩衝液分散液を各ホールに0.o4−加える。
グリシン緩衝液分散液を各ホールに0.o4−加える。
この後直ちに平沢製作所製テーバー式攪拌機によりホー
ルグラス′fr1分間に120回転の速度で水平回転し
攪拌を行なう。抗原・抗体反応により反応性及合体粒子
の凝集の有無から、ヒ) IgG舌・651足化した反
応性型′合体粒子の特性である鋭敏性を評価した。ホー
ルグラスを用いた実施例1の反応性重合体粒子の凝集試
験の結果t−第1図に示す。第1図は10分間の攪拌後
の凝集状態を示す。
ルグラス′fr1分間に120回転の速度で水平回転し
攪拌を行なう。抗原・抗体反応により反応性及合体粒子
の凝集の有無から、ヒ) IgG舌・651足化した反
応性型′合体粒子の特性である鋭敏性を評価した。ホー
ルグラスを用いた実施例1の反応性重合体粒子の凝集試
験の結果t−第1図に示す。第1図は10分間の攪拌後
の凝集状態を示す。
凝集が全く認められない場合←)、凝集の有無が判定し
が九い場合(±)、明らかに#集が認められる場合、凝
集の強い順に千〇 +4−#+と判定した。
が九い場合(±)、明らかに#集が認められる場合、凝
集の強い順に千〇 +4−#+と判定した。
図中Cは抗原もしく扶抗体を全く含まないことを示す。
凝集試験の結果、明らかに凝集の認められたホールに於
ける抗ヒ) IgGウサギ血清希釈液の最高希釈倍数を
もって1反応性重合体粒子の鋭敏性を評価した。
ける抗ヒ) IgGウサギ血清希釈液の最高希釈倍数を
もって1反応性重合体粒子の鋭敏性を評価した。
反応性重合体粒子の特性として、さらに反応性重合体粒
子の分散安定性を評価した。すなわち。
子の分散安定性を評価した。すなわち。
反応性重合体粒子にヒ) IgG希釈液を加え室温で1
月放置した後の反応性重合体粒子の分散状態をもりて反
応性重合体粒子のヒ)IgG固足固定の分散安定性″に
評価した。又と) xga固定化後3ケ月経過した後の
反応性重合体粒子の分散状態をもってヒ)IgGt−固
定化した反応性重合体粒子の保存中の分散安定性を評価
した。
月放置した後の反応性重合体粒子の分散状態をもりて反
応性重合体粒子のヒ)IgG固足固定の分散安定性″に
評価した。又と) xga固定化後3ケ月経過した後の
反応性重合体粒子の分散状態をもってヒ)IgGt−固
定化した反応性重合体粒子の保存中の分散安定性を評価
した。
尚、比較例1として、(1)で得られた重合体粒子に実
施例1と同様の操作で、本発明で特定した範11J以下
の粒子表面のエポキシ基濃度(Cwpx )の反応性重
合体粒子を得た。得られた反応性重合体粒子を実九例1
と同様の操作で性能を調べた。その結果を組1表に示す
。
施例1と同様の操作で、本発明で特定した範11J以下
の粒子表面のエポキシ基濃度(Cwpx )の反応性重
合体粒子を得た。得られた反応性重合体粒子を実九例1
と同様の操作で性能を調べた。その結果を組1表に示す
。
また、比較例2として、(1)で得られた重合体粒子′
5r:98℃で2時間加熱することによシエIキシ基を
加水分解した。次いで重合体粒子を濾紙(A2)で濾別
した後に、遠心分離、蒸留水への再分散の操作を3回繰
返して精製した。得られt重合体粒子を実施例1と同様
の操作で性能を調べた。
5r:98℃で2時間加熱することによシエIキシ基を
加水分解した。次いで重合体粒子を濾紙(A2)で濾別
した後に、遠心分離、蒸留水への再分散の操作を3回繰
返して精製した。得られt重合体粒子を実施例1と同様
の操作で性能を調べた。
その結果な泥り表に示す。
第1表の結果から明らかな如く1本発明の反応性重合体
粒子はヒ)IgG’に吸着で固定化した後に残存する結
合部位を親水性の蛋白、例えば、ウシ崩清アルブミンな
どでブロックさせることなく、分散安定性がよく、かつ
鋭敏性が高いというI#徴がある。
粒子はヒ)IgG’に吸着で固定化した後に残存する結
合部位を親水性の蛋白、例えば、ウシ崩清アルブミンな
どでブロックさせることなく、分散安定性がよく、かつ
鋭敏性が高いというI#徴がある。
実施例4
(1)反応性及合体粒子の調製
実施例1で得られた反応性重合体粒子(粒子表面のm
$ IFA子濃度(CN ) = 5.6 AmoLJ
’jj−反応性重合体粒子、エポキシM 1lik L
(Cz P x ) = 6.4 tmobsJ−反
応性重合体粒子)を21′!1に%濃度で蒸留水に分散
させた懸濁液50ゴと300μmot・のα−チオグリ
セロールの水浴液1〇−を混合し、室温で48時M攪拌
下に反応した。反応後、反応性重合体粒子を遠心分離、
′#c貿水留水再分散の操作を5回繰返して精製した。
$ IFA子濃度(CN ) = 5.6 AmoLJ
’jj−反応性重合体粒子、エポキシM 1lik L
(Cz P x ) = 6.4 tmobsJ−反
応性重合体粒子)を21′!1に%濃度で蒸留水に分散
させた懸濁液50ゴと300μmot・のα−チオグリ
セロールの水浴液1〇−を混合し、室温で48時M攪拌
下に反応した。反応後、反応性重合体粒子を遠心分離、
′#c貿水留水再分散の操作を5回繰返して精製した。
子のFA製
(りで得られた反応性重合体粒子全固型分濃反1ム鈑チ
でpi4 = 8.2に調製したグリシン緩衝液に分散
させた。次いでヤギの産生じた抗CRP血清を塩層1と
透析でγ−グロブリンにw8輪しt後、アフイニティク
ロマトにエリ精製して得た精′#CRP抗体を1000
4.勺漠度に當有するグリモノ駿伽液全調製し几後に倍
歓布釈法にニジ希釈してCRP抗体希釈液をy4Nした
。反応性重合体粒子分散液1容と′!′PI製CRP抗
CRP抗体1容とを加え、攪拌し、室温下2時間放置し
た。次いで遠心分離、グリシン緩衝液への再分散の操作
を繰り返して洗浄した後、CRP抗体を固定化した反応
性重合体粒子をグリシン緩衝液に固型分濃度全0.51
電チになるように調製し几。
でpi4 = 8.2に調製したグリシン緩衝液に分散
させた。次いでヤギの産生じた抗CRP血清を塩層1と
透析でγ−グロブリンにw8輪しt後、アフイニティク
ロマトにエリ精製して得た精′#CRP抗体を1000
4.勺漠度に當有するグリモノ駿伽液全調製し几後に倍
歓布釈法にニジ希釈してCRP抗体希釈液をy4Nした
。反応性重合体粒子分散液1容と′!′PI製CRP抗
CRP抗体1容とを加え、攪拌し、室温下2時間放置し
た。次いで遠心分離、グリシン緩衝液への再分散の操作
を繰り返して洗浄した後、CRP抗体を固定化した反応
性重合体粒子をグリシン緩衝液に固型分濃度全0.51
電チになるように調製し几。
(3)抗原・抗体反応
検体として既知濃度のヒ) CRP血消を56℃で30
分間加熱処理して非動化しt後、グリシン緩@液で希釈
系列全訳節した。実施例1と同様の操作で、ガラス製1
0穴のホールグラスを利用して抗原・抗体反応金銅べた
。その結果、鋭敏性は7日後及び3ケ月後共に5μI淘
であっ九。オた、分散安定性は7日後1本、3ケ月後に
1本の非特異的凝集が誌められた。
分間加熱処理して非動化しt後、グリシン緩@液で希釈
系列全訳節した。実施例1と同様の操作で、ガラス製1
0穴のホールグラスを利用して抗原・抗体反応金銅べた
。その結果、鋭敏性は7日後及び3ケ月後共に5μI淘
であっ九。オた、分散安定性は7日後1本、3ケ月後に
1本の非特異的凝集が誌められた。
実施例5及び比較例3
(1) ]!合体粒子のV@製
攪拌機付きガラス製フラスコを窒素tt換し次後ニ、#
留水2700(Lk加えて75℃に保ツ7’Cfljに
、音素雰囲気下、攪拌下に過硫酸カリウム5ミリモル/
71.チオ硫酸ナトリウム5ミリモル/l。
留水2700(Lk加えて75℃に保ツ7’Cfljに
、音素雰囲気下、攪拌下に過硫酸カリウム5ミリモル/
71.チオ硫酸ナトリウム5ミリモル/l。
硫酸@o、25ミlJモル/lを添加した。次いで75
℃に加温し几グリシジルアクリレート15ミリモル及び
メチルメタクリレート250ミリモルの混合物を添加し
て75℃で30分間攪拌下に重合した。その後、メチル
メタクリレート2.6モルヲ定量ポンプで満々添加して
、更に75℃で2時間攪拌下に重合した。その後の操作
は実施例1と同様の操作を行なった。得られ九重合体粒
子の粒子径は0.208μmであった。この重合体粒子
の表面におけるエポキシ基諷度(G)は0.8μmol
@//l−重合体粒子であっ友。
℃に加温し几グリシジルアクリレート15ミリモル及び
メチルメタクリレート250ミリモルの混合物を添加し
て75℃で30分間攪拌下に重合した。その後、メチル
メタクリレート2.6モルヲ定量ポンプで満々添加して
、更に75℃で2時間攪拌下に重合した。その後の操作
は実施例1と同様の操作を行なった。得られ九重合体粒
子の粒子径は0.208μmであった。この重合体粒子
の表面におけるエポキシ基諷度(G)は0.8μmol
@//l−重合体粒子であっ友。
辺−医艮其重合体粒子の調製
得られた重合体粒子t−2重−1tチ濃度で蒸留水に分
散させた懸濁液200−と200μmoteのジエチレ
ントリアミンを溶かした水浴液50−を混合し、室温で
72時間攪拌下に反応し友。反応後、重合体粒子を遠心
分離、蒸留水への再分散操作を繰返した後に、2重1に
チ濃度で蒸留水に分散させた懸濁液200tdと600
μmoteのグリセロールジグリシジルエーテルの水浴
液100−を混合し、室温で攪拌下に50時間反応した
。反応後、遠心分離、蒸留水への再分散操作を繰返して
精製した反応性重合体粒子を得た。得られた反応性重合
体粒子に上記反応を全く同様の操作ft緑返して、分岐
数の多い反応性重合体粒子を合成した。かくして得られ
た反応性重合体粒子のtMiX原子濃度(CN)は2.
1μmot−A−反応性重合体粒子、エポキシ基の濃度
((−epx )は2.6μrnoLe/II−反応性
重合体粒子であった。さらに該反応性重合体粒子を98
℃で2時間、音素雰囲気下で加熱することにより反応性
重合体粒子のエポキシ基を加水分解した。次いで反応性
重合体粒子を濾紙(ム2)で濾別した後に、遠心分離、
蒸留水への再分散の操作を3回繰返してN製した。
散させた懸濁液200−と200μmoteのジエチレ
ントリアミンを溶かした水浴液50−を混合し、室温で
72時間攪拌下に反応し友。反応後、重合体粒子を遠心
分離、蒸留水への再分散操作を繰返した後に、2重1に
チ濃度で蒸留水に分散させた懸濁液200tdと600
μmoteのグリセロールジグリシジルエーテルの水浴
液100−を混合し、室温で攪拌下に50時間反応した
。反応後、遠心分離、蒸留水への再分散操作を繰返して
精製した反応性重合体粒子を得た。得られた反応性重合
体粒子に上記反応を全く同様の操作ft緑返して、分岐
数の多い反応性重合体粒子を合成した。かくして得られ
た反応性重合体粒子のtMiX原子濃度(CN)は2.
1μmot−A−反応性重合体粒子、エポキシ基の濃度
((−epx )は2.6μrnoLe/II−反応性
重合体粒子であった。さらに該反応性重合体粒子を98
℃で2時間、音素雰囲気下で加熱することにより反応性
重合体粒子のエポキシ基を加水分解した。次いで反応性
重合体粒子を濾紙(ム2)で濾別した後に、遠心分離、
蒸留水への再分散の操作を3回繰返してN製した。
(3)熱変性ヒトIgGの固定化
(2)で得た反応性重合体粒子をグリシン緩衝液に0、
51k 倉チになるように分散させた。次いで60℃で
10分114J加熱処理したヒ) IgGをグリシン緩
衝液にニジ希釈し1■/−に調整した。0.5重量sy
a度の反応性重合体粒子分散液1答に熱変性し几と)
IgG希釈液1容を加え、攪拌し、室温下2時間放置し
た。その後、遠心分離して洗浄した後、固型分濃度が0
.5]k1it%になるように0.05i−itチ濃度
の牛血清アルブミンを含むグリシン緩衝液に再分散した
。
51k 倉チになるように分散させた。次いで60℃で
10分114J加熱処理したヒ) IgGをグリシン緩
衝液にニジ希釈し1■/−に調整した。0.5重量sy
a度の反応性重合体粒子分散液1答に熱変性し几と)
IgG希釈液1容を加え、攪拌し、室温下2時間放置し
た。その後、遠心分離して洗浄した後、固型分濃度が0
.5]k1it%になるように0.05i−itチ濃度
の牛血清アルブミンを含むグリシン緩衝液に再分散した
。
検体として非動化慢性関節リウマチ患者プール血?iI
fをグリシン緩衝液で20倍に希釈したものを原液とし
て、実施例1と同様にしてガラス製10大のホールグラ
スにグリシン緩衝液で希釈した慢性関節リウマチ患者血
清を各ホールに0.04d’e加え1次いで熱変性ヒ)
IgG k固定化した反応性重合体粒子をグリシン緩
衝液で希釈した分散液全容ホールに0.04−加えて実
施例1と同体の操作で鋭敏性及び分散安定性音調べ比。
fをグリシン緩衝液で20倍に希釈したものを原液とし
て、実施例1と同様にしてガラス製10大のホールグラ
スにグリシン緩衝液で希釈した慢性関節リウマチ患者血
清を各ホールに0.04d’e加え1次いで熱変性ヒ)
IgG k固定化した反応性重合体粒子をグリシン緩
衝液で希釈した分散液全容ホールに0.04−加えて実
施例1と同体の操作で鋭敏性及び分散安定性音調べ比。
その結果、鋭敏性は1目抜×2560.3次月後X25
6(1゜であり、分散安定性は1日後及び3次月後に共
に非特異凝集反応は認められなかった。
6(1゜であり、分散安定性は1日後及び3次月後に共
に非特異凝集反応は認められなかった。
尚、比較例3として比較例1で用いた重合体粒子を用い
て上記と一様の操作でテストすると、鋭敏性は1目抜X
1280.3ケ月後は非特異凝集の几め評価できなかつ
友。
て上記と一様の操作でテストすると、鋭敏性は1目抜X
1280.3ケ月後は非特異凝集の几め評価できなかつ
友。
夾り例6
攪拌機付きガラス製フラスコrmxu換し友後に、蒸留
水2700CI1.加えて70℃に保つ几後に、窒素雰
囲気下、攪拌下に過硫酸カリウム10ミリモル/l濃度
になるように添加した。次いで70℃に加温したグリシ
ジルメタアクリレート100ミリモル及びクロルメチル
スチレン400ミリモルの混合物を添加して70℃で1
時間攪拌下に重合した。その後スチレン2.5モルを足
置ポンプで満々添加してから、70℃で29時間攪拌下
に1合した。その後の操作は実施例1と同様の操作を行
なった。得られた重合体粒子の粒子径は0.324μm
であっ友。重合体粒子表面におけるエポキシ基濃度(G
)は3.5μmole/9−重合体粒子であった、得ら
れた重合体粒子を実施例1と同様の操作でテトラエチレ
ンペンタミン、1.4−ブタンジグリシジルエーテル全
反工しさせ、詔素原子−度(Cs )が12.5μmo
leカー反応性重合体粒子、エポキシ両度(Cxpx)
が13.3μmote/、9−反応性重合体粒子となる
反応性重合体粒子を合成した。かくして得られ几反応性
重合体粒子全実施例1と同様の操作でヒ)IgG’e固
定化し、抗ヒ) IgGウザギ血清との抗原・抗体反応
を行なった。その結果、鋭敏性は1目抜X1280.3
ケ月彼X1280.tた分散安定性は1日後と3ケ月後
共非特異的凝集が認められなかった。
水2700CI1.加えて70℃に保つ几後に、窒素雰
囲気下、攪拌下に過硫酸カリウム10ミリモル/l濃度
になるように添加した。次いで70℃に加温したグリシ
ジルメタアクリレート100ミリモル及びクロルメチル
スチレン400ミリモルの混合物を添加して70℃で1
時間攪拌下に重合した。その後スチレン2.5モルを足
置ポンプで満々添加してから、70℃で29時間攪拌下
に1合した。その後の操作は実施例1と同様の操作を行
なった。得られた重合体粒子の粒子径は0.324μm
であっ友。重合体粒子表面におけるエポキシ基濃度(G
)は3.5μmole/9−重合体粒子であった、得ら
れた重合体粒子を実施例1と同様の操作でテトラエチレ
ンペンタミン、1.4−ブタンジグリシジルエーテル全
反工しさせ、詔素原子−度(Cs )が12.5μmo
leカー反応性重合体粒子、エポキシ両度(Cxpx)
が13.3μmote/、9−反応性重合体粒子となる
反応性重合体粒子を合成した。かくして得られ几反応性
重合体粒子全実施例1と同様の操作でヒ)IgG’e固
定化し、抗ヒ) IgGウザギ血清との抗原・抗体反応
を行なった。その結果、鋭敏性は1目抜X1280.3
ケ月彼X1280.tた分散安定性は1日後と3ケ月後
共非特異的凝集が認められなかった。
実施例7
(1)i合体粒子のV@製
攪拌機付きガラス製フラスコ金窒素置換しt後に、蒸留
水2700CI−’に加えて70℃に保った後に、S1
素雰囲気下、攪拌下に過仇酸カリウム4ミリモル/1.
チオ硫酸ナトリウム2ミリモル/ノ、及び倣敏銅0.2
ミ!Jモル/lを添加した。次いで70℃に加温した
グリシジルメタクリレート1.5モル及びスチレン0.
5モルの混合物を添加して70℃で6時間1合した。重
合後、室温まで冷却してから得られ定型合体粒子を濾紙
(屋2)で濾別して大きなM集体を除いた。次いで透析
を行なった後に遠心分離、蒸角水への再分散の操作全繰
返した後に、イオン交換樹脂で脱イオン操作を行ない、
更に遠心分離と洗浄を行なって重合体粒子金鞘゛製した
。得られた重合体粒子の粒子径は0.304μm得らね
、た重合体粒子を2N蓋チ濃度で蒸留水に分散した懸濁
液200−と3.4μmateのテトラ(アミノメチル
)メタンの水溶液200mtk混合し、室温で48時間
攪拌下に反応した。反応後、重合体粒子全遠心分離、蒸
留水への再分散の操作を3回繰返した後に、98℃で2
時間加熱することによシ、重合体粒子の未反応のエポキ
シ基を加水分解した。次いで、得られた重合体粒子を2
M播%濃度にP+調製した懸濁液100ゴに過ヨウ素酸
ナトリウム15 mmoleと酢酸15 mmoteの
混合物50mを添加し、40℃で一夜攪拌した後・−が
6.5以上になる壕で透析をつづけて私製して、重合体
粒子のジヒドロキジル基をホルミル化した。
水2700CI−’に加えて70℃に保った後に、S1
素雰囲気下、攪拌下に過仇酸カリウム4ミリモル/1.
チオ硫酸ナトリウム2ミリモル/ノ、及び倣敏銅0.2
ミ!Jモル/lを添加した。次いで70℃に加温した
グリシジルメタクリレート1.5モル及びスチレン0.
5モルの混合物を添加して70℃で6時間1合した。重
合後、室温まで冷却してから得られ定型合体粒子を濾紙
(屋2)で濾別して大きなM集体を除いた。次いで透析
を行なった後に遠心分離、蒸角水への再分散の操作全繰
返した後に、イオン交換樹脂で脱イオン操作を行ない、
更に遠心分離と洗浄を行なって重合体粒子金鞘゛製した
。得られた重合体粒子の粒子径は0.304μm得らね
、た重合体粒子を2N蓋チ濃度で蒸留水に分散した懸濁
液200−と3.4μmateのテトラ(アミノメチル
)メタンの水溶液200mtk混合し、室温で48時間
攪拌下に反応した。反応後、重合体粒子全遠心分離、蒸
留水への再分散の操作を3回繰返した後に、98℃で2
時間加熱することによシ、重合体粒子の未反応のエポキ
シ基を加水分解した。次いで、得られた重合体粒子を2
M播%濃度にP+調製した懸濁液100ゴに過ヨウ素酸
ナトリウム15 mmoleと酢酸15 mmoteの
混合物50mを添加し、40℃で一夜攪拌した後・−が
6.5以上になる壕で透析をつづけて私製して、重合体
粒子のジヒドロキジル基をホルミル化した。
得られたホルミル化重合体粒子を1.5重f%旋度に再
調製した懸濁液100−に300μmob・のジエチレ
ングリコールジグリシジルエーテル水浴液20−を加え
て、室温で72時間攪拌下に反応し几後に、濾紙(崖2
)で濾別し、次いで遠心分離、蒸留水への再分散の操作
を3回繰返して1#i製した。かくして得られた反応性
重合体粒子の窒素原子濃度(CN)は11,6μmot
e/9−反応性重合体粒子であり、エポキシ基濃度((
4px )は18.3μmoze/g〜反応性重合体粒
子であった。
調製した懸濁液100−に300μmob・のジエチレ
ングリコールジグリシジルエーテル水浴液20−を加え
て、室温で72時間攪拌下に反応し几後に、濾紙(崖2
)で濾別し、次いで遠心分離、蒸留水への再分散の操作
を3回繰返して1#i製した。かくして得られた反応性
重合体粒子の窒素原子濃度(CN)は11,6μmot
e/9−反応性重合体粒子であり、エポキシ基濃度((
4px )は18.3μmoze/g〜反応性重合体粒
子であった。
(3)抗原・抗体反応−1
(2)で得られた反応性重合体粒子のエポキシ基を加水
分解してジヒドロキジル基に変換した後に、実施例1で
使用したグリシン緩衝液をホウ酸緩衝液(0,IM
pH8,2、NaCA’ 0.05M )k用いた以
外、全て実施例1と同様の操作でヒ) IgGを固定化
し友診断用試薬の性能を評価した。
分解してジヒドロキジル基に変換した後に、実施例1で
使用したグリシン緩衝液をホウ酸緩衝液(0,IM
pH8,2、NaCA’ 0.05M )k用いた以
外、全て実施例1と同様の操作でヒ) IgGを固定化
し友診断用試薬の性能を評価した。
その結果、鋭敏性は7目抜X5120.3ケ月後X51
20.分散安定性は7日後VCO本、3ケ力抜には1木
の非特異凝集が餡められた。
20.分散安定性は7日後VCO本、3ケ力抜には1木
の非特異凝集が餡められた。
(4)抗原・抗体反応−2
(2)で得られた反応性重合体粒子を11蓋%濃度に再
1)4Jしたhi液5()−に10011moleのε
−アミノカプロン酸水溶液50−を加えて、pi(=8
.2に調製し童濡で72時間攪拌下に反応した。次いで
濾紙(A2)で濾別した後、遠心分離、蒸留水へのp)
分散の操作43回繰返して精製することに1す、エポキ
シM’にカルボキシル基に変換した反応性重合体粒子會
得た。
1)4Jしたhi液5()−に10011moleのε
−アミノカプロン酸水溶液50−を加えて、pi(=8
.2に調製し童濡で72時間攪拌下に反応した。次いで
濾紙(A2)で濾別した後、遠心分離、蒸留水へのp)
分散の操作43回繰返して精製することに1す、エポキ
シM’にカルボキシル基に変換した反応性重合体粒子會
得た。
ヤギの産生じたアルファーフェトプロティン(4を下A
FPと略す)の抗体をアフィニティクロマトにより鞘製
し−て得た鞘i AFP抗体を1〜/−濃度に官有する
ホウ酸*衝液全調製し九後に倍数布釈法に工り煽釈して
AFP抗体布釈液を調製し友。
FPと略す)の抗体をアフィニティクロマトにより鞘製
し−て得た鞘i AFP抗体を1〜/−濃度に官有する
ホウ酸*衝液全調製し九後に倍数布釈法に工り煽釈して
AFP抗体布釈液を調製し友。
i:&m%濃度の反応性重合体粒子の懸濁液1容にAF
I)抗体希釈液1容會加え攪拌下に室温で4時間数fl
te L几。そして遠ノし分離した後に固型分濃度が0
、51J%となるようにグリシン緩衝液に一調製し4℃
に保有した。
I)抗体希釈液1容會加え攪拌下に室温で4時間数fl
te L几。そして遠ノし分離した後に固型分濃度が0
、51J%となるようにグリシン緩衝液に一調製し4℃
に保有した。
検体としてヒト血清中のAFp 濃度がioo。
μ9/、atであるものを原液とし、グリシン緩衝液で
希釈系列金vI4製した。実施例1と同様にしてガラス
製lO大のホールグラスにグリシン緩衝液で希釈したA
FP f:各ホールに0.(1411t加え1次いでA
FP抗体を固足化した診断用試薬の分散液を各ホール[
0,04m加えて実施例1と同様の操作で鋭敏性。
希釈系列金vI4製した。実施例1と同様にしてガラス
製lO大のホールグラスにグリシン緩衝液で希釈したA
FP f:各ホールに0.(1411t加え1次いでA
FP抗体を固足化した診断用試薬の分散液を各ホール[
0,04m加えて実施例1と同様の操作で鋭敏性。
分散安定性音調べ友。その結果、鋭敏性は1日後、3か
力抜共に25μ9/wtであった。分散安定性は1日後
、3か力抜共に非%異凝集は認められなかった・ 実施例8 攪拌機付きガラス製フラスコを窒素置換した後に、i*
水270UCC1−加えて70 ℃に保った後に、窒素
yI1.曲気下圧気下酸カリウム5.0ミリモル/1.
チオ硫酸ナトリウム5.0ミリモル/ l 、(mt酸
銅0.25ミリモル/〕、及びメルカプトエタノ−)v
(15ミIJモル/!を添加した。次いで70℃に加
温し友グリシジルメタクリレート2.0モル及びエチレ
ングリコールジメタクリレー)40℃リモルの混合物を
添加して70℃で2時間攪拌下に重合した。その後の操
作は実施例1と同様の操作を行なった。得られた重合体
粒子の粒子径は0.245得られた重合体粒子を2重量
係濃度で蒸留水に分散した懸濁液200−と10 mm
oムの1−アミノ−2,2−に’X(アミノメチル)デ
ロノヤンー1−オール水溶液200−を混合し、室温で
48時間攪拌下に反応し九1反応後、遠心分離、蒸留水
への再分数の操作を3回繰返して精製した。得られた重
合体粒子を2jI[量襲濃度で蒸留水200m!7に分
散させs50mmet−の1.4−ブタンゾオールゾダ
リシゾルエーテル200dと混合して室温で72時間攪
拌下に反応した後に、濾紙(A2)で濾別した。
力抜共に25μ9/wtであった。分散安定性は1日後
、3か力抜共に非%異凝集は認められなかった・ 実施例8 攪拌機付きガラス製フラスコを窒素置換した後に、i*
水270UCC1−加えて70 ℃に保った後に、窒素
yI1.曲気下圧気下酸カリウム5.0ミリモル/1.
チオ硫酸ナトリウム5.0ミリモル/ l 、(mt酸
銅0.25ミリモル/〕、及びメルカプトエタノ−)v
(15ミIJモル/!を添加した。次いで70℃に加
温し友グリシジルメタクリレート2.0モル及びエチレ
ングリコールジメタクリレー)40℃リモルの混合物を
添加して70℃で2時間攪拌下に重合した。その後の操
作は実施例1と同様の操作を行なった。得られた重合体
粒子の粒子径は0.245得られた重合体粒子を2重量
係濃度で蒸留水に分散した懸濁液200−と10 mm
oムの1−アミノ−2,2−に’X(アミノメチル)デ
ロノヤンー1−オール水溶液200−を混合し、室温で
48時間攪拌下に反応し九1反応後、遠心分離、蒸留水
への再分数の操作を3回繰返して精製した。得られた重
合体粒子を2jI[量襲濃度で蒸留水200m!7に分
散させs50mmet−の1.4−ブタンゾオールゾダ
リシゾルエーテル200dと混合して室温で72時間攪
拌下に反応した後に、濾紙(A2)で濾別した。
次いで遠心分離、蒸留水への再分散の操作を3回繰返し
て精製した。かくして得られた反応性重合体粒子の犠素
原子濃度(CM)は300μmoA・/11−反応性重
合体粒子、エポキシ基濃度(Cgpx)は430μmo
t@/、!i’−反応性重合体粒子であった。
て精製した。かくして得られた反応性重合体粒子の犠素
原子濃度(CM)は300μmoA・/11−反応性重
合体粒子、エポキシ基濃度(Cgpx)は430μmo
t@/、!i’−反応性重合体粒子であった。
(3)抗原・抗体反応
(2)で得られた反応性重合体粒子を固型分濃度1重量
%でホウ酸緩衝液に分散させた。次いでヒト絨毛性ブナ
ドトロピン(hCG )を100OIU/mJ濃度に含
有するホウ酸緩衝液を調製した後に倍数希釈法によシ希
釈したhCG希釈溶液1容と1重量%の反応性重合体粒
子!容を混合し、攪拌下に室温で2時間放置した後、4
℃にて攪拌下に1週間放置した。次いで遠心分離した後
にグリシン緩衝液に再分散し、固型分濃度を0.5重量
%に調製した。
%でホウ酸緩衝液に分散させた。次いでヒト絨毛性ブナ
ドトロピン(hCG )を100OIU/mJ濃度に含
有するホウ酸緩衝液を調製した後に倍数希釈法によシ希
釈したhCG希釈溶液1容と1重量%の反応性重合体粒
子!容を混合し、攪拌下に室温で2時間放置した後、4
℃にて攪拌下に1週間放置した。次いで遠心分離した後
にグリシン緩衝液に再分散し、固型分濃度を0.5重量
%に調製した。
抗hcGウサギ抗体をグリシン緩衝液で20倍に希釈し
たものを原液とし、倍数希釈法により抗hCGウサギ抗
体をグリシン緩衝液で希釈して抗hCG抗体希釈液を調
製する。その後実施例1と同様の操作で鋭敏性、分散安
定性を評価した。その結果、鋭敏性は7口径x320,
3ケ月後×320であった。また分散安定性は7日後及
び3ケ月後共に保存中に全く非特異的凝集が認められな
かった。
たものを原液とし、倍数希釈法により抗hCGウサギ抗
体をグリシン緩衝液で希釈して抗hCG抗体希釈液を調
製する。その後実施例1と同様の操作で鋭敏性、分散安
定性を評価した。その結果、鋭敏性は7口径x320,
3ケ月後×320であった。また分散安定性は7日後及
び3ケ月後共に保存中に全く非特異的凝集が認められな
かった。
実施例9
(1)反応性重合体粒子の調製
実施例8で得られた重合体粒子を2重量チ濃度で蒸留水
に分散した懸濁液200−と10 ymoL@の1−ア
ミノ−2,2−ビス(アミノメチル)デロノ4?ンー1
−オール水溶液200−を混合し、室温で48時間攪拌
下に反応した。反応後、遠心分離、蒸留水への再分散の
操作を3回繰返してyIN製した後に、98℃で2時間
加熱することにより1重合体粒子の未反応のエポキシ基
を加水分解した。次いで、得られ定型合体粒子を2重量
%濃度で蒸留水2()0−に分散させ、50 mnot
eの1.4−ブタンヅオールジグリシジルエーテル20
0−と混合して室温で72時間攪拌下に反応した後に、
濾紙(42)で濾別した。次いで、遠心分離蒸留水への
再分散の操作を3回繰返して精製した。かくして得られ
た反応性重合体粒子の窒素原子濃度(CN)は285μ
mote/9反応性重合体粒子、エポキシ酸[4j (
C*:px )は400μmole19反応性夏合体粒
子であった。
に分散した懸濁液200−と10 ymoL@の1−ア
ミノ−2,2−ビス(アミノメチル)デロノ4?ンー1
−オール水溶液200−を混合し、室温で48時間攪拌
下に反応した。反応後、遠心分離、蒸留水への再分散の
操作を3回繰返してyIN製した後に、98℃で2時間
加熱することにより1重合体粒子の未反応のエポキシ基
を加水分解した。次いで、得られ定型合体粒子を2重量
%濃度で蒸留水2()0−に分散させ、50 mnot
eの1.4−ブタンヅオールジグリシジルエーテル20
0−と混合して室温で72時間攪拌下に反応した後に、
濾紙(42)で濾別した。次いで、遠心分離蒸留水への
再分散の操作を3回繰返して精製した。かくして得られ
た反応性重合体粒子の窒素原子濃度(CN)は285μ
mote/9反応性重合体粒子、エポキシ酸[4j (
C*:px )は400μmole19反応性夏合体粒
子であった。
(2)抗原・抗体反応
(1)で得られた反応性重合体粒子を2重蓋%濃度で蒸
留水に分散した慇濁液100−にε−アミノカブ07酸
5 mmote (il−加え、 d−1= 8.2に
R)nシて室温で72時間攪拌下に反応し友。反応後、
遠心分離、蒸留水への再分散の操作を3回繰返して精製
した。
留水に分散した慇濁液100−にε−アミノカブ07酸
5 mmote (il−加え、 d−1= 8.2に
R)nシて室温で72時間攪拌下に反応し友。反応後、
遠心分離、蒸留水への再分散の操作を3回繰返して精製
した。
かくして得られ友カルぎキシル化重合体粒子を固型分濃
度1重ikiチで声=6.0のリン酸緩衝液に分散し念
。次いでヒト胎盤ラクトゲン(hPL ) ff110
00 IU/Lt嬢度に官有するリン酸緩衝液を調製し
友後に倍数希釈法により希釈したhPL希釈溶液1容と
1重量%濃度のカルボキシル化重合体粒子1容全混合し
、4℃で2日出)攪拌下に放置した。
度1重ikiチで声=6.0のリン酸緩衝液に分散し念
。次いでヒト胎盤ラクトゲン(hPL ) ff110
00 IU/Lt嬢度に官有するリン酸緩衝液を調製し
友後に倍数希釈法により希釈したhPL希釈溶液1容と
1重量%濃度のカルボキシル化重合体粒子1容全混合し
、4℃で2日出)攪拌下に放置した。
次いで遠心分離した後に、リン酸緩衝液に再分散し、固
型分濃度を0.5]1fliチに詞製し几。
型分濃度を0.5]1fliチに詞製し几。
抗hPLウサギ抗体をリン酸緩衝液で20倍に希釈した
もの全原液とし、倍数希釈法に工り抗hPLウサギ抗体
をリン酸緩衝液で希釈して抗hPL抗体希釈液を調製す
る。その後、実施例1と同様の操作で鋭敏性と分散安定
性を評価した。その結果、鋭敏性は7口径×160%3
ケ月後×160であった。舊た、分散安定性は7日後及
び3ケ月後共に保存中に全く非%異的#集が認められな
かった。
もの全原液とし、倍数希釈法に工り抗hPLウサギ抗体
をリン酸緩衝液で希釈して抗hPL抗体希釈液を調製す
る。その後、実施例1と同様の操作で鋭敏性と分散安定
性を評価した。その結果、鋭敏性は7口径×160%3
ケ月後×160であった。舊た、分散安定性は7日後及
び3ケ月後共に保存中に全く非%異的#集が認められな
かった。
第1図は、実施例1で得ら7’した反応性重合体粒子f
担体とした診断用試薬の#集試験の結果を示す。 %訂出願人 徳山曹達株式会社
担体とした診断用試薬の#集試験の結果を示す。 %訂出願人 徳山曹達株式会社
Claims (4)
- (1)グリシジル(メタ)アクリレート単量体単位を有
する重合体粒子にアミノ基及び/又はイミノ基とさらに
エポキシ基とが導入されてなる反応性重合体粒子であっ
て、該反応性重合体粒子の表面に於ける窒素原子の濃度
をC_N(μmole/g−反応性重合体粒子)、エポ
キシ基の濃度をC_E_P_X(μmole/g−反応
性重合体粒子)とするとき、次式 C_E_P_X≧0.6×C_N を満たす濃度のエポキシ基を有することを特徴とする反
応性重合体粒子。 - (2)グリシジル(メタ)アクリレート単量体単位を有
する重合体粒子と、分子中にアミノ基及び/又はイミノ
基を有し、且つ該アミノ基及び/又はイミノ基の窒素原
子に結合する水素原子の数が2個である含窒素化合物と
を反応させ、次いで、得られた重合体粒子と分子中にエ
ポキシ基を3個以上有するエポキシ化合物とを反応させ
ることを特徴とする反応性重合体粒子の製造方法。 - (3)グリシジル(メタ)アクリレート単量体単位を有
する重合体粒子と、分子中にアミノ基及び/又はイミノ
基を有し、且つ該アミノ基及び/又はイミノ基の窒素原
子に結合する水素原子の数が3個以上である含窒素化合
物とを反応させ、次いで、得られた重合体粒子と分子中
にエポキシ基を2個以上有するエポキシ化合物とを反応
させることを特徴とする反応性重合体粒子の製造方法。 - (4)グリシジル(メタ)アクリレート単量体単位を有
する重合体粒子にアミノ基及び/又はイミノ基とさらに
エポキシ基とが導入されてなる反応性重合体粒子であっ
て、該反応性重合体粒子の表面に於ける窒素原子の濃度
をC_N(μmole/g−反応性重合体粒子)、エポ
キシ基の濃度をC_E_P_X(μmole/g−反応
性重合体粒子)とするとき、次式 C_E_P_X≧0.6×C_N を満たす濃度のエポキシ基を有する反応性重合体粒子よ
りなることを特徴とする免疫診断用試薬の担体。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP14498586A JPH0613567B2 (ja) | 1986-06-23 | 1986-06-23 | 反応性重合体粒子及びその製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP14498586A JPH0613567B2 (ja) | 1986-06-23 | 1986-06-23 | 反応性重合体粒子及びその製造方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS631973A true JPS631973A (ja) | 1988-01-06 |
JPH0613567B2 JPH0613567B2 (ja) | 1994-02-23 |
Family
ID=15374795
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP14498586A Expired - Lifetime JPH0613567B2 (ja) | 1986-06-23 | 1986-06-23 | 反応性重合体粒子及びその製造方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPH0613567B2 (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2007100035A (ja) * | 2005-10-07 | 2007-04-19 | Jsr Corp | 有機ポリマー粒子およびその製造方法 |
-
1986
- 1986-06-23 JP JP14498586A patent/JPH0613567B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2007100035A (ja) * | 2005-10-07 | 2007-04-19 | Jsr Corp | 有機ポリマー粒子およびその製造方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPH0613567B2 (ja) | 1994-02-23 |
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